特表 2022-519199 ＣＢＭの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-22

(54)【発明の名称】ＣＢＭの使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/195 20060101AFI20220314BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220314BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 47/62 20170101ALI20220314BHJP

   A61K 47/55 20170101ALI20220314BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20220314BHJP

   C07K 14/33 20060101ALI20220314BHJP

   C07K 14/315 20060101ALI20220314BHJP

   C07K 14/32 20060101ALI20220314BHJP

【ＦＩ】

C07K14/195

A61P43/00 105

A61P35/00

A61K47/62

A61K47/55

A61K38/16

C07K14/33 ZNA

C07K14/315

C07K14/32

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021542554

(86)(22)【出願日】2020-01-24

(85)【翻訳文提出日】2021-09-06

(86)【国際出願番号】 GB2020050170

(87)【国際公開番号】W WO2020152479

(87)【国際公開日】2020-07-30

(31)【優先権主張番号】1901057.8

(32)【優先日】2019-01-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521038094

【氏名又は名称】オミデオン リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100147485

【弁理士】

【氏名又は名称】杉村 憲司

(74)【代理人】

【識別番号】230118913

【弁護士】

【氏名又は名称】杉村 光嗣

(74)【代理人】

【識別番号】100181847

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 かおり

(72)【発明者】

【氏名】グレアム ロジャーズ

(72)【発明者】

【氏名】ヘレン コナリス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC26

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA21

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084BA42

4C084CA04

4C084DA31

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB211

4C084ZB261

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA53

4H045CA11

4H045EA20

(57)【要約】

本開示は、細胞成長を調整する分子を提供する。これらの分子は、炭水化物を結合する分子を含み、細胞の増殖および/または分化障害、癌および/またはその転移および/または拡散の治療および/または予防における適用を見出すことができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

細胞成長および/または細胞活動を調整する方法で使用するための炭水化物結合モジュールで、炭水化物結合モジュールが構成されるグループから選択され、
(i)炭水化物結合モジュール家庭32(CBM32)の炭水化物結合モジュール、
(ii)炭水化物結合モジュール家庭47(CBM47)の炭水化物結合モジュール、
(iii)炭水化物結合モジュール家庭67(CBM67)の炭水化物結合モジュール、
(iv)炭水化物結合モジュール家庭70(CBM70)の炭水化物結合モジュール。

【請求項2】

請求項1の使用のための、請求項1の炭水化物結合モジュール家庭32(CBM32)は、SEQ ID NO: 1またはSEQ ID NO: 2またはそれらの炭水化物結合部を含む。

【請求項3】

請求項1又は2の炭水化物結合モジュールは、炭水化物結合モジュールがガンの処理及び/又は防止のために使用される請求項1又は2の使用のために使用される。

【請求項4】

炭水化物結合モジュールがCBM32である請求項3の使用のための請求項3の炭水化物結合分子。

【請求項5】

ガンが構成されるグループから選択される請求項4の使用のための請求項4の炭水化物結合モジュール、
(a)卵巣がん、
(b)肺癌、
(c)結腸がん、および
(d)乳癌。

【請求項6】

細胞成長および/または細胞活動を調整する方法で使用するための炭水化物結合モジュールを含む分子で、分子は、以下のグループから選ばれた単一のCBMからなり、
(i)一つのCBM32、
(ii)一つのCBM47、
(iii)一つのCBM67、
(iv)一つのCBM70、
(v)一つのCpCBM32、
(vi)単独のSpCBM47、
(vii)1つのSaCBM67、
(viii)１つのSpCBM70。

【請求項7】

細胞成長および/または細胞活動を調整する方法で使用するための、2つ以上の炭水化物結合モジュールからなる分子で、分子は、群から選ばれた2つ以上のCBMで構成され、
(i)CBM32、
(ii)CBM47、
(iii)CBM67、
(iv)CBM70、
(v)CpCBM32、
(vi)SpCBM47、
(vii)Saa CBM67、
(viii)SpCBM70。

【請求項8】

細胞の成長及び/又は細胞の活動を調整する方法で使用するための分子で、分子が構成されるグループから選択され、
(i)Cp2CBM32TDを含む分子、
(ii)Sp2CBM47TDからなる分子、
(iii)Sa2CBM67TDを含む分子、および
(iv)Sp2CBM70TDからなる分子。

【請求項9】

請求項6-8のうち、がんの処理および/または防止のために使用される請求項6-8の分子のいずれか。

【請求項10】

請求項9の使用のために、分子が構成されるグループから選択される請求項9の分子、
(i)1つ、2つ以上のCBM32からなる分子、
(ii)1つ、2つ以上のCpCBM32(s)からなる分子、
(iii)SEQ ID NO: 1、2またはそれらの炭水化物結合部の配列からなる1、2またはそれ以上のペプチドまたはタンパク質からなる分子、
(iv)CpCBM32TDからなる分子。

【請求項11】

請求項10の使用のために、ガンが構成されるグループから選択される請求項10の分子、
(a)卵巣がん、
(b)肺癌、
(c)結腸がん、および
(d)乳癌。

【請求項12】

ガンの処理及び/又は防止のための分子であって、分子が構成されるグループの中から選択されるもの:、
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【請求項13】

CBM32および/またはCBM40として分類される炭水化物結合モジュールまたはCBM32および/またはCBM40として分類され、耐性(または耐性)ガンの治療および/または予防に使用される炭水化物結合モジュール。

【請求項14】

請求項13を使用するための炭水化物結合モジュール又は請求項13の分子からなるグループから選択され、
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)Cp2CBM32TDからなる分子、
(iii)Vc2CBM40TDからなる分子、
(iv)Sp2CBM40TDからなる分子。

【請求項15】

請求項13又は14の使用のための、炭水化物結合モジュール又は請求項13又は14の分子で、炭水化物結合モジュール家庭32(CBM32)がSEQ ID NO: 1又はSEQ ID NO: 2又はそれらの炭水化物結合部分を含み、炭水化物結合モジュール家庭40(CBM40)が、グループから選ばれた配列を構成する、
(i)配列番号: 23またはそれらの炭水化物結合部、
(ii)配列番号: 24またはそれらの炭水化物結合部、
(iii)配列番号25またはそれらの炭水化物結合部、
(iv)配列番号26またはそれらの炭水化物結合部。

【請求項16】

CpC2BM32TDを構成する分子、Vc2CBM40TDを構成する分子、および/またはSp2CBM40TDを構成する分子で、耐性(または耐性)のオバリアンがんの治療に使用されるCpCBM32(s)。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ガンの治療のための使用、方法及び組成を提供する。

【背景技術】

【0002】

非免疫起点の糖蛋白質であるいくつかのレクチンは、悪性細胞においてアポトーシスを誘導する能力を示し、したがって抗癌特性を示す。この現象は、部分的には、これらのレクチンと、細胞上の特定のグリカンレセプターとの相互作用を通して起こる(Yauら、2015)。

【0003】

上記レクチンの1つにヤドリギ由来のビスクミンがあり、これはα2,6シアリルラクトースでグリコシル化される細胞受容体に結合する毒素である(M珀ら、2002)。ビスクミンはAとBの2つのサブユニットから成る57DakDaヘテロダイマーであり、Aサブユニットはリボソームを無力化することで毒効果を発揮し、それによってタンパク質の製造を妨げるが、Bサブユニットは結合機能を発揮する。このレクチンは、体外および体内でピコモラル細胞毒を実証し、臨床試験被検者(13分の半減期)において推奨される上限値である6mm/kg(Zwierzina et al., 2011)を持っている。

【0004】

また、細胞の移動と成長を防ぐ能力(したがって、抗がん性)を実証した別の植物レクチンは、Maackia amurensis seed lectin lectin、またはMASL (Ochoa-Alvarez et al., 2012; Astarita et al., 2012)である。このレクチンはまた、ナノモラールの効能(～300nM)を示すサイトトキシックも示しており、種々のヒトのがんで過剰に表現されている、α2,3 シアリル化されたムチンタイプのトランス膜糖タンパク質であるポドプラニンの結合を通してその効果を発揮する(Kato et al., 2005; Schacht et al., 2005; Shibahara et al., 2006)。

【0005】

WO2018/055373は、細胞成長を調整する方法、および/または細胞の拡散および/または区別障害の処理および/または防止における、炭水化物結合モジュールを含む塩酸結合分子の使用について述べている。

【0006】

例えば、癌を含む細胞増殖および分化障害の治療は、宿主において十分に許容され、治療可能性を有するさらなる分子の提供を要求する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本開示は、炭水化物結合モジュール(CBM)として知られる一種の砂糖(炭水化物)結合タンパク質が細胞成長および/または細胞活動の側面を調整することができるという発見に基づく。

【0008】

従って、本開示は、記載されたCBMを含む分子の医学的使用を含む、様々な用途を提供する。

【0009】

CBMは、炭水化物リガンドを結合し、その触媒ドメインをその基材に向ける役割を持つ、より大きな(例えば、グリコシダーゼのような)炭水化物活性エンザイムの一部としてしばしば見出される。

【0010】

開示は、特に、以下として知られるグループに属するCBMに関するものである。
(i)炭水化物結合モジュール家庭32(CBM32)
(ii)糖鎖結合モジュール家庭47(CBM47)
(iii)糖鎖結合モジュール家庭67(CBM67)
(iv)糖鎖結合モジュール家庭70(CBM70)。

【0011】

この点に関し、開示は、上述したすべてのCBM家庭(CBM家庭(i)-(iv))からのCBMが、細胞成長および/または細胞活動の側面を調整するという発見に関する。

【0012】

本明細書で使用される用語「CBM32」、「CBM47」、「CBM67」および「CBM70」は、1つまたは複数の炭水化物結合モジュールファミリー32、47、67および/または70に属するものとして分類される化合物、組成物または分子を意味することができ、本明細書で使用される用語「CBM32」は、炭水化物活性酵素データベース中のCBM32ファミリーに属するものとして指定される炭水化物結合モジュール（(http://www.cazy.org/)ではインターネット上で自由にアクセス可能)を包含することができ、さらに、本明細書で使用される用語「CBM47」、「CBM67」および「CBM70」は、炭水化物活性酵素データベース中のCBM47、CBM67およびCBM70ファミリーに属するものとして指定される炭水化物結合モジュール（(http://www.cazy.org/)ではインターネット上で自由にアクセス可能)を包含することができる。

【0013】

本開示は、例えば、CBMを含むより大きな分子、例えば、CBM32、CBM47、CBM67及びCBM70を含む分子の使用を包含することができる。(限定しない)実施例によると、この開示の分子は、シアル酸を結合する能力を示すだけでなく、1つ以上の他の機能を持つこともある。たとえば、分子には活性がある。

【0014】

幾つかの例では、ここに記載される種々の用途のためのCBMは、分子(例えば、フュージョンたんぱく質)とエンザイマティック(例えば、シリダーズ)活動の一部として提供されないか、内部で構成されないことがある。

【0015】

本明細書において、「構成」および/または「構成」という用語は、本発明の側面および実施形態が「特定の特徴または特徴を構成する」ことを意味するために使用されることに留意する必要がある。また、本用語は、関連する特徴または特徴を「本質的に構成する」または「構成する」ことを含む側面および/または「構成する」ことを含んでいることを理解すべきである。

【0016】

従って、この開示の文脈において、「CBM47」、「CBM67」又は「CBM70」は、本質的に、炭水化物結合モジュール家庭32、47、67及び/又は70に属する1つ以上の分子から構成され、又はそれ以上から構成されることができる。「CBM32」、「CBM47」、「CBM67」及び/又は「CBM70」という用語は、それらが由来する本来の、野生の又は参照のCBM32、CBM47、CBM47、CBM67及び/又はCBM70の断片又は一部を包含することができる。これらの断片又は部分は、機能的でなければならない。つまり、それらは、それらが由来する本来の、野生の又は参照のCBM32、CBM47、CBM67及び/又はCBM70の炭水化物結合能力を保持することができる。

【0017】

有用なCBM32は、あらゆる適当なソースから得られることがある。例えば、使用のためのCBM32は、例えば、Cellvibrio属、Yersinia属、Micromonospora属、連鎖球菌属、Bifidobacteria属およびクロストリジウム属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なCBM32は、例えば、Cellvibrio mixtus、Yersinia enterolitica、Clostridium perfringens、Clostridium thermocellum、Streptococcus pneumoniae、Bifidobacterium longumおよびMicromonospora viridifaciensから得られ、または誘導され得る。CBM32家庭の出所、構造、機能に関する詳細は、炭水化物活性エンザイムデータベース(ウェブサイト: http://www.cazy.org/CBM32.html))に掲載されている。

【0018】

例示的なCBM32配列は、SEQ ID NO: 1によって以下に提供される:
SEQ ID NO1:
AIIETAIPQSEMTASATSEEGQDPASSAIDGNTNTMWHTKWNGSDALPQSLSVNLGSSRKVSSIAITPRTSGNNGFITKYEIHAINNGVETLVAEGTWEENNLVKTVTFDSPIDAEEIKITAIQGVGGFASIAELNVYE

【0019】

従って、使用のためのCBMは、本質的に、SEQ ID NO: 1またはそれらの炭水化物結合部の配列を有するCBMから成ることができる。

【0020】

SEQ ID NO: 1の炭水化物結合断片は、SEQ ID NO: 1から約138(連続または隣接)のアミノ酸に、約5、6、7、8、9または10(連続または隣接)の間のどこでも含むことができる。適切な断片は、配列番号1からの約11、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130または約135(連続または連続)アミノ酸を含み得る。

【0021】

CBM32またはSEQ ID NOから成る、またはそれから成るタンパク質:1は、例えば、ガラクトース、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)、および/またはラクトースを結合することができる。従って、使用するどんな断片でも、ガラクトース、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)および/またはラクトースを結合することができる。技能の1つは、所与のCBM32分子の結合親和性が、正確なCBM32サブタイプに依存することを理解するだろう。更なる例として、いくつかのCBM32は、様々なリガンド(例として、タイプII血液型H-トリサッカリド(Fuca1-2Galb1-4GlacNAc)、N-アセチル-D-ラクトサミン(LacNAc)、ガラクトース、乳酸-Nバイオゼ、脱糖性アクトNAc-α-1、4-Gal(N-アセチルグルコサミンとガラクトースと結合したアルファ1,4)、および/またはGlcNAcを含む)に対する親和性を示している。また、複数のCBM32サブタイプは、単一の生物から誘導されてもよいことに留意されたい。これらの異なるCBMサブタイプは、同一、類似または異なる結合特異性を呈し得る。例えば、Clostridium perfringensは2つのシリアーゼNanJとNanHを含んでいる; NanJは1つのガラクトース比CBM32を含んでいる。NanHは異なる結合選択性を持つ4つの推定CBM32を含んでいる。例えば、NanHによってエンコードされたCBM32はGlcNAcを結合する。ここで用いられるように、CBM32という用語は、すべてのCBM32バリアント、誘導体、およびサブタイプを包含する。

【0022】

SEQ ID NO: 1 は、ID No A0A2X2YJF2の下にUniProt データベースに保存されている配列から派生し、この配列は、SEQ ID NO: 2 (SEQ ID NO: 1 は残渣42-180 として表示され、下の列では影が付いている) として再現される。
SEQ ID NO: 2
MKSKKIIATL VASLVISNMG GYLVKANPNV NHKAVIIEDR QAIIETAIPQ SEMTASATSE EGQDPASSAI DGNTNTMWHT KWNGSDALPQ SLSVNLGSSR KVSSIAITPR TSGNNGFITK YEIHAINNGV ETLVAEGTWE ENNLVKTVTF DSPIDAEEIK ITAIQGVGGF ASIAELNVYE IKGEVDEIAN YGNLKITKEE ERLNITRDLE KFSSLDEGTI VTRFNMNDTS IQSLIGLSDG NKANNYFSLY VSGGKVGYEL RRQEGNGDFN VHHSADVTFN KGINTLALKI EKGVGAKIFL
NGSLVKTVSD PNIKFLNAIN LNSGFIGKTD RANGYNEYLF RGNIDFMNIY DKPVSDNYLL RKTGETKAPS EDSLLPDDVY KTQPVELFYP GYLESRGYRI PALETTKKGT VLASIDVRNN GDHDAPNNNI DVGIRRKEVN GEWEEGKVIL DYPGKSAAID TSLMSATIEE NGIEKERIFL IVTHFPEGYG FPNTEGGSGY KEIDGKYYFI LKDAQNNEYT VREDGIVYNS EGNETDYVMK NDKTLIQNGE EVGNALLSNS PLKAVGTAHI EMIYSDDDGN TWSEPEDLNP GLKKEWMKFF
GTAPGKGIQI KNGEHKGRLV FPIYYTNQNN FQSSAVIYSD DFGETWKLGE SPIDTASVSS ETVSSGTQLT ECQVVEMPNG QLKLFMRNTG SYTRIATSFD GGATWHDEVP EDTSLREPYC QLSVINYSGK INGKDAIIFS NPDASSRVNG SVKVGLINEN GTYENGQPRY EFDWIYNKTV KPGSFAYSCL TELPDGNLGL FYEGEGAGRM AYTEFDLNYL KFNASEDSPA ATVQSIESLD EDLIYNAGDE VSIKVNFNQL VSLIGDRKIT LDIGGVDVPL NMVNYEGKSS AIFKGTIPEG
INPGNYEIKL KENNALELNT VYNKVSTLNG LDNTGINVQI GELKTTVGNS TIKVNEEVQV GSAFEAILGI KGLNGDTEVY SAEYLFEYNA EAFKLNEITS FSDSLFVKSK EVEPGKVRIL VASLGNEIEK DSELVKVNLT PKISSELEVL GLTTALVGAG DGNTHDLELS SKEVKINEEA SGEIVVNPVQ NFEIPEINKK NVKLTWNAPI TTEGLEGYVI YKDGKKLSEV PAESTEFVVS KLNRHTIYNF KVAAKYSNGE LSAKESKTIR TAR

【0023】

SEQ ID NOS 1と2はClostridium perfringensに由来する。

【0024】

本開示の様々な側面で使用するためのCBMは、1、2、3、4以上のCBM32からなることができる。

【0025】

使用するためのCBMは、SEQ ID NO: 1またはそれらの炭水化物結合断片を含む1、2、3、4以上のタンパク質からなることができる。

【0026】

スキルの1つは、有用なCBM32は、SEQ ID NOS: 1および2のCBM32配列との配列同一性または同質性を示す配列(例えば、99%、95%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、または60%)を示すことができることを認識するだろう。全てのこのような変異体または上記配列は、本開示の範囲内に、および用語「CBM32」によって包含されるべきである。同一および/または相同なCBM32配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0027】

CBM47は、あらゆる適切な情報源から得られる。例えば、使用のためのCBM47は、例えばAcinetobacter属、Bathymodiolus属、Campylobacter属、Planctomycetes属、連鎖球菌属およびStreptomyces属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なCBM47は、例えば、連鎖球菌・ミティスまたは連鎖球菌・肺炎から得られるか、または由来することができる。CBM47家庭の潜在的な供給源、構造および機能に関する詳細は、炭水化物活性エンザイムデータベース(インターネット上で無料で入手可能: http://www.cazy.org/CBM47.html)に掲載されている。

【0028】

例示的なCBM47配列は、SEQ ID NO: 3によって以下に提供される:
SEQ ID NO: 3
TPDKFNDGNLNIAYAKPTTQSSVDYNGDPNRAVDGNRNGNFNSGSVTHTRADNPSWWEVDLKKMDKVGLVKIYNRTDAETQRLSNFDVILYDNNRNEVAKKHVNNLSGESVSLDFKEKGARYIKVKLLTSGVPLSLAEVEVFRES

【0029】

従って、使用のためのCBMは、本質的に、SEQ ID NO: 3またはそれらの炭水化物結合部の配列を有するCBMから成ることができる。

【0030】

SEQ ID NO: 3の炭水化物結合断片は、SEQ ID NO: 3の約5,6,7,8,9または10(連続または連続)のアミノ酸から約144(連続または連続)のアミノ酸までのどこでも成り得る。適切な断片は、配列番号3からの約11、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130または約135、約140または約143(連続するまたは隣接する)アミノ酸を含み得る。

【0031】

CBM47または、本質的に、またはSEQ ID NOから成るタンパク質:3は、L-フコース、フコシルラクトース、H-トリサッカリドおよび/またはLewis^y抗原を結合することができる。従って、使用するどんな断片でも、L-フコース、フコシルラクトース、H-トリサッカリドおよび/またはLewis^y抗原を結合することができる。

【0032】

SEQ ID NO: 3 は、ID No A0A1Q2T229.の下にUniProt データベースに保存されている配列から派生し、この配列は、SEQ ID NO: 4 (SEQ ID NO: 3 は残渣の601-745 として表示され、下の列では影が付いている) として再現される:
SEQ ID NO: 4
MNKEKIKRKL ITILFVCIGM LCFGLLAGVK ADNRVQMRTT INNESPLLLS PLYGNDNGNG LWWGNTLKGA WEAIPEDVKP YAAIELHPAK VCKPTSCIPR DTKELREWYV KMLEEAQSLN IPVFLVIMSA GERNTVPPEW LDEQFQKYSV LKGVLNIENY WIYNNQLAPH SAKYLEVCAK YGAHFIWHDH EKWFWETIMN DPTFFEASQK YHKNLVLATK NTPIRDDAGT DSIVSGFWLS GLCDNWGSST DTWKWWEKHY TNTFETGRAR DMRSYASEPE SMIAMEMMNV YTGGGTVYNF
ECAAYTFMTN DVPTPAFTKG IIPFFRHAIQ NPAPSKEEVV NRTKAVFWNG EGRISSLNGF YQGLYSNDET MPLYNNGRYH ILPVIHEKID KEKISSIFPN AKILTKNSEE LSSKVNYLNS LYPKLYEGDG YAQRVGNSWY IYNSNANINK NQQVMLPMYT NNTKSLSLDL TPHTYAVVKE NPNNLHILLN NYRTDKTAMW ALSGNFDASK SWKKEELELA NWISKNYSIN PVDNDFRTTT LTLKGHTGHK PQINISGDKN HYTYTENWDE NTHVYTITVN HNGMVEMSIN TEGTGPVSFP
TPDKFNDGNL NIAYAKPTTQ SSVDYNGDPN RAVDGNRNGN FNSGSVTHTR ADNPSWWEVD LKKMDKVGLV KIYNRTDAET QRLSNFDVIL YDNNRNEVAK KHVNNLSGES VSLDFKEKGA RYIKVKLLTS GVPLSLAEVE VFRESDGKQS EEDIDKITED KVVSTNKVAT QSSTNYEGVA ALAVDGNKDG DYGHHSVTHT KEDSPSWWEI DLAQTEELEK LIIYNRTDAE IQRLSNFDII IYDSNDYEVF TQHIDSLESN NLSIDLKGLK GKKVRISLRN AGIPLSLAEV EVYTYK

【0033】

SEQ ID NOS 3と4はStreptococcus pneumoniaeに由来する。

【0034】

この開示の様々な側面で使用されるCBMは、1、2、3、4以上のCBM47からなることがある。

【0035】

使用するためのCBMは、SEQ ID NO: 3またはそれらの炭水化物結合断片を含む1、2、3、4以上のタンパク質からなることができる。

【0036】

有用なCBM47sは、ある程度(例えば、99%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%または60%)の配列同一性または同質性を示す配列を、SEQ ID NOS: 3および4のCBM47配列と共に含み得ることが理解されよう。全てのこのような変異体または上記配列は、本開示の範囲内に、および用語「CBM47」によって包含されるべきである。同一および/または相同なCBM47配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0037】

CBM67は、あらゆる適切な情報源から得られる。例えば、使用のためのCBM67は、例えば、Bacillus属、Paenibacillus属、PlanctomycetesおよびStreptomyces属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なCBM67は、例えば、Streptomyces avermitilisから得られるか、又は由来することができる。CBM67家庭の潜在的な供給源、構造および機能に関する詳細は、炭水化物活性エンザイムデータベース(インターネット上で無料で入手できる: http://www.cazy.org/CBM67.html)に記載されている。

