▶ パスウェイズ ニューロ ファーマ， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-13
(54)【発明の名称】依存症障害の遺伝子治療
(51)【国際特許分類】
C12N 15/867 20060101AFI20220406BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20220406BHJP
C12N 15/863 20060101ALI20220406BHJP
C12N 15/866 20060101ALI20220406BHJP
C12N 15/869 20060101ALI20220406BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20220406BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/32 20060101ALI20220406BHJP
A61P 25/30 20060101ALI20220406BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220406BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20220406BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20220406BHJP
【ＦＩ】
C12N15/867 Z
C12N15/12 ZNA
C12N15/863 Z
C12N15/866 Z
C12N15/869 Z
C12N15/864 100Z
A61K48/00
A61P25/00
A61P25/28
A61P25/16
A61P25/24
A61P25/18
A61P25/32
A61P25/30
A61P43/00 105
A61K35/76
A61K38/17
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021550130
(86)(22)【出願日】2020-02-27
(85)【翻訳文提出日】2021-09-17
(86)【国際出願番号】 US2020020216
(87)【国際公開番号】W WO2020176796
(87)【国際公開日】2020-09-03
(31)【優先権主張番号】62/811,339
(32)【優先日】2019-02-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521378509
【氏名又は名称】パスウェイズ ニューロ ファーマ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ラウ， ウォーレン シー．
(72)【発明者】
【氏名】トンプソン， ブラッド
【テーマコード（参考）】
4C084
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA13
4C084BA44
4C084CA53
4C084DC50
4C084MA56
4C084MA59
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA021
4C084ZA022
4C084ZA121
4C084ZA122
4C084ZA161
4C084ZA162
4C084ZA181
4C084ZA182
4C084ZB211
4C084ZB212
4C084ZC391
4C084ZC392
4C087AA01
4C087AA03
4C087BC83
4C087MA56
4C087MA59
4C087MA65
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZA02
4C087ZA12
4C087ZA16
4C087ZA18
4C087ZB21
4C087ZC39
(57)【要約】
本発明は、Ｇ蛋白質共役受容体をコードする組換えウイルスベクターによる神経障害の治療を包含する。特に、本発明は、アルコール依存症およびオピエート依存症を含むがこれらに限定されない依存症障害の治療を対象とする。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ウイルスを含み、神経受容体および／または神経受容体のサブペプチドをコードする核酸をさらに含む、組換えウイルスベクター（ＲＶＶ）。
【請求項2】
前記核酸が５－ヒドロキシトリプタミン受容体４（ＨＴＲ４）をコードするものである、請求項１に記載のＲＶＶ。
【請求項3】
前記核酸が配列番号１として示される配列を有する、請求項２に記載のＲＶＶ。
【請求項4】
前記核酸がドーパミン受容体Ｄ１（Ａ）をコードする、請求項１に記載のＲＶＶ。
【請求項5】
前記核酸が配列番号２として示される配列を有する、請求項４に記載のＲＶＶ。
【請求項6】
前記核酸がＧＰＲ１３９をコードする、請求項１に記載のＲＶＶ。
【請求項7】
核酸が配列番号３に設定された配列を有する、請求項６に記載のＲＶＶ。
【請求項8】
前記ウイルスベクターが、ガンマレトロウイルス、レンチウイルス、フラビウイルス、インフルエンザ、エンテロウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、ルビウイルス、モルビリウイルス、オルトポックスウイルス、水痘ウイルス、ディペンドパルボウイルス、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、デルタバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、マスタデノウイルス、シンプレックスウイルス、水痘ウイルス、サイトメガロウイルス、およびこれらの組合せからなる群より選択される、請求項１に記載のＲＶＶ。
