特表 2022-519586 糖ポリシアル酸化治療用タンパク質を使用する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-24

(54)【発明の名称】糖ポリシアル酸化治療用タンパク質を使用する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/61 20170101AFI20220316BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20220316BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20220316BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220316BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220316BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20220316BHJP

   A61K 38/36 20060101ALI20220316BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20220316BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220316BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/745 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/755 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/54 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/555 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/515 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/475 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/50 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/495 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/76 20060101ALN20220316BHJP

   C07K 14/79 20060101ALN20220316BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20220316BHJP

【ＦＩ】

A61K47/61 ZNA

A61K38/00

A61P31/18

A61P43/00

A61P35/00

A61P37/06

A61K38/36

A61K31/7088

A61K48/00

C07K14/47

C07K14/745

C07K14/755

C07K14/54

C07K14/555

C07K14/515

C07K14/475

C07K14/50

C07K14/495

C07K16/18

C07K14/76

C07K14/79

C12N15/113 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021545297

(86)(22)【出願日】2020-02-04

(85)【翻訳文提出日】2021-09-15

(86)【国際出願番号】 US2020016500

(87)【国際公開番号】W WO2020163269

(87)【国際公開日】2020-08-13

(31)【優先権主張番号】62/801,013

(32)【優先日】2019-02-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521341581

【氏名又は名称】ゼネティック バイオサイエンシーズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ロクシン，カーティス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC29

4C076CC35

4C076EE30

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA13

4C084BA42

4C084BA44

4C084DC10

4C084NA13

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB331

4C084ZB332

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA05

4C086NA05

4C086NA06

4C086NA13

4C086ZC51

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA50

4H045BA53

4H045CA40

4H045DA02

4H045DA10

4H045DA15

4H045DA20

4H045DA30

4H045DA75

4H045EA20

4H045EA50

(57)【要約】

ポリシアル酸（ＰＳＡ）にコンジュゲートされた新規なタンパク質および化合物が本明細書において提供される。これらの化合物を使用する方法および様々な疾患および障害の治療方法も提供される。本明細書において提供される新規な化合物は、向上した薬力学的および／または薬物動態学的特性、向上した有効性および他の望ましい特性を有する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ－１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ １３プロテアーゼ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、コロニー刺激因子－１（ＣＳＦ－１）、Ｍ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－ω、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２α、ＩＬ－３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２、Ａｎｇ－４、Ａｎｇ－Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形成タンパク質－１、骨形成タンパク質－２、骨形成タンパク質－３、骨形成タンパク質－４、骨形成タンパク質－５、骨形成タンパク質－６、骨形成タンパク質－７、骨形成タンパク質－８、骨形成タンパク質－９、骨形成タンパク質－１０、骨形成タンパク質－１１、骨形成タンパク質－１２、骨形成タンパク質－１３、骨形成タンパク質－１４、骨形成タンパク質－１５、骨形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン－１、毛様体神経栄養因子、毛様体神経栄養因子受容体、Ｃｒｉｐｔｏ、Ｃｒｙｐｔｉｃ、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、表皮増殖因子、エピジェン、エピレグリン、上皮由来好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、線維芽細胞増殖因子（酸性）、線維芽細胞増殖因子（塩基性）、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α１、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合性表皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子１、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子２、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病阻害因子、白血病阻害因子受容体α、神経増殖因子、神経増殖因子受容体、ニューロポイエチン、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β１．２、トランスフォーミング増殖因子β２、トランスフォーミング増殖因子β３、トランスフォーミング増殖因子β５、潜在型トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質Ｉ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチンリシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＤ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、プロリア（デノスマブ）、あるいはその生物学的に活性な断片、誘導体またはバリアントから選択されるタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項2】

ＨＩＶＡを治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、ｇｐ１２０－ｇｐ４１界面においてＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合するタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項3】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、炭酸脱水酵素ＩＸ、α－フェトプロテイン、α－アクチニン－４、Ａ３（Ａ３３抗体に特異的な抗原）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤ１－１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０，ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ～ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＤＫ ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ－１α、結腸特異的抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－Ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ，Ｆｌｔ－１、Ｆｌｔ－３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２もしくは１ａ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、インスリン様増殖因子－１（ＩＧＦ－１）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ１－抗原、ＫＳ１－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、胎盤増殖因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、Ｐ１ＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、サバイビン、サバイビン２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ抗原、トムゼン・フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ｌＡ－抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、癌遺伝子マーカーおよび癌遺伝子産物から選択されるタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項4】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、メソテリンを認識する抗体または結合タンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項5】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、メタロプロテイナーゼ、スブチラーゼまたはリパーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、スブチラーゼ、メタロプロテイナーゼ、コリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、トリプシン、サブチリシン、サーモリシンまたはＣＴ、コリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、スブチラーゼ、サブチリシン、サーモリシン、リパーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、メタロプロテイナーゼ、キモトリプシン、－キモトリプシンまたはトリプシンを含むエステラーゼ群、キモトリプシン－ｐＤＭＡＥＭＡ（ＣＴ－ｐＤＭＡＥＭＡ）複合体、メタロプロテイナーゼ－ｐＯＥＧＭＡ複合体、サーモリシン－ｐＯＥＧＭＡ複合体、サブチリシン－イオン液体ポリマー複合体、スブチラーゼ－イオン液体ポリマー複合体またはリパーゼ－ｐＤＭＡＡ複合体を含むエステラーゼ－ポリマー複合体などの酵素ポリマー複合体からの酵素から選択されるタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項6】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、以下の抗体：トラスツズマブおよびペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブおよびイブリツモマブなどの抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、オレゴボマブなどの抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体、エドレコロマブなどの抗ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）モノクローナル抗体、セツキシマブ、パニツムマブおよびニモツズマブなどの抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、ブレンツキシマブなどの抗ＣＤ３０モノクローナル抗体、ゲムツズマブおよびｈｕＭｙ９－６などの抗ＣＤ３３モノクローナル抗体、エタラシズマブなどの抗血管新生インテグリンαｖβ３モノクローナル抗体、５アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２モノクローナル抗体、エピラツズマブなどの抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、ラベツズマブなどの抗ＣＥＡモノクローナル抗体、ビバツズマブなどの抗ＣＤ４４ｖ６モノクローナル抗体、シブロツズマブなどの抗ＦＡＰモノクローナル抗体、ｈｕＢ４などの抗ＣＤ１９モノクローナル抗体、ｈｕＣ２４２などの抗ＣａｎＡｇモノクローナル抗体、ｈｕＮ９０１などの抗ＣＤ５６モノクローナル抗体、ダラツムマブなどの抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ＤＳ６などの抗ＣＡ６モノクローナル抗体１０、シクスツムマブおよび３Ｂ７などの抗ＩＧＦ－ＩＲモノクローナル抗体、ＣＮＴＯ ９５などの抗インテグリンモノクローナル抗体およびＢ－Ｂ４などの抗シンデカン－１モノクローナル抗体を含む抗体－薬物複合体に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項7】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－複合体は、抗体ではない以下の結合化合物を含む結合分子－薬物複合体に共有結合的に結合されたＰＳＡを含み、前記抗体以外の結合タンパク質は、限定されるものではないが、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮ－ｆ３およびＩＦＮ－ｙなどのインターフェロン、トランスフェリン、表皮増殖因子（ＥＧＦ）およびＥＧＦ様ドメイン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、ワクシニア増殖因子（ＶＧＦ）、インスリンならびにＩＧＦ－１およびＩＧＦ－２などのインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、メラニン細胞刺激３０ホルモン（ＭＳＨ）、ステロイドホルモン（例えば、エストロゲンおよびアンドロゲン）およびソマトスタチンなどの他の好適なホルモン、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４およびＩＬ－６などのリンホカイン、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、ボンベシン、ガストリンおよび葉酸などの、前記リガンド－薬物複合体のための細胞結合リガンドとしても使用することができる方法。

【請求項8】

病気を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－トロンビン複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ－トロンビン複合体はトロンビンに共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【請求項9】

前記病気は癌または自己免疫不全である、請求項１または３～８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

有効量のＰＳＡ－核酸複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ複合体は、二本鎖ＲＮＡ、単鎖ＲＮＡまたは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）から選択されるＲＮＡオリゴヌクレオチドに共有結合的に結合されたＰＳＡを含む、遺伝子発現障害を治療する方法。

【請求項11】

有効量のＰＳＡ－核酸複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ複合体は、切断可能なリンカー部分を介してＲＮＡオリゴヌクレオチドに共有結合的に結合されたＰＳＡを含む、遺伝子発現障害を治療する方法。

【請求項12】

有効量のＰＳＡ－核酸複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ分子は、任意にリンカーを介してＲＮＡ３’末端塩基において少なくとも１つのＲＮＡ分子にコンジュゲートされている、遺伝子発現障害を治療する方法。

【請求項13】

有効量のＰＳＡ－核酸複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、前記ＰＳＡ複合体はＲＮＡオリゴヌクレオチドに共有結合的に結合されたＰＳＡを含み、前記ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、ポリペプチドまたはその相補配列をコードするコード領域を含み、前記ポリペプチドは、ＶＥＧＦ、アポリポタンパク質Ｂ、ジストロフィンのエクソン５１、ＳＭＮ２、トランスサイレチン、ＣＥＰ２９０ ｃ．２９９１ ＋ １６５５Ａ ＞ Ｇ突然変異、ＫＲＡＳ、補体５（Ｃ５）タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＣＴＧＦ、ＴＲＰＶ１、ＬＤＨＡ、ＴＧＦ－β１、Ｃｏｘ－２、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ、Ｐ５３、カスパーゼ－２、抗トロンビン、ＦＡＮＣＡ、第ＶＩＩＩ凝固因子、第ＩＸ凝固因子、ＡＮＫ１、ＰＩＧ－Ａ、ＵＲＯＤ、アデノシンデアミナーゼ、ＪＡＫ３、ＲＡＧ１／２、アルテミス 、ＩＬ７Ｒ－α、ＩＬ－２Ｒγ、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤＫＮ２、ＮＦ１、ＮＦ２、ＬＩＭキナーゼ、エラスチン、ＡＬＤＰ、ＣＦＴＲ、ヘプシジン、ＡＢＣＡ３、界面活性剤タンパク質Ｂ、ＡＤＡＭＴＳ１３、α１－アンチトリプシンまたはＧＡＡから選択される、遺伝子発現障害を治療する方法。

【請求項14】

前記遺伝子発現障害は、高血圧症、コレステロールレベルの上昇、癌、神経変性障害、精神病、嚢胞性線維症、血友病（または他の血液凝固疾患）、神経精神疾患、例えば統合失調症、双極性障害、大鬱病、パーキンソン病、アルツハイマー病および自閉スペクトラム症、色素欠乏症、アンゲルマン症候群、強直性脊椎炎、アペール症候群、シャルコー・マリー・トゥース病、先天性副腎過形成、嚢胞性線維症、ダウン症、軟骨形成不全、α１－アンチトリプシン欠乏症、抗リン脂質抗体症候群、注意欠陥多動性障害、自閉症、常染色体優性多発性嚢胞腎、シャルコー・マリー・トゥース病、猫鳴き症候群、クローン病、嚢胞性線維症、ダーカム病、デュアン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、第Ｖ因子ライデン血栓形成傾向、家族性高コレステロール血症、家族性地中海熱、脆弱Ｘ症候群、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス、全前脳胞症、ハンチントン病、先天性代謝異常、クラインフェルター症候群、マルファン症候群、メチルマロン酸血症、筋強直性ジストロフィー、神経線維腫症、ヌーナン症候群、骨形成不全症、パーキンソン病、フェニルケトン尿症、ポーランド症候群、ポルフィリン症、早老症、網膜色素変性症、重症複合免疫不全症、鎌状赤血球症、脊髄性筋萎縮症、テイ・サックス病、地中海貧血症、トリメチルアミン尿症、ターナー症候群、口蓋心臓顔面症候群またはウイルソン病のうちの少なくとも１つである、請求項１０～１３のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本願は、２０１９年２月４日に出願された米国仮特許出願公開第６２／８０１，０１３号の優先権を主張し、かつその出願日の権利を有する。上記出願の内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、水溶性ポリマーにコンジュゲートされたタンパク質および他の生物学的化合物、特にＰＳＡなどの水溶性ポリマーへのコンジュゲーションにより得られる新規なタンパク質（例えば糖タンパク質）複合体に関する。本発明は、本明細書に記載されている新規なコンジュゲートされたタンパクおよび化合物および製剤の使用方法とそれらを用いた治療方法とにも関する。

【背景技術】

【0003】

ＰＥＧ化またはポリシアル酸化などのポリペプチド薬物のコンジュゲーションは、血液循環中でそれらが分解するのを保護し、かつこのようにしてそれらの薬力学的および薬物動態学的プロファイルを向上させる（ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓ， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２００３；２：２１４－２１；Ｓ．Ｊａｉｎ，Ｄ．Ｈｒｅｃｚｕｋ－Ｈｉｒｓｔ，Ｐ．ＬａｉｎｇおよびＧ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（薬物送達システムおよび科学），４（Ｎｏ １）：３－９，２００４）。シアル酸（Ｎ－アセチルノイラミン酸とも呼ばれる）およびポリシアル酸は、動物組織において広く分布されており、植物および真菌類から酵母および細菌に及ぶ範囲の他の生物種、主に糖タンパク質およびガングリオシドにおいてより少ない程度で分布されていることが分かっている。本明細書で使用される「ＰＳＡ」という略語は「ポリシアル酸」という用語を指す。同様に、本明細書で使用される「ｍＰＳＡ」という用語は「修飾ポリシアル酸」という用語を指す。

【0004】

ＰＳＡは、Ｎ－アセチルノイラミン酸のポリマー（一般にホモポリマー）からなる。第二級アミノ基は通常アセチル基を有するが、代わりにグリコリル基を有していてもよい。ヒドロキシル基上の可能な置換基としては、アセチル、ラクチル、エチル、硫酸およびリン酸基が挙げられる。

【0005】

ＰＳＡおよびｍＰＳＡは一般に、２，８－もしくは２，９－グリコシド結合またはこれらの組み合わせ（例えば、交互の２，８－および２，９－結合）によって結合された本質的にＮ－アセチルノイラミン酸部分からなる直鎖状ポリマーを含む。特に好ましいＰＳＡおよびｍＰＳＡでは、グリコシド結合はα－２，８である。そのようなＰＳＡおよびｍＰＳＡは好都合にはコロミン酸から誘導されており、本明細書では「ＣＡ」および「ｍＣＡ」とも呼ぶ。典型的なＰＳＡおよびｍＰＳＡは、少なくとも２個、好ましくは少なくとも５個、より好ましくは少なくとも１０個、最も好ましくは少なくとも２０個のＮ－アセチルノイラミン酸部分を含む。従って、それらは５～５００個のＮ－アセチルノイラミン酸部分、好ましくは１０～３００個のＮ－アセチルノイラミン酸部分を含んでいてもよい。ＰＳＡおよびＣＡは異なる糖部分を含むポリマーであってもよい。それらはコポリマーであってもよい。ＰＳＡおよびＣＡは、好ましくは本質的にＮ－アセチルノイラミン酸以外の糖部分を含んでいない。ＰＳＡおよびＣＡは好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％のＮ－アセチルノイラミン酸部分を含む。

【0006】

ＰＳＡおよびＣＡがＮ－アセチルノイラミン酸以外の部分を含む場合（例えばｍＰＳＡおよびｍＣＡにおいて）、これらは好ましくはポリマー鎖の一方または両方の端部に位置している。そのような「他の」部分は、例えば酸化または還元による末端Ｎ－アセチルノイラミン酸部分から誘導された部分であってもよい。例えば、非還元性末端Ｎ－アセチルノイラミン酸単位が過ヨウ素酸ナトリウムとの反応によってアルデヒド基に変換されているｍＰＳＡおよび／またはｍＣＡを調製することができる（国際公開第Ａ－０１８７９２２号を参照）。あるいは、例えば還元性末端Ｎ－アセチルノイラミン酸単位を還元させて、還元性末端Ｎ－アセチルノイラミン酸単位における環を還元的に開環させてビシナルジオール基を形成し、これを酸化させてビシナルジオール基をアルデヒド基に変換させているｍＰＳＡおよびｍＣＡを利用することができる（国際公開第２００５／０１６９７４号を参照）。

【0007】

水溶性ポリマーとタンパク質（例えば治療用タンパク質）との共有結合を形成することによる複合体の調製は、様々な化学的方法によって行うことができる。ＰＳＡをタンパク質に結合させるための１つの手法は、タンパク質の炭水化物部分を介したポリマーのコンジュゲーションである。タンパク質中の炭水化物のビシナルヒドロキシル（ＯＨ）基を過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）により容易に酸化させて、活性なアルデヒド基を形成することができる（ＲｏｔｈｆｕｓおよびＳｍｉｔｈ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９６３；２３８：１４０２－１０；ｖａｎ ＬｅｎｔｅｎおよびＡｓｈｗｅｌｌ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９７１；２４６：１８８９－９４）。その後に、ポリマーを例えば活性なヒドラジド基を含む試薬の使用によって炭水化物のアルデヒド基に結合させることができる（Ｗｉｌｃｈｅｋ Ｍおよび Ｂａｙｅｒ ＥＡ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９８７；１３８：４２９４２）。より最近の技術は、アルデヒドを反応させてオキシム結合を形成するアミノオキシ基を含む試薬の使用である（国際公開第９６／４０６６２号、国際公開第２００８／０２５８５６号）。

【0008】

水溶性ポリマーを治療用タンパク質にコンジュゲートする利用可能な方法にも関わらず、化合物の薬力学的および／または薬物動態学的特性を向上させるために水溶性ポリマーを多種多様な炭水化物含有タンパク質および化合物にコンジュゲートするための材料および方法を開発することが依然として必要とされている。さらに、ＰＳＡまたはｍＰＳＡにコンジュゲートされた幅広い薬物を開発および試験して、それらが有益な特性を有するか否かを決定するという必要性については全く未だに対処されていないままである。本願において、本発明者らはＰＳＡまたはｍＰＳＡにコンジュゲートされた数多くの特定の化合物を提供および試験することによりこの不足に対処する。

【発明の概要】

【0009】

本発明は、水溶性ポリマーにコンジュゲートされた化合物（例えばタンパク質）、特にＰＳＡまたはｍＰＳＡにコンジュゲートされた新規な化合物と、そのような化合物の使用方法とを提供する。

【0010】

本明細書において提供される新規な化合物は、好ましくは向上した薬力学的および／または薬物動態学的特性および他の望ましい特性を有する。本明細書において提供される化合物は典型的にはタンパク質であり、より典型的には血液凝固タンパク質以外の糖タンパク質である。

【0011】

使用される好ましい非限定的な水溶性ポリマーはＰＳＡまたはｍＰＳＡであり、これらを本明細書では、本明細書中の実施形態を参照する際に単にＰＳＡとも呼ぶ。また使用される水溶性ポリマーは、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐鎖状ＰＥＧ、ＰＥＧ誘導体、ＣＡ、ｍＣＡ、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、デキストリン、ポリオキサゾリン、炭水化物、多糖、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、澱粉、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン－ｃｏ－マレイン酸無水物、ポリスチレン－ｃｏ－マレイン酸無水物、ポリ（１－ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２－メタクリロイルオキシ－２’－エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）であってもよい。

【0012】

以下の実施例に例示されている本発明のさらなる実施形態では、水溶性ポリマーはポリシアル酸（ＰＳＡ）または修飾ＰＳＡ（ｍＰＳＡ）である。ＰＳＡまたはｍＰＳＡは、３５０Ｄａ～１２０，０００Ｄａ、５００Ｄａ～１００，０００Ｄａ、１０００Ｄａ～８０，０００Ｄａ、１５００Ｄａ～６０，０００Ｄａ、２，０００Ｄａ～４５，０００Ｄａまたは３，０００Ｄａ～３５，０００Ｄａの分子量範囲を有していてもよい。ＰＳＡまたはｍＰＳＡはコロミン酸または修飾コロミン酸であってもよい。ＰＳＡまたはｍＰＳＡは典型的には約２～５００または１０～３００個のシアル酸単位からなるが、他の数のシアル酸単位が考えられる。化合物の薬力学的および／または薬物動態学的特性を向上させるために、水溶性ポリマーを多種多様な炭水化物含有化合物にコンジュゲートするための材料および方法も本明細書に記載されている。本明細書に記載されている様々な方法によって、本明細書に記載されている化合物を調製することができる。非限定的な例は、コンジュゲーションを可能にする条件下で酸化された炭水化物部分を水溶性ポリマーに接触させることを含み、前記水溶性ポリマーはアミノオキシ基を含有し、かつオキシム結合が酸化された炭水化物部分と水溶性ポリマー上のアミノオキシ基との間で形成されるか、あるいは前記水溶性ポリマーはヒドラジド基を含有し、かつヒドラゾン結合が酸化された炭水化物部分と水溶性ポリマー上のヒドラジド基との間で形成される。また水溶性ポリマーを酸化させて水溶性ポリマーの末端シアル酸単位上にアルデヒド基を形成し、その後に酸化された水溶性ポリマーをアミノオキシリンカーと反応させてもよい。従って特定の実施形態では、ホモ二官能性もしくはヘテロ二官能性リンカーである活性化されたアミノオキシリンカーを酸化された水溶性ポリマーと反応させることにより水溶性ポリマーを調製する。ホモ二官能性リンカーは一般式ＮＨ_２［ＯＣＨ_２ＣＨ_２］_ｎＯＮＨ_２（式中、ｎ＝１～５０、好ましくは１～１１、より好ましくは１～６である）を有していてもよい。他の好適なリンカーは「非血液凝固タンパク質の糖ポリシアル酸化（Ｇｌｙｃｏｐｏｌｙｓｉａｌｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎ－ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」という発明の名称のＪａｉｎらの国際公開第２０１１／０１２８５０号にさらに記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0013】

本明細書において提供される水溶性ポリマーにコンジュゲートされた特定の新規な化合物を生成するために使用される方法の別の非限定的な例は、水溶性ポリマーを酸化させて水溶性ポリマーの末端単位、例えばＰＳＡまたはｍＰＳＡの末端シアル酸単位上にアルデヒド基を形成すること、および酸化された水溶性ポリマーをアミノオキシリンカーと反応させることを含む。酸化された水溶性ポリマーをヒドラジドリンカーと反応させることによりヒドラジド基が水溶性ポリマー（例えばＰＳＡまたはｍＰＳＡ）上に形成されている特定の新規な化合物を形成してもよい。ヒドラジドリンカーは、好適にはアジピン酸ジヒドラジドもしくはヒドラジンであってもよい。特定の新規な化合物はコンジュゲートされた化合物（例えばタンパク質）中のオキシムもしくはヒドラゾン結合を還元することにより形成してもよい。本明細書に記載されている他の新規な化合物は、米国特許出願第１０／２７６，５５２号、米国特許出願第１０／５６８，１１１号、米国特許出願第１１／６６０，１２８号、米国特許出願第１１／８１６，８２３号、米国特許出願第１２／３７５，０１２号、米国特許出願第１２／８４３，２８４号、米国特許第６，１６６，６８７号、米国特許第８，２１７，１５４号および米国特許第９，７９５，６８３号に詳細に記載されている結合およびリンカーの使用により調製し、それら全ての内容全体が参照により組み込まれる。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本明細書で使用される「生物学的に活性な誘導体」または「生物学的に活性なバリアント」は、ペプチド骨格または基本的なポリマー単位などの結合特性および／または同じ構造的基盤などの、実質的に同じ機能的および／または生物学的特性を有する分子のあらゆる誘導体またはバリアントを含む。

【0015】

「遺伝子発現障害」という用語は、ＲＮＡ治療法のための候補であることが知られている、単一遺伝子の突然変異によって引き起こされる数多くの遺伝性疾患を指す。嚢胞性線維症、血友病および多くのその他の疾患のように単一遺伝子突然変異によって引き起こされる障害は、特定の形質が子孫において現れる可能性に関して優性または劣性である可能性がある。優性対立遺伝子は対立遺伝子の１つのコピーのみを有する個体において表現型を現すが、劣性対立遺伝子の場合、個体は外に現れる状態にするために各親から１つずつの２つのコピーを有していなければならない。対照的に、多遺伝子性疾患は２つ以上の遺伝子によって引き起こされ、それぞれの疾患の症状発現は流動的であり、かつ環境因子に関連づけられることが多い。多遺伝子性疾患の例は、高血圧症、コレステロールレベルの上昇、癌、神経変性障害、精神病およびそれ以外である。またこれらの場合には、これらの遺伝子の１つ以上を表す治療用ＲＮＡはそれらの患者にとって有益であり得る。さらに、遺伝性疾患は親の遺伝子から受け継がれたものだけではなく、新しい突然変異によって引き起こされる可能性もある。またこれらの場合には、正しい遺伝子配列を表す治療用ＲＮＡは当該患者にとって有益であり得る。他の遺伝子発現障害としては、高血圧症、コレステロールレベルの上昇、癌、神経変性障害、精神病、嚢胞性線維症、血友病（または他の血液凝固疾患）、神経精神疾患、例えば統合失調症、双極性障害、大鬱病、パーキンソン病、アルツハイマー病および自閉スペクトラム症、色素欠乏症、アンゲルマン症候群、強直性脊椎炎、アペール症候群、シャルコー・マリー・トゥース病、先天性副腎過形成、嚢胞性線維症、ダウン症、軟骨形成不全、α１－アンチトリプシン欠乏症、抗リン脂質抗体症候群、注意欠陥多動性障害、自閉症、常染色体優性多発性嚢胞腎、シャルコー・マリー・トゥース病、猫鳴き症候群、クローン病、嚢胞性線維症、ダーカム病、デュアン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、第Ｖ因子ライデン血栓形成傾向、家族性高コレステロール血症、家族性地中海熱、脆弱Ｘ症候群、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス、全前脳胞症、ハンチントン病、先天性代謝異常、クラインフェルター症候群、マルファン症候群、メチルマロン酸血症、筋強直性ジストロフィー、神経線維腫症、ヌーナン症候群、骨形成不全症、パーキンソン病、フェニルケトン尿症、ポーランド症候群、ポルフィリン症、早老症、網膜色素変性症、重症複合免疫不全症、鎌状赤血球症、脊髄性筋萎縮症、テイ・サックス病、地中海貧血症、トリメチルアミン尿症、ターナー症候群、口蓋心臓顔面症候群およびウイルソン病が挙げられる。それらのそれぞれの遺伝子およびそれらの表現型の説明と共に、ヒト遺伝子および遺伝性疾患の現在２２，９９３のエントリーを有するオンラインカタログがＯＮＩＭ（Ｏｎｌｉｎｅ Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ）ウェブページ（ｈｔｔｐ：／／ｏｍｉｍ．ｏｒｇ）において入手可能であり、それぞれの配列はＵｎｉｐｒｏｔデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）から入手可能である。