【0038】

例示的なCBM67配列は、SEQ ID NO: 5によって以下に提供される。
SEQ ID NO: 5
APSLEGSSWIWFPEGEPANSAPAATRWFRRTVDLPDDITGATLAISADNVYAVSVDGAEVARTDLEADNEGWRRPAVIDVLDHVHSGNNTLAVSASNASVGPAGWICVLVLTTASGEKKIFSDASWKSTDHEPADGWREPDFDDSGWPAAKVAAAWGAGPWGRVA

【0039】

従って、使用のためのCBMは、本質的に、SEQ ID NO: 5またはそれらの炭水化物結合部の配列を有するCBMからなることができる。

【0040】

SEQ ID NO: 5の炭水化物結合断片は、約5、6、7、8、9または10(連続または隣接)の間のどこでも、SEQ ID NO: 5の約164(連続または隣接)のアミノ酸からなることができる。適切な断片は、配列番号5からの約11、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160または約163(連続するまたは隣接する)アミノ酸を含み得る。

【0041】

CBM67または、本質的に、またはSEQ ID NO: 5から成るタンパク質から成る、L-ラムノーズを結合することができる。したがって、使用されるどんな断片でもL-ラムノーズを結合することができる。

【0042】

SEQ ID NO: 5 は、ID No :Q82PP4の下にUniProt データベースに保存されている配列から派生し、この配列は、SEQ ID NO: 6として再現される(SEQ ID NO: 5は残渣132-296として表示され、下の列で影がついている)。
SEQ ID NO: 6
MSALRVTSPS VEYVQRPLGL DAAHPRLSWP MASAAPGRRQ SAYQVRVASS AAGLSHPDVW DSGKVVSDDS VLVPYAGPPL KPRTRYFWSV RVWDADGGAS EWSAPSWWET GLMGASQWSA KWISAPAPLT EAPSLEGSSW IWFPEGEPAN SAPAATRWFR RTVDLPDDIT GATLAISADN VYAVSVDGAE VARTDLEADN EGWRRPAVID VLDHVHSGNN TLAVSASNAS VGPAGWICVL VLTTASGEKK IFSDASWKST DHEPADGWRE PDFDDSGWPA AKVAAAWGAG PWGRVAPVAS
AANQLRHEFR LPHKKVSRAR LYATALGLYE AHLNGRRVGR DQLAPGWTDY RKRVQYQTYD VTSSVRPGAN ALAAYVAPGW YAGNVGMFGP HQYGERPALL AQLEVEYADG TSERITSGPD WRAASGPIVS ADLLSGETYD ARKETAGWTS PGFDDRAWLA VRGADNDVPE QIVAQVDGPV RIAKELPARK VTEPKPGVFV LDLGQNMVGS VRLRVSGDAG TTVRLRHAEV LNPDGTIYTA NLRSAAATDT YTLKGQGEET YEPRFTFHGF RYVEVTGFPG KPSTTSVTGR VMHTSAPFTF
EFETNVPMLN KLHSNITWGQ RGNFLSVPTD TPARDERLGW TGDINVFAPT AAYTMESARF LTKWLVDLRD AQTSDGAFTD VAPAVGNLGN GVAGWGDAGV TVPWALYQAY GDRQVLADAL PSVHAWLRYL EKHSDGLLRP ADGYGDWLNV SDETPKDVIA TAYFAHSADL AARMATELGK DAAPYTDLFT RIRKAFQTAY VASDGKVKGD TQSAYVLTLS MNLVPDALRK AAADRLVALI EAKDWHLSTG FLGTPRLLPV LTDTGHTDVA YRLLHQRTFP SWGYPIDKGS TTMWERWDSI
QPDGGFQTPE MNSFNHYAYG SVGEWMYANI AGIAPGRAGY RQVVIRPRPG GEVTSARATF ASLHGPVSTR WQQRSGGFVL TCSVPPNTTA EVWIPADHPD RVQHTHGTFV RAEDGCAVFE VGSGSHRFTV

【0043】

SEQ ID NOS 5と6はStreptomyces avermitilisに由来する。

【0044】

本開示の様々な側面で使用するためのCBMは、1、2、3、4以上のCBM67を含むことができる。

【0045】

使用するためのCBMは、SEQ ID NO: 5またはそれらの炭水化物結合断片を含む1、2、3、4以上のタンパク質からなることができる。

【0046】

有用なCBM67sは、ある程度(例えば、99%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%または60%)の配列同一性または同質性を、SEQ ID NOS: 5および6のCBM67配列と共に示す配列を含み得ることを当業者は理解するであろう。全てのこのような変異体または上記配列は、本開示の範囲内に、および用語「CBM67」によって包含されるべきである。同一および/または相同なCBM67配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0047】

CBM70は、任意の適切な供給源から誘導され得る。例えば、使用のためのCBM70は、例えば、Bacillus属、Paenibacillus属、Planctomycetes属および連鎖球菌属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なCBM70は、例えば、Streptomyces pneumoniaeから入手または由来することができる。CBM70家庭の潜在的な供給源、構造および機能に関する詳細は、炭水化物活性エンザイムデータベース(インターネット上に無料で入手可能: http://www.cazy.org/CBM70.html)に掲載されている。

【0048】

例示的なCBM70配列は、SEQ ID NO: 7によって以下に提供される。
配列番号7
NLVENGDFGQTEDGSSPWTGSKAQGWSAWVDQKNSADASTRVIEAKDGAITISSHEKLRAALHRMVPIEAKKKYKLRFKIKTDNKIGIAKVRIIEESGKDKRLWNSATTSGTKDWQTIEADYSPTLDVDKIKLELFYETGTGTVSFKDIELVEVADQLS

【0049】

従って、使用のためのCBMは、本質的に、SEQ ID NO: 7またはそれらの炭水化物結合部の配列を有するCBMから成ることができる。

【0050】

SEQ ID NO: 7の炭水化物結合断片は、SEQ ID NO: 7の約5,6,7,8,9または10(連続または連続)のアミノ酸から約158(連続または連続)のアミノ酸までのどこでも構成され得る。適切な断片は、配列番号7からの約11、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155または約157(連続するまたは隣接する)アミノ酸を含み得る。

【0051】

本質的に、またはSEQ ID NO: 7から成るCBM70またはタンパク質から成る、ヒアルロン酸を結合することができる。従って、使用のための断片もまたヒアルロン酸を結合することができる。

【0052】

SEQ ID NO: 7 は、ID No :Q54873の下にUniProt データベースに保存されている配列から派生し、この配列は、SEQ ID NO: 8 (SEQ ID NO: 7 は残渣54-212 として表示され、下の列で色づけされている) として再現される。
SEQ ID NO: 8
MQTKTKKLIV SLSSLVLSGF LLNHYMTIGA EETTTNTIQQ SQKEVQYQQR DTKNLVENGD FGQTEDGSSP WTGSKAQGWS AWVDQKNSAD ASTRVIEAKD GAITISSHEK LRAALHRMVP IEAKKKYKLR FKIKTDNKIG IAKVRIIEES GKDKRLWNSA TTSGTKDWQT IEADYSPTLD VDKIKLELFY ETGTGTVSFK DIELVEVADQ LSEDSQTDKQ LEEKIDLPIG KKHVFSLADY TYKVENPDVA SVKNGILEPL KEGTTNVIVS KDGKEVKKIP LKILASVKDA YTDRLDDWNG
IIAGNQYYDS KNEQMAKLNQ ELEGKVADSL SSISSQADRT YLWEKFSNYK TSANLTATYR KLEEMAKQVT NPSSRYYQDE TVVRTVRDSM EWMHKHVYNS EKSIVGNWWD YEIGTPRAIN NTLSLMKEYF SDEEIKKYTD VIEKFVPDPE HFRKTTDNPF KALGGNLVDM GRVKVIAGLL RKDDQEISST IRSIEQVFKL VDQGEGFYQD GSYIDHTNVA YTGAYGNVLI DGLSQLLPVI QKTKNPIDKD KMQTMYHWID KSFAPLLVNG ELMDMSRGRS ISRANSEGHV AAVEVLRGIH
RIADMSEGET KQCLQSLVKT IVQSDSYYDV FKNLKTYKDI SLMQSLLSDA GVASVPRPSY LSAFNKMDKT AMYNAEKGFG FGLSLFSSRT LNYEHMNKEN KRGWYTSDGM FYLYNGDLSH YSDGYWPTVN PYKMPGTTET DAKRADSDTG KVLPSAFVGT SKLDDANATA TMDFTNWNQT LTAHKSWFML KDKIAFLGSN IQNTSTDTAA TTIDQRKLES GNPYKVYVND KEASLTEQEK DYPETQSVFL ESFDSKKNIG YFFFKKSSIS MSKALQKGAW KDINEGQSDK EVENEFLTIS
QAHKQNRDSY GYMLIPNVDR ATFNQMIKEL ESSLIENNET LQSVYDAKQG VWGIVKYDDS VSTISNQFQV LKRGVYTIRK EGDEYKIAYY NPETQESAPD QEVFKKLEQA AQPQVQNSKE KEKSEEEKNH SDQKNLPQTG EGQSILASLG FLLLGAFYLF RRGKNN

【0053】

SEQ ID NOS 7と8はストレプトコッカスニューモニエに由来する。

【0054】

この開示の様々な側面で使用されるCBMは、1、2、3、4以上のCBM70からなることがある。

【0055】

使用するためのCBMは、SEQ ID NO: 7またはそれらの炭水化物結合断片を含む1、2、3、4以上のタンパク質からなることができる。

【0056】

スキルの1つは、有用なCBM70は、配列番号 NO: 7と8の配列同一性または同質性を示す配列(例えば、99%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%)を含むことができることを認識するであろう。全てのこのような変異体または上記配列は、本開示の範囲内に、および用語「CBM70」によって包含されるべきである。同一および/または相同なCBM70配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0057】

要約すると、この開示の様々な側面及び実施形態において使用するための分子は、1つ以上のCBM(例えば、1つ以上のCBM32(s)、1つ以上のCBM47(s)、1つ以上のCBM67(s)、及び/or複数のCBM70(s)からなることができる。

【0058】

使用用の分子は、以下のグループから選ばれた単一のCBMからなることができる。
一つのCBM32、
一つのCBM47、
1つのCBM67と、1つのCBM70。

【0059】

使用用の分子は、以下のグループから選ばれた単一のCBMからなることができる。
一つのCpCBM32、
単独のSpCBM47、
1つのSaCBM67、１つのSpCBM70。

【0060】

「Cp」がClostridium perfringensを意味する場合、「CpCBM32」はCBM32母枝がClostridium perfringensに由来することを意味し、「Sp」はStreptococcus pneumoniaeを意味するため、「SpCBM47」および「SpCBM70」はCBM47および/またはCBM70母枝がStreptococcus pneumoniaeに由来することを意味し、「SaCBM67」はCBM67母枝がStreptomyces avermitilisに由来することを意味する。

【0061】

使用のためのCBMは、複数のCBMまたは複数のCBM(すなわち、2つ以上のCBM)を含むことができる。複数のCBMを構成する分子は、「多価CBM」と呼ばれることができる。多価CBMは、例えば、上述したように、2つ以上のCpCBM、2つ以上のSpCBM、2つ以上のSaCBMからなることができる。多価CBMは、例えば、1つ以上のSp/SaCBMとの1つ以上のCpCBMのような、異なるCBMの混合物を含むことができる。

【0062】

多価CBM分子(例えば、2つ以上のCpCBM32部分を含む分子)は、アミノ酸/ペプチドリンカーによって連結された複数のCBMを含む構築物として調製され得る。各CBMは、例えば、5、10または15のアミノ酸からなるペプチドによって他のペプチドと結合することができる。例として、以下のペプチドのいずれか又はそれ以上を用いて、2つ以上のCBMを結合して多価CBMを生成することができる。
(i)5種のアミノ酸リンカー、
ALNGS (SEQ ID NO: 9)
LQALG (配列番号10)
GNSG (SEQ ID NO: 11)
GGGSG (SEQ ID NO: 12)
GGSLG (SEQ ID NO: 13)
GGGSA (配列番号14)
(ii)10のアミノ酸リンカー、
ALNGSGGGSG (SEQ ID NO: 15)
LQALGGGGSL (配列番号16)
(iii)15のアミノ酸リンカー、
ALNGSGGGSGGGGSG (配列番号17)。

【0063】

従って、本開示の様々な側面及び実施形態(使用、使用のためのCBM、方法及び医薬品)は、集団から選ばれたCBMで構成され、本質的に構成されたCBMで構成され、又は構成された分子を利用することができる。
(i)1つ以上のCpCBM32、
(ii)1つ以上のSpCBM47、
(iii)1つ以上のSaCBM67、
(iv)1つ以上のSpCBM70。

【0064】

使用する分子は、さらに少数化領域を構成することができる。適切なオリゴメリゼーション・ドメインは、例えばトリマーのように、複数の構造を形成するために自己関連性を示す能力を示すことができる。使用のためのオリゴメリゼーション領域は、上述のオリゴメリゼーション特性を有する任意の分子またはそれらの機能的断片を含むことができる。例えば、1つ以上の(例えば2つの) CBM分子は、オリゴメリゼーション・ドメインに結合し、結合し、他は融合することができる。その結果生まれるCBM分子:オリゴメリゼーション・ドメイン「フュージョン」は、細胞成長および/又は活動を調整するための分子として、および/又は、本書で開示される病気および/又は条件のいずれかを治療他は予防するための分子として(1つ以上の「フュージョン」とともに)使用されることができる。

【0065】

適当な少数化領域は、例えば、Pseudomonas eruginosa pseudaminidaseに由来することができる。典型的なPseudomonas aeruginosa pseudaminidase配列アミノ酸配列は、アクセション数PAO579の下に蓄積され、SEQ ID NO: 18(438アミノ酸)として以下に再現された。

【0066】

MNTYFDIPHR LVGKALYESY YDHFGQMDIL SDGSLYLIYR RATEHVGGSD GRVVFSKLEG
GIWSAPTIVA QAGGQDFRDV AGGTMPSGRI VAASTVYETG EVKVYVSDDS GVTWVHKFTL
ARGGADYNFA HGKSFQVGAR YVIPLYAATG VNYELKWLES SDGGETWGEG STIYSGNTPY
NETSYLPVGD GVILAVARVG SGAGGALRQF ISLDDGGTWT DQGNVTAQNG DSTDILVAPS
LSYIYSEGGT PHVVLLYTNR TTHFCYYRTI LLAKAVAGSS GWTERVPVYS APAASGYTSQ
VVLGGRRILG NLFRETSSTT SGAYQFEVYL GGVPDFESDW FSVSSNSLYT LSHGLQRSPR
RVVVEFARSS SPSTWNIVMP SYFNDGGHKG SGAQVEVGSL NIRLGTGAAV WGTGYFGGID
NSATTRFATG YYRVRAWI

【0067】

SEQ ID NO: 18のオリゴマー化領域は、アミノ酸残基333から438(灰色ハイライト)であり、この配列はSEQ ID NO: 19であろう。

【0068】

したがって、使用のためのオリゴマー化ドメインは、配列番号18によって提供されるP. aeruginosa pseudaminidase trimerisationドメイン(PaTD)の約残渣250、275、300、310、320、333、340～350(すなわち、約任意の残渣間を含む約残渣250～約350)～約残渣400、410、420、430または438(すなわち、約から約任意の残渣間を含む約400残渣438～約任意の残渣)を含み得る。例えば、有用な分子は、SEQ ID NO: 18の残渣333から438からなるオリゴメリゼーション領域を利用することができる。

【0069】

この開示の様々な側面及び実施形態において使用するためのさらなる分子は、以下に述べる。

【0070】

使用するための1つの分子は、「Cp2CBM32TD」と称され、この構築物は、それ自体がClostridium perfringens由来の2つのCBM32分子(灰色のハイライト)を含むCp2CBM32単位を含み、ここで、CBM32の2つのコピーは、短いペプチドリンカー分子(破線で下線を引いた)によってタンデムで連結される。この構成はさらに三分位体領域(TD:下線を引いたもの)を構成し、それ自体は別の短いリンカー部(太字下線を引いたもの)を介して2つのCBM32のうちの1つに融合する。例示的なCp2CBM32TDの配列は、SEQ ID NO: 19として提供される。

【0071】

SEQ ID NO: 19
使用する分子の1つは「Sp2CBM47TD」と呼ばれている。これは、Streptococcus pneumoniaeに由来する2つのCBM47分子(灰色のハイライト)から成るSp2CBM47単位を構築する。ここでは、CBM47のコピー2つが短いペプチドリンカー分子(下線を引いた)でつながれている。構築物はさらに、別の短いリンカー部分を介して2つのCBM47のうちの1つにそれ自体融合される三量体化ドメイン(TD:下線付き)を含む(太字下線付き)。模範的なSp2CBM47TDの配列は、SEQ ID NO: 20として提供される。

【0072】

SEQ ID NO: 20
GAMGTPDKFNDGNLNIAYAKPTTQSSVDYNGDPNRAVDGNRNGNFNSGSVTHTRADNPSWWEVDLKKMDKVGLVKIYNRTDAETQRLSNFDVILYDNNRNEVAKKHVNNLSGESVSLDFKEKGARYIKVKLLTSGVPLSLAEVEVFRESGGGSATPDKFNDGNLNIAYAKPTTQSSVDYNGDPNRAVDGNRNGNFNSGSVTHTRADNPSWWEVDLKKMDKVGLVKIYNRTDAETQRLSNFDVILYDNNRNEVAKKHVNNLSGESVSLDFKEKGARYIKVKLLTSGVPLSLAEVEVFRESGGSLGVPDFESDWFSVSSNSLYTLSHGLQRSPRRVVVEFARSSSPSTWNIVMPSYFNDGGHKGSGAQVEVGSLNIRLGTGAAVWGTGYFGGIDNSATTRFATGYYRVRAWI
使用する1つの分子は「Sa2CBM67TD」と命名され、この構築物は、それ自体がStreptococcus avermitilis由来の2つのCBM67分子(灰色のハイライト)を含むSa2CBM67単位を含み、ここで、CBM67の2つのコピーは短いペプチドリンカー分子(破線で下線が付いた)によってタンデムで連結されている。構築物はさらに、別の短いリンカー部分を介して2つのCBM67のうちの1つにそれ自体融合される三量体化ドメイン(TD:下線付き)を含む(太字下線付き)。模範的なSa2CBM67TDの配列は、SEQ ID NO: 21として提供される。

【0073】

配列番号21
GAMAPSLEGSSWIWFPEGEPANSAPAATRWFRRTVDLPDDITGATLAISADNVYAVSVDGAEVARTDLEADNEGWRRPAVIDVLDHVHSGNNTLAVSASNASVGPAGWICVLVLTTASGEKKIFSDASWKSTDHEPADGWREPDFDDSGWPAAKVAAAWGAGPWGRVAGGGSGAPSLEGSSWIWFPEGEPANSAPAATRWFRRTVDLPDDITGATLAISADNVYAVSVDGAEVARTDLEADNEGWRRPAVIDVLDHVHSGNNTLAVSASNASVGPAGWICVLVLTTASGEKKIFSDASWKSTDHEPADGWREPDFDDSGWPAAKVAAAWGAGPWGRVAGGSLGVPDFESDWFSVSSNSLYTLSHGLQRSPRRVVVEFARSSSPSTWNIVMPSYFNDGGHKGSGAQVEVGSLNIRLGTGAAVWGTGYFGGIDNSATTRFATGYYRVRAWI

【0074】

使用する1つの分子は「Sp2CBM70TD」と称され、この構築物は、それ自体がStreptococcus pneumoniae由来の2つのCBM70分子(灰色のハイライト)を含むSp2CBM70単位を含み、ここで、CBM70の2つのコピーは、短いペプチドリンカー分子(破線で下線が付いた)によってタンデムに連結されている。この構成はさらに三分位体領域(TD:下線を引いたもの)を構成し、それ自体は別の短いリンカー部(太字下線を引いたもの)を介して2つのCBM70のうちの1つに融合する。模範的なSp2CBM70TDの配列は、SEQ ID No:22として提供される。

【0075】

配列番号22
GAMENLVENGDFGQTEDGSSPWTGSKAQGWSAWVDQKNSADASTRVIEAKDGAITISSHEKLRAALHRMVPIEAKKKYKLRFKIKTDNKIGIAKVRIIEESGKDKRLWNSATTSGTKDWQTIEADYSPTLDVDKIKLELFYETGTGTVSFKDIELVEVADQLSGGGSGNLVENGDFGQTEDGSSPWTGSKAQGWSAWVDQKNSADASTRVIEAKDGAITISSHEKLRAALHRMVPIEAKKKYKLRFKIKTDNKIGIAKVRIIEESGKDKRLWNSATTSGTKDWQTIEADYSPTLDVDKIKLELFYETGTGTVSFKDIELVEVADQLSGGSLGVPDFESDWFSVSSNSLYTLSHGLQRSPRRVVVEFARSSSPSTWNIVMPSYFNDGGHKGSGAQVEVGSLNIRLGTGAAVWGTGYFGGIDNSATTRFATGYYRVRAWI

【0076】

最初の側面において、本発明に開示される様々な分子は、治療に使用され得る。さらに、本明細書中に開示される様々な分子は、医薬としての使用のためであり得る。このアスペクトの文脈において、リーダは、「本開示される分子」は少なくとも以下を含むことを理解しなければならない。
(i)1つ以上のCBM32を含む分子、
(ii)一つ以上のCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のCBM67を含む分子、
(iv)一つ以上のCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDを含む分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDを含む分子、および
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0077】

1つの側面において、細胞成長および/または細胞活動を調整する方法で使用するためのCBM32からなる分子が提供される。CBM32を構成する分子は、Cp2CBM32TDを構成するか、あるいはCp2CBM32TDとすることができる。

【0078】

別の側面において、細胞成長及び/又は細胞活動を調整する方法で使用するためのCBM47からなる分子が提供される。CBM47を含む分子は、Sp2CBM47TDを含むか、または含むことができる。

【0079】

更なる側面において、細胞成長及び/又は細胞活動を調整する方法で使用するためのCBM67からなる分子が提供される。CBM67からなる分子は、Sa2CBM67TDを構成するか、またはそれらとなることができる。

【0080】

さらに、細胞成長及び/又は細胞活動を調整する方法で使用するためのCBM70からなる分子が提供される。CBM70を含む分子は、Sp2CBM70TDを構成するか、または構成することができる。

【0081】

別の側面は、細胞成長及び/又は活動を調整する方法を提供する。この方法は、細胞とCBM32を含む分子とを接触することからなる。この方法はin vitro法かもしれない。CBM32を構成する分子は、Cp2CBM32TDを構成するか、あるいはCp2CBM32TDとすることができる。

【0082】

追加の側面は、細胞成長及び/又は活動を調整する方法を提供する。この方法は、細胞とCBM47を含む分子とを接触することを含んでいる。この方法はin vitro法かもしれない。CBM47を含む分子は、Sp2CBM47TDを含むか、または含むことができる。

【0083】

更なる側面は、細胞成長及び/又は活動を調整する方法を提供する。この方法は、細胞とCBM67を含む分子とを接触することを含んでいる。この方法はin vitro法かもしれない。CBM67からなる分子は、Sa2CBM67TDを構成するか、またはそれらとなることができる。

【0084】

別の側面は、細胞成長及び/又は活動を調整する方法を提供する。この方法は、細胞とCBM70を含む分子とを接触することを含んでいる。この方法はin vitro法かもしれない。CBM70を含む分子は、Sp2CBM70TDを構成するか、または構成することができる。

【0085】

述べたように、「CBM32を構成する分子」、「CBM47を構成する分子」、「CBM67を構成する分子」および/または「CBM70を構成する分子」は、本質的にそれぞれのCBM32、CBM47、CBM67またはCBM70から構成されるか、またはそれぞれのCBM32、CBM47、CBM67またはCBM70から構成されることがある。

