特表 2022-520183 治療物質の眼投与のための薬物送達組成物及びその使用法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-29

(54)【発明の名称】治療物質の眼投与のための薬物送達組成物及びその使用法

(51)【国際特許分類】

   A61K 9/50 20060101AFI20220322BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20220322BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20220322BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220322BHJP

【ＦＩ】

A61K9/50

A61P27/02

A61K47/36

A61K47/34

A61K47/38

A61K47/32

A61K47/42

A61K45/00

A61K9/48

A61K39/395 M

A61K39/395 N

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021546362

(86)(22)【出願日】2020-02-10

(85)【翻訳文提出日】2021-10-05

(86)【国際出願番号】 US2020017523

(87)【国際公開番号】W WO2020163871

(87)【国際公開日】2020-08-13

(31)【優先権主張番号】62/803,388

(32)【優先日】2019-02-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514137997

【氏名又は名称】オハイオ・ステイト・イノベーション・ファウンデーション

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，ポンフェイ

(72)【発明者】

【氏名】ライリー，ケイトリン エリザベス

(72)【発明者】

【氏名】オー，マシュー ピー

(72)【発明者】

【氏名】ラヌッティ，ジョン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C076AA61

4C076AA62

4C076AA63

4C076AA64

4C076AA67

4C076AA95

4C076BB11

4C076BB24

4C076CC10

4C076EE13

4C076EE23

4C076EE24

4C076EE25

4C076EE26

4C076EE30

4C076EE31

4C076EE42

4C076EE43

4C076FF31

4C076FF32

4C076GG21

4C084AA17

4C084MA37

4C084MA66

4C084NA13

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZC202

4C085AA14

4C085BB11

4C085GG01

(57)【要約】

本開示は、タンパク質治療物質の送達（例えば目へのタンパク質治療物質の硝子体内送達）のための組成物、デバイス、及び方法に関する。特に、本開示は、二層壁及び治療剤を有するカプセルを含み、治療剤がカプセルの内腔空間内に最初に存在する、それを必要とする対象の目の中への注射のための薬物送達デバイスを記載する。これらの薬物送達デバイスを作製及び使用する方法も記載される。
【選択図】図１０

【特許請求の範囲】

【請求項1】

各々が、閉鎖された２つの末端を備えたチューブ形状を有する１つまたは複数のカプセルであって、前記１つまたは複数のカプセルの各々が二層壁及び少なくとも１つの内腔区画を独立して含む、前記カプセル；及び
各々が、前記少なくとも１つの内腔区画のうちの１つまたは複数内に存在する、１つまたは複数の治療剤、
を含み；
各々の二層壁が、内側層及び外側層を含み；
前記内側層が、生理的条件下で正味の正電荷を有する第１のポリマーを含み；
前記外側層が、前記第１のポリマーとは異なる第２のポリマーを独立して含む、
薬物送達組成物。

【請求項2】

前記組成物が、対象の目の中への注射のために意図される、請求項１に記載の薬物送達組成物。

【請求項3】

前記注射が、目の硝子体眼房の中へのものである、請求項２に記載の薬物送達組成物。

【請求項4】

前記注射が、硝子体内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、または脈絡膜上注射である、請求項２に記載の薬物送達組成物。

【請求項5】

前記第１のポリマーが、キトサン、ポリエチレンイミン、プロタミン、ポリプロピルエニミン（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｉｍｉｎｅ）、ポリ－Ｌ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン、ポリ－Ｄ－リジン、ポリ－Ｄ－アルギニン、セルロース、デキストラン、ポリ（アミドアミン）、ポリ（２－（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート）、その誘導体、またはその組み合わせを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項6】

前記第１のポリマーが、キトサンまたはその誘導体を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項7】

前記第２のポリマーが、ポリ（ε－カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ－乳酸（ＰＬＡ）、ポリ－グリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ－ラクチド－コ－グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリエステル、ポリ（オテル（ｏｔｈｅｒ）エステル）、ポリ（ホスファジン）、ポリ（リン酸エステル）、ゼラチン、コラーゲン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、その誘導体、及びその組み合わせを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項8】

前記第２のポリマーが、ＰＣＬまたはその誘導体を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項9】

前記１つまたは複数のカプセルの各々が、約０．１ｃｍ～約５ｃｍの長さを有する、請求項１～８のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項10】

前記１つまたは複数のカプセルの各々が、約０．５ｃｍ～約３ｃｍの長さを有する、請求項９に記載の薬物送達組成物。

【請求項11】

前記１つまたは複数のカプセルの各々が、約１ｃｍ～約３ｃｍの長さを有する、請求項９または１０のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項12】

前記１つまたは複数のカプセルの各々が、約１００μｍ～約２０００μｍの内径を有する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項13】

前記内径が約１００μｍ～約５００μｍである、請求項１２に記載の薬物送達組成物。

【請求項14】

前記内径が約１００μｍ～約３００μｍである、請求項１２または１３のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項15】

前記１つまたは複数のカプセルの各々が、前記内径よりも約５０μｍ～約３００μｍ大きい外径を有する、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項16】

前記二層壁が約２５μｍ～約１５０μｍの壁の厚さを有する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項17】

前記壁の厚さが約７０μｍ～約１００μｍである、請求項１６に記載の薬物送達組成物。

【請求項18】

前記壁の厚さが約７５μｍ～約９５μｍである、請求項１６または１７のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項19】

前記壁の厚さが約８０μｍ～約９０μｍである、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項20】

前記外側層が、約１００ｎｍ～約１００００ｎｍの孔直径を有する孔をさらに含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項21】

前記孔直径が約３５０ｎｍ～６５０ｎｍである、請求項２０に記載の薬物送達組成物。

【請求項22】

前記外側層が、約１００ｎｍ～約２０００ｎｍの直径を有する繊維を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項23】

前記繊維が約５００ｎｍ～約１０００ｎｍの直径を有する、請求項２２に記載の薬物送達組成物。

【請求項24】

前記内側層が、約５０ｎｍ～約１０００ｎｍの直径を有する繊維を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項25】

前記繊維が約１００ｎｍ～約４００ｎｍの直径を有する、請求項２４に記載の薬物送達組成物。

【請求項26】

前記治療剤が、約ｐＨ６．０～約ｐＨ７．４内の任意のｐＨで正味の負電荷を有する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項27】

前記治療剤が抗ＶＥＧＦ治療剤である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項28】

前記抗ＶＥＧＦ治療剤が、治療抗体、治療タンパク質、またはその組み合わせである、請求項２７に記載の薬物送達組成物。

【請求項29】

前記治療抗体が、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ＩＢＩ３０５、またはその組み合わせである、請求項２８に記載の薬物送達組成物。

【請求項30】

前記治療タンパク質がＶＥＧＦデコイ受容体である、請求項２８に記載の薬物送達組成物。

【請求項31】

前記ＶＥＧＦデコイ受容体がアフリベルセプトである、請求項３０に記載の薬物送達組成物。

【請求項32】

前記抗ＶＥＧＦ治療剤がチロシンキナーゼ阻害物質である、請求項２７に記載の薬物送達組成物。

【請求項33】

前記チロシンキナーゼ阻害物質が、ラパチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、またはその組み合わせである、請求項３２に記載の薬物送達組成物。

【請求項34】

前記抗ＶＥＧＦ治療剤が、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体を標的化するアンチセンス核酸である、請求項２７に記載の薬物送達組成物。

【請求項35】

前記治療剤が、約０．０１ｍｇ～約３ｍｇの量で存在する、請求項１～３４のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項36】

前記治療剤が、約０．５ｍｇ～約２ｍｇの量で存在する、請求項３５に記載の薬物送達組成物。

【請求項37】

前記治療剤が、約０．５ｍｇ～約１．５ｍｇの量で存在する、請求項３５または３６のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項38】

前記治療剤が、少なくとも３０日の期間にわたってほぼゼロ次放出速度論を示す、請求項１～３７のいずれか１項に記載の薬物送達組成物。

【請求項39】

前記治療剤が、少なくとも３か月の期間にわたってほぼゼロ次放出速度論を示す、請求項３８に記載の薬物送達組成物。

【請求項40】

前記治療剤が、少なくとも６か月の期間にわたってほぼゼロ次放出速度論を示す、請求項３８に記載の薬物送達組成物。

【請求項41】

前記治療剤が、少なくとも９か月の期間にわたってほぼゼロ次放出速度論を示す、請求項３８に記載の薬物送達組成物。

【請求項42】

治療有効量の請求項１～４１のいずれか１項に記載の薬物送達組成物をそれを必要とする対象の目の中へ注射することを含む、前記対象における眼科的障害を治療する方法。

【請求項43】

前記眼科的障害が、急性黄斑神経網膜症；Ｂｅｈｃｅｔ病；血管新生（脈絡膜血管新生を包含する）；糖尿病性ぶどう膜炎；ヒストプラスマ症；感染（真菌またはウイルスが原因の感染等）；黄斑変性（滲出型ＡＭＤ及び非滲出ＡＭＤ及び滲出ＡＭＤを含む、急性黄斑変性（ＡＭＤ）等）；浮腫（黄斑浮腫、類嚢胞黄斑浮腫、及び糖尿病性黄斑浮腫等）；多巣性脈絡膜炎；後眼部の部位または位置に影響する眼外傷；眼腫瘍；網膜障害（網膜中心静脈閉塞症、糖尿病性網膜症（増殖性糖尿病性網膜症を包含する）、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞性疾患、網膜剥離、ぶどう膜炎網膜疾患等）；交感性眼炎；Ｖｏｇｔ Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ（ＶＫＨ）症候群；ぶどう膜滲出；眼のレーザー治療によって引き起こされるか、またはそれによって影響を受ける、後眼部病態；光線力学療法、光凝固術、放射線網膜症、網膜上膜障害、網膜静脈分枝閉塞症、前部虚血性視神経症、非網膜症糖尿病性網膜機能不全、網膜色素変性症、がん、及び緑内障によって引き起こされるか、またはそれらによって影響を受ける、後眼部病態である、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記眼科的障害が、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、血管新生、黄斑浮腫、または浮腫である、請求項４２に記載の方法。

【請求項45】

前記対象の目の中へ注射することが、目の硝子体眼房の中への注射を含む、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記対象の目の中へ注射することが、硝子体内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、または脈絡膜上注射を含む、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

対象の目の中への注射のための薬物送達カプセルを調製する方法であって、
生理的条件下で正味の正電荷を有する第１のポリマーを含む内側層を伝導性ロッド上に形成すること；及び
前記内側層上に外側層を形成し、前記外側層が、前記第１のポリマーとは異なる第２のポリマーを含むこと、
を含み；
前記内側層の前記形成が、前記第１のポリマーの溶液及び、約１０ｋＶ～約３０ｋＶの電圧差を使用する、エレクトロスピニングを含み；
前記第１のポリマーの前記溶液が、少なくとも１つの有機溶媒中で約１ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％であり；
前記外側層の前記形成が、前記第２のポリマー及び任意選択でポロゲンを含む溶液を使用して、前記形成された内側層の上へエレクトロスピニングすることを含み；エレクトロスピニングのために使用される前記電圧差が、約１０ｋＶ～約３０ｋＶであり；
前記第２のポリマー及び任意選択で前記ポロゲンを含む前記溶液が、全重量に基づいて、約１ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％の前記第２のポリマー及び前記ポロゲンであり；
前記第２のポリマー対前記任意選択のポロゲンの重量比が、約５０：５０～約１００：０である、
前記方法。

【請求項48】

前記第１のポリマーがキトサンまたはその誘導体を含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記第２のポリマーがＰＣＬまたはその誘導体を含む、請求項４７または４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記第１のポリマーの前記溶液中の少なくとも１つの有機溶媒が、トリフルオロ酢酸及びジクロロメタンの混合物であり；前記トリフルオロ酢酸及び前記ジクロロメタンが、約１：１０～約１０：１の比で存在する、請求項４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記トリフルオロ酢酸及び前記ジクロロメタンが、約５：３～約１０：３の比で存在する、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記トリフルオロ酢酸及び前記ジクロロメタンが、約７：３の比で存在する、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記第２のポリマー対前記ポロゲンの重量比が、約９０：１００～約９９．９：０．１である、請求項４７～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記第２のポリマー対前記ポロゲンの重量比が、約９０：１００～約９５：５である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記第２のポリマー対前記ポロゲンの重量比が、約９５：５～約９９．９：０．１である、請求項５３に記載の方法。

【請求項56】

前記第２のポリマー及び前記ポロゲンを含む前記溶液が、全重量に基づいて、約２．５ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％の前記第２のポリマー及び前記ポロゲンである、請求項４７～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記第２のポリマー及び前記ポロゲンを含む前記溶液が、全重量に基づいて、約５ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％の前記第２のポリマー及び前記ポロゲンである、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記外側層の形成に続いて、前記薬物送達カプセルを焼結することをさらに含む、請求項４７～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

焼結が、約５０℃～約１５０℃の温度での約１分間～約６時間の期間の加熱を含む、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

焼結が、約９０℃～約１１０℃の温度での約３０分間～約６時間の期間の加熱を含む、請求項５８に記載の方法。

【請求項61】

焼結に続いて、前記薬物送達カプセルを洗浄することをさらに含む、請求項５８～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

洗浄が、塩基性溶液、水溶液、またはその組み合わせにより前記薬物送達カプセルを洗浄することを含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

洗浄が、飽和重炭酸ナトリウム溶液により洗浄すること、続いて脱イオン水により洗浄することを含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項64】

洗浄に続いて、前記薬物送達カプセルを乾燥することをさらに含む、請求項６１～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

乾燥が、真空下での約５０℃～約１５０℃の温度の約１分間～約６時間の期間である、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

乾燥が、真空下での約９０℃～約１１０℃の温度の約３０分間～約６時間の期間である、請求項６４に記載の方法。

【請求項67】

請求項４７～６６のいずれか１項に記載の方法によって作製される、薬物送達カプセル。

【請求項68】

治療剤をさらに含む、請求項６７に記載の薬物送達カプセル。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年２月８日に出願された米国仮特許出願第６２／８０３，３８８号の優先権の利益を主張し、この開示は参照することによってその全体が本明細書に援用される。

【0002】

本開示は、薬物送達組成物、より具体的には、目への治療剤の送達のための１つまたは複数の多層性薬物送達カプセルを含有する組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、白内障、早産、及び緑内障に続く、世界で４番目に多い失明の一般的な原因である。米国では１１００万を超える人々が滲出型ＡＭＤと診断される。この数は３０年で２倍になるだろうと推定される。したがって、疾患病因を理解し、治療方法を開発するために多くの研究が行われてきた。加齢に伴う血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の過剰発現が脈絡膜中の血管新生を刺激し、そのことが、新しく形成された血管の出血及び瘢痕化の間に、網膜への不可逆的損傷を導くことは広く知られる。滲出型ＡＭＤのための現在のゴールドスタンダード治療は、ＶＥＧＦを阻害し、血管形成を防止するために、抗ＶＥＧＦ（ベバシズマブまたはラニビズマブ等）を月１回硝子体内注射することである。しかしながら、頻繁な注射は、多くの場合感染、眼内圧の上昇、及び裂孔原性網膜剥離、そして患者コンプライアンスの問題を導く。

【0004】

最近、目中での長期的な薬物送達のための植込み物及びマイクロ粒子／ナノ粒子等の新規デバイスの報告があった。残念なことに、かかる植込み物は、植込み及び除去のための外科的手順を要求する。さらに、現時点で公知の植込みデバイスは、オフターゲットであり且つ薬物有効性を低下させる傾向がある。マイクロ粒子またはナノ粒子は３０ゲージ針による目の中への注射に適切な比較的小さなサイズを有するが、現在のところ記載されたマイクロ粒子またはナノ粒子は、最初の３か月の既知の粒子組成物の生物分解に起因する急速な放出ウィンドウにわたって、治療剤（抗ＶＥＧＦ治療物質等）を放出する。

【0005】

したがって、ＡＭＤまたは他の眼科的障害の治療へ向けられた著しい努力にもかかわらず、現在のところ利用可能な治療レジメンの有害な副作用を最小限にする方法及び組成物の不足が依然として存在する。さらに、生物分解性であり且つ硝子体内注射後に９か月またはそれ以上まで薬物放出を制御することができる、薬物送達系及び組成物についての必要性がある。目への治療剤の直接的な送達を要求するＡＭＤ及び他の眼疾患の治療のための改善された治療アプローチについての必要性が、依然として存在する。これらの必要性及び他の必要性は本開示によって満たされる。

【発明の概要】

【0006】

本開示の目的（複数可）によれば、本明細書において実施され幅広く記載されるように、本開示は、一態様において、タンパク質治療物質の送達（例えば目へのタンパク質治療物質の硝子体内送達）のための組成物、デバイス、及びプロセスに関する。開示される薬物送達組成物は、二層壁、及びその中に含有される治療剤を有するカプセルを含む。さらなる態様において、本開示は、眼科的な疾患または障害を治療する方法に関する。

【0007】

したがって一態様において、各々が、閉鎖された２つの末端を備えたチューブ形状を有する１つまたは複数のカプセルであって、１つまたは複数のカプセルの各々が多層壁及び少なくとも１つの内腔区画を独立して含む、前記カプセル；及び
各々が、少なくとも１つの内腔区画のうちの１つまたは複数内に最初に存在する、１つまたは複数の治療剤、
を含み；
各々の多層壁が、少なくとも内側層及び外側層を独立して含み；
各々の内側層が、生理的条件下で正味の正電荷を有する第１のポリマーを含み；
各々の外層が、第１のポリマーとは異なる第２のポリマーを独立して含む、
薬物送達組成物が、提供される。

【0008】

いくつかの実施形態において、薬物送達組成物は、２つ以上のカプセルを含み得る。いくつかの実施形態において、異なる治療剤は、２つ以上のカプセルの各々内に最初に存在する。他の実施形態において、同じ治療剤は、２つ以上のカプセルの各々内に最初に存在する。

【0009】

いくつかの実施形態において、少なくとも１つまたは１つもしくは複数のカプセルは、２つ以上の内腔区画を含む。いくつかの実施形態において、異なる治療剤は、２つ以上の内腔区画の各々内に最初に存在する。他の実施形態において、同じ治療剤は、２つ以上の内腔区画の各々内に最初に存在する。

【0010】

いくつかの態様において、第１のポリマーは、キトサン、ポリエチレンイミン、プロタミン、ポリプロピルイミン、ポリ－Ｌ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン、ポリ－Ｄ－リジン、ポリ－Ｄ－アルギニン、セルロース、デキストラン、ポリ（アミドアミン）、ポリ（２－（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート）、その誘導体、またはその組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、第１のポリマーは、キトサンまたはその誘導体を含み得る。いくつかの実施形態において、第１のポリマーは、約５０ｎｍ～約１０００ｎｍの平均直径を有する繊維を含む。

【0011】

いくつかの態様において、第２のポリマーは、生物分解性ポリマーを含み得る。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ポリ（ε－カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ－乳酸（ＰＬＡ）、ポリ－グリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ－ラクチド－コ－グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ホスファジン）、ポリ（リン酸エステル）、ゼラチン、コラーゲン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、その誘導体、またはその組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ＰＣＬを含む。他の実施形態において、第２のポリマーは、ＰＬＡを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、約１００ｎｍ～約２０００ｎｍの平均直径を有する繊維を含む。

【0012】

いくつかの態様において、１つまたは複数のカプセルは各々、約０．１ｃｍ～約５ｃｍの長さを独立して有する。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のカプセルは各々、約１００μｍ～約２０００μｍの内径を独立して有する。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のカプセルは各々、同じカプセルの内径よりも約５０μｍ～約３００μｍ大きい外径を独立して有する。いくつかの実施形態において、各々の多層壁は、約２５μｍ～約１５０μｍの壁の厚さを有する。いくつかの実施形態において、各々の外側層は、約１００ｎｍ～約１００００ｎｍの平均孔直径を有する孔をさらに含み得る。

【0013】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数の薬物送達カプセルの各々は、約－２５ｍＶ～約２５ｍＶの、ｐＨ７．４でのゼータ電位として測定された表面電荷を有する。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の治療剤は各々、約６．０～約７．４のｐＨ範囲内で正味の負電荷を有する。

【0014】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数の治療剤のうちの少なくとも１つは、抗ＶＥＧＦ剤である。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、治療抗体（例えばベバシズマブ、ラニビズマブ、ＩＢＩ３０５、その組み合わせ）である。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、ＶＥＧＦデコイ受容体（例えばアフリベルセプト）である。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、チロシンキナーゼ阻害物質（例えばラパチニブ、スニチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、またはその組み合わせ）である。

【0015】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数の治療剤は、抗炎症剤（シクロスポリン、ステロイドまたは非ステロイド性抗炎症薬等）、抗微生物剤、免疫調節薬、眼圧降下剤、神経保護剤、遺伝子療法、ウイルスベクター療法、α－アドレナリン作用アゴニスト、β－アドレナリン作用アゴニスト、またはその組み合わせを含み得る。

【0016】

別の態様において、治療有効量の本明細書において記載される薬物送達組成物をそれを必要とする対象の目の中へ注射することを含む、対象における眼科的障害を治療する方法が、提供される。いくつかの実施形態において、眼科的障害は、急性黄斑神経網膜症；Ｂｅｈｃｅｔ病；血管新生（脈絡膜血管新生を包含する）；糖尿病性ぶどう膜炎；ヒストプラスマ症；感染（真菌またはウイルスが引き起こす感染等）；黄斑変性（滲出型ＡＭＤ及び非滲出ＡＭＤ及び滲出ＡＭＤを含む、急性黄斑変性（ＡＭＤ）等）；浮腫（黄斑浮腫、類嚢胞黄斑浮腫、及び糖尿病性黄斑浮腫等）；多巣性脈絡膜炎；後眼部の部位または位置に影響する眼外傷；眼腫瘍；網膜障害（網膜中心静脈閉塞症、糖尿病性網膜症（増殖性糖尿病性網膜症を包含する）、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞性疾患、網膜剥離、ぶどう膜炎網膜疾患等）；交感性眼炎；Ｖｏｇｔ Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ（ＶＫＨ）症候群；ぶどう膜滲出；眼のレーザー治療によって引き起こされるか、またはそれによって影響を受ける、後眼部病態；光線力学療法、光凝固術、放射線網膜症、網膜上膜障害、網膜静脈分枝閉塞症、前部虚血性視神経症、非網膜症糖尿病性網膜機能不全、網膜色素変性症、がん、及び緑内障によって引き起こされるか、またはそれらによって影響を受ける、後眼部病態を含み得る。いくつかの実施形態において、眼科的障害は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、血管新生、または黄斑浮腫を含む。いくつかの実施形態において、対象の目の中へ記載される組成物を注射することは、目の硝子体眼房の中への注射を含む。他の実施形態において、対象の目の中へ記載される組成物を注射することは、硝子体内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、または脈絡膜上注射を含む。

【0017】

本明細書において記載される薬物送達組成物中で使用される１つまたは複数のカプセルを生成する方法であって、
第１のポリマーの第１の層を伝導性ロッド上に形成し、第１の層の形成が、少なくとも１つの有機溶媒中で第１のポリマーを含む第１の溶液を使用して、エレクトロスピニングすることを含み、エレクトロスピニングが、約１０ｋＶ～約３０ｋＶの電圧差を使用して遂行されること；ならびに
第２のポリマーの第２の層を第１の層上に形成し、第２の層の形成が、第１のポリマー及び任意選択でポロゲンを含む第２の溶液を形成された第１の層の上へエレクトロスピンすることを含み、エレクトロスピニングが、約１０ｋＶ～約３０ｋＶの電圧差を使用して遂行されること、
を含む、前記方法も提供される。

【0018】

（ａ）開示される薬物送達組成物；（ｂ）滅菌されたパッケージ中の開示される薬物送達組成物；または（ｃ）開示される薬物送達組成物を含む、前充填されたシリンジもしくは針のうちの１つ、及び本明細書において記載される眼科的な疾患または障害を治療する薬物送達組成物を投与するための指示書を含む、キットも開示する。

【0019】

本開示の他の系、方法、特性、及び利点は、以下の図面及び発明を実施するための形態の検討に際して、当業者に明らかであるかまたは明らかになるだろう。すべてのかかる追加の系、方法、特性、及び利点がこの発明を実施するための形態内に包含され、本開示の範囲内であり、添付の特許請求の範囲によって保護されることが意図される。加えて、記載される実施形態のすべての任意選択の好ましい特性及び修飾は、本明細書において教示される本開示のすべての態様において使用可能である。さらに、記載される実施形態のすべての任意選択の好ましい特性及び修飾と同様に、従属請求項の個別の特性も、互いと組み合わせ可能且つ交換可能である。

【0020】

本開示の多くの態様は、以下の図面を参照してより理解され得る。図面中の構成要素は必ずしも一定の比率の縮尺でなく、その代りに本開示の原理を明瞭に例証することに重点が置かれている。さらに、図面中の同様の参照数字は、複数の概観図を通して対応する部分を指定する。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1A】以下の：ａ）キトサンナノ繊維及びＰＣＬのナノ繊維の２つの層をエレクトロスピニングを使用して、回転ロッド上に収集するステップ；ｂ）二層コートロッドを真空オーブン中で１００℃で約３時間焼結するステップ；ｃ）ロッドを除去して中心部が中空の円筒を生成するステップ；ｄ）多孔質構造を塩類溶脱によってＰＣＬ層中に生成するステップ；及びｅ）治療物質をカプセルへ装填し、後続して末端をシールするステップを含む、代表的な開示されるプロセスを示す。次いで調製した二層カプセルは、３７℃の適切なバッファー（例えばＰＢＳ）の中への薬物放出（ステップｆ等）の査定等の研究において利用することができるか；または硝子体内注射を経由する好適な標的（例えば目）への装填した薬物の送達（ステップｇ等）のために使用することができる。

【図1B】開示される二層カプセルの図解の横断面の表示、及び開示される二層カプセルの硝子体内注射の図解の表示を示す。

【図2】開示される技法を使用して形成されたキトサン及びＰＣＬ繊維マットの代表的な図解の表示を示す（パネルＡを参照）。以下の図は代表的な走査型電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）画像も示す。（パネルＢ）二層キトサン－ＰＣＬ繊維マットの横断面の代表的なＳＥＭ画像；ならびに（パネルＣ）それぞれ９３２．５７±３９９．４２ｎｍ及び３３１．６１±１８６．１９ｎｍの直径のＰＣＬナノ繊維層及びキトサンナノ繊維層の代表的なＳＥＭ画像。

【図3】開示される二層カプセルの代表的な写真画像を示す。図の左側の枠は、２個のカプセル（１つは１．６４５ｍｍの直径を有し、他方は２６０μｍの直径を有する）の写真画像を示す。図の中央の枠は、２６０μｍの内径のＰＣＬ単層カプセルの代表的なＳＥＭ画像を示す。右側の枠は、８９．８５±４．２７μｍの膜厚のキトサン－ＰＣＬの二層カプセルの代表的なＳＥＭ画像を示す。右側の枠中の画像は、この代表的な実例において、キトサン繊維マットの層が外側のＰＣＬ層へ付着され、キトサン層が壁の全体の厚さの近似で２５％を占めることを示す。

【図4】示された濃度のＨＥＰＥＳ塩を使用して調製した開示されるＰＣＬ膜の代表的な画像を示し、画像は、開示されるＰＣＬ膜の表面または横断面図を図示されるように示す。画像から、ＨＥＰＥＳナトリウム塩の比率の増加が、ＰＣＬ膜に対してより大きな孔をもたらしたことが示される。孔の相互接続は、５．０％を超える塩濃度により、膜の内部に過剰に供給され得る。矢印：塩類溶脱後のＰＣＬフィルムの内部の特徴的な相互接続する孔。各々の画像は、画像の下方左隅に示されるスカラーバーを有する。

【図5】開示される二層カプセルの特徴評価に係わる画像及びデータを示す。パネルａは、塩類溶脱及び洗浄後の二層構造の代表的なスキームを示す。パネルｂは、塩類溶脱の前後の開示される二層膜の代表的なＳＥＭ画像を示す。示されるように、多孔質構造は、塩類溶脱、及び飽和重炭酸ナトリウム溶液による洗浄後に失われたキトサン繊維構造によって生成された。多孔質二層構造が、横断面において観察された。パネルｃは、塩類溶脱後のキトサン層及びＰＣＬ層の代表的なＦＴＩＲスペクトルを示す。示されるように、１７５２ｃｍ^－１の有意なピークはＰＣＬ中のカルボニル基へ割り当てられた。３４７８ｃｍ^－１の幅広い群はキトサン中のヒドロキシル基であった。

【図6】開示される二層カプセルからのタンパク質放出に対する多孔質の二層構造の効果に係わるデータを示す。データは、ＰＢＳ中のインキュベーションから本明細書において記載されるように決定されて、ＢＳＡまたはベバシズマブをカプセル化する、代表的な開示されるキトサン－ＰＣＬ二層カプセル（グラフ凡例中でＣｈ－ＰＣＬとラベルされる）及びＰＣＬ単層カプセル（グラフ凡例中でＰＣＬとラベルされる）から本明細書において以下で記載されるように得られた。グラフ凡例中の「Ｃｈ－ＰＣＬ」ラベルまたは「ＰＣＬ」ラベルと共に示されるパーセント値は、二層カプセルまたは単層カプセルを調製するのに使用されたｗ／ｖ％を示す。パネルａは、１．６４５ｍｍの内径の二層カプセルからの代表的なＢＳＡ放出プロファイル及び２６０μｍの内径の二層カプセルからの代表的なＢＳＡ放出プロファイルを示す。パネルｂは、１．６４５ｍｍの内径の二層カプセルからの代表的なベバシズマブ放出プロファイル及び２６０μｍの内径の二層カプセルからの代表的なベバシズマブ放出プロファイルを示す。薬物送達組成物は、各々のタイムポイントで単層カプセルよりも低い累積放出を示す（＃＝ｐ≦０．０５）。データから、塩濃度を増加させることが、各々のタイムポイントでの累積放出の増加と相関したことも示される（＊＝ｐ≦０．０５）。

【図7】開示される二層カプセルからのタンパク質放出に対する多孔質の二層構造の効果に係わるデータを示す。この図中で、トレンドラインを、示されるように、フィッティングパラメーターによりデータへフィッティングさせる。データは、ＰＢＳ中のインキュベーションから本明細書において記載されるように決定されて、ＢＳＡまたはベバシズマブをカプセル化する、代表的な開示されるキトサン－ＰＣＬ二層カプセル（グラフ凡例中でＣｈ－ＰＣＬとラベルされる）及びＰＣＬ単層カプセル（グラフ凡例中でＰＣＬとラベルされる）から本明細書において以下で記載されるように得られた。グラフ凡例中の「Ｃｈ－ＰＣＬ」ラベルまたは「ＰＣＬ」ラベルと共に示されるパーセント値は、二層カプセルまたは単層カプセルを調製するのに使用されたｗ／ｖ％を示す。パネルａは、１．６４５ｍｍの内径の二層カプセルからの代表的なＢＳＡ放出プロファイル及び２６０μｍの内径の二層カプセルからの代表的なＢＳＡ放出プロファイルを示す。パネルｂは、１．６４５ｍｍの内径の二層カプセルからの代表的なベバシズマブ放出プロファイル及び２６０μｍの内径の二層カプセルからの代表的なベバシズマブ放出プロファイルを示す。データから、開示される二層カプセルがほぼゼロ次放出速度論を達成できることが示される。

【図8】開示されるカプセルの潜在毒性を査定するためのアッセイスキーム、及びアッセイから得られたデータを示す。パネルａは、直接的接触方法による、ＡＲＰＥ－１９細胞を使用するインビトロの細胞毒性を査定するアッセイスキームを示す。パネルｂは、直接的接触方法による、１０．０％のＨＥＰＥＳ塩、７．５％のＨＥＰＥＳ塩、及び５．０％のＨＥＰＥＳ塩により調製されたカプセルについてのインビトロの毒性データを示す。パネルｃは、抽出物曝露方法による、ＡＲＰＥ－１９細胞を使用するインビトロの細胞毒性を査定するアッセイスキームを示す。パネルｄは、異なる条件により調製されたカプセルの抽出物のインビトロの細胞毒性を示す。異なるタイムポイント及び塩濃度での各々のバーは、３つの独立したサンプルの平均測定値を表わす。エラーバーは標準偏差を示す。上記のように、データは、代表的な開示されるキトサン－ＰＣＬ二層カプセル（グラフ凡例中でＣｈ－ＰＣＬとラベルされる）及びＰＣＬ単層カプセル（グラフ凡例中でＰＣＬとラベルされる）を使用して得られた。データから、ＰＣＬ抽出物またはキトサン－ＰＣＬ抽出物により処理した細胞の間で細胞生存率に対する有意差は示されず（ｐ＞０．０５）、そして、経時的な有意な差は観察されなかった（ｐ＞０．０５）。