【0016】

いくつかの実施形態は遺伝子発現障害を治療する方法を含む。本方法は、患者に有効量のＰＳＡ－核酸複合体を投与する工程を含むことができる。ＰＳＡ－複合体は、二本鎖ＲＮＡ、単鎖ＲＮＡまたは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）から選択されるＲＮＡオリゴヌクレオチドに共有結合的に結合されたＰＳＡを含むことができる。あるいはＰＳＡ－複合体は、切断可能なリンカー部分を介してＲＮＡオリゴヌクレオチドに共有結合的に結合されたＰＳＡを含むことができる。他の実施形態では、ＰＳＡ分子は任意にリンカーを介してＲＮＡ３’末端塩基において少なくとも１つのＲＮＡ分子にコンジュゲートされている。あるいは、ＰＳＡ－複合体はＲＮＡオリゴヌクレオチドに共有結合的に結合されたＰＳＡを含むことができ、このＲＮＡオリゴヌクレオチドはポリペプチドまたはその相補配列をコードするコード領域を含み、このポリペプチドは、ＶＥＧＦ、アポリポタンパク質Ｂ、ジストロフィンのエクソン５１、ＳＭＮ２、トランスサイレチン、ＣＥＰ２９０ ｃ．２９９１ ＋ １６５５Ａ ＞ Ｇ突然変異、ＫＲＡＳ、補体５（Ｃ５）タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＣＴＧＦ、ＴＲＰＶ１、ＬＤＨＡ、ＴＧＦ－β１、Ｃｏｘ－２、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ、Ｐ５３、カスパーゼ－２、抗トロンビン、ＦＡＮＣＡ、第ＶＩＩＩ凝固因子、第ＩＸ凝固因子、ＡＮＫ１、ＰＩＧ－Ａ、ＵＲＯＤ、アデノシンデアミナーゼ、ＪＡＫ３、ＲＡＧ１／２、アルテミス、ＩＬ７Ｒ－α、ＩＬ－２Ｒγ、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤＫＮ２、ＮＦ１、ＮＦ２、ＬＩＭキナーゼ、エラスチン、ＡＬＤＰ、ＣＦＴＲ、ヘプシジン、ＡＢＣＡ３、界面活性剤タンパク質Ｂ、ＡＤＡＭＴＳ１３、α１－アンチトリプシンまたはＧＡＡである。

【0017】

「病気（ａｉｌｍｅｎｔ）」または「疾患」という用語は、あらゆる直接外傷に起因しないヒトの一部または全ての構造または機能に悪影響を与える特定の異常な状態を指す。疾患は多くの場合、特定の症状および徴候に関連づけられる医学的状態であることが知られている。疾患は病原体などの外部因子または体内の機能不全によって引き起こされ得る。例えば免疫系の体内の機能不全は、様々な形態の免疫不全、過敏症、アレルギーおよび自己免疫不全を含む様々な異なる疾患を生じさせ得る。

【0018】

「類似体」「バリアント」または「誘導体」は、場合によっては異なる程度であるが天然に生じる分子と構造が実質的に同様であり、かつ同じ生物活性を有する化合物である。例えばポリペプチドバリアントは、参照ポリペプチドと実質的に同様の構造を共有し、かつ同じ生物活性を有するポリペプチドを指す。バリアントまたは類似体は、（ｉ）ポリペプチドの１つ以上の末端および／または天然に生じるポリペプチド配列の１つ以上の内部領域（例えば断片）における１つ以上のアミノ酸残基の欠失、（ｉｉ）ポリペプチドの１つ以上の末端（典型的には「付加」または「融合」）および／または天然に生じるポリペプチド配列の１つ以上の内部領域（典型的には「挿入」）における１つ以上のアミノ酸の挿入または付加、または（ｉｉｉ）天然に生じるポリペプチド配列における他のアミノ酸の１つ以上のアミノ酸の置換を含む１つ以上の突然変異に基づいて、類似体の誘導元である天然に生じるポリペプチドと比較してそれらのアミノ酸配列の組成において異なる。例として「誘導体」は、例えば化学的に修飾されている参照ポリペプチドと同じもしくは実質的に同様の構造を共有しているポリペプチドを指す。

【0019】

バリアントまたは類似体ポリペプチドは挿入バリアントを含み、ここでは１つ以上のアミノ酸残基が本発明のタンパク質アミノ酸配列に付加されている。挿入はタンパク質の一方もしくは両方の末端に位置していてもよく、かつ／またはタンパク質アミノ酸配列の内部領域内に位置していてもよい。一方もしくは両方の末端にさらなる残基を有する挿入バリアントとしては、例えば融合タンパク質およびアミノ酸タグまたは他のアミノ酸ラベルを含むタンパク質が挙げられる。一態様では、タンパク質分子は、特に当該分子が大腸菌などの細菌細胞において組換えで発現されている場合に任意にＮ末端Ｍｅｔを含有する。

【0020】

欠失バリアントでは、本明細書に記載されているタンパク質またはポリペプチド中の１つ以上のアミノ酸残基が除去されている。欠失はタンパク質またはポリペプチドの一方もしくは両方の末端および／またはタンパク質アミノ酸配列内の１つ以上の残基の除去により達成することができる。従って欠失バリアントは、タンパク質またはポリペプチド配列の断片を含む。

【0021】

置換バリアントでは、タンパク質またはポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が除去されて他の残基で置き換えられている。一態様では、置換は本質的に保存的であり、この種の保存的置換は当該技術分野でよく知られている。あるいは、本発明は非保存的置換を包含する。例示的な保存的置換は、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ニューヨーク（１９７５），ｐｐ．７１７７］に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0022】

血液凝固タンパク質以外の糖タンパク質などの炭水化物含有化合物の薬理学的および免疫学的特性は、水溶性ポリマー、特にＰＥＧまたはＰＳＡまたはｍＰＳＡによる化学的修飾およびコンジュゲーションによって向上させることができる。得られた複合体の特性は一般に、ポリマーの構造およびサイズに大きく依存する。従って、定められた狭いサイズ分布を有するポリマーが通常好ましい。具体例に使用されているＰＳＡおよびｍＰＳＡは、狭いサイズ分布を有する最終的なＰＳＡ製剤が得られるような方法で精製することができる。

【0023】

糖タンパク質および他のタンパク質標的
本明細書に記載されているように、限定されるものではないが、サイトカイン、例えばインターロイキン、α－、β－およびγ－インターフェロン、顆粒球コロニー刺激因子を含むコロニー刺激因子、線維芽細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、植物タンパク質、例えばレクチンおよびリシン、腫瘍壊死因子および関連対立遺伝子、可溶性腫瘍壊死因子受容体、インターロイキン受容体および可溶性インターロイキン受容体、増殖因子、組織増殖因子、トランスフォーミング増殖因子、例えばＴＧＦαまたはＴＧＦβ、および表皮増殖因子、ホルモン、ソマトメジン、色素ホルモン、視床下部放出因子、抗利尿ホルモン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、オキシントモジュリンおよびオキシントモジュリン様ペプチド、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ならびに免疫グロブリン、例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＤ、モノクローナル抗体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、血液凝固タンパク質以外の血液因子、ガラクトシダーゼ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、フェチュインなどの血液凝固タンパク質以外の糖タンパク質、その断片、ならびに一般な治療用糖タンパク質と共に上記タンパク質のいずれかまたはその断片を含むあらゆる融合タンパク質が本発明によって意図されている。

【0024】

本明細書において提供される数多くの特定の実施形態では、多種多様な調節経路およびシグナル伝達経路に関与するタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドをコンジュゲートしてタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、新規なタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるタンパク質、ペプチドおよび他の化合物は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、トロンボモジュリン（および類似体、例えばＳｏｌｕｌｉｎ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ－１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ １３プロテアーゼ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、コロニー刺激因子－１（ＣＳＦ－１）、Ｍ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－ω、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２α、ＩＬ－３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２、Ａｎｇ－４、Ａｎｇ－Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形成タンパク質－１、骨形成タンパク質－２、骨形成タンパク質－３、骨形成タンパク質－４、骨形成タンパク質－５、骨形成タンパク質－６、骨形成タンパク質－７、骨形成タンパク質－８、骨形成タンパク質－９、骨形成タンパク質－１０、骨形成タンパク質－１１、骨形成タンパク質－１２、骨形成タンパク質－１３、骨形成タンパク質－１４、骨形成タンパク質－１５、骨形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン－１、毛様体神経栄養因子、毛様体神経栄養因子受容体、Ｃｒｉｐｔｏ、Ｃｒｙｐｔｉｃ、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、表皮増殖因子、エピジェン、エピレグリン、上皮由来好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、線維芽細胞増殖因子（酸性）、線維芽細胞増殖因子（塩基性）、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α１、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合性表皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子１、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子２、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病阻害因子、白血病阻害因子受容体α、エンドモルフィン（１＆２）、神経ペプチド、神経増殖因子、神経増殖因子受容体、ニューロポイエチン（ｎｅｕｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β１．２、トランスフォーミング増殖因子β２、トランスフォーミング増殖因子β３、トランスフォーミング増殖因子β５、潜在型トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質Ｉ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチンリシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＤ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、トロンボモジュリン、レプチン、アダリムマブ、デノスマブまたはエタネルセプトから選択される。これらのタンパク質およびこれらの化合物を調製する特定の方法は、「オキシム結合のための求核性触媒（Ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｉｃ ｃａｔａｌｙｓｔ ｆｏｒ ｏｘｉｍｅ ｌｉｎｋａｇｅ）」という発明の名称の米国特許第９，７３１，０２４号にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0025】

特定の実施形態では、新規なタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるタンパク質、ペプチドおよび他の化合物は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ－１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ １３プロテアーゼ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、コロニー刺激因子－１（ＣＳＦ－１）、Ｍ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－ω、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２α、ＩＬ－３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２、Ａｎｇ－４、Ａｎｇ－Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形成タンパク質－１、骨形成タンパク質－２、骨形成タンパク質－３、骨形成タンパク質－４、骨形成タンパク質－５、骨形成タンパク質－６、骨形成タンパク質－７、骨形成タンパク質－８、骨形成タンパク質－９、骨形成タンパク質－１０、骨形成タンパク質－１１、骨形成タンパク質－１２、骨形成タンパク質－１３、骨形成タンパク質－１４、骨形成タンパク質－１５、骨形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン－１、毛様体神経栄養因子、毛様体神経栄養因子受容体、Ｃｒｉｐｔｏ、Ｃｒｙｐｔｉｃ、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、表皮増殖因子、エピジェン、エピレグリン、上皮由来好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、線維芽細胞増殖因子（酸性）、線維芽細胞増殖因子（塩基性）、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α１、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合性表皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子１、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子２、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病阻害因子、白血病阻害因子受容体α、神経増殖因子、神経増殖因子受容体、ニューロポイエチン、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β１．２、トランスフォーミング増殖因子β２、トランスフォーミング増殖因子β３、トランスフォーミング増殖因子β５、潜在型トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質Ｉ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチンリシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＤ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ（例えばデオキシリボヌクレアーゼＩ）、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、トロンボモジュリン、レプチン、ヒュミラ（Ｈｕｍｉｒａ）（アダリムマブ）、プロリア（デノスマブ）あるいはその生物学的に活性な断片、誘導体またはバリアントから選択される。これらのタンパク質およびこれらの化合物を調製する特定の方法は、米国特許出願公開第２０１２０１９００９６号として公開されている「水溶性脂肪酸誘導体をタンパク質にコンジュゲートするための材料および方法（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ ａ ｗａｔｅｒ ｓｏｌｕｂｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｔｏ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ）」という発明の名称の米国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0026】

特定の実施形態では、新規なタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるタンパク質、ペプチドおよび他の化合物は、アスパラギナーゼ、アムドキソビル（ＤＡＰＤ）、Ａｎｔｉｄｅ、ベカプレルミン（ｂｅｃａｐｌｅｒｍｉｎ）、カルシトニン、シアノビリン、デニロイキンジフチトクス、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、ＥＰＯ作動薬（例えば、国際公開第９６／４０７４９号に記載されている約１０～４０アミノ酸長であり、かつ特定のコア配列を含むペプチド）、ドルナーゼアルファ、赤血球造血刺激タンパク質（ＮＥＳＰ）、凝固因子、例えば第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フォンウィルブランド因子、セレデース、セレザイム、α－グルコシダーゼ、コラーゲン、シクロスポリン、αディフェンシン、βディフェンシン、エキセンジン－４、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、α－１プロテイナーゼ阻害剤、エルカトニン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、フィブリノーゲン、フィルグラスチム、成長ホルモン、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、ＧＲＯ－β、ＧＲＯ－β抗体、骨形成タンパク質、例えば骨形成タンパク質－２、骨形成タンパク質－６、ＯＰ－１、酸性線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、ＣＤ－４０リガンド、ヘパリン、ヒト血清アルブミン、低分子ヘパリン（ＬＭＷＨ）、インターフェロン、例えばインターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターフェロンω、インターフェロンτ、コンセンサスインターフェロン、インターロイキンおよびインターロイキン受容体、例えばインターロイキン－１受容体、インターロイキン－２、インターロイキン－２融合タンパク質、インターロイキン－１受容体拮抗薬、インターロイキン－３、インターロイキン－４、インターロイキン－４受容体、インターロイキン－６、インターロイキン－８、インターロイキン－１２、インターロイキン－１３受容体、インターロイキン－１７受容体、ラクトフェリンおよびラクトフェリン断片、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、インスリン、プロインシュリン、インスリン類似体（例えば、米国特許第５，９２２，６７５号に記載されているモノ－アシル化インスリン）、アミリン、Ｃ－ペプチド、ソマトスタチン、オクトレオチドを含むソマトスタチン類似体、バソプレシン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、インフルエンザワクチン、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、インスリントロピン（ｉｎｓｕｌｉｎｔｒｏｐｉｎ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、プラスミノーゲン活性化因子、例えばアルテプラーゼ、ウロキナーゼ、レテプラーゼ、ストレプトキナーゼ、パミテプラーゼ、ラノテプラーゼおよびテネクテプラーゼ、神経増殖因子（ＮＧＦ）、オステオプロテゲリン、血小板由来増殖因子、組織増殖因子、トランスフォーミング増殖因子－１、血管内皮増殖因子、白血病阻害因子、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、グリア増殖因子（ＧＧＦ）、Ｔ細胞受容体、ＣＤ分子／抗原、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、単球走化性タンパク質－１、内皮増殖因子、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、グルカゴン様ペプチド、ソマトトロピン、サイモシンα１、サイモシンα１ Ｉｌｂ／Ｉｌｌａ阻害剤、サイモシンβ１０、サイモシンβ９、サイモシンβ４、α１－アンチトリプシン、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）化合物、ＶＬＡ－４（最晩期抗原４）、ＶＬＡ－４阻害剤、ビスホスホネート、呼吸器合胞体ウイルス抗体、嚢胞性線維症膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）遺伝子、デオキシリボヌクレアーゼ（Ｄｎａｓｅ）、殺菌性／透過性増強タンパク質（ＢＰＩ）および抗ＣＭＶ抗体から選択される。例示的なモノクローナル抗体としては、エタネルセプト（ＩｇＧ１のＦｃ部分に結合されたヒト７５ｋＤ ＴＮＦ受容体の細胞外リガンド結合部分からなる二量体融合タンパク質）、アブシキシマブ、アフェリオモマブ（ａｆｅｌｉｏｍｏｍａｂ）、バシリキシマブ、ダクリズマブ、インフリキシマブ、イブリツモマブチウキセタン、ミツモマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ヨウ素１３１トシツモマブ複合体、オマリズマブ、リツキシマブおよびトラスツズマブ（ハーセプチン）が挙げられる。これらのタンパク質およびこれらの化合物を調製する特定の方法は、米国特許出願公開第２０１８０２１４４４号として公開されている「マルチアームポリマープロドラッグ（Ｍｕｌｔｉ－ａｒｍ ｐｏｌｙｍｅｒ ｐｒｏｄｒｕｇｓ）」という発明の名称の米国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。新規なタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるものの例としては、限定されるものではないが、組換えヒトＥＰＯ（ｒｈＥＰＯ）などのエリスロポエチン（ＥＰＯ）、組換えヒトＧ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）のようなＧ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、組換えヒトＩＦＮαまたはＩＦＮβ（ｒｈＩＦＮαまたはｒｈＩＦＮβ）のようなＩＦＮαおよびＩＦＮβなどのα－インターフェロン（ＩＦＮα）、β－インターフェロン（ＩＦＮβ）またはγ－インターフェロン（ＩＦＮγ）、インターロイキン、例えば組換えヒトＩＬ－２またはＩＬ３（ｒｈＩＬ－２またはｒｈＩＬ－３）のようなＩＬ－２またはＩＬ－３などのＩＬ－１～ＩＬ－１８、血清タンパク質、例えば第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子のような第ＩＩ～ＸＩＩＩ凝固因子、α１－アンチトリプシン（Ａ１ＡＴ）、活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（ｈＴＰＡ）などの組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）などのプラスミノーゲン活性化因子、組換えヒトＡＴ ＩＩＩ（ｒｈＡＴ ＩＩＩ）などのＡＴ ＩＩＩ、ミオグロビン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などのアルブミン、増殖因子、例えば表皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、脳由来増殖因子（ＢＤＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、Ｂ細胞増殖因子（ＢＣＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ＴＧＦαまたはＴＧＦβ、ＢＭＰ（骨形成タンパク質）などのトランスフォーミング増殖因子、ヒト成長ホルモンなどの成長ホルモン、ＴＮＦαまたはＴＮＦβなどの腫瘍壊死因子、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、ヘモグロビン、ホルモンまたはプロホルモン、例えばインスリン、ゴナドトロピン、メラニン細胞刺激ホルモン（α－ＭＳＨ）、トリプトレリン、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）およびオキシトシン、ならびに放出ホルモンおよび放出阻害ホルモン、副甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモン、例えばチロキシン、チロトロピン、チロリベリン、プロラクチン、カルシトニン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ－１、ＧＬＰ－２など）、エキセンディン－４およびエキセナチド（Ｅｘｔｅｎｄａｔｉｄｅ）などのエキセンディン、レプチン、バソプレシン、ガストリン、セクレチン、インテグリン、糖タンパク質ホルモン（例えばＬＨ、ＦＳＨなど）、メラノシド（ｍｅｌａｎｏｓｉｄｅ）刺激ホルモン、リポタンパク質およびアポ－Ｂ、アポ－Ｅ、アポ－Ｌａなどのアポリポタンパク質、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびその断片などの免疫グロブリン、ヒルジン、組織経路阻害剤、レクチンまたはリシンなどの植物タンパク質、ハチ毒、ヘビ毒、免疫毒素、抗原Ｅ、α－プロテイナーゼ阻害剤、ブタクサアレルゲン、メラニン、オリゴリジン（ｏｌｉｇｏｌｙｓｉｎｅ）タンパク質、ＲＧＤタンパク質またはこれらのタンパク質の１つのための任意に対応する受容体、あるいはこれらのタンパク質または受容体のいずれかの機能的誘導体または断片が挙げられる。好ましい酵素は、例えば、炭水化物特異的酵素、タンパク分解酵素、オキシダーゼ、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、リアーゼ、異性化酵素、キナーゼおよびリガーゼである。非限定的な具体例は、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、グルタミナーゼ、グルタミナーゼ－アスパラギナーゼ、フェニルアラニン、トリプトファナーゼ、チロシナーゼ、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）、エンドトキシナーゼ（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎａｓｅ）、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、カリクレイン、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、サーモリシン、リパーゼ、ウリカーゼ、アデノシンジホスファターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース、グルコン酸オキシダーゼ（ｇｌｕｃｏｎａｔｅ ｏｘｉｄａｓｅ）、ガラクトシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、グルクロニダーゼ、ヒアルロニダーゼ、組織因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、ＭＡＰキナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ（例えば、デオキシリボヌクレアーゼＩ）、リボヌクレアーゼ、ラクトフェリンおよびそれらの機能的誘導体または断片である。これらのタンパク質およびこれらの化合物を調製する特定の方法は、米国特許出願公開第２００７１３４１９７号として公開されている「還元的アミノ化によって調製されるヒドロキシアルキル澱粉とタンパク質との複合体（Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙａｌｋｙｌ ｓｔａｒｃｈ ａｎｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ａｍｉｎａｔｉｏｎ）」という発明の名称の米国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0027】

別の態様では、抗体－薬物複合体をコンジュゲートして抗体－薬物－ＰＳＡ複合体を調製する。これらの抗体およびこれらの化合物を調製する特定の方法は、国際公開第２０１８００２９０２号として公開されている「抗体－薬物複合体およびそれを用いた治療方法（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｅ）」という発明の名称のＰＣＴに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。これらの実施形態では、１種の好適な抗体－薬物複合体は、リンカー分子に共有結合的に結合され、次いでこれがＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合することができる１種以上の薬物に共有結合的に結合された抗体を含む。複合体を調製するための別の好適な抗体は、ＣＤ４結合部位においてＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合するものである。複合体を調製するための別の好適な抗体は、ｇｐ１２０－ｇｐ４１界面でＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合するものである。そのような抗体としては、限定されるものではないが、米国特許出願公開第２０１５０３６１１６０号、米国特許出願公開第２０１６００２２８０３号および米国特許出願公開第２０１５０１５２１６７号に詳細に記載されている、８ＡＮＣ１９５、３５０２２およびＰＧＴ１５１から選択される抗体が挙げられる。複合体を調製するための別の好適な抗体は、限定されるものではないが、米国特許出願公開第２０１６０００９７８９号、ＰＣＴ出願の国際公開第２０１３０７０７７６号、米国特許出願公開第２０１５０１５８９３４号、米国特許出願公開第２０１２０２６９８２１号に詳細に記載されている４Ｅ１０、１０Ｅ８、２Ｆ５およびＺ１３ｅ１を含む、ｇｐ４１膜近位外部領域（ＭＰＥＲ）に結合するものである。さらなる抗体複合体を調製するために、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合させる際に用いられる例示的な抗体としては、限定されるものではないが、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３、３ＢＮＣ１ １７、ＮＩＨ４５－４６、ＰＧＶ０４、ｂ１２、ＣＨ３１およびＣＨ１０３が挙げられる。ＶＲＣ０７－５２３の例は、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，８８（２１）：ｐｐ．１２６６９－１２６８２（２０１４年１１月）に記載されている。３ＢＮＣ１ １７の例は米国特許出願公開第２０１４０２１２４５８号に記載されている。ＮＩＨ４５－４６の例は、米国特許出願公開第２０１５０２７４８１３号に記載されている。ＰＧＶ０４の例は、米国特許出願公開第２０１３０２５１７２６号に記載されている。ｂ１２の例は、米国特許出願公開第２０１６０００９７８９号に記載されている。ＣＨ３１の例は、米国特許出願公開第２０１３０２５１７２６号に記載されている。ＣＨ１０３の例は、米国特許出願公開第２０１４０２１２４５８号に記載されている。

【0028】

さらなる抗体複合体を調製するために、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合させる際に用いられる例示的な抗体としては、限定されるものではないが、国際公開第２０１２１０６５７号、国際公開第２０１６１９６９７５号、米国特許第８，６３７，０３６号、米国特許出願公開第２０１４／０３２２１６３号、国際公開第２０１６１９６９７５号および国際公開第２０１７／７９４７９号に詳細に記載されている２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１ １７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０－１０７４、１２Ａ１２、３５０２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１－０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６－ＬＳ、ＮＩＨ４５－４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１～ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３、ＶＲＣ０７－ＬＳおよびＺ１３、好ましくはＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、Ｎ６、Ｎ６－ＬＳ、ＶＲＣ０７およびＶＲＣ０７－５２３が挙げられ、これらは全て参照により本明細書に組み込まれる。

【0029】

別の態様では、抗体－薬物複合体をコンジュゲートして抗Ａｘｌ抗体ＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態では、抗Ａｘｌ抗体は、哺乳類のＴＡＭ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のサブファミリーの一部である１０４～１４０ｋＤａの分子量を有する８９４個のアミノ酸からなるタンパク質であるＵＦＯまたはＪＴＫ１１ともいうＡＸＬタンパク質の細胞外部分にあるエピトープに結合する抗体である。これらの抗体およびこれらの化合物を調製する特定の方法は、国際公開第２０１８００７５９２号として公開されている「抗Ａｘｌ抗体に基づく抗体薬物複合体のための新しい投与計画（Ｎｅｗ ｄｏｓａｇｅ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａｎｔｉ－ａｘｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という発明の名称のＰＣＴに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0030】