【0086】

上記の側面で言及されている分子のCBM32、CBM47、CBM67又はCBM70構成要素は、完成ワイルドタイプのCBM32、CBM47、CBM67又はCBM70配列を含むことができる(上記の各SEQ ID NOS: 1-8により提供される)。さらに、または、この開示の様々な側面は、ここに開示されているCBM32、47、67又は70の配列のいずれかの炭水化物結合断片を利用することができる(SEQ ID NOS: 1-8の配列を含む)。

【0087】

CBM32、CBM47、CBM67またはCBM70という用語は、さらに、参照CBM32、CBM47、CBM67またはCBM70の配列(SEQ ID NOS: 1-8を含む)から生成される組み換え分子を含むことに留意する必要がある。これらの組換え分子は、繰り返しになるが、全長CBM32、CBM47、CBM67またはCBM70配列またはそれらの炭水化物結合断片を含むことができる。

【0088】

便宜上、CBM32/47/67/70という用語は、上述のすべてのCBM分子(これらの分子は本質的に一つ以上のCBM32(s)、1つ以上のCBM47(s)、1つ以上のCBM67(s)又は1つ以上のCBM70(s)又はこれらのいずれかの炭水化物結合断片で構成されているか、またはそれらで構成されている)を指すために使用される。

【0089】

「変調」という用語は、細胞成長および/または活性の1つ以上の側面における増加または減少を包含することができる。言い換えれば、ここに記載されている分子(例えば、1つ以上のCBM32/47/67/70(s)からなる分子)は、細胞成長および/または活性の特定の側面を抑制するか、あるいは細胞成長および/または活性の他の側面を誘発または刺激することができる。

【0090】

細胞に適用される「成長」および/または「活動」という用語は、細胞の拡散、細胞移動、細胞代謝、細胞分化および/または細胞の形態/表象の1つ以上に関連するプロセスおよび/または現象を包含することができる。「成長」および/または「活動」という用語は、さらに、特定の外生的および/または内生的要因または刺激に対する細胞の反応を含み得る。これには、例えば、抗菌システムのある種の化合物への反応、サイトキン、ケモキンおよび1つ以上の環境要因(光、温度、圧力、機械的ストレスなど)が含まれる。したがって、本明細書中に開示されるCBM32/47/67/70分子は、細胞応答性の量を調節(阻害、減少または増加)するために使用され得る。

【0091】

CBM32/47/67/70は、細胞の成長および活動を調整することが示されていることを考えると(上述のように)、これらの分子は、多くの関連する医学および獣医学の応用および使用に置かれることができることを認識するであろう。

【0092】

例えば、1つ以上のCBM32/47/67/70を含む分子は異常細胞成長または異常細胞活動が要因となる病気または状態の処理および/または防止に適用することができるであろう。

【0093】

ここに開示される分子は、CBM32/47/67/70を含む。これは、異常な細胞成長および/または活性に寄与し/または特徴づけられる病気および/または条件の治療および/または予防に使用される。CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0094】

さらに、開示されるのは、CBM32/47/67/70を含む分子を用いて、異常な細胞成長および/または活性に引き起こされ、寄与され/または特徴づけられる病気および/または条件の処理および/または防止のための医薬品を製造することである。

【0095】

CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0096】

本開示はまた、異常な細胞成長および/または活性に寄与し、および/または特徴づけられる、および/または、それらを必要とする被検者にCBM32/47/67/70を含む治療有効量の分子を管理する工程を含んでいる当該方法を提供する。CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0097】

異常な細胞の成長および/または活性に起因し、寄与し、あるいは特徴づけられる病気には、例えば、良性または悪性と呼ばれるものを含む細胞の拡散障害が含まれ得る。例えば、用語「細胞増殖障害」は、「癌」と総称される疾患および/または条件を含み得る。用語「癌」は、乳癌、結腸がん、肺癌、卵巣癌、神経膠腫および黒色腫の形成と称される癌を含むが、これらに限定されない。特に、癌(または細胞増殖障害)という用語は、結腸がん、肺癌および卵巣癌に関連し得る。

【0098】

「ガン」という用語にはまた、「白血病」(慢性および深刻の両方)と総称される病気および/または条件、および粘膜関連の表面または組織に影響を及ぼすガンを含むこともある。

【0099】

したがって、ここに記載されているCBM32/47/67/70を含む分子は、ガンの処理及び/又は予防に出願することができる。CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0100】

したがって、ガンの治療および/または予防に使用するためのCBM32/47/67/70からなる分子が提供される。CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0101】

さらに、ガンの処理および/または防止のための薬品の製造のために、CBM32/47/67/70を含む分子の使用が提供されている。CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0102】

また、癌を治療および/または予防する方法であって、治療有効量のCBM32/47/67/70を含む分子を、それを必要とする被検者に投与する工程を含む方法も提供される。CBM32/47/67/70を含む分子は、以下のグループから選択され得る。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)1つ以上のSpCBM47を含む分子、
(iii)1つ以上のSaCBM67を含む分子、
(iv)1つ以上のSpCBM70を含む分子、
(v)Cp2CBM32TDからなる分子、
(vi)Sp2CBM47TDからなる分子、
(vii)Sa2CBM67TDからなる分子、
(viii)Sp2CBM70TDからなる分子。

【0103】

CBM32/47/67/70を含む分子は、ガンの処理および/または防止に有用であるという一般的な発見に加えて、1つ以上のCBM32(s)を含む分子は、多くの特定のガンの処理および/または防止に特定の適用を見出すことができる。

【0104】

従って、本開示は、さらに、1つ以上のCBM32(s)から成るグループから選択されたガンの処理及び/又は予防に使用するための分子を提供する。
(a)卵巣がん、
(b)肺癌、
(c)結腸がん、および
(d)乳癌。

【0105】

以上を考慮して、開示は、以下を提供する。
(i) ガンの治療および/または予防に使用するための、1つ以上のCBM32から成る分子、
(ii) ガンの処理および/または防止のための薬品の製造における、1つ以上のCBM32からなる分子の使用、
(iii) それを必要とする被検者に、1つ以上のCBM32からなる治療有効量の分子を施術することによって、がんを治療し、または/または予防する方法。

【0106】

(i)、(ii)、(iii)および(iii)の各々について、ガンは、以下のグループから選ばれた1つ以上である。
(a)卵巣がん、
(b)肺癌、
(c)結腸がん、および
(d)乳癌。

【0107】

言い換えれば、本開示CBM32の各々は、これら個々のがんの処理および/または防止に有用であることに加えて、2、3、または4つのがんのすべて(a)から(d)の処理および/または防止に使用されることがある。

【0108】

本明細書に開示されるCBM32のいずれかを、1、2、3、または4種類のがんのすべて(a)または(d)の治療および/または予防に使用するのに適したCBM32を含むことができる。実施例を挙げると、ある場合には、そのような方法で使用する分子は、以下のグループから選択することができる。
(i)1つ、2つ以上のCBM32からなる分子、
(ii)1つ、2つ以上のCpCBM32(s)からなる分子、
(iii)SEQ ID NO: 1、2、またはそれらの炭水化物結合部の配列からなる1つ以上のペプチドからなる分子、
(iv)CpCBM32TDからなる分子。

【0109】

発明者たちは、CBM32は広範囲のガンに対して一般的な効能があることを確認したが、場合によっては、1つ以上のCBM32からなる分子が特定のガン型に対して同レベルの効能を示すことができないこともある。従って、1つ以上のCBM32(s)からなる分子に関しては、ガンの処理および/または予防は、メラノマ、膵臓がんおよびグリオマから選ばれた1つ以上のガンの処理を排除することができる。

【0110】

本開示はさらに、耐火性(または抵抗性)ガンの治療および/または予防に使用するためのCBM32および/またはCBM40からなる分子を提供する。

【0111】

ここに既に記載されているCBM32に加えて、使用のための例示的なCBM40は、Vibrio cholerae NanH sialidase (VcCBM:CBM40)および/またはStreptococcus pneumoniae NanA sialidase (SpCBM:またCBM40)からの同等の(または同質の)ドメインの塩酸結合領域を含むことができる。もちろん、「CBM」および「CBM40」という用語の範囲内には、他の生物に存在する類似の又は同質の塩酸結合モジュールが含まれる。典型的なVibrio cholerae NanH sialidaseアミノ酸配列は、アクセション番号A5F7A4の下に沈着し、SEQ ID NO: 23(781アミノ酸)として以下に再現される。

【0112】

MRFKNVKKTA LMLAMFGMAT SSNAALFDYN ATGDTEFDSP AKQGWMQDNT NNGSGVLTNA
DGMPAWLVQG IGGRAQWTYS LSTNQHAQAS SFGWRMTTEM KVLSGGMITN YYANGTQRVL
PIISLDSSGN LVVEFEGQTG RTVLATGTAA TEYHKFELVF LPGSNPSASF YFDGKLIRDN
IQPTASKQNM IVWGNGSSNT DGVAAYRDIK FEIQGDVIFR GPDRIPSIVA SSVTPGVVTA
FAEKRVGGGD PGALSNTNDI ITRTSRDGGI TWDTELNLTE QINVSDEFDF SDPRPIYDPS
SNTVLVSYAR WPTDAAQNGD RIKPWMPNGI FYSVYDVASG NWQAPIDVTD QVKERSFQIA
GWGGSELYRR NTSLNSQQDW QSNAKIRIVD GAANQIQVAD GSRKYVVTLS IDESGGLVAN
LNGVSAPIIL QSEHAKVHSF HDYELQYSAL NHTTTLFVDG QQITTWAGEV SQENNIQFGN
ADAQIDGRLH VQKIVLTQQG HNLVEFDAFY LAQQTPEVEK DLEKLGWTKI KTGNTMSLYG
NASVNPGPGH GITLTRQQNI SGSQNGRLIY PAIVLDRFFL NVMSIYSDDG GSNWQTGSTL
PIPFRWKSSS ILETLEPSEA DMVELQNGDL LLTARLDFNQ IVNGVNYSPR QQFLSKDGGI
TWSLLEANNA NVFSNISTGT VDASITRFEQ SDGSHFLLFT NPQGNPAGTN GRQNLGLWFS
FDEGVTWKGP IQLVNGASAY SDIYQLDSEN AIVIVETDNS NMRILRMPIT LLKQKLTLSQ
N

【0113】

配列番号23のCBM領域は、アミノ酸残基25～216であり、この配列は、配列番号24であってもよい。

【0114】

典型的なStreptococcus pneumoniae NanA sialidaseアミノ酸配列は、アクセス数P62575の下に沈着し、SEQ ID NO: 25(1035アミノ酸)として以下に再現された。

【0115】

MSYFRNRDID IERNSMNRSV QERKCRYSIR KLSVGAVSMI VGAVVFGTSP VLAQEGASEQ
PLANETQLSG ESSTLTDTEK SQPSSETELS GNKQEQERKD KQEEKIPRDY YARDLENVET
VIEKEDVETN ASNGQRVDLS SELDKLKKLE NATVHMEFKP DAKAPAFYNL FSVSSATKKD
EYFTMAVYNN TATLEGRGSD GKQFYNNYND APLKVKPGQW NSVTFTVEKP TAELPKGRVR
LYVNGVLSRT SLRSGNFIKD MPDVTHVQIG ATKRANNTVW GSNLQIRNLT VYNRALTPEE
VQKRSQLFKR SDLEKKLPEG AALTEKTDIF ESGRNGKPNK DGIKSYRIPA LLKTDKGTLI
AGADERRLHS SDWGDIGMVI RRSEDNGKTW GDRVTITNLR DNPKASDPSI GSPVNIDMVL
VQDPETKRIF SIYDMFPEGK GIFGMSSQKE EAYKKIDGKT YQILYREGEK GAYTIRENGT
VYTPDGKATD YRVVVDPVKP AYSDKGDLYK GNQLLGNIYF TTNKTSPFRI AKDSYLWMSY
SDDDGKTWSA PQDITPMVKA DWMKFLGVGP GTGIVLRNGP HKGRILIPVY TTNNVSHLNG
SQSSRIIYSD DHGKTWHAGE AVNDNRQVDG QKIHSSTMNN RRAQNTESTV VQLNNGDVKL
FMRGLTGDLQ VATSKDGGVT WEKDIKRYPQ VKDVYVQMSA IHTMHEGKEY IILSNAGGPK
RENGMVHLAR VEENGELTWL KHNPIQKGEF AYNSLQELGN GEYGILYEHT EKGQNAYTLS
FRKFNWDFLS KDLISPTEAK VKRTREMGKG VIGLEFDSEV LVNKAPTLQL ANGKTARFMT
QYDTKTLLFT VDSEDMGQKV TGLAEGAIES MHNLPVSVAG TKLSNGMNGS EAAVHEVPEY
TGPLGTSGEE PAPTVEKPEY TGPLGTSGEE PAPTVEKPEY TGPLGTAGEE AAPTVEKPEF
TGGVNGTEPA VHEIAEYKGS DSLVTLTTKE DYTYKAPLAQ QALPETGNKE SDLLASLGLT
AFFLGLFTLG KKREQ

【0116】

配列番号25のCBM領域は、アミノ酸残基121～305であり、この配列は、配列番号26であってもよい。

【0117】

このように、難治性がんの治療に使用する分子は、SEQ ID NO: 23または24の配列を有するタンパク質またはペプチドまたはそれらのシリアル酸結合フラグメントを含むことができる。例えば、有用な塩酸結合分子は、V. cholerae(SEQ ID NO: 23によって提供された)のナンH遺伝子(サイアリダーゼをエンコードしている)のシアル酸結合領域によってエンコードされたプロテイン酸性分子、または他の有機体に存在する同等または同質性遺伝子(例えば、S. pneumoniaeの同等/同質性nanA sialidase遺伝子:SEQ ID NO: 25参照)によってエンコードされたプロテイン酸結合部を含むことができる。難治性がんの治療に使用するためのCBM40は、SEQ ID NOS: 23または24のV. cholerae sialidase分子の約残基1、5、10、15、25または30(すなわち、1～30、または任意のアミノ酸残基から)から約残基150、175、200、210、216、220～781(それらの間の任意の残基を含む150～781までの任意の残基)を含んでもよい。例えば、難治性癌の治療に使用するためのCBM40は、上記の配列番号23の残基25～約残基216に対応する配列を有するペプチドを含み得る。

【0118】

難治性ガンの治療に使用するための更なる適当なCBM40は、SEQ ID NO: 25または26の配列を有するタンパク質またはペプチドまたはそれらのシリアル酸結合フラグメントを含むことができる。例えば、有用なものは、Streptococcus pneumoniae nanA gene (サイアリダーゼをエンコードしている)のシアル酸結合領域によってエンコードされたプロテイン性基質を含み得る。ガンの治療に使用するためのBMC40は、80、90、100、110、120、121から130(すなわち、80から130のどれか、その間のどれかを含む)から約250、275、300、305、310、320-1035(すなわち、その間のどれかを含む、約250-1035のどれかの残渣)まで、SEQ ID NOS: 25と26のS. pneumoniae sialidase分子からなることができる。例えば、使用のためのCBM40は、上記の配列番号25の残基121～約残基305に対応する配列を有するペプチドを含み得る。

【0119】

有用なCBM40は、配列番号23、24、25および26のCBM40配列とある程度(例えば、99%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%または60%)の配列同一性または相同性を示す配列を含み得ることを、当業者は理解するであろう。そのような変異または分岐配列はすべて、本開示の範囲内および用語「CBM40」によって包含されるべきである。同一および/または相同なCBM40配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0120】

難治性癌の治療に使用するための分子は、1つ以上のCBM40を含み得る。分子は、単一又は個々のCBM40-例えば、単一のVcCBM40又は単一のSpCBM40-から構成され得る。別の方法として、使用のための分子は、複数又は複数の(すなわち、2つ以上の) CBM40を含むことができる。複数のCBMを構成する分子は、「多価」分子またはCBMと呼ばれることがある。多価CBMは、例えば、2つ以上のVcCBM40sまたは2つ以上のSpCBM40sを含み得る。多価CBMは、例えば、1つ以上のSpCBMを有する1つ以上のVcCBMのような、異なるCBMの混合物を含み得る。

【0121】

耐火性(または抵抗性)ガンの治療に使用するためのCBM32および/またはCBM40を含む分子は、以下のグループから選択することができる。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)Cp2CBM32TDからなる分子、
(iii)Vc2CBM40TDからなる分子、
(iv)Sp2CBM40TDからなる分子。

【0122】

さらに、本開示は、耐性(又は抵抗性)ガンの治療のための薬品の製造のために、CBM32及び/又はCBM40からなる分子を使用することを提供する。CBM32及び/又はCBM40を含む分子は、以下のグループから選択することができる。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)Cp2CBM32TDからなる分子、
(iii)Vc2CBM40TDからなる分子、
(iv)Sp2CBM40TDからなる分子。

【0123】

また、開示されるのは、耐火性(又は抵抗性)ガンを治療する方法であり、CBM32及び/又はCBM40を含む治療効果のある分子を必要とする被検者を管理する方法である。CBM32及び/又はCBM40を含む分子は、以下のグループから選択することができる。
(i)1つ以上のCpCBM32を含む分子、
(ii)Cp2CBM32TDからなる分子、
(iii)Vc2CBM40TDからなる分子、
(iv)Sp2CBM40TDからなる分子。

【0124】

ここに開示されている、または本当に同じものを含む被検者を管理する被検者は、(i)細胞拡散障害、(ii)ガン、(ii)その他の病気および/または条件、(iv)異常な細胞の成長および/または活動により引き起こされ、あるいは特徴づけられる病気または状態、(v)乳がん、(b)大腸ガン、(c)肺がん、(d)卵巣ガン、(e)グリオマおよび(f)メラノマから成るグループから選ばれた1つ以上のガン、(6)肺がん、(b)大腸ガンおよび(c)卵巣ガンから成るグループから選ばれた1つ以上のガン、および/または(v)耐性(または抵抗性)ガンから成るグループから選ばれた1つ以上のガンである。

【0125】

加えて、またはその代わりに、任意の被検者は、(i)細胞増殖障害、(ii)癌、(iii)本明細書に記載される任意の他の疾患および/または条件、(iv)異常な細胞増殖および/または活性に起因または特徴づけられる疾患または条件、(v)(a)乳癌、(b)結腸がん、(c)肺がん、(d)卵巣癌、(e)神経膠腫および(f)黒色腫、または(vi)(a)肺がん、(b)結腸がん、および(c)卵巣癌からなる群から選択される1つ以上の癌になり得る。

【0126】

難治性または抵抗性癌は、第一選択薬または好ましい薬物(標準的または好ましい化学療法または放射線療法の選択肢を含む)に反応しない癌を含み得る。難治性または抵抗性のがんには、シスプラチンに抵抗性(または反応しない)のがんが含まれる可能性がある。難治性がんまたは抵抗性がんという用語は、難治性または抵抗性卵巣がんを包含しうる。難治性(卵巣)がんや抵抗性(卵巣)がんという用語には、シスプラチンに抵抗性を示す卵巣がんが含まれることがある。

【0127】

したがって、本開示は、(i)難治性(または耐性)卵巣癌の治療に使用するための、(i)1つまたは複数のCpCBM32(複数可)を含む分子、(ii)Cp2CBM32TDを含む分子、(iii)Vc2CBM40TDを含む分子、および/または(iv)Sp2CBM40TDを含む分子を提供する。

【0128】

本明細書に記載される治療のいずれも、本明細書に記載される様々な疾患および障害の1つ以上の症状を治療、改善または軽減するための本開示の1つ以上の分子の使用を含み得ることを理解されたい。たとえば、がんのような疾患の症状には、チュームや細胞の塊の存在などがある。このように、ここに記載される分子は、チューム形成及び/又はその転換を調整する(例えば、停止、遅らせる、抑制する、または減少させる)ために使用されてもよい。また、これらの分子は、チューム全体の大きさを減少させるために使用されることもある。大きな腫瘍や進行性腫瘍など、ある種の腫瘍は、最初に縮小した場合には手術で切除しやすくなる。典型的には、チュームのサイズを縮小するために、ケモおよび/または上記セラピーベースのトリートメントが使用されるかもしれないが、このようなトリートメントは、CBM32/47/67/70を含む分子の使用に基づくトリートメントによって置き換えられ/または補足されるかもしれない。先に述べたように、CBM32/47/67/70を含む分子は、細胞成長及び/又は活動を調整する能力を示し、したがって、理論に縛られることを望まないで、チューマーのサイズに影響を与える開示された分子のいずれかの能力を支える機構は、分子の細胞拡散、分化及び/又は代謝の調整効果に根ざすことができる。

【0129】

したがって、上記を考慮すると、腫瘍の治療の成功は、腫瘍サイズの縮小、観察されたまたは検出可能なレベルの腫瘍転移、腫瘍形成組織内の血管新生および/または組織浸潤の低下によって特徴づけられ得る。

【0130】

この開示の分子は、チュームの生長、発達および/現像それを必要とする被検者の移動を調整する(例えば抑制現像減少させる)方法で使用されることがある。ここに記載される分子は、チュームの現像、発達、および/または移行を調整するのに使用するための、または、同じことを達成するために薬品の製造において使用するための組成物として定式化され得る。この開示はまた、チュームの治療に使用するためのCBM32/47/67/70からなる分子を提供する。さらに、腫瘍を治療するための医薬の製造のためのCBM32/47/67/70を含む分子の使用が記載される。また、本開示は、チュームを必要とする被検者(またはチュモリゲン組織)にCBM32/47/67/70を含む分子を管理することで構成される、チュームを処理する方法を提供する。

【0131】

以前に定義されているように、「それを必要とする被検者」という言葉は、腫瘍を有すると疑われるか、腫瘍および/または腫瘍の素因および/または腫瘍に対する感受性があると同定される腫瘍および/または被検者と診断されたあらゆる被検者を包含することができ、「腫瘍」という言葉には、難治性または抵抗性腫瘍が含まれることがある。「腫瘍」という用語には、難治性または抵抗性の卵巣癌腫瘍が含まれうる。

【0132】

従って、本開示は、CBM32/47/67/70を含む、細胞成長および/または活性のモジュレーターとして確認されている分子のための様々な用途を提供する。所与の分子(CBM32/47/67/70を含む)は、本特許出願の例のセクションに記載された様々な実験及びアッセイを通して、細胞成長及び/又は活動のモジュレーターとして特定されることができる。例えば、細胞創傷スクラッチアッセイは、所与の「テスト」分子が細胞成長、細胞移動および/または活性を調整する必要な能力を示すかどうかを決定するのに適応するアッセイの一例である。さらに、または代替的に、細胞の拡散、成長および/または活性に対する試験剤(例えばCBM32/47/67/70を含む分子)の効果を決定するために、BrdU細胞拡散アッセイを使用することができる。簡単に言うと、細胞が成長し、拡散するにつれて、細胞はBrdUを補充した媒体で栽培され、BrdUはチミジンの置換としてde novo-syned DNAに組み込まれる。このラベルは子細胞と呼ばれ、BrdUの取り込み量は細胞の拡散/成長の測定または指標として使用することができる。BrdU検出は、BrdUに特異性または親和性のある抗生物質を使用することによって達成することができる。

【0133】

他の場合、セルティターグロ(R)2.0アッセイ(CTG(R)2.0)のような代謝ベースのアッセイを用いて、細胞の拡散、成長および/または活性に対する試験剤(たとえばCBM32/47/67/70を含む分子)の影響を決定することができる。このようなアッセイでは、多数の代謝活性細胞を決定するために、ATP (アデノシン三リン酸)の量を評価してもよい(したがって、生存細胞の測定値を提供しうる)。試験剤を用いて処理した後の生存細胞数は、細胞の拡散/成長の測定値または指標として使用することができる。

