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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-27
(54)【発明の名称】神経認知障害を処置するための組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 35/12 20150101AFI20220420BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20220420BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220420BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220420BHJP
A61K 35/545 20150101ALI20220420BHJP
A61K 35/28 20150101ALI20220420BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20220420BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20220420BHJP
C07K 19/00 20060101ALN20220420BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20220420BHJP
C12N 15/86 20060101ALN20220420BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20220420BHJP
【ＦＩ】
A61K35/12
A61K48/00
A61P25/00
A61P25/28
A61K35/545
A61K35/28
A61K35/76
C07K14/47 ZNA
C07K19/00
C12N15/113 Z
C12N15/86 Z
C12N15/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021544547
(86)(22)【出願日】2020-01-31
(85)【翻訳文提出日】2021-09-29
(86)【国際出願番号】 US2020016192
(87)【国際公開番号】W WO2020160458
(87)【国際公開日】2020-08-06
(31)【優先権主張番号】62/800,096
(32)【優先日】2019-02-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520346572
【氏名又は名称】アブロバイオ，インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】メイソン，クリス
(72)【発明者】
【氏名】クーパー，オリバー
(72)【発明者】
【氏名】プラスチャート，ロバート
(72)【発明者】
【氏名】ディーンドレイド，マーク
(72)【発明者】
【氏名】ヴァン ティル，ニコ，ペーター
【テーマコード（参考）】
4C084
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA021
4C084ZA022
4C084ZA151
4C084ZA152
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB44
4C087BB64
4C087BB65
4C087BC83
4C087CA12
4C087NA05
4C087NA14
4C087ZA02
4C087ZA15
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045EA21
4H045FA74
(57)【要約】
前頭側頭骨大葉変性または神経セロイドリポフスチン症などの神経認知障害を有するか、またはそれを発症するリスクのある対象を処置するための方法であって、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）もしくはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞またはＰＧＲＮもしくはＧＲＮを発現する細胞を前記対象に投与することによる方法が、本明細書において記載されている。ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞を含む組成物も開示されている。
【選択図】図１Ａ
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
神経認知障害（ＮＣＤ）を有すると診断されている対象を処置する方法であって、前記対象に、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含む組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項2】
前記ＮＣＤが重度ＮＣＤである、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記重度ＮＣＤが、前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害する、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記重度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、請求項２または３に記載の方法。
【請求項5】
前記ＮＣＤが軽度ＮＣＤである、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記軽度ＮＣＤが、前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記軽度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから標準偏差１～２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、請求項５または６に記載の方法。
【請求項8】
前記基準集団が、一般集団である、請求項４または７に記載の方法。
【請求項9】
前記認知検査が、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）からなる群から選択される、請求項４、７、または８に記載の方法。
【請求項10】
前記ＮＣＤが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連している、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記ＮＣＤが、せん妄または他の精神障害によるものではない、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記ＮＣＤが前頭側頭骨ＮＣＤである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
前記前頭側頭骨ＮＣＤが前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記ＮＣＤがリソソーム疾患によるものである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記リソソーム疾患が神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが分泌シグナルペプチドを含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
前記分泌シグナルペプチドがＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドである、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記細胞が、前記ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
前記ＰＧＲＮが少なくとも２つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも３つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも４つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも５つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも６つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも７つのＧＲＮドメインを含む、または任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも８つのＧＲＮドメインを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記ＰＧＲＮが２～１６のＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが２～１２のＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが２～８つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが２～４つのＧＲＮドメインを含む、または任意選択で、前記ＰＧＲＮが２つのＧＲＮドメインを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項21】
前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項22】
前記ＰＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