別の態様では、多くの細胞表面マーカーおよびそれらのリガンドに対してタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。例えば癌細胞は、限定されるものではないが、炭酸脱水酵素ＩＸ、α－フェトプロテイン、α－アクチニン－４、Ａ３（Ａ３３抗体に特異的な抗原）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤ１－１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０，ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ～ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫ ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ－１α、結腸特異的抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－Ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ，Ｆｌｔ－１、Ｆｌｔ－３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２もしくは１ａ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、インスリン様増殖因子－１（ＩＧＦ－１）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ１－抗原、ＫＳ１－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、胎盤増殖因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、Ｐ１ＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、サバイビン、サバイビン２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ抗原、トムゼン・フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ｌＡ－抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、癌遺伝子マーカーおよび癌遺伝子産物（例えば、Ｓｅｎｓｉら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１２（２００６）５０２３－５０３２；Ｐａｒｍｉａｎｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８（２００７）１９７５－１９７９；Ｎｏｖｅｌｌｉｎｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４（２００５）１８７－２０７を参照）を含む細胞表面マーカーおよび／またはリガンドのうちの少なくとも１つを発現することが報告されている。本明細書に報告されている方法により得られる複合体は、例えば腫瘍疾患、心血管疾患、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、代謝（例えば内分泌）疾患、または神経系（例えば神経変性）疾患の治療のための薬の調製において使用することができる。これらの疾患の典型的かつ非限定的な例は、アルツハイマー病、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性および慢性リンパ性白血病、バーキット・リンパ腫、ホジキンリンパ腫、毛様細胞白血病、急性および慢性骨髄性白血病、Ｔ細胞リンパ腫および白血病、多発性骨髄腫、神経膠腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、癌腫（口腔、胃腸管、結腸、胃、気道、肺、乳房、卵巣、前立腺、子宮、子宮内膜、子宮頸部、膀胱、膵臓、骨、肝臓、胆嚢、腎臓、皮膚および精巣の癌腫など）、黒色腫、肉腫、神経膠腫および皮膚癌、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シデナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、連鎖球菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨大細胞動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬または線維化性肺胞炎である。これらのタンパク質は、国際公開第２０１６０９６７４１号として公開されている「ソルターゼを用いた酵素媒介性ポリペプチドコンジュゲーションのための新規な方法（Ｎｏｖｅｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｓｏｒｔａｓｅ）」という発明の名称のＰＣＴに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0031】

別の態様では、抗メソテリン抗体－ＰＳＡ複合体は、メソテリンに対して反応性を有する抗体を用いてそれらをＰＳＡとコンジュゲートして調製する。これらの実施形態では、ＰＳＡ－複合体を調製するために使用される抗体が別の細胞外抗原によってマスクされていないメソテリンのエピトープを認識することが好ましい。これらの実施形態の別の態様では、抗体－ＰＳＡ複合体を膵臓、卵巣、中皮腫および肺癌などの癌の治療方法に使用する。これらのタンパク質は、米国特許出願公開第２０１５０２５９４３３号として公開されている「抗メソテリン抗体およびその使用（Ａｎｔｉ－ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ）」という発明の名称の米国特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0032】

別の態様では、酵素をコンジュゲートして酵素ＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態では、ＰＳＡ複合体を調製するために使用するのに適した酵素としては、限定されるものではないが、メタロプロテイナーゼ、スブチラーゼまたはリパーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、スブチラーゼ、メタロプロテイナーゼ、コリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、トリプシン、サブチリシン、サーモリシンまたはＣＴ、コリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、スブチラーゼ、サブチリシン、サーモリシン、リパーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、メタロプロテイナーゼ、キモトリプシン、－キモトリプシンまたはトリプシンを含むエステラーゼ群、キモトリプシン－ｐＤＭＡＥＭＡ（ＣＴ－ｐＤＭＡＥＭＡ）複合体、メタロプロテイナーゼ－ｐＯＥＧＭＡ複合体、サーモリシン－ｐＯＥＧＭＡ複合体、サブチリシン－イオン液体ポリマー複合体、スブチラーゼ－イオン液体ポリマー複合体またはリパーゼ－ｐＤＭＡＡ複合体を含むエステラーゼ－ポリマー複合体などの酵素ポリマー複合体からの酵素が挙げられる。これらの実施形態では、酵素－ポリマー複合体によって触媒される化学反応としては、例えばエステル交換反応、加水分解反応、エナンチオ選択反応、レドックス反応、縮合反応、ポリエステル合成反応またはペプチド合成反応あるいはそれらのあらゆる組み合わせが挙げられる。これらのタンパク質は、国際公開第２０１６１３０６７７号として公開されている「非水性酵素－ポリマー複合体溶液および関連する方法（Ｎｏｎ－ａｑｕｅｏｕｓ ｅｎｚｙｍｅ－ｐｏｌｙｍｅｒ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ）」という発明の名称のＰＣＴ出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0033】

別の態様では、リガンド－薬物複合体をコンジュゲートしてリガンド－薬物－ＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態では、新規なＰＳＡ複合体を抗体－薬物複合体から調製する。これらの実施形態はＰＳＡ抗体複合体の調製および使用を含み、ここでは当該抗体は細胞毒性薬などの薬物に結合されるように修飾されている。本発明の抗体－薬物複合体のために使用することができる具体的な抗体としては、限定されるものではないが、トラスツズマブおよびペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブおよびイブリツモマブなどの抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、オレゴボマブなどの抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体、エドレコロマブなどの抗ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）モノクローナル抗体、セツキシマブ、パニツムマブおよびニモツズマブなどの抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、ブレンツキシマブなどの抗ＣＤ３０モノクローナル抗体、ゲムツズマブおよびｈｕＭｙ９－６などの抗ＣＤ３３モノクローナル抗体、エタラシズマブなどの抗血管新生インテグリンαｖβ３モノクローナル抗体、５アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２モノクローナル抗体、エピラツズマブなどの抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、ラベツズマブなどの抗ＣＥＡモノクローナル抗体、ビバツズマブ（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）などの抗ＣＤ４４ｖ６モノクローナル抗体、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）などの抗ＦＡＰモノクローナル抗体、ｈｕＢ４などの抗ＣＤ１９モノクローナル抗体、ｈｕＣ２４２などの抗ＣａｎＡｇモノクローナル抗体、ｈｕＮ９０１などの抗ＣＤ５６モノクローナル抗体、ダラツムマブなどの抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ＤＳ６などの抗ＣＡ６モノクローナル抗体１０、シクスツムマブ（ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）および３Ｂ７などの抗ＩＧＦ－ＩＲモノクローナル抗体、ＣＮＴＯ ９５などの抗インテグリンモノクローナル抗体、およびＢ－Ｂ４などの抗シンデカン（ｓｙｎｄｅｃａｎ）－１モノクローナル抗体が挙げられる。特定の実施形態では、抗体以外の結合タンパク質もリガンド－薬物複合体のための細胞結合リガンドとして使用することができ、限定されるものではないが、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮ－ｆ３およびＩＦＮ－ｙなどのインターフェロン、トランスフェリン、表皮増殖因子（ＥＧＦ）およびＥＧＦ様ドメイン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、ワクシニア増殖因子（ＶＧＦ）、インスリンならびにＩＧＦ－１およびＩＧＦ－２などのインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、メラニン細胞刺激３０ホルモン（ＭＳＨ）、ステロイドホルモン（例えば、エストロゲンおよびアンドロゲン）およびソマトスタチンなどの他の好適なホルモン、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４およびＩＬ－６などのリンホカイン、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、ボンベシン、ガストリンおよび葉酸が挙げられる。ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるこれらの抗体または結合タンパク質複合体は、国際公開第２０１６１４７０３１号として公開されている「新規な親水性リンカーおよびそのリガンド－薬物複合体（Ｎｏｖｅｌ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｌｉｎｋｅｒｓ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ）」という発明の名称のＰＣＴ出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0034】

別の態様では、抗体－複合体をコンジュゲートして、さらにＰＳＡにコンジュゲートされた抗体複合体を調製して新規な抗体複合体を提供する。この態様に係る実施形態では、ＰＳＡ複合体を調製するために使用される抗体の典型的な例としては、限定されるものではないが、アブシキシマブ、リツキシマブ、バシリキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、アダリムマブ、トシツモマブ－１１３１、セツキシマブ、イブリツキシマブチウキセタン、オマリズマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、エクリズマブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムマブ、カナキヌマブ、カツマキソマブ（ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、ウステキヌマブ、トシリズマブ、オファツムマブ、デノスマブ、ベリムマブ、イピリムマブおよびブレンツキシマブが挙げられる。ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるこれらの抗体または結合タンパク質複合体は、国際公開第２０１７１３７４５７号として公開されている「ｃｄ３０腫瘍を標的にするための向上した治療指数を有する抗体－複合体および抗体－複合体の治療指数を向上させるための方法（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃｄ３０ ｔｕｍｏｕｒｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）」という発明の名称のＰＣＴ出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0035】

別の態様では、抗体－リファマイシン複合体をさらにＰＳＡにコンジュゲートして新規な抗体複合体を得る。ＰＳＡ複合体を調製するために使用されるこれらの抗体または結合タンパク質複合体は、国際公開第２０１７１５２０８３号として公開されている「抗体－リファマイシン複合体の調製のためのプロセス（Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｒｉｆａｍｙｃｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」という発明の名称のＰＣＴ出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0036】

特定の実施形態では、Ｔ細胞Ｉｇおよびムチンドメイン含有分子－３（Ｔｉｍ－３）に対して反応性を有する抗体またはその抗原結合部分をＰＳＡにコンジュゲートして抗ＴＩＭ３複合体を形成する。ムチンドメイン含有分子－３（Ｔｉｍ－３）に好適な抗体は米国特許出願公開第２０１８０１６３３６号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。別の態様では、抗ＴＩＭ３／ＰＳＡ抗体複合体を治療方法で使用する。一実施形態では、抗ＴＩＭ３／ＰＳＡ抗体複合体は、ヒトＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－３（ＴＩＭ３）に結合し、かつ可溶性ヒトＴＩＭ３に結合し、膜結合型ヒトＴＩＭ３に結合し、かつＴ細胞活性化を誘導または増強する。別の態様では、調製される抗体複合体を膀胱癌、乳癌、子宮／子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、膵臓癌、結腸直腸癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、肺癌、胃癌、生殖細胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮膚癌、中枢神経系の腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびウイルス関連癌を含む腫瘍および癌の増殖を阻害するための方法で使用する。

【0037】

特定の実施形態では、タンパク質トロンボスポンジン１ドメイン含有７Ａ（ＴＨＳＤ７Ａ）に対して反応性を有する抗体またはその抗原結合部分をコンジュゲートして抗ＴＨＳＤ７Ａ複合体を形成する。ＴＨＳＤ７Ａタンパク質に好適な抗体は国際公開第２０１７１６７７７０号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。別の態様では、調製される抗体複合体を腎臓、前立腺、甲状腺、膀胱、食道、結腸および乳癌を含む腫瘍および癌の増殖を阻害するために方法で使用する。

【0038】

別の態様では、ペプチドおよびペプチド模倣体をＰＳＡにコンジュゲートしてペプチドＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、国際公開第２０１８０１５２９６号に記載されているペプチドおよびペプチド模倣体（これは参照により本明細書に組み込まれる）をＰＳＡにコンジュゲートして特定のペプチドＰＳＡ複合体を調製する。複合体を調製するために使用される特定のタンパク質は可溶性アミロイド前駆体タンパク質ａ（ｓＡＰＰａ）である。このタンパク質はＧＡＢＡＢＲＩａ受容体に結合するのを可能にする特定の結合部位を有し、それによりＧＡＢＡＢＲＩａのｓｕｓｈｉドメイン１への特異的結合により作動薬作用を引き起こす。この受容体を活性化させることができるＰＳＡにコンジュゲートされた可溶性アミロイド前駆体タンパク質（ｓＡＰＰａ）が本明細書において提供される。

【0039】

別の態様では、受容体、リガンド、二次メッセンジャーならびに関連するタンパク質および化合物などの調節経路およびシグナル伝達経路に関与するタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドをコンジュゲートしてタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、ＥＩ２４タンパク質またはその断片をＰＳＡにコンジュゲートしてＥ１２４タンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。Ｅ１２４－ＰＳＡ複合体を調製する際に、配列番号１（Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｌｙｓ－ＡｓｐＳｅｒ－Ｉｌｅ－Ｔｒｐ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｇｌｎ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｃｙｓ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｉｌｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｍｅｔ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｈｉｓ－Ｍｅｔ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｈｉｓ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ａｓｎ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｔｙｒ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｍｅｔ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｈｉｓ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－ＨＩＳ）に係るヒトＥ１２４タンパク質の全長ポリペプチド、断片またはバリアントを利用してもよい。別の態様では、Ｅ１２４－ＰＳＡ複合体を癌などを治療する方法で使用する。特定の実施形態において治療される特定の種類であるが非限定的な種類の癌は、乳癌、子宮頸癌、白血病、胃癌、肉腫、肝癌、肺癌、結腸直腸癌および腎癌からなる群から選択される癌である。ＥＩ２４タンパク質は米国特許出願公開第２０１８００２８６０５号にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0040】

別の態様では、免疫系、アレルギー反応の調節に関与するタンパク質およびペプチドならびアレルギー、関連するタンパク質および化合物をコンジュゲートしてタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。いくつかの実施形態では、ＰＲＵＮＵＳ ＰＥＲＳＩＣＡのＰＲＵ Ｐ ３アレルゲンから誘導されたペプチドをコンジュゲートしてタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。Ｐｒｕ ｐ ３タンパク質およびそのバリアントの様々な領域から開発されたアミノ酸配列Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－ｌｌｅ－Ａｒｇ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ａｓｎ－Ａｓｎ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｃｙｓ（配列番号２）を利用してＰｒｕ ｐ ３タンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、Ｐｒｕ ｐ ３タンパク質－ＰＳＡ複合体をアレルギーの治療を含む免疫不全を治療する方法で使用する。Ｐｒｕ ｐ ３タンパク質は国際公開第２０１７０５１０４９号にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0041】

別の態様では、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）ならびに関連するタンパク質および化合物に結合することができるタンパク質およびペプチドをコンジュゲートしてＴＮＦ結合タンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）に結合することができるこれらのタンパク質は、配列番号３（Ｖ－Ｐ－Ａ－Ｑ－Ｗ－Ｆ－Ｐ－Ｒ－Ｓ－Ｉ－Ｐ－Ｅ－Ｐ－Ｓ－Ｎ－Ｌ－Ｃ－Ｑ－Ｐ－Ｒ－Ｅ－Ｙ－Ｙ－Ｄ－Ｅ－Ｒ－Ａ－Ｑ－Ｒ－Ｒ－Ｃ－Ｓ－Ｑ－Ｃ－Ｐ－Ｐ－Ｇ－Ｃ－Ｒ－Ａ－Ｋ－Ｓ－Ｆ－Ｃ－Ｎ－Ｅ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｔ－Ｖ－Ｃ－Ｖ－Ｐ－Ｃ－Ｅ－Ｄ－Ｓ－Ｔ－Ｙ－Ｔ－Ｑ－Ｌ－Ｗ－Ｎ－Ｗ－Ｌ－Ｐ－Ｅ－Ｃ－Ｌ－Ｓ－Ｃ－Ｇ－Ｓ－Ｒ－Ｃ－Ｓ－Ｔ－Ｇ－Ｑ－Ｖ－Ｅ－Ｔ－Ｑ－Ａ－Ｃ－Ｔ－Ｌ－Ｋ－Ｑ－Ｎ－Ｒ－Ｉ－Ｃ－Ｔ－Ｃ－Ｅ－Ｐ－Ｇ－Ｒ－Ｙ－Ｃ－Ｉ－Ｌ－Ｐ－Ｒ－Ｑ－Ｅ－Ｇ－Ｃ－Ｑ－Ｖ－Ｃ－Ｇ－Ｌ－Ｌ－Ｒ－Ｋ－Ｃ－Ｐ－Ｐ－Ｇ－Ｆ－Ｇ－Ｖ－Ａ－Ｋ－Ｐ－Ｇ－Ｔ－Ａ－Ｔ－Ｓ－Ｎ－Ｗ－Ｃ－Ａ）に係るアミノ酸配列を含む受容体または結合分子またはそのバリアントである。これは、ＭｕｋａｉらによるＳｃｉｅｎｃｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３（１４８）：ｒａ８３に記載されているヒトＴＮＦＲ ｐ８０イソ型のＣＤＲ２およびＣＤＲ３結合ドメインから予測されるように、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ ＴＮＦ結合ドメインを含むウマＴＮＦＲ ｐ８０ポリペプチドの切断型細胞外ドメインを表す。別の態様では、ＴＮＦ結合タンパク質－ＰＳＡ複合体をアレルギーまたは免疫不全を治療する方法で使用する。特定の実施形態では、ＴＮＦ結合タンパク質－ＰＳＡ複合体の使用によって治療される免疫不全は、炎症媒介性疾患、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば炎症媒介性多発性関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、多発性関節炎、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性脈管炎、アトピー性皮膚炎、鬱血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支喘息、アレルギー状態、敗血症、ショック、糖尿病および神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、脳卒中および筋萎縮性側索硬化症を含む、ＴＮＦ媒介性疾患である。ＰＳＡにコンジュゲートされるＴＮＦ結合タンパク質は、国際公開第２０１６１１９０２３号にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0042】

別の態様では、エリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）ならびに関連するタンパク質および化合物に結合することができるタンパク質およびペプチドをコンジュゲートしてＥＰＯＥタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＥＰＯＥタンパク質－ＰＳＡ複合体をＥＰＯ／ＥＰＯＲシグナル伝達経路を阻止または阻害するために、特に癌および特に肝細胞癌を治療する方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされるＥＰＯＲタンパク質は、国際公開第２０１７２１９９５１号にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0043】

別の態様では、非タンパク質化合物をＰＳＡにコンジュゲートして、ＰＳＡにコンジュゲートされたさらなる新規な化合物を形成する。別の態様では、これらの非タンパク質化合物ＰＳＡ複合体を、例えば特に本明細書において提供される製剤または治療方法において特定のタンパク質またはペプチド－ＰＳＡ複合体と組み合わせることができる。

【0044】

別の群の実施形態では、ｐ３８γタンパク質の細胞内発現を阻害することができる化合物をコンジュゲートしてｐ３８阻害剤ＰＳＡ複合体を調製する。これらの化合物は、特定の実施形態では癌の治療を含む治療方法において、他の非タンパク質化合物ＰＳＡ複合体と組み合わせてタンパク質またはペプチドＰＳＡ複合体を利用してもよい。これらの実施形態を創出する目的となり、かつ特に有効な１つの特定の種類の非限定的な癌は肝癌である。

【0045】

特定の実施形態では、ｐ３８γタンパク質の細胞内発現を阻害することができる化合物は、配列番号４（Ｙ－Ｇ－Ｒ－Ｋ－Ｋ－Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ａ－Ｒ－Ｖ－Ｐ－Ｋ－Ｅ－Ｔ－Ａ－Ｌ）に係るアミノ酸配列を含むペプチドである。癌および他の疾患の治療のための製剤において、当該化合物をそれ自体が新規であってもそうでなくてもよい他の化合物と組み合わせてもよい。例えば上記ペプチドを使用して、特定の実施形態に応じてＰＳＡ複合体であってもそうでなくてもよい他の化合物を任意に含む製剤で使用されるＰＳＡ複合体を形成する。新規なＰＳＡ複合体を調製するのに適した特定の化合物は、国際公開第２０１６１９８６９８号として公開されているＰＣＴ特許出願に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0046】

別の態様では、ＣＣＩＯと呼ばれるＣｌａｒ細胞１０ｋＤａタンパク質をコンジュゲートしてＣＣＩＯタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＣＣＩＯタンパク質－ＰＳＡ複合体は、Ａ型インフルエンザ、Ｈ１Ｎ１インフルエンザおよびエボラ出血熱（ＥＨＦ）としても知られているエボラウイルス疾患（ＥＶＤ）を含む、ウイルス感染および特にインフルエンザ感染を治療する方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされるＣＣＩＯタンパク質は、国際公開第２０１６１３３５６０号として公開されているＰＣＴ特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0047】

別の態様では、可溶性組換えＭ１タンパク質ＫｕｎｉｎポリペプチドをコンジュゲートしてＫｕｎｉｎタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。この態様に係る特定の実施形態では、可溶性組換えＰ－セレクチンタンパク質を使用して新規なＫｕｎｉｎタンパク質ＰＳＡ複合体を形成する。別の態様では、これらの新規なＫｕｎｉｎタンパク質ＰＳＡ複合体を、特に例えば子宮内膜症の治療のための製剤および治療方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされる可溶性組換えＭ１タンパク質Ｋｕｎｉｎポリペプチドは、中国特許出願公開第１０６１４６６６９号として公開されているＧｕｏ、Ｓｕｎｗｅｉらによる中国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0048】

別の態様では、セイヨウオオマルハナバチ幼虫由来ポリペプチドをコンジュゲートしてセイヨウオオマルハナバチタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、これらの新規なセイヨウオオマルハナバチタンパク質ＰＳＡ複合体を、特に例えば勃起障害および動脈硬化症の治療および／または予防のための製剤および治療方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされるセイヨウオオマルハナバチ幼虫由来ポリペプチドは、韓国特許出願公開第２０１５００７３９３２号として公開されているＡｈｎ Ｍｉ Ｙｏｕｎｇ ＡＣらによる韓国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0049】

別の態様では、ＪＡＭＡ－Ａとも呼ばれる接合部接着分子タンパク質をコンジュゲートしてＪＡＭＡ－Ａタンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。新規なＪＡＭＡ－Ａ ＰＳＡ複合体を免疫不全を治療する方法で使用する。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＪＡＭＡ－Ａタンパク質－ＰＳＡ複合体を関節炎および特に関節リウマチ（ＲＡ）を治療する方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされるＪＡＭＡ－Ａタンパク質は、中国特許出願公開第１０５１２５５４８号として公開されているＬｉ Ｍｅｉｚｈａｎｇらによる中国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0050】

別の態様では、ＴＩＰＥ２とも呼ばれる腫瘍壊死因子－α誘導タンパク質８様２をコンジュゲートしてＴＩＰＥ２タンパク質－ＰＳＡ複合体を調製する。新規なＴＩＰＥ２ ＰＳＡ複合体は免疫調節または免疫不全の治療の方法で使用することができる。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＴＩＰＥ２タンパク質－ＰＳＡ複合体を、急性肺傷害と併発するエンドトキシン敗血症を治療する方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされるＴＩＰＥ２タンパク質は、中国特許出願公開第１０５１２６１０６号として公開されているＴａｏ Ｚｈｅｎ Ｇａｎｇらによる中国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0051】

別の態様では、粘液透過性ペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして、粘膜浸透が高められている鼻腔内送達により治療用化合物の浸透および送達を向上させるための他の化合物と共に利用することができる粘液透過性ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態では、典型的に５～１０個のアミノ酸からなるペプチドを使用してＰＳＡ複合体を形成することができ、多くの実施形態では当該ペプチドは約６～８アミノ酸長である。新規な粘液透過性ペプチドＰＳＡ複合体は、鼻腔内送達が望まれる多種多様な治療方法で使用することができる。ＰＳＡにコンジュゲートされる粘液透過性ペプチドは、国際公開第２０１８０１３９０７号として公開されているＰＣＴ特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0052】

別の態様では、グルカゴン受容体選択的類似体およびそのペプチド誘導体をＰＳＡにコンジュゲートして、向上した治療特性を有する新規なグルカゴン受容体類似体ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態では、典型的には５～１５個のアミノ酸からなるペプチドを使用してＰＳＡ複合体を形成することができ、多くの実施形態では当該ペプチドは約７～１０アミノ酸長であり、多くの実施形態では、９個のアミノ酸を有するペプチドを使用して新規なＰＳＡ複合体を形成する。別の態様では、本明細書において提供される新規なグルカゴン受容体類似体ペプチドＰＳＡ複合体を、特に肥満症および糖尿病を治療する方法を含む代謝疾患の治療方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされる特定のグルカゴン受容体選択的類似体およびペプチド誘導体は、米国特許出願公開第２０１８００９８７１号として公開されている米国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0053】

別の態様では、ペプチドベースの治療薬をＰＳＡにコンジュゲートして向上した治療特性を有する新規なペプチドベースの治療薬ＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態で使用されるペプチドの非限定的な例としては、配列番号５（Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ）および配列番号６（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｉｌｅ－Ｔｒｐ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｈｉｓ－Ｉｌｅ）が挙げられる。別の態様では、ＰＳＡにコンジュゲートされた新規なペプチドベースの治療薬を癌、特定の実施形態では乳癌、肺癌、鼻咽頭癌および上皮癌を治療する方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされる特定のペプチドベースの治療薬は、米国特許出願公開第２０１８０００２４００号として公開されている米国特許出願にさらに詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0054】

別の態様では、Ｔタンパク質エピトープに結合する抗体をＰＳＡにコンジュゲートして向上した治療特性を有する新規な抗Ｔａｕ抗体ＰＳＡ複合体を調製する。この態様の特定の実施形態では、新規なＰＳＡにコンジュゲートされた抗体は異常型Ｔａｕタンパク質を選択的に認識する。特定の実施形態では、正常なＴａｕと比較した場合に異常型Ｔａｕタンパク質に対してより高い親和性を与える特定のエピトープは、配列番号７（Ｋ－Ｈ－Ｑ－Ｐ－Ｇ－Ｇ－Ｇ）、配列番号８（Ｋ－Ｈ－Ｖ－Ｐ－Ｇ－Ｇ－Ｇ）、配列番号９（Ｈ－Ｈ－Ｋ－Ｐ－Ｇ－Ｇ－Ｇ）および配列番号１０（Ｔ－Ｈ－Ｖ－Ｐ－Ｇ－Ｇ－Ｇ）から選択される異常型Ｔａｕタンパク質内で生じるアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書において提供される新規な抗Ｔａｕ抗体ＰＳＡ複合体をアルツハイマー病および他の形態の認知症を治療および予防する方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされる特定の抗体および好ましいエピトープは、オーストラリア特許出願公開第２０１７２７２２５９号として公開されているオーストラリア特許出願にさらに記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0055】

別の態様では、αヘリックス抗菌性ペプチドＧＶをＰＳＡにコンジュゲートして、向上した抗菌性または他の治療特性を有する新規なαヘリックス抗菌性ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、本明細書において提供される新規な抗菌性ペプチド複合体を、特に細菌感染症の治療のための治療方法で使用する。ＰＳＡにコンジュゲートされる特定のαヘリックス抗菌性ペプチドＧＶペプチドは、中国特許出願公開第１０６３６６１６２号として公開されている中国特許出願にさらに記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0056】