【0134】

また、または追加的に、Cya QUANT(R)直接細胞拡散アッセイのようなDNA汚染ベースのアッセイを用いて、細胞の拡散、成長および/または活性に対する試験剤(たとえばCBM32/47/67/70を含む分子)の影響を決定することができる。このようなアッセイでは、細胞パーマ及びDNA結合色素のようなDNA色素を用いて、生存細胞数を決定することができる。繰り返しになるが、試験剤で処理した後の生存細胞数は、細胞の拡散/成長の測定値または指標として使用することができる。

【0135】

従って、開示は、細胞活性の変調アッセイ(例えば、細胞創傷スクラッチアッセイ)を通して、細胞成長および/または活性を変調する能力を示す分子に関連することができる。この目的のために、本開示はさらに、細胞成長及び/又は活性を調整する方法又はここに記載された各種医療及び/又は獣医療応用のために使用する分子(CBM32/47/67/70を含む分子を含む)を識別する方法を提供する。前記方法、細胞成長及び/又は活性に及ぼすテスト複合物の影響を報告することができるアッセイを受験することができるアッセイを受験することで構成されており、このテスト複合体はCBM32/47/67/70を含む分子であり、また、アッセイが細胞成長及び/又は活性のいかなる側面にも影響を及ぼすと報告する場合には、本記載のタイプの病気及び/又はコンディションの処理及び/又は予防に有用であろう。細胞成長および/または活性に対する試験化合物体の影響を報告することができるアッセイは、本書に記載されている細胞創傷アッセイ、BrdU型、CellTiter-Glo(R)2.0型および/またはCya QUANT(R)直接細胞拡散アッセイである。

【0136】

CBM32/47/67/70を構成する分子は、そのエンティティを何らかの組織または細胞にターゲティングまたは配達する目的で結合、結合、または関連する他のエンティティとして更なる応用を見出すことができる。

【0137】

この種の分子は、別名では「治療弾頭」または「結合型」として知られている。理論に縛られることを望まず、この開示の分子(例えばCBM32、CBM47、CBM67および/またはCBM70)の中で構成されうる種々のCBMに対するリガンドの存在は、特定の細胞レセプターおよび膜結合分子において、本記載の様々な分子を、当該細胞または組織に結合ヘテロロゴ分子(すなわち、CBM32/47/67/70を含む分子とは異なった、また異なる分子)を送り出す手段として利用することができるかもしれない。このような、結合した分子は、ガンの治療において有用であり、ここに記載される分子(細胞の表面に表される炭水化物への親和性を示す)が、それらに直接治療および/または細胞中毒モイテイを運ぶために使用されるかもしれない。

【0138】

例として、ここに記載されているような分子(CBM32/47/67/70分子のいずれかを含む)は、例えば、治療及び/又はサイトトキシックである1つ以上の(例えば、2、3、4又はそれ以上の)モイティーに結合することができる。従って、本開示はCBM32/47/67/70分子結合体に関する。

【0139】

CBM32/47/67/70分子共役は、異種部分に共役された(結合された、結合された、または他の方法で結合された)本開示のCBM32/47/67/70分子を含み得る。異性体の部分は、CBM32/47/67/70分子の一部に結合した、および/または治療トキシックな部分を含み得る。

【0140】

例えば、ヘテロロジー部分は、CBM32/47/67/70分子の一方または両端に結合することができる。異質部は、CBM32/47/67/70分子の内部部分に追加または交互に結合(または結合)することができる。異性基部がCBM32/47/67/70分子に結合されるが、分子(およびその結合)は、CBM32/47/67/70分子の炭水化物結合特性を(実質的に)妨げたり、無力化したり、あるいは減少させたりしてはならないことは、理解されるであろう。

【0141】

述べたように、異種部分は、CBM32、CBM47、CBM67またはCBM70分子のいずれか1つに対するリガンドを含むレセプターを発現する細胞または組織に影響を及ぼす疾患の治療に有用な薬物であり得る。例えば、この薬はガン等の治療に使用するための安価な母性薬である。異性の部分は、細胞内でアポトーシスを殺したり誘発したりすることができる細胞中毒の部分かもしれない。異数の部分は、特定の細胞を特定の組織に、または特定の組織に集めることができる分子を含んでいることがある。例えば、ヘテロロゴの部分は、たとえば、T細胞をたとえばチュームまたはガン組織に集める手段として使用され得るT細胞レセプター(TCR)である。

【0142】

本開示は、本明細書中に記載される種々の用途、医薬および方法において使用するための組成物を提供し得る。したがって、ここに記載されているCBM32/47/67/70を含む分子のいずれかを使用のために定式化することができる。

【0143】

便宜上、また、組成物、製剤等を説明する以下のセクションを参照して、ここに記載されているCBM32/47/67/10を含む両分子および同一を構成する全ての活用体(例えば、CBM32/47/67/70:薬物活用体/フュージョン)は、「CBM32/47/67/70を含む分子」の総称の下に含まれることに注意しなければならない。

【0144】

CBM32/47/67/70を含む分子は、使用のため、また、治療用又は医薬組成物として定式化することができる。種々の組成は、ここに記載される1つ以上の分子を含むことができ、また、所与の処理には、これらの組成のうちの1つ以上の投与(同時又は別途)を必要とすることができる。本開示による組成物は、例えば、分子、小分子、抗毒素、オリゴヌクレオチドなど、1つ以上の病気および/または条件の処理に有用な、1つ以上の他の治療モイティーをさらに含むことに注意しなければならない。加えて、または、代替的に、CBM32/47/67/70を含む分子を、1つ以上の(異なる)治療的エンティティと共に、又はそれ以外の(異なる)治療的エンティティが、同一又は別の病気の治療のために使用されることができる、一又はそれ以上の(異なる)治療的エンティティと共に、管理することができる。「一緒に投与」という用語は、CBM32/47/67/70を、1つ以上の他の治療機関の投与の前、後、及び/又は同時に投与することを含む。

【0145】

ここに記載される分子は、娯楽(口頭、両親、及び/又は時事的な管理を含む)のために形成され得るし、技能の1つは、正確な定式化は、管理のルートにより異なることを認識するだろう。

【0146】

本発明による医薬組成物は、従来から調製されてもよく、これらの物質は、医薬に慣用的に使用され、例えば、Remington's The Sciences and Practice of Pharmacy, 22nd 版 (Pharmaceutical Press 2012)および/またはHandbook of Pharmaceutical Excipients, 7th edition (Roweら、Pharmaceutical Press, 2012)に記載されているように、これらの文献および参照により全体が組み入れられている。

【0147】

本開示(それは、CBM32/47/67/70を含み、また、本書に記載されたいかなる医薬品又は方法においても使用するための組成物であり、細胞成長及び/又は活動及び/又はがん治療のための調整の方法を含む)の治療剤又は薬品組成物は、1つ以上の薬事的に受け入れられる補助剤、担体、補助剤及び緩衝剤と共に調合されることができる。組成物は、口頭で(粘膜を含む)、親中で、腹内で、腹筋内で、腹筋内で、筋肉下で、皮下で、静脈で、又は所望の効果を達成するのに有用な他の経路を介して、与えられる(この場合、効果には、細胞成長/活動の調整、治療又は同じ又は/又はガンに関連する疾病/状態の予防、及び/又はチューム成長の調整が含まれる)。前述したように、選ばれた投与経路によって、配合の正確な構成が異なることもある。

【0148】

CBM32/47/67/70を含む分子を含み、被検者への投与のための治療剤または薬品配合は、複合物やその炭水化物結合特性を不活性化または変性させることができる、分子、酸および他の自然な化合物/条件(たとえば、抗毒物を含む化合物、電池およびその過程を含む)の作用から分子を保護する物質に包まれ、包まれ、または包まれることができる。

【0149】

本稿に記載されている分子を構成する組成において使用することができる種々の標準的及び従来の添加物の中には、両親、経口、口内(粘膜を含む)及びCBM32/47/67/70を含む分子と無害に反応しないその他の投与経路に適した薬学的に許容される有機又は無機の運搬物質が含まれる。

【0150】

CBM32/47/67/70を含む分子が親の投与のために定式化される場合、その組成物は不毛であるかもしれない。

【0151】

組成物は、油性又は水溶液、吊り下げ及び/又は乳化を含むことができる。

【0152】

他の実施形態では、組成は、例えば、(溶存性又は生分解性の)フィルム、ペッサリー又は注入(沈殿物を含む)のような注入の形態をとることができる。

【0153】

ここに記載される分子を含む製剤は、安定剤、湿らせた剤、乳化剤、塩(浸透圧力に影響を与えるために使用される)、緩衝剤、および/または活性化合物と有害に反応しないその他の物質と混ぜてもよい。

【0154】

ここに記載されている分子の1つ以上は、口頭で定式化され、管理されてもよい。先に述べたように、口頭での投与は、それ自体で鼻内および/または吸入による投与を含む粘膜行政を含んでいるであろう。

【0155】

使用するための組成物には、口頭での管理に適した固形の剤形が含まれることがある。例えば、カプセル、タブレット端末、ピル、パウダー、グラニュールなどである。所与の固形量の形態では、CBM32/47/67/70を含む分子(または、同じものを含むどんな共役体でも)に、少なくとも一つの不活性な薬事許容可能な添加物を混ぜることができる。適切な賦形剤の例は、この分野の当業者に公知であるが、例えば、充填剤または増量剤、湿潤剤、湿潤剤、結合剤、崩壊剤、溶液遅延剤、吸収促進剤、吸着剤、潤滑剤またはそれらの混合物を含むことができる。タブレット端末、ピルまたはカプセルはさらに緩衝剤を含んでいる。また、タブレット端末、ドラゲ、カプセル、ピル、及び/又は顆粒などの固形の量は、胃腸管環境及び/又は胃酸を防ぐ被覆物及び貝類と共に調製することができる。

【0156】

固形の量の形態は、不透明化剤を含み、また、腸管の特定の部分(この場合、CBM32/47/67/70またはそれを含む共役物からなる分子)の遅れた放出を確実にするために製剤することができる。

【0157】

経口投与のための固体組成物は、CBM32/47/67/70(又は同じものを活用した)を含む各量を含む単位量の形態で作成することができる。所与の固体線量形態の中に含まれるCBM32/47/67/70(またはそれを含む共役体)を含む分子の正確な量は、意図する用途により異なる。固体組成は、「単位用量」を含むことができる。これは、治療期間中に所望効果(例えば、細胞成長および/または活性の変調)を生み出すように計算されたCBM32/47/67/70(または同じものを含む共役物)を含む量を含む単位である。

【0158】

経口投与のための液体量の形態には、(記載されているように)エマルション、ソリューション、サスペンション、シロップ、およびエリキシルが含まれることがある。混合物または組成物に加えて、液体投薬形態は、本技術によく用いられる不活性溶媒、例えば水またはその他の溶媒、溶解剤および乳化剤を含んでいることがある。

【0159】

開示された分子のいずれも適当な量で使用することができる。すでに述べたように、酸性分子は口、粘膜、あるいは上記の行政のために定式化され得るので、正確な定式化は意図された投与ルートに依存することがある。所与の線量に存在するCBM32/47/67/70を含む分子の量は、0.1mmug-1000mmugの領域であることができる。例えば、約0.1μg、0.2μg、0.3μg、0.4μg、0.5μg、1μg、10μg、20μg、25μg、50μg、100μg、200μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μgまたは900μgの量である。CBM32/47/67/70分子の選択された量は、薬事的に受け入れられる賦形剤、賦形剤および/または緩衝液の特定の体積で定式化することができる。賦形剤、溶剤、緩衝液の体積は、約10mmL～5mlであることがある。例えば、必要量のCBM32/47/67/70分子を、約15μL、20μL、25μL、30μL、35μL、40μL、45μL、50μL、55μL、60μL、65μL、70μL、75μL、80μL、85μL、90μL、95μL、100μL、200μL、250μL、300μL、400μL、500μL、600μL、700μL、800μL、900μL、1mL、2mL、3mLまたは4mLと組み合わせる(または処方する)ことができる。例えば、100マイクログラムのCBM32/47/67/70分子を約250マイクロリットルの賦形剤と組み合わせて、400マイクログラム/mlの最終濃度を得ることができる。例えば、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、500μg/mL、600μg/mL、700μg/mL、800μg/mLまたは900μg/mLの濃度の投与量を含めて、約0.1μg/mL～1mg/mLの濃度の投与量を用いることができる。

【0160】

CBM32/47/67/70分子を使用し、細胞の拡散や差別化障害(がんなど)の治療や防止の一環として、数日間、数ヶ月間、数年にわたって複数回、治療を行う。例えば、最初の(または最初の)投与の後、CBM32/47/67/70分子を約(1/2日)後、3、4、5、6、7、17、21、28、および/または35日後に再度注入することができる。時間の日にも、CBM32/47/67/70分子を1、2、3回以上、あるいはそれ以上、服用することができる。毎回、CBM32/47/67/70分子を(適当な治療に影響すると考えられる道筋、細胞拡散および/または区別障害の発生に対する予防薬を誘発するのに最良と考えられる道筋で)使用することができる。

【発明を実施するための形態】

【0161】

本発明は、以下の図を参照することにより、詳細に説明される。

【図面の簡単な説明】

【0162】

【図1】拡散データ(BrdU取り込みアッセイ)である。異なる癌細胞株(メラノーマ(a)、A2058)、乳房((b)、MDA.MB.231)、膵臓((c)、PANC1)および肺(((d)、A549)を、Cp2CBM32TD (400μg/mL)、PBS (制御)、シアル酸結合CBM40剤(Sp2CBMTD (400μg/mL)、Vc2CBMTD (400μg/mL)またはVc4CBM (400μg/mL))またはシアル酸結合ヌルCBM40変異体(Sp2(R274Q)CBMTD(400μg/mL))で処理し、24時間放置した。その後、2～6時間、BrdUを用いて電池をインキュベートした。DNAに組み込まれたBrdUの量を測定するためにELISAアッセイを行った。これは細胞の成長/拡散をアッセイするための標準的なアッセイ法である。方法分散分析を用いて、対照群に対して統計的有意性を示した(****で表されるp<0.0001、***で表されるp<0.001、**で表されるp<0.01、*で表されるp<0.1)。

【図2】拡散データ (BrdU 取り込みアッセイ)である。異なる癌細胞株((a)、膠腫(T98G)、結腸((b)、SW620)および卵巣((c)、PE014)を、Cp2CBM32TD (400μg/mL)、PBS (制御)、シアル酸結合CBM40剤(Sp2CBMTD (400μg/mL)、Vc2CBMTD (400μg/mL)またはVc4CBM (400μg/mL))またはシアル酸結合ヌルCBM40変異体(Sp2(R274Q)CBMTD(400μg/mL))で処理し、24時間放置した。その後、電池をBrdUアッセイに被検者し、2～6時間インキュベートした。DNAに組み込まれたBrdUの量を測定するためにELISAアッセイを行った。これは細胞の成長/拡散をアッセイするための標準的なアッセイ法である。二元配置分散分析を用いて、対照群に対して統計的有意性を示した(****で表されるp<0.0001、***で表されるp<0.001、**で表されるp<0.01、*で表されるp<0.1)。

【図3】ヒト由来転移性卵巣癌細胞株PE01、PE01 cisplatin-resistant (PE01-CR)及びPE014における細胞増殖抑制率。(a) シスプラチン耐性型(PE01-CR)を含む3つの卵巣細胞株に対するCp2CBM32TD(Clostridium perfringens由来のGalNAc/ガラクトース/ラクトース結合CBM)を用いる。(b) 3つの卵巣細胞系(PE01、PE01-CR、PE014)に対するVc2CBMTDを用いる。(c) 3つの卵巣細胞系(PE01、PE01-CR、PE014)に対する2CBMTDを用いる。

【図4】拡散データ(BrdU取り込みアッセイ)である。異なる癌細胞株(メラノーマ(a)、A2058)、乳房((b)、MDA.MB.231)、膵臓((c)、PANC1)および肺(((d)、A549)を、2CBM47TD (400μg/mL)、2CBM67TD (400μg/mL)、2CBM70TD (400μg/mL)、PBS (制御)またはシアル酸結合CBM40剤Sp2CBMTD (400μg/mL)で処理し、24時間放置した。その後、2～6時間、BrdUを用いて電池をインキュベートした。DNAに組み込まれたBrdUの量を測定するためにELISAアッセイを行った。これは細胞の成長/拡散をアッセイするための標準的なアッセイ法である。二元配置分散分析を用いて、対照群に対して統計的有意性を示した(****で表されるp<0.0001、***で表されるp<0.001、**で表されるp<0.01、*で表されるp<0.1)。

【図5】拡散データ (BrdU 取り込みアッセイ)である。異なる癌細胞株((a)、膠腫(T98G)、結腸((b)、SW620)および卵巣((c)、PE014、(d) PE01))を、2CBM47TD (400μg/mL)、2CBM67TD (400μg/mL)、2CBM70TD (400μg/mL)、PBS (制御)またはシアル酸結合CBM40剤Sp2CBMTD (400μg/mL)で処理し、24時間放置した。その後、電池をBrdUアッセイに被検者し、2～6時間インキュベートした。DNAに組み込まれたBrdUの量を測定するためにELISAアッセイを行った。これは細胞の成長/拡散をアッセイするための標準的なアッセイ法である。二元配置分散分析を用いて、対照群に対して統計的有意性を示した(****で表されるp<0.0001、***で表されるp<0.001、**で表されるp<0.01、*で表されるp<0.1)。

【図6】拡散データ(BrdU取り込みアッセイ)である。オバリアンガン細胞(PE01プラチシン抵抗性(CR))は、Sp2CBMTD (400mmug/ml)、2CBM47TD (400mmug/ml)、2CBM67TD (400mmug/ml)、2CBM70TD (400mmug/ml)またはPBS (制御)で処理し、24時間放置した。その後、電池をBrdUアッセイに被検者し、2～6時間インキュベートした。DNAに組み込まれたBrdUの量を測定するためにELISAアッセイを行った。これは細胞の成長/拡散をアッセイするための標準的なアッセイ法である。二元配置分散分析を用いて、対照群に対して統計的有意性を示した(****で表されるp<0.0001、***で表されるp<0.001、**で表されるp<0.01、*で表されるp<0.1)。

【図7】(a)CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0)および(b) CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayから得られた拡散データである。オバリアンがん細胞株(SK‐OV‐3)をCp2CBM32TDで処理し、以下に概説するように72時間放置した。3ag/ml から0.457mm/ml の3倍希釈シリーズを用い、9種類の濃度で回答曲線を作成した。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【図8】(a)CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0)および(b) CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayから得られた拡散データである。オバリアン癌細胞系統(TOV‐21G)をCp2CBM32TDで治療し、以下に概説するように72時間放置した。3ag/ml から0.457mm/ml の3倍希釈シリーズを用い、9種類の濃度で回答曲線を作成した。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【図9】(a)CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0)および(b) CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayから得られた拡散データである。大腸がん細胞株(Gp2D)をCp2CBM32TDで治療し、以下に概説するように72時間放置した。3ag/ml から0.457mm/ml の3倍希釈シリーズを用い、9種類の濃度で回答曲線を作成した。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【図10】(a) CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0) および (b) CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assay から得られた拡散データである。乳がん細胞株(MDA‐MB‐231)をCp2CBM32TDで治療し、以下に概説するように72時間放置した。3ag/ml から0.457mm/ml の3倍希釈シリーズを用い、9種類の濃度で回答曲線を作成した。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【図11】(a) CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0) および (b) CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assay から得られた拡散データである。乳がん細胞系(CAMA-1)をCp2CBM32TDで治療し、以下に概説するように72時間放置した。3ag/ml から0.457mm/ml の3倍希釈シリーズを用い、9種類の濃度で回答曲線を作成した。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【図12】(a) CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0) および (b) CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assay から得られた拡散データである。肺癌細胞株(NCI-H441)をCp2CBM32TDで処理し、以下に概略するように72時間放置した。3ag/ml から0.457mm/ml の3倍希釈シリーズを用い、9種類の濃度で回答曲線を作成した。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【実施例】

【0163】

パートA
CBM32、CBM40、CBM47、CBM67、CBM70からなる群から選抜されたCBMを含む1つ以上の分子からなる様々なCBM試験剤を用いて、多くの異なるガン細胞系を治療した。

【0164】

これらの試験剤は、図1から図6の各々の下で概説したように、BrdU細胞拡散アッセイで評価された。

【0165】

その結果を図1から図6に示す。

【0166】

パートB
CBM Cp2CBM32TDは、以下のアッセイを用いてさらなる調査のために選ばれた。
(i)CellTiter Glo(R)2.0 Assay (CTG2.0)、および
(ii)CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assay。

【0167】

CellTiter-Glo^(R) 2.0 Assayは、代謝活性細胞の存在を示すATPの量を定量することにより、培養中の生存細胞数を決定する均質な方法を提供する。CyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayは、バックグラウンド抑制試薬と組み合わせた細胞透過性DNA結合色素の使用に依存している。これらの手順は、Promega CellTiter-Glo(R)2.0 Assay テクニカル手動TM403 (2018 年10 月)およびCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assay Molecular Probes 手動MP 35011 (2009 年7 月20 日)に詳しく記載されている。

【0168】

液体窒素で保存された細胞株は、成長媒体で解凍・拡大される。電池が期待される倍増時間に達すると、スクリーニングが開始される。成長媒体中の細胞の25mmullを、1ウェルあたり500～1500電池のブラック384ウェル組織培養プレートに播種した。アッセイプレートを遠心分離により均衡させ、複合処理の前に37^o Cで24時間インキュベートした。治療時には、(治療を受けていない)タイムポイント0(T₀)アッセイプレートを集め、それぞれCyQUANT Direct (ThermoFisher)とCellTitre-Glo 2.0(Promega)を用いてDNA含有量と生存性を測定した。15 アッセイプレートには、試験剤のマイクロL/ウェルを加える。9種類の濃度を、3つ折りの希釈系列(3mm/ml～0.457mm/ml)を用いて評価した。

【0169】

Timepoint 0(T₀)プレートは、エンビジョンプレートリーダー(Perkin Elmer)で蛍光(CyQUANT)または吸光度(CellTitre-Glo 2.0)を読み取る。アッセイプレートは、72時間複合体でインキュベートされ、CyQUANT DirectおよびCellTitre-Glo 2.0を用いて分析される。

【0170】

細胞増殖の測定値として成長抑制(GI)を用いた。GI割合は、以下のテストと方程式を適用して算出される。
[数１]
[数２]
ここで、Tは試験品の信号測定、Vは未処理/車両処理の制御測定、V _oはゼロ時点での未処理/車両管理測定(通称T ₀板)である。この公式は、国立がん研究所のNCI-60高スループット画面で使用されている成長抑制計算から導き出されている。

【0171】

0%のGI読み取りは、成長抑制を表すものではなく、72時間のT読み取りがそれぞれの期間読み取りに匹敵する場合に発生する。100%のGIは完全成長抑制(サイトスタシス)を表し、この場合、72時間の複合処理セルは、T₀制御セルと同じエンドポイントの読み取りを持つ。200%のGIは、文化のすべての細胞の完全な死(細胞毒性)を表し、この場合、72時間のTリーディングはT₀制御よりも低いであろう。

【0172】

電池生存性の測定値として抑制も提供された。0%の阻害レベルは、処理による細胞増殖の阻害を示さない。100%を抑制することは、治療期間中に電池数を2倍にすることを意味しない。細胞増殖抑制処理および細胞傷害性処理の両方で、100%の阻害割合を得ることができる。禁酒率は以下の公式で算出されている。
I=1-T/U
Tを処理し、Uを未処理/車両制御とする。

【0173】

それぞれの場合に、電池をブラック384の組織培養プレートの成長媒体に播種し、遠心分離により均衡化した。処理したアッセイプレートを72時間、試験化合物と共にインキュベートした。治療後、プレートはCellTiter-Glo(R)2.0 AssayまたはCyQUANT(R) Direct Cell Proliferation Assayを使用してエンドポイント分析のために開発された。