【図9】ＰＣＬ単層カプセルまたは開示される二層カプセルを使用して送達されるベバシズマブへ曝露されたＶＥＧＦ処理ＨＵＶＥＣ細胞における細胞－細管の長さの阻害に係わる、代表的な蛍光顕微鏡写真画像及びデータを示す。Ｃａｌｃｉｅｎ ＡＭを使用して細胞を標識した。パネルａは、細胞培養培地中での１０ｍｇの元のベバシズマブの非存在（左側）及び存在（右側）下における、５ｎｇのＶＥＧＦで処理したＨＵＶＥＣを示す、代表的な蛍光画像を示す。データから、対照群へ比較して、ベバシズマブの存在下における細胞の細胞細管の有意な破壊が示される。パネルｂは、示されるように１週間、１か月、３か月、及び９か月間の曝露で、２６０μｍの直径のＰＣＬ単層薬物送達デバイス及びキトサン－ＰＣＬ薬物送達デバイスから放出された１０ｍｇのベバシズマブへ曝露された細胞の細胞細管の阻害を示す代表的な蛍光画像を示す。パネルｃは、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量的に分析した、示された群の平均の管の長さの阻害を示す。データを平均±標準偏差、ｎ＝３として提示する。データから、単層カプセルから溶出したベバシズマブにより処理した群のＨＵＶＥＣの管の長さの有意差が、二層カプセルからのものに比較して、認められたことが示される（＊＝ｐ≦０．０５）。データから、溶出したベバシズマブのＨＵＶＥＣ管の阻害能力の有意差が、遊離の元のベバシズマブのものに比較して、経時的に観察されたことも示される（＃＝ｐ≦０．０５）。

【図10】エクスビボのブタの目のモデルの中への代表的な開示される二層カプセルの注射を査定する研究から得られた結果を示す。パネルａは、皮下注射針を経由する硝子体液の中への二層カプセルの注射の図解表示を示す。パネルｂは、２１ゲージの針中に前装填したカプセルを示し、当該カプセルは、エクスビボのブタの目の中の輪部の３ｍｍ後方に注射された（中央の枠を参照）。注射に続いて、エクスビボのブタの目を解剖し、インタクトカプセルが、エクスビボのブタ目の硝子体液中でインタクトであることが観察された（右側の枠を参照）。

【図11】ＰＣＬ単層カプセル及び本明細書において記載される二層カプセルの１年間のインキュベーションにわたる生物分解の比較を示す。パネルａは、異なる塩濃度により調製された代表的な走査型電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）画像を示す。ＰＣＬ膜上の孔のサイズの増加は、９か月後のすべてのサンプルで観察された。断面像（右側の枠を参照）は、カプセルが１年の期間にわたってインタクトなままであったことを示す。パネルｂは、二層カプセルの代表的なＳＥＭ画像を示す。繊維フレームワークを多孔質のキトサン層中で観察することができた。インタクトな二層構造が断面像から示される（右側の枠を参照）。

【図12】異なる濃度でＰＢＳ中で希釈したベバシズマブのＵＶ－可視光吸収スペクトルを示す。パネルａは、ＵＶ－可視光分光法によって測定した、希釈ベバシズマブの吸光度を示す。パネルｂは、プレートリーダーによって測定した、ベバシズマブの標準曲線を示す。ＵＶ－可視光分光法及びプレートリーダーによって検出できる最少濃度は、５μｇ／ｍＬである。

【図13】ＥＬＩＳＡによって査定した、ベバシズマブ放出に対する本明細書において記載されるカプセルの多孔質の二層構造の効果を示す。ベバシズマブをカプセル化する本明細書において記載される二層カプセル及びＰＣＬ単層カプセルを、ＰＢＳ中でインキュベーションした。２６０μｍの内径のカプセルについてのベバシズマブ放出プロファイルを得た。開示される二層カプセルは、カプセルの内部のタンパク質を少なくとも９か月間有効に保持し、各々のタイムポイントで単層カプセルよりも低い累積放出を有する（＃＝ｐ≦０．０５）。塩濃度を増加させることも、各々のタイムポイントでの累積放出を増加させる（＊＝ｐ≦０．０５）。ＥＬＩＳＡによって取得した放出プロファイルは、ＵＶ－可視光分光法によって決定した結果と一致する。

【図14】凍結乾燥の前後の遊離の元のベバシズマブ、ならびに最初の３か月にわたる単層カプセル及び本明細書において記載される二層カプセルから溶出したベバシズマブの安定性を示す。パネルａは、遊離の元のベバシズマブ、凍結乾燥したベバシズマブ、及びデバイス中のベバシズマブのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。パネルｂは、生理的温度で１か月及び３か月間インキュベーションした単層カプセル及び二層カプセルから溶出したベバシズマブのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

【図15】３週間にわたってＰＢＳへ曝露したキトサン－ＰＣＬ二層カプセルの生物分解を示す。最も多孔質な構造を表わす、１０％のＨＥＰＥＳ塩により調製した２６０μｍの内径の二層カプセルの代表的なＳＥＭ画像が提供される。横断面及び内側画像から、カプセルがＰＢＳへ曝露された場合に３週間後に内側キトサン層を失ったが、キトサン層がＰＣＬによりコートされた場合に生物分解は有意ではなかったことが示される。二層カプセルの厚さは７３．２３±３．６２μｍであった。

【0022】

本開示の追加の利点は、続く記載において部分的に説明され、記載から部分的に明白になるか、本開示の実践によって習得され得る。本開示の利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘される要素及び組み合わせを用いて実現及び達成されるだろう。前述の一般的な記載及び以下の詳細な記載の両方は、例示及び説明のみのためであり、特許請求される本開示を制限しないことを理解すべきである。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本明細書において開示される多くの修飾及び他の実施形態は、開示される組成物及び方法に係わり、前述の記載及び添付の図面において提示される教示の恩恵を受ける当業者に、思い浮かぶだろう。したがって、本開示は開示される特定の実施形態に限定されないこと、ならびに修飾及び他の実施形態は添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されることを理解すべきである。当業者は、本明細書において記載される態様の多くの変形及び適合を認識するだろう。これらの変形及び適合は、本開示の教示中に含まれ、本明細書の特許請求の範囲によって網羅されることが意図される。

【0024】

特定の用語が本明細書において用いられるが、それらは一般的且つ記載の意味でのみ使用され、限定の目的のためではない。

【0025】

本開示の読了に際して当業者に明らかになるように、本明細書において記載及び図示される各々の個別の実施形態は不連続の構成要素及び特性を有し、それらは本開示の範囲または趣旨から逸脱せずに、他の複数の実施形態のうちの任意のものの特性から容易に分離され得るかまたはそれらと組み合わせられ得る。

【0026】

任意の列挙された方法は、列挙された事象の順序または論理上可能な任意の他の順序で実行され得る。すなわち、別段明確に明示されない限り、本明細書において説明される任意の方法または態様は、そのステップが特定の順序で遂行されることを要求するものとして解釈されるようには一切意図されない。したがって、方法クレームが、ステップが特定の順序に限定されるべきことを、請求項または記載中で具体的に明示しない場合には、いかなる点でも、順序が暗示されることは一切意図されない。これは、解釈のためのあらゆる可能性のある不明確な基準（ステップもしくは動作フローのアレンジに関する論理の問題、文法構成もしくは句読点に由来する平明な意味、または明細書中に記載される態様の数もしくは型が挙げられる）についても当てはまる。

【0027】

本明細書において言及されるすべての出版物は、それらの出版物が引用される方法及び／または材料を開示及び記載するために、参照することによって本明細書に援用される。本明細書において考察される出版物は、本出願の申請日の前のそれらの開示のためにのみ提供される。本明細書におけるいかなるものも、本発明が先行発明のおかげでかかる出版物に先行する権利のないことの承認として解釈されるべきではない。さらに、本明細書において提供される公開日は、実際の公開日とは異なる場合があり、独立した確認を要求し得る。

【0028】

本開示の態様は、特定の法定分類（システム法定分類等）において記載及び請求され得るが、これは便宜上のみのものであり、当業者は、任意の法定分類において各々の本開示の態様が記載及び請求され得ることを理解するだろう。

【0029】

本明細書において使用される用語は特定の態様を記載するためのみの目的であり、限定することは意図されないことも理解すべきである。別段定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語は、開示される組成物及び方法が属する技術分野の当業者によって共通して理解されるものと同じ意味を有する。用語（共通して使用される辞書において定義されたもの等）が明細書及び関連技術の文脈中のそれらの意味と一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書において明確に定義されない限り、理想化されたかまたは過度に形式的な意味で解釈されるべきでないことがさらに理解されるだろう。

【0030】

本開示の様々な態様の記載の前に、以下の定義が提供され、別段の指示のない限り使用されるべきである。追加の用語は、本開示における他の箇所で定義され得る。

【0031】

定義
本明細書において使用される時、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、参照されるような明示された特性、整数、ステップ、または構成要素の存在を規定すると解釈されるが、１つまたは複数の特性、整数、ステップ、もしくは構成要素、またはその群の存在または追加を除外するものではない。さらに、「によって（ｂｙ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」「包含すること（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「包含する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「包含される（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」、「含むこと（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｅｓ）」、「含まれる（ｉｎｖｏｌｖｅｄ）」、及び「等（ｓｕｃｈ ａｓ）」という用語の各々は、それらのオープンで非限定的な意味で使用され、互換的に使用され得る。さらに、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「～から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び「～からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語によって網羅される例及び態様を含むことが意図される。同様に、「～から本質的になること」という用語は、「～からなること」という用語によって網羅される例を含むことが意図される。

【0032】

本明細書及び添付の特許請求の範囲中で使用される時、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈による明瞭な別段の定めがない限り、複数の指示物を包含する。したがって例えば、「薬物送達組成物」、「治療剤」、または「臨床状態」への参照は、２つ以上のかかる薬物送達組成物、治療剤、または臨床状態、及び同種のものを包含するがこれらに限定されない。

【0033】

比、濃度、量、及び他の数値データは、本明細書において範囲のフォーマットで表現され得ることに注目されたい。範囲の各々の端点が、他の端点に関連して、及び他の端点から独立して、有意であることがさらに理解されるだろう。本明細書において開示される多数の値があり、各々の値が、値それ自体に加えて、「約」その特定の値としても本明細書において開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示されるならば、そのとき「約１０」も開示される。範囲は、「約」ある特定の値から、及び／または「約」別の特定の値まで、として本明細書において表現され得る。同様に、先行詞「約」の使用によって値が近似として表現される場合に、特定の値がさらなる態様を形成することが理解されるだろう。例えば、「約１０」という値が開示されるならば、そのとき「１０」も開示される。

【0034】

範囲が表現される場合に、さらなる態様は、１つの特定の値から、及び／または他方の特定の値までを包含する。例えば、明示された範囲が限界のうちの一方または両方を含む場合に、それらの含まれる限界のいずれかまたは両方を除外する範囲も、本開示中に包含される（例えば語句「ｘ～ｙ」は、「ｘ」から「ｙ」までの範囲と同様に、「ｘ」を超える及び「ｙ」未満の範囲を含む）。範囲は、上限（例えば「約ｘ、ｙ、ｚ、またはそれ未満」）としても表現され得、「約ｘ」、「約ｙ」、及び「約ｚ」の特定の範囲と同様に、「ｘ未満」、「ｙ未満」、及び「ｚ未満」の範囲を含むように解釈されるべきである。同様に、「約ｘ、ｙ、ｚ、またはそれを超える」という語句は、「約ｘ」、「約ｙ」、及び「約ｚ」の特定の範囲と同様に、「ｘを超える」、「ｙを超える」、及び「ｚを超える」範囲を含むように解釈されるべきである。加えて、「『ｘ』～『ｙ』」という語句は、「ｘ」及び「ｙ」が数値である場合に、「約『ｘ』～約『ｙ』」を含む。

【0035】

かかる範囲フォーマットが利便性及び簡潔性のために使用され、したがって、範囲の限界として明示的に列挙された数値を含むだけではなく、あたかも各々の数値及び下位範囲が明示的に列挙されたかのように、その範囲内に網羅されたすべての個別の数値または下位範囲も含むように、柔軟な方式で解釈されるべきであることを理解されたい。例証のために、「約０．１％～５％」の数値範囲は、約０．１％～約５％の明示的に列挙された値を含むだけではなく、示された範囲内の個別の値（例えば約１％、約２％、約３％、約４％）及び下位範囲（例えば約０．５％～約１．１％；約５％～約２．４％；約０．５％～約３．２％、及び約０．５％～約４．４％、ならびに他の可能な下位範囲）も含むように解釈されるべきである。

【0036】

本明細書において使用される時、「約」、「近似で」、「～であるか、または約～である」、及び「実質的に」という用語は、問題になっている量または値が、正確な値、または特許請求の範囲で列挙されるかもしくは本明細書において教示されるものと同等の結果もしくは効果を提供する値であり得ることを意味する。すなわち、量、サイズ、配合、パラメーター、ならびに他の量及び特徴が、正確ではなく、且つ正確である必要がない、が、所望に応じて、反映する耐性、換算係数、四捨五入、測定誤差、及び同種のもの、ならびに同等の結果または効果が得られるような当業者に公知の他の因子を反映して、近似の、及び／またはより大きいかもしくはより小さなものであり得ることが理解される。いくつかの状況において、同等の結果または効果を提供する値は、論理的に決定され得ない。かかる事例において、概して、本明細書において使用される時、別段の指示または暗示のない限り、「約」及び「～であるか、または約～である」は、示される公称値±１０％の変動を意味することが理解される。概して、量、サイズ、配合、パラメーター、または他の量もしくは特徴は、「約」、「近似で」、または「～であるか、または約～である」であことが明確に明示されるかどうかにかかわらず、そのようなものである。定量値の前に「約」、「近似で」、または「～であるか、または約～である」が使用される場合に、別段具体的に明示されない限り、パラメーターが特定の定量値それ自体も含むことが理解される。

【0037】

本明細書において使用される時、「有効量」は、細胞、組織、系、動物、またはヒトの有益なまたは所望される生物学的、情緒的、医学的、または臨床的な応答を達成するのに十分な、開示される化合物または本明細書において提供される医薬組成物の量を指し得る。有効量は、１つまたは複数の投与、適用、または投薬量で投与され得る。当該用語は、実質的に正常な生理機能を促進またはそれに回復するのに有効な量も、その範囲内に包含し得る。

【0038】

本明細書において使用される時、「治療有効量」という用語は、所望される治療結果を達成するか、または所望されない症状に対する効果を有するのに十分であるが、概して有害な副作用を引き起こすには不十分な量を指す。任意の特定の患者のための具体的な治療有効用量レベルは、治療されている障害及び障害の重症度；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、及び食餌；投与の時間；投与の経路；用いられる具体的な化合物の排泄率；治療の継続時間；用いられる具体的な化合物と併用してまたは同時に使用される薬物、ならびに医療従事者の知識及び専門技術内の同様の因子、ならびに医学分野において周知であり得るものを包含する多様な因子に依存するだろう。特定の疾患または病態の治療の事例において、いくつかの実例では、所望される応答は、疾患または病態の進行を阻害することであり得る。これは一時的に疾患の進行を遅らせることのみを含み得る。しかしながら、他の実例において、疾患の進行を恒久的に中断することが所望され得る。これは、任意の特定の疾患について当業者に公知のルーチンの診断方法によってモニターされ得る。疾患または病態の治療への所望される応答は、疾患または病態の発症を遅延させることまたは場合によっては発症を予防することであり得る。

【0039】

例えば、所望される治療効果を達成するために要求されるものよりも低いレベルで化合物の用量を開始し、所望される効果が達成されるまで徐々に投薬量を増加させることは、十分に当業者の技能の範囲内にある。所望されるならば、有効な１日の用量は、投与の目的のために複数の用量へと分割され得る。それゆえ、単回用量組成物はかかる量またはその約数を含有して、１日の用量を構成し得る。投薬量は、任意の禁忌の事象において個別の医師によって調整され得る。本発明の薬理学的薬剤の最大用量（単独でまたは他の治療剤と組み合わせて）、すなわち妥当な医学的判断に従って最も高い安全量が使用されることは、概して好ましい。しかしながら、患者が、医学的理由、精神的理由、または実際上他の理由のために、より低い用量または耐用量を主張し得ることは当業者によって理解されるだろう。

【0040】

開示される薬物送達組成物の治療有効用量への応答は、治療または医薬物の生理的作用（治療または薬理学的薬剤の投与に続く疾患症状の減少または欠如等）の決定によって測定され得る。他のアッセイは当業者に公知であり、応答のレベルの測定のために用いられ得る。治療の量は、例えば開示される化合物及び／または医薬組成物の量を増加または減少させることによって、投与された開示される化合物及び／または医薬組成物を変化させることによって、投与経路を変化させることによって、投薬タイミングを変化させることによって等で、変動され得る。投薬量は変動し得るとともに、１または複数の用量投与で１または複数日間毎日投与され得る。所与のクラスの医薬製品についての適切な投薬量についての文献中で、指針を見出すことができる。

【0041】

本明細書において使用される時、「予防有効量」という用語は、疾患または病態の発症または開始の予防のために有効な量を指す。

【0042】

本明細書において使用される時、「予防する」または「予防」という用語は、何かが起こることを、特に事前の行為によって、排除するか、回避するか、未然に防ぐか、機先を制するか、停止するか、または妨害することを指す。低減する、阻害する、または予防する、が本明細書において使用される場合に、別段具体的に示されない限り、他の２つの言葉の使用も明確に開示されることが理解される。

【0043】

本明細書において使用される時、「任意選択の」または「任意選択で」という用語は、後続して記載される事象または状況が起こり得るかまたは起こり得ないこと、ならびに当該記載が、前記事象または状況が起こる実例及びそれが起こらない実例を包含することを意味する。

【0044】

本明細書において使用される時、「治療剤」は、局所的及び／または全身的な作用で投与される対象に対して、生物学的に活性があり得るか、あるいはそうでなければ、薬理学的、免疫原性、生物学的、及び／または生理的な効果を誘導し得る、任意の物質、化合物、分子、及び同種のものを指し得る。治療剤は、一次活性剤、または、換言すれば、組成物の効果の全体もしくは一部が帰属する組成物の構成要素（複数可）であり得る。治療剤は、二次治療剤、あるいは、換言すれば、組成物の追加の部分及び／または他の効果が帰属する組成物の構成要素（複数可）であり得る。したがって当該用語は、薬物、ワクチン、及び生物医薬品（タンパク質、ペプチド、ホルモン、核酸、遺伝子コンストラクト、及び同種のもの等の分子を包含する）であると伝統的に見なされる、化合物または化学物質を網羅する。治療剤の例は、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ（１４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（６４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）及びＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１２ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）等の周知の文献参照中で記載され、当該例としては、医薬品；ビタミン；ミネラルサプリメント；疾患または病気の治療、予防、診断、治癒、または緩和のために使用される物質；身体の構造もしくは機能に影響する物質、または生理的環境に配置された後に生物学的に活性になるかもしくはより活性になるプロドラッグが限定されずに挙げられる。例えば、「治療剤」という用語は、アジュバント；抗感染物質（抗生物質及び抗ウイルス剤等）；鎮痛物質及び鎮痛物質の組み合わせ、食欲減退物質、抗炎症剤、抗癲癇物質、局所及び全身の麻酔物質、催眠物質、鎮静物質、抗精神病剤、神経弛緩剤、抗鬱物質、抗不安物質、アンタゴニスト、ニューロン遮断剤、抗コリン作用剤及びコリン様作用剤、抗ムスカリン作用剤及びムスカリン作用剤、抗アドレナリン作用物質、抗不整脈物質、降圧剤、ホルモン及び、栄養物質、抗関節炎物質、抗喘息剤、抗痙攣物質、抗ヒスタミン物質、抗嘔吐物質、抗新生物物質、抗掻痒物質、解熱物質；抗発作物質、循環器官用薬（カルシウムチャンネル遮断物質、β遮断物質、βアゴニスト及び抗不整脈物質が挙げられる）、抗高血圧物質、利尿物質、血管拡張物質；中枢神経興奮物質；感冒薬；充血除去物質；診断用物質；ホルモン；骨成長刺激物質及び骨吸収阻害物質；免疫抑制物質；筋弛緩物質；精神刺激物質；鎮静物質；トランキライザー；タンパク質、ペプチド、及びその断片（天然に存在するか、化学的に合成されるか、または組み換えにより産生されるかにかかわらず）；ならびに核酸分子（リボヌクレオチド（ＲＮＡ）またはデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）のいずれかの２つ以上のヌクレオチドのポリマー形態であり、二本鎖及び一本鎖の分子、遺伝子コンストラクト、発現ベクター、アンチセンス分子、ならびに同種のものが挙げられる）、小分子（例えばドキソルビシン）、及び他の生物学的に活性のあるマクロ分子（例えばタンパク質及び酵素）が挙げられるがこれらに限定されない、主要な治療領域のすべてにおける使用のための、化合物または組成物を包含する。薬剤は、獣医学を含む医学応用、農業（植物によるもの等）、そして他の領域で使用される生物学的活性剤であり得る。治療剤という用語は、医薬品；ビタミン；ミネラルサプリメント；疾患もしくは病気の治療、予防、診断、治癒、もしくは緩和のために使用される物質；または身体の構造もしくは機能に影響する物質；または所定の生理的環境に配置された後に生物学的に活性になるかもしくはより活性になるプロドラッグも限定されずに包含する。

【0045】

治療剤の本明細書における開示が、治療剤の薬学的に許容される塩、薬学的に許容されるエステル、薬学的に許容されるアミド、プロドラッグ形態、及び誘導体も開示したことが理解される。

【0046】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書において使用される時、治療有効量において投与された場合に、生物学的系によって忍容されるか、または対象によって忍容されるか、または生物学的系によって忍容され且つ対象によって忍容される、酸または塩基により調製される、活性のある主剤の塩を意味する。本開示の化合物が比較的酸性の官能基を含有する場合に、塩基付加塩は、液体を加えないで、または好適な不活性溶媒中で、のいずれかで、かかる化合物の中性形態を十分な量の所望される塩基と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩、マグネシウム塩、リチウム塩、ストロンチウム塩、または類似する塩が挙げられるがこれらに限定されない。本開示の化合物が比較的塩基性の官能基を含有する場合に、酸付加塩は、液体を加えないで、または好適な不活性溶媒中で、のいずれかで、かかる化合物の中性形態を十分な量の所望される酸と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｃａｒｂｏｎｉｃ）、リン酸、一水素リン酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ）、二水素リン酸（ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ）、硫酸、一水素硫酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｓｕｌｆｕｒｉｃ）、ヨウ化水素酸、または亜リン酸、及び同種のもののような無機酸に由来するもの、そして酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、コルク酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、及び同種のもののような比較的非毒性の有機酸に由来する塩が挙げられるがこれらに限定されない。アルギニン酸塩及び同種のもの等のアミノ酸の塩、ならびにグルクロン酸またはガラクツノリン酸（ｇａｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、及び同種のもののような有機酸の塩も包含される。

【0047】

「薬学的に許容されるエステル」という用語は、インビボで加水分解し、ヒト身体中で容易に分解して親化合物またはその塩を残すものを含む、本開示の化合物のエステルを指す。本開示の薬学的に許容される非毒性エステルの例としては、Ｃ１～Ｃ６アルキルエステル及びＣ５～Ｃ７シクロアルキルエステルが挙げられるが、Ｃ１～Ｃ４アルキルエステルが好ましい。開示される化合物のエステルは、従来の方法に従って調製され得る。薬学的に許容されるエステルは、ヒドロキシ基を含有する化合物を、酸及びアルキルカルボキシル酸（酢酸等）、または酸及びアリールカルボキシル酸（安息香酸等）と反応させることによって、ヒドロキシ基へ付加され得る。カルボキシル酸基を含有する化合物の事例において、薬学的に許容されるエステルは、化合物を、トリエチルアミン及びハロゲン化アルキル等の塩基と（例えばヨウ化メチル、ヨウ化ベンジル、ヨウ化シクロペンチル、またはアルキルトリフレートと）、反応させることによって、カルボキシル酸基を含有する化合物から調製される。エステルは、化合物を、酸（塩酸等）及びアルコール（エタノールまたはメタノール等）と反応させることによっても調製され得る。

【0048】

「薬学的に許容されるアミド」という用語は、アンモニアに由来する本開示の非毒性アミド（第一級Ｃ１～Ｃ６アルキルアミン及び第二級Ｃ１～Ｃ６ジアルキルアミン）を指す。第二級アミンの事例において、アミンは、１つの窒素原子を含有する５員または６員のヘテロ環の形態でもあり得る。アンモニアに由来するアミド（Ｃ１～Ｃ３アルキル第一級アミド及びＣ１～Ｃ２ジアルキル第二級アミド）が好ましい。開示される化合物のアミドは、従来の方法に従って調製され得る。薬学的に許容されるアミドは、アミノ基を含有する化合物を、無水アルキル、無水アリール、ハロゲン化アシル、またはハロゲン化アロイルと、反応させることによって、第一級アミン基または第二級アミン基を含有する化合物から調製され得る。カルボキシル酸基を含有する化合物の事例において、薬学的に許容されるアミドは、化合物を、塩基（トリエチルアミン等）、脱水剤（ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはカルボニルジイミダゾール等）、及びアルキルアミン（ジアルキルアミン）と（例えばメチルアミン、ジエチルアミン、及びピペリジンと）、反応させることによって、カルボキシル酸基を含有する化合物から調製される。アミドは、化合物を、酸（硫酸等）及びアルキルカルボキシル酸（酢酸等）、または酸及びアリールカルボン酸（モレキュラーシーブを添加する等の脱水条件下の安息香酸等）と、反応させることによっても調製され得る。組成物は、本開示の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグの形態で含有し得る。

【0049】

「薬学的に許容されるプロドラッグ」または「プロドラッグ」という用語は、妥当な医学的判断の範囲内で、不適当な毒性、刺激、アレルギー反応、及び同種のもの無しに、ヒト及び下等動物の組織と接触させる使用に好適であり、合理的なベネフィット／リスク比で釣り合い、それらの意図される使用に有効な、本開示の化合物のプロドラッグを表わす。本開示のプロドラッグは、例えば血液中の加水分解によって、開示される化合物の構造を有する親化合物へ、インビボで急速に形質転換され得る。詳細な考察は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏ－ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖ．１４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ、及びＥｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９８７）中で提供される。

【0050】

本明細書において使用される時、「キット」は、キットを構成する少なくとも２つの構成要素の集合を意味する。構成要素は、一緒に、所与の目的のための機能単位を構成する。個別のメンバーの構成要素は、物理的に一緒にまたは別々にパッケージングされ得る。例えば、キットを使用するための指示書を含むキットは、他の個別のメンバー構成要素と共に指示書を物理的に含んでも含まなくてもよい。その代りに、指示書は、紙形態、またはコンピューター可読メモリーデバイス上に供給され得るか、もしくはインターネットウェブサイトからダウンロードされ得るか、もしくは記録された体裁としての電子形態のいずれかで、分離したメンバー構成要素として供給され得る。

【0051】

本明細書において使用される時、「指示書（複数可）」は、キットへ係わる関連する材料または方法論を記載する文書を意味する。これらの材料は、以下の：背景情報、構成要素及びそれらの入手情報のリスト（購入情報等）、キットの使用のための簡潔なまたは詳細なプロトコール、トラブルシューティング、参照文献、テクニカルサポート、ならびに他の関係書類のうちの任意の組み合わせを含み得る。指示書は、紙形態、またはコンピューター可読メモリーデバイス上に供給され得るか、もしくはインターネットウェブサイトからダウンロードされ得るか、もしくは記録された体裁としての電子形態のいずれかとして、キットと共に、または分離したメンバー構成要素として供給され得る。指示書は１つまたは複数の文書を含むことができ、今後の改訂版を包含するように意図される。

【0052】

本明細書において互換的に使用される時、「対象」、「個体」、または「患者」は、哺乳動物等の脊椎動物生物体（例えばヒト）を指し得る。「対象」は、細胞、細胞の集団、組織、器官、または生物体、好ましくはヒト及びその構成物も指し得る。

【0053】

本明細書において使用される時、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、概して所望される薬理学的効果及び／または生理的効果を得ることを指し得る。効果は、疾患、症状またはその病態（眼科的障害等）を防止すること、または部分的に防止することに関して、予防的であり得るが必ずしもそうである必要はない。効果は、疾患、病態、症状、または疾患、障害、もしくは病態に起因する有害効果の、部分的または完全な治癒に関して治療的であり得る。「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、本明細書において使用される時、対象（特にヒト）における眼科的障害の任意の治療を含み得るとともに、以下の：（ａ）疾患への素因があり得るが、まだそれを有すると診断されていない対象において疾患が起こることを予防すること；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわちその発症を阻止すること；ならびに（ｃ）疾患を軽減するここと、すなわち疾患及び／または症状または病態を緩和または寛解することのうちの任意の１つまたは複数を含み得る。「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、本明細書において使用される時、治療処置単独、予防処置単独、または治療処置及び予防処置の両方を指し得る。治療を必要とするもの（それを必要とする対象）としては、既に障害の有るもの及び／または障害が予防されるべきものが挙げられ得る。本明細書において使用される時、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、疾患、障害、または病態を阻害すること（例えばその進行を妨げること）；及び疾患、障害、または病態を軽減すること（例えば疾患、障害及び／または病態の退行を引き起こすこと）を包含し得る。疾患、障害、または病態の治療は、たとえ根本にある病態生理が影響されなくても、特定の疾患、障害、または病態の少なくとも１つの症状を寛解すること（例えばたとえかかる薬剤が疼痛の原因を治療しなくても、鎮痛剤の投与によって対象の疼痛を治療すること等）を包含し得る。

【0054】

本明細書において使用される時、「用量」、「単位用量」、または「投薬量」は、対象における使用に好適な物理的に不連続の単位を指し、各々の単位は、その投与に付随して所望される応答（複数可）を産生するように計算された、あらかじめ決定された量の開示される化合物及び／またはその医薬組成物を含有し得る。

【0055】

本明細書において使用される時、「治療の（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」は、疾患、障害、病態、または副作用を、治療、治癒、及び／または寛解すること、あるいは疾患、障害、病態、または副作用の進行の速度を減少させることを指し得る。

【0056】

本明細書において使用される時、化合物（有機化合物を包含する）についての命名法は、一般的な名称、ＩＵＰＡＣ、ＩＵＢＭＢ、またはＣＡＳの推奨を命名法について使用して与えられ得る。１つまたは複数の立体化学特性が存在する場合に、立体化学についてのＣａｈｎ－Ｉｎｇｏｌｄ－Ｐｒｅｌｏｇ則は、立体化学的優先順位、Ｅ／Ｚ指定、及び同種のものを表記するために用いられ得る。当業者は、名称が与えられれば、命名規則を使用する化合物構造の体系的低減によって、またはＣＨＥＭＤＲＡＷ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｏｆｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）等の商業的に入手可能なソフトウェアによって、化合物の構造を容易に確かめることができる。

【0057】

別段の定めのない限り、本明細書において参照される温度は、大気圧（すなわち１気圧）に基づく。

【0058】

治療的または臨床的な有用性を有する薬物送達組成物が、本明細書において記載される。開示される薬物送達組成物を調製または作製する方法も、本明細書において記載される。開示される薬物送達組成物をそれを必要とする対象へ投与する方法も、本明細書において記載される。いくつかの態様において、対象は、臨床状態または病変（眼科的障害等）を有し得る。本開示の他の組成物、化合物、方法、特性、及び利点は、以下の図面、発明を実施するための形態、及び実施例の検討に際して、当業者に明らかであるかまたは明らかになるだろう。すべてのかかる追加の組成物、化合物、方法、特性、及び利点がこの発明を実施するための形態内に包含され、本開示の範囲内であることが意図される。

