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特表2022-519389グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）アゴニストのアナログ、その調製プロセスおよび使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-03-23
(54)【発明の名称】グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）アゴニストのアナログ、その調製プロセスおよび使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/605 20060101AFI20220315BHJP
C07K 1/06 20060101ALI20220315BHJP
C07K 1/14 20060101ALI20220315BHJP
C07K 1/10 20060101ALI20220315BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20220315BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220315BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20220315BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220315BHJP
A61P 27/12 20060101ALI20220315BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20220315BHJP
A61P 29/02 20060101ALI20220315BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220315BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220315BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20220315BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20220315BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20220315BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220315BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20220315BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20220315BHJP
A61P 5/00 20060101ALI20220315BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20220315BHJP
A61P 25/22 20060101ALI20220315BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20220315BHJP
A61P 25/20 20060101ALI20220315BHJP
A61P 3/02 20060101ALI20220315BHJP
A61P 25/08 20060101ALI20220315BHJP
A61P 25/32 20060101ALI20220315BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220315BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20220315BHJP
【ＦＩ】
C07K14/605
C07K1/06
C07K1/14
C07K1/10
A61K38/22
A61P3/10
A61P3/00
A61P19/02
A61P27/12
A61P25/02
A61P29/02
A61P13/12
A61P27/02
A61P3/04
A61P9/12
A61P3/06
A61P9/10
A61P19/10
A61P19/08
A61P5/00
A61P15/00
A61P25/22
A61P25/24
A61P25/20
A61P3/02
A61P25/08
A61P25/32
A61P1/04
A61P1/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021569598
(86)(22)【出願日】2020-02-06
(85)【翻訳文提出日】2021-09-28
(86)【国際出願番号】 IB2020050957
(87)【国際公開番号】W WO2020161664
(87)【国際公開日】2020-08-13
(31)【優先権主張番号】201921004787
(32)【優先日】2019-02-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521353285
【氏名又は名称】エンジーン バイオサイエンシーズ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100137626
【弁理士】
【氏名又は名称】田代 玄
(72)【発明者】
【氏名】ガドジル ヒマンシュ
(72)【発明者】
【氏名】バナージー アビール
(72)【発明者】
【氏名】ロンデ ハルシタ
(72)【発明者】
【氏名】マグダム ディーパリ
(72)【発明者】
【氏名】レヴィン ダニエル
(72)【発明者】
【氏名】シン サンディープ
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA09
4C084BA19
4C084BA23
4C084DB37
4C084MA52
4C084MA55
4C084NA12
4C084NA14
4C084ZA051
4C084ZA061
4C084ZA081
4C084ZA121
4C084ZA201
4C084ZA331
4C084ZA361
4C084ZA401
4C084ZA421
4C084ZA451
4C084ZA661
4C084ZA681
4C084ZA701
4C084ZA811
4C084ZA961
4C084ZA971
4C084ZC031
4C084ZC211
4C084ZC331
4C084ZC351
4C084ZC391
4C084ZC411
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA01
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA30
4H045EA20
4H045FA34
4H045GA05
(57)【要約】
本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログに関する。本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供する。このグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）のアナログは、半減期が延長されている、より良好な薬物動態プロファイルである、生物活性が保持されている、ならびに、投薬頻度および用量を低下させることにより患者の負担を軽減するのに有利である、のうち１種または複数の特性を有する。本開示は、合成グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）アナログを調製するためのプロセスをさらに提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログ。
【請求項2】
リラグルチドのアナログであって、天然のリラグルチドのアミノ酸配列の２位のアミノ酸Ｌ－アラニンがＤ－アラニンで置き換えられており、Ｄ－リラグルチドである、アナログ。
【請求項3】
セマグルチドのアナログであって、天然物の２位のアミノ酸Ａｉｂ（アミノイソ酪酸）がＤ－アラニンで置き換えられており、Ｄ－セマグルチドである、アナログ。
【請求項4】
天然のリラグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－リラグルチドを調製するためのプロセスであって、ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、パルミチン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－リラグルチドを得るステップ
を含む、プロセス。
【請求項5】
天然のセマグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－セマグルチドアナログを調製するためのプロセスであって、ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのシークエンス、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、オキサオクタデカン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－セマグルチドを得るステップ
を含む、プロセス。
【請求項6】
Ｄ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを精製して、それぞれ精製されたＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを得るステップを含んでもよい、請求項４または５に記載のプロセス。
【請求項7】
カップリング剤が、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス（ジメチル－アミノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、およびＯ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）から選択される、請求項４または５に記載のプロセス。
【請求項8】
カップリング反応のための溶媒が、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ピリジン、無水酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジクロロエタン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、Ｎ－メチル－２－ピロリジノン（ＮＭＰ）、酢酸エチル、アセトニトリルおよびアセトンから選択される、請求項４または５に記載のプロセス。
【請求項9】
活性成分としての請求項１、２または３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アナログを、１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に含む、医薬組成物。
【請求項10】
投与経路が、経口または非経口である、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
治療有効量の請求項１、２または３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アナログを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法。
【請求項12】
有効量の請求項１、２または３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アナログを投与するステップを含む、対象におけるＧＬＰ－１介在性の疾患、障害または症候群を治療する方法。
【請求項13】
前記疾患が、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、メタボリックシンドローム（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満、肥満により悪化する病態、高血圧症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、フレイル、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン分泌不全による低身長症、多嚢胞性卵巣症候群による不妊症、不安、うつ、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸管運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群または短腸症候群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記疾患が、糖尿病および肥満から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、メタボリックシンドローム（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満、肥満により悪化する病態、高血圧症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、フレイル、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン分泌不全による低身長症、多嚢胞性卵巣症候群による不妊症、不安、うつ、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸管運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群または短腸症候群から選択される疾患の治療のための、請求項１、２または３のいずれか１項に記載のＧＬＰ－１アナログの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）のアナログに関する。より詳細には、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然（ｎａｔｉｖｅ）のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログに関する。本発明は、さらに、半減期が延長されている、より良好な薬物動態プロファイルである、生物活性が保持されている、ならびに、投薬頻度および用量を低下させることにより患者の負担を軽減するのに有利である、のうち１種または複数の特性を有する、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）のアナログに関する。特に、本発明は、異なるペプチド合成プロセスから得られる合成グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）アナログ、および、合成グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）アナログを調製するためのプロセスに関する。