【0174】

その結果を図7～12に示す。

【0175】

これらのさらなる調査の間、発明者らは、Cp2CBM32TDが乳がん細胞株MDA.MB.231(図10aおよび10bを参照)および乳がん細胞株CAMA-1(図11aおよび11bを参照)に対して反拡散活動を示したことを確認した。この同レベルのMDA.MB.231癌細胞に対する活性は、BrdUアッセイでは観察されなかった。

【0176】

理論に縛られることなく、発明者たちはこの差はMDA.MB.231細胞の人口倍増時間(約36時間)に起因すると仮定した。従って、BrdUアッセイにおける短い処理期間(24時間)は、MDA.MB.231細胞に対するCp2CBM32TDの不拡散活動を適切に実証するのに十分ではなかったと考えられる。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3(a)】

【図3(b)】

【図3(c)】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7a】

【図7b】

【図8a】

【図8b】

【図9a】

【図9b】

【図10a】

【図10b】

【図11a】

【図11b】

【図12a】

【図12b】

【配列表】

2022519199000001.app

【誤訳訂正書】

【提出日】2021-10-12

【誤訳訂正1】

【訂正対象書類名】明細書

【訂正対象項目名】全文

【訂正方法】変更

【訂正の内容】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、がんの処置のための使用、方法及び組成物を提供する。

【背景技術】

【0002】

非免疫起源の糖タンパク質である一部のレクチンは、悪性細胞のアポトーシスを誘導する能力を示すものであり、したがって、抗がん特性を実証している。この現象は、これらのレクチンと、免疫細胞上の特異的な糖鎖受容体との相互作用を一因として起きる（Ｙａｕら、２０１５）。このようなレクチンの１つが、ヤドリギからとれるビスクミン（ｖｉｓｃｕｍｉｎ）であり、ビスクミンは、α２，６シアリルラクトースによってグリコシル化された細胞受容体に結合する毒素である（Ｍｕｔｈｉｎｇら、２００２）。ビスクミンは、２つのサブユニットＡ及びＢからなる、５７ｋＤａのヘテロダイマーである。Ａサブユニットは、リボソームの無効化によるタンパク質生成の妨害によって毒性作用を及ぼすが、Ｂサブユニットは、糖鎖結合機能を示す。レクチンは、インビトロ及びインビボにおいては、ピコモル細胞傷害性を明確に示すものであり、臨床試験対象においては、推奨用量上限が６μｇ／ｋｇである（１３分の半減期）（Ｚｗｉｅｒｚｉｎａら、２０１１）。

【0003】

細胞遊走及び成長を妨げる能力を実証した（したがって、抗がん特性を実証した）別の植物レクチンは、マーキア・アムレンシス（Ｍａａｃｋｉａ ａｍｕｒｅｎｓｉｓ）種子レクチン又はＭＡＳＬ（Ｏｃｈｏａ－Ａｌｖａｒｅｚら、２０１２；Ａｓｔａｒｉｔａら、２０１２）である。このレクチンも、ナノモル効力（約３００ｎＭ）を示す細胞傷害性を有し、種々のヒトがんにおいて過剰発現するα２，３シアリル化ムチン型膜貫通糖タンパク質であるポドプラニンの結合によって作用を及ぼす（Ｋａｔｏら、２００５；Ｓｃｈａｃｈｔら、２００５；Ｓｈｉｂａｈａｒａら、２００６）。

【0004】

ＷＯ２０１８／０５５３７３は、細胞成長を調節する方法と、細胞増殖及び／又は分化障害の処置及び／又は予防とにおける、炭水化物結合モジュールを含むシアル酸結合分子の使用を説明している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】ＷＯ２０１８／０５５３７３

【0006】

【非特許文献1】Ｙａｕら、２０１５

【非特許文献2】Ｍｕｔｈｉｎｇら、２００２

【非特許文献3】Ｚｗｉｅｒｚｉｎａら、２０１１

【非特許文献4】Ｏｃｈｏａ－Ａｌｖａｒｅｚら、２０１２

【非特許文献5】Ａｓｔａｒｉｔａら、２０１２

【非特許文献6】Ｋａｔｏら、２００５

【非特許文献7】Ｓｃｈａｃｈｔら、２００５

【非特許文献8】Ｓｈｉｂａｈａｒａら、２００６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

例えばがんを含む細胞増殖及び分化障害の処置には、宿主内で良好な耐用性を示すものであり、治療可能性を有する、さらなる分子の提供が必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示は、炭水化物結合モジュール（ＣＢＭ）として知られるあるクラスの糖（炭水化物）結合タンパク質が、細胞成長及び／又は細胞活性の態様を調節することができるという発見に基づく。

【0009】

したがって、本開示は、本明細書に記載のＣＢＭ分子の医療に関する使用を含む、様々な使用を提供する。

【0010】

ＣＢＭは、より大きな酵素（例えば、グリコシダーゼ等の糖質関連酵素）の一部として見受けられることが多く、その役割は、炭水化物リガンドに結合し、酵素の触媒ドメインを基質に向かって誘導することである。

【0011】

本開示は、
（ｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）
（ｉｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー４７（ＣＢＭ４７）
（ｉｉｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー６７（ＣＢＭ６７）
（ｉｖ） 炭水化物結合モジュールファミリー７０（ＣＢＭ７０）
として知られるグループに属するＣＢＭに特に関する。

【0012】

この点について、本開示は、上記ＣＢＭファミリー（ＣＢＭファミリー（ｉ）～（ｉｖ））のすべてのＣＢＭが、細胞成長及び／又は細胞活性の態様を調節するという発見に関する。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本明細書において使用される「ＣＢＭ３２」、「ＣＢＭ４７」、「ＣＢＭ６７」及び「ＣＢＭ７０」という用語は、１個以上の炭水化物結合モジュールを含み、炭水化物結合モジュールファミリー３２、４７、６７及び／又は７０に属するものとして分類されている、化合物、組成物又は分子を指し得る。本明細書において使用されている「ＣＢＭ３２」という用語は、ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓデータベース（インタ－ネットのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／で自由にアクセス可能）でＣＢＭ３２ファミリーに属するものとして指定されている炭水化物結合モジュールを包含及び／又は包摂し得る。さらに、本明細書において使用されている「ＣＢＭ４７」、「ＣＢＭ６７」及び「ＣＢＭ７０」という用語は、ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／で自由に入手可能）でＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７及びＣＢＭ７０ファミリーに属するものとして指定されている炭水化物結合モジュールを包含及び／又は包摂し得る。

【0014】

本開示は、ＣＢＭ、例えば、ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７及びＣＢＭ７０を含む分子、例えば、より大きな分子の使用を包含し得る。（非限定的な）例として、本開示の分子は、シアル酸に結合する能力を示すことができるだけでなく、１種以上の他の機能を有することもできる。例えば、本開示の分子は、酵素活性を有し得る。

【0015】

場合によっては、本明細書に記載の様々な使用のためのＣＢＭは、酵素（例えば、シアリダーゼ）活性を有する分子（例えば、融合タンパク質）の一部として用意されなくてもよいし、又はこのような分子に含まれなくてもよい。

【0016】

本明細書を通して、「備える」、「含む」及び／又は「具備する」という」用語は、本発明の態様及び実施形態が、特定の１種以上の特徴を「備える」ことを意味するように使用されている点に留意すべきである。これらの用語は、前述の関連する１種以上の特徴「から本質的になる」又は「からなる」態様及び／又は実施形態も包摂し得ることを理解すべきである。

【0017】

したがって、本開示との関連において、「ＣＢＭ３２」、「ＣＢＭ４７」、「ＣＢＭ６７」及び／又は「ＣＢＭ７０」は、炭水化物結合モジュールファミリー３２、４７、６７及び／又は７０に属するものとして分類される１種以上の分子を含む、から本質的になる、又はからなることができる。「ＣＢＭ３２」、「ＣＢＭ４７」、「ＣＢＭ６７」及び／又は「ＣＢＭ７０」という用語は、天然、野生型又は参照用ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７及び／又はＣＢＭ７０のフラグメント又は部分を包含し得るが、このようなフラグメント又は部分はいずれも、機能的なものであるべきであり、すなわち、このようなフラグメント又は部分は、そのフラグメント又は部分が由来する天然、野生型又は参照用ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７及び／又はＣＢＭ７０の炭水化物結合能力を保持している。

【0018】

有用なＣＢＭ３２は、任意の適切な供給源に由来することができる。例えば、使用のためのＣＢＭ３２は、例えばセルビブリオ（Ｃｅｌｌｖｉｂｒｉｏ）属、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属、ミクロモノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属及びクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なＣＢＭ３２は例えば、セルビブリオ・ミクスタス（Ｃｅｌｌｖｉｂｒｉｏ ｍｉｘｔｕｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｌｉｔｉｃａ）（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｌｉｔｉｃａ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・サーモセラム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ）、ストレプトコッカス・ニューモニアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）及びミクロモノスポラ・ビリジファシエンス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｖｉｒｉｄｉｆａｃｉｅｎｓ）から得ることができ、又は由来し得る。ＣＢＭ３２ファミリーの供給源、構造及び機能に関するさらなる詳細は、ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓデータベース（インターネットのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／ＣＢＭ３２．ｈｔｍｌで自由に入手可能）で確認することができる。

【0019】

例示的なＣＢＭ３２配列は、下記配列番号１によって規定されている：
配列番号１

【0020】

したがって、使用のためのＣＢＭは、配列番号１の配列又はその炭水化物結合部分を有するＣＢＭを含む、から本質的になる、又はからなることができる。

【0021】

配列番号１の炭水化物結合フラグメントは、配列番号１に属する約５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の（連続する又は連接する）アミノ酸から約１３８個の（連続する又は連接する）アミノ酸までの任意の場所を構成することができる。適切なフラグメントは、配列番号１に属する約１１個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、約５０個、約５５個、約６０個、約６５個、約７０個、約７５個、約８０個、約８５個、約９０個、約９５個、約１００個、約１０５個、約１１０個、約１１５個、約１２０個、約１２５個、約１３０個又は約１３５個の（連続する又は連接する）アミノ酸を含むことができる。

【0022】

配列番号１を含む、から本質的になる、又はからなるＣＢＭ３２又はタンパク質は例えば、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）及び／又はラクトースに結合することができる。したがって、使用のためのフラグメントはいずれも、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）及び／又はラクトースにも結合することができる。任意の所与のＣＢＭ３２分子の結合アフィニティが、厳密なＣＢＭ３２サブタイプに依存し得ることは、当業者ならば理解されようが；さらなる例として、一部のＣＢＭ３２は、種々のリガンド（例には、タイプＩＩ血液型Ｈサッカリド（Ｆｕｃａ１－２Ｇａｌｂ１－４ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ－アセチル－Ｄ－ラクトサミン（ＬａｃＮＡｃ）、ガラクトース、ラクト－Ｎ－ビオース、ジサッカリドＧｌｃＮＡｃ－α－１，４－Ｇａｌ（α１，４結合を介してガラクトースに結合したＮ－アセチルグルコサミンと呼ばれることもある）及び／又はＧｌｃＮＡｃが挙げられる。）に対するアフィニティを示している。複数のＣＢＭ３２サブタイプは、単一の有機体に由来してもよいことにも留意すべきであり；これらの異なるＣＢＭサブタイプは、同じ、類似する又は異なる結合特異性を示し得る。例えば、クロストリジウム・パーフリンジェンスは、２種のシアリダーゼＮａｎＪ及びＮａｎＨを含有し；ＮａｎＪは、１種のガラクトース特異的ＣＢＭ３２を含有し；ＮａｎＨは、結合選択性が異なる４種の推定ＣＢＭ３２を含有し、例えば、ＮａｎＨによってコードされるＣＢＭ３２は、ＧｌｃＮＡｃに結合する。本明細書において使用されているとき、ＣＢＭ３２という用語は、すべてのＣＢＭ３２バリアント、誘導体及びサブタイプを包含する。

【0023】

配列番号１は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースにＩＤ番号Ａ０Ａ２Ｘ２ＹＪＦ２として寄託された配列に由来する。この配列は、下記配列番号２として再現される（配列番号１は、下記配列中で網かけされた残基４２～１８０として出現する。）：
配列番号２

【0024】

配列番号１及び２は、クロストリジウム・パーフリンジェンスに由来する。

【0025】

本開示の様々な態様における使用のためのＣＢＭは、１個、２個、３個又は４個以上のＣＢＭ３２を含むことができる。

【0026】

使用のためのＣＢＭは、配列番号１若しくはその炭水化物結合フラグメントを含む１つ、２つ、３つ又は４つ以上のタンパク質を含むことができる。

【0027】

有用なＣＢＭ３２が、配列番号１及び２のＣＢＭ３２配列との間にある程度（例えば、９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％又は６０％）の配列同一性又は相同性を示す配列を含み得ることは、当業者ならば理解されよう。すべてのこのようなバリアント又は分岐配列は、本開示の範囲及び「ＣＢＭ３２」という用語に包含されるものとする。同一の及び／又は相同なＣＢＭ３２配列は、炭水化物結合機能を有し得る。
・ ＣＢＭ４７は、任意の適切な供給源に由来することができる。例えば、使用のためのＣＢＭ４７は、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、バチモディオラス（Ｂａｔｈｙｍｏｄｉｏｌｕｓ）属、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）属、プランクトミケス（Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ）属、ストレプトコッカス属及びストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なＣＢＭ４７は、例えばストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）又はストレプトコッカス・ニューモニアエから得ることができ、又は由来し得る。ＣＢＭ４７ファミリーの潜在的な供給源並びに構造及び機能に関するさらなる詳細は、ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓデータベース（インターネットのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／ＣＢＭ４７．ｈｔｍｌで自由に入手可能）で確認することができる。

【0028】

例示的なＣＢＭ４７配列は、下記配列番号３によって規定されている：
配列番号３

【0029】

したがって、使用のためのＣＢＭは、配列番号３の配列又はその炭水化物結合部分を有するＣＢＭを含む、から本質的になる、又はからなることができる。配列番号３の炭水化物結合フラグメントは、配列番号３に属する約５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の（連続する又は連接する）アミノ酸から約１４４個の（連続する又は連接する）アミノ酸までの任意の場所を構成することができる。適切なフラグメントは、配列番号３に属する約１１個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、約５０個、約５５個、約６０個、約６５個、約７０個、約７５個、約８０個、約８５個、約９０個、約９５個、約１００個、約１０５個、約１１０個、約１１５個、約１２０個、約１２５個、約１３０個又は約１３５個、約１４０個又は約１４３個の（連続する又は連接する）アミノ酸を含むことができる。

【0030】

配列番号３を含む、から本質的になる、又はからなるＣＢＭ４７又はタンパク質は、Ｌ－フコース、フコシルラクトース、Ｈサッカリド及び／又はＬｅｗｉｓ ｙ抗原に結合することができる。したがって、使用のためのフラグメントはいずれも、Ｌ－フコース、フコシルラクトース、Ｈサッカリド及び／又はＬｅｗｉｓ ｙ抗原にも結合することができる。

【0031】

配列番号３は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースにＩＤ番号Ａ０Ａ１Ｑ２Ｔ２２９として寄託された配列に由来する。この配列は、下記配列番号４として再現される（配列番号３は、下記配列中で網かけされた残基６０１～７４５として出現する。）：
配列番号４

【0032】

配列番号３及び４は、ストレプトコッカス・ニューモニアエに由来する。

【0033】

本開示の様々な態様における使用のためのＣＢＭは、１個、２個、３個又は４個以上のＣＢＭ４７を含むことができる。

【0034】

使用のためのＣＢＭは、配列番号３若しくはその炭水化物結合フラグメントを含む１つ、２つ、３つ又は４つ以上のタンパク質を含むことができる。

【0035】

有用なＣＢＭ４７が、配列番号３及び４のＣＢＭ４７配列との間にある程度（例えば、９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％又は６０％）の配列同一性又は相同性を示す配列を含み得ることは、当業者ならば理解されよう。すべてのこのようなバリアント又は分岐配列は、本開示の範囲及び「ＣＢＭ４７」という用語に包含されるものとする。同一の及び／又は相同なＣＢＭ４７配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0036】

ＣＢＭ６７は、任意の適切な供給源に由来することができる。例えば、使用のためのＣＢＭ６７は、例えばバシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、パエニバシラス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、プランクトミケス属及びストレプトマイセス属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なＣＢＭ６７は、例えばストレプトマイセス・アベルミティリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）から得ることができ、又は由来し得る。ＣＢＭ６７ファミリーの潜在的な供給源並びに構造及び機能に関するさらなる詳細は、ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／ＣＢＭ６７．ｈｔｍｌで自由に入手可能）で確認することができる。

【0037】

例示的なＣＢＭ６７配列は、下記配列番号５によって規定されている：
配列番号５

【0038】

したがって、使用のためのＣＢＭは、配列番号５の配列又はその炭水化物結合部分を有するＣＢＭを含む、から本質的になる、又はからなることができる。

【0039】

配列番号５の炭水化物結合フラグメントは、配列番号５に属する約５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の（連続する又は連接する）アミノ酸から約１６４個の（連続する又は連接する）アミノ酸までの任意の場所を構成することができる。適切なフラグメントは、配列番号５に属する約１１個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、約５０個、約５５個、約６０個、約６５個、約７０個、約７５個、約８０個、約８５個、約９０個、約９５個、約１００個、約１０５個、約１１０個、約１１５個、約１２０個、約１２５個、約１３０個、約１３５個、約１４０個、約１４５個、約１５０個、約１５５個、約１６０個又は約１６３（連続する又は連接する）アミノ酸を含むことができる。

【0040】

配列番号５を含む、から本質的になる、又はからなるＣＢＭ６７又はタンパク質は、Ｌ－ラムノースに結合することができる。したがって、使用のためのフラグメントはいずれも、Ｌ－ラムノースにも結合することができる。

【0041】

配列番号５は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースにＩＤ番号Ｑ８２ＰＰ４として寄託された配列に由来する。この配列は、下記配列番号６として再現される（配列番号５は、下記配列中で網かけされた残基１３２～２９６として出現する。）：
配列番号６

【0042】

配列番号５及び６は、ストレプトマイセス・アベルミティリスに由来する。

【0043】

本開示の様々な態様における使用のためのＣＢＭは、１個、２個、３個又は４個以上のＣＢＭ６７を含むことができる。

【0044】

使用のためのＣＢＭは、配列番号５若しくはその炭水化物結合フラグメントを含む１つ、２つ、３つ又は４つ以上のタンパク質を含むことができる。

【0045】

有用なＣＢＭ６７が、配列番号５及び６のＣＢＭ６７配列との間にある程度（例えば、９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％又は６０％）の配列同一性又は相同性を示す配列を含み得ることは、当業者ならば理解されよう。すべてのこのようなバリアント又は分岐配列は、本開示の範囲及び「ＣＢＭ６７」という用語に包含されるものとする。同一の及び／又は相同なＣＢＭ６７配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0046】

ＣＢＭ７０は、任意の適切な供給源に由来することができる。例えば、使用のためのＣＢＭ７０は、例えば、バシルス属、パエニバシラス属、プランクトミケス属及びストレプトコッカス属の細菌を含む微生物から得ることができる。例えば、有用なＣＢＭ７０は、例えばストレプトマイセス・ニューモニアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）から得ることができ、又は由来し得る。ＣＢＭ７０ファミリーの潜在的な供給源並びに構造及び機能に関するさらなる詳細は、ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓデータベース（インターネットのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ／ＣＢＭ７０．ｈｔｍｌで自由に入手可能）で確認することができる。

【0047】

例示的なＣＢＭ７０配列は、下記配列番号７によって規定されている：
配列番号７

【0048】

したがって、使用のためのＣＢＭは、配列番号７の配列又はその炭水化物結合部分を有するＣＢＭを含む、から本質的になる、又はからなることができる。

【0049】

配列番号７の炭水化物結合フラグメントは、配列番号７に属する約５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の（連続する又は連接する）アミノ酸から約１５８個の（連続する又は連接する）アミノ酸までの任意の場所を構成することができる。適切なフラグメントは、配列番号７に属する約１１個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、約５０個、約５５個、約６０個、約６５個、約７０個、約７５個、約８０個、約８５個、約９０個、約９５個、約１００個、約１０５個、約１１０個、約１１５個、約１２０個、約１２５個、約１３０個、約１３５個、約１４０個、約１４５個、約１５０個、約１５５個又は約１５７個の（連続する又は連接する）アミノ酸を含むことができる。

【0050】

配列番号７を含む、から本質的になる、又はからなるＣＢＭ７０又はタンパク質は、ヒアルロナンに結合することができる。したがって、使用のためのフラグメントはいずれも、ヒアルロナンにも結合することができる。

【0051】

配列番号７は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースにＩＤ番号Ｑ５４８７３として寄託された配列に由来する。この配列は、下記配列番号８として再現される（配列番号７は、下記配列中で網かけされた残基５４～２１２として出現する。）：
配列番号８

【0052】

配列番号７及び８は、ストレプトコッカス・ニューモニアエに由来する。

【0053】

本開示の様々な態様における使用のためのＣＢＭは、１個、２個、３個又は４個以上のＣＢＭ７０を含むことができる。

【0054】

使用のためのＣＢＭは、配列番号７若しくはその炭水化物結合フラグメントを含む１つ、２つ、３つ又は４つ以上のタンパク質を含むことができる。

【0055】

有用なＣＢＭ７０が、配列番号７及び８のＣＢＭ７０配列との間にある程度（例えば、９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％又は６０％）の配列同一性又は相同性を示す配列を含み得ることは、当業者ならば理解されよう。すべてのこのようなバリアント又は分岐配列は、本開示の範囲及び「ＣＢＭ７０」という用語に包含されるものとする。同一の及び／又は相同なＣＢＭ７０配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0056】

要するに、本開示の様々な態様及び実施形態における使用のための分子は、１個以上のＣＢＭ、例えば、１個以上のＣＢＭ３２、１個以上のＣＢＭ４７、１個以上のＣＢＭ６７及び／又は１個以上のＣＢＭ７０を含んでもよい。

【0057】

使用のための分子は、
単一のＣＢＭ３２；
単一のＣＢＭ４７；
単一のＣＢＭ６７；及び
単一のＣＢＭ７０
からなる群より選択される単一のＣＢＭを含んでもよい。

【0058】

使用のための分子は、
単一のＣｐＣＢＭ３２；
単一のＳｐＣＢＭ４７；
単一のＳａＣＢＭ６７；及び
単一のＳｐＣＢＭ７０
からなる群より選択される単一のＣＢＭを含んでもよい。

【0059】

「Ｃｐ」がクロストリジウム・パーフリンジェンスを意味する場合、「ＣｐＣＢＭ３２」は、ＣＢＭ３２部分がクロストリジウム・パーフリンジェンスに由来することを表し；「Ｓｐ」は、ストレプトコッカス・ニューモニアエを意味し、したがって、「ＳｐＣＢＭ４７」及び「ＳｐＣＢＭ７０」は、ＣＢＭ４７及び／又はＣＢＭ７０部分がストレプトコッカス・ニューモニアエに由来することを表し；「ＳａＣＢＭ６７」は、ＣＢＭ６７部分がストレプトマイセス・アベルミティリスに由来することを表す。

【0060】

使用のためのＣＢＭは、複数の又はいくつかの（すなわち、２つ以上の）ＣＢＭを含んでもよい。複数のＣＢＭを含む分子は、「多価ＣＢＭ」と呼ばれることもある。多価ＣＢＭは例えば、２個以上の上記ＣｐＣＢＭ、２個以上の上記ＳｐＣＢＭ、２個以上の上記ＳａＣＢＭを含むことができる。多価ＣＢＭは、異なるＣＢＭの混合物、例えば、１個以上のＣｐＣＢＭと１個以上のＳｐ／ＳａＣＢＭとの混合物を含んでもよい。

