特表 2022-521497 ＤＮＡ分子の混合物を含む組成物、生物学的阻害剤としてのその使用及び製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-08

(54)【発明の名称】ＤＮＡ分子の混合物を含む組成物、生物学的阻害剤としてのその使用及び製造方法

(51)【国際特許分類】

   A01N 63/60 20200101AFI20220401BHJP

   A01N 65/08 20090101ALI20220401BHJP

   A01N 63/12 20200101ALI20220401BHJP

   A01N 63/14 20200101ALI20220401BHJP

   A01P 1/00 20060101ALI20220401BHJP

   A01P 3/00 20060101ALI20220401BHJP

   A01P 7/00 20060101ALI20220401BHJP

   A01N 25/02 20060101ALI20220401BHJP

   A01N 63/23 20200101ALI20220401BHJP

   A01N 63/20 20200101ALI20220401BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 15/02 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20220401BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20220401BHJP

   A61K 8/99 20170101ALI20220401BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20220401BHJP

   A23L 3/3562 20060101ALI20220401BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20220401BHJP

【ＦＩ】

A01N63/60

A01N65/08

A01N63/12

A01N63/14

A01P1/00

A01P3/00

A01P7/00

A01N25/02

A01N63/23

A01N63/20

A61K48/00

A61P1/00

A61P1/02

A61P11/00

A61P13/02 105

A61P15/02

A61P17/00 101

A61P31/00

A61P33/00

A61P27/02

A61K31/711

A61K8/99

A61Q19/00

A23L3/3562

C12N15/11 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021547796

(86)(22)【出願日】2020-02-14

(85)【翻訳文提出日】2021-10-11

(86)【国際出願番号】 NL2020050086

(87)【国際公開番号】W WO2020167128

(87)【国際公開日】2020-08-20

(31)【優先権主張番号】2022581

(32)【優先日】2019-02-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521359092

【氏名又は名称】コパート ベスローテン フェンノートシャップ

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】特許業務法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ディアーノ、マルチェッロ マリア

(72)【発明者】

【氏名】ロリート、マッテオ

(72)【発明者】

【氏名】マッツォレーニ、ステファノ

(72)【発明者】

【氏名】ミッケルセン、ハラルド ハイスベルト

【テーマコード（参考）】

4B021

4C083

4C084

4C086

4H011

【Ｆターム（参考）】

4B021MC01

4B021MC10

4B021MK28

4B021MP10

4C083AA031

4C083AA032

4C083BB48

4C083CC01

4C083FF01

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA33

4C084ZA59

4C084ZA66

4C084ZA67

4C084ZA81

4C084ZA82

4C084ZA90

4C084ZB32

4C084ZB37

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA67

4C086ZA81

4C086ZA82

4C086ZA90

4C086ZB32

4C086ZB37

4H011AA01

4H011AA03

4H011AC01

4H011BA06

4H011BB21

4H011BB22

4H011DA12

4H011DC05

4H011DC11

(57)【要約】

本発明は、標的種の阻害に適したＤＮＡ分子の混合物を含む組成物、前記組成物を用いる方法及び使用、並びに組成物を製造するための方法に関する。前記組成物は、中でもヒト及び／又は動物用医薬の分野、農業又は１つ若しくは複数の標的種の阻害が有益となる他の分野における害虫防除及び／又は病害防除に有用性を見出すことができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

異なる供給源からのＤＮＡ配列を有するＤＮＡ分子の混合物を含む組成物であって、前記混合物は、ある種である供給源種の、好ましくは染色体ＤＮＡ配列由来の、いくつかの第１のＤＮＡ配列と、前記供給源種とは異なる種である宿主種の、好ましくは染色体ＤＮＡ配列由来の、いくつかの第２のＤＮＡ配列とを含み、場合により、該ＤＮＡ分子の混合物は、供給源種ＤＮＡ配列が少なくとも１つの末端で非供給源種ＤＮＡ配列と隣接しているキメラＤＮＡ分子を含み、該非供給源種ＤＮＡ配列が、宿主種ＤＮＡ配列、好ましくは、該宿主種の天然のゲノム由来の染色体ＤＮＡ配列、又はプラスミド、コスミド若しくは人工染色体などから選択される人工ＤＮＡ構築物由来のＤＮＡ配列から選択される該組成物。

【請求項2】

好ましくは微生物種から選択される宿主種からの、前記宿主種の細胞の集団を含み、ＤＮＡ分子が宿主種細胞、好ましくは生存宿主種細胞に存在する、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記ＤＮＡ分子は非断片化キメラＤＮＡ分子を含み、前記供給源種ＤＮＡ配列は部分的ＤＮＡ配列、好ましくは染色体ＤＮＡのランダムに生成された部分的ＤＮＡ配列、を含むか、又は前記キメラＤＮＡ分子に組み込まれた前記宿主種のトランスクリプトームから逆転写されたｃＤＮＡ配列を含む、請求項１から２までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項4】

前記ＤＮＡ分子が断片化ＤＮＡ分子である、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記供給源種ＤＮＡ配列は染色体ＤＮＡ配列を含み、前記ＤＮＡ分子の混合物中の前記供給源種ゲノムのカバレッジが２０～１００％の間、例えば２０～９０％、３０～１００％、３０～９０％、４０～１００％、４０～９０％、５０～１００％、５０～９０％など、好ましくは６０～１００％、例えば６０～９０％、７０～１００％、７０～９０％、８０～１００％、８０～９０％などである、請求項１から４までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

好ましくは非供給源種ＤＮＡ：供給源種ＤＮＡの比が１０：１～１０００：１の間、例えば２０：１～５００：１、５０：１～５００：１、１００：１～５００：１の間となるように、非供給源種ＤＮＡ、好ましくは宿主種ＤＮＡが、供給源種ＤＮＡを上回る、請求項１から５までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記宿主種が、細菌種などの微生物種、又は子嚢菌からの種、又は古細菌からの種、又は微細植物、多細胞植物などの多細胞生物、又は蠕虫種、土壌微生物、ＧＲＡＳステータス微生物、微生物防除剤から選択される、請求項１から６までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

細菌種が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、桿菌種、シュードモナス種、乳酸菌（例えばラクトバチルス属種、ロイコノストック属種、ペディオコッカス属種、ラクトコッカス属種、又は連鎖球菌属種など）、シアノバクテリア種（例えばアルスロスピラ種など、特にアルスロスピラ・プランテニス（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｐｌａｎｔｅｎｉｓ）、又はアルスロスピラ・マキシマ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｍａｘｉｍａ））から選択され、
子嚢菌からの微生物種が、酵母菌種（例えば出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）など）、又はアスペルギルス種（例えばクロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、若しくはアスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）など）、又は乳酸菌（例えばラクトバチルス属種、ロイコノストック属種、ペディオコッカス属種、ラクトコッカス属種、エンテロコッカス属種など、又は連鎖球菌属種など）、又はシアノバクテリア（例えばアルスロスピラ種など、特にアルスロスピラ・プランテニス（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｐｌａｎｔｅｎｉｓ）、又はアルスロスピラ・マキシマ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｍａｘｉｍａ））から選択され、
多細胞植物が、作物、好ましくは食用作物（例えば穀物、トウモロコシ、テンサイ、ナタネ、エンドウマメ、ダイズなどから選択される）、油料作物（例えばナタネ、エチオピアンマスタード、ヒマワリなど）、澱粉作物（例えば（サトウ）モロコシなど）、繊維作物（例えば亜麻又は麻など）、リグノセルロース作物（例えば草葦、暖竹、スイッチグラス、ススキ、カルドンなど）、短輪作森林作物（例えばヤナギ、ポプラ、又はユーカリなど）から選択され、
蠕虫種が、蠕虫療法に使用される蠕虫（例えばブタ鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｕｉｓ）、アメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）、鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ）、縮小条虫（Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｄｉｍｉｎｕｔａ）、回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）、糞線虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ）、蟯虫（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ）、又は小型条虫（Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｎａｎａ）など）から選択され、
土壌微生物が、アルファプロテオバクテリア属種、ベータプロテオバクテリア属種、デルタプロテオバクテリア属種、アクチノバクテリア属種、サーモレオフィラム（Ｔｈｅｒｍｏｌｅｏｐｈｉｌｉａ）属種、ルブロバクター（Ｒｕｂｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）属種、クロラキドバクテリウム（Ｃｈｌｏｒａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属種、アシドバクテリウム（Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属種、又はソリバクター（Ｓｏｌｉｂａｃｔｅｒｅｓ）属種から選択され、
微生物防除剤が、細菌生物防除剤、特にバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）若しくは枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｕｓ）、又は真菌生物防除剤、例えば昆虫病原性真菌（例えば白きょう病菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ）、イサリア・フモソロセア（Ｉｓａｒｉａ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅａ）、レカニニシリウム属種、又はメタリジウム属種など）、又は例えばトリコデルマ属種又はアンペロマイセス・クイスクアリス（Ａｍｐｅｌｏｍｙｃｅｓ ｑｕｉｓｑｕａｌｉｓ）から選択される、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記供給源種が、標的種又は該標的種に系統的に類似の種から選択され、該標的種が、疾患関連種、例えば病原種、寄生種若しくは病原媒介生物として機能する種などであり、又は外部寄生種であり、又は製品、例えば食品及び／若しくは化粧品及び／若しくは医薬品及び／若しくは有機物を含む他の製品などの劣化と関連する種である、請求項１から８までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記標的種が、病原種、好ましくは局所病原性標的種、最も好ましくは古細菌、細菌、真菌（酵母を含む）及び原生生物から選択される病原性標的種、寄生種（特にヒト及び／又は家畜及び／又はペット動物に寄生する種、好ましくは、皮膚寄生虫及び／又は消化管寄生虫及び／又は粘膜寄生虫から選択される寄生標的種）、植物病原種（例えば、真菌、卵菌、細菌、ウイルス又は原生生物から選択される植物病原体）、農業害虫節足動物、動物疾患の病原媒介生物、好ましくは節足動物から選択される病原媒介生物、植物疾患の病原媒介生物、好ましくは節足動物から選択される病原媒介生物、植物に寄生する線虫種、雑草種、又は製品劣化を引き起こす種から選択される、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記宿主種が前記標的種のための食料源を含む、例えば、前記宿主種が細菌種から選択され、前記標的種が細菌摂食線虫種から選択される、又は前記宿主種が多細胞植物であり、前記標的種が、植物食性節足動物種若しくは陸生腹足類種などの植物食性種である、請求項１から１０までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記供給源種ＤＮＡ配列のサイズが、約５０ｂｐ～約２Ｍｂ、例えば５０～３０００ｂｐ、１００～１５００ｂｐ、若しくは１００～２０００ｂｐ、１００～２５００ｂｐなど、或いは０．３～１５ｋｂ、例えば１～１０ｋｂなど、例えば５～１０ｋｂなど、或いは１５～６０ｋｂ、例えば１５～４０、２５～４０ｋｂなど、或いは４０～３４０ｋｂ、例えば５０～２００ｋｂなど、例えば１２０～３００ｋｂなど、例えば２００～３００ｋｂなど、或いは２５０ｋｂ～２Ｍｂ、例えば４００ｋｂ～１５００ｋｂ又は４００ｋｂ～１０００ｋｂなど、或いは０．３ｋｂ～２Ｍｂ、例えば１ｋｂ～２Ｍｂなど、例えば１０ｋｂ～２Ｍｂなど、例えば１００ｋｂ～２Ｍｂなど、例えば３６０ｋｂ～１Ｍｂなどである、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

人工ＤＮＡ構築物のＤＮＡが存在する場合、前記組成物が、プラスミド、コスミド、フォスミド、又は細菌人工染色体、酵母人工染色体、若しくは真菌人工染色体などの人工染色体から選択される人工ＤＮＡ構築物のＤＮＡを含む、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記供給源種及び前記宿主種が、異なる綱、異なる門、異なる界、又は異なるドメインから選択されるなど、好ましくは異なる分類学上の目から選択されることによって系統的に遠い、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

前記供給源種が、標的種又は該標的種に系統的に類似の種から選択され、該標的種が、特に、例えばコリストネウラ属（特にコリストネウラ・オラエ（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｏｒａｅ）、コリストネウラ・フミフェラナ（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｆｕｍｉｆｅｒａｎａ）、又はコリストネウラ・フレエマニ（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｆｒｅｅｍａｎｉ））などのハマキガ科から選択される、若しくは例えばスポドプテラ属（特にツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）、ハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ）、エジプトヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ）、クシナシスジキリヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｃｉｌｉｕｍ）、又はアメリカハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｏｒｎｉｔｈｏｇａｌｌｉ））などのヤガ科から選択される、若しくは例えばプロディア（Ｐｌｏｄｉａ）属若しくはエフェスチア（Ｅｐｈｅｓｔｉａ）属などのメイガ科から選択される鱗翅目、又は双翅目、鞘翅目、又は膜翅目から選択され、最も好ましくはコリストネウラ属から選択され、前記組成物が、該標的種に対する生物防除剤、例えば細菌生物防除剤（例えばバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又は枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｕｓ））、又は真菌生物防除剤、例えば昆虫病原性真菌（例えば白きょう病菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ）、イサリア・フモソロセア（Ｉｓａｒｉａ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅａ）、レカニニシリウム属種、又はメタリジウム属種など）などさらに含み、該生物防除剤が、好ましくはバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）バイオマスであり、最も好ましくは、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）バイオマスが生存宿主種細胞である、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

薬学的に許容される形態での、請求項１から１５までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

農学的組成物である、請求項１から１５までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

前記供給源種が、標的種として選択され、又は該標的種に系統的に類似の種であり、好ましくは種が同じ科又は同じ属などの同じ分類学上の目からである場合、該種は系統的に類似している、医薬品、特に、寄生虫及び／又は病原体から選択される該標的種による感染症、好ましくは皮膚、爪又は粘膜、特に眼、口、消化管、膣、尿路、肺を含む気道の粘膜の病原体及び／又は寄生虫による感染症の治療を目的とする医薬品としての使用のための、請求項１から１６までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項19】

前記供給源種が、標的種から選択され、又は該標的種に系統的に類似の種であり、好ましくは種が同じ科又は同じ属などの同じ分類学上の目からである場合、該種は系統的に類似している、標的種である種を阻害する製品としての請求項１から１６までのいずれか一項に記載の組成物の非医療用、又は医療用などの使用。

【請求項20】

前記組成物が宿主種細胞を含み、前記ＤＮＡ分子が宿主種細胞中にあり、前記使用において宿主種細胞が破壊され、破壊された宿主種細胞由来の物質が、場合により該破壊された細胞からのＤＮＡの単離後に、前記標的種の阻害に使用される、請求項１９に記載の使用。

【請求項21】

前記供給源種が、標的種から選択され、又は該標的種に系統的に類似の種から選択され、好ましくは種が同じ科又は同じ属などの同じ分類学上の目からである場合、該種は系統的に類似している、標的種である種を阻害する方法であって、該標的種を請求項１から１７までのいずれか一項に記載の組成物に曝露するステップを含む方法。

【請求項22】

前記方法が非治療的方法であり、又は治療的方法である、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

－場合により断片化された供給源種ＤＮＡを含む、供給源種由来のＤＮＡ源を準備するステップと、
－前記供給源種とは異なるいくつかの種である宿主種の細胞を準備するステップと、
－前記宿主種細胞を前記供給源種由来のＤＮＡ源と共に、前記宿主種の細胞が前記供給源種ＤＮＡを複製可能な形態で取り込み可能な条件に供するステップと、
－場合により、宿主種細胞を単離するステップと、
－場合により、前記宿主種細胞からＤＮＡを単離するステップと、
－場合により、前記宿主種細胞のＤＮＡ内容物を断片化するステップと
を含む、請求項１から１７までに記載の組成物を製造する方法。

【請求項24】

病原種又は害虫種によって感染されやすく、及び／又は病原種又は害虫種によって寄生又は外部寄生されやすい、ヒト以外の種であるいくつかの製造種（production species）から農産物を製造する方法であって、
－標的領域である領域に、前記いくつかの製造種のいくつかの個体を提供するステップと、
－前記製造種の個体に又は前記標的領域に、請求項１から１５まで又は１７のいずれか一項に記載の組成物を提供するステップと、
－前記いくつかの製造種の前記個体に適切な栄養及び環境条件を提供して、農産物を製造するステップと
を含む該方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、標的種の阻害に適したＤＮＡ分子の混合物を含む組成物、前記組成物を用いる方法及び使用、並びに組成物を製造するための方法に関する。前記組成物は、中でもヒト及び／又は動物用医薬の分野、農業又は１つ若しくは複数の標的種の阻害が有益となる他の分野における害虫防除及び／又は病害防除に有用性を見出すことができる。

【背景技術】

【0002】

近年、ある生物種の断片化ＤＮＡが、該ＤＮＡが由来する種及び類似のゲノムを有する系統的に類似の種に対して抑制性であるという知見が得られるようになってきている。ＤＮＡ断片のこの自己阻害効果を開示する最初の刊行物は、国際特許出願ＷＯ２０１４／０２０６２４及びそのイタリア優先出願ＮＡ２０１２Ａ００００４６である。これらの文献は主として、自己阻害ＤＮＡ断片の新しく発見された効果に焦点を当てている。これらの刊行物によれば、阻害されるべき種由来の（又は系統的に類似の種由来の）単離された全ＤＮＡの超音波処理、加熱処理、若しくは熱分解によって、又は該種の全ＤＮＡから（又は系統的に類似の種から）始まるランダムＤＮＡ断片合成によって製造される。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

生物種を阻害するためのＤＮＡ断片をより効率的に用いるために、ＤＮＡ断片を有効な形態で製造するさらなる方法が望まれる。阻害される種のＤＮＡ断片は、阻害される種に由来しないＤＮＡに組み込まれた後で有効となることが今や、驚くべきことに見出された。この驚くべき発見に基づき、本発明の発明者らは、ある生物種の阻害ＤＮＡ断片が、阻害される種と無関係の宿主種においても効果的に製造され得ることを見出した。これは、阻害ＤＮＡ断片を製造するための新たな発明可能性を開くものである。

【課題を解決するための手段】

【0004】

第１の態様による本発明は、異なる供給源からのＤＮＡ配列を有するＤＮＡ分子の混合物を含む組成物であって、該混合物は、ある種である供給源種の、好ましくは染色体ＤＮＡ配列由来の、いくつかの第１のＤＮＡ配列と、該供給源種とは異なる種である宿主種由来のいくつかの第２のＤＮＡ配列とを含む、組成物に関する。組成物において、該ＤＮＡ分子の混合物は、供給源種ＤＮＡ配列が、少なくとも１つの末端で、宿主種ＤＮＡ配列又は人工ＤＮＡ構築物由来のＤＮＡ配列から選択される非供給源種ＤＮＡ配列と隣接しているキメラＤＮＡ分子を場合により含む。そのような組成物は、阻害ＤＮＡ断片が、標的種とは系統的に離れた宿主種において製造することができるという点で、供給源種として選択される、又は供給源種と系統的に類似の種から選択される標的種の阻害に有益である。

【0005】

本発明のさらなる態様は、医薬で使用するための本発明の組成物に関する。本発明の組成物は、寄生生物及び／又は病原生物の阻害に使用され得るという事実を考えると、該組成物はヒト及び／又は動物用医薬において有用性がある。

【0006】

さらに、本発明のさらなる態様は、標的種を阻害する製品としての本発明による組成物の使用に関する。この使用は、ヒト及び／若しくは動物用医薬における使用であってもよく、又は医薬以外での使用であってもよい。医薬以外での使用の例には、例えば農業での使用が挙げられ得、植物にとって寄生性及び／若しくは病原性及び／若しくは害虫である生物、並びに／又はウシ若しくは家禽などの家畜動物にとって害虫である生物、又はさもなければ農業生産を妨げる雑草などの生物を阻害するのに有益であり得る。

【0007】

或いは、組成物は、例えば、微生物腐敗を起こしやすい食品などの製品、パーソナルヘルスケア製品、又は微生物基質として適した化合物を含む他の製品において保存料として使用することもできるであろう。

【0008】

さらなる態様による本発明は、標的種である種を阻害する方法であって、前記標的種を本発明による組成物に曝露するステップを含む方法に関する。方法は、非治療的方法又は治療的方法であってもよい。

【0009】

さらなる態様によれば、本発明は、
－場合により断片化した供給源種ＤＮＡを含む、供給源種由来のＤＮＡ源を準備するステップと、
－該供給源種とは異なるいくつかの種である宿主種の細胞を準備するステップと、
－該宿主種が供給源種ＤＮＡを複製可能な形態で取り込めるようにする条件に該宿主種を供するステップと、
－場合により、宿主種細胞を単離するステップと、
－場合により、供給源種細胞からＤＮＡを単離するステップと、
－場合により、供給源種細胞から場合により単離されたＤＮＡを断片化するステップと
を含む、本発明による組成物を製造する方法に関する。

【0010】

方法は、標的種に対して阻害性のＤＮＡが、標的種又は系統的に類似の種の外部で今や効果的に製造され得るという点で有益である。自己阻害ＤＮＡは今や、標的種と系統的に無関係の種において特に製造することができる。

【0011】

さらに、本発明のさらなる態様は、農産物を生産する方法に関する。方法において、本発明の組成物は、植物又はウシ若しくは家禽などの家畜動物にとって、感染症及び／又は寄生性及び／又は害虫である生物、さもなければ農業生産を妨げる生物の阻害に使用される。植物又は家畜動物にとって感染症及び／又は寄生性及び／又は害虫である生物の阻害によって、そのような生産生物による農業生産が改善される可能性がある。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】実験１の阻害試験の結果を示す図である。同種実生生存に対するシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）市販ライブラリーの効果が示されている。データは、処理ごとに１０個の反復試料（１０個の実生を含む皿）の平均及び標準偏差を指している。対照と比べた有意差がアスタリスクでマークされている（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊、ｐ＜０．０１；^＊＊＊、ｐ＜０．００１）。

【図2】実験２の阻害試験を示す図である。２つの異なる基質タイプでの同種実生成長に対するショクヨウガヤツリ（Ｃｙｐｅｒｕｓ ａｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ）ゲノムＢＡＣライブラリーの効果が示されている。データは、処理ごとに１０個の複製ポットの平均及び標準偏差を指している。対照と比べた有意差がアスタリスクでマークされている（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊、ｐ＜０．０１；^＊＊＊、ｐ＜０．００１）。

【図3】実験３の阻害試験の結果を示す図である。異種ＤＮＡを含むが自己ＤＮＡゲノムライブラリーを含まない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株（ＥＰＩ３００）と比較した、同種胚致死（上）及び発育異常（下）に対する増殖培地でのカエノラブディティス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ）ゲノムＢＡＣライブラリーの効果が示されている。データは、処理ごとに１２個の反復試料の平均及び標準偏差を指している。

【図4】実験４の阻害試験の結果を示す図である。同種幼虫生存に対するエジプトヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ）市販ライブラリーの効果が示されている。データは、処理ごとに１０個の反復試料の平均及び標準偏差を指している。対照と比べた有意差がアスタリスクでマークされている（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１）。

【図5】実験９、調査の最後における異なる処理ブロック中のスベリヒユ植物の数の合計を示す図である。

【図6】系統的距離を決定するために実験１０で使用されたＡＧＰ（２００９）からの被子植物の系統樹を示す図である。

【図7】自己ＤＮＡ又は異種（ｈｅｔｅｒｏｓｐｅｃｉｆｉｃｓ）から抽出された異種ＤＮＡのどちらかで処理された７つの標的植物種の根の成長を示す図である。各バーは、４つの複製バイオアッセイの平均及び標準偏差を指している。各パネル中、ＤＮＡ抽出に使用された植物種が、実験１０の方法に記載のように決定された標的種からの系統的距離によってランク付けされている。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明の組成物は、異なる供給源からのＤＮＡ配列を有するＤＮＡ分子の混合物を含む。ＤＮＡ分子の混合物は、供給源種のいくつかの第１のＤＮＡ配列と、供給源種とは異なる宿主種のいくつかの第２のＤＮＡ配列とを含む。当業者が理解するように、用語「種」は抽象概念を指し、そのようなものとしての種は阻害することができない。種への言及は、故に、種の複数の個体又は生物、すなわち集団などの種の個体又は生物を意味すると解釈されるべきである。

【0014】

用語混合物が示唆するように、組成物は異なるＤＮＡ分子を含む。組成物中のＤＮＡ分子は配列が異なり、好ましくはサイズも異なる。組成物中のＤＮＡ分子のＤＮＡ配列は、異なる供給源由来であることによって異なる。特にＤＮＡ分子の第１のセットは、第１の種である供給源種の配列を有し、ＤＮＡ分子の第２のセットは、供給源種とは異なる第２の種である宿主種の配列を有する。さらに、供給源種ＤＮＡ配列の数もまた異なる。さらに、宿主種ＤＮＡ配列の数もまた異なる。故に、供給源種ＤＮＡ配列の集団内、及び宿主種ＤＮＡ配列の集団内にも変動がある。

【0015】

組成物において、供給源種ＤＮＡ配列は、宿主種細胞の天然のゲノム由来の染色体若しくは天然のプラスミドなどの宿主種の天然のゲノムのＤＮＡ分子に、好ましくは染色体ＤＮＡの部分配列（断片）として組み込まれ、又は宿主種細胞に導入された人工ＤＮＡ構築物に組み込まれ、故にキメラＤＮＡを形成することができる。或いは、組成物中の供給源種ＤＮＡ配列は、例えば断片化によって、そのようなキメラＤＮＡから破壊的に遊離されている。組成物中のＤＮＡ分子は、故に、種の完全な（インタクトな）天然染色体、種の完全な（インタクトな）天然染色体外ＤＮＡ（例えば天然のプラスミドなど）、完全な（インタクトな）人工ＤＮＡ構築物（例えば、プラスミド、コスミド、フォスミド又は人工染色体などから選択される）、種の断片化天然染色体、種の断片化天然染色体外ＤＮＡ（例えば天然のプラスミドなど）、又は断片化人工構築物（例えば、プラスミド、コスミド、フォスミド又は人工染色体などから選択される）の１つ又は複数を含んでもよい。本発明の組成物において、そのようなＤＮＡ分子は組み合わせて存在することもできる。これらの代わりのＤＮＡ分子は配列及びサイズが異なり得ること、及びそれらがどのように異なり得るかは当業者に明らかであろう。

