特表 2022-520220 組換えワクシニアウイルスおよびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-29

(54)【発明の名称】組換えワクシニアウイルスおよびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 7/01 20060101AFI20220322BHJP

   A61K 35/768 20150101ALI20220322BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220322BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220322BHJP

   A61K 31/522 20060101ALI20220322BHJP

   C12N 15/54 20060101ALN20220322BHJP

   C12N 15/39 20060101ALN20220322BHJP

   C12N 9/12 20060101ALN20220322BHJP

   C07D 473/18 20060101ALN20220322BHJP

【ＦＩ】

C12N7/01

A61K35/768

A61P35/00

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K9/08

A61K31/522

C12N15/54

C12N15/39

C12N9/12

C07D473/18

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021546834

(86)(22)【出願日】2020-02-10

(85)【翻訳文提出日】2021-09-29

(86)【国際出願番号】 IB2020051025

(87)【国際公開番号】W WO2020165730

(87)【国際公開日】2020-08-20

(31)【優先権主張番号】62/805,794

(32)【優先日】2019-02-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/885,487

(32)【優先日】2019-08-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521353687

【氏名又は名称】イグナイト イミュノセラピー インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】デヴィッド エイチ． キルン

(72)【発明者】

【氏名】リリアナ マルリ アヴィダル

(72)【発明者】

【氏名】プラジット リムシリチャイ

【テーマコード（参考）】

4B050

4B065

4C076

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B050CC04

4B050DD01

4B050LL01

4B065AA93X

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BD15

4B065CA29

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4C076AA11

4C076BB11

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4C076CC27

4C076FF11

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4C084AA19

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4C087NA05

4C087NA06

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZC75

(57)【要約】

本開示は、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス、ワクシニアウイルスを含む組成物、および腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導するためのワクシニアウイルスまたは組成物の使用を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

異種チミジンキナーゼ（ＴＫ）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、異種ＴＫポリペプチドは、デオキシグアノシンのリン酸化を触媒しうる、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項2】

チミジンキナーゼ発現または機能の欠如をもたらす改変を含む、請求項１に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項3】

異種ＴＫポリペプチドが、変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドである、請求項１または請求項２に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項4】

変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、野生型ＨＳＶ ＴＫに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１の野生型ＨＳＶ ＴＫアミノ酸配列のアミノ酸番号表記に準拠して、Ｌ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、およびＬ１６９の１つまたは複数の置換を含む、請求項３に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項5】

変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、Ａ１６８Ｈ置換を含む、請求項４に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項6】

変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、Ｌ１５９Ｉ置換、Ｉ１６０Ｌ置換、Ｆ１６１Ａ置換、Ａ１６８Ｙ置換、およびＬ１６９Ｆ置換を含む、請求項４に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項7】

変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、Ｌ１５９Ｉ置換、Ｉ１６０Ｆ置換、Ｆ１６１Ｌ置換、Ａ１６８Ｆ置換、およびＬ１６９Ｍ置換を含む、請求項４に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項8】

変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、配列番号２、３、または４のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項9】

コペンハーゲン株ワクシニアウイルスである、請求項１から８のいずれか一項に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項10】

ＷＲ株ワクシニアウイルスである、請求項１から８のいずれか一項に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項11】

ワクシニアウイルス遺伝子の全部または一部分の欠失を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項12】

細胞外エンベロープウイルスの生成を強化する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項13】

Ｋ１５１Ｅ置換を含むＡ３４ポリペプチドをコードするＡ３４Ｒ遺伝子を含む、請求項１２に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項14】

免疫調節性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項15】

ａ）請求項１から１４のいずれか一項に記載のワクシニアウイルスと、
ｂ）薬学的に許容できる賦形剤と
を含む組成物。

【請求項16】

腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導する方法であって、個体に、請求項１から１４のいずれか一項に記載のワクシニアウイルスまたは請求項１５に記載の組成物を有効量投与するステップを含む方法。

【請求項17】

前記投与するステップが、単一用量のウイルスまたは組成物の投与を含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

単一用量が、少なくとも１０^６プラーク形成単位（ｐｆｕ）のワクシニアウイルスを含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

単一用量が、１０^９～１０^１２ｐｆｕのワクシニアウイルスを含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項20】

前記投与するステップが、複数回用量のワクシニアウイルスまたは組成物の投与を含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項21】

ワクシニアウイルスまたは組成物が、１日おきに投与される、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ワクシニアウイルスまたは組成物が、週１回投与される、請求項１６から２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

ワクシニアウイルスまたは組成物が、１週間おきに投与される、請求項１６から２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

腫瘍が、脳腫瘍、頭頸部がんの腫瘍、食道がんの腫瘍、皮膚がんの腫瘍、肺がんの腫瘍、胸腺がんの腫瘍、胃がんの腫瘍、結腸がんの腫瘍、肝臓がんの腫瘍、卵巣がんの腫瘍、子宮がんの腫瘍、膀胱がんの腫瘍、精巣がんの腫瘍、直腸がんの腫瘍、乳がんの腫瘍、または膵臓がんの腫瘍である、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

腫瘍が結腸直腸腺癌である、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

腫瘍が非小細胞肺癌である、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

腫瘍がトリプルネガティブ乳がんである、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

腫瘍が固形腫瘍である、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

腫瘍が液状腫瘍である、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

腫瘍が再発性である、請求項１６から２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

腫瘍が原発腫瘍である、請求項１６から２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

腫瘍が転移性である、請求項１６から２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

個体に第２のがん療法を施すステップをさらに含む、請求項１６から３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

第２のがん療法が、化学療法、生物学的療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管新生療法、寒冷療法、毒素療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、細胞療法、および手術から選択される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

第２のがん療法が、抗ＰＤ１薬または抗ＰＤ－Ｌ１薬を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項36】

個体が免疫不全である、請求項１６から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が腫瘍内である、請求項１６から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が腫瘍周囲である、請求項１６から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が静脈内である、請求項１６から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が、動脈内、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内である、請求項１６から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

ワクシニアウイルスと組み合わせて、ワクシニアウイルスの有害な副作用を低減するのに有効である量のガンシクロビルを個体に投与するステップを含む、請求項１６から４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

副作用が皮膚病変である、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

配列番号２、３、または４のアミノ酸配列を含む変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項44】

配列番号２、３、または４のアミノ酸配列を含む変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、コペンハーゲン株ワクシニアウイルスであり、Ｋ１５１Ｅ置換を含むＡ３４Ｒ遺伝子を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項45】

配列番号１１、１２、または１３を含む変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドヌクレオチド配列を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【請求項46】

（ｉ）請求項４３～４５のいずれか一項に記載のワクシニアウイルスと、（ｉｉ）薬学的に許容できる担体とを含む組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

テキストファイルとして提供する配列表の参照による組込み
配列表は、２０２０年１月２４日に作成され、サイズが２１ＫＢであるテキストファイル「ＰＣ４０３１７＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」として本文書と共に提出する。テキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

序文
腫瘍溶解性ウイルス（ＯＶ）は、がん細胞において選択的に複製するウイルスである。生の複製ＯＶが、様々なヒトがんにおいて、臨床試験で試験されている。ＯＶは、腫瘍細胞を直接溶解させるだけでなく、抗腫瘍免疫応答を引き起こしうる。一般的なＯＶには、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス（Ａｄ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、コクサッキーウイルス（ＣＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、およびワクシニアウイルス（ＶＶ）の弱毒化株が含まれる。

【0003】

ワクシニアウイルスは、宿主細胞の細胞質において複製する。広大なワクシニアウイルスゲノムは、ウイルスＤＮＡ複製に使用される種々の酵素およびタンパク質をコードする。ワクシニアは、複製の際、その外膜が異なるいくつかの感染性形態、すなわち、細胞内成熟ビリオン（ＩＭＶ）、細胞内エンベロープビリオン（ＩＥＶ）、細胞結合性エンベロープビリオン（ＣＥＶ）、および細胞外エンベロープビリオン（ＥＥＶ）を生じる。ＩＭＶは、最も豊富な感染性形態であり、宿主間の伝播の一因になると考えられ、ＣＥＶは、細胞から細胞への伝播において役割を果たすと考えられ、ＥＥＶは、宿主生物内での長距離播種にとって重要であると考えられる。

【0004】

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本開示では、異種チミジンキナーゼポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス、および複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを含む組成物が提供される。本開示では、腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導する方法であって、個体に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスまたは本開示の組成物を有効量投与するステップを含む方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0007】

【図1】野生型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）（ＨＳＶ－ＴＫ）（配列番号１）およびＨＳＶ－ＴＫ変異体（配列番号２、３、４）のアミノ酸配列の配列比較を示す図である。

【図2】ＨＳＶ－ＴＫのアミノ酸１５１～１７５（配列番号５）およびＨＳＶ－ＴＫ変異体の対応する領域（配列番号６、７、８）の配列比較を示す図である。

【図3】ＨＳＶ－ＴＫが、ガンシクロビルに対するワクシニアウイルスの感受性に与える影響を、ウイルス複製の観点から示すグラフである。

【図4A】代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響を示すグラフである。

【図4B】代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響を示すグラフである。

【図4C】代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響を示すグラフである。

【図4D】代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響を示すグラフである。

【図4E】代表的な正常一次ヒト細胞および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響を示すグラフである。

【図4F】代表的な正常一次ヒト細胞および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響を示すグラフである。

【図5A】ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒトがん細胞を死滅させるワクシニアウイルスの能力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響を示すグラフである。

【図5B】ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒトがん細胞を死滅させるワクシニアウイルスの能力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響を示すグラフである。

【図5C】ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒトがん細胞を死滅させるワクシニアウイルスの能力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響を示すグラフである。

【図6A】ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒト正常一次細胞を死滅させるワクシニアウイルスの能力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響を示すグラフである。

【図6B】ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒト正常一次細胞を死滅させるワクシニアウイルスの能力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響を示すグラフである。

【図7A】肺患者由来異種移植（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関する図である。

【図7B】肺患者由来異種移植（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するグラフである。

【図7C】肺患者由来異種移植（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するグラフである。

【図8A】結腸直腸ＰＤＸ腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関する図である。

【図8B】結腸直腸ＰＤＸ腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するグラフである。

【図8C】結腸直腸ＰＤＸ腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するグラフである。

【図9A】本開示の腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスで処置したマウスにおける病変に対する局所ガンシクロビル投与の効果を示す像である。

【図9B】本開示の腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスで処置したマウスにおける病変に対する局所ガンシクロビル投与の効果を示すグラフである。

【図9C】本開示の腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスで処置したマウスにおける病変に対する局所ガンシクロビル投与の効果を示すグラフである。

【図10A】本開示の腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製に対する全身ガンシクロビル投与のｉｎ ｖｉｖｏでの効果を示すグラフである。

【図10B】本開示の腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製に対する全身ガンシクロビル投与のｉｎ ｖｉｖｏでの効果を示す像である。

【図11A】肺患者由来異種移植（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関する図である。

【図11B】肺患者由来異種移植（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するグラフである。

【図12A】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関する図である。

【図12B】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するグラフである。

【図13A】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでのリアルタイム分布および複製を検出するための放射標識ＴＫ基質の使用に関する像である。

【図13B】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでのリアルタイム分布および複製を検出するための放射標識ＴＫ基質の使用に関する像である。

【図13C】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでのリアルタイム分布および複製を検出するための放射標識ＴＫ基質の使用に関するグラフである。

【図13D】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでのリアルタイム分布および複製を検出するための放射標識ＴＫ基質の使用に関するグラフである。

【図13E】結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでのリアルタイム分布および複製を検出するための放射標識ＴＫ基質の使用に関するグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0008】

定義
本明細書で使用するとき、「腫瘍溶解性」ワクシニアウイルスとは、正常（非がん性）細胞に比べてがん細胞に優先的に感染し、がん細胞を死滅させるワクシニアウイルスである。

【0009】

本明細書で使用する「異種」とは、それぞれ、所与の生物の未変性核酸またはタンパク質中に見出されないヌクレオチドまたはポリペプチド配列を意味する。たとえば、本開示の組換えワクシニアウイルスという文脈で、「異種」チミジンキナーゼ（ＴＫ）（ここで、異種ＴＫは、変異体（ＴＫｖ）ポリペプチドである）をコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、ワクシニアウイルスには本来見出されない核酸であり、すなわち、コードされているＴＫｖポリペプチドは、自然に存在するワクシニアウイルスによってコードされない。

【0010】

本明細書において区別なく使用される用語「ポリヌクレオチド」および「核酸」とは、いずれかの長さであり、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかである、重合体の形のヌクレオチドを指す。したがって、この用語は、限定はしないが、一本鎖、二本鎖、もしくは多重鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリンおよびピリミジン塩基、もしくは他の天然、化学もしくは生化学修飾、非天然、もしくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含む重合体を包含する。

【0011】

本明細書で使用するとき、用語「処置」、「処置する」などとは、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防するという点で、予防的な場合もあり、かつ／または疾患および／もしくは疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な治癒という観点から、治療的である場合もある。本明細書で使用する「処置」は、哺乳動物、たとえばヒトにおける疾患のいずれの処置も範囲に含み、（ａ）疾患の素因がありうるが疾患を有するとまだ診断されていない対象において疾患が生じるのを予防すること、（ｂ）疾患を抑制する、すなわち、その進展を阻止すること、および（ｃ）疾患を軽減する、すなわち、疾患を後退させることを包含する。

【0012】

本明細書において区別なく使用される用語「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」とは、限定はしないが、ネズミ（たとえば、ラット、マウス）、ウサギ目動物（たとえば、ウサギ）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄類（たとえば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）などを始めとする哺乳動物を指す。

【0013】

「治療有効量」または「有効量」とは、疾患を処置するために哺乳動物または他の対象に投与されたとき、疾患のそのような処置を実現するのに十分である、薬剤（たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス）の量、または２種の薬剤（たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスと第２の治療薬）を合わせた量を指す。「治療有効量」は、薬剤、疾患およびその重症度、ならびに処置を受ける対象の年齢、体重などに応じて様々となる。

【0014】

本発明についてさらに述べる前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されず、そのため、当然様々となりうることが理解される。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、文書で使用する術語は、特定の実施形態について述べる目的のものにすぎない。

【0015】

値の範囲が示されている場合では、その範囲の上限と下限の間にある、文脈からそうでないことが明らかに規定されない限り１０分の１の単位の下限までの各介在値、およびその明示された範囲における他のいずれかの明示または介在値が、本開示内に包含されると理解される。こうしたより小さい範囲の上限および下限は、独立に、より小さい範囲に含まれる場合もあり、明示された範囲に詳細に除外される境界があることを仮定して、本発明の範囲内に包含される。明示された範囲が境界の一方または両方を含む場合では、含まれるそうした境界のいずれかまたは両方を除外する範囲も、本発明に含まれる。

【0016】

別段定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の技術者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。本発明を実施または試験する際は、本明細書に記載するものと同様または同等ないずれの方法および材料を使用してもよいが、好ましい方法および材料についてここで述べる。本明細書で言及するすべての公表文献は、参照により本明細書に組み込まれて、公表文献の引用と関係のある方法および／または材料が開示および記載される。

【0017】

本明細書および添付の特許請求の範囲において使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明らかに規定されない限り、複数の指示対象を包含することを指摘しなければならない。したがって、たとえば、「ワクシニアウイルス」への言及は、複数のそうしたワクシニアウイルスを包含し、「変異体チミジンキナーゼポリペプチド」への言及は、１種または複数の変異体チミジンキナーゼポリペプチドおよび当業者に知られているその均等物への言及を包含する、などである。請求項は、取捨選択できるいずれかの要素が除外されるように起草される場合があることもさらに指摘される。そのため、この言明は、請求項要素の列挙と併せた「のみ」、「だけ」などの排他的用語法の使用、または「否定的」限定の使用について、先行根拠（ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ ｂａｓｉｓ）となるものとする。

【0018】

明確にするために、別個の実施形態という状況で記載されている、本発明のある特定の特色は、単一の実施形態として組み合わせて提供されてもよいと認識される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態という状況で記載されている、本発明の種々の特色は、別々に、または適切ないずれかの下位組合せとして提供されてもよい。本発明に関係する実施形態の組合せはすべて、本発明に明確に包含され、ありとあらゆる組合せが個々にかつ明示的に開示されたかの如く、本明細書において開示される。加えて、種々の実施形態およびその要素の下位組合せもすべて、本発明に明確に包含され、ありとあらゆるそうした下位組合せが個々にかつ明示的に本明細書で開示されたかの如く、本明細書において開示される。

【0019】

本明細書で開示する公表文献は、本出願の出願日より前のその開示についてのみ提供される。本明細書には、本発明が、先行発明のせいで、そうした公表文献に先行する権利を与えられないことを容認すると解釈されるものは何もない。さらに、示した公表の日付は、実際の公表日と異なる場合があり、個々に確認する必要があることもある。

【0020】

詳細な説明
本開示では、異種チミジンキナーゼ（ＴＫ）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、異種ＴＫポリペプチドは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫの変異体である、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス、および複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを含む組成物が提供される。本開示では、腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導する方法であって、個体に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスまたは本開示の組成物を有効量投与するステップを含む方法が提供される。

【0021】

腫瘍溶解性ワクシニアウイルス
本開示では、異種ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、異種ＴＫポリペプチドは、単純ヘルペスウイルスＴＫ（ＨＳＶ－ＴＫ）ポリペプチドの変異体である、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが提供される。野生型ＨＳＶ－ＴＫの変異体である異種ＴＫポリペプチドを、本明細書では、「ＨＳＶ－ＴＫｖポリペプチド、「ＴＫｖポリペプチド」、または簡潔に「ＴＫｖ」と呼ぶ。

【0022】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、宿主細胞中に存在するとき、ワクシニアウイルスチミジンキナーゼの産生を実質的にもたらさない、または代わりにワクシニアウイルスチミジンキナーゼ活性が欠如している。内因性ワクシニアウイルスチミジンキナーゼ活性が欠如しているウイルスを、「チミジンキナーゼ陰性」、「ＴＫ陰性」、「チミジンキナーゼ欠損」、または「ＴＫ欠損」であると呼ぶことができる。ある場合では、ＴＫ座に別の遺伝子を挿入することにより、ウイルスをＴＫ欠損にすることができる。ある場合では、ＴＫコード領域の一部分または全ＴＫコード領域を欠失させることにより、本開示の組換えワクシニアウイルスをＴＫ欠損にすることもできる。たとえば、ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、Ｊ２Ｒ欠失を含む。たとえば、Ｍｅｊｉａ－Ｐｅｒｅｚら（２０１８） Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ ８：２７を参照されたい。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、Ｊ２Ｒ領域への挿入を含み、その結果、ワクシニアウイルスＴＫ活性が低下し、またはゼロになる。野生型ワクシニアウイルスでは、Ｊ２Ｒ領域がワクシニアウイルスＴＫをコードする。一部の例では、ＴＫｖコード化ヌクレオチド配列によって、ワクシニアウイルスＴＫコード化ヌクレオチド配列のすべてまたは一部が置き換えられる。たとえば、ある場合では、異種ＴＫポリペプチドコード化ヌクレオチド配列によって、ワクシニアウイルスのＪ２Ｒ領域の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または１００％が置き換えられる。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、内因性（ワクシニアウイルスにコードされている）ＴＫコード化遺伝子の転写が低減または消去されるような改変を含む。たとえば、ある場合では、内因性（ワクシニアウイルスにコードされている）ＴＫコード化遺伝子の転写が、改変なしでの内因性（ワクシニアウイルスにコードされている）ＴＫコード化遺伝子の転写に比べて、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または９０％より高く、または１００％低減される。

【0023】

ある場合では、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製が、野生型ＨＳＶ－ＴＫポリペプチドをコードする複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製が阻害される濃度より低い濃度のガンシクロビルによって阻害される。たとえば、野生型ＨＳＶ－ＴＫの変異体をコードする本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製が最大の５０％（ＩＣ_５０）阻害されるガンシクロビル阻害濃度は、野生型ＨＳＶ－ＴＫポリペプチドをコードする複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製の阻害についてのガンシクロビルＩＣ_５０より少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％低い。ある場合では、前記ＩＣ_５０は、実施例１（ウイルス複製のガンシクロビルに対する感受性）において開示する条件でＨｅＬａ細胞を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで求められる。