【0061】

多価ＣＢＭ分子（例えば、２個以上のＣｐＣＢＭ３２部分を含む分子）は、アミノ酸／ペプチドリンカーによって連結された複数のＣＢＭを含むコンストラクトとして調製することもできる。各ＣＢＭは、例えば５個、１０個又は１５個のアミノ酸を含むペプチドによって、互いに連結されていてもよい。例として、次のペプチドのうちのいずれか１つ以上を使用して、２個以上のＣＢＭを連結させ、これにより、多価ＣＢＭを生成することができる：
（ｉ） ５個のアミノ酸リンカー： ALNGS（配列番号９）
LQALG（配列番号１０）
GGNSG（配列番号１１）
GGGSG（配列番号１２）
GGSLG（配列番号１３）
GGGSA（配列番号１４）
（ｉｉ） １０個のアミノ酸リンカー： ALNGSGGGSG（配列番号１５）
LQALGGGGSL（配列番号１６）
（ｉｉｉ） １５個のアミノ酸リンカー： ALNGSGGGSGGGGSG（配列番号１７）

【0062】

したがって、本開示の様々な態様及び実施形態（使用、使用のためのＣＢＭ、方法及び医薬）は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７；及び
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０
からなる群より選択されるＣＢＭを含む、からなる、又はから本質的になる分子を利用することができる。

【0063】

使用のための分子は、オリゴマー化ドメインをさらに含んでもよい。適切なオリゴマー化ドメインは、マルチマー構造、例えばトリマーを形成するように自己会合する能力を示すことができる。使用のためのオリゴマー化ドメインは、上記オリゴマー化特性を有する任意の分子又はこの分子に属する任意の機能的フラグメントを含んでもよい。例えば、１個以上の（例えば２個の）ＣＢＭ分子は、オリゴマー化ドメインに結合されていてもよく、つなげられていてもよく、又は融合していてもよい。得られたＣＢＭ分子：：オリゴマー化ドメイン「融合物」は後で、細胞成長及び／若しくは活性を調節するため、並びに／又は、本明細書において開示された疾患及び／又は状態のいずれかを処置若しくは予防するための分子として（１つ以上の他のこのような「融合物」と一緒に）使用することもできる。

【0064】

適切なオリゴマー化ドメインは、例えばシュードモナス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）シューダミニダーゼ（ｐｓｅｕｄａｍｉｎｉｄａｓｅ）に由来してもよい。例示的なシュードモナス・エルギノーザシューダミニダーゼ配列のアミノ酸配列は、受託番号ＰＡＯ５７９として寄託されており、配列番号１８（４３８個のアミノ酸）として下記に再現される。

【0065】

配列番号１８のオリゴマー化ドメインは、アミノ酸残基３３３～４３８（灰色のハイライト）であり、この配列は、配列番号１９であってもよい。

【0066】

したがって、使用のためのオリゴマー化ドメインは、配列番号１８によって規定されたＰ．エルギノーザシューダミニダーゼトリマー化ドメイン（ＰａＴＤ）の概ね残基２５０、２７５、３００、３１０、３２０、３３３、３４０～３５０（すなわち、それらの間にある概ね任意の残基を含む、概ね残基２５０～概ね残基３５０）から概ね残基４００、４１０、４２０、４３０又は４３８（すなわち、それらの間にある概ね任意の残基を含む、概ね残基４００～残基４３８までの概ね任意の残基）までを含むことができる。例えば、有用な分子は、配列番号１８の残基３３３～４３８を含むオリゴマー化ドメインを利用することができる。

【0067】

本開示の様々な態様及び実施形態における使用のためのさらなる分子を以下に説明する。

【0068】

使用のための分子の１つは、「Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤ」と呼ばれ、このコンストラクトは、クロストリジウム・パーフリンジェンスに由来する２個のＣＢＭ３２分子をそれ自体が含む、Ｃｐ２ＣＢＭ３２単位（灰色のハイライト）を含み、２コピーのＣＢＭ３２が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ３２のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤの配列は、配列番号１９として下記に規定されている。
配列番号１９

【0069】

使用のための分子の１つは、「Ｓｐ２ＣＢＭ４７Ｔ」と呼ばれ、このコンストラクトは、ストレプトコッカス・ニューモニアエに由来する２個のＣＢＭ４７分子をそれ自体が含む、Ｓｐ２ＣＢＭ４７単位（灰色のハイライト）を含み、２コピーのＣＢＭ４７が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ４７のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＳｐ２ＣＢＭ４７ＴＤの配列は、配列番号２０として下記に規定されている。
配列番号２０

【0070】

使用のための分子の１つは、「Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤ」と呼ばれ、このコンストラクトは、ストレプトコッカス・アベルミティリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）に由来する２個のＣＢＭ６７分子をそれ自体が含む、Ｓａ２ＣＢＭ６７単位（灰色のハイライト）を含み、２コピーのＣＢＭ６７が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ６７のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＳａ２ＣＢＭ６７ＴＤの配列は、配列番号２１として下記に規定されている。
配列番号２１

【0071】

使用のための分子の１つは、「Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤ」と呼ばれ、このコンストラクトは、ストレプトコッカス・ニューモニアエに由来する２個のＣＢＭ７０分子（灰色のハイライト）をそれ自体が含む、Ｓｐ２ＣＢＭ７０単位を含み、２コピーのＣＢＭ７０が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ７０のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＳｐ２ＣＢＭ７０ＴＤの配列は、配列番号２２として下記に規定されている。
配列番号２２

【0072】

第１の態様において、本明細書において開示された様々な分子は、治療における使用のためのものであってもよい。さらに、本明細書において開示された様々な分子は、医薬としての使用のためのものであってもよい。この態様との関連において、読者は、「本明細書において開示された分子」が少なくとも次のものを含むことを理解すべきである：
（ｉ） １個以上のＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子。

【0073】

一態様において、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための、ＣＢＭ３２を含む分子が提供される。ＣＢＭ３２を含む分子は、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含んでもよく、又はＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤであってもよい。

【0074】

別の態様において、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のためのＣＢＭ４７を含む分子が提供される。ＣＢＭ４７を含む分子は、Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含んでもよく、又はＳｐ２ＣＢＭ４７ＴＤであってもよい。

【0075】

さらなる一態様において、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のためのＣＢＭ６７を含む分子が提供される。ＣＢＭ６７を含む分子は、Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含んでもよく、又はＳａ２ＣＢＭ６７ＴＤであってもよい。

【0076】

さらに、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のためのＣＢＭ７０を含む分子が提供される。ＣＢＭ７０を含む分子は、Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含んでもよく、又はＳｐ２ＣＢＭ７０ＴＤであってもよい。

【0077】

別の態様は、細胞を、ＣＢＭ３２を含む分子と接触させることを含む、細胞成長及び／又は活性を調節する方法を提供する。この方法は、インビトロ方法であってもよい。ＣＢＭ３２を含む分子は、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含んでもよく、又はＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤであってもよい。

【0078】

さらなる態様は、細胞を、ＣＢＭ４７を含む分子と接触させることを含む、細胞成長及び／又は活性を調節する方法を提供する。この方法は、インビトロ方法であってもよい。ＣＢＭ４７を含む分子は、Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含んでもよく、又はＳｐ２ＣＢＭ４７ＴＤをであってもよい。

【0079】

さらなる態様は、細胞を、ＣＢＭ６７を含む分子と接触させることを含む、細胞成長及び／又は活性を調節する方法を提供する。この方法は、インビトロ方法であってもよい。ＣＢＭ６７を含む分子は、Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含んでもよく、又はＳａ２ＣＢＭ６７ＴＤであってもよい。

【0080】

別の態様は、細胞を、ＣＢＭ７０を含む分子と接触させることを含む、細胞成長及び／又は活性を調節する方法を提供する。この方法は、インビトロ方法であってもよい。ＣＢＭ７０を含む分子は、Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含んでもよく、又はＳｐ２ＣＢＭ７０ＴＤであってもよい。

【0081】

前述のように、「ＣＢＭ３２を含む分子」、「ＣＢＭ４７を含む分子」、「ＣＢＭ６７を含む分子」及び／又は「ＣＢＭ７０を含む分子」は、各ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７若しくはＣＢＭ７０から本質的になってもよく、又は、各ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７若しくはＣＢＭ７０からなってもよい。

【0082】

上記態様において言及された分子のＣＢＭ３２成分、ＣＢＭ４７成分、ＣＢＭ６７成分又はＣＢＭ７０成分は、（上記配列番号１～８のそれぞれによって規定された）完全な野生型ＣＢＭ３２配列、ＣＢＭ４７配列、ＣＢＭ６７配列又はＣＢＭ７０配列を含むことができる。さらには又は代替的には、本開示の様々な態様は、本明細書において開示されたＣＢＭ３２、４７、６７又は７０配列（配列番号１～８の配列を含む）のいずれかの炭水化物結合フラグメントを利用することができる。

【0083】

ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７又はＣＢＭ７０という用語が、参照ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７又はＣＢＭ７０配列（配列番号１～８を含む）から生成された組み換え分子をさらに包含することには、留意すべきである。やはり、これらの組み換え分子は、完全長ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７又はＣＢＭ７０配列又はその炭水化物結合フラグメントを含むことができる。

【0084】

便宜上、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０という用語は、上記ＣＢＭ分子（１個以上のＣＢＭ３２、１個以上のＣＢＭ４７、１個以上のＣＢＭ６７若しくは１個以上のＣＢＭ７０又はこれらのいずれかの炭水化物結合フラグメントを含む、から本質的になる、又はからなる分子のすべてを指すために使用される。

【0085】

「調節する」という用語は、細胞成長及び／又は活性の１つ以上の態様の何らかの増大又は減少を包含し得る。言い換えると、本明細書に記載の分子（例えば、１個以上のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子）は、細胞成長及び／若しくは活性の特定の態様を阻害することもでき、又は、細胞成長及び／若しくは活性の他の態様を誘導若しくは刺激することができる。

【0086】

細胞に適用される「成長」及び「活性」という用語は、細胞増殖、細胞生存可能性、細胞遊走、細胞代謝、細胞分化及び／又は細胞の形態／表現型のうちの１つ以上に関連付けられたプロセス及び／又は現象を包含し得る。「成長」及び／又は「活性」という用語は、特定の外因性及び／又は内因性因子若しくは刺激に対する細胞の反応をさらに含み得るが、例えば、免疫系の特定の化合物、サイトカイン、ケモカイン及び１つ以上の環境因子（光、温度、圧力及び機械的応力等）に対する反応が挙げられる。したがって、本明細書において開示されたＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子は、細胞反応性のレベルを調節する（阻害、低下又は上昇させる）ために使用することができる。

【0087】

（上述のように）ＣＢＭ３２／４７／６７／７０が細胞成長及び活性を調節することが示されていることを考慮すると、これらの分子が、関連する医療及び獣医学に関する数多くの用途及び使用に供され得ることは、理解されよう。

【0088】

例えば、１個以上のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、異常な細胞成長、及び／又は異常な細胞活性が因子である疾患又は状態の処置及び／又は予防に応用することができる。

【0089】

異常な細胞成長及び／又は活性によって引き起こされ、これらが一因となり、及び／又はこれらを特徴とする疾患及び／又は状態の処置及び／又は予防における使用のための、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子が、本明細書において開示されている。ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0090】

さらに、異常な細胞成長及び／又は活性よって引き起こされ、これらが一因となり、及び／又はこれらを特徴とする疾患及び／又は状態の処置及び／又は予防のための医薬の製造のための、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子の使用も開示されている。
ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0091】

本開示は、異常な細胞成長及び／又は活性によって引き起こされ、これらが一因となり、及び／又はこれらを特徴とする疾患及び／又は状態を処置及び／又は予防する方法であって、ある治療有効量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子を、それを必要としている対象に投与するステップを含む、方法も提供する。ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0092】

異常な細胞成長及び／又は活性によって引き起こされ、これらが一因となり、又はこれらを特徴とする疾患には例えば、良性状態又は悪性状態と呼ばれる又は分類される細胞増殖障害を含む細胞増殖障害を挙げることができる。例えば、「細胞増殖障害」という用語は、ひとまとめにして「がん」と呼ばれる疾患及び／又は状態も含み得る。「がん」という用語は、乳がん、結腸がん、肺がん、卵巣がん、グリオーマ及びメラノーマの形態と呼ばれるがんを含み得るが、これらに限定されるわけではない。特に、がん（又は細胞増殖障害）という用語は、結腸がん、肺がん及び卵巣がんに関係する場合もある。

【0093】

「がん」という用語は、ひとまとめにして「白血病」（慢性白血病と急性白血病の両方）と呼ばれる疾患及び／又は状態、並びに、粘膜の／粘膜関連の表面又は組織に影響するあらゆるがんも同様に含み得る。

【0094】

したがって、本明細書に記載のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、がんの処置及び／又は予防に用途を見出すことができる。ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0095】

したがって、がんの処置及び／又は予防における使用のためのＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子が提供される。ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0096】

さらに、がんの処置及び／又は予防のための医薬の製造のためのＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子の使用が提供される。ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0097】

ある治療有効量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子を、それを必要としている対象に投与するステップを含む、がんを処置及び／又は予防する方法も提供される。ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0098】

ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子ががんの処置及び／又は予防に有用であり得るという一般的な発見に加えて、１個以上のＣＢＭ３２を含む分子は、いくつかの特異的ながんの処置及び／又は予防に特段の用途を見出すことができる。

【0099】

したがって、本開示は、
（ａ） 卵巣がん；
（ｂ） 肺がん；
（ｃ） 結腸がん；及び
（ｄ） 乳がん
からなる群より選択されるがんの処置及び／又は予防における使用のための１個以上のＣＢＭ３２を含む分子をさらに提供する。

【0100】

上記を鑑みて、本開示は、
（ｉ） がんの処置及び／又は予防における使用のための１個以上のＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） がんの処置及び／又は予防のための医薬の製造における１個以上のＣＢＭ３２を含む分子の使用；並びに
（ｉｉｉ） ある治療有効量の１個以上のＣＢＭ３２を含む分子を、それを必要としている対象に投与することによってがんを処置及び／又は予防する方法
を提供し、
（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）のそれぞれに関しては、がんが、
（ａ） 卵巣がん；
（ｂ） 肺がん；
（ｃ） 結腸がん；及び
（ｄ） 乳がん
からなる群より選択される１つ以上である。

【0101】

言い換えると、これらの個別のがんのそれぞれの処置及び／又は予防に有用であることに加えて、本明細書において開示されたＣＢＭ３２のそれぞれは、がん（ａ）～（ｄ）のうちの２種、３種又は４種すべての処置及び／又は予防に使用することができる。

【0102】

がん（ａ）～（ｄ）のうちの任意の１種、２種、３種又は４種すべての処置及び／又は予防における使用に適したＣＢＭ３２は、本明細書において開示されたＣＢＭ３２のいずれかを含み得る。ほんの一例として、場合によっては、このような方法における使用のための分子は、
（ｉ） １個又は２個以上のＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個又は２個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉｉ） 配列番号１の配列、配列番号２の配列又はその炭水化物結合部分を含む１つ又は２つ以上のペプチドを含む分子；及び
（ｉｖ） ＣｐＣＢＭ３２ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0103】

本発明者らは、ＣＢＭ３２が多種多様ながんに対する総合的有効性を有することを確認したが、場合によっては、１個以上のＣＢＭ３２を含む分子は、特定の特異的ながんの種類に対しては、同じレベルの有効性を明確に示さないこともあり得る。したがって、１個以上のＣＢＭ３２を含む分子に関しては、がんの処置及び／又は予防は、メラノーマ、膵臓がん及びグリオーマから選択される１種以上のがんの処置を排除してもよい。

【0104】

本開示は、難治性（又は耐性）がんの処置及び／又は予防における使用のためのＣＢＭ３２及び／又はＣＢＭ４０を含む分子をさらに提供する。

【0105】

すでに本明細書で説明されたＣＢＭ３２に加えて、使用のための例示的なＣＢＭ４０は、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）ＮａｎＨシアリダーゼのシアル酸結合ドメイン（ＶｃＣＢＭ：ＣＢＭ４０）及び／又はストレプトコッカス・ニューモニアエＮａｎＡシアリダーゼの等価な（若しくは相同な）ドメイン（ＳｐＣＢＭ：同様にＣＢＭ４０）を含むことができる。当然ながら、他の有機体中に存在する類似する又は相同なシアル酸結合モジュールは、「ＣＢＭ」及び「ＣＢＭ４０」という用語の範囲に包摂されるものとする。例示的なビブリオ・コレレＮａｎＨシアリダーゼのアミノ酸配列は、受託番号Ａ５Ｆ７Ａ４として寄託されており、配列番号２３（７８１個のアミノ酸）として下記に再現される。

【0106】

配列番号２３のＣＢＭ領域は、アミノ酸残基２５～２１６であり、この配列は、配列番号２４であってもよい。

【0107】

例示的なストレプトコッカス・ニューモニアエＮａｎＡシアリダーゼアミノ酸配列は、受託番号Ｐ６２５７５として寄託されており、配列番号２５（１０３５個のアミノ酸）として下記に再現される。

【0108】

配列番号２５のＣＢＭ領域は、アミノ酸残基１２１～３０５であり、この配列は、配列番号２６であってもよい。

【0109】

したがって、難治性がんの処置における使用のための分子は、配列番号２３若しくは２４の配列又はそのシアル酸結合フラグメントを有するタンパク質又はペプチドを含むことができる。例えば、有用なシアル酸結合分子は、（配列番号２３によって規定された）Ｖ．コレレの（シアリダーゼをコードする）ｎａｎＨ遺伝子のシアル酸結合ドメインによってコードされるタンパク質部分、又は、別の有機体中に存在する等価若しくは相同な遺伝子（例えば、等価／相同なＳ．ニューモニアエのｎａｎＡシアリダーゼ遺伝子：配列番号２５を参照されたい。）を含んでもよい。難治性がんの処置における使用のためのＣＢＭ４０は、配列番号２３又は２４のＶ．コレレシアリダーゼ分子の概ね残基１、５、１０、１５、２５又は３０（すなわち、１～３０又はそれらの間にある任意のアミノ酸残基）から概ね残基１５０、１７５、２００、２１０、２１６、２２０～７８１（それらの間にある任意の残基を含む、１５０～７８１までの任意の残基）までを含むことができる。例えば、難治性がんの処置における使用のためのＣＢＭ４０は、上記配列番号２３の残基２５から概ね残基２１６までに対応する配列を有するペプチドを含んでもよい。

【0110】

難治性がんの処置における使用に適したさらなるＣＢＭ４０は、配列番号２５若しくは２６の配列又はそのシアル酸結合フラグメントを有するタンパク質又はペプチドを含むことができる。例えば、有用なものは、（シアリダーゼをコードする）ストレプトコッカス・ニューモニアエｎａｎＡ遺伝子のシアル酸結合ドメインによってコードされるタンパク質部分を含むことができる。がんの処置における使用のためのＣＢＭ４０は、配列番号２５及び２６のＳ．ニューモニアエシアリダーゼ分子の概ね残基８０、９０、１００、１１０、１２０、１２１～１３０（すなわち、それらの間にある任意の残基を含む、概ね残基８０～１３０のいずれか）から概ね残基２５０、２７５、３００、３０５、３１０、３２０～１０３５（すなわち、それらの間にある概ね任意の残基を含む、約２５０～１０３５までの任意の残基）までを含むことができる。例えば、使用のためのＣＢＭ４０は、上記配列番号２５の残基１２１から概ね残基３０５までに対応する配列を有するペプチドを含んでもよい。

【0111】

有用なＣＢＭ４０が、配列番号２３、２４、２５及び２６のＣＢＭ４０配列との間にある程度（例えば、９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％又は６０％）の配列同一性又は相同性を示す配列を含み得ることは、当業者ならば理解されよう。すべてのこのようなバリアント又は分岐配列は、本開示の範囲及び「ＣＢＭ４０」という用語に包含されるものとする。同一の及び／又は相同なＣＢＭ４０配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【0112】

難治性がんの処置における使用のための分子は、１個以上のＣＢＭ４０を含んでもよい。分子は、単一の又は個別のＣＢＭ４０、例えば、単一のＶｃＣＢＭ４０又は単一のＳｐＣＢＭ４０を含んでもよい。代替的には、使用のための分子は、複数の又はいくつかの（すなわち、２個以上の）ＣＢＭ４０を含んでもよい。複数のＣＢＭを含む分子は、「多価」分子又はＣＢＭと呼ばれる。多価ＣＢＭは、例えば２個以上のＶｃＣＢＭ４０又は２個以上のＳｐＣＢＭ４０を含んでもよい。多価ＣＢＭは、異なるＣＢＭの混合物、例えば、１個以上のＶｃＣＢＭと１個以上のＳｐＣＢＭとの混合物を含んでもよい。

【0113】

難治性（又は耐性）がんの処置における使用のためのＣＢＭ３２及び／又はＣＢＭ４０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0114】

さらに、本開示は、難治性（又は耐性）がんの処置のための医薬の製造のためのＣＢＭ３２及び／又はＣＢＭ４０を含む分子の使用を提供する。ＣＢＭ３２及び／又はＣＢＭ４０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0115】

ある治療有効量のＣＢＭ３２及び／又はＣＢＭ４０を含む分子を、それを必要としている対象に投与することを含む、難治性（又は耐性）がんを処置する方法も開示されている。ＣＢＭ３２及び／又はＣＢＭ４０を含む分子は、
（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子
からなる群より選択することができる。

【0116】

それを必要としている対象、又は実際においては、本明細書において開示された分子若しくはこの分子を含む医薬を投与すべき対象は、（ｉ） 細胞増殖障害、（ｉｉ） がん、（ｉｉｉ） 本明細書に記載の他の任意の疾患及び／若しくは状態；（ｉｖ） 異常な細胞成長及び／若しくは活性によって引き起こされ、これらが一因となり、若しくはこれらを特徴とする疾患若しくは状態；（ｖ） （ａ） 乳がん、（ｂ） 結腸がん、（ｃ） 肺がん、（ｄ） 卵巣がん、（ｅ） グリオーマ及び（ｆ） メラノーマからなる群より選択される１種以上のがん；（ｖｉ） （ａ） 肺がん、（ｂ） 結腸がん及び（ｃ） 卵巣がんからなる群より選択される１種以上のがん；並びに／又は、（ｖ） 難治性（又は耐性）がんを患っている（又は患っているとの疑いがある）任意の対象であり得る。

【0117】

さらには又は代替的には、任意の対象は、（ｉ） 細胞増殖障害、（ｉｉ） がん、（ｉｉｉ） 本明細書に記載の他の任意の疾患及び／若しくは状態；（ｉｖ） 異常な細胞成長及び／若しくは活性によって引き起こされ、これらが一因となり、若しくはこれらを特徴とする疾患若しくは状態；（ｖ） （ａ） 乳がん；（ｂ） 結腸がん；（ｃ） 肺がん；（ｄ） 卵巣がん；（ｅ） グリオーマ及び（ｆ） メラノーマからなる群より選択される１種以上のがん；又は、（ｖｉ） （ａ） 肺がん、（ｂ） 結腸がん；及び（ｃ） 卵巣がんからなる群より選択される１種以上のがんを患う傾向がある又は患いやすい対象であってもよい。

【0118】

難治性又は耐性がんは、第一選択医薬又は好ましい医薬（標準的な又は好ましい化学療法又は放射線療法の選択肢を含む）に反応しないがんを含み得る。難治性又は耐性がんは、シスプラチンに対して抵抗性がある（又は反応しない）がんを含み得る。難治性がん又は耐性がんという用語は、難治性又は耐性卵巣がんを包含し得る。難治性（卵巣）がん及び耐性（卵巣）がんという用語は、シスプラチンに対して抵抗性がある卵巣がんを含み得る。

【0119】

したがって、本開示は、難治性（又は耐性）卵巣がんの処置における使用のための（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；（ｉｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；（ｉｉｉ） Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び／又は、（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子を提供する。