【0016】

供給源種ＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子及び宿主種ＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子は、好ましくはＤＮＡ断片である。当業者は、用語「断片化ＤＮＡ」及び「ＤＮＡ断片」などの関連用語は、より大きなＤＮＡ分子の部分鎖（又は部分配列）であることを理解するであろう。ＤＮＡ断片は、ＤＮＡ断片化（ＤＮＡ分子の分解）又はポリヌクレオチド鋳型から始まるＤＮＡの合成によって得られてもよい。ＤＮＡ断片は、故に、より大きなＤＮＡ分子の部分配列を有するＤＮＡ分子である。本発明の文脈では、阻害ＤＮＡ断片は、好ましくはＤＮＡ断片化によって得られる。本発明の文脈により、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び関連用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などは、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」を含む。

【0017】

ＤＮＡ断片は、適切な任意の手段、特にランダムＤＮＡ断片生成の手法によって生成されてもよい。Ｗ０２０１４／０２０６２４は、自己阻害性ＤＮＡ断片を生成するためのいくつかの適切な手法を開示している。中でも、供給源種から単離されたＤＮＡの超音波処理、加熱処理、又は熱分解が開示されている。或いは、供給源種のＤＮＡから始まるランダムＤＮＡ断片合成は、ＤＮＡ断片のランダム生成に使用することもできる。ＤＮＡ断片を生成するためのこれらの及び他の手法は当業者に公知であり、利用可能な共通の一般知識に基づきそれらは用いられ得る。Ｍａｎｎ及びＫｒｕｌｌ（Ｍａｎｎ及びＫｒｕｌｌ ２００４．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ ２０：９４５～９５５頁）、Ｔｏｎｇら、（Ｔｏｎｇら、２００６．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ、１（２）：７２９～７４８頁）、Ｆａｎら（Ｆａｎら、（２００８）．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３６（１９）： ｅ１２５）及び、Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ（登録商標）Ｐｉｃｏの標準プロトコルＤＮＡ剪断（Ｓｔａｎｄａｒｄ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ＤＮＡ ｓｈｅａｒｉｎｇ ｆｏｒ Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ（登録商標） Ｐｉｃｏ）（ｄｉａｇｅｎｏｄｅウェブサイトｗｗｗ．ｄｉａｇｅｎｏｄｅ．ｃｏｍ）より入手可能がさらに参照され得る。或いは、ＤＮＡｓｅ Ｉ、エンドヌクレアーゼＶ又は制限酵素などのエンドヌクレアーゼが、供給源種ＤＮＡの断片化に使用されてもよい。

【0018】

ＤＮＡ断片化は、（次世代）ＤＮＡシーケンシング法でも頻用される。当業者は、これに関連してＤＮＡ断片化との関連で培われた知識体系を利用することもできる。

【0019】

さらに、ゲノム配列の一部を合成するＤＮＡ合成方法もＤＮＡ断片を得るのに使用することができる。例えば、ランダムＰＣＲ法などのＰＣＲ法が適切である場合がある。また、ｍＲＮＡの逆転写によって得られたｃＤＮＡ分子は、そのようなｃＤＮＡ分子がより大きなＤＮＡ分子の部分配列に相当することから、本発明の文脈内でＤＮＡ断片と見なされる場合がある。適切なｃＤＮＡ分子の合成は、当業者の知識の範囲内である。

【0020】

さらに、（生物学的）消化、分解などのプロセス、及び細胞などの、ＤＮＡを含有する生体物質に作用する類似のプロセスも、生体物質に含有されるＤＮＡの断片化をもたらし得る。故に、ＤＮＡ断片は、そのようなプロセスによってより大きな分子から遊離することもできることから、供給源種ＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子がＤＮＡ断片であることは必要とされない。

【0021】

ＤＮＡ断片生成に選択される手法は、好ましくはランダムＤＮＡ断片生成に適した手法である。ランダムＤＮＡ断片は、ランダムに生成されたＤＮＡ断片を意味すると理解されるべきである。それは、所定のパターンなしで生成されたＤＮＡ断片である。

【0022】

（次世代）ＤＮＡシーケンシングの文脈でのＤＮＡ断片化に関する研究から、（部分的）制限酵素消化及び超音波処理などの、ランダムＤＮＡ断片化のためのある特定の手法は、ゲノムのある特定の領域及び／又は配列に対するある程度の偏りを有し得るという知識が浮上してきた。ＷＯ２０１４／０２０６２４に開示される自己ＤＮＡの阻害から当業者が理解するように、この偏りは自己ＤＮＡのランダムに生成された断片の阻害作用とは関係がない。

【0023】

本発明の組成物では、ＤＮＡ分子は、好ましくは二本鎖ＤＮＡ分子（ｄｓＤＮＡ）として提供される。これは、ＤＮＡ分子が二本鎖状態でその生物学的阻害機能を果たすことを必ずしも意味しない。

【0024】

この理論に拘束されることを望むものではないが、二本鎖ＤＮＡ分子に関して、（部分的に）巻きの解けたｄｓＤＮＡから生じる一本鎖ＤＮＡ配列が阻害作用に関与しているというのがもっともらしく思われる。二本鎖形態のＤＮＡ分子は、故に、（部分的に）ＤＮＡが解ける機構を介して阻害作用をもたらし得る。

【0025】

組成物は、サイズが約５０塩基（５０ｂｐ）～約２Ｍｂ（２^＊１０^６ｂｐ）、例えば５０～３０００ｂｐ、１００～１５００ｂｐ、又は１００～２０００ｂｐ、１００～２５００ｂｐなど、或いは０．３～１５ｋｂ、例えば１～１０ｋｂなど、例えば５～１０ｋｂなど、或いは１５～６０ｋｂ、例えば１５～４０、２５～４０ｋｂ、２４～など、或いは４０～３４０ｋｂ、例えば５０～２００ｋｂなど、例えば１２０～３００ｋｂなど、例えば２００～３００ｋｂなど、或いは２５０ｋｂ～２Ｍｂ、例えば４００ｋｂ～１５００ｋｂ若しくは４００ｋｂ～１０００ｋｂなど、或いは０．３ｋｂ～２Ｍｂ、例えば１ｋｂ～２Ｍｂなど、例えば１０ｋｂ～２Ｍｂなど、例えば１００ｋｂ～２Ｍｂなど、例えば３６０ｋｂ～１Ｍｂなどにわたる供給源種ＤＮＡ配列を有するＤＮＡ分子を含んでもよい。供給源種ＤＮＡ配列が遊離断片化ＤＮＡ配列であるかどうか、又はそれらが非供給源種ＤＮＡ配列を含むより大きなＤＮＡ分子に組み込まれるかどうかに応じて、それらのサイズは異なり得る。遊離断片化ＤＮＡ配列は、好ましくはより低い範囲の方向により多くのサイズを有するであろう。より大きなＤＮＡ分子に組み込まれる供給源種ＤＮＡ配列は、それぞれのＤＮＡ分子に安定に組み込むことができるものに応じて最大サイズ範囲を有するであろう。当業者は、クローニング及び／又は発現ベクターが異なれば、収容できるＤＮＡインサートのサイズも異なることがわかり、理解するであろう。表１は、本発明のある特定の実施形態での使用のために想定される種々のクローニング／発現ベクター系の概要を示しており、それぞれのインサートサイズはこれらの実施形態に従っている。組成物が人工ＤＮＡ構築物（ベクター、特にクローニングベクター）のＤＮＡを含む場合、人工ＤＮＡ構築物は、プラスミド、コスミド、フォスミド、又は細菌人工染色体、酵母人工染色体、若しくは真菌人工染色体などの人工染色体から選択されることが好ましい。

【表1】

【0026】

組成物は、好ましくは供給源種及び／又は宿主種由来の染色体ＤＮＡの断片を含む。当業者は、用語「染色体ＤＮＡ」の範囲を承知しており、ＤＮＡ断片が由来し得るある特定の生物の染色体ＤＮＡを提供することができるであろう。

【0027】

阻害ＤＮＡ配列が由来する種は、本明細書及び特許請求の範囲では「供給源種」と呼ばれる。用語「供給源種」が参照語として使用されることは明らかであろう。該用語は、供給源種を「宿主種」及び以下にさらに論じられる「標的種」と容易に区別するために使用される。

【0028】

ある特定の実施形態によれば、本発明の組成物において、ＤＮＡ分子は遊離ＤＮＡであってもよい。用語「遊離ＤＮＡ」は、ＤＮＡ断片が細胞又はウイルス粒子などのエンベロープに組み込まれていない状態を指す。遊離ＤＮＡ断片は、任意の適切な形態で提供され得る。例えば、遊離ＤＮＡ断片は、水又は水性混合物などの適切な溶媒中の溶液中にあってもよい。溶媒は、単相溶液又はエマルジョン若しくは分散液などの多相の一部であってもよい。或いは、遊離ＤＮＡ断片は、固体で本発明の組成物中に存在してもよい。遊離ＤＮＡを含有する固体は、単相中の固体又は分散液などの多相中の固体であってもよい。

【0029】

ある特定の実施形態によれば、本発明の組成物においてＤＮＡ分子の混合物は、供給源種ＤＮＡ配列が少なくとも１つの末端で非供給源種ＤＮＡ配列と隣接しているキメラＤＮＡ分子を含む。当業者は、用語「キメラＤＮＡ分子」の意味を承知し、この用語が、少なくとも２つの異なる供給源、例えば第１の種由来及び少なくとも１つの異なる供給源由来など（例えば、第１の種とは異なる第２の種由来など）のＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子を指すことを理解するであろう。供給源種のＤＮＡ配列及び少なくとも１つの隣接する非供給源種ＤＮＡ配列は、故に単一ＤＮＡ分子中にある。或いは、キメラＤＮＡ分子はハイブリッドＤＮＡ分子と呼ばれる場合がある。

【0030】

キメラＤＮＡ分子では、供給源種ＤＮＡ配列は、少なくとも１つの末端で非供給源種ＤＮＡ配列と隣接している。本発明の記載における用語「少なくとも１つの」は「いくつかの」に等しく、これらの用語のどちらかが使用されるたびに「１つ又は複数の」を意味し、その逆も同様である。ある特定の好ましい実施形態では、これらの用語は適切な場合、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０などの複数を意味する。当業者は、ＤＮＡ分子の構造のために、供給源種ＤＮＡ配列がキメラＤＮＡ分子中多くても２つの末端で非供給源種ＤＮＡ配列と隣接し得ることを承知するであろう。

【0031】

当業者が理解するように、隣接するＤＮＡ配列は互いの側の位置を占める。故に用語「隣接した（ｆｌａｎｋｅｄ）」は、「境を接する（ｂｏｒｄｅｒ）」又は「隣接する（ａｄｊｏｉｎ）」又は「隣接する（ａｂｕｔ）」ことを意味するものとして本発明の定義で使用され、これらの用語と置き換えることができる。これは、用語「隣接した」（及びその同等の用語のいずれか）が使用される文脈によって既に示唆されているが、明確にするために、供給源種ＤＮＡ配列は、単一ＤＮＡ分子中で少なくとも１つの隣接する非供給源種に連結されていることが明記される。

【0032】

非供給源種ＤＮＡ配列は、供給源種以外の起源を有するＤＮＡ配列である。非供給源種ＤＮＡ配列は、染色体ＤＮＡ配列などの、供給源種とは異なる種由来（宿主種由来など）の天然に存在するＤＮＡ配列であってもよい。或いは、非供給源種ＤＮＡ配列は、人工ＤＮＡ構築物由来などの人工ＤＮＡ配列、例えば、人工プラスミド、コスミド、フォスミド又は人工染色体由来のＤＮＡ配列などであってもよい。本発明の文脈内では、人工染色体は、酵母若しくは真菌人工染色体又は細菌人工染色体から選択され得る。

【0033】

少なくとも１つの末端で非供給源種ＤＮＡ配列と隣接している供給源種ＤＮＡ配列を含むキメラＤＮＡ分子は、当業者に公知の手順により得ることができる。供給源種ＤＮＡ配列が染色体ＤＮＡ配列であり、非供給源種ＤＮＡ配列が人工プラスミド由来の配列であるある特定の実施形態によれば、染色体供給源種のＤＮＡ（全ゲノムの他の部分のＤＮＡと一緒である可能性のある）は、例えば（部分的）制限酵素消化によって単離され、（ランダムに）断片化されてもよい。消化された供給源種ＤＮＡは、その後、適合する制限酵素で切断された人工プラスミドにライゲートされ、故に、組み込まれた供給源種ＤＮＡの異なる部分配列（断片）を有するキメラプラスミドの集団を製造することができる。プラスミドのそのような混合集団を含む組成物、及び例えばプラスミドがＤＮＡ断片へと（ランダムに）断片化された同等又は派生組成物は、本発明の組成物の実施形態である。供給源種ＤＮＡ配列が染色体ＤＮＡ配列であり、非供給源種ＤＮＡ配列も染色体ＤＮＡ配列である他の実施形態によれば、染色体供給源種のＤＮＡ（全ゲノムの他の部分のＤＮＡと一緒である可能性のある）は、例えば（部分的）制限酵素消化、超音波処理又は機械的剪断の他の手段によって単離され、（ランダムに）断片化されてもよく、断片化供給源種ＤＮＡは、外来ＤＮＡ断片をゲノムに吸収及び組み込むことができる宿主種の細胞と接触されてもよい。異なる種の生物間の水平（ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ）（又はｌａｔｅｒａｌ）遺伝子伝播に関する科学的知識が増加しており、特に微生物、特に原核生物については、それらが、外来ＤＮＡをその染色体ＤＮＡを含むそのゲノムに吸収及び組み込むことができることが示されている。さらに、転位因子（又はトランスポゾン）は、異なる種の細胞間のＤＮＡ転移を容易にすることができ、宿主種のゲノムへの組み込みを容易にするために供給源種ＤＮＡ配列が転位因子に組み込まれ得る。遺伝子水平伝播の過程で外来ＤＮＡが受け入れ生物のＤＮＡに組み込まれる場合、外来（供給源）ＤＮＡが受け入れ（宿主）生物のＤＮＡと隣接しているキメラＤＮＡ分子が形成される。染色体ＤＮＡに供給源種ＤＮＡ配列を組み込んでいる宿主生物のそのような混合集団を含む組成物、及び例えば宿主種染色体ＤＮＡが単離され（全ゲノムの他の部分のＤＮＡと一緒である可能性のある）、ＤＮＡ断片へと（ランダムに）断片化された同等又は派生組成物は、したがって、本発明の組成物の代替の実施形態である。

【0034】

キメラＤＮＡ分子のキメラ領域（供給源種ＤＮＡ配列が非供給源種ＤＮＡ配列と隣接する領域）は、供給源種ＤＮＡ配列の長さ及び／又は非供給源種ＤＮＡ配列の長さと比べると、極めて小さくなり得ることが理解されるべきである。故に、キメラＤＮＡ分子が断片化される場合、ＤＮＡ断片が供給源種ＤＮＡ配列又は非供給源種ＤＮＡ配列のみを含有するという可能性が高くなり得る。故に、キメラＤＮＡ断片の数は極めて小さくなり得る。

【0035】

供給源種は、好ましくは、そこから由来する断片化ＤＮＡ配列が標的種に対して阻害性であるように選択される。ＷＯ２０１４／０２０６２４の公開以降、当業者に明らかなように、標的種に対して阻害性であるＤＮＡ断片は、標的種自体又は系統的に類似の種に由来してもよい。本発明の文脈では、供給源種は故に、標的種又は標的種に系統的に類似の種から選択されてもよい。当業者が理解するように、標的種の阻害の文脈での用語「阻害」は、標的種の個体及び／又は標的種の集団の発生を妨げる、遅らせる、又はさらには止めることを指す。阻害性自己ＤＮＡの阻害効果は、標的種の生理機能を細胞レベルで妨げることにより効果を発揮することが予想され得る。自己ＤＮＡは、種又は系統的に類似の種のＤＮＡを意味すると理解されるべきである。

【0036】

標的種は、植物、真菌、昆虫、酵母、細菌、古細菌、藻類、線虫、ダニ類、ウイルス及び原生生物から選択される種、好ましくは健康及び／又は経済及び／又は環境被害の原因となり得る種であってもよい。そのような標的種は、例えば、疾患関連種、例えば病原種、寄生種若しくは病原媒介生物として機能する種などであってもよく、又は外部寄生種（ｉｎｆｅｓｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉｅｓ）であってもよく、又は製品、例えば食品及び／若しくは化粧品及び／若しくは医薬品及び／若しくは有機物を含む他の製品などの劣化と関連する種であってもよい。疾患関連種は、動物、特にヒト及び／若しくは家畜動物への、又は植物、特に作物への疾患の拡大を引き起こす及び／又は容易にする可能性がある。外部寄生種は、その個体が望ましい数より大量に場所又は部位（標的領域）に存在する、昆虫種、又は高等動物種、又は植物種などの任意の種であり得る。外部寄生種は、少なくとも害をもたらし、被害又は損害を（潜在的に）もたらす場合がある。ある特定の実施形態による外部寄生種は、故に害虫と見なされ得る。当業者が理解するように、生物種は製品の劣化をさまざまに引き起こし得る。特にある生物種が異臭及び／又は毒素を産生し得る場合、該種の個体が食品などに存在するだけでしばしば望ましくない。さらに、製品中に存在する有機物の変換は、製品仕様に適合しない製品による及び／又は製品機能の（部分的な）喪失によるなどの製品の品質の低下につながる可能性がある。用語「疾患関連種」、「病原種」、「寄生種」、「病原媒介生物として機能する種」、「外部寄生種」及び「製品の劣化と関連する種」は相互に排除しないこと、及び２つ以上のこれらの用語の間にはある程度の重複があることは当業者に明らかであろう。該用語は、標的種の阻害が有益であり得、本発明が好ましくは用いられるドメインを同定するのに使用されるにすぎない。

【0037】

標的種が病原種として選択される場合、病原種は、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、又はアクチノマイセス・イスラエリー（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｉｉ）、又はアクチノマイセス・ゲレンセリアエ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｇｅｒｅｎｃｓｅｒｉａｅ）、又はプロピオニバクテリウム・プロピオニクス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｓ）、又はトリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、又はＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、又は赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、又はアナプラズマ種、又は住血線虫種、又はアニサキス種、又は炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、又は溶血性アルカノバクテリア（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、又はフニンウイルス、又は回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）、又はアスペルギルス種、又はアストロウイルス科の種、又はバベシア種、又はセレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、又はバクテロイデス種、又は大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ）、又はバルトネラ、又はバイリサスカリス種、又はＢＫウイルス、又はピエドライア・ホルタエ（Ｐｉｅｄｒａｉａ ｈｏｒｔａｅ）、又はブラストシスチス種、又はブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、又はマチュポウイルス、又はボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、又はサビアウイルス、又はブルセラ種、又はペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ Ｐｅｓｔｉｓ）、又はセパシア菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、又は他のバークホルデリア種、又はマイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、又はカリシウイルス科、又はカンピロバクター種、又はカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、又は他のカンジダ種、又はフィリピン毛頭虫（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）、又はカピラリア・アエロフィラ（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ ａｅｒｏｐｈｉｌａ）、又はバルトネラ・バシリホルミス（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ）、又はヘンセラ菌（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ）、又はＡ群連鎖球菌属種、又はブドウ球菌属種、又はトリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、又は軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ）、又は水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、又はアルファウイルス、又はクラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、又は肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、又はコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、又はフォンセカ・ペドロソイ（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｐｅｄｒｏｓｏｉ）、又はバトラコキトリウム・デンドロバチディス（Ｂａｔｒａｃｈｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ｄｅｎｄｒａｂａｔｉｄｉｓ）、又は肝吸虫（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、又はクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、又はコクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）及びコクシジオイデス・ポサダシ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）、又はコロラドダニ熱ウイルス（ＣＴＦＶ）、又はライノウイルス属種、又はコロナウイルス、又はＰＲＮＰ、又はクリミア－コンゴ出血熱ウイルス（Ｃｒｉｍｅａｎ-Ｃｏｎｇｏ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ）、又はクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、又はクリプトスポリジウム種、又はブラジル鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ）、又はシクロスポラ・カイエタネンシス（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）、又は有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、又はサイトメガロウイルス属種、又はデングウイルス（ＤＥＮ－１、ＤＥＮ－２、ＤＥＮ－３及びＤＥＮ－４）、又はフラビウイルス属種、又は緑藻類、又はデスモデスムス・アルマタス（Ｄｅｓｍｏｄｅｓｍｕｓ ａｒｍａｔｕｓ）、又は二核アメーバ（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、又はジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂ ａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、又は裂頭条虫、又はメジナ虫（Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ）、又はエボラウイルス（ＥＢＯＶ）、又はエキノコックス種、又はエーリキア種、又は蟯虫（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ）、又はエンテロコッカス種、又はエンテロウイルス種、又は発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）、又はパルボウイルスＢ１９（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ Ｂ１９）、又はヒトヘルペスウイルス６型（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ６）（ＨＨＶ－６）、又はヒトヘルペスウイルス７型（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ７）（ＨＨＶ－７）、又は肝蛭（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ）、又は巨大肝蛭（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ）、又は肥大吸虫（Ｆａｓｃｉｏｌｏｐｓｉｓ ｂｕｓｋｉ）、又はＰＲＮＰ、又はフィラリア上科、又はウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、又は多発性（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）、又はフソバクテリウム種、又はウェルシュ菌、又は他のクロストリジウム種、又はゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）、又はランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、又は鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ）、又は有棘顎口虫（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｓｐｉｎｉｇｅｒｕｍ）、又は剛棘顎口虫（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｈｉｓｐｉｄｕｍ）、又は淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、又はクレブシエラ・グラニュロマティス（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、又は化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、又はストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、又はインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、又はコクサッキーＡウイルス及びエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）などのエンテロウイルス、又はシンノンブレウイルス（Ｓｉｎ Ｎｏｍｂｒｅ ｖｉｒｕｓ）、又はハートランドウイルス（Ｈｅａｒｔｌａｎｄ ｖｉｒｕｓ）、又はピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、又は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１及びＯ１０４：Ｈ４、又はブニヤウイルス科からの種、又はヘンドラウイルス（Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ）、又はＡ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、又はＢ型肝炎ウイルス、又はＣ型肝炎ウイルス、又はＤ型肝炎ウイルス、又はＥ型肝炎ウイルス、又は単純ヘルペスウイルス１型及び２型（ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２）、又はヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、又は十二指腸鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）及びアメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）、又はヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、又はエーリキア・エウィンギ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｅｗｉｎｇｉｉ）、又はアナプラズマ・ファゴサイトフィルム（Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ）、又はヒトメタニューモウイルス（Ｈｕｍａｎ ｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ）（ｈＭＰＶ）、又はエーリキア・シャフェンシ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ）、又はヒトパピローマウイルスの１つ、又はヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、又は小型条虫（Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｎａｎａ）及び縮小条虫（Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｄｉｍｉｎｕｔａ）、又はエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）、又はオルトミクソウイルス科、又は戦争イソスポーラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｅｌｌｉ）、又はキンゲラ・キンゲ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ）、又はラッサウイルス、又は在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、又は在郷軍人病菌、又はリーシュマニア種、又はライ菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、又はマイコバクテリウム・レプロマトーシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、又はレプトスピラ種、又はリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、又はライム病ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、又はボレリア・ガリニ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｇａｒｉｎｉｉ）、又はボレリア・アフゼリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ａｆｚｅｌｉｉ）、又はバンクロフト糸状虫（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ）、又はマレー糸状虫（Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ）、又はリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、又はマラリア原虫種、又はマールブルグウイルス、又は麻疹ウイルス、又は中東呼吸器症候群コロナウイルス、又は類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）、又は髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、又はメタゴニムス・ヨカガワイ（Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ ｙｏｋａｇａｗａｉ）、又はミクロスポリジア・フィルム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ ｐｈｙｌｕｍ）、又は伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、又はサル痘ウイルス、又はムンプスウイルス、又は発疹熱リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ）、又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、又はマイコプラズマ・ゲニタリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、又は放線菌腫（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｏｍａ）属種、又は真菌性菌腫（Ｅｕｍｙｃｅｔｏｍａ）属種、又はクラミジア・トラコマチス及び淋菌、又はニパウイルス、又はノロウイルス、又はノカルジア・アステロイズ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、又は他のノカルジア種、又は回旋糸状虫（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ）、又はタイ肝吸虫（Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ）、又はネコ肝吸虫（Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｆｅｌｉｎｅｕｓ）、又は南アメリカ分芽菌（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、又はウエステルマン肺吸虫（パラゴニムスｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ）、又は他のパラゴニムス種、又はパスツレラ種、又はアタマジラミ（Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ ｈｕｍａｎｕｓ ｃａｐｉｔｉｓ）、又はコロモジラミ（Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ ｈｕｍａｎｕｓ ｃｏｒｐｏｒｉｓ）、又はケジラミ（Ｐｔｈｉｒｕｓ ｐｕｂｉｓ）、又は百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、又はペスト菌、又は肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、又はニューモシスチス・ジロベシ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ）、又はポリオウイルス、又はプレボテラ種、又はネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ）、又はＪＣウイルス、又はオウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、又はコクシエラ菌（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、又は狂犬病ウイルス、又は回帰熱ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｈｅｒｍｓｉｉ）、ボレリア・ヘルムシー（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ）、又は他のボレリア種、又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はリノスポリジウム・セーベリ（Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｅｅｂｅｒｉ）、又はライノウイルス、又はリケッチア種、又は痘瘡リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ）、又はリフトバレー熱ウイルス、又はリケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、又はロタウイルス、又は風疹ウイルス、又はサルモネラ種、又はＳＡＲＳコロナウイルス、又はヒゼンダニ（Ｓａｒｃｏ
ｐｔｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ）、又はＡ群連鎖球菌種、又は住血吸虫種、又は赤痢菌種、又は水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、又は大痘瘡ウイルス、又は小痘瘡ウイルス、又はスポロトリックス・シェンキー（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、又はブドウ球菌種、又は糞線虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ）、又は麻疹ウイルス、又は梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、又は条虫類種、又は破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、又は白癬菌種、又はトリコフィトン・トンズランス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ）、又は有毛表皮糸状菌（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、又は紅色白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）、又は毛瘡白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、又は紅色白癬菌、又はホルタエア・ウエルネキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）、又はマラセチア種、又はイヌ回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ）、又はネコ回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ）、又はトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、又はクラミジア・トラコマチス、又は旋毛虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ）、又は腟トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、又は鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ）、又は結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、又は野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、又はサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ）、又はチフス菌（ｓｅｒｏｖａｒ ｔｙｐｈｉ）、又はリケッチア、又はウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、又はコクシジオイデス・イミチス、又はコクシジオイデス・ポサダシ、又はベネズエラウマ脳炎ウイルス、又はグアナリトウイルス、又はビブリオ・バルニフィカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）、又は腸炎ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、又は西ナイルウイルス、又はバイゲル毛芽胞菌（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、又は仮性結核菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、又は腸炎エルシニア菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、又は黄熱病ウイルス、又はゼアスポラ・フンガス（Ｚｅａｓｐｏｒａ ｆｕｎｇｕｓ）、又はジカウイルス、又はケカビ目、又はハエカビ目から選択され得る。

