特表 2022-523422 皮膚吸収増進のための多重層陽イオン性リポソーム、及びその製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-22

(54)【発明の名称】皮膚吸収増進のための多重層陽イオン性リポソーム、及びその製造方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/14 20060101AFI20220415BHJP

   A61K 8/63 20060101ALI20220415BHJP

   A61K 8/42 20060101ALI20220415BHJP

   A61K 8/41 20060101ALI20220415BHJP

   A61K 8/55 20060101ALI20220415BHJP

   A61K 8/73 20060101ALI20220415BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20220415BHJP

   B01J 13/04 20060101ALI20220415BHJP

【ＦＩ】

A61K8/14

A61K8/63

A61K8/42

A61K8/41

A61K8/55

A61K8/73

A61Q19/00

B01J13/04

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021552808

(86)(22)【出願日】2020-09-22

(85)【翻訳文提出日】2021-09-06

(86)【国際出願番号】 KR2020012758

(87)【国際公開番号】W WO2021060797

(87)【国際公開日】2021-04-01

(31)【優先権主張番号】10-2019-0117490

(32)【優先日】2019-09-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517039760

【氏名又は名称】コスマックス、インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】特許業務法人 ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】キム、ス ジ

(72)【発明者】

【氏名】イ、ジュン ベ

(72)【発明者】

【氏名】ホン、ソン ユン

(72)【発明者】

【氏名】パク、ミョン サム

【テーマコード（参考）】

4C083

4G005

【Ｆターム（参考）】

4C083AA111

4C083AA121

4C083AC491

4C083AC641

4C083AC642

4C083AC691

4C083AC692

4C083AC851

4C083AC852

4C083AD131

4C083AD351

4C083AD391

4C083AD491

4C083AD492

4C083AD571

4C083AD572

4C083AD621

4C083AD641

4C083AD661

4C083BB11

4C083BB51

4C083CC01

4C083CC02

4C083DD45

4C083EE10

4C083EE12

4C083FF01

4G005AA07

4G005AB02

4G005BA12

4G005DB21X

4G005DB22X

4G005DB23X

4G005DC56Z

4G005DE05Z

4G005EA03

(57)【要約】

皮膚吸収増進のための多重層陽イオン性リポソーム、それを含む化粧料組成物、及びその製造方法に係る。
【選択図】図５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

陽イオン性脂質、コレステロール及びセラミドを含む、陽イオン性リポソーム組成物。

【請求項2】

陽イオン性脂質、コレステロール及びセラミドを含むリン脂質層と、
前記リン脂質層内部に担持され、水溶性皮膚活性物質または油溶性皮膚活性物質を含む被担持体と、を含む、陽イオン性リポソームを含む化粧料組成物。

【請求項3】

前記陽イオン性脂質は、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタンカルバモイルコレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ：３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅ）ｃａｒｂａｍｏｙｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）、１，２－ジオレオイルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリエチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ：１，２－ｄｉ－Ｏ－ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジミリストレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１４：１ Ｅｔｙｌｅ ＰＣ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１６：０－１８：１ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１－ｐａｌｍｉｔｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１８：１ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１８：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１６：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１４：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１２：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｌａｕｒｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、Ｎ１－［２－（（１Ｓ）－１－［（３－アミノプロピル）アミノ］－４－［ジ（３－アミノ－プロピル）アミノ］ブチルカボキサミド）エチル］－３，４－ジ［オレイルオキシ］－ベンザミド（ＭＶＬ５：Ｎ１－［２－（（１Ｓ）－１－［（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ａｍｉｎｏ］－４－［ｄｉ（３－ａｍｉｎｏ－ｐｒｏｐｙｌ）ａｍｉｎｏ］ｂｕｔｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ）ｅｔｈｙｌ］－３，４－ｄｉ［ｏｌｅｙｌｏｘｙ］－ｂｅｎｚａｍｉｄｅ）、１，２－ジミリストイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（１４：０ ＤＡＰ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ－３－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジパルミトイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（１６：０ ＤＡＰ：１，２－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－３－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジステアロイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（１８：０ ＤＡＰ：１，２－ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ－３－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、Ｎ－（４－カルボキシベンジル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（オレオイルオキシ）プロパン－１－アミニウム（ＤＯＢＡＱ：Ｎ－（４－ｃａｒｂｏｘｙｂｅｎｚｙｌ）－Ｎ，Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－２，３－ｂｉｓ（ｏｌｅｏｙｌｏｘｙ）ｐｒｏｐａｎｅ－１－ａｍｉｎｉｕｍ）、１，２－ステアロイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（１８：０ ＴＡＰ：１，２－ｓｔｅａｒｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジパルミトイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（１６：０ ＴＡ：１，２－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（１４：０ ＴＡＰ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、Ｎ４－コレステリル－スペルミン（ＧＬ６７：Ｎ４－ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ－ｓｐｅｒｍｉｎｅ）、ポリクオタニウム－１０（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ－１０）、ポリクオタニウム－７（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ－７）、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド（ｇｕａｒ ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｔｒｉｍｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、コカミドプロピルアミンオキシド（ｃｏｃａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ）、ステアラミドプロピルジメチルアミン（ｓｔｅａｒａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）、またはそれらの組み合わせである、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項4】