【0059】

薬物送達組成物
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は異常な血管形成に関与する必須の調節因子であり、それは、迅速な腫瘍増殖及び滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の形成を支援する（Ｈｏｌｍｅｓ，Ｄ．Ｉ．Ｒ．ａｎｄ Ｉ．Ｚａｃｈａｒｙ，Ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｆａｍｉｌｙ：ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇｅｎｏｍｅ ｂｉｏｌｏｇｙ，２００５．６（２）：ｐ．２０９－２０９；Ｓｈｉｂｕｙａ，Ｍ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ａｎｄ Ｉｔｓ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＶＥＧＦＲ）Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：Ａ Ｃｒｕｃｉａｌ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ａｎｔｉ－ ａｎｄ Ｐｒｏ－Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｇｅｎｅｓ ＆ ｃａｎｃｅｒ，２０１１．２（１２）：ｐ．１０９７－１１０５；及びＦｅｒｒａｒａ，Ｎ．，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，１９９９．５６（３）：ｐ．７９４－８１４を参照）。抗血管形成の戦略が、滲出型ＡＭＤを遅延させるために提案された（Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ，ａｎ ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ．２００４．３（５）：ｐ．３９１；及びＮｉｕ，Ｇ．ａｎｄ Ｘ．Ｃｈｅｎ，Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａｎ ａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ，２０１０．１１（８）：ｐ．１０００－１０１７を参照）。ヒト化モノクローナル抗体（抗ＶＥＧＦ）は、滲出型ＡＭＤの適応外使用の治療のために眼科において使用されている（Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ，ａｎ ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ．２００４．３（５）：ｐ．３９１；及びＰｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．１９９７．５７（２０）：ｐ．４５９３－４５９９を参照）。

【0060】

この加齢関連網膜疾患の治療は、現在のところ進行を遅延または中断するための抗血管形成剤の使用に依存する。抗ＶＥＧＦ治療物質（ベバシズマブ及びラニビズマブ等）の硝子体内注射は、滲出型ＡＭＤのための現在のゴールドスタンダード治療を構成し、ＶＥＧＦによる、網膜下脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の開始、ならびに新規に形成された血管の出血及び瘢痕化によって引き起こされる不可逆的網膜損傷を予防する（Ｄｅｌｐｌａｃｅ，Ｖ．，Ｓ．Ｐａｙｎｅ，ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｊ．ｏ．Ｃ．Ｒ．Ｓｈｏｉｃｈｅｔ，Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｏｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ｆｒｏｍ ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｏ ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．２０１５．２１９：ｐ．６５２－６６８；及びＯｈｒ，Ｍ．ａｎｄ Ｐ．Ｋ．Ｊ．Ｅ．ｏ．ｏ．ｐ．Ｋａｉｓｅｒ，Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ（ｗｅｔ）ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．２０１２．１３（４）：ｐ．５８５－５９１を参照）。ベバシズマブは、費用が比較的低いので、例えば滲出型ＡＭＤの治療に広く使用されている。しかしながら、これらのタンパク質治療物質は硝子体液中での半減期が短いので、多くの場合、目中での実効性を維持するために頻繁な（最大月１回の）硝子体内注射を要求する（Ｈａｒｄ，Ａ．Ｌ．ａｎｄ Ａ．Ｊ．Ａ．ｐ．Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｏｎ ｓａｆｅｔｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｉｎ ＲＯＰ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ－ａ ｒｅｖｉｅｗ．２０１１．１００（１２）：ｐ．１５２３－１５２７；及びＳｔｅｗａｒｔ，Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｄｏｓｉｎｇ ｅｖｅｒｙ ２ ｗｅｅｋｓ ｖｅｒｓｕｓ ４ ｗｅｅｋｓ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ，ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ，ａｎｄ ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｔｒａｐ－ｅｙｅ）．Ｒｅｔｉｎａ，２０１２．３２（３）：ｐ．４３４－４５７を参照）。残念なことに、この様式は、頻繁に疼痛、感染、眼内炎、眼内圧の上昇、炎症、網膜剥離、及び白内障形成を包含する副作用をもたらす（Ｓａｍｐａｔ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ Ｓ．Ｊ．Ｊ．Ｃ．ｏ．ｉ．ｏ．Ｇａｒｇ，Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ．２０１０．２１（３）：ｐ．１７８－１８３を参照）。治療への主要な障壁は各々の注射に付随する高費用であり、患者及び家族に月１回の治療を受けるという苦労を課す（Ｈｅｉｍｅｓ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ ｖｏｎ Ｐａｔｉｅｎｔｅｎ ｍｉｔ ａｌｔｅｒｓａｂｈａｎｇｉｇｅｒ Ｍａｋｕｌａｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｕｎｔｅｒ Ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ－Ｔｈｅｒａｐｉｅ．Ｄｅｒ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｅ，２０１６．１１３（１１）：ｐ．９２５－９３２を参照）。したがって、滲出型ＡＭＤのためのより容易且つより効率的な治療についての明瞭な必要性が存在する。

【0061】

植込み及び粒子の形態の従来の送達系は、可能なＡＭＤ治療のための制御放出を達成するために開発されている（Ｄｅｌｐｌａｃｅ，Ｖ．，Ｓ．Ｐａｙｎｅ，ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｊ．ｏ．Ｃ．Ｒ．Ｓｈｏｉｃｈｅｔ，Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｏｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ｆｒｏｍ ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｏ ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．２０１５．２１９：ｐ．６５２－６６８；Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｂａｃｋ ｏｆ ｔｈｅ ｅｙｅ：ｂａｒｒｉｅｒｓ，ｃａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．２０１７．２２（２）：ｐ．４１６－４２３；Ｉｍｐｅｒｉａｌｅ，Ｊ．Ｃ．，Ｇ．Ｂ．Ａｃｏｓｔａ，ａｎｄ Ａ．Ｊ．Ｊ．ｏ．Ｃ．Ｒ．Ｓｏｓｎｉｋ，Ｐｏｌｙｍｅｒ－ｂａｓｅｄ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１８；及びＬｅｅ，Ｓ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｄｒｕｇ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｙｅ．２０１０．２７（１０）：ｐ．２０４３－２０５３を参照）。マイクロ粒子／ナノ粒子ベースの系に比較して、植込みは、より大きなサイズに起因してより高い安定性及び薬物ペイロードを有する（Ｋｉｍ，Ｙ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｃｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０１４．１９０：ｐ．１７２－１８１を参照）。しかしながら、大部分の植込みベースの治療は、注射に関する困難が付随し、非生物分解性の眼内レンズについては、植込み及び除去のための追加の外科手術が要求される（Ｓｉｌｖａ，Ｇ．Ｒ．ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐｌａｎｔｓ ａｓ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｄｅｖｉｃｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１０．４６：ｐ．５８５－５９５を参照）。これらには、術後合併症そして費用の増加が付随する。加えて、粒子または植込みのいずれかからの長期的な継続放出は、不十分な物理的及び化学的な薬物保持に起因して難しかった。例えば、（乳酸－グリコール酸）コポリマー（ＰＬＧＡ）（薬物送達のために最も一般的に使用されるポリマーのうちの１つ）は、迅速な加水分解を特徴とし、多くの場合最大９０日の治療的放出を導く（Ｌｉ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．２０１２．６：ｐ．５４；及びＳｏｕｓａ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ａ ｎｅｗ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｆｒｏｍ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．２０１７．７（１）：ｐ．３７３６を参照）。追加の欠点としては、炎症を誘導し、異物反応を悪化させ得る酸性の副産物の形成が挙げられる（Ｌｕ，Ｌ．，Ｍ．Ｊ．Ｙａｓｚｅｍｓｋｉ，ａｎｄ Ａ．Ｇ．Ｊ．Ｂ．Ｍｉｋｏｓ，Ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒｓ．２００１．２２（２４）：ｐ．３３４５－３３５５を参照）。

【0062】

本明細書において、治療剤（例えばベバシズマブ）により装填された注射可能で生物分解性の多層のカプセルを含む薬物送達組成物が、従来から利用可能な注射可能薬物送達デバイスよりも高い薬物装填率及びより長期的な薬物放出継続期間の達成のために開示される。高度に持続可能且つ制御可能な薬物放出を達成するために、例えばナノ多孔性ＰＣＬ外側シェル及びキトサン内側層を含んで、それぞれ物理的なトラッピング及び静電気のベースの化学吸収を達成する薬物送達組成物が、本明細書において開示される。少なくとも１年の長期的な薬物放出のために十分な治療物質を装填するために、二層ハイブリッドシェルによってカプセル化された中空構造が利用された。より具体的には、全体の薬物送達組成物は、エレクトロスピニング、焼結、及び塩類溶脱を含む材料加工技術を組み合わせることによって調製される。開示される方法は、高アスペクト比を備えた中心部が中空の円筒状マイクロロッドを提供して、硝子体内植込み送達のために２１ゲージまたはそれより小さい針を経由する注射実行可能性を可能にする。開示される方法を使用してカプセルの化学的及び物理的な構造を最適化することによって、開示される薬物送達組成物を使用して１０か月を上回る間タンパク質治療物質の安定的且つ制御された放出を得ることができる。小さいゲージの針を介する注射の頻度を低減することによって、開示される薬物送達組成物は、滲出型ＡＭＤの患者の生活の質を改善し得る可能性がある。

【0063】

したがって一態様において、各々が、閉鎖された２つの末端を備えたチューブ形状を有する１つまたは複数のカプセルであって、１つまたは複数のカプセルの各々が多層壁及び少なくとも１つの内腔区画を独立して含む、前記カプセル；及び
各々が、少なくとも１つの内腔区画のうちの１つまたは複数内に最初に存在する、１つまたは複数の治療剤、
を含み、
各々の多層壁が、少なくとも内側層及び外側層を独立して含み；
各々の内側層が、生理的条件下で正味の正電荷を有する第１のポリマーを独立して含み；
各々の外側層が、第１のポリマーとは異なる第２のポリマーを独立して含む、
薬物送達組成物が、提供される。

【0064】

いくつかの実施形態において、薬物送達組成物は、２つ以上のカプセル（例えば２つのカプセル、３つのカプセル、４つのカプセル、５つのカプセル、６つのカプセル、７つのカプセル、８つのカプセル、９つのカプセル、１０のカプセル、またはそれ以上）を含み得る。かかる実施形態において、２つ以上のカプセルは、各々のカプセルの多層壁について同じ組成物を含み得るか、またはそれらの組成物で異なり得る。いくつかの実施形態において、同じ治療剤または異なる治療剤は、２つ以上のカプセルの各々内に最初に存在し得る。

【0065】

いくつかの実施形態において、薬物送達組成物中の各々のカプセルは、２つ以上の内腔区画（例えば２つの内腔区画、３つの内腔区画、４つの内腔区画、またはそれ以上）を独立して含み得る。いくつかの実施形態において、同じ治療剤または異なる治療剤は、単一カプセル内の２つ以上の内腔区画の各々内に最初に存在し得る。

【0066】

いくつかの実施形態において、各々のカプセルは、約０．１ｃｍ～約５ｃｍ（例えば０．５ｃｍ～約３ｃｍ、または１ｃｍ～約３ｃｍ）の長さを独立して有する。いくつかの実施形態において、各々のカプセルは、約０．１ｃｍ～５ｃｍ、０．５ｃｍ～５ｃｍ、１ｃｍ～５ｃｍ、２ｃｍ～５ｃｍ、３ｃｍ～５ｃｍ、４ｃｍ～５ｃｍ、０．１ｃｍ～４ｃｍ、０．５～４ｃｍ、１ｃｍ～４ｃｍ、２ｃｍ～４ｃｍ、３ｃｍ～４ｃｍ、０．１ｃｍ～３ｃｍ、０．５ｃｍ～３ｃｍ、１ｃｍ～３ｃｍ、２ｃｍ～３ｃｍ、０．１ｃｍ～２ｃｍ、０．５ｃｍ～２ｃｍ、１ｃｍ～２ｃｍ、０．１ｃｍ～１ｃｍ、０．５～１ｃｍ、または０．１～０．５ｃｍの長さを独立して有する。

【0067】

いくつかの実施形態において、多層壁は、約２５μｍ～約１５０μｍ（例えば約７０μｍ～約１００μｍ、約７５μｍ～約９５μｍ、または約８０μｍ～約９０μｍ）の壁の厚さを有する。いくつかの実施形態において、多層壁は、約５０μｍ～１５０μｍ、約５５μｍ～１５０μｍ、約６０μｍ～約１５０μｍ、約６５μｍ～約１５０μｍ、約７０μｍ～約１５０μｍ、約７５μｍ～約１５０μｍ、約８０μｍ～約１５０μｍ、約９０μｍ～約１５０μｍ、約９５μｍ～約１５０μｍ、約１００μｍ～約１５０μｍ、約１１０μｍ～約１５０μｍ、約１２５μｍ～約１５０μｍ、約１４０μｍ～約１５０μｍ、約５０μｍ～１４０μｍ、約５５μｍ～１４０μｍ、約６０μｍ～約１４０μｍ、約６５μｍ～約１４０μｍ、約７０μｍ～約１４０μｍ、約７５μｍ～約１４０μｍ、約８０μｍ～約１４０μｍ、約９０μｍ～約１４０μｍ、約９５μｍ～約１４０μｍ、約１００μｍ～約１４０μｍ、約１１０μｍ～約１４０μｍ、約１２５μｍ～約１４０μｍ、約５０μｍ～１２５μｍ、約５５μｍ～１２５μｍ、約６０μｍ～約１２５μｍ、約６５μｍ～約１２５μｍ、約７０μｍ～約１２５μｍ、約７５μｍ～約１２５μｍ、約８０μｍ～約１２５μｍ、約９０μｍ～約１２５μｍ、約９５μｍ～約１２５μｍ、約１００μｍ～約１２５μｍ、約１１０μｍ～約１２５μｍ、約５０μｍ～１１０μｍ、約５５μｍ～１１０μｍ、約６０μｍ～約１１０μｍ、約６５μｍ～約１１０μｍ、約７０μｍ～約１１０μｍ、約７５μｍ～約１１０μｍ、約８０μｍ～約１１０μｍ、約９０μｍ～約１１０μｍ、約９５μｍ～約１１０μｍ、約１００μｍ～約１１０μｍ、約５０μｍ～１００μｍ、約５５μｍ～１００μｍ、約６０μｍ～約１００μｍ、約６５μｍ～約１００μｍ、約７０μｍ～約１００μｍ、約７５μｍ～約１００μｍ、約８０μｍ～約１００μｍ、約９０μｍ～約１００μｍ、約９５μｍ～約１００μｍ、約５０μｍ～９５μｍ、約５５μｍ～９５μｍ、約６０μｍ～約９５μｍ、約６５μｍ～約９５μｍ、約７０μｍ～約９５μｍ、約７５μｍ～約９５μｍ、約８０μｍ～約９５μｍ、約９０μｍ～約９５μｍ、約５０μｍ～９０μｍ、約５５μｍ～９０μｍ、約６０μｍ～約９０μｍ、約６５μｍ～約９０μｍ、約７０μｍ～約９０μｍ、約７５μｍ～約９０μｍ、約８０μｍ～約９０μｍ、約５０μｍ～８０μｍ、約５５μｍ～８０μｍ、約６０μｍ～約８０μｍ、約６５μｍ～約８０μｍ、約７０μｍ～約８０μｍ、約７５μｍ～約８０μｍ、約５０μｍ～７５μｍ、約５５μｍ～７５μｍ、約６０μｍ～約７５μｍ、約６５μｍ～約７５μｍ、約７０μｍ～約７５μｍ、約５０μｍ～７０μｍ、約５５μｍ～７０μｍ、約６０μｍ～約７０μｍ、約６５μｍ～約７０μｍ、約５０μｍ～６５μｍ、約５５μｍ～６５μｍ、約６０μｍ～約６５μｍ、約５０μｍ～６０μｍ、約５５μｍ～６０μｍ、及び約５０μｍ～約５５μｍの壁の厚さを有する。

【0068】

いくつかの実施形態において、内側層の厚さは、約１μｍ～約１００μｍの範囲であり得る。いくつかの実施形態において、内側層の厚さは、約１００ｎｍ～約９９０ｎｍ（例えば約１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、または９９０ｎｍ）の範囲であり得る。

【0069】

いくつかの実施形態において、外側層の厚さは、約１μｍ～約１００μｍの範囲であり得る。いくつかの実施形態において、外側層の厚さは、約１００ｎｍ～約９９０ｎｍ（例えば約１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、または９９０ｎｍ）の範囲であり得る。

【0070】

いくつかの実施形態において、薬物送達カプセルのチューブ形状は、約１００μｍ～約１０００μｍ（例えば約１００μｍ～約１０００μｍ、約１００μｍ～約５００μｍ、または１００μｍ～約３００μｍ）の内径を有する。いくつかの実施形態において、薬物送達カプセルのチューブ形状は、約１００μｍ～約２０００μｍ、２００μｍ～約２０００μｍ、約３００μｍ～約２０００μｍ、約４００μｍ～約２０００μｍ、約５００μｍ～約２０００μｍ、約６００μｍ～約２０００μｍ、約７００μｍ～約２０００μｍ、約８００μｍ～約２０００μｍ、約９００μｍ～約２０００μｍ、約１０００μｍ～約２０００μｍ、約１５００μｍ～約２０００μｍ、約１００μｍ～約１５００μｍ、２００μｍ～約１５００μｍ、約３００μｍ～約１５００μｍ、約４００μｍ～約１５００μｍ、約５００μｍ～約１５００μｍ、約６００μｍ～約１５００μｍ、約７００μｍ～約１５００μｍ、約８００μｍ～約１５００μｍ、約９００μｍ～約１５００μｍ、約１０００μｍ～約１５００μｍ、約１００μｍ～約１０００μｍ、２００μｍ～約１０００μｍ、約３００μｍ～約１０００μｍ、約４００μｍ～約１０００μｍ、約５００μｍ～約１０００μｍ、約６００μｍ～約１０００μｍ、約７００μｍ～約１０００μｍ、約８００μｍ～約１０００μｍ、約９００μｍ～約１０００μｍ、約１００μｍ～約９００μｍ、２００μｍ～約９００μｍ、約３００μｍ～約９００μｍ、約４００μｍ～約９００μｍ、約５００μｍ～約９００μｍ、約６００μｍ～約９００μｍ、約７００μｍ～約９００μｍ、約８００μｍ～約９００μｍ、約１００μｍ～約８００μｍ、２００μｍ～約８００μｍ、約３００μｍ～約８００μｍ、約４００μｍ～約８００μｍ、約５００μｍ～約８００μｍ、約６００μｍ～約８００μｍ、約７００μｍ～約８００μｍ、約１００μｍ～約７００μｍ、２００μｍ～約７００μｍ、約３００μｍ～約７００μｍ、約４００μｍ～約７００μｍ、約５００μｍ～約７００μｍ、約６００μｍ～約７００μｍ、約１００μｍ～約６００μｍ、２００μｍ～約６００μｍ、約３００μｍ～約６００μｍ、約４００μｍ～約６００μｍ、約５００μｍ～約６００μｍ、約１００μｍ～約５００μｍ、２００μｍ～約５００μｍ、約３００μｍ～約５００μｍ、約４００μｍ～約５００μｍ、約１００μｍ～約４００μｍ、２００μｍ～約４００μｍ、約３００μｍ～約４００μｍ、約１００μｍ～約３００μｍ、２００μｍ～約３００μｍ、及び約１００μｍ～約２００μｍの内径を有する。いくつかの実施形態において、チューブ形状は、内径よりも約１００μｍ～約３００μｍ大きい（例えば内径よりも約１００μｍ～約３００μｍ、１５０μｍ～約３００μｍ、２００μｍ～約３００μｍ、約２５０μｍ～約３００μｍ、約１００μｍ～約２５０μｍ、約１５０μｍ～約２５０μｍ、約２００μｍ～約２５０μｍ、約１００μｍ～約２００μｍ、約１５０μｍ～約２００μｍ、または約１００μｍ～約１５０μｍ大きい）外径を有する。

【0071】

いくつかの実施形態において、第１のポリマーは、キトサン、ポリエチレンイミン、プロタミン、ポリプロピルエニミン（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｉｍｉｎｅ）、ポリ－Ｌ－リジン、ポリ－Ｌ－アルギニン、ポリ－Ｄ－リジン、ポリ－Ｄ－アルギニン、セルロース、デキストラン、ポリ（アミドアミン）、ポリ（２－（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート）、その誘導体、またはその組み合わせを含み得る。

【0072】

いくつかの実施形態において、第１のポリマーは、キトサンまたはその誘導体を含む。キトサンは、約６０％～約９０％の脱アセチル化度；少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％の脱アセチル化度を有し得る。

【0073】

いくつかの実施形態において、第１のポリマーは、約５０ｋＤａ～約５００ｋＤａ（例えば約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約２００ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約３００ｋＤａ～約４００ｋＤａ、または約３１０ｋＤａ～約３７５ｋＤａ）の分子量を有する。いくつかの実施形態において、第１のポリマーは、約１０ｋＤａ以上、（例えば約１５ｋＤａ以上、約２０ｋＤａ以上、約３０ｋＤａ以上、約４０ｋＤａ以上、約５０ｋＤａ以上、約６０ｋＤａ以上、約７０ｋＤａ以上、約９０ｋＤａ以上、約９０ｋＤａ以上、または約１００ｋＤａ以上）の分子量を有する。

【0074】

いくつかの実施形態において、内側層中で使用される第１のポリマーは、繊維を含む。いくつかの実施形態において、繊維は、約５０ｎｍ～約１０００ｎｍ（例えば約１００ｎｍ～約４００ｎｍ）の直径を有し得る。いくつかの実施形態において、繊維は、約５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約４００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約６００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約８００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約８００ｎｍ、約１００ｎｍ～約８００ｎｍ、約２００ｎｍ～約８００ｎｍ、約４００ｎｍ～約８００ｎｍ、約６００ｎｍ～約８００ｎｍ、約５０ｎｍ～約６００ｎｍ、約１００ｎｍ～約６００ｎｍ、約２００ｎｍ～約６００ｎｍ、約４００ｎｍ～約６００ｎｍ、約５０ｎｍ～約４００ｎｍ、約１００ｎｍ～約４００ｎｍ、約２００ｎｍ～約４００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、または約５０ｎｍ～約１００ｎｍの直径を有し得る。

【0075】

いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ポリ（ε－カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ－乳酸（ＰＬＡ）、ポリ－グリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ－ラクチド－コ－グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリエステル、ポリ（オテル（ｏｔｈｅｒ）エステル）、ポリ（ホスファジン）、ポリ（リン酸エステル）、ゼラチン、コラーゲン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、その誘導体、及びその組み合わせを含み得る。他の実施形態において、第２のポリマーは、ＰＬＧＡ、ＰＣＬ、ＰＬＡ、ＰＧＡ、ＰＥＧ、ポリソルベート、ポリ（ε－カプロラクトン－チオエチルエチレンホスフェート）（ＰＣＬＥＥＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、またはその組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ＰＬＧＡ、ＰＣＬ、ＰＬＡ、ＰＧＡ、またはその組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ＰＬＧＡ、ＰＣＫ、ＰＬＡ、またはその組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ＰＬＧＡを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ＰＣＬを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、ＰＬＡを含む。

【0076】

いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、約５０ｋＤａ～約５００ｋＤａ（例えば約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約２００ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約３００ｋＤａ～約４００ｋＤａ、または約３１０ｋＤａ～約３７５ｋＤａ）の分子量を有する。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、約１０ｋＤａ以上、（例えば約１５ｋＤａ以上、約２０ｋＤａ以上、約３０ｋＤａ以上、約４０ｋＤａ以上、約５０ｋＤａ以上、約６０ｋＤａ以上、約７０ｋＤａ以上、約９０ｋＤａ以上、約９０ｋＤａ以上、または約１００ｋＤａ以上）の分子量を有する。

【0077】

いくつかの実施形態において、第２のポリマーはインビボで生物分解性であり、組成物の存在及び分解の継続期間を通して良好な忍容性を示す。いくつかの実施形態において、生理的条件下で、第２のポリマーは鎖のランダム切断によって分解し、それは二相の分解を生じさせる。最初に、分子量が減少しても、物理的構造は著しく影響されない。分解はポリマー材料の全体にわたって起こり、分解産物が可溶化するのに十分に小さくなる臨界分子量に到達するまで、進行する。この時点で、構造は、著しく多孔質であり水和したようになり始める。いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、約９０ｋＤａ以上の分子量を有し、対象の目中で６か月以上後まで、分解しない。いくつかの実施形態において、生物分解性ポリマーの分子量は、材料の分解時間をインビボで調整するように選択される。

【0078】

いくつかの実施形態において、第２のポリマーは、高分子量ポリマー及び低分子量ポリマーのブレンドを含み得る。いくつかの実施形態において、高分子量ポリマーは、約２５ｋＤａ以上（例えば約３０ｋＤａ以上、４０ｋＤａ以上、５０ｋＤａ以上、６０ｋＤａ以上、７０ｋＤａ以上、８０ｋＤａ以上、９０ｋＤａ以上、または１００ｋＤａ以上）であり得、低分子量ポリマーは、約２０ｋＤａ以下（例えば１５ｋＤａ以下、１０ｋＤａ以下、８ｋＤａ以下、６ｋＤａ以下、または４ｋＤａ以下）であり得る。いくつかの実施形態において、高分子量ポリマー対より低い分子量のポリマーの比は、約１：９～約９：１の間（例えば約２：８～約８：２の間、約２：８～約６：４の間、または約２：８～約１：１の間）である。

【0079】

いくつかの実施形態において、外側層中で使用される第２のポリマーの外側層は、繊維を含む。いくつかの実施形態において、繊維は、約１００ｎｍ～約２０００ｎｍ（例えば約５００ｎｍ～約１０００ｎｍ）の直径を有し得る。いくつかの実施形態において、繊維は、約１００ｎｍ～約２０００ｎｍ、約２５０ｎｍ～約２０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約２０００ｎｍ、約７５０ｎｍ～約２０００ｎｍ、約１０００ｎｍ～約２０００ｎｍ、約１５００ｎｍ～約２０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１５００ｎｍ、約２５０ｎｍ～約１５００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１５００ｎｍ、約７５０ｎｍ～約１５００ｎｍ、約１０００ｎｍ～約１５００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約２５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約７５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約７５０ｎｍ、約２５０ｎｍ～約７５０ｎｍ、約５００ｎｍ～約７５０ｎｍ、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、約２５０ｎｍ～約５００ｎｍ、または約１００ｎｍ～約２５０ｎｍの直径を有し得る。

【0080】

いくつかの実施形態において、外側層は、孔をさらに含み得る。他の実施形態において、外側層は、孔を含まない。いくつかの実施形態において、外側層は、約１ｎｍ～約９９０ｎｍ（例えば約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約２ｎｍ～約７００ｎｍ、約３ｎｍ～約４００ｎｍ、約５ｎｍ～約２００ｎｍ、または約７ｎｍ～約５０ｎｍ）の平均孔直径を有する孔を含む。いくつかの実施形態において、外側層は、約１００ｎｍ～１０００ｎｍ（例えば３５０ｎｍ～６５０ｎｍ）の平均孔直径を有する孔を含む。いくつかの実施形態において、外側層は、約１００ｎｍ～約１０００ｎｍ、２００ｎｍ～約１０００ｎｍ、３００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約４００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約４５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約５５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約６００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約６５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約７００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約８００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約９００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約９００ｎｍ、２００ｎｍ～約９００ｎｍ、３００ｎｍ～約９００ｎｍ、約４００ｎｍ～約９００ｎｍ、約４５０ｎｍ～約９００ｎｍ、約５００ｎｍ～約９００ｎｍ、約５５０ｎｍ～約９００ｎｍ、約６００ｎｍ～約９００ｎｍ、約６５０ｎｍ～約９００ｎｍ、約７００ｎｍ～約９００ｎｍ、約８００ｎｍ～約９００ｎｍ、約１００ｎｍ～約８００ｎｍ、２００ｎｍ～約８００ｎｍ、３００ｎｍ～約８００ｎｍ、約４００ｎｍ～約８００ｎｍ、約４５０ｎｍ～約８００ｎｍ、約５００ｎｍ～約８００ｎｍ、約５５０ｎｍ～約８００ｎｍ、約６００ｎｍ～約８００ｎｍ、約６５０ｎｍ～約８００ｎｍ、約７００ｎｍ～約８００ｎｍ、約１００ｎｍ～約７００ｎｍ、２００ｎｍ～約７００ｎｍ、３００ｎｍ～約７００ｎｍ、約４００ｎｍ～約７００ｎｍ、約４５０ｎｍ～約７００ｎｍ、約５００ｎｍ～約７００ｎｍ、約５５０ｎｍ～約７００ｎｍ、約６００ｎｍ～約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ～約７００ｎｍ、約１００ｎｍ～約６５０ｎｍ、２００ｎｍ～約６５０ｎｍ、３００ｎｍ～約６５０ｎｍ、約４００ｎｍ～約６５０ｎｍ、約４５０ｎｍ～約６５０ｎｍ、約５００ｎｍ～約６５０ｎｍ、約５５０ｎｍ～約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ～約６５０ｎｍ、約１００ｎｍ～約６００ｎｍ、２００ｎｍ～約６００ｎｍ、３００ｎｍ～約６００ｎｍ、約４００ｎｍ～約６００ｎｍ、約４５０ｎｍ～約６００ｎｍ、約５００ｎｍ～約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ～約６００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５５０ｎｍ、２００ｎｍ～約５５０ｎｍ、３００ｎｍ～約５５０ｎｍ、約４００ｎｍ～約５５０ｎｍ、約４５０ｎｍ～約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ～約５５０ｎｍ、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、２００ｎｍ～約５００ｎｍ、３００ｎｍ～約５００ｎｍ、約４００ｎｍ～約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約１００ｎｍ～約４５０ｎｍ、２００ｎｍ～約４５０ｎｍ、３００ｎｍ～約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ～約４５０ｎｍ、約１００ｎｍ～約４００ｎｍ、２００ｎｍ～約４００ｎｍ、３００ｎｍ～約４００ｎｍ、約１００ｎｍ～約３００ｎｍ、約２００ｎｍ～約３００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの平均孔直径を有する孔を含む。いくつかの実施形態において、平均孔のサイズは、１つまたは複数の治療剤がナノポアを介して一列縦隊拡散または束縛拡散を経由して拡散するように、治療剤のサイズに類似する。所望される治療剤が十分に小さいサイズ（例えば５００未満の分子量を有する）であり、それがカプセルの外側層を介して容易に拡散し得る場合に、孔は必要ではない場合がある。

【0081】

いくつかの実施形態において、第１のポリマーまたは第２のポリマーの組成物は、約５０℃～約７０℃の間の溶融温度を提供し得る。いくつかの実施形態において、第１のポリマーまたは第２のポリマーの組成物は、約－５０℃～約－８０℃の間のガラス転移温度（Ｔ_ｇ）を提供するように提供される。

【0082】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数のカプセルの各々は、約－２５ｍＶ～約２５ｍＶ（例えば約－２０ｍＶ～約２０ｍＶ、約－１５ｍＶ～約１５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約１０ｍＶ、約－５ｍＶ～約５ｍＶ、約－１ｍＶ～約１ｍＶ、約－０．５ｍＶ～約０．５ｍＶ、または約－０．１ｍＶ～約０．１ｍＶ）の、ｐＨ７．５でのゼータ電位として、表面電荷測定値を独立して有する。

【0083】

いくつかの実施形態において、第１のポリマー及び第２のポリマーの組成は、生理的条件へさらされた場合に、層のうちの１つまたは複数についての質量の５０％が、少なくとも３か月後に残るように選択される。所望されるならば、層のうちの１つまたは複数のいずれかの分解速度は、カプセルの製造におけるかかる態様（層の厚さまたは多孔性等）の調整によって、または１つもしくは複数の層を製造するのに使用されるポリマー組成物の親水性を増加させることによって、加速され得る。

【0084】

治療剤
さらなる態様において、本開示は、本明細書において開示される組成物中で使用され得る、１つまたは複数の治療剤も提供する。

【0085】

いくつかの実施形態において、１つまたは複数の治療剤は各々、約６．０～約７．４のｐＨ範囲内で正味の負電荷を有する。

【0086】

本明細書において使用される時、「治療剤」は、目の医学的条件またはがんを治療するのに使用され得る、１つまたは複数の治療剤、活性成分、または物質を指す。治療剤は、典型的には、眼科的に許容され、本明細書において開示される組成物が目中に配置される場合に、有害反応を引き起こさない形態で提供される。本明細書において論じられるように、治療剤は、生物学的に活性のある形態で開示される組成物から放出され得る。例えば、目の中へ系から放出された場合に、治療剤はそれらの三次元構造を保持し得る。