【背景技術】
【0002】
背景技術の説明には、本発明の理解に有用でありうる情報が含まれる。このことは、本明細書において提供されるいずれかの情報を本願発明の先行技術もしくは関連技術であると認めたものでもなければ、明示的もしくは暗示的に言及されているいずれかの刊行物を先行技術であると認めたものでもない。
【0003】
薬物クラスとしては、長時間作用性のＧＬＰ－１受容体アゴニストは、２型糖尿病患者における血糖コントロールを向上させ、グルコース依存性の作用機序を有することから低血糖リスクが低い薬物に分類される。グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）は、腸により産生され、グルコース依存的に、グルカゴン分泌を阻害しつつインスリン分泌を刺激し、食欲およびエネルギー摂取量を低下させ、胃内容排出を遅らせる。この薬物クラスは、体重減少を促進しＳＢＰを低下させることも実証されており、このことは２型糖尿病患者にとっては有益で、心血管系リスクを低減させる可能性がある。さらに、長時間作用性のＧＬＰ－１受容体アゴニストに伴う一般的副作用として悪心があるが、悪心は一過性であることが多く、全体的に見れば、長時間作用性のＧＬＰ－１受容体アゴニストは概ね忍容性良好である。したがって、長時間作用性のＧＬＰ－１受容体アゴニストは、２型糖尿病に罹患している個体にとって効果的な治療選択肢となる可能性があり、血糖への対処のみに留まらない治療において、ＡＤＡ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：米国糖尿病学会）により定められた標準治療のガイドラインに合う格好の位置付けにある。
ＧＬＰ－１は、偏在するジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）－４により２位（アラニン）の位置で切断されやすい。この切断は、ＧＬＰ－１が分泌されるとほぼ即時に生じるので、ＧＬＰ－１の半減期は＜２分と短くなる（Gupta V., Indian J Endocr Metab 2013, 17, 413-21）。
ＧＬＰ－１は、偏在するジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）－４により２位（アラニン）の位置で切断されやすい。この切断は、ＧＬＰ－１が分泌されるとほぼ即時に生じるので、ＧＬＰ－１の半減期は＜２分と短くなる（Gupta V., Indian J Endocr Metab 2013, 17, 413-21）。
【0004】
多くのＧＬＰ－１アゴニストは、半減期が短いという課題を克服するため、天然のＧＬＰ－１に修飾を加えることにより開発された。用いられたアプローチの１つは、ＧＬＰ－１ポリペプチドの１個または複数のアミノ酸を置換してこのペプチドに親油性の置換基を付加することであった。これらの親油性の置換ＧＬＰ－１アゴニストは、注射されると作用の長期化を示した。ＵＳ６２６８３４３には、そのような脂肪酸アシル化ＧＬＰ－１アゴニストが開示されている。
ＧＬＰ－１アナログの１つの特定例は、リラグルチドである。リラグルチドは、内因性ＧＬＰ－１のうち比較的少ない形態であるヒトＧＬＰ－１－（７－３７）から誘導されたアシル化グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）アゴニストである。リラグルチドの血漿中半減期は短く（９～１５時間）、半減期を増大させることでその抗高血糖効果を活用できるようにするための新規の方法が開発されてきた。治療には、糖尿病患者に１日１回の注射が必要である。
ＧＬＰ－１アナログの１つの特定例は、リラグルチドである。リラグルチドは、内因性ＧＬＰ－１のうち比較的少ない形態であるヒトＧＬＰ－１－（７－３７）から誘導されたアシル化グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）アゴニストである。リラグルチドの血漿中半減期は短く（９～１５時間）、半減期を増大させることでその抗高血糖効果を活用できるようにするための新規の方法が開発されてきた。治療には、糖尿病患者に１日１回の注射が必要である。
【0005】
セマグルチドも、２型糖尿病を治療するために最近登録されたＧＬＰ－１アナログである。セマグルチドは、ヒトＧＬＰ－１と比較して２箇所のアミノ酸置換を有し（Ａｉｂ（８）、Ａｒｇ（３４））、リジン２６の位置で誘導体化されている。
【0006】
週１回皮下注射した場合のセマグルチドの薬物動態を評価するいくつかの試験がこれまでに実施されている。用量が０．５ｍｇまたは１ｍｇの場合の半減期が７日であることから、セマグルチドは４～５週間で定常状態に達するであろう。しかしながら、薬物間相互作用が若干あり、用量調節が必要である。その上、他のＧＬＰ－１ ＲＡと同様、セマグルチドは胃内容排出を遅らせることが可能であり、経口薬の吸収に影響を与えうる。セマグルチドは、２型糖尿病に罹患している対象には有用な薬物でありうるが、一方で、網膜症をわずかに増加させることが観察されている。また、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストであるリキシセナチドおよびエキセナチドを用いて失敗した臨床アウトカム試験に含まれていた母集団より年齢、ＨｂＡ１ｃ値は低く体重は同程度である母集団を含む他の母集団においてセマグルチドが心血管系アウトカムを改善するかどうかは、未知である。セマグルチドに関連するその他の難題は、経口製剤の場合に必要となるセマグルチドの投与量である。経口セマグルチドの場合、Ｏｚｅｍｐｉｃブランドのセマグルチド注射剤の場合よりはるかに高い。経口セマグルチドは、治験時に説明されていた効果を達成するのに一用量当たりセマグルチド１４ｍｇを必要としたのに対し、Ｏｚｅｍｐｉｃが必要としたのは０．５ｍｇにすぎなかったが、こちらの方がわずかに良い結果を達成した。この相違は、活性な経口薬物の大半は胃および小腸で消化され、治療結果を達成するために肝臓に向かう途中の腸壁を通過したのはごく一部であったという結果によるものである。
【発明の概要】
【0007】
これまでのところ、調査から、セマグルチドは血糖コントロールの強化および体重減少の促進をもたらすことが可能であるとはいえ、医薬を注射すること、または、経口製剤の場合ははるかに高い投与量のセマグルチドが必要になること、副作用が頻繁にみられること、網膜症のリスクが増大すること、および、潜在的にコストがかかること等、いくつかの難点があることが示唆されている。
しかし、半減期が改善されており、そのため臨床的有効性を保持しつつバイオアベイラビリティーがより増大しているＧＬＰ－１のアナログは、十分に探索されてはいない。
したがって、公知技術に伴う不足点を克服できるＧＬＰ－１アナログを開発する必要性が存在する。
したがって、先述の欠点のうち１つまたは複数を克服でき、それによりリラグルチドおよびセマグルチド等のＧＬＰ－１アナログと同様の有望な候補が糖尿病およびその他の治療において相応の地位を得ることができるような、ＧＬＰ－１のアナログを提供する必要性が、依然として存在する。
しかし、半減期が改善されており、そのため臨床的有効性を保持しつつバイオアベイラビリティーがより増大しているＧＬＰ－１のアナログは、十分に探索されてはいない。
したがって、公知技術に伴う不足点を克服できるＧＬＰ－１アナログを開発する必要性が存在する。
したがって、先述の欠点のうち１つまたは複数を克服でき、それによりリラグルチドおよびセマグルチド等のＧＬＰ－１アナログと同様の有望な候補が糖尿病およびその他の治療において相応の地位を得ることができるような、ＧＬＰ－１のアナログを提供する必要性が、依然として存在する。
【0008】
本開示の目的は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、既存のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）のアナログの短所のうち１つまたは複数を克服しうる、アナログを提供することである。
本開示の目的は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供することである。
本開示の目的は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを調製するためのプロセスを提供することである。
本開示の目的は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）のアナログであって、該ペプチドの生物活性を保持する、半減期を延長する、より良好な薬物動態プロファイルを有する、ならびに、投薬頻度および用量を減少させることにより患者の負担を軽減するのに有利であることが可能なアナログを提供することである。
本開示の目的は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供することである。
本開示の目的は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを調製するためのプロセスを提供することである。
本開示の目的は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）のアナログであって、該ペプチドの生物活性を保持する、半減期を延長する、より良好な薬物動態プロファイルを有する、ならびに、投薬頻度および用量を減少させることにより患者の負担を軽減するのに有利であることが可能なアナログを提供することである。
【0009】
本開示の目的は、既存技術にみられる１つまたは複数の不足点を克服できる、リラグルチドおよびセマグルチドのアナログを提供することである。
本開示の目的は、リラグルチドおよびセマグルチドのアナログであって、半減期が延長されており薬物動態プロファイルが改良されていながら、それぞれの特有の生物活性を保持することが可能である、ならびに、投薬頻度および用量を減少させることにより患者の負担を軽減するのに有利である、のうち１種または複数の特性を備えるアナログを提供することである。
本発明の別の目的は、簡単に合成できる、リラグルチドおよびセマグルチドの合成アナログを提供することである。
本開示の目的は、リラグルチドおよびセマグルチドのアナログであって、半減期が延長されており薬物動態プロファイルが改良されていながら、それぞれの特有の生物活性を保持することが可能である、ならびに、投薬頻度および用量を減少させることにより患者の負担を軽減するのに有利である、のうち１種または複数の特性を備えるアナログを提供することである。
本発明の別の目的は、簡単に合成できる、リラグルチドおよびセマグルチドの合成アナログを提供することである。
【0010】
ある態様において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、既存のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）の短所のうち１つまたは複数を克服しうる、アナログを提供する。
一態様において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供する。
一態様において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、該グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストがリラグルチドまたはセマグルチドである、アナログを提供する。
一態様において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供する。
一態様において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、該グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストがリラグルチドまたはセマグルチドである、アナログを提供する。
【0011】
一態様において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを調製するためのプロセスを提供する。
