特表 2022-520067 モノホスホリルリピドＡリポソーム系癌ワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-28

(54)【発明の名称】モノホスホリルリピドＡリポソーム系癌ワクチン

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20220318BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20220318BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220318BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20220318BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220318BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20220318BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H

A61K47/36

A61P35/00

A61K9/127

A61K39/395 T

A61K39/39

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021546326

(86)(22)【出願日】2020-02-10

(85)【翻訳文提出日】2021-10-06

(86)【国際出願番号】 US2020017553

(87)【国際公開番号】W WO2020163875

(87)【国際公開日】2020-08-13

(31)【優先権主張番号】62/803,103

(32)【優先日】2019-02-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】507371168

【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インコーポレーティッド

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100151301

【弁理士】

【氏名又は名称】戸崎 富哉

(72)【発明者】

【氏名】ミルナー、ローワン、ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】セイヤー、エリアス、ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】サルート、マーク、イー．

(72)【発明者】

【氏名】サハイ、ビカシュ

(72)【発明者】

【氏名】ラグメイ、ジョアン、ピグ

(72)【発明者】

【氏名】カシオ、マシュー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C076AA17

4C076AA19

4C076CC06

4C076EE30

4C076FF33

4C085AA03

4C085AA14

4C085FF21

(57)【要約】

一実施形態では、ワクチン組成物が投与される対象において、ジシアロガングリオシドＧＤ３および／またはＧＤ２に対する抗体の生成を増強するためのワクチン組成物が提供される。一実施形態では、組成物は、対象における抗体生成を刺激または増強するための有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３および／またはＧＤ２を含むリポソームと、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）を含む有効量のアジュバントと、を含む。一例では、ワクチン組成物は、化学療法と組み合わせて対象に投与され得る。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ジサロガングリオシドＧＤ３もしくはＧＤ２、またはそれらの組み合わせに対する抗体の生成を増強するためのワクチン組成物であって、
対象における抗体生成を増強するための有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３もしくはＧＤ２、またはＧＤ３およびＧＤ２の組み合わせと、
モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）を含む有効量のアジュバントと、の混合物を含む、組成物。

【請求項2】

前記組成物が、有効量のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）をさらに含む、請求項１に記載のワクチン組成物。

【請求項3】

前記組成物が、対象においてトール様受容体（ＴＬＲ）を標的とする、請求項１または２に記載のワクチン組成物。

【請求項4】

前記ＭＰＬが、水中油型エマルジョンからなる、請求項１～３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。

【請求項5】

前記水中油型エマルジョンが、前記ＭＰＬを含むリポソームを含む、請求項４に記載のワクチン組成物。

【請求項6】

前記ＭＰＬが、前記リポソームの主成分である、請求項５に記載のワクチン組成物。

【請求項7】

前記リポソームが、１３９．９ＳＤ±５７ｎｍのサイズからなる、請求項５または６に記載のワクチン組成物。

【請求項8】

前記リポソームが、負の２０～１０ｍＶのゼータ電位を含む、請求項５～７のいずれかに記載のワクチン組成物。

【請求項9】

前記ゼータ電位が、負の１７．３２±３．０２ｍＶである、請求項８に記載のワクチン組成物。

【請求項10】

前記組成物が、化学療法と併せて使用者に投与される、請求項１に記載のワクチン組成物。

【請求項11】

前記組成物が、化学療法の２４～７２時間以内に投与される、請求項１０に記載のワクチン組成物。

【請求項12】

対象において癌を治療する方法であって、
有効量の請求項１に記載の前記ワクチン組成物を対象に投与することを含み、
前記ワクチン組成物が、ジシアロガングリオシドＧＤ３、もしくはＧＤ２、またはそれらの組み合わせに対する抗体を生成することに有効である、方法。

【請求項13】

前記投与するステップの前に、細胞試料が対象から得られ、ジシアロガングリオシドＧＤ３ガングリオシドおよび／またはＧＤ２ガングリオシドが、前記細胞内で検出され、ＧＤ３および／またはＧＤ２が、前記細胞試料中で検出され、前記対象が、有効量の請求項１に記載のワクチン組成物で治療される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記細胞試料が、癌細胞試料を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記投与ステップが、前記対象における化学療法治療レジメンと併せて行われる、請求項１２に記載の方法。

【請求項16】

前記投与が、化学療法治療の１２～２４０時間以内に行われる、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記投与が、前記対象に投与される少なくとも４回のワクチン接種を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項18】

前記投与が、前記対象に投与される少なくとも３回のワクチン接種を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項19】

前記投与が、前記対象に投与される少なくとも２回のワクチン接種を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項20】

前記投与が、皮内である、請求項１０～１９に記載の方法。

【請求項21】

前記投与が、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、およびＢ細胞応答のうちの１つ以上を含む前記対象の免疫応答をもたらす、請求項１０～２０に記載の方法。

【請求項22】

ＥＬＩＳＡアッセイを介して、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、またはＢ細胞応答を検出することをさらに含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項23】

フローサイトメトリーを介して、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、またはＢ細胞応答を検出することをさらに含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項24】

前記癌が、脳腫瘍、黒色腫、または肉腫を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項25】

前記肉腫が、骨肉腫を含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

ＧＤ３もしくはＧＤ２、またはＧＤ３とＧＤ２－ナノリポソームとの組み合わせ組成物を生成する方法であって、
リポソーム組成物を得ることであって、前記リポソーム組成物が、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）含有リポソームを含む、リポソーム組成物を得ることと、
有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３、もしくはＧＤ２、またはそれらの自己抗原とＣｐＧＯＤＮとの組み合わせを、前記リポソーム組成物に組み合わせることと、を含む、方法。

【請求項27】

前記リポソーム組成物の前記ナノリポソームが、１３９．９ＳＤ±５７ｎｍのサイズを有する、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記リポソーム組成物の前記ナノリポソームが、－１７．３２±３．０２ｍＶの平均ゼータ電位を含む、請求項２６または２７に記載の方法。

【請求項29】

前記ＭＰＬが、前記リポソームの主成分を含む、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

ＭＰＬ対リポソームのモル比が、少なくとも１：１０である、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項231】

ＭＰＬ対リポソームのモル比が、少なくとも１：４である、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

ＭＰＬ対リポソームのモル比が、少なくとも１：３である、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記リポソーム組成物が、ある量のリピドＡ、スクアレン、レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０および水を組み合わせて混合物を形成することと、エマルジョンを形成するのに十分な時間、前記混合物を超音波処理することとによって生成される、請求項２６～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

超音波処理の２４～４８時間後に、請求項２６～３３に記載のリポソーム組成物を、ＧＤ３もしくはＧＤ２、またはそれらの組み合わせ、および／またはＣＰＧ－ＯＤＮと組み合わせることをさらに含む、請求項３３に記載のいずれかの方法。

【請求項35】

前記化学療法治療レジメンが、白金系化合物を含む少なくとも１つの化学療法剤を含む、請求項１５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

癌は、免疫系による破壊を逃れる能力を有するが、癌細胞の免疫監視および免疫逃避のエビデンスは、免疫系の情報に基づいた処置によって効率的かつ効果的な癌治療が達成可能であり得ることを示唆している。現在までのそのようなアプローチの結果は、一部には、複雑さ、ならびに、例えば、腫瘍反応性Ｔ細胞集団の枯渇、腫瘍における制御性Ｔ細胞による免疫抑制作用、腫瘍抗原の変異性などを含む、癌および免疫系の多くの特徴の依然として限られた理解に起因して、決定的ではなかった。

【背景技術】

【0002】

ジシアロガングリオシドＧＤ３は、ほとんどのヒト黒色腫細胞の主要な表面マーカーである。ＧＤ３に向けられたモノクローナル抗体は、ＧＤ３を認識し、１）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または２）補体媒介性細胞傷害の２つのメカニズムのいずれかによってモノクローナル抗体の表面にかなりのレベルのＧＤ３を発現する４つのヒト黒色腫細胞株を効果的に溶解するように使用されてきた。しかし、細胞の１３％で最小レベルのＧＤ３を発現する黒色腫細胞株は、これら２つのメカニズムのいずれかによるモノクローナル抗体にわずかな溶解を示しており、効果的なインビトロ細胞溶解には閾値レベルの抗原発現が必要であり得ることを示唆している。

【0003】

黒色腫および骨肉腫の癌の不良な予後を考えると、生存率を改善するために新規の治療アプローチが必要である。化学療法は、治療法としての効果はごくわずかであり、多くの副作用を引き起こすが、免疫療法などの他の療法はまだ初期段階にある。癌ワクチンは、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原に対する免疫応答を誘発するように設計されており、免疫系がこれらの抗原を担持する癌細胞を攻撃するよう促す。しかし、癌ワクチンの開発は、癌ワクチンの標的エピトープを頻繁に改変する癌細胞集団におけるクローン進化が進んでいるために難しい。さらに、ワクチンの摂取およびワクチン送達のタイミングにより、癌治療に対するこの免疫療法的アプローチの有効性が制限される。

【0004】

養子Ｔ細胞療法は、様々な癌の治療のための免疫療法に使用されるが、これらの治療には生細胞全体が含まれるため、化学療法後に投与する必要がある。場合によっては、これらの治療法を順番に提供するのではなく、免疫療法を含む他の治療法と化学療法とを同時に組み合わせることが有益であろう。

【発明の概要】

【0005】

例えば、ＧＤ３抗原、ＧＤ２抗原、またはそれらの組み合わせを含むナノリポソーム、ならびに対象における癌を治療または予防するためのアジュバントを含む、癌ワクチンへの異なる新規のアプローチが、本明細書に記載の実施形態で提供される。一実施形態では、アジュバントには、例えば、対象における任意の耐性を克服するのに十分に有意な免疫応答を開始するために、ナノリポソームの主成分としてモノホスホリピドＡ（ＭＰＬ）が含まれる。

【0006】

一実施形態では、ジサロガングリオシドＧＤ３および／またはＧＤ２に対する抗体の生成を増強するためのワクチン組成物が提供される。ワクチン組成物には、対象における抗体生成を増強するための有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３および／またはＧＤ２の混合物と、有効量のモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）を含むアジュバントと、が含まれる。

【0007】

別の実施形態では、対象における癌を治療する方法は、本明細書に記載の有効量のワクチン組成物を対象に投与することによって対象にワクチン接種することを含み、ワクチン組成物は、ジシアロガングリオシドＧＤ３もしくはＧＤ２、または両方に対する抗体を生成するのに効果的である。

【0008】

さらに別の実施形態では、ＧＤ３および／またはＧＤ２含有ナノリポソームを生成する方法が提供される。この方法は、有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３自己抗原および／またはＧＤ２自己抗原と、有効量のモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（「第１の組成物」）とを組み合わせ、第１の組成物を超音波処理に供して、乳化された第１の組成物（「乳化組成物」）を生成することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】ＭＰＬエマルジョン中のナノリポソーム粒子濃度の分布を示すグラフである。

【図2】ナノリポソーム粒子の低温電子顕微鏡スライドを示す。

【図3】黒色腫のイヌおよび正常なイヌにおけるＧＤ３ワクチン接種に対するＩｇＧおよびＩｇＭ特異的免疫応答のグラフを示す。

【図4】黒色腫ワクチン試験において、フェーズ１（中央値３５６日ＩＱＲ１４９２～１６６日）およびフェーズ２中央値（１１６３日ＩＱＲ＋ｉｎｆ－２１０日（Ｐ＝０．０４６））の生存期間を比較するカプラン・マイヤー曲線を示す。

【図5】骨肉腫ワクチン試験のワクチンプロトコルである。

【図6】骨肉腫ワクチン試験におけるイヌのワクチン群と対照群との間の相違を示す無病期間（ＤＦＩ）のグラフである。

【図7】骨肉腫ワクチン試験におけるＤＦＩグラフのデータを示すチャートである。

【図8】骨肉腫試験のフェーズ１後のワクチン群と対照群との間の全生存率をグラフで示す。

【図9】図８の全生存率グラフに表示されたデータを示すチャートである。

【図10】イヌの末梢血中のＭ－ＭＤＳＣおよびＰＭＮ－ＭＤＳＣを分析するためのゲーティング戦略である。黒色腫患者の細胞の代表的なフローサイトメトリー分析。全血をＣＤ１１ｂ、ＭＨＣＩＩおよびＣＤ１４抗体で染色した。死細胞を除外するために、ＦＳＣｖｓ．ＳＳＣ取得ゲートを設定した。ダブレットを除外するために、ＦＳＣ－Ａｖｓ．ＦＳＣ－Ｈを使用した。ＣＤ１１ｂｖｓ．ＭＨＣＩＩを使用してＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－集団を識別し、次いでＣＤ１１ｂｖｓ．ＣＤ１４としてゲートして、ＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４＋（Ｍ－ＭＤＳＣ）集団およびＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４－（ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）集団を識別した。

【図11】図１１Ａ～１１Ｄは黒色腫（ＭＭ）群と対照群との間、およびワクチンの時点全体でのＭ－ＭＤＳＣとＰＭＮ－ＭＤＳＣの割合の比較を示す。ＡおよびＢの測定値は、ベースラインであり、ＣおよびＤのワクチン１時点に相当する。箱ひげ図、ＡおよびＢのひげとドットは、それぞれＩＱＲ、１０パーセンタイルおよび９０パーセンタイル、ならびに外れ値を表す。エラーバーは、ＣおよびＤの線散布図の標準偏差を表す。パーセントＭ－ＭＤＳＣ（Ａ）およびＰＭＮ－ＭＤＳＣ（Ｂ）は、ＭＭ群において対照群と比較して有意に高かった（それぞれ、マン－ホイットニー順位和検定ｐ＝０．００１およびｐ＜０．００１）。ＭＤＳＣの割合は、ＰＭＮ－ＭＤＳＣ（Ｃ）およびＭ－ＭＤＳＣ（Ｄ）の両方について、各ワクチン時点でベースライン（ワクチン１と指定）から減少した。（ＡＮＯＶＡ^＊ｐ＝０．００３、^＊＊ｐ＜０．００１）。

【図12】黒色腫（ＭＭ）群と対照群との間のＭＣＰ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０の血清中濃度の違いを示す。結果を最もよく視覚的に表示するために、ｙ軸にはｌｏｇ１０スケールを使用した。ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０は、対照群と比較してＭＭ群で有意に高かった（それぞれ、マン－ホイットニー順位和検定^＊ｐ＝０．０３５およびｐ＝０．０４６）。群間でＧＭ－ＣＳＦ濃度に有意差はなかった（マン－ホイットニー順位和検定ｐ＞０．０５）。

【図13】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおけるＢ１６－Ｆ１０マウス黒色腫細胞株の試験の図である。３群のマウスにＢ１６黒色腫細胞株を注射した。１群だけにＧＤ３系ワクチンを投与し、他の群は、対照群、マウスとヒトｉＮＫＴ細胞の強力で特異的な活性化因子であるα－ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ）群であった。

【図14】ＧＤ３の存在について染色したＡ３７５、ＣＭＬ－２およびＢ１６の黒色腫細胞から得られたデータを示す。Ｂ１６黒色腫細胞を抗ＧＤ３抗体（クローンＲ２４）（赤線）とともにインキュベートし、ＦＩＴＣタグ付き抗マウス二次抗体（灰色）で染色したＢ１６細胞と染色を比較した。染色した細胞をＢＤ Ｃａｎｔｏ ａｎｄ ＦｌｏｗＪｏ １０版で分析した。

【図15】ＧａｌＣｅｒ（ＩＰ）またはＧＤ３系ワクチンを週４回（皮下）注射したＣ５７ＢＬ／６マウスのデータを示す。最後のワクチン接種から１週間後、ＩＡＣＵＣプロトコルに従ってマウスを安楽死させ、血液、脾臓、肝臓の単離した細胞を抗ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＴＣＲｂ、ＣＤ４９ｂ、およびＮＫ１．１抗体で染色することにより、ナチュラルキラーＴ細胞を評価した。染色した細胞を、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ ａｎｄ ＦｌｏｗＪｏ１０版で分析した。（Ａ）代表的なドットプロットは、肝臓ではＮＫＴ細胞の増加を示しているが、血液および脾臓では増加を示していない（データ不図示）。（Ｂ）収集したＮＫＴ細胞データは、ワクチン接種したマウスの肝臓において有意な増加を示している。ｎ＝４、^＊＜Ｐ０．０５、^＊＊＜Ｐ０．０１。

【図16】Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスまたは雌マウスの左脇腹にＭｅｔｒｉｇｅｌとともに皮下移植した１０^５のＢ１６黒色腫細胞から生じたデータを示す。これらのマウスの群に腫瘍移植の翌日から２週間、毎週胸骨にＧＤ３系ワクチンを皮下投与した。移植から２週間後、マウスを安楽死させ、腫瘍サイズを測定した。（Ａ）雄のマウスの腫瘍サイズおよび（Ｂ）雌のマウスの腫瘍サイズ。ｎ＝５、^＊＜Ｐ０．０５、^＊＊＊＊＜Ｐ０．０００１

【発明を実施するための形態】

【0010】

定義
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書で言及されるすべての刊行物は、参照により本書に組み込まれる。

【0011】

一般に、本明細書に記載の細胞と組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質、および核酸化学とハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法およびそれらの技術は、当技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。本発明の方法および技術は、特に明記しない限り、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書全体で引用および考察されている様々な一般的かつより具体的な参考文献に記載されるように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２，およびＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ ｔｏ ２００２）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）；Ｋａｎｄｅｌ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，ａｎｄ Ｊｅｓｓｅｌｌ，ｅｄｓ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，４ｔｈ ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ／Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２０００）を参照されたい。別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。