【0038】

病原性標的種の阻害は、動物（ヒトを含む）の身体内又は身体上である必要はないことが理解されるべきである。その代わりに阻害はまた、動物の身体の文脈の外側であってもよい。例えば標的種を培養で（インビトロで）阻害するために。局所病原性標的種及び／又は局所標的種、特に上記に直接提示したリストからの局所病原性標的種からの病原性標的種の選択が好ましい。当業者は、ヒト及び動物用医薬の文脈での局所という用語が、身体の特定の表面、特に皮膚又は粘膜（ｍｕｃｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅ）（粘膜（ｍｕｃｏｓａ））に関することを意味することを理解するであろう。局所病原性標的種は、故に、皮膚及び／若しくは爪、並びに／又は眼、口、膣、尿路、消化管、肺を含む気道の粘膜を含む粘膜と関連していると見なされるべきである。局所という用語は、故に、動物の身体の外部表面に限定されないが、肺及び消化管などの内部表面への言及を含む。局所病原性標的種は、最も好ましくは皮膚病原体及び／若しくは爪病原体であり、並びに／又は粘膜病原体である。本発明の文脈内では、古細菌、細菌、真菌（酵母を含む）及び原生生物、特に直接上記に提示したリストからの古細菌、細菌、真菌（酵母を含む）及び原生生物からの病原性標的種の選択がさらに好ましい。

【0039】

標的種が寄生種として選択される場合、寄生種は、アカントアメーバ属種、又はバラムチア・マンドリルリス（Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ ｍａｎｄｒｉｌｌａｒｉｓ）、又は多型バベシア（Ｂａｂｅｓｉａ Ｂ．ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）、又はバベシア・ビゲミナ（Ｂ．ｂｉｇｅｍｉｎａ）、又はバベシア・エクイ（Ｂ．ｅｑｕｉ）、又はバベシア・ミクロチ（Ｂ．ｍｉｃｒｏｆｔｉ）、又はバベシア・ダンカニ（Ｂ．ｄｕｎｃａｎｉ）、又は大腸バランチジウム、又はブラストシスチス属種、又はクリプトスポリジウム属種、又はシクロスポラ・カイエタネンシス、又は二核アメーバ、又は赤痢アメーバ、又はランブル鞭毛虫、又は戦争イソスポーラ、又はリーシュマニア属種、又はネグレリア・フォーレリ、又は熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、又は三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、又はプラスモジウム・オバレ・クルチシ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ ｃｕｒｔｉｓｉ）、又はプラスモジウム・オバレ・ワリケリ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ Ｗａｌｌｉｋｅｒｉ）、又は四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ）、又は二日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｋｎｏｗｌｅｓｉ）、又はリノスポリジウム・セーベリ（Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｅｅｂｅｒｉ）、又は肉胞子虫、又はサルコシスティス・ボビホミニス、（ｂｏｖｉｈｏｍｉｎｉｓ，Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ）、又は豚肉胞子虫（ｓｕｉｈｏｍｉｎｉｓ）、又はトキソプラズマ原虫、又は腟トリコモナス、又はトリパノソーマ・ブルセイ、又はトリパノソーマ・クルージ、又は条虫類（Ｃｅｓｔｏｄａ）、又は条虫類（Ｔａｅｎｉａ）、又はムルチセプス、又は広節裂頭条虫（Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ ｌａｔｕｍ）、又はエキノコックス、又は単包条虫、又はエキノコックス、又は多包条虫、又はエキノコックス・ボゲリ（Ｅ．ｖｏｇｅｌｉ）、又はヤマネコ条虫（Ｅ．ｏｌｉｇａｒｔｈｒｕｓ）、又は小型条虫、又は縮小条虫、又は無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓａｇｉｎａｔａ）、又は有鉤条虫、又はヒト条虫（Ｂｅｒｔｉｅｌｌａ ｍｕｃｒｏｎａｔａ）、又はベルチエラ・スツデリイ（Ｂｅｒｔｉｅｌｌａ ｓｔｕｄｅｒｉ）、又はスピロメトラ、又はマンソン裂頭条虫（Ｅｒｉｎａｃｅｉｅｕｒｏｐａｅｉ）、又はビルハルツ住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ）、又は日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、又はメコン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍｅｋｏｎｇｉ）、又はエキノストマ・エキナツム（Ｅｃｈｉｎｏｓｔｏｍａ ｅｃｈｉｎａｔｕｍ）、又はトリコビルハルジア・レゲンチ（Ｔｒｉｃｈｏｂｉｌｈａｒｚｉａ ｒｅｇｅｎｔｉ）、又は住血吸虫科、又は十二指腸鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）、又はアメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）、又は住血線虫属、又はコスタリケンシス（ｃｏｓｔａｒｉｃｅｎｓｉｓ）、又はアニサキス、又は回虫種、又はヒト回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）、又はアライグマ回虫（Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ ｐｒｏｃｙｏｎｉｓ）、又はマレー糸状虫、又はチモール糸状虫（Ｂｒｕｇｉａ ｔｉｍｏｒｉ）、又は腎虫（Ｄｉｏｃｔｏｐｈｙｍｅ ｒｅｎａｌｅ）、又はメジナ虫（Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ）、又は蟯虫（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ）、又はエンテロビウス・グレゴリイ（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｇｒｅｇｏｒｉｉ）、又は有棘顎口虫（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｓｐｉｎｉｇｅｒｕｍ）、又は剛棘顎口虫（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｈｉｓｐｉｄｕｍ）、又はハリセファロブス・ジンジバリス（Ｈａｌｉｃｅｐｈａｌｏｂｕｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、又はロア糸状虫（Ｌｏａ ｌｏａ ｆｉｌａｒｉａ）、又はマンソネラ・ストレプトセルカ（Ｍａｎｓｏｎｅｌｌａ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｅｒｃａ）、又は回旋糸状虫、又は糞線虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ）、又はカリフォルニア眼虫（Ｔｈｅｌａｚｉａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｅｎｓｉｓ）、又は東洋眼虫（Ｔｈｅｌａｚｉａ ｃａｌｌｉｐａｅｄａ）、又はイヌ回虫、又はネコ回虫、又は旋毛虫から選択され得る。

【0040】

病原性標的種との関連で注記されていることと同様に、寄生標的種の阻害は、動物（ヒトを含む）の身体内又は身体上である必要はないことが理解されるべきである。その代わりに阻害はまた、動物の身体の文脈の外側であってもよい。例えば標的種を培養で阻害するために。皮膚寄生虫及び／又は消化管寄生虫及び／又は粘膜寄生虫、特に上記に直接提示したリストからの寄生標的種の選択が好ましい。原生生物又は線虫、特に上記に直接提示したリストからの原生生物及び線虫からの寄生標的種の選択が好ましい。

【0041】

ある特定の実施形態によれば、標的種は、真菌、又は卵菌、又は細菌、又はウイルス、又は原生生物、又はフサリウム属種、又はチエラビオプシス属種、又はベルチシリウム属種、又はマグナポルテ属種、又はイネいもち病菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ）、又はスクレロティニア属種、又はスクレロティニア・スクレロティオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、又は疫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）属種、又はフハイカビ属種、ネコブカビ属種、又はスポンゴスポラ属種、又は植物病原性桿菌（ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｉｌｌｉ）、又はエルウィニア属種、又はアグロバクテリウム属種、又はバークホルデリア属種、又はプロテオバクテリア、又はザントモナス属種、又はシュードモナス属種、又はフィトプラズマ属種、又はスピロプラズマ属種から選択される植物病原体などの、植物に対して病原性の種から選択され得る。

