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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-21
(54)【発明の名称】ウイルスベクターを製造するための方法及びシステム
(51)【国際特許分類】
C12N 15/86 20060101AFI20220414BHJP
B01D 61/14 20060101ALI20220414BHJP
B01D 35/02 20060101ALI20220414BHJP
B01D 15/08 20060101ALI20220414BHJP
B01D 61/20 20060101ALI20220414BHJP
B01D 61/58 20060101ALI20220414BHJP
C12N 15/867 20060101ALI20220414BHJP
C12N 15/861 20060101ALI20220414BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20220414BHJP
C12N 15/869 20060101ALI20220414BHJP
C12N 15/863 20060101ALI20220414BHJP
C12M 1/00 20060101ALI20220414BHJP
G01N 15/02 20060101ALI20220414BHJP
G01N 15/06 20060101ALI20220414BHJP
C12N 7/01 20060101ALN20220414BHJP
【ＦＩ】
C12N15/86 Z
B01D61/14 500
B01D35/02 Z
B01D15/08
B01D61/20
B01D61/58
C12N15/867 Z
C12N15/861 Z
C12N15/864 100Z
C12N15/869 Z
C12N15/863 Z
C12M1/00 A
G01N15/02 A
G01N15/06 E
G01N15/06 C
C12N7/01
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021543160
(86)(22)【出願日】2020-01-22
(85)【翻訳文提出日】2021-09-16
(86)【国際出願番号】 US2020014668
(87)【国際公開番号】W WO2020154445
(87)【国際公開日】2020-07-30
(31)【優先権主張番号】62/795,513
(32)【優先日】2019-01-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513167522
【氏名又は名称】ブルーバード バイオ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ディッカー， スティーブン マイケル
(72)【発明者】
【氏名】デューエル， ジュリア ルース
(72)【発明者】
【氏名】バイジャ， ヴィマル エイチ．
【テーマコード（参考）】
4B029
4B065
4D006
4D017
4D116
【Ｆターム（参考）】
4B029AA23
4B029BB13
4B029CC01
4B029GB02
4B065AA95X
4B065AB01
4B065BA02
4D006GA06
4D006KA01
4D006KA52
4D006KB14
4D006KB21
4D006PA01
4D006PA02
4D006PB55
4D006PC41
4D017AA03
4D017BA20
4D017EB03
4D116BB01
4D116DD07
4D116FF18B
4D116QA45C
4D116QA45D
4D116QA45G
4D116UU19
4D116VV30
(57)【要約】
本明細書に開示されるのは、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置を使用してウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）を製造するための方法及びシステムである。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置を使用して、製造プロセスにおける１つ以上のユニットの操作（例えば、２、３、４、５、または６つのユニットの操作）を制御する及び／または自動化する。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、製造プロセスにおける各ユニットの操作を制御するために使用される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
製造プロセスにおいてユニットの操作を制御する前記製造プロセスに関してインラインのマルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）装置を使用することを含む、ウイルスベクターを製造するための方法。
【請求項2】
前記ＭＡＬＳ装置が、前記製造プロセスにおける複数のユニットの操作を制御するために使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＭＡＬＳ装置が、前記製造プロセスにおける２、３、４、５、または６つのユニットの操作を制御するために使用される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
ＭＡＬＳ装置が、前記製造プロセスにおける各ユニットの操作を制御するために使用される、請求項２または３に記載の方法。
【請求項5】
前記ユニットが分離ユニットである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記分離ユニットが、クロマトグラフィーユニット、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニットである、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記ユニットが濾過ユニット、清澄化ユニット、精製ユニット、及び／または濃縮ユニットである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記ユニットが配合ユニットまたは充填ユニットである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
製造プロセスに関してインラインのマルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）装置を使用して、前記製造プロセス中に生成された前記ウイルス粒子を検出することを含む、ウイルス粒子を検出するための方法。
【請求項12】
前記ＭＡＬＳ装置が、前記ウイルス粒子を検出するため、前記製造プロセス中に、クロマトグラフィー及び／または濾過に関してインラインに使用される、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記ＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記ＭＡＬＳ装置がタンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過に関してインラインに使用される、請求項１２に記載の方法。
【請求項15】
第１のＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置が濾過に関してインラインに使用される、請求項１２に記載の方法。
【請求項16】
前記ウイルス粒子を精製することをさらに含む、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記ＭＡＬＳ装置が、粒子サイズに基づいて不純物からの前記ウイルス粒子の前記分離を自動化する、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記粒子サイズは、前記粒子の半径または直径として測定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項１１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
宿主細胞から採取されたウイルス粒子を清澄化し、前記ウイルス粒子を不純物から分離し、前記ウイルス粒子を濾過し、前記ウイルス粒子を濃縮することを含むウイルスベクター製造プロセスであって、前記製造プロセスは、１つ以上のＭＡＬＳ装置に関してインラインに実行される、前記プロセス。
【請求項22】
前記ウイルス粒子が、ＭＡＬＳ装置に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して分離される、請求項２１に記載のプロセス。
【請求項23】
前記ウイルス粒子が、粒子サイズに基づいて不純物から分離される、請求項２１または２２に記載のプロセス。
【請求項24】
粒子サイズが前記ＭＡＬＳ装置を使用して測定される、請求項２３に記載のプロセス。
【請求項25】
前記ウイルス粒子が、ＭＡＬＳ装置に関してインラインのタンジェンシャルフロー濾過を使用して濾過及び濃縮される、請求項２１～２４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項26】
前記ＭＡＬＳ装置が、溶液中の前記ウイルス粒子のリアルタイムの濃度を判定する、請求項２５に記載のプロセス。
【請求項27】
前記１つ以上のＭＡＬＳ装置が、分離プロセス、濾過プロセス、濃縮プロセス、清澄化プロセス、精製プロセス、及び／または配合プロセスに関してインラインに使用される、請求項２１に記載のプロセス。
【請求項28】
前記ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルス粒子からなる群から選択される、請求項２１～２７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項29】
前記ウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項２１～２８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項30】
ウイルスベクターの製造プロセスを開始し、前記製造プロセスに関してインラインのマルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）装置を使用してウイルス粒子の存在を検出し、前記ウイルス粒子を精製することを含む、ウイルスベクターを製造するための方法。
【請求項31】
前記ＭＡＬＳ装置が、前記ウイルス粒子を検出するため、前記製造プロセス中に、クロマトグラフィー及び／または濾過に関してインラインに使用される、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記ＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用される、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記ＭＡＬＳ装置がタンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過に関してインラインに使用される、請求項３１に記載の方法。
【請求項34】
第１のＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置が濾過に関してインラインに使用される、請求項３１に記載の方法。
【請求項35】
前記ＭＡＬＳ装置が、濾過に関してインラインに使用されて、粒子サイズに基づいて不純物からの前記ウイルス粒子の精製を制御する、請求項３０に記載の方法。
【請求項36】
前記粒子サイズは、前記粒子の半径または直径として測定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記粒子サイズが前記ＭＡＬＳ装置によって測定される、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項38】
前記濾過ユニットがノーマルフロー濾過ユニットである、請求項３５～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
