特表 2022-519328 癌の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-22

(54)【発明の名称】癌の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20220314BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220314BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220314BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20220314BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 31/4166 20060101ALI20220314BHJP

   A61K 31/4439 20060101ALI20220314BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20220314BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20220314BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H

A61P35/00

A61P43/00 111

A61P43/00 121

A61P37/04

A61K31/7088

A61K45/06

A61K39/395 T

A61K48/00

A61K39/39

A61K39/395 N

A61K38/19

A61P13/08

A61K31/4166

A61K31/4439

C12N15/12 ZNA

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021546363

(86)(22)【出願日】2020-02-07

(85)【翻訳文提出日】2021-10-06

(86)【国際出願番号】 US2020017172

(87)【国際公開番号】W WO2020163690

(87)【国際公開日】2020-08-13

(31)【優先権主張番号】62/802,813

(32)【優先日】2019-02-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518286769

【氏名又は名称】マディソン ヴァクシーンズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】特許業務法人ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】マクニール，ダグ

(72)【発明者】

【氏名】レシニェフスキ，リチャード アール．

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084AA20

4C084BA44

4C084CA53

4C084DA19

4C084MA02

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA10

4C084NA14

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC021

4C084ZC022

4C084ZC421

4C084ZC422

4C084ZC751

4C085AA03

4C085AA14

4C085AA38

4C085CC23

4C085DD62

4C085DD86

4C085EE03

4C085EE06

4C085FF24

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG05

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC38

4C086EA16

4C086GA07

4C086GA08

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA65

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA10

4C086NA14

4C086ZA81

4C086ZB09

4C086ZB26

4C086ZC02

4C086ZC42

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

癌の治療および予防に関する技術を提供する。とりわけ、前立腺癌の治療に関する組成物および方法を提供する（ただし、これに限定されるものではない）。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

被験体における前立腺癌を治療する方法であって、以下の工程を含む方法：
（ａ）被験体に１つ以上のワクチンを投与する工程であって、
上記ワクチンは、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）遺伝子とアンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子のリガンド結合ドメインとからなる群より選択されるヌクレオチド配列を有する核酸を含んでいる、工程；
（ｂ）上記被験体に、ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）阻害剤を投与する工程；
（ｃ）上記被験体に、アンドロゲン受容体拮抗剤を投与する工程；
ここで、上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、８～１６週間にわたり併用投与し、
これに続いて、上記ワクチン、上記ＰＤ－１阻害剤および上記アンドロゲン受容体拮抗剤を、８～１６週間にわたり併用投与する。

【請求項2】

上記併用投与は、
上記ワクチンを投与する工程と、
これに続いて、上記ワクチンの投与から２４時間以内に、上記ＰＤ－１阻害剤および／または上記アンドロゲン受容体拮抗剤を投与する工程と、
を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

上記核酸は、転写調節因子および／または免疫刺激配列をさらに有している、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

ＰＡＰ遺伝子またはＡＲ遺伝子に由来する上記ヌクレオチド配列は、転写調節因子に作動可能に連結されている、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

上記ＰＡＰ遺伝子は、ヒトＰＡＰ遺伝子である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

上記ＰＡＰ遺伝子は、齧歯類ＰＡＰ遺伝子である、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

上記ＡＲ遺伝子は、ヒトである、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

上記被験体は、ヒトである、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

上記核酸は、ｐＴＶＧ４－ＨＰである、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

上記ＰＤ－１阻害剤は、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

上記ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３またはニボルマブである、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

上記ヌクレオチド配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号６、これらの一部、またはこれらの置換変異体に由来するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

上記ＰＤ－１阻害剤を１～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、上記ワクチンを約１００μｇの量で投与する、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

上記ＰＤ－１阻害剤を静脈内投与する、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

上記アンドロゲン受容体拮抗剤は、エンザルタミドまたはアパルタミドである、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

上記エンザルタミドを１６０ｍｇの用量で投与し、上記アパルタミドを２４０ｍｇの用量で投与する、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

上記ワクチンは、アジュバントをさらに含んでいる、請求項１に記載の方法。

【請求項18】

上記ワクチンは、ＧＭ－ＣＳＦをさらに含んでいる、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

上記ワクチンを皮内投与または経皮投与する、請求項１に記載の方法。

【請求項20】

上記ワクチンを約３週間ごとに投与する、請求項１に記載の方法。

【請求項21】

上記ワクチン、上記アンドロゲン受容体拮抗剤および上記ＰＤ－１阻害剤を複数回投与し、
上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤の最初の併用投与の後、
上記ワクチンを、１０～２１日ごとに投与し、
上記ＰＤ－１阻害剤を、最長９０日間にわたって１７～２８日ごとに投与し、
上記アンドロゲン受容体拮抗剤を、上記ワクチンの最初の投与の約８～１２週間後から最長９０日間にわたって、毎日投与する、
請求項１に記載の方法。

【請求項22】

上記アンドロゲン受容体拮抗剤を、９０日間にわたり毎日投与し、
これに続いて、上記アンドロゲン受容体拮抗剤を投与しない期間を設ける、
請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

上記アンドロゲン受容体拮抗剤の投与を、９０日ごとに繰り返す、請求項２１または２２に記載の方法。

【請求項24】

上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、最長９０日間にわたって、１０～２８日ごとに併用投与する、請求項１に記載の方法。

【請求項25】

上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、９１～３６５日間にわたって、１０～２８日ごとに併用投与する工程さらに含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、３６６～７３０日間にわたって、１０～２８日ごとに投与する工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

上記ワクチンは、ＰＡＰに対する第１ワクチンおよびＡＲに対する第２ワクチンを含んでおり、
上記第１ワクチンおよび上記第２ワクチンを併用投与する、
請求項２４に記載の方法。

【請求項28】

上記方法により、上記被験体における抗腫瘍反応が生じ、
上記抗腫瘍反応は、上記ワクチンの単独投与または上記ワクチンと上記ＰＤ－１阻害剤との組合せ投与と比較して優れている、
請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

上記方法により、ＰＡＰ特異的Ｔ細胞および／またはＡＲ特異的Ｔ細胞の数が増加する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

上記方法により、被験体におけるＰＡＰ特異的抗体および／またはＡＲ特異的抗体の量が増加する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

上記方法により、ＰＳＡレベルが検出不能となる、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

上記検出不能なＰＳＡレベルは、上記アンドロゲン受容体拮抗剤の投与停止後においても持続する、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

上記検出不能なレベルは、上記アンドロゲン受容体拮抗剤の投与停止後、６箇月間以上持続する、請求項３１または３２に記載の方法。

【請求項34】

（１）前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）遺伝子とアンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子のリガンド結合ドメインとからなる群より選択されるヌクレオチド配列を有する核酸を含有するワクチンを含んでいる、第１医薬組成物と、
（２）ＰＤ－１阻害剤を含んでいる、第２医薬組成物と、
（３）アンドロゲン受容体拮抗剤を含んでいる、第３医薬組成物と、
を備えている、キット。

【請求項35】

上記ＰＡＰ遺伝子は、ヒトＰＡＰ遺伝子または齧歯類ＰＡＰ遺伝子である、請求項３４に記載のキット。

【請求項36】

上記ＡＲ遺伝子は、ヒトである、請求項３４に記載のキット。

【請求項37】

上記第２医薬組成物は、ペムブロリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３またはニボルマブを含んでいる、請求項３４に記載のキット。

【請求項38】

上記第３医薬組成物は、エンザルタミドまたはアパルタミドを含んでいる、請求項３４に記載のキット。

【請求項39】

上記第１医薬組成物、上記第２医薬組成物および上記第３医薬組成物を、単回用量として含んでいる、請求項３４に記載のキット。

【請求項40】

上記第１医薬組成物の量、上記第２医薬組成物の量および上記第３医薬組成物の量は、核酸ワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびアンドロゲン受容体拮抗剤を複数回投与する投薬スケジュールのための用量に対して充分な量である、請求項３４に記載のキット。

【請求項41】

上記ヌクレオチド配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号６に記載の配列によって与えられるポリペプチドまたはペプチドをコードする、請求項３４に記載のキット。

【請求項42】

それを必要とする被験体の前立腺癌を治療するための、
前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）遺伝子および／またはＡＲ遺伝子に由来するヌクレオチド配列を有する核酸を含んでいるワクチン、
ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）阻害剤、ならびに、
アンドロゲン受容体拮抗剤
の使用であって、
上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、８～１６週間にわたって併用投与し、
これに続いて、上記ワクチン、上記ＰＤ－１阻害剤および上記アンドロゲン受容体拮抗剤を８～１６週間にわたって併用投与する、
使用。

【請求項43】

上記併用投与は、
上記ワクチンを投与する工程と、
これに続いて、上記ワクチンの投与から２４時間以内に、上記ＰＤ－１阻害剤および／または上記アンドロゲン受容体拮抗剤を投与する工程と、
を含む、請求項４２に記載の使用。

【請求項44】

上記核酸は、転写調節因子および／または免疫刺激配列をさらに含んでいる、請求項４２または４３に記載の使用。

【請求項45】

上記ＰＡＰ遺伝子に由来するヌクレオチド配列は、転写調節因子に作動可能に連結されている、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の使用。

【請求項46】

上記ＰＡＰ遺伝子は、ヒトＰＡＰ遺伝子である、請求項４２～４５のいずれか１項に記載の使用。

【請求項47】

上記ＰＡＰ遺伝子は、齧歯類ＰＡＰ遺伝子である、請求項４２～４５のいずれか１項に記載の使用。

【請求項48】

上記ＡＲ遺伝子は、ヒトである、請求項４２～４７のいずれか１項に記載の使用。

【請求項49】

上記被験体は、ヒトである請求項４２～４８のいずれか１項に記載の使用。

【請求項50】

上記核酸は、ｐＴＶＧ４－ＨＰである、請求項４２～４９のいずれか１項に記載の使用。

【請求項51】

上記ＰＤ－１阻害剤は、モノクローナル抗体である、請求項４２～５０のいずれか１項に記載の使用。

【請求項52】

上記ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３またはニボルマブである、請求項５１に記載の使用。

【請求項53】

上記ヌクレオチド配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号６、これらの一部、またはこれらの置換変異体に由来するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする、請求項４２～５２のいずれか１項に記載の使用。

【請求項54】

上記ＰＤ－１阻害剤を１～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、上記ワクチンを約１００μｇの量で投与する、請求項４２～４３のいずれか１項に記載の使用。

【請求項55】

上記ＰＤ－１阻害剤を静脈内投与する、請求項４２～５４のいずれか１項に記載の使用。

【請求項56】

上記アンドロゲン受容体拮抗剤は、エンザルタミドまたはアパルタミドである請求項４２～５５のいずれか１項に記載の使用。

【請求項57】

上記エンザルタミドを１６０ｍｇの用量で投与し、上記アパルタミドを２４０ｍｇの用量で投与する、請求項５６に記載の使用。

【請求項58】

上記ワクチンは、アジュバントをさらに含んでいる、請求項４２～５７のいずれか１項に記載の使用。

【請求項59】

上記ワクチンは、ＧＭ－ＣＳＦをさらに含んでいる、請求項４２～５８のいずれか１項に記載の使用。

【請求項60】

上記ワクチンを皮内投与または経皮投与する、請求項４２～５９のいずれか１項に記載の使用。

【請求項61】

上記ワクチンを約３週間ごとに投与する、請求項４２～６０のいずれか１項に記載の使用。

【請求項62】

上記ワクチン、上記アンドロゲン受容体拮抗剤および上記ＰＤ－１阻害剤を複数回投与し、
上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤の最初の併用投与の後、
上記ワクチンを、１０～２１日ごとに投与し、
上記ＰＤ－１阻害剤を、最長９０日間にわたって１７～２８日ごとに投与し、
上記アンドロゲン受容体拮抗剤を、上記ワクチンの最初の投与の約８～１２週間後から最長９０日間にわたって、毎日投与する、
請求項４２から６１のいずれか一項記載の使用。

【請求項63】

上記アンドロゲン受容体拮抗剤を、９０日間にわたり毎日投与し、
これに続いて、上記アンドロゲン受容体拮抗剤を投与しない期間を設ける、
請求項６２に記載の使用。

【請求項64】

上記アンドロゲン受容体拮抗剤の投与を、９０日ごとに繰り返す、請求項６３に記載の使用。

【請求項65】

上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、最長９０日間にわたって、１０～２８日ごとに併用投与する、請求項４２～６４のいずれか１項に記載の使用。

【請求項66】

上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、９１～３６５日間にわたって、１０～２８日ごとに併用投与する工程さらに含む、請求項４２～６５のいずれか１項に記載の使用。

【請求項67】

上記ワクチンおよび上記ＰＤ－１阻害剤を、３６６～７３０日間にわたって、１０～２８日ごとに投与する工程をさらに含む、請求項４２～６６のいずれか１項に記載の使用。

【請求項68】

上記ワクチンは、ＰＡＰに対する第１ワクチンおよびＡＲに対する第２ワクチンを含んでおり、
上記第１ワクチンおよび上記第２ワクチンを併用投与する、
請求項４２～６７のいずれか１項に記載の使用。

【請求項69】

上記方法により、上記被験体における抗腫瘍反応が生じ、
上記抗腫瘍反応は、上記ワクチンの単独投与または上記ワクチンと上記ＰＤ－１阻害剤との組合せ投与と比較して優れている、
請求項４２～６８のいずれか１項に記載の使用。

【請求項70】

上記方法により、ＰＡＰ特異的Ｔ細胞および／またはＡＲ特異的Ｔ細胞の数が増加する、請求項４２～６９のいずれか１項に記載の使用。

【請求項71】

上記方法により、被験体におけるＰＡＰ特異的抗体および／または特異的抗体の量が増加する、請求項４２～７０のいずれか１項に記載の使用。

【請求項72】

上記方法により、ＰＳＡレベルが検出不能となる、請求項４２～７１のいずれか１項に記載の使用。

【請求項73】

上記検出不能なＰＳＡレベルは、上記アンドロゲン受容体拮抗剤の投与停止後においても持続する、請求項７２に記載の使用。

【請求項74】

上記検出不能なレベルは、上記アンドロゲン受容体拮抗剤の投与停止後、６箇月間以上持続する、請求項７２または７３に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

〔関連出願の相互参照〕
本出願は、米国仮出願第６２／８０２，８１３号（２０１９年２月８日出願）の優先権および利益を主張する。同仮出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

〔技術分野〕
本明細書において提供される技術は、癌の治療および予防に関連しており、とりわけ前立腺癌の治療に関する組成物および方法に関連している（ただし、これに限定されるものではない）。

【背景技術】

【0003】

アメリカ合衆国において、前立腺癌は、男性に最も多くみられる癌である。２０１７年のアメリカ癌学会の予測によると、前立腺癌の新規診断は約１６１，３６０件であり、前立腺癌に起因する死亡は約２６，７３０件である。

【0004】

早期前立腺癌の治療としては、通常、注意深い経過観察またはモニタリング、根治的前立腺摘除術、放射線療法（単独療法またはアンドロゲン遮断療法（ＡＤＴ）との組合せ療法）が挙げられる。

【0005】

進行前立腺癌は、ＡＤＴで治療する。現在のところ、根治的前立腺全摘除術は、進行癌の症例に対する選択肢ではない。これは、この療法は身体の他の部位に転移した癌を治療するものではないからである。

【0006】

進行前立腺癌および侵襲性前立腺癌に対する、さらなる治療が必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本明細書にて提供される技術は、癌の治療および予防に関連しており、とりわけ前立腺癌の治療に関する組成物および方法に関連している（ただし、これに限定されるものではない）。

【0008】

本明細書に記載の組成物および方法により、前立腺癌の治療のための既存のプロトコルよりも改善された治療が提供される。本明細書に記載の方法によれば、アンドロゲン受容体拮抗剤と、１つ以上のＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害とを組合せた間欠治療によって、進行前立腺癌の被験体のテストステロン減少療法による副作用を回避または遅延させられる。それゆえ、この被験体はＱＯＬが改善される。

【0009】

例えば、いくつかの実施形態において、本明細書では、被験体（例えば、ヒト被験体）における前立腺癌を治療する方法を提供する。この方法は、以下の工程を含む。

【0010】

（ａ）被験体に１つ以上のワクチンを投与する工程。このワクチンは、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）遺伝子とアンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子のリガンド結合ドメインとからなる群より選択されるヌクレオチド配列を有する核酸を含んでいる。

【0011】

（ｂ）被験体に、ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）阻害剤を投与する工程。

【0012】

（ｃ）被験体に、アンドロゲン受容体拮抗剤を投与する工程。

【0013】

ここで、ワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびアンドロゲン受容体拮抗剤は、併用投与する。

【0014】

さらなる実施形態においては、それを必要とする被験体の前立腺癌を治療するための、下記の使用が提供される。

【0015】

（ａ）前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）遺伝子および／またはＡＲ遺伝子に由来するヌクレオチド配列を有する核酸を含んでいるワクチン
（ｂ）ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）阻害剤
（ｃ）アンドロゲン受容体拮抗剤
ここで、ワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびアンドロゲン受容体拮抗剤は、併用投与する。

【0016】

いくつかの実施形態において、併用投与は、下記の工程を含む。

【0017】

（ａ）ワクチンを投与する工程。

【0018】

（ｂ）これに続いて、ワクチンの投与から２４時間以内に、ＰＤ－１阻害剤およびアンドロゲン受容体拮抗剤を投与する工程。

【0019】

本発明は、特定のＰＡＰ遺伝子またはＡＲ遺伝子に限定されない。いくつかの実施形態において、ＰＡＰ遺伝子またはＡＲ遺伝子は、ヒトＰＡＰ遺伝子または齧歯類ＰＡＰ遺伝子である。いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列がコードするポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号６、これらの一部、またはこれらの置換変異体であるアミノ酸配列を有している。いくつかの実施形態において、核酸は、ｐＴＶＧ４－ＨＰを有している。いくつかの実施形態において、核酸は、転写調節因子および／または免疫刺激配列をさらに有している。いくつかの実施形態において、ＰＡＰ遺伝子またはＡＲ遺伝子に由来するヌクレオチド配列は、転写調節因子に作動可能に連結されている。

【0020】

本発明は、特定のＰＤ－１阻害剤に限定されない。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、モノクローナル抗体である（例えば、ペムブロリズマブ、ＪＮＪ－６３７２３２８３またはニボルマブ）。いくつかの実施形態においては、１～５ｍｇ／ｋｇの用量でＰＤ－１阻害剤を投与する。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１阻害剤を、１５０～２５０ｍｇ（好ましくは１８０～２００ｍｇ、最も好ましくは約２００ｍｇ）の用量で、３週間または４週間ごとに投与する。あるいは、ＰＤ－１阻害剤を、２２０～２６０ｍｇ（最も好ましくは約２４０ｍｇ）の用量で、２週間ごとに投与する。あるいは、ＰＤ－１阻害剤を、４５０～５１０ｍｇ（最も好ましくは４８０ｍｇ）の用量で、４週間ごとに投与する。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１阻害剤を静脈内投与する。

【0021】

本発明は、特定のアンドロゲン受容体拮抗剤に限定されない。いくつかの実施形態において、アンドロゲン受容体拮抗剤は、エンザルタミドまたはアパルタミドである。いくつかの実施形態においては、エンザルタミドを、１２０～２００ｍｇ（好ましくは１４０～１８０ｍｇ、最も好ましくは約１６０ｍｇ）の用量で、毎日投与する。あるいは、エンザルタミドを、２１０～２７０ｍｇ（より好ましくは約２４０ｍｇ）用量で、毎日投与する。また、アパルタミドを、２１０～２７０ｍｇ（より好ましくは約２４０ｍｇ）の用量で、毎日投与する。

