特表2022-523908ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａに対する特異性を有する多重特異性抗体、ＩＬ－１７Ａを標的とする抗体、及びそれらの使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-27
(54)【発明の名称】ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａに対する特異性を有する多重特異性抗体、ＩＬ－１７Ａを標的とする抗体、及びそれらの使用方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220420BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220420BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20220420BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20220420BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220420BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20220420BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220420BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C07K16/46
C07K16/24
C07K16/18
A61P29/00
A61P37/06
A61K39/395 N
A61K39/395 D
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021543446
(86)(22)【出願日】2020-01-31
(85)【翻訳文提出日】2021-09-24
(86)【国際出願番号】 EP2020052481
(87)【国際公開番号】W WO2020157305
(87)【国際公開日】2020-08-06
(31)【優先権主張番号】19154852.8
(32)【優先日】2019-01-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】19154846.0
(32)【優先日】2019-01-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】19154850.2
(32)【優先日】2019-01-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】515310984
【氏名又は名称】ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(74)【代理人】
【識別番号】100166165
【弁理士】
【氏名又は名称】津田 英直
(72)【発明者】
【氏名】ダービド ウレッヒ
(72)【発明者】
【氏名】テア グンデ
(72)【発明者】
【氏名】ゼバスチャン マイアー
(72)【発明者】
【氏名】クリスティアン ヘス
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA13
4C085BB11
4C085CC21
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA22
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ＴＮＦαに特異的に結合する第１ドメインと、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第２ドメインと、任意選択的にヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含む単離された多重特異性抗体に関する。本発明はさらに、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体に関する。さらに本発明は、前記抗体の使用方法、前記抗体を含む医薬組成物、その使用方法、及びキットに関する。本発明はまた、前記抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸、前記核酸を含むベクター、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞、及び前記抗体を産生する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及び任意選択的に、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に特異的に結合する第３ドメインを含む、単離された多重特異性抗体であって、ここで、（ａ）前記第１ドメインは、（ｉ）ＣＤＲのセット、すなわち、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）ＣＤＲのセット、すなわちそれぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み；及び
（ｂ）前記第２ドメインは、ＣＤＲのセット、すなわち、それぞれ配列番号６３、６４、及び６５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号７６、７７、及び７８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み；及び
（ｃ）前記第３ドメインは、存在する場合、ＣＤＲのセット、すなわち、（ｉ）それぞれ配列番号９０、９１、及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１１１、１１２、及び１１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２１、１２２、及び１２３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、前記多重特異性抗体。
【請求項2】
抗体が、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する１つのみのドメイン、及び／又はＴＮＦαに特異的に結合する１つのみのドメイン、及び／又は任意選択的に、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する１つのみのドメインを含む、請求項１に記載の多重特異性抗体。
【請求項3】
前記ドメインがそれらの各抗原又は受容体に同時に結合することができる、請求項１又は請求項２に記載の多重特異性抗体。
【請求項4】
抗体が以下の特性を有する、前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体：（ａ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、セクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば５より大きい、１０より大きい、１５より大きい、２０より大きい、２５より大きい、３０より大きい、３５より大きい、４０より大きい、４５より大きい、好ましくは５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び
（ｂ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、配列番号１４９（Ａ１３）のｓｃＤｂの力価と比較して、少なくとも１、例えば１より大きい、１．５より大きい、２より大きい、２．５より大きい、３より大きい、３．５より大きい、好ましくは４より大きい、より好ましくは４．５より大きい力価（相対力価）で、ＴＮＦαを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定された配列番号１４９（Ａ１３）の前記ｓｃＤｂのＩＣ50値（ｎＭ）と、ＨＴ－２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎＭ）との比である；及び
（ｃ）任意選択的に、ＥＬＩＳＡアッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば３より大きい、４より大きい、５より大きい、６より大きい、７より大きい、８より大きい、９より大きい、好ましくは１０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び
（ｄ）任意選択的に、Ｌ９２９アッセイで決定された配列番号１４９（Ａ１３）のｓｃＤｂの力価と比較して、少なくとも０．４、例えば少なくとも０．５、好ましくは少なくとも１の力価（相対力価）で、ＴＮＦαを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、Ｌ９２９アッセイによって測定された配列番号１２５の前記ｓｃＤｂのＩＣ50値（ｎＭ）と、Ｌ９２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎＭ）との比である；及び／又は
（ｅ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒトＩＬ－１７Ａに結合し、及び任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満のＫDで、カニクイザルＩＬ－１７Ａに結合する；及び
（ｆ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満、より好ましくは０．２５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒトＴＮＦαに結合する；及び
（ｇ）任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒト血清アルブミンに結合し、任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、カニクイザル血清アルブミンに結合する。
【請求項5】
抗体が以下の特性を有する、前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体：（ａ）示差走査蛍光測定法によって決定すると、ｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液中で、少なくとも５５℃、好ましくは少なくとも５８℃、より好ましくは少なくとも６０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する；
（ｂ）前記多重特異性抗体が、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、５回の連続した凍結融解サイクル後に、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％以下のモノマー含有量の損失を有する；
（ｃ）前記多重特異性抗体が、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、特に少なくとも４週間、４℃で保存した後、１０％未満、好ましくは５％未満のモノマー含有量の損失を有する；及び／又は
（ｄ）前記多重特異性抗体が、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、特に少なくとも４週間、３７℃で保存した後、２０％未満、好ましくは１５％未満のモノマー含有量の損失を有する。
【請求項6】
前記第１ドメイン、及び／又は前記第２ドメイン、及び／又は任意選択的に前記第３ドメインが重鎖可変領域ＶＨを含み、ここで、前記ＶＨはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である、前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体。
【請求項7】
前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体であって、ここで、前記第１ドメイン、及び／又は前記第２ドメイン、及び／又は任意選択的に前記第３ドメインが軽鎖可変領域ＶＬを含み、ここで、前記ＶＬは、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、特にＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、特にＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、特に配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかに記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は２７に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４から選択される、前記多重特異性抗体。
【請求項8】
請求項６～７のいずれか１項に記載の多重特異性抗体であって、ここで前記第１ドメインのＶＨが、アミノ酸配列配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記第１ドメインのＶＬが、アミノ酸配列配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記第１ドメインのＶＨが、アミノ酸配列配列番号１０及び１１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記第１ドメインのＶＬが、アミノ酸配列配列番号２１及び２２から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、
より好ましくは、前記第１ドメインのＶＨが、配列番号１０に記載されているものであり、及び／又は前記第１ドメインのＶＬが、配列番号２１に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
【請求項9】
請求項６～８のいずれか１項に記載の多重特異性抗体であって、ここで、前記第２ドメインのＶＨが、配列番号７２、７３、７４、及び７５から成る群から選択されるアミノ酸、好ましくは配列番号７２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は、前記第２ドメインのＶＬが、配列番号８５、８６、８７、８８、及び８９から成る群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号８５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、前記第２ドメインのＶＨが、配列番号７２、７３、７４、及び７５から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は、前記第２ドメインのＶＬが、配列番号８５、８６、８７、８８、及び８９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、より好ましくは、ここで、前記第２ドメインのＶＨが配列番号７２に記載されているものであり、及び／又は前記第２ドメインのＶＬが配列番号８５に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
【請求項10】
請求項６～９のいずれか１項に記載の多重特異性抗体であって、ここで、前記第３ドメインが存在し、及び（ｉ）前記第３ドメインのＶＨが、アミノ酸配列配列番号９９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記第３ドメインのＶＬが、アミノ酸配列配列番号１０８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、前記第３ドメインのＶＨが、配列番号９９に記載されているものであり、及び／又は前記第３ドメインのＶＬが、配列番号１０８に記載されているものである；又は
（ｉｉ）前記第３ドメインのＶＨが、アミノ酸配列配列番号１２０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又はＶＬが、アミノ酸配列配列番号１３０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、前記第３ドメインのＶＨが、配列番号１２０に記載されているものであり、及び／又は前記第３ドメインのＶＬが、配列番号１３０に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
【請求項11】
前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体であって、１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線形二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ－ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ－ｓｃＤｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、トリボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）又はバイボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1）、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、モリソン（ＩｇＧ ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）又はＩｇＧ ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、トリアボディ、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、二重特異性Ｆａｂ2、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ融合体、ジダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＣＯＶＤ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆｖ2－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖と軽鎖の両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに基づく二重特異性抗体、例えばＫｎｏｂ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ抗体（ＫｉＨ）；Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＤｂ、タンデム－ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン又は任意の他のヘテロ二量体化ドメインのいずれかの鎖のＮ末端及び／又はＣ末端に融合したＣＯＶＤ、ＭＡＴＣＨ及びデュオボディ、好ましくはトリボディ又はｓｃＤｂ－ｓｃＦｖから成る群から選択される形式である、前記多重特異性抗体。
【請求項12】
前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体であって、ここで、前記抗体が、配列番号１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、及び１４８のいずれか、好ましくは１４３から選択される配列と、少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ前記抗体が、（ｉ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、及び
（ｉｉ）それぞれ配列番号６３、６４、及び６５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号７６、７７、及び７８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及び
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９０、９１、及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含み、
好ましくは、前記抗体は、配列番号１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、及び１４８、好ましくは１４３のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、前記多重特異性抗体。
【請求項13】
前記請求項のいずれか１項に記載の多重特異性抗体と医薬的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。
【請求項14】
薬剤として使用するための、請求項１～１２のいずれか１項に記載の多重特異性抗体、又は請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
請求項１～１３のいずれか１項に記載の多重特異性抗体、又は請求項１４に記載の医薬組成物を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＴＮＦαに特異的に結合する第１ドメインと、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第２ドメインと、任意選択的にヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインとを含む、単離された多重特異性抗体に関する。本発明はさらに、前記抗体の使用方法、前記抗体を含む医薬組成物、その使用方法、及びキットに関する。本発明はまた、前記抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸、前記核酸を含むベクター、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞、及び前記抗体を産生する方法に関する。
【0002】
本発明はさらに、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体、本発明の前記単離された抗体を含む多重特異性分子、医薬組成物、及びその使用方法に関する。本発明はさらに、前記抗体を含むキット、前記抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸、前記核酸を含むベクター、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞、及び前記抗体を産生する方法を含む方法に関する。
【背景技術】
【0003】
ＴＮＦαは、免疫系の細胞によって放出され、前記細胞と相互作用するホモ三量体の炎症促進性サイトカインである。ＴＮＦαは、可溶性タンパク質並びに膜貫通型ＴＮＦαと呼ばれる前駆体として見いだされ、細胞表面のＩＩ型ポリペプチドとして発現される。膜貫通型ＴＮＦαは、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）などのメタロプロテイナーゼによって残基Ａｌａ７６とＶａｌ７７の間で処理され、１５７アミノ酸残基の可溶性型ＴＮＦαが放出される。可溶性ＴＮＦαは、１７ｋＤａの切断されたモノマーのホモ三量体である。膜貫通型ＴＮＦαは、２６ｋＤの非切断モノマーのホモ三量体としても存在する。膜ＴＮＦαと可溶性ＴＮＦαの両方とも生物学的に活性である。ＴＮＦαは、２つの受容体、ＴＮＦ受容体１（ＴＮＦＲ１）と２（ＴＮＦＲ２）に結合することができ、ここで、膜貫通型ＴＮＦαは主にＴＮＦＲ２を介して作用する。ＴＮＦＲ１は様々な細胞で広く発現され、その関与が炎症促進性応答を引き起こす。ＴＮＦＲ２の発現はほとんど免疫細胞に限定されており、その結合は細胞の生存と増殖を促進する（Bazzoni F, Beutler B, N Engl J Med (1996) 334(26):1717-25; Locksley RM, et al., Cell (2001) 104(4):487-501; Cabal-Hierro L, Lazo PS, Cell Signal (2012) 24(6):1297-305; Brenner D, et al., Nat Rev Immunol (2015) 15(6):362-74）。
【0004】
ＴＮＦαは、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症などの慢性疾患を含む炎症性疾患や自己免疫疾患などの多くのヒトの疾患でアップレギュレートされていることが証明されている。ＴＮＦαに対する抗体が、エンドトキシンショックの予防及び治療のために提案されている（Beutler et al., Science, 234, 470-474, 1985）。Bodmer et al., (Critical Care Medicine, 21, S441-S446, 1993) 及び Wherry et al., (Critical Care Medicine, 21, S436-S440, 1993) は、敗血症ショックの治療における抗ＴＮＦα抗体の治療的可能性を考察している。敗血症ショックの治療における抗ＴＮＦα抗体の使用は、Kirschenbaum et al., (Critical Care Medicine, 26, 1625-1626, 1998) によっても考察されている。コラーゲン誘発関節炎は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体を使用して効果的に治療することができる（Williams et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 9784-9788, 1992)）。関節リウマチ及びクローン病の治療における抗ＴＮＦα抗体の使用は、Feldman et al. (Transplantation Proceedings, 30, 4126-4127, 1998)、Adorini et al. (Trends in Immunology Today, 18, 209-211, 1997)、及びFeldman et al. (Advances in Immunology, 64, 283-350, 1997) で考察されている。そのような治療で以前に使用されるＴＮＦαに対する抗体は、一般に、米国特許第５，９１９，４５２号に記載されているようなキメラ抗体である。
【0005】
ＴＮＦαに対するモノクローナル抗体は、先行技術に記載されている。Meager et al. (Hybridoma, 6, 305-311, 1987) は、組換えＴＮＦαに対するマウスモノクローナル抗体について記載している。Fendly et al. (Hybridoma, 6, 359-370, 1987) は、ＴＮＦα上の中和エピトープを定義する際の組換えＴＮＦαに対するマウスモノクローナル抗体の使用について記載している。さらに、国際特許出願ＷＯ９２／１１３８３には、ＴＮＦαに特異的なＣＤＲ移植抗体を含む組換え抗体が開示されている。Rankin et al. (British J. Rheumatology, 34, 334-342, 1995) は、関節リウマチの治療におけるそのようなＣＤＲ移植抗体の使用を記載している。米国特許第５，９１９，４５２号は、抗ＴＮＦαキメラ抗体、及びＴＮＦαの存在に関連する病状の治療におけるそれらの使用を開示している。さらに抗ＴＮＦα抗体は、Stephens et al. (Immunology, 85, 668-674, 1995)、ＧＢ－Ａ－２ ２４６５７０、ＧＢ－Ａ－２ ２９７１４５、ＵＳ８，６７３，３１０、ＵＳ２０１４／０１９３４００、ＥＰ２３９０２６７Ｂ１、ＵＳ８，２９３，２３５、ＵＳ８，６９７，０７４、ＷＯ２００９／１５５７２３Ａ２、及びＷＯ２００６／１３１０１３Ａ２に記載されている。
【0006】
現在承認されている抗ＴＮＦα生物製剤には、（ｉ）キメラＩｇＧ抗ヒトモノクローナル抗体であるインフリキシマブ（Remicade（登録商標）；Wiekowski M et al: “Infliximab (Remicade)"、Handbook of Therapeutic Antibodies、WILEY-VCH; Weinheim、2007-01-01、p.885-904）；（ｉｉ）ＩｇＧ１ ＦｃとのＴＮＦＲ２二量体融合タンパク質であるエタネルセプト（Enbrel（登録商標））；（ｉｉｉ）完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であるアダリムマブ（Humira（登録商標）；Kupper H et al: “Adalimumab (Humira)”, Handbook of Therapeutic Antibodies, WILEY-VCH; Weinheim, 2007-01-01, p.697-732) ）；（ｉｖ）ＰＥＧ化Ｆａｂ断片であるセルトリズマブ（Cimzia（登録商標）；Melmed G Y et al: “Certolizumab pegol”, Nature Reviews. Drug Discovery, Nature Publishing Group, GB, Vol. 7, No. 8, 2008-08-01, p.641-642）；（ｖ）ヒトＩｇＧ１Ｋモノクローナル抗体であるゴリムマブ（Simponi（登録商標）；Mazumdar S et al: “Golimumab”, mAbs, Landes Bioscience, US, Vol. 1, No. 5, 2009-09-01, p.422-431）が含まれる。
【0007】
しかし、抗ＴＮＦα治療には一定の制限があることが示された。必ずしもすべての患者が十分な臨床応答を達成したり、抗ＴＮＦαに対する臨床応答を長期にわたって維持したりするわけではないため、疾患を制御するために新しい治療法に切り替える必要がある。例えば、関節リウマチ（ＲＡ）患者の抗ＴＮＦα治療では、約４０％の患者は反応せず、疾患活性の大幅な低下を経験するのは患者の２０％のみである。従って、炎症及び自己免疫障害などの障害の進行のより効果的な抑制に関する治療に対して、大きな満たされていない臨床的必要性が引き続き存在する。
【0008】
抗ＴＮＦα治療後の患者における補体生物学的経路の活性化は、おそらく、多くの患者が抗ＴＮＦα療法に反応しないか部分的な反応しか持たない理由の１つであり得る。最近明らかになった一連の証拠は、例えば関節リウマチにおける炎症性疾患及び自己免疫疾患の病因におけるＩＬ－１７Ａの役割を示している。
【0009】
ヒト及びマウスのインターロイキン１７（ＩＬ－１７）ファミリーは、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ（ＩＬ－２５とも呼ばれる）、及びＩＬ－１７Ｆの６つのサイトカインで構成されており、急性及び慢性の炎症応答で役割を果たす。インターロイキン１７受容体（ＩＬ－１７Ｒ）ファミリーは、ＩＬ－１７ＲＡ、ＩＬ－１７ＲＢ、ＩＬ－１７ＲＣ、ＩＬ－１７ＲＤ、及びＩＬ－１７ＲＥの５つのメンバーで構成されている。
【0010】
インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａ又はＩＬ１７Ａ、これはＩＬ－１７又は細胞障害性Ｔリンパ球関連抗原－８（ＣＴＬＡ－８）と同義）は、ホモ二量体の炎症促進性サイトカインである。ＩＬ－１７Ａは、メモリーＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｈ１７と呼ばれる）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｔｃ１７）、不変ＮＫＴ細胞、γδＴ細胞、非Ｔ非Ｂリンパ球（３型自然リンパ球と呼ばれる）、及び好中球のサブセットによって産生される。ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７Ｆは、ＩＬ－１７ファミリー内で別個のサブグループを形成する。それらはＩＬ－１７ファミリー内で最大の配列相同性と同一性を共有するが、ＩＬ－１７ファミリーの他のメンバーはＩＬ－１７Ａに対して有意に低い配列同一性を有する（Starnes, T., et al., J Immunol. 167(8):4137-40 (2001); Aggarwal, S. and Gurney, A. L., J. Leukoc Biol, 71(1): 1-8 (2002)）。ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７Ｆはどちらも、ＩＬ－１７ＲＡとＩＬ－１７ＲＣで構成されるヘテロ二量体の受容体複合体を介してシグナルを伝達する（Toy D., et al., J Immunol. 2006; Wright JF., et al., J Immunol. 2008; 181(4):2799-2805）。ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－１７Ｆは、ＩＬ－１７Ａ／Ａ又はＩＬ－１７Ｆ／Ｆジスルフィド結合ホモ二量体及びＩＬ－１７Ａ／Ｆジスルフィド結合ヘテロ二量体を形成できる（Wright JF. et al., J Immunol. 2008; 181(4):2799-2805; Liang SC. et al., J Immunol. 2007; 179(11):7791-7799）。ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－１７Ｆは、炎症促進性サイトカイン及び抗菌ペプチドの発現を誘導する。
【0011】
ヒトＩＬ－１７Ａ（ＣＴＬＡ－８、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｑ１６５５２、ＩＬ－１７又はＩＬ１７とも呼ばれる；配列番号３３）は、様々な炎症状態、例えば自己免疫疾患、代謝障害、及び癌に関与している（Ouyang W., et al., Immunity. 2008; 28(4):454-467；Milner JD., Curr Opin Immunol. 2011; 23(6):784-788；Kuchroo VK., et al., Nat Med. 2012; 18(1):42-47；Ahmed M. and Gaffen SL., Cytokine Growth Factor Rev. 2010; 21(6):449-453；Trinchieri G., Annu Rev Immunol. 2012; 30:677-706；Gallimore AM, Godkin A., N Engl J Med. 2013; 368(3):282-284；Ye P., et al., J Exp Med. 2001; 194(4):519-527；Chung DR., et al., J Immunol. 2003; 170(4):1958-1963；Huang W., et al., J Infect Dis. 2004; 190(3):624-631；Ishigame H., et al., Immunity. 2009; 30(1):108-119；総説については、Gu C., et al., Cytokine. 2013 Nov 64(2)を参照）。ＩＬ－１７Ａは、好中球動員のための他の炎症促進性サイトカイン及びケモカイン、急性相タンパク質、抗菌ペプチド、ムチン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、及び接着分子の誘導に役割を果たす。ＩＬ－１７Ａはまた、ＴＮＦα及びＩＬ－１ベータを含む他のサイトカインと相乗作用して、ケモカイン発現をさらに誘導する（Chabaud M., et al., J. Immunol. 161(1):409-14 (1998)）。
【0012】
ＩＬ－１７Ａの病理学的産生は、過度の炎症と組織損傷を引き起こす（総説については、Gu et al., Cytokine. 2013 November; 64(2)を参照）。高レベルのＩＬ－１７Ａが多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、喘息、クローン病、及び関節リウマチの患者に見られた。動物をＩＬ－１７Ａ中和抗体で治療すると、自己免疫性脳脊髄炎の発症率と重症度が低下する（Komiyama, Y. et al, J. Immunol. 177 (2006) 566-573）。さらに、ＩＬ－１７Ａ中和抗体は、コラーゲン誘発関節炎のマウス関節リウマチモデルの重症度と発症率を低下させ、関節リウマチ患者の炎症を起こした関節の滑液で高レベルのＩＬ－１７Ａを検出することができる（Ziolkowska, M. et al, J. Immunol. 164 (2000) 2832-2838; Kotake, S. et al, J. Clin. Invest. 103 (1999) 1345-1352; Hellings P.W. et al, Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 28 (2003) 42-50）。
【0013】
ヒト及び動物モデルにおける実験的証拠の大部分は、ＩＬ－１７Ａを標的化治療法の開発を支持してきた。ＡＩＮ４５７（セクキヌマブ（secukinumab）；米国特許第７，８０７，１５５号及びＷＯ２００６／０１３１０７を参照）、ＬＹ２４３９８２１（イキセキズマブ（ixekizumab）；米国特許第７，８３８，６３８号及び第８，１１０，１９１号、及びＷＯ２００７／０７０７５０を参照）、ＳＣＨ９００１１７（Merck）、ＲＧ４９４３（Roche）などを含むいくつかの抗ＩＬ－１７抗体が開発された。抗ＩＬ－１７Ａ抗体の例は、ＷＯ２００６／０１３１０７、ＷＯ２００６／０５４０５９、ＷＯ２００７／０７０７５０、ＷＯ２００７／１４９０３２、ＷＯ２００８／００１０６３、ＷＯ２００８／０２１１５６、ＷＯ２０１０／０３４４４３、ＷＯ２０１０／１０２２５１、ＷＯ２０１２／０１８７６７、ＷＯ２０１４／１６１５７０、ＷＯ２０１４／００１３６８、ＷＯ２０１４／１２２６１３、ＷＯ２０１５／０７０６９７、ＷＯ２０１５／１３７８４３、ＷＯ２０１６／０４８１８８、ＷＯ２０１６／１１３５５７、ＷＯ２０１６／１３８８４２、ＷＯ２０１７／０６８４７２に開示されている。
【0014】
ＩＬ－１７Ａシグナル伝達を阻止する様々な分子を用いたいくつかの臨床試験が実施されているか、現在も進行中である。ＩＬ－１７Ａ又はその受容体を標的とする生物製剤とその有効性は、関節リウマチ、強直性脊椎関節症、クローン病、乾癬、多発性硬化症、オゾン誘発性好中球増加症などの炎症性又は自己免疫疾患の状況で評価されている。
【0015】
例えば、完全ヒトＩｇＧ１κ抗ＩＬ－１７Ａモノクローナル抗体であるセクキヌマブ（米国特許第７，８０７，１５５号及びＷＯ２００６／０１３１０７）は現在、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎挙動の治療薬として承認されている（総説については、Wang et al., Eur J Rheumatol 2017 (4) 272-7を参照）。乾癬性関節炎の被験者におけるセクキヌマブの長期的な有効性と安全性を評価する第ＩＩＩ相試験（ＦＵＴＵＲＥ Ｉ及びＦＵＴＵＲＥ ＩＩ）では、乾癬性関節炎の徴候と症状の改良において、セクキヌマブはプラセボよりも有意に有効であった（Mease PJ. et al. N Engl J Med 2015; 373: 1329-39； McInnes IB. et al. The Lancet; 386:1137-46）。
【0016】
ヒト化抗ＩＬ－１７Ａモノクローナル抗体であるイキセキズマブ（米国特許第７，８３８，６３８号及び第８，１１０，１９１号及びＷＯ２００７／０７０７５０）は、活動性乾癬性関節炎の生物製剤未経験患者で、２４週間の第ＩＩＩ相試験（ＳＰＩＲＩＴ－Ｐ１）で試験された（Mease PJ. Et al., Ann Rheum Dis. 2017 Jan;76(1):79-87）。活動性乾癬性関節炎の生物製剤未経験患者において、イキセキズマブ治療は、疾患活動性及び身体機能の改良、並びに構造的損傷の進行の阻害をもたらすことが証明された。イキセキズマブはまた、中等度から重度の尋常性乾癬の患者の治療にも有効であることが示された（Griffiths CEM, et al., The Lancet; 386: 541-51）。
【0017】
ブロダルマブ（Brodalumab）は完全ヒトＩＬ－１７受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）モノクローナル抗体であり（米国特許第７，７６７，２０６号を参照）、乾癬の治療に有効であることが証明されている（Papp KA. et al. N Engl J Med 2012; 366: 1181-9）。またこれは、プラセボ対照第ＩＩ相試験で乾癬性関節炎患者に顕著で持続的な応答を示した（Mease PJ. et al., N Engl J Med 2014; 370: 2295-306）。しかしブロダルマブによる治療は、上気道感染症、倦怠感、下痢などの強い有害事象、及び報告された自殺念慮及び行動と結びついている（総説については、Wang et al., Eur J Rheumatol 2017 (4) 272-7を参照）。
【0018】
従って、ＩＬ－１７Ａは炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療において有望な標的である。現在までに多くの抗ＩＬ－１７Ａ抗体が同定されているが、炎症応答や自己免疫疾患におけるＩＬ－１７Ａ活性を効果的に低減又は排除でき、同時に改良された安全性プロフィールを有し開発に適している、改良された治療用抗体の開発が依然として必要である。治療用抗体は、有益な親和性、有効性、及び免疫原性に加えて、生物理学的特性が改良され、開発性、高収率での生産性、タンパク質の安定性が向上している必要がある。ＴＮＦαとＩＬ－１７Ａの両方の生物学的経路が同時に阻止される治療は、応答率が大幅に改良され、ＴＮＦαとＩＬ－１７Ａによって媒介される障害の治療における満たされていないニーズに対処する可能性がある。ＩＬ－１７及びＴＮＦαに特異的に結合するいくつかの生物学的治療薬がこれまでに提案されてきた。ＷＯ２０１０／１０２２５１（Abbvie Inc.）は、ＴＮＦαとＩＬ－１７の両方に結合する二重特異性四価抗体を開示している。ＷＯ２０１３／０６３１１０（Abbvie Inc.）は、ＴＮＦ及びＩＬ－１７に結合することができる多価ＤＶＤ－Ｉｇ結合タンパク質を開示している。ＷＯ２０１４／０４４７５８（Covagen ACJ）は、グリコシル化されたＩＬ－１７Ａを阻害し、ＴＮＦαに結合することができる融合構築物を開示している。またＷＯ２０１４／１３７９６１（Eli Lilly and Company）及びＷＯ２０１７／１３２４５７（Janssen Biotech）は、抗ＴＮＦ及び抗ＩＬ－１７Ａ二重特異性抗体を開示している。ＷＯ２０１７／１０２８３０（UCB Biopharma）は多重特異性抗体を開示しており、これは、ＴＮＦα、ＩＬ－１７Ａ、及びＩＬ－１７Ｆを阻害することができ、特に、ヒトＴＮＦαに特異的な結合ドメインとヒトＩＬ－１７Ａ及びヒトＩＬ－１７Ｆに特異的な結合ドメインとを含む。Xu et al., Oncotarget, 8 (2017) 81860-81872は、ＩｇＧ様分子の２つのアームがそれぞれＴＮＦαとＩＬ－１７Ａに向けられているＩｇＧ様二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）を生成した。興味深いことに、ＷＯ２０１５／０１４９７９（Roche、Fischer et al., Arthritis & Rheumatology 67 (2015) 51-62も参照）は、二重特異性四価ＩＬ－１７ＡｘＴＮＦ抗体構築物を開示しており、これらは、２つの抗原のそれぞれについて、二価（「２＋２」構築物）又は一価（「２＋２」構築物）のいずれかである。ＷＯ２０１５／０１４９７９によれば、二価の構築物は一価の代替物よりも好適である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0019】
しかし、炎症性疾患や自己免疫疾患などの障害、例えばいまだに大多数の患者が治療に適切に応答しない関節リウマチの治療のために、ＩＬ－１７ＡとＴＮＦαの両方の活性を効果的に中和できる改良された抗炎症薬の必要性が依然として存在する。ＩＬ－１７ＡとＴＮＦαの両方の活性を効果的に中和し、有益な親和性と有効性、及び改良された安全性プロフィール、例えば免疫原性がより低い、改良された治療用抗体の開発が依然として必要である。さらに、治療用抗体は、より良好な開発性、高収率の生産性、及び優れた抗体安定性につながる改良された生物理学的特性を有するべきである。
【課題を解決するための手段】
【0020】
本発明の目的は、炎症性及び自己免疫障害の治療を改良するための薬剤を提供することである。
【0021】
本発明の抗体は、満たされていない医学的ニーズを有する患者に新しい治療選択肢を提供する。本発明は新規の多重特異性抗体を提供し、これはＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαを同時に阻害することができ、治療に使用するのに有益なさらに改良された特性、例えばより高い親和性、改良された有効性、選択性、安全性、例えば低い免疫原性、及び改良された生物理学的特性、例えば開発性や安定性を有する。
【0022】
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインと、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインと、及び任意選択的に、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインとを含む、単離された多重特異性抗体に関する。
【0023】
１つの態様において本開示は、本発明の多重特異性抗体と医薬的に許容し得る担体とを含む医薬組成物に関する。
【0024】
さらなる態様において本開示は、薬剤として使用するための本発明の多重特異性抗体又は本発明の医薬組成物を提供する。
【0025】
さらなる態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療、特に炎症状態又は自己免疫疾患の治療に使用するための、本発明の多重特異性抗体又は本発明の医薬組成物を提供する。
【0026】
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療、特に炎症状態又は自己免疫疾患の治療に使用するための、本発明の多重特異性抗体又は本発明の医薬組成物の使用を提供する。
【0027】
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療、特に炎症状態又は自己免疫疾患の治療のための薬剤の製造における、本発明の多重特異性抗体又は本発明の医薬組成物の使用を提供する。
【0028】
さらに別の態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害を治療する方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量の本発明の多重特異性抗体又は本発明の医薬組成物を、必要な被験体に投与することを含む。
【0029】
１つの態様において本開示は、本発明の多重特異性抗体、又は本発明の医薬組成物を含むキットを提供する。
【0030】
さらなる態様において本開示は、本発明の多重特異性抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。さらなる態様において本開示は、前記核酸を含むベクターを提供する。さらなる態様において本開示は、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【0031】
さらに別の態様において本開示は、本発明の多重特異性抗体又はその結合ドメイン又はその断片を製造する方法を提供し、ここで、前記方法は、本発明の多重特異性抗体又はその結合ドメイン又はその断片をコードする核酸又はベクターを含む宿主細胞を培養する工程を含む。
【0032】
以下の項目で要約される、本開示の態様、有利な特徴、及び好適な実施態様は、それぞれ単独で又は組み合わせて、本発明の目的の解決にさらに寄与する：
【0033】
１． ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む単離された多重特異性抗体。
【0034】
２． 前記抗体が、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する１つのみのドメイン、及び／又はＴＮＦαに特異的に結合する１つのみのドメインを含む、項目１に記載の多重特異性抗体。
【0035】
３． 前記抗体が、ヒトＴＮＦα及びヒトＩＬ－１７Ａの生物活性を中和することができる、項目１又は項目２に記載の多重特異性抗体。
【0036】
４． ＥＬＩＳＡによって測定すると、前記抗体が、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆよりも、ヒトＩＬ－１７Ａに選択的に結合する、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0037】
５． ＩＬ－１７Ａ又はＴＮＦα以外の抗原に対して特異性を有する第３ドメインをさらに含む、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0038】
６． 前記抗体が、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に特異的に結合する第３ドメインを含み、好ましくは、前記抗体がヒト血清アルブミンに特異的に結合する１つのみのドメインを含む、項目５に記載の多重特異性抗体。
【0039】
７． 前記ドメインが、それらの各抗原又は受容体に同時に結合することができる、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0040】
８． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、前記第１ドメインと前記第２ドメイン、並びに任意選択的に前記第３ドメインが、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、及び単一ドメイン軽鎖抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、サメのＶＮＡＲ構造に基づく単一ドメイン抗体、及び、特に限定されるものではないが、アンキリンベースのドメイン、ファイノマー、アビマー、アンチカリン、フィブロネクチンを含む代替足場に基づく結合ドメイン、及び抗体の定常領域に組み込まれた結合部位（例えば、F-star's Modular Antibody Technology（商標））から成る群から独立して選択され、好ましくはＦａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖから成る群から選択される、より好ましくは、ここで前記第１ドメイン及び／又は前記第２ドメイン及び／又は前記第３ドメインはＦｖ又はｓｃＦｖである、前記多重特異性抗体。
【0041】
９． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、前記多重特異性抗体が、１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線形二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ－ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ－ｓｃＤｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、トリボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）又はバイボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1）、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、モリソン（ＩｇＧ ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）又はＩｇＧ ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、トリアボディ、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、二重特異性Ｆａｂ2、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ融合体、ジダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＣＯＶＤ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆｖ2－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖と軽鎖の両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに基づく二重特異性抗体、例えばＫｎｏｂ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ抗体（ＫｉＨ）；Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＤｂ、タンデム－ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン又は任意の他のヘテロ二量体化ドメインのいずれかの鎖のＮ末端及び／又はＣ末端に融合したＣＯＶＤ、ＭＡＴＣＨ及びデュオボディ、好ましくはトリボディ又はｓｃＤｂ－ｓｃＦｖから成る群から選択される形式である、前記多重特異性抗体。
【0042】
１０． 前記抗体が免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まず、任意選択的に、ＣＨ１及び／又はＣＬ領域を含まない、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0043】
１１． 前記抗体がトリボディである、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0044】
１２． 前記第１ドメイン、前記第２ドメイン、及び前記第３ドメインが、Ｆａｂ及びｓｃＦｖから成る群から独立して選択され、好ましくは、前記第２ドメインがＦａｂであり、前記第１及び第３ドメインがｓｃＦｖである、項目１１に記載の多重特異性抗体。
【0045】
１３． 前記抗体がｓｃＤｂ－ｓｃＦｖであり、好ましくは前記ｓｃＦｖ部分がｓｃＤｂにＣ末端で融合され、より好ましくは前記第１ドメイン及び前記第２ドメインがｓｃＤｂを形成し、前記第３ドメインがｓｃＦｖである、項目９に記載の多重特異性抗体。
【0046】
１４． 項目１３に記載の多重特異性抗体であって、前記抗体は、式：
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＣ－Ｌ２－ＶＬＣ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＢ－Ｌ５－ＶＨＢ、又はＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ又はＶＬＣ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＣ－Ｌ４－ＶＬＡ－Ｌ５－ＶＨＡ又はＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
好ましくは、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、又はＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
より好ましくは、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣで表され、
ここで、ＶＬＡ及びＶＨＡは、それぞれ第１ドメインの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、ＶＬＢ及びＶＨＢは、それぞれ第２ドメインの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、ＶＬＣ及びＶＨＣは、それぞれ第３ドメインの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、及びここで、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＬ５は、ポリペプチドリンカーである、前記多重特異性抗体。
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＣ－Ｌ２－ＶＬＣ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＢ－Ｌ５－ＶＨＢ、又はＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ又はＶＬＣ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＣ－Ｌ４－ＶＬＡ－Ｌ５－ＶＨＡ又はＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
好ましくは、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、又はＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
より好ましくは、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣで表され、
ここで、ＶＬＡ及びＶＨＡは、それぞれ第１ドメインの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、ＶＬＢ及びＶＨＢは、それぞれ第２ドメインの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、ＶＬＣ及びＶＨＣは、それぞれ第３ドメインの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、及びここで、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＬ５は、ポリペプチドリンカーである、前記多重特異性抗体。
【0047】
１５． 前記Ｌ１及びＬ３が配列番号１３２に記載されるものである、項目１４に記載の多重特異性抗体。
【0048】
１６． 前記Ｌ２、Ｌ４、及びＬ５が配列番号２３に記載されるものである、項目１４～１５のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0049】
１７． 前記抗体が以下の特性を有する、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体：
【0050】
（ａ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、セクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば５より大きい、１０より大きい、１５より大きい、２０より大きい、２５より大きい、３０より大きい、３５より大きい、４０より大きい、４５より大きい、好ましくは５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び
【0051】
（ｂ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、配列番号１４９（Ａ１３）のｓｃＤｂの力価と比較して、少なくとも１、例えば１より大きい、１．５より大きい、２より大きい、２．５より大きい、３より大きい、３．５より大きい、好ましくは４より大きい、より好ましくは４．５より大きい力価（相対力価）で、ＴＮＦαを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定された配列番号１４９（Ａ１３）の前記ｓｃＤｂのＩＣ50値（ｎＭ）と、ＨＴ－２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎＭ）との比である；及び
【0052】
（ｃ）任意選択的に、ＥＬＩＳＡアッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば３より大きい、４より大きい、５より大きい、６より大きい、７より大きい、８より大きい、９より大きい、好ましくは１０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び
【0053】
（ｄ）任意選択的に、Ｌ９２９アッセイで決定された配列番号１４９（Ａ１３）のｓｃＤｂの力価と比較して、少なくとも０．４、例えば少なくとも０．５、好ましくは少なくとも１の力価（相対力価）で、ＴＮＦαを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、Ｌ９２９アッセイによって測定された配列番号１４９の前記ｓｃＤｂのＩＣ50値（ｎＭ）と、Ｌ９２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎＭ）との比である；及び／又は
【0054】
（ｅ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒトＩＬ－１７Ａに結合し、及び任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満のＫDで、カニクイザルＩＬ－１７Ａに結合する；及び
【0055】
（ｆ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満、より好ましくは０２５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒトＴＮＦαに結合する；及び
【0056】
（ｇ）任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒト血清アルブミンに結合し、任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、カニクイザル血清アルブミンに結合する。
【0057】
１８． 前記抗体が以下の特性を有する、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体：
（ａ）ｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液中で、示差走査蛍光測定法によって決定される融解温度（Ｔｍ）が、少なくとも５５℃、好ましくは少なくとも５８℃、より好ましくは少なくとも６０℃である；
（ｂ）前記多重特異性抗体が、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、５回の連続した凍結融解サイクル後に、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％以下のモノマー含有量の損失を有する；
（ｃ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、４℃で保存した後、１０％未満、好ましくは５％未満のモノマー含有量の損失を有する；及び／又は
（ｄ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、３７℃で保存した後、２０％未満、好ましくは１５％未満のモノマー含有量の損失を有する。
（ａ）ｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液中で、示差走査蛍光測定法によって決定される融解温度（Ｔｍ）が、少なくとも５５℃、好ましくは少なくとも５８℃、より好ましくは少なくとも６０℃である；
（ｂ）前記多重特異性抗体が、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、５回の連続した凍結融解サイクル後に、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％以下のモノマー含有量の損失を有する；
（ｃ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、４℃で保存した後、１０％未満、好ましくは５％未満のモノマー含有量の損失を有する；及び／又は
（ｄ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、３７℃で保存した後、２０％未満、好ましくは１５％未満のモノマー含有量の損失を有する。
【0058】
１９． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、各ドメインが重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、前記多重特異性抗体。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、前記多重特異性抗体。
【0059】
２０． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインがＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を含み、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１に記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号２に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号３に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４に記載されるものであるか、又は（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９に記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'は、配列番号５２に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、前記多重特異性抗体。
【0060】
２１． 項目２０に記載の多重特異性抗体であって、
（ｉ）
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；及び
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；又は
（ｉｉ）
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；及び
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
（ｉ）
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；及び
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；又は
（ｉｉ）
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；及び
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
【0061】
２２． （ｉ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列、又は、（ｉｉ）（ｉ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、項目２１に記載の多重特異性抗体。
【0062】
２３． ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインが重鎖可変領域ＶＨＡを含み、前記ＶＨＡがＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0063】
２４． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、ここで、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは軽鎖可変領域ＶＬＡを含み、前記ＶＬＡは、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は２７に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
【0064】
２５． 項目２３～２４のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、前記ＶＨＡが、
（ｉ）アミノ酸配列配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、アミノ酸配列配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号４８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、アミノ酸配列配列番号５９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記多重特異性抗体。
（ｉ）アミノ酸配列配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、アミノ酸配列配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号４８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、アミノ酸配列配列番号５９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記多重特異性抗体。
【0065】
２６． 項目２５に記載の多重特異性抗体であって、前記ＶＨＡが、
（ｉ）配列番号１０及び１１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、配列番号２１及び２２から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｉｉ）配列番号４８及び４９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、配列番号５９及び６０から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記多重特異性抗体。
（ｉ）配列番号１０及び１１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、配列番号２１及び２２から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｉｉ）配列番号４８及び４９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬＡが、配列番号５９及び６０から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記多重特異性抗体。
【0066】
２７． （ｉ）配列番号１０のＶＨＡ配列、及び／又は配列番号２１のＶＬＡ配列、又は（ｉｉ）配列番号４８のＶＨＡ配列、及び／又は配列番号５９のＶＬＡ配列を含む、項目２６に記載の多重特異性抗体。
【0067】
２８． ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインがＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を含む、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、ＨＣＤＲ１'が配列番号６３に記載されているに記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'が配列番号６４に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'が配列番号６５に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'が配列番号７６に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'が配列番号７７に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'が配列番号７８に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、前記多重特異性抗体。
【0068】
２９． （ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号６５、６８、及び７１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号７６、７９、及び８２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号７７、８０、及び８３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；そして
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号７８、８１、及び８４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、項目２８に記載の多重特異性抗体。
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号６５、６８、及び７１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号７６、７９、及び８２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号７７、８０、及び８３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；そして
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号７８、８１、及び８４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、項目２８に記載の多重特異性抗体。
【0069】
