特表 2022-521478 薬剤を担持したプラズマポリマーナノ粒子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-08

(54)【発明の名称】薬剤を担持したプラズマポリマーナノ粒子

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/51 20170101AFI20220401BHJP

   A61K 47/58 20170101ALI20220401BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 31/192 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 31/366 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20220401BHJP

【ＦＩ】

A61K47/51

A61K47/58

A61K45/00

A61K38/20

A61K31/192

A61K31/366

A61K31/337

A61K31/436

A61P9/14

A61P9/10

A61K9/14

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021546883

(86)(22)【出願日】2020-02-11

(85)【翻訳文提出日】2021-09-03

(86)【国際出願番号】 AU2020050111

(87)【国際公開番号】W WO2020163906

(87)【国際公開日】2020-08-20

(31)【優先権主張番号】2019900427

(32)【優先日】2019-02-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519223745

【氏名又は名称】ザ ハート リサーチ インスティテュート リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ワイズ，スティーヴン ギャリー

(72)【発明者】

【氏名】コレイア ドス サントス，ミゲル

(72)【発明者】

【氏名】タン，リチャード フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】ファン，ジュイ チーエン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076AA29

4C076AA94

4C076AA95

4C076BB12

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC11

4C076CC27

4C076EE03

4C076EE59

4C076FF31

4C076FF68

4C084AA03

4C084AA17

4C084BA44

4C084CA23

4C084CA53

4C084DA12

4C084DA16

4C084MA05

4C084MA17

4C084MA66

4C084NA10

4C084NA12

4C084ZA44

4C084ZA45

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA02

4C086BA17

4C086CB22

4C086MA02

4C086MA05

4C086MA17

4C086MA66

4C086NA10

4C086NA12

4C086ZA44

4C086ZA45

4C206JA19

4C206MA02

4C206MA05

4C206MA37

4C206MA86

4C206NA10

4C206NA12

4C206ZA44

4C206ZA45

(57)【要約】

本開示は、ナノ粒子、それらの複合体、及び血管炎症の治療または予防方法におけるそれらの使用の分野に関する。本開示はまた、患者のある血管のある領域への薬剤の送達方法であって、ａ）上記薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、ｂ）上記複合体を上記血管の上記領域に送達することとを含む上記方法にも関する。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者のある血管のある領域への薬剤の送達方法であって、
ａ）前記薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）前記複合体を前記血管の前記領域に送達することと
を含む前記方法。

【請求項2】

前記薬剤が生物学的に活性な薬剤または造影剤である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

患者のある血管のある領域における炎症の調節方法または治癒の促進方法であって、
ａ）生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）前記複合体を前記血管の前記領域に送達することと
を含む前記方法。

【請求項4】

前記複合体が、複合体化されていない生物学的に活性な薬剤が前記血管の前記領域に保持される期間よりも長い期間、前記血管の前記領域に保持される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記複合体が、前記血管中の前記送達部位に少なくとも１日保持される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記複合体が、前記血管中の前記送達部位に少なくとも５日間保持される、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記複合体が、前記血管中の前記送達部位に少なくとも１４日間保持される、請求項５に記載の方法。

【請求項8】

前記生物学的に活性な薬剤が、抗炎症性サイトカイン、抗炎症薬、リムス系薬物、スタチン系薬物、または抗増殖薬である、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記生物学的に活性な薬剤が抗炎症性サイトカインである、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記抗炎症性サイトカインがインターロイキン－４またはインターロイキン－１０である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記抗炎症薬がスリンダクであるか、または
前記スタチン系薬物がシンバスタチンであるか、または
前記抗増殖薬が、パクリタキセル、シロリムス、もしくはｍＴＯＲ阻害剤である、
請求項８に記載の方法。

【請求項12】

前記炎症の調節がマクロファージの極性化を介する、請求項３～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

生物学的に活性な薬剤を、患者のある血管のある領域に少なくとも１４日の期間保持させる方法であって、
ａ）前記生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）前記複合体を前記血管に送達することと
を含む前記方法。

【請求項14】

前記複合体がカテーテルを使用して前記血管に送達される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記カテーテルが閉塞灌流カテーテルまたはｓｗｅａｔｉｎｇバルーンカテーテルである、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記患者が血管内介入を受けている、または受けたことがある、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の前記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約５ｎｍ～約５００ｎｍである凝集体と、
抗炎症性サイトカイン、抗炎症薬、スタチン系薬物、及び抗増殖薬からなる群より選択される生物学的に活性な薬剤と
を含む複合体。

【請求項18】

前記生物学的に活性な薬剤が抗炎症性サイトカインである、請求項１７に記載の複合体。

【請求項19】

前記抗炎症性サイトカインがインターロイキン－４またはインターロイキン－１０である、請求項１８に記載の複合体。

【請求項20】

前記抗炎症薬がスリンダクであるか、または
前記スタチン系薬物がシンバスタチンであるか、または
前記抗増殖薬が、パクリタキセル、シロリムス、もしくはｍＴＯＲ阻害剤である
請求項１７に記載の複合体。

【請求項21】

平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の前記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
ｉ）インターロイキン－１０、
ｉｉ）スリンダク、または
ｉｉｉ）シロリムス
とを含む複合体。

【請求項22】

請求項１７～２１のいずれか１項に記載の複合体を、それを必要とする患者のある血管のある領域に送達することを含む、血管損傷または血管疾患の治療または予防方法。

【請求項23】

前記複合体がカテーテルを使用して前記血管の前記領域に送達される、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記カテーテルが閉塞灌流カテーテルまたはｓｗｅａｔｉｎｇバルーンカテーテルである、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記血管損傷が血管内介入の結果である、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記血管損傷が新生内膜過形成または再狭窄である、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記血管疾患がアテローム性動脈硬化症である、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

それを必要とする患者の血管損傷または血管疾患の治療または予防用の薬剤の製造における、請求項１７～２１のいずれか１項に記載の複合体の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年２月１１日出願のオーストラリア仮特許出願第２０１９９００４２７号の優先権を主張し、上記出願の内容は本明細書に援用される。

【0002】

本開示は、ナノ粒子、それらの複合体、及び血管炎症の治療方法または予防方法におけるそれらの使用の分野に関する。

【背景技術】

【0003】

冠状動脈アテローム硬化症は、西洋社会における死亡及び障害の主要な原因である。冠血管の閉塞によって、心筋への血流の低下、心筋組織の損傷、及び最終的には心筋梗塞が起こる。しかしながら、薬剤溶出性ステント及び血管形成術用バルーンなど、アテローム性動脈硬化症の治療に使用される医療器具の長期的な性能は、損傷部位の慢性的な炎症によって制限される。

【0004】

外科的及び血管的介入の長期的な成功は、新生内膜過形成（ＮＩＨ）によって制限される。動脈においては、ＮＩＨは、血管形成術、ステント留置術、または外科的修復などの損傷後の動脈内膜の肥厚である。ＮＩＨはまた、内腔径及び流量が減少し、最終的には移植片の閉塞及び血栓症につながる静脈移植片及び人工バイパス移植片の肥厚を説明するためにも使用される。ＮＩＨは、静脈導管ならびに冠状動脈及び末梢動脈のバイパスで使用される人工導管の両方、ならびに血液透析アクセス用に作製された自己血管動静脈瘻（ＡＶＦ）を含む、すべての形態の血管移植片で発症する。

【0005】

再狭窄は、ステントの挿入、バルーン血管形成術、または血管手術などの血管内処置の一般的な有害事象である。再狭窄の原因となる因子の１つは、血管内処置に応答して誘発される炎症性免疫反応である。再狭窄は血管の狭小化である狭窄の再発であり、血流の低下に繋がる。

【0006】

したがって、抗炎症剤などの生物学的に活性な薬剤及び薬物の血管への送達方法に対するニーズが依然として存在する。

【発明の概要】

【0007】

本開示は、例えば、炎症を調節するかまたは血管における疾患の治癒もしくは治療もしくは予防を促進するために、ある血管のある領域に生物学的に活性な薬剤または薬物を局在化させるための新規な治療法を記載する。特に、本発明者らは、ナノ粒子またはｎａｎｏＰ^３が、生物学的に活性な薬剤、薬物、及び造影剤などの薬剤に、インビトロ及びインビボの両方でそれらの薬剤の生物活性を保持しながら結合することができることを特定している。

【0008】

したがって、一態様において、本開示は、患者のある血管のある領域への薬剤の送達方法であって、
ａ）上記薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）上記複合体を上記血管の上記領域に送達することと
を含む上記方法を提供する。

【0009】

別な態様において、本開示は、患者のある血管のある領域における炎症の調節方法または治癒の促進方法であって、
ａ）生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）上記複合体を上記血管の上記領域に送達することと
を含む上記方法を提供する。

【0010】

別な態様において、本開示は、生物学的に活性な薬剤を、患者のある血管のある領域に少なくとも１４日の期間保持させる方法であって、
ａ）上記生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）上記複合体を上記血管に送達することと
を含む上記方法を提供する。

【0011】

別な態様において、本開示は、平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約５ｎｍ～約５００ｎｍである凝集体と、
抗炎症性サイトカイン、抗炎症薬、スタチン系薬物、及び抗増殖薬からなる群より選択される生物学的に活性な薬剤と
を含む複合体を提供する。

【0012】

別な態様において、本開示は、平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
インターロイキン－１０と
を含む複合体を提供する。

【0013】

別な態様において、本開示は、平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
シロリムスと
を含む複合体を提供する。

【0014】

別な態様において、本開示は、平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
スリンダクと
を含む複合体を提供する。

【0015】

別な態様において、本開示は、本明細書に開示の複合体を、それを必要とする患者のある血管のある領域に送達することを含む、血管損傷または血管疾患の治療または予防方法を提供する。

【0016】

別な態様において、本開示は、それを必要とする患者の血管損傷または血管疾患の治療または予防用の薬剤の製造における、本明細書に開示の複合体の使用を提供する。

【0017】

以下の図は本明細書の一部を形成し、本開示の特定の態様をさらに示すために含まれている。本開示は、本明細書に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図の１つ以上を参照することによって、理解をより深めることができる。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】心血管疾患を軽減するための治療薬としての、ＮＰ３と複合体化されたＩＬ－４（ＮＰ３＋ＩＬ－４）の評価を示す図である。血管構造が減少した部位への治療用カーゴの直接の送達を検討した。Ａ）ＮＰ３プラットフォームの固有の特性により、治療用化合物を迅速に複合体化すること、及びこれらの化合物の、インビボで送達された際の生物学的利用能を向上させることが可能である。Ｂ）血管損傷／心血管疾患の病理を駆動するＭ１マクロファージは炎症誘発性である。これらのマクロファージの表現型を該マクロファージのＭ２抗炎症性状態へと誘導することによって、血管損傷のさらなる進行が緩和され、疾患の退行が促進される可能性がある。ＩＬ－４及びＩＬ－１０を含む、インターロイキンファミリーのさまざまなサイトカインが、このＭ１からＭ２への表現型のシフトを促進する。Ｃ）血管のラット頸動脈モデルを使用して、ＮＰ３結合インターロイキンの心血管病理の治療に対する有効性を判定した。

【図2】ＮＰ３上へのＩＬ－４（青）及びＩＬ－１０（赤）の負荷容量を示す図である。Ｃｙ５標識を使用してＩＬ－４及びＩＬ－１０を標識化し、ＮＰ３上に複合体化した。洗浄液のＣｙ５標識の蛍光読み取り値を定量化し、溶液中に残存しているカーゴ（ＮＰ３に結合していない）を測定し、ＮＰ３への負荷量を測定した。Ａ）溶液中のカーゴの関数としての結合したカーゴの総量。Ｂ）ＩＬ－４及びＩＬ－１０の、負荷容量の関数としてのＮＰ３に対する結合効率。Ｃ）ＩＬ－４及びＩＬ－１０の結合を確認するための、結合したＩＬ－４及びＩＬ－１０の発光スペクトル。

【図3】インビトロでのＭ２マクロファージの極性化に対するＮＰ３＋ＩＬ－４の検証を示す図である。Ａ）ＲＡＷ２６４．７６マウスマクロファージの走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）によって、未処理の対照及びＮＰ３のみと比較して、ＮＰ３＋ＩＬ－４処理により、伸展（ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）（上の列）及び表面粗さ（下の列）が増加することが示され、これらはＭ２活性化と一致する。Ｂ）共焦点顕微鏡を使用すると、高発現Ｍ２酵素であるアルギナーゼ－１（ＡＲＧ－１）（緑）の免疫染色によって、ＮＰ３＋ＩＬ－４により、ＡＲＧ－１の発現が有意に上方制御されることが示され、このことは、対照及びＮＰ３のみと比較して、Ｍ２が強固に活性化されたことを示した。

【図4】血管損傷のインビボモデル及びＮＰ３の保持を示す図である。Ａ）血管損傷の手順のワークフロー：１．結紮／分離した頸動脈ラットセグメントに微小眼内鉗子を挿入する。２．鉗子を拡張し、３６０度回転させて、バルーン損傷過拡張損傷／裸出を模擬する。３．鉗子を抜き出し、同一の切開部を通して小径カテーテルを挿入する。４．上記カテーテルを通してＮＰ３＋ＩＬ－４溶液を送達し、上記分離した血管中で２分間インキュベートする。５．切開部を縫合し、血流を回復させる。Ｂ）Ｃｙ５標識を使用して、上記分離した血管中のＩＬ－４の保持を追跡することにより、遊離のＩＬ－４は血流の回復後すぐに血管壁から洗い流されることが判る。しかし、ＩＬ－４をＮＰ３に結合すると（ＮＰ３＋ＩＬ－４）血管中に有意に保持され、これは５日後も実質的なレベルで持続する。