【0022】

いくつかの実施形態において、ワクチンは、アジュバント（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ）をさらに含んでいる。いくつかの実施形態においては、ワクチンを、皮内投与または経皮投与する。いくつかの実施形態においては、ワクチンを、約１００μｇの量で投与する。いくつかの実施形態においては、ワクチンを、約１～４ごと（例えば、３週間ごと）に投与する。

【0023】

いくつかの実施形態においては、ワクチン、アンドロゲン受容体拮抗剤、およびＰＤ－１阻害剤を複数回投与する。この複数回投与において、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を最初に併用投与した後、（ａ）ワクチンは、１０～２１日ごとに投与し；（ｂ）ＰＤ－１阻害剤は、最長９０日間にわたって１７～３０日ごとに投与し；（ｃ）アンドロゲン受容体拮抗剤は、ワクチンの最初の投与の１～１６週間後（最も好ましくは約１２週間後）から、最長９０日間にわたって、毎日投与する。いくつかの実施形態においては、（ａ）アンドロゲン受容体拮抗剤を、９０日間にわたり毎日投与し；（ｂ）これに続いて、アンドロゲン受容体拮抗剤を投与しない期間を設ける。例えば、いくつかの実施形態においては、アドロゲン受容体拮抗剤を投与しない９０日間の休止期間の後に、アンドロゲン受容体拮抗剤を毎日投与することを、９０日ごとに繰り返す。いくつかの実施形態においては、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を、最長９０日間にわたって、１０～２８日ごとに併用投与する。いくつかの実施形態においては、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を、９１～３６５日間（または３６６～７３０日間）にわたって、１０～２８日ごとに投与する。いくつかの実施形態において、ワクチンは、ＰＡＰに対する第１ワクチンおよびＡＲに対する第２ワクチンを含んでおり、第１ワクチンおよび第２ワクチンを併用投与する（例えば、別々のまたは同じ医薬組成物中において）。

【0024】

いくつかの実施形態において、上述の方法または使用により被験体に生じる抗腫瘍反応は、ワクチンの単独投与またはワクチンとＰＤ－１阻害剤との組合せ投与と比較して優れている。いくつかの実施形態においては、上述の方法または使用によって、被験体におけるＰＡＰ特異的Ｔ細胞および／またはＡＲ特異的Ｔ細胞の数が増加するか、あるいは、被験体におけるＰＡＰ特異的抗体および／またはＡＲ特異的抗体の数が増加する。いくつかの実施形態においては、上述の方法または使用により、ＰＳＡレベルが検出不能となる。この状態は、例えば、アンドロゲン受容体拮抗剤の投与の中断後でも持続する（例えば、アンドロゲン受容体拮抗剤の投与の中断から、１箇月後、４箇月後、６箇月後、１２箇月後、２４箇月後、またはそれ以上経過後）。

【0025】

さらなる実施形態においては、下記を備えているキットを提供する。

【0026】

（１）前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）遺伝子とアンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子のリガンド結合ドメインとからなる群より選択されるヌクレオチド配列を有する核酸を含んでいるワクチンを含んでいる、第１医薬組成物
（２）ＰＤ－１阻害剤を含んでいる、第２医薬組成物
（３）アンドロゲン受容体拮抗剤を含んでいる、第３医薬組成物
いくつかの実施形態においては、第１医薬組成物、第２医薬組成物および第３医薬組成物を、単回用量として提供する。いくつかの実施形態において、キットが備えている第１医薬組成物の量、第２医薬組成物の量および第３医薬組成物の量は、核酸ワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびアンドロゲン受容体拮抗剤を複数回投与する投薬スケジュールのための用量に対して充分な量である。

【0027】

本明細書に含まれる教示に基づけば、関連技術の当業者にとって、さらなる実施形態の存在は明白であろう。

【0028】

本技術に関して上述した（および他の）特徴、態様および利点は、以下の図面に関連して、より良く理解されるであろう。

【0029】

以下で理解されたいことには、図は必ずしも一定の縮尺で描かれている訳ではなく、面中の対象の縮尺関係も必ずしも一定ではない。図は、本明細書において開示されている装置、システムおよび方法の種々の実施形態を明確にし、理解することを意図して描かれている。図面を通して、同一の参照符号は、可能な限り同一または類似の構成要素を参照するために用いている。また、図面は、いかなる形でも本教示の範囲を限定することを意図していないことを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1A】図１Ａは、研究の１日目以降における、血清ＰＳＡの最良の変化（％）を示している。アスタリスクは、ＰＡＰ特異的Ｔｈ１免疫の証拠が認められた被験体を示している（有意なＩＦＮγおよび／またはグランザイムＢ応答が、治療後に２回以上検出された被験体）。

【図1B-1】図１Ｂは、６箇月間（左）および２４箇月間（右）における、血清ＰＳＡのベースラインからの最良の変化を示している。

【図1B-2】図１Ｂ－１を参照。

【図2】図２は、例示的な臨床試験のプロトコルを示す。

【図3】図３は、例示的なＰＡＰ配列を示す。

【図4】図４は、例示的なＡＲ配列を示す。

【図5A】図５Ａ～Ｂは、被験体における無増悪生存を示す。（Ａ）は、ＡＲペプチドに対する免疫応答ありおよび免疫応答なしを示している。（Ｂ）は、ＡＲタンパク質に対する免疫応答ありおよび免疫応答なしを示している。

【図5B】図５Ａを参照。

【図6A】図６Ａ～Ｂは、ＡＲワクチンとＡＤＴとの組合せにに関して、被験体におけるＡＲに対する患者応答を示している（ＡＲにおける応答ありおよび応答なし）。（Ｃ）は、ＰＣＷＧ２基準である。（Ｄ）は、被験体におけるＰＳＡ進行までの期間である（ＡＲにおける応答ありおよび応答なし）。

【図6B】図６Ａを参照。

【図7A】図７Ａ～Ｂは、ＡＲワクチンおよびチェックポイント阻害剤により、前立腺腫瘍を患っているマウスにおける抗腫瘍効果が改善されたことを示している。（Ａ）は、ＡＲワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を施した。（Ｂ）は、ＡＲワクチン、ＡＤＴおよびＰＤ－１阻害剤を施した。

【図7B】図７Ａを参照。

【発明を実施するための形態】

【0031】

本明細書において提供されるのは、癌の治療および予防に関連する技術である。とりわけ、前立腺癌の治療に関連する組成物および方法に関連する（ただし、これに限定されるものではない）。種々の実施形態の詳細な説明においては、説明を目的として、多数の具体的な詳細説明を記載し、開示された実施形態の完全なる理解を与える。しかし、当業者ならば理解するであろうが、これらの具体的な詳細説明の有無にかかわらず、これらの種々の実施形態は実施できる。他の例においては、構造およびデバイスをブロック図で示す。さらに、当業者ならば容易に理解するであろうが、方法の提供および実行に係る特定の順序は、例示的なものである。この順序は変更されることがあり、そのような方法も、本明細書に開示されている種々の実施形態の趣旨および範囲内にあることが意図される。

【0032】

本出願において引用されている全ての文献および類似の物には、特許、特許出願、記事、書籍、学術論文およびインターネットのウェブページが含まれる（ただし、これらには限定されない）。これらは、あらゆる目的のために、その全体が参照により明示的に組み込まれる。別途定義されていない限り、本明細書において用いられる全ての技術用語および科学用語は、本明細書に記載されている種々の実施形態が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味である。組み込まれた参考文献における用語の定義が、本教示において提供される定義と異なるように見受けられる場合は、本教示において提供される定義が優先する。本明細書において用いられる節の見出しは、編集のみを目的としており、いかなる形であっても、記載されている主題を限定するものとして解釈すべきではない。

【0033】

〔定義〕
本技術の理解を促進するために、いくつかの用語および語句を以下に定義する。詳細な説明の全体にわたって、追加の定義が記載されている。

【0034】

本明細書および特許請求の範囲の全体を通して、文脈上明らかに異なる場合を除いて、下記の用語は本節に明示的に関連付けられている意味を有する。本明細書において用いられるとき、用語「一実施形態において」とは、必ずしも同じ実施形態を意味する訳ではないが、同じ実施形態を意味する場合もある。さらに、本明細書において用いられるとき、用語「他の実施形態において」とは、必ずしも異なる実施形態を意味する訳ではないが、他の実施形態を意味する場合もある。したがって、後述の通り、本発明の種々の実施形態は容易に組合せることができ、これは本発明の技術的範囲または技術的思想から逸脱していない。

【0035】

本明細書において用いられるとき、用語「または」とは、文脈上明らかに異なる場合を除いて、包括的な演算子「または」であり、用語「および／または」に相当する。用語「に基づく」とは、排他的ではなく、文脈上明らかに異なる場合を除いて、記載されていない追加の要因に基づくことを許容する。さらに、本明細書全体を通じて、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」の意味は、複数形への言及をも包含している。「ｉｎ」の意味は、「ｉｎ」および「ｏｎ」を包含している。

【0036】

本明細書において用いられるとき、「最良の全応答」とは、ベースラインから疾患の進行／再発までに記録された最良の応答である。このとき、進行性疾患の参照点は、ベースライン後に記録された最小の測定値である。

【0037】

本明細書において用いられるとき、「応答の最初の記録」とは、治療の開始と、本明細書で定義される治療に対する部分奏効または完全奏効の最初の記録との間の時間を意味する。

【0038】

本明細書において用いられるとき、「奏効の持続時間」とは、測定基準が完全奏効または部分奏効（いずれの状態が先に記録される場合でも）を満たす時点から、疾患の再発または進行が客観的に記録される最初の日までの期間を意味する。このとき、治療が開始されてから記録された最小の測定値を参照点とする。

【0039】

本明細書において用いられるとき、「全完全奏効の持続時間」とは、完全奏効に関する測定基準が満たされた時点から、疾患の再発が客観的に記録される最初の日までの期間を意味する。

【0040】

本明細書において用いられるとき、「安定した疾患の持続時間」とは、ベースラインから疾患進行の基準が満たされるまでの期間を意味する。このとき、ベースライン以降に記録された最小の測定値を参照点とする。

【0041】

本明細書において用いられるとき、「生存」とは、説明されている技術に係る治療を開始してから、何らかの原因による死まで（または、追跡を打切った患者においては最後の追跡まで）の期間を意味する。

【0042】

本明細書において用いられるとき、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」とは、互換的に使用され、ペプチド結合により連結されているアミノ酸を含有している化合物を意味する。遺伝子によってコードされる「タンパク質」または「ポリペプチド」とは、遺伝子によってコードされるアミノ酸配列のみならず、タンパク質の翻訳後修飾をも包含している。用語「アミノ酸配列」が、タンパク質分子のアミノ酸配列を意味するために本明細書に記載されている場合、アミノ酸配列および類似の用語（ポリペプチドまたはタンパク質など）は、記載されているタンパク質分子に関連する完全な天然アミノ酸配列に当該アミノ酸配列を限定することを意味しない。さらに、アミノ酸配列は、タンパク質をコードする核酸配列から推定できる。本明細書で用いられる、従来の１文字および３文字のアミノ酸コードは下記の通りである。アラニン＝Ａｌａ、Ａ；アルギニン＝Ａｒｇ、Ｒ；アスパラギン＝Ａｓｎ、Ｎ；アスパラギン酸＝Ａｓｐ、Ｄ；システイン＝Ｃｙｓ、Ｃ；グルタミン酸＝Ｇｌｕ、Ｅ；グルタミン＝Ｇｌｎ、Ｑ；グリシン＝Ｇｌｙ、Ｇ；ヒスチジン＝Ｈｉｓ、Ｈ；イソロイシン＝Ｉｌｅ、Ｉ；ロイシン＝Ｌｅｕ、Ｌ；リジン＝Ｌｙｓ、Ｋ；メチオニン＝Ｍｅｔ、Ｍ；フェニルアラニン＝Ｐｈｅ、Ｆ；プロリン＝Ｐｒｏ、Ｐ；セリン＝Ｓｅｒ、Ｓ；トレオニン＝Ｔｈｒ、Ｔ；トリプトファン＝Ｔｒｐ、Ｗ；チロシン＝Ｔｙｒ、Ｙ；バリン＝Ｖａｌ、Ｖ。本明細書において用いられるとき、コード「Ｘａａ」およびコード「Ｘ」は、任意のアミノ酸を意味する。

【0043】

用語「部分」とは、タンパク質に関連して使用する場合（「所与のタンパク質の一部」のように）、当該タンパク質の断片を意味する（当該タンパク質のペプチドなど）。断片の大きさは、４アミノ酸残基から、アミノ酸配列全体から１個のアミノ酸を引いたものまででありうる。例えば、断片の大きさの範囲は、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれ以上のアミノ酸から、最長でアミノ酸配列全体から１個のアミノ酸を引いたものまでである。

【0044】

用語「相同体」または「相同」とは、ポリペプチドに関連して使用する場合、２つのポリペプチド間において、配列同一性が高いこと、三次元構造の類似性が高いこと、または活性中心と作用機序との間の類似性が高いことを意味する。好適な実施形態において、相同体は、参照配列との配列同一性が６０％超であり、より好ましくは７５％超であり、さらにより好ましくは９０％超である。

【0045】

ポリペプチドに適用するとき、用語「実質的な同一性」とは、２つのペプチド配列の配列同一性が８０％以上（好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上またはそれ以上（例えば、９９％））であることを意味する。このとき、２つの配列の比較は、デフォルトギャップ重量を使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって、アラインメントを最適化して行う。好ましくは、同一でない残基の位置同士は、保存的アミノ酸置換の関係にある。

【0046】

用語「変異体」および「突然変異体」とは、ポリペプチドに関連して使用する場合、他のアミノ酸配列（通常は関連するポリペプチド）とは１個以上のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を意味する。変異体は、置換されたアミノ酸が類似の構造的または化学的特性を有するような、保存的変化を有していてもよい。保存的アミノ酸置換の一類型は、類似の側鎖を有している残基の間の互換性を意味している。例えば、脂肪族側鎖を有しているアミノ酸群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンである。脂肪族ヒドロキシル側鎖を有しているアミノ酸群は、セリンおよびトレオニンである。アミド含有側鎖を有しているアミノ酸群は、アスパラギンおよびグルタミンである。芳香族側鎖を有しているアミノ酸群は、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンである。塩基性側鎖を有しているアミノ酸群は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンである。硫黄含有側鎖を有しているアミノ酸群は、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、およびアスパラギン－グルタミンである。より稀な事態であるが、変異体は、非保存的変化を有していてもよい（例えば、グリシンのトリプトファンによる置換）。類似する小変異は、アミノ酸の欠失もしくは挿入（例えば、付加）、またはその両方を有していてもよい。生物活性を維持したまま置換、挿入または欠失できるアミノ酸残基およびその数を決定する際のガイドラインは、本技術分野で周知のコンピュータプログラムによって判明しうる（例えば、ＤＮＡＳｔａｒソフトウェア）。機能的アッセイにより変異体を試験してもよい。好ましい変異体における変化（置換、欠失などの種類に関わらず）は、１０％未満であり、好ましくは５％未満であり、さらにより好ましくは２％未満である。

【0047】

核酸またはタンパク質の変異体を記載するために使用される表記法によって、突然変異の種類と、塩基またはアミノ酸の変化とが特定される。ヌクレオチドの置換に関して（例えば、７６Ａ＞Ｔ）、数字は５’末端からのヌクレオチドの位置を表しており、最初の文字は野生型のヌクレオチドを表しており、２番目の文字は置換後のヌクレオチドを表している。上記の例においては、７６番目のアデニンがチミンで置換されている。ゲノムＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）およびＲＮＡの突然変異を区別する必要が生じた場合は、簡便な慣例を用いる。例えば、核酸塩列の１００番目の塩基がＧからＣに突然変異した場合、この突然変異がゲノムＤＮＡに発生したならば、ｇ．１００Ｇ＞Ｃと表す。この突然変異がミトコンドリアＤＮＡに発生したならば、ｍ．１００Ｇ＞Ｃと表す。この突然変異がｃＤＮＡに発生したならば、ｃ．１００Ｇ＞Ｃと表す。この突然変異がＲＮＡに発生したならば、ｒ．１００ｇ＞ｃと表す。アミノ酸の置換の場合（例えば、Ｄ１１１Ｅ）、最初の文字は野生型アミノ酸の１文字コードを表しており、数字はＮ末端からのアミノ酸の位置を表しており、２番目の文字は突然変異において存在するアミノ酸の１文字コードを表している。ナンセンス突然変異は、２番目のアミノ酸をＸで表す（例えば、Ｄ１１１Ｘ）。アミノ酸の欠失について（例えば、ΔＦ５０８、Ｆ５０８ｄｅｌ）、ギリシャ文字Δ（デルタ）または文字列「ｄｅｌ」は、欠失を表している。文字は野生型に存在するアミノ酸を表しており、数字は野生型に存在するアミノ酸のＮ末端からの位置を表している。イントロンの突然変異は、イントロン番号またはｃＤＮＡ位置によって指定される。具体的には、ＧＴスプライスドナー部位のＧから始まる正の数、またはＡＧスプライスアクセプター部位のＧから始まる負の数のいずれかにより表される。「ｇ．３’＋７Ｇ＞Ｃ」は、ゲノムＤＮＡレベルにおける、ｎｔ＋７でのＧからＣへの置換を表している。完全長ゲノム配列が分かっている場合、その突然変異は、ゲノム参照配列のヌクレオチド番号によって最良に表される。以下を参照（あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）：den Dunnen & Antonarakis, "Mutation nomenclature extensions and suggestions to describe complex mutations: a discussion". Human Mutation 15: 7-12 (2000); Ogino S, et al., "Standard Mutation Nomenclature in Molecular Diagnostics: Practical and Educational Challenges", J. Mol. Diagn. 9(1): 1-6 (February 2007)
用語「ドメイン」とは、ポリペプチドに関連して使用する場合、固有の構造的特性および／または機能的特性を有しているポリペプチドのサブセクションを意味する。通常、この特性は、多様なポリペプチドにわたって類似している。このサブセクションは、通常は連続するアミノ酸が含まれている。しかし、協調して作用するアミノ酸や、折り畳みまたは他の構造の結果互いに近接しているアミノ酸が含まれていてもよい。タンパク質ドメインの例としては、膜貫通ドメインおよびグリコシル化部位が挙げられる。

【0048】

用語「遺伝子」とは、コーディング配列を有している核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）配列を意味する。このコーディング配列は、ＲＮＡまたはポリペプチドもしくはその前駆体（例えば、プロインスリン）の産生に必要である。ポリペプチドの所望の活性または機能的特性（例えば、酵素活性、リガンド結合、シグナル伝達など）が保持される限りにおいて、機能的ポリペプチドは、完全長コーディング配列（または、コーディング配列の任意の部分）によってコードされていてよい。用語「部分」とは、遺伝子に関連して使用する場合、当該遺伝子の断片を意味する。この断片の大きさの範囲は、少数のヌクレオチドから、遺伝子配列全体から１個のヌクレオチドを引いたものまでであってよい。したがって、「遺伝子の少なくとも一部を有しているヌクレオチド」には、遺伝子の断片または遺伝子全体が含まれる場合がある。

【0049】

用語「遺伝子」はまた、構造遺伝子のコーディング領域をも包含している。遺伝子には、コーディング領域の５’末端および３’末端に隣接している長さ約１ｋｂの配列も含まれる。このとき、遺伝子は、完全長ｍＲＮＡの長さに対応している。コーディング領域の５’側に位置し、ｍＲＮＡ上に存在する配列を、５’非翻訳配列と称する。コーディング領域の３’側または下流側に位置し、ｍＲＮＡ上に存在する配列を、３’非翻訳配列と称する。用語「遺伝子」には、遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノム形態の両方が含まれる。遺伝子のゲノム形態またはクローンに含まれているコーディング領域は、「イントロン」または「介在領域」もしくは「介在配列」と称される非コーディング配列で中断されている。イントロンとは、核ＲＮＡ（ｈｎＲＮＡ）に転写される遺伝子の部分である。イントロンは、調節因子（エンハンサーなど）を有していてもよい。イントロンは、核または一次転写産物から除去されるか、あるいはスプライスアウトされる。したがって、イントロンは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写産物には存在しない。ｍＲＮＡは、翻訳中に機能して、新生ポリペプチドにおけるアミノ酸の配列または順序を特定する。