【0024】

異種ＴＫポリペプチド
上で指摘したとおり、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。ＴＫｖポリペプチドは、ある場合では、Ｉ型ＴＫポリペプチドである。ある場合では、ＴＫポリペプチドは、デオキシグアノシン（ｄＧ）一リン酸を生じるｄＧのリン酸化を触媒しうる。ある場合では、それぞれ、デオキシチミジン（ｄＴ）一リン酸およびデオキシグアノシン（ｄＧ）一リン酸を生じる、ｄＴとｄＧ両方のリン酸化を触媒しうるＴＫポリペプチド。

【0025】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス中に存在するヌクレオチド配列によってコードされている異種ＴＫポリペプチドは、野生型ＨＳＶ－ＴＫの変異体であり、ＴＫｖポリペプチドは、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（配列番号１）に対して１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。したがって、たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス中に存在するヌクレオチド配列によってコードされているＴＫポリペプチドは、野生型ＨＳＶ－ＴＫに対して１～４０のアミノ酸置換を含む。たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス中に存在するヌクレオチド配列によってコードされているＴＫポリペプチドは、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（配列番号１）に対して、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、または３５～４０のアミノ酸置換を含む。

【0026】

異なるＨＳＶ株または分離株からの多数のヒト野生型ＨＳＶ ＴＫのアミノ酸配列が当業界で知られている。たとえば、ＳＣ１６株（受入番号Ｐ０６４７９、配列番号１としても明記している）、ＨＦＥＭ株（受入番号Ｐ０８３３３）、ＫＯＳ株（受入番号Ｐ１７４０２）、１７株（受入番号Ｐ０３１７６）、およびＣＬ１０１株（受入番号Ｐ０６４７８）について、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列が入手可能である。これらの配列は、高度な相同性を示し、配列番号１の配列との配列同一性が少なくとも９８．６７％である。野生型ＨＳＶ－ＴＫ配列の高度な相同性を考慮すると、本開示の組換えワクシニアウイルスに含めることのできるＨＳＶ－ＴＫ変異体は、配列番号１の配列に関して本明細書に記載する詳細な突然変異を導入することにより、今日知られているまたは将来発見される野生型ＨＳＶ－ＴＫのいずれから構築してもよい。

【0027】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス中に存在する異種ＴＫポリペプチドは、次の野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列：
ＭＡＳＹＰＧＨＱＨＡＳＡＦＤＱＡＡＲＳＲＧＨＳＮＲＲＴＡＬＲＰＲＲＱＱＥＡＴＥＶＲＰＥＱＫＭＰＴＬＬＲＶＹＩＤＧＰＨＧＭＧＫＴＴＴＴＱＬＬＶＡＬＧＳＲＤＤＩＶＹＶＰＥＰＭＴＹＷＲＶＬＧＡＳＥＴＩＡＮＩＹＴＴＱＨＲＬＤＱＧＥＩＳＡＧＤＡＡＶＶＭＴＳＡＱＩＴＭＧＭＰＹＡＶＴＤＡＶＬＡＰＨＩＧＧＥＡＧＳＳＨＡＰＰＰＡＬＴＬＩＦＤＲＨＰＩＡＡＬＬＣＹＰＡＡＲＹＬＭＧＳＭＴＰＱＡＶＬＡＦＶＡＬＩＰＰＴＬＰＧＴＮＩＶＬＧＡＬＰＥＤＲＨＩＤＲＬＡＫＲＱＲＰＧＥＲＬＤＬＡＭＬＡＡＩＲＲＶＹＧＬＬＡＮＴＶＲＹＬＱＧＧＧＳＷＲＥＤＷＧＱＬＳＧＴＡＶＰＰＱＧＡＥＰＱＳＮＡＧＰＲＰＨＩＧＤＴＬＦＴＬＦＲＡＰＥＬＬＡＰＮＧＤＬＹＮＶＦＡＷＡＬＤＶＬＡＫＲＬＲＰＭＨＶＦＩＬＤＹＤＱＳＰＡＧＣＲＤＡＬＬＱＬＴＳＧＭＩＱＴＨＶＴＴＰＧＳＩＰＴＩＣＤＬＡＲＴＦＡＲＥＭＧＥＡＮ（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸を含む場合があり、ＴＫｖポリペプチドは、配列番号１に対して１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。

【0028】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス中に存在する異種ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、次の野生型ＨＳＶ－ＴＫヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＣＣＴＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＧＣＴＡＧＴＧＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＴＣＧＡＡＴＡＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＡＴＴＡＣＧＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＡＡＣＡＧＧＡＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＴＣＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＴＧＣＣＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＴＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＧＧＡＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣＣＣＡＧＴＴＧＴＴＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＧＧＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＧＡＴＡＴＴＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＣＡＴＧＡＣＴＴＡＣＴＧＧＣＧＡＧＴＣＣＴＡＧＧＴＧＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＧＡＴＡＧＣＧＡＡＣＡＴＣＴＡＴＡＣＧＡＣＡＣＡＧＣＡＴＣＧＴＴＴＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡＣＧＣＡＧＣＡＧＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＡＴＴＡＣＧＡＴＧＧＧＴＡＴＧＣＣＴＴＡＴＧＣＧＧＴＡＡＣＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＴＧＧＣＴＣＣＧＣＡＴＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＣＧＧＡＴＣＧＴＣＡＣＡＣＧＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＴＡＡＣＴＣＴＡＡＴＴＴＴＣＧＡＣＣＧＡＣＡＣＣＣＡＡＴＴＧＣＴＧＣＧＣＴＴＴＴＡＴＧＴＴＡＣＣＣＣＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴＡＴＴＴＡＡＴＧＧＧＡＴＣＡＡＴＧＡＣＣＣＣＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＴＴＡＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＣＧＡＡＴＡＴＡＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＧＣＴＡＡＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＴＧＧＣＧＧＣＣＡＴＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＧＧＡＣＴＴＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＣＧＧＴＴＡＧＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＣＴＣＡＧＴＣＴＡＡＣＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＧＡＣＣＴＣＡＣＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＣＧＴＴＡＴＴＴＡＣＣＣＴＡＴＴＣＣＧＴＧＣＧＣＣＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＡＣＣＣＡＡＣＧＧＴＧＡＴＣＴＡＴＡＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＧＣＧＴＧＧＧＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＧＣＧＴＣＴＡＣＧＴＣＣＴＡＴＧＣＡＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＡＧＡＣＴＡＣＧＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＣＧＣＧＧＧＡＴＧＴＣＧＡＧＡＣＧＣＣＴＴＧＣＴＡＣＡＧＴＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＡＡＴＧＡＴＴＣＡＧＡＣＡＣＡＣＧＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＡＣＣＣＡＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＣＣＣＧＡＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＴＡＡＣ（配列番号１０）に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のヌクレオチド配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む場合がある。この配列は、ワクシニアウイルス向けにコドン最適化されている。ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（上で明記、配列番号１）に対して１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。たとえば、ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、Ｌ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、およびＬ１６９の１つまたは複数の置換を含む。

【0029】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むが、Ｌ１５９において置換を有する、すなわち、アミノ酸１５９がＬｅｕ以外である。たとえば、アミノ酸１５９は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。ある場合では、置換は、Ｌ１５９Ｉ置換である。ある場合では、置換は、Ｌ１５９Ａ置換である。ある場合では、置換は、Ｌ１５９Ｖ置換である。

【0030】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むが、Ｉ１６０において置換を有する、すなわち、アミノ酸１６０がＩｌｅ以外である。たとえば、アミノ酸１６０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。ある場合では、置換は、Ｉ１６０Ｌ置換である。ある場合では、置換は、Ｉ１６０Ｖ置換である。ある場合では、置換は、Ｉ１６０Ａ置換である。ある場合では、置換は、Ｉ１６０Ｆ置換である。ある場合では、置換は、Ｉ１６０Ｙ置換である。ある場合では、置換は、Ｉ１６０Ｗ置換である。

【0031】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むが、Ｆ１６１において置換を有する、すなわち、アミノ酸１６１がＰｈｅ以外である。たとえば、アミノ酸１６１は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。ある場合では、置換は、Ｆ１６１Ａ置換である。ある場合では、置換は、Ｆ１６１Ｌ置換である。ある場合では、置換は、Ｆ１６１Ｖ置換である。ある場合では、置換は、Ｆ１６１Ｉ置換である。

【0032】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むが、Ａ１６８において置換を有する、すなわち、アミノ酸１６８がＡｌａ以外である。たとえば、アミノ酸１６８は、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。ある場合では、置換は、Ａ１６８Ｈである。ある場合では、置換は、Ａ１６８Ｒである。ある場合では、置換は、Ａ１６８Ｋである。ある場合では、置換は、Ａ１６８Ｙである。ある場合では、置換は、Ａ１６８Ｆである。ある場合では、置換は、Ａ１６８Ｗである。ある場合では、ＴＫｖポリペプチドは、Ａ１６８の置換以外の他のいずれの置換も含まない。

【0033】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むが、Ｌ１６９において置換を有する、すなわち、アミノ酸１６９がＬｅｕ以外である。たとえば、アミノ酸１６９は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。ある場合では、置換は、Ｌ１６９Ｆである。ある場合では、置換は、Ｌ１６９Ｍである。ある場合では、置換は、Ｌ１６９Ｙである。ある場合では、置換は、Ｌ１６９Ｗである。

【0034】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であり、ｉ）アミノ酸１５９がＬｅｕ以外であり、ｉｉ）アミノ酸１６０がＩｌｅ以外であり、ｉｉｉ）アミノ酸１６１がＰｈｅ以外であり、ｉｖ）アミノ酸１６８がＡｌａ以外であり、ｖ）アミノ酸１６９がＬｅｕ以外であるアミノ酸配列を含む。ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、アミノ酸１５９がＩｌｅであり、アミノ酸１６０がＬｅｕであり、アミノ酸１６１がＡｌａであり、アミノ酸１６８がＴｙｒであり、アミノ酸１６９がＰｈｅである次のアミノ酸配列：
ＭＡＳＹＰＧＨＱＨＡＳＡＦＤＱＡＡＲＳＲＧＨＳＮＲＲＴＡＬＲＰＲＲＱＱＥＡＴＥＶＲＰＥＱＫＭＰＴＬＬＲＶＹＩＤＧＰＨＧＭＧＫＴＴＴＴＱＬＬＶＡＬＧＳＲＤＤＩＶＹＶＰＥＰＭＴＹＷＲＶＬＧＡＳＥＴＩＡＮＩＹＴＴＱＨＲＬＤＱＧＥＩＳＡＧＤＡＡＶＶＭＴＳＡＱＩＴＭＧＭＰＹＡＶＴＤＡＶＬＡＰＨＩＧＧＥＡＧＳＳＨＶＰＰＰＡＬＴＩＬＡＤＲＨＰＩＡＹＦＬＣＹＰＡＡＲＹＬＭＧＳＭＴＰＱＡＶＬＡＦＶＡＬＩＰＰＴＬＰＧＴＮＩＶＬＧＡＬＰＥＤＲＨＩＤＲＬＡＫＲＱＲＰＧＥＲＬＤＬＡＭＬＡＡＩＲＲＶＹＧＬＬＡＮＴＶＲＹＬＱＧＧＧＳＷＲＥＤＷＧＱＬＳＧＴＡＶＰＰＱＧＡＥＰＱＳＮＡＧＰＲＰＨＩＧＤＴＬＦＴＬＦＲＡＰＥＬＬＡＰＮＧＤＬＹＮＶＦＡＷＡＬＤＶＬＡＫＲＬＲＰＭＨＶＦＩＬＤＹＤＱＳＰＡＧＣＲＤＡＬＬＱＬＴＳＧＭＩＱＴＨＶＴＴＰＧＳＩＰＴＩＣＤＬＡＲＴＦＡＲＥＭＧＥＡＮ（「ｄｍ３０」；配列番号２）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含む。

【0035】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、コードされているアミノ酸１５９がＩｌｅであり、アミノ酸１６０がＬｅｕであり、アミノ酸１６１がＡｌａであり、アミノ酸１６８がＴｙｒであり、アミノ酸１６９がＰｈｅである次のヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＣＣＴＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＧＣＴＡＧＴＧＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＴＣＧＡＡＴＡＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＡＴＴＡＣＧＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＡＡＣＡＧＧＡＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＴＣＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＴＧＣＣＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＴＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＧＧＡＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣＣＣＡＧＴＴＧＴＴＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＧＧＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＧＡＴＡＴＴＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＣＡＴＧＡＣＴＴＡＣＴＧＧＣＧＡＧＴＣＣＴＡＧＧＴＧＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＧＡＴＡＧＣＧＡＡＣＡＴＣＴＡＴＡＣＧＡＣＡＣＡＧＣＡＴＣＧＴＴＴＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡＣＧＣＡＧＣＡＧＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＡＴＴＡＣＧＡＴＧＧＧＴＡＴＧＣＣＴＴＡＴＧＣＧＧＴＡＡＣＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＴＧＧＣＴＣＣＧＣＡＴＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＣＧＧＡＴＣＧＴＣＡＣＡＣＧＴＧＣＣＣＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＴＡＡＣＴＡＴＴＴＴＡＧＣＧＧＡＣＣＧＡＣＡＣＣＣＡＡＴＴＧＣＴＴＡＣＴＴＣＴＴＡＴＧＴＴＡＣＣＣＣＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴＡＴＴＴＡＡＴＧＧＧＡＴＣＡＡＴＧＡＣＣＣＣＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＴＴＡＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＣＧＡＡＴＡＴＡＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＧＣＴＡＡＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＴＧＧＣＧＧＣＣＡＴＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＧＧＡＣＴＴＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＣＧＧＴＴＡＧＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＣＴＣＡＧＴＣＴＡＡＣＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＧＡＣＣＴＣＡＣＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＣＧＴＴＡＴＴＴＡＣＣＣＴＡＴＴＣＣＧＴＧＣＧＣＣＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＡＣＣＣＡＡＣＧＧＴＧＡＴＣＴＡＴＡＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＧＣＧＴＧＧＧＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＧＣＧＴＣＴＡＣＧＴＣＣＴＡＴＧＣＡＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＡＧＡＣＴＡＣＧＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＣＧＣＧＧＧＡＴＧＴＣＧＡＧＡＣＧＣＣＴＴＧＣＴＡＣＡＧＴＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＡＡＴＧＡＴＴＣＡＧＡＣＡＣＡＣＧＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＡＣＣＣＡＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＣＣＣＧＡＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＴＡＡＣ（配列番号１１）に対するヌクレオチド配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるヌクレオチド配列を含む。この配列は、ワクシニアウイルス向けにコドン最適化されている。ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であり、ｉ）アミノ酸１５９がＬｅｕ以外であり、ｉｉ）アミノ酸１６０がＩｌｅ以外であり、ｉｉｉ）アミノ酸１６１がＰｈｅ以外であり、ｉｖ）アミノ酸１６８がＡｌａ以外であり、ｖ）アミノ酸１６９がＬｅｕ以外であるアミノ酸配列を含む。ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、アミノ酸１５９がＩｌｅであり、アミノ酸１６０がＰｈｅであり、アミノ酸１６１がＬｅｕであり、アミノ酸１６８がＰｈｅであり、アミノ酸１６９がＭｅｔである次のアミノ酸配列：
ＭＡＳＹＰＧＨＱＨＡＳＡＦＤＱＡＡＲＳＲＧＨＳＮＲＲＴＡＬＲＰＲＲＱＱＥＡＴＥＶＲＰＥＱＫＭＰＴＬＬＲＶＹＩＤＧＰＨＧＭＧＫＴＴＴＴＱＬＬＶＡＬＧＳＲＤＤＩＶＹＶＰＥＰＭＴＹＷＲＶＬＧＡＳＥＴＩＡＮＩＹＴＴＱＨＲＬＤＱＧＥＩＳＡＧＤＡＡＶＶＭＴＳＡＱＩＴＭＧＭＰＹＡＶＴＤＡＶＬＡＰＨＩＧＧＥＡＧＳＳＨＡＰＰＰＡＬＴＩＦＬＤＲＨＰＩＡＦＭＬＣＹＰＡＡＲＹＬＭＧＳＭＴＰＱＡＶＬＡＦＶＡＬＩＰＰＴＬＰＧＴＮＩＶＬＧＡＬＰＥＤＲＨＩＤＲＬＡＫＲＱＲＰＧＥＲＬＤＬＡＭＬＡＡＩＲＲＶＹＧＬＬＡＮＴＶＲＹＬＱＧＧＧＳＷＲＥＤＷＧＱＬＳＧＴＡＶＰＰＱＧＡＥＰＱＳＮＡＧＰＲＰＨＩＧＤＴＬＦＴＬＦＲＡＰＥＬＬＡＰＮＧＤＬＹＮＶＦＡＷＡＬＤＶＬＡＫＲＬＲＰＭＨＶＦＩＬＤＹＤＱＳＰＡＧＣＲＤＡＬＬＱＬＴＳＧＭＩＱＴＨＶＴＴＰＧＳＩＰＴＩＣＤＬＡＲＴＦＡＲＥＭＧＥＡＮ（「ＳＲ３９」；配列番号３）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含む。

【0036】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、コードされているアミノ酸１５９がＩｌｅであり、アミノ酸１６０がＰｈｅであり、アミノ酸１６１がＬｅｕであり、アミノ酸１６８がＰｈｅであり、アミノ酸１６９がＭｅｔである次のヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＣＣＴＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＧＣＴＡＧＴＧＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＴＣＧＡＡＴＡＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＡＴＴＡＣＧＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＡＡＣＡＧＧＡＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＴＣＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＴＧＣＣＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＴＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＧＧＡＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣＣＣＡＧＴＴＧＴＴＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＧＧＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＧＡＴＡＴＴＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＣＡＴＧＡＣＴＴＡＣＴＧＧＣＧＡＧＴＣＣＴＡＧＧＴＧＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＧＡＴＡＧＣＧＡＡＣＡＴＣＴＡＴＡＣＧＡＣＡＣＡＧＣＡＴＣＧＴＴＴＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡＣＧＣＡＧＣＡＧＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＡＴＴＡＣＧＡＴＧＧＧＴＡＴＧＣＣＴＴＡＴＧＣＧＧＴＡＡＣＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＴＧＧＣＴＣＣＧＣＡＴＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＣＧＧＡＴＣＧＴＣＡＣＡＣＧＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＴＡＡＣＴＡＴＴＴＴＣＴＴＡＧＡＣＣＧＡＣＡＣＣＣＡＡＴＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＴＴＡＴＧＴＴＡＣＣＣＣＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴＡＴＴＴＡＡＴＧＧＧＡＴＣＡＡＴＧＡＣＣＣＣＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＴＴＡＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＣＧＡＡＴＡＴＡＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＧＣＴＡＡＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＴＧＧＣＧＧＣＣＡＴＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＧＧＡＣＴＴＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＣＧＧＴＴＡＧＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＣＴＣＡＧＴＣＴＡＡＣＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＧＡＣＣＴＣＡＣＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＣＧＴＴＡＴＴＴＡＣＣＣＴＡＴＴＣＣＧＴＧＣＧＣＣＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＡＣＣＣＡＡＣＧＧＴＧＡＴＣＴＡＴＡＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＧＣＧＴＧＧＧＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＧＣＧＴＣＴＡＣＧＴＣＣＴＡＴＧＣＡＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＡＧＡＣＴＡＣＧＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＣＧＣＧＧＧＡＴＧＴＣＧＡＧＡＣＧＣＣＴＴＧＣＴＡＣＡＧＴＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＡＡＴＧＡＴＴＣＡＧＡＣＡＣＡＣＧＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＡＣＣＣＡＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＣＣＣＧＡＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＴＡＡＣ（配列番号１２）に対するヌクレオチド配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるヌクレオチド配列を含む。この配列は、ワクシニアウイルス向けにコドン最適化されている。