３０． それぞれ配列番号６３、６４、及び６５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号７６、７７、及び７８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、項目２９に記載の多重特異性抗体。
【0070】
３１． ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインが重鎖可変領域ＶＨＢを含み、前記ＶＨＢがＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0071】
３２． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインが軽鎖可変領域ＶＬＢを含み、前記ＶＬＢが、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、このフレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかに記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は２７に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４を含む、前記多重特異性抗体。
【0072】
３３． 項目３１～３２のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、前記ＶＨＢが、配列番号７２、７３、７４、及び７５から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一で、好ましくは配列番号７２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は、前記ＶＬＢが、配列番号８５、８６、８７、８８、及び８９から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一で、好ましくは配列番号８５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記多重特異性抗体。
【0073】
３４． 前記ＶＨＢが、配列番号７２、７３、７４、及び７５から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は、前記ＶＬＢが、配列番号８５、８６、８７、８８、及び８９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目３３に記載の多重特異性抗体。
【0074】
３５． （ｉ）配列番号７２のＶＨＢ配列、及び／又は配列番号８５のＶＬＢ配列；又は（ｉｉ）配列番号７５のＶＨＢ配列、及び／又は配列番号８８のＶＬＢ配列；又は
（ｉｉｉ）配列番号７５のＶＨＢ配列、及び／又は配列番号８９のＶＬＢ配列を含む、項目３４に記載の多重特異性抗体。
（ｉｉｉ）配列番号７５のＶＨＢ配列、及び／又は配列番号８９のＶＬＢ配列を含む、項目３４に記載の多重特異性抗体。
【0075】
３６． 項目６～３５のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、ＨＳＡに特異的に結合する前記第３ドメインがＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を含み、ここで、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、
（ａ）ＨＣＤＲ１'は配列番号９０に記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'は配列番号９１に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'は配列番号９２に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'は配列番号１００に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'は配列番号１０１に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'は配列番号１０２に記載されているものである；又は
（ｂ）ＨＣＤＲ１'は配列番号１１１に記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'は配列番号１１２に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'は配列番号１１３に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'は配列番号１２０に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'は配列番号１２１に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'は配列番号１２２に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、前記多重特異性抗体。
（ａ）ＨＣＤＲ１'は配列番号９０に記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'は配列番号９１に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'は配列番号９２に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'は配列番号１００に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'は配列番号１０１に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'は配列番号１０２に記載されているものである；又は
（ｂ）ＨＣＤＲ１'は配列番号１１１に記載されているものであり；ＨＣＤＲ２'は配列番号１１２に記載されているものであり；ＨＣＤＲ３'は配列番号１１３に記載されているものであり；ＬＣＤＲ１'は配列番号１２０に記載されているものであり；ＬＣＤＲ２'は配列番号１２１に記載されているものであり；ＬＣＤＲ３'は配列番号１２２に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、前記多重特異性抗体。
【0076】
３７． 項目３６に記載の多重特異性抗体であって、
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号９０、９３、及び９６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号９１、９４、及び９７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号９２、９５、及び９８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１００、１０３、及び１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１０１、１０４、及び１０７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１０２、１０５、及び１０８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｂ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１１１、１１４、及び１１７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号１１２、１１５、及び１１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１１３、１１６、及び１１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２１、１２４、及び１２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１２２、１２５、及び１２８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１２３、１２６、及び１２９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号９０、９３、及び９６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号９１、９４、及び９７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号９２、９５、及び９８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１００、１０３、及び１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１０１、１０４、及び１０７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１０２、１０５、及び１０８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｂ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１１１、１１４、及び１１７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号１１２、１１５、及び１１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１１３、１１６、及び１１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２１、１２４、及び１２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１２２、１２５、及び１２８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１２３、１２６、及び１２９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、前記多重特異性抗体。
【0077】
３８． 以下を含む項目３７に記載の多重特異性抗体：
（ａ）それぞれ配列番号９０、９１、及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は
（ｂ）それぞれ配列番号１１１、１１２、及び１１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２１、１２２、及び１２３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列。
（ａ）それぞれ配列番号９０、９１、及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１００、１０１、及び１０２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は
（ｂ）それぞれ配列番号１１１、１１２、及び１１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２１、１２２、及び１２３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列。
【0078】
３９． ＨＳＡに特異的に結合する前記第３ドメインが重鎖可変領域ＶＨＣを含み、前記ＶＨＣがＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である、項目６～３８のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0079】
４０． 項目６～３９のいずれか１つに記載の多重特異性抗体であって、ＨＳＡに特異的に結合する前記第３ドメインが軽鎖可変領域ＶＬＣを含み、前記ＶＬＣが、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、このフレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかに記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は２７のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４を含む、前記多重特異性抗体。
【0080】
４１． 前記ＶＨＣが、アミノ酸配列配列番号９９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は前記ＶＬＣが、アミノ酸配列配列番号１０９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目３９～４０のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0081】
４２． 配列番号９９のＶＨＣ配列及び／又は配列番号１０９のＶＬＣ配列を含む、項目４１に記載の多重特異性抗体。
【0082】
４３． 前記ＶＨＣが、アミノ酸配列配列番号１１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は前記ＶＬＣが、アミノ酸配列配列番号１２０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目３９～４０のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0083】
４４． 配列番号１１０のＶＨＣ配列及び／又は配列番号１２０のＶＬＣ配列を含む、項目４３に記載の多重特異性抗体。
【0084】
４５． 前記抗体がヒト化されている、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0085】
４６． 前記抗体が、配列番号１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、及び１４８のいずれか、好ましくは１４３から選択される配列と、少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＣＤＲが、項目２２、３０、及び３８（ａ）の配列を有する、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0086】
４７． 前記抗体が、配列番号１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、及び１４８のいずれか、好ましくは１４３から選択されるアミノ酸配列を含む、前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体。
【0087】
４８． 前述の項目のいずれか１つに記載の多重特異性抗体と医薬的に許容し得る担体とを含む医薬組成物。
【0088】
４９． 薬剤として使用するための、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物。
【0089】
５０． Ｌ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療に使用するための、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物。
【0090】
５１． 炎症状態又は自己免疫疾患の治療に使用するための、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物。
【0091】
５２． 以下の疾患の治療に使用するための、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物：癌、関節炎、関節リウマチ、変形性肘関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性疾患、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症性又は内毒素性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂質異常症。
【0092】
５３． Ｌ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療に使用するための薬剤の製造における、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物の医薬組成物の使用。
【0093】
５４． 炎症状態又は自己免疫疾患の治療に使用するための薬剤の製造における、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物の使用。
【0094】
５５． 以下の疾患の治療に使用するための薬剤の製造における、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物の使用：癌、関節炎、関節リウマチ、変形性肘関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性疾患、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症性又は内毒素性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂質異常症。
【0095】
５６． ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害を治療する方法であって、前記状態が緩和されるように、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、上記方法。
【0096】
５７． ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される前記障害が炎症状態又は自己免疫疾患である、項目５６に記載の方法。
【0097】
５８． ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される前記障害が、癌、関節炎、関節リウマチ、変形性肘関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性疾患、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症性又は内毒素性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂質異常症である、項目５６に記載の方法。
【0098】
５９． 項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体又はその断片をコードする核酸。
【0099】
６０． 項目５９に記載の核酸を含むベクター。
【0100】
６１． 項目５９に記載の核酸又は項目６０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【0101】
６２． 項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体又はその断片をコードする核酸又はベクターを含む宿主細胞を培養する工程を含む、項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体を産生する方法。
【0102】
６３． 項目１～４７のいずれか１つに記載の多重特異性抗体、又は項目４８に記載の医薬組成物を含むキット。
【0103】
本発明の別の目的は、改良された親和性、有効性、及び改良された生物理学的特性、例えば改良された溶解性、開発性、及び安定性を有する抗ＩＬ－１７Ａ抗体を提供することである。
【0104】
本発明の抗ＩＬ－１７Ａ抗体は、治療における使用に有益な改良された特性、例えばより高い親和性、改良された有効性、選択性、改良された生物理学的特性、例えば溶解性、開発性、及び安定性を有する。
【0105】
従って、１つの態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する単離された抗体を提供し、特に、これは、ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含み、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、ＨＣＤＲ１'は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２'は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３'は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する］から１０個以下の、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。１つの態様において本開示は、本開示の単離された抗体を含む多重特異性分子に関する。
【0106】
別の態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する単離された抗体を提供し、特に、これは、ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含み、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３'は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する］からの１０個以下の、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。１つの態様において本開示は、本開示の単離された抗体を含む多重特異性分子に関する。
【0107】
１つの態様において本開示は、本開示の単離された抗体、又は本開示の単離された抗体を含む多重特異性分子、及び医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物に関する。
【0108】
別の態様において本開示は、薬剤として使用するための、本開示の抗体、又は前記単離された抗体を含む多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物に関する。
【0109】
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害又はＧＲＯ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療に使用するための、本開示の抗体、又は前記単離された抗体を含む多重特異性分子、又は医薬組成物に関する。
【0110】
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害又はＧＲＯ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療に使用するための薬剤の製造における、本開示の抗体、又は前記単離された抗体を含む多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。
【0111】
別の態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害を治療する方法に関し、この方法は、有効量の、本開示の抗体、又は本開示の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を、それを必要としている被験者に投与することを含む。さらに別の態様において本開示は、本開示の抗体をコードする核酸に関する。さらなる態様において本開示は、前記核酸を含むベクターに関する。さらなる態様において本開示は、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞に関する。
【0112】
別の態様において本開示は、本開示の抗体を産生する方法に関し、この方法は、本開示の抗体をコードする核酸又はベクターを含む宿主細胞を培養する工程を含む。
【0113】
それぞれ単独で又は組み合わせて、以下の項目に要約された本開示の態様、有利な特徴、及び好適な実施態様は、本発明の目的を解決することにさらに寄与する。
【0114】
１． ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含む、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する抗体であって、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、
（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、上記抗体。
（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列であり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、上記抗体。
【0115】
２． ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含む項目１の抗体であって、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、
（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号２に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号３に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４に記載されているものである；又は
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号５２に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、上記抗体。
（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号２に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号３に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４に記載されているものである；又は
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０に記載されているものであり、
ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１に記載されているものであり、
ＬＣＤＲ３'は、配列番号５２に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換を有する、上記抗体。
【0116】
３． 重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、項目１又は項目２の抗体であって、
（ｃ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び
（ｄ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記抗体。
（ｃ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び
（ｄ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記抗体。
【0117】
４． （ｉ）
（ｇ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｈ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｉ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｊ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｋ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、そして
（ｌ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｉｉ）
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、そして
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、項目３の抗体。
（ｇ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｈ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｉ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｊ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｋ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、そして
（ｌ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｉｉ）
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、そして
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである、項目３の抗体。
【0118】
５． （ｉ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む、項目４の抗体。
【0119】
６． 前記ＶＨがＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である、項目３～５のいずれか１つの抗体。
【0120】
７． 前記ＶＬが、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかに記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は２７に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４を含む、項目３～６のいずれか１つの抗体。
【0121】
８． （ｉ）前記ＶＨが、アミノ酸配列配列番号１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬが、アミノ酸配列配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む；又は（ｉｉ）前記ＶＨが、アミノ酸配列配列番号４８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬが、アミノ酸配列配列番号５９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目３～７のいずれか１つの抗体。
【0122】
９． （ｉ）前記ＶＨが、配列番号１０及び１１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬが、配列番号２１及び２２から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む；又は（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号４８及び４９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬが、配列番号５９及び６０から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目８の抗体。
【0123】
１０． （ｉ）配列番号１０のＶＨ配列及び／又は配列番号２１のＶＬ配列；又は（ｉｉ）配列番号４８のＶＨ配列及び／又は配列番号５９のＶＬ配列を含む、項目９の抗体。
【0124】
１１． （ｉ）配列番号１１のＶＨ配列及び／又は配列番号４９のＶＬ配列；又は（ｉｉ）配列番号１１のＶＨ配列及び／又は配列番号６０のＶＬ配列を含む、項目９の抗体
【0125】
１２． 前記抗体がカニクイザルＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する、前述の項目のいずれか１つの抗体。
【0126】
１３． ＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７ＦよりもヒトＩＬ－１７Ａに選択的に結合する、前述の項目のいずれか１つの抗体。
【0127】
１４． ＩＬ－１７Ａへの結合が
（ａ）ＩＬ－１７Ａとその受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）の結合を阻害又は阻止し、
（ｂ）ＩＬ－１７Ａ活性を低減又は中和する、前述の項目のいずれか１つの抗体。
（ａ）ＩＬ－１７Ａとその受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）の結合を阻害又は阻止し、
（ｂ）ＩＬ－１７Ａ活性を低減又は中和する、前述の項目のいずれか１つの抗体。
【0128】
１５． ＨＴ－２９アッセイでインビトロで評価した場合、前記抗体がＧＲＯ－α分泌を阻害することができる、項目１４の抗体。
【0129】
１６． 前述の項目のいずれかの抗体であって、
（ｈ）ＥＬＩＳＡアッセイで決定された、セクキヌマブの力価と比較して、５より大きい、好ましくは１０より大きい、より好ましくは１５より大きい、さらにより好ましくは２０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡによって測定されたｓｃＦｖ形式の本発明の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び／又は
（ｉ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、セクキヌマブの力価と比較して、５０より大きい、好ましくは１００より大きい、より好ましくは１５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたｓｃＦｖ形式の本発明の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び／又は
（ｊ）１ｎｇ／ｍＬ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ以下、より好ましくは０．２ｎｇ／ｍＬ以下の濃度で１ｎｇのヒトＩＬ－１７Ａの活性を５０％阻害することができ、ここで前記阻害活性は、５０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下でＨＴ－２９アッセイで、ヒトＩＬ－１７Ａによって誘導されるＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定される、上記抗体。
（ｈ）ＥＬＩＳＡアッセイで決定された、セクキヌマブの力価と比較して、５より大きい、好ましくは１０より大きい、より好ましくは１５より大きい、さらにより好ましくは２０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡによって測定されたｓｃＦｖ形式の本発明の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び／又は
（ｉ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、セクキヌマブの力価と比較して、５０より大きい、好ましくは１００より大きい、より好ましくは１５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたｓｃＦｖ形式の本発明の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である；及び／又は
（ｊ）１ｎｇ／ｍＬ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ以下、より好ましくは０．２ｎｇ／ｍＬ以下の濃度で１ｎｇのヒトＩＬ－１７Ａの活性を５０％阻害することができ、ここで前記阻害活性は、５０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下でＨＴ－２９アッセイで、ヒトＩＬ－１７Ａによって誘導されるＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定される、上記抗体。
【0130】
１７． 前述の項目のいずれかの抗体であって、
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、詳細には表面プラズモン共鳴により直接設定で測定すると、ヒトＩＬ－１７Ａに、５ｎＭ未満、詳細には１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、さらに詳細には１００ｐＭ未満、より詳細には５０ｐＭ未満の解離定数（ＫD）で結合し、そして
（ｂ）任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、詳細にはキャプチャ設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、カニクイザルＩＬ－１７Ａに、１０ｎＭ未満、詳細には７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、より詳細には０．５ｎＭ未満のＫDで結合する、上記抗体。
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、詳細には表面プラズモン共鳴により直接設定で測定すると、ヒトＩＬ－１７Ａに、５ｎＭ未満、詳細には１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、さらに詳細には１００ｐＭ未満、より詳細には５０ｐＭ未満の解離定数（ＫD）で結合し、そして
（ｂ）任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、詳細にはキャプチャ設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、カニクイザルＩＬ－１７Ａに、１０ｎＭ未満、詳細には７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、より詳細には０．５ｎＭ未満のＫDで結合する、上記抗体。
【0131】
１８． 前記抗体が、表面プラズモン共鳴によって測定すると、詳細には表面プラズモン共鳴により直接設定で測定すると、ヒトＩＬ－１７Ａに、０．５ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、１００ｐＭ未満、詳細には５０ｐＭ未満の解離定数（ＫD）で結合する、項目１７の抗体
【0132】
１９． 前述の項目のいずれかの抗体であって、
（ｅ）ｓｃＦｖ形式である場合、詳細には前記抗体がｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸塩緩衝液中にある場合、示差走査蛍光測定法によって決定される融解温度（Ｔｍ）は、少なくとも６０℃、詳細には少なくとも６２℃、少なくとも６５℃、より詳細には少なくとも７０℃である；
（ｆ）ｓｃＦｖ形式である場合、本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度である場合、詳細には前記抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中にある場合、５回の連続凍結融解サイクル後、モノマー含有量の損失は５％未満、詳細には３％未満、より詳細には１％未満である；
（ｇ）ｓｃＦｖ形式である場合、本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度である場合、詳細には前記抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中にある場合、４℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存後、モノマー含有量の損失は５％以下、詳細には４％未満、３％未満、２％未満、より詳細には１％未満である、及び／又は
（ｈ）本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度である場合、３７℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存後、モノマー含有量の損失は５％未満である、上記抗体。
（ｅ）ｓｃＦｖ形式である場合、詳細には前記抗体がｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸塩緩衝液中にある場合、示差走査蛍光測定法によって決定される融解温度（Ｔｍ）は、少なくとも６０℃、詳細には少なくとも６２℃、少なくとも６５℃、より詳細には少なくとも７０℃である；
（ｆ）ｓｃＦｖ形式である場合、本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度である場合、詳細には前記抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中にある場合、５回の連続凍結融解サイクル後、モノマー含有量の損失は５％未満、詳細には３％未満、より詳細には１％未満である；
（ｇ）ｓｃＦｖ形式である場合、本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度である場合、詳細には前記抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中にある場合、４℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存後、モノマー含有量の損失は５％以下、詳細には４％未満、３％未満、２％未満、より詳細には１％未満である、及び／又は
（ｈ）本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度である場合、３７℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存後、モノマー含有量の損失は５％未満である、上記抗体。
【0133】
２０． 前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、及び単一ドメイン軽鎖抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、サメのＶＮＡＲ構造に基づく単一ドメイン抗体、及び、特に限定されるものではないが、アンキリンベースのドメイン、ファイノマー、アビマー、アンチカリン、フィブロネクチンを含む代替の足場に基づく結合ドメイン、及び抗体の定常領域に組み込まれている結合部位（例えば、F-star's Modular Antibody Technology（商標））、好ましくはｓｃＦＶから成る群から選択される、前述の項目のいずれかの抗体。
【0134】
２１． 前記ｓｃＦｖが、（ｉ）配列番号２４及び配列番号２５から成る群から選択されるアミノ酸配列を有し、好ましくは前記ｓｃＦｖが配列番号２４のアミノ酸配列を有する；又は（ｉｉ）配列番号６１及び配列番号６２から成る群から選択されるアミノ酸配列を有し、好ましくは前記ｓｃＦｖが配列番号６１のアミノ酸配列を有する、項目２０の抗体。
【0135】
２２． 前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から成る群から選択されるＩｇＧであり、好ましくは前記抗体がＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、項目２０の単離された抗体。
【0136】
２３． 前記抗体がヒト化されている、前述の項目のいずれかの単離された抗体。
【0137】
２４． 多重特異性分子である項目１～２３のいずれか１つの抗体。
【0138】
２５． 項目２４の抗体であって、１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線形二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ－ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ－ｓｃＤｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、トリボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）又はバイボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1）、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、モリソン（ＩｇＧ ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）又はＩｇＧ ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、トリアボディ、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、二重特異性Ｆａｂ2、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ融合体、ジダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＣＯＶＤ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆｖ2－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖と軽鎖の両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）、ヘテロ二量体性Ｆｃドメインに基づく二重特異性抗体、例えばＫｎｏｂ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ抗体（ＫｉＨ）；Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＤｂ、タンデム－ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン又は任意の他のヘテロ二量体化ドメインのＮ末端及び／又はＣ末端に融合したＣＯＶＤ、ＭＡＴＣＨ、及びデュオボディから成る群から選択される、上記抗体。
【0139】
２６． 項目１～２５のいずれか１つの抗体と医薬的に許容し得る担体とを含む医薬組成物。
【0140】
２７． 薬剤として使用するための、項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物。
【0141】
２８． ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害、又はＧＲＯ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療に使用するための、項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物。
【0142】
２９． 炎症状態又は自己免疫疾患の治療に使用するための、項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物。
【0143】
３０． 以下の疾患の治療に使用するための、項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物：癌、関節炎、関節リウマチ、変形性肘関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性疾患、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症性又は内毒素性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂質異常症。
【0144】
３１． ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療に使用するための薬剤の製造における、項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物の使用。
【0145】
３２． 炎症状態又は自己免疫疾患の治療に使用するための薬剤の製造における、項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物の使用。
【0146】
３３． 以下の疾患の治療に使用するための薬剤の製造における、項目１～２５のいずれか１つの抗体又は項目２６の医薬組成物の使用：癌、関節炎、関節リウマチ、変形性肘関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性疾患、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症性又は内毒素性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂質異常症。
【0147】
３４． ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害を治療する方法であって、状態が緩和されるように、有効量の項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物を投与することを含む上記方法。
【0148】
３５． ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害が炎症状態又は自己免疫疾患である、項目３４の方法。
【0149】
３６． 項目３４の方法であって、ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害が、癌、関節炎、関節リウマチ、変形性肘関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性疾患、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症性又は内毒素性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂質異常症である、上記方法。
【0150】
３７． 項目１～２５の抗体をコードする核酸。
【0151】
３８． 項目３７の核酸を含むベクター。
【0152】
３９． 項目３７の核酸又は項目３８のベクターを含む宿主細胞。
【0153】
４０． 項目１～２５の抗体をコードする核酸又はベクターを含む宿主細胞を培養する工程を含む、項目１～２５の抗体を産生する方法。
【0154】
４１． 項目１～２５のいずれか１つの抗体、又は項目２６の医薬組成物を含むキット。
【0155】
本開示は、前述の態様及び／又は実施態様のいずれか１つ以上のすべての組み合わせ、並びに詳細な説明及び実施例に記載された実施態様のいずれか１つ以上との組み合わせを企図する。
【0156】
本明細書における組成物及び方法の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0157】
【図1】標識されたＩＬ－１７Ａが選別プロセスでの使用に適していることを示す。ＨＴ－２９アッセイにおける標識ＩＬ－１７Ａの生物活性。標識及び非標識ＩＬ－１７Ａの３倍連続希釈物を、ＨＴ－２９細胞でＧＲＯ－α分泌を誘導する可能性について並行して試験した。標識（ＩＬ－１７Ａ－ＲＰＥ）及び非標識（ＩＬ－１７Ａ）ＩＬ－１７ＡのＥＣ50値は、それぞれ８２．８ｎｇ／ｍｌ及び５５ｎｇ／ｍｌである。
【図2】ＨＴ－２９アッセイにおいてＩＬ－１７Ａを中和するための、２７－０７－Ｇ０２ウサギＩｇＧ（Ａ）及び２７－３１－ＣＯ４ ＩｇＧ（Ｂ）の力価を示す。
【図3】ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻害するための、２７－０７－Ｇ０２ウサギＩｇＧ（Ａ）と２７－３１－ＣＯ４ ＩｇＧ（Ｂ）の力価を示す。
【図4】ＨＴ－２９アッセイにおいてＩＬ－１７Ａを中和するための、ヒト化ｃＦｖ Ａ１及びＡ２（Ａ）、並びにＰＲＯ５７１及びＰＲＯ５９２（Ｂ）の力価を示す。
【図5】ヒトＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻害するための、抗ＩＬ－１７Ａ ｓｃＦｖ Ａ１及びＡ２（Ａ）、並びにＰＲＯ５７１及びＰＲＯ５９２（Ｂ）の力価（ＥＬＩＳＡ）を示す。
【図6-I】ｓｃＦｖ Ａ１（Ａ）、及びｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２（Ｂ）の標的特異性を示す。ビオチン化ＩＬ－１７ＡとｓｃＦｖとの相互作用をＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆにより阻害する可能性を競合ＥＬＩＳＡにより分析した。ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆの用量依存性作用が示される。
【図6-II】ｓｃＦｖ Ａ１（Ａ）、及びｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２（Ｂ）の標的特異性を示す。ビオチン化ＩＬ－１７ＡとｓｃＦｖとの相互作用をＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆにより阻害する可能性を競合ＥＬＩＳＡにより分析した。ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆの用量依存性作用が示される。
【図7】ｓｃＦｖ Ａ１及びＡ２（Ａ）、並びにｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１及びＰＲＯ５９２（Ｂ）のＤＳＦ測定値からの熱展開曲線を示す。得られるＴｍ値は、データをボルツマン方程式にフィッティングして遷移の中点を得ることによって決定されている。
【図8A】＞１０ｍｇ／ｍＬの濃度で３つの温度（３７℃、４℃、及び－８０℃）で４週間実施されたｓｃＦｖＡ１（Ａ）とｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２（Ｂ）の保存安定性試験を示す。様々な保存温度での経時的なモノマー含有量を左側に示し、様々な保存温度（４℃（左）と３７℃（右））での経時的なタンパク質濃度を右側に示す。モノマー含有量はＳＥ－ＨＰＬＣピーク面積の積分によって決定され、タンパク質濃度はＵＶ280測定によって計算された。
【図8B】＞１０ｍｇ／ｍＬの濃度で３つの温度（３７℃、４℃、及び－８０℃）で４週間実施されたｓｃＦｖＡ１（Ａ）とｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２（Ｂ）の保存安定性試験を示す。様々な保存温度での経時的なモノマー含有量を左側に示し、様々な保存温度（４℃（左）と３７℃（右））での経時的なタンパク質濃度を右側に示す。モノマー含有量はＳＥ－ＨＰＬＣピーク面積の積分によって決定され、タンパク質濃度はＵＶ280測定によって計算された。
【図9】５回にわたる凍結及び融解サイクルの繰り返しにおける、ｓｃＦｖ Ａ１（Ａ）、及びｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２（Ｂ）のモノマー含有量の追跡を示す。
【図10】三重特異性形式を示す。Ａ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2分子の３つのドメインの並べ換え変種が設計された。トリボディ形式の位置ＣＬとＣＨ１でのＳｃＦｖ融合体は同等であると見なされ、この形式の３つの変種が得られる。Ｂ、３つのｓｃＤｂ－ｓｃＦｖドメイン並べ換え変種が設計された。ドメインの特異性は下部に示される。可変ドメインとドメイン間ジスルフィド結合を連結するＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーは、灰色のカギ型で示されている。
【図11】リード化合物製造の一般的なプロセスを示す。Ａ、最終的なＡ３～Ａ５（左のグラフ）及びＡ６～Ａ８（右のグラフ）試料のＳＥ－ＨＰＬＣトレースの重ね合わせ。保持時間が７～８分のピークは、それぞれの分子のモノマーの見かけの分子量に対応する。保持時間が１０分より大きいピークは、緩衝液及び塩に関連するアーティファクトである。Ｂ、非還元（左）及び還元（右）緩衝液条件下でのＡ３～Ａ８のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。分子量標準物質は中央のレーンに添加された。非還元条件下のバンドは、Ａ３～Ａ５の場合は約１００ｋＤａ、Ａ６～Ａ８の場合は約７５ｋＤａの予測分子量にそれぞれ対応する。予測通り、ヘテロ二量体のＦａｂ－（ｓｃＦｖ）2抗体形式の場合、（Ａ３～Ａ５）バンドは還元条件下で約５０ｋＤａにシフトするが、分子量が約７５ｋＤａのＡ６～Ａ８バンドは還元条件下でも観察できる。
【図12】図１２は、Ｌ９２９アッセイにおいてＴＮＦαを中和する力価を示す。細胞計数キット－８を使用して測定された吸光度は、三重特異性分子Ａ３～Ａ８濃度（ｎＭ単位）の関数として表される。Ａ１３（親の二重特異性、ＨＳＡ結合剤及びＴＮＦα阻止剤）を参照として使用した。
【図13】ヒトＴＮＦα及びカニクイザルＴＮＦαを中和する力価の比較を示す。ヒトＴＮＦα又はカニクイザルＴＮＦ－αの存在下で細胞計数キット－８を使用して測定された吸光度は、Ａ５及びＡ７濃度に対して関数で示される。
【図14】ＨＴ－２９アッセイにおけるＨＳＡの存在下でのＴＮＦ－α及びＩＬ－１７Ａの同時阻止を示す。６つの三重特異性分子Ａ３～Ａ８によるＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａのインビトロ同時阻止を、ＨＴ－２９細胞ベースのアッセイを使用して１ｍｇ／ｍｌのＨＳＡの存在下で分析した。セクキヌマブ（ＩＬ－１７Ａ阻止剤）及びＡ１３（親の二重特異性、ＨＳＡ結合剤及びＴＮＦα阻止剤）を参照として使用した。得られたＧＲＯ－α分泌データは、分子濃度ｎＭ（Ａ、Ｃ、及びＥ）及びｎｇ／ｍｌ（Ｂ、Ｄ、及びＦ）の関数で表される。「ＴＮＦαなし」は、ＩＬ－１７Ａのみを添加した場合のＧＲＯ－α分泌を示し、ＴＮＦα阻止による最大の効果に対応する。「ＩＬ１７ａなし」は、ＴＮＦαのみを添加した場合のＧＲＯ－α分泌を示し、ＩＬ－１７Ａ阻止による最大の効果に対応する。「ＩＬ１７ａなし、ＴＮＦａなし」は、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαが添加されていない場合のバックグラウンドＧＲＯ－α分泌を示し、ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａの同時阻止による最大の効果に対応する。
【図15】競合ＥＬＩＳＡにおけるＩＬ－１７ＲＡへのＩＬ－１７Ａの結合の中和を示す。ＩＬ－１７ＲＡへのＩＬ－１７Ａの結合を評価する競合ＥＬＩＳＡによって測定された吸光度は、６つの三重特異性分子（Ａ３～Ａ８）の濃度の増加の関数で表される。参照としてセクキヌマブ（ＩＬ－１７Ａ阻止剤）を使用した。
【図16】ＳＰＲによるヒトＴＮＦα、ヒトＩＬ－１７Ａ、及びＨＳＡへの同時結合を示す。異なる分析物（ヒトＴＮＦα、ヒトＩＬ－１７Ａ、及びＨＳＡ）の６つの可能な順序の注入をＭＡＡＳ－１ ＳＰＲ装置で実施し、得られたセンサーグラムが示される。三重特異性分子をセンサーチップに固定化し（チャネル１ＢのＡ３、Ｃｈ１Ｂ、チャネル２ＢのＡ４、Ｃｈ２Ｂ、チャネル３ＢのＡ５、Ｃｈ３Ｂ、チャネル４ＢのＡ６、Ｃｈ４Ｂ、チャネル５ＢのＡ７、Ｃｈ５Ｂ、チャネル６ＢのＡ８、Ｃｈ６Ｂ）、抗原を順次注入した。
【図17】３７℃、４℃、及び－８０℃の温度で、１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で４週間実施した保存安定性試験を示す。モノマー含有量％及びモノマー損失％の経時変化を、ｄ０、ｄ２、ｄ７、ｄ１４、ｄ２１、及びｄ２８に記録した。
【図18】Ａ５（左）、Ａ７（中央）、及びＡ８（右）のｄ０（黒、影付き）、及びｄ２８（灰色）安定性試料のＳＥ－ＨＰＬＣトレースの重ね合わせを示す。
【図19】静脈内（ｎ＝３）及び皮下（ｎ＝３）投与、及びＡＤＡ分析後の、カニクイザルにおけるＡ７の薬物動態プロフィールを示す。
【図20】モリソンＬ構築物Ａ１４及びＡ１５の概略構造を示す。
【図21】ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ Ａ７について動的光散乱によって決定された可溶性複合体の平均サイズを示す。
【図22】Ａ１４の動的光散乱によって決定された可溶性複合体の平均サイズを示す。
【図23】Ａ１５の動的光散乱によって決定された可溶性複合体の平均サイズを示す。
【図24】ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ Ａ７の可溶性複合体のタンパク質濃度回収を示す。
【図25】Ａ１４の可溶性複合体のタンパク質濃度の回収を示す。
【図26】Ａ１５の可溶性複合体のタンパク質濃度の回収を示す。
【発明の詳細な説明】
【0158】
本開示は、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαに特異的に結合し、改良された親和性、有効性、及び選択性を有する多重特異性抗体分子の発見に基づく。さらに本発明者らが、前記抗体はＴＮＦαと免疫複合体を形成せず、従って潜在的に免疫原性が低いことを証明したように、本開示の多重特異性抗体は改良された安全性プロフィールを有する。他の多重特異性物（例えば、Covagen、Abbvieなど）の二価結合により、免疫原性又は他の悪影響をもたらす可能性のある免疫複合体形成の可能性が高い。対照的に、本開示の一価の二重及び三重特異性構築物は、そのような複合体を形成する可能性が低く、従って抗薬物抗体及び免疫関連の有害作用をもたらす可能性は低い。さらに、本開示の多重特異性抗体は、改良された生物理学的特性、例えば、開発可能性及び比較的不純物が少ない大量の生産性、並びに優れた安定性を有する。
【0159】
本開示はさらに、ヒトＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合する抗体、並びに医薬組成物、製造方法、及びそのような抗体及び医薬組成物の使用方法を提供する。
【0160】
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【0161】
「含む（comprising）」及び「含む（including）」という用語は、特に他に明記しない限り、本明細書ではそれらの制限のない非限定的な意味で使用される。従って、そのような後者の実施態様に関して、「含む（comprising）」という用語は、より狭い用語「から成る（consisting of）」を含む。
【0162】
本発明を説明する文脈（特に以下の特許請求の範囲の文脈）における用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び同様の参照は、本明細書に別段の記載がない限り又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。例えば「細胞」という用語は、それらの混合物を含む複数の細胞を含む。複数形が化合物、塩などに使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味すると解釈される。
【0163】
本開示の多重特異性抗体
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む単離された多重特異性抗体を提供する。
１つの態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む単離された多重特異性抗体を提供する。
【0164】
「ＴＮＦα」又は「ＴＮＦ－α」又は「腫瘍壊死因子」という用語は、特にヒトＴＮＦαを指す。ＴＮＦαは、可溶性タンパク質として、また細胞表面のII型ポリペプチドとして発現される膜貫通型ＴＮＦαと呼ばれる前駆体として見いだされる。膜貫通型ＴＮＦαは、残基Ａｌａ７６とＶａｌ７７の間でＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）などのメタロプロテイナーゼによって処理され、１５７アミノ酸残基のＴＮＦαの可溶型が放出される。可溶性ＴＮＦαは、１７ｋＤａの切断されたモノマーのホモ三量体である。膜貫通型ＴＮＦαは、２６ｋＤの非切断モノマーのホモ三量体としても存在する。本明細書で使用される「ＴＮＦα」という用語は、可溶型及び膜貫通型の両方を包含する。「ＴＮＦα」という用語は、特に本明細書で配列番号１３４として複製されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｐ０１３７５を有するヒト膜貫通型ＴＮＦαを指す。「ＴＮＦα」という用語は、特に本明細書で配列番号１３５として複製されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｐ０１３７５を有する可溶性膜貫通型ＴＮＦαを指す。
【0165】
適切には、本開示の抗体は単離された抗体である。本明細書で使用される「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαのみに特異的に結合する単離された抗体は、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦα以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαに特異的に結合する単離された抗体は、他の種からのＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦα分子などの他の抗原に対して交差反応性を有する可能性がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合がある。
【0166】
適切には、本開示の抗体はモノクローナル抗体である。本明細書で使用される「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、同じ遺伝的供給源に由来するアミノ酸配列と実質的に同一であるか又はそれに由来する抗体を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する結合特異性及び親和性、又は特定のエピトープに対する結合特異性及び親和性を示す。
【0167】
本開示の抗体には、特に限定されるものではないが、キメラ抗体及びヒト化抗体が含まれる。
【0168】
「キメラ抗体」という用語は、（ａ）定常領域又はその一部が、改変、置換、又は交換されており、従って抗原結合部位（可変領域）が、異なる又は改変されたクラス、エフェクター機能、及び／又は種の、又はキメラ抗体に新しい特性を与える完全に異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などの定常領域に連結されているか；又は（ｂ）可変領域又はその一部が、改変、置換、又は異なるか又は改変された抗原特異性を有する可変領域と交換されている、抗体分子である。例えば、マウス抗体は、その定常領域をヒト免疫グロブリンからの定常領域で置き換えることによって改変することができる。ヒト定常領域を用いる置換により、キメラ抗体は、元のマウス抗体と比較して、ヒトにおける抗原性を低下させながら、抗原を認識するその特異性を保持することができる。
【0169】
本明細書で使用される「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体の反応性を保持しながら、ヒトにおいて免疫原性が低い抗体である。これは、例えば非ヒトＣＤＲを保持し、抗体の残りの部分をそれらのヒト対応物（すなわち、定常領域、及び可変領域のフレームワーク部分）で置き換えることによって達成することができる。追加のフレームワーク領域の修飾は、ヒトフレームワーク配列内、並びに別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列内で行うことができる。本開示のヒト化抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム又は部位特異的突然変異誘発、又はインビボでの体細胞突然変異、又は安定性若しくは製造を促進するための保存的置換によって導入される突然変異）。例えば、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984; Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92, 1988; Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536, 1988; Padlan, Molec. Immun., 28:489-498, 1991; 及び Padlan, Molec. Immun., 31: 169-217, 1994 を参照されたい。ヒト工学技術の他の例には、特に限定されるものではないが、米国特許第５，７６６，８８６号に開示されたＸｏｍａ技術が含まれる。
【0170】
本明細書で使用される「組換えヒト化抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作成、又は単離された本開示のすべてのヒト化抗体、例えば動物（例えばウサギ）から単離された抗体、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む任意の他の手段によって調製、発現、作成、又は単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域（存在する場合）を有する。しかしながら、そのような抗体は、インビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）を受けやすく、従って組換え抗体のＶＨ（抗体重鎖可変領域）及びＶＬ（抗体軽鎖可変領域）のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列のＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関連しているが、ヒト抗体生殖系列内に自然に存在しない可能性がある配列である。
【0171】
適切には、本開示の抗体又はその結合ドメインはヒト化されている。適切には、本開示の抗体又はその結合ドメインはヒト化されており、ウサギ由来のＣＤＲを含む。
【0172】
本明細書で使用される「多重特異性抗体」という用語は、少なくとも２つ以上の異なる標的（例えば、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦα）上の２つ以上の異なるエピトープに結合するか、又は同じ標的の２つ以上の異なるエピトープに結合する抗体を指す。本開示の「多重特異性抗体」という用語は、２つ以上の結合ドメイン、例えば２つ又は３つの結合ドメインを有する。「多重特異性抗体」という用語は、二重特異性、三重特異性、四重特異性、五重特異性、及び六重特異性を含む。本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、例えば２つの異なる標的（例えば、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦα）上、又は同じ標的上の２つの異なるエピトープに結合する抗体を指す。本明細書で使用される「三重特異性抗体」という用語は、例えば３つの異なる標的（例えば、ＩＬ－１７Ａ、ＴＮＦα、及びＨＳＡ）上の、又は同じ標的上の３つの異なるエピトープに結合する抗体を指す。
【0173】
「多価抗体」という用語は、複数の原子価を有する単一の結合分子を指し、ここで「原子価」は、同一の標的分子上のエピトープに結合する抗原結合部分の数として説明される。「価」は、分子内の抗原に特異的な特定の数の結合ドメインの存在を指す。従って、「一価」、「二価」、「四価」、及び「六価」という用語は、それぞれ分子内の抗原に特異的な１つ、２つ、４つ、及び６つの結合ドメインの存在を指す。本明細書で使用される「一価抗体」という用語は、ＩＬ－１７Ａ又はＴＮＦαなどの標的分子上の単一のエピトープに結合する単一の抗原結合部分を有する抗体を指す。本明細書で使用される「二価抗体」という用語は、それぞれが同一のエピトープに結合する２つの抗原結合部分を有する抗体を指す。
【0174】
本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに結合するために、一価又は多価、例えば、二価、三価、若しくは四価、好ましくは一価であり得る。
【0175】
本開示の多重特異性抗体は、ＴＮＦαに結合するために、一価又は多価、例えば、二価、三価、若しくは四価、好ましくは一価であり得る。ＴＮＦαは三量体を形成するため、潜在的に三価であり、ＴＮＦαに特異的に結合するいくつかのドメインを有する抗体、例えばＴＮＦαに結合するための二価、三価、又は多価抗体と、三次元免疫複合体を形成することができる。説明のために、ＴＮＦとインフリキシマブ（キメラＴＮＦα ＩｇＧ抗体）及びエタネルセプト（ＩｇＧ１ ＦｃとのＴＮＦＲ２二量体融合タンパク質）の間で、異なる抗原／抗体比で形成された免疫複合体のサイズの研究は、各抗体が、固有のサイズプロフィールを有する免疫複合体を生成することを示した（Kim MS, et al., J Mol Biol. 2007;374:1374-1388）。従って、潜在的な高い免疫原性は、ＴＮＦαを標的とする治療用抗体の懸念事項の１つである。従って、好適な実施態様において、本開示の多重特異性抗体はＴＮＦαへの結合について一価である。
【0176】
適切には、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する１つのみのドメインを、及び／又はＴＮＦαに特異的に結合する１つのみのドメインを含む。好適な実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、ＴＮＦαに特異的に結合する１つのみのドメインを含む。適切には、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する１つのみのドメインと、ＴＮＦαに特異的に結合する１つのみのドメインとを含む。特定の実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインと、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインと、及び任意選択的に、２つのドメイン間のポリペプチドリンカーとから成る。特定の実施態様において、任意のポリペプチドリンカーが存在し、４～２５個のアミノ酸残基を有するポリペプチドから成る。
【0177】
