特表 2022-521217 ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質およびそれらを含むロタウイルス様粒子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-06

(54)【発明の名称】ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質およびそれらを含むロタウイルス様粒子

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20220330BHJP

   C12N 15/46 20060101ALI20220330BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20220330BHJP

   C07K 14/14 20060101ALI20220330BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20220330BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220330BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20220330BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20220330BHJP

   A61K 39/15 20060101ALI20220330BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220330BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20220330BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20220330BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/46

C07K19/00

C07K14/14

C12N7/01

C12N5/10

C07K16/00

C12P21/08

A61K39/15

A61P37/04

A61P31/12

A61K38/16

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021548591

(86)(22)【出願日】2020-02-19

(85)【翻訳文提出日】2021-10-15

(86)【国際出願番号】 CA2020050212

(87)【国際公開番号】W WO2020168424

(87)【国際公開日】2020-08-27

(31)【優先権主張番号】62/807,389

(32)【優先日】2019-02-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】502121395

【氏名又は名称】メディカゴ インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】000002956

【氏名又は名称】田辺三菱製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100150500

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 靖

(74)【代理人】

【識別番号】100176474

【弁理士】

【氏名又は名称】秋山 信彦

(72)【発明者】

【氏名】ダウスト，マルク－アンドレ

(72)【発明者】

【氏名】ラボイエ，ピエール－オリヴィエ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA11

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA88X

4B065AA88Y

4B065AA89X

4B065AA89Y

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA45

4C084AA01

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA44

4C084CA01

4C084CA53

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB33

4C085AA03

4C085BA56

4C085CC08

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045BA41

4H045CA01

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA31

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質および前記ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）をコードする核酸が提供される。植物におけるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質およびＲＬＰの生成のための方法もまた記載される。前記ＶＰ７融合タンパク質は、７－１ａサブドメインをコードする第１の配列、７－２ドメインをコードする第２の配列、および７－１ｂサブドメインをコードする第３の配列を含み、前記７－２ドメインの配列は、第１のロタウイルス株に由来し、前記７－１ａサブドメインの配列、前記７－１ｂサブドメインの配列、または前記７－１ａサブドメインの配列および前記７－１ｂサブドメインの配列は、第２のロタウイルス株に由来する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、前記配列が、７－１ａサブドメインをコードする第１の配列、７－２ドメインをコードする第２の配列、および７－１ｂサブドメインをコードする第３の配列を含み、
前記７－２ドメインの配列が、第１のロタウイルス株に由来し、
前記７－１ａサブドメインの配列、前記７－１ｂサブドメインの配列、または前記７－１ａサブドメインの配列および前記７－１ｂサブドメインの配列が、第２のロタウイルス株に由来するものであって、
前記第１のロタウイルス株が、前記第２のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株である、核酸。

【請求項2】

前記７－２ドメインおよび前記７－１ｂサブドメインが、第１のロタウイルス株に由来し、前記７－１ａサブドメインが、第２のロタウイルス株に由来する、請求項１に記載の核酸。

【請求項3】

前記７－２ドメインおよび前記７－１ａサブドメインが、第１のロタウイルス株に由来し、前記７－１ｂサブドメインが、第２のロタウイルス株に由来する、請求項１に記載の核酸。

【請求項4】

前記７－２ドメインが、第１のロタウイルス株に由来し、前記７－１ａサブドメインおよび前記７－１ｂサブドメインが、第２のロタウイルス株に由来する、請求項１に記載の核酸。

【請求項5】

リーダーペプチドおよびグリップアームをさらにコードする、請求項１～４のいずれか１項に記載の核酸であって、前記リーダーペプチドおよびグリップアームが、前記第１のロタウイルス株に由来する、核酸。

【請求項6】

前記第１のロタウイルス株および前記第２のロタウイルス株が、遺伝子型Ｇ１～Ｇ１９を有するロタウイルス株のいずれか１つから選択される、請求項１に記載の核酸。

【請求項7】

前記第１のロタウイルス株が、遺伝子型Ｇ１２のロタウイルス株である、請求項１に記載の核酸。

【請求項8】

前記第１のロタウイルス株、前記第２のロタウイルス株、または前記第１のロタウイルス株および前記第２のロタウイルス株が、遺伝子型Ｇ４のロタウイルス株ではない、請求項１に記載の核酸。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸によってコードされる、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質。

【請求項10】

請求項９に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含む、ロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）。

【請求項11】

ロタウイルスタンパク質ＶＰ２およびＶＰ６をさらに含む、請求項１０に記載のＲＬＰ。

【請求項12】

植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法であって、請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸を含む植物、植物の部分、または植物細胞を供し、次いで前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の発現および生成を可能にする条件下でインキュベートすることを含む、方法。

【請求項13】

植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法であって、請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸を、前記植物、植物の部分、または植物細胞に導入し、次いで前記植物、植物の部分、または植物細胞を、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の発現および生成を可能にする条件下でインキュベートすることを含む、方法。

【請求項14】

請求項１２または１３に記載の方法によって生成される、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質。

【請求項15】

植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）を生成するための方法であって、
ａ）請求項９に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第１の調節領域を含む、第１の核酸、ロタウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第２の調節領域を含む、第２の核酸、およびロタウイルスＶＰ６タンパク質をコードする第３のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第３の調節領域を含む、第３の核酸を含む、植物、植物の部分、または植物細胞を供し、次いで
ｂ）前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記第１、第２、および第３の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートし、それにより前記ＲＬＰを生成することを含む、方法。

【請求項16】

植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）を生成するための方法であって、
ａ）前記植物、植物の部分、または植物細胞に、
ＶＰ２、ＶＰ６、および請求項９に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のうちの１つから選択される第１のロタウイルス構造タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第１の調節領域を含む、第１の核酸、
ＶＰ２、ＶＰ６、および請求項９に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のうちの１つから選択される第２のロタウイルス構造タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第２の調節領域を含む、第２の核酸、ならびに
ＶＰ２、ＶＰ６、および請求項９に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のうちの１つから選択される第３のロタウイルス構造タンパク質をコードする第３のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第３の調節領域を含む、第３の核酸
を導入し、次いで
ｂ）前記植物、植物の部分または植物細胞を、前記第１、第２、および第３の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートし、それによりＶＰ２、ＶＰ６、および請求項９に記載のＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを生成することを含む、方法。

【請求項17】

ｃ）前記植物、植物の部分、または植物細胞を回収し、次いで
ｄ）前記植物、植物の部分、または植物細胞から前記ＲＬＰを抽出し、精製することを含む、請求項１５～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記第１、第２、および第３の核酸が、前記植物、植物の部分、または植物細胞において一過的または安定的に発現される、請求項１５または１６に記載の方法。

【請求項19】

請求項１５～１８のいずれか１項に記載の方法によって生成される、ＲＬＰ。

【請求項20】

請求項９または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を用いて調製される、抗体または抗体フラグメント。

【請求項21】

請求項１０または１９に記載のＲＬＰを用いて調製される、抗体または抗体フラグメント。

【請求項22】

前記抗体または抗体フラグメントが、７－１ａサブドメインのエピトープを認識する、請求項２０または２１に記載の抗体または抗体フラグメント。

【請求項23】

抗体または抗体フラグメントを生成するための方法であって、請求項７または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、あるいは請求項１０または１９に記載のＲＬＰを、これを必要とする対象、または宿主動物に投与し、それにより抗体または抗体を生成することを含む、方法。

【請求項24】

有効用量の請求項９または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、あるいは請求項１０または１９に記載のＲＬＰ、ならびに医薬的に許容される担体、アジュバント、ベヒクル、または賦形剤を含む、免疫応答を誘導するための組成物。

【請求項25】

有効用量の請求項９または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、あるいは請求項１０または１９に記載のＲＬＰを含む、免疫応答を誘導するためのワクチン。

【請求項26】

対象においてロタウイルス感染に対する免疫を誘導するための方法であって、請求項９または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、あるいは請求項１０または１９に記載のＲＬＰを前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項27】

請求項９または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、あるいは請求項１０または１９に記載のＲＬＰを含む植物、植物の部分、または植物細胞。

【請求項28】

請求項９または１４に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、あるいは請求項１０または１９に記載のＲＬＰを含む、植物抽出物。

【請求項29】

請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸を含む、植物、植物の部分、または植物細胞。

【請求項30】

植物、植物の部分、または植物細胞におけるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の生成の収量を増加させるための方法であって、
ａ）請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸を、前記植物、植物の部分、または植物細胞に導入するか、あるいは請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸を含む植物、植物の部分、または植物細胞を供し、次いで
ｂ）前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記核酸によってコードされるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の発現を可能にする条件下でインキュベートし、それにより天然ロタウイルスＶＰ７タンパク質を発現する植物、植物の部分、または植物細胞と比較してより高い収率でロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成することを含む、方法。

【請求項31】

前記方法が、前記植物、植物の部分、または植物細胞を回収し、次いで前記ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を精製する工程ｃ）をさらに含む、請求項３０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

ロタウイルス融合タンパク質
本開示は、ロタウイルス融合タンパク質、ロタウイルス融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子、およびこれらを生成するための方法に関する。

【背景技術】

【0002】

急性胃腸炎は、先進国と発展途上国の両方において、子供の罹患率と死亡率の主な原因として実証されている。実際に全ての子供は、ロタウイルスに３歳までに少なくとも１回感染していることは十分に立証されている。レオウイルス科の属を構成するロタウイルスは、外観が球形であり、直径が約８０ｎｍである。

【0003】

感染性およびサブウイルス性ロタウイルス粒子の構造は、Ｘ線結晶学およびクライオＥＭ画像の単一粒子再構成を用いて解明された（McClain B, Settembre E, Temple BR, Bellamy AR, Harrison SC J Mol Biol. 2010;397:587-599）。直径約８０ｎｍの感染性三層粒子（ＴＬＰ）は、他の多くのエンベロープを有しない正二十面体ウイルスと比較して比較的大きい。ＴＬＰの最内層はコア殻と呼ばれ、ウイルスのｄｓＲＮＡゲノムを直接取り囲んでいる。コア殻は、ＶＰ２の６０個の二量体（１０２ｋＤａ）で構成されている。ロタウイルスＶＰ２殻の周囲には、２つのさらなるタンパク質層がある（Trask et al. Nat Rev Microbiol. 2012 Jan 23; 10(3): 165-177）。中間層は他の２つの層と比べて比較的厚く、ＶＰ６の２６０個の三量体（モノマー、４５ｋＤａ）で構成されている。ＶＰ６がＶＰ２に結合すると、非常に壊れやすいコアが劇的に安定し、非感染性の二重層ウイルス粒子（ＤＬＰ）が形成される。ＶＰ６はまた、宿主細胞への付着と侵入に重要であるロタウイルスの外側カプシドタンパク質のアダプターとしても機能する。具体的には、糖タンパク質ＶＰ７の２６０個の三量体（モノマー、３７ｋＤａ）がＶＰ６三量体の真上に位置し、連続した有孔殻を形成する。ＶＰ７三量体は、安定性について結合カルシウムイオンに依存し、２つのカルシウムイオンが各サブユニット接触面で保持され、これには、三量体ごとに合計６つの結合イオンが必要とされる（Aoki ST, et al. Science. 2009; 324:1444-1447）。ロタウイルスビリオンのＶＰ７層から突き出ているのは、ＶＰ６層のペントン周囲チャネル（peripentonal channel）から発出する長さ１２０Åの６０個の三量体のスパイクである。これらのスパイクは、ウイルス付着タンパク質であるＶＰ４（８８ｋＤａ）によって形成される。外側のカプシドタンパク質ＶＰ７およびＶＰ４（ＶＰ４切断産物、ＶＰ５^＊およびＶＰ８^＊を含む）は、ロタウイルス中和抗体の主な標的である。ＶＰ７糖タンパク質（Ｇ抗原）およびプロテアーゼ感受性スパイクタンパク質のＶＰ４（Ｐ抗原）は、配列比較と中和抗体との反応性に基づいてロタウイルス株の血清型を分類するために用いられる。

【0004】

ロタウイルスは、ＶＰ６の抗原特性に基づいて、７つのグループ（Ａ～Ｇ）とグループＡにおける４つのサブグループ（Ｉ、ＩＩ、Ｉ＋ＩＩ、および非Ｉ／ＩＩ）に分けられる。２つの外側カプシドタンパク質がウイルスの二重血清型分類を決定し、ＶＰ４（プロテアーゼ感受性）がＰ血清型を決定し、ＶＰ７（糖タンパク質）がＧ血清型を決定する。

【0005】

グループＡ、Ｂ、およびＣは、人間と動物の両方で発見されており、グループＤ、Ｅ、およびＦは、動物でのみ発見されている。ロタウイルスのグループＡは、ヒトにおけるロタウイルス下痢の一般的な原因であり、ワクチン開発の第一候補である。

【0006】

サブグループ間の高い多様性にもかかわらず、ＶＰ６タンパク質は、全てのグループＡのロタウイルス間で厳密に保存されており、非常に免疫原性がある。但し、カプシドタンパク質ＶＰ７およびＶＰ４は、株間で非常に高い多様性を有し、中和抗体の主な標的である。

【0007】

適切な免疫試薬が不足しており、配列決定が容易になっているため、血清型は、同族のロタウイルス遺伝子セグメントの配列間の同一性に基づく遺伝子型で補完されている。これまでに、１５Ｇの遺伝子型（１４Ｇの血清型）が特定され、２７個の異なるＰ遺伝子型のうち、１４個のＰ血清型（１Ａ、１Ｂ、および２～１４）が利用可能なＶＰ４特異的抗体で特定されている（Matthijnssens J. et al. J. Virol. April 2008 vol. 82 no. 7 3204-3219）。

【0008】

従来、８９％のＶＰ７アミノ酸配列同一性のカットオフ値がＧ遺伝子型を分類するために使用され、異なるＧ血清型にほぼ完全に一致する（Estes, M. K., and A. Z. Kapikian. 2007. Rotaviruses and their replication, p. 1917-1974. In B. N. Fields, D. M. Knipe, P. M. Howley, D. E. Griffin, R. A. Lamb, M. A. Martin, B. Roizman, and S. E. Straus (ed.), Fields virology, 5th ed. Lippincott, Williams and Wilkins, Philadelphia, PA）。対照的に、Ｇｏｒｚｉｇｌｉａらによって確立されたＶＰ４の８９％のアミノ酸同一性のカットオフ値は（Gorziglia, M., G. Larralde, A. Z. Kapikian, and R. M. Chanock. 1990. Antigenic relationships among human rotaviruses as determined by outer capsid protein VP4. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:7155-7159.）、異なるＰ遺伝子型とＰ血清型の間で絶対的に一致するものではない。具体的に、Ｐ血清型は、四角括弧間のアラビア数字で示されるＰ遺伝子型の約半分について決定されていない（Estes, M. K., and A. Z. Kapikian. 2007. Rotaviruses and their replication, p. 1917-1974. In B. N. Fields, D. M. Knipe, P. M. Howley, D. E. Griffin, R. A. Lamb, M. A. Martin, B. Roizman, and S. E. Straus (ed.), Fields virology, 5th ed. Lippincott, Williams and Wilkins, Philadelphia, PA）。

【0009】

Ｇ遺伝子型と血清型の命名法は、同一であるが（Ｇの後に数字が続く）、Ｐ遺伝子型を示す数字は、括弧で囲まれているが、血清型の命名法はそうではない。ＶＰ４とＶＰ７遺伝子は、独立して分離されているため、異なるＧとＰの組み合わせが自然感染で観察されている。世界的な疫学データに基づくと、Ｇ１Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［４］、Ｇ３Ｐ［８］、Ｇ４Ｐ［８］、Ｇ９Ｐ［６］、およびＧ９Ｐ［８］は、ヒトで見られる最も普及している遺伝子型の組み合わせである。他の遺伝子型は、動物によく見られるが、人間への感染は可能であり、ヒトで見られる遺伝子型の範囲は増加している。

【0010】

ＶＰ６の分子分析は、ＶＰ６の３７９ｂｐのフラグメントにのみ限定されているため、ＳＧ特異性とは相関しない２つの広い遺伝子群となる。ロタウイルスの非構造タンパク質の分類はＮＳＰ４に限定されており、６つの遺伝子型（Ａ～Ｆ）が、アミノ酸に基づく系統樹樹状図のクラスタリングパターンに基づいて認識されている（Ito, H., M. Sugiyama, K. Masubuchi, Y. Mori, and N. Minamoto. 2001. Complete nucleotide sequence of a group A avian rotavirus genome and a comparison with its counterparts of mammalian rotaviruses. Virus Res. 75:123-138）。最近では、１１個のＲＶ遺伝子セグメント全てを網羅する分類システムが導入され、Ｗａ様およびＤＳ－１様と呼ばれる２つの主要な遺伝子型（非Ｇ、非Ｐ）の一群が同定された。

【0011】

ロタウイルスの糖タンパク質ＶＰ７は、Ｇ血清型ＶＰ７、またはＧタンパク質を決定する。ＶＰ７は、Ｎ末端とＣ末端の伸長（アーム）を有し、ロスマンフォールドのループに挿入されたβ－ゼリーロールドメインを有するロスマンフォールドドメインである。Ｃａ^２＋で安定化されたＶＰ７三量体は、ＤＬＰにおける各ＶＰ６三量体をキャップする。

【0012】

ＶＰ７三量体は、構造的に決定された２つの抗原領域（ドメインとも本明細書で称される）：７－１および７－２を含む。７－２抗原領域またはドメインは、ロタウイルスＶＰ７タンパク質のアミノ酸１６１からアミノ酸２５５を含む。領域７－１は、サブユニット間の境界に及び、さらに２つのサブ領域（またはサブドメイン）：７－１ａ（接触面の一方の側）および７－１ｂ（もう一方の側）に分けられる。７－１ａサブ領域またはサブドメインは、アミノ酸７８～アミノ酸１６０に及び、７－１ｂサブ領域またはサブドメインは、ロタウイルスＶＰ７タンパク質のアミノ酸２５６～３１１に及ぶ。各領域またはドメインには、文字で以前に同定され、指定されたいくつかの「エピトープ」が含まれ、７－１領域は、６８個のテスト済み抗体のうち５８個によって認識される「免疫ドミナント」領域である（Aoki et al. Science, 2009 June 12; 324(5933):1444-1447）。

【0013】

ロタウイルスのさまざまな血清型からヒト集団を保護するために適したロタウイルスワクチンを作成するために、様々な異なるアプローチが行われてきた。これらのアプローチには、様々なジェネリアンアプローチ、弱毒化生ウイルスの使用、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）の使用、核酸ワクチン、および免疫原としてのウイルスサブユニットが含まれる。現在、市場には２つの経口ワクチンが存在するが、一部の発展途上国では、株の変動や他の病原体の存在により、これらのワクチンの有効性は低くなっている。

【0014】

従来のワクチン作成方法とは異なり、分子生物学分野における進歩により、個々のロタウイルスタンパク質の発現およびロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）の生成が可能となった。

【0015】

ＲＬＰは、ウイルス構造タンパク質から自己構築し、ウイルスゲノムのない対応する天然ウイルス粒子および非構造ウイルスタンパク質の形態構造を模倣する、高度に組織化された多量体タンパク質複合体である。それらは、細菌発現系から様々な哺乳動物細胞株までの異なる異種発現宿主細胞における構造タンパク質の組換え発現によって生成される。ＲＬＰは、弱毒生経口ワクチンの安全で有用な代替候補ワクチンとなりうる。

【0016】

Ｃｒａｗｆｏｒｄら（J Virol. 1994 September; 68(9): 5945-5952）は、主要なカプシドタンパク質をコードするＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、およびＶＰ７をバキュロウイルス発現系にクローン化し、各タンパク質を昆虫細胞で発現させた。ロタウイルスの主要な構造タンパク質の異なる組み合わせの共発現により、安定なウイルス様粒子（ＶＬＰ）が形成された。ＶＰ２とＶＰ６を単独で、またはＶＰ４と共発現させると、２層ロタウイルス粒子と類似したＶＰ２／６またはＶＰ２／４／６のＲＬＰが生成された。ＶＰ４の有無にかかわらず、ＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７の共発現により、内在的な感染性ロタウイルス粒子と類似する３層のＶＰ２／６／７またはＶＰ２／４／６／７のＲＬＰが生成された。ＲＬＰは、粒子の電子顕微鏡検査により調べられる天然粒子の構造的および機能的な特徴、ＶＰ４およびＶＰ７上の非中和および中和エピトープの存在、およびＶＰ２／４／６／７のＲＬＰの血球凝集活性を維持していた。

【0017】

多くの研究者がＲＶのＶＬＰの生成と精製を昆虫細胞で成功しているが、昆虫細胞におけるＲＶのＶＬＰの構築の効率は非常に低く、昆虫細胞で生成されたウイルスカプシドタンパク質全体の約１５％のみがＲＶのＶＬＰの形成に関与している（Vieira H L A, Alves P M, et al. Intracellular dynamics in rotavirus-like particles production: Evaluation of multigene and monocistronic infection strategies. Proc Biochem, 2006, 41: 2188-2199）。

【0018】

トランスジェニック植物で生成された２／６－ＲＶのＶＬＰの自己構築化効率はさらに低下した。Ｓａｌｄａｎａらは、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）３５Ｓプロモーターおよび組換えA. tumefaciensを用いてトマト植物の細胞質でＶＰ２とＶＰ６を発現させた（Saldana et al., 2006）。電子顕微鏡研究により、前記粒子のごく一部が２／６ＶＬＰに構築されたことが示された。防御免疫応答がマウスで検出され、これは、組み立てられていないＶＰによるある程度の寄与の可能性がある（Saldana S, Esquivel Guadarrama F, Olivera Flores T de J, et al. Production of rotavirus-like particles in tomato (Lycopersicon esculentum L.) fruit by expression of capsid proteins VP2 and VP6 and immunological studies. Viral immunol, 2006, 19: 42-53）。

【0019】

米国特許第６８６７３５３号は、安定した形質転換されたトマト植物における組換えロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ４およびＶＰ７の発現を開示している。血清型Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４のＶＰ７タンパク質が発現した。しかしながら、米国特許第６８６７３５３号は、ロタウイルス様粒子の生成を示していない。

【0020】

Ｃｈｏｉらはまた、ＶＰ７－コレラ毒素Ｂ融合タンパク質（ＣＴＢ：：ＶＰ７融合）をジャガイモで発現させた。サルロタウイルスＳＡ１１由来のＶＰ７は、コレラ毒素Ｂサブユニットのカルボキシル末端に融合され、ジャガイモ塊茎組織で発現した。しかしながら、ＥＬＩＳＡの結果により、ＣＴＢ：：ＶＰ７融合タンパク質が総可溶性塊茎タンパク質の約０．０１％のみを構成することが示された（Choi, NW., Estes, M.K. & Langridge, W.H.R. Mol Biotechnol (2005) 31: 193）。

【0021】

Ｗｕら（２００３年）は、ヒトグループＡのロタウイルス血清型Ｇ１のＶＰ７をトランスジェニックジャガイモで発現させた。形質転換された塊茎で免疫されたマウスは、ＶＰ７に特異的な血清ＩｇＧおよび粘膜ＩｇＡを誘発することに成功した。しかしながら、ＶＰ７のロタウイルスに対する中和活性は、粘膜ＩｇＡ力価が１０００と高いが、血清ＩｇＧ力価がわずか６００であったことから、主にＩｇＧではなく抗体ＩｇＡに依存すした（Wu et al. 2003 "Oral immunization with rotavirus VP7 expressed in transgenic potatoes induced high titers of mucosal neutralizing IgA" Virology, 313 (2003), pp. 337-342）。

【0022】

トランスジェニックジャガイモ植物を用いてヒトグループＡのロタウイルス血清型Ｇ１のＶＰ７を発現させる別の研究では、ＶＰ７遺伝子が形質転換された植物で５０世代にわたり安定であることが示された。５０世代に由来するＶＰ７タンパク質は、成体マウスで防御抗体と中和抗体の両方を誘導した（Li et al. 2006 "Immunogenicity of a plant-derived edible rotavirus subunit vaccine transformed over fifty generations" Virology, Volume 356, Issues 1-2, 5-20 December 2006, Pages 171-178.）。

【0023】

ヤンら（２０１１年）（Science China Life Sciences January 2011, Volume 54, Issue 1, pp 82-89）は、グループＡのＲＶ（Ｐ［８］Ｇ１）の３つのロタウイルスのカプシドタンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７をタバコ植物で共発現させ、これらのタンパク質の発現レベル、ならびにロタウイルス様粒子の形成および免疫原性を研究した。ＶＬＰは、トランスジェニックタバコ植物から精製され、電子顕微鏡とウエスタンブロットによって分析された。ヤンらの結果は、植物由来のＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７タンパク質が、直径６０～８０ｎｍの２／６または２／６／７ロタウイルス様粒子に自己構築化したことを示している。しかしながら、トランスジェニックタバコ植物で生成された発現したロタウイルスのカプシドタンパク質のごく一部のみがＲＶのＶＬＰに構築された。ヤンら（２０１１年）は、ＶＰ７がそれらの植物中で低発現していることを知見し、ＶＰ７が三層粒子の構築中の制限するタンパク質である可能性を推測した。

【0024】

組換えＶＰ７を発現させることの困難性は、E. coliおよび真核生物の細胞発現系について以前に報告されており、ＶＰ７は細胞に対して毒性があることが示されている（Emslie KR, Miller JM, Slade MB, Dormitzer PR, Greenberg HB, Williams KL. Expression of the rotavirus SA11 protein VP7 in the simple eukaryote Dictyostelium discoideum. J Virol. 1995; 69(3):1747-54, McCrae MA, Corquodale JG. Expression of a major bovine rotavirus neutralization antigen (VP7c) in Escherichia coli. Gene. 1987;55:9-18.）。

【0025】

ペラら（２０１５年）（Virology Journal201512:205）は、Nicotiana benthamianaにおけるヒトＧ９Ｐ［６］（RVA/ヒト-wt/ZAF/GR10924/1999/G9P[6]）株からＶＰ２およびＶＰ６を一過的に発現した。ペラらはまた、ロタウイルスの糖タンパク質ＶＰ７とスパイクタンパク質ＶＰ４の発現を試行した。しかしながら、ＶＰ７の発現は、試験時間の経過過程で植物がしおれ、いずれのタンパク質においても発現を検出できなかった。

【0026】

ＷＯ２０１３／１６６６０９は、ロタウイルスのカプシドタンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４およびＶＰ７を植物で発現させ、前記ロタウイルスタンパク質がロタウイルス様粒子に自動的に構築された。ＶＰ７タンパク質は、ＶＰ７タンパク質の発現および／または収量を増加させるために、短縮型シグナルペプチドまたは非天然シグナルペプチドを有していた。

【発明の概要】

【0027】

本開示は、ロタウイルスの構造タンパク質を植物で生成することに関する。より具体的には、本発明はまた、ロタウイルスの構造タンパク質を含むウイルス様粒子を植物で生成することに関する。

【0028】

本発明によれば、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、前記配列が、７－１ａサブドメインをコードする第１の配列、７－２ドメインをコードする第２の配列、および７－１ｂサブドメインをコードする第３の配列を含み、
前記７－２ドメインの配列が、第１のロタウイルス株に由来し、
前記７－１ａサブドメインの配列、前記７－１ｂサブドメインの配列、または前記７－１ａサブドメインの配列および前記７－１ｂサブドメインの配列が、第２のロタウイルス株に由来するものであって、
前記第１のロタウイルス株が、前記第２のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株である、核酸が提供される。

【0029】

７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメインは、第１のロタウイルス株に由来してもよく、７－１ａサブドメインは、第２のロタウイルス株に由来する。７－２ドメインおよび７－１ａサブドメインは、第１のロタウイルス株に由来してもよく、７－１ｂサブドメインは、第２のロタウイルス株に由来する。７－２ドメインは、第１のロタウイルス株に由来してもよく、７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインは、第２のロタウイルス株に由来する。さらに、第１のロタウイルス株および第２のロタウイルス株は、遺伝子型Ｇ１からＧ１９を有するロタウイルス株のいずれか１つから選択されてもよい。例えば、第１のロタウイルス株は、遺伝子型Ｇ１２のロタウイルス株であってもよい。さらに、第２のロタウイルス株または第１のロタウイルス株および第２のロタウイルス株は、遺伝子型Ｇ４のロタウイルス株ではなくてもよい。

【0030】

本開示の核酸は、リーダーペプチド（シグナルペプチドとも呼ばれる）およびグリップアーム（grip arm）をさらにコードしていてもよく、前記リーダーペプチドおよびグリップアームは、第１のロタウイルス株に由来する。

【0031】

別の態様において、本開示は、上記に記載される核酸によってコードされるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をさらに提供する。

【0032】

さらなる態様において、上記に記載されるロタウイルスのＶＰ７融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）が提供される。ＲＬＰは、ロタウイルスのタンパク質ＶＰ２およびＶＰ６をさらに含んでいてもよく、三層であってもよい。ＲＬＰは、ＶＰ７：ＶＰ６の比率を０．２～０．８５で含みうる。ＲＬＰは、ロタウイルスの構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６およびＶＰ７融合タンパク質をさらに含むものであってもよく、ＲＬＰの総構造タンパク質重量の５％～３８％は、ＶＰ７融合タンパク質である。

【0033】

別の態様において、本開示は、植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法であって、上記に記載される核酸を含む植物、植物の部分、または植物細胞を供し、次いで前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の発現および生成を可能にする条件下でインキュベートすることを含む方法が提供される。さらに、上記に記載される方法によって生成されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質もまた提供される。

【0034】

別の態様において、植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法であって、上記に記載される核酸を、前記植物、植物の部分、または植物細胞に導入し、次いで前記植物、植物の部分、または植物細胞を、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の発現および生成を可能にする条件下でインキュベートすることを含む方法が提供される。さらに、上記に記載される方法によって生成されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質もまた提供される。

【0035】

別の態様において、本開示は、植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）を生成するための方法（Ａ）であって、
ａ）本開示のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第１の調節領域を含む、第１の核酸、ロタウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第２の調節領域を含む、第２の核酸、およびロタウイルスＶＰ６タンパク質をコードする第３のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第３の調節領域を含む、第３の核酸を含む、植物、植物の部分、または植物細胞を供し、次いで
ｂ）前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記第１、第２、および第３の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートし、それにより前記ＲＬＰを生成することを含む、方法を提供する。

【0036】

上記方法において、植物、植物の部分、または植物細胞は、植物において活性であり、ロタウイルスＮＳＰ４タンパク質またはロタウイルスＶＰ４タンパク質をコードする第４のヌクレオチド配列に作動可能に連結された第４の調節領域を含む、第４の核酸をさらに適宜含んでいてもよい。上記方法において、植物、植物の部分、または植物細胞は、植物において活性であり、ロタウイルスＮＳＰ４タンパク質またはロタウイルスＶＰ４タンパク質をコードする第５のヌクレオチド配列に作動可能に連結された第５の調節領域を含む、第５の核酸をさらに適宜含んでいてもよい。

【0037】

さらに別の態様において、植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）を生成するための方法（Ｂ）であって、
ａ）前記植物、植物の部分、または植物細胞に、
ＶＰ２、ＶＰ６、および本開示に記載されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のうちの１つから選択される第１のロタウイルス構造タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第１の調節領域を含む、第１の核酸、
ＶＰ２、ＶＰ６、および前記ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のうちの１つから選択される第２のロタウイルス構造タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第２の調節領域を含む、第２の核酸、ならびに
ＶＰ２、ＶＰ６、および前記ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のうちの１つから選択される第３のロタウイルス構造タンパク質をコードする第３のヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物において活性な第３の調節領域を含む、第３の核酸
を導入し、次いで
ｂ）前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記第１、第２、および第３の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートし、それによりＶＰ２、ＶＰ６、および前記ＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを生成することを含む方法が提供される。

【0038】

方法（Ｂ）において、植物において活性であり、ロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４またはロタウイルスタンパク質ＶＰ４をコードする第４のヌクレオチド配列に作動可能に連結された第４の調節領域を含む第４の核酸は、工程ａ）において、植物、植物の部分、または植物細胞にさらに導入されてもよく、工程ｂ）において、植物、植物の部分、または植物細胞をインキュベートしながら発現させて、ＲＬＰを生成してもよい。さらに、植物において活性であり、ロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４またはロタウイルスタンパク質ＶＰ４をコードする第５のヌクレオチド配列に作動可能に連結された第５の調節領域を含む第５の核酸は、工程ａ）において、植物、植物の部分または植物細胞にさらに導入されてもよく、工程ｂ）において、植物、植物の部分、または植物細胞をインキュベートしながら発現させて、ＲＬＰを生成してもよい。

【0039】

上記に記載される方法（Ａ）および（Ｂ）は、ｃ）植物、植物の部分、または植物細胞を収集し、次いでｄ）植物、植物の部分、または植物細胞からＲＬＰを抽出し、精製する工程をさらに含んでいてもよい。方法（Ａ）または（Ｂ）において、第１、第２、および第３の核酸は、植物、植物の部分、または植物細胞において一過的または安定的に発現されうる。

【0040】

さらなる態様において、上記に記載される方法（Ａ）または（Ｂ）によって生成されるＲＬＰが提供される。ＲＬＰは、ＶＰ７：ＶＰ６の比率を０．２～０．８５で含みうる。ＲＬＰの総構造タンパク質重量の５％～３８％は、ＶＰ７融合タンパク質でありうる。

【0041】

別の態様において、上記に記載されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を用いて作成される抗体または抗体フラグメントが提供される。抗体または抗体フラグメントは、７－１ａサブドメインのエピトープを認識しうる。

【0042】

別の態様において、上記に記載されるＲＬＰを用いて作成される抗体または抗体フラグメントが提供される。抗体または抗体フラグメントは、７－１ａサブドメインのエピトープを認識しうる。

【0043】

別の態様において、抗体または抗体フラグメントを生成するための方法であって、上記に記載されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質またはＲＬＰを、それを必要とする対象または宿主動物に投与し、それにより抗体または抗体フラグメントを生成することを含む方法が提供される。有効用量のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質またはＲＬＰ、および医薬的に許容される担体、アジュバント、ベヒクルまたは賦形剤を含む、免疫応答を誘導するための組成物もまた提供される。さらに、免疫応答を誘導するための有効用量のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質またはＲＬＰを含むワクチンが提供される。

【0044】

別の態様において、対象においてロタウイルス感染に対する免疫を誘導するための方法であって、本明細書に記載されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質またはＲＬＰを前記対象に投与することを含む方法が提供される。

【0045】

さらなる態様において、本明細書に記載される核酸、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質またはＲＬＰを含む、植物、植物の部分、または植物細胞もしくは植物抽出物が提供される。

【0046】

さらに別の態様において、本開示は、植物、植物の部分、または植物細胞におけるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の生成の収量を増加させるための方法であって、
ａ）本明細書に記載の核酸を、前記植物、植物の部分、または植物細胞に導入するか、あるいは本明細書に記載の核酸を含む植物、植物の部分、または植物細胞を供し、次いで
ｂ）前記植物、植物の部分、または植物細胞を、前記核酸によってコードされるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の発現を可能にする条件下でインキュベートし、それにより天然ロタウイルスＶＰ７タンパク質を発現する植物、植物の部分、または植物細胞と比較してより高い収率でロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成することを含む、方法を提供する。