【0037】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、上で明記した野生型ＨＳＶ－ＴＫアミノ酸配列（配列番号１）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であり、アミノ酸１６８がＡｌａ以外である、たとえば、アミノ酸１６８が、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである、アミノ酸配列を含む。ある場合では、アミノ酸１６８は、Ｈｉｓである。ある場合では、アミノ酸１６８は、Ａｒｇである。ある場合では、アミノ酸１６８は、Ｌｙｓである。ある場合では、異種ＴＫポリペプチドは、アミノ酸１６８がＨｉｓである次のアミノ酸配列：
ＭＡＳＹＰＧＨＱＨＡＳＡＦＤＱＡＡＲＳＲＧＨＳＮＲＲＴＡＬＲＰＲＲＱＱＥＡＴＥＶＲＰＥＱＫＭＰＴＬＬＲＶＹＩＤＧＰＨＧＭＧＫＴＴＴＴＱＬＬＶＡＬＧＳＲＤＤＩＶＹＶＰＥＰＭＴＹＷＲＶＬＧＡＳＥＴＩＡＮＩＹＴＴＱＨＲＬＤＱＧＥＩＳＡＧＤＡＡＶＶＭＴＳＡＱＩＴＭＧＭＰＹＡＶＴＤＡＶＬＡＰＨＩＧＧＥＡＧＳＳＨＡＰＰＰＡＬＴＬＩＦＤＲＨＰＩＡＨＬＬＣＹＰＡＡＲＹＬＭＧＳＭＴＰＱＡＶＬＡＦＶＡＬＩＰＰＴＬＰＧＴＮＩＶＬＧＡＬＰＥＤＲＨＩＤＲＬＡＫＲＱＲＰＧＥＲＬＤＬＡＭＬＡＡＩＲＲＶＹＧＬＬＡＮＴＶＲＹＬＱＧＧＧＳＷＲＥＤＷＧＱＬＳＧＴＡＶＰＰＱＧＡＥＰＱＳＮＡＧＰＲＰＨＩＧＤＴＬＦＴＬＦＲＡＰＥＬＬＡＰＮＧＤＬＹＮＶＦＡＷＡＬＤＶＬＡＫＲＬＲＰＭＨＶＦＩＬＤＹＤＱＳＰＡＧＣＲＤＡＬＬＱＬＴＳＧＭＩＱＴＨＶＴＴＰＧＳＩＰＴＩＣＤＬＡＲＴＦＡＲＥＭＧＥＡＮ（「ＴＫ．００７」；配列番号４）に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含む。

【0038】

ある場合では、異種ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、コードされているアミノ酸１６８がＨｉｓである次のヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＣＣＴＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＧＣＴＡＧＴＧＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＴＣＧＡＡＴＡＧＡＣＧＡＡＣＡＧＣＡＴＴＡＣＧＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＡＡＣＡＧＧＡＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＴＣＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＴＧＣＣＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＴＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＣＧＧＡＡＴＧＧＧＴＡＡＡＡＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣＣＣＡＧＴＴＧＴＴＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＧＧＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＧＡＴＡＴＴＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＣＡＴＧＡＣＴＴＡＣＴＧＧＣＧＡＧＴＣＣＴＡＧＧＴＧＣＡＴＣＧＧＡＡＡＣＧＡＴＡＧＣＧＡＡＣＡＴＣＴＡＴＡＣＧＡＣＡＣＡＧＣＡＴＣＧＴＴＴＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡＣＧＣＡＧＣＡＧＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＡＡＧＴＧＣＴＣＡＡＡＴＴＡＣＧＡＴＧＧＧＴＡＴＧＣＣＴＴＡＴＧＣＧＧＴＡＡＣＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＴＧＧＣＴＣＣＧＣＡＴＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＣＧＧＡＴＣＧＴＣＡＣＡＣＧＣＴＣＣＣＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＴＡＡＣＴＣＴＡＡＴＴＴＴＣＧＡＣＣＧＡＣＡＣＣＣＡＡＴＴＧＣＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＴＧＴＴＡＣＣＣＣＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴＡＴＴＴＡＡＴＧＧＧＡＴＣＡＡＴＧＡＣＣＣＣＧＣＡＡＧＣＴＧＴＧＴＴＡＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＣＧＡＡＴＡＴＡＧＴＣＣＴＴＧＧＴＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＴＧＡＣＡＧＡＣＴＴＧＣＴＡＡＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＴＧＧＣＧＧＣＣＡＴＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＧＧＡＣＴＴＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＣＧＧＴＴＡＧＡＴＡＴＴＴＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＧＴＣＡＧＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＣＴＣＡＧＴＣＴＡＡＣＧＣＴＧＧＡＣＣＡＣＧＡＣＣＴＣＡＣＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＣＧＴＴＡＴＴＴＡＣＣＣＴＡＴＴＣＣＧＴＧＣＧＣＣＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＧＣＡＣＣＣＡＡＣＧＧＴＧＡＴＣＴＡＴＡＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＧＣＧＴＧＧＧＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＧＣＧＴＣＴＡＣＧＴＣＣＴＡＴＧＣＡＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＣＴＡＧＡＣＴＡＣＧＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＣＧＣＧＧＧＡＴＧＴＣＧＡＧＡＣＧＣＣＴＴＧＣＴＡＣＡＧＴＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＡＡＴＧＡＴＴＣＡＧＡＣＡＣＡＣＧＴＣＡＣＣＡＣＣＣＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＡＣＣＣＡＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＣＴＴＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＣＣＣＧＡＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＴＡＡＣ（配列番号１３）に対するヌクレオチド配列同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であるヌクレオチド配列を含む。この配列は、ワクシニアウイルス向けにコドン最適化されている。

【0039】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの構築に使用されるワクシニアウイルスには、弱毒化および／または腫瘍選択的ワクシニアウイルスが含まれうる。本明細書で使用するとき、「弱毒化」とは、正常細胞（たとえば、非腫瘍細胞）に対する低い毒性（たとえば、弱いウイルス複製、低い細胞溶解活性、低い細胞障害活性）を意味する。本明細書で使用するとき、「腫瘍選択的」とは、腫瘍細胞に対する毒性（たとえば、腫瘍溶解性）が正常細胞（たとえば、非腫瘍細胞）に対するものより高いことを意味する。特定のタンパク質の機能が欠損を有するように、または特定の遺伝子もしくはタンパク質の発現が抑制されるように遺伝子改変されたワクシニアウイルス（Ｇｕｓｅら（２０１１） Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ １１：５９５）を、本開示の腫瘍溶解性ウイルスにおいて使用することができる。たとえば、ワクシニアウイルスの腫瘍選択性を高めるために、ワクシニア増殖因子（ＶＧＦ）の機能に欠損を有するワクシニアウイルス（ＭｃＣａｒｔら（２００１） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６１：８７５１）、改変ワクシニアウイルスＴＫ遺伝子、改変血球凝集素（ＨＡ）遺伝子、および改変Ｆ３遺伝子もしくはＦ３座中断を有するワクシニアウイルス（ＷＯ２００５／０４７４５８）、ＶＧＦおよびＯ１Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（ＷＯ２０１５／０７６４２２）、がん細胞において発現が減少する標的マイクロＲＮＡ配列がＢ５Ｒ遺伝子の３’非コード領域に挿入されているワクシニアウイルス（ＷＯ２０１１／１２５４６９）、ＨＡおよびＦ１４．５Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｚｈａｎｇら（２００７） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６７：１００３８）、リボヌクレオチド還元酵素の機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｇａｍｍｏｎら（２０１０） ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ６：ｅ１０００９８４）、セリンプロテアーゼインヒビター（たとえば、ＳＰＩ－１、ＳＰＩ－２）の機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｇｕｏら（２００５） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６５：９９９１）、ＳＰＩ－１およびＳＰＩ－２の機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｙａｎｇら（２００７） Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １４：６３８）、リボヌクレオチド還元酵素遺伝子Ｆ４ＬもしくはＩ４Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｃｈｉｌｄら（１９９０） Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７４：６２５、Ｐｏｔｔｓら（２０１７） ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ９：６３８）、Ｂ１８Ｒ（コペンハーゲン株ではＢ１９Ｒ）の機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｓｙｍｏｎｓら（１９９５） Ｃｅｌｌ ８１：５５１、Ｋｉｒｎら（２００８） ＰＬｏＳ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４：ｅ３５３）、Ａ４８Ｒの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｈｕｇｈｅｓら（１９９１） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６６：２０１０３）、Ｂ８Ｒの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｖｅｒａｒｄｉら（２００１） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５：１１）、Ｂ１５Ｒ（コペンハーゲン株ではＢ１６Ｒ）の機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｓｐｒｉｇｇｓら（１９９２） Ｃｅｌｌ ７１：１４５）、Ａ４１Ｒの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｎｇら（２００１） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８２：２０９５）、Ａ５２Ｒの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｂｏｗｉｅら（２０００） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１０１６２）、Ｆ１Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｇｅｒｌｉｃら（２０１３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０：７８０８）、Ｅ３Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｃｈａｎｇら（１９９２） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４８２５）、Ａ４４Ｒ－Ａ４６Ｒの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｂｏｗｉｅら（２０００） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１０１６２）、Ｋ１Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｂｒａｖｏ Ｃｒｕｚら（２０１７） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ９１：ｅ００５２４）、Ａ４８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、Ｃ１１Ｒ、およびＴＫの機能に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｍｅｊｉａｓ－Ｐｅｒｅｚら（２０１７） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ ８：２７）、またはＥ３ＬおよびＫ３Ｌ領域に突然変異を有するワクシニアウイルス（ＷＯ２００５／００７８２４）を使用することができる。さらに、Ｏ１Ｌの機能に欠損を有するワクシニアウイルスを使用してもよい（Ｓｃｈｗｅｎｅｋｅｒら（２０１２） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８６：２３２３）。さらに、Ｂ５Ｒ細胞外領域に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｂｅｌｌら（２００４） Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３２５：４２５）またはＡ３４Ｒ領域に欠損を有するワクシニアウイルス（Ｔｈｉｒｕｎａｖｕｋａｒａｓｕら（２０１３） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２１：１０２４）を使用してもよい。さらに、インターロイキン－１ｂ（ＩＬ－１ｂ）受容体に欠損を有するワクシニアウイルス（ＷＯ２００５／０３０９７１）を使用してもよい。このような、外来遺伝子の挿入または遺伝子の欠失もしくは突然変異は、たとえば、既知の相同組換えまたは部位特異的突然変異誘発によってなされうる。さらに、そうした遺伝子改変の２つ以上の組合せを有するワクシニアウイルスを、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスにおいて使用してもよい。

【0040】

本明細書で使用するとき、「欠損を有する」は、この用語によって詳細に記される遺伝子領域が機能の低下または喪失を有することを意味し、ｉ）この用語によって詳細に記される遺伝子領域の突然変異（たとえば、置換、逆位など）および／または切り詰めおよび／または欠失、ｉｉ）遺伝子領域の発現を制御するプロモーター領域の突然変異および／または切り詰めおよび／または欠失、ならびにｉｉｉ）遺伝子領域によってコードされているポリペプチドの翻訳が低減または消去されるようなポリアデニル化配列の突然変異および／または切り詰めおよび／または欠失の１つまたは複数の結果として生じる欠損を包含する。複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが所与のワクシニアウイルス遺伝子の「欠損を有する」結果となるような遺伝子変化を含む本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、遺伝子の遺伝子産物（たとえば、ｍＲＮＡ遺伝子産物、ポリペプチド遺伝子産物）の産生および／または活性の低下を示し、たとえば、遺伝子産物の量および／または活性が、野生型ワクシニアウイルスまたは遺伝子変化を含まない対照ワクシニアウイルスによって産生される同じ遺伝子産物の量および／または活性の７５％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満である。たとえば、「欠損を有する」は、詳細に記された遺伝子領域からなる領域の欠失、または詳細に記された遺伝子領域を含む隣接する遺伝子領域の欠失の結果である場合がある。一例として、遺伝子領域の転写を低減するプロモーター領域の突然変異および／または切り詰めおよび／または欠失が欠損をもたらす場合がある。遺伝子領域によってコードされているポリペプチドの翻訳が低減または消去されるような転写終結エレメントの組込みによって、遺伝子領域に欠損を与えることもできる。遺伝子編集酵素または遺伝子編集複合体（たとえば、ガイドＲＮＡと複合体形成したＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓエフェクターポリペプチド）を使用して遺伝子領域の転写を低減または消去することにより、遺伝子領域に欠損を与えることもできる。競合的な逆プロモーター／ポリメラーゼ占有を使用して遺伝子領域の転写を低減または消去することにより、遺伝子領域に欠損を与えることもできる。核酸を遺伝子領域に挿入し、それによって遺伝子領域をノックアウトさせることにより、遺伝子領域に欠損を与えることもできる。

【0041】

上で指摘したとおり、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、一部の例では、内因性ワクシニアウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）活性が欠如している。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、ワクシニアウイルスＴＫコード領域の全体または一部分の欠失を含む結果、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、ＴＫ欠損となる。たとえば、ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、Ｊ２Ｒ欠失を含む。たとえば、Ｍｅｊｉａ－Ｐｅｒｅｚら（２０１８） Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ ８：２７を参照されたい。

【0042】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、一部の例では、細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）の生成を強化する１つまたは複数の改変を含む。たとえば、ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、コードされている（以前は「ｇｐ２２－２４」として知られた）Ａ３４タンパク質にＫ１５１Ｅ置換をもたらす、ワクシニアウイルスＡ３４Ｒ遺伝子の改変を含む。たとえば、Ｂｌａｓｃｏら（１９９３） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７（６）：３３１９－３３２５、およびＴｈｉｒｕｎａｖｕｋａｒａｓｕら（２０１３） Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２１：１０２４を参照されたい。Ａ３４Ｒ遺伝子は、ワクシニアウイルスｇｐ２２－２４をコードしている。

【0043】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、様々なワクシニアウイルス株のいずれから構築してもよい。使用に適するワクシニアウイルス株には、限定はしないが、Ｌｉｓｔｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃｉｔｙ Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＹＢＨ）、Ｗｙｅｔｈ、コペンハーゲン、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ（ＷＲ）、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、ＥＭ６３、池田、Ｄａｌｉａｎ、ＬＩＶＰ、Ｔｉａｎ Ｔａｎ、ＩＨＤ－Ｊ、タシケント、ベルン、パリ、大連株、および同様の派生株が含まれる。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、コペンハーゲン株ワクシニアウイルスである。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、ＷＲ株ワクシニアウイルスである。

【0044】

種々の株のワクシニアウイルスのゲノムのヌクレオチド配列が、当業界で知られている。たとえば、Ｇｏｅｂｅｌら（１９９０） Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７９：２４７、Ｇｏｅｂｅｌら（１９９０） Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７９：５１７を参照されたい。コペンハーゲン株ワクシニアウイルスのヌクレオチド配列は、既知であり、たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｍ３５０２７を参照されたい。ＷＲ株ワクシニアウイルスのヌクレオチド配列は、既知であり、たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＹ２４３３１２およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００６９９８を参照されたい。ワクシニアウイルスのＷＲ株は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手可能である（ＡＴＣＣ ＶＲ－１３５４）。

【0045】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、腫瘍溶解活性を示す。所与のウイルスが腫瘍溶解活性を示すかどうかを評価する方法の例としては、ウイルスを加えることによるがん細胞の生存率の低下を評価する方法が挙げられる。評価に使用されるがん細胞の例としては、悪性黒色腫細胞ＲＰＭＩ－７９５１（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－６６）、肺腺癌ＨＣＣ４００６（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２８７１）、肺癌Ａ５４９（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１８５）、肺癌ＨＯＰ－６２（たとえば、ＤＣＴＤ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）、肺癌ＥＫＶＸ（たとえば、ＤＣＴＤ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）、小細胞肺がん細胞ＤＭＳ５３（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２０６２）、肺扁平上皮癌ＮＣＩ－Ｈ２２６（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－５８２６）、腎臓がん細胞Ｃａｋｉ－１（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－４６）、膀胱がん細胞６４７－Ｖ（たとえば、ＤＳＭＺ ＡＣＣ ４１４）、頭頚部がん細胞Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１３８）、乳がん細胞ＪＩＭＴ－１（たとえば、ＤＳＭＺ ＡＣＣ ５８９）、乳がん細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２６）、乳がん細胞ＭＣＦ７（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２２）、乳がんＨＳ－５７８Ｔ（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－１２６）、乳管癌Ｔ－４７Ｄ（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－１３３）、食道がん細胞ＯＥ３３（たとえば、ＥＣＡＣＣ ９６０７０８０８）、神経膠芽腫Ｕ－８７ＭＧ（たとえば、ＥＣＡＣＣ ８９０８１４０２）、神経芽細胞腫ＧＯＴＯ（たとえば、ＪＣＲＢ ＪＣＲＢ０６１２）、骨髄腫ＲＰＭＩ８２２６（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１５５）、卵巣がん細胞ＳＫ－ＯＶ－３（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－７７）、卵巣がん細胞ＯＶＭＡＮＡ（たとえば、ＪＣＲＢ ＪＣＲＢ１０４５）、子宮頚がん細胞株ＨｅＬａ（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２）、結腸がん細胞ＲＫＯ（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２５７７）、結腸がん細胞ＨＴ－２９（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３８）、結腸がんＣｏｌｏ２０５（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２２２）、結腸がんＳＷ６２０（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２２７）、結腸直腸癌ＨＣＴ１１６（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２４７）、膵臓がん細胞ＢｘＰＣ－３（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６８７）、骨肉腫Ｕ－２ ＯＳ（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－９６）、前立腺がん細胞ＬＮＣａＰクローンＦＧＣ（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１７４０）、肝細胞癌ＪＨＨ－４（たとえば、ＪＣＲＢ ＪＣＲＢ０４３５）、中皮腫ＮＣＩ－Ｈ２８（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－５８２０）、子宮頚がん細胞ＳｉＨａ（たとえば、ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３５）、および胃がん細胞Ｋａｔｏ ＩＩＩ（たとえば、理研ＢＲＣ ＲＣＢ２０８８）が挙げられる。

【0046】

ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、確立された技術を使用してワクシニアウイルスに導入することができる。そのような技術の一例は、相同組換えと再活性化である（ＹａｏおよびＥｖａｎｓ（２００３） Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７７（１３）：７２８１～９０）。たとえば、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸が挿入されている（移入ベクタープラスミドＤＮＡとも呼ばれる）プラスミドを生じさせ、組換え移入ベクターを生成することができ、ワクシニアウイルスからの消化されたゲノムＤＮＡが形質移入され、ヘルパーウイルスを感染させた細胞に、組換え移入ベクターを導入することができる。次いで、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸が、組換え移入ベクターから、相同組換えによってワクシニアウイルスに導入される。ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸が導入される領域は、内因性ワクシニアウイルスＴＫをコードする遺伝子、たとえば、Ｊ２Ｒでよい。ＴＫｖポリペプチドをコードする核酸によって、ワクシニアウイルスＪ２Ｒの全体または一部分が置き換えられる場合がある。ＴＫｖポリペプチドをコードする核酸によって、限定はしないが、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ８Ｒ、Ｂ１８Ｒ、Ｃ１１Ｒ、Ｃ１２Ｌ、Ｂ１９Ｒ、Ａ４１Ｌ、Ａ４４Ｌ、Ａ４５Ｒ、Ａ４６Ｒ、Ａ５２Ｒなどを始めとする、複製に必要とならないいずれかのワクシニア遺伝子の全部または一部分も置き換えられる場合がある。ＴＫｖポリペプチドをコードする核酸は、２種のウイルス遺伝子の間、たとえば、Ｂ１５Ｒ遺伝子とＢ１７Ｌ遺伝子の間の遺伝子間領域に導入される場合もある。

【0047】

ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメント、たとえば、プロモーターに、動作可能に連結される。ある場合では、プロモーターは、腫瘍細胞においてＴＫｖポリペプチドの発現をもたらす。適切なプロモーターには、限定はしないが、ｐＳＥＬプロモーター、ＰＳＦＪ１－１０プロモーター、ＰＳＦＪ２－１６プロモーター、ｐＨｙｂプロモーター、後期－初期最適化プロモーター、ｐ７．５Ｋプロモーター、ｐ１１Ｋプロモーター、Ｔ７．１０プロモーター、ＣＰＸプロモーター、改変Ｈ５プロモーター、ＨＦプロモーター、Ｈ６プロモーター、Ｈ５プロモーター、Ｈ４プロモーター、Ｆ１７プロモーター、およびＴ７ハイブリッドプロモーターが含まれる。