第２の濾過ユニットが前記ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用され、前記第２の濾過ユニットが限外濾過ユニットである、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
第１のＭＡＬＳ装置がウイルス粒子の存在を検出するために使用され、第２のＭＡＬＳ装置が前記ウイルス粒子の精製を制御するために使用される、請求項３０に記載の方法。
【請求項41】
前記ウイルス粒子を濃縮することをさらに含む、請求項３０～４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
前記ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルス粒子からなる群から選択される、請求項３０～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
前記ウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項３０～４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
ＭＡＬＳ装置に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用してウイルス粒子及び不純物を含む溶液を分離することを含む、ウイルスベクター製造プロセスにおいて不純物を除去するための方法であって、前記ＭＡＬＳ装置が粒子サイズに基づいて前記不純物からの前記ウイルス粒子の分離を制御する、前記方法。
【請求項45】
前記ＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーユニットに関してインラインに使用される、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記ＭＡＬＳ装置が、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニットに関してインラインに使用される、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項47】
第１のＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーユニットに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置が濾過ユニットに関してインラインに使用される、請求項４４に記載の方法。
【請求項48】
前記ウイルス粒子を精製することをさらに含む、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
前記ＭＡＬＳ装置が、濾過ユニットに関してインラインに使用されて、粒子サイズに基づいて不純物からの前記ウイルス粒子の精製を制御する、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記濾過ユニットがノーマルフロー濾過ユニットである、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
第２の濾過ユニットが前記ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用され、前記第２の濾過ユニットが限外濾過ユニットである、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項52】
前記不純物からの前記ウイルス粒子の分離を制御するために第１のＭＡＬＳ装置が使用され、前記ウイルス粒子の精製を制御するために第２のＭＡＬＳ装置が使用される、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
前記ウイルス粒子を濃縮することをさらに含む、請求項４４～５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項54】
前記粒子サイズは、前記粒子の半径または直径として測定される、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項55】
前記ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルス粒子からなる群から選択される、請求項４４～５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項56】
前記ウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項４４～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項57】
ＭＡＬＳ装置に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して溶液の中で感染性ウイルス粒子を不純物から分離することを含む、ウイルスベクターの製造プロセスにおける感染性ウイルス粒子の回収を増加させるための方法であって、前記ＭＡＬＳ装置が粒子サイズに基づいて前記不純物からの前記感染性ウイルス粒子の分離を制御する、前記方法。
【請求項58】
前記ＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用される、請求項５７に記載の方法。
【請求項59】
前記ＭＡＬＳ装置がタンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過に関してインラインに使用される、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項60】
第１のＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置が濾過に関してインラインに使用される、請求項５７に記載の方法。
【請求項61】
前記感染性ウイルス粒子を濃縮することをさらに含む、請求項５７～６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項62】
前記感染性ウイルス粒子を精製することをさらに含む、請求項５７～６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
前記ＭＡＬＳ装置が、濾過に関してインラインに使用されて、粒子サイズに基づいて前記不純物からの前記感染性ウイルス粒子の精製を制御する、請求項６２に記載の方法。
【請求項64】
前記濾過がノーマルフロー濾過である、請求項６３に記載の方法。
【請求項65】
第２の濾過が前記ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用され、前記第２の濾過が限外濾過である、請求項６３または６４に記載の方法。
【請求項66】
前記不純物からの前記感染性ウイルス粒子の分離を制御するために第１のＭＡＬＳ装置が使用され、前記感染性ウイルス粒子の精製を制御するために第２のＭＡＬＳ装置が使用される、請求項６６～６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項67】
前記粒子サイズは、前記粒子の半径または直径として測定される、請求項５７～６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項68】
前記ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルス粒子からなる群から選択される、請求項５７～６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項69】
前記ウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項５７～６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項70】
ＭＡＬＳ装置に関してインラインのタンジェンシャルフロー濾過を使用してウイルス粒子を含む溶液を濾過することを含む、ウイルスベクター製造プロセスにおいてウイルス粒子を濃縮するための方法であって、前記ＭＡＬＳ装置は、溶液中の前記ウイルス粒子のリアルタイムの濃度を判定し、前記リアルタイムの濃度が前記溶液中の前記ウイルス粒子の目標濃度に実質的に等しくなるまで、前記溶液の前記濾過を自動化する、前記方法。
【請求項71】
前記ウイルス粒子を清澄化することをさらに含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項72】
前記ウイルス粒子を精製することをさらに含む、請求項７０または７１に記載の方法。
【請求項73】
前記ＭＡＬＳ装置が、濾過ユニットに関してインラインに使用されて、粒子サイズに基づいて不純物からの前記ウイルス粒子の精製を制御する、請求項７２に記載の方法。
【請求項74】
前記粒子サイズは、前記粒子の半径または直径として測定される、請求項７２に記載の方法。
【請求項75】
前記濾過ユニットがノーマルフロー濾過ユニットである、請求項７３または７４に記載の方法。
【請求項76】
第２の濾過ユニットが前記ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用され、前記第２の濾過ユニットが限外濾過ユニットである、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項77】
前記ウイルス粒子の濃縮を制御するために第１のＭＡＬＳ装置が使用され、前記ウイルス粒子の精製を制御するために第２のＭＡＬＳ装置が使用される、請求項７２～７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項78】
前記ウイルス粒子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルス粒子からなる群から選択される、請求項７２～７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項79】
前記ウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項７２～７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項80】
ウイルス粒子を含む溶液の濁度を検出し、それによって前記ユニットの操作を制御するために、前記製造プロセスに関してインラインのＭＡＬＳ装置を使用することを含む、ウイルス製造プロセスにおけるユニットの操作を制御するための方法。
【請求項81】
前記製造プロセスに関してインラインのマルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）装置を含む、ウイルスベクターを製造するためのシステム。
【請求項82】
前記ＭＡＬＳ装置が１つ以上のユニットに接続されている、請求項８１に記載のシステム。
【請求項83】
前記ＭＡＬＳ装置が分離ユニットに接続されている、請求項８１または８２に記載のシステム。
【請求項84】
前記ＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーユニットに接続されている、請求項８１～８３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項85】
前記ＭＡＬＳ装置が濾過ユニットに接続されている、請求項８１～８４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項86】
前記ＭＡＬＳ装置が、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニットに接続される、請求項８１～８５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項87】
前記ＭＡＬＳ装置が濃縮ユニットに接続されている、請求項８１～８６のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項88】
前記ＭＡＬＳ装置が清澄化ユニットに接続されている、請求項８１～８７のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項89】
前記ＭＡＬＳ装置が精製ユニットに接続されている、請求項８１～８８のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項90】
