特表 2022-521321 アミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素およびこの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-06

(54)【発明の名称】アミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素およびこの使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 9/00 20060101AFI20220330BHJP

   C12N 15/52 20060101ALI20220330BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20220330BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20220330BHJP

   C07K 14/575 20060101ALN20220330BHJP

【ＦＩ】

C12N9/00 ZNA

C12N15/52 Z

C12P21/02 C

C12N15/11 Z

C07K14/575

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021549377

(86)(22)【出願日】2020-02-19

(85)【翻訳文提出日】2021-09-15

(86)【国際出願番号】 EP2020054343

(87)【国際公開番号】W WO2020169658

(87)【国際公開日】2020-08-27

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2019/075525

(32)【優先日】2019-02-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】19172611.6

(32)【優先日】2019-05-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509091848

【氏名又は名称】ノヴォ ノルディスク アー／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ホンタオ・グアン

【テーマコード（参考）】

4B050

4B064

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B050CC04

4B050DD02

4B050LL05

4B064AG01

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA18

4H045CA42

4H045DA30

4H045EA30

4H045FA10

(57)【要約】

本発明は、ｔＲＮＡを２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）でアミノアシル化し、これにより、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの真正細菌宿主細胞において、翻訳中にＡｉｂを成長するポリペプチド鎖に組み込むことを可能にするアミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素に関する。例えば、限定されないが、本発明は、新しいアミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素およびこの使用、ならびに１つ以上のＡｉｂを含有するポリペプチドを産生するための方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）であって、配列番号７の前記バリアントが、２１５Ｇｌｙを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）。

【請求項2】

配列番号７の前記バリアントが、式Ｉのバリアントであり、式Ｉが、
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ
であり、式中、式Ｉの各Ｘａａは独立して選択され、１つ以上のアミノ酸であるか、または存在せず、
式Ｉの前記バリアントが、Ｘａａと指定されていない位置で、配列番号７と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項3】

配列番号７の前記バリアントが、配列番号７と少なくとも４１％同一である、請求項１または２に記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項4】

配列番号７の前記バリアントが、配列番号７と少なくとも５５％同一である、請求項１～３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項5】

配列番号７の前記バリアントが、配列番号７と少なくとも９０％同一である、請求項１～４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項6】

配列番号７の前記バリアントが、
１９２位がＴｒｐ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
１９３位がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、
２１３位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、またはＡｌａであり、
２１６位がＰｈｅまたはＴｒｐであり、
２１７位がＭｅｔ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
２４９位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、またはＰｈｅであり、
３６０位がＡｓｎまたはＡｌａであり、
４５９位がＧｌｕまたはＡｌａであることを特徴とする、請求項１～５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項7】

配列番号７の前記バリアントが、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ］；［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ．４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｖａｌ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｉｌｅ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｌｅｕ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；１９３Ｇｌｙ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｓｅｒ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｓｅｒ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｃｙｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、または［１９２Ｈｉｓ；２１３Ａｌａ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｐｈｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］を含む、請求項１～６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項8】

配列番号７の前記バリアントが、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなるリストから選択される、請求項１～７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項9】

前記ＡｉｂＲＳが、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、請求項１～８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項10】

前記ｔＲＮＡが、サプレッサーｔＲＮＡである、請求項７～９に記載のＡｉｂＲＳ。

【請求項11】

１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドの調製のための、請求項１～１０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。

【請求項12】

前記結果として生じるポリペプチドが、配列番号３２を含む、請求項１１に記載のＡｉｂＲＳの使用。

【請求項13】

化合物を製造する方法であって、
ｉ．請求項１～１２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳを使用して、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドを調製するステップと、
ｉｉ．前記結果として生じるポリペプチドを誘導体化するステップと、を含む、方法。

【請求項14】

前記化合物が、Ｃｈｅｍ．２である、請求項１３に記載の方法。

【化1】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、翻訳生化学の分野である。本発明は、非天然アミノ酸をポリペプチドに組み込むために使用され得るアミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素に関する。

【0002】

配列表の参照による組み込み
本出願は、電子形式の配列表と共に提出される。配列表の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

組換え発現は、天然のまたは操作されたタンパク質およびペプチド（個々に、および集合的に「ポリペプチド」と称される）を産生するための効率的な方法である。既知の生物の大多数は、同じ２０個の天然に存在するアミノ酸をコードし、その結果として、組換え発現は、さらなる開発なしでは、天然に存在するアミノ酸のみから作製されたポリペプチドに限定される。原核生物および真核生物の両方において、多様な非天然アミノ酸をポリペプチドにインビボで部位特異的に組み込むための、この制限を克服するための１つの戦略が開発されている（Ｗａｎｇ Ｌ１，Ｓｃｈｕｌｔｚ ＰＧ，Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔＲＮＡｓ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１ Ｓｅｐ，８（９）：８８３－９０、Ｌｉｕ ＣＣ，Ｓｃｈｕｌｔｚ ＰＧ，Ａｄｄｉｎｇ ｎｅｗ ｃｈｅｍｉｓｔｒｉｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０１０，７９：４１３－４４）。これらの方法は、アミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素（ＲＳ）を利用し、これは、ｔＲＮＡを所望の非天然アミノ酸でアミノアシル化し、次に、翻訳中にセレクターコドンに応答して、その所望の非天然アミノ酸を成長するポリペプチド鎖に組み込む。翻訳成分は、効率の低下を伴って、宿主生物の内因性ｔＲＮＡ、ＲＳ、またはアミノ酸と交差反応するように開発されてもよい。

【0004】

２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）は、構造式Ｈ_２Ｎ－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＣＯＯＨを有する非タンパク質新生アミノ酸である。Ａｉｂは、ポリペプチドに組み込まれ、ポリペプチドに所望の特性を与えることができる。Ａｉｂを含む所望の特性を有するポリペプチドの一例は、セマグルチド、生物活性ＧＬＰ－１（グルカゴン様ペプチド－１）類似体であり［Ｌａｕ Ｊ．ｅｔ．ａｌ，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｎｃｅ－ｗｅｅｋｌｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１（ＧＬＰ－１）ａｎａｌｏｇｕｅ ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１５；５８：７３７０－７３８０］、抗糖尿病薬Ｏｚｅｍｐｉｃ（登録商標）として販売されている。セマグルチドは、ＷＯ０６０９７５３７に開示されている。

【0005】

Ａｉｂを遺伝的にコードする翻訳成分は報告されておらず、したがって、Ａｉｂを含有するポリペプチドは、現在、組換え発現から除外されている。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、アミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素に関し、これは、ｔＲＮＡを２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）でアミノアシル化し、これにより、翻訳中にＡｉｂを成長するポリペプチド鎖に組み込むことを可能にする。言い換えれば、本発明は、翻訳的に組み込まれたＡｉｂを有するポリペプチドの調製のための手段を提供する。

【0007】

第１の態様では、本発明は、ｔＲＮＡを２－アミノイソ酪酸でアミノアシル化する、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）に関する。第２の態様では、本発明は、Ａｉｂを含有するポリペプチドの調製のためのＡｉｂＲＳの使用に関する。第３の態様では、本発明は、Ａｉｂを含有するポリペプチドを含む化合物を調製するための方法に関し、本方法は、Ａｉｂを含有するポリペプチドの調製のためにＡｉｂＲＳを使用するステップを含む。

【発明を実施するための形態】

【0008】

本明細書および添付の特許請求の範囲に別段示されない限り、単数形で提示される用語は、複数の状況も含む。したがって、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「ポリペプチド（ａ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」への言及は、実際問題として、多くのポリペプチドを含む。

【0009】

第１の態様では、本発明は、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）に関する。２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）は、配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含み、配列番号７のバリアントは、２１５位にＧｌｙを有する。

【0010】

別の態様では、本発明は、Ａｉｂを含有するポリペプチドの調製のための本発明のＡｉｂＲＳの使用に関する。別の態様では、本発明は、配列番号３２を含む結果として生じるポリペプチドの、本発明のＡｉｂＲＳの使用に関する。

【0011】

別の態様では、本発明は、（ｉ）本発明のＡｉｂＲＳを使用して結果として生じるポリペプチドを調製するステップと、（ｉｉ）結果として生じるポリペプチドを誘導体化するステップとを含む、Ｃｈｅｍ．２を調製するための方法に関する。

【0012】

２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）
本明細書で使用される場合、「２－アミノイソ酪酸」という用語は、化学構造、Ｃｈｅｍ １によって表される非天然アミノ酸を指す。Ａｉｂは、「α－メチルアラニン」とも称され得る。

【化1】

【0013】

２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）
本明細書で使用される場合、「２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素」（ＡｉｂＲＳ）は、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化することができるアミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素（ＲＳ）を指す。ＡｉｂＲＳは、（ｉ）天然に存在するアラニン－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｌａＲＳ）と同一または実質的に同様であってもよく、（ｉｉ）天然もしくは人工の変異誘発によって天然に存在するＡｌａＲＳから得られてもよく、または（ｉｉｉ）（ｉ）もしくは（ｉｉ）の野生型もしくは変異ＡｌａＲＳ配列の配列を考慮に入れる任意のプロセス、例えば、ライブラリースクリーニングもしくは合理的設計によって得られてもよい。ＡｉｂＲＳは、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉのＡｌａＲＳまたは任意の天然に存在するＡｌａＲＳに由来してもよい。

【0014】

本明細書で使用される場合、「翻訳」という用語は、分子生物学および遺伝学の分野から既知の遺伝子発現の翻訳操作と同一または同様である翻訳操作、または翻訳操作の一部を指す。翻訳の結果は、成長するポリペプチド鎖であり、これは「結果として生じるポリペプチド」とも称される。本発明のＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化し、ｔＲＮＡを翻訳に利用可能なものにし得、翻訳の結果は、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドである。このように機能するｔＲＮＡは、「ｔＲＮＡ^Ａｉｂ」とも称される。言い換えれば、ＡｉｂＲＳは、翻訳プロセスに関連して使用される場合、Ａｉｂを結果として生じるポリペプチドに組み込むように構成されてもよい。Ａｉｂの機能は、任意の特定の結果として生じるポリペプチドに限定されない。翻訳系は、配列番号３２を含む結果として生じるポリペプチドを調製するのに特に適している。

【0015】

ＡｉｂＲＳによるｔＲＮＡのＡｉｂでのアミノアシル化は、他のアミノ酸、例えば、宿主細胞中に存在するＡｌａなどの天然アミノ酸との競合で行われてもよい。言い換えれば、本発明は、翻訳系のｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化するためにのみ機能するＡｉｂＲＳに限定されない。本発明のＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡを任意のアミノ酸でアミノアシル化し得る。好ましくは、ＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する。ＡｉｂＲＳ機能の効率は、ｔＲＮＡの翻訳時に結果として生じるポリペプチドを分析することによって決定され得る。効率は、Ａｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドの量と、別のアミノ酸、例えば、Ａｌａを含有する結果として生じるポリペプチドの量との間の比率として表され得る。結果として生じるポリペプチドの定量化は、ＬＣ－ＭＳを使用して実施され得る。

【0016】

本発明のＡｉｂＲＳの機能は、任意の特定の生物系に限定されない。ＡｉｂＲＳは、インビトロ条件および／またはインビボ条件との関連で作動し得る。ＡｉｂＲＳは、宿主細胞との関連で作動するのに適しており、Ａｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドの翻訳は、宿主細胞の翻訳機構の１つ以上の成分を利用することによって行われる。ＡｉｂＲＳは、ＡｉｂＲＳが利用される生物系の内因性成分、例えば、宿主細胞の成分と相互作用し得る。

【0017】

本明細書で使用される場合、「アミノアシル化」という用語は、ＡｉｂＲＳ（または任意の他のアミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素）がｔＲＮＡとアミノ酸との間の結合を触媒する作用を指す。ＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡを「アミノアシル化」すると言われている。「アミノアシル化する」という用語は、「充填する」と互換的に使用される。

【0018】

一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含み、バリアントは、２１５Ｇｌｙを含む。一実施形態では、配列番号７のバリアントは、式Ｉのバリアントである。一実施形態では、式Ｉのバリアントは、Ｘａａと指定されていない位置で、配列番号７と少なくとも９０％同一である。一実施形態では、式Ｉのバリアントは、Ｘａａと指定されていない配列位置で、式Ｉと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である。一実施形態では、配列番号７のバリアントは、配列番号７と少なくとも４１％、少なくとも５５％、または少なくとも９０％同一である。一実施形態では、配列番号７のバリアントは、配列番号７と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、および最も好ましくは少なくとも９９％同一である。一実施形態では、配列番号７のバリアントは、１９２位がＴｒｐ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、１９３位がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、２１３位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、またはＡｌａであり、２１６位がＰｈｅまたはＴｒｐであり、２１７位がＭｅｔ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、２４９位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、またはＰｈｅであり、３６０位がＡｓｎまたはＡｌａであり、４５９位がＧｌｕまたはＡｌａであることを特徴とする。一実施形態では、配列番号７のバリアントは、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ］；［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ．４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｖａｌ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｉｌｅ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｌｅｕ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；１９３Ｇｌｙ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｓｅｒ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｓｅｒ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｃｙｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、または［１９２Ｈｉｓ；２１３Ａｌａ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｐｈｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］を含む。一実施形態では、配列番号７のバリアントは、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなるリストから選択される。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、古細菌に由来する。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来する。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化することができる。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、宿主細胞においてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、Ｅ．ｃｏｌｉにおいてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている。一実施形態では、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能の効率は、発現産物、すなわち、ｔＲＮＡの翻訳時に結果として生じるポリペプチドを分析することによって決定される。一実施形態では、効率は、Ａｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドと、Ａｉｂを対象とした位置にＡｌａまたはＡｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドの量との間の組み込み比として表される。一実施形態では、組み込み比は、ＬＣ－ＭＳを使用して決定され、質量スペクトルに基づいて以下のように計算される：組み込み比＝［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}／（［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}＋［ピーク強度］_{Ａｌａ含有ポリペプチド}）＊１００％。一実施形態では、組み込み比は、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、または少なくとも７０％である。