前記セラミドは、セラミドＥＯＰ、セラミドＮＳ、セラミドＮＰ、セラミドＡＳ、セラミドＥＯＳ、セラミドＡＰ、セラミドＮＤＳ、グルコシルセラミド、オメガヒドロキシセラミド、またはそれらの組み合わせである、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項5】

前記コレステロールは、コレステロール、コレステリルクロリド、コレステリルオクタノエート、コレステリルノナノエート、コレステリルオレイルカーボネート、コレステリルイソステアリルカーボネート、またはそれらの組み合わせである、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項6】

前記セラミド及び前記コレステロールを、１ないし１０：４０ないし６０の重量比で含む、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項7】

前記陽イオン性リポソームは、多重層（ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒ）構造である、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項8】

前記陽イオン性リポソームは、水溶性皮膚活性物質は、リン脂質層間に位置し、油溶性皮膚活性物質は、リン脂質層内部に位置する多重層構造である、請求項７に記載の化粧料組成物。

【請求項9】

前記陽イオン性リポソームのゼータ電位は、１０ないし６０ｍＶである、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項10】

前記水溶性皮膚活性物質は、ナイアシンアミド（ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ）、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アデノシン（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）、植物抽出物、またはそれらの組み合わせである、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項11】

前記油溶性皮膚活性物質は、レチノール（ｒｅｔｉｎｏｌ）、酢酸レチノール（ｒｅｔｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、パルミチン酸レチノール（ｒｅｔｉｎｙｌ ｐａｒｍｉｔａｔｅ）、コエンザイムＱ１０（ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ｑ１０）、α－トコフェロール（α－ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）、酢酸トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ ａｃｅｔａｔｅ）、植物抽出物、植物抽出物エッセンシャルオイル、またはそれらの組み合わせである、請求項２に記載の化粧料組成物。

【請求項12】

陽イオン性脂質、セラミド及びコレステロールを有機溶媒に溶解させて溶液を製造する段階と、
前記溶液から溶媒を除去して脂質膜を形成する段階と、
前記脂質膜を乾燥させて水和する段階と、を含む、陽イオン性リポソーム組成物を製造する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１９年９月２４日に出願された大韓民国特許出願第１０－２０１９－０１１７４９０号を優先権として主張し、前記明細書全体は、本出願の参考文献である。

【0002】

本発明は、皮膚吸収増進のための多重層陽イオン性リポソーム、それを含む化粧料組成物、及びその製造方法に関する。

【背景技術】

【0003】

皮膚は、表皮、真皮及び皮下脂肪層によって構成されており、体の最外部の膜として、有害環境から体内を保護し、恒常性維持に重要な役割を行う。そのうち、表皮の最外層である角質層は、タンパク質成分である角質細胞（ｃｏｒｎｅｏｃｙｔｅ）と、細胞間脂質とによって構成されている。特に、該細胞間脂質は、セラミド、コレステロール、遊離脂肪酸などによって構成されており、有害物質の経皮侵入遮断、及び皮膚内水分維持のような皮膚障壁の役割を行う。しかし、角質層のそのような皮膚障壁機能は、多様な有効成分の効果的吸収においては、障害要素になる。

【0004】

リポソームは、効能物質の皮膚吸収増進のために周知されている代表的な薬物伝達システムである。リポソームは、生体内物質であるリン脂質によって構成されており、生体親和性が高く、化粧品や医薬品の分野に汎用される。また、リポソームは、内部には、親水性の空間があり、二重層構造または多重層構造の間には、疎水性物質を担持することができる特徴を有しており、多様な効能物質の皮膚伝達に有利である。リポソームは、膜を形成する構成成分により、エトソーム、弾性リポソーム、高分子コーティングリポソーム、陽イオンリポソームなどにも製造され、それぞれのリポソームごとに、有効成分を皮膚に伝達する原理が異なる。そのうち、陽イオンリポソームは、陽イオン脂質によって構成されたリポソームであり、負電荷を帯びる皮膚表面と、静電気的引力によって接近が容易であり、皮膚内への有効成分吸収を増進させる。