【0048】

ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、調節可能なプロモーターに、動作可能に連結される。ある場合では、調節可能なプロモーターは、可逆的プロモーターである。ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、テトラサイクリンによって調節されるプロモーター（たとえば、ＴｅｔＡｃｔｉｖａｔｏｒ、ＴｅｔＯＮ、ＴｅｔＯＦＦ、Ｔｅｔ－Ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ、Ｔｅｔ－Ｏｎ ３Ｇなどのプロモーター系）に、動作可能に連結される。ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、抑制可能なプロモーターに、動作可能に連結される。ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、テトラサイクリンによって抑制可能である、たとえば、テトラサイクリンまたはテトラサイクリン類似体もしくは誘導体の存在下で抑制されるプロモーターに、動作可能に連結される。ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＴｅｔＯＦＦプロモーター系に、動作可能に連結される。ＢｕｊａｒｄおよびＧｏｓｓｅｎ（１９９２） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７。たとえば、ＴｅｔＯＦＦプロモーター系は、テトラサイクリン（または適切な類似体もしくは誘導体、たとえば、ドキシサイクリン）の存在下では抑制され（不活性であり）、テトラサイクリンが取り除かれると、プロモーターは、活性を有し、ＴＫｖポリペプチドの発現の動因となる。ある場合では、ＴＫｖポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、テトラサイクリンによって活性化可能である、たとえば、テトラサイクリンまたはテトラサイクリン類似体もしくは誘導体の存在下で活性化されるプロモーターに、動作可能に連結される。

【0049】

組成物
本開示は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを含む、医薬組成物としてもよい、組成物を提供する。ある場合では、組成物は、医薬組成物である。ある場合では、医薬組成物は、それを必要とする個体への投与に適しており、個体は、ヒトである。

【0050】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを含む医薬組成物は、活性成分の薬学的に許容できる組成物への加工処理を容易にする、薬学的に許容できる担体を場合により含んでもよい。本明細書で使用するとき、用語「薬理学的に許容できる担体」とは、投与されたとき、長期的または永続的な有害作用を実質的に及ぼさない、いずれかの担体を指し、「薬理学的に許容できる媒体、安定剤、希釈剤、鎖剤、または賦形剤」などの用語を包含する。このような担体は、一般に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスと混合され、固体、半固体、または液体薬剤である場合がある。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、可溶性になる場合もあり、または所望の担体もしくは希釈剤中の懸濁液として送達される場合もあると理解される。限定はせず、たとえば蒸留脱イオン水、食塩水などの水性媒質、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌および抗カビ剤、等張剤および吸収遅延剤、または他のいずれかの不活性成分を始めとする、様々な薬学的に許容できる担体のいずれを使用してもよい。薬学的に許容できる担体の選択は、投与方式次第となりうる。薬学的に許容できる担体は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスと適合しないということでない限り、薬学的に許容できる組成物へのその使用が企図される。そのような薬学担体の詳細な使用の非限定的な例は、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」（Ｈｏｗａｒｄ Ｃ．Ａｎｓｅｌら共編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、第７版、１９９９）；「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０^ｔｈ ２０００）；「Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、Ｊｏｅｌ Ｇ．Ｈａｒｄｍａｎら共編、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ、第１０版、２００１）；および「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（Ｒａｙｍｏｎｄ Ｃ．Ｒｏｗｅら、ＡＰｈＡ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第４版、２００３）において見ることができる。

【0051】

対象医薬組成物は、限定はせず、緩衝剤、保存剤、等張化剤、塩、酸化防止剤、生理物質、薬理物質、増量剤、乳化剤、湿潤剤などを始めとする薬学的に許容できる他の成分を、限定はせず、場合により含んでもよい。得られる調製物が薬学的に許容できるものであるという前提で、種々の緩衝剤およびｐＨ調整手段を、本明細書で開示する医薬組成物の調整に使用することができる。そのような緩衝剤には、限定はせず、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、中性緩衝食塩水（ｎｅｕｔｒａｌ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）、リン酸緩衝溶液、およびホウ酸緩衝液が含まれる。組成物のｐＨを調整するために、必要に応じて酸または塩基を使用してよいと理解される。薬学的に許容できる酸化防止剤には、限定はせず、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチルヒドロキシアニソール、およびブチルヒドロキシトルエンが含まれる。有用な保存剤には、限定はせず、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、および安定化されたオキシクロロ組成物、たとえば、ＰＵＲＩＴＥ（商標）が含まれる。対象医薬組成物に含めるのに適する等張化剤には、限定はせず、たとえば塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの塩、マンニトール、グリセリン、および薬学的に許容できる他の等張化剤が含まれる。薬理学の分野で知られているこれらおよび他の物質を、対象医薬組成物に含めることができると理解される。

【0052】

薬学的に許容できる担体となりうる材料のいくつかの例として、（１）糖、たとえば、ラクトース、グルコース、スクロース、（２）デンプン、たとえば、コーンスターチやバレイショデンプン、（３）セルロースおよびその誘導体、たとえば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロース、（４）粉末状トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）賦形剤、たとえば、カカオ脂や坐剤ワックス、（９）油、たとえば、ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、大豆油、（１０）グリコール、たとえば、プロピレングリコール、（１１）ポリオール、たとえば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、（１２）エステル、たとえば、オレイン酸エチルやラウリン酸エチル、（１３）寒天、（１４）緩衝剤、たとえば、水酸化マグネシウムや水酸化アルミニウム、（１５）アルギン酸、（１６）無パイロジェン水、（１７）等張食塩水、（１８）リンガー液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝溶液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリ酸無水物、ならびに（２２）医薬品製剤に用いられる他の適合する非毒性物質が挙げられる。

【0053】

本開示の医薬組成物は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを、１ｍｌあたり約１０^２プラーク形成単位（ｐｆｕ）（ｐｆｕ／ｍｌ）～約１０^４ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^４ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^５ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^５ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^６ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^６ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^７ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^７ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^８ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^８ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^９ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^９ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^１０ｐｆｕ／ｍｌ、約１０^１０ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^１１ｐｆｕ／ｍｌ、または約１０^１１ｐｆｕ／ｍｌ～約１０^１２ｐｆｕ／ｍｌの量で含む場合がある。

【0054】

腫瘍溶解を誘導する方法
本開示では、腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導する方法であって、個体に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスまたは本開示の組成物を有効量投与するステップを含む方法が提供される。

【0055】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」とは、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体におけるがん細胞の数を減少させる量である。たとえば、ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」は、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体におけるがん細胞の数を、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与前、または複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与なしでの個体におけるがん細胞の数に比べて、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる量である。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」とは、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体におけるがん細胞の数を検出不可能なレベルに減少させる量である。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」とは、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体における腫瘍量を減少させる量である。たとえば、ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」は、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体における腫瘍量を、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与前、または複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与なしでの個体における腫瘍量に比べて、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる量である。

【0056】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」とは、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体の生存期間を伸ばす量である。たとえば、ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」とは、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体の生存期間を、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与なしでの個体の予測生存期間に比べて、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、３か月～６か月、６か月～１年、１年～２年、２年～５年、５年～１０年、または１０年より長く伸ばす量である。

【0057】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの「有効量」とは、それを必要とする個体に１または複数の用量で投与されたとき、耐久性のある抗腫瘍免疫応答、たとえば、腫瘍細胞数および／または腫瘍量および／または腫瘍成長の低減を少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも６か月、または少なくとも１年間もたらす抗腫瘍免疫応答を誘導する量である。

【0058】

適切な投与量は、種々の臨床的要素に基づき、担当医または他の有資格医療従事者が決定してよい。医療分野でよく知られているとおり、いずれか１人の患者のための投与量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、腫瘍負荷、および他の該当する要素を始めとする多くの要素に応じて決まる。

【0059】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、１用量あたり約１０^２プラーク形成単位（ｐｆｕ）～約１０^４ｐｆｕ、約１０^４ｐｆｕ～約１０^５ｐｆｕ、約１０^５ｐｆｕ～約１０^６ｐｆｕ、約１０^６ｐｆｕ～約１０^７ｐｆｕ、約１０^７ｐｆｕ～約１０^８ｐｆｕ、約１０^８ｐｆｕ～約１０^９ｐｆｕ、約１０^９ｐｆｕ～約１０^１０ｐｆｕ、約１０^１０ｐｆｕ～約１０^１１ｐｆｕ、または約１０^１１～約１０^１２ｐｆｕの量で投与される場合がある。

【0060】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、約１×１０^９ｐｆｕ～５×１０^１１ｐｆｕの合計量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、約１×１０^９ｐｆｕ～約５×１０^９ｐｆｕ、約５×１０^９ｐｆｕ～約１０^１０ｐｆｕ、約１０^１０ｐｆｕ～約５×１０^１０ｐｆｕ、約５×１０^１０ｐｆｕ～約１０^１１ｐｆｕ、約１０^１１ｐｆｕ～約５×１０^１１ｐｆｕ、または約５×１０^１１ｐｆｕ～約１０^１２ｐｆｕの合計量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、約２×１０^１０ｐｆｕの合計量で投与される。

【0061】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、約１×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇ～約５×１０^９ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、約１×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇ～約５×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇ、約５×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇ～約１０^９ｐｆｕ／患者体重ｋｇ、または約１０^９ｐｆｕ／患者体重ｋｇ～約５×１０^９ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、１×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、２×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、３×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、４×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、５×１０^８ｐｆｕ／患者体重ｋｇの量で投与される。

【0062】

ある場合では、複数回用量の本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが投与される。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与の頻度は、様々な要素、たとえば、症状の重症度などのいずれによっても変化しうる。たとえば、一部の実施形態では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、１か月に１回、１か月に２回、１か月に３回、１週間おき（ｑｏｗ）、週１回（ｑｗ）、週２回（ｂｉｗ）、週３回（ｔｉｗ）、週４回、週５回、週６回、１日おき（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与される。

【0063】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与の継続期間、たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与が行われる期間は、様々な要素、たとえば、患者応答などのいずれによっても変化しうる。たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、約１日～約１週間、約２週間～約４週間、約１か月～約２か月、約２か月～約４か月、約４か月～約６か月、約６か月～約８か月、約８か月～約１年、約１年～約２年、もしくは約２年～約４年に及ぶ期間、またはより長期間にわたって投与される場合がある。

【0064】

本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ法、ならびに全身および局所的投与経路を含む、薬物送達に適する利用可能ないずれかの方法および経路を使用して、個体に投与される。

【0065】

慣例的で薬学的に許容できる投与経路には、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、気管支内、くも膜下腔内、頭蓋内、皮下、皮内、局所適用、静脈内、動脈内、腹腔内、膀胱内、直腸、経鼻、経口、ならびに他の経腸および非経口投与経路が含まれる。投与経路は、所望なら、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスおよび／もしくは所望の効果に応じて組み合わせ、または調整してもよい。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、単一用量または複数回用量で投与される場合がある。

【0066】

ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、静脈内投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、筋肉内投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、局所投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、腫瘍内投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、腫瘍周囲に投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、頭蓋内投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、皮下投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、動脈内投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、腹腔内投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、膀胱内投与経路によって投与される。ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、くも膜下腔内投与される。

【0067】

本開示は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを医薬として使用するために提供する。

【0068】

本開示は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを、腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導する方法において使用するために提供する。

【0069】

組合せ
ある場合では、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、標準がん療法に対する補助療法として投与される。標準がん療法には、手術（たとえば、がん性の組織の外科的除去）、放射線療法、骨髄移植、化学療法処置、抗体処置、生体応答修飾物質処置、免疫療法処置、および前述のもののある特定の組合せが含まれる。ある場合では、本開示の方法は、ａ）それを必要とする個体に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスまたはそれを含む組成物を投与するステップと、ｂ）個体に第２のがん療法を施すステップとを含む。ある場合では、第２のがん療法は、化学療法、生物学的療法、放射線療法、免疫療法（腫瘍溶解性ワクチンを含む）、ホルモン療法、抗血管新生療法（ａｎｔｉ－ｖａｓｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ）、寒冷療法、毒素療法、腫瘍溶解性ウイルス療法（たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス以外の腫瘍溶解性ウイルス）、細胞療法、および手術から選択される。

【0070】

放射線療法には、限定はしないが、ビームなどの外部から適用される線源から、または小型放射線源の埋め込みによって送達される、Ｘ線またはガンマ線が含まれる。

【0071】

がん処置における使用に適する抗体として、限定はしないが、たとえば、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標））、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）、アレムツズマブ（Ｌｅｍｔｒａｄａ（商標））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（商標））、オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ（商標））、ランブロリズマブ（ＭＫ－３４７５）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ（商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（商標））など、および複合化抗体、たとえば、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｒｔａｒｇ（商標））、ブレンツキシマブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、^９０Ｙ標識イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（商標））、^１３１Ｉ標識トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（商標））などが挙げられる。がん処置における使用に適する抗体として、限定はしないが、たとえば、ＣＴＬＡ－４を標的とするイピリムマブ（黒色腫、前立腺がん、ＲＣＣの処置において使用される）、ＣＴＬＡ－４を標的とするトレメリムマブ（ＣＲＣ、胃、黒色腫、ＮＳＣＬＣの処置において使用される）、ＰＤ－１を標的とするニボルマブ（黒色腫、ＮＳＣＬＣ、ＲＣＣの処置において使用される）、ＰＤ－１を標的とするＭＫ－３４７５（黒色腫の処置において使用される）、ＰＤ－１を標的とするピディリズマブ（血液悪性腫瘍の処置において使用される）、ＰＤ－Ｌ１を標的とするＢＭＳ－９３６５５９（黒色腫、ＮＳＣＬＣ、卵巣、ＲＣＣの処置において使用される）、ＰＤ－Ｌ１を標的とするＭＥＤＩ４７３６、ＰＤ－Ｌ１を標的とするＭＰＤＬ３３２８０Ａ（黒色腫の処置において使用される）、ＣＤ２０を標的とするリツキシマブ（非ホジキンリンパ腫の処置において使用される）、イブリツモマブチウキセタンおよびトシツモマブ（リンパ腫の処置において使用される）、ＣＤ３０を標的とするブレンツキシマブベドチン（ホジキンリンパ腫の処置において使用される）、ＣＤ３３を標的とするゲムツズマブオゾガマイシン（急性骨髄性白血病の処置において使用される）、ＣＤ５２を標的とするアレムツズマブ（慢性リンパ球性白血病の処置において使用される）、ＥｐＣＡＭを標的とするＩＧＮ１０１およびアデカツムマブ（ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）（上皮性腫瘍（乳房、結腸、および肺）の処置において使用される）、ＣＥＡを標的とするラベツズマブ（乳房、結腸、および肺腫瘍の処置において使用される）、ｇｐＡ３３を標的とするｈｕＡ３３（結腸直腸癌の処置において使用される）、ムチンを標的とするペムツモマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）およびオレゴボマブ（乳房、結腸、肺、および卵巣腫瘍の処置において使用される）、ＴＡＧ－７２を標的とするＣＣ４９（ミンレツモマブ（ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ））（乳房、結腸、および肺腫瘍の処置において使用される）、ＣＡＩＸを標的とするｃＧ２５０（腎細胞癌の処置において使用される）、ＰＳＭＡを標的とするＪ５９１（前立腺癌の処置において使用される）、葉酸結合タンパク質を標的とするＭＯｖ１８およびＭＯＲＡｂ－００３（ファーレツズマブ）（卵巣腫瘍の処置において使用される）、ガングリオシド（ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２など）を標的とする３Ｆ８、ｃｈ１４．１８、およびＫＷ－２８７１（神経外胚葉腫瘍および一部の上皮性腫瘍の処置において使用される）、Ｌｅ ｙを標的とするｈｕ３Ｓ１９３およびＩｇＮ３１１（乳房、結腸、肺、および前立腺腫瘍の処置において使用される）、ＶＥＧＦを標的とするベバシズマブ（腫瘍脈管構造の処置において使用される）、ＶＥＧＦＲを標的とするＩＭ－２Ｃ６およびＣＤＰ７９１（上皮由来固形腫瘍の処置において使用される）、インテグリン＿Ｖ＿３を標的とするエタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）（腫瘍脈管構造の処置において使用される）、インテグリン＿５＿１を標的とするボロシキシマブ（腫瘍脈管構造の処置において使用される）、ＥＧＦＲを標的とするセツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、および８０６（神経膠腫、肺、乳房、結腸、および頭頚部腫瘍の処置において使用される）、ＥＲＢＢ２を標的とするトラスツズマブおよびペルツズマブ（乳房、結腸、肺、卵巣、および前立腺腫瘍の処置において使用される）、ＥＲＢＢ３を標的とするＭＭ－１２１（乳房、結腸、肺、卵巣、および前立腺腫瘍の処置において使用される）、ＭＥＴを標的とするＡＭＧ１０２、ＭＥＴＭＡＢ、およびＳＣＨ９００１０５（乳房、卵巣、および肺腫瘍の処置において使用される）、ＩＧＦ１Ｒを標的とするＡＶＥ１６４２、ＩＭＣ－Ａ１２、ＭＫ－０６４６、Ｒ１５０７、およびＣＰ７５１８７１（神経膠腫、肺、乳房、頭頚部、前立腺、および甲状腺がんの処置において使用される）、ＥＰＨＡ３を標的とするＫＢ００４およびＩＩＩＡ４（肺、腎臓、および結腸腫瘍、黒色腫、神経膠腫、ならびに血液悪性腫瘍の処置において使用される）、ＴＲＡＩＬＲ１を標的とするマパツムマブ（ＨＧＳ－ＥＴＲ１）（結腸、肺、および前立腺腫瘍、ならびに血液悪性腫瘍の処置において使用される）、ＴＲＡＩＬＲ２を標的とするＨＧＳ－ＥＴＲ２およびＣＳ－１００８、ＲＡＮＫＬを標的とするデノスマブ（前立腺がんおよび骨転移の処置において使用される）、ＦＡＰを標的とするシブロツズマブ（Ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）およびＦ１９（結腸、乳房、肺、膵臓、および頭頚部腫瘍の処置において使用される）、テネイシンを標的とする８１Ｃ６（神経膠腫、乳房および前立腺腫瘍の処置において使用される）、ＣＤ３を標的とするブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ、Ａｍｇｅｎ）（ＡＬＬの処置において使用される）、がん免疫療法において使用されるＰＤ－１を標的とするペンブロリズマブ、ｃ－Ｍｙｃを標的とする９Ｅ１０抗体などが挙げられる。

【0072】

ある場合では、本開示の方法は、ａ）有効量の本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスと、ｂ）抗ＰＤ－１抗体を投与するステップを含む。ある場合では、本開示の方法は、ａ）有効量の本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスと、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与するステップを含む。適切な抗ＰＤ－１抗体としては、限定はしないが、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）、ＭＫ－３４７５）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、ＢＭＳ－９２６５５８、ＭＤＸ１１０６）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ－０６８０）、ならびにＰＤＲ００１およびＰＦ－０６８０１５９１が挙げられる。適切な抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、限定はしないが、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ１１０５）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、Ｉｍｆｉｎｚｉ）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３３２８０Ａ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、およびアベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）が挙げられる。たとえば、ＳｕｎｓｈｉｎｅおよびＴａｕｂｅ（２０１５） Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２３：３２；Ｈｅｅｒｙら（２０１７） Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １８：５８７；Ｉｗａｉら（２０１７） Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．２４：２６；Ｈｕ－Ｌｉｅｓｋｏｖａｎら（２０１７） Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２８：増刊号５、ｍｄｘ３７６．０４８；および米国特許公開第２０１６／０１５９９０５を参照されたい。

【0073】

ある場合では、適切な抗体は、二重特異性抗体、たとえば、二重特異性モノクローナル抗体である。カツマキソマブ、ブリナツモマブ、ソリトマブ（ｓｏｌｉｔｏｍａｂ）、パソツキシズマブ（ｐａｓｏｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、およびフロテツズマブ（ｆｌｏｔｅｔｕｚｕｍａｂ）が、がん療法における使用に適する二重特異性抗体の非限定的な例である。たとえば、ＣｈａｍｅｓおよびＢａｔｙ（２００９） ＭＡｂｓ １：５３９；およびＳｅｄｙｋｈら（２０１８） Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．Ｄｅｖｅｌ．Ｔｈｅｒ．１２：１９５を参照されたい。

【0074】

本開示の方法と共に使用するのに適する生体応答修飾物質には、限定はしないが、（１）チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）活性の阻害薬、（２）セリン／スレオニンキナーゼ活性の阻害薬、（３）腫瘍関連抗原拮抗薬、たとえば、腫瘍抗原に特異的に結合する抗体、（４）アポトーシス受容体作動薬、（５）インターロイキン２、（６）インターフェロンα、（７）インターフェロンγ、（８）コロニー刺激因子、（９）血管新生の阻害薬、および（１０）腫瘍壊死因子の拮抗薬が含まれる。