【0019】

ｔＲＮＡ^Ａｉｂ
本明細書で使用される場合、「ｔＲＮＡ^Ａｉｂ」は、ＡｉｂＲＳによってＡｉｂでアミノアシル化され得、かつ翻訳中にＡｉｂを結果として生じるポリペプチドに組み込む、ｔＲＮＡを指す。ｔＲＮＡは、（ｉ）天然に存在するアラニン－ｔＲＮＡ（ｔＲＮＡ^Ａｌａ）と同一または実質的に同様であってもよく、（ｉｉ）天然もしくは人工の変異誘発によって天然に存在するｔＲＮＡ^Ａｌａから得られてもよく、（ｉｉｉ）（１）もしくは（２）の野生型もしくは変異ｔＲＮＡ^Ａｌａ配列の配列を考慮に入れる任意のプロセス、例えば、ライブラリースクリーニングおよび／もしくは合理的設計によって得られてもよい。いくつかの実施形態では、ｔＲＮＡは、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来し得る。ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、サプレッサーｔＲＮＡであってもよい。

【0020】

ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、充填状態（すなわち、アミノ酸でアミノアシル化されている）、または非充填状態（すなわち、アミノ酸でアミノアシル化されていない）で存在することができる。ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、本発明のＡｉｂＲＳと同族であり、Ａｉｂでアミノアシル化される。ＡｉｂＲＳによるｔＲＮＡのＡｉｂでのアミノアシル化は、別のアミノ酸、例えば、宿主細胞中に存在するＡｌａなどの天然アミノ酸との競合で行われてもよい。言い換えれば、ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、ＡｉｂＲＳによってＡｉｂおみでアミノアシル化されるｔＲＮＡ分子に限定されず、ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、ＡｉｂＲＳによって別のアミノ酸でアミノアシル化されてもよい。ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、セレクターコドンに応答して、翻訳中にアミノ酸を結果として生じるポリペプチドに挿入するように機能する。好ましくは、そのアミノ酸は、Ａｉｂである。

【0021】

本明細書で使用される場合、「に応答して」という用語は、本発明のｔＲＮＡがセレクターコドンを認識し、ｔＲＮＡに結合されている非天然アミノ酸の結果として生じるポリペプチドへの組み込みを媒介するプロセスを指す。ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、終止コドン、例えば、ＴＡＧであるセレクターコドンに応答してＡｉｂを組み込み得る。

【0022】

本明細書で使用される場合、「コードする」という用語は、分子または配列ストリング中の情報が、第１の分子または配列ストリングとは異なる第２の分子または配列ストリングの生成を誘導するために使用される、任意のプロセスを指す。特に、ＲＮＡ分子は、ポリペプチドをコードすることができ、その場合、結果として生じるポリペプチドが得られ得る前に、翻訳プロセスが行われる必要がある。翻訳プロセスを説明するために使用される場合、「コードする」という用語はまた、アミノ酸または終止コドンをコードするトリプレットコドンにまで及んでもよい。特に、ＤＮＡ分子は、結果として生じるポリペプチドをコードすることができ、その場合、結果として生じるペプチドが得られ得る前に、転写プロセスおよび翻訳プロセスの両方が行われる必要がある。本発明は、ポリヌクレオチドとの関連で作用することに限定されず、これに対して、翻訳プロセスのみが、結果として生じるポリペプチド（例えば、ＲＮＡ）を生成するために必要とされることが理解されるべきである。本発明はまた、ポリヌクレオチドとの関連で作用してもよく、これに対して、転写プロセスおよび翻訳プロセスの両方が、結果として生じるポリペプチド（例えば、ＤＮＡ）を生成するために必要とされる。

【0023】

一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている。一実施形態では、ｔＲＮＡは、サプレッサーｔＲＮＡである。一実施形態では、ｔＲＮＡは、Ａｉｂをコードする１つ以上のアンチコドンを含む。一実施形態では、ＡｉｂをコードするｔＲＮＡのアンチコドンは、終止コドンに相補的である。一実施形態では、セレクターコドンは、ナンセンスコドン、例えば、終止コドン、４塩基コドン、希少コドン、ならびに天然、非天然塩基対および／または類似のものに由来するコドンである。一実施形態では、終止コドンは、アンバーコドン、オーカーコドン、および／またはオパールコドンである。一実施形態では、Ａｉｂをコードするアンチコドンは、ＣＴＡである。一実施形態では、ｔＲＮＡは、配列番号３またはこのバリアントによってコードされる。一実施形態では、ｔＲＮＡをコードする配列番号３のバリアントは、Ｇ３Ａ変異を含有する。一実施形態では、ｔＲＮＡをコードする配列番号３のバリアントは、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である。一実施形態では、ｔＲＮＡをコードする配列番号３のバリアントは、配列番号４である。一実施形態では、ｔＲＮＡは、配列番号４によってコードされる。一実施形態では、ｔＲＮＡは、古細菌に由来する。一実施形態では、ｔＲＮＡは、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来する。

【0024】

アミノ酸
本明細書で使用される場合、「天然アミノ酸」という用語は、ヒトにおける標準遺伝子コードによってコードされる２０個の標準アミノ酸を指す。天然アミノ酸はまた、「タンパク質新生アミノ酸」とも称され得る。「非天然アミノ酸」という用語は、自然界に存在し得る（ただし、ヒトにおける標準遺伝子コードによってコードされる２０個の標準アミノ酸に該当しない）か、または純粋に合成のアミノ酸、例えば、修飾アミノ酸およびアミノ酸類似体であり得るアミノ酸を指す。非天然アミノ酸はまた、「非タンパク質新生アミノ酸」または「非コードアミノ酸」とも称され得る。非天然アミノ酸の非限定的な例は、Ａｉｂおよび天然アミノ酸のＤ異性体である。「アミノ酸」という用語が、天然または非天然であるかどうかを示すことなく本明細書で使用される場合、それは、天然アミノ酸および非天然アミノ酸の両方を含むかのように解釈されるべきである。本明細書で使用される場合、「任意のアミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸の両方を含むかのように解釈されるべきである。

【0025】

サプレッサーｔＲＮＡおよびセレクターコドン
本明細書で使用される場合、「サプレッサーｔＲＮＡ」という用語は、所与の翻訳系におけるｍＲＮＡの読み取りを変化させ、そうでなければ翻訳の終了または誤翻訳（例えば、フレームシフト）をもたらすコドン（例えば、終止コドンであるセレクターコドン）の翻訳リードスルーを可能にする、ｔＲＮＡを指す。典型的には、サプレッサーｔＲＮＡは、ポリペプチドの翻訳中に終止コドンに応答してアミノ酸の組み込みを可能にする（「リードスルー」と称されるプロセス）。

【0026】

本明細書で使用される場合、「セレクターコドン」という用語は、ｔＲＮＡ（例えば、サプレッサーｔＲＮＡ）がアミノ酸を結果として生じるポリペプチドに組み込むことに応答するコドンを指す。ｔＲＮＡは、セレクターコドンに対する「アンチコドン」であると言われている。セレクターコドンは、ナンセンスコドン、例えば、終止コドン、４塩基コドン、希少コドン、ならびに天然、非天然塩基対および／または類似のものに由来するコドンであり得る。終止コドンの非限定的な例は、アンバーコドン、オーカーコドン、およびオパールコドンである。

【0027】

変異および変異体
アミノ酸配列またはポリペプチドとの関連で本明細書において使用される場合、「変異」という用語は、（ｉ）別のアミノ酸によって置換されている、（ｉｉ）欠失している、または（ｉｉｉ）付加されているアミノ酸を指す。アミノ酸配列との関連における変異は、「アミノ酸変化」と称され得る。アミノ酸配列（またはポリペプチド）の特定の位置における特定のアミノ酸は、問題の配列位置を参照し、続いて、その位置に存在するアミノ酸の３文字コードを参照することによって説明され得る。アミノ酸配列またはポリペプチドとの関連におけるこの命名法の非限定的な例は、「１９２Ｈｉｓおよび２１５Ｇｌｙ」であり、Ｈｉｓが１９２位に存在し、Ｇｌｙが２１５位に存在することを意味する。アミノ酸配列（またはポリペプチド）における置換は、置換されるアミノ酸の３文字コードを参照し、続いて、問題の配列位置を参照し、続いて、置換するアミノ酸を参照することによって説明され得る。この命名法の非限定的な例は、「Ｔｒｐ１９２Ｈｉｓ；Ｖａｌ２１５Ｇｌｙ」であり、１９２位のＴｒｐがＨｉｓで置換されており、２１５位のＶａｌがＧｌｙで置換されている。置換は、配列表に記載される特定の配列に関連して（典型的には野生型ｔＲＮＡ合成酵素に関して）提供されてもよく、置換されるアミノ酸の位置は、配列表中のその特定の配列から導き出され得るナンバリングに基づいて決定されるようなものである。配列表において、配列番号１の第１のアミノ酸残基（Ｎ末端から数えて）（Ｍｅｔ）は、番号１に割り当てられ、配列番号１の第２のアミノ酸残基（Ｇｌｕ）は、番号２に割り当てられる、などである。ヌクレオチド配列またはポリヌクレオチドとの関連で本明細書において使用される場合、「変異」という用語は、（ｉ）別のヌクレオチドによって置換されている、（ｉｉ）欠失している、または（ｉｉｉ）付加されているヌクレオチドを指す。ヌクレオチド配列またはポリヌクレオチドにおける置換は、置換されるヌクレオチドの核酸塩基の１文字コードを参照し、続いて、置換されるヌクレオチドの配列位置を参照し、続いて、置換するヌクレオチドの核酸塩基を参照することによって説明され得る。ヌクレオチド配列またはポリヌクレオチドとの関連における置換命名法の非限定的な例は、「Ｇ３Ａ」であり、グアニンは、アデニンで置き換えられている。置換は、配列表に記載される特定の配列に関連して（典型的には野生型ｔＲＮＡに関して）提供されてもよく、置換されるヌクレオチドの位置は、配列表中のその特定の配列から導き出され得るナンバリングに基づいて決定されるようなものである。配列表において、配列番号２の第１のヌクレオチド残基（５’末端から数えて）（Ｇ）は、番号１に割り当てられ、配列番号２の第２のアミノ酸残基（Ｇ）は、番号２に割り当てられる、などである。

【0028】

アミノ酸配列またはポリペプチドとの関連で本明細書において使用される場合、「変異体」という用語は、それが変異体である配列と比較して、１つ以上の変異を有する配列を指す。

【0029】

バリアント
本明細書で使用される場合、「バリアント」という用語は、それがバリアントである成分と比較して構造的な差異を有し得る成分を指すが、それは同様の機能性を維持する。例えば、ＡｉｂＲＳおよびこのバリアントは、必ずしも同じアミノ酸配列を共有するとは限らないが、それらは両方とも、同族ｔＲＮＡを非天然アミノ酸でアミノアシル化する。本発明のＡｉｂＲＳのバリアントは、バリアントが依然としてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化するように機能する限り、ＡｉｂＲＳと比較して１つ以上の変異を有し得る。変異は、置換、欠失、および付加を含み得る。バリアントにおける変異はまた、「変動（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）」とも称され得る。

【0030】

ポリヌクレオチドおよびポリペプチド
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、２つ以上のヌクレオチドの配列を指す。「ポリヌクレオチド」および「ヌクレオチド配列」という用語は、互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、２つ以上の天然または非天然のアミノ酸の配列を指す。したがって、「ポリペプチド」という用語は、ペプチドおよびタンパク質の両方を包含する。「ポリペプチド」および「アミノ酸配列」という用語は、互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「結果として生じるポリペプチド」という用語は、典型的には本発明のＡｉｂＲＳを伴う翻訳プロセスの産物であるポリペプチドを指す。結果として生じるポリペプチドはまた、特に、結果として生じるポリペプチドが翻訳プロセスとの関連で記載される場合、「成長するポリペプチド鎖」とも称され得る。本発明のＡｉｂＲＳは、セマグルチドのアミノ酸配列である配列番号３２を含む結果として生じるポリペプチドの調製に特に適している、［Ｌａｕ Ｊ．ｅｔ．ａｌ，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｎｃｅ－ｗｅｅｋｌｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１（ＧＬＰ－１）ａｎａｌｏｇｕｅ ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１５；５８：７３７０－７３８０］。

【0031】

一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドの調製に使用される。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドの調製に使用され、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドは、ＧＬＰ－１類似体である。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、結果として生じるポリペプチドの調製に使用され、結果として生じるポリペプチドは、配列番号３２を含む。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、結果として生じるポリペプチドの調製に使用され、結果として生じるポリペプチドは、配列番号３２である。

【0032】

誘導体
ポリペプチドとの関連で本明細書において使用される場合、「誘導体」という用語は、１つ以上の置換基がポリペプチドに共有結合している化学修飾ポリペプチドを意味する。本明細書で使用される場合、「誘導体化」という用語は、ポリペプチドから誘導体を得るプロセスを指す。例えば、Ｃｈｅｍ．２は、Ｃｈｅｍ．３の置換基（「側鎖」とも称され得る）を導入する誘導体化によって、配列番号３２から得られ得る。

【0033】

本発明のＡｉｂＲＳは、（ｉ）本発明のＡｉｂＲＳを使用して配列番号３２を含む結果として生じるポリペプチドを調製するステップと、（ｉｉ）配列番号３２を含むポリペプチドを、置換基Ｃｈｅｍ．３で誘導体化するステップとを含む、セマグルチド（Ｃｈｅｍ．２）を調製する方法において特に有用である。