別の態様では、マイクロバブルおよびＧＢＭ標的化（多形性膠芽腫標的化）を修飾するためのポリペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして、向上した治療特性を有する新規なポリペプチドＰＳＡ複合体を調製する。この態様の特定の実施形態では、マイクロバブルを修飾するのに適したポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への順序で配置された親油性ドメイン、細胞死滅ドメインおよび腫瘍標的化ドメインを含み、ここでは腫瘍標的化ドメインは、親油性ドメインと細胞死滅ドメインとの間および細胞死滅ドメインと腫瘍標的化ドメインとの間に結合された低密度Ａリポタンパク質ペプチド模倣ペプチドであり、柔軟な結合ペプチドによって結合されている。ＰＳＡにコンジュゲートされるマイクロバブルおよびＧＢＭ標的化を修飾するための特定のポリペプチドは、中国特許出願公開第１０６６３２６８８号として公開されているＲｅｎ Ｊｉｎｇｈｕａらによる中国特許出願にさらに記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0057】

別の態様では、筋肉もしくは腱再生または動脈形成を促進するためのＰＥＤＦ由来ペプチド／ポリペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして、向上した治療特性を有する新規なＰＥＤＦ由来ポリペプチドＰＳＡ複合体を調製する。筋肉もしくは腱再生を促進するためのＰＥＤＦ由来ペプチド／ポリペプチドは合成であってもよく、それらは少なくとも２０アミノ酸長、約２９～３０アミノ酸長を含む様々な長さであってもよく、あるいは代わりとしてそれらが常にではないが典型的に５～５０アミノ酸長であるように、より多いまたは少ないアミノ酸を有する。筋肉もしくは腱再生または動脈形成を促進するための特定のＰＥＤＦ由来ポリペプチドは、日本特許出願公開第２０１７１６５７４５号として公開されているＴｓａｏ Ｙｅｏｕ－Ｐｉｎｇらによる日本特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0058】

別の態様では、ＳＥＲＣＡカルシウムポンプの活性を促進するためのペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして、向上した治療特性を有する新規なＳＥＲＣＡカルシウムポンプ活性化ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態に適したペプチドは、Ｍ－Ａ－Ｅ－Ｋ－Ｅ－Ｓ－Ｔ－Ｓ－Ｐ－Ｈ－Ｌ－Ｍ－Ｖ－Ｐ－Ｉ－Ｌ－Ｌ－Ｌ－Ｖ－Ｇ－Ｗ－Ｉ－Ｖ－Ｇ－Ｃ－Ｉ－Ｉ－Ｖ－Ｉ－Ｙ－Ｉ－Ｖ－Ｆ－Ｆ（配列番号１１）、Ｍ－Ａ－Ｅ－Ｋ－Ａ－Ｅ－Ｓ－Ｔ－Ｓ－Ｐ－Ｈ－Ｌ－Ｍ－Ｖ－Ｐ－Ｉ－Ｌ－Ｌ－Ｌ－Ｖ－Ｇ－Ｗ－Ｉ－Ｖ－Ｇ－Ｃ－Ｉ－Ｉ－Ｖ－Ｉ－Ｙ－Ｉ－Ｖ－Ｆ－Ｆ（配列番号１２）、Ｍ－Ａ－Ｅ－Ｋ－Ｅ－Ｓ－Ｔ－Ｓ－Ｐ－Ｈ－Ｌ－Ｉ－Ｖ－Ｐ－Ｉ－Ｌ－Ｌ－Ｌ－Ｖ－Ｇ－Ｗ－Ｉ－Ｖ－Ｇ－Ｃ－Ｉ－Ｉ－Ｖ－Ｉ－Ｙ－Ｉ－Ｖ－Ｆ－Ｆ（配列番号１３）およびＭ－Ａ－Ｅ－Ｋ－Ａ－Ｅ－Ｓ－Ｔ－Ｓ－Ｐ－Ｈ－Ｌ－Ｉ－Ｖ－Ｐ－Ｉ－Ｌ－Ｌ－Ｌ－Ｖ－Ｇ－Ｗ－Ｉ－Ｖ－Ｇ－Ｃ－Ｉ－Ｉ－Ｖ－Ｉ－Ｙ－Ｉ－Ｖ－Ｆ－Ｆ（配列番号１４）を含む。別の態様では、本明細書において提供されるＳＥＲＣＡカルシウムポンプの活性を促進するためのペプチドの新規なＰＳＡ複合体を治療方法、特に心臓および心血管系疾患を治療する方法で使用する。特定のＳＥＲＣＡカルシウムポンプの活性を促進するためのペプチドは、米国特許出願公開第２０１７０２９８１０７Ａ１号として公開されている米国特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0059】

別の態様では、興奮性神経毒性関連損傷のための治療用ペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして、中枢神経系損傷の治療を含む向上した神経治療特性を有する新規な神経治療用ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。新規なＰＳＡ複合体の調製に使用される１種の特定のペプチドは、Ｙ－Ｅ－Ｋ－Ｌ－Ｌ－Ｄ－Ｔ－Ｅ－Ｉ（配列番号１５）のアミノ酸配列またはその機能的バリアントを有する。新規な複合体の調製に使用される興奮性神経毒性関連損傷に有用なペプチドは、国際公開第２０１７１８５２４９号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0060】

別の態様では、ＳＡＬＬ４ペプチドを使用してＰＳＡ複合体を調製する。これらの実施形態では、網膜芽細胞腫結合タンパク質４（ＲＢＢｐ４）に結合する治療用ペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして、結合するとＳＡＬＬ４－ＲＢＢｐ４相互作用を阻止する新規なペプチド複合体を形成する。別の態様では、網膜芽細胞腫の治療のために開発されて本明細書に記載されているＰＳＡにコンジュゲートされた新規なペプチドを使用する方法の実施形態を含む、ＳＡＬＬ４の調節異常によって媒介される障害を有する対象を治療するための方法も提供される。新規な複合体の調製に使用される網膜芽細胞腫結合タンパク質４（ＲＢＢｐ４）に結合するのに適したペプチドは、国際公開第２０１７１９００３２号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0061】

別の態様では、ＮＦＫＢ必須調節因子（ＮＥＭＯ）結合ドメインＣＡＲＧＯ配列に結合させたペプチド複合体を使用して、向上した透過性および他の治療特性を有するペプチドＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、ブドウ膜炎またはドライアイ疾患を有する対象を治療するための方法も提供される。新規な複合体の調製に使用される好適なペプチドは、国際公開第２０１７１８９８２６号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0062】

別の態様では、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体ペプチドおよび類似体ペプチドに結合されたペプチド複合体を使用して、向上した治療特性を有するペプチドＰＳＡ複合体を調製する。配列Ｈ－Ｓ－Ｑ－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｙ－Ｓ－Ｋ－Ｙ－Ｌ－Ｄ－Ｓ－Ｒ－Ｒ－Ａ－Ｑ－Ｄ－Ｆ－Ｖ－Ｑ－Ｗ－Ｌ－Ｍ－Ｎ－Ｔ（配列番号１６）およびそのバリアントを有するＧＬＰ－１と類似性を有するペプチドを使用して特定の新規なＧＬＰ－１ペプチド－ＰＳＡ複合体を調製する。これらのペプチドの特定の実施形態では、数３０または末端アミノ酸（典型的にはＣ末端）は、Ｅ－Ｅ－Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号１７）、Ｅ－Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号１８）、Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号１９）、Ｇ－Ｇ－Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２０）、Ｇ－Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２１）、Ｋ－Ｒ－Ｎ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２２）、Ｋ－Ｒ－Ｎ－Ｋ－Ｎ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２３）、Ｋ－Ｒ－Ｎ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｉ－Ａ－－ＯＨ（配列番号２４）、Ｋ－Ｒ－Ｎ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ａ－ＯＨ（配列番号２５）、Ｋ－Ｒ－Ｎ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２６）、Ｋ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２７）、Ｐ－Ｅ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２８）、ＰＫ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号２９）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＮＨ２（配列番号３０）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号３１）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－Ｅ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＮＨ２（配列番号３２）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－Ｅ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号３３）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－ＱＰ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号３４）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＮＨ２（配列番号３５）、Ｐ－Ｋ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号３６）、Ｐ－Ｒ－Ｎ－Ｋ－Ｎ－Ｎ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号３７）、Ｐ－Ｓ－Ｋ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号３８）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－Ｅ－ＯＨ（配列番号３９）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＮＨ２（配列番号４０）、ＰＳ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４１）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４２）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｅ－Ｐ－ＰＰ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４３）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｋ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４４）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＮＨ２（配列番号４５）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｋ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４６）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｓ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４７）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４８）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｅ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号４９）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号５０）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｑ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号５１）、Ｐ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号５２）、Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号５３）およびＳ－Ｓ－Ｇ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－ＯＨ（配列番号５４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドで置換されている。別の態様では、本明細書において提供される新規なＧＬＰ－１ペプチド－ＰＳＡ複合体を使用して糖尿病を含む様々な代謝疾患を治療する。新規なＧＬＰ－１ＰＳＡおよび関連する複合体の調製に使用される他の好適なペプチドは、米国特許第１０，０１０，６１４号、米国特許第９，９８２，０２９号、米国特許第９，８３９，６９２号、米国特許第９，９８８，４３０号、米国特許第７，０６７，４８８号および国際公開第２０１７２００９４４号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、それら全てが参照により本明細書に組み込まれる。

【0063】

別の関連する態様では、向上した望ましい製剤および送達特性を有する新規なＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体ポリシアル酸化化合物が本明細書において提供される。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体ポリシアル酸化化合物および製剤は向上した鼻腔内送達能力を有する。別の関連する態様では、非ポリシアル酸化ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体と比較した場合に、新規および／または向上した治療的使用を有する新規なＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体ポリシアル酸化化合物が本明細書において提供される。

【0064】

別の関連する態様では、特定の実施形態は、特定の組織および細胞型においてポリシアル酸化ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体の効果と組み合わせたポリシアル酸部分の効果の結果として相乗的活性を示すと考えられる。例えば、ポリシアル酸またはＰＳＡ部分それ自体は、特定の神経組織において抗炎症性特性を有することが報告されている。

【0065】

従って、本明細書中の他の実施形態では、ニューロン障害または疾患の治療に有用な本明細書において提供される他のポリシアル酸化化合物の使用と組み合わせたかそれと共に抗炎症剤としてＰＳＡを使用するニューロン障害（例えば神経変性）を治療する方法が提供される。特定の実施形態において治療される例示的な神経変性疾患としては、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病、認知機能障害、脱髄疾患、網膜変性疾患、レビー小体を有する認知症、パーキンソン病、睡眠時随伴症、糖尿病性神経障害（例えば網膜症）または多発性硬化症が挙げられる。好適なポリシアル酸は、「ポリシアル酸ならびに神経変性および神経炎症性疾患の治療のための使用（Ｐｏｌｙｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｕｓｅ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）」という発明の名称のＮｅｗｍａｎｎらの国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０５５４４５号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0066】

特定の実施形態では、例えばパーキンソン病の治療に有用なポリシアル酸化エキセナチド化合物が提供される。１つのレポートでは、エキセンディン－４／エキセナチドは潜在的パーキンソン病治療薬として探求された。Ａｖｉｌｅｓ－Ｏｌｍｏ，Ｉ．ら，Ｅｘｔｅｎｄａｔｉｄｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ（エキセナチドおよびパーキンソン病を有する患者の治療），Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．，３０１３，１２３（６）：２７３０－２７３６．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣ１６８２９５を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0067】

別の態様では、本明細書において提供される特定の実施形態は、抗炎症剤として使用するため、および炎症を伴う疾患および障害の治療のための本質的にポリシアル酸化合物からなるかそれからなる製剤を使用する。従って、いくつかの実施形態は治療用化合物に共有結合的に結合されたか治療用化合物と組み合わせられたポリシアル酸を使用し、他の実施形態は他の治療用化合物なしにポリシアル酸化合物を使用する。

【0068】

別の態様では、ヒト上皮増殖因子受容体（ＨＥＲ）を過剰発現する癌の治療に有用なペプチドＤＮＡ複合体を使用して、向上した治療特性を有するペプチドＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、１種以上のヒト上皮増殖因子受容体（ＨＥＲ）結合ペプチド、リンカーおよび単鎖ポリヌクレオチドを含むペプチド－ポリヌクレオチドキメラを使用して新規なＰＳＡ複合体を形成する。別の態様では、新規な（ＨＥＲ）結合キメラＰＳＡ複合体を癌、特にヒト上皮増殖因子受容体を過剰発現する癌を治療する方法で使用する。新規なＰＳＡ複合体の調製で使用される他の好適なペプチドおよび化合物は、国際公開第２０１７２００７８７号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0069】

別の態様では、癌を治療するための抗菌ペプチドＴＰ４を使用して向上した治療特性を有するペプチドＰＳＡ複合体を調製する。アミノ酸配列Ｆ－Ｉ－Ｈ－Ｈ－Ｉ－Ｉ－Ｇ－Ｇ－Ｌ－Ｆ－Ｓ－Ａ－Ｇ－Ｋ－Ａ－Ｉ－Ｈ－Ｒ－Ｌ－Ｉ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｒ（配列番号５５）またはそのバリアントを有するＴＰ４ペプチドを使用して新規なペプチドＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、本明細書において提供されるＴＰ４ ＰＳＡ複合体を、例えば悪性ＭＤＲ癌、再発性癌または転移性癌すなわちトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む癌を治療する組成物および方法で使用する。新規なＰＳＡ複合体の調製で使用される他の好適なペプチドおよび化合物は、台湾特許出願公開第２０１７２５０４８号として公開されている台湾特許出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0070】

別の態様では、ポロ様キナーゼ１ポロボックスドメインのペプチドおよび模倣体結合作動薬を使用して、向上した治療特性を有するペプチドＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、本明細書において提供されるポロ様キナーゼ１ポロボックスドメインＰＳＡ複合体を、限定されるものではないが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、底細胞癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー、網膜芽細胞腫、胃癌、胃腸腫瘍、神経膠腫、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、膵島細胞腫瘍（膵臓内分泌部）、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、髄芽細胞腫、黒色腫、膵臓癌、前立腺癌、腎癌、直腸癌および甲状腺癌を含む癌を治療する組成物および方法で使用する。この態様に係る新規なＰＳＡ複合体の調製で使用される特定の好適なペプチドおよび化合物は、国際公開第２０１７０８２９２４号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0071】

別の態様では、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）に特異的なタンパク質を使用して向上した治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。特定の実施形態では、ＣＧＲＰに結合するｈＮＧＡＬ突然変異タンパク質を使用して本明細書中のＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、新規なＣＧＲＰ結合ポリペプチドＰＳＡ複合体を、片頭痛および関連疾患の治療などのための治療方法で使用する。この態様に係る新規なＰＳＡ複合体の調製で使用される好適なＣＧＲＰ結合ポリペプチドは、台湾出願公開第２０１７２５２１２号として公開されている台湾出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0072】

別の態様では、虚血および虚血再灌流損傷の治療および／または予防のためのペプチドを使用して向上した治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、本明細書において提供される新規な虚血および虚血再灌流損傷ペプチドＰＳＡ複合体を、虚血および虚血再灌流損傷および関連障害の治療方法で使用する。この態様に係る新規なＰＳＡ複合体の調製で使用される特定のペプチドバリアントおよび化合物は、国際公開第２０１７１１７３８１号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0073】

別の態様では、血液脳関門を横切る免疫グロブリンの送達を支援するためのペプチドを使用して新規なＰＳＡペプチド複合体を形成する。この態様に係る特定の実施形態では、血液脳障壁を横切る免疫グロブリンの送達を支援するためのペプチドは、血液脳関門物質に共有結合的に結合したリンカー部分に共有結合的に結合した免疫グロブリン親和性リガンドを有する。これらの実施形態における好適な血液脳関門物質としては、１つまたは２つの保存的アミノ酸置換を有する配列Ｌ－Ｒ－Ｖ－Ｒ－Ｌ－Ａ－Ｓ－Ｈ－Ｌ－Ｒ－Ｋ－Ｌ－Ｒ－Ｋ－Ｒ－Ｌ－Ｌ－Ｒ－Ｄ－Ａ（配列番号５６）を有するペプチドまたはそのバリアントが挙げられる。この態様に係る新規なＰＳＡ複合体の調製で使用される血液脳障壁を横切る免疫グロブリンの送達を支援するための特定のペプチドは、米国特許出願公開第２０１７００５８０１７Ａ１号として公開されている米国出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0074】

別の態様では、テロメラーゼ転位置のペプチド阻害剤を使用して向上した治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。この態様に係る特定の実施形態では、テロメラーゼ転位置の好適なペプチド阻害剤は、Ｒ－Ｒ－Ｒ－Ｇ－Ｇ－Ｘｊ－Ａ－Ｓ－Ｒ－Ｓ－Ｌ－Ｐ－Ｌ－Ｐ－Ｋ－Ｒ－Ｐ－Ｒ－Ｒまたはそのバリアントを含み、ここではＸｉは、アスパラギン酸（配列番号５７）およびグルタミン酸（配列番号５８）からなる群から選択されるリン酸化模倣残基である。これらの実施形態の別の態様では、化学療法剤を受けている対象における心臓もしくは血管毒性を治療または予防するための組成物および方法であって、心臓もしくは血管毒性が化学療法剤の投与に付随するものである組成物および方法が、テロメラーゼ転位置のペプチド阻害剤にコンジュゲートされた新規なＰＳＡを用いて提供される。この態様に係る新規なＰＳＡ複合体の調製で使用されるテロメラーゼ転位置の特定のペプチド阻害剤は、国際公開第２０１７０４０３０９号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0075】

別の態様では、治療用ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの体細胞または組織への送達のための細胞透過性複合体に関する組成物および方法を使用して、向上した治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。この態様に係る特定の実施形態では、好適な細胞透過性送達複合体は、細胞透過性ペプチド、核局在化シグナル、エフェクター部分および任意にエピトープタグを有し、これらは一緒に本明細書において提供される新規なＰＳＡ複合体を調製するために使用される化合物を形成する。この態様に係る好適な細胞透過性ペプチドとしては、限定されるものではないが、タンパク質形質導入ドメイン、ショウジョウバエアンテナペディア（Ａｎｔｐ）ペプチドおよびポリアルギニン（Ａｒｇ８）ペプチドを含むＨＩＶ ＴＡＴタンパク質またはその断片が挙げられる。別の態様では、これらの新規な複合体を様々な治療薬を送達するための組成物および方法で使用する。この態様に係る細胞透過性複合体は、国際公開第２０１７０４８４６６号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0076】

別の態様では、ＨＩＶ融合タンパク質を標的にするポリペプチドを使用して向上した治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。この態様に係る好適なＨＩＶ融合を標的にするポリペプチドは３つの活性ドメインを含み、ここでは１つのドメインは抗ＣＤ４アドネクチンタンパク質であり、第２のドメインはｇｐ４１結合部分であり、第３のドメインはＨＩＶ融合ペプチド阻害部分である。別の態様では、ＨＩＶ融合タンパク質を標的にするポリペプチドの新規なＰＳＡ複合体を使用してＨＩＶおよび関連するウイルス感染および関連障害を治療する。この態様に係るＨＩＶ融合を標的にするポリペプチドは、国際公開第２０１６１７１９８０号として公開されているＰＣＴ出願により詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0077】

別の態様では、癌細胞に住みつく、分布する、標的にする、方向づけられる、蓄積する、遊走する、および／または結合するペプチドを使用して新規な癌標的ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、癌細胞に住みつく、分布する、標的にする、方向づけられる、蓄積する、遊走する、および／または結合するペプチドのＰＳＡ複合体を、癌および関連障害を治療するための方法および製剤で使用する。特定の実施形態では、本開示のペプチドはオーストラリア特許出願公開第２０１６２８３３９１号に列挙されている配列を含むことができる。複合体のために使用するための他の好適なペプチドは、「治療用ペプチドおよびその使用方法（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｏｆ）」という発明の名称であり、オーストラリア特許出願公開第２０１６２８３３９１（Ａ１）号として公開されているオーストラリア特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0078】

別の態様では、カルボキシル末端ペプチドおよび長時間作用性インターフェロンを使用して新規なＰＳＡ複合体を調製する。好適な新しいカルボキシル末端ペプチドは、アミノ酸配列Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ａ－Ｐ－Ｐ－Ｐ－Ｓ－Ｌ－Ｐ－Ｓ－Ｐ－Ｓ－Ｒ－Ｌ－Ｐ－Ｇ－Ｐ－Ｓ－Ｄ－Ｔ－Ｐ－Ｉ－Ｌ－Ｐ－Ｑ－Ｎ－Ｇ－Ｓ（配列番号５９）またはそのバリアントを有する。ＰＳＡ複合体を調製する際に使用するための他の好適なペプチドとしては、中国特許出願公開第１０６３９７５７０号として公開されている中国特許出願に記載されているものが挙げられ、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0079】

別の態様では、インテグリン結合ペプチドをＰＳＡにコンジュゲートして向上した治療特性を有する新規なインテグリン結合ペプチドＰＳＡ複合体を調製する。この態様の特定の実施形態では、好ましいインテグリン結合ペプチドは、アミノ酸配列ＶＧＤＬＴＹＬＫ（配列番号６０）およびＶＧＤＬＴＹＬＫＫ（配列番号６１）を有する。別の態様では、本明細書において提供される新規なインテグリン結合ペプチドＰＳＡ複合体を、癌、炎症性疾患、自己免疫疾患、慢性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫、放射線誘発肺線維症および慢性創傷性皮膚疾患を含む疾患および障害の治療方法で使用する。特定の実施形態では、本明細書において提供される新規なインテグリン結合ペプチドＰＳＡ複合体を使用して膵臓癌、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、口腔扁平上皮癌を治療する。ＰＳＡにコンジュゲートされる特定のインテグリン結合ペプチドは、国際公開第２０１７２１８５６９号として公開されているＰＣＴ特許出願にさらに記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0080】

別の態様では、好ましくは前記ムラミルペプチドは、ムラミン酸およびアラニン、イソグルタミン、グルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸またはそれらの塩を含むムラミルペプチドに結合することができる抗体、結合タンパク質または抗原結合断片を用いて新規なＰＳＡ複合体を調製する。別の態様では、ムラミルペプチドまたは誘導体もしくは類似体に結合する抗体などの新規なＰＳＡ複合体を、限定されるものではないが、自己免疫疾患または炎症性疾患を治療することを含む治療方法で使用する。ＰＳＡ複合体を調製するのに有用な他の好適な抗体は、米国特許出願公開第２０１７３４２１３６号として公開されている米国特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0081】

別の態様では、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘発リガンド（ＴＲＡＩＬ）を用いて新規なＰＳＡ複合体を調製して、向上した抗腫瘍活性、浸透および他の治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。ＰＳＡ複合体を調製するのに有用な好適なペプチドおよびタンパク質は、米国特許出願公開第２０１７２４７４２７号として公開されている米国特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0082】

別の態様では、エゾアワビの臓器から分離された抗炎症性ペプチドを用いて新規なＰＳＡ複合体を調製して、治療特性を有するＰＳＡ複合体を調製する。特定の態様では、調製される新規なＰＳＡ複合体は、炎症性および免疫系疾患および障害の治療で使用することができる。ＰＳＡ複合体を調製するのに有用な好適なペプチドは、中国特許出願公開第１０５４４０１０号として公開されているＱｉａｎ Ｚｈｏｎｇｊｉによる中国特許出願に詳細に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0083】

別の態様では、ペプチド毒素を用いて新規なＰＳＡ複合体を調製して、向上した治療特性を有するか他の望ましい特性を有する新規な複合体を調製する。ＰＳＡにコンジュゲートするための新規なＰＳＡ－毒素複合体を形成するのに適したペプチド毒素としては、ボツリヌス毒素（ＡおよびＢ）ならびにコノトキシン（例えば、α、δ、κ、μ、ω、ジコノチド、レコノチド（Ｌｅｃｏｎｏｔｉｄｅ）など）が挙げられる。好適なボツリヌス神経毒素は、米国特許第７，７８０，９６７号、米国特許第７，７５８，８７３号、米国特許第９，２２０，７８３号および米国特許第９，５９８，６８５号に記載されており、それら全てが参照により本明細書に組み込まれる。ボツリヌス神経毒素生物活性を決定するための方法は米国特許第９，２１２，３５５号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。通常は魚食性海生巻貝に存在する合成のω－コノトキシンＭＶＩＩＡであることが報告されているレコノチド（ｌｅｃｏｎｏｔｉｄｅ）は、ＰＳＡペプチド複合体を調製するための特に好適なコノトキシンである。ジコノチドはＰＳＡペプチド複合体を調製するための別の特に好適なコノトキシンであり、ＭｃＧｉｖｅｒｎ，Ｊ．，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｄｉｓ．Ｔｒｅａｔ．，２００７，３（Ｉ），６９－８５および米国特許第７，５２４，８１２号に記載されており、それら全てが参照により本明細書に組み込まれる。ＰＳＡ複合体を調製する際に使用するための好適なジコノチドペプチド配列は、配列番号６２（Ｃ－Ｋ－Ｇ－Ｋ－Ｇ－Ａ－Ｋ－Ｃ－Ｓ－Ｒ－Ｌ－Ｍ－Ｙ－Ｄ－Ｃ－Ｃ－Ｔ－Ｇ－Ｓ－Ｃ－Ｒ－Ｓ－Ｇ－Ｋ－Ｃ）およびその類似体を含む。