前記システムが２つ以上のＭＡＬＳ装置を含む、請求項８１に記載のシステム。
【請求項91】
前記システムが、２、３、４、５、または６つのＭＡＬＳ装置を含む、請求項９０に記載のシステム。
【請求項92】
第１のＭＡＬＳ装置が分離ユニットに接続されている、請求項９０または９１に記載のシステム。
【請求項93】
第１のＭＡＬＳ装置がクロマトグラフィーユニットに接続されている、請求項９０～９２のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項94】
第２のＭＡＬＳ装置が濾過ユニットに接続されている、請求項９０～９３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項95】
第２のＭＡＬＳ装置が、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニットに接続される、請求項９０～９４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項96】
第３のＭＡＬＳ装置が濃縮ユニットに接続されている、請求項９０～９５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項97】
第４のＭＡＬＳ装置が清澄化ユニットに接続されている、請求項９０～９６のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項98】
第５のＭＡＬＳ装置が精製ユニットに接続されている、請求項９０～９７のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項99】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルスベクターからなる群から選択される、請求項８１～９８のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項100】
前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項８１～９９のいずれか一項に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本願は、２０１９年１月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／７９５，５１３号の利益を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本願は、２０１９年１月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／７９５，５１３号の利益を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
ウイルスベクターを用いた遺伝子治療は、大きな関心を呼んでいる分野である。しかし、大量のウイルスベクターを効率的に製造する能力が、継続的な問題となっている。現在、製造プロセス中にウイルスベクターを検出または定量化するためのインラインプロセス分析技術（ＰＡＴ）の解決策がない。製造プロセス中に感染性粒子からの非感染性粒子の分離を制御するためのインラインプロセスもない。ウイルスベクターの定量化と同定には通常、長々しいアッセイが必要であり、製造プロセス中にリアルタイムの意思決定を行うことはできない。さらに、現在、エクソソームなどのプロセス固有の不純物からのインタクトなウイルスベクター粒子の分離を制御するインラインでの解決策はない。感染性ウイルス粒子を検出し、これらの粒子を不純物からリアルタイムで分離できるようにするプロセスが必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0003】
本明細書に開示されるのは、ウイルスベクターを製造するための方法である。この方法は、製造プロセスにおけるユニットの操作を制御及び／または自動化する製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、マルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ））装置を使用することを含む。
【0004】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置を使用して、製造プロセスにおける１つ以上のユニットの操作（例えば、２、３、４、５、または６つのユニットの操作）を制御する及び／または自動化する。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、製造プロセスにおける各ユニットの操作を制御するために使用される。
【0005】
いくつかの実施形態では、ユニットは、分離ユニット（例えば、クロマトグラフィーユニット、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニット）である。いくつかの実施形態では、ユニットは、濾過ユニット、清澄化ユニット、精製ユニット、濃縮ユニット、配合ユニット、及び／または充填ユニットである。
【0006】
ウイルス粒子を検出するための方法も本明細書に開示される。この方法は、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用して、製造プロセス中に生成されたウイルス粒子を検出することを含む。
【0007】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置が、ウイルス粒子を検出するため、製造プロセス中に、クロマトグラフィー及び／または濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態において、第１のＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置は、濾過に関してインラインに使用される。
【0008】
いくつかの実施形態において、ウイルス粒子を検出するための方法は、ウイルス粒子を精製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、粒子サイズに基づいて不純物からのウイルス粒子の分離を自動化する。粒子サイズは、粒子の半径または直径として測定することができる。
【0009】
本明細書に開示されるのは、ウイルスベクター製造プロセスである。方法は、宿主細胞から採取されたウイルス粒子を清澄化し、ウイルス粒子を不純物から分離し、ウイルス粒子を濾過し、ウイルス粒子を濃縮することを含み、製造プロセスは、１つ以上の静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインに実行される。
【0010】
いくつかの実施形態では、ウイルス粒子は、ＭＡＬＳ装置に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して分離される。いくつかの実施形態において、ウイルス粒子は、粒子サイズに基づいて不純物から分離される。粒子サイズは、ＭＡＬＳ装置を使用して測定できる。いくつかの実施形態において、ウイルス粒子は、ＭＡＬＳ装置に関してインラインのタンジェンシャルフロー濾過を使用して濾過及び濃縮される。特定の実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、溶液中のウイルス粒子（例えば、ウイルス粒子／ｍＬ）のリアルタイムの濃度を判定する。いくつかの実施形態では、１つ以上のＭＡＬＳ装置は、分離プロセス、濾過プロセス、濃縮プロセス、清澄化プロセス、精製プロセス、及び／または配合プロセスに関してインラインに使用される。
【0011】
本明細書にさらに開示されるのは、ウイルスベクターを製造するための方法である。この方法は、ウイルスベクター製造プロセスを開始し、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用してウイルス粒子の存在を検出し、ウイルス粒子を精製することを含む。
【0012】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置が、ウイルス粒子を検出するため、製造プロセス中に、クロマトグラフィー及び／または濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態において、第１のＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置は、濾過に関してインラインに使用される。
【0013】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、濾過に関してインラインに使用されて、１つ以上のユニットの操作を制御して、粒子サイズに基づいて不純物からウイルス粒子を精製する。粒子サイズは、ＭＡＬＳ装置によって、粒子の半径または直径として測定することができる。いくつかの実施形態では、濾過ユニットは、ノーマルフロー濾過ユニットである。いくつかの実施形態では、第２の濾過ユニットは、ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用され、第２の濾過ユニットは、限外濾過ユニットである。
【0014】
いくつかの実施形態では、第１のＭＡＬＳ装置を使用してウイルス粒子の存在を検出し、第２のＭＡＬＳ装置を使用して、１つ以上のユニットの操作を制御してウイルス粒子を精製する。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターを製造するための方法は、ウイルス粒子を濃縮することをさらに含む。
【0015】
ウイルスベクター製造プロセスにおいて不純物を除去するための方法も、本明細書に開示される。方法は、静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用してウイルス粒子及び不純物を含む溶液を分離することを含み、静的光散乱装置が、粒子サイズに基づいて不純物から、ウイルス粒子を分離する。特定の実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、サイズに基づいてウイルス粒子と不純物との差を検出し、それによって分離装置を制御する（例えば、ＭＡＬＳからクロマトグラフィースキッドへの信号が、ウイルス粒子の収集を制御し、不純物を廃棄物に送る）。
【0016】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーユニットに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置が、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニットに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態において、第１のＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーユニットに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置が濾過ユニットに関してインラインに使用される。
【0017】
いくつかの実施形態において、ウイルスベクター製造プロセスにおいて不純物を除去するための方法は、ウイルス粒子を精製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、濾過ユニット（例えば、ノーマルフロー濾過ユニット）に関してインラインに使用され、粒子サイズに基づいて不純物からのウイルス粒子の精製を制御する。いくつかの実施形態では、第２の濾過ユニット（例えば、限外濾過ユニット）が、ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態において、第１のＭＡＬＳ装置は、不純物からのウイルス粒子の分離を可能にするために使用され、第２のＭＡＬＳ装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために使用される。いくつかの実施形態において、ウイルスベクター製造プロセスにおいて不純物を除去するための方法は、ウイルス粒子を濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、粒子サイズは、粒子の半径または直径として測定される。