【図5】新生内膜形成の阻害機序を示す図である。Ａ）処理した頸動脈セグメントにおけるＭ２マクロファージの存在の免疫染色（黄色／緑色）によって、裸出、ＮＰ３＋ＩＬ－４、及び遊離のＩＬ－１０と比較して、ＮＰ３＋ＩＬ－１０群で有意に増加することが示される。Ｂ）損傷した血管内皮の修復の免疫染色による評価によって、ＮＰ３＋ＩＬ４及びＮＰ３＋ＩＬ－１０の両方により、損傷後１４日までに十分な血管内皮の完全性が回復することが示されるが、遊離のＩＬ－１０で処理した場合にはこれが見られない。

【図6A】治療用ＮＰ３送達後２週間での新生内膜形成の分析を示す図である。各処理群における新生内膜形成の程度を示す代表的な組織像。

【図6B】治療用ＮＰ３送達後２週間での新生内膜形成の分析を示す図である。処理した頸動脈セグメントの長さ方向に沿った３つの区画における、定量化した新生内膜形成率。「近位」及び「遠位」という表示は、心臓に対する近接度で血管吻合の位置を示すものである。裸出した損傷は、２週間後には概略６０％が血管閉塞につながる。これが、ＮＰ３＋ＩＬ－４群及びＮＰ３＋ＩＬ１０群においてそれぞれ約３５％及び２０％まで顕著に低下する。遊離のＩＬ－１０及びＮＰ３のみでは血管閉塞に有意な効果はなく、このことは、ＮＰ３プラットフォームがＩＬ－１０の治療効果を促進することを示唆している。

【図7】ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使用したラット頸動脈損傷モデルにおける新生内膜過形成のインビボ分析を示す図である。被検化合物としては、遊離の状態でまたは２００ｎｍのＮＰ３と複合体化された状態で送達される、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、抗増殖薬であるシロリムス、及び非ステロイド系抗炎症薬（スリンダク）が挙げらる。２００ｎｍのＮＰ３上で送達される場合、すべての処理が、それぞれの遊離の状態で送達された対照と比較して、新生内膜過形成の抑制を示す。

【図8】フォン・ウィルブランド因子（ｖｗｆ）染色を使用したラット頸動脈損傷モデルにおける血管再内皮化のインビボ分析を示す図である。被検化合物としては、遊離の状態でまたは２００ｎｍのＮＰ３と複合体化された状態で送達される、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、抗増殖薬であるシロリムス、及び非ステロイド系抗炎症薬（スリンダク）が挙げられる。ＮＰ３で送達されたＩＬ－１０は、血管の治癒（内皮化）を刺激する。驚くべきことに、ＮＰ３で送達されたシロリムスも血管の治癒を刺激する。

【図9】マンノース受容体（ＣＤ２０６）とＣＤ６８細胞表面受容体との共染色を使用したラット頸動脈損傷モデルにおける血管炎症／マクロファージ極性化のインビトロ分析を示す図である。被分析化合物としては、遊離の状態でまたは２００ｎｍのＮＰ３と複合体化された状態で送達される、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）及び非ステロイド系抗炎症薬（スリンダク）が挙げらる。ＮＰ３－ＩＬ－１０は、Ｍ２マクロファージの極性化を促進することによって抗炎症反応を刺激する。

【図10】腸骨動脈損傷のウサギモデルにおけるインビボでのＩＬ－１０と複合体化した２００ｎｍのＮＰ３の性能評価結果を示す図である。Ａ）腸骨動脈損傷のウサギモデル。Ｂ）新生内膜過形成のＨ＆Ｅ染色。Ｃ）血栓症のＣＤ３１染色（白い点線）。Ｄ）炎症性マクロファージ浸潤のＣＤ６８染色（白色の染色）。

【図11】腸骨動脈損傷のウサギモデルにおけるインビボでのＩＬ－１０と複合体化した２００ｎｍのＮＰ３の性能評価結果を示す図である。Ａ）Ｈ＆Ｅ染色分析によって、未処理の対照と比較して、ＩＬ－１０＋ＮＰ３で処理した血管では、７日間にわたって過形成が低下したことが示される。Ｂ）ＣＤ３１染色分析によって、７日間にわたって血栓症の発生が増加し、これがＩＬ－１０＋ＮＰ３で処理した血管では有意に低下することが明らかになっている。Ｃ）血管炎症のＣＤ６８染色によって、未処理の対照と比較して、ＩＬ－１０＋ＮＰ３は７日間にわたって、炎症誘発性マクロファージの浸潤を低下させ、炎症を低下させることが示される。

【図12】１００ｎｍ及び２００ｎｍの両方のｎａｎｏＰ３が７日後に保持され、１００ｎｍのｎａｎｏＰ３も送達後２週間で保持されていたことを示す。

【発明を実施するための形態】

【0019】

当業者であれば、本開示の広範な概括的範囲から逸脱することなく、上記の実施形態に対して多数の変形及び／または変更を行うことができることを認識しよう。したがって、本実施形態は、すべての点において例示であり、限定するものではないと理解されるべきである。

【0020】

全般的な技法及び用語の定義
特に別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、（例えば、免疫学、分子生物学、免疫組織化学、生化学、腫瘍学、及び薬理学の）当業者によって一般的に理解されるものと同一の意味を有すると解釈されるべきである。

【0021】

本開示は、別段の指示がない限り、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、免疫学、及び薬理学の従来の技法を使用して、過度の実験を行うことなく実施される。かかる手順は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＆ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１２），第Ｉ巻、第ＩＩ巻、及び第ＩＩＩ巻のすべて；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，第Ｉ巻及び第ＩＩ巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．，１９９５），ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，本文のすべて；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ，１９８４）ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，本文のすべて、ならびに特にその中の，Ｇａｉｔ，ｐｐｌ－２２；Ａｔｋｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ，ｐｐ３５－８１；Ｓｐｒｏａｔ ｅｔ ａｌ，ｐｐ ８３－１１５；及びＷｕ ｅｔ ａｌ，ｐｐ １３５－１５１による論文；４．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，本文のすべて；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（１９８６）ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，本文のすべて；Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、ならびにＭｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．），全シリーズに記載される。

【0022】

当業者であれば、本開示が、具体的に記載されたもの以外の変形及び変更が可能であることを理解しよう。本開示は、すべてのかかる変形及び変更を含むことを理解されたい。本開示はまた、本明細書において個別にまたは包括的に言及または示されるすべてのステップ、特徴、組成物、及び化合物、ならびに上記ステップまたは特徴の任意の２つ以上の任意且つすべての組み合わせを含む。

【0023】

本開示は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではなく、上記実施形態は例示のみを目的とすることを意図している。機能的に等価な製品、組成物、及び方法は、本明細書に記載されるように、明確に本開示の範囲内にある。

【0024】

本開示の任意の特定の態様または実施形態もしくは実施形態のそれぞれの特徴は、必要な変更を加えて、本開示の任意の他の態様または実施形態もしくは実施形態に適用することができる。

【0025】

本明細書全体を通して、特に別段の明記がない限り、または文脈により別段の解釈をすべきではない限り、単一のステップ、組成物、ステップの群、または組成物の群への言及は、１つ及び複数（すなわち１つ以上）のこれらのステップ、組成物、ステップの群、または組成物の群を包含すると解釈されるべきである。

【0026】

本明細書では、単数形の「ａ」、「及び（ａｎｄ）」、及び「ｔｈｅ」は、文脈による明確な別段の指示がない限り、これらの単語の複数形を含む。例えば、「細菌（ａ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）」への言及は、複数のかかる細菌を包含し、「アレルゲン（ａｎ ａｌｌｅｒｇｅｎ）」への言及は、１種以上のアレルゲンへの言及である。

【0027】

本明細書では、用語「約」は、その語に繋がる任意の値（複数可）における１０％の許容誤差を包含する。誤解を避けるために、用語「約」は当該の整数への明確に限定された言及を包含することを理解されたい（例えば、「約１０」は１０への明示的な言及を包含すると理解されたい）。

【0028】

用語「及び／または」、例えば「Ｘ及び／またはＹ」とは、「Ｘ及びＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると解釈され、両方の意味またはいずれかの意味を明示的に支持するものと解釈されるものとする。

【0029】

本明細書全体を通して、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、明記された要素、整数、もしくはステップ、または要素、整数、もしくはステップの群を含むことを意味するが、任意のその他の要素、整数、もしくはステップ、または要素、整数、もしくはステップの群を排除することは意味しないことが理解されよう。

【0030】

本発明者らは、ＷＯ２０１８／１１２５４３（その内容の全体が本明細書に援用される）において、本明細書において「ｎａｎｏＰ^３」、「ｎａｎｏＰ３」、「ＮａｎｏＰ^３」、「ｎａｎｏＰ^３材料」、「ＮａｎｏＰ^３材料」、または「ＮＰ３」と記述されるナノ粒子状材料の製造を実証した。これらのｎａｎｏＰ^３材料は、容易に機能化することができる、多用途且つ多機能の一群のナノ担体として機能することができる。上記ｎａｎｏＰ^３材料は、ｎａｎｏＰ^３材料内に包埋され、ｎａｎｏＰ^３材料の表面に拡散するラジカルとの反応によって、及び／またはｎａｎｏＰ^３材料もしくはその複合体の表面上に形成された部分／官能基との反応によって、広範囲の生体分子及び薬物と複合体化することができる。

【0031】

本発明者らは、ナノ粒子と複合体化した生物学的に活性な薬剤及び／または造影剤の送達により、ある血管のある領域、例えばある血管の損傷部位において、上記血管の上記領域に遊離の状態で注入した場合の当該薬剤（すなわち、該薬剤は、本明細書に記載のナノ粒子と複合体化されていない形態で送達される）と比較して、インビボで送達した薬剤及び薬物の生物学的利用能及び／または持続性を延長することができることを見出した。

【0032】

したがって、いくつかの実施形態において、上記複合体は、上記血管の上記領域に、複合体化されていない生物学的に活性な薬剤が上記血管の上記領域に保持される期間よりも長い期間保持される。

【0033】

本開示は、血管介入に反応した血管における、生物学的に活性な薬剤の局在化方法及び炎症の調節方法を提供する。本開示はまた、血管の疾患または損傷の治療または予防方法も提供する。

【0034】

炎症、再狭窄、及び新生内膜過形成
本開示の方法を使用して、薬剤、例えば生物学的に活性な薬剤または造影剤を患者のある血管のある領域に送達及び／または局在化することができる。それに代えてまたはそれに加えて、本開示の方法を使用して、患者のある血管のある領域において、炎症を調節するまたは治癒を促進することができる。

【0035】

一態様において、本開示は、患者のある血管のある領域への薬剤の送達方法であって、
ａ）上記薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）上記複合体を上記血管の上記領域に送達することと
を含む上記方法を提供する。

【0036】

一実施形態において、上記ナノ粒子は、平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約５ｎｍ～約５００ｎｍである凝集体である。

【0037】

一実施形態において、上記薬剤は生物学的に活性な薬剤である。

【0038】

別の実施形態において、上記薬剤は造影剤である。

【0039】

一態様において、本開示は、患者のある血管のある領域における炎症の調節方法であって、
ａ）生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）上記複合体を上記血管の上記領域に送達することと
を含む上記方法を提供する。

【0040】

一例において、炎症の調節はマクロファージの極性化を介する。

【0041】

一態様において、本開示は、患者のある血管のある領域における治癒の促進方法であって、
ａ）生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化して複合体を製造することと、
ｂ）上記複合体を上記血管の上記領域に送達することと
を含む上記方法を提供する。

【0042】

炎症は、組織が１つ以上のさまざまな損傷を受けた際に誘発される。この反応は、さまざまな化学的メディエータの放出ならびに循環血液細胞（血小板及び白血球）の損傷部位へのリクルートメント、及びその後の上記循環血液細胞の活性化を含む事象のカスケードから構成される。

【0043】

理論に拘束されることを望むものではないが、再狭窄は、あらゆる形態の血管形成術中に発生する動脈損傷に応答する自然な治癒過程であると考えられている。この非常に複雑な治癒過程によって内膜過形成、より詳細には、内側の平滑筋細胞（ＳＭＣ）の遊走及び増殖が起こる。この動脈の治癒過程に関連する問題は、該治癒過程が停止されない場合があることである。動脈は、その動脈が閉塞するようになるまで「治癒」し続ける。再狭窄は、当該の動脈を当初閉塞させたプラーク様コレステロール物質の再沈着ではないことに留意されたい。

【0044】

理論に拘束されることを望むものではないが、狭窄病変の血管形成術が成功により、プラークの破砕、中膜への切開、内皮細胞の裸出及び破壊、血栓形成性コラーゲンの曝露、組織トロンボプラスチンの放出、及び活性化血小板の凝集につながるプロスタサイクリン産生の低下の拡大が生じると考えられている。

【0045】

活性化血小板は、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、上皮成長因子、及びトランスフォーミング成長因子を含む数種の有糸分裂促進因子を放出する。ＰＤＧＦは有糸分裂促進性及び走化性の両方の特性を有しており、そのため、ＳＭＣの中膜から内膜への遊走及び増殖（内膜過形成）の両方を誘発する可能性がある。ＰＤＧＦは、特定のＰＤＧＦ受容体に結合することにより、ＳＭＣの増殖を引き起こす。ＰＤＧＦが上記受容体に結合すると、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）合成を生じ、新たな細胞が複製される。軽度の内皮損傷によって、血小板の接着及び結果として生じるＰＤＧＦによる活性化が生じる可能性がある。したがって、単層の血小板の沈着ですら、ＳＭＣの増殖を誘発する可能性が十分にある。