【0012】

具体的な例として、「主成分」という用語は、リポソーム中のリン脂質含有量に対するＭＰＬのモル比を指す。この文脈において、例えば、ＭＰＬがリポソームの１：１０以上の総リン脂質（ＭＰＬ：リン脂質）に対するモル比を構成する場合、ＭＰＬは主成分である。より具体的な非限定的例では、ＭＰＬは、その主成分として、リポソームの少なくとも１：４のモル比を構成し得る。さらに、別の非限定的実施形態では、ＭＰＬは、リポソームの主成分として少なくとも１：３のモル比を構成し得る。

【0013】

「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」などの用語は、単一のエンティティのみを指すことを意図したものではなく、説明のために、具体的な例が使用され得る一般的なクラスを含む。本明細書の用語は、本発明の具体的な実施形態を説明するために使用されるが、それらの使用法は、特許請求の範囲に概説される場合を除いて、本発明の限界を定めるものではない。

【0014】

本明細書で使用される「動物」、「患者」、または「対象」という用語は、特定の治療のレシピエントとなる任意の動物（例えば、哺乳動物（ヒト、霊長類、イヌ、ウシ、雌ウシ、ウマ、カンガルー、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、ウサギ、げっ歯類、およびトランスジェニック非ヒト動物）などを含むがこれらに限定されない、を意味する。典型的には、「動物」、「対象」および「患者」という用語は、本明細書では、ヒト対象またはげっ歯類に関連して言い換え可能で使用される。好ましい動物、患者、または対象は、ヒトである。

【0015】

ヒト、哺乳動物、哺乳動物対象、動物、獣医対象、プラセボ対象、研究対象、実験対象、細胞、組織、器官、または生体液に適用される「投与」という用語は、対象、細胞、組織、器官、または生体液などへの外因性リガンド、試薬、プラセボ、小分子、医薬品、治療薬、診断薬、または組成物の接触を指すが、これらに限定されない。

【0016】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、意図された生物学的効果を生み出すのに十分なワクチン組成物または混合物の量を指す。

【0017】

本明細書で使用される「癌」という用語は、その独自の特性である正常な制御が喪失し、無秩序な成長、分化の欠如、局所組織浸潤、および／または転移をもたらす細胞の過剰増殖として定義される。例としては、黒色腫、結腸癌、十二指腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、腺管癌、肝癌、膵臓癌、肝臓癌、肉腫、腎癌、子宮内膜癌、精巣癌、胃癌、異形成口腔粘膜、ポリープ症、甲状腺癌、頸部癌、頭頸部癌、浸潤性口腔癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、移行性および扁平上皮細胞尿癌、脳癌、神経芽細胞腫、および神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。非限定的実施形態では、癌は、本明細書で考察されるように、脳腫瘍、肉腫、特に骨肉腫、または黒色腫を指し得る。

【0018】

本明細書で使用される場合、「ワクチン」という用語は、適応免疫応答の細胞、すなわち、Ｂ細胞および／またはＴ細胞に効果をもたらすことによって疾患の経過に影響を及ぼす組成物を指す。ワクチンの効果には、例えば、細胞媒介性免疫の誘導またはその抗原に対するＴ細胞の応答の変化が含まれ得る。ワクチンは、治療的投与または予防的投与に使用することができる。ワクチン組成物の効果は、抗体レベル、例えば、ＩｇＭおよびＩｇＧのレベル、または対象における他の抗体を試験することによって測定することもできる。他の例では、ワクチン組成物の効果は、細胞媒介性細胞傷害が発生したかどうかを識別することによるものを含み得る。本明細書に記載の特定の実施形態では、ワクチンは、自然免疫応答、すなわち、インバリアントナチュラルキラー細胞（ｉＮＫＴ細胞）に効果をもたらし得る。ＧＤ３は、自己抗原として説明されることが多く、したがって、アジュバント系免疫療法として使用するには、自己抗原に対する体の耐性を克服するために免疫応答の強化が必要である。本明細書で使用されるＧＤ３という用語は、正常な神経細胞およびメラノサイトの表面に正常なレベルで見出され、発現されるガングリオシドを含むが、それらは、例えば、骨肉腫、黒色腫などを含む癌組織において高レベルで発現されることが本明細書で見出されている。ＧＤ３は、ガングリオシドであり、細胞外領域に伸びるその様々なグリカンにより、そのセラミド脂質を介して原形質膜に固定される。本明細書で使用される用語ＧＤ３は、ＧＤ３またはＧＤ３タンパク質模倣物を指す。

【0019】

本明細書で使用される「ＧＤ２」という用語は、ＧＤ３と同様に、正常な神経細胞およびメラノサイトの表面に正常なレベルで見出され、発現されるガングリオシドを含むが、それらは、例えば、骨肉腫、黒色腫、および他の癌を含む癌組織において高レベルで発現されることが本明細書で見出されている。ＧＤ２は、例えば、ヒト脳またはウシの脳などの神経組織から供給でき、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（ｗｗｗ．ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇ／ｐｒｏｄｕｃｔ）またはＭｙ ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｙｂｉｏｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ／ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ－ｇｄ２／６５４２７３）から入手可能である。本明細書で使用される用語ＧＤ２は、ＧＤ２またはＧＤ２タンパク質模倣物を指す。

【0020】

一非限定的実施形態では、本明細書に記載のＧＤ２模倣物は、ＥＤＰＳＨＳＬＧＬＤＡＡＬＦＭまたはＲＣＮＰＮＭＥＰＰＲＣＷＡＡＥＧＤのアミノ酸配列を含み得る。一非限定的実施形態では、本明細書に記載のＧＤ３模倣物は、ＲＨＡＹＲＳＭＡＥＷＧＦＬＹＳのアミノ酸配列を含み得る。

【0021】

いくつかの実施形態では、ＧＤ３またはＧＤ２を含むワクチン組成物が、本明細書で提供され得る。しかし、他の実施形態では、ワクチン組成物は、ＧＤ３またはＧＤ２のいずれかを含み得る。本明細書で参照される「ＧＤ３」はまた、ＧＤ３模倣物を含むと解釈され、本明細書で参照される「ＧＤ２」はまた、Ｐｏｐａ ｅｔ ａｌ．に記載のＤ２模倣物を含むと解釈される。ファージペプチドライブラリーから選択されるＧＤ３レプリカペプチドは、ＧＤ３ガングリオシド抗体応答を誘導する。Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８０（２００６）１３９８－１４０４．１８ Ｊａｎｕａｒｙ ２００６．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ＢＶ ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｆｅｂｓｌｅｔ．２００６．０１．０６３により発表された。

【0022】

本明細書で使用される場合、「併せて」という用語は、同時にまたはほぼ同時タイミングを指す。併せては、化学療法治療の投与から１２～２４０時間以内、または化学療法治療前の１２～２４０時間以内、または化学療法治療後の１２～２４０時間以内が含まれ得る。

【0023】

請求項に記載の方法に関連する本明細書で使用される「細胞試料」という用語は、癌細胞試料を含む。

【0024】

本明細書に記載の実施形態としては、対象に投与される化学療法治療レジメンを含む方法が挙げられる。化学療法治療レジメンは、１つ以上の化学療法剤の対象への投与を含む。本明細書で使用される「化学療法剤」という用語としては、白金系化合物、ビンカアルカロイド、タキサン、プロテアソーム阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、および抗腫瘍抗生物質が挙げられるが、これらに限定されない様々な既知の種類の化学療法を含み得る。非限定的実施形態では、白金系化合物としては、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチンを挙げることができる。非限定的実施形態では、ビンカアルカロイドとしては、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンブラスチン、またはビノレルビンを挙げることができる。タキサンとしては、例えば、パクリタキセルまたはドセタキセルを挙げることができる。プロテアソーム阻害剤としては、例えば、ボルテゾミブが挙げられることができる。

【0025】

本明細書で使用される「増強」という用語は、質または量の増加、刺激、または強化を指す。一非限定的例では、対象へのワクチンの投与は、対象において抗体の産生を増強し得る。いくつかの非限定的実施形態では、抗体の産生を増強することは、提示された抗原に対する抗体の産生を刺激することを含み得る。別の非限定的例では、抗体の産生を増強することは、関連する抗原に対する対象の免疫寛容または免疫抑制を克服するのに十分な抗体の増加を含み得る。

【0026】

概要
その転移の可能性の結果として、悪性黒色腫は、従来の治療プロトコルに対する反応が悪い。ヒトおよびイヌの黒色腫は、侵襲性で転移性の高い癌である。ヒトおよびイヌの両粘膜形態は、いくつかの遺伝的および病理組織学的特徴を共有しており、イヌを貴重な自然発生疾患の動物モデルにしている。ヒトおよびイヌの両方において、悪性黒色腫は、疾患経過の初期に、転移率の高い侵襲性の癌である［６２、９３］。ヒトの粘膜黒色腫および非ＵＶ誘発皮膚黒色腫は、病理組織学的および遺伝的特徴をイヌの粘膜黒色腫および皮膚悪性黒色腫と共有しているが、イヌ（経口）とヒトの粘膜黒色腫間の変異プロファイルにおける類似点および相違点が明らかにされている［９４］。変異プロファイルにおけるこれらの相違は、腫瘍の挙動に影響し、したがって治療に対する反応に影響を与え得る。それにもかかわらず、イヌの粘膜黒色腫は、免疫療法の標的が両方の種、例えばＧＤ３で発生することが既知である自然発生の癌における免疫療法剤の研究のための大型動物のトランスレーショナルモデルとして貴重な役割を果たしている［４３、９４］。免疫療法の成功の重要な要因は、腫瘍誘発性の宿主免疫寛容および免疫回避を克服することであり、これにより腫瘍免疫学と抑制性腫瘍微小環境に関する研究が増加している［２３］。この中で、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、免疫エフェクター細胞の機能をブロックする重要なプレーヤーとして最近浮上している。［８６］_．

【0027】

骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、免疫抑制能力を備えた骨髄由来の細胞の不均一集団であり、多くのヒトの癌において増加し、腫瘍の免疫回避に寄与する。癌に関連する拡大のために最初に識別されたＭＤＳＣは、炎症、外傷、敗血症などの他の病的状態で拡大することが示されているが、健康な動物には少数しか存在しない（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ａｎｄ Ｎａｇａｒａｊ、２００９；Ｇｏｕｌａｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。ＭＤＳＣは、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、活性酸素種（ＲＯＳ）、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－βおよびＩＦＮ－γなどの免疫抑制メディエータの生成を含む、宿主免疫応答を調節できる様々なメカニズムを有する（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｋｈａｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。複数の要因が、癌のＭＤＳＣの増加に関与していることが明らかにされている（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｋｈａｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。特に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）は、骨髄刺激を介してＭＤＳＣ形成を促進することが判明しており（Ｄｏｌｃｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｌｅｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）、および単球走化性タンパク質（ＭＣＰ－１、ケモカイン（ＣＣモチーフ）リガンド２またはＣＣＬ２としても既知である）は、腫瘍形成および転移を促進するＭＤＳＣを含む腫瘍微小環境内の細胞に直接影響を与えることが明らかにされている（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。さらに、ＭＣＰ－１／ＣＣＲ２経路は、ＭＤＳＣの腫瘍への移動および腫瘍の成長に重要な役割を果たしていることが判明している（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７）。

【0028】

マウスでは、ＭＤＳＣは、ＣＤ１１ｂおよびＧＲ１（顆粒球マーカー）の特徴的な共発現によって定義されるが、ヒト白血球にはＧＲ１に類似したマーカーがなく、現在まで、ＭＤＳＣ特有のマーカーは識別されていない（Ｂｒｏｎｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｋｈａｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。それにもかかわらず、細胞表面マーカーの形態および表現型発現の分析における進歩は、ヒトおよびマウスの両方における単球（Ｍ－ＭＤＳＣ）および多形核（ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）の少なくとも２つの主要なＭＤＳＣサブセットの識別をもたらし、主要なサブセットの拡大のパターンは、様々なヒトの癌型間で変化することが明らかにされている（Ｋｈａｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｍａｒｖｅｌ ａｎｄ Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ，２０１５）。

【0029】

ヒトの実験室と研究との間の解釈および比較を改善するために、ＰＭＮ－ＭＤＳＣについてＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４－ＣＤ１５＋（またはＣＤ６６ｂ＋）およびＭ－ＭＤＳＣについてＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４＋ＨＬＡ－ＤＲｌｏｗ／－ＣＤ１５－の最小表現型定義が、ＭＤＳＣの識別を確認するために推奨されるＴ細胞抑制アッセイによる免疫抑制能力の機能実証により最近提案された（Ｂｒｏｎｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。ＭＤＳＣは、腫瘍免疫回避および宿主腫瘍耐性に大きく貢献しており、サイトカインメディエータとともに、治療的介入の魅力的な標的となっている（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ａｎｄ Ｎａｇａｒａｊ，２００９）。しかし、これまでのところ、イヌのＭＤＳＣに関する研究はわずかしか発表されておらず、このモデルの標的としてこれらの細胞を調査する能力が制限されている。

【0030】

免疫療法は、依然としてヒトの黒色腫の治療における重要な治療選択肢であり、結果を改善する試みの中で多くの異なる治療法が使用されてきた（Ｌｉｎｄｓａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。同様に、黒色腫の患犬に使用される免疫療法戦略は様々であり、大部分はワクチン投与を介する能動的な特異免疫を使用している（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｂｅｒｇｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｄｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｆｉｎｏｃｃｈｉａｒｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｈｅｌｆａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９９，１９９４；Ｈｏｇｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９９；ＭａｃＥｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，１９８６；ｖｏｎ Ｅｕｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。これまでの研究では、黒色腫細胞表面のジシアロガングリオシドＧＤ３がイヌの黒色腫細胞株で高度に発現し、ジシアロガングリオシドＧＤ３系ワクチンは、忍容性が高く、正常なイヌに適切な自然免疫応答と適応免疫応答を誘導することが示されている［２］。ＭＤＳＣおよびＭＣＰ－１／ＣＣＲ２経路の腫瘍促進能力により、ＭＤＳＣを治療的介入の魅力的な標的とし、それらの効果を軽減することで、免疫療法の反応の改善に役立ち得る。

【0031】

治療標的としてこれらの細胞を調査するために、ＭＤＳＣのさらなる特徴づけおよび個々のイヌの癌におけるそれらの役割が、本明細書に記載されるように判定された。本明細書での発見により、フローサイトメトリープロトコルを使用して、正常なイヌ、皮膚および指の黒色腫を有するイヌにおける抗体と適合する市販の抗体を使用して、ＭＤＳＣサブセットの主要な変化を識別および特徴付けた。実現可能性の調査により、公開されたプロトコルを要約し、将来の免疫療法介入研究のベースラインを確立した。さらに、ＭＤＳＣサブセットの変化を、さらなる細胞傷害性癌治療の非存在下で、本明細書に記載のＧＤ３系ワクチンの実施形態の投与に応じて経時的に比較した。最後に、ケモカインＭＣＰ－１およびサイトカインＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－１０の血清発現プロファイルを、ＧＤ３系ワクチン実施形態の投与に応じてそれらのレベルの相関とともに評価した。

【0032】

前述のように、ＭＤＳＣは、免疫療法の結果を改善するための貴重な標的として本明細書で識別されている。イヌのＭＤＳＣに関する現在の情報はわずかであり、ＭＤＳＣの研究のためのトランスレーショナルモデルとしてのそれらの使用は限定される。本明細書では、ＧＤ３系能動免疫療法に応じてＭＤＳＣおよびサイトカインの経時変化を評価するために、悪性黒色腫のイヌにおける主要なＭＤＳＣサブセット（単球と多形核）およびサイトカイン顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）および単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）の特徴付けを行った。

【0033】

免疫療法は現在、癌の治療における主要な研究分野であり、免疫系を使用して腫瘍の発症を予防し、または発症した腫瘍を拒絶することを目的とする。免疫療法の最大の課題は、免疫系にもかかわらず腫瘍が発症することであり、これは、一部には、免疫細胞の効果的な浸潤を妨げる免疫抑制性腫瘍微小環境が原因であると考えられている（Ｔｉｋｏｏ ａｎｄ Ｈａａｓｓ、２０１５；Ｖｅｓｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。免疫抑制性腫瘍微小環境に対抗することは、腫瘍回避のメカニズムを妨げ、免疫療法の有効性を改善するための潜在的な方法である。ＭＤＳＣは最近、これらの主要なプレーヤーの１つとして浮上してきた（Ｔｃｙｇａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｔｓａｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。本明細書の実施形態では、黒色腫を有するイヌ由来の全血試料でフローサイトメトリープロトコルを使用して、さらなる細胞傷害性癌治療の非存在下で、ＧＤ３系ワクチン実施形態の投与に応じてＭＤＳＣサブセットおよび潜在的な影響力のあるサイトカインの経時変化を比較する。

【0034】

本明細書に記載の実施形態は、ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ）を含むリポソームと組み合わされたＧＤ３抗原ワクチンを含み、この場合、ＭＰＬは、リポソームの主成分である。ワクチンの実施形態は、免疫系を刺激するために化学療法治療中に送達され得る癌ワクチンを提供する。

【0035】

一実施形態では、例えば、ＧＤ３およびアジュバントを含む皮内ワクチン接種が設計されている。ワクチンの実施形態は、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）配列、および自然免疫系のトール様受容体（ＴＬＲ）を標的とするためのアジュバントを含む。ワクチンにＣｐＧ－ＯＤＮ配列を含め、ＧＤ３濃度を上げると、注射部位の炎症反応が増加する。

【0036】

本明細書の試験に記載されるように、ワクチン接種されたイヌにおけるＧＤ３のＩｇＧおよびＩｇＭ抗体は、経時的に増加する力価を示した。細胞媒介性細胞傷害は、ワクチン接種されたイヌの末梢血単核細胞でのみ検出された。腫瘍抗原ＧＤ３（既知の弱い自己抗原）をアジュバントと組み合わせると、自然免疫および適応免疫応答による耐性を克服する結果になった。