【請求項9】
前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項１～８のいずれかに記載のＲＶＶ。
【請求項10】
前記ウイルスベクターがアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１～８のいずれかに記載のＲＶＶ。
【請求項11】
前記核酸が、配列番号１の５～３８７位のＨＴＲ４の直鎖シーケンシャルサブペプチドをコードする、請求項２に記載の核酸。
【請求項12】
前記核酸が、配列番号２の５～４４５位のＤ１（Ａ）の直鎖シーケンシャルサブペプチドをコードする、請求項４に記載の遺伝子挿入。
【請求項13】
前記核酸が、配列番号３の５～３５２位のＧＰＲ１３９の直鎖シーケンシャルサブペプチドをコードする、請求項６に記載の遺伝子挿入。
【請求項14】
中枢神経系に関連する病態を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～８のいずれかに記載のＲＶＶを、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【請求項15】
病態を治療する方法であって、前記病態は中枢神経系に関連し、請求項９に記載のＲＶＶを、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【請求項16】
病態を治療する方法であって、前記病態は中枢神経系に関連し、請求項１０に記載のＲＶＶを、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【請求項17】
前記病態が統合失調症である、請求項１４に記載の方法。
【請求項18】
前記病態が依存症である、請求項１４に記載の方法。
【請求項19】
前記病態がうつ病である、請求項１４に記載の方法。
【請求項20】
前記病態がアルコール中毒である、請求項１４に記載の方法。
【請求項21】
前記病態がパーキンソン病である、請求項１４に記載の方法。
【請求項22】
前記病態が精神病である、請求項１４に記載の方法。
【請求項23】
前記病態が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項24】
前記病態がアルツハイマー病である、請求項１４に記載の方法。
【請求項25】
前記投与する工程が、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、髄腔内経路、膀胱内経路、局所経路、鼻腔内経路、経粘膜経路、肺経路、およびそれらの組み合わせによって起こる、請求項１４に記載の方法。
【請求項26】
前記治療有効量が、患者の体重の約１０～約１×１０１６ＴＣＩＤ５０／ｋｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項27】
前記治療有効量が、前記遺伝子ベクターの約１０～約１×１０１６ＴＰＣ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の方法。
【請求項28】
前記治療有効量が、前記遺伝子ベクターの約１０～約１×１０１６ＴＰＣ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の方法。
【請求項29】
前記アデノ随伴ウイルスが、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－８およびＡＡＶ－９からなる群より選択される、請求項１０に記載のＲＶＶ。
【請求項30】
ＧＰＣＲをコードする核酸をさらに含む、請求項２９に記載のＲＶＶベクター。
【請求項31】
前記ＧＰＣＲがＧＰ１３９である、請求項３０に記載のＲＶＶベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年２月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／８１１，３３９号の利益を主張し、その完全な開示は参照により本明細書に組み込まれる。
テキストファイルとして提供される配列表の参照による組み込み
本出願は、２０１９年２月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／８１１，３３９号の利益を主張し、その完全な開示は参照により本明細書に組み込まれる。
テキストファイルとして提供される配列表の参照による組み込み
【0002】
配列表は、２０２０年２月２７日に作成され、１１，０００バイトのサイズを有するテキストファイル「１０１９０７－５００１－ＷＯ－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」としてここに提供される。テキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0003】
本発明は、一般に、オピエートおよびアルコール依存症を含む依存症障害を含む神経障害のための遺伝子治療に関する。
【背景技術】
【0004】
神経受容体、特にＧ蛋白質共役受容体（ＧＰＣＲ）は多くの精神機能に重要な役割を果たしている。ＧＰＣＲは、創薬の最も一般的な標的の１つである。中枢神経系組織に主に発現するＧＰＣＲは、アルコール中毒、オピエート依存症、抑うつ不安、およびその他を含むが、これらに限定されない複雑な行動病理の治療のための高度な遺伝子療法の魅力的な標的となる。
【0005】
５－ヒドロキシトリプタミン受容体、ＨＴＲ４（配列番号１）などのセロトニン受容体は、主に被殻、尾状核、側坐核、淡蒼球、および黒質内で脳に発生するＧＰＣＲである。ザコプリドなどのＨＴＲ４アゴニストは、強力な抗不安作用と認知増強作用を有することが知られている。
【0006】