【0047】

方法において、工程ｃ）植物、植物の部分、または植物細胞を収集し、次いでロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を精製することをさらに含んでいてもよい。

【0048】

本発明のこの概要は、必ずしも本発明の全ての特徴を説明するものではない。

【0049】

本発明のこれらの他の特徴は、添付の図面を参照して以下の説明からより明らかとなる。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1】図１Ａは、三回転軸に沿って図示した（すなわち、ビリオン表面上を見るように）三量体のリボン図を示し、１つのサブユニットを濃い灰色で示し、他の２つのサブユニットを薄い灰色で示した。７－１ａおよび７－１ｂサブドメインならびに７－２ドメイン（βバレルドメイン：ドメインＩＩ）を含む７－１ドメイン（ロスマンフォールドドメイン；ドメインＩ）を示す。図１Ｂは、シグナルペプチド（Ｓｐ）とも称されるリーダー配列（残基１～５０、薄い灰色）、グリップアーム（残基５１～７７）、７－１ａサブドメイン（残基７８～１６０、灰色）、７－２ドメイン（残基１６１～２５５、黒色）、７－１ｂサブドメイン（残基２５６～３１１、灰色）およびＣ末端（残基３１２～３２６）を含むＶＰ７一次構造の概略図を示す。サブユニット内のジスルフィド結合のパターンも示され、システイン残基の位置に対応する番号を示す。

【図2】図２Ａは、第１のロタウイルス遺伝子型（例えば、遺伝子型Ｇ１）および第２の遺伝子型からの天然ＶＰ７タンパク質および例示的なＶＰ７融合タンパク質のドメイン構造の概略図を示す。ＶＰ７タンパク質は、シグナルペプチド（Ｓｐ）、グリップアームドメイン（マークなし）、７－１ａサブドメイン、７－２ドメイン、７－１ｂサブドメイン、およびＣ末端（マークなし）を含む。ロタウイルス７－１ａ ＶＰ７融合タンパク質（７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_１）は、第１のロタウイルス遺伝子型からのシグナルペプチド、グリップアーム、７－２ドメイン、７－１ｂサブドメインおよびＣ末端、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型からの７－１ａサブドメインを含む。ロタウイルス７－１ｂ ＶＰ７融合タンパク質（７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２）は、第１のロタウイルス遺伝子型からのシグナルペプチド、グリップアーム、７－１ａサブドメイン、７－２ドメインおよびＣ末端、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型からの７－１ｂサブドメインを含む。ロタウイルス７－１ａ＋７－１ｂ ＶＰ７融合タンパク質（７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２）は、第１のロタウイルス遺伝子型からのシグナルペプチド、グリップアーム、７－２ドメインおよびＣ末端、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型からの７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインを含む。図２Ｂは、ロタウイルスの遺伝子型Ｇ１Ｐ８（Ｇ１Ｐ８＿Ｒｔｘ；Ｈ２Ｅ８Ｇ２；ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］；Ｇｅｎｂａｎｋ：ＡＥＸ３０６８２）、Ｇ２Ｐ５（Ｇ２Ｐ５＿ＳＣ２－９；ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］，ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６）、Ｇ３Ｐ５（Ｇ３Ｐ６＿ＷＩ７８－８；ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３７）、Ｇ４Ｐ５（Ｇ４Ｐ５＿ＢｒＢ－９；ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＢｒＢ－９／１９９６／Ｇ４Ｐ７［５］；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８）、Ｇ９Ｐ８（Ｇ９Ｐ８＿ＷＩ６１；Ａ Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９）およびＧ１２Ｐ８（Ｇ１２Ｐ８＿ＫＤＨ６５１；ＲＶＡ／ヒト－ｔｃ／ＫＥＮ／ＫＤＨ６５１／２０１０／Ｇ１２Ｐ［８］；ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５）のＶＰ７ドメインおよびサブドメインの境界配列のアミノ酸配列のアラインメントを示す。保存されたアミノ酸を濃い灰色で網掛けした。ＶＰ７タンパク質配列の配列中のアミノ酸位置に対応する番号を示す。

【図3A】図３Ａの上の図は、下記ＶＰ７タンパク質をコードする構築物で形質転換させたN. benthamianaの葉から調製した粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す：ヒトコドン最適化天然Ｇ１ ＶＰ７（「ＶＰ７ Ｒｔｘ」、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］、Ｇｅｎｂａｎｋ：ＡＥＸ３０６８２、構築物１１９９、配列番号２０）；ヒトコドン最適化天然Ｇ２Ｐ５ ＶＰ７（「ＶＰ７Ｇ２Ｐ５」、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６、構築物３４６３、配列番号２６）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ Ｇ２）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ）Ｇ２」、構築物４５４０、配列番号２８）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ２）（ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ２、構築物４５４１、配列番号３１）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ２」、構築物４５４２、配列番号３３）；ヒトコドン最適化天然Ｇ９Ｐ８ＶＰ７（Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９、構築物３４８１、配列番号３７）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ Ｇ９）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ）Ｇ９」、構築物４５４６、配列番号３９）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ－Ｇ９）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ９」、構築物４５４７、配列番号４１）、およびヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ」）Ｇ９、構築物４５４８、配列番号４３）。下の図は、上の図で示すゲルの抗ＶＰ７抗体を用いたウエスタンブロット分析を示す。

【図3B】図３Ｂの上の図は、下記ＶＰ７タンパク質をコードする構築物で形質転換させたN. benthamianaの葉から調製した粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す：ヒトコドン最適化天然Ｇ１ ＶＰ７（「ＶＰ７ Ｒｔｘ」、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］、Ｇｅｎｂａｎｋ：ＡＥＸ３０６８２、構築物１１９９、配列番号２０）；ヒトコドン最適化天然Ｇ３Ｐ５ ＶＰ７（「ＶＰ７Ｇ３Ｐ５」、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３７、構築物３４６９、配列番号４７）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ３）（「ＶＰ７（ｒｔｘ）＋７－１ｂ）Ｇ３、構築物４５５１、配列番号５０）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３）（「ＶＰ７（ｒｔｘ）＋７－１ａ－１ｂ）Ｇ３、構築物４５５２、配列番号５２）；ヒトコドン最適化天然Ｇ１２Ｐ８ＶＰ７（「ＶＰ７Ｇ１２Ｐ８」、ＲＶＡ／ヒト－ｔｃ／ＫＥＮ／ＫＤＨ６５１／２０１０／Ｇ１２Ｐ［８］、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５、構築物３４８７、配列番号５６）；ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ１２）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋７－１ｂ）Ｇ１２、構築物４５５３、配列番号５９）およびヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２）（「ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋７－１ａ－１ｂ）Ｇ１２、構築物４５５４、配列番号６１）。下の図は、上の図で示すゲルの抗ＶＰ７抗体を用いたウエスタンブロット分析を示す。

【図4】図４Ａは、植物で生成されたロタウイルスＲＬＰの電子顕微鏡写真を示し、前記ＲＬＰは、ロタウイルス株Ｇ９Ｐ［６］（Ｈｕ／ＢＥＬ／ＢＥ２００１／２００９／Ｇ９Ｐ［６］、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５）からの天然ＶＰ７を含む。図４Ｂは、植物で生成されたロタウイルスＲＬＰの電子顕微鏡写真を示し、前記ＲＬＰは、ヒトコドン最適化融合ＶＰ７ ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９）（コンストラクト４５４８、配列番号４３）を含む。

【図5】図５は、ＷＩ６１株（Ｇ９Ｐ［８］）に対する天然Ｇ９－ＲＬＰ（Ｇ９－ＲＬＰ ＡＦＪ１１２１５）およびＶＰ７融合タンパク質（Ｇ９－ＲＬＰキメラ）を含むＧ９－ＲＬＰの中和活性を示す。

【図6A】図６ａは、ベクター１７１０（ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6B】図６ｂは、ベクター１１９１（Ｃ５－１ガンマ）の概略図を示す。

【図6C】図６ｃは、ベクター１７１３（ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ６（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6D】図６ｄは、ベクター１７０６（ＲＶＡ（ＷＡ）ＮＳＰ４）の概略図を示す。

【図6E】図６ｅは、ベクター１７０８（ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ６（ｏｐｔ）およびＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6F】図６ｆは、ベクター２２５２（ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ６（ｏｐｔ）、ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ）、およびＲＶＡ（ＷＡ）ＮＳＰ４）の概略図を示す。

【図6G】図６ｇは、ベクター１１９０（Ｃ５－１ガンマ）の概略図を示す。

【図6H】図６ｈは、ベクター１１９９（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6I】図６ｉは、ベクター３４６３（ＲＶＡ（Ｓｃ２－９ Ｇ２）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6J】図６ｊは、ベクター４５４０（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ Ｇ２））の概略図を示す。

【図6K】図６ｋは、ベクター４５４１（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ２））の概略図を示す。

【図6L】図６ｌは、ベクター４５４２（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２））の概略図を示す。

【図6M】図６ｍは、ベクター３４８１（ＲＶＡ（ＷＩ６１ Ｇ９）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6N】図６ｎは、ベクター４５４６（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ Ｇ９））の概略図を示す。

【図6O】図６ｏは、ベクター４５４７（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ９））の概略図を示す。

【図6P】図６ｐは、ベクター４５４８（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９））の概略図を示す。

【図6Q】図６ｑは、ベクター３４６９（ＲＶＡ（ＷＩ７８－８ Ｇ３）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6R】図６ｒは、ベクター４５５１（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ３））の概略図を示す。

【図6S】図６ｓは、ベクター４５５２（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３））の概略図を示す。

【図6T】図６ｔは、ベクター３４８７（ＲＶＡ（ＫＤＨ６５１ Ｇ１２）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図6U】図６ｕは、ベクター４５５３（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ１２））の概略図を示す。

【図6V】図６ｖは、ベクター４５５４（ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２））の概略図を示す。

【図7A】図７ａは、ベクター６０２６（ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7B】図７ｂは、ベクター６５０１（ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7C】図７ｃは、ベクター６５０２（ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（ｏｐｔ）を示す。

【図7D】図７ｄは、ベクター６５０３（ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ ＢｒＢ－９）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7E】図７ｅは、ベクター６５０４（ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９ ＢＥ２００１）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7F】図７ｆは、ベクター６５０５（ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２ Ｋ１２）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7G】図７ｇは、ベクター３４７５（ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ－９）ＶＰ７（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7H】図７ｈは、ベクター６５０６（ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ－９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7I】図７ｉは、ベクター６５０７（ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ－９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7J】図７ｊは、ベクター６５０８（ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ－９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３ ＨＣＲ３）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7K】図７ｋは、ベクター６５０９（ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ－９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９ ＢＥ２００１）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7L】図７ｌは、ベクター６５１０（ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ－９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２ Ｋ１２）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【図7M】図７ｍは、ベクター４５６８（ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（ｏｐｔ）（ＲＶＡ（ＷＩ６１ Ｇ９）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7N】図７ｎは、ベクター６５１１（ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7O】図７ｏは、ベクター６５１２（ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7P】図７ｐは、ベクター６５１３（ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３ ＨＣＲ３）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7Q】図７ｑは、ベクター６５１４（ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ ＢｒＢ－９）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7R】図７ｒは、ベクター６５１５（ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２ Ｋ１２）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7S】図７ｓは、ベクター６０４２（ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7T】図７ｔは、ベクター６５１６（ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7U】図７ｕは、ベクター６５１７（ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7V】図７ｖは、ベクター６５１８（ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３ ＨＣＲ３）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7W】図７ｗは、ベクター６５１９（ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ ＢｒＢ－９）（ｏｐｔ））の概略図を示す。

【図7X】図７ｘは、ベクター６５２０（ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９ ＢＥ２００１）（ｏｐｔ）の概略図を示す。

【発明を実施するための形態】

【0051】

以下の説明は、好ましい実施態様のものである。

【0052】

本発明は、１つまたはそれ以上の実施態様に関して記載されている。しかしながら、当業者には、特許請求の範囲で定義される本発明の範囲から逸脱することなく、多くの変形および修正を行うことができることが明らかであろう。

【0053】

本明細書で用いられるように、用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「包含する（including）」および「含有する（containing）」、ならびにこれらの文法上のバリエーションは、包括的であるか、またはオープンエンドであり、さらなる列挙されていない要素および／または方法工程を除外するものではない。用語「から本質的になる」は、使用または方法に関して本明細書で用いられる場合、さらなる要素および／または方法工程が存在してもよいことを意味するが、これらの追加は、列挙される方法または使用が機能する方法に実質的に影響を及ぼさないことを意味する。用語「からなる」は、使用または方法に関して本明細書で用いられる場合、さらなる要素および／または方法工程の存在を除外する。特定の要素および／または工程を含むものとして本明細書に記載される使用または方法はまた、特定の実施態様において、これらの要素および／または工程から本質的になっていてもよく、他の実施態様において、これらの実施態様が特に言及されているか、または言及されていない。さらに、単数形の使用には、複数形が含まれ、「または」は、特に明記しない限り「および／または」を意味する。本明細書で用いられる用語「複数」は、１つより多い、例えば、２つまたはそれ以上、３つまたはそれ以上、４つまたはそれ以上などを意味する。本明細書で別段の定義がない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同一の意味を有する。本明細書で用いられるように、用語「約」は、所定の値からの約＋／－１０％の変動を意味する。このような変動は、それが具体的に言及されているかどうかにかかわらず、本明細書で供されるいずれの所定の値に常に含まれるものと理解されるべきである。単語「ａ」または「ａｎ」の使用は、用語「含む」と併せて本明細書で使用される場合、「１つ」を意味しうるが、「１つまたはそれ以上」、「少なくとも１つ」および「１つまたはそれ以上の」の意味とも一致する。

【0054】

植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、ならびにロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法が、本明細書に記載される。ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、第２のロタウイルスからの１つまたは１つ以上のドメインまたはサブドメインに融合された第１のロタウイルスからの１つまたは１つ以上のドメインまたはサブドメインを有していてもよい。植物、植物の部分、または植物細胞におけるＶＰ７融合タンパク質の発現は、同一タイプの植物、植物の部分、または植物細胞において、同一条件下で発現される野生型または天然のＶＰ７タンパク質の収量と比較した場合、ＶＰ７融合タンパク質の収量を増加することが観察されている。

【0055】

さらに、植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）を生成するための方法もまた記載される。本明細書に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰが生成される場合、ＲＬＰ生成の収量は、同一タイプの植物、植物の部分、または植物細胞において、同一条件下で生成される野生型または天然のＶＰ７を含むＲＬＰの収量と比較して増加することが観察されている。

【0056】

本明細書に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰが生成される場合、ＲＬＰは、野生型または天然のＶＰ７を含むＲＬＰと比較して、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のより高い含有量、より多い量、またはより高い導入を含むことも観察されている。よって、植物、植物の部分、または植物細胞で生成されたＲＬＰへのロタウイルスＶＰ７の導入を高めるための方法、および植物、植物の部分または植物細胞で生成されたロタウイルスＶＰ７タンパク質の導入が高まったＲＬＰもまた、提供される。

【0057】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質のより高い含有量、より多い量またはより高い導入は、例えば、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質（ＶＰ７）のロタウイルスＶＰ６タンパク質（ＶＰ６）に対する比率として表されてもよい。よって、野生型または天然のＶＰ７を含むＲＬＰと比較した場合、ＶＰ７：ＶＰ６のより高い比率を含みうるＲＬＰがさらに提供される。

【0058】

ロタウイルス株
本明細書で用いられる用語「ロタウイルス」は、レオウイルス科のロタウイルス属の多層であり、エンベロープを有しないウイルス株を意味する。成熟した粒子は、外層、中間層、および内層からなる三層カプシドからなる。外側のカプシドもしくは層にはＶＰ４およびＶＰ７タンパク質が含まれるが、中間層は、ＶＰ６によって形成され、内層は、他の２つのタンパク質ＶＰ１およびＶＰ３を包むＶＰ２、ならびに二本鎖ＲＮＡの１１個のセグメントからなるウイルスゲノムによって形成され、後者は６つの構造タンパク質および６つの非構造タンパク質をコードしている。カプシドの内層は、ＶＰ２の１２０個のポリペプチドで構成される薄い殻であり、６０個の非対称二量体を形成し、Ｔ＝１の正二十面体対称性で配置される。二層粒子（ＤＬＰ）の外層、すなわち、成熟粒子の中間層は、２６０個の三量体として分布する７８０個のＶＰ６ポリペプチドで構成される。ビリオンの外層は、ビリオンの滑らかな表面を構成する最も豊富な外部タンパク質である３７ｋＤａの糖タンパク質ＶＰ７の２６０個の三量体と、８８ｋＤａのタンパク質ＶＰ４の６０個の二量体スパイクで構成されている。ロタウイルスゲノムのセグメント化された性質のために、遺伝子再集合は混合感染中に高頻度で発生する。

【0059】

ロタウイルスは、抗血清のパネルを用いて中和アッセイによって血清型を決定し、異なる遺伝子セグメントの配列分析によって遺伝子型を決定することができる。２つの分類システムの間には密接な関係が存在するが、近年、血清型という用語を血清学的分析に使用し、遺伝子型という用語を遺伝子分類および比較配列分析に使用することが推奨されている。一般に、８９％を超えるアミノ酸同一性を示す株は、同一の遺伝子型であると見なされることが認められている（Estes, M. K. 2001. Rotaviruses and their replication, p. 1747-1786. In P. M. Howley (ed.), Fields virology, vol. 2., 4th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa）。しかしながら、ごく最近の系統発生分析に基づいて、適切な同一性のカットオフ値が各遺伝子について決定された。ＶＰ７遺伝子の場合、８０％のヌクレオチド同一性のカットオフ値は、確立されたＧ遺伝子型とほぼ一致したが、マウスまたはトリのロタウイルス株で構成される４つのさらに異なる遺伝子型を特定した（J Virol. 2008 Apr; 82(7):3204-19）。

【0060】

よって、本出願について、２つまたはそれ以上のロタウイルスは、ロタウイルス由来のＶＰ７タンパク質のアミノ酸配列が、少なくとも８９％のアミノ酸同一性を有する場合、またはロタウイルス由来のＶＰ７タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、少なくとも８０％の配列類似性を共有する場合、同一の「ロタウイルス株」または同一の「ロタウイルス遺伝子型」に属すると考えられる。逆に、２つまたはそれ以上のロタウイルスは、ロタウイルス由来のＶＰ７タンパク質のアミノ酸配列が、８９％以下のアミノ酸同一性を有する場合、またはロタウイルス由来のＶＰ７タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、８０％以下の配列類似性を共有する場合、異なる「ロタウイルス株」または異なる「ロタウイルス遺伝子型」に属すると考えられる。

【0061】

配列同一性または配列類似性を決定するための方法は、当該技術分野で周知であり、ヌクレオチド配列比較プログラム（例えば、ＤＮＡＳＩＳ内で提供されるものなど）を用いて決定することができる（例えば、限定されないが、下記パラメーターを用いる：ＧＡＰペナルティ５、上対角線の数５、固定ギャップペナルティ１０、ｋタプル２、フローティングギャップ１０、およびウィンドウサイズ５）。しかしながら、配列比較のアラインメントおよび配列の同一性または類似性の決定のための他の方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎのアルゴニズム（1981, Adv. Appl. Math. 2:482）、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（J. Mol. Biol. 48:443, 1970）、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（1988, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444）のアルゴリズム、およびこれらのアルゴリズムのコンピュータ上の実行（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＢＬＡＳＴ（ＮＩＨを通して利用可能））であり、ならびに手動によるアラインメントと目視による研究（例えば、Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds. 1995 supplementを参照）、またはストリンジェントな条件下でのサザンまたはノーザンハイブリダイゼーションの使用（Maniatis et al., in Molecular Cloning (A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Laboratory, 1982）による。

【0062】

ＶＰ７融合タンパク質
ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質および植物においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法が本明細書に記載される。ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質（「ＶＰ７融合」または「融合ＶＰ７」とも呼ばれる）は、第２のロタウイルスに由来する１つまたはそれ以上のドメインまたはサブドメインに融合した第１のロタウイルスに由来する１つまたはそれ以上のドメインまたはサブドメインを有していてもよい。

【0063】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、７－１ａサブドメイン、７－２ドメイン、および７－１ｂサブドメインを有していてもよく、ここで、前記７－２ドメインの配列は、第１のロタウイルス株に由来し、前記７－１ａサブドメインの配列、前記７－１ｂサブドメインの配列または前記７－１ａサブドメインの配列、および前記７－１ｂサブドメインの配列は、第２のロタウイルス株に由来する。前記第１のロタウイルス株は、前記第２のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株である。

【0064】

「第１のロタウイルス」または「第１のロタウイルス株」との記載は、第１のロタウイルスのロタウイルスＶＰ７タンパク質の遺伝子型決定または血清型決定に基づく第１の遺伝子型または第１の血清型を有するロタウイルスを意味する。「第２のロタウイルス」または「第２のロタウイルス株」との記載は、第２のロタウイルスのロタウイルスＶＰ７タンパク質の遺伝子型または血清型に基づく第２の遺伝子型または第２の血清型を有し、第２の遺伝子型または第２の血清型は、第１の遺伝子型または第１の血清型とは異なる、１つまたはそれ以上のロタウイルスを意味する。第１のロタウイルス株は、ＶＰ７タンパク質の遺伝子型、血清型、または遺伝子型と血清型において第２のロタウイルス株とは異なる。

【0065】

ロタウイルスＶＰ７のドメイン構成が図１Ｂおよび図２Ａに示される。ロタウイルスＶＰ７の一次構造には、リーダー配列（シグナルペプチド（Ｓｐ）とも呼ばれる）（残基１～５０）、グリップアーム（残基５１～７７）、７－１ａサブドメイン（残基７８～１６０）、７－２ドメイン（残基１６１－２５５）、７－１ｂサブドメイン（残基２５６－３１１）、およびＣ末端（残基３１２－３２６）が含まれる。

【0066】

様々な遺伝子型のロタウイルス株における対応するアミノ酸の位置は、ロタウイルスＶＰ７タンパク質の公知の配列に対するアラインメントによって決定されてもよい。比較のための配列のアラインメントの方法は、当該技術分野で周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)のローカルホモロジーアルゴリズム、Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)のホモロジーアラインメントアルゴリズム、Pearson & Lipman, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)の類似性サーチ方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理実行（Wisconsin Genetics Software PackageにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI）、手動によるアラインメントと目視による研究（例えば、Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds. 1995 supplement)を参照）によって行うことができる。

【0067】

上記に記載されるように、ＶＰ７タンパク質は株間で高い多様性を有するが、ロタウイルスＶＰ７の複数のヌクレオチド配列、または対応するポリペプチド配列は、ＶＰ７タンパク質の「コンセンサス」または「コンセンサス配列」を決定するために整列されてもよい。

【0068】

ロタウイルスＶＰ７のＶＰ７ドメインおよびサブドメインの境界に隣接するアミノ酸配列は、よく保存されており（図２ｂを参照）、以下の例示的なコンセンサス配列で構成される。
ａ．ロタウイルスＶＰ７のグリップアームドメインと７－１ａサブドメインとの間の境界配列の非限定的な例
…ＳｔｑＸＸＸＦｌ｜｜ｔＳＴＬ…（配列番号１１８）
［配列中、「｜｜」は、グリップアームドメインと７－１ａサブドメインとの間の境界を示す］。境界配列は、ロタウイルスＶＰ７タンパク質内の７０位から８１位までのアミノ酸を含んでいてもよく、グリップアームドメインと７－１ａサブドメインとの間の境界は、ロタウイルスＶＰ７タンパク質のアミノ酸７７と７８との間に位置していてもよい。

【0069】

ｂ．ロタウイルスＶＰ７の７－１ａサブドメインと７－２ドメインとの間の境界配列の非限定的な例
…ＤＬｉＬ｜｜ＮＥＷＬ…（配列番号１１９）
［配列中、「｜｜」は、７－１ａサブドメインと７－２ドメインとの間の境界を示す］。境界配列は、ロタウイルスＶＰ７タンパク質内の１５７位から１６４位までのアミノ酸を含んでいてもよく、７－１ａサブドメインと７－２ドメインとの間の境界は、ロタウイルスＶＰ７タンパク質のアミノ酸１６０と１６１との間に位置していてもよい。

【0070】

ｃ．ロタウイルスＶＰ７の７－２ドメインと７－１ｂサブドメインとの間の境界配列の非限定的な例
…ＧＰＲＥ｜｜ＮＶＡｉ…（配列番号１２０）
［配列中、「｜｜」は、７－２ドメインと７－１ｂサブドメインとの間の境界を示す］。境界配列は、ロタウイルスのＶＰ７タンパク質内の位置２５３から位置２６０までのアミノ酸を含んでいてもよく、７－２ドメインと７－１ｂサブドメインとの間の境界は、ロタウイルスのＶＰ７タンパク質のアミノ酸２５６と２５７との間に位置していてもよい。

【0071】

ｄ．ロタウイルスＶＰ７の７－１ｂサブドメインとＣ末端との間の境界配列
…ＭＳＫ｜｜ＲＳ…（配列番号１２１）
［配列中、「｜｜」は、７－１ｂサブドメインとＣ末端との間の境界を示す］。境界配列は、ロタウイルスのＶＰ７タンパク質内の３１０位から３１４位までのアミノ酸を含んでいてもよく、７－１ｂサブドメインとＣ末端との間の境界は、ロタウイルスのＶＰ７タンパク質のアミノ酸３１２と３１３との間に位置していてもよい。

【0072】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインと、第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメイン、７－１ｂサブドメイン、または７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインとを含んでいてもよい。よって、「ＶＰ７融合タンパク質」または「キメラＶＰ７タンパク質」とは、第２のロタウイルス遺伝子型に由来する７－１ａ、７－１ｂ、または７－１ａおよび７－１ｂサブドメインに融合した第１のロタウイルス遺伝子型に由来する７－２ドメインを含むものであって、前記ＶＰ７融合タンパク質が、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する少なくとも１つのドメインまたはサブドメインと、第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する少なくとも１つまたはそれ以上のドメインまたはサブドメインを含む、タンパク質を意味する。前記ＶＰ７融合タンパク質は、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインを含んでいてもよく、７－１ａおよび７－１ｂサブドメインのうちの１つまたは１つ以上は、第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来していてもよい：
７－１ａ_{第１または第２の株}－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_{第１または第２の株}（７－１ａ_１／２－７－２_１－７－１ｂ_１／２）。

【0073】

ＶＰ７融合タンパク質をコードする配列は、ヒトのコドン使用、ＧＣ含量の増加、またはこれらの組み合わせのために最適化されてもよい。

【0074】

本明細書に記載のロタウイルス構造タンパク質は、短縮型、天然または非天然のシグナルペプチド（ＳＰ）を含んでいてもよい。シグナルペプチド（ＳＰ）は、例えば、ＶＰ７融合、ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６またはＮＳＰ４などのロタウイルス構造タンパク質に由来していてもよい。例えば、ＶＰ７融合タンパク質において、シグナルペプチドは、第１または第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来していてもよい。シグナルペプチドはまた、シグナルペプチドが、第１または第２のロタウイルス遺伝子型または株とは異なる第３のロタウイルス遺伝子型または株に由来しうるという意味で異種であってもよい。例えば、シグナルペプチドは、ＶＰ７融合タンパク質の第１または第２のロタウイルス遺伝子型または株に関して異種であってもよい。ロタウイルス構造タンパク質の天然のシグナルペプチドは、宿主または宿主細胞、例えば、植物系、植物、植物の部分または植物細胞においてロタウイルス構造タンパク質を発現させるために用いられうる。

【0075】

シグナルペプチドはまた、例えば、ロタウイルスタンパク質以外のウイルスのタンパク質、ウイルスタンパク質または天然構造タンパク質に由来し、あるいは植物、動物または細菌のポリペプチドに由来する非天然のものであってもよい。用いられうるシグナルペプチドの非限定的な例は、ジスルフィドイソメラーゼシグナル（ＰＤＩ）ペプチド、例えば、アルファルファタンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（受入番号Ｚ１１４９９のヌクレオチド３２～１０３）である。さらに、シグナルペプチドは、完全に欠失され、または短縮されていてもよい。短縮または短縮型とは、アミノ酸残基の１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間のいずれかの量がシグナルペプチドから欠失されることを意味する。よって、短縮型シグナルペプチドは、欠失された１～５０個のアミノ酸またはこれらの間のいずれかの量を有していてもよい。例えば、短縮型シグナルペプチドは、元の配列から欠失された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０個のアミノ酸を有していてもよい。好ましくは、短縮されたアミノ酸残基は、連続的であり、短縮は第２のメチオニン以降で生じる。

【0076】

ＶＰ７融合タンパク質は、融合タンパク質が、（第１のロタウイルス株または遺伝子型に由来に由来する）第１のＶＰ７タンパク質に由来する７－２ドメイン、および（第２のロタウイルス株または遺伝子型に由来する）第２のＶＰ７タンパク質に由来する７－１ａサブドメイン、７－１ｂサブドメイン、または７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインを含む点で異種である。異種ＶＰ７融合タンパク質は、７－２ドメイン、７－１ａサブドメイン、および７－１ｂサブドメイン（含まれるアミノ酸配列を有する）、または前記アミノ酸配列が、前記ＶＰ７配列の７－２ドメイン、７－１ａサブドメイン、７－１ｂサブドメインコンセンサス配列内で見出され（または前記配列に対してマッピングされ）、図２ａおよび２ｂで示されるように、７－１ａサブドメイン配列は、グリップアーム｜｜７－１ａ境界（配列番号６２）と７－１ａ｜｜７－２境界（配列番号６３）との間にあり、７－２ドメイン配列は、７－１ａ｜｜７－２境界（配列番号６３）と７－２｜｜７－１ｂ境界（配列番号：６４）との間にあり、７－１ｂサブドメイン配列は、７－２｜｜７－１ｂ境界（配列番号６４）と７－１ｂ｜｜Ｃ末端境界（配列番号６５）との間にあるが、但し、融合タンパク質の７－２ドメインは、７－１ａサブドメイン、７－１ｂサブドメイン、または７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインに対して異種であり、ＶＰ７融合タンパク質は、ＶＰ７タンパク質が対象に投与されると対象においてロタウイルスに対して免疫を誘導する場合に限る。誘導された免疫は、第２のロタウイルス株または遺伝子型、第１のロタウイルス株または遺伝子型、あるいはその両方に対するものでありうる。

【0077】

Ａ．７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_１；７－１ａ
例えば、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、およびロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法は、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメイン、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメインを含むロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含んでいてもよい。第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメインは、７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメインに融合されており、７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメインは両方とも最初のロタウイルス遺伝子型または株に由来する：
７－１ａ_第２の株－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_第１の株（７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_１；７－１ａ）。

【0078】

第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメイン、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメインを含むＶＰ７融合タンパク質（７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_１）の発現は、同一の第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ドメイン（７－１ａおよび７－１ｂサブドメイン）を含む野生型または天然のＶＰ７タンパク質の収量と比較した場合、天然または野生型のＶＰ７タンパク質と同一タイプの植物において同一条件下で発現させる場合、ＶＰ７融合タンパク質の収量を増加させることが観察されている（例えば、図３ａを参照し、３番目と７番目のレーン（７－１ａ）を２番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ２Ｐ５）と６番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ９Ｐ８）とそれぞれ比較）。

【0079】

７－１ａ_２－－７－２_１－７－１ｂ_１（７－１ａ）の形態のＶＰ７融合タンパク質の例には、以下に限定されないが、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ２Ｐ５［ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］］に由来する７－１ａサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ）Ｇ２Ｐ５［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ Ｇ２）；配列番号２８］、またはＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－２ドメインおよび７－１ｂサブドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ９Ｐ８［ＲＶＡ／Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］］に由来する７－１ａサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ）Ｇ９Ｐ８［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ Ｇ９）；配列番号３９］、または配列番号２８または３９の７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_１（７－１ａ）融合アミノ酸配列のアミノ酸配列と約５９～１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性、例えば、配列番号２８または３９の７－１ａ_２－－７－２_１－７－１ｂ_１（７－１ａ）融合アミノ酸配列のアミノ酸配列と約５９、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列であるが、前記ＶＰ７タンパク質は、対象に投与されると対象においてロタウイルスに対する免疫を誘導するものである配列が含まれる。

【0080】

Ｂ．７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２；７－１ｂ
例えば、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、およびロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法は、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ａサブドメイン、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ｂサブドメインを含むロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含んでいてもよい。７－１ａサブドメインと７－２ドメインは両方とも、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来し、第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ｂサブドメインに融合されている：
７－１ａ_第１の株－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_第２の株（７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２；７－１ｂ）。

【0081】

第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ａサブドメイン、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７融合タンパク質（７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２）の発現は、同一の第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ドメイン（７－１ａおよび７－１ｂサブドメイン）を含む野生型または天然のＶＰ７タンパク質の収量と比較した場合、天然または野生型のＶＰ７タンパク質と同一タイプの植物において同一条件下で発現させる場合、ＶＰ７融合タンパク質の収量を増加させることが観察されている（例えば、図３ａを参照し、４番目と８番目のレーン（７－１ｂ）を２番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ３Ｐ５）と５番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ１２Ｐ８）とそれぞれ比較）。

【0082】

７－１ａ_１－－７－２_１－７－１ｂ_２（７－１ｂ）の形態のＶＰ７融合タンパク質の例には、以下に限定されないが、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－１ａサブドメインおよび７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ２Ｐ５［ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］］に由来する７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ２Ｐ５［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ２）；配列番号３１］、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－１ａサブドメインおよび７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ９Ｐ８［ＲＶＡ／Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］］に由来する７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ９Ｐ８［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ９）；配列番号４１］、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－１ａサブドメインおよび７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ３Ｐ５［ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］］に由来する７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ３Ｐ５［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ３）；配列番号５０］、ならびにＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－１ａサブドメインおよび７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ１２Ｐ８［ＲＶＡ／ヒト－ｔｃ／ＫＥＮ／ＫＤＨ６５１／２０１０／Ｇ１２Ｐ［８］］に由来する７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ１２Ｐ８［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ｂ Ｇ１２）；配列番号５９］、あるいは配列番号３１、４１、５０、または５９の７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２（７－１ｂ）融合アミノ酸配列のアミノ酸配列と約５９～１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性、例えば、配列番号３１、４１、５０、または５９の７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２（７－１ｂ）融合アミノ酸配列のアミノ酸配列と約５９、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列であるが、前記ＶＰ７タンパク質は、対象に投与されると対象においてロタウイルスに対する免疫を誘導するものである配列が含まれる。

【0083】

Ｃ．７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２；７－１ａ－１ｂ
例えば、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、およびロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を生成するための方法は、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメイン、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインを含むロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含んでいてもよい。７－１ａサブドメインは、第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来し、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインに融合し、次いで、第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ｂサブドメインに融合されている：
７－１ａ_第２の株－－７－２_第１の株－－７－１ｂ第２の株（７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２；７－１ａ－１ｂ）。

【0084】

第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメイン、ならびに第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７融合タンパク質（７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２；７－１ａ－１ｂ）の発現は、同一の第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメインおよび７－１ドメイン（７－１ａおよび７－１ｂサブドメイン）を含む野生型または天然のＶＰ７タンパク質の収量と比較した場合、天然または野生型のＶＰ７タンパク質と同一タイプの植物において同一条件下で発現させる場合、ＶＰ７融合タンパク質の収量を増加させることが観察されている（例えば、図３ａを参照し、５番目と９番目のレーン（７－１ａ－１ｂ）を２番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ３Ｐ５）と６番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ９Ｐ８）とそれぞれ比較し、図３ｂを参照し、４番目と７番目のレーン（７－１ａ－１ｂ）を２番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ３Ｐ５）と５番目のレーン（ＶＰ７ Ｇ１２Ｐ８）とそれぞれ比較）。