【0037】

ＧＤ３抗原ワクチンは、特に、黒色腫に対して、および手術と化学療法が標準治療である骨肉腫では、有益である。ＧＤ３抗原を含むナノサイズのＭＰＬリポソームは、少なくとも部分的には、少なくとも負の１７のゼータ電位の結果として、安定の増加をもたらし、ナノリポソームが安定する。

【0038】

脂質および糖脂質のメディエータは、アポトーシスを含むストレスへの適応応答の重要なメッセンジャである。哺乳類細胞では、酸性スフィンゴ糖脂質であるガングリオシドＧＤ３の細胞内蓄積が、アポトーシスプログラム中の重要な事象であるミトコンドリア損傷に寄与する。ＧＤ３は、ほとんどの正常組織に見られる微量のガングリオシドであるその発現は、癌および神経変性障害などの発症中、およびそれらの病的状態で増加し、これらの疾患の治療または予防に使用するための標的を提供する。

【0039】

本明細書に記載のワクチン組成物は、癌、特に肉腫または黒色腫腫瘍を治療および／または予防および／または制御するために哺乳動物、特にヒトへの投与に有用である。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物、特にヒトを含み得、さらに、いくつかの非限定的実施形態では、神経変性障害、脳腫瘍を含む癌、黒色腫もしくはいくつかの例では肉腫と診断された、またはこれらを発症するリスクのあるヒトを含み得る。

【0040】

本明細書に記載のガングリオシドを含むワクチン組成物は、癌を患っている患者、または癌を患うリスクのある患者に投与することができる。治療用途では、ガングリオシド（ＧＤ３）およびリポソームＭＰＬおよび／または核酸組成物は、癌抗原、またはより具体的には癌イディオタイプに対する効果的な自然免疫応答および／または適応免疫応答を誘発するのに十分な量で患者に投与されて、症状および／または合併症を少なくとも部分的に阻止または遅延させる。これを達成するために十分な量は、「治療上有効な用量または量」として定義される。この使用に有効な量は、例えば、投与される特定の組成物、投与方法、治療される疾患のステージおよび重症度、患者の体重および健康状態全般、ならびに処方する医師の判断に依存することになる。

【0041】

本明細書に記載の少なくともいくつかの実施形態では、ガングリオシドは、セラミドと、１つ以上のシアル酸が糖鎖上に連結されているセラミドおよびオリゴ糖と、ＭＰＬと、ＯＤＮであるＣｐＧ（非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド）と、を含む。

【0042】

本発明のワクチン組成物の実施形態はまた、純粋に予防剤として使用され得る。一般に、最初の予防的免疫化の投与量は、一般に、単位投与量範囲で生じる。１つの具体的な非限定的な例において、投与量は、約３００μＬのＭＰＬ、１５０μＬのＧＤ３（ＧＤ３は、１ｍＬの水溶液中１ｍｇの１５０μＬを含み得る）および２６．８μＬのＣＰＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ ＯＤＮは、１ｍＬの水溶液中５ｍｇを２６．８μＬであり得る）を一用量に含むことができ、または非限定的実施形態では、複数のサブパートで含むことができる。したがって、一実施形態では、ＭＰＬは、ＭＰＬ－ＧＤ３－ＣｐＧ ＯＤＮの組み合わせの６０％を超えて構成され、それ自体、本明細書に記載のワクチン組成物の主成分である。

【0043】

ワクチンの免疫原性は、患者の血液試料から得られたＧＤ３特異的抗体（ＩｇＧおよびＩｇＭ）の比活性を測定することによって評価することができる（Ｍｉｌｎｅｒ ２００６）。インビトロ細胞傷害性アッセイを、インビトロで黒色腫細胞の死滅を示したワクチン接種されたイヌ由来の末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用して行った。さらに、ＧＤ３系ワクチンは、対照と比較した場合、マウスＣ５７ＢＬ／６黒色腫モデルのナチュラルキラー細胞（ＮＫＴ）を増加させることが明らかになった（ＡＡＣＲ Ｍｉｌｎｅｒ ２０１８）。ＮＫＴ細胞は、ＧＤ３などの脂質抗原に関連する癌内のエフェクター細胞（癌死滅細胞）として識別される。免疫学的エンドポイントに加えて、経時的な原発腫瘍サイズ、転移までの期間、および全生存を、例えば、Ｘ線検査、ＣＴおよび超音波を含む当技術分野で既知である標準的画像検査方法を使用して測定した。

【0044】

最初の治療的免疫化の投与量は、一般に数週間から数ヶ月にわたって単位投与量で生じ、上述のように患者の血液試料から得られたＧＤ３特異的抗体（ＩｇＧおよびＩｇＭ）を測定することによって判定される患者の反応および状態に応じて投与され得る。

【0045】

本発明の組成物は、生命を脅かすまたは潜在的に生命を脅かす状況を含む深刻な病状で使用することができる。そのような場合、最小量の異物および本発明の組成物の比較的非毒性の性質の結果として、これらの記載された投与量と比べてこれらの組成物のかなりの過剰を投与することもあり得、望ましいこともあり得る。

【0046】

治療的治療のための組成物は、非経口、局所、経口、髄腔内または局所投与を目的としている。好ましくは、組成物は、非経口的に、例えば、静脈内、皮下、皮内、または筋肉内に投与される。したがって、本発明は、許容される担体、好ましくは水性担体に溶解または懸濁されたガングリオシドの溶液を含む非経口投与用の組成物を提供する。様々な水性担体、例えば、水、緩衝水、０．８％生理食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸などを使用することができる。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができ、または滅菌濾過することができる。得られた水溶液は、そのまま使用するためにパッケージするか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥した調製物は、投与前に滅菌溶液と混合される。組成物は、ｐＨ調整剤および緩衝剤、等張化剤、湿潤剤、保存剤などの生理学的条件に近づけるために必要とされる薬学的に許容される補助物質、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンラウリン酸モノエステル、トリエタノールアミンオレアートなどを含み得る。

【0047】

本明細書に記載のＧＤ３／ＭＰＬ組成物の実施形態のヒト単位剤形は、典型的には、許容される担体、好ましくは水性担体のヒト単位用量を含み、そのような組成物をヒトに投与するために使用されることが当業者によって既知である流体の量で投与される医薬組成物に含まれる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄｉｔｏｒ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５を参照されたい）。

【0048】

本明細書に記載の組成物の実施形態は、ＧＤ３／ＭＰＬまたは他の組成物の実施形態をリンパ組織などの特定の組織に標的化する、または感染細胞に選択的に標的化する、および／または組成物の半減期を増加させるのに役立つリポソームを介して投与することができる。リポソームには、エマルジョン、発泡体、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、層状層などが含まれ得る。これらの調製物において、送達されるガングリオシドは、リポソームの一部として、単独で、または癌細胞に行き渡っている受容体に結合する分子と併せて組み込まれる。したがって、本明細書の実施形態に記載の所望のガングリオシド、すなわちＧＤ３で満たされたまたは装飾されたリポソームのいずれか、およびＭＰＬは、樹状細胞（すなわち、ランゲルハンス細胞（ＬＣ））などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）に送達される。その後、ＡＰＣは、ＣＤ１ｂを介してＧＤ３を免疫系に提示し、次いでＣＤ１ｂは、ｉＮＫＴ細胞を活性化する。これらのｉＮＫＴ細胞は、ＧＤ３を発現する癌細胞に移動し、癌細胞上で細胞殺傷効果を刺激する。本発明に記載の実施形態に従って使用するためのリポソームは、標準的な小胞形成脂質から形成することができ、これは一般に中性リン脂質および負に荷電したリン脂質ならびにコレステロールなどのステロールを含む。脂質の選択は、一般に、血流中のリポソームのサイズ、酸の不安定性、およびリポソームの安定性を考慮することによって導かれる。様々な方法が、例えば、Ｓｚｏｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７（１９８０）、および米国特許第４，２３５，８７１号、同４，５０１，７２８号、同４，８３７，０２８号、および同５，０１９，３６９号に記載されるように、リポソームを調製するために利用可能である。代替的な実施形態では、本明細書に記載の本発明概念に従ってリポソームを形成するための新規の方法が提供される。特に、対象への投与のために本明細書で考察される組成物で使用するための新規ナノリポソームを形成するための方法が記載されている。

【0049】

免疫系の細胞を標的とするために、リポソームに組み込まれるリガンドは、例えば、所望の免疫系細胞の細胞表面決定因子に特異的な抗体またはそのフラグメントを含み得る。本明細書に記載の組成物を含むリポソーム懸濁液は、静脈内に、局部的に、局所的に、または他の方法で、とりわけ、投与方法、送達される組成物、および治療される疾患の段階に応じて変化する用量で投与され得る。

【0050】

固体組成物の場合、従来の無毒の固体担体を使用してもよく、例えば、これらに限定されないが、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。

【0051】

一実施形態では、ジシアロガングリオシドＧＤ３に対する抗体の産生を増強するためのワクチン組成物が提供される。組成物は、対象における抗体産生を増強するための有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３の混合物と、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）を含む有効量のアジュバントとを含み得る。さらなる実施形態では、組成物は、有効量のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含み得る。さらに別の実施形態では、アジュバントは、適応免疫系および／または自然免疫系の活性化において、対象のトール様受容体（ＴＬＲ）を標的とする。

【0052】

ＭＰＬには、抗原提示細胞を活性化し、サイトカインカスケードを誘導する能力を有する。ＭＰＬは単球およびマクロファージを活性化することも示されている（３）。これらの細胞を活性化することにより、ワクチン抗原は、より容易に貪食、処理、かつ提示される。ＭＰＬはまた、Ｔヘルパー細胞１型（Ｔｈ１）サイトカインＩＬ－２およびインターフェロンγの産生を直接刺激する。いくつかの非限定的実施形態では、ＭＰＬが主成分である組成物が提供され得る。

【0053】

本明細書に記載のワクチン組成物または混合物の実施形態は、皮下に、皮内に、真皮内に、静脈内に、動脈内に、腫瘍内に、非経口に、腹腔内に、筋肉内に、眼内に、骨内に、硬膜外に、硬膜内などに投与することができる。多くの場合、ワクチン接種の最も一般的な経路は、皮下（ＳＣ）、皮内（ＩＤ）、静脈内（ＩＶ）、腫瘍内（ＩＴ）、および腹腔内（ＩＰ）である。本明細書に記載の実施形態では、皮内注射が最も効果的である。局所炎症は、局所免疫刺激を引き起こし、その後に全身性免疫応答に発展する。これは、筋肉内注射または皮下注射でさえ発生する可能性がはるかに低い。ワクチンが緩衝液および／または薬理学的に許容される塩と適合性がある限り、これらは、１つ以上の添加剤と好適に混合された水溶液中で調製することができる。通常の保管および使用条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐために、限られた量の保存剤および／または抗生物質を含み得る。

【0054】

さらに、いくつかの実施形態では、組成物は、水中油型エマルジョンを含み得る。エマルジョンは、注射部位に組織損傷を引き起こし、非特異的炎症、マクロファージの誘引、および免疫学的カスケードの開始という結果になり得る。エマルジョン中の油滴に結合する抗原は、本質的により粒子状になりやすい。粒子は、リンパ節に閉じ込められやすく、マクロファージおよび樹状細胞に取り込まれ、抗原提示が強化される。ＭＰＬは、両親媒性であるため、油滴と結合し、油と水の界面に沿って分布することにより、水中油型エマルジョンのアジュバント活性を補完および強化する。さらなる実施形態では、水中油型エマルジョンには、ＭＰＬを含むリポソームが含まれている。

【0055】

本明細書に記載のリポソームは、１３９．９ＳＤ±５７ｎｍのサイズを含み得る。いくつかの非限定的実施形態では、リポソームは、負の２０～１０ｍＶのゼータ電位を含み、別の実施形態では、ゼータ電位は、負の１７．３２±３．０２ｍＶであり得る。

【0056】

本明細書に記載の他の実施形態は、癌、例えば、対象の黒色腫および／または肉腫を治療する方法を含み、実施形態では本明細書に記載のワクチン組成物の有効量を対象に投与することによって対象にワクチン接種することを含み、ワクチン組成物は、ジシアロガングリオシドＧＤ３に対する抗体を生成することに効果的である。投与は、対象における化学療法治療レジメンと併せて行われ得る。いくつかの例において、化学療法治療と併せた投与は、化学療法治療の２４～７２時間以内を含み得、これは、化学療法治療前の２４～７２時間、または化学療法治療後の２４～７２時間を含み得る。併せて、化学療法治療中に行われる投与も含まれる。

【0057】

一実施形態では、投与は、少なくとも４回のワクチン接種を含み得る。別の実施形態では、投与は、少なくとも３回のワクチン接種を含み得る。さらに別の実施形態では、投与は、少なくとも２回のワクチン接種を含み得る。投与は、対象の複数の投与部位で行われ得る。いくつかの例では、投与部位での局所反応を識別するために、複数部位投与が行われ得る。一例では、投与部位は、細針吸引物サンプリングのために容易にアクセス可能な流入領域リンパ節を有する部位でなされ得る。非限定的例では、部位は、左肩、右肩、および１つの臀部投与部位を含み得る。

【0058】

別の実施形態では、ＧＤ３－リポソーム組成物を生成する方法が提供される。特定の実施形態では、リポソームは、ナノリポソームを含む。一実施形態では、この方法は、リポソーム組成物を得ることであって、該リポソーム組成物がモノホスホリルリピドＡ含有リポソームを含むリポソーム組成物を得ることと、有効量のジシアロガングリオシドＧＤ３自己抗原およびＣｐＧ ＯＤＮをリポソーム組成物に組み合わせることとを含む。一実施形態では、乳化組成物中のナノリポソームは、１３９．９ＳＤ±５７ｎｍのサイズを有し得る。別の実施形態では、組成物中のナノリポソームは、－１７．３２±３．０２ｍＶの平均ゼータ電位を含み得る。

【0059】

別の実施形態では、ＧＤ３－リポソーム組成物を生成する方法は、ある量のリピドＡ、スクアレン、レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０および水を組み合わせて混合物を形成することと、エマルジョンを形成するのに十分な時間、この混合物を超音波処理することと、をさらに含み得る。さらに別の実施形態では、この方法は、ＧＤ３およびＣｐＧ－ＯＤＮを組み合わせる前に、リポソーム組成物を少なくとも２４時間または４８時間保存することを含み得る。

【0060】

材料および方法
実施例１の材料および方法
本明細書に記載の実施形態では、新規ナノリポ－ＧＤ３組成物の調製は、ＭＰＬ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ（Ｌ６８９５）、５ｍｇボトル）、ＣＰＧ－ＯＤＮ（Ａｌｐｈａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｓａｎ Ａｎｔｏｎｉｏ ＴＸ（ＯＤＮ２００７－５））Ｂ型）およびＧＤ３（Ｍａｔｒｅｙａ ＬＬＣ，Ｓｔａｔｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ＰＡ，（ＳＰＬ１５０４，ＧＤ３ＮＨ４＋塩）を含む。ＭＰＬ製剤を調製し［４］、超音波処理する。いくつかの実施形態では、ナノリポ－ＧＤ３免疫療法は、成分（３００μＬのＭＰＬ、１５０μＬのＧＤ３および２６．８μＬのＣＰＧ ＯＤＮ ２００７）を組み合わせることにより、ワクチン接種時に新たに調製される。調製されたエマルジョン（４７６．８μＬ）を含む組成物は、皮内投与され得る。いくつかの実施形態では、投与は、３つの別々の部位（例えば、左右の肩および左臀部）でなされ得る。３つの別々の投与部位により、ワクチン接種部位での局所反応を追跡することができ、必要に応じて、細針吸引物サンプリングのために流入領域リンパ節に容易にアクセス可能である。

【0061】

リポソームの調製
スクアレンとレシチンの組み合わせ（ＳＱ＋Ｌ）を、６００ｍｇのレシチンを５ｍＬのスクアレンに添加することによって作製する。５００μＬのＳＱ＋Ｌを、５ｍｇのＬｉｐｉｄ－Ａ粉末（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ（Ｌ６８９５））プラス（４．５ｍＬのＨ_２ＯプラスＴｗｅｅｎ８０［２５０μＬ］）に添加して、ＭＰＬを得る。次いで、この混合物を超音波処理して、冷蔵する［４］。

【0062】

通常のイヌにおける臨床試験（２００６）
通常のイヌの試験では、ワクチンの実施形態には、ＲＩＢＩアジュバントが含まれる。イヌは、アジュバントからの局所反応を示し、ＧＤ３特異的ＩｇＭおよびＩｇＧ反応を示した。これらの試験の結果、自己免疫は見られず、色素脱失のエビデンスも認められなかった。黒色腫および骨肉腫を有するイヌを用いてさらなる試験を行い、本明細書の実施形態に記載のＭＰＬアジュバントを含めた。

【0063】

実施例２の材料および方法
Ｃ５７／ＢＬ６マウスのＢ１６－Ｆ１０マウス黒色腫細胞株は、自然発生的な高転移性腫瘍の同系モデルを提供する。図１３の図形に示すように、３つの群のマウスにＢ１６黒色腫細胞株を注射した。１つの群だけにＧＤ３系ワクチンを投与し、他の群は、対照群、マウスとヒトｉＮＫＴ細胞の強力で特異的な活性化因子であるα－ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ）群であった。これらのＣ５７ＢＬ／６マウスに、週一回４週間ワクチン接種し、その後１週間安静させた（図１３を参照されたい）。次いで、ＮＫＴ細胞の評価のためマウスを安楽死させ、血液、肝臓、脾臓を収集した。酵素消化後に得られた肝臓の単細胞懸濁液を作製することによって肝臓リンパ球を収集した。収集したリンパ球を、ＣＤ３、ＣＤ４、ＴＣＲβ、ＮＫ１．１、ＣＤ４９ｂおよび死細胞について染色した。これらの実験では、未処理マウスおよびα－ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ）処理マウスを対照として使用した。腫瘍のサイズおよび質量のみを記録した。