【0042】

標的種が外部寄生種として選択される場合、外部寄生種は、農業害虫節足動物（例えば、アカリンマ（Ａｃａｌｙｍｍａ）、又はアシルソシフォン・コンドイ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｋｏｎｄｏｉ）、又はアシルトシフォン・ゴッシピイ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｇｏｓｓｙｐｉｉ）、又はエンドウヒゲナガアブラムシ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ）、又はアフリカンアーミーワーム、又はアフリカ蜂化ミツバチ、又はハモグリバエ科、又はタマナヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ）、又はアグロティス・ムンダ（Ａｇｒｏｔｉｓ ｍｕｎｄａ）、又はアグロティス・オルトゴニア（Ａｇｒｏｔｉｓ ｏｒｔｈｏｇｏｎｉａ）、又はアグロティス・ポルフィリコリス（Ａｇｒｏｔｉｓ ｐｏｒｐｈｙｒｉｃｏｌｌｉｓ）、又はアッカイア・タイワナ（Ａｋｋａｉａ ｔａｉｗａｎａ）、又はミカンクロトゲコナジラミ（Ａｌｅｕｒｏｃａｎｔｈｕｓ ｗｏｇｌｕｍｉ）、又はキャベツコナジラミ（Ａｌｅｙｒｏｄｅｓ ｐｒｏｌｅｔｅｌｌａ）、又はガイマイゴミムシダマシ（Ａｌｐｈｉｔｏｂｉｕｓ ｄｉａｐｅｒｉｎｕｓ）、又はアルソフィラ・アエスクラリア（Ａｌｓｏｐｈｉｌａ ａｅｓｃｕｌａｒｉａ）、又はアルティカ・チャリビア（Ａｌｔｉｃａ ｃｈａｌｙｂｅａ）、又はアナサ・トリスティス（Ａｎａｓａ ｔｒｉｓｔｉｓ）、又はアニソプリア・アウストリアカ（Ａｎｉｓｏｐｌｉａ ａｕｓｔｒｉａｃａ）、又はリンゴハナゾウムシ（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ ｐｏｍｏｒｕｍ）、又はアンソノムス・シグナタス（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ ｓｉｇｎａｔｕｓ）、又はアカマルカイガラムシ（Ａｏｎｉｄｉｅｌｌａ ａｕｒａｎｔｉｉ）、又はキマルカイガラムシ（Ａｏｎｉｄｉｅｌｌａ ｃｉｔｒｉｎａ）、又はオスベッキーマルカイガラムシ（Ａｏｎｉｄｉｅｌｌａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、又はアパメア・アパミフォルミス（Ａｐａｍｅａ ａｐａｍｉｆｏｒｍｉｓ）、又はアパメア・ニベイベノサ（Ａｐａｍｅａ ｎｉｖｅｉｖｅｎｏｓａ）、又はアフィド・ゴシピイ（Ａｐｈｉｄ ｇｏｓｓｙｐｉｉ）若しくはワタアブラムシ（Ａｐｈｉｓ ｇｏｓｓｙｐｉｉ）、又はアフィス・ナスツルティイ（Ａｐｈｉｓ ｎａｓｔｕｒｔｉｉ）、又はリンゴミバエ、又はアルゼンチンアリ、又はアーミーカットワーム（Ａｒｍｙ ｃｕｔｗｏｒｍ）、又はツマジロクサヨトウ、又はアルトロフォラ・アルクアタリス（Ａｒｏｔｒｏｐｈｏｒａ ａｒｃｕａｔａｌｉｓ）、又はアッシュホワイトフライ（Ａｓｈ ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、又はアステゴプテリクス・バンブサエ（Ａｓｔｅｇｏｐｔｅｒｙｘ ｂａｍｂｕｓａｅ）、又はアステゴプテリクス・インスラリス（Ａｓｔｅｇｏｐｔｅｒｙｘ ｉｎｓｕｌａｒｉｓ）、又はアステゴプテリクス・ミヌタ（Ａｓｔｅｇｏｐｔｅｒｙｘ ｍｉｎｕｔａ）、又はアステロレカニウム（Ａｓｔｅｒｏｌｅｃａｎｉｕｍ）、又はアステロレカニウム・コフェアエ（Ａｓｔｅｒｏｌｅｃａｎｉｕｍ ｃｏｆｆｅａｅ）、又はシバクキハナバエ（Ａｔｈｅｒｉｇｏｎａ ｒｅｖｅｒｓｕｒａ）、又はアトウス・ハエモロイダリス（Ａｔｈｏｕｓ ｈａｅｍｏｒｒｈｏｉｄａｌｉｓ）、又はウリハムシ、又はジャガイモヒゲナガアブラムシ（Ａｕｌａｃｏｒｔｈｕｍ ｓｏｌａｎｉ）、又はオーストラリアトビバッタ、又はジャガイモトガリキジラミ（Ｂａｃｔｅｒｉｃｅｒａ ｃｏｃｋｅｒｅｌｌｉ）、又はミバエ（Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ）、又はバクトロセラ・コルレクタ（Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ ｃｏｒｒｅｃｔａ）、又はバグラダ・ヒラリス（Ｂａｇｒａｄａ ｈｉｌａｒｉｓ）、又はクヌリアナ（Ｋｎｕｌｌｉａｎａ）、又はビーロアワヨトウ、又はマメクロアブラムシ（Ｂｌａｃｋ ｂｅａｎ ａｐｈｉｄ）、又はブレファリドプテラス・クロリオニス（Ｂｌｅｐｈａｒｉｄｏｐｔｅｒｕｓ ｃｈｌｏｒｉｏｎｉｓ）、又はボゴンモス、又はワタミハナゾウムシ（Ｂｏｌｌ ｗｅｅｖｉｌ）、又はボールワーム（Ｂｏｌｌｗｏｒｍ）、又はダイコンアブラムシ（Ｂｒｅｖｉｃｏｒｙｎｅ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、又はブラウンローカスト（Ｂｒｏｗｎ ｌｏｃｕｓｔ）、又はクサギカメムシ、又はトビイロウンカ、又はコナガ、又はアオムシ、又はヨツモンマメゾウムシ（Ｃａｌｌｏｓｏｂｒｕｃｈｕｓ ｍａｃｕｌａｔｕｓ）、又はキャロットフライ、又はフェラタフィス・ブラジリエンシス（Ｃｅｒａｔａｐｈｉｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、又はセラチチス・アリエナ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ａｌｉｅｎａ）、又はセラチチス・アンドラノトバカ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ａｎｄｒａｎｏｔｏｂａｋａ）、又はチチュウカイミバエ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｃａｐｉｔａｔａ）、又はセラチチス・フレクスオーサ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｆｌｅｘｕｏｓａ）、又はセラチチス・グラハミ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｇｒａｈａｍｉ）、又はセラチチス・オバリス（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｏｖａｌｉｓ）、又はセラチチス・ペニシラタ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｐｅｎｉｃｉｌｌａｔａ）、又はナタールミバエ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｒｏｓａ）、又はウラジロエゴノキアブラムシ（Ｃｅｒａｔｏｇｌｙｐｈｉｎａ ｂａｍｂｕｓａｅ）、又はセラトペンフィガス・ゼントネリ（Ｃｅｒａｔｏｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｚｅｈｎｔｎｅｒｉ）、又はカンショワタアブラムシ（Ｃｅｒａｔｏｖａｃｕｎａ ｌａｎｉｇｅｒａ）、又はシリアルリーフビート（Ｃｅｒｅａｌ ｌｅａｆ ｂｅｅｔｌｅ）、又はカエトシフォン・テトラロダム（Ｃｈａｅｔｏｓｉｐｈｏｎ ｔｅｔｒａｒｈｏｄｕｍ）、又はクロロプス・プミリオニス（Ｃｈｌｏｒｏｐｓ ｐｕｍｉｌｉｏｎｉｓ）、又ゴマダラカミキリ、又はヒラタカタカイガラムシ（Ｃｏｃｃｕｓ ｈｅｓｐｅｒｉｄｕｍ）、又はミドリカタカイガラムシ（Ｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄｉｓ）、又はコドリンガ、又はコーヒーノミキクイムシ、又はコリアス・ユリテム（Ｃｏｌｉａｓ ｅｕｒｙｔｈｅｍｅ）、又はコロラドハムシ、又はコモンブロッサムスリップ（Ｃｏｍｍｏｎ ｂｌｏｓｓｏｍ ｔｈｒｉｐｓ）、又はヒラタコクヌストモドキ、又はオオタバコガ、又はツトガ属（Ｃｒａｍｂｕｓ）、又はキューカンバービートル（Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｂｅｅｔｌｅ）、又はクルクリオ・エレファス（Ｃｕｒｃｕｌｉｏ ｅｌｅｐｈａｓ）、又はクルクリオ・ヌカム（Ｃｕｒｃｕｌｉｏ ｎｕｃｕｍ）、又はクルクリオ・オシデンチス（Ｃｕｒｃｕｌｉｏ ｏｃｃｉｄｅｎｔｉｓ）、又はヨトウムシ、又はシクロセファラ・ボレアリス（Ｃｙｃｌｏｃｅｐｈａｌａ ｂｏｒｅａｌｉｓ）、又はダルギアダ・ディフューザ（Ｄａｒｇｉｄａ ｄｉｆｆｕｓａ）、、又はダイコンタマバエ（Ｄａｓｉｎｅｕｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、又はデートストーンビートル（Ｄａｔｅ ｓｔｏｎｅ ｂｅｅｔｌｅ）、又はデリア（ハエ）、又はタマネギバエ（Ｄｅｌｉａ ａｎｔｉｑｕａ）、又はダイコンバエ（Ｄｅｌｉａ ｆｌｏｒａｌｉｓ）、又はタネバエ（Ｄｅｌｉａ ｐｌａｔｕｒａ）、又はキャベツハナバエ（Ｄｅｌｉａ ｒａｄｉｃｕｍ）、又はトビカツオブシムシ（Ｄｅｒｍｅｓｔｅｓ ａｔｅｒ）、又はデルモレピダ・アルボヒルツム（Ｄｅｒｍｏｌｅｐｉｄａ ａｌｂｏｈｉｒｔｕｍ）、又はサバクバッタ、又はジアブロチカ属（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ）、又はジアブロチカ・バルテアタ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｌｔｅａｔａ）、又はジアブロチカ・スペシオサ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐｅｃｉｏｓａ）、又はジアブロチカ・モス（Ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ ｍｏｔｈ）、又はワタクロヘリノメイガ（Ｄｉａｐｈａｎｉａ ｉｎｄｉｃａ）、又はジアファニア・ニチダリス（Ｄｉａｐｈａｎｉａ ｎｉｔｉｄａｌｉｓ）、又はミカンキジラミ（Ｄｉａｐｈｏｒｉｎａ ｃｉｔｒｉ）、又はジアプレペス・アブレビアツス（Ｄｉａｐｒｅｐｅｓ ａｂｂｒｅｖｉａｔｕｓ）、又はジアトラエア・サッカラリス（Ｄｉａｔｒａｅａ ｓａｃｃｈａｒａｌｉｓ）、又はディファレンシャルグラスホッパー（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｇｒａｓｓｈｏｐｐｅｒ）、又はジパロプシス・カスタネア（Ｄｉｐａｒｏｐｓｉｓ ｃａｓｔａｎｅａ）、又はドキオスタウルス・マロカヌス（Ｄｏｃｉｏｓｔａｕｒｕｓ ｍａｒｏｃｃａｎｕｓ）、又はオウトウショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｓｕｚｕｋｉｉ）、又はクリタマバチ（Ｄｒｙｏｃｏｓｍｕｓ ｋｕｒｉｐｈｉｌｕｓ）、又はジサフィス・クラタエギ（Ｄｙｓａｐｈｉｓ ｃｒａｔａｅｇｉ）、又はパイナップルコナカイガラムシ（Ｄｙｓｍｉｃｏｃｃｕｓ ｂｒｅｖｉｐｅｓ）、又はエアリアス・ペルフエゲィ（Ｅａｒｉａｓ ｐｅｒｈｕｅｇｅｌｉ）、又はエピカウタ・ヴィッタータ（Ｅｐｉｃａｕｔａ ｖｉｔｔａｔａ）、又はエピラクナ属、又はエピトリキス・ククメリス（Ｅｐｉｔｒｉｘ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、又はエピトリキス・ツベリス（Ｅｐｉｔｒｉｘ ｔｕｂｅｒｉｓ）、又はエリオノタ・スラックス（Ｅｒｉｏｎｏｔａ ｔｈｒａｘ）、又はリンゴワタムシ（Ｅｒｉｏｓｏｍａ ｌａｎｉｇｅｒｕｍ）、又はワタムシ亜科、又はエウレイア・ヘラクレイ（Ｅｕｌｅｉａ ｈｅｒａｃｌｅｉ）、又はユーメトピナ・フラビペス（Ｅｕｍｅｔｏｐｉｎａ ｆｌａｖｉｐｅｓ）、又はヨーロッパアワノメイガ、又はユーリデマ・オレラセア（Ｅｕｒｙｄｅｍａ ｏｌｅｒａｃｅａ）、又はユーリガステル・インテグリセプス（Ｅｕｒｙｇａｓｔｅｒ ｉｎｔｅｇｒｉｃｅｐｓ）、又はフェリシア・ヴィルガタ（Ｆｅｒｒｉｓｉａ ｖｉｒｇａｔａ）、又はフォレストバグ（Ｆｏｒｅｓｔ ｂｕｇ）、又はフランクリニエラ・トリチチ（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、又はハチノスツヅリガ（Ｇａｌｌｅｒｉａ ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）、又はガーデンダート（Ｇａｒｄｅｎ ｄａｒｔ）、又はサトウキビネワタムシ（Ｇｅｏｉｃａ ｌｕｃｉｆｕｇａ）、又はグラッシーウイングドシャープシューター（Ｇｌａｓｓｙ－ｗｉｎｇｅｄ ｓｈａｒｐｓｈｏｏｔｅｒ）、又はオンシツコナジラミ（Ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、又はグレエニデア・アルトカルピ（Ｇｒｅｅｎｉｄｅａ ａｒｔｏｃａｒｐｉ）、又はグレエニデア・フォルモサナ（Ｇｒｅｅｎｉｄｅａ ｆｏｒｍｏｓａｎａ）、又はグレエニデオイダ・セイロニアエ（Ｇｒｅｅｎｉｄｅｏｉｄａ ｃｅｙｌｏｎｉａｅ）、又はケラ（Ｇｒｙｌｌｏｔａｌｐａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、又はグリロタルパ・ヴィナエ（Ｇｒｙｌｌｏｔａｌｐａ ｖｉｎａｅ）、又は米国のマイマイガ、又はオオタバコガ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ）、又はヘリコベルパ・ゲロトポエオン（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｇｅｌｏｔｏｐｏｅｏｎ）、又はヘリコベルパ・プンクチゲラ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｐｕｎｃｔｉｇｅｒａ）、又はアメリカタバコガ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｚｅａ）、又はニセアメリカタバコガ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）、又はヘノセピラクナ属、又はオオニジュウヤホシテントウ（Ｈｅｎｏｓｅｐｉｌａｃｈｎａ ｖｉｇｉｎｔｉｏｃｔｏｍａｃｕｌａｔａ）、又はニジュウヤホシテントウ（Ｈｅｎｏｓｅｐｉｌａｃｈｎａ ｖｉｇｉｎｔｉｏｃｔｏｐｕｎｃｔａｔａ）、又はコムギタマバエ、又はヘテロニクス・アラトル（Ｈｅｔｅｒｏｎｙｃｈｕｓ ａｒａｔｏｒ）、又はモモコフキアブラムシ（Ｈｙａｌｏｐｔｅｒｕｓ ｐｒｕｎｉ）、又はホモノクロアブラムシ（Ｈｙｓｔｅｒｏｎｅｕｒａ ｓｅｔａｒｉａｅ）、又はイセリアカイガラムシ（Ｉｃｅｒｙａ ｐｕｒｃｈａｓｉ）、又はイプカ・ディスペルスム（Ｉｐｕｋａ ｄｉｓｐｅｒｓｕｍ）、又はチャノミドリヒメヨコバイ（Ｊａｃｏｂｉａｓｃａ ｆｏｒｍｏｓａｎａ）、又はナギナタコウジュワタムシ（Ｋａｌｔｅｎｂａｃｈｉｅｌｌａ ｅｌｓｈｏｌｔｒｉａｅ）、又はカルテンバチエラ・ジャポニカ（Ｋａｌｔｅｎｂａｃｈｉｅｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）、又はヒメアカカツオブシムシ、又はウラナミシジミ（Ｌａｍｐｉｄｅｓ ｂｏｅｔｉｃｕｓ）、又は潜葉虫、又はレマ・ダツラフィラ（Ｌｅｍａ ｄａｔｕｒａｐｈｉｌａ）、又はレピジオタ・コンソブリナ（Ｌｅｐｉｄｉｏｔａ ｃｏｎｓｏｂｒｉｎａ）、
又はミカンカキカイガラムシ（Ｌｅｐｉｄｏｓａｐｈｅｓ ｂｅｃｋｉｉ）、又はリンゴカキカイガラムシ（Ｌｅｐｉｄｏｓａｐｈｅｓ ｕｌｍｉ）、又はレプトシベ・インバサ（Ｌｅｐｔｏｃｙｂｅ ｉｎｖａｓａ）、又はレプトグロッサス・ゾナツス（Ｌｅｐｔｏｇｌｏｓｓｕｓ ｚｏｎａｔｕｓ）、又はレプトプテルナ・ドラブラタ（Ｌｅｐｔｏｐｔｅｒｎａ ｄｏｌａｂｒａｔａ）、又はコハチノスツヅリガ、又はレウコプテラ属（ガ）、又はコーヒーリーフマイナー（Ｌｅｕｃｏｐｔｅｒａ ｃａｆｆｅｉｎａ）、又はリンゴウスチャイロハマキ、又は、ライトブラウンアップルモスコントロバーシー（Ｌｉｇｈｔ ｂｒｏｗｎ ａｐｐｌｅ ｍｏｔｈ ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｙ）、又はニセダイコンアブラムシ（Ｌｉｐａｐｈｉｓ ｅｒｙｓｉｍｉ）、又はアシグロハモグリバエ（Ｌｉｒｉｏｍｙｚａ ｈｕｉｄｏｂｒｅｎｓｉｓ）、又はイネミズゾウムシ（Ｌｉｓｓｏｒｈｏｐｔｒｕｓ ｏｒｙｚｏｐｈｉｌｕｓ）、又はリストロノツス・ボナリエンシス（Ｌｉｓｔｒｏｎｏｔｕｓ ｂｏｎａｒｉｅｎｓｉｓ）、又はオナガセセリ（Ｌｏｎｇ－ｔａｉｌｅｄ ｓｋｉｐｐｅｒ）、又はリリガス属（Ｌｙｇｕｓ）、又はリグス・ヘスペルス（Ｌｙｇｕｓ ｈｅｓｐｅｒｕｓ）、又はマクロダクチルス・スブスピノサス（Ｍａｃｒｏｄａｃｔｙｌｕｓ ｓｕｂｓｐｉｎｏｓｕｓ）、又はマクロシフォニエラ・シュードアルテミシアエ（Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｏｎｉｅｌｌａ ｐｓｅｕｄｏａｒｔｅｍｉｓｉａｅ）、又はキクヒメヒゲナガアブラムシ（Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｏｎｉｅｌｌａ ｓａｎｂｏｒｎｉ）、又はチューリップヒゲナガアブラムシ（Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｕｍ ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ）、又はコクゾウ、又はタバコスズメガ（Ｍａｎｄｕｃａ ｓｅｘｔａ）、又はマツムラジャ・カピトフォロイデス（Ｍａｔｓｕｍｕｒａｊａ ｃａｐｉｔｏｐｈｏｒｏｉｄｅｓ）、又はマイエチオラ・ホルデイ（Ｍａｙｅｔｉｏｌａ ｈｏｒｄｅｉ）、又はコナカイガラムシ、又はタイワンマルカメムシ（Ｍｅｇａｃｏｐｔａ ｃｒｉｂｒａｒｉａ）、又はヒエノアブラムシ（Ｍｅｌａｎａｐｈｉｓ ｓａｃｃｈａｒｉ）、又はメリトビア・オーストラリカ（Ｍｅｌｉｔｔｏｂｉａ ａｕｓｔｒａｌｉｃａ）、又はメトカルファ・プルイノサ（Ｍｅｔｃａｌｆａ ｐｒｕｉｎｏｓａ）、又はインゲンテントウ、又はミクロミズス・ジュデンコイ（Ｍｉｃｒｏｍｙｚｕｓ ｊｕｄｅｎｋｏｉ）、又はミクロミザス・カリムポンゲンシス（Ｍｉｃｒｏｍｙｚｕｓ ｋａｌｉｍｐｏｎｇｅｎｓｉｓ）、又はミクロミザス・ニゲル（Ｍｉｃｒｏｍｙｚｕｓ ｎｉｇｅｒ）、又はガ、又はリークモス、又はアメリカキヨトウ（Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｕｎｉｐｕｎｃｔａ）、又はワケギコブアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ ａｓｃａｌｏｎｉｃｕｓ）、又はカラムシコブアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ ｂｏｅｈｍｅｒｉａｅ）、又はニワウメクロコブアブラムシ （Ｍｙｚｕｓ ｃｅｒａｓｉ）、又はミズス・オブツシロストリス（Ｍｙｚｕｓ ｏｂｔｕｓｉｒｏｓｔｒｉｓ）、又はミズス・オルナツス（Ｍｙｚｕｓ ｏｒｎａｔｕｓ）、又はモモアカアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）、又はネマツス属（Ｎｅｍａｔｕｓ）、又はネマツス・レウコトロクス（Ｎｅｍａｔｕｓ ｌｅｕｃｏｔｒｏｃｈｕｓ）、又はネマツス・リベシイ（Ｎｅｍａｔｕｓ ｒｉｂｅｓｉｉ）又はネマツス・スピラエア（Ｎｅｍａｔｕｓ ｓｐｉｒａｅａｅ）、又はシクラメンコブアブラムシ（Ｎｅｏｍｙｚｕｓ ｃｉｒｃｕｍｆｌｅｘｕｓ）、又はネオトキソプテラ・オリベリ（Ｎｅｏｔｏｘｏｐｔｅｒａ ｏｌｉｖｅｒｉ）、又はミナミアオカメムシ（Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕｌａ）、又はオークプロフェッショナリー（Ｏａｋ ｐｒｏｃｅｓｓｉｏｎａｒｙ）、又はオエバルス・プグナキス（Ｏｅｂａｌｕｓ ｐｕｇｎａｘ）、又はオリーブミバエ、又はオフィオミア・シンプレクス（Ｏｐｈｉｏｍｙｉａ ｓｉｍｐｌｅｘ）、又はオピシナ・アレノセラ（Ｏｐｉｓｉｎａ ａｒｅｎｏｓｅｌｌａ）、又はオポミザ属、又はオポミザ・フロルム（Ｏｐｏｍｙｚａ ｆｌｏｒｕｍ）、又はヒメコバエ科、又はイネノシントメタマバエ（Ｏｒｓｅｏｌｉａ ｏｒｙｚａｅ）、又はオオメノコギリヒラタムシ（Ｏｒｙｚａｅｐｈｉｌｕｓ ｍｅｒｃａｔｏｒ）、又はオシネラ・フリト（Ｏｓｃｉｎｅｌｌａ ｆｒｉｔ）、又はオストリニア・フルナカリス（Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ）、又はオキシカレヌス・ヒアリニペンニス（Ｏｘｙｃａｒｅｎｕｓ ｈｙａｌｉｎｉｐｅｎｎｉｓ）、又はパピリオ・デモドクス（Ｐａｐｉｌｉｏ ｄｅｍｏｄｏｃｕｓ）、又はパラコッカス・マルギナツス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｇｉｎａｔｕｓ）、又はパラタチャルディナ・シュードロバタ（Ｐａｒａｔａｃｈａｒｄｉｎａ ｐｓｅｕｄｏｌｏｂａｔａ）、又はパロプシステルナ・セルマニ（Ｐａｒｏｐｓｉｓｔｅｒｎａ ｓｅｌｍａｎｉ）、又はタイワンツチイナゴ（Ｐａｔａｎｇａ ｓｕｃｃｉｎｃｔａ）、又はペンフィグス・ベタエ（Ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｂｅｔａｅ）、又はクロスジコバネアブラムシ（Ｐｅｎｔａｌｏｎｉａ ｎｉｇｒｏｎｅｒｖｏｓａ）、又はカメムシ目、又はニセタマナヤガ（Ｐｅｒｉｄｒｏｍａ ｓａｕｃｉａ）、又はフォロドン・フムリ（Ｐｈｏｒｏｄｏｎ ｈｕｍｕｌｉ）、又はフトリマエア・オペルクレラ（Ｐｈｔｈｏｒｉｍａｅａ ｏｐｅｒｃｕｌｅｌｌａ）、又はフィロファガ属、又はフィロトレタ・ネモルム（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｎｅｍｏｒｕｍ）、又はネアブラムシ科、又はフィロキセロイデア（Ｐｈｙｌｌｏｘｅｒｏｉｄｅａ）、又はフィトミザ・フォルチコラ（Ｐｈｙｔｏｍｙｚａ ｈｏｒｔｉｃｏｌａ）、又はオオモンシロチョウ（Ｐｉｅｒｉｓ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、又はワタアカミムシ、又はミカンコナカイガラムシ（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｃｉｔｒｉ）、又はプラチノタ・イダエウサリス（Ｐｌａｔｙｎｏｔａ ｉｄａｅｕｓａｌｉｓ）、又はプラムクルキュリオ（Ｐｌｕｍ ｃｕｒｃｕｌｉｏ）、又はカリフォルニアノコギリカミキリ（Ｐｒｉｏｎｕｓ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｓ）、又はプリスチフォラ属（Ｐｒｉｓｔｉｐｈｏｒａ）、又はシュードレグマ・バンブチコラ（Ｐｓｅｕｄｏｒｅｇｍａ ｂａｍｂｕｃｉｃｏｌａ）、又はシュードテラプタス・ワイイ（Ｐｓｅｕｄｏｔｈｅｒａｐｔｕｓ ｗａｙｉ）、又はプシリオデス・クリソセファラ（Ｐｓｙｌｌｉｏｄｅｓ ｃｈｒｙｓｏｃｅｐｈａｌａ）、又はプチヌス・フル（Ｐｔｉｎｕｓ ｆｕｒ）、又はカシノシマメイガ（Ｐｙｒａｌｉｓ ｆａｒｉｎａｌｉｓ）、又はラフィドパルパ・フォベイコリス（Ｒａｐｈｉｄｏｐａｌｐａ ｆｏｖｅｉｃｏｌｌｉｓ）、又はヒアリ、又はレッドバッタ、又はヨーロッパオウトウミバエ（Ｒｈａｇｏｌｅｔｉｓ ｃｅｒａｓｉ）、又はラゴレチス・インディフェレンス（Ｒｈａｇｏｌｅｔｉｓ ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｓ）、又はラゴレチス・メンダキス（Ｒｈａｇｏｌｅｔｉｓ ｍｅｎｄａｘ）、又はハラミドリアブラムシ（Ｒｈｏｄｏｂｉｕｍ ｐｏｒｏｓｕｍ）、又はロパロシフォニヌス・ラチシフォン（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｏｎｉｎｕｓ ｌａｔｙｓｉｐｈｏｎ）、又はトウモロコシアブラムシ（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ ｍａｉｄｉｓ）、又はムギクビレアブラムシ（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ ｐａｄｉ）、又はオカボノアカアブラムシ（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ ｒｕｆｉａｂｄｏｍｉｎａｌｅ）、又はリアキオニア・フルストラナ（Ｒｈｙａｃｉｏｎｉａ ｆｒｕｓｔｒａｎａ）、又はヤシオオオサゾウムシ（Ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｓ）、又はリンコフォルス・パルマルム（Ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｐａｌｍａｒｕｍ）、又はリンコフォルス・ブルネラツス（Ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｖｕｌｎｅｒａｔｕｓ）、又はリゾペルタ属、又はガイマイツヅリガ、又はロシアコムギアブラムシ、又はオリーブカタカイガラムシ（Ｓａｉｓｓｅｔｉａ ｏｌｅａｅ）、又はサンホーゼカイガラムシ、又はカイガラムシ、又はアメリカトビバッタ（Ｓｃｈｉｓｔｏｃｅｒｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）、又はムギミドリアブラムシ（Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ ｇｒａｍｉｎｕｍ）、又はスキザフィス・ハイペルシフォナタ（Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ ｈｙｐｅｒｓｉｐｈｏｎａｔａ）、又はスキザフィス・ミヌタ（Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ ｍｉｎｕｔａ）、又はスキザフィス・ロツンジベントリス（Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ ｒｏｔｕｎｄｉｖｅｎｔｒｉｓ）、又はショウテデニア・ルテア（Ｓｃｈｏｕｔｅｄｅｎｉａ ｌｕｔｅａ）、又はクロバネキノコバエ科、又はチャノキイロアザミウマ（Ｓｃｉｒｔｏｔｈｒｉｐｓ ｄｏｒｓａｌｉｓ）、又はキンカメムシ科、又はスクチフォラ・ペディセラータ（Ｓｃｕｔｉｐｈｏｒａ ｐｅｄｉｃｅｌｌａｔａ）、又はマメハモグリバエ、又はシロモンヤガ、又はエノキワタアブラムシ（Ｓｈｉｖａｐｈｉｓ ｃｅｌｔｉ）、又はシルバーホワイトフライ（Ｓｉｌｖｅｒ ｗｈｉｔｅｆｌｙ）又はシルバーコナジラミ若しくはシルバーリーフコナジラミ、又はシノメゴウラ・キトリコラ（Ｓｉｎｏｍｅｇｏｕｒａ ｃｉｔｒｉｃｏｌａ）、又はシファ・フラバ（Ｓｉｐｈａ ｆｌａｖａ）、又はムギヒゲナガアブラムシ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ａｖｅｎａｅ）、又はシトビオン・ラムベルシ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ｌａｍｂｅｒｓｉ）、又はシトビオン・レエラマニアエ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ｌｅｅｌａｍａｎｉａｅ）、又はシトビオン・ミスカンティ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ｍｉｓｃａｎｔｈｉ）、又はシトビオン・パウリアニ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ｐａｕｌｉａｎｉ）、又はシトビオン・フィランティ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ｐｈｙｌｌａｎｔｈｉ）、又はシトビオン・ウィクストロエミアエ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａｅ）、又はシトナ・レピドゥス（Ｓｉｔｏｎａ ｌｅｐｉｄｕｓ）、又はアカアシチビコフキゾウムシ（Ｓｉｔｏｎａ ｌｉｎｅａｔｕｓ）、又はハチノスムクゲケシキスイ、又はサウスウェスタンコーンボーラー（Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ）、又はダイズアブラムシ、又はクシナシスジキリヨトウ、又はハスモンヨトウ、又はジュウイチホシウリハムシ、又はスポッテドランタンフライ（Ｓｐｏｔｔｅｄ ｌａｎｔｅｒｎｆｌｙ）、又はスカッシュバインボーラー、又はテッポウムシ、又はフタスジカスミカメ（Ｓｔｅｎｏｔｕｓ ｂｉｎｏｔａｔｕｓ）、又はストラウジア・ロンギペンニス（Ｓｔｒａｕｚｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｎｎｉｓ）、又はキスジノミハムシ、又はサンペスト（Ｓｕｎｎ ｐｅｓｔ）、又はスウィートポテトバグ（Ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ ｂｕｇ）、又はシナンテドン・エキシチイオサ（Ｓｙｎａｎｔｈｅｄｏｎ ｅｘｉｔｉｏｓａ）、又はサビイロメクラガメ、又はテキア・ソラニボラ（Ｔｅｃｉａ ｓｏｌａｎｉｖｏｒａ）、又はナミハダニ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ ｕｒｔｉｃａｅ）、又は他のテトラニカス属種、オカボノクロアブラムシ（Ｔｅｔｒａｎｅｕｒａ ｎｉｇｒｉａｂｄｏｍｉｎａｌｉｓ）、又はエゾヨスジワタムシ（Ｔｅｔｒａｎｅｕｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）、又はアザミウマ類、又はトリプス・アングスチセプス（Ｔｈｒｉｐｓ ａｎｇｕｓｔｉｃｅｐｓ）又はミナミキイロアザミウマ（Ｔｈｒｉｐｓ ｐａｌｍｉ）、又はグラジオラスアザミウマ（Ｔｈｒｉｐｓ ｓｉｍｐｌｅｘ）、又はネギアザミウマ（Ｔｈｒｉｐｓ ｔａｂａｃｉ）、又はネッタイキクキンウワバ（Ｔｈｙｓａｎｏｐｌｕｓｉａ ｏｒｉｃｈａｌｃｅａ）、又はサルスベリヒゲマダラアブラムシ（Ｔｉｎｏｃａｌｌｉｓ ｋａｈａｗａｌｕｏｋａｌａｎｉ）、又はコミカンアブラムシ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ ａｕｒａｎｔｉｉ）、又はミカンクロアブラムシ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ ｃｉｔｒｉｃｉｄａ）、又はハゼアブラムシ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ ｏｄｉｎａｅ）、又はトリコバリス・トリノタタ（Ｔｒｉｃｈｏｂａｒｉｓ ｔｒｉｎｏｔａｔａ）、又はトリオザ・エリトレアエ（Ｔｒｉｏｚａ ｅｒｙｔｒｅａｅ）、又はカブラヤガ、又はトマトキバガ（Ｔｕｔａ ａｂｓｏｌｕｔａ）、又はウロレウコン・ミ
ヌツム（Ｕｒｏｌｅｕｃｏｎ ｍｉｎｕｔｕｍ）、又はヒメマルカツオブシムシ（Ｖａｒｉｅｄ ｃａｒｐｅｔ ｂｅｅｔｌｅ）、又はツツジアブラムシ（Ｖｅｓｉｃｕｌａｐｈｉｓ ｃａｒｉｃｉｓ）、又はビラコラ・イソクラテス（Ｖｉｒａｃｈｏｌａ ｉｓｏｃｒａｔｅｓ）、又はワックスワーム、又はウェスタンコーンルートワーム、又はミカンキイロアザミウマ、又はウィートフライ（ｗｈｅａｔ ｆｌｙ）、又はコムギゾウムシ、又はコナジラミ、又はフユシャク、又はキシロトレクス・クゥアドリペス（Ｘｙｌｏｔｒｅｃｈｕｓ ｑｕａｄｒｉｐｅｓ）、又はサンフラワービートル（Ｚｙｇｏｇｒａｍｍａ ｅｘｃｌａｍａｔｉｏｎｉｓ）から選択される種）などの農業害虫から選択され得る。ある特定の実施形態によれば、鱗翅目からの標的種の選択が好ましく、特に、例えばコリストネウラ属（特にコリストネウラ・オラエ（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｏｒａｅ）、コリストネウラ・フミフェラナ（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｆｕｍｉｆｅｒａｎａ）、又はコリストネウラ・フレエマニ（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｆｒｅｅｍａｎｉ））などのハマキガ科から選択される、又は例えばスポドプテラ属（特にツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）、ハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ）、エジプトヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ）、クシナシスジキリヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｃｉｌｉｕｍ）、又はアメリカハスモンヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｏｒｎｉｔｈｏｇａｌｌｉ））などのヤガ科から選択される、又は例えばプロディア（Ｐｌｏｄｉａ）属若しくはエフェスチア（Ｅｐｈｅｓｔｉａ）属などのメイガ科から選択され、又は上記に直接リストに示したこの属からの他の種から選択される。農業害虫種はまた、植物食性陸生腹足類種から選択することもできる。

【0043】

害虫種は、さらに、節足動物から選択される病原媒介生物などの病原媒介生物から選択され得る。病原媒介生物は、ヒト疾患を含む動物疾患の拡大に関与し得、又は植物疾患を運び得る。動物疾患を運ぶ病原媒介生物は、例えば、カ科（例えばヤブカ属など）、又はヌカカ科（例えばサシバエ属など）、又はアブ科、又はブユ科（例えばオーストロシムリウム（Ａｕｓｔｒｏｓｉｍｕｌｉｕｍ）属など）、又はツェツェバエ科（例えばツェツェバエ属など）、又はオオサシガメ亜科（例えばブラジルサシガメ（Ｔｒｉａｔｏｍａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）又はオオサシガメ（Ｒｈｏｄｎｉｕｓ ｐｒｏｌｉｘｕｓ）など）、又はノミ目（Ｓｉｐｈｏｎｏｐｔｅｒａ）（例えばパブリシダエ（Ｐｕｂｌｉｃｉｄａｅ）など）、又はシラミ目（例えばシラミ属など）、又はマダニ科、又はヒメダニ科から選択される、吸血（ｂｌｏｏｄ ｆｅｅｄｉｎｇ）（吸血性（ｈａｅｍａｔｏｐｈａｇｏｕｓ））又は血リンパ食節足動物、好ましくは吸血節足動物から選択され得る。

【0044】

植物疾患の拡大に関与する節足動物媒介生物は、エンドウヒゲナガアブラムシ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ）、又はハモグリバエ科、又はアナトレファ・グランディス（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ ｇｒａｎｄｉｓ）、又はニシインドミバエ（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ ｏｂｌｉｑｕａ）、又はハナバエ科、又はアブラムシ、又はキクイムシ、又はテンサイヨコバイ、又はダイコンアブラムシ、又はカコプシラ・メラノネウラ（Ｃａｃｏｐｓｙｌｌａ ｍｅｌａｎｏｎｅｕｒａ）、又はカコプシラ・ウルミ（Ｃａｃｏｐｓｙｌｌａ ｕｌｍｉ）、又はセラチチス・ポドカルピ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｐｏｄｏｃａｒｐｉ）、又はイチゴケナガアブラムシ（Ｃｈａｅｔｏｓｉｐｈｏｎ ｆｒａｇａｅｆｏｌｉｉ）、又はシカヅリナ属、又はシカヅリナ・ムビラ（Ｃｉｃａｄｕｌｉｎａ ｍｂｉｌａ）、又はコモンブラウンリーフホッパー（Ｃｏｍｍｏｎ ｂｒｏｗｎ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ）、又はクリプトコッカス・ファギスガ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｇｉｓｕｇａ）、又はゾウムシ科、又はジアブロチカ・バルテアタ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｌｔｅａｒａ）、又はエムポアスカ・デセデンス（Ｅｍｐｏａｓｃａ ｄｅｃｅｄｅｎｓ）、又はユーメトピナ・フラビペス（Ｅｕｍｅｔｏｐｉｎａ ｆｌａｖｉｐｅｓ）、又はユーセリス・プレベユス（Ｅｕｓｃｅｌｉｓ ｐｌｅｂｅｊｕｓ）、又はフランクリニエラ・トリチチ（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、又はグラッシーウイングドシャープシューター、又はハプラキシウス・クルズス（Ｈａｐｌａｘｉｕｓ ｃｒｕｄｕｓ）、又はヒアレステス・オブソレツス（Ｈｙａｌｅｓｔｈｅｓ ｏｂｓｏｌｅｔｕｓ）、又はマツノクロキクイムシ（Ｈｙｌａｓｔｅｓ ａｔｅｒ）、又はハムシ、又はヨコバイ、又はニセダイコンアブラムシ、又はマクロステレス・クアドリリネアツス（Ｍａｃｒｏｓｔｅｌｅｓ ｑｕａｄｒｉｌｉｎｅａｔｕｓ）、又はコナカイガラムシ、又はウリミバエ、又はアナアキゾウムシ亜科、又はアカザモグリハナバエ（Ｐｅｇｏｍｙａ ｈｙｏｓｃｙａｍｉ）、又はピソデス属（Ｐｉｓｓｏｄｅｓ）、又はピソデス・ストロビ（Ｐｉｓｓｏｄｅｓ ｓｔｒｏｂｉ ｏｒ Ｐｉｓｓｏｄｉｎｉ）、又はウンカ、又はシュードコッカス・マリチムス（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ ｍａｒｉｔｉｍｕｓ）、又はオレンジコナカイガラムシ（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｂｕｍｉ）、又はプシラ・ピリ（Ｐｓｙｌｌａ ｐｙｒｉ）、又はキジラミ科、又はラブドファガ・クラビフェクス（Ｒａｂｄｏｐｈａｇａ ｃｌａｖｉｆｅｘ）、又はリンコフォルス・パルマルム（Ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｐａｌｍａｒｕｍ）、又はスカフォイデウス・チタヌス（Ｓｃａｐｈｏｉｄｅｕｓ ｔｉｔａｎｕｓ）、又はチャノキイロアザミウマ、又はシルバーリーフコナジラミ、又はミバエ科、又はアザミウマ科、又はミナミキイロアザミウマ、又はマツノキクイムシ（Ｔｏｍｉｃｕｓ ｐｉｎｉｐｅｒｄａ）、又はミカンクロアブラムシ、又はツノゼミ、又はトガリキジラミ科、又はミカンキイロアザミウマ、又はキシレボルス・グラブラツス（Ｘｙｌｅｂｏｒｕｓ ｇｌａｂｒａｔｕｓ）から選択され得る。

【0045】

ある特定の好ましい実施形態によれば、害虫種は、特に、ネコブセンチュウ属（例えば、アレナリアネコブセンチュウ（Ｍ．ａｒｅｎａｒｉａ）、サツマイモネコブセンチュウ（Ｍ．ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）、ジャワネコブセンチュウ（Ｍ．ｊａｖａｎｉｃａ）、又はキタネコブセンチュウ（Ｍ．ｈａｐｌａ）など）から選択される、又はヘテロデラ属（例えば、ダイズシストセンチュウ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ）、又はムギシストセンチュウ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ）及びヘテロデラ・フィリプジェビ（Ｈ．ｆｉｌｉｐｊｅｖｉ）など）から選択される、又はグロボデラ属（例えば、ジャガイモシロシストセンチュウ（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｐａｌｌｉｄａ）、又はジャガイモシストセンチュウ（Ｇ．ｒｏｓｔｏｃｈｉｅｎｓｉｓ）など）から選択される、又はネグサレセンチュウ属（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）（例えば、キタネグサレセンチュウ（Ｐ．ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）、プラチレンクス・トルネイ（Ｐ．ｔｈｏｒｎｅｉ）、ムギネグサレセンチュウ（Ｐ．ｎｅｇｌｅｃｔｕｓ）、モロコシネグサレセンチュウ（Ｐ．ｚｅａｅ）、クルミネグサレセンチュウ（Ｐ．ｖｕｌｎｕｓ）又はミナミネグサレセンチュウ（Ｐ．ｃｏｆｆｅａｅ）など）から選択される、又はラドフォルス属（例えばバナナネモグリセンチュウ（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ ｓｉｍｉｌｉｓ）など）から選択される、植物に寄生する線虫種として選択される。

【0046】

ある特定の実施形態によれば、外部寄生種は雑草種から選択され得る。本発明内の標的種として見なされる雑草種は、例えば、オモダカ科、又はセリ科、又はキク科、又はヒユ科、又はサボテン科、又はナデシコ科、又はアカザ科、又はイワヅタ科、又はツユクサ科、又はイネ科、又はスベリヒユ科、又はトウダイグサ科、又はマメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）（（マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ））、又はアカネ科、又はトチカガミ科、又はアカウキクサ科、又はサンショウモ科、又はアヤメ科、又はユリ科、又はミズアオイ科、又はノボタン科、又はフトモモ科、又はタデ科、又はカニクサ科、又はバラ科、又はキツネノマゴ科、又はハマウツボ科、又はゴマノハグサ科、又はヒルガオ科、又はネナシカズラ科、又はナス科、又はミクリ科からの雑草種である。