【0075】

化学療法薬は、がん細胞の増殖を減少させる非ペプチド（すなわち、非タンパク質）化合物であり、細胞傷害薬および細胞分裂阻害薬を包含する。化学療法薬の非限定的な例には、アルキル化薬、ニトロソ尿素、代謝拮抗薬、抗腫瘍抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、およびステロイドホルモンが含まれる。

【0076】

細胞増殖を低減する働きをする薬剤は、当業界で知られており、広く使用されている。そのような薬剤には、限定はしないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、メルファラン（Ｌ－サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル－ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、ダカルバジン、およびテモゾロミドを始めとする、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、トリアゼンなどのアルキル化薬が含まれる。

【0077】

代謝拮抗薬には、限定はしないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ－Ｕ）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、フロクスウリジン（ＦｕｄＲ）、６－チオグアニン、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、ペントスタチン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、メトトレキセート、１０－プロパルギル－５，８－ジデアザホレート（ＰＤＤＦ、ＣＢ３７１７）、５，８－ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボリン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、およびゲムシタビンを始めとする、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害薬が含まれる。

【0078】

適切な天然産物およびその誘導体（たとえば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、エピポドフィロトキシン）としては、限定はしないが、Ａｒａ－Ｃ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン－Ｃ、Ｌ－アスパラギナーゼ、アザチオプリン、ブレキナル；アルカロイド、たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン他；ポドフィロトキシン、たとえば、エトポシド、テニポシド他；抗生物質、たとえば、アントラサイクリン、ダウノルビシン塩酸塩（ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン（ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ））、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、モルホリノ誘導体他；フェノキシゾンビスシクロペプチド、たとえば、ダクチノマイシン；塩基性グリコペプチド、たとえば、ブレオマイシン；アントラキノングリコシド、たとえば、プリカマイシン（ミトラマイシン）；アントラセンジオン、たとえば、ミトキサントロン；アジリノピロロインドールジオン、たとえば、マイトマイシン；大環状免疫抑制薬、たとえば、シクロスポリン、ＦＫ－５０６（タクロリムス、ｐｒｏｇｒａｆ）、ラパマイシン他；などが挙げられる。

【0079】

他の抗増殖性細胞傷害薬は、ナベルベン（ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、ＣＰＴ－１１、アナストラゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）、レトラゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン、レロキサフィン（ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、シクロホスファミド、イホスアミド（ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、およびドロロキサフィン（ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）である。

【0080】

抗増殖活性を有する微小管作用薬も、使用に適しており、限定はしないが、アロコルヒチン（ａｌｌｏｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）（ＮＳＣ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ ７５７）、コルヒチン誘導体（たとえば、ＮＳＣ３３４１０）、ドルスタチン１０（ｄｏｌｓｔａｔｉｎ１０）（ＮＳＣ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ１５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、Ｔａｘｏｌ（登録商標）誘導体、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、チオコルヒチン（ｔｈｉｏｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）（ＮＳＣ３６１７９２）、トリチルシステリン（ｔｒｉｔｙｌ ｃｙｓｔｅｒｉｎ）、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン；限定はしないが、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ディスコデルモリドを始めとする天然および合成エポチロン；エストラムスチン、ノコダゾールなどが含まれる。

【0081】

使用に適するホルモンモジュレーターおよびステロイド（合成類似体を含める）としては、限定はしないが、副腎皮質ステロイド、たとえば、プレドニゾン、デキサメタゾンなど；エストロゲンおよびプロゲスチン、たとえば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、エストラジオール、クロミフェン、タモキシフェンなど；副腎皮質抑制薬、たとえば、アミノグルテチミド；１７α－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル－テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、リュープロリド、フルタミド（Ｄｒｏｇｅｎｉｌ）、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）、およびＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）が挙げられる。エストロゲンは、増殖および分化を刺激し、したがって、この活性をブロックするのに、エストロゲン受容体に結合する化合物が使用される。コルチコステロイドは、Ｔ細胞増殖を阻害しうる。

【0082】

他の化学療法薬には、金属錯体、たとえば、シスプラチン（ｃｉｓ－ＤＤＰ）、カルボプラチンなど；尿素、たとえば、ヒドロキシ尿素；ヒドラジン、たとえば、Ｎ－メチルヒドラジン；エピドフィロトキシン（ｅｐｉｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）、トポイソメラーゼ阻害薬、プロカルバジン、ミトキサントロン、ロイコボリン、テガフールなどが含まれる。該当する他の抗増殖薬として、免疫抑制薬、たとえば、ミコフェノール酸、サリドマイド、デスオキシスパガリン（ｄｅｓｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、アザスポリン（ａｚａｓｐｏｒｉｎｅ）、レフルノミド、ミゾリビン、アザスピラン（ＳＫＦ１０５６８５）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）（ＺＤ１８３９、４－（３－クロロ－４－フルオロフェニルアミノ）－７－メトキシ－６－（３－（４－モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）などが挙げられる。

【0083】

「タキサン」は、活性のあるいずれかのタキサン誘導体またはプロドラッグだけでなく、パクリタキセルを包含する。「パクリタキセル」（本明細書では、たとえば、ドセタキセル、ＴＡＸＯＬ（商標）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）（ドセタキセルの製剤）、パクリタキセルの１０－デスアセチル類似体、パクリタキセルの３’Ｎ－デスベンゾイル－３’Ｎ－ｔ－ブトキシカルボニル類似体などの、類似体、製剤、および誘導体を包含すると理解すべきである）は、当業者に知られている技術を利用して容易に調製することもでき（ＷＯ９４／０７８８２、ＷＯ９４／０７８８１、ＷＯ９４／０７８８０、ＷＯ９４／０７８７６、ＷＯ９３／２３５５５、ＷＯ９３／１００７６；米国特許第５，２９４，６３７号、第５，２８３，２５３号、第５，２７９，９４９号、第５，２７４，１３７号、第５，２０２，４４８号、第５，２００，５３４号、第５，２２９，５２９号、およびＥＰ５９０，２６７も参照されたい）、または、たとえば、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、ミズーリ州セントルイス（太平洋イチイ（Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）起源のＴ７４０２、または雲南紅豆杉（Ｔａｘｕｓ ｙａｎｎａｎｅｎｓｉｓ）起源のＴ－１９１２）を始めとする様々な市販品供給元から入手することもできる。

【0084】

パクリタキセルは、パクリタキセルの化学的に入手可能な一般形態だけでなく、類似体および誘導体（たとえば、上で指摘したとおりのＴａｘｏｔｅｒｅ（商標）ドセタキセル）ならびにパクリタキセルコンジュゲート（たとえば、パクリタキセル－ＰＥＧ、パクリタキセル－デキストラン、パクリタキセル－キシロース）も指すと理解されるべきである。

【0085】

細胞療法には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法（ＣＡＲ－Ｔ療法）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞療法、樹状細胞（ＤＣ）療法（たとえば、ＤＣ系ワクチン）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）操作Ｔ細胞基盤療法などが含まれる。

【0086】

２’－デオキシグアノシンの合成類似体
本開示の方法は、ａ）本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを有効量投与するステップと、ｂ）２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体を有効量投与するステップとを含む場合がある。

【0087】

ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の有効量は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの投与の有害な副作用を軽減するのに有効である量である。たとえば、考えられる有害な副作用は、皮膚病変である。ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の有効量は、個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体におけるワクシニアウイルスを誘因とする皮膚病変の数および／または重症度および／または存続期間を減らすのに有効である量である。たとえば、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の有効量は、個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体におけるワクシニアウイルスを誘因とする皮膚病変の数および／または重症度および／または存続期間を、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体が投与される前または２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の投与なしでの個体におけるワクシニアウイルスを誘因とする皮膚病変の数および／または重症度および／または存続期間と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、または７５％より大きく減らすのに有効である量とされる場合がある。ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の有効量は、個体に１または複数の用量で投与されたとき、ワクシニアウイルスを誘因とする皮膚病変からのウイルスの排出（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）を減らすのに有効である量である。たとえば、ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の有効量は、個体に１または複数の用量で投与されたとき、ワクシニアウイルスを誘因とする皮膚病変からのウイルスの排出を、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体が投与される前または２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の投与なしでの個体におけるワクシニアウイルスを誘因とする皮膚病変からのウイルス排出のレベルまたは程度と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、または７５％より大きく減らすのに有効である量である。有害な副作用が皮膚病変である場合において、ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体は、好都合ないずれの投与経路（たとえば、局所、経口、静脈内など）によって投与してもよい。たとえば、有害な副作用が皮膚病変である場合において、ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体を局所投与することができる。

【0088】

２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の投与によって、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製は減少する。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製のそのような減少は、たとえば、個体における複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスのレベルの制御、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの効果の制御などに望ましい場合がある。ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の有効量は、個体に１または複数の用量で投与されたとき、個体における本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製を、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体が投与される前または２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の投与なしでの個体における複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製のレベルと比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、または７５％より大きく減少させるのに有効である量である。

【0089】

２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体は、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが投与された後に投与することができる。たとえば、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを投与してから１日～７日、７日～２週間、２週間～１か月、１か月～３か月、または３か月より長期間後に、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体を投与することができる。

【0090】

ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスによって誘導された、腫瘍成長の緩慢化が起こった時点、および／またはウイルス複製がそのピークもしくはピーク直後に達した時点、および／またはワクシニアウイルスタンパク質に対する循環抗体がそのピークもしくはピーク直後に達した時点で、個体に投与することができる。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが投与された後に腫瘍成長の緩慢化が起こったかどうかは、確立されている様々な方法のいずれかを使用して腫瘍成長および／またはがん細胞数を測定して明らかにすることができる。個体における本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの複製がそのピークまたはそのピーク直後にあるかどうかは、本明細書に記載するように、個体におけるＴＫｖポリペプチドのレベルを検出および／または測定することにより明らかにすることができ、適切な方法の非限定的な例は、ＰＥＴである。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスに対する循環抗体がそのピークまたはピーク直後にあるかどうかは、抗体のレベルを測定する標準の方法を使用して測定することができ、そのような方法としては、たとえば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などが挙げられる。

【0091】

一例として、本開示の方法は、ａ）それを必要とする個体に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを有効量投与するステップと、ｂ）ｉ）個体における腫瘍サイズおよび／もしくはがん細胞数、および／またはｉｉ）個体におけるＴＫｖポリペプチドのレベル、および／またはｉｉｉ）個体における複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスに対する抗体のレベルを測定するステップと、ｃ）測定ステップによって、ｉ）複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが投与される前の腫瘍成長および／またはがん細胞の数に比べて、腫瘍成長が緩慢化し、かつ／またはがん細胞の数が減少していること、および／またはｉｉ）個体におけるＴＫｖポリペプチドのレベルがそのピークにあるまたはそのピークを過ぎたばかりであること、および／またはｉｉｉ）個体における複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスに対する循環抗体のレベルがそのピークにあるまたはそのピークを過ぎたばかりであることが示される場合において、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体を投与するステップとを含む場合がある。たとえば、本開示の方法は、ａ）それを必要とする個体に、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを有効量投与するステップと、ｂ）個体に、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体を有効量投与するステップとを含む場合があり、投与ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）から５日～２０日（たとえば、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、または２０日）後に実施される。

【0092】

２’－デオキシ－グアノシンの適切な合成類似体としては、たとえば、アシクロビル（アシクログアノシン）、５’－ヨードデオキシウリジン（「イドクスウリジン」とも呼ばれる）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、２’－フルオロ－２’－デオキシ－５－ヨード－１－ベータ－ｄ－アラビノフラノシルウラシル（ＦＩＡＵ）などが挙げられる。２’－デオキシ－グアノシンの適切な合成類似体の構造を以下に示す。
ガンシクロビル：

【0093】

【化1】

バルガンシクロビル：

【0094】

【化2】

バラシクロビル：

【0095】

【化3】

ファムシクロビル：

【0096】

【化4】

【0097】

ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体は、１日に４０００ｍｇ未満の用量で、経口的に投与される。ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の適切な経口用量は、１日に約５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ、たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約１００ｍｇ、１日に約１００ｍｇ～１日に約２００ｍｇ、１日に約２００ｍｇ～１日に約３００ｍｇ、１日に約３００ｍｇ～１日に約４００ｍｇ、１日に約４００ｍｇ～１日に約５００ｍｇ、１日に約５００ｍｇ～１日に約６００ｍｇ、１日に約６００ｍｇ～１日に約７００ｍｇ、１日に約７００ｍｇ～１日に約８００ｍｇ、１日に約８００ｍｇ～１日に約９００ｍｇ、１日に約９００ｍｇ～１日に約１０００ｍｇ、１日に約１０００ｍｇ～１日に約１２５０ｍｇ、１日に約１２５０ｍｇ～１日に約１５００ｍｇ、１日に約１５００ｍｇ～１日に約１７５０ｍｇ、１日に約１７５０ｍｇ～１日に約２０００ｍｇ、１日に約２０００ｍｇ～１日に約２２５０ｍｇ、または１日に約２２５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇの範囲にある。ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の適切な経口用量は、１日に約２５００ｍｇ～１日に約３０００ｍｇ、１日に約３０００ｍｇ～１日に約３５００ｍｇ、または１日に約３５００ｍｇ～１日に約４０００ｍｇの範囲にある。

【0098】

非限定的な一例として、３０００ｍｇの合計日用量が１０００ｍｇの用量で１日３回投与されるガンシクロビル。ガンシクロビルは、３０００ｍｇ未満の合計日用量（たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ、たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約１００ｍｇ、１日に約１００ｍｇ～１日に約２００ｍｇ、１日に約２００ｍｇ～１日に約３００ｍｇ、１日に約３００ｍｇ～１日に約４００ｍｇ、１日に約４００ｍｇ～１日に約５００ｍｇ、１日に約５００ｍｇ～１日に約６００ｍｇ、１日に約６００ｍｇ～１日に約７００ｍｇ、１日に約７００ｍｇ～１日に約８００ｍｇ、１日に約８００ｍｇ～１日に約９００ｍｇ、１日に約９００ｍｇ～１日に約１０００ｍｇ、１日に約１０００ｍｇ～１日に約１２５０ｍｇ、１日に約１２５０ｍｇ～１日に約１５００ｍｇ、１日に約１５００ｍｇ～１日に約１７５０ｍｇ、１日に約１７５０ｍｇ～１日に約２０００ｍｇ、１日に約２０００ｍｇ～１日に約２２５０ｍｇ、または１日に約２２５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ）で投与される場合がある。ある場合では、ガンシクロビルは、経口投与で投与される。

【0099】

別の非限定的な一例として、アシクロビルを、１０００ｍｇ～４０００ｍｇの合計日用量で投与することができる。アシクロビルは、４０００ｍｇ未満の合計日用量（たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ、たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約１００ｍｇ、１日に約１００ｍｇ～１日に約２００ｍｇ、１日に約２００ｍｇ～１日に約３００ｍｇ、１日に約３００ｍｇ～１日に約４００ｍｇ、１日に約４００ｍｇ～１日に約５００ｍｇ、１日に約５００ｍｇ～１日に約６００ｍｇ、１日に約６００ｍｇ～１日に約７００ｍｇ、１日に約７００ｍｇ～１日に約８００ｍｇ、１日に約８００ｍｇ～１日に約９００ｍｇ、１日に約９００ｍｇ～１日に約１０００ｍｇ、１日に約１０００ｍｇ～１日に約１２５０ｍｇ、１日に約１２５０ｍｇ～１日に約１５００ｍｇ、１日に約１５００ｍｇ～１日に約１７５０ｍｇ、１日に約１７５０ｍｇ～１日に約２０００ｍｇ、１日に約２０００ｍｇ～１日に約２２５０ｍｇ、または１日に約２２５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ）で投与される場合がある。ある場合では、アシクロビルは、経口投与で投与される。

【0100】

別の一例としては、バルガンシクロビルが、約９００ｍｇ～約１８００ｍｇの合計日用量で投与される。バルガンシクロビルは、１８００ｍｇ未満の合計日用量（たとえば、約５００ｍｇ／日～約６００ｍｇ／日、約６００ｍｇ／日～約７００ｍｇ／日、約７００ｍｇ／日～約８００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日～約９００ｍｇ／日、約９００ｍｇ／日～約１０００ｍｇ／日、約１０００ｍｇ／日～約１２００ｍｇ／日、約１２００ｍｇ／日～約１４００ｍｇ／日、または約１４００ｍｇ／日～約１６００ｍｇ／日）で投与される場合がある。ある場合では、バルガンシクロビルは、経口投与で投与される。

【0101】

別の一例としては、ファムシクロビルが、約２０００ｍｇ／日～約４０００ｍｇ／日の合計日用量で投与される。ファムシクロビルは、４０００ｍｇ未満の合計日用量（たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ、たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約１００ｍｇ、１日に約１００ｍｇ～１日に約２００ｍｇ、１日に約２００ｍｇ～１日に約３００ｍｇ、１日に約３００ｍｇ～１日に約４００ｍｇ、１日に約４００ｍｇ～１日に約５００ｍｇ、１日に約５００ｍｇ～１日に約６００ｍｇ、１日に約６００ｍｇ～１日に約７００ｍｇ、１日に約７００ｍｇ～１日に約８００ｍｇ、１日に約８００ｍｇ～１日に約９００ｍｇ、１日に約９００ｍｇ～１日に約１０００ｍｇ、１日に約１０００ｍｇ～１日に約１２５０ｍｇ、１日に約１２５０ｍｇ～１日に約１５００ｍｇ、１日に約１５００ｍｇ～１日に約１７５０ｍｇ、１日に約１７５０ｍｇ～１日に約２０００ｍｇ、１日に約２０００ｍｇ～１日に約２２５０ｍｇ、または１日に約２２５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ）で投与される場合がある。ある場合では、ファムシクロビルは、経口投与で投与される。

【0102】

別の一例としては、バラシクロビルが、約２０００ｍｇ～約４０００ｍｇの合計日用量で投与される。バラシクロビルは、４０００ｍｇ未満の合計日用量（たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ、たとえば、１日に約５０ｍｇ～１日に約１００ｍｇ、１日に約１００ｍｇ～１日に約２００ｍｇ、１日に約２００ｍｇ～１日に約３００ｍｇ、１日に約３００ｍｇ～１日に約４００ｍｇ、１日に約４００ｍｇ～１日に約５００ｍｇ、１日に約５００ｍｇ～１日に約６００ｍｇ、１日に約６００ｍｇ～１日に約７００ｍｇ、１日に約７００ｍｇ～１日に約８００ｍｇ、１日に約８００ｍｇ～１日に約９００ｍｇ、１日に約９００ｍｇ～１日に約１０００ｍｇ、１日に約１０００ｍｇ～１日に約１２５０ｍｇ、１日に約１２５０ｍｇ～１日に約１５００ｍｇ、１日に約１５００ｍｇ～１日に約１７５０ｍｇ、１日に約１７５０ｍｇ～１日に約２０００ｍｇ、１日に約２０００ｍｇ～１日に約２２５０ｍｇ、または１日に約２２５０ｍｇ～１日に約２５００ｍｇ）で投与される場合がある。ある場合では、バラシクロビルは、経口投与で投与される。

【0103】

別の一例としては、ガンシクロビルが、約１０ｍｇ／ｋｇの合計日用量で投与される。ガンシクロビルは、１０ｍｇ／ｋｇ未満の合計日用量（たとえば、約１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約４ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ～約７ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、または約８ｍｇ／ｋｇ～約９ｍｇ／ｋｇ）で投与される場合がある。ある場合では、ガンシクロビルは、注射（たとえば、筋肉内注射、静脈内注射、または皮下注射）によって投与される。

【0104】

別の一例としては、アシクロビルが、約１５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇまたは約３０ｍｇ／ｋｇ～約４５ｍｇ／ｋｇの合計日用量で投与される。アシクロビルは、４５ｍｇ／ｋｇ未満の合計日用量（たとえば、約５ｍｇ／ｋｇ～約７．５ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ～約１２．５ｍｇ／ｋｇ、約１２．５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、または約３０ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇ）で投与される場合がある。ある場合では、アシクロビルは、注射（たとえば、筋肉内注射、静脈内注射、または皮下注射）によって投与される。