【0064】

マウス、ヒト、およびイヌの黒色腫細胞上の同様の標的発現（ＧＤ３）の証拠を、フローサイトメトリーを使用して図１４に記述した。ＧＤ３アジュバントワクチンの皮下注射で処置されたマウスは、肝臓においてＮＫＴ細胞（ＮＫ１．１＋ＣＤ４９ｂ＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＴＣＲｂ＋）の増加を示したが、未処置のマウスと比較した場合、脾臓および血液における増加を示すことができなかった（図１５Ａを参照されたい）。α－ＧａｌＣｅｒで処置されたマウスはまた、肝臓においてＮＫＴ細胞の蓄積を示したが、ワクチン処置したマウスから得られた肝臓における増加は、α－ＧａｌＣｅｒ処置マウスと比較して５～１０倍高かった（図１５Ｂを参照されたい）。対照と比較したＧＤ３ワクチン群における雄マウスと雌マウスの間の腫瘍重量およびサイズの統計的差異の偶然の発見（図１６Ｂ～Ｃを参照されたい）が剖検で発見された。興味深いことに、性別間の生存率の違いは、自然発生の粘膜黒色腫のＧＤ３ワクチンでも認められ（２）、不妊化された雌は、去勢手術済み雄イヌよりも長生きした（図１６Ａを参照されたい）。

【0065】

本明細書では、ＧＤ３をナノリポソームと組み合わせると、経時的にマウスのｉＮＫＴ細胞が増加することが示されている。ｉＮＫＴ細胞は、ＧＤ３に対する免疫応答に特異的である（以下を参照されたい：Ｒｏｗａｎ Ｊ．Ｍｉｌｎｅｒ．Ａ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ＧＤ３－ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ＮＫＴ－ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ ＣＲＩ－ＣＩＭＴ－ＥＡＴＩ－ＡＡＣＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｉｎｔｏ Ｓｕｒｖｉｖａｌ；Ｓｅｐｔ ３０－Ｏｃｔ ３，２０１８；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（ＰＡ）：ＡＡＣＲ；Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ ２０１９；７（２ Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ ｎｒ Ａ２０４）。

【0066】

実施例３～４の材料および方法
ワクチン臨床試験
黒色腫ワクチン試験：ワクチンプロトコル
フェーズＩでは、６５匹のイヌを登録し（表５）、３つの異なる部位で毎月３回（皮内）ワクチン接種した。ＣＢＣと血清および病期分類のＸ線写真と免疫モニタリングを行った。経過観察は、ワクチン接種後１ヵ月に、次いで進行するまで６ヵ月ごとに行った。この試験では、主にステージＩＩＩの口腔高悪性度黒色腫（７０％）が生じた。

【0067】

フェーズＩＩでは、６５匹のイヌを登録し（表５）、４つの異なる部位で毎月４回（皮内）ワクチン接種した。ＣＢＣおよび血清ならびに病期分類のＸ線写真および免疫モニタリングを行った。経過観察は、ワクチン接種後１ヵ月に、次いで進行するまで６ヵ月ごとに行った。臨床試験と同様に、主にステージＩＩＩの口腔高悪性度黒色腫（７０％）が生じた。

【0068】

フェーズＩＩＩ（オープンエンド）では、４００匹のイヌを登録し（表５）、４つの異なる部位で毎月４回（皮内）ワクチン接種し、その後、毎月１回６回の追加免疫を行った。ＣＢＣと血清および病期分類のＸ線写真と免疫モニタリングを行った。経過観察は、最初のワクチン接種の１ヵ月後、次いで、進行するまで６ヵ月ごとに行った。臨床試験と同様に、主にステージＩＩＩの口腔高悪性度黒色腫（７０％）が生じた。

【0069】

骨肉腫ワクチン試験：ワクチンプロトコル
骨肉腫ワクチンプロトコルを図５に示す。骨肉腫ワクチン試験には、２つのフェーズが含まれた。ワクチン群には２５匹のイヌが含まれた（ｎ＝２５）。フェーズＩでは、すべての骨肉腫イヌは、切断術を受け、続いてカルボプラチンの初回投与を行い、続いてカルボプラチンの２週間後にＧＤ３ワクチン接種（ｘ４）を行った。イヌを病期分類および他の状態に関して黒色腫の場合と同様に経過観察した。

【0070】

フェーズＩＩでは、すべての骨肉腫イヌは、切断術を受け、続いてカルボプラチンの初回投与を行い、続いてカルボプラチンの２週間後にＧＤ３ワクチン接種（ｘ６）を行った。イヌを病期分類および他の状態に関して黒色腫の場合と同様に経過観察した。骨肉腫ワクチン試験の結果を図６～９に示す。

【0071】

実施例５～９の材料および方法
試験対象集団
患犬を前向きに２つの群集団に登録した。第１の患者群は、口腔、指、または皮膚の黒色腫（黒色腫集団、ＭＭと略す）の細胞学的または病理組織学的診断を受けたイヌで構成されていた。黒色腫集団の追加の選択基準は、化学、ＣＢＣ、尿検査、３つの視野の胸部Ｘ線写真、および入手可能な場合は局所リンパ節吸引物を用いた試験登録から２週間以内の病期分類であり、最低４ヵ月の生存期間が期待された。すべての患者は、口腔黒色腫のイヌを対象とした世界保健機関（ＷＨＯ）のスキームに従って、試験登録時にステージ分類された（表１）（Ｏｗｅｎ，１９８０）。ステージＩ～ＩＶ疾患の患者は、黒色腫集団登録の対象となった。

【0072】

さらに、腫瘍を有糸分裂指数（ＭＩ）のためにコード化し、高ＭＩまたは低ＭＩのいずれかとして、１０高倍率視野あたりの有糸分裂像の数として定義した。以前に公開された情報に基づいて、口腔／粘膜皮膚腫瘍の場合、ＭＩ≧４のカットオフ、皮膚／指の腫瘍の場合、ＭＩ≧３のカットオフを用いて、高ＭＩ腫瘍を定義した（Ｓｍｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。除外基準には、あらゆる免疫修飾薬（例えば、プレドニゾロン、栄養補助食品、例えばアロエベラ、既存の内分泌疾患、例えば副腎皮質機能亢進症）の使用、黒色腫以外の既存の任意の癌または任意の活動性感染症の存在が含まれた。

【0073】

第２の群は、病院の教職員所有の年齢、体重、性別が適合するイヌで構成され、健康診断、ＣＢＣ、および腫瘍の無病歴（対照集団）に基づいて臨床的に健康であると判定された。除外基準には、既存の内分泌疾患または活動性感染症を含むが、これらに限定されない、既知の全身性疾患、およびＮＳＡＩＤＳを含むが、予防薬（例えば、ノミ、ダニ、フィラリアの予防）を除く、任意の処方薬または栄養補助食品の現在または最近（１ヵ月以内）の使用が含まれる。

【0074】

ワクチン調製および投与
ワクチンは、前述のとおり（Ｍｉｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００６）、市販の試薬Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｒｅ ５９５（ＭＰＬ）アジュバント（Ｓｉｇｍａ，ＭＳ，ＵＳＡ［製品番号Ｌ６８９５］）からのモノホスホリルリピドＡ、シトシン－ホスフェート－グアニン（ＣｐＧ）オリゴデオキシヌクレオチド配列を含むオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）（Ａｌｐｈａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＴＸ，ＵＳＡ［カタログ番号ＯＤＮ２００７］ＣｐＧ－ＯＤＮ配列５’－ＴＣＧ ＴＣＧ ＴＴＧ ＴＣＧ ＴＴＴ ＴＧＴ ＣＧＴ Ｔ－３’）およびＧＤ３（Ｍａｔｒｅｙａ ＬＬＣ、Ｐｌｅａｓａｎｔ Ｇａｐ，ＰＡ，ＵＳＡ［カタログ番号１５０４］）から調製した。ワクチン調製は、投与直前に行った。

【0075】

ワクチンは、一連の４回の注射で、４週間ごとに黒色腫集団に皮内投与された。次のように、３つの別々のワクチン接種部位を順番に使用した：０週目に左肩、４週目に右肩、８週目に右臀部、１２週目に左肩。ワクチン投与に続発する急性皮膚反応またはその後の皮膚合併症が発生した場合のモニタリングを可能にするために、別々のワクチン接種部位を選択した。

【0076】

試料捕集
黒色腫集団では、各ワクチンの時点と、４回目のワクチン接種の１ヵ月後の再ステージ分類時に採血した。正常な対照集団の場合、血液試料は、単一時点で収集した。すべての血液試料を頸静脈穿刺によって収集し、血清分離管とヘパリン管に分けた。血清を少なくとも３０分間凝固させた後、１６４０ｇで８分間遠心分離し、２つの試料に分注し、最初に－２０℃で凍結した後、－８０℃に移して長期保存し、サイトカイン分析のためにバッチで使用した。ヘパリン処理した全血をフローサイトメトリー分析に使用し、すべての試料を収集から２４時間以内に処理した。ヘパリン処理した血液試料は、処理が１時間以上遅れた場合、処理するまで４℃で保存した。

【0077】

フローサイトメトリー分析
フローサイトメトリー分析は、多形核骨髄由来サプレッサー細胞（ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）サブセットをＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４－細胞集団として、単球骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍ－ＭＤＳＣ）サブセットをＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４＋細胞集団として定義した公開プロトコル（Ｇｏｕｌａｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２）に基づいた。ＭＤＳＣサブセットの評価のために、全血試料を一次非結合マウス抗イヌＣＤ１１ｂ抗体（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ、クローンＣＡ１６．３Ｅ１０）またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）とともに３０分間インキュベートし、次いでＲＰＥ結合ウサギＦ（ａｂ’）抗マウスＩｇＧ（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）二次抗体とともに３０分間インキュベートした。

【0078】

特に明記しない限り、すべてのインキュベーションは、暗所で、４℃で行った。間接染色後、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ結合ラット抗イヌＭＨＣＩＩ（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ、クローンＹＫＩＸ３３４．２）およびＡｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７結合マウス抗ヒトＣＤ１４抗体（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ、クローンＴＵＫ４）またはアイソタイプ対照（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）で製造元のプロトコルに従って３０分間染色した。抗ＣＤ１１ｂおよび抗ＭＨＣＩＩクローンは、製造元が標的とするイヌとして販売されており、ならびに以前のいくつかの研究で反応性を示している（Ｂｒｏｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｇｏｕｌａｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｌａｎａ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。抗ＣＤ１４クローンは、以前のいくつかの研究でイヌの交差反応性を示している（Ｇｏｕｌａｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｊａｃｏｂｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３；Ｌａｎａ ｅｔ ａｌ．，２００６）。次いで、細胞を２回洗浄した後、赤血球をＢＤ Ｐｈａｒｍｌｙｓｅ赤血球溶解緩衝液（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ ＵＳＡ）で溶解し、室温で、２５分間暗所でインキュベートした。次いで、抗体標識細胞を２回洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで、室温で２０分間固定した後、最終洗浄を行って過剰なパラホルムアルデヒドを除去して、フローサイトメトリー分析のためにＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。陰性対照および補償対照のために、各患者に対して未染色試料と単一染色試料をそれぞれ調製した。

【0079】

試料は、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃａｎｔｏ ３レーザフローサイトメータ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ ＵＳＡ）で分析し、試料ごとに１００，０００件の事象を収集した。品質対照は、製造元のセットアップビーズ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ［カタログ番号６４２４１２］）を使用して、最初の起動時に毎日行った。取得ゲートは、ＲＢＣ／死細胞を除外するように設定した。補償は、単一の染色試料と未染色対照に基づいて設定された。収集後の分析は、ＦｌｏｗＪｏ Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｅｌｌ分析ソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ，ＵＳＡ）を使用して行った。分析ゲートを、未染色対照に基づいて設定した。集団のフローサイトメトリーゲーティングでは、前方散乱（ＦＳＣ）および側方散乱（ＳＳＣ）の取得ゲートを最初に設定して、死細胞を除外した。ＦＳＣ－ＡｒｅａおよびＦＳＣ－Ｈｅｉｇｈｔを使用して、ダブレットを除外し、単一細胞集団を識別した。次に、ＣＤ１１ｂ対ＭＨＣＩＩを使用してＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－集団を識別し、次いでＣＤ１１ｂ対ＣＤ１４としてゲートして、ＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４＋（推定Ｍ－ＭＤＳＣ）およびＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４－（推定ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）集団（Ｇｏｕｌａｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２）を識別した。推定ＰＭＮ－ＭＤＳＣおよび推定Ｍ－ＭＤＳＣの数は、単一細胞集団のパーセンテージとして計算した。

【0080】

サイトカイン測定
ＧＭＣＳＦ、ＩＬ－１０、およびＭＣＰ－１の連続血清濃度は、カスタマイズされたＭｉｌｌｉｐｌｅｘ ＭＡＰイヌサイトカイン／ケモカインキット（ＣＣＹＴＯＭＡＧ－９０Ｋ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して、内部品質対照とともに測定した。４℃で一晩インキュベートし、磁気プレートウォッシャを使用した。すべての試料、標準、品質対照は、重複して分析した。プレートをＢｉｏ－Ｐｌｅｘ（登録商標）ＭＡＧＰＩＸ（商標）マルチプレックスリーダおよび付属のＢｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアバージョン６．１（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して読み取った。アッセイ内およびアッセイ間の変動係数、ならびに検出可能な最小濃度は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ．ｃｏｍにおいて、オンラインで閲覧することができる。

【0081】

単一のイヌ黒色腫細胞株（レミ）をＴ７５フラスコからトリプシン処理し、トリパンブルー排除色素を使用してカウントした。生細胞（１ｘ１０６）は、Ｆａｌｃｏｎ＃２０５２チューブ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）で、２５０×重力で遠心沈殿させた。上清を除去し、４つのアリコートに分割し、最初に－２０°Ｃで凍結し、次いでサイトカインキット分析が行われるまで長期保存用に－８０℃に移した。

【0082】

統計解析
データが正規分布していない場合は、対応のない両側スチューデントのｔ検定またはノンパラメトリックウィルコクソン順位和（マン－ホイットニー）検定を使用して、２つの群間の量的差異を分析した。２つを超える群間の差異は、ランクでＡＮＯＶＡを使用して分析した。ワクチン時点でのＭＤＳＣの割合を比較するために、反復測定の一元配置分散分析を使用した。カテゴリデータの比較には、カイ二乗分析を使用した。サイトカインの統計分析には、マン－ホイットニー順位和検定を使用し、試料濃度の結果が０．０ｐｇ／ｍＬの値を示した場合、製造元がリストした最小検出可能濃度に濃度を調整した。すべての分析はＳｉｇｍａ－Ｐｌｏｔソフトウェア（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ、バージョン１３；Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｅｒｋｒａｔｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して行い、ｐ値＜０．０５は、統計的に有意であると見なした。

【0083】

患者の特徴
平均集団年齢１０．５６歳（ＳＤ±３．４３）、体重中央値２７．３ｋｇ（ＩＱＲ １２．２５～３５．７５）の去勢手術済み雄１９匹と避妊手術済み雌１４匹を含む３３頭のイヌを黒色腫集団に登録した。対照集団には、平均年齢８．９８歳（ＳＤ±２．７５）、体重中央値２０．６ｋｇ（ＩＱＲ １２．２５～２９．４３）の去勢手術済み雄１３匹と避妊手術済み雌１７匹を含む３０匹のイヌを登録した。対照（ｎ＝３０）および黒色腫集団の特徴を表２に要約する。代表的な犬種は、混合犬種、ラブラドールレトリバー、ゴールデンレトリバー、ビーグル、ヨークシャーテリア、ミニチュアシュナウザー、他の犬種であった。性別、体重、性別、年齢に関して、黒色腫と対照集団の間に統計的有意性はなかった（ｐ＞０．０５）。

【0084】

フロリダ大学黒色腫ワクチン試験に登録された３０匹の健康な対照および３３匹の患者から収集された全血および血清は、表面上多形核－ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４－）サブセットおよび単球－ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４＋）サブセットを評価するために、イヌ特異的ＣＤ１１ｂ、ＭＨＣＩＩおよび抗ヒトＣＤ１４抗体を用いた公開フローサイトメトリープロトコルを使用したフローサイトメトリーによって分析した。ＩＬ－１０、ＭＣＰ－１、および両方の推定ＭＤＳＣサブセットは、黒色腫イヌと対照群で有意に上昇した。両方の推定ＭＤＳＣサブセットは、ＧＤ３系免疫療法投与後に有意に減少したが、サイトカインの有意な変化は経時的に見られなかった。発明者らが知る限り、これはイヌの黒色腫における推定単球ＭＤＳＣの増加を記述した最初の報告である。これは、ヒトの悪性黒色腫データと一致しており、治療的介入研究の貴重な潜在的モデルとしてイヌを支持している。

【実施例】

【0085】

実施例１：ナノサイズの二層リポソーム免疫療法（ナノリポ－ＧＤ３）の調製および予備データ
通常のイヌにおける試験の１つのアプローチは、アジュバント系ＧＤ３免疫療法によって誘発される免疫応答を測定することであった［２］。ＧＤ３は正常組織よりも腫瘍において高レベルで発現するが［３］、自己抗原と見なされ、したがって自己抗原に対する身体の耐性を克服するために免疫増強を必要とする。結果として、免疫増強を伴う免疫療法が本明細書で提供されている。一試験では、正常なイヌが弱い自己抗原（ＧＤ３）と見なされるものに反応するという仮説が検証された。この実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（（ＣｐＧ－ＯＤＮ）（Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，２００７ ＣｐＧ－ＯＤＮ配列５’－ＴＣＧ ＴＣＧ ＴＴＧ ＴＣＧ ＴＴＴ ＴＧＴ ＣＧＴ Ｔ－３’））配列、およびＲＩＢＩアジュバントＭＰＬ（登録商標）＋ＴＤＭ＋ＣＷＳアジュバントシステム（Ｓｉｇｍａ，ＭＳ，ＵＳＡ［製品番号Ｍ６６６１ＲＩＢＩ］）を含み、両アジュバントは、自然免疫系のトール様受容体（ＴＬＲ）を標的とすることが既知である。１０匹のイヌのコホートから、４匹にＧＤ３とアジュバントを４週間間隔で皮内に３回ワクチン接種し、４匹にＲＩＢＩアジュバントのみを、および２匹にリン酸緩衝生理食塩水を接種した。ワクチン接種部位で皮膚反応についてキャリパー測定値を収集し、ＧＤ３に対するＩｇＭ抗体およびＩｇＧ抗体、ならびに黒色腫細胞株に対する細胞媒介性細胞傷害について血清をアッセイした。