ドーパミン受容体は、別のクラスのＧＰＣＲであり、いくつかの重要な脳機能の重要なメディエーターであり、筋肉モータ制御において重要な役割を果たす。ドキサントリンなどのアゴニストであるドーパミン受容体Ｄｌ、Ｄ１（Ａ）（配列番号２）は、パーキンソン病の治療に有用であり、不安に苦しむ患者の全般的な気分および健康状態の改善に効力を示している。Ｄ１（Ａ）は主に背側線条体と腹側線条体に発現し、程度は低いが扁桃体、大脳皮質、視床下部に発現する。
【0007】
天然リガンドが未発見のままであるＧＰＣＲであるオーファンＧＰＣＲは、医薬開発のための特に魅力的な標的である。１つの高度に保存されたＧＰＣＲ、ＧＰＲ１３９（配列番号３）は、脳機能において重要な役割を果たすことが最近明らかにされており、脳の領域（手綱とセプタムの脳室周囲領域および脚間核）で高度に発現しており、依存症、不安、および気分調節と関連している。手綱におけるＧＰ１３９発現とアルコール中毒との関連がラットモデルで実証されている。このモデルは、ＧＰＲ１３９アゴニストの投与が依存症的アルコール摂取を減少させ、他の強迫的依存症様行動を減少させる可能性を示唆している。
【0008】
米国ではアルコール中毒とオピエート依存症が増加している。しかし、薬物による治療は限られており、短期間に有効である一方で、行動療法は再発率が非常に高い。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明は、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスなどの遺伝子導入ベクター、および核酸を含むか、または神経受容体の１つ以上の神経受容体および／もしくはリガンド結合サブペプチドをコードする他の遺伝子導入ベクターを利用して、脳のある領域において神経受容体および／または神経受容体のサブペプチドの内因性産生および／または過剰産生を誘導するための方法に関する。
【0010】
本発明はまた、脳のＧＰＣＲレセプター、特に被殻、尾状核、側坐核、淡蒼球、ならびに／または黒質ならびに手綱および手綱の脳室周囲領域の発現を増加させる方法に向けられる。好ましい実施形態では、遺伝子ベクターは、脳の様々な領域におけるＨＴＲ４の発現を増加させる。
【0011】
本発明の遺伝子導入ベクターによって標的とされ得る脳の他の領域は、背側および／もしくは腹側線条体、扁桃体、大脳皮質、ならびに／または視床下部を含む。好ましい実施形態において、ベクターは、ＣＮＳにおけるＤ１（Ａ）の発現を増加させる。
【0012】
本発明の他の態様は、手綱および手綱の脳室周囲領域を標的とする遺伝子導入ベクターに関する。いくつかの実施形態において、遺伝子ベクターは、手綱領域に特異的な標的とし、神経受容体をコードする手綱遺伝子に導入する。好ましい実施形態において、遺伝子ベクターは、ＧＰＲ１３９の内因性の発現をアップレギュレートするか、または補足する。
【0013】
本発明の他の実施形態は、薬学的に許容可能な担体中に上記の遺伝子導入ベクターをさらに含む遺伝子ベクター、ならびに／または神経受容体および／もしくは神経受容体のサブペプチドの産生をアップレギュレートまたは補足する賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【0014】
本発明のいくつかの実施形態は、脳内の標的組織への遺伝子導入ベクターの送達を増強するための方法および組成物に関する。そのような方法および組成物は、限定されるものではないが、浸透圧、超音波、低線量放射線、またはブラジキニンの投与を含み、標的への遺伝子導入ベクターのアクセスを可能にするために、血液脳関門を崩壊させることができる。血液脳関門を回避するための他の方法としては、ウイルス媒介送達、外科的に埋め込まれたカテーテルの使用、ならびにリポソーム担体の使用、髄腔内、および頭蓋内注射を含む方法および組成物が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【0015】
本発明のいくつかの実施形態は、病態の療法、または対象への療法の送達のために使用されるキットを含む。キットは、本明細書に記載されるような遺伝子導入ベクターの単位投与量、単位投与量のための担体、および単位投与量を対象に投与するための説明書を含む。遺伝子ベクターは、標的組織における神経受容体および／または神経受容体のサブペプチドの産生を増加させ得る。担体は、当技術分野で一般的に理解されているように、薬学的に許容可能な担体であってもよい。説明書には、最適な効果を得るために固体担体を対象にどのように投与するかが記載されている。また、説明書には、液体担体を様々な投与経路によって対象に投与する方法を記載してもよい。
【0016】
本発明のいくつかの実施形態は、特定の神経障害を治療する方法に関する。この方法は、神経受容体および／または神経受容体のサブペプチドの産生をアップレギュレートする遺伝子ベクターの治療有効量を対象に投与する工程を含む。障害には、不安、アルコール中毒、オピエート依存症（アヘン中毒）、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および本明細書に示される他の障害などの行動障害が含まれる。
【0017】
本発明の別の実施形態は、神経組織にＧＰＣＲをコードする核酸を導入することができる遺伝子導入ベクターを含む：ガンマレトロウイルス、レンチウイルス、フラビウイルス、インフルエンザ、エンテロウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、ルビウイルス、モルビリウイルス、オルトポックスウイルス、水痘ウイルス、ディペンドパルボウイルス、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、デルタバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、マスタデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘ウイルス、サイトメガロウイルス、またはこれらの組合せ。本発明の好ましい実施形態は、アデノウイルスベクターヘルペスウイルスベクター、麻疹ウイルス、ワクシニアウイルス、レンチウイルスベクターを含むレトロウイルスベクター、および当技術分野で知られている他のウイルスベクターをカバーするアデノ随伴ウイルスなどのウイルスベクターを含む。本発明のウイルスベクターは、組換えウイルスベクター（ＲＶＶ）と総称することができる。