【0087】

本明細書において使用される時、「治療剤」という用語は、生物体（ヒトまたは非ヒト動物）へ投与された場合に、局所的及び／または全身的な作用によって所望される薬理学、免疫原性、及び／または生理的な効果を誘導する物体の任意の合成のまたは天然に存在する生物学的に活性のある化合物または組成物を包含することがさらに理解される。したがって当該用語は、薬物、ワクチン、及び生物医薬品（タンパク質、ペプチド、ホルモン、核酸、遺伝子コンストラクト、及び同種のもの等の分子を包含する）と伝統的に見なされる、化合物または化学物質を網羅する。治療剤の例は、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ（１４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（６４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）及びＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１２ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）等の周知の文献参照中で記載され、当該例としては、医薬品；ビタミン；ミネラルサプリメント；疾患または病気の治療、予防、診断、治癒、または緩和のために使用される物質；身体の構造もしくは機能に影響する物質、または生理的環境に配置された後に生物学的に活性になるかもしくはより活性になるプロドラッグが限定されずに挙げられる。例えば、「治療剤」という用語は、アジュバント；抗感染物質（抗生物質及び抗ウイルス剤等）；鎮痛物質及び鎮痛物質の組み合わせ、食欲減退物質、抗炎症剤、抗癲癇物質、局所及び全身の麻酔物質、催眠物質、鎮静物質、抗精神病剤、神経弛緩剤、抗鬱物質、抗不安物質、アンタゴニスト、ニューロン遮断剤、抗コリン作用剤及びコリン様作用剤、抗ムスカリン作用剤及びムスカリン作用剤、抗アドレナリン作用物質、抗不整脈物質、降圧剤、ホルモン及び、栄養物質、抗関節炎物質、抗喘息剤、抗痙攣物質、抗ヒスタミン物質、抗嘔吐物質、抗新生物物質、抗掻痒物質、解熱物質；抗発作物質、循環器官用薬（カルシウムチャンネル遮断物質、β遮断物質、βアゴニスト及び抗不整脈物質が挙げられる）、抗高血圧物質、利尿物質、血管拡張物質；中枢神経興奮物質；感冒薬；充血除去物質；診断用物質；ホルモン；骨成長刺激物質及び骨吸収阻害物質；免疫抑制物質；筋弛緩物質；精神刺激物質；鎮静物質；トランキライザー；タンパク質、ペプチド、及びその断片（天然に存在するか、化学的に合成されるか、または組み換えにより産生されるかにかかわらず）；ならびに核酸分子（リボヌクレオチド（ＲＮＡ）またはデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）のいずれかの２つ以上のヌクレオチドのポリマー形態であり、二本鎖及び一本鎖の分子、遺伝子コンストラクト、発現ベクター、アンチセンス分子、及び同種のものが挙げられる）、小分子（例えばドキソルビシン）、及び他の生物学的に活性のあるマクロ分子（例えばタンパク質及び酵素）が挙げられるがこれらに限定されない、主要な治療領域のすべてにおける使用のための、化合物または組成物を包含する。薬剤は、獣医学を含む医学応用、農業（植物によるもの等）、そして他の領域で使用される生物学的活性剤であり得る。治療剤という用語は、医薬品；ビタミン；ミネラルサプリメント；疾患もしくは病気の治療、予防、診断、治癒、もしくは緩和のために使用される物質；または身体の構造もしくは機能に影響する物質；または所定の生理的環境に配置された後に生物学的に活性になるかもしくはより活性になるプロドラッグも限定されずに包含する。

【0088】

いくつかの実施形態において、治療剤は、β遮断物質（チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール、及びカルテオロールが挙げられる）；縮瞳物質（ピロカルピンが挙げられる）；炭酸脱水酵素阻害物質；セロトニン作用物質；ムスカリン作用物質；ドーパミンアゴニスト；アドレナリン作用アゴニスト（アプラクロニジン及びブリモニジンを包含する）；抗血管形成剤；抗感染剤（キノロン（シプロフロキサシン等）及びアミノグリコシド（トブラマイシン及びゲンタミシン等）が挙げられる）；非ステロイド性抗炎症剤及びステロイド性抗炎症剤（スプロフェン、ジクロフェナク、ケトロラク、リメキソロン、及びテトラヒドロコルチゾール等）；増殖因子（ＥＧＦ等）；免疫抑制剤；及び抗アレルギー剤（オロパタジンが挙げられる）；プロスタグランジン（ラタノプロスト等）；１５－ケトラタノプロスト；トラボプロスト；及びイソプロピルウノプロストン等の眼科的障害または眼疾患の治療に有用な薬剤を含み得る。

【0089】

いくつかの実施形態において、治療剤は、抗炎症剤、カルシニューリン阻害物質、抗生物質、ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニスト、及び抗リンパ管形成剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、シクロスポリンであり得る。いくつかの実施形態において、カルシニューリン阻害物質は、ボクロスポリンであり得る。いくつかの実施形態において、抗生物質は、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルミシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、テイコプラニン、バンコマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、ナフシリン、ペニシリン、ピペラシリン、チカルシリン、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、マフェナイド、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム、コトリモキサゾール、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、及びテトラサイクリンからなる群から選択されてもよい。いくつかの実施形態において、ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニストは、ピロカルピン、アトロピン、ニコチン、エピバチジン、ロベリン、またはイミダクロプリドのうちの任意のものであり得る。いくつかの実施形態において、抗リンパ管形成剤は、血管内皮増殖因子Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）抗体、ＶＥＧＦ－Ｄ抗体、またはＶＥＧＦ－３抗体であり得る。

【0090】

いくつかの態様において、治療剤は、β遮断物質（レボブノロール（ＢＥＴＡＧＡＮ）、チモロール（ＢＥＴＩＭＯＬ、ＴＩＭＯＰＴＩＣ）、ベタキソロール（ＢＥＴＯＰＴＩＣ）、及びメチプラノロール（ＯＰＴＩＰＲＡＮＯＬＯＬ）が挙げられる）；α－アゴニスト（アプラクロニジン（ＩＯＰＩＤＩＮＥ）及びブリモニジン（ＡＬＰＨＡＧＡＮ）等）；炭酸脱水酵素阻害物質（アセタゾラミド、メタゾラミド、ドルゾラミド（ＴＲＵＳＯＰＴ）、及びブリンゾラミド（ＡＺＯＰＴ）等）；プロスタグランジンまたはプロスタグランジン類似体（ラタノプロスト（ＸＡＬＡＴＡＮ）、ビマトプロスト（ＬＵＭＩＧＡＮ）、及びトラボプロスト（ＴＲＡＶＡＴＡＮ）等）；縮瞳剤またはコリン作用剤（ピロカルピン（ＩＳＯＰＴＯ ＣＡＲＰＩＮＥ、ＰＩＬＯＰＩＮＥ）及びカルバコール（ＩＳＯＰＴＯ ＣＡＲＢＡＣＨＯＬ）等）；エピネフリン化合物（ジピベフリン（ＰＲＯＰＩＮＥ）等）；フォルスコリン；または神経保護化合物（ブリモニジン及びメマンチン等）；ステロイド誘導体（２－メトキシエストラジオールまたはその類似体もしくは誘導体等）；または抗生物質から選択され得る。

【0091】

「ＶＥＧＦ」という用語は、血管形成または血管形成プロセス（透過性の増加が挙げられるがこれらに限定されない）を誘導する血管内皮増殖因子を指す。本明細書において使用される時、「ＶＥＧＦ」という用語は、例えばＶＥＧＦ－Ａ／ＶＰＦ遺伝子のオルタナティブスプライシングによって生じるＶＥＧＦの様々なサブタイプ（血管透過性因子（ＶＰＦ）及びＶＥＧＦ－Ａとしても公知である）を包含し、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、及びＶＥＧＦ１８９を包含する。さらに本明細書において使用される時、「ＶＥＧＦ」という用語は、ＶＥＧＦ関連血管形成因子（同族のＶＥＦＧ受容体（すなわちＶＥＧＦＲ）を介して作用して血管形成または血管形成プロセスを誘導する、ＰＩＧＦ（胎盤増殖因子）、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄ、及びＶＥＧＦ－Ｅ等）を包含する。「ＶＥＧＦ」という用語は、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）、またはＶＥＧＦＲ－３（ＦＬＴ－４））へ結合する、増殖因子のクラスの任意のメンバーを包含する。「ＶＥＧＦ」という用語は「ＶＥＧＦ」ポリペプチドまたは「ＶＥＧＦ」コード遺伝子もしくは核酸を指すように使用され得る。

【0092】

「抗ＶＥＧＦ剤」という用語は、ＶＥＧＦの活性または産生を部分的または完全のいずれかで低減または阻害する薬剤を指す。抗ＶＥＧＦ剤は、特異的ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦ１６５等）の活性または産生を直接または間接的に低減または阻害することができる。さらに、「抗ＶＥＧＦ剤」は、ＶＥＧＦに付随する受容体シグナルを低減または阻害するように、ＶＥＧＦリガンドまたはその同族の受容体のいずれかに対して作用する薬剤を包含する。「抗ＶＥＧＦ剤」の非限定例としては、ＶＥＧＦ核酸を標的化するアンチセンス分子、リボザイム、またはＲＮＡｉ；抗ＶＥＧＦアプタマー、ＶＥＧＦそれ自体もしくはその受容体への抗ＶＥＧＦ抗体、またはその同族の受容体へのＶＥＧＦの結合を防止する可溶性ＶＥＧＦ受容体デコイ；同族のＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）核酸を標的化する、アンチセンス分子、リボザイム、またはＲＮＡｉ；同族のＶＥＧＦＲ受容体へ結合する、抗ＶＥＧＦＲアプタマーまたは抗ＶＥＧＦＲ抗体；及びＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害物質が挙げられる。

【0093】

いくつかの実施形態において、治療剤は、抗ＶＥＧＦ剤を含み得る。抗ＶＥＧＦ剤の代表例としては、ラニビズマブ、ベバシズマブ、アフリベルセプト、ＫＨ９０２ ＶＥＧＦ受容体－Ｆｃ、融合タンパク質、２Ｃ３抗体、ＯＲＡ１０２、ペガプタニブ、ベバシラニブ、ＳＩＲＮＡ－０２７、デクルシン、デクルシノール、ピクロポドフィリン、ググルステロン、ＰＬＧ１０１、エイコサノイドＬＸＡ４、ＰＴＫ７８７、パゾパニブ、アキシチニブ、ＣＤＤＯ－Ｍｅ、ＣＤＤＯ－Ｉｍｍ、シコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、ガングリオシドＧＭ３、ＤＣ１０１抗体、Ｍａｂ２５抗体、Ｍａｂ７３抗体、４Ａ５抗体、４Ｅ１０抗体、５Ｆ１２抗体、ＶＡ０１抗体、ＢＬ２抗体、ＶＥＧＦ関連タンパク質、ｓＦＬＴ０１、ｓＦＬＴ０２、ペプチドＢ３、ＴＧ１００８０１、ソラフェニブ、Ｇ６－３１抗体、融合抗体、及びＶＥＧＦのエピトープへ結合する抗体が挙げられる。本方法において有用な抗ＶＥＧＦ剤の追加の非限定例としては、ヒト血管内皮増殖因子－Ａ（ＶＥＧＦ－Ａ）、ヒト血管内皮増殖因子－Ｂ（ＶＥＧＦ－Ｂ）、ヒト血管内皮増殖因子－Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）、ヒト血管内皮増殖因子－Ｄ（ＶＥＧＦ－Ｄ）、及びヒト血管内皮増殖因子－Ｅ（ＶＥＧＦ－Ｅ）のうちの１つまたは複数へ特異的に結合する物質、ならびにＶＥＧＦのエピトープへ結合する抗体が挙げられる。

【0094】

様々な態様において、抗ＶＥＧＦ剤は、抗体ラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩である。ラニビズマブは、商標ＬＵＣＥＮＴＩＳで商業的に入手可能である。別の実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、抗体ベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩である。ベバシズマブは、商標ＡＶＡＳＴＩＮで商業的に入手可能である。別の実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、アフリベルセプトまたはその薬学的に許容される塩である。アフリベルセプトは、商標ＥＹＬＥＡで商業的に入手可能である。一実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、ペガプタニブまたはその薬学的に許容される塩である。ペガプチニブ（ｐｅｇａｐｔｉｎｉｂ）は、商標ＭＡＣＵＧＥＮで商業的に入手可能である。別の実施形態において、抗ＶＥＧＦ剤は、ＶＥＧＦのエピトープ（ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはＶＥＧＦ－Ｅのエピトープ等）へ結合する抗体または抗体断片である。いくつかの実施形態において、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦとＶＥＧＦＲの結合が阻害されるように、ＶＥＧＦのエピトープへ結合する。一実施形態において、エピトープは、折りたたまれたＶＥＧＦ分子の表面上にエピトープが曝露されるように、提示されるＶＥＧＦの三次元構造の構成要素を網羅する。一実施形態において、エピトープは、ＶＥＧＦからの直線状アミノ酸配列である。

【0095】

様々な態様において、治療剤は、ＶＥＧＦ媒介性活性を遮断または阻害する薬剤（例えば１つまたは複数のＶＥＧＦアンチセンス核酸）を含み得る。本開示は、ＶＥＧＦまたはその部分をコードする遺伝子またはｃＤＮＡへのアンチセンスである、少なくとも６つのヌクレオチドを含む核酸の治療的または予防的な使用を提供する。本明細書において使用される時、ＶＥＧＦ「アンチセンス」核酸は、ＶＥＧＦをコードするＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）の一部へのいくらかの配列相補性によってハイブリダイズすることが可能な核酸を指す。アンチセンス核酸は、ＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡのコーディング領域及び／または非コーディング領域に相補的であり得る。かかるアンチセンス核酸はＶＥＧＦ発現を防止する化合物としての有用性を有し、糖尿病の治療において使用され得る。本開示のアンチセンス核酸は、二本鎖または一本鎖のオリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、もしくはＤＮＡ、またはその修飾物もしくは誘導体であり、直接細胞へ投与されるか、または外来性の導入された配列の転写によって細胞内で産生され得る。

【0096】

ＶＥＧＦアンチセンス核酸は少なくとも６ヌクレオチドであり、好ましくは６～約５０オリゴヌクレオチドの範囲のオリゴヌクレオチドである。特定の態様において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１５ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、または少なくとも２００ヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドはＤＮＡもしくはＲＮＡまたはキメラ混合物、あるいはその誘導体または修飾バージョンであり得、一本鎖または二本鎖であり得る。加えて、アンチセンス分子は、核酸模倣体（ＰＮＡ、モルホリノオリゴ、及びＬＮＡ等）であるポリマーであり得る。他の型のアンチセンス分子としては、ｓｉＲＮＡとして公知の短い二本鎖ＲＮＡ、及び短いヘアピンＲＮＡ、及び長いｄｓＲＮＡ（＞５０ｂｐ、しかし通常≧５００ｂｐ）が挙げられる。

【0097】

様々な態様において、治療剤は、ＶＥＧＦをコードする遺伝子ｍＲＮＡの転写物を触媒的に切断し、標的遺伝子ｍＲＮＡの翻訳及びしたがって遺伝子産物の発現を防止するようにデザインされた１つまたは複数のリボザイム分子を含み得る。

【0098】

リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒することが可能な酵素ＲＮＡ分子である。リボザイム作用のメカニズムは、リボザイム分子の相補的標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイゼーション、続いてエンドヌクレアーゼ的切断事象を含む。リボザイム分子の組成物は、標的遺伝子ｍＲＮＡに相補的な１つまたは複数の配列を含まなくてはならず、ｍＲＮＡの切断を担う周知の触媒配列を含まなくてはならない。この配列については、例えば米国特許第５，０９３，２４６号を参照されたい。部位特異的認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザイムが、ＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡの破壊に使用され得るが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成する隣接領域によって定められた位置でｍＲＮＡを切断する。唯一の要求性は、標的ｍＲＮＡが以下の２塩基の配列：５’－ＵＧ－３’を有するということである。ハンマーヘッド型リボザイムの構築及び産生は、当技術分野において周知である。本開示のリボザイムは、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａにおいて天然に存在するもの（ＩＶＳまたはＬ－１９ ＩＶＳ ＲＮＡとして公知である）等のＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ（以後「Ｃｅｃｈ型リボザイム」）も包含する。Ｃｅｃｈ型リボザイムは、標的ＲＮＡの切断が起こった後に、標的ＲＮＡ配列にハイブリダイズする８つの塩基対活性部位を有する。本開示は、ＶＥＧＦをコードする遺伝子中に存在する８つの塩基対活性部位配列を標的化するＣｅｃｈ型リボザイムを網羅する。

【0099】

さらなる態様において、治療剤は、ＶＥＧＦを阻害する抗体（ベバシズマブまたはラニビズマブ等）を含み得る。なおさらなる態様において、治療剤は、ＶＥＧＦ活性（ＶＥＧＦによって刺激されるチロシンキナーゼ等）を阻害する薬剤を含み、その例としては、ラパチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、及びパゾパニブが挙げられるがこれらに限定されない。

【0100】

「抗ＲＡＳ剤」または「抗レニンアンジオテンシン系剤」という用語は、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）の分子の活性または産生を、部分的または完全のいずれかで、低減または阻害する薬剤を指す。「抗ＲＡＳ」または「抗レニンアンジオテンシン系」の分子の非限定例は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害物質、アンジオテンシン受容体遮断物質、及びレニン阻害物質のうちの１つまたは複数である。

【0101】

いくつかの実施形態において、治療剤は、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）阻害物質を含み得る。いくつかの実施形態において、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）阻害物質は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害物質、アンジオテンシン受容体遮断物質、及びレニン阻害物質のうちの１つまたは複数である。

【0102】

本発明において有用なアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害物質の非限定例としては、アラセプリル、アラトリオプリル、アルチオプリルカルシウム、アンコベニン、ベナゼプリル、塩酸ベナゼプリル、ベナゼプリラート、ベンザゼプリル（ｂｅｎｚａｚｅｐｒｉｌ）、ベンゾイルカプトプリル、カプトプリル、カプトプリルシステイン、カプトプリルグルタチオン、セラナプリル、セラノプリル、セロナプリル、シラザプリル、シラザプリラート、コンベルスタチン（ｃｏｎｖｅｒｓｔａｔｉｎ）、デラプリル、デラプリル二酸、エナラプリル、エナラプリラト、エナルキレン、エナプリル（ｅｎａｐｒｉｌ）、エピカプトプリル、ホロキシミチン、ホスフェノプリル、ホスエノプリル、ホスエノプリルナトリウム、ホシノプリル、ホシノプリルナトリウム、ホシノプリラト、ホシノプリル酸、グリコプリル（ｇｌｙｃｏｐｒｉｌ）、ヘモルフィン－４、イダプリル（ｉｄａｐｒｉｌ）、イミダプリル、インドラプリル、インドラプリラト、リベンザプリル、リシノプリル、リシウミン（ｌｙｃｉｕｍｉｎ）Ａ、リシウミンＢ、ミキサンプリル、モエキシプリル、モエキシプリラート、モベルチプリル、ムラセインＡ、ムラセインＢ、ムラセインＣ、ペントプリル、ペリンドプリル、ペリンドプリラート、ピバロプリル（ｐｉｖａｌｏｐｒｉｌ）、ピボプリル、キナプリル、塩酸キナプリル、キナプリラト、ラミプリル、ラミプリラート、スピラプリル、塩酸スピラプリル、スピラプリラート、スピロプリル（ｓｐｉｒｏｐｒｉｌ）、塩酸スピラプリル、テモカプリル、塩酸テモカプリル、テプロチド、トランドラプリル、トランドラプリラート、ウチバプリル（ｕｔｉｂａｐｒｉｌ）、ザビシプリル、ザビシプリラート（ｚａｂｉｃｉｐｒｉｌａｔ）、ゾフェノプリル、ゾフェノプリラト、その薬学的に許容される塩、及びその混合物が挙げられるがこれらに限定されない。

【0103】

本発明において有用なアンジオテンシン受容体遮断物質の非限定例としては、イルベサルタン（米国特許第５，２７０，３１７号、その全体は参照することによって本明細書に援用される）、カンデサルタン（米国特許第５，１９６，４４４号及び同第５，７０５，５１７号、それらの全体は参照することによって本明細書に援用される）、バルサルタン（米国特許第５，３９９，５７８号、その全体は参照することによって本明細書に援用される）、及びロサルタン（米国特許第５，１３８，０６９号、その全体は参照することによって本明細書に援用される）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0104】

治療剤として使用され得るレニン阻害物質の非限定例としては、アリスキレン、ジテキレン、エナルキレン、レミキレン、テルラキレン、シプロキレン、及びザンキレン、その薬学的に許容される塩及びその混合物が挙げられるがこれらに限定されない。

【0105】

「ステロイド」という用語は、以下の化合物の例示的なファミリー：コルチコステロイド、ミネラリコステロイド（ｍｉｎｅｒａｌｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ）、及び性ステロイド（例えば可能性としてアンドロゲン性もしくはエストロゲン性、または抗アンドロゲン性及び抗エストロゲン性の分子を包含する）に属するかまたはそれらに関連する化合物を指す。これらの中には、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、メチル－プレドニゾロン、トリアムシノロン、フルオシノロン、アルドステロン、スピロノラクトン、ダナゾール（他の場合にはＯＰＴＩＮＡとして公知である）、及びその他が包含される。いくつかの実施形態において、治療剤は、ステロイドを含み得る。

【0106】

「ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ剤」または「ＰＰＡＲ－γ剤」または「ＰＰＡＲＧ剤」または「ＰＰＡＲ－γ剤」という用語は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体に対して直接または間接的に作用する薬剤を指す。この薬剤は、ＰＰＡＲ－α（「ＰＰＡＲＡ」）活性にも影響を及ぼし得る。

【0107】

いくつかの実施形態において、治療剤は、マクロファージ極性化の調節物質を含み得る。マクロファージ極性化の例示的な調節物質としては、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ－ｇ）調節物質が挙げられ、例えばアゴニスト、部分アゴニスト、アンタゴニスト、またはＰＰＡＲ－γ／αアゴニストの組み合わせを包含する。いくつかの実施形態において、治療剤は、ＰＰＡＲγ調節物質（完全アゴニストまたは部分アゴニストであるＰＰＡＲγ調節物質を包含する）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲγ調節物質は、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ、またはグリタゾン）の薬物クラスのメンバーである。非限定例として、ＰＰＡＲγ調節物質は、ロシグリタゾン（ＡＶＡＮＤＩＡ）、ピオグリタゾン（ＡＣＴＯＳ）、トログリタゾン（ＲＥＺＵＬＩＮ）、ネトグリタゾン、リボグリタゾン、シグリタゾン、ローダニンのうちの１つまたは複数であり得る。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲγ調節物質は、イルベサルタン及びテルメサルタン（ｔｅｌｍｅｓａｒｔａｎ）のうちの１つまたは複数である。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲγ調節物質は、非ステロイド性抗炎症薬（例えばイブプロフェン等のＮＳＡＩＤ）またはインドールである。公知の阻害物質は、実験的薬剤ＧＷ－９６６２を包含する。ＰＰＡＲγ調節物質のさらなる例は、ＷＩＰＯ公開番号ＷＯ／１９９９／０６３９８３、ＷＯ／２００１／０００５７９、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１ Ｏｃｔ．２５；１１（１１）：７５０－６１中で記載されるもの、またはＷＯ／２００２／０６８３８６の方法を使用して同定される薬剤である（それらの内容は参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）。

【0108】

いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲγ調節物質は、「デュアル」ＰＰＡＲ調節物質または「バランスされた」ＰＰＡＲ調節物質または「汎」ＰＰＡＲ調節物質である。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲγ調節物質は、２つ以上のＰＰＡＲアイソフォームを結合するグリタザール（例えばムラグリタザール（Ｐａｒｇｌｕｖａ）及びテサグリタザール（Ｇａｌｉｄａ）及びアレグリタザール）である。

【0109】

いくつかの実施形態において、治療剤は、Ｂｉａｎｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．（Ｍａｒｃｈ １９９５）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）１（３）：２５４－２６６（この内容は参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載されるセマピモド（ＣＮＩ－１４９３）を含み得る。

【0110】

いくつかの実施形態において、治療剤は、遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害物質を含み得る。例示的なＭＩＦ阻害物質は、ＷＩＰＯ公開番号ＷＯ２００３／１０４２０３、ＷＯ２００７／０７０９６１、ＷＯ２００９／１１７７０６、ならびに米国特許第７，７３２，１４６号及び同第７，６３２，５０５号及び同第７，２９４，７５３号、同第７，２９４，７５３号（それらの内容は参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）中で記載される。いくつかの実施形態において、ＭＩＦ阻害物質は、（Ｓ，Ｒ）－３－（４－ヒドロキシフェニル）－４，５－ジヒドロ－５－イソオキサゾール酢酸メチルエステル（ＩＳＯ－１）、イソオキサゾリン、ｐ４２５（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８７，３０６５３－３０６６３）、エポキシアザジラジオン、またはビタミンＥである。

【0111】

いくつかの実施形態において、治療剤は、例えば米国特許及び特許公開：米国特許第７，７９９，８２４号、米国特許第８，０６７，４１５号、ＵＳ２００７／０１９７５９０、ＵＳ２００６／００６９１２３、ＵＳ２００６／００５８２８９、及びＵＳ２００７／００３７７９４（それらの内容は参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）中で記載されるケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）阻害物質を含み得る。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ２阻害物質は、マラビロク、セニクリビロック、ＣＤ１９２、ＣＣＸ８７２、ＣＣＸ１４０、２－（（イソプロピルアミノカルボニル）アミノ）－Ｎ－（２－（（ｃｉｓ－２－（（４－（メチルチオ）ベンゾイル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）－２－オキソエチル）－５－（トリフルオロメチル）－ベンズアミド、ビクリビロク、ＳＣＨ３５１１２５、ＴＡＫ７７９、Ｔｅｉｊｉｎ、ＲＳ－５０４３９３、化合物２、化合物１４、または化合物１９（Ｐｌｏｓ ＯＮＥ ７（３）：ｅ３２８６４）である。

【0112】

いくつかの実施形態において、治療剤は、オートファジー、ミクロオートファジー、マイトファジー、またはオートファジーの他の形態を調節する薬剤を含み得る。いくつかの実施形態において、治療剤は、シロリムス、タクロリミス（ｔａｃｒｏｌｉｍｉｓ）、ラパマイシン、エベロリムス、バフィロマイシン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、スパウチン－１、メトホルミン、ペリホシン、レスベラトロル、トリコスタチン、バルプロ酸、Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫ、または当技術分野において公知の他のものを含み得る。理論に束縛されることを望むものではないが、オートファジー、ミクロオートファジー、マイトファジー、またはオートファジーの他の形態を調節する薬剤は、細胞内構成要素（例えば細胞器官、ミトコンドリア、小胞体、脂質、または他のものであるがこれらに限定されない）のリサイクルを変更し得る。理論に束縛されることをさらに望むものではないが、この薬剤は、微小管結合タンパク質１Ａ／１Ｂ軽鎖３（ＬＣ３）を介して作用しても作用しなくてもよい。

【0113】

いくつかの実施形態において、治療剤は、がんの治療に使用される薬剤（すなわち制がん薬または抗がん剤）を含み得る。例示的な制がん薬は、抗代謝抗がん剤及び抗有糸分裂抗がん剤、ならびにその組み合わせから、対象に対して選択され得る。様々な抗代謝抗がん剤及び抗有糸分裂抗がん剤（単一のかかる薬剤またはかかる薬剤の組み合わせを包含する）は、方法及び本明細書において記載される組成物中で用いられ得る。

【0114】

抗代謝抗がん剤は、典型的には天然の代謝物質に構造的に類似し、当該代謝物質は、がん細胞の正常な代謝プロセス（核酸及びタンパク質の合成等）に関与する。しかしながら、抗代謝物質は、それらががん細胞の代謝プロセスを妨害するように、天然の代謝物質とは十分に異なる。細胞中で、抗代謝物質は、類似する代謝物質と間違えられ、正常な化合物に類似する方式で細胞によって加工される。「デコイ」代謝物質の存在は、細胞が生体機能を実行することを防止し、細胞は増殖及び生存することがでない。例えば、抗代謝物質は、細胞ＤＮＡの中へこれらの不正なヌクレオチドを置換し、それによって細胞分裂を邪魔することによって、または重要な細胞酵素を阻害し、ＤＮＡの複製を防止することによって、細胞毒性活性を発揮し得る。

【0115】

したがって一態様において、抗代謝抗がん剤は、ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体である。ある特定の態様において、例えば、抗代謝剤は、結合された糖部分の有無にかかわらず、プリン（例えばグアニンまたはアデノシン）もしくはその類似体、またはピリミジン（シチジンまたはチミジン）もしくはその類似体を含み得る。

【0116】

本開示で使用される好適な抗代謝抗がん剤は、概してそれらが影響する代謝プロセスに従って分類され、当該抗がん剤としては、葉酸、ピリミジン、プリン、及びシチジンの類似体及び誘導体が挙げられ得るがこれらに限定されない。したがって一態様において、抗代謝剤（複数可）は、シチジン類似体、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体、及びその組み合わせからなる群から選択される。

【0117】

１つの特定の態様において、例えば抗代謝剤は、シチジン類似体である。この態様によれば、例えばシチジン類似体は、シタラビン（シトシンアラビノドシド（ａｒａｂｉｎｏｄｓｉｄｅ））、アザシチジン（５－アザシチジン）、ならびにその塩、類似体、及び誘導体からなる群から選択され得る。

【0118】

別の特定の態様において、例えば抗代謝剤は、葉酸類似体である。葉酸類似体または抗葉酸物質は、概してジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）（ヌクレオチドの形成に関与する酵素）を阻害することによって機能する。この酵素が遮断される場合に、ヌクレオチドは形成されず、ＤＮＡ複製及び細胞分裂を邪魔する。ある特定の態様によれば、例えば葉酸類似体は、デノプテリン、メトトレキサート（アメトプテリン）、ペメトレキセド、プテロプテリン、ラルチトレキセド、トリメトレキサート、ならびにその塩、類似体、及び誘導体からなる群から選択され得る。

【0119】

別の特定の態様において、例えば抗代謝剤は、プリン類似体である。プリンベースの抗代謝剤は、ＤＮＡ合成を阻害することによって（例えばプリン含有ヌクレオチド（アデニン及びグアニン）の産生を妨害し、その妨害がＤＮＡ合成そして細胞分裂を中断することによって）機能する。プリン類似体もＤＮＡ合成の間にＤＮＡ分子それ自体の中へ取り込まれ、それは細胞分裂を妨害し得る。ある特定の態様によれば、例えばプリン類似体は、アシクロビル、アロプリノール、２－アミノアデノシン、アラビノシルアデニン（アラＡ）、アザシチジン、アザチプリン（ａｚａｔｈｉｐｒｉｎｅ）、８－アザ－アデノシン、８－フルオロ－アデノシン、８－メトキシ－アデノシン、８－オキソ－アデノシン、クラドリビン、デオキシコフォルマイシン、フルダラビン、ガンシロビル（ｇａｎｃｙｌｏｖｉｒ）、８－アザ－グアノシン、８－フルオロ－グアノシン、８－メトキシ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、グアノシン二リン酸、グアノシン二リン酸－β－Ｌ－２－アミノフコース、グアノシン二リン酸－Ｄ－アラビノース、グアノシン二リン酸－２－フルオロフコース、グアノシン二リン酸フコース、メルカプトプリン（６－ＭＰ）、ペントスタチン、チアミプリン、チオグアニン（６－ＴＧ）、ならびにその塩、類似体、及び誘導体からなる群から選択され得る。

【0120】

さらに別の特定の態様において、例えば抗代謝剤は、ピリミジン類似体である。上で考察されたプリン類似体に類似して、ピリミジンベースの抗代謝剤は、ピリミジン含有ヌクレオチド（ＤＮＡ中のシトシン及びチミン；ＲＮＡ中のシトシン及びウラシル）の合成を遮断する。「デコイ」として作用することによって、ピリミジンベースの化合物は、ヌクレオチドの産生を防止し得る、及び／または、成長しているＤＮＡ鎖の中へ取り込まれ、終結を導き得る。ある特定の態様によれば、例えばピリミジン類似体は、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、ブロモウラシル（例えば５－ブロモウラシル）、カペシタビン、カルモフール、クロロウラシル（例えば５－クロロウラシル）、シタラビン（シトシンアラビノサイド）、シトシン、ジデオキシウリジン、３’－アジド－３’－デオキシチミジン、３’－ジデオキシシチジン－２’－エン、３’－デオキシ－３’－デオキシチミジン－２’－エン、ジヒドロウラシル、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－フルオロシトシン、２－フルオロデオキシシチジン、３－フルオロ－３’－デオキシチミジン、フルオロウラシル（例えば５－フルオロウラシル（５－ＦＵとしても公知である））、ゲムシタビン、５－メチルシトシン、５－プロピニルシトシン、５－プロピニルチミン、５－プロピニルウラシル、チミン、ウラシル、ウリジン、ならびにその塩、類似体、及び誘導体からなる群から選択され得る。一態様において、ピリミジン類似体は、５－フルオロウラシル以外である。別の態様において、ピリミジン類似体は、ゲムシタビンまたはその塩である。