【0047】

標的種として見なされる特定の雑草種は、サジタリア・サジチフォリア（Ｓａｇｉｔｔａｒｉａ ｓａｇｉｔｔｉｆｏｌｉａ Ｌｉｎｎａｅｕｓ）、又はジャイアントホグウィード（Ｈｅｒａｃｌｅｕｍ ｍａｎｔｅｇａｚｚｉａｎｕｍ Ｓｏｍｍｉｅｒ ＆ Ｌｅｖｉｅｒ）、又はアゲラティナ・アデノフォラ（Ａｇｅｒａｔｉｎａ ａｄｅｎｏｐｈｏｒａ（Ｓｐｒｅｎｇ．）Ｋｉｎｇ ＆ Ｈ．Ｅ．Ｒｏｂｉｎｓ）、又はアゲラティナ・リパリア（Ａｇｅｒａｔｉｎａ ｒｉｐａｒｉａ（Ｒｅｇｅｌ）Ｋｉｎｇ ＆ Ｈ．Ｅ．Ｒｏｂｉｎｓ）、又はアレクトテカ・カレンドゥラ（Ａｒｃｔｏｔｈｅｃａ ｃａｌｅｎｄｕｌａ（Ｌ．）Ｌｅｖｙｎｓ）、又はカルタムス・オキシカンサス（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｏｘｙａｃａｎｔｈｕｓ Ｍ．Ｂｉｅｂｅｒｓｔｅｉｎ）、又はクルピナ・ブルガリス・Ｃａｓｓ．（Ｃｒｕｐｉｎａ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｃａｓｓ．）、又はイヌラ・ブリタニカ（Ｉｎｕｌａ ｂｒｉｔａｎｎｉｃａ Ｌ．）、又はミカニア・コルダタ・（Ｂｕｒｍ．ｆ．）Ｂ．Ｌ．ロビンス（Ｍｉｋａｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ（Ｂｕｒｍ．ｆ．）Ｂ．Ｌ．Ｒｏｂｉｎｓ）、又はツルヒヨドリ（Ｍｉｋａｎｉａ ｍｉｃｒａｎｔｈａ Ｋｕｎｔｈ）、又はオノポルダム・アカウロン（Ｏｎｏｐｏｒｄｕｍ ａｃａｕｌｏｎ Ｌ．）、又はオノポルダム・イリリクム・Ｌ．（Ｏｎｏｐｏｒｄｕｍ ｉｌｌｙｒｉｃｕｍ Ｌ．）、又はセネシオ・イナエクイデンス（Ｓｅｎｅｃｉｏ ｉｎａｅｑｕｉｄｅｎｓ ＤＣ．）、又はナルトサワギク（Ｓｅｎｅｃｉｏ ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ Ｐｏｉｒ．）、又はコトブキギク（Ｔｒｉｄａｘ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ Ｌ．）、又はツルノゲイトウ（Ａｌｔｅｒｎａｎｔｈｅｒａ ｓｅｓｓｉｌｉｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．ｅｘ ＤＣ．）、又はオプンティア・アウランティアカ（Ｏｐｕｎｔｉａ ａｕｒａｎｔｉａｃａ Ｌｉｎｄｌｅｙ）、又はドリマリア・アレナリオイデス（Ｄｒｙｍａｒｉａ ａｒｅｎａｒｉｏｉｄｅｓ Ｈｕｍｂｏｌｄｔ ＆ Ｂｏｎｐｌａｎｄ）、又はサルソラ・ヴェルミクラタ（Ｓａｌｓｏｌａ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｔａ Ｌ．）、又はイチイヅタ（Ｃａｕｌｅｒｐａ ｔａｘｉｆｏｌｉａ（Ｖａｈｌ）Ｃ．Ａｇａｒｄｔｈ）、又はマルバツユクサ（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ ｂｅｎｇｈａｌｅｎｓｉｓ Ｌ．）、又はアベナ・ステリィス（Ａｖｅｎａ ｓｔｅｒｉｌｉｓ Ｌｉｎｎａｅｕｓ）、又はオキナワミチシバ（Ｃｈｒｙｓｏｐｏｇｏｎ ａｃｉｃｕｌａｔｕｓ（Ｒｅｔｚ．）Ｔｒｉｎ．）、又はディギタリア・アビシニカ（Ｄｉｇｉｔａｒｉａ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａ（Ａ．Ｒｉｃｈ）Ｓｔａｐｆ）、又はディギタリア（Ｄｉｇｉｔａｒｉａ ｖｅｌｕｔｉｎａ（Ｆｏｒｓｋ．）Ｂｅａｕｖ．）、又はインペラタ・ブラジリエンシス（Ｉｍｐｅｒａｔａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ Ｔｒｉｎｉｕｓ）、又はチガヤ（Ｉｍｐｅｒａｔａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ（Ｌ．）Ｂｅａｕｖ．）、又はタイワンアイシン（Ｉｓｃｈａｅｍｕｍ ｒｕｇｏｓｕｍ Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ）、又はアゼガヤ（Ｌｅｐｔｏｃｈｌｏａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｅｓ）、又はナセラ・トリコトマ（Ｎａｓｓｅｌｌａ ｔｒｉｃｈｏｔｏｍａ Ｈａｃｋｅｌ ｅｘ Ａｒｅｃｈ．）、又はオリザ・ロンギスタミナタ（Ｏｒｙｚａ ｌｏｎｇｉｓｔａｍｉｎａｔａ Ａ．Ｃｈｅｖ．＆ Ｒｏｅｈｒ．）、又はオリザ・プンクタタ（Ｏｒｙｚａ ｐｕｎｃｔａｔａ Ｋｏｔｚｃｈｙ ｅｘ Ｓｔｅｕｄ．）、又はオリザ・ルフィポゴン（Ｏｒｙｚａ ｒｕｆｉｐｏｇｏｎ Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ）、又はスズメノコビエ（Ｐａｓｐａｌｕｍ ｓｃｒｏｂｉｃｕｌａｔｕｍ Ｌｉｎｎａｅｕｓ）、又はペンニセツム・クランデスチヌム（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｃｌａｎｄｅｓｔｉｎｕｍ Ｈｏｃｈｓｔ．ｅｘ Ｃｈｉｏｖ．）、又はペンニセツム・マクロウルム（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｍａｃｒｏｕｒｕｍ Ｔｒｉｎｉｕｓ）、又はペンニセツム・ペディセラツム（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｐｅｄｉｃｅｌｌａｔｕｍ Ｔｒｉｎｉｕｓ）、又はペンニセツム・ポリスタチオン（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｐｏｌｙｓｔａｃｈｉｏｎ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）Ｓｃｈｕｌｔｅｓ））、又はロットボエリア・コチンキネンシス（Ｒｏｔｔｂｏｅｌｌｉａ ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌｏｕｒ．）Ｗ．Ｄ．Ｃｌａｙｔｏｎ）、又はサッカルム・スポンタネウム（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ ｓｐｏｎｔａｎｅｕｍ Ｌ．）、又はコツブキンエノコロ（Ｓｅｔａｒｉａ ｐｕｍｉｌａ ｓｓｐ．ｐａｌｌｉｄｅｆｕｓｃａ（Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ）Ｂ．Ｋ．Ｓｉｍｏｎ ｏｒ Ｕｒｏｃｈｌｏａ ｐａｎｉｃｏｉｄｅｓ Ｂｅａｕｖｏｉｓ）、又はユーフォルビア・テラキナ（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ ｔｅｒｒａｃｉｎａ Ｌ．）、又はアカシア・ニロチカ（Ａｃａｃｉａ ｎｉｌｏｔｉｃａ（Ｌ．）Ｗｉｌｌｄ．ｅｘ Ｄｅｌｉｌｅ）、又はガレガ・オフィシナリス（Ｇａｌｅｇａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．）、又はミモザ・ディプロトリカ（Ｍｉｍｏｓａ ｄｉｐｌｏｔｒｉｃｈａ Ｃ．Ｗｒｉｇｈｔ ｅｘ Ｓａｕｖａｌｌｅ）、又はミモザ・ピグラ（Ｍｉｍｏｓａ ｐｉｇｒａ Ｌ．）、又はプロソピス・アルパタコ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ａｌｐａｔａｃｏ Ｒ．Ａ．Ｐｈｉｌｉｐｐｉ）、又はプロソピス・アルゲンチナ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ａｒｇｅｎｔｉｎａ Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・アルティクラタ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ａｒｔｉｃｕｌａｔａ Ｓ．Ｗａｔｓｏｎ）、又はプロソピス・ブクカルティイ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｂｕｒｋａｒｔｉｉ Ｍｕｎｏｚ）、又はプロソピス・カルデニア（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｃａｌｄｅｎｉａ Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・カリンガスタナ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｃａｌｉｎｇａｓｔａｎａ Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・カンペストリス（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ Ｇｒｉｅｓｂａｃｈ）、又はプロソピス・カステラノシイ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｃａｓｔｅｌｌａｎｏｓｉｉ Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・デヌダンス（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｄｅｎｕｄａｎｓ Ｂｅｎｔｈａｍ）、又はプロゾピス・エラタ・（ブルカルト）ブルカルト（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｅｌａｔａ（Ｂｕｒｋａｒｔ）Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・ファルクタ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｆａｒｃｔａ（Ｂａｎｋｓ ＆ Ｓｏｌａｎｄ．）Ｊ．Ｆ．Ｍａｃｂｒ．）、又はプロソピス・フェロクス（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｆｅｒｏｘ Ｇｒｉｅｓｂａｃｈ）、又はプロソピス・フィエブリギイ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｆｉｅｂｒｉｇｉｉ Ｈａｒｍｓ）、又はプロソピス・ハスレリ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｈａｓｓｌｅｒｉ Ｈａｒｍｓ ｅｘ Ｈａｓｓｌｅｒ）、又はプロソピス・フミリス（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｈｕｍｉｌｉｓ Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｘ Ｈｏｏｋｅｒ ＆ Ａｒｎｏｔｔ）、又はプロソピス・クンゼイ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｋｕｎｔｚｅｉ Ｈａｒｍｓ ｅｘ Ｈａｓｓｌｅｒ）、又はプロソピス・パリダ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｐａｌｌｉｄａ（Ｈｕｍｂ．＆ Ｂｏｎｐｌ．ｅｘ Ｗｉｌｌｄ．）Ｋｕｎｔｈ）、又はプロソピス・パルメリ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｐａｌｍｅｒｉ Ｓ．Ｗａｔｓｏｎ）、又はプロソピス・ レプタンス（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｒｅｐｔａｎｓ Ｂｅｎｔｈ．）、又はプロソピス・ロジャシアナ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｒｏｊａｓｉａｎａ Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・ルイズレアリイ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｒｕｉｚｌｅａｌｉｉ Ｂｕｒｋａｒｔ）、又はプロソピス・ルスキフォリア（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｒｕｓｃｉｆｏｌｉａ Ｇｒｉｅｓｂａｃｈ）、又はプロソピス・セリカンタ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｓｅｒｉｃａｎｔｈａ Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｘ Ｈｏｏｋ．＆ Ａｒｎ．）、又はプロソピス・ストロンブリフェラ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｓｔｒｏｍｂｕｌｉｆｅｒａ（Ｌａｍａｒｃｋ）Ｂｅｎｔｈａｍ）、又はプロソピス・トルクアタ（Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ｔｏｒｑｕａｔａ（Ｃａｖａｎ ｅｘ Ｌａｇａｓｃａ ｙ Ｓｅｇｕｒａ）ＤＣ．）、又はスペルマコセ・アラタ（Ｓｐｅｒｍａｃｏｃｅ ａｌａｔａ Ａｕｂｌ．）、又はクロモ（Ｈｙｄｒｉｌｌａ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔａ（Ｌ．ｆ．）Ｒｏｙｌｅ）、又はラガロシフォン・マヨール（Ｌａｇａｒｏｓｉｐｈｏｎ ｍａｊｏｒ（Ｒｉｄｌｅｙ）Ｍｏｓｓ）、又はミズオオバコ（Ｏｔｔｅｌｉａ ａｌｉｓｍｏｉｄｅｓ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）Ｐｅｒｓ．）、又はアゾラ・ピンナタ（Ａｚｏｌｌａ ｐｉｎｎａｔａ Ｒ．Ｂｒｏｗｎ）、又はサルビニア・アウリクラータ（Ｓａｌｖｉｎｉａ ａｕｒｉｃｕｌａｔａ Ａｕｂｌｅｔ）、又はサルビニア・ビロバ（Ｓａｌｖｉｎｉａ ｂｉｌｏｂａ Ｒａｄｄｉ）、又はサルビニア・ヘルツォギイ（Ｓａｌｖｉｎｉａ ｈｅｒｚｏｇｉｉ ｄｅ ｌａ Ｓｏｔａ）、又はオオサンショウモ（Ｓａｌｖｉｎｉａ ｍｏｌｅｓｔａ Ｄ．Ｓ．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ）、又はモラエア・コリナ（Ｍｏｒａｅａ ｃｏｌｌｉｎａ Ｔｈｕｎｂ．）、又はモラエア・フラッキダ（Ｍｏｒａｅａ ｆｌａｃｃｉｄａ （Ｓｗｅｅｔ） Ｓｔｅｕｄ．）、又はモラエア・ミニアータ（Ｍｏｒａｅａ ｍｉｎｉａｔａ Ａｎｄｒｅｗｓ）、又はモラエア・オクロレウカ（Ｍｏｒａｅａ ｏｃｈｒｏｌｅｕｃａ（Ｓａｌｉｓｂ．）Ｄｒａｐｉｅｚ）、又はモラエア・パリダ（Ｍｏｒａｅａ ｐａｌｌｉｄａ（Ｂａｋｅｒ）Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ）、又はアスフォデルス・フィスツロスス（Ａｓｐｈｏｄｅｌｕｓ ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｓ Ｌｉｎｎａｅｕｓ）、又はエイクホルニア・アズレア（Ｅｉｃｈｈｏｒｎｉａ ａｚｕｒｅａ（Ｓｗａｒｔｚ）Ｋｕｎｔｈ）、又はモノコリア・ハスタタ（Ｍｏｎｏｃｈｏｒｉａ ｈａｓｔａｔａ（Ｌ．）Ｓｏｌｍｓ）、又はモノコリア・バギナリス（Ｍｏｎｏｃｈｏｒｉａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ（Ｂｕｒｍ．ｆ．）Ｋ．Ｐｒｅｓｌ ｅｘ Ｋｕｎｔｈ）、又はメラストマ・マラバスリクム（Ｍｅｌａｓｔｏｍａ ｍａｌａｂａｔｈｒｉｃｕｍ Ｌ．）、又はメラレウカ・キンケネルビア（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ｑｕｉｎｑｕｅｎｅｒｖｉａ（Ｃａｖ．）Ｂｌａｋｅ）、又はエメクス・オーストラリス（Ｅｍｅｘ ａｕｓｔｒａｌｉｓ Ｓｔｅｉｎｈａｌｌ）、又はエメクス・スピノザ（Ｅｍｅｘ ｓｐｉｎｏｓａ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）Ｃａｍｐｄｅｒａ）、又はリゴジウム・フレクスオスム（Ｌｙｇｏｄｉｕｍ ｆｌｅｘｕｏｓｕｍ（Ｌ．）Ｓｗ．（１８０１）（Ｍｏｂｏｔ））、又はイリオモテシャミセンヅル（Ｌｙｇｏｄｉｕｍ ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ（Ｃａｖ．）Ｒ．Ｂｒ．）、又はルブス・フルティコスス（Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ Ｌ．）、又はルブス・モルッカヌス（Ｒｕｂｕｓ ｍｏｌｕｃｃａｎｕｓ Ｌ．）、又はハイグロフィラ・ポリスペルマ（Ｈｙｇｒｏｐｈｉｌａ ｐｏｌｙｓｐｅｒｍａ（Ｒｏｘｂ．）Ｔ．Ａｎｄｅｒｓ）、又はナンバンギセル種（Ａｅｇｉｎｅｔｉａ ｓｐｐ．Ｌ．）、又はアレクトラ属種（Ａｌｅｃｔｒａ ｓｐｐ．Ｔｈｕｎｂ．）、又はハマウツボ属種（外来）（Ｏｒｏｂａｎｃｈｅ ｓｐｐ．（ｎｏｎｎａｔｉｖｅ） Ｌ．）、又はリムノフィラ・セシリフローラ（Ｌｉｍｎｏｐｈｉｌａ ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒａ（Ｖａｈｌ）Ｂｌｕｍｅ）、又はストリガ属種（Ｓｔｒｉｇａ ｓｐｐ．Ｌｏｕｒ．）、又はヨウサイ（Ｉｐｏｍｏｅａ ａｑｕａｔｉｃａ Ｆｏｒｓｓｋ．）、又はネナシカズラ属種（Ｃｕｓｃｕｔａ ｓｐｐ．Ｌ．）、又はリシウム・フェロキッシマム（Ｌｙｃｉｕｍ ｆｅｒｏｃｉｓｓｉｍｕｍ Ｍｉｅｒｓ）、又はソラナム・タムピセンセ（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔａｍｐｉｃｅｎｓｅ Ｄｕｎａｌ）、又はソラナム・トルバム（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｏｒｖｕｍ Ｓｗ．）、又はソラナム．ビアルム（Ｓｏｌａｎｕｍ ｖｉａｒｕｍ Ｄｕｎａｌ）、又はミクリ（Ｓｐａｒｇａｎｉｕｍ ｅｒｅｃｔｕｍ Ｌ．）から選択され得る。

【0048】

標的種として選択され得る製品劣化を引き起こす種は、グラム陰性桿菌（例えばシュードモナス属種、シュワネラ属種）、グラム陽性胞子菌（例えば桿菌属種、クロストリジウム属種）、乳酸菌及び他のグラム陽性菌（例えばブロコトリックス属種、ミクロコッカス属種）、又は腸内細菌科、真菌（例えば、アオカビ属、又はアスペルギルス属からの接合菌、又はザイゴサッカロミセス属種、酵母菌属種、カンジダ属種、デッケラ（ブレタノマイセス）属種などの酵母）などの細菌などから選択される、腐敗性微生物から選択され得る。或いは、製品劣化を引き起こす標的種は、ニクダニ科、又はサトウダニ科などから選択されるコナダニ亜目などから選択されるコナダニから選択され得る。

【0049】

本発明の組成物のある特定の好ましい実施形態によれば、組成物は、ＤＮＡ分子が宿主種細胞の中にある、供給源種とは異なるいくつかの種、宿主種由来の細胞を含む。

【0050】

既に上述したように、用語「宿主種」は参照用語として使用されるにすぎない。本発明の文脈での宿主種は、一般に、供給源種とは異なる種、好ましくは、細胞内に供給源種ＤＮＡ配列が組み込まれた系統的に異なる種である。ある特定の実施形態による系統的に異なる（遠い）種は、異なる綱、異なる門（ｐｈｙｌｌａ）、異なる界、又は異なるドメインなどからの異なる分類学上の目からの種である。ある特定の実施形態によれば、系統的に異なる種は、異なる目、異なる綱、異なる門、異なる界、又は異なるドメインからのような異なる科からの種である。宿主種は、供給源種の外来ＤＮＡ、特に、クロ－ニング及び／又は発現ベクターに組み込まれた供給源種の断片などの供給源種ＤＮＡの断片を取り込み、複製することができる任意の種から選択され得る。本明細書から明らかなように、宿主種の個体が供給源種のゲノム全体を取り込み、複製することは必要とされない。その代わりに、標的種に対する自己ＤＮＡの阻害効果は、複数の宿主種細胞及び／又は個体によってもたらされてもよく、異なる細胞及び／又は個体は、それぞれＤＮＡライブラリーでのように供給源種のゲノムの異なる部分を複製する。宿主種細胞の集団の単一の細胞は、故に、組成物中に存在する供給源種ＤＮＡ配列全体の一部のみを含有する。宿主種は、例えば多細胞生物又は微生物から選択され得る。例えば多細胞植物の細胞が、宿主種細胞として使用され得る。当業者が理解するように、供給源種ＤＮＡは、例えば胚細胞培養物の粒子ボンバードメント（微粒子銃）、アグロバクテリウム媒介形質転換、ウイルスベクター（単数又は複数）によって媒介される形質転換を含むさまざまな手法によって多細胞植物の細胞に導入することができる。植物として選択される場合、宿主種は、作物、好ましくは食用作物（例えば穀物、トウモロコシ、テンサイ、ナタネ、エンドウマメ、ダイズなどから選択される）、油料作物（例えばナタネ、エチオピアンマスタード、ヒマワリなど）、澱粉作物（例えば（サトウ）モロコシなど）、繊維作物（例えば亜麻又は麻など）、リグノセルロース作物（例えば草葦、暖竹、スイッチグラス、ススキ、カルドンなど）、短輪作森林作物（例えばヤナギ、ポプラ、又はユーカリなど）から選択され得る。

【0051】

或いは、ブタ鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｕｉｓ）、アメリカ鉤虫、鞭虫、縮小条虫、回虫、糞線虫、蟯虫又は小型条虫などの蠕虫療法に使用される蠕虫が、宿主種として使用され得る。宿主種として使用される蠕虫種は、好ましくはヒトの相利共生種である（特にブタ鞭虫、アメリカ鉤虫、鞭虫又は縮小条虫）。遺伝子水平伝播の事象が線虫種に関して観察されており（中でも、ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ．２００７年１０月；１（１）：ｅ３５；ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｎｔｄ．０００００３５を参照のこと）、治療用蠕虫が供給源種ＤＮＡをそのゲノムに組み込むように遺伝子水平伝播を誘導し得る。

【0052】

他の代替の実施形態によれば、宿主種は微生物から選択される。当業者にはわかるように、微生物は微視的生物であり、単細胞形態であってもよく、又は細胞のコロニーで存在してもよい。本発明の文脈内では微生物は、好ましくは、原核生物（例えば、古細菌又は細菌など）、又は真核生物（例えば真菌（酵母を含む）など）、又は微細植物（微細藻類）から選択される。微生物から選択される宿主種は、液体培養で増殖され得る微生物（例えば大腸菌など、特にＤＨ５ａ株若しくは由来株、又はＤＨ１０Ｂ株若しくは由来株）、又は酵母菌種（例えば出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）など、例えばＡＢ１３８０株又は由来株など）、又はアスペルギルス種（例えばクロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、又はアスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）など）、又は桿菌種、又はシュードモナス種、又は乳酸菌（例えば、ラクトバチルス属種、ロイコノストック属種、ペディオコッカス属種、ラクトコッカス属種、エンテロコッカス属種、又は連鎖球菌属種など）、又はシアノバクテリア（例えばアルスロスピラ種など、特にアルスロスピラ・プランテンシス（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｐｌａｎｔｅｎｓｉｓ））、又はアルスロスピラ・マキシマ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ ｍａｘｉｍａ））から選択され得る。ある特定の実施形態によれば、微生物は、ＦＤＡによって認定される一般に安全と認められる（一般的に Ｒｅｇａｒｄｅｄ ａｓ Ｓａｆｅ）（ＧＲＡＳ）ステータスを有する生物であってもよい。或いは土壌微生物、好ましくは異なる土壌細菌及び／又は土壌真菌の混合培養物が宿主種として使用され得る。宿主種として使用される土壌微生物は、アルファプロテオバクテリア属種、ベータプロテオバクテリア属種、デルタプロテオバクテリア属種、アクチノバクテリア属種、サーモレオフィラム（Ｔｈｅｒｍｏｌｅｏｐｈｉｌｉａ）属種、ルブロバクター（Ｒｕｂｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）属種、クロラキドバクテリウム（Ｃｈｌｏｒａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属種、アシドバクテリウム（Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属種、又はソリバクター（Ｓｏｌｉｂａｃｔｅｒｅｓ）属種から選択され得る。ある特定の好ましい実施形態によれば、宿主種は、生物防除剤、例えば昆虫病原性生物防除剤（例えば微生物防除剤など、特に、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）又は枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｌｕｓ）などの細菌生物防除剤）、又は真菌生物防除剤（例えば白きょう病菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ）、イサリア・フモソロセア（Ｉｓａｒｉａ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅａ）、レカニニシリウム属種、又はメタリジウム属種など）から選択される。生物防除剤は、或いは、例えばトリコデルマ属種又はアンペロマイセス・クイスクアリス（Ａｍｐｅｌｏｍｙｃｅｓ ｑｕｉｓｑｕａｌｉｓ）から選択され得る。宿主種は、さらに、桿菌種、トリコデルマ種又は菌根（Ｍｙｃｏｒｒｈｙｚａ）種などの微生物の植物成長促進剤から選択され得る。ある特定の高度に好ましい実施形態よれば、宿主種が微生物の昆虫病原性生物防除剤である場合、標的種は、節足動物、好ましくは、植物疾患の拡大に関与する農業害虫節足動物又は節足動物媒介生物から選択される節足動物である。これらの群からの生物の特定の例は、上記に提示されている。

【0053】

説明したように、供給源種ＤＮＡ配列が宿主種細胞中にある実施形態では、供給源種ＤＮＡ配列は、宿主種細胞に導入された人工プラスミド若しくは人工染色体などの複製可能な人工ＤＮＡ構築物に組み込まれるか、又は宿主種細胞の天然のゲノムに組み込まれるかのどちらかである。宿主細胞に導入された人工ＤＮＡ構築物又は宿主細胞の天然のゲノムへの、供給源種ＤＮＡ配列のこの組み込みにより、供給源種ＤＮＡ配列は、宿主種細胞のＤＮＡ複製機構によって宿主種ＤＮＡの複製と一緒に複製され得る。種の阻害ＤＮＡ断片は、（産生）宿主種のＤＮＡに付随した形で提示されるとき、依然として阻害性のままであるという本発明者らの驚くべき発見は、自己阻害ＤＮＡ断片を製造及び提示する新たな可能性を開いた。