適切には、本開示の多重特異性抗体は、有利には、ヒトＴＮＦα及びヒトＩＬ－１７Ａの生物活性を中和することができる。本明細書で使用される「中和する」という用語は、部分的又は完全であり得る生物学的シグナル伝達活性の低下を指すことが理解されるであろう。中和を決定するための適切なアッセイは当技術分野で知られており、そのようなアッセイのいくつかは本明細書の実施例に提供されている。
【0178】
１つの実施態様において、本開示の抗体又はその第１ドメインは、詳細にはＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆよりも、ヒトＩＬ－１７Ａに選択的に結合する。本明細書で使用される「選択的に結合する」という用語は、抗体、組成物、製剤などがＩＬ－１７Ｂ／Ｃ／Ｄ／Ｅ／Ｆに有意には結合しないが、ＩＬ－１７Ａには結合することを意味するものとする。選択的結合は、高親和性（又は低ＫD）と低～中程度のＩＣ50によって特徴付けられ、これは、通常低親和性（又は高ＫD）で中程度～高ＩＣ50を有する非特異的結合とは区別される。典型的には、抗体が１０-7Ｍ未満のＫDで結合する場合、結合は選択的であると見なされる。適切には、本開示の抗体又はその第１ドメインは、ＳＰＲによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、ＩＬ－１７Ｆに結合するより高い親和性又はより低いＫDで、ヒトＩＬ－１７Ａに結合する。適切には、本開示の抗体又はその第１ドメインは、ＥＬＩＳＡによって測定すると、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆに対するＩＣ50は、ＩＬ－１７Ａに対するＩＣ50よりも少なくとも１００倍大きく、例えば、少なくとも２００倍大きく、少なくとも３００倍大きく、少なくとも４００倍大きいＩＣ50値を有する。１つの実施態様において、本開示の抗体又はその第１ドメインは、詳細にはＳＰＲ及び／又はＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ａには結合するが、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆには結合しない。
【0179】
さらなる実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαとは異なる抗原に対して特異性を有する第３ドメインをさらに含む。適切には、本開示の多重特異性抗体は、三重特異性抗体である。本明細書で使用される「三重特異性抗体」は、３つの抗原結合ドメインを有する抗体分子を指し、例えば、１つの結合ドメインはヒトＴＮＦαに結合し、別の結合ドメインはヒトＩＬ－１７Ａに結合し、さらに別の結合ドメインは、抗体分子の半減期を延長することができる抗原、例えばヒト血清アルブミンに結合する。
【0180】
詳細には、本開示の多重特異性抗体は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に特異的に結合する第３ドメインをさらに含む。
【0181】
本発明者らは、驚くべきことに、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む本開示の多重特異性抗体への、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインの付加が、以下の有益な効果を有することを見出した：
（ｉ）ヒト血清アルブミンに特異的に結合する少なくとも１つのドメインを含む本開示の多重特異性抗体の血清半減期の延長；及び
（ｉｉ）本開示の多重特異性抗体へのヒト血清アルブミン結合ドメインの付加は、他の結合ドメインの機能、例えばＩｌ－１７Ａ及びＴＮＦα結合ドメインの中和活性と、適合性がある。
（ｉ）ヒト血清アルブミンに特異的に結合する少なくとも１つのドメインを含む本開示の多重特異性抗体の血清半減期の延長；及び
（ｉｉ）本開示の多重特異性抗体へのヒト血清アルブミン結合ドメインの付加は、他の結合ドメインの機能、例えばＩｌ－１７Ａ及びＴＮＦα結合ドメインの中和活性と、適合性がある。
【0182】
「ＨＳＡ」という用語は、詳細にはＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｐ０２７６８のヒト血清アルブミンを指す。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、５８５個のアミノ酸から構成されるヒト血清中の６６．４ｋＤａの豊富なタンパク質（総タンパク質の５０％）である（Sugio, Protein Eng, Vol. 12, 1999, 439-446）。多機能性ＨＳＡタンパク質は、脂肪酸、金属イオン、ビリルビン、及びいくつかの薬物などの多くの代謝物の結合と輸送を可能にするその構造に関連している（Fanali, Molecular Aspects of Medicine, Vol. 33, 2012, 209-290）。血清中のＨＳＡ濃度は約３．５～５ｇ／ｄＬである。アルブミン結合抗体は、例えば、薬物又はそこに結合したタンパク質のインビボ血清半減期を延長するために使用することができる。
【0183】
適切には、１つの実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及びヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含む。本開示の多重特異性抗体は、ヒト血清アルブミンに結合するために、一価又は多価、例えば二価、三価、又は四価、好ましくは一価であり得る。適切には、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する１つのみのドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する１つのみのドメイン、及びヒト血清アルブミンに特異的に結合する１つのみのドメインを含む。特定の実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメイン、及び任意選択的に、２つのドメイン間のポリペプチドリンカーから成る。特定の実施態様において、任意選択的なポリペプチドリンカーが存在し、４～２５個のアミノ酸残基を有するポリペプチドから成る。
【0184】
有利には、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及び任意選択的に、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含み、ここで、前記ドメインはこれらの各抗原又は受容体に同時に結合することができる。
【0185】
本開示の多重特異性抗体のドメイン、例えば前記第１ドメイン、前記第２ドメイン、前記第３ドメインは、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、及び単一ドメイン軽鎖抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、サメのＶＮＡＲ構造に基づく単一ドメイン抗体、及び特に限定されるものではないが、アンキリンベースのドメイン、ファイノマー、アビマー、アンチカリン、フィブロネクチン、及び抗体の定常領域（例えば、-star's Modular Antibody Technology（登録商標））に組み込まれている結合部位を含む代替足場に基づく結合ドメインから成る群から、好ましくはＦａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖから成る群から独立して選択され、より好ましくは、ここで、前記第１ドメイン及び／又は前記第２ドメイン及び／又は前記第３ドメインはＦｖ又はｓｃＦｖである。
【0186】
本開示の多重特異性抗体は、任意の適切な形式であり得る。１つの実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線形二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ－ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ－ｓｃＤｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、トリボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）又はバイボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1）、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、モリソン（ＩｇＧ ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）又はＩｇＧ ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、トリアボディ、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、二重特異性Ｆａｂ2、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ融合体、ジダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＣＯＶＤ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆｖ2－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖と軽鎖の両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに基づく二重特異性抗体、例えばＫｎｏｂ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ抗体（ＫｉＨ）；Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＤｂ、タンデム－ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン又は任意の他のヘテロ二量体化ドメインのいずれかのＮ末端及び／又はＣ末端に融合したＣＯＶＤ、ＭＡＴＣＨ及びデュオボディから成る群から選択される形式、好ましくはトリボディ又はｓｃＤｂ－ｓｃＦｖである。
【0187】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）内でＶＬに接続されたＶＨを含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、これらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとの対合を強いられ、２つの抗原結合部位が作成される。ダイアボディは二価又は二重特異性であり得る。ダイアボディは、より詳細には、例えばＥＰ４０４０９７、ＷＯ９３／０１１６１、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003), 及び Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6444-6448 (1993)に記載されている。トリアボディ及びテトラボディもまた、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。二重特異性ｓｃＤｂ、詳細には二重特異性モノマーｓｃＤｂは、詳細には２つの可変重鎖ドメイン（ＶＨ）又はそれらの断片と、２つの可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）又はそれらの断片を含み、これらは、リンカーＬ１、Ｌ２、及びＬ３によって、ＶＨＡ－Ｌ１－ＶＬＢ－Ｌ２－ＶＨＢ－Ｌ３－ＶＬＡ、ＶＨＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＬＡ、ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＬＢ－Ｌ２－ＶＨＢ－Ｌ３－ＶＨＡ、ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ、ＶＨＢ－Ｌ１－ＶＬＡ－Ｌ２－ＶＨＡ－Ｌ３－ＶＬＢ、ＶＨＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＬＢ、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＬＡ－Ｌ２－ＶＨＡ－Ｌ３－ＶＨＢ、又はＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢの順に接続され、ここで、ＶＬＡ及びＶＨＡドメインは一緒に第１の抗原の抗原結合部位を形成し、ＶＬＢ及びＶＨＢは一緒に第２の抗原の抗原結合部位を形成する。リンカーＬ１は、詳細には２～１０アミノ酸、より詳細には３～７アミノ酸、最も詳細には５アミノ酸のペプチドであり、リンカーＬ３は、詳細には１～１０アミノ酸、より詳細には２～７アミノ酸、詳細には５アミノ酸のペプチドである。中間リンカーＬ２は、詳細には１０～４０アミノ酸、より詳細には１５～３０アミノ酸、そして最も詳細には２０～２５アミノ酸のペプチドである。
【0188】
１つの実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含む。本明細書において「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変種Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。適切な天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が含まれる。「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変種及び代替的にスプライシングされた形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 5:203-234 (1997を参照)。ＦＣＲは、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)；Capet et al, Immunomethods 4: 25-34 (1994)；及び de Haas et al, J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995) の総説に記載されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書では「ＦｃＲ」という用語に含まれる。「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」という用語はまた、新生児受容体ＦｃＲｎを含み、これは母体のＩｇＧの胎児への輸送に関与する。Guyer et al, J. Immunol. 117: 587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は知られている（例えば、Ghetie and Ward, Immunol. Today 18: (12): 592-8 (1997); Ghetie et al, Nature Biotechnology 15 (7): 637-40 (1997); Hinton et al, J. Biol. Chem. TJI (8): 6213-6 (2004); ＷＯ２００４／９２２１９ (Hinton et al)を参照）。インビボでのＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えばトランスジェニックマウス又はヒトＦｃＲｎを発現するトランスフェクトされたヒト細胞株において、又は変種Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与された霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Presta）は、ＦｃＲへの結合を改良又は減少させた抗体変種を記載している。例えば、Shields et al, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)Shields et al, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照されたい。
【0189】
同じ又はより小さい分子量で特異性／官能性の数を増やすために、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、及びＦ（ａｂ'）2断片などの抗体断片、及び他の抗体断片を含む抗体を使用することが有利である。これらのより小さな分子は、抗体全体の抗原結合活性を保持し、免疫グロブリン分子全体と比較して、改良された組織浸透及び薬物動態特性を示すこともできる。このような断片は、免疫グロブリン全体に比べて多くの利点を示すように見えるが、インビボで長い半減期を与えるＦｃドメインを欠いているため、血清からのクリアランス速度が速くなる（Medasan et al., 1997, J. Immunol. 158:2211-2217）。低分子量の分子は、標的組織（固形癌など）により効率的に浸透するため、同じ又はより低用量で有効性が向上する可能性がある。適切には、本開示の抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含まず、任意選択的に、詳細には前記多重特異性抗体がヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含む場合、ＣＨ１及びＣＬ領域を含まない。
【0190】
適切には、本開示の抗体は、トリボディ形式（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）であり得る。適切には、第１ドメイン及び／又は第２ドメイン及び／又は第３ドメインは、Ｆａｂ又はｓｃＦｖドメインである。特に、本開示の多重特異性抗体は、１つのＦａｂドメイン及び２つのｓｃＦｖドメインを有し、詳細には、ｓｃＦｖドメインはＦａｂドメインの各鎖のカルボキシ末端に融合される。本発明者らは、薬力学的及び生物理学的特性の観点から、三重特異性形式における個々の結合ドメインの最適な相対位置を試験し、驚くべきことに、本開示の多重特異性抗体が、トリボディ形式の場合、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインがＦａｂドメインであり、ＩＬ－１７Ａ及びＨＳＡにそれぞれ特異的に結合する第１及び第３ドメインが、前記Ｆａｂドメインに融合されたｓｃＦｖドメインである場合、有利な特性を有することを見出した。
【0191】
好ましくは、本開示の抗体は、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ形式である。「ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ」という用語は、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片が、柔軟なＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーによって１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）に融合されている抗体形式を指す。適切には、第１ドメイン及び／又は第２ドメイン及び／又は第３ドメインは、Ｆｖ又はｓｃＦｖドメインである。詳細には、本開示の多重特異性抗体は、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ形式である場合、他の２つのドメインを含むｓｃＤｂにＣ末端で融合された１つのｓｃＦｖドメインを有する。本開示の多重特異性抗体は、ｓｃＤｂ－Ｆｖ形式である場合、以下の式で表すことができる：
【0192】
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＣ－Ｌ２－ＶＬＣ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＢ－Ｌ５－ＶＨＢ、又は
ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、又は
ＶＬＣ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＣ－Ｌ４－ＶＬＡ－Ｌ５－ＶＨＡ、又は
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
好ましくは、
ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、又は
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
より好ましくは、
ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、又は
ＶＬＣ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＣ－Ｌ４－ＶＬＡ－Ｌ５－ＶＨＡ、又は
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
好ましくは、
ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、又は
ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
より好ましくは、
ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢ－Ｌ４－ＶＬＣ－Ｌ５－ＶＨＣ、
【0193】
ここで、ＶＬＡ及びＶＨＡは、それぞれ第１ドメイン（ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する）の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり；ＶＬＢ及びＶＨＢは、それぞれ第２ドメイン（ＴＮＦαに特異的に結合する）の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり；ＶＬＣ及びＶＨＣは、それぞれ第３ドメイン（ＨＳＡに特異的に結合する）の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域であり、ここで、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＬ５は、ポリペプチドリンカーである。
【0194】
本開示の文脈において、「ポリペプチドリンカー」という用語は、それぞれがリンカーの一端に結合している２つのドメインを接続しているペプチド結合によって連結された、アミノ酸残基の鎖から成るリンカーを指す。ポリペプチドリンカーは、２つの分子が互いに正しいコンフォメーションをとり、こうして目的の活性を保持するように、２つの分子を連結するのに十分な長さを持たなければならない。特定の実施態様において、ポリペプチドリンカーは、２から３０個のアミノ酸残基（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０個のアミノ酸残基）の連続鎖を有する。さらに、ポリペプチドリンカーに含めるために選択されたアミノ酸残基は、ポリペプチドの活性を著しく妨害しない特性を示さなければならない。従って、リンカーペプチドは全体として、ポリペプチドの活性と一致しなかったり、内部折り畳みを妨害したり、モノマードメインの結合を大きく妨げるであろう１種以上のモノマーのアミノ酸残基と結合又は他の相互作用を形成したりする電荷を示してはならない。特定の実施態様において、ポリペプチドリンカーは非構造化ポリペプチドである。有用なリンカーには、グリシン－セリン又はＧＳリンカーが含まれる。「Ｇｌｙ－Ｓｅｒ」又は「ＧＳ」リンカーとは、直列のグリシンとセリンのポリマー（例えば、（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（ＧＧＧＧＳ）ｎ及び（ＧＧＧＳ）ｎを含み、ここでｎは、少なくとも１の整数）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及びシェーカーカリウムチャネルのテザーなどの他の柔軟なリンカー、及び当業者には理解されるように、その他の様々な柔軟なリンカーである。グリシン－セリンポリマーのアミノ酸は両方とも比較的構造化されておらず、従って成分間の中性テザーとして機能することができる可能性があるため、グリシン－セリンポリマーが好ましい。第２に、セリンは親水性であるため、球状のグリシン鎖である可能性のあるものを可溶化することができる。第３に、同様の鎖は、１本鎖抗体などの組換えタンパク質のサブユニットを結合するのに有効であることが証明されている。
【0195】
適切には、本開示の前記Ｌ１及びＬ３は、配列番号１３２に記載されるものである。適切には、本開示の前記Ｌ２、Ｌ４、及びＬ５は、配列番号２３に記載されるものである。
【0196】
本発明者らは、薬力学的及び生物理学的特性の観点から、三重特異性形式における個々の結合ドメインの最適な相対位置を試験し、驚くべきことに、本開示の多重特異性抗体は、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ形式の場合、それぞれＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαに特異的に結合する第１ドメイン及び前記第２ドメインがｓｃＤｂを形成し、ＨＳＡに特異的に結合する前記第３ドメインがｓｃＦｖであることを見いだした。
【0197】
本開示の多重特異性抗体は、以下の有利な特性を有する：
（ａ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、セクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば５より大きい、１０より大きい、１５より大きい、２０より大きい、２５より大きい、３０より大きい、３５より大きい、４０より大きい、４５より大きい、好ましくは５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって決定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって決定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比であり；及び
（ａ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、セクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば５より大きい、１０より大きい、１５より大きい、２０より大きい、２５より大きい、３０より大きい、３５より大きい、４０より大きい、４５より大きい、好ましくは５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって決定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって決定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比であり；及び
【0198】
（ｂ）ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定された、配列番号１４９（Ａ１３）のｓｃＤｂの力価と比較して、少なくとも１、例えば１より大きい、１．５より大きい、２より大きい、２．５より大きい、３より大きい、３．５より大きい、好ましくは４より大きい、より好ましくは４．５より大きい力価（相対力価）で、ＴＮＦαを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって決定された配列番号１４９（Ａ１３）の前記ｓｃＤｂのＩＣ50値（ｎＭ）と、ＨＴ－２９アッセイによって決定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎＭ）との比であり；及び
【0199】
（ｃ）任意選択的に、ＥＬＩＳＡアッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば３より大きい、４より大きい、５より大きい、６より大きい、７より大きい、８より大きい、９より大きい、好ましくは１０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって決定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡによって決定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比であり；及び
【0200】
（ｄ）任意選択的に、Ｌ９２９アッセイで決定された配列番号１４９（Ａ１３）のｓｃＤｂの力価と比較して、少なくとも０．４、例えば少なくとも０．５、好ましくは少なくとも１の力価（相対力価）で、ＴＮＦαを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、Ｌ９２９アッセイによって測定された配列番号１４９の前記ｓｃＤｂのＩＣ50値（ｎＭ）と、Ｌ９２９アッセイによって測定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎＭ）との比であり；及び／又は
【0201】
（ｅ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒトＩＬ－１７Ａに結合し、及び任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満のＫDで、カニクイザルＩＬ－１７Ａに結合する；
【0202】
（ｆ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満、より好ましくは０２５ｎＭの解離定数（ＫD）で、ヒトＴＮＦαに結合する；及び
【0203】
（ｇ）任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒト血清アルブミンに結合し、任意選択的に、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、例えば４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）で、カニクイザル血清アルブミンに結合する。
【0204】
本明細書で使用される「親和性」という用語は、単一の抗原性部位での抗体と抗原との相互作用の強さを指す。各抗原性部位内で、抗体「アーム」の可変領域は、弱い非共有結合力を介して多数の部位の抗原と相互作用する。相互作用が多いほど、親和性が強い。
【0205】
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との非共有相互作用の合計の強さを指す。特に他に明記しない限り、本明細書で使用される「結合親和性」、「に結合する」、「に結合する」、又は「に結合している」は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に解離定数（ＫD）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は一般に抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があり、高親和性抗体は一般に抗原に速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で知られており、それらのいずれも本開示の目的のために使用することができる。結合親和性すなわち結合強度を測定するための特定の説明的かつ例示的な実施態様を以下に記載する。
【0206】
本明細書で使用される「ｋassoc」、「ｋａ」、又は「ｋon」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことを意図し、一方、本明細書で使用される「ｋdis」、「ｋｄ」、又は「ｋoff」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことを意図している。１つの実施態様において、本明細書で使用される「ＫD」という用語は解離定数を指すことを意図しており、これは、ｋｄ対ｋａの比（すなわち、ｋｄ／ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。本開示による「ＫD」若しくは「ＫD値」又は「ＫＤ」若しくは「ＫＤ値」は、１つの実施態様において、実施例に記載されるように、ＭＡＡＳ－１ ＳＰＲ装置（SierraSensors）を用いる表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって測定される。抗体の結合親和性は、例えば解離定数（ＫD）によって決定され得る。より強い親和性はより低いＫDによって表され、より弱い親和性はより高いＫDによって表される。
【0207】
従って、適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、１ｐＭ～１０ｎＭ、１ｐＭ～７ｎＭ、１ｐＭ～５ｎＭ、１ｐＭ～４ｎＭ、１ｐＭ～３ｎＭ、１ｐＭ～２．５ｎＭ、１ｐＭ～２ｎＭ、１ｐＭ～１．５ｎＭ、１ｐＭ～１ｎＭ、好ましくは１ｐＭ～０．５ｎＭの解離定数（ＫD）でヒトＩＬ－１７Ａに結合する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、１～５００ｐＭの解離定数（ＫD）でヒトＩＬ－１７Ａに結合する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＩＬ－１７Ａに結合する。適切には、本開示の抗体は、１ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＩＬ－１７Ａに結合する。適切には、本開示の抗体は、０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＩＬ－１７Ａに結合する。さらなる実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定すると、１０ｎＭ未満、例えば７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満のＫDでカニクイザルＩＬ－１７Ａに結合する。
【0208】
適切には、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定すると、１ｐＭ～１０ｎＭ、１ｐＭ～７ｎＭ、１ｐＭ～５ｎＭ、１ｐＭ～４ｎＭ、１ｐＭ～３ｎＭ、１ｐＭ～２．５ｎＭ、１ｐＭ～２ｎＭ、１ｐＭ～１．５ｎＭ、１ｐＭ～１ｎＭ、好ましくは１ｐＭ～０．５ｎＭ、より好ましくは１ｐＭ～０．２５ｎＭの解離定数（ＫD）でヒトＴＮＦαに結合する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、１～５００ｐＭ、好ましくは１～２５０ｐＭの解離定数（ＫD）でヒトＴＮＦαに結合する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、好ましくは０．５ｎＭ未満、より好ましくは０．２５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＴＮＦαに結合する。適切には、本開示の抗体は、０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＴＮＦαに結合する。適切には、本開示の抗体は、０．２５ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＴＮＦαに結合する。
【0209】
適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、１ｐＭ～１０ｎＭ、１ｐＭ～７ｎＭ、１ｐＭ～５ｎＭ、１ｐＭ～４ｎＭ、１ｐＭ～３ｎＭ、好ましくは１ｐＭ～２ｎＭの解離定数（ＫD）でヒト血清アルブミンに結合する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、１～２０００ｐＭの解離定数（ＫD）でヒト血清アルブミンに結合する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒト血清アルブミンに結合する。適切には、本開示の抗体は、２ｎＭ未満の解離定数（ＫD）でヒト血清アルブミンに結合する。さらなる実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定すると、１０ｎＭ未満、例えば７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、好ましくは２ｎＭ未満のＫDでカニクイザル血清アルブミンに結合する。
【0210】
適切には、本開示の抗体は有益な生物理学的特性を有する。
（ａ）示差走査蛍光測定法によって決定される、ｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液中で、少なくとも５５℃、好ましくは少なくとも５８℃、より好ましくは少なくとも６０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する；
（ｂ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、５回の連続した凍結融解サイクル後に、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％以下のモノマー含有量の損失を有する；
（ｃ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、４℃で保存した後、１０％未満、好ましくは５％未満のモノマー含有量の損失を有する；及び／又は
（ｄ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、３７℃で保存した後、２０％未満、好ましくは１５％未満のモノマー含有量の損失を有する。
（ａ）示差走査蛍光測定法によって決定される、ｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸緩衝液中で、少なくとも５５℃、好ましくは少なくとも５８℃、より好ましくは少なくとも６０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する；
（ｂ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、５回の連続した凍結融解サイクル後に、５％未満、例えば４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％以下のモノマー含有量の損失を有する；
（ｃ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、４℃で保存した後、１０％未満、好ましくは５％未満のモノマー含有量の損失を有する；及び／又は
（ｄ）前記多重特異性抗体がリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中で１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度であるとき、少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間、３７℃で保存した後、２０％未満、好ましくは１５％未満のモノマー含有量の損失を有する。
【0211】
融解温度（Ｔｍ）は、既に記載されているように示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）によって決定される（Egan, et al., MAbs, 9(1) (2017), 68-84; Niesen, et al., Nature Protocols, 2(9) (2007) 2212-2221）。熱展開の遷移の中点は、蛍光色素SYPRO（登録商標）Orangeを使用した示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）によって決定される（Wong & Raleigh, Protein Science 25 (2016) 1834-1840を参照）。ｐＨ６．４のリン酸－クエン酸緩衝液中の試料は、１００μｌの総量で５０μｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度と５×SYPRO（登録商標）Orangeの最終濃度で調製される。２５マイクロリットルの調製試料を白壁のＡＢ遺伝子ＰＣＲプレートに三重測定で加える。アッセイはサーマルサイクラーとして使用されるｑＰＣＲ装置で実施され、蛍光発光はソフトウェアのカスタム色素較正ルーチンを使用して検出される。試験試料を含むＰＣＲプレートを、２５℃から９６℃まで１℃刻みで温度勾配に付し、各温度上昇後に３０秒休止する。総アッセイ時間は約２時間である。Ｔｍは、ソフトウェアGraphPad Prismによって、数学的な２次導関数法を使用して計算され、曲線の変曲点が計算される。報告されたＴｍは、３回の測定の平均である。
【0212】
モノマー含有量の損失は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定される。ＳＥ－ＨＰＬＣは、ＵＳＰの第６２１章で概説されているように、固体固定相と液体移動相に基づく分離技術である。この方法は、疎水性固定相と水性移動相を利用して、サイズと形状に基づいて分子を分離する。分子の分離は、特定のカラムのボイド容量（Ｖ０）と総透過容量（ＶＴ）の間で発生している。ＳＥ－ＨＰＬＣによる測定は、自動試料注入と検出波長２８０ｎｍに設定されたＵＶ検出器を備えたChromasterＨＰＬＣシステム（Hitachi High-Technologies Corporation）で実施される。この装置は、ソフトウェアEZChrom Elite（Agilent Technologies、バージョン３．３．２ ＳＰ２）によって制御され、これは、得られるクロマトグラムの分析もサポートする。タンパク質試料は遠心分離によって清澄化され、オートサンプラー内で６℃の温度に保たれた後、注入される。ｓｃＦｖ試料の分析には、Shodex KW403-4Fカラム（昭和電工株式会社、＃Ｆ６９８９２０２）が、標準化された緩衝化生理食塩水移動相（５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．５、３００ｍＭ塩化ナトリウム）を用いて推奨流量０．３５ｍＬ／分で使用される。注入あたりの標的試料負荷は５μｇであった。試料は波長２８０ｎｍのＵＶ検出器で検出され、データは適切なソフトウェアスイートで記録される。得られたクロマトグラムは、Ｖ０～ＶＴの範囲で分析されるため、溶出時間が１０分を超える大きいマトリックス関連ピークは除外される。
【0213】
ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する例示的ドメイン
本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインを含み、ここで、前記ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインを含み、ここで、前記ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【0214】
本開示の多重特異性抗体で使用するための、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する適切なドメインは、特に限定されるものではないが、以下を含む：
・ 以下のセクション「本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体」に提示されるヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメインであり、その配列は表１に記載されている；
・ ＡＩＮ４５７（セクキヌマブとも呼ばれ、米国特許第７，８０７，１５５号及びＷＯ２００６／０１３１０７に開示されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）又はその抗原結合断片；
・ ＬＹ２４３９８２１（イキセキズマブとも呼ばれる；米国特許第７，８３８，６３８号及び第８，１１０，１９１号、及びＷＯ２００７／０７０７５０に開示されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）又はその抗原結合断片；
・ ＳＣＨ９００１１７又はその抗原結合断片（Merck）；
・ ＲＧ４９４３又はその抗原結合断片（Roche）；
・ 抗ＩＬ－１７Ａ抗体又はその抗原結合断片は、ＷＯ２００６／０１３１０７、ＷＯ２００６／０５４０５９、ＷＯ２００７／０７０７５０、ＷＯ２００７／１４９０３２、ＷＯ２００８／００１０６３、ＷＯ２００８／０２１１５６、ＷＯ２０１０／０３４４４３、ＷＯ２０１０／１０２２５１、ＷＯ２０１２／０１８７６７、ＷＯ２０１４／１６１５７０、ＷＯ２０１４／００１３６８、ＷＯ２０１４／１２２６１３、ＷＯ２０１５／０７０６９７、ＷＯ２０１５／１３７８４３、ＷＯ２０１６／０４８１８８、ＷＯ２０１６／１１３５５７、ＷＯ２０１６／１３８８４２、ＷＯ２０１７／０６８４７２に開示されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
・ 以下のセクション「本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体」に提示されるヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメインであり、その配列は表１に記載されている；
・ ＡＩＮ４５７（セクキヌマブとも呼ばれ、米国特許第７，８０７，１５５号及びＷＯ２００６／０１３１０７に開示されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）又はその抗原結合断片；
・ ＬＹ２４３９８２１（イキセキズマブとも呼ばれる；米国特許第７，８３８，６３８号及び第８，１１０，１９１号、及びＷＯ２００７／０７０７５０に開示されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）又はその抗原結合断片；
・ ＳＣＨ９００１１７又はその抗原結合断片（Merck）；
・ ＲＧ４９４３又はその抗原結合断片（Roche）；
・ 抗ＩＬ－１７Ａ抗体又はその抗原結合断片は、ＷＯ２００６／０１３１０７、ＷＯ２００６／０５４０５９、ＷＯ２００７／０７０７５０、ＷＯ２００７／１４９０３２、ＷＯ２００８／００１０６３、ＷＯ２００８／０２１１５６、ＷＯ２０１０／０３４４４３、ＷＯ２０１０／１０２２５１、ＷＯ２０１２／０１８７６７、ＷＯ２０１４／１６１５７０、ＷＯ２０１４／００１３６８、ＷＯ２０１４／１２２６１３、ＷＯ２０１５／０７０６９７、ＷＯ２０１５／１３７８４３、ＷＯ２０１６／０４８１８８、ＷＯ２０１６／１１３５５７、ＷＯ２０１６／１３８８４２、ＷＯ２０１７／０６８４７２に開示されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0215】
本開示の多重特異性抗体で使用するための、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する好ましいドメインは、特に限定されるものではないが、以下に提示されるヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメインを含み、これらの配列は表１に記載される。
【0216】
従って、１つの実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを提供し、ここで、前記第１ドメインは、ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含み、ここで、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１から選択される配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つ、好ましくは配列番号１２から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を有する；又は（ｉｉ）ここで、ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列あり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１、５４、及び及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１から選択されるアミノ酸配列であり；及びＬＣＤＲ３'は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２から選択されるアミノ酸配列を有する］からの、１０個以下のアミノ酸置換、例えば、９個以下のアミノ酸置換、８個以下のアミノ酸置換、７個以下のアミノ酸置換、６個以下のアミノ酸置換、５個以下のアミノ酸置換、４個以下のアミノ酸置換、３個以下のアミノ酸置換、２個以下のアミノ酸置換、１個又は０個のアミノ酸置換、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。
【0217】
特に本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に列記されたＶＨ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特に、前記ドメインは、表１に記載されたＶＨ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＨ ＣＤＲを含む（又は、あるいは、それらから成る）。
【0218】
適切には、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ここで、前記ＶＨは、順に以下を含む：（ｉ）３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３であって、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む抗体を提供する；又は（ｉｉ）３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３であって、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む抗体を提供する。
【0219】
本開示はまた、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＬ ＣＤＲを含む（あるいは、それらから成る）。
【0220】
適切には、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、前記ＶＬは、順に以下を含む：（ｉ）３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３であって、前記ＬＤＣＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０いずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む抗体を提供する；又は（ｉｉ）３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３であって、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＣＲ３は配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む抗体を提供する。
【0221】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ｉ）ここで
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｉｉ）ここで
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
（ｉ）ここで
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｉｉ）ここで
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
【0222】
特に、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）（ａ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0223】
ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、そのＣＤＲ領域中で、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。適切には、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する本開示の他のドメインは、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域中で１、２、３、４、５、又は１０個以下のアミノ酸が、アミノ酸の欠失、挿入、又は置換によって変異されている変異アミノ酸配列を含む。変異、例えば置換がＣＤＲのセット内の任意の残基で行われる可能性があり、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３内であってもよい。
【0224】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸、合成アミノ酸、並びに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコード化されたアミノ酸、並びに後で修飾されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、Ｏ－ホスホセリンなどである。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。特に他に明記しない限り、特定のポリペプチド配列はまた、その保存的に修飾された変種を暗黙のうちに包含する。
【0225】
ＣＤＲ、抗体ＶＨ又はＶＬドメイン、及び抗体のアミノ酸配列内で、突然変異、例えば置換を行うために必要な技術は、一般に当技術分野で利用可能である。変異、例えば置換を用いて、活性に最小限の又は有益な効果をもたらすと予測される場合もされない場合もある変種配列を作製し、ＩＬ－１７ＡあるいはＴＮＦα又はヒト血清アルブミンに結合及び／又はそれを中和する能力、及び／又はその他の望ましい特性について試験するか又は試験されない。ＣＤＲ内の適切な突然変異、例えば置換は、機能の喪失をもたらさないため、このように突然変異したアミノ酸配列を含む本開示の抗体又はその結合ドメインは、ＩＬ－１７Ａ、あるいはＴＮＦα又はヒト血清アルブミンに結合及び／又は中和する能力を保持する。例えばそれは、例えば本明細書に記載のアッセイによって測定すると、改変されていない本開示のドメインと同じ定量的結合及び／又は中和能力を保持し得る。適切には、このように変異したアミノ酸配列を含む抗原結合断片の本開示のドメインは、ＩＬ－１７Ａ、あるいはＴＮＦα又はヒト血清アルブミンに結合及び／又は中和する改良された能力を有し得る。適切には、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、このように変異したアミノ酸配列を含む本開示の第１ドメインは、ＨＴ－２９アッセイでＧｒｏ－α分泌を測定することによって決定されるセクキヌマブの力価と比較して、２より大きい、例えば５より大きい、１０より大きい、１５より大きい、２０より大きい、２５より大きい、３０より大きい、３５より大きい、４０より大きい、４５より大きい、好ましくは５０より大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって決定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって決定された前記多重特異性抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である。
【0226】
さらに、ＣＤＲ内の適切な突然変異、例えば置換は、本開示の多重特異性抗体の溶解性、安定性、及び高収率の生産性の損失をもたらさないため、こうして変異されたアミノ酸配列を含む本開示の多重特異性抗体又はその結合ドメインは、生物理学的特性を保持している。例えばそれは、例えば本明細書に記載のアッセイによって測定した場合、変更が行われない本開示の多重特異性抗体と同じ高収率の生産性及び／又は安定性で保持し得る。適切には、こうして変異されたアミノ酸配列を含む多重特異性抗体又はその結合ドメインは、改良された生物理学的特性を有し得る。
【0227】
「同一の」又は「同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列との関連で、同じである２つ以上の配列又は部分配列を指す。核酸、ペプチド、ポリペプチド、又は抗体配列に関する「パーセント（％）配列同一性」及び「相同性」は、必要に応じて、最大のパーセント配列同一性を達成するために、配列を整列させ、ギャップを導入した後、保存的置換を配列同一性の一部として考慮しない場合の、特定のペプチド又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のヌクレオチド又はアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するための整列は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、又はＡＬＩＧＮソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、整列を測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
【0228】
配列比較では、通常、１つの配列が参照配列として機能し、試験配列と比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列と参照配列がコンピューターに入力され、必要に応じてサブ配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムのパラメーターが指定される。デフォルトのプログラムパラメーターを使用することも、別のパラメーターを指定することもできる。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメーターに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を計算する。
【0229】
配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ Altschul et al., Nuc. AcidsRes. 25:3389-3402, 1977、及びAltschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、National Center for Biotechnology Informationを通じて公開されている。
【0230】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているE. Meyers and W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17, 1988) のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み付け表、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を使用して、決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（www.gcg.comで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているNeedleman and Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970) アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｏｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、及びギャップウェイト１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、長さの重み１、２、３、４、５、又は６を用いて、決定することができる。
【0231】
適切には、本開示の多重特異性抗体のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
（ｉ）
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つ、好ましくは配列番号１２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；又は
（ｉ）
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つ、好ましくは配列番号１２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；又は
【0232】
（ｉｉ）
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0233】
適切には、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、以下を含む：（ｉ）それぞれ配列番号１、２、及び３の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、及び／又は、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、及び／又は、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
【0234】
さらなる実施態様において、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＡ及び軽鎖可変領域ＶＬＡを含む。
【0235】
本開示の文脈において、用語「ＶＨ」（可変重鎖又は重鎖可変領域）、「ＶＬ」（可変軽鎖又は軽鎖可変領域）、「Ｖκ」、及び「Ｖλ」は、配列の同一性及び相同性に従ってグループ化された抗体重鎖及び軽鎖配列のファミリーを指す。例えば、ＢＬＯＳＵＭ（Henikoff, S. & Henikoff, J. G., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89 (1992) 10915-10919）などの相同性検索マトリックスを使用することによる配列相同性の決定方法、及び相同性による配列のグループ化の方法は、当業者によく知られている。ＶＨ、Ｖκ、及びＶλについては、例えば、Knappik et al., J. Mol. Biol. 296 (2000) 57-86に示されているように、異なるサブファミリーを特定することができ、これは、ＶＨをＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ２～ＶＨ６に、ＶκをＶκ１～Ｖκ４に、ＶλをＶλ１～Ｖλ３にグループ化する。インビボでは、抗体Ｖκ鎖、Ｖλ鎖、及びＶＨ鎖は、それぞれ生殖細胞系κ鎖のＶ及びＪセグメント、生殖細胞系λ鎖のＶ及びＪセグメント、並びに重鎖Ｖ、Ｄ、及びＪセグメントのランダムな再配列の結果である。特定の抗体可変鎖がどのサブファミリーに属するかは、対応するＶセグメント、詳細にはフレームワーク領域ＦＲ１～ＦＲ３によって決定される。従って本出願において、フレームワーク領域ＨＦＲ１～ＨＦＲ３のみの特定のセットによって特徴付けられる任意のＶＨ配列は、任意のＨＦＲ４配列、例えば、重鎖生殖系列Ｊセグメントの１つから取られたＨＦＲ４配列、又は再配列されたＶＨ配列から取られたＨＦＲ４配列と組合せることができる。
【0236】
適切には、本開示の多重特異性抗体のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＡを含み、ここで前記ＶＨＡは、ＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ３、又はＶＨ４である。１つの実施態様において、本開示のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは重鎖可変領域ＶＨＡを含み、ここで、前記ＶＨＡはＶＨ４である。好適な実施態様において、本開示のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＡを含み、ここで、前記ＶＨＡはＶＨ３である。
【0237】
適切には、本開示の多重特異性抗体のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、軽鎖可変領域ＶＬＡを含み、前記ＶＬＡは、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１フレームワークＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、このフレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４から選択される。適切なＶλ ＦＲ４は、配列番号２６～配列番号３２に記載されるものである。１つの実施態様において、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、配列番号２６～配列番号３２のいずれか、好ましくは配列番号２６又は配列番号２７、より好ましくは配列番号２７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４を含む。適切には、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は２７に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４を含む。
【0238】
従って、１つの実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは以下を含む：
（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は（ｉ）（ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）ＶＨ３又はＶＨ４ドメイン、好ましくはＶＨ３ドメイン；そして
（ｉｉｉ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬドメインであり、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は（ｉ）（ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）ＶＨ３又はＶＨ４ドメイン、好ましくはＶＨ３ドメイン；そして
（ｉｉｉ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬドメインであり、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
【0239】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に記載されたＶＨを含む。適切には本開示はまた、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン及びＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に記載のＶＨアミノ酸配列を含み（又は、代替的に、それから成る）、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約２０個以下のアミノ酸、好ましくは１０個以下のアミノ酸が変異されている（ここで、変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、ＶＨ領域中で、表１に記載の配列に示されているＶＨ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を有する。
【0240】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に記載されたＶＬドメインを含む。適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に記載されたＶＬアミノ酸配列を含み（又は、あるいは、それからなり）、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）において、約２０個以下のアミノ酸、好ましくは約１０個以下のアミノ酸が変異されている（ここで、変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する本開示の他のドメインには、変異されているが、ＶＬ領域中で、表１に記載の配列に示されているＶＬ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸が含まれる。
【0241】
１つの実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、アミノ酸配列配列番号１０又は配列番号１１、好ましくは配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に、前記ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施態様において、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、アミノ酸配列配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、Ｑ１４Ｋ、Ｇ１６Ｅ、及びＧ５６Ａ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0242】
別の実施態様において本開示は、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、アミノ酸配列配列番号４８又は配列番号４９、好ましくは配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に、前記ドメインは、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施態様において、本開示はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、Ｒ２０Ｔ及びＱ１４１Ｐ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0243】
別の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、（ｉ）アミノ酸配列配列番号２１又は配列番号２２、好ましくは配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特に前記抗体は、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む；又は（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号５９又は配列番号６０、好ましくは配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特に前記抗体は、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0244】
別の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、アミノ酸配列配列番号２２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記軽鎖可変領域はＡ５１Ｐ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0245】
さらなる実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、（ｉ）アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む；又は（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0246】
好ましくは、本開示の多重特異性抗体のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、（ｉ）アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及びアミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びに／又はそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み；特に、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む；又は（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及びアミノ酸配列配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びに／又はそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み；特に前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
【0247】
特定の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、（ｉ）配列番号１０及び１１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ；及び／又は配列番号２１及び２２から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ，又は（ｉｉ）配列番号４８及び１９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ；及び／又は配列番号５９及び６０から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。
【0248】