【0121】

ある特定の態様において、抗代謝剤は、５－フルオロウラシル、カペシタビン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン、ペメトレキセド、ならびにその塩、類似体、誘導体、及び組み合わせからなる群から選択される。他の態様において、抗代謝剤は、カペシタビン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン、ペメトレキセド、ならびにその塩、類似体、誘導体、及び組み合わせからなる群から選択される。１つの特定の態様において、抗代謝剤は、５－フルオロウラシル以外である。特に好ましい態様において、抗代謝剤は、ゲムシタビンまたはその塩（例えばゲムシタビンＨＣｌ（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）））である。

【0122】

他の抗代謝抗がん剤は、アカンチホリン酸、アミノチアジアゾール、ブレキナルナトリウム、Ｃｉｂａ－Ｇｅｉｇｙ ＣＧＰ－３０６９４、シクロペンチルシトシン、シタラビンホスフェートステアレート、シタラビンコンジュゲート、Ｌｉｌｌｙ ＤＡＴＨＦ、Ｍｅｒｒｅｌ Ｄｏｗ ＤＤＦＣ、デザグアニン、ジデオキシシチジン、ジデオキシグアノシン、ジドックス、Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ ＤＭＤＣ、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ ＥＨＮＡ、Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．ＥＸ－０１５、ファザラビン、リン酸フルダラビン、Ｎ－（２’－フラニジル）－５－フルオロウラシル、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓｅｉｙａｋｕ ＦＯ－１５２、５－ＦＵ－フィブリノーゲン、イソプロピルピロリジン、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ－１８８０１１；とりわけ、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ－２６４６１８、メトベンザプリム、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ ＭＺＰＥＳ、ノルスペルミジン、ＮＣＩ ＮＳＣ－１２７７１６、ＮＣＩ ＮＳＣ－２６４８８０、ＮＣＩ ＮＳＣ－３９６６１、ＮＣＩ ＮＳＣ－６１２５６７、Ｗａｒｎｅｒ－Ｌａｍｂｅｒｔ ＰＡＬＡ、ペントスタチン、ピリトレキシム、プリカマイシン、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＰＬ－ＡＣ、Ｔａｋｅｄａ ＴＡＣ－７８８、チアゾフリン、Ｅｒｂａｍｏｎｔ ＴＩＦ、チロシンキナーゼ阻害物質、Ｔａｉｈｏ ＵＦＴ、及びウリシチン（ｕｒｉｃｙｔｉｎ）からなる群から選択され得るがこれらに限定されない。

【0123】

一態様において、抗有糸分裂剤は、微小管阻害物質または微小管安定化物質である。概して、微小管安定化物質（タキサン及びエポチロン等）はβ－微小管鎖の内面に結合し、重合反応の核形成相及び伸長相の増進によって、ならびに微小管のアセンブリに要求されるチューブリンサブユニット臨界濃度を低減させることによって、微小管アセンブリを促進する。微小管アセンブリを防止する微小管阻害物質（ビンカアルカロイド等）とは異なり、微小管安定化物質（タキサン等）はラグタイムを減少させ、チューブリンダイマーと微小管ポリマーとの間の動的平衡を重合に向けて劇的にシフトさせる。したがって一態様において、微小管安定化物質は、タキサンまたはエポチロンである。別の態様において、微小管阻害物質は、ビンカアルカロイドである。

【0124】

いくつかの実施形態において、治療剤は、タキサンまたはその誘導体もしくは類似体を含み得る。タキサンは、天然に由来する化合物もしくは関連形態であり得るか、または抗新生物性の特質を備えた化学的に合成された化合物もしくはその誘導体であり得る。タキサンは、テルペンのファミリー（パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））及びドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない）であり、それらは主としてタイヘイヨウイチイの木（Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）に由来し、特定の腫瘍（特に乳房の腫瘍、卵巣腫瘍）に対する活性を有する。一態様において、タキサンは、ドセタキセルまたはパクリタキセルである。パクリタキセルは、好ましいタキサンであり、チューブリンダイマーからの微小管のアセンブリを増進し、脱重合の防止によって微小管を安定化する抗有糸分裂剤と考えられる。この安定性は、生命に関する間期及び有糸分裂細胞機能に必須の微小管ネットワークの正常な動的な再編成の阻害をもたらす。

【0125】

親水性誘導体及び疎水性誘導体の両方を含む、様々な公知のタキサン誘導体も包含される。タキサン誘導体としては、国際特許出願番号ＷＯ９９／１８１１３中で記載されるガラクトース誘導体及びマンノース誘導体；ＷＯ９９／１４２０９中で記載されるピペラジノ誘導体及び他の誘導体；ＷＯ９９／０９０２１、ＷＯ９８／２２４５１及び米国特許第５，８６９，６８０号中で記載されるタキサン誘導体；ＷＯ９８／２８２８８中で記載される６－チオ誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号中で記載されるスルフェンアミド誘導体；脱酸素化パクリタキセル化合物（米国特許第５，４４０，０５６号中で記載されるもの等）；ならびに米国特許第５，４１５，８６９号中で記載されるタキソール誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。上で指摘されるように、それは、パクリタキセルのプロドラッグをさらに包含し、ＷＯ９８／５８９２７；ＷＯ９８／１３０５９；及び米国特許第５，８２４，７０１号中で記載されるものが挙げられるがこれらに限定されない。タキサンは、タキサンコンジュゲート（例えばパクリタキセル－ＰＥＧ、パクリタキセル－デキストラン、パクリタキセル－キシロース、ドセタキセル－ＰＥＧ、ドセタキセル－デキストラン、ドセタキセル－キシロース、及び同種のもの等）でもあり得る。他の誘導体は、他の参照文献の中でも、表題“Ｎｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（１９８６），Ａｔｔａ－ｕｒ－Ｒａｂｍａｎ，Ｐ．Ｗ．ｌｅ Ｑｕｅｓｎｅ，Ｅｄｓ．（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ １９８６）の“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔａｘｏｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，”Ｄ．Ｇ．Ｉ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．２６中で言及される。これらの参照文献の各々は、本明細書において参照することによってその全体が本明細書に援用される。

【0126】

様々なタキサンは、当業者に公知の技法（ＷＯ９４／０７８８２、ＷＯ９４／０７８８１、ＷＯ９４／０７８８０、ＷＯ９４／０７８７６、ＷＯ９３／２３５５５、ＷＯ９３／１００７６；米国特許第５，２９４，６３７号；同第５，２８３，２５３号；同第５，２７９，９４９号；同第５，２７４，１３７号；同第５，２０２，４４８号；同第５，２００，５３４号；同第５，２２９，５２９；及びＥＰ５９０，２６７も参照）（その各々は参照することによってその全体が本明細書に援用される）を利用して容易に調製され得るか、または様々な商業的供給源（例えばＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏを包含する）から得られ得る。

【0127】

代替的に、抗有糸分裂剤は微小管阻害物質であり得る。１つの好ましい態様において、微小管阻害物質は、ビンカアルカロイドである。概して、ビンカアルカロイドは、有糸分裂紡錘体毒である。ビンカアルカロイド剤は、細胞分離の前に、染色体が分配され、極のうちの１つに向けて有糸分裂紡錘体の細管に沿って移動し始める時の有糸分裂の間に作用する。これらの紡錘体毒の作用下で、紡錘体は有糸分裂の間の染色体の分散によって無秩序になり、細胞増殖に影響する。ある特定の態様によれば、例えばビンカアルカロイドは、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、かつビノレルビン、ならびにその塩、類似体、及び誘導体からなる群から選択される。

【0128】

抗有糸分裂剤は、エポチロンでもあり得る。概して、エポチロンクラスの化合物のメンバーは、タキサンのメカニズムに類似するものに従って微小管機能を安定化する。エポチロンは、Ｇ２－Ｍ移行期で細胞周期停止も引き起こし、細胞毒性及び最終的にはアポトーシスを導き得る。好適なエピチオロン（ｅｐｉｔｈｉｏｌｏｎｅ）としては、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、及びエポチロンＦ、ならびにその塩、類似体及び、その誘導体が挙げられる。１つの特定のエポチロン類似体は、エポチロンＢ類似体であるイキサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（商標））である。

【0129】

ある特定の態様において、抗有糸分裂の抗がん剤は、タキサン、エポチロン、ビンカアルカロイドならびにその塩及び組み合わせからなる群から選択される。したがって例えば、一態様において、抗有糸分裂剤はタキサンである。より好ましくは、この態様において、抗有糸分裂剤は、パクリタキセルまたはドセタキセル、さらにより好ましくはパクリタキセルである。別の態様において、抗有糸分裂剤は、エポチロン（例えばエポチロンＢ類似体）である。別の態様において、抗有糸分裂剤は、ビンカアルカロイドである。

【0130】

本開示において使用され得る制がん薬の例としては、サリドマイド；白金配位錯体（シスプラチン（ｃｉｓ－ＤＤＰ）、オキサリプラチン、及びカルボプラチン等）；アントラセンジオン（ミトキサントロン等）；置換尿素（ヒドロキシ尿素等）；メチルヒドラジン誘導体（プロカルバジン（Ｎ－メチルヒドラジン、ＭＩＨ）等）；副腎皮質抑制物質（ミトタン（ｏ，ｐ’－ＤＤＤ）及びアミノグルテチミド等）；ＲＸＲアゴニスト（ベキサロテン等）；及びチロシンキナーゼ阻害物質（スニチミブ（ｓｕｎｉｔｉｍｉｂ）及びイマチニブ等）が挙げられるがこれらに限定されない。追加の制がん薬の例としては、アルキル化薬、抗代謝物質、天然産物、ホルモン及びアンタゴニスト、ならびに様々な薬剤が挙げられる。代替名は丸括弧で示される。アルキル化剤の例としては、ナイトロジェンマスタード［メクロレタミン、シクロホスファニド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｉｎｉｄｅ）及びイホスファミド及びメルファラン（サルコリシン）及びクロラムブシル等］；エチレンイミン及びメチルメラミン［ヘキサメチルメラミン及びチオテパ等］；アルキルスルホネート［ブスルファン等］；ニトロソウレア［カルムスチン（ＢＣＮＵ）、セムスチン（メチル－ＣＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、及びストレプトゾシン（ストレプトゾトシン）等］；ＤＮＡ合成アンタゴニスト［リン酸エストラムスチン等］；及びトリアジン［ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ジメチル－トリアゼノイミダゾールカルボキサミド）、及びテモゾロマイド等］が挙げられる。抗代謝物質の例としては、葉酸類似体［メトトレキサート（アメトプテリン）等］；ピリミジン類似体［フルオロウラシン（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｎ）（５－フルオロウラシル、５－ＦＵ、ＳＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン、ＦＵｄＲ）、シタラビン（シトシンアラビノサイド）、及びゲムシタビン等］；プリン類似体［メルカプトプリン（６－メルカプトプリン、６－ＭＰ）、チオグアニン（６－チオグアニン、ＴＧ）及びペントスタチン（２’－デオキシコフォルマイシン、デオキシコフォルマイシン）、クラドリビン及びフルダラビン等］；及びトポイソメラーゼ阻害物質［アムサクリン等］が挙げられる。天然産物の例としては、ビンカアルカロイド［ビンブラスチン（ＶＬＢ）及びビンクリスチン等］；タキサン［パクリタキセル、タンパク質結合パクリタキセル（Ａｂｒａｘａｎｅ）、及びドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）等］；エピポドフィロトキシン［エトポシド及びテニポシド等］；カンプトテシン［トポテカン及びイリノテカン等］；抗生物質［ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン（マイトマイシンＣ）、イダルビシン、エピルビシン等］；酵素［Ｌ－アスパラギナーゼ等］；及び生物学的応答修飾物質［インターフェロンα及びインターレルキン（ｉｎｔｅｒｌｅｌｕｋｉｎ）２等］が挙げられる。ホルモン及びアンタゴニストの例としては、黄体形成放出ホルモン（ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）アゴニスト［ブセレリン等］；副腎皮質ステロイド［プレドニゾン及び関連調製物等］；プロゲスチン［カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、及び酢酸メゲストロール等］；エストロゲン［ジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオールならびに関連調製物等］；エストロゲンアンタゴニスト［タモキシフェン及びアナストロゾール等］；アンドロゲン［プロピオン酸テストステロン及びフルオキシメステロンならびに関連調製物等］；アンドロゲンアンタゴニスト［フルタミド及びビカルタミド等］；及び性腺刺激ホルモン放出ホルモン類似体［ロイプロリド等］が挙げられる。制がん薬のこれら及び追加の例の代替名及び商標名、ならびに投薬及び投与のレジメンを包含するそれらの使用法は、当業者に公知であろう。

【0131】

いくつかの態様において、抗がん剤は、化学療法剤を含み得る。好適な化学療法剤としては、アルキル化剤、抗生剤、抗代謝剤、ホルモン剤、植物由来剤及びそれらの合成誘導体、抗血管新生剤、分化誘導剤、細胞増殖停止誘導剤、アポトーシス誘導剤、細胞毒性剤、細胞生体エネルギーに影響する（すなわち細胞ＡＴＰレベル及びこれらのレベルを調節する分子／活性に影響する）薬剤、生物学的薬剤（例えばモノクローナル抗体）、キナーゼ阻害物質、ならびに増殖因子及びそれらの受容体の阻害物質、遺伝子療法剤、細胞療法（例えば幹細胞）、またはその任意の組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

【0132】

これらの態様に従って、化学療法剤は、シクロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、メクロレタミン、イホスファミド、ブスルファン、ロムスチン、ストレプトゾシン、テモゾロマイド、ダカルバジン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、プロカルバジン、ウラムスチン、メトトレキサート、ペメトレキセド、フルダラビン、シタラビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、ゲムシタビン、カペシタビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、エトポシド、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ヒドロキシ尿素、トポテカン、イリノテカン、アムサクリン、テニポシド、エルロチニブ塩酸塩、及びその組み合わせからなる群から選択される。各々の可能性は、本発明の分離した態様を表わす。

【0133】

ある特定の態様によれば、治療剤は、生物学的薬物（特に抗体）を含み得る。いくつかの態様に従って、抗体は、セツキシマブ、抗ＣＤ２４抗体、パニツムマブ、及びベバシズマブからなる群から選択される。

【0134】

治療剤は、本開示において使用される時、ペプチド、タンパク質（ホルモン、酵素、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、モノクローナル抗体断片、及び同種のもの等）、核酸（アプタマー、ｓｉＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス核酸または同種のもの、アンチセンス核酸類似体または同種のもの等）、低分子量化合物または高分子量化合物、受容体アゴニスト、受容体アンタゴニスト、部分受容体アゴニスト、及び部分受容体アンタゴニストを含み得る。

【0135】

追加の代表的な治療剤としては、ペプチド薬、タンパク薬、脱感作材、抗原、因子、増殖因子、抗感染剤（抗生物質、抗微生物剤、抗ウイルス物質、抗菌物質、抗寄生虫物質、抗真菌物質、及びその組み合わせ等）、抗アレルギー物質、ステロイド、アンドロゲン性ステロイド、充血除去物質、催眠物質、ステロイド性抗炎症剤、抗コリン作用物質、交感神経興奮物質、鎮静物質、縮瞳物質、精神賦活物質、トランキライザー、ワクチン、エストロゲン、プロゲステロン剤、液性剤（ｈｕｍｏｒａｌ ａｇｅｎｔ）、プロスタグランジン、鎮痛物質、抗発作物質、抗マラリア物質、抗ヒスタミン物質、心臓作用剤、非ステロイド性抗炎症剤、抗パーキンソン病剤、抗アルツハイマー病剤、降圧剤、β－アドレナリン作用遮断剤、α－アドレナリン作用遮断剤、栄養剤、及びベンゾフェナントリジンアルカロイドが挙げられ得るがこれらに限定されない。治療剤はさらに、刺激物質、鎮静物質、催眠物質、鎮痛物質、抗痙攣物質、及び同種のものとして作用することが可能な物質であり得る。

【0136】

追加の治療剤は、ＣＮＳ活性薬、神経活性薬、炎症薬及び抗炎症薬、腎臓薬及び心臓血管薬、胃腸薬、抗新生物物質、免疫調節物質、免疫抑制物質、造血剤、増殖因子、抗凝固物質、血栓溶解物質、抗血小板剤、ホルモン、ホルモン活性剤、ホルモンアンタゴニスト、ビタミン、眼用薬剤、同化剤、制酸物質、抗喘息剤、抗コレステロール剤及び抗脂質剤、抗痙攣物質、抗下痢物質、制吐物質、抗躁病剤、抗代謝剤、抗催吐物質、抗肥満剤、抗発熱剤及び鎮痛剤、抗痙攣剤、抗血栓剤、鎮咳剤、抗尿酸血症剤、抗狭心症剤、抗ヒスタミン物質、食欲抑制物質、生物学的製剤、大脳拡張物質、冠動脈拡張物質、気管支拡張物質、細胞毒性剤、充血除去物質、利尿物質、診断剤、赤血球造血剤、去痰物質、胃腸鎮静物質、血糖上昇剤、催眠物質、血糖降下剤、緩下剤、ミネラルサプリメント、粘液溶解剤、神経筋薬物、末梢血管拡張物質、向精神物質、刺激物質、甲状剤及び抗甲状剤、組織増殖剤、子宮弛緩物質、ビタミン、抗原性材料等を含み得る。他のクラスの治療剤としては、Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ）中で引用されたもの、そしてＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ ａｎｄ Ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中に包含される治療剤が挙げられる。

【0137】

他の治療剤としては、アンドロゲン阻害物質、多糖類、増殖因子（例えば血管内皮増殖因子－ＶＥＧＦ）、ホルモン、抗血管形成誘導因子、デキストロメトルファン、臭化水素酸デキストロメトルファン、ノスカピン、クエン酸カルベタペンタン、塩酸クロフェジアノール、マレイン酸クロルフェニラミン、酒石酸フェニンダミン、マレイン酸ピリラミン、コハク酸ドキシラミン、クエン酸フェニルトロキサミン、塩酸フェニレフリン、塩酸フェニルプロパノールアミン、塩酸プソイドエフェドリン、エフェドリン、リン酸コデイン、硫酸コデインモルヒネ、ミネラルサプリメント、コレストリラミン（ｃｈｏｌｅｓｔｒｙｒａｍｉｎｅ）、Ｎ－アセチルプロカインアミド、アセトアミノフェン、アスピリン、イブプロフェン、塩酸フェニルプロパノールアミン、カフェイン、グアイフェネシン、水酸化アルミニウム、水酸化マグネシウム、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、ホルモン、インターフェロン、サイトカイン、及びワクチンが挙げられる。

【0138】

治療剤のさらなる例としては、ペプチド薬、タンパク薬、脱感作材、抗原、抗感染剤（抗生物質、抗微生物剤、抗ウイルス物質、抗菌物質、抗寄生虫物質、抗真菌物質、及びその組み合わせ等）、抗アレルギー物質、アンドロゲン性ステロイド、充血除去物質、催眠物質、ステロイド性抗炎症剤、抗コリン作用物質、交感神経興奮物質、鎮静物質、縮瞳物質、精神賦活物質、トランキライザー、ワクチン、エストロゲン、プロゲステロン剤、液性剤（ｈｕｍｏｒａｌ ａｇｅｎｔ）、プロスタグランジン、鎮痛物質、抗発作物質、抗マラリア物質、抗ヒスタミン物質、抗分裂増殖物質（ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）、抗ＶＥＧＦ剤、心臓作用剤、非ステロイド性抗炎症剤、抗パーキンソン病剤、抗アルツハイマー病剤、降圧剤、β－アドレナリン作用遮断剤、栄養剤、及びベンゾフェナントリジンアルカロイドが挙げられるがこれらに限定されない。薬剤はさらに、刺激物質、鎮静物質、催眠物質、鎮痛物質、抗痙攣物質、及び同種のものとして作用することが可能な物質であり得る。

【0139】

さらなる代表的な治療剤としては、鎮痛物質（アセトアミノフェン、アセチルサリチル酸、及び同種のもの等）；麻酔物質（リドカイン、キシロカイン、及び同種のもの等）；食欲減退物質（デキサドリン、酒石酸フェンジメトラジン、及び同種のもの等）；抗関節炎物質（メチルプレドニゾロン、イブプロフェン、及び同種のもの等）；抗喘息物質（硫酸テルブタリン、テオフィリン、エフェドリン、及び同種のもの等）；抗生物質（スルフイソキサゾール、ペニシリンＧ、アンピシリン、セファロスポリン、アミカシン、ゲンタミシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、イソニアジド、リファンピン、及び同種のもの等）；抗真菌物質（アンホテリシンＢ、ナイスタチン、ケトコナゾール、及び同種のもの等）；抗ウイルス剤（アシクロビル、アマンタジン、及び同種のもの等）；抗がん剤（シクロホスファミド、メトトレキサート、エトレチナート、パクリタキセル、タキソール、及び同種のもの等）；抗凝固物質（ヘパリン、ワルファリン、及び同種のもの等）；抗痙攣物質（フェニロイン（ｐｈｅｎｙｌｏｉｎ）ナトリウム、ジアゼパム、及び同種のもの等）；抗鬱物質（イソカルボキサジド、アモキサピン、及び同種のもの等）；抗ヒスタミン物質（ジフェンヒドラミンＨＣｌ、マレイン酸クロルフェニラミン、及び同種のもの等）；ホルモン（インスリン、プロゲスチン、エストロゲン、コルチコイド、グルココルチコイド、アンドロゲン、及び同種のもの等）；トランキライザー（ソラジン、ジアゼパム、クロルプロマジンＨＣｌ、レセルピン、クロルジアゼポキシドＨＣｌ、及び同種のもの等）；抗発作物質（ベラドンナアルカロイド、塩酸ジサイクロミン、及び同種のもの等）；ビタミン及びミネラル（必須アミノ酸、カルシウム、鉄、カリウム、亜鉛、ビタミンＢ１２、及び同種のもの等）；心血管剤（プラゾシンＨＣｌ、ニトログリセリン、プロプラノロールＨＣｌ、ヒドララジンＨＣｌ、パンクレリパーゼ、コハク酸デヒドロゲナーゼ、及び同種のもの等）；ペプチド及びタンパク質（ＬＨＲＨ、ソマトスタチン、カルシトニン、成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド、成長ホルモン放出因子、アンジオテンシン、ＦＳＨ、ＥＧＦ、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、エリソポエイチン（ｅｒｙｔｈｏｐｏｅｉｔｉｎ）（ＥＰＯ）、インターフェロン、インターロイキン、コラーゲン、フィブリノーゲン、インスリン、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｍ（登録商標）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、α－グルコシダーゼ、Ｃｅｒａｚｙｍｅ／Ｃｅｒｅｄｏｓｅ（登録商標）、バソプレッシン、ＡＣＴＨ、ヒト血清アルブミン、γグロブリン、構造タンパク質、血液産物タンパク質、複合タンパク質、酵素、抗体、モノクローナル抗体、及び同種のもの等）；プロスタグランジン；核酸；炭水化物；脂肪；麻薬（モルヒネ、コデイン、及び同種のもの、精神療法等）；抗マラリア物質、Ｌ－ドーパ、利尿物質（フロセミド、スピロノラクトン、及び同種のもの等）；抗潰瘍薬（ランチジン（ｒａｎｔｉｄｉｎｅ）ＨＣｌ、シメチジンＨＣｌ、及び同種のもの等）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0140】

治療剤は、免疫調節物質（例えばサイトカイン、インターロイキン、インターフェロン、コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子、及び同種のものが挙げられる）；免疫抑制物質（ラパマイシン、タクロリムス、及び同種のもの等）；アレルゲン（ネコのふけ、カバの木の花粉、イエダニ、草の花粉、及び同種のもの等）；細菌性生物（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｄｏｒｆｅｒｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、及び同種のもの等）の抗原；ウイルス（天然痘ウイルス、インフルエンザＡ型及びＢ型ウイルス、ＲＳウイルス、パラインフルエンザウイルス、はしかウイルス、ＨＩＶウイルス、ＳＡＲＳウイルス、水痘－帯状ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス１型及び２型、サイトメグラウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇｌａｖｉｒｕｓ）、エプスタイン－バーウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、ポリオウイルス、おたふくかぜウイルス、狂犬病ウイルス、風疹ウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及び同種のもの等）の抗原；かかる真菌生物、原生動物性生物、及び寄生性生物（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｙｐａｎａｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、及び同種のもの等）の抗原でもあり得る。これらの抗原は、死んだ生物体の全体、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、炭水化物、またはその組み合わせの形態であり得る。

【0141】

さらなる特定の態様において、治療剤は、抗生物質を含み得る。抗生物質は、例えばアミカシン、ゲンタミシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルミシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、アンサマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、カルバセフェム、ロラカルベフ、カルバペネム、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム、セファロスポリン（第一世代）、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ）、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｈｉｎ）、セファレキシン、セファロスポリン（第二世代）、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セファロスポリン（第三世代）、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セファロスポリン（第四世代）、セフェピム、セファロスポリン（第五世代）、セフトビプロル（ｃｅｆｔｏｂｉｐｒｏｌｅ）、糖ペプチド、テイコプラニン、バンコマイシン、マクロライド、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スペクチノマイシン、モノバクタム、アズトレオナム、ペニシリン、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン（ｍｅｔｉｃｉｌｌｉｎ）、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ピペラシリン、チカルシリン、ポリペプチド、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、キノロン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、スルホンアミド、マフェナイド、プロントジル（古典的）、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファニルイミド（ｓｕｌｆａｎｉｌｉｍｉｄｅ）（古典的）、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム、トリメトプリム－スルファメトキサゾール（コ－トリモキサゾール）（ＴＭＰ－ＳＭＸ）、テトラサイクリン類（デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、及びその他が挙げられる）；アルスフェナミン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、エタンブトール、ホスホマイシン、フシジン酸、フラゾリドン、イソニアジド、リネゾリド、メトロニダゾール、ムピロシン、ニトロフラントイン、プラテンシマイシン、ピラジンアミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、リファンピシン（米国ではリファンピン）、チミダゾール（ｔｉｍｉｄａｚｏｌｅ）、またはその組み合わせのうちの１つまたは複数であり得る。一態様において、治療剤は、リファンピシン（米国ではリファンピン）及びミノサイクリンの組み合わせであり得る。

【0142】

治療剤として有用な増殖因子としては、形質転換増殖因子－α（「ＴＧＦ－α」）、形質転換増殖因子（「ＴＧＦ－β」）、血小板由来増殖因子（「ＰＤＧＦ」）、線維芽細胞増殖因子（「ＦＧＦ」）（ＦＧＦ酸性アイソフォーム１及び２、ＦＧＦ塩基型２、ならびにＦＧＦ ４、８、９、及び１０を包含する）、神経増殖因子（「ＮＧＦ」）（ＮＧＦ ２．５、ＮＧＦ ７．０及びβＮＧＦ及びニューロトロフィン、脳由来神経栄養因子を包含する）、軟骨由来因子、骨成長因子（ＢＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、果粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）Ｉ及びＩＩ、肝細胞増殖因子、グリア神経栄養増殖因子（ＧＤＮＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）（ＴＧＦα、β、β１、β２、β３ を包含する）、骨格成長因子、骨マトリックス由来増殖因子、及び骨由来増殖因子、ならびにその混合物が挙げられるがこれらに限定されない。

【0143】

治療剤として有用なサイトカインとしては、カルディオトロフィン、ストロマ細胞由来因子、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ）、黒色腫増殖刺激活性（ＭＧＳＡ）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ－１α）、２、３α、３β、４、及び５、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＴＮＦ－α、ならびにＴＮＦ－βが挙げられるがこれらに限定されない。本開示において有用な免疫グロブリンとしては、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びその混合物が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの好ましい増殖因子としては、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）、ＮＧＦ（神経増殖因子）、ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ＰＤＧＦ－ＡＢ、ＦＧＦｂ、ＦＧＦａ、及びＢＧＦが挙げられる。

【0144】

治療剤として有用な他の分子としては、成長ホルモン、レプチン、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、腫瘍壊死因子α及びβ、エンドスタチン、トロンボスポンジン、骨形成タンパク質－１、骨形成タンパク質２及び７、オステオネクチン、ソマトメジン様ペプチド、オステオカルシン、インターフェロンα、インターフェロンαＡ、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターフェロン１α、ならびにインターロイキン２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、１７、及び１８が挙げられるがこれらに限定されない。

【0145】

いくつかの実施形態において、治療剤は、開示される薬物送達組成物中で、約１０、約２０、約３０、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２１０、約２２０、約２３０、約２４０、約２５０、約２６０、約２７０、約２８０、約２９０、約３００、約３１０、約３２０、約３３０、約３４０、約３５０、約３６０、約３７０、約３８０、約３９０、約４００、約４１０、約４２０、約４３０、約４４０、約４５０、約４６０、約４７０、約４８０、約４９０、もしくは約５００の量で（開示される薬物送達組成物のうちで、ｍｇ体重あたりのμｇ治療剤で）；または前述の値のうちの任意のものによってくくられた治療試薬の量の範囲で；または前述の値の任意の組み合わせで、存在する。

【0146】

いくつかの実施形態において、治療剤は、少なくとも３０日（例えば４５日、６０日、３か月、６か月、９か月、１年、またはそれ以上）の期間にわたってほぼゼロ次放出速度論を示す。治療剤は、薬物送達組成物の植込み時で、またはその後の期間後にほぼゼロ次放出速度論を示し得る（例えば治療剤は、薬物送達組成物の植込みの約３０日後にほぼゼロ次放出速度論を示し始める）。他の実施形態において、薬物送達組成物は、ゼロ次速度論を逸脱する速度論を示し得る。

【0147】

開示される薬物送達組成物を調製する方法
様々な態様において、開示される薬物送達デバイスは、本明細書において以下で開示される方法によって、及び続く代表的な実施例の特定の態様において記載されるように、調製される。

【0148】

したがって一態様において、本明細書において記載される薬物送達デバイスを調製する方法は、第１のポリマーを含む第１の層を伝導性ロッド上に形成すること；及び第２のポリマーを含む第２の層を第１の層上に形成すること、を含んで提供される。

【0149】

いくつかの実施形態において、第１の層の形成は、第１のポリマーの溶液及び約１０ｋＶ～約３０ｋＶの電圧差を使用する、エレクトロスピニングを含む。

【0150】

いくつかの実施形態において、第１のポリマー溶液は、少なくとも１つの有機溶媒中で約１ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％である。いくつかの実施形態において、第１のポリマー溶液中の少なくとも１つの有機溶媒は、トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン、ヘキサフルオロイソプロパノール、またはその組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、トリフルオロ酢酸及びジクロロメタンは、約１：１０～約１０：１の比（例えば約５：３～約１０：３の比）で存在する。いくつかの実施形態において、トリフルオロ酢酸及びジクロロメタンは、約７：３の比で存在する。

【0151】

いくつかの実施形態において、第２の層の形成は、第２のポリマー及び任意選択でポロゲンを含む溶液を使用して、形成された第１の層の上へエレクトロスピニングすることを含み、エレクトロスピニングのために使用される電圧差は、約２０ｋＶ～約３０ｋＶである。

【0152】

いくつかの実施形態において、第２のポリマー及び任意選択でポロゲンを含む溶液は、全重量に基づいて、約１ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％（例えば約２．５ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％または約５ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％）の第２のポリマー及びポロゲンである。いくつかの実施形態において、第２のポリマー及びポロゲンを含む溶液は、１，１，１，３，３，３，－ヘキサフルオロプロパン－２－オール溶液である。

【0153】

いくつかの実施形態において、第２のポリマー対ポロゲンの重量比は、約９０：１００～約１００：１（例えば約９０：１００～９９．９：０．１、約９０：１００～９５：５、または約９５：５～９９．９：０．１）である。いくつかの実施形態において、第２のポリマー対ポロゲンの重量比は、約９９：１、約９５：５、約９２．５：７．５、または約９０：１０である。いくつかの実施形態において、第２のポリマー対ポロゲンの重量比は、約５０：５０～約１００：０の範囲である。

【0154】

「ポロゲン」は、本明細書において使用される時、多孔質材料（例えば本明細書において記載されるような多孔質ポリカプロラクトン）を生成するのに使用され得る任意の材料を指す。いくつかの実施形態において、ポロゲンは、水溶性化合物を含み、すなわち薬物送達デバイスを水により洗浄することに際して、ポロゲンが外側層から実質的に除去されるようにする。いくつかの実施形態において、ポロゲンは、（［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸）（ＴＡＰＳ）、（２－（ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸）（ビシン）、（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）または（２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール）（トリス）、（Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）（トリシン）、（３－［Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＴＡＰＳＯ）、（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、（２－［［１，３－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－２－イル］アミノ］エタンスルホン酸）（ＴＥＳ）、（３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸）（ＭＯＰＳ）、（ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸））（ＰＩＰＥＳ）、ジメチルヒ酸、（２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸）（ＭＥＳ）、またはその塩（そのナトリウム塩等）から選択される化合物を含む。いくつかの実施形態において、ポロゲンは、ＨＥＰＥＳナトリウム塩を含む。いくつかの実施形態において、ポロゲンは、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンコポリマー、アクリレートコポリマー（第四級アンモニウム基、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ヒアルロナン、及びポリビニルピロリドンを包含する）等の水溶性ポリマーを含む。他の実施形態において、ポロゲンは、ゼラチン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、キトサン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール、またはアガロースを含む。