【0050】

さらに、遺伝子のゲノム形態は、イントロンを含むことに加えて、ＲＮＡ転写物上に存在する配列の５’末端および３’末端の両方に位置する配列を含んでいてもよい。これらの配列を、フランキング配列またはフランキング領域と称する。フランキング配列は、ｍＲＮＡ転写物上に存在する非翻訳配列の５’側または３’側に位置している。５’フランキング領域は、調節配列を含んでいてもよい（遺伝子の転写を制御または影響するプロモーターおよびエンハンサーなど）。３’フランキング領域は、転写の終了、転写後切断およびポリアデニル化を指示する配列を含んでいてもよい。

【0051】

用語「野生型」とは、遺伝子に関連して使用する場合、天然に存在する供給源から単離される遺伝子の特徴を有している遺伝子を意味する。用語「野生型」とは、遺伝子産物に関連して使用する場合、天然に存在する供給源から単離される遺伝子産物の特徴を有している遺伝子産物を意味する。用語「天然に存在する」とは、対象に適用する場合、対象が天然に見られることを意味する。例えば、天然の供給源から単離でき、実験室でヒトによって意図的に修飾されていない生物（ウイルスを含む）に存在するポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列は、「天然に存在する」ものである。野生型遺伝子は、集団の中で最も頻繁に見られる遺伝子である。したがって、遺伝子の正常な形態または野生型形態として、任意に指定される。逆に、用語「修飾された」または「突然変異」とは、遺伝子または遺伝子産物に関連して使用する場合、野生型遺伝子または野生型遺伝子産物と比較したときに、配列および／または機能特性に修飾を有している（すなわち、変化した特徴を有している）遺伝子または遺伝子産物を意味する。「天然に存在する」突然変異体を単離できることに留意されたい。この突然変異体は、野生型遺伝子または野生型遺伝子産物と比較したときに、変化した特性を有していることによって認定される。

【0052】

用語「遺伝子発現」とは、遺伝子にコードされた遺伝情報が、遺伝子の転写により（すなわち、ＲＮＡポリメラーゼの酵素作用をにより）ＲＮＡに変換され、ｍＲＮＡの翻訳によってタンパク質に変換する過程を意味する。ＲＮＡは、例えば、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはｓｎＲＮＡである。上記の過程における多くの段階において、遺伝子発現を制御できる。

【0053】

本明細書において用いられるとき、用語「作動可能に連結されている」とは、ヌクレオチド配列の転写または翻訳が、別の機能的ヌクレオチド配列（プロモーター、エンハンサー、転写因子結合部位など）の影響下にあることを意味することを意図する。また、「作動可能に連結されている」とは、ＤＮＡ断片のコーディング配列が適切なリーディングフレームを維持して存在するように、２つのヌクレオチド配列が連結されていることも意図する。このようにして、ＤＮＡ構築物中には、所定のヌクレオチド配列（例えば、ＰＡＰをコードするヌクレオチド配列）に加えて、被験体における発現のために、プロモーター、エンハンサーなどのヌクレオチド配列が含まれている。用語「異種ヌクレオチド配列」とは、プロモーター配列と作動可能に連結されることが天然にはない配列を意図する。このヌクレオチド配列は、プロモーター配列に対しては異種であるが、被験体に対しては同種（天然）であってもよいし、異種（外来）であってもよい。

【0054】

本明細書において用いられるとき、用語「治療」とは、本明細書に記載の治療剤（例えば、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１阻害剤および／またはアンドロゲン受容体拮抗剤）の適用または投与として定義される。あるいは、用語「治療」は、本明細書に記載の患者に対する方法によって特定される。あるいは、用語「治療」は、患者から単離された組織または細胞株に対する、治療剤の適用または投与によっても特定される。ここで言う患者は、疾患、疾患の症状、または疾患に対する素質を有している。治療の目的は、疾患、疾患の症、または疾患に対する素質を、治療すること(cure）、治癒させること（heal）、軽減すること（alleviate）、緩和すること（relieve）、変化させること（alter）、治療すること（remedy）、改善すること（ameliorate）、改善すること（improve）、または影響を与えること（affect）である。

【0055】

本技術に係る組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態で投与してもよい。用語「薬学的に許容可能な塩」とは、親化合物の有効性を有しており、生物学的または他の点で好ましくない点を有していない塩（例えば、受容者に対する毒性または有害性がない塩）を意味する。好適な塩には、酸付加塩が含まれる。酸付加塩は、例えば、本技術の化合物の溶液と、薬学的に許容可能な酸（塩酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸または安息香酸など）の溶液とを混合することによって形成できる。本技術で採用される特定の化合物は、酸部分（例えば、ＣＯＯＨまたはフェノール基）を有していてもよい。この場合、薬学的に許容可能な好適な塩としては、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩）、および適当な有機配位子と形成される塩（第四級アンモニウム塩など）が挙げられる。また、酸（ＣＯＯＨ）またはアルコール基が存在する場合、薬学的に許容可能なエステルを採用することにより、化合物の溶解性または加水分解特性を変化させられる。例えば、薬学的に許容可能な塩には、金属（無機）塩および金属有機塩の両方が含まれている。薬学的に許容可能な塩の一覧は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, pg. 1418 (1985)において与えられている。物理的特性および化学的特性に基づいて適切な塩形態を選択することは、当業者の間で周知である。当業者によって理解されることには、薬学的に許容可能な塩の例としては、無機酸の塩（塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸、および硝酸塩など）；有機酸の塩（リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩もしくはパルモ酸塩、サリチル酸塩およびステアリン酸塩など）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。同様に、薬学的に許容可能なカチオンの例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウム（特に、第二級アミンとのアンモニウム塩）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。また、結晶形、水和物および溶媒和物も本技術の範囲内に含まれる。

【0056】

用語「投与」およびその変化形（例えば、化合物、ワクチン、薬物などを「投与する」工程）とは、化合物に関連して使用する場合、治療または予防を必要とする個体に、化合物または当該化合物のプロドラッグを提供することを意味する。本技術の化合物またはそのプロドラッグを１種類以上の他の有効成分と組合せて提供する場合、「投与」およびその変化形には、化合物またはプロドラッグおよび他の薬剤を、同時にまたは異なる時点で提供することが含まれると理解される。本明細書において用いられるとき、用語「併用投与」とは、２種類の薬剤を投与する（好ましくは２４時間以内に投与する）ことを意味する。組合せ薬剤を併用投与する（例えば、２４時間以内に投与する）場合、これらの薬剤を、単一の組成物中で一緒に投与してもよいし、別々に投与してもよい。別々に投与する場合には、第１薬剤（ＰＡＰワクチンなど）を投与し、患者をモニタリングした後、指定された期間内（好ましくは２４時間以内）に第２薬剤（ＰＤ－１阻害薬およびアンドロゲン受容体拮抗剤など）を投与する。本明細書において用いられるとき、用語「組成物」には、特定量の特定成分を含む製品と、ならびに特定量の特定成分の組合せから直接または間接的に生じる任意の製品とが包含されることが意図される。

【0057】

本明細書において用いられるとき、用語「共投与（co-administration）」および「共投与する工程（co-administering）」とは、２種類以上の薬剤（例えば、ＤＮＡワクチンと、ＰＤ－１阻害剤および／またはアンドロゲン受容体拮抗剤）を被験体に投与または処置することを意味する。いくつかの実施形態において、２種類以上の薬剤または処置の共投与は、同時である。他の実施形態においては、第１薬剤／第１処置を、第２薬剤／第２処置の前に施す。いくつかの実施形態において、共投与は、同じ投与経路であってもよいし、異なる投与経路であってもよい。当業者であれば理解するであろうことには、使用される種々の薬剤または処置の製剤および／または投与経路は変更できる。共投与における適切な投薬量は、当業者によって容易に決定される。いくつかの実施形態において、薬剤または処置を共投与する場合には、それぞれの薬剤または処置を、それらの単独投与に適切な用量よりも低い用量で投与する。したがって、薬剤または処置の共投与により、潜在的に有害な（例えば、毒性のある）薬剤の必要な投薬量を減少させるような実施形態においては、共投与は特に望ましい。あるいは、２種類以上の薬剤の共投与によって、他の薬剤を共投与することにより、ある薬剤の有益な作用に対する被験体の感作が生じる場合にも、共投与は特に望ましい。

【0058】

本明細書において用いられるとき、用語「薬学的に許容可能な」とは、医薬組成物の成分が互いに適合しており、医薬組成物の受容者にとって有害でないことを意味する。

【0059】

本明細書において用いられるとき、用語「被験体」とは、治療、観察または実験の対象となる動物（好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒト）を意味する。

【0060】

本明細書において用いられるとき、用語「有効量」とは、生物学的応答または医薬的応答を誘発する有効成分または医薬品の量を意味する。この応答は、細胞、組織、臓器、システム、動物またはヒトにおいて生じるものであり、研究者、獣医師、医師または他の臨床家によって求められているものである。いくつかの実施形態において、有効量とは「治療有効量」であり、治療する疾患または状態の症状を軽減するための量である。いくつかの実施形態において、有効量とは「予防有効量」であり、予防する疾患または状態の症状を予防するための量である。有効成分を塩として投与する場合、有効成分の量に関する言明は、化合物の遊離形態（非塩形態）の量に関する言明である。

【0061】

本技術の方法においては、化合物（任意構成で塩の形態）を、有効成分と作用部位とが接触させる任意の手段によって投与してよい。医薬と組合せた使用に利用できる任意の従来の手段によって、化合物を投与してよい。一つの治療剤として投与してもよいし、治療剤の組合せとして投与してもよい。化合物を単独で投与してもよい。しかし、通常は、採用する投与経路および標準的な薬学慣行に基づいて選択される薬学的担体と共に投与される。本技術の化合物の投与方法の例としては、経口投与、非経口投与（皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射または点滴など）、吸入スプレー、または直腸投与が挙げられる。有効量の化合物と、非毒性かつ薬学的に許容可能な従来の担体、アジュバントおよびビヒクルを含んでいる医薬組成物の単位投薬量の形態で投与できる。本技術分野で周知の技術に従えば、経口投与に好適な液体調製物（例えば、懸濁液、シロップ、エリキシルなど）を調製できる。この際、一般的な媒体（水、グリコール、油、アルコールなど）を使用してもよい。好適な本技術分野で周知の技術に従えば、経口投与に固体調製物（例えば、粉末、丸剤、カプセル剤および錠剤）を調製できる。この際、固体賦形剤（デンプン、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤など）を使用してもよい。本技術分野で周知の技術に従えば、非経口組成物を調製できる。この際、通常は、担体として滅菌水（および、溶解助剤などの任意構成である他の成分）を使用する。本技術分野で周知の方法に従えば、注射可能な溶液を調製できる。この際、担体は、生理食塩水、グルコース溶液、または生理食塩水とグルコースの混合物を含む溶液を含んでいる。本技術で使用する医薬組成物の調製に適した方法や、組成物に適した成分に関するさらなる説明は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th edition, edited by A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990に与えられている。本技術の化合物は、本明細書に記載の合成反応スキームにて説明されている種々の方法によって作製できる。化合物の調製に使用する出発物質および試薬は、一般的に、市販の供給業者（例えば、Aldrich Chemical Co.）から入手可能である。あるいは、下記の参考文献に記載されている手順に従って、当業者に周知の方法で作製する。Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Wiley & Sons: New York, Volumes 1-21 ; R. C. LaRock, Comprehensive Organic Transformations, 2nd edition Wiley-VCH, New York 1999; Comprehensive Organic Synthesis, B. Trost and I. Fleming (Eds.) vol. 1-9 Pergamon, Oxford, 1991; Comprehensive Heterocyclic Chemistry, A. R. Katritzky and C. W. Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1984, vol. 1-9; Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, A. R. Katritzky and C. W. Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1996, vol. 1-11; Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40.
本明細書において用いられるとき、用語「免疫応答を誘導するための組成物」とは、（例えば、１回、２回、３回またはそれ以上を、例えば、数週間、数箇月間または数年間の間隔を空けて）被験体に投与したときに、被験体における免疫応答を刺激、生成および／または誘発する組成物を意味する。この組成物により、例えば、ＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞が産生されたり、抗体が産生されたりする。いくつかの実施形態において、組成物は、核酸および１つ以上の他の化合物または薬剤を含んでいる。他の化合物または薬剤の例としては、治療薬、生理学的に許容可能な液体、ゲル、担体、稀釈剤、アジュバント、賦形剤、サリチル酸塩、ステロイド、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗体、サイトカイン、抗生物質、結合剤、充填剤、防腐剤、安定化剤、乳化剤、および／または緩衝剤が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。免疫応答は、先天性免疫応答（例えば、非特異的免疫応答）であってもよいし、学習性免疫応答（例えば、後天性免疫応答）であってもよい。

【0062】

本明細書において用いられるとき、用語「アジュバント」とは、免疫応答を賦活しうる任意の物質を意味する。いくつかのアジュバントは、免疫系の細胞を活性化できる（例えば、アジュバントによって、免疫細胞はサイトカインを産生および分泌するようになる）。免疫系の細胞を活性化できるアジュバントの例としては、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）；ＱＳ２１などのQ. saponariaの樹皮から精製されたサポニン（ＨＰＬＣ分画で２１番目のピークに溶出する糖脂質。Aquila Biopharmaceuticals, Inc., Worcester, Mass.）；ポリ（ジ（カルボキシラートフェノキシ）フォスファゼン（ＰＣＰＰポリマー。Virus Research Institute, USA）；モノホスホリル脂質Ａなどのリポ多糖類の誘導体（ＭＰＬ。Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont.）；ムラミルジペプチド（ＭＤＰ。Ribi）；トレオニル－ムラミルジペプチド（ｔ-ＭＤＰ。Ribi）；ＯＭ－１７４（脂質Ａに関連するグルコサミン二糖類；OM Pharma SA, Meyrin, Switzerland）；リーシュマニア伸長因子（精製リーシュマニアタンパク質。Corixa Corporation, Seattle, Wash.）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。従来のアジュバントも、本技術分野で周知である。従来のアジュバントの例としては、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム（ミョウバン）が挙げられる。いくつかの実施形態においては、本技術の組成物を、１種類以上のアジュバントと共に投与する。

【0063】

本明細書において用いられるとき、用語「（例えば、免疫応答を誘導する組成物の）免疫応答を誘導するために有効な量」とは、（例えば、被験体に投与する場合には）当該被験体における免疫応答を刺激、生成および／または誘発するために必要とされる用量レベルを意味する。（例えば、同じまたは異なる経路を介する）１回以上の投与、適用または用量によって、有効量を投与できる。特定の製剤または投与経路に限定されることを意図するものではない。

【0064】

本明細書において用いられるとき、用語「被験体が免疫応答を生じるような条件下」とは、定性的または定量的な任意の免疫応答（例えば、先天性免疫応答または後天性免疫応答）が、誘導、生成および／または刺激されることを意味する。

【0065】

本明細書において用いられるとき、用語「免疫応答」とは、被験体の免疫系による応答を意味する。免疫応答の例としては、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の活性化における検出可能な変化（例えば、増加）；リンホカイン（例えば、Ｔｈ１もしくはＴｈ２型サイトカインなどのサイトカインまたはケモカイン）の発現および／または分泌；マクロファージの活性化；樹状細胞の活性化；Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞）の活性化；ＮＫ細胞の活性化；Ｂ細胞の活性化（例えば、抗体の生成および／または分泌）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。免疫応答のさらなる例としては、ＭＨＣ分子に対する免疫原（例えば、免疫原性ポリペプチドなどの抗原）の結合および細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答の誘導；Ｂ細胞応答（例えば、抗体産生）の誘導；Ｔヘルパーリンパ球応答；免疫原性ポリペプチドが由来する抗原に対する遅延型過敏応答（ＤＴＨ）の誘導；任意成長段階にある（例えば、形質細胞）Ｔ細胞やＢ細胞などの免疫系の細胞の増殖（例えば、細胞集団の増殖）；抗原提示細胞による抗原の修飾および提示の増加が挙げられる。免疫応答は、被験体の免疫系により外来性と認識される免疫原（例えば、非自己抗原または外来性として認識される自己抗原）に対する免疫応答であってもよい。したがって、本明細書において用いられるとき、用語「免疫応答」には、任意の類型の免疫応答が含まれる。その例としては、先天性免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナリングカスケードの活性化）；細胞媒介性の免疫応答（例えば、抗原特異的Ｔ細胞などのＴ細胞および免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答）；体液性免疫応答（例えば、血漿、リンパ液および／または組織液中への抗体の産生および分泌を媒介する応答などの、Ｂ細胞によって媒介される応答）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。用語「免疫応答」は、抗原および／または免疫原に応答する被験体の免疫系の能力に関する、あらゆる態様を包含している。抗原および／または免疫原に応答の例としては、免疫原に対する初期応答、および適応免疫応答による後天性応答（例えば、免疫記憶）が挙げられる。

【0066】

本明細書において用いられるとき、用語「免疫原」および「抗原」とは、被験体における免疫応答を誘発できる薬剤および／またはその部分もしくは構成要素を意味する。薬剤の例としては、ＰＡＰポリペプチドおよび／またはＡＲポリペプチドが挙げられる。薬剤の部分または構成要素の例としては、ＰＡＰポリペプチド由来のペプチドおよび／またはＡＲポリペプチド由来のペプチドが挙げられる。

【0067】

本明細書において用いられるとき、用語「疾患進行」とは、診断アッセイ（分子アッセイまたは画像化アッセイなど）による、疾患が進行している新たな証拠の出現を意味する。例えば、骨スキャンにおける新たな病変の出現が挙げられる。

【0068】

〔詳細な説明〕
本明細書の開示は、特定の例示的態様に言及している。しかし、これらの態様は例示であって、限定ではないと理解されたい。

【0069】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を用いて観察された劇的な臨床反応は、癌免疫療法が２０１３年の科学における飛躍的進歩であると評される理由の一つとなった（Science［１］）。実際に、ＰＤ－１を標的とすることは、腫瘍ではなくＴ細胞を直接標的とするため、普遍的な抗癌治療となる可能性がある。しかし、これまでの臨床試験の結果が示すところによると、ある種の固形腫瘍を患っている患者は、前立腺癌を含む他の組織型の患者よりも、効果が高い［２］。この差は、奏効患者および非奏効患者における既存のＴ細胞の差に起因している可能性が高い。前立腺癌は、ＰＤ－Ｌ１を発現することがあり、浸潤性ＰＤ－１発現Ｔ細胞を有していることが明らかになっているが、一部の癌に比べると頻度は低い［３］。まとめると、これらの結果が示しているのは、機能的に活性な腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度の増加を目的とする治療と組合せることにより、反応性の低い腫瘍（前立腺癌など）に対するＰＤ－１／ＰＤ－リガンド阻害の有効性が向上しうるということである。