【化2】

【化3】

【0034】

一実施形態では、本発明は、（ｉ）本発明のＡｉｂＲＳを使用して１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドを調製するステップと、（ｉｉ）結果として生じるポリペプチドを誘導体化するステップとを含む、化合物を産生する方法に関し、好ましい実施形態では、化合物は、Ｃｈｅｍ．２であり、好ましい実施形態では、結果として生じるポリペプチドは、配列番号３２であり、好ましい実施形態では、結果として生じるポリペプチドは、Ｃｈｅｍ．３で誘導体化される。誘導体化は、Ｌａｕ Ｊ．ｅｔ．ａｌ，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｎｃｅ－ｗｅｅｋｌｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１（ＧＬＰ－１）ａｎａｌｏｇｕｅ ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１５；５８：７３７０－７３８０に記載されるように実施されてもよい。

【0035】

同族体
本明細書で使用される場合、「同族体」は、共に機能するか、または互いに対して特異性の何らかの側面を有する成分、例えば、ｔＲＮＡ^ＡｉｂおよびＡｉｂＲＳ、ならびにアンチコドンおよび終止コドンを指す。成分はまた、「相補的」であるものとも称され得る。一実施形態では、ＡｉｂＲＳは、ｔＲＮＡ^Ａｉｂと同族である。

【0036】

直交
本明細書で使用される場合、「直交」という用語は、宿主細胞に内因性であるか、または細胞の内因性成分と機能しない対応する分子と比較して、低下した効率で宿主細胞の内因性成分と機能する分子（例えば、ＡｉｂＲＳおよび／またはｔＲＮＡ^Ａｉｂ）を指す。ｔＲＮＡおよびＲＳとの関連で、直交とは、内因性ＲＳと機能する内因性ｔＲＮＡと比較して、直交ｔＲＮＡが内因性ＲＳと機能することができないこと、もしくはその低下した効率、または内因性ｔＲＮＡと機能する内因性ＲＳと比較して、直交ＲＳが内因性ｔＲＮＡと機能することができないこと、もしくはその低下した効率を指す。直交分子は、細胞内に機能的に正常な内因性相補的分子を欠く。例えば、細胞内の直交ｔＲＮＡは、内因性ＲＳによる内因性ｔＲＮＡのアミノアシル化と比較して、低下した、またはゼロでさえある効率で、細胞の任意の内因性ＲＳによってアミノアシル化される。別の例では、直交ＲＳは、内因性ＲＳによる内因性ｔＲＮＡのアミノアシル化と比較して、低下した、またはゼロでさえある効率で、目的の細胞の任意の内因性ｔＲＮＡをアミノアシル化する。直交性は、ＡｉｂＲＳ機能の効率として表され得る。

【0037】

本発明の翻訳成分（例えば、ＡｉｂＲＳおよび／またはｔＲＮＡ^Ａｉｂ）は、任意の他の種由来の宿主翻訳系で使用するための任意の生物（または生物の組み合わせ）に由来してもよく、ただし、翻訳成分および宿主系は、直交的に機能することに注意する必要がある。いくつかの実施形態では、翻訳成分は、真正細菌宿主系で使用するための古細菌遺伝子（すなわち、古細菌（ａｒｃｈａｅｂａｃｔｅｒｉａ））に由来する。例えば、直交ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、古細菌生物、例えば、古細菌（ａｒｃｈａｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、例えば、Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ、好塩菌（例えば、Ｈａｌｏｆｅｒａｘ ｖｏｌｃａｎｉｉおよび好塩菌種ＮＲＣ－Ｉ）、Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ、Ａｅｕｒｏｐｙｒｕｍ ｐｅｒｎｉｘ、Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｐａｌｕｄｉｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｐｙｒｕｓ ｋａｎｄｌｅｒｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｍａｚｅｉ、Ｐｙｒｏｂａｃｕｌｕｍ ａｅｒｏｐｈｉｌｕｍ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ａｂｙｓｓｉ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｓｏｌｆａｔａｒｉｃｕｓ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｌｏｋｏｄａｉｉ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ ｖｏｌｃａｎｉｕｍなど、または真正細菌、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、ならびにＴｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓに由来し得る。いくつかの実施形態では、翻訳成分は、真核細胞源、例えば、植物、藻、原生生物、真菌、酵母、動物（例えば、哺乳動物、昆虫、節足動物など）、または類似のものに由来する。

【0038】

宿主細胞
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、本発明のＡｉｂＲＳがその機能を果たし得る細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞、例えば、細菌および古細菌、または真核細胞、例えば、酵母、藻、糸状真菌、哺乳類細胞、植物細胞、および昆虫細胞であってもよい。微生物宿主細胞はまた、「微生物」とも称され得る。真正細菌の非限定的な例としては、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍが挙げられる。古細菌の非限定的な例としては、Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｍａｚｅｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ、Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｐａｌｕｄｉｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｐｙｒｕｓ ｋａｎｄｌｅｒｉ、好塩菌（例えば、Ｈａｌｏｆｅｒａｘ ｖｏｌｃａｎｉｉおよび好塩菌種ＮＲＣ－Ｉ）、Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ、Ｐｙｒｏｂａｃｕｌｕｍ ａｅｒｏｐｈｉｌｕｍ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ａｂｙｓｓｉ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｓｏｌｆａｔａｒｉｃｕｓ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｔｏｋｏｄａｉｉ、Ａｅｕｒｏｐｙｒｕｍ ｐｅｒｎｉｘ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｍ、ならびにＴｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ ｖｏｌｃａｎｉｕｍが挙げられる。酵母および糸状真菌の非限定的な例としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｆａｆｆｉ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、およびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｓｅｉが挙げられる。哺乳類細胞の非限定的な例としては、ＣＨＯ、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－ＤＸＢ１１、ＣＨＯ－ＤＧ４４、ＣＨＯ－Ｓ、ＨＥＫ２９３、またはこれらの細胞のいずれかの誘導体が挙げられる。

【0039】

宿主細胞は、典型的には、本発明のＡｉｂＲＳをコードするポリヌクレオチドを用いて、例えば、１つ以上のベクターを使用して、遺伝子操作される（例えば、形質転換、形質導入、またはトランスフェクトされる）。本発明のＡｉｂＲＳのコード領域、および翻訳されるポリペプチドは、所望の宿主細胞において機能的である遺伝子発現制御エレメントに作動可能に結合されてもよい。ベクターは、転写および翻訳ターミネーター、転写および翻訳開始配列、ならびに特定の標的核酸の発現の調節に有用なプロモーターを含有してもよい。ベクターは、少なくとも１つの独立したターミネーター配列を含有する一般的発現カセット、真核生物もしくは原核生物または両方におけるカセットの複製を可能にする配列（例えば、シャトルベクター）、ならびに原核細胞系および真核細胞系の両方の選択マーカーを含んでもよい。ベクターの非限定的な例は、プラスミド、細菌、ウイルス、裸のポリヌクレオチド、またはコンジュゲートポリヌクレオチドである。一実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉである。

【0040】

コンセンサス配列
本明細書で使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、配列アライメントの各位置に見られる最も頻度の高いアミノ酸残基の計算された順序を指す。これは、関連する配列（例えば、古細菌ＡｌａＲＳ配列）が互いに比較され、同様の配列モチーフが計算される、複数の配列アライメントの結果を表す。したがって、コンセンサス配列は、生物活性ポリペプチドの機能性（例えば、フォールディングおよび／またはアミノ酸結合に関与することによる）に不可欠な推定アミノ酸位置のモデルである。概して、これらの位置のアミノ酸がしばしばループ内で溶媒曝露されるため、推定活性部位として同定されないアミノ酸配列位置に対して高い自由度があり、したがって、生物活性ポリペプチドによって果たされる機能を維持しながら、これらの位置において高度な変動が導入され得る。一実施形態では、Ａｉｂは、コンセンサス配列のバリアントとして定義される。一実施形態では、Ａｉｂは、式Ｉのバリアントとして定義される。一実施形態では、Ａｉｂは、式ＩＩのバリアントとして定義される。一実施形態では、Ａｉｂは、式ＩＩＩのバリアントとして定義される。

【0041】

配列同一性
配列同一性は、２つの（ヌクレオチドまたはアミノ酸）配列が、アライメント中の同じ位置で同じ残基を有する程度である。配列同一性は、便利にパーセンテージで表され、すなわち、２つの配列間の１００個のアラインされた位置のうち８５個のアミノ酸が同一である場合、同一性の程度は８５％である。２つの配列のうちの１つがコンセンサス配列である場合、コンセンサス配列の保存された位置のみが計算のために考慮される。すなわち、１００個のアラインおよび保存された位置のうち８５個のアミノ酸が同一である場合、配列が１００個のアミノ酸よりも長い場合があるにもかかわらず、同一性の程度は８５％である。本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、単純な手書きおよび目測、ならびに／またはＮｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムに基づく「アライン」などの標準的なタンパク質もしくはペプチドアライメントプログラムを使用することによって決定される。このアルゴリズムは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．，（１９７０），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４８：４４３－４５３、およびＭｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ ｉｎ”Ｏｐｔｉｍａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｌｉｎｅａｒ Ｓｐａｃｅ”ＣＡＢＩＯＳ（ｃｏｍｐｕｔｅｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１９８８）４：１１－１７によるアラインプログラムに記載されている。アライメントのために、デフォルトのスコアマトリックスＢＬＯＳＵＭ６２およびデフォルトの同一性マトリックスが使用されてもよく、ギャップにおける第１の残基に対するペナルティは－１２、または好ましくは－１０に設定されてもよく、ギャップにおける追加の残基に対するペナルティは－２、または好ましくは－０．５に設定されてもよい。

【0042】

特定の実施形態
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのものであり、したがって限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。
１．配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）であって、バリアントが、２１５Ｇｌｙを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）。
２．配列番号７のバリアントが、式Ｉのバリアントであり、式Ｉが、
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ
であり、式中、式Ｉの各Ｘａａは独立して選択され、１つ以上のアミノ酸であるか、または存在せず、
式Ｉのバリアントが、Ｘａａと指定されていない位置で、配列番号７と少なくとも９０％同一である、実施形態１に記載のＡｉｂＲＳ。
３．配列番号７のバリアントが、式Ｉのバリアントであり、式Ｉが、以下の式：
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ
のコンセンサス配列に対応し、式中、式Ｉの各Ｘａａは独立して選択され、１つ以上のアミノ酸であるか、または存在せず、
式Ｉのバリアントが、Ｘａａと指定されていない位置で、配列番号７と少なくとも９０％同一である、実施形態１または２に記載のＡｉｂＲＳ。
４．式Ｉのバリアントが、Ｘａａと指定されていない配列位置で、式Ｉと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、実施形態１～３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５．Ｘａａが、任意の種類の１つ以上のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６．式ＩのＸａａが、任意のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
７．式ＩのＸａａが、任意のアミノ酸である、実施形態１～６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
８．配列番号７のバリアントが、配列番号７と少なくとも４１％同一である、実施形態１～７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
９．配列番号７のバリアントが、配列番号７と少なくとも５５％同一である、実施形態１～８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１０．配列番号７のバリアントが、配列番号７と少なくとも９０％同一である、実施形態１～９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１１．配列番号７のバリアントが、配列番号７と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、および最も好ましくは少なくとも９９％同一である、実施形態１～１０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１２．配列番号７のバリアントが、
１９２位がＴｒｐ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
１９３位がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、
２１３位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、またはＡｌａであり、
２１６位がＰｈｅまたはＴｒｐであり、
２１７位がＭｅｔ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
２４９位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、またはＰｈｅであり、
３６０位がＡｓｎまたはＡｌａであり、
４５９位がＧｌｕまたはＡｌａであることを特徴とする、実施形態１～１１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１３．配列番号７のバリアントが、
１９２位がＨｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
１９３位がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、
２１３位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、またはＡｌａであり、
２１６位がＰｈｅまたはＴｒｐであり、
２１７位がＭｅｔ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
２４９位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、またはＰｈｅであり、
３６０位がＡｌａであり、
４５９位がＡｌａであることを特徴とする、実施形態１～１２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１４．配列番号７のバリアントが、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ］；［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ．４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｖａｌ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｉｌｅ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｌｅｕ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；１９３Ｇｌｙ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｓｅｒ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｓｅｒ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｃｙｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、または［１９２Ｈｉｓ；２１３Ａｌａ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｐｈｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］を含む、実施形態１～１３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１５．配列番号７のバリアントが、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１６Ｔｒｐ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｉｌｅ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ．４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；１９３Ｌｅｕ；２１７Ｌｅｕ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｖａｌ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｉｌｅ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｌｅｕ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；１９３Ｇｌｙ；２１５Ｇｌｙ；２１７Ｉｌｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｓｅｒ；２１５Ｇｌｙ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｓｅｒ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、［１９２Ｈｉｓ；２１３Ｃｙｓ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｖａｌ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］、または［１９２Ｈｉｓ；２１３Ａｌａ；２１５Ｇｌｙ；２４９Ｐｈｅ；３６０Ａｌａ；４５９Ａｌａ］を含む、実施形態１～１４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１６．配列番号７のバリアントが、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなるリストから選択される、実施形態１～１５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１７．配列番号７のバリアントが、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなるリストから選択される、実施形態１～１６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１８．ＡｉｂＲＳが、古細菌に由来する、実施形態１～１７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
１９．ＡｉｂＲＳが、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来する、実施形態１～１８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２０．ＡｉｂＲＳが、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、実施形態１～１９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２１．ＡｉｂＲＳが、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化することができる、実施形態１～２０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２２．ｔＲＮＡが、サプレッサーｔＲＮＡである、実施形態１～２１に記載のＡｉｂＲＳ。
２３．ｔＲＮＡが、Ａｉｂをコードする１つ以上のアンチコドンを含む、実施形態１～２２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２４．ＡｉｂをコードするｔＲＮＡのアンチコドンが、終止コドンに相補的である、実施形態１～２３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２５．Ａｉｂをコードするアンチコドンが、ＣＴＡである、実施形態１～２４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２６．ｔＲＮＡが、配列番号３またはこのバリアントによってコードされる、実施形態１～２５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２７．ｔＲＮＡをコードする配列番号３のバリアントが、Ｇ３Ａ変異を含有する、実施形態１～２６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２８．ｔＲＮＡをコードする配列番号３のバリアントが、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、実施形態１～２７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２９．ｔＲＮＡをコードする配列番号３のバリアントが、配列番号４である、実施形態１～２８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３０．ｔＲＮＡが、配列番号４によってコードされる、実施形態１～２９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３１．ｔＲＮＡが、古細菌に由来する、実施形態１～３０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３２．ｔＲＮＡが、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来する、実施形態１～３１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３３．ＡｉｂＲＳが、宿主細胞においてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、実施形態１～３２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３４．ＡｉｂＲＳが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、実施形態１～３３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３５．機能の効率が、発現産物、すなわち、ｔＲＮＡの翻訳時に結果として生じるポリペプチドを分析することによって決定される、実施形態１～３４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３６．効率が、Ａｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドと、Ａｉｂを対象とした位置にＡｌａまたはＡｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドの量との間の組み込み比として表される、実施形態１～３５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３７．組み込み比が、ＬＣ－ＭＳを使用して決定され、質量スペクトルに基づいて以下のように計算される、実施形態１～３６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。組み込み比＝［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}／（［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}＋［ピーク強度］_{Ａｌａ含有ポリペプチド}）＊１００％。
３８．組み込み比が、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、または少なくとも７０％である、実施形態１～３７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３９．１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドの調製のための、実施形態１～３８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。
４０．１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドが、ＧＬＰ－１類似体である、実施形態１～３９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。
４１．１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドが、配列番号３２を含む、実施形態１～４０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。
４２．化合物を産生する方法であって、
ｉ．実施形態１～４１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳを使用して、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドを調製するステップと、
ｉｉ．結果として生じるポリペプチドを誘導体化するステップと、を含む、方法。
４３．化合物が、Ｃｈｅｍ ２である、実施形態１～４２のいずれかに記載の方法。