前記ＰＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
前記ＰＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
前記ＰＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
前記ＰＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項27】
前記ＰＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項28】
前記ＰＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項30】
前記ＰＧＲＮが全長ＰＧＲＮである、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項31】
前記細胞が、前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項32】
前記ＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインである、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項33】
前記ＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
前記ＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記ＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項36】
前記ＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項37】
前記ＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項38】
前記ＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項39】
前記ＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項40】
前記ＧＲＮが全長ＧＲＮを含む、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、任意選択で、前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、任意選択で、前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、任意選択で、前記細胞が、配列番号１０の核酸配列を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
前記細胞が、コドン最適化ＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、任意選択で、前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、任意選択で、前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、または任意選択で、前記コドン最適化導入遺伝子が配列番号１９の核酸配列を有する、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項45】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）の受容体結合（Ｒｂ）ドメインを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項47】
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項48】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ及びグリコシル化非依存性リソソームターゲティング（ＧＩＬＴ）タグを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項49】
前記ＧＩＬＴタグが、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩ（配列番号１２）のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有し、かつインスリン受容体についての天然に存在するヒトＩＧＦ－ＩＩの親和性と比べて、インスリン受容体について低下した結合親和性を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含み、前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、フーリン切断に抵抗性があり、かつマンノース－６－リン酸依存的手法でヒトカチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体に結合する、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、かつ前記変異が少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を破壊する、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
前記変異が、アミノ酸置換、欠失、及び／または挿入である、請求項５０に記載の方法。
【請求項52】
前記変異が、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である、請求項５１に記載の方法。
【請求項53】
前記変異が、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０からなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換、及びそれらの組み合わせである、請求項５１に記載の方法。
【請求項54】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列を有する、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項55】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列を有する、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項56】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列を有する、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項57】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項58】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項59】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項60】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮをコードする前記導入遺伝子がさらに、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）－１２６（ｍｉＲ－１２６）ターゲティング配列を３’－ＵＴＲに含む、請求項１～５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項61】
前記対象に前記組成物を投与すると、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが前記対象の血液脳関門を透過する、請求項１～６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項62】
前記ＦＴＬＤまたはＮＣＬがＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬである、請求項１３～６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項63】
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの行動異常型前頭側頭型認知症異型である、請求項６２に記載の方法。
【請求項64】
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの意味性認知症異型である、請求項６２に記載の方法。
【請求項65】
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの進行性非能弁性失語症異型である、請求項６２に記載の方法。
【請求項66】
前記ＰＧＲＮ関連ＮＣＬがバッテン病である、請求項６２に記載の方法。
【請求項67】
前記細胞が、万能性細胞または多能性細胞である、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項68】
前記多能性細胞がＣＤ３４＋細胞である、請求項６７に記載の方法。
【請求項69】
前記ＣＤ３４＋細胞が、造血幹細胞（ＨＳＣ）または骨髄性前駆細胞（ＭＰＣ）である、請求項６８に記載の方法。
【請求項70】
前記万能性細胞が、胚性幹細胞（ＥＳＣ）または人工万能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である、請求項６７に記載の方法。
【請求項71】
前記細胞が、血液系統前駆細胞（ＢＬＰＣ）、ミクログリア前駆細胞、単球、マクロファージ、またはミクログリアである、請求項１～６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項72】