【0085】

７－１ａ_２－－７－２_１－７－１ｂ_２（７－１ａ－１ｂ）の形態のＶＰ７融合タンパク質の例には、以下に限定されないが、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ２Ｐ５［ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］］に由来する７－１ａおよび７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ２Ｐ５［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２）；配列番号３３］、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ９Ｐ８［ＲＶＡ／Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］］に由来する７－１ａおよび７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ９Ｐ８［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９）；配列番号４３］、ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ３Ｐ５［ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］］に由来する７－１ａおよび７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ３Ｐ５［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３）；配列番号５２］、ならびにＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］に由来する７－２ドメイン、ならびにロタウイルス株Ｇ１２Ｐ８［ＲＶＡ／ヒト－ｔｃ／ＫＥＮ／ＫＤＨ６５１／２０１０／Ｇ１２Ｐ［８］］に由来する７－１ａおよび７－１ｂサブドメインを含むＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ１２Ｐ８［ＲＶＡ（Ｒｔｘ Ｇ１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２）；配列番号６１］、あるいは配列番号３３、４３、５２、または６１の７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２（７－１ａ－１ｂ）融合アミノ酸配列のアミノ酸配列と約５９～１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性、例えば、配列番号３３、４３、５２、または６１の７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２（７－１ａ－１ｂ）融合アミノ酸配列のアミノ酸配列と約５９、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列であるが、前記ＶＰ７タンパク質は、対象に投与されると対象においてロタウイルスに対する免疫を誘導するものである配列が含まれる。

【0086】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、Ｇ１からＧ２７およびＰ１からＰ３４、より好ましくはＧ１からＧ１９およびＰ１からＰ２７のＧ型とＰ型の任意の組み合わせの遺伝子型を有する任意のロタウイルス株に由来する１つまたはそれ以上のドメインまたはサブドメインを含んでいてもよく、下記に限定されないが、Ｇ１Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［４］、Ｇ２Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［５］、Ｇ３Ｐ［５］、Ｇ３Ｐ［８］、Ｇ４Ｐ［５］、Ｇ４Ｐ［８］、Ｇ９Ｐ［６］、Ｇ９Ｐ［８］、Ｇ１２Ｐ［８］、ロタウイルスＡ ＷＡ株、ロタウイルスＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］株、ロタウイルスＳＡ１１株、ヒトロタウイルスＨＣＲ３（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８５２２）、ブタ様ヒトＧ９Ｐ［６］ロタウイルス株（Ａ Ｈｕ／ＢＥＬ／ＢＥ２００１／２００９／Ｇ９Ｐ［６］；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５．１）、ロタウイルスＧ１２（ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＤ８９０９５）；ロタウイルス株Ｇ４ ＢｒＢ－９、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］；（ＧｅｎＢａｎ；ＡＤＫ２７０３７）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＢｒＢ－９／１９９６／Ｇ４Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８）、ＲＶＡ Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９）ＲＶＡ／ヒト－ｔｃ／ＫＥＮ／ＫＤＨ６５１／２０１０／Ｇ１２Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１４．１）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７９－９／１９９２／Ｇ１Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０５７）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１５２０／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１７５／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５４）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２８０／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１００１ａ／２００８／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２６）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ０２５３／２００８／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１０２３／２００８／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２８６／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１２８／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３６）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０６８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２４８／２００９／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１４１／２００９／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５６）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１０５８／２００８／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２４）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２５１／２００９／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４４）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０７９）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１３２２／２００９／Ｇ３Ｐ［６］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＦ４６０８２８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２１４／２００９／Ｇ３Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２５９／２００９／Ｇ３Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４６０）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＢｒＢ－９／１９９６／Ｇ４Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０９０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１２９／２００９／Ｇ４Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１１３／２００９／Ｇ４Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３４）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７９－４／１９９２／Ｇ６Ｐ１Ａ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０４６）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２４２／２００９／Ｇ９Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１１９／２００９／Ｇ９Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１０３２／２００８／Ｇ９Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ０２５８／２００８／Ｇ１２Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ００８５／２００８／Ｇ１２Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１６）に由来する１つまたはそれ以上のドメインまたはサブドメインを含んでいてもよく、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８５２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＤ８９０９５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６、ＧｅｎＢａｎ；ＡＤＫ２７０３７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１４．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０５７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０６８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０７９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＦ４６０８２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４６０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０９０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０４６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１６の配列のアミノ酸配列と約５９～１００％またはその間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列を含んでいてもよく、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８５２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＤ８９０９５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１４．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０５７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０６８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０７９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＦ４６０８２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４６０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０９０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０４６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１６と、例えば、約５９、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはこれらの間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列を含んでいてもよいが、但し、前記ＶＰ７タンパク質は、対象に投与されると対象においてロタウイルスに対する免疫を誘導するものである配列が含まれる。

【0087】

本明細書に開示されるロタウイルス株または遺伝子型には、任意の既知のロタウイルス株または遺伝子型が含まれるが、時間とともに定期的に発生することが知られている既知のロタウイルス株への改変も含まれる（例えば、Kirkwood CD The Journal of Infectious Diseases, 2010, Volume 202 (Supplement 1)を参照のこと）。よって、第１のロタウイルス株もしくは遺伝子型または第２のロタウイルス株もしくは遺伝子型は、例えば、Ｇ１からＧ２７およびＰ１からＰ３４、より好ましくは、Ｇ１からＧ１９およびＰ１からＰ２７のＧ型およびＰ型の任意の組み合わせの遺伝子型を有する任意のロタウイルス株に由来していてもよく、下記に限定されないが、Ｇ１Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［４］、Ｇ２Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［５］、Ｇ３Ｐ［５］、Ｇ３Ｐ［８］、Ｇ４Ｐ［５］、Ｇ４Ｐ［８］、Ｇ９Ｐ［６］、Ｇ９Ｐ［８］、Ｇ１２Ｐ［８］、ロタウイルスＡ ＷＡ株、ロタウイルスＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］株、ロタウイルスＳＡ１１株、ヒトロタウイルスＨＣＲ３（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８５２２）、ブタ様ヒトＧ９Ｐ［６］ロタウイルス株（Ａ Ｈｕ／ＢＥＬ／ＢＥ２００１／２００９／Ｇ９Ｐ［６］；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５．１）、ロタウイルスＧ１２（ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＤ８９０９５）；ロタウイルス株Ｇ４ ＢｒＢ－９、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎ；ＡＤＫ２７０３７）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＢｒＢ－９／１９９６／Ｇ４Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８）、ＲＶＡ Ｈｕ／ＷＩ６１／１９８３／Ｇ９Ｐ１Ａ［８］（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９）、ＲＶＡ／ヒト－ｔｃ／ＫＥＮ／ＫＤＨ６５１／２０１０／Ｇ１２Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１４．１）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７９－９／１９９２／Ｇ１Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０５７）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１５２０／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１７５／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５４）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２８０／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１００１ａ／２００８／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２６）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ０２５３／２００８／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１０２３／２００８／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２８６／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１２８／２００９／Ｇ１Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３６）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＳＣ２－９／１９９２／Ｇ２Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０６８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２４８／２００９／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１４１／２００９／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５６）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１０５８／２００８／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２４）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２５１／２００９／Ｇ２Ｐ［４］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４４）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７８－８／１９９２／Ｇ３Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０７９）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１３２２／２００９／Ｇ３Ｐ［６］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＦ４６０８２８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２１４／２００９／Ｇ３Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２５９／２００９／Ｇ３Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４６０）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＢｒＢ－９／１９９６／Ｇ４Ｐ７［５］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０９０）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１２９／２００９／Ｇ４Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１１３／２００９／Ｇ４Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３４）、ＲＶＡ／ワクチン／ＵＳＡ／ＲｏｔａＴｅｑ－ＷＩ７９－４／１９９２／Ｇ６Ｐ１Ａ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０４６）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１２４２／２００９／Ｇ９Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１１１９／２００９／Ｇ９Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３２）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ１０３２／２００８／Ｇ９Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ０２５８／２００８／Ｇ１２Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１８）、ＲＶＡ／ヒト－ｗｔ／ＢＥＬ／ＢＥ００８５／２００８／Ｇ１２Ｐ［８］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１６）を含み、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８５２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＤ８９０９５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６、ＧｅｎＢａｎ；ＡＤＫ２７０３７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１４．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０５７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０６８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０７９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＦ４６０８２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４６０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０４６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１６の配列のアミノ酸配列と約５９～１００％またはこれらの間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ１８５２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦＪ１１２１５．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＤ８９０９５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３６、ＧｅｎＢａｎ；ＡＤＫ２７０３７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＤＫ２７０３８、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｂ３ＳＲＸ９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＢＡＯ７４１４５、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１４．１、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０５７、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０６８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１５６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０７９、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＦ４６０８２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４６０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０９０、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＧＵ５６５０４６、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１４２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１３２、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１２８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１８、ＧｅｎＢａｎｋ：ＪＮ８４９１１６の配列のアミノ酸配列と、約５９、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはそれらの間の任意の量の配列類似性または同一性を示す配列を含んでいてもよいが、但し、前記ＶＰ７タンパク質は、対象に投与されると対象においてロタウイルスに対する免疫を誘導するものである配列が含まれる。

【0088】

融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）
また、ロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）とも呼ばれるウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成するための方法、または植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＶＬＰの生成を増加させるための方法もまた、本明細書で提供される。

【0089】

ＶＬＰはまた、ＶＰ７融合タンパク質を含む「ロタウイルスＶＬＰ」、「ロタウイルス様粒子（ＲＶＬＰ）」、「ロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）」、「ロタウイルス様粒子」、「ＲＶＬＰ」、「ＲＬＰ」、または「融合ＲＬＰ」とも呼ばれうる。ＶＬＰまたはＲＬＰは、自己集合し、１つまたはそれ以上のロタウイルス天然構造タンパク質、１つまたはそれ以上のロタウイルス融合タンパク質、またはこれらの組み合わせを自己構築し、含む構造である。例えば、ＲＬＰは、１つまたはそれ以上のロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ４および／またはＶＰ６、ならびに／あるいは１つまたはそれ以上のＶＰ７融合タンパク質を含んでいてもよい。非限定的な例において、ＲＬＰは、構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、および融合タンパク質ＶＰ７を含む。別の非限定的な例において、ＲＬＰは、構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、および融合タンパク質ＶＰ７を含んでいてもよい。ＶＬＰまたはＲＬＰは、一般に、感染時に生成されるビリオンと形態学的および抗原的に類似しているが、複製するのに十分な遺伝学的情報が不足し、それゆえ非感染性である。

【0090】

ＶＰ２タンパク質、ＶＰ６タンパク質およびＶＰ７融合タンパク質、またはＶＰ２タンパク質、ＶＰ６タンパク質、ＶＰ４タンパク質およびＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰまたはＶＬＰは、約５０ｎｍ～１２０ｎｍまたはこれらの間の任意のサイズ、例えば、５５、６０、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０ｎｍ、またはこれらの間の任意の量のサイズのものである。例えば、ＲＬＰは、約７５～約１１０ｎｍであってもよい。

【0091】

本明細書に記載の方法によって生成されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＶＬＰまたはＲＬＰは、野生型の天然ＶＰ７を含むＲＬＰと比較した場合、ＶＰ７：ＶＰ６をより高い比率で含んでいてもよい（実施例３を参照のこと）。

【0092】

成熟したロタビリオンは、タンパク質の３つの同心円層（殻）とｄｓ ＲＮＡの１１個のセグメントのゲノムからなるＴ＝１３の二十面体である（Patton J.T. Journal of General Virology (1995), 76, 2633-264）。最外層は、糖タンパク質ＶＰ７（３７ｋＤａ）の７８０コピーと、ウイルス付着タンパク質ＶＰ４（８７ｋＤａ）の二量体から形成された６０個のスパイクで構成されている（Patton J.T. Journal of General Virology (1995), 76, 2633-264）。中間殻または層は、Ｔ＝１３の格子に配置されたＶＰ６（４５ｋＤａ）の２６０個の三量体で構成されている。最内層は、ＲＮＡ結合タンパク質ＶＰ２（１０２ｋＤａ）の６０個の二量体で構成されるＴ＝１構造である（Patton J.T. Journal of General Virology (1995), 76, 2633-264）。成熟ロタビリオンにおけるＶＰ２：ＶＰ６：ＶＰ７の化学量論的質量比は、約：１：２．８：２．４である。したがって、成熟ロタビリオンにおいて、ＶＰ７：ＶＰ６の質量比は、約０．８５である。

【0093】

Ｙａｎｇら（２０１１年）（Science China Life Sciences January 2011, Volume 54, Issue 1, pp 82-89）は、タバコ植物において、グループＡのＲＶ（Ｐ［８］Ｇ１）の３つのロタウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７を共発現させ、これらのタンパク質の発現レベルならびにロタウイルス様粒子の形成を研究した。しかしながら、ＲＶ ＶＬＰに構築され生成された発現ロタウイルスカプシドタンパク質のごく一部と、外層タンパク質ＶＰ７は、Ｙａｎｇら（２０１１年）によって生成されたＲＶ ＶＬＰに、部分的にのみ存在するか、または完全に存在しない可能性がある。

【0094】

Ｙａｎｇら（２０１１年）が提供したデータに基づくと、ＲＬＰにおけるＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比は０．１８である。この比率は、Ｙａｎｇらの表２において供されるデータから決定することができ、当該データは、ＶＰ６：ＶＰ２の比率が４．２６であり、ＶＰ７／ＶＰ２の比率が０．７７であり、これは、ＶＰ７：ＶＰ６の比率が、ＶＰ７／ＶＰ６＝０．７７／４．２６＝０．１８について解くことにより０．１８と等しくなることを示している。

【0095】

本明細書に記載の方法によって生成されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰは、野生型または天然のＶＰ７を含むＲＬＰと比較した場合、ＶＰ７：ＶＰ６のより高い比率を含んでいてもよい。

【0096】

ＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰと同一の条件下で生成されるが、ＲＬＰが野生型または天然のＶＰ７タンパク質を含むＲＬＰと比較した場合、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の増加した量または増加した取り込みを含むＲＬＰを生成するための方法もまた本明細書で提供される。

【0097】

ＲＬＰにおけるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質の量または取り込みは、例えば、上記に記載されるように、ＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比として表されうる。したがって、植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）中のＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比を増加させるための方法が提供される。さらに、ＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比が増加したＲＬＰが提供される。前記方法またはＲＬＰにおけるＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比は、野生型または天然のＶＰ７タンパク質を含むＲＬＰと比較され、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰと同一の条件下で生成される。

【0098】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰにおけるＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比は、約０．２から０．８５またはこれらの間の任意の量であってもよい。例えば、ＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比は、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、またはこれらの間の任意の量であってもよい。

【0099】

ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７融合タンパク質を含む三重層ロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）であって、前記ＲＬＰのＶＰ７：ＶＰ６の比が、０．２から０．８５またはこれらの間の任意の量である、前記ＲＬＰがさらに提供される。例えば、三重層ＲＬＰは、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７を含んでいてもよく、ＶＰ７：ＶＰ６の化学量論的質量比は、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、またはこれらの間の任意の量である。三重層ＲＬＰは、適宜、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ４を含んでいてもよい。

【0100】

ＲＬＰにおけるＶＰ７の組み込みまたはＶＰ７の含有量は、ＲＬＰにおけるＶＰ７の％含有量でさらに表されてもよい（例えば、表５を参照のこと）。天然のロタウイルスにおいて、（ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、およびＶＰ７を含む）ＲＬＰの総構造タンパク質の質量の約３７％が、理論上の分子量と構造タンパク質の化学量論を用いて算出されたＶＰ７タンパク質である。本開示のＲＬＰにおけるＶＰ７融合タンパク質の含有量は、ＶＰ７融合、ＶＰ２およびＶＰ６を含むＲＬＰの総構造タンパク質の質量の約５％から約３８％またはこれらの間の任意の量であってもよい。例えば、ＲＬＰにおけるＶＰ７融合タンパク質の含有量は、ＶＰ７融合物、ＶＰ２およびＶＰ６を含むＲＬＰの総構造タンパク質の質量の５％、１０％、１２％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、またはこれらの間の任意の量であってもよい。

【0101】

ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６およびＶＰ７融合タンパク質を含む三重層ロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）であって、前記ＲＬＰの総構造タンパク質の質量の５％から３８％またはこれらの間の任意の量が、ＶＰ７タンパク質である、前記ＲＬＰがさらに提供される。例えば、三層ＲＬＰは、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６およびＶＰ７を含んでいてもよく、ＲＬＰにおけるＶＰ７融合タンパク質の含有量は、ＲＬＰの総構造タンパク質の質量の５％、１０％、１２％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、またはこれらの間の任意の量であってもよい。三重層ＲＬＰは、適宜、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ４を含んでいてもよい。

【0102】

植物、植物の部分、または植物細胞においてロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを生成するための方法またはＲＬＰの生成を増加させるための方法において、本明細書に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、例えば、タンパク質７－１ａ（７－１ａ_第２の株－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_第１の株）、タンパク質７－１ｂ（７－１ａ_第１の株－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_第２の株）、タンパク質７－１ａ－１ｂ（７－１ａ_第２の株－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_第２の株）またはこれらの組み合わせをコードする核酸が、植物、植物の部分、または植物細胞に導入される。核酸は、植物、植物の部分、または植物細胞において適切な条件下で発現され、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰが生成される。１つまたは１つ以上のタイプのロタウイルス融合タンパク質は、１つまたは１つ以上のタイプのロタウイルス融合タンパク質を含むＲＬＰを生成するために、植物、植物の部分、または植物細胞で発現させることができる。

【0103】

ＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを生成するための方法はまた、植物または植物の部分において、ロタウイルスＶＰ２構造タンパク質、ロタウイルスＶＰ６構造タンパク質、およびロタウイルスＶＰ４構造タンパク質をコードする核酸配列を共発現する工程を含んでいてもよい。ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、および／またはＶＰ４構造タンパク質は、ＶＰ７融合のドメインまたはサブドメインが由来する第１のロタウイルス株に由来していてもよい。さらに、ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、および／またはＶＰ４構造タンパク質は、ＶＰ７融合物のドメインまたはサブドメインが由来する第２のロタウイルス株に由来していてもよい。さらに、ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、および／またはＶＰ４構造タンパク質は、第３のロタウイルス株に由来し、前記第３のロタウイルス株は、第１または第２のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株であってもよい。

【0104】

例えば、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、またはＶＰ２およびＶＰ６の両方は、Ｇ１からＧ２７およびＰ１からＰ３４、より好ましくは、Ｇ１からＧ１９およびＰ１からＰ２７のＧ型およびＰ型のいずれかの組み合わせであって、Ｇ１Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［４］、Ｇ２Ｐ［８］、Ｇ２Ｐ［５］、Ｇ３Ｐ［５］、Ｇ３Ｐ［８］、Ｇ４Ｐ［５］、Ｇ４Ｐ［８］、Ｇ９Ｐ［６］、Ｇ９Ｐ［８］およびＧ１２Ｐ［８］を含むが、これらに限定されない、遺伝子型を有するいずれかのロタウイルス株に由来していてもよい。したがって、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ２、ＶＰ６、またはＶＰ２およびＶＰ６の両方は、ＶＰ２、ＶＰ６、またはＶＰ２とＶＰ６の両方は、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７、Ｇ８、Ｇ９、Ｇ１０、Ｇ１１、Ｇ１２、Ｇ１３、Ｇ１４、Ｇ１５、Ｇ１６、Ｇ１７、Ｇ１８、Ｇ１９、Ｇ２０、Ｇ２１、Ｇ２２、Ｇ２３、Ｇ２４、Ｇ２５、またはＧ２７の遺伝子型を有するいずれかのロタウイルス株に由来していてもよい。

【0105】

さらに、上記に記載されるＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを生成するための方法は、ロタウイルス非構造タンパク質、例えば、ＮＳＰ４をコードする核酸配列を発現する工程をさらに含んでいてもよい。

【0106】

ロタウイルス構造タンパク質およびロタウイルス非構造タンパク質を宿主（例えば、植物または植物の部分など）に導入し、共発現させることにより、生成されるＶＬＰまたはＲＬＰの収量を調節することができることが見出された。特に、ロタウイルス構造タンパク質をロタウイルス非構造タンパク質ＮＳＰ４とともに宿主（例えば、植物、植物の部分、または植物細胞など）で共発現させることにより、構造タンパク質ＶＰ７のＲＰＬへの取り込みは、同一条件下で同一のロタウイルス構造タンパク質を発現するがロタウイルス非構造タンパク質を発現しない第２の宿主（例えば、第２の植物、第２の植物の部分、または第２の植物細胞など）により生成されるＶＰ７のレベルと比較して増加しうる（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１１５６３０を参照のこと）。

【0107】

よって、宿主または宿主細胞においてＶＰ７融合物を含むＲＬＰを生成するための方法は、ＶＰ７融合物をコードする第１のヌクレオチド配列、ＶＰ２をコードする第２のヌクレオチド配列およびＶＰ６をコードする第３のヌクレオチド配列、ならびにＮＳＰ４をコードする第４のヌクレオチド配列を含む１つまたはそれ以上の核酸を含む、宿主または宿主細胞（例えば、植物、植物の部分、または植物細胞など）を供することを含んでいてもよい。第１、第２、第３、および第４のヌクレオチド配列は、宿主または宿主細胞（例えば、植物、植物の部分、または植物細胞など）において活性な１つまたはそれ以上の調節領域に作動可能に連結されている。宿主または宿主細胞は、１つまたはそれ以上の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートされ、その結果、ＶＰ７融合物、ＶＰ２、ＶＰ６およびＮＳＰ４の各々が発現される。前記方法によって生成されるＶＬＰ（またはＲＬＰ）には、ロタウイルス構造タンパク質のＶＰ７融合物、ＶＰ２およびＶＰ６が含まれる。ＲＬＰには、ロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４が含まれない。

【0108】

宿主または宿主細胞（例えば、植物、植物の部分、または植物細胞など）には、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ４をコードする第５のヌクレオチド配列がさらに含まれていてもよく、発現時に、ＶＰ４は、前記宿主または宿主細胞内で生成される。この方法によって生成されるＶＬＰ（またはＲＬＰ）には、ロタウイルス構造タンパク質ＶＰ７融合物、ＶＰ２、ＶＰ６が含まれ、さらにＶＰ４が適宜含まれてもよい。

【0109】

ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４、ＮＳＰ４タンパク質、またはこれらの組み合わせは、ＶＰ７融合物のドメインまたはサブドメインが由来する第１のロタウイルス株に由来していてもよい。さらに、ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４、ＮＳＰ４タンパク質、またはこれらの組み合わせは、ＶＰ７融合物のドメインまたはサブドメインが由来する第２のロタウイルス株に由来していてもよい。さらに、ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４、ＮＳＰ４タンパク質、またはこれらの組み合わせは、第３のロタウイルス株に由来していてもよく、第３のロタウイルス株は、第１または第２のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株である。さらに、ＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４、ＮＳＰ４タンパク質、またはこれらの組み合わせは、第４のロタウイルス株に由来していてもよく、第３のロタウイルス株は、第１、第２、または第４のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株である。表１に示されるように、ある株に由来するＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４、およびＮＳＰ４のうちのいずれか１つは、少なくとも１つのＶＰ２および１つのＶＰ６が用いられる限り、１つまたは１つより多くの他の株に由来するＶＰ２、ＶＰ６、ＶＰ４、およびＮＳＰ４のいずれか１つと組み合わされてもよい。ＶＰ６が使用されている。ロタウイルスタンパク質ＶＰ４およびＮＳＰ４は、記載される方法において適宜用いられてもよい。
表１：ロタウイルスタンパク質と株の組み合わせ

【表1】

^＊（＿）は、様々なロタウイルス株を示す。第１、第２、第３、第４のロタウイルス株のいずれか１つは異なる株である。

【0110】

例えば、ロタウイルスタンパク質ＶＰ２およびＶＰ６の以下の組み合わせは、本明細書に記載のＶＰ７融合タンパク質とともに用いられ／共発現されてもよい：ＶＰ２（１）、ＶＰ６（１）、ＶＰ２（１）、ＶＰ６（２）；ＶＰ２（１）、ＶＰ６（３）；ＶＰ２（１）、ＶＰ６（４）；ＶＰ２（２）、ＶＰ６（１）；ＶＰ２（２）、ＶＰ６（２）；ＶＰ２（２）、ＶＰ６（３）；ＶＰ２（２）、ＶＰ６（４）；ＶＰ２（３）、ＶＰ６（１）；ＶＰ２（３）、ＶＰ６（２）；ＶＰ２（３）、ＶＰ６（３）；ＶＰ２（３）、ＶＰ６（４）；ＶＰ２（４）、ＶＰ６（１）；ＶＰ２（４）、ＶＰ６（２）；ＶＰ２（４）、ＶＰ６（３）またはＶＰ２（４）、ＶＰ６（４）。

【0111】

１つまたはそれ以上のタイプのロタウイルスＶＰ７融合タンパク質が、植物、植物の部分、または植物細胞において、１つまたはそれ以上のロタウイルス構造タンパク質、例えば、ＶＰ２、ＶＰ６および／またはＶＰ４タンパク質と共発現される場合、１つまたはそれ以上のタイプのＶＰ７融合タンパク質と１つまたはそれ以上のロタウイルス構造タンパク質がＲＬＰに自己構築する。植物または植物の部分は、ＲＬＰの完全性を維持するために適切な抽出および精製条件下で収集され、１つまたはそれ以上のタイプのＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰが精製されうる。１つまたはそれ以上のＶＰ７融合タンパク質はまた、ロタウイルスＶＰ２タンパク質（ＶＰ２）をコードするヌクレオチド配列およびロタウイルスＶＰ６タンパク質（ＶＰ６）をコードするヌクレオチド配列と共発現され、その結果、ＲＬＰは、ＶＰ７融合タンパク質、ＶＰ２およびＶＰ６タンパク質を含みうる。１つまたはそれ以上のＶＰ７融合タンパク質はまた、ＶＰ２をコードするヌクレオチド配列、ＶＰ６をコードするヌクレオチド配列、ロタウイルスＶＰ４タンパク質（ＶＰ４）をコードするヌクレオチド配列と共発現され、その結果、ＲＬＰは、ＶＰ７融合タンパク質、ＶＰ２、ＶＰ６およびＶＰ４タンパク質を含みうる。本開示はまた、植物、植物の部分、または植物細胞内における本明細書に記載される１つまたはそれ以上のタイプのＶＰ７融合タンパク質の生成、ならびにＶＰ７融合タンパク質を含む植物物質、植物抽出物、またはタンパク質抽出物を生成するための植物、植物の部分、または植物細胞からの１つまたはそれ以上のタイプのＶＰ７の抽出および精製を提供する。

【0112】

植物物質、植物抽出物、またはタンパク質抽出物は、を使用して、対象におけるロタウイルス感染に対する免疫を誘導するために用いられてもよい。あるいは、ＶＰ７融合タンパク質、またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰは、精製され、または部分的に精製されてもよく、精製され、または部分的に精製された調製物は、対象におけるロタウイルス感染に対する免疫を誘導するために用いられてもよい。

【0113】

本開示はまた、免疫応答を誘導するための、１つまたはそれ以上のタイプのロタウイルスＶＰ７融合タンパク質、または１つまたはそれ以上のタイプのロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰの有効用量、および医薬的に許容される担体、アジュバント、ベヒクル、または賦形剤を含む組成物を提供する。

【0114】

また、対象においてロタウイルス感染に対する免疫を誘導するための方法であって、１つまたはそれ以上のタイプのロタウイルスＶＰ７融合タンパク質または１つまたはそれ以上のタイプのロタウイルスＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを、対象に経口、鼻腔内、筋肉内、腹腔内、静脈内、または皮下に投与することを含む方法が、本明細書で提供される。

【0115】

本開示はまた、植物においてＲＬＰを生成するための方法であって、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードする第１の核酸が、第２のロタウイルス構造タンパク質（例えば、ＶＰ２タンパク質）をコードする第２の核酸および第３のロタウイルス構造タンパク質（例えば、ＶＰ６）をコードする第３の核酸と共発現され、前記第１、第２、および第３の核酸が植物において共発現される。第１の核酸、第２の核酸、および第３の核酸は、同一の工程で植物に導入されてもよく、または植物に順次導入されてもよい。

【0116】

さらに、ＶＰ７融合タンパク質をコードする第１の核酸、第２のロタウイルス構造タンパク質（例えば、ＶＰ２タンパク質）をコードする第２の核酸、および第３のロタウイルス構造タンパク質（例えば、ＶＰ６タンパク質）をコードする第３の核酸を発現する植物は、第４のロタウイルス構造タンパク質（例えば、ＶＰ４タンパク質）をコードする第４の核酸でさらに形質転換され、その結果、第１、第２、第３および第４の核酸が植物において共発現されてもよい。

【0117】

さらに、ＶＰ７融合をコードする第１の核酸を発現する第１の植物は、例えば、ＶＰ６またはＶＰ２タンパク質に限定されないが１つまたはそれ以上のロタウイルス構造タンパク質をコードする第２の核酸を発現する第２の植物と交配させて、ＶＰ７融合タンパク質およびＶＰ６タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質およびＶＰ２タンパク質をそれぞれコードする第１および第２の核酸を共発現する子孫植物（第３の植物）を生成することできる。さらに、ＶＰ７融合タンパク質およびＶＰ６タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質およびＶＰ２タンパク質をそれぞれコードする第１および第２の核酸を発現する第３の植物は、例えば、１つまたはそれ以上のロタウイルス構造タンパク質（例えば、下記に限定されないが、ＶＰ６またはＶＰ２タンパク質）をコードする第３の核酸を発現する第４の植物と交配されて、ＶＰ７融合タンパク質、ＶＰ２タンパク質またはＶＰ６タンパク質、およびＶＰ６またはＶＰ２タンパク質をコードする第１、第２、および第３の核酸を共発現するさらなる子孫植物（第５の植物）を生成し、その結果、ＶＰ７融合タンパク質、ＶＰ２タンパク質およびＶＰ６タンパク質が前記第５番目の植物内で発現されてもよい。

【0118】

ＶＰ７融合タンパク質、ＶＰ２タンパク質およびＶＰ６タンパク質を発現する第５の植物は、１つまたはそれ以上のロタウイルス構造タンパク質（例えば、下記に限定されないが、ＶＰ４）をコードする第４の核酸を発現する第６の植物とさらに交配されて、ＶＰ７融合タンパク質、ＶＰ２タンパク質、ＶＰ６タンパク質およびＶＰ６タンパク質を発現する第７の植物を生成してもよい。

【0119】

図４ｂで見られるように、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、植物においてＶＰ２およびＶＰ６とともにＲＬＰ内で自己構築する。単離されたＲＬＰは、野生型ＶＰ７タンパク質を有するＲＬＰと同様の立体構造を示す（図４ａ）。

【0120】

核酸
本開示は、本明細書に記載されるロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸をさらに提供する。したがって、前記核酸は、第１のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－２ドメイン、および第２のロタウイルス遺伝子型または株に由来する７－１ａサブドメイン、７－１ｂサブドメインまたは７－１ａサブドメインを含みうるＶＰ７融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでいてもよい（７－１ａ_{第１または第２の株}－－７－２_第１の株－－７－１ｂ_{第１または第２の株}（７－１ａ_１／２－７－２_１－７－１ｂ_１／２）。

【0121】

さらに、ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、前記配列は、７－１ａサブドメインをコードする第１の配列、７－２ドメインをコードする第２の配列、および７－１ｂサブドメインをコードする第３の配列を含み；７－２ドメインの配列は、第１のロタウイルス株に由来し、および７－１ａサブドメインの配列、７－１ｂサブドメインの配列または７－１ａサブドメインの配列および７－１ｂサブドメインの配列は、第２のロタウイルス株に由来し、第１のロタウイルス株は、第２のロタウイルス株とは異なるロタウイルス株である、核酸がさらに提供される。

【0122】

ロタウイルス融合タンパク質をコードする核酸は、「ロタウイルスＶＰ７融合核酸」、「ロタウイルスＶＰ７融合ヌクレオチド配列」として記載されうる。このような核酸の非限定的な例は、配列番号２７、３０、３２、３８、４０、４２、４９、５１、５８または６０に開示される配列、あるいは配列番号２７、３０、３２、３８、４０、４２、４９、５１、５８、６０と約５９～１００％またはこれらの間の任意の割合の配列類似性または同一性、例えば、配列番号２７、３０、３２、３８、４０、４２、４９、５１、５８または６０の配列と約５９、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％またはこれらの間の任意の割合の配列類似性または同一性を示す配列である。

【0123】

ヌクレオチド配列は、例えば、ヒトのコドン使用または植物のコドン使用のために最適化されうる。さらに、ＶＰ７融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、１つまたはそれ以上の増幅要素に作動可能に連結されていてもよい。さらに、例えば、ロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７融合タンパク質またはＮＳＰ４などのロタウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、１つまたはそれ以上のエンハンサー配列に作動可能に連結されていてもよい。例えば、発現エンハンサーは、ＣＰＭＶエンハンサーエレメントと呼ばれる、カウピーモザイクウイルス（ＣＰＭＶ）に由来するエンハンサーであってもよい。

【0124】

本明細書で用いられる用語「ＣＰＭＶエンハンサーエレメント」は、当技術分野で知られているカウピーモザイクウイルス（ＣＰＭＶ）ＲＮＡ２ポリペプチドを調節する５’ＵＴＲをコードするヌクレオチド配列またはその改変ＣＰＭＶ配列を意味する。例えば、ＣＰＭＶエンハンサーエレメントまたはＣＰＭＶ発現エンハンサーは、ＷＯ２０１５／１４３６７、ＷＯ２０１５／１０３７０４；ＷＯ２００７／１３５４８０；ＷＯ２００９／０８７３９１；Sainsbury F., and Lomonossoff G.P., (2008, Plant Physiol. 148: pp. 1212-1218)（これらの文献の各々は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるヌクレオチド配列を含む。ＣＰＭＶエンハンサー配列は、それらが結合している下流の異種オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の発現を高めることができる。ＣＰＭＶ発現エンハンサーは、ＣＰＭＶ ＨＴ、ＣＰＭＶＸ、ＣＰＭＶＸ＋、ＣＰＭＶ－ＨＴ＋、ＣＰＭＶ ＨＴ＋［ＷＴ１１５］、またはＣＰＭＶ ＨＴ＋［５１１］を含んでいてもよい（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１４３６７；ＷＯ２０１５／１０３７０４）。ＣＰＭＶ発現エンハンサーは、ＣＰＭＶ発現エンハンサー配列および目的のヌクレオチド配列と作動可能に連結されている調節領域を含む植物発現システム内で用いられてもよい。用語「５’ＵＴＲ」、「５’非翻訳領域」または「５’リーダー配列」は、翻訳されないｍＲＮＡの領域を意味する。５’ＵＴＲは、典型的に、転写開始部位から開始し、コード領域の翻訳開始部位または開始コドンの直前で終結する。５’ＵＴＲは、ｍＲＮＡ転写物の安定性および／または翻訳を調節しうる。