【化4】

【0043】

さらなる特定の実施形態
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのものであり、したがって限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。
１．配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）であって、バリアントが、２１５Ｇｌｙを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）。
２．配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号７と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
３．配列番号１０のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１０と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
４．配列番号１１のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１１と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
５．配列番号１２のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１２と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
６．配列番号１３のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１３と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
７．配列番号１４のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１４と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
８．配列番号１５のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１５と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
９．配列番号１６のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１６と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１０．配列番号１７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１７と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１１．配列番号１８のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１８と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１２．配列番号１９のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号１９と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１３．配列番号２０のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２０と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１４．配列番号２１のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２１と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１５．配列番号２２のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２２と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１６．配列番号２３のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２３と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１７．配列番号２４のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２４と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１８．配列番号２５のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２５と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
１９．配列番号２６のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２６と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
２０．配列番号２７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２７と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
２１．配列番号２８のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２８と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
２２．配列番号２９のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号２９と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
２３．配列番号３０のアミノ酸配列またはこのバリアントを含むＡｉｂＲＳであって、バリアントが、配列番号３０と少なくとも４１％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、ＡｉｂＲＳ。
２４．バリアントは、２１５Ｇｌｙを含む、実施形態４～２３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２５．バリアントが、式Ｉまたはこのバリアント：
式Ｉ：
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ、
のものであり、式中、Ｘａａは、任意の種類の１つ以上のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～２４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２６．式Ｉのバリアントが、Ｘａａと指定されていない配列位置で、式Ｉと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、実施形態１～２５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２７．式ＩのＸａａが、任意のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～２６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２８．式ＩのＸａａが、任意のアミノ酸である、実施形態１～２７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
２９．バリアントが、式ＩＩまたはこのバリアント：
式ＩＩ：
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｇｌｎ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ、
のものであり、式中、Ｘａａは、任意の種類の１つ以上のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～２８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３０．式ＩＩのバリアントが、Ｘａａと指定されていない配列位置で、式ＩＩと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、実施形態１～２９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３１．式ＩＩのＸａａが、任意のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～３０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３２．式ＩＩのＸａａが、任意のアミノ酸である、実施形態１～３１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３３．バリアントが、式ＩＩＩまたはこのバリアント：
式ＩＩＩ：
Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ａｒｇ－Ｍｅｔ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｍｅｔ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｇｌｎ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｎ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｉｌｅ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ｇｌｕ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｍｅｔ－Ｐｈｅ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｍｅｔ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｍｅｔ－Ｈｉｓ－Ｉｌｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ、
のものであり、式中、Ｘａａは、任意の種類の１つ以上のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～３２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３４．式ＩＩＩのバリアントが、Ｘａａと指定されていない配列位置で、式ＩＩＩと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、実施形態１～３３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３５．式ＩＩＩのＸａａが、任意のアミノ酸であるか、または存在しない、実施形態１～３４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３６．式ＩＩＩのＸａａが、任意のアミノ酸である、実施形態１～３５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３７．