特定の実施態様において、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、（ｉ）配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列、又は（ｉｉ）配列番号４８のＶＨ配列及び配列番号５９のＶＬ配列を含む。さらに別の特定の実施態様において、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインは、（ｉ）配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２２のＶＬ配列、又は（ｉｉ）配列番号４９のＶＨ配列及び配列番号６０のＶＬ配列を含む。
【0249】
１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合するドメインは、表１に記載されるドメインである。１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合するドメインは、（ｉ）配列番号２４及び２５、好ましくは配列番号２４から成る群から選択されるアミノ酸配列、又は（ｉｉ）配列番号６１及び６２、好ましくは配列番号６１から成る群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合するドメインは、（ｉ）配列番号２４又は配列番号２５、好ましくは配列番号２４、又は（ｉｉ）配列番号６１又は配列番号６２、好ましくは配列番号６１、に記載されるものである。
【0250】
ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する本開示の他のドメインには、前記アミノ酸又は前記アミノ酸をコードする核酸が変異されているが、表１に記載されている配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５％の同一性を有するドメインが含まれる。１つの実施態様において、これは、表１に記載の配列に示される可変領域と比較した場合、可変領域において１、２、３、４、又は５個以下のアミノ酸が変異されている変異アミノ酸配列を含むが、実質的に同じ活性は保持されている。本明細書で使用される「実質的に同じ活性」という用語は、親抗体、例えば本開示の多重特異性抗体、特に表１に記載のヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、及び／又は表１に記載のヒトＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインを含む、本開示の多重特異性抗体について決定される活性の、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも１１０％、又は少なくとも１２０％、又は少なくとも１３０％、又は少なくとも１４０％、又は少なくとも１５０％、又は少なくとも１６０％、又は少なくとも１７０％、又は少なくとも１８０％、又は少なくとも１９０％、例えば最大２００％である実質的に同じ活性によって示される活性を指す。
【0251】
さらに別の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、表１に記載の配列に相同的なアミノ酸配列を含み、前記第１ドメインはヒトＩＬ－１７Ａに結合し、表１に記載のドメインの望ましい機能特性を保持している。
【0252】
１つの実施態様において、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する本開示のドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む軽鎖可変領域とを有し、ここで、これらのＣＤＲ配列のうちの１つ以上は、本明細書に記載のドメイン又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、前記ドメインは、本開示の抗体の所望の機能特性を保持している。
【0253】
「保存的に修飾された変種」又は「保存的変種」という用語は、アミノ酸配列及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変種は、同一又は本質的に同一のアミノ酸配列をコードするか、又はアミノ酸配列を本質的に同一の配列にコードしない核酸を指す。遺伝暗号の縮重のために、機能的に同一の多数の核酸が任意のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、ＧＣＵはすべてアミノ酸アラニンをコードしている。従って、アラニンがコドンによって指定されるすべての位置で、コードされたポリペプチドを変更することなく、コドンを、記載された対応するコドンのいずれかに変更することができる。そのような核酸変種は「サイレント変種」であり、これは保存的に修飾された変種の一種である。ポリペプチドをコードする本明細書のすべての核酸配列はまた、核酸のすべての可能なサイレント変種を説明する。当業者は、核酸の各コドン（通常はメチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常はトリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して、機能的に同一の分子を生成できることを認識するだろう。従って、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変種は、記載された各配列に暗示されている。
【0254】
ポリペプチド配列の場合、「保存的に修飾された変種」又は「保存的変種」は、化学的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらす、ポリペプチド配列への個々の置換、欠失、又は付加を含む。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野でよく知られている。そのような保存的に修飾された変種（すなわち、１つ以上の「保存的修飾物」を有する）は、本開示の多型変種、種間相同体、及び対立遺伝子に追加され、それらを除外しない。次の８つのグループは、相互に保存的に置換されたアミノ酸を含む：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Creighton、Proteins(1984)を参照）。１つの実施態様において、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意に影響を与えたり変更したりしないアミノ酸修飾物を指すために使用される。
【0255】
従って、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは、以下を含む（又はから成る）：
【0256】
（ｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号２又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１２又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号１３又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号１４又はその保存的変種を有する；又は
（ｉｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号３９又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号４０又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号５０又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号５１又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号５２又はその保存的変種を有する；
ここで、前記抗体はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、及び／又はＩＬ－１７Ａを中和する。
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号２又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１２又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号１３又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号１４又はその保存的変種を有する；又は
（ｉｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号３９又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号４０又はその保存的変種であり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号５０又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号５１又はその保存的変種であり；前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号５２又はその保存的変種を有する；
ここで、前記抗体はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、及び／又はＩＬ－１７Ａを中和する。
【0257】
本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体
本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、改良された親和性、有効性、及び選択性を有する抗体分子の発見に基づいている。さらに、本開示の抗体は、改良された生物理学的特性、例えば、改良された溶解性、開発性、比較的不純物の少ない高い生産性（＞９８％、詳細にはＳＥ－ＨＰＬＣで検出した場合は＞９９％のモノマー）、及び安定性を有する。
本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、改良された親和性、有効性、及び選択性を有する抗体分子の発見に基づいている。さらに、本開示の抗体は、改良された生物理学的特性、例えば、改良された溶解性、開発性、比較的不純物の少ない高い生産性（＞９８％、詳細にはＳＥ－ＨＰＬＣで検出した場合は＞９９％のモノマー）、及び安定性を有する。
【0258】
１つの態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含む単離された抗体を提供し、ここで、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、
（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１２から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１、５４、及び及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１から選択されるアミノ酸配列であり；及びＬＣＤＲ３'は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２から選択されるアミノ酸配列を有する］からの、１０個以下のアミノ酸置換、例えば、９個以下のアミノ酸置換、８個以下のアミノ酸置換、７個以下のアミノ酸置換、６個以下のアミノ酸置換、５個以下のアミノ酸置換、４個以下のアミノ酸置換、３個以下のアミノ酸置換、２個以下のアミノ酸置換、１個又は０個のアミノ酸置換、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。
（ｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１２から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ３'は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｉｉ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号５１、５４、及び及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１から選択されるアミノ酸配列であり；及びＬＣＤＲ３'は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２から選択されるアミノ酸配列を有する］からの、１０個以下のアミノ酸置換、例えば、９個以下のアミノ酸置換、８個以下のアミノ酸置換、７個以下のアミノ酸置換、６個以下のアミノ酸置換、５個以下のアミノ酸置換、４個以下のアミノ酸置換、３個以下のアミノ酸置換、２個以下のアミノ酸置換、１個又は０個のアミノ酸置換、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。
【0259】
「ＩＬ－１７Ａ」又は「ＩＬ１７Ａ」という用語は、特に、本明細書で配列番号３３として再生されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｑ１６５５２を有するヒトＩＬ－１７Ａを指す。「カニクイザル（cynomolgus）ＩＬ－１７Ａ」又は「カニクイザル（cynomolgus monkey）ＩＬ－１７Ａ」という用語は、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｇ１ＱＵＳ７を有するカニクイザル（Macaca fascicularis）ＩＬ－１７Ａを指す。
【0260】
「ＩＬ－１７Ｂ」という用語は、特に、配列番号３４として本明細書で再生されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｑ９ＵＨＦ５を有するヒトＩＬ－１７Ｂを指す。「ＩＬ－１７Ｃ」という用語は、特に、配列番号３５として本明細書で複製されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｑ９Ｐ０Ｍ４を有するヒトＩＬ－１７Ｃを指す。「ＩＬ－１７Ｄ」という用語は、特に、配列番号３６として本明細書で再生されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｑ８ＴＡＤ２を有するヒトＩＬ－１７Ｄを指す。「ＩＬ－１７Ｅ」という用語は、特に、本明細書で配列番号３７として再生されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｑ９Ｈ２９３を有するヒトＩＬ－１７Ｅを指す。「ＩＬ－１７Ｆ」という用語は、特に、本明細書で配列番号３８として再生されたＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号Ｑ９６ＰＤ４を有するヒトＩＬ－１７Ｆを指す。
【0261】
「エピトープ」という用語は、抗体が特異的に結合することができる抗原の局所領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接アミノ酸であり得るか、又はエピトープは、例えば、つ以上のポリペプチドの２つ以上の非隣接領域から一緒になり得る。
【0262】
本明細書で使用される「抗体」などの用語は、全抗体；全抗体の任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）又はその単鎖；及び抗体ＣＤＲ、ＶＨ領域、又はＶＬ領域を含む分子（特に限定されるものではないが、多特異的抗体を含む）を含む。天然に存在する「全抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３で構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）及び軽鎖定常領域から成る。軽鎖定常領域は、ＣＬという１つのドメインで構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に細分化でき、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在している。各ＶＨとＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配置されている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【0263】
本明細書で使用される「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＹ、及びＩｇＧ１又はＩｇＧ４などのＩｇＧ）を指す。アイソタイプは、これらのクラスの１つの改変バージョンも含み、ここでは、Ｆｃ機能を改変するために、例えばエフェクター機能又はＦｃ受容体への結合を強化又は低減するために変更が加えられている。適切には、本開示の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から成る群から選択されるＩｇＧである。より適切には、本開示の抗体は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である。
【0264】
本明細書で使用される「抗原結合断片」、「抗原結合部分」などの用語は、所定の抗原（例えばＩＬ－１７Ａ）に特異的に結合する能力を保持する無傷の全抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の例は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから成る一価断片であるＦａｂ断片；ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ）2断片；ＶＨドメインとＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから成るＦｖ断片；ＶＨドメインから成る単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ward et al., 1989 Nature 341:544-546）；単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、及び単一ドメイン軽鎖抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、サメのＶＮＡＲ構造に基づく単一ドメイン抗体、及び特に限定されるものではないが、アンキリンベースのドメイン、ファイノマー、アビマー、アンチカリン、フィブロネクチンを含む代替の足場に基づく結合ドメイン、及び抗体の定常領域に組み込まれている結合部位（例えば、F-star's Modular Antibody Technology（商標））を含む。
【0265】
「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語は、いくつかの周知のスキームのいずれかを使用して決定された境界を有するアミノ酸配列であって、例えば、Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat”番号付けスキーム), 番号付けスキーム、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948 (“Chothia”番号付けスキーム)、ImMunoGenTics (IMGT) 番号付け(Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003) (“IMGT” numbering scheme) 、及びHonegger & Pluckthun, J. Mol. Biol. 309 (2001) 657-670（「ＡＨｏ」番号付け）に記載された番号付けスキームが含まれる。例えば古典的な形式では、Kabatでは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）に番号付けられ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）に番号付けられる。Chothiaでは、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）に番号付けられ、及びＶＬのアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）に番号付けられる。KabatとChothiaの両方のＣＲＲ定義を合わせると、ＣＤＲは、ヒトＶＨのアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）、ヒトＶＬのアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、８９～９７（ＬＣＤＲ３）で構成される。ＩＭＧＴでは、ＶＨのＣＤＲアミノ酸残基は、約２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５１～５７（ＨＣＤＲ２）、及び９３～１０２（ＨＣＤＲ３）に番号付けられ、ＶＬのＣＤＲアミノ酸残基は、約２７～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）に番号付けられる（「Kabat」による番号付け）。ＩＭＧＴでは、抗体のＣＤＲは、プログラムＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ Ａｌｉｇｎを使用して決定することができる。
【0266】
本発明の文脈では、特に他に明記しない限り、Honegger & Pluuckthun（「ＡＨｏ」）によって提案された番号付けシステムが使用される（Honegger & Pluuckthun, J. Mol. Biol. 309 (2001) 657-670）。さらに、以下の残基はＡＨｏ番号付けスキームに従ってＣＤＲとして定義される：ＬＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１とも呼ばれる）：Ｌ２４～Ｌ４２；ＬＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２とも呼ばれる）：Ｌ５８～Ｌ７２；ＬＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３とも呼ばれる）：Ｌ１０７～Ｌ１３８；ＨＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１とも呼ばれる）：Ｈ２７～Ｈ４２；ＨＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２とも呼ばれる）：Ｈ５７～Ｈ７６；ＨＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３とも呼ばれる）：Ｈ１０８～Ｈ１３８。明確にするために、Honegger & Pluuckthunによる番号付けシステムでは、様々なＶＨ及びＶＬサブファミリー、特にＣＤＲの両方に自然に存在する抗体に見られる長さの多様性を考慮に入れており、配列におけるギャップを提供する。従って、所定の抗体可変ドメインでは、通常、１～１４９位のすべてがアミノ酸残基によって占有されるわけではない。
【0267】
好ましくは、「抗原結合領域」は、可変軽鎖（ＶＬ）の少なくともアミノ酸残基４～１３８、及び可変重鎖（ＶＨ）のアミノ酸残基５～１３８を含み（いずれの場合も、Honegger & Pluuchthunによる番号付け）、より好ましくは、ＶＬの３～１４４及びＶＨの４～１４４のアミノ酸残基、そして特に好ましくは、完全なＶＬ鎖及びＶＨ鎖（ＶＬの１～１４９及びＶＨの１～１４９のアミノ酸位置）である。抗原結合部分はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、及びｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1 Hel l 36を参照）。抗体の抗原結合部分は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく足場に移植することができる（米国特許第６，７０３，１９９号を参照、これはフィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載している）。抗原結合部分は、相補的な軽鎖ポリペプチドと一緒になって、一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む１本鎖分子に組み込むことができる（Zapata et al., 1995 Protein Eng. 8 (10): 1057-1062；及び米国特許第５，６４１，８７０号）。
【0268】
本明細書で使用される、抗体の「ドメイン」又は「Ｘに特異的に結合するドメイン」又は「結合ドメイン」、「その抗原結合断片」、「抗原結合部分」などの用語は、所定の抗原（ＩＬ－１７Ａ、ＴＮＦα、ＨＳＡなど）に特異的に結合する能力を保持する無傷の全抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、無傷の抗体の断片によって行われる。いくつかの実施態様において、本開示の多重特異性抗体の結合ドメインは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから成る一価断片であるＦａｂ断片；ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ）2断片；ＶＨドメインとＣＨ１ドメインで構成されるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから成るＦｖ断片；ＶＨドメインから成る単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ward et al., 1989 Nature 341:544-546）；単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、及び単一ドメイン軽鎖抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、サメのＶＮＡＲ構造に基づく単一ドメイン抗体、及び特に限定されるものではないが、アンキリンベースのドメイン、ファイノマー、アビマー、アンチカリン、フィブロネクチンを含む代替の足場に基づく結合ドメイン、及び抗体の定常領域に組み込まれている結合部位（例えば、F-star's Modular Antibody Technology（商標））を含む。適切には、本開示の結合ドメインは、Ｆｖ断片（Ｆｖ）である。適切には、本開示の結合ドメインは、１本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。適切には、本開示の結合ドメインは、Ｆａｂ断片である。
【0269】
好ましくは、「ドメイン」又は「Ｘに特異的に結合するドメイン」又は「結合ドメイン」、「その抗原結合断片」、「抗原結合部分」は、可変軽鎖（ＶＬ）の少なくともアミノ酸残基４～１３８及び可変重鎖（ＶＨ）のアミノ酸残基５～１３８（いずれの場合もHonegger & Pluckthunによる番号付け）を含み、より好ましくはＶＬのアミノ酸残基３～１４４及びＶＨのアミノ酸残基４～１４４、そして特に好ましいのは完全なＶＬ鎖及びＶＨ鎖である（ＶＬのアミノ酸位置１～１４９及びＶＨのアミノ酸位置１～１４９）。抗原結合部分はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、及びｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1 Hel l 36を参照）。抗体の抗原結合部分は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく足場に移植することができる（フィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照）。抗原結合部分は、相補的な軽鎖ポリペプチドと一緒になって、一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む１本鎖分子に組み込むことができる（Zapata et al., 1995 Protein Eng. 8 (10): 1057-1062; and U.S. Pat. No. 5,641,870；及び米国特許第５，６４１，８７０号）。
【0270】
本明細書で使用される「結合特異性」又は「特異的結合する」という用語は、異なる抗原決定基とではなく、１つの抗原決定基と反応する個々の抗体又は抗体ドメインの能力を指す。本明細書で使用される「に特異的に結合する」又は「に特異的である」という用語は、標的と抗体又は抗体ドメインとの結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用を指し、これは、生体分子を含む分子の不均一な分子集団の存在下での、標的の存在を決定する。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体又は抗体ドメインは、他の標的に結合するよりも、より高い親和性、結合力、より容易に、及び／又はそれよりも長い持続時間、この標的に結合する抗体又は抗体ドメインである。その最も一般的な形式（及び定義された参考文献が言及されていない場合）では、「特異的結合」は、例えば、当技術分野で公知の特異性アッセイ方法に従って決定されるように、目的の標的と無関係の分子とを区別する抗体又は抗体ドメインの能力を指す。このような方法には、特に限定されるものではないが、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＥＣＬ、ＩＲＭＡ、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）試験、及びペプチドスキャンが含まれる。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイを実施することができる。スコア化は、標準的な発色（例えば、西洋ワサビペルオキシドを用いた２次抗体、及び過酸化水素を用いたテトラメチルベンジジン）によって実施することができる。特定のウェルでの反応は、例えば４５０ｎｍでの光学密度によってスコア化される。典型的なバックグラウンド（＝陰性反応）は約０．１ＯＤである。典型的な陽性反応は約１ＯＤであり得る。これは、正のスコアと負のスコアの比率が１０倍以上になり得ることを意味する。さらなる例では、ＳＰＲアッセイを実施することができ、バックグラウンドとシグナルとの少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも１００倍の差が特異的結合を示す。典型的には、結合特異性の決定は、単一の参照分子ではなく、粉乳、トランスフェリンなどの約３～５個の無関係な分子のセットを使用して実施される。本開示の特定の抗体又は抗体ドメインは、ヒトＩＬ－１７Ａ又はヒトＴＮＦαに対する結合特異性を有する。
【0271】
本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含み、従ってＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαに対する結合特異性を有し、特にヒトＩＬ－１７Ａ及びヒトＴＮＦαに対する結合特異性を有する。１つの実施態様において、本開示の抗体は、ヒトＩＬ－１７Ａ及びカニクイザル（Macaca fascicularis）（Cynomolgus monkey又は「Cynomolgus」としても知られている）ＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する。１つの実施態様において、本開示の抗体は、ヒトＴＮＦα及びカニクイザル（Macaca fascicularis）（Cynomolgus monkey又は「Cynomolgus」としても知られている）ＴＮＦαに対する結合特異性を有する。
【0272】
別の態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａ及びカニクイザル（Macaca fascicularis）（Cynomolgus monkey又は「Cynomolgus」としても知られている）ＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する抗体又は抗体ドメインに関する。
【0273】
適切には、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体は、単離された抗体である。
【0274】
適切には、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体はモノクローナル抗体である。
【0275】
本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体は、特に限定されるものではないが、キメラ抗体及びヒト化抗体を含む。
【0276】
適切には、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体はヒト化されている。適切には、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体はヒト化されており、ウサギ由来のＣＤＲを含む。
【0277】
本開示の抗体には、特に限定されるものではないが、実施例中のものを含む本明細書に記載の単離されたヒト化モノクローナル抗体が含まれる。そのような抗ヒトＩＬ－１７Ａ抗体の例は、その配列が表１に記載されている抗体である。本明細書に記載の抗体の生成及び特性評価に関する追加の詳細は、実施例に提供されている。
【0278】
ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する本開示の単離された抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含む。
【0279】
本開示は、ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合する抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＨ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特に本開示は、ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合する抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＨ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＨ ＣＤＲを含む。
【0280】
本開示は、重鎖可変領域（ＶＨ）を含むヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する抗体を提供し、ここで、前記ＶＨは順に以下を含む：（ｉ）３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３であって、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む抗体を提供する；又は（ｉｉ）３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３であって、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む抗体を提供する。
【0281】
本開示はまた、ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合する抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、本開示は、ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合する抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＬ ＣＤＲを含む。
【0282】
本開示は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する抗体を提供し、ここで、前記ＶＬは、順に以下を含む：（ｉ）３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３であって、前記ＬＤＣＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０いずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む抗体を提供する；又は（ｉｉ）３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３であって、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＣＲ３は配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む抗体を提供する。
【0283】
適切には本開示は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する抗体を提供し、
【0284】
（ｉ）ここで
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
【0285】
（ｉｉ）ここで
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
【0286】
特に、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有し、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は（ｉｉ）（ａ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列、を含む抗体を提供する。
【0287】
本開示の他の抗体は、変異されているが、そのＣＤＲ領域中で、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。適切には、本開示の他の抗体は、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域において、１、２、３、４、５、又は１０個以下のアミノ酸がアミノ酸の欠失、挿入、又は置換によって変異されている変異アミノ酸配列を含む。変異、例えば置換がＣＤＲのセット内の任意の残基で行われる可能性があり、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３内であってもよい。
【0288】
適切には、変異アミノ酸配列を含む本開示の抗体は、１ｎｇのヒトＩＬ－１７Ａの活性を、５０ｎｇ／ｍｌ、好ましくは２０ｎｇ／ｍｌ、好ましくは１０ｎｇ／ｍｌ、好ましくは５ｎｇ／ｍｌ、より好ましくは１ｎｇ／ｍｌ、より好ましくは０．５ｎｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは０．２ｎｇ／ｍｌ以下の濃度で、５０％阻害することができ、前記阻害活性は、５０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下でのＨＴ－２９アッセイで、ヒトＩＬ－１７Ａによって誘導されるＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定される。
【0289】
適切には、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する本開示の単離された抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
【0290】
（ｉ）
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つ、好ましくは配列番号１２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；又は
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１、４、及び７のいずれか１つ、好ましくは配列番号１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２、５、及び８のいずれか１つ、好ましくは配列番号２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３、６、及び９のいずれか１つ、好ましくは配列番号３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２、１５、及び１８のいずれか１つ、好ましくは配列番号１２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３、１６、及び１９のいずれか１つ、好ましくは配列番号１３と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４、１７、及び２０のいずれか１つ、好ましくは配列番号１４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；又は
【0291】
（ｉｉ）
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１、４４、及び４７のいずれか１つ、好ましくは配列番号４１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＬＣＤＲ１は、配列番号５０、５３、及び５６のいずれか１つ、好ましくは配列番号５０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２は、配列番号５１、５４、及び５７のいずれか１つ、好ましくは配列番号５１と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つ、好ましくは配列番号５２と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0292】
適切には、ヒトＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する本開示の単離された抗体は、以下を含む：（ｉ）それぞれ配列番号１、２、及び３の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、及び／又は、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、及び／又は、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
【0293】
さらなる実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体を提供し、ここで、前記抗体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。
【0294】
適切には本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体を提供し、ここで、前記抗体は、ＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ３、又はＶＨ４を含む。１つの実施態様において、本開示の単離された抗体はＶＨ４ドメインを含む。好適な実施態様において、本開示の単離された抗体はＶＨ３ドメインを含む。
【0295】
適切には本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１フレームワークＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４から選択される。適切なＶλ ＦＲ４は、配列番号２６～配列番号３２に記載されるものである。１つの実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、配列番号２６～配列番号３２のいずれか、好ましくは配列番号２６又は配列番号２７、より好ましくは配列番号２７から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４を含む。適切には本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６又は配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４を含む。
【0296】
従って、１つの実施態様において本開示は、以下を含む抗体を提供する：
【0297】
（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；又は（ｉ）（ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）ＶＨ３又はＶＨ４ドメイン、好ましくはＶＨ３ドメイン；及び
（ｉｉｉ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬドメインであって、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
（ｉｉ）ＶＨ３又はＶＨ４ドメイン、好ましくはＶＨ３ドメイン；及び
（ｉｉｉ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬドメインであって、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号２６～配列番号３２のいずれかから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号２７に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
【0298】
適切には本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＨドメインを含む。
【0299】
適切には、本開示はまた、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＨアミノ酸配列を含み、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約１０個以下のアミノ酸が変異されている（変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。
【0300】
適切には、本開示はまた、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＨアミノ酸配列を含み、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約２０個以下のアミノ酸が変異されている（変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。
【0301】
本開示の他の抗体は、変異されているが、表１に記載の配列に示されているＶＨ領域と、ＶＨ領域中で、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。
【0302】
適切には本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＬドメインを含む。
【0303】
適切には、本開示はまた、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＬアミノ酸配列を含み、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約１０個以下のアミノ酸が変異されている（変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。
【0304】
適切には、本開示はまた、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、表１に記載されたＶＬアミノ酸配列を含み、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約２０個以下のアミノ酸が変異されている（変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。
【0305】
本開示の他の抗体には、変異されているが、表１に記載の配列に示されているＶＬ領域と、ＶＬ領域中で、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。
【0306】
１つの実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号１０又は配列番号１１、好ましくは配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号１１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域は、Ｑ１４Ｋ、Ｇ１６Ｅ、及びＧ５６Ａ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0307】
別の実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４８は配列番号４９、好ましくは配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。さらなる実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ここで、前記重鎖可変領域は、Ｒ２０Ｔ及びＱ１４１Ｐ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0308】
別の実施態様におい、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、（ｉ）アミノ酸配列配列番号２１又は配列番号２２、好ましくは配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特に前記抗体は、それぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む；又は（ｉｉ）アミノ酸配列配列番号５９又は配列番号６０、好ましくは配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特に前記抗体は、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0309】
さらなる実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号２２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記軽鎖可変領域は、Ａ５１Ｐ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0310】
さらなる実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体を提供し、ここで、（ｉ）前記抗体は、アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、アミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む；又は（ｉｉ）前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、アミノ酸配列配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0311】
従って、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、
（ｉ）前記抗体は、アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み；特に前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む；又は、
（ｉｉ）前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み；特に前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
（ｉ）前記抗体は、アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み；特に前記抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む；又は、
（ｉｉ）前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４８と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号５９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み；特に前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
【0312】
さらなる実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４９と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号６０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、特に前記重鎖可変領域は、Ｒ２０Ｔ及びＱ１４１Ｐ（ＡＨｏ番号付け）を含む。
【0313】
従って、本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで、前記抗体は、アミノ酸配列配列番号４９と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号６０と少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、特に前記重鎖可変領域は、Ｒ２０Ｔ及びＱ１４１Ｐ（ＡＨｏ番号付け）を含み、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び／又は、それぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み、特に、ここで、前記抗体は、それぞれ配列番号３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号５０、５１、及び５２のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
【0314】
特定の実施態様において本開示は、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、（ｉ）配列番号１０及び１１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／又は配列番号２１及び２２から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むそのＶＬ；又は（ｉｉ）配列番号４８及び４９から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／又は配列番号５９及び６０から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むそのＶＬを含む単離された抗体を提供する。特定の実施態様において、本開示の抗体は、（ｉ）配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列；又は（ｉｉ）配列番号４８のＶＨ配列及び配列番号５９のＶＬ配列を含む。さらに別の特定の実施態様において、本開示の抗体は、（ｉ）配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２２のＶＬ配列；又は（ｉｉ）配列番号４９のＶＨ配列及び配列番号６０のＶＬ配列を含む。
【0315】
１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体は、表１に記載される抗体である。１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体は、（ｉ）配列番号２４及び２５、好ましくは配列番号２４、又は（ｉｉ）配列番号６１及び６２、好ましくは配列番号６１から成る群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体は、（ｉ）配列番号２４又は配列番号２５、好ましくは配列番号２４、又は（ｉｉ）配列番号６１又は配列番号６２、好ましくは配列番号６１、に記載されるものである。
【0316】
ヒトＩＬ－１７Ａ対する結合特異性を有する本開示の他の抗体には、アミノ酸又はアミノ酸をコードする核酸が変異されているが、表１に記載されている配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５％の同一性を有するものが含まれる。１つの実施態様において、これは、表１に記載の配列に示される可変領域と比較した場合、可変領域において１、２、３、４、又は５個以下のアミノ酸が変異されているが、実質的に同じ活性を保持している変異アミノ酸配列を含む。本明細書で使用される「実質的に同じ活性」という用語は、親抗体、例えば本開示の抗体、特に表１に記載の本開示の抗体について決定された活性の、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも１１０％、又は少なくとも１２０％、又は少なくとも１３０％、又は少なくとも１４０％、又は少なくとも１５０％、又は少なくとも１６０％、又は少なくとも１７０％、又は少なくとも１８０％、又は少なくとも１９０％、例えば最大２００％である、実質的に同じ活性によって示される活性を指す。
【0317】
さらに別の実施態様において本開示は、表１に記載の配列に相同的なアミノ酸配列を含む抗体を提供し、ここで、前記抗体はヒトＩＬ－１７Ａに結合し、表１に記載の抗体の所望の機能特性を保持しているる。
【0318】
１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を有し、これらのＣＤＲ配列の１つ以上は、本明細書に記載の抗体に基づく特定のアミノ酸配列又はその保存的修飾物を有し、前記抗体は、本開示の抗体の所望の機能特性を保持している。
【0319】
従って、本開示は、以下を含むモノクローナル抗体を提供する：
（ｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号２又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１２又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号１３又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号１４又はその保存的変種を有する；又は
（ｉｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号３９又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号４０又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号５０又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号５１又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号５２又はその保存的変種を有する；
ここで、前記抗体はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、及び／又はＩＬ－１７Ａを中和する。
（ｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号２又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号１２又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号１３又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号１４又はその保存的変種を有する；又は
（ｉｉ）
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号３９又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号４０又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号４１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；及び
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号５０又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号５１又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号５２又はその保存的変種を有する；
ここで、前記抗体はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、及び／又はＩＬ－１７Ａを中和する。
【0320】
１つの実施態様において、本開示の抗体は、哺乳動物細胞における発現のために最適化されており、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを有し、ここで、これらの配列の１つ以上は、本明細書に記載の抗体又はに基づく特定のアミノ酸配列を有し、及びここで、前記抗体は本開示の抗体の所望の機能特性を保持している。従って、本開示は、哺乳動物細胞における発現に最適化されており、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を提供し、ここで、前記重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号１０及び１１のいずれか、及びその保存的修飾物、又は（ｉｉ）配列番号４８及び４９のいずれか、及びその保存的修飾物から選択されるアミノ酸配列を含み：前記軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号２１及び２２のいずれか、及びその保存的修飾物、又は（ｉｉ）配列番号５９及び６０のいずれか、及びその保存的修飾物から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで、前記抗体はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、及び／又はＩＬ－１７Ａを中和する。
【0321】
１つの実施態様において、本開示の抗体は、哺乳動物細胞における発現のために最適化されており、全長重鎖配列及び全長軽鎖配列を有し、これらの配列の１つ以上は、本明細書に記載の抗体又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、ここで、抗体は、本開示の抗体の所望の機能特性を保持している。
【0322】
本明細書で使用される「最適化された」という用語は、産生細胞又は生物、一般に真核細胞、例えば、ピキアの細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、又はヒト細胞において好ましいコドンを使用して、アミノ酸配列をコードするように、ヌクレオチド配列が変更されていることを意味する。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている開始ヌクレオチド配列によって最初にコードされたアミノ酸配列を、完全に又は可能な限り保持するように工学作成されている。本明細書の最適化された配列は、哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように工学作成されている。しかしながら、他の真核細胞又は原核細胞におけるこれらの配列の最適化された発現もまた、本明細書において想定される。最適化されたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列もまた、最適化されたと言われる。
【0323】
別のタイプの可変領域修飾は、ＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させて、それによって「親和性成熟」として知られる目的の抗体の１つ以上の結合特性（例えば親和性）を改良することである。部位特異的変異誘発又はＰＣＲ介在変異誘発を実施して変異を導入することができ、抗体結合に対する効果、又は目的の他の機能特性を、本明細書に記載され実施例で提供されるようなインビトロ又はインビボアッセイで評価することができる。（上記で説明したように）保存的修飾を導入することができる。突然変異は、アミノ酸の置換、付加、又は欠失であり得る。さらに典型的には、ＣＤＲ領域内の１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つ以下の残基が変更される。
【0324】
「親和性成熟」抗体は、１つ以上の可変ドメインに１つ以上の改変を有するものであり、これは、それらの改変を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改良をもたらす。１つの実施態様において、親和性成熟抗体は標的抗原に対してナノモル又はピコモルの親和性さえも有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で知られている手順によって産生される。例えば、Marks et al, Bio/Technology 10:779-783 (1992)は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟について説明している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば、Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci U.S.A. 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Jackson et al, J. Immunol. 154(7):3310- 9 (1995); 及び Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)に記載されている。従って、本開示は、親和性成熟している前記抗体を提供する。
【0325】
本開示の抗体はさらに、修飾抗体を工学作成するための出発物質として本明細書に示される１つ以上のＶＨ及び／又はＶＬ配列を有する抗体を使用して調製することができ、その修飾抗体は、出発抗体から改変された特性を有し得る。抗体は、１つ又は両方の可変領域（すなわち、ＶＨ及び／又はＶＬ）内の、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内の、及び／又は１つ以上のフレームワーク領域内の、１つ以上の残基を修飾することによって工学作成することができる。追加的又は代替的に、抗体は、定常領域内の残基を修飾することによって工学作成して、例えば抗体のエフェクター機能を変更することができる。
【0326】
実施できる可変領域の工学作成の１つのタイプは、ＣＤＲ移植である。抗体は、主に６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）にあるアミノ酸残基を介して、標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列よりも個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体－抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体のフレームワーク配列に移植された特定の天然抗体のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることができる（例えば、Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522- 525; Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 10029-10033；Winterの米国特許第５，２２５，５３９号、及びQueenらの米国特許第５，５３０，１０１号、５，５８５，０８９号、５，６９３，７６２号、及び６，１８０，３７０号を参照）。
【0327】
このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系の抗体遺伝子配列又は再構成された抗体配列を含む公開ＤＮＡデータベース又は公開された参考文献から取得できる。例えば、ヒトの重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネットのwww.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseで入手可能）、並びにKabat, E. A., et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. fol. Biol. 227:776-798; 及び Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836中に見出され、これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。例えば、ヒトの重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列、及び再構成された抗体配列は、「ＩＭＧＴ」データベース（インターネットのwww.imgt.orgで入手可能；Lefranc, M.P. et al., 1999 Nucleic Acids Res. 27:209-212を参照；これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる）に見いだされる。
【0328】
本開示の抗体で使用するためのフレームワーク配列の例は、本開示の選択された抗体によって使用されるフレームワーク配列、例えば、本開示のモノクローナル抗体によって使用されるコンセンサス配列及び／又はフレームワーク配列に構造的に類似するものである。ＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３の配列、及びＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３の配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子に見られるものと同一の配列を有するフレームワーク領域に移植することができるか、又は生殖細胞系配列と比較して、ＣＤＲ配列を、１つ以上の変異を含むフレームワーク領域に移植することができる。例えば、特定の例において、抗体の抗原結合能力を維持又は増強するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であることが見出された（例えば、Queen et al. の米国特許第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６２号、及び第６，１８０，３７０号を参照）
【0329】
得られるポリペプチドが、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワーク又は足場を使用することができる。そのようなフレームワーク又は足場は、ヒト免疫グロブリンの５つの主要なイディオタイプ、その抗原結合断片を含み、好ましくはヒト化された態様を有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。
【0330】
１つの態様において本開示は、本開示のＣＤＲを移植することができる非免疫グロブリン足場を使用して非免疫グロブリンベースの抗体を生成する方法に関する。既知の又は将来の非免疫グロブリンフレームワーク及び足場は、それらが標的ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的な結合領域を含む限り、使用することができる。既知の非免疫グロブリンフレームワーク又は足場には、特に限定されるものではないが、フィブロネクチン（Compound Therapeutics, Inc., Waltham, Mass.）、アンキリン（Molecular Partners AG, Zurich, Switzerland）、ドメイン抗体（Domantis, Ltd., Cambridge, Mass., and Ablynx nv, Zwijnaarde, Belgium）、リポカリン（Pieris Proteolab AG, Freising, Germany）、小型モジュラー免疫医薬品（Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, Wash.）、マキシボディ（Avidia, Inc., Mountain View, Calif）、プロテインＡ（Affibody AG, Sweden）、及びアフィリン（ガンマクリスタリン又はユビキチン）（Scil Proteins GmbH, Halle, Germany）が含まれる。
【0331】
本開示による抗体は、ヒトＩＬ－１７Ａ標的療法を必要とするヒト患者にとって有益であると予測される貴重な特性を有する。本開示による抗体は、以下の特性（実施例１及び２で決定される）のうちの１つ以上によって特徴付けられる：
【0332】
抗体はヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、そして：
（ａ）カニクイザルＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する、
（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆよりも、ヒトＩＬ－１７Ａに選択的に結合する、
（ｃ）ＩＬ－１７Ａとその受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）間の結合を阻害又は阻止する、
（ｄ）ＩＬ－１７Ａ活性を低減又は中和する、
（ｅ）ＨＴ－２９アッセイでインビトロで評価した場合にＧＲＯ－α分泌を阻害することができる、
（ａ）カニクイザルＩＬ－１７Ａに対する結合特異性を有する、
（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆよりも、ヒトＩＬ－１７Ａに選択的に結合する、
（ｃ）ＩＬ－１７Ａとその受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）間の結合を阻害又は阻止する、