前記ＢＬＰＣが単球である、請求項７１に記載の方法。
【請求項73】
前記組成物の投与前に、前記対象における内因性ミクログリアの集団を除去しておく、請求項１～７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項74】
前記対象に前記組成物を投与する前に、前記対象における内因性ミクログリアの集団を除去することを含む、請求項１～７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項75】
前記ミクログリアを、ブスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、トレオスルファン、及びクロドロネートリポソームからなる群から選択される薬剤を使用して、放射線療法により、またはそれらの組み合わせで除去する、請求項７２または７３に記載の方法。
【請求項76】
前記組成物を前記対象に、全身投与により、前記対象の中枢神経系への直接投与により、前記対象の骨髄への直接投与により、または前記組成物を含む骨髄移植により投与する、請求項１～７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項77】
前記対象に、細胞の集団を投与することをさらに含む、請求項１～７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項78】
前記組成物の投与前に、または前記組成物の投与後に、前記細胞の集団を前記対象に投与する、請求項７７に記載の方法。
【請求項79】
前記細胞が万能性細胞または多能性細胞である、請求項７７または７８に記載の方法。
【請求項80】
前記多能性細胞がＣＤ３４＋細胞である、請求項７９に記載の方法。
【請求項81】
前記ＣＤ３４＋細胞が造血幹細胞（ＨＳＣ）または骨髄性前駆細胞（ＭＰＣ）である、請求項８０に記載の方法。
【請求項82】
前記万能性細胞が胚性幹細胞（ＥＳＣ）または人工万能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である、請求項７９に記載の方法。
【請求項83】
前記細胞が、血液系統前駆細胞（ＢＬＰＣ）、ミクログリア前駆細胞、単球、マクロファージ、またはミクログリアである、請求項７７～７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項84】
前記ＢＬＰＣが単球である、請求項８３に記載の方法。
【請求項85】
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するように改変されていない、請求項７７～８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項86】
前記対象への前記組成物の投与前に、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、前記細胞において、前記対象において、または前記対象のニューロンの集団において破壊する、請求項１～８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項87】
前記細胞を、前記細胞中の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ核酸の切断を触媒するヌクレアーゼと接触させることにより、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する、請求項８６に記載の方法。
【請求項88】
前記ヌクレアーゼが、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質９（Ｃａｓ９）であり、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである、請求項８７に記載の方法。
【請求項89】
前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、阻害性ＲＮＡ分子を前記細胞、前記対象、または前記ニューロンの集団に投与することにより破壊する、請求項８６～８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項90】
前記阻害性ＲＮＡ分子が短鎖干渉ＲＮＡ、短鎖ヘアピンＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡである、請求項８９に記載の方法。
【請求項91】
前記細胞が自家細胞または同種異系細胞である、請求項１～９０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項92】
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトまたは形質導入されている、請求項１～９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項93】
前記細胞を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、及びレトロウイルス科ウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターで形質導入する、請求項９２に記載の方法。
【請求項94】
前記ウイルスベクターがレトロウイルス科ウイルスベクターである、請求項９３に記載の方法。
【請求項95】
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクターである、請求項９４に記載の方法。
【請求項96】
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、中央ポリプリン路、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶ Ｐｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項97】
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４からなる群から選択されるＡＡＶである、請求項９３に記載の方法。
【請求項98】
前記ウイルスベクターが偽型ウイルスベクターである、請求項９３～９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項99】
前記偽型ウイルスベクターが、偽型ＡＡＶ、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ウイルスからなる群から選択される、請求項９８に記載の方法。
【請求項100】
前記細胞を、ａ）カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチル－デキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び磁気ビーズからなる群から選択される薬剤；またはｂ）エレクトロポレーション、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ、スクイーズ－ポレーション、ソノポレーション、光学トランスフェクション、Ｍａｇｎｅｔｏｆｅｃｔｉｏｎ、及びインペールフェクションからなる群から選択される技術を使用してトランスフェクトする、請求項９２に記載の方法。
【請求項101】
前記細胞における前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、ユビキタスプロモーター、細胞系統特異的プロモーター、または合成プロモーターにより媒介する、請求項１～１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項102】
前記ユビキタスプロモーターが、伸長因子１－アルファプロモーター及びホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーターからなる群から選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項103】
前記細胞系統特異的プロモーターが、ＰＧＲＮプロモーター、ＣＤ１１ｂプロモーター、ＣＤ６８プロモーター、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１プロモーター、同種移植炎症因子１プロモーター、プリン受容体Ｐ２Ｙ１２プロモーター、膜貫通タンパク質１１９プロモーター、及びコロニー刺激因子１受容体プロモーターからなる群から選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項104】
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含み、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または添加剤をさらに含む、薬学的組成物。
【請求項105】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮがＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドを含む、請求項１０４に記載の薬学的組成物。
【請求項106】
前記細胞が、前記ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、請求項１０４または１０５に記載の薬学的組成物。
【請求項107】
