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▶ ユーカー（ベンジン） バイオファーマ カンパニー，リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-06
(54)【発明の名称】抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220330BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20220330BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220330BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20220330BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20220330BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20220330BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20220330BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220330BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220330BHJP
A61K 51/10 20060101ALI20220330BHJP
A61K 49/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220330BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20220330BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220330BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20220330BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C07K16/46
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61K39/395 D
A61K51/10 200
A61K49/00
A61P35/00
A61P43/00 111
A61K47/68
A61K45/00
C12P21/08
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021549339
(86)(22)【出願日】2020-02-20
(85)【翻訳文提出日】2021-09-06
(86)【国際出願番号】 CN2020075983
(87)【国際公開番号】W WO2020169062
(87)【国際公開日】2020-08-27
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2019/075654
(32)【優先日】2019-02-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521106670
【氏名又は名称】ユーカー（ベンジン） バイオファーマ カンパニー，リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100094112
【弁理士】
【氏名又は名称】岡部 讓
(74)【代理人】
【識別番号】100128668
【弁理士】
【氏名又は名称】齋藤 正巳
(74)【代理人】
【識別番号】100096943
【氏名又は名称】臼井 伸一
(74)【代理人】
【識別番号】100136799
【弁理士】
【氏名又は名称】本田 亜希
(72)【発明者】
【氏名】ヤン，イ
(72)【発明者】
【氏名】シャ，ジンシュ
(72)【発明者】
【氏名】ドン，チュンヤン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン，ファン
(72)【発明者】
【氏名】ル，チェンユアン
(72)【発明者】
【氏名】シェン，ユエレイ
(72)【発明者】
【氏名】ニ，ジアン
(72)【発明者】
【氏名】グオ，ヤナン
(72)【発明者】
【氏名】チェン，ユンユン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG26
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE10
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA83X
4B065AA87X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AB04
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA44
4B065CA46
4C076AA95
4C076CC27
4C076EE41
4C076EE59
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC75
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC02
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE03
4C085HH03
4C085HH11
4C085HH13
4C085KA03
4C085KA27
4C085KA29
4C085LL18
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045GA21
(57)【要約】
本開示は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその抗原結合性フラグメント並びにその使用を提供する。本開示は、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントを含む二重特異性抗体などの多重特異性抗体、コンジュゲート及び組成物、及び癌などの疾患の治療における使用を更に提供する。
【選択図】図１Ａ
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）を有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項2】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３のＣＤＲ Ｈを有する請求項１に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項3】
前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｌ）を更に有する請求項１又は２に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項4】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３のＣＤＲ Ｌを有する請求項３に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項5】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３のＣＤＲ Ｈ及びＣＤＲ Ｌを有する請求項４に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項6】
前記抗体は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２から選択されるアミノ酸配列、
ｂ）ａ）のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｃ）ａ）のアミノ酸配列において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項7】
前記抗体は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３から選択されるアミノ酸配列、
ｂ）ａ）のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｃ）ａ）のアミノ酸配列において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に有する請求項６に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項8】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項9】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項10】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項11】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項12】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項13】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項14】
前記抗体は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する請求項７に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項15】
前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体である請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項16】
前記アミノ酸修飾は、可変ドメインのフレームワーク領域において行われる請求項６～１４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項17】
前記アミノ酸修飾は、ヒト化修飾である請求項６～１４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項18】
前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬと、を有する請求項８に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項19】
前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬと、を有する請求項９に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項20】
前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬと、を有する請求項１０に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項21】
前記抗体は、前記抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を低下させるＦｃ領域の修飾を含む請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項22】
前記修飾は、Ｎ２９７Ａ置換を含む、請求項２１に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項23】
前記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤアイソタイプから選択される請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項24】
前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブクラスから選択される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項25】
前記抗原結合性フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、一本鎖フラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、及び線状抗体から選択される請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項26】
ＰＤ－Ｌ１に結合する第１の抗原結合領域と、別の抗原に結合する第２の抗原結合領域とを含み、前記第１の抗原結合領域は、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３、及び／又はＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３、又は請求項６～２０のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨ及び／又はＶＬを含む二重特異性抗体。