【0086】

この試験の結果により、ワクチン接種部位の反応、ＩｇＭおよびＩｇＧレベル、およびワクチン接種イヌと非ワクチン接種イヌとの間の細胞媒介性細胞傷害の間に有意差（Ｐ＜０．０５）が見られた。ワクチンにＣｐＧ－ＯＤＮ配列およびＧＤ３を追加すると、注射部位の炎症反応が上昇した。この試験の結果から、腫瘍抗原ＧＤ３（既知の弱い自己抗原）とアジュバント（ＴＬＲを標的とする）を組み合わせることにより、この正常なイヌの集団における自然免疫応答と適応免疫応答によって耐性が克服されることが識別された。皮膚反応は、有意であり、アジュバントに起因した。いくつかの実施形態では、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）の水中油型エマルジョンが、ＲＩＢＩアジュバントの代わりに使用された。超音波処理によってワクチンのモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）成分を乳化すると、１３９．９ＳＤ±５７ｎｍの安定したナノサイズの粒子が生成されることも本明細書で見出された（図１を参照されたい）。これらのナノ粒子の安定性は、安定性試験によって確認されている。

【0087】

ナノ粒子を低温電子顕微鏡法でさらに調査し、その結果、二脂質層状リポソームを識別した（図２を参照されたい）。リポソームの主成分としてＭＰＬを組み込むことは、本明細書で識別された新規の発見である［４－６］。本明細書で提供される実施形態におけるナノサイズのリポソームの安定化の増強は、平均電位負１７．３２±３．０２ｍＶのゼータ電位によってもたされ、抗原提示細胞によるリポソームの取り込みに寄与する。エマルジョンの安定化および凝集に対する保護をもたらすゼータ電位の結果として、本明細書に記載のリポソームの実施形態は安定している。［６］。

【0088】

実施例２：ＧＤ３系保護ワクチンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルのＮＫＴ細胞を増加させる
ＮＫＴ細胞は、免疫系全体を調節するために様々なサイトカインおよびケモカインを産生することができる。２０年前の発見後、ＮＫＴ細胞の活性化は、様々な感染症および非感染症において重要な保護的役割を果たしていることが示された。これらの細胞は、自然免疫細胞と適応免疫細胞との間の架け橋を形成する。これらの細胞の活性化および維持は、ＣＤ１受容体上の樹状細胞による脂質分子の提示に依存する。ワクチン中の標的抗原は脂質（ＧＤ３）であるため、標的抗原はＮＫＴ細胞の活性化のためにＣＤ１受容体上に提示される可能性が非常に高い。検証済みの好適なイヌのＣＤ１受容体試薬が不足しているため、イヌのＧＤ３系ワクチンに見られる仮想保護の背後にあるメカニズムを定義することができなかった（１）。マウスモデルでは、ＮＫＴ細胞は十分に特徴付けられており、ＧＤ３系ワクチンによるＮＫＴ細胞の選択的活性化の可能性を理解する機会を提供する。我々のデータは、ＧＤ３およびα－ＧａｌＣｅｒでワクチン接種されたマウスの肝臓においてＮＫＴ細胞の増加を明らかにしたが、ワクチン接種されたマウスと正常な対照との間で、血液および脾臓に識別可能な違いは見出せなかった。ＧＤ３ワクチンを接種したＣ５７ＢＬ／６マウスおよび好適な対照においてＢ１６黒色腫細胞株を使用したさらなる調査により、腫瘍微小環境におけるＮＫＴ応答を識別し得る。

【0089】

ＧＤ３系ワクチンおよびα－ＧａｌＣｅｒは、双方ともマウス肝臓においてＮＫＴ細胞を増加させたが、ＧＤ３は、α－ＧａｌＣｅｒの５～１０倍のＮＫＴ数を増加させた。さらに、末梢血中のＮＫＴ数の変化をモニタリングすることは、細胞数が少ないために有益ではないことがあり得る。

【0090】

ヒト、イヌおよびマウスの（Ｂ１６）黒色腫細胞上でのＧＤ３発現を示す図１４を参照されたい。ＧＤ３の存在について、Ａ３７５、ＣＭＬ－２およびＢ１６黒色腫細胞を染色した。Ｂ１６黒色腫細胞を抗ＧＤ３抗体（クローンＲ２４）（赤線）とともにインキュベートし、ＦＩＴＣタグ付き抗マウス二次抗体（灰色）で染色したＢ１６細胞とこの染色を比較した。染色した細胞をＢＤ Ｃａｎｔｏ ａｎｄ ＦｌｏｗＪｏ１０ｖで分析した。

【0091】

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＧａｌＣｅｒ（ＩＰ）またはＧＤ３系ワクチンを週４回（皮下）注射した。最後のワクチン接種から１週間後、ＩＡＣＵＣプロトコルに従ってマウスを安楽死させ、単離した細胞を抗ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＴＣＲｂ、ＣＤ４９ｂ、およびＮＫ１．１抗体で染色することにより、ナチュラルキラーＴ細胞を血液、脾臓、肝臓で評価した。染色した細胞をＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ ａｎｄ ＦｌｏｗＪｏ１０ｖで分析した。（Ａ）代表的なドットプロットは、肝臓ではＮＫＴ細胞の増加を示しているが、血液および脾臓では増加していない（データ不図示）。（Ｂ）収集したＮＫＴ細胞データは、ワクチン接種したマウスの肝臓において有意な増加を示している。図１５に示すように、ｎ＝４、^＊＜Ｐ０．０５、^＊＊＜Ｐ０．０１。

【0092】

１０^５のＢ１６黒色腫細胞を、Ｍｅｔｒｉｇｅｌを用いて左脇腹のＣ５７ＢＬ／６雄または雌マウスの皮下に移植した。これらのマウスの群に、腫瘍移植の翌日から２週間、毎週胸骨にＧＤ３系ワクチンを皮下投与した。移植から２週間後、マウスを安楽死させ、腫瘍サイズを測定した。結果として、図１６Ａは、雄マウスの腫瘍サイズを示し、図１６Ｂは、雌マウスの腫瘍サイズを示す。ｎ＝５、^＊＜Ｐ０．０５、^＊＊＊＊＜Ｐ０．０００１

【0093】

実施例３：黒色腫のイヌおよび正常なイヌにおけるＧＤ３ワクチン接種に対するＩｇＧおよびＩｇＭの特異的免疫応答
図３は、黒色腫ワクチン試験の結果を示す。検証したＧＤ３のＩｇＭおよびＩｇＧの免疫応答を正常なイヌと比較し、結果を図３に示す。ＩｇＧおよびＩｇＭは、一時的な増加を示した。臨床例および反復ワクチン接種と一致するエビデンスは、メモリーＴ細胞応答の欠如を裏付けている。４回のワクチンは、手術単独の２～３倍の生存率を改善した（Ｂｏｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４）（図４－カプランの生存曲線を参照されたい）。ケモカインＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）の有意な上昇は、正常なイヌと比較してワクチン接種されたイヌにおいて見られた。副作用は、認められなかった。対象の１％が、（皮内）注射時に痛みを示すことがある。

【0094】

図４のカプラン・マイヤー曲線は、フェーズ１（中央値３５６日ＩＱＲ １４９２－１６６日）とフェーズ２中央値（１１６３日 ＩＱＲ＋ｉｎｆ－２１０日（Ｐ＝０．０４６））間の生存期間の比較を示す。丸は、黒色腫ワクチン試験の打ち切りデータ（ＩＱＲ－四分位範囲）を表す。

【0095】

実施例４：骨肉腫ワクチン試験－無病生存率および転移までの期間
骨肉腫ワクチン試験のワクチンプロトコルの概略図を図５に示す。図６は、骨肉腫ワクチン試験の無病期間（転移までの期間）をグラフで示す。症例のうち５例は、１～３回のワクチンを接種し、早期に失敗し、結果から除外した。無病区間グラフの生存データを図７に示す。比較して、図８は、骨肉腫ワクチン試験（フェーズＩ）におけるワクチン群と対照群との間の全生存率（ｎ＝３０（－５）ｘ３０）をグラフで示す。フェーズ１は、４回のワクチンと４～６ラウンドのカルボプラチンを完了した２５匹のイヌを含んでいた。２５匹のイヌのうち８匹は、依然として生存しており、４５０日～１２５８日（５症例＞５５１日）に及んだ。５５１日の生存期間中央値（７５％２２１日、２５％に達していなかった）を維持したことは、７５０日（ＣＩの下限が５２６日、ＣＩの上限が９７５日）を意味する。打ち切り１４症例－８症例は依然として生存、１症例は追跡調査不能、５症例は他の原因で死亡。図９は、図８のグラフに示した全生存データを含む表を示す。

【0096】

ＲＴ－ｑＰＣＲおよびＲＮＡ ＦＩＳＨの両方の試験を行い、ＧＤ３シンターゼおよびＧＤ２シンターゼの発現を識別した。細胞内のＧＤ２／ＧＤ３のレベルは、ＲＴ－ｑＰＣＲおよびＲＮＡ－Ｓｃｏｐｅ（ＲＮＡ ＦＩＳＨ）で検出されたＧＤ２／ＧＤ３シンターゼと相関しており、データに相関が見られた。ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＲＮＡ－Ｓｃｏｐｅ、およびフローサイトメトリーを使用して、組織内のＧＤ２およびＧＤ３を観察した。

【0097】

実施例５：ベースラインを示すイヌのＭＤＳＣサブセットのフローサイトメトリーによる特徴づけ
黒色腫集団および対照集団の末梢血中のＭＤＳＣのパーセンテージをフローサイトメトリーによって評価して、Ｇｏｕｌａｒｄ ｅｔ ａｌ ２０１２によって特徴づけられたように各集団に存在するＭＤＳＣサブセットを特徴付けた。市販の抗体をベースにして、図１０に外形を描いたゲーティング戦略を使用して、多形核骨髄由来サプレッサー細胞（ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）サブセットをＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４－細胞集団と定義し、単球骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍ－ＭＤＳＣ）サブセットをＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ－ＣＤ１４＋細胞集団と定義した。最初のワクチン接種前のベースラインでの黒色腫集団におけるこれらのＭＤＳＣサブセットを対照集団と比較した。黒色腫群と対照群の両方で、Ｍ－ＭＤＳＣは、全単一細胞集団の比較的小さな部分を構成したが、対照集団と比較して黒色腫集団で有意に増加することがわかった（ｐ＜０．００１）（図１１Ａ）。黒色腫集団では、ＰＭＮ－ＭＤＳＣは、単一細胞集団の大部分を構成し、対照集団と比較して有意に増加した（ｐ＜０．００１）（図１１Ｂ）

【0098】

実施例６：ステージ、解剖学的位置、および有糸分裂指数と比較したＭＤＳＣサブセット
黒色腫の集団を、黒色腫の既知の予後因子（Ｓｍｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１）であるステージ、解剖学的位置、および有糸分裂指数（表２）に従って分類し、次いでＰＭＮ－ＭＤＳＣおよびＭ－ＭＤＳＣの集団に関してこれらを評価した。黒色腫集団内には、１５匹のステージＩのイヌ、８匹のステージＩＩのイヌ、６匹のステージＩＩＩのイヌ、４匹のステージＩＶのイヌがいた。任意のステージ間、またはグループ化されたステージＩ／ＩＩとグループ化されたステージＩＩＩ／ＩＶとの間で、ＭＤＳＣサブセットに有意差はなかった。これらのイヌのうち２５匹は口腔腫瘍、４匹は指腫瘍、４匹は皮膚腫瘍であった。口腔／粘膜皮膚、指、皮膚の腫瘍部位を有する患犬間のＭＤＳＣサブセットに有意差は見られなかった。

【0099】

有糸分裂指数の評価のために黒色腫集団の３２匹の患犬の病理組織診断が利用可能であった。１匹の患犬は細胞診のみを受けており、分析のこの部分から除外した。口腔／粘膜皮膚腫瘍についてＭＩが≧４の場合、または皮膚／指の腫瘍についてＭＩが≧３の場合、高ＭＩとして分類し、これらのカットオフより下の腫瘍は、低ＭＩとして分類した。２３匹のイヌは高ＭＩ腫瘍を有し、９匹は低ＭＩ腫瘍を有していた。高ＭＩ腫瘍と低ＭＩ腫瘍のＰＭＮ－ＭＤＳＣとＭ－ＭＤＳＣとの割合に有意差はなかった。

【0100】

実施例７：ＧＤ３系免疫療法ワクチン投与によるＭＤＳＣサブセットの減少
ＧＤ３系ワクチンを４回投与した後、黒色腫のイヌのＭＤＳＣサブセットに経時的な変化があったかどうかを判定するために、４回のワクチン接種時のそれぞれのワクチン接種前に、および４回目のワクチン接種の１ヵ月後に、血液試料を収集した。次いで、ＰＭＮ－ＭＤＳＣおよびＭ－ＭＤＳＣの識別および定量化のためにフローサイトメトリーを使用して試料を分析した。ＰＭＮ－ＭＤＳＣとＭ－ＭＤＳＣの両方の割合は、ベースラインの最初のワクチン接種時と比較した場合、２回目のワクチン接種時からワクチン接種後１ヵ月まで、各時点で大幅に減少した（（すべてのＰＭＮ－ＭＤＳＣ時点で、ｐ＜０．００１でああり、Ｍ－ＭＤＳＣ第２のワクチン時点についてはｐ＝０．００３であり、他のすべてのＭ－ＭＤＳＣ時点ではｐ＜０．００１であった）、図１１Ｃおよび１１Ｄを参照されたい）。

【0101】

実施例８：黒色腫集団および対照集団におけるサイトカインおよびケモカインのプロファイル
黒色腫のイヌのサイトカインおよびケモカインの変化をモニタリングするために、４回のワクチン接種時のそれぞれでワクチン接種前、および４回目のワクチン接種の１ヵ月後に収集した血清試料をＩＬ－１０、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＣＰ－１について分析した。ベースラインでの黒色腫集団および対照集団のサイトカイン濃度の中央値を表３に要約する。

【0102】

ＩＬ－１０およびＭＣＰ－１の両方の血清レベルは、対照集団と比較して黒色腫集団のベースラインで有意に高かった（それぞれｐ＝０．０４６およびｐ＝０．０３５）が、ＧＭ－ＣＳＦでは高くなかった（ｐ＝０．３５４）（図１２）。黒色腫集団内では、評価した５つの時点の間で、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、およびＭＣＰ－１の血清レベルに有意差はなかった。

【0103】

ＭＣＰ－１のパイロット評価をイヌの転移性黒色腫細胞株（Ｒｅｍｉ）を使用して行い、腫瘍細胞がＭＣＰ－１を生成できるかどうか、およびどの濃度で生成できるかを確認した。Ｒｅｍｉ細胞株のＭＣＰ－１濃度は、５７７．７３５ｐｇ／ｍＬであり、これは、黒色腫集団で見られる血清ＭＣＰ－１濃度の中央値５２９．３２ｐｇ／ｍＬと類似していた。

【0104】

実施例９：黒色腫集団および対照集団における試験登録時の血球数
全血球計算（ＣＢＣ）データを両集団で評価して、フローサイトメトリー分析から除外する必要があり得る可能性のある極端な外れ値を識別するために、全体的な細胞分布を調べた。極端な外れ値は識別されなかった。次いで、両郡の試験登録時および黒色腫集団のワクチン接種前に収集したベースラインＣＢＣデータを集団間の有意差について比較することができた。両郡の中央値、平均値、および範囲を表４に要約する。

【0105】

白血球数（ＷＢＣ）、好中球数および血小板数の中央値は、対照集団と比較して黒色腫集団で有意に高かった（それぞれ、ｐ＝０．０３６、ｐ＝０．００２、およびｐ＝０．０２５）。黒色腫集団においてＷＢＣ（８．２３ｘ１０^３／ｕＬ、ＩＱＲ６．４０５～１１．７７）、好中球数（５．９９ｘ１０^３／ｕＬ、ＩＱＲ４．３３～７．５１９）および血小板数（２９５ｘ１０^３／ｕＬ、ＩＱＲ２２５～３９１．５）の中央値はすべて基準範囲内であったので、この所見の臨床的な意義は不明である。同様に、対照集団のＷＢＣ（７．１６５ｘ１０^３／ｕＬ、ＩＱＲ６．４０５～１１．７７）、好中球（４．５８ｘ１０^３／ｕＬ、ＩＱＲ４．３３～７．５１９）、血小板数（２３０．５ｘ１０^３／ｕＬ、ＩＱＲ２２５～３９１．５）の中央値も基準範囲内であった。黒色腫集団の５匹のイヌ（１５％）は、成熟した好中球増加（９．２４～２６ｘ１０^３／ｕＬの範囲、基準範囲２．７～８．９ｘ１０^３／ｕＬ）を特徴とする白血球増加症（１３．４～３０．４ｘ１０^３／ｕＬの範囲、基準範囲５～１３ｘ１０^３／ｕｌ）であった。黒色腫集団の８匹のイヌ（２４％）は、軽度から中等度の血小板増加症であった（４０２～７０９ｘ１０^３／ｕＬの範囲；基準範囲１３４～３９６ｘ１０^６／ｕＬ）。両郡集団間で、リンパ球、単球、好酸球、または好塩基球の数に有意差はなかった。