別の態様において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のＬ－アラニンアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、リラグルチドのアナログを提供する。
別の態様において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のＡｉｂ（アミノイソ酪酸）アミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、セマグルチドのアナログを提供する。
別の態様において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のＬ－アラニンアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、リラグルチドのアナログを提供する。
別の態様において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のＡｉｂ（アミノイソ酪酸）アミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、セマグルチドのアナログを提供する。
【0012】
別の態様において、本開示は、本開示のリラグルチドアナログまたはセマグルチドアナログのアナログを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法を提供する。
別の態様において、本開示は、週１回または隔週１回または月１回投与のための長時間作用性のリラグルチドアナログを提供する。
さらなる一態様において、本発明は、天然のリラグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－リラグルチドを調製するためのプロセスであって、
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、パルミチン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－リラグルチドを得るステップ
を含む、方法に関する。
一態様において、本プロセスは、Ｄ－リラグルチドを精製して、精製されたＤ－リラグルチドを得るステップを含んでもよい。
別の態様において、本開示は、週１回または隔週１回または月１回投与のための長時間作用性のリラグルチドアナログを提供する。
さらなる一態様において、本発明は、天然のリラグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－リラグルチドを調製するためのプロセスであって、
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、パルミチン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－リラグルチドを得るステップ
を含む、方法に関する。
一態様において、本プロセスは、Ｄ－リラグルチドを精製して、精製されたＤ－リラグルチドを得るステップを含んでもよい。
【0013】
一態様において、本開示は、天然のセマグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－セマグルチドアナログを調製するためのプロセスであって、
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのシークエンス、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、オキサオクタデカン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－セマグルチドを得るステップ
を含む、プロセスを提供する。
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのシークエンス、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、オキサオクタデカン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－セマグルチドを得るステップ
を含む、プロセスを提供する。
【0014】
一態様において、本プロセスは、Ｄ－セマグルチドを精製して、精製されたＤ－セマグルチドを得るステップを含んでもよい。
別の態様において、本開示は、本開示のＧＬＰ－１アナログを含む好適な剤形を提供する。当該剤形は、経口または非経口経路による投与に好適でありうる。
別の態様において、本開示は、本開示により提供されるリラグルチドまたはセマグルチドのアナログを含む好適な剤形を提供する。当該剤形は、経口または非経口経路による投与に好適でありうる。
別の態様において、本開示は、本開示のＧＬＰ－１アナログを含む好適な剤形を提供する。当該剤形は、経口または非経口経路による投与に好適でありうる。
別の態様において、本開示は、本開示により提供されるリラグルチドまたはセマグルチドのアナログを含む好適な剤形を提供する。当該剤形は、経口または非経口経路による投与に好適でありうる。
【0015】
一態様において、本開示は、治療有効量の本開示のＧＬＰ－１アナログを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法を提供する。
一態様において、本開示は、治療有効量の本開示のリラグルチドまたはセマグルチドのアナログを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法を提供する。
一態様において、本開示は、治療有効量の本開示のリラグルチドまたはセマグルチドのアナログを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法を提供する。
【0016】
本発明の主題の多様な目的、特徴、態様および利点は、以下の好ましい実施形態の詳細な説明からより明確となろう。
以下の図面は、本明細書の一部を形成するものであり、本開示の態様をさらに例証するために添付されている。本開示は、本明細書で提示する特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面を参照することにより、さらによく理解することができる。
以下の図面は、本明細書の一部を形成するものであり、本開示の態様をさらに例証するために添付されている。本開示は、本明細書で提示する特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面を参照することにより、さらによく理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図9】図９は、参照品Ｖｉｃｔｏｚａ、リラグルチドおよびＤ－リラグルチドのＥＣ５０値の比較を示すグラフである。グラフ中、ＳＰＬ１はリラグルチドを表し、ＳＰＬ２は、本開示の例示的な実施形態の１つによるＤ－リラグルチドを表す。
【発明を実施するための形態】
【0018】
以下は、本開示の実施形態の詳細な説明である。実施形態は、本開示を明確に伝えられる程度まで詳細に記載してある。ただし、提示した多くの詳細事項は、実施形態の予想される変形を限定することを意図したものではない。逆に、意図するところは、添付の特許請求の範囲により規定される本開示の精神および範囲内にあるすべての改変物、等価物および代替物を包含することである。
【0019】
本明細書におけるすべての刊行物は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示された場合と同じ程度に、参照により組み込まれる。組み込まれている参照文献における用語の定義または使用法が、本明細書においてなされている当該用語の定義と矛盾するまたは相反する場合には、本明細書においてなされている当該用語の定義が適用され、参照文献における当該用語の定義は適用されない。
本明細書を通じて、「一実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」または「ある実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」に言及した場合は、その実施形態に関連して記載されている特定の特徴、構造または特質が少なくとも一実施形態に含まれていることを意味する。したがって、本明細書を通じてさまざまな箇所で「一実施形態において」または「ある実施形態において」という語句が出現するが、必ずしもそのすべてが同一の実施形態に言及しているとは限らない。さらに、特定の特徴、構造または特質は、１つまたは複数の実施形態において任意の適当な様式で組み合わされてもよい。
本明細書を通じて、「一実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」または「ある実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」に言及した場合は、その実施形態に関連して記載されている特定の特徴、構造または特質が少なくとも一実施形態に含まれていることを意味する。したがって、本明細書を通じてさまざまな箇所で「一実施形態において」または「ある実施形態において」という語句が出現するが、必ずしもそのすべてが同一の実施形態に言及しているとは限らない。さらに、特定の特徴、構造または特質は、１つまたは複数の実施形態において任意の適当な様式で組み合わされてもよい。
【0020】
一部の実施形態において、本発明の特定の実施形態の説明および特許請求に用いられる、成分量、濃度等の特性、反応条件その他を表現する数字は、「約」という用語によって、場合により修正されるものと理解されたい。したがって、一部の実施形態において、明細書および添付の特許請求の範囲に記載されている数値パラメーターは、特定の実施形態により得ようとする所望の特性に応じて変動する可能性がある近似値である。一部の実施形態において、数値パラメーターは、報告されている有効桁の桁数に照らして、および、通常の丸め法を適用することによって、解釈されるべきである。本発明の一部の実施形態が及ぶ広範な範囲を記載する数値的な範囲およびパラメーターは近似値ではあるものの、具体的な例に記載されている数値は、できうる限り正確に報告してある。本発明の一部の実施形態において提示される数値は、その試験測定値それぞれに標準偏差が伴うことから必然的に生じる一定の誤差を含有しうる。
【0021】
本明細書中の記載において、および、添付の特許請求の範囲を通じて使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」の意味は、文脈によりそうでないことが明確に示されていない限り、複数形への言及を包含する。また、本明細書中の記載において使用される場合、「ｉｎ」の意味は、文脈によりそうでないことが明確に示されていない限り、「ｉｎ」および「ｏｎ」を包含する。
文脈上、異なる解釈が求められない限り、以下の本明細書を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語およびその変化形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等は、「限定されるものではないが、～を含む」と同じオープンで包含的な意味合いに解釈されたい。
文脈上、異なる解釈が求められない限り、以下の本明細書を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語およびその変化形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等は、「限定されるものではないが、～を含む」と同じオープンで包含的な意味合いに解釈されたい。
【0022】
本明細書においては、値の範囲の記載は、その範囲内に含まれるそれぞれ別の値に個々に言及する簡便な方法として機能させることを意図したものにすぎない。本明細書において特に指示がない限り、それぞれ個々の値は、それらが本明細書に個々に記載された場合と同じく、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されているすべての方法は、本明細書中で特に指示がある、または、それ以外の順序では明らかに文脈に反するのでない限り、任意の適当な順序で実施できる。本明細書における特定の実施形態に関してなされる一切の例または例示的な文言（例：「例えば」「等」）の使用も、本発明をよりわかりやすく例証することを意図したものであるにすぎず、別紙にて特許請求する本発明の範囲に限定を加えるものではない。本明細書におけるいかなる文言も、本発明の実施に不可欠な何らかの特許請求の範囲外の要素を示しているものと解釈されるべきではない。
本明細書において開示される本発明の代替的な要素または実施形態のグループ化は、限定を行ったものと解釈されるべきではない。各グループ構成物は、個別に、または、そのグループにおける他の構成物もしくは本明細書に記載されている他の要素と任意に組み合わせて言及および特許請求され得る。グループの１種または複数の構成物は、利便性および／または特許性を理由に、グループに包含するまたはグループから削除することができる。そのような包含または削除が生じた場合、本明細書は、当該グループについては、改変されたグループを含むものと判断され、したがって添付の特許請求の範囲で使用されているすべてのマーカッシュ群の記載内容を満たす。
本明細書において開示される本発明の代替的な要素または実施形態のグループ化は、限定を行ったものと解釈されるべきではない。各グループ構成物は、個別に、または、そのグループにおける他の構成物もしくは本明細書に記載されている他の要素と任意に組み合わせて言及および特許請求され得る。グループの１種または複数の構成物は、利便性および／または特許性を理由に、グループに包含するまたはグループから削除することができる。そのような包含または削除が生じた場合、本明細書は、当該グループについては、改変されたグループを含むものと判断され、したがって添付の特許請求の範囲で使用されているすべてのマーカッシュ群の記載内容を満たす。