【0005】

従って、有効成分の皮膚吸収率を高めるために、生体親和性にすぐれ、皮膚との高い付着力を有する陽イオンリポソームの開発が必要である。また、皮膚との類似性増大のために、セラミド及びコレステロールのような細胞間脂質成分を含むリポソームの開発が必要である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明が解決しようとする課題の一つは、陽イオン性脂質、セラミド及びコレステロールを含む陽イオン性リポソーム（ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｏｓｏｍｅ）組成物を提供することである。

【0007】

本発明が解決しようとする課題の一つは、また、陽イオン性脂質、コレステロール及びセラミドを含むリン脂質層と、前記リン脂質層内部に担持され、水溶性皮膚活性物質または油溶性皮膚活性物質を含む被担持体と、を含む陽イオン性リポソームを含む化粧料組成物を提供する。

【0008】

本発明が解決しようとする課題の一つは、また、陽イオン性脂質、セラミド及びコレステロールを含む陽イオン性リポソーム組成物を製造する方法を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

一様態は、陽イオン性脂質、セラミド及びコレステロールを含む陽イオン性リポソーム（ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｏｓｏｍｅ）組成物を提供するものである。

【0010】

他の様態は、陽イオン性脂質、コレステロール及びセラミドを含むリン脂質層と、前記リン脂質層内部に担持され、水溶性皮膚活性物質または油溶性皮膚活性物質を含む被担持体と、を含む陽イオン性リポソームを含む化粧料組成物を提供するものである。

【0011】

本明細書で使用される用語「リポソーム」とは、微細な球形膜で覆い包まれた約５０～２，０００ｎｍ径の小胞（ｖｅｓｉｃｌｅ）を意味するものであり、脂質二重層で覆い包まれた全区画を含む概念である。

【0012】

本明細書で使用される用語「陽イオン性脂質」とは、生理学的ｐＨのような、選択されたｐＨにおいて、正値の正味電荷を有する脂質を意味するものであり、前記生理学的ｐＨは、６ないし８、具体的には、６．５ないし８、さらに具体的には、７．５のｐＨを意味するものでもある。

【0013】

前記陽イオン性脂質は、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタンカルバモイルコレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ：３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅ）ｃａｒｂａｍｏｙｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）、１，２－ジオレオイルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリエチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ：１，２－ｄｉ－Ｏ－ｏｃｔａｄｅｃｅｎｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジミリストレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１４：１ Ｅｔｙｌｅ ＰＣ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１６：０－１８：１ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１－ｐａｌｍｉｔｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１８：１ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１８：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１６：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１４：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（１２：０ Ｅｔｈｙｌ ＰＣ：１，２－ｄｉｌａｕｒｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）、Ｎ１－［２－（（１Ｓ）－１－［（３－アミノプロピル）アミノ］－４－［ジ（３－アミノ－プロピル）アミノ］ブチルカボキサミド）エチル］－３，４－ジ［オレイルオキシ］－ベンザミド（ＭＶＬ５：Ｎ１－［２－（（１Ｓ）－１－［（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ａｍｉｎｏ］－４－［ｄｉ（３－ａｍｉｎｏ－ｐｒｏｐｙｌ）ａｍｉｎｏ］ｂｕｔｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ）ｅｔｈｙｌ］－３，４－ｄｉ［ｏｌｅｙｌｏｘｙ］－ｂｅｎｚａｍｉｄｅ）、１，２－ジミリストイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（１４：０ ＤＡＰ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ－３－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジパルミトイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（１６：０ ＤＡＰ：１，２－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－３－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジステアロイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（１８：０ ＤＡＰ：１，２－ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ－３－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、Ｎ－（４－カルボキシベンジル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（オレオイルオキシ）プロパン－１－アミニウム（ＤＯＢＡＱ：Ｎ－（４－ｃａｒｂｏｘｙｂｅｎｚｙｌ）－Ｎ，Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－２，３－ｂｉｓ（ｏｌｅｏｙｌｏｘｙ）ｐｒｏｐａｎｅ－１－ａｍｉｎｉｕｍ）、１，２－ステアロイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（１８：０ ＴＡＰ：１，２－ｓｔｅａｒｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジパルミトイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（１６：０ ＴＡ：１，２－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（１４：０ ＴＡＰ：１，２－ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、Ｎ４－コレステリル－スペルミン（ＧＬ６７：Ｎ４－ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ－ｓｐｅｒｍｉｎｅ）、ポリクオタニウム－１０（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ－１０）、ポリクオタニウム－７（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ－７）、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド（ｇｕａｒ ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｔｒｉｍｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、コカミドプロピルアミンオキシド（ｃｏｃａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ）、ステアラミドプロピルジメチルアミン（ｓｔｅａｒａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）、またはそれらの組み合わせでもある。