【0018】
特定の理論に拘束されるものではないが、本発明の実施形態は、アルコールおよび／またはオピエート依存症、うつ病、精神病、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、アルツハイマー病、およびパーキンソン病などの依存症を含むが、これらに限定されない病態を治療するのに有用であり得る。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【発明を実施するための形態】
【0020】
本発明は、１以上の遺伝子ベクター（例えば、遺伝子導入ベクター（すなわち、組換えウイルスベクター（ＲＶＶ））、療法、治療およびベクターの使用方法、ならびに／または、神経受容体および／もしくは神経受容体のサブペプチドの産生を増加させるための療法および／もしくは治療に関する。
定義
定義
【0021】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本明細書の文脈において当業者によって一般的に理解される意味を有する。ここに記載するものと同様なまたは等価なあらゆる方法並びに材料は、本発明の実施または試験においても使用できるが、好ましい方法並びに材料は、本明細書に記載されている。本明細書で言及されるすべての刊行物は、刊行物が引用されることに関連して方法および／または材料を開示および説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【0022】
本明細書中で使用されるように、単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の言及を含む。例えば、「作用物質」への言及は、１つ以上の作用物質を含み、「対象」または「その対象」への言及は、１以上の対象を含む。
【0023】
本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、所与の値または範囲の約２５％以内、好ましくは約２０％以内を意味する。そのような変形は、特に言及されるか否かにかかわらず、本明細書に提供される任意の所与の値に常に含まれることが理解される。
【0024】
本明細書中で使用される「遺伝子ベクター」という用語は、患者に投与された場合、脳の関連部分におけるＧＰＣＲ発現を増加させ、それによって、患者における依存症挙動、身体反応、および／または１つ以上の生理学的反応を含むがこれらに限定されない脳の特定の障害を改善する、ＧＰＣＲをコードする核酸を含む遺伝子導入ベクターを指す。
【0025】
本明細書中で使用される「賦形剤」という用語は、それ自体遺伝子ベクターではなく、任意の物質を指し、それは、治療有効量の遺伝子ベクターを対象に投与するための医薬組成物または医薬内の成分として使用され得る。さらに、またはその代わりに、賦形剤は、単独で、またはさらなる化学成分と組み合わせて、取り扱いおよび／もしくは貯蔵特性を改善し、ならびに／または遺伝子ベクターの用量単位の形成を可能にするか、もしくは促進することができる。賦形剤としては、結合剤、崩壊剤、希釈剤、緩衝剤、溶媒、増粘遺伝子ベクター、ゲル化剤、浸透増強剤、可溶化剤、湿潤剤、酸化防止剤、防腐剤、界面活性剤、滑剤、皮膚軟化剤、組成物の外観または質感を改善するために添加される物質、および医薬組成物または医薬を形成するために使用される物質のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。任意のそのような賦形剤は、本発明による任意の剤形で使用することができる。前述のクラスの賦形剤は、網羅的であることを意味するものではなく、単に当業者が知るであろうことの例示として提供され；当業者はまた、１つ以上の投与経路を介して対象への遺伝子ベクターの治療有効量の送達を達成するために、追加のタイプおよび賦形剤の組合せが使用され得ることを認識するであろう。
【0026】
本明細書中で使用される「対象」という用語は、本明細書中に記載される遺伝子導入ベクターを受ける任意の治療標的を指す。対象は、脊椎動物、例えば、ヒトを含む哺乳動物であり得る。「対象」という用語は、特定の年齢または性別を意味しない。「対象」という用語は、生物の１つ以上の細胞、１つ以上の組織タイプのインビトロ培養、１つ以上の細胞タイプのインビトロ培養、ｅｘ ｖｉｖｏ調製物、ならびに組織および／または生体液などの生物学的材料の試料をも指す。
【0027】
本明細書で使用される用語「医薬品」は、遺伝子ベクターを含み、疾患、障害もしくはその症状からの回復を促進することができる、および／または疾患、障害もしくはその症状を予防することができる、および／または疾患、障害もしくはその症状の進行を阻害することができる、医薬品および／または医薬組成物を指す。
【0028】
本明細書で使用される用語「患者」とは、疾患又は障害に罹患している対象をいい、用語「患者」とは、ヒト及び動物の対象を含む。
【0029】
本明細書中で使用される場合、用語「医薬組成物」は、疾患、障害またはそれらの症状の療法または治療を必要とする対象への遺伝子ベクターの投与のための任意の組成物を意味する。医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容される塩、賦形剤などの添加剤を含むことができる。医薬組成物はまた、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤、鎮痛剤などのような１つ以上のさらなる活性成分をさらに含んでもよい。