【0125】

例えば、ロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７融合タンパク質またはＮＳＰ４などのロタウイルスタンパク質に作動可能に連結された１つまたはそれ以上のエンハンサー配列は、さらに、（参照により本明細書に組み込まれる）米国出願第６２／６４３，０５３号であってもよい。よって、用いられうる発現エンハンサーの非限定的な例には：
nbGT61 (配列番号122);
ATCCAGAAGTAGGAATTCTTCAGTATAATCTAGGGTTTTTTGAAAAGCAAATTGATCGAAA;
nbATL75 (配列番号123);
ATCTCCACCACCAAAAACCCTAATCGCCTCTCCGTTTCTTCATCAGATTCTCGGTTCTCTTCTTCTACAGCAACA;
nbDJ46 (配列番号124);
ACTCACCAAGAAAATAAACAAATTAAAGAATTTTAAGAAAAACAAG;
nbCHP79 (配列番号125);
ATTCTGCCCTCAGTTAACTAAATTATCTCTCTGATTAACAGTACTTTCTGATTTTCTGTGATTTCTACAAATCTGAGAC;
nbEN42 (配列番号126);
ACTTTTGTATAGCTCCATTGAAATAGAGAAAAGAAAATAGCC;
atHSP69 (配列番号127);
AAATTCAAAATTTAACACACAAACACAAACACACACACCAAAAAAAACACAGACCTTAAAAAAATAAAA;
atGRP62 (配列番号128);
ATAACAAAACAAGATTTTGAAGTAAAACATAAAAGAAAATAAACCCTAAGAATATATCGAAA
atPK65 (配列番号129);
GCAAAAACAAAAATAAAAAAAACATCGCACAAGAAAATAAAAGATTTGTAGAATCAACTAAGAAA
atRP46 (配列番号130);
AGAAACAAAAAGAATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAATAAAGAA;
nb30S72 (配列番号131);
ATCTTTCCCTCAAAACCCTAGCCGCAGTCACTTCCGTAGGTGCTTACTTCGCTGTTAGTGCAATTCCAAACC;
nbMT78 (配列番号132);
(AC)ACAATTTGCTTTAGTGATTAAACTTTCTTTTACAACAAATTAAAGGTCTATTATCTCCCAACAACATAAGAAAACA
nbPV55 (配列番号133);
AATTAAAGATCAATTCACTGTATCCCTCTTCTCCAAAAAAAACTCTGCTGTAGTC
nbPPI43 (配列番号134);
(AGC)ACAAATCGTACACAGCGAAAACCTCACTGAAATATTTAGAGAG
nbPM64 (配列番号135);
(GTTC)AGAAAGATTTGTTTCCTCTGAAATAGTTTTACAGAGCCAGAAGAAGAAAAAGAAGAAGAGAGCAおよび
nbH2A86 (配列番号136);
ACTCAACACTCAAATCGCAATCCAAAAGCTTCAATTTTTCCTAATACTTCTCTGTATTCAAGCTTCGTAAACTTTCATTCACATCA
が含まれる。

【0126】

本開示で言及される核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下において本明細書で定義される１つまたはそれ以上のヌクレオチド配列またはその核酸配列の相補物にハイブリダイズする場合、配列またはその相補物に対して「実質的に相同」、「実質的に類似」または「実質的に同一」であってもよい。配列は、そのヌクレオチドの少なくとも約７０％、または７０～１００％、またはこれらの間の任意の割合、例えば、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００％、またはこれらの間の任意の割合が、ヌクレオチド配列の定義された長さに対して一致する場合、「実質的に相同」「実質的に類似」「実質的に同一」であるが、但し、このような相同配列が、その配列の特性、または本明細書に記載のコード化された産物のうちの１つまたはそれ以上を示すことを条件とする。

【0127】

このような配列類似性または同一性は、ＤＮＡＳＩＳ内で提供されるものなどのヌクレオチド配列比較プログラムを用いて（例えば、以下に限定されないが、ＧＡＰペナルティ５、上部対角線５の数（# of top diagonals 5）、固定ＧＡＰペナルティ１０、ｋ－タプル２、フローティングギャップ１０、およびウィンドウサイズ５を用いて）決定されてもよい。しかしながら、比較のための配列アラインメントの他の方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、Smith & Waterman (1981, Adv. Appl. Math. 2:482)、Needleman & Wunsch (J. Mol. Biol. 48:443, 1970)、Pearson & Lipman (1988, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444)のアルゴリズム、これらのアルゴリズムＮＩＨにより利用可能なＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＢＬＡＳＴ）のコンピュータ上の実行、あるいは手動アラインメントと目視による研究（例えば、Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds. 1995 supplementを参照のこと)、あるいはストリンジェントな条件下におけるサザンまたはノザンハイブリダイゼーションを用いる（Maniatis et al., in Molecular Cloning (A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Laboratory, 1982を参照のこと)。好ましくは、実質的に相同である配列は、その分子の定義された長さに対して少なくとも約８０％、最も好ましくは少なくとも約９０％の配列類似性を示す。

【0128】

このようなストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の１つの例として、６５℃で４ＸＳＳＣ中において終夜（約１６～２０時間）ハイブリダイゼーションし、次いで６５℃で０．１ＸＳＳＣ中において１時間洗浄するか、６５℃で０．１ＸＳＳＣ中において各々２０分または３０分間で２回洗浄することがであってもよい。あるいは、例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件として、ユニークな配列領域のために、４２℃で５０％のホルムアミド、４ＸＳＳＣにおいて終夜（１６～２０時間）、続いて６５℃で０．１ＸＳＳＣにおいて１時間洗浄するか、６５℃で０．１ＸＳＳＣ中において各々２０または３０分間または一晩（１６～２０時間）で２回洗浄しうるか、または６５℃でＣｈｕｒｃｈ水性リン酸緩衝液（７％ ＳＤＳ；０．５Ｍ ＮａＰＯ_４緩衝液、ｐＨ７．２；１０ｍＭ ＥＤＴＡ）でハイブリダイゼーションし、５０℃で０．１ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中において各々２０または３０分間で２回洗浄し、または６５℃で２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中において各々２０または３０分間で２回洗浄しうる。

【0129】

コドン最適化
多くの生物は、成長するペプチド鎖における特定のアミノ酸の挿入のためにコードする特定のコドンの使用について偏りを示す。生物間のコドン使用におけるコドン選択、コドンバイアス、差異は、遺伝コードの縮重によってもたらされ、多くの生物の間で十分に記録されている。コドンバイアスは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と相関することが多く、これは、とりわけ、翻訳されるコドンの特性と特定の転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の利用可能性に依存すると考えられている。細胞内の選択されるｔＲＮＡの優勢性は、一般に、ペプチド合成で最も頻繁に使用されるコドンを反映している。よって、遺伝子は、コドン最適化に基づいて、一定の生物における最適な遺伝子発現のために調整されうる。異種的に発現されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列を最適化するためのプロセスは、発現収量を改善するための重要なステップとなりうる。最適化の要件には、外来タンパク質を生成する宿主の能力を改善するためのステップが含まれうる。

【0130】

「コドン最適化」は、天然配列の少なくとも１つ、それ以上、または多数のコドンを、別の生物または種の遺伝子でより頻繁にまたは最も頻繁に用いられうるコドンで置き換えることによって、目的の細胞において発現を高めるために核酸配列を改変することとして定義される。様々な種が、特定のアミノ酸の特定のコドンに対して特定のバイアスを示す。

【0131】

本開示には、コドン最適化された合成ポリヌクレオチド配列が含まれ、例えば、配列は、ヒトコドン使用または植物コドン使用のために最適化されている。次いで、コドン最適化ポリヌクレオチド配列は、植物で発現させうる。より具体的には、ヒトのコドン使用または植物のコドン使用のために最適化された配列は、植物において発現されてもよい。理論に拘束されることを望まないが、ヒトコドンに最適化された配列は、配列のグアニンシトシン含有量（ＧＣ含量）を増加させ、植物における発現収量を改善すると考えられている。

【0132】

翻訳的に非効率的なタンパク質コード領域の翻訳速度を改善するために当該技術分野で公知の様々なコドン最適化技術が存在する。これらの技術は、主に、特定の宿主生物のコドン使用を同定することによるものである。特定の遺伝子または配列がこの生物で発現されるべきである場合、このような遺伝子および配列のコード配列は、目的の配列のコドンをその宿主生物のより頻繁に使用されるコドンで置き換えるように改変される。

【0133】

ロタウイルス感染に対する免疫の誘導
「免疫応答」は、一般に、対象の適応免疫系の応答を意味する。適応免疫系は、一般に、体液性応答と細胞性応答を含む。体液性応答は、Ｂリンパ球系統の細胞（Ｂ細胞）で生成される分泌抗体によって介在される免疫の態様である。分泌された抗体は、侵入する微生物（例えば、ウイルスや細菌など）の表面上の抗原に結合し、それらに破壊のための旗を立てる。体液性免疫は、一般に、抗体生成およびそれに伴うプロセス、ならびにＴｈ２細胞の活性化およびサイトカイン生成、メモリー細胞の生成、食作用のオプソニン促進、病原体の排除などを含む抗体のエフェクター機能を意味するために用いられる。「調節する」または「調節する」などの用語は、一般に知られ、または用いられるいくつかのアッセイのうちのいずれかによって決定される、特定の応答またはパラメーターの増加または減少を意味し、そのいくつかは本明細書に例示される。

【0134】

細胞性応答は、抗体に関連しない免疫応答であり、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、抗原特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化、および抗原に対する応答時の様々なサイトカインの放出に関する。細胞性免疫は、一般に、Ｔｈ細胞活性化、Ｔｃ細胞活性化、およびＴ細胞媒介性応答を意味するために用いられる。細胞性免疫は、ウイルス感染に対する応答時に特に重要でありうる。

【0135】

例えば、抗原特異的なＣＤ８陽性Ｔリンパ球の誘導は、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを用いて測定されてもよく、ＣＤ４陽性Ｔリンパ球の刺激は、増殖アッセイを用いて測定されてもよい。抗ロタウイルス抗体価は、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて定量化されてもよく、抗原特異的または交差反応性の抗体のアイソタイプはまた、抗アイソタイプ抗体（例えば、抗ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭ）を用いて測定されてもよい。このようなアッセイを実施するための方法および技術は、当該技術分野で周知である。

【0136】

サイトカインの存在またはレベルもまた定量化されうる。例えば、Ｔヘルパー細胞応答（Ｔｈ１／Ｔｈ２）は、ＥＬＩＳＡ（例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＯｐｔＥＩＡキットなど）を用いるＩＦＮ－γおよびＩＬ－４分泌細胞の測定によって特徴付けられる。対象から得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）または脾細胞が培養され、上清が分析されうる。Ｔリンパ球はまた、当該技術分野で公知のマーカー特異的蛍光標識および方法を用いて、蛍光励起セルソーター（ＦＡＣＳ）によって定量化されうる。

【0137】

マイクロ中和アッセイはまた、対象における免疫応答を特徴付けるために行われうる。例えば、Ｒｏｗｅら（１９７３）の方法を参照のこと。ウイルス中和力価は、細胞のクリスタルバイオレット（crystal violent）固定／着色後の溶解プラークの計数（プラークアッセイ）、インビトロ培養における細胞溶解の顕微鏡観察、およびロタウイルスのＥＬＩＳＡおよび分光光度検出を含む多くの方法で定量化されうる。

【0138】

本明細書で用いられる用語「エピトープ（epitope）」または「エピトープ（epitopes）」は、抗体が特異的に結合する抗原の構造部分を意味する。

【0139】

ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含む植物生成ＲＬＰの投与に応答して誘発される免疫応答は、例えば、Ｂａｌｂ／Ｃマウスで観察されうる。動物から採取された血液に由来する血清試料は、ＶＰ７特異的な総ＩｇＧおよびＩｇＡ抗体についてＥＬＩＳＡによって分析されうる。ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含む植物生成ＲＬＰで免疫化されたマウスは、各治療群について血清中にロタウイルスＶＰ７特異的ＩｇＧ抗体価を示しうる（図５を参照のこと）。図５は、Ｇ９マウス免疫化血清の存在下でロタウイルスＧ９株に感染した細胞培養物のマイクロ中和力価を示す。前記図に見られるように、天然のＶＰ７融合およびＶＰ７融合を含むＲＬＰは、Ｇ９ウイルス感染から保護し、およびＧ９ウイルスで得られた免疫から保護する。

【0140】

抗体または抗体フラグメントを生成するための方法であって、本明細書に記載されるＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを、対象または宿主動物に投与し、それにより抗体または抗体フラグメントを生成することを含む方法が提供される。前記方法によって生成された抗体または抗体フラグメントもまた提供される。

【0141】

それゆえ、本開示はまた、対象においてロタウイルス感染に対する免疫を誘導するための、本明細書に記載されるＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰの使用を提供する。また、ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰを対象または宿主動物に投与することによって生成される抗体または抗体フラグメントもまた、本明細書で開示される。対象において免疫応答を誘導するための、本明細書に記載されるＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰの有効用量、および医薬的に許容される担体、アジュバント、ベヒクル、または賦形剤を含む組成物がさらに提供される。対象において免疫応答を誘導するためのワクチンであって、前記ワクチンが、ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰの有効用量を含むものである、ワクチンもまた提供される。

【0142】

ロタウイルスＶＰ７タンパク質について、７－１ａサブドメインは、免疫優性である。したがって、７－１ａサブドメインまたは７－１ａエピトープは、対象において優性な免疫応答を生じうる。よって、１の態様において、ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰは、７－１ａサブドメインが由来するロタウイルス遺伝子型または株に対する対象における免疫を誘導しうる。別の態様において、ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰは、７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインが由来するロタウイルス遺伝子型または株に対する対象における免疫を誘導しうる。

【0143】

ロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、第１のロタウイルス株に由来する７－２ドメインをコードする第１の配列、ならびに第２のロタウイルス株に由来する７－１ａドメイン、７－１ｂサブドメインまたは７－１ａサブドメインおよび７－１ｂサブドメインをコードする第２の配列を含んでいてもよい。ＶＰ７融合タンパク質またはＶＰ７融合タンパク質を含むＲＬＰは、第２のロタウイルス株に対して対象において免疫を誘導しうる。

【0144】

植物の発現
本開示の構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどを用いて植物細胞に導入することができる。このような技術の総説については、例えば、Weissbach and Weissbach, Methods for Plant Molecular Biology, Academy Press, New York VIII, pp. 421-463 (1988); Geierson and Corey, Plant Molecular Biology, 2d Ed. (1988);ならびにMiki and Iyer, Fundamentals of Gene Transfer in Plants In Plant Metabolism, 2d Ed. DT. Dennis, DH Turpin, DD Lefebvre, DB Layzell (eds), Addison Wesly, Langmans Ltd. London, pp. 561-579 (1997)をご参照下さい。他の方法として、直接的なＤＮＡの取り込み、リポソーム、エレクトロポレーション（例えば、プロトプラスト、マイクロインジェクション、マイクロプロジェクタイルまたはウィスカーを使用）、および真空浸潤（vacuum infiltration）が含まれる。例えば、Bilang, et al. (1991, Gene 100: 247-250)、Scheid et al. (1991, Mol. Gen. Genet. 228: 104-112)、Guerche et al. (1987, Plant Science 52: 111-116)、Neuhause et al. (1987, Theor. Appl Genet. 75: 30-36)、Klein et al. (2987, Nature 327: 70-73)、Freeman et al. (1984, Plant Cell Physiol. 29: 1353)、Howell et al. (1980, Science 208: 1265)、Horsch et al. (1985, Science 227: 1229-1231)、DeBlock et al. (1989, Plant Physiology 91: 694-701)、Methods for Plant Molecular Biology (Weissbach and Weissbach, eds., Academic Press Inc., 1988)、Methods in Plant Molecular Biology (Schuler and Zielinski, eds., Academic Press Inc., 1989)、ＷＯ９２／０９６９６、ＷＯ９４／００５８３、ＥＰ３３１０８３、ＥＰ１７５９６６、Liu and Lomonossoff (2002, J Virol Meth, 105:343-348)、ＥＰ２９０３９５；ＷＯ８７０６６１４；米国特許第４，９４５，０５０号；第５，０３６，００６号；および第５，１００，７９２号、１９９５年５月１０日出願の米国特許出願第０８／４３８，６６６号、および１９９２年９月２５日出願の第０７／９５１，７１５号（これらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。

【0145】

一過的な発現方法は、本開示の構築物を発現させるために用いられうる（D’Aoust et al., 2009, Methods in molecular biology, Vol 483, pages41-50；Liu and Lomonossoff, 2002, Journal of Virological Methods, 105:343-348；これらは、参照により本明細書に取り込まれる)。あるいは、Ｋａｐｉｌａら（1997, Plant Sci.122, 101-108；参照により本明細書に組み込まれる）、またはＷＯ００／０６３４００、ＷＯ００／０３７６６３（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される、真空を基にした一過的発現法が用いられてもよい。これらの方法には、例えば、以下に限定されないが、アグロ接種（Agro-inoculation）、アグロ浸潤（Agro-infiltration）、またはシリンジ浸潤（syringe infiltration）の方法が含まれうるが、他の一過的方法もまた、上記に記載されるように用いられてもよい。アグロ接種、アグロ浸潤、またはシリンジ浸潤では、所望の核酸を含むアグロバクテリアの混合物が、組織の細胞間空間、例えば、葉、植物の大気中部分（茎、葉および花を含む）、植物の他の部分（茎、根、花）、または植物全体に入る。表皮を通過した後、アグロバクテリアは感染し、ｔ－ＤＮＡコピーを細胞に移行する。ｔ－ＤＮＡは、エピソームとして転写され、ｍＲＮＡが翻訳されて、感染細胞で目的のタンパク質が生成されるが、核内でのｔ－ＤＮＡの通過は一時的なものである。

【0146】

また、本開示の一部としては、本明細書に記載の一過的なタンパク質の発現に適したプラットフォーム植物として用いられうる、本開示の遺伝子構築物を含むトランスジェニック植物、植物細胞、または種子である。植物細胞から植物全体を再生するための方法もまた、当該当技術分野で公知である（例えば、Guerineau and Mullineaux (1993, Plant transformation and expression vectors. In: Plant Molecular Biology Labfax (Croy RRD ed) Oxford, BIOS Scientific Publishers, pp 121-148を参照のこと）。一般に、形質転換された植物細胞は、抗生物質などの選択性薬剤を含有していてもよい適切な培地で培養され、選択可能なマーカーは、形質転換された植物細胞の同定を容易にするために用いられる。カルスが形成されると、芽の形成は、公知の方法による適切な植物ホルモンを使用することによって促進することができ、その芽は植物の再生のための発根培地に移される。次に、前記植物は、種子から、または栄養繁殖技術を用いて、反復世代を確立することができる。トランスジェニック植物はまた、組織培養を用いずに生成することもできる。これらの生物の安定した形質転換および再生のための方法は、当該技術分野で確立されており、当業者に公知である。利用可能な技術は、Vasil et al. (Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, VoI I, Il and III, Laboratory Procedures and Their Applications, Academic Press, 1984)、およびWeissbach and Weissbach (Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, 1989)で総説されている。形質転換され、再生された植物を取得するための方法は、本開示にとって重要ではない。

【0147】

植物、植物の部分または植物細胞は、２つまたはそれ以上の核酸構築物によって形質転換され、または同時形質転換される場合、前記核酸構築物は、一回のトランスフェクションでアグロバクテリウムに導入され、そして核酸がプールされ、細菌細胞がトランスフェクトされてもよい。トランスフェクトされた細胞。あるいは、前記構築物は、連続的に導入されてもよい。この場合、第１の構築物は、記載されるようにアグロバクテリウムに導入され、細胞は、単一の形質転換された細菌のみが増殖できる選択的な条件下（例えば、抗生物質の存在下）で増殖される。この第１の選択工程ステップ後、第２の核酸構築物は、記載されるようにアグロバクテリウムに導入され、前記細胞は、２つの形質転換された細菌のみが増殖できる二重選択条件下で増殖される。次に、２つの形質転換された細菌は、本明細書に記載される植物、植物の部分、または植物細胞を形質転換するために用いられるか、あるいは第３の核酸構築物を受容するためのさらなる形質転換工程に供されてもよい。

【0148】

あるいは、植物、植物の部分、または植物細胞が２つまたはそれ以上の核酸構築物によって形質転換され、または同時形質転換される場合、前記核酸構築物は、アグロバクテリウム細胞の混合物を植物、植物の部分、または植物細胞と共浸潤させることによって植物に導入されてもよく、各アグロバクテリウム細胞は、植物内に導入される１つまたはそれ以上の構築物を含みうる。構築物内の目的のヌクレオチド配列の植物、植物の部分、または植物細胞内の相対的な発現レベルを変化させるために、浸潤工程中に、所望の構築物を含む様々なアグロバクテリア集団の濃度が変化されてもよい。

【0149】

本明細書で用いられる用語「植物」、「植物の部分」、「植物の部分」、「植物物質」、「植物バイオマス」、「植物材料」、「植物抽出物」、または「植物の葉」は、本明細書に記載の１つまたはそれ以上の核酸の発現のための転写、翻訳、または翻訳後機構を供することができ、および／または発現されたタンパク質またはＲＬＰが抽出され、精製されうる、植物全体、組織、細胞、またはこれらのいずれかの画分、細胞内植物構成成分、細胞外植物構成成分、植物の液体または固体抽出物、またはこれらの組み合わせを含んでいてもよい。植物として、以下に限定されないが、例えば、キャノーラ、ブラッシカ属、トウモロコシ、ニコチアナ属、（タバコ）、例えば、Nicotiana benthamiana、Nicotiana rustica、Nicotiana tabacum、Nicotiana alata、Arabidopsis thaliana、アルファルファ、ジャガイモ、サツマイモ（Ipomoea batatus)、ニンジン、エンドウ豆、オート麦、米、大豆、小麦、大麦、ヒマワリ、綿、トウモロコシ、ライ麦（Secale cereale）、モロコシ（Sorghum bicolor、Sorghum vulgare）、ベニバナ（Carthamus tinctorius）を含む農業作物が含まれうる。

【0150】

本明細書で用いられる用語「植物の部分」は、以下に限定されないが、葉、茎、根、花、果実、葉、茎、根、花、果実から得られる植物細胞、葉、茎、根、花、果物から得られた抽出物、またはこれらの組み合わせを含む、植物のいずれかの部分を意味する。本明細書で用いられる用語「植物抽出物」は、植物、植物の部分、植物細胞、またはこれらの組み合わせを、物理的に（例えば、適切な緩衝液中で凍結し、続いて抽出することによって）、機械的に（例えば、植物または植物の部分を粉砕し、または均質化し、続いて適切な緩衝液中で抽出することによって）、酵素的に（例えば、細胞壁分解酵素を用いて）、化学的に（例えば、１つまたはそれ以上のキレート剤または緩衝液を用いて）、またはこれらの組み合わせにより処理した後に得られる植物由来の生成物を意味する。植物抽出物は、望ましくない植物成分、例えば、細胞壁の破片を除去するために、さらに処理されてもよい。植物抽出物は、植物、植物の部分、または植物細胞からの１つまたはそれ以上の構成成分、例えば、植物、植物の部分、または植物細胞からのタンパク質（タンパク質複合体、タンパク質超構造および／またはＲＬＰを含む）、核酸、脂質、炭水化物、またはこれらの組み合わせの回収に有用であるために得られてもよい。植物抽出物がタンパク質を含む場合、それはタンパク質抽出物と呼ばれうる。タンパク質抽出物は、植物組織からの１つまたはそれ以上のタンパク質、タンパク質複合体、タンパク質超構造、および／またはＶＬＰを含む、粗植物抽出物、部分的に精製された植物またはタンパク質抽出物、または精製された生成物であってもよい。必要に応じて、タンパク質抽出物または植物抽出物は、当業者に公知の技術を用いて部分的に精製されてもよく、例えば、抽出物は、塩またはｐＨ沈殿、遠心分離、勾配密度遠心分離、濾過、クロマトグラフィー、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供されてもよい。タンパク質抽出物は、当業者に公知の技術を用いて精製されてもよい。

【0151】

本明細書で用いられる核酸セグメントという用語は、目的のタンパク質をコードする核酸の配列を示す。核酸の配列に加え、核酸セグメントには、核酸の配列に作動可能に連結されている調節領域およびターミネーターを含まれる。調節領域は、例えば、プロモーターを含み、適宜、プロモーターに作動可能に連結されたエンハンサーエレメントを含んでいてもよい。

【0152】

本明細書のロタウイルスタンパク質、例えば、本明細書に記載のロタウイルスＶＰ７融合タンパク質は、ウイルスを基にしたＤＮＡまたはＲＮＡ発現系を含む発現系、例えば、以下に限定されないが、コモウイルスを基にした発現カセットにおいて発現されてもよい。

【0153】

本明細書に記載される発現系には、二分節型ウイルス、または二分節ゲノムを有するウイルスに基づく発現カセットが含まれうる。例えば、二分節型ウイルスは、コモウイルス科のものであってもよい。コモウイルス科の属として、コモウイルス、ネポウイルス、ファバウイルス、チェラウイルス、およびサドワウイルスが含まれる。コモウイルスには、ササゲモザイクウイルス（ＣＰＭＶ）、ササゲ重症モザイクウイルス（ＣＰＳＭＶ）、スカッシュモザイクウイルス（ＳｑＭＶ）、アカツメクサ斑紋ウイルス（Red clover mottle virus）（ＲＣＭＶ）、ビーンポッドモットルウイルス（Bean pod mottle virus）（ＢＰＭＶ）、カブ輪点ウイルス（Turnip ringspot）（ＴｕＲＳＶ）、ソラマメトゥルーモザイクウイルス（Broad bean true mosaic virus）（ＢＢｔＭＶ）、ソラマメステインウイルス（Broad bean stain virus）（ＢＢＳＶ）、ダイコンモザイクウイルス（Radish mosaic virus）（ＲａＭＶ）が含まれる。本発明の様々な態様に有用でありうるエンハンサーエレメントを含むコモウイルスＲＮＡ－２配列の例には、以下に限定されないが、ＣＰＭＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００３５５０）、ＲＣＭＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００３７３８）、ＢＰＭＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００３４９５）、ＣＰＳＭＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００３５４４）、ＳｑＭＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００３８００）、ＴｕＲＳＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿０１３２１９．１）、ＢＢｔＭＶ ＲＮＡ－２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＧＵ８１０９０４）、ＢＢＳＶ ＲＮＡ２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＦＪ０２８６５０）、ＲａＭＶ（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００３８００）が含まれる。

【0154】

二分節型コモウイルスＲＮＡゲノムのセグメントは、ＲＮＡ－１およびＲＮＡ－２と呼ばれる。ＲＮＡ－１は、複製に関連するタンパク質をコードし、ＲＮＡ－２は、細胞間移動に必要なタンパク質と２つのカプシドタンパク質をコードする。ＣＰＭＶ、ＣＰＳＭＶ、ＳｑＭＶ、ＲＣＭＶ、またはＢＰＭＶを含む適切なコモウイルスを基にしたカセットが用いられてもよく、例えば、発現カセットは、ＣＰＭＶに基づいていてもよい。

【0155】

「発現カセット」は、宿主細胞における目的の核酸の転写のための適切なプロモーターまたは他の調節エレメントの制御下にあり、それらに作動可能に（または作動的に）連結された目的の核酸を含むヌクレオチド配列を意味する。

【0156】

本明細書で用いられる用語「核酸複合体」は、２つまたはそれ以上の核酸セグメントの組み合わせを意味する。２つまたはそれ以上の核酸セグメントは、単一の核酸中に存在し、その結果、核酸複合体は、２つまたはそれ以上の核酸セグメントを含み、各核酸セグメントは、調節領域およびターミネーターの制御下にありうる。あるいは、核酸複合体は、２つまたはそれ以上の別々の核酸を含み、前記核酸の各々は、１つまたはそれ以上の核酸セグメントを含み、各核酸セグメントは、調節領域およびターミネーターの制御下にありうる。例えば、核酸複合体は、２つの核酸セグメントを含む１つの核酸を含んでいてもよく、核酸複合体は、２つの核酸を含み、各核酸は１つの核酸セグメントを含んでいてもよく、あるいは核酸複合体は、２つまたはそれ以上の核酸を含み、各核酸は１つまたはそれ以上の核酸セグメントを含んでいてもよい。

【0157】

本明細書で用いられる用語「ベクター」または「発現ベクター」は、外因性核酸配列を宿主細胞（例えば、植物細胞）に移行し、前記外因性核酸配列の発現を宿主細胞内で指揮するための組換え核酸を意味する。「発現カセット」は、宿主細胞における目的の核酸の転写のための適切なプロモーターまたは他の調節エレメントの制御下にあり、これらに作動可能に（または作動的に）連結された目的の核酸を含むヌクレオチド配列を意味する。当業者が理解するように、発現カセットは、植物宿主を活性にする配列である終結（ターミネーター）配列を含みうる。例えば、終結配列は、二分節型ＲＮＡウイルス（例えば、コモウイルス）のＲＮＡ－２ゲノムセグメントに由来していてもよく、終結配列は、ＮＯＳターミネーターであってもよく、または終結配列は、アルファルファプラストシアニン遺伝子の３’ＵＴＲから得られうる。

【0158】

本開示の構築物は、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）をさらに含みうる。３’非翻訳領域には、ポリアデニル化シグナルおよびｍＲＮＡプロセッシングまたは遺伝子発現を引き起こすことができる他の調節シグナルが含まれる。ポリアデニル化シグナルは、通常、ｍＲＮＡ前駆体の３’末端にポリアデニル酸を付加することを特徴とする。ポリアデニル化シグナルは、一般に、標準型５’ＡＡＴＡＡＡ－３’に対する相同性の存在によって認識されるが、変異型は異常ではない。適切な３’領域の非限定的な例は、アグロバクテリウム腫瘍誘導（Ｔｉ）プラスミド遺伝子（例えば、ノパリンシンターゼ（Ｎｏｓ遺伝子））および植物遺伝子（例えば、大豆貯蔵タンパク質）のポリアデニル化シグナルを含む３’転写非翻訳領域、リブロース－１，５－ビスホスフェートカルボキシラーゼ遺伝子の小サブユニット（ｓｓＲＵＢＩＳＣＯ；ＵＳ４，９６２，０２８；参照により本明細書に組み込まれる）（プラストシアニン発現の調節に用いられるプロモーター）である。

【0159】

「調節領域」「調節エレメント」または「プロモーター」とは、ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか、あるいはＤＮＡおよびＲＮＡの両方から構成されうる、遺伝子のタンパク質コード領域の上流にあるが必ずしもそうではなく、典型的には、核酸の一部を意味する。調節領域が活性であり、目的のヌクレオチド配列と作動可能に結合しているか、または作動可能に連結されている場合、これは、目的のヌクレオチド配列の発現を生じうる。調節エレメントは、器官特異的に介在し、発生的または一時的な遺伝子活性化を制御することができてもよい。「調節領域」には、プロモーターエレメント、基本的なプロモーター活性を示すコアプロモーターエレメント、外部刺激に応答して誘導可能なエレメント、負の調節エレメントまたは転写エンハンサーなどのプロモーター活性を介在するエレメントが含まれる。本明細書で用いられる「調節領域」にはまた、転写後に活性であるエレメント、例えば、遺伝子発現を調節する調節エレメント、例えば、翻訳および転写エンハンサー、翻訳および転写リプレッサー、上流活性化配列、およびｍＲＮＡ不安定性決定因子などが含まれる。これらの後者のエレメントのいくつかは、コード領域の近位に位置していてもよい。

【0160】

本開示の文脈において、用語「調節エレメント」または「調節領域」は、典型的に、特定の部位で転写を開始するために必要なＲＮＡポリメラーゼおよび／または他の因子の認識を供することによるコード領域の発現を制御する、構造遺伝子のコード配列の上流（５’）にある、必ずしもそうではないが、通常、ＤＮＡ配列を意味する。しかしながら、イントロンまたは前記配列の３’側に位置する他のヌクレオチド配列もまた、目的のコード領域の発現の調節に関与しうることを理解されたい。特定の部位での開始を確保するためのＲＮＡポリメラーゼまたは他の転写因子の認識を供する調節エレメントの例は、プロモーターエレメントである。全てではないがほとんどの真核生物のプロモーターエレメントは、通常、転写開始部位の約２５塩基対上流に位置するアデノシンおよびチミジンヌクレオチド塩基対で構成される保存された核酸配列であるＴＡＴＡボックスを含む。プロモーターエレメントは、転写の開始に関連する基本的なプロモーターエレメント、ならびに遺伝子発現を調節する他の調節エレメントを含みうる。

【0161】

発生的に調節され、誘導され、または構成されている領域を含む、いくつかのタイプの調節領域が存在する。発生的に調節され、またはその制御下で遺伝子の差次的発現を制御する調節領域は、器官または組織の発生中に特定の時間に特定の器官または器官の組織織内で活性化される。しかしながら、発生的に調節されるいくつかの調節領域は、特定の発生段階で特定の器官または組織内で優先的に活性されてもよく、それらはまた、発生的に調節される方法で、または植物内の他の器官または組織における基礎レベルで活性化されてもよい。組織特異的な調節領域の例、例えば、種子特異的な調節領域には、ナピンプロモーターおよびクルシフェリンプロモーターが含まれる（Rask et al., 1998, J. Plant Physiol. 152: 595-599; Bilodeau et al., 1994, Plant Cell 14: 125-130）。葉特異的プロモーターの例には、プラストシアニンプロモーターが含まれる（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１２５，９７８号を参照のこと）。

【0162】

誘導性調節領域は、誘導因子に応答して１つまたはそれ以上のＤＮＡ配列または遺伝子の転写を直接的または間接的に活性化することができる領域である。誘導因子が不在の場合、ＤＮＡ配列または遺伝子は転写されない。典型的に、誘導性調節領域に特異的に結合して転写を活性化するタンパク質因子は、不活性型で存在し、誘導因子によって直接的または間接的に活性型に変換されてもよい。但し、タンパク質因子が不在であってもよい。誘導因子は、化学物質、例えば、タンパク質、代謝物、成長調節因子、除草剤またはフェノール化合物、あるいは熱、寒さ、塩、または毒性要素によって直接的に、または病原もしくは病気媒介物（例えば、ウイルス）の作用によって間接的に課される生理学的ストレスでありうる。誘導性調節領域を含有する植物細胞は、誘導因子を細胞または植物に外部から適用することによって、例えば、例えば、噴霧、水やり、加熱または類似する方法などによって誘導因子に曝露されてもよい。誘導性調節エレメントは、植物または非植物遺伝子のいずれかに由来していてもよい（例えば、Gatz, C. and Lenk, I.R.P., 1998, Trends Plant Sci. 3, 352-358）。可能性のある誘導性プロモーターの例には、以下に限定されないが、テトラサイクリン誘導性プロモーター（Gatz, C.,1997, Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48, 89-108）、ステロイド誘導性プロモーター（Aoyama, T. and Chua, N.H.,1997, Plant J. 2, 397-404）およびエタノール誘導性プロモーター（Salter, M.G., et al, 1998, Plant Journal 16, 127-132; Caddick, M.X., et al,1998, Nature Biotech. 16, 177-180）、サイトカイニン誘導性ＩＢ６およびＣＫＩ１遺伝子（Brandstatter, I. and Kieber, J.J.,1998, Plant Cell 10, 1009-1019; Kakimoto, T., 1996, Science 274, 982-985）およびオーキシン誘導性エレメントのＤＲ５（Ulmasov, T., et al., 1997, Plant Cell 9, 1963-1971）が含まれる。