【請求項27】
前記別の抗原は、腫瘍関連抗原及び免疫チェックポイント分子から選択される請求項２６に記載の二重特異性抗体。
【請求項28】
請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列。
【請求項29】
請求項６～２０のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨ又はＶＬをコードするヌクレオチド配列。
【請求項30】
請求項２８又は２９に記載のヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項31】
請求項２８又は２９に記載のヌクレオチド配列、又は請求項３０に記載のベクターを含む組換え宿主細胞。
【請求項32】
請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントを産生するハイブリドーマ細胞。
【請求項33】
請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、又は請求項２６又は２７に記載の二重特異性抗体、及びそれとコンジュゲートする部分を含むコンジュゲートであって、前記部分は、細胞毒素、放射性同位体、蛍光標識、発光物質、発色物質又は酵素を含むコンジュゲート。
【請求項34】
請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、請求項２６又は２７に記載の二重特異性抗体又は請求項３３に記載のコンジュゲート、及び任意選択的な１つ又は複数の薬学的に許容されるベクター、賦形剤及び／又は希釈剤を含む組成物。
【請求項35】
被験者に請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、請求項２６又は２７に記載の二重特異性抗体、請求項３３に記載のコンジュゲート、又は請求項３４に記載の組成物を投与するステップを含む被験者における癌を治療する方法。
【請求項36】
前記癌は、黒色腫、リンパ腫、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、結腸癌及び皮膚癌から選択される請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記被験者に１つ又は複数の別の治療剤を投与するステップを更に含む請求項３５又は３６に記載の方法。
【請求項38】
前記治療剤は、抗体、化学療法剤及び小分子化合物から選択される請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記治療剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ１０３から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項40】
請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、請求項２６又は２７に記載の二重特異性抗体、請求項３３に記載のコンジュゲート、又は請求項３４に記載の組成物の被験者における癌の治療における使用。
【請求項41】
請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、請求項２６又は２７に記載の二重特異性抗体、請求項３３に記載のコンジュゲート、又は請求項３４に記載の組成物の被験者における癌を治療するための薬物の調製における使用。
【請求項42】
前記癌は、黒色腫、リンパ腫、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、結腸癌及び皮膚癌から選択される請求項４０又は４１に記載の使用。
【請求項43】
前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、コンジュゲート又は組成物は、１つ又は複数の別の治療剤と併用される請求項４０～４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項44】
前記治療剤は、抗体、化学療法剤及び小分子化合物から選択される請求項４３に記載の使用。
【請求項45】
前記治療剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ１０３から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする請求項４３又は４４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生物医学分野に関する。より具体的には、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその使用、特に、癌の治療における使用に関する。
【背景技術】
【0002】
癌は、現在、ヒトの死亡率が最も高い疾患の１つである。世界保健機関の統計によれば、２０１２年に全世界の悪性腫瘍発生症例数及び死亡症例数が１４００万及び８２０万に達し、中国で新たに診断された癌症例が３０７万であり、死亡者数が２２０万である。近年、免疫チェックポイントは、種々の癌の治療に用いられる有効な潜在的標的であると考えられており、免疫チェックポイントに対する抗体薬物の研究開発は、益々注目されるようになってきた。
【0003】
ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１の正式名称は、それぞれプログラム細胞死受容体１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－１）及びプログラム細胞死受容体－リガンド１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）であり、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する共刺激分子の重要なメンバーとして、主に自己免疫、腫瘍免疫などの生体免疫調節過程に関与する。ＰＤ－１は、大きさが４０ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質であり、主に活性化Ｔ細胞において発現される阻害性受容体である。そのリガンドＰＤ－Ｌ１に結合した後、Ｔ細胞の活性化及び増殖を顕著に阻害することができる。現在、既知のＰＤ－１のリガンドが２つあり、それぞれＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１とも呼ばれる）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣとも呼ばれる）である。ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子は、染色体９ｐ２４に位置し、２９０個のアミノ酸をコードするＩ型膜貫通タンパク質であり、細胞外領域のＩｇＶ、ＩｇＣドメイン、疎水性膜貫通ドメイン及び３０個のアミノ酸の細胞内ドメインで構成される。ＰＤ－Ｌ１は、様々な免疫細胞、上皮細胞及び腫瘍細胞の表面において広く発現されている。ＰＤ－Ｌ２は、主に免疫細胞表面において発現される。現在の研究によれば、腫瘍細胞は、ＰＤ－Ｌ１分子を高発現し、Ｔ細胞表面の受容体ＰＤ－１に結合し、負の調節シグナルを伝達することにより、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化及び増殖を阻害して、生体の免疫監視及び殺傷を回避することを見出した。
【0004】
近年、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１タンパク質を標的とするモノクローナル抗体薬物を使用し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の結合を遮断し、更に生体内Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進することにより、腫瘍細胞を殺傷する目的を達成することは、既に黒色腫、リンパ腫、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、結腸癌などの種々の腫瘍に適用されており、且つ、一定の治療効果を収めた。腫瘍免疫療法は、既に世界中の研究ホットスポット及び新薬研究開発の方向の１つになっている。
【0005】
現在、３つのＰＤ－Ｌ１抗体薬物は、ＦＤＡにより認可され、それぞれロシュ社より開発したＰＤ－Ｌ１抗体Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ（膀胱癌、局所進行性又は転移性尿路上皮癌、転移性非小細胞肺癌に用いられる）、メルク社／ファイザー社より共同開発した抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体Ａｖｅｌｕｍａｂ（稀な皮膚癌、メルケル細胞癌などに用いられる）及びアストラゼネカ社より開発したＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（進行性又は転移性尿路上皮癌に用いられる）である。単剤に加えて、ＰＤ－Ｌ１抗体の併用も試みており、例えば、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂは、現在、ＯＸ４０、ＭＥＫ、ＣＴＬＡ４などを含む１３個の異なる機序の薬物と併用されている。既に出回ったＰＤ－Ｌ１を標的とするモノクローナル抗体薬物は、癌治療においてそれぞれの利点と欠点を有するが、高価であるため、広範な使用及び普及がまだできない。従って、適用範囲がより広く、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路をより効率的に遮断できる抗体薬物を研究することは、種々の腫瘍及び免疫系関連疾患の治療に可能性を提供し、非常に高い応用可能性及び市場価値を有する。
【発明の概要】
【0006】
本明細書において特に定義されていない限り、本発明に合わせて使用される科学と技術用語及びその略語は、当業者に一般に理解される意味を有するものとする。以下、本明細書で使用される用語及び略語の一部を列挙する。
抗体：ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ａｂ
免疫グロブリン：ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ
重鎖：ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ，ＨＣ
軽鎖：ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ，ＬＣ
重鎖可変ドメイン：Ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ，ＶＨ
重鎖定常ドメイン：Ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎ，ＣＨ
軽鎖可変ドメイン：Ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ，ＶＬ
軽鎖定常ドメイン：Ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎ，ＣＬ
相補性決定領域：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ，ＣＤＲ，抗体の抗原相補性結合領域を指す
Ｆａｂフラグメント：Ａｎｔｉｇｅｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ，Ｆａｂ
Ｆｃフラグメント：Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ，Ｆｃ
モノクローナル抗体：ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｍＡｂｓ
抗体依存性細胞傷害性：ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＡＤＣＣ
補体依存性細胞傷害性：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＣＤＣ
二重特異性抗体：Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＢｓＡｂ
抗体：ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ａｂ
免疫グロブリン：ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ
重鎖：ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ，ＨＣ
軽鎖：ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ，ＬＣ
重鎖可変ドメイン：Ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ，ＶＨ