【0046】

複雑な狭窄病変に関連する場合があるより深い動脈損傷によって、血小板がより広範に沈着し、且つ活性化され、それにより有糸分裂誘発因子のさらにより大きな利用能が生じ、延いてはＳＭＣの増殖及び内膜過形成が増加する可能性がある。血管形成術に由来する動脈損傷によって、血小板のみならず、マクロファージ、単球、内皮細胞、またはＳＭＣ自体からもＰＤＧＦ様化合物が放出される可能性がある。

【0047】

ヒトアテローム由来または後述の実験的動脈損傷由来の活性化ＳＭＣはＰＤＧＦ様分子を分泌し、このことにより、該ＳＭＣ自体のＰＤＧＦ様物質の放出によって、ＳＭＣの増殖がＳＭＣ自体によって永続化されるように思われる。したがって、ＰＤＧＦ関連物質（血小板、マクロファージ、単球、内皮細胞、及び平滑筋細胞）を分泌することができる細胞のいずれかまたはすべてが、血管形成術後の再狭窄のカスケード作用に寄与する可能性がある。

【0048】

再狭窄を予防する１つの方法は、平滑筋細胞の増殖を止めることである。したがって、理論に拘束されることを望むものではないが、再狭窄を止める可能性のあるいくつかの方法としては、
・動脈損傷部位での血小板の接着及び凝集を低減すること、
・成長因子及びそれらの受容体の発現をブロックすること、
・上記成長因子の競合的アンタゴニストを開発すること、
・応答性細胞における受容体シグナル伝達を妨害すること、または
・平滑筋の増殖を阻害すること
がある。

【0049】

ナノ粒子
用語「ナノ粒子」は、「ｎａｎｏＰ^３」または「ＮＰ３」と同義で使用することができる。用語「ナノ粒子」または「ｎａｎｏＰ^３」または「ＮＰ３」とは、別段の指定がない限り、または該用語が使用される文脈から明らかでない限り、粒径が１００ミクロン未満のナノ粒子状材料をいう。例えば、上記ｎａｎｏＰ^３は、粒径が、約５０～５００、１００～５００、２００～５００、５～２００、５～１００、５～５０、５～２０、２０～１００、１００～３００、または２００～４００ｎｍ、例えば、約５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、もしくは５００ｎｍ、または約５～約４００ｎｍ、もしくは約５～約３００ｎｍ、もしくは約５～約２００ｎｍ、もしくは約５～約１００ｎｍ、もしくは約５０～約１００ｎｍ、もしくは約１００～約５００ｎｍ、もしくは約１５０～約５００ｎｍ、もしくは約１８０ｎｍ～約５００ｎｍ、もしくは約１００～約４００ｎｍ、もしくは約１５０～約４００ｎｍ、もしくは約１８０～約４００ｎｍ、もしくは約１００～約３００ｎｍ、もしくは約１５０～３００ｎｍ、もしくは約１８０～３００ｎｍ、もしくは約１００～約２００ｎｍ、もしくは約１５０～約２００ｎｍ、もしくは約１８０～約２００ｎｍ、もしくは約１５０～約２５０ｎｍ、もしくは約１８０～約２５０ｎｍ、もしくは約２００～約４００ｎｍ、もしくは約２００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲、またはそれらの混合物であってよい。一実施形態において、上記ｎａｎｏＰ３は約２００ｎｍである。別の実施形態において、上記ｎａｎｏＰ３は約５０～約１００ｎｍである。本明細書に記載の粒径とは、上記ナノ粒子状材料の径または平均径をいうことが理解されよう。用語「ｎａｎｏＰ^３」または「ＮＰ３」は、別段の指定がない限り、または該用語が使用される文脈から明らかでない限り、本明細書で定義される「ナノ粒子状ポリマー」及び「凝集体」の両方を包含する。したがって、例えば、上述の粒径は、ナノ粒子またはナノ粒子の凝集体に等しく適用される。１つの好ましい実施形態において、上記ナノ粒子状材料はプラズマポリマーを含む。上記プラズマポリマーはプラズマ中のフラグメントの縮合によって形成することができ、上記材料は、１種以上の化合物、例えば、有機種または有機金属種を含む１種以上の反応剤と共有結合することができる。

【0050】

上記ｎａｎｏＰ３材料は、ホモポリマーまたはコポリマーであってよい。好適なｎａｎｏＰ３材料の例及び好適なｎａｎｏＰ３材料の誘導方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／１１２５４３号の２１ページ、２行～２８ページ、１２行に記載され、該公開は参本明細書に援用される。

【0051】

ナノ粒子状ポリマーは、窒素などの、周期表の第１５、１６、または１７族のガスの存在下で生成させることができる。このガスのフラグメントはナノ粒子状ポリマー中に取り込まれる場合がある。例えば、窒素が存在することによって、ナノ粒子状ポリマーまたはｎａｎｏＰ^３材料中に、アミン基、イミン基、もしくはニトリル基、またはそれらの混合物が存在する場合がある。したがって、本明細書に開示のナノ粒子状ポリマーは窒素を含む場合がある。

【0052】

窒素は、キャリアーとしてだけでなく、反応性の非重合性ガスとしても好適であることが見出されている。このことは、窒素は上記ナノ粒子状材料中に導入され、得られる官能化ナノ粒子状材料に特定の物理化学的特性を与える可能性もあることを意味する。さらに、窒素によって、窒素を使用しない場合には不可能である異なる形態のナノ粒子の生成が可能になることも考えられる。窒素と同一の族のガスなどの他のガスを含めることで、ナノ粒子の生成機構及び物理化学的特性を調節における自由度がさらに高まることも期待される。

【0053】

一実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料は、少なくとも１種の本明細書に記載のモノマーを含むプラズマから得られる。任意選択で、上記ｎａｎｏＰ^３材料は、ガス、例えば窒素の存在下で生成され、上記ガスのフラグメントは上記ナノ粒子状ポリマー中に導入される。

【0054】

上記ｎａｎｏＰ^３材料の窒素：炭素元素比は約０．０１：１～約２：３であってよい。例えば、上記ナノ粒子状ポリマーの窒素：炭素元素比は、約０．０５～約１、または約０．１～約１、または約０．１５～約１、または約０．２～約１、または約０．２５～約１、または約０．３～約１、または約０．３５～約１、または約０．４～約１、または約０．４５～約１、または約０．５～約１、または約０．５５～約１、または約０．６～約１、または約０．６５～約１であってよい。あるいは、上記ナノ粒子状ポリマーの窒素：炭素元素比は約０．１～約１：２であってよい。一例において、上記ナノ粒子状ポリマーの窒素：炭素元素比は、約０．３５～約０．５または約０．３５～約１であってよい。別の例において、上記ナノ粒子状ポリマーの窒素：炭素元素比は約０．３８であってよい。

【0055】

本明細書に記載のｎａｎｏＰ^３材料は、好ましくは、１種以上の化合物、例えば、有機化合物もしくは有機金属化合物、または本明細書で定義される第２の種を結合することができる少なくとも１種の結合部位を含む。

【0056】

一実施形態において、本明細書に記載のｎａｎｏＰ^３材料は、少なくとも、１種以上の化合物を結合することができる結合部位を含み、該結合部位は、有機化合物もしくは有機金属化合物、または本明細書で定義される第２の種を結合することができる不対電子を含む。

【0057】

上記ｎａｎｏＰ^３材料は上記ポリマー中に不対電子を含んでいてもよい。これらの不対電子は、上記ナノ粒子の表面上または表面近傍に存在していてもよい。上記不対電子は、ナノ粒子状材料の粒子内の４０ｎｍ以下の深さ、または表面の約３０、２０、もしくは１０ｎｍ以内に存在していてもよく、あるいは表面から約１０～約４０ｎｍ、または表面から約１０～３０ｎｍ、２０～４０ｎｍ、もしくは２０～３０ｎｍ、または表面から約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、もしくは４０ｎｍである。上記不対電子は約０～約４０ｎｍのさまざまな深さに存在していてもよい。場合により、上記不対電子は４０ｎｍを超える深さに存在していてもよい。上記不対電子は上記ナノ粒子状材料の体積全体にわたって存在していてもよい。これによって、この材料が、有機種または有機金属種などの第２の種と反応することができ、上記種を上記ナノ粒子状ポリマーに共有結合させて複合体を形成するようにすることができる。

【0058】

一実施形態において、ｎａｎｏＰ^３材料であって、その粒子の平均径が約５ｎｍ～約５００ｎｍであり、上記ｎａｎｏＰ^３材料は有機プラズマポリマーを含み、上記ｎａｎｏＰ^３（ナノ粒子状ポリマーまたはその凝集体）は不対電子を含み、それにより有機種または有機金属種と共有結合することができる上記ｎａｎｏＰ^３材料が提供される。

【0059】

別の実施形態において、上記ナノ粒子状材料またはｎａｎｏＰ^３材料は、第２の種と化学的または物理的に結合することができる少なくとも１つの機能的部分を含む。

【0060】

上記ｎａｎｏＰ^３材料の粒径は、走査型電子顕微鏡法、透過型電子顕微鏡法、小角レーザー光散乱法、光子相関分光法、微分型電気移動度分析法、またはいくつかのその他の適宜の技法によって測定することができる。上記ｎａｎｏＰ^３材料の粒子の粒径分布は、狭くてもまたは広くてもよい。上記粒径分布の標準偏差は、平均粒径の約１％～約５００％、または約１～２００、１～１００、１～５０、１～２０、１～１０、１～５、１～２、１０～５００、２０～５００、５０～５００、１００～５００、２００～５００、１０～１００、１０～５０、または５０～１００％、例えば、約１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００％であってよい。場合によって、上記粒子は略単分散であってもよい、すなわち、すべての粒子の径が略同一（例えば、同一の径の約１０％、または約５％、または約２％以内）であってもよい。

【0061】

上記ｎａｎｏＰ^３材料は有機プラズマポリマーを含んでいてもよい。プラズマポリマーは、不均一で、密な、高度に架橋されたネットワークを特徴とする。上記プラズマポリマーは非晶性であってもよい。このプラズマポリマーは、プラズマ中で、ガス混合物中の有機ガス及び他の反応性ガスから生成する活性種の反応（例えば、イオン化及びフラグメンテーション）によって、またはプラズマ／ガス混合物中で、上記ガス混合物中のガスのイオン化及びフラグメンテーションから生じる反応性種によって生成させることができる。

【0062】

上記ｎａｎｏＰ^３材料は、電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）分光法、赤外線分光法（フーリエ変換赤外線分光法など）、ラマン分光法、ＵＶ－ＶＩＳ分光法、元素分析（例えばＸ線光電子分光法）、軟Ｘ線分光法、ゼータ電位の測定、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析法、ゲル浸透クロマトグラフィー、走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）、小角レーザー光散乱法、光子相関分光法、微分型電気移動度分析法、弾性反跳検出分析（ＥＲＤＡ）法、または中性子散乱法を含む、但しこれらに限定されない多くの方法によってキャラクタライズすることができる。

【0063】

上記ｎａｎｏＰ^３材料（例えば上記ナノ粒子状ポリマー状または凝集体）は、以下の特徴の１つ以上によってキャラクタライズすることができる：
・約３４７０Ｇ～約３５２０Ｇの範囲を中心とし、及び／または約２．００１～約２．００５の範囲のｇ因子に相当するブロードな電子常磁性共鳴ピーク、
・合成後約０時間～約２時間内に電子常磁性共鳴法によって測定された、約１０^１９～約１０^１５スピン／ｃｍ^３の範囲のスピン密度、
・合成後約０時間～約２４０時間内に電子常磁性共鳴法によって測定された、約１０^１７～約１０^１５スピン／ｃｍ^３の範囲のスピン密度、
・以下を中心とする赤外線スペクトルの吸収帯の１つ以上：
＊約３６８０～約２７００ｃｍ^－１の範囲、
＊約１８００～約１２００ｃｍ^－１の範囲、
＊約２３３０～約２０２０ｃｍ^－１の範囲、
＊約１２００～約１０１０ｃｍ^－１の範囲、及び／または
＊約１０１０～約７００ｃｍ^－１の範囲、
・以下を中心とする赤外線スペクトルの吸収帯の１つ以上：
＊約３６００～３１００ｃｍ^－１の範囲、及び／または
＊約３１００～２７００ｃｍ^－１の範囲、
・約－１００ｍＶ～約＋１００ｍＶの範囲のゼータ電位、
・約２～約１０のｐＨ範囲内の溶液中で測定された約－８０ｍＶ～約＋８０ｍＶの範囲のゼータ電位、または
・約０．１：１～約２：３の窒素：炭素元素比。

【0064】

一実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体は、ＥＰＲ分光法を使用してキャラクタライズされる。上記ナノ粒子状ポリマーまたは凝集体は、約３４７０Ｇ～約３５２０Ｇの範囲を中心とし、及び／または約２．００１～約２．００５の範囲のｇ因子に相当するブロードな電子常磁性共鳴ピークを示してもよい。

【0065】

一実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体は、合成後約０時間～約２時間内にＥＰＲ分光法によって測定された、約１０^１９～約１０^１５スピン／ｃｍ^３の範囲のスピン密度を有する。上記測定は、合成後約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、または約１２０分に行ってもよい。