【0030】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、遺伝子ベクターの有効性および／または安全性を阻害しない、医薬組成物または医薬内の本質的に化学的に不活性で非毒性の成分を指す。薬学的に許容可能な担体およびそれらの製剤のいくつかの実施例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（１９９５，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（１９ｔｈ ｅｄ．）ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に記載されており、その発明は参照により本明細書に組み込まれる。典型的には、製剤を等張にするために、適量の薬学的に許容可能な担体が製剤中で使用される。適切な薬学的に許容可能な担体の実施例としては、食塩水溶液、グリセロール溶液、エタノール、Ｎ－（ｌ（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、ジオレシルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、および種々の成分のリポソームが挙げられるが、これらに限定されない。そのような医薬組成物は、対象への適切な投与に適した形態を提供するために、１つ以上の薬学的に許容可能な担体および／または賦形剤の適切な量と共に、治療有効量の遺伝子導入ベクターを含有する。投与経路に応じた処方とする。例えば、経口投与は、製剤が、遺伝子ベクターを対象の胃腸管の部分内で分解することから保護するために、腸溶コーティングを組み込むことを必要とし得る。別の実施例では、注射可能な投与経路をリポソーム製剤で投与して、対象の血管系全体にわたる輸送を容易にし、標的化された細胞内部位の細胞膜を横切る送達を容易にすることができる。
【0031】
本明細書で使用される場合、「産生」、「産生すること」、および「産生する」という用語は、ＤＮＡの合成および／または複製、ＲＮＡの１つ以上の配列の転写、１つ以上のアミノ酸配列の翻訳、アミノ酸配列の翻訳後修飾、および／またはエフェクター分子の産生または機能性に影響し得る１つ以上の調節分子の産生または機能性を指す。
【0032】
本明細書で使用される場合、「促進する」、「促進」、および「促進すること」という用語は、活性、応答、病態、疾患、または他の生物学的パラメータの増加を意味する。これには、活性、応答、病態、または疾患の開始が含まれ得るが、これらに限定されない。これには、例えば、天然または対照レベルと比較して、活性、応答、病態、または疾患の１０％の増加も含まれ得る。したがって、活性、応答、病態、疾患、または他の生物学的パラメータの増加は、天然レベルまたは対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、またはそれ以上であり得、具体的に列挙されたパーセンテージ間の任意の量の増加を含む。
【0033】
本明細書で使用される場合、用語「予防的投与」は、対象内の疾患または障害の発生および／または進行を予防するために、疾患または障害の何らかの症状または徴候がない場合に、対象に任意の組成物を投与することを指す。
【0034】
本明細書で使用される場合、用語「標的細胞」は、病態によって直接的または間接的のいずれかで、有害に影響を受ける１つまたは複数の細胞を指す。
【0035】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療」、および「治療すること」は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、疾患、障害またはその症状の発生を完全にまたは部分的に予防する観点から予防的であってもよく、および／または疾患、障害またはその症状の部分的または完全な改善もしくは抑制を提供する上で治療的であってもよい。さらに、用語「治療」は、対象における疾患、障害、またはそれらの症状の任意の治療を指し、（ａ）疾患の素因となり得るが、それを有するとはまだ診断されていない対象において疾患が生じるのを防止すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を停止すること、および（ｃ）疾患を改善することを含む。
【0036】
本明細書中で使用される場合、「治療有効量」という用語は、疾患、障害またはそれらの症状の１つまたは複数を改善、治療および／または阻害するのに十分な量の使用される遺伝子ベクターの量を指す。「治療有効量」は、使用される遺伝子ベクター、遺伝子ベクターの投与経路、ならびにその疾患、障害または症状の重症度に応じて変化する。対象の年齢、体重、および遺伝的構成はまた、治療有効量となる遺伝子ベクターの量に影響を及ぼす可能性がある。
【0037】
本明細書で使用される場合、用語「単位投与形態」および「単位投与量」は、患者のための単一投与量として適切な物理的に別個の単位を指す。各単位は、所定量の遺伝子ベクターおよび任意に、１つ以上の適切な薬学的に許容可能な担体、１つ以上の賦形剤、１つ以上の追加の活性成分、またはそれらの組合せを含有する。各単位内の遺伝子ベクターの量は、治療有効量である。
【0038】