重鎖定常ドメイン：Ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎ，ＣＨ
軽鎖可変ドメイン：Ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ，ＶＬ
軽鎖定常ドメイン：Ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎ，ＣＬ
相補性決定領域：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ，ＣＤＲ，抗体の抗原相補性結合領域を指す
Ｆａｂフラグメント：Ａｎｔｉｇｅｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ，Ｆａｂ
Ｆｃフラグメント：Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ，Ｆｃ
モノクローナル抗体：ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｍＡｂｓ
抗体依存性細胞傷害性：ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＡＤＣＣ
補体依存性細胞傷害性：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＣＤＣ
二重特異性抗体：Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＢｓＡｂ
【0007】
本明細書において用いられる「抗体」という用語は、少なくとも１つの抗原認識部位を含み、且つ抗原に特異的に結合できる免疫グロブリン分子を指す。本発明において言及される「抗体」という用語は、その最も広い意味で理解され、且つ、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、少なくとも２つの異なる抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含む。抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体及び他の供給源に由来する抗体を更に含む。本発明の抗体は、任意の動物に由来してもよく、ヒト、非ヒト霊長類動物、マウス又はラットなどの免疫グロブリン分子を含むが、これらに限定されない。抗体は、例えば、非天然アミノ酸、Ｆｃエフェクター機能突然変異及びグリコシル化部位突然変異などのさらなる改変を含んでもよい。抗体はまた、所望の生物活性を示す限り、翻訳後修飾抗体、抗体の抗原決定基を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位に対する任意の他の修飾を含む免疫グロブリン分子を含む。
【0008】
抗体の重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、免疫グロブリンをＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスに分けることができ、更に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、ＩＧＡ２などの異なるサブクラス（アイソタイプ）に分けてもよい。軽鎖アミノ酸配列に基づき、軽鎖をλ鎖又はκ鎖に分類することができる。本発明の抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ）又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）であり得る。
【0009】
「抗原結合性フラグメント」という用語は、ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを有するＦａｂフラグメント、ＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ又は複数のシステイン残基を有するＦａｂフラグメントであるＦａｂ’フラグメント、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント、ＶＨ、ＣＨ１ドメイン、及びＣＨ１ドメインのＣ末端における１つ又は複数のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインを有するＦｖフラグメント、ＶＨドメイン又はＶＬドメインからなるｄＡｂフラグメント、単離されたＣＤＲ領域、ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ’フラグメントを含む２価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、一本鎖抗体分子（例えば、一本鎖Ｆｖ、ｓｃＦｖ）、同一のポリペプチド鎖における軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を有する「ダイアボディ」、相補的軽鎖ポリペプチドと共に１対の抗原結合領域を形成する１対の直列型Ｆｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む「線状抗体」、及び抗原結合活性を保持する前記物質の任意の修飾形態を含むが、これらに限定されない。
【0010】
本明細書において用いられる「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。各可変ドメインについて、重鎖及び軽鎖の各可変ドメインには、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれる３つのＣＤＲがある。これらのＣＤＲの正確な境界の定義は、異なるシステムによって異なる。Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）及び（１９９１））より記載したシステムは、抗体可変ドメインに適用できる明確な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを限定する残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれてよい。各相補性決定領域は、Ｋａｂａｔより定義した「相補性決定領域」に由来するアミノ酸残基を含むことができる。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９６：９０１－９１７（１９８７）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３（－１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内のいくつかのサブ部分がアミノ酸配列レベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらのサブ部分は、それぞれＬ１、Ｌ２及びＬ３、又はＨ１、Ｈ２及びＨ３と呼ばれ、「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ軽鎖及び重鎖領域を表す。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれてよく、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。更に別のＣＤＲ境界の定義は、上記システムの１つに厳しく従わなくてもよいが、依然としてＫａｂａｔ ＣＤＲと重複し、本明細書において用いられる方法は、これらのシステムのいずれかにより定義されたＣＤＲを利用してもよいが、好ましい実施形態においてＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用する。本明細書において用いられる「抗体可変ドメイン」とは、抗体分子の軽鎖及び重鎖における、相補性決定領域（ＣＤＲ、即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及びフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む部分を指す。ＶＨは、重鎖の可変ドメインを指す。ＶＬは、軽鎖の可変ドメインを指す。
【0011】
本明細書において用いられる「キメラ抗体」という用語は、可変ドメインが非ヒト種（例えば、齧歯動物に由来する）に由来し、且つ定常ドメインが異なる種（例えば、ヒト）に由来する抗体を指す。キメラ抗体は、抗体工学によって生成することができる。「抗体工学」は、通常、抗体の異なる種類の修飾に用いられる用語であり、且つ、抗体工学に用いられる方法は、当業者に周知のものである。従って、キメラ抗体は、遺伝子組換え抗体又は工学的組換え抗体である。キメラ抗体を生成する方法は、当業者に周知のものであり、それにより、キメラ抗体の生成は、本明細書に記載の方法以外の他の方法によって行われてもよい。非ヒト抗体（例えば、齧歯動物抗体）の予想される抗体免疫原性を低下させるように、ヒトの治療に適用されるキメラモノクローナル抗体を開発する。それらは、通常、目的の抗原に対して特異的である非ヒト（例えば、マウス又はウサギ）可変ドメインと、ヒト定常抗体重鎖及び軽鎖ドメインとを含むことができる。キメラ抗体の文脈において用いられる「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の両方のＣＤＲ及びフレームワーク領域を含む領域を指し、以下の通りである。
【0012】
本明細書において用いられる「ヒト化抗体」という用語は、ヒト可変ドメインと高レベルの配列相同性を有するように、修飾されたヒト抗体定常ドメイン及び非ヒト可変ドメインを含む、遺伝子工学により改変された非ヒト抗体を指す。これは、６つの非ヒト抗体ＣＤＲ（共に抗原結合部位を形成する）を相同ヒト受容体のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植することによって実現することができる。親抗体の結合親和性及び特異性を完全に再構成するために、フレームワーク残基を親抗体（即ち、非ヒト抗体）からヒトフレームワーク領域（復帰突然変異）に置き換える必要がある場合がある。従って、ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列、主に非ヒトアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸に対する復帰突然変異を任意選択的に含むヒトフレームワーク領域、及び完全ヒト定常ドメインを含むことができる。任意選択的に、親和性及び生化学的特性などの好ましい特徴を有するヒト化抗体を得るように、別のアミノ酸修飾（必ずしも復帰突然変異であるとは限らない）を適用してもよく、及び／又は定常ドメインに別のアミノ酸突然変異を導入してもよい。
【0013】
本明細書において用いられる「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指し、即ち、集団を構成する各抗体は、少量で存在する可能性のある天然に存在する突然変異を除くと、同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原に対するものである。なお、通常、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは異なり、モノクローナル製剤における各抗体は、抗原上の同じ単一の決定基に対するものである。本明細書において用いられる「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されず、且つ、「モノクローナル抗体」という修飾語は、抗体を産生するには何らかの特定の方法を必要とすると解釈すべきではない。
【0014】
本発明において、本発明者らは、新しい抗ＰＤ－Ｌ１の抗体を生成し、且つ、それにヒト化操作を行った。上記抗体及びそのヒト化形態は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の結合を効果的に遮断することができ、且つ、癌にかかった動物モデルにおいて顕著な治療効果を示した。
【0015】
従って、一態様において、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントに関し、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ１、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）を有する。
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３のＣＤＲ Ｈを有する。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ１、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）を有する。
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３のＣＤＲ Ｈを有する。
【0016】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｌ）を更に有する。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｌ）を更に有する。