（ｄ）ＩＬ－１７Ａ活性を低減又は中和する、
（ｅ）ＨＴ－２９アッセイでインビトロで評価した場合にＧＲＯ－α分泌を阻害することができる、
【0333】
（ｆ）ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を、ＥＬＩＳＡアッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、５より大きい、詳細には１０より大きい、１５より大きい、より詳細には２０より大きい力価（相対力価）で阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって決定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）とＥＬＩＳＡによって決定されたｓｃＦｖ形式の前記抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である、
【0334】
（ｇ）ＨＴ－２９アッセイでＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定されたセクキヌマブと比較した力価（相対力価）と比較して、５０より大きい、詳細には１００より大きい、より詳細には１５０より大きい力価（相対力価）でＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）とＨＴ－２９アッセイによって測定されたｓｃＦｖ形式の本発明の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である、
【0335】
（ｈ）１ｎｇのヒトＩＬ－１７Ａの活性を、１ｎｇ／ｍＬ以下、詳細には０．５ｎｇ／ｍＬ以下、より詳細には０．２ｎｇ／ｍＬ以下の濃度で５０％阻害することができ、前記阻害活性は、５０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下でＨＴ－２９アッセイでヒトＩＬ－１７Ａによって誘導されるＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定される、
【0336】
（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、好ましくは直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、詳細には１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、詳細には１００ｐＭ未満、より詳細には５０ｐＭ未満の解離定数（ＫD）で、ヒトＩＬ－１７Ａに結合する、
【0337】
（ｊ）表面プラズモン共鳴によって測定すると、詳細にはキャプチャー設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、１０ｎＭ未満、例えば７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、詳細には０．５ｎＭ未満のＫDで、カニクイザルＩＬ－１７Ａに結合する、
【0338】
（ｋ）ｓｃＦｖ形式である場合、示差走査蛍光測定法によって決定される融解温度（Ｔｍ）は、少なくとも６０℃、詳細には少なくとも６２℃、より詳細には少なくとも６５℃、さらにより詳細には少なくとも７０℃であり、特にここで、前記抗体はｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌのリン酸－クエン酸塩緩衝液中にある、
【0339】
（ｌ）ｓｃＦｖ形式である場合、５回の連続した凍結融解サイクル後、本発明の抗体の開始濃度が１０ｍｇ／ｍｌである場合、５％未満、詳細には３％未満、より詳細には１％未満のモノマー含有量の損失があり、特にここで、前記抗体はｐＨ７．４のリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中にある、及び／又は
【0340】
（ｍ）ｓｃＦｖ形式である場合、４℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存した後、本開示の抗体の開始濃度が１０ｍｇ／ｍｌである場合、モノマー含有量の損失は、５％以下、詳細には４％未満、３％未満、２％未満、詳細には１％未満であり、特にここで、前記抗体はリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中にある；及び／又は
（ｎ）本開示の抗体の開始濃度が１０ｍｇ／ｍｌである場合、３７℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存した後、５％未満のモノマー含有量の損失がある。
（ｎ）本開示の抗体の開始濃度が１０ｍｇ／ｍｌである場合、３７℃で少なくとも２週間、詳細には少なくとも４週間保存した後、５％未満のモノマー含有量の損失がある。
【0341】
１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆよりも、ヒトＩＬ－１７Ａに選択的に結合する。本明細書で使用される「選択的に結合する」という用語は、抗体、組成物、製剤などがＩＬ－１７Ｂ／Ｃ／Ｄ／Ｅ／Ｆに有意に結合しないが、ＩＬ－１７Ａに結合することを意味するものとする。選択的結合は、通常中程度～高ＩＣ50の低親和性を有する非特異的結合からは区別されるように、高親和性（又は低ＫD）と低～中程度のＩＣ50によって特徴付けられる。典型的には、抗体が１０-7Ｍ未満のＫDで結合する場合、結合は選択的であると見なされる。適切には本開示の抗体は、ＳＰＲによって測定すると、ヒトＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、ＩＬ－１７Ｆに結合するより高い親和性すなわちより低いＫDで、ヒトＩＬ－１７Ａに結合する。適切には本開示の抗体は、ＥＬＩＳＡによって測定すると、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆに対して、ＩＬ－１７Ａに対するＩＣ50よりも少なくとも１００倍大きい、詳細には少なくとも２００倍、少なくとも３００倍、少なくとも４００倍大きいＩＣ50値を有する。
【0342】
本開示の抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、ここで、ＩＬ－１７Ａへの結合は、（ａ）ＩＬ－１７Ａとその受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）との結合を阻害又は阻止し、及び（ｂ）ＩＬ－１７Ａ活性を低減又は中和する。
【0343】
本明細書で使用される「中和抗体」という用語は、例えばＩＬ－１７Ａから１つ以上のその受容体への結合を阻止することによって、詳細にはＩＬ－１７ＡからＩＬ－１７ＲＡへの結合を阻止することによって、ＩＬ－１７Ａの生物学的シグナル伝達活性を中和することができる抗体を説明する。本開示の抗体は、ＩＬ－１７Ａ中和抗体である。本明細書で使用される「中和する」という用語は、部分的でも完全でもよい生物学的シグナル伝達活性の低減を指すことが理解されよう。ＩＬ－１７Ａの中和は、様々なアッセイで決定することができ、その例は本明細書の他の場所に記載されている。
【0344】
従って、本開示の抗体は、インビトロでＨＴ－２９アッセイ（実施例１及び２に記載）において評価される場合、ＧＲＯ－α分泌を阻害することができる。１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＨＴ－２９アッセイでＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定されるセクキヌマブの力価と比較して、５０より大きい、好ましくは１００より大きく、より好ましくは１５０よりより大きい力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａを中和する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイによって決定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイによって決定されたｓｃＦｖ形式の本開示の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である。さらなる実施態様において、本開示の抗体は、１ｎｇのヒトＩＬ－１７Ａの活性を、１ｎｇ／ｍＬ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ以下、より好ましくは０．２ｎｇ／ｍＬ以下の濃度で、５０％阻害することができ、前記阻害活性は、５０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下でのＨＴ－２９アッセイにおいてヒトＩＬ－１７Ａによって誘導されるＧＲＯ－α分泌を測定することによって決定される。
【0345】
１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７ＲＡとの相互作用を、ＥＬＩＳＡアッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、５より大きい、好ましくは１０より大きい、１５より大きい、より詳細には２０より大きい力価（相対力価）で阻止する能力を有し、ここで、前記相対力価は、ＥＬＩＳＡによって測定されたセクキヌマブのＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡによって測定されたｓｃＦｖ形式の本開示の抗体のＩＣ50値（ｎｇ／ｍＬ）との比である。
【0346】
本明細書で使用される「親和性」という用語は、単一の抗原性部位における抗体と抗原の相互作用の強さを指す。各抗原部位内で、抗体の「アーム」の可変領域は、弱い非共有結合力を介して、多数の部位で抗原と相互作用し、相互作用が多いほど、親和性が強くなる。
【0347】
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。特に他に明記しない限り、本明細書で使用される「結合親和性」、「に結合する」、「に結合する」、又は「に結合している」は、結合対のメンバー（例えば抗体断片と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に解離定数（ＫD）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。一般に、低親和性抗体は抗原との結合が遅く、解離しやすい傾向があるが、高親和性抗体は一般に抗原との結合が速く、結合が長く維持される傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で知られており、それらのいずれも本発明の目的に使用することができる。結合親和性、すなわち結合強度を測定するための特定の例示的実施態様を以下に記載する。
【0348】
本明細書で使用される「Ｋassoc」、「Ｋａ」、又は「Ｋon」という用語は、特定の抗体抗原相互作用の会合速度を指すことが意図され、一方、本明細書で使用される用語「Ｋdis」、「Ｋｄ」又は「Ｋoff」は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことが意図されている。１つの実施態様において、本明細書で使用される「ＫD」という用語は、解離定数を指すことが意図され、これはＫｄとＫａの比（すなわちＫｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。本開示による「ＫD」若しくは「ＫD値」又は「ＫＤ」若しくは「ＫＤ値」は、１つの実施態様において、Ｔ２００装置（Biacore, GE Healthcare）を使用して測定される。ヒトＩＬ－１７Ａに対するヒト化ｓｃＦｖの親和性を測定するために、ビオチン化ヒトＩＬ－１７Ａは、BiacoreのBiotin-CAPtureキットを使用して捕捉される。各分析物注入サイクルの後に、ＣＡＰセンサーチップが再生され、新しい抗原が捕捉される。ｓｃＦｖは、ランニング緩衝液で希釈された０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物の濃度で、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して分析物として注入される。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされる。代替的に又は追加的に、ヒト化ｓｃＦｖの親和性は、代替ＳＰＲアッセイ設定を使用して測定及び分析することができる：ＩＬ－１７Ａは、アミンカップリングによってＣＭ５センサーチップ（GE Healthcare）に固定化され、ｓｃＦｖの０．３５～９０ｎＭの連続希釈物が、固定化されたＩＬ－１７Ａ上に再注入される。
【0349】
適切には、本開示の抗体のＩＬ－１７Ａに対する親和性は、ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡに対する親和性よりも高くてもよい。ＩＬ－１７ＡのＩＬ－１７ＲＡへの親和性と比較して、本開示の抗体のより高い親和性は、予備形成されたＩＬ－１７ＲＡ／ＩＬ－１７Ａ複合体を解離又は中和するために特に有用であり得ることが理解される。１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＩＬ－１７ＲＡ／ＩＬ－１７Ａ相互作用を中和する。別の実施態様において、本開示の抗体は、ＩＬ－１７Ａとその受容体（ＩＬ－１７ＲＡ）との結合を阻害又は阻止する。１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＩＬ－１７Ａ活性を中和する。
【0350】
適切には、本開示の抗体のＩＬ－１７Ａに対する親和性は、セクキヌマブのＩＬ－１７Ａに対する親和性に匹敵するか、又はより高い、好ましくはより高い場合がある。１つの実施態様において、本開示の抗体は、セクキヌマブと同等か又はより高い、好ましくはより高い力価でＩＬ－１７Ａ活性を中和する。さらなる実施態様において、本開示の抗体は、セクキヌマブと同等か又はより高い、好ましくはより高い力価でＩＬ－１７ＲＡ／ＩＬ－１７Ａ相互作用を中和する。
【0351】
抗体の結合親和性は、例えば、解離定数（ＫD）によって決定され得る。より強い親和性はより低いＫDによって表され、より弱い親和性はより高いＫDによって表される。
【0352】
従って、適切な実施態様において、本開示の抗体は、好ましくは表面プラズモンによって測定すると、より好ましくは、直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、１～１００００ｐＭ、１～７０００ｐＭ、１～５０００ｐＭ、１～２５００ｐＭ、１～２０００ｐＭ、１～１０００ｐＭ、１～７５０ｐＭ、１～５００ｐＭ、１～４００ｐＭ、１～３００ｐＭ、１～２００ｐＭ、１～１００ｐＭ、１～５０ｐＭのＫDを有し得る。適切な実施態様において、本開示の抗体は、直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、１～２００ｐＭ、詳細には１～１００ｐＭのＫDを有する。特定の実施態様において、本開示の抗体は、直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、１～５０ｐＭのＫDを有する。適切な実施態様において、本開示の抗体は、好ましくは表面プラズモンによって測定すると、より好ましくは直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２５ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、又は５０ｐＭ未満のＫDを有し得る。適切には、本開示の抗体は、１ｎＭ未満、詳細には１００ｐＭ未満のＫDを有する。適切には、本開示の抗体は、０．５ｎＭ未満、詳細には５０ｐＭ未満のＫDを有する。より適切には、本開示の抗体は、直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、０．２ｎＭ未満、詳細には５０ｐＭ未満のＫDを有する。
【0353】
さらなる実施態様において、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によりキャプチャ設定で測定すると、カニクイザルＩＬ－１７Ａに、１０ｎＭ未満、例えば７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、詳細には０．５ｎＭ未満のＫDで結合する。
【0354】
適切には、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定すると、好ましくは直接設定で表面プラズモン共鳴によって測定すると、少なくとも１０3Ｍ-1ｓ-1以上、少なくとも１０4Ｍ-1ｓ-1以上、少なくとも５×１０4Ｍ-1ｓ-1以上、少なくとも１０5Ｍ-1ｓ-1以上、少なくとも５×１０5Ｍ-1ｓ-1以上、少なくとも１０6Ｍ-1ｓ-1以上のＫon速度で、ヒトＩＬ－１７Ａに結合する。好ましくは本開示の抗体は、ＳＰＲによって測定すると、好ましくは表面プラズモン共鳴によって直接設定で測定すると、少なくとも１０5Ｍ-1ｓ-1以上、詳細には少なくとも５×１０5Ｍ-1ｓ-1以上、より詳細には少なくとも１０6Ｍ-1ｓ-1以上のＫon速度を有する。
【0355】
適切には、本開示の抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定すると、好ましくは表面プラズモン共鳴によって直接設定で測定すると、ヒトＩＬ－１７Ａに、５×１０-3ｓ-1以下、３×１０-3ｓ-1以下、１０-3ｓ-1以下、５×１０-4ｓ-1以下、３×１０-4ｓ-1以下、１０-4ｓ-1以下、５×１０-5ｓ-1以下のＫoff速度で結合する。好ましくは、本開示の抗体は、ＳＰＲによって測定すると、好ましくは表面プラズモン共鳴によって直接設定で測定すると、１０-4ｓ-1以下、詳細には５×１０-5ｓ-1以下のＫoff速度を有する。
【0356】
適切には、本開示の抗体は有益な生物理学的特性を有する。
【0357】
適切には、本開示の抗体は、既に記載されている（Egan, et al., MAbs, 9(1) (2017), 68-84; Niesen, et al., Nature Protocols, 2(9) (2007) 2212-2221）示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）によって決定されるように、ｓｃＦｖ（１本鎖可変断片）抗体形式で表される場合、少なくとも６０℃、好ましくは少なくとも６２℃、より好ましくは少なくとも６５℃、さらにより好ましくは少なくとも７０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する。ｓｃＦｖ構築物の熱展開の遷移の中点は、示差走査蛍光測定法により、蛍光色素SYPRO（登録商標）Orange（Wong & Raleigh, Protein Science 25 (2016) 1834-1840を参照）を使用して決定される。ｐＨ６．４のリン酸－クエン酸緩衝液中の試料が、５０μｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度で調製され、総量１００μｌに５×SYPRO（登録商標）Orangeの最終濃度が含まれている。２５μｌの調製試料を白壁ＡＢ遺伝子ＰＣＲプレートに三重測定で加える。アッセイはサーマルサイクラーとして使用されるｑＰＣＲ装置で実施され、蛍光発光はソフトウェアのカスタム色素較正ルーチンを使用して検出される。試験試料を含むＰＣＲプレートを、２５℃から９６℃まで１℃刻みで温度勾配に付し、各温度上昇後に３０秒休止する。総アッセイ時間は約２時間である。Ｔｍは、ソフトウェアGraphPad Prismによって、数学的な２次導関数法を使用して計算され、曲線の変曲点が計算される。報告されたＴｍは、３つの測定値の平均である。
【0358】
本開示の抗体は、特にｓｃＦｖ（１本鎖可変断片）抗体形式で表される場合、特に本開示の抗体の開始濃度が１０ｍｇ／ｍｌである場合、５回の連続した凍結融解サイクル後のモノマー含有量の損失が、５％未満、詳細には３％未満、より詳細には１％未満であることを特徴とする。
【0359】
少なくとも２週間、詳細には４℃で少なくとも４週間保存した後、本開示の抗体は、特にｓｃＦｖ（１本鎖可変断片）抗体形式で表される場合、本開示の抗体の開始濃度が１０ｍｇ／ｍｌである場合、５％以下、詳細には４％未満、３％未満、２％未満、好ましくは１％未満のモノマー含有量の損失を特徴とする。モノマー含有量の損失は、ＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラムの曲線下の面積の計算によって決定される。ＳＥ－ＨＰＬＣは、ＵＳＰの第６２１章で概説されているように、固体固定相と液体移動相に基づく分離技術である。この方法は、疎水性固定相と水性移動相を利用して、サイズと形状に基づいて分子を分離する。分子の分離は、特定のカラムのボイド容量（Ｖ０）と総透過容量（ＶＴ）の間で発生する。ＳＥ－ＨＰＬＣによる測定は、自動試料注入と検出波長２８０ｎｍに設定されたＵＶ検出器を備えたChromaster ＨＰＬＣシステム（Hitachi High-Technologies Corporation）で実施される。この装置は、ソフトウェアEZChrom Elite（Agilent Technologies、バージョン３．３．２ ＳＰ２）によって制御され、これはまた、得られるクロマトグラムの分析もサポートする。タンパク質試料は遠心分離によって清澄化され、注入前にオートサンプラー内で４～６℃の温度に保たれる。ｓｃＦｖ試料の分析には、Shodex KW403-4Fカラム（Showa Denko Inc.、＃Ｆ６９８９２０２）を、標準化された緩衝化生理食塩水移動相（５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．５、３００ｍＭ塩化ナトリウム）を用いて、推奨流量０．３５ｍＬ／分で使用される。注入あたりの目標試料の負荷量は５μｇであった。試料は波長２８０ｎｍのＵＶ検出器で検出され、データは適切なソフトウェアスイートで記録される。得られたクロマトグラムは、Ｖ０からＶＴの範囲で分析されるため、溶出時間が１０分より大きいマトリックス関連ピークは除外される。
【0360】
適切には、本開示の単離された抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ又はｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、及び単一ドメイン軽鎖抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、サメのＶＮＡＲ構造に基づく単一ドメイン抗体、及び特に限定されるものではないが、アンキリンベースのドメイン、ファイノマー、アビマー、アンチカリン、フィブロネクチンを含む代替の足場に基づく結合ドメイン、及び抗体の定常領域に組み込まれている結合部位（例えば、F-star's Modular Antibody Technology（商標））、好ましくはｓｃＦｖから成る群から選択される。
【0361】
適切には、本開示の抗体はＦｖである。適切には、本開示の抗体は、ｓｃＦｖ抗体断片である。「１本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」又は「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓＦｖが標的結合のための所望の構造を形成することが可能になる。「１本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる（例えば、Pluckthun, The pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315を参照）。特定の実施態様において、前記機能的断片は、配列番号２３によるリンカーを含むｓｃＦｖ形式である。１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体は、表１に記載の抗体である。１つの実施態様において、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合する抗体は、（ｉ）配列番号２４及び配列番号２５から成る群；又は（ｉｉ）配列番号６１及び配列番号６２から成る群、から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。さらなる実施態様において、本開示の抗体は、（ｉ）配列番号２４又は配列番号２５に示されている、又は（ｉｉ）配列番号６１又は配列番号６２に示されているような、１本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【0362】
適切には、本開示の抗体はＩｇＧ抗体である。１つの実施態様において、本開示の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、好ましくはＩｇＧ１から成る群から選択されるＩｇＧである。
【0363】
ＴＮＦαに特異的に結合する例示的なドメイン
本開示の多重特異性抗体は、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインを含み、前記ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含む。
本開示の多重特異性抗体は、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインを含み、前記ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含む。
【0364】
本開示の多重特異性抗体で使用するためにＴＮＦαに特異的に結合する適切なドメインには、特に限定されるものではないが、以下が含まれる：
・ その配列が表１に記載されているヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメイン（ＷＯ２０１７／１５８１０１に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；
・ インフリキシマブ（Remicade（登録商標）；米国特許第６，２７７，９６９号、第６，２８４，４７１号、第６，７９０，４４４号、及び第６，８３５，８２３号、これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）；
・ アダリムマブ／Ｄ２Ｅ７（Humira（登録商標）；米国特許第６，０９０，３８２号に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；
・ セルトリズマブ、ＰＥＧ化Ｆａｂ断片（Cimzia（登録商標）；米国特許第７，０１２，１３５号及び米国特許第７，１８６，８２０号に記載されており、これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）；
・ ゴリムマブ（Simponi（登録商標）；公開された米国出願第２００９／２１４５２８号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
・ その配列が表１に記載されているヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメイン（ＷＯ２０１７／１５８１０１に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；
・ インフリキシマブ（Remicade（登録商標）；米国特許第６，２７７，９６９号、第６，２８４，４７１号、第６，７９０，４４４号、及び第６，８３５，８２３号、これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）；
・ アダリムマブ／Ｄ２Ｅ７（Humira（登録商標）；米国特許第６，０９０，３８２号に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；
・ セルトリズマブ、ＰＥＧ化Ｆａｂ断片（Cimzia（登録商標）；米国特許第７，０１２，１３５号及び米国特許第７，１８６，８２０号に記載されており、これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）；
・ ゴリムマブ（Simponi（登録商標）；公開された米国出願第２００９／２１４５２８号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【0365】
本開示の多重特異性抗体で使用するためのＴＮＦαに特異的に結合する好ましいドメインには、特に限定されるものではないが、その配列が表１に記載されているヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメインが含まれる（ＷＯ２０１７／１５８１０１に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【0366】
従って、１つの実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含み、ここで、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、ＨＣＤＲ１'は、配列番号２５、２８、及び３１のいずれか１つ、好ましくは配列番号２５から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ２'は、配列番号２６、２９、及び３２のいずれか１つ、好ましくは配列番号２６から選択されるアミノ酸配列であり；ＨＣＤＲ３'は、配列番号２７、３０、及び３３のいずれか１つ、好ましくは配列番号２７から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ１'は、配列番号３８、４１、及び４４のいずれか１つ、好ましくは配列番号３８から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ２'は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つ、好ましくは配列番号３９から選択されるアミノ酸配列であり；ＬＣＤＲ３'は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つ、好ましくは配列番号４０から選択されるアミノ酸配列を有する］からの、１０個以下のアミノ酸置換、例えば、９個以下のアミノ酸置換、８個以下のアミノ酸置換、７個以下のアミノ酸置換、６個以下のアミノ酸置換、５個以下のアミノ酸置換、４個以下のアミノ酸置換、３個以下のアミノ酸置換、２個以下のアミノ酸置換、１個又は０個のアミノ酸置換、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。
【0367】
特に、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載されるＶＨ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特に、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインは、表１に記載されたＶＨ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＨ ＣＤＲを含む（あるいは、それから成る）。
【0368】
適切には本開示は、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインを提供し、ここで、前記第２ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２５、２８、及び３１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２６、２９、及び３２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号２７、３０、及び３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、前記第２ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。
【0369】
本開示はまた、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＬ ＣＤＲを含む（あるいは、それから成る）。
【0370】
適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含み、前記ＬＤＣＲ１は配列番号３８、４１、及び４４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。特に、前記第２ドメインは、それぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
【0371】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで：
【0372】
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２５、２８、及び３１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２６、２９、及び３２のいずれか１つから選択されるアミノ酸を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号２７、３０、及び３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；そして
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３８、４１、及び４４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３８、４１、及び４４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つから選択されるアミノ酸を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
【0373】
特に、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0374】
ＴＮＦαに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、そのＣＤＲ領域中で、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する本開示の他のドメインは、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域において、１、２、３、４、５、又は１０個以下のアミノ酸がアミノ酸の欠失、挿入、又は置換によって変異されている変異アミノ酸配列を含む。変異、例えば置換は、ＣＤＲのセット内の任意の残基で行われる可能性があり、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３内であってもよい。
【0375】
適切には、本開示の多重特異性抗体のＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２５、２８、及び３１のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２６、２９、及び３２のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号２７、３０、及び３３のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は、
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３８、４１、及び４４のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２５、２８、及び３１のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２６、２９、及び３２のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号２７、３０、及び３３のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は、
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３８、４１、及び４４のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３９、４２、及び４５のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号４０、４３、及び４６のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0376】
適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７の配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、及び／又は、それぞれ配列番号３８、３９、及び４０の配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【0377】
さらなる実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＢ及び軽鎖可変領域ＶＬＢを含む。
【0378】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＢを含み、前記ＶＨＢは、ＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ３、又はＶＨ４である。１つの実施態様において、本開示のＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＢを含み、ここで、前記ＶＨＢはＶＨ４である。好適な実施態様において、本開示のＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＢを含み、ここで、前記ＶＨＢはＶＨ３である。
【0379】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、軽鎖可変領域ＶＬＢを含み、前記ＶＬＢは、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１フレームワークＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４から選択される。適切なＶλ ＦＲ４は、配列番号９７～配列番号１０３に記載されるものである。１つの実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、配列番号９７～配列番号１０３のいずれか、好ましくは配列番号９７又は配列番号９８、より好ましくは配列番号９７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４を含む。
【0380】
従って、１つの実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、以下を含む：
（ａ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｂ）ＶＨＢ、ここで、前記ＶＨＢはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である；そして
（ｃ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬＢであって、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には、配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７～配列番号１０３のいずれかに記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
（ａ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｂ）ＶＨＢ、ここで、前記ＶＨＢはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３である；そして
（ｃ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬＢであって、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には、配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７～配列番号１０３のいずれかに記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
【0381】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載されたＶＨを含む。適切には、本開示はまた、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載されたＶＨアミノ酸配列を含み（又は、それからなり）、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約２０個以下のアミノ酸、好ましくは約１０個以下のアミノ酸は変異されている（ここで、変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。ＴＮＦαに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、表１に記載の配列に示されるＶＨ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。
【0382】
適切には本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載されたＶＬを含む。適切には、本開示はまた、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載されたＶＬアミノ酸配列を含み（又は、それからなり）、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）中の約２０個以下のアミノ酸、好ましくは約１０個以下のアミノ酸は変異されている（ここで、変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。ＴＮＦαに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、表１に記載の配列に示されるＶＬ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。
【0383】
１つの実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、配列番号３４、３５、３６、及び３７、好ましくは配列番号３４から成る群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。好適な実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、Ｇ５６Ａ、Ｒ８２Ｌ、Ｓ８５Ａ、Ｋ８６Ｑ（ＡＨｏ番号付け）を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むことができ、ここで、前記重鎖可変領域は、Ａ２４Ｋ、Ｇ５６Ａ、Ｒ８２Ｌ（ＡＨｏ番号付け）を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むことができ、ここで、前記重鎖可変領域は、Ｇ５６Ａ、Ｒ８２Ｌ、Ｓ８５Ａ、Ｋ８６Ｑ（ＡＨｏ番号付け）を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。
【0384】
別の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、配列番号４７、４８、４９、５０、及び５１、好ましくは配列番号４７から成る群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0385】
好適な実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号４７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記軽鎖可変領域は、Ｔ２２Ｎ、Ａ５１Ｒ、Ｆ８９Ｙ（ＡＨｏ番号付け）を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号４９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができ、ここで、前記軽鎖可変領域は、Ｔ２２Ｎ、Ｄ８８Ｅ、Ｓ９５Ｇ、Ｅ９９Ａ（ＡＨｏ番号付け）を含み、及び特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号５０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができ、ここで、前記軽鎖可変領域は、Ｔ２２Ｎ、Ａ５１Ｒ、Ｆ８９Ｙ、Ｓ９５Ｇ、Ｇ１４１Ｔ、Ｌ１４５Ｖ（ＡＨｏ番号付け）を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号５１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができ、ここで、前記軽鎖可変領域は、Ｔ２２Ｎ、Ｋ５０Ｑ、Ａ５１Ｒ、Ｆ８９Ｙ、Ｇ１４１Ｔ、Ｌ１４５Ｖ（ＡＨｏ番号付け）を含み、特に、前記ドメインはそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0386】
さらなる実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３４と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号４７と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0387】
好ましくは、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３４と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号４７と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びに／又はそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み、好ましくは、前記ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0388】
適切には、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３７と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列配列番号５０又は５１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びに／又はそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み、好ましくは、前記ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0389】
具体的な実施態様において、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、配列番号３４、３５、３６、及び３７から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／又は配列番号４７、４８、４９、５０、及び５１から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。特定の実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインは、配列番号３４のＶＨ配列、及び配列番号４７のＶＬ配列を含む。さらに別の特定の実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、配列番号３７のＶＨ配列及び配列番号５０又は配列番号５１のＶＬ配列を含む。
【0390】
１つの実施態様において、ヒトＴＮＦαに特異的に結合するドメインは、表１に記載されるドメインである。ヒトＴＮＦαに対する結合特異性を有する本開示の他のドメインは、アミノ酸又はアミノ酸をコードする核酸が変異されているが、表１に記載の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５％の同一性を有するドメインが含まれる。１つの実施態様において、これは、表１に記載された配列に示される可変領域と比較した場合、１、２、３、４、又は５個以下のアミノ酸が、可変領域において変異されているが、実質的に同じ活性を保持している変異アミノ酸配列を含む。
【0391】
さらに別の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、表１に記載の配列に相同的なアミノ酸配列を含み、前記ドメインはヒトＴＮＦαに結合し、表１に記載されているドメインの望ましい機能特性を保持している。
【0392】
１つの実施態様において、ＴＮＦαに特異的に結合する本開示のドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む軽鎖可変領域とを有し、これらのＣＤＲ配列の１つ以上は、本明細書に記載のドメイン又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、前記ドメインは、本開示の抗体の所望の機能特性を保持している。
【0393】
従って、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは、以下を含む（又はから成る）：
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であり、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号２５又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号２６又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；そして
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であり、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号３８又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号３９又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号４０又はその保存的変種を有する；
ここで、前記ドメインは、ヒトＴＮＦαに特異的に結合し、及び／又はＴＮＦαを中和する。
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であり、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号２５又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号２６又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列又はその保存的変種である；そして
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であり、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号３８又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号３９又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号４０又はその保存的変種を有する；
ここで、前記ドメインは、ヒトＴＮＦαに特異的に結合し、及び／又はＴＮＦαを中和する。
【0394】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に特異的に結合する例示的ドメイン
本開示の多重特異性抗体は、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含み、前記ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含む。
本開示の多重特異性抗体は、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含み、前記ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含む。
【0395】
適切には、本開示の多重特異性抗体は、第１ドメイン及び第２ドメインの特異性とは異なる第３の特異性を有する第３結合ドメインを含み得る。適切には、本開示の多重特異性抗体は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に特異的に結合する第３ドメインを含み得る。従って、１つの実施態様において、本開示の多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及びヒト血清アルブミンに特異的に結合する第３ドメインを含む。
【0396】
本開示の多重特異性抗体で使用するためのヒト血清アルブミンに特異的に結合する適切なドメインには、特に限定されるものではないが、その配列が表１に記載されているヒト化モノクローナル抗体又はその結合ドメインが含まれる。
【0397】
１つの実施態様において、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、ＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３）を含み、ここで、前記ＣＤＲのセットは、あるＣＤＲのセット［ここで、
（ａ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号５２に記載されているものであり、ＨＣＤＲ２'は、配列番号５３に記載されているものであり、ＨＣＤＲ３'は、配列番号５４に記載されているものであり、ＬＣＤＲ１'は、配列番号６２に記載されているものであり、ＬＣＤＲ２'は、配列番号６３に記載されているものであり、ＬＣＤＲ３'は、配列番号６４に記載されるものである；又は
（ｂ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号７３に記載されているものであり、ＨＣＤＲ２'は、配列番号７４に記載されているものであり、ＨＣＤＲ３'は、配列番号７５に記載されているものであり、ＬＣＤＲ１'は、配列番号８３に記載されているものであり、ＬＣＤＲ２'は、配列番号８４に記載されているものであり、ＬＣＤＲ３'は、配列番号８５に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換、例えば９個以下のアミノ酸置換、８個以下のアミノ酸置換、７個以下のアミノ酸置換、６個以下のアミノ酸置換、５個以下のアミノ酸置換、４個以下のアミノ酸置換、３個以下のアミノ酸置換、２個以下のアミノ酸置換、１又は０個のアミノ酸置換、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。
（ａ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号５２に記載されているものであり、ＨＣＤＲ２'は、配列番号５３に記載されているものであり、ＨＣＤＲ３'は、配列番号５４に記載されているものであり、ＬＣＤＲ１'は、配列番号６２に記載されているものであり、ＬＣＤＲ２'は、配列番号６３に記載されているものであり、ＬＣＤＲ３'は、配列番号６４に記載されるものである；又は
（ｂ）ＨＣＤＲ１'は、配列番号７３に記載されているものであり、ＨＣＤＲ２'は、配列番号７４に記載されているものであり、ＨＣＤＲ３'は、配列番号７５に記載されているものであり、ＬＣＤＲ１'は、配列番号８３に記載されているものであり、ＬＣＤＲ２'は、配列番号８４に記載されているものであり、ＬＣＤＲ３'は、配列番号８５に記載されるものである］からの、１０個以下のアミノ酸置換、例えば９個以下のアミノ酸置換、８個以下のアミノ酸置換、７個以下のアミノ酸置換、６個以下のアミノ酸置換、５個以下のアミノ酸置換、４個以下のアミノ酸置換、３個以下のアミノ酸置換、２個以下のアミノ酸置換、１又は０個のアミノ酸置換、好ましくは０個のアミノ酸置換を有する。
【0398】
特に、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する前記ドメインは、表１に記載されたＶＨ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特に本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記ドメインは、表１に記載されたＶＨ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＨ ＣＤＲを含む（あるいは、それから成る）。
【0399】
適切には、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ここで、前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ここで、
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５３、５６、及び５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４、５７、及び６０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｂ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号７３、７６、及び７９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７４、７７、及び８０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５、７８、及び８１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである。
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５３、５６、及び５９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４、５７、及び６０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｂ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号７３、７６、及び７９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７４、７７、及び８０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５、７８、及び８１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである。
【0400】
好適な実施態様において、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。別の実施態様において、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。
【0401】
適切には、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記ドメインは、表１に記載されたＶＬ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、又はそれ以上のＶＬ ＣＤＲを含む（又は、あるいは、それから成る）。
【0402】
適切には、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する前記ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含み、ここで、
（ａ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号６２、６５、及び６８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｂ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号８３、８６、及び８９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号８４、８７、及び９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号８５、８８、及び９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである。
（ａ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号６２、６５、及び６８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである；又は
（ｂ）前記ＬＣＤＲ１は、配列番号８３、８６、及び８９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号８４、８７、及び９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものであり、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号８５、８８、及び９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載されているものである。
【0403】
好適な実施態様において、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、それぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。別の実施態様において、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
【0404】
適切には本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５３、５６、及び５９のいずれか１つから選択される配列を有し、前記前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４、５７、及び６０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；及び、前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含み、前記ＬＳＣＲ１は、配列番号６２、６５、及び６８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＣＲ２は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｂ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号７３、７６、及び７９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７４、７７、及び８０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５、７８、及び８１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；及び、前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含み、前記ＬＳＣＲ１は、配列番号８３、８６、及び８９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＣＲ２は、配列番号８４、８７、及び９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＩＣＲ３は、配列番号８５、８８、及び９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５３、５６、及び５９のいずれか１つから選択される配列を有し、前記前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４、５７、及び６０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；及び、前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含み、前記ＬＳＣＲ１は、配列番号６２、６５、及び６８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＣＲ２は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；又は
（ｂ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号７３、７６、及び７９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７４、７７、及び８０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５、７８、及び８１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する；及び、前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３を含み、前記ＬＳＣＲ１は、配列番号８３、８６、及び８９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＣＲ２は、配列番号８４、８７、及び９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＬＤＩＣＲ３は、配列番号８５、８８、及び９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有する。
【0405】
好適な実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。別の実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、及び（ｂ）それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0406】
ＨＳＡに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、そのＣＤＲ領域中で、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。適切には、ＨＳＡに特異的に結合する本開示の他のドメインは、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域において、１、２、３、４、５、又は１０個以下のアミノ酸がアミノ酸の欠失、挿入、又は置換によって変異されている変異アミノ酸配列を含む。変異、例えば置換がＣＤＲのセット内の任意の残基で行われる可能性があり、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３内であってもよい。
【0407】
適切には、本開示の多重特異性抗体のＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５３、５６、及び５９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４、５７、及び６０のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号６２、６５、及び６８のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号５２、５５、及び５８のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５３、５６、及び５９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４、５７、及び６０のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号６２、６５、及び６８のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号６３、６６、及び６９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号６４、６７、及び７０のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0408】
適切には、前記多重特異性抗体は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含み、ここで、前記第３ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４の配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％の同一性を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び／又は、それぞれ配列番号６２、６３、及び６４の配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【0409】
適切には、本開示の多重特異性抗体のＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号７３、７６、及び７９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７４、７７、及び８０のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５、７８、及び８１のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号８３、８６、及び８９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号８４、８７、及び９０のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号８５、８８、及び９１のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
（ａ）前記ＶＨは、順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号７３、７６、及び７９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７４、７７、及び８０のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５、７８、及び８１のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する；及び／又は
（ｂ）前記ＶＬは、順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号８３、８６、及び８９のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号８４、８７、及び９０のいずれか１つと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号８５、８８、及び９１のいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0410】
適切には、前記多重特異性抗体は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含み、前記第３ドメインは、それぞれ配列番号７３、７４、及び７５の配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、及び／又は、それぞれ配列番号８３、８４、及び８５の配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【0411】
さらなる実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＣ及び軽鎖可変領域ＶＬＣを含む。
【0412】
適切には本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＣを含み、前記ＶＨＣは、ＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ３、又はＶＨ４である。１つの実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合する本開示の第３ドメインは重鎖可変領域ＶＨＣを含み、ここで、前記ＶＨＣはＶＨ４である。好適な実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合する本開示の第３ドメインは、重鎖可変領域ＶＨＣを含み、ここで、前記ＶＨＣはＶＨ３である。
【0413】
適切には本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、軽鎖可変領域ＶＬＣを含み、前記ＶＬＣは、ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１フレームワークＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含み、前記ＦＲ４は、Ｖλ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４から選択される。適切なＶλ ＦＲ４は、配列番号９７～配列番号１０３に記載されるものである。１つの実施態様において、前記第３ドメインは、配列番号９７～配列番号１０３のいずれか、好ましくは配列番号９７又は配列番号９８、より好ましくは配列番号９７のいずれかから選択されるアミノ酸配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４を含む。適切には、前記第３ドメインは、配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４を含む。