【0084】

別の態様では、カンナビノイドを用いて新規なＰＳＡ複合体を調製して、治療特性を有するか他の望ましい特性を有するＰＳＡペプチド複合体を調製する。好適なカンナビノイドとしては、限定されるものではないが、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、テトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）、カンナビジオール（ＣＢＤ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビゲロール（ＣＢＧ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビシクロール（ＣＢＬ）、カンナビバリン（ＣＢＶ）、テトラヒドロカンナビバリン（ＴＨＣＶ）、カンナビジバリン（ＣＢＤＶ）、カンナビクロメバリン（ｃａｎｎａｂｉｃｈｒｏｍｅｖａｒｉｎ）（ＣＢＣＶ）、カンナビゲロバリン（ｃａｎｎａｂｉｇｅｒｏｖａｒｉｎ）（ＣＢＧＶ）、カンナビゲロールモノメチルエーテル（ＣＢＧＭ）、カンナビエルソイン（ＣＢＥ）、カンナビシトラン（ｃａｎｎａｂｉｃｉｔｒａｎ）（ＣＢＴ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書において提供されるカンナビノイド－ＰＳＡ複合体は、肥満症、食欲不振、嘔吐、疼痛、神経因性疼痛、多発性硬化症、神経保護、炎症、癌、パーキンソン病、ハンチントン病、トゥレット障害、アルツハイマー病、てんかん、双極性障害、統合失調症、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、鬱病、不安症および不眠症などの病気、疾患または障害を治療する方法で使用される。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＰＳＡ－カンナビノイドを、例えば溶解性を促進するための水および非水性成分（例えば油、脂質および脂肪酸など）を有する実質的に非水性の製剤などとして製剤化する。

【0085】

本実施形態の他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体は疾患の重症度を、例えば少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低下させる。本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体は腫瘍のサイズを、例えば約５％～約１００％、約１０％～約１００％、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、約１０％～約９０％、約２０％～約９０％、約３０％～約９０％、約４０％～約９０％、約５０％～約９０％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約８０％、約３０％～約８０％、約４０％～約８０％、約５０％～約８０％、約６０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約７０％、約３０％～約７０％、約４０％～約７０％または約５０％～約７０％減少させる。

【0086】

本明細書に開示されている医薬組成物は、個体への通常の投与を可能にするのに十分な量でＰＳＡ－タンパク質複合体を含んでもよい。本実施形態の態様では、本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも５５ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも６５ｍｇ、少なくとも７０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも８０ｍｇ、少なくとも８５ｍｇ、少なくとも９０ｍｇ、少なくとも９５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ。少なくとも２００ｍｇ、少なくとも３００ｍｇ、少なくとも４００ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも６００ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも９００ｍｇ、少なくとも１ｇ、少なくとも２ｇ、少なくとも３ｇ、少なくとも４ｇ、少なくとも５ｇ、少なくとも６ｇ、少なくとも７ｇ、少なくとも８ｇ、少なくとも９ｇ、少なくとも１０ｇ、少なくとも１５ｇ、少なくとも２０ｇ、少なくとも２５ｇ、少なくとも５０ｇ、少なくとも１００ｇのＰＳＡ－タンパク質複合体であってもよい。

【0087】

本実施形態の他の態様では、本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも２００ｍｇ、少なくとも３００ｍｇ、少なくとも４００ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも６００ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも９００ｍｇ、少なくとも１ｇ、少なくとも２ｇ、少なくとも３ｇ、少なくとも４ｇ、少なくとも５ｇ、少なくとも６ｇ、少なくとも７ｇ、少なくとも８ｇ、少なくとも９ｇ、少なくとも１０ｇ、少なくとも１５ｇ、少なくとも２０ｇ、少なくとも２５ｇ、少なくとも５０ｇ、少なくとも１００ｇのＰＳＡ－タンパク質複合体であってもよい。本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば約５ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、約５０ｍｇ～約１５０ｍｇ、約１００ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約３５０ｍｇ、約２５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約３５０ｍｇ～約６００ｍｇ、約５００ｍｇ～約７５０ｍｇ、約６００ｍｇ～約９００ｍｇ、約７５０ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約８５０ｍｇ～約１，２００ｍｇ、約２５０ｍｇ～約１０ｇ、約５００ｍｇ～約７．５ｇ、約１ｇ～約５ｇ、約２５０ｍｇ～約２．５ｇ、約５００ｍｇ～約２．５ｇまたは約１，０００ｍｇ～約１，５００ｍｇの範囲であってもよい。本実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば約１０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１０ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約７５０ｍｇ、約１０ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１，５００ｍｇ、約５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約５０ｍｇ～約７５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約５０ｍｇ～約１，５００ｍｇ、約１００ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１００ｍｇ～約５００ｍｇ、約１００ｍｇ～約７５０ｍｇ、約１００ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約１００ｍｇ～約１，５００ｍｇ、約２００ｍｇ～約５００ｍｇ、約２００ｍｇ～約７５０ｍｇ、約２００ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１，５００ｍｇ、約５ｍｇ～約１，５００ｍｇ、約５ｍｇ～約１，０００ｍｇまたは約５ｍｇ～約２５０ｍｇの範囲であってもよい。

【0088】

本明細書に開示されている医薬組成物中の本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の最終濃度は、所望のどんな濃度であってもよい。本実施形態の一態様では、医薬組成物中のＰＳＡ－タンパク質複合体の最終濃度は治療的有効量であってもよい。本実施形態の他の態様では、医薬組成物中のＰＳＡ－タンパク質複合体の最終濃度は、例えば少なくとも０．００００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．０００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．００１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１，０００ｍｇ／ｍＬまたは少なくとも１，２００ｍｇ／ｍＬであってもよい。本実施形態の他の態様では、当該溶液中の本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の濃度は、例えば最大で１，０００ｍｇ／ｍＬ、最大で１，１００ｍｇ／ｍＬ、最大で１，２００ｍｇ／ｍＬ、最大で１，３００ｍｇ／ｍＬ、最大で１，４００ｍｇ／ｍＬ、最大で１，５００ｍｇ／ｍＬ、最大で２，０００ｍｇ／ｍＬ、最大で２，０００ｍｇ／ｍＬまたは最大で３，０００ｍｇ／ｍＬであってもよい。本実施形態の他の態様では、医薬組成物中のＰＳＡ－タンパク質複合体の最終濃度は、例えば約０．００００１ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約０．０００１ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約７５０ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約１，０００ｍｇ／ｍＬ～約３，０００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２，０００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約２，０００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約２，０００ｍｇ／ｍＬ、約７５０ｍｇ／ｍＬ～約２，０００ｍｇ／ｍＬ、約１，０００ｍｇ／ｍＬ～約２，０００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１，５００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約１，５００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約１，５００ｍｇ／ｍＬ、約７５０ｍｇ／ｍＬ～約１，５００ｍｇ／ｍＬ、約１，０００ｍｇ／ｍＬ～約１，５００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１，２００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約１，２００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約１，２００ｍｇ／ｍＬ、約７５０ｍｇ／ｍＬ～約１，２００ｍｇ／ｍＬ、約１，０００ｍｇ／ｍＬ～約１，２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約７５０ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約７５０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約７５０ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約７５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約０．００００１ｍｇ／ｍＬ～約０．０００１ｍｇ／ｍＬ、約０．００００１ｍｇ／ｍＬ～約０．００１ｍｇ／ｍＬ、約０．００００１ｍｇ／ｍＬ～約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．００００１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．００００１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬ、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬ、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬまたは約０．００１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲であってもよい。

【0089】

本明細書の態様は部分的に、疾患に罹患している個体を治療することを開示している。本明細書で使用される「治療する」という用語は、個体における疾患の臨床的症状を減少または除去すること、あるいは個体における疾患の臨床的症状の発症を遅らせるまたは予防することを指す。例えば「治療する」という用語は、病気の症状または疾患の重症度を例えば少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも１００％低下させることを意味することができる。当業者であれば、特定の疾患に関連づけられた適当な症状または指標を知っており、個体がＰＳＡ－タンパク質複合体による本明細書に開示されている治療のための候補であるか否かを決定する方法を知っている。

【0090】

本実施形態の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、疾患に伴う症状を例えば少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも１００％減少させる。本実施形態の他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、疾患に伴う症状を例えば最大で１０％、最大で１５％、最大で２０％、最大で２５％、最大で３０％、最大で３５％、最大で４０％、最大で４５％、最大で５０％、最大で５５％、最大で６０％、最大で６５％、最大で７０％、最大で７５％、最大で８０％、最大で８５％、最大で９０％、最大で９５％または最大で１００％減少させる。本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、疾患に伴う症状を例えば約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％または約３０％～約５０％減少させる。

【0091】

本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は一般に、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。本実施形態の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の有効量は、例えば少なくとも０．００１ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも５．０ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも３５ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ／日、少なくとも４５ｍｇ／ｋｇ／日または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。本実施形態の他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の有効量は、例えば約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約３０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約３５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約４０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約４５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約７５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の有効量は、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約３０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約３５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約４０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約４５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約７５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。本実施形態のさらに他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の有効量は、例えば約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約３０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約３５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約４０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約４５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約７５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。

【0092】

本実施形態の他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の有効量は、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約３０ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約３５ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約４０ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約４５ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日～約７５ｍｇ／ｋｇ／日または約１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の有効量は、例えば約５ｍｇ／ｋｇ／日～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約３０ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約３５ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約４０ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約４５ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日～約７５ｍｇ／ｋｇ／日または約５ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。

【0093】

液体および半固体製剤中の本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の濃度は、典型的に約５０ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬであってもよい。本実施形態の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、例えば約５０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約４００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約６００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約４００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約６００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約４００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約６００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約４００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約６００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約４００ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約４００ｍｇ／ｍＬ～約６００ｍｇ／ｍＬ、約４００ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約４００ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約４００ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬ、約４００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約６００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬ、約６００ｍｇ／ｍＬ～約７００ｍｇ／ｍＬ、約６００ｍｇ／ｍＬ～約８００ｍｇ／ｍＬ、約６００ｍｇ／ｍＬ～約９００ｍｇ／ｍＬまたは約６００ｍｇ／ｍＬ～約１，０００ｍｇ／ｍＬであってもよい。

【0094】

投与は単回投与または累積（連続投与）であってもよく、当業者によって容易に決定することができる。例えば、疾患の治療は本明細書に開示されている医薬組成物の有効用量の１回投与を含んでもよい。あるいは疾患の治療は、例えば１日１回、１日２回、１日３回、数日に１回または１週間に１回などの様々な時間間隔にわたって行われる医薬組成物の有効用量の複数回投与を含んでもよい。投与のタイミングは、個体の症状の重症度などの因子に応じて個体ごとに異なってもよい。例えば本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体を含む医薬組成物の有効用量は不確定期間にわたって、あるいは個体がもはや治療法を必要としなくなるまで個体に１日１回投与することができる。当業者であれば、個体の状態を治療過程を通して監視することができること、および投与される本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体を含む医薬組成物の有効量をそれに応じて調整することができることを認識しているであろう。

【0095】

一実施形態では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体は、同じ治療を受けていない患者と比較した場合に、癌に罹患している個体における疾患の重症度を例えば少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低下させることができる。本実施形態の他の態様では、ＰＳＡ－タンパク質複合体は、同じ治療を受けていない患者と比較した場合に、癌に罹患している個体における疾患の重症度を例えば約１０％～約１００％、約２０％～約１００％、約３０％～約１００％、約４０％～約１００％、約５０％～約１００％、約６０％～約１００％、約７０％～約１００％、約８０％～約１００％、約１０％～約９０％、約２０％～約９０％、約３０％～約９０％、約４０％～約９０％、約５０％～約９０％、約６０％～約９０％、約７０％～約９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約８０％、約３０％～約８０％、約４０％～約８０％、約５０％～約８０％または約６０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約７０％、約３０％～約７０％、約４０％～約７０％または約５０％～約７０％低下させることができる。

【0096】

さらなる実施形態では、ＰＳＡ－タンパク質複合体およびその誘導体は、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月またはそれ以上の半減期を有する。

【0097】

一実施形態では、ＰＳＡ－タンパク質複合体の投与期間は、１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月またはそれ以上である。さらなる実施形態では、投与を停止する期間は、１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月またはそれ以上である。

【0098】

本実施形態の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、個体における疾患の重症度を例えば少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも１００％低下させるか維持する。本実施形態の他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、個体における疾患の重症度を例えば最大で１０％、最大で１５％、最大で２０％、最大で２５％、最大で３０％、最大で３５％、最大で４０％、最大で４５％、最大で５０％、最大で５５％、最大で６０％、最大で６５％、最大で７０％、最大で７５％、最大で８０％、最大で８５％、最大で９０％、最大で９５％または最大で１００％低下させるか維持する。本実施形態のなお他の態様では、本明細書に開示されているＰＳＡ－タンパク質複合体の治療的有効量は、個体における疾患の重症度を例えば約１０％～約１００％、約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約２０％～約１００％、約２０％～約９０％、約２０％～約８０％、約２０％～約２０％、約２０％～約６０％、約２０％～約５０％、約２０％～約４０％、約３０％～約１００％、約３０％～約９０％、約３０％～約８０％、約３０％～約７０％、約３０％～約６０％または約３０％～約５０％低下させるか維持する。

【0099】

医薬組成物またはＰＳＡ－タンパク質複合体は個体に投与する。個体は典型的には人間であるが、限定されるものではないが、飼い慣らされているか否かに関わらずイヌ、ネコ、トリ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、爬虫類および他の動物を含む動物であってもよい。典型的には、治療のための候補であるあらゆる個体は、疾患が良性または悪性であるかに関わらず個体が罹患している疾患のためのいくつかの形態の治療法による候補である。癌に関しては、最も一般的な種類の癌としては、限定されるものではないが、膀胱癌、乳癌、結腸および直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、胃癌および甲状腺癌が挙げられる。術前評価は典型的には処置の全ての関連するリスクおよび利点を開示する徹底的なインフォームド・コンセントに加えて、日常的な病歴および身体検査を含む。

【0100】

ガングリオシド
本発明の実施形態では、ガングリオシドを水溶性ポリマー、例えばＰＥＧまたはＰＳＡまたはｍＰＳＡにコンジュゲートする。ガングリオシドは、細胞認識および細胞間コミュニケーションにおいて機能することができる特徴的な表面マーカーを細胞に提供することが知られている。それらは治療薬として有用である。

【0101】

本発明の複合体はガングリオシドおよび水溶性ポリマーを含んでいてもよく、ガングリオシドは、１つ以上のシアル酸が糖鎖上に結合されているスフィンゴ糖脂質（セラミドおよびオリゴ糖）を含む。ガングリオシドは、いくつのシアル酸単位が分子上に存在するかに従って分類することができる。ガングリオシドの例はＧＭ１、ＧＭ２およびＧＭ３（モノシアロガングリオシド）、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂ、ＧＤ２およびＧＤ３（ジシアロガングリオシド）、ＧＴ１ｂ（トリシアロガングリオシド）およびＧＱ１（テトラシアロガングリオシド）である。

【0102】

本発明での使用のために、好ましいガングリオシドは、グルコースに結合されたセラミドであって、このグルコースが第１のガラクトースに結合され、これがＮ－アセチルガラクトサミンに結合され、これが第２のガラクトースに結合されているセラミドを含む。この第２のガラクトースは１つのシアル酸に結合させることができる。第１のガラクトースは１つ、２つ、３つまたは４つのシアル酸に結合させることができる。シアル酸は、モノマー（ガラクトース分子のそれぞれの上に１つ）またはオリゴシアル酸（２－４シアル酸）のいずれかとして第１のガラクトースに結合されていてもよい。

【0103】

投与した場合に、治療用ガングリオシドは長期間にわたって血中を循環する必要がある。標的組織に対するそれらの作用がより有効になるように、ガングリオシドを例えば本発明の方法によってポリシアル酸化させることができる。

【0104】

薬物送達システム
本発明のさらなる実施形態では、薬物送達システムを水溶性ポリマー、例えばＰＥＧまたはＰＳＡまたはｍＰＳＡにコンジュゲートする。一般に、薬物送達システム（ＤＤＳ）はあらゆる分子もしくは粒子状実体であり、これはそのような実体に会合された薬物の運命および効果を制御することができる。ＤＤＳは２つの一般的な種類に分けることができる。第１の種類は、高分子（ＭＤＤＳ）、例えば抗体、新糖タンパク質ならびにポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド）、ポリリジンおよび重合されたシアノアクリル酸アルキルなどの合成ポリマーを含む。薬物を所望の部位に向けるためのモノクローナル抗体を含む様々な高分子担体との薬物の会合は、例えばＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓによってＮａｔｕｒｅ ２６５，４０７－４１１（１９７７）に記載されている。第２の種類は粒子状ＤＤＳ（ＰＤＤＳ）であり、これは例えばナノ球体またはマイクロスフェアを含み、これはアルブミンなどの生分解性材料またはデキストランおよびシアノアクリル酸アルキルポリマーなどの半生分解性材料、あるいは非イオン性界面活性剤またはリポソームから形成されたベシクルを含み、その詳細については、例えばＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓのＮＩＰＳ，４，１４６－１５１（１９８９）を参照されたい。

【0105】

薬物は、ＤＤＳに共有結合的に結合させるかその中に受動的に封入させることができる。例えば、界面活性剤ベシクルまたはリポソームを含むＰＤＤＳは、界面活性剤または脂質分子の層の適当な組み合わせから形成されることで、親水性もしくは疎水性の薬学的に活性な化合物を封入してもよい。薬学的に活性な化合物は通常、結合によってＭＤＤＳに共有結合的に結合されており、この結合は例えば活性化合物がその機能を行う前後に体内で溶解されても溶解されなくもよい。

【0106】

ＭＤＤＳの多くは、その表面にある受容体を介して標的細胞または組織によって認識される内因性（例えば抗体）または獲得性（例えば新糖タンパク質）能力を有する。典型的には、そのようなＤＤＳは注射すると標的によって特異的に取り込まれる。しかし特異的な取込みは、他の（治療法にとって）無関係な組織によって取り込まれる大量のＤＤＳにより制限される。この理由は、抗体および他のＤＤＳタンパク質（標的に対するそれらの特異性とは無関係）が他のタンパク質のように、それらの生物学的寿命の終了時に異化されなければならないからである。

【0107】

高分子型ＭＤＤＳ中に使用される合成ポリマーは、例えばポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド）ポリリジンおよび重合されたシアノアクリル酸アルキルである。これらは適当なリソゾーム酵素によって細網内皮系（ＲＥＳ）または他の組織において異化される場合がある。いくつかの手段によって、例えばＲＥＳまたは他の組織によるＤＤＳの取込みを減少させることによって、あるいはＲＥＳによって取り込まれたらリソゾーム酵素による分解を減少させることにより、そのような生分解性高分子型ＤＤＳの異化作用の速度を低下させることが望ましい。

【0108】

粒子状ＤＤＳ（ＰＤＤＳ）は原則として、ＲＥＳによって循環から除去される。ＲＥＳのそれらの性向により、ＰＤＤＳは、これらの組織への薬物の送達のために使用されることが多い。但し多くの場合、ＰＤＤＳはＲＥＳの組織以外の組織に向けられることが望ましい。この目標を達成するために、ＰＤＤＳのＲＥＳ妨害を阻止するか遅らせなければならない。

【0109】

本発明に使用するためのＤＤＳは最初にグリコンを含んでいなくてもよい。１つの選択肢はグリコンをＤＤＳ構造の中に追加するかそれ以外の方法で組み込むことである。そのような場合の例は、マンノシル化またはガラクトシル化脂質を組み込んでいるリポソームである。これらの糖リポソームは、活性体をそれぞれマンノースもしくはガラクトース受容体を発現している組織に向ける。

【0110】

例えば、（肝臓の実質細胞と同様に）標的組織による取込みがより有効になるように、ＤＤＳが長期間にわたって血中を循環する必要がある場合、それらは有利には本発明の方法によってポリシアル酸化される。

【0111】

一実施形態では、本明細書に開示されている医薬組成物は、有効成分の薬学的に許容される組成物内への処理を容易する薬学的に許容される担体を任意に含んでいてもよい。本明細書で使用される「薬理学的に許容される担体」という用語は「薬理学的担体」と同義であり、投与された場合に実質的に長期間または恒常的有害作用を有しないあらゆる担体を意味し、かつ「薬理学的に許容される媒体、安定化剤、希釈液、添加剤、補助剤または賦形剤」などの用語を包含する。そのような担体は一般に活性化合物と混合されるか、活性化合物を希釈または封入することができ、かつ固体、半固体もしくは液体薬剤であってもよい。当然ながら有効成分は可溶性であってもよく、あるいは所望の担体または希釈液中の懸濁液として送達することができる。限定されるものではないが、水、生理食塩水、グリシンおよびヒアルロン酸などの水性媒体、限定されるものではないが、マンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石、セルロース、グルコース、スクロースおよび炭酸マグネシウムなどの固体担体、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤またはあらゆる他の不活性成分を含む、様々な薬学的に許容される担体のいずれを使用することができるが、これらに限定されるものではない。薬理学的に許容される担体の選択は投与様式によって決まってもよい。いずれかの薬理学的に許容される担体が有効成分と適合しない場合を除いて、薬学的に許容される組成物におけるその使用が意図されている。そのような医薬担体の特定の使用の非限定的な例は、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（医薬剤形および薬物送達システム）」（Ｈｏｗａｒｄ Ｃ．Ａｎｓｅｌら編，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，第７版．１９９９）；「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（レミントン：科学および薬学の実務）」（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，第２０版．２０００）；「Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎの治療における薬理学の基本）（Ｊｏｅｌ Ｇ．Ｈａｒｄｍａｎら編，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ，第１０版．２００１）；および「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（医薬賦形剤のハンドブック）」（Ｒａｙｍｏｎｄ Ｃ．Ｒｏｗｅら，ＡＰｈＡ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，第４版 ２００３）に記載されている。これらのプロトコルは常法であり、あらゆる改訂版が当業者の範囲内であり、かつ本明細書における教示の一部をなす。

【0112】

一実施形態では、本明細書に開示されている医薬組成物は、限定されるものではないが緩衝液、防腐剤、等張化剤、塩、抗酸化剤、オスモル濃度調整剤、生理的物質、薬理学的物質、増量剤、乳化剤、湿潤剤、着香料および着色料などを含む、限定されるものではないが他の薬学的に許容される成分（または医薬成分）を任意に含んでいてもよいが、これらに。一実施形態では、得られる製剤が薬学的に許容される限り、様々な緩衝液およびｐＨ調整手段を使用して本明細書に開示されている医薬組成物を調製することができる。そのような緩衝液としては、限定されるものではないが、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水およびホウ酸緩衝液が挙げられる。当然ながら、酸または塩基を使用して必要に応じて組成物のｐＨを調整することができる。一実施形態では、薬学的に許容される抗酸化剤としては、限定されるものではないが、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチルヒドロキシアニソールおよびブチルヒドロキシトルエンが挙げられる。有用な防腐剤としては、限定されるものではないが、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、安定化オキシクロロ組成物ならびに例えばＤＴＰＡまたはＤＴＰＡビスアミド、カルシウムＤＴＰＡおよびＣａＮａＤＴＰＡビスアミドなどのキレート剤が挙げられる。一実施形態では、医薬組成物において有用な等張化剤は、限定されるものではないが、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの塩、マンニトールまたはグリセリンおよび他の薬学的に許容される等張化剤が挙げられる。一実施形態では、本医薬組成物は塩として提供してもよく、限定されるものではないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などを含む多くの酸と共に形成することができる。塩は対応する遊離塩基形態よりも水性もしくは他のプロトン性溶媒により可溶性である傾向がある。当然ながら、薬理学の技術分野で知られているこれらおよび他の物質を医薬組成物に含めることができる。

【0113】

一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物（例えばＰＳＡ－タンパク質複合体）またはそのような治療用化合物を含む組成物は、局所、腸内もしくは非経口投与経路を用いる局所もしくは全身送達のいずれかのために製剤化してもよい。さらなる実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物はそれ自体を医薬組成物として製剤化してもよく、あるいは単一の医薬組成物として本明細書に開示されている１種以上の他の治療用化合物と共に製剤化してもよい。

【0114】

一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物または組成物製剤において、そのような治療用化合物を吸入製剤に調製してもよい。一実施形態では、腸内もしくは非経口投与に適した吸入製剤としては、限定されるものではないが、エアロゾル、乾燥粉末が挙げられる。さらなる実施形態では、そのような投与を目的とした本明細書に開示されている治療用化合物または組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野に公知のあらゆる方法に従って調製してもよい。

【0115】

一実施形態では、そのような吸入剤形において、当該治療用化合物を加圧式（ＰＤＩ）または他の定量噴霧式吸入器（ＭＤＩ）に使用するための液体噴射剤中のエアロゾルとして送達するために調製してもよい。一実施形態では、ＰＤＩまたはＭＤＩに使用するのに適した噴射剤としては、限定されるものではないが、ＣＦＣ－１２、ＨＦＡ－１３４ａ、ＨＦＡ－２２７、ＨＣＦＣ－２２（ジフルオロクロロメタン）、ＨＦＡ－１５２（ジフルオロエタンおよびイソブタン）が挙げられる。また一実施形態では、治療用化合物をネブライザーまたは他のエアロゾル送達システムを用いて送達してもよい。一実施形態では、治療用化合物を乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）に使用するための乾燥粉末として送達するために調製してもよい。一実施形態では、吸入器に使用するための乾燥粉末は通常、１００ｐｍ、９０ｐｍ、８０ｐｍ、７０ｐｍ、６０ｐｍ、５０ｐｍ、４０ｐｍ、３０ｐｍ、２０ｐｍおよび１０ｐｍ未満の質量中央空気動力学径を有する。一実施形態では、約５ｐｍ～約０．５ｐｍの範囲の空気動力学径を有する微小粒子は一般に呼吸細気管支に蓄積され、約２ｐｍ～約０．０５ｐｍの範囲の空気動力学径を有するより小さい粒子は肺胞に蓄積される可能性が高い。一実施形態では、ＤＰＩは受動的送達機序であってもよく、これは粒子を肺に導入するための個体の吸息、すなわち能動的送達機序に依存し、粉末を個体に送達するための機序を必要とする。一実施形態では、吸入製剤のための本明細書に開示されている治療用化合物の治療的有効量は、約０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であってもよい。また一実施形態では、吸入製剤中の吸入製剤のための本明細書に開示されている治療用化合物の治療的有効量は、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であってもよい。