本明細書で使用される場合、「アップレギュレートする」という用語は、特定の遺伝子産物、例えば脳内のＧＰＣＲの発現を増加させることを指す。アップレギュレーションのための手段は、限定されるものではないが、標的遺伝子産物の転写、翻訳の増加または安定性もしくは活性の改善を含むことができる。アップレギュレーションはまた、標的遺伝子産物の発現を増加させるために、負の調節タンパク質または他要因の不活性化または発現の減少または有効性を含むことができる。いくつかの実施形態において、アップレギュレーションは、標的遺伝子産物をコードする遺伝子の１つ以上のコピーを提供することを含む。標的遺伝子産物をコードする遺伝子は、１つ以上の異種プロモーターを含むことができ、標的遺伝子産物の発現または酵素活性を増加させるために、遺伝子の変異型をさらに含むことができる。他の実施形態において、標的遺伝子産物のアップレギュレーションは、標的遺伝子産物の発現または酵素活性の増加を提供する突然変異のための選択を含み得る。
【0039】
本明細書において値の範囲が提供される場合、文脈上、その範囲の上限および下限と、その記載された範囲内の任意の他の記載または介在する値との間に別段の明記がない限り、各介在する値は、下限の単位の１０分の１まで、本発明内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立して、より小さい範囲に含まれてもよく、また、記載された範囲内のいかなる具体的に除外された制限にも従うことを条件として、本発明内に包含される。既述の範囲が当該制限の一方または両方を含む場合、それらの含まれる制限のいずれかまたは両方を排除する範囲も本発明に含まれる。
【0040】
本発明のいくつかの実施形態は、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、髄腔内経路、小胞内経路、脳室内経路、局所経路、鼻腔内経路、経粘膜経路、肺経路、静脈内経路によって遺伝子ベクターを対象に投与することを包含する。遺伝子ベクターは、定位的および他の神経外科的手段を用いて、中枢神経系に直接投与してもよい。
【0041】
本発明のいくつかの実施形態において、遺伝子ベクターは、ＧＰＣＲおよび／またはＧＰＣＲのサブペプチドをコードする核酸を中枢神経系の標的に導入するために使用される、ＨＴ４、ＤＩ（Ａ）またはＧＰＲ１３９などのＧＰＣＲをコードするカーゴ（ｃａｒｇｏ）核酸をさらに含むウイルスベクターを含む。
【0042】
本発明のいくつかの実施形態において、遺伝子導入は、ガンマレトロウイルス、レンチウイルス、フラビウイルス、インフルエンザ、エンテロウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、ルビウイルス、モルビリウイルス、オルトポックスウイルス、水痘ウイルス、ディペンドパルボウイルス、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、デルタバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、マスタデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘ウイルス、サイトメガロウイルス、およびこれらの組合せを含む、または、これらからなる群から選択されるウイルスである。好ましい実施形態において、遺伝子導入ベクターは、アデノ随伴ウイルスレンチウイルス、ヘルペスウイルス、および向神経性であり得る他のウイルスである。
【0043】
本発明はまた、治療有効量の遺伝子導入ベクターおよびそのＧＰＣＲコード核酸を投与することによって、アルコール中毒および／またはオピエート依存症のような病態を治療することを目的とする。本発明のいくつかの実施形態において、患者に投与されるベクターの治療有効量は、約１０～約１×１０１６ ＴＣＩＤ５０／ｋｇ（患者の体重１ｋｇ当たり５０％の組織培養感染量）のである。本発明のいくつかの実施形態において、患者に投与される遺伝子ベクターの治療有効量は、約１×１０１３ ＴＣＩＤ５０／ｋｇである。本発明のいくつかの実施形態において、患者に投与される遺伝子ベクターの治療有効量は、ＴＰＣ／ｋｇ（患者の体重１ｋｇ当たりの遺伝子ベクターの総粒子数）で測定される。いくつかの実施形態において、遺伝子ベクターの治療有効量は、約１０～約１×１０１６ ＴＰＣ／ｋｇである。
【0044】
本発明のいくつかの実施形態は、好ましくは、それに限定されないが、手綱および手綱の脳室周囲領域の神経受容体および／または神経受容体のサブペプチドの産生をアップレギュレートするであろう遺伝子導入ベクターおよびそのカーゴ核酸の治療有効量を対象に投与する工程を含む、病態を治療する方法に関する。
【0045】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルスベクター中にＨＴ４（配列番号１）を含む遺伝子導入ベクターを用いて、依存症、不安、および／またはうつ病などの障害を有する患者を治療するための方法を含む。標的組織内の細胞、例えば被殻、尾状核、側坐核、淡蒼球ならびに／または黒質手綱および手綱の脳室周囲領域へのベクターの治療有効量の曝露は、標的組織内のＨＴ４の発現を増加させ、それにより障害の症状を寛解または改善する。
【0046】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルスベクターに導入されたＤ１（Ａ）（配列番号２）を含む遺伝子ベクターを用いて、依存症、不安、および／またはうつ病などの障害を有する患者を治療するための方法を含む。治療有効量の遺伝子導入ベクターを、標的組織内の細胞、例えば、背側および／もしくは腹側線条体、扁桃体、大脳皮質、ならびに／または視床下部に暴露すると、標的組織内のＤ１（Ａ）の発現が増加し、それによって障害の症状が寛解または改善されるであろう。
【0047】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルスベクターに導入されたＧＰＲ１３９（配列番号３）を含む遺伝子導入ベクターを用いて、依存症、不安、および／またはうつ病などの障害を有する患者を治療するための方法を含む。標的組織内の細胞、例えば、手綱の脳室周囲および／または脚間核へのベクターの治療有効量の曝露は、標的組織内のＧＰＲ１３９の発現を増加させ、それにより、障害の症状を寛解または改善し、すなわち、アルコールおよび／またはオピエートに対する欲求を減少させる。