【0014】

本明細書で使用される用語「セラミド」とは、内部・外部のストレス（ｓｔｒｅｓｓ）によって損傷された細胞を除去することにより、ストレスから皮膚を保護する機能を遂行すると知られたスフィンゴ脂質（ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ）の一種であり、前記セラミドは、セラミドＥＯＰ、セラミドＮＳ、セラミドＮＰ、セラミドＡＳ、セラミドＥＯＳ、セラミドＡＰ、セラミドＮＤＳ、グルコシルセラミド、オメガヒドロキシセラミド、またはそれらの組み合わせでもある。

【0015】

本明細書で使用される用語「コレステロール」とは、皮膚角質構造において、セラミド、脂肪酸と共に、細胞の膜系を構成する主要成分であり、前記コレステロールは、コレステロール、コレステリルクロリド、コレステリルオクタノエート、コレステリルノナノエート、コレステリルオレイルカーボネート、コレステリルイソステアリルカーボネート、またはそれらの組み合わせでもある。

【0016】

前記陽イオン性リポソーム組成物は、多重層（ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒ）構造でもある。前記用語「多重層構造」とは、外相と内相とを区分する層が３層以上によってなる構造を意味し、前記陽イオン性リポソーム組成物は、多重層構造を有することにより、有効成分担持、及び有効成分の皮膚透過において、さらに有利な効果を示すことができる。具体的には、前記陽イオン性リポソームは、水溶性皮膚活性物質は、リン脂質層間に位置し、油溶性皮膚活性物質は、リン脂質層内部に位置する多重層構造でもある。そのように、皮膚活性物質が多層構造の各層ごとに分離されて安定して存在することにより、皮膚の真皮層まで伝達体の損傷なしに、栄養分のような皮膚活性物質を安定して伝達することができる。一具体例において、透過電子顕微鏡を利用し、陽イオン性リポソーム及び一般リポソームの構造を観察した結果、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン、コレステロール及びセラミドを含んで製造された陽イオン性リポソームは、多重層構造を示した一方、一般リポソームは、二重層（ｂｉｌａｙｅｒ）構造を示すということを確認した。

【0017】

前記セラミド及び前記コレステロールの重量比は、１ないし１０：４０ないし６０、例えば、１ないし１０：４５ないし６０、例えば、１ないし８：４０ないし５５、例えば、１ないし６：４０ないし５５、例えば、１ないし６：４５ないし５５、例えば、１ないし４：４０ないし５５、例えば、１ないし４：４５ないし５５、例えば、１ないし３：４０ないし５５、例えば、１ないし３：４５ないし５５でもある。前記重量比において、セラミドの比率が増大すれば、結晶性により、析出現象が生じ、コレステロールの比率が増大すれば、膜が過度に堅固になり、有効成分放出に不利な問題が生じてしまう。

【0018】

前記陽イオン性リポソームのゼータ電位は、正の電位を示すことができる。前記陽イオン性リポソームのゼータ電位は、ｐＨが中性である条件において、例えば、１ないし８０ｍＶ、例えば、５ないし７５ｍＶ、例えば、１０ないし６０ｍＶ、例えば、１５ないし５５ｍＶ、例えば、２０ないし５０ｍＶでもある。一具体例において、陽イオン性脂質を含んでいない一般リポソームは、ゼータ電位が負の値に測定された一方、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン、コレステロール及びセラミドを含んで製造された陽イオン性リポソームは、ゼータ電位が正の値に測定されることを確認した。

【0019】

前記陽イオン性リポソーム組成物は、当業界に知られた方法によっても製造され、例えば、薄膜水和法（ｔｈｉｎ ｆｉｌｍ ｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）によっても製造される。例えば、水溶性（親水性）物質の水和液体（ｈｙｄｒａｔｉｎｇ ｆｌｕｉｄ）として、それらの物質の水性溶液（ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を使用するか、あるいはリポソームの製造過程のある段階において、薬物または薬物溶液を添加することにより、水溶性物質が捕集された（ｅｎｔｒａｐｐｅｄ）リポソームを製造することができる。また、脂溶性（疎水性）物質は、構成脂質の有機溶液に溶解させ、その後、蒸発させて乾燥させた薬物含有脂質フィルムを形成した後、水和（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）させることによっても製造される。

【0020】

前記化粧料組成物は、陽イオン性リポソームを含むことにより、化粧料組成物に含まれた有効成分の皮膚透過及び皮膚吸収の程度が顕著に増大されうる。一具体例において、陽イオン性リポソームまたは一般リポソームに、有効成分としてナイアシンアミドをカプセル化させ、その皮膚透過程度を比較した結果、一般リポソームに比べ、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン、コレステロール及びセラミドを含んで製造された陽イオンリポソームに捕集されたナイアシンアミドの皮膚透過及び皮膚吸収の程度が顕著に増大されるということを確認した。