【0414】
従って、好適な実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、以下を含む：
（ａ）それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｂ）ＶＨＣであって、ここで、前記ＶＨＣはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３であり；そして
（ｃ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬＣであって、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７～配列番号１０３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
（ａ）それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｂ）ＶＨＣであって、ここで、前記ＶＨＣはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３であり；そして
（ｃ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬＣであって、ここで、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７～配列番号１０３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８に記載のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
【0415】
さらなる実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、以下を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）ＶＨＣであって、ここで、前記ＶＨＣはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３であり；そして
（ｉｉｉ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬＣであって、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７～配列番号１０３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
（ｉ）それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）ＶＨＣであって、ここで、前記ＶＨＣはＶＨ３又はＶＨ４、好ましくはＶＨ３であり；そして
（ｉｉｉ）ＶκフレームワークＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３、詳細にはＶκ１又はＶκ３ ＦＲ１～ＦＲ３、好ましくはＶκ１ ＦＲ１～ＦＲ３、及びフレームワークＦＲ４を含むＶＬフレームワークを含むＶＬＣであって、前記フレームワークＦＲ４は、Ｖκ ＦＲ４、詳細にはＶκ１ ＦＲ４、Ｖκ３ ＦＲ４、及びＶλ ＦＲ４、詳細には配列番号９７～配列番号１０３のいずれかから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０、７０、８０、９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７～配列番号１０３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に記載のＶλ ＦＲ４、好ましくは配列番号９７又は９８のＶλ ＦＲ４、より好ましくは配列番号９８に記載のＶλ ＦＲ４から選択される。
【0416】
適切には本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは表１に記載されたＶＨを含む。適切には本開示はまた、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、表１に記載されたＶＨアミノ酸配列を含み（又は、あるいはそれからなり）、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）において、約２０個以下のアミノ酸、好ましくは約１０ア個以下のミノ酸が変異されている（変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。ＨＳＡに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、ＶＨ領域において表１に記載の配列に示されているＶＨ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。
【0417】
適切には本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、表１に記載されたＶＬドメインを含む。適切には本開示はまた、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、表１に記載されたＶＬアミノ酸配列を含み（又は、あるいはそれからなり）、ここで、フレームワーク配列（例えば、ＣＤＲではない配列）において、約２０個以下のアミノ酸、好ましくは約１０ア個以下のミノ酸が変異されている（変異は、様々な非限定的な例として、付加、置換、又は欠失である）。ＨＳＡに特異的に結合する本開示の他のドメインは、変異されているが、ＶＬ領域において表１に記載の配列に示されているＶＬ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性を有するアミノ酸を含む。
【0418】
１つの実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号６１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に、ここで前記ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。
【0419】
別の実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号７１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特に、ここで前記ドメインは、それぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0420】
さらなる実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号６１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み；及び、アミノ酸配列配列番号７１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0421】
好適な実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号６１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み；及び、アミノ酸配列配列番号７１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み；ここで前記ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びに／又はそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み、好ましくは前記ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0422】
特定の実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号６１を含むＶＨ、及び／又はアミノ酸配列配列番号７１を含むＶＬを含む。好適な実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインは、配列番号６１のＶＨ配列、及び配列番号７１のＶＬ配列を含む。
【0423】
さらに別の実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号８２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、特に、前記ドメインは、それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む。
【0424】
別の実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号９２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、特にここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0425】
さらなる実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号８２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号９２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0426】
好適な実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号８２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号９２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、及び、前記ドメインは、それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びに／又はそれぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み、好ましくは前記ドメインは、それぞれ配列番号７３、７４、及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号８３、８４、及び８５のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む。
【0427】
特定の実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号８２を含むＶＨ、及び／又はアミノ酸配列配列番号９２を含むそのＶＬを含む。好適な実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合する前記第３ドメインは、配列番号８２のＶＨ配列、及び配列番号９２のＶＬ配列を含む
【0428】
１つの実施態様において、ヒト血清アルブミンに特異的に結合するドメインは、表１に記載されているドメインである。１つの実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合するドメインは、配列番号７２及び９３から成る群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号７２と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％と同一であるアミノ酸配列を含む。１つの実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合ドメインは、配列番号７２又は配列番号９３、好ましくは配列番号７２に記載されるものである。
【0429】
ＨＳＡに対する結合特異性を有する本開示の他のドメインは、アミノ酸又はアミノ酸をコードする核酸は変異されているが、表１に記載の配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５％の同一性を有するドメインを含む。１つの実施態様において、これは、表１に記載の配列に示される可変領域と比較した場合に、可変領域において１、２、３、４、又は５個以下のアミノ酸が変異されているが、実質的に同じ活性を保持している変異アミノ酸配列を含む。
【0430】
さらに別の実施態様において本開示は、特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、表１に記載の配列に相同的なアミノ酸配列を含み、前記ドメインは、ヒト血清アルブミンに結合し、表１に記載されているそれらのドメインの望ましい機能特性を保持している。
【0431】
１つの実施態様において、ＨＳＡに特異的に結合する本開示のドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＬＣＤＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含む軽鎖可変領域を有し、ここで、これらのＣＤＲ配列の１つ以上は、本明細書に記載のドメイン又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、前記ドメインは、本開示の抗体の所望の機能特性を保持している。
【0432】
従って、本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、以下を含む（又はから成る）：
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号５２又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号５３又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４のいずれか１つ、又はその保存的変種から選択されるアミノ酸配列である；そして
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号６２又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号６３又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号６４又はその保存的変種を有する；
ここで、前記ドメインは、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する。
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号５２又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号５３又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号５４のいずれか１つ、又はその保存的変種から選択されるアミノ酸配列である；そして
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号６２又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号６３又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号６４又はその保存的変種を有する；
ここで、前記ドメインは、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する。
【0433】
本開示はまた、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは、以下を含む（又はから成る）：
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号７３又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号７４又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５のいずれか１つ、又はその保存的変種から選択されるアミノ酸配列である；そして
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号８３又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号８４又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号８５又はその保存的変種を有する；
ここで、前記ドメインは、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する。
順に３つの相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号７３又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号７４又はその保存的変種であり、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７５のいずれか１つ、又はその保存的変種から選択されるアミノ酸配列である；そして
順に３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列配列番号８３又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列配列番号８４又はその保存的変種であり、前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列配列番号８５又はその保存的変種を有する；
ここで、前記ドメインは、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する。
【0434】
本開示の多重特異性抗体のさらなるドメイン
さらに本開示の多重特異性抗体で使用するのに適したドメインは、特に限定されるものではないが、その配列が表１に記載され、さらに改変された（その改変バージョン）抗体又はその結合ドメインを含む。
さらに本開示の多重特異性抗体で使用するのに適したドメインは、特に限定されるものではないが、その配列が表１に記載され、さらに改変された（その改変バージョン）抗体又はその結合ドメインを含む。
【0435】
１つの実施態様において、前記多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含み、ここで、前記第１ドメインは、哺乳動物細胞における発現のために最適化されており、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを有し、これらの配列の１つ以上は、本明細書に記載のドメイン又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、前記ドメインは、本開示のドメインの所望の機能特性を保持している。
【0436】
１つの実施態様において、前記多重特異性抗体は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含み、ここで、前記第２ドメインは、哺乳動物細胞における発現のために最適化されており、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを有し、これらの配列の１つ以上は、本明細書に記載のドメイン又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、前記ドメインは、本開示のドメインの所望の機能特性を保持している。
【0437】
１つの実施態様において、前記多重特異性抗体は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含み、前記第３ドメインは、哺乳動物細胞における発現に最適化されており、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを有し、これらの配列の１つ以上は、本明細書に記載のドメイン又はその保存的修飾物に基づく特定のアミノ酸配列を有し、前記ドメインは、本開示のドメインの所望の機能特性を保持している。
【0438】
本明細書で使用される「最適化された」という用語は、産生細胞又は生物、一般に真核細胞、例えば、ピキア（Pichia）の細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、又はヒト細胞において好ましいコドンを使用して、ヌクレオチド配列がアミノ酸配列をコードするように変更されていることを意味する。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている開始ヌクレオチド配列によって最初にコードされたアミノ酸配列を、完全に又は可能な限り保持するように工学作成されている。本明細書の最適化された配列は、哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように工学作成されている。しかしながら、他の真核細胞又は原核細胞におけるこれらの配列の最適化された発現もまた、本明細書において想定される。最適化されたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列もまた、最適化されたと呼ばれる。
【0439】
従って、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは哺乳動物細胞における発現用に最適化され、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、配列番号１０及び１１のいずれかから選択されるアミノ酸配列及びそれらの保存的修飾物を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２１及び２２のいずれかから選択されるアミノ酸配列及びそれらの保存的修飾物を含み、ここで、前記第１ドメインは、ヒトＩＬ－１７Ａに特異的に結合し、及び／又はＩＬ－１７Ａを中和する。
【0440】
従って、本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第２ドメインは哺乳動物細胞における発現用に最適化され、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、配列番号３４、３５、３６、及び３７のいずれかから選択されるアミノ酸配列、及びそれらの保存的修飾物を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４７、４８、４９、５０、及び５１のいずれかから選択されるアミノ酸配列、及びそれらの保存的修飾物を含み、ここで、前記ドメインは、ヒトＴＮＦαに特異的に結合し、及び／又はＴＮＦαを中和する。
【0441】
従って、本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは哺乳動物細胞における発現用に最適化されており、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、配列番号６１及び配列番号８２のいずれかから選択されるアミノ酸配列、及びそれらの保存的修飾物を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７１及び配列番号９２のいずれかから選択されるアミノ酸配列、及びそれらの保存的修飾物を含み、ここで、前記ドメインは、ヒト血清アルブミンに特異的に結合する。
【0442】
別のタイプの可変領域の修飾は、ＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させて、それによって「親和性成熟」として知られる目的の抗体の１つ以上の結合特性（例えば親和性）を改良することである。部位特異的変異誘発又はＰＣＲ介在変異誘発を実施して変異を導入することができ、抗体結合に対する効果、又は目的の他の機能特性を、本明細書に記載され実施例に提供されているインビトロ又はインビボアッセイで評価することができる。保存的修飾（前述）を導入することができる。突然変異は、アミノ酸の置換、付加、又は欠失であり得る。さらに、通常、ＣＤＲ領域内の１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つ以下の残基が改変される。
【0443】
「親和性成熟」抗体は、その１つ以上の可変ドメインに１つ以上の改変を有するものであり、それらの改変を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改良をもたらす。１つの実施態様において、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル又はさらにはピコモルの親和性さえも有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で知られている手順によって産生される。例えば、Marks et al, Bio/Technology 10:779-783 (1992) は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟について説明している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば、Barbas et al. Proc Natl. Acad. Sci. U.S.A 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Jackson et al, J. Immunol. 154(7):3310- 9 (1995); 及び Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992) に記載されている。従って本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメインとＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメインとを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第１ドメインは親和性成熟ドメインであり、及び／又は前記第２ドメインは親和性成熟ドメインである。さらなる実施態様において本開示は、ＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインをさらに含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記第３ドメインは親和性成熟ドメインである。
【0444】
本開示の抗体はさらに、改変抗体を工学作成するための出発物質として本明細書に示される１つ以上のＶＨ及び／又はＶＬ配列を有する抗体を使用して調製することができ、この改変抗体は、出発抗体から改変された特性を有し得る。抗体は、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内及び／又は１つ以上のフレームワーク領域内の、１つ又は両方の可変領域（すなわち、ＶＨ及び／又はＶＬ）内の１つ以上の残基を修飾することによって工学作成することができる。追加的又は代替的に、抗体は、例えば抗体のエフェクター機能を改変するために、定常領域内の残基を修飾することによって工学作成することができる。
【0445】
実施できる可変領域の工学作成の１つのタイプは、ＣＤＲ移植である。抗体は、主に６つの重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）内にあるアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列よりも個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体－抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体からのフレームワーク配列に移植された特定の天然抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることができる（例えば、Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522- 525; Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 10029-10033; Winterの米国特許第５，２２５，５３９号, 及びQueen et al.の米国特許第５，５３０，１０１号、第５，第５８５，０８９号、第５，６９３，７６２号、及び第６，１８０，３７０号を参照）。
【0446】
そのようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列又は再構成された抗体配列を含む公開ＤＮＡデータベース又は公開された参考文献から取得することができる。例えば、ヒトの重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネットのwww.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseで入手可能）、並びにKabat, E. A., et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. fol. Biol. 227:776-798; and Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836中に存在し、これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。例えば、ヒトの重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列及び再構成された抗体配列は、「ＩＭＧＴ」データベース（インターネットのwww.imgt.orgで入手可能。Lefranc, M.P. et al., 1999 Nucleic Acids Res. 27:209-212を参照、これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる）中に存在する。
【0447】
本開示の多重特異性抗体の結合ドメインで使用するためのフレームワーク配列の例は、本開示の選択されたドメインによって使用されるフレームワーク配列に構造的に類似するもの、例えば、本開示のドメインによって使用されるコンセンサス配列及び／又はフレームワーク配列である。ＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３配列、及びＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子に見られるものと同一の配列を有するフレームワーク領域に移植することができるか、又は前記ＣＤＲ配列は、生殖細胞系配列と比較して１つ以上の変異を含むフレームワーク領域に移植することができる。例えば特定の例において、抗体の抗原結合能力を維持又は増強するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であることが見出された（例えば、Queen et al.の米国特許第５，５３０，１０１号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６２号、及び第６，１８０，３７０号を参照）。
【0448】
本開示の例示的な多重特異性抗体
特定の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及び任意選択的にＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、（ｉ）前記第１ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み、及び（ｉｉ）前記第２ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み、及び（ｉｉｉ）任意選択的に、前記第３ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
特定の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及び任意選択的にＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、（ｉ）前記第１ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み、及び（ｉｉ）前記第２ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、及びＬＤＣＲ３配列を含み、及び（ｉｉｉ）任意選択的に、前記第３ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0449】
より具体的な実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及び任意選択的にＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、
（ｉ）本開示の多重特異性抗体のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む；そして
（ｉｉ）ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３４と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号４７と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む；そして
（ｉｉｉ）任意選択的に、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号６１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号７１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む
（ｉ）本開示の多重特異性抗体のＩＬ－１７Ａに特異的に結合する前記第１ドメインは、アミノ酸配列配列番号１０と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号２１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む；そして
（ｉｉ）ＴＮＦαに特異的に結合する前記第２ドメインは、アミノ酸配列配列番号３４と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号４７と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む；そして
（ｉｉｉ）任意選択的に、前記第３ドメインは、アミノ酸配列配列番号６１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びアミノ酸配列配列番号７１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、前記ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む
【0450】
特定の実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及びＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記多重特異性抗体は、配列番号１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、及び１２４のいずれか、好ましくは配列番号１１９から選択される配列と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、特に、ここで
（ａ）前記第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み；
（ｂ）前記第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み；そして
（ｃ）前記第３の結合ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
（ａ）前記第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号１２、１３、及び１４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み；
（ｂ）前記第２の結合ドメインは、それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号３８、３９、及び４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含み；そして
（ｃ）前記第３の結合ドメインは、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号６２、６３、及び６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含む。
【0451】
より具体的な実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａに特異的に結合する第１ドメイン、ＴＮＦαに特異的に結合する第２ドメイン、及びＨＳＡに特異的に結合する第３ドメインを含む多重特異性抗体を提供し、ここで、前記多重特異性抗体は、配列番号１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、及び１２４のいずれか、好ましくは配列番号１１９から選択される配列を含む（又は、から成る）。
【0452】
本開示の追加の多重特異性分子
本開示はまた、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体と、少なくとも別の特異性、例えば二重特異性分子、三重特異性分子、四重特異性、五重特異性、六重特異性分子とを含む多重特異性分子である抗体を提供する。
本開示はまた、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体と、少なくとも別の特異性、例えば二重特異性分子、三重特異性分子、四重特異性、五重特異性、六重特異性分子とを含む多重特異性分子である抗体を提供する。
【0453】
本明細書で使用される「多重特異性分子」又は「多重特異性抗体」という用語は、少なくとも２つ以上の異なる標的（例えば、ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－１７Ａとは異なる別の標的）上の２つ以上の異なるエピトープに結合する抗体、又は同じ標的の２つ以上の異なるエピトープに結合する抗体を指す。
【0454】
「多重特異性分子」という用語は、二重特異性、三重特異性、四重特異性、五重特異性、六重特異性抗体を含む。本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、２つの異なる標的又は同じ標的上の２つの異なるエピトープに結合する抗体を指す。本明細書で使用される「三重特異性抗体」という用語は、３つの異なる標的又は同じ標的上の３つの異なるエピトープに結合する抗体を指す。
【0455】
本開示の抗体は、別の機能性分子、例えば別のペプチド又はタンパク質（例えば、別の抗体、又は受容体に対するリガンド）に誘導体化又は連結して、少なくとも２つの結合部位に及び／又は異なる標的に結合する多重特異性分子を生成することができる。本開示の抗体は、実際には、誘導体化、又は２つ以上の他の機能的分子に連結して、３つ以上の異なる結合部位に及び／又は標的分子に結合する多重特異性分子を生成し得る。本開示の多重特異性分子を作成するために、本開示の抗体は、別の抗体、ペプチド、又は結合模倣物などの１つ以上の他の結合分子に機能的に連結（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合などによって）して、多重特異性分子が生じることができる。
【0456】
従って、本開示は、ＩＬ－１７Ａに対する少なくとも１つの第１の結合特異性、及び第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む多重特異性分子を含む。例えば、第２の標的エピトープは、ＩＬ－１７Ａとは異なる別の標的分子に存在する。従って本開示は、ＩＬ－１７Ａに対する少なくとも１つの第１の結合特異性及び第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む多重特異性分子を含む。例えば第２の標的エピトープは、第１の標的エピトープとは異なるＩＬ－１７Ａの別のエピトープである。多重特異性分子は、第１及び第２の標的エピトープに加えて、第３の結合特異性をさらに含むことができる。
【0457】
さらなる実施態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ特異性について一価、二価、又は多価、好ましくは一価の多重特異性分子を含む。
【0458】
本開示の別の具体的な実施態様において、本開示の抗体は、ＩＬ－１７Ａ特異性分子に対して一価又は多価、例えば二価、三価、四価、五価、六価である。
【0459】
本明細書で使用される「一価分子」又は「一価抗体」という用語は、ＩＬ－１７Ａなどの標的分子上の単一のエピトープに結合する単一の抗原結合部分を有する抗体を指す。
【0460】
「多価抗体」という用語は、複数の原子価を有する単一の結合分子を指し、「原子価」は、同一の標的分子上のエピトープに結合する抗原結合部分の数として説明される。従って、単一の結合分子は、エピトープの複数のコピーを含有する標的分子上の複数の分子又は複数の結合部位に結合することができる。多価抗体の例には、特に限定されるものではないが、二価抗体、三価抗体、四価抗体、五価抗体などが含まれる。本明細書で使用される「二価抗体」という用語は、それぞれが同一のエピトープに結合する２つの抗原結合部分を有する抗体を指す。
【0461】
適切には、本開示の多重特異性分子、例えば、二重特異性分子、及び／又は多価分子、例えば、ＩＬ－１７Ａに対して一価特異性分子、ＩＬ－１７Ａに対して二価特異性分子は、当技術分野で公知の任意の適切な多重特異性形式、例えば二重特異性形式から選択される抗体形式であり、例えば、非限定例として、１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線形二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ－ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ－ｓｃＤｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ；タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ）、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、トリボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）又はバイボディ（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1）、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、モリソン（ＩｇＧ ＣＨ３－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＬ）又はＩｇＧ ＣＬ－ｓｃＦｖ融合体（モリソンＨ））、トリアボディ、ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ、二重特異性Ｆａｂ2、ジミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合体、ｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ融合体、ジダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＣＯＶＤ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆｖ2－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、例えばｂｓＡｂ（軽鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ１Ａｂ（軽鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ２Ａｂ（重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｂｓ３Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ１Ａｂ（重鎖と軽鎖の両方のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ）、Ｔｓ２Ａｂ（重鎖のＣ末端に連結されたｄｓｓｃＦｖ）、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに基づく二重特異性抗体、例えばＫｎｏｂ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ抗体（ＫｉＨ）（ＫｉＨテクノロジーによって調製された二重特異性ＩｇＧ）；Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＤｂ、タンデム－ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2、Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）1、Ｆａｂ、Ｆａｂ－Ｆｖ2、ヘテロ二量体Ｆｃドメイン又は任意の他のヘテロ二量体化ドメインのいずれか鎖のＮ末端及び／又はＣ末端に融合したＣＯＶＤ、ＭＡＴＣＨ（ＷＯ２０１６／０２０２４５７；Egan T., et al., mAbs 9 (2017) 68-84に記載）、及びデュオボディ（デュオボディ技術により調製された二重特異性ＩｇＧ）（MAbs. 2017 Feb/Mar;9(2):182-212. doi: 10.1080/19420862.2016.1268307）に基づく形式が含まれる。本明細書における使用に特に適しているのは、１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）又はｓｃＤｂ－ｓｃＦｖである。
【0462】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖内のＶＬに接続されたＶＨ（ＶＨ－ＶＬ）を含む。 同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは別の鎖の相補的ドメインとの対合を強制され、２つの抗原結合部位が作成される。 ダイアボディは二価又は二重特異性でもよい。ダイアボディは、例えばＥＰ４０４０９７、ＷＯ９３／０１１６１、Nat. Med. 9:129-134 (2003), and Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6444-6448 (1993)に、より詳細に記載されている。トリアボディ及びテトラボディもまた、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。「ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ」という用語は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片が柔軟なＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーに融合されて単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）になる抗体の形式を指す。
【0463】
二重特異性ｓｃＤｂ、詳細には二重特異性単量体ｓｃＤｂは、特に、リンカーＬ１、Ｌ２及びＬ３によって、ＶＨＡ－Ｌ１－ＶＬＢ－Ｌ２－ＶＨＢ－Ｌ３－ＶＬＡ、ＶＨＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＬＡ、ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＬＢ－Ｌ２－ＶＨＢ－Ｌ３－ＶＨＡ、ＶＬＡ－Ｌ１－ＶＨＢ－Ｌ２－ＶＬＢ－Ｌ３－ＶＨＡ、ＶＨＢ－Ｌ１－ＶＬＡ－Ｌ２－ＶＨＡ－Ｌ３－ＶＬＢ、ＶＨＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＬＢ、ＶＬＢ－Ｌ１－ＶＬＡ－Ｌ２－ＶＨＡ－Ｌ３－ＶＨＢ、又はＶＬＢ－Ｌ１－ＶＨＡ－Ｌ２－ＶＬＡ－Ｌ３－ＶＨＢの順序で接続された、２つの可変重鎖ドメイン（ＶＨ）又はその断片と２つの可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）又はその断片を含み、ここで、ＶＬＡ及びＶＨＡドメインは一緒に第１の抗原の抗原結合部位を形成し、ＶＬＢ及びＶＨＢは一緒に第２の抗原の抗原結合部位を形成する。
【0464】
リンカーＬ１は、詳細には２～１０個のアミノ酸、より詳細には３～７個のアミノ酸、最も詳細には５個のアミノ酸のペプチドであり、リンカーＬ３は、詳細には１～１０個のアミノ酸、より詳細には２～７個のアミノ酸、最も詳細には５個のアミノ酸のペプチドである。中間リンカーＬ２は、詳細には１０～４０個のアミノ酸、より詳細には１５～３０個のアミノ酸、そして最も詳細には２０～２５個のアミノ酸のペプチドである。
【0465】
１つの実施態様において、本開示の多重特異性及び／又は多価分子は、ＷＯ２０１３／０２０２４５７；Egan T., et al., mAbs 9 (2017) 68-84に記載されているＭＡＴＣＨ形式である。
【0466】
本開示の多重特異性及び／又は多価分子は、当技術分野で知られている任意の便利な抗体製造方法を使用して生成することができる（例えば、二重特異性構築物の製造については、Fischer, N. & Leger, O., Pathobiology 74 (2007) 3-14；及び二重特異性ダイアボディ及びタンデムｓｃＦｖについては、Hornig, N. & Farber-Schwarz, A., Methods Mol. Biol. 907 (2012)713-727、及びＷＯ９９／５７１５０を参照）。本開示の二重特異性構築物を調製するための適切な方法の具体例には、特に、Genmab（Labrijn et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110 (2013) 5145-5150を参照）及び Merus（de Kruif et al., Biotechnol. Bioeng. 106 (2010) 741-750を参照）技術がある。機能的抗体Ｆｃ部分を含む二重特異性抗体の製造方法も当技術分野で知られている（例えば、Zhu et al., Cancer Lett. 86 (1994) 127-134；及び Suresh et al., Methods Enzymol. 121 (1986) 210-228を参照）
【0467】
本開示の多重特異性及び多価分子で使用することができる他の抗体は、マウス、キメラ、及びヒト化モノクローナル抗体である。
【0468】
本開示の多重特異性分子は、当技術分野で知られている方法を使用して、構成要素の結合特異性物を結合することによって調製することができる。例えば、二重特異性分子の各結合特異性物は、別々に生成し、次に互いに結合することができる。結合特異性物がタンパク質又はペプチドである場合、様々なカプリング剤又は架橋剤を共有結合に使用することができる。架橋剤の例には、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５'－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、及びスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）が含まれる（例えば、Karpovsky et al., 1984 J. Exp. Med. 160: 1686; Liu, M A et al., 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:8648を参照）。他の方法には、Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78, 118-132; Brennan et al., 1985 Science 229:81-83, 及び Glennie et al., 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375 に記載されたものがある。カプリング剤はＳＡＴＡ及びスルホ－ＳＭＣＣであり、いずれも Pierce Chemical Co. (Rockford, 111.) から入手することができる。
【0469】
結合特異性物が抗体である場合、それらは、２本の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によって結合することができる。具体的な実施態様において、ヒンジ領域は、結合の前に、奇数、例えば１つのスルフヒドリル残基を含むように修飾される。
【0470】
あるいは、２つ以上の結合特異性物を同じベクターにコードし、同じ宿主細胞で発現させ、組み立てることができる。この方法は、二重特異性分子がｍＡｂ Ｘ ｍＡｂ、ｍＡｂ Ｘ Ｆａｂ、Ｆａｂ Ｘ Ｆ（ａｂ'）2、又はリガンドＸ Ｆａｂ融合タンパク質である場合に特に有用である。適切には、本開示の多重特異性分子は、１つの１本鎖抗体及び結合決定基を含む１本鎖分子、又は２つの結合決定基を含む１本鎖多重特異性分子であり得る。多重特異性分子は、少なくとも２つの１本鎖分子を含み得る。多重特異性分子を調製するための方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号；米国特許第５，４５５，０３０号；米国特許第４，８８１，１７５号；米国特許第５，１３２，４０５号；米国特許第５，０９１，５１３号；米国特許第５，４７６，７８６号；米国特許第５，０１３，６５３号；米国特許第５，２５８，４９８号；及び米国特許第５，４８２，８５８号に記載されている。
【0471】
多重特異性分子のそれらの特異的標的への結合は、例えば酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、増殖阻害）、又はウエスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらの測定法のそれぞれは、一般に、目的の複合体に特異的な標識試薬（例えば抗体）を使用することによって、特に目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。
【0472】
本開示の核酸、ベクター、宿主細胞、及び製造方法
さらなる態様において本開示は、本開示の抗体又はその断片又は抗原結合断片をコードする核酸を提供する。本開示はまた、ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合するＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、及びそれらの抗原結合断片をコードする核酸配列を提供する。本開示はまた、ＴＮＦαタンパク質に特異的に結合するＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、及びそれらの抗原結合断片をコードする核酸配列を提供する。本開示はまた、ＨＳＡタンパク質に特異的に結合するＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、及びそれらの抗原結合断片をコードする核酸配列を提供する。このような核酸配列は、哺乳動物細胞における発現のために最適化することができる。
さらなる態様において本開示は、本開示の抗体又はその断片又は抗原結合断片をコードする核酸を提供する。本開示はまた、ＩＬ－１７Ａタンパク質に特異的に結合するＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、及びそれらの抗原結合断片をコードする核酸配列を提供する。本開示はまた、ＴＮＦαタンパク質に特異的に結合するＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、及びそれらの抗原結合断片をコードする核酸配列を提供する。本開示はまた、ＨＳＡタンパク質に特異的に結合するＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、及びそれらの抗原結合断片をコードする核酸配列を提供する。このような核酸配列は、哺乳動物細胞における発現のために最適化することができる。
【0473】
「核酸」という用語は、本明細書では「ポリヌクレオチド」という用語と互換的に使用され、１本鎖又は二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びそれらのポリマーを指す。この用語は、既知のヌクレオチド類似体又は修飾された骨格残基又は結合を含む核酸を包含し、これらは、合成物、天然物、及び非天然物であり、参照核酸と同様の結合特性を有し、そして参照ヌクレオチドと同様の方法で代謝される。そのような類似体の例には、特に限定されるものではないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホレート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド－核酸（ＰＮＡ）が含まれる。他に明記しない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に修飾された変種（例えば縮重コドン置換物）及び相補的配列、並びに明示的に示された配列も暗黙的に包含する。具体的には、以下に詳述するように、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又はすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換される配列を生成することによって達成され得る（Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; 及びRossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994）。
【0474】
本開示は、上記の多重特異性抗体鎖のセグメント又はドメイン、及び／又は上記のＩＬ－１７Ａ結合抗体鎖のセグメント又はドメインを含むポリペプチドをコードする、実質的に精製された核酸分子を提供する。適切な発現ベクターから発現される場合、これらの核酸分子によってコードされるポリペプチドは、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦα及び／又はＨＳＡ抗原結合能力を示すことができる。
【0475】
表１に示されるＩＬ－１７Ａ結合抗体の、表１に示されるＴＮＦα結合ドメインの、又は表１に示されるＨＳＡ結合ドメインの、重鎖又は軽鎖からの、少なくとも１つのＣＤＲ領域及び通常は３つすべてのＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示において提供される。いくつかの他のポリヌクレオチドは、表１に示されるＩＬ－１７Ａ結合抗体の、表１に示されるＴＮＦα結合ドメインの、又は表１に示されるＨＳＡ結合ドメインの、重鎖及び／又は軽鎖の可変領域配列のすべて又は実質的にすべてをコードする。コードの縮重のために、様々な核酸配列が免疫グロブリンアミノ酸配列のそれぞれをコードするであろう。
【0476】
ポリヌクレオチド配列は、表１に示されるＩＬ－１７Ａ結合抗体、表１に示されるＴＮＦα結合ドメイン、又は表１に示されるＨＳＡ結合ドメインをコードする既存の配列（例えば、以下の実施例に記載される配列）の、新規の固相ＤＮＡ合成又はＰＣＲ突然変異誘発によって製造することができる。核酸の直接化学合成は、当技術分野で知られている方法、例えばNarang et al., 1979, Meth. Enzymol. 68:90のホスホトリエステル法；Brown et al., Meth. Enzymol. 68: 109, 1979 のホスホジエステル法；Beaucage et al., Tetra. Lett., 22: 1859, 1981のジエチルホスホルアミダイト法；及び、米国特許第４，４５８，０６６号の固体支持体法などによって達成することができる。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入は、例えば、PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H. A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, N.Y., 1992; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, Calif, 1990; Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991; 及び Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991に記載されているように実施することができる。
【0477】
本開示の抗体を産生するための発現ベクター及び宿主細胞もまた本開示において提供される。
【0478】
「ベクター」という用語は、それが連結されている別のポリヌクレオチドを輸送することができるポリヌクレオチド分子を指すことを意図している。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得る。いくつかのベクターは、それらが導入された宿主細胞において自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター、及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それにより、宿主ゲノムと共に複製される。
【0479】
さらに、いくつかのベクターは、それらが機能的に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形式であるため、「プラスミド」及び「ベクター」を互換的に使用することができる。しかしながら、本開示は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などのそのような他の形態の発現ベクターを含むことを意図している。
【0480】
「機能できる形で結合している」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。典型的には、これは、転写調節配列と転写された配列との機能的関係を指す。例えば、プロモーター又はエンハンサー配列は、それが適切な宿主細胞又は他の発現系におけるコード配列の転写を刺激又は調節する場合、コード配列に機能できる形で結合している。一般に、転写された配列に機能できる形で結合しているプロモーター転写調節配列は、転写された配列に物理的に隣接しており、すなわち、それらはシス作用性である。ただし、エンハンサーなどの一部の転写調節配列は、物理的に隣接している必要も、その転写が増強されるコード配列に近接して配置されている必要もない。
【0481】
本開示の抗体をコードするポリヌクレオチドを発現するために、様々な発現ベクターを使用することができる。ウイルスベースの発現ベクターと非ウイルス発現ベクターの両方を使用して、哺乳動物宿主細胞で抗体を産生することができる。非ウイルスベクター及びシステムには、プラスミド、典型的にはタンパク質又はＲＮＡを発現するための発現カセットを有するエピソームベクター、及びヒト人工染色体が含まれる（例えば、Harrington et al., Nat Genet. 15:345, 1997を参照）。例えば、哺乳動物（例えばヒト）細胞における、ＩＬ－１７Ａ結合ポリペプチド及びポリペプチドを含む、本開示の多重特異性抗体又はそのドメインの発現に有用な非ウイルスベクターには、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、Ｂ、及びＣ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、Ｂ、及びＣ（Invitrogen, San Diego, Calif.）、ＭＰＳ Ｖベクター、及び他のタンパク質を発現するための当技術分野で知られている他の多数のベクターが含まれる。有用なウイルスベクターには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０に基づくベクター、乳頭腫ウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワクシニアウイルスベクター、及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が含まれる。上記のBrent et al., 前述； Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995; 及びRosenfeld et al., Cell 68: 143, 1992を参照されたい。
【0482】
発現ベクターの選択は、ベクターが発現される目的の宿主細胞に依存する。典型的には、発現ベクターは、ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む本開示の多重特異性抗体又はそのドメインをコードするポリヌクレオチドに機能できる形で結合しているプロモーター及び他の調節配列（例えば、エンハンサー）を含む。１つの実施態様において、誘導性条件下を除いて、挿入された配列の発現を防ぐために、誘導性プロモーターが使用される。誘導性プロモーターには、例えばアラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター、又は熱ショックプロモーターが含まれる。形質転換された生物の培養物は、その発現生成物が宿主細胞によってよりよく許容されるコード配列について集団にバイアスをかけることなく、非誘導条件下で拡大することができる。プロモーターに加えて、ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む本開示の抗体又はその断片の効率的な発現のために、他の調節要素も必要とされるか又は望まれ得る。これらの要素には、通常、ＡＴＧ開始コドン及び隣接するリボソーム結合部位又は他の配列が含まれる。さらに、使用中の細胞系に適切なエンハンサーを含めることによって、発現の効率が増強され得る（例えば、Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20: 125, 1994; 及び Bittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987を参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサー又はＣＭＶエンハンサーを使用して、哺乳動物宿主細胞における発現を増加させることができる。
【0483】
発現ベクターはまた、ＩＬ－１７Ａ結合抗体コード配列を含む挿入された多重特異性抗体コード配列によってコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成するための分泌シグナル配列位置を提供し得る。多くの場合、挿入された抗体配列、例えば多重特異性抗体コード配列又はＩＬ－１７Ａ結合抗体コード配列は、ベクターに含まれる前にシグナル配列に連結される。ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む多重特異性抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメイン又はその断片若しくはドメインをコードする配列を受け取るために使用されるベクターは、定常領域又はその一部をコードすることもある。そのようなベクターは、定常領域との融合タンパク質として可変領域の発現を可能にし、それにより無傷の抗体の産生をもたらす。通常、このような定常領域はヒト定常領域である。
【0484】
「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）という用語は、組換え発現ベクターが導入された細胞を指す。そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことを意図していることを理解されたい。突然変異又は環境の影響のいずれかにより、後の世代で特定の修飾が起こり得るため、そのような子孫は、実際には親細胞と同一ではないかもしれないが、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。
【0485】
ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む多重特異性抗体又はその断片若しくはドメインの鎖を保持及び発現するための宿主細胞は、原核生物でも真核生物でもよい。大腸菌は、本開示のポリヌクレオチドをクローニング及び発現するのに有用な１つの原核生物宿主である。使用に適した他の微生物宿主には、枯草菌などの桿菌、並びにサルモネラ、セラチア、及び様々なシュードモナス種などの他の腸内細菌科が含まれる。これらの原核生物宿主では、通常、宿主細胞と適合性のある発現制御配列（例えば複製起点）を含む発現ベクターを作製することもできる。さらに、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータラクタマーゼプロモーター系、又はラムダファージ由来のプロモーター系など、任意の多数の様々な周知のプロモーターが存在するであろう。プロモーターは、典型的には、任意選択的にオペレーター配列を用いて発現を制御し、転写及び翻訳を開始及び完了するためのリボソーム結合部位配列などを有する。酵母などの他の微生物もまた、ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む本開示の多重特異性抗体又はその断片若しくはドメインの鎖を発現するために使用することもできる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用することができる。
【0486】
１つの実施態様において、哺乳動物宿主細胞を使用して、ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む本開示の多重特異性抗体又はその断片若しくはドメインの鎖が発現及び産生される。例えば、それらは、内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株、又は外因性発現ベクターを保有する哺乳動物細胞株のいずれかであり得る。これらには、正常な不死ではない又は正常若しくは異常な不死の動物若しくはヒトの細胞が含まれる。例えば、無傷の免疫グロブリンを分泌することができる多くの適切な宿主細胞株が開発されており、これには、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換Ｂ細胞、及びハイブリドーマが含まれる。ポリペプチドを発現するための哺乳動物組織細胞培養の使用は、例えば、Winnacker, FROM GENES TO CLONES, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987で一般的に議論されている。哺乳動物宿主細胞の発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製開始点、プロモーター、及びエンハンサー（例えば、Queen, et al., Immunol. Rev. 89:49-68, 1986を参照）、及び必要なプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列を含むことができる。これらの発現ベクターは通常、哺乳類の遺伝子又は哺乳類のウイルスに由来するプロモーターを含む。適切なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的、及び／又は変更可能又は調節可能であり得る。有用なプロモーターには、特に限定されるものではないが、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰｐｏｌＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳ Ｖプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（例えばヒト前初期ＣＭＶプロモーター）、構成的ＣＭＶプロモーター、及び当技術分野で知られているプロモーター－エンハンサーの組み合わせが含まれる。
【0487】
目的のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主のタイプに応じて異なる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは一般的に原核細胞に利用されているが、リン酸カルシウム処理又は電気穿孔法は他の細胞宿主に使用され得る（一般に上記のSambrook et al.を参照）。他の方法には、例えば電気穿孔法、リン酸カルシウム処理、リポソーム介在形質転換、注入及び微量注入法、衝撃法、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸結合体、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合（Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997）、薬剤によって増強されたＤＮＡ摂取、及びエクスビボ形質導入が含まれる。組換えタンパク質の長期にわたる高収量の産生には、安定した発現がしばしば望まれる。例えば、ＩＬ－１７Ａ結合抗体を含む多重特異性抗体又はその断片若しくはドメインのポリペプチドを安定して発現する細胞株は、ウイルスの複製起点又は内因性発現要素及び選択可能なマーカー遺伝子を含む本開示の発現ベクターを使用して調製することができる。ベクターの導入後、濃縮培地で１～２日間増殖させた後、細胞を選択培地に切り替える。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在により、選択培地で導入された配列をうまく発現する細胞の増殖が可能になる。耐性があり、安定的にトランスフェクトされた細胞は、細胞タイプに適した組織培養技術を使用して増殖させることができる。従って本開示は、本開示の抗体を産生する方法を提供し、ここで、前記方法は、本開示の抗体をコードする核酸又はベクターを含む宿主細胞を培養する工程を含み、それにより、本開示の抗体又はその断片が発現される。