【0018】
本明細書に開示されるのは、ウイルスベクター製造プロセスにおいて感染性ウイルス粒子の回収を増加させるための方法である。方法は、静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して溶液の中で感染性ウイルス粒子を不純物から分離することを含み、静的光散乱装置が粒子サイズに基づいて不純物から感染性ウイルス粒子を分離する。
【0019】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置が、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態において、第１のＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２のＭＡＬＳ装置は、濾過に関してインラインに使用される。
【0020】
いくつかの実施形態において、ウイルスベクター製造プロセスにおいて感染性ウイルス粒子の回収を増加させるための方法は、感染性ウイルス粒子を濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態において、ウイルスベクター製造プロセスにおいて感染性ウイルス粒子の回収を増加させるための方法は、感染性ウイルス粒子を精製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、濾過（例えば、ノーマルフロー濾過）に関してインラインに使用され、粒子サイズに基づいて不純物からの感染性ウイルス粒子の精製を制御する。いくつかの実施形態では、第２の濾過（例えば、限外濾過）が、ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用される。
【0021】
いくつかの実施形態では、第１のＭＡＬＳ装置は、感染性ウイルス粒子を不純物から分離するために使用され、第２のＭＡＬＳ装置は、感染性ウイルス粒子を精製するための製造プロセスの側面に関連するユニットの操作を検出及び制御する。いくつかの実施形態では、粒子サイズは、粒子の半径または直径として測定される。
【0022】
ウイルスベクターの製造プロセスにおいてウイルス粒子を濃縮するための方法も本明細書に開示される。この方法は、静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインのタンジェンシャルフロー濾過を使用してウイルス粒子を含む溶液を濾過することを含み、静的光散乱装置は、溶液中のウイルス粒子のリアルタイムの濃度を判定し、リアルタイムの濃度が溶液中のウイルス粒子の目標濃度に実質的に等しくなるまで、溶液の濾過を自動化する。
【0023】
いくつかの実施形態において、ウイルスベクター製造プロセスにおいてウイルス粒子を濃縮するための方法は、ウイルス粒子を清澄化すること及び／またはウイルス粒子を精製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、濾過ユニット（例えば、ノーマルフロー濾過ユニット）に関してインラインに使用されて、粒子サイズに基づいて不純物からのウイルス粒子の精製を制御する。いくつかの態様において、粒子サイズが、粒子の半径または直径として測定されている。いくつかの実施形態では、第２の濾過ユニット（例えば、限外濾過ユニット）が、ＭＡＬＳ装置に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、第１のＭＡＬＳ装置は、ウイルス粒子の濃度を制御するために使用され、第２のＭＡＬＳ装置は、ウイルス粒子を精製するための製造プロセスの制御の態様に関連するユニットの操作を検出及び制御する。
【0024】
本明細書に開示されるのは、ウイルス製造プロセスにおけるユニットの操作を制御するための方法である。方法は、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用して、ウイルス粒子を含む溶液の濁度を検出し、それによってユニットの操作を制御することを含む。
【0025】
本明細書にさらに開示されるのは、ウイルスベクターを製造するためのシステムである。システムは、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を含む。
【0026】
本明細書に開示される様々な実施形態において、ウイルスベクターまたはウイルス粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、及びワクシニアウイルスベクターからなる群から選択される。特定の実施形態において、ウイルスベクターまたはウイルス粒子は、レンチウイルスベクターまたは粒子である。
【0027】
いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、１つ以上のユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、分離ユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、濾過ユニット（例えば、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニット）に接続されている。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、濃縮ユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、清澄化ユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＳ装置は、精製ユニットに接続されている。
【0028】
いくつかの実施形態では、システムは、１つ以上のＭＡＬＳ装置（例えば、２、３、４、５、または６つのＭＡＬＳ装置）を含む。いくつかの実施形態では、第１のＭＡＬＳ装置は、分離ユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、第１のＭＡＬＳ装置は、クロマトグラフィーユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、第２のＭＡＬＳ装置は、濾過ユニット（例えば、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニット）に接続されている。いくつかの実施形態では、第３のＭＡＬＳ装置は、濃縮ユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、第４のＭＡＬＳ装置は、清澄化ユニットに接続されている。いくつかの実施形態では、第５のＭＡＬＳ装置は、精製ユニットに接続されている。
【0029】
本特許または出願書類は、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を含むこの特許または特許出願公開のコピーは、請求及び必要な料金の支払いに応じて官庁により提供されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0030】
【図1】ウイルスベクター製造プロセスのフローチャートを提示する。
【図2】製造中のウイルスベクターの存在及びサイズを評価するためにクロマトグラフィーに関してインラインのＭＡＬＳ装置を使用している概略図を提示する。
【図3】製造中のウイルスベクターの濃度を評価するために濾過に関してインラインのＭＡＬＳ装置を使用している概略図を提示する。
【図4】ウイルスベクタークロマトグラフィーを用いたインラインＭＡＬＳを示している。
【図5】ウイルスベクターの製造プロセスの下流部分のフローチャートを提示する。
【図6】ＭＡＬＳ装置の図を提示する。
【発明を実施するための形態】
【0031】
本明細書に開示されるのは、ウイルスベクターを製造するための方法である。いくつかの実施形態では、方法は、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、マルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）装置）を使用することを含む。ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター）を製造するためのシステムも、本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、システムは、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を含む。特定の実施形態では、１つ以上のＭＡＬＳ装置が、製造プロセスにインラインで使用されて、ウイルスベクター製造プロセスにおける１つ以上のユニットの操作を制御及び／または自動化する。
【0032】
定義
本開示をより詳細に説明する前に、本明細書で使用される特定の用語の定義を提示することは、その理解を促進し得る。
本開示をより詳細に説明する前に、本明細書で使用される特定の用語の定義を提示することは、その理解を促進し得る。
【0033】
別途定義されない限り、本明細書で使用する技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施または試験の際に、本明細書に記載の方法及び材料に類似したまたは同等の、任意の方法及び材料を使用することは可能であるが、好ましい実施形態の組成物、方法、及び材料について説明する。本発明において、以下の用語は下記のように定義する。
【0034】
冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、本明細書では、冠詞の文法的対象の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ、または１つ以上）を指すように使用している。例えば、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」とは、１つの要素、または１つ以上の要素を意味する。
【0035】
選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の一方、両方またはその任意の組み合わせのいずれかを意味することを理解されたい。
【0036】
「ａｎｄ／ｏｒ（及び／または）」という用語は、選択肢のうちの１つまたは両方のいずれかを意味するものと理解されたい。
【0037】
本明細書で使用する「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、参照の数数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対し、３０、２５、２０、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％異なる数数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さを指す。特定の実施形態では、数値の前にあるときの「約」または「おおよそ」という用語は、値の１５％、１０％、５％、または１％プラスまたはマイナスの範囲を示す。
【0038】
本明細書で使用する場合、「実質的」という用語は、参照の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さに比較して、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより多い数量、または長さを指す。一実施形態では、「実質的に同じ」は、参照の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さについて、おおよそ同じである作用、例えば生理学的作用を産出する数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さを指す。
【0039】