【0116】

一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物またはそのような治療用化合物を含む組成物は固体製剤に調製してもよい。一実施形態では、腸内もしくは非経口投与に適した固体製剤としては、限定されるものではないが、カプセル、錠剤、丸剤、トローチ、ロゼンジ、経口溶解ストリップ、吸入または無菌注射溶液もしくは分散液への再構成に適した粉末および顆粒が挙げられる。一実施形態では、上記製剤のそれぞれとしては、限定されるものではないが、即時放出製剤、徐放製剤（限定されるものではないが、ワックスマトリックスが挙げられる）、ビーズ製剤（限定されるものではないが、あるビーズが放出した直後に、より後の時間で別のビーズが放出するダブルビーズ製剤が挙げられる）、球状経口薬物吸収システム（「ＳＯＤＡＳ」）、浸透圧経口放出システム（「ＯＲＯＳ」）、咀嚼錠、パッチ（限定されるものではないが、送達最適化熱力学（「ＤＯＴ」）が挙げられる）、スプリンクル製剤またはプロドラッグを挙げることができる。一実施形態では、そのような投与を目的とした本明細書に開示されている治療用化合物または組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野に公知のあらゆる方法に従って調製してもよい。一実施形態では、そのような固体剤形において当該治療用化合物を、（ａ）限定されるものではないが、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１種の不活性な通常の賦形剤（または担体）、または（ｂ）例えば限定されるものではないが、澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、イソマルトおよびケイ酸などの充填剤または増量剤、（ｃ）限定されるものではないが、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシアなどの結合剤、（ｄ）例えばグリセロールなどの湿潤剤、（ｅ）限定されるものではないが、寒天、炭酸カルシウム、コーンスターチ、ジャガイモ澱粉、タピオカ澱粉、アルギン酸、特定のケイ酸塩および炭酸ナトリウム複合体などの崩壊剤、（ｆ）限定されるものではないが、パラフィンなどの溶解遅延剤、（ｇ）限定されるものではないが、第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（ｈ）限定されるものではないが、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、（ｉ）限定されるものではないが、カオリンおよびベントナイトなどの吸着剤、（ｊ）限定されるものではないが、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムまたはそれらの混合物などの滑沢剤および（ｋ）緩衝剤と混合してもよいが、これらに限定されない。一実施形態では、錠剤はコーティングされていなくてもよく、あるいは胃腸管における崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたって持続的作用を与えるために公知の技術によってコーティングされていてもよい。さらなる実施形態では、限定されるものではないが、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を用いてもよい。一実施形態では、固体製剤中の本明細書に開示されている治療用化合物の治療的有効量は典型的には、約０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であってもよい。

【0117】

一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物またはそのような治療用化合物を含む組成物は、半固体製剤に調製してもよい。一実施形態では、局所投与に適した半固体製剤としては、限定されるものではないが、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、クリーム、軟膏（ｓａｌｖｅ）およびジェルが挙げられる。一実施形態では、そのような投与を目的とした本明細書に開示されている治療用化合物または組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野に公知のあらゆる方法に従って調製してもよい。一実施形態では、半固体製剤中の本明細書に開示されている治療用化合物の治療的有効量は典型的には、約０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であってもよい。また一実施形態では、半固体製剤中の本明細書に開示されている治療用化合物の治療的有効量は典型的には、約０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であってもよい。

【0118】

一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物またはそのような治療用化合物を含む組成物は、液体製剤に調製してもよい。一実施形態では、腸内もしくは非経口投与に適した液体製剤としては、限定されるものではないが、溶液、シロップ、エリキシル剤、分散液、乳濁液および懸濁液が挙げられる。一実施形態では、そのような投与を目的とした本明細書に開示されている治療用化合物または組成物は、限定されるものではないが、医薬組成物の製造のための当該技術分野に公知のあらゆる方法に従って調製してもよい。一実施形態では、そのような液体剤形において本明細書に開示されている治療用化合物または組成物を、限定されるものではないが、（ａ）好適な水性および非水性担体、（ｂ）希釈液、（ｃ）限定されるものではないが水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、限定されるものではないが菜種油およびオリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルなどの溶媒、および／または限定されるものではないが界面活性剤またはレシチンのようなコーティング剤などの流動化剤と混合してもよい。分散液および懸濁液の場合、特定の粒径を維持することにより流動性を制御することもできる。一実施形態では、液体製剤中の本明細書に開示されている治療用化合物の治療的有効量は典型的には、約０．０００１％（ｗ／ｖ）～約９０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約８０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約７０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約６０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約５０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約４０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、０．０００１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）、０．００１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約９０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約８０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約７０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約６０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約５０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約４０．０％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約３０．０％（ｗ／ｖ）約０．０１％（ｗ／ｖ）～約２０．０％（ｗ／ｖ）または約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１０．０％（ｗ／ｖ）であってもよい。

【0119】

一実施形態では、シロップおよびエリキシル剤は、限定されるものではないが、甘味料、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースを用いて製剤化してもよい。さらなる実施形態では、そのような製剤は限定されるものではないが、粘滑剤、防腐剤、着香料および着色料も含有していてもよい。

【0120】

一実施形態では、液体懸濁液は、限定されるものではないが本明細書に開示されている治療用化合物を水性懸濁液の製造に適した賦形剤を含む混合物に懸濁させることにより製剤化してもよい。一実施形態では、そのような賦形剤は、例えば限定されるものではないが、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、天然ガム、寒天、トラガカントガムおよびアラビアガムのための懸濁化剤であり、分散剤または湿潤剤は天然に生じるリン脂質、例えばレシチンまたはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば限定されるものではないがステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば限定されるものではないがヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸から誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えば限定されるものではないがモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってもよい。

【0121】

一実施形態では、油性懸濁液は、本明細書に開示されている治療用化合物を（ａ）限定されるものではないが、扁桃油、落花生油（ａｒａｃｈｉｓ ｏｉｌ）、アボカド油、キャノーラ油、ヒマシ油、ヤシ油、トウモロコシ油、綿実油、グレープシードオイル、ヘーゼルナッツ油、ヘンプオイル、亜麻仁油、オリーブ油、パーム油、落花生油（ｐｅａｎｕｔ ｏｉｌ）、菜種油、米糠油、サフラワー油、胡麻油、大豆油（ｓｏｙｂｅａｎ ｏｉｌ）、大豆油（ｓｏｙａ ｏｉｌ）、ヒマワリ油、クルミ油、麦芽油またはそれらの組み合わせなどの植物油、（ｂ）限定されるものではないが、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸またはそれらの組み合わせなどの飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸またはそれらの組み合わせ、（ｃ）限定されるものではないが、液体パラフィンなどの鉱油、（ｄ）界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）または界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）を含む混合物に懸濁させることにより製剤化してもよい。一実施形態では、油性懸濁液は増粘剤、例えば蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含有していてもよい。一実施形態では、上に記載されている甘味料および着香料を添加して味のよい経口製剤を提供してもよい。一実施形態では、これらの組成物はアスコルビン酸などの抗酸化剤の添加により保存されていてもよい。

【0122】

一実施形態では、水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種以上の防腐剤を含む混合物中で組み合わせられた治療用化合物を提供する。

【0123】

一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物は水中油型乳濁液の形態であってもよい。一実施形態では、油相は本明細書に開示されている植物油または本明細書に開示されている鉱油またはそれらの混合物であってもよい。さらなる実施形態では、好適な乳化剤は、限定されるものではないが、アラビアガムまたはトラガカントガムなどの天然に生じるゴム、天然に生じるリン脂質、例えばダイズ、レシチン、脂肪酸とヘキシトール無水物とから誘導されたエステルまたは部分エステル、例えば限定されるものではないがモノオレイン酸ソルビタン、および前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってもよい。

【0124】

また一実施形態では、本明細書に開示されている治療用化合物またはそのような治療用化合物を含む組成物は、時間をかけた制御放出プロファイルを達成するために薬物送達プラットフォームに組み込まれていてもよい。一実施形態では、そのような薬物送達プラットフォームは、ポリマーマトリックス、典型的には限定されるものではないが、生分解性、生体内分解性および／または生体吸収性ポリマーマトリックス内に分散された本明細書に開示されている治療用化合物を含む。一実施形態では、本明細書で使用される「ポリマー」という用語は、合成のホモポリマーまたはコポリマー、天然に生じるホモポリマーまたはコポリマーならびに限定されるものではないが、直鎖状、分岐鎖状または星形構造を有するその合成的修飾または誘導体を指す。一実施形態ではコポリマーは、限定されるものではないが、ランダム、ブロック、セグメント化、テーパードブロック、グラフトまたはトリブロックなどの任意の形態で配置させることができる。一実施形態では、ポリマーは一般に縮合ポリマーである。一実施形態では、ポリマーは、架橋剤を導入するか側鎖残基の疎水性を変えることによりそれらの機械的特性または分解特性を向上させるためにさらに修飾することができる。一実施形態では、架橋結合されている場合には、ポリマーは通常７５％、６５％、５５％、４５％、３５％、２５％、１５％または５％未満で架橋結合されており、通常は１％未満で架橋結合されている。

【0125】

一実施形態では、好適なポリマーとしては、限定されるものではないが、アルギン酸塩、脂肪族ポリエステル、ポリアルキレンオキサレート、ポリアミド、ポリアミドエステル、ポリ無水物、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシ脂肪族カルボン酸、ポリオルトエステル、ポリオキサエステル、ポリペプチド、ポリホスファゼン、多糖およびポリウレタンが挙げられる。一実施形態では、ポリマーは通常、少なくとも約１０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約２０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約３０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約４０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約５０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約６０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約７０％（ｗ／ｗ）、少なくとも約８０％（ｗ／ｗ）または少なくとも約９０％（ｗ／ｗ）の薬物送達プラットフォームを含む。一実施形態では、生分解性、生体内分解性および／または生体吸収性ポリマーおよび薬物送達プラットフォームを調製するのに有用な方法の例は限定されるものではないが、例えばＤｒｏｓｔ，制御放出製剤（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ），米国特許第４，７５６，９１１号；Ｓｍｉｔｈら，徐放薬物送達装置（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｄｅｖｉｃｅｓ），米国特許第５，３７８，４７５号；ＷｏｎｇおよびＫｏｃｈｉｎｋｅ，親水性および疎水性薬剤を組み合わせることによる薬物の制御放出のための製剤（Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｂｙ Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ Ｈｙｒｏｐｈｉｌｉｃ ａｎｄ Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ Ａｇｅｎｔｓ），米国特許７，０４８，９４６；Ｈｕｇｈｅｓら，眼の局所治療法のための組成物および方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌｉｚｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｙｅ），米国特許出願公開第２００５／０１８１０１７号；Ｈｕｇｈｅｓ，降圧脂質含有生分解性眼内インプラントおよび関連する方法（Ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ Ｌｉｐｉｄ－Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ Ｉｍｐｌａｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ），米国特許出願公開第２００５／０２４４４４号；Ａｌｔｍａｎら，絹フィブロインヒドロゲルおよびその使用（Ｓｉｌｋ Ｆｉｂｒｏｉｎ Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ），米国特許出願公開第２０１１／０００８４３７号に記載されており、そのそれぞれの内容全体が参照により組み込まれる。

【0126】

一実施形態では、マトリックスを含むポリマーは、限定されるものではないが、絹フィブロイン、ケラチンまたはコラーゲンなどのポリペプチドである。さらなる実施形態では、マトリックスを含むポリマーは、限定されるものではないが、セルロース、アガロース、エラスチン、キトサン、キチンまたはグリコサミノグリカン様コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸またはヒアルロン酸などの多糖である。さらに別の実施形態では、マトリックスを含むポリマーは、限定されるものではないが、Ｄ－乳酸、Ｌ－乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、カプロラクトンおよびそれらの組み合わせなどのポリエステルである。

【0127】

当業者は、好適な開示されている薬物送達プラットフォームを形成するのに適したポリマーの選択はいくつかの因子によって決まることを理解している。適当なポリマーの選択におけるより関連する因子は、限定されるものではないが、ポリマーの薬物との適合性、所望の薬物放出速度、埋め込み部位におけるプラットフォームの所望の生分解速度、埋め込み部位におけるプラットフォームの所望の生体内分解速度、埋め込み部位におけるプラットフォームの所望の生体吸収速度、プラットフォームのインビボでの機械的性能、処理温度、プラットフォームの生体適合性および患者忍容性が挙げられる。限定されるものではないがポリマーのインビトロおよびインビボ挙動をある程度決める他の関連する因子としては、化学的組成、成分の空間分布、ポリマーの分子量および結晶化度が挙げられる。

【0128】

投与
一実施形態では本発明のコンジュゲートされた化合物は、静脈内、筋肉内または腹膜内注射などの注射によって投与してもよい。本組成物は治療用、診断用および／または同様の薬剤として有用であり得る。

【0129】

本発明のコンジュゲートされた化合物を含む組成物をヒトもしくは試験動物に投与するために、一態様では、本組成物は１種以上の薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に」または「薬理学的に許容される」という用語は、以下に記載するように凝集および切断生成物などのタンパク質分解を阻害し、かつまた当該技術分野でよく知られている経路を用いて投与した場合にアレルギーまたは他の有害反応を生じさせない安定な分子実体および組成物を指す。「薬学的に許容される担体」としては、上に開示されている薬剤を含むありとあらゆる臨床的に有用な溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。

【0130】

本明細書で使用される「有効量」は、臨床的に定義されている障害を有する哺乳類を治療するのに適した用量を含む。

【0131】

本組成物は経口、局所、経皮、非経口、吸入スプレー、膣内、直腸内または頭蓋内注射により投与してもよい。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、槽内注射または注入技術を含む。特定の部位における静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹膜内、クモ膜下腔内、球後、肺内注射投与および／または外科移植も意図されている。一般に組成物は発熱物質ならびにレシピエントに有害であり得る他の不純物を本質的に含まない。

【0132】

本組成物の単回もしくは複数回投与は、治療する医師によって選択される用量レベルおよびパターンにより行うことができる。疾患の予防または治療のための適当な投与量は、上記のとおり治療される疾患の種類、疾患の重症度および経過、薬物が予防もしくは治療目的のどちらのために投与されるか、過去の治療法、患者の病歴および薬物に対する応答および担当医の指示によって決まる。

【0133】

本発明は、有効量の本明細書に定義されているコンジュゲートされた化合物またはタンパク質を含む医薬組成物にも関する。本医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈液、塩、緩衝液または賦形剤をさらに含んでいてもよい。本医薬組成物は、臨床的に定義されている障害を治療するために使用することができる。本発明の医薬組成物は溶液または凍結乾燥した製品であってもよい。本医薬組成物の溶液を任意の好適な凍結乾燥プロセスに供してもよい。

【0134】

さらなる態様としては、本発明は、対象への投与のためのその使用を容易にするような方法で包装された本発明の組成物を含むキットを含む。一実施形態では、そのようなキットは、本方法を実施する際の化合物または組成物の使用について記載しているラベルが容器に貼り付けられているかパッケージに含まれている状態で密閉瓶もしくは容器などの入れ物に包装された本明細書に記載されている化合物または組成物（例えば、コンジュゲートされたタンパクを含む組成物）を含む。一実施形態では、本キットは、コンジュゲートされたタンパクを含む組成物を有する第１の容器と、第１の容器中の組成物のための生理学的に許容される再構成溶液を有する第２の容器とを含む。一態様では、本化合物または組成物は単位剤形で包装されている。本キットは特定の投与経路に従って本組成物を投与するのに適した装置をさらに含んでいてもよい。好ましくは、本キットは治療用タンパク質またはペプチド組成物の使用について記載しているラベルを含む。

【0135】

一実施形態では、誘導体は未変性の治療用化合物の完全な機能的活性を保持しており、未変性の治療用化合物と比較してインビボにおいて引き延ばされた半減期を提供する。別の実施形態では、誘導体は、未変性の化合物に対して少なくとも２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２００または５００パーセント（％）の生物活性を保持している。

【0136】

一実施形態では、薬物送達プラットフォームは、徐放（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）薬物送達プラットフォームおよび徐放（ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）薬物送達プラットフォームの両方を含む。一実施形態では、「徐放（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）」という用語は、約７日間またはそれ以上の期間にわたる本明細書に開示されている治療用化合物の放出を指す。一実施形態では、「徐放（ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）」という用語は、約７日未満の期間にわたる本明細書に開示されている治療用化合物の放出を指す。

【0137】

一実施形態では、徐放薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後約３日間、投与後約７日間、投与後約１０日間、投与後約１５日間、投与後約２０日間、投与後約２５日間、投与後約３０日間、投与後約４５日間、投与後約６０日間、投与後約７５日間または投与後約９０日間の期間にわたって治療用化合物を放出する。別の実施形態では、徐放薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後少なくとも３日間、投与後少なくとも７日間、投与後少なくとも１０日間、投与後少なくとも１５日間、投与後少なくとも２０日間、投与後少なくとも２５日間、投与後少なくとも３０日間、投与後少なくとも４５日間、投与後少なくとも６０日間、投与後少なくとも７５日間または投与後少なくとも９０日間の期間にわたって、実質的にゼロ次放出速度で本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。

【0138】

一実施形態では、ＰＳＡ－治療用化合物は、限定されるものではないが、徐放組成物を含む長時間作用性組成物の形態である。一実施形態は、投与される患者に時間をかけて当該治療用化合物を与える、限定されるものではないが徐放カプセル、錠剤または他の固体もしくは液体製剤を含む。長時間作用性組成物は、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、４０時間、４８時間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、２週間、３週間または４週間にわたって患者に与えることができる。長時間作用性製剤は、４時間ほどの短期間または４週間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または３週間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または２週間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または１週間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または６日間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または５日間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または４日間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または３日間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または２日間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または１日ほどの長期間、４時間ほどの短期間または２０時間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または１６時間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または１４時間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または１２時間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または１０時間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または８時間ほどの長期間、４時間ほどの短期間または６時間ほどの長期間にわたってポリシアル酸化治療用化合物の活性を与えることができる。

【0139】

一実施形態では、徐放薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後約３日間、投与後約７日間、投与後約１０日間、投与後約１５日間、投与後約２０日間、投与後約２５日間、投与後約３０日間、投与後約４５日間、投与後約６０日間、投与後約７５日間または投与後約９０日間の期間にわたって本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。本実施形態の他の態様では、徐放薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後少なくとも３日間、投与後少なくとも７日間、投与後少なくとも１０日間、投与後少なくとも１５日間、投与後少なくとも２０日間、投与後少なくとも２５日間、投与後少なくとも３０日間、投与後少なくとも４５日間、投与後少なくとも６０日間、投与後少なくとも７５日間または投与後少なくとも９０日間の期間にわたって、実質的に一次放出速度で本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。

【0140】

一実施形態では、薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後約１日、投与後約２日間、投与後約３日間、投与後約４日間、投与後約５日間、投与後約６日間または投与後約７日間またはそれ以上の期間にわたって本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。さらなる実施形態では、薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後最大で１日、投与後最大で２日間、投与後最大で３日間、投与後最大で４日間、投与後最大で５日間、投与後最大で６日間または投与後最大で７日間またはそれ以上の期間にわたって、実質的にゼロ次放出速度で本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。

【0141】

一実施形態では、薬物送達プラットフォームは、限定されるものではないが、投与後約１日、投与後約２日間、投与後約３日間、投与後約４日間、投与後約５日間、投与後約６日間または投与後約７日間またはそれ以上の期間にわたって、ある放出速度で本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。さらなる実施形態では、薬物送達プラットフォームは、例えば投与後最大で１日、投与後最大で２日間、投与後最大で３日間、投与後最大で４日間、投与後最大で５日間、投与後最大で６日間または投与後最大で７日間またはそれ以上の期間にわたって、実質的に一次放出速度で本明細書に開示されている治療用化合物を放出する。

【0142】

シアル酸およびＰＳＡ
本明細書で使用される「シアル酸部分」は、水溶液または懸濁液に可溶性であり、かつＰＳＡ－タンパク質複合体を薬学的に有効な量で投与した際に哺乳類に対して副作用などの悪影響をほとんどまたは全く有しないシアル酸モノマーまたはポリマー（「多糖」）を含む。ＰＳＡおよびｍＰＳＡは、一態様では１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、２００、３００、４００または５００個のシアル酸単位を有するものとして特徴づけられる。特定の態様では、異なるシアル酸単位は鎖状に組み合わせられている。

【0143】

本発明の一実施形態では、ＰＳＡまたはｍＰＳＡ化合物のシアル酸部分は高親水性であり、別の実施形態では、当該化合物全体が高親水性である。親水性は主にシアル酸単位のペンダントカルボキシル基ならびにヒドロキシル基によって与えられる。糖単位はアミン、ヒドロキシルまたは硫酸基などの他の官能基あるいはそれらの組み合わせを含んでいてもよい。これらの基は天然に生じる糖化合物上に存在していてもよく、あるいは誘導体多糖化合物の中に導入されていてもよい。本発明の方法および複合体に使用されるＰＳＡおよびｍＰＳＡは、上の本発明の背景技術の箇所に記載されているようにさらに特徴づけてもよい。

【0144】

天然に生じるポリマーＰＳＡは、広いサイズ分布（例えばＳｉｇｍａ Ｃ－５７６２）および高多分散性（ＰＤ）を示す多分散製剤として利用可能である。多糖はエンドトキシンを同時精製するという固有のリスクを有する細菌において通常生成されるので、長いシアル酸ポリマー鎖の精製がエンドトキシン含有量を増加させる可能性を高める場合がある。１～４個のシアル酸単位を有する短いＰＳＡ分子は合成により調製することもでき（Ｋａｎｇ ＳＨら，Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ．２０００；２２７－８；Ｒｅｓｓ ＤＫおよびＬｉｎｈａｒｄｔ ＲＪ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．２００４；１：３１－４６）、従って高エンドトキシンレベルというリスクが最小限に抑えられる。但し、エンドトキシンを含んでもいなく狭いサイズ分布および低い多分散性を有するＰＳＡ製剤を今日では製造することができる。本発明のための特定の使用の多糖化合物は一態様では細菌によって生成されるものである。これらの天然に生じる多糖のいくつかは糖脂質として知られている。一実施形態では、多糖化合物は実質的に末端ガラクトース単位を含んでいない。

【0145】

様々な実施形態では、本化合物は化学量論量（例えば、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：７、１：８、１：９または１：１０など）でＰＳＡまたはｍＰＳＡ化合物に結合または会合されている。様々な実施形態では、１～６、７～１２または１３～２０個のＰＳＡおよび／またはｍＰＳＡ単位が本化合物に結合されている。さらに他の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のＰＳＡおよび／またはｍＰＳＡ単位が本化合物に結合されている。

【0146】

任意に、本化合物はグリコシル化部位（すなわち、未変性グリコシル化部位以外の部位）を導入するために修飾されている。そのような修飾は当該技術分野で知られている標準的な分子生物学的技術を用いて達成してもよい。さらに１つ以上の炭水化物部分を介したコンジュゲーションの前に本化合物は、インビボまたはインビトロにおいてグリコシル化されていてもよい。

【0147】

アミノオキシ結合
本発明の一実施形態では、オキシム基を形成するためにヒドロキシルアミンまたはヒドロキシルアミン誘導体とアルデヒド（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムによる酸化後の炭水化物部分上）との反応を化合物の複合体の調製に適用する。例えば糖タンパク質を最初に過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）などの酸化剤により酸化させる（Ｒｏｔｈｆｕｓ ＪＡおよびＳｍｉｔｈ ＥＬ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９６３，２３８，１４０２－１０；ならびにＶａｎ Ｌｅｎｔｅｎ ＬおよびＡｓｈｗｅｌｌ Ｇ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９７１，２４６，１８８９－９４）。例えば糖タンパク質の過ヨウ素酸酸化は、１９２８に記載されている古典的なマラプラード反応、すなわち活性アルデヒド基を形成するためのビシナルジオールの過ヨウ素酸による酸化に基づいている（Ｍａｌａｐｒａｄｅ Ｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｂｕｌｌ Ｓｏｃ Ｃｈｉｍ Ｆｒａｎｃｅ，１９２８，４３，６８３－９６）。そのような酸化剤のためのさらなる例は、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）_４）、酢酸マンガン（ＭｎＯ（Ａｃ）_３）、酢酸コバルト（Ｃｏ（ＯＡｃ）_２）、酢酸タリウム（ＴｌＯＡｃ）、硫酸セリウム（Ｃｅ（ＳＯ_４）_２）（米国特許第４，３６７，３０９号）または過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ_４）である（Ｍａｒｋｏら，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １９９７，１１９，１２６６１－２）_。「酸化剤」とは、炭水化物中のビシナルジオールを酸化し、それにより生理的反応条件下で活性アルデヒド基を生成することができる穏やかな酸化化合物を意味する。

【0148】

第２の工程は、アミノオキシ基を含むポリマーを酸化された炭水化物部分に結合させてオキシム結合を形成する。本発明の一実施形態では、この工程は触媒量の求核性触媒アニリンまたはアニリン誘導体の存在下で行うことができる（Ｄｉｒｋｓｅｎ Ａ．，Ｄａｗｓｏｎ ＰＥ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００８；Ｚｅｎｇ Ｙら，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００９；６：２０７－９）。アニリン触媒はオキシム結合を劇的に加速し、非常に低い濃度の試薬の使用を可能にする。本発明の別の実施形態では、オキシム結合をＮａＣＮＢＨ_３による還元により安定化させてアルコキシアミン結合を形成する。

【0149】

本発明の一実施形態では、ＰＳＡまたはｍＰＳＡとタンパク質とをコンジュゲートするための反応工程は別々に、かつ連続的に行う（すなわち、出発物質（例えば、タンパク質、ポリマーなど）、試薬（例えば、酸化剤、アニリンなど）および反応生成物（例えば、タンパク質上の酸化された炭水化物、活性化されたアミノオキシポリマーなど）は個々の反応工程間で分離されている）。