【0066】

一実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体は、合成後約０時間～約２４０時間内に電子常磁性共鳴法によって測定された、約１０^１７～約１０^１５スピン／ｃｍ^３の範囲のスピン密度を有する。上記測定は、合成後約０．５時間、約１時間、約２時間、約４時間、約５時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約２０時間、約３０時間、約４０時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約８０時間、約９０時間、約１００時間、約１１０時間、約１２０時間、約１３０時間、約１４０時間、約１５０時間、約１６０時間、約１７０時間、約１８０時間、約１９０時間、約２００時間、約２１０時間、約２２０時間、約２３０時間、または約２４０時間に行ってもよい。

【0067】

一実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体は、赤外線分光法（フーリエ変換赤外線分光法など）を使用してキャラクタライズされる。例えば、上記ナノ粒子状ポリマーまたは凝集体は、以下を中心とする赤外線スペクトルの吸収帯の１つ以上を示してもよい：
・約３６８０～約２７００ｃｍ^－１の範囲、
・約１８００～約１２００ｃｍ^－１の範囲、
・約２３３０～約２０２０ｃｍ^－１の範囲、
・約１２００～約１０１０ｃｍ^－１の範囲、
・約１０１０～約７００ｃｍ^－１の範囲、
・約３６００～３１００ｃｍ^－１の範囲、
・約３１００～２７００ｃｍ^－１の範囲、及び／または
・それらの混合物。

【0068】

別の実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体は、該ナノ粒子状ポリマーまたは凝集体のゼータ電位を使用してキャラクタライズされる。例えば、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体のゼータ電位は約－１００ｍＶ～約＋１００ｍＶであってよい。例えば、上記ゼータ電位は約－５０ｍＶ～約６０ｍＶの範囲であってよい。

【0069】

さらなる実施形態において、上記ｎａｎｏＰ^３材料、ナノ粒子状ポリマー、または凝集体の、約２～約１０のｐＨ範囲内の溶液中で測定した場合のゼータ電位は、約－８０ｍＶ～約＋８０ｍＶの範囲である。

【0070】

上記ｎａｎｏＰ^３材料の表面モルホロジーは粗いカリフラワー様である場合がある。これは、上記ｎａｎｏＰ^３材料の生成が上記ナノ粒子状ポリマーの凝集によることに起因する可能性がある。したがって、上記ｎａｎｏＰ^３材料は上記ナノ粒子状ポリマーの凝集体であってもよい。上記ｎａｎｏＰ^３材料及び凝集体は球形であっても、または略球形であってもよい。上記ナノ粒子状ポリマーの粒径は、約１～約５０ｎｍ、または約５～１０、５～１０、１０～５０、２０～５０、または１０～３０ｎｍ、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０ｎｍであってよい。凝集体（及び関連するナノ粒子状ポリマー）には、経時的に量が減少する反応性の高いラジカルが包埋されている場合がある。上記ｎａｎｏＰ^３材料は、炭素クラスターの非局在化軌道中の長寿命で安定したラジカルが包埋されている場合もある。上記安定ラジカル（二次ラジカル）は、反応性の高いラジカル（一次ラジカル）が関与する反応から生じる場合がある。上記ｎａｎｏＰ^３材料の表面は親水性である場合がある。したがって、上記表面によって、上記ｎａｎｏＰ^３材料を水中に容易に分散することができる場合がある。そのことによって、表面に固定化された生物活性分子の生物活性を保持することが可能になる場合がある。上記表面は、該表面を空気に曝露することによって、生成中または生成後にラジカルが酸化される結果親水性になる可能性がある。１種以上の第２の種との複合体化後に、上記ｎａｎｏＰ^３材料複合体は親水性であるかまたは疎水性である場合がある。あるいは、上記ｎａｎｏＰ^３材料複合体は両親媒性を示す場合がある。

【0071】

使用されるモノマーまたは重合中に適用される条件に応じて、上記ｎａｎｏＰ^３材料は架橋される場合がある。本明細書における用語「架橋」とは、分子内及び／または分子間結合を含むポリマー組成物をいう。これらの架橋結合は本質的に共有結合であってもまたは非共有結合であってもよい。非共有結合としては、水素結合、静電結合、及びイオン結合が挙げられる。

【0072】

架橋によって得られる潜在的な利点の１つは、得られるｎａｎｏＰ^３材料及び、潜在的には、かかる材料から形成される複合体の安定性である。例えば、架橋によって、架橋されていない類似の組成物と比較して、上記ｎａｎｏＰ^３材料（または結果として得られる複合体）の溶解性が低下する可能性がある。さらに、上記ｎａｎｏＰ^３材料（またはそれから形成される複合体）の架橋後の性質によって、上記ナノ粒子状材料または結果として得られる複合体の耐薬品性が向上する場合がある。

【0073】

上記ｎａｎｏＰ^３にはさらに無機元素もしくは化合物、または有機金属化合物をドープすることができ、これらは医用画像診断技法における画像強調造影剤として作用する。上記ｎａｎｏＰ^３には、酸化鉄またはガドリニウム化合物などの磁気共鳴画像診断法（ＭＲＩ）造影剤をドープすることができる。画像強調造影剤の例としては、蛍光色素（例えば、Ａｌｅｘａ ６８０、インドシアニングリーン、及びＣｙ５．５）；^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^５１Ｍｎ、^５２ｍＭｎ、^５２Ｆｅ、^５５Ｃｏ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７２Ａｓ、^７３Ｓｅ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、^８２ｍＲｂ、^８３Ｓｒ、^８６Ｙ、^９０Ｙ、^８９Ｚｒ、^９４ｍＴｃ、^９４Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^１１０Ｉｎ、^１１１Ｉｎ、^１２０Ｉ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５４Ｇｄ、^１５５Ｇｄ、^１５６Ｇｄ、^１５７Ｇｄ、^１５８Ｇｄ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、及び^２２３Ｒａなどの同位体及び放射性核種；クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジミウム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、またはエルビウム（ＩＩＩ）などの常磁性イオン；ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及びビスマス（ＩＩＩ）などの金属；クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジミウム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、またはエルビウム（ＩＩＩ）の酸化物；酸化鉄及び酸化ガドリニウムを含む、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及びビスマス（ＩＩＩ）などの金属；リポソームなどの超音波造影剤；バリウム、ガリウム、及びタリウム化合物などの放射線不透剤が挙げられる。上記画像強調造影剤は、上記ｎａｎｏＰ^３材料上に直接導入しても、またはキレート剤などの中間官能基を使用することによって間接的に導入してもよい。

【0074】

例示的なプロセスにおいて、上記ｎａｎｏＰ３材料は、１５０ｍＴｏｒｒのＮ_２／Ｃ_２Ｈ_２／Ａｒのガス状混合物の活性化及び５０Ｗの高周波電力の印加を介したプラズマ重合によって調製することができる。

【0075】

モノマー
本明細書に記載のｎａｎｏＰ^３材料は、１種以上のモノマーから誘導される。

【0076】

一実施形態において、上記１種以上のモノマーはガス状の形態で使用され、上記ｎａｎｏＰ^３材料を生成する。

【0077】

モノマーは炭化水素であってよい。炭化水素の例としては、アルケン、アルキン、シクロアルケン、及びシクロアルキンが挙げられる。

【0078】

好適なアルケンモノマーの例としては、エチレン、プロペン、１－ブテン、１－ペンテン、１－ヘキセン、１－ヘプテン、１－オクテン、１－ノネン、１－デセン、それらの異性体、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0079】

好適なアルキンモノマーの例としては、エチン（アセチレン）、プロピン、１－ブチン、１－ペンチン、１－ヘキシン、１－ヘプチン、１－オクチン、１－ノニン、１－デシン、それらの異性体、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0080】

好適なシクロアルケンモノマーの例としては、シクロプロペン、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテン、１，３－シクロヘキサジエン、１，４－シクロヘキサジエン、１，５－シクロオクタジエン、それらの異性体、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0081】

好適なシクロアルキンモノマーの例としては、シクロヘプチン、シクロオクチン、シクロノニン、それらの異性体、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0082】

一実施形態において、モノマーとしてアルケンが使用される。上記アルケンは、ナノ粒子状ポリマーの生成に利用される唯一のモノマーであってもよく、あるいは該アルケンは、コポリマーを生成させるための少なくとも１種の他のモノマー、例えば、別のアルケン及び／またはアルキン、シクロアルケン、もしくはシクロアルキンの存在下で使用されてもよい。

【0083】

一実施形態において、モノマーとしてアルキンが使用される。上記アルキンは、ナノ粒子状ポリマーの生成に利用される唯一のモノマーであってもよく、あるいは該アルケンは、コポリマーを生成させるための少なくとも１種の他のモノマー、例えば、別のアルキン及び／またはアルケン、シクロアルケン、もしくはシクロアルキンの存在下で使用されてもよい。さらなる実施形態において、モノマーとしてアセチレンが、単独で、または少なくとも１種の他のモノマーの存在下で使用される。

【0084】

別の実施形態において、モノマーとしてアセチレンが、少なくとも１種の他のモノマー、例えば、アルケン、アルキン、シクロアルケン、またはシクロアルキンである少なくとも１種の他のモノマーとの組み合わせで使用される。

【0085】

一実施形態において、モノマーとしてシクロアルケンが使用される。上記シクロアルケンは、ナノ粒子状ポリマーの生成に利用される唯一のモノマーであってもよく、あるいは該シクロアルケンは、コポリマーを生成させるための少なくとも１種の他のモノマー、例えば、別のシクロアルケン及び／またはアルケン、アルキン、もしくはシクロアルキンの存在下で使用されてもよい。

【0086】

一実施形態において、モノマーとしてシクロアルキンが使用される。上記シクロアルキンは、ナノ粒子状ポリマーの生成に利用される唯一のモノマーであってもよく、あるいは該シクロアルキンは、コポリマーを生成させるための少なくとも１種の他のモノマー、例えば、別のシクロアルキン及び／またはアルケン、アルキン、もしくはシクロアルケンの存在下で使用されてもよい。

【0087】

上記ｎａｎｏＰ^３を生成させるために使用することができる他のモノマーとしては、ペルフルオロカーボン、エーテル、エステル、アミン、アルコール、またはカルボン酸が挙げられる。

【0088】

好適なペルフルオロカーボンの例としてはペルフルオロアリルベンゼンが挙げられるが、これに限定はされない。

【0089】

好適なエーテルの例としては、ジエチレングリコールビニルエーテル、ジエチレングリコールジビニルエーテル、ジエチレングリコールモノアリルエーテル、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0090】

好適なアミンの例としては、アリルアミン、シクロプロピルアミン、ポリ（ビニルアミン）、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0091】

好適なアルコールの例としては、ポリ（ビニルアルコール）、アリルアルコール、エタノール、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0092】

好適なカルボン酸の例としてはアクリル酸が挙げられるが、これに限定はされない。

【0093】

生物学的に活性な薬剤
本明細書では、用語「生物学的に活性な薬剤」とは、インビボで生物学的及び／または薬理学的活性を有する任意の薬剤（例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸、または小分子薬物）をいう。当業者であれば、再狭窄を予防するもしくは炎症を予防することが知られている生物学的に活性な薬剤もしくは薬物、または心血管疾患を治療する薬剤が、本明細書に記載のナノ粒子と複合体化するのに適した薬剤である可能性があることを理解しよう。好適な生物学的に活性な薬剤の例としては、抗血小板剤及び抗凝血剤、抗血栓剤及び線維素溶解剤、抗複製剤及び抗増殖剤、抗炎症剤、心血管系薬剤、タンパク質、ペプチド、及びヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0094】

本明細書では、用語「ペプチド」は、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸を含む任意のポリマーを意味することを意図する。用語「ペプチド」は、リボソームを使用して組み立てられるポリマーのみならず、酵素によって組み立てられるポリマー（すなわち、非リボソームペプチド）、及び合成的に組み立てられるポリマーも包含することを意図する。種々の実施形態において、用語「ペプチド」は、「タンパク質」または「ポリペプチド」と同義であると見なされる場合がある。種々の実施形態において、用語「ペプチド」は、５０個を超えるアミノ酸、あるいは、５０個以下のアミノ酸のポリマーに限定される場合がある。種々の実施形態において、用語「ペプチド」は、当該ポリマーのモノマー単位としてアミノ酸のみを含むことを意図する一方で、種々の実施形態において、用語「ペプチド」は、アミノ酸骨格に対する追加の成分及び／または修飾を含む。例えば、種々の実施形態において、用語「ペプチド」は、アミノ酸のコアポリマーのみならず、上記コアポリマーの誘導体、例えば、ペンダントポリエチレングリコール基を有するコアポリマーまたはアミノ酸鎖のアミノ末端もしくはカルボキシ末端にアミド基を有するコアポリマーにも適用される場合がある。

【0095】

「ペプチド模倣物」は、活性なリガンド、または酵素基質もしくはサイトカインなどの生体分子を生物学的に模倣する、ペプチド、修飾ペプチド、または任意の他の分子などの分子であってよい。例えば、ペプチド模倣物は、炎症過程に関与するサイトカインの生理学的活性に拮抗し、該活性を刺激し、または他の方法で該活性を調節する場合がある。あるいは、上記ペプチド模倣物は、その天然のタンパク質の心血管疾患の治療における活性を模倣する。