【0105】

別の一例としては、バルガンシクロビルが、約１０ｍｇ／ｋｇの合計日用量で投与される。バルガンシクロビルは、１０ｍｇ／ｋｇ未満の合計日用量（たとえば、約１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ～約４ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ～約７ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、または約８ｍｇ／ｋｇ～約９ｍｇ／ｋｇ）で投与される場合がある。ある場合では、バルガンシクロビルは、注射（たとえば、筋肉内注射、静脈内注射、または皮下注射）によって投与される。

【0106】

ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体は、局所投与される。局所投与に適する製剤には、たとえば、皮膚科製剤（たとえば、液体、クリーム、ゲルなど）および眼科製剤（たとえば、クリーム、液体、ゲルなど）が含まれる。ガンシクロビルの局所用量は、たとえば、眼科適応症については、たとえば、０．１５％製剤１滴を１日５回とすることができる。アシクロビルの局所用量は、たとえば、５％製剤を、皮膚病変を覆うのに十分な量で、１日６回適用とすることができる。イドクスウリジンの局所用量は、０．５％軟膏または０．１％クリーム１滴を４時間毎に適用とすることができる。

【0107】

ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体は、１０ｍｇ／体重ｋｇ未満の用量で静脈内に投与される。ある場合では、２’－デオキシ－グアノシンの合成類似体の適切な静脈内用量は、約１ｍｇ／体重ｋｇ～約２．５ｍｇ／体重ｋｇ、約２．５ｍｇ／体重ｋｇ～約５ｍｇ／体重ｋｇ、約５ｍｇ／体重ｋｇ～約７．５ｍｇ／体重ｋｇ、または約７．５ｍｇ／体重ｋｇ～約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲にある。

【0108】

がん
本開示の方法および組成物によって処置することのできるがん細胞には、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、首、卵巣、前立腺、皮膚、胃、脊髄、精巣、舌、または子宮からの細胞が含まれる。加えて、がんは、詳細には、次の組織学的タイプのもの、すなわち、新生物、悪性；癌腫；癌腫、未分化；巨細胞および紡錘体細胞癌；小細胞癌；乳頭状癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガストリノーマ、悪性；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌・胆管癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープ内腺癌；腺癌、家族性結腸ポリポーシス；固形癌；カルチノイド腫瘍、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞状腺癌；乳頭状・濾胞腺癌；非被包性硬化癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；脂腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫瘍、悪性；莢膜細胞腫、悪性；顆粒膜細胞腫瘍、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞癌；ライディッヒ細胞腫瘍、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；傍神経節腫、悪性；乳房外傍神経節腫、悪性；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性黒色腫；無色素性黒色腫；表層拡大性黒色腫；巨大色素性母斑における悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎芽性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、悪性；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚腫；胎芽性癌；奇形腫、悪性；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；血管外皮腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍皮質骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽腫、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫瘍；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫；グリオーマ、悪性；上衣腫；アストロサイトーマ；原形質性アストロサイトーマ；細線維性アストロサイトーマ；星芽腫；膠芽腫；希突起膠腫；希突起芽腫；原始神経外胚葉性；小脳肉腫；神経節神経芽腫；神経芽腫；網膜芽腫；嗅神経原腫瘍；髄膜腫、悪性；神経線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞性腫瘍、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞、びまん性；悪性リンパ腫、濾胞性；菌状息肉症；他の指定された非ホジキンリンパ腫；悪性組織球症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；膵臓がん；直腸がん；およびヘアリー細胞白血病でよいが、これらに限定されない。

【0109】

本開示の方法を使用して処置することのできる腫瘍には、たとえば、脳腫瘍、頭頸部がんの腫瘍、食道がんの腫瘍、皮膚がんの腫瘍、肺がんの腫瘍、胸腺がんの腫瘍、胃がんの腫瘍、結腸がんの腫瘍、肝臓がんの腫瘍、卵巣がんの腫瘍、子宮がんの腫瘍、膀胱がんの腫瘍、精巣がんの腫瘍、直腸がんの腫瘍、乳がんの腫瘍、または膵臓がんの腫瘍が含まれる。

【0110】

ある場合では、腫瘍は、結腸直腸腺癌である。ある場合では、腫瘍は、非小細胞肺癌である。ある場合では、腫瘍は、トリプルネガティブ乳がんである。ある場合では、腫瘍は、固形腫瘍である。ある場合では、腫瘍は、液状腫瘍である。ある場合では、腫瘍は、再発性である。ある場合では、腫瘍は、原発腫瘍である。ある場合では、腫瘍は、転移性である。

【0111】

検出
本開示は、個体において、組織、臓器、または体液中の本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを検出する方法を提供する。たとえば、本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスは、個体において、個体にワクシニアウイルスが投与された後、検出される場合がある。検出を行って、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが、意図した標的の場所またはその付近（たとえば腫瘍の場所またはその付近）に存在するかどうかを明らかにすることができる。検出を行って、個体の種々の組織、臓器、および体液における複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの分布を明らかにすることもできる。検出を行って、投与された複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが複製しているかどうか、および／またはどの程度複製しているかを明らかにすることもできる。

【0112】

本開示の検出方法は、ａ）本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが投与されている個体に、２’－デオキシ－グアノシンの検出可能に標識された合成類似体を投与するステップと、ｂ）個体において、検出可能に標識された合成類似体をｉｎ ｖｉｖｏで検出するステップとを含む場合がある。本開示の検出方法は、ａ）本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが投与されている個体に、２’－デオキシ－グアノシンの検出可能に標識された合成類似体を投与するステップと、ｂ）個体から取得された生体サンプル（たとえば、組織、臓器、または体液）において、検出可能に標識された合成類似体を検出するステップとを含む場合がある。本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの検出は、ワクシニアウイルスによってコードされている変異体ＴＫの活性を検出することを含みうる。

【0113】

２’－デオキシ－グアノシンの検出可能に標識された合成類似体としては、２’－デオキシ－グアノシンのいずれかの合成類似体の放射標識されたタイプが挙げられる。適切な放射標識には、たとえば、^１３１Ｉ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^６４Ｃｕ、^９９ｍＴｅ、^１１Ｃ、^１２４Ｉ、^１２３Ｉ、^１５Ｏ、^１３Ｎ、^８２ＲｂＣｌなどが含まれる。たとえば、適切な、検出可能に標識された類似体は、放射標識（たとえば、^１３１Ｉ標識）２’－フルオロ－２’－デオキシ－５－ヨード－１－ベータ－ｄ－アラビノフラノシルウラシル（ＦＩＡＵ）である。別の一例として、適切な、検出可能に標識された類似体は、９－［（３－［^１８Ｆ］フルオロ－１－ヒドロキシ－２－プロポキシ）メチル］グアニン（［^１８Ｆ］ＦＨＰＧである。別の一例として、適切な、検出可能に標識された類似体は、放射性ヨウ素標識（Ｅ）－５－（２－ヨードビニル）－２’－フルオロ－２’－デオキシウリジン（ＩＶＦＲＵ）である。

【0114】

検出可能に標識されたＨＳＶ－ＴＫ基質は、ＦＨＢＧ（９－［４－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン）、ＦＨＰＧ（９－（［３－フルオロ－１－ヒドロキシ－２－プロポキシ］メチル）グアニン）、ＦＧＣＶ（フルオロガンシクロビル）、ＦＰＣＶ（フルオロペンシクロビル）、ＦＩＡＵ（１－（２’－デオキシ－２’－フルオロ－１－β－Ｄ－アラビノフラノシル）－５－ヨードウラシル）、ＦＥＡＵ（フルオロ－５－エチル－１－ベータ－Ｄ－アラビノフラノシルウラシル）、ＦＭＡＵ（フルオロ－５－メチル－１－ベータ－Ｄ－アラビノフラノシルウラシル）、ＦＨＯＭＰ（６－（（１－フルオロ－３－ヒドロキシプロパン－２－イルオキシ）メチル）－５－メチルプリルイミジン－２，４（１Ｈ，－３Ｈ）－ジオン）、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、Ｎ－１に４－ヒドロキシ－３－（ヒドロキシメチル）ブチル側鎖を有する放射標識ピリミジン（ＨＨＧ－５－ＦＥＰ）、または２，３－ジヒドロキシプロピル、アシクロビル、ガンシクロビル、およびペンシクロビル様側鎖を有する５－（２－）ヒドロキシエチル）および５－（３－ヒドロキシプロピル）置換されたピリミジン誘導体から選択される化合物の検出可能に標識されたタイプでよい。

【0115】

個体において、検出可能に標識された合成類似体をｉｎ ｖｉｖｏで検出するのに適する方法には、たとえば、陽電子放射トポグラフィー（ＰＥＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）などが含まれる。

【0116】

上で指摘したとおり、ある場合では、検出は、個体から取得された生体サンプルにおいて複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスを検出する（たとえば、変異体ＴＫ活性を検出する）ことを含む。

【0117】

適切な生体サンプルには、限定はしないが、唾液、血液、血清、血漿、尿、吸引液、および生検サンプルが含まれる。したがって、患者に関しての用語「生体サンプル」は、血液および他の生体起源液状サンプル、生検材料などの固形組織サンプル、または組織培養物もしくはそれから得られる細胞およびその後代を包含する。この定義は、たとえば、試薬での処理、洗浄、またはがん細胞などのある特定の細胞集団の富化により、調達後にいずれかの方法で操作されているサンプルも包含する。この定義は、特定のタイプの分子が富化されているサンプルも包含する。用語「生体サンプル」は、臨床サンプル、たとえば、血液、血漿、血清、吸引液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、硝子体液、房水、滑液などの生体サンプルを包含し、外科的切除によって得られた組織、生検によって得られた組織、培養物中の細胞、細胞上清、細胞可溶化物、組織サンプル、臓器、骨髄なども含む。「生体サンプル」は、細胞、臓器、または組織から得られた生体液（たとえば、がん細胞、腫瘍などから得られた生体液）を包含する。適切な生体サンプルとしては、たとえば、腫瘍生検材料、腫瘍を取り囲む液体、血液、血清、血漿、胸水、腹水、臓器、組織などが挙げられる。生体サンプルは、細胞を含む場合もあり、または無細胞であることもある。

【0118】

個体における（ｉｎ ｖｉｖｏ）または個体から取得された生体サンプルにおける本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの検出は、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが個体に投与された後のいずれの時期に行ってもよい。たとえば、個体における（ｉｎ ｖｉｖｏ）または個体から取得された生体サンプルにおける本開示の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスの検出は、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルスが個体に投与されてから１日～７日後、１週間～４週間後、４週間～１か月後、１か月～３か月後、３か月～６か月後、６か月～１年後、または１年を超えた後に行われる場合がある。

【0119】

処置に適する対象
様々な対象が、本がん処置法による処置に適する。適切な対象には、いずれかの個体、たとえば、がんを有する、がんと診断されている、がんになるリスクがある、がんになったことがあり、がんが再発するリスクがある、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス以外の薬剤によるがんの処置を受け、そのような処置に応答しなかったことがある、または本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス以外の薬剤によるがんの処置を受けたが、そのような処置に最初に応答した後に再発してしまった、ヒトまたは非ヒト動物が含まれる。

【0120】

本開示の非限定的な態様の例
上述の本主題についての、実施形態を含めた態様は、単独でも、または他の１つもしくは複数の態様もしくは実施形態と組み合わせても、有益となりうる。前述の説明を限定することなく、１～４１の番号を付けた本開示のある特定の非限定的な態様を以下に提供する。本開示を読めば当業者には明白であるように、個々に番号が付けられた態様はそれぞれ、個々に番号が付けられた先行または後続の態様のいずれかと一緒に使用してもよいし、またはそれらと組み合わせてもよい。これは、態様のそのような組合せすべてについての支持を示すものであり、以下で明確に示す態様の組合せに限定されない。

【0121】

態様１．異種チミジンキナーゼ（ＴＫ）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、異種ＴＫポリペプチドは、デオキシグアノシンのリン酸化を触媒しうる、複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0122】

態様２．チミジンキナーゼ発現または機能の欠如をもたらす改変を含む、態様１の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0123】

態様３．異種ＴＫポリペプチドが、変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドである、態様１または２の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0124】

態様４．変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、野生型ＨＳＶ ＴＫに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１の野生型ＨＳＶ ＴＫアミノ酸配列のアミノ酸番号表記に準拠して、Ｌ１５９、Ｉ１６０、Ｆ１６１、Ａ１６８、およびＬ１６９の１つまたは複数の置換を含む、態様３の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0125】

態様５．変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、Ａ１６８Ｈ置換を含む、態様４の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0126】

態様６．変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、Ｌ１５９Ｉ置換、Ｉ１６０Ｌ置換、Ｆ１６１Ａ置換、Ａ１６８Ｙ置換、およびＬ１６９Ｆ置換を含む、態様４の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0127】

態様７．変異体ＴＫポリペプチドが、Ｌ１５９Ｉ置換、Ｉ１６０Ｆ置換、Ｆ１６１Ｌ置換、Ａ１６８Ｆ置換、およびＬ１６９Ｍ置換を含む、態様４の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0128】

態様８．変異体ＨＳＶ ＴＫポリペプチドが、配列番号２、３、または４のアミノ酸配列を含む、態様３の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0129】

態様９．コペンハーゲン株ワクシニアウイルスである、態様１～８のいずれか１つの複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0130】

態様１０．ＷＲ株ワクシニアウイルスである、態様１～８のいずれか１つの複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0131】

態様１１．ワクシニアウイルス遺伝子の全部または一部分の欠失を含む、態様１～１０のいずれか１つの複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0132】

態様１２．細胞外エンベロープウイルスの生成を強化する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、態様１～１１のいずれか１つの複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0133】

態様１３．Ｋ１５１Ｅ置換を含むＡ３４ポリペプチドをコードするＡ３４Ｒ遺伝子を含む、態様１０の複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0134】

態様１４．免疫調節性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む異種核酸を含む、態様１～１３のいずれか１つの複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0135】

態様１５．ａ）態様１～１２のいずれか１つのワクシニアウイルスと、ｂ）薬学的に許容できる賦形剤とを含む組成物。

【0136】

態様１６．腫瘍を有する個体において腫瘍溶解を誘導する方法であって、個体に、態様１～１４のいずれか１つのワクシニアウイルスまたは態様１５の組成物を有効量投与するステップを含む方法。

【0137】

態様１７．前記投与するステップが、単一用量のウイルスまたは組成物の投与を含む、態様１６の方法。

【0138】

態様１８．単一用量が、少なくとも１０^６プラーク形成単位（ｐｆｕ）のワクシニアウイルスを含む、態様１７の方法。

【0139】

態様１９．単一用量が、１０^９～１０^１２ｐｆｕのワクシニアウイルスを含む、態様１７の方法。

【0140】

態様２０．前記投与するステップが、複数回用量のワクシニアウイルスまたは組成物の投与を含む、態様１６の方法。

【0141】

態様２１．ワクシニアウイルスまたは組成物が、１日おきに投与される、態様２０の方法。

【0142】

態様２２．ワクシニアウイルスまたは組成物が、週１回投与される、態様１６～２１のいずれか１つの方法。

【0143】

態様２３．ワクシニアウイルスまたは組成物が、１週間おきに投与される、態様１６～２１のいずれか１つの方法。

【0144】

態様２４．腫瘍が、脳腫瘍、頭頸部がんの腫瘍、食道がんの腫瘍、皮膚がんの腫瘍、肺がんの腫瘍、胸腺がんの腫瘍、胃がんの腫瘍、結腸がんの腫瘍、肝臓がんの腫瘍、卵巣がんの腫瘍、子宮がんの腫瘍、膀胱がんの腫瘍、精巣がんの腫瘍、直腸がんの腫瘍、乳がんの腫瘍、または膵臓がんの腫瘍である、態様１６～２３のいずれか１つの方法。

【0145】

態様２５．腫瘍が結腸直腸腺癌である、態様１６～２３のいずれか１つの方法。

【0146】

態様２６．腫瘍が非小細胞肺癌である、態様１６～２３のいずれか１つの方法。

【0147】

態様２７．腫瘍がトリプルネガティブ乳がんである、態様１６～２３のいずれか１つの方法。

【0148】

態様２８．腫瘍が固形腫瘍である、態様１６～２３のいずれか１つの方法。

【0149】

態様２９．腫瘍が液状腫瘍である、態様１６～２３のいずれか１つの方法。

【0150】

態様３０．腫瘍が再発性である、態様１６～２９のいずれか１つの方法。

【0151】

態様３１．腫瘍が原発腫瘍である、態様１６～２９のいずれか１つの方法。

【0152】

態様３２．腫瘍が転移性である、態様１６～２９のいずれか１つの方法。

【0153】

態様３３．個体に第２のがん療法を施すステップをさらに含む、態様１６～３２のいずれか１つの方法。

【0154】

態様３４．第２のがん療法が、化学療法、生物学的療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管新生療法、寒冷療法、毒素療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、細胞療法、および手術から選択される、態様３３の方法。

【0155】

態様３５．第２のがん療法が、抗ＰＤ１薬または抗ＰＤ－Ｌ１薬を含む、態様３３の方法。

【0156】

態様３６．個体が免疫不全である、態様１６～３５のいずれか１つの方法。

【0157】

態様３７．ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が腫瘍内である、態様１６～３５のいずれか１つの方法。

【0158】

態様３８．ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が腫瘍周囲である、態様１６～３５のいずれか１つの方法。

【0159】

態様３９．ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が静脈内である、態様１６～３５のいずれか１つの方法。

【0160】

態様４０．ワクシニアウイルスまたは組成物の前記投与が、動脈内、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内である、態様１６～３５のいずれか１つの方法。

【0161】

態様４１．ワクシニアウイルスと組み合わせて、ワクシニアウイルスの有害な副作用を低減するのに有効である量のガンシクロビルを個体に投与するステップを含む、態様１６～４０のいずれか１つの方法。

【0162】

態様４２．副作用が皮膚病変である、態様４１の方法。

【0163】

態様４３．配列番号２、３、または４のアミノ酸配列を含む変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0164】

態様４４．配列番号２、３、または４のアミノ酸配列を含む変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、コペンハーゲン株ワクシニアウイルスであり、Ｋ１５１Ｅ置換を含むＡ３４Ｒ遺伝子を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0165】

態様４５．配列番号１１、１２、または１３を含む変異体単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＴＫポリペプチドヌクレオチド配列を含む複製コンピテント腫瘍溶解性組換えワクシニアウイルス。

【0166】

態様４６．（ｉ）態様４３～４５のいずれか１つのワクシニアウイルスと、（ｉｉ）薬学的に許容できる担体とを含む組成物。

【実施例】

【0167】

以下の実施例は、本発明の製造法および使用法についての完全な開示および説明が当業者に提供されるように掲げており、本発明者らが自らの発明であるとみなすものの範囲を限定するものでもなければ、以下の実験が、実施されたすべてまたは唯一の実験であることを表すものでもない。使用した数字（たとえば、量、温度など）に関しては、精度を確実にするように努めているが、多少の実験誤差およびずれが見込まれるはずである。別段指摘しない限り、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、摂氏度であり、圧力は、大気圧またはほぼ大気圧である。標準的な略語、たとえば、ｂｐ：塩基対、ｋｂ：キロベース、ｐｌ：ピコリットル、ｓまたはｓｅｃ：秒、ｍｉｎ：分、ｈまたはｈｒ：時間、ａａ：アミノ酸、ｎｔ：ヌクレオチド、ｉ．ｍ．：筋肉内、ｉ．ｐ．：腹腔内、ｓ．ｃ．：皮下などを使用する場合がある。

【0168】

（実施例１）
材料および方法
プラスミド構築
遺伝子合成技術を使用して、ＷＴ ＨＳＶ－ＴＫ、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ変異体、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ変異体、またはＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を含んでいるプラスミドを生成した。ｐＳＥＬプロモーターによって制御される、ＷＴ ＨＳＶ－ＴＫ、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ、またはＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫをコードする配列を、ワクシニアウイルス発現用にコドン最適化し、遺伝子合成についてはＧｅｎＳｃｒｉｐｔに寄託し、ｐＵＣ５７－ｍｉｎｉベクターに挿入した。ＷＴ ＨＳＶ－ＴＫ、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ、またはＴＫ．００７のアミノ酸配列は、図１において、それぞれ、配列番号１、２、３、および４の注釈が付けられている。ＷＴ ＨＳＶ－ＴＫ、ｄｍ３０ ＨＳＶ－Ｔｋ、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ、またはＴＫ．００７のアミノ酸１５１～１７５の並びは、図２において、それぞれ、配列番号５、６、７、および８の注釈が付けられている。ｐＳＥＬプロモーターは、次のヌクレオチド配列：ａａａａａｔｔｇａａａｔｔｔｔａｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｇｇａａｔａｔａａａｔａ（配列番号９）を有する。