【0070】

早期かつＰＳＡ再発性（非転移性）前立腺癌患者を対象に、前立腺酸性ホスファターゼ（ＭＶ－８１６）を標的としたＤＮＡワクチンに対する応答を評価した［４、５］。治療を施した３８人の被験体において、重大な有害事象は認められなかった。さらに、ＰＡＰ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の証拠が出現した患者が数例認められ、ＰＳＡ倍加時間が延長された患者も数例認められた。このことから、免疫学的有効性が示され、抗腫瘍効果の可能性が示された［４，５］。免疫後数箇月の時点で複数回検出可能なＰＡＰに対する長期的なＩＦＮγ分泌免疫応答の存在は、ＰＳＡ倍加時間の増加と関連しており、これが有効性に関する合理的なバイオマーカーとして役立つ可能性が示された［６］。さらに、免疫反応は、数箇月後に反復免疫によって増強される可能性があることが分かり、ＤＮＡワクチンが腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発する簡便な手段となる可能性が示された［５］。さらに、予備的な研究では、以前にＭＶＩ－８１６を用いて治療した患者は、ＰＤ－Ｌ１を発現しているＥｐＣａｍ＋循環上皮細胞（ＣＥＣ）を有しており、マウスモデルでの所見と類似していることが示されている［７］。これらの所見は、前立腺腫瘍に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発するためにＭＶＩ－８１６ワクチンを使用することができ、その有効性はＰＤ－１阻害との併用治療によって向上する可能性があることを、さらに支持するものである。

【0071】

本発明の実施形態の開発過程において実施された研究が実証するところによると、ＤＮＡワクチン接種によるＴ細胞活性化によりＣＤ８＋Ｔ細胞のＰＤ－１が上方制御され、ワクチン接種時のＰＤ－１阻害によりマウスモデルにおけるより良好な抗腫瘍応答が得られる。これらの所見に基づき、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）患者を対象に、ＭＶＩ－８１６とペムブロリズマブを組合せて使用する試験を実施した。この試験では、２種類の薬剤を同時または順番に、１２～２４週間にわたって患者に投与した。観察されたところによると、ペムブロリズマブによるＰＤ－１阻害は、ワクチンと併用投与する場合、１３人の患者中８人でＰＳＡ低下を誘発し（図１）、ＰＳＡ低下が最も大きかった患者のうち２人において客観的腫瘍縮小効果がみられた。ＰＳＡ応答は、ＰＡＰ標的抗原に対する免疫応答の発現を伴っており、ＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球を誘発し、Ｔ細胞活性化療法としてのワクチンの役割と一致した。これらは、以下に示す理由により、有望な所見である。すなわち、チェックポイント阻害剤単独によるＰＤ－１阻害は、エンザルタミドを併用投与された患者以外には、これまでの第Ｉ相試験におけるこの段階の前立腺癌患者に対する単剤での臨床効果をほとんど示さなかった［８，９，１０］。さらに、ワクチン投与後のＰＳＡ値の低下、および客観的Ｘ線応答の改善はまれである。

【0072】

アンドロゲン遮断は、転移性前立腺癌患者に対する基本的な治療である。この療法は、ＰＳＡ再発前立腺癌の患者にも一般的に使用されており、この段階の疾患では間隔を空けてまたは継続的に使用されている。アンドロゲン遮断療法は、オンターゲット直接抗腫瘍効果に加えて、免疫刺激効果をも有している。免疫刺激効果には、胸腺の再増殖、ナイーブＴ細胞の放出増加の誘導、前立腺への免疫細胞浸潤の増加（骨髄細胞およびリンパ球のいずれも）、調節Ｔ細胞数の減少、および前立腺抗原に対する抗体反応の増加が含まれる［１１～１６］。前臨床研究が示すところによると、アンドロゲン遮断により、チェックポイント阻害［１７］、放射線照射腫瘍細胞ワクチン［１８］、Ｔ細胞養子移入［１９］、および抗原特異的ワクチン［２０，２１］を含む、種々の免疫療法アプローチの有効性が高められる可能性がある。

【0073】

最近公開された結果［２２］が示すところによると、アンドロゲン遮断により、in vitroおよびin vivoにおいて、ヒトおよびマウスの前立腺腫瘍細胞におけるＡＲ発現が増加する。発現の増加は、経時的に持続した。ＡＲ発現の増加は、ＡＲ特異的Ｔ細胞による認識および細胞溶解活性を伴っていた。さらに、ＡＤＴおよびワクチン接種（具体的には、ＡＲのリガンド結合ドメインをコードするＤＮＡワクチン（ＭＶＩ－１１８））を組合せることにより、２種類のマウス前立腺癌モデル（Ｍｙｃ－ＣａＰマウスおよび前立腺特異的ＰＴＥＮ欠損マウス）において、腫瘍体積で測定する抗腫瘍応答が改善され、去勢抵抗性前立腺腫瘍の出現が遅延された。

【0074】

したがって、いくつかの実施形態においては、ＡＤＴをＡＲ指向免疫療法と組合せて、ＡＲの抵抗性および過剰発現の主要なメカニズムを標的とする。いくつかの実施形態においては、アンドロゲン受容体拮抗剤であるエンザルタミドを、抗腫瘍ワクチン接種と組合せて使用する［２１］。エンザルタミドまたはアパルタミドなどのアンドロゲン受容体拮抗剤の利点は、テストステロン産生に影響を及ぼすことなく、その作用を媒介することである。したがって、上述の通り、アンドロゲン受容体拮抗剤は免疫療法と組合せて断続的に使用することができる［２３］。疾患の初期段階にある患者においては、テストステロン抑制による潜在的かつ長期的な影響を抑制できる。ＰＳＡを検出不能なレベルまで低下させ、アンドロゲン遮断療法が必要になる前に前立腺癌を治癒させるか転移性再発を有意に遅延させる能力が、前立腺癌の治療における実質的かつ臨床的に意義のある革新的な進歩である。

【0075】

例示的な組成物および方法を、本明細書にて説明する。

【0076】

〔Ｉ．ＤＮＡワクチン〕
本発明の実施形態には、癌標的（例えば、ＰＡＰおよび／またはＡＲ）に対するＤＮＡワクチンが含まれる。

【0077】

［ＰＡＰ］
前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）は、前立腺癌における腫瘍抗原である。ＰＡＰ特異的ＣＤ８＋ＣＴＬは、前立腺癌細胞を溶解させることができる。ＰＡＰは、１９３８年に初めて同定され、最初は前立腺癌を検出する血清マーカーとして使用されていた。正常な前立腺細胞および悪性の前立腺細胞におけるＰＡＰの発現には、確固とした証拠がある。ＰＡＰの発現は、転移性癌の前立腺起源を証明するために、現在でも免疫組織化学的染色において使用されている。前立腺組織において、ＰＡＰは、普遍的に発現している。そのため、特定の腫瘍によっては発現したりしなかったりする可能性がある特定の癌遺伝子とは異なり、前立腺癌に対する免疫指向療法のための普遍的な標的候補として有望な抗原である。さらに、前立腺癌患者の一部は、ＰＡＰに対応する既存の抗体およびＴ細胞有していることが示されている。このことは、この自己タンパク質に対する耐性が、in vivoで回避できることを示唆している。特に、ＰＡＰに特異的なＴｈ１様免疫応答は、免疫化されていない患者においてでさえ、抗腫瘍応答を許容する免疫環境が存在していることを示している。また、実験により実証されているところによると、前立腺癌細胞に対する細胞溶解活性を有しているＰＡＰに特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞が前立腺癌患者において存在しており、これはワクチン接種により増強できる。

【0078】

ＰＡＰ遺伝子は公知であり、ヒト、マウスおよびラットからクローニングされている（例えば、配列番号１、配列番号２および配列番号３をそれぞれ参照）。当業者であれば容易に認識されるように、ＰＡＰ遺伝子をコードするＤＮＡ配列はいずれも、本発明にとって適している。他の動物由来の任意の他のＰＡＰ遺伝子も、当該遺伝子は同定され、特徴付けられ、クローニングされているため、本発明にとって適している。イヌおよび非ヒト霊長類は、ＰＡＰ遺伝子を有していることが知られている。容易に認識できることに、任意の起源のＰＡＰ遺伝子によってコードされるタンパク質（または、その誘導体、等価物、変異体もしくは突然変異体）が、自己または異種抗原性ＰＡＰタンパク質によって動物に誘導される免疫応答と実質的に同様の免疫応答を宿主動物に誘導する限りにおいて、当該ＰＡＰ遺伝子（または、その誘導体、等価物、変異体、突然変異体など）は、本技術に適している。前立腺癌におけるＰＡＰの役割およびＰＡＰを標的とする例示的なワクチンは、ＷＯ２０１７／１３９６２８に記載されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0079】

［ＡＲ］
いくつかの実施形態においては、アンドロゲン受容体のリガンド結合ドメインを標的とするＤＮＡワクチンが提供される（例えば、米国特許第９，４３３，６６８号、第８，９６２，５９０号、第８，５１３，２１０号および第７，９１０，５６５号を参照。各文献は参照により本明細書に組み込まれる）。このワクチンは、任意の期限のアンドロゲン受容体のリガンド結合ドメイン（または、当該リガンド結合ドメインの誘導体、等価物、変異体、突然変異体など）を利用している。リガンド結合ドメイン（または、その誘導体、等価物、変異体もしくは突然変異体）が、アンドロゲン受容体の自己または異種抗原性リガンド結合ドメインによって動物に誘導される免疫応答と実質的に同様の免疫応答を、宿主であるヒトまたは非ヒト動物に誘導できる限りにおいて、このワクチンは、本発明に適している。同様に、ポリヌクレオチド配列および当該ポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドまたはタンパク質（または、その誘導体、等価物、変異体もしくは突然変異体）が、アンドロゲン受容体の自己または異種抗原性リガンド結合ドメインによって動物に誘導される免疫応答と実質的に同様の免疫応答を、宿主であるヒトまたは非ヒト動物に誘導できる限りにおいて、アンドロゲン受容体のリガンド結合ドメインをコードする任意の起源のアンドロゲン受容体遺伝子のポリヌクレオチド配列（または、当該ポリヌクレオチドの誘導体、等価物、変異体、突然変異体など）は、本発明に適している。

【0080】

アンドロゲン受容体遺伝子は、公知であり、多くの種からクローニングされている。例えば、ヒト、マウス、ラット、イヌ、チンパンジー、マカクおよびキツネザルのアンドロゲン受容体のｃＤＮＡおよびアミノ酸配列には、それぞれ、それぞれ以下のGenBankのアクセッション番号が付与されている：NM_000044（ｃＤＮＡ：配列番号５、アミノ酸配列：配列番号６）；NM_013476（ｃＤＮＡ：配列番号７、アミノ酸配列：配列番号８）；NM_012502（ｃＤＮＡ：配列番号９、アミノ酸配列：配列番号１０）；NM_001003053；NM_001009012；U94179；U94178。他の生物種に由来するアンドロゲン受容体遺伝子も公知である。このような種としては、Sus scrofa、Astatotilapia burtoni、Gallus gallus、Kryptolebias marmoratus、Alligator mississippiensis、Leucoraja erinacea、Haplochromis burtoni、Pimephales promelas、Dicentrarchus labrax、Gambusia affinis、Micropogonias undulates、Oryzias latipes、Acanthopagrus schlegelii、Rana catesbeiana、Crocuta crocuta、Eulemur fulvus collarisおよびAnguilla japonicaが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。それぞれ、GenBankのアクセッション番号NM_214314（またはAF161717）、AY082342、NM_001040090、DQ339105、AB186356、DQ382340、AF121257、AY727529、AY647256、AB099303、AY701761、AB076399、AY219702、AY324231、AY128705、U94178およびAB023960を参照されたい。本発明において、ヒトアンドロゲン受容体のリガンド結合ドメインとは、アミノ酸位置が第６５１位～第６８１位である任意のアミノ酸から、アミノ酸位置が第９００位～第９２０位である任意のアミノ酸までのポリペプチドを表す。例えば、第６８１位～第９００位のアミノ酸を含むヒトアンドロゲン受容体またはその断片と、これをコードするポリヌクレオチドを含んでいるＤＮＡワクチンとが、好適なワクチンである。他の生物種に由来するアンドロゲン受容体の対応するリガンド結合ドメインは、（ヒトの配列に対する）配列アラインメントによって容易に決定できる。例えば、配列の同一性または相同性に関連して後述する方法によって決定できる。好適な実施形態において、本発明において使用されるポリペプチドは、アミノ酸位置が第６６１位～第６７１位である任意のアミノ酸から、アミノ酸位置が第９１０位～第９２０位の任意のアミノ酸までのヒトアンドロゲン受容体由来のポリペプチドである。より好適な実施形態において、本発明において使用されるポリペプチドは、ヒトアンドロゲン受容体の第６６１位～第９２０位または第６６４位～第９２０位のアミノ酸を含むポリペプチドである。他の生物種に由来するアンドロゲン受容体の対応する断片を決定するための参考として、ヒトアンドロゲン受容体のアミノ酸位置第６６１位～第９２０位に対応する、ラット、イヌ、チンパンジー、マカクおよびキツネザルのアンドロゲン受容体上のアミノ酸位置は、それぞれ、第６４０位～第８９９位、第６４３位～第９０２位、第６４８位～第９０７位、第６５２位～第９１０位、第６３６～８９５位および第６２５位～第８８４位である。留意されたいことには、上述したヒト、マウス、ラット、イヌ、チンパンジー、マカク、およびキツネザルのアンドロゲン受容体の断片は、同じアミノ酸配列を有している。他の生物種のアンドロゲン受容体のリガンド結合ドメインも公知であるか、または配列アラインメントによって容易に同定できる。当業者ならば容易に理解するように、アンドロゲン受容体のリガンド結合ドメイン（またはより大きな断片）をコードする任意のＤＮＡ配列は、本発明に適している。このＤＮＡ配列には、上述の生物種のいずれかおよび他の動物に由来する完全長の受容体も含まれる。

【0081】

さらに、アンドロゲン受容体のリガンド結合ドメインの断片（ＨＬＡ－Ａ２と結合しうる断片など）もまた、アンドロゲン受容体またはそのリガンド結合ドメインを発現している細胞に対する細胞傷害性応答を誘発する、有用な抗原である。これらの断片をコードするポリヌクレオチドは、機能的等価物と見做せる。これらの断片の例は、後述する実施例に記載している。とりわけ、以下の４つの断片の使用が意図される：配列番号１１（配列番号６の第８１１位～第８１９位のアミノ酸）、配列番号１２（配列番号６の第７６１位～第７７０位のアミノ酸）、配列番号１３（配列番号６の第８０５位～第８１３位のアミノ酸）、配列番号１４（配列番号６の第８５９位～第８６７位のアミノ酸）。

【0082】

［ＤＮＡワクチン］
本発明が提供するＤＮＡ型ワクチンは、ポリペプチド抗原、哺乳動物アンドロゲン受容体のリガンド結合ドメイン（またはその特定の断片）、および／またはＰＡＰ抗原を発現させる。本発明が提供する方法は、上述のワクチンを使用して、ヒトまたは非ヒト動物における前立腺癌を治療する方法である。いくつかの実施形態において、ワクチンは、プラスミドワクチンである。プラスミド型ＤＮＡワクチンの利点は、規定された数（通常は少数）のタンパク質しかコードしないことである。したがって、動物または患者を繰り返し免疫化できる。また、ウイルスであれば、細胞を殺傷したり、ゲノムに組み込まれたり、他の望ましくない免疫応答を潜在的に誘導したりすることがある。これらの欠点はいずれも、プラスミド型ＤＮＡワクチンによって回避される可能性が高い。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン技術（例えば、組成物、方法などに関する技術）は、米国特許出願公開第２００４／０１４２８９０Ａ１に開示されている通りである（この文献は、その全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる）。

【0083】

ＤＮＡワクチンは、ペプチド型ワクチンと同様に、製造が比較的容易かつ安価である点で有利である。また、ＤＮＡワクチンは、樹状細胞型ワクチンのように、患者ごとに個々別々のものではない。組換えタンパク質ワクチンでは、抗原は抗原提示細胞に取り込まれ、主にＭＨＣクラスＩＩに関連して発現する。これとは異なり、核酸ワクチンに含まれているＤＮＡは、抗原提示細胞に取り込まれ、同細胞により直接発現させられる。そのため、自然な流れとして、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩのエピトープの両方によって抗原提示される［３８］。

【0084】

いくつかの実施形態において、ＰＡＰポリペプチドの誘導体、等価物、変異体、断片、または突然変異体の配列は、ヒトＰＡＰ配列（配列番号１）またはヒトＡＲ配列（配列番号６）に対して、８５％以上同一である。より好ましくは、同一性は８８％以上であり、９０％以上が好ましく、９５％以上がより一層この悪しく、９５％以上がより一層好ましい。アミノ酸配列間またはヌクレオチド配列間の同一性は、当業者が手動で決定してもよいし、アルゴリズムを採用したコンピューターベースの配列比較・同定ツール（ＢＬＡＳＴ（Basic Local Alignment Search Tool; Altschul et al. (1993) J. Mol. Biol. 215:403-410）など）を使用して決定してもよい。

【0085】

いくつかの実施形態においては、完全長ＰＡＰタンパク質または完全長ＡＲタンパク質の一部分のみをコードする、完全長遺伝子の断片が構築される。これらの断片ペプチドは、タンパク質抗原における体液性応答、細胞傷害性応答またはその両方を誘発するので、機能的等価物とみなされる。

【0086】

本技術が提供するＤＮＡ型ワクチンは、タンパク質抗原、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）抗原、および／またはＡＲ抗原を発現させる。いくつかの実施形態において、ＰＡＰ抗原およびＡＲ抗原は、同じ核酸によって提供される。いくつかの実施形態において、ＰＡＰ抗原およびＡＲ抗原は、２つの核酸において提供される。いくつかの実施形態において、ＰＡＰ抗原およびＡＲ抗原は、同じ組成物に含まれている２つの核酸において提供される。いくつかの実施形態において、ＰＡＰ抗原およびＡＲ抗原は、異なる組成物に含まれている２つの核酸において提供される。

【0087】

いくつかの実施形態において、ＰＡＰ遺伝子および／またはＡＲ遺伝子が連結されている発現ベクターは、ポリヌクレオチドワクチン接種のために特異的に最適化されている発現ベクターである。当業者に周知の通り、好適な発現ベクターの特徴の例としては、転写プロモーター、免疫原性エピトープ、免疫刺激配列、および免疫増強遺伝子または免疫調節遺伝子をコードする追加のシストロン（当該シストロン自体のプロモーター、転写ターミネーター、細菌性複製起点、および抗生物質耐性遺伝子を含む）が挙げられる。必要に応じて、いくつかの実施形態において、ベクターは、ポリシストロン性ｍＲＮＡを発現させるための内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を有している。

【0088】

本技術のいくつかの実施形態においては、転写プロモーターに直接連結されているＰＡＰタンパク質および／またはＡＲタンパク質をコードする遺伝子を使用してもよい。いくつかの実施形態においては、組織特異的なプロモーターまたはエンハンサー（例えば、筋クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）エンハンサー要素）を使用して、ポリヌクレオチドの発現を特定の組織型に制限する。例えば、筋細胞は、最終的に分化した細胞であり分裂しない。外来ＤＮＡの染色体への組み込みは、細胞分裂およびタンパク質合成の両方によって促進されるとされている。したがって、タンパク質の発現を非分裂細胞（筋細胞など）に制限することが、好ましい場合がある。さらに、いくつかの実施形態においては、ＰＳＡプロモーターを使用して、タンパク質の発現を前立腺組織に制限する。いくつかの実施形態においては、組織特異的または細胞特異的なプロモーターを使用して、タンパク質の発現を抗原提示細胞に標的化する。例えば、いくつかの実施形態においては、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）プロモーターを使用して、発現を肝組織に制限する（例えば、Peyton et al. 2000, Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 97:10890-10894を参照）。しかし、プラスミド型ＤＮＡワクチンが導入される多くの組織においては、ＣＭＶプロモーターの使用は発現のために充分である。