【0021】

前記水溶性皮膚活性物質または前記油溶性皮膚活性物質は、皮膚に肯定的な効果または作用を与えることができる物質を意味し、例えば、抗酸化、皮膚美白、皮膚障壁強化、皮膚弾力改善、皮膚しわ改善、紫外線からの皮膚保護、紫外線による皮膚損傷回復、皮膚保湿、皮膚再生促進、皮膚炎症改善、皮膚老化防止などを含む多様な皮膚改善効果を示すことができる。

【0022】

前記水溶性皮膚活性物質は、ナイアシンアミド（ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ）、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、アデノシン（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）、植物抽出物、またはそれらの組み合わせでもある。

【0023】

前記油溶性皮膚活性物質は、レチノール（ｒｅｔｉｎｏｌ）、酢酸レチノール（ｒｅｔｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、パルミチン酸レチノール（ｒｅｔｉｎｙｌ ｐａｒｍｉｔａｔｅ）、コエンザイムＱ１０（ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ｑ１０）、α－トコフェロール（α－ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）、酢酸トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ ａｃｅｔａｔｅ）、植物抽出物、植物抽出物エッセンシャルオイル、またはそれらの組み合わせでもある。

【0024】

前記化粧料組成物の剤形は、一般的な化粧料の剤形であるならば、制限されるものではないが、例えば、柔軟化粧水・収斂化粧水または栄養化粧水のようなスキン、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、アイエッセンス、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、パウダー、ボディーローション、ボディークリーム、ボディーオイルまたはボディーエッセンスでもある。

【0025】

前記化粧料組成物は、保存剤、安定化剤、界面活性剤、溶解剤、保湿剤、エモリエント剤、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、有機顔料及び無機顔料、香料、冷感剤または制汗剤などをさらに含んでもよい。前記保湿剤などの追加成分の配合量は、本発明の目的及び効果を損傷させない範囲内において、当業者が容易に選定可能である。

【0026】

さらに他の様態は、陽イオン性脂質、セラミド及びコレステロールを含む陽イオン性リポソーム組成物を製造する方法を提供するものである。前記陽イオン性脂質、セラミド、コレステロール、陽イオン性リポソーム組成物などについては、前述のところと同一である。

【0027】

前記陽イオン性リポソーム組成物を製造する方法は、陽イオン性脂質、セラミド及びコレステロールを有機溶媒に溶解させて溶液を製造する段階と、前記溶液から溶媒を除去して脂質膜を形成する段階と、前記脂質膜を乾燥させて水和する段階と、を含むものでもある。

【0028】

前記方法は、前記乾燥されて水和された脂質膜を均質化させる段階をさらに含むものでもある。

【0029】

前記有機溶媒は、メタノール（ｍｅｔｈａｎｏｌ）、エタノール（ｅｔｈａｎｏｌ）、プロパノール（ｐｒｏｐａｎｏｌ）、イソプロパノール（ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ）、ブタノール（ｂｕｔａｎｏｌ）、アセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）、エーテル（ｅｔｈｅｒ）、ベンゼン（ｂｅｎｚｅｎｅ）、クロロホルム（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、塩化メチレン（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヘキサン（ｈｅｘａｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）、またはそれらの組み合わせでもあるが、それらに特に制限されるものではない。

【発明の効果】

【0030】

一様態による陽イオン性リポソーム組成物は、一般リポソームに比べ、リポソームに含有された有効成分の皮膚透過程度が有意的に高く示されるので、リポソーム組成物に含まれる有効成分の皮膚吸収増進のための用途にも利用される。

【0031】

他の様態による陽イオン性リポソーム組成物は、コレステロール及びセラミドを含むことにより、リポソーム膜安定性及び皮膚安全性が顕著に改善されるので、化粧料組成物として安全に利用されうる。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】陽イオン性リポソーム、一般リポソーム、並びにセラミド及びコレステロールを含んでいない陽イオン性リポソームの経時的な平均粒子サイズを示した図である。

【図2】陽イオン性リポソーム、一般リポソーム、並びにセラミド及びコレステロールを含んでいない陽イオン性リポソームの経時的なゼータ電位（ｍＶ）を示した図である。

【図3】セラミド及びコレステロール１：２０の重量比で含む陽イオン性リポソームの粒子サイズの増大を示したグラフである。

【図4A】セラミド及びコレステロールを１：３０の重量比で含む陽イオン性リポソームの粒子サイズの増大を示したグラフである。

【図4B】セラミド及びコレステロールを１：３０の重量比で含む陽イオン性リポソームの析出現象を示した写真である。

【図5】陽イオン性リポソームの多重層構造を確認した透過電子顕微鏡の観察写真である。

【図6】陽イオン性リポソームの皮膚吸収能を確認した試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）皮膚透過評価結果を示した図面である。