【0017】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３のＣＤＲ Ｌを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３のＣＤＲ Ｌを有する。
【0018】
好ましい実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３のＣＤＲ Ｈ及びＣＤＲ Ｌを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３、又は、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４を含むＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３、及び、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７を含むＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２及びＣＤＲ Ｌ３のＣＤＲ Ｈ及びＣＤＲ Ｌを有する。
【0019】
別の態様において、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントに関し、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２から選択されるアミノ酸配列、
ｂ）ａ）のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｃ）ａ）のアミノ酸配列において１つ又は複数のアミノ酸修飾、例えば、１～５個、５～１０個、１０～２０個、２０～３０個又は３０～４０個のアミノ酸修飾、例えば、１～４０個、１～３０個、１～２０個、１～１０個又は１～５個のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する。
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２から選択されるアミノ酸配列、
ｂ）ａ）のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｃ）ａ）のアミノ酸配列において１つ又は複数のアミノ酸修飾、例えば、１～５個、５～１０個、１０～２０個、２０～３０個又は３０～４０個のアミノ酸修飾、例えば、１～４０個、１～３０個、１～２０個、１～１０個又は１～５個のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する。
【0020】
本明細書に用いられる「アミノ酸修飾」とは、ポリペプチド鎖における１つ又は複数のアミノ酸の付加、置換、挿入及び／又は欠失を指す。
【0021】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３から選択されるアミノ酸配列、
ｂ）ａ）のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｃ）ａ）のアミノ酸配列において１つ又は複数のアミノ酸修飾、例えば、１～５個、５～１０個又は１０～２０個のアミノ酸修飾、例えば１～２０個、１～１０個又は１～５個のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に有する。
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３から選択されるアミノ酸配列、
ｂ）ａ）のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｃ）ａ）のアミノ酸配列において１つ又は複数のアミノ酸修飾、例えば、１～５個、５～１０個又は１０～２０個のアミノ酸修飾、例えば１～２０個、１～１０個又は１～５個のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を更に有する。
【0022】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0023】
別のいくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0024】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0025】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0026】
別のいくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0027】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0028】
いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ、又は、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３において１つ又は複数のアミノ酸修飾を行ったアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを有する。
【0029】
上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントの任意の実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体であってよい。
【0030】
上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントの任意の実施形態において、アミノ酸修飾に関する時、前記アミノ酸修飾は、可変ドメインのフレームワーク領域において行われてよい。いくつかの実施形態において、前記アミノ酸修飾は、ヒト化修飾である。
【0031】
一態様において、本発明は、ヒト化操作された本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体に関する。
【0032】
いくつかの実施形態において、前記ヒト化操作された抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬと、を有する。
【0033】
別のいくつかの実施形態において、前記ヒト化操作された抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬと、を有する。
【0034】
いくつかの実施形態において、前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬと、を有する。
【0035】
上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は他の抗原結合性フラグメントのいくつかの実施形態において、前記抗体は、前記抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を低下させるＦｃ領域の修飾を更に含んでよい。いくつかの実施形態において、前記修飾は、Ｎ２９７Ａ置換を含む。
【0036】
前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントのいかなる実施形態においても、前記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ及びＩｇＤアイソタイプから選択されてよい。いくつかの実施形態において、前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブクラスから選択される。
【0037】
上記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合性フラグメントのいかなる実施形態においても、前記抗原結合性フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、一本鎖フラグメント、ダイアボディ、及び線状抗体から選択されてよい。
【0038】
別の態様において、本発明は、二重特異性抗体に関する。本明細書において用いられる「二重特異性抗体」とは、２つの異なる抗原結合部位の構成要素で構成され、２つの異なる抗原結合部位に同時に結合できる人工的に設計された抗体を指す。
【0039】
いくつかの実施形態において、前記二重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第１の抗原結合領域と、別の抗原に結合する第２の抗原結合領域とを含み、前記第一抗原結合領域は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３、及び／又はＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨ及び／又はＶＬを含む。いくつかの実施形態において、前記別の抗原は、腫瘍関連抗原及び免疫チェックポイント分子から選択されてよい。
【0040】
本分野において、特定の癌に関連する多くの腫瘍関連抗原が既に同定された。本明細書において用いられる「腫瘍関連抗原」という用語は、癌細胞によって示差的に発現されるため、癌細胞を標的とするために利用できる抗原を指す。腫瘍関連抗原は、明らかな腫瘍特異的免疫応答を潜在的に刺激できる抗原である。これらの抗原の一部は、正常細胞によってコードされるが、必ずしも正常細胞によって発現されるとは限らない。これらの抗原は、正常細胞において通常沈黙である（即ち、発現しない）抗原、いくつかの特定の分化段階のみにおいて発現される抗原、及び胚と胎児抗原などの時間的に発現される抗原として特徴付けることができる。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化されたｒａｓ癌遺伝子）などの突然変異細胞遺伝子、阻害遺伝子（例えば、突然変異型ｐ５３）及び内部欠失又は染色体転座により生じた融合タンパク質によってコードされる。他の癌抗原は、ＲＮＡ及びＤＮＡ腫瘍ウイルスに担持される遺伝子などのウイルス遺伝子によってコードされてもよい。多くの他の腫瘍関連抗原及びそれに対する抗体は、既知であり、及び／又は市販されており、且つ、当業者によって生産されてもよい。
【0041】
免疫チェックポイントタンパク質受容体及びそのリガンド（本明細書において一括して免疫チェックポイント分子と称する）は、Ｔ細胞媒介の細胞傷害性の阻害を媒介し、且つ、通常、腫瘍によって、又は腫瘍微小環境でのアネルギーＴ細胞において発現され、且つ、腫瘍が免疫攻撃を回避することを可能にする。免疫阻害チェックポイントタンパク質受容体及びそのリガンドの活性の阻害剤は、腫瘍の細胞傷害性Ｔ細胞の攻撃を可能にするために、免疫阻害性腫瘍環境を克服することができる。免疫チェックポイントタンパク質の実例として、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ１０３を含むが、これらに限定されない。このようなタンパク質の活性の調節（阻害を含む）は、免疫チェックポイントの調節因子によって達成することができ、例えば、チェックポイントタンパク質を標的とする抗体、アプタマー、小分子及びチェックポイント受容体タンパク質の可溶性形態を含んでよく、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ１０３に対して特異性を有する抗体は、既知であり、及び／又は市販されており、且つ、当業者によって生産されてもよい。
【0042】
一態様において、本発明は、ヌクレオチド配列に関する。いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のポリペプチド鎖をコードする。別のいくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨ又はＶＬをコードする。
【0043】
別の態様において、本発明は、本発明のヌクレオチド配列を含むベクターに関する。
【0044】
本明細書において用いられる「ベクター」とは、ポリヌクレオチドをその中に挿入可能な核酸送達媒体を指す。ベクターによって、挿入されたポリヌクレオチドにコードされるタンパク質の発現が可能となる場合、当該ベクターは、発現ベクターと呼ばれる。ベクターは、形質転換、形質導入又は形質移入などの方法によって宿主細胞に導入され、続いて、それが担持している遺伝物質要素を宿主細胞で発現させることができる。ベクターは、当業者に周知のものであり、（１）プラスミド、（２）ファージミド、（３）コスミド、（４）酵母人工染色体、細菌人工染色体又はＰ１由来人工染色体のような人工染色体、（５）λファージ又はＭ１３ファージのようなファージ、及び（６）レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルスのような動物ウイルスを含むが、これらに限定されない。ベクターは、発現を制御する種々の要素を含んでよく、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択要素及びレポーター遺伝子を含むが、これらに限定されない。また、ベクターは、複製開始点を更に含んでもよい。