【0169】

以下に示す実施例と関連して生成されたある特定のワクシニアウイルス構築物の特色を、以下で表１に要約する。

【0170】

【表1】

【0171】

ウイルスおよび細胞
野生型ポックスウイルスコペンハーゲン株を、さらなる改変のための最初のベクターとして使用した。ｐＳＥＬプロモーターの制御下にあるルシフェラーゼ－２Ａ－緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）カセットを、ワクシニアウイルスコペンハーゲン株のチミジンキナーゼ遺伝子（Ｊ２Ｒ領域）に挿入することにより、ワクシニアウイルスＩＧＶ－００６を構築した。ルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現は、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＳｐｅｃｔｒａｍａｘＭ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、発光によって確認した。ＧＦＰ発現を蛍光顕微鏡で確認した。

【0172】

ｐＳＥＬプロモーターの制御下にある合成されたＨＳＶ－ＴＫ遺伝子をＩＧＶ－００６のチミジンキナーゼ領域に入れて組み換えることにより、ＷＴ ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０３５）、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０３４）、およびｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０３３）を発現するワクシニア株を構築した。ＩＧＶ－００６チミジンキナーゼ領域へのＨＳＶ－ＴＫ遺伝子の挿入の成功を、サンガー配列決定およびガンシクロビルに対する感受性によって検証した。ウイルスを、以下に記載するとおりに増幅および精製した。

【0173】

ＨｅＬａおよびＢＳＣ－４０細胞は、ＡＴＣＣから入手した。Ａ５４９、Ｃｏｌｏ２０５、およびＭＤＡ ＭＢ２３１細胞は、腫瘍および腫瘍細胞株のＮＣＩ ＤＣＴＤ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙから入手した。ＨＭＥＣおよびＳＡＥＣ細胞は、Ｌｏｎｚａから入手した。ＨｅＬａＳ３およびＶｅｒｏＢ４細胞は、ＤＳＭＺから入手した。

【0174】

ウイルス増幅および精製
ウイルスを加え、１時間インキュベートすることにより、ＨｅＬａＳ３細胞（ＤＳＭＺ）を感染させた。感染させた後、培地を新たな培地と入れ替え、４８時間インキュベートして、ウイルス増幅を可能にした。インキュベートした後、遠心分離によって細胞を回収および収集した。Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザー（Ｗｈｅａｔｏｎ）を用いた機械的破砕によって細胞を溶解させた。２４％～４０％のスクロース勾配および超遠心分離法によってウイルス精製を実施した。精製ウイルスを－８０℃で保管し、以前に記載されているとおりに、精製ウイルスの段階希釈物をＢＳＣ－４０細胞（ＡＴＣＣ）に加えることにより、二通りに滴定した（Ｃｏｔｔｅｒら（２０１５） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３９：１４Ａ．３．１－１４Ａ．３．１８）。

【0175】

プラークアッセイによるウイルス滴定
保存濃縮された精製ウイルスの最終希釈度を１０^－９とした１０倍段階希釈によって、ウイルス力価を決定した。ウイルス希釈物を使用してＢＳＣ－４０細胞を感染させて、１ｍＬあたりのプラーク形成単位（ＰＦＵ／ｍＬ）の数字を求めた。標準の６ウェルマイクロプレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）において、ＢＳＣ－４０細胞の集密単層を含んでいるウェルに、各段階希釈物１ｍＬを二通りに適用した。細胞を１時間感染させ、新たな培地で洗浄し、１．５％のカルボキシメチルセルロースを含有する新たな培地の溶液（Ｔｅｋｎｏｖａ）で表面を覆った。４８時間インキュベートした後、培地を除去し、細胞を固定し、０．１％のクリスタルバイオレットを含有する２０％エタノール溶液（Ｓｉｇｍａ）で染色した。次いで、各ウェルにおけるプラークの数を計数し、二通りの力価の平均をとり、希釈倍率について調整することにより、保存力価を決定した。

【0176】

一段増殖曲線
ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ）の単層を、感染多重度（ＭＯＩ）３で１時間、三通りにウイルス感染させることにより、ウイルス複製を明らかにした。感染させた後、ウイルス接種材料を新たな培地と入れ替えた。感染後１２、１８、２４、４８、および７２時間の時点で、細胞を培地中に回収し、－８０℃で凍結させた。各サンプルのウイルス力価を、ウイルスプラークアッセイによって、二通りに決定した。

【0177】

ウイルス複製のガンシクロビルに対する感受性
ＨｅＬａ細胞の単層をＭＯＩ３で１時間、三通りにウイルス感染させることにより、ＨＳＶ－ＴＫを発現するウイルスについての、ガンシクロビル存在下でのウイルス複製の阻害を明らかにした。感染させた後、ウイルス接種材料を新たな培地と入れ替えた。感染したＨｅＬａ細胞に、０μＭ、０．０５μＭ、０．１μＭ、０．２５μＭ、０．５μＭ、０．７５μＭ、または１μＭのガンシクロビル（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を投与した。感染後４８時間の時点で、細胞を培地中に回収し、－８０℃で凍結させた。各サンプルのウイルス力価を、ウイルスプラークアッセイによって、二通りに決定した。

【0178】

腫瘍および正常一次ヒト細胞におけるウイルス複製
腫瘍細胞株Ａ５４９（ＮＣＩ）、Ｃｏｌｏ２０５（ＮＣＩ）、ＭＤＡ ＭＢ２３１（ＮＣＩ）、およびＨｅＬａ、ならびに一次ヒト細胞であるＨＭＥＣ（Ｌｏｎｚａ）およびＳＡＥＣ（Ｌｏｎｚａ）におけるウイルス複製を、細胞の単層をＭＯＩ１で１時間、三通りにウイルス感染させることにより明らかにした。感染させた後、ウイルス接種材料を新たな培地と入れ替えた。感染後２４および４８時間の時点で、細胞を培地中に回収し、－８０℃で凍結させた。各サンプルのウイルス力価を、ウイルスプラークアッセイによって、二通りに決定した。

【0179】

腫瘍および正常一次ヒト細胞における細胞傷害性アッセイ
腫瘍細胞株Ａ５４９（ＮＣＩ）、Ｃｏｌｏ２０５（ＮＣＩ）、およびＭＤＡ ＭＢ２３１（ＮＣＩ）、ならびに一次ヒト細胞であるＨＭＥＣ（Ｌｏｎｚａ）およびＳＡＥＣ（Ｌｏｎｚａ）における細胞死滅を、細胞の単層を種々のＭＯＩのウイルスに１時間かけて四通りに感染させることにより明らかにした。感染させた後、ウイルス接種材料を新たな培地と入れ替えた。感染後４８時間の時点で、Ｃｙｔｏｔｏｘ９６アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＳｐｅｃｔｒａｍａｘＭ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を４９０ｎｍで使用して、細胞傷害性をＬＤＨ放出によって明らかにした。Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを用いてデータ解析を行った。

【0180】

動物モデル、腫瘍モデル準備、および試験薬剤準備
ヌードＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を温度（６８～７９°Ｆ）および湿度（３０～７０％）制御された設備に収容した。動物の部屋は、１２時間で交替する明暗サイクルで維持した。順化および研究の生物学的段階の間は終始、乾燥食（５０５３ Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｐｉｃｏ Ｌａｂ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ２０）に自由に有り付けるようにした。ＨＣＴ－１１６細胞を培養し、各マウスの右前側腹部に移植した（１００μＬ中に１００万個の細胞）。ＨＣＴ１１６腫瘍体積が１５０～２５０ｍｍ^３に到達したとき、各動物に、ウイルス性試験薬剤（１００μＬ中３０００万ＰＦＵ）を静脈内投与した。

【0181】

ｉｎ ｖｉｖｏイメージング
試験薬剤投与から３または４日および７日後に、生物発光イメージング（ＢＬＩ）および陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを使用して動物を評価した。ＢＬＩについては、動物に腹腔内注射し、次いで、ＢＬＩのために酸素中のイソフルランガスで直ちに麻酔した。ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）を用いてイメージングを実施した。各撮像時点において、遮蔽および非遮蔽の、うつ伏せおよび仰向けに配置された動物について、ＶｉｖｏＱｕａｎｔ（Ｉｎｖｉｃｒｏ）を用いて２つの倍率変更された被写体像を生成し、当該領域について、ルシフェリン放射輝度を求めた。画像は、分析のために、放射輝度の単位（フォト／秒／ミリメートル^２／ステラジアン）で生成され、解剖学的照合用の白色光画像に同時記録された。

【0182】

ＰＥＴイメージングについては、動物に、覚醒状態で^１８Ｆ－ＦＨＢＧを静脈内注射してから、１０５分後に、酸素中のイソフルランガスで麻酔し、^１８Ｆ－ＦＨＢＧ取込み時間の１２０分が経過後に撮像した。Ｉｎｖｅｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）多モードＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ／ＣＴ撮像装置を用いてイメージングを実施した。ＶｉｖｏＱｕａｎｔソフトウェアを使用して、最大強度投影（ＭＩＰ）像を生成した。詳細には、同時記録されたＰＥＴ／ＣＴ ＭＩＰを、各時点において各動物について生成し、０．１～１０％の注射用量／ｇ（ＩＤ／ｇ）の固定範囲に合わせて調整した。さらに、他の領域全体にわたって少なめの取込みがより良好に示されるように胃腸シグナルが手作業で除去された、同時記録されたＰＥＴ／ＣＴ ＭＩＰを生成した。これらのＭＩＰは、０．５～３％ＩＤ／ｇの固定範囲に合わせて調整され、各撮像時点において生成された。

【0183】

解析する前に、活性を単位にして再生像を生成し、互いに同時記録し、０．２ｍｍ^３ボクセルに再サンプリングし、一様なサイズにトリミングした。^１８Ｆ－ＦＨＢＧの組織取込みを予測するために、筋肉（上腕）、下顎（左右）、および肝臓（左葉および右葉）についての関心領域（ＲＯＩ）が、一定体積の球形ＲＯＩを、各臓器それぞれの全域を代表する濃淡の範囲を取り囲むように組織の中心に置くことにより生成された。手動および自動分割閾値の組合せをＣＴに適用することにより、全身のＲＯＩを生成した。腸および胆嚢についてのＲＯＩは、適切な領域における該当ＰＥＴシグナルの連続閾値化を使用することにより生成した。尾および腫瘍ＲＯＩは、これらの領域に対象間で解剖学的なばらつきがあるため、手作業で分割した。

【0184】

臓器サンプル採取
試験薬剤投与から７日後、さらなるｅｘ ｖｉｖｏ分析のために、すべての動物を人道的に安楽死させ、組織を切除した。頭部、心臓、左右の後肢、左右の腎臓、大腸、肝臓、肺、左右の卵巣、小腸、脾臓、尾、および腫瘍組織を各動物から切除した。ｅｘ ｖｉｖｏ分析の後、組織サンプルは、液体窒素中で瞬間凍結し、－８０℃で保管した。

【0185】

組織サンプルからのウイルス滴定
臓器サンプルを室温の水浴で解凍し、秤量し、ＢｅａｄＲｕｐｔｏｒ Ｅｌｉｔｅホモジナイザー（Ｏｍｎｉ）を使用して、作動期間の間に氷浴上で５分間静止させる間隔を挟んで２回、６，０００ＲＰＭで２０秒間均質化した。サンプルの均質化には、１．４ｍｍまたは２．８ｍｍのセラミックビーズを含んだ補強されたプラスチックチューブが使用された。次いで、サンプルを２分間の遠心分離によって清澄化し、音波処理し、上清を直ちに滴定に使用した。最終希釈度を１０^－６までとした１０倍段階希釈によって、ウイルス力価を決定した。ウイルス希釈物を使用して、６ウェルプレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）中のＵ－２ ＯＳ細胞を感染させた。細胞は、各段階希釈物１ｍＬで１時間感染させ、新たな培地で洗浄し、１．５％のカルボキシメチルセルロースを含有する新たな培地の溶液（Ｔｅｋｎｏｖａ）で表面を覆った。４８時間インキュベートした後、培地を除去し、細胞を固定し、０．１％のクリスタルバイオレットを含有する２０％エタノール溶液（Ｓｉｇｍａ）で染色した。次いで、各ウェルにおけるプラークの数を計数し、二通りの力価の平均をとり、希釈倍率について調整することにより、力価を決定した。データは、組織１グラムあたりのプラーク形成単位（ＰＦＵ／グラム）の数字で示される。

【0186】

（実施例２）
ＨＳＶ－ＴＫ発現およびガンシクロビル感受性がワクシニアウイルス複製に与える影響を、ＨｅＬａ細胞を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３４）、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３３）、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、または無ＨＳＶ－ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）を発現するワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。ＨｅＬａ細胞に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３４）、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３３）、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、または無ＨＳＶ－ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）を発現するワクシニアウイルスを、３７℃で１時間かけて感染させた。インキュベート時間経過後、感染細胞を洗浄し、０μＭ、０．０５μＭ、０．１μＭ、０．２５μＭ、０．５μＭ、０．７５μＭ、および１μＭの濃度の漸増する量のガンシクロビルを有する新たな培地で表面を覆った。感染後４８時間の時点で、実施例１に記載したとおりのワクシニアウイルス力価についてのプラークアッセイによってウイルス複製を定量して、各条件におけるウイルス複製の量を表す、細胞あたりのウイルスプラーク形成単位の数字を求めた。無ＨＳＶ－ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）に比べて、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３４）、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３３）、および野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）では、ガンシクロビル存在下でのワクシニアウイルス複製が有意に減少した（図３）。特に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体の発現によって、低めのガンシクロビル濃度でのワクシニアウイルス複製が、変異体または野生型ＨＳＶ－ＴＫを発現するワクシニアウイルスに比べて有意に減少し、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体は、ガンシクロビルに対する感受性が最も高かったことが示された（図３）。この研究は、ＨＳＶ－ＴＫの組込みによって、ワクシニアウイルスにガンシクロビルに対する感受性がもたらされることの例証となる。

【0187】

図３に、ワクシニアウイルス複製という観点から、ガンシクロビルに対する感受性を付与するＨＳＶ－ＴＫに関するデータを提供する。ＨｅＬａ細胞に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、ＳＲ３９ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３４）、ｄｍ３０ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３３）、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、または無ＨＳＶ－ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）を発現するワクシニアウイルスを、ＭＯＩを１として感染させた。感染から２時間後、感染ＨｅＬａ細胞を新たな培地で１回洗浄し、０μＭ、０．０５μＭ、０．１μＭ、０．２５μＭ、０．５μＭ、０．７５μＭ、および１μＭの濃度のガンシクロビルを投与した。感染後４８時間の時点で、プラークアッセイによってワクシニアウイルス複製を定量した。漸増するガンシクロビル投与濃度によって、ＨＳＶ－ＴＫ ＷＴまたはＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスについては、ワクシニアウイルス複製が減少する結果となった。ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスは、最も低いガンシクロビル濃度でワクシニアウイルス産生が最も少なくなり、したがって、試験したＨＳＶ－ＴＫ ＷＴまたはＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスの中で最も高いガンシクロビルに対する感受性を示した。誤差バーは、ＳＤ（ｎ＝３）を示す。データは、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続いて、無ＨＳＶ－ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）に対するＴｕｋｅｙの多重比較検定によって分析した。（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【0188】

（実施例３）
ＨＳＶ－ＴＫ変異体発現がワクシニアウイルス複製に及ぼす影響を、代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、無ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）、およびＨＳＶ－ＴＫなしの野生型ワクシニアＴＫ（ＩＧＶ－０５９）を発現するワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。ＨｅＬａ（子宮頚がん）、Ａ５４９（肺腺癌）、Ｃｏｌｏ２０５（結腸がん）、およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳がん）がん細胞、ならびに正常一次ヒト乳腺上皮細胞（ＨＭＥＣ）および小気道上皮細胞（ＳＡＥＣ）に、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、無ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）、およびＨＳＶ－ＴＫなしの野生型ワクシニアＴＫ（ＩＧＶ－０５９）を発現するワクシニアウイルスを感染させた。感染後２４および４８時間の時点で、実施例１に記載したとおりに、ウイルスプラークアッセイを行い、プラークを計数して、細胞１個あたりに生じたウイルスプラーク形成単位の数を求めることにより、ウイルス複製を定量した。正常一次ヒト細胞１個あたりに生じたウイルスプラーク形成単位は、がん細胞１個あたりに比べて少なかった。さらに、ＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するウイルスは、野生型ワクシニアＴＫを発現するウイルスより有意に多くは複製しない。図４Ａ～４Ｆに、代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞における、ＨＳＶ－ＴＫ発現のワクシニアウイルス複製に対する影響に関するデータを提供する。がん細胞株Ａ）Ａ５４９（肺腺癌）、Ｂ）ＨｅＬａ（子宮頚がん）、Ｃ）Ｃｏｌｏ－２０５（結腸がん）、およびＤ）ＭＤＡ ＭＢ２３１（乳がん）、ならびにＥ）正常一次ヒト乳腺上皮細胞（ＨＭＥＣ）およびＦ）小気道上皮細胞（ＳＡＥＣ）に、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、無ＨＳＶ－ＴＫもしくはＪ２ＲワクシニアＴＫ（ＩＧＶ－００６）、またはＨＳＶ－ＴＫなしの野生型Ｊ２ＲワクシニアＴＫ（ＩＧＶ－０５９）を発現するワクシニアウイルスを、ＭＯＩを１として感染させた。感染後２４および４８時間の時点で、感染細胞を回収した。ウイルスプラークアッセイによって各サンプルのウイルス力価を決定し、細胞１個あたりに生じたプラーク形成単位（ｐｆｕ）によって表した。ワクシニアウイルス複製の正常細胞ではなく腫瘍細胞に対する選択性が、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）を発現するワクシニアウイルスで維持され、このウイルスは、試験した種々のがんおよび正常ヒト細胞において、Ｊ２ＲワクシニアＴＫなしのワクシニアウイルス（ＩＧＶ－００６）と非常に似通ったウイルス複製を示している。誤差バーは、ＳＤ（ｎ＝３）を示す。アステリスクは、無ＨＳＶ－ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）に対する統計的有意性を示す（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１，＊＊＊＊＊ｐ＜０．００００１ スチューデントｔ検定）。

【0189】

（実施例４）
ＨＳＶ－ＴＫ変異体発現が、正常ヒト細胞を標的とせずにがん細胞を標的とするワクシニアウイルス死滅効力に及ぼす影響を、代表的なヒトがん細胞株および正常一次ヒト細胞を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、および無ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）を発現するワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。Ａ５４９（肺腺癌）、Ｃｏｌｏ ２０５（結腸がん）、およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳がん）ヒトがん細胞、ならびにＳＡＥＣおよびＨＭＥＣ正常一次ヒト細胞に、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）、または無ＴＫ対照（ＩＧＶ－００６）を発現するワクシニアウイルスを感染させた。感染後４８時間の時点で、実施例１に記載したとおりに、４９０ｎｍでのＣｙｔｏｔｏｘ９６アッセイ読み出し情報を使用して、ＬＤＨ放出によって細胞傷害性を明らかにした。ヒトがん細胞において、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）を発現するウイルスの、無ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－００６）と比較して同様の細胞傷害性が観察された（図５Ａ～５Ｃ）。しかし、野生型（ＨＳＶ－ＴＫ）を発現するウイルスは、すべてのがん細胞において、他の２種のウイルスほど死滅効力を付与しなかった（図５Ａ～５Ｃ）。正常細胞では、試験したすべてのウイルスがより低い細胞傷害性を示す（図６Ａ～６Ｂ）。これらの結果から、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体が、ヒトがん細胞株において、ＴＫを発現しないワクシニアウイルスと同様の死滅効力を有することが証明される（図５Ａ～５Ｃ）。さらに、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体は、複製して腫瘍細胞株を死滅させ、一方、正常細胞は死滅させないワクシニアウイルス特異性を変化させない。