【0054】

ＤＮＡ構築物へのＤＮＡ配列の組み込み及び宿主細胞へのＤＮＡ構築物の導入は、生物化学のさまざまな分野で標準的技法になっている。故に当業者は、そのような手順を本発明内で容易に適用することができる。さらに、さまざまな生物がそれらの環境からＤＮＡ分子を取り込むことができ、これらのＤＮＡ分子をそれらの天然のゲノムに組み込むことができることが知られるようになってきた。特に微生物、とりわけ原核生物は天然において、そのような水平遺伝子伝達を起こすことができる。さらに、微粒子銃などのある特定の公知の遺伝子工学手法は、植物細胞などの細胞の天然のゲノムへのＤＮＡ断片の組み込みに頼っている。

【0055】

さらに、転位因子（すなわちトランスポゾン）は、異なる種の細胞間のＤＮＡ転移を促進し得る。

【0056】

ＤＮＡ分子の混合物における供給源種のゲノムのカバレッジが、２０～１００％の間、例えば２０～９０％、３０～１００％、３０～９０％、４０～１００％、４０～９０％、５０～１００％、５０～９０％など、好ましくは６０～１００％、例えば６０～９０％、７０～１００％、７０～９０％、８０～１００％、８０～９０％などであることが好ましい。本発明者らによる実験観察に基づき、これらの範囲内に本発明の組成物中の供給源種ＤＮＡ配列の良好な阻害活性があることが導き出され得る。ＤＮＡ分子の混合物における供給源種ゲノムのカバレッジは、組成物中に存在するＤＮＡ分子全体（集団）の中に存在する供給源種ＤＮＡ配列、特に染色体ＤＮＡ配列のパーセンテージと相関することを当業者は承知し、理解するであろう。全ゲノムの一部が阻害性であることを実験結果が示しているという事実を考えると、同様にゲノムの全ＤＮＡ配列の一部に相当する（断片化）ｃＤＮＡ配列は、それらが由来する種及び系統的に類似の種に対して阻害活性を有することもまた予想され得る。しかし、染色体構造との関連で利用可能な知見に基づき、非コード領域配列により高い種特異性があることが予想され得ることから、供給源種ゲノムが相当量の非コード領域配列を含むならば、供給源種ＤＮＡ配列は、そのような非コード領域配列を含むことが好ましい。これを考慮すると、供給源種ＤＮＡ配列は、ランダムに断片化された染色体ＤＮＡを含むことが好ましい。

【0057】

宿主種細胞において（キメラ）ＤＮＡ分子の供給源種ＤＮＡ配列を複製することにより、供給源種ＤＮＡ配列は、かなりの量の宿主種ＤＮＡ配列及び、おそらくは人工ＤＮＡ構築物由来のかなりの量のＤＮＡ配列に付随することになる。本発明者らは、驚くべきことに、供給源種ＤＮＡ配列が比較的大量のこれらの非供給源種ＤＮＡ配列に付随するとき、供給源種ＤＮＡ配列はその自己阻害性活性を維持することを見出した。故に、宿主種ＤＮＡ配列及び／又は人工構築物由来のＤＮＡ配列の組成物からの排除は必要ない。ある特定の好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、それ故に、非供給源種ＤＮＡが供給源種ＤＮＡを超えている、好ましくは非供給源種ＤＮＡ：供給源種ＤＮＡの比が、１０：１～１０００：１の間、例えば２０：１～５００：１の間、５０：１～５００：１の間、又は１００：１～５００：１の間などであるように、非供給源種ＤＮＡを含む。非供給源種ＤＮＡは、宿主種ＤＮＡ配列及び場合により人工ＤＮＡ構築物由来のＤＮＡ配列（例えば、例えばプラスミド、ＢＡＣ、ＹＡＣ又は人工真菌染色体から選択される、クロ－ニング及び／又は発現ベクターなど）を含み、好ましくは本質的にこれらからなる。

【0058】

供給源種は、好ましくは、そこから由来する阻害ＤＮＡ配列が、上記に論じたように標的種に対して阻害性であるように選択される。ＷＯ２０１４／０２０６２４の公開以降、当業者に明らかなように、阻害ＤＮＡ配列は、標的種自体又は系統的に類似の種に由来してもよい。本発明の文脈では、供給源種は故に、標的種又は標的種に系統的に類似の種から選択されてもよい。

【0059】

本発明の文脈内では、系統的に類似の種は類似のゲノムを有する種である。系統的に密接に関連している種は、系統的に遠い種より類似のゲノムを有することを当業者は理解するであろう。系統的に類似は、故に系統的に近い関係を有することを意味する。系統的類似性は、故に、既知の系統的関係に基づき決定することができる。故に、ある特定の好ましい実施形態によれば、系統的に類似の種は同じ分類学上の目内の種である。ある特定の目内では、系統的に類似の種は、好ましくは同じ単系統群（クレード）由来、例えば同じ科、同じ亜科、同じ族、同じ亜族、同じ属由来などである。系統的に類似の種は、同じ分類学上の科、例えば同じ亜科、同じ族、同じ亜族、同じ属由来であることが最も好ましい。

【0060】

さらに、ゲノム類似性（又は関連性）を決定するための手法は容易に利用可能である。ゲノム類似性は、両方の種由来のゲノムの一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）断片の再生／再会合キネティクスを決定することによって、例えば決定することができる。或いは、又はさらに、両方の種由来のゲノムのｓｓＤＮＡ断片の混合物から再生された二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）断片の変性（融解）が調査されてもよい。後者の手法により、融解温度Ｔ_ｍ、すなわちＤＮＡ鎖の半分がｓｓＤＮＡ状態である温度、及び関連するＴ_５０Ｈの定義が可能になる。再生／変性キネティクス及び融解プロファイルの評価を伴うアプローチは、細菌の関連性を決定するために７０年代初めに導入された（ｄｅ Ｌｅｙら Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７０年１月；１２（１）：１３３～４２頁を参照のこと）が、融解温度プロファイル分析を伴うこれらのアプローチは、真核生物種の関連性を決定するのにも使用されている（例えば、Ｓｉｂｌｅｙ及びＡｈｌｑｕｉｓｔ、Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ（１９８４）２０：２～１５頁を参照のこと）。ＷＯ２０１４／０２０６２４の公開以降さらに知られているように、種の系統的類似性は、１つの種由来の阻害ＤＮＡ断片が別の種に対しても阻害性であるかどうかに基づき決定することができる。ある特定の他の実施形態によれば、系統的に類似の種は故に、抽出された全ＤＮＡのランダム断片化又は全ＤＮＡから始まるランダム断片合成によって得られるＤＮＡが標的種に対して阻害性である種である。この機能定義に基づき、系統発生は、Ｗ０２０１４／０２０６２４に示されているものと類似した試験により、及びこれに添付された実験の中で決定され得ることは当業者に明らかであろう。抽出された全ＤＮＡのランダム断片化又は全ＤＮＡから始まるランダム断片合成によって供給源種から得られるＤＮＡは、標的種に対して阻害となるため、同じ分類学上の目内で供給源種は、同様に標的種に系統的に類似するであろう。

【0061】

本発明の組成物は、標的種を阻害することが意図される。前記標的種は、供給源種と同一であってもよく、又は供給源種と系統的に類似の種であってもよい。標的種の阻害を強化するために、組成物は、いくつかの他の（天然の）殺生物剤、例えば（天然の）駆除剤など、例えば、殺真菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺節足動物剤（ａｒｔｒｏｐｏｃｉｄｅ）、殺菌剤又は殺藻剤の使用と組み合わされてもよい。追加の（天然の）殺生物剤は、生物防除剤、例えば微生物防除剤など、例えば、細菌生物防除剤又は真菌生物防除剤、特に昆虫病原性生物防除剤であってもよい。ある特定の実施形態によれば、追加の（天然の）殺生物剤は組成物中に存在する。追加の（天然の）殺生物剤が、昆虫病原性生物防除剤などの微生物防除剤である場合、微生物防除剤の生存細胞が、供給源種ＤＮＡを含みこれを複製する宿主細胞として機能することが好ましい。例えば、供給源種は、標的種が、特に、例えばコリストネウラ属（特にコリストネウラ・オラエ、コリストネウラ・フミフェラナ、又はコリストネウラ・フレエマニ）などのハマキガ科から選択される、若しくは例えばスポドプテラ属（特にツマジロクサヨトウ、ハスモンヨトウ、エジプトヨトウ、クシナシスジキリヨトウ、又はアメリカハスモンヨトウ）などのヤガ科から選択される、若しくは例えばプロディア属若しくはエフェスチア属などのメイガ科から選択される鱗翅目、又は双翅目、鞘翅目、又は膜翅目から選択され、最も好ましくはコリストネウラ属から選択される、標的種又は標的種に系統的に類似の種から選択され得る。組成物は、次いで、標的種に対する生物防除剤、例えば細菌生物防除剤（例えばバチルス・チューリンゲンシス又は枯草菌）、又は真菌生物防除剤、例えば昆虫病原性真菌（例えば白きょう病菌、イサリア・フモソロセア、レカニニシリウム属種、又はメタリジウム属種など）などをさらに含んでもよい。生物防除剤は、細菌生物防除剤又は真菌生物防除剤の生存バイオマス、好ましくはバチルス・チューリンゲンシスバイオマスであってもよい。バチルス・チューリンゲンシス細胞などの前記生存バイオマスも、次いで複製可能な形態で組み込まれた供給源種ＤＮＡを有することができ、故に宿主種細胞として機能する。

【0062】

組成物は、表面接触、細胞親和性投与、全身投与（例えば、注射、摂取若しくは吸入、又は吸着による）などの任意の適切な手段によって標的種に投与することができる。組成物は、分散液（例えばエアロゾルの形態）、懸濁液、水和剤又は可溶性粉末、水中エマルジョン又は他の溶媒、分散性顆粒、マイクロカプセルの懸濁液、乳剤、流体ペースト、マクロエマルジョン、油分散液、ベイトからなる群において選択される乾燥処理又は液体処理のための形態で製剤化することができる。水、又は天然の深共融溶媒（ＮＡＤＥＳ）系などの深共融溶媒（ＤＥＳ）系を含む溶媒系が使用され得る。

【0063】

本発明の組成物のＤＮＡが標的種に対して阻害性である濃度範囲の決定は、当業者の知識の範囲内である。当業者は、必要とされる濃度が、標的種を阻害する組成物中のＤＮＡの能力、所望の阻害レベル、又は追加の殺生物剤が適用されるか否か、及び／又は標的種への適用経路などの要因に依存し得ることを理解するであろう。多くの適用に対して、適切な濃度は、１～１５００ｐｐｍ、例えば２～１３００ｐｐｍ、２～１０００ｐｐｍ、５～１０００ｐｐｍ、１０～１０００ｐｐｍ、５０～１０００ｐｐｍ、１００～１０００ｐｐｍ、２００～１０００ｐｐｍ、５００～１０００ｐｐｍなどの範囲であってもよい。他の適用に対してより高い濃度が望まれる場合がある。

【0064】

Ｗ０２０１４／０２０６２４から明らかなように、阻害ＤＮＡ断片は医薬において使用されてもよい。中でも、Ｗ０２０１４／０２０６２４は、外耳道真菌症などの感染症を引き起こし得るクロコウジカビの阻害を示している。同様に、ＤＮＡ断片又はその前駆体を含む本発明の組成物は、クロコウジカビ、又は線虫、寄生虫などの他の寄生生物及び／若しくは病原生物を阻害するための医薬において使用することもできる。供給源種ＤＮＡが非断片化形態である場合、消化管などでのインサイチュで断片化形態に変換され得ることから、組成物の医学的用途において、供給源種ＤＮＡは阻害剤又はその前駆体である。本発明のさらなる態様は、それ故に、医薬における使用のための、又は換言すれば医薬品としての使用のための本発明の組成物である。本発明の文脈での医薬用途は、ヒト用医薬及び／又は動物用医薬、好ましくはヒト医薬に関する。本発明の文脈での動物への言及には、それが使用される文脈から異なる意味が次に続かない限り、ヒトへの言及が含まれる。組成物は、病原性生物の拡大及び／若しくは増殖を阻害することができる、又はさらには病原性生物を死滅させるための抗病原性組成物として医薬で例えば使用されてもよい。本発明の組成物を用いて阻害され得る病原性標的生物は、例えば局所病原体、腸内病原体、肺病原体又は全身性病原体である。病原体は、例えば、微生物病原体（例えば、細菌、真菌又はウイルスなどから選択される）、寄生虫（例えば、原生生物などから選択される）、又は蠕虫（例えば、線虫、条虫、吸虫又は回虫）から選択されてもよい。本発明の組成物の医療用途は、本発明の組成物の議論の中で上記に示した病原性及び／又は寄生標的種、特に皮膚、爪又は粘膜と関連した局所病原体及び／又は寄生虫を特に対象にする。医薬品として使用するために、組成物は薬学的に許容される形態にある。

【0065】

本発明のさらなる態様は、標的種を阻害する製品としての本発明の組成物の使用に関する。標的種は供給源種に対応してもよく、又は供給源種と系統的に類似の種である。製品において本発明の組成物は、標的種を阻害するための活性成分として使用され得る。標的種の意図された阻害は、例えば製品の生物学的安全性を改善するために製品中であってもよく、又は或いは標的種の意図された阻害は、標的表面若しくは製品が適用される標的領域であってもよい。製品は、例えば、殺生物剤、除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、殺ダニ剤、殺線虫剤、殺節足動物剤、殺藻剤、殺菌剤から選択されるうちの１つ又は複数を含む、寄生種、病原種及び外部寄生種に対して阻害性のさらなる成分を含むさらなる成分を含んでもよい。製品は、医療製品であってもよく、又は非医療製品であってもよい。ある特定の実施形態によれば、製品は、非医療製品、例えば農学製品、パ－ソナルヘルスケア製品、又は石鹸若しくは洗剤などの衛生製品などである。

【0066】

組成物の使用のある特定の好ましい実施形態では、供給源種ＤＮＡ配列は宿主種細胞中のキメラＤＮＡ分子にあってもよい。一部の適用に関して、宿主種細胞中のキメラＤＮＡ分子を示すことで十分である。その理由は、宿主種細胞がさらされる条件によって、宿主種細胞中のキメラＤＮＡ分子は宿主種細胞から遊離され得るためである。例えば、製品が、宿主種細胞が適切な食料源となる標的種を阻害するための製品である場合、供給源種ＤＮＡ配列を含むキメラＤＮＡ分子が標的種によって食べられるとき、それらは標的種の腸内で宿主種細胞から遊離される。このプロセスにおいて、供給源種ＤＮＡ配列もまたキメラＤＮＡ分子から遊離され得る。また、宿主種細胞の天然の分解プロセスにおいて、宿主種細胞中に含有されるキメラＤＮＡ分子は宿主種細胞から遊離され得、供給源種ＤＮＡ配列は断片化によってキメラＤＮＡ分子から遊離され得る。本発明の代替的な使用において、ＤＮＡを断片化する細胞破壊法などの細胞破壊法によって宿主種細胞が破壊され、破壊された宿主種細胞からの材料が標的種の阻害に使用される。このために、ＤＮＡは、破壊され宿主種細胞から公知の方法で場合により単離されてもよい。或いは、破壊された細胞集団が、ＤＮＡをさらに単離することなく標的種の阻害に使用されてもよい。

【0067】

本発明のさらなる態様は、本発明による組成物を製造する方法に関する。方法は、
－いくつかの宿主種を準備するステップと、
－場合により断片化された供給源種ＤＮＡを含む、供給源種由来のＤＮＡ源を準備するステップと、
－宿主種細胞を、供給源種由来のＤＮＡ源と共に、宿主種細胞が供給源種ＤＮＡを複製可能な形態で取り込み可能な条件に、供するステップと、
－複製可能な形態で供給源種ＤＮＡを含有する宿主種細胞を増殖させるステップと、
－場合により、複製可能な形態で供給源種ＤＮＡを含有する宿主種細胞を単離するステップと、
－場合により、宿主種細胞からＤＮＡ、特に供給源種ＤＮＡを含有するＤＮＡを単離するステップと、
－場合により、宿主種細胞のＤＮＡ、特に供給源種ＤＮＡを含有するＤＮＡを断片化するステップと
を含む。

【0068】

方法の第１のステップでは、宿主種の数が提供される。本発明の組成物と関連して論じられてきたこと、本発明及び利用可能な共通の一般知識の使用に基づき、当業者は適切な宿主種細胞の提供方法を承知し、理解するであろう。

【0069】

第２のステップでは、供給源種由来のＤＮＡの供給源（場合により断片化ＤＮＡを含む）が提供される。供給源種由来のＤＮＡの供給源は、任意の適切な供給源であってもよい。例えば、供給源種の細胞がそれ自体として使用されてもよい。或いは、供給源種細胞から放出されたＤＮＡ、例えばＤＮＡを断片化する細胞破壊法などの細胞破壊法によって破壊された細胞から放出されたＤＮＡが使用されてもよい。放出されたＤＮＡは単離されても又はされなくてもよい。ＤＮＡは断片化されてもされなくてもよい。供給源種から断片化されたＤＮＡはそれ自体として提示されてもよく、又は人工プラスミド、コスミド、人工染色体（例えばＹＡＣ又はＢＡＣ又は真菌人工染色体など）などの人工ＤＮＡ構築物、若しくは転位因子と関連して構築されたキメラＤＮＡ分子に組み込まれてもよい。

【0070】

第３のステップでは、宿主種細胞が供給源種ＤＮＡを複製可能な形態で取り込めるようにする条件に、供給源種由来のＤＮＡの供給源を含む宿主種細胞が供される。供給源種ＤＮＡを複製可能な形態で取り込むことにより、宿主種細胞はそのＤＮＡ複製機構で供給源種ＤＮＡを複製することになる。故に条件は、供給源種ＤＮＡが提供されるとき、複製される宿主種細胞のＤＮＡ複製機構にとって機能的に利用可能なように宿主種細胞に組み込まれるようでなければならない。当業者は、宿主種細胞が供給源種ＤＮＡを複製可能な形態で取り込めるようにするための適切な条件を選択することができるであろう。

【0071】

例えば、供給源種ＤＮＡが、プラスミド、コスミド、人工染色体などの人工ＤＮＡ構築物、又は転位因子に付随している構築されたキメラＤＮＡ分子に組み込まれて提供される場合、これらの人工ＤＮＡ構築物が効果的に複製され得るようにそれらを効果的に取り込むために宿主種細胞を競合させる条件づけの方法を当業者は承知しているであろう。

【0072】

供給源種ＤＮＡが供給源種の細胞として提供される場合、当業者には、必要とされる条件は、供給源種細胞が供給源種ＤＮＡを放出し、供給源種ＤＮＡが断片化されることを可能にしなければならないことがわかるであろう。リター分解の過程では、条件は、リター中の植物材料由来のＤＮＡが土壌マイクロバイオームに移動できるようなものになることが見出されている。これらの知見に基づき当業者は、リター又は類似の分解生体物質に含まれる非植物供給源由来のＤＮＡも、土壌マイクロバイオーム（ｍｉｃｏｂｉｏｍｅ）に組み込まれ得ることを予想するであろう。適切な条件は、故に、特に宿主種が、アルファプロテオバクテリア属種、ベータプロテオバクテリア属種、デルタプロテオバクテリア属種、アクチノバクテリア属種、サーモレオフィラム属種、ルブロバクター属種、クロラキドバクテリウム属種、アシドバクテリウム属種、又はソリバクター属種などから選択される土壌微生物であるリター分解の条件であり得る。

【0073】

供給源種ＤＮＡが供給源種細胞から放出されるＤＮＡとして提供される場合、当業者には、放出される供給源ＤＮＡが宿主種の適切な細胞によって、又は微粒子銃（又は遺伝子ショットガン）などの強制された方法により天然のプロセスで取り込まれ得ることがわかるであろう。

【0074】

第４、ステップは任意選択であり、宿主種細胞を単離するステップを含む。例を含む本明細書の全体から、当業者は、宿主種細胞の単離が全ての適用に必要とされるわけではないことを理解するであろう。宿主種細胞の単離が必要とされる又は望まれる場合、当業者は、宿主種細胞を単離するための適切な手法について知識を有するであろう。

【0075】

第５、ステップは同様に任意選択であり、宿主種細胞からＤＮＡを単離するステップを含む。例を含む本明細書の全体から、当業者は、宿主種細胞からのＤＮＡの単離が全ての適用に必要とされるわけではないことを理解するであろう。宿主種細胞からのＤＮＡの単離が必要とされる又は望まれる場合、当業者は、宿主種細胞からＤＮＡを単離するための適切な手法について知識を有するであろう。

【0076】

第６、ステップはさらなる任意選択のステップであり、宿主種細胞のＤＮＡを断片化するステップを含む。例を含む本明細書の全体から、当業者は、宿主種細胞からのＤＮＡの断片化が全ての適用に必要とされるわけではないことを理解するであろう。宿主種ＤＮＡの断片化が必要とされる又は望まれる場合、当業者は、宿主種細胞からＤＮＡを断片化するための適切な手法について知識を有するであろう。宿主種細胞由来のＤＮＡが断片化される場合、キメラＤＮＡ分子が断片化されることが好ましい。ランダム断片化法によるＤＮＡ断片化が好ましくは使用される。

【0077】

本発明はこれより、以下の非限定的な実験によってさらに例示される。

【実施例】

【0078】

（実験１）
シロイヌナズナライブラリー
シロイヌナズナの市販の微生物ゲノムライブラリーをＴＡＩＲ（ｈｔｔｐｓ／／ｗｗｗ．ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ｏｒｇ／）から購入し、酵母及び大腸菌の両方で操作した。

【0079】

ＹＡＣライブラリーＣＤ４－２１Ｐは、ｐＹＡＣ４ベクターでのプール酵母人工染色体（ＹＡＣ）ゲノムライブラリーであった；コロンビア（Ｃｏｌｕｍｂｉａ）植物の核から単離されたＤＮＡ；元のライブラリーは１，１５２個のクローンからなった；平均インサートサイズ＝４２０ｋｂ；クローンの２１％が葉緑体ＤＮＡを有する；ライブラリーは８１個のプールからなる；クロ－ニング酵素：ＥｃｏＲＩ及びＥｃｏＲＩからなる。

【0080】

ＰＯＣＡ１８－ｈｙｇベクター中のＢＡＣライブラリーＣＤ４－２１Ｐバイナリーコスミドゲノムライブラリー； ＴａｑＩによる部分消化によって作製されたＷａｓｓｉｌｅｗｓｋｉｊａ（Ｗｓ）ゲノムＤＮＡ断片から生成；１０ゲノム当量に相当；ベクターはＣａＭＶ３５Ｓプロモーターの制御下でハイグロマイシン耐性遺伝子を有する；クロ－ニング酵素：ＣｌａＩ及びＣｌａＩ。

【0081】

各ライブラリーを使用して、次のように調製された微生物溶液を得た：
ＹＡＣライブラリーＣＤ４－２１Ｐ：
ライブラリーの８０ストックの各々を、ＹＰＤ培地（１％酵母抽出物、２％バクトペプトン、１％グルコース）を含有するチューブに接種し、２８℃で４８時間インキュベートした。インキュベーション後、チューブをプールし、細胞懸濁液を遠心分離し（４０００ｒｐｍ、５分）、１０ｍｌ ＮａＣｌ ０．９％（プール酵母懸濁液）に再懸濁した。次いで、プールＹＡＣ培養を、ＹＰＤ培地１Ｌを含有するベンチ撹拌リアクター（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）で２８℃、２００ｒｐｍ、１ｖｖｍ通気速度で行った。リアクターにプール酵母懸濁液の適当なアリコートを接種して、最初のＯ．Ｄ．５９０＝０．１を得た。４８時間後、酵母バイオマスを回収し、洗浄し、蒸留水に再懸濁して１ｍｌあたり５０ｍｇ細胞乾燥重量の最終濃度を得た。

【0082】

対照として使用する酵母細胞については同じ手順に従ったが、リアクターの接種材料として、ＹＰＤ培地での出芽酵母ＣＥＮ．ＰＫ１１３－７Ｄ株の前培養物を使用した。この場合もまた、製造されたバイオマスを回収し、洗浄し、上記に報告した同じ細胞密度まで蒸留水に再懸濁した。

【0083】

ＢＡＣライブラリーＣＤ４－２１Ｐ：
ライブラリーの８０ストックの各々を、５０ｍｇｍｌ^－１ハイグロマイシン（ｈｙｇｒｏｍｉｃｉｎ）を含むＴｒｙｐｔｏｎｅ Ｓｏｙａブロス（ＴＳＢ）を含有するチューブに接種し、３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベーション後、チューブをプールし、細胞懸濁液を遠心分離し（１０，０００ｒｐｍ、１０分）、１０ｍｌ ＮａＣｌ ０．９％（プール細菌懸濁液）に再懸濁した。次いで、細菌ライブラリーの培養を、ハイグロマイシンを含むＴＳＢ培地１Ｌを含有するベンチ撹拌リアクター（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）で３７℃、２００ｒｐｍ、１ｖｖｍ通気速度で行った。リアクターにプール細菌懸濁液の適当なアリコートを接種して、最初のＯ．Ｄ．５９０＝０．０１を得た。４８時間後、細菌バイオマスを回収し、洗浄し、蒸留水に再懸濁して１ｍｌあたり５０ｍｇ細胞乾燥重量の細胞密度を得た。

【0084】

対照として使用する細菌細胞については同じ手順に従ったが、リアクターの接種材料として、ＴＳＢでの大腸菌ＡＴＣＣ １０５３６の前培養物を使用した。この場合もまた、製造されたバイオマスを回収し、洗浄し、上記に報告した同じ細胞密度まで蒸留水に再懸濁した。