【0045】
一態様において、本発明は、本発明のヌクレオチド配列又はベクターを含む組換え宿主細胞に関する。
【0046】
別の態様において、本発明は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントを産生するハイブリドーマ細胞に関する。
【0047】
一態様において、本発明は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、又は二重特異性抗体、及びそれとコンジュゲートした部分を含むコンジュゲートに関する。いくつかの実施形態において、前記部分は、細胞毒素、放射性同位体、蛍光標識、発光物質、発色物質又は酵素から選択されてよい。
【0048】
別の態様において、本発明は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、二重特異性抗体、又はコンジュゲート、及び任意選択的な１つ又は複数の薬学的に許容されるベクター、賦形剤及び／又は希釈剤を含む組成物に関する。
【0049】
「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内において、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応、又は他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触して好適に使用され、妥当なリスク／ベネフィット比に見合った化合物、材料、組成物及び剤形を指す。本明細書において用いられる「薬学的に許容されるベクター、賦形剤及び／又は希釈剤」とは、液体又は固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶剤、媒体、封入材料、製造助剤又は溶媒封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物又はビヒクルを指し、それらは本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメントの安定性、溶解度又は活性の維持に関する。
【0050】
一態様において、本発明は、被験者に本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、二重特異性抗体、コンジュゲート、又は組成物を投与するステップを含む被験者の疾患を治療する方法に関する。
【0051】
別の態様において、本発明は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、二重特異性抗体、コンジュゲート、又は組成物の被験者の疾患の治療における使用に関する。
【0052】
更に別の態様において、本発明は、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合性フラグメント、二重特異性抗体、コンジュゲート、又は組成物の被験者の疾患を治療するための薬物の調製における使用に関する。
【0053】
上記の方法及び使用のいくつかの実施形態において、前記疾患は、癌であり得る。癌の具体的な実例として、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、腹膜癌、子宮頸癌、胆管癌、絨毛癌、結腸及び直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、神経膠芽腫、肝臓癌、腎臓癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺扁平上皮細胞癌）、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、黄紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮又は子宮内膜癌、泌尿器系癌、Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病などを含むが、これらに限定されない。
【0054】
いくつかの実施形態において、前記癌は、黒色腫、リンパ腫、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、結腸癌及び皮膚癌から選択される。
【0055】
上記の方法及び使用のいくつかの実施形態において、前記被験者に投与する１つ又は複数の別の治療剤を更に含む。いくつかの実施形態において、前記治療剤は、抗体、化学療法剤及び小分子化合物から選択される。いくつかの実施形態において、前記治療剤は、腫瘍関連抗原を標的とする。別のいくつかの実施形態において、前記治療剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ１０３から選択可能な免疫チェックポイント分子を標的とする。
【0056】
本明細書において用いられる「化学療法剤」という用語は、異常細胞増殖を特徴とする疾患を治療する際に治療有用性を有するいかなる化学試薬を指す。本明細書において用いられる化学療法剤は、化学剤及び生物剤を含む。これらの試薬は、癌細胞が持続的な生存を実現するために依存する細胞活性を阻害するように機能する。化学療法剤のカテゴリーは、アルキル化／アルカロイド剤、代謝拮抗剤、ホルモン又はホルモン類似体、及び種々の抗新生物薬を含む。
【図面の簡単な説明】
【0057】
【図1C】本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体がビオチン－ｈＰＤ１リガンドとＰＤ－Ｌ１の間の結合を遮断する作用を示すフローサイトメトリーの結果である。図１Ｃは、キメラ抗体２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１の結果を示す。Ａｔｚｅｏｌｉｚｕｍａｂは陽性対照として用いられる。
【図2A】本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と異なる種に由来するＰＤ－Ｌ１タンパク質及びキメラＰＤ－Ｌ１タンパク質との間の交差反応を示すフローサイトメトリーグラフである。図２Ａは、抗体０７－６Ａ１１、１７－７Ｅ４及び０８－３Ｆ２の結果を示す。ＮＣは陰性対照である。
【図2B】本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と異なる種に由来するＰＤ－Ｌ１タンパク質及びキメラＰＤ－Ｌ１タンパク質との間の交差反応を示すフローサイトメトリーグラフである。図２Ｂは、キメラ抗体２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１の結果を示す。ＮＣは陰性対照である。Ａｔｚｅｏｌｉｚｕｍａｂは陽性対照として用いられる。
【図3A】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図３Ａは、実験動物の体重の絶対値の経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。Ａｔｚｅｏｌｉｚｕｍａｂは陽性対照として用いられる。
【図3B】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図３Ｂは、実験動物の体重パーセントの経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。Ａｔｚｅｏｌｉｚｕｍａｂは陽性対照として用いられる。
【図4】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。Ａｔｚｅｏｌｉｚｕｍａｂは陽性対照として用いられる。
【図5A】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図５Ａは、実験動物の体重の絶対値の経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図5B】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図５Ｂは、実験動物の体重パーセントの経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図6】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図7A】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図７Ａは、実験動物の体重の絶対値の経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図7B】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図７Ｂは、実験動物の体重パーセントの経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図8】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図9A】異なる投与量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図９Ａは、実験動物の体重の絶対値の経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図9B】異なる投与量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図９Ｂは、実験動物の体重パーセントの経時的変化を示す。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図10】異なる投与量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水（ＰＳ）は陰性対照として用いられる。
【図11A】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＯＸ４０抗体又はその組み合わせを使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図１１Ａは、実験動物の体重の絶対値の経時的変化を示す。生理食塩水は陰性対照として用いられる。
【図11B】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＯＸ４０抗体又はその組み合わせを使用して処理した後の実験動物の体重の経時的変化を示す折れ線グラフである。図１１Ｂは、実験動物の体重パーセントの経時的変化を示す。生理食塩水は陰性対照として用いられる。
【図12A】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＯＸ４０抗体又はその組み合わせを使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水は陰性対照として用いられる。
【図12B】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＯＸ４０抗体又はその組み合わせを使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水は陰性対照として用いられる。
【図12C】示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＯＸ４０抗体又はその組み合わせを使用して処理した後の実験動物体内の腫瘍体積の経時的変化を示す折れ線グラフである。生理食塩水は陰性対照として用いられる。
【発明を実施するための形態】
【0058】
以下、実施例を参照しながら本発明の内容を更に説明する。以下の実施例は、単に説明的なものであり、本発明の範囲を限定するものであると考えられるべきではない。
【0059】
本明細書において用いられる抗体の名称には、抗体源、可変ドメイン及び定常ドメインの情報を含む。例えば、キメラ抗体０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１は、マウス抗体０８－３Ｆ２（「３Ｆ２」）のＶＨ及びＶＬドメインとヒトＩｇＧ１定常ドメインからなる抗体であり、同様に、ヒト化抗体３Ｆ２－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１は、ヒト化されたマウス抗体０８－３Ｆ２（「３Ｆ２」）の重鎖可変ドメインＨ１及び軽鎖可変ドメインＫ２とヒトＩｇＧ１定常ドメインからなる抗体である。一部の抗体のＦｃ末端には、グリコシル化部位を突然変異させることでＦｃエフェクター機能を消去するために、Ｎ２９７Ａ突然変異（例えば、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ）を更に含む。
【0060】
実施例１．抗体の生成