【0096】

本明細書では、用語「タンパク質」とは、アミノ酸の配列であって、鎖長が、より高いレベルの該アミノ酸の配列の三次構造及び／または四次構造を形成するのに十分な上記アミノ酸の配列をいう。上記タンパク質の分子量は、約３００Ｄａ～約１５０ｋＤａの範囲であってよい。上記タンパク質の分子量は、１５０ｋＤａを超えていてもよく、または３００Ｄａ未満であってもよい。

【0097】

抗血小板剤及び抗凝血剤
接着及び血小板凝集は、抗血小板剤及び抗凝血剤によって予防することができる。一例において、上記生物学的に活性な薬剤は抗血小板剤である。別の例において、上記生物学的に活性な薬剤は抗凝血剤である。

【0098】

好適な抗血小板剤の例としては、アスピリン及びジピリダモールが挙げられるが、これらに限定はされない。アスピリンは、鎮痛薬、解熱薬、抗炎症薬、抗血小板薬に分類される。アスピリンは臨床試験が行われ、心筋梗塞（心臓発作）後の患者の突然死及び／または非致死的再梗塞のリスクを軽減することが証明されている。提案されたアスピリンの作用機序は血小板に直接関係する。アスピリンは何らかの理由で血小板を遮断し、凝血を制限する。これにより、血栓に見られるカスケード血小板凝集及びその後の再狭窄が予防される。したがって、アスピリンは再狭窄阻害剤の候補である。ジピリダモールは、抗血小板特性を有するという点で、アスピリンに類似する薬物である。ジピリダモールは冠血管拡張剤としても分類される。ジピリダモールは、全身血圧または末梢動脈の血流を変化させることなく、冠動脈の一次選択的拡張によって冠動脈血流を増加させる。これらの血管拡張特性は、再狭窄の予防に有益である可能性があると考えられている。

【0099】

好適な抗凝血薬の例としては、ヘパリン、クマジン、プロタミン、及びヒルジンが挙げられるが、これらに限定はされない。これらの薬物は、血液を凝固させる結合剤であるトロンビンの産生を防ぐことにより、抗凝血剤として機能する。これもまた、病変部位における血小板凝集のカスケード効果を低減し、したがって再狭窄を低減する可能性がある。ヘパリンの存在下でプロタミンを使用すると、プロタミンはヘパリンアンタゴニストとして作用し、ヘパリンの効果を遮断する。但し、単独で使用されたプロタミンは抗凝血剤として作用する。ヒルジンは通常人体中に存在しないために選択される。ヒルジンはヒルの唾液腺中に存在する薬物である。ヒルジンは、ヘパリン、クマジン、及びプロタミンと類似の形態で作用する、非常に高濃度の抗凝血剤である。

【0100】

抗血栓剤及び線維素溶解剤
一例において、上記生物学的に活性な薬剤は抗血栓剤である。別の例において、上記生物学的に活性な薬剤は線維素溶解剤である。

【0101】

抗血栓剤及び線維素溶解剤の例としては、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤、直接トロンビン阻害剤、ヘパリン、低分子量ヘパリン、血小板アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体阻害剤、線維素溶解剤（ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、組換え組織プラスミノーゲン活性化因子、レテプラーゼ、及びテネクテプラーゼを含む）、酵素（ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、及びプラスミンを含む）、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0102】

抗複製剤及び抗増殖剤
細胞の複製を妨げる薬物にはいくつかの種類がある。理論に拘束されることを望むものではないが、有糸分裂阻害剤（細胞毒性剤）は直接作用して細胞の有糸分裂（複製）を防ぐ一方、代謝拮抗剤はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）合成を防ぎ、延いては複製を防ぐ。一例において、上記生物学的に活性な薬剤は抗複製薬である。一例において、上記生物学的に活性な薬剤は抗増殖剤である。

【0103】

好適な抗複製薬の例としては、メトトレキサート、コルヒチン、アザチオプリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、フルオロウラシル、アドリアマイシン、及びムタマイシンが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0104】

好適な抗増殖薬の例としては、ラパマイシンの標的（ｍＴＯＲ）阻害剤（シロリムス、エベロリムス、及びＡＢＴ－５７８を含む）、パクリタキセル及び抗腫瘍剤（アルキル化剤、例えば、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン、ロムスチン、イホスファミド、プロカルバジン、ダカルバジン、テモゾロミド、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチンを含む）が挙げられるが、これらに限定はされない。一実施形態において、上記生物学的に活性な薬剤はパクリタキセルである。

【0105】

別の実施形態において、上記生物学的に活性な薬剤は、シロリムス（（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｅ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１２－［（２Ｒ）－１－［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－３－メトキシシクロヘキシル］プロパン－２－イル］－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０^４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－２，３，１０，１４，２０－ペントン；ＣＡＳ番号５３１２３－８８－９）である。ラパマイシンとしても知られるシロリムスは、ｍＴＯＲ阻害によってＴ細胞及びＢ細胞のＩＬ－２に対する感受性を低下させることにより、Ｔ細胞及びＢ細胞の活性化を阻害すると考えられているマクロライド化合物である。シロリムスは免疫抑制薬であり、創傷治癒に禁忌であると以前報告されている。この薬の投与を受けている患者の多くにおいて、手術部位の創傷治癒が害されることが観察される。シロリムスによる治療を受けた血管の領域は、その薬物の抗増殖作用に起因して再内皮化が遅れることが知られている。シロリムスは式Ｉとして示される。
式Ｉ：

【0106】

【化1】

【0107】

抗炎症剤
抗炎症性の生物学的に活性な薬剤または薬物はまた、血管形成術中の管腔組織への損傷によって生じた炎症を局所的に抑制することにも有用である場合がある。

【0108】

一例において、上記生物学的に活性な薬剤は抗炎症剤である。例えば、上記抗炎症剤は抗炎症薬または生体分子であってよい。

【0109】

好適な抗炎症薬としては、デキサメタゾン、ベタメタゾン、及びプレドニゾンなどのコルチコステロイド、ならびにスリンダク（２－［（３Ｚ）－６－フルオロ－２－メチル－３－［（４－メチルスルフィニルフェニル）メチリデン］インデン－１－イル］酢酸；ＣＡＳ番号３８１９４－５０－２）、ナプロキセン（ＣＡＳ番号２２２０４－５３－１）、及びアスピリン（ＣＡＳ番号５０－７８－２）などの広範囲に使用される免疫抑制剤が挙げられるが、これらに限定はされない。一実施形態において、上記生物学的に活性な薬剤はスリンダク（２－［（３Ｚ）－６－フルオロ－２－メチル－３－［（４－メチルスルフィニルフェニル）メチリデン］インデン－１－イル］酢酸；ＣＡＳ番号３８１９４－５０－２）である。式ＩＩとして示されるスリンダクは非ステロイド系抗炎症薬である。
式ＩＩ：

【0110】

【化2】

【0111】

好適な抗炎症剤としてはサイトカインまたはそのフラグメントが挙げられる。サイトカインは細胞シグナル伝達において重要な小タンパク質（約５～２０ＫＤａ）である。炎症は炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインとの間の相互作用によりキャラクタライズされる。サイトカインとしては、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子を挙げることができる。好適な例としては、ＩＬ４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＦＮ－α、及びトランスフォーミング成長因子－βなどの抗炎症性サイトカインが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0112】

当技術分野では、マクロファージの極性化がインターロイキンによって二者択一的に活性化される場合があることは公知である。Ｍ１表現型は炎症誘発性であり、Ｍ２表現型は抗炎症性である。したがって、当業者であれば、Ｍ２抗炎症性表現型を活性化することが知られているインターロイキンが、本明細書に記載のナノ粒子に複合体化するのに好適な生物学的に活性な薬剤であることが理解されよう。一例において、上記生物学的に活性な薬剤はサイトカインまたはそのフラグメントである。一例において、上記生物学的に活性な薬剤はインターロイキン－４（ＩＬ－４）である。別の例において、上記生物学的に活性な薬剤はインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）である。

【0113】

心血管系薬剤
一例において、上記生物学的に活性な薬剤は心血管疾患を治療するための医薬であってよい。好適な医薬としては、ＡＣＥ阻害剤、抗ゴテンシン受容体遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、血管拡張剤、及びスタチン（ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ阻害剤としても知られる）が挙げられるが、これらに限定はされない。例えば、上記生物学的に活性な薬剤は、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチンなどのスタチン、またはそれらの混合物である。一実施形態において、上記生物学的に活性な薬剤はシンバスタチンである。

【0114】

一酸化窒素放出薬剤が、本明細書に記載のナノ粒子に複合体化するのに好適な薬剤である場合があることも企図される。

【0115】

抗体
一実施形態において、上記生物学的に活性な薬剤は抗体である。上記抗体は、上記生物学的に活性な薬剤を血管中の正しい位置に標的化することができる抗体であってもよい。それに加えてまたはそれに代えて、上記抗体は、アンタゴニスト、例えばサイトカイン阻害剤であってもよい。

【0116】

本明細書では、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「複数種の抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」は、１つ以上の免疫グロブリン鎖、例えば、Ｖ_Ｌを含むポリペプチド及びＶ_Ｈを含むポリペプチドから構成される可変領域を含むタンパク質を包含すると解釈されるものとする。抗体はまた、定常ドメインを含んでいてもよく、定常ドメインの一部は、定常領域または定常フラグメントまたは結晶化可能フラグメント（Ｆｃ）に配置されていてもよい。Ｖ_ＨとＶ_Ｌは相互作用して、１つまたは少数の密接に関連した抗原に特異的に結合することができる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳動物由来の軽鎖は、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかであり、且つ哺乳動物由来の重鎖は、α、δ、ε、γ、またはμである。上記抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）、またはサブクラスであってよい。用語「抗体」はまた、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、非枯渇性抗体、非作動性抗体（ｎｏｎ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、霊長動物化抗体、ヒト抗体、及びキメラ抗体も包含する。本明細書では、用語「抗体」はまた、エピトープ決定基に結合することができる、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖなどの、完全長の、インタクトな、または全抗体分子以外の形式を含むことも意図する。これらの形式は、抗体の「フラグメント」と呼ばれることもある。これらの抗体形式は標的タンパク質に選択的に結合する何らかの能力を保持しており、これらの抗体形式の例としては、以下、すなわち、
（１）Ｆａｂ：抗体分子の一価の結合性フラグメントを含み、全抗体を酵素パパインで消化して、インタクトな軽鎖及び１つの重鎖の一部分を生成させることによって製造することができるフラグメント；
（２）Ｆａｂ’：全抗体をペプシンで処理し、その後還元してインタクトな軽鎖及び１つの重鎖の一部分を生成させることによって得ることができる抗体分子のフラグメント；抗体分子当り２つのＦａｂ’フラグメントが得られる；
（３）（Ｆａｂ’）_２：全抗体を酵素ペプシンで処理し、その後還元することなく得ることができる抗体のフラグメント；Ｆ（ａｂ）２は、２つのジスルフィド結合によって結合した２つのＦａｂ’フラグメントの二量体；
（４）Ｆｖ：軽鎖の可変領域及び２本鎖として表される重鎖の可変領域を含む遺伝子操作されたフラグメントとして定義される；
（５）単鎖抗体（「ＳＣＡ」）：遺伝子的に融合した単鎖分子としての、適宜のポリペプチドリンカーによって連結された軽鎖の可変領域、重鎖の可変領域を含む、遺伝子操作された分子として定義される；かかる単鎖抗体は、多重特異性であってもそうでなくてもよい、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディなどの多量体の形態であってよい；ならびに
（６）単一ドメイン抗体、一般的には軽鎖を含まない可変重鎖ドメイン
が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0117】

したがって、本明細書に記載の抗体は、別個の重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、いずれの重鎖を含まない可変軽鎖ドメイン、軽鎖を含まない可変重鎖ドメイン、及びＦｖを含んでいてもよい。かかるフラグメントは組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離によって製造することができる。本明細書に記載される、及びその他の当技術分野で公知の抗体またはそれらのフラグメントのいずれも、本明細書に開示のｎａｎｏＰ^３粒子と複合体化することができる。

【0118】

したがって、上記生物学的に活性な薬剤は、炎症過程に関与する因子を標的とする抗体またはタンパク質またはペプチドであってよい。

【0119】

本明細書において、用語「標的化リガンド」とは、標的分子に結合するかまたは標的分子と相互作用する分子をいう。一般的には、上記相互作用または結合の性質は非共有結合、例えば、水素、静電、またはファンデルワールス相互作用によるものあるが、共有結合であってもよい。

【0120】

本明細書では、用語「リガンド」とは、生物学的マーカーを標的とする化合物をいう。リガンドの例としては、タンパク質、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、糖類、炭水化物、グリカン、サイトカイン、ケモカイン、ヌクレオチド、レクチン、脂質、受容体、ステロイド、神経伝達物質、表面抗原分類（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ／Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）（ＣＤ）マーカー、インプリントポリマーなどが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0121】

標的化リガンドの例としては、核局在化シグナル（例えば、ＫＲ［ＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡ］ＫＫＫＫ）、ＲＧＤ、ＮＧＲ、葉酸、トランスフェリン、ＧＭ－ＣＳＦ、ガラクトサミン、抗ＶＥＧＦＲ、抗ＥＲＢＢ２、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ３３、抗ＣＤ２５、抗テネイシン、抗ＣＥＡ、抗ＭＵＣ１、抗ＴＡＧ７２、抗ＨＬＡ－ＤＲ１０、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0122】