前記ＰＧＲＮが少なくとも２つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、少なくとも３つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも４つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも５つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも６つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも７つのＧＲＮドメインを含む、または任意選択で、前記ＰＧＲＮが少なくとも８つのＧＲＮドメインを含む、請求項１０６に記載の薬学的組成物。
【請求項108】
前記ＰＧＲＮが２～１６のＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが２～１２のＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが２～８つのＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮが２～４つのＧＲＮドメインを含む、または任意選択で、前記ＰＧＲＮが２つのＧＲＮドメインを含む、請求項１０４～１０７のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項109】
前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１０８のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項110】
前記ＰＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１０９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項111】
前記ＰＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項112】
前記ＰＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項113】
前記ＰＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項114】
前記ＰＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項115】
前記ＰＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項116】
前記ＰＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項117】
前記ＰＧＲＮが全長ＰＧＲＮである、請求項１０４～１１６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項118】
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記細胞が、前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、請求項１１７に記載の薬学的組成物。
【請求項119】
前記ＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインである、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１８のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項120】
前記ＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１１９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項121】
前記ＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１２０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項122】
前記ＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項123】
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項124】
前記ＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１２３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項125】
前記ＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１２４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項126】
前記ＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインである、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、または任意選択で、前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項１０４～１２５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項127】
前記ＧＲＮが全長ＧＲＮである、請求項１０４～１２６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項128】
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、任意選択で、前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、任意選択で、前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、または任意選択で、前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列を有する、請求項１０４～１２６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項129】
前記細胞がコドン最適化ＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、請求項１０４～１２８のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項130】
前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、任意選択で、前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、任意選択で、前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、または任意選択で、前記コドン最適化導入遺伝子が配列番号１９の核酸配列を有する、請求項１２９に記載の薬学的組成物。
【請求項131】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である、請求項１０４～１３０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項132】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、ＡｐｏＥのＲｂドメインを含む、請求項１３１に記載の薬学的組成物。
【請求項133】
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む、請求項１３２に記載の薬学的組成物。
【請求項134】
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む、請求項１３２または１３３に記載の薬学的組成物。
【請求項135】
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ及びグリコシル化非依存性リソソームターゲティング（ＧＩＬＴ）タグを含む、請求項１３１に記載の薬学的組成物。
【請求項136】
前記ＧＩＬＴタグが、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩ（配列番号１２）のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有し、かつインスリン受容体についての天然に存在するヒトＩＧＦ－ＩＩの親和性と比べて、インスリン受容体について低下した結合親和性を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含み、前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、フーリン切断に抵抗性があり、かつマンノース－６－リン酸依存的手法でヒトカチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体に結合する、請求項１３５に記載の薬学的組成物。
【請求項137】
前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、かつ前記変異が少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を破壊する、請求項１３６に記載の薬学的組成物。
【請求項138】
前記変異が、アミノ酸置換、欠失、及び／または挿入である、請求項１３７に記載の薬学的組成物。
【請求項139】
前記変異が、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である、請求項１３８に記載の薬学的組成物。
【請求項140】
前記変異が、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０からなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換、及びそれらの組み合わせである、請求項１３８に記載の薬学的組成物。