【0163】

構成性調節領域は、植物の様々な部分全体にわたって、植物の発生にわたり継続して遺伝子の発現を指示する。公知の構成性調節エレメントの例には、ＣａＭＶ３５Ｓ転写物に関連するプロモーター（ｐ３５Ｓ；Odell et al., 1985, Nature, 313: 810-812；参照により本明細書に組み込まれる）、イネアクチン１（rice actin 1）（Zhang et al, 1991, Plant Cell, 3: 1155-1165）、アクチン２（An et al., 1996, Plant J., 10: 107-121）、またはｔｍｓ ２（米国特許第５，４２８，１４７号）、およびトリオースリン酸イソメラーゼ１（Xu et. al., 1994, Plant Physiol. 106: 459-467）遺伝子、トウモロコシユビキチン１遺伝子（Cornejo et al, 1993, Plant Mol. Biol. 29: 637-646）、シロイヌナズナユビキチン１および６遺伝子（Holtorf et al, 1995, Plant Mol. Biol. 29: 637-646）、タバコ翻訳開始因子４Ａ遺伝子（Mandel et al, 1995 Plant Mol. Biol. 29: 995-1004）、キャッサバ葉脈（Cassava Vein）モザイクウイルスプロモーター、ｐＣＡＳ（Verdaguer et al., 1996）；リブロース二リン酸カルボキシラーゼの小サブユニットのプロモーター、ｐＲｂｃＳ（Outchkourov et al., 2003）、ｐＵｂｉ（単子葉植物および双子葉植物）が含まれる。

【0164】

本明細書で用いられる用語「構成性」は、構成性調節領域の制御下にあるヌクレオチド配列が、全ての細胞型において同一レベルで発現されることを必ずしも意味するものではないが、前記配列は、分布にばらつきが見られることがよくあるが、広範囲の細胞型で発現されることを意味する。

【0165】

上記に記載の発現構築物は、ベクター中に存在していてもよい。ベクターは、発現カセットの生物または宿主のゲノムへの移入および組み込みを可能にする境界配列を含んでいてもよい。構築物は、植物バイナリーベクター、例えば、ｐＰＺＰに基づくバイナリー形質転換ベクターであってもよい（Hajdukiewicz, et al. 1994）。構築物の他の例として、ｐＢｉｎ１９が含まれる（Frisch, D. A., L. W. Harris-Haller, et al. 1995, Plant Molecular Biology 27: 405-409を参照のこと）。

【0166】

本明細書で用いられる用語「天然」、「天然タンパク質」または「天然ドメイン」は、野生型と同一の最初のアミノ酸配列を有するタンパク質またはドメインを意味する。天然タンパク質またはドメインは、野生型配列と１００％の配列類似性を有するヌクレオチド配列によってコードされうる。天然アミノ酸配列はまた、ヒトコドン（ｈＣｏｄ）最適化されたヌクレオチド配列または野生型ヌクレオチド配列と比較した場合に高いＧＣ含量を含むヌクレオチド配列によってコードされていてもよいが、ｈＣｏｄヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列は、天然アミノ酸配列と１００％の配列同一性を示すものとする。

【0167】

「ヒトコドン最適化」または「ｈＣｏｄ」ヌクレオチド配列であるヌクレオチド配列とは、ヒトヌクレオチド配列のオリゴヌクレオチド配列内で一般的に見られるコドン使用に近いオリゴヌクレオチド配列またはそのフラグメントの合成のための適切なＤＮＡヌクレオチドの選択を意味する。「高いＧＣ含量」とは、対応する天然オリゴヌクレオチド配列と比較した場合、例えば、オリゴヌクレオチド配列のコーディング部分の長さに対して、約１から約３０％またはこれらの間のいずれかの割合などの高いＧＣ含量を含む、コドン使用に近づけるためのオリゴヌクレオチド配列またはそのフラグメントの合成のための適切なＤＮＡヌクレオチドの選択を意味する。高いＧＣ含量は、例えば、オリゴヌクレオチド配列のコーディング部分の長さに対して、約１、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０％、またはこれらの間のいずれかの割合である。下記に記載されるように、ヒトコドン最適化ヌクレオチド配列または（野生型ヌクレオチド配列と比較した場合に）高いＧＣ含量を含むヌクレオチド配列は、非ヒト最適化された（またはより低いＧＣ含量の）ヌクレオチド配列の発現と比較した場合に植物、植物の部分、または植物細胞において高い発現を示す。
表２：配列番号および配列の説明

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

表３：ロタウイルス株および構築物

【表3-1】

【表3-2】

【実施例】

【0168】

本発明は、以下の実施例でさらに例示される。

【0169】

天然ロタウイルスＧ２Ｐ５ＶＰ７タンパク質および天然Ｇ３Ｐ５ＶＰ７タンパク質の発現は、困難であることが示されており、ＶＰ７タンパク質の生成は、ウエスタンブロット分析で検出可能なレベル以下である（図３ａおよび３ｂを参照のこと）。しかしながら、図３ａおよび３ｂに示すように、７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_１（７－１ａ）、７－１ａ_１－－７－２_１－－７－１ｂ_２（７－１ｂ）または７－１ａ_２－－７－２_１－－７－１ｂ_２（７－１ａ－１ｂ）を含むＶＰ７融合タンパク質は、ＳＤＳ－Ｃｏｍａｓｓｉｅ染色ゲルまたはウエスタン分析を用いて決定されるように、第１（Ｒｔｘ）または第２のロタウイルス株（Ｇ２Ｐ５またはＧ３Ｐ５）のいずれかからのみの対応するドメインまたはサブドメインを含む天然ＶＰ７タンパク質の収量と同様またはそれ以上である（ＳＤＳ－Ｃｏｍａｓｓｉｅ染色ゲルまたはウエスタン分析を用いて決定されるような）植物におけるＶＰ７融合タンパク質を生成した。図３ａで見られるように、植物において発現させた場合、ＶＰ７融合タンパク質ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ）Ｇ２Ｐ５、ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ２Ｐ５、およびＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ２Ｐ５は、天然ＶＰ７ Ｇ２Ｐ５タンパク質よりも高い発現レベルを示した。さらに、ＶＰ７融合タンパク質ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ）Ｇ９Ｐ８、ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ９Ｐ８、およびＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ９Ｐ８は、天然ＶＰ７ Ｇ９Ｐ８タンパク質よりも高い発現レベルを示した。

【0170】

さらに、図３ｂで示されるように、植物において発現させた場合、ＶＰ７融合タンパク質ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ３Ｐ５およびＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ３Ｐ５は、天然ＶＰ７ Ｇ３Ｐ５タンパク質よりも高い発現レベルを示した。同様に、ＶＰ７融合タンパク質ＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ｂ）Ｇ１２Ｐ８、およびＶＰ７（Ｒｔｘ）＋（７－１ａ－１ｂ）Ｇ１２Ｐ８は、天然ＶＰ７ Ｇ１２Ｐ８タンパク質よりも高い発現レベルを示した。

【0171】

実施例１：ロタウイルスＶＰ７構築物
２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ）／ＮＯＳ（構築物番号１７１０）
ロタウイルスＡ ＷＡ株に由来するＶＰ２をコードする最適化された配列を、以下のＰＣＲに基づく方法を用いて、Ｐｌａｓｔｏ＿ｐｒｏ／Ｐ１９／Ｐｌａｓｔｏ＿ｔｅｒ発現カセットを含むプラスミド中において２Ｘ３５Ｓ－ＣＰＭＶ－ＨＴ－ＮＯＳ発現系にクローニングした。ＶＰ２コード配列を含むフラグメントは、最適化されたＶＰ２遺伝子配列（配列番号３）を鋳型として使用して、プライマーＩＦ－ＷＡ＿ＶＰ２（ｏｐｔ）．ｓ１＋３ｃ（配列番号１）およびＩＦ－ＷＡ＿ＶＰ２（ｏｐｔ）．ｓ１－４ｒ（配列番号２）を用いて増幅した。配列の最適化のために、ＶＰ２タンパク質配列（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＣＡＡ３３０７４）を逆翻訳し、ヒトコドン使用、ＧＣ含量、およびｍＲＮＡ構造について最適化した。ＰＣＲ産物は、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＮＯＳ発現系中にクローニングした。構築物番号１１９１（図６ｂ）をＳａｃＩＩおよびＳｔｕＩ制限酵素で消化し、線状化したプラスミドをＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ構築反応に用いた。構築物番号１１９１は、ＣＰＭＶ－ＨＴを基にした発現カセット中に目的の遺伝子を「Ｉｎ Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングするためのアクセプタープラスミドである。また、これは、アルファルファ プラストシアニン遺伝子プロモーターおよびターミネーター下でサイレンシングするためのＴＢＳＶＰ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物もまた組み込まれている。骨格は、ｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左から右へのｔ－ＤＮＡ境界の配列を配列番号５の配列で示す。得られた構築物に番号１７１０を与えた（図６ａ、配列番号６）。ロタウイルスＡ株ＷＡに由来するＶＰ２のアミノ酸配列を配列番号４の配列で示す。プラスミド１７１０を図６ａで図示する。

【0172】

２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ６（ｏｐｔ）／ＮＯＳ（構築物番号１７１３）
ロタウイルスＡ ＷＡ株からのＶＰ６をコードする最適化された配列を、以下のＰＣＲに基づく方法を用いて、Ｐｌａｓｔｏ＿ｐｒｏ／Ｐ１９／Ｐｌａｓｔｏ＿ｔｅｒ発現カセットを含むプラスミド中の２Ｘ３５Ｓ－ＣＰＭＶ－ＨＴ－ＮＯＳ発現系にクローニングした。ＶＰ６をコードする配列を含むフラグメントは、最適化されたＶＰ６遺伝子（配列番号６）をテンプレートとして用いて、プライマーＩＦ－ＷＡ＿ＶＰ６（ｏｐｔ）．ｓ１＋３ｃ（配列番号７）およびＩＦ－ＷＡ＿ＶＰ６（ｏｐｔ）．ｓ１－４ｒ（配列番号８）を使用して増幅させた。配列の最適化のために、ＶＰ６タンパク質配列（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＡ４７３１１）を逆翻訳し、ヒトコドン使用、ＧＣ含量、およびｍＲＮＡ構造について最適化した。ＰＣＲ産物は、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＮＯＳ発現系中にクローニングした。構築物番号１１９１（図６ｂ）をＳａｃＩＩおよびＳｔｕＩ制限酵素で消化し、線状化したプラスミドをＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ構築反応に用いた。構築物番号１１９１は、ＣＰＭＶ－ＨＴを基にした発現カセット中に目的の遺伝子を「Ｉｎ Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングするためのアクセプタープラスミドである。また、アルファルファ プラストシアニン遺伝子プロモーターおよびターミネーター下でサイレンシングするためのＴＢＳＶ Ｐ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物も組み込まれている。骨格はｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左から右へのｔ－ＤＮＡ境界の配列を配列番号５の配列に示す。得られた構築物には番号１７１３を与えた（図６ｃ、配列番号１１）。ロタウイルスＡ株ＷＡに由来するＶＰ６のアミノ酸配列を、配列番号１０の配列で示す。プラスミド１７１３を図６ｃに図示する。

【0173】

２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＮＳＰ４／ＮＯＳ（構築物番号１７０６）
ロタウイルスＡ ＷＡ株からのＮＳＰ４をコードする配列を、以下のＰＣＲに基づく方法を用いて、Ｐｌａｓｔｏ＿ｐｒｏ／Ｐ１９／Ｐｌａｓｔｏ＿ｔｅｒ発現カセットを含むプラスミド中の２Ｘ３５Ｓ－ＣＰＭＶ－ＨＴ－ＮＯＳ発現系にクローニングした。ＮＳＰ４コード配列を含むフラグメントを、プライマーＩＦ－ＷＡ＿ＮＳＰ４．ｓ１＋３ｃ（配列番号１２）およびＩＦ－ＷＡ＿ＮＳＰ４．ｓ１－４ｒ（配列番号１３）を用い、合成されたＮＳＰ４遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｋ０２０３２からのｎｔ４２～５６９に対応）（配列番号１４）をテンプレートとして使用して増幅させた。ＰＣＲ産物は、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＮＯＳ発現系にクローニングした。構築物番号１１９１（図６ｂ）をＳａｃＩＩおよびＳｔｕＩ制限酵素で消化し、線状化したプラスミドをＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ構築反応に用いた。構築物番号１１９１は、ＣＰＭＶ－ＨＴを基にした発現カセット中に目的の遺伝子を「Ｉｎ Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングするためのアクセプタープラスミドである。また、アルファルファ プラストシアニン遺伝子プロモーターおよびターミネーター下でサイレンシングするためのＴＢＳＶ Ｐ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物もまた組み込まれている。骨格はｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左から右へのｔ－ＤＮＡ境界の配列を配列番号５の配列に示す。得られた構築物には番号１７０６を与えた（図６ｄ、配列番号１６）。ロタウイルスＡ株ＷＡに由来するＮＳＰ４のアミノ酸配列を配列番号１５の配列で示す。プラスミド１７０６を図６ｄに図示する。

【0174】

ＣＰＭＶ－ＨＴ発現カセット下でのＶＰ６およびＶＰ２の発現のための二重遺伝子構築物（構築物番号１７０８）
ＣＰＭＶ－ＨＴ発現系の制御下でのロタウイルスＡ ＷＡ株からのＶＰ６およびロタウイルスＡ ＷＡ株からのＶＰ２の共発現のための単一ベクターを、以下の制限酵素／リガーゼに基づく方法を用いて構築した。ドナープラスミドＤＮＡ（構築物番号１７１０；２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ）／ＮＯＳ）（図６ａ、配列番号６）をＡｖｒＩＩ（２Ｘ３５Ｓプロモーターの前に位置）およびＡｓｃＩ（ＮＯＳターミネーターの後に位置）制限酵素で消化し、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ）／ＮＯＳ発現カセットに相当するフラグメントをゲル精製した。次に、このフラグメントを、ＸｂａＩおよびＡｓｃＩ制限酵素（両方の部位は、ＶＰ６発現カセットのＮＯＳターミネーターの後に位置する）を用いて線状化させたアクセプター構築物番号１７１３（２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ６（ｏｐｔ）／ＮＯＳ）（図６ｃ、配列番号１１）に挿入した。得られた構築物には番号１７８を与えた。プラスミド１７０８を図６ｅに図示する。

【0175】

ＣＰＭＶ－ＨＴ発現カセット下でのＶＰ６、ＶＰ２およびＮＳＰ４の発現のための三重遺伝子構築物（構築物番号２２５２）
ＣＰＭＶ－ＨＴ発現系の制御下でのロタウイルスＡ ＷＡ株からのＶＰ６、ロタウイルスＡ ＷＡ株からのＶＰ２、およびロタウイルスＷＡ株からのＮＳＰ４の共発現のための単一ベクターを、以下の制限酵素／リガーゼに基づく方法を用いて構築した。ドナープラスミドＤＮＡ（構築物番号１７０６；２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＮＳＰ４／ＮＯＳ）（図６ｄ、配列番号１６）をＡｖｒＩＩ（２Ｘ３５Ｓプロモーターの前に位置）およびＡｓｃＩ（ＮＯＳターミネーターの後に位置）制限酵素で消化し、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＮＳＰ４／ＮＯＳ発現カセットに相当するフラグメントをゲル精製した。次に、このフラグメントを、ＸｂａＩおよびＡｓｃＩ制限酵素（両方の部位はＶＰ２発現カセットのＮＯＳターミネーターの後に位置する）を用いて線状化したアクセプター構築物番号１７０８（２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ６（ｏｐｔ）／ＮＯＳ＋２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－ＨＴ／ＲＶＡ（ＷＡ）ＶＰ２（ｏｐｔ）／ＮＯ）（図６ｅ）に挿入した。得られた構築物には番号２２５２を与えた。プラスミド１７０８を図６ｅに図示する。

【0176】

２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－１６０／ＴｒＳｐ－ＲＶＡ（Ｒｔｘ）ＶＰ７（ｏｐｔ）／ＮＯＳ（構築物番号１１９９）
ロタウイルスＡワクチンＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］株からの天然シグナルペプチドの短縮型を有するＶＰ７をコードする最適化された配列を、以下のＰＣＲに基づく方法を用いて、Ｐｌａｓｔｏ＿ｐｒｏ／Ｐ１９／Ｐｌａｓｔｏ＿ｔｅｒ発現カセットを含むプラスミド中の２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－１６０／ＮＯＳ発現系にクローニングした。ＶＰ７をコードする配列を含むフラグメントは、最適化されたＶＰ７遺伝子配列（配列番号１９）をテンプレートとして用いて、プライマーＩＦ（Ｃ１６０）－ＴｒＳＰ＋Ｒｔｘ＿ＶＰ７（ｏｐｔ）．ｃ（配列番号１７）およびＩＦ－Ｒｔｘ＿ＶＰ７（ｏｐｔ）．ｓ１－４ｒ（配列番号１８）を使用して増幅した。配列の最適化のために、ＶＰ７タンパク質配列（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＥＸ３０６８２）を逆翻訳し、ヒトコドン使用、ＧＣ含量、およびｍＲＮＡ構造について最適化した。ＰＣＲ産物は、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ－１６０／ＮＯＳ発現系中にクローニングした。構築物番号１１９０（図６ｇ）をＳａｃＩＩおよびＳｔｕＩ制限酵素で消化し、線状化したプラスミドをＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ構築反応に使用した。構築物番号１１９０は、ＣＰＭＶ－１６０を基にした発現カセット中に目的の遺伝子を「Ｉｎ Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングするためのアクセプタープラスミドである。また、アルファルファ プラストシアニン遺伝子プロモーターおよびターミネーター下でサイレンシングするためのＴＢＳＶＰ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物も組み込まれている。骨格はｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左から右へのｔ－ＤＮＡ境界の配列を配列番号２１の配列で示す。得られた構築物には番号１１９９（７ｈ、配列番号２２）を与えた。ロタウイルスＡワクチンＵＳＡ／Ｒｏｔａｒｉｘ－Ａ４１ＣＢ０５２Ａ／１９８８／Ｇ１Ｐ１Ａ［８］株からの短縮型シグナルペプチドを有するＶＰ７のアミノ酸配列を、配列番号２０の配列で示す。プラスミド１１９９を図６ｈに図示する。

【0177】

他の構築物は、以下の表４に記載されている合成された遺伝子およびプライマーを使用して、構築物１１９９（図６ｈ、配列番号２２）と同一の方法を用いて構築した。
表４：本明細書に記載のされる調製された構築物の例。配列を実施例５および配列表に示す。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【0178】

実施例２：遺伝子構築物の構築とアグロバクテリウム形質転換
プラスミド１７１０、１７１３、１７３０、および１７３４を含む全てのプラスミドを、エレクトロポレーション（Mattanovich et al., 1989, Nucleic Acid Res. 17:6747）によってAgrobacterium tumefaciens（ＡＧＬ１；ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ２０１０８、ＵＳＡ）を形質転換するために使用したが、ＣａＣｌ_２で調製したコンピテントセルを用いるヒートショック（XU et al., 2008, Plant Methods 4）を用いてもよい。作成されたA. tumefaciens株中のプラスミドの完全性を、制限酵素マッピングによって確認した。所定のバイナリープラスミドで形質転換されたA. tumefaciens株は、ＡＧＬ１／「プラスミド番号」で名付ける。例えば、構築物番号１７１０で形質転換されたA. tumefaciens株は、「ＡＧＬ１／１７１０」と呼ばれる。

【0179】

植物バイオマスの調製、接種、アグロ浸潤、および収穫
ベンサミアナタバコ（Nicotiana benthamiana）植物を、市販のピートモス基質を充填した平地で種子から育てた。前記植物を、１６／８の光周期および日中２５℃／夜間２０℃の温度状況下で温室内にて成長させた。播種から３週間後、各苗木を摘み取り、鉢に移植し、同一環境条件下でさらに３週間温室内で成長させた。

【0180】

各構築物でトランスフェクトしたアグロバクテリアは、ＯＤ６００が０．６～２．５に達するまで、１０ｍＭの２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）および５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを添加した植物由来のＬＢ培地（ｐＨ５．６）で増殖させた。アグロバクテリウム懸濁液を核公知物の適切な比率に達するまで混合し、浸潤培地（１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２および１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．６）で２．５ＸＯＤ６００にした。A. tumefaciens懸濁液を４℃で終夜保存した。浸潤の日に、培養バッチを２．５倍の懸濁液体積に浸潤培地で希釈し、使用前に温めた。ベンサミアナタバコ（N. benthamiana）の植物全体を、２０～４０Ｔｏｒｒの真空下において、気密性のあるステンレス鋼タンク内の細菌懸濁液中に逆さまに２分間置いた。浸潤後、植物を収穫まで３～１２日間のインキュベーション期間温室に戻した。収穫されたバイオマスを、粒子の精製に使用するまで凍結（－８０℃）した。

【0181】

ロタウイルス様粒子の抽出および精製
タンパク質は、３倍体積の抽出緩衝液（ＴＮＣ：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＣａＣｌ_２）を用いてブレンダーで機械的抽出により凍結させたバイオマスから抽出した。該スラリーを大孔径ナイロンフィルターに通して濾過して大きな破片を取り除き、５０００ｇで４℃にて５分間遠心分離した。上清を回収し、５０００ｇで３０分間（４℃）再度遠心分離して、さらなる量の破片を除去した。上澄みを深層濾過し、限外濾過し、濾液を７５０００ｇで２０分間（４℃）遠心分離して、ロタウイルス様粒子を濃縮した。該粒子を含む沈殿物を１／１２体積のＴＮＣ中に再懸濁させ、不溶性物質を５０００ｇで５分間の遠心分離により除去した。上澄みをミラクロスで濾過し、イオジキサノール密度勾配にロードした。

【0182】

密度勾配遠心分離を以下のとおり行った。５％～４５％のイオジキサノールの段階的勾配を含むチューブを調製し、ロタウイルス様粒子を含む濾過された抽出物で覆った。該勾配物を１２００００ｇで４時間（４℃）遠心分離した。遠心分離後、１ｍｌのフラクション物を下から上まで採取し、クーマシー染色するＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットで分析した。さらなる分析のために選択されたフラクションのイオジキサノールを除去するために、選択したフラクションを７５０００ｇで２０分間（４℃）遠心分離し、沈殿した粒子を新たなＴＮＣ緩衝液中に再懸濁させた。

【0183】

ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびイムノブロッティング
タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、イリノイ州ロックポート）によって調べた。タンパク質を還元または非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離し、クーマシーブルーで染色した。染色されたゲルをスキャンし、デンシトメトリー分析をＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて行った。

【0184】

イムノブロッティングについて、電気泳動したタンパク質をポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレン（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、インディアナ州インディアナポリス）上で電気泳動転写させた。イムノブロッティングの前に、前記メンブレンを５％のスキムミルクおよび０．１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ－Ｔ）中で４℃にて１６～１８時間ブロックした。

【0185】

イムノブロッティングは、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ２０の０．１％中の２％スキムミルク中で２μｇ／ｍｌの適切な抗体（表６）とインキュベートすることにより行った。化学発光検出のために使用した二次抗体は、表６に示すとおりであり、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ２０ ０．１％中の２％スキムミルク中で示されるように希釈した。免疫反応性複合体は、ルミノールを基質として用いて化学発光によって検出した（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。ヒトＩｇＧ抗体の西洋ワサビペルオキシダーゼ－酵素コンジュゲーションを、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｐｌｕｓ（登録商標）Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅコンジュゲーションキット（Ｐｉｅｒｃｅ、イリノイ州ロックポート）を用いて行った。

【0186】

ＶＰ２タンパク質、ＶＰ６タンパク質、およびＶＰ７融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子の生成
ＶＰ２タンパク質、ＶＰ６タンパク質、およびＶＰ７融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子を、ベンサミアナタバコ（Nicotiana benthamiana）において一過的な発現によって生成させた。植物を、ＶＰ２タンパク質、ＶＰ６タンパク質、およびＶＰ７融合タンパク質をコードする構築物（構築物については表３を参照）の混合物を１：１：１の割合で含むアグロバクテリアの接種物でアグロ浸潤し、収穫前に７日間インキュベートした。ロタウイルス様粒子を、材料と方法の項目で説明されている方法を用いて前記バイオマスから精製した。清澄化した抽出物をイオジキサノール密度勾配で遠心分離し、チューブの底から最初の１０個のフラクションをクーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析した。

【0187】

ＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７を含むロタウイルス様粒子の生成
ＶＰ２タンパク質、ＶＰ４タンパク質、ＶＰ６タンパク質、およびＶＰ７融合タンパク質を含むロタウイルス様粒子を、ベンサミアナタバコ（Nicotiana benthamiana）において一過的な発現によって生成させた。植物を、ＶＰ２タンパク質、ＶＰ４タンパク質、ＶＰ６タンパク質、およびＶＰ７融合タンパク質をコードする構築物（構築物については表３を参照）の混合物を１：１：１の割合で含むアグロバクテリアの接種物でアグロ浸潤し、収穫前に７日間インキュベートした。ロタウイルス様粒子を、材料と方法の項目で説明されている方法を用いて前記バイオマスから精製した。清澄化した抽出物をイオジキサノール密度勾配で遠心分離し、チューブの底から最初の１０個のフラクションをクーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析した。

【0188】

精製したＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７ ＲＬＰを、クライオ電子顕微鏡分析（ＮａｎｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｉｎｃ．，カリフォルニア州ラホヤ）にかけ、ロタウイルス粒子に類似する粒子への４つの抗原の構築を確認した。図４ｂに示すように、ＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子のクライオＥＭ画像により、ロタウイルス様粒子への抗原の正しい構築を確認した。

【0189】

実施例３：ロタウイルス様粒子（ＲＬＰ）におけるＶＰ７含有量
ＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子におけるＶＰ７の取り込みまたはＶＰ７の含有量をさらに分析した。簡単に説明すると、上記および表５に記載されるように、ロタウイルスＶＰ２、ＶＰ６、およびＶＰ７融合物を共発現するベンサミアナタバコ（N. benthamiana）の葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配フラクション（３５％）を、クーマシー染色ＳＤＳＰＡＧＥ分析によって分析した。簡単に説明すると、一定量のＲＬＰをＳＤＳ－ＰＡＧＥにロードし、クーマシー染色した。バンド濃度測定を、構造タンパク質各々について調べ、ＲＬＰ純度を補正して、各構造タンパク質の割合を決定する。

【0190】

以下の表５からわかるように、本明細書に記載の７－１ａ_２－－７－２_１－７－１ｂ_２（７－１ａ－１ｂ）型ＶＰ７融合タンパク質を含むＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子（ＲＬＰ）は、粒子の総構造タンパク質重量の５％から３５％の範囲のＶＰ７融合物含有量である。

【0191】

例えば、ＶＰ７含有量またはＶＰ７取り込みは、Ｇ４株からの天然／野生型ＶＰ７を含むＲＬＰにおける５％～１０％のＶＰ７含有量から、ＶＰ７融合物ＶＰ７（Ｇ３）＋７－１ａ－１ｂ Ｇ４、ＶＰ７（Ｇ９）７－１ａ－１ｂ Ｇ４、またはＶＰ７（Ｇ１２）＋７－１ａ－１ｂ Ｇ４を含むＲＬＰにおける２５％～３５％のＶＰ７含有量に増加した（表５、５列目の「Ｇ４ＢｒＢ－９」を参照）。

【0192】

ＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ ＢｒＢ－９）（構築＃６５０３）、ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ ＢｒＢ－９）（構築＃６５１４）、ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ ＢｒＢ－９）（構築＃６５１９）およびＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ４ Ｇ３ ＨＣＲ３）（構築＃６５１８）は、粒子の総構造タンパク質重量の約２５％～約３５％のＶＰ７融合物含有量であった。

【0193】

ＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（構築＃６５１６）、ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（構築＃６５１７）、ＲＶＡ（Ｇ１２ Ｋ１２）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９ ＢＥ２００１）（構築＃６５２０）、ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２ Ｋ１２）（構築＃６５１５）は、粒子の総構造タンパク質重量の約１５％～約２５％のＶＰ７融合物含有量であった。

【0194】

ＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（構築＃６５０１）、ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（構築＃６５０２）、ＲＶＡ（Ｇ３ ＨＣＲ３）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ９ Ｂｅ２００１）（構築＃６５０４）、ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（構築＃６５０６）、ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ３ ＨＣＲ３）（構築＃６５０８）、ＲＶＡ（Ｇ４ ＢｒＢ９）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１２Ｋ１２）（構築＃６５１０）、ＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ１ Ｒｔｘ）（構築＃６５１１）およびＲＶＡ（Ｇ９ ＢＥ２００１）ＶＰ７（７－１ａ－１ｂ Ｇ２ Ｓｃ２－９）（構築＃６５１２）は、粒子の総構造タンパク質重量の約１０％～約１５％のＶＰ７融合物含有量であった。
表５：ＶＰ２／ＶＰ６／融合ＶＰ７粒子（ＶＰ２／ＶＰ６／ＶＰ７融合ＲＬＰ）のＶＰ７融合物含有量

【表5】

【0195】

実施例４：免疫原性実験
マウスを、表６に示される抗原と用量で２回（３週間間隔）免疫した。最後の投与から３週間後に、マウスを屠殺し、血清を採取した。
表６：免疫原性実験の概要

【表6】

【0196】

Ｇ９ ＷＩ６１ウイルスに対する中和抗体
血清のＷＩ６１株（Ｇ９Ｐ［８］）に対する中和活性を以下の手順に従って評価した。ＷＩ６１（Ｇ９Ｐ［８］）株（Ｇ９－ＷＩ６１ビリオン）、天然Ｇ９－ＲＬＰ（Ｇ９－ＲＬＰ ＡＦＪ１１２１５）およびＶＰ７融合タンパク質を含むＧ９－ＲＬＰ（Ｇ９－ＲＬＰキメラ－ＶＰ７（Ｇ１）＋７－１ａ－１ｂ Ｇ９）に対する中和活性における差異はあまり存在しなかった（図５を参照）。

【0197】

活性化とｍｏｉ（感染多重度）調整済みロタウイルスＷＩ６１（Ｇ９Ｐ［８］）株を、同体積のＭＥＭ希釈マウス血清とチューブ内で３７℃にて１時間混合した。混合物を、加湿ＣＯ_２インキュベーター（３７℃および５％ＣＯ_２に設定）内で９６ウェルプレートに播種したＭＡ－１０４細胞に１時間感染させた。プレートの上清を除去し、１００μＬのＭＥＭをプレートの各ウェルに加えた。プレートを加湿ＣＯ_２インキュベーター内で約１６時間インキュベートした。プレートを、最終濃度２％のパラホルムアルデヒド中にて室温で３０分間固定し、細胞を０．２ｗ／ｖ％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶液中において室温で３０分間透過処理した。細胞を、３％ＢＳＡ－ＰＢＳ－Ｔで２００倍希釈した抗ロタウイルス抗体と室温で終夜染色し、２０００倍希釈したロバ抗ヤギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体のａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ４８８を３％ＢＳＡ－ＰＢＳで室温にて１時間コンジュゲートする。核を、ＤＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）で１０００倍希釈したＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８（最終濃度：１μｇ／ｍＬ）にて室温で３０分間染色し、感染細胞（ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８染色細胞）数をアレイスキャンＶＴＩでカウントした。

【0198】

血清のＷａ株（Ｇ１Ｐ［８］）に対する中和活性を以下の手順で評価した。天然Ｇ９－ＲＬＰ（Ｇ９－ＲＬＰ）、ＶＰ７融合タンパク質を含むＧ９－ＲＬＰ（Ｇ９－ＲＬＰキメラ－ＶＰ７（Ｇ１）＋７－１ａ－１ｂ Ｇ９）およびＧ９ ＷＩ６１ビリオンは、プラセボ対照に相当する中和活性を示した。

【0199】

活性化とｍｏｉ（感染多重度）調整済みロタウイルスＷａ（Ｇ１Ｐ［８］）株を、同体積のＭＥＭ希釈マウス血清とチューブ内で３７℃にて１時間混合した。混合物を、加湿ＣＯ_２インキュベーター（３７℃および５％ＣＯ_２に設定）内で９６ウェルプレートに播種したＭＡ－１０４細胞に１時間感染させた。プレートの上清を除去し、１００μＬのＭＥＭをプレートの各ウェルに加えた。プレートを加湿ＣＯ_２インキュベーター内で約１６時間インキュベートした。プレートを、最終濃度２％のパラホルムアルデヒド中にて室温で３０分間固定し、細胞を０．２ｗ／ｖ％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶液中において室温で３０分間透過処理した。細胞を、３％ＢＳＡ－ＰＢＳ－Ｔで２００倍希釈した抗ロタウイルス抗体と室温で終夜染色し、２０００倍希釈したロバ抗ヤギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体のａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８を３％ＢＳＡ－ＰＢＳで室温にて１時間コンジュゲートする。核を、ＤＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）で１０００倍希釈したＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８（最終濃度：１μｇ／ｍＬ）にて室温で３０分間染色し、感染細胞（ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８染色細胞）数をアレイスキャンＶＴＩでカウントした。

【0200】

実施例５：配列
下記の配列を用いた（表４も参照のこと）。
配列番号１ IF-WA_VP2(opt).s1+3c
AAATTTGTCGGGCCCATGGCATACCGGAAGAGAGGAGCAAAGCGCGAA

【0201】

配列番号２ IF-WA_VP2(opt).s1-4r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTTAAAGCTCGTTCATTATTCGCATATTGTCGA