本明細書全体において、文脈上他の意味が要求されない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、述べられるステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を含むことを意味するが、任意の他のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を除外することを意味するものではないことを理解されたい。本明細書で使用される場合、「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」という用語は、同義に使用される。「からなる」とは、「からなる」という句に続くものを含み、それに限定されることを意味する。したがって、「からなる」という語句は、挙げられる要素が必要または必須であり、かつ他の要素は存在し得ないことを示す。「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、この語句の後に挙げられる任意の要素を含み、他の要素については、挙げられる要素の開示内容で指定された活性または作用を妨げず、寄与もしない要素に限定することを意味する。したがって、「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という語句は、挙げられる要素が必要または必須であるが他の要素については挙げられる要素の活性または作用に物質的に影響を及ぼす他の要素が存在しない、ということを示す。
【0040】
本明細書全体における「一実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「特定の実施形態（ａ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「関連した実施形態」、「特定の実施形態（ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「追加的な実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはこれらの組合せに対する言及は、実施形態に関連して記載されている特定の特徴、構造、または特色が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれていることを意味する。したがって、本明細書全体の様々な箇所で出現する上記語句が、必ずしも全て、同じ実施形態を言及しているわけではない。
【0041】
さらに、特定の特徴、構造、または特色は、１つ以上の実施形態における任意の好適な方法で組み合わせることができる。一実施形態における特徴の積極的な列挙は、特定の実施形態における特徴を除外するための基礎としての機能を果たすことも理解される。
【0042】
本明細書で使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、複合的なレトロウイルスの群（つまり、属）を指す。例示的なレンチウイルスには、以下が含まれるが、これらに限定されない：ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶタイプ１及びＨＩＶタイプ２を含む）；ビスナウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）。一実施形態では、ＨＩＶベースのベクターのバックボーン（すなわち、ＨＩＶシス作用性配列要素）が好ましい。
【0043】
レトロウイルスベクター、より具体的にはレンチウイルスベクターは、本発明の実施に使用することができる。したがって、本明細書で使用される「レトロウイルス」または「レトロウイルスベクター」という用語は、それぞれ「レンチウイルス」及び「レンチウイルスベクター」を含むことを意味する。
【0044】
「ベクター」という用語は、本明細書では、ポリヌクレオチド（例えば、目的の遺伝子または導入遺伝子をコードする）を細胞（すなわち、ウイルスベクター）に移入するために使用されるウイルス粒子を指すために使用される。有用なウイルスベクターには、例えば、複製欠陥レトロウイルス及びレンチウイルスが含まれる。
【0045】
当業者に明らかであるように、「ウイルスベクター」という用語は、核酸の転移を媒介するウイルス粒子を指すために広く使用されている。ウイルス粒子は、通常、核酸（複数可）に加えて、様々なウイルス成分を含み、時には宿主細胞成分も含む。例示的なウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが含まれるが、これらに限定されない。
【0046】
ウイルスベクターという用語は、核酸を細胞に移すことができるウイルスまたはウイルス粒子のいずれかを指し得る。ウイルスベクターには、主にウイルスに由来する構造及び／または機能的な遺伝的要素が含まれている。「レトロウイルスベクター」という用語は、主にレトロウイルスに由来するウイルスベクター及び機能的遺伝的要素、またはその一部を指す。「レンチウイルスベクター」という用語は、主にレンチウイルスに由来するＬＴＲを含む、構造的及び機能的遺伝的要素、またはその一部を含むレトロウイルスベクターを指す。「ハイブリッド」という用語は、レトロウイルス、例えばレンチウイルスの配列及び非レンチウイルスのウイルス配列の両方を含むベクターを指す。一実施形態では、ハイブリッドベクターは、逆転写、複製、組み込み、及び／またはパッケージングのためのレトロウイルス、例えばレンチウイルスの配列を含むベクターを指す。
【0047】
特定の実施形態において、「レンチウイルスベクター」及び「レンチウイルス発現ベクター」という用語は、感染性レンチウイルス粒子を指すために使用され得る。本明細書において、クローニング部位、プロモーター、調節要素、異種核酸などの要素に言及する場合、これらの要素の配列は、本発明のレンチウイルス粒子において、ＲＮＡ形態で存在することが理解されるべきである。
【0048】
「減少する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」、「減少した（ｒｅｄｕｃｅｄ）」、「減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」、「減少（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」、及び「阻害」という用語は全て、本明細書では一般に、参照と比較して統計的に有意な量の減少を意味するために使用される。しかし、誤解を避けるために、「減少した（ｒｅｄｕｃｅｄ）」、「減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）または「減少する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」または「抑制する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」は、参照レベルと比較して、少なくとも１０％の減少、例えば、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または最大で１００％または１００％を含む減少（つまり、参照サンプルと比較して存在しないレベル）、または参照レベルと比較して１０～１００％の任意の減少を意味する。
【0049】
「増加した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」、「増加（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」または「増強（ｅｎｈａｎｃｅ）」または「活性化（ａｃｔｉｖａｔｅ）」という用語はすべて、本明細書では、一般に、静的に有意な量の増加を意味するために使用される；いずれかの疑義を回避するために、「増加した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」、「増加（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」または「増強（ｅｎｈａｎｃｅ）」または「活性化（ａｃｔｉｖａｔｅ）」という用語は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の増加、例えば、参照レベルと比較して、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または最大で１００％また１００％を含む増加、または１０～１００％の間の任意の増加、または参照レベルと比較して、少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍、または少なくとも約４倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍の増加、または２倍から１０倍の間またはそれより多い任意の増加を意味する。
【0050】
「統計的に有意」または「有意に」という用語は、統計的有意性を指し、一般に、マーカーの通常の濃度またはそれより低い濃度よりも２標準偏差（２ＳＤ）低いことを意味する。この用語は、差があるということの統計的な証拠を指す。これは、帰無仮説が実際に真である場合に、帰無仮説を棄却する決定を下す確率として定義される。多くの場合、決定はｐ値を使用して行われる。
【0051】
さらなる定義は、本開示の全体を通して記載されている。
【0052】
以下の詳細な説明では、本明細書で企図されている本発明の多様な説明的な実施形態の完全な理解を成すために、特定の具体的な詳細が述べられている。しかし、当業者は、特定の例示的な実施形態がこれらの詳細なしで実施され得ることを理解する。
【0053】
ウイルスベクターを製造するためのシステム
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターを製造するためのシステムは、製造プロセスに関してインラインの１つ以上の静的光散乱装置を含む。特定の実施形態では、ウイルスベクターを製造するためのシステムは、製造プロセスに関してインラインの１つ以上のマルチアングル光散乱装置（本明細書ではマルチアングル静的光散乱装置とも呼ばれる）を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターを製造するためのシステムは、製造プロセスに関してインラインの２、３、４、５、または６つの静的光散乱装置を含む。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、１つ以上の製造ユニットに関してインラインに使用される。静的光散乱装置は、１つ以上の製造操作ユニットに接続することができる。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が操作ユニットに接続されている。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が複数の操作ユニットに接続されている。操作ユニットは、分離ユニットを含み得る。いくつかの態様において、分離ユニットは、濾過ユニット、濃縮ユニット、清澄化ユニット、精製ユニット、及び／または配合ユニットを含む。いくつかの態様において、分離ユニットはクロマトグラフィーユニットである。特定の態様では、クロマトグラフィーユニットは、イオン交換クロマトグラフィーユニット（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィーユニット）である。特定の態様において、クロマトグラフィーユニットは、アフィニティークロマトグラフィーユニット（例えば、ヘパリンアフィニティークロマトグラフィーユニット、アビジン－ビオチンアフィニティークロマトグラフィー、及び／または固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）ユニット）である。特定の態様において、クロマトグラフィーユニットは、サイズ排除クロマトグラフィーユニットである。いくつかの態様において、分離ユニットは濾過ユニットである。特定の態様において、濾過ユニットは、タンジェンシャルフロー濾過ユニットである。特定の態様において、濾過ユニットは、ノーマルフロー濾過ユニットである。特定の態様では、濾過ユニットは限外濾過ユニットである。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターを製造するためのシステムは、製造プロセスに関してインラインの１つ以上の静的光散乱装置を含む。特定の実施形態では、ウイルスベクターを製造するためのシステムは、製造プロセスに関してインラインの１つ以上のマルチアングル光散乱装置（本明細書ではマルチアングル静的光散乱装置とも呼ばれる）を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターを製造するためのシステムは、製造プロセスに関してインラインの２、３、４、５、または６つの静的光散乱装置を含む。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、１つ以上の製造ユニットに関してインラインに使用される。静的光散乱装置は、１つ以上の製造操作ユニットに接続することができる。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が操作ユニットに接続されている。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が複数の操作ユニットに接続されている。操作ユニットは、分離ユニットを含み得る。いくつかの態様において、分離ユニットは、濾過ユニット、濃縮ユニット、清澄化ユニット、精製ユニット、及び／または配合ユニットを含む。いくつかの態様において、分離ユニットはクロマトグラフィーユニットである。特定の態様では、クロマトグラフィーユニットは、イオン交換クロマトグラフィーユニット（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィーユニット）である。特定の態様において、クロマトグラフィーユニットは、アフィニティークロマトグラフィーユニット（例えば、ヘパリンアフィニティークロマトグラフィーユニット、アビジン－ビオチンアフィニティークロマトグラフィー、及び／または固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）ユニット）である。特定の態様において、クロマトグラフィーユニットは、サイズ排除クロマトグラフィーユニットである。いくつかの態様において、分離ユニットは濾過ユニットである。特定の態様において、濾過ユニットは、タンジェンシャルフロー濾過ユニットである。特定の態様において、濾過ユニットは、ノーマルフロー濾過ユニットである。特定の態様では、濾過ユニットは限外濾過ユニットである。