【0106】

平均赤血球数（ＲＢＣ）およびヘマトクリット中央値は、対照集団と比較した場合、黒色腫集団において有意に低かった（それぞれ、ｐ＝０．００７およびｐ＝０．０１４）。黒色腫集団（６．５５６×１０^６／ｕＬ、ＳＤ±０．８７９）および対照群（７．１３９×１０^６／ｕＬ、ＳＤ±０．７７７）の平均ＲＢＣは、基準範囲内にとどまった。同様に、黒色腫集団（４４．４％、ＩＱＲ４０．３～４９．９）および対照集団（４８．２５％、ＩＱＲ４３．９～５２．６７５）のヘマトクリット中央値も基準範囲内であった。黒色腫集団の４匹のイヌ（１２％）は、ＲＢＣ数が基準範囲（４．６９～５．６４ｘ１０^６／ｕＬの範囲、基準範囲５．７～８．３ｘ１０^６／ｕＬ）をわずかに下回り、同時にヘマトクリットがわずかに減少した（３３．４～３９．８％の範囲、基準範囲４０～５６％）。すべての貧血は非再生性であり、２匹は、軽度の小球性正色素性貧血であり、２匹は、正球性正色素性貧血であることが判明した。

【0107】

表

【0108】

【表1】

【0109】

【表2】

【0110】

【表3】

【0111】

【表4】

【0112】

【表5】

【0113】

参考文献
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１１．Ｃｈｅｅｖｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｆｅｒｒｉｓ，Ａ．Ｓ．，Ｆｉｎｎ，Ｏ．Ｊ．，Ｈａｓｔｉｎｇｓ，Ｂ．Ｍ．，Ｈｅｃｈｔ，Ｔ．Ｔ．，Ｍｅｌｌｍａｎ，Ｉ．，Ｐｒｉｎｄｉｖｉｌｌｅ，Ｓ．Ａ．，Ｖｉｎｅｒ，Ｊ．Ｌ．，Ｗｅｉｎｅｒ，Ｌ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２００９）．Ｔｈｅ ｐｒｉｏｒｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ：ａ ｎａｔｉｏｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｐｉｌｏｔ ｐｒｏｊｅｃｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５，５３２３－５３３７．
１２．Ｃｈｉｂｏｗｓｋｉ，Ｅ．，ａｎｄ Ｓｚｃｚｅｓ，Ａ．（２０１６）．Ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｈａｒｇｅ ｏｆ ＤＰＰＣ ａｎｄ ＤＯＰＣ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ＰＬＣ ｅｎｚｙｍｅ．Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ２２，７５５－７６５．
１３．Ｄｏｂｒｅｎｋｏｖ，Ｋ．，Ｏｓｔｒｏｖｎａｙａ，Ｉ．，Ｇｕ，Ｊ．，Ｃｈｅｕｎｇ，Ｉ．Ｙ．，ａｎｄ Ｃｈｅｕｎｇ，Ｎ．－Ｋ．Ｖ．（２０１６）．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ ＧＤ２ ａｎｄ ＧＤ３ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａｓ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ，ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ，ａｎｄ ｙｏｕｎｇ ａｄｕｌｔｓ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ ６３，１７８０－１７８５．
１４．Ｌｏｐｅｚ，Ｐ．Ｈ．Ｈ．，ａｎｄ Ｓｃｈｎａａｒ，Ｒ．Ｌ．（２００９）．Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１９，５４９－５５７．
１５．Ｍｉｌｎｅｒ，Ｒ．Ｊ．，Ｓａｌｕｔｅ，Ｍ．，Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｃ．，Ａｂｂｏｔ，Ｊ．Ｒ．，ａｎｄ Ｆａｒｅｓｅ，Ｊ．（２００６）．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｉｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ＧＤ３ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｄｏｇｓ：ａ ｍｅｌａｎｏｍａ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１１４，２７３－２８４．
１６．Ｍｉｌｎｅｒ，Ｒ．Ｊ．，Ｃｈｉｍｕｒａ，Ｎ．，Ｂｏｗｌｅｓ，Ｋ．Ｄ．，ａｎｄ Ｓａｌｕｔｅ，Ｍ．（２０１５）．Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａ２９：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ ＧＤ３ ａｎｄ ＧＤ２ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ：Ａｎ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｔａｒｇｅｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３，Ａ２９－Ａ２９．
１７．Ｐａｒｋ，Ｊ．－Ｅ．，Ｗｕ，Ｄ．Ｙ．，Ｐｒｅｎｄｅｓ，Ｍ．，Ｌｕ，Ｓ．Ｘ．，Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．，Ｓｃｈｒａｎｔｚ，Ｎ．，ａｎｄ Ｃｈａｐｍａｎ，Ｐ．Ｂ．（２００８）．Ｆｉｎｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｇａｉｎｓｔ ＧＤ３ ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＭ３ ａｓ ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｉｇａｎｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２３，１４５－１５５．
１８．Ｐｅｒｒｉｅ，Ｙ．，Ｃｒｏｆｔｓ，Ｆ．，Ｄｅｖｉｔｔ，Ａ．，Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｈ．Ｒ．，Ｋａｓｔｎｅｒ，Ｅ．，ａｎｄ Ｎａｄｅｌｌａ，Ｖ．（２０１６）．Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．９９，Ｐａｒｔ Ａ，８５－９６．
１９．Ｐｅｒｒｉｅ，Ｙ．，Ｋａｓｔｎｅｒ，Ｅ．，Ｋｈａｄｋｅ，Ｓ．，Ｒｏｃｅｓ，Ｃ．Ｂ．，ａｎｄ Ｓｔｏｎｅ，Ｐ．（２０１７）．Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｆｔｏｎ ＮＪ １４９４，１２７－１４４．
２０．Ｓｋｏｒｕｐｓｋｉ，Ｋ．Ａ．，Ｕｈｌ，Ｊ．Ｍ．，Ｓｚｉｖｅｋ，Ａ．，Ａｌｌｓｔａｄｔ Ｆｒａｚｉｅｒ，Ｓ．Ｄ．，Ｒｅｂｈｕｎ，Ｒ．Ｂ．，ａｎｄ Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｃ．Ｏ．（２０１６）．Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ｖｅｒｓｕｓ ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ａｎｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｒ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｔｒｉａｌ．Ｖｅｔ．Ｃｏｍｐ．Ｏｎｃｏｌ．１４，８１－８７．
２１．Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ａ．Ｎ．，Ｈｕｅｌｓｍｅｙｅｒ，Ｍ．Ｋ．，Ｍｉｔｚｅｙ，Ａ．，Ｄｕｂｉｅｌｚｉｇ，Ｒ．Ｒ．，Ｋｕｒｚｍａｎ，Ｉ．Ｄ．，Ｍａｃｅｗｅｎ，Ｅ．Ｇ．，Ｖａｉｌ，Ｄ．Ｍ．，２００６．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ ｖａｃｃｉｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ｇｐ１００ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｐｈａｓｅ ＩＩ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．ＣＩＩ ５５，４３３－４４２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２６２－００５－００２５－６
２２．Ａｔｈａｎａｓｉｏｕ，Ｌ．Ｖ．，Ｐｏｌｉｚｏｐｏｕｌｏｕ，Ｚ．Ｓ．，Ｐａｐａｖａｓｉｌｅｉｏｕ，Ｅ．Ｇ．，Ｍｐａｉｒａｍｏｇｌｏｕ，Ｅ．Ｌ．，Ｋａｎｔｅｒｅ，Ｍ．Ｃ．，Ｒｏｕｓｏｕ，Ｘ．Ａ．，２０１７．Ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｓｉｓ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｏｇｓ．Ｖｅｔ．Ｒｅｃ．１８１，２６７－２６７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１３６／ｖｒ．１０４０４２
２３．Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ａ．，Ｖａｓａｎｔｈａｋｕｍａｒ，Ａ．，Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，２０１３．Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ Ｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：ｈｏｗ ｃｌｏｓｅ ａｒｅ ｗｅ？Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９１，３４０－３４９．
２４．Ｂｅｒｇｍａｎ，Ｐ．Ｊ．，ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｊ．，Ｎｏｖｏｓａｄ，Ａ．，Ｃｈａｒｎｅｙ，Ｓ．，Ｆａｒｒｅｌｌｙ，Ｊ．，Ｃｒａｆｔ，Ｄ．，Ｗｕｌｄｅｒｋ，Ｍ．，Ｊｅｆｆｅｒｓ，Ｙ．，Ｓａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，Ｈｏｈｅｎｈａｕｓ，Ａ．Ｅ．，Ｓｅｇａｌ，Ｎ．，Ｇｒｅｇｏｒ，Ｐ．，Ｅｎｇｅｌｈｏｒｎ，Ｍ．，Ｒｉｖｉｅｒｅ，Ｉ．，Ｈｏｕｇｈｔｏｎ，Ａ．Ｎ．，Ｗｏｌｃｈｏｋ，Ｊ．Ｄ．，２００３．Ｌｏｎｇ－Ｔｅｒｍ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ Ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｍｅｌａｎｏｍａ ａｆｔｅｒ ＤＮＡ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｕｍａｎ Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ：Ａ Ｐｈａｓｅ Ｉ Ｔｒｉａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．９，１２８４－１２９０．
２５．Ｂｒｏｄｅｒｓｅｎ，Ｒ．，Ｂｉｊｌｓｍａ，Ｆ．，Ｇｏｒｉ，Ｋ．，Ｊｅｎｓｅｎ，Ｋ．．，Ｃｈｅｎ，Ｗ．，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，Ｊ．，Ｈａｖｅｒｓｏｎ，Ｋ．，Ｍｏｏｒｅ，Ｐ．．，Ｓａａｌｍｕｌｌｅｒ，Ａ．，Ｓａｃｈｓ，Ｄ．，Ｓｌｉｅｒｅｎｄｒｅｃｈｔ，Ｗ．．，Ｓｔｏｋｅｓ，Ｃ．，Ｖａｉｎｉｏ，Ｏ．，Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ，Ｆ．，Ａａｓｔｅｄ，Ｂ．，１９９８．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｒｏｓｓ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ２１３ ｗｅｌｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｖａｒｉｏｕｓ ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｄ １１ ａｎｉｍａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．６４，１－１３．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ０１６５－２４２７（９８）００１１７－２
２６．Ｂｒｏｎｔｅ，Ｖ．，Ｂｒａｎｄａｕ，Ｓ．，Ｃｈｅｎ，Ｓ．－Ｈ．，Ｃｏｌｏｍｂｏ，Ｍ．Ｐ．，Ｆｒｅｙ，Ａ．Ｂ．，Ｇｒｅｔｅｎ，Ｔ．Ｆ．，Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ，Ｓ．，Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｊ．，Ｏｃｈｏａ，Ａ．，Ｏｓｔｒａｎｄ－Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｐ．Ｃ．，Ｓｉｃａ，Ａ．，Ｕｍａｎｓｋｙ，Ｖ．，Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ，Ｒ．Ｈ．，Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ，Ｄ．Ｉ．，２０１６．Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｓ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．７，１２１５０．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１２１５０
２７．Ｂｒｕｓａ，Ｄ．，Ｓｉｍｏｎｅ，Ｍ．，Ｇｏｎｔｅｒｏ，Ｐ．，Ｓｐａｄｉ，Ｒ．，Ｒａｃｃａ，Ｐ．，Ｍｉｃａｒｉ，Ｊ．，Ｄｅｇｉｕｌｉ，Ｍ．，Ｃａｒｌｅｔｔｏ，Ｓ．，Ｔｉｚｚａｎｉ，Ａ．，Ｍａｔｅｒａ，Ｌ．，２０１３．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｒａｄｉｃａｌ ｐｒｏｓｔａｔｅｃｔｏｍｙ：Ｐｒｏｆｉｌｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．２０，９７１－９７８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｉｊｕ．１２０８６
２８．Ｃａｌｖａｌｉｄｏ，Ｊ．，Ｗｏｏｄ，Ｇ．Ａ．，Ｍｕｔｓａｅｒｓ，Ａ．Ｊ．，Ｗｏｏｄ，Ｄ．，Ｓｅａｒｓ，Ｗ．，Ｗｏｏｄｓ，Ｊ．Ｐ．，２０１６．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈｙ ｄｏｇｓ．Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１８２，１０６－１１４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｖｅｔｉｍｍ．２０１６．１０．００９
２９．Ｃｈａｎｇ，Ａ．Ｌ．，Ｍｉｓｋａ，Ｊ．，Ｗａｉｎｗｒｉｇｈｔ，Ｄ．Ａ．，Ｄｅｙ，Ｍ．，Ｒｉｖｅｔｔａ，Ｃ．Ｖ．，Ｙｕ，Ｄ．，Ｋａｎｏｊｉａ，Ｄ．，Ｐｉｔｕｃｈ，Ｋ．Ｃ．，Ｑｉａｏ，Ｊ．，Ｐｙｔｅｌ，Ｐ．，Ｈａｎ，Ｙ．，Ｗｕ，Ｍ．，Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｈｏｒｂｉｎｓｋｉ，Ｃ．Ｍ．，Ａｈｍｅｄ，Ａ．Ｕ．，Ｌｅｓｎｉａｋ，Ｍ．Ｓ．，２０１６．ＣＣＬ２ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｇｌｉｏｍａ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｉｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７６，５６７１－５６８２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８－５４７２．ＣＡＮ－１６－０１４４
３０．Ｃｈｕｎ，Ｅ．，Ｌａｖｏｉｅ，Ｓ．，Ｍｉｃｈａｕｄ，Ｍ．，Ｇａｌｌｉｎｉ，Ｃ．Ａ．，Ｋｉｍ，Ｊ．，Ｓｏｕｃｙ，Ｇ．，Ｏｄｚｅ，Ｒ．，Ｇｌｉｃｋｍａｎ，Ｊ．Ｎ．，Ｇａｒｒｅｔｔ，Ｗ．Ｓ．，２０１５．ＣＣＬ２ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｂｙ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２，２４４－２５７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１５．０６．０２４
３１．Ｃｏｎｔｉ，Ｉ．，Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｊ．，２００４．ＣＣＬ２（ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ－１）ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．１４，１４９－１５４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｓｅｍｃａｎｃｅｒ．２００３．１０．００９
３２．Ｄａｍｕｚｚｏ，Ｖ．，Ｐｉｎｔｏｎ，Ｌ．，Ｄｅｓａｎｔｉｓ，Ｇ．，Ｓｏｌｉｔｏ，Ｓ．，Ｍａｒｉｇｏ，Ｉ．，Ｂｒｏｎｔｅ，Ｖ．，Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ，Ｓ．，２０１５．Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ：Ｄｅｆｉｎｉｎｇ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｂ Ｃｌｉｎ．Ｃｙｔｏｍ．８８，７７－９１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｃｙｔｏ．ｂ．２１２０６
３３．ｄｅ Ａｎｄｒｅｓ，Ｐ．Ｊ．，Ｉｌｌｅｒａ，Ｊ．Ｃ．，Ｃａｃｅｒｅｓ，Ｓ．，Ｄｉｅｚ，Ｌ．，Ｐｅｒｅｚ－Ａｌｅｎｚａ，Ｍ．Ｄ．，Ｐｅｎａ，Ｌ．，２０１３．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｓ ８ ａｎｄ １０ ａｓ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍａｍｍａｒｙ ｃａｎｃｅｒ．Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１５２，２４５－２５１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｖｅｔｉｍｍ．２０１２．１２．０１０
３４．Ｄｅ Ｓａｎｃｔｉｓ，Ｆ．，Ｓｏｌｉｔｏ，Ｓ．，Ｕｇｅｌ，Ｓ．，Ｍｏｌｏｎ，Ｂ．，Ｂｒｏｎｔｅ，Ｖ．，Ｍａｒｉｇｏ，Ｉ．，２０１６．ＭＤＳＣｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：Ｃｏｎｃｅｉｖｉｎｇ ｎｅｗ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ＢＢＡ－Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：ｆｒｏｍ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ １８６５，３５－４８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｂｂｃａｎ．２０１５．０８．００１
３５．Ｄｏｌｃｅｔｔｉ，Ｌ．，Ｐｅｒａｎｚｏｎｉ，Ｅ．，Ｕｇｅｌ，Ｓ．，Ｍａｒｉｇｏ，Ｉ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ Ｇｏｍｅｚ，Ａ．，Ｍｅｓａ，Ｃ．，Ｇｅｉｌｉｃｈ，Ｍ．，Ｗｉｎｋｅｌｓ，Ｇ．，Ｔｒａｇｇｉａｉ，Ｅ．，Ｃａｓａｔｉ，Ａ．，Ｇｒａｓｓｉ，Ｆ．，Ｂｒｏｎｔｅ，Ｖ．，２００９．Ｈｉｅｒａｒｃｈｙ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ａｍｏｎｇ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＧＭ－ＣＳＦ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４０，２２－３５．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｅｊｉ．２００９３９９０３
３６．Ｄｏｗ，Ｓ．Ｗ．，Ｅｌｍｓｌｉｅ，Ｒ．Ｅ．，Ｗｉｌｌｓｏｎ，Ａ．Ｐ．，Ｒｏｃｈｅ，Ｌ．，Ｇｏｒｍａｎ，Ｃ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｔ．Ａ．，１９９８．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｕｍｏｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ ｐｌｕｓ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｏｎｇｓ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１，２４０６－２４１４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７２／ＪＣＩ５１０
３７．Ｄｒａｘｌｅｒ，Ｄ．Ｆ．，Ｍａｄｏｎｄｏ，Ｍ．Ｔ．，Ｈａｎａｆｉ，Ｇ．，Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ，Ｍ．，Ｍｅｄｃａｌｆ，Ｒ．Ｌ．，２０１７．Ａ ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｑｕａｎｔｉｆｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ．Ｃｙｔｏｍ．Ｐａｒｔ Ｊ．Ｉｎｔ．Ｓｏｃ．Ａｎａｌ．Ｃｙｔｏｌ．９１，３３６－３５０．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｃｙｔｏ．ａ．２３０８０
３８．Ｄｕｆｆｙ，Ａ．，Ｚｈａｏ，Ｆ．，Ｈａｉｌｅ，Ｌ．，Ｇａｍｒｅｋｅｌａｓｈｖｉｌｉ，Ｊ．，Ｆｉｏｒａｖａｎｔｉ，Ｓ．，Ｍａ，Ｃ．，Ｋａｐａｎａｄｚｅ，Ｔ．，Ｃｏｍｐｔｏｎ，Ｋ．，Ｆｉｇｇ，Ｗ．Ｄ．，Ｇｒｅｔｅｎ，Ｔ．Ｆ．，２０１３．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ａｎｄ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６２，２９９－３０７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２６２－０１２－１３３２－３