【0190】

図５Ａ～５Ｃに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒトがん細胞を死滅させるワクシニアウイルス効力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響に関するデータを提供する。Ａ）Ａ５４９（肺腺癌）、Ｂ）ＭＤＡ ＭＢ２３１（乳がん）、およびＣ）Ｃｏｌｏ－２０５（結腸がん）がん細胞に、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）を発現するワクシニアウイルス、またはＨＳＶ－ＴＫもしくはＪ２ＲワクシニアＴＫを発現しない対照ウイルス（ＩＧＶ－００６）を、異なるＭＯＩの範囲で感染させた。１時間吸収させた後、感染細胞を洗浄し、４８時間インキュベートした。上清を収集し、Ｃｙｔｏｔｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共に３０分間インキュベートし、プレートリーダーで４９０ｎｍの吸収を読み取った。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＣｏｌｏ－２０５細胞株では、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫを発現するウイルスと、Ｊ２ＲワクシニアＴＫなしのウイルスとに同様の細胞傷害性が認められる。しかし、Ａ５４９ヒト腫瘍細胞株では、高めのＭＯＩにおいて、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体または野生型ＨＳＶ－ＴＫを発現するワクシニアウイルスで、Ｊ２Ｒなしのワクシニアウイルスに比べて低い細胞傷害性が認められる。野生型ＨＳＶ－ＴＫを発現するワクシニアウイルスに感染したすべてのヒトがん細胞株において、より低い細胞傷害性が認められる。これは、Ｎ＝３からの代表的な実験であり、誤差バーは、ＳＤ（ｎ＝４）を示す。

【0191】

図６Ａおよび６Ｂに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって評価される、ヒト正常一次細胞を死滅させるワクシニアウイルス効力に対するＨＳＶ－ＴＫ発現の影響に関するデータを提供する。Ａ）ＳＡＥＣおよびＢ）ＨＭＥＣ正常一次ヒト細胞に、野生型ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０２３）、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）を発現するワクシニアウイルス、またはＨＳＶ－ＴＫもしくはＪ２ＲワクシニアＴＫを発現しない対照ウイルス（ＩＧＶ－００６）を、異なるＭＯＩの範囲で感染させた。１時間吸収させた後、感染細胞を洗浄し、４８時間インキュベートした。上清を収集し、Ｃｙｔｏｔｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共に３０分間インキュベートし、プレートリーダーで４９０ｎｍの吸収を読み取った。両方の正常一次ヒト細胞型において、試験したすべてのウイルスで同様の、低い細胞傷害性が認められる。有意差は認められなかった。誤差バーは、ＳＤ（ｎ＝４）を示す。

【0192】

（実施例５）
ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスは、非小細胞肺がんおよび結腸直腸腫瘍モデルの皮下の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）において有効性を示す。ワクシニアウイルスＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３８）を、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。ＮＯＤ／ＳＣＩＤ雌マウスに、両方の側腹部において、肺（ＬＵ５１９１）または結腸直腸（ＣＲ５０４３）ＰＤＸモデルのいずれかを皮下に移植した。腫瘍が５０ｍｍ^３～１００ｍｍ^３の間の体積範囲に達した後、動物を２つの群に無作為化し、研究の１日目および３日目に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３８）を発現するワクシニアウイルスまたは媒体を、（ＬＵ５１９１については）１×１０^８ｐｆｕまたは（ＣＲ５０４３については）１×１０^７ｐｆｕで２回投与した。実験の過程において、ＬＵ５１９１については３６日日間、ＣＲ５０４３については３３日日間、腫瘍サイズおよび動物体重を週２回測定し、腫瘍体積および体重の百分率変化を求めた（それぞれ、図７Ａ～７Ｃおよび図８Ａ～８Ｃ）。両方のＰＤＸモデルにおいて、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を含有するワクシニアウイルスの投与により、媒体のみに比べて、腫瘍体積が有意に縮小された。この研究によって、変異体ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫを発現するワクシニアウイルスの、２種の異なるＰＤＸモデルにおける有効性が証明される。

【0193】

図７Ａ～７Ｃに、肺患者由来異種移植（ＰＤＸ）腫瘍モデルにおける、ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するデータを提供する。Ａ）研究計画概略図。雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、ＬＵ５１９１を、各マウスの左右の側腹部において皮下移植した。腫瘍が５０ｍｍ^３～１００ｍｍ^３の間の体積範囲に達した後、マウスを２つの群に無作為化し、研究の１日目および３日目に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３８）を発現するワクシニアウイルスまたは媒体を、１×１０^８ｐｆｕで２回投与した。Ｂ）すべての動物について、腫瘍を週２回測定した。Ｃ）動物を週２回秤量し、両方の群について、投与前体重に対する百分率を算出した。誤差バーは、ＳＥＭを示す。データは、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続いて、ダネットの多重比較検定によって分析した。（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【0194】

図８Ａ～８Ｃに、結腸直腸ＰＤＸ腫瘍モデルにおける、ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するデータを提供する。Ａ）研究計画概略図。雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、ＣＲ５０４３を、各マウスの左右の側腹部において皮下移植した。腫瘍が５０ｍｍ^３～１００ｍｍ^３の間の体積範囲に達した後、動物を２つの群に無作為化し、研究の１日目および３日目に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３８）を発現するワクシニアウイルスまたは媒体を、１×１０^７ｐｆｕで２回投与した。Ｂ）すべての動物について、腫瘍を週２回測定した。Ｃ）動物を週２回秤量し、両方の群について、投与前体重に対する百分率を算出した。誤差バーは、ＳＥＭを示す。データは、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続いて、ダネットの多重比較検定によって分析した。（＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１）。

【0195】

（実施例６）
ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスの、局所ガンシクロビル投与に対する感受性の評価を、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて尾乱切モデルを使用してｉｎ ｖｉｖｏで実施した。ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。マウス尾乱切モデルにおいてウイルスを誘因とする病変の重症度がガンシクロビル処置によって軽減されうるかを試験することにより、ガンシクロビル感受性を評価した。尾の基部における、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）を発現するワクシニアウイルス１．５×１０^７ｐｆｕの乱切によって、マウス尾病変を生成させた。動物は、３つの群に分けた。すなわち、１つの群には、媒体（ワクシニアウイルスなし）を与え、１つの群には、病変の範囲に、１０μＬの０．１５％ガンシクロビルゲルを、ワクシニアの投与から４時間後に出発して、乱切後６日間毎日、１日に４回与え、１つの群には、ガンシクロビルを与えなかった。投与後６日目に、両方の群において、ウイルス排出を定量した。乱切後の合計１８日間、６日毎に病変進行を観察および測定した。病変長さを、６日目、１２日目、および１８日目に測定し、写真撮影した。ガンシクロビルで処置された群では、非処置群に比べて、ワクシニアウイルスによって引き起こされた局所病変がより速く治癒し、病変は、有意に小さかった（図９Ａおよび９Ｂ）。ガンシクロビルで処置した群における平均病変サイズは、媒体で処置した群と互角であった（図９Ａおよび９Ｂ）。ガンシクロビルで処置した群における病変重症度は、媒体で処置した群と同様であった。ガンシクロビル処置なしでは、乱切を受けたすべての動物が、時間と共に増悪する重度の病変を示した（図９Ａ）。最後に、局所ガンシクロビル処置によって、投与後６日目には、尾乱切部位からのウイルス排出が減少した（図９Ｃ）。この研究によって、ガンシクロビルでの局所処置が、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの投与後早期に適用されると、病変進展、病変サイズ、病変重症度、およびウイルス排出に効果を示すことが証明される。加えて、ガンシクロビルで処置した動物では、病変がより速く治癒し、解消した。

【0196】

図９Ａ～９Ｃに、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現するワクシニアウイルスの局所ガンシクロビル投与に対する感受性、および病変進展の減衰に関するデータを提供する。ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）を発現するワクシニアウイルスを、局所ガンシクロビル（ＧＣＶ）処置の非存在下または存在下で、尾乱切によって投与した。Ａ）尾病変の代表的な像、Ｂ）局所０．１５％ガンシクロビルゲル処置の存在下または非存在下での、ウイルス乱切後６、１２、および１８日目における病変サイズの定量化、およびＣ）局所０．１５％ガンシクロビルゲル処置の存在下または非存在下での、ウイルス乱切後６日目における尾乱切部位からの感染性ウイルス排出の定量化。誤差バーは、ＳＥＭを示す。データは、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続いて、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定によって分析した。（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。

【0197】

（実施例７）
皮下の非小細胞肺がん患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルにおいて腫瘍におけるウイルス複製を評価することにより、全身に送達されたＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体発現ワクシニアウイルスに対するガンシクロビルの影響をｉｎ ｖｉｖｏで推定した。ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体を発現するワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。マウスに、右側腹部において、非小細胞肺がん（ＬＵ５１９１）ＰＤＸ細胞を皮下移植した。腫瘍体積が１００ｍｍ^３～２００ｍｍ^３の間の体積範囲に達した時点で（移植後およそ３週間）、マウスを４つの処置群に無作為化した。１群のマウスには、媒体を投与し、２、３、および４群のマウスには、研究の１日および３日目に、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）を発現するワクシニアウイルスを、処置日あたり１×１０^７ｐｆｕで、２回静脈内投与した。ガンシクロビル５０ｍｇ／ｋｇを、３群には研究の１～５日目に、４群には研究の４～８日目に、腹腔内投与した。２群には、ガンシクロビルの代わりに媒体を与えた。研究の８日目に、各群における動物を屠殺し、腫瘍を採取し、腫瘍全域にわたるウイルス複製およびウイルスを介した導入遺伝子発現を、プラークアッセイおよび免疫組織化学によって明らかにした。ガンシクロビルが研究の４～８日目に投与されたとき、腫瘍におけるウイルス複製が有意に減少し、ガンシクロビルが研究の１～５日目に投与されたとき、ウイルス複製は完全に阻害された（図１０Ａ）。加えて、卵巣、脾臓、肺、および肝臓を含む正常臓器では、いずれの群についても、複製するウイルスが検出されなかった。ガンシクロビルが研究の４～８日目に投与されたとき、８日目に、免疫組織化学によって、ウイルスを介したＧＦＰ発現が低レベルで検出され、ガンシクロビルが研究の１～５日に投与されたとき、ウイルスを介したＧＦＰ発現は検出されなかった（図１０Ｂ）。この研究は、ワクシニアウイルスへのＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体の組込みによって、このウイルスがガンシクロビル全身処置による複製阻害およびクリアランスを被りやすくなることの例証となる。さらに、腫瘍溶解性ウイルスの活性を加減する方法として、ウイルス複製が減少するが完全に阻害されないように、ガンシクロビル処置のタイミングを調整することができる。

【0198】

図１０Ａおよび１０Ｂに、変異体ＨＳＶ－ＴＫ発現ワクシニアウイルスの、ガンシクロビル全身投与による全身性阻害に関するデータを提供する。ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）を発現するワクシニアウイルスを、２種の異なるガンシクロビル処置タイムラインを使用する全身ガンシクロビル（ＧＣＶ）処置の非存在下または存在下で静脈内投与した。Ａ）投与後８日目の腫瘍におけるウイルス複製（感染性ウイルス）の定量化。誤差バーは、９５％ＣＩを示す。 ＊＊＊ ＡＮＯＶＡによるｐ＜０．００１。Ｂ）腫瘍における、ワクシニアウイルスを介したＧＦＰ導入遺伝子発現の代表的な像。

【0199】

（実施例８）
ヌードマウスにおいてヒトＰＤＸおよびヒト腫瘍細胞株異種移植片の腫瘍成長阻害を評価することにより、置換変異体の影響をｉｎ ｖｉｖｏで推定した。ワクシニアウイルスＴＫをもたず、ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＶＶ０７）またはＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）のいずれかを含んでいるコペンハーゲンワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。第１の研究では、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ雌マウスに、後方側腹部において、肺（ＬＵ５１９１）ＰＤＸ組織を皮下移植した。腫瘍が５０ｍｍ^３～８５ｍｍ^３の間の体積範囲に達した後、動物を３つの群に無作為化した。１日目に、１群のマウスには、媒体を投与し、２～３群のマウスには、ワクシニアウイルスＴＫをもたず、ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＶＶ０７）またはＴＫ．００７ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）のいずれかを含んでいる組換えコペンハーゲンワクシニアウイルス３×１０^６ＰＦＵを静脈内投与した（図１１Ａ）。腫瘍体積を、終点（２０００ｍｍ^３を超過する腫瘍体積）まで週２回測定した。ＩＧＶ－０７７およびＶＶ０７が投与されたマウスは、媒体に比べて統計的に有意に増した腫瘍成長阻害を示した（図１１Ｂ）。第２の研究では、マウスに、右前方側腹部において、ヒトＨＣＴ－１１６結腸直腸細胞を皮下移植した。腫瘍が５０ｍｍ^３～８５ｍｍ^３のサイズ範囲に達した時点で、マウスを３つの処置群に無作為化した。１日目に、１群のマウスには、媒体を投与し、２～３群のマウスには、ワクシニアウイルスＴＫをもたず、ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＶＶ０７）またはＴＫ．００７ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）のいずれかを含んでいる組換えコペンハーゲンワクシニアウイルス３×１０^６ＰＦＵを静脈内投与した（図１２Ａ）。腫瘍体積を、終点（腫瘍体積が２０００ｍｍ^３を超過）まで週２回測定した。ＩＧＶ－０７７およびＶＶ０７が投与されたマウスは、媒体に比べて有意に増した腫瘍成長阻害を示した（図１２Ｂ）。これらの研究は、変異体ＨＳＶ－ＴＫの組込みが、腫瘍成長阻害における腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの有効性、したがってｉｎ ｖｉｖｏでの生存に有害な影響を及ぼさないことの例証となる。

【0200】

図１１Ａおよび１１Ｂに、肺ＰＤＸ腫瘍モデルにおける、ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するデータを提供する。Ａ）研究計画概略図。雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、各マウスの後方側腹部において、ヒトＬＵ５１９１ ＰＤＸ組織を皮下移植した。腫瘍が５６．５ｍｍ^３～８４．３ｍｍ^３の間の体積範囲に達した後、マウスを３つの群に無作為化し、研究の１日目に、ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＶＶ００７）を発現するワクシニアウイルス、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）を発現するワクシニアウイルス、または媒体を、３×１０^６ｐｆｕで１回投与した。Ｂ）すべての動物について、腫瘍を週２回測定した。

【0201】

図１２Ａおよび１２Ｂに、結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に関するデータを提供する。Ａ）研究計画概略図。マウスに、各マウスの右前方側腹部において、ＨＣＴ－１１６を皮下移植した。腫瘍が５６．５ｍｍ^３～８４．３ｍｍ^３の間の体積範囲に達した後、マウスを３つの群に無作為化し、研究の１日目に、ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＶＶ００７）を発現するワクシニアウイルス、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０７７）を発現するワクシニアウイルス、または媒体を、３×１０^６ｐｆｕで１回投与した。Ｂ）すべての動物について、腫瘍を週２回測定した。

【0202】

（実施例９）
腫瘍溶解性ワクシニアのｉｎ ｖｉｖｏでの分布および複製のリアルタイム像を検出できるかどうかを、放射標識ガンシクロビルおよび陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ－ＣＴ）の使用によって判定した。ワクシニアウイルスＴＫをもたず、ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＩＧＶ－００６）またはＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５）のいずれかを含んでいるコペンハーゲンワクシニアウイルスを、実施例１に記載したとおりに生成および製造した。マウスに、右前方側腹部において、ＨＣＴ－１１６ヒト結腸直腸細胞を皮下移植した。腫瘍が９０ｍｍ^３～２２０ｍｍ^３のサイズ範囲に達した時点で、マウスを２つの処置群に無作為化した。マウスには、１日目に、ワクシニアウイルスＴＫをもたず、ＴＫ．００７ ＨＳＶ－ＴＫ変異体（ＩＧＶ－０３５、１群）またはルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＩＧＶ－００６、２群）のいずれかを含んでいる組換えコペンハーゲンワクシニアウイルス３×１０^７ＰＦＵを静脈内投与した。５日目および８日目に、放射標識^１８Ｆ－フルオロ－３－［ヒドロキシメチル］ブチル）グアニン（^１８Ｆ－ＦＨＢＧ）をマウスに投与し、ＰＥＴ－ＣＴを使用して撮像した。ＩＧＶ－０３５が投与されたマウスは、８日目に、腫瘍特異的シグナルの増加を示した（図１３Ａ）。比較として、２群に投与されたＩＧＶ－００６腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにはＨＳＶ－ＴＫが存在しないため、予想されたとおり、ＩＧＶ－００６が投与されたマウスは、腫瘍特異的シグナルを示さなかった（図１３Ｂ）。^１８Ｆ－ＦＨＢＧシグナルを定量化し、腫瘍において検出された注射された^１８Ｆ－ＦＨＧＢ活性の百分率を（グラムでの）組織重量に対して正規化したものとして報告した。ＩＧＶ－０３５が投与されたマウスは、ＩＧＶ－００６が投与されたマウスに比べて有意に高い^１８Ｆ－ＦＨＢＧシグナルを示し（図１３Ｃ）、ＨＳＶ－ＴＫの発現を、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍溶解性ウイルス複製の画像化に使用できる可能性があることが示された。組織重量あたりのウイルス力価は、ＩＧＶ－０３５（図１３Ｄ）およびＩＧＶ－００６（図１３Ｅ）の両方について、肝臓および肺組織に比べて腫瘍において桁違いに高かった。他の組織に比べて腫瘍においてウイルス力価が高いことから、観察されたＩＧＶ－０３５からのシグナルが、腫瘍組織に特異的に局在化していることがさらに証明される。腫瘍組織重量あたりの平均ウイルス力価は、ＩＧＶ－０３５とＩＧＶ－００６について同様であったが、これは、ＩＧＶ－００６ではなくＩＧＶ－０３５で腫瘍組織におけるシグナルが存在したことは、変異体ＨＳＶ－ＴＫの存在によるものであり、ウイルス力価の違いによるものではないことを示している。これらの研究は、変異体ＨＳＶ－ＴＫの組込みが、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのｉｎ ｖｉｖｏでの分布および複製のイメージング検出を容易にしうることの例証となる。

【0203】

図１３Ａ～１３Ｅに、変異体ＨＳＶ－ＴＫを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの、ヒト結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの分布および複製のリアルタイム像検出への、放射標識基質の使用に関するデータを提供する。Ａ）変異体ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０３５）を発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルス３×１０^７ｐｆｕおよび放射標識基質が静脈内投与されたマウスの全身ＰＥＴ－ＣＴイメージング。マウスに、各マウスの右前方側腹部において、ヒトＨＣＴ－１１６結腸直腸細胞を皮下移植した。Ｂ）ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＩＧＶ－００６）を含んでいる腫瘍溶解性ワクシニアウイルス３×１０^７ｐｆｕおよび放射標識基質（^１８Ｆ－ＦＨＢＧ）が静脈内投与されたマウスの全身ＰＥＴ－ＣＴイメージング。マウスに、各マウスの右前方側腹部において、ヒトＨＣＴ－１１６結腸直腸細胞を皮下移植した。Ｃ）組織重量１グラムあたりの注射用量の^１８Ｆ－ＦＨＧＢ活性に対する百分率として示す、腫瘍における^１８Ｆ－ＦＨＢＧ活性の定量化。Ｄ）変異体ＨＳＶ－ＴＫ（ＩＧＶ－０３５）を発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルス３×１０^７ｐｆｕが投与されたマウスの腫瘍および非腫瘍組織におけるウイルス力価の定量化。Ｅ）ルシフェラーゼ－２Ａ－ＧＦＰ（ＩＧＶ－００６）を含んでいる腫瘍溶解性ワクシニアウイルス３×１０^７ｐｆｕが投与されたマウスの腫瘍および非腫瘍組織におけるウイルス力価の定量化。Ａ）およびＢ）については、腸において認められた非特異的シグナルを、すべての像から削除している。Ｃ）、Ｄ）、およびＥ）について、誤差バーはＳＥＭを示す。データは、Ｃ）についてはスチューデントｔ検定、またはＤ）およびＥ）については二元配置ＡＮＯＶＡによって分析した。アステリスクは、ｃ）についてはＩＧＶ－００６と比較した有意性、またはＤ）およびＥ）については腫瘍組織力価と比較した有意性を示す（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１）。

【0204】

本発明について、その詳細な実施形態に関連して述べてきたが、本発明の真意および範囲から逸脱することなく、種々の変更がなされてもよく、均等物を代用してもよいことは、当業者に理解されるはずである。加えて、特定の状況、材料、物体の組成、工程、１または複数の工程ステップが、本発明の目的、意図、および範囲に適合するように、多くの改変を行うことができる。そうしたすべての改変は、本明細書に添付される請求項の範囲内にあるものとする。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4-1】

【図4-2】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13-1】

【図13-2】

【図13-3】

【図13-4】

【配列表】

2022520220000001.app

【国際調査報告】