【0155】

いくつかの実施形態において、方法は、外側層の形成に続いて、薬物送達デバイスを焼結することをさらに含む。いくつかの実施形態において、焼結は、約５０℃～約１５０℃（例えば約９０℃～約１１０℃）の温度で構成される。いくつかの実施形態において、焼結は、約１分間～約６時間（例えば約３０分間～約６時間）の期間の加熱を含む。

【0156】

いくつかの実施形態において、方法は、焼結に続いて、薬物送達デバイスを洗浄することをさらに含む。いくつかの実施形態において、薬物送達デバイスは、飽和重炭酸ナトリウム溶液、続いて脱イオン水により洗浄される。いくつかの実施形態において、ポロゲンは、脱イオン水により洗浄することに際して、薬物送達デバイスから実質的に除去される。

【0157】

いくつかの実施形態において、方法は、洗浄に続いて、薬物送達デバイスを乾燥することをさらに含む。いくつかの実施形態において、乾燥は、真空下である。いくつかの実施形態において、乾燥は、約５０℃～約１５０℃（例えば約９０℃～１１０℃）の温度である。いくつかの実施形態において、乾燥は、約１分間～約６時間（例えば約３０分間～約６時間）の期間で起こる。

【0158】

他の実施形態において、開示されるカプセルは、当業者によって容易に理解されるような任意の適切な方法によって製造され得る。いくつかの実施形態において、開示されるカプセルは、非対称膜形成によって製造され得る。かかる方法の代表的な例は、Ｙｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｎｏｐｏｒｏｕｓ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｖｉａ ｔｈｅｒｍａｌｌｙ－ ａｎｄ ｎｏｎｓｏｌｖｅｎｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｈａｓｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００９，３４３：１８０－８８（その全体はすべての目的のために本明細書において参照することによって本明細書に援用される）中で提供される。いくつかの実施形態において、開示されるカプセルは、三次元プリンティングを使用して製造され得る。いくつかの実施形態において、開示されるカプセルは、メチルセルロースの周囲に製造され、それは後続して除去されて、内腔区画を形成し得る。いくつかの実施形態において、開示されるカプセルは、ＷＯ２０１５／０８５２５１、ＷＯ２０１６／１４４８３２、ＷＯ２０１６／１９６３６５、ＷＯ２０１７／０１５６０４、ＷＯ２０１７／０１５６１６、またはＷＯ２０１７／０１５６７５（その各々は、すべての目的のために参照することによってその全体が本明細書に援用される）中でＥｎｖｉｓｉａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって記載される方法によって製造され得る。さらに他の実施形態において、開示されるカプセルは、中空繊維膜の製造において使用されたものに類似する方法（非溶媒誘起相反転（ＮＩＰＳ）、（溶媒）蒸発誘起相反転（ＥＩＰＳ）、蒸気吸着誘起相反転（ＶＩＰＳ）、及び熱誘起相反転法（ＴＩＰＳ）を包含する相反転等）によって製造され得る。いくつかの実施形態において、開示されるカプセルは、ＵＳ２０１５／２３２５０６（その全体はすべての目的のために参照することによって本明細書に援用される）中で記載される方法に類似する方法を使用して製造され得る。いくつかの実施形態において、孔は、代りに、カプセルのレーザー回折によって形成され得る。

【0159】

いくつかの態様において、カプセルのチューブ形状の２つの末端は、閉鎖される。末端は、当業者によって適切に選択されるような任意のシーリング技法によって閉鎖され得る。いくつかの実施形態において、２つの末端は、高周波チューブシーリング技法を使用してシールされる。かかる技法において、高周波は、壁中で渦電流を生成し、それは少なくともポリマー層を加熱する。温度がポリマーの融点に到達した場合に、クランプは閉鎖され、溶融されたポリマーは冷却され、形成される。いくつかの実施形態において、２つの末端はホットジョー（ｈｏｔ－ｊａｗ）のチューブシーリングを使用してシールされ、そこでは、加熱されたジョーがチューブ形状の外側へ加熱を適用して、シーリングのために内側を加熱する。いくつかの実施形態において、２つの末端は、超音波チューブシーリングを使用してシールされ得る。かかる技法において、内側層のポリマー組成物は、超音波ホーンから導入される高周波摩擦力によって加熱及び溶融される。クランプは、次いでシールされることが意図されるセクションの周囲で閉鎖され、冷却され、末端をシールするために形成される。いくつかの実施形態において、２つの末端はホットエアシーリングを使用してシールされ、そこでは、系が、カプセルの内部のシール領域をホットエアにより加熱し、次いで後続して次のステーション中で末端をプレスし冷やす。

【0160】

開示される薬物送達デバイスを使用する治療の方法
開示される薬物送達組成物の投与によって臨床状態を治療する方法も、本明細書において提供される。臨床状態は、治療組成物によって寛解され得る臨床的障害、疾患、機能不全、または他の病態であり得る。

【0161】

開示される薬物送達デバイスを対象へ「投与すること」またはその「投与」という用語は、その意図された機能を遂行するためにデバイスを対象へ導入または送達する任意の経路を包含する。投与は、経口、鼻内、非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下）、または局所を包含する、任意の好適な経路によって実行され得る。投与としては、自己投与及び他者による投与が挙げられる。いくつかの実例において、投与は、目への注射（眼内注射を包含する）を経由する。他の実例において、例えばがんの治療において、投与は、腫瘍またはがん細胞の他の塊内への、それらに接する、それらに隣接する、またはそれらに近位の、開示される薬物送達組成物の注射を経由し得る。

【0162】

記載されるような医学的疾患及び病態の治療または予防の様々なモードが、「実質的」を意味することが意図され、それは全面的そして全面的より少ない治療または予防を包含し、ある程度の生物学的または医学的に意義のある結果が達成されることも認識されよう。治療は、慢性疾患のための連続的な延長治療、または急性病態の治療のための単回もしくは数回の投与であり得る。

【0163】

「分離」投与という用語は、同じ時間または実質的に同じ時間での、異なる経路による、少なくとも２つの活性成分の投与を指す。

【0164】

「連続」投与という用語は、異なる時間での、投与経路が同一かまたは異なる、少なくとも２つの活性成分の投与を指す。より詳細には、連続使用は、他のもの（複数可）の投与が開始する前に活性成分のうちの１つを投与することの全体を指す。したがって、他の活性成分（複数可）の投与の前に、数分間、数時間、または数日にわたって、活性成分のうちの１つを投与することは可能である。したがって「連続」という用語は、「同時」投与とは異なる。

【0165】

「同時」投与という用語は、同じ時間または実質的に同じ時間での、同じ経路による、少なくとも２つの活性成分の投与を指す。

【0166】

「治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、本明細書において使用される時、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）及び／または予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）を意味する。治療効果は、疾患状態の抑制、寛解、または根絶によって得られる。

【0167】

本開示は、治療有効量の本明細書において記載される組成物の投与によって眼科的な疾患または障害を治療する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態において、開示される方法は、治療有効量の開示される組成物を対象の目の中へ注射することを含む、眼科的障害の治療に係わる。対象は患者であり得、患者は眼科的障害と診断され得た。いくつかの態様において、方法は、対象を眼科的障害と診断することをさらに含み得る。

【0168】

眼科的障害は、急性黄斑神経網膜症；Ｂｅｈｃｅｔ病；血管新生（脈絡膜血管新生を包含する）；糖尿病性ぶどう膜炎；ヒストプラスマ症；感染（真菌またはウイルスが原因の感染等）；黄斑変性（滲出型ＡＭＤ及び非滲出ＡＭＤ及び滲出ＡＭＤを含む、急性黄斑変性（ＡＭＤ）等）；浮腫（黄斑浮腫、類嚢胞黄斑浮腫、及び糖尿病性黄斑浮腫等）；多巣性脈絡膜炎；後眼部の部位または位置に影響する眼外傷；眼腫瘍；網膜障害（網膜中心静脈閉塞症、糖尿病性網膜症（増殖性糖尿病性網膜症を包含する）、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞性疾患、網膜剥離、ぶどう膜炎網膜疾患等）；交感性眼炎；Ｖｏｇｔ Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ（ＶＫＨ）症候群；ぶどう膜滲出；眼のレーザー治療によって引き起こされるか、またはそれによって影響を受ける、後眼部病態；光線力学療法、光凝固術、放射線網膜症、網膜上膜障害、網膜静脈分枝閉塞症、前部虚血性視神経症、非網膜症糖尿病性網膜機能不全、網膜色素変性症、がん、及び緑内障によって引き起こされるか、またはそれらによって影響を受ける、後眼部病態であり得る。ある特定の実例において、眼科的障害は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、がん、血管新生、黄斑浮腫、または浮腫である。さらなる特定の態様において、眼科的障害は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）である。

【0169】

様々な態様において、眼科的障害の治療のための注射は、目の硝子体眼房への注射であり得る。いくつかの事例において、注射は、硝子体内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、または脈絡膜上注射である。

【0170】

「眼領域」または「眼部位」は、前眼部及び後眼部を包含する眼球（ｏｃｕｌａｒ ｇｌｏｂｅ）（眼球（ｅｙｅｂａｌｌ））のうちの任意の区域を意味し、概して眼球中で見出される任意の機能的な（例えば視覚についての）もしくは構造的な組織、または眼球の内部もしくは外部を部分的にもしくは完全に裏打ちする組織もしくは細胞層が挙げられるがこれらに限定されない。眼領域中の眼球の区域の具体的な例としては、前眼房、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、脈絡膜上腔、結膜、結膜下腔、強膜外隙、角膜内腔（ｉｎｔｒａｃｏｒｎｅａｌ ｓｐａｃｅ）、網膜下腔、テノン嚢下腔、角膜上腔（ｅｐｉｃｏｒｎｅａｌ ｓｐａｃｅ）、強膜、毛様体扁平部、外科的に誘導された無血管領域、黄斑、及び網膜が挙げられるがこれらに限定されない。

【0171】

「眼科的障害」は、目、または目の部分もしくは領域のうちの１つに影響するかまたは関与する疾患、病気、または病態を意味し得る。大まかに言って、目は、眼球（角膜を包含する）、ならびに眼球を構成する他の組織及び液体、眼周囲の筋肉（斜筋及び直筋等）、ならびに眼球内またはそれに隣接する視神経の部分を包含する。

【0172】

「緑内障」は、原発性緑内障、続発性緑内障、及び／または先天性緑内障を意味する。原発性緑内障としては、開放隅角緑内障及び閉塞隅角緑内障が挙げられ得る。続発性緑内障は、様々な他の病態（傷害、炎症、色素散乱、血管疾患、及び糖尿病等）の合併症として起こり得る。緑内障の眼圧の増加は、目に侵入する視神経を損傷するので、失明を引き起こす。したがって１つの非限定実施形態において、活性酸素種を低下させることによって、ＳＴＣ－１、または増加量のＳＴＣ－１を発現するＭＳＣは、緑内障の治療において用いられ、失明の開始を予防または遅延させ得る。

【0173】

眼の病態に関連して「炎症媒介性」は、抗炎症剤による治療から利益を得ることができる目の任意の病態を意味し、ぶどう膜炎、黄斑浮腫、急性黄斑変性、網膜剥離、眼腫瘍、真菌感染またはウイルス感染、多巣性脈絡膜炎、糖尿病性網膜症、ぶどう膜炎、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、交感性眼炎、Ｖｏｇｔ－Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ（ＶＫＨ）症候群、ヒストプラスマ症、及びぶどう膜滲出を包含するがこれらに限定されないものが意図される。

【0174】

眼の病態に関して「傷害」または「損傷」は交換可能であり、炎症媒介性病態（例えば炎症等）からもたらされる細胞性及び形態的な兆候及び症状、そして炎症以外の手段（化学的熱傷を包含する化学的傷害等）によって引き起こされる組織傷害、そして感染（細菌感染、ウイルス感染、または真菌感染が挙げられるがこれらに限定されない）によって引き起こされる傷害を指す。

【0175】

「眼内」は、眼組織内または眼組織下を意味する。薬物送達系の眼内投与としては、テノン嚢下、結膜下、脈絡膜上、網膜下、硝子体内、前眼房、及び同種のものの位置への薬物送達系の投与が挙げられる。薬物送達系の眼内投与は、局所的、全身的、筋肉内、皮下、腹腔内、及び同種のものの位置への薬物送達系の投与を除外する。

【0176】

「黄斑変性」は、黄斑が変性するか、または機能活性を喪失した、多数の障害及び病態のうちの任意のものを指す。変性または機能活性の喪失は、例えば細胞死、細胞の分裂増殖の減少、正常な生物学的機能の喪失、または前述のものの組み合わせの結果として生じ得る。黄斑変性は、黄斑の細胞及び／または細胞外マトリックスの構造完全性の変更、正常な細胞マトリックス構築及び／または細胞外マトリックス構築の変更、及び／または黄斑細胞の機能喪失を導き得る、及び／またはそれらのものとして現われ得る。細胞は、ＲＰＥ細胞、光受容体、及び毛細管内皮細胞を含む、黄斑中にまたは黄斑の付近に、通常存在する任意の細胞タイプであり得る。加齢黄斑変性（またはＡＲＭＤ）は主要な黄斑変性関連病態であるが、多数の他のものが知られており、Ｂｅｓｔ黄斑変性、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ黄斑変性、Ｓｏｒｓｂｙ眼底ジストロフィー、Ｍａｌｌａｔｉａ Ｌｅｖｅｎｔｉｎｅｓｅ／Ｄｏｙｎｅ蜂巣状網膜ジストロフィー、及びＲＰＥパターンジストロフィーが挙げられるがこれらに限定されない。加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、「萎縮型」または「滲出型」のいずれかとして記載される。ＡＭＤの湿潤した滲出性の血管新生の形態は、ＡＭＤに罹患するもののうちの約１０～２０％に影響し、網膜色素上皮（ＲＰＥ）下またはそれを介して増殖する異常な血管を特徴とし、出血、浸出、瘢痕化、または漿液性網膜剥離をもたらす。ＡＭＤ患者のうちの８０～９０パーセントは萎縮型であり、網膜色素上皮の萎縮及び黄斑光受容体の喪失を特徴とする。ドルーゼンは、黄斑中に存在してもしなくてもよい。視覚喪失の原因となる黄斑中の網膜色素上皮の地区の萎縮もあり得る。現在のところ、ＡＭＤのいかなる形態についての治癒はないが、滲出型ＡＭＤの弱化のある程度の成功は、光線力学療法及び特に抗ＶＥＧＦ療法により得られている。

【0177】

「ドルーゼン」は、ＲＰＥの下に年齢により蓄積する残屑様の材料である。ドルーゼンは、眼底検査を使用して観察される。正常な目はドルーゼンのない黄斑であるが、ドルーゼンは網膜周辺部中に豊富にある場合がある。黄斑中の軟性ドルーゼンの存在は、任意の黄斑視覚の喪失の非存在下において、ＡＭＤの早期ステージと判断される。ドルーゼンは、複数のタンパク質、修飾されたタンパク質、またはタンパク質付加体と共に、様々な脂質、多糖類、及びグリコサミノグリカンを含有する。ドルーゼン形成に対処し、それによってＡＭＤの進行性性質を管理する概して容認される治療方法はない。

【0178】

「眼の血管新生」（ＯＮＶ）は、脈絡膜血管新生もしくは網膜血管新生、または両方を指すように本明細書において使用される。

【0179】

「網膜血管新生」（ＲＮＶ）は、例えば網膜表面上の網膜血管の異常な発生、分裂増殖、及び／または増殖を指す。

【0180】

「網膜下血管新生」（ＳＲＮＶＭ）は、網膜の表面下の血管の異常な発生、分裂増殖、及び／または増殖を指す。

【0181】

「角膜」は、眼球線維膜の前部を形成する透明構造を指す。角膜は５層からなり、具体的には、１）前角膜上皮（結膜と一続き）；２）前境界板（Ｂｏｗｍａｎ層）；３）固有質または間質細胞層；４）後境界板（Ｄｅｓｃｅｍｅｔ膜）；及び５）前眼房の内皮または角膜内皮（ｋｅｒａｔｏｄｅｒｍａ）である。

【0182】

「網膜」は、硝子体を取り囲み、視神経と後方で一続きの、眼球の最内層を指す。網膜は、１）内境界膜；２）神経線維層；３）神経節細胞の層；４）内網状層；５）内顆粒層；６）外網状層；７）外顆粒層；８）外境界膜；９）杆状体・錐状体層を含む層から構成される。

【0183】

「網膜変性」は、網膜及び／または網膜色素上皮の任意の遺伝性変性または後天性変性を指す。非限定例としては、網膜色素変性症、Ｂｅｓｔ病、ＲＰＥパターンジストロフィー、及び加齢黄斑変性が挙げられる。

【0184】

様々な態様において、眼科的障害を治療する方法は、眼の網膜の様々な疾患または病態の治療を含み、当該疾患または病態としては、以下の：黄斑症／網膜変性：黄斑変性（非滲出性加齢黄斑変性及び滲出性加齢黄斑変性症等の加齢黄斑変性（ＡＲＭＤ）を包含する）；脈絡膜血管新生；網膜症（糖尿病性網膜症、急性黄斑神経網膜症及び慢性黄斑神経網膜症、中心性漿液性脈絡網膜症を包含する）；及び黄斑浮腫（類嚢胞黄斑浮腫及び糖尿病性黄斑浮腫を包含する）；ぶどう膜炎／網膜炎／脈絡膜炎：急性多発性斑状色素上皮症、Ｂｅｈｃｅｔ病、散弾状脈絡網膜症、感染性（梅毒、ライム病、結核、トキソプラズマ症）、ぶどう膜炎（中間部ぶどう膜炎（扁平部炎）及び前部ブドウ膜炎を包含する）、多巣性脈絡膜炎、多発性一過性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、眼サルコイドーシス、後部強膜炎、匍行性脈絡膜炎、網膜下線維症、ぶどう膜炎症候群、及びＶｏｇｔ－Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ症候群；血管疾患／滲出性疾患：網膜動脈閉塞性疾患、網膜中心静脈閉塞症、播種性血管内血液凝固症候群、網膜静脈分枝閉塞症、高血圧性変化、眼虚血症候群、網膜動脈微小動脈瘤、Ｃｏａｔｓ病、傍中心窩毛細血管拡張症、半側網膜静脈閉塞、乳頭血管炎、網膜中心動脈閉塞、網膜動脈分枝閉塞症、頚動脈疾患（ＣＡＤ）、樹氷状血管炎、鎌状赤血球網膜症及び他の異常血色素症、色素線条、家族性滲出性硝子体網膜症、Ｅａｌｅｓ病；外傷性／外科的疾患：交感性眼炎、ぶどう膜炎性網膜疾患、網膜剥離、外傷、レーザー、ＰＤＴ、光凝固術、外科手術の間の血流低下、放射線網膜症、骨髄移植網膜症；増殖性障害：増殖性硝子体網膜症及び網膜上膜、増殖性糖尿病性網膜症；感染性障害：眼ヒストプラスマ症、眼トキソカラ症、眼ヒストプラスマ症候群（ＯＨＳ）、眼内炎、トキソプラズマ症、ＨＩＶ感染症に付随する網膜疾患、ＨＩＶ感染症に付随する脈絡膜疾患、ＨＩＶ感染症に付随するぶどう膜炎疾患、ウイルス性網膜炎、急性網膜壊死、進行性網膜外層壊死、真菌性網膜疾患、眼梅毒、眼結核、広汎性片眼性亜急性視神経網膜炎、及び蠅蛆病；遺伝的障害：網膜色素変性症、網膜ジストロフィーに付随する全身性障害、先天性停止性夜盲、錐体ジストロフィー、Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病、黄色斑眼底、Ｂｅｓｔ病、網膜色素上皮のパターンジストロフィー、Ｘ連鎖性網膜分離症、Ｓｏｒｓｂｙ眼底ジストロフィー、良性中心性黄斑症、Ｂｉｅｔｔｉ結晶状ジストロフィー、弾性線維性仮性黄色腫；網膜裂傷／網膜裂孔：網膜剥離、黄斑円孔、巨大網膜裂孔；腫瘍：腫瘍に付随する網膜疾患、ＲＰＥの先天性肥大、後部ぶどう膜黒色腫、脈絡膜血管腫、脈絡膜骨腫、脈絡膜転移、網膜・網膜色素上皮過誤腫、網膜芽細胞腫、眼底の血管増殖性腫瘍、網膜星状膠細胞腫、眼内リンパ球系腫瘍；その他：点状脈絡膜内層症、急性後部多発性斑状色素上皮症、近視性網膜変性、急性網膜色素上皮炎、及び同種のものが、挙げられる。

【0185】

前眼部病態は、眼の前部（すなわち目の正面）の領域または部位（眼周囲の筋肉、眼瞼、または水晶体嚢の後壁もしくは毛様体筋より前部に位置する眼球の組織もしくは液体等）に影響または関与する疾患、病気、または病態である。したがって、前眼部病態は、主として結膜、角膜、前眼房、虹彩、後眼房（虹彩の後ろであるが水晶体嚢の後壁の前）、水晶体または水晶体嚢、ならびに前眼部領域または部位を血管形成または神経支配する血管及び神経に影響または関与する。

【0186】

したがって、前眼部病態としては、例えば無水晶体；偽水晶体；乱視；眼瞼痙攣；白内障；結膜疾患；結膜炎（アトピー性角結膜炎が挙げられるがこれに限定されない）；角膜傷害（角膜間質領域への傷害が挙げられるがこれに限定されない）；角膜疾患；角膜潰瘍；ドライアイ症候群；眼瞼疾患；涙器疾患；涙管閉塞；近視；老眼；瞳孔障害；屈折障害及び斜視等の疾患、病気、または病態が挙げられ得る。緑内障治療の臨床目標が、前眼房中の房水の高圧を低減させる（すなわち、眼内圧を低減させる）ことであり得るので、緑内障は前眼部病態であると判断され得る。

【0187】

本発明に従って治療され得る目の他の疾患または障害としては、眼瘢痕性類天疱瘡（ＯＣＰ）、Ｓｔｅｖｅｎｓ Ｊｏｈｎｓｏｎ症候群、及び白内障が挙げられるがこれらに限定されない。

【0188】

後眼部病態は、主として後眼部の領域または部位（脈絡膜または強膜（水晶体嚢の後壁を介する面に対して後方の位置の）、硝子体、硝子体眼房、網膜、視神経（すなわち視神経円板）、ならびに後眼部領域または部位を血管形成または神経支配する血管及び神経等）に影響または関与する疾患、病気、または病態である。したがって、後眼部病態としては、例えば急性黄斑神経網膜症；Ｂｅｈｃｅｔ病；脈絡膜血管新生；糖尿病性網膜症；ぶどう膜炎；眼ヒストプラスマ症；感染（真菌またはウイルスが原因の感染等）；黄斑変性（急性黄斑変性、非滲出性加齢黄斑変性、及び滲出性加齢黄斑変性症等）；浮腫（黄斑浮腫、類嚢胞黄斑浮腫、及び糖尿病性黄斑浮腫等）；多巣性脈絡膜炎；後眼部の部位または位置に影響する眼外傷；眼腫瘍；網膜障害（網膜中心静脈閉塞症、糖尿病性網膜症（増殖性糖尿病性網膜症を包含する）、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜動脈閉塞性疾患または網膜静脈閉塞性疾患、網膜剥離、ぶどう膜炎網膜疾患等）；交感性眼炎；Ｖｏｇｔ－Ｋｏｙａｎａｇｉ－Ｈａｒａｄａ（ＶＫＨ）症候群；ぶどう膜滲出；眼のレーザー治療によって引き起こされるか、またはそれによって影響を受ける、後眼部病態；光線力学療法、光凝固術、放射線網膜症、網膜上膜障害、網膜静脈分枝閉塞症、前部虚血性視神経症、非網膜症糖尿病性網膜機能不全、網膜色素変性症、及び緑内障によって引き起こされるか、またはそれらによって影響を受ける、後眼部病態等の疾患、病気、または病態が挙げられ得る。治療目標が、網膜神経節細胞または網膜神経線維への損傷またはそれらの喪失に起因する、視覚の喪失を防止することまたはその喪失の出現を低減させること（すなわち神経保護）であり得るので、緑内障は後眼部病態と判断され得る。

【0189】

いくつかの実施形態において、眼用障害は、例えば虹彩炎、結膜炎、季節性アレルギー性結膜炎、急性及び慢性の眼内炎、前部ブドウ膜炎、全身性疾患に付随するぶどう膜炎、後眼部ぶどう膜炎、脈絡網膜炎、扁平部炎、仮面症候群（眼リンパ腫を包含する）、類天疱瘡、強膜炎、角膜炎、重症の眼アレルギー、角膜剥離、及び血液房水関門破壊からもたらされる眼炎症である。さらに別の実施形態において、眼用障害は、例えばレーザー屈折矯正角膜切除術、白内障除去外科手術、眼内レンズ挿入術、硝子体切除術、角膜移植術、表層角膜切除術の形態（ＤＳＥＫ等）、及び放射状角膜切除術からもたらされる術後眼炎症である。

【0190】

様々な態様において、眼科的障害の治療のための注射は、目の硝子体眼房への注射であり得る。いくつかの事例において、注射は、硝子体内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、または脈絡膜上注射である。

【0191】

様々な態様において、眼科的障害の治療のための方法は、例えば注射を経由する、約０．０１ｍｇ～約２５ｍｇの治療剤；または約１ｍｇ～約１５ｍｇの治療剤の量を含有する開示される薬物送達デバイスの投与を含む。いくつかの実施形態において、薬物送達組成物は、約１０日～約１２か月の期間にわたって目の硝子体内で約１０ピコモル～約５００ピコモルの濃度を維持する薬物の量を放出し得る。薬物送達組成物中の治療物質の量は、１つまたは複数のカプセル中に存在することができる治療剤の量、そして所望される治療効果を達成するのに必要な量に依存するであろう。

【0192】

いくつかの実施形態において、開示される薬物送達は、１２か月までの期間にわたって封入された治療物質の生物活性を保護し得る。生物活性の保護のレベルは、使用される治療剤そして開示されるカプセルの選択された組成物の両方に依存するであろうが、ＨＰＬＣ（目中に存在する薬物の量及び形態の決定のために）、陽性対照（治療剤単独の使用等）に対する活性の細胞性アッセイ、そして他の治療物質の形態を特徴づけるかまたは生物学的活性（転写因子発現等）の変化を査定するＥＬＩＳＡのような方法によって定量化され得る。

【0193】

キット
本開示は、（ａ）本明細書において記載される薬物送達組成物；（ｂ）滅菌されたパッケージ中の本明細書において記載される薬物送達組成物；または（ｃ）本明細書において記載される薬物送達組成物を含む、前充填されたシリンジもしくは針のうちの１つ；及び臨床状態または病理を治療する本明細書において記載される薬物送達組成物を投与するための指示書を含むキットにも係わる。

【0194】

さらなる態様において、開示されるキットは毎日の投薬レジメンでパッケージングされ得る（例えばカード上にパッケージングされる、投薬カードと共にパッケージングされる、ブリスターまたはブローモールド成形されたプラスチック上にパッケージングされる等）。かかるパッケージングは製品を向上させ、ヘルスケア専門家による投与のための使用の容易性を増加させる。かかるパッケージングは、潜在的な医療過誤を低減させることもできる。本発明は、使用指示書をさらに含有するかかるキットも特色とする。

【0195】

さらなる態様において、本開示は、開示される薬物送達組成物を含む１つまたは複数のパッケージを含む医薬用パックまたはキットも提供する。かかるパッケージに付随するものは、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形態での通知であり得、当該通知は、ヒト投与のための製造、使用、または販売の官庁による承認を反映するものである。

【0196】

様々な態様において、開示されるキットは、他の構成要素と共パッケージング、共製剤化、及び／または共送達される、治療剤、化合物、及び／または製品もさらに含み得る。例えば、薬物製造業者、薬物再販業者、医師、調合工場、または薬剤師は、開示される薬物送達組成物、及び患者への送達のための別の構成要素を含むキットを提供することができる。

【0197】

開示されるキットは、開示される組成物を作製する開示される方法、開示される組成物を使用もしくは処理する開示される方法、及び／または開示される組成物と関連して使用され得ることが意図される。

【0198】

前述のことから、本明細書における態様が、上で説明されたすべての結末及び目的を達成するように、明白であり構造に固有である他の利点と一緒に、良好に適合されることが、理解されるだろう。

【0199】

特定のエレメント及びステップが互いに関連して検討されるが、本明細書において提供される任意のエレメント及び／またはステップは、他のエレメント及び／またはステップと組み合わせ可能であるとして、その同じ組み合わせ（それは依然として本明細書において提供される範囲内であるが）の明示的な供与に関係なく、企図されることが理解される。

【0200】

ある特定の特性及び部分的組み合わせが有益であり、他の特性及び部分的組み合わせに関係なく用いられ得ることが理解されるだろう。これは、特許請求の範囲によって企図され、その範囲内である。

【0201】

その範囲から逸脱せずに、多くの可能な態様が作製され得るので、添付の図面及び発明を実施するための形態中で説明または示される本明細書におけるすべての事項は、限定的ではなく例示的な意味として解釈されるべきであることが理解されよう。

【0202】

本明細書において使用される用語は、特定の態様を記載するためのみの目的であり、限定することは意図されないことも理解されるべきである。当業者は、本明細書において記載される態様の多くの変形及び適合を認識するだろう。これらの変形及び適合は、本開示の教示中に含まれ、本明細書の特許請求の範囲によって網羅されることが意図される。

【0203】

本開示の態様を記載してきており、以下の実施例は、概して本開示のいくつかの追加の態様を記載する。本開示の態様は、以下の実施例ならびに対応するテキスト及び図と関連して記載されるが、本開示の態様を、この記載に限定する意図はない。これとは反対に、本開示の趣旨及び範囲内に包含されるすべての代替物、修飾物、及び同等物をカバーすることが意図される。

【実施例】

【0204】

以下の実施例は、本明細書において請求される化合物、組成物、製品、デバイス、及び／または方法が、どのように作製及び評価されるかについて完全な開示及び記載を当業者に提供するように載せられ、本開示の純粋な例示あることが意図され、本発明者が自身の開示と見なす範囲を限定するようには意図されない。数値（例えば量、温度等）に関して正確性を確実にする取り組みがなされているが、ある程度の誤差及び偏差があるだろう。別段の指示のない限り、部分は重量部であり、温度は℃であるかまたは周囲温度であり、圧力は大気圧または大気圧の近傍である。

【0205】

材料
キトサン（ＤＤ＞７５％、Ｍｗ３１０，０００～３７５，０００Ｄａ）、ポリカプロラクトン（Ｍｎ８０，０００）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）ナトリウム塩、及びツイーン２０を、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｃ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノール（ＨＦＰ）をＯａｋｗｏｏｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．（Ｅｓｔｉｌｌ、ＳＣ）から購入した。ジクロロメタン（ＤＣＭ）、クロマトグラフィー精製ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及びＶＥＧＦ組み換えヒトタンパク質を、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．（Ｈａｍｐｔｏｎ（ＮＨ））から購入した。ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）を、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）から購入した。ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキット及び比色定量性３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾリウム（ＭＴＳ）アッセイ、ホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）結晶性断片（Ｆｃ）二次抗体、ならびに３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）から購入した。ヒト網膜色素上皮細胞株（ＡＲＰＥ－１９細胞、ＣＲＬ２３０２）及びＤＭＥＭ：Ｆ－１２培地を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から購入した。ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、培地２００ＰＲＦ及び低血清増殖サプリメント及びラクトースデヒドロゲナーゼ上昇ウイルス（ＬＤＥＶ）不含有増殖因子低減基底膜マトリックスを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．（Ｗａｌｔｈａ、ＭＡ）から購入した。すべての他の使用された試薬は分析グレードであった。

【0206】

カプセル製作
異なる内径（２６０μｍ及び１６４５μｍ）を備えた２つのサイズのカプセルを、この研究において製作した。１．６４５ｍｍサイズのカプセルを、より小さいカプセルのための予備的モデルとして主に供して、加工条件を最適化した。２６０μｍのサイズのカプセルを、後続する研究のために使用した。