ポリヌクレオチド
上記生物学的に活性な薬剤は、炎症過程を調節することができるポリヌクレオチドであってもよい。本明細書では、用語「ポリヌクレオチド」は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスポリヌクレオチド、リボザイム、干渉ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、及び当技術分野で公知の任意の他のポリヌクレオチドを包含すると解釈されるものとする。上記ポリヌクレオチドは、炎症を破壊する可能性のあるタンパク質または機能的ＲＮＡ（干渉ＲＮＡなど）をコードしていてもよい。したがって、上記ポリヌクレオチドはポリヌクレオチドベクターまたはプラスミドであってもよい。

【0123】

遺伝子ターゲティング薬の例としては、ＤＮＡ（ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ）、ＲＮＡ（センスＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ＳｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ＳｎｏＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ））、リボザイム、アプタマー、ＤＮＡザイム、アンチセンスオリオゴヌクレオチド、ベクター、プラスミド、その他のリボヌクレアーゼ型複合体、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。例えば、上記生物学的に活性な薬剤は、ＮＦ－κＢのｐ６５サブユニットに対して し、延いてはＮＦ－κＢ媒介性炎症を改変するｓｉＲＮＡ、あるいはサイトカイン発現及び／またはサイトカイン受容体発現をコードする、ＩｋＢキナーゼまたはＡＰ－１に対する遺伝子ターゲティング薬であってもよい。

【0124】

幹細胞
上記生物学的に活性な薬剤は、幹細胞、例えば、骨格筋芽細胞、骨髄由来幹細胞、骨髄由来単核細胞、骨髄由来造血幹細胞及び内皮前駆細胞、間葉系間質細胞／幹細胞、心筋幹細胞及び前駆細胞、人工多能性幹細胞、またはそれらの混合物であってもよい。例えば、上記幹細胞は、炎症性サイトカインの存在下で免疫抑制性表現型をとる間葉系間質細胞／幹細胞であってもよい。

【0125】

造影剤
一実施形態において、上記薬剤は造影剤である。造影剤をインビボで使用して、血管の構造、機能、及び血管新生を調べることができる。好適な造影剤の例としては、ルシフェラーゼ；蛍光標識した色素及び抗体、造影剤（イオパミドール、イオヘキソール、及びイオキシランを含む）；硫酸バリウム；インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0126】

上記造影剤は画像強調造影剤であってもよい。好適な画像強調造影剤の例としては、蛍光色素（例えば、Ａｌｅｘａ ６８０、インドシアニングリーン、及びＣｙ５．５）；蛍光色素（例えば、Ａｌｅｘａ ６８０、インドシアニングリーン、及びＣｙ５．５）；^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^５１Ｍｎ、^５２ｍＭｎ、^５２Ｆｅ、^５５Ｃｏ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７２Ａｓ、^７３Ｓｅ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、^８２ｍＲｂ、^８３Ｓｒ、^８６Ｙ、^９０Ｙ、^８９Ｚｒ、^９４ｍＴｃ、^９４Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^１１０Ｉｎ、^１１１Ｉｎ、^１２０Ｉ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５４Ｇｄ、^１５５Ｇｄ、^１５６Ｇｄ、^１５７Ｇｄ、^１５８Ｇｄ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、及び^２２３Ｒａなどの同位体及び放射性核種；クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジミウム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、またはエルビウム（ＩＩＩ）などの常磁性イオン；ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及びビスマス（ＩＩＩ）などの金属；クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジミウム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、またはエルビウム（ＩＩＩ）の酸化物；酸化鉄及び酸化ガドリニウムを含む、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及びビスマス（ＩＩＩ）などの金属；リポソームなどの超音波造影剤；バリウム、ガリウム、及びタリウム化合物などの放射線不透剤が挙げられるが、これらに限定はされない。上記画像強調造影剤は、上記ｎａｎｏＰ^３材料上に直接複合体化しても、またはキレート剤などの中間官能基を使用することによって間接的に複合体化してもよい。

【0127】

複合体
本明細書では、用語「複合体」とは、１種以上の化合物を、ナノ粒子状ポリマーまたはナノ粒子状ポリマーを含む凝集体に結合することによって形成される分子をいう。上記「１種以上の化合物」は本明細書で定義される生物学的に活性な薬剤であってよい。上記結合は共有結合または静電相互作用を介する場合がある。

【0128】

本明細書に記載のナノ粒子状ポリマー、凝集体、またはｎａｎｏＰ^３材料は薬剤と複合体化される。上記薬剤は生物学的に活性な薬剤または造影剤であってよい。一実施形態において、上記薬剤は生物学的に活性な薬剤である。別の実施形態において上記薬剤は造影剤である。上記薬剤の結合は、複合体化過程中の反応条件のｐＨを変化させることによって調節することができる。溶液のｐＨは、アミン基及びカルボン酸基などの表面官能基のプロトン化または脱プロトン化を通じてｎａｎｏＰ^３の電荷を調節する。例えば、正に荷電した複合体のｎａｎｏＰ^３材料への結合は、上記ｎａｎｏＰ^３材料及び上記薬剤を含む溶液のｐＨを高めることによって改善される場合がある。高アルカリ性の媒体では、ｎａｎｏＰ^３はカルボン酸表面基の脱プロトン化によって負に荷電した状態となり、これにより、負に荷電した粒子間の反発に起因してナノ粒子の安定化も起こる。あるいは、負に荷電した複合体のｎａｎｏＰ^３材料への結合は、上記ｎａｎｏＰ^３材料及び上記薬剤を含む溶液のｐＨを低下させることによって改善される場合がある。

【0129】

本明細書では、複合体の形成におけるｎａｎｏＰ^３材料（例えば、ナノ粒子ポリマー、凝集体、またはそれらの混合物）の使用が開示される。

【0130】

上記複合体は単一の薬剤のみを含んでいてもよい。あるいは、上記複合体は、２種以上の異なる薬剤、例えば、２種、３種、または４種の第２の薬剤を含んでいてもよい。

【0131】

上記ｎａｎｏＰ^３材料は、一般に、例えば共有結合またはイオン結合によって、薬剤、例えば生物学的に活性な薬剤または造影剤に直接結合することができる。上記ナノ粒子ポリマーまたは凝集体がプラズマポリマーである場合、上記結合過程は一般に迅速であり、穏やかな条件下で進行することができる。上記結合は、ポリマー構造中の不対電子（すなわち、ラジカル部位）、あるいは上記ｎａｎｏＰ^３材料上に生成した、または適宜の生物学的に活性な薬剤の添加によって、または上記ｎａｎｏＰ^３材料が曝露される空気（もしくは別のガス）、もしくは何らかの他の流体との反応によって、得られる複合体上に導入された官能基によるものである。上記ｎａｎｏＰ^３材料は、薬剤を化学的に結合することができる官能基を含むモノマー単位を含んでいてもよい。１種以上の薬剤と上記ｎａｎｏＰ^３材料との複合体化により、得られる複合体上または複合体中に官能基を導入してもよく、これらの官能基は、さらなる化学反応に使用する、またはインビトロもしくはインビボ条件で行われる生化学的／生物学的過程などの過程のための結合部位として使用することができる。

【0132】

本明細書では、官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍｏｉｅｔｉｅｓ）（または「官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｒｏｕｐｓ）」）とは、モノマー、ｎａｎｏＰ^３材料、またはｎａｎｏＰ^３材料を含む複合体上に存在する原子の群であって、他の相補的な官能基、例えば薬剤上に存在する他の官能基と反応することができる上記原子の群をいう。官能基としては、以下の基、すなわち、カルボン酸（－（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ）、カルボニル、第一級または第二級アミン（－ＮＨ_２、－ＮＨ－）、一酸化窒素、マレイミド、チオール（－ＳＨ）、スルホン酸（－（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）ＯＨ）、炭酸エステル、カルバミン酸エステル（－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｎ＜）、ヒドロキシ（－ＯＨ）、アルデヒド（－（Ｃ＝Ｏ）Ｈ）、ケトン（－（Ｃ＝Ｏ）－）、ヒドラジン（＞Ｎ－Ｎ＜）、イソシアナート、イソチオシアナート、リン酸（－Ｏ（Ｐ＝Ｏ）ＯＨＯＨ）、ホスホン酸（－Ｏ（Ｐ＝Ｏ）ＯＨＨ）、ハロアセチル、ハロゲン化アルキル、アクリロイル、フッ化アリール、ヒドロキシルアミン、ジスルフィド、ビニルスルホン、ビニルケトン、ジアゾアルカン、オキシラン、及びアジリジン、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0133】

したがって、一態様において、本開示は、
平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約５ｎｍ～約５００ｎｍである凝集体と、
抗炎症性サイトカイン、抗炎症薬、スタチン系薬物、及び抗増殖薬からなる群より選択される生物学的に活性な薬剤と
を含む複合体を提供する。

【0134】

一実施形態において、上記凝集体の平均径は、約５～５００ｎｍ、もしくは約５～約４００ｎｍ、もしくは約５～約３００ｎｍ、もしくは約５～約２００ｎｍ、もしくは約５～約１００ｎｍ、もしくは約５０～約１００ｎｍ、もしくは約１００～約５００ｎｍ、もしくは約１５０～約５００ｎｍ、もしくは約１８０ｎｍ～約５００ｎｍ、もしくは約１００～約４００ｎｍ、もしくは約１５０～約４００ｎｍ、もしくは約１８０～約４００ｎｍ、もしくは約１００～約３００ｎｍ、もしくは約１５０～３００ｎｍ、もしくは約１８０～３００ｎｍ、もしくは約１００～約２００ｎｍ、もしくは約１５０～約２００ｎｍ、もしくは約１８０～約２００ｎｍ、もしくは約１５０～約２５０ｎｍ、もしくは約１８０～約２５０ｎｍ、もしくは約２００～約４００ｎｍ、もしくは約２００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲、またはそれらの混合物である。一実施形態において、上記凝集体の平均径は約２００ｎｍである。一実施形態において、上記凝集体の平均径は約１００ｎｍである。一実施形態において、上記凝集体の平均径は約１００ｎｍ～約２００ｎｍである。別の実施形態において、上記凝集体の平均径は約５０～約１００ｎｍである。

【0135】

一実施形態において、上記抗炎症性サイトカインはＩＬ－４である。上記ＩＬ－４は、約０．５μｇ、約０．６μｇ、約０．７μｇ、約０．８μｇ、約０．９μｇ、約１．０μｇ、もしくは約１．１μｇ ＩＬ－４／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。

【0136】

一実施形態において、上記抗炎症性サイトカインはＩＬ－１０である。上記ＩＬ－１０は、約０．５μｇ、約０．６μｇ、約０．７μｇ、約０．８μｇ、約０．９μｇ、約１μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、もしくは約１．４μｇ ＩＬ－１０／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。一例において、上記ＩＬ－１０は約１．３μｇ ＩＬ－１０／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。

【0137】

したがって、別の態様において、本開示は、
平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
ＩＬ－１０と
含む複合体を提供する。それに代わる本明細書に記載の平均径を使用してもよい。

【0138】

一実施形態において、上記抗増殖薬はシロリムスである。上記シロリムスは、約１．５μｇ～約３μｇ、もしくは約１．５μｇ～約２．５μｇ、もしくは約２μｇ～約２．５μｇ、もしくは約２μｇ～約３μｇ シロリムス／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。一例において、上記シロリムスは約２．５０μｇ シロリムス／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。

【0139】

驚くべきことに、本発明者らは、ｎａｎｏＰ３に結合した上記シロリムスによって再内皮化が増加し、延いては血管の治癒が促進されることを見出した。この知見は遊離のシロリムスの作用に反する。

【0140】

したがって、別の態様において、本開示は、
平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
シロリムスと
含む複合体を提供する。それに代わる本明細書に記載の平均径を使用してもよい。

【0141】

一実施形態において、上記抗炎症薬はスリンダクである。上記スリンダクは、約２μｇ～約３．５μｇ、もしくは約２．５μｇ～約３．５μｇ、もしくは約２．５μｇ～約３．１μｇ スリンダク／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。一例において、上記スリンダクは、約３．０５μｇ スリンダク／１０^９－ｎａｎｏＰ３の負荷容量、またはそれに代わる量のｎａｎｏＰ３における等価の濃度でｎａｎｏＰ３に結合させてもよい。

【0142】

したがって、別の態様において、本開示は、
平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
スリンダクと
含む複合体を提供する。それに代わる本明細書に記載の平均径を使用してもよい。

【0143】

上記ナノ粒子状ポリマー、それらの凝集体または複合体は、切り傷／創傷または血管損傷の治療に好適なスキャフォールドに組み込むことが可能であることが企図される。例えば、上記ナノ粒子状ポリマー、それらの凝集体または複合体は、心臓パッチ、血管移植片、及びステントなどのインプラント上またはインプラント中で使用することができる。

【0144】

複合体の製造
上記ｎａｎｏＰ３材料及びｎａｎｏＰ３複合体の製造の詳細は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／１１２５４３号の４９ページ、１８行～７１ページ、７行に記載され、該公開は本明細書に援用される。例示的な複合体の製造のためのプロセスを以下に提示する。

【0145】

ｎａｎｏＰ３材料は、１５０ｍＴｏｒｒのＮ_２／Ｃ_２Ｈ_２／Ａｒのガス状混合物の活性化及び５０Ｗの高周波電力の印加を介したプラズマ重合によって調製することができる。Ｃｙ５などの蛍光標識分子を使用して、ｎａｎｏＰ３のＩＬ－４及びＩＬ－１０などの生物学的に活性な薬剤に対する負荷容量及び結合効率を測定し、インビトロ及びインビボの両方の処理に関する最適なインキュベーションパラメータを確立することができる。