【0054】
本発明の実施形態では、任意の静的光散乱装置を使用することができる。静的光散乱装置の例は、参照により本明細書に組み込まれるｗｙａｔｔ．ｃｏｍにて見出すことができる。いくつかの態様では、静的光散乱装置は、１つ以上の検出器または角度を有する。検出器の数及び／または静的光散乱装置に望まれる角度は、装置の用途に依存し得る。１つの非限定的な例では、粒子のサイズを測定するための静的光散乱装置は、３つ以上の検出器（例えば、３、７、８、９、１８、２０、または２１個の検出器）を有し得る。他の非限定的な例では、濃度または濁度の測定に使用するための静的光散乱装置は、単一の検出器を有し得る。静的光散乱装置は、その使用目的、例えば、粒子サイズまたは濃度の測定に基づいて選択することができ、粒子サイズを測定する場合、測定される粒子サイズに基づいて選択することができる（例えば、大きな粒子ほど、漸次より多くの検出器を必要とする）。特定の実施形態では、静的光散乱装置は、マルチアングル光散乱（ＭＡＬＳ）装置である。
【0055】
静的光散乱装置を使用して、ウイルスベクターの半径及び／または直径を測定することができる。静的光散乱装置は、ウイルスベクターの二乗平均平方根の半径を測定する。これは、球状粒子の幾何学的半径を計算するために使用できる。製造されたウイルスベクターの濃度は、計算された幾何学的半径及び光散乱信号によって判定され得る。静的光散乱装置をウイルスベクター製造システムで使用して、ウイルスベクターの存在及び／またはサイズを測定する、及び／または溶液中のウイルスベクターの濃度を測定することができる。
【0056】
製造プロセスに関してインラインに使用される静的光散乱装置は、１つ以上の動作を実行する場合がある。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、製造プロセスに関してインラインに使用されて、製造プロセスにおいてユニットの操作を制御する。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、製造プロセス中に産生されたウイルス粒子を検出するために、製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子（例えば、感染性ウイルス粒子）を不純物から分離するために、製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、製造プロセスに関してインラインに使用されて、溶液中のウイルス粒子の濃度（例えば、リアルタイムの濃度）を判定する。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、ウイルス粒子を含む溶液の濁度を検出するために、製造プロセスに関してインラインに使用される。
【0057】
ウイルスベクターの製造方法
ウイルスベクターの製造は、上流プロセス及び下流プロセスを含み得る。いくつかの態様において、上流プロセスは、細胞の増殖、細胞の培養、トランスフェクション、産生、及び採取を含むがこれらに限定されない、様々なユニットの操作、段階またはフェーズを含む。いくつかの態様において、下流プロセスは、分離、濾過、濃縮、清澄化、精製、配合、及び充填を含むがこれらに限定されない、１つ以上のユニットの操作、段階またはフェーズを含む。いくつかの態様において、本明細書で企図される方法で製造されるウイルスベクターには、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが含まれるが、これらに限定されない。特定の態様において、レンチウイルスベクターが製造される。
ウイルスベクターの製造は、上流プロセス及び下流プロセスを含み得る。いくつかの態様において、上流プロセスは、細胞の増殖、細胞の培養、トランスフェクション、産生、及び採取を含むがこれらに限定されない、様々なユニットの操作、段階またはフェーズを含む。いくつかの態様において、下流プロセスは、分離、濾過、濃縮、清澄化、精製、配合、及び充填を含むがこれらに限定されない、１つ以上のユニットの操作、段階またはフェーズを含む。いくつかの態様において、本明細書で企図される方法で製造されるウイルスベクターには、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが含まれるが、これらに限定されない。特定の態様において、レンチウイルスベクターが製造される。
【0058】
いくつかの実施形態では、１つ以上の静的光散乱装置が、ウイルスベクター製造プロセスに関してインラインに使用される。特定の実施形態では、１つ以上の静的光散乱装置が、ウイルスベクター製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が、製造プロセスの１つ以上の段階に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、単一の静的光散乱装置が、製造プロセスの各段階に関してインラインに使用される。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が、製造プロセスの複数の段階に関してインラインに使用される。製造プロセスの段階には、採取、分離、濾過、清澄化、精製、濃縮、配合、及び充填が含まれる場合がある。
【0059】
いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、分離プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、濾過プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、清澄化プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、精製プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、濃縮プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、配合プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、分離プロセス、濾過プロセス、清澄化プロセス、精製プロセス、濃縮プロセス、配合プロセス、及び充填プロセスからなる群から選択される複数のプロセスに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、各プロセスは複数のフェーズを含む。例えば、濾過プロセスは、第１の濾過（例えば、ノーマルフロー濾過を使用する）及び第２の濾過（例えば、限外濾過を使用する）を含み得る。
【0060】
いくつかの態様において、１つ以上の静的光散乱装置は、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、及び／またはサイズ排除クロマトグラフィー）、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過）及び／または遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置がクロマトグラフィーと濾過に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、第１の静的光散乱装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置が濾過に関してインラインに使用される。
【0061】
いくつかの実施形態では、製造プロセスに関してインラインに使用される静的光散乱装置は、ウイルスベクターの存在及び／またはサイズを測定する。いくつかの態様において、製造プロセスに関してインラインに使用される静的光散乱装置は、溶液中のウイルスベクターの濃度を測定する。いくつかの実施形態では、製造プロセスに関してインラインに使用される静的光散乱装置は、製造プロセスの自動化をトリガーする。いくつかの態様において、測定された粒子サイズに基づく製造プロセスの自動化は、製造されたウイルスベクターの精製をもたらす。例えば、ウイルス粒子は、測定された粒子サイズに基づいて製造プロセス中に精製され得る。いくつかの態様において、溶液中のウイルスベクターの測定された濃度に基づく製造プロセスの自動化は、ウイルスベクター産生の停止をもたらす。例えば、特定の濃度のウイルス粒子が溶液中で検出されると、ウイルスベクターの製造が停止する可能性がある。
【0062】
いくつかの実施形態では、製造プロセスに関してインラインに使用される静的光散乱装置は、ウイルス粒子及び不純物を含む溶液での成分の分離を制御する。いくつかの態様において、溶液中の不純物は、産生物関連の不純物またはプロセス関連の不純物である。産生物関連の不純物には、不活性なベクター形態、ウイルス凝集体、可溶性エンベロープタンパク質、遊離ウイルス成分、破壊された／分解された粒子、及び／またはｅｎｖ（－）粒子が含まれる場合がある。プロセス関連の不純物には、培地に由来する不純物（例えば、タンパク質、ペプチド、アミノ酸；脂質、リン脂質；塩、緩衝液；糖（すなわち、グルコース）；微量元素、ビタミン；血清／加水分解物添加剤）、宿主細胞（例えば、細胞デブリ、小胞；宿主のタンパク質；宿主の核酸；プロテオグリカン）、産生物（例えば、ポリエチレニミン（ＰＥＩ）；プラスミドＤＮＡ；小分子；外来剤、内毒素）及び／または精製物（例えば、ヌクレアーゼ；緩衝液；界面活性剤；抽出物、浸出物）を含み得る。
【0063】
ウイルスベクター製造プロセスは、ウイルスベクターを不純物から分離し、ウイルスベクターを精製するための複数のフェーズまたはプロセスを含み得る。例えば、製造プロセスは、所望の濃度及び配合を有するウイルスベクターを得るための複数の（例えば５～７の）下流処理ステップ、例えば清澄化ステップ、濃縮／精製ステップ、核酸消化ステップ、配合ステップ、最終濾過ステップ、及び充填ステップを含み得る。
【0064】
いくつかの実施形態において、ウイルスベクターの製造プロセスは、清澄化プロセスを含む。清澄化プロセスを、ウイルスベクターを含む溶液から産生体細胞及び細胞のデブリを排除するために使用することができる。いくつかの態様において、清澄化プロセスは、遠心分離、濾過、及び／またはクロマトグラフィーを含む。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、清澄化プロセスに関してインラインに使用される（例えば、クロマトグラフィー、濾過、及び／または遠心分離に関してインラインに使用される）。
【0065】