【0089】

種々の実施形態における好適なベクターは、ＰＡＰ抗原および／またはＡＲ抗原（または、その機能的等価物もしくは誘導体）をコードする任意のプラスミドＤＮＡ構築物を有している。このＰＡＰ抗原および／またはＡＲ抗原は、真核生物プロモーターに作動可能に連結されている。このようなベクターの例としては、ｐＣＭＶシリーズの発現ベクター（Stratagene (La Jolla, Calif.)より販売）；または、ｐＣＤＮＡシリーズもしくはｐＲＥＰシリーズの発現ベクター（Invitrogen Corporation (Carlsbad, Calif.)より販売）が挙げられる。

【0090】

本発明には数多の実施形態が存在することが、本明細書に基づいて当業者に理解される。したがって、種々の実施形態において、異なる転写プロモーター、ターミネーターおよび他の転写調節要素が使用される。他の真核生物の転写プロモーターの例としては、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーター、およびヒトユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーターが挙げられる。

【0091】

いくつかの実施形態においては、導入遺伝子を発現させる裸のプラスミドＤＮＡを使用してもよい。例えば、いくつかの実施形態においては、裸のプラスミドＤＮＡを直接に皮内注射または筋肉内注射し、取り込ませ、発現させる（例えば、Wolff et al., 1990, Science 247:1465-8を参照）。このアプローチが有効であるのは、ごく僅かな割合の筋細胞のみがin vivoで直接形質転換され、指向性の高い送達によって限局された筋組織のみを標的化できることである。高い効率で遺伝子を送達する方法を与える、種々の代替的アプローチが知られている（例えば、Acsadi et al., 1991, New Biol. 3:71-81; Wolff et. al., 1991, Biotechniques 11:474-85; Budker et. al., 1996, Nat. Biotechnol. 14:760-4; Davis et al., 1993, Hum. Gene Ther. 4:151-9; Danko et al., 1994, Gene Ther. 1:114-21; Manthorpe et al., 1993, Hum. Gene Ther. 4:419-31を参照）。

【0092】

いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ｐＴＶＧ－ＨＰである（例えば、ヒトＰＡＰのｃＤＮＡを有しているｐＴＶＧ４ベクターである）。ｐＴＶＧ－ＨＰは、E. coli中で産生されるプラスミドＤＮＡであって、ヒト前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）のｃＤＮＡをコードしている。特に、ｐＴＶＧ－ＨＰプラスミドは、プラスミドベクターｐＮＧＶＬ３（例えば、ミシガン大学National Gene Vector Laboratoryから入手したもの）から構築した。このベクターは、ｐＣＤＮＡ３．１発現ベクターと同様にＣＭＶプロモーターからの転写を駆動し、ＣＭＶイントロンＡ配列もさらに有しておりタンパク質発現が増強されている（Lee et al., 1997, Mol. Cells 7:495-501）。このベクターはまた、マルチクローニング部位を有しており、真核細胞性の抗生物質耐性遺伝子を発現しない。そのため、真核細胞系で発現が予想される唯一のタンパク質は、ＣＭＶプロモーターによって駆動されるものであり、この点はｐＣＤＮＡベクターとは異なっている。このベクターに、２コピーの免疫刺激（ＩＳＳ）断片（３６ｂｐ）を挿入して、ベクターｐＴＶＧ４を作製した。ＩＳＳ断片は、既報（Hartmann et al., 2000, J. Immunol. 164:1617-24）にて同定された５’－ＧＴＣＧＴＴ－３’モチーフを有していた（例えば、５’末端にＴｐＣジヌクレオチドを有しており、これに続いてＴｐＴジヌクレオチドによって分離されている３個の６－ｍｅｒ ＣｐＧモチーフ（５’－ＧＴＣＧＴＴ－３’）を有するポリヌクレオチド）。このベクターにヒトＰＡＰのコーディング配列をクローニングし、ＰＡＰの発現をin vitroの発現研究にて確認した。この構築物を「ｐＴＶＧ－ＨＰ」と称する。したがって、いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、ＣｐＧ免疫刺激配列を有している。いくつかの実施形態において、免疫刺激配列は、ＴＣＧ ＴＣＧ ＴＴＴ ＴＧＴ ＣＧＴ ＴＴＴ ＧＴＣ ＧＴＴ（配列番号４）である。

【0093】

いくつかの実施形態において、ワクチンは、ＧＭ－ＣＳＦを含んでいる。ＧＭ－ＣＳＦ（Leukine (R), Sargramostim）は、ワクチンアジュバントである。具体的に、ＧＭ－ＣＳＦは、造血前駆細胞（樹状抗原提示細胞など）の生存、クローン増殖および分化を支える成長因子である。ＧＭ－ＣＳＦは、安全であり、免疫抗原に対する抗体およびＴ細胞の応答の誘導に有効なアジュバントとなることが示されている［５８，５９］。ＧＭ－ＣＳＦの使用は、ほとんど毒性を伴わない［６０，６１，６２］。ＧＭ－ＣＳＦは、無菌・白色・防腐剤不使用であり、凍結乾燥粉末として２５０μｇのバイアルで提供されている。組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）は、静脈内投与または皮下投与する場合、５０～５００μｇ／ｍ^２／日の用量範囲ならば、一般的に許容できる。

【0094】

本技術の特定の実施形態においては、バイアルを解凍し、プラスミド型ＤＮＡワクチンを使用してＧＭ－ＣＳＦを再構成する。例えば、各ＤＮＡによる免疫化ににおいては、０．２ｍｇ／ｍＬのｐＴＶＧ－ＨＰを０．６ｍＬ吸引して、２５０μｇのＧＭ－ＣＳＦを再構成する。次に、２つのツベルクリンシリンジに０．２５ｍＬずつ吸引する。これによって、１００μｇの用量のＤＮＡと、２０８μｇのＧＭ－ＣＳＦとが、効果的に提供される。

【0095】

〔ＩＩ．ＰＤ－１阻害〕
腫瘍が免疫系による検出を回避する主要な機構に、Ｔ細胞受容体ＰＤ－１のリガンドである、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２を発現させるというものがある。ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２によりＰＤ－１が活性化すると、Ｔ細胞の機能が低下し、免疫耐性が向上する。臨床試験においてこれらの薬剤により観察された有害事象は比較的少なく、また早期臨床試験のいくつかの症例において観察された長期的な疾患応答を考慮すると、ＰＤ／ＰＤ－Ｌ阻害剤（例えば、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤）の開発は、現在のところ非常に興味深い話題である。とりわけ、ＰＤ－１を標的とすることは、普遍的な治療法となるはずである。なぜならば、この治療法はＴ細胞の一部を標的とするのであり、腫瘍を直接標的としないからである。しかし、これまでの臨床試験の結果が示唆するところによると、ある種の固形腫瘍型（特に、腎細胞癌、黒色腫、非小細胞肺癌）の患者は、前立腺癌を含む他の組織癌の患者よりも、より効果が高い［１８，１９］。応答した患者と応答しなかった患者のＴ細胞の違いが、この相違の根底にあるのかもしれない。具体的には、前立腺癌と比べて腎細胞癌および黒色腫の患者では、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）がより高い頻度で観察されることが多い。さらに、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を使用した早期臨床試験から判明しているところによると、生検により確認された標的腫瘍細胞にＰＤ－１のリガンド（ＰＤ－Ｌ１）の１つ以上の発現は、治療に対する臨床的応答と関連する［１８］。組織浸潤Ｔ細胞がＩＦＮγの発現を介してＰＤ－Ｌ１の発現を誘導するができ、かつ、ＰＤ－１のリガンド結合によりＴ細胞のエフェクター機能が低下するを鑑みるに、これは予想される結果である。前立腺癌はＰＤ－Ｌ１を発現させることができ、浸潤性のＰＤ－１発現Ｔ細胞を有しうることが実証されている［２０］。総括すると、これらの結果によって示されているのは、前立腺癌に対する抗腫瘍免疫療法の有効性が、以下によって高まるかも知れないことである：(i)ワクチン接種などにより腫瘍特異的Ｔ細胞の数を増加させられる薬剤を組合せること。(ii)例えば、ＰＤ阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体などのＰＤ－１阻害剤および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－Ｌ１阻害剤）による、ＰＤ阻害および／またはＰＤ－Ｌ阻害（ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１阻害など）。

【0096】

ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とした抗体を用いた早期臨床試験において抗腫瘍効果が認められたことに鑑みて、複数の製薬企業が関連製剤の開発を進めている。現時点では１種類の治療薬が承認されており、それはペムブロリズマブ（KEYTRUDA, Merck）である。具体的に、ペムブロリズマブは、イピリムマブ抵抗性の進行黒色腫の治療薬として２０１４年９月に承認された。これは、イピリムマブによる治療後に疾患が進行した進行（転移性）黒色腫の患者を対象とするオープンラベルで国際的な多施設共同拡大コホートの第Ｉ相試験に基づく、画期的な療法として承認されたのであった。この臨床試験では、１７３人の患者に対して、２種類の用量（２ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）のうちいずれかの容量にて、３週間隔でペムブロリズマブを投与した。投与は、疾患が進行するか、耐えられない毒性が現れるまで続けた。用量に関係なく、全奏効率は２６％であった。グレード３の倦怠感が、複数の患者で報告された薬剤関連のグレード３または４の有害事象として唯一のものであった。これらの所見を考慮し、今日では、ペムブロリズマブはイピリムマブ抵抗性黒色腫患者の治療薬としてＦＤＡに承認されており、疾患進行または耐えられない有害作用が現れるまで、２ｍｇ／ｋｇの用量を３週間ごとに静脈内投与する。しかし、注目すべきことに、早期臨床試験が示唆するところによると、治療を停止した場合であっても、治療による奏効期間が延長することがある。

【0097】

いくつかの実施形態において、ＰＤ－１経路阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ペンブロリズマブである（商標名「Keytruda (R)」として市販されている）。ペンブロリズマブは、ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ－１）阻害抗体であり、イピリムマブ投与後に切除不能または転移性黒色腫が認められ、疾患が進行した患者の治療に適応される。また、ＢＲＡＦのＶ６００突然変異が陽性である場合には、ＢＲＡＦ阻害剤にも適応される。ペンブロリズマブは単回使用バイアルで入手可能であり、注射用の１００ｍｇの凍結乾燥粉末から構成されている。３週間ごとに２００ｍｇの固定用量で投与することが好ましい。４．０ｍＬの注射用無菌水（ＵＳＰ）をバイアルに加えると、２５ｍｇ／ｍＬ溶液が調製される。いくつかの実施形態においては、０．９％塩化ナトリウム注射液（ＵＳＰ）を含んでいるＩＶバッグに２個のバイアルの内容物を移して、稀釈溶液の最終濃度が１～１０ｍｇ／ｍＬとなるようにする。したがって、いくつかの実施形態においては、ペンブロリズマブを静脈内注入する。例えば、無菌の非発熱性低タンパク質結合０．２μｍ～５μｍインラインフィルターまたはアドオンフィルターを有しているＩＶラインを使用して、３０分間にわたって投与する。

【0098】

いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体はニボルマブである（商標名「Opdivo (R)」として市販されている）。ニボルマブは、ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ－１モノクローナル抗体であり、活性化Ｔ細胞におけるプログラム細胞死１（ＰＤ－１）受容体のリガンド活性化を阻害することにより、免疫調節因子として作用する。具体的に、ニボルマブは、Ｔ細胞の活性化および応答に関する負の調節因子を阻害するように作用する。そのため、免疫系が腫瘍を攻撃できるようになる。すなわち、ニボルマブは、ＰＤ－Ｌ１がＰＤ－１に結合することを阻害し、Ｔ細胞が腫瘍を攻撃できるようにする。

【0099】

本発明はまた、本発明の方法およびキットにおける他のＰＤ－１拮抗剤の使用を意図する。他のＰＤ－１拮抗剤の例としては、BMS-936559（Bristol-Myers Squibb）、MEDI0680（MedImmune/AstraZeneca）、MEDI4736（MedImmune/AstraZeneca）、MPDL3280A（Genentech/Roche）、MSB0010718C（EMD Serono）、Pidilizumab（CureTech）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0100】

〔ＩＩＩ．アンドロゲン遮断療法〕
いくつかの実施形態において、前立腺癌の治療は、アンドロゲン遮断療法（ＡＤＴ）を含む。テストステロンは、脳において開始される一連の過程を介して合成される。身体がテストステロンのレベルが低いことを検知すると、視床下部はＬＨＲＨを産生し始める。ＬＨＲＨが下垂体により受容されると、ＬＨ（黄体形成ホルモン）の合成が活性化される。ＬＨは精巣へ移動し、そこでテストステロンの形成を誘導する。薬物によるアンドロゲン遮断療法には、２種類の方法がある。一つは、下垂体からのＬＨの放出を防ぐものである。もう一つは、身体がアンドロゲンを使用する能力を阻害するものである。

【0101】

ＬＨＲＨ作動剤およびＬＨＲＨ拮抗剤の２種類の薬剤があり、いずれも精巣で作られるテストステロンの量を減少させる。これらの薬剤には、下垂体におけるＬＨの形成を抑制する働きがある。ＬＨＲＨ作動剤は、テストステロン量を急激に増加させた後、大幅に減少させる（この仮定をフレアと称する）。ＬＨＲＨ拮抗剤は、テストステロン量を直接減少させる。ＬＨＲＨ作動剤およびＬＨＲＨ拮抗剤の有効成分の例、リュープロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ヒストレリンおよびデガレリクスが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。いくつかの実施形態においては、これらの薬物を皮下注射し、外科的去勢と同じ結果をえる。

【0102】

いくつかの実施形態においては、抗アンドロゲン療法（例えば、アンドロゲン受容体拮抗剤）を利用する。去勢処置後においても、副腎がアンドロゲン産生の他の中心となることが判明した。そのため、抗アンドロゲン剤を使用してアンドロゲンを使用するあらゆる身体能力を阻害する、補完的な治療が開発されている。前立腺細胞はアンドロゲン受容体（ＡＲ）を有しており、アンドロゲン（テストステロンなど）によって刺激されると、成長が促進され、前立腺への分化が維持される。しかし、これらの成長促進シグナルは、癌細胞において発生した場合には問題となりうる。抗アンドロゲン剤はアンドロゲン受容体に対する親和性が高いため、細胞内に入り、テストステロンと受容体タンパク質との結合を阻害できる。

【0103】

アンドロゲン受容体拮抗剤の例としては、酢酸シプロテロン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エンザルタミドおよびアパルタミドが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。これらのアンドロゲン受容体拮抗剤は、全て経口錠剤の形態で投与される。さらなるアンドロゲン受容体拮抗剤の例としては、テストステロン合成を標的とする薬剤（例えば、アビラテロン酢酸エステルおよびseviteronel）、ＡＲの核移行を標的とする薬剤（例えば、エンザルタミド、アパルタミドおよびダロルタミド）、併用治療剤（例えば、ガレテロン）が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0104】

いくつかの実施形態において、アンドロゲン受容体拮抗剤は、エンザルタミドまたはアパルタミドである。

【0105】

〔ＩＶ．治療方法〕
上述した通り、本明細書においては、前立腺癌の治療のための併用治療が提供される。いくつかの実施形態において、治療には、１つ以上のＤＮＡワクチン（例えば、ＰＡＰおよび／またはＡＲを標的とするＤＮＡワクチン）と、ＰＤ－１阻害およびアンドロゲン受容体拮抗剤ととの組合せが含まれている。

【0106】

いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン（例えば、ＰＡＰおよび／またはＡＲを標的とするＤＮＡワクチン）は、本明細書に記載の通り、ＰＤ経路阻害剤およびＡＲ拮抗剤と併用投与される（例えば、本明細書に詳細に記載されている投薬スケジュールを参照）。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン（例えば、ＰＡＰおよび／またはＡＲを標的とするＤＮＡワクチン）は、ＰＤ経路阻害剤による治療の前、治療と同時、または治療後に投与される（例えば、本明細書に詳細に記載されている投薬スケジュールを参照）。

【0107】

いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１経路阻害剤を、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上にわたって併用投与する。これに続いて、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１経路阻害剤およびＡＲ拮抗剤を、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上併用投与する。これに続いて、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１経路阻害剤およびＡＲ拮抗剤を投与しない期間を設ける（例えば、１週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２４週間、またはそれ以上）。

【0108】

いくつかの実施形態においては、ＡＲ拮抗剤を、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１経路阻害剤と同時に、複数週間の間隔を空けて投与する（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、またはそれ以上）。これに続いて、ＡＲ拮抗剤を投与しない期間を設ける（例えば、１週間、４週間、６週間、１０週間、１２週間、１６週間、１８週間、２４週間、またはそれ以上）。いくつかの実施形態において、ＡＲ拮抗剤による治療の期間は、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１経路阻害剤による長期治療中に設けられる。

【0109】

したがって、本技術のいくつかの実施形態は、癌患者（例えば、非転移性、ホルモン感受性、生化学的再発（ＰＳＡ再発）の前立腺癌患者、または転移性、去勢抵抗性の前立腺癌患者）における、ペムブロリズマブまたはニボルマブと、ＤＮＡワクチンおよびＡＲ拮抗剤との組合せ投与に関する（例えば、同時または連続的な投与）。

【0110】

いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンの投与の前および／または後において、併用治療に対する応答に関して患者を試験する。いくつかの実施形態においては、ＰＤ経路阻害剤（例えば、ペンブロリズマブまたはニボルマブ）の投与の前および／または後において、患者を試験する。いくつかの実施形態において、試験の例としては、イメージング（例えば、放射線撮影法、骨イメージング）、抗腫瘍応答速度の測定（ＰＣＷＧ２基準を使用する客観的応答速度および／またはＰＳＡ応答速度）、ＰＡＰまたはＡＲ特異的Ｔ細胞の応答強度の測定、循環Ｔ細胞におけるＰＤ－１発現の測定、循環上皮細胞（ＣＥＣ）および／または腫瘍生検におけるＰＤ－Ｌ１発現の測定、腫瘍増殖速度の測定、ＰＡＰ特異的抗体の量の測定、前立腺関連抗原（例えば、ＰＳＡおよび／またはＰＡＰ）の量の測定が挙げられる。

【0111】

いくつかの実施形態においては、バイオマーカーをモニタリングする（例えば、治療経過を追跡するために、および／または、治療の有効性の予測因子として）。バイオマーカーの例としては、ＣＥＣまたは腫瘍生検におけるＰＤ－Ｌ１発現、腫瘍特異的Ｔ細胞または腫瘍細胞における他の調節分子の発現（前者の場合はＴＩＭ３、ＢＴＬＡおよびＬＡＧ３など；後者の場合はＨＶＥＭ、ホスファチジルセリン、ＰＤ－Ｌ２など）、ＰＤ－１調節抗原特異的Ｔ細胞（例えば、trans vivo ＤＴＨ試験によって同定される）が挙げられる。

【0112】

一般的に意図されているところによると、ＤＮＡワクチン、ＡＲ拮抗剤およびＰＤ－１阻害剤は、哺乳動物に投与するために製剤化されている。とりわけ、これらの化合物の投与に応答する状態にあるヒト（例えば、前立腺癌を患っているヒト被験体）に投与するために製剤化されている。したがって、意図される化合物を薬理学的組成物として投与するとき、当該化合物は、薬学的に許容可能な担体と混合して製剤化されていることが意図される。例えば、意図される化合物を、薬理学的に許容可能な塩として経口投与してもよいし、生理食塩水溶液（例えば、ｐＨ：約７．２～７．５に緩衝されている液）として静脈内投与してもよい。この目的のために、従来公知の緩衝液（リン酸塩、重炭酸塩またはクエン酸塩など）が使用できる。もちろん、当業者であれば、本明細書の教示の範囲内で製剤を設計変更して、特定の投与経路のための様々な製剤を提供することができる。特に、意図される化合物を、水または他のビヒクルにおける溶解性を高めるために設計変更することができる。溶解性の向上は、例えば、通常の技術的創作の範囲内に含まれる些少な設計変更により、容易に達成できる（塩製剤、エステル化など）。また、特定の化合物の投与経路および投薬レジメンを変更して、患者における有益な効果を最大化するために当該化合物の薬物動態を管理することも、通常の技術的創作の範囲内である。