組換えヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質又は組換えヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする発現プラスミドを使用することでマウスを免疫化させ、その後、ハイブリドーマ細胞を構築する方法により、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体０８－３Ｆ２（「３Ｆ２」）、０７－６Ａ１１（「６Ａ１１」）、１７－７Ｅ４（「７Ｅ４」）、２３－２Ａ６（「２Ａ６」）、２３－４Ａ８（「４Ａ８」）、３３－１０Ｃ９（「１０Ｃ９」）及び２４－１Ｆ４（「１Ｆ４」）を得る。製造業者の指示に従い、ＧＥ ＡＫＴＡタンパク質クロマトグラフィー全自動精製装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を利用して抗体を精製する。上記抗体の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びＣＤＲのアミノ酸配列を以下の表１乃至表３に示す。
組換えヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質又は組換えヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする発現プラスミドを使用することでマウスを免疫化させ、その後、ハイブリドーマ細胞を構築する方法により、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体０８－３Ｆ２（「３Ｆ２」）、０７－６Ａ１１（「６Ａ１１」）、１７－７Ｅ４（「７Ｅ４」）、２３－２Ａ６（「２Ａ６」）、２３－４Ａ８（「４Ａ８」）、３３－１０Ｃ９（「１０Ｃ９」）及び２４－１Ｆ４（「１Ｆ４」）を得る。製造業者の指示に従い、ＧＥ ＡＫＴＡタンパク質クロマトグラフィー全自動精製装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を利用して抗体を精製する。上記抗体の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びＣＤＲのアミノ酸配列を以下の表１乃至表３に示す。
【0061】
【表1】
【0062】
【表2】
【0063】
【表3】
【0064】
実施例２．抗体配列の改変
次に、マウス抗体にヒト化操作を行う。具体的には、マウス抗体６Ａ１１、３Ｆ２及び７Ｅ４の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列の一部をヒト配列に置き換えることで、抗体及び抗原の親和性を最適化し、創薬可能性を向上させる。各抗体に対して、複数のヒト化重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインの配列を生成した。ヒト化後の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を以下の表４に示す。
次に、マウス抗体にヒト化操作を行う。具体的には、マウス抗体６Ａ１１、３Ｆ２及び７Ｅ４の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列の一部をヒト配列に置き換えることで、抗体及び抗原の親和性を最適化し、創薬可能性を向上させる。各抗体に対して、複数のヒト化重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインの配列を生成した。ヒト化後の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を以下の表４に示す。
【0065】
【表4】
【0066】
実施例３．抗体の結合検出
ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合に対する抗体の遮断作用
本実験は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合に対する抗ＰＤ－Ｌ１抗体の遮断能力を検出するために用いられる。具体的な実験操作は、以下の通りである。９６ウェル細胞培養プレートを使用し、ウェルごとにヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質を発現するＣＨＯ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（２５μｌ，２×１０４細胞／ウェル）を添加する。精製した腹水を５０、５、０．５、０．０５、０．００５μｇ／ｍｌの濃度で希釈し、血清を１：１００で希釈した後、各ウェルに２５μｌ添加し、４℃で３０分間静置する。Ｂｉｏｔｉｎ－ｈＰＤ－１タンパク質を０．４μｇ／ｍｌに希釈した後、各ウェルに５０μｌ添加し、４℃で１５分間静置する。９６ウェル細胞培養プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＰＢＳで２回洗浄する。その後、各ウェルに５０μｌの１：１００で希釈した抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ及び１：１００で希釈したストレプトアビジン－ＰＥ二次抗体を添加し、４℃で３０分間静置する。その後、９６ウェル細胞培養プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＰＢＳで１回洗浄した後、各ウェルに２００μｌのＰＢＳを添加してフローサイトメトリー分析を行う。
ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合に対する抗体の遮断作用
本実験は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合に対する抗ＰＤ－Ｌ１抗体の遮断能力を検出するために用いられる。具体的な実験操作は、以下の通りである。９６ウェル細胞培養プレートを使用し、ウェルごとにヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質を発現するＣＨＯ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（２５μｌ，２×１０４細胞／ウェル）を添加する。精製した腹水を５０、５、０．５、０．０５、０．００５μｇ／ｍｌの濃度で希釈し、血清を１：１００で希釈した後、各ウェルに２５μｌ添加し、４℃で３０分間静置する。Ｂｉｏｔｉｎ－ｈＰＤ－１タンパク質を０．４μｇ／ｍｌに希釈した後、各ウェルに５０μｌ添加し、４℃で１５分間静置する。９６ウェル細胞培養プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＰＢＳで２回洗浄する。その後、各ウェルに５０μｌの１：１００で希釈した抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ及び１：１００で希釈したストレプトアビジン－ＰＥ二次抗体を添加し、４℃で３０分間静置する。その後、９６ウェル細胞培養プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＰＢＳで１回洗浄した後、各ウェルに２００μｌのＰＢＳを添加してフローサイトメトリー分析を行う。
【0067】
図１Ａ、図１Ｂ及び図１Ｃに示す結果から分かるように、腹水から精製した抗ＰＤ－Ｌ１抗体（０８－３Ｆ２、０７－６Ａ１１及び１７－７Ｅ４）及びキメラ抗ＰＤ－Ｌ１抗体（２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１）の濃度が増加するにつれて、ＰＥ標識Ｂｉｏｔｉｎ－ｈＰＤ－１の蛍光強度が徐々に弱くなるため、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体がヒトＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合を遮断できることが示唆された。
【0068】
抗体交差反応の検出
それぞれアカゲザルＰＤ－Ｌ１タンパク質コード配列（ｒｍＰＤ－Ｌ１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質コード配列（ｍＰＤ－Ｌ１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）及びヒト－マウスキメラＰＤ－Ｌ１（マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインをヒトタンパク質フラグメントに置き換える）タンパク質コード配列（ｃｈｉＰＤ－Ｌ１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）をＣＨＯ細胞に導入してタンパク質発現を行い、抗体交差反応の検出に使用する。上記ＰＤ－Ｌ１タンパク質のアミノ酸配列を以下の表５に示す。
それぞれアカゲザルＰＤ－Ｌ１タンパク質コード配列（ｒｍＰＤ－Ｌ１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質コード配列（ｍＰＤ－Ｌ１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）及びヒト－マウスキメラＰＤ－Ｌ１（マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインをヒトタンパク質フラグメントに置き換える）タンパク質コード配列（ｃｈｉＰＤ－Ｌ１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）をＣＨＯ細胞に導入してタンパク質発現を行い、抗体交差反応の検出に使用する。上記ＰＤ－Ｌ１タンパク質のアミノ酸配列を以下の表５に示す。
【0069】
【表5】
【0070】
図２Ａ及び図２Ｂに示す結果から分かるように、３つの腹水から精製した抗ＰＤ－Ｌ１抗体（０８－３Ｆ２、０７－６Ａ１１及び１７－７Ｅ４）及び４つの抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体（２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１）は、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質と交差反応しないが、アカゲザルＰＤ－Ｌ１タンパク質及びヒト－マウスキメラＰＤ－Ｌ１タンパク質と強く交差反応する。
【0071】
抗体の親和性検出
その後、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（Ｂｉａｃｏｒｅ）のＰｒｏｔｅｉｎ Ａセンサチップを利用して抗体を捕捉する方法により、抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体、ヒト化抗体及び市販されている対照抗体薬物とｈＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ（Ａｂｓｉｎ社製）との結合の親和性を検出する。
その後、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（Ｂｉａｃｏｒｅ）のＰｒｏｔｅｉｎ Ａセンサチップを利用して抗体を捕捉する方法により、抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体、ヒト化抗体及び市販されている対照抗体薬物とｈＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ（Ａｂｓｉｎ社製）との結合の親和性を検出する。
【0072】
具体的な実験操作は、以下の通りである。抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体（０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ，０．５ｕｇ／ｍｌ）、市販されている対照抗体薬物（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ、Ａｖｅｌｕｍａｂ、Ｄｕｒａｌｕｍａｂ，０．５ｕｇ／ｍｌ）及びヒト化抗体（６Ａ１１－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ１Ｋ４－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ２Ｋ３－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ２Ｋ４－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ３Ｋ３－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ３Ｋ４－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ４Ｋ３－ＩｇＧ１、６Ａ１１－Ｈ４Ｋ４－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ２Ｋ１－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ２Ｋ３－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ３Ｋ１－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ３Ｋ２－ＩｇＧ１、７Ｅ４－Ｈ３Ｋ３－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ２Ｋ１－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ２Ｋ２－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ２Ｋ３－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ３Ｋ１－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ３Ｋ２－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ３Ｋ３－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ４Ｋ１－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ４Ｋ２－ＩｇＧ１、３Ｆ２－Ｈ４Ｋ３－ＩｇＧ１）をセンサチップ（１０μｌ／ｍｉｎ，２５ｓ）に注入し、タンパク質捕捉量は４５～６５ＲＵとする。