【0023】
以下の説明およびそこに記載されている実施形態は、本開示の原理および態様の特定の実施形態の１つまたは複数の例を示す目的で提供するものである。これらの例は、説明の目的で提供するものであり、その原理および本開示の限定を目的としたものではない。
また、本開示はさまざまな方式で、例えば、システム、方法またはデバイスとして実施可能であることも理解されるべきである。本明細書においては、本発明がとりうるこれらの実施手段または任意の他の形態を「プロセス」と呼ぶことがある。一般的に、本開示のプロセスにおけるステップの順序は、本発明の範囲内で変更してもよい。
本明細書に付されている本発明の名称および要約は、便利のためのものにすぎず、実施形態の範囲または意味を説明したものではない。
また、本開示はさまざまな方式で、例えば、システム、方法またはデバイスとして実施可能であることも理解されるべきである。本明細書においては、本発明がとりうるこれらの実施手段または任意の他の形態を「プロセス」と呼ぶことがある。一般的に、本開示のプロセスにおけるステップの順序は、本発明の範囲内で変更してもよい。
本明細書に付されている本発明の名称および要約は、便利のためのものにすぎず、実施形態の範囲または意味を説明したものではない。
【0024】
以下の論考では、本発明の主題の多くの実施形態例を記載する。各実施形態につき発明の要素の単一の組合せを示すが、本発明の主題は本開示の要素のすべての可能な組合せを包含するものとする。したがって、一実施形態が要素Ａ、ＢおよびＣを含み、第２の実施形態が要素ＢおよびＤを含む場合であれば、本発明の主題は、明示的に開示されていない場合であっても、Ａ、Ｂ、ＣまたはＤからなるその他残りの組合せも包含するものとする。
【0025】
本明細書において使用するさまざまな用語を以下に示す。特許請求の範囲で使用されている用語が以下に定義されていない限りにおいて、その用語には、出願時点における印刷された刊行物および交付された特許に現れる当該用語に当業者が与えている最も広い定義が与えられるべきである。
【0026】
「アナログ」という用語は、本明細書において使用される場合、構造は別の化合物に類似しているが一定の成分に関しては当該化合物と異なっている化合物を指す。そのようなアナログは、大きく異なる物理的、化学的、生化学的または薬理学的特性を有する可能性がある。
【0027】
本明細書において使用される省略形は、以下の完全形を指す。
Ｂｏｃ：ｔ－ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄｅ：１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＯＤＴ：２，２’－（エチレンジオキシ）ジエタンチオール
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム
ＨＯＢｔ：Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＴＢＥ：メチル－ｔ－ブチルエーテル
ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチルエステル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｔｒｔ：トリチル
２－ＣＴＣ：２－クロロトリチルクロリド
ＨＣｌ：塩酸
ｍＬ：ミリリットル
ｇ：グラム
℃：摂氏度
ｈ：時間（ｈｏｕｒ）
ｍｉｎ：分
ＩＰＡ：イソプロパノール
ｖｏｌ：体積
ＲＴ：室温
Ｍｍｏｌ：ミリモル
ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシラン
Ａo：オングストローム
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
Ｂｏｃ：ｔ－ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄｅ：１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＯＤＴ：２，２’－（エチレンジオキシ）ジエタンチオール
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム
ＨＯＢｔ：Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＴＢＥ：メチル－ｔ－ブチルエーテル
ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチルエステル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｔｒｔ：トリチル
２－ＣＴＣ：２－クロロトリチルクロリド
ＨＣｌ：塩酸
ｍＬ：ミリリットル
ｇ：グラム
℃：摂氏度
ｈ：時間（ｈｏｕｒ）
ｍｉｎ：分
ＩＰＡ：イソプロパノール
ｖｏｌ：体積
ＲＴ：室温
Ｍｍｏｌ：ミリモル
ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシラン
Ａo：オングストローム
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
【0028】
本開示は、（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの合成アナログに関する。
一般的な実施形態において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを提供する。
特定の実施形態において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供する。
グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログは、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストより有利であり、例えば、それぞれのグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストよりも、より良好なバイオアベイラビリティーおよび強化された有効性を有しうる。
一実施形態において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストがリラグルチドまたはセマグルチドである、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを提供する。
一般的な実施形態において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを提供する。
特定の実施形態において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログを提供する。
グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログであって、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、アナログは、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストより有利であり、例えば、それぞれのグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストよりも、より良好なバイオアベイラビリティーおよび強化された有効性を有しうる。
一実施形態において、本開示は、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストがリラグルチドまたはセマグルチドである、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログを提供する。
【0029】
一実施形態において、本開示は、リラグルチドの生物活性を保持できる、リラグルチドの合成アナログを開示する。
一実施形態において、本開示は、セマグルチドの生物活性を保持できる、セマグルチドの合成アナログを開示する。
リラグルチドの合成アナログは、本明細書中では、ＧＬＰ－１のアナログ、ＧＬＰ－Ａアナログ、リラグルチドのアナログ、リラグルチドアナログ、またはＤ－リラグルチド、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログとも呼ばれ、そのような表現は、全体を通じて互換的に用いられる。
セマグルチドの合成アナログは、本明細書中では、ＧＬＰ－１のアナログ、ＧＬＰ－Ａアナログ、セマグルチドのアナログ、セマグルチドアナログ、またはＤ－セマグルチド、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログとも呼ばれ、そのような表現は、全体を通じて互換的に用いられる。
別の実施形態において、本開示は、固相ペプチド合成により簡単に合成できる、リラグルチドの合成アナログを開示する。
別の実施形態において、本開示は、固相ペプチド合成により簡単に合成できる、セマグルチドの合成アナログを開示する。
一実施形態において、本開示は、セマグルチドの生物活性を保持できる、セマグルチドの合成アナログを開示する。
リラグルチドの合成アナログは、本明細書中では、ＧＬＰ－１のアナログ、ＧＬＰ－Ａアナログ、リラグルチドのアナログ、リラグルチドアナログ、またはＤ－リラグルチド、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログとも呼ばれ、そのような表現は、全体を通じて互換的に用いられる。
セマグルチドの合成アナログは、本明細書中では、ＧＬＰ－１のアナログ、ＧＬＰ－Ａアナログ、セマグルチドのアナログ、セマグルチドアナログ、またはＤ－セマグルチド、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストのアナログとも呼ばれ、そのような表現は、全体を通じて互換的に用いられる。
別の実施形態において、本開示は、固相ペプチド合成により簡単に合成できる、リラグルチドの合成アナログを開示する。
別の実施形態において、本開示は、固相ペプチド合成により簡単に合成できる、セマグルチドの合成アナログを開示する。
【0030】
一実施形態において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの合成アナログを調製するためのプロセスを提供する。
一実施形態において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、リラグルチドの合成アナログを調製するためのプロセスを提供する。
一実施形態において、本開示は、天然のリラグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－リラグルチドを調製するためのプロセスであって、
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、パルミチン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－リラグルチドを得るステップ
を含む、プロセスを提供する。
一実施形態において、本開示は、天然のグルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｐ－１）受容体アゴニストの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられている、リラグルチドの合成アナログを調製するためのプロセスを提供する。
一実施形態において、本開示は、天然のリラグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－リラグルチドを調製するためのプロセスであって、
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いてＦｍｏｃを脱保護し、パルミチン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－リラグルチドを得るステップ
を含む、プロセスを提供する。
【0031】
一態様において、本方法は、Ｄ－リラグルチドを精製して、精製されたＤ－リラグルチドを得るステップを含んでもよい。
別の実施形態において、本開示は、スキーム１（図１）に示すステップを含む、Ｄ－リラグルチドを調製するためのプロセスを提供する。
別の実施形態において、本開示は、スキーム１（図１）に示すステップを含む、Ｄ－リラグルチドを調製するためのプロセスを提供する。
【0032】
一実施形態において、本開示は、天然のセマグルチドの２位のアミノ酸がＤ－アラニンで置き換えられているＤ－セマグルチドアナログを調製するためのプロセスであって、
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのシークエンス、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いて、Ｆｍｏｃを脱保護し、オキサオクタデカン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－セマグルチドを得るステップ
を含む、プロセスを提供する。
ａ）Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを樹脂にアンカーリングし、これをキャッピングするステップ、
ｂ）アミノ基を選択的に脱保護するステップ、
ｃ）断片Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨを連続的カップリングするステップ、