【0085】

阻害試験
２つのライブラリーの微生物溶液を超音波処理し、得られた細胞ホモジネートを、蒸留水を添加して水分蒸発を補充しながら、好気条件下、室温で１５日間インキュベートした。ホモジネートの異なるアリコートを蒸留水で１：１、１：１０、及び１：１００希釈し、濃度レベルごとに１０個の植物を含む３個の反復試料でペトリ皿の濾紙を湿らせるのに使用した。シロイヌナズナの実生は、濾紙に標準的な栄養溶液を含むペトリ皿で種子を発芽させて準備した。少なくとも１週齢の類似したサイズの健康な実生を阻害試験に使用するために選択した。実験は、ペトリ皿で種々の溶液に実生を曝露して行った（１皿あたり１０種子、１処理あたり１０皿）。対照は、実験期間中蒸留水のみで維持した実生によって評価した。処理は、ライブラリー、又はゲノムライブラリーがない対応する微生物溶液のどちらかに曝露させるものであった。実生の生存率を、生きている植物の数を数えて１０日後に評価した。実験は、最適なレベルの温度及び空気湿度で維持したグロースチャンバーで行った。

【0086】

結果
阻害試験の結果は、シロイヌナズナのゲノムの微生物ライブラリー（ＢＡＣ及びＹＡＣ）を試験することにより、同種の実生生存率に対する異種及び自己ＤＮＡの混合物による阻害効果を実証するものであった。実際に、実生生存率は、蒸留水で処理した対照、及び異種ＤＮＡを含むが自己ＤＮＡゲノムライブラリーを含まない対応する微生物溶液の両方と比べて、ゲノム自己ＤＮＡのＹＡＣ及びＢＡＣライブラリーへの曝露下で有意に低かった（図１）。このパタ－ンは、処理希釈の３つのレベルにわたって一致していた。さらに、異種ＤＮＡを含有するが自己ＤＮＡを含有しない処理は、実生生存率に概ね影響を与えず、最高濃度レベルで非特異的阻害効果を示した出芽酵母材料を除いて、対照の実生生存率と変わらなかった。

【0087】

（実験２）
ショクヨウガヤツリライブラリー
ショクヨウガヤツリのゲノムＢＡＣライブラリーは、ベクターｐＳｍａｒｔ－ＨｉｎｄＩＩＩ（クロラムフェニコール耐性）を使用して大腸菌ＥＰＩ３００でＢｉｏ Ｓ＆Ｔ（モントリオール、カナダ）によって構築した。合計１１，８０８クローン（＞２×ゲノムカバレッジ）に対して各ウェルが１２３個の一次クローンを含有する１×９６ウェルプレートにライブラリーをプールした。平均インサートサイズ（１１０Ｋｂ）を、ＮｏｔＩで消化した試験ランダムクローンを使用して決定した。ライブラリーを－８０℃で保存した。

【0088】

ライブラリーを使用して、次のように調製された微生物溶液を得た：
増幅のために、クロラムフェニコールを１２．５ｍｇ／Ｌで含むＴｒｙｐｔｏｎｅ Ｓｏｙａブロス（ＴＳＢ）を含有するチューブ中の凍結ストックから各ウェルに接種し、３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベーション後、９６チューブをプールし、細胞懸濁液を遠心分離し（１０，０００ｒｐｍ、１０分）、１０ｍｌ ＮａＣｌ ０．９％（プール細菌懸濁液）に再懸濁した。次いで、細菌ライブラリーの培養を、クロラムフェニコールを含むＴＳＢ培地１Ｌを含有するベンチ撹拌リアクター（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）で３７℃、２００ｒｐｍ、１ｖｖｍ通気速度で行った。リアクターにプール細菌懸濁液の適当なアリコートを接種して、最初のＯ．Ｄ．５９０＝０．０１を得た。４８時間後、細菌のバイオマスを回収し、洗浄し、蒸留水に再懸濁して１ｍｌあたり５０ｍｇ細胞乾燥重量の細胞密度を得た。

【0089】

対照として使用する細菌細胞については同じ手順に従ったが、リアクターの接種材料としてＴＳＢでの大腸菌ＥＰＩ３００の前培養物を使用した。この場合もまた、製造されたバイオマスを回収し、洗浄し、上記に報告した同じ細胞密度まで蒸留水に再懸濁した。

【0090】

阻害試験
微生物溶液を超音波処理し、得られた細胞ホモジネートを、蒸留水を添加して水分蒸発を補充しながら、好気条件下、室温で１５日間インキュベートした。次いで、ホモジネートの異なるアリコートを、植物成長用の２つの異なる基質（ケイ砂及び標準的な培養土）の各々で１：１０及び１：１００ｖ／ｖ希釈した。ショクヨウガヤツリの実生は、濾紙に標準的な栄養溶液を含むペトリ皿で種子を発芽させて準備した。少なくとも１０日齢の類似したサイズの健康な実生を阻害試験に使用するために選択した。実験は、１５ｍＬ容量の小型のプラスチックポットで異なる基質混合物に実生を曝露して行った（１ポットあたり１実生、１処理あたり２０ポット）。処理には、基質タイプ（２水準、砂又は培養土のどちらか）、大腸菌材料タイプ（２水準、ＢＡＣライブラリー有り又は無しのどちらか）、及び溶液濃度（２水準、１：１０又は１：１００のどちらか）の階乗の組み合わせが含まれた。非混合基質を含有するポットを対照と見なした（基質タイプごとに１０ポット）。管理条件（２２／１６℃の昼／夜Ｔ、光周期１６：８時間、周囲空気湿度、ポットの圃場容水量まで毎日散水）で成長させたショクヨウガヤツリを、植物材料の破壊的サンプリングと、その後のオーブン乾燥（６０℃×４８時間）及び総バイオマスの秤量によって、実生の鉢植えから１０日で評価した。

【0091】

結果
結果は、同種の実生成長に対するショクヨウガヤツリのＢＡＣゲノムライブラリーの阻害効果を実証するものであった。実際に、実生バイオマスは、蒸留水で処理した対照、及び異種ＤＮＡを含むが自己ＤＮＡゲノムライブラリーを含まない対応する微生物材料の両方と比べて、ゲノム自己ＤＮＡのＢＡＣライブラリーへの曝露下で有意に低かった（図２）。阻害効果は用量依存的であり、２つのレベルの処理濃度にわたって一致していた。異種ＤＮＡを含有するが自己ＤＮＡを含有しない処理は、実生成長に影響を与えず、対照の実生成長と変わらなかった。

【0092】

（実験３）
カエノラブディティス・エレガンスライブラリー
カエノラブディティス・エレガンスのフォスミドライブラリーをＳｏｕｒｃｅ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｏｕｒｃｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ｃｏｍ／）で購入した（市販）。ライブラリーには、合計１５，７４４クローンを含む４１×３８４プレートが含まれた。大きなインサート（平均サイズ４３．３ｋｂ）ライブラリーを、フォスミドＣｏｐｙＣｏｎｔｒｏｌベクターｐＣＣ１ＦＯＳ（クロラムフェニコール耐性）を使用して大腸菌ＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒで構築した。

【0093】

２つの大腸菌株を使用した：ＯＰ５０及びＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒ。大腸菌株はＬＢ増殖培地で増殖させた。必要な場合、１２．５μｇ／ｍｌの最終濃度のクロラムフェニコール、及び０．０１％重量／容量の最終濃度のアラビノースを増殖培地に添加した。カエノラブディティス・エレガンス株は野生型Ｂｒｉｓｔｏｌ（Ｎ２）であった。カエノラブディティス・エレガンス株を、食料源として大腸菌ＯＰ５０を塗布したＮＧＭ寒天プレート（アラビノースを含まない）で２０℃で維持した。大腸菌ＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒ及びｐＣＣ１ＦＯＳベースのライブラリーで形質転換したＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを、指定されたようにＮＧＭプレート（アラビノースを含む）で食料源として使用した。

【0094】

フォスミド増幅に関して、３８４ライブラリークローンを含有する各マイクロタイタープレートに、クロラムフェニコールを含有するＬＢ寒天プレート（１５０ｍｍペトリ皿）の凍結ストックから接種した。得られた４１プレートを３７℃で一晩インキュベートした。インキュベーション後、クロラムフェニコールを含有するＬＢブロス１２ｍｌに細菌を回収し、スパチュラを用いて各プレートに塗布した。得られた細菌混合物を１５ｍｌ培養チューブ（４１チューブ）に移した。クロラムフェニコール及びアラビノースを含有する４ｍｌ ＬＢブロスに１００μｌを接種し、３７℃で一晩インキュベートした（４１チューブ）。翌日、細菌培養物１００μｌを、クロラムフェニコール及びアラビノースを含有する２ｍｌ ＬＢブロスに移し、３７℃で一晩インキュベートした（４１チューブ）。

【0095】

阻害試験
得られた４１個の細菌培養物をプールし、これらのプールした細菌２０μｌを、アラビノースを含有する各ＮＧＭプレート（３５ｍｍ）で使用した。非形質転換大腸菌ＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを陰性対照として使用した。この場合、フォスミド増幅に関して従った同じ手順で細菌を増殖させたが、クロラムフェニコールは除外した。世代Ｉスクリーニングのために、単一のＬ４期カエノラブディティス・エレガンスワームを、アラビノースを含有する各ＮＧＭプレートに移し、細菌を接種し、２０℃で維持した。このワームを１２時間ごとに新鮮な同一のプレートに移して卵全ての産卵を可能にした（３日間）。

【0096】

以下のパラメーターをモニターした：胚致死（産みつけられた卵に対する生存不能な卵の比）及び異常な表現型（孵化卵に対する異常な表現型の比）。同じパラメーターを世代ＩＩスクリーニングについてもモニターした。世代ＩＩスクリーニングのために、世代Ｉからの単一の欠損していないＬ４期カエノラブディティス・エレガンスワームを、アラビノースを含有する各ＮＧＭプレートに移し、細菌を接種し、世代Ｉスクリーニングについて上記に記載したように処理した。

【0097】

カエノラブディティス・エレガンスゲノムの一部による阻害も試験した。これに関して、カエノラブディティス・エレガンスライブラリーのクローンＡ０１（ＷＲＭ０６１０ａＡ０１）（染色体Ｉ；クローン開始：１３２４９８６３～クローン終わり：１３２８７５４３［サイズ３７６８０］）、カエノラブディティス・エレガンスライブラリーのクローンＢ０１（ＷＲＭ０６１０ｃＡ０２）（染色体Ｘ；クローン開始：１２６７１８４２～クローン終わり：１２７０５８４０［サイズ３３９９８］）、並びにクローンＡＯ１及びクローンＢＯ１の組み合わせをワームに与えた。胚致死（産みつけられた卵に対する生存不能な卵の比）及び異常な表現型（孵化卵に対する異常な表現型の比）を第一世代子孫で試験した。

【0098】

結果
該実験では、カエノラブディティス・エレガンスフォスミドライブラリー全体を含有するＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを餌にした１１ワーム、及び非形質転換ＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを餌にした１２ワームを世代Ｉスクリーニングで分析した（それぞれ２５７４及び３０５５卵）。カエノラブディティス・エレガンスフォスミドライブラリー全体を含有するＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを餌にしたワームは、ＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを餌にしたワームとは有意に異なる胚致死の増加を示した（それぞれ３．８５％及び０．８２％、ｐ＜０．０００１）。孵化卵に対するオスの比は、両方の子孫でオスがいなかったため処理間で変わらなかった。ＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを餌にしたワームと比べて、有意により高頻度（６．３２％）の発育異常が、カエノラブディティス・エレガンスフォスミドライブラリー全体を含有するＥＰＩ３００－Ｔ１Ｒを餌にしたワームの子孫で観察された（ｐ＜０．０００１、図３）。

【0099】

特に、カエノラブディティス・エレガンスフォスミドライブラリー全体による負の効果は、世代Ｉと比べて世代ＩＩで悪化した（図３）。

【0100】

ゲノムの一部による阻害の結果を以下の表２に示す。

【表2】

【0101】

結果は、ゲノムのほんの一部により、胚致死及び異常な表現型の出現の両方に対する有意な効果がもたらされることを示している。組み合わせたクローンは増大効果（付加効果より高い）をもたらす。さらなるクローンと組み合わせることにより、阻害効果は累増し得ることが予想され得る。

【0102】

（実施例４）
エジプトヨトウライブラリー
エジプトヨトウ（コットンリーフワーム）のゲノムＢＡＣライブラリーは、実験室で成長させたエジプトヨトウ幼虫から高分子量ゲノムＤＮＡを抽出及び消化（制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩ）後に、大腸菌ＤＨ１０ＢでベクターＣｏｐｙ対照ｐＣＣ１ＢＡＣＨ（ＢａｍＨ Ｉ Ｈｉｎｄ ＩＩＩ、ＥｃｏＲ Ｉ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｒｅａｄｙ Ｖｅｃｔｏｒ－８１２８ｂｐ）を使用してＨｉｎｄ ＩＩＩ部位に構築し、次いで凍結した。クローンを、ルリアベルターニ（ＬＢ）＋クロラムフェニコール固体基質を含有するプレートで増殖させ、選択した。クローンをスクリーニングし、採取し、発現を高コピー数に誘導し、次いで９６ディープウェルプレートのウェルに移した。各ウェルは２９０個の一次クローンを含有した（合計２７，８４０クローン）（＞１０×ゲノムカバレッジ）。平均インサートサイズ（１３２Ｋｂ）を、ＮｏｔＩで消化した試験ランダムクローンを使用して決定した。空ベクター対照も調製し、ライブラリーベクターの同じ条件で増殖させた。ライブラリー及び空ベクターを－８０℃で保存した。

【0103】

ライブラリーを使用して、プラスミドＤＮＡを次のように製造した：単一滅菌爪楊枝を各単一ウェル培養物に浸し、濡らし、次いでクロラムフェニコール（１２．５μｇ／ｍｌ）を含むＬＢ１ｍｌを含有する２ｍＬ微量遠心分離チューブに移し、接種に使用した。接種したら、微量遠心管培養物を３７℃、軌道撹拌で一晩インキュベートした。９６個のスターター培養物全て（９６ｍｌ）を一緒にプールして、ライブラリー全体を代表するスターター接種材料を得た。クロラムフェニコールを含むＬＢ １０リットルを調製し、ガラス三角フラスコに分け、滅菌した。各基質レシピエントにスターター接種材料を接種し、３７℃、軌道撹拌で一晩インキュベートした。

【0104】

プラスミドＤＮＡをライブラリー及び空ベクター対照の両方から抽出するために、ＱＩＡＧＥＮ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｇｉｇａ Ｋｉｔを製造者の説明書に従って使用した。
得られたＤＮＡ濃度は、ライブラリーが６８８ｎｇ／μｌ、約８００μｌ容量（総収量ＤＮＡ＝５５０μｇ）、空ベクターが２６８ｎｇ／μｌであった。

【0105】

阻害試験
３齢期のエジプトヨトウの幼虫を、１５ｃｍペトリ皿で管理条件（Ｔ２２～２４℃、光周期１６：８時間）で維持し、以前に記載されているように給餌した（Ｂｅｒｇｏｍａｚ及びＢｏｐｐｒｅ、１９８６）。処理には、Ｍａｚｚｏｌｅｎｉら（２０１５ｂ）に記載されている抽出及び超音波処理によってサケ（タイセイヨウサケ（Ｓａｌｍｏ ｓａｌａｒ））及びエジプトヨトウから得られたＤＮＡ断片、並びに上記に記載のＢＡＣライブラリーからの抽出によって得られた自己及び異種ＤＮＡの混合物の溶液が含まれた。

【0106】

３つの処理溶液の各々をＤＮＡ濃度２００ｎｇ／μｌで希釈し、各溶液４ｍＬを幼虫の毎日の食餌に含めた。処理ごとに２０個の反復試料（ペトリ皿、それぞれが３０匹の幼虫を含む）を、成長実験の開始以降、管理条件で２０日間維持した。対照反復試料（Ｎ＝１０）も同じ条件で維持し、標準的な未処理食を給餌した。全ての処理に関する幼虫の生存を２０日成長期間の終わりに評価した。

【0107】

結果
実験４の試験の結果は、エジプトヨトウ幼虫の生存が、給餌ペレット中の異種ＤＮＡ（すなわち、ＢＡＣライブラリーベクターとして使用した微生物株のＤＮＡ）の存在下及び非存在下の両方で、摂取による自己ＤＮＡへの曝露によって有意に影響されることを示した。実際に、これら２つの場合、５％及び０％の生存率が２０日後に観察された（図４）。逆に、異種ＤＮＡ（すなわちサケＤＮＡ）のみを含有する給餌ペレットの場合、未処理対照と比べて有意な生存低下は観察されず、異種ＤＮＡ単独は幼虫に対する阻害効果を誘導しないことを示した（図４）。

【0108】

（実施例５）
確認実験では、異種ＤＮＡ（例えば、ＤＮＡ増幅に使用した宿主生物のＤＮＡ）に付随した形で提示される場合、断片化自己ＤＮＡはある生物種の個体に対して阻害性であるという上記の実験の知見をさらに確認するために、キイロショウジョウバエの適切な食料源である酵母での増幅で得られた自己ＤＮＡによるキイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）の阻害を試験した。

【0109】

自己ＤＮＡ増幅
キイロショウジョウバエの培養を標準的な飼育方法で得た。キイロショウジョウバエＤＮＡの断片を含有する酵母細胞をＢｉｏ Ｓ＆Ｔ（モントリオール、カナダ）で操作した。キイロショウジョウバエの個体から単離したこの全ＤＮＡについて、Ｓａｕ３ ＡＩを使用して培養物を部分的に消化した。消化ＤＮＡ断片を、ＢａｍＨＩクロ－ニング部位を使用してｐＧＡＤＴ７ベクターにクローニングした。大腸菌ＤＨ１０Ｂ宿主細胞を、クローンニングしたキイロショウジョウバエ断片を含有するｐＧＡＤＴ７ベクターで形質転換し、得られたライブラリーを一晩培養して寒天培地で増幅した。約１２０，０００個のオリジナルのクローンを、半固体培地で大きなペトリ皿（合計１０皿）にプレーティングした。次いでコロニーを洗浄し、１０チューブに回収した。マキシプレップを行ってライブラリーＤＮＡを単離した。

【0110】

大腸菌ライブラリーからの単離ＤＮＡを、次いで出芽酵母Ｙ１８７宿主細胞を形質転換するのに使用した。ライブラリーを一晩培養して寒天培地で増幅し、大きなペトリ皿（合計１０皿）あたり約１２０，０００個のオリジナルのクローンを半固体培地にプレーティングする。次いでコロニーを洗浄し、１０チューブに回収する。インサートサイズの決定は、ゲルクロマトグラフィーによって１０個のランダムに選択したクローンで行い、１～６ｋｂの範囲で４ｋの平均サイズを示した。

【0111】

阻害試験
酵母ライブラリーを、孵化から蛹期までショウジョウバエの標準的な給餌食（Ｓａｎｇ（１９７８））の成分として使用した。処理は、以下からなった：自己ＤＮＡ処理：酵母ライブラリーを給餌；対照１：対照としてのベクターを含まない同じ酵母株を給餌；対照２：空ベクターを含む同じ酵母株を給餌。結果を以下の表３に示す。

【表3】

【0112】

結果は、ショウジョウバエ ＤＮＡを含有する酵母ライブラリーを給餌した幼虫に対する有意な阻害を示した。発育時間の有意な延長（対照の２倍の時間）及び死亡率（３齢期で４０％、及び蛹の８３％）が幼虫の成長中に観察された。標準食を用いた対照１と空ライブラリーベクターを含む酵母を用いた対照２の間に差は観察されず、故に阻害（ライフステージ持続時間及び死亡率のレベルで決定された）は、酵母ライブラリーへのショウジョウバエＤＮＡ挿入によるものであったことを実証した。

【0113】

（実施例６）
アレッポマツ（Ｐｉｎｕｓ ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）及びセイヨウハコヤナギ（Ｐｏｐｕｌｕｓ ｎｉｇｒａ）の阻害
宿主生物で複製される人工ＤＮＡ構築物に組み込まれた自己ＤＮＡ断片（の一部）による標的種の有効な阻害に基づき、宿主種の天然のゲノムに組み込まれた自己ＤＮＡは、標的種の阻害において同様に有効であることが予想され得る。水平遺伝子伝達は、土壌マイクロバイオームを含む自然界では広く生じることが知られている。

【0114】

この実験土壌微生物において、宿主種の天然のゲノムに組み込まれた自己ＤＮＡによる標的種の阻害を確認するために、２つの異なるリター材料（アレッポマツ及びセイヨウハコヤナギの葉）に、２つの種が存在しないオーク林の土壌からの土壌微生物を接種した。Ｍａｚｚｏｌｅｎｉら ２０１５のように、分解リターを阻害試験に使用した。同種阻害を示す分解リター材料をマイクロバイオームＤＮＡのメタゲノミクス解析に使用して、土壌マイクロバイオームＤＮＡへの植物ＤＮＡの組み込みを確認した。

【0115】

詳細には、アレッポマツ及びセイヨウハコヤナギの新鮮な葉をフィールドから回収し、分解実験において以下の方法で使用した。ランダムに選択した植物（ｎ＞２０）の下にネットを置き、落葉したばかりの葉を自然群落で回収し、換気チャンバーで一定の重量に達するまで室温で乾燥させ、次いで室温で保存した。分解実験は、最適な水利用条件及び温度条件でのグロースチャンバーで実施した。リターに７日ごとに保水容量まで蒸留水で散水し、温度は夜間１８±２℃、日中２４±２℃であった。乾燥葉リター（３個の反復試料で各種１００ｇ）をプラスチックトレー（サイズ３０×５０×５０ｃｍ）の中に置いた。Ｂｏｎａｎｏｍｉら（２０１１）に従って、２つの種が存在しないオーク林から回収した微生物接種材料を調製し、区分した。接種１２０日後にリターを回収し、紙袋の中で乾燥させた（一定の重量に達するまで４０℃で）。

【0116】

分解リター材料の種特異的阻害効果を確認するために、バイオアッセイ試験を次のように行った： ８ｃｍ幅の滅菌濾紙ストリップを四角いペトリ皿（サイズ１２×１２×１．５ｃｍ）に置いた。各種の発芽前種子（皿ごとに５個）を、異なる分解リター材料で予め修正した紙ストリップの一番上に置いた。根の観察プレートを４５°で置き、不透明シートで覆った。根の長さを２８日後に評価した。

【0117】

微生物集団を分解材料から分離するために、リター試料１ｇを５ｍｌチューブに入れた。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）３ｍｌを各試料に添加した。試料を６０秒間ボルテックスしてホモジナイズし、その後１００００ｒｐｍで１分間遠心分離して、微生物細胞をリター残渣から分離した。遠心分離後、分離した微生物細胞の上清（ｓｕｒｐｅｒｎａｔａｎｔｓ）を新たな２ｍｌチューブに移した。プール段階後、ＣＴＡＢ法によって微生物細胞からＤＮＡを抽出した。抽出ステップの終わりに、試料をポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）で処理して、ＰＣＲに対する阻害の可能性を回避するためにフェノールを除去した。抽出ＤＮＡをエタノールでさらに精製し、次いで微生物学的層流空気流チャンバーで乾燥させ、ヌクレアーゼフリーＰＣＲグレード水で溶出した。

【0118】

分解リターのメタゲノミクス解析を、標準的なショットガンシーケンシング法によって行った。メタゲノミクスからのペアエンドリードを、次いで、以下に記載するバイオインフォマティクス手順に従って解析して、微生物種、及び分解リターの植物種由来のＤＮＡの両方に属する組換え断片を見出した。

【0119】

上述の植物及び対応するマイクロバイオームの種の両方に属する可能性のある組換えＤＮＡ断片を見出すために、以下の手順に従った。ＢＢｍａｐのＢＢｍｅｒｇｅ機能（Ｂｕｓｈｎｅｌｌ（２０１６））を使用し、ｋｍｅｒオプションを適用して偽陽性を低減し（ｅｘｔｅｎｄ２＝２０、ｉｔｅｒａｔｉｏｎ＝５）、メタゲノミクス実験からのペアエンドリードを統合した。統合されなかったペアエンドは、ＢＢｍａｐ のｆｕｓｅ．ｓｈ機能（Ｂｕｓｈｎｅｌｌ ２０１６）を使用して、フォワードリードとリバースリードの間に０Ｎを挿入して融合する。次いで、統合及び融合リードを、ＢＬＡＳＴｎ（Ｃａｍａｃｈｏら ２００９）を使用して、宿主参照ゲノム又はゲノムが利用できない場合は関連する種に対して整列させた。以下の参照ゲノムを使用した：テーダマツ（Ｐｉｎｕｓ ｔａｅｄａ）（１７６０４６４スキャフォールド、約２２ＧＢ）及びコットンウッド（Ｐｏｐｕｌｕｓ ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ）（１６９４スキャフォールド、約５００ＭＢ）。宿主ゲノムとの少なくとも１つのヒットがあった全てのリードを一致と見なした。参照種との一致を確認するために、ＢＬＡＳＴｎ（Ｃａｍａｃｈｏら ２００９）を使用して、宿主ゲノムと一致するリードをＮＣＢＩの非重複データベースに対して独立に整列させた。

【0120】

結果
バイオアッセイ実験は、アレッポマツ及びセイヨウハコヤナギの分解リターの種特異的阻害効果を確認した。アレッポマツの発芽種子の根の成長は、セイヨウハコヤナギのリターでの成長と比べて自身のリターでは５０％少なかった。セイヨウハコヤナギの根の成長は、アレッポマツのリターと比べて自身の分解リターでは７０％少なかった。

【0121】

分解リターのメタゲノミクスデータの解析は、植物種と微生物の間のいくつかの組換えＤＮＡ断片が存在することを明らかに示した。４４，４３１，５３２個の統合リードからスタートし、１０８，２８８個のリードがテーダマツゲノムスキャフォールドと一致した。次いで１０８，２８８個のリードを、ＮＣＢＩヌクレオチドデータベース（ＮＴ）に対して比較し、１００％のリードで４１，５３３個の固有ＩＤとの少なくとも１つの一致がＮＴデータベースで見出された。本発明者らは、固有ＩＤのうち１０，０００個のＩＤのランダムサブセットを選択して、詳細な分類群アノテーションを得た。一致配列（１０８，２８８個）の総数から、２９，１４９配列のサブセットについてアノテーションを確認し、４，５９５配列がＮＴのテーダマツ配列と一致することが確認された。これらの４，５９５配列のうち、１，３５９配列はカバレッジが８０％より低かった。これは、該配列がマツと微生物種の間の組換え配列として見なされ得ることを意味する。マツのリター中の微生物によるマツゲノム取り込みの特異性を確認するために、コットンウッドとの一致もチェックし、１３９配列のみが見出された。類似の結果は、セイヨウハコヤナギのリターの場合で見出される。アノテーション結果を表４及び５に要約する。