バリアントが、１０Ｐｈｅ、１２Ｇｌｕ、１４Ｇｌｙ、１８Ｌｙｓ、２０Ｃｙｓ、２３Ｃｙｓ、２４Ｇｌｙ、２７Ｐｈｅ、２８Ｔｒｐ、２９Ｔｈｒ、３４Ａｒｇ、３７Ｃｙｓ、３８Ｇｌｙ、３９Ａｓｐ、４１Ｐｒｏ、４２Ｃｙｓ、４５Ｔｙｒ、４７Ｐｈｅ、４８Ｉｌｅ、４９Ｇｌｙ、５１Ｐｒｏ、５９Ｌｅｕ、６１Ｇｌｕ、６３Ａｒｇ、６６Ｐｈｅ、６９Ｐｈｅ、７０Ｐｈｅ、７１Ｇｌｕ、７５Ｈｉｓ、８０Ａｒｇ、８１Ｔｙｒ、８２Ｐｒｏ、８３Ｖａｌ、８６Ａｒｇ、８７Ｔｒｐ、８８Ａｒｇ、８９Ａｓｐ、９０Ａｓｐ、９１Ｖａｌ、９３Ｌｅｕ、９４Ｖａｌ、９５Ｇｌｙ、９６Ａｌａ、９７Ｓｅｒ、９８Ｉｌｅ、１００Ａｓｐ、１０１Ｐｈｅ、１０２Ｇｌｎ、１０３Ｐｒｏ、１０４Ｔｒｐ、１０５Ｖａｌ、１０８Ｇｌｙ、１１２Ｐｒｏ、１１３Ｐｒｏ、１１４Ａｌａ、１１５Ａｓｎ、１１６Ｐｒｏ、１１７Ｌｅｕ、１１９Ｉｌｅ、１２０Ｓｅｒ、１２１Ｇｌｎ、１２２Ｐｒｏ、１２４Ｉｌｅ、１２５Ａｒｇ、１２８Ａｓｐ、１３０Ａｓｐ、１３２Ｖａｌ、１３３Ｇｌｙ、１３６Ｇｌｙ、１３７Ａｒｇ、１３８Ｈｉｓ、１４０Ｔｈｒ、１４２Ｐｈｅ、１４３Ｇｌｕ、１４４Ｍｅｔ、１４５Ｍｅｔ、１４６Ａｌａ、１４７Ｈｉｓ、１４８Ｈｉｓ、１４９Ａｌａ、１５０Ｐｈｅ、１５１Ａｓｎ、１５８Ｔｙｒ、１５９Ｔｒｐ、１６２Ｇｌｕ、１６３Ｔｈｒ、１６４Ｖａｌ、１７０Ｐｈｅ、１８２Ｉｌｅ、１８３Ｔｈｒ、１８４Ｐｈｅ、１８６Ｇｌｕ、１８９Ｔｒｐ、１９１Ｇｌｙ、１９２Ｇｌｙ、１９３Ｇｌｙ、１９４Ａｓｎ、１９５Ａｌａ、１９６Ｇｌｙ、２００Ｇｌｕ、２０１Ｖａｌ、２０５Ｇｌｙ、２０７Ｇｌｕ、２０９Ａｌａ、２１０Ｔｈｒ、２１１Ｌｅｕ、２１２Ｖａｌ、２１３Ｐｈｅ、２１４Ｍｅｔ、２１６Ｔｙｒ、２３８Ｐｒｏ、２４４Ｖａｌ、２４５Ａｓｐ、２４６Ｔｈｒ、２４７Ｇｌｙ、２４８Ｔｙｒ、２４９Ｇｌｙ、２５０Ｌｅｕ、２５１Ｇｌｕ、２５２Ａｒｇ、２５５Ｔｒｐ、２５７Ｓｅｒ、２５９Ｇｌｙ、２６１Ｐｒｏ、２６２Ｔｈｒ、２６４Ｔｙｒ、２６５Ａｓｐ、２６６Ａｌａ、２７５Ｌｅｕ、２７９Ａｌａ、２８０Ｇｌｙ、２８９Ｉｌｅ、２９０Ｌｅｕ、２９７Ａｌａ、２９８Ｇｌｙ、３０１Ａｓｐ、３０８Ｌｅｕ、３１１Ｌｅｕ、３１２Ａｒｇ、３１５Ｖａｌ、３１６Ａｌａ、３２５Ｇｌｕ、３２６Ｌｅｕ、３３２Ｐｒｏ、３３４Ｇｌｕ、３３７Ｔｙｒ、３３８Ａｌａ、３３９Ｉｌｅ、３４０Ａｌａ、３４１Ａｓｐ、３４２Ｈｉｓ、３４３Ｔｈｒ、３４６Ｌｅｕ、３４８Ｐｈｅ、３４９Ｍｅｔ、３５０Ｌｅｕ、３５２Ａｓｐ、３５３Ｇｌｙ、３５４Ｖａｌ、３５６Ｐｒｏ、３５７Ｓｅｒ、３５８Ａｓｎ、３６１Ａｌａ、３６２Ｇｌｙ、３６３Ｔｙｒ、３６４Ｌｅｕ、３６５Ａｌａ、３６６Ａｒｇ、３６７Ｌｅｕ、３６９Ｉｌｅ、３７０Ａｒｇ、３７４Ａｒｇ、３７９Ｌｅｕ、３８０Ｇｌｙ、３８４Ｐｒｏ、３８５Ｌｅｕ、３８８Ｉｌｅ、４０１Ｐｒｏ、４０２Ｇｌｕ、４０５Ｇｌｕ、４１７Ｇｌｕ、４１８Ｇｌｕ、４２４Ｔｈｒ、４２７Ａｒｇ、４２８Ｇｌｙ、４４０Ｌｙｓ、４４３Ｇｌｙ、４４８Ｐｒｏ、４５２Ｌｅｕ、４５６Ｔｙｒ、４５８Ｓｅｒ、４５９Ｈｉｓ、４６０Ｇｌｙ、４６３Ｐｒｏ、４６４Ｇｌｕ、４６８Ｇｌｕ、４７０Ａｌａ、４７７Ｖａｌ、４８０Ｐｒｏ、４８１Ａｓｐ、４８２Ａｓｎ、４８３Ｐｈｅ、４８４Ｔｙｒ、４８７Ｖａｌ、および４８８Ａｌａからなるリストから選択される少なくとも１９７個のアミノ酸を含む、実施形態１～３６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３８．バリアントが、１０Ｐｈｅ、１２Ｇｌｕ、１４Ｇｌｙ、１７Ａｒｇ、１８Ｌｙｓ、２０Ｃｙｓ、２３Ｃｙｓ、２４Ｇｌｙ、２７Ｐｈｅ、２８Ｔｒｐ、２９Ｔｈｒ、３１Ａｓｐ、３２Ｐｒｏ、３３Ａｓｐ、３４Ａｒｇ、３５Ｇｌｕ、３６Ｔｈｒ、３７Ｃｙｓ、３８Ｇｌｙ、３９Ａｓｐ、４１Ｐｒｏ、４２Ｃｙｓ、４３Ａｓｐ、４５Ｔｙｒ、４７Ｐｈｅ、４８Ｉｌｅ、４９Ｇｌｙ、５１Ｐｒｏ、５７Ｔｙｒ、５９Ｌｅｕ、６１Ｇｌｕ、６３Ａｒｇ、６４Ｇｌｕ、６６Ｐｈｅ、６７Ｌｅｕ、６９Ｐｈｅ、７０Ｐｈｅ、７１Ｇｌｕ、７５Ｈｉｓ、７７Ａｒｇ、８０Ａｒｇ、８１Ｔｙｒ、８２Ｐｒｏ、８３Ｖａｌ、８６Ａｒｇ、８７Ｔｒｐ、８８Ａｒｇ、８９Ａｓｐ、９０Ａｓｐ、９１Ｖａｌ、９３Ｌｅｕ、９４Ｖａｌ、９５Ｇｌｙ、９６Ａｌａ、９７Ｓｅｒ、９８Ｉｌｅ、１００Ａｓｐ、１０１Ｐｈｅ、１０２Ｇｌｎ、１０３Ｐｒｏ、１０４Ｔｒｐ、１０５Ｖａｌ、１０７Ｓｅｒ、１０８Ｇｌｙ、１１２Ｐｒｏ、１１３Ｐｒｏ、１１４Ａｌａ、１１５Ａｓｎ、１１６Ｐｒｏ、１１７Ｌｅｕ、１１９Ｉｌｅ、１２０Ｓｅｒ、１２１Ｇｌｎ、１２２Ｐｒｏ、１２３Ｓｅｒ、１２４Ｉｌｅ、１２５Ａｒｇ、１２７Ｔｈｒ、１２８Ａｓｐ、１３０Ａｓｐ、１３１Ａｓｎ、１３２Ｖａｌ、１３３Ｇｌｙ、１３５Ｔｈｒ、１３６Ｇｌｙ、１３７Ａｒｇ、１３８Ｈｉｓ、１４０Ｔｈｒ、１４２Ｐｈｅ、１４３Ｇｌｕ、１４４Ｍｅｔ、１４５Ｍｅｔ、１４６Ａｌａ、１４７Ｈｉｓ、１４８Ｈｉｓ、１４９Ａｌａ、１５０Ｐｈｅ、１５１Ａｓｎ、１５３Ｐｒｏ、１５８Ｔｙｒ、１５９Ｔｒｐ、１６１Ａｓｐ、１６２Ｇｌｕ、１６３Ｔｈｒ、１６４Ｖａｌ、１６５Ｇｌｕ、１７０Ｐｈｅ、１７２Ｔｈｒ、１７５Ｌｅｕ、１８０Ｇｌｕ、１８２Ｉｌｅ、１８３Ｔｈｒ、１８４Ｐｈｅ、１８５Ｌｙｓ、１８６Ｇｌｕ、１８９Ｔｒｐ、１９１Ｇｌｙ、１９２Ｇｌｙ、１９３Ｇｌｙ、１９４Ａｓｎ、１９５Ａｌａ、１９６Ｇｌｙ、１９７Ｐｒｏ、２００Ｇｌｕ、２０１Ｖａｌ、２０２Ｌｅｕ、２０４Ａｒｇ、２０５Ｇｌｙ、２０６Ｌｅｕ、２０７Ｇｌｕ、２０８Ｖａｌ、２０９Ａｌａ、２１０Ｔｈｒ、２１１Ｌｅｕ、２１２Ｖａｌ、２１３Ｐｈｅ、２１４Ｍｅｔ、２１５Ｇｌｎ、２１６Ｔｙｒ、２１７Ｌｙｓ、２３３Ｇｌｙ、２３８Ｐｒｏ、２３９Ｍｅｔ、２４４Ｖａｌ、２４５Ａｓｐ、２４６Ｔｈｒ、２４７Ｇｌｙ、２４８Ｔｙｒ、２４９Ｇｌｙ、２５０Ｌｅｕ、２５１Ｇｌｕ、２５２Ａｒｇ、２５４Ｖａｌ、２５５Ｔｒｐ、２５７Ｓｅｒ、２５９Ｇｌｙ、２６０Ｔｈｒ、２６１Ｐｒｏ、２６２Ｔｈｒ、２６３Ａｌａ、２６４Ｔｙｒ、２６５Ａｓｐ、２６６Ａｌａ、２６７Ｖａｌ、２７１Ｖａｌ、２７５Ｌｅｕ、２７９Ａｌａ、２８０Ｇｌｙ、２８９Ｉｌｅ、２９０Ｌｅｕ、２９２Ｇｌｕ、２９３Ａｓｎ、２９４Ｓｅｒ、２９６Ｌｅｕ、２９７Ａｌａ、２９８Ｇｌｙ、３０１Ａｓｐ、３０２Ｉｌｅ、３０３Ｇｌｕ、３０７Ａｓｐ、３０８Ｌｅｕ、３１１Ｌｅｕ、３１２Ａｒｇ、３１５Ｖａｌ、３１６Ａｌａ、３２０Ｇｌｙ、３２１Ｉｌｅ、３２５Ｇｌｕ、３２６Ｌｅｕ、３３２Ｐｒｏ、３３４Ｇｌｕ、３３６Ｉｌｅ、３３７Ｔｙｒ、３３８Ａｌａ、３３９Ｉｌｅ、３４０Ａｌａ、３４１Ａｓｐ、３４２Ｈｉｓ、３４３Ｔｈｒ、３４６Ｌｅｕ、３４８Ｐｈｅ、３４９Ｍｅｔ、３５０Ｌｅｕ、３５２Ａｓｐ、３５３Ｇｌｙ、３５４Ｖａｌ、３５６Ｐｒｏ、３５７Ｓｅｒ、３５８Ａｓｎ、３５９Ｖａｌ、３６０Ｌｙｓ、３６１Ａｌａ、３６２Ｇｌｙ、３６３Ｔｙｒ、３６４Ｌｅｕ、３６５Ａｌａ、３６６Ａｒｇ、３６７Ｌｅｕ、３６８Ｌｅｕ、３６９Ｉｌｅ、３７０Ａｒｇ、３７４Ａｒｇ、３７９Ｌｅｕ、３８０Ｇｌｙ、３８１Ｌｅｕ、３８４Ｐｒｏ、３８５Ｌｅｕ、３８７Ｇｌｕ、３８８Ｉｌｅ、３９６Ｌｅｕ、４０１Ｐｒｏ、４０２Ｇｌｕ、４０５Ｇｌｕ、４１０Ｉｌｅ、４１７Ｇｌｕ、４１８Ｇｌｕ、４２１Ｔｙｒ、４２４Ｔｈｒ、４２５Ｌｅｕ、４２７Ａｒｇ、４２８Ｇｌｙ、４３１Ｌｅｕ、４３２Ｖａｌ、４３９Ｌｅｕ、４４０Ｌｙｓ、４４１Ｌｙｓ、４４３Ｇｌｙ、４４６Ｇｌｕ、４４８Ｐｒｏ、４４９Ｌｅｕ、４５０Ｇｌｕ、４５２Ｌｅｕ、４５６Ｔｙｒ、４５８Ｓｅｒ、４５９Ｈｉｓ、４６０Ｇｌｙ、４６３Ｐｒｏ、４６４Ｇｌｕ、４６６Ｖａｌ、４６８Ｇｌｕ、４７０Ａｌａ、４７４Ｇｌｙ、４７７Ｖａｌ、４８０Ｐｒｏ、４８１Ａｓｐ、４８２Ａｓｎ、４８３Ｐｈｅ、４８４Ｔｙｒ、４８６Ｌｅｕ、４８７Ｖａｌ、４８８Ａｌａ、および４９２Ｇｌｕからなるリストから選択される少なくとも２６４個のアミノ酸を含む、実施形態１～３７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
３９．バリアントが、１Ｍｅｔ、３Ｍｅｔ、４Ａｓｐ、５Ｍｅｔ、７Ｔｈｒ、８Ａｒｇ、９Ｍｅｔ、１０Ｐｈｅ、１１Ｌｙｓ、１２Ｇｌｕ、１３Ｇｌｕ、１４Ｇｌｙ、１５Ｔｒｐ、１６Ｉｌｅ、１７Ａｒｇ、１８Ｌｙｓ、２０Ｃｙｓ、２１Ｌｙｓ、２３Ｃｙｓ、２４Ｇｌｙ、２５Ｌｙｓ、２７Ｐｈｅ、２８Ｔｒｐ、２９Ｔｈｒ、３０Ｌｅｕ、３１Ａｓｐ、３２Ｐｒｏ、３３Ａｓｐ、３４Ａｒｇ、３５Ｇｌｕ、３６Ｔｈｒ、３７Ｃｙｓ、３８Ｇｌｙ、３９Ａｓｐ、４０Ｐｒｏ、４１Ｐｒｏ、４２Ｃｙｓ、４３Ａｓｐ、４４Ｇｌｕ、４５Ｔｙｒ、４７Ｐｈｅ、４８Ｉｌｅ、４９Ｇｌｙ、５０Ｌｙｓ、５１Ｐｒｏ、５２Ｇｌｙ、５３Ｉｌｅ、５４Ｐｒｏ、５５Ｌｙｓ、５６Ｌｙｓ、５７Ｔｙｒ、５８Ｔｈｒ、５９Ｌｅｕ、６１Ｇｌｕ、６２Ｍｅｔ、６３Ａｒｇ、６４Ｇｌｕ、６５Ｌｙｓ、６６Ｐｈｅ、６７Ｌｅｕ、６８Ｓｅｒ、６９Ｐｈｅ、７０Ｐｈｅ、７１Ｇｌｕ、７４Ｇｌｙ、７５Ｈｉｓ、７６Ｇｌｙ、７７Ａｒｇ、７８Ｖａｌ、７９Ｌｙｓ、８０Ａｒｇ、８１Ｔｙｒ、８２Ｐｒｏ、８３Ｖａｌ、８４Ｌｅｕ、８５Ｐｒｏ、８６Ａｒｇ、８７Ｔｒｐ、８８Ａｒｇ、８９Ａｓｐ、９０Ａｓｐ、９１Ｖａｌ、９２Ｌｅｕ、９３Ｌｅｕ、９４Ｖａｌ、９５Ｇｌｙ、９６Ａｌａ、９７Ｓｅｒ、９８Ｉｌｅ、９９Ｍｅｔ、１００Ａｓｐ、１０１Ｐｈｅ、１０２Ｇｌｎ、１０３Ｐｒｏ、１０４Ｔｒｐ、１０５Ｖａｌ、１０６Ｉｌｅ、１０７Ｓｅｒ、１０８Ｇｌｙ、１０９Ｇｌｕ、１１０Ａｌａ、１１１Ａｓｐ、１１２Ｐｒｏ、１１３Ｐｒｏ、１１４Ａｌａ、１１５Ａｓｎ、１１６Ｐｒｏ、１１７Ｌｅｕ、１１８Ｔｈｒ、１１９Ｉｌｅ、１２０Ｓｅｒ、１２１Ｇｌｎ、１２２Ｐｒｏ、１２３Ｓｅｒ、１２４Ｉｌｅ、１２５Ａｒｇ、１２６Ｐｈｅ、１２７Ｔｈｒ、１２８Ａｓｐ、１２９Ｉｌｅ、１３０Ａｓｐ、１３１Ａｓｎ、１３２Ｖａｌ、１３３Ｇｌｙ、１３４Ｉｌｅ、１３５Ｔｈｒ、１３６Ｇｌｙ、１３７Ａｒｇ、１３８Ｈｉｓ、１３９Ｐｈｅ、１４０Ｔｈｒ、１４１Ｉｌｅ、１４２Ｐｈｅ、１４３Ｇｌｕ、１４４Ｍｅｔ、１４５Ｍｅｔ、１４６Ａｌａ、１４７Ｈｉｓ、１４８Ｈｉｓ、１４９Ａｌａ、１５０Ｐｈｅ、１５１Ａｓｎ、１５２Ｔｙｒ、１５３Ｐｒｏ、１５４Ｇｌｙ、１５５Ｌｙｓ、１５６Ｐｒｏ、１５７Ｉｌｅ、１５８Ｔｙｒ、１５９Ｔｒｐ、１６０Ｍｅｔ、１６１Ａｓｐ、１６２Ｇｌｕ、１６３Ｔｈｒ、１６４Ｖａｌ、１６５Ｇｌｕ、１６６Ｌｅｕ、１６７Ａｌａ、１６８Ｐｈｅ、１６９Ｇｌｕ、１７０Ｐｈｅ、１７１Ｐｈｅ、１７２Ｔｈｒ、１７３Ｌｙｓ、１７５Ｌｅｕ、１７６Ｇｌｙ、１７７Ｍｅｔ、１７８Ｌｙｓ、１７９Ｐｒｏ、１８０Ｇｌｕ、１８１Ａｓｐ、１８２Ｉｌｅ、１８３Ｔｈｒ、１８４Ｐｈｅ、１８５Ｌｙｓ、１８６Ｇｌｕ、１８７Ａｓｎ、１８８Ｐｒｏ、１８９Ｔｒｐ、１９０Ａｌａ、１９１Ｇｌｙ、１９２Ｇｌｙ、１９３Ｇｌｙ、１９４Ａｓｎ、１９５Ａｌａ、１９６Ｇｌｙ、１９７Ｐｒｏ、１９８Ａｌａ、１９９Ｐｈｅ、２００Ｇｌｕ、２０１Ｖａｌ、２０２Ｌｅｕ、２０３Ｔｙｒ、２０４Ａｒｇ、２０５Ｇｌｙ、２０６Ｌｅｕ、２０７Ｇｌｕ、２０８Ｖａｌ、２０９Ａｌａ、２１０Ｔｈｒ、２１１Ｌｅｕ、２１２Ｖａｌ、２１３Ｐｈｅ、２１４Ｍｅｔ、２１５Ｇｌｎ、２１６Ｔｙｒ、２１７Ｌｙｓ、２１９Ａｌａ、２２０Ｐｒｏ、２２３Ａｌａ、２２７Ｇｌｎ、２２８Ｖａｌ、２２９Ｖａｌ、２３１Ｉｌｅ、２３２Ｌｙｓ、２３３Ｇｌｙ、２３４Ａｓｐ、２３６Ｔｙｒ、２３７Ｖａｌ、２３８Ｐｒｏ、２３９Ｍｅｔ、２４１Ｔｈｒ、２４３Ｖａｌ、２４４Ｖａｌ、２４５Ａｓｐ、２４６Ｔｈｒ、２４７Ｇｌｙ、２４８Ｔｙｒ、２４９Ｇｌｙ、２５０Ｌｅｕ、２５１Ｇｌｕ、２５２Ａｒｇ、２５３Ｌｅｕ、２５４Ｖａｌ、２５５Ｔｒｐ、２５６Ｍｅｔ、２５７Ｓｅｒ、２５８Ｇｌｎ、２５９Ｇｌｙ、２６０Ｔｈｒ、２６１Ｐｒｏ、２６２Ｔｈｒ、２６３Ａｌａ、２６４Ｔｙｒ、２６５Ａｓｐ、２６６Ａｌａ、２６７Ｖａｌ、２６８Ｌｅｕ、２６９Ｇｌｙ、２７０Ｔｙｒ、２７１Ｖａｌ、２７２Ｖａｌ、２７３Ｇｌｕ、２７４Ｐｒｏ、２７５Ｌｅｕ、２７６Ｌｙｓ、２７８Ｍｅｔ、２７９Ａｌａ、２８０Ｇｌｙ、２８２Ｇｌｕ、２８３Ｌｙｓ、２８４Ｉｌｅ、２８５Ａｓｐ、２８８Ｉｌｅ、２８９Ｌｅｕ、２９０Ｍｅｔ、２９１Ｇｌｕ、２９２Ａｓｎ、２９３Ｓｅｒ、２９４Ａｒｇ、２９５Ｌｅｕ、２９６Ａｌａ、２９７Ｇｌｙ、２９８Ｍｅｔ、２９９Ｐｈｅ、３００Ａｓｐ、３０１Ｉｌｅ、３０２Ｇｌｕ、３０３Ａｓｐ、３０４Ｍｅｔ、３０５Ｇｌｙ、３０６Ａｓｐ、３０７Ｌｅｕ、３０８Ａｒｇ、３１０Ｌｅｕ、３１１Ａｒｇ、３１４Ｖａｌ、３１５Ａｌａ、３１７Ａｒｇ、３１８Ｖａｌ、３１９Ｇｌｙ、３２０Ｉｌｅ、３２１Ｓｅｒ、３２２Ｖａｌ、３２３Ｇｌｕ、３２４Ｇｌｕ、３２５Ｌｅｕ、３２６Ｇｌｕ、３３０Ａｒｇ、３３１Ｐｒｏ、３３２Ｔｙｒ、３３３Ｇｌｕ、３３４Ｌｅｕ、３３５Ｉｌｅ、３３６Ｔｙｒ、３３７Ａｌａ、３３８Ｉｌｅ、３３９Ａｌａ、３４０Ａｓｐ、３４１Ｈｉｓ、３４２Ｔｈｒ、３４３Ｌｙｓ、３４４Ａｌａ、３４５Ｌｅｕ、３４６Ｔｈｒ、３４７Ｐｈｅ、３４８Ｍｅｔ、３４９Ｌｅｕ、３５０Ａｌａ、３５１Ａｓｐ、３５２Ｇｌｙ、３５３Ｖａｌ、３５４Ｉｌｅ、３５５Ｐｒｏ、３５６Ｓｅｒ、３５７Ａｓｎ、３５８Ｖａｌ、３５９Ｌｙｓ、３６０Ａｌａ、３６１Ｇｌｙ、３６２Ｔｙｒ、３６３Ｌｅｕ、３６４Ａｌａ、３６５Ａｒｇ、３６６Ｌｅｕ、３６７Ｌｅｕ、３６８Ｉｌｅ、３６９Ａｒｇ、３７０Ｌｙｓ、３７１Ｓｅｒ、３７２Ｉｌｅ、３７３Ａｒｇ、３７４Ｈｉｓ、３７５Ｌｅｕ、３７６Ａｒｇ、３７７Ｇｌｕ、３７８Ｌｅｕ、３７９Ｇｌｙ、３８０Ｌｅｕ、３８１Ｇｌｕ、３８３Ｐｒｏ、３８４Ｌｅｕ、３８５Ｓｅｒ、３８６Ｇｌｕ、３８７Ｉｌｅ、３８８Ｖａｌ、３８９Ａｌａ、３９０Ｍｅｔ、３９１Ｈｉｓ、３９２Ｉｌｅ、３９３Ｌｙｓ、３９４Ｇｌｕ、３９５Ｌｅｕ、３９８Ｔｈｒ、３９９Ｐｈｅ、４００Ｐｒｏ、４０１Ｇｌｕ、４０２Ｐｈｅ、４０３Ｌｙｓ、４０４Ｇｌｕ、４０５Ｍｅｔ、４０６Ｇｌｕ、４０７Ａｓｐ、４０８Ｖａｌ、４０９Ｉｌｅ、４１０Ｌｅｕ、４１１Ａｓｐ、４１２Ｉｌｅ、４１５Ｖａｌ、４１６Ｇｌｕ、４１７Ｇｌｕ、４１８Ｌｙｓ、４１９Ａｒｇ、４２０Ｔｙｒ、４２２Ｇｌｕ、４２３Ｔｈｒ、４２４Ｌｅｕ、４２６Ａｒｇ、４２７Ｇｌｙ、４２８Ｓｅｒ、４３０Ｌｅｕ、４３１Ｖａｌ、４３３Ａｒｇ、４３４Ｇｌｕ、４３５Ｉｌｅ、４３７Ｌｙｓ、４３８Ｌｅｕ、４３９Ｌｙｓ、４４０Ｌｙｓ、４４２Ｇｌｙ、４４５Ｇｌｕ、４４７Ｐｒｏ、４４８Ｌｅｕ、４４９Ｇｌｕ、４５０Ｌｙｓ、４５１Ｌｅｕ、４５２Ｉｌｅ、４５３Ｌｅｕ、４５４Ｐｈｅ、４５５Ｔｙｒ、４５６Ｇｌｕ、４５７Ｓｅｒ、４５８Ｈｉｓ、４５９Ｇｌｙ、４６０Ｌｅｕ、４６１Ｔｈｒ、４６２Ｐｒｏ、４６３Ｇｌｕ、４６４Ｉｌｅ、４６５Ｖａｌ、４６７Ｇｌｕ、４６８Ｉｌｅ、４６９Ａｌａ、４７０Ｇｌｕ、４７１Ｌｙｓ、４７２Ｇｌｕ、４７３Ｇｌｙ、４７５Ｌｙｓ、４７６Ｖａｌ、４７８Ｉｌｅ、４７９Ｐｒｏ、４８０Ａｓｐ、４８１Ａｓｎ、４８２Ｐｈｅ、４８３Ｔｙｒ、４８４Ｓｅｒ、４８５Ｌｅｕ、４８６Ｖａｌ、４８７Ａｌａ、４８８Ｌｙｓ、４９０Ａｌａ、および４９１Ｇｌｕからなるリストから選択される少なくとも４３４個のアミノ酸を含む、実施形態１～３８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４０．バリアントが、