ｄ）リジン側鎖保護基Ｄｄｅを除去し、続いてＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのシークエンス、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとカップリングし、続いて、Ｆｍｏｃを脱保護し、オキサオクタデカン酸とカップリングするステップ、ならびに
ｅ）樹脂からペプチドを切断して直鎖状のＤ－セマグルチドを得るステップ
を含む、プロセスを提供する。
【0033】
一実施形態において、本プロセスは、Ｄ－セマグルチドを精製して、精製されたＤ－セマグルチドを得るステップを含んでもよい。
一実施形態において、本開示は、スキーム２（図２）に示すステップを含む、Ｄ－セマグルチドを調製するためのプロセスを提供する。
一実施形態において、本開示は、スキーム２（図２）に示すステップを含む、Ｄ－セマグルチドを調製するためのプロセスを提供する。
【0034】
一実施形態において、固相は樹脂である。
一実施形態において、樹脂は、限定されるものではないが、２－クロロトリチルクロリド（２－ＣＴＣ）、Ｓａｓｒｉｎ、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＴＧＡ、Ｒｉｎｋ、Ｗａｎｇ、ＡｍｐｈｉＳｐｈｅｒｅｓおよび他の適当な樹脂から選択される。
一実施形態において、カップリング剤は、限定されるものではないが、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス（ジメチル－アミノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびこれらの組合せから選択される。
一実施形態において、カップリング反応のための溶媒は、限定されるものではないが、ＤＭＦ、ピリジン、無水酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジクロロエタン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、Ｎ－メチル－２－ピロリジノン（ＮＭＰ）、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン等またはこれらの組合せから選択される。
一実施形態において、樹脂は、限定されるものではないが、２－クロロトリチルクロリド（２－ＣＴＣ）、Ｓａｓｒｉｎ、ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ、ＴｅｎｔａＧｅｌ ＴＧＡ、Ｒｉｎｋ、Ｗａｎｇ、ＡｍｐｈｉＳｐｈｅｒｅｓおよび他の適当な樹脂から選択される。
一実施形態において、カップリング剤は、限定されるものではないが、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス（ジメチル－アミノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびこれらの組合せから選択される。
一実施形態において、カップリング反応のための溶媒は、限定されるものではないが、ＤＭＦ、ピリジン、無水酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジクロロエタン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、Ｎ－メチル－２－ピロリジノン（ＮＭＰ）、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン等またはこれらの組合せから選択される。
【0035】
一実施形態において、アミノ基は、当技術分野で公知の方法により、例えば、ＤＭＦ等の適切な溶媒中でピペリジン、ＤＢＵおよびジクロロメタンの混合物を用いることにより、選択的に脱保護することができる。
一実施形態において、形成されるペプチドは、限定されるものではないが、ジフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸等から選択される化学薬品を用いて、樹脂から切断することができる。
一実施形態において、形成されるペプチドは、限定されるものではないが、ジフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸等から選択される化学薬品を用いて、樹脂から切断することができる。
【0036】
一実施形態において、Ｄ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドから選択されるＧＬＰ－１アナログの精製プロセスは、当技術分野で周知のプロセスにより実施できる。精製プロセスは、限定されるものではないが、分取用逆相ＨＰＬＣ、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等から選択できる。
本開示により提供されるＧＬＰ－１の合成アナログすなわちＤ－リラグルチドおよびＤ－セマグルチドは、それぞれ天然のリラグルチドおよびセマグルチドと比較して、より良好な薬物動態プロファイルを有しうる。
本開示により提供されるＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドおよびＤ－セマグルチドは、例えばリラグルチドまたはセマグルチドのアナログを含む剤形の投与頻度を低下させること等により、患者の負担を軽減するのに有利でありうる。
本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、代謝障害、例えば糖尿病および肥満等の治療に使用することができる。
本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、従来のＧＬＰ－１より低頻度で投与しうることから、患者に利便性をもたらし、それにより患者コンプライアンスを増加させ、さらには、より長い期間にわたる効果的な血糖コントロールを可能にするというそれぞれ従来のＧＬＰ－１を超える利点をもたらすことができる。
本開示により提供されるＧＬＰ－１の合成アナログすなわちＤ－リラグルチドおよびＤ－セマグルチドは、それぞれ天然のリラグルチドおよびセマグルチドと比較して、より良好な薬物動態プロファイルを有しうる。
本開示により提供されるＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドおよびＤ－セマグルチドは、例えばリラグルチドまたはセマグルチドのアナログを含む剤形の投与頻度を低下させること等により、患者の負担を軽減するのに有利でありうる。
本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、代謝障害、例えば糖尿病および肥満等の治療に使用することができる。
本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、従来のＧＬＰ－１より低頻度で投与しうることから、患者に利便性をもたらし、それにより患者コンプライアンスを増加させ、さらには、より長い期間にわたる効果的な血糖コントロールを可能にするというそれぞれ従来のＧＬＰ－１を超える利点をもたらすことができる。
【0037】
本開示によるＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、週１回または隔週１回または月１回投与に適した長時間作用性のアナログとすることができる。
【0038】
ＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、塩基の形態で、または、その塩もしくはその混合物の形態で、存在しうる。塩の代表例としては、適当な無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸等との塩が挙げられる。塩の代表例としては、有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、アスコルビン酸等との塩も挙げられる。塩の代表例としては、塩基、例えば、トリエタノールアミン、ジエチルアミン、メグルミン、アルギニン、アラニン、ロイシン、ジエチルエタノールアミン、トリエチルアミン、トロメタミン、コリン、トリメチルアミン、タウリン、ベンザミン、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、メチルエタノールアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン等との塩も挙げられる。
しかし、当業者であれば、ＤＰＰ－ＩVにより分解不可能な任意の他の合成部分を、当業者には公知のとおり、本開示の範囲および精神から逸脱せずに使用することができることを理解するであろう。
しかし、当業者であれば、ＤＰＰ－ＩVにより分解不可能な任意の他の合成部分を、当業者には公知のとおり、本開示の範囲および精神から逸脱せずに使用することができることを理解するであろう。
【0039】
別の実施形態において、本開示により提供されるＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、Ｄ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを非経口的に許容されるアミン塩基とともに含むそれぞれの凍結乾燥混合物の形態でそれぞれ提供されうる。この凍結乾燥混合物は、ＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドもしくはＤ－セマグルチドまたはその薬学的に許容される塩と非経口的に許容されるアミン塩基とを注射用水中で混合して溶液を形成し、この溶液を凍結乾燥させて凍結乾燥混合物を形成することによって調製してもよい。非経口的に許容されるアミン塩基は、トリエタノールアミン、ジエチルアミン、メグルミン、オルニチン、リジン、アルギニン、アラニン、ロイシン、ジエチルエタノールアミン、オラミン、トリエチルアミン、トロメタミン、グルコサミン、コリン、トリメチルアミン、タウリン、ベンザミン、トリメチル水酸化アンモニウム、エポラミン、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、メチルエタノールアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン等から選択されうる。
【0040】
本開示は、代謝性疾患の治療における、本開示により提供されるＧＬＰ－１アナログすなわち本開示のＤ－リラグルチドおよびＤ－セマグルチドの使用も提供する。ある好ましい実施形態において、本開示のセマグルチドアナログは、糖尿病の治療における使用に対し適したものでありうる。別の実施形態において、本開示のセマグルチドアナログは、肥満の治療における使用に対し適したものでありうる。
別の実施形態において、本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、その必要がある患者において少なくとも１週間の期間にわたり血糖レベルを低減させることにおける使用に対し適したものであることができる。
別の実施形態において、本開示は、本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを経口または非経口経路により投与するのに適した剤形を提供する。
別の実施形態において、本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、その必要がある患者において少なくとも１週間の期間にわたり血糖レベルを低減させることにおける使用に対し適したものであることができる。
別の実施形態において、本開示は、本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを経口または非経口経路により投与するのに適した剤形を提供する。
【0041】
本開示のＧＬＰ－１アナログすなわちＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、適当な非経口剤形に製剤化されてもよい。本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドもしくはＤ－セマグルチド、またはこれを含む組成物、またはこれを含む剤形は、皮下または筋肉内注射により投与されうる。
本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、適当な経口剤形に製剤化されてもよい。本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドもしくはＤ－セマグルチド、またはこれを含む組成物、またはこれを含む経口剤形は、ＧＬＰ－１の投与を必要とする対象の必要性に応じた頻度で経口投与されうる。
本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、適当な経口剤形に製剤化されてもよい。本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドもしくはＤ－セマグルチド、またはこれを含む組成物、またはこれを含む経口剤形は、ＧＬＰ－１の投与を必要とする対象の必要性に応じた頻度で経口投与されうる。
【0042】
本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、単回投与後１週間または２週間または１カ月に及びうる長期間にわたって治療レベルを維持することができる。
本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、ＧＬＰ－１アナログ、またはこれを含む組成物もしくは剤形を週に１回、隔週に１回または月に１回投与することにより、糖尿病の治療に使用することができる。