【0202】

配列番号３ Wa_VP2_DNA_Opt
ATGGCATACCGGAAGAGAGGAGCAAAGCGCGAAAACCTGCCGCAACAGAACGAGAGACTGCAAGAAAAAGAGATAGAGAAAGATGTCGACGTAACAATGGAAAACAAGAATAACAATAGGAAACAACAGCTGTCCGACAAAGTTCTGTCCCAGAAGGAGGAAATTATCACTGACGCCCAGGACGATATTAAAATTGCCGGAGAAATAAAGAAGAGCTCGAAAGAAGAATCTAAACAGCTGCTCGAAATTCTGAAAACAAAAGAAGACCATCAGAAAGAGATTCAATATGAAATTTTGCAAAAAACAATACCTACATTTGAGTCCAAAGAAAGTATCCTCAAGAAGCTTGAAGACATAAGACCGGAGCAGGCAAAAAAACAGATGAAACTCTTTCGCATTTTCGAGCCAAAACAGCTCCCTATATATCGCGCCAATGGCGAGAAGGAGCTACGCAACCGGTGGTACTGGAAGTTGAAAAAAGACACCCTGCCAGATGGAGATTATGACGTCCGGGAGTATTTCCTCAATCTCTATGATCAGATCCTCATCGAAATGCCGGACTATCTGCTCCTCAAGGACATGGCCGTGGAGAACAAAAATAGCAGAGACGCCGGCAAAGTTGTCGACTCTGAGACTGCCAATATTTGTGATGCCATCTTCCAGGATGAGGAGACCGAGGGAGTCGTCCGTAGATTCATCGCTGATATGCGGCAACAGGTCCAGGCTGATCGTAACATTGTCAATTACCCTTCCATCCTTCACCCTATTGATCATGCATTCAATGAGTATTTTCTTAACCACCAGTTGGTGGAGCCGCTGAACAATGAGATAATCTTCAATTACATACCAGAGAGGATAAGGAATGACGTGAATTACATCCTGAACATGGATATGAATCTGCCATCTACAGCCAGGTATATCAGGCCAAACTTGTTGCAGGATAGACTGAATCTTCACGATAATTTTGAGTCCCTGTGGGATACCATCACAACATCCAACTACATTCTGGCCAGGTCCGTCGTTCCCGATTTGAAGGAGAAGGAGCTGGTCTCCACCGAAGCACAGATCCAGAAAATGAGCCAGGACCTGCAGCTGGAGGCCCTCACTATTCAGAGCGAGACACAGTTTTTAGCCGGGATTAACAGTCAGGCTGCCAATGATTGTTTCAAGACCCTCATAGCCGCCATGCTGTCTCAAAGAACCATGTCTTTGGACTTTGTGACCACGAACTATATGAGCCTAATCTCCGGAATGTGGCTACTTACAGTGATTCCCAACGATATGTTCCTCCGGGAGTCACTAGTGGCCTGTGAGCTGGCGATCATCAACACCATCGTGTATCCAGCATTCGGAATGCAGAGAATGCATTACCGGAATGGCGACCCTCAGACACCCTTCCAGATCGCAGAACAGCAGATCCAGAATTTCCAGGTGGCGAACTGGCTCCATTTTATTAACAATAACAGATTCAGGCAAGTTGTGATTGATGGAGTTCTGAATCAGACTCTGAACGACAATATACGGAATGGACAGGTCATCAACCAGCTGATGGAAGCATTGATGCAACTCAGCAGACAGCAGTTCCCCACGATGCCTGTGGATTACAAACGGAGCATCCAACGGGGCATTCTGCTTCTCTCCAATAGGCTGGGGCAGCTTGTCGACTTAACCCGACTGGTCTCCTATAACTACGAGACGCTAATGGCTTGTGTGACCATGAACATGCAGCACGTGCAAACCCTGACAACTGAGAAGTTGCAGCTCACTTCTGTGACTTCGCTTTGTATGTTAATTGGTAACACAACCGTGATTCCGTCCCCACAGACACTGTTCCACTACTACAACATCAACGTGAATTTCCACTCCAATTATAATGAGCGGATCAACGACGCCGTCGCCATAATTACCGCAGCAAATAGGCTGAATCTTTATCAGAAAAAAATGAAGTCCATAGTGGAAGACTTTCTGAAACGGCTCCAGATTTTCGACGTACCACGAGTGCCTGACGACCAAATGTACAGGCTGAGGGATCGCCTTCGGCTCTTACCCGTTGAACGGAGACGGCTTGACATATTCAACTTGATCCTGATGAATATGGAGCAGATCGAACGCGCTTCTGATAAGATTGCTCAGGGGGTTATCATCGCATACCGAGATATGCAGCTGGAACGCGACGAGATGTACGGATATGTTAATATTGCACGGAATCTTGATGGCTACCAGCAAATTAACTTGGAGGAACTCATGCGCACCGGTGATTACGGACAAATTACGAACATGCTTCTCAACAATCAACCCGTTGCCCTTGTGGGTGCATTGCCCTTCGTTACGGACTCATCCGTGATCAGTCTAATCGCCAAGCTCGACGCAACCGTCTTCGCTCAGATAGTGAAGCTCAGGAAAGTTGACACACTGAAGCCCATACTGTACAAAATAAACTCGGATTCCAATGACTTTTACCTTGTGGCCAACTACGACTGGATCCCCACAAGTACAACTAAGGTCTACAAACAGGTGCCACAACCATTCGACTTTAGAGCCAGCATGCACATGCTGACTTCTAACCTTACGTTTACCGTCTACTCTGACCTACTGTCATTTGTTTCAGCGGACACGGTAGAGCCCATTAACGCAGTCGCATTCGACAATATGCGAATAATGAACGAGCTTTAA

【0203】

配列番号４ Wa_VP2_AA
MAYRKRGAKRENLPQQNERLQEKEIEKDVDVTMENKNNNRKQQLSDKVLSQKEEIITDAQDDIKIAGEIKKSSKEESKQLLEILKTKEDHQKEIQYEILQKTIPTFESKESILKKLEDIRPEQAKKQMKLFRIFEPKQLPIYRANGEKELRNRWYWKLKKDTLPDGDYDVREYFLNLYDQILIEMPDYLLLKDMAVENKNSRDAGKVVDSETANICDAIFQDEETEGVVRRFIADMRQQVQADRNIVNYPSILHPIDHAFNEYFLNHQLVEPLNNEIIFNYIPERIRNDVNYILNMDMNLPSTARYIRPNLLQDRLNLHDNFESLWDTITTSNYILARSVVPDLKEKELVSTEAQIQKMSQDLQLEALTIQSETQFLAGINSQAANDCFKTLIAAMLSQRTMSLDFVTTNYMSLISGMWLLTVIPNDMFLRESLVACELAIINTIVYPAFGMQRMHYRNGDPQTPFQIAEQQIQNFQVANWLHFINNNRFRQVVIDGVLNQTLNDNIRNGQVINQLMEALMQLSRQQFPTMPVDYKRSIQRGILLLSNRLGQLVDLTRLVSYNYETLMACVTMNMQHVQTLTTEKLQLTSVTSLCMLIGNTTVIPSPQTLFHYYNINVNFHSNYNERINDAVAIITAANRLNLYQKKMKSIVEDFLKRLQIFDVPRVPDDQMYRLRDRLRLLPVERRRLDIFNLILMNMEQIERASDKIAQGVIIAYRDMQLERDEMYGYVNIARNLDGYQQINLEELMRTGDYGQITNMLLNNQPVALVGALPFVTDSSVISLIAKLDATVFAQIVKLRKVDTLKPILYKINSDSNDFYLVANYDWIPTSTTKVYKQVPQPFDFRASMHMLTSNLTFTVYSDLLSFVSADTVEPINAVAFDNMRIMNEL

【0204】

配列番号５ 左から右へのT-DNAのクローニングベクター1191
TGGCAGGATATATTGTGGTGTAAACAAATTGACGCTTAGACAACTTAATAACACATTGCGGACGTTTTTAATGTACTGAATTAACGCCGAATCCCGGGCTGGTATATTTATATGTTGTCAAATAACTCAAAAACCATAAAAGTTTAAGTTAGCAAGTGTGTACATTTTTACTTGAACAAAAATATTCACCTACTACTGTTATAAATCATTATTAAACATTAGAGTAAAGAAATATGGATGATAAGAACAAGAGTAGTGATATTTTGACAACAATTTTGTTGCAACATTTGAGAAAATTTTGTTGTTCTCTCTTTTCATTGGTCAAAAACAATAGAGAGAGAAAAAGGAAGAGGGAGAATAAAAACATAATGTGAGTATGAGAGAGAAAGTTGTACAAAAGTTGTACCAAAATAGTTGTACAAATATCATTGAGGAATTTGACAAAAGCTACACAAATAAGGGTTAATTGCTGTAAATAAATAAGGATGACGCATTAGAGAGATGTACCATTAGAGAATTTTTGGCAAGTCATTAAAAAGAAAGAATAAATTATTTTTAAAATTAAAAGTTGAGTCATTTGATTAAACATGTGATTATTTAATGAATTGATGAAAGAGTTGGATTAAAGTTGTATTAGTAATTAGAATTTGGTGTCAAATTTAATTTGACATTTGATCTTTTCCTATATATTGCCCCATAGAGTCAGTTAACTCATTTTTATATTTCATAGATCAAATAAGAGAAATAACGGTATATTAATCCCTCCAAAAAAAAAAAACGGTATATTTACTAAAAAATCTAAGCCACGTAGGAGGATAACAGGATCCCCGTAGGAGGATAACATCCAATCCAACCAATCACAACAATCCTGATGAGATAACCCACTTTAAGCCCACGCATCTGTGGCACATCTACATTATCTAAATCACACATTCTTCCACACATCTGAGCCACACAAAAACCAATCCACATCTTTATCACCCATTCTATAAAAAATCACACTTTGTGAGTCTACACTTTGATTCCCTTCAAACACATACAAAGAGAAGAGACTAATTAATTAATTAATCATCTTGAGAGAAAATGGAACGAGCTATACAAGGAAACGACGCTAGGGAACAAGCTAACAGTGAACGTTGGGATGGAGGATCAGGAGGTACCACTTCTCCCTTCAAACTTCCTGACGAAAGTCCGAGTTGGACTGAGTGGCGGCTACATAACGATGAGACGAATTCGAATCAAGATAATCCCCTTGGTTTCAAGGAAAGCTGGGGTTTCGGGAAAGTTGTATTTAAGAGATATCTCAGATACGACAGGACGGAAGCTTCACTGCACAGAGTCCTTGGATCTTGGACGGGAGATTCGGTTAACTATGCAGCATCTCGATTTTTCGGTTTCGACCAGATCGGATGTACCTATAGTATTCGGTTTCGAGGAGTTAGTATCACCGTTTCTGGAGGGTCGCGAACTCTTCAGCATCTCTGTGAGATGGCAATTCGGTCTAAGCAAGAACTGCTACAGCTTGCCCCAATCGAAGTGGAAAGTAATGTATCAAGAGGATGCCCTGAAGGTACTCAAACCTTCGAAAAAGAAAGCGAGTAAGTTAAAATGCTTCTTCGTCTCCTATTTATAATATGGTTTGTTATTGTTAATTTTGTTCTTGTAGAAGAGCTTAATTAATCGTTGTTGTTATGAAATACTATTTGTATGAGATGAACTGGTGTAATGTAATTCATTTACATAAGTGGAGTCAGAATCAGAATGTTTCCTCCATAACTAACTAGACATGAAGACCTGCCGCGTACAATTGTCTTATATTTGAACAACTAAAATTGAACATCTTTTGCCACAACTTTATAAGTGGTTAATATAGCTCAAATATATGGTCAAGTTCAATAGATTAATAATGGAAATATCAGTTATCGAAATTCATTAACAATCAACTTAACGTTATTAACTACTAATTTTATATCATCCCCTTTGATAAATGATAGTACACCAATTAGGAAGGAGCATGCTCGCCTAGGAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGTTTGCAAGCTGCTCTAGCCGTGTAGCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGGAATTACTAGCGCGTGTCGACAAGCTTGCATGCCGGTCAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGTATTAAAATCTTAATAGGTTTTGATAAAAGCGAACGTGGGGAAACCCGAACCAAACCTTCTTCTAAACTCTCTCTCATCTCTCTTAAAGCAAACTTCTCTCTTGTCTTTCTTGCGTGAGCGATCTTCAACGTTGTCAGATCGTGCTTCGGCACCAGTACAACGTTTTCTTTCACTGAAGCGAAATCAAAGATCTCTTTGTGGACACGTAGTGCGGCGCCATTAAATAACGTGTACTTGTCCTATTCTTGTCGGTGTGGTCTTGGGAAAAGAAAGCTTGCTGGAGGCTGCTGTTCAGCCCCATACATTACTTGTTACGATTCTGCTGACTTTCGGCGGGTGCAATATCTCTACTTCTGCTTGACGAGGTATTGTTGCCTGTACTTCTTTCTTCTTCTTCTTGCTGATTGGTTCTATAAGAAATCTAGTATTTTCTTTGAAACAGAGTTTTCCCGTGGTTTTCGAACTTGGAGAAAGATTGTTAAGCTTCTGTATATTCTGCCCAAATTTGTCGGGCCCGCGGATGGCGAAAAACGTTGCGATTTTCGGCTTATTGTTTTCTCTTCTTGTGTTGGTTCCTTCTCAGATCTTCGCCTGCAGGCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGCGATCGCTCACCATCACCATCACCATCACCATCACCATTAAAGGCCTATTTTCTTTAGTTTGAATTTACTGTTATTCGGTGTGCATTTCTATGTTTGGTGAGCGGTTTTCTGTGCTCAGAGTGTGTTTATTTTATGTAATTTAATTTCTTTGTGAGCTCCTGTTTAGCAGGTCGTCCCTTCAGCAAGGACACAAAAAGATTTTAATTTTATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACCGGGAATTCGATATCAAGCTTATCGACCTGCAGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCTCTAGAGTCTCAAGCTTGGCGCGCCCACGTGACTAGTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGCTAGAGCAGCTTGAGCTTGGATCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGTTTAAACTATCAGTGTTTGACAGGATATATTGGCGGGTAAACCTAAGAGAAAAGAGCGTTTA

【0205】

配列番号６ 2X35SからNOSへの構築物1710
GTCAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGTATTAAAATCTTAATAGGTTTTGATAAAAGCGAACGTGGGGAAACCCGAACCAAACCTTCTTCTAAACTCTCTCTCATCTCTCTTAAAGCAAACTTCTCTCTTGTCTTTCTTGCGTGAGCGATCTTCAACGTTGTCAGATCGTGCTTCGGCACCAGTACAACGTTTTCTTTCACTGAAGCGAAATCAAAGATCTCTTTGTGGACACGTAGTGCGGCGCCATTAAATAACGTGTACTTGTCCTATTCTTGTCGGTGTGGTCTTGGGAAAAGAAAGCTTGCTGGAGGCTGCTGTTCAGCCCCATACATTACTTGTTACGATTCTGCTGACTTTCGGCGGGTGCAATATCTCTACTTCTGCTTGACGAGGTATTGTTGCCTGTACTTCTTTCTTCTTCTTCTTGCTGATTGGTTCTATAAGAAATCTAGTATTTTCTTTGAAACAGAGTTTTCCCGTGGTTTTCGAACTTGGAGAAAGATTGTTAAGCTTCTGTATATTCTGCCCAAATTTGTCGGGCCCATGGCATACCGGAAGAGAGGAGCAAAGCGCGAAAACCTGCCGCAACAGAACGAGAGACTGCAAGAAAAAGAGATAGAGAAAGATGTCGACGTAACAATGGAAAACAAGAATAACAATAGGAAACAACAGCTGTCCGACAAAGTTCTGTCCCAGAAGGAGGAAATTATCACTGACGCCCAGGACGATATTAAAATTGCCGGAGAAATAAAGAAGAGCTCGAAAGAAGAATCTAAACAGCTGCTCGAAATTCTGAAAACAAAAGAAGACCATCAGAAAGAGATTCAATATGAAATTTTGCAAAAAACAATACCTACATTTGAGTCCAAAGAAAGTATCCTCAAGAAGCTTGAAGACATAAGACCGGAGCAGGCAAAAAAACAGATGAAACTCTTTCGCATTTTCGAGCCAAAACAGCTCCCTATATATCGCGCCAATGGCGAGAAGGAGCTACGCAACCGGTGGTACTGGAAGTTGAAAAAAGACACCCTGCCAGATGGAGATTATGACGTCCGGGAGTATTTCCTCAATCTCTATGATCAGATCCTCATCGAAATGCCGGACTATCTGCTCCTCAAGGACATGGCCGTGGAGAACAAAAATAGCAGAGACGCCGGCAAAGTTGTCGACTCTGAGACTGCCAATATTTGTGATGCCATCTTCCAGGATGAGGAGACCGAGGGAGTCGTCCGTAGATTCATCGCTGATATGCGGCAACAGGTCCAGGCTGATCGTAACATTGTCAATTACCCTTCCATCCTTCACCCTATTGATCATGCATTCAATGAGTATTTTCTTAACCACCAGTTGGTGGAGCCGCTGAACAATGAGATAATCTTCAATTACATACCAGAGAGGATAAGGAATGACGTGAATTACATCCTGAACATGGATATGAATCTGCCATCTACAGCCAGGTATATCAGGCCAAACTTGTTGCAGGATAGACTGAATCTTCACGATAATTTTGAGTCCCTGTGGGATACCATCACAACATCCAACTACATTCTGGCCAGGTCCGTCGTTCCCGATTTGAAGGAGAAGGAGCTGGTCTCCACCGAAGCACAGATCCAGAAAATGAGCCAGGACCTGCAGCTGGAGGCCCTCACTATTCAGAGCGAGACACAGTTTTTAGCCGGGATTAACAGTCAGGCTGCCAATGATTGTTTCAAGACCCTCATAGCCGCCATGCTGTCTCAAAGAACCATGTCTTTGGACTTTGTGACCACGAACTATATGAGCCTAATCTCCGGAATGTGGCTACTTACAGTGATTCCCAACGATATGTTCCTCCGGGAGTCACTAGTGGCCTGTGAGCTGGCGATCATCAACACCATCGTGTATCCAGCATTCGGAATGCAGAGAATGCATTACCGGAATGGCGACCCTCAGACACCCTTCCAGATCGCAGAACAGCAGATCCAGAATTTCCAGGTGGCGAACTGGCTCCATTTTATTAACAATAACAGATTCAGGCAAGTTGTGATTGATGGAGTTCTGAATCAGACTCTGAACGACAATATACGGAATGGACAGGTCATCAACCAGCTGATGGAAGCATTGATGCAACTCAGCAGACAGCAGTTCCCCACGATGCCTGTGGATTACAAACGGAGCATCCAACGGGGCATTCTGCTTCTCTCCAATAGGCTGGGGCAGCTTGTCGACTTAACCCGACTGGTCTCCTATAACTACGAGACGCTAATGGCTTGTGTGACCATGAACATGCAGCACGTGCAAACCCTGACAACTGAGAAGTTGCAGCTCACTTCTGTGACTTCGCTTTGTATGTTAATTGGTAACACAACCGTGATTCCGTCCCCACAGACACTGTTCCACTACTACAACATCAACGTGAATTTCCACTCCAATTATAATGAGCGGATCAACGACGCCGTCGCCATAATTACCGCAGCAAATAGGCTGAATCTTTATCAGAAAAAAATGAAGTCCATAGTGGAAGACTTTCTGAAACGGCTCCAGATTTTCGACGTACCACGAGTGCCTGACGACCAAATGTACAGGCTGAGGGATCGCCTTCGGCTCTTACCCGTTGAACGGAGACGGCTTGACATATTCAACTTGATCCTGATGAATATGGAGCAGATCGAACGCGCTTCTGATAAGATTGCTCAGGGGGTTATCATCGCATACCGAGATATGCAGCTGGAACGCGACGAGATGTACGGATATGTTAATATTGCACGGAATCTTGATGGCTACCAGCAAATTAACTTGGAGGAACTCATGCGCACCGGTGATTACGGACAAATTACGAACATGCTTCTCAACAATCAACCCGTTGCCCTTGTGGGTGCATTGCCCTTCGTTACGGACTCATCCGTGATCAGTCTAATCGCCAAGCTCGACGCAACCGTCTTCGCTCAGATAGTGAAGCTCAGGAAAGTTGACACACTGAAGCCCATACTGTACAAAATAAACTCGGATTCCAATGACTTTTACCTTGTGGCCAACTACGACTGGATCCCCACAAGTACAACTAAGGTCTACAAACAGGTGCCACAACCATTCGACTTTAGAGCCAGCATGCACATGCTGACTTCTAACCTTACGTTTACCGTCTACTCTGACCTACTGTCATTTGTTTCAGCGGACACGGTAGAGCCCATTAACGCAGTCGCATTCGACAATATGCGAATAATGAACGAGCTTTAAAGGCCTATTTTCTTTAGTTTGAATTTACTGTTATTCGGTGTGCATTTCTATGTTTGGTGAGCGGTTTTCTGTGCTCAGAGTGTGTTTATTTTATGTAATTTAATTTCTTTGTGAGCTCCTGTTTAGCAGGTCGTCCCTTCAGCAAGGACACAAAAAGATTTTAATTTTATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACCGGGAATTCGATATCAAGCTTATCGACCTGCAGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGAT

【0206】

配列番号７ IF-WA_VP6(opt).s1+3c
AAATTTGTCGGGCCCATGGAGGTCCTTTATAGTCTCTCCAAAACGCTGA

【0207】

配列番号８ IF-WA_VP6(opt).s1-4r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTACTTGATCAACATACTCCGGATAGAGGCCACA

【0208】

配列番号９ Wa_VP6_DNA_Opt
ATGGAGGTCCTTTATAGTCTCTCCAAAACGCTGAAGGACGCTAGGGACAAGATCGTGGAGGGTACACTTTATAGCAATGTCAGCGACCTAATACAGCAGTTTAATCAAATGATCGTTACAATGAATGGGAATGATTTCCAAACTGGCGGTATTGGTAATCTGCCCGTGAGGAACTGGACATTCGATTTCGGCCTGCTGGGCACGACTCTCCTTAATCTCGATGCAAATTATGTAGAAAACGCCAGAACGATTATCGAGTACTTTATCGATTTCATTGATAACGTTTGTATGGATGAGATGGCCCGCGAGTCACAACGGAACGGAGTTGCTCCACAGTCCGAGGCCCTTCGGAAACTCGCCGGCATTAAGTTCAAGCGTATTAATTTCGACAACTCCTCCGAATATATAGAGAACTGGAACTTGCAGAATCGTCGACAGAGAACCGGCTTCGTGTTCCATAAACCTAATATCTTTCCGTATAGCGCCTCATTCACCCTGAATAGGAGTCAGCCCATGCACGACAACCTCATGGGTACAATGTGGCTGAATGCGGGGAGTGAAATACAGGTCGCCGGGTTCGATTACTCCTGTGCCATTAATGCACCCGCAAACATCCAGCAGTTCGAACATATCGTGCAACTAAGACGGGCTCTCACGACCGCGACAATTACACTCCTGCCCGACGCCGAGCGCTTCTCCTTTCCCCGCGTAATCAACTCAGCTGATGGCGCCACCACTTGGTTCTTCAACCCTGTTATATTGCGCCCTAACAACGTAGAGGTGGAGTTTCTCTTAAACGGACAGATCATCAATACCTACCAAGCCAGGTTCGGCACGATTATTGCAAGAAATTTCGACGCTATCAGGCTGCTCTTCCAACTGATGAGGCCCCCCAATATGACTCCCGCTGTGAACGCTTTGTTTCCGCAGGCTCAGCCTTTCCAGCACCACGCCACCGTCGGCTTGACTCTTCGAATAGAGAGCGCGGTCTGCGAATCAGTGCTGGCAGACGCCAACGAGACGCTGCTGGCAAACGTTACCGCCGTGCGGCAAGAGTATGCCATCCCAGTAGGGCCTGTGTTTCCACCCGGCATGAACTGGACTGAACTAATTACTAACTATAGCCCATCCAGAGAAGACAACTTGCAGCGGGTCTTCACTGTGGCCTCTATCCGGAGTATGTTGATCAAGTAG

【0209】

配列番号１０ Wa_VP6_AA
MEVLYSLSKTLKDARDKIVEGTLYSNVSDLIQQFNQMIVTMNGNDFQTGGIGNLPVRNWTFDFGLLGTTLLNLDANYVENARTIIEYFIDFIDNVCMDEMARESQRNGVAPQSEALRKLAGIKFKRINFDNSSEYIENWNLQNRRQRTGFVFHKPNIFPYSASFTLNRSQPMHDNLMGTMWLNAGSEIQVAGFDYSCAINAPANIQQFEHIVQLRRALTTATITLLPDAERFSFPRVINSADGATTWFFNPVILRPNNVEVEFLLNGQIINTYQARFGTIIARNFDAIRLLFQLMRPPNMTPAVNALFPQAQPFQHHATVGLTLRIESAVCESVLADANETLLANVTAVRQEYAIPVGPVFPPGMNWTELITNYSPSREDNLQRVFTVASIRSMLIK

【0210】

配列番号１１ 2X35SからNOSへの構築物1713
GTCAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGTATTAAAATCTTAATAGGTTTTGATAAAAGCGAACGTGGGGAAACCCGAACCAAACCTTCTTCTAAACTCTCTCTCATCTCTCTTAAAGCAAACTTCTCTCTTGTCTTTCTTGCGTGAGCGATCTTCAACGTTGTCAGATCGTGCTTCGGCACCAGTACAACGTTTTCTTTCACTGAAGCGAAATCAAAGATCTCTTTGTGGACACGTAGTGCGGCGCCATTAAATAACGTGTACTTGTCCTATTCTTGTCGGTGTGGTCTTGGGAAAAGAAAGCTTGCTGGAGGCTGCTGTTCAGCCCCATACATTACTTGTTACGATTCTGCTGACTTTCGGCGGGTGCAATATCTCTACTTCTGCTTGACGAGGTATTGTTGCCTGTACTTCTTTCTTCTTCTTCTTGCTGATTGGTTCTATAAGAAATCTAGTATTTTCTTTGAAACAGAGTTTTCCCGTGGTTTTCGAACTTGGAGAAAGATTGTTAAGCTTCTGTATATTCTGCCCAAATTTGTCGGGCCCATGGAGGTCCTTTATAGTCTCTCCAAAACGCTGAAGGACGCTAGGGACAAGATCGTGGAGGGTACACTTTATAGCAATGTCAGCGACCTAATACAGCAGTTTAATCAAATGATCGTTACAATGAATGGGAATGATTTCCAAACTGGCGGTATTGGTAATCTGCCCGTGAGGAACTGGACATTCGATTTCGGCCTGCTGGGCACGACTCTCCTTAATCTCGATGCAAATTATGTAGAAAACGCCAGAACGATTATCGAGTACTTTATCGATTTCATTGATAACGTTTGTATGGATGAGATGGCCCGCGAGTCACAACGGAACGGAGTTGCTCCACAGTCCGAGGCCCTTCGGAAACTCGCCGGCATTAAGTTCAAGCGTATTAATTTCGACAACTCCTCCGAATATATAGAGAACTGGAACTTGCAGAATCGTCGACAGAGAACCGGCTTCGTGTTCCATAAACCTAATATCTTTCCGTATAGCGCCTCATTCACCCTGAATAGGAGTCAGCCCATGCACGACAACCTCATGGGTACAATGTGGCTGAATGCGGGGAGTGAAATACAGGTCGCCGGGTTCGATTACTCCTGTGCCATTAATGCACCCGCAAACATCCAGCAGTTCGAACATATCGTGCAACTAAGACGGGCTCTCACGACCGCGACAATTACACTCCTGCCCGACGCCGAGCGCTTCTCCTTTCCCCGCGTAATCAACTCAGCTGATGGCGCCACCA CTTGGTTCTTCAACCCTGTTATATTGCGCCCTAACAACGTAGAGGTGGAGTTTCTCTTAAACGGACAGATCATCAATACCTACCAAGCCAGGTTCGGCACGATTATTGCAAGAAATTTCGACGCTATCAGGCTGCTCTTCCAACTGATGAGGCCCCCCAATATGACTCCCGCTGTGAACGCTTTGTTTCCGCAGGCTCAGCCTTTCCAGCACCACGCCACCGTCGGCTTGACTCTTCGAATAGAGAGCGCGGTCTGCGAATCAGTGCTGGCAGACGCCAACGAGACGCTGCTGGCAAACGTTACCGCCGTGCGGCAAGAGTATGCCATCCCAGTAGGGCCTGTGTTTCCACCCGGCATGAACTGGACTGAACTAATTACTAACTATAGCCCATCCAGAGAAGACAACTTGCAGCGGGTCTTCACTGTGGCCTCTATCCGGAGTATGTTGATCAAGTAGAGGCCTATTTTCTTTAGTTTGAATTTACTGTTATTCGGTGTGCATTTCTATGTTTGGTGAGCGGTTTTCTGTGCTCAGAGTGTGTTTATTTTATGTAATTTAATTTCTTTGTGAGCTCCTGTTTAGCAGGTCGTCCCTTCAGCAAGGACACAAAAAGATTTTAATTTTATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACCGGGAATTCGATATCAAGCTTATCGACCTGCAGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGAT

【0211】

配列番号１２ IF-WA_NSP4.s1+3c
AAATTTGTCGGGCCCATGGATAAGCTTGCCGACCTCAACTACACATTGAGTG

【0212】

配列番号１３ IF-WA_NSP4.s1-4r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTCACATGGATGCAGTCACTTCTGACGGTTCATATGGA

【0213】

配列番号１４ Wa_NSP4_DNA
ATGGATAAGCTTGCCGACCTCAACTACACATTGAGTGTAATCACTTCAATGAATGACACATTGCATTCTATAATTCAAGATCCTGGAATGGCGTATTTTCTATATATTGCATCTGTTCTAACAGTTTTGTTCACATTACATAAAGCTTCAATTCCAACCATGAAAATAGCATTGAAAACATCAAAATGTTCATATAAAGTGATTAAATATTGTATAGTCACGATCATTAATACTCTTTTAAAATTGGCTGGATATAAAGAGCAGGTTACTACAAAAGACGAAATTGAGCAACAGATGGACAGAATTGTGAAAGAGATGAGACGTCAGCTGGAGATGATTGATAAACTAACTACTCGTGAAATTGAACAGGTTGAATTGCTTAAACGTATACATGACAACCTGATAACTAGACCAGTTGACGTTATAGATATGTCGAAGGAATTCAATCAGAAAAACATCAAAACGCTAGATGAATGGGAGAGTGGAAAAAATCCATATGAACCGTCAGAAGTGACTGCATCCATGTGA

【0214】

配列番号１５ Wa_NSP4_AA
MDKLADLNYTLSVITSMNDTLHSIIQDPGMAYFLYIASVLTVLFTLHKASIPTMKIALKTSKCSYKVIKYCIVTIINTLLKLAGYKEQVTTKDEIEQQMDRIVKEMRRQLEMIDKLTTREIEQVELLKRIHDNLITRPVDVIDMSKEFNQKNIKTLDEWESGKNPYEPS

【0215】

配列番号１６ 2X35SからNOSへの構築物1706
GTCAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGTATTAAAATCTTAATAGGTTTTGATAAAAGCGAACGTGGGGAAACCCGAACCAAACCTTCTTCTAAACTCTCTCTCATCTCTCTTAAAGCAAACTTCTCTCTTGTCTTTCTTGCGTGAGCGATCTTCAACGTTGTCAGATCGTGCTTCGGCACCAGTACAACGTTTTCTTTCACTGAAGCGAAATCAAAGATCTCTTTGTGGACACGTAGTGCGGCGCCATTAAATAACGTGTACTTGTCCTATTCTTGTCGGTGTGGTCTTGGGAAAAGAAAGCTTGCTGGAGGCTGCTGTTCAGCCCCATACATTACTTGTTACGATTCTGCTGACTTTCGGCGGGTGCAATATCTCTACTTCTGCTTGACGAGGTATTGTTGCCTGTACTTCTTTCTTCTTCTTCTTGCTGATTGGTTCTATAAGAAATCTAGTATTTTCTTTGAAACAGAGTTTTCCCGTGGTTTTCGAACTTGGAGAAAGATTGTTAAGCTTCTGTATATTCTGCCCAAATTTGTCGGGCCCATGGATAAGCTTGCCGACCTCAACTACACATTGAGTGTAATCACTTCAATGAATGACACATTGCATTCTATAATTCAAGATCCTGGAATGGCGTATTTTCTATATATTGCATCTGTTCTAACAGTTTTGTTCACATTACATAAAGCTTCAATTCCAACCATGAAAATAGCATTGAAAACATCAAAATGTTCATATAAAGTGATTAAATATTGTATAGTCACGATCATTAATACTCTTTTAAAATTGGCTGGATATAAAGAGCAGGTTACTACAAAAGACGAAATTGAGCAACAGATGGACAGAATTGTGAAAGAGATGAGACGTCAGCTGGAGATGATTGATAAACTAACTACTCGTGAAATTGAACAGGTTGAATTGCTTAAACGTATACATGACAACCTGATAACTAGACCAGTTGACGTTATAGATATGTCGAAGGAATTCAATCAGAAAAACATCAAAACGCTAGATGAATGGGAGAGTGGAAAAAATCCATATGAACCGTCAGAAGTGACTGCATCCATGTGAAGGCCTATTTTCTTTAGTTTGAATTTACTGTTATTCGGTGTGCATTTCTATGTTTGGTGAGCGGTTTTCTGTGCTCAGAGTGTGTTTATTTTATGTAATTTAATTTCTTTGTGAGCTCCTGTTTAGCAGGTCGTCCCTTCAGCAAGGACACAAAAAGATTTTAATTTTATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACCGGGAATTCGATATCAAGCTTATCGACCTGCAGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAA

【0216】

配列番号１７ IF(C160)-TrSP+Rtx_VP7(opt).c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTA

【0217】

配列番号１８ IF-Rtx_VP7(opt).s1-4r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTAAACGCGATAATAGAAGGCTGCTGAGTTCAGGGA

【0218】

配列番号１９ Rtx_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0219】

配列番号２０ Rtx_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0220】

配列番号２１ 左から右へのT-DNAのクローニングベクター1190
TGGCAGGATATATTGTGGTGTAAACAAATTGACGCTTAGACAACTTAATAACACATTGCGGACGTTTTTAATGTACTGAATTAACGCCGAATCCCGGGCTGGTATATTTATATGTTGTCAAATAACTCAAAAACCATAAAAGTTTAAGTTAGCAAGTGTGTACATTTTTACTTGAACAAAAATATTCACCTACTACTGTTATAAATCATTATTAAACATTAGAGTAAAGAAATATGGATGATAAGAACAAGAGTAGTGATATTTTGACAACAATTTTGTTGCAACATTTGAGAAAATTTTGTTGTTCTCTCTTTTCATTGGTCAAAAACAATAGAGAGAGAAAAAGGAAGAGGGAGAATAAAAACATAATGTGAGTATGAGAGAGAAAGTTGTACAAAAGTTGTACCAAAATAGTTGTACAAATATCATTGAGGAATTTGACAAAAGCTACACAAATAAGGGTTAATTGCTGTAAATAAATAAGGATGACGCATTAGAGAGATGTACCATTAGAGAATTTTTGGCAAGTCATTAAAAAGAAAGAATAAATTATTTTTAAAATTAAAAGTTGAGTCATTTGATTAAACATGTGATTATTTAATGAATTGATGAAAGAGTTGGATTAAAGTTGTATTAGTAATTAGAATTTGGTGTCAAATTTAATTTGACATTTGATCTTTTCCTATATATTGCCCCATAGAGTCAGTTAACTCATTTTTATATTTCATAGATCAAATAAGAGAAATAACGGTATATTAATCCCTCCAAAAAAAAAAAACGGTATATTTACTAAAAAATCTAAGCCACGTAGGAGGATAACAGGATCCCCGTAGGAGGATAACATCCAATCCAACCAATCACAACAATCCTGATGAGATAACCCACTTTAAGCCCACGCATCTGTGGCACATCTACATTATCTAAATCACACATTCTTCCACACATCTGAGCCACACAAAAACCAATCCACATCTTTATCACCCATTCTATAAAAAATCACACTTTGTGAGTCTACACTTTGATTCCCTTCAAACACATACAAAGAGAAGAGACTAATTAATTAATTAATCATCTTGAGAGAAAATGGAACGAGCTATACAAGGAAACGACGCTAGGGAACAAGCTAACAGTGAACGTTGGGATGGAGGATCAGGAGGTACCACTTCTCCCTTCAAACTTCCTGACGAAAGTCCGAGTTGGACTGAGTGGCGGCTACATAACGATGAGACGAATTCGAATCAAGATAATCCCCTTGGTTTCAAGGAAAGCTGGGGTTTCGGGAAAGTTGTATTTAAGAGATATCTCAGATACGACAGGACGGAAGCTTCACTGCACAGAGTCCTTGGATCTTGGACGGGAGATTCGGTTAACTATGCAGCATCTCGATTTTTCGGTTTCGACCAGATCGGATGTACCTATAGTATTCGGTTTCGAGGAGTTAGTATCACCGTTTCTGGAGGGTCGCGAACTCTTCAGCATCTCTGTGAGATGGCAATTCGGTCTAAGCAAGAACTGCTACAGCTTGCCCCAATCGAAGTGGAAAGTAATGTATCAAGAGGATGCCCTGAAGGTACTCAAACCTTCGAAAAAGAAAGCGAGTAAGTTAAAATGCTTCTTCGTCTCCTATTTATAATATGGTTTGTTATTGTTAATTTTGTTCTTGTAGAAGAGCTTAATTAATCGTTGTTGTTATGAAATACTATTTGTATGAGATGAACTGGTGTAATGTAATTCATTTACATAAGTGGAGTCAGAATCAGAATGTTTCCTCCATAACTAACTAGACATGAAGACCTGCCGCGTACAATTGTCTTATATTTGAACAACTAAAATTGAACATCTTTTGCCACAACTTTATAAGTGGTTAATATAGCTCAAATATATGGTCAAGTTCAATAGATTAATAATGGAAATATCAGTTATCGAAATTCATTAACAATCAACTTAACGTTATTAACTACTAATTTTATATCATCCCCTTTGATAAATGATAGTACACCAATTAGGAAGGAGCATGCTCGCCTAGGAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGTTTGCAAGCTGCTCTAGCCGTGTAGCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGGAATTACTAGCGCGTGTCGACAAGCTTGCATGCCGGTCAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGTATTAAAATCTTAATAGGTTTTGATAAAAGCGAACGTGGGGAAACCCGAACCAAACCTTCTTCTAAACTCTCTCTCATCTCTCTTAAAGCAAACTTCTCTCTTGTCTTTCTTGCGTGAGCGATCTTCAACGTTGTCAGATCGTGCTTCGGCACCGCGGATGGCGAAAAACGTTGCGATTTTCGGCTTATTGTTTTCTCTTCTTGTGTTGGTTCCTTCTCAGATCTTCGCCTGCAGGCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGCGATCGCTCACCATCACCATCACCATCACCATCACCATTAAAGGCCTATTTTCTTTAGTTTGAATTTACTGTTATTCGGTGTGCATTTCTATGTTTGGTGAGCGGTTTTCTGTGCTCAGAGTGTGTTTATTTTATGTAATTTAATTTCTTTGTGAGCTCCTGTTTAGCAGGTCGTCCCTTCAGCAAGGACACAAAAAGATTTTAATTTTATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACCGGGAATTCGATATCAAGCTTATCGACCTGCAGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCTCTAGAGTCTCAAGCTTGGCGCGCCCACGTGACTAGTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGCTAGAGCAGCTTGAGCTTGGATCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGTTTAAACTATCAGTGTTTGACAGGATATATTGGCGGGTAAACCTAAGAGAAAAGAGCGTTTA