【請求項141】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列を有する、請求項１３５～１４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項142】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列を有する、請求項１３５～１４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項143】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列を有する、請求項１３５～１４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項144】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項１３５～１４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項145】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項１３５～１４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項146】
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、任意選択で、前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項１３５～１４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項147】
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする前記導入遺伝子がさらに、ｍｉＲ－１２６ターゲティング配列を３’－ＵＴＲに含む、請求項１０４～１４６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項148】
前記細胞が万能性細胞または多能性細胞である、請求項１０４～１４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項149】
前記多能性細胞がＣＤ３４＋細胞である、請求項１４８に記載の組成物。
【請求項150】
前記ＣＤ３４＋細胞がＨＳＣまたはＭＰＣである、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項151】
前記万能性細胞がＥＳＣまたはｉＰＳＣである、請求項１４８に記載の組成物。
【請求項152】
前記細胞が、ＢＬＰＣ、ミクログリア前駆細胞、マクロファージ、またはミクログリアである、請求項１０４～１４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項153】
前記ＢＬＰＣが単球である、請求項１５２に記載の組成物。
【請求項154】
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトまたは形質導入されている、請求項１０４～１５３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項155】
請求項１０４～１５４のいずれか１項に記載の薬学的組成物と添付文書とを含むキット。
【請求項156】
前記添付文書が、前記キットのユーザーに、請求項１～１０３のいずれか１項に記載の方法を実行するように指示する、請求項１５５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年１月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーの名称は「５１１８２－０１９ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１．２９．２０＿ＳＴ２５」であり、サイズは２２，２７５バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年１月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーの名称は「５１１８２－０１９ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１．２９．２０＿ＳＴ２５」であり、サイズは２２，２７５バイトである。
【0002】
発明の分野
本開示は、前頭側頭骨大葉変性及び神経セロイドリポフスチン症などの神経認知障害を処置するための組成物及び方法に関する。
本開示は、前頭側頭骨大葉変性及び神経セロイドリポフスチン症などの神経認知障害を処置するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【0003】
神経変性は、前頭側頭骨大葉変性及び神経セロイドリポフスチン症などの進行性認知症と関連するいくつかの疾患において観察される病態生理学的プロセスである。このプロセスの重要な特徴は、脳組織の大規模な破壊及び随伴する、とりわけ認知低下、言語機能障害を含む全範囲の行動欠陥を引き起こす神経変性及びニューロン死である。
【0004】
前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）は、発語理解及び生成の欠陥、不十分な運動計画及び調整、及び／または衝動制御の欠如及び固執行動の優先により特徴づけられる実行機能の喪失を含み得る複合臨床症状により特徴づけられる神経変性障害である。ＦＴＬＤの臨床記述は、３つの別個の異型に分かれる：１）行動、人格の顕著な変化、及び前頭葉の顕著な変性により特徴づけられる行動－前頭側頭型認知症；２）言語の潜行性崩壊及び前側頭葉の顕著な変性により特徴づけられる意味性認知症；ならびに３）発語及び文法の欠陥により特徴づけられ、かつ左シルビウス裂周囲皮質の変性に対応する進行性非能弁性失語症。ＦＴＬＤ患者からの死後脳組織の組織学的分析は、脳の前頭葉及び側頭葉における神経組織の変性の共通する表示を伴う、複雑で不均質性の神経病理学的プロファイルを示す。
【0005】
神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）は、ニューロン、肝臓、脾臓、心筋層、及び腎臓細胞などの身体の細胞内でのリポフスチンの蓄積に起因する少なくとも８つのリソソーム貯蔵障害の臨床的に認識される集合についての総称である。リポフスチンは、脂肪及びタンパク質から構成される脂肪色素である。ＮＣＬを有する患者は、顕著な神経変性ならびに運動及び認知能力の進行性で不可逆的な喪失を示すが、疾患重症度及び臨床症状は、特定のＮＣＬ異型に依存し得る。ＮＣＬの既知の異型には、Ｓａｎｔｏｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病（ＳＨＤ）としても公知の小児性異型、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病（ＪＢＤ）としても公知の遅発型小児性異型、Ｆｉｎｎｉｓｈ遅発型小児性異型（ＦＬＩ）、変異遅発型小児性（ＶＬＩ）、ＣＬＮ７異型（ＣＬＮ７）、ＣＬＮ８異型（ＣＬＮ８）、Ｔｕｒｋｉｓｈ遅発型小児性異型（ＴＬＩ）、９型異型（Ｔ９）、ＣＬＮ１０異型（ＣＬＮ１０）、ＣＬＮ１１異型（ＣＬＮ１１）、バッテン病（ＢＤ）としても公知の若年性異型、及びクーフス病（ＫＤ）としても公知の成人性異型が含まれる。ＳＨＤは、進行して２歳までに完全な網膜失明となる早期視力低下、続く、３歳での植物状態、及び４歳までの脳死と関連する。この異型は、てんかん発作の自然発生とも関連する。ＪＢＤ異型は、２～４歳の間に発生し、運動失調、てんかん発作、進行性認知低下、及び異常な発語発達と関連し、典型的には、８歳までに死をもたらす。ＢＤは典型的には、４～１０歳の間に発生し、視力喪失、てんかん発作、認知機能障害、及び早期死亡などの症状を含む。ＫＤ異型を有するＮＣＬ患者は一般に、ＳＨＤ及びＢＤ異型よりも軽度な症状を示し、約４０年の平均余命を有する。
【0006】
ＦＴＬＤ及びＮＣＬのための既存の処置は、疾患症候を寛解するように努めているものであり、根底にある神経変性を標的とする治療は存在せず、したがって、新たな治療手段の必要性が強調されている。
【発明の概要】
【0007】
本開示は、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）などの神経認知障害（ＮＣＤ）を処置するための方法であって、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞、例えば、万能性細胞（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ）（例えば、胚性幹細胞（ＥＳＣ）または人工万能性幹細胞（ＩＳＰＣ））、多能性細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ）（例えば、ＣＤ３４＋細胞、例えば、造血幹細胞（ＨＳＣ）または骨髄前駆細胞（ＭＰＣ））、血液系統前駆細胞（ＢＬＰＣＳ；例えば、単球）、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアを投与することによる前記方法を提供する。前記細胞は、とりわけ対象の中枢神経系に直接的に（例えば、脳室内注射により）または全身的に（例えば、静脈内投与により）を含む、１つまたは複数の様々な経路により、ＮＣＤを有する対象に投与することができる。本開示はまた、そのような細胞を含有する組成物、さらには、ＮＣＤを処置するためのこれらの細胞を含有するキットを特徴とする。
【0008】