３９．Ｆｉｎｏｃｃｈｉａｒｏ，Ｌ．Ｍ．Ｅ．，Ｆｏｎｄｅｌｌｏ，Ｃ．，Ｇｉｌ－Ｃａｒｄｅｚａ，Ｍ．Ｌ．，Ｒｏｓｓｉ，Ｕ．Ａ．，Ｖｉｌｌａｖｅｒｄｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｒｉｖｅｒｏｓ，Ｍ．Ｄ．，Ｇｌｉｋｉｎ，Ｇ．Ｃ．，２０１５．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－β ｐｌｕｓ Ｓｕｉｃｉｄｅ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｓ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ Ｃａｎｉｎｅ Ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２６，３６７－３７６．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８９／ｈｕｍ．２０１４．１３０
４０．Ｆｌｏｒｃｋｅｎ，Ａ．，Ｔａｋｖｏｒｉａｎ，Ａ．，Ｓｉｎｇｈ，Ａ．，Ｇｅｒｈａｒｄｔ，Ａ．，Ｏｓｔｅｎｄｏｒｆ，Ｂ．Ｎ．，Ｄｏｒｋｅｎ，Ｂ．，Ｐｅｚｚｕｔｔｏ，Ａ．，Ｗｅｓｔｅｒｍａｎｎ，Ｊ．，２０１５．Ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ：Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｄｏｎｏｒｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１６８，２６０－２６７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｉｍｌｅｔ．２０１５．１０．００１
４１．Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ，Ｄ．Ｉ．，Ｎａｇａｒａｊ，Ｓ．，２００９．Ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９，１６２－１７４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎｒｉ２５０６
４２．Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ，Ｄ．Ｉ．，Ｏｓｔｒａｎｄ－Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，Ｂｒｏｎｔｅ，Ｖ．，２０１２．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｕｍｏｕｒｓ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２，２５３－２６８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎｒｉ３１７５
４３．Ｇｉｌｌａｒｄ，Ｍ．，Ｃａｄｉｅｕ，Ｅ．，Ｄｅ Ｂｒｉｔｏ，Ｃ．，Ａｂａｄｉｅ，Ｊ．，Ｖｅｒｇｉｅｒ，Ｂ．，Ｄｅｖａｕｃｈｅｌｌｅ，Ｐ．，Ｄｅｇｏｒｃｅ，Ｆ．，Ｄｒｅａｎｏ，Ｓ．，Ｐｒｉｍｏｔ，Ａ．，Ｄｏｒｓｏ，Ｌ．，Ｌａｇａｄｉｃ，Ｍ．，Ｇａｌｉｂｅｒｔ，Ｆ．，Ｈｅｄａｎ，Ｂ．，Ｇａｌｉｂｅｒｔ，Ｍ．－Ｄ．，Ａｎｄｒｅ，Ｃ．，２０１４．Ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｍｅｌａｎｏｍａｓ ｉｎ ｄｏｇｓ ａｓ ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ ｎｏｎ－ＵＶ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａｓ．Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ．２７，９０－１０２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｐｃｍｒ．１２１７０
４４．Ｇｏｕｌａｒｔ，Ｍ．Ｒ．，Ｐｌｕｈａｒ，Ｇ．Ｅ．，Ｏｈｌｆｅｓｔ，Ｊ．Ｒ．，２０１２．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ Ｎａｔｕｒａｌｌｙ Ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７，ｅ３３２７４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００３３２７４
４５．Ｇｏｕｌａｒｔ，Ｍ．Ｒ．，Ｈｌａｖａｔｙ，Ｓ．Ｉ．，Ｃｈａｎｇ，Ｙ．－Ｍ．，Ｐｏｌｔｏｎ，Ｇ．，Ｓｔｅｌｌ，Ａ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｊ．，Ｗｕ，Ｙ．，Ｓｈａｒｍａ，Ｅ．，Ｂｒｏｘｈｏｌｍｅ，Ｊ．，Ｌｅｅ，Ａ．Ｃ．，Ｓｚｌａｄｏｖｉｔｓ，Ｂ．，Ｔｕｒｍａｉｎｅ，Ｍ．，Ｇｒｉｂｂｅｎ，Ｊ．，Ｘｉａ，Ｄ．，Ｇａｒｄｅｎ，Ｏ．Ａ．，２０１９．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．９，３５７４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１９－４０２８５－３
４６．Ｈｅｌｆａｎｄ，Ｓ．Ｃ．，Ｄｉｃｋｅｒｓｏｎ，Ｅ．Ｂ．，Ｍｕｎｓｏｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｐａｄｉｌｌａ，Ｍ．Ｌ．，１９９９．ＧＤ３ ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｔｕｍｏｒｉｃｉｄａｌ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １２．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９，３１１９－３１２７．
４７．Ｈｅｌｆａｎｄ，Ｓ．Ｃ．，Ｓｏｅｒｇｅｌ，Ｓ．Ａ．，Ｍｏｄｉａｎｏ，Ｊ．Ｆ．，Ｈａｎｋ，Ｊ．Ａ．，Ｓｏｎｄｅｌ，Ｐ．Ｍ．，１９９４．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ（ＬＡＫ）ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．９，２３７－２４４．
４８．Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｂ．，Ａｄｉｓｓｕ，Ｈ．Ａ．，Ｗｅｉ，Ｂ．－Ｒ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ｈ．Ｔ．，Ｍｅｒｌｉｎｏ，Ｇ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．，２０１８．Ｎａｔｕｒａｌｌｙ Ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ Ｃａｎｉｎｅ Ｍｅｌａｎｏｍａ ａｓ ａ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｃｏｓａｌ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｔｒｉｐｌｅ Ｗｉｌｄ－Ｔｙｐｅ Ｍｅｌａｎｏｍａｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３９０／ｉｊｍｓ１９０２０３９４
４９．Ｈｏｇｇｅ，Ｇ．Ｓ．，Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ，Ｊ．Ｋ．，Ｃｕｌｐ，Ｊ．，Ａｌｂｅｒｔｉｎｉ，Ｍ．Ｒ．，Ｄｕｂｉｅｌｚｉｇ，Ｒ．Ｒ．，Ｙａｎｇ，Ｎ．Ｓ．，ＭａｃＥｗｅｎ，Ｅ．Ｇ．，１９９９．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｖａｃｃｉｎｅ ｕｓｉｎｇ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｃａｎｉｎｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｄｏｇｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．６，２６－３６．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓｊ．ｃｇｔ．７７０００１５
５０．Ｈｕａｎｇ，Ｂ．，Ｌｅｉ，Ｚ．，Ｚｈａｏ，Ｊ．，Ｇｏｎｇ，Ｗ．，Ｌｉｕ，Ｊ．，Ｃｈｅｎ，Ｚ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｌｉ，Ｄ．，Ｙｕａｎ，Ｙ．，Ｚｈａｎｇ，Ｇ．－Ｍ．，Ｆｅｎｇ，Ｚ．－Ｈ．，２００７．ＣＣＬ２／ＣＣＲ２ ｐａｔｈｗａｙ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．２５２，８６－９２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃａｎｌｅｔ．２００６．１２．０１２
５１．Ｉｓｈｉｏｋａ，Ｋ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｙ．，Ｔａｊｉｍａ，Ｋ．，Ｏｈｔａｋｉ，Ｓ．，Ｍｉｙａｂｅ，Ｍ．，Ｔａｋａｓａｋｉ，Ｍ．，Ｍｏｒｉ，Ａ．，Ｍｏｍｏｔａ，Ｙ．，Ａｚａｋａｍｉ，Ｄ．，Ｓａｋｏ，Ｔ．，２０１３．Ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ－１ ｉｎ ｄｏｇｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｏｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．７５，１７３－１７７．
５２．Ｊａｃｏｂｓｅｎ，Ｃ．Ｎ．，Ａａｓｔｅｄ，Ｂ．，Ｂｒｏｅ，Ｍ．Ｋ．，Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｊ．Ｌ．，１９９３．Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ２０ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｌｅｕｃｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｔｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎｉｍａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．３９，４６１－４６６．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／０１６５－２４２７（９３）９００７５－Ｆ
５３．Ｊａｍｅｓ，Ｂ．Ｒ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｇ．，Ｂｒｉｎｃｋｓ，Ｅ．Ｌ．，Ｋｕｃａｂａ，Ｔ．Ａ．，Ｎｏｒｉａｎ，Ｌ．Ａ．，Ｍａｓｏｐｕｓｔ，Ｄ．，Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｔ．Ｓ．，２０１４．ＣｐＧ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＳＣ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｄ５－ＴＲＡＩＬ ｔｈｅｒａｐｙ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６３，１２１３－１２２７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２６２－０１４－１５９８－８
５４．Ｊｉａｎｇ，Ｈ．，Ｇｅｂｈａｒｄｔ，Ｃ．，Ｕｍａｎｓｋｙ，Ｌ．，Ｂｅｃｋｈｏｖｅ，Ｐ．，Ｓｃｈｕｌｚｅ，Ｔ．Ｊ．，Ｕｔｉｋａｌ，Ｊ．，Ｕｍａｎｓｋｙ，Ｖ．，２０１５．Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １３６，２３５２－２３６０．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｉｊｃ．２９２９７
５５．Ｊｉａｎｇ，Ｊ．，Ｇｕｏ，Ｗ．，Ｌｉａｎｇ，Ｘ．，２０１４．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ，ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７５，１１２８－１１３７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｈｕｍｉｍｍ．２０１４．０９．０２５
５６．Ｊｏｒｄａｎ，Ｋ．Ｒ．，Ａｍａｒｉａ，Ｒ．Ｎ．，Ｒａｍｉｒｅｚ，Ｏ．，Ｃａｌｌｉｈａｎ，Ｅ．Ｂ．，Ｇａｏ，Ｄ．，Ｂｏｒａｋｏｖｅ，Ｍ．，Ｍａｎｔｈｅｙ，Ｅ．，Ｂｏｒｇｅｓ，Ｖ．Ｆ．，ＭｃＣａｒｔｅｒ，Ｍ．Ｄ．，２０１３．Ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ－ｓｔａｇｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６２，１７１１－１７２２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２６２－０１３－１４７５－ｘ
５７．Ｋｈａｌｅｄ，Ｙ．Ｓ．，Ａｍｍｏｒｉ，Ｂ．Ｊ．，Ｅｌｋｏｒｄ，Ｅ．，２０１３．Ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｃｅｎｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ａｎｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９１，４９３－５０２．
５８．Ｋｉｍ，Ｙ．Ｗ．，Ｋｉｍ，Ｓ．－Ｋ．，Ｋｉｍ，Ｃ．Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｉ．Ｙ．，Ｃｈｏ，Ｍ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｎ．Ｋ．，２０１４．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｗｉｔｈ Ｔｕｍｏｒ Ｓｔａｇｅ ａｎｄ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｒａｔｉｏ ｉｎ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３４，３４８１－３４８７．
５９．Ｌａｎａ，Ｓ．，Ｐｌａｚａ，Ｓ．，Ｈａｍｐｅ，Ｋ．，Ｂｕｒｎｅｔｔ，Ｒ．，Ａｖｅｒｙ，Ａ．Ｃ．，２００６．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ Ｍａｓｓｅｓ ｉｎ Ｄｏｇｓ ｂｙ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２０，１１６１－１１６５．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．２００６．ｔｂ００７１６．ｘ
６０．Ｌｅｃｈｎｅｒ，Ｍ．Ｇ．，Ｌｉｅｂｅｒｔｚ，Ｄ．Ｊ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ａ．Ｌ．，２０１０．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８５，２２７３－２２８４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１０００９０１
６１．Ｌｉｍ，Ｓ．Ｙ．，Ｙｕｚｈａｌｉｎ，Ａ．Ｅ．，Ｇｏｒｄｏｎ－Ｗｅｅｋｓ，Ａ．Ｎ．，Ｍｕｓｃｈｅｌ，Ｒ．Ｊ．，２０１６．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＣＣＬ２－ＣＣＲ２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｘｉｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７，２８６９７．
６２．Ｌｉｎｄｓａｙ，Ｃ．Ｒ．，Ｓｐｉｌｉｏｐｏｕｌｏｕ，Ｐ．，Ｗａｔｅｒｓｔｏｎ，Ａ．，２０１５．Ｂｌｉｎｄｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ：ｗｈｙ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ ｈａｓ ｃｒｅａｔｅｄ ａ ｎｅｗ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．Ａｄｖ．Ｍｅｄ．Ｏｎｃｏｌ．７，１０７－１２１．
６３．ＭａｃＥｗｅｎ，Ｅ．Ｇ．，Ｋｕｒｚｍａｎ，Ｉ．Ｄ．，Ｖａｉｌ，Ｄ．Ｍ．，Ｄｕｂｉｅｌｚｉｇ，Ｒ．Ｒ．，Ｅｖｅｒｌｉｔｈ，Ｋ．，Ｍａｄｅｗｅｌｌ，Ｂ．Ｒ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｃ．Ｏ．，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｂ．，Ｚｗａｈｌｅｎ，Ｃ．Ｈ．，Ｏｂｒａｄｏｖｉｃｈ，Ｊ．，Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ，Ｒ．Ｃ．，Ｆｏｘ，Ｌ．Ｅ．，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．，Ｈｅｎｒｙ，Ｃ．，Ｆｉｄｅｌ，Ｊ．，１９９９．Ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｎ ｄｏｇｓ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ ｕｓｉｎｇ ｓｕｒｇｅｒｙ，ｌｉｐｏｓｏｍｅ－ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｍｕｒａｍｙｌ ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ，ａｎｄ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５，４２４９－４２５８．
６４．ＭａｃＥｗｅｎ，Ｅ．Ｇ．，Ｐａｔｎａｉｋ，Ａ．Ｋ．，Ｈａｒｖｅｙ，Ｈ．Ｊ．，Ｈａｙｅｓ，Ａ．Ａ．，Ｍａｔｕｓ，Ｒ．，１９８６．Ｃａｎｉｎｅ ｏｒａｌ ｍｅｌａｎｏｍａ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｕｒｇｅｒｙ ｖｅｒｓｕｓ ｓｕｒｇｅｒｙ ｐｌｕｓ Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｖｅｓｔ．４，３９７－４０２．
６５．Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ，Ｓ．，Ｂｒａｎｄａｕ，Ｓ．，Ｂｒｉｔｔｅｎ，Ｃ．Ｍ．，Ｂｒｏｎｔｅ，Ｖ．，Ｄａｍｕｚｚｏ，Ｖ．，Ｇｏｕｔｔｅｆａｎｇｅａｓ，Ｃ．，Ｍａｕｒｅｒ，Ｄ．，Ｏｔｔｅｎｓｍｅｉｅｒ，Ｃ．，ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｕｒｇ，Ｓ．Ｈ．，Ｗｅｌｔｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．Ｐ．，Ｗａｌｔｅｒ，Ｓ．，２０１６．Ｔｏｗａｒｄ ｈａｒｍｏｎｉｚｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎｔｅｒｉｍ ｓｔｕｄｙ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６５，１６１－１６９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２６２－０１５－１７８２－５
６６．Ｍａｎｌｅｙ，Ｃ．Ａ．，Ｌｅｉｂｍａｎ，Ｎ．Ｆ．，Ｗｏｌｃｈｏｋ，Ｊ．Ｄ．，Ｒｉｖｉｅｒｅ，Ｉ．Ｃ．，Ｂａｒｔｉｄｏ，Ｓ．，Ｃｒａｆｔ，Ｄ．Ｍ．，Ｂｅｒｇｍａｎ，Ｐ．Ｊ．，２０１１．Ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ Ｍｕｒｉｎｅ Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ ＤＮＡ Ｖａｃｃｉｎｅ ｆｏｒ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｍｅｌａｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｉｇｉｔ ｏｆ Ｄｏｇｓ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２５，９４－９９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．２０１０．０６２７．ｘ
６７．Ｍａｒｖｅｌ，Ｄ．，Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ，Ｄ．Ｉ．，２０１５．Ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｅ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７２／ＪＣＩ８０００５
６８．Ｍｅｙｅｒ，Ｃ．，Ｃａｇｎｏｎ，Ｌ．，Ｃｏｓｔａ－Ｎｕｎｅｓ，Ｃ．Ｍ．，Ｂａｕｍｇａｅｒｔｎｅｒ，Ｐ．，Ｍｏｎｔａｎｄｏｎ，Ｎ．，Ｌｅｙｖｒａｚ，Ｌ．，Ｍｉｃｈｉｅｌｉｎ，Ｏ．，Ｒｏｍａｎｏ，Ｅ．，Ｓｐｅｉｓｅｒ，Ｄ．Ｅ．，２０１４．Ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＭＤＳＣ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６３，２４７－２５７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２６２－０１３－１５０８－５
６９．Ｍｉｌｎｅｒ，Ｒ．Ｊ．，Ｓａｌｕｔｅ，Ｍ．，Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｃ．，Ａｂｂｏｔ，Ｊ．Ｒ．，Ｆａｒｅｓｅ，Ｊ．，２００６．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｉｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ＧＤ３ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｄｏｇｓ：Ａ ｍｅｌａｎｏｍａ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１１４，２７３－２８４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｖｅｔｉｍｍ．２００６．０８．０１２
７０．Ｍｕｃｈａ，Ｊ．，Ｍａｊｃｈｒｚａｋ，Ｋ．，Ｔａｃｉａｋ，Ｂ．，Ｈｅｌｌｍｅｎ，Ｅ．，Ｋｒｏｌ，Ｍ．，２０１４．ＭＤＳＣｓ Ｍｅｄｉａｔｅ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅ Ｃａｎｉｎｅ Ｍａｍｍａｒｙ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｖｉａ ＩＬ－２８／ＩＬ－２８ＲＡ（ＩＦＮ－λ）Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９，ｅ１０３２４９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１０３２４９