【0146】

上記生物学的に活性な薬剤を超純水中の上記ｎａｎｏＰ３と１ｍｌの総反応容量で混合し、室温で１時間、静置でインキュベートする。１時間インキュベートした後に、残余の洗浄液を使用し、Ｃｌａｒｉｏｓｔａｒモノクロメーターマイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で結合速度論の解析を行うことができる。

【0147】

医薬組成物
上記複合体を医薬組成物中に存在するようにしてもよい。好適な医薬組成物及び好適な医薬組成物の誘導方法の詳細は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／１１２５４３号の４０ページ、７行～４４ページ、２６行に記載され、該公開は本明細書に援用される。

【0148】

血管への複合体の送達
本明細書では、生物学的に活性な薬剤のある血管のある領域への局在化方法、ある血管のある領域における炎症の調節方法、及び生物学的に活性な薬剤の血管中の送達部位への保持方法であって、上記生物学的に活性な薬剤をナノ粒子と複合体化し、それによって複合体を製造すること、及び上記複合体を上記血管の上記領域に送達することによる上記方法が開示される。

【0149】

上記複合体は、当技術分野で公知の任意且つ適宜の送達方法によって上記血管に送達することができる。好適な送達方法の例としては、カテーテル、ステント、ステント内挿型人工血管、移植、及び弁、または血管中への直接注入が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0150】

一例において、上記カテーテルは閉塞灌流カテーテルである。別の例において、上記カテーテルはｓｗｅａｔｉｎｇバルーンカテーテルである。

【0151】

送達後、上記複合体は上記血管中の上記送達部位に保持される。一実施形態において、上記複合体は、複合体化されていない生物学的に活性な薬剤が上記血管の上記領域に保持される期間よりも長い期間、上記血管の上記領域に保持される。例えば、上記複合体は、上記血管の上記領域に、上記複合体化されていない生物学的に活性な薬剤が上記血管の上記領域に保持される期間の少なくとも１．２倍、１．２倍、１．５倍、１．７倍、もしくは２倍の期間保持されてもよく、または上記複合体は、上記送達部位に少なくとも１日、もしくは少なくとも２日間、もしくは少なくとも３日間、もしくは少なくとも４日間、もしくは少なくとも５日間、もしくは少なくとも６日間、もしくは少なくとも７日間、もしくは少なくとも８日間、もしくは少なくとも９日間、もしくは少なくとも１０日間、もしくは少なくとも１１日間、もしくは少なくとも１２日間、もしくは少なくとも１３日間、もしくは少なくとも１４日間保持される。一例において、上記複合体は上記送達部位に少なくとも１日保持される。別の例において、上記複合体は上記送達部位に少なくとも５日間保持される。別の例において、上記複合体は上記送達部位に少なくとも１４日間保持される。

【0152】

治療方法
本明細書では、本明細書において規定される複合体、または本明細書において規定される複合体を含む医薬組成物を対象に送達するステップ含む、血管損傷または血管疾患の治療または予防方法も開示される。用語「治療する」は、本明細書では、治療的処置及び予防的処置の両方を包含するように使用される。したがって、本明細書に開示の治療方法は、疾患、障害、または疾病の１つ以上の症状の予防方法を包含する場合がある。「治療する」は、疾患、障害、または疾病の任意の１つ以上の症状を軽減することと解釈される場合があることが理解されよう。したがって、「治療する」は、本明細書に開示の複合体の投与を受けていない、または複合体化されていない生物学的に活性な薬剤のみの投与を受けた患者と比較して、血管閉塞もしくは新生内膜形成が低下すること及び／または再内皮化の速度が増加することを包含する。本明細書では、「治癒を促進する」とは、本明細書に開示の複合体の投与を受けていない、または複合体化されていない生物学的に活性な薬剤のみの投与を受けた患者と比較して、治癒のいずれかの指標マーカーが増加することをいう。「治癒」とは、血管の創傷の治癒を指す場合がある。用語「治癒」は内皮化などの過程を包含することが理解されよう。したがって、本明細書における治癒を促進することへの如何なる言及も、内皮化の促進を指すものとして理解されたい。

【0153】

一態様において、本開示は、それを必要とする患者のある血管のある領域に本明細書で規定される複合体を送達することを含む、血管損傷または血管疾患の治療または予防方法を提供する。

【0154】

したがって、一例において、本開示は、
平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
ｉ）インターロイキン－１０、または
ｉｉ）スリンダク、または
ｉｉｉ）シロリムスと
を含む複合体を送達することを含む、血管損傷または血管疾患の治療または予防方法を提供する。

【0155】

別の態様において、本開示は、本明細書で規定される複合体を、それを必要とする患者のある血管のある領域に送達することを含む治癒の促進方法を提供する。

【0156】

したがって、一例において、本開示は、
平均径が約１ｎｍ～約５０ｎｍであり、アルケン、アルキン、シクロアルケン、シクロアルキン、もしくはそれらの混合物から選択される少なくとも１種のモノマーを含むプラズマから形成されるナノ粒子状ポリマー；または、２つ以上の上記ナノ粒子状ポリマーを含み、平均径が約１００ｎｍ～約２００ｎｍである凝集体と、
ｉ）インターロイキン－１０、または
ｉｉ）シロリムスと
を含む複合体を送達することを含む、治癒の促進方法を提供する。

【0157】

本明細書では、患者の疾病の治療または予防用の薬剤の製造における、本明細書で規定される複合体の使用も開示される。

【0158】

一態様において、本開示は、それを必要とする患者の血管損傷または血管疾患の治療または予防用の薬剤の製造における、本明細書で規定される複合体の使用を提供する。

【0159】

一態様において、本開示は、それを必要とする患者の治癒の促進用の薬剤の製造における、本明細書で規定される複合体の使用を提供する。

【0160】

一実施形態において、本明細書で規定される複合体は、薬剤として使用されるかまたは薬剤の製造に利用される。

【0161】

別の実施形態において、本明細書で規定される複合体は、血管疾患の治療または予防に使用するためのものである。

【0162】

別の実施形態において、本明細書で規定される複合体は、治癒の促進に使用するためのものである。

【0163】

別の態様において、本開示は、血管疾患の治療または予防に使用される場合の本明細書で規定される複合体を提供する。

【0164】

別の態様において、本開示は、治癒の促進に使用される場合の本明細書で規定される複合体を提供する。

【0165】

上記複合体は、例えば、適宜の化合物が医薬組成物に添加される場合に、「有効量」で提供することができる。語句「有効量」は、上記化合物を含む組成物の上記化合物を投与する、研究者、獣医、医師、または他の臨床医が求めている組織、系、動物、またはヒトの所望の生物学的または医学的応答を誘発することとなる上記複合体の量を意味すると解釈される。

【0166】

上記「有効量」は、特定の複合体の有効性を含む多くの因子に依存することとなる。患者の体重及び年齢も、患者が投与を受け取るべき化合物の濃度を決定する際の、当業者にとっての因子となる場合がある。

【0167】

語句化合物「の投与」及び／または化合物を「投与する」は、治療を必要とする患者に、本明細書で規定される複合体または複合体を含む医薬組成物を提供することを意味すると理解されるべきものである。

【0168】

本明細書で規定される複合体の投与を受ける者は、男性または女性のヒトであってよい。

【0169】

あるいは、ナノ粒子、凝集体、もしくは複合体；または、ナノ粒子、凝集体、もしくは複合体を含む医薬組成物の投与を受ける者は、非ヒト動物であってもよい。「複数の非ヒト動物」または「非ヒト動物」は、ヒトを除く動物界を対象とし、オスまたはメスの脊椎動物及び無脊椎動物の両方を含み、哺乳動物を含む温血動物（霊長動物、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、モルモット、ウマ、またはその他のウシ属、ヒツジ属、ウマ属、イヌ属、ネコ属、げっ歯動物、もしくはマウス種を含む、但しこれらに限定されない）、鳥、昆虫、爬虫類、魚、及び両生類を含む。

【0170】

上記複合体及び薬学的に許容される組成物の投与を受ける者は、本明細書では、同義の用語「患者」、「投与を受ける者」、「個体」、及び「対象」を用いて言及される。これらの４種の用語は同義で使用され、本明細書で定義される任意のヒトまたは動物をいう（別段の指示がない限り）。上記患者は血管内介入を受けているかまたは以前に受けていてもよい。一例において、上記患者は血管内介入を受けている。別の例において、上記患者は血管内介入を以前に受けていた。上記血管損傷は血管内介入に起因していてもよい。例えば、上記血管内介入は、ステント留置術またはバルーン血管形成術であってよい。一例において、上記血管内介入はステント留置であってよい。別の例において、上記血管内介入はバルーン血管形成術である。

【0171】

本明細書に記載の複合体を使用して治療することができる可能性のある疾患、障害、または疾病としては、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、急性冠症候群などの血管疾患；胃腸疾患、及び腎疾患が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0172】

本明細書に含まれる文書、法令、物質、装置、または論文などの議論は、それが添付の特許請求の範囲の各項の優先日よりも前に存在していたことによって、これらの事項のいずれかまたはすべてが先行技術基準の一部を形成するか、または本開示に関連する分野における共通の一般的な知識であったことを認めると解されるべきものではない。

【実施例】

【0173】

実施例１ ｎａｎｏＰ３へのインターロイキンの表面結合
無担体組換えラットＩＬ－４及びＩＬ－１０（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）を、１００ｎｇ／μｌの原液濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解した。結合速度論を確認するために、各インターロイキンにＬｉｇｈｔｎｉｎｇ－ｌｉｎｋ Ｃｙ５抗体標識（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，ＵＳＡ）をタグ付けした。超純水（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，ＵＳＡ）中の１×１０^９のｎａｎｏＰ３（２００ｎｍ径）毎に、１．４２μｇのＩＬ－４または１．３２μｇのＩＬ－１０のいずれかを添加した。総反応容量が１ｍｌになるように水を追添加し、室温で１時間、静置でインキュベートした。１時間インキュベートした後に、残余の洗浄液を使用し、Ｃｌａｒｉｏｓｔａｒモノクロメーターマイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で結合速度論の解析を行った。

【0174】

溶液中のＩＬ－４に対するｎａｎｏＰ３の結合効率は９９％で最大であったが、これは０．５±０．０１μｇ／１０^９－粒子の負荷容量に相当する。上記負荷容量はさらに１．１±０．０２μｇ／１０^９－粒子まで増加したが、より低い５３．１％の結合効率における値である。ｎａｎｏＰ３のＩＬ－１０に対する最大結合効率は９９．９％であったが、これは０．５±０．０２μｇ／１０^９－粒子の総質量負荷容量に相当する。ＩＬ－１０がｎａｎｏＰ３上に、０．８０±０．０２μｇ／１０^９－粒子までさらに負荷されることが観測されたが、これは４０％の結合効率に相当する。すべての実験は、室温の超純水（ｐＨ＝６．５）中で実施した。インキュベーション時間は３０分であった。

【0175】

図１のＡは、ｎａｎｏＰ３の機能化の概略図である。小分子、造影剤、ターゲティングリガンド、またはタンパク質をｎａｎｏＰ３と共にインキュベートして、上記ｎａｎｏＰ３を機能化する。

【0176】

図１のＢは、ＩＬ－４及びＩＬ－１０に対するマクロファージの応答を示す。ＩＬ－４及びＩＬ－１０は、Ｍ１マクロファージ（炎症誘発性）の表現型をＭ２マクロファージ（抗炎症性）にシフトさせることができる。

【0177】

図２はｎａｎｏＰ３に対するＩＬ－４及びＩＬ－１０の負荷容量を示す。ＩＬ－４及びＩＬ－１０の結合効率は１００％である。発光スペクトルによって、ｎａｎｏＰ３がＩＬ－４及びＩＬ－１０に結合することができることが確認されている。

【0178】

実施例２ ｎａｎｏＰ３に結合したＩＬ－４によってＭ２マクロファージの極性化が生じる
マクロファージの表現型をマクロファージのＭ２抗炎症性の状態へと誘導することによって、血管損傷のさらなる進行が緩和され、疾患の退行が促進される可能性がある。ＩＬ－４及びＩＬ－１０を含む、インターロイキンファミリーのさまざまなサイトカインが、Ｍ１からＭ２への表現型のこのシフトを促進する。

【0179】

本発明者らは、インビトロでのマクロファージの極性化に対するＮＰ３＋ＩＬ－４の効果の検討を模索した。未処理の２４６．７マウスマクロファージ細胞（ＡＴＣＣ，ＵＳＡ）を、９６ウェルプレート中、５×１０^３細胞／ウェルで培養した。ＩＬ－４結合ｎａｎｏＰ３を１×１０^５ ｎａｎｏＰ３／ウェルの濃度でマクロファージ培養物中に添加した。２４時間後に、マクロファージを４％パラホルムアルデヒド中で固定化し、その後走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）法及び共焦点顕微鏡画像法を実施した。共焦点染色は、Ａｃｔｉｎ細胞骨格染色（Ａｂｃａｍ，ＵＳＡ）及び抗アルギナーゼ－１抗体（Ａｂｃａｍ，ＵＳＡ）を使用して実施した。