【0488】
本開示の医薬組成物
さらなる態様において本開示は、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、及び医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物に関する。医薬的に許容し得る担体は、組成物を増強又は安定化するか、又は組成物の調製を容易にする。医薬的に許容し得る担体には、生理学的に適合性のある溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤などが含まれる。
さらなる態様において本開示は、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、及び医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物に関する。医薬的に許容し得る担体は、組成物を増強又は安定化するか、又は組成物の調製を容易にする。医薬的に許容し得る担体には、生理学的に適合性のある溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤などが含まれる。
【0489】
本開示の医薬組成物は、当技術分野で知られている様々な方法によって投与することができる。投与経路及び／又は投与様式は所望の結果に応じて異なる。投与は、静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下で行うか、又は標的部位の近傍に投与することができる。医薬的に許容し得る担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に適しているべきである。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち抗体及び多重特異性分子を材料でコーティングして、化合物を不活性化する可能性のある酸及び他の自然条件の作用から化合物を保護することができる。
【0490】
本開示の医薬組成物は、当技術分野で周知で日常的に実施されている方法に従って調製することができる。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., 20th ed., 2000；及び Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照されたい。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子の治療有効用量又は有効用量が、本開示の医薬組成物で使用される。本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子は、当技術分野で知られている従来の方法によって、医薬的に許容し得る剤形に処方される。投与計画は、最適な所望の応答（例えば治療応答）を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスを投与することができ、いくつかの分割された用量を経時的に投与することができ、又は治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例して減少又は増加させることができる。投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、単回投与剤形で非経口組成物を処方することは特に有利である。本明細書で使用される投与単位剤形は、治療される被験体の単一投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共に所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性化合物を含む。
【0491】
本開示の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に対する毒性無しで、特定の患者、組成物、及び投与様式に対して所望の治療応答を達成するのに有効な有効成分の量を得るように変動させることができる。選択される投与量レベルは、使用される本開示の特定の組成物、又はそのエステル、塩、若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排泄速度、治療の期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物及び／又は材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康、及び病歴などを含む、様々な薬物動態学的要因に依存する。
【0492】
抗体は通常、複数回投与される。単回投与の間隔は、毎週、毎月、又は毎年にすることができる。患者の抗体の血中濃度を測定することによって示されるように、間隔も不規則である可能性がある。あるいは、抗体は徐放性製剤として投与することができ、その場合、より少ない頻度の投与が必要とされる。投与量と頻度は、患者中の抗体の半減期によって異なる。一般にヒト化抗体は、キメラ抗体や非ヒト抗体よりも長い半減期を示す。投与量及び投与頻度は、治療が予防的であるか治療的であるかによって異なり得る。予防的適用では、比較的低用量が比較的長い間隔で長期間にわたって投与される。一部の患者は、一生治療を受け続ける。治療適用では、疾患の進行が減少又は終了するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的又は完全な改良を示すまで、比較的短い間隔で比較的高い投与量が必要とされる場合がある。次に、患者は予防処方を投与することができる。
【0493】
本開示の使用と方法
本開示の抗体は、インビトロ及びインビボの診断的及び治療的有用性を有する。例えば、これらの分子は、培養中の細胞に、例えばインビトロ又はインビボで、又は被験体に、例えばインビボで投与して、様々な障害を治療、予防、又は診断することができる。
本開示の抗体は、インビトロ及びインビボの診断的及び治療的有用性を有する。例えば、これらの分子は、培養中の細胞に、例えばインビトロ又はインビボで、又は被験体に、例えばインビボで投与して、様々な障害を治療、予防、又は診断することができる。
【0494】
「被験体」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を含む。非ヒト動物には、すべての脊椎動物、例えば哺乳動物及び非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類が含まれる。他に明記しない限り、「患者」又は「被験体」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
【0495】
本明細書で使用される「治療」、「治療している」、「治療する」、「治療される」などの用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。効果は、疾患及び／又は疾患に起因するかは疾患の進行を遅らせる有害作用の部分的又は完全な治癒の観点から治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物、例えばヒトにおける疾患の任意の治療をカバーし、以下を含む：（ａ）疾患を阻害する、例えばその発症を阻止する；（ｂ）疾患を緩和する、例えば疾患の退行を引き起こす。
【0496】
「予防する」又は「予防」という用語は、疾患の発症、又は疾患の任意の２次的影響の完全な阻害を指す。本明細書で使用される「予防する」又は「予防」という用語は、疾患の素因を有する可能性があるが、まだそれを有すると診断されていない個人において、疾患又は症状が発生することを予防することを包含する。
【0497】
「治療有効量」又は「有効量」という用語は、疾患を治療するために哺乳動物又は他の被験体に投与されたときに、疾患のそのような治療を行うのに十分である薬剤の量を指す。「治療有効量」は、薬剤、疾患とその重症度、及び治療される被験体の年齢、体重などによって異なる。
【0498】
１つの態様において本開示は、薬剤として使用するための、本開示の抗体、本開示の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物に関する。
【0499】
１つの態様において、本開示の多重特異性抗体又は本開示の医薬組成物は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧｒｏ－α分泌を阻害することで治療できる障害の治療、予防、又は診断、特に治療における使用に特に適している。
【0500】
別の態様において、本開示のＩＬ－１７Ａ結合抗体又は本開示の医薬組成物は、ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害、又ＧＲＯ－α分泌を阻害することで治療できる障害の治療、予防、又は診断、特に治療における使用に特に適している。
【0501】
本開示において「ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害」という用語は、直接的又は間接的に、疾患又は状態の原因、発症、進行、持続、又は病理を含む疾患又は病状において、ＩＬ－１７Ａが役割を果たすすべての疾患及び病状を包含する。従って、「ＩＬ－１７Ａによって媒介される障害」という用語は、異常なＩＬ－１７Ａレベルに関連するか又はそれによって特徴付けられる状態、及び／又は標的細胞又は組織におけるＩＬ－１７Ａ誘導活性、例えばＩＬ－６又はＧＲＯ－αの産生を低減又は抑制することによって治療できる疾患又は状態を含む。本開示において「ＴＮＦαによって媒介される障害」という用語は、直接的又は間接的に、疾患又は状態の原因、発症、進行、持続、又は病理を含む疾患又は病状において、ＴＮＦαが役割を果たすすべての疾患及び病状を包含する。従って「ＴＮＦαによって媒介される障害」という用語は、異常なＴＮＦαレベルに関連するか又はそれによって特徴付けられる状態、及び／又は標的細胞又は組織におけるＴＮＦα誘導活性、例えば、ＩＬ－６又はＧＲＯ－αの産生を低減又は抑制することによって治療できる疾患又は状態を含む。ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害には、炎症状態及び自己免疫疾患、例えば関節炎、関節リウマチ、又は乾癬が含まれる。これらにはさらに、アレルギー及びアレルギー状態、過敏反応、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、及び臓器又は組織移植拒絶反応が含まれる。例えば、本開示の抗体は、心臓、肺、心－肺、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚、又は角膜移植物（同種移植片拒絶又は異種移植片拒絶を含む）の受容者の治療に、及び、骨髄移植後、及び臓器移植に関連する動脈硬化症などの移植片対宿主病の予防に使用することができる。
【0502】
１つの実施態様において、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物は、特に、炎症状態又は自己免疫疾患の治療、予防、又は診断、特に治療での使用に適している。
【0503】
本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物は、自己免疫疾患及び炎症状態、特に関節炎（例えば、関節リウマチ、慢性関節炎進行性関節炎、及び変形性関節炎）などの自己免疫成分を含む病因を伴う炎症状態、及び炎症状態を含むリウマチ疾患、及び骨量減少を含むリウマチ性疾患、炎症性疼痛、強直性脊椎炎を含む脊椎関節症、ライター症候群、反応性関節炎、乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎、及び腸障害性関節炎、腱付着部炎、過敏症（気道過敏症及び皮膚過敏症の両方を含む）及びアレルギーの、治療、予防、又は改善に使用するのに適している。本開示の抗体が使用され得る具体的な自己免疫疾患には、自己免疫血液障害（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、純赤血球貧血、及び特発性血小板減少症を含む）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、炎症性筋疾患（皮膚筋炎）、歯周炎、多軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブン－ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、及び過敏性腸症候群を含む）、内分泌眼症、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、全身性硬化症、線維性疾患、原発性胆道肝硬変、若年性糖尿病（糖尿病Ｉ型、１型糖尿病）、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎及びヴァーナル角結膜炎、間質性肺線維症、人工関節周囲炎、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群あり又はなし、例えば特発性腎症症候群又は最小変化腎症を含む）、多発性骨髄腫、他のタイプの腫瘍、皮膚及び角膜の炎症性疾患、筋炎、骨移植片の緩み、代謝障害（例えば、肥満、アテローム性動脈硬化症、及び拡張性心筋症、心筋炎、ＩＩ型糖尿病、及び脂質異常症を含む他の心血管疾患）、及び自己免疫性甲状腺疾患（橋本甲状腺炎を含む）、中小血管原発性血管炎、巨大細胞動脈炎を含む大血管血管炎、化膿性汗腺炎、視神経脊髄炎、シェーグレン症候群、ベーセット病、アトピー性及び接触性皮膚炎、気管支炎、炎症性筋疾患、自己免疫性末梢神経障害、免疫性腎疾患、肝疾患及び甲状腺疾患、炎症及びアテローム血栓症、自己炎症性発熱症候群、免疫血液障害、及び皮膚及び粘膜の水疱性疾患が含まれる。解剖学的に、ブドウ膜炎は、前部、中間、後部、又は汎ブドウ膜炎であり得る。これは、慢性又は急性の場合がある。ブドウ膜炎の病因は、自己免疫性又は非感染性、感染性、全身性疾患関連、又はホワイトドット症候群である可能性がある。
【0504】
特定の実施態様において、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物は、多発性硬化症、乾癬、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、及びループス腎炎の治療に使用するのに適している。別の特定の実施態様において、本開示の抗体は、糖尿病、特にＩ型又はＩＩ型糖尿病の治療における使用に適している。
【0505】
「ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害」という用語は、炎症関連の癌も含む。特定の実施態様において本開示の抗体は、癌、特にＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦα媒介性癌の治療における使用に適している。特定の実施態様において、本開示の抗体は、炎症関連癌の治療における使用に適している。
【0506】
「癌」という用語は、異常な細胞の急速で制御されていない増殖を特徴とする疾患を指す。癌細胞は、局所的に、又は血流やリンパ系を介して体の他の部分に広がる可能性がある。様々な癌の例が本明細書に記載されており、特に限定されるものではないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、皮膚癌、膵臓癌、結腸直腸癌、腎癌、肝臓癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが含まれる。「腫瘍」及び「癌」という用語は、本明細書では互換的に使用され、例えば両方の用語は、固体及び液体、例えばびまん性又は循環腫瘍を包含する。本明細書で使用される「癌」又は「腫瘍」という用語は、前悪性並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
【0507】
炎症関連癌の非限定的な例には、胃癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、及び腺癌が含まれる（Wu et al., 2014 Tumour Biol. 35(6):5347-56; Wu et al., 2012 PLoS One 7(12); Zhang et al. 2012 Asian Pac J Cancer Prev 13(8):3955-60; Liu et al., 201 1 Biochem Biophys Res Commun.407(2):348-54）。
【0508】
本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子もまた、特定の癌、例えば胃癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、及び腺癌などの炎症関連癌などの診断及び／又は予後における使用に適している。例えば、ＩＬ－１７Ａは、非小細胞肺癌（Chen et al., 2010 Lung Cancer 69(3):348-54）、結腸直腸癌、及び肝細胞癌（Punt et al., 2015 Oncoimmunology, 4(2): e984547）に苦しむ患者の予後と生存率の低下に関連している。
【0509】
従って、特定の実施態様において、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子は、以下での使用に適している。癌、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、反応性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、自己免疫性炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、嚢胞性線維症、骨量減少、気道過敏症、脱髄障害、皮膚過敏症、急性移植片拒絶反応、同種移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性硬化症、泌尿器系炎症性障害、心血管疾患、血管炎、周期的発熱、グルコース代謝障害、肺疾患、歯周炎、肝間質性角膜炎、アレルギー、炎症性疼痛、脊椎関節症、敗血症、敗血症又は内分泌毒性ショック、髄膜炎、外科的外傷、自己免疫性血液疾患、アルツハイマー病、サルコイドーシス、肝硬変、肝炎、糸球体腎炎、又は脂肪血症の治療における使用に適している。
【0510】
１つの態様において本開示は、薬剤の製造における、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。
【0511】
別の態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害、又はＧＲＯ－α分泌を阻害することによって治療できる障害の治療、予防、又は診断、特に治療に使用するための薬剤の製造における、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。１つの実施態様において本開示は、炎症状態又は自己免疫疾患の治療、予防、又は診断、特に治療に使用するための薬剤の製造における、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。別の実施態様において本開示は、多発性硬化症、乾癬、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、及びループス腎炎の治療、予防、又は診断、特に治療に使用するための薬剤の製造における、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。さらなる実施態様において本開示は、糖尿病、特にＩ型又はＩＩ型糖尿病の治療、予防、又は診断、特に治療に使用するための薬剤の製造における、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。さらなる実施態様において本開示は、癌、特にＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαに媒介される癌、特に炎症関連癌の治療、予防、又は診断、特に治療に使用するための薬剤の製造における、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の使用に関する。
【0512】
別の態様において本開示は、治療を必要とする被験体の治療方法に関し、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物の治療有効量を、被験体に投与することを特徴とする。
【0513】
さらなる態様において本開示は、ＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαによって媒介される障害の治療方法に関し、前記方法は、その症状が改善されるように、有効量の、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を投与することを含む。１つの実施態様において本開示は、炎症状態又は自己免疫疾患を治療する方法に関し、前記方法は、その症状が改善されるように、有効量の、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を投与することを含む。別の実施態様において本開示は、多発性硬化症、乾癬、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、及びループス腎炎を治療する方法に関し、前記方法は、その症状が改善されるように、有効量の、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を投与することを含む。さらなる実施態様において本開示は、糖尿病、特にＩ型又はＩＩ型糖尿病を治療する方法に関し、前記方法は、その症状が改善されるように、有効量の、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を投与することを含む。さらなる実施態様において本開示は、癌、特にＩＬ－１７Ａ及び／又はＴＮＦαに媒介される癌、特に炎症関連癌を治療する方法に関し、前記方法は、その症状が改善されるように、有効量の、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を投与することを含む。
【0514】
また、本開示の中には、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子、又は本開示の医薬組成物を含むキットがある。キットには、次のような１つ以上の他の要素を含めることができる：使用説明書；他の試薬、例えば、標識物、治療薬、又は抗体を標識物、治療薬、又は放射線防護組成物に、キレート化又は他の方法でカップリングするのに有用な薬剤；投与用の抗体分子を調製するための機器又は他の材料；医薬的に許容し得る担体；被験者に投与するための機器又はその他の材料。特定の実施態様において、キットは、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子を、医薬的に有効な量で含む。さらなる実施態様において、キットは、医薬的有効量の、本開示の多重特異性抗体、本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体、又は本開示の抗ＩＬ－１７Ａ抗体を含む別の多重特異性分子を、凍結乾燥形態で、及び希釈剤中に、及び任意選択的に使用説明書を含む。前記キットは、復元用のフィルター針、及び注射用の針をさらに含み得る。
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【表1-6】
【表1-7】
【表1-8】
【表1-9】
【表1-10】
【表1-11】
【表1-12】
【0515】
明確にするために、別個の実施態様の文脈で説明される本発明の特定の特徴もまた、単一の実施態様で組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施態様の文脈で説明される本発明の様々な特徴はまた、別個に又は任意の適切な部分的組合せで提供され得る。本発明に関連する実施態様のすべての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、あたかもそれぞれの及びすべての組み合わせが個別に明示的に開示されたかのように、本明細書に開示される。さらに、様々な実施態様及びそれらの要素のすべての部分的組合せもまた、本発明によって具体的に包含され、あたかもそのような部分的組合せのそれぞれ及びすべてが個別にかつ明示的に本明細書に開示されたかのように、本明細書に開示される。
【0516】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施態様によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の様々な変更が、前述の説明から当業者に明らかになるであろう。このような変更は、添付の特許請求の範囲内に含まれることを意図している。
【0517】
それぞれの特許法の下で可能な範囲で、本明細書に引用されているすべての特許、特許出願、刊行物、試験方法、文献、及び他の資料は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0518】
以下の実施例は、上記の本発明を説明するが、いかなる方法でも本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者に知られている他の試験モデルもまた、特許請求される発明の有益な効果を決定することができる。
【実施例】
【0519】
実施例１：ヒトＩＬ－１７Ａに対するウサギ抗体の生成
１．１ 免疫
ウサギは、組換え法により産生及び精製されたＩＬ－１７Ａ（Peprotech、カタログ番号２００－１７）で免疫された。免疫の過程で、抗原に対する体液性免疫応答の強さを、ポリクローナル血清抗体の抗原への検出可能な結合を依然としてもたらす各ウサギの血清の最大希釈率（力価）を決定することによって、定性的に評価した。固定化された抗原（組換えヒトＩＬ－１７Ａ）に対する血清抗体価は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価された。
１．１ 免疫
ウサギは、組換え法により産生及び精製されたＩＬ－１７Ａ（Peprotech、カタログ番号２００－１７）で免疫された。免疫の過程で、抗原に対する体液性免疫応答の強さを、ポリクローナル血清抗体の抗原への検出可能な結合を依然としてもたらす各ウサギの血清の最大希釈率（力価）を決定することによって、定性的に評価した。固定化された抗原（組換えヒトＩＬ－１７Ａ）に対する血清抗体価は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価された。
【0520】
ＩＬ－１７Ａの生物活性を阻害するウサギ血清の能力は、ＩＬ－１７Ａ刺激時にＧＲＯ－αを分泌するＨＴ－２９細胞を用いた細胞ベースのアッセイを使用して評価された。ウェルあたり５万個のＨＴ－２９細胞を９６ウェルプレートに播種し、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１７Ａで刺激した。ＩＬ－１７Ａ免疫化ウサギの最終出血血液の５回連続希釈物を、ＩＬ－１７Ａの生物学的機能を中和する力価について試験した。５つの血清すべてがＨＴ－２９細胞のＧＲＯ－α分泌を阻害した。リンパ球を免疫化された動物の脾臓から単離し、その後のHit同定操作の対象とした。
【0521】
１．２ 抗ＩＬ－１７Ａ抗体の同定
１．２．１ 抗ＩＬ－１７Ａ抗体を発現するＢ細胞の単離
ＩＬ－１７Ａ結合Ｂ細胞を同定するために、ＩＬ－１７ＡをＲ－フィコエリスリン（ＲＰＥ）で標識した。標識されたＩＬ－１７Ａ上のＩＬ－１７受容体Ａ結合部位は、かさばるＲＰＥ標識物によってブロックされる可能性があるため、エピトープのアクセス可能性を２つのアプローチによって確認した。最初のアッセイでは、ＲＰＥ標識ＩＬ－１７Ａのセクキヌマブ及びＩＬ－１７受容体Ａへの結合をフローサイトメトリーを使用して分析した。ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したセクキヌマブとＩＬ－１７受容体Ａ細胞外ドメインをプロテインＧビーズに捕捉し、ＲＰＥ標識ＩＬ－１７Ａの結合をフローサイトメトリーで確認した。これにより、ＩＬ－１７Ａのセクキヌマブ及びＩＬ－１７受容体Ａ Ｆｃキメラへの結合が確認されたが、無関係のＩｇＧ又はサイトカイン受容体への結合は検出されなかった。第２のアプローチでは、標識ＩＬ－１７Ａの生物活性をＨＴ－２９アッセイで確認した。図１に示すように、ＲＰＥ標識ＩＬ－１７Ａは、非標識ＩＬ－１７Ａと比較して、生物活性はほんのわずかにしか低下しなかった（ＩＬ－１７Ａ依存性ＧＲＯ－α分泌の誘導については１．５倍高いＥＣ50）。従って、標識されたＩＬ－１７Ａが選別プロセスでの使用に適していることが確認された。
１．２．１ 抗ＩＬ－１７Ａ抗体を発現するＢ細胞の単離
ＩＬ－１７Ａ結合Ｂ細胞を同定するために、ＩＬ－１７ＡをＲ－フィコエリスリン（ＲＰＥ）で標識した。標識されたＩＬ－１７Ａ上のＩＬ－１７受容体Ａ結合部位は、かさばるＲＰＥ標識物によってブロックされる可能性があるため、エピトープのアクセス可能性を２つのアプローチによって確認した。最初のアッセイでは、ＲＰＥ標識ＩＬ－１７Ａのセクキヌマブ及びＩＬ－１７受容体Ａへの結合をフローサイトメトリーを使用して分析した。ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したセクキヌマブとＩＬ－１７受容体Ａ細胞外ドメインをプロテインＧビーズに捕捉し、ＲＰＥ標識ＩＬ－１７Ａの結合をフローサイトメトリーで確認した。これにより、ＩＬ－１７Ａのセクキヌマブ及びＩＬ－１７受容体Ａ Ｆｃキメラへの結合が確認されたが、無関係のＩｇＧ又はサイトカイン受容体への結合は検出されなかった。第２のアプローチでは、標識ＩＬ－１７Ａの生物活性をＨＴ－２９アッセイで確認した。図１に示すように、ＲＰＥ標識ＩＬ－１７Ａは、非標識ＩＬ－１７Ａと比較して、生物活性はほんのわずかにしか低下しなかった（ＩＬ－１７Ａ依存性ＧＲＯ－α分泌の誘導については１．５倍高いＥＣ50）。従って、標識されたＩＬ－１７Ａが選別プロセスでの使用に適していることが確認された。
【0522】
１．２．２ ＩＬ－１７Ａ結合上清のスクリーニング
スクリーニング段階で得られた結果は、抗体分泌細胞（ＡＳＣ）の培養上清からの精製されていない抗体を使用して実施されたアッセイに基づいている。ＡＳＣ上清は、組換えヒトＩＬ－１７Ａへの結合について高処理能力ＥＬＩＳＡでスクリーニングされた。ＩＬ－１７Ａ結合上清は、それらの結合速度について及びＩＬ－１７Ａの生物活性を中和する可能性について、細胞ベースのＨＴ－２９アッセイ及び競合ＥＬＩＳＡで、さらに特性評価された。ＩＬ－１７Ａ結合上清は、カニクイザルＩＬ－１７Ａへの結合についてＥＬＩＳＡによってさらに特性評価された。
スクリーニング段階で得られた結果は、抗体分泌細胞（ＡＳＣ）の培養上清からの精製されていない抗体を使用して実施されたアッセイに基づいている。ＡＳＣ上清は、組換えヒトＩＬ－１７Ａへの結合について高処理能力ＥＬＩＳＡでスクリーニングされた。ＩＬ－１７Ａ結合上清は、それらの結合速度について及びＩＬ－１７Ａの生物活性を中和する可能性について、細胞ベースのＨＴ－２９アッセイ及び競合ＥＬＩＳＡで、さらに特性評価された。ＩＬ－１７Ａ結合上清は、カニクイザルＩＬ－１７Ａへの結合についてＥＬＩＳＡによってさらに特性評価された。
【0523】
１．２．２．１ ＥＬＩＳＡによるＩＬ－１７Ａ結合
ヒトＩＬ－１７Ａに結合する抗体を産生するＢ細胞クローンを同定するために、Ｂ細胞クローンの細胞培養上清を、ヒトＩＬ－１７Ａに対する抗体の存在についてＥＬＩＳＡによって分析した。使用したＥＬＩＳＡ法は、組換えヒトＩＬ－１７Ａに結合したＩｇＧサブタイプの抗体の「量」を評価するが、抗体の親和性や濃度に関する情報は得られない。
ヒトＩＬ－１７Ａに結合する抗体を産生するＢ細胞クローンを同定するために、Ｂ細胞クローンの細胞培養上清を、ヒトＩＬ－１７Ａに対する抗体の存在についてＥＬＩＳＡによって分析した。使用したＥＬＩＳＡ法は、組換えヒトＩＬ－１７Ａに結合したＩｇＧサブタイプの抗体の「量」を評価するが、抗体の親和性や濃度に関する情報は得られない。
【0524】
１．２．２．２ ヒトＩＬ－１７Ａに対する親和性
１次スクリーニング中に陽性と認定された培養上清からのヒトＩＬ－１７Ａに対するモノクローナルウサギ抗体の結合親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によってＭＡＡＳ－１ ＳＰＲ装置（Sierra Sensors）を使用して決定した。親和性スクリーニングでは、ウサギＩｇＧのＦｃ領域に特異的な抗体を、標準的なアミンカップリング法を使用してセンサーチップ（SPR-2 Affinity Sensor, High Capacity Amine, Sierra Sensors）に固定化した。Ｂ細胞上清中のウサギモノクローナル抗体は、固定化された抗ウサギＩｇＧ抗体によって捕捉された。十分な捕捉を可能にするには、Ｂ細胞上清中の最小ＩｇＧ濃度が必要である。モノクローナル抗体を捕捉した後、ヒトＩＬ－１７Ａをフローセルに９０ｎＭの濃度で３分間注入し、センサーチップに捕捉されたＩｇＧからのタンパク質の解離を５分間進行させた。見かけの解離（ｋｄ）及び会合（ｋａ）速度定数、及び見かけの解離平衡定数（ＫD）は、ＭＡＡＳ－１分析ソフトウェア（Analyzer, Sierra Sensors）を用いて１対１のラングミュア結合を使用して計算された。
１次スクリーニング中に陽性と認定された培養上清からのヒトＩＬ－１７Ａに対するモノクローナルウサギ抗体の結合親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によってＭＡＡＳ－１ ＳＰＲ装置（Sierra Sensors）を使用して決定した。親和性スクリーニングでは、ウサギＩｇＧのＦｃ領域に特異的な抗体を、標準的なアミンカップリング法を使用してセンサーチップ（SPR-2 Affinity Sensor, High Capacity Amine, Sierra Sensors）に固定化した。Ｂ細胞上清中のウサギモノクローナル抗体は、固定化された抗ウサギＩｇＧ抗体によって捕捉された。十分な捕捉を可能にするには、Ｂ細胞上清中の最小ＩｇＧ濃度が必要である。モノクローナル抗体を捕捉した後、ヒトＩＬ－１７Ａをフローセルに９０ｎＭの濃度で３分間注入し、センサーチップに捕捉されたＩｇＧからのタンパク質の解離を５分間進行させた。見かけの解離（ｋｄ）及び会合（ｋａ）速度定数、及び見かけの解離平衡定数（ＫD）は、ＭＡＡＳ－１分析ソフトウェア（Analyzer, Sierra Sensors）を用いて１対１のラングミュア結合を使用して計算された。
【0525】
１．２．２．３ ＨＴ－２９アッセイ及び競合ＥＬＩＳＡによるＩＬ－１７Ａの中和
力価を評価するために、細胞ベースのアッセイ（ＨＴ－２９アッセイ）及び受容体リガンド競合－ＥＬＩＳＡが開発された。
力価を評価するために、細胞ベースのアッセイ（ＨＴ－２９アッセイ）及び受容体リガンド競合－ＥＬＩＳＡが開発された。
【0526】
ＩＬ－１７Ａの生物活性を阻害するＢ細胞上清中の抗体の能力を、ＩＬ－１７Ａ刺激によりＧＲＯ－αを分泌するＨＴ－２９細胞を用いた細胞ベースのアッセイを使用して評価した。ウェルあたり５万個のＨＴ－２９細胞を９６ウェルプレートに播種し、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１７Ａで刺激した。最終濃度５０％のＢ細胞上清を、ＩＬ－１７Ａの生物学的機能を中和する力価について分析した。
【0527】
ｈＩＬ－１７ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害を、競合ＥＬＩＳＡによって評価した。ｈＩＬ－１７ＲＡをＥＬＩＳＡプレートに４μｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ビオチン化ｈＩＬ－１７Ａ（２０ｎｇ／ｍｌ）をＢ細胞上清（９５％）で１時間プレインキュベートし、混合物をＥＬＩＳＡプレートに加えて、ｈＩＬ－１７ＲＡに１．５時間結合させた。次に、ビオチン化したＩＬ－１７Ａに使用したストレプトアビジン－ＨＲＰを、ストレプトアビジン－ＨＲＰによって検出した。
【0528】
１．２．２．４ 種交差反応性（ＳＰＲによるカニクイザルＩＬ－１７Ａへの結合）
選択されたヒットを、カニクイザルＩＬ－１７Ａに対する種の交差反応性についてＳＰＲによって分析した。結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によってＭＡＡＳ－１ ＳＰＲ装置（Sierra Sensors）を使用して、ヒトＩＬ－１７Ａについてセクション１．２．２．２で説明したものと同様に決定したが、ヒトＩＬ－１７Ａの代わりに９０ｎＭのカニクイザルＩＬ－１７Ａを使用した。
選択されたヒットを、カニクイザルＩＬ－１７Ａに対する種の交差反応性についてＳＰＲによって分析した。結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によってＭＡＡＳ－１ ＳＰＲ装置（Sierra Sensors）を使用して、ヒトＩＬ－１７Ａについてセクション１．２．２．２で説明したものと同様に決定したが、ヒトＩＬ－１７Ａの代わりに９０ｎＭのカニクイザルＩＬ－１７Ａを使用した。
【0529】
１．２．２．５ ＥＬＩＳＡによるＩＬ－１７Ｆ結合
抗ＩＬ－１７Ａ ｓｃＦｖの特異性を確認するために、すべてのＩＬ－１７ファミリーメンバー（ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｆ、及びＩＬ－１７Ｅ）への結合を、最高のパフォーマンスを示すヒト化ｓｃＦｖについて評価した。ＩＬ－１７ＦはＩＬ－１７Ａと最も高い同一性を示すため（４７％、表２を参照）、選別上清をＥＬＩＳＡでＩＬ－１７Ｆへの結合についてスクリーニングした。結合は、２μｇ／ｍｌセクキヌマブで得られたシグナルと比較して定量化された。
抗ＩＬ－１７Ａ ｓｃＦｖの特異性を確認するために、すべてのＩＬ－１７ファミリーメンバー（ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｆ、及びＩＬ－１７Ｅ）への結合を、最高のパフォーマンスを示すヒト化ｓｃＦｖについて評価した。ＩＬ－１７ＦはＩＬ－１７Ａと最も高い同一性を示すため（４７％、表２を参照）、選別上清をＥＬＩＳＡでＩＬ－１７Ｆへの結合についてスクリーニングした。結合は、２μｇ／ｍｌセクキヌマブで得られたシグナルと比較して定量化された。
【表2】
【0530】
１．３ 機能的特性評価
Ｂ細胞上清中のモノクローナル抗体の薬理学的特性に基づいて、いくつかのローンをヒット確認分析のために選択した。Ｂ細胞上清中の選択されたクローンのモノクローナル抗体の薬理学的特性を表３に示す。
Ｂ細胞上清中のモノクローナル抗体の薬理学的特性に基づいて、いくつかのローンをヒット確認分析のために選択した。Ｂ細胞上清中の選択されたクローンのモノクローナル抗体の薬理学的特性を表３に示す。
【0531】
１．３．１ ＩＬ－１７Ａ結合動態（ＳＰＲによる）
多数の精製したモノクローナルウサギ抗体のヒトＩＬ－１７Ａへの結合動態を、ＳＰＲ（Ｍａｓｓ－１）測定によって決定した。各ＩｇＧを、カルボキシルメチル化デキストラン表面（ＳＰＲ－２親和性センサー、高容量アミン、Sierra Sensors）に結合した抗ウサギＩｇＧ（Bethyl Laboratories、カタログ番号Ａ１２０－１１１Ａ）を介して捕捉し、ＩＬ－１７Ａの用量応答を測定して、動態パラメーターの正確なフィッティングを可能にした。モノクローナル抗体を捕捉した後、ヒトＩＬ－１７Ａ（Peprotech、カタログ番号２００－１７）をフローセルに３分間注入し、センサーチップに捕捉されたＩｇＧからのタンパク質の解離を５分間進行させた。各注入サイクルの後、表面を１０ｍＭグリシン－ＨＣｌを２回注入して再生した。見かけの解離（ｋｄ）と会合（ｋａ）速度定数、及び見かけの解離平衡定数（ＫD）を、ＭＡＳＳ－１分析ソフトウェア（Analyzer、Sierra Sensors）を使用して、１対１のラングミュア結合モデルを用いて計算し、フィッティングの品質を相対的Ｃｈｉ２（分析物の推定最大結合レベルに標準化されたＣｈｉ２）（これはカーブフィッティングの品質の尺度である）に基づいて追跡した。
多数の精製したモノクローナルウサギ抗体のヒトＩＬ－１７Ａへの結合動態を、ＳＰＲ（Ｍａｓｓ－１）測定によって決定した。各ＩｇＧを、カルボキシルメチル化デキストラン表面（ＳＰＲ－２親和性センサー、高容量アミン、Sierra Sensors）に結合した抗ウサギＩｇＧ（Bethyl Laboratories、カタログ番号Ａ１２０－１１１Ａ）を介して捕捉し、ＩＬ－１７Ａの用量応答を測定して、動態パラメーターの正確なフィッティングを可能にした。モノクローナル抗体を捕捉した後、ヒトＩＬ－１７Ａ（Peprotech、カタログ番号２００－１７）をフローセルに３分間注入し、センサーチップに捕捉されたＩｇＧからのタンパク質の解離を５分間進行させた。各注入サイクルの後、表面を１０ｍＭグリシン－ＨＣｌを２回注入して再生した。見かけの解離（ｋｄ）と会合（ｋａ）速度定数、及び見かけの解離平衡定数（ＫD）を、ＭＡＳＳ－１分析ソフトウェア（Analyzer、Sierra Sensors）を使用して、１対１のラングミュア結合モデルを用いて計算し、フィッティングの品質を相対的Ｃｈｉ２（分析物の推定最大結合レベルに標準化されたＣｈｉ２）（これはカーブフィッティングの品質の尺度である）に基づいて追跡した。
【0532】
ヒトＩＬ－１７Ａへの高親和性結合を、ピコモル以下までの範囲（２．８７×１０-10から１．５１×１０-13Ｍ未満）の親和性のＫD値を有するすべての抗体で確認した。選択されたクローン２７－０７－Ｇ０２のモノクローナル抗体は、ＳＰＲによって測定すると、解離定数（ＫD）は１．８８ｐＭ、オンレートのｋａは２．４４×１０6Ｍ-1ｓ-1及びオフレートのｋｄは４．５８×１０-6ｓ-1を有する（表３を参照）。選択したクローン２７－３１－Ｃ０４のモノクローナル抗体は、ＳＰＲによって測定すると、解離定数（ＫD）は０．５ｐＭ未満、オンレートのｋａは１．９９×１０6Ｍ-1ｓ-1、オフレートのｋｄは１×１０-6ｓ-1未満を有する（表３を参照）。
【0533】
１．３．２ カニクイザルＩＬ－１７Ａに対する交差反応性（ＳＰＲによる）
カニクイザルＩＬ－１７Ａの種の交差反応性は、選択した精製モノクローナルウサギ抗体について、上記と同様のＳＰＲ（Ｍａｓｓ－１）測定により決定した。アッセイには、Trenzyme 社が特注したカニクイザルＩＬ－１７Ａを使用した。選択したクローン２７－０７－Ｇ０２のモノクローナル抗体は、ＳＰＲによって決定すると、解離定数（ＫD）は０．６ｐＭ、オンレートのｋａは１．２４×１０6Ｍ-1ｓ-1、オフレートのｋｄは７．７２×１０-6ｓ-1であった（表３を参照）。ＳＰＲによって決定されたＫDcynoIL-17A／ＫDhumanIL-17Aの比率は０．３であった（表３を参照）。選択したクローン２７－３１－Ｃ０４のモノクローナル抗体の解離定数（ＫD）は２５ｐＭ未満であり、オンレートのｋａは１．６９×１０6Ｍ-1ｓ-1、オフレートのｋｄは４．２２×１０-5ｓ-1であった（表３を参照）。ＳＰＲによって決定されたＫDcynoIL-17A／ＫDhumanIL-17Aの比率は、５より大きいと決定された（表３を参照）。
カニクイザルＩＬ－１７Ａの種の交差反応性は、選択した精製モノクローナルウサギ抗体について、上記と同様のＳＰＲ（Ｍａｓｓ－１）測定により決定した。アッセイには、Trenzyme 社が特注したカニクイザルＩＬ－１７Ａを使用した。選択したクローン２７－０７－Ｇ０２のモノクローナル抗体は、ＳＰＲによって決定すると、解離定数（ＫD）は０．６ｐＭ、オンレートのｋａは１．２４×１０6Ｍ-1ｓ-1、オフレートのｋｄは７．７２×１０-6ｓ-1であった（表３を参照）。ＳＰＲによって決定されたＫDcynoIL-17A／ＫDhumanIL-17Aの比率は０．３であった（表３を参照）。選択したクローン２７－３１－Ｃ０４のモノクローナル抗体の解離定数（ＫD）は２５ｐＭ未満であり、オンレートのｋａは１．６９×１０6Ｍ-1ｓ-1、オフレートのｋｄは４．２２×１０-5ｓ-1であった（表３を参照）。ＳＰＲによって決定されたＫDcynoIL-17A／ＫDhumanIL-17Aの比率は、５より大きいと決定された（表３を参照）。
【0534】
１．３．３ ヒトＩＬ－１７Ａの中和（ＨＴ－２９アッセイによる）
ヒト結腸癌細胞株ＨＴ－２９のＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌に対する、精製ウサギモノクローナル抗体の効果を調べた。ＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を中和する力価（ＩＣ50）（市販のＥＬＩＳＡで定量）をすべての抗体の連続希釈物について分析し、セクキヌマブの力価と比較した。データは４パラメーターロジスティック曲線フィッティングを使用して分析され、ＧＲＯ－α分泌を５０％に減らすために必要なＩＬ－１７Ａ阻害剤のモル濃度（ＩＣ50）を阻害曲線から得た。異なるアッセイプレートからのＩＣ50値を互いに直接比較できるようにするために、各プレートの個々のＩＣ50値を、各プレートに沿って採取した参照分子セクキヌマブのＩＣ50に対して較正した（相対ＩＣ50：ＩＣ50、セクキヌマブ／ＩＣ50、試験抗体）。相対的なＩＣ50値は、セクキヌマブとｓｃＦｖの質量単位（ｎｇ／ｍｌ）で計算した。
ヒト結腸癌細胞株ＨＴ－２９のＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌に対する、精製ウサギモノクローナル抗体の効果を調べた。ＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を中和する力価（ＩＣ50）（市販のＥＬＩＳＡで定量）をすべての抗体の連続希釈物について分析し、セクキヌマブの力価と比較した。データは４パラメーターロジスティック曲線フィッティングを使用して分析され、ＧＲＯ－α分泌を５０％に減らすために必要なＩＬ－１７Ａ阻害剤のモル濃度（ＩＣ50）を阻害曲線から得た。異なるアッセイプレートからのＩＣ50値を互いに直接比較できるようにするために、各プレートの個々のＩＣ50値を、各プレートに沿って採取した参照分子セクキヌマブのＩＣ50に対して較正した（相対ＩＣ50：ＩＣ50、セクキヌマブ／ＩＣ50、試験抗体）。相対的なＩＣ50値は、セクキヌマブとｓｃＦｖの質量単位（ｎｇ／ｍｌ）で計算した。
【0535】
中和アッセイは、力価アッセイで使用される標的濃度よりも高い平衡結合定数（ＫD）で標的に結合する場合（ＫD＞標的濃度）にのみ、標的ブロッキング抗体の力価を区別できる。ＨＴ－２９アッセイでは、２０ｎｇ／ｍｌ（＝６４５ｐＭ）のＩＬ－１７Ａ濃度を使用した。従って、理論的には、ＨＴ－２９アッセイはＫD＞６４５ｐＭのＩｇＧ間の力価を区別することができる。分析されたすべてのＩｇＧが６４５ｐＭ未満のＫD値を示したため、異なる親和性（ただし同様の作用機序）を有するＩｇＧ間の力価をこれで区別することはできない。従って、ＨＴ－２９アッセイをさらに開発して、力価をよりよく分離するために５０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦαを含めた。このサイトカインはＩＬ－１７Ａと相乗作用してＧＲＯ－α分泌を誘導し、その結果、ＴＮＦαの存在下でＩＬ－１７Ａ濃度を１ｎｇ／ｍｌ（＝３２ｐＭ）に低下させることができるであろう。
【0536】
選択されたクローン２７－０７－Ｇ０２は、セクキヌマブの５０倍の力価を示した（表３、図２を参照）。より詳細には、クローン２７－０７－Ｇ０２は、ＨＴ－２９アッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、ＩＣ50については７５、ＩＣ90については４８の力価（相対力価）でＩＬ－１７Ａを中和することが示され、ここで前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイにおけるセクキヌマブのＩＣ50又はＩＣ90値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイにおけるクローン２７－０７－Ｇ０２のモノクローナル抗体のＩＣ50又はＩＣ90値（ｎｇ／ｍＬ）との比である（表３、図２を参照）。
【0537】
選択されたクローン２７－３１－Ｃ０４は、セクキヌマブの１００倍の力価を示した（表３、図２を参照）。より詳細には、クローン２７－３１－Ｃ０４は、ＨＴ－２９アッセイで決定されたセクキヌマブの力価と比較して、ＩＣ50については２８７、ＩＣ90については７０４の力価（相対力価）でＩＬ－１７Ａを中和することが示され、ここで前記相対力価は、ＨＴ－２９アッセイにおけるセクキヌマブのＩＣ50又はＩＣ90値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＨＴ－２９アッセイにおけるクローン２７－３１－Ｃ０４のモノクローナル抗体のＩＣ50又はＩＣ90値（ｎｇ／ｍＬ）との比である（表３、図２を参照）。
【0538】
１．３．４ ヒトＩＬ－１７Ａ／ＩＬ－１７ＲＡ相互作用の阻止（競合ＥＬＩＳＡによる）
ｈＩＬ－１７ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害は、競合ＥＬＩＳＡによって評価された。４μｇ／ｍｌのＩＬ－１７ＲＡ（Sino Biological、カタログ番号１０８９５－Ｈ０８Ｈ）を含む５０μｌのＰＢＳを４℃で添加することにより、ｈＩＬ－１７ＲＡをＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。ビオチン化ｈＩＬ－１７Ａをウサギモノクローナル抗体と１時間プレインキュベートした後、混合物をＥＬＩＳＡプレートに加えて、ｈＩＬ－１７ＲＡに１．５時間結合させた。次に、ビオチン化ＩＬ－１７Ａの検出に使用した１０ｎｇ／ｍｌストレプトアビジン－ポリＨＲＰ４０（SDT、カタログ番号ＳＰ４０Ｃ）５０μｌを添加し、プレートを１時間インキュベートした。最後に、テトラメチルベンジジン溶液（KPL、カタログ番号５３－００－００）を添加してプレートを５～１０分間発色させ、１Ｍ ＨＣｌで反応を停止させた。マイクロタイタープレートリーダー（Infinity reader M200 Pro, Tecan）を使用して、４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ（参照波長）の波長でプレートを読み取った。
ｈＩＬ－１７ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害は、競合ＥＬＩＳＡによって評価された。４μｇ／ｍｌのＩＬ－１７ＲＡ（Sino Biological、カタログ番号１０８９５－Ｈ０８Ｈ）を含む５０μｌのＰＢＳを４℃で添加することにより、ｈＩＬ－１７ＲＡをＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。ビオチン化ｈＩＬ－１７Ａをウサギモノクローナル抗体と１時間プレインキュベートした後、混合物をＥＬＩＳＡプレートに加えて、ｈＩＬ－１７ＲＡに１．５時間結合させた。次に、ビオチン化ＩＬ－１７Ａの検出に使用した１０ｎｇ／ｍｌストレプトアビジン－ポリＨＲＰ４０（SDT、カタログ番号ＳＰ４０Ｃ）５０μｌを添加し、プレートを１時間インキュベートした。最後に、テトラメチルベンジジン溶液（KPL、カタログ番号５３－００－００）を添加してプレートを５～１０分間発色させ、１Ｍ ＨＣｌで反応を停止させた。マイクロタイタープレートリーダー（Infinity reader M200 Pro, Tecan）を使用して、４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ（参照波長）の波長でプレートを読み取った。
【0539】
選択されたウサギＩｇＧについて得られた用量応答曲線を図３に示す。参照セクキヌマブと比較したＩＣ50値及びＩＣ90値を表３に要約する。前のセクションで述べたように、中和アッセイは、力価アッセイで使用される目標濃度よりも高い（ＫD＞目標濃度）平衡結合定数（ＫD）でその標的に結合する場合にのみ、標的ブロッキング抗体の力価を区別することができる。ＨＴ－２９アッセイでは、３２ｐＭのＩＬ－１７Ａ濃度を使用したが、ＩＬ－１７Ａ／ＩＬ－１７ＲＡ阻害ＥＬＩＳＡでは、１９３ｐＭのＩＬ－１７Ａ濃度を使用した。従って、理論的には、ＨＴ－２９アッセイは、ＫD＞３２ｐＭのＩｇＧ間で力価を区別できるが、阻害ＥＬＩＳＡは、ＫD＞１９３ｐＭのＩｇＧ間でのみ力価を区別できる。ＨＴ－２９アッセイと同様に、クローン２７－０７－Ｇ０２及びクローン２７－３１－Ｃ０４は、セクキヌマブよりも高い力価を示した。クローン２７－０７－Ｇ０２は、ＥＬＩＳＡアッセイで決定されたセクキヌマブと比較して、ＩＣ50については５、ＩＣ90については１４の力価（相対力価）で、ＩＬ－１７Ａ／ＩＬ－１７ＲＡ相互作用を阻止することが示され、ここで前記相対力価は、ＥＬＩＳＡアッセイにおけるセクキヌマブのＩＣ50又はＩＣ90値（ｎｇ／ｍＬ）と、ＥＬＩＳＡアッセイにおけるクローン２７－０７－Ｇ０２のモノクローナル抗体のＩＣ50又はＩＣ90値（ｎｇ／ｍＬ）との比である。同様に、クローン２７－３１－Ｃ０４は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定されたセクキヌマブと比較して、ＩＬ－１７Ａ／ＩＬ－１７ＲＡ相互作用をＩＣ50については８、ＩＣ90では２１の力価で阻止することが示された（表３を参照）。
【0540】
１．３．５ カニクイザルＩＬ－１７Ａに対する交差反応性（ＨＴ－２９アッセイによる）
５万個のＨＴ－２９細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種した。ウサギモノクローナル抗体と内部参照セクキヌマブの連続希釈物に加えて、ヒトＴＮＦα（５０ｐｇ／ｍｌ）とヒト又はカニクイザルＩＬ－１７Ａ（１ｎｇ／ｍｌ）の予備希釈物をそれぞれＨＴ－２９細胞に添加した。３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、上清を採取し、ＧＲＯ－α（ＣＸＣＬ１ケモカイン）分泌をＥＬＩＳＡにより定量した。カニクイザルＩＬ－１７Ａで得られたＩＣ50値を互いに直接比較できるようにするために、各プレートの個々のＩＣ50値を、各プレートで取得したヒトＩＬ－１７Ａで得られたＩＣ50に対して較正した（相対ＩＣ50：ＩＣ50、カニクイザルＩＬ－１７Ａ／ＩＣ50、ヒトＩＬ－１７Ａ）。選択したクローンの力価を表３に示す。クローン２７－０７－Ｇ０２の場合、カニクイザルＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を中和する力価（ＩＣ50）は０．６４ｎｇ／ｍｌと決定され、クローン２７－３１－Ｃ０４の場合、はカニクイザルＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌に対する力価（ＩＣ50）は０．４９ｎｇ／ｍｌであると決定された（表３を参照）。
５万個のＨＴ－２９細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種した。ウサギモノクローナル抗体と内部参照セクキヌマブの連続希釈物に加えて、ヒトＴＮＦα（５０ｐｇ／ｍｌ）とヒト又はカニクイザルＩＬ－１７Ａ（１ｎｇ／ｍｌ）の予備希釈物をそれぞれＨＴ－２９細胞に添加した。３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、上清を採取し、ＧＲＯ－α（ＣＸＣＬ１ケモカイン）分泌をＥＬＩＳＡにより定量した。カニクイザルＩＬ－１７Ａで得られたＩＣ50値を互いに直接比較できるようにするために、各プレートの個々のＩＣ50値を、各プレートで取得したヒトＩＬ－１７Ａで得られたＩＣ50に対して較正した（相対ＩＣ50：ＩＣ50、カニクイザルＩＬ－１７Ａ／ＩＣ50、ヒトＩＬ－１７Ａ）。選択したクローンの力価を表３に示す。クローン２７－０７－Ｇ０２の場合、カニクイザルＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を中和する力価（ＩＣ50）は０．６４ｎｇ／ｍｌと決定され、クローン２７－３１－Ｃ０４の場合、はカニクイザルＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌に対する力価（ＩＣ50）は０．４９ｎｇ／ｍｌであると決定された（表３を参照）。
【表3】
【表4】
【0541】
１．３．６ ＩＬ－１７ＡとＩＬ－１７Ｆの選択性
他のＩＬ－１７ファミリーメンバーに対するＩＬ－１７ＡへのＩｇＧ結合の選択性を、標的特異的結合を確実にするために決定した。抗ＩＬ－１７Ａ ＩｇＧのＩＬ－１７Ｆへの結合を測定するために、プレートをＩＬ－１７Ａ又はＩＬ－１７Ｆ（Peprotech、カタログ番号２００－２５）でコーティングし、１０μｇ／ｍｌ組換え抗ＩＬ－１７Ａ ＩｇＧでインキュベートする（対照としてセクキヌマブを含む）直接ＥＬＩＳＡを開発した。ＩＬ－１７Ｆ結合のＯＤ（４５０～６９０ｎｍ）は、ａ）ＩＬ－１７Ａ結合のＯＤ（４５０～６９０ｎｍ）、及びｂ）セクキヌマブ結合のＯＤ（４５０～６９０ｎｍ）と比較して計算される。データは表４にまとめられている。
他のＩＬ－１７ファミリーメンバーに対するＩＬ－１７ＡへのＩｇＧ結合の選択性を、標的特異的結合を確実にするために決定した。抗ＩＬ－１７Ａ ＩｇＧのＩＬ－１７Ｆへの結合を測定するために、プレートをＩＬ－１７Ａ又はＩＬ－１７Ｆ（Peprotech、カタログ番号２００－２５）でコーティングし、１０μｇ／ｍｌ組換え抗ＩＬ－１７Ａ ＩｇＧでインキュベートする（対照としてセクキヌマブを含む）直接ＥＬＩＳＡを開発した。ＩＬ－１７Ｆ結合のＯＤ（４５０～６９０ｎｍ）は、ａ）ＩＬ－１７Ａ結合のＯＤ（４５０～６９０ｎｍ）、及びｂ）セクキヌマブ結合のＯＤ（４５０～６９０ｎｍ）と比較して計算される。データは表４にまとめられている。
【0542】
実施例２：ヒト化とｓｃＦｖの生成
２．１ ヒト化ｓｃＦｖ抗体の生成
ヒット確認中に得られたデータに基づいて、クローン２７－０７－Ｇ０２及び２７－３１－Ｃ０４がヒト化のために選択された。選択されたクローンのヒト化は、ＷＯ２０１４／２０６５６１に記載されているように、Ｖκ１－λｃａｐ／ＶＨ３タイプのｓｃＦｖアクセプターフレームワークへのウサギＣＤＲの転移を含んでいた。このプロセスでは、６つのＣＤＲ領域のアミノ酸配列がドナー配列（ウサギｍＡｂ）で同定され、アクセプター足場配列に移植され、「ＣＤＲグラフト」と呼ばれる構築物が得られた（それぞれ配列番号２４、Ａ１；及び配列番号６１、ＰＲＯ５７１を参照）。さらに、第２のグラフトが両方のクローン２７－０７－Ｇ０２及び２７－３１－ＣＯ４（それぞれ配列番号２５、Ａ２；及び配列番号６２、ＰＲＯ５９２）について設計され、これらは、特定のフレームワーク位置でウサギドナーからの追加のアミノ酸修飾を含み、従って、ＣＤＲ位置に影響を与え、抗原結合及び／又は安定性に影響を与える可能性があると説明されている（Borras et al., 2010; J. Biol. Chem., 285:9054-9066）。これらのヒト化構築物は「構造（ＳＴＲ）グラフト」と呼ばれる。さらに、クローン２７－０７－Ｇ０２の場合、４つの変異、すなわち可変軽鎖上のＡ５１Ｐ、及び可変重鎖上のＱ１４Ｋ、Ｇ１６Ｅ、及びＧ５６Ａ（ＡＨｏ番号付けによる）が、親和性を改良するために構造ベースのグラフト（配列番号２５、Ａ２）に導入された。クローン２７－３１－Ｃ０４の場合、親和性を改良するために２つの変異、すなわちＲ２０Ｔ及びＱ１４１Ｐ（ＡＨｏ番号付けによる）が、構造ベースのグラフト（配列番号６２、ＰＲＯ５９２）の可変重鎖に導入された。
２．１ ヒト化ｓｃＦｖ抗体の生成
ヒット確認中に得られたデータに基づいて、クローン２７－０７－Ｇ０２及び２７－３１－Ｃ０４がヒト化のために選択された。選択されたクローンのヒト化は、ＷＯ２０１４／２０６５６１に記載されているように、Ｖκ１－λｃａｐ／ＶＨ３タイプのｓｃＦｖアクセプターフレームワークへのウサギＣＤＲの転移を含んでいた。このプロセスでは、６つのＣＤＲ領域のアミノ酸配列がドナー配列（ウサギｍＡｂ）で同定され、アクセプター足場配列に移植され、「ＣＤＲグラフト」と呼ばれる構築物が得られた（それぞれ配列番号２４、Ａ１；及び配列番号６１、ＰＲＯ５７１を参照）。さらに、第２のグラフトが両方のクローン２７－０７－Ｇ０２及び２７－３１－ＣＯ４（それぞれ配列番号２５、Ａ２；及び配列番号６２、ＰＲＯ５９２）について設計され、これらは、特定のフレームワーク位置でウサギドナーからの追加のアミノ酸修飾を含み、従って、ＣＤＲ位置に影響を与え、抗原結合及び／又は安定性に影響を与える可能性があると説明されている（Borras et al., 2010; J. Biol. Chem., 285:9054-9066）。これらのヒト化構築物は「構造（ＳＴＲ）グラフト」と呼ばれる。さらに、クローン２７－０７－Ｇ０２の場合、４つの変異、すなわち可変軽鎖上のＡ５１Ｐ、及び可変重鎖上のＱ１４Ｋ、Ｇ１６Ｅ、及びＧ５６Ａ（ＡＨｏ番号付けによる）が、親和性を改良するために構造ベースのグラフト（配列番号２５、Ａ２）に導入された。クローン２７－３１－Ｃ０４の場合、親和性を改良するために２つの変異、すなわちＲ２０Ｔ及びＱ１４１Ｐ（ＡＨｏ番号付けによる）が、構造ベースのグラフト（配列番号６２、ＰＲＯ５９２）の可変重鎖に導入された。
【0543】
これらの構築物の特性評価データの比較により、ＳＴＲ構築物の重要な利点が明らかになった場合、ＣＤＲグラフト化ＶＬとＳＴＲグラフト化ＶＨを組み合わせた追加の変種を設計できる。この組み合わせは、ＳＴＲグラフトの活性を保持するのにしばしば十分であることが証明されており（Borras et al. JBC. 2010;285:9054-9066）、ヒトアクセプター足場のより少ない非ヒト改変が、傷害された安定性のリスクと免疫原性の可能性を低下させるため、一般的に好ましい。
【0544】
２．２ ヒト化ｓｃＦｖの製造
インシリコ（in-silico）構築物の設計が完了した後、対応する遺伝子が合成され、細菌発現ベクターが構築された。発現構築物の配列はＤＮＡのレベルで確認され、構築物は一般的な発現及び精製プロトコールに従って製造された。
インシリコ（in-silico）構築物の設計が完了した後、対応する遺伝子が合成され、細菌発現ベクターが構築された。発現構築物の配列はＤＮＡのレベルで確認され、構築物は一般的な発現及び精製プロトコールに従って製造された。
【0545】
タンパク質の異種発現は、大腸菌中で不溶性封入体として、小規模（５５ｍＬ）で一晩の誘導発現により行った。封入体は、均質化された細胞ペレットから、数回の洗浄工程を含む遠心分離プロトコールによって単離され、細胞破片及び他の宿主細胞不純物を除去した。精製された封入体を変性緩衝液（１００ｍＭトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８．０、６Ｍ Ｇｄｎ－ＨＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解し、ｓｃＦｖを拡張性のある再折り畳みプロトコールにより再折り畳みをして、ミリグラム量の本来の折り畳まれたモノマーｓｃＦｖを生成した。この時点で、標準化されたプロトコールを使用してｓｃＦｖを精製した。再折り畳み後の生成物を親和性クロマトグラフィーで捕捉し、精製されたｓｃＦｖを得た。さらにｓｃＦｖの融解温度を示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）測定によって決定して、次の段落で説明される薬力学的特性評価の完了後に、より広範な安定性評価に入る分子の選択をサポートした。選択した分子のＤＳＦ測定については、２．４．２項で詳しく説明する。
【0546】
２．３ ヒト化ｓｃＦｖの機能特性評価
以下では、ヒト化ｓｃＦｖを、ヒット確認フェーズで説明したのと同じアッセイシステムを使用して、しかしｓｃＦｖ分子の異なる形式に対応するために特定の適応を加えて、主要な薬力学特性について特性評価した。
以下では、ヒト化ｓｃＦｖを、ヒット確認フェーズで説明したのと同じアッセイシステムを使用して、しかしｓｃＦｖ分子の異なる形式に対応するために特定の適応を加えて、主要な薬力学特性について特性評価した。
【0547】
２．３．１ ヒトＩＬ－１７Ａ及びカニクイザルＩＬ－１７Ａに対する親和性
ヒトＩＬ－１７Ａ及びカニクイザル（Macaca fascicularis）ＩＬ－１７Ａに対するヒト化ｓｃＦｖの親和性は、Ｔ２００装置（Biacore, GE Healthcare）でＳＰＲ分析によって決定された。この実験では、ビオチン化ヒトＩＬ－１７Ａを、BiocoreのBiotin-CAPtureキットを使用して捕捉した（「キャプチャ設定」）。各分析物注入サイクルの後、ＣＡＰセンサーチップが再生され、新しい抗原が捕捉された。ｓｃＦｖは、ランニング緩衝液で希釈された０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物の濃度で、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して分析物として注入された。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされた。さらに、ｓｃＦｖは代替のＳＰＲアッセイ設定（「直接設定」）で分析された。ＩＬ－１７Ａは、アミンカップリングによってＣＭ５センサーチップ（GE Healthcare）に固定化された。０．３５～９０ｎＭの範囲のｓｃＦｖの連続希釈物を、固定化されたＩＬ－１７Ａに注入した。直接設定を使用した場合、キャプチャ設定と比較して、試験したｓｃＦｖの親和性は２～５０倍以上であった。キャプチャ設定を使用した場合の親和性の低下は、ｓｃＦｖの結合に対するビオチンの干渉が原因である可能性がある。
ヒトＩＬ－１７Ａ及びカニクイザル（Macaca fascicularis）ＩＬ－１７Ａに対するヒト化ｓｃＦｖの親和性は、Ｔ２００装置（Biacore, GE Healthcare）でＳＰＲ分析によって決定された。この実験では、ビオチン化ヒトＩＬ－１７Ａを、BiocoreのBiotin-CAPtureキットを使用して捕捉した（「キャプチャ設定」）。各分析物注入サイクルの後、ＣＡＰセンサーチップが再生され、新しい抗原が捕捉された。ｓｃＦｖは、ランニング緩衝液で希釈された０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物の濃度で、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して分析物として注入された。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされた。さらに、ｓｃＦｖは代替のＳＰＲアッセイ設定（「直接設定」）で分析された。ＩＬ－１７Ａは、アミンカップリングによってＣＭ５センサーチップ（GE Healthcare）に固定化された。０．３５～９０ｎＭの範囲のｓｃＦｖの連続希釈物を、固定化されたＩＬ－１７Ａに注入した。直接設定を使用した場合、キャプチャ設定と比較して、試験したｓｃＦｖの親和性は２～５０倍以上であった。キャプチャ設定を使用した場合の親和性の低下は、ｓｃＦｖの結合に対するビオチンの干渉が原因である可能性がある。
【0548】
カニクイザルＩＬ－１７Ａへの交差反応性は、ヒトＩＬ－１７Ａへの結合を測定するために使用されたものと同様のアッセイで、Trenzymeによって生成されたＩＬ－１７Ａを用いて測定された。
【0549】
ＳＰＲキャプチャ設定によって測定すると、ｓｃＦｖ Ａ１（ＣＤＲ）及びＡ２（ＳＴＲ）はヒトＩＬ－１７Ａに、それぞれ２．５×１０-10Ｍ及び３×１０-9Ｍの親和性で結合した（表５）。直接ＳＰＲ設定では、ｓｃＦｖ Ａ１（ＣＤＲ）及びＡ２（ＳＴＲ）はヒトＩＬ－１７Ａに、それぞれ１．４×１０-10Ｍ及び５．５×１０-11Ｍの親和性で結合した（表５）。ｓｃＦｖ Ａ１（ＣＤＲ）及びＡ２（ＳＴＲ）はカニクイザルＩＬ－１７Ａに、それぞれ９×１０-10Ｍ及び５×１０-9Ｍの親和性で結合した（表５）。
【0550】
ＳＰＲキャプチャ設定によって測定すると、ｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１（ＣＤＲ）及びＰＲＯ５９２（ＳＴＲ）はヒトＩＬ－１７Ａに、それぞれ１．２×１０-10Ｍ及び３．７×１０-10Ｍの親和性で結合した（表５）。直接ＳＰＲ設定では、ｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１（ＣＤＲ）及びＰＲＯ５９２（ＳＴＲ）はヒトＩＬ－１７Ａに、それぞれ４×１０-11Ｍ及び３．８×１０-11Ｍの親和性で結合した（表５）。ｓｃＦｖ ＰＲＯ５７１（ＣＤＲ）及びＰＲＯ５９２（ＳＴＲ）はカニクイザルＩＬ－１７Ａに、それぞれ３．３×１０-11Ｍ及び１．６×１０-10Ｍの親和性で結合した（表５）。
【0551】
２．３．２ ＨＴ－２９アッセイ（ヒトＩＬ－１７Ａの中和）
ＨＴ２９アッセイにより、ヒト結腸癌細胞株ＨＴ－２９のＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を阻害するヒト化ｓｃＦｖの能力を試験した。上記のセクション１．３．３及び１．３．５で説明したように、アッセイの感度を上げるために、ＩＬ－１７Ａに加えてＴＮＦαを添加した。９６ウェルプレートの各ウェルに５万個のＨＴ－２９細胞を播種した。連続希釈したｓｃＦｖと内部参照セクキヌマブに加えて、ヒトＴＮＦα（５０ｐｇ／ｍｌ）とヒトＩＬ－１７Ａ（１ｎｇ／ｍｌ）の予備希釈物をＨＴ－２９細胞に添加した。３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、上清を採取し、ＧＲＯ－α（ＣＸＣＬ１ケモカイン）分泌をＥＬＩＳＡで定量した。
ＨＴ２９アッセイにより、ヒト結腸癌細胞株ＨＴ－２９のＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を阻害するヒト化ｓｃＦｖの能力を試験した。上記のセクション１．３．３及び１．３．５で説明したように、アッセイの感度を上げるために、ＩＬ－１７Ａに加えてＴＮＦαを添加した。９６ウェルプレートの各ウェルに５万個のＨＴ－２９細胞を播種した。連続希釈したｓｃＦｖと内部参照セクキヌマブに加えて、ヒトＴＮＦα（５０ｐｇ／ｍｌ）とヒトＩＬ－１７Ａ（１ｎｇ／ｍｌ）の予備希釈物をＨＴ－２９細胞に添加した。３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、上清を採取し、ＧＲＯ－α（ＣＸＣＬ１ケモカイン）分泌をＥＬＩＳＡで定量した。
【0552】
ヒト化されたｓｃＦｖＡ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２の阻害曲線が図４に示される。すべての力価データは表５及び表６に要約される。各分子について報告された相対的ＩＣ50値を参照抗体セクキヌマブに対して較正して、異なるアッセイプレートからのＩＣ50値の直接比較を可能にした。相対的なＩＣ50値はセクキヌマブとｓｃＦｖの質量単位（ｎｇ／ｍｌ）で計算された。
【0553】
クローン２７－０７－Ｇ０２、Ａ１、及びＡ２に由来するヒト化ｓｃＦｖ、並びにクローン２７－３１－Ｃ０４、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２に由来するヒト化ｓｃＦｖは、ＩＬ－１７Ａ誘導ＧＲＯ－α分泌を、セクキヌマブよりも低いＩＣ50で阻害し（表５及び表６を参照）、セクキヌマブと比較して１００倍以上高い力価を示した（表５及び表６を参照）。
【表5】
【表6】
【0554】
２．３．３ 競合ＥＬＩＳＡ（ｈＩＬ－１７－ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害）
ＨＴ－２９アッセイに加えて、ヒトＩＬ－１７ＡとヒトＩＬ－１７ＲＡの相互作用を阻害する各ヒト化ｓｃＦｖの力価を、ＥＬＩＳＡによって、セクション１．３．４で説明したのと同じ操作で評価した。ＨＴ－２９アッセイと同様に、各プレートの個々のＩＣ50値は、各プレートで使用される参照分子セクキヌマブのＩＣ50及び相対的ＩＣ50（相対的ＩＣ50：ＩＣ50、セクキヌマブ／ＩＣ50、試験抗体）に対して較正される（表５及び表７）。このアッセイでは、６ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１７Ａが使用され、これは、アッセイがＫD＞１９３ｐＭのＩｇＧ間の力価のみを分離できることを意味する。Ａ１、Ａ２、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２の阻害曲線を図５に示し、力価は表５及び表７に要約される。
ＨＴ－２９アッセイに加えて、ヒトＩＬ－１７ＡとヒトＩＬ－１７ＲＡの相互作用を阻害する各ヒト化ｓｃＦｖの力価を、ＥＬＩＳＡによって、セクション１．３．４で説明したのと同じ操作で評価した。ＨＴ－２９アッセイと同様に、各プレートの個々のＩＣ50値は、各プレートで使用される参照分子セクキヌマブのＩＣ50及び相対的ＩＣ50（相対的ＩＣ50：ＩＣ50、セクキヌマブ／ＩＣ50、試験抗体）に対して較正される（表５及び表７）。このアッセイでは、６ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１７Ａが使用され、これは、アッセイがＫD＞１９３ｐＭのＩｇＧ間の力価のみを分離できることを意味する。Ａ１、Ａ２、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２の阻害曲線を図５に示し、力価は表５及び表７に要約される。
【表7】
【0555】
２．３．４ ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆに対する選択性（競合ＥＬＩＳＡ）
各ｓｃＦｖへのＩＬ－１７Ａの結合を最大の半分阻害するＩＬ－１７Ｂ～Ｆの相対的可能性を、ＩＬ－１７Ａと比較して、競合ＥＬＩＳＡによって評価した。非標識ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆによるビオチン化ＩＬ－１７ＡとｓｃＦｖの相互作用を阻害する可能性を、競合ＥＬＩＳＡで分析した。この目的のために、ｓｃＦｖを９６ウェルＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。連続希釈されたＩＬ－１７Ａ又はＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆの存在下での、コーティングされたｓｃＦｖへのビオチン化ＩＬ－１７Ａの結合は、ＨＲＰに結合したビオチン結合性ストレプトアビジンを使用して検出された。ＩＬ－１７Ａの用量応答曲線について、データを４パラメーターロジスティック曲線フィッティングを使用して分析し、ビオチン化ＩＬ－１７ＡとコーティングされたｓｃＦｖとの相互作用を５０％阻止するために必要なＩＬ－１７Ａの濃度（ＥＣ50）を計算した。ＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆは、ビオチン化ＴＮＦとｓｃＦｖとの相互作用の有意な阻害を示さなかった（図６を参照）。各ｓｃＦｖへのＩＬ－１７Ａの結合を阻害するＩＬ－１７Ａと比較したこれらのＩＬ－１７ファミリーメンバーの相対的可能性を定量化するために、ＩＬ－１７Ａと比較してＩＬ－１７ファミリーメンバーによる相互作用を阻害するＥＣ50を計算した。ＩＬ－１７ＡのＥＣ50よりも約１００～４０，０００倍高い濃度でＩＬ－１７メンバーを使用しても、有意な阻害は観察されなかったため、ＩＬ－１７ファミリーメンバーよりもＩＬ－１７Ａに対する結合の選択性は、１００～４０，０００倍よりも大幅に高いことが判明した。