【0122】

ショットガンアプローチによる提示された解析は、分解植物リターの参照ゲノムと部分的に類似する断片のメタゲノミクスデータにおける濃縮を明らかに確認するものである。換言すると、結果は、リター基質由来のＤＮＡ断片が特異的に含まれ、それにより、阻害効果を示す植物を特徴とするマイクロバイオームが生じることを示している。

【0123】

【表4】

【表5】

【0124】

これらの注目すべき発見を確認するために、実験を繰り返し、解析を拡大した。葉の回収、リターの製造、及び材料の取り扱いは、上記に記載した通りであった。リター材料をインキュベートし、１２０日間最適条件で分解し、３０日後及び実験の終わりに試料を回収した。３０日間及び１２０日間の新鮮なリター及び分解材料を、Ｍａｚｚｏｌｅｎｉら（２０１５）によって記載されている標準的な市販のキットを用いたＤＮＡ抽出に使用し、抽出したＤＮＡを解析した。本発明者らは、宿主植物種（マツ属及びポプラ属）からのリター（分解０、３０、１２０日）でショットガンシーケンスアプローチから得られたリードを、示された参照ゲノムに対して比較した。

【0125】

生物情報学的解析を以下の手順に従って行った：
ＢＢｍａｐのＢＢｍｅｒｇｅ機能（Ｂｕｓｈｎｅｌｌ（２０１６））を使用し、ｋｍｅｒオプションを適用して偽陽性を低減し（ｅｘｔｅｎｄ２＝２０、ｉｔｅｒａｔｉｏｎ＝５）、メタゲノミクス実験からのペアエンドリードを統合する。

【0126】

次いで、ＢＬＡＳＴｎ（Ｃａｍａｃｈｏら（２００９））を使用して、統合リードを宿主ゲノムに対して整列させた。少なくとも１つのヒットを有する全てのリードを、一致を有するリード全体としてリストし、それらをそのカバレッジに従ってグループに分けてリストする。可能性のある組換え断片は、２０～８０又は９０％カバレッジに一致するものである。９０％同一性でのフィルタリングも検討する。生物情報学的手順に関するさらなる詳細は、Ｂｕｓｈｎｅｌｌ（２０１６）及びＣａｍａｃｈｏら（２００９）に見出すことができる。

【0127】

結果を表６に示す。結果は、分解が進むにつれてリター中の遊離植物ＤＮＡの量が減少することを考えると、試料中に認められる植物のＤＮＡ断片全体の頻度が時間とともに減少することを示している。その一方で、植物ゲノムと一致する部分断片（それらが植物ＤＮＡの一部及び何か他のＤＮＡの一部で構成された断片であることを意味する）の数は、分解が進むにつれて増加し（表７）、１２０日後にピークとなる。１２０日間分解されたリター材料は、同じ種（すなわち、マツ属及びポプラ属）の種子の発芽に対して最大の阻害効果を示すことに留意することが重要である。

【0128】

各試料におけるシーケンスマッチング数（表６）、及びゲノムの部分からの各リードの相対カバレッジ数（表７）に関してデータを解析した。部分的カバーリードは、リードサンプリングにおけるキメラを反映していると想定される。

【0129】

【表6】

表６は、それぞれマツ属及びポプラ属ゲノムと対比したｂｌａｓｔ検索解析からの一致頻度の検討は、１２０日目のリターより０日目のリターでより高い数字をもたらすことを示している。これは、宿主植物と対比した類似性が、配列の崩壊により低下することを意味する。

【0130】

【表7】

表７は、宿主植物に対して比べた場合、リターの熟成に従って、リードの高カバレッジが相対的に減少し（９９～１００％カバレッジ値の減少）、部分的カバー配列（２０～９０％カバレッジ）が増加することを示している。

【0131】

宿主ゲノムに対する信頼できそうにない類似性を捨てるために、宿主ゲノムに対する類似性も９０％同一性で調査した。カバレッジ減少は、リターからシーケンスされたリード中のキメラの存在を示す。

【0132】

極めて興味深い点は、一方では、植物ゲノムとの一致数がポプラ属の高速分解リターにおいて極めて高い減少を示したのに対し、マツ属リターのより遅い分解がマツ配列の非常に遅い消失に対応していることである。他方で、両方の種材料は、依然として種を認め得る混合断片数の持続的増加を示す。これは、微生物への天然の組み込みを反映するものである。

【0133】

これらの結果は、微細藻類の単一種培養について本出願でさらに記載されること（以下参照）と類似した天然のライブラリーの形成を支持する。この場合、天然のライブラリー形成の現象は、その環境の植物リターのＤＮＡが濃縮され、故にリターを生産する植物（単数又は複数）の種特異的阻害効果をもたらす天然の土壌マイクロバイオームで生じる。

【0134】

（実験７）
アルスロスピラ・プラテンシス天然ライブラリー
宿主種の天然のゲノムに組み込まれた自己ＤＮＡによる標的種の阻害をさらに確認するために、シアノバクテリアに属する種であるアルスロスピラ・プラテンシスを、シロイヌナズナから抽出したＤＮＡとインキュベートしてＤＮＡの天然の取り込みも誘導し、形質転換アルスロスピラ・プラテンシス細胞をシロイヌナズナの阻害に使用した。

【0135】

インキュベーション前に、シアノバクテリアの純粋培養物をＺａｒｒｏｕｋの増殖培地中、管理条件（Ｔ２２～２４℃、光周期１２：１２時間、照射量２０μｍｏｌ ｐｈｏｔｏｎｓ ｍ^－２ ｓ^－１）でインキュベーション前の少なくとも４時間ガス注入せずに維持した。

【0136】

インキュベーション用のシロイヌナズナＤＮＡを、新鮮な葉からの全ゲノム抽出のための標準的な方法によって調製し、超音波処理バーストによってランダムに断片化した（Ｍａｚｚｏｌｅｎｉら（２０１５ａ）によって報告されたプロトコルに詳細が示されている）。試料は、マイクロチップが水槽で１．５ｍｌマイクロチューブに冷水で浸漬されているＶＣ ５０５ ＳＯＮＩＣＳ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃプロセッサにおいて、振幅２０％で４５ｓｅｃ／１５ｓｅｃオン／オフサイクルにより３０分間超音波処理しておいた。

【0137】

シロイヌナズナＤＮＡとのアルスロスピラ・プラテンシスのインキュベーション
シアノバクテリアの細胞内及び細胞外ＤＮＡｓｅ活性を減少させ、外来ＤＮＡの残留及び組み込みを促進するために、アルスロスピラ・プラテンシスをインキュベーション前にＭｇ^＋＋欠乏増殖培地で培養した（Ｃａｏら、１９９９）。インキュベーション中、濃縮アルスロスピラ・プラテンシス細胞（穏やかな遠心分離によって得られた最大５×１０^７細胞）３００μｌを、ガラスビーズ（直径５００μ）３００ｍｇを含有する１５ｍＬ遠心チューブに添加した。次いで、超音波処理バーストによって予め断片化したシロイヌナズナＤＮＡ １００μＬ、及びＭｇ^＋＋欠乏増殖培地１００μＬをインキュベーションチューブに添加し、その後ボルテックスミキサーで１５秒間、トップスピードで撹拌した。

【0138】

ＺａｒｒｏｕｋのＭｇ^＋＋欠乏培地を用いて試料容量を同じチューブ内で２．５ｍｌに増やし、ＬＤ発光周期下、オシレーターで２４時間インキュベートした。

【0139】

次いで、光バイオリアクターで完全Ｚａｒｒｏｕｋ培地を用いて容量を１０ｌまで徐々に増やし、１ｌあたり１ｇ細胞乾燥重量の細胞密度を得た。９０日後、バイオマスを遠心分離し、回収し、１ｌあたり１００ｇ細胞乾燥重量の細胞密度を有する材料のペレットを得た。

【0140】

阻害試験
シアノバクテリアペレットを超音波処理し、得られた細胞ホモジネートを、蒸留水を添加して水分蒸発を補充しながら、室温で１５日間インキュベートした。次いで、ホモジネートの異なるアリコートを蒸留水で１：１、１：１０、及び１：１００希釈し、濃度レベルごとに１０植物を含む３個の反復試料でペトリ皿の濾紙を湿らせるのに使用した。シロイヌナズナの実生を調製し、実験を実験１のように行った。

【0141】

結果
アルスロスピラ・プラテンシス細胞へのシロイヌナズナＤＮＡの組み込みの間接的な目安となる、シロイヌナズナＤＮＡとのインキュベーション後のアルスロスピラ・プラテンシス培養物の色の変化を観察した。実際に、この観察された色の変化は、おそらくシロイヌナズナＤＮＡの組み込みによるアルスロスピラ・プラテンシスゲノムの変化の結果ではない遺伝子発現の変化を示す。

【0142】

阻害試験の結果は、同種実生生存率に対する異種及び自己ＤＮＡの混合物による阻害効果を、シロイヌナズナのゲノムのシアノバクテリア天然ライブラリーを試験することによって実証した。高濃度では、実生生存率は、アラビドプシスＤＮＡがない微細藻類溶液を用いた対照（すなわち、異種ＤＮＡを含有するが、該植物ＤＮＡを含有しない）と比べて、アラビドプシスＤＮＡを吸収したアルスロスピラ・プラテンシスの天然のライブラリーへの曝露下で有意により低かった（表８）。

【0143】

シロイヌナズナＤＮＡの一部のみが、アルスロスピラ・プラテンシスゲノムに組み込まれ（故にアルスロスピラ・プラテンシス細胞によって複製され）る可能性が最も高いが、シロイヌナズナ実生の阻害がかなりある。カエノラブディティス・エレガンスのゲノムの一部による阻害に関する試験の結果を考えると（実験３参照のこと）、阻害性形質転換アルスロスピラ・プラテンシス培養物を、類似の形質転換手順で得られるさらなる培養物と組み合わせることにより、阻害効果は増加し得ることが予想され得る。

【表8】

【0144】

（実施例８）
宿主種の天然のゲノムに組み込まれた自己ＤＮＡの阻害をさらに確認するために、確認実験を行った。この確認実験では、シアノバクテリア（光合成微細藻類）の２つの異なる種をバイオリアクターで増殖させ、断片化アラビドプシスＤＮＡを増殖培地に添加し、シアノバクテリアからの破壊バイオマスの阻害を試験した。

【0145】

選択したシアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス（実施例７と同様）及びシネコシスティス種ＰＣＣ６８０３であった。インキュベーション前に、全ての培養物を表１に示した培養条件でインキュベーションの少なくとも４時間前からガス注入せずに維持する。

【表9】

【0146】

採取した細胞から単離したＤＮＡを超音波処理バーストによってランダム断片化する。試料は、マイクロチップが水槽で１．５ｍｌマイクロチューブに冷水で浸漬されているＶＣ ５０５ ＳＯＮＩＣＳ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃプロセッサにおいて、振幅２０％で４５ｓｅｃ／１５ｓｅｃオン／オフサイクルにより３０分間超音波処理しておいた。

【0147】

シロイヌナズナＤＮＡとのアルスロスピラ・プラテンシスのインキュベーション
シアノバクテリアの細胞内及び細胞外ＤＮＡｓｅ活性を減少させ、外来ＤＮＡの残留及び組み込みを促進するために、アルスロスピラ・プラテンシスをインキュベーション前にＭｇ^＋＋欠乏増殖培地で培養した（Ｃａｏら、１９９９）。インキュベーション中、濃縮アルスロスピラ・プラテンシス細胞（穏やかな遠心分離によって得られた最大５×１０^７細胞）３００ｕｌを、Ｄｕｎａｈａｙら（１９９７）に記載されているようにガラスビーズ（直径５００μｍ）３００ｍｇを含有する１５ｍｌ遠心チューブに添加した。次いで、超音波処理バースト（約１０ｕｇ）によって予め断片化したシロイヌナズナＤＮＡ １００ｕｌ、及びＭｇ^＋＋欠乏増殖培地１００ｕｌをインキュベーションチューブに添加し、ボルテックスミキサーを使用して１５秒間、トップスピードでチューブを撹拌した。

【0148】

同じチューブでＺａｒｒｏｕｋのＭｇ^＋＋欠乏培地を用いて試料容量を２．５ｍｌに増やし、ＬＤ発光周期下、オシレーターで２４時間インキュベートする。次いで、完全Ｚａｒｒｏｕｋ培地を用いて容量を徐々に増やす。

【0149】

シロイヌナズナＤＮＡとのシネコシスティス種ＰＣＣ６８０３のインキュベーション
Ｚａｎｇら（２００７）によって記載されているように、Ｃａ^＋＋依存性ＤＮＡｓｅ活性を減少させるために、細胞は、ＥＤＴＡ（２ｍＭ）で改変したＢＧ１１培地でインキュベーション前に２日間培養しておいた。

【0150】

インキュベーション中、濃縮シネコシスティス種ＰＣＣ６８０３細胞（穏やかな遠心分離によって得られ、ＢＧ１１ ＥＤＴＡフリー培地で洗浄した最大５×１０^７細胞）４００μｌを、超音波処理バースト（約１０μｇ）によって予め断片化したシロイヌナズナＤＮＡ １００μｌを含有する１５ｍｌ遠心チューブに添加する。次いでチューブをＬＤ発光周期下、オシレーターで５時間インキュベートし、次いでフラスコに移し、ＢＧ１１培地を用いて２．５ｍｌに希釈し、次いで容量を徐々に増やす。

【0151】

実験
上記のプロトコルに従ってアラビドプシスＤＮＡに曝露した微細藻類を、２つの５リットルバイオリアクターで接種材料として使用し、最大細胞密度の到達まで標準的な増殖条件で増殖させた。次いで、該２つの種の藻類バイオマスを培地から抽出してペレットを形成し、慎重に洗浄し、次いで乾燥させた。

【0152】

藻類ペレットに森林土壌１ｇを接種し、室温で維持し、毎週湿らせて最大６０日間天然の分解を保った。腐敗材料を１５日ごとにサンプリングし、実験室最適条件でのペトリ皿の濾紙に添加して、プレート上のアラビドプシス植物の発芽及び根の成長を評価した。

【0153】

結果
未分解ペレットは、アラビドプシスの種子の発芽及び根の伸長に対する有意な阻害効果がなかったが、分解の３０日及び６０日後、両方の種由来の分解ペレットによる処理では発芽の有意な阻害が観察された。分解の９０日後、分解ペレットの阻害効果はわずかな減少を示した。これは、シアノバクテリアのペレットの分解が、植物の発芽に対して明らかな阻害効果があることを示している。その理由は、藻類ゲノムに含まれた該植物のＤＮＡが分解プロセスによって放出され、最終的には分解土壌微生物によってさらに増幅されるためである。

【表10】

【0154】

生物情報学的解析
上述の種子発芽実験で天然のライブラリーとして使用した２種類のシアノバクテリアのゲノムをシーケンスし、解析した。ＢＢｍａｐのＢＢｍｅｒｇｅ機能（Ｂｕｓｈｎｅｌｌ（２０１６））を使用し、ｋｍｅｒオプションを適用して偽陽性を低減し（ｅｘｔｅｎｄ２＝２０、ｉｔｅｒａｔｉｏｎ＝５）、メタゲノミクス実験からのペアエンドリードを統合する。

【0155】

次いで、統合リードを、ＢＬＡＳＴｎ（Ｃａｍａｃｈｏら（２００９））を使用して、宿主ゲノムに対して整列させる。リスト作成者が一致を有する全リードとしてリストした、少なくとも１つのヒットを有する全てのリードを、そのカバレッジに従ってグループに分けてリストする。可能性のある組換え断片は、２０～８０又は９０％カバレッジに一致するものである。９０％同一性でのフィルタリングも検討する。生物情報学的手順に関する詳細は、Ｂｕｓｈｎｅｌｌ（２０１６）及びＣａｍａｃｈｏら（２００９）に見出すことができる。

【0156】

【表11】

表１１は、シアノバクテリアの試料由来のＤＮＡに見出された配列数を示し、一致したシロイヌナズナゲノムは、試料間だけでなく、植物及びシアノバクテリアのゲノムによるパーセントカバレッジに従って定義した異なるマッチングクラス間でも大きく異なったことを示している。

【0157】

クラス１及び２は、おそらくシーケンシング及びバイオインフォマティクス方法に固有の不確実性と関連する、極めて低い数を示した。クラス３は、おそらく２種類のシアノバクテリア間のゲノムサイズ、染色体コピー数、及び参照ゲノムデータベースでのｂｌａｓｔのデータ有用性の差に関連する、最も高い試料間の差を示した。クラス４データは、両方の試料タイプにおいて植物及びシアノバクテリアゲノムの両方に部分的に一致する可能性のあるキメラ配列の発生を示している。クラス５は、両方の試料タイプが、キメラ配列からの遊離シロイヌナズナＤＮＡを含まなかったことを示すヌル値を示した。

【0158】

注目すべきことに、アルスロスピラ・プラテンシス試料と比べて、シロイヌナズナ実生に対するより大きな阻害効果を示したシネコシスティス種ＰＣＣ ６８０３試料は、全てのクラスをプールした配列数を検討、又は意味のあるクラスごとに別個に配列数を検討した場合のいずれも、シロイヌナズナゲノムと一致するＤＮＡ配列の数がより多かったことも示した。これは、阻害効果が自己ＤＮＡ断片に関連していること、及び自己ＤＮＡ断片のこれらの阻害効果は、宿主種ＤＮＡと関連する場合維持されることを確認するものである。この実験に基づき、宿主種の細胞が、系統的に遠い標的種の阻害性自己ＤＮＡをその天然のゲノムにおいて効果的に複製できることをさらに確認する。

【0159】

（実験９）
土壌マイクロバイオームによる分解及び吸収を受けた断片化自己ＤＮＡによる雑草スベリヒユ（Ｐｏｒｔｕｌａｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）の阻害を試験して、さらなる確認実験を行った。試験は、スベリヒユ外部寄生が繰り返し問題となる農場においてホウレンソウ栽培の試験プロットで行った。

【0160】

スベリヒユのＢＡＣライブラリーは、実験２で論じたショクヨウガヤツリライブラリーに使用したものと類似した方法論で、Ｂｉｏ Ｓ＆Ｔ（モントリオール、カナダ）によって最初に生成された。該ライブラリー（培養培地としてＴｅｒｒｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ（ＴＢ）、２５０ｒｐｍ撹拌、Ｔ＝３７℃）の一晩培養物を、４０リットルの有効容量で６０Ｌのバイオリアクター発酵用スターター培養物として使用した（バイオリアクターの有効容量の１％）。
大規模液体発酵用の基質として栄養ブロス（ＮＢ）を使用した。
さらに、０．１％Ｌ－アラビノースを培養培地の全容量に添加してｐＳｍａｒｔ－Ｈｉｎｄｌｌｌプラスミドを誘導した。高細胞密度の発酵ブロスを得るために、温度、撹拌、通気、ｐＨの管理条件下で液体発酵を２日間実施し、プラスミドＤＮＡの産生を刺激した。到達した濃度は、ＯＤ_６００によって推定した通り、約５．６×１０^８細胞／ｍｌであった。

【0161】

コンポストの接種及び熟成
以前に記載されているように、得られた発酵ブロスを約１５分間煮沸に供し、その後３つの異なる濃度で泥炭に添加した：
１．３０ｍＬ／ｋｇ（１）
２．３ｍＬ／ｋｇ（希釈１：１０）
３．０．３ｍＬ／ｋｇ（希釈１：１００）

【0162】

接種された土壌を空気中で約２０日熟成させた。故に得られた製品を野外実験で使用した。

【0163】

野外実験
野外試験は、スベリヒユ外部寄生が繰り返し問題となっているＳａｌｅｒｎｏ（イタリア）地方の農場で行った。

【0164】

ホウレンソウの種まき（７月中旬）の２日前、製品を以下のスキームに従って分配した：
野外実験（ブロック面積約２×２．４ｍ）

【表12】

【0165】

製品の有効性を実験で評価するために、実験試験用に調製した製品の隣のトンネルで、従来の農耕法及び、さらなる規制をもたらす現行法により承認された除草剤の使用により、スベリヒユ雑草に対する戦いを実施した。

【0166】

特に、農家によって採用されている闘いの通常の慣行では、雑草、雑草種子、真菌、線虫、及び土壌昆虫を抑制するための植え付け前の広域スペクトル土壌燻蒸剤として主に使用される農業用汎用駆除剤であるメタムナトリウムの使用が提供される。メタムナトリウムによる処理は高額であり、根圏の生物多様性の喪失をもたらし土壌に有害である。

【0167】

ホウレンソウの発芽時（種まきの約１０日後）に最初の調査を実施し、これ以降は栽培ホウレンソウの生活環の最後まで週１回の頻度で他の評価を行った。スベリヒユ発芽率に対する製品の阻害効果を確かめるために、野外評価中スベリヒユ植物を根こそぎにし、カウントし、壊死の存在について根をチェックした。

【0168】

結果
図５に示すように、調査の終わりに決定したブロック処理１でのスベリヒユ植物の数の有意な低下があった。さらに、予想した通り、スベリヒユ植物が少ないブロックでは発芽ホウレンソウの数が有意に高かった。

【0169】

この実験は、阻害効果が自己ＤＮＡ断片と関連していること、及び自己ＤＮＡ断片が宿主種で増幅され、宿主種ＤＮＡに付随している場合、自己ＤＮＡ断片のこれらの阻害効果が維持されることをさらに確認している。使用した実験プロトコルに照らして、及び上記の実験結果を考慮すると、泥炭マイクロバイオームによるスベリヒユＤＮＡ断片の増幅は阻害効果に起因していたに違いないと予想するのが妥当である。

【0170】

（実験１０）
系統的に類似の種由来のＤＮＡ断片の阻害
系統的に類似の種由来のＤＮＡ断片の阻害を、Ｗ０２０１４／０２０６２４による断片化ＤＮＡ（宿主種ＤＮＡ配列に付随していない）を用いて試験した。他の実験からの結果に照らして、阻害効果がＷ０２０１４／０２０６２４によるＤＮＡ断片について観察される場合、本発明による組成物中の、断片化された場合のＤＮＡについても効果が観察されることが予想され得る。

【0171】

植物材料由来のＤＮＡの抽出及び定量化
ＤＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍａｘｉ Ｋｉｔを使用して製造者（ＱＩＡＧＥＮ、バレンシア、ＣＡ）による説明の通りに植物の葉材料からＤＮＡを抽出して、処理溶液をＦｕｌｔｏｎら（１９９５）（添付書類Ｅ）によるプロトコルを使用して調製した。１００グラムの新鮮重の出発材料を採取し、－２０℃で凍結した。次いで、試料を２００ｍｌ新鮮マイクロプレップ緩衝液で浸漬撹拌し、次いで寒冷紗で濾過した。ＤＮＡを純粋滅菌水に再懸濁した。葉から抽出したＤＮＡを２００～５００ｂｐの標的サイズ範囲に超音波処理によって断片化した。これは、Ｂａｎｄｅｌｉｎ Ｓｏｎｏｐｕｌｓｅ（Ｂａｎｄｅｌｉｎ、ベルリン、ＤＥ）によって１２分間、０．９秒パルス、９０％出力で行った。超音波処理したバンドサイズの検証を、Ｓｙｂｒ（登録商標）Ｓａｆｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による３％ＭｅｔａＰｈｏｒ（商標）アガロースゲル（Ｌｏｎｚａ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＮＪ）で視覚的に検証して行った。

【0172】

標的植物での精製ＤＮＡによるバイオアッセイ
植物の葉から抽出した精製ＤＮＡの自己中毒及び植物毒性効果を８つの標的種で評価した（表１２）。実験デザインは以下であった：１．滅菌蒸留水を用いた対照；２．抽出し、ランダムに断片化した全自己ＤＮＡの添加；３．単一の異種から抽出し、ランダムに断片化した全ＤＮＡの添加（表１）；ＤＮＡを２００μｇ ｍｌ^－１で適用した。試験溶液４ｍｌで浸した９ｃｍペトリ皿の滅菌濾紙上に置いた標的種（４個の反復試料）ごとに表面滅菌種子（各プレート中、ｎ＝２０）を使用して、インビトロでバイオアッセイを行った。標的種に応じて実験開始以降の可変日数後に実生の根の長さを測定した（表１２）。ペトリ皿を完全なランダムデザインによりグロースチャンバーに並べた（温度２２±２℃、蒸留水で２日ごとに散水）。

【表13-1】

【表13-2】

【0173】

バイオアッセイごとに、標的種とＤＮＡ抽出の供給源として使用した植物種を区別する系統的距離を以下の方法で評価した：
－距離ゼロで同種
－距離＝１で同じ科に属する種
－距離＝２で同じ目内の異なる科に属する種
－距離＝２＋Ｎで異なる目からの種。Ｎは、被子植物（すなわち顕花植物）の分類学上の目の系統発生を報告する参照系統樹（ＡＰＧ ２００９、図６）において植物目を区別するツリーノードの数に等しい。
バイオアッセイで使用した全ての植物の種、科及び目、並びに標的植物及びＤＮＡ供給源植物の全てのペアについて得られた系統的距離を表１２に報告する。

【0174】

バイオアッセイ結果（すなわち、標的種の根の成長）を、蒸留水で処理した対照のパーセンテージとして表し、標的種からＤＮＡ供給源を区別する系統的距離の関数としてプロットした。

【0175】

結果
バイオアッセイ結果は、標的種の根の成長に対する自身のＤＮＡによる明らかな阻害効果を示している（図７）。標的種と系統的に類似した（同じ分類学上の目内の）種由来のＤＮＡについて試験した場合、同様にかなりの阻害効果が観察されたが、標的種自体由来のＤＮＡの効果より低かった。標的種から遠い種由来の異種ＤＮＡによる効果は有意でなかった。
（参考文献）

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【国際調査報告】