【0207】

カプセル製作プロセスを図１Ａ中で示す。キトサン繊維層を、修飾した以前の研究に基づくエレクトロスピニングを経由して調製した（Ｇｕ，Ｂ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｎｉｃａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｎａｎｏｆｉｂｅｒ ｍａｔ ｗｉｔｈ ｅｎｌａｒｇｅｄ ｐｏｒｏｓｉｔｙ ｆｏｒ ｕｓｅ ａｓ ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ ｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１３．９７（１）：ｐ．６５－７３を参照）。簡潔には、７：３の体積比のＴＦＡ及びＤＣＭの混合物中で調製した５．０％（ｗ／ｖ）のキトサン溶液を、高電圧直流発電機の陰極に接続された２０ゲージのステンレス鋼の針を介して押出した。下地を５００ｒｐｍのスピードで回転ドラムコレクターに付着させ、そこにエレクトロスピンした繊維を沈着させた。２つの異なる内径を備えたカプセルを得るために、１．６４５ｍｍまたは２６０μｍのいずれかの直径の３１５ステンレス鋼ロッドを、繊維収集のために使用した。２５．０ｋＶの電圧で、１．６４５ｍｍのドラムコレクターについては３．０ｍＬ／時及び２６０μｍのドラムコレクターについては１．０ｍＬ／時のフィード率で、溶液を継続的に供給した。エレクトロスピニングの間の湿度を、窒素充填グローブボックスを使用して３０％に制御した。

【0208】

ＰＣＬナノ多孔性層を調製するために（Ｃｉｐｉｔｒｉａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｓｉｇｎ，ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣＬ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｓｃａｆｆｏｌｄｓ－ａ ｒｅｖｉｅｗ．２０１１．２１（２６）：ｐ．９４１９－９４５３；Ｃｈａｐａｒｒｏ，Ｆ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１９；Ｎａｍ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｖｉａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｖｅｒ ｐｕｒｅ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｍｏｄｕｌｕｓ ｉｎ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｎａｎｏｆｉｂｅｒｓ．２０１１．７（４）：ｐ．１５１６－１５２４；及びＣｈａｐａｒｒｏ，Ｆ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙ（ε－ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）－ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ）ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１９．０（０）：ｐ．４７７３１を参照）、ＰＣＬ及びＨＥＰＥＳナトリウム塩の０．５ｇの組み合わせを１０．０ｇのＨＦＰ中に溶解し、溶液を４０℃で一晩継続的に撹拌した。ＰＣＬ対ＨＥＰＥＳナトリウム塩の５つの質量比（１００：０；９９：１；９５：５；９２．５：７．５；９０：１０）を研究して、薬物放出に対するＰＣＬフィルムの塩誘導性多孔質構造の影響を査定した。１．６４５ｍｍのドラムコレクターについては３．０ｍＬ／時及び２６０μｍのドラムコレクターについては１．０ｍＬ／時間のフィード率で、シリンジポンプを使用して、ＰＣＬ溶液を継続的に供給した。高電圧直流発電機を２４．０ｋＶに設定して、未延伸キトサン層有りまたは無しで１．６４５ｍｍ及び２６０μｍの直径の３１５ステンレス鋼ロッド上に堆積するＰＣＬナノ繊維を産生して、それぞれ二層フィルム及び単層フィルムを形成した。

【0209】

エレクトロスピンしたカプセルを、表面の多孔性を除去するために、ＡｃｃｕＴｅｍｐのデジタル真空オーブンを使用して１００℃で３時間真空下で焼結し、次いでカプセルをロッドから穏やかに除去した（Ｃｈａｐａｒｒｏ，Ｆ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１９を参照）。サンプルを、ＴＦＡを中和するために飽和重炭酸ナトリウム溶液、次いでＨＥＰＥＳナトリウム塩を溶解及び除去するために脱イオン水により洗浄した。カプセルを一晩真空乾燥させた。１．６４５ｍｍのロッドを使用して調製した焼結前後のカプセルの外径を、デジタルマイクロメーター（Ｋｅｙｅｎｃｅ）を使用して測定した。フィルムの厚さを、［焼結したカプセルの外径－１．６４５ｍｍ］／２として計算した。光学顕微鏡（Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ）を使用して、２６０μｍの直径のロッドを使用して調製したカプセルの画像を取得した。画像をＭｏｔｉｃ Ｉｍａｇｅ Ｐｌｕｓによって分析して、カプセルの外径を決定した。フィルムの厚さを、［焼結したカプセルの外径－２６０μｍ］／２として計算した。

【0210】

カプセルの特徴評価
カプセルの形態的特徴を、走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）（ＦＥＩ、Ｑｕａｎｔａ ２００）によって調査した。キトサン繊維層、ＰＣＬ繊維層、ならびに塩類溶脱の前後の二層フィルム及び単層フィルムの横断面を、アルミニウムスタブマウント上に配置した炭素テープ上に付着させ、金－パラジウムの層をスパッタコーティングした。カプセルを液体窒素中に浸漬し断裂させ、画像化のための横断面を取得した。ＰＣＬ層及びキトサン層の平均繊維サイズ及び孔サイズを、ＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ）を使用して、３つのサンプルのＳＥＭ画像から特徴評価し定量した。

【0211】

エレクトロスピンしたサンプルの表面の化学的分析を、減衰全反射（ＡＴＲ）モードで、フーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）分光計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｎｅｘｕｓ ６７０）を使用して遂行した。ゲルマニウム結晶をサンプルと接触させて配置し、１００スキャンを８ｃｍ^－１分解能で収集した。１７２７ｃｍ^－１及び１５９０ｃｍ^－１での標準的なピーク位置を、それぞれＰＣＬ（カルボニルピーク）及びキトサン（アミンバンド）を同定するのに使用した（Ｅｌｚｅｉｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，ＦＴＩＲ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｃｈａｉｎ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ａｔ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｌｌｏｉｄ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４．２７３（２）：ｐ．３８１－３８７；及びＯｓｍａｎ，Ｚ．ａｎｄ Ａ．Ｋ．Ａｒｏｆ，ＦＴＩＲ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ａｃｅｔａｔｅ ｂａｓｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒ ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００３．４８（８）：ｐ．９９３－９９９を参照）。

【0212】

薬物放出プロファイル及び装填／カプセル化有効性
２つの開放末端を備えた中空性の二層カプセルを、ドラムコレクターの除去によって得た。１．６４５ｍｍの内径のカプセルについて、０．１ｍｇ／μＬの濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で溶解した２．０ｍｇのＢＳＡ粉末（モデルタンパク質）または２．０ｍｇの凍結乾燥ベバシズマブ粉末（Ａｖａｓｔｉｎ、抗ＶＥＧＦ）を、チューブシーラー（Ｄｏｕｇ Ｃａｒｅ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ、ＴＴＳ－８Ｃ）を使用して、末端でシールされたカプセルに装填した（Ｃｈａｐａｒｒｏ，Ｆ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１９；及びＢｅｒｎａｒｄｓ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ｔｈｉｎ ｆｉｌｍ ｐｏｌｙｍｅｒ ｄｅｖｉｃｅｓ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔａｎｔ－ｒａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１２．１２（１０）：ｐ．５３５５－５３６１を参照）。２６０μｍの内径のカプセルについて、カプセルの内部の限定的な体積を考慮して、１．０ｍｇ／μＬの濃度の濃縮された１．０ｍｇのＢＳＡまたは１．０ｍｇのベバシズマブのスラリーを、３１ゲージの針を使用して、カプセルの中へ装填した。

【0213】

以下のステップにおいて記載されるように、ＰＣＬ単層カプセル及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルからのインビトロのＢＳＡ放出プロファイルを取得した。カプセルを１．５ｍＬの低結合遠心チューブ中の１ｍＬのＰＢＳ中で浸漬して、溶出したタンパク質への遠心チューブの結合を低減させた。浸漬したカプセルを備えた遠心チューブを３７℃でインキュベーションして、生理的条件を模倣した。１時間、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３日、１週間、２週間、１か月、及びその後毎月で、溶出物を収集した（Ｓｏｕｓａ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ａ ｎｅｗ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｆｒｏｍ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．２０１７．７（１）：ｐ．３７３６；Ｙａｎｄｒａｐｕ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｐｏｒｏｕｓ Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｑｕｅｎｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１３．１０（１２）：ｐ．４６７６－４６８６；及びＴｙａｇｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｇｈｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ，ｉｎ ｓｉｔｕ ｆｏｒｍｉｎｇ ｇｅｌ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｕｐｒａｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１３．１０（８）：ｐ．２８５８－２８６７を参照）。次いで、新鮮な１．０ｍＬのＰＢＳを添加し、インキュベーション下で維持した。溶出したＢＳＡの吸収をＢＣＡアッセイによって決定すること及びＢＳＡタンパク質ベースの標準曲線を使用して濃度を定量することによって、ＢＳＡ放出プロファイルを取得した。ＰＣＬ単層カプセル及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルからのインビトロのベバシズマブ放出について、同じプロトコールをベバシズマブ溶出物の取得に適用した。ベバシズマブの特徴的な吸光度をＵＶ－可視光分光法（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｃａｒｙ １００ ＵＶ－Ｖｉｓ）によって２７７ｎｍで同定し、カプセルからのベバシズマブの放出率を２７７ｎｍでマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ）によって決定し、異なる濃度でのストックベバシズマブ溶液の標準曲線に基づいて定量した（Ｌｉ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．２０１２．６：ｐ．５４を参照）。実験を三重で行った。

【0214】

２６０μｍの内径のカプセルからの反応性ベバシズマブの放出率を決定するために、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を報告されるように遂行した（Ｔｙａｇｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｇｈｔ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ，ｉｎ ｓｉｔｕ ｆｏｒｍｉｎｇ ｇｅｌ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｕｐｒａｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１３．１０（８）：ｐ．２８５８－２８６７；及びＶａｒｓｈｏｃｈｉａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｌｂｕｍｉｎａｔｅｄ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｏｃｕｌａｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｔ Ａ，２０１５．１０３（１０）：ｐ．３１４８－３１５６を参照）。簡潔には、１００μＬの、ｐＨ９．６の炭酸ナトリウムバッファー溶液中の１μｇ／ｍＬのＶＥＧＦ組み換えヒトタンパク質を、９６ウェルＮｕｎｃ ｍａｘｉｓｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に４℃で一晩固定化した。プレートを、２００μＬの、ＰＢＳ／Ｔ（ｐＨ７．４のＰＢＳ中の０．０５％ｖ／ｖツイーン２０）中の２％のＢＳＡ溶液によって室温で２時間ブロックし、３００μＬのＰＢＳ／Ｔにより３回洗浄した。次いで、カプセルから溶出したベバシズマブを、０．１％のＢＳＡ－ＰＢＳ／Ｔの溶液中で０ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ（標準曲線によって決定した）の間で希釈し、１００μＬのサンプルを各々のウェルに添加し、さらに室温で２時間インキュベーションした。その後に、プレートをＰＢＳ／Ｔにより３回洗浄し、１００μＬのＨＲＰヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体ＰＢＳ／Ｔ溶液（１：１０００）を各々のウェルへ添加した。プレート全体を室温で１時間暗所でインキュベーションし、ＰＢＳ／Ｔにより５回洗浄した。１００μＬのＴＭＢの添加によって発色させ、１００μＬの１Ｎの硫酸によって停止した。各々の試験サンプル中の活性ベバシズマブの濃度を、４５０ｎｍでの吸光度を標準曲線と比較することによって決定した。

【0215】

薬物ペイロードを、異なるサイズの３つのＢＳＡ及びベバシズマブを装填した単層及び二層のカプセルのＰＢＳ中での破壊によって決定した。簡潔には、３つのＢＳＡ及びベバシズマブを装填した単層及び二層のカプセルを、１ｍＬのＰＢＳの溶液中で破壊及び浸漬した。ボルテックスミキサーを使用して、デバイスを１ｍＬのＰＢＳによって強く５回洗浄した。各々の洗浄は少なくとも１０分間かかった。ＢＳＡ及び反応性ベバシズマブの収集した溶出液を、ＢＣＡアッセイ、ＵＶ－可視光分光法、及びＥＬＩＳＡによって決定した。薬物カプセル化効率を、溶出液中の遊離薬物／全量の薬物＊１００％として計算した。薬物装填効率を、薬物ペイロード／カプセル重量＊１００％として計算した。累積放出％を、カプセルから溶出した薬物の累積量／［薬物ペイロード＊カプセル化効率］＊１００％として計算した。

【0216】

カプセルの生物分解
２６０μｍの内径のＰＣＬ単層カプセル及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルの長期的な期間にわたるインビトロの分解及び侵食を、形態変化によって決定した。簡潔には、生理的温度でＰＢＳ中で９か月及び３週間にわたってインキュベーションした２つのシールされた末端を備えたカプセル及び２つの開放末端を備えた二層カプセルを、それぞれ回収し、次いで特徴評価のために真空乾燥した。ＰＣＬ外側層、キトサン内側層、ならびに単層及び二層の両方のカプセルの横断面をＳＥＭを使用して調査した。大きな破壊及び裂目を査定し、ＨＥＰＥＳナトリウム塩の異なる比により調製したＰＣＬ層の平均孔サイズを、Ｉｍａｇｅ Ｊを使用して、３つの異なる画像を分析することによって定量し、０．０５の有意水準で事後Ｔｕｋｅｙ試験による一元配置分散分析によってインキュベーション前のカプセルの初期の孔サイズと比較した。データを平均±標準偏差として提示する。

【0217】

細胞毒性
ＰＣＬ単層カプセル及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルのインビトロの細胞毒性を、ヒト網膜色素上皮（ＡＲＰＥ－１９）細胞により遂行するＭＴＳアッセイによって査定した（Ｓｕｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｓｕｌｉｎｄａｃ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ＰＰＡＲ－α．２０１４．１１１（４７）：ｐ．１６７５４－１６７５９；Ａｎｄｒｅｓ－Ｇｕｅｒｒｅｒｏ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｅｓｔｅｒａｍｉｄｅ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２０１５．２１１：ｐ．１０５－１１７；及びＨｕｈｔａｌａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｏｃｕｌａｒ ｔｉｓｓｕｅｓ：ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８．１９（２）：ｐ．６４５－６４９を参照）。ＡＲＰＥ－１９細胞を、すべての実験について４×１０^４細胞／ウェルの密度で４８ウェルプレート中に播種した。細胞毒性アッセイを、直接的接触方法及び抽出物曝露方法の両方によって遂行した。直接的接触方法について、１ｃｍのＰＣＬ単層カプセルまたはＰＣＬ－キトサン二層カプセルを、細胞を播種したウェルプレート中に２４時間配置した。抽出物曝露方法について、ＰＣＬ単層カプセルまたはＰＣＬ－キトサン二層カプセルを、１日、３日、１週間、２週間、及び１か月間１ｍＬの新鮮培地中に浸漬した。各々のタイムポイントで、カプセル馴化培地をＡＲＰＥ－１９細胞培養へ移行させ、各々のサンプルを細胞と２４時間インキュベーションして、測定を遂行した。細胞毒性アッセイを遂行するために、細胞培養培地を２０μＬのＭＴＳ試薬と混合し、続いて３７℃で３時間インキュベーションした。上清の吸光度測定を、４９０ｎｍでマイクロプレートリーダーを使用して得た。実験群の細胞生存率を対照群（処理無し）に対して正規化した。すべての実験を三重で反復し、データを、０．０５の有意水準で事後Ｔｕｋｅｙ試験による一元配置分散分析によって分析した。データを平均±標準偏差として提示する。

【0218】

凝集及び抗血管形成活性の査定
ベバシズマブの安定性を、ＳＥＣ－１０００カラムを使用する超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）３０００システム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）によって決定した。凍結乾燥プロセスの間のベバシズマブ安定性を決定するために、５００μＬの２５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）を凍結乾燥装置（Ｌａｂｃｏｎｃｏ）によって冷凍乾燥し、粉末を５００μＬのＰＢＳ中で再希釈した。濃縮されたベバシズマブの不安定性も、デバイスからのベバシズマブスラリーを２５ｍｇ／ｍＬへＰＢＳ中で希釈することによって査定した。凍結乾燥の前後の遊離の元のベバシズマブ、濃縮されたベバシズマブ、ならびに特異的タイムポイントで単層及び二層のカプセルから溶出したベバシズマブを、注射前に０．２μｍのＷｈａｔｍａｎ ＳＰＡＲＴＡＮ ＨＰＬＣ Ｓｙｒｉｎｇｅ Ｆｉｌｔｅｒ（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ）を介して濾過した。元のベバシズマブモノマー、凝集体、及び断片の画分を、ＨＰＬＣスペクトラルデコンボリューションによって分析し、個別の溶出ピークへと分離した。モノマー、凝集体、及び断片の積分面積をＨＰＬＣピークの全面積へ正規化して、各々の構成要素のパーセンテージを得た。次いで平均分子量を各々の構成要素の画分％及び分子量から計算した。

【0219】

ＰＣＬ単層カプセル及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルから放出されたベバシズマブの抗血管形成活性を、毛細血管様細管形成アッセイを使用してさらに査定した（Ｅｌｓａｉｄ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＬＧＡ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ ｃｈｉｔｏｓａｎ－ｂａｓｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｃｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ．２０１６．１３（９）：ｐ．２９２３－２９４０；Ａｒｎａｏｕｔｏｖａ，Ｉ．ａｎｄ Ｈ．Ｋ．Ｊ．Ｎ．ｐ．Ｋｌｅｉｎｍａｎ，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｔｕｂｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｎ ｇｅｌｌｅｄ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｅｘｔｒａｃｔ．２０１０．５（４）：ｐ．６２８；及びＤｅＣｉｃｃｏ－Ｓｋｉｎｎｅｒ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｔｕｂｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１４（９１）を参照）。より具体的には、ＨＵＶＥＣを、ｉ）１０μｇ／ｍＬの元のベバシズマブ；ｉｉ）ＰＣＬ単層カプセルから放出された１０μｇ／ｍＬベバシズマブ；ならびにｉｉｉ）１週間、２週間、１か月、３か月、６か月、及び９か月でＰＣＬ－キトサン二層カプセルから放出された１０μｇ／ｍＬベバシズマブ、と混合した血管形成プロモーターのＶＥＧＦ（５ｎｇ／ｍＬ）へ、曝露した。６時間後に、カルセインＡＭを細胞へ添加し、続いて３０分間インキュベーションした。次いで細胞を、デジタルカメラ（Ｑｉｍａｇｉｎｇ）を装備した蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、Ｅｃｌｉｐｓｅ ＴＳ１００）を直接使用して可視化した。Ｉｍａｇｅ Ｊを使用して３つの画像を分析して、形成された毛細管構造の長さを定量した。実験群からの全管長を、各々のサンプルについてのＶＥＧＦ処理対照群に対して正規化し、すべての実験を３回反復した。データを、０．０５の有意水準で事後Ｔｕｋｅｙ試験による一元配置分散分析によって分析した。データを平均±標準偏差として提示する。

【0220】

注射実行可能性
地域の食肉処理場（Ｄｅｌａｗａｒｅ Ｍｅａｔｓ、Ｄｅｌａｗａｒｅ、Ｏｈｉｏ）から得た新鮮なブタの目を、デバイスの注射実行可能性の査定のために使用した（Ｈｏｓｈｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｖｉｖｏ ａｎｄ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ Ｕｓｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ－Ｂａｓｅｄ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｓｅａｌａｎｔ ｔｏ Ｃｌｏｓｅ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｂｒｅａｋｓ ｉｎ Ｐｏｒｃｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｂｂｉｔ Ｅｙｅｓ．２０１５．５６（８）：ｐ．４７０５－４７１１を参照）。カプセルを、１ｍＬのシリンジへ接続した２１ゲージの皮下注射針の中へ前装填した。この研究において使用した２１ゲージの針は、商業化された眼内レンズ注射器（Ｏｚｕｒｄｅｘアプリケーター）に類似する内径を有する（Ｌｅｅ，Ｓ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｄｒｕｇ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｙｅ．２０１０．２７（１０）：ｐ．２０４３－２０５３を参照）。眼内注射物を、注射器針を使用して輪部の３ｍｍ後方に配置した。小体積（１００μＬ）のＰＢＳを使用して、ブタの硝子体液の中へカプセルを押出し、眼内圧上昇の影響を低減させた。注射後に、針を除去し、強膜を目の真中の周囲で切断して、硝子体液中のカプセルの配置をチェックした。

【0221】

ＩＢＢカプセルのためのビルディングブロックとしてのキトサン及びＰＣＬのナノ繊維のエレクトロスピン
ＩＢＢカプセルを製作する開示される戦略は、ロッド形状の鋳型上のキトサン及びＰＣＬのフィルムの２ステップのコーティング、続いて鋳型からの除去に基づく。多孔質の中心部が中空の二層構造を生成するために、エレクトロスピニングを使用し、これにより、タンパク質の化学吸着のための高い表面積対体積比、及び薬物拡散のための調整可能な多孔性を提供して、所望される機能を得ることができる。ナノ繊維製作のための方法としてのエレクトロスピニングは、電気力を使用して、ナノサイズの繊維へ荷電したポリマー溶液を吸引することに基づく。キトサンナノ繊維を合成するために、加工パラメーター（湿度及び電圧を包含する）を最適化した。例えば、高湿度（３０％を超える）または低電圧（２４ｋＶ未満）のいずれかは、スピニングヘッドからの電荷の有意な喪失を引き起こし、キトサン溶液の糸が繊維を形成することを防止した。したがって、低い湿度及び比較的高い電圧を使用した。一方、ＴＦＡの添加がより良好にキトサンを溶解し、ＤＣＭが溶媒の蒸発を適時に可能にし、その両方がエレクトロスピニングのために要求されるので、キトサン前駆体をＴＦＡ及びＤＣＭ中に溶解した。鋼ロッド鋳型の上へキトサンナノ繊維を配置するために、キトサンナノ繊維を、回転下の鋼ロッド上に直接収集した。図２中で示すＳＥＭ画像から、キトサン繊維の直径は３３１．６１±１８６．１９ｎｍであり、これらの繊維は高度に相互接続し、高多孔質構造を形成して、効率的な薬物拡散を可能にした。しかしながら、キトサン繊維マットは脆弱なことが見出され、そのことは低い機械的柔軟性についての報告と一致する（Ｊａｙａｋｕｍａｒ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｈｉｔｉｎ ａｎｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｂａｓｅｄ ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ－Ａ ｓｈｏｒｔ ｒｅｖｉｅｗ．２０１０．８２（２）：ｐ．２２７－２３２を参照）。この目的に向けて、ＰＣＬの第２の層を添加し、それは薬物の物理的なトラップを提供しただけでなく、柔軟性の改善も付与した。より具体的には、キトサンナノ繊維の上に、９３２．５７±３９９．４２ｎｍの直径を備えたＰＣＬナノ繊維をコーティングした（Ｂａｋｅｒ，Ｓ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙ－ε－ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ（ＰＣＬ）ｎａｎｏｆｉｂｅｒｓ ｕｓｉｎｇ ＡＦＭ ａｎｄ ａ ｎｏｖｅｌ ｆｉｂｅｒ ａｎｃｈｏｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．２０１６．５９：ｐ．２０３－２１２を参照）。この目的に向けて、高い表面積、高い機械的柔軟性、及び異なる層の間の強い接着を有する、ナノ繊維ベースの円筒を、ＩＢＢカプセルのためのビルディングブロックとして構築した。

【0222】

注射可能な二層マイクロカプセルの合成及び特徴評価
ビルディングブロックとして２つのナノ繊維層を利用して、図３中で示されるようにエレクトロスピニング後に鋼ロッド鋳型を直接除去することによって、中空性カプセル構造を形成した。二層ＰＣＬ－キトサンナノ繊維構造は、タンパク質治療物質との有意な物理的な及び静電的な相互作用を提供することができるが、タンパク質のサイズに比較してナノ繊維の連続多孔質構造のサイズが有意に大きいことを考慮すると、バースト放出はまだ起こり得る（Ｃｈａｐａｒｒｏ，Ｆ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１９を参照）。焼結を使用してＰＣＬナノ繊維層を溶融して、多孔性を低減させ、薬物のバースト放出を低減させた。その一方で、最初のナノ繊維構造でスタートせずに、ＰＣＬ層を直接コーティングすることは、注射可能な小さいカプセルの作製のために重要である、キトサンの上に薄い層構造を達成することを困難にした。二層構造の焼結ベースの形成のメカニズムは、２２０℃でのキトサンナノ繊維に比較して、６０℃でのＰＣＬの比較的低い融点に基づいていた。したがって、ＰＣＬが物理的に薬物を保持するプロセスの間にほとんど非多孔質になったが、キトサンは薬物を静電的に結合するために多孔質のままであった。加えて、このプロセスはまた、溶融プロセスの間に２つの層を良好に統合した。図３中で示すＳＥＭ画像から、ＰＣＬナノ繊維の溶融が２つの層の間の接着を増加するので、キトサン繊維層はＰＣＬ外側層へ接着し、それは二層構造を安定化した。しかしながら、大きな繊維から構成されるフレームワークは、焼結後にＰＣＬの表面上でまだ観察することができる。焼結プロセスの間に、フィルムの厚さは圧縮及び密度の増加に起因して８０％減少し、そのため、エレクトロスピニングプロセスの間にキトサン及びＰＣＬの繊維層の厚さを調節することによって、カプセルサイズを制御することができる。

【0223】

キトサン及びＰＣＬの繊維フィルムを焼結させた後に、中空構造を備えた二層マイクロカプセルを、鋳型戦略によって、及びＰＣＬ外側層の機械的堅牢性の利用によって、生成した。鋳型ロッドの形状及びサイズの制御によって、カプセルのサイズ及び構造を有効に制御することができるだろう。概念の証明として、単層ＰＣＬカプセル及び二層キトサン－ＰＣＬカプセルの２つのサイズ：スキャフォールドとして移植することができる１．６４５ｍｍ（前モデル）のより大きな内径を備えたもの、及び２１ゲージの針を介して注射可能な２６０μｍ（最終的なモデル）のより小さい内径を備えたものを調製した。鋼ロッドが鋳型である中空構造は、主として薬物装填のために高い体積を可能にしたが、二層膜は物理的なトラッピング及び化学的非共有結合形成を提供して、長い間持続可能な放出を達成した。

【0224】

薬物放出研究のために使用されたデバイスにおいて、１．６４５ｍｍの内径のカプセルの外径はおよそ１．８１５ｍｍであり、壁の厚さは８９．３６±１１．５２μｍであった。同様に、２６０μｍの内径のカプセルの外径はおよそ４３０μｍであり、膜の厚さは８９．８５±４．２７μｍであり、２１ゲージの針を経由して注射可能であるようにデザインした。カプセルの厚さの増加は、カプセルの機械的特質を促進し、それは注射の間の断裂を防止した。しかしながら、カプセルのサイズの増加は、硝子体内注射を妨げる可能性がある。したがって、８０～９０μｍが、機械的堅牢性そして注射実行可能性のバランスがとれた壁の厚さとして決定された。また、膜の厚さは薬物の拡散率に密接に関連し、そのため、単層カプセルと二層カプセルとの間の厚みの差を制御し最小限にして、薬物放出に対する厚さの影響を低減させた。

【0225】

二層膜のナノ多孔性構造の調節
焼結後に、ＰＣＬ層は非多孔質になり、薬物放出速度は有意に限定された（Ｃｈａｐａｒｒｏ，Ｆ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１９を参照）。しかしながら、焼結無しでは、二層カプセルは高度に多孔質であり、所望されない高い薬物放出速度をもたらすだろう。それゆえ、塩類溶脱方法を用いて二層膜の３次元の多孔質構造を正確に調節して、薬物の長期的な持続可能な放出を可能にした。より具体的には、変動量の水溶性塩（ＨＥＰＥＳ）を、エレクトロスピニングの間にナノ繊維の中へ混合した。薬物装填前の水中でカプセルのインキュベーションは、フィルムの内部のＨＥＰＥＳの溶出を導き、それによって、二層膜上に再び多孔質構造を形成した。ＰＣＬナノ繊維中のＨＥＰＥＳの濃度の調節によって、多孔性を有効に制御することができるだろう。図４中で示されるように、ＰＣＬ焼結フィルム中の孔サイズ及び分布は、塩対ＰＣＬの質量比に大きく依存した。例えば、孔は、より低い塩濃度では、より小さく、フィルムの表面の全体にわたってより分散する傾向があった。しかしながら、低い量の塩は、大きな分子の拡散及び放出のための相互接続する孔の生成も妨害した。表１は、ＰＣＬ対ＨＥＰＥＳナトリウム塩の異なる比についての分析的孔サイズの結果を示す。この目的に向けて、相互接続する多孔質構造がＳＥＭを介して横断面で観察されたので、５．０％を超える塩濃度により調製したＰＣＬフィルムをカプセル製造及び薬物放出研究において使用した。

【0226】

塩類溶脱の前後の二層構造中の変化を査定するために、ＳＥＭ画像化を、二層カプセルの内側表面、外側表面、及び横断面を観察するのに使用した。塩類溶脱前に、ＰＣＬ焼結フィルムは、その中で埋め込まれた若干のＨＥＰＥＳナトリウム塩の結晶により荒かった。塩類溶脱後に、多孔質構造がＰＣＬ層中で現われ、キトサン層はその繊維構造を失い、多孔性層を形成した。キトサン層の平均孔サイズは８０２．４７±５０１．０２ｎｍであり、当該サイズは、静電的相互作用を介するタンパク質との相互作用を最大化することによって、持続可能な放出のためのタンパク質の３次元拡散及び当該タンパク質との相互作用を可能にした。内側キトサン層は、２５μｍの厚さを備えたよりナノ多孔性である構造を示し、それはキトサンの比較的高い融点に起因し得る。これとは対照的に、外側ＰＣＬ層は、通過するナノチャンネルを備え６５μｍの全厚さのより緻密な構造を有して、薬物を物理的にトラップする一方でタンパク質拡散を支持した。これらの結果は、ＰＣＬ及びキトサンの個別の層上に収集された形態と一致する。

【0227】

焼結及び洗浄後に二層カプセルの化学的特質をさらに確認するために、図５中で示される最終的なカプセルで、ＦＴＩＲ分光法を遂行した。示されたスペクトルにおいて、１７２７ｃｍ^－１の有意なピークがＰＣＬ中のカルボニル基へ割り当てられた。２９６３ｃｍ^－１及び２９９５ｃｍ^－１でのピークは、ＰＣＬの骨格中のＣ－Ｈ伸縮であった。キトサンの骨格中に豊富なヒドロキシル基からのＯ－Ｈ伸縮振動に起因する３４７８ｃｍ^－１での幅広い群を観察することができるだろう。さらに、１５７１のｃｍ^－１でのキトサンについての特徴的なピークが、Ｎ－Ｈ伸張へ割り当てられた。かかるピークは、焼結への曝露後でさえ、キトサン層及びＰＣＬ層の化学的特質の強固な証拠を提供する。したがって、陽イオン性キトサンは活性があるままであり、陰イオン性タンパク質（ベバシズマブ）を化学的に非共有結合することが可能である。ＳＥＭ及びＦＴＩＲにより、広く調整可能な孔サイズ、アスペクト比、寸法を有し、薬物装填及びタンパク質治療物質の制御放出に最適な物理的及び化学的な特質を提供し得る、ハイブリッドナノ微細構造カプセルの合成のための開示されるボトムアップアプローチの実行可能性が、証明された。

【0228】

ベバシズマブの高ペイロード及び長期的な持続可能な薬物放出
カプセルの中空構造によって可能にされたタンパク薬の高ペイロードを確認するために、薬物を装填したカプセルの破壊ならびにカプセルから漏出するＢＳＡ及びベバシズマブの量のそれぞれの査定によって、薬物カプセル化有効性を決定した。ＢＳＡをモデルタンパク薬として使用し、ベバシズマブはＡＭＤの治療のための臨床的に使用される抗ＶＥＧＦ治療物質である。ＢＳＡ及びベバシズマブが二層カプセルのキトサン層へ吸着し得ることを考慮して、単層カプセル及び二層カプセルの両方を、薬物ペイロードの査定に使用した。薬物ペイロードにおける有意差は、両方のカプセルの間で見出されなかった。当該研究に基づいて、３つの大カプセル及び３つの小カプセルのＢＳＡカプセル化有効性は、それぞれ１００．３９±６．４６％及び６９．６４±７．１５％であった。より低いカプセル化有効性が、大カプセル及び小カプセルの両方のベバシズマブの装填において観察され、それは、図１２中で示されるように、ＵＶ－可視光分光法（２８０ｎｍの周囲の特徴的な吸収を有するタンパク質の濃度を決定する、一般的に使用される機器）によって、５２．６６±６．４７％と査定された。しかしながら、より高い量の反応性ベバシズマブ（７２９．０２±８４．６７μｇ）がＥＬＩＳＡによって定量され、それはおよそ７０％のベバシズマブカプセル化有効性を与えた。より低いカプセル化効率は、より低い濃度のベバシズマブに対してＵＶ－可視光分光法の感度が減少すること及び累積放出がＥＬＩＳＡによって有効に検出できることに起因し得るだろう。カプセルの装填能力はおよそ２６．６０±１．９０％ｗ／ｗであり、それは、１０～１５％の装填能力の大部分の報告されたデバイスよりも高い（Ｌｉ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．２０１２．６：ｐ．５４；及びＢａｄｉｅｅ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｃｕｌａｒ ｉｍｐｌａｎｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ‐ｌｏａｄｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｔ Ａ，２０１８．１０６（８）：ｐ．２２６１－２２７１を参照）。