第１の態様では、本開示は、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有すると診断されている対象を処置する方法であって、前記対象に、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含有する組成物を投与することによる前記方法を提供する。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子は、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る。一部の実施形態では、ＮＣＤは、重度ＮＣＤである。一部の実施形態では、重度ＮＣＤは、対象の自立及び／または正常な日常機能（例えば、社会的、職業的、または学術的機能、個人衛生、身だしなみ、身支度、トイレ衛生、機能的運動性（例えば、歩行能力、ベッドへの出入り）、及び自己給仕を妨害する。一部の実施形態では、重度ＮＣＤは、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で対象により得られるスコアと関連している。一部の実施形態では、ＮＣＤは、軽度ＮＣＤである。一部の実施形態では、軽度ＮＣＤは、対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない。一部の実施形態では、軽度ＮＣＤは、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差１～２離れている、認知検査で対象により得られるスコアと関連している。一部の実施形態では、認知検査は、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＮＣＤは、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連する。一部の実施形態では、ＮＣＤは、せん妄または他の精神障害（例えば、統合失調症、双極性障害、または大うつ病）によるものではない。一部の実施形態では、基準集団は、一般集団である。一部の実施形態では、基準集団は、対象の年齢、病歴、教育、社会経済的状況、及び生活様式に基づき選択される。一部の実施形態では、ＮＣＤは、前頭側頭骨ＮＣＤである。一部の実施形態では、前頭側頭骨ＮＣＤは、ＦＴＬＤである。一部の実施形態では、ＮＣＤは、リソソーム疾患によるものである。一部の実施形態では、リソソーム疾患は、ＮＣＬである。
【0009】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、全長ＰＧＲＮ、例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＰＧＲＮ、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、配列番号１に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する少なくとも２つ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインまたはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、配列番号２～９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも３つ（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも４つ（例えば、少なくとも４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも５つ（例えば、少なくとも５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも６つ（例えば、少なくとも６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも７つ（例えば、少なくとも７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも８つ（例えば、少なくとも８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～１６（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～１２（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～８（例えば、２、３、４、５、６、７、または８）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～４（例えば、２、３、または４）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２つのＧＲＮドメインを含む。
【0010】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有する。
【0011】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。
【0012】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【0013】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【0014】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を有する。
【0015】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有する。
【0016】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を有する。
【0017】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有する。
【0018】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、配列番号２～９のアミノ酸配列のいずれか１つを有するＧＲＮなどの全長ＧＲＮ、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、配列番号２～９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮは、パラ－ＧＲＮまたは配列番号２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮは、配列番号２に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮは、配列番号２に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列を有する。
【0019】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－１または配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１は、配列番号３に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１は、配列番号３に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１は、配列番号３のアミノ酸配列を有する。
【0020】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－２または配列番号４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２は、配列番号４に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２は、配列番号４に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【0021】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－３または配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３は、配列番号５に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３は、配列番号５に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３は、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【0022】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－４または配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４は、配列番号６に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４は、配列番号６に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４は、配列番号６のアミノ酸配列を有する。
【0023】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－５または配列番号７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５は、配列番号７に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５は、配列番号７に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５は、配列番号７のアミノ酸配列を有する。
【0024】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－６または配列番号８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６は、配列番号８に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６は、配列番号８に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。