７１．Ｎｅｅｌ，Ｊ．Ａ．，Ｓｎｙｄｅｒ，Ｌ．，Ｇｒｉｎｄｅｍ，Ｃ．Ｂ．，２０１２．Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｓｉｓ：ａ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ １６５ ｄｏｇｓ．Ｖｅｔ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．４１，２１６－２２２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６５Ｘ．２０１２．００４１６．ｘ
７２．Ｎｉｋｏｌｉｃ Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｌ．，Ｋｊｅｌｇａａｒｄ－Ｈａｎｓｅｎ，Ｍ．，Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ａ．Ｔ．，２０１３．Ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－１ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ Ｂｅｒｎｅｓｅ Ｍｏｕｎｔａｉｎ ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ ｈｉｓｔｉｏｃｙｔｉｃ ｓａｒｃｏｍａ．Ｖｅｔ．Ｊ．１９８，４２４－４２８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｔｖｊｌ．２０１３．０７．０３０
７３．Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｋ．，Ｇｕｔｈ，Ａ．，Ｂｉｌｌｅｒ，Ｂ．，Ｅｌｍｓｌｉｅ，Ｒ．，Ｄｏｗ，Ｓ．，２００９．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｔｕｍｏｒ Ｔｙｐｅ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２３，８７５－８８１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．２００９．０３３３．ｘ
７４．Ｏｗｅｎ，Ｌ．．，１９８０．ＴＮＭ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｕｒｓ ｉｎ Ｄｏｍｅｓｔｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ．
７５．Ｐｅｒｒｙ，Ｊ．Ａ．，Ｔｈａｍｍ，Ｄ．Ｈ．，Ｅｉｃｋｈｏｆｆ，Ｊ．，Ａｖｅｒｙ，Ａ．Ｃ．，Ｄｏｗ，Ｓ．Ｗ．，２０１１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｏｕｎｔ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ ａ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｖｅｔ．Ｃｏｍｐ．Ｏｎｃｏｌ．９，５５－６４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１４７６－５８２９．２０１０．００２３５．ｘ
７６．Ｒａｏ，Ｓ．，Ｌａｎａ，Ｓ．，Ｅｉｃｋｈｏｆｆ，Ｊ．，Ｍａｒｃｕｓ，Ｅ．，Ａｖｅｒｙ，Ｐ．Ｒ．，Ｍｏｒｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．，Ａｖｅｒｙ，Ａ．Ｃ．，２０１１．Ｃｌａｓｓ ＩＩ Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｓｉｚｅ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ Ｐｒｅｄｉｃｔ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ Ｃａｎｉｎｅ Ｂ－Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２５，１０９７－１１０５．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．２０１１．０７６７．ｘ
７７．Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ｂ．Ｍ．，Ｌｏｑｕａｉ，Ｃ．，Ｇｅｒｗｅ，Ａ．，Ｂａｃｈｅｒ，Ｎ．，Ｓｔｅｉｎｂｒｉｎｋ，Ｋ．，Ｇｒａｂｂｅ，Ｓ．，Ｔｕｅｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ａ．，２０１４．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ＣＤ１１ｂ（＋）ＣＤ３３（＋）ＣＤ１４（＋）ＨＬＡ－ＤＲ（ｌｏｗ）ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ａｎ ｅａｒｌｙ ｅｖｅｎｔ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２３，２０２－２０４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｅｘｄ．１２３３６
７８．Ｓｃｈｉｆｆｍａｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｂｒｅｅｎ，Ｍ．，２０１５．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｗｈａｔ ｄｏｇｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｃａｎ ｔｅａｃｈ ｕｓ ａｂｏｕｔ ｈｕｍａｎｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ．Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｂ Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．３７０，２０１４０２３１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９８／ｒｓｔｂ．２０１４．０２３１
７９．Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ，Ｂ．，Ｓｕｃｋｅｒ，Ａ．，Ｇｒｉｅｗａｎｋ，Ｋ．，Ｚｈａｏ，Ｆ．，Ｗｅｉｄｅ，Ｂ．，Ｇｏｒｇｅｎｓ，Ａ．，Ｇｉｅｂｅｌ，Ｂ．，Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ，Ｄ．，Ｐａｓｃｈｅｎ，Ａ．，２０１３．Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ：Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ ａｎｄ ＭＤＳＣｓ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １３３，１６５３－１６６３．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｉｊｃ．２８１６８
８０．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｈ．，Ｂａｓｔｈｏｌｔ，Ｌ．，Ｇｅｅｒｔｓｅｎ，Ｐ．，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｉ．Ｊ．，Ｌａｒｓｅｎ，Ｓ．，Ｇｅｈｌ，Ｊ．，Ｍａａｓｅ，Ｈ．ｖｏｎ ｄｅｒ，２００５．Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｏｕｎｔｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ：ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｍｏｄｅｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９３，２７３－２７８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓｊ．ｂｊｃ．６６０２７０２
８１．Ｓｈｅｒｇｅｒ，Ｍ．，Ｋｉｓｓｅｂｅｒｔｈ，Ｗ．，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｃ．，Ｏｌｉｖｏ－Ｍａｒｓｔｏｎ，Ｓ．，Ｐａｐｅｎｆｕｓｓ，Ｔ．Ｌ．，２０１２．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｂｅａｒｉｎｇ ｄｏｇｓ．ＢＭＣ Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．８，２０９．
８２．Ｓｈｉｒｏｔａ，Ｙ．，Ｓｈｉｒｏｔａ，Ｈ．，Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．Ｍ．，２０１２．Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣｐＧ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８，１５９２－１５９９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１１０１３０４
８３．Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．，Ｂａｓｔｉａｎ，Ｂ．Ｃ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ｈ．Ｔ．，Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｊ．Ｄ．，Ｐｒａｓａｄ，Ｍ．Ｌ．，Ｃｏｎｗａｙ，Ｃ．Ｍ．，Ｐｒｉｅｔｏ，Ｖ．Ｍ．，Ｇａｒｙ，Ｊ．Ｍ．，Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ，Ｍ．Ｈ．，Ｅｓｐｌｉｎ，Ｄ．Ｇ．，Ｓｍｅｄｌｅｙ，Ｒ．Ｃ．，Ｐｉｒｉｓ，Ａ．，Ｍｅｕｔｅｎ，Ｄ．Ｊ．，Ｋｉｕｐｅｌ，Ｍ．，Ｌｅｅ，Ｃ．－Ｃ．Ｒ．，Ｗａｒｄ，Ｊ．Ｍ．，Ｄｗｙｅｒ，Ｊ．Ｅ．，Ｄａｖｉｓ，Ｂ．Ｊ．，Ａｎｖｅｒ，Ｍ．Ｒ．，Ｍｏｌｉｎｏｌｏ，Ａ．Ａ．，Ｈｏｏｖｅｒ，Ｓ．Ｂ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｃａｎａｌｅｓ，Ｊ．，Ｈｅｗｉｔｔ，Ｓ．Ｍ．，２０１４．Ｓｐｏｒａｄｉｃ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｎ ｄｏｇｓ ａｓ ａ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ．２７，３７－４７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｐｃｍｒ．１２１８５
８４．Ｓｍｅｄｌｅｙ，Ｒ．Ｃ．，Ｓｐａｎｇｌｅｒ，Ｗ．Ｌ．，Ｅｓｐｌｉｎ，Ｄ．Ｇ．，Ｋｉｔｃｈｅｌｌ，Ｂ．Ｅ．，Ｂｅｒｇｍａｎ，Ｐ．Ｊ．，Ｈｏ，Ｈ．－Ｙ．，Ｂｅｒｇｉｎ，Ｉ．Ｌ．，Ｋｉｕｐｅｌ，Ｍ．，２０１１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ Ｃａｎｉｎｅ Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ：Ａ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ Ｇｏａｌｓ ｆｏｒ Ｆｕｔｕｒｅ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．Ｖｅｔ．Ｐａｔｈｏｌ．４８，５４－７２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７７／０３００９８５８１０３９０７１７
８５．Ｓｏｔｔｎｉｋ，Ｊ．ｌ．，Ｒａｏ，Ｓ．，Ｌａｆｆｅｒｔｙ，Ｍ．ｈ．，Ｔｈａｍｍ，Ｄ．ｈ．，Ｍｏｒｌｅｙ，Ｐ．ｓ．，Ｗｉｔｈｒｏｗ，Ｓ．ｊ．，Ｄｏｗ，Ｓ．ｗ．，２０１０．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ ａｎｄ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｃｏｕｎｔ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ－Ｆｒｅｅ Ｉｎｔｅｒｖａｌ ｉｎ Ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２４，１４３９－１４４４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．２０１０．０５９１．ｘ
８６．Ｔｃｙｇａｎｏｖ，Ｅ．，Ｍａｓｔｉｏ，Ｊ．，Ｃｈｅｎ，Ｅ．，Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ，Ｄ．Ｉ．，２０１８．Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１，７６－８２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｏｉ．２０１８．０３．００９
８７．Ｔｉｋｏｏ，Ｓ．，Ｈａａｓｓ，Ｎ．Ｋ．，２０１５．Ｆｒｉｅｎｄｓ ｏｒ ｆｏｅｓ：ＩＬ－１０ ａｎｄ ＴＧＦ－β ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２４，２５４－２５５．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｅｘｄ．１２６６１
８８．Ｔｓａｉ，Ｍ．－Ｊ．，Ｃｈａｎｇ，Ｗ．－Ａ．，Ｈｕａｎｇ，Ｍ．－Ｓ．，Ｋｕｏ，Ｐ．－Ｌ．，２０１４．Ｔｕｍｏｒ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：Ａ Ｎｅｗ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ．ＩＳＲＮ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１４，１－８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５５／２０１４／３５１９５９
８９．Ｖａｓｉｅｖｉｃｈ，Ｅ．Ａ．，Ｈｕａｎｇ，Ｌ．，２０１１．Ｔｈｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：ａ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．８，６３５－６４１．
９０．Ｖｅｓｅｌｙ，Ｍ．Ｄ．，Ｋｅｒｓｈａｗ，Ｍ．Ｈ．，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．，Ｓｍｙｔｈ，Ｍ．Ｊ．，２０１１．Ｎａｔｕｒａｌ Ｉｎｎａｔｅ ａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ Ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９，２３５－２７１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ－ｉｍｍｕｎｏｌ－０３１２１０－１０１３２４
９１．ｖｏｎ Ｅｕｌｅｒ，Ｈ．，Ｓａｄｅｇｈｉ，Ａ．，Ｃａｒｌｓｓｏｎ，Ｂ．，Ｒｉｖｅｒａ，Ｐ．，Ｌｏｓｋｏｇ，Ａ．，Ｓｅｇａｌｌ，Ｔ．，Ｋｏｒｓｇｒｅｎ，Ｏ．，Ｔｏｔｔｅｒｍａｎ，Ｔ．Ｈ．，２００８．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｄｅｎｏｖｅｃｔｏｒ ＣＤ４０ ｌｉｇａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｈａｇｅｒｓｔｏｗｎ Ｍｄ １９９７ ３１，３７７－３８４．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９７／ＣＪＩ．０ｂ０１３ｅ３１８１６ａ８１２ｄ
９２．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｙ．，Ｋａｎｏ，Ｒ．，Ｍａｒｕｙａｍａ，Ｈ．，Ｈａｓｅｇａｗａ，Ａ．，Ｋａｍａｔａ，Ｈ．，２０１０．Ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ Ｂｃｌ－２ ｇｅｎｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ａ ｃａｎｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．７２，３８３－３８６．
９３．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｅ．，Ｐａｃｋｅｒ，Ｒ．Ａ．，２００３．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｓｉｚｅ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｄｏｇｓ ｗｉｔｈ ｏｒａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ：１００ ｃａｓｅｓ（１９８７－２００１）．Ｊ．Ａｍ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２２２，１２３４－１２３６．
９４．Ｗｏｎｇ，Ｋ．，ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｙｄｅｎ，Ｌ．，Ｓｃｈｏｔｔ，Ｃ．Ｒ．，Ｆｏｏｔｅ，Ａ．，Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏ－Ｃａｓａｓ，Ｆ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｓ．，Ｄｏｂｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｍｕｒｃｈｉｓｏｎ，Ｅ．Ｐ．，Ｗｕ，Ｈ．，Ｙｅｈ，Ｉ．，Ｆｕｌｌｅｎ，Ｄ．Ｒ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｎ．，Ｂａｓｔｉａｎ，Ｂ．Ｃ．，Ｐａｔｅｌ，Ｒ．Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎｃｏｒｅｎａ，Ｉ．，Ｒｏｂｌｅｓ－Ｅｓｐｉｎｏｚａ，Ｃ．Ｄ．，Ｉｙｅｒ，Ｖ．，Ｋｕｉｊｊｅｒ，Ｍ．Ｌ．，Ａｒｅｎｄｓ，Ｍ．Ｊ．，Ｂｒｅｎｎ，Ｔ．，Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．，Ｗｏｏｄ，Ｇ．Ａ．，Ａｄａｍｓ，Ｄ．Ｊ．，２０１９．Ｃｒｏｓｓ－ｓｐｅｃｉｅｓ ｇｅｎｏｍｉｃ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｕｃｏｓａｌ ｍｅｌａｎｏｍａ ｗｉｔｈ ｃａｎｉｎｅ ｏｒａｌ ａｎｄ ｅｑｕｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１０．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１４６７－０１８－０８０８１－１
９５．Ｙａｍａｕｃｈｉ，Ｙ．，Ｓａｆｉ，Ｓ．，Ｂｌａｔｔｎｅｒ，Ｃ．，Ｒａｔｈｉｎａｓａｍｙ，Ａ．，Ｕｍａｎｓｋｙ，Ｌ．，Ｊｕｅｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｗａｒｔｈ，Ａ．，Ｅｉｃｈｈｏｒｎ，Ｍ．，Ｍｕｌｅｙ，Ｔ．，Ｈｅｒｔｈ，Ｆ．Ｊ．Ｆ．，Ｄｉｅｎｅｍａｎｎ，Ｈ．，Ｐｌａｔｔｅｎ，Ｍ．，Ｂｅｃｋｈｏｖｅ，Ｐ．，Ｕｔｉｋａｌ，Ｊ．，Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｈ．，Ｕｍａｎｓｋｙ，Ｖ．，２０１８．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ａｎｄ Ｔｕｍｏｒ Ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ Ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１６４／ｒｃｃｍ．２０１７０８－１７０７ＯＣ
９６．Ｙａｏ，Ｙ．，Ｓｉｍａｒｄ，Ａ．Ｒ．，Ｓｈｉ，Ｆ．－Ｄ．，Ｈａｏ，Ｊ．，２０１３．ＩＬ－１０－Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２，３２４－３３６．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３１０９／０８８３０１８５．２０１２．７６２３６１
９７．Ｙｕａｎ，Ｌ．，Ｘｕ，Ｂ．，Ｆａｎ，Ｈ．，Ｙｕａｎ，Ｐ．，Ｚｈａｏ，Ｐ．，Ｓｕｏ，Ｚ．，２０１５．Ｐｒｅ－ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ：ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎｅｏｐｌａｓｍａ ６２，２３９－２４９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４１４９／ｎｅｏ＿２０１５＿０２９
９８．Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｐａｔｅｌ，Ｌ．，Ｐｉｅｎｔａ，Ｋ．Ｊ．，２０１０．ＣＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｌｉｇａｎｄ ２（ＣＣＬ２）ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２１，４１－４８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｙｔｏｇｆｒ．２００９．１１．００９
９９．Ｚｈａｏ，Ｙａｎｇ，Ｗｕ，Ｔ．，Ｓｈａｏ，Ｓ．，Ｓｈｉ，Ｂ．，Ｚｈａｏ，Ｙｏｎｇ，２０１６．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ．ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５，ｅ１００４９８３．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８０／２１６２４０２Ｘ．２０１５．１００４９８３
１００．Ｚｏｇｌｍｅｉｅｒ，Ｃ．，Ｂａｕｅｒ，Ｈ．，Ｎｏｒｅｎｂｅｒｇ，Ｄ．，Ｗｅｄｅｋｉｎｄ，Ｇ．，Ｂｉｔｔｎｅｒ，Ｐ．，Ｓａｎｄｈｏｌｚｅｒ，Ｎ．，Ｒａｐｐ，Ｍ．，Ａｎｚ，Ｄ．，Ｅｎｄｒｅｓ，Ｓ．，Ｂｏｕｒｑｕｉｎ，Ｃ．，２０１１．ＣｐＧ Ｂｌｏｃｋｓ Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ－Ｂｅａｒｉｎｇ Ｍｉｃｅ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７，１７６５－１７７５．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１０－２６７２

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【国際調査報告】