【0150】

アミノオキシ技術に関するさらなる情報は、以下の参考文献：欧州特許第１６８１３０３Ａ１号「ヒドロキシアルキルデンプン化エリスロポエチン（ＨＡＳｙｌａｔｅｄ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）」、国際公開第２００５／０１４０２４号「オキシム結合基によって結合されたポリマーとタンパク質との複合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ａ ｐｏｌｙｍｅｒ ａｎｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｄ ｂｙ ａｎ ｏｘｉｍｅ ｌｉｎｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」、国際公開第９６／４０６６２号「アミノオキシ含有リンカー化合物および複合体におけるそれらの適用（ａｍｉｎｏｏｘｙ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｌｉｎｋｅｒ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）」、国際公開第２００８／０２５８５６号「修飾タンパク質（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」、Ｐｅｒｉ Ｆら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９８，５４，１２２６９－７８、Ｋｕｂｌｅｒ－Ｋｉｅｌｂ ＪおよびＰｏｚｓｇａｙ Ｖ．， Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ２００５，７０，６８８７－９０、Ｌｅｅｓ Ａら，Ｖａｃｃｉｎｅ ２００６，２４（６），７１６－２９ならびにＨｅｒｅｄｉａ ＫＬら，Ｍａｃｒｏｍｏｅｃｕｌｅｓ ２００７，４０（１４），４７７２－９に記載されており、それらのそれぞれの内容全体が組み込まれる。

【0151】

ＰＳＡの抗体への結合に関するさらなる情報は以下の参考文献：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎ Ｒ．およびＤｕｂｅｌ Ｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１０，Ｖ．１，第２版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｐｒｏｔｏｃａｌｓ，ＩＳＢＮ－１３：９７８－３６４２０１１４３６；Ｚｈａｎｇ Ｂら：Ｕｎｖｅｉｌｉｎｇ ａ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｈｏｔ ｓｐｏｔ ｉｎ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ（組換えヒト化モノクローナル抗体における糖化ホットスポットの解明），Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．，２００８，８０，２３７９－２３９０；Ｍｉｌｌｅｒ ＡＫら，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ヒト治療用モノクローナル抗体のプロセス開発中の部位特異的糖化の特性評価），Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，２０１１，１００，２５４３－２５５０に記載されており、それらのそれぞれの内容全体が組み込まれる。

【0152】

本発明の利点としては、複合体の高い回収、コンジュゲートされていないタンパク質と比較してコンジュゲートされている糖タンパク質の活性の高い保持および高いコンジュゲーション効率が挙げられる。

【0153】

生理活性アッセイ
様々なバイオアッセイは、標的タンパク質の活性に対するポリシアル酸化の効果を決定するのに有用である。修飾前の標的タンパク質と、ポリシアル酸／ＰＳＡの結合後の標的タンパク質との間で比較を行う。例えば本明細書においてポリシアル酸化されている酵素は、酵素活性を試験することにより修飾された標的タンパク質の活性を試験するのに特に適している。本明細書中のポリシアル酸化されている抗体またはその結合断片のために標準的な抗体－リガンド結合アッセイを利用し、かつ修飾された抗体と修飾されていない抗体とを比較する。他の標的タンパク質のために標的のためのバイオアッセイを利用して、本明細書中のポリシアル酸化標的タンパク質の活性を測定してもよい。適当な高感度アッセイが特定の標的タンパク質のために必要とされる。当該アッセイは、関連化合物による干渉なしにポリシアル酸化標的タンパク質のための特異的な読み出しも提供しなければならない。多種多様な標的に適用可能なバイオアッセイ方法は本明細書中の実施例に記載されている。本発明に従ってポリシアル酸化されている特定の標的タンパク質に関連する特定のバイオアッセイも上記特許および特許出願の中で本明細書に記載されており、特定の標的タンパク質に関連するものとして参照により本明細書に組み込まれる。

【0154】

本明細書中の治療用ＰＳＡタンパク質は様々なインビトロアッセイを用いて同定することができる。好ましくは、これらのアッセイは、複数の候補を同時にスクリーニングするのを可能にするハイスループットアッセイである。いくつかの実施形態では、生体分子相互作用をＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムによりリアルタイムで監視することができ、これはＳＰＲを使用して、最大３００ｎｍの表面の屈折率の変化によりガラス支持体上の薄い金膜の表面における光の共鳴角度の変化を検出する。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により、結合速度定数、解離速度定数、平衡解離定数および親和定数を生成する。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴システム（Ｂｉａｃｏｒｅ社）を用いて結合および解離速度定数を評価することより結合親和性を得る。標的の共有結合のためにバイオセンサーチップを活性化させる。次いでこの標的を希釈してチップの上に注入して、固定化材料の応答単位でシグナルを得る。共鳴単位（ＲＵ）でのシグナルは固定化材料の質量に比例しているので、これはマトリックス上の様々な固定化標的密度を表す。

【0155】

細胞ベースアッセイを使用して、本明細書において提供される様々なポリシアル酸化タンパク質の生物活性を特徴づけ、測定および比較することができる。いくつかの実施形態では、細胞ベースアッセイは酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）である。ＥＬＩＳＡキットは、Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（登録商標）（マサチューセッツ州カントン）などの数多くの提供源から市販されている。ＥＬＩＳＡキットを使用するための方法は当該技術分野で知られており、当該キットは一般に、例えば試料、標準物質、較正曲線を準備して実験を行う方法に関する取扱説明書を含む。別の実施形態では、細胞ベースアッセイは均一時間分解蛍光測定法（ＨＴＲＦ（登録商標））である。ＨＴＲＦ（登録商標）キットはＣｉｓｂｉｏ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社（マサチューセッツ州ベッドフォード）から市販されている。ＨＴＲＦ（登録商標）キットを使用するための方法は当該技術分野で知られており、当該キットは一般に例えば試料、標準物質、較正曲線を準備して実験を行う方法に関する取扱説明書を含む。均一時間分解蛍光細胞ベースアッセイは米国特許第５，５２７，６８４号（その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる）、およびＣｉｓｂｉｏ ＨＴＲＦ（登録商標）Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｅｎｔｅｒから利用可能な文献参照番号６２ＡＭ４ＰＥＢ ｒｅｖ０２（２００７年８月）に記載されている。ｗｗｗ．ｈｔｒｆ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｇｐｃｒ／ｃａｍｐ／を参照されたく、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0156】

次に、以下の実施例を参照しながら本発明について例示する。

【実施例】

【0157】

実施例１：アミノオキシ－ＰＳＡポリマーの調製
１．３ｇの酸化されたコロミン酸（２３ｋＤａ）を１８ｍＬの５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５±０．０２）に溶解した。２０倍モルの過剰な１，１１－ジアミノ－３，６，９－トリオキサウンデカン（３，６，９－トリオキサ－ウンデカン－１，１１－ジオキシアミンともいう）を最小量の５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５±０．０２）に溶解し、ＰＳＡ溶液に添加した。最終的なコロミン酸濃度は６２．５ｍｇ／ｍｌであった。この反応混合物を穏やかなミキサー（１分当たり２２回の振動）上で２２±１．０℃で２±０．１時間インキュベートした。この後に、５．００ｍｇ／ｍｌの最終濃度にするために０．６５ｍＬのＮａＣＮＢＨ_３溶液（１６０ｍｇ／ｍｌ）を上記反応混合物に添加した。これを混合のために十分な上部空き高を有するエンドトキシンを含まない気密容器に入れて、振盪機（１分当たり２２回の振動）上、４．０±１．０℃で３．０±０．２０時間インキュベートした。精製のために、この試料を２ｍＭトリエタノールアミン（ｐＨ８．０±０．０２）で希釈して２０ｍｇ／ｍｌの最終的なコロミン酸濃度にした。反応混合物を脱塩して、過剰な１，１１－ジアミノ－３，６，９－トリオキサウンデカン、ＮａＣＮＢＨ_３および反応副生成物を除去した。この後に２０ｍＭトリエタノールアミン緩衝液（ｐＨ８．０±０．０２）を用いてＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムで脱塩した。脱塩した試料のｐＨをｐＨ７．８～８．０に調整し、２０ｍＭ ＴＥＡ（ｐＨ８．０）で１回、２ｍＭトリエタノールアミン（ＴＥＡ）（ｐＨ８．０）で２回限外濾過／透析濾過した。この試料を凍結乾燥して－８０℃で貯蔵した。

【0158】

あるいは、脱塩および限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）工程の間に、高い塩の存在下で精製を行った。高い塩でのイオン交換クロマトグラフィも使用して高純度アミノオキシ－ＰＳＡを調製した。類推により異なる分子量のアミノオキシ－ＰＳＡを合成した。

【0159】

実施例２：ジアミノオキシ－ＰＳＡのエリスロポエチン（ＥＰＯ）への結合
０．２ｍｇのＥＰＯを１０ｍＭのＮａＩＯ_４により４℃で３０分間酸化した。５ｍＭの最終濃度までＮａＨＳＯ_３を添加して酸化を停止した。２３ｋＤａのジアミノオキシポリマーと共に酸化されたＥＰＯを用いてコンジュゲーション反応を行った。反応混合物中のポリマーの最終濃度は１．２５ｍＭであった。反応混合物中のＥＰＯの最終濃度は０．１２５ｍｇ／ｍｌであった。反応混合物の最終的なｐＨは約５．７５であった。５０ｍＭまたは３．１７ｍｇ／ｍｌの濃度までシアノ水素化ホウ素ナトリウムを反応混合物に添加した。この反応を４℃で２４時間行った。未精製の複合体をＳＤＳ ＰＡＧＥを用いて特性評価した。ＰＡＧＥ ＳＤＳにおいて当該複合体についてバンドのシフトが認められた。

【0160】

実施例３：求核性触媒として機能するためのアニリンを用いたジアミノオキシ－ＰＳＡのＥＰＯへの結合
０．２ｍｇのＥＰＯを１０ｍＭ ＮａＩＯ_４により４℃で３０分間酸化した。５ｍＭの最終濃度までＮａＨＳＯ_３を添加してこの酸化を停止した。ジアミノオキシＰＳＡポリマー（２２ｋＤａ）と共に酸化されたＥＰＯを用いてコンジュゲーション反応を行った。反応混合物中のポリマーの最終濃度は１．２５ｍＭであった。反応混合物の最終的なｐＨは約５．７５であった。５０ｍＭまたは３．１７ｍｇ／ｍｌの濃度までシアノ水素化ホウ素ナトリウムを反応混合物に添加した。反応系における最終的なタンパク質濃度は０．１２５ｍｇ／ｍｌであった。８４．２１μｌの２００ｍＭアニリン溶液を１．６ｍＬの反応混合物に添加した。この反応を４℃で一晩行った。当該複合体をＳＤＳ ＰＡＧＥを用いて特性評価した。当該複合体においてバンドのシフトが認められた。当該複合体の活性に対してアニリンの有害作用は観察されなかった。

【0161】

実施例４：ヒドラジド－ＰＳＡのエリスロポエチンへの結合
エリスロポエチン（ＥＰＯ）の酸化のために、ＮａＩＯ_４を１０ｍＭの濃度で使用した。ＥＰＯ（１ｍｇ）を４℃で３０分間ｐＨ５．７５で酸化し、次いで５ｍＭの最終濃度までＮａＨＳＯ_３を添加して酸化を停止した。ヒドラジド－ＰＳＡポリマーと共に酸化されたＥＰＯを用いてコンジュゲーション反応を行った。コンジュゲーションのために使用したヒドラジド－ＰＳＡの分子量は２４．３４ｋＤａであった。反応混合物中のヒドラジド－ＰＳＡの最終濃度は１．２５ｍＭであった。反応混合物中のＥＰＯの最終濃度は０．１２５ｍｇ／ｍｌであった。反応混合物の最終的なｐＨは約５．７５であった。５０ｍＭまたは３．１７ｍｇ／ｍｌの濃度までシアノ水素化ホウ素ナトリウムを反応混合物に添加した。この反応を４℃で２４時間行った。複合体をＳＤＳ ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット法を用いて特性評価した。ＰＡＧＥ ＳＤＳでは当該複合体についてバンドのシフトが認められ、ウエスタンブロット法から陽性の結果が得られた。

【0162】

実施例５：アミノオキシ－ＰＳＡのＮＧＦへの結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇの神経増殖因子（ＮＧＦ）に、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍ酢酸アンモニウムの最終濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0163】

実施例６：アミノオキシ－ＰＳＡのインターフェロン－α（ＩＦＮ－α）への結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇインターフェロン－α（ＩＦＮ－α）に、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0164】

実施例７：アミノオキシ－ＰＳＡのＴＰＡ（組織プラスミノーゲン活性化因子）への結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇのＴＰＡに、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0165】

実施例８：アミノオキシ－ＰＳＡのトロンボポエチン（ＴＰＯ）への結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇのＴＰＡに、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0166】

実施例９：アミノオキシ－ＰＳＡのトロンビンへの結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇのトロンビンに、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0167】

実施例１０：アミノオキシ－ＰＳＡのＦＧＦへの結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇの線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）に、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0168】

実施例１１：アミノオキシ－ＰＳＡのＴＧＦ－βへの結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇのトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β）に、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0169】

実施例１２：アミノオキシ－ＰＳＡのＰＤＧＦへの結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇの血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）に、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0170】

実施例１３：アミノオキシ－ＰＳＡのＶＥＧＦへの結合
１０ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ６）（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ）に溶解した１０ｍｇの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に、５０μｌの１０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウムを添加した。この混合物を暗所において４℃で３０分間振盪し、１００μｌの水性１Ｍグリセロール溶液の添加により４℃で３０分間失活させた。次いで２０．０ｍｇのアミノオキシ－ＰＳＡ（１８．８ｋＤ）を添加し、この混合物を４℃で一晩振盪した。８Ｍの酢酸アンモニウムを含有する緩衝液（８Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）を添加してイオン強度を増加させて、２．５Ｍの最終酢酸アンモニウム濃度を得た。次に、反応混合物をＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、コネチカット州フェアフィールド）カラムに充填し、これを平衡化緩衝液（２．５Ｍの酢酸アンモニウム、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、３５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．９）で平衡化した。この生成物を溶出緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．４）で溶出し、この溶出液を３０，０００ＭＷＣＯでＶｉｖａｓｐｉｎ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ドイツのゲッティンゲン）装置を用いた遠心濾過により濃縮した。

【0171】

実施例１４：ジアミノオキシ（３－オキサペンタン－１，５－ジオキシアミンリンカー）－ＰＳＡのトロンボモジュリンへの結合
トロンボモジュリンの酸化のために、ＮａＩＯ_４を２ｍＭの濃度で使用する。３ｍｇのトロンボモジュリンを４℃で３０分間５．７５の酸性のｐＨで酸化し、次いで２ｍＭの最終濃度までＮａＨＳＯ_３を添加して酸化を停止した。このコンジュゲーション反応は、ジアミノオキシＰＳＡポリマー（２３ｋＤａ）と共に酸化されたトロンボモジュリンを用いて行う。反応混合物中のポリマーの最終濃度を決定する。反応混合物の最終的なｐＨは約５．７５であった。５０ｍＭまたは３．１７ｍｇ／ｍｌの濃度までシアノ水素化ホウ素ナトリウムを反応混合物に添加した。この反応を４℃で２時間行った。複合体をＳＤＳ ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット法を用いて特性評価した。ＳＤＳ ＰＡＧＥでの当該複合体についてのバンドのシフトは陽性の結果を示している。

【0172】

実施例１５：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるトロンボポエチン（ＴＰＯ）結合親和性の決定
ＴＰＯ結合親和性を、以下のようにＢｉａｃｏｒｅ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、スウェーデンのウプサラ）を用いて分析する。

【0173】

ＴＰＯを３種類の密度でＣＭＳバイオセンサーチップのフローセル上に固定化する。調査用のＴＰＯ試料を泳動用緩衝液（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、ｐＨ７．４）により一連の７種類の希釈度に希釈し（所与のタンパク質値に従って０．１～５０ｎＭ×）、次いで５０μＬ／分の一定の流速で「単一サイクル」モードを用いてチップに適用する。結合の時間は４分であり、解離の時間は１０分であった。各サイクル後に、ＴＰＯをチップから除去し（「再生」）、その実験を新しいＴＰＯ試料で繰り返す。結合および解離定数を「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて決定する。以下の反応速度パラメータ：結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄおよび平衡解離定数ＫＤを決定する。結合はＲｍａｘ、すなわち飽和時に計算された最大結合も評価して決定する。反応速度の結果は３種類の異なるＴＰＯ固定レベルの平均から計算する。

【0174】

Ｂｉａｃｏｒｅ技術を使用して、ＴＰＯと腫瘍壊死因子受容体との間での複合体形成の速度を決定する。この目的のために、ＴＰＯを３種類の異なるレベルでセンサチップ表面に固定化し、調査用のＴＰＯおよびトロンボポエチン受容体を緩衝液中で再緩衝化し、試料を単一サイクルモードにおいて５種類の異なる濃度で注入する。固定化ＴＰＯとトロンボポエチン受容体との間では均一な１：１相互作用であると仮定して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器の「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて、結合および解離定数を決定する。

【0175】

結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および平衡解離定数（＝ｋｄ／ｋａ）などのＴＰＯとトロンボポエチン受容体との相互作用を記述する反応速度パラメータを決定し、さらなる評価およびデータ比較を行う。ＰＳＡ修飾タンパク質からのデータを未修飾のものと比較する。

【0176】

実施例１６：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるＣＤ２０結合親和性の決定
ＣＤ２０結合親和性を、以下のようにＢｉａｃｏｒｅ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、スウェーデンのウプサラ）を用いて分析する。

【0177】

ＣＤ２０を３種類の密度でＣＭＳバイオセンサーチップのフローセル上に固定化する。調査用のＴＰＯ試料を泳動用緩衝液（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、ｐＨ７．４）で一連の７種類の希釈度に希釈し（所与のタンパク質値に従って０．１～５０ｎＭ×）、次いで５０μＬ／分の一定の流速で「単一サイクル」モードを用いてチップに適用する。結合の時間は４分であり、解離の時間は１０分であった。各サイクル後に、ＴＰＯをチップから除去し（「再生」）、その実験を新しいＴＰＯ試料で繰り返す。結合および解離定数を「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて決定する。以下の反応速度パラメータ：結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄおよび平衡解離定数ＫＤを決定する。結合はＲｍａｘ、すなわち飽和時に計算された最大結合も評価して決定する。反応速度の結果は３種類の異なるＴＰＯ固定レベルの平均から計算する。

【0178】

Ｂｉａｃｏｒｅ技術を使用して、ＣＤ２０とＣＤ２０受容体との間での複合体形成の速度を決定する。この目的のために、ＣＤ２０を３種類の異なるレベルでセンサチップ表面に固定化し、調査用のＣＤ２０およびＣＤ２０受容体を緩衝液中で再緩衝化し、試料を単一サイクルモードにおいて５種類の異なる濃度で注入する。固定化ＣＤ２０とＣＤ２０受容体との間では均一な１：１相互作用であると仮定して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器の「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて、結合および解離定数を決定する。

【0179】

結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および平衡解離定数（＝ｋｄ／ｋａ）などのＣＤ２０とＣＤ２０受容体との相互作用を記述する反応速度パラメータを決定し、さらなる評価およびデータ比較を行う。ＰＳＡ修飾タンパク質からのデータを未修飾のものと比較する。

【0180】

実施例１７：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるトロンビン結合親和性の決定
トロンビン結合親和性を、以下のようにＢｉａｃｏｒｅ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、スウェーデンのウプサラ）を用いて分析する。

【0181】

トロンビンを３種類の密度でＣＭＳバイオセンサーチップのフローセル上に固定化する。調査用のトロンビン試料を泳動用緩衝液（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、ｐＨ７．４）で一連の７種類の希釈度に希釈し（所与のタンパク質値に従って０．１～５０ｎＭ×）、次いで５０μＬ／分の一定の流速で「単一サイクル」モードを用いてチップに適用する。結合の時間は４分であり、解離の時間は１０分であった。各サイクル後に、トロンビンをチップから除去し（「再生」）、その実験を新しいトロンビン試料で繰り返す。結合および解離定数を「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて決定する。以下の反応速度パラメータ：結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄおよび平衡解離定数ＫＤを決定する。結合はＲｍａｘ、すなわち飽和時に計算された最大結合も評価して決定する。反応速度の結果は３種類の異なるＴＮＦ固定レベルの平均から計算する。

【0182】

Ｂｉａｃｏｒｅ技術を使用して、トロンビンとトロンボモジュリンとの間での複合体形成の速度を決定する。この目的のために、トロンビンを３種類の異なるレベルでセンサチップ表面に固定化し、調査用のトロンビンおよびトロンボモジュリン（または類似体、例えばＳｏｌｕｌｉｎ）を緩衝液中で緩衝化し、試料を単一サイクルモードにおいて５種類の異なる濃度で注入する。固定化トロンビンとトロンボモジュリンとの間では均一な１：１相互作用であると仮定して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器の「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて、結合および解離定数を決定する。

【0183】

結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および平衡解離定数（＝ｋｄ／ｋａ）などのＴＮＦと腫瘍壊死因子受容体との相互作用を記述する反応速度パラメータを決定し、さらなる評価およびデータ比較を行う。ＰＳＡ修飾タンパク質からのデータを未修飾のものと比較する。

【0184】

実施例１８：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）結合親和性の決定
ＴＮＦ結合親和性を、以下のようにＢｉａｃｏｒｅ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、スウェーデンのウプサラ）を用いて分析する

【0185】

ＴＮＦを３種類の密度でＣＭＳバイオセンサーチップのフローセル上に固定化する。調査用のＴＮＦ試料を泳動用緩衝液（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、ｐＨ７．４）で一連の７種類の希釈度に希釈し（所与のタンパク質値に従って０．１～５０ｎＭ×）、次いで５０μＬ／分の一定の流速で「単一サイクル」モードを用いてチップに適用する。結合の時間は４分であり、解離の時間は１０分であった。各サイクル後に、ＴＮＦをチップから除去し（「再生」）、その実験を新しいＴＮＦ試料で繰り返す。結合および解離定数を「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて決定する。以下の反応速度パラメータ：結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄおよび平衡解離定数ＫＤを決定する。結合はＲｍａｘ、すなわち飽和時に計算された最大結合も評価して決定する。反応速度の結果は３種類の異なるＴＮＦ固定レベルの平均から計算する。

【0186】

Ｂｉａｃｏｒｅ技術を使用して、ＴＮＦと腫瘍壊死因子受容体との間での複合体形成の速度を決定する。この目的のために、ＴＮＦを３種類の異なるレベルでセンサチップ表面に固定化し、調査用のＴＮＦおよび腫瘍壊死因子受容体を緩衝液の中に再緩衝化し、試料を単一サイクルモードにおいて５種類の異なる濃度で注入する。固定化ＴＮＦと腫瘍壊死因子受容体との間では均一な１：１相互作用であると仮定して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器の「Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ」プログラムのＬａｎｇｍｕｉｒモデルを用いて、結合および解離定数を決定する。

【0187】

結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および平衡解離定数（＝ｋｄ／ｋａ）などのＴＮＦと腫瘍壊死因子受容体との相互作用を記述する反応速度パラメータを決定し、さらなる評価およびデータ比較を行う。ＰＳＡ修飾タンパク質からのデータを未修飾のものと比較する。

【0188】

実施例１９：活性化プロテインＣアッセイによるトロンボモジュリンに結合した際のトロンビン活性の決定
供給会社名を含む以下の材料を利用する。６～８週齢の雄のＣ５７ＢＬ６Ｊマウスは、例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得て、ヒトＡＰＣはＨａｅｍｏｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（米国バーモント州エセックス・ジャンクション）から、Ｓｐｅｃｔｒａｚｙｍｅ ＰＣａはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ社から、ウシトロンビンはＧＥ Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社から、組換えヒルジンはＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社から、ベンズアミジンＨＣｌ水和物およびウシ血清アルブミンＶ型はＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から、ブタの腸粘膜からのヘパリンはＳｉｇｍａ社から、インビトロ実験のための９６ウェルＣｏｓｔａｒ（ｃａｔ＃３５９５）プレートおよびインビボ実験のための８ウェルＥＩＡ／ＲＩＡ Ｃｏｒｎｉｎｇストリップ（ｃａｔ＃２５９０）はＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から得ることができ、ヒトＡＰＣに対するマウスモノクローナル抗体は商業的供給源から得ることができる。トロンボモジュリン活性の発色決定を使用する多くの現在の抗体は、Ｓａｌｅｍら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２５９，Ｎｏ．１９，ｐｐ．１２２４６－１２２５１（１９８４）に基づいており、これは参照により本明細書に組み込まれる。また市販されている発色アッセイＢＩＯＰＨＥＮ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ２．５もいくつかの実験で使用されており、Ｈｙｐｈｅｎ ＢｉｏＭｅｄ（オハイオ州ウェストチェスター）から得ることができる。

【0189】

インビトロでのヒトプロテインＣの用量応答。ヒトプロテインＣ（３２．２５、６４．５および３２２．５ｎＭ）を、１．７ｍＬ極小遠心管中でｓＴＭ（２９．３ｎＭ）およびウシトロンビン（７．３６ｎＭ）の０．１ｍＬのＰＢＳ（ｗ／Ｃａ^２＋）溶液と共に１０分間インキュベートする。２５μｌの一定分量を除去し、２５μｌの組換えヒルジン［０．２５Ｕ／μｌ］に添加して９６ウェルプレート内の各ウェルにおいてトロンビン活性を失活させる。５０μｌのスペクトラザイム（２μＭ）溶液を添加し、６０分でのＯＤを決定する。３つの独立した実験からの６０分時点の値を平均する（Ｎ＝３±ＳＤ）。ヒトプロテインＣおよびウシトロンビンのモル濃度をそれぞれ６２ＭＷおよび３６．７ｋＤａに基づいて計算する。

【0190】

インビトロでのトロンボモジュリンの用量応答。ヒトプロテインＣ（６４．５ｎＭ）を、１．７ｍＬの極小遠心管中でｓＴＭ（０．２９３、２．９３、２９．３および１４７０ｎＭ）およびウシトロンビン（７．３６ｎＭ）の０．１ｍＬのＰＢＳ（ｗ／Ｃａ^２＋）溶液と共に１０分間インキュベートする。２５μｌの一定分量を除去し、９６ウェルプレート内の各ウェルに入れ、２５μｌの組換えヒルジン［０．２５Ｕ／μｌ］および５０μＬのスペクトラザイム（２μＭ）溶液を添加し、６０分でのＯＤを決定する。６０分時点での独立した実験の値を平均した（Ｎ＝３±ＳＤ）。