【実施例】
【0048】
本発明は、例示のみのために提供される以下の実施例を参照することによってさらに説明される。本発明は、実施例に限定されるものではなく、むしろ、本明細書に提供される教示によって提供されるすべての変形を含む。
【0049】
実施例１
ＨＴ４発現のアップレギュレーションと治療効果
ＨＴ４（配列番号１）をコードするコドン最適化核酸、ＣＡＳＩプロモーター、およびＡＡＶ２逆方向末端反復の間に位置するＳＶ４０ポリＡシグナルを含む、アデノ随伴ウイルスベクターゲノム（例えば、ＡＡＶ－２０または他の既知のＡＡＶ－ベクター）プラスミドは、ヒト胚性腎２９３細胞のＡＡＶゲノムおよびパッケージングプラスミドとの同時トランスフェクションによって産生され、Ｈａｌｂｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，［Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８７：２５７－６６（２０１８）］によって記載されているように精製される。得られた精製ウイルス調製物（ＡＡＶ－ＨＴ４）の力価を定量的ポリメラーゼ連鎖反応分析により測定する。
ＨＴ４発現のアップレギュレーションと治療効果
ＨＴ４（配列番号１）をコードするコドン最適化核酸、ＣＡＳＩプロモーター、およびＡＡＶ２逆方向末端反復の間に位置するＳＶ４０ポリＡシグナルを含む、アデノ随伴ウイルスベクターゲノム（例えば、ＡＡＶ－２０または他の既知のＡＡＶ－ベクター）プラスミドは、ヒト胚性腎２９３細胞のＡＡＶゲノムおよびパッケージングプラスミドとの同時トランスフェクションによって産生され、Ｈａｌｂｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，［Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８７：２５７－６６（２０１８）］によって記載されているように精製される。得られた精製ウイルス調製物（ＡＡＶ－ＨＴ４）の力価を定量的ポリメラーゼ連鎖反応分析により測定する。
【0050】
対象マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡから入手したＢＡＬＢ／ｃ）にＡＡＶ－ＨＴ４の約１×１０１１の感染性微粒子を筋肉内、頭蓋内、熱内、静脈内投与すると、被殻、尾状核、側坐核、淡蒼球、および黒質におけるＨＴ４発現量が増加したマウスが作製される。アップレギュレートされたＨＴ４発現のレベルは、抗ＨＴ４抗体（例えば、カタログ番号ＮＬＳ６５６，Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ，ＣＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＳＯ １９５，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ－Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を利用する定量的蛍光によって決定され得る。関連する脳組織への低線量放射線曝露を受けたマウスでは、ＨＴ４のアップレギュレーションレベルの増加が観察される可能性がある。
【0051】
対象動物の不安レベルに対するＨＴ４のアップレギュレーションの影響は、オープンフィールド試験、高架式十字迷路試験、またはＨｏｌｍｅｓ［Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｂｉｏｂｅｈａｖ．Ｒｅｖ．２５（３）：２６１－７３（２００１）］が記載したダーク／ライトボックス試験など、一般的に使用されている一連の検査を用いることにより決定される（不安はアルコールおよびオピエート離脱に伴う一般的な症状であることにも留意すべきである）。ＡＡＶ－ＨＴ４で処置された動物間で観察された不安の統計的有意差は、開示された組成物および方法が抗不安療法を提供することを示す。
【0052】
実施例２
Ｄ１（Ａ）発現のアップレギュレーションと治療効果
Ｄ１（Ａ）（配列番号２）をコードするコドン最適化核酸配列を、ベクターＩＲＥＳ配列と３’－ＬＴＲ（Ｒｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ））との間のマウス幹細胞ウイルス由来のＭＳＣＶベクターに挿入する。Ｒｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ）におけるＤ１（Ａ）配列の発現は、上流の５’－ＬＴＲ内の活性の高いプロモーターからもたらされる。ＭＳＣＶベクターおよびパッケージング細胞株は、タカラ（カタログ番号６３４４０１，Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から得られ、高力価のＲｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ）を精製するために製造業者によって記載されているように使用される。
Ｄ１（Ａ）発現のアップレギュレーションと治療効果
Ｄ１（Ａ）（配列番号２）をコードするコドン最適化核酸配列を、ベクターＩＲＥＳ配列と３’－ＬＴＲ（Ｒｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ））との間のマウス幹細胞ウイルス由来のＭＳＣＶベクターに挿入する。Ｒｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ）におけるＤ１（Ａ）配列の発現は、上流の５’－ＬＴＲ内の活性の高いプロモーターからもたらされる。ＭＳＣＶベクターおよびパッケージング細胞株は、タカラ（カタログ番号６３４４０１，Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から得られ、高力価のＲｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ）を精製するために製造業者によって記載されているように使用される。