別の実施形態において、本開示は、治療有効量の本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法を提供する。
別の実施形態によれば、本発明は、活性成分としての本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを、１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に含む、医薬組成物を提供する。
本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、ＧＬＰ－１アナログ、またはこれを含む組成物もしくは剤形を週に１回、隔週に１回または月に１回投与することにより、糖尿病の治療に使用することができる。
別の実施形態において、本開示は、治療有効量の本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを投与するステップを含む、その必要がある患者においてグルコースレベルを低下させる方法を提供する。
別の実施形態によれば、本発明は、活性成分としての本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを、１種または複数の薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に含む、医薬組成物を提供する。
【0043】
別の実施形態によれば、組成物は、１種または複数の本明細書に記載のアナログまたはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体と、薬学的に許容される担体等とを混合することにより、調製して、さまざまなＧＬＰ－１関連の病態を治療するまたは良くすることができる。本開示の医薬組成物は、当技術分野で周知の方法、例えば、従来の造粒、混合、溶解、カプセル化、凍結乾燥、乳化または湿式顆粒化処理等により製造することができる。組成物は、例えば、顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、乳剤、エリキシル剤、懸濁剤または溶液剤の形態であってもよい。本組成物は、多様な投与経路に合わせて、例えば、経口投与、経粘膜投与、直腸投与、局所投与または皮下投与、ならびに、くも膜下腔内、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、眼内または脳室内注射による投与に合わせて、製剤化することができる。本発明の１種または複数の化合物は、全身性にではなく局所性に、例えば、徐放製剤としての注射等の形で、投与することもできる。
【0044】
別の実施形態によれば、本開示のＧＬＰ－１のアナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドは、単独で、または、１種もしくは複数種の追加的な治療的活性剤と組み合わせて使用できる。
一実施形態において、本発明は、有効量の本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを投与するステップを含む、対象におけるＧＬＰ－１介在性の疾患、障害または症候群を治療する方法を提供する。
別の実施形態において、本発明は、有効量のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを投与するステップを含む、対象におけるＧＬＰ－１介在性の疾患、障害または症候群を治療する方法であって、該疾患が、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、メタボリックシンドローム（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満、肥満により悪化する病態、高血圧症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、フレイル、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン分泌不全による低身長症、多嚢胞性卵巣症候群による不妊症、不安、うつ、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸管運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群または短腸症候群である、方法を提供する。
一実施形態において、本発明は、有効量の本開示のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを投与するステップを含む、対象におけるＧＬＰ－１介在性の疾患、障害または症候群を治療する方法を提供する。
別の実施形態において、本発明は、有効量のＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドを投与するステップを含む、対象におけるＧＬＰ－１介在性の疾患、障害または症候群を治療する方法であって、該疾患が、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、メタボリックシンドローム（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満、肥満により悪化する病態、高血圧症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、フレイル、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン分泌不全による低身長症、多嚢胞性卵巣症候群による不妊症、不安、うつ、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸管運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群または短腸症候群である、方法を提供する。
【0045】
別の実施形態において、本発明は、２型糖尿病、１型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、メタボリックシンドローム（Ｘ症候群および／またはインスリン抵抗症候群）、糖尿、代謝性アシドーシス、関節炎、白内障、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性心筋症、肥満、肥満により悪化する病態、高血圧症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、骨減少症、フレイル、骨損失、骨折、急性冠症候群、成長ホルモン分泌不全による低身長症、多嚢胞性卵巣症候群による不妊症、不安、うつ、不眠症、慢性疲労、てんかん、摂食障害、慢性疼痛、アルコール依存症、腸管運動に関連する疾患、潰瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群または短腸症候群から選択される疾患の治療のための、ＧＬＰ－１アナログのＤ－リラグルチドまたはＤ－セマグルチドの使用を提供する。
【0046】
ここまでが本開示の多様な実施形態についての記載であるが、これら以外およびさらなる本開示の実施形態をその基本的な範囲から逸脱することなく考案することは可能である。本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲により決定される。本開示は、記載されている実施形態、変形または例に限定されず、当業者が入手可能な情報および知識と組み合わせれば本発明を製造および使用できるものが含まれる。
【実施例】
【0047】
本発明について、以下の実施例の形態でさらに説明する。ただし、以下の実施例は単に例証的なものであり、本発明の範囲に限定を加えるものと受け取られるべきでないことは理解されたい。
（実施例１）
Ｄ－リラグルチドの合成
ステップ１：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＣＴＣを樹脂にアンカーリングする
置換度０．３５ｍｍｏｌ／ｇのＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＣＴＣ樹脂を秤量し、固相反応カラムに添加した。続いて、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＣＴＣ樹脂を、ＤＭＦを用いて２回洗浄してＤＭＦ中で３０分間膨潤させた。
ステップ２：アミノ酸を脱保護する
２０％ピペリジンによりＦｍｏｃ保護を除去してから、樹脂をＤＭＦで４回およびＤＣＭで２回洗浄した。樹脂をニンヒドリンテストにより試験し、Ｆｍｏｃが除去されていることは、樹脂の色の外観により示された。
ステップ３：他のＦｍｏｃ－保護アミノ酸の連続的カップリング
Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（６．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（７．２ｍｍｏｌ）を体積比１：１のＤＣＭとＤＭＦの混合溶液に溶解し、固相反応カラムにロードし、室温で２時間反応させた。反応の終点は、ニンヒドリンテストにより決定し、樹脂が無色透明であれば反応が完全であることを示していたが、樹脂が色を呈していれば反応が不完全であることを示しており、この場合はさらに１時間の反応を必要とした。こうした基準を、ニンヒドリンテストによる終点決定に適用した。
前述のステップ２および対応するアミノ酸カップリングステップを繰り返し、および、Ｄ－リラグルチドのペプチド主鎖の配列に基づき、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
を連続的にカップリングさせた。
（実施例１）
Ｄ－リラグルチドの合成
ステップ１：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＣＴＣを樹脂にアンカーリングする
置換度０．３５ｍｍｏｌ／ｇのＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＣＴＣ樹脂を秤量し、固相反応カラムに添加した。続いて、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＣＴＣ樹脂を、ＤＭＦを用いて２回洗浄してＤＭＦ中で３０分間膨潤させた。
ステップ２：アミノ酸を脱保護する
２０％ピペリジンによりＦｍｏｃ保護を除去してから、樹脂をＤＭＦで４回およびＤＣＭで２回洗浄した。樹脂をニンヒドリンテストにより試験し、Ｆｍｏｃが除去されていることは、樹脂の色の外観により示された。
ステップ３：他のＦｍｏｃ－保護アミノ酸の連続的カップリング
Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（６．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（７．２ｍｍｏｌ）を体積比１：１のＤＣＭとＤＭＦの混合溶液に溶解し、固相反応カラムにロードし、室温で２時間反応させた。反応の終点は、ニンヒドリンテストにより決定し、樹脂が無色透明であれば反応が完全であることを示していたが、樹脂が色を呈していれば反応が不完全であることを示しており、この場合はさらに１時間の反応を必要とした。こうした基準を、ニンヒドリンテストによる終点決定に適用した。
前述のステップ２および対応するアミノ酸カップリングステップを繰り返し、および、Ｄ－リラグルチドのペプチド主鎖の配列に基づき、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨおよびＢｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ
を連続的にカップリングさせた。
【0048】
ステップ４：Ｄｄｅ脱保護樹脂フラグメントの調製
前段のステップ３で連続的カップリング後得られた樹脂フラグメントを、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中３％ヒドラジン水和物の透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中３％ヒドラジン水和物の透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｄｄｅ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
前段のステップ３で連続的カップリング後得られた樹脂フラグメントを、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中３％ヒドラジン水和物の透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中３％ヒドラジン水和物の透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｄｄｅ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
【0049】
ステップ５：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕとパルミチン酸とのカップリング
ステップ（５ａ）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕのカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｂ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