１９２位がＴｒｐ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
１９３位がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、
２１３位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、またはＡｌａであり、
２１６位がＰｈｅまたはＴｒｐであり、
２１７位がＭｅｔ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
２４９位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、またはＰｈｅであり、
３６０位がＡｓｎまたはＡｌａであり、
４５９位がＧｌｕまたはＡｌａであることをさらに特徴とする、実施形態１～３９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４１．バリアントが、
１９２位がＨｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
１９３位がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、
２１３位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、またはＡｌａであり、
２１６位がＰｈｅまたはＴｒｐであり、
２１７位がＭｅｔ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕであり、
２４９位がＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、またはＰｈｅであり、
３６０位がＡｌａであり、
４５９位がＡｌａであることをさらに特徴とする、実施形態１～４０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４２．バリアントが、１９２Ｔｒｐ、１９２Ｈｉｓ、１９２Ｖａｌ、１９２Ｉｌｅ、１９２Ｌｅｕ、１９３Ａｌａ、１９３Ｌｅｕ、１９３Ｉｌｅ、１９３Ｇｌｙ、２１３Ｔｈｒ、２１３Ｓｅｒ、２１３Ｃｙｓ、２１３Ａｌａ、２１６Ｐｈｅ、２１６Ｔｒｐ、２１７Ｍｅｔ、２１７Ｉｌｅ、２１７Ｌｅｕ、２４９Ｔｈｒ、２４９Ｓｅｒ、２４９Ｖａｌ、２４９Ｐｈｅ、３６０Ａｓｎ、３６０Ａｌａ、４５９Ｇｌｕ、および４５９Ａｌａからなるリストから選択される１つ以上のアミノ酸をさらに含む、実施形態１～４１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４３．バリアントが、１９２Ｔｒｐ、１９２Ｈｉｓ、１９２Ｖａｌ、１９２Ｉｌｅ、１９２Ｌｅｕ、１９３Ａｌａ、１９３Ｌｅｕ、１９３Ｉｌｅ、１９３Ｇｌｙ、２１３Ｔｈｒ、２１３Ｓｅｒ、２１３Ｃｙｓ、２１３Ａｌａ、２１６Ｐｈｅ、２１６Ｔｒｐ、２１７Ｍｅｔ、２１７Ｉｌｅ、２１７Ｌｅｕ、２４９Ｔｈｒ、２４９Ｓｅｒ、２４９Ｖａｌ、２４９Ｐｈｅ、３６０Ａｓｎ、３６０Ａｌａ、４５９Ｇｌｕ、および４５９Ａｌａからなるリストから選択される２つ以上のアミノ酸をさらに含む、実施形態１～４２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４４．バリアントが、１９２Ｔｒｐ、１９２Ｈｉｓ、１９２Ｖａｌ、１９２Ｉｌｅ、１９２Ｌｅｕ、１９３Ａｌａ、１９３Ｌｅｕ、１９３Ｉｌｅ、１９３Ｇｌｙ、２１３Ｔｈｒ、２１３Ｓｅｒ、２１３Ｃｙｓ、２１３Ａｌａ、２１６Ｐｈｅ、２１６Ｔｒｐ、２１７Ｍｅｔ、２１７Ｉｌｅ、２１７Ｌｅｕ、２４９Ｔｈｒ、２４９Ｓｅｒ、２４９Ｖａｌ、２４９Ｐｈｅ、３６０Ａｓｎ、３６０Ａｌａ、４５９Ｇｌｕ、および４５９Ａｌａからなるリストから選択される３つ以上のアミノ酸をさらに含む、実施形態１～４３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４５．バリアントが、１９２Ｈｉｓ、１９２Ｖａｌ、１９２Ｉｌｅ、１９２Ｌｅｕ、１９３Ｌｅｕ、１９３Ｉｌｅ、１９３Ｇｌｙ、２１３Ｓｅｒ、２１３Ｃｙｓ、２１３Ａｌａ、２１６Ｔｒｐ、２１７Ｉｌｅ、２１７Ｌｅｕ、２４９Ｓｅｒ、２４９Ｖａｌ、２４９Ｐｈｅ、３６０Ａｌａ、および４５９Ａｌａからなるリストから選択される１つ以上のアミノ酸をさらに含む、実施形態１～４４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４６．バリアントが、１９２Ｈｉｓ、１９２Ｖａｌ、１９２Ｉｌｅ、１９２Ｌｅｕ、１９３Ｌｅｕ、１９３Ｉｌｅ、１９３Ｇｌｙ、２１３Ｓｅｒ、２１３Ｃｙｓ、２１３Ａｌａ、２１６Ｔｒｐ、２１７Ｉｌｅ、２１７Ｌｅｕ、２４９Ｓｅｒ、２４９Ｖａｌ、２４９Ｐｈｅ、３６０Ａｌａ、および４５９Ａｌａからなるリストから選択される２つ以上のアミノ酸をさらに含む、実施形態１～４５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４７．バリアントが、１９２Ｈｉｓ、１９２Ｖａｌ、１９２Ｉｌｅ、１９２Ｌｅｕ、１９３Ｌｅｕ、１９３Ｉｌｅ、１９３Ｇｌｙ、２１３Ｓｅｒ、２１３Ｃｙｓ、２１３Ａｌａ、２１６Ｔｒｐ、２１７Ｉｌｅ、２１７Ｌｅｕ、２４９Ｓｅｒ、２４９Ｖａｌ、２４９Ｐｈｅ、３６０Ａｌａ、および４５９Ａｌａからなるリストから選択される３つ以上のアミノ酸をさらに含む、実施形態１～４６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４８．バリアントが、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなるリストから選択される、実施形態１～４７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
４９．バリアントが、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０からなるリストから選択される、実施形態１～４８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５０．ＡｉｂＲＳが、古細菌に由来する、実施形態１～４９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５１．ＡｉｂＲＳが、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来する、実施形態１～５０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５２．ＡｉｂＲＳが、ｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、実施形態１～５１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５３．ｔＲＮＡが、サプレッサーｔＲＮＡである、実施形態１～５２に記載のＡｉｂＲＳ。
５４．ｔＲＮＡが、Ａｉｂをコードする１つ以上のアンチコドンを含む、実施形態１～５３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５５．ＡｉｂをコードするｔＲＮＡのアンチコドンが、終止コドンに相補的である、実施形態１～５４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５６．Ａｉｂをコードするアンチコドンが、ＣＴＡである、実施形態１～５５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５７．ｔＲＮＡが、配列番号３またはこのバリアントによってコードされる、実施形態１～５６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５８．ｔＲＮＡをコードするバリアントが、Ｇ３Ａ変異を含有する、実施形態１～５７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
５９．ｔＲＮＡをコードするバリアントが、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％同一である、実施形態１～５８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６０．ｔＲＮＡをコードするバリアントが、配列番号４である、実施形態１～５９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６１．ｔＲＮＡが、配列番号４によってコードされる、実施形態１～６０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６２．ｔＲＮＡが、古細菌に由来する、実施形態１～６１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６３．ｔＲＮＡが、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉに由来する、実施形態１～６２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６４．ＡｉｂＲＳが、宿主細胞においてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、実施形態１～６３のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６５．ＡｉｂＲＳが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいてｔＲＮＡをＡｉｂでアミノアシル化する機能を果たすように構成されている、実施形態１～６４のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６６．機能の効率が、発現産物、すなわち、ｔＲＮＡの翻訳時に結果として生じるポリペプチドを分析することによって決定される、実施形態１～６５のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６７．効率が、Ａｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドと、Ａｉｂを対象とした位置にＡｌａまたはＡｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドの量との間の組み込み比として表される、実施形態１～６６のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
６８．組み込み比が、ＬＣ－ＭＳを使用して決定され、質量スペクトルに基づいて以下のように計算される、実施形態１～６７のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。組み込み比＝［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}／（［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}＋［ピーク強度］_{Ａｌａ含有ポリペプチド}）＊１００％。
６９．組み込み比が、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、または少なくとも７０％である、実施形態１～６８のいずれかに記載のＡｉｂＲＳ。
７０．１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドの調製のための、実施形態１～６９のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。
７１．１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドが、ＧＬＰ－１類似体である、実施形態１～７０のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。
７２．１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドが、配列番号３２を含む、実施形態１～７１のいずれかに記載のＡｉｂＲＳの使用。
７３．化合物を産生する方法であって、
ａ．実施形態１～７２のいずれかに記載のＡｉｂＲＳを使用して、１つ以上のＡｉｂ残基を含有する結果として生じるポリペプチドを調製するステップと、
ｂ．結果として生じるポリペプチドを誘導体化するステップと、を含む、方法。
７４．結果として生じるポリペプチドが、配列番号３２を含む、実施形態１～７３のいずれかに記載の方法。
７５．化合物が、Ｃｈｅｍ．２である、実施形態１～７４のいずれかに記載の方法。