【0053】
対象マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡから入手したＢＡＬＢ／ｃ）に約１ｘ１０１２のＲｅｔｒｏ－Ｄｌ（Ａ）を静脈内投与すると、背側線条体および／もしくは腹側線条体、扁桃体、大脳皮質、ならびに／または視床下部でＤ１（Ａ）発現量が増加したマウスが作製される。アップレギュレートされたＤＩ（ＣＡ）発現のレベルは、抗Ｄｌ（Ａ）抗体（例えば、カタログ番号ＳＧ２－Ｄｌａ，Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ，ＣＯ；カタログ番号ＡＢ９１４１，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ－Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いた定量的蛍光によって測定することができる。血液脳関門の集束低強度超音波破壊を受けたマウスでは、Ｄ１（Ａ）のアップレギュレーションレベルの増加が観察される可能性がある。
【0054】
ＨＴ４と同様に、対象動物の不安レベルに対するＤ１（Ａ）のアップレギュレーションの影響は、オープンフィールド試験、高架式十字迷路試験、またはＨｏｌｍｅｓ［Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｂｉｏｂｅｈａｖ．Ｒｅｖ．２５（３）：２６１－７３（２００１）］に記載されているダーク／ライトボックス試験のような一連の一般的に使用される試験を用いて決定することができる。ＡＡＶ－Ｄｌ（Ａ）で処置された動物間で観察された不安の統計的有意差は、開示された組成物および方法が抗不安療法を提供することを示す。
【0055】
実施例３
ＧＰＲ１３９のアップレギュレーションと治療効果
ＧＰＲ１３９（配列番号３）をコードするコドン最適化核酸配列を、多重クローニング部位ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－ｍＣｈｅｒｒｙベクター（レンチウイルスベクター）に挿入する。ベクターおよびパッケージング細胞株は、タカラ（カタログ番号６３２１８２，Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から得られ、製造業者によって記載されているように、高力価の所望の遺伝子ベクター（ＬＶＸ－ＧＰＲ１３９）を精製するために使用される。
ＧＰＲ１３９のアップレギュレーションと治療効果
ＧＰＲ１３９（配列番号３）をコードするコドン最適化核酸配列を、多重クローニング部位ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－ｍＣｈｅｒｒｙベクター（レンチウイルスベクター）に挿入する。ベクターおよびパッケージング細胞株は、タカラ（カタログ番号６３２１８２，Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から得られ、製造業者によって記載されているように、高力価の所望の遺伝子ベクター（ＬＶＸ－ＧＰＲ１３９）を精製するために使用される。
【0056】
対象ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡから入手可能なウイスターラット）約１×１０１１ ＬＶＸ－ＧＰＲ１３９を定位的に導入すると、手綱（依存症挙動に関連する神経解剖学的部位）でＧＰＲ１３９発現量が増加したラットが作製される。アップレギュレートされたＨＴ４発現のレベルは、抗ＧＰＲ１３９抗体（例えば、カタログ番号ＮＬＳ２７１７，Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ，ＣＯ；カタログ番号ＳＡＢ４５００３３５，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ－Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を利用する定量的蛍光によって測定され得る。Ｌｕｘ－ＧＰＲ１３９ベクターはまた、静脈内投与の前または後に血液脳関門を一時的に崩壊させるための上記で詳述した種々の方法によって、または上記で論じた方法のいずれかによって、手綱に導入することができる。
【0057】
Ｋｏｎｏｎｏｆｆ，ｅｔ ａｌ，［ｅＮｅｕｒｏ ２０１８；１０．１５２３／ＥＮＥＵＲ０．０１５３－１６．２０１８］に記載されているような強迫的アルコール自己投与挙動を示す対象ラットのコホートは、上記の手順によりＬＶＸ－ＧＰＲ１３９で処置される。このようなラットに対するＧＰＲ１３９のアップレギュレーションの予測される効果は、アルコール自己投与イベントの頻度を減少させることである。ベクターのみで治療されたラットと比較して、ＬＶＸ－ＧＰＲ１３９で処置されたラットにおけるアルコールの自己投与の統計的に有意な減少は、開示された組成物および方法が依存症挙動の治療を提供することを示す。
【0058】
同様に、ＧＰＲ１３９をＡＡＶ１、２、４、５、８または９（中枢神経系の細胞に対する親和性を有することが示されている）のクローニング部位に導入してもよい。投与は、定位手術、上述の血液脳関門を一時的に崩壊させる様々な手段による静脈内投与を介して行うことができる。
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】
【国際調査報告】