【0120】

本明細書に記載の処置はいずれも、本明細書に記載の様々な疾患及び障害の１種以上の症状を処置、改善又は低減するための、本開示の１種以上の分子の使用を含み得ることを理解すべきである。例として、がん等の疾患の症状は例えば、腫瘍及び／又は細胞塊の存在を含み得る。したがって、本明細書に記載の分子は、腫瘍形成及び／又は腫瘍の転移を調節する（例えば、停止させ、遅延させ、阻害し、又は低減する）ために使用することができる。前述の分子は、腫瘍の全体サイズを減少させるために使用することもできる。大型の腫瘍及び／又はアグレッシブな腫瘍を含む特定の腫瘍は、最初にサイズを減少させていた場合、外科手術により除去することが容易になることが多い。一般的に、化学療法及び／又は放射線療法ベースの処置は、腫瘍のサイズを小さくするために使用することもできるが、このような処置等の処置は、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子の使用をベースとする処置によって置きかえ、及び／又は補完することもできる。前述のように、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、細胞成長及び／又は活性を調節する能力を示し、したがって、理論によって縛られることを望むわけではないが、腫瘍のサイズに影響する本開示の分子のうちのいずれか１つの能力を補強するメカニズムは、前述の分子の細胞増殖調節効果、分化調節効果及び／又は代謝調節効果に起因する可能性がある。

【0121】

したがって、上記を鑑みて、奏功する腫瘍の処置は、腫瘍転移、腫瘍形成性組織内での血管新生及び／又は組織浸潤を対象にして観察されたレベル若しくは検出可能な／検出されたレベルの低下である、腫瘍サイズの減少を特徴とし得る。

【0122】

本開示の分子は、それを必要としている対象における腫瘍の成長、発達及び／又は転移を調節する（例えば阻害し、制限し、又は低減する）方法における使用のためのものであってもよい。本明細書に記載の分子は、腫瘍の成長、発達及び／若しくは転移の調節における使用のための、又は、このような調節を達成するための医薬の製造に使用される組成物として配合することができる。本開示は、腫瘍の処置における使用のためのＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子も提供する。さらに、腫瘍を処置するための医薬の製造におけるＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子の使用も記載されている。さらに、本開示は、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子を、それを必要としている対象（又は腫瘍形成性組織）に投与することを含む、腫瘍を処置する方法も提供する。

【0123】

上記において規定されたように、「それを必要としている対象」という用語は、腫瘍を有するとの疑いがある若しくは腫瘍があると診断された任意の対象、並びに／又は、腫瘍を患う傾向がある及び／若しくは患いやすいものであると認められた対象を包含し得る。「腫瘍」という用語は、難治性又は耐性腫瘍を含み得る。腫瘍という用語は、難治性又は耐性卵巣がん腫瘍を含み得る。

【0124】

したがって、本開示は、細胞成長及び／又は活性のモジュレーターであると認められた、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子の様々な用途を提供する。任意の所与の（ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む）分子は、本特許出願の実施例の部に記載された様々な実験及びアッセイにより、細胞成長及び／又は活性のモジュレーターであると認められ得る。例えば、細胞創傷スクラッチアッセイは、任意の所与の「供試」分子が、細胞成長、細胞遊走及び／又は活性を調節するのに必要な能力を示すかどうかを判定するように構成され得る、アッセイの一例である。さらには又は代替的には、ＢｒｄＵ細胞増殖アッセイを使用して、細胞増殖、成長及び／又は活性に対する供試作用物質（例えば、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子）の何らかの効果を判定することもできる。簡単に言うと、細胞が成長及び増殖するにつれて、チミジンの代用品としてＢｒｄＵがデノボ合成されたＤＮＡに取り込まれるため、細胞は、ＢｒｄＵを添加した培地中で培養することができる。これにより、子孫細胞は標識され、ＢｒｄＵ取り込みの量を細胞増殖／成長の尺度又は指標として使用することができる。ＢｒｄＵ検出は、ＢｒｄＵに対する特異性又はアフィニティを有する抗原の使用によって、達成することができる。

【0125】

他の場合においては、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ（登録商標）２．０）等の代謝ベースのアッセイを使用して、細胞増殖、成長及び／又は活性に対する供試作用物質（例えば、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子）の何らかの効果を判定することもできる。このようなアッセイにおいては、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の量を評価して、代謝的に活性な細胞の数を判定することができる（したがって、生細胞の尺度を提供することができる）。供試作用物質による処理後の生細胞の数は、細胞増殖／成長の尺度又は指標として使用することができる。

【0126】

代替的には又はさらには、ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ等のＤＮＡ染色ベースのアッセイを使用して、細胞増殖、成長及び／又は活性に対する供試作用物質（例えば、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子）の何らかの効果を判定することもできる。このようなアッセイにおいては、生細胞の数は、ＤＮＡ染色剤、例えば、細胞透過性ＤＮＡ結合染料を使用して判定することができる。やはり、供試作用物質による処理後の生細胞の数は、細胞増殖／成長の尺度又は指標として使用することができる。

【0127】

したがって、本開示は、細胞活性調節アッセイ（例えば、細胞創傷スクラッチアッセイ）により、細胞成長及び／又は活性を調節する能力を示す分子に関することもあり得る。この目的のために、本開示は、細胞成長及び／又は活性に対する供試化合物の効果を報告することができるアッセイを供試化合物に施すことを含む、細胞成長及び／若しくは活性を調節する方法における使用のため又は本明細書に記載の様々な医療及び／又は獣医学に関する用途のための分子（ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子を含む）を識別する方法であって、供試化合物が、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子であり、アッセイにより、供試化合物が細胞成長及び／又は活性の何らかの態様に影響を及ぼすことが報告された場合、供試化合物が、本明細書に記載の種類の疾患及び／又は状態の処置及び／又は予防に有用であり得る、方法をさらに提供する。細胞成長及び／又は活性に対する供試化合物の効果を報告することができるアッセイは、本明細書に記載の細胞創傷スクラッチアッセイ、ＢｒｄＵ型細胞増殖アッセイ、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０型細胞増殖アッセイ及び／又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ細胞増殖アッセイであってよい。
ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、何らかの組織又は細胞をターゲッティングし、又はその要素を何らかの組織又は細胞に送達するという目的で他の要素にコンジュゲート化し、結合させ、若しくはつなぎ合わせ、又は会合することができる分子として、さらなる用途を見出すことができる。

【0128】

この種の分子は、別名「治療弾頭（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｗａｒｈｅａｄ）」又は「コンンジュゲート」として知られていることもある。理論に縛られることを望むわけではないが、本開示の分子に含まれ得る様々なＣＢＭ（例えば、ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７及び／又はＣＢＭ７０）に対するリガンドが、特定の細胞受容体及び膜結合分子に存在することにより、コンジュゲート化された非相同分子（すなわち、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子とは異なる別個の分子）を、前記細胞又は前記細胞を含む組織に送達するための手段として、本明細書に記載の様々な分子を利用することができる。このようなコンジュゲート化分子は、がんの処置に有用であり得、本明細書に記載の分子（細胞の表面上に発現した炭水化物に対するアフィニティを示す分子）を使用して、治療作用及び／又は細胞傷害性を有する部分をがんに誘導することができる。

【0129】

例として、本明細書に記載の分子（ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子のいずれかを含む）は、例えば治療作用及び／又は細胞傷害性を有する１個以上の（例えば、２つ、３つ又は４つ以上の）部分にコンジュゲート化することができる。したがって、本開示は、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子コンジュゲートに関する。

【0130】

ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子コンジュゲートは、非相同部分にコンジュゲート化した（つなぎ合わせられ、結合し、又は会合した）本開示のＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子を含んでもよい。非相同部分は、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子の何らかの部分にコンジュゲート化することができる、治療作用及び／又は細胞傷害性を有する部分を含んでもよい。

【0131】

例えば、非相同部分は、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子の一方の端部又は両方の端部にコンジュゲート化することができる。さらには又は代替的には、非相同部分は、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子の内部部分にコンジュゲート化（又は融合）することもできる。非相同部分はＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子にコンジュゲート化されることになるが、この分子は（この分子のコンジュゲート化も）、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子の炭水化物結合特性に（実質的に）干渉し、又ははく奪し、又は低下させるべきでないことは、理解されよう。

【0132】

前述のように、非相同部分は、ＣＢＭ３２、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７又はＣＢＭ７０分子のうちのいずれか１つを対象とするリガンドを含む受容体を発現した細胞又は組織に影響する疾患の処置に有用な薬物であってもよい。例えば、薬物は、がん等の処置における使用のための化学療法薬であってもよい。非相同部分は、細胞を死滅させる又は細胞のアポトーシスを誘導することができる、細胞傷害性部分であってもよい。非相同部分は、特異的な細胞を特定の組織に又は組織内に動員することができる分子を含んでもよい。例えば、非相同部分は例えば、Ｔ細胞を、例えば腫瘍又はがん組織に動員するための手段として用いられ得る、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であってもよい。

【0133】

本開示は、本明細書に記載の様々な使用、医薬及び方法における使用のための組成物も提供し得る。したがって、本明細書に記載のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子はいずれも、使用のために配合することができる。

【0134】

組成及び配合等を説明している下記の部に関しては便宜上、本明細書に記載のＣＢＭ３２／４７／６７／１０を含む分子と、この分子を含む任意のコンジュゲート（例えば、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０：：薬物コンジュゲート／融合物）との両方が、「ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子」という一般用語に含まれるものとすることには、留意すべきである。

【0135】

ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、治療用又は医薬組成物として、使用のために配合することができる。様々な組成物は、本明細書に記載の分子のうちの１種以上を含んでもよく、任意の所与の処置には、これらの組成物の１種以上を（一緒に、同時に、又は別々に）投与することが必要となることもある。本開示による組成物が、例えば１種以上の疾患及び／又は状態の処置に有用な分子、低分子、抗体及びオリゴヌクレオチド等、１つ以上の他の治療作用を有する部分をさらに含んでもよいことには、留意すべきである。さらには又は代替的には、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子は、１種以上の他の（異なる）治療作用を有する要素と一緒に投与することも可能であり、１種以上の他の（異なる）治療作用を有する要素は、同じ又は異なる疾患の処置のために使用することができる。「一緒に投与される」という用語は、１つ以上の他の治療作用を有する要素の投与の前、投与の後及び／又は投与と同時のＣＢＭ３２／４７／６７／７０の投与を包含する。

【0136】

本明細書に記載の分子は、経腸投与（経口投与を含む）、非経口投与及び／又は局所投与のために配合することが可能であり、当業者ならば、厳密な配合が投与経路に応じて変更され得ることは理解されよう。

【0137】

本発明による医薬組成物は、従来の方法で調製することも可能であり、医薬中に慣例的に使用されるものであり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２２版（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ２０１２）及び／又はＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第７版（Ｒｏｗｅら編、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、２０１２）で説明されている、物質を含んでもよく、これらの文献及び参考文献のすべての全内容は、参照により組み込む。

【0138】

本開示の治療用又は医薬組成物（細胞成長及び／若しくは活性を調節し、並びに／若しくはがんを処置する方法、又は、細胞成長及び／若しくは活性を調節するため、並びに／若しくはがんを処置するための医薬を含む、本明細書に記載の医薬又は方法のいずれかにおける使用のための、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子を含む、組成物）は、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、キャリア、アジュバント及びバッファーと一緒にして配合することができる。この組成物は例えば、経口投与（経粘膜投与を含む）、非経口投与、腹腔内投与、経腸投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与投与することも可能であるし、又は、望ましい効果（この場合、細胞成長／活性の調節、細胞成長／活性及び／若しくはがんに関連付けられた疾患／状態の処置若しくは予防、並びに／又は、腫瘍の成長の調節を含む効果）を引き出すのに有用な他の任意の経路によって投与することも可能である。前述のように、選択された投与経路に応じて、配合物の厳密な組成は変更され得る。

【0139】

対象への投与のためのＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子を含む治療用配合物又は医薬配合物は、化合物及び／又は化合物の炭水化物結合特性を不活性化し、又は変性させることができる酵素、酸及び他の天然化合物／条件（例えば、化合物（抗体を含む）、細胞及び免疫系のプロセスが挙げられる。）の作用から前述の分子を保護する物質で覆われるようにコーティングし、カプセル化し、又はエンベロープ化することもできる。

【0140】

本明細書に記載の分子を含む組成物中への使用のために利用できる可能性がある様々な標準的な従来の賦形剤の中でも、非経口、経腸、経口（経粘膜を含む）、及び、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子との間に有害な反応を起こさない他の投与経路に適した薬学的に許容される有機又は無機キャリア物質が特に挙げられる。

【0141】

ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子が非経口投与用に配合されるべき場合、上記組成物は、無菌状態であってもよい。

【0142】

上記組成物は、オイルをベースとする溶液若しくは水溶液、懸濁液及び／又はエマルションを含んでもよい。

【0143】

他の実施形態において、上記組成物は、例えば（溶解可能な若しくは生分解性の）フィルム、ペッサリー又はインプラント（座薬を含む）等のインプラントの形態をとることができる。

【0144】

本明細書に記載の分子を含む医薬品は、安定剤、湿潤剤、乳化剤、（浸透圧に影響を与えるのに使用するための）塩、バッファー、及び／又は、活性化合物との間に有害な反応を起こさない他の物質と混合することができる。

【0145】

本明細書に記載の分子の１種以上は、経口投与用に配合し、経口投与することができる。前述のように、経口投与は、鼻腔内投与及び／又は吸入による投与をそれ自体が含む、経粘膜投与を含む。

【0146】

使用のための組成物は、経口投与に適した固体状剤形を含み得る。これらの固体状剤形は、例えばカプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤を含み得る。任意の所与の固体状剤形において、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子（又はこの分子を含む任意のコンジュゲート）は、少なくとも１種の薬学的に許容される不活性賦形剤と混合されてもよい。適切な賦形剤の例は、当業者に公知であるが、例えば充填剤若しくは増量剤、保湿剤、湿潤剤、結合剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、吸着剤、潤滑剤又はこれらの混合物を含み得る。錠剤、丸剤又はカプセル剤は、緩衝剤をさらに含んでもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤及び／又は顆粒剤等の固体状剤形は、胃腸環境及び／又は胃酸から保護するコーティング等のコーティング及びシェルを有するように調製することもできる。

【0147】

固体状剤形は乳白剤を含有してもよく、腸管の特定の部分の中に又は腸管の特定の部分に活性作用物質（この場合、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子又はこの分子を含むコンジュゲート）を確実に遅延放出するように配合することもできる。

【0148】

経口投与用の固体状組成物は、各投与量が、適切な用量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子（又はこの分子を含むコンジュゲート）を含有する単位剤形として配合することができる。任意の所与の固体状剤形に含有されるＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子（又はこの分子を含むコンジュゲート）の厳密な量は、所期の使用に応じて変更される。固体状組成物は、「単位用量」を含有することが可能であり、単位用量は、処置期間にわたって望ましい効果（例えば、細胞成長及び／又は活性の調節）を発生させるように計算された量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子（又はこの分子を含有するコンジュゲート）を含有する。

【0149】

経口投与用の液体状剤形は（前述のように）は、乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤及びエリキシル剤を含み得る。上記化合物又は組成物に加えて、液体状剤形は、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤等、当技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤を含有してもよい。

【0150】

本開示の分子はいずれも、任意の適切な量で使用することができる。前述のように、上記酸分子は、経口投与、経粘膜投与又は非経口投与用に配合することが可能であり、したがって、厳密な配合は、所期の投与経路に依存し得る。任意の所与の用量中に存在するＣＢＭ３２／４７／６７／７０を含む分子の量は、０．１μｇ～１０００μｇの範囲であり得、例えば、約０．１μｇ、０．２μｇ、０．３μｇ、０．４μｇ、０．５μｇ、１μｇ、１０μｇ、２０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ又は９００μｇの量であり得る。選択された量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子は、特定の体積の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤及び／又はバッファー中に配合することができる。賦形剤、希釈剤又はバッファーの体積は、約１０μＬ～５ｍＬであり得る。例えば、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子の必要量は、約１５μＬ、２０μＬ、２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、２００μＬ、２５０μＬ、３００μＬ、４００μＬ、５００μＬ、６００μＬ、７００μＬ、８００μＬ、９００μＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ又は４ｍＬと合わせる（又は配合する）ことができる。例えば、１００μｇのＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子を約２５０μＬの賦形剤と合わせて、４００μｇ／ｍＬの最終濃度を得ることもできる。約０．１μｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬの濃度の用量を使用することも可能であり、例えば、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ、６００μｇ／ｍＬ、７００μｇ／ｍＬ、８００μｇ／ｍＬ又は９００μｇ／ｍＬの用量が挙げられる。

【0151】

使用の際、細胞増殖及び／又は分化障害（例えば、がん）の処置及び／又は予防の一部として投与されるＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子の用量は、数日、数週間又は数年にわたって複数回投与することもできる。例えば、初回の（又は最初の）投与後、ある用量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子を、約（±１日又は２日）３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、１７日後、２１日後、２８日後及び／又は３５日後に再び投与することができる。任意の所与の日において、特定の用量のＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子を１回、２回又は３回以上投与することができる。毎回、ＣＢＭ３２／４７／６７／７０分子は、適切な処置に影響を与えるため、又は細胞増殖及び／又は分化障害の進行に対する予防を誘導するために最良のものであると考えられる経路であればいかなる経路によっても投与することが可能である。

【0152】

次に、下記の図面を参照することにより、本発明を詳細に説明する。

【図面の簡単な説明】

【0153】

【図1】増殖データ（ＢｒｄＵ取り込みアッセイ）。異なるがん細胞株（メラノーマ細胞株（（ａ）、Ａ２０５８）、乳がん細胞株（（ｂ）、ＭＤＡ．ＭＢ．２３１）、膵臓がん細胞株（（ｃ）、ＰＡＮＣ１）及び肺がん細胞株（（ｄ）、Ａ５４９）を、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、ＰＢＳ（コントロール）、シアル酸結合ＣＢＭ４０型作用物質（Ｓｐ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、Ｖｃ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）又はＶｃ４ＣＢＭ（４００μｇ／ｍＬ））又はシアル酸結合ＣＢＭ４０ヌル変異体（Ｓｐ２（Ｒ２７４Ｑ）ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ））によって処理し、２４時間放置した。次に、これらの細胞を、ＢｒｄＵと一緒にして２～６時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡアッセイを実施して、ＤＮＡ内に取り込まれたＢｒｄＵの量を測定した。このアッセイは、細胞成長／増殖を測定するための標準的なアッセイである。二元配置ＡＮＯＶＡを用いて、コントロール群に対する統計学的有意性を示した（０．０００１未満のｐは、^＊＊＊＊によって表され、０．００１未満のｐは、^＊＊＊によって表され、０．０１未満のｐは、^＊＊によって表され、０．１未満のｐは、^＊によって表される。）

【図2】増殖データ（ＢｒｄＵ取り込みアッセイ）。異なるがん細胞株（（ａ）、グリオーマがん細胞株（Ｔ９８Ｇ）、結腸がん細胞株（（ｂ）、ＳＷ６２０）及び卵巣がん細胞株（（ｃ）、ＰＥ０１４））を、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、ＰＢＳ（コントロール）、シアル酸結合ＣＢＭ４０型作用物質（Ｓｐ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、Ｖｃ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）若しくはＶｃ４ＣＢＭ（４００μｇ／ｍＬ））又はシアル酸結合ＣＢＭ４０ヌル変異体（Ｓｐ２（Ｒ２７４Ｑ）ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ））によって処理し、２４時間放置した。次に、細胞にＢｒｄＵアッセイを施し、２～６時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡアッセイを実施して、ＤＮＡ内に取り込まれたＢｒｄＵの量を測定した。このアッセイは、細胞成長／増殖を測定するための標準的なアッセイである。二元配置ＡＮＯＶＡを用いて、コントロール群に対する統計学的有意性を示した（０．０００１未満のｐは、^＊＊＊＊によって表され、０．００１未満のｐは、^＊＊＊によって表され、０．０１未満のｐは、^＊＊によって表され、０．１未満のｐは、^＊によって表される。）。

【図3】ヒト由来転移性卵巣がん細胞株ＰＥ０１、ＰＥ０１シスプラチン抵抗性（ＰＥ０１－ＣＲ）及びＰＥ０１４における細胞増殖の阻害率％。（ａ） シスプラチン抵抗性形態（ＰＥ０１－ＣＲ）を含む３種の卵巣細胞株に対して、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤ（クロストリジウム・パーフリンジェンス由来のＧａｌＮＡｃ／ガラクトース／ラクトース結合ＣＢＭ）を使用した場合。（ｂ） ３種の卵巣細胞株（ＰＥ０１、ＰＥ０１－ＣＲ、ＰＥ０１４）に対して、Ｖｃ２ＣＢＭＴＤを使用した場合。（ｃ） ３種の卵巣細胞株（ＰＥ０１、ＰＥ０１－ＣＲ、ＰＥ０１４）に対して、Ｓｐ２ＣＢＭＴＤを使用した場合。

【図4】増殖データ（ＢｒｄＵ取り込みアッセイ）。異なるがん細胞株（メラノーマ細胞株（（ａ）、Ａ２０５８）、乳がん細胞株（（ｂ）、ＭＤＡ．ＭＢ．２３１）、膵臓がん細胞株（（ｃ）、ＰＡＮＣ１）及び肺がん細胞株（（ｄ）、Ａ５４９）を、２ＣＢＭ４７ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ６７ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ７０ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、ＰＢＳ（コントロール）又はシアル酸結合ＣＢＭ４０型作用物質Ｓｐ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）によって処理し、２４時間放置した。次に、これらの細胞を、ＢｒｄＵと一緒にして２～６時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡアッセイを実施して、ＤＮＡ内に取り込まれたＢｒｄＵの量を測定した。このアッセイは、細胞成長／増殖を測定するための標準的なアッセイである。二元配置ＡＮＯＶＡを用いて、コントロール群に対する統計学的有意性を示した（０．０００１未満のｐは、^＊＊＊＊によって表され、０．００１未満のｐは、^＊＊＊によって表され、０．０１未満のｐは、^＊＊によって表され、０．１未満のｐは、^＊によって表される。）。

【図5】増殖データ（ＢｒｄＵ取り込みアッセイ）。異なるがん細胞株（（ａ）、グリオーマがん細胞株（Ｔ９８Ｇ）、結腸がん細胞株（（ｂ）、ＳＷ６２０）及び卵巣がん細胞株（（ｃ）、ＰＥ０１４、（ｄ）ＰＥ０１））を、２ＣＢＭ４７ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ６７ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ７０ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、ＰＢＳ（コントロール）又はシアル酸結合ＣＢＭ４０型作用物質Ｓｐ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）によって処理し、２４時間放置した。次に、細胞にＢｒｄＵアッセイを施し、２～６時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡアッセイを実施して、ＤＮＡ内に取り込まれたＢｒｄＵの量を測定した。このアッセイは、細胞成長／増殖を測定するための標準的なアッセイである。二元配置ＡＮＯＶＡを用いて、コントロール群に対する統計学的有意性を示した（０．０００１未満のｐは、^＊＊＊＊によって表され、０．００１未満のｐは、^＊＊＊によって表され、０．０１未満のｐは、^＊＊によって表され、０．１未満のｐは、^＊によって表される。）。

【図6】増殖データ（ＢｒｄＵ取り込みアッセイ）。卵巣がん細胞（ＰＥ０１シスプラチン抵抗性（ＣＲ））を、Ｓｐ２ＣＢＭＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ４７ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ６７ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）、２ＣＢＭ７０ＴＤ（４００μｇ／ｍＬ）又はＰＢＳ（コントロール）によって処理し、２４時間放置した。次に、細胞にＢｒｄＵアッセイを施し、２～６時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡアッセイを実施して、ＤＮＡ内に取り込まれたＢｒｄＵの量を測定した。このアッセイは、細胞成長／増殖を測定するための標準的なアッセイである。二元配置ＡＮＯＶＡを用いて、コントロール群に対する統計学的有意性を示した（０．０００１未満のｐは、^＊＊＊＊によって表され、０．００１未満のｐは、^＊＊＊によって表され、０．０１未満のｐは、^＊＊によって表され、０．１未満のｐは、^＊によって表される。）。