続いて、ｈＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓタンパク質をそれぞれ２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６２５又は０．７８１２５ｎＭの濃度でセンサチップ（３０μｌ／ｍｉｎ，１００－４００ｓ）に注入し、解離時間は３００～１０００ｓとする。ｐＨ２．０のグリシン（３０μｌ／ｍｉｎ，１０～２０ｓ）でチップを再生してから検出結果を読み取る。動力学的結合速度（Ｋｉｎｅｔｉｃ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ，ｋｏｎ）及び動力学的解離速度（Ｋｉｎｅｔｉｃ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ，ｋｏｆｆ）は、Ｂｉｏａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアによって１：１ラングミュア結合モデルにフィッティングすることで得られてよい（（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．，１９９４．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ６．９９－１１０）。親和性速度定数ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎであり、全ての抗体の親和性検出のフィッティング結果を表６に示す。
【0073】
【表6】
【0074】
実施例４．抗体の熱安定性検出
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ Ｄｙｅ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏＴＭ ５ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を利用して抗体の熱安定性検出を行う。抗体タンパク質を加熱してアンフォールディングした後、蛍光染料で露出した疎水性領域を標識し、蛍光強度を検出することで抗体の熱安定性を反映する。製造業者の指示に従い、２μｌの抗体、１０．５μｌの水、５μｌのＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ緩衝液及び２．５μｌの染料を混合した後、１．６℃／秒の速度で２５℃に加熱し、更に０．０５℃／秒の速度で９９℃に加熱し、抗体タンパク質の変性温度のＴｍ値を検出する（２つの検出ピークがある場合、通常、２番目のピーク値ＦａｂのＴｍを基準とする）。
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ Ｄｙｅ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏＴＭ ５ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を利用して抗体の熱安定性検出を行う。抗体タンパク質を加熱してアンフォールディングした後、蛍光染料で露出した疎水性領域を標識し、蛍光強度を検出することで抗体の熱安定性を反映する。製造業者の指示に従い、２μｌの抗体、１０．５μｌの水、５μｌのＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ緩衝液及び２．５μｌの染料を混合した後、１．６℃／秒の速度で２５℃に加熱し、更に０．０５℃／秒の速度で９９℃に加熱し、抗体タンパク質の変性温度のＴｍ値を検出する（２つの検出ピークがある場合、通常、２番目のピーク値ＦａｂのＴｍを基準とする）。
【0075】
表７に、検出されたキメラ抗体及びヒト化抗体のＴｍ値が示されている。また、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を低下させるために、得られた抗体に対してグリコシル化修飾を行い、抗体の治療効果及び安全性を向上させる。一部の抗体Ｆｃ領域のいくつかのアミノ酸を置き換え、例えば、抗体にＮ２９７Ａ突然変異を行った。
【0076】
【表7】
【0077】
実施例５．抗体の生体内薬効検出
抗ＰＤ－Ｌ１抗体の生体内薬効を検出するために、ＰＤ－Ｌ１遺伝子ヒト化マウスを使用して腫瘍動物モデルを作成した。当該マウスは、ヒト－マウスキメラＰＤ－Ｌ１タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）を発現し、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、ヒト配列に置き換えられ、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の第２１～１２８位のアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）は、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の第２１～１２８位のアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）に置き換えられた。当該Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスモデルは、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体薬物の前臨床動物実験のために新しい検出方法を提供し、臨床実験の予測可能性（ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９９５７４及び中国出願番号２０１７１０７５７０２２．６を参照し、上記の文献は、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる）を大幅に向上させた。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体の生体内薬効を検出するために、ＰＤ－Ｌ１遺伝子ヒト化マウスを使用して腫瘍動物モデルを作成した。当該マウスは、ヒト－マウスキメラＰＤ－Ｌ１タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）を発現し、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、ヒト配列に置き換えられ、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の第２１～１２８位のアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）は、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の第２１～１２８位のアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）に置き換えられた。当該Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスモデルは、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体薬物の前臨床動物実験のために新しい検出方法を提供し、臨床実験の予測可能性（ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９９５７４及び中国出願番号２０１７１０７５７０２２．６を参照し、上記の文献は、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる）を大幅に向上させた。
【0078】
腫瘍動物モデルの作成過程は、以下の通りである。Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスの体内で皮下注射によってヒト化されたＰＤ－Ｌ１遺伝子のマウスＭＣ－３８細胞（結腸癌細胞）を接種する。腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後、マウスを抗ＰＤ－Ｌ１抗体投与群及び対照群（生理食塩水）にランダムに分けて腫瘍阻害薬効実験を行う。腹腔内注射によって投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回定期的に測定する。腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５×長径×短径２である。マウスの体重に基づいて投与量（０．３ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇ）を計算する。
【0079】
腫瘍増殖阻害率（ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ＴＧＩ）の計算式は、ＴＧＩ（％）＝１－（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）］×１００であり、そのうち、Ｔｉは、治療群のｉ日目の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は、治療群の０日目の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、対照群のｉ日目の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は、対照群の０日目の平均腫瘍体積である。Ｔ－検定を用いて統計学的分析を行う。ＴＧＩ％が６０％よりも大きい場合、腫瘍増殖に対して顕著な阻害効果を有することを示す。Ｐ＜０．０５である場合、統計結果が有意な差を有することを示す。
【0080】
抗ＰＤ－Ｌ１マウス抗体０８－３Ｆ２、１７－７Ｅ４、１７－８Ｅ９及び０７－６Ａ１１の生体内薬効実験
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３０匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１抗体０８－３Ｆ２、１７－７Ｅ４、１７－８Ｅ９、０７－６Ａ１１及び陽性対照抗体薬物Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂを使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図３Ａ及び図３Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図４の結果（群分けを行ってから２１日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。以下の表８に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３０匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１抗体０８－３Ｆ２、１７－７Ｅ４、１７－８Ｅ９、０７－６Ａ１１及び陽性対照抗体薬物Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂを使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図３Ａ及び図３Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図４の結果（群分けを行ってから２１日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。以下の表８に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。
【0081】
【表8】
【0082】
キメラ抗体０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａの生体内薬効実験