【図7】陽イオン性リポソームの皮膚吸収能を確認した皮膚透過程度を比較するために、人工皮膚を利用した皮膚透過評価結果を示した蛍光顕微鏡の写真である。

【発明を実施するための形態】

【0033】

以下、実施例を介し、さらに詳細に説明する。しかし、それら実施例は、例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲は、それら実施例に限定されるものではない。

【0034】

実施例１．陽イオン性リポソームの製造
薄膜水和法（ｔｈｉｎ ｆｉｌｍ ｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）を介し、陽イオン性リポソームを製造した。丸フラスコに、Ｌ－α－ホスファチジルコリン（Ｅｇｇ ｐｃ：Ｌ－α－ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、陽イオン脂質である１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ：１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）、セラミド、コレステロールを入れ、クロロホルム・メタノール（４：１）２０ｍＬに完全に溶解されるまで溶かした後、回転蒸発濃縮器（ｒｏｔａｒｙ ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を利用し、溶媒を完全に除去し、フラスコ壁面に薄膜を形成させた。形成された脂質フィルム膜を、１２時間真空で乾燥させ、残余溶媒を完全に除去した後、精製水１０ｍＬを添加して水和させた後、超音波破砕機（ｐｒｏｂｅ ｓｏｎｉｃａｔｏｒ）を利用し、５分間均質化させた。そのようにして得られたリポソーム溶液は、０．４５μｍフィルタ（Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＣＡ ２６ｍｍ）に通過させて実験に使用した。

【0035】

比較例１．一般リポソームの製造
一般リポソームは、前述のような組成及び方法によって製造し、前述の組成から、陽イオン脂質である１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ：１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ）を除いて製造した。陽イオン性リポソームと一般リポソームとに使用されたセラミド及びコレステロールは、膜の安定度向上、生体との類似性、及び皮膚安全性を高めるために使用した。

【0036】

比較例２．セラミド及びコレステロールを含んでいない陽イオン性リポソームの製造
陽イオン性リポソームの皮膚吸収効能評価と共に、実施例のリポソーム製造に使用されたセラミドとコレステロールとが、リポソームの膜安定性及び皮膚安全性にいかなる影響を及ぼすものであるかということを知るために、セラミド及びコレステロールが含まれていない陽イオン性リポソームを比較例２として製造した。具体的な製造方法は、前記実施例１と同一である。

【0037】

下記表１に実施例１、比較例１及び２の組成を示した。

【0038】

【表1】

【0039】

前記陽イオン性リポソームにおいて、陽イオン性脂質が０．１％以上であるか、あるいは、Ｅｇｇ ＰＣが０．５以下または１．０％以上である場合、保管時、混濁（ｈａｚｅ）が生じ、安定度が良好ではない。また、セラミド及びコレステロールの重量比が、１ないし１０：４０ないし６０（ｗ／ｗ）である場合、膜安定性が最もすぐれていた。前記重量比において、セラミド比率が増大すれば、結晶性によって析出現象が生じ、コレステロールの比率が増大すれば、膜が過度に堅固になり、有効成分放出に不利にもなるために、適切な比率維持が重要である。

【0040】

比較例３～５．セラミド及びコレステロール含量変化による陽イオン性リポソームの製造
陽イオンリポソームの皮膚吸収効能の評価と共に、実施例のリポソーム製造に使用されたセラミドとコレステロールとが、リポソームの膜安定性及び皮膚安全性にいかなる影響を及ぼすかということを知るために、セラミドとコレステロールとの含量を異ならせたリポソームを製造した。具体的な製造方法は、前記実施例１と同一である。

【0041】

下記表２に、比較例３ないし５の組成を示した。

【0042】

【表2】

【0043】

実験例１．リポソーム粒子の物性評価
１．１ 粒子サイズ及びゼータ電位の確認
一般リポソームと陽イオン性リポソームとの粒子サイズ及びゼータ電位（ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）測定のために、中性条件（ｐＨ７）において、動的光散乱装置（ｄｙｎａｍｉｃ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ，ＤＬＳ，ＳＺ－１００，ＨＯＲＩＢＡ）を利用した。製造直後から一週間間隔で４週間、粒子サイズとゼータ電位とを測定した結果を、それぞれ図１ないし図４Ａに示した。