【化5】

７６．結果として生じるポリペプチドが、配列番号３２を含み、化合物が、Ｃｈｅｍ．２である、実施形態１～７５のいずれかに記載の方法。

【化6】

７７．誘導体化が、Ｃｈｅｍ．３の置換基を導入する、実施形態１～７６のいずれかに記載の方法。

【化7】

【実施例】

【0044】

一般手順
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ＳＤＳ－ＰＡＧＥを、４～１２％のＮｕＰＡＧＥ（商標）Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓを使用して当技術分野における標準として実行して、発現試料を分析した。ゲルおよび試料の調製については、供給業者（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ社）のプロトコルを適用した。

【0045】

ｔＲＮＡ^Ａｉｂ、ＡｉｂＲＳ、および標的ポリペプチド（すなわち、結果として生じるポリペプチド）の発現のためのプラスミド構築
ｔＲＮＡ^Ａｉｂ、ＡｉｂＲＳ、および標的ポリペプチド（すなわち、結果として生じるポリペプチド）の発現を、２つの別個のプラスミドまたは単一のプラスミドから行った。２つの別個のプラスミドを使用する場合、各々は、別個の選択マーカー、すなわち、ａｍｐおよびｋａｎ耐性マーカーを含有した。単一のプラスミドを使用する場合、単一のマーカー、すなわち、ａｍｐを用いた。ｔＲＮＡ^Ａｉｂ、ＡｉｂＲＳ、および標的ポリペプチド（すなわち、結果として生じるポリペプチド）の発現を、別個のプロモーター配列およびターミネーター配列、すなわち、標的ポリペプチドの発現を制御するＴ７プロモーターおよびターミネーター、ＡｉｂＲＳの発現を制御するｌａｃプロモーターおよびターミネーター、ならびにｔＲＮＡ^Ａｉｂの発現を制御するｌｐｐプロモーターおよびターミネーターによって制御した。好ましくは、ｔＲＮＡ^Ａｉｂを、ｔＤＮＡの複数のコピーについて、すなわち、２つの別個の３×コンカテマーとして発現し、各々からの発現を、それぞれｌｐｐプロモーターおよびターミネーター、ならびにｔｅｔプロモーターおよびターミネーターによって制御した。コンカテマー中の各個々のｔＲＮＡ^Ａｉｂを、ＶａｌＵ－ＶａｌＸオペロンリンカーならびにＩｌｅＴおよびＡｌａＴオペロンリンカーによって離間して、ＲＮＡｓｅによる処理が別個のｔＲＮＡ分子を放出することを可能にした。

【0046】

Ｅ．ｃｏｌｉ形質転換
Ｅ．ｃｏｌｉの形質転換を、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９）［Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＥＦ，Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ ｅｄｎ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；１９８９］に従った標準方法によって、またはＤｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）［Ｄｏｗｅｒ，Ｗ．Ｊ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｆ．，＆Ｒａｇｓｄａｌｅ，Ｃ．Ｗ．（１９８８）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６，６１２７－６１４５］に従った、２ｍｍのキュベットにおける、２５μＦ、２００オーム、および２．５ｋＶに設定したＢｉｏ－Ｒａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒを用いたエレクトロポレーションによって行った。形質転換細胞を、適切な選択抗生物質、すなわち、アンピシリンおよび／またはカナバニンが補充されたＬＢ培地上で選択した。

【0047】

Ｅ．ｃｏｌｉ培養
試験されるプラスミドで形質転換したＥ．ｃｏｌｉ ＴＫＯ細胞（ＷＯ／２０１０／０５２３３５）を、凍結ストックから、または（適切な抗生物質を用いて）ＬＢプレート上の新鮮な形質転換体から直接、採取した。次いで、細胞を、８ｍＬのＬＢ培地および抗生物質を充填した５０ｍＬ ｔｕｂｅｓｐｉｎ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｐ５０に接種した。細胞を、２２０ｒｐｍで５時間振盪しながら３７℃で増殖させた。前培養物からの細胞を、適切な抗生物質を１２５ｍＬ Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ Ｆｌａｓｋに充填した、２０ｍＬの最小規定培地（Ｍ９）に希釈した。Ａｉｂを１０ｍＭの濃度まで添加した。細胞を３７℃において１．０のＯＤ６００まで培養した。標的タンパク質発現を、１ｍＭのＩＰＴＧの添加によって誘導し、３０℃または３７℃で最低４時間から一晩までさらに培養した。封入体画分を単離し、次の段落に記載されるように、超音波処理および遠心分離を用いて採取した。

【0048】

試料調製およびＬＣ－ＭＳ方法
１０ＯＤに相当するＥ．ｃｏｌｉ細胞の懸濁液を、１３０００×ｇで５分間遠心分離した。結果として生じる沈殿物を、１ｍＬの１０ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ ５．０の緩衝液中に再懸濁し、３０％の振幅で２分間、５”／５”オン／オフでソニフィケーション処理した。１３０００×ｇで５分間繰り返し遠心分離した後、沈殿物画分を８Ｍ尿素／１００ｍＭ ＤＴＴ／５０ｍＭ ＣＡＰＳ、ｐＨ１２の緩衝液で溶解し、室温で１時間、２０００×ｒｐｍで振盪した。試料を、０．２μｍのＵＰＬＣフィルタで濾過し、以下の設定を使用してＬＣ－ＭＳによって分析した。

【表1】

【0049】

翻訳中のポリペプチドへの２－アミノイソ酪酸の組み込みに適したｔＲＮＡ合成酵素およびｔＲＮＡ
Ｅ．ｃｏｌｉ、酵母、および哺乳類細胞の遺伝子コードへの非天然アミノ酸の系統的付加を可能にする方法論は、以前に報告されている［Ｗａｌｓ Ｋ．ａｎｄ Ｏｖａａ Ｈ；Ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ：ｃｕｒｒｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ｆｒｏｎｔ Ｃｈｅｍ．Ａｐｒ １；２：１５（２０１４）］、［Ｗａｎｇ Ｑ．ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｌ；Ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｙｅａｓｔ；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ；７９４：１９９－２１３（２０１２）］、および［Ｓｃｈｍｉｅｄ ＷＨ，Ｅｌｓａｓｓｅｒ ＳＪ；Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｌｔｉｓｉｔｅ ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｐｙｒｒｏｌｙｓｙｌ ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ／ｔＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｅＲＦ１；Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．Ｎｏｖ ５；１３６（４４）：１５５７７－８３（２０１４）］。方法は、内因性宿主ｔＲＮＡ、ＲＳ、またはアミノ酸との交差反応の低下を伴って、または伴わず、細胞が固有のコドンに応答して所与のアミノ酸を組み込むことを可能にする、遠隔生物から単離された直交ｔＲＮＡ／ＲＳ対の選択に基づく。

【0050】

２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）をポリペプチドに特異的に組み込むために、ｔＲＮＡをＡｉｂで充填することができるＲＳを、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）の内因性部分などの他の翻訳機構と共に開発および利用することができる。ｔＲＮＡをＡｉｂで充填することができるＲＳは、以下で、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）と称される。Ａｉｂで充填されたｔＲＮＡ分子は、以下で、ｔＲＮＡ^Ａｉｂと称される。ＡｉｂＲＳおよびｔＲＮＡ^Ａｉｂは、以下で集合的に、ＡｉｂＲＳ／ｔＲＮＡ^Ａｉｂ対と称される。

【0051】

ＡｌａがＡｉｂと構造的類似性を共有するため、ＡｉｂＲＳおよびｔＲＮＡ^Ａｉｂは便利に、それぞれＡｌａＲＳおよびｔＲＮＡ^Ａｌａに由来し得る。ＡｌａＲＳおよびｔＲＮＡ^Ａｌａは、理論上、任意の生物に由来し得る。この場合、ＡｉｂＲＳおよびｔＲＮＡ^Ａｉｂは、古細菌、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ（ｐｈ）（ｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１）、およびｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（ｗｔ）（配列番号２）からの野生型ＡｌａＲＳおよび野生型ｔＲＮＡ^Ａｌａに由来した。この場合、任意の宿主細胞が理論上この目的に使用され得るが、モデル系としてＥ．ｃｏｌｉを使用して、ｔＲＮＡ^Ａｉｂ最適化およびＡｉｂＲＳ開発を行った。

【0052】

ｔＲＮＡ^Ａｉｂの最適化
［実施例１］
ｔＲＮＡ^Ａｉｂは、原則として、ＡｉｂＲＳと同族である任意のｔＲＮＡ（例えば、ｔＲＮＡ^Ａｌａ）であってもよい。しかしながら、Ａｉｂ残基を組み込む翻訳プロセスの効率を改善するために、ｔＲＮＡが最適化されて、望ましくない翻訳産物、例えば、ＡｉｂではなくＡｌａを含有するポリペプチドの形成が低減され得る。

【0053】

望ましくないＡｉｂを、Ａｌａをコードするすべての位置に組み込むことを回避するために、ｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（ｗｔ）（配列番号２）中のアンチコドンをＣＴＡに変更し、アンバー終止コドンであるＴＡＧで逆補完し、これにより、サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）を得た。任意の終止コドンが、この目的のために原則として使用され得る。

【0054】

サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）は、内因性Ｅ．ｃｏｌｉ翻訳系に直交せず、サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）が、Ｅ．ｃｏｌｉ（ｅｃＡｌａＲＳ）の内因性ＡｌａＲＳによって認識され、ＡｉｂではなくＡｌａでアミノアシル化され得ることを意味する。Ａｉｂでのアミノアシル化に有利に働くために、変異がｐｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）に導入されて、ＡｉｂＲＳに対するその相補性を維持しながら、ｅｃＡｌａＲＳに直交させることができる。そのような変異は、効率の改善をもたらし得るが、それらは原則として、本発明が作用するために必要とされない。パブリックドメイン（すなわち、ＧｅｎｂａｎｋまたはＥＭＢＬ）からの配列、ｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（ｗｔ）（配列番号２）二次構造におけるＧ－Ｕ対を形成するＧ３およびＴ７２ ＤＮＡヌクレオチドのアライメントは、異なる種にわたってｔＲＮＡ^Ａｌａで保存される。さらに、Ａｑｕｉｆｅｘ ａｅｏｌｉｃｕｓのｔＲＮＡ^ＡｌａにおけるＧ３Ａの変異が、ｔＲＮＡ^Ａｌａを任意のＡｌａＲＳに対して認識不可能にすることが、他の古細菌について実証されている［ＭＡ Ｓｗａｉｒｊｏ ｅｔ ａｌ．；Ａｌａｎｙｌ－ｔＲＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ ｆｏｒ Ａｃｃｅｐｔｏｒ－Ｓｔｅｍ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．１３，８２９－８４１，（２００４）］。Ａｑｕｉｆｅｘ ａｅｏｌｉｃｕｓにおける観察から発想を得て、Ｇ３Ａ変異を含有するサプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）を調製し、ｔＲＮＡ^Ａｉｂ（配列番号４）を得た。

【0055】

サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）およびｔＲＮＡ^Ａｉｂ（配列番号４）の直交性を試験した。第１の試料では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を標準プラスミド形質転換によって修飾し、外因性ＤＮＡコード化サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）、およびモデルポリペプチドＭＳ－（Ａｉｂ）－ｈｓＬｅｐｔｉｎ（配列番号５）を細胞内に導入した。第２の試料では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を標準プラスミド形質転換によって修飾し、外因性ＤＮＡコード化ｔＲＮＡ^Ａｉｂ（配列番号４）、およびモデルポリペプチドＭＳ－（Ａｉｂ）－ｈｓＬｅｐｔｉｎ（配列番号５）を細胞内に導入した。理論上、内因性ｅｃＡｌａＲＳが外因性サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）を認識した場合、完全長モデルポリペプチドが発現される（モデルポリペプチドＭＳ－（Ａｉｂ）－ｈｓＬｅｐｔｉｎは、ＡｉｂではなくＡｌａを含有するが）。細胞を一般的な手順に従って培養し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。分析は、完全長モデルポリペプチドが、サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）を含有する細胞中で発現された一方で、ｔＲＮＡ^Ａｉｂ（配列番号４）をコードするＤＮＡを含有する細胞中では、完全長モデルポリペプチドは全く（またはほとんど）発現されなかったことを示し、したがって、ｔＲＮＡ^Ａｉｂ（配列番号４）は、著しく低下した効率で、ｅｃＡｌａＲＳによって認識されることが判明した。

【0056】

２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）の開発
［実施例２］
Ａｌａと比較して、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）（Ｃｈｅｍ．１）は、アルファ－炭素位置に余分なメチル基を含有し、これにより、Ａｉｂは、立体障害のためにｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）と相互作用することができない。