【0113】

特定の医薬剤型において、種々の目的のために意図される化合物のプロドラッグ形態を形成してもよい（毒性の減少、臓器または標的細胞特異性の向上など）。種々のプロドラッグ形態の中でも、当該化合物のアシル化（アセチル化または他のアシル化）誘導体、ピリジンエステル、および種々の塩形態が好ましい。当業者であれば、当該化合物を容易に設計変更してプロドラッグ形態とし、宿主生物または患者内の標的部位への有効成分の送達を促進する方法を認識している。また、当業者であれば、、宿主生物または患者内の標的部位に当該化合物を送達する際に、プロドラッグ形態の好ましい薬物動態学的パラメータを（利用できるならば）利用して、当該化合物の意図される効果を最大化させる。同様に理解されたいことには、意図される化合物は、生物学的に活性のある形態に代謝されてもよい。それゆえ、本明細書に記載の化合物の全ての代謝産物が、特に意図されている。さらに、意図される化合物（およびこれらの組合せ）を、追加の薬剤とさらに組合せて投与してもよい。

【0114】

被験体への投与に関して意図されることには、化合物は、薬学的に有効な量で投与される。当業者であれば理解するように、薬学的に有効な量は、使用する治療剤、被験体の年齢、状態および性別、ならびに被験体における疾患の重篤度に応じて変化する。一般的に、投薬量は、有害な副作用を引き起こすほど多量にするべきではない（血液の問題、肺の問題、大腸炎、肝炎、腎炎、下垂体炎、甲状腺機能障害など）。また、投薬量は、所望の治療目標を達成するために、個々の医師によって調節されうる。したがって、腫瘍が小さい疾患を患っている男性（例えば、非転移性または微小転移性ホルモン感受性前立腺癌、生化学的に再発した前立腺癌を患っている男性）においては、ＰＤ－１阻害剤の標準用量の１／２、１／３または１／４を投与することが意図される。これにより、有効な抗腫瘍応答を生じさせ、かつ、進行癌または転移癌に用いられる標準用量のＰＤ－１阻害剤に起因する毒性および副作用を低減させる。

【0115】

本明細書において用いられるとき、用語「薬学的に有効な量」によって包含される実際の量は、投与経路、治療される被験体の類型、および特定の被験体の考慮すべき身体的特徴に応じて変化する。薬学的に有効な量を決定するための、これらの因子および因子間の関係は、医学、獣医学および他の関連技術の当業者に周知である。薬学的に有効な量および投与方法は、有効性を最大にするように設計できるが、体重、食事、併用している医薬品、および当業者が認識する他の因子などに応じて変化する。

【0116】

好ましくは、医薬組成物は、本技術の１種類以上の化合物と、１つ以上の薬学的に許容可能な担体、稀釈剤または賦形剤と、を含んでいる。薬学的に許容可能な担体は、本技術分野で周知である。例えば、Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.(A. R. Gennaro edit. 1985)に記載されているものが挙げられる（あらゆる目的のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる）。

【0117】

したがって、いくつかの実施形態において、免疫療法剤は以下に示すものとして製剤化されている。錠剤、カプセル、持続放出性錠剤、持続放出性カプセル、持続放出性ペレット；徐放性錠剤、徐放性カプセル、徐放性ペレット；速放性錠剤、速放性カプセル、速放性ペレット；舌下錠剤；ゲルカプセル；マイクロカプセル；経皮送達製剤；経皮ゲル；経皮パッチ；経皮溶解性マイクロニードル製剤（例えば、パッチにおいて提供される）；無菌溶液；標的部位への直接注射として筋肉内注射、皮内注射、もしくは皮下注射に使用するために、または静脈内投与に使用するために調製されている無菌溶液；直腸投与用に調製されている溶液；胃栄養チューブまたは十二指腸栄養チューブを通して投与するために調製されている溶液；直腸投与のための坐剤；溶液またはエリキシル剤として調製されている、経口摂取のための液体；局所用クリーム；ゲル；ローション；チンキ；シロップ；エマルション；懸濁液。

【0118】

いくつかの実施形態において、持続放出製剤は、持続的放出メカニズム、持続的活性メカニズム、延長された放出メカニズム、制御された放出メカニズム、調節された放出メカニズム、または継続的放出メカニズムを有している。例えば、組成物は、迅速に、ゆっくりと、または任意の適切な放出速度で化合物が経時的に溶解するように製剤化されている。

【0119】

いくつかの実施形態において、組成物は、有効成分が不溶性物質（例えば、種々のアクリル樹脂、キチン）の基剤に埋め込まれているように製剤化されている。これにより、溶解した化合物は、基剤中の孔を通って外に放出される（例えば、拡散によって）。いくつかの実施形態において、製剤は、ポリマー系の錠剤に封入されている。このポリマー系の錠剤は、一方の側にレーザー穿孔された穴を有しており、他方の側に多孔質膜を有している。胃酸は多孔質膜を透過し、それによって、レーザー穿孔された穴を通して薬物が押し出される。やがて、全ての用量の薬物が系内に放出される一方で、ポリマー容器は無傷のままであり、通常の消化を経た後に排泄される。いくつかの持続的放出製剤では、化合物は基剤中に溶解しており、基剤は物理的に膨潤してゲルを形成している。これにより、化合物はゲルの外表面を通って放出されるようになる。いくつかの実施形態において、製剤はマイクロカプセル化形態である。マイクロカプセル化形態は、例えば、いくつかの実施形態において、複合体溶解プロファイルを与えるために使用される。例えば、不活性コアの周りに化合物をコーティングし、不溶性物質を用いて層状にして微小球を形成することにより、いくつかの実施形態においては、より安定で再現性のある溶解速度が便利な形態で提供される。この形態は、他の制御放出される（例えば、即時放出される）医薬成分と特定の実施形態において組合せられる。例えば、マルチパートゲルカプセルが提供される。

【0120】

いくつかの実施形態において、本技術の調製物および／または製剤は、粒子として提供される。本明細書において用いられるとき「粒子」とは、全体または一部が本明細書に記載の化合物からなり構成されうる、ナノ粒子またはマイクロ粒子（または、場合によってはさらに大きい粒子）を意味する。粒子は、コーティング（腸溶コーティングなどであるが、これには限定されない）に被覆されているコアの中に、調製物および／または製剤を含んでいてもよい。調製物および／または製剤は、粒子全体に分散していてもよい。調製物および／または製剤は、粒子中に吸収されていてもよい。粒子は、任意の次数放出動態を取ってもよい（ゼロ次放出、一次放出、二次放出、遅延放出、持続放出、即時放出、およびこれらの任意の組合せなど）。粒子は、調製物および／または製剤の他に、薬学および医学の分野で通常に使用される任意の材料を含んでいてもよい（侵食性材料、非侵食性材料、生分解性もしくは非生分解性材料、またはこれらの組合せなどであるが、これらには限定されない）。粒子は、溶液または半固体状態の製剤を含有しているマイクロカプセルであってもよい。粒子は、事実上、どのような形状であってもよい。

【0121】

非生分解性ポリマー材料および生分解性ポリマー材料のいずれもを使用して、調製物および／または製剤を送達するための粒子を製造できる。ポリマーは、天然ポリマーまたは合成ポリマーであってもよい。ポリマーは、放出が望まれる時間に基づいて選択される。特に興味深い生体接着性ポリマーとしては、H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubell in Macromolecules, (1993) 26: 581-587に記載されている生体侵食性ヒドロゲルが挙げられる（この教示は、参照によって本明細書に組み込まれる）。ポリマーの例としては、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、およびポリ（アクリル酸オクタデシル）が挙げられる。

【0122】

本技術はまた、化合物またはその塩の水溶液を含んでいる安定な医薬品を調製して、分解産物の形成を阻害する方法を提供する。化合物またはその塩と、１種類以上の阻害剤とを含んでいる溶液が提供される。密封可能な容器内に溶液を最終充填する前および／または後に、１つ以上の滅菌技術の下で溶液を処理して、安定な医薬品を形成させる。当該製剤は、製剤が実質的に均質である限り（例えば、薬物が製剤内に実質的に均一に分布する限り）、本技術分野で周知の種々の方法によって調製できる。均一に分布させることにより、製剤からの薬物の放出の制御が容易になる。

【0123】

いくつかの実施形態において、化合物は緩衝剤と共に製剤化されている。緩衝剤は、薬学的に許容可能な任意の緩衝剤であってよい。緩衝系の例としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液およびリン酸緩衝液が挙げられる。緩衝剤の例としては、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、酢酸、リン酸ナトリウムおよびリン酸、アスコルビン酸ナトリウム、酒石酸、マレイン酸、グリシン、乳酸ナトリウム、乳酸、アスコルビン酸、イミダゾール、重炭酸ナトリウムおよび炭酸、コハク酸ナトリウムおよびコハク酸、ヒスチジン、安息香酸ナトリウムおよび安息香酸が挙げられる。

【0124】

いくつかの実施形態において、化合物は、キレート剤と共に製剤化されている。キレート剤は、薬学的に許容可能な任意のキレート剤であってよい。キレート化剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ、エデト酸、versene acidおよびsequestreneとも同義）、およびＥＤＴＡ誘導体（エデト酸二カリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトリウムおよびエデト酸カリウムなど）が挙げられる。他のキレート剤の例としては、クエン酸およびその誘導体が挙げられる。クエン酸は、クエン酸一水和物としても知られている。クエン酸の誘導体の例としては、無水クエン酸およびクエン酸三ナトリウム二水和物が挙げられる。さらに他のキレート剤の例としては、ナイアシンアミドおよびその誘導体、ならびにデソキシコール酸ナトリウムおよびその誘導体が挙げられる。

【0125】

いくつかの実施形態において、化合物は酸化防止剤と共に製剤化されている。酸化防止剤は、薬学的に許容可能な任意の酸化防止剤であってよい。酸化防止剤は当業者に周知であり、例えば以下の物質が挙げられる。アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸アスコルビル、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウムなど）、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、没食子酸アルキル、ピロ亜硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、チオグリコール酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシラートナトリウム、トコフェロールおよびその誘導体（ｄ－αトコフェロール、ｄ－αトコフェロール酢酸エステル、ｄｌ－αトコフェロール酢酸エステル、ｄ－αトコフェロールコハク酸エステル、βトコフェロール、δトコフェロール、γトコフェロールおよびｄ－αトコフェロールポリオキシエチレングリコール１０００コハク酸エステル）、モノチオグリセロール、亜硫酸ナトリウム。これらの物質は、通常、０．０１～２．０％の範囲で添加する。

【0126】

いくつかの実施形態において、化合物は凍結防止剤と共に製剤化されている。凍結防止剤は、薬学的に許容可能な任意の凍結防止剤であってよい。一般的な凍結防止剤の例としては、ヒスチジン、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリジン、ラクトース、スクロース、マンニトール、およびポリオールが挙げられる。

【0127】

いくつかの実施形態において、化合物は等張化剤と共に製剤化されている。等張化剤は、薬学的に許容可能な任意の等張化剤であってよい。「等張化剤」は、本技術分野では等浸透圧剤と互換的に使用され、医薬品に添加することにおり浸透圧を高める化合物として知られている。例えば、いくつかの実施形態においては、ヒト細胞外液（血漿など）と等浸透圧である０．９％塩化ナトリウム水溶液の浸透圧を高める。好ましい等張化剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロースおよびグリセロールである。

【0128】

医薬品は、必要に応じて防腐剤を含んでいてもよい。一般的な防腐剤の例としては、クロロブタノール、パラベン、チメロサール、ベンジルアルコールおよびフェノールからなる群から選択されるものが挙げられる。好適な防腐剤としては、クロロブタノール（０．３～０．９％ｗ／ｖ）、パラベン（０．０１～５．０％）、チメロサール（０．００４～０．２％）、ベンジルアルコール（０．５～５％）、フェノール（０．１～１．０％）などが挙げられる（ただし、これらには限定されない）。

【0129】

いくつかの実施形態において、化合物は湿潤剤と共に製剤化されており、これにより口腔適用において心地よい口当たりが提供される。本技術分野で周知の湿潤剤の例としては、コレステロール、脂肪酸、グリセリン、ラウリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ペンタエリスリトールおよびプロピレングリコールが挙げられる。

【0130】

いくつかの実施形態において、製剤には乳化剤が含まれている。これにより、例えば、あらゆる賦形剤（特に、ベンジルアルコールなどの疎水性成分）を完全に溶解させられる。多くの乳化剤が本技術分野で周知である（例えば、ポリソルベート６０）。

【0131】

経口投与に関するいくつかの実施形態において、薬学的に許容可能な矯味剤および／または甘味料を添加することが望ましい場合がある。サッカリン、グリセリン、単シロップおよびソルビトールなどの化合物は、甘味料として有用である。

【0132】

〔測定方法およびアッセイ方法〕
種々の実施形態においては、様々な技術および観察可能なものを利用してデータを収集する。これにより、例えば、被験体に関するベースラインを測定する、および／または、治療の有効性をモニタリングする。例えば、いくつかの実施形態は、イメージングに基づいて被験体を評価する工程を含む。いくつかの特定の実施形態において、イメージング技術は、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）を含む。いくつかの特定の実施形態において、イメージング技術は、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を含む。いくつかの実施形態においては、ＣＴおよび／またはＭＲＩにより、標的病変を測定するための正確かつ再現可能な方法が提供される。いくつかの実施形態においては、スライス厚が１０ｍｍ以下の連続した断面を用いて、ＣＴおよびＭＲＩを実施する。いくつかの実施形態においては、５ｍｍの連続再構成アルゴリズムを用いてスパイラルＣＴを実施する（例えば、胸部、腹部および骨盤の腫瘍に対して）。

【0133】

いくつかの実施形態においては、腫瘍マーカーを測定する。例えば、いくつかの実施形態においては、ＰＳＡを測定する。いくつかの実施形態において、異なる時点におけるＰＳＡ動態を報知するためにＰＳＡ値を収集する。いくつかの実施形態において、被験体のＰＳＡ値が０．２ｎｇ／ｍＬ未満に低下した場合には、ＰＳＡ応答は完全である。いくつかの実施形態においては、血清中のＰＡＰおよび／またはＡＲを測定する。いくつかの実施形態において、ＰＡＰおよび／またはＰＳＡの血清濃度は、ワクチン接種後に安定化および／または低下する。これにより、ワクチンの有効性を評価する。いくつかの実施形態においては、血清ＰＡＰまたは血清ＡＲに対する血清ＰＳＡの比率を計算することにより、ワクチンの有効性を評価する。いくつかの実施形態においては、治療によってＰＳＡ：ＰＡＰ比率が上昇する。これは、治療により、ＰＡＰ産生細胞がＰＳＡ産生細胞よりも選択的に枯渇させられ、それゆえ、ＰＡＰ濃度がＰＳＡ濃度よりも速く低下するからである。ただし、理論に拘束されるものではなく、作用機序または理論を理解しなくとも本技術は実施できる。

【0134】

いくつかの実施形態においては、被験体に対して臨床試験を行う。いくつかの実施形態において、病変が表在性（例えば、皮膚の結節や、触知可能なリンパ節）である場合には、臨床的に検出された病変は測定可能であると見做される。いくつかの実施形態において、カラー写真によって皮膚の病変を記録し、この写真には病変の大きさを推定するためのスケールバーが含まれている。

【0135】

〔病理組織学的評価〕
いくつかの実施形態においては、治療前および治療後に、転移性病変（例えば、患者については同じ病変）から組織生検を得る（例えば、治療の開始から１～２４週間後において；例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１４週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２１週間、２２週間、２３週間または２４週間の期間）。いくつかの実施形態においては試験を行い、腫瘍におけるＰＤ－Ｌ１発現に免疫化がどのように影響するかを評価する。ＩＦＮγを分泌する腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を誘発することによって、免疫化は腫瘍におけるＰＤ－Ｌ１発現に影響を及ぼしていると考えられる。ただし、理論に拘束されるものではなく、作用機序または理論を理解しなくとも本技術は実施できる。さらに試験を行って、抗ＰＤ－１ｍＡｂとの併用治療によりＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤が増加するか否かと、処理がＴ細胞または腫瘍における他のＴ細胞調節リガンド（前者においては、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ－３；後者においては、例えば、ＨＶＥＭ、ホスファチジルセリン、ＰＤ－Ｌ２）の発現が治療により増加するか否かと、を評価する。次に、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦｏｘＰ３、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ホスファチジルセリンおよび／またはＨＶＥＭおよび／または他のマーカーに特異的な抗体を用いて、治療前および治療開始後に得られた生検標本を染色する。治療群について盲検化した病理医が染色および定量を検討して、１視野あたりのＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋（Ｔｒｅｇ）：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、ＰＤ－Ｌ１発現（例えば、１視野あたり５個以上のＰＤ－Ｌ１陽性細胞によって示される）を決定する。治療前後に測定したこれらのパラメータを比較して、治療の結果として変化した何らかの測定値または計算されるパラメータを同定する。

【0136】

〔循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の評価〕
いくつかの実施形態においては、ＣＴＣを計数し、特徴付ける。例えば、いくつかの実施形態においては、免疫評価と同じ時点においてこれを行う（例えば、治療前および治療後１～６週間（例えば、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、または６週間後））。評価の間隔は、最大で１年間である（例えば、毎月、四半期ごと）。ＣＴＣの計数および特徴づけには、フローサイトメトリーを用いる。例えば、いくつかの実施形態においては、これらの時点で得たＰＢＭＣを染色する（例えば、ＣＤ４５、ＥｐＣＡＭ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４およびＤＡＰＩのうちの１つ以上に特異的な蛍光色素標識抗体を用いて染色する）。ＣＴＣとは、ＣＤ４５－ＥｐＣＡＭ＋ＤＡＰＩ－細胞として定義される。全ての生細胞事象におけるこれらの事象の割合を、異なる時点において決定する。ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＡＲまたはＣＴＬＡ－４を発現しているＣＴＣの割合も決定する。異なる時点における結果が報告され、一般的な傾向を評価する。いくつかの実施形態において、結果は定量的である。いくつかの実施形態において、結果は定性的である（例えば、いくつかの実施形態においては、複数の複製を得て標準偏差を決定することができない）。本技術には、ＣＴＣを捕捉し計数するの他の方法も含まれている。

【0137】

〔被験体〕
いくつかの実施形態においては、被験体に併用治療を施す。例えば、いくつかの実施形態において、被験体は癌患者である（例えば、前立腺癌患者、例えば、非転移性、ホルモン感受性、生物化学的に再発性の前立腺癌を患っている患者、または転移性、去勢抵抗性の前立腺癌を患っている患者）。いくつかの実施形態において、被験体は成人である（例えば、１８歳以上である）。いくつかの実施形態において、被験体は、組織学的に確認された前立腺癌を患っている。いくつかの実施形態において、被験体は転移性疾患を患っている（例えば、画像化技術（ＣＴ（例えば、腹部ＣＴ／骨盤ＣＴ）、骨シンチグラフィーなど）によって検出される、軟組織および／または骨への転移が存在している）。いくつかの実施形態において、被験体は去勢抵抗性疾患を患っている。例えば、いくつかの実施形態において、被験体はアンドロゲン遮断療法を受けている（例えば、外科的去勢、ＧｎＲＨアナログ療法または拮抗剤療法）。いくつかの実施形態においては、本明細書に記載の併用治療（例えば、ＤＮＡワクチン、ＡＲ拮抗剤およびＰＤ－１阻害剤）による治療の間に、ＧｎＲＨアナログまたは拮抗剤を被験体に投与する。いくつかの実施形態において、被験体は、非ステロイド性抗アンドロゲンを用いた治療を事前に受けている。いくつかの実施形態において、被験体は、非ステロイド性抗アンドロゲンを用いた治療を事前に受けていない。被験体が抗アンドロゲンによる治療を事前に受けているいくつかの実施形態において、当該被験体は、本明細書に記載の併用治療による治療を施すに先立って、４週間以上（フルタミドの場合）または６週間以上（ビカルタミドまたはニルタミドの場合）にわたって抗アンドロゲンの使用を停止する。さらに、いくつかの実施形態においては、被験体におけるＰＳＡをモニタリングする。例えば、抗アンドロゲン離脱応答（非ステロイド性抗アンドロゲンを停止してから４～６週間以内にＰＳＡが２５％超低下するなど）を示した被験体対して、ＰＳＡをモニタリングする。被験体のＰＳＡが抗アンドロゲン離脱後に観察される最低値を超えて上昇した場合に、本明細書に記載の併用治療を実施する。いくつかの実施形態において、テストステロンの去勢レベルは、治療の開始から６週間以内に５０ｎｇ／ｄＬ未満となる。