【0221】

配列番号２２ 2X35SからNOSへの構築物1199
GTCAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACACTTGTCTACTCCAAAAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCAATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTTATTGTGAAGATAGTGGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGTATTAAAATCTTAATAGGTTTTGATAAAAGCGAACGTGGGGAAACCCGAACCAAACCTTCTTCTAAACTCTCTCTCATCTCTCTTAAAGCAAACTTCTCTCTTGTCTTTCTTGCGTGAGCGATCTTCAACGTTGTCAGATCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAGAGGCCTATTTTCTTTAGTTTGAATTTACTGTTATTCGGTGTGCATTTCTATGTTTGGTGAGCGGTTTTCTGTGCTCAGAGTGTGTTTATTTTATGTAATTTAATTTCTTTGTGAGCTCCTGTTTAGCAGGTCGTCCCTTCAGCAAGGACACAAAAAGATTTTAATTTTATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACCGGGAATTCGATATCAAGCTTATCGACCTGCAGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGA

【0222】

配列番号２３ IF-(160)RVA(G2P5SC2-9)VP7.c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGACTACATTATCTATCGATTTTTA

【0223】

配列番号２４ IF-RVA(G2P5SC2-9)VP7.r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTACACTCGGTAATAGAAGGCGGCAGCATCCAGGCTC

【0224】

配列番号２５ Sc2-9_VP7_DNA_Opt
ATGGACTACATTATCTATCGATTTTTATTGGTAATTGTGCTGATCTCACCATTCGTCAGGACTCAGAACTACGGGATCTACCTGCCGATAACCGGCTCTCTGGATGCAGTGTATACAAATAGCACCTCAGGTGAGACATTTCTCACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGTTGTGCAACCCAATGGACATCTCCCTTTACTATTACCAGCAGTCCTCCGAGAGTAACAAGTGGATTAGCATGGGTACCGATTGCACTGTAAAGGTGTGTCCCCTGAATACCCAGACTCTCGGAATCGGTTGCAAAACCACCGACGTGAGCACTTTCGAAATAGTTGCTTCCTCAGAGAAGCTAGTTATCACAGACGTGGTGAACGGCGTCAACCACAAAATCAATATCAGCATCTCCACTTGCACTATTCGAAATTGCAACAAACTCGGCCCCCGGGAGAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAAAGGAGCAGGAGCCTGGATGCTGCCGCCTTCTATTACCGAGTGTAG

【0225】

配列番号２６ Sc2-9_VP7_AA
MDYIIYRFLLVIVLISPFVRTQNYGIYLPITGSLDAVYTNSTSGETFLTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDISLYYYQQSSESNKWISMGTDCTVKVCPLNTQTLGIGCKTTDVSTFEIVASSEKLVITDVVNGVNHKINISISTCTIRNCNKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLDAAAFYYRV

【0226】

配列番号２７ 7-1a_Sc2-9_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0227】

配列番号２８ 7-1a_Sc2-9_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0228】

配列番号２９ IF-VP7(3End)Rtx+VP7-1b(G2SC2-9).r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTAAACGCGATAATAGAAGGCTGCTGAGTTCAGGGATCTGGACCGTTTGCTCATCACCTGTACGATC

【0229】

配列番号３０ 7-1b_Sc2-9_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0230】

配列番号３１ 7-1b_Sc2-9_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0231】

配列番号３２ 7-1a+1b_Sc2-9_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0232】

配列番号３３ 7-1a+1b_Sc2-9_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0233】

配列番号３４ IF-(160)RVA(G9P8WI61)VP7.c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTTTATCATCTACCGATTTCTA

【0234】

配列番号３５ IF-RVA(G9P8WI61)VP7.r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTCAAACCCGGTAATAGAACGCTGCGGAGTTT

【0235】

配列番号３６ WI61_VP7_DNA_Opt
ATGGATTTTATCATCTACCGATTTCTATTGTTGATTGTTATCGTAAGCCCGTTCGTGAAAACGCAGAACTATGGAATCAATCTGCCTATTACAGGGAGTATGGATACCGCGTACGCTAATTCTTCACAGCTGGATACGTTTTTAACCTCCACACTTTGCTTATACTATCCTGCTGAGGCGAGCACTCAGATTGGAGACACCGAGTGGAAGAACACTCTGAGCCAGCTATTCCTGACGAAAGGGTGGCCCACAGGCTCTGTGTATTTCAAAGAATATACTGACATCGCCTCCTTCAGCATCGATCCACAGCTCTACTGCGACTATAACGTGGTTTTAATGAAGTATGATTCTACACTTAAACTTGACATGTCCGAACTGGCTGACCTGATCCTGAACGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACGCTGTATTATTACCAGCAGACAGACGAAGCCAACAAGTGGATCGCCATGGGACAGAGCTGTACAATTAAAGTGTGTCCACTCAACACCCAAACTCTCGGTATTGGGTGCACTACAACCAATACGGCCACTTTTGAGGAGGTGGCGGCCTCTGAGAAGCTGGTGATTACAGATGTGGTAGACGGCGTGAACCACAAACTGGATGTGACGACGACAACGTGTACAATCAGAAACTGTCGCAAGCTGGGACCTCGGGAAAACGTCGCTATTATACAGGTGGGAGGGAGCGAAGTGCTAGATATTACGGCAGATCCAACTACAGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGAGGATTAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTCTTTTACACCGTCGTGGACTATATTAATCAGATTGTTCAGGTAATGAGCAAAAGGAGTAGGTCTTTAAACTCCGCAGCGTTCTATTACCGGGTTTGA

【0236】

配列番号３７ WI61_VP7_AA
MDFIIYRFLLLIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDTAYANSSQLDTFLTSTLCLYYPAEASTQIGDTEWKNTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLKLDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWIAMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVAASEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCRKLGPRENVAIIQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0237】

配列番号３８ 7-1a_WI61_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACCTCCACACTTTGCTTATACTATCCTGCTGAGGCGAGCACTCAGATTGGAGACACCGAGTGGAAGAACACTCTGAGCCAGCTATTCCTGACGAAAGGGTGGCCCACAGGCTCTGTGTATTTCAAAGAATATACTGACATCGCCTCCTTCAGCATCGATCCACAGCTCTACTGCGACTATAACGTGGTTTTAATGAAGTATGATTCTACACTTAAACTTGACATGTCCGAACTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0238】

配列番号３９ 7-1a_WI61_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPAEASTQIGDTEWKNTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLKLDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0239】

配列番号４０ 7-1b_WI61_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCTATTATACAGGTGGGAGGGAGCGAAGTGCTAGATATTACGGCAGATCCAACTACAGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGAGGATTAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTCTTTTACACCGTCGTGGACTATATTAATCAGATTGTTCAGGTAATGAGCAAAAGGAGTAGGTCTTTAAACTCCGCAGCGTTCTATTACCGGGTTTGA

【0240】

配列番号４１ 7-1b_WI61_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0241】

配列番号４２ 7-1a+1b_WI61_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACCTCCACACTTTGCTTATACTATCCTGCTGAGGCGAGCACTCAGATTGGAGACACCGAGTGGAAGAACACTCTGAGCCAGCTATTCCTGACGAAAGGGTGGCCCACAGGCTCTGTGTATTTCAAAGAATATACTGACATCGCCTCCTTCAGCATCGATCCACAGCTCTACTGCGACTATAACGTGGTTTTAATGAAGTATGATTCTACACTTAAACTTGACATGTCCGAACTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCTATTATACAGGTGGGAGGGAGCGAAGTGCTAGATATTACGGCAGATCCAACTACAGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGAGGATTAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTCTTTTACACCGTCGTGGACTATATTAATCAGATTGTTCAGGTAATGAGCAAAAGGAGTAGGTCTTTAAACTCCGCAGCGTTCTATTACCGGGTTTGA

【0242】

配列番号４３ 7-1a+1b_WI61_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPAEASTQIGDTEWKNTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLKLDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0243】

配列番号４４ IF-(160)RVA(G3P5WI78-8)VP7.c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTTCATTATATACCGCTTCCTGCTCATC

【0244】

配列番号４５ IF-RVA(G3P5WI78-8)VP7.r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTTAAACCCGGTAATAGAATGCGGCCGAATTCA

【0245】

配列番号４６ WI78-8_VP7_DNA_Opt
ATGGATTTCATTATATACCGCTTCCTGCTCATCATTGTGATACTTTCTCCCTTGTTGAACGCGCAAAATTACGGGATTAACCTCCCAATTACTGGTTCCATGGACACTAGCTACACCAATTCAACCCGGGAGGAAGTTTTCCTCACGAGCACTCTTTGCCTATATTATCCCACCGAGGCTGCCACAGAGATCAATGACAATTCCTGGAAAGATACTTTGAGCCAGCTGTTCCTGACCAAAGGGTGGCCAACCGAGAGTATCTATTTTAAAGATTACACCGACATAGCGTCATTTTCTGTTGACCCACAGCTCTATTGCGACTACAATCTGGTGCTCATGAAATACGACGCAACCCTTCAGCTGGACATGTCCGAGCTAGCAGACCTGCTGCTCAACGAGTGGCTCTGCAACCCTATGGATATAACGCTGTACTATTACCAGCAGACAGATGAAGCCAACAAGTGGATTAGTATGGGTTCGAGCTGCACGATCAAGGTTTGCCCACTGAACACTCAAACCCTCGGTATAGGTTGTTTGACCACTGACGCGAATACATTTGAGGAAGTGGCCACCGCTGAAAAACTTGTGATCACCGACGTCGTGGACGGTGTTAACCACAAGCTGAAAGTGACCACCGACACGTGCACGATTCGCAACTGTAAAAAATTAGGGCCCCGTGAAAACGTGGCTGTGATCCAAGTCGGAGGGAGTGACGTGCTGGACATTACCGCAGATCCCACAACTGCTCCACAGACTGAGAGGATGATGAGGGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTATACGATTGTTGACTACGTCAATCAGATTGTGCAGGCCATGTCAAAGAGGTCACGATCTCTGAATTCGGCCGCATTCTATTACCGGGTTTAA

【0246】

配列番号４７ WI78-8_VP7_AA
MDFIIYRFLLIIVILSPLLNAQNYGINLPITGSMDTSYTNSTREEVFLTSTLCLYYPTEAATEINDNSWKDTLSQLFLTKGWPTESIYFKDYTDIASFSVDPQLYCDYNLVLMKYDATLQLDMSELADLLLNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDANTFEEVATAEKLVITDVVDGVNHKLKVTTDTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSDVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYVNQIVQAMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0247】

配列番号４８ IF-VP7(3End)Rtx+VP7-1b(G3P5).r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTAAACGCGATAATAGAAGGCTGCTGAGTTCAGGGATCTGGACCGCTTTGACATGGCCTGCACAATCT

【0248】

配列番号４９ 7-1b_WI78-8_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTGGCTGTGATCCAAGTCGGAGGGAGTGACGTGCTGGACATTACCGCAGATCCCACAACTGCTCCACAGACTGAGAGGATGATGAGGGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTATACGATTGTTGACTACGTCAATCAGATTGTGCAGGCCATGTCAAAGCGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0249】

配列番号５０ 7-1b_WI78-8_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSDVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYVNQIVQAMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0250】

配列番号５１ 7-1a+1b_WI78-8_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACGAGCACTCTTTGCCTATATTATCCCACCGAGGCTGCCACAGAGATCAATGACAATTCCTGGAAAGATACTTTGAGCCAGCTGTTCCTGACCAAAGGGTGGCCAACCGAGAGTATCTATTTTAAAGATTACACCGACATAGCGTCATTTTCTGTTGACCCACAGCTCTATTGCGACTACAATCTGGTGCTCATGAAATACGACGCAACCCTTCAGCTGGACATGTCCGAGCTAGCAGACCTGCTGCTCAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTGGCTGTGATCCAAGTCGGAGGGAGTGACGTGCTGGACATTACCGCAGATCCCACAACTGCTCCACAGACTGAGAGGATGATGAGGGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTATACGATTGTTGACTACGTCAATCAGATTGTGCAGGCCATGTCAAAGCGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0251】

配列番号５２ 7-1a+1b_WI78-8_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPTEAATEINDNSWKDTLSQLFLTKGWPTESIYFKDYTDIASFSVDPQLYCDYNLVLMKYDATLQLDMSELADLLLNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSDVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYVNQIVQAMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0252】

配列番号５３ IF-(160)RVA(G12P8KDH651)VP7.c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTTCATCATCTACCGCTTCCTCCTA

【0253】

配列番号５４ IF-RVA(G12P8KDH651)VP7.r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTCAGATCCTGTAGTAAAAGGCAGCGGAGTTCAGG

【0254】

配列番号５５ KDH651_VP7_DNA_Opt
ATGGATTTCATCATCTACCGCTTCCTCCTAATAGTAGTGATCATCCTGCCCTTCATTAAAGCACAGAACTATGGGATCAACCTGCCCATCACAGGCTCTATGGATGCCGCGTACGTGAATTCAACACAACAGGAAAATTTCATGACCTCCACACTTTGTCTTTACTATCCGAGTAGCGTGACTACTGAAATCACAGATCCCGATTGGACCAATACCCTGAGCCAGCTGTTTCTAACCAAGGGATGGCCCGTGAACTCTGTGTATTTTAAGAGCTATGCAGATATTTCTTCATTTTCGGTGGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACATAGTGCTGATACAGTACCAGAACTCGCTGGCTTTGGATGTTAGTGAACTGGCTGACCTGATCCTGAATGAATGGTTGTGCAACCCTATGGACGTGACACTCTACTACTACCAACAGACAGATGAGGCAAACAAGTGGATCTCGATGGGAGAATCTTGCACAGTCAAAGTCTGCCCCCTCAACACCCAAACCCTGGGTATTGGATGCACGACTACCGATGTGACAACCTTCGAAGAAGTGGCGAATGCCGAGAAACTTGTGATCACCGATGTGGTTGACGGCGTGAACCATAAAATTAACATCACCGTCAACACATGTACTATCAGGAATTGCAAAAAACTCGGTCCAAGGGAGAACGTCGCCATCATACAGGTGGGGAGTTCAGATGTCATCGATATCACCGCCGACCCCACAACCATCCCGCAGACCGAGCGAATGATGAGAATCAATTGGAAAAAATGGTGGCAAGTATTTTACACAGTCGTGGATTATATTAATCAGATCGTGCAGGTTATGAGCAAAAGGTCAAGAAGCCTGAACTCCGCTGCCTTTTACTACAGGATCTGA

【0255】

配列番号５６ KDH651_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVIILPFIKAQNYGINLPITGSMDAAYVNSTQQENFMTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFLTKGWPVNSVYFKSYADISSFSVDPQLYCDYNIVLIQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITVNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGSSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRI

【0256】

配列番号５７ IF-VP7(3End)Rtx+VP7-1b(G12P8).r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTAAACGCGATAATAGAAGGCTGCTGAGTTCAGGGATCTGGACCGTTTGCTCATAACCTGCACGAT

【0257】

配列番号５８ 7-1b_KDH651_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACCTCCACACTTTGTCTTTACTATCCGAGTAGCGTGACTACTGAAATCACAGATCCCGATTGGACCAATACCCTGAGCCAGCTGTTTCTAACCAAGGGATGGCCCGTGAACTCTGTGTATTTTAAGAGCTATGCAGATATTTCTTCATTTTCGGTGGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACATAGTGCTGATACAGTACCAGAACTCGCTGGCTTTGGATGTTAGTGAACTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCCATCATACAGGTGGGGAGTTCAGATGTCATCGATATCACCGCCGACCCCACAACCATCCCGCAGACCGAGCGAATGATGAGAATCAATTGGAAAAAATGGTGGCAAGTATTTTACACAGTCGTGGATTATATTAATCAGATCGTGCAGGTTATGAGCAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0258】

配列番号５９ 7-1b_KDH651_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFLTKGWPVNSVYFKSYADISSFSVDPQLYCDYNIVLIQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGSSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0259】

配列番号６０ 7-1a+1b_KDH651_VP7_DNA_Opt
ATGGATTATATTATCTATCGTAGCCTCCTCATCTACGTGGCCCTTTTTGCCCTGACCAGGGCCCAGAACTATGGCCTGAACTTACCAATCACCGGTTCAATGGATACCGTTTACGCTAATTCCACTCAAGAGGGGATATTTCTGACCTCCACACTTTGTCTTTACTATCCGAGTAGCGTGACTACTGAAATCACAGATCCCGATTGGACCAATACCCTGAGCCAGCTGTTTCTAACCAAGGGATGGCCCGTGAACTCTGTGTATTTTAAGAGCTATGCAGATATTTCTTCATTTTCGGTGGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACATAGTGCTGATACAGTACCAGAACTCGCTGGCTTTGGATGTTAGTGAACTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGCAACCCCATGGACATCACATTATATTACTACCAGCAGTCTGGAGAATCCAACAAGTGGATCAGTATGGGCTCAAGTTGCACCGTGAAGGTGTGTCCCTTGAACACCCAAATGCTGGGCATTGGTTGTCAGACAACTAATGTGGATTCGTTTGAAATGGTAGCCGAAAACGAGAAGCTGGCTATAGTGGACGTAGTCGATGGGATTAACCACAAGATCAATCTGACTACCACCACTTGTACCATCAGAAACTGTAAAAAGCTCGGCCCCCGGGAGAACGTCGCCATCATACAGGTGGGGAGTTCAGATGTCATCGATATCACCGCCGACCCCACAACCATCCCGCAGACCGAGCGAATGATGAGAATCAATTGGAAAAAATGGTGGCAAGTATTTTACACAGTCGTGGATTATATTAATCAGATCGTGCAGGTTATGAGCAAACGGTCCAGATCCCTGAACTCAGCAGCCTTCTATTATCGCGTTTAG

【0260】

配列番号６１ 7-1a+1b_KDH651_VP7_AA
MDYIIYRSLLIYVALFALTRAQNYGLNLPITGSMDTVYANSTQEGIFLTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFLTKGWPVNSVYFKSYADISSFSVDPQLYCDYNIVLIQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQSGESNKWISMGSSCTVKVCPLNTQMLGIGCQTTNVDSFEMVAENEKLAIVDVVDGINHKINLTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGSSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV

【0261】

配列番号６２ IF-VP7(G3AAA18522).c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTT

【0262】

配列番号６３ IF-VP7(G3AAA18522).r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTTACACCCTATAATAGAATGCAGCGGAGTTAAGG

【0263】

配列番号１１７ G3HCR3_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTTATAATAGTGATTCTGTCACCTCTACTCAAGGCGCAAAACTATGGCATAAACCTCCCTATCACCGGCTCAATGGACACCGCCTATGCAAACTCCACGCAGGAAGAAACTCTGCTGACCAGCACACTCTGCCTCTACTACCCGACAGAGGCTGCCACTGAGATCAACGATAATTCTTGGAAAGACACGTTATCGCAGCTGTTTCTTACTAAGGGCTGGCCCACCGGTAGTGTCTACTTTAAAGAGTATACCGACATTGCCTCTTTTAGCGTGGATCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACATCGTGTTGATGAAGTATGACGCAGCGCTGCAGCTGGATATGAGTGAGCTGGCCGATTTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGTAATCCAATGGATATCACACTCTACTACTACCAGCAGACTGACGAAGCCAACAAGTGGATCTCTATGGGTTCTAGCTGCACCATCAAAGTGTGCCCCCTGAACACCCAGACACTGGGCATTGGCTGTCTGACGACAGATGTCAGTACCTTCGAGGAGGTGGCGACAACAGAGAAACTGGTGATCACCGACGTGGTTGACGGCGTGAACCACAAACTCGACGTGACAACTACCACCTGCACCATCCGGAATTGTAAGAAGCTGGGACCGAGAGAAAATGTTGCAGTCATCCAGGTAGGAGGCAGTGATATTCTCGACATCACGGCCGACCCGACGACCGCGCCTCAGACAGAAAGGATGATGCGGATCAATTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTACACAGTGGTGGACTACGTTAACCAGATTATTCAGGCTATGAGCAAGCGCAGCAGATCCCTTAACTCCGCTGCATTCTATTATAGGGTGTAA

【0264】

配列番号７７ G3HCR3_VP7_AA
MDFIIYRFLFIIVILSPLLKAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQEETLLTSTLCLYYPTEAATEINDNSWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSVDPQLYCDYNIVLMKYDAALQLDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDVSTFEEVATTEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSDILDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYVNQIIQAMSKRSRSLNSAAFYYRV *

【0265】

配列番号６４ G3HCR3+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTTATAATAGTGATTCTGTCACCTCTACTCAAGGCGCAAAACTATGGCATAAACCTCCCTATCACCGGCTCAATGGACACCGCCTATGCAAACTCCACGCAGGAAGAAACTCTGCTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAGTGGCTGTGTAATCCAATGGATATCACACTCTACTACTACCAGCAGACTGACGAAGCCAACAAGTGGATCTCTATGGGTTCTAGCTGCACCATCAAAGTGTGCCCCCTGAACACCCAGACACTGGGCATTGGCTGTCTGACGACAGATGTCAGTACCTTCGAGGAGGTGGCGACAACAGAGAAACTGGTGATCACCGACGTGGTTGACGGCGTGAACCACAAACTCGACGTGACAACTACCACCTGCACCATCCGGAATTGTAAGAAGCTGGGACCGAGAGAAAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGCAGCAGATCCCTTAACTCCGCTGCATTCTATTATAGGGTGTAA

【0266】

配列番号６５ G3HCR3+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_AA
MDFIIYRFLFIIVILSPLLKAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQEETLLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDVSTFEEVATTEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0267】

配列番号６６ G3HCR3+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTTATAATAGTGATTCTGTCACCTCTACTCAAGGCGCAAAACTATGGCATAAACCTCCCTATCACCGGCTCAATGGACACCGCCTATGCAAACTCCACGCAGGAAGAAACTCTGCTGACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGTAATCCAATGGATATCACACTCTACTACTACCAGCAGACTGACGAAGCCAACAAGTGGATCTCTATGGGTTCTAGCTGCACCATCAAAGTGTGCCCCCTGAACACCCAGACACTGGGCATTGGCTGTCTGACGACAGATGTCAGTACCTTCGAGGAGGTGGCGACAACAGAGAAACTGGTGATCACCGACGTGGTTGACGGCGTGAACCACAAACTCGACGTGACAACTACCACCTGCACCATCCGGAATTGTAAGAAGCTGGGACCGAGAGAAAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAACGCAGCAGATCCCTTAACTCCGCTGCATTCTATTATAGGGTGTAA

【0268】

配列番号６７ G3HCR3+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_AA
MDFIIYRFLFIIVILSPLLKAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQEETLLTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDVSTFEEVATTEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0269】

配列番号６８ G3HCR3+7-1a-1b_G4Brb-9_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTTATAATAGTGATTCTGTCACCTCTACTCAAGGCGCAAAACTATGGCATAAACCTCCCTATCACCGGCTCAATGGACACCGCCTATGCAAACTCCACGCAGGAAGAAACTCTGCTGTCTAGCACACTGTGCCTTTACTATCCTAGTGAGGCACCGACTCAAATCAGTGATACAGAATGGAAGGATACACTGTCTCAACTCTTTCTCACCAAGGGATGGCCCACTGGCTCAGTGTATTTTAATGAATACAGCAACGTTTTGGAGTTCAGTATTGACCCCAAGCTGTACTGCGACTACAATGTAGTGCTGATTCGATTCGCCTCGGGGGAGGAACTTGACGTATCCGAGTTGGCCGACCTCATCCTGAATGAGTGGCTGTGTAATCCAATGGATATCACACTCTACTACTACCAGCAGACTGACGAAGCCAACAAGTGGATCTCTATGGGTTCTAGCTGCACCATCAAAGTGTGCCCCCTGAACACCCAGACACTGGGCATTGGCTGTCTGACGACAGATGTCAGTACCTTCGAGGAGGTGGCGACAACAGAGAAACTGGTGATCACCGACGTGGTTGACGGCGTGAACCACAAACTCGACGTGACAACTACCACCTGCACCATCCGGAATTGTAAGAAGCTGGGACCGAGAGAAAACGTTGCCATAATCCAGGTGGGAGGTAGCAATATCCTCGACATAACCGCCGATCCTACGACGTCCCCTCAGACTGAAAGGATGATGCGAGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAAGTTTTCTATACAGTGGTTGACTATATCAACCAAATAGTCAAGGTGATGAGTAAACGCAGCAGATCCCTTAACTCCGCTGCATTCTATTATAGGGTGTAA

【0270】

配列番号６９ G3HCR3+7-1a-1b_G4Brb-9_VP7_AA
MDFIIYRFLFIIVILSPLLKAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQEETLLSSTLCLYYPSEAPTQISDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFNEYSNVLEFSIDPKLYCDYNVVLIRFASGEELDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDVSTFEEVATTEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSNILDITADPTTSPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVKVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0271】

配列番号７０ G3HCR3+7-1a-1b_G9BE2001_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTTATAATAGTGATTCTGTCACCTCTACTCAAGGCGCAAAACTATGGCATAAACCTCCCTATCACCGGCTCAATGGACACCGCCTATGCAAACTCCACGCAGGAAGAAACTCTGCTGACATCAACCTTGTGCTTGTATTACCCCACTGAAGCGTCTACTCAGATCGGAGATACCGAGTGGAAAGATACTCTCAGTCAGCTGTTCCTCACCAAGGGATGGCCAACAGGCTCTGTCTACTTTAAAGAGTACACGGACATCGCATCTTTTAGCATCGATCCTCAGTTATACTGCGACTACAACGTGGTGTTGATGAAATACGACAGCACGCTGGAGCTCGACATGTCCGAGCTGGCTGATCTGATTCTCAATGAGTGGCTGTGTAATCCAATGGATATCACACTCTACTACTACCAGCAGACTGACGAAGCCAACAAGTGGATCTCTATGGGTTCTAGCTGCACCATCAAAGTGTGCCCCCTGAACACCCAGACACTGGGCATTGGCTGTCTGACGACAGATGTCAGTACCTTCGAGGAGGTGGCGACAACAGAGAAACTGGTGATCACCGACGTGGTTGACGGCGTGAACCACAAACTCGACGTGACAACTACCACCTGCACCATCCGGAATTGTAAGAAGCTGGGACCGAGAGAAAACGTGGCTATCGTTCAGGTGGGCGGTTCCGAGGTTCTCGACATAACGGCTGACCCAACCACCGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGCGCGTGAACTGGAAAAAATGGTGGCAAGTGTTCTACACTGTGGTGGACTATATCAACCAGATTGTGCAGGTGATGTCCAAACGCAGCAGATCCCTTAACTCCGCTGCATTCTATTATAGGGTGTAA

【0272】

配列番号７１ G3HCR3+7-1a-1b_G9BE2001_VP7_AA
MDFIIYRFLFIIVILSPLLKAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQEETLLTSTLCLYYPTEASTQIGDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDVSTFEEVATTEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIVQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0273】

配列番号７２ G3HCR3+7-1a-1b_G12K12_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATATATAGGTTTCTGTTTATAATAGTGATTCTGTCACCTCTACTCAAGGCGCAAAACTATGGCATAAACCTCCCTATCACCGGCTCAATGGACACCGCCTATGCAAACTCCACGCAGGAAGAAACTCTGCTGACCTCTACCTTGTGTCTGTATTACCCCTCTTCTGTCACAACAGAGATCACAGATCCTGATTGGACCAATACATTGTCTCAGCTCTTCATGACCAAAGGGTGGCCTACTAACAGCGTGTATTTCAAGTCATATGCGGACATCGCTAGCTTCAGCGTTGATCCACAGCTCTATTGCGACTACAACATCGTTCTGGTTCAGTACCAAAATTCCCTGGCCTTAGACGTGTCTGAACTCGCCGACCTGATCCTGAATGAGTGGCTGTGTAATCCAATGGATATCACACTCTACTACTACCAGCAGACTGACGAAGCCAACAAGTGGATCTCTATGGGTTCTAGCTGCACCATCAAAGTGTGCCCCCTGAACACCCAGACACTGGGCATTGGCTGTCTGACGACAGATGTCAGTACCTTCGAGGAGGTGGCGACAACAGAGAAACTGGTGATCACCGACGTGGTTGACGGCGTGAACCACAAACTCGACGTGACAACTACCACCTGCACCATCCGGAATTGTAAGAAGCTGGGACCGAGAGAAAACGTCGCGATAATACAAGTGGGTGGCTCTGATGTTATCGATATAACAGCTGATCCCACAACGATTCCACAGACAGAGCGGATGATGCGGATCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTTTTTTACACCGTGGTCGATTACATCAACCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAGCGCAGCAGATCCCTTAACTCCGCTGCATTCTATTATAGGGTGTAA

【0274】

配列番号７３ G3HCR3+7-1a-1b_G12K12_VP7_AA
MDFIIYRFLFIIVILSPLLKAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQEETLLTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFMTKGWPTNSVYFKSYADIASFSVDPQLYCDYNIVLVQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGSSCTIKVCPLNTQTLGIGCLTTDVSTFEEVATTEKLVITDVVDGVNHKLDVTTTTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0275】

配列番号７４ IF-(160)RVA(G4P5BrB-9)VP7.c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTG

【0276】

配列番号７５ IF-RVA(G4P5BrB-9)VP7.r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTTAAACTCTGTAGTAAAAGCTACTGGAGTC

【0277】

配列番号７６ G4BrB-9_VP7_DNA_opt
ATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTGATTGTCGTTCTCTCTGTGTTATCAAATGCTCAGAATTACGGCATCAACCTGCCAATTACCGGCTCCATGGACACAGCCTACGCTAACTCCACCCAGGACAACAACTTTTTGTCTAGCACACTGTGCCTTTACTATCCTAGTGAGGCACCGACTCAAATCAGTGATACAGAATGGAAGGATACACTGTCTCAACTCTTTCTCACCAAGGGATGGCCCACTGGCTCAGTGTATTTTAATGAATACAGCAACGTTTTGGAGTTCAGTATTGACCCCAAGCTGTACTGCGACTACAATGTAGTGCTGATTCGATTCGCCTCGGGGGAGGAACTTGACGTATCCGAGTTGGCCGACCTCATCCTGAATGAATGGCTTTGTAATCCTATGGACATTACGCTGTACTATTACCAGCAGACCGGCGAGGCCAACAAATGGATCTCGATGGGGAGCAGCTGCACTGTGAAGGTGTGTCCCCTGAACACCCAGACTCTCGGTATCGGGTGCCAGACAACTGATACCGCAACTTTTGAGACAGTGGCAGATAGCGAGAAGCTGGCCCTAATTGATGTGGTGGATAATGTGAACCACAAGCTGGACGTAACATCGACAACCTGTACTATCCGAAACTGTAACAAACTTGGGCCACGAGAGAACGTTGCCATAATCCAGGTGGGAGGTAGCAATATCCTCGACATAACCGCCGATCCTACGACGTCCCCTCAGACTGAAAGGATGATGCGAGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAAGTTTTCTATACAGTGGTTGACTATATCAACCAAATAGTCAAGGTGATGAGTAAAAGATCCCGATCCCTAGACTCCAGTAGCTTTTACTACAGAGTTTAA

【0278】

配列番号７８ G4BrB-9_VP7_AA
MDYLIYRITFVIVVLSVLSNAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQDNNFLSSTLCLYYPSEAPTQISDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFNEYSNVLEFSIDPKLYCDYNVVLIRFASGEELDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTGEANKWISMGSSCTVKVCPLNTQTLGIGCQTTDTATFETVADSEKLALIDVVDNVNHKLDVTSTTCTIRNCNKLGPRENVAIIQVGGSNILDITADPTTSPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVKVMSKRSRSLDSSSFYYRV^*

【0279】

配列番号７９ G4BrB-9+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_DNA_opt
ATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTGATTGTCGTTCTCTCTGTGTTATCAAATGCTCAGAATTACGGCATCAACCTGCCAATTACCGGCTCCATGGACACAGCCTACGCTAACTCCACCCAGGACAACAACTTTTTGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAATGAATGGCTTTGTAATCCTATGGACATTACGCTGTACTATTACCAGCAGACCGGCGAGGCCAACAAATGGATCTCGATGGGGAGCAGCTGCACTGTGAAGGTGTGTCCCCTGAACACCCAGACTCTCGGTATCGGGTGCCAGACAACTGATACCGCAACTTTTGAGACAGTGGCAGATAGCGAGAAGCTGGCCCTAATTGATGTGGTGGATAATGTGAACCACAAGCTGGACGTAACATCGACAACCTGTACTATCCGAAACTGTAACAAACTTGGGCCACGAGAGAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAAAGATCCCGATCCCTAGACTCCAGTAGCTTTTACTACAGAGTTTAA