【0044】

その結果、図１に示されているように、一般リポソームの場合、粒子サイズ１８０ないし２００ｎｍ、陽イオン性リポソームは、粒子サイズ１００ないし１２０ｎｍと測定され、図２に示されているように、一般リポソームのゼータ電位は、－１０～０ｍＶであり、陽イオン性リポソームのゼータ電位は、２０～５０ｍＶであり、表面電荷が陽イオンであるということを確認した。すなわち、コレステロール及びセラミドを含む実施例１の陽イオン性リポソームの粒子サイズ及びゼータ電位に係わる経時的な安定性観察の結果、４週間、安定した物性を維持するということを確認した。それとは異なり、セラミド及びコレステロールを含んでいない比較例２の陽イオン性リポソームは、時間が経過するほど、粒子サイズが増大する傾向を示した。そのような結果から、コレステロール及びセラミドは、陽イオン性リポソームの膜安定性向上に重要な役割があるということを確認することができる。

【0045】

図３は、比較例３の粒子サイズの増大を示したグラフであり、図４は、比較例５の粒子サイズの増大を示したグラフ（図４Ａ）、及び析出現象を示した写真（図４Ｂ）である。

【0046】

図３に示されているように、セラミド及びコレステロールを１：２０の重量比で含む比較例３の陽イオン性リポソームの場合、目に見える析出現象は、ないものの、製造１週間後、約５０ｎｍから約１００ｎｍにサイズが２倍増大することを確認することができた。また、セラミド及びコレステロールを１：１００の重量比で含む比較例４の陽イオン性リポソームの場合、回転蒸発濃縮器を利用し、フラスコ壁面に薄膜を形成させる段階において、析出現象が生じ、リポソーム製造が不可能であった。また、図４Ａに示されているように、セラミド及びコレステロールを１：３０の重量比で含む比較例５の陽イオン性リポソームの場合、セラミド含量の増大により、製造１週間後、約１００ｎｍから約２００ｎｍにサイズが約２倍以上増大し、図４Ｂに示されているように、脂質膜の崩壊現象及び析出現象が生じるということを確認することができた。従って、一様態による陽イオン性リポソームは、セラミド及びコレステロールを、１ないし１０：３０ないし６０の重量比で含むことにより、結晶性による析出問題、及び膜が堅固になる問題を改善させることができる。

【0047】

１．２ 粒子構造及び粒子外観の確認
リポソーム構造分析のために、リポソーム粒子を超低温状態に維持したまま、本来の構造観察が可能であるＣｒｙｏ－ＴＥＭ（ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）を使用した。まず、リポソーム５μＬを、２００メッシュカーボンレーシーフィルムＣｕ－ｇｒｉｄ（ｃａｒｂｏｎ ｌａｃｅｙ ｆｉｌｍ Ｃｕ－ｇｒｉｄ）にローディングした後、ビットロボット（ｖｉｔｒｏｂｏｔ）で液化された（約－１７０℃）エタン（ｅｔｈａｎｅ）に浸し、急激に凍結させた。作られた凍結試料を、加速電圧２００ｋＶ下で、Ｃｒｙｏ－ＴＥＭ（Ｔｅｃｎａｉ Ｆ２０，ＦＥＩ）で観察した。

【0048】

その結果、図５に示されているように、陽イオン性リポソームは、有効成分担持と、有効成分の皮膚透過とに有利な多重層（ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒ）構造体を形成し、一般リポソームは、二重層（ｂｉｌａｙｅｒ）構造体を形成するということを確認した。

【0049】

実験例２．試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）皮膚透過評価
前記実施例１と比較例１とで製造した陽イオン性リポソームと一般リポソームとにつき、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）条件における有効成分の皮膚吸収効果を評価するために、フランツ細胞拡散システム（Ｆｒａｎｚ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｅｌｌ ｓｙｓｔｅｍ）を利用した皮膚透過実験を行った。具体的には、皮膚透過実験のために、人工膜（Ｓｔｒａｔ－Ｍ，Ｍｅｒｃｋ）上に、美白機能性成分と知られたナイアシンアミド（ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ）を含む、一般リポソームと陽イオン性リポソームとをそれぞれ定量に塗布し、受容体相（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｈａｓｅ）としては、ＰＢＳ：ＥｔＯＨ（８：２）を使用した。該実験は、３２℃条件で実施され、塗布８時間経過後、受容体相を、サンプリングポート（ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐｏｒｔ）を介して採取し、ＨＰＬＣを利用し、採取した試料からナイアシンアミドを分析した。