【図7】（ａ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び（ｂ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙから得られた増殖データ。下記に概説しているように、卵巣がん細胞株（ＳＫ－ＯＶ－３）をＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤによって処理し、７２時間放置した。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、異なる９種の濃度により、用量応答曲線を作成した。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【図8】（ａ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び（ｂ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙから得られた増殖データ。下記に概説しているように、卵巣がん細胞株（ＴＯＶ－２１Ｇ）をＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤによって処理し、７２時間放置した。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、異なる９種の濃度により、用量応答曲線を作成した。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【図9】（ａ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び（ｂ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙから得られた増殖データ。下記に概説しているように、結腸直腸がん細胞株（Ｇｐ２Ｄ）をＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤによって処理し、７２時間放置した。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、異なる９種の濃度により、用量応答曲線を作成した。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【図10】（ａ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び（ｂ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙから得られた増殖データ。下記に概説しているように、乳がん細胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）をＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤによって処理し、７２時間放置した。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、異なる９種の濃度により、用量応答曲線を作成した。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【図11】（ａ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び（ｂ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙから得られた増殖データ。下記に概説しているように、乳がん細胞株（ＣＡＭＡ－１）をＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤによって処理し、７２時間放置した。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、異なる９種の濃度により、用量応答曲線を作成した。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【図12】（ａ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び（ｂ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙから得られた増殖データ。下記に概説しているように、肺がん細胞株（ＮＣＩ－Ｈ４４１）をＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤによって処理し、７２時間放置した。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、異なる９種の濃度により、用量応答曲線を作成した。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【0154】

実験
パートＡ
いくつかの異なるがん細胞株を、それぞれがＣＢＭ３２、ＣＢＭ４０、ＣＢＭ４７、ＣＢＭ６７及びＣＢＭ７０からなる群より選択されるＣＢＭを含む１種以上の分子を含む様々なＣＢＭ供試作用物質によって処理した。

【0155】

上記において図１～図６のそれぞれで概説したＢｒｄＵ細胞増殖アッセイにおいて、これらの供試作用物質を評価した評価した。

【0156】

これらのアッセイの結果は、図１～図６に示されている。

【0157】

パートＢ
ＣＢＭ Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを、次のアッセイを用いたさらなる調査のために選択した：
（ｉ） ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（ＣＴＧ２．０）；及び
（ｉｉ） ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ。

【0158】

ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ^{（登録商標）}２．０ Ａｓｓａｙは、代謝的に活性な細胞の存在を指し示すＡＴＰの存在量の定量化によって、培養物中の性細胞の数を判定するための均一な方法を提供する。ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙは、細胞透過性ＤＮＡ結合染料と、バックグラウンド抑制用試薬との併用に基づくものである。これらの手順は、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ＴＭ４０３（２０１８年１０月）及びＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ ｍａｎｕａｌ ＭＰ ３５０１１（２００９年７月２０日）において、十分に説明されている。

【0159】

液体窒素中に保存しておいた細胞株を解凍し、培地中で増やした。細胞が予想倍化時間に到達したらすぐに、スクリーニングを開始する。培地中の細胞２５μＬを、ウェル１個当たり５００～１５００個の細胞になるように、組織培養処理３８４ウェル黒色プレートに播種した。アッセイプレートを遠心分離によって平衡化し、２４時間３７℃でインキュベートした後、化合物によって処理した。処理の際、１組の時点０（Ｔ_０）アッセイプレート（処理を受けていない）を収集し、ＣｙＱＵＡＮＴ Ｄｉｒｅｃｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）及びＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ２．０（Ｐｒｏｍｅｇａ）のそれぞれを用いて測定されたＤＮＡ含量及び生存能力についての表示値。１５μＬ／ウェルのアッセイ試薬をアッセイプレートに加える。３ｍｇ／ｍＬから０．４５７μｇ／ｍＬまでの３倍希釈系列を用いて、９種の異なる濃度を評価した。

【0160】

時点０（Ｔ_０）プレートは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）により、蛍光（ＣｙＱＵＡＮＴ）又は吸光度（ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ２．０）について読み取られる。アッセイプレートを化合物と一緒にして７２時間インキュベートした後、ＣｙＱＵＡＮＴ Ｄｉｒｅｃｔ及びＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ２．０を用いて分析した。

【0161】

増殖阻害（ＧＩ）を細胞成長の尺度として用いた。ＧＩ％は、次の検定及び式の適用によって計算される：

【数1】

式中、Ｔは、供試品のシグナル測定値であり、Ｖは、無処理／溶媒処理コントロールの測定値であり、Ｖ_０は、時点０のときの無処理／溶媒コントロールの測定値である（口語的には、Ｔ_０プレートとも呼ばれる）。この式は、ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＮＣＩ－６０ハイスループットスクリーンにおいて用いられる増殖阻害計算から導かれる。

【0162】

０％のＧＩ表示値は、成長阻害がないことを表すが、７２時間のときのＴ表示値が各期間においてＶ表示値と同等である場合に発生する。１００％のＧＩは、完全な成長阻害（細胞分裂停止）を表し、この場合、化合物によって７２時間処理された細胞は、Ｔ_０コントロール細胞と同じエンドポイント表示値を有する。２００％のＧＩは、培養ウェル中のすべての細胞の完全な死滅（細胞傷害性）を表し、この場合、７２時間のときのＴ表示値は、Ｔ_０コントロールより低い。

【0163】

阻害は、細胞生存可能性の尺度としても規定された。０％の阻害レベルは、処理による細胞成長の阻害がないことを表す。１００％の阻害は、処理期間中に細胞の数の倍化がないことを表す。細胞増殖抑制処理と細胞傷害処理の両方が、１００％の阻害率％を達成することができる。阻害率％は、次の式用いて計算される：
Ｉ＝１－Ｔ／Ｕ
式中、Ｔは、処理済みのものであり、Ｕは、無処理／溶媒コントロールである。

【0164】

いずれの場合においても、組織培養処理済みの３８４ウェル黒色プレートの培地に細胞を播種し、遠心分離によって平衡化した。処理済みのアッセイプレートを、供試化合物と一緒にして７２時間インキュベートした。処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ又はＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いたエンドポイント分析のためにプレートを発色させた。

【0165】

その結果は、図７～図１２に示されている。

【0166】

これらのさらなる調査の間に、本発明者らは、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤが、乳がん細胞株ＭＤＡ．ＭＢ．２３１（図１０ａ及び１０ｂを参照されたい。）及び乳がん細胞株ＣＡＭＡ－１（図１１ａ及び図１１ｂを参照されたい。）に対する抗増殖活性を示すことを確認した。このＭＤＡ．ＭＢ．２３１がん細胞に対する同レベルの活性は、ＢｒｄＵアッセイにおいては観察されなかった。

【0167】

理論に縛られるわけではないが、本発明者らは、上記差異は、ＭＤＡ．ＭＢ．２３１細胞の母集団倍化時間（約３６時間）によるものである可能性があると仮定している。したがって、ＢｒｄＵアッセイ（持続期間は２４時間だった。）のより短い処理期間は、ＭＤＡ．ＭＢ．２３１細胞に対するＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤの抗増殖活性を適切に実証するのに十分ではなかったと考えられている。

【誤訳訂正2】

【訂正対象書類名】特許請求の範囲

【訂正対象項目名】全文

【訂正方法】変更

【訂正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）の炭水化物結合モジュール；
（ｉｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー４７（ＣＢＭ４７）の炭水化物結合モジュール；
（ｉｉｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー６７（ＣＢＭ６７）の炭水化物結合モジュール；及び
（ｉｖ） 炭水化物結合モジュールファミリー７０（ＣＢＭ７０）の炭水化物結合モジュール
からなる群より選択される、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための炭水化物結合モジュール。

【請求項2】

炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）の炭水化物結合モジュールが、配列番号１若しくは配列番号２又はその炭水化物結合部分を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の炭水化物結合モジュール。

【請求項3】

がんの処置及び／又は予防における使用のためのものである、請求項１又は２に記載の使用のための請求項１又は２に記載の炭水化物結合モジュール。

【請求項4】

炭水化物結合モジュールが、ＣＢＭ３２である、請求項３に記載の使用のための請求項３に記載の炭水化物結合分子。

【請求項5】

がんが、
（ａ） 卵巣がん；
（ｂ） 肺がん；
（ｃ） 結腸がん；及び
（ｄ） 乳がん
からなる群より選択される、請求項４に記載の使用のための請求項４に記載の炭水化物結合モジュール。

【請求項6】

細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための炭水化物結合モジュールを含む分子であって、
（ｉ） 単一のＣＢＭ３２；
（ｉｉ） 単一のＣＢＭ４７；
（ｉｉｉ） 単一のＣＢＭ６７；
（ｉｖ） 単一のＣＢＭ７０；
（ｖ） 単一のＣｐＣＢＭ３２；
（ｖｉ） 単一のＳｐＣＢＭ４７；
（ｖｉｉ） 単一のＳａＣＢＭ６７；及び
（ｖｉｉｉ） 単一のＳｐＣＢＭ７０
からなる群より選択される単一のＣＢＭを含む、分子。

【請求項7】

細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための２個以上の炭水化物結合モジュールを含む分子であって、
（ｉ） ＣＢＭ３２；
（ｉｉ） ＣＢＭ４７；
（ｉｉｉ） ＣＢＭ６７；
（ｉｖ） ＣＢＭ７０；
（ｖ） ＣｐＣＢＭ３２；
（ｖｉ） ＳｐＣＢＭ４７；
（ｖｉｉ） ＳａＣＢＭ６７；及び
（ｖｉｉｉ） ＳｐＣＢＭ７０
からなる群より選択される２個以上のＣＢＭを含む、分子。

【請求項8】

（ｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための分子。

【請求項9】

がんの処置及び／又は予防における使用のためのものである、請求項６から８に記載の使用のための請求項６から８のいずれか一項に記載の分子。

【請求項10】

（ｉ） １個又は２個以上のＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個又は２個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉｉ） 配列番号１の配列、配列番号２の配列又はその炭水化物結合部分を含む１つ又は２つ以上のペプチド又はタンパク質を含む分子；及び
（ｉｖ） ＣｐＣＢＭ３２ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、請求項９に記載の使用のための請求項９に記載の分子。

【請求項11】

がんが、
（ａ） 卵巣がん；
（ｂ） 肺がん；
（ｃ） 結腸がん；及び
（ｄ） 乳がん
からなる群より選択される、請求項１０に記載の使用のための請求項１０に記載の分子。

【請求項12】

（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子を含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、がんの処置及び／又は予防における使用のための分子。

【請求項13】

難治性（又は耐性）がんの処置及び／又は予防における使用のための、ＣＢＭ３２及び／若しくはＣＢＭ４０として分類される炭水化物結合モジュール、又は、ＣＢＭ３２及び／若しくはＣＢＭ４０として分類される炭水化物結合モジュールを含む分子。

【請求項14】

（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、請求項１３に記載の使用のための請求項１３に記載の分子の炭水化物結合モジュール。

【請求項15】

炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）の炭水化物結合モジュールが、配列番号１若しくは配列番号２又はその炭水化物結合部分を含み、炭水化物結合モジュールファミリー４０（ＣＢＭ４０）の炭水化物結合モジュールが、
（ｉ） 配列番号２３又はその炭水化物結合部分、
（ｉｉ） 配列番号２４又はその炭水化物結合部分、
（ｉｉｉ） 配列番号２５又はその炭水化物結合部分；及び
（ｉｖ） 配列番号２６又はその炭水化物結合部分
からなる群より選択される配列を含む、請求項１３又は１４に記載の使用のための請求項１３又は１４に記載の炭水化物結合モジュール又は分子。

【請求項16】

難治性（又は耐性）卵巣がんの処置における使用のための、ＣｐＣＢＭ３２、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び／又は、Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子。

【誤訳訂正3】

【訂正対象書類名】図面

【訂正対象項目名】全図

【訂正方法】変更

【訂正の内容】

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【手続補正書】

【提出日】2021-10-12

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）の炭水化物結合モジュール；
（ｉｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー４７（ＣＢＭ４７）の炭水化物結合モジュール；
（ｉｉｉ） 炭水化物結合モジュールファミリー６７（ＣＢＭ６７）の炭水化物結合モジュール；及び
（ｉｖ） 炭水化物結合モジュールファミリー７０（ＣＢＭ７０）の炭水化物結合モジュール
からなる群より選択される、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための炭水化物結合モジュール。

【請求項2】

炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）の炭水化物結合モジュールが、配列番号１若しくは配列番号２又はその炭水化物結合部分を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の炭水化物結合モジュール。

【請求項3】

がんの処置及び／又は予防における使用のためのものである、請求項１又は２に記載の使用のための請求項１又は２に記載の炭水化物結合モジュール。

【請求項4】

炭水化物結合モジュールが、ＣＢＭ３２である、請求項３に記載の使用のための請求項３に記載の炭水化物結合分子。

【請求項5】

がんが、
（ａ） 卵巣がん；
（ｂ） 肺がん；
（ｃ） 結腸がん；及び
（ｄ） 乳がん
からなる群より選択される、請求項４に記載の使用のための請求項４に記載の炭水化物結合モジュール。

【請求項6】

細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための炭水化物結合モジュールを含む分子であって、
（ｉ） 単一のＣＢＭ３２；
（ｉｉ） 単一のＣＢＭ４７；
（ｉｉｉ） 単一のＣＢＭ６７；
（ｉｖ） 単一のＣＢＭ７０；
（ｖ） 単一のＣｐＣＢＭ３２；
（ｖｉ） 単一のＳｐＣＢＭ４７；
（ｖｉｉ） 単一のＳａＣＢＭ６７；及び
（ｖｉｉｉ） 単一のＳｐＣＢＭ７０
からなる群より選択される単一のＣＢＭを含む、分子。

【請求項7】

細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための２個以上の炭水化物結合モジュールを含む分子であって、
（ｉ） ＣＢＭ３２；
（ｉｉ） ＣＢＭ４７；
（ｉｉｉ） ＣＢＭ６７；
（ｉｖ） ＣＢＭ７０；
（ｖ） ＣｐＣＢＭ３２；
（ｖｉ） ＳｐＣＢＭ４７；
（ｖｉｉ） ＳａＣＢＭ６７；及び
（ｖｉｉｉ） ＳｐＣＢＭ７０
からなる群より選択される２個以上のＣＢＭを含む、分子。

【請求項8】

（ｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、細胞成長及び／又は細胞活性を調節する方法における使用のための分子。

【請求項9】

がんの処置及び／又は予防における使用のためのものである、請求項６から８に記載の使用のための請求項６から８のいずれか一項に記載の分子。

【請求項10】

（ｉ） １個又は２個以上のＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個又は２個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉｉ） 配列番号１の配列、配列番号２の配列又はその炭水化物結合部分を含む１つ又は２つ以上のペプチド又はタンパク質を含む分子；及び
（ｉｖ） ＣｐＣＢＭ３２ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、請求項９に記載の使用のための請求項９に記載の分子。

【請求項11】

がんが、
（ａ） 卵巣がん；
（ｂ） 肺がん；
（ｃ） 結腸がん；及び
（ｄ） 乳がん
からなる群より選択される、請求項１０に記載の使用のための請求項１０に記載の分子。

【請求項12】

（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） １個以上のＳｐＣＢＭ４７を含む分子；
（ｉｉｉ） １個以上のＳａＣＢＭ６７を含む分子；
（ｉｖ） １個以上のＳｐＣＢＭ７０を含む分子；
（ｖ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｖｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ４７ＴＤを含む分子を含む分子；
（ｖｉｉ） Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤを含む分子；及び
（ｖｉｉｉ） Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、がんの処置及び／又は予防における使用のための分子。

【請求項13】

難治性（又は耐性）がんの処置及び／又は予防における使用のための、ＣＢＭ３２及び／若しくはＣＢＭ４０として分類される炭水化物結合モジュール、又は、ＣＢＭ３２及び／若しくはＣＢＭ４０として分類される炭水化物結合モジュールを含む分子。

【請求項14】

（ｉ） １個以上のＣｐＣＢＭ３２を含む分子；
（ｉｉ） Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；
（ｉｉｉ） Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び
（ｉｖ） Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子
からなる群より選択される、請求項１３に記載の使用のための請求項１３に記載の分子の炭水化物結合モジュール。

【請求項15】

炭水化物結合モジュールファミリー３２（ＣＢＭ３２）の炭水化物結合モジュールが、配列番号１若しくは配列番号２又はその炭水化物結合部分を含み、炭水化物結合モジュールファミリー４０（ＣＢＭ４０）の炭水化物結合モジュールが、
（ｉ） 配列番号２４又はその炭水化物結合部分、
（ｉｉ） 配列番号２５又はその炭水化物結合部分、
（ｉｉｉ） 配列番号２６又はその炭水化物結合部分；及び
（ｉｖ） 配列番号２７又はその炭水化物結合部分
からなる群より選択される配列を含む、請求項１３又は１４に記載の使用のための請求項１３又は１４に記載の炭水化物結合モジュール又は分子。

【請求項16】

難治性（又は耐性）卵巣がんの処置における使用のための、ＣｐＣＢＭ３２、Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤを含む分子；Ｖｃ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子；及び／又は、Ｓｐ２ＣＢＭ４０ＴＤを含む分子。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0068】

使用のための分子の１つは、「Ｃｐ２ＣＢＭ３２ＴＤ」と呼ばれ、このコンストラクトは、クロストリジウム・パーフリンジェンスに由来する２個のＣＢＭ３２分子をそれ自体が含む、Ｃｐ２ＣＢＭ３２単位（灰色のハイライト）を含み、２コピーのＣＢＭ３２が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ３２のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＣｐ２ＣＢＭ３２ＴＤの配列は、配列番号２０として下記に規定されている。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0069】

使用のための分子の１つは、「Ｓｐ２ＣＢＭ４７Ｔ」と呼ばれ、このコンストラクトは、ストレプトコッカス・ニューモニアエに由来する２個のＣＢＭ４７分子をそれ自体が含む、Ｓｐ２ＣＢＭ４７単位（灰色のハイライト）を含み、２コピーのＣＢＭ４７が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ４７のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＳｐ２ＣＢＭ４７ＴＤの配列は、配列番号２１として下記に規定されている。

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００７０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0070】

使用のための分子の１つは、「Ｓａ２ＣＢＭ６７ＴＤ」と呼ばれ、このコンストラクトは、ストレプトコッカス・アベルミティリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）に由来する２個のＣＢＭ６７分子をそれ自体が含む、Ｓａ２ＣＢＭ６７単位（灰色のハイライト）を含み、２コピーのＣＢＭ６７が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ６７のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＳａ２ＣＢＭ６７ＴＤの配列は、配列番号２２として下記に規定されている。

【手続補正5】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００７１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0071】

使用のための分子の１つは、「Ｓｐ２ＣＢＭ７０ＴＤ」と呼ばれ、このコンストラクトは、ストレプトコッカス・ニューモニアエに由来する２個のＣＢＭ７０分子（灰色のハイライト）をそれ自体が含む、Ｓｐ２ＣＢＭ７０単位を含み、２コピーのＣＢＭ７０が、短いペプチドリンカー分子（点線の下線）によってタンデムに連結されている。コンストラクトは、別の短いリンカー部分（太い下線）を介して２個のＣＢＭ７０のうちの１つにそれ自体が融合した、トリマー化ドメイン（ＴＤ：下線）をさらに含む。例示的なＳｐ２ＣＢＭ７０ＴＤの配列は、配列番号２３として下記に規定されている。

【手続補正6】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0105】

すでに本明細書で説明されたＣＢＭ３２に加えて、使用のための例示的なＣＢＭ４０は、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）ＮａｎＨシアリダーゼのシアル酸結合ドメイン（ＶｃＣＢＭ：ＣＢＭ４０）及び／又はストレプトコッカス・ニューモニアエＮａｎＡシアリダーゼの等価な（若しくは相同な）ドメイン（ＳｐＣＢＭ：同様にＣＢＭ４０）を含むことができる。当然ながら、他の有機体中に存在する類似する又は相同なシアル酸結合モジュールは、「ＣＢＭ」及び「ＣＢＭ４０」という用語の範囲に包摂されるものとする。例示的なビブリオ・コレレＮａｎＨシアリダーゼのアミノ酸配列は、受託番号Ａ５Ｆ７Ａ４として寄託されており、配列番号２４（７８１個のアミノ酸）として下記に再現される。

【手続補正7】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0106】

配列番号２４のＣＢＭ領域は、アミノ酸残基２５～２１６であり、この配列は、配列番号２５であってもよい。

【手続補正8】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0107】

例示的なストレプトコッカス・ニューモニアエＮａｎＡシアリダーゼアミノ酸配列は、受託番号Ｐ６２５７５として寄託されており、配列番号２６（１０３５個のアミノ酸）として下記に再現される。

【手続補正9】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0108】

配列番号２６のＣＢＭ領域は、アミノ酸残基１２１～３０５であり、この配列は、配列番号２７であってもよい。

【手続補正10】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0109】

したがって、難治性がんの処置における使用のための分子は、配列番号２４若しくは２５の配列又はそのシアル酸結合フラグメントを有するタンパク質又はペプチドを含むことができる。例えば、有用なシアル酸結合分子は、（配列番号２４によって規定された）Ｖ．コレレの（シアリダーゼをコードする）ｎａｎＨ遺伝子のシアル酸結合ドメインによってコードされるタンパク質部分、又は、別の有機体中に存在する等価若しくは相同な遺伝子（例えば、等価／相同なＳ．ニューモニアエのｎａｎＡシアリダーゼ遺伝子：配列番号２６を参照されたい。）を含んでもよい。難治性がんの処置における使用のためのＣＢＭ４０は、配列番号２４又は２５のＶ．コレレシアリダーゼ分子の概ね残基１、５、１０、１５、２５又は３０（すなわち、１～３０又はそれらの間にある任意のアミノ酸残基）から概ね残基１５０、１７５、２００、２１０、２１６、２２０～７８１（それらの間にある任意の残基を含む、１５０～７８１までの任意の残基）までを含むことができる。例えば、難治性がんの処置における使用のためのＣＢＭ４０は、上記配列番号２４の残基２５から概ね残基２１６までに対応する配列を有するペプチドを含んでもよい。

【手続補正11】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１１０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0110】

難治性がんの処置における使用に適したさらなるＣＢＭ４０は、配列番号２６若しくは２７の配列又はそのシアル酸結合フラグメントを有するタンパク質又はペプチドを含むことができる。例えば、有用なものは、（シアリダーゼをコードする）ストレプトコッカス・ニューモニアエｎａｎＡ遺伝子のシアル酸結合ドメインによってコードされるタンパク質部分を含むことができる。がんの処置における使用のためのＣＢＭ４０は、配列番号２６及び２７のＳ．ニューモニアエシアリダーゼ分子の概ね残基８０、９０、１００、１１０、１２０、１２１～１３０（すなわち、それらの間にある任意の残基を含む、概ね残基８０～１３０のいずれか）から概ね残基２５０、２７５、３００、３０５、３１０、３２０～１０３５（すなわち、それらの間にある概ね任意の残基を含む、約２５０～１０３５までの任意の残基）までを含むことができる。例えば、使用のためのＣＢＭ４０は、上記配列番号２６の残基１２１から概ね残基３０５までに対応する配列を有するペプチドを含んでもよい。

【手続補正12】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１１１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0111】

有用なＣＢＭ４０が、配列番号２４、２５、２６及び２７のＣＢＭ４０配列との間にある程度（例えば、９９％、９５％、９０％、８
５％、８０％、７５％、７０％、６５％又は６０％）の配列同一性又は相同性を示す配列を含み得ることは、当業者ならば理解されよう。すべてのこのようなバリアント又は分岐配列は、本開示の範囲及び「ＣＢＭ４０」という用語に包含されるものとする。同一の及び／又は相同なＣＢＭ４０配列は、炭水化物結合機能を有し得る。

【国際調査報告】