各ｓｃＦｖへのＩＬ－１７Ａの結合を最大の半分阻害するＩＬ－１７Ｂ～Ｆの相対的可能性を、ＩＬ－１７Ａと比較して、競合ＥＬＩＳＡによって評価した。非標識ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆによるビオチン化ＩＬ－１７ＡとｓｃＦｖの相互作用を阻害する可能性を、競合ＥＬＩＳＡで分析した。この目的のために、ｓｃＦｖを９６ウェルＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。連続希釈されたＩＬ－１７Ａ又はＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆの存在下での、コーティングされたｓｃＦｖへのビオチン化ＩＬ－１７Ａの結合は、ＨＲＰに結合したビオチン結合性ストレプトアビジンを使用して検出された。ＩＬ－１７Ａの用量応答曲線について、データを４パラメーターロジスティック曲線フィッティングを使用して分析し、ビオチン化ＩＬ－１７ＡとコーティングされたｓｃＦｖとの相互作用を５０％阻止するために必要なＩＬ－１７Ａの濃度（ＥＣ50）を計算した。ＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆは、ビオチン化ＴＮＦとｓｃＦｖとの相互作用の有意な阻害を示さなかった（図６を参照）。各ｓｃＦｖへのＩＬ－１７Ａの結合を阻害するＩＬ－１７Ａと比較したこれらのＩＬ－１７ファミリーメンバーの相対的可能性を定量化するために、ＩＬ－１７Ａと比較してＩＬ－１７ファミリーメンバーによる相互作用を阻害するＥＣ50を計算した。ＩＬ－１７ＡのＥＣ50よりも約１００～４０，０００倍高い濃度でＩＬ－１７メンバーを使用しても、有意な阻害は観察されなかったため、ＩＬ－１７ファミリーメンバーよりもＩＬ－１７Ａに対する結合の選択性は、１００～４０，０００倍よりも大幅に高いことが判明した。
【0556】
Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２について図６に示し表８に要約されるように、ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２とビオチン化ＩＬ－１７Ａとの相互作用は、非標識ＩＬ－１７Ａによって阻止されたが、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆは、試験したサイトカインの最高濃度（２０～５００μｇ／ｍｌ）でも有意な効果を示さなかった。従って、Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２はＩＬ－１７Ａに特異的に結合するが、最も近いホモログであるＩＬ－１７Ｂ～ＩＬ－１７Ｆには結合しない。従って、本明細書に記載のｓｃＦｖのオフターゲット結合は、非常に起きにくいと思われる。
【0557】
２．４ ヒト化ｓｃＦｖの生物理学的特性評価
２．４．１ 安定性材料の製造
ｓｃＦｖは、上記と同じ製造プロセス（セクション２．２を参照）を使用して、再度さらに大規模（１．２Ｌ～２．４Ｌの発現量）で製造された。さらにタンパク質試料は、精製後に遠心濃縮チューブを使用して＞１０ｍｇ／ｍＬに濃縮された。安定性評価のための材料の大規模製造を表９にまとめている。すべての分子は十分な量と純度（９５％超のモノマー）で製造することができた。
２．４．１ 安定性材料の製造
ｓｃＦｖは、上記と同じ製造プロセス（セクション２．２を参照）を使用して、再度さらに大規模（１．２Ｌ～２．４Ｌの発現量）で製造された。さらにタンパク質試料は、精製後に遠心濃縮チューブを使用して＞１０ｍｇ／ｍＬに濃縮された。安定性評価のための材料の大規模製造を表９にまとめている。すべての分子は十分な量と純度（９５％超のモノマー）で製造することができた。
【0558】
ｓｃＦｖ構築物の生産性は、様々なレポートポイントによって特徴づけられた（表９）。生産性基準は、選択されたｓｃＦｖ本体が、十分な量で発現、再折り畳み、及び精製されて、リード化合物分子の後の開発をサポートできるものとする。定義された基準は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価される発酵ブロス１リットルあたりのｓｃＦｖの発現収量、及びＵＶ分光法による精製タンパク質の量の測定によって評価される一般的な実験室規模のプロセスで達成された精製収量を、１リットルの再折り畳み溶液に戻して計算したものである。
【0559】
発現力価は、遠心分離による細胞の採取後の粗大腸菌溶解物のレベルで決定された。採取中、細胞のわずかな損失が予想されたが、発現収量の計算のためにこの要因は無視して、生産性のより控えめな推定を行った。溶解物中のｓｃＦｖ生成物の定量については、試料中の宿主細胞タンパク質から生成物を区別できる方法の特異性が高いため、クマシー染色還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを選択した
【0560】
生産性を評価するための第２の基準は、再折り畳み溶液１リットルあたりの計算されたｓｃＦｖの精製収率である。このパラメーターは、タンパク質の再折り畳み工程を含む予想される製造プロセスの潜在的な障害に対処する。再折り畳み操作の効率が、同等の製造プロセスにおいて制限的であることが証明されているため、定義された再折り畳み容量に標準化された生産性に関して、様々な構築物の性能を比較することができる。収量を計算するために、各バッチからの最終タンパク質試料をＵＶ吸光度で定量し、それぞれの精製の実際の再折り畳み量で割った。
【表8】
【表9】
【0561】
２．４．２ 熱による展開
ｓｃＦｖ構築物Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２のＤＳＦ測定値から得られた熱展開曲線を図７に示す。ＤＳＦ測定には、小規模発現で作成された材料が使用された。５０ｍＭリン酸クエン酸塩緩衝液、ｐＨ６．４、中の試料を、最終タンパク質濃度５０μｇ／ｍＬ及び最終濃度５×SYPRO（登録商標）Orangeで総量１００μｌに調製した。２５μｌの調製試料を白壁のＡＢ遺伝子ＰＣＲプレートに三重測定で加えた。アッセイはサーマルサイクラーとして使用されるｑＰＣＲ装置で実施され、蛍光発光はソフトウェアのカスタム色素較正ルーチンを使用して検出された。試験試料を含むＰＣＲプレートを、２５℃から９６℃まで１℃刻みで温度勾配に付し、各温度上昇後に３０秒間休止させた。総アッセイ時間は約２時間であった。Ｔｍは、ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍによって、曲線の変曲点を計算するための数学的２次導関数法を使用して計算された。エラーバーで示されているように、測定はそれぞれ二重測定又は三重測定で行った。得られたＴｍ値は、データをボルツマン方程式にフィッティングして決定されている。
ｓｃＦｖ構築物Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２のＤＳＦ測定値から得られた熱展開曲線を図７に示す。ＤＳＦ測定には、小規模発現で作成された材料が使用された。５０ｍＭリン酸クエン酸塩緩衝液、ｐＨ６．４、中の試料を、最終タンパク質濃度５０μｇ／ｍＬ及び最終濃度５×SYPRO（登録商標）Orangeで総量１００μｌに調製した。２５μｌの調製試料を白壁のＡＢ遺伝子ＰＣＲプレートに三重測定で加えた。アッセイはサーマルサイクラーとして使用されるｑＰＣＲ装置で実施され、蛍光発光はソフトウェアのカスタム色素較正ルーチンを使用して検出された。試験試料を含むＰＣＲプレートを、２５℃から９６℃まで１℃刻みで温度勾配に付し、各温度上昇後に３０秒間休止させた。総アッセイ時間は約２時間であった。Ｔｍは、ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍによって、曲線の変曲点を計算するための数学的２次導関数法を使用して計算された。エラーバーで示されているように、測定はそれぞれ二重測定又は三重測定で行った。得られたＴｍ値は、データをボルツマン方程式にフィッティングして決定されている。
【0562】
図７は、Ｔｍの計算に使用された選択されたドメインの、データのボルツマン方程式へのフィッティングによる融解曲線を示す。表１０は、Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２のＳＥ－ＨＰＬＣによって測定され計算された融解温度と純度をまとめたものである。
【表10】
【0563】
２．４．３ 保存安定性試験
ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２に、４週間の安定性試験などのさらなる安定性試験を実施した。この試験では、ｓｃＦｖを水性緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌで調製し、－６５℃未満、４℃、及び３７℃で４週間保存した。１週間目、２週間目、及び各試験の最後に、調製物中のモノマーとオリゴマーの割合をＳＥ－ＨＰＬＣピーク面積の積分によって評価した。表１１は、研究の２８日目に得られたエンドポイント測定値を比較している。２８日間の経時的なモノマー含有量（％）及びタンパク質濃度（ｍｇ／ｍＬ）を図８に示す。本発明のｓｃＦｖは、４℃の温度及び＞１０ｍｇ／ｍｌの濃度で保存時に、５％以下のモノマー損失、特にＡ１の場合１％未満のモノマー損失を有することが示された。さらに、本発明のｓｃＦｖ Ａ１は、３７℃の温度及び＞１０ｍｇ／ｍｌの濃度で保存時に、モノマー損失は５％未満であることが示された。
ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２に、４週間の安定性試験などのさらなる安定性試験を実施した。この試験では、ｓｃＦｖを水性緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌで調製し、－６５℃未満、４℃、及び３７℃で４週間保存した。１週間目、２週間目、及び各試験の最後に、調製物中のモノマーとオリゴマーの割合をＳＥ－ＨＰＬＣピーク面積の積分によって評価した。表１１は、研究の２８日目に得られたエンドポイント測定値を比較している。２８日間の経時的なモノマー含有量（％）及びタンパク質濃度（ｍｇ／ｍＬ）を図８に示す。本発明のｓｃＦｖは、４℃の温度及び＞１０ｍｇ／ｍｌの濃度で保存時に、５％以下のモノマー損失、特にＡ１の場合１％未満のモノマー損失を有することが示された。さらに、本発明のｓｃＦｖ Ａ１は、３７℃の温度及び＞１０ｍｇ／ｍｌの濃度で保存時に、モノマー損失は５％未満であることが示された。
【表11】
【0564】
２．４．４ 凍結融解安定性試験
上記の保存安定性試験に加えて、ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２の適合性を、凍結融解（Ｆ／Ｔ）サイクル（コロイド安定性）に関して評価した。
上記の保存安定性試験に加えて、ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２の適合性を、凍結融解（Ｆ／Ｔ）サイクル（コロイド安定性）に関して評価した。
【0565】
Ｆ／Ｔ安定性評価では、保存安定性試験（ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）と同じ分析方法とパラメーター（モノマー含有量％とモノマー損失％）を適用して、５回のＦ／Ｔサイクル後の分子の品質を追跡した。試料をＰＢＳで調製し、VivaSpin濃縮装置を使用して１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した後、試験を開始した。少量の試料（＜２０μＬ）により、急速な凍結融解の間隔が可能になった。試料の凍結融解サイクルを５回繰り返した。試料を－８０℃の温度で凍結し、室温で融解した。Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２の安定性を評価するために、各サイクルの後、タンパク質含有量や純度などの分析読み取り値を、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＵＶ280測定によって様々な時点で記録した。データを表１２に示す。図９は、５回繰り返しＦ／Ｔサイクルにわたるモノマー含有量（％）の経過を示している。
【0566】
２．４．５ ｐＨ安定性試験
ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２に短期間のストレス安定性試験を実施し、この試験では、ｓｃＦｖ分子をｐＨ値が３．５～７．５の一連の水性（リン酸－クエン酸塩）緩衝液系で２０ｍｇ／ｍｌで調製した。４℃で４８時間及び２５℃で８時間保存した後、モノマー含有量（％）及びモノマー損失（％）を分析した（表１３）。Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２は、試験された緩衝液系のいずれかで、測定された任意の時点で、５％未満のモノマー損失を示した（表１３及び表１４）。
ｓｃＦｖ Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２に短期間のストレス安定性試験を実施し、この試験では、ｓｃＦｖ分子をｐＨ値が３．５～７．５の一連の水性（リン酸－クエン酸塩）緩衝液系で２０ｍｇ／ｍｌで調製した。４℃で４８時間及び２５℃で８時間保存した後、モノマー含有量（％）及びモノマー損失（％）を分析した（表１３）。Ａ１、ＰＲＯ５７１、及びＰＲＯ５９２は、試験された緩衝液系のいずれかで、測定された任意の時点で、５％未満のモノマー損失を示した（表１３及び表１４）。
【0567】
この評価の範囲内で提案された様々な試験が、タンパク質の安定性の明確な機構的側面に対処していることに注意することが重要である。どちらの方法も、潜在的な生成物の寿命と安定性を推定するように設計されているが、対処するメカニズムは大きく異なる。熱展開によって評価される遷移の中点（Ｔｍ）は、タンパク質ドメインの安定性の定性的尺度である（ΔＧの熱力学的決定はできない）。非常に安定したタンパク質ドメイン（高Ｔｍ）は、周囲温度で自発的に展開する可能性が低く、従って、展開されたドメインの相互作用によって引き起こされる不可逆的な凝集／沈殿の傾向が小さくなる。高いドメイン安定性は、アミノ酸残基の密な充填を示し、これはプロテアーゼ切断に対する耐性とも相関している。一方、ＳＥ－ＨＰＬＣ評価は、モノマー画分の含有量と可溶性オリゴマー／凝集体の含有量を定量的に決定する。そのような可溶性オリゴマーはしばしば可逆的であり、正しく折りたたまれたタンパク質間の静電的又は疎水性相互作用によって比較的緩く会合する。熱変性によって評価されるＴｍとＳＥ－ＨＰＬＣによって評価されるオリゴマー／凝集体形成の傾向との間には、特に「境界線」安定性を有するタンパク質について、ある程度の相関関係がある。約６０℃の特定の閾値Ｔｍより大きいと、抗体可変ドメインは一般に十分に安定しており、周囲温度での部分的なドメインの展開による凝集／沈殿及びタンパク質分解に対して耐性がある。しかしながら、表面残基の疎水性及び／又は静電相互作用によって引き起こされるオリゴマー化は、依然として起こり得る。重要なことに、高温（例えば３７℃）での加速（ストレス）安定性試験では、オリゴマーの形成と沈殿の様々なメカニズムが同時に発生する可能性がある。
【表12】
【表13】
【表14】
【表15】
【0568】
２．４．６ 方法
２．４．６．１ 還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）は、定性的な特性評価とタンパク質の純度の制御に使用される分析手法である。米国薬局方（ＵＳＰ）（ＵＳＰ第１０５６章）によると、分析的ゲル電気泳動は、原薬中のタンパク質の均一性を特定し評価するための適切で日常的な方法である。
２．４．６．１ 還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）は、定性的な特性評価とタンパク質の純度の制御に使用される分析手法である。米国薬局方（ＵＳＰ）（ＵＳＰ第１０５６章）によると、分析的ゲル電気泳動は、原薬中のタンパク質の均一性を特定し評価するための適切で日常的な方法である。
【0569】
この方法は、大腸菌溶解物からのｓｃＦｖ生成物の量を定量して、発酵後の発現収量を得るために使用される。この方法の別の用途は、理論値に対する分子量に基づいて試験物質の本体を検証することである。支持的目的で、この方法は、プロセス関連の不純物（宿主細胞タンパク質）及び生成物関連の不純物（分解生成物又は付加物）に関して試験試料の純度を定量するために使用される。
【0570】
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、Bio-Rad Laboratories Inc.から入手した市販のプレキャストゲルシステム「MiniProtean」を使用して実施した。ヒト化ｓｃＦｖは「Any kD」分解ゲル（＃４５６－９０３６）で分析した。どちらの場合も、製造業者が推奨するトリス／グリシン緩衝液系を使用した。タンパク質バンドの検出には、SimplyBlueTM染色液（Life Technologies Corp.、＃ＬＣ６０６０）によるクマシー染色を使用した。染色操作については、供給業者のプロトコールに従った。
【0571】
染色されたタンパク質ゲルの記録及び分析は、記録システムChemiDoc XRSシステム（Bio-Rad Laboratories Inc.、＃１７０－８２６５）及びソフトウェアImage Lab、バージョン４．０．１（Bio-Rad Laboratories Inc.、＃１７０－９６９０）を使用して実施した
【0572】
２．４．６．２ ２８０ｎｍにおけるＵＶ吸光度
２８０ｎｍでのＵＶ吸光度法は、ＵＳＰ第１０５７章に概説されている総タンパク質アッセイである。タンパク質溶液は、芳香族アミノ酸の存在により、２８０ｎｍの波長のＵＶ光を吸収する。ＵＶ吸収は、タンパク質中のチロシン及びトリプトファン残基の含有量の関数であり、タンパク質濃度に比例する。未知のタンパク質溶液の吸光度は、分光法に関するＵＳＰ第８５１章に従って、ベールの法則Ａ＝ε×ｌ×ｃを適用することにより決定でき、式中、吸光度（Ａ）はモル吸光係数（ε）と吸収経路の長さと物質の濃度の積に等しい。ｓｃＦｖのモル吸光係数は、ソフトウェアVectorNTI（登録商標）（Life Technologies Corporation）を使用して計算した。
２８０ｎｍでのＵＶ吸光度法は、ＵＳＰ第１０５７章に概説されている総タンパク質アッセイである。タンパク質溶液は、芳香族アミノ酸の存在により、２８０ｎｍの波長のＵＶ光を吸収する。ＵＶ吸収は、タンパク質中のチロシン及びトリプトファン残基の含有量の関数であり、タンパク質濃度に比例する。未知のタンパク質溶液の吸光度は、分光法に関するＵＳＰ第８５１章に従って、ベールの法則Ａ＝ε×ｌ×ｃを適用することにより決定でき、式中、吸光度（Ａ）はモル吸光係数（ε）と吸収経路の長さと物質の濃度の積に等しい。ｓｃＦｖのモル吸光係数は、ソフトウェアVectorNTI（登録商標）（Life Technologies Corporation）を使用して計算した。
【0573】
ＵＶ吸光度の測定は、Nanoquantプレート（Tecan Group Ltd.）を備えるInfinityreader M200Proを使用して行われる。タンパク質試料の吸光度は２８０ｎｍと３１０ｎｍで測定され、後者の波長は参照信号となり、２８０ｎｍの信号から差し引かれる。試料マトリックスの潜在的な干渉を考慮して、測定ごとにブランク減算が実施される。得られたタンパク質試料の最終的な吸光度信号を使用して、ランベルトベールの法則を使用してタンパク質濃度が計算される。
【0574】
すべての測定は、０～４ＯＤの測定範囲で、機器の仕様に指定された範囲内で実施され、再現性１％未満及び均一性３％未満が製造業者によって指定されている。
【0575】
２．４．６．３ ＳＥ－ＨＰＬＣ（サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー）
ＳＥ－ＨＰＬＣは、ＵＳＰ第６２１章で概説されているように、固体固定相と液体移動相に基づく分離技術である。この方法では、サイズと形状に基づいて、疎水性固定相と水性移動相を利用して分子を分離する。分子の分離は、特定のカラムのボイド容量（Ｖ０）と総透過容量（ＶＴ）の間で発生する。ＳＥ－ＨＰＬＣによる測定は、自動試料注入と検出波長２８０ｎｍに設定されたＵＶ検出器を備えたChromasterＨＰＬＣシステム（Hitachi High-Technologies Corporation）で実施される。この装置は、ソフトウェアEZChrom Elite（Agilent Technologies、バージョン３．３．２ ＳＰ２）によって制御され、これはまた、得られるクロマトグラムの分析もサポートする。タンパク質試料は遠心分離によって清澄化され、注入するまでオートサンプラー内で４～６℃の温度に保たれる。ｓｃＦｖ試料の分析には、Shodex KW403-4Fカラム（Showa Denko Inc.、＃Ｆ６９８９２０２）が、標準化された緩衝生理食塩水移動相（５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ６．０、２５０ｍＭ塩化ナトリウム）を用いて推奨流量０．３５ｍＬ／分で使用される。注入あたりの標的試料負荷量は５μｇであった。試料は波長２８０ｎｍのＵＶ検出器で検出され、データは適切なソフトウェアスイートで記録される。得られたクロマトグラムは、Ｖ０～ＶＴの範囲で分析されるため、溶出時間が１０分より大きいマトリックス関連ピークは除外される。
ＳＥ－ＨＰＬＣは、ＵＳＰ第６２１章で概説されているように、固体固定相と液体移動相に基づく分離技術である。この方法では、サイズと形状に基づいて、疎水性固定相と水性移動相を利用して分子を分離する。分子の分離は、特定のカラムのボイド容量（Ｖ０）と総透過容量（ＶＴ）の間で発生する。ＳＥ－ＨＰＬＣによる測定は、自動試料注入と検出波長２８０ｎｍに設定されたＵＶ検出器を備えたChromasterＨＰＬＣシステム（Hitachi High-Technologies Corporation）で実施される。この装置は、ソフトウェアEZChrom Elite（Agilent Technologies、バージョン３．３．２ ＳＰ２）によって制御され、これはまた、得られるクロマトグラムの分析もサポートする。タンパク質試料は遠心分離によって清澄化され、注入するまでオートサンプラー内で４～６℃の温度に保たれる。ｓｃＦｖ試料の分析には、Shodex KW403-4Fカラム（Showa Denko Inc.、＃Ｆ６９８９２０２）が、標準化された緩衝生理食塩水移動相（５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ６．０、２５０ｍＭ塩化ナトリウム）を用いて推奨流量０．３５ｍＬ／分で使用される。注入あたりの標的試料負荷量は５μｇであった。試料は波長２８０ｎｍのＵＶ検出器で検出され、データは適切なソフトウェアスイートで記録される。得られたクロマトグラムは、Ｖ０～ＶＴの範囲で分析されるため、溶出時間が１０分より大きいマトリックス関連ピークは除外される。
【0576】
方法の中間精度を確保するために、各ＨＰＬＣ工程の開始時と終了時に参照標準物質がルーチンに測定される。このシステム適合性試験に使用される参照標準物質は、バッチ毎に生成され、各測定時点で使用されるように分注されたｓｃＦｖである。
【0577】
２．４．６．４ ＤＳＦ（示差走査蛍光測定法）
試験されたｓｃＦｖ構築物の熱展開の遷移の中点は、本質的にNiesen（Niesen et al., Nat Protoc. 2 (2007) 2212-21）によって説明されているように、示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）によって決定された。ＤＳＦ法は、温度依存性のタンパク質の展開を測定するための非公定法である。ＤＳＦによる熱展開温度の測定は、MX Proソフトウェアパッケージ（Agilent Technologies）で制御され、４９２／６１０ｎｍの励起／発光フィルターセットを備えたMX3005P qPCR装置（Agilent Technologies）を使用して実施される。反応は、Thermo fast 96白色ＰＣＲプレート（Abgene；＃ＡＢ－０６００／Ｗ）で設定される。タンパク質の展開を検出するために、SYPRO orange色素の市販のストック溶液（Molecular Probes；＃Ｓ６６５０）が最終希釈率１：１，０００で使用される。タンパク質試料は、展開測定用に、標準化された緩衝化生理食塩水で最終濃度５０μｇ／ｍＬに希釈される。熱展開は、２５℃で開始し３０秒間の１℃工程で９６℃まで上昇する温度プログラムによって実施される。温度プログラム中に、各試料の蛍光発光が記録される。記録された生データは、Microsoft Excelテンプレートのパッケージ（Niesen, Nature Protocols 2007, Vol. 2 No.9）で処理及び評価され、蛍光データは、プログラムGraphPad Prism（GraphPad Software, Inc.）を使用して、ボルツマン式にフィッティングされ、遷移の中間点（Ｔｍ）を取得する。
試験されたｓｃＦｖ構築物の熱展開の遷移の中点は、本質的にNiesen（Niesen et al., Nat Protoc. 2 (2007) 2212-21）によって説明されているように、示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）によって決定された。ＤＳＦ法は、温度依存性のタンパク質の展開を測定するための非公定法である。ＤＳＦによる熱展開温度の測定は、MX Proソフトウェアパッケージ（Agilent Technologies）で制御され、４９２／６１０ｎｍの励起／発光フィルターセットを備えたMX3005P qPCR装置（Agilent Technologies）を使用して実施される。反応は、Thermo fast 96白色ＰＣＲプレート（Abgene；＃ＡＢ－０６００／Ｗ）で設定される。タンパク質の展開を検出するために、SYPRO orange色素の市販のストック溶液（Molecular Probes；＃Ｓ６６５０）が最終希釈率１：１，０００で使用される。タンパク質試料は、展開測定用に、標準化された緩衝化生理食塩水で最終濃度５０μｇ／ｍＬに希釈される。熱展開は、２５℃で開始し３０秒間の１℃工程で９６℃まで上昇する温度プログラムによって実施される。温度プログラム中に、各試料の蛍光発光が記録される。記録された生データは、Microsoft Excelテンプレートのパッケージ（Niesen, Nature Protocols 2007, Vol. 2 No.9）で処理及び評価され、蛍光データは、プログラムGraphPad Prism（GraphPad Software, Inc.）を使用して、ボルツマン式にフィッティングされ、遷移の中間点（Ｔｍ）を取得する。
【0578】
展開の中間点の信頼性が高く堅牢な測定値を生成するために、少なくとも二重測定が実施される。中間精度の評価のために、参照標準物質（既知の特性評価されたｓｃＦｖ）がすべての測定に含まれ、異なる日のアッセイ性能の比較を可能にする。
【0579】
２．４．６．５ 安定性試験
これらの分子の開発可能性のために、読み出しとしての様々なｓｃＦｖ構築物の安定性を評価するために、短期安定性試験プロトコールを設計することができる。タンパク質構築物は、単純な緩衝生理食塩水調製物（上記参照）で１０ｍｇ／ｍＬの目標濃度に濃縮される。モノマー含有量はＳＥ－ＨＰＬＣによって測定して、純度が成功基準の＞９５％であることが確認される。次に、タンパク質試料を－８０℃未満、４℃、３７℃で４週間保存し、アリコートを様々な時点で分析する。主な読み取り値は、ＳＥ－ＨＰＬＣによる分析であり、これにより、可溶性の高分子量オリゴマー及び凝集体の定量が可能になる。裏付けとなる測定値として、タンパク質含有量は２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって決定される。これは、保存期間中に多量のタンパク質が沈殿によって失われたかどうかを示す。さらに、試験の終点での純度が、分解又は共有多量体化に関して構築物の安定性を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される。
これらの分子の開発可能性のために、読み出しとしての様々なｓｃＦｖ構築物の安定性を評価するために、短期安定性試験プロトコールを設計することができる。タンパク質構築物は、単純な緩衝生理食塩水調製物（上記参照）で１０ｍｇ／ｍＬの目標濃度に濃縮される。モノマー含有量はＳＥ－ＨＰＬＣによって測定して、純度が成功基準の＞９５％であることが確認される。次に、タンパク質試料を－８０℃未満、４℃、３７℃で４週間保存し、アリコートを様々な時点で分析する。主な読み取り値は、ＳＥ－ＨＰＬＣによる分析であり、これにより、可溶性の高分子量オリゴマー及び凝集体の定量が可能になる。裏付けとなる測定値として、タンパク質含有量は２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって決定される。これは、保存期間中に多量のタンパク質が沈殿によって失われたかどうかを示す。さらに、試験の終点での純度が、分解又は共有多量体化に関して構築物の安定性を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される。
【0580】
実施例３：多重特異性構築物の生成
抗ＩＬ－１７（２７－０７－Ｇ０２－ｓｃ０１、表１を参照）、抗ＴＮＦα（１６－１９－Ｂ１１－ｓｃ０６、表１を参照、ＷＯ２０１７／１５８１０１に記載）、及び抗ＨＳＡ結合ドメイン（１９－０１－Ｈ０４－ｓｃ０３、表１を参照）を２つの異なる三重特異性抗体形式に組み合わせた：トリボディ及びｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ形式（表１）。トリボディ形式は、Ｆａｂ断片と、Ｆａｂの各鎖のカルボキシ末端に融合した１つのｓｃＦｖ分子との融合体であり、三重特異性分子（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）をもたらす。この形式は、１つのタンパク質鎖上の定常軽ドメイン（ＣＬ）に融合した可変軽ドメイン（ＶＬ）と、第２のタンパク質鎖上の定常重ドメイン（ＣＨ１）に融合した可変重ドメイン（ＶＨ）とから成る、Ｆａｂ断片のヘテロ二量体アセンブリを使用している。カルボキシ末端では、定常ドメインはそれぞれ柔軟なＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーを介してｓｃＦｖ断片に接続されている。ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ断片が柔軟なＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーによって、非常に安定した１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）形式に融合された形式である。Ｆａｂ－ｓｃＦｖ2（トリボディ）とｓｃＤｂ－ｓｃＦｖの両方の形式は、ＣＨＯ－Ｓ宿主細胞で組換え発現させることができる。
抗ＩＬ－１７（２７－０７－Ｇ０２－ｓｃ０１、表１を参照）、抗ＴＮＦα（１６－１９－Ｂ１１－ｓｃ０６、表１を参照、ＷＯ２０１７／１５８１０１に記載）、及び抗ＨＳＡ結合ドメイン（１９－０１－Ｈ０４－ｓｃ０３、表１を参照）を２つの異なる三重特異性抗体形式に組み合わせた：トリボディ及びｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ形式（表１）。トリボディ形式は、Ｆａｂ断片と、Ｆａｂの各鎖のカルボキシ末端に融合した１つのｓｃＦｖ分子との融合体であり、三重特異性分子（Ｆａｂ－（ｓｃＦｖ）2）をもたらす。この形式は、１つのタンパク質鎖上の定常軽ドメイン（ＣＬ）に融合した可変軽ドメイン（ＶＬ）と、第２のタンパク質鎖上の定常重ドメイン（ＣＨ１）に融合した可変重ドメイン（ＶＨ）とから成る、Ｆａｂ断片のヘテロ二量体アセンブリを使用している。カルボキシ末端では、定常ドメインはそれぞれ柔軟なＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーを介してｓｃＦｖ断片に接続されている。ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ断片が柔軟なＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーによって、非常に安定した１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）形式に融合された形式である。Ｆａｂ－ｓｃＦｖ2（トリボディ）とｓｃＤｂ－ｓｃＦｖの両方の形式は、ＣＨＯ－Ｓ宿主細胞で組換え発現させることができる。
【0581】
三重特異性形式における個々の結合ドメインの最適な相対位置を、薬力学的及び生物理学的パラメーターの観点から試験した。各形式は、異なる構成、つまりドメインの相互の相対的な配置を可能にする。
【0582】
トリボディ断片の位置ＣＬ及びＣＨ１でのＳｃＦｖ融合は同等であると見なされ、この形式の３つの変種が得られる（図１０、Ａ）。分子の１本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）コアドメインへのｓｃＦｖ部分のＣ末端融合は、Ｎ末端融合よりも優れているため、この形式のＣ末端融合変種のみを評価した。この形式のいくつかの並べ換え変種を分析した（図１０、Ｂ）。すべての分子の配列を表１に示す。
【0583】
実施例４：リード化合物製造の一般的なプロセス
すべての三重特異性構築物の発現は、ＣＨＯｇｒｏ一過性トランスフェクションキット（Mirus）を使用してＣＨＯ－Ｓ細胞で実施された。培養物は３７℃で５～７日間（細胞生存率＜７０％）の発現後に遠心分離により採取され、タンパク質は清澄化された培養上清から、プロテインＬ親和性クロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーによる仕上げ工程によって精製された。製造された材料の品質管理には、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＵＶ２８０などの標準的な分析方法が使用された。
すべての三重特異性構築物の発現は、ＣＨＯｇｒｏ一過性トランスフェクションキット（Mirus）を使用してＣＨＯ－Ｓ細胞で実施された。培養物は３７℃で５～７日間（細胞生存率＜７０％）の発現後に遠心分離により採取され、タンパク質は清澄化された培養上清から、プロテインＬ親和性クロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーによる仕上げ工程によって精製された。製造された材料の品質管理には、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＵＶ２８０などの標準的な分析方法が使用された。
【0584】
表１６は、三重特異性形式の変種の作成と特性評価の概要を示す。図１１は、Ａ３～Ａ８の産生と精製の概要を示す。抗体断片は、ＣＨＯ細胞培養上清から、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）結合緩衝液で予備平衡化された充填プロテインＬカラムを使用して直接捕捉された。試料を適用した後、カラムを結合緩衝液で洗浄し、タンパク質を一工程ｐＨ勾配で溶出した。タンパク質画分のモノマー含有量をサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって測定し、画分をプールし、緩衝液を透析によりｐＨ６．４のリン酸クエン酸緩衝液（最終緩衝液）に交換した。後続の分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のために、画分プールを遠心濃縮機を使用して濃縮して総試料量を減少させ、ここで、前記分取サイズ排除クロマトグラフィーを、ＰＢＳで予備平衡化したGE Superdex 200 10/300カラムを使用して、タンパク質試料の仕上げのために行った。試料は、最終緩衝液を使用してアイソクラティックに溶出され、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及びＵＶ280によってさらに特性評価された。
【表16】
【0585】
実施例５：薬理学的特性評価
５．１ ｐＨ５．５及びｐＨ７．４でのＨＳＡ及びＣＳＡへの親和性
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及びカニクイザル血清アルブミン（ＣＳＡ）への結合は、精製された三重特異性分子について、ＭＡＳＳ－１装置（Sierra Sensors）でＳＰＲ分光測定を実施することにより評価された。ＨＳＡは大容量アミンセンサーチップ（Sierra Sensors）に直接固定化され、三重特異性分子は、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して、ｐＨ５．５又はｐＨ７．５のランニング緩衝液で０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物濃度を用いて、分析物として注入した。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされた。ＣＳＡへの親和性は、同様のアプローチでＣＳＡ固定化センサーチップを使用して評価された。ＣＳＡへの結合は、ｐＨ５．５及びｐＨ７．５のＡ５及びＡ７についてのみ測定された。以下の表（表１７）は、ＨＳＡ及びＣＳＡに対して得られた親和性をまとめたものである。
５．１ ｐＨ５．５及びｐＨ７．４でのＨＳＡ及びＣＳＡへの親和性
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及びカニクイザル血清アルブミン（ＣＳＡ）への結合は、精製された三重特異性分子について、ＭＡＳＳ－１装置（Sierra Sensors）でＳＰＲ分光測定を実施することにより評価された。ＨＳＡは大容量アミンセンサーチップ（Sierra Sensors）に直接固定化され、三重特異性分子は、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して、ｐＨ５．５又はｐＨ７．５のランニング緩衝液で０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物濃度を用いて、分析物として注入した。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされた。ＣＳＡへの親和性は、同様のアプローチでＣＳＡ固定化センサーチップを使用して評価された。ＣＳＡへの結合は、ｐＨ５．５及びｐＨ７．５のＡ５及びＡ７についてのみ測定された。以下の表（表１７）は、ＨＳＡ及びＣＳＡに対して得られた親和性をまとめたものである。
【表17】
【0586】
５．２ ヒトＴＮＦα並びにヒト及びカニクイザルＩＬ－１７Ａへの親和性
ヒトＴＮＦα並びにヒト及びカニクイザルＩＬ－１７Ａへの親和性は、ＳＰＲ分析を使用してＴ２００装置（Biocore, GE Healthcare）で測定した。この実験では、ビオチン化抗原をBiocoreのBiotin-CAPtureキットを使用して捕捉した。各分析物注入サイクルの後、ＣＡＰセンサーチップが再生され、新しい抗原が捕捉された。三重特異性分子は、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して、分析物としてランニング緩衝液で希釈された０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物濃度を用いて注入された。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされた。カニクイザルＩＬ－１７Ａへの結合は、Ａ５とＡ７についてのみ測定された。以下の表（表１８）は、ヒトＴＮＦα並びにヒト及びカニクイザルＩＬ－１７Ａで得られた親和性をまとめたものである。この表に示されているように、いくつかの分子では、ＴＮＦα又はＩＬ－１７Ａへの結合は１０％未満であった。この知見は、ドメインのそれぞれの標的へのアクセス可能性が低下することで説明できる可能性がある。これらの低結合剤の測定された親和性は同様の範囲であり、より高い結合レベルに達する分子と比較して時には著しく高いが、ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａの生物活性を阻害する分子の可能性は著しく低下した（表１９及び表２１を参照）。
ヒトＴＮＦα並びにヒト及びカニクイザルＩＬ－１７Ａへの親和性は、ＳＰＲ分析を使用してＴ２００装置（Biocore, GE Healthcare）で測定した。この実験では、ビオチン化抗原をBiocoreのBiotin-CAPtureキットを使用して捕捉した。各分析物注入サイクルの後、ＣＡＰセンサーチップが再生され、新しい抗原が捕捉された。三重特異性分子は、用量応答マルチサイクル反応速度アッセイを使用して、分析物としてランニング緩衝液で希釈された０．３５～９０ｎＭの範囲の分析物濃度を用いて注入された。得られたセンサーグラムは、１：１結合モデルを使用してフィッティングされた。カニクイザルＩＬ－１７Ａへの結合は、Ａ５とＡ７についてのみ測定された。以下の表（表１８）は、ヒトＴＮＦα並びにヒト及びカニクイザルＩＬ－１７Ａで得られた親和性をまとめたものである。この表に示されているように、いくつかの分子では、ＴＮＦα又はＩＬ－１７Ａへの結合は１０％未満であった。この知見は、ドメインのそれぞれの標的へのアクセス可能性が低下することで説明できる可能性がある。これらの低結合剤の測定された親和性は同様の範囲であり、より高い結合レベルに達する分子と比較して時には著しく高いが、ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａの生物活性を阻害する分子の可能性は著しく低下した（表１９及び表２１を参照）。
【0587】
ＴＮＦ誘導性の生物学的応答に対する精製された三重特異性分子の効果は、マウスＬ９２９線維芽細胞を使用して決定された。まず、Ｌ９２９細胞の増殖をアクチノマイシンＤで停止させた。次に、ウェルあたり６万個の細胞を播種し、次にヒト（５ｐＭ）又はカニクイザル（５ｐＭ）ＴＮＦα、並びに３回連続希釈した三重特異性分子と内部参照Ａ１３、三重特異性分子（配列番号１２５）として同一の抗ＴＮＦドメインを含むｓｃＤｂで処理した。２０時間のインキュベーション後、細胞生存活性をSigma-Aldrichの細胞計数kit-8を使用して評価した。６つの三重特異性分子によるＴＮＦαの中和について得られたデータが図１２に示される。さらに、ヒト及びカニクイザルＴＮＦαを中和するそれらの能力を比較するＡ５及びＡ７について得られた結果が図１３に示される。ヒトＴＮＦαについての参照Ａ１３に対する決定された相対ＩＣ50値、並びにヒト及びカニクイザルＴＮＦαについて得られたＩＣ50値間の比率が表１９に要約される。
【表18】
【表19】
【0588】
５．３ ＨＴ－２９アッセイ（ヒトＴＮＦ及びヒトＩＬ－１７Ａの同時阻止）
結腸直腸腺癌細胞株ＨＴ－２９におけるＧｒｏ－α／ＣＸＣＬ１などのケモカイン及びサイトカインのサブセットの発現をアップレギュレートする際に、ＩＬ－１７ＡはＴＮＦと相乗作用する。従って、ＨＴ－２９細胞によるＧｒｏ－α／ＣＸＣＬ１分泌を分析することにより、ヒトＴＮＦα及びヒトＩＬ－１７Ａの同時阻止を評価した。ＨＳＡ結合が力価に及ぼす影響を試験するために、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαによって誘導されるＧｒｏ－α／ＣＸＣＬ１分泌を阻害するＩＣ50も、ＨＳＡの存在下で評価された。実験は、１ｍｇ／ｍｌ ＨＳＡの非存在下及び存在下で実施された。９６ウェルプレートの各ウェルに５万個のＨＴ－２９細胞を播種した。力価測定された試験された三重特異性分子、内部参照Ａ１３（配列番号１２５）、及びセクキヌマブに加えて、ヒトＴＮＦα（０．２ｎｇ／ｍｌ）及びヒトＩＬ－１７Ａ（２ｎｇ／ｍｌ）の予備希釈物がＨＴ－２９細胞に加えられた。３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、上清を採取し、ＧＲＯ－α（ＣＸＣＬ１ケモカイン）分泌をＥＬＩＳＡで定量した。１ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下で、６つの三重特異性分子について作成された力価測定曲線を図１４に示す。参照セクキヌマブとＡ１３の両方に対する相対ＩＣ50値、並びにＨＳＡの存在下又は非存在下で観察された阻害パーセントを表２０に要約する。セクキヌマブに対する相対ＩＣ50は、セクキヌマブのＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）を試験された三重特異性分子のＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）で割ることによって計算された。Ａ１３に対する相対的ＩＣ50は、Ａ１３のＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）を試験された三重特異性分子のＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）で割ることによって計算された。
結腸直腸腺癌細胞株ＨＴ－２９におけるＧｒｏ－α／ＣＸＣＬ１などのケモカイン及びサイトカインのサブセットの発現をアップレギュレートする際に、ＩＬ－１７ＡはＴＮＦと相乗作用する。従って、ＨＴ－２９細胞によるＧｒｏ－α／ＣＸＣＬ１分泌を分析することにより、ヒトＴＮＦα及びヒトＩＬ－１７Ａの同時阻止を評価した。ＨＳＡ結合が力価に及ぼす影響を試験するために、ＩＬ－１７Ａ及びＴＮＦαによって誘導されるＧｒｏ－α／ＣＸＣＬ１分泌を阻害するＩＣ50も、ＨＳＡの存在下で評価された。実験は、１ｍｇ／ｍｌ ＨＳＡの非存在下及び存在下で実施された。９６ウェルプレートの各ウェルに５万個のＨＴ－２９細胞を播種した。力価測定された試験された三重特異性分子、内部参照Ａ１３（配列番号１２５）、及びセクキヌマブに加えて、ヒトＴＮＦα（０．２ｎｇ／ｍｌ）及びヒトＩＬ－１７Ａ（２ｎｇ／ｍｌ）の予備希釈物がＨＴ－２９細胞に加えられた。３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、上清を採取し、ＧＲＯ－α（ＣＸＣＬ１ケモカイン）分泌をＥＬＩＳＡで定量した。１ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下で、６つの三重特異性分子について作成された力価測定曲線を図１４に示す。参照セクキヌマブとＡ１３の両方に対する相対ＩＣ50値、並びにＨＳＡの存在下又は非存在下で観察された阻害パーセントを表２０に要約する。セクキヌマブに対する相対ＩＣ50は、セクキヌマブのＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）を試験された三重特異性分子のＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）で割ることによって計算された。Ａ１３に対する相対的ＩＣ50は、Ａ１３のＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）を試験された三重特異性分子のＩＣ50（ｎｇ／ｍｌ）で割ることによって計算された。
【0589】
最高の力価は、Ａ５、Ａ７、及びＡ８で観察された。三重特異性分子の力価は、セクキヌマブよりも５０～９０倍高く、Ａ１３よりも２～５倍高い。ＴＮＦα及びＩＬ－１７Ａの同時阻止は、ＴＮＦα又はＩＬ－１７Ａの単一阻止と比較して、効果量を劇的に増加させた。それぞれセクキヌマブとＡ１３で達成される最大効果と同じ効果に達するためには、それぞれ約２００倍と６０倍低い濃度が必要である。
【表20】
【0590】
５．４ 競合ＥＬＩＳＡ（ｈＩＬ－１７ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害）
ｈＩＬ－１７ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害は競合ＥＬＩＳＡによって評価された。ｈＩＬ－１７ＲＡをＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。ビオチン化ｈＩＬ－１７Ａを三重特異性分子とともに１．５時間プレインキュベートした後、混合物をＥＬＩＳＡプレートに加えて、ｈＩＬ－１７ＲＡに１時間結合させた。次に、ビオチン化ＩＬ－１７Ａの検出に使用されたストレプトアビジン－ＨＲＰを添加し、プレートを１時間インキュベートした。最後に、テトラメチルベンジジン溶液を加えてプレートを５～１０分間発色させ、反応を１Ｍ ＨＣｌで停止させた。プレートを４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ（参照波長）で読み取った。６つの三重特異性分子について得られた力価測定曲線を図１５に示す。参照セクキヌマブに対する計算された相対ＩＣ50値を表２１に要約する。
ｈＩＬ－１７ＲＡへのｈＩＬ－１７Ａ結合の阻害は競合ＥＬＩＳＡによって評価された。ｈＩＬ－１７ＲＡをＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。ビオチン化ｈＩＬ－１７Ａを三重特異性分子とともに１．５時間プレインキュベートした後、混合物をＥＬＩＳＡプレートに加えて、ｈＩＬ－１７ＲＡに１時間結合させた。次に、ビオチン化ＩＬ－１７Ａの検出に使用されたストレプトアビジン－ＨＲＰを添加し、プレートを１時間インキュベートした。最後に、テトラメチルベンジジン溶液を加えてプレートを５～１０分間発色させ、反応を１Ｍ ＨＣｌで停止させた。プレートを４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ（参照波長）で読み取った。６つの三重特異性分子について得られた力価測定曲線を図１５に示す。参照セクキヌマブに対する計算された相対ＩＣ50値を表２１に要約する。
【表21】
【0591】
５．５ ＴＮＦ、ＩＬ－１７Ａ、及びＨＳＡへの同時結合
ヒトＴＮＦα、ヒトＩＬ－１７Ａ、及びＨＳＡへの三重特異性分子の同時結合を証明するために、ＳＰＲ実験を使用した。簡単に説明すると、６つの三重特異性分子（Ａ３～Ａ８）を大容量アミンセンサーチップ（Sierra Sensors）に直接固定し、抗原を分析対象物として２５００ｎＭ（ＨＳＡ）、１８０ｎＭ（ＴＮＦα）、及び９０ｎＭ（ＩＬ－１７Ａ）の濃度で順次注入して、各結合が飽和状態に達したことを確認した。抗原注入のすべての可能な工程が試験され、６つの可能な工程が得られた。すべての三重特異性分子について、３つすべての抗原への同時結合が観察された。三重特異性分子への同時結合を証明するセンサーグラムが図１６に示される。
ヒトＴＮＦα、ヒトＩＬ－１７Ａ、及びＨＳＡへの三重特異性分子の同時結合を証明するために、ＳＰＲ実験を使用した。簡単に説明すると、６つの三重特異性分子（Ａ３～Ａ８）を大容量アミンセンサーチップ（Sierra Sensors）に直接固定し、抗原を分析対象物として２５００ｎＭ（ＨＳＡ）、１８０ｎＭ（ＴＮＦα）、及び９０ｎＭ（ＩＬ－１７Ａ）の濃度で順次注入して、各結合が飽和状態に達したことを確認した。抗原注入のすべての可能な工程が試験され、６つの可能な工程が得られた。すべての三重特異性分子について、３つすべての抗原への同時結合が観察された。三重特異性分子への同時結合を証明するセンサーグラムが図１６に示される。
【0592】
各抗原の三重特異性分子への同時結合を評価するために、理論上のＲｍａｘに対する結合レベルを、各リガンド及び分析物の分子量と三重特異性分子の固定化レベルを使用して、各注入について計算した。各抗原の理論的Ｒｍａｘに対する最大結合の平均は、それぞれの抗原が最初の分析物として注入された２回の注入（他の結合抗原の非存在下で）で得られた理論的Ｒｍａｘに対する個々の最大結合を平均することによって得られた。次に、各分析物注入の理論的Ｒｍａｘに対する結合をその平均最大結合と比較して、他の結合抗原の存在下で得られた結合率を計算した。平均最大結合に対する各抗原の結合レベルを表１２に示す。表１２は、平均最大結合と比較した各抗原の相対結合レベルを示す。各抗原の理論的Ｒｍａｘに対する結合レベル及び最大結合の平均（他の抗原の非存在下での結合レベル）を計算した。他の結合抗原の存在下での各抗原の結合を評価するために、各分析物注入の理論的Ｒｍａｘに対する結合をその平均最大結合に標準化して、他の抗原の存在下での結合の程度を示す結合値を得た。
【表22】
【0593】
すべての組み合わせで、抗原結合は理論上のＲｍａｘと比較して、平均最大結合の少なくとも７０％であった（例えば、ＴＮＦαを２番目又は３番目の分析物として固定化Ａ３に注入した場合、得られた相対結合レベルは、他の抗原の非存在下での結合レベルと比較した場合、わずかに減少して９２．８％となるか、又はわずかに増加して１２６．６％になった）。注目すべきことに、ＨＳＡが最後の分析物として注入された場合、相対結合レベルは、Ａ３を除くすべての三重特異性分子について約７０％に減少した。要約すると、試験された分子間で実質的な差異なしで、すべての三重特異性分子で同時結合が観察された。
【0594】
５．６ 基本的な開発可能性評価のための薬物動態学的特性評価と分子選択の要約
表２３は、６つの三重特異性分子の薬理学的特評価性の概要を示し、開発可能性評価のための分子の選択の基礎を提供した。Ｌ９２９アッセイでのＴＮＦ中和と、ＨＴ２９アッセイでのＴＮＦαとＩＬ－１７Ａの同時中和の観点から、Ａ３、Ａ４、及びＡ６よりも全体的に優れた性能に基づく開発可能性評価のために、３つの分子、すなわちＡ５、Ａ７、及びＡ８が選択された。３つの分子はすべて、３つの標的のそれぞれに対して同様の親和性を示した。Ａ７はＩＬ－１７ＡとＴＮＦαの両方を中和する最も高い力価を示し、Ａ５は約２倍低いＩＬ－１７Ａ中和力価と示し、Ａ８は、Ａ７と比較して約２倍低いＴＮＦα中和力価を示す。
表２３は、６つの三重特異性分子の薬理学的特評価性の概要を示し、開発可能性評価のための分子の選択の基礎を提供した。Ｌ９２９アッセイでのＴＮＦ中和と、ＨＴ２９アッセイでのＴＮＦαとＩＬ－１７Ａの同時中和の観点から、Ａ３、Ａ４、及びＡ６よりも全体的に優れた性能に基づく開発可能性評価のために、３つの分子、すなわちＡ５、Ａ７、及びＡ８が選択された。３つの分子はすべて、３つの標的のそれぞれに対して同様の親和性を示した。Ａ７はＩＬ－１７ＡとＴＮＦαの両方を中和する最も高い力価を示し、Ａ５は約２倍低いＩＬ－１７Ａ中和力価と示し、Ａ８は、Ａ７と比較して約２倍低いＴＮＦα中和力価を示す。
【表23】
【0595】
実施例６：開発可能性評価
Ａ３、Ａ４、及びＡ６は、抗ＴＮＦドメインの結合と力価の大幅な低下を示したため、開発可能性の評価にはＡ５、Ａ７、及びＡ８のみを選択した。
Ａ３、Ａ４、及びＡ６は、抗ＴＮＦドメインの結合と力価の大幅な低下を示したため、開発可能性の評価にはＡ５、Ａ７、及びＡ８のみを選択した。
【0596】
６．１ 探索的ｐＨ適合性
選択された精製三重特異性候補（Ａ５、Ａ７、及びＡ８）を＞２０ｇ／Ｌに濃縮し、次に、調製プロセスの潜在的なｐＨ範囲をカバーする緩衝液で調製した。ｐＨ３．５～７．５の範囲のこれらの条件で、分子を２０℃で８時間又は４℃で４８時間インキュベートした後、一般的安定性を示す方法であるＳＥ－ＨＰＬＣ及びＳＤＳ－ＰＡＧＥを適用して、潜在的なプロセス条件を有する分子の初期適合性プロフィールを確立し、分子の保存安定性評価のための緩衝液条件を規定した。
選択された精製三重特異性候補（Ａ５、Ａ７、及びＡ８）を＞２０ｇ／Ｌに濃縮し、次に、調製プロセスの潜在的なｐＨ範囲をカバーする緩衝液で調製した。ｐＨ３．５～７．５の範囲のこれらの条件で、分子を２０℃で８時間又は４℃で４８時間インキュベートした後、一般的安定性を示す方法であるＳＥ－ＨＰＬＣ及びＳＤＳ－ＰＡＧＥを適用して、潜在的なプロセス条件を有する分子の初期適合性プロフィールを確立し、分子の保存安定性評価のための緩衝液条件を規定した。
【0597】
探索的ｐＨ実験は、ｐＨ３．５～７．５の範囲の複数の５０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液中でＡ５及びＡ７を使用して実施された（表２４）。さらに、Ａ５、Ａ７、及びＡ８を含むｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液で、実験を行った（表２５）。３つの分子はすべて、評価したどの緩衝液でも＞５％のモノマー含有量の喪失はなかった。
【表24】
【表25】
【0598】
６．２ 熱による展開
示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）は、温度依存性のタンパク質の展開を測定するための非公定法であり、以下に記載のように測定された。
示差走査蛍光測定法（ＤＳＦ）は、温度依存性のタンパク質の展開を測定するための非公定法であり、以下に記載のように測定された。
【0599】
ｐＨ６．４の５０ｍＭリン酸クエン酸塩緩衝液中の試料を、最終タンパク質濃度５０μｇ／ｍＬ、及び最終濃度５×SYPRO（登録商標）Orangeで総量１００μｌに調製した。２５マイクロリットルの調製試料を三重測定で白壁のＡＢ遺伝子ＰＣＲプレートに加えた。アッセイはサーマルサイクラーとして使用されるｑＰＣＲ装置で実施され、蛍光発光はソフトウェアのカスタム色素較正ルーチンを使用して検出された。試験試料を含むＰＣＲプレートを、２５℃から９６℃まで１℃刻みの温度勾配に付し、各温度上昇後に３０秒間休止させた。総アッセイ時間は約２時間であった。Ｔｍは、ソフトウェアGraphPadPrismによって、曲線の変曲点を計算するための数学的２次導関数法を使用して計算された。報告されたＴｍは３回の測定の平均である。
【0600】
表２６は、一般的な緩衝液（リン酸－クエン酸塩緩衝液、ｐＨ６．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）で調製された三重特異性分子の融解温度を示す。
【表26】
【0601】
６．３ 保存安定性
選択された三重特異性分子の安定性と最終的な開発可能性の指標として、一般的な最適化されていない調製緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で様々な温度とタンパク質濃度で、選択された分子（Ａ５、Ａ７、Ａ８）を使用して短期安定性試験を実施した。
選択された三重特異性分子の安定性と最終的な開発可能性の指標として、一般的な最適化されていない調製緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で様々な温度とタンパク質濃度で、選択された分子（Ａ５、Ａ７、Ａ８）を使用して短期安定性試験を実施した。
【0602】
試料をＰＢＳで調製し、VivaSpin濃縮装置を使用して１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した後、試験を開始した。この試験に適用されたインキュベーション条件は、－８０℃、４℃、３７℃の温度と１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で４週間であった。分子の安定性を評価するために、タンパク質含有量及び純度などの分析読み取り値を、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＵＶ280測定、及びＳＤＳ－ＰＡＧＥによって異なる時点で記録した（図１７及び表２７）。
【表27】
【0603】
３７℃での経時的なモノマー含有量％の記録は、図１８のｄ０及びｄ２８安定性試料のＳＥ－ＨＰＬＣトレースの重なりによって示されるように、分子間の実質的な差異を明らかにした。Ａ８は明らかに安定性が低く、Ａ５及びＡ７と比較した場合、かなりの量の高分子量分子種を示し、これは、後者の分子が同じ抗体形式を共有し、Ａ７と同じドメインで構成されているため（ドメイン配向は並べ替えられているが）、予想外である。
【0604】
６．４ 凍結／融解の安定性
上記の保存安定性試験に加えて、５回の繰り返し凍結融解（Ｆ／Ｔ）サイクルに関して、分子の適合性が評価された（表２８）。Ｆ／Ｔ安定性評価では、保存安定性試験と同じ分析方法を使用して、５回のＦ／Ｔサイクル後の分子の品質を追跡した。すべての分子は、１％未満のモノマー含有量の損失を示した（表２８）。
上記の保存安定性試験に加えて、５回の繰り返し凍結融解（Ｆ／Ｔ）サイクルに関して、分子の適合性が評価された（表２８）。Ｆ／Ｔ安定性評価では、保存安定性試験と同じ分析方法を使用して、５回のＦ／Ｔサイクル後の分子の品質を追跡した。すべての分子は、１％未満のモノマー含有量の損失を示した（表２８）。
【0605】
試料をＰＢＳで調製し、VivaSpin濃縮装置を使用して１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した後、試験を開始した。少量の試料（＜２０μＬ）により、急速な凍結と融解の間隔が可能になった。試料は５回の凍結融解サイクルを繰り返した。これらは－８０℃の温度で凍結され、室温で融解された。各サイクル後の分子の安定性を評価するために、タンパク質含有量や純度などの分析読み取り値を、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＵＶ280測定によって異なる時点で記録した。
【表28】
【0606】
６．５ 基本的な開発可能性評価の要約
開発可能性評価は表２９に要約される。
開発可能性評価は表２９に要約される。
【表29】
【0607】
実施例７：カニクイザルにおける薬物動態（ＰＫ）の特性評価
抗ＨＳＡドメインを含む三重特異性形式の使用による半減期の延長を確認するために、カニクイザルにおける非ＧＬＰ薬物動態試験を実施した。以下に簡単に概説される試験計画に従って、Ａ７をカニクイザルに投与した（表３０も参照）。Ａ７の薬物動態を、オスのカニクイザルへの静脈内及び皮下投与後に決定した。合計６匹の投薬経験済み動物（各グループ３匹）に、３ｍｇ／ｋｇの目標用量レベルでＡ７を単回投与した。タンパク質は、無菌１×リン酸緩衝化生理食塩水、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、５００ｍＭスクロース、ｐＨ７．５で予備調製した（表３０）。
抗ＨＳＡドメインを含む三重特異性形式の使用による半減期の延長を確認するために、カニクイザルにおける非ＧＬＰ薬物動態試験を実施した。以下に簡単に概説される試験計画に従って、Ａ７をカニクイザルに投与した（表３０も参照）。Ａ７の薬物動態を、オスのカニクイザルへの静脈内及び皮下投与後に決定した。合計６匹の投薬経験済み動物（各グループ３匹）に、３ｍｇ／ｋｇの目標用量レベルでＡ７を単回投与した。タンパク質は、無菌１×リン酸緩衝化生理食塩水、１５０ｍＭ Ｌ－アルギニン、５００ｍＭスクロース、ｐＨ７．５で予備調製した（表３０）。
【表30】
【0608】
血清は、以下の時点で採取された血液試料から調製された：投与前、投与後１０分、３０分、１、２、４、６、８、１２、２４、３６、４８、７２、９６、１４４、１９２、２４０、２８８、３３６、３８４、４３２、及び５０４時間。
【0609】
測定された血清濃度を図１９に示す。１９２時間目以降にＡ７濃度の大幅な低下が観察された。２８８から５０４時間目時点までのすべての試料は、定量限界（ＢＬＱ）を下回った。この信号の低下は、サルによる抗薬物抗体（ＡＤＡ）の出現を示唆した。ヒト可変ドメインに対するＡＤＡの形成が予想され、これは抗ＴＮＦα×ＨＳＡ暫定抗体で以前観察されている。従って、Ａ７をＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、血清試料とインキュベートするアッセイを実施した。Ａ７に結合したカニクイザルＩｇＧは、抗サルＩｇＧ抗体を使用して検出された。ＡＤＡの存在が確認され、結果は図１９に示される。動物は１９２時間目以降にＡＤＡを発症したため、Ａ７の半減期を過小評価しないために、ＰＤパラメーターの推定では後の時点を省略した。
【0610】
次に、サルの血清試料をＰＫ－ＥＬＩＳＡで分析した。すべての処理動物からの血清試料を希釈した。ＥＬＩＳＡプレートをヒトＴＮＦαで一晩コーティングし、５％カニクイザル血清中のＡ７の連続希釈物をプレートに加えて、検量線を得た。ＴＮＦα結合Ａ７は、ビオチン化ヒトＩＬ－１７Ａ、続いてストレプトアビジンポリＨＲＰにより検出された。濃度が不明な血清試料は、必要であれば２０倍以上に希釈し、Ａ７濃度を検量線から補間した。アッセイの適格性確認のために、定量及び品質管理の下限と上限を設定して、５０～６００ｎｇ／ｍｌの分析範囲を規定した。アッセイは、希釈の直線性、フック効果、及び選択性について試験された。さらに、１～３回の凍結融解サイクルに付されたカニクイザル血清中のＡ７の安定性が、定量化の前に示された。
【0611】
次に、ＰＫ分析からのデータをＰＫパラメーターの計算に利用した。薬物動態パラメーターは、WinNonlin薬物動態ソフトウェア（Phoenixバージョン１．４）を使用して非コンパートメントアプローチを使用した推定された。
【0612】
様々な動力学的パラメーターを正確に評価するには、時間ゼロから無限大までのＡＵＣが必要である。最後に測定された濃度（ｔlast）の時間からの外挿が、ｔlastから無限大までの曲線の数学的積分によって行われる。最後の試料から無限大までの外挿面積は、得られた動力学的パラメーターの正確性を確認するために、合計ＡＵＣの２０％未満である必要がある。Ａ７のＩＶ投与とＳＣ投与の両方で、ＡＵＣの無限大までの外挿は総面積の２０％を超えている。その結果、計算されたデータ（表３１）は注意して解釈する必要がある。おそらくこの効果は、アッセイを妨害する抗薬物抗体の出現が原因で発生するのであろう。このような干渉は、より高い投与量によって回避される可能性がある。
【表31】
【0613】
抗ＨＳＡドメインを含むｓｃＤｂ－ｓｃＦｖでは、明確な半減期の延長が観察された。Ａ７の半減期（ｔ１／２）は５日より長かった。これは表３１に示すように、投与方法とは無関係に達成された。排除段階の最後のポイント（信号の低下前）の変動が大きいため、動物００６Ｍで計算された４３６時間の半減期は、残りの動物について決定された半減期よりも精度が低い可能性がある。平均半減期は、皮下注射後の方がＩＶ投与後よりも高く、平均半減期はそれぞれ２３７時間（９．９日）と１５３時間（６．４日）であった。
【0614】
実施例８：複合体形成分析
この試験では、様々な比率のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ Ａ７、モリソンＬ Ａ１４及びＡ１５（図２０を参照）、及び標的結合分子であるヒトＩＬ－１７Ａ及びヒトＴＮＦαを共培養し、生成された複合体を特性評価した。
この試験では、様々な比率のｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ Ａ７、モリソンＬ Ａ１４及びＡ１５（図２０を参照）、及び標的結合分子であるヒトＩＬ－１７Ａ及びヒトＴＮＦαを共培養し、生成された複合体を特性評価した。
【0615】
Ａ１４はモリソンＬ形式で、抗ＴＮＦα結合ドメインがＦａｂアーム上に配置され、抗ＩＬ－１７Ａ結合ドメインがｓｃＦｖとして軽鎖のＣ末端に結合している。
【0616】
Ａ１５はモリソンＬ形式で、抗ＩＬ－１７Ａ結合ドメインがＦａｂアーム上に配置され、抗ＴＮＦα結合ドメインがｓｃＦｖとして軽鎖のＣ末端に結合している。
【0617】
Ａ７、Ａ１４、及びＡ１５の発現は、一過性ＣＨＯｇｒｏ発現システム（Mirus）を使用してＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ＣＨＯ－Ｓ細胞で行った。目的の遺伝子は哺乳類での発現に最適化され、合成され、標準のｐｃＤＮＡ３．１ベクターにクローニングされた。シグナル配列はマウス重鎖ＩｇＧに由来する。発現培養物を、バッチで３７℃で６～７日間（細胞生存率＜７０％）又は３７℃で１日培養し、次に、温度を３２℃にシフトさせて５～６日間培養した。遠心分離とそれに続く０．４５μｍろ過により、培養上清を分離した。清澄化された培養上清から、Ａ７をプロテインＬ親和性クロマトグラフィーとそれに続く仕上げサイズ排除クロマトグラフィーによって捕捉した。
【0618】
組換えヒトＩＬ－１７Ａは、Peprotech, Rocky Hill, NJ, USAから、大腸菌で発現され、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＨＰＬＣ（カタログ＃２００－１７、ロット＃０６１１８４）で純度９８％以上に精製されたジスルフィド結合ホモダイマーとして購入した。
【0619】
組換えヒトＴＮＦαは、Peprotech, Rocky Hill, NJ, USAから、大腸菌で発現され、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＨＰＬＣ（カタログ＃３００－００１Ａ、ロット＃０９０６ＣＹ２５）で純度９８％以上に精製されたホモトリマーとして購入した。
【0620】
形成された複合体の特性評価は、遠心分離後に、動的光散乱（ＤＬＳ）による流体力学的半径の決定、及び２８０ｎｍでの吸光度測定によるタンパク質濃度の回収によって実施された。
【0621】
動的光散乱は、経時的な散乱光強度の変動を記録することにより、溶液中の粒子サイズ分布を決定するための高速で感度の高い方法である。データは、数学的に自己相関関数に変換されて、平行拡散係数（Ｄt）を与える。次に流体力学的半径（Ｒh）は、ストークス－アインシュタインの方程式から得られる：
ここで、ｋｂはボルツマン定数、Ｔはケルビン単位の温度、ηは溶媒の粘度である。
【数1】
【0622】
流体力学的半径は、DynaPro（登録商標）Plate reader（商標）II及びDynamicsソフトウェアパッケージ（Wyatt Technology Corp., Santa Barbara, CA, USA）を使用して決定された。２５μＬを３８４ウェルの光学的透明底マイクロタイタープレート（例：Corning（登録商標）３８４ウェルマイクロプレート、Merck、ＣＬＳ３５４０－５０ＥＡ）に添加し、残りの気泡を遠心分離（１０００ｇ、４分）により除去した。試料は、２５℃で５～１０秒間の１０回の取得によって測定された。粘度をＰＢＳに設定した。
【0623】
複合体形成の実験中、Ａ７は、その可溶性標的であるヒトＩＬ－１７Ａ及びヒトＴＮＦαのそれぞれと、表３２に示す相対モル比（Ａ７上の結合部位（パラトープ）及び各標的上のエピトープの相対数）、及びＫDより少なくとも１０００倍の濃度（表３２）でインキュベートされた。各エピトープ／結合部位とＡ７の濃度範囲は０．５～５μＭであった。
【表32】
【0624】
試験された結合パートナー比のそれぞれで形成された可溶性複合体の流体力学的半径は、図２１、図２２、及び図２３に要約されている。回収された可溶性タンパク質濃度のパーセントは、図２４、図２５、及び図２６に要約されている。
【0625】
１． ほとんどの条件で、タンパク質濃度の完全な回収が観察され、これは、Ａ７の不溶性複合体の形成がないか又は限られていることを示す
２． 複合体サイズ形成中の流体力学的半径の増加が、Ａ７について最大５倍に制限されている
３． Ａ７について可溶性複合体形成とわずかなサイズ増加のため、免疫原性リスクの制限されている
４． Ａ７による各標的の一価結合は、複合体形成時にわずかなサイズの増加で可溶性複合体のみの形成を促進する
２． 複合体サイズ形成中の流体力学的半径の増加が、Ａ７について最大５倍に制限されている
３． Ａ７について可溶性複合体形成とわずかなサイズ増加のため、免疫原性リスクの制限されている
４． Ａ７による各標的の一価結合は、複合体形成時にわずかなサイズの増加で可溶性複合体のみの形成を促進する
【0626】
結論：
抗体を介した免疫複合体の形成は、免疫原性及び免疫関連の有害事象に関連している。そのような免疫複合体は、例えば多量体形態（すなわち、二量体、三量体、四量体など）で存在する標的分子を二価抗体が架橋する場合に形成される。三量体標的（例えばＴＮＦα）の状況では、抗体はその２つのＦａｂアームで２つの異なるＴＮＦ三量体に結合して、小さな可溶性複合体を生成することができる。複合体中の２つの結合したＴＮＦ三量体のそれぞれの２つの非結合単位は、次に他の抗体によって結合され得る。複数の抗体が同時に結合すると、これは高次の複合体と免疫沈殿物の形成につながる。このような大きな免疫複合体は治療用抗体の免疫原性を高め、抗薬物抗体の形成や免疫関連の有害事象を引き起こす可能性がある。免疫複合体形成のリスクは、分子がそれぞれ二価の相互作用によって複数の標的タイプに同時に関与できる場合にさらに明白になる。この例は、二重特異性抗ＴＮＦα／ＩＬ－１７阻止剤ＡＢＴ１２２及びＣＯＶＡ３２２であり、これらは二価結合モードでそれぞれの標的と相互作用している。ＡＢＴ１２２は高い頻度で抗薬物抗体の形成を引き起こすことが報告されたが、ＣＯＶＡ３２２はさらに、おそらく免疫複合体の形成によって引き起こされる免疫関連の有害反応（皮膚の発疹）を引き起こした。
抗体を介した免疫複合体の形成は、免疫原性及び免疫関連の有害事象に関連している。そのような免疫複合体は、例えば多量体形態（すなわち、二量体、三量体、四量体など）で存在する標的分子を二価抗体が架橋する場合に形成される。三量体標的（例えばＴＮＦα）の状況では、抗体はその２つのＦａｂアームで２つの異なるＴＮＦ三量体に結合して、小さな可溶性複合体を生成することができる。複合体中の２つの結合したＴＮＦ三量体のそれぞれの２つの非結合単位は、次に他の抗体によって結合され得る。複数の抗体が同時に結合すると、これは高次の複合体と免疫沈殿物の形成につながる。このような大きな免疫複合体は治療用抗体の免疫原性を高め、抗薬物抗体の形成や免疫関連の有害事象を引き起こす可能性がある。免疫複合体形成のリスクは、分子がそれぞれ二価の相互作用によって複数の標的タイプに同時に関与できる場合にさらに明白になる。この例は、二重特異性抗ＴＮＦα／ＩＬ－１７阻止剤ＡＢＴ１２２及びＣＯＶＡ３２２であり、これらは二価結合モードでそれぞれの標的と相互作用している。ＡＢＴ１２２は高い頻度で抗薬物抗体の形成を引き起こすことが報告されたが、ＣＯＶＡ３２２はさらに、おそらく免疫複合体の形成によって引き起こされる免疫関連の有害反応（皮膚の発疹）を引き起こした。
【0627】
ここで我々は、Ａ７と同じ結合ドメインを含む標的（Ａ１４及びＡ１５など）と二価で相互作用する二重特異性形式と比較した場合、Ａ７によって例示される二重特異性一価ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖが免疫複合体形成を媒介する能力が著しく低下していることを示す。従って我々は、ＡＤＡ形成のリスクが低く、リスク対利益プロフィールが良好であるため、一価二重特異性形式が二重特異性二価形式よりもの方が好ましいと結論する。
【0628】
多くの場合、標的への比較的低い親和性を補償するために、二価形式が選択される（例えば、ＩＬ－１７へのＣＯＶＡ３２２結合）。従って、多重特異的アプローチで一価形式を可能にするためには、それぞれの標的に対して非常に高い親和性が必要である。Ａ７（及びその変種）中のＦｖドメインの高い親和性は一価形式の使用を可能にし、非常に強力な二重特異性治療薬が得られる。
【0629】
さらに、一価の二重特異性ｓｃＤｂ－ｓｃＦｖ形式中にＦｃ領域が存在しないため、免疫細胞上のＦｃ受容体への結合が回避され、これもまた、免疫関連の有害事象の発生に寄与する可能性がある。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6-I】
【図6-II】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【配列表】
【国際調査報告】