【0138】

いくつかの実施形態において、被験体は、アビラテロンまたはエンザルタミドを用いた治療を事前に受けている。いくつかの実施形態において、被験体は、コルチコステロイド治療に先立つ３箇月間以上にわたって、治療を受けていない（例えば、停止している）。いくつかの実施形態において、被験体のＥＣＯＧパフォーマンス段階は、０、１または２である。いくつかの実施形態において、被験体は、充分な血液機能、腎機能および肝機能を有している（例えば、ＷＢＣ＞２０００／ｍｍ^３、ＡＮＣ＞１０００／ｍｍ^３、ＨｇＢ＞９．０ｇｍ／ｄＬ；、血小板＞１００，０００／ｍｍ^３、クレアチニン＜２．０ｍｇ／ｄＬ、および／または、ＡＳＴおよびＡＬＴ＜２．５×組織正常上限）。いくつかの実施形態において、被験体の病歴には、ＨＩＶ１およびＨＩＶ２、ＨＴＬＶ－１、または活動性のＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎がない。いくつかの実施形態において、被験体は、４週間以上に及んで他の治療を受けておらず、治療前の時点で、急性毒性から回復している（グレード２未満まで回復している）。いくつかの実施形態において、被験体は生検を受けている。

【0139】

いくつかの実施形態においては、被験体におけるＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＡＲのレベルを測定して、治療を評価または変更する。いくつかの実施形態において、レベルの測定およびＤＮＡワクチンの投与は、特に限定されない任意の順序および頻度で行う（測定／投与、投与／測定、測定／投与／測定、投与／測定／投与、測定／投与／測定／投与、測定／投与／測定／投与／測定、測定／投与／投与／測定／投与／投与など）。

【0140】

いくつかの実施形態においては、治療スケジュールまたは投与量を、測定（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＡＲの標的レベルを得る測定）に応じて変更する。

【0141】

〔投与、治療、投与量および投与スケジュール〕
いくつかの実施形態において、本技術は、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤とＡＲ拮抗剤との組合せを被験体に投与する方法に関する。いくつかの実施形態において、ＡＲ拮抗剤は、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤とは異なる投薬スケジュールで投与される。

【0142】

いくつかの実施形態において、本技術は、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を被験体に投与する方法に関する。この方法は、本技術に従ってＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を被験体に投与する一般的な工程を含む。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤、その誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩を、薬学的に有効な量で投与する。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤、その誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩を、治療上有効な用量で投与する。

【0143】

投与量および頻度は、有害な影響を実質的に生じさせることなく、化合物の有効レベルを与えられるように選択する。経口投与、皮内投与、経皮投与または静脈内投与の場合、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤の投与量は、一般的に、０．００１～１０，０００ｍｇ／ｋｇ／日（またはｍｇ／ｋｇ／１回用量）である。例えば、０．０１～１０００ｍｇ／ｋｇ／日（またはｍｇ／ｋｇ／１回用量）、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ／日（またはｍｇ／ｋｇ／１回用量）である。

【0144】

薬学的に有効な量を投与する方法の例としては、非経口投与、経口投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、局所投与、舌下投与、直腸投与および膣投与の形態が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。非経口投与経路の例としては、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、静脈内経路、皮内経路、経皮経路および注入経路が挙げられる。いくつかの実施形態においては、化合物、その誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩を経口投与する。

【0145】

いくつかの実施形態においては、化合物または関連化合物の単回用量を被験体に投与する。他の実施形態においては、時間、日、週などによって隔てられた２つ以上の時点において、複数の用量を投与する。いくつかの実施形態においては、化合物を長期間にわたって（例えば、慢性的に）投与する。例えば、数週間、数箇月間または数年間にわたって投与する（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間またはそれ以上；１箇月間、２箇月間、３箇月間、４箇月間、５箇月間、６箇月間、７箇月間、８箇月間、９箇月間、１０箇月間、１１箇月間、１２箇月間またはそれ以上；１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間またはそれ以上）。このような実施形態においては、化合物を長期間にわたり定期的なスケジュールで投与してもよい（毎日、毎週、毎晩など）。

【0146】

本技術はまた、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を用いて、被験体を治療する方法にも関する。本技術の他の態様によれば、有効量のＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤（または、その１種類以上の塩）を用いて、治療を必要とする被験体を治療する方法が提供される。この方法は、有効量のＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤（または、その塩）を、本明細書において上述した、本項目で詳述しているおよび／または特許請求の範囲に記載した医薬品のいずれか１つにおいて、被験体に投与する工程を含む。被験体は、このような治療を必要とする任意の被験体であってよい。上述の説明において、本技術は、化合物またはその塩に関連する。このような塩の例としては、臭化物塩、塩化物塩、ヨウ化物塩、炭酸塩および硫酸塩が挙げられる（ただし、これらには限定されない）。しかし、ここで理解されたいことには、上述の化合物は化合物群の一要素であり、当該化合物群に包含される関連誘導体を含んでいる医薬品、方法およびキットも、本技術に包含されることが意図される。それゆえ、本技術の他の態様は上述の概要を包含しているが、いずれの態様においても、「化合物」と表記されている箇所はこのような誘導体に置換えて読まれる。

【0147】

いくつかの実施形態においては、被験体を試験して、疾患および／または状態（前立腺癌など）の存在、非存在またはレベルを評価する。このような試験を実施するには、例えば、バイオマーカー、代謝産物、身体症状、徴候などをアッセイまたは測定して、疾患または状態のリスクまたは存在を決定する。いくつかの実施形態においては、試験の結果に基づいて、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤により被験体を治療する。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤により被験体を治療し、サンプルを得て、検出可能な薬剤のレベルを測定し、その後、測定された検出可能な薬剤のレベルに基づいてＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤により被験体を再び治療する。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤により被験体治療し、サンプルを得て、検出可能な薬剤のレベルを測定し、測定された検出可能な薬剤のレベルに基づいてＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤により被験体を再び治療し、その後、別のサンプルを得て、検出可能な薬剤のレベルを測定する。いくつかの実施形態においては、他の試験を実施する（例えば、検出可能な薬剤のレベルの測定に基づかない試験）。他の試験は、様々な段階において実施する（例えば、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤を用いた最初の治療の前に実施し、最初の用量を決定する指標とする）。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤による治療の後の治療を、試験結果に基づいて調節する（例えば、投薬量、投薬スケジュール、薬物の種類などを変更する）。

【0148】

いくつかの実施形態においては、患者を試験し治療し、次に再び試験して、治療に対する応答をモニタリングしたり、治療を変化させたりする。いくつかの実施形態において、試験および治療のサイクルは、試験および治療のパターン、周期性、または試験フェーズと治療フェーズとの間隔に制限されることなく設計してよい。このように、本技術は、試験および治療の特に限定されない種々の組合せを意図している。例えば、試験／治療、治療／試験、試験／治療／試験、治療／試験／治療、試験／治療／試験／治療、試験／治療／試験／治療／試験、試験／治療／試験／試験／治療／治療／治療／試験、治療／治療／試験／治療、試験／治療／治療／試験／治療／治療などである。

【0149】

本技術において、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤の投与における用量および投与スケジュールは、特に限定されない。例えば、いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンを１日目に開始して週２回、全６回皮内投与する。ＤＮＡワクチンの例としては、交互投与されるｐＴＶＧ－ＨＰ（例えば、１００μｇ）およびｒｈＧＭ－ＣＳＦ（例えば、２０８μｇ）；ｐＴＶＧ－ＨＰ（例えば、１００μｇ）およびＧＭ－ＣＳＦ（例えば、２０８μｇ）；ｐＴＶＧ－ＡＲ（例えば、１００μｇ）およびｒｈＧＭ－ＣＳＦ（例えば、２０８μｇ）が挙げられる。このとき、ＰＤ－１阻害剤は、１日目に開始して３週間ごとに４回静脈内投与する。ＰＤ－１阻害剤の例としては、約２００ｍｇの固定用量のペンブロリズマブまたはニボルマブが挙げられる。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチン（例えば、ｐＴＶＧ－ＨＰ（例えば、１００μｇ）およびｒｈＧＭ－ＣＳＦ（例えば、２０８μｇ））を、１日目に開始して週２回、全６回皮内投与する。この実施形態においては、ＰＤ－１阻害剤（例えば、約２００ｍｇの固定用量のペンブロリズマブまたはニボルマブ）を、２週間ごと、３週間ごとまたは４週間ごとに静脈内投与する（例えば、必要に応じて３～６回投与する）。この実施形態では、ＰＤ－１阻害剤の最初の投与は、ｐＴＶＧ－Ｈの最後の投与から２週間後に行う。

【0150】

したがって、いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン（例えば、ｐＴＶＧ－ＨＰ）の投与量は、約１００μｇである（例えば、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇまたはそれ以上）。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンと、ＧＭ－ＣＳＦ（例えば、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）などのアジュバントとを組合せて投与する。投与量は、例えば、約２００μｇである（例えば、１００～５００μｇ。例えば、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ（例えば、いくつかの実施形態においては２０８μｇ）、２１０μｇ、２２０μｇ、２３０μｇ、２４０μｇ、２５０μｇ、２６０μｇ、２７０μｇ、２８０μｇ、２９０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ、またはそれ以上）。上述した通り、いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンを皮内投与する（例えば、側腕の三角筋領域）。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンの投与量は、約０．２５ｍＬである。（例えば、１００～５００μＬ。例えば、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、２５０μＬ、２６０μＬ、２７０μＬ、２８０μＬ、２９０μＬ、３００μＬ、４００μＬ、５００μＬ、６００μＬ、７００μＬ、８００μＬ、９００μＬ、１０００μＬまたはそれ以上）。いくつかの実施形態においては、上述の量のＤＮＡワクチンを、互いに隣接する２箇所に投与する。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンを隔週で投与する（例えば、約２週間ごと。例えば、約１４日ごと（例えば、１４±３日ごと（例えば、１１～１７日ごと）））。いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンを６回投与する（例えば、３～９回。例えば、３回、４回、５回、６回、７回、８回または９回）。

【0151】

さらに、いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤（例えば、ペンブロリズマブまたはニボルマブ）を、２ｍｇ／ｋｇの用量で投与する（例えば、１～５ｍｇ／ｋｇ。例えば、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ）。最も好ましくは、約２００ｍｇの固定用量で投与される。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤を静脈内投与する。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤を、３０分間にわたって（例えば、１５分～２時間にわたって。例えば、１５分間、３０分間、４５分間、６０分間、７５分間、９０分間、１０５分間または１２０分間にわたって）静脈内などに投与する。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤は、３週間ごとに投与する（例えば、１週間ごと、１．５週間ごと、２週間ごと、２．５週間ごと、３週間ごと（例えば、２１±３日ごと（例えば、１８～２２８日ごと））、３．５週間ごと、４週間ごと、または５週間ごと）。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤を４回投与する（例えば、２～９回。例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回または９回）。いくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤をＤＮＡワクチンと併用投与する（例えば、ＤＮＡワクチンによる最初のワクチン接種の１日前、ワクチン接種と同日、ワクチン接種の１日後）。ＰＤ－１経路阻害剤およびＤＮＡワクチンを併用投与するいくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤を第１組成物にて投与し、ＤＮＡワクチンを第１組成物とは異なる第２組成物にて投与する。ＰＤ－１経路阻害剤およびＤＮＡワクチンを併用投与するいくつかの実施形態においては、ＰＤ－１経路阻害剤およびＤＮＡワクチンを同じ組成物にて投与する。他の例示的な実施形態においては、ＤＮＡワクチンの投与に引き続いてＰＤ－１経路阻害剤を投与する（例えば、ＤＮＡワクチンによる最後のワクチン接種の１週間後、２週間後、３週間後、４週間後またはそれ以上後に投与する）。

【0152】

いくつかの実施形態において、本技術は、スケジュールに従ってＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１経路阻害剤を投与する工程を含む。例えば、いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチン（例えば、ｐＴＶＧ－ＨＰ）およびＰＤ－１経路阻害剤を被験体に同日に投与して、治療を開始する（例えば、１日目とする）。例えば、ＤＮＡワクチンの投与後０～０．５時間から５時間の間に（最長で２４時間後に）ＰＤ－１経路阻害剤を投与する。次に、いくつかの実施形態においては、治療の開始から数日後の期間にＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤を投与する。例えば、いくつかの実施形態においては、以下の日程でＤＮＡワクチンを投与する。１５日目（例えば、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤の１日目の投与から１５±３日後（例えば、１２～１８日目））；２９日目（例えば、ＤＮＡワクチンの１５日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；４３日目（例えば、ＤＮＡワクチンの２９日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；５７日目（例えば、ＤＮＡワクチンの４３日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；７１日目（例えば、ＤＮＡワクチンの５７日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））。また、以下の日程でＰＤ－１阻害剤を投与する。２２日目（例えば、ＤＮＡワクチンの１５日目の投与から７±３日後（例えば、４～１０日後））；４３日目（例えば、ＤＮＡワクチンの４３日目の投与後、０～０．５時間から５時間経過後）；６４日目（例えば、ＤＮＡワクチンの５７日目の投与から７±３日後（例えば、４～１０後））。

【0153】

いくつかの好適な実施形態においては、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を、重複投与スケジュールにおいて複数回投与する。いくつかの実施形態においては、最初にワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を併用投与し（すなわち、治療スケジュールの１日目の２４時間以内に投与する）、その後、ワクチンを１０～２０日または２１日ごと（好ましくは約１４日ごと）に投与し、ＰＤ－１阻害剤を１７～２４日ごと（好ましくは約２１日ごと）に投与し、投与期間は最長９０日間にわたる。いくつかの実施形態において、この方法は、ワクチンを１０～２０日または２１日ごと（好ましくは約１４日ごと）に投与し、ＰＤ－１阻害剤を１７～２４日ごと（好ましくは約２１日ごと）に投与し、投与期間は９１～３６５日間である工程をさらに含む。いくつかの実施形態においては、９０日後にＰＳＡの減少または腫瘍の縮小を示す患者を選択して、ワクチンを１０～２０日または２１日ごとに投与し、ＰＤ－１阻害剤を１７～２４日ごとに投与し、投与期間を９１～３６５日間とする。いくつかの実施形態において、この方法は、ワクチンを１０～２０日または２１日ごと（好ましくは約１４日ごと）に投与し、ＰＤ－１阻害剤を１７～２４日ごと（好ましくは約２１日ごと）に投与し、投与期間を３６６～７３０日間とする工程をさらに含む。いくつかの実施形態においては、３６５日後にＰＳＡの減少または腫瘍の縮小を示す患者を選択して、ワクチンを１０～２０日または２１日ごとに投与し、ＰＤ－１阻害剤を１７～２４日ごとに投与し、投与期間は３６６～７３０日間とする。いくつかの実施形態においては、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を、１０～２８日ごと（好ましくは１０～２０日もしくは２１日もしくは２１日ごと、または１０～２４日ごと；最も好ましくは約１４日ごとまたは約２１日ごと）に投与し、投与期間を最長９０日間とする重複スケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、この方法は、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を１０～２８日ごと（好ましくは１０～２０日または２１日ごと、または１０～２４日ごと；最も好ましくは約１４日ごと）に投与し、投与期間を９１～３６５日間とする重複スケジュールで投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態においては、９０日後にＰＳＡの減少または腫瘍の縮小を示す患者を選択して、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を１０～２８日ごと（好ましくは１０～２０日または２１日ごと、または１０～２４日ごと；最も好ましくは約１４日ごと）に投与し、投与期間を９１～３６５日間とする重複スケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、この方法は、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を１０～２８日ごと（好ましくは１０～２０日または２１日ごと、または１０～２４日ごと；最も好ましくは約１４日ごと）に投与し、投与期間を３６６～７３０日間とする重複スケジュールで投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態においては、３６５日後にＰＳＡの減少または腫瘍の縮小を示す患者を選択して、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を１０～２８日ごと（好ましくは１０～２０日または２１日ごと、または１０～２４日ごと；最も好ましくは約１４日ごと）に投与し、投与期間を３６６～７３０日間とする併用投与を行う。いくつかの実施形態において、重複投与スケジュール内において、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を併用投与する。併用投与には、ワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を同じ組成物（例えば、溶液）にて投与することが含まれる。あるいは、薬剤を別々に投与する場合は、同日に投与することも含まれる（好ましくは、約１分間～約５時間もしくは２４時間以内に投与する、または、約３０分間～約５時間もしくは２４時間以内に投与する）。

【0154】

投薬スケジュールの他の実施形態においては、被験体にＤＮＡワクチン（例えば、ｐＴＶＧ－ＨＰ）を投与して治療を開始し（例えば、１日目とする）、１日目にはＰＤ－１阻害剤を投与しない。次に、ＤＮＡワクチンおよび／またはＰＤ－１阻害剤を、治療の開始から数日後に投与する。例えば、いくつかの実施形態においては、ＤＮＡワクチンを以下のスケジュールで投与する。１５日目（例えば、ＤＮＡワクチンの１日目の投与から１５±３日後（例えば、１２～１８日後））；２９日目（例えば、ＤＮＡワクチンの１５日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；４３日目（例えば、ＤＮＡワクチンの２９日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；５７日目（例えば、ＤＮＡワクチンの４３日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；７１日目（例えば、ＤＮＡワクチンの５７日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））。このとき、ＤＮＡワクチンの一連の投与の後に、ＰＤ－１阻害剤を投与する。例えば、８５日目（例えば、ＤＮＡワクチンの７１日目の投与から１４±３日後（例えば、１１～１７日後））；１０６日目（例えば、ＤＮＡワクチンの８５日目の投与から２１±３日後（例えば、１８～２４日後））；１２７日目（例えば、ＤＮＡワクチンの１０６日目の投与から２１±３日後（例えば、１８～２４日後））；１４８日目（例えば、ＤＮＡワクチンの１２７日目の投与から２１±３日後（例えば、１８～２４日後））に投与する。例えば、図１を参照。

【0155】

いくつかの実施形態においては、投薬スケジュールの任意の時点で、被験体に対して（または、被験体から得られたサンプルを使用して）１つ以上の試験を実施してもよい。試験の例としては、化学物質、バイオマーカー、代謝産物など（例えば、ナトリウム、カリウム、重炭酸塩、ＢＵＮ、クレアチニン、グルコース、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ビリルビン、アルカリ性ホスファターゼ、アミラーゼ、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、ＬＤＨ、血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、血清ＰＡＰ、血清テストステロン）のレベルを測定する試験；血液試験（例えば、ＣＢＣ。いくつかの実施形態においては、血小板数も含む）；他の試験（例えば、ＣＴスキャン、骨スキャン、身体検査、白血球除去療法、抗体パネル、ＣＴＣ計数、組織生検、パルス、血圧、呼吸数、体温、Ｔ細胞応答、ＰＥＴスキャン、質問表などを含む）が挙げられる。