ステップ（５ｃ）：パルミチン酸のカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のパルミチン酸（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ａ）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕのカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｂ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
ステップ（５ｃ）：パルミチン酸のカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のパルミチン酸（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
【0050】
ステップ６：Ｄ－リラグルチドの調製
ステップ５で得られた、２－ＣＴＣ樹脂と結合された保護フラグメントを、ペプチド合成フラスコに入れた。樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）（１０ｖｏｌ）に、撹拌せずに１０分間懸濁させた。樹脂を、ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：ＤＯＤＴ：水（８．５：０．５：０．５：０．５ｖｏｌ）の混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で３．０時間、静かにかき混ぜた。樹脂を焼結漏斗に通して濾過した。濾液を、予冷したＭＴＢＥ混合物に０～１０℃で添加した。添加完了後、反応混合物を０～３５℃で１．０時間撹拌すると、灰白色の固体が沈殿した。次いで、沈殿した固体をブフナー（Ｂｕｃｋｎｅｒ）漏斗に通して濾過し、ＭＴＢＥで洗浄した。次いで、吸引乾燥した固体を３５～４０℃の真空オーブンで恒量まで乾燥させて、Ｄ－リラグルチドを得た。
ステップ５で得られた、２－ＣＴＣ樹脂と結合された保護フラグメントを、ペプチド合成フラスコに入れた。樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）（１０ｖｏｌ）に、撹拌せずに１０分間懸濁させた。樹脂を、ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：ＤＯＤＴ：水（８．５：０．５：０．５：０．５ｖｏｌ）の混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で３．０時間、静かにかき混ぜた。樹脂を焼結漏斗に通して濾過した。濾液を、予冷したＭＴＢＥ混合物に０～１０℃で添加した。添加完了後、反応混合物を０～３５℃で１．０時間撹拌すると、灰白色の固体が沈殿した。次いで、沈殿した固体をブフナー（Ｂｕｃｋｎｅｒ）漏斗に通して濾過し、ＭＴＢＥで洗浄した。次いで、吸引乾燥した固体を３５～４０℃の真空オーブンで恒量まで乾燥させて、Ｄ－リラグルチドを得た。
【0051】
ステップ７：Ｄ－リラグルチドの精製
ステップ（７ａ）：精製－１
全体的な脱保護後得られたＤ－リラグルチド３．６ｇを３００ｍＬの緩衝液Ａに溶解し、約０．５ｍＬの水酸化アンモニウム溶液を用いてｐＨを８．５～９．５に調整した。精製の際、以下のパラメーターに従った：
・カラム仕様：２５０×５０ｍｍ ＳＳ
・充填剤（仕様：Ｃ－１８（第３世代）、１０μ、１００Å
・移動相Ａ：０．０１Ｍ炭酸水素アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル、
・プール基準：ＨＰＬＣ純度≧８５％および単一不純物の最大濃度≦３％を有する画分を、精製２のためにプールした。
・ＨＰＬＣ純度≦８５％および≧６０％を有する画分を、再精製のためにプールした。
ステップ（７ａ）：精製－１
全体的な脱保護後得られたＤ－リラグルチド３．６ｇを３００ｍＬの緩衝液Ａに溶解し、約０．５ｍＬの水酸化アンモニウム溶液を用いてｐＨを８．５～９．５に調整した。精製の際、以下のパラメーターに従った：
・カラム仕様：２５０×５０ｍｍ ＳＳ
・充填剤（仕様：Ｃ－１８（第３世代）、１０μ、１００Å
・移動相Ａ：０．０１Ｍ炭酸水素アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル、
・プール基準：ＨＰＬＣ純度≧８５％および単一不純物の最大濃度≦３％を有する画分を、精製２のためにプールした。
・ＨＰＬＣ純度≦８５％および≧６０％を有する画分を、再精製のためにプールした。
【0052】
ステップ（７ｂ）：精製－２
精製－１で得た、ペプチド含有量９００ｍｇのプール画分を、等量の精製水でさらに希釈し、以下のパラメーターに従って精製した：
・カラム仕様：２５０×５０ｍｍ ＳＳ
・充填剤仕様：Ｃ－１８（第３世代）、１０μ、１００Å
・移動相Ａ：水中０．１％ＴＦＡ、移動相Ｂ：アセトニトリル、
・プール基準：ＨＰＬＣ純度≧９６％および単一不純物の最大濃度≦０．５％を有する画分を、精製３のためにプールした。
・ＨＰＬＣ純度≦９６％および≧８５％を有する画分を、再精製のためにプールした。
精製－１で得た、ペプチド含有量９００ｍｇのプール画分を、等量の精製水でさらに希釈し、以下のパラメーターに従って精製した：
・カラム仕様：２５０×５０ｍｍ ＳＳ
・充填剤仕様：Ｃ－１８（第３世代）、１０μ、１００Å
・移動相Ａ：水中０．１％ＴＦＡ、移動相Ｂ：アセトニトリル、
・プール基準：ＨＰＬＣ純度≧９６％および単一不純物の最大濃度≦０．５％を有する画分を、精製３のためにプールした。
・ＨＰＬＣ純度≦９６％および≧８５％を有する画分を、再精製のためにプールした。
【0053】
ステップ（７ｃ）：精製－３
精製－２で得た、ペプチド含有量１２００ｍｇのプール画分を、等量の精製水でさらに希釈し、以下のとおり精製した：
・カラム仕様：２５０×５０ｍｍ ＳＳ
・充填剤仕様：Ｃ－１８（第３世代）、１０μ、１００Å
・移動相Ａ：水中０．０５％水酸化アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル、移動相Ｃ：水中３％酢酸アンモニウム、移動相Ｄ：精製水
・プール基準：ＨＰＬＣ純度≧９８％および単一不純物の最大濃度≦０．３％を有する画分を、濃縮のためにプールした。
・ＨＰＬＣ純度≦９８％および≧９６％を有する画分を、再精製のためにプールした。
・精製－３で得たプール画分を濃縮し、凍結乾燥に供して、純粋なＤ－リラグルチド（Ｉ）を灰白色から白色の粉末として得た。
・得られたＤ－リラグルチドのＨＰＬＣ純度は９９．０％以上であり、単離収率は９～１２％の範囲であった。
精製－２で得た、ペプチド含有量１２００ｍｇのプール画分を、等量の精製水でさらに希釈し、以下のとおり精製した：
・カラム仕様：２５０×５０ｍｍ ＳＳ
・充填剤仕様：Ｃ－１８（第３世代）、１０μ、１００Å
・移動相Ａ：水中０．０５％水酸化アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル、移動相Ｃ：水中３％酢酸アンモニウム、移動相Ｄ：精製水
・プール基準：ＨＰＬＣ純度≧９８％および単一不純物の最大濃度≦０．３％を有する画分を、濃縮のためにプールした。
・ＨＰＬＣ純度≦９８％および≧９６％を有する画分を、再精製のためにプールした。
・精製－３で得たプール画分を濃縮し、凍結乾燥に供して、純粋なＤ－リラグルチド（Ｉ）を灰白色から白色の粉末として得た。
・得られたＤ－リラグルチドのＨＰＬＣ純度は９９．０％以上であり、単離収率は９～１２％の範囲であった。
【0054】
（実施例２）
Ｄ－セマグルチドの合成
Ｄ－セマグルチドを、以下のプロセスに従って合成した。
ステップ１～ステップ４：ステップ１～４によるＤ－リラグルチド調製物の合成のため実施例１に記載したプロセスに従った。
Ｄ－セマグルチドの合成
Ｄ－セマグルチドを、以下のプロセスに従って合成した。
ステップ１～ステップ４：ステップ１～４によるＤ－リラグルチド調製物の合成のため実施例１に記載したプロセスに従った。
【0055】
ステップ５：Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕおよび１８－ｔＢｕ－１８－オキサオクタデカン酸のカップリング
カップリングは、以下に示す段階的方式のスキームに従って、段階的に実施した：
ステップ（５ａ）：Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｂ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
カップリングは、以下に示す段階的方式のスキームに従って、段階的に実施した：
ステップ（５ａ）：Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｂ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
【0056】
ステップ（５ｃ）：Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨのカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｄ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－ＰＥＧ２－ＣＨ2－ＣＯＯＨ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｄ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
【0057】
ステップ（５ｅ）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕのカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｆ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ステップ（５ｆ）：Ｆｍｏｃ脱保護
樹脂を、ＤＭＦロット－１（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で１０分間、静かにかき混ぜた。溶媒を排液し、樹脂を、ＤＭＦロット－２（１０ｖｏｌ）中２０％ピペリジンの透明な混合物に添加した。懸濁液を２５～３０℃で１０分間撹拌した。溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）およびＩＰＡ（１×１０ｖｏｌ）およびＤＭＦ（２×１０ｖｏｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護の完了は、Ｋａｉｓｅｒ呈色テストにより確認した。
【0058】
ステップ（５ｇ）：１８－ｔＢｕ－１８－オキサオクタデカン酸のカップリング
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中の１８－ｔＢｕ－１８－オキサオクタデカン酸（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
ＤＭＦ（１０ｖｏｌ）中の１８－ｔＢｕ－１８－オキサオクタデカン酸（２．０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２．０当量）および１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．０当量）の透明な混合物を樹脂に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて４５～５５℃で３０分間、静かにかき混ぜた。反応の進行をＫａｉｓｅｒ呈色テストによりモニタリングした。反応の完了後、反応溶媒を排液し、樹脂をＤＭＦ（４×１０ｖｏｌ）で洗浄した。
【0059】
ステップ６：Ｄ－セマグルチドの調製
ステップ５で得られた、２－ＣＴＣ樹脂と結合された保護フラグメントを、ペプチド合成フラスコに入れた。樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）（１０ｖｏｌ）に懸濁させ、撹拌せずに１０分間おいた。樹脂を、ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：ＤＯＤＴ：水（８．５：０．５：０．５：０．５ｖｏｌ）の混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で３．０時間、静かにかき混ぜた。樹脂を焼結漏斗に通して濾過した。濾液を、予冷したＭＴＢＥ混合物に０～１０℃で添加した。添加完了後、反応混合物を０～３５℃で１．０時間撹拌すると、灰白色の固体が沈殿した。次いで、沈殿した固体をブフナー漏斗に通して濾過し、ＭＴＢＥで洗浄した。次いで、吸引乾燥した固体を３５～４０℃の真空オーブンで恒量まで乾燥させて、Ｄ－セマグルチドを得た。
ステップ５で得られた、２－ＣＴＣ樹脂と結合された保護フラグメントを、ペプチド合成フラスコに入れた。樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）（１０ｖｏｌ）に懸濁させ、撹拌せずに１０分間おいた。樹脂を、ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：ＤＯＤＴ：水（８．５：０．５：０．５：０．５ｖｏｌ）の混合物に添加した。懸濁液は、窒素バブリングおよび穏やかな撹拌下にて２５～３０℃で３．０時間、静かにかき混ぜた。樹脂を焼結漏斗に通して濾過した。濾液を、予冷したＭＴＢＥ混合物に０～１０℃で添加した。添加完了後、反応混合物を０～３５℃で１．０時間撹拌すると、灰白色の固体が沈殿した。次いで、沈殿した固体をブフナー漏斗に通して濾過し、ＭＴＢＥで洗浄した。次いで、吸引乾燥した固体を３５～４０℃の真空オーブンで恒量まで乾燥させて、Ｄ－セマグルチドを得た。
【0060】
（実施例３）
（Ｌ－Ａｌａ）－リラグルチドおよび（Ｄ－Ａｌａ）－リラグルチドの精製