【0180】

図３は、未処理のマクロファージ及びｎａｎｏＰ３のみで処理したマクロファージと比較して、ｎａｎｏＰ３－ＩＬ４によってＭ２が活性化されることを示す。共焦点染色により、ＮＰ３－ＩＬ４で処理したマクロファージにおいて、高度に発現されたＭ２酵素であるＡＲＧ－１が有意に上方制御されることが確認され、Ｍ２の活性化がさらに確認される。

【0181】

実施例３ ラット頸動脈損傷及びｎａｎｏＰ３送達のモデル（Ｉ）
血管損傷のラット頸動脈モデルを使用して、心血管病理を治療するためのＮＰ３結合インターロイキンの有効性をインビボで判定した（図１のＣ）。

【0182】

研究の認可はＳｙｄｎｅｙ Ｌｏｃａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅから得た（プロトコル番号２０１７／００６）。実験は、Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｃｏｄｅ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｆｏｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｒｐｏｓｅに準拠して実施した。ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、オス、７週齢）はＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から購入した。ラットにケタミン（７５ｍｇ／ｋｇ）及びメデトミジン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の単回筋肉内注射を行い、麻酔を誘導した。総頸動脈を分離し、二重結紮を約１ｃｍ離して行った。遠位端を小さく切開し、そこから微小眼内鉗子（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＳＡ）を挿入し、該鉗子全幅まで拡張し、３６０度回転させて、血管の管腔表面領域全体を損傷させた。これを５回繰り返した後、鉗子を引き抜き、２２Ｇカテーテルを同一の切開部に挿入した。このカテーテルを通して、約８０μｌの総容量のＲＰＭＩ培地中、２×１０^８ ｎａｎｏＰ３の濃度のＩＬ－４結合ｎａｎｏＰ３またはＩＬ－１０結合ｎａｎｏＰ３の溶液を注入した。このｎａｎｏＰ３溶液を２分間インキュベートし、次いでこの血管から完全に抜き出した。切開部を、９－０ナイロン縫合糸を使用して縫合して閉じ、両方の結紮を元に戻して血流を再確立した。次に、病理学的評価のために、上記分離した血管セグメントを１４日後に外植した。

【0183】

図４のＢは、血流が回復すると、遊離ＩＬ－４は血管壁から迅速に洗い流されることを示す。しかし、ｎａｎｏＰ３に結合したＩＬ－４は血管中に顕著に保持され、且つ５日後もかなりのレベルで存続している。

【0184】

図５は、新生内膜の形成が阻害されていることを示す。処理した頸動脈セグメントにおけるＭ２マクロファージの存在の免疫染色（黄色／緑色）が、裸出、ＮＰ３＋ＩＬ－４、及び遊離ＩＬ－１０と比較して、ＮＰ３＋ＩＬ－１０群において有意に増加していること示している。免疫染色による損傷した内皮の修復の評価によって、ＮＰ３＋ＩＬ４及びＮＰ３＋ＩＬ－１０の両方が損傷後１４日までに十分な内皮の完全性を回復することが示されている。しかし、このことは遊離ＩＬ－１０で処理した場合に見られない。

【0185】

インビボでの１４日後に、血管外植片を４％ ＰＦＡで終夜固定化し、エタノール脱水に供した後、パラフィンに包埋した。次いで、包埋した血管セグメントを、長さ方向に５μｍの厚さの切片に切り分けた。Ｍ２マクロファージ及び管腔内皮の染色を、抗ＣＤ２０６（Ａｂｃａｍ，ＵＳＡ）及び抗フォン・ウィルブランド因子（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）抗体を使用して実施した。Ａｌｅｘａ－ｆｌｕｏｒ ５９４二次抗体を使用することによって蛍光画像化を行った。新生内膜形成の染色をヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使用して行った。正規化した過形成を、過形成の総面積を当初の血管内腔の面積で除したものとして算出した。

【0186】

治療用ｎａｎｏＰ３送達後２週間の新生内膜形成の解析により、血管閉塞が、ＮＰ３＋ＩＬ－４群及びＮＰ３＋ＩＬ－１０群においてそれぞれ、約３５％及び２０％の断面内腔面積に減少することを示している。遊離ＩＬ－１０及びｎａｎｏＰ３のみでは血管閉塞に有意な効果はなく、このことは、ｎａｎｏＰ３プラットフォームがＩＬ－１０の治療効果を促進することを示唆している（図６）。

【0187】

実施例４ ラット頸動脈損傷及びｎａｎｏＰ３送達のモデル（ＩＩ）
血管損傷のラット頸動脈モデルを使用して、心血管病変を治療するためのＮＰ３＋ＩＬ－１０、ＮＰ３＋シロリムス、またはＮＰ３＋スリンダクの有効性をインビボで判定した。無担体組換えラットＩＬ－１０（１．３４μｇ／１０^９－ｎａｎｏＰ３；Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）、シロリムス（２．５０μｇ／１０^９－ｎａｎｏＰ３；ラパマイシン，Ｓｉｇｍａ－Ｍｅｒｃｋ，ＵＳＡ）、スリンダク（３．０５μｇ／１０^９－ｎａｎｏＰ３；Ｓｉｇｍａ－Ｍｅｒｃｋ，ＵＳＡ）、またはＣｙ７蛍光標識（５．０３μｇ／１０^９－ｎａｎｏＰ３；ＣＦ７５０ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌａｂｅｌ，Ｓｉｇｍａ－Ｍｅｒｃｋ，ＵＳＡ）を滅菌水で希釈し、２×１０^９ ｎａｎｏＰ３と複合体化した。

【0188】

上記カテーテルを通して、約８０μｌの総容量のＲＰＭＩ培地中、２×１０^８ ｎａｎｏＰ３の濃度のＩＬ－１０結合ｎａｎｏＰ３、シロリムス結合ｎａｎｏＰ３、またはスリンダク結合ｎａｎｏＰ３の溶液（ＩＬ－１０、０．２６８μｇ；シロリムス、０．５μｇ；スリンダク０．６１μｇ；Ｃｙ７、１．０１μｇ）を注入したことを除いて、実施例３に記載したように、ラットを血管損傷に供した。

【0189】

図７は、ＮＰ３＋ＩＬ－１０、ＮＰ３＋シロリムス、またはＮＰ３＋スリンダクの送達によって、ラット頸動脈損傷モデルにおける遊離の薬剤の送達と比較して、新生内膜過形成が抑制されることを示している。

【0190】

ＮＰ３＋ＩＬ－１０、ＮＰ３＋シロリムス、またはＮＰ３＋スリンダクで処理したラット頸動脈モデルにおける血管再内皮化も、実施例３に記載のフォン・ウィルブランド因子（ｖｗｆ）染色を使用して検討した。シロリムスは、創傷治癒を損なうことが知られている薬剤である。驚くべきことに、本発明者らは、シロリムスが創傷治癒を損なうと以前に記載されているが、ＮＰ３＋シロリムス及びＮＰ３＋ＩＬ１０の両方が治癒（内皮化）を刺激することを明らかにしている（図８）。

【0191】

実施例５ ｎａｎｏＰ３に結合したＩＬ－１０及びスリンダクによりＭ２マクロファージの極性化が生じる
本発明者らは、インビトロでのマクロファージの極性化に対するＮＰ３＋ＩＬ－１０及びＮＰ３＋スリンダクの効果の検討を模索した。

【0192】

未処理の２４６．７マウスマクロファージ細胞（ＡＴＣＣ，ＵＳＡ）を、９６ウェルプレート中、５×１０^３細胞／ウェルで培養した。ＩＬ－１０（１．３４μｇ／１０^９－ｎａｎｏＰ３）及びスリンダク（３．０５μｇ／１０^９－ｎａｎｏＰ３）を、実施例４に記載の通りにしてｎａｎｏＰ３に結合させた。

【0193】

ＮＰ３＋ＩＬ－１０またはＮＰ３＋スリンダクを１×１０^５ ｎａｎｏＰ３／ウェルの濃度でマクロファージ培養物中に添加した。２４時間後に、マクロファージを４％パラホルムアルデヒド中で固定化し、その後走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）法及び共焦点顕微鏡画像法を実施した。共焦点染色は、Ａｃｔｉｎ細胞骨格染色（Ａｂｃａｍ，ＵＳＡ）及び抗アルギナーゼ－１抗体（Ａｂｃａｍ，ＵＳＡ）を使用して実施した。

【0194】

図９は、未処理のマクロファージ（「裸出」）及びｎａｎｏＰ３のみで処理したマクロファージ（「＋ＮＰ３」）と比較して、ＮＰ３＋ＩＬ－１０によってＭ２が活性化されることを示す。共焦点染色により、ＮＰ３＋ＩＬ１０で処理したマクロファージにおいて、高度に発現されたＭ２酵素であるＡＲＧ－１が有意に上方制御されされることが確認され、Ｍ２の活性化がさらに確認される。

【0195】

実施例６ ウサギ腸骨損傷及びｎａｎｏＰ３送達のモデル
ウサギ腸骨損傷モデルを使用して、ＮＰ３＋ＩＬ－１０処理の有効性を評価した。

【0196】

研究の認可はＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｙｄｎｅｙ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＡＥＣ）（プロトコル２０１９－１６５３）から得た。実験は、Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｃｏｄｅ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｆｏｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｒｐｏｓｅに準拠して実施した。鼠径部の皮膚の中央に切開（長さ約１ｃｍ）を行い、筋層の鈍的切開後に右大腿動脈を露出させた。この動脈を遠位端で結紮し、該結紮の上に、５Ｆシース（Ａｂｂｏｔｔ，ＴＲＥＫ冠状動脈拡張カテーテル、３．２５ｍｍ）を挿入できるように小さく切開を行った。上記シースを縫合糸（３－０、絹）で所定の位置に固定した。上記シースを通して０．０１４インチのガイドワイヤーを挿入し、腹部大動脈中を逆行させた。次に、３．２５ｍｍの血管形成バルーンカテーテルをガイドワイヤー上に挿入し、大動脈中に進入させた。ＮＰ３送達及び周囲の血管系の位置を、造影剤流体ＩＳＯＶＵＥ ３７０またはＯＭＮＩＰＡＱＵＥ（７５．５ｇ／１００ｍｌ）、２５％～５０％（ｖ／ｖ）造影剤／生理食塩水の静脈内注射によって測定し、その後血管造影法を実施した。

【0197】

腹部大動脈の分岐部でバルーンを３．１ｍｍ径に膨張させ、大腿動脈へとゆっくりと３回引き抜くことによって腸骨動脈の裸出を行った（１回の裸出当り１分）。主切開部を通して、同一のバルーンを損傷した腸骨中に分岐部まで再挿入し、６～８気圧に膨張させて近位の血流を閉鎖した。血流が閉鎖された直後に、上記シースを通してＩＬ－１０ ｎａｎｏＰ３溶液（３×１０^８、計２ｍｌ）を送達し、動脈を膨張させ、２分間インキュベートし、その後上記シースを通して残留した溶液を吸い出した。シースを取り出し、大腿動脈を３－０絹縫合糸で恒久的に結紮し、続いてシースを取り出した。露出領域を３－０絹縫合糸により、個別の縫い目及び二層縫合で閉じた。

【0198】

図１０は、腸骨動脈損傷のウサギモデルにおけるインビボでの、ＩＬ－１０を複合体化した２００ｎｍのＮＰの性能評価結果を示す。Ａ）腸骨動脈損傷のウサギモデル。Ｂ）新生内膜過形成のＨ＆Ｅ染色。Ｃ）血栓症のＣＤ３１染色（白い点線）。Ｄ）炎症性マクロファージ浸潤のＣＤ６８染色（白色染色）。ＮＰ３＋ＩＬ１０で処理した血管は、閉塞、血栓症、及び炎症の減少を示した。図１１は、ＮＰ３＋ＩＬ－１０で処理した血管において、未処理の対照と比較して、７日間にわたって過形成が減少したことを示す。さらに、血栓症の発生率は７日間にわたって増加し、これがＮＰ３＋ＩＬ－１０で処理した血管では有意に減少する。血管炎症のＣＤ６８染色により、未処理の対照と比較して、ＮＰ３＋ＩＬ－１０が炎症誘発性マクロファージの浸潤を減少させ、且つ７日間にわたって炎症を軽減することが示される。

【0199】

実施例７ ラット頸動脈損傷モデルにおけるｎａｎｏＰ３の保持
ラット頸動脈損傷モデルにおいて、２００ｎｍ径のｎａｎｏＰ３と１００ｎｍ径のｎａｎｏＰ３（ＮＰ３）の保持を比較検討した。

【0200】

Ｃｙ７フルオロフォアを２００ｎｍ径または１００ｎｍ径のｎａｎｏＰ３のいずれかに複合体化した。

【0201】

カテーテルを通して、約８０μｌの総容量のＲＰＭＩ培地中、２×１０^８ ｎａｎｏＰ３の濃度の、１００ｎｍのｎａｎｏＰ３に結合したＣｙ７または２００ｎｍのｎａｎｏＰ３に結合したＣｙ７を含む溶液を注入したことを除いて、実施例３に記載のようにしてラットを血管損傷に供した。

【0202】

図１２は、１００ｎｍ及び２００ｎｍの両方のｎａｎｏＰ３が７日後に保持され、１００ｎｍのｎａｎｏＰ３も送達後２週間で保持されていたことを示す。

【0203】

ｎａｎｏＰ３は、いずれの粒径を使用した場合でも１４日後に検出された。使用したｎａｎｏＰ３の粒径に応じて、保持プロファイルに多少の変動があった。したがって、特に好ましい保持時間は、好適なｎａｎｏＰ３粒径を選択することによって達成することができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【国際調査報告】