【0156】

いくつかの実施形態においては、上述の投薬スケジュールに、間隔を空けた頻度でのＡＲ拮抗剤の投与を加える。例えば、いくつかの実施形態においては、ＡＲ拮抗剤を数週間または数箇月間投与する（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１８週間、２０週間またはそれ以上の間、１日１回以上を投与する）。次に、投与を中断する（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１８週間、２０週間またはそれ以上期間中断する）。ＡＲ拮抗剤の投与を中断している間には、本明細書に記載のスケジュールにて、ＤＮＡワクチンおよびＰＤ－１阻害剤を投与する。例えば、いくつかの実施形態においては、治療期間の間は（例えば、１箇月間、６箇月間、１年間またはそれ以上）、ＡＲ拮抗剤を９０日ごとに９０日間投与する（例えば、９０日間毎日投与し、９０日間投与を中断する）。ただし、他のスケジュールも特に意図されている。

【0157】

〔治療およびモニタリングに対する応答〕
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の併用療法による治療に対する応答の例としては、腫瘍性病変の縮小、被験体の生物学的腫瘍負荷の減少が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態においては、被験体の測定可能な病変を、治療前、治療中および治療後に同定し、モニタリングする。いくつかの実施形態においては、初期治療後における被験体の腫瘍負荷を評価して、治療の経過をモニタリングするためのベースラインを設定する（例えば、後の測定値と比較するための測定値を得る）。いくつかの実施形態においては、ベースラインとなる腫瘍負荷を、被験体をイメージングして決定する。本明細書において用いられるとき、１つ以上の測定可能な病変を被験体が有しているならば、当該被験体は測定可能な疾患を患っている。本明細書において用いられるとき、「測定可能な病変」とは、１つ以上の寸法（記録される長径）が正確に測定できる病変である。具体的には、従来の技術では、長径が２０ｍｍ（２．０ｃｍ）超であり、スパイラルＣＴスキャンでは長径が１０ｍｍ（１．０ｃｍ）超である。リンパ節転移の場合の「測定可能な病変」とは、スパイラルＣＴまたは従来の技術によって測定した長径が２．０ｃｍ以上である病変である。いくつかの実施形態において、以前に放射線治療した領域にある腫瘍病変は、測定可能とは見做されない。本明細書において用いられるとき、「測定不能な」病変とは、測定可能ではない病変である。例えば、小さな病変（従来の技術では長径が２０ｍｍ（２．０ｃｍ）未満であり、またはスパイラルＣＴスキャンでは長径が１０ｍｍ（１．０ｃｍ）未満である病変）；２．０ｃｍ未満のリンパ節の病変；信頼できる測定値が得られない病変（例えば、骨病変、軟膜疾患、腹水、胸水／心膜滲出液、皮膚リンパ管炎／肺リンパ管炎、腹部腫瘤（確認されないため、その後にイメージング技法が行われる）、および嚢胞性病変）と、が含まれる、他の全ての病変である。

【0158】

いくつかの実施形態においては、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）（例えば、^１８Ｆ ＮａＦ ＰＥＴ）を用いて病変を測定する。^１８Ｆ ＮａＦ ＰＥＴは、３次元の測定値を得る際に使用される（例えば、組織の３次元の測定値）。したがって、病変の体積を定量化し、全体的な腫瘍体積を測定できる。

【0159】

いくつかの実施形態においてを、関連する臓器に表れる測定可能な病変の大きさをモニタリングすることによって、治療に対する応答をモニタリングする。いくつかの実施形態においては、ＲＥＣＩＳＴ１．１を使用して、Ｘ線撮影データを評価する。いくつかの実施形態においては、ＷＨＯ基準に基づく免疫関連応答の基準（ｉｒＲＣ）を使用して、免疫腫瘍学的評価を下す。例えば、ｉｒＲＥＣＩＳＴ基準を使用する。この基準は、ＲＥＣＩＳＴ１．１、ｉｒＲＣ、およびNishino (2013) "Developing a common language for tumor response to immunotherapy: immune-related response criteria using unidimensional measurements.", Clin Cancer Res. 19(14): 3936-43（参照により本明細書中に組込まれる）に基づいている。

【0160】

いくつかの実施形態においては、大きさ（例えば、直径が最大の病変）および正確な測定の繰り返しやすさ基づいて標的病変を選択する。いくつかの実施形態においては、全ての標的病変の長径を合計した合計長径を与えることにより、治療に対する応答をモニタリングする。いくつかの実施形態においては、合計長径を使用して、腫瘍応答を特徴付ける。２次元または３次元で測定可能な病変については、それぞれの評価時における長径を使用する。さらに、いくつかの実施形態においては、例えば、ＲＥＣＩＳＴ１．１および／またはｉｒＲＥＣＩＳＴによる短軸の測定を使用して、リンパ節を測定する。

【0161】

いくつかの実施形態においては、治療に対する被験体応答に基づいたクラスに被験体を分類する。例えば、全ての標的病変が焼失したならば、「完全応答（ＣＲ）」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態においては、完全応答の状態を決定するために、応答の基準を最初に満たしてから４週間以上経過後に行う反復評価によって、腫瘍測定値の変化を確認する。いくつかの実施形態において、ＰＳＡは、０．２ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態においては、１．０ｃｍ未満に縮小したリンパ節を正常と見做す。ベースラインの合計長径を参照値として、標的病変の合計長径が３０％以上減少したならば、「部分応答（ＰＲ）」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態においては、部分応答の状態を決定するために、応答の基準が最初に満たされてから４週間以上経過後に行われる反復評価によって、腫瘍測定値の変化を確認せねばならない。いくつかの実施形態においては、新たな病変が存在しない。ベースラインの測定以降に記録された合計長径の最小値を参照値として、標的病変の合計長径が２０％以上増加（および、絶対値が０．５ｃｍ以上増加）したならば、あるいは１個以上の新しい病変が出現したならば、「進行性疾患（ＰＤ）」クラスに被験体を分類する。部分奏効と見做されるだけの縮小も、進行性疾患とみなされるだけの増加もないならば、「安定疾患（ＳＤ）」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態において、安定疾患の状態を決定するためには、最短で１２週間の間隔を空けて試験を行った後に、少なくとも１回の測定値が安定疾患基準を満たしている。

【0162】

いくつかの実施形態において、治療に対する応答をモニタリングする工程は、非標的病変（例えば、標的病変ではない全ての病変または疾患部位）をモニタリングする工程を含む。いくつかの実施形態においては、例えば、骨シンチグラフィーによって非標的病変をモニタリングする。いくつかの実施形態においては、非標的病変のモニタリングに基づいて、被験体を被験体クラスに分類する。例えば、全ての非標的病変の消失しＰＳＡ腫瘍マーカーレベルが検出不能となったならば、「完全奏効（ＣＲ）」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態においては、完全奏効の状態を決定するために、応答の基準が最初に満たされてから４週間以上経過後に行われる反復評価によって、腫瘍測定値の変化を確認する。いくつかの実施形態において、１つ以上の非標的病変が持続するか、および／または、検出可能な血清ＰＳＡ腫瘍マーカーレベルが持続するならば、「不完全奏効／安定疾患（ＳＤ）」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態において、安定疾患の状態を決定するためには、最短１２週間の間隔を空けて試験を行った後に、１回以上測定値が安定疾患基準を満たしている。いくつかの実施形態において、１つ以上の新しい病変が出現するか、および／または、存在していた非標的病変が明確な進行したならば、「進行性疾患（ＰＤ）」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態において、骨スキャンによってのみ検出可能な病変については、症状を伴う新しい病変が２個超出現したならば、疾患進行である。症状がなく、疾患進行の他の証拠がないならば（例えば、ＰＳＡまたは測定可能な疾患基準による疾患の進行がないならば）、いくつかの実施形態においては、骨シンチグラフィーで進行を記録して（例えば、６週間以上後に新しい病変２個超の病変を確認して）、骨スキャンで見られるフレア応答の可能性を排除する。

【0163】

いくつかの実施形態においては、（例えば、ＰＳＡの量および／または動態に基づく）ＰＳＡ進行をモニタリングして、治療に対する被験体の応答をモニタリングする。いくつかの実施形態において、ＰＳＡが０．２ｎｇ／ｍＬ未満まで低下したならば、「ＰＳＡ完全奏効」に被験体を分類する。いくつかの実施形態において、「ＰＳＡ完全奏効」クラスへの分類は、後にＰＳＡ測定をすることにより確認する（例えば、（ＰＳＡ完全奏効が確認されてから）４週間以上経過後のＰＳＡ測定）。いくつかの実施形態において、「ＰＳＡ完全奏効」への分類は、Ｘ線所見による進行の証拠がないことにさらに基づいている。いくつかの実施形態において、ベースラインＰＳＡが５０％以上低下したならば、「ＰＳＡ部分奏効」クラスに被験体を分類する。いくつかの実施形態において、「ＰＳＡ部分奏効」クラスへの分類は、Ｘ線所見による進行の証拠がないことをさらに含む。いくつかの実施形態においては、ＰＳＡ進行の時間を使用して、治療に対する被験体の応答をモニタリングする。本明細書において用いられるとき、ＰＳＡ進行とは、ＰＳＡが最低値から５０％および２ｎｇ／ｍＬ超増加することを意味する。このことは、（例えば、上昇傾向が確認された時点から）３週間以上経過後に測定した第２の値によって確認する。試験中に減少が起こらなかった場合、最低値はベースライン値である（例えば、治療前の値）。

【0164】

いくつかの実施形態において、被験体の免疫系をモニタリングする。このモニタリングは、例えば、以下のように行う。ＰＡＰまたはＡＲ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞エフェクター免疫を評価する；ＰＡＰまたはＡＲ特異的記憶Ｔ細胞免疫を評価する；ＰＡＰまたはＡＲ特異的Ｔ細胞を評価する；抗原特異的抗体（例えば、ＰＡＰまたはＡＲ特異的抗体）を評価する；抗原特異的調節免疫応答を評価する；他の前立腺関連抗原への抗原拡散を評価する。いくつかの実施形態においては、循環腫瘍細胞を計数し特徴付けることによって、被験体を評価する。いくつかの実施形態においては、組織学的に被験体を評価する（例えば、組織生検を検査することによって評価する）。いくつかの実施形態においては、ＰＥＴおよび／またはＣＴ（例えば、ＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴ）を使用する定量的な全骨イメージングによって、被験体を評価する。

【0165】

いくつかの実施形態においては、ＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴを使用する全骨イメージング（例えば、定量的全骨イメージング；ＱＴＢＩ）を使用して、被験体を評価する。例えば、いくつかの実施形態においては、ＱＴＢＩを使用して、体積が小さい骨転移性疾患および腫瘍増殖速度を評価する。例えば、いくつかの実施形態において、被験体は、標準的な骨シンチグラフィーによっては検出されない骨疾患を患っている。いくつかの実施形態においては、様々な時点において患者を評価する（例えば、治療の１箇月前、ベースライン、および治療から３箇月後）。いくつかの実施形態においては、機能的ＮａＦ ＰＥＴ取込みと、ＣＴスキャンから得られる解剖学的情報とに基づいて、骨における転移性前立腺癌病変を位置付け同定する。いくつかの実施形態においては、自動セグメンテーション方法を使用して（例えば、固定ＳＵＶ閾値を使用して）セグメンテーションを実行し、医師の指導の下に調整する。いくつかの実施形態においては、関節登録技術を用いて異なる時点におけるスキャンを位置合わせする。関節登録技術は、ＣＴによる骨格要素（例えば、骨）の剛体位置合わせと、それに続くＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴによる骨および病変の非剛体位置合わせとを組合せることにより、位置合わせを最適化している。いくつかの実施形態においては、治療前スキャンと追跡スキャンとの間の病変を適合させて、病変の長期的な対応を確立させる。いくつかの実施形態においては、各患者についての包括的な治療応答の測定基準が計算される。この基準には、例えば、ＳＵＶ_{ｔｏｔａｌ}（全疾患負担）、ＳＵＶ_ｍａｘ（最大強度病変）、ＳＵＶ_ｍｅａｎ（平均強度）、病変の数、および骨病変の総体積が含まれる。さらに、いくつかの実施形態においては、個々の病変ごとに画像応答距離を計算する。いくつかの実施形態においては、経時的な変化を評価することにより（例えば、治療前からベースラインまでの変化をベースラインから３箇月までに得られた測定値と比較する）、この方法を使用して骨転移性疾患の成長速度を評価する。

【0166】

〔キット〕
いくつかの実施形態において、本技術は、前立腺癌を患っている被験体または前立腺癌のリスクがある被験体を治療するキットを提供する。例えば、いくつかの実施形態は、例えば、ＰＡＰ遺伝子および／またはＡＲ遺伝子由来のヌクレオチド配列を有する核酸を含有している核酸ワクチン（例えば、ＤＮＡワクチン）を含んでいる第１組成物（例えば、第１医薬組成物）と；ＰＤ－１阻害剤を含んでいる第２組成物（例えば、第２医薬組成物）と；ＡＲ拮抗剤を含んでいる第３組成物と；を提供する。さらに、いくつかのキットの実施形態は、添付文書をさらに備えている。添付文書により、核酸ワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤の投与に関する指示を含む投薬スケジュールが提供される。

【0167】

いくつかの実施形態において、核酸ワクチンはｐＴＶＧ－ＨＰをふくんでおり、ＰＤ－１阻害剤はＰＤ－１のモノクローナル抗体阻害剤である。いくつかの実施形態において、核酸ワクチンはｐＴＶＧ－ＨＰを含んでおり、ＰＤ－１阻害剤はペムブロリズマブである。いくつかの実施形態において、核酸ワクチンはｐＴＶＧ－ＨＰを含んでおり、ＰＤ－１阻害剤はニボルマブである。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチンはアジュバントを含んでいる（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ）。いくつかの実施形態において、ＡＲ拮抗剤は、エンザルタミドまたはアパルタミドである。

【0168】

いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤は、すぐに使用できる医薬組成物として提供される。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤は、乾燥状態（例えば、凍結乾燥）で提供される。例えば、薬学的に適切な溶液により、投与前に可溶化および／または再懸濁する。

【0169】

いくつかの実施形態において、キットは、容器（バイアル、アンプル、ボトルなど）に格納されているＤＮＡワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤を備えている。いくつかの実施形態において、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤は、容器（バイアル、アンプル、ボトルなど）中において、単回投与量にて提供される。例えば、いくつかのキットの実施形態は、以下を以下を備えている。（１）約１００μｇのＤＮＡワクチン（例えば、ｐＴＶＧ－ＨＰ）および約２０８μｇのＧＭ－ＣＳＦを含む医薬組成物が格納されている第１バイアル（ＤＮＡワクチンは、例えば、ＰＡＰおよびＡＲを標的とする単回投与用または複数回投与用のＤＮＡワクチンである）。（２）１０～１０００ｍｇのＰＤ－１阻害剤が格納されている第２バイアル。（３）エンザルタミドまたはアパルタミドが格納されている第３バイアル。いくつかの実施形態において、第１バイアルｎｉは、約２００～３００μＬの医薬組成物が格納されている。いくつかの実施形態において、キットは、ＤＮＡワクチンのバイアルを２個備えており、２回分の投与量のＤＮＡワクチンが提供される。

【0170】

キットのいくつかの実施形態は、ＤＮＡワクチン、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤の複数回投与を提供する。例えば、本明細書に記載の投薬スケジュールを完了させるのに充分な回数の投与量を提供する。例えば、キットのいくつかの実施形態は、ＤＮＡワクチンを５～２０バイアル備えている。また、キットのいくつかの実施形態は、ＰＤ－１阻害剤およびＡＲ拮抗剤を２～１０バイアル備えている。

【実施例】

【0171】

〔実施例１：臨床試験のプロトコル〕
この実施例では、前立腺癌における併用治療を試験するための臨床試験のプロトコルについて説明する。この試験で検証する仮説は、「１または２種類の前立腺癌抗原を標的とする免疫化とＰＤ－１阻害およびアパルタミドとを組合せることにより、有効な抗腫瘍免疫が得られる」というものである。抗腫瘍免疫は、アパルタミドの停止後にもＰＳＡ完全奏効が持続することによって示される。アンドロゲン遮断療法が必要になる前に、ＰＳＡを検出不能なレベルまで低下させ、前立腺癌を治癒させるか転移性再発を有意に遅延させる能力は、前立腺癌の治療において重要かつ臨床的に意義のある革新的な進歩であると言える。

【0172】

この試験は、前立腺癌患者の集団を対象に、無作為化第２相多施設試験として実施する。具体的に、この試験で評価するのは、それぞれ異なる抗原（ＰＡＰおよびＡＲ）を標的とする、１種類のＤＮＡワクチンの使用と２種類のＤＮＡワクチンの使用との比較である。ＤＮＡワクチンは、ＰＤ－１阻害剤（ＪＮＪ－６３７２３２８３）と同時に送達する。レジメンにおいて、アパルタミドは１２週間使用し、試験全体は６箇月間に及ぶ。

【0173】

図２に試験のプロトコルを示す。この試験で評価するのは、Ｄ０／Ｍ０前立腺癌を患っている患者における、ＭＶＩ－１１８ＤＮＡワクチン（または、ＭＶＩ－１１８ＤＮＡワクチンおよびＭＶＩ－８１６ＤＮＡワクチン）と、ＪＮＪ－６３７２３２８３（Janssen, Raritan, NJ）と、アパルタミドとの安全性および忍容性である。１年のＰＳＡ完全奏効（ＰＳＡ＜０．２ｎｇ／ｍＬ）率を測定する。

【0174】

加えて、この試験においては、２年の無転移生存率およびＸ線所見における無増悪生存の中央値も評価する。さらなる実験により、抗原特異的Ｔ細胞および／またはＩｇＧ応答が治療によって誘発されるか否かと、ＮａＦ ＰＥＴ／ＣＴを用いて腫瘍応答をモニタリングできるか否かを判断する。

【0175】

〔実施例２：ＡＲに対する免疫応答〕
図５は、被験体における無増悪生存を示す。（Ａ）は、ＡＲペプチドに対する免疫応答ありおよび免疫応答なしを示している。（Ｂ）は、ＡＲタンパク質に対する免疫応答ありおよび免疫応答なしを示している。図６は、ＡＲワクチンとＡＤＴとの組合せのデータを示している。このデータが示すところによると、ＡＲに対する患者免疫応答とＰＳＡ進行までの遅延時間との間には正の相関がある。図７は、ＰＤ－１阻害剤とＡＲワクチン（または、ＡＲワクチンおよびＡＤＴ）との組合せにより、マウス腫瘍モデルにおける有効性が改善されたことを示している。

【0176】

表１は、ＰＳＡ進行を示している。具体的には、試験実施日からＰＳＡ進行が認められた日または試験終了日（ＰＳＡ進行が認められなかった場合）までの日数を示している。ここで言うＰＳＡ進行とは、ＰＳＡが治療前より２５％超増加した場合、または絶対量が２ｎｇ／ｍＬ増加した場合と定義される。

【0177】

【表1】

【0178】

〔参考文献〕
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上記の明細書において言及した全ての刊行物および特許（参考文献の節にて引用したものを含むが、これらには限定されない）は、あらゆる目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。記載されている組成物、方法および技術の使用に種々の設計変更を加えたり、変形例としたりすることは、当業者にとって明白であり、記載されている技術的範囲および技術的思想から逸脱することはない。特定の例示的な実施形態に関連して本技術を説明してきた。しかし、ここで理解されたいことには、クレームされている本発明は、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきではない。実際には、本発明を実施するための記載された形態の種々の設計変更は当業者にとって明白であり、以下の特許請求の範囲に含まれていることが意図される。

【図1A】

【図1B-1】

【図1B-2】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図3-4】

【図3-5】

【図3-6】

【図4-1】

【図4-2】

【図4-3】

【図4-4】

【図4-5】

【図4-6】

【図4-7】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【配列表】

2022519328000001.app

【国際調査報告】