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、及びマウス抗体０７－６Ａ１１を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、対照群に対してｈＩｇＧ抗体を使用して処理し、投与量は３ｍｇ／ｋｇである。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。且つ、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、０７－６Ａ１１－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、及びマウス抗体０７－６Ａ１１を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、対照群に対してｈＩｇＧ抗体を使用して処理し、投与量は３ｍｇ／ｋｇである。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。且つ、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。
【0083】
キメラ抗体０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４及び１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａの生体内薬効実験
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、及びマウス抗体０７－６Ａ１１と０８－３Ｆ２を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。且つ、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、０８－３Ｆ２－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ４、１７－７Ｅ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、及びマウス抗体０７－６Ａ１１と０８－３Ｆ２を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。且つ、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。
【0084】
キメラ抗体３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２４－１Ｃ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１の生体内薬効実験
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２４－１Ｃ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図５Ａ及び図５Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図６の結果（群分けを行ってから２５日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。そのうち、キメラ抗体２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１の効果が最も好ましく、その次が３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１である。以下の表９に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１キメラ抗体３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２４－１Ｆ４－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１、２３－２Ａ５－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２４－１Ｃ３－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に投与する。マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図５Ａ及び図５Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図６の結果（群分けを行ってから２５日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。そのうち、キメラ抗体２３－２Ａ６－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１の効果が最も好ましく、その次が３３－１０Ｃ９－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１及び２３－４Ａ８－ｍＨｖＫｖ－ＩｇＧ１である。以下の表９に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。
【0085】
【表9】
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを５６匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は８匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１ヒト化抗体６Ａ１１－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、６Ａ１１－Ｈ１Ｋ４－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、３Ｆ２－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、３Ｆ２－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ、７Ｅ４－Ｈ１Ｋ１－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ及び７Ｅ４－Ｈ２Ｋ１－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａを使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の２日目、５日目に投与し、マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図７Ａ及び図７Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図８の結果（群分けを行ってから２４日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害された。そのうち、ヒト化抗体６Ａ１１－Ｈ１Ｋ３－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａの効果が最も好ましく、その次が３Ｆ２－Ｈ１Ｋ２－ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａである。以下の表１０に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。
【0086】
【表10】
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを２０匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に４群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体０７－６Ａ１１を使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、対照群に対して生理食塩水を注射する。２日ごとに１回投与し、合計で８回投与し、マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図９Ａ及び図９Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与した後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図１０の結果（群分けを行ってから１８日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖が異なる程度で阻害され、且つ抗体の投与量が大きいほど、腫瘍阻害効果が良好になる。以下の表１１に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。
【0087】
【表11】
【0088】
抗ＰＤ－Ｌ１抗体と他の治療剤の生体内併用投与の薬効実験
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１マウス抗体０７－６Ａ１１（０．３ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＴＬＡ４抗体ｍＣＴＬＡ４（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＯＸ４０抗体ｍＯＸ４０（０．３ｍｇ／ｋｇ）又はその組み合わせを使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与し、毎週の１日目、４日目に抗ＣＴＬＡ４抗体及び抗ＯＸ４０を投与し、マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図１１Ａ及び図１１Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、上記３つの抗体の単独投与又は併用投与後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図１２Ａ、図１２Ｂ及び図１２Ｃの結果（群分けを行ってから２１日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖がいずれも異なる程度で阻害された。以下の表１２に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。当該結果から分かるように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体又は抗ＯＸ４０抗体の併用による治療効果は、抗体の単独使用による治療効果よりも明らかに優れ、腫瘍細胞の増殖をより効果的に阻害することができる。使用されるｍＣＴＬＡ４は、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入され、型番がＢＥ０１６４である。ｍＯＸ４０は、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入され、型番がＢＥ００３１である。
５～６週齢のＢ－ｈＰＤ－Ｌ１マウスを３５匹使用し、ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（５×１０５／匹）を皮下接種し、腫瘍体積が１５０±５０ｍｍ３になった後に７群にランダムに分け、各群は５匹とする。投与群に対してそれぞれ抗ＰＤ－Ｌ１マウス抗体０７－６Ａ１１（０．３ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＴＬＡ４抗体ｍＣＴＬＡ４（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＯＸ４０抗体ｍＯＸ４０（０．３ｍｇ／ｋｇ）又はその組み合わせを使用して腹腔内注射によって投与処理を行い、対照群に対して生理食塩水を注射する。毎週の１日目、３日目、５日目に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与し、毎週の１日目、４日目に抗ＣＴＬＡ４抗体及び抗ＯＸ４０を投与し、マウスの体重及び腫瘍体積を週に２回測定し、３週間後に実験を終了する。図１１Ａ及び図１１Ｂに示すように、対照群及び投与群のマウスの平均体重は、全実験周期に着実に増加し、且つ群間に有意な差がなく、上記３つの抗体の単独投与又は併用投与後にマウスに有意な毒性を生じなかったことを示す。図１２Ａ、図１２Ｂ及び図１２Ｃの結果（群分けを行ってから２１日間の腫瘍体積データ）に示すように、対照群と比べ、投与群の腫瘍の増殖がいずれも異なる程度で阻害された。以下の表１２に、各群のＴＧＩ％結果が示されている。当該結果から分かるように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体又は抗ＯＸ４０抗体の併用による治療効果は、抗体の単独使用による治療効果よりも明らかに優れ、腫瘍細胞の増殖をより効果的に阻害することができる。使用されるｍＣＴＬＡ４は、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入され、型番がＢＥ０１６４である。ｍＯＸ４０は、ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入され、型番がＢＥ００３１である。
【0089】
【表12】
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【配列表】
【国際調査報告】