固相合成により得られた（Ｌ－Ａｌａ）－リラグルチド（天然物）および（Ｄ－Ａｌａ）－リラグルチドの両粗製物を精製するための方法は、以下のステップを含むことを特徴とする：
ステップ１：固相合成により得られた粗製リラグルチド１００ｍｇを０．０１Ｍ炭酸水素アンモニウムを２５％アンモニア溶液で溶解することにより粗製リラグルチドの溶液を得、これを０．２μｍフィルターで濾過した。
ステップ２：（Ｌ－Ａｌａ）－リラグルチドおよび（Ｄ－Ａｌａ）－リラグルチドの両粗製リラグルチドの溶液を、１０＊２５０ｍｍ Ｐｈｅｎｏｍｉｎｅｘ Ｃ１８（第３世代）１００Ａ、１０μｍカラム、ならびに移動相Ａとして０．０１Ｍ炭酸水素アンモニウムおよび表１に記載のとおりの勾配で溶出する移動相Ｂとしてアセトニトリルを使用する第１のＨＰＬＣ精製に供し、標的ピークを収集し、純度および含有量についてＲＰ－ＨＰＬＣで分析する。
（Ｌ－Ａｌａ）－リラグルチドおよび（Ｄ－Ａｌａ）－リラグルチドの精製
固相合成により得られた（Ｌ－Ａｌａ）－リラグルチド（天然物）および（Ｄ－Ａｌａ）－リラグルチドの両粗製物を精製するための方法は、以下のステップを含むことを特徴とする：
ステップ１：固相合成により得られた粗製リラグルチド１００ｍｇを０．０１Ｍ炭酸水素アンモニウムを２５％アンモニア溶液で溶解することにより粗製リラグルチドの溶液を得、これを０．２μｍフィルターで濾過した。
ステップ２：（Ｌ－Ａｌａ）－リラグルチドおよび（Ｄ－Ａｌａ）－リラグルチドの両粗製リラグルチドの溶液を、１０＊２５０ｍｍ Ｐｈｅｎｏｍｉｎｅｘ Ｃ１８（第３世代）１００Ａ、１０μｍカラム、ならびに移動相Ａとして０．０１Ｍ炭酸水素アンモニウムおよび表１に記載のとおりの勾配で溶出する移動相Ｂとしてアセトニトリルを使用する第１のＨＰＬＣ精製に供し、標的ピークを収集し、純度および含有量についてＲＰ－ＨＰＬＣで分析する。
【0061】
【0062】
リラグルチドおよびＤ－リラグルチド双方についての関心ピークを示したクロマトグラムプロファイルを、図５および図６に記載する。リラグルチドおよびＤ－リラグルチドについてプールした画分を凍結乾燥により精製したところ、ＲＰ－ＨＰＬＣ純度はそれぞれ９３．１％および９０．０％を示している（それぞれ図７および図８）。詳細を以下の表２に示す。
【0063】
【表2】
（実施例４）
リラグルチドおよびＤ－リラグルチドの生物学的特徴付け
自社製品のｉｎ－ｖｉｔｒｏ効力を、ラット甲状腺ｃ細胞系６－２３（Ｃｌｏｎｅ ６）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１６０７（商標））に対するアデニル酸シクラーゼ活性の刺激に基づいて決定する。ＧＬＰ－１受容体の活性化は、細胞内でのｃＡＭＰ濃度の上昇を爆発的に高めるカスケード事象を惹起する。ｃＡＭＰ ＥＬＩＳＡキットを用いてｃＡＭＰ濃度を決定し、ＲＭＰ（Ｖｉｃｔｏｚａ）と比較した。
統計解析は、Ｇｒａｐｈ ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。
図９に記載のとおり、参照（Ｖｉｃｔｏｚａ）のために観測されたＥＣ５０値は１．９９ｎｇ／ｍＬであり、合成リラグルチドおよびＤ－リラグルチドで観測されたＥＣ５０値は、それぞれ１．８２ｎｇ／ｍｌおよび１．４３ｎｇ／ｍＬであった。
【0064】
（実施例５）
糖尿病（ＤＭ－２）ウィスター系ラットを用いた、リラグルチドおよびＤ－リラグルチドの薬物動態（ＰＫ）解析
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）は、膵臓のβ細胞に対して選択的な毒物であり、ウィスター系ラットを含む多数の種を用いた２型糖尿病（ＤＭ）モデルに一般的に使用される。実験のために１２～１４週齢の雄のウィスター系ラット（体重３００～３８０ｇ）を選抜した。ラットは、自由摂食時の血糖および体重に基づいて、異なる群にランダムに割り付けた。ストレプトゾトシンをＳＴＺ６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）で単回腹腔内注射することにより、ウィスター系（Ｗｉｓｔｅｒ）ラットの対照群および被験群双方に２週間かけて糖尿病（ＤＭ）を誘導した。
糖尿病（ＤＭ－２）ウィスター系ラットを用いた、リラグルチドおよびＤ－リラグルチドの薬物動態（ＰＫ）解析
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）は、膵臓のβ細胞に対して選択的な毒物であり、ウィスター系ラットを含む多数の種を用いた２型糖尿病（ＤＭ）モデルに一般的に使用される。実験のために１２～１４週齢の雄のウィスター系ラット（体重３００～３８０ｇ）を選抜した。ラットは、自由摂食時の血糖および体重に基づいて、異なる群にランダムに割り付けた。ストレプトゾトシンをＳＴＺ６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）で単回腹腔内注射することにより、ウィスター系（Ｗｉｓｔｅｒ）ラットの対照群および被験群双方に２週間かけて糖尿病（ＤＭ）を誘導した。
【0065】
ＳＴＺを注射する前に、すべての動物についてベースのグルコースレベルを記録した。ＳＴＺ処置の１５日後、すべての動物について上昇した血中レベルに対し再度評価をした。グルコースレベルが高くなっていることを確認した後、動物を単回用量（５ｍｇ／ｋｇ）のリラグルチドおよびＤ－リラグルチドで皮下経路により処置した。
血液試料は、投薬後０時間（投薬前）、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２、９６、１２０および１４４時間時点で採取した。各時点において、軽いイソフルラン麻酔下で後眼窩神経叢からおよそ０．３ｍＬの血液を、ラベルを付けたｍｉｃｒｏｆｕｇｅチューブ中に回収した。すべての血液試料は、設定温度４℃、７０００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。遠心分離の後、血清を分離し、さらなる分析のために－８０℃で保存した。
血清試料中のリラグルチドの定量的測定には、Ｃｌｏｕｄ－Ｃｌｏｎｅ Ｃｏｒｐ．（ＣＥＶ７６９Ｇｅ ９６ Ｔｅｓｔｓ）キットを用いてＥＬＩＳＡを実施した。このキットは、競合的阻害酵素阻害アッセイ法に利用できる。リラグルチド群およびＤ－リラグルチド群双方のすべての血清試料を、試料希釈緩衝液を用いて１：１００希釈し、標準的なグラフを用いて、さまざまな時点におけるリラグルチドの存在についてＥＬＩＳＡにより試験した。
血液試料は、投薬後０時間（投薬前）、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２、９６、１２０および１４４時間時点で採取した。各時点において、軽いイソフルラン麻酔下で後眼窩神経叢からおよそ０．３ｍＬの血液を、ラベルを付けたｍｉｃｒｏｆｕｇｅチューブ中に回収した。すべての血液試料は、設定温度４℃、７０００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。遠心分離の後、血清を分離し、さらなる分析のために－８０℃で保存した。
血清試料中のリラグルチドの定量的測定には、Ｃｌｏｕｄ－Ｃｌｏｎｅ Ｃｏｒｐ．（ＣＥＶ７６９Ｇｅ ９６ Ｔｅｓｔｓ）キットを用いてＥＬＩＳＡを実施した。このキットは、競合的阻害酵素阻害アッセイ法に利用できる。リラグルチド群およびＤ－リラグルチド群双方のすべての血清試料を、試料希釈緩衝液を用いて１：１００希釈し、標準的なグラフを用いて、さまざまな時点におけるリラグルチドの存在についてＥＬＩＳＡにより試験した。
【0066】
表３および図１０に示すとおり、ＥＬＩＳＡ完了および統計解析後得られたデータを、ＰＫパラメーター（Ｔ1/2、Ｃmax、ｔmax、ＡＵＣ0-tおよびＭＲＴ）決定値についてノンコンパートメントモデルを用いてＰＫ ｓｏｌｖｅｒソフトウェアにかけた。
【0067】
【表3】
【0068】
Ｄ－リラグルチドを試験した。その目的は、吸収が遅くなることで、予測される臨床的有効性に影響を及ぼすことなく投薬間隔を延長し、それにより、治療コストを低減し、処方遵守を高め、および、動物福祉に資することが可能になるかどうかを調査することであった。結果は、リラグルチドとＤ－リラグルチドとの間で有意差が検出された（ＳＣ投与の場合、半減期（Ｔ１／２）がそれぞれ２４．７７時間対５４．４４時間）ことを示している。Ｄ－リラグルチドのＡＵＣ値はリラグルチドの場合より３倍高いことが見出されていたため、絶対的バイオアベイラビリティーは、Ｄ－リラグルチドの場合で有意に高かった。Ｄ－リラグルチドの方がＣｍａｘ値が高いことも、前述の知見を支持する。
【0069】
（実施例６）
皮下経路に対するＤ－リラグルチドの経口バイオアベイラビリティー
第２段階の薬物動態試験は、Ｄ－リラグルチドの経口バイオアベイラビリティーを皮下経路との比較により理解するために実施した。通常、タンパク質およびペプチドは、胃腸管においては酵素による分解が大規模であること、ならびに、胃腸粘膜を越えた透過は限定されていることのために、乏しい経口バイオアベイラビリティーを示す。タンパク質およびペプチドの経口バイオアベイラビリティーは１％未満である。
皮下経路に対するＤ－リラグルチドの経口バイオアベイラビリティー
第２段階の薬物動態試験は、Ｄ－リラグルチドの経口バイオアベイラビリティーを皮下経路との比較により理解するために実施した。通常、タンパク質およびペプチドは、胃腸管においては酵素による分解が大規模であること、ならびに、胃腸粘膜を越えた透過は限定されていることのために、乏しい経口バイオアベイラビリティーを示す。タンパク質およびペプチドの経口バイオアベイラビリティーは１％未満である。
【0070】
年齢（７～９週齢）の健康な成体雄ラットを、２つの群にランダムに割り付けた。対照群には６ｍｇ／ｋｇのＶｉｃｔｏｚａを皮下に投与し、被験群には１５ｍｇ／ｋｇの被験分子すなわちＤ－リラグルチドを経口投与した。表４に従い血液試料を採取して、ＰＫ比較用の血液中のリラグルチド含有量を推定した。
【0071】
【表4】
【0072】
血漿試料中のリラグルチド量推定：
ＳＤラット血漿中リラグルチドの５０倍量を調製し、アッセイ緩衝液（ＨＢＳＳにＩＭＢＸ、ＭｇＣｌ2およびＲｏを添加したもの）で希釈した。次いで、ＧＬＰ－１Ｒを過剰発現している細胞［（ＣＨＯＫ１／ＧＬＰ１／Ｇα１５）、カタログ番号Ｍ００４５１、ロット番号：Ｒ１００８１０９３－１２）］をトリプシン処理により取り出し、遠心分離した。次いで、これらの細胞をアッセイ緩衝液で洗浄した。細胞を１５ｋ／ウェル／１５ｕＬで播種し、１５μＬの２倍量を添加し、プレートを３０分間、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、ｃＡＭＰ推定キット（Ｐｒｏｍｅｇａ ｃＡＭＰ－Ｇｌｏ（商標）Ｍａｘ Ａｓｓａｙ、カタログ番号Ｖ１６８２）を用いてｃＡＭＰ産生量を推定した。３０分間のインキュベーションの後、プロテインキナーゼＡ ２０μＬ溶液をプレートに添加し、室温で２０分間インキュベートした。次いで、５０μＬの基質をプレートに添加し、室温で１０分間おいた。
発光をプレートリーダーで読み取った。血漿中のリラグルチド含有量は、表５のとおりの各実行により生成した較正曲線を用いて逆算した。逆算には、Ｇｅｎ ５ソフトウェアを用いた。リラグルチドの前臨床ＰＫパラメーターを表６に示す。
ＳＤラット血漿中リラグルチドの５０倍量を調製し、アッセイ緩衝液（ＨＢＳＳにＩＭＢＸ、ＭｇＣｌ2およびＲｏを添加したもの）で希釈した。次いで、ＧＬＰ－１Ｒを過剰発現している細胞［（ＣＨＯＫ１／ＧＬＰ１／Ｇα１５）、カタログ番号Ｍ００４５１、ロット番号：Ｒ１００８１０９３－１２）］をトリプシン処理により取り出し、遠心分離した。次いで、これらの細胞をアッセイ緩衝液で洗浄した。細胞を１５ｋ／ウェル／１５ｕＬで播種し、１５μＬの２倍量を添加し、プレートを３０分間、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、ｃＡＭＰ推定キット（Ｐｒｏｍｅｇａ ｃＡＭＰ－Ｇｌｏ（商標）Ｍａｘ Ａｓｓａｙ、カタログ番号Ｖ１６８２）を用いてｃＡＭＰ産生量を推定した。３０分間のインキュベーションの後、プロテインキナーゼＡ ２０μＬ溶液をプレートに添加し、室温で２０分間インキュベートした。次いで、５０μＬの基質をプレートに添加し、室温で１０分間おいた。
発光をプレートリーダーで読み取った。血漿中のリラグルチド含有量は、表５のとおりの各実行により生成した較正曲線を用いて逆算した。逆算には、Ｇｅｎ ５ソフトウェアを用いた。リラグルチドの前臨床ＰＫパラメーターを表６に示す。
【0073】
【表5】
【0074】
【表6】
【0075】
ペプチド薬には、消化酵素による分解、疎水性等に起因する経口送達上の難題が常に伴う。ＧＬＰ－１が生理学的に活性な形態になるには５～１０分間を要し、また、グルコース移送に必要なＧＬＰ－１濃度は、１桁または２桁台前半ｐＭである。ＤＰＰ－ＩＶ抑制薬を使用後でも循環血中ＧＬＰ－１濃度は５０～６０ｐＭにまで達し、臨床的に有意であることが証明されている。
【0076】
経口投与したＤ－リラグルチド（Ｌｉｒａｌｇｕｔｉｄｅ）および皮下投与したＶｉｃｔｏｚａのＰＫプロファイルを図１１に示す。経口投与したＤ－リラグルチドが示したｃｍａｘは１．５ｎｇ／ｍｌであり、４００ｐＭに対応する。生理学的には食後にＧＬＰ１ Ｒが活性化するには９０～１５０分を要すること、および、耐糖能の改善には循環血中ＧＬＰ－１レベルは６０ｐＭで十分であることから、発明者らが動物３匹において観測したＤ－リラグルチド４００ｐＭというレベルは、治療的に有望な選択肢でありうる。より低い効力（２～５倍）のリラグルチドをＤ－リラグルチドとの比較で検討はしたが、耐糖能の有意な改善をもたらすのに満足できるのは、本試験における循環血中濃度でありうる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【国際調査報告】