いくつかの実施形態において、ウイルスベクター製造プロセスは、濃縮及び／または清澄化プロセスを含む。濃縮及び／または精製プロセスは、ウイルス粒子の溶液から不純物を分離するために使用することができる。いくつかの態様において、濃縮及び／または精製プロセスは、遠心分離、濾過、及び／またはクロマトグラフィーを含む。いくつかの態様において、濃縮及び／または精製プロセスは、遠心分離及びクロマトグラフィーを含む。いくつかの態様において、濾過及びクロマトグラフィーは、１つ以上の静的光散乱装置に関してインラインに実行される。いくつかの態様において、ウイルス粒子の溶液は、ウイルスベクターの目標濃度が得られるまで濾過される。いくつかの態様において、目標濃度は、使用されるウイルスの量及びウイルスが投与される部位（例えば、組織型）に基づいて変化し得る。
【0066】
濃度は、総ウイルス粒子／ｍＬにおいてＭＡＬＳ装置によって、または形質導入ユニット（ＴＵ）／ｍＬにおいて他の方法で、測定できる。
【0067】
特定の態様では、濃度は、総ウイルス粒子／ｍＬにおいてＭＡＬＳ装置によって測定される。非限定的な一例では、ウイルスベクターの目標濃度は、約１×１０６～１×１０７ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０６～１×１０８ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０６～１×１０９ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０７～１×１０１０ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０８～１×１０１１ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０８～１×１０１２ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０１０～１×１０１３ウイルス粒子／ｍＬ、約１×１０１０～１×１０１４ウイルス粒子／ｍＬ、または約１×１０１０～１×１０１５ウイルス粒子／ｍＬを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターの目標濃度は、約１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、１×１０１４、または１×１０１５ウイルス粒子／ｍＬである。
【0068】
特定の実施形態では、濃度は形質導入ユニット（ＴＵ）／ｍＬで測定される。
【0069】
１つの非限定的な例において、ウイルスベクターの目標濃度は、約１×１０６～１×１０７、約１×１０６～１×１０８、約１×１０６～１×１０９、約１×１０７～１×１０１０、約１×１０８～１×１０１１、約１×１０８～１×１０１２、または約１×１０１０～１×１０１２の形質導入ユニット（ＴＵ）／ｍＬを有し得る。いくつかの態様では、ウイルスベクターの目標濃度は、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、または１×１０１３のＴＵ／ｍＬを有し得る。
【0070】
いくつかの態様において、製造プロセスは、ウイルス粒子の溶液（例えば、濃縮された及び／または精製させたウイルス粒子の溶液）の核酸消化を実施することをさらに含み得る。いくつかの態様において、ヌクレアーゼは、ウイルス粒子の溶液中の核酸を減少または排除するために使用される。いくつかの態様において、エンドヌクレアーゼは、ウイルス粒子の溶液中の核酸を減少または排除するために使用される。特定の態様において、エンドヌクレアーゼのベンゾナーゼ（登録商標）が、ウイルス粒子の溶液中の核酸を減少または排除するために使用される。
【0071】
いくつかの実施形態では、製造プロセスから得られたウイルスベクターが配合される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターの配合が充填されている。
【0072】
本明細書に開示される特定の実施形態は、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用して、製造プロセスにおけるユニットの操作を制御することを含む、ウイルスベクターを製造するための方法である。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置を使用して、製造プロセスにおける１つ以上の操作ユニットを制御する。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が、各操作ユニットを制御するために使用されている。いくつかの態様では、単一の静的光散乱装置が、複数の操作ユニットを制御するために使用されている。いくつかの態様において、操作ユニットは、分離ユニットを含む。いくつかの態様において、分離ユニットは、濾過ユニット、濃縮ユニット、清澄化ユニット、精製ユニット、配合ユニット、充填ユニット、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、分離ユニットは、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニットである。特定の態様において、分離ユニットは、クロマトグラフィーユニット（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、及び／またはサイズ排除クロマトグラフィー）である。特定の態様では、操作ユニットは、濾過ユニットである（例えば、タンジェンシャルフロー濾過ユニット、ノーマルフロー濾過ユニット、及び／または限外濾過ユニット）。
【0073】
本明細書に開示されているのは、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用して、製造プロセス中に生成されたウイルス粒子を検出することを含む、ウイルス粒子の検出方法である。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置を使用して、製造プロセス中にクロマトグラフィー及び／または濾過に関してインラインのウイルス粒子を検出する。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインのウイルス粒子を検出するために使用される。いくつかの態様において、ＭＡＬＳ装置は、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、限外濾過）に関してインラインのウイルス粒子を検出するために使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインのウイルス粒子を検出するために使用され、第２の静的光散乱装置は、濾過に関してインラインのウイルス粒子を検出するために使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、クロマトグラフィーと濾過に関してインラインのウイルス粒子を検出するために使用される。
【0074】
いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するため、濾過、クロマトグラフィー、及び／または遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、ＭＡＬＳ装置は、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマル濾過、限外濾過）に関してインラインの、ウイルス粒子を精製するために使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置はクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は濾過に関してインラインに使用され、第３の静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するため、クロマトグラフィー、濾過、及び任意選択で遠心分離に関してインラインに使用される。
【0075】
いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、粒子サイズに基づいて、不純物からのウイルス粒子の分離を制御する。いくつかの態様において、粒子サイズは、粒子の半径または直径として測定されている。静的光散乱装置は、ウイルス粒子の二乗平均平方根半径を測定することができる。二乗平均平方根半径の値を使用して、球状のウイルス粒子の幾何学的半径を計算できる。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子を精製するために、粒子サイズに基づく製造プロセスの自動化を引き起こす。例えば、ウイルス粒子は、それらの測定されたサイズに基づいて、製造中に自動的に分離され得る。
【0076】
宿主細胞から採取されたウイルス粒子を清澄化し、ウイルス粒子を不純物から分離し、ウイルス粒子を濾過し、ウイルス粒子を濃縮することを含むウイルスベクター製造プロセスも本明細書に開示される。製造プロセスは、製造プロセスの１つ以上のユニットの操作に関してインラインの１つ以上の静的光散乱装置（例えば、１つ以上のＭＡＬＳ装置）を含む。
【0077】
いくつかの態様において、ウイルス粒子は、１つまたは複数の静的光散乱装置に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して、不純物から分離される。いくつかの態様において、ウイルス粒子は、粒子サイズに基づいて不純物から分離される。粒子サイズは、１つ以上の静的光散乱装置によって測定することができる。いくつかの態様において、ウイルス粒子は、１つまたは複数の静的光散乱装置に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して、濾過及び濃縮される。特定の態様において、ウイルス粒子は、静的光散乱装置に関してインラインのタンジェンシャルフロー濾過を使用して濾過及び濃縮される。静的光散乱装置は、溶液中のウイルス粒子のリアルタイムの濃度を判定することができる。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の濃度に基づいて製造プロセスの自動化を引き起こし、目標濃度に達したときに産生を停止するようにする。
【0078】
いくつかの態様において、１つ以上の静的光散乱装置は、分離プロセス、濾過プロセス、清澄化プロセス、濃縮プロセス、精製プロセス、及び／または配合プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置が各プロセスで使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置が１つ以上のプロセスで使用される。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターの製造プロセスは、ウイルス粒子を配合することをさらに含む。
【0079】
この方法は、ウイルスベクター製造プロセスを開始し、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用してウイルス粒子の存在を検出し、ウイルス粒子を精製することを含む、ウイルスベクターを製造するための方法も開示している。
【0080】
いくつかの態様では、静的光散乱装置は、ウイルス粒子を検出するために製造プロセス中にクロマトグラフィー及び／または濾過に関してインラインに使用されている。いくつかの態様では、静的光散乱装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、及び／または限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの態様では、静的光散乱装置がクロマトグラフィー及び濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様では、第１の静的光散乱装置がクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置が濾過に関してインラインに使用される。
【0081】
いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、粒子サイズに基づいて不純物からのウイルス粒子の精製を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。粒子サイズは、１つ以上の静的光散乱装置によって測定することができる。いくつかの態様において、粒子サイズは粒子の半径または直径として測定されている。いくつかの態様において、濾過プロセスは複数の濾過を使用する。いくつかの態様において、第１の濾過はノーマルフロー濾過であり、第２の濾過は限外濾過である。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、第１の濾過で使用され、第２の静的光散乱装置は、第２の濾過で使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、第１の濾過及び第２の濾過の両方で使用される。
【0082】
いくつかの実施形態では、第１の静的光散乱装置は、ウイルス粒子を検出するために製造プロセスに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、この方法は、ウイルス粒子を濃縮すること及び／または配合することをさらに含む。いくつかの態様において、１つ以上の静的光散乱装置は、濃縮プロセス及び／または配合プロセスに関してインラインに使用される。
【0083】
本明細書に開示されるのは、静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用してウイルス粒子及び不純物を含む溶液を分離することを含む、ウイルスベクター製造プロセスにおいて不純物を除去する方法であって、静的光散乱装置が、粒子サイズに基づいて、不純物からウイルス粒子を分離するのを制御する、方法である。
【0084】
いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子及び不純物の分離を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子及び不純物の分離を制御するために、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、ウイルス粒子及び不純物の分離を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子及び不純物の分離を制御するために、クロマトグラフィー及び濾過に関してインラインに使用される。
【0085】
いくつかの実施形態では、この方法は、ウイルス粒子を精製することをさらに含む。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子を検出し、ウイルス粒子を精製するための１つ以上のユニットの操作を制御するために、製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するため、濾過、クロマトグラフィー、及び／または遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマル濾過、限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置はクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は濾過に関してインラインに使用され、第３の静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために、遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するため、クロマトグラフィー、濾過、及び任意選択で遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、粒子サイズに基づいて、不純物からのウイルス粒子の分離を制御するために使用されている。
【0086】
いくつかの実施形態では、第１の静的光散乱装置は、ウイルス粒子と不純物の分離を制御するために製造プロセスに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、ウイルス粒子の精製を制御するために製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、この方法は、ウイルス粒子を濃縮すること及び／または配合することをさらに含む。いくつかの態様において、１つ以上の静的光散乱装置は、濃縮プロセス及び／または配合プロセスに関してインラインに使用される。
【0087】
本明細書に開示されるのは、静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインのクロマトグラフィー及び／または濾過を使用して溶液中の不純物から感染性ウイルス粒子を分離することを含む、ウイルスベクターの製造プロセスにおける感染性ウイルス粒子の回収を増加させるための方法である。静的光散乱装置は、粒子サイズに基づいて、不純物からの感染性ウイルス粒子の分離を制御する。特定の態様において、不純物は非感染性粒子である。
【0088】
いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の不純物からの分離を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の不純物からの分離を制御するために、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマルフロー濾過、限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の不純物からの分離を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の不純物からの分離を制御するために、クロマトグラフィー及び濾過に関してインラインに使用される。
【0089】
いくつかの実施形態では、この方法は、感染性ウイルス粒子を濃縮すること及び／または精製することをさらに含む。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するために、製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するため、濾過、クロマトグラフィー、及び／または遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するために、クロマトグラフィーに関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するために、濾過（例えば、タンジェンシャルフロー濾過、ノーマル濾過、限外濾過）に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するために、遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、クロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置はクロマトグラフィーに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は濾過に関してインラインに使用され、第３の静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するために、遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の濃縮及び／または精製を制御するため、クロマトグラフィー及び濾過、及び任意選択で遠心分離に関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、粒子サイズに基づいて、不純物からの感染性ウイルス粒子の分離を制御する。
【0090】
いくつかの実施形態では、静的光散乱装置は、粒子サイズに基づいて不純物からの感染性ウイルス粒子の精製を制御するために、濾過に関してインラインに使用される。いくつかの態様において、濾過プロセスは複数の濾過を使用する。いくつかの態様において、第１の濾過はノーマルフロー濾過であり、第２の濾過は限外濾過である。いくつかの態様において、第１の静的光散乱装置は、第１の濾過で使用され、第２の静的光散乱装置は、第２の濾過で使用される。いくつかの態様において、静的光散乱装置は、第１の濾過及び第２の濾過の両方で使用される。
【0091】
いくつかの実施形態では、第１の静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の不純物からの分離を制御するために製造プロセスに関してインラインに使用され、第２の静的光散乱装置は、感染性ウイルス粒子の精製を制御するために製造プロセスに関してインラインに使用される。いくつかの実施形態では、この方法は、感染性ウイルス粒子を配合することをさらに含む。いくつかの態様において、１つ以上の静的光散乱装置は、配合プロセスに関してインラインに使用される。
【0092】
静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）に関してインラインのタンジェンシャルフロー濾過を使用してウイルス粒子を含む溶液を濾過することを含む、ウイルスベクター製造プロセスにおいてウイルス粒子を濃縮するための方法も、本明細書に開示される。静的光散乱装置は、溶液中のウイルス粒子のリアルタイムの濃度を判定し、リアルタイムの濃度が溶液中のウイルス粒子の目標濃度と実質的に等しくなるまで、溶液の濾過の操作を自動化することができる。いくつかの実施形態では、この方法は、ウイルス粒子を清澄化、精製及び／または配合することをさらに含む。
【0093】
ウイルス粒子を含む溶液の濁度を検出し、それによってユニットの操作を制御するために、製造プロセスに関してインラインの静的光散乱装置（例えば、ＭＡＬＳ装置）を使用することを含む、ウイルス製造プロセスにおけるユニットの操作を制御するための方法も、本明細書に開示されている。
【0094】
本明細書で引用された全ての刊行物、特許出願及び発行された特許は、個々の刊行物、特許出願、または発行された特許が明確に及び個々に示され、参照により援用されているかのように、参照により本明細書に援用される。
【0095】
以下の実施例は、単に例として提供されるものであり、限定として提供されるものではない。当業者は、本質的に類似した結果をもたらすために、特定の実施形態において変更または修正ができる様々な重要性の低いパラメーターについて、容易に認識する。
【実施例】
【0096】
ＭＡＬＳ検出器が、製造プロセス中に取得されたデータに基づいて、検出、自動化、または決定を行うために、ウイルスベクター製造プロセスのユニットの操作に関してインラインに接続される。
【0097】
図２に示されるように、ＭＡＬＳ検出器は、それを通るウイルスベクターの存在及びサイズを評価するために、クロマトグラフィースキッドの流出物に取り付けられている。ＭＡＬＳ検出器によって収集された情報は、ＭＡＬＳによって検出されたら、異なる平均半径の粒子集団を分離できる下流のバルブを自動化するために、インラインに使用できる。半径は、溶出液がインラインフローセルを通るときにＭＡＬＳによってリアルタイムで測定される。マルチアングルの光散乱は、粒子の二乗平均平方根半径を直接測定できる。二乗平均平方根半径はモデルに依存しない。つまり、特定の分子コンフォメーションを想定していない。この二乗平均平方根半径の値を使用して、球状の粒子の幾何学的半径を計算できる。宿主細胞のタンパク質などの一部の不純物が、感染性粒子とは異なる半径の非感染性粒子と優先的に関連し得るということの証拠がある。したがって、サイズに基づく精製により、産生物のストリーム中の不純物を減らすことができる。
【0098】
図３に示されるように、ＭＡＬＳ検出器は、ベクター粒子の濃度を評価するために、タンジェンシャルフロー濾過スキッドにインラインで接続されている。これにより、スキッドが自動化し、ベクター粒子の特定の濃度に達したとき、ポンプを停止することで、ユニットの動作を停止できる。粒子の濃度は、上記のように計算された幾何学的半径と光散乱信号から判定される。
【0099】
概して、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を明細書及び特許請求の範囲に開示された特定の実施形態に限定するものと解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を有する同等の全範囲と共にすべての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、クレームは開示によって制限されない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【国際調査報告】