【0050】

８時間後、角質層と皮膚とに残っているナイアシンアミドの量を測定するために、人工皮膚をＰＢＳで３回洗浄した後、テープストリッピング（ｔａｐｅ ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）法を利用し、角質層に残っているナイアシンアミドの量を測定した。皮膚の角質層は、テープを利用し、３回剥がした後、ＥｔＯＨ １０ｍＬに入れ、超音波洗浄器を利用して抽出した。該テープストリッピング法を経た後、角質層が除去された皮膚は、洗浄後、前述のところと同一にＥｔＯＨに入れ、超音波洗浄器を利用して抽出した。そのようにして得られた試料中のナイアシンアミドは、ＨＰＬＣを利用して定量化した。ＨＰＬＣ分析条件は、下記表３に示した。人工膜を利用した皮膚透過実験結果は、図６に示した。

【0051】

【表3】

【0052】

人工膜を利用した８時間後、皮膚吸収効果を確認した結果、図６に示されているように、陽イオン性リポソームは、一般リポソームと比較し、角質層に存在するナイアシンアミドの量（テープ）、角質層を除いた表皮と真皮とに存在するナイアシンアミドの量（膜）、皮膚を透過した量（経皮）、及びそれらをいずれも合わせた透過総量において、顕著に増大された皮膚吸収能を示した。

【0053】

実験例３．人工皮膚への皮膚透過評価
前記実験例２の結果に加え、実施例１の陽イオン性リポソームの皮膚透過程度を視覚的に確認するために、人工皮膚（Ｎｅｏｄｅｒｍ，ＴＥＧＯ ＳＣＩＥＮＣＥ）を利用し、皮膚透過評価を進めた。具体的には、表皮層だけ存在する人工皮膚に、蛍光試薬ロダミンＢ（Ｓｉｇｍａ－ａｌｄｒｉｃｈ）を担持させたリポソームを３０μＬ滴下させ、２時間３７℃でインキュベーションした。その後、人工皮膚が固定されている支持台を除去し、分離された人工皮膚を、ＯＣＴ（ｏｐｔｉｍａｌ ｃｕｔｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）溶液が入っているモールドに入れ、８０℃で約２０分間保管した後、冷凍組織切片器（Ｌｅｉｃａ ＣＭ１８５０，Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を利用し、２０μｍサイズに切片した。切片された組織は、共焦点走査顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ ｌａｓｅｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ＬＳＭ－７００，Ｚｅｉｓｓ）で観察した。

【0054】

その結果、図７に示されているように、一般リポソームに比べ、実施例１の陽イオン性リポソームを処理した皮膚断面において、蛍光強度がさらに高く示され、表皮下層部までさらに深く透過されているということを確認した。そのような結果は、実験例２のフランツ細胞拡散システムを利用した試験管内皮膚透過実験結果と相応する結果である。

【0055】

また、そのような結果は、前記実験で使用された蛍光試薬ロダミンＢが、水溶性蛍光試薬においてリポソームコアに捕集されるが、捕集された蛍光試薬は、リポソーム粒子が細胞膜と融合した後、皮膚細胞内に分散されるとき、陽イオン性リポソームの表面電位が、負電荷を帯びる皮膚表面との親和力におり、一般リポソームより皮膚透過が強く示されたと分析されうる。

【0056】

実験例４．皮膚安全性の評価
セラミド及びコレステロールの含有いかんによる陽イオン性リポソームの皮膚安全性を比較するために、前記実施例１及び比較例２の皮膚安全性評価を行った。具体的には、皮膚疾患がない成人男女２０人を対象にし、前記実施例１及び前記比較例２の陽イオン性リポソームの刺激程度を次のように評価した。試験者らの腕全般に、２０μＬの試料を塗布した後、試験部位を密閉した後、２４時間貼布した。貼布を除去した後、３０分後及び２４時間後における皮膚での反応をＣＴＦＡガイドラインに提示された用語（ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ）に基づいて検査した。判定基準によって得られた試験者らの皮膚刺激指数（ＰＩＩ）点数を平均し、１未満であるならば、低刺激、２未満であるならば、軽刺激、３．５未満であるならば、中刺激、３．５以上であるならば、強刺激として評価した。

【0057】

【表4】

【0058】

その結果、前記表４に示されているように、セラミドを含む陽イオン性リポソーム及び一般リポソームは、無刺激であり、化粧料組成物として安全に使用されうるということを確認したが、セラミドが含有されていない比較例２の陽イオン性リポソームは、刺激程度がさらに高い低刺激と示された。前記結果から、陽イオン性リポソームは、セラミドを含むことにより、リポソームの皮膚安全性が向上されうるということを確認した。

【0059】

以上の結果から、前記陽イオン性リポソームは、一般リポソームに比べ、リポソームに含有された有効成分の皮膚透過程度が有意的に高く示され、前記陽イオン性リポソームは、コレステロール及びセラミドを含むことにより、陽イオン性リポソームの膜安定性及び皮膚安全性が顕著に改善されるということを確認することができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【国際調査報告】