【化8】

【0057】

Ａｌａ結合ポケットを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）のＡｌａＲＳクラスＩＩコア触媒ドメインは、野生型配列の１～２６３位に及ぶアミノ酸配列であり、Ａｌａ結合およびｔＲＮＡ^Ａｌａ結合機能を含むＮ末端ドメインの一部であり、これは以下で、「ａａ１－４９５」と称される。編集およびオリゴマー化ドメイン（ａａ４９６～９１５）は、本試験のすべての構築物から省略され、したがって、以下のすべてのＲＳ構築物は、ｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号６）のａａ１～４９５部分に基づく。Ｎ末端ドメイン（ａａ１～７５２）のｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）結晶構造は、Ｍ．Ｓｏｋａｂｅ ｅｔ ａｌ．（２００９）［Ｓｏｋａｂｅ Ｍ，Ｏｓｅ Ｔ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ａ，Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｋ，Ｎｕｒｅｋｉ Ｏ，Ｙａｏ Ｍ，Ｔａｎａｋａ Ｉ；Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａｌａｎｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｗｉｔｈ ｅｄｉｔｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ；ＰＮＡＳ １０６（２７）：１１０２８－１１０３３（２００９）］によって公開されている。

【0058】

結晶構造２ＺＺＧ（オリゴマー化ドメインなしの５”－Ｏ－（Ｎ－（Ｌ－アラニル）－スルファミオキシル）アデニンと複合したアラニン－ｔＲＮＡ合成酵素の結晶構造）中のアラニンＣ－アルファ炭素原子に５オングストロームよりも近い原子を有する残基に基づいて、ＡｌａＲＳのアラニン結合ポケットを計算した。２ＺＺＧ．ｐｄｂファイルをロードし、Ａ５Ａ９９９．ＣＡ原子を選択し、次いで、５オングストローム以内の原子を選択することによって、標準的な構造可視化ソフトウェア、特にＡｃｃｅｌｒｙｓ ＶＬ Ｖｉｅｗｅｒで、距離を計算した。これらの原子は、Ａ９９、Ｍ１４７、Ｗ１９２、Ｔ２１３、Ｖ２１５、Ｄ２４８、Ｔ２４９、およびＧ２５０に属した。特に、Ｗ１９２およびＶ２１５は、Ａｉｂの余分なメチル基の推定位置に近接していた。Ａｉｂの余分なメチル基は、これら２つの位置の変異によって適合され得ると推測された。ｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号６）のａａ１～４９５部分の変異体を調製し、具体的には、１９２位の２つの変異、すなわち、Ｗ１９２ＨおよびＷ１９２Ｆを試験し、２１５位の１つの変異、すなわち、Ｖ２１５Ｇを単独で、およびＷ１９２Ｈと組み合わせて試験し、合計４つの変異体をもたらした。また、ｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号６）の野生型ａａ１～４９５部分も試験した。

【表2】

【0059】

変異体を、標準プラスミド形質転換方法によって、サプレッサーｐｈｔＲＮＡ^Ａｌａ（配列番号３）の１コピー、およびモデルポリペプチドＭＳ－（Ａｉｂ）－ｈｓＬｅｐｔｉｎ（配列番号５）をコードするポリヌクレオチドと共に、Ｅ．ｃｏｌｉ ＴＫＯ細胞に形質転換した。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を、一般的な手順に従って培養した。単離した封入体画分を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析した。Ｖ２１５Ｇおよび／またはＷ１９２Ｈ変異を含むすべての変異体（すなわち、配列番号７、配列番号９、および配列番号１０）について、約１６ｋＤａにおける異なる強度のバンドが観察された（配列番号８または野生型については、バンドは観察されなかった）。可溶化封入体を、一般的な手順に従ってＬＣ－ＭＳを使用して分析し、配列番号７を有する試料におけるバンドが、発現したポリペプチドＭＳ－（Ａｉｂ）－ｈｓＬｅｐｔｉｎ（配列番号５）の小さい部分を表したことが確認された（実測値［ｍ／１］＝１６１９８．６；計算値［ｍ／１］＝１６１９８．４）。変異体の効率を組み込み比として表し、実施例３に記載されるように計算した。配列番号７の組み込み比は、１０％以上であった。

【0060】

［実施例３］
古細菌のＡｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓについては、ｔＲＮＡ^Ａｌａアミノアシル化機構が、ＤＮＡポリヌクレオチド中のＧ３およびＴ７２に対応する単一のＧ－Ｕ対に基づいていてもよいこと、ならびにこの対との相互作用に関与するＡｌａＲＳの主要な残基が、Ｎ３５９およびＤ４５０であること、ならびにＰｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉのＡｌａＲＳについては、２つの対応する主要な残基が、Ｎ３６０およびＥ４５９であることが報告されている。さらに、ＡｌａＲＳ中のこれらの主要な残基が、古細菌ドメインにわたって保存されることが報告されている［Ｍ．Ｎａｇａｎｕｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５１０，ｐａｇｅｓ ５０７－５１１（２０１４）］。

【0061】

Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａ変異を含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１１）のａａ１～４９５の変異体を、一般的な手順に従って、ｔＲＮＡ^Ａｉｂ（配列番号４）の６コピー、ならびに１～２４位のＩＬ－２１タンパク質からの封入体誘導領域およびＡｉｂ含有ＧＬＰ－１類似体領域を含む、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１（配列番号３１）をコードするポリヌクレオチドを含有する、プラスミド上のＥ．ｃｏｌｉ ＴＫＯ細胞に形質転換した。Ａｉｂ含有ＧＬＰ－１領域は、セマグルチドのポリペプチド骨格（配列番号３２）と同一であった［Ｌａｕ Ｊ．ｅｔ．ａｌ，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｎｃｅ－ｗｅｅｋｌｙ ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１（ＧＬＰ－１）ａｎａｌｏｇｕｅ ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１５；５８：７３７０－７３８０］。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を一般的な手順に従って培養し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。約８ｋＤａの強力なバンドが識別され、ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１（配列番号３１）が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３。Ａｉｂ機能の効率を、Ａｉｂを含有する結果として生じるポリペプチドの量と、Ａｉｂをコードする位置にＡｉｂまたはＡｌａを含有する結果として生じるポリペプチドの量との間の組み込み比として表し、質量スペクトルに基づいて以下のように計算した：組み込み比＝［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}／（［ピーク強度］_{Ａｉｂ含有ポリペプチド}＋［ピーク強度］_{Ａｌａ含有ポリペプチド}）＊１００％。配列番号１１の組み込み比は、６３％であると計算された。

【0062】

［実施例４］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１２）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４，６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、８２％であった。

【0063】

［実施例５］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ｍ２１７Ｌ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１３）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、６６％であった。

【0064】

［実施例６］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ａ１９３Ｌ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１４）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４，６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、７１％であった。

【0065】

［実施例７］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ｆ２１６Ｗ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１５）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、６６％であった。

【0066】

［実施例８］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ａ１９３Ｌ、Ｆ２１６Ｗ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１６）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、６３％であった。

【0067】

［実施例９］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、およびＡ１９３Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１７）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．８；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、６０％であった。

【0068】

［実施例１０］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ａ１９３Ｉ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１８）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、７２％であった。

【0069】

［実施例１１］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ａ１９３Ｌ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号１９）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、８２％であった。

【0070】

［実施例１２］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ａ１９３Ｉ、Ｍ２１７Ｌ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２０）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．８；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、５１％であった。

【0071】

［実施例１３］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ａ１９３Ｌ、Ｍ２１７Ｌ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２１）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．８；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、５７％であった。

【0072】

［実施例１４］
Ｗ１９２Ｖ、Ｖ２１５Ｇ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２２）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．４；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、７７％であった。

【0073】

［実施例１５］
Ｗ１９２Ｉ、Ｖ２１５Ｇ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２３）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．４；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、７４％であった。

【0074】

［実施例１６］
Ｗ１９２Ｌ、Ｖ２１５Ｇ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２４）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２５．０；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、５４％であった。

【0075】

［実施例１７］
Ｗ１９２Ｈ、Ａ１９３Ｇ、Ｖ２１５Ｇ、Ｍ２１７Ｉ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２５）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．４；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、８６％であった。

【0076】

［実施例１８］
Ｗ１９２Ｈ、Ｔ２１３Ｓ、Ｖ２１５Ｇ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２６）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．２；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、５６％であった。

【0077】

［実施例１９］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ｔ２４９Ｓ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２７）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２５．０；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、６７％であった。

【0078】

［実施例２０］
Ｗ１９２Ｈ、Ｖ２１５Ｇ、Ｔ２４９Ｖ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２８）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．８；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、７８％であった。

【0079】

［実施例２１］
Ｗ１９２Ｈ、Ｔ２１３Ｃ、Ｖ２１５Ｇ、Ｔ２４９Ｖ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号２９）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．８；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、８２％であった。

【0080】

［実施例２２］
Ｗ１９２Ｈ、Ｔ２１３Ａ、Ｖ２１５Ｇ、Ｔ２４９Ｆ、Ｎ３６０Ａ、およびＥ４５９Ａを含有するｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号３０）のａａ１～４９５の変異体を調製し、実施例３に記載される手順に従って試験した。ＬＣ－ＭＳは、モデルポリペプチドＩＬ２１－Ｈ（Ａｉｂ）－ＧＬＰ－１が発現されていることを確認した（実測値［ｍ／１］＝８３２４．６；計算値［ｍ／１］＝８３２４．３）。計算された組み込み比は、８３％であった。

【0081】

［実施例２３］
古細菌ＡｌａＲＳのコンセンサス配列を、ｐｈＡｌａＲＳ（ｗｔ）（配列番号６）のａａ１～４９５部分と最も同一の１００個の配列を抽出することによって作製した。「Ａｌｌ ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＰＤＢ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ＋ＰＩＲ＋ＰＲＦ」に対するクエリーとして配列番号６を使用し、かつＮＣＢＩオンラインｂｌａｓｔｐスイートを使用した、ＮＣＢＩ配列データベースから。抽出した配列を、配列番号６と同じ長さまでＮ末端およびＣ末端でトリミングし（Ｎ末端伸長およびＣ末端編集ドメインを除去するために）、次いで、標準アライメントアルゴリズム、特に，Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックスを用いたＭｕｌｔｉｐｌｅ Ａｌｉｇｎを使用したＧｅｎｅｉｏｕｓ（登録商標）１０．２．２ソフトウェアを使用してアラインした。アミノ酸位置が保存されたかどうかを示すために、アライメント中のすべての配列にわたって、同一性の閾値をそれぞれ８５％、７５％、または５０％として設定することによって、３つのコンセンサス配列を作り出した。次いで、コンセンサス配列中の所与のアミノ酸位置を、設定された閾値を超えて保存される場合は特定のアミノ酸として、またはそうでなければ、閾値を超えて保存されていない場合は任意のアミノ酸に対するＸａａとして、のいずれかで示した。コンセンサス配列を表２に提供する。コンセンサス配列は、ＮＣＢＩゲノムデータベースが定期的に更新されるにつれて、経時的に変化し得る。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0082】

クレームされたＡｉｂＲＳは、コンセンサス配列に関して、例えば、コンセンサス配列のバリアントとして定義されてもよい。コンセンサス配列のバリアントとして定義されるクレームされたＡｉｂＲＳは、コンセンサス配列と参照配列との保存されたアミノ酸（すなわち、Ｘａａと指定されていないアミノ酸）の間の特定のレベルの配列同一性によってさらに定義されてもよい。この場合、コンセンサス配列のクレームされたバリアントが、コンセンサス配列と参照配列との間の特定の配列同一性によって設定される限界内に入る限りにおいて、保存されたアミノ酸位置の変動を有し得ることが理解されるべきである。コンセンサス配列のバリアントとして定義されるクレームされたＡｉｂＲＳの非限定的な例が、以下に提供される：
Ａ．配列番号７のアミノ酸配列またはこのバリアントを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）であって、配列番号７のバリアントが、２１５Ｇｌｙを含む、２－アミノイソ酪酸－ｔＲＮＡ合成酵素（ＡｉｂＲＳ）。
Ｂ．配列番号７のバリアントが、式Ｉのバリアントであり、式Ｉが、
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｈｉｓ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｍｅｔ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｔｈｒ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ａｌａ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｈｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ
であり、式中、各Ｘａａは独立して選択され、１つ以上のアミノ酸であるか、または存在せず、
式Ｉのバリアントが、Ｘａａと指定されていない位置で、配列番号７と少なくとも９０％同一である、クレームＡに記載のＡｉｂＲＳ。

【0083】

本実施例では、クレームＢのクレーム用語は、クレームされたＡｉｂＲＳをコンセンサス配列のバリアント、すなわち、式Ｉのバリアントとして定義する。さらに、クレームＢのクレーム用語は、式Ｉのバリアントが、Ｘａａと指定されていない位置で、配列番号７と少なくとも９０％同一であることを定義し、配列番号７と比較した場合の１０％の変動が、保存されたアミノ酸で許容されることを意味する。クレームＢが依存するクレームＡによると、２１５位は、Ｇｌｙでなければならない。しかしながら、式Ｉは、２１５位をＶａｌであると定義し、これは、クレームＢのクレームされたＡｉｂＲＳが、式Ｉのバリアントとして（および式Ｉそれ自体としてではなく）定義され、保存されたアミノ酸における変動が、上記で説明したように許容され、したがって、式Ｉのクレームされたバリアントが、２１５位にＧｌｙを含有してもよいためであり、その結果、クレームＡとＢとの間に矛盾はない。

【0084】

本発明のある特定の特徴が本明細書に例示および記載されているが、ここで、多くの修正、置換、変更、および同等物が当業者に想到されるであろう。したがって、添付の特許請求の範囲が、本発明の真の趣旨の範囲内にあるこうしたすべての修正および変更を網羅することを意図していることが理解されるべきである。

【配列表】

2022521321000001.app

【国際調査報告】