【0229】

モデル薬物ＢＳＡを使用して、図６中で示されるように、カプセルの表面形態及び多孔性の変更によって薬物放出プロファイルを調節するための例示的なカプセルの能力を示した。概念の証明として、１．６４５ｍｍ及び２６０μｍの内径を備えた一層及び二層のカプセルを調製し、５％、７．５％、及び１０％の塩の塩類溶脱条件により調製したサンプルも調査した。図６は、両方のサイズのための単層及び二層カプセルのＢＳＡ放出プロファイルを示す。予想されるように、バースト放出が最初の１か月中に１．６４５ｍｍの内径ＰＣＬ単層カプセル中で起こり、装填したＢＳＡの７５％超がカプセルから溶出し、それは薬物放出の継続期間を有意に限定した。表面面積対体積の比の増加に起因して、バースト放出の期間は、２６０μｍの内径のカプセルにおいて２週間に短縮し、累積放出パーセンテージは、この期間の間で１．６４５ｍｍの内径のカプセルのものに類似する。それゆえ、小さいカプセルの薬物拡散率が向上した。しかしながら、両方のカプセルサイズにおいて、安定した放出に続いてバースト放出があった。単層カプセルの最大の薬物放出期間は、１０％の塩により調製した、１．６４５ｍｍの内径のカプセルについておよそ５か月及び２６０μｍの内径のカプセルについて３か月であった。ＨＥＰＥＳナトリウム塩の効果も調査した。より高い塩濃度は、孔の相互接続性の増加に起因して、より迅速な放出速度をもたらした。より低い塩濃度によるカプセルにおいて、バースト放出は遅れたが、まだ制御不可能であった。

【0230】

これとは対照的に、ＰＣＬキトサン二層カプセルは、バースト放出の明白なエビデンスを示さなかった。二層カプセルは有意にＢＳＡ放出を遅らせた。二層カプセルの放出プロファイルは、高い直線性を示し、それは図７中に要約される。１か月後に、１．６４５ｍｍの内径の二層カプセルは、装填したＢＳＡのうちのおよそ１５％を放出し、それは同じ期間における単層ＰＣＬカプセルに比較して６０％低い放出であり、デバイスの内部のＢＳＡを保持するより高い能力を示した。同様に、２６０μｍの内径の二層カプセルは、バースト放出を有意に低減させた。ＢＳＡのうちの２５％のみが、２６０μｍの内径の二層カプセルから溶出し、それは、拡散のための比較的より大きな面積対体積に起因して、１．６４５ｍｍのカプセルよりも高かった。キトサン層は薬物拡散の限定に有効であり、ＰＣＬシェルの多孔性はＢＳＡ放出の制御において重大な役割を果たさなかった。単層カプセルと二層カプセルの直径との間に有意差は無く（ｐ＞０．０５）、そのため、薬物放出に対する厚さの効果はこれらの研究においてごくわずかであった。理論的には、二層構造は、累積放出データに基づいて、両方のサイズのカプセルについて少なくとも１年にわたって薬物放出を制御する能力を有する。

【0231】

二層カプセルの多孔質構造が包括的に調査され最適化された後に、ベバシズマブ（臨床的ＡＭＤ治療のための標的薬物）の装填及び放出のために、二層構造を備えたカプセルを使用し、１０％のＨＥＰＥＳにより溶脱した。ＢＳＡ薬物放出実験と一致して、明白な初期バースト放出無しの１年９か月にわたる持続可能な放出プロファイルが、１．６４５ｍｍのカプセル及び２６０μｍのカプセルの両方において成功裡にそれぞれ達成された。興味深いことには、二層カプセルベースの薬物放出の間に、ＢＳＡに比較して、ベバシズマブのバースト放出のさらなる低減があった。これは、ＢＳＡに比較して、ベバシズマブの分子量の増加及びより低い有効電荷に起因し得る。この条件では、孔サイズがベバシズマブの拡散率を支配する。より高い分子量のベバシズマブが、限定的な多孔質のチャンネルを備えたカプセルから溶出することは難しいだろう。これは、なぜ５％のＨＥＰＥＳ塩により調製された単層カプセル及び二層カプセルの両方の全放出が類似する放出速度論を有するのかを説明する。また、膜の内側により大きな孔を備えた他の２つのカプセルに比較して、５％のＨＥＰＥＳ塩によって調製したカプセルは、最も低い放出速度を有する。図７中で示されるように、ベバシズマブを装填した２６０μｍの内径の二層カプセルにより、バースト放出後にほぼゼロ次放出速度論が達成されたことは注目に値する（Ｐ＜０．０５）。

【0232】

単純なＵＶ吸収を使用してベバシズマブの量を査定及び定量化したが、それは、反応性ベバシズマブを特定すること、及び破壊されたポリマーのバックグラウンドとカプセルを経時的に区別することができなかった。したがって、２６０μｍのカプセルから溶出したベバシズマブを、ＥＬＩＳＡによって再度決定した。図１３は、ベバシズマブを放出する一般的傾向が、ＵＶ－可視光によって決定した以前の結果と一致したことを示す。例えば、５％のＨＥＰＥＳ塩によって作製された単層カプセルからのベバシズマブの長期的な累積放出は、ＵＶ－可視光によっておよそ１６０μｇと査定され、これは９か月にわたってＥＬＩＳＡによって特徴評価したものと同じであった。したがって、ＵＶ－可視光及びＥＬＩＳＡからの放出結果の比較によって、ＵＶ－可視光によって取得した放出プロファイルは信頼でき、それは単層及び二層のカプセルからのベバシズマブ放出の一般的傾向を提供することができた。同様に、５％の塩により調製したカプセルは、７．５％及び１０％の塩によるものに比較して、９か月にわたって、比較的より遅い放出速度を有していた。これらの考慮に基づいて、次いでより高い（７．５％及び１０％）ＨＥＰＥＳ塩濃度による二層カプセルを同定し、抗ＶＥＧＦの長期的な放出のために使用した。それと同時に、高い薬物装填能力及び９か月の期間にわたる安定的な薬物放出プロファイルは、抗ＶＥＧＦ治療物質の送達のための多用性のあるプラットフォームとしての例示的な二層カプセルの可能性を強く示す。

【0233】

カプセルの生物分解
ＰＣＬ単層カプセル及びキトサン－ＰＣＬ二層カプセルのインビトロの分解を研究した。２つの閉鎖末端を備えたカプセルを３７℃で９か月にわたってＰＢＳ中で配置して、カプセルを回収し、ＳＥＭによって特徴評価した。全体のデバイスの機械的完全性は、エステル結合での加水分解をゆっくり受けるＰＣＬ層によって主に決定される（Ｄａｒｗｉｓ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ ｐｏｌｙ（ε－ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，１９９８．６２（２）：ｐ．２５９－２６５を参照）。したがって、ＰＣＬ層の侵食及び分解を経時的に査定することは重要である。図１１中に示される特徴的なＳＥＭ画像から、単層カプセル及び二層カプセルの両方は９か月のインキュベーション後にインタクトなままであった。しかしながら、最初のカプセルに比較して、９か月後に、ＰＣＬ膜の表面上の孔はより大きくより分散するようになり、それはＰＣＬ膜の遅い分解を示した。表２は、ＨＥＰＥＳ塩の異なる条件でのカプセルの分析的孔サイズを要約する。ＰＣＬ表面上の孔は、平均で直径およそ１８０ｎｍだけ有意に増加した（ｐ≦０．０５）が、全体のデバイスは、明白な割れ及び破壊無しに完全性を維持した。二層カプセルも特徴評価した。９か月後に、キトサン層はＰＣＬ層上にまだ緊密に接着し、繊維はまだ輪郭が明確でインタクトであった。キトサン表面層の繊維フレームワークは、有意な変化無しにまだ明らかであった。さらに、単層カプセル及び二層カプセルの両方の膜の厚さは、８０μｍ～９０μｍの範囲中であり、それはインキュベーション前のその元の厚さに類似する。しかしながら、図１５中で示されるように、３週間にわたって生理的温度でＰＢＳ中で２つの開放末端を備えたカプセルを浸漬する場合に、有意な厚さの減少及びキトサン繊維の喪失が観察された。これはおそらく、長期で水へ直接露出される場合のキトサンの遅い分解によって引き起こされる（Ｋｅａｎ，Ｔ．ａｎｄ Ｍ．Ｔｈａｎｏｕ，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０１０．６２（１）：ｐ．３－１１；及びＯｎｉｓｈｉ，Ｈ．ａｎｄ Ｙ．Ｍａｃｈｉｄａ，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｔｅｒ－ｓｏｌｕｂｌｅ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，１９９９．２０（２）：ｐ．１７５－１８２を参照）。さらに、キトサンの弱い機械的特質に起因して、内側キトサン繊維膜は水中で長期的なインキュベーションの間の剪断力下で脆弱になり、キトサンの有意な喪失をもたらし得る（Ｓａｎｇｓａｎｏｈ，Ｐ．ａｎｄ Ｐ．Ｊ．Ｂ．Ｓｕｐａｐｈｏｌ，Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｎａｎｏｆｉｂｒｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｉｎ ｎｅｕｔｒａｌ ｏｒ ｗｅａｋ ｂａｓｉｃ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．２００６．７（１０）：ｐ．２７１０－２７１４；及びＣｈｅｎ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｃｈｉｔｏｓａｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｓｉｎｇｌｅ ｆｉｂｅｒｓ ａｎｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｃ，２００９．２９（８）：ｐ．２４２８－２４３５を参照）。したがって、疎水性ＰＣＬ層は分解から内側キトサン層を保護し、デバイス全体の劣化をさらに低減させることが可能である。

【0234】

細胞毒性
任意の薬物送達デバイスについての最も重要な特質のうちの１つは、短期及び長期の両方で、標的の細胞または組織の存在下における許容される生体適合性である。この目的に向けて、例示的な二層カプセルの細胞毒性を網膜色素上皮（ＡＲＰＥ－１９）細胞を使用して調査したが、その理由は、それらは網膜における最も優勢な細胞であり、直接的接触方法及び抽出物曝露方法の両方で、毒性材料及び外来性材料に高度に敏感であるからである。標準的なミトコンドリア活性測定アッセイの使用によって、単層及び二層のカプセルの処理有り及び無しで、ＲＰＥ細胞の細胞生存率を測定した。図８中で示される結果から、ＰＣＬ単層カプセル及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルの両方は、２４時間の直接的なインキュベーションの間に、ＲＰＥ細胞へごくわずかな毒性を示した。ＰＣＬ及びキトサンの両方は、眼内適用において良好な生体適合性であることが報告された（Ｋｉｍ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｃａｍｅｒａｌ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ ｇｌａｕｃｏｍａ ｄｅｖｉｃｅｓ ｔｈａｔ ｄｅｌｉｖｅｒ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉ－ｇｌａｕｃｏｍａ ａｇｅｎｔ．２０１８．２６９：ｐ．４５－５１；及びＷａｓｓｍｅｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｔｉｎａ．Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｉａ，２０１３．９（８）：ｐ．７８５５－７８６４を参照）。同様に、両方のカプセルの抽出物も、図８中で示されるように、１か月にわたって細胞生存率に影響を及ぼさなかった。１か月の間のタイムポイントでさえ、二層カプセルについて９５％を上回る生存率が見出された。これらの結果はまとめると、網膜色素上皮細胞へ無視できる細胞毒性を示し、今後の研究における眼用モデルの前臨床的評価のための二層カプセルの可能性を示唆する。

【0235】

放出されたＶＥＧＦ阻害物質の安定性及び抗血管形成に対する治療効果
長期的な持続的タンパク質送達系の開発を妨げる１つの主な問題点は、水性環境中のタンパク質の凝集及び分解である。ベバシズマブは生理的条件下で不安定であり、身体中で経時的に分解及び凝集する傾向がある（Ｃｏｕｒｔｏｉｓ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍＡｂｓ ａｇａｉｎｓｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ．ｍＡｂｓ，２０１６．８（１）：ｐ．９９－１１２；Ｏｌｉｖａ，Ａ．，Ｍ．Ｌｌａｂｒｅｓ，ａｎｄ Ｊ．Ｂ．Ｆａｒｉｎａ，Ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ａ ｌｉｇｈｔ－ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ａ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｄｉｃｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，２０１４．１３５３：ｐ．８９－９８；Ｌａｔｙｐｏｖ，Ｒ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ ａｎｄ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ＩｇＧ１ ａｎｄ ＩｇＧ２ Ｆｃ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２．２８７（２）：ｐ．１３８１－１３９６；及びＢａｋｒｉ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｘ－ｍｏｎｔｈ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（Ａｖａｓｔｉｎ）ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｆｔｅｒ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｉｎｔｏ ａ ｓｙｒｉｎｇｅ ａｎｄ ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ ｏｒ ｆｒｅｅｚｉｎｇ．Ｒｅｔｉｎａ，２００６．２６（５）：ｐ．５１９－５２２を参照）。さらに、デバイスに、冷凍乾燥から取得した高濃縮ベバシズマブを装填する。凝集及び活性の喪失が、高濃度でまたは凍結乾燥プロセスの間に起こり得る（Ｖａｒｓｈｏｃｈｉａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｂｕｍｉｎ ｏｎ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｒｅｔｉｎａｌ ａｎｄ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３．５０（３）：ｐ．３４１－３５２を参照）。ベバシズマブ凝集体が、モノマーと同じ速度で植込みから放出されない可能性があるので、このことは重要になる。したがって、ベバシズマブ安定性研究は、デバイス製作及び経時的なデバイスインキュベーションの間のベバシズマブの凝集及び断片化をＨＰＬＣを使用して査定するために要求された。ベバシズマブの分析的凝集及び断片化を表３中で要約し、ＨＰＬＣスペクトルを図１４中で示す。凍結乾燥の間のベバシズマブの安定性を確認するために、凍結乾燥ベバシズマブのＨＰＬＣスペクトルを、市販のベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）のものと比較した。１６％の凝集体が遊離の元のベバシズマブ中で形成され、ベバシズマブ凝集体のわずかな増加が凍結乾燥サイクルの間に観察された。また、濃溶液中の凝集を、ＰＢＳ中で希釈し、続いて直ちにＨＰＬＣ特徴評価を行うことによって査定した。しかしながら、ベバシズマブ凝集体の変化は観察されず、このことはタンパク質が濃溶液中でかなり安定的であると示し、例示的なデバイスがベバシズマブモノマーの放出を遅らせ得ることをさらに証明した。単層カプセル及び二層カプセルから長期に放出されたベバシズマブの効力も査定した。凝集体のパーセンテージは、３か月にわたって両方のカプセルについて１１％～１６％の間の範囲であり、ベバシズマブが長期的なインキュベーションの間に断片化を受けたことも見出された。しかしながら、ベバシズマブの効力は、表３中で示されるこの期間にわたって高レベルで依然として維持された。２６０μｍの内径のＰＣＬ単層カプセルから溶出したベバシズマブのモノマーは、１か月で８４％を占め、この数値は３か月で７９％へわずかに減少した。同様に、２６０μｍの内径のキトサン－ＰＣＬ二層カプセルから放出されたベバシズマブモノマーは、最初の３か月にわたって８２％であった。この促進された安定性は、糖タンパク質へイオン結合することによるキトサンへの接着、及びその生体利用能の増加に起因し得る。また、疎水性ＰＣＬ層は、カプセルを横切る液体交換を低減させることによって断片化のプロセスを遅らせた。それゆえ、長期に放出されたベバシズマブの効力は良好に維持され、頻繁な注射無しにＡＭＤの治療のための例示的なカプセルの高い可能性を示唆する。

【0236】

ＨＰＬＣは例示的なカプセルによって送達されたベバシズマブモノマー及び凝集についての明瞭な情報を提供するが、ＥＬＩＳＡは、長期に放出されたＶＥＧＦへ反応性のベバシズマブの効力及び量を特徴づけて、血管形成に対するその効果を保証する。したがって、ベバシズマブＥＬＩＳＡを遂行して、２６０μｍの内径のカプセルから経時的に放出された反応性ベバシズマブを決定した。１か月後に、活性のあるベバシズマブの放出速度は１か月あたり約２０μｇ／ｍＬで維持され、それはＵＶ－可視光によって決定されたベバシズマブの量に類似する。さらに、溶出したベバシズマブの生物活性パーセンテージも、ＥＬＩＳＡによって測定された累積放出パーセンテージをＵＶ／可視光によって決定されたものへ比較することから、計算した。この結果から、単層カプセルから放出されたベバシズマブは、９か月の期間の間に９０％を超える生物活性を維持することができ、それはタンパク質の保護における可能性を示す。生物活性の揺らぎは二層カプセルにおいて観察され、それは８０％の付近で維持された。前述のようなインキュベーションの長期的な期間にわたる内側層の遅い生物分解によるＵＶ－可視光吸光度効果のバックグラウンドの増加が、より低い生体活性パーセンテージを引き起こし得る。しかしながら、両方の結果は、単層カプセル及び二層カプセルによって保護されたタンパク質の高い生物活性を強く支持する。この点に関して、薬物を物理的に保護する例示的な中空性二層カプセルは、継続放出に対するこの障害を克服する可能性を有する。

【0237】

また、単層ＰＣＬ及びＰＣＬ－キトサン二層カプセルから溶出したベバシズマブを、図９中で示されるように、ＨＵＶＥＣを使用する管形成アッセイにおいて、ＶＥＧＦ誘導性細管増殖に対する阻害効果について査定した。１０μｇ／ｍＬの濃度で、陽性対照の元のベバシズマブは、９３．１５±１．４９％の細管の長さ阻害をもたらした。１か月後の単層カプセル及び二層カプセルから溶出したベバシズマブは、２６０μｍの内径のカプセル及び１．６４５ｍｍの内径のカプセルでそれぞれおよそ１３．３３±６．５１％及び１２．３３±４．６３％の管形成を導き、それは、元のベバシズマブの従来の注射に比較してより有効であった。管の長さ形成におけるわずかな増加が、生理的温度での長期的なインキュベーションによって引き起こされた生物活性の喪失に起因して、３か月後に現われた。しかしながら、二層カプセルから溶出したベバシズマブ及び単層カプセルから溶出したベバシズマブの抗血管形成誘導特質における有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。遅い薬物拡散が酵素によるベバシズマブ分解のプロセスを遅延させ、そのことがカプセルの内部のタンパク質を有意に保護したことが予想される。全体として、抗血管形成生物活性は、９か月にわたって高レベルで良好に維持され、長期的な薬物放出に向けたカプセルの保護的効果の可能性が示唆される。

【0238】

注射実行可能性
高い薬物装填能力、タンパク質治療物質の持続可能な放出、及び抗ＶＥＧＦの生物活性の維持に加えて、これらのカプセルは、注射可能にすることもできる。このことを実証するために、図１０中で示されるように、２１ゲージの針を経由してエクスビボのブタの硝子体液の中へ１０ｍｍの長さのカプセルを強膜を介して送達することによって、注射実行可能性試験を遂行した。４３０μｍの外径を備えたカプセルをこの研究において使用したが、その理由は、それらが、４６０μｍの直径及び６ｍｍの長さで商業化された眼内レンズ（Ｏｚｕｒｄｅｘ）に類似するサイズだからである。Ｏｚｕｒｄｅｘアプリケーターは、２２ゲージのＴＳＫ針を装備する（Ｃｈａｎ，Ａ．，Ｌ．－Ｓ．Ｌｅｕｎｇ，ａｎｄ Ｍ．Ｓ．Ｂｌｕｍｅｎｋｒａｎｚ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ ａｐｐｒａｉｓａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｍｐｌａｎｔ（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｂｒａｎｃｈ ｒｅｔｉｎａｌ ｖｅｉｎ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｏｒ ｃｅｎｔｒａｌ ｒｅｔｉｎａｌ ｖｅｉｎ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（Ａｕｃｋｌａｎｄ，ＮＺ），２０１１．５：ｐ．１０４３；Ａｒｃｉｎｕｅ，Ｃ．Ａ．，Ｏ．Ｍ．Ｃｅｒｏｎ，ａｎｄ Ｃ．Ｓ．Ｆｏｓｔｅｒ，Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ（Ｒｅｔｉｓｅｒｔ）ａｎｄ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（Ｏｚｕｒｄｅｘ）ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｍｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｕｖｅｉｔｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｏｃｕｌａｒ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１３．２９（５）：ｐ．５０１－５０７；及びＱｕｅｒｑｕｅｓ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｐｅａｔｅｄ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｉｍｐｌａｎｔ（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））ｆｏｒ ｒｅｔｉｎａｌ ｖｅｉｎ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃａ，２０１３．２２９（１）：ｐ．２１－２５を参照）。針の内径はおよそ５００μｍであり、それは例示的なカプセルをフィッティングさせることができた（Ｍｅｙｅｒ，Ｃ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒｃｅ，ｇｅｏｍｅｔｒｙ，ａｎｄ ｃｕｔｔｉｎｇ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ａｎｄ ｏｌｄ Ｏｚｕｒｄｅｘ ｎｅｅｄｌｅ：ｔｈｅ ＭＯＮＯ ｓｔｕｄｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１４．３０（５）：ｐ．３８７－３９１を参照）。より具体的には臨床適用において、典型的には抗ＶＥＧＦ装填カプセルを、類似のアプリケーターによって硝子体内に送達することができ、それは侵襲性切開手術を回避することができる。したがって、例示的な二層カプセルに基づく進歩した薬物送達系は、現在使用される臨床的アプローチとかなり互換性があるだろう。

【0239】

この研究において、滲出型ＡＭＤ治療のための長期療法の重要な難問に対処するために、ポリマーベースの微細構造送達プラットフォームはインビトロで抗ＶＥＧＦの持続可能な放出を達成するようにデザインされ開発された。持続可能なタンパク質放出は、複合材化学及び工学的方法の使用によりキトサン－ＰＣＬ二層マイクロカプセルの構造をデザイン及び最適化することによって達成された。これらのキトサン－ＰＣＬマイクロカプセルの重要な特性としては、サイズ、ＰＣＬシェルの多孔性、及び単純で手際のいい薬物装填のための中空構造が挙げられる。

【0240】

ＰＣＬ－キトサンマイクロカプセルは、エレクトロスピニング、焼結、及び塩類溶脱の新規組み合わせによって合成された。予備的研究において、キトサン繊維が塩類溶脱後にそれらの構造を失ったことが示された。繊維調製の間のトリフルオロ酢酸塩の形成が、溶媒としてＴＦＡ及びＤＣＭを使用している間のキトサンの溶出のプロセスを加速したと考えられ、そのため、重炭酸ナトリウム溶液による中和の必要なステップが、ベバシズマブの生物活性に対する酸性塩の効果を低減させるために洗浄の間に要求された（Ｓａｎｇｓａｎｏｈ，Ｐ．ａｎｄ Ｐ．Ｊ．Ｂ．Ｓｕｐａｐｈｏｌ，Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｕｎ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｎａｎｏｆｉｂｒｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｉｎ ｎｅｕｔｒａｌ ｏｒ ｗｅａｋ ｂａｓｉｃ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．２００６．７（１０）：ｐ．２７１０－２７１４を参照）。

【0241】

膜の厚さは、薬物放出期間に相関した。理論的には、より厚い膜は薬物のより遅い拡散をもたらした。たとえ、カプセルのサイズを増加させることがより遅い薬物放出を達成することを支援する可能性があったとしても、マイクロカプセルのサイズを増加させると、小さいゲージの針を介する注射ができなくなるだろう。したがって、カプセルを臨床適用のために注射可能にするために、より薄い膜が要求された。キトサン層は、この問題に対処するために添加された。この研究において、すべてのカプセルは８０～９５μｍの間の厚さを有し、それは、薬物放出速度とキトサン－ＰＣＬ複合物との間の関係性の探索において、厚さの影響を最小限にした。

【0242】

薬物放出を制御するためにこれらの重要な因子を最適化した後に、マイクロカプセルのパフォーマンスを、抗ＶＥＧＦの持続可能な放出について評価及び最適化した。ベバシズマブは、２００４年以来滲出型ＡＭＤの治療において臨床的に使用されている（Ｍｉｃｈｅｌｓ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（Ａｖａｓｔｉｎ）ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｔｗｅｌｖｅ－ｗｅｅｋ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａｎ ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ．２００５．１１２（６）：ｐ．１０３５－１０４７．ｅ９を参照）。理論的には、ベバシズマブの等電点（ｐＩ）は７．８である（Ｎｏｍｏｔｏ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ａｆｔｅｒ ｔｏｐｉｃａｌ，ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ，ａｎｄ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ．２００９．５０（１０）：ｐ．４８０７－４８１３を参照）。ｐＩから計算されたその正味電荷は、多数の研究によって報告されたようにｐＨ７．４でわずかに正であるはずである。しかしながら、水、及びデバイス製造の間に典型的に使用される他の有機溶媒中のタンパク質凝集体は、生物活性を低減させ、所望されない副作用を引き起こす可能性を有する（Ｖａｒｓｈｏｃｈｉａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｌｂｕｍｉｎａｔｅｄ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｏｃｕｌａｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｔ Ａ，２０１５．１０３（１０）：ｐ．３１４８－３１５６；Ｃｏｕｒｔｏｉｓ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍＡｂｓ ａｇａｉｎｓｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ．ｍＡｂｓ，２０１６．８（１）：ｐ．９９－１１２；及びＶａｒｓｈｏｃｈｉａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｂｕｍｉｎ ｏｎ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｒｅｔｉｎａｌ ａｎｄ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３．５０（３）：ｐ．３４１－３５２を参照）。したがって、ＰＢＳは、安定性及び生物活性を維持するためにベバシズマブの懸濁に広く使用される。ベバシズマブがｐＨ７．４のＰＢＳ中で正味で負に荷電することが報告され、それはキトサンへの結合を示唆し、例示的なカプセルからより持続可能な放出を提供し得る（Ｌｉ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒｇｅｓ ｏｆ ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｚｏｎｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．２０１１．５５（３）：ｐ．６０３－６０７；及びＧａｒｃｉａ－Ｑｕｉｎｔａｎｉｌｌａ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ａｇｅ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１９．１１（８）：ｐ．３６５を参照）。ベバシズマブへのＰＢＳ中のバッファーイオンの結合はその親水性を増加させ、それはその安定性をさらに増加させ、タンパク質の理論上正味電荷と実験的正味電荷との間の差を引き起こす（Ｌｉ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒｇｅｓ ｏｆ ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｚｏｎｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．２０１１．５５（３）：ｐ．６０３－６０７；及びＣｈｏｐｒａ，Ｐ．，Ｊ．Ｈａｏ，ａｎｄ Ｓ．Ｋ．Ｊ．Ｉ．ｊ．ｏ．ｐ．Ｌｉ，Ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ ｃｈａｒｇｅｄ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｃｒｏｓｓ ｈｕｍａｎ ｓｃｌｅｒａ．２０１０．３８８（１－２）：ｐ．１０７－１１３を参照）。したがって、ベバシズマブは硝子体及びカプセル中で負電荷を有し、それゆえ、正に荷電したキトサンによって静電引力を経由してこのタンパク質を保持できるという仮説を立てられる。同様に、ＢＳＡは４．７付近の等電点を備えた、水中で負に荷電したタンパク質である。ＢＳＡは陽イオン性イオンへ結合し、生理的条件下で（ＰＢＳ中で）その表面電荷を上昇させることができた。しかしながら、以前に報告されたように、これらのイオンがＢＳＡの電荷に対してあまり効果がないので、ＢＳＡはＰＢＳ中でなお負に荷電したままである（Ｌｉ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒｇｅｓ ｏｆ ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｚｏｎｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．２０１１．５５（３）：ｐ．６０３－６０７；及びａｌｉｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ Ｚｅｒｏ Ｃｈａｒｇｅ／Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ＢＳＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ，２０１１．２７（１８）：ｐ．１１５９７－１１６０４を参照）。ベバシズマブまたはＢＳＡとキトサンとの間の組み合わせた静電的相互作用及びＰＣＬシェルからの保護的効果を提供することによって、所望される持続性薬物放出プロファイルを達成することができるだろう。

【0243】

この研究において、ベバシズマブの類似のペイロードについての放出速度も有意に改善された。報告されたデバイスの平均ペイロードは５００μｇ～１０００μｇの範囲であった（Ｌｉ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．２０１２．６：ｐ．５４；及びＶａｒｓｈｏｃｈｉａｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｌｂｕｍｉｎａｔｅｄ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｏｃｕｌａｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｔ Ａ，２０１５．１０３（１０）：ｐ．３１４８－３１５６を参照）。しかしながら、これらのデバイスには、注射可能でないことや３か月にわたって放出を持続しないことを包含する限定があった。これらのデバイスの薬物装填能力は予想通りではなかった。また、抗ＶＥＧＦの生物活性は、溶媒または高温との治療物質の相互作用に起因して、これらのデバイス中で製作プロセスの間に影響を受ける可能性がある。しかしながら、デバイスを製作した後に薬物装填を加工し、それは従来の調製方法（エマルション等）を使用して一般に起こる薬物喪失及び非活性化を回避した。したがって、本明細書においてデザインされたカプセルは、注射可能なカプセル中の狭い空間及びベバシズマブの高分子量に起因して、７００μｇのベバシズマブの薬物ペイロードを保証した。鋳型ロッドを選択的に増加させて、内側空間を拡大させ、薬物装填を促進することができる。また、医薬用において、顕微鏡下でベバシズマブの乾燥粉末を正確に置き換えて、装填することができ、薬物装填効率及びベバシズマブ安定性をさらに促進することができるだろう。加えて、モデル薬物ＢＳＡに匹敵するより低い分子量による他の治療物質は、例示的なデバイスを使用して評価され、薬物ペイロードを有意にさらに増加させる可能性があるだろう（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｐ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｐｔｉｃａｌ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ａｆｔｅｒ ａｎ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））ｆｏｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．２００５．３６（４）：ｐ．３３１－３３５を参照）。

【0244】

二層カプセルは、タンパク質治療物質とポリマーとの間の静電的相互作用の利用によって薬物放出速度を効率的に制御することができ、滲出型ＡＭＤの臨床治療に付随する現在の問題の多くに取り組むことができる。それは、タンパク質治療物質による長期的な治療を要求するいくつかの疾患（結腸直腸癌及び乳癌、そしていくつかの脳腫瘍等）についての代替の方法も提供する。しかしながら、デバイス製造方法は、異なるタンパク質治療物質の要求について最適化されることがまだ必要であり、眼、がん、及び他の生物医学的適用についての大きな可能性があるだろう。

【0245】

結論として、ポリマーベースの送達プラットフォームが抗ＶＥＧＦの制御放出のために開発され、それは、キトサンと抗ＶＥＧＦとの間の静電結合を、ＰＣＬの保護的疎水性層と相乗的に組み合わせる二層微細構造に基づいて、治療物質の制御放出のためのポリマータンパク質相互作用を調節する有効な手段を提供する。二層構造が詳細に特徴づけられ、タンパク質送達のためのカプセル性能がさらに決定された。最も重要なことには、例示的なデザインされた送達プラットフォームは、最も最近のデバイスに比較して、抗ＶＥＧＦのインビトロの長期的な放出を有意に改善し、ＡＭＤを治療する可能性を支持する。今後の研究において、インビボのＡＭＤモデルで抗ＶＥＧＦ装填デバイスの治療効果を評価及び再度最適化することが要求される。

【0246】

本開示の範囲または趣旨から逸脱せずに、本開示において様々な修飾及び変動が行われ得ることが、当業者に明らかであろう。本開示の他の実施形態は、本明細書の考慮及び本明細書において開示される本開示の実践から、当業者に明らかであろう。本明細書及び実施例は単に例示的なものとして考慮され、本開示の真の範囲及び趣旨は以下の特許請求の範囲によって示されることが意図される。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図6-1】

【図6-2】

【図7-1】

【図7-2】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【国際調査報告】