【0280】

配列番号８０ G4BrB-9+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_AA
MDYLIYRITFVIVVLSVLSNAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQDNNFLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTGEANKWISMGSSCTVKVCPLNTQTLGIGCQTTDTATFETVADSEKLALIDVVDNVNHKLDVTSTTCTIRNCNKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLDSSSFYYRV^*

【0281】

配列番号８１ G4BrB-9+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_DNA_opt
ATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTGATTGTCGTTCTCTCTGTGTTATCAAATGCTCAGAATTACGGCATCAACCTGCCAATTACCGGCTCCATGGACACAGCCTACGCTAACTCCACCCAGGACAACAACTTTTTGACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAATGAATGGCTTTGTAATCCTATGGACATTACGCTGTACTATTACCAGCAGACCGGCGAGGCCAACAAATGGATCTCGATGGGGAGCAGCTGCACTGTGAAGGTGTGTCCCCTGAACACCCAGACTCTCGGTATCGGGTGCCAGACAACTGATACCGCAACTTTTGAGACAGTGGCAGATAGCGAGAAGCTGGCCCTAATTGATGTGGTGGATAATGTGAACCACAAGCTGGACGTAACATCGACAACCTGTACTATCCGAAACTGTAACAAACTTGGGCCACGAGAGAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAAAGATCCCGATCCCTAGACTCCAGTAGCTTTTACTACAGAGTTTAA

【0282】

配列番号８２ G4BrB-9+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_AA
MDYLIYRITFVIVVLSVLSNAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQDNNFLTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTGEANKWISMGSSCTVKVCPLNTQTLGIGCQTTDTATFETVADSEKLALIDVVDNVNHKLDVTSTTCTIRNCNKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLDSSSFYYRV^*

【0283】

配列番号８３ G4BrB-9+7-1a-1b_G3HCR3_VP7_DNA_opt
ATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTGATTGTCGTTCTCTCTGTGTTATCAAATGCTCAGAATTACGGCATCAACCTGCCAATTACCGGCTCCATGGACACAGCCTACGCTAACTCCACCCAGGACAACAACTTTTTGACCAGCACACTCTGCCTCTACTACCCGACAGAGGCTGCCACTGAGATCAACGATAATTCTTGGAAAGACACGTTATCGCAGCTGTTTCTTACTAAGGGCTGGCCCACCGGTAGTGTCTACTTTAAAGAGTATACCGACATTGCCTCTTTTAGCGTGGATCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACATCGTGTTGATGAAGTATGACGCAGCGCTGCAGCTGGATATGAGTGAGCTGGCCGATTTGATCCTGAATGAATGGCTTTGTAATCCTATGGACATTACGCTGTACTATTACCAGCAGACCGGCGAGGCCAACAAATGGATCTCGATGGGGAGCAGCTGCACTGTGAAGGTGTGTCCCCTGAACACCCAGACTCTCGGTATCGGGTGCCAGACAACTGATACCGCAACTTTTGAGACAGTGGCAGATAGCGAGAAGCTGGCCCTAATTGATGTGGTGGATAATGTGAACCACAAGCTGGACGTAACATCGACAACCTGTACTATCCGAAACTGTAACAAACTTGGGCCACGAGAGAATGTTGCAGTCATCCAGGTAGGAGGCAGTGATATTCTCGACATCACGGCCGACCCGACGACCGCGCCTCAGACAGAAAGGATGATGCGGATCAATTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTACACAGTGGTGGACTACGTTAACCAGATTATTCAGGCTATGAGCAAGAGATCCCGATCCCTAGACTCCAGTAGCTTTTACTACAGAGTTTAA

【0284】

配列番号８４ G4BrB-9+7-1a-1b_G3HCR3_VP7_AA
MDYLIYRITFVIVVLSVLSNAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQDNNFLTSTLCLYYPTEAATEINDNSWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSVDPQLYCDYNIVLMKYDAALQLDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTGEANKWISMGSSCTVKVCPLNTQTLGIGCQTTDTATFETVADSEKLALIDVVDNVNHKLDVTSTTCTIRNCNKLGPRENVAVIQVGGSDILDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYVNQIIQAMSKRSRSLDSSSFYYRV^*

【0285】

配列番号８５ G4BrB-9+7-1a-1b_G9BE2001_VP7_DNA_opt
ATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTGATTGTCGTTCTCTCTGTGTTATCAAATGCTCAGAATTACGGCATCAACCTGCCAATTACCGGCTCCATGGACACAGCCTACGCTAACTCCACCCAGGACAACAACTTTTTGACATCAACCTTGTGCTTGTATTACCCCACTGAAGCGTCTACTCAGATCGGAGATACCGAGTGGAAAGATACTCTCAGTCAGCTGTTCCTCACCAAGGGATGGCCAACAGGCTCTGTCTACTTTAAAGAGTACACGGACATCGCATCTTTTAGCATCGATCCTCAGTTATACTGCGACTACAACGTGGTGTTGATGAAATACGACAGCACGCTGGAGCTCGACATGTCCGAGCTGGCTGATCTGATTCTCAATGAATGGCTTTGTAATCCTATGGACATTACGCTGTACTATTACCAGCAGACCGGCGAGGCCAACAAATGGATCTCGATGGGGAGCAGCTGCACTGTGAAGGTGTGTCCCCTGAACACCCAGACTCTCGGTATCGGGTGCCAGACAACTGATACCGCAACTTTTGAGACAGTGGCAGATAGCGAGAAGCTGGCCCTAATTGATGTGGTGGATAATGTGAACCACAAGCTGGACGTAACATCGACAACCTGTACTATCCGAAACTGTAACAAACTTGGGCCACGAGAGAACGTGGCTATCGTTCAGGTGGGCGGTTCCGAGGTTCTCGACATAACGGCTGACCCAACCACCGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGCGCGTGAACTGGAAAAAATGGTGGCAAGTGTTCTACACTGTGGTGGACTATATCAACCAGATTGTGCAGGTGATGTCCAAAAGATCCCGATCCCTAGACTCCAGTAGCTTTTACTACAGAGTTTAA

【0286】

配列番号８６ G4BrB-9+7-1a-1b_G9BE2001_VP7_AA
MDYLIYRITFVIVVLSVLSNAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQDNNFLTSTLCLYYPTEASTQIGDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTGEANKWISMGSSCTVKVCPLNTQTLGIGCQTTDTATFETVADSEKLALIDVVDNVNHKLDVTSTTCTIRNCNKLGPRENVAIVQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLDSSSFYYRV^*

【0287】

配列番号８７ G4BrB-9+7-1a-1b_G12K12_VP7_DNA_opt
ATGGATTATCTGATCTACCGCATCACCTTTGTGATTGTCGTTCTCTCTGTGTTATCAAATGCTCAGAATTACGGCATCAACCTGCCAATTACCGGCTCCATGGACACAGCCTACGCTAACTCCACCCAGGACAACAACTTTTTGACCTCTACCTTGTGTCTGTATTACCCCTCTTCTGTCACAACAGAGATCACAGATCCTGATTGGACCAATACATTGTCTCAGCTCTTCATGACCAAAGGGTGGCCTACTAACAGCGTGTATTTCAAGTCATATGCGGACATCGCTAGCTTCAGCGTTGATCCACAGCTCTATTGCGACTACAACATCGTTCTGGTTCAGTACCAAAATTCCCTGGCCTTAGACGTGTCTGAACTCGCCGACCTGATCCTGAATGAATGGCTTTGTAATCCTATGGACATTACGCTGTACTATTACCAGCAGACCGGCGAGGCCAACAAATGGATCTCGATGGGGAGCAGCTGCACTGTGAAGGTGTGTCCCCTGAACACCCAGACTCTCGGTATCGGGTGCCAGACAACTGATACCGCAACTTTTGAGACAGTGGCAGATAGCGAGAAGCTGGCCCTAATTGATGTGGTGGATAATGTGAACCACAAGCTGGACGTAACATCGACAACCTGTACTATCCGAAACTGTAACAAACTTGGGCCACGAGAGAACGTCGCGATAATACAAGTGGGTGGCTCTGATGTTATCGATATAACAGCTGATCCCACAACGATTCCACAGACAGAGCGGATGATGCGGATCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTTTTTTACACCGTGGTCGATTACATCAACCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAGAGATCCCGATCCCTAGACTCCAGTAGCTTTTACTACAGAGTTTAA

【0288】

配列番号８８ G4BrB-9+7-1a-1b_G12K12_VP7_AA
MDYLIYRITFVIVVLSVLSNAQNYGINLPITGSMDTAYANSTQDNNFLTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFMTKGWPTNSVYFKSYADIASFSVDPQLYCDYNIVLVQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTGEANKWISMGSSCTVKVCPLNTQTLGIGCQTTDTATFETVADSEKLALIDVVDNVNHKLDVTSTTCTIRNCNKLGPRENVAIIQVGGSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLDSSSFYYRV^*

【0289】

配列番号８９ IF-VP7(G9AFJ11215)(opt).c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGC

【0290】

配列番号９０ IF-VP7(G9AFJ11215)(opt).r
ACTAAAGAAAATAGGCCTTCACACTCGATAATAGAAGGCGGCTGAGTTC

【0291】

配列番号９１ G9BE2001_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGCTTTTCATCGTTATTGTGAGCCCCTTTGTGAAGACACAGAACTACGGCATCAACCTCCCAATTACCGGTTCGATGGACGCAGCCTACGCAAATTCCTCACAGCAGGAGACCTTTCTCACATCAACCTTGTGCTTGTATTACCCCACTGAAGCGTCTACTCAGATCGGAGATACCGAGTGGAAAGATACTCTCAGTCAGCTGTTCCTCACCAAGGGATGGCCAACAGGCTCTGTCTACTTTAAAGAGTACACGGACATCGCATCTTTTAGCATCGATCCTCAGTTATACTGCGACTACAACGTGGTGTTGATGAAATACGACAGCACGCTGGAGCTCGACATGTCCGAGCTGGCTGATCTGATTCTCAACGAGTGGCTTTGCAACCCGATGGATATCACCCTGTATTACTATCAGCAGACCGACGAAGCCAATAAGTGGATTAGCATGGGGCAGTCCTGCACTATTAAGGTGTGCCCCCTCAATACACAAACCCTCGGCATCGGCTGCACTACCACCAACACCGCCACTTTTGAGGAGGTGGCTACACGAGAAAAGCTCGTGATCACTGACGTGGTGGACGGCGTGAACCACAAGCTGGACGTCACCACCAACACATGTACCATACGCAACTGCAAGAAGCTGGGACCCAGGGAAAACGTGGCTATCGTTCAGGTGGGCGGTTCCGAGGTTCTCGACATAACGGCTGACCCAACCACCGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGCGCGTGAACTGGAAAAAATGGTGGCAAGTGTTCTACACTGTGGTGGACTATATCAACCAGATTGTGCAGGTGATGTCCAAACGGTCGCGGTCTCTGAACTCAGCCGCCTTCTATTATCGAGTGTGA

【0292】

配列番号９２ G9BE2001_VP7_AA
MDFIIYRFLLFIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDAAYANSSQQETFLTSTLCLYYPTEASTQIGDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVATREKLVITDVVDGVNHKLDVTTNTCTIRNCKKLGPRENVAIVQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0293】

配列番号９３ G9BE2001+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGCTTTTCATCGTTATTGTGAGCCCCTTTGTGAAGACACAGAACTACGGCATCAACCTCCCAATTACCGGTTCGATGGACGCAGCCTACGCAAATTCCTCACAGCAGGAGACCTTTCTCACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAACGAGTGGCTTTGCAACCCGATGGATATCACCCTGTATTACTATCAGCAGACCGACGAAGCCAATAAGTGGATTAGCATGGGGCAGTCCTGCACTATTAAGGTGTGCCCCCTCAATACACAAACCCTCGGCATCGGCTGCACTACCACCAACACCGCCACTTTTGAGGAGGTGGCTACACGAGAAAAGCTCGTGATCACTGACGTGGTGGACGGCGTGAACCACAAGCTGGACGTCACCACCAACACATGTACCATACGCAACTGCAAGAAGCTGGGACCCAGGGAAAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGGTCGCGGTCTCTGAACTCAGCCGCCTTCTATTATCGAGTGTGA

【0294】

配列番号９４ G9BE2001+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_AA
MDFIIYRFLLFIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDAAYANSSQQETFLTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVATREKLVITDVVDGVNHKLDVTTNTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0295】

配列番号９５ G9BE2001+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGCTTTTCATCGTTATTGTGAGCCCCTTTGTGAAGACACAGAACTACGGCATCAACCTCCCAATTACCGGTTCGATGGACGCAGCCTACGCAAATTCCTCACAGCAGGAGACCTTTCTCACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAACGAGTGGCTTTGCAACCCGATGGATATCACCCTGTATTACTATCAGCAGACCGACGAAGCCAATAAGTGGATTAGCATGGGGCAGTCCTGCACTATTAAGGTGTGCCCCCTCAATACACAAACCCTCGGCATCGGCTGCACTACCACCAACACCGCCACTTTTGAGGAGGTGGCTACACGAGAAAAGCTCGTGATCACTGACGTGGTGGACGGCGTGAACCACAAGCTGGACGTCACCACCAACACATGTACCATACGCAACTGCAAGAAGCTGGGACCCAGGGAAAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAACGGTCGCGGTCTCTGAACTCAGCCGCCTTCTATTATCGAGTGTGA

【0296】

配列番号９６ G9BE2001+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_AA
MDFIIYRFLLFIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDAAYANSSQQETFLTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVATREKLVITDVVDGVNHKLDVTTNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0297】

配列番号９７ G9BE2001+7-1a-1b_G3HCR3_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGCTTTTCATCGTTATTGTGAGCCCCTTTGTGAAGACACAGAACTACGGCATCAACCTCCCAATTACCGGTTCGATGGACGCAGCCTACGCAAATTCCTCACAGCAGGAGACCTTTCTCACCAGCACACTCTGCCTCTACTACCCGACAGAGGCTGCCACTGAGATCAACGATAATTCTTGGAAAGACACGTTATCGCAGCTGTTTCTTACTAAGGGCTGGCCCACCGGTAGTGTCTACTTTAAAGAGTATACCGACATTGCCTCTTTTAGCGTGGATCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACATCGTGTTGATGAAGTATGACGCAGCGCTGCAGCTGGATATGAGTGAGCTGGCCGATTTGATCCTGAACGAGTGGCTTTGCAACCCGATGGATATCACCCTGTATTACTATCAGCAGACCGACGAAGCCAATAAGTGGATTAGCATGGGGCAGTCCTGCACTATTAAGGTGTGCCCCCTCAATACACAAACCCTCGGCATCGGCTGCACTACCACCAACACCGCCACTTTTGAGGAGGTGGCTACACGAGAAAAGCTCGTGATCACTGACGTGGTGGACGGCGTGAACCACAAGCTGGACGTCACCACCAACACATGTACCATACGCAACTGCAAGAAGCTGGGACCCAGGGAAAATGTTGCAGTCATCCAGGTAGGAGGCAGTGATATTCTCGACATCACGGCCGACCCGACGACCGCGCCTCAGACAGAAAGGATGATGCGGATCAATTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTACACAGTGGTGGACTACGTTAACCAGATTATTCAGGCTATGAGCAAGCGGTCGCGGTCTCTGAACTCAGCCGCCTTCTATTATCGAGTGTGA

【0298】

配列番号９８ G9BE2001+7-1a-1b_G3HCR3_VP7_AA
MDFIIYRFLLFIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDAAYANSSQQETFLTSTLCLYYPTEAATEINDNSWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSVDPQLYCDYNIVLMKYDAALQLDMSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVATREKLVITDVVDGVNHKLDVTTNTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSDILDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYVNQIIQAMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0299】

配列番号９９ G9BE2001+7-1a-1b_G4BrB-9_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGCTTTTCATCGTTATTGTGAGCCCCTTTGTGAAGACACAGAACTACGGCATCAACCTCCCAATTACCGGTTCGATGGACGCAGCCTACGCAAATTCCTCACAGCAGGAGACCTTTCTCTCTAGCACACTGTGCCTTTACTATCCTAGTGAGGCACCGACTCAAATCAGTGATACAGAATGGAAGGATACACTGTCTCAACTCTTTCTCACCAAGGGATGGCCCACTGGCTCAGTGTATTTTAATGAATACAGCAACGTTTTGGAGTTCAGTATTGACCCCAAGCTGTACTGCGACTACAATGTAGTGCTGATTCGATTCGCCTCGGGGGAGGAACTTGACGTATCCGAGTTGGCCGACCTCATCCTGAACGAGTGGCTTTGCAACCCGATGGATATCACCCTGTATTACTATCAGCAGACCGACGAAGCCAATAAGTGGATTAGCATGGGGCAGTCCTGCACTATTAAGGTGTGCCCCCTCAATACACAAACCCTCGGCATCGGCTGCACTACCACCAACACCGCCACTTTTGAGGAGGTGGCTACACGAGAAAAGCTCGTGATCACTGACGTGGTGGACGGCGTGAACCACAAGCTGGACGTCACCACCAACACATGTACCATACGCAACTGCAAGAAGCTGGGACCCAGGGAAAACGTTGCCATAATCCAGGTGGGAGGTAGCAATATCCTCGACATAACCGCCGATCCTACGACGTCCCCTCAGACTGAAAGGATGATGCGAGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAAGTTTTCTATACAGTGGTTGACTATATCAACCAAATAGTCAAGGTGATGAGTAAACGGTCGCGGTCTCTGAACTCAGCCGCCTTCTATTATCGAGTGTGA

【0300】

配列番号１００ G9BE2001+7-1a-1b_G4BrB-9_VP7_AA
MDFIIYRFLLFIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDAAYANSSQQETFLSSTLCLYYPSEAPTQISDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFNEYSNVLEFSIDPKLYCDYNVVLIRFASGEELDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVATREKLVITDVVDGVNHKLDVTTNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSNILDITADPTTSPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVKVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0301】

配列番号１０１ G9BE2001+7-1a-1b_G12K12_VP7_DNA_opt
ATGGATTTCATCATCTACAGGTTCCTGCTTTTCATCGTTATTGTGAGCCCCTTTGTGAAGACACAGAACTACGGCATCAACCTCCCAATTACCGGTTCGATGGACGCAGCCTACGCAAATTCCTCACAGCAGGAGACCTTTCTCACCTCTACCTTGTGTCTGTATTACCCCTCTTCTGTCACAACAGAGATCACAGATCCTGATTGGACCAATACATTGTCTCAGCTCTTCATGACCAAAGGGTGGCCTACTAACAGCGTGTATTTCAAGTCATATGCGGACATCGCTAGCTTCAGCGTTGATCCACAGCTCTATTGCGACTACAACATCGTTCTGGTTCAGTACCAAAATTCCCTGGCCTTAGACGTGTCTGAACTCGCCGACCTGATCCTGAACGAGTGGCTTTGCAACCCGATGGATATCACCCTGTATTACTATCAGCAGACCGACGAAGCCAATAAGTGGATTAGCATGGGGCAGTCCTGCACTATTAAGGTGTGCCCCCTCAATACACAAACCCTCGGCATCGGCTGCACTACCACCAACACCGCCACTTTTGAGGAGGTGGCTACACGAGAAAAGCTCGTGATCACTGACGTGGTGGACGGCGTGAACCACAAGCTGGACGTCACCACCAACACATGTACCATACGCAACTGCAAGAAGCTGGGACCCAGGGAAAACGTCGCGATAATACAAGTGGGTGGCTCTGATGTTATCGATATAACAGCTGATCCCACAACGATTCCACAGACAGAGCGGATGATGCGGATCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTTTTTTACACCGTGGTCGATTACATCAACCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAGCGGTCGCGGTCTCTGAACTCAGCCGCCTTCTATTATCGAGTGTGA

【0302】

配列番号１０２ G9BE2001+7-1a-1b_G12K12_VP7_AA
MDFIIYRFLLFIVIVSPFVKTQNYGINLPITGSMDAAYANSSQQETFLTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFMTKGWPTNSVYFKSYADIASFSVDPQLYCDYNIVLVQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDITLYYYQQTDEANKWISMGQSCTIKVCPLNTQTLGIGCTTTNTATFEEVATREKLVITDVVDGVNHKLDVTTNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRV^*

【0303】

配列番号１０３ IF-VP7(G12BAD89095).c
TCGTGCTTCGGCACCAGTACAATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCT

【0304】

配列番号１０４ IF-VP7(G12BAD89095).r
ACTAAAGAAAATAGGCCTCTAGATCCTGTAGTAGAATGCGGCAGAATTAA

【0305】

配列番号１０５ G12K12_VP7_DNA_opt
ATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCTCATCGTGGTTGTGATGTTGCCATTCATAAAAGCCCAGAACTACGGGATCAACCTGCCCATAACAGGATCTATGGACACAGCTTACACCAATTCAACTCAACAAGAGAATTTCATGACCTCTACCTTGTGTCTGTATTACCCCTCTTCTGTCACAACAGAGATCACAGATCCTGATTGGACCAATACATTGTCTCAGCTCTTCATGACCAAAGGGTGGCCTACTAACAGCGTGTATTTCAAGTCATATGCGGACATCGCTAGCTTCAGCGTTGATCCACAGCTCTATTGCGACTACAACATCGTTCTGGTTCAGTACCAAAATTCCCTGGCCTTAGACGTGTCTGAACTCGCCGACCTGATCCTGAACGAATGGCTATGTAACCCAATGGACGTGACCCTGTACTACTACCAGCAGACCGACGAGGCAAATAAGTGGATCAGCATGGGAGAATCTTGCACCGTGAAAGTTTGTCCACTGAATACACAGACTCTCGGGATCGGCTGCACTACTACCGATGTTACCACCTTTGAAGAAGTGGCAAACGCCGAGAAGCTTGTCATCACAGATGTAGTTGACGGCGTTAATCACAAAATTAATATTACTATGAACACCTGCACGATTAGGAATTGTAAGAAACTGGGGCCACGCGAAAACGTCGCGATAATACAAGTGGGTGGCTCTGATGTTATCGATATAACAGCTGATCCCACAACGATTCCACAGACAGAGCGGATGATGCGGATCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTTTTTTACACCGTGGTCGATTACATCAACCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAGCGTAGCCGGAGCCTTAATTCTGCCGCATTCTACTACAGGATCTAG

【0306】

配列番号１０６ G12K12_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVVMLPFIKAQNYGINLPITGSMDTAYTNSTQQENFMTSTLCLYYPSSVTTEITDPDWTNTLSQLFMTKGWPTNSVYFKSYADIASFSVDPQLYCDYNIVLVQYQNSLALDVSELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITMNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSDVIDITADPTTIPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRI^*

【0307】

配列番号１０７ G12K12+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_DNA_opt
ATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCTCATCGTGGTTGTGATGTTGCCATTCATAAAAGCCCAGAACTACGGGATCAACCTGCCCATAACAGGATCTATGGACACAGCTTACACCAATTCAACTCAACAAGAGAATTTCATGACAAGTACCCTGTGCCTGTATTATCCAACAGAAGCCTCTACCCAGATCAATGATGGGGAGTGGAAGGATAGTCTCTCACAGATGTTCCTAACCAAGGGCTGGCCCACCGGTTCCGTCTACTTCAAGGAATACTCTAGTATTGTCGACTTCTCAGTTGACCCCCAGCTTTATTGCGACTACAACCTGGTACTTATGAAATACGACCAGAACCTGGAGCTGGATATGTCCGAGCTGGCTGACCTGATCCTCAACGAATGGCTATGTAACCCAATGGACGTGACCCTGTACTACTACCAGCAGACCGACGAGGCAAATAAGTGGATCAGCATGGGAGAATCTTGCACCGTGAAAGTTTGTCCACTGAATACACAGACTCTCGGGATCGGCTGCACTACTACCGATGTTACCACCTTTGAAGAAGTGGCAAACGCCGAGAAGCTTGTCATCACAGATGTAGTTGACGGCGTTAATCACAAAATTAATATTACTATGAACACCTGCACGATTAGGAATTGTAAGAAACTGGGGCCACGCGAAAACGTCGCCGTGATCCAGGTGGGGGGGAGCAATGTGCTCGACATTACTGCCGACCCTACCACCAATCCACAGACGGAACGGATGATGAGAGTCAACTGGAAGAAATGGTGGCAGGTCTTTTATACCATTGTGGACTACATTAACCAGATTGTGCAAGTCATGAGTAAACGTAGCCGGAGCCTTAATTCTGCCGCATTCTACTACAGGATCTAG

【0308】

配列番号１０８ G12K12+7-1a-1b_G1Rtx_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVVMLPFIKAQNYGINLPITGSMDTAYTNSTQQENFMTSTLCLYYPTEASTQINDGEWKDSLSQMFLTKGWPTGSVYFKEYSSIVDFSVDPQLYCDYNLVLMKYDQNLELDMSELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITMNTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSNVLDITADPTTNPQTERMMRVNWKKWWQVFYTIVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRI^*

【0309】

配列番号１０９ G12K12+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_DNA_opt
ATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCTCATCGTGGTTGTGATGTTGCCATTCATAAAAGCCCAGAACTACGGGATCAACCTGCCCATAACAGGATCTATGGACACAGCTTACACCAATTCAACTCAACAAGAGAATTTCATGACAAGCACCCTTTGCCTTTATTACCCAGCAGAAGCAAAGAATGAAATTAGCGACGATGAGTGGGAGAATACACTTTCACAGCTGTTTCTCACCAAGGGGTGGCCAACCGGTAGCGTATACTTCAAAGACTATAACGACATTACGACCTTTAGTATGAACCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACGTCGTGTTAATGCGCTATGACAATACCAGCGAGCTCGACGCCTCTGAGCTGGCTGACCTGATCCTGAACGAATGGCTATGTAACCCAATGGACGTGACCCTGTACTACTACCAGCAGACCGACGAGGCAAATAAGTGGATCAGCATGGGAGAATCTTGCACCGTGAAAGTTTGTCCACTGAATACACAGACTCTCGGGATCGGCTGCACTACTACCGATGTTACCACCTTTGAAGAAGTGGCAAACGCCGAGAAGCTTGTCATCACAGATGTAGTTGACGGCGTTAATCACAAAATTAATATTACTATGAACACCTGCACGATTAGGAATTGTAAGAAACTGGGGCCACGCGAAAACGTGGCCATTATCCAGGTTGGCGGCCCTAACGCGCTCGACATCACTGCAGATCCAACAACCGTGCCTCAAATTCAGCGGATTATGAGAATCAATTGGAAAAAGTGGTGGCAGGTGTTTTATACGGTTGTGGACTATATTAATCAGATCGTACAGGTGATGAGCAAACGTAGCCGGAGCCTTAATTCTGCCGCATTCTACTACAGGATCTAG

【0310】

配列番号１１０ G12K12+7-1a-1b_G2Sc2-9_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVVMLPFIKAQNYGINLPITGSMDTAYTNSTQQENFMTSTLCLYYPAEAKNEISDDEWENTLSQLFLTKGWPTGSVYFKDYNDITTFSMNPQLYCDYNVVLMRYDNTSELDASELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITMNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGPNALDITADPTTVPQIQRIMRINWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRI^*

【0311】

配列番号１１１ G12K12+7-1a-1b_G3HCR3_VP7_DNA_opt
ATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCTCATCGTGGTTGTGATGTTGCCATTCATAAAAGCCCAGAACTACGGGATCAACCTGCCCATAACAGGATCTATGGACACAGCTTACACCAATTCAACTCAACAAGAGAATTTCATGACCAGCACACTCTGCCTCTACTACCCGACAGAGGCTGCCACTGAGATCAACGATAATTCTTGGAAAGACACGTTATCGCAGCTGTTTCTTACTAAGGGCTGGCCCACCGGTAGTGTCTACTTTAAAGAGTATACCGACATTGCCTCTTTTAGCGTGGATCCTCAGCTCTACTGTGACTATAACATCGTGTTGATGAAGTATGACGCAGCGCTGCAGCTGGATATGAGTGAGCTGGCCGATTTGATCCTGAACGAATGGCTATGTAACCCAATGGACGTGACCCTGTACTACTACCAGCAGACCGACGAGGCAAATAAGTGGATCAGCATGGGAGAATCTTGCACCGTGAAAGTTTGTCCACTGAATACACAGACTCTCGGGATCGGCTGCACTACTACCGATGTTACCACCTTTGAAGAAGTGGCAAACGCCGAGAAGCTTGTCATCACAGATGTAGTTGACGGCGTTAATCACAAAATTAATATTACTATGAACACCTGCACGATTAGGAATTGTAAGAAACTGGGGCCACGCGAAAATGTTGCAGTCATCCAGGTAGGAGGCAGTGATATTCTCGACATCACGGCCGACCCGACGACCGCGCCTCAGACAGAAAGGATGATGCGGATCAATTGGAAGAAGTGGTGGCAGGTGTTCTACACAGTGGTGGACTACGTTAACCAGATTATTCAGGCTATGAGCAAGCGTAGCCGGAGCCTTAATTCTGCCGCATTCTACTACAGGATCTAG

【0312】

配列番号１１２ G12K12+7-1a-1b_G3HCR3_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVVMLPFIKAQNYGINLPITGSMDTAYTNSTQQENFMTSTLCLYYPTEAATEINDNSWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSVDPQLYCDYNIVLMKYDAALQLDMSELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITMNTCTIRNCKKLGPRENVAVIQVGGSDILDITADPTTAPQTERMMRINWKKWWQVFYTVVDYVNQIIQAMSKRSRSLNSAAFYYRI^*

【0313】

配列番号１１３ G12K12+7-1a-1b_G4BrB-9_VP7_DNA_opt
ATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCTCATCGTGGTTGTGATGTTGCCATTCATAAAAGCCCAGAACTACGGGATCAACCTGCCCATAACAGGATCTATGGACACAGCTTACACCAATTCAACTCAACAAGAGAATTTCATGTCTAGCACACTGTGCCTTTACTATCCTAGTGAGGCACCGACTCAAATCAGTGATACAGAATGGAAGGATACACTGTCTCAACTCTTTCTCACCAAGGGATGGCCCACTGGCTCAGTGTATTTTAATGAATACAGCAACGTTTTGGAGTTCAGTATTGACCCCAAGCTGTACTGCGACTACAATGTAGTGCTGATTCGATTCGCCTCGGGGGAGGAACTTGACGTATCCGAGTTGGCCGACCTCATCCTGAACGAATGGCTATGTAACCCAATGGACGTGACCCTGTACTACTACCAGCAGACCGACGAGGCAAATAAGTGGATCAGCATGGGAGAATCTTGCACCGTGAAAGTTTGTCCACTGAATACACAGACTCTCGGGATCGGCTGCACTACTACCGATGTTACCACCTTTGAAGAAGTGGCAAACGCCGAGAAGCTTGTCATCACAGATGTAGTTGACGGCGTTAATCACAAAATTAATATTACTATGAACACCTGCACGATTAGGAATTGTAAGAAACTGGGGCCACGCGAAAACGTTGCCATAATCCAGGTGGGAGGTAGCAATATCCTCGACATAACCGCCGATCCTACGACGTCCCCTCAGACTGAAAGGATGATGCGAGTCAACTGGAAGAAGTGGTGGCAAGTTTTCTATACAGTGGTTGACTATATCAACCAAATAGTCAAGGTGATGAGTAAACGTAGCCGGAGCCTTAATTCTGCCGCATTCTACTACAGGATCTAG

【0314】

配列番号１１４ G12K12+7-1a-1b_G4BrB-9_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVVMLPFIKAQNYGINLPITGSMDTAYTNSTQQENFMSSTLCLYYPSEAPTQISDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFNEYSNVLEFSIDPKLYCDYNVVLIRFASGEELDVSELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITMNTCTIRNCKKLGPRENVAIIQVGGSNILDITADPTTSPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVKVMSKRSRSLNSAAFYYRI^*

【0315】

配列番号１１５ G12K12+7-1a-1b_G9BE2001_VP7_DNA_opt
ATGGACTTTATCATATATAGGTTCCTGCTCATCGTGGTTGTGATGTTGCCATTCATAAAAGCCCAGAACTACGGGATCAACCTGCCCATAACAGGATCTATGGACACAGCTTACACCAATTCAACTCAACAAGAGAATTTCATGACATCAACCTTGTGCTTGTATTACCCCACTGAAGCGTCTACTCAGATCGGAGATACCGAGTGGAAAGATACTCTCAGTCAGCTGTTCCTCACCAAGGGATGGCCAACAGGCTCTGTCTACTTTAAAGAGTACACGGACATCGCATCTTTTAGCATCGATCCTCAGTTATACTGCGACTACAACGTGGTGTTGATGAAATACGACAGCACGCTGGAGCTCGACATGTCCGAGCTGGCTGATCTGATTCTCAACGAATGGCTATGTAACCCAATGGACGTGACCCTGTACTACTACCAGCAGACCGACGAGGCAAATAAGTGGATCAGCATGGGAGAATCTTGCACCGTGAAAGTTTGTCCACTGAATACACAGACTCTCGGGATCGGCTGCACTACTACCGATGTTACCACCTTTGAAGAAGTGGCAAACGCCGAGAAGCTTGTCATCACAGATGTAGTTGACGGCGTTAATCACAAAATTAATATTACTATGAACACCTGCACGATTAGGAATTGTAAGAAACTGGGGCCACGCGAAAACGTGGCTATCGTTCAGGTGGGCGGTTCCGAGGTTCTCGACATAACGGCTGACCCAACCACCGCCCCACAGACCGAGAGGATGATGCGCGTGAACTGGAAAAAATGGTGGCAAGTGTTCTACACTGTGGTGGACTATATCAACCAGATTGTGCAGGTGATGTCCAAACGTAGCCGGAGCCTTAATTCTGCCGCATTCTACTACAGGATCTAG

【0316】

配列番号１１６ G12K12+7-1a-1b_G9BE2001_VP7_AA
MDFIIYRFLLIVVVMLPFIKAQNYGINLPITGSMDTAYTNSTQQENFMTSTLCLYYPTEASTQIGDTEWKDTLSQLFLTKGWPTGSVYFKEYTDIASFSIDPQLYCDYNVVLMKYDSTLELDMSELADLILNEWLCNPMDVTLYYYQQTDEANKWISMGESCTVKVCPLNTQTLGIGCTTTDVTTFEEVANAEKLVITDVVDGVNHKINITMNTCTIRNCKKLGPRENVAIVQVGGSEVLDITADPTTAPQTERMMRVNWKKWWQVFYTVVDYINQIVQVMSKRSRSLNSAAFYYRI^*

【0317】

全ての引用は、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図6G】

【図6H】

【図6I】

【図6J】

【図6K】

【図6L】

【図6M】

【図6N】

【図6O】

【図6P】

【図6Q】

【図6R】

【図6S】

【図6T】

【図6U】

【図6V】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図7J】

【図7K】

【図7L】

【図7M】

【図7N】

【図7O】

【図7P】

【図7Q】

【図7R】

【図7S】

【図7T】

【図7U】

【図7V】

【図7W】

【図7X】

【配列表】

2022521217000001.app

【国際調査報告】