【0191】

インビボでのヒトプロテインＣの用量応答。２５ｇマウスの場合、１．５ｍＬの平均血液体積であると仮定する。ｓＴＭ（２９．３ｎＭ）およびウシトロンビン（７．３６ｎＭ）を１０分間プレインキュベートし、Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスの頸静脈に注射した。その直後、ヒトプロテインＣ（３２．２５、６４．５または３２２．５ｎＭ）を対側の頸静脈に注射する。１０分後、血液を下大静脈から３．８％クエン酸ナトリウムおよびベンズアミジンＨＣｌ（ｖ／ｖ２：１）の中に採取し、６００μｌの採取した血液あたり１００μｌのクエン酸ナトリウム混合物を添加した。血液を１５００×ｇで５分間遠心分離する。血漿を回収し、液体窒素中で急速冷凍し、使用するまで－８０℃で貯蔵した。

【0192】

インビボでのトロンボモジュリンの用量応答。ｓＴＭ（０．２９３、２．９３、２９．３および１４７０ｎＭ）およびウシトロンビン（７．３６ｎＭ）を１０分間プレインキュベートした後、Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスの頸静脈に注射する。その直後、ヒトプロテインＣ（６４．５ｎＭ）を対側の頸静脈に注射する。１０分後、血液を下大静脈から３．８％クエン酸ナトリウムおよびベンズアミジンＨＣｌ（ｖ／ｖ２：１）の中に採取した。６００μｌの血液あたり１００μｌのクエン酸ナトリウム：ベンズアミジンＨＣｌ混合物を添加する。血漿を上記のとおり調製した。好適かつ関連するＰＫＣアッセイ方法は、Ｃａｍｅｍｏｌｌａ，Ｒ．ら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．，２０１２年１０月３１日；３８４，（１－２），２１－２４，およびＸｕ，Ｈ．ら，Ｃ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０（９）：７９５６－７９６１にも記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0193】

実施例２０：抗体ベースのＥＬＩＳＡによるヒトＡＰＣの検出
２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、（ｐＨ７．５）中の抗ヒトＡＰＣ ｍＡｂ １５５５（５μｇ／ｍＬ）を高結合ＥＩＡ／ＲＩＡ８ウェルストリップに４℃で一晩結合させる。ウェルを２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．５）で２回洗浄し、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、１％ＢＳＡ（ｐＨ７．５）により室温で１時間ブロックする。次いでウェルをそれぞれ５分間で２回洗浄する。ヒトＡＰＣ標準物質［０～３２００ｎｇ／ｍＬ］を、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．１％のＢＳＡ、２Ｕ／ｍＬのヘパリン、２０ｍＭのベンズアミジンＨＣｌ（ｐＨ７．５）（１００μｌ／ｗｅｌｌ）で１：４に希釈したマウス血漿中で調製した。バックグラウンド（抗体非特異性）を下げるために、ヒトＡＰＣ抗体［５０μｇ／ｍＬ］でスパイクしたヒトＡＰＣ標準物質を平行して調製する。様々な用量のヒトＰＣまたはｓＴＭが与えられたマウスからの血漿試料を標準物質と同様に調製する。標準物質および試料を室温で１時間インキュベートし、それぞれ５分間で４回洗浄する。１００μｌの１μＭスペクトラザイム溶液（コーティング緩衝液で１：１０に希釈されている）を各ウェルに添加し、４０５ｎｍでのＯＤを１分ごとに２時間測定した。ヒトＡＰＣの生の値を過剰な抗ヒトＡＰＣ ｍＡｂ［５０μｇ／ｍＬ］の存在下で得られたヒトＡＰＣ値から差し引く。次いでＡＰＣ値を標準曲線に基づく一次方程式から推定する。ヒトＡＰＣ値［ｎｇ／ｍＬ］は、Ｎ＝３～４±ＳＤの平均として報告する。

【0194】

実施例２１：脳血栓モデルにおけるＰＳＡ－トロンボモジュリン類似体（Ｓｏｌｕｌｉｎ）活性
この実験では、本発明に従って調製した様々なＰＳＡ－トロンボモジュリンをマウス脳血栓モデルにおける生物活性について試験および比較する。これらの実験はＳｕ，Ｅ．Ｊ．ら，２０１１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，９，１１７４－１１８２，ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１５３８－７８３６．２０１１．０４２６９．ｘに記載されている方法に従って行い、これは参照により本明細書に組み込まれる。供給会社名を含む以下の材料を利用する。６～８週齢の雄Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスは、例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得、ヒトＡＰＣはＨａｅｍｏｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（米国バーモント州エセックス・ジャンクション）から得ることができ、Ｓｐｅｃｔｒａｚｙｍｅ ＰＣａはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ社から得ることができる。

【0195】

虚血性脳卒中モデル。雄（１０週間）を抱水クロラール（４５０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、解剖顕微鏡下にしっかりと固定して置く。左側のＭＣＡを記載されているように露出し、レーザードップラーフロープローブ（Ｎ型：Ｔｒａｎｓｏｎｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、米国ニューヨーク州イサカ）をＭＣＡの分岐部から１．５ｍｍ背側正中に位置する大脳皮質の表面に置く。このプローブを流速計（ＴｒａｎｓｏｎｉｃモデルＢＬＦ２１）に接続し、相対的組織灌流単位（ＴＰＵ）を連続的なデータ取得プログラム（ｗｉｎｄａｑ社、ｄａｔａｑ、米国オハイオ州アクロン）を用いて記録した。ローズベンガル（ＲＢ）（Ｆｉｓｈｅｒ社）を乳酸リンゲル液で１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、次いで尾静脈に注射する（５０ｍｇ／ｋｇ）。３．５ｍＷの緑色光レーザー（５４０ｎｍ；Ｍｅｌｌｅｓ Ｇｒｉｏｔ、米国ニューメキシコ州アルバカーキ）を６ｃｍ離れたところからＭＣＡに向け、大脳皮質のＴＰＵを記録した。ＴＰＵが予備閉塞レベルの＜２０％に低下し、かつレーザーの中止後１０分以内にリバウンドしない場合に、安定な閉塞が達成される。

【0196】

ＰＳＡ－Ｓｏｌｕｌｉｎの送達および脳血流量の追跡。ＰＳＡ－Ｓｏｌｕｌｉｎを、尾静脈に挿入され、かつＧｅｎｉｅ Ｐｌｕｓシリンジポンプ（Ｋｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、米国コネチカット州トリントン）に接続された２６－Ｇ Ａｂｂｏｃａｔｈ（登録商標）－Ｔ血管カテーテル（Ｈｏｓｐｉｒａ社、米国イリノイ州レイクフォレスト）を介して投与する。マウスにＲＢ注射の３０分前あるいはＭＣＡＯから３０分または６０分後のいずれかに乳酸リンゲル液（対照）またはＳｏｌｕｌｉｎを投与する。量を決定する。

【0197】

全ての脳血流量（ＣＢＦ）の追跡はＲＢ注射の１０分前に開始し、この時間での平均ＣＢＦを１００％とみなし、これを使用してＣＢＦを正規化する。０時間はＲＢ注射時に設定する。ＭＣＡＯから７２時間後に、動物を抱水クロラール（４５０ｍｇ／ｋｇ）で再度麻酔し、手術部位を再度露出し、ドップラーフロープローブを前と同じように同じ位置に再度取り付けて７２時間のＣＢＦデータを得た。

【0198】

脳卒中体積を決定するために、脳を取り出して２ｍｍ厚の冠状方向切片に切断して、４％の２，３，５－トリフェニルテトラゾリウム塩化物（ＴＴＣ）のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液を用いて３７℃で２０分間染色し、次いで１０分間にわたって４％パラホルムアルデヒド溶液で固定する。ＮＩＨ Ｉｍａｇｅ Ｊで以下の式：Ｖ％脳卒中＝Σ（病変部の面積）／Σ（同側半球の面積）×１００（式中、Ｖ％脳卒中は同側半球の割合として計算される脳卒中体積である）を用いて、これらの切片を分析する。

【0199】

ヘモグロビンアッセイ。ＭＣＡＯから２４時間に脳を取り出し、ＭＣＡＯに対して同側半球と対側半球に分離し、各半球を氷上のＰＢＳ中で均質化した。均質化および混合後に、試料を２３℃で５分間インキュベートし、次いで２５０００ｇおよび４℃で３０分間遠心分離し、上澄みの吸光度を４１０ｎｍで読み取り、精製したヘモグロビン標準（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、米国ミズーリ州セントルイス）に対してヘモグロビンを定量化する。

【0200】

免疫組織化学。ＭＣＡＯから７２時間後に安楽死させた媒体およびＳｏｌｕｌｉｎ処置した動物からのパラフィン包埋した切片（５μｍ）を、Ａｐｏｐｔａｇキット（Ｏｎｃｏｒ社、米国メリーランド州ゲーサーズバーグ）を用い、製造業者の説明書に従って調べる。

【0201】

また本明細書の態様は以下のように記載することができる。

【0202】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ－１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ １３プロテアーゼ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、コロニー刺激因子－１（ＣＳＦ－１）、Ｍ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－ω、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２α、ＩＬ－３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２、Ａｎｇ－４、Ａｎｇ－Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形成タンパク質－１、骨形成タンパク質－２、骨形成タンパク質－３、骨形成タンパク質－４、骨形成タンパク質－５、骨形成タンパク質－６、骨形成タンパク質－７、骨形成タンパク質－８、骨形成タンパク質－９、骨形成タンパク質－１０、骨形成タンパク質－１１、骨形成タンパク質－１２、骨形成タンパク質－１３、骨形成タンパク質－１４、骨形成タンパク質－１５、骨形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン－１、毛様体神経栄養因子、毛様体神経栄養因子受容体、Ｃｒｉｐｔｏ、Ｃｒｙｐｔｉｃ、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、表皮増殖因子、エピジェン、エピレグリン、上皮由来好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、線維芽細胞増殖因子（酸性）、線維芽細胞増殖因子（塩基性）、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α１、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合性表皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子１、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子２、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病阻害因子、白血病阻害因子受容体α、神経増殖因子、神経増殖因子受容体、ニューロポイエチン、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β１．２、トランスフォーミング増殖因子β２、トランスフォーミング増殖因子β３、トランスフォーミング増殖因子β５、潜在型トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質Ｉ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチンリシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＤ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、アダリムマブ、デノスマブまたはエタネルセプトから選択されるタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0203】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ－１、組織因子（ＴＦ）、ＡＤＡＭＴＳ １３プロテアーゼ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、コロニー刺激因子－１（ＣＳＦ－１）、Ｍ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、コンセンサスインターフェロン、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－ω、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２α、ＩＬ－３３、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ａｎｇ－１、Ａｎｇ－２、Ａｎｇ－４、Ａｎｇ－Ｙ、アンジオポエチン様ポリペプチド１（ＡＮＧＰＴＬ１）、アンジオポエチン様ポリペプチド２（ＡＮＧＰＴＬ２）、アンジオポエチン様ポリペプチド３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様ポリペプチド４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様ポリペプチド５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様ポリペプチド６（ＡＮＧＰＴＬ６）、アンジオポエチン様ポリペプチド７（ＡＮＧＰＴＬ７）、ビトロネクチン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオゲニン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、骨形成タンパク質－１、骨形成タンパク質－２、骨形成タンパク質－３、骨形成タンパク質－４、骨形成タンパク質－５、骨形成タンパク質－６、骨形成タンパク質－７、骨形成タンパク質－８、骨形成タンパク質－９、骨形成タンパク質－１０、骨形成タンパク質－１１、骨形成タンパク質－１２、骨形成タンパク質－１３、骨形成タンパク質－１４、骨形成タンパク質－１５、骨形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形成タンパク質受容体ＩＢ、骨形成タンパク質受容体ＩＩ、脳由来神経栄養因子、カルジオトロフィン－１、毛様体神経栄養因子、毛様体神経栄養因子受容体、Ｃｒｉｐｔｏ、Ｃｒｙｐｔｉｃ、サイトカイン誘導好中球走化性因子１、サイトカイン誘導好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、表皮増殖因子、エピジェン、エピレグリン、上皮由来好中球誘引物質、線維芽細胞増殖因子４、線維芽細胞増殖因子５、線維芽細胞増殖因子６、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子８、線維芽細胞増殖因子８ｂ、線維芽細胞増殖因子８ｃ、線維芽細胞増殖因子９、線維芽細胞増殖因子１０、線維芽細胞増殖因子１１、線維芽細胞増殖因子１２、線維芽細胞増殖因子１３、線維芽細胞増殖因子１６、線維芽細胞増殖因子１７、線維芽細胞増殖因子１９、線維芽細胞増殖因子２０、線維芽細胞増殖因子２１、線維芽細胞増殖因子（酸性）、線維芽細胞増殖因子（塩基性）、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α１、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合性表皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、肝細胞癌由来増殖因子、インスリン様増殖因子１、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子２、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病阻害因子、白血病阻害因子受容体α、神経増殖因子、神経増殖因子受容体、ニューロポイエチン、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、胎盤増殖因子、胎盤増殖因子２、血小板由来内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、血小板由来増殖因子Ａ鎖、血小板由来増殖因子ＡＡ、血小板由来増殖因子ＡＢ、血小板由来増殖因子Ｂ鎖、血小板由来増殖因子ＢＢ、血小板由来増殖因子受容体α、血小板由来増殖因子受容体β、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β１．２、トランスフォーミング増殖因子β２、トランスフォーミング増殖因子β３、トランスフォーミング増殖因子β５、潜在型トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質Ｉ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩＩ、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＵＰ）、インスリン、レクチンリシン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＤ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、フェチュイン、黄体形成ホルモン、エストロゲン、インスリン、アルブミン、リポタンパク質、フェトプロテイン、トランスフェリン、トロンボポエチン、ウロキナーゼ、インテグリン、トロンビン、レプチン、ヒュミラ（アダリムマブ）、プロリア（デノスマブ）、あるいはその生物学的に活性な断片、誘導体またはバリアントから選択されるタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0204】

ＨＩＶＡを治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、ｇｐ１２０－ｇｐ４１界面においてＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合するタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0205】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、炭酸脱水酵素ＩＸ、α－フェトプロテイン、α－アクチニン－４、Ａ３（Ａ３３抗体に特異的な抗原）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤ１－１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０，ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ～ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＤＫ ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ－１α、結腸特異的抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－Ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ，Ｆｌｔ－１、Ｆｌｔ－３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２もしくは１ａ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、インスリン様増殖因子－１（ＩＧＦ－１）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ１－抗原、ＫＳ１－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、胎盤増殖因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、Ｐ１ＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、サバイビン、サバイビン２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ抗原、トムゼン・フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ｌＡ－抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、癌遺伝子マーカーおよび癌遺伝子産物から選択されるタンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0206】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、メソテリンを認識する抗体または結合タンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0207】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、メタロプロテイナーゼ、スブチラーゼまたはリパーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、スブチラーゼ、メタロプロテイナーゼ、コリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、トリプシン、サブチリシン、サーモリシンまたはＣＴ、コリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、スブチラーゼ、サブチリシン、サーモリシン、リパーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、メタロプロテイナーゼ、キモトリプシン、－キモトリプシンまたはトリプシンを含むエステラーゼ群、キモトリプシン－ｐＤＭＡＥＭＡ（ＣＴ－ｐＤＭＡＥＭＡ）複合体、メタロプロテイナーゼ－ｐＯＥＧＭＡ複合体、サーモリシン－ｐＯＥＧＭＡ複合体、サブチリシン－イオン液体ポリマー複合体、スブチラーゼ－イオン液体ポリマー複合体またはリパーゼ－ｐＤＭＡＡ複合体を含むエステラーゼ－ポリマー複合体などの酵素ポリマー複合体からの酵素から選択される、タンパク質に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0208】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、以下の抗体：トラスツズマブおよびペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブおよびイブリツモマブなどの抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、オレゴボマブなどの抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体、エドレコロマブなどの抗ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）モノクローナル抗体、セツキシマブ、パニツムマブおよびニモツズマブなどの抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、ブレンツキシマブなどの抗ＣＤ３０モノクローナル抗体、ゲムツズマブおよびｈｕＭｙ９－６などの抗ＣＤ３３モノクローナル抗体、エタラシズマブなどの抗血管新生インテグリンαｖβ３モノクローナル抗体、５アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２モノクローナル抗体、エピラツズマブなどの抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、ラベツズマブなどの抗ＣＥＡモノクローナル抗体、ビバツズマブなどの抗ＣＤ４４ｖ６モノクローナル抗体、シブロツズマブなどの抗ＦＡＰモノクローナル抗体、ｈｕＢ４などの抗ＣＤ１９モノクローナル抗体、ｈｕＣ２４２などの抗ＣａｎＡｇモノクローナル抗体、ｈｕＮ９０１などの抗ＣＤ５６モノクローナル抗体、ダラツムマブなどの抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ＤＳ６などの抗ＣＡ６モノクローナル抗体１０、シクスツムマブおよび３Ｂ７などの抗ＩＧＦ－ＩＲモノクローナル抗体、ＣＮＴＯ ９５などの抗インテグリンモノクローナル抗体およびＢ－Ｂ４などの抗シンデカン－１モノクローナル抗体を含む抗体－薬物複合体に共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0209】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－タンパク質複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－複合体は、抗体ではない以下の結合化合物を含む結合分子－薬物複合体に共有結合的に結合されたＰＳＡを含み、抗体以外の結合タンパク質は、限定されるものではないが、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮ－ｆ３およびＩＦＮ－ｙなどのインターフェロン、トランスフェリン、表皮増殖因子（ＥＧＦ）およびＥＧＦ様ドメイン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、ワクシニア増殖因子（ＶＧＦ）、インスリンならびにＩＧＦ－１およびＩＧＦ－２などのインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、メラニン細胞刺激３０ホルモン（ＭＳＨ）、ステロイドホルモン（例えば、エストロゲンおよびアンドロゲン）およびソマトスタチンなどの他の好適なホルモン、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４およびＩＬ－６などのリンホカイン、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、ボンベシン、ガストリンおよび葉酸などの、リガンド－薬物複合体のための細胞結合リガンドとしても使用することができる方法。

【0210】

病気、癌または免疫不全を治療する方法であって、有効量のＰＳＡ－トロンビン複合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、ＰＳＡ－トロンビン複合体はトロンビンに共有結合的に結合されたＰＳＡを含む方法。

【0211】

本発明者（ら）に公知の本発明を実施するための最良の形態を含む本発明の特定の実施形態が本明細書に記載されている。当然ながら、これらの記載されている実施形態に対する変形は、上記説明を読めば当業者に明らかになるであろう。本発明者（ら）は、当業者がそのような変形を適宜用いることを期待しており、本発明者（ら）は、本明細書に具体的に記載されているものとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って本発明は、本明細書に添付されている特許請求の範囲に列挙されている主題の全ての修正および均等物を適用法により認められるものとして含む。さらに、本明細書に特に記載がない限り、あるいは文脈と明らかに矛盾しない限り、その全ての可能な変形における上記実施形態の任意の組み合わせが本発明によって包含される。

【0212】

本発明の他の実施形態、要素または工程のグループ化は、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。各グループの構成要素は個々に、あるいは本明細書に開示されている他のグループの構成要素との任意の組み合わせで言及および特許請求することができる。グループの１つ以上の構成要素は、便宜上および／または特許性のためにグループに含めたり、そこから削除したりすることができるものと予想される。任意のそのような包含または削除が生じた場合、本明細書は、そのグループを修正されたものとして含み、従って、添付の特許請求の範囲に使用されている全てのマーカッシュ群の記載を満たすものとみなされる。

【0213】

特に記載がない限り、本明細書および特許請求の範囲に使用されている特性、項目、量、パラメータ、性質および用語などを表わす全ての数は、「約」という用語により、全ての場合に修正されるものとして理解されるべきである。本明細書で使用される「約」という用語は、そのように修飾された特性、項目、量、パラメータ、性質または用語が、その記載されている特性、項目、量、パラメータ、性質または用語の値の上下±１０％の範囲を包含することを意味する。従って特に矛盾した記載がない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載されている数値パラメータは、変動し得る近似値である。少なくとも、特許請求の範囲に対する均等論の適用を制限しようとするものではなく、各数値の表示は、少なくとも、報告されている有効数字の数を考慮し、かつ通常の丸め技術を適用して解釈されるべきである。本発明の広い範囲を示す数値範囲および数値が近似値であっても、具体例に示されている数値範囲および数値は、可能な限り正確に報告されている。但し、あらゆる数値範囲または数値は本質的に、それらのそれぞれの試験測定値に認められる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含む。本明細書における値の数値範囲の記載は単に、その範囲に含まれる各個別の数値を個々に述べるのを省略する方法としての役割を担うものである。特に本明細書に記載がない限り、数値範囲の各個々の値は、あたかも本明細書に個々に記載されているかのように本明細書に組み込まれる。同様に本明細書で使用される「実質的に」という用語は特に矛盾した記載がない限り、そのように修飾されている特性、項目、量、パラメータ、性質の近似値を示すことが意図されている程度に関する用語であり、当業者によって理解および解釈することができる範囲を包含する。

【0214】

一実施形態または一実施形態の態様を参照する際の「～してもよい」または「～することができる」という用語の使用は、「～しなくてもよい」または「～することはできない」という二者択一的な意味もそれにより有する。従って、本明細書が一実施形態または一実施形態の態様を本発明の主題の一部として含めてもよいこと、あるいは含めることができることを開示している場合、否定的限定または排他的条件も明示的に意味されており、一実施形態または一実施形態の態様を本発明の主題の一部として含めなくてもよい、あるいは含めることができないことを意味する。同様の方法で、一実施形態または一実施形態の態様に言及する際の「任意に」という用語の使用は、そのような実施形態またはそのような実施形態の態様を本発明の主題の一部として含めてもよいこと、または本発明の主題の一部として含めなくてもよいことを意味する。そのような否定的限定または排他的条件が適用されるか否かは、否定的限定または排他的条件が特許請求されている主題に列挙されているか否かに基づく。

【0215】

本発明を記載する文脈（特に、以下の特許請求の範囲の文脈）に使用されている「１つの（ａ）」「１つの（ａｎ）」「その（前記）（ｔｈｅ）」という用語および同様の言及は、本明細書に特に記載がない限り、あるいは文脈と明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含するものとして解釈されるべきである。さらに、特定される要素のための「第１の」「第２の」「第３の」などの序数標識は、それらの要素を区別するために使用されており、特に具体的な記載がない限り、そのような要素の必要な数または限定された数を指示または暗示するものではなく、そのような要素の特定の位置または順序を指示するものではない。本明細書に記載されている全ての方法は、本明細書に特に記載がない限り、あるいは文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供されているありとあらゆる例または例を表わす言葉（例えば「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにするためのものであり、特許請求の範囲に別段の記載がない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいずれの言葉も、本発明の実施に必須なあらゆる特許請求されていない要素を示すものとして解釈されるべきではない。

【0216】

特許請求の範囲に使用されている場合は、出願の際であるのか補正による追加の際であるのかに関わらず、非限定的移行句「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は（「～を備える（含む）（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「～を含有する（含む）（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」）および「～を有する（ｈａｖｉｎｇ）などのその同等の非限定的移行句」と共に）、単独または列挙されていない主題と組み合わせた全ての明示的に列挙されている要素、限定、工程および／または特徴を包含し、列挙されている要素、限定および／または特徴は必須であるが、他の列挙されていない要素、限定および／または特徴が追加されてもよく、特許請求の範囲内の構成をなお形成している。本明細書に開示されている具体的な実施形態は、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の代わりまたは補正として限定的移行句「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」を用いて特許請求の範囲においてさらに限定されている場合がある。特許請求の範囲で使用されている場合、出願の際であるのか補正による追加の際であるのかに関わらず、限定的移行句「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、特許請求の範囲において明示的に列挙されていないあらゆる要素、限定、工程または特徴を排除する。「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という限定的移行句は、特許請求の範囲を明示的に列挙されている要素、限定、工程および／または特徴ならびに特許請求されている主題の基本的および新規な特性に実質的に影響を与えないあらゆる他の要素、限定、工程および／または特徴に限定する。従って、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という非限定的移行句の意味は、具体的に列挙されている要素、限定、工程および／または特徴ならびにあらゆる任意のさらなる明記されていないものを全て包含するものとして定義される。「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という限定的移行句の意味は、特許請求の範囲に具体的に列挙されている要素、限定、工程および／または特徴のみを含むものとして定義されるが、「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という限定的移行句の意味は、特許請求の範囲に具体的に列挙されている要素、限定、工程および／または特徴ならびに特許請求されている主題の基本的および新規な特性に実質的に影響を与えない要素、限定、工程および／または特徴のみを含むものとして定義される。従って、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という非限定的移行句は（その同等の非限定的移行句と共に）、その意味の範囲内で極限の場合として、「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という限定的移行句によって明記されている特許請求されている主題を含む。従って、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語句と共に本明細書に記載されているかそのように特許請求されている実施形態は、「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」および「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という語句のために明示的または本質的に明白に記載され、使用可能であり、かつ支持されている。

【0217】

本明細書で言及および特定されている全ての特許、特許公開公報および他の刊行物の内容全体が、例えば、本発明に関して使用され得るそのような刊行物に記載されている組成物および方法論を記載および開示するために参照により個々に、かつ明示的に本明細書に組み込まれる。これらの刊行物は単に、本出願の出願日より前のそれらの開示のために提供されている。この点に関してはいずれも、本発明者（ら）が、先願発明により、あるいはあらゆる他の理由のために、そのような開示に先行する権利がないということを認めるものとして解釈されるべきではない。これらの文献の日付に関する全ての記載または内容に関する表現は、本出願人に利用可能な情報に基づくものであり、これらの文献の日付または内容の正確性に関するいかなる承認も構成するものではない。

【表1】

【手続補正書】

【提出日】2021-10-05

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2022519586000001.app

【国際調査報告】