【0025】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－７または配列番号９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７は、配列番号９に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７は、配列番号９に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７は、配列番号９のアミノ酸配列を有する。
【0026】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮポリペプチド内のＧＲＮドメインの順序は、野生型ヒトＰＧＲＮにおいて観察されるのと同じ順序で生じる。一部の実施形態では、ＰＧＲＮポリペプチド内のＧＲＮドメインの順序は、野生型ヒトＰＧＲＮにおいて見い出される順序とは異なる順序で生じる。
【0027】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子は、コドン最適化されている。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするコドン最適化導入遺伝子は、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子は、分泌シグナルペプチド（例えば、ＰＧＲＮ分泌シグナルペプチド）を含む。
【0028】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質は、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）の低密度リポタンパク質受容体ファミリー（ＬＤＬＲｆ）結合（Ｒｂ）ドメイン、またはその断片、バリアント、もしくはオリゴマーを含む。一部の実施形態では、ＡｐｏＥのＲｂドメイン、またはその断片、バリアント、もしくはオリゴマーを、ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＮ末端に作動可能に連結させる。一部の実施形態では、ＡｐｏＥのＲｂドメイン、またはその断片、バリアント、もしくはオリゴマーを、ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＣ末端に作動可能に連結させる。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質は、ＡｐｏＥのＲｂドメインの少なくとも１つ（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）のオリゴマーを含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基２５～１８５に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基５０～１８０に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基７５～１７５に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基１００～１７０に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基１２５～１６０に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基１３０～１５０に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、残基１４８～１７３に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するＡｐｏＥの領域、または配列番号１１の残基１５９～１６７を含むその一部、または配列番号１１の残基１５９～１６７に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する領域を含む。
【0029】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮと、グリコシル化非依存性リソソームターゲティング（ＧＩＬＴ）タグとを含む。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグを、ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＮ末端に作動可能に連結させる。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグを、ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＣ末端に作動可能に連結させる。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩのアミノ酸配列（配列番号１２）に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含む。ムテインは、インスリン受容体についての天然に存在するヒトＩＧＦ－ＩＩの親和性と比べて、インスリン受容体についての結合親和性が低下していてもよく、及び／またはフーリン切断に対して抵抗性があってもよい。ムテインは、マンノース－６－リン酸非依存的な様式で、ヒトカチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体に結合してよい。一部の実施形態では、ＩＧＦ－ＩＩムテインは、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、その際、その変異は少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を無効にする。一部の実施形態では、変異は、アミノ酸の置換、欠失、及び／または挿入である。一部の実施形態では、変異は、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である。一部の実施形態では、変異は、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０及びそれらの組み合わせからなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換である。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する。
【0030】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）ターゲティング配列（例えば、ｍｉＲ－１２６ターゲティング配列）をさらに含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡターゲティング配列は、導入遺伝子の３’－非翻訳領域（ＵＴＲ）内に配置される。
【0031】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、対象の血液脳関門（ＢＢＢ）を透過する。
【0032】
一部の実施形態では、ＮＣＤは、ＰＧＲＮ関連ＮＣＤである。一部の実施形態では、ＦＴＬＤまたはＮＣＬは、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬである。
【0033】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬに罹患している対象は、ＰＧＲＮ遺伝子に変異を持つ。ＰＧＲＮ遺伝子における変異は、フレームシフト変異であり得る。一部の実施形態では、フレームシフト変異は、ｐ．Ｃ３１ＬｆｓＸ３５変異、ｐ．Ｃ３１ＬｆｓＸ３５変異、ｐ．Ｓ８２ＶｆｓＸ１７４変異、ｐ．Ｌ２７１ＬｆｓＸ１７４変異、またはｐ．Ｔ３８２ＮｆｓＸ３２変異である。
【0034】
加えて、または別法では、ＰＧＲＮ遺伝子における変異は、例えば、ミスセンス変異であり得る。例えば、対象は、ｐ．Ｃ５２１Ｙ変異、ｐ．Ａ９Ｄ変異、ｐ．Ｐ２４８Ｌ変異、ｐ．Ｒ４３２Ｃ変異、ｐ．Ｃ１３９Ｒ変異、ｐ．Ｃ５２１Ｙ変異、またはｐ．Ｃ１３９Ｒ変異を持っていてよい。
【0035】
加えて、または別法では、ＰＧＲＮ遺伝子における変異は、例えば、ナンセンス変異であってよい。例えば、対象は、ｐ．Ｑ１２５Ｘ変異を持っていてよい。一部の実施形態では、対象は、ｐ．Ｒ４９３Ｘ変異を持っていてよい。
【0036】
加えて、または別法では、ＰＧＲＮ遺伝子における変異は、例えば、挿入型変異であってよい。例えば、対象は、ｃ．１１４５ｉｎｓＡ変異を持っていてよい。
【0037】
加えて、または別法では、ＰＧＲＮ遺伝子における変異は、例えば、転換型変異であってよい。例えば、対象は、ｐ．０（ＩＶＳ１＋５Ｇ＞Ｃ）変異を持っていてよい。
【0038】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬに罹患している対象は、ＦＴＬＤまたはＮＣＬにおいて原因的役割を有することが公知の、ＰＧＲＮ遺伝子における任意の他の病原性変異を持っていてよい。例えば、ＰＧＲＮ遺伝子において病原性変異を有し、かつ本明細書に記載の組成物及び方法を用いて処置され得る対象には、その開示がヒトＰＧＲＮ変異に関係するため、参照により本明細書に組み込まれるＧｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ２９（１２），１３７３－１３８６，（２０１２）において論述されている変異のいずれか１つを有するものが含まれる。
【0039】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤに罹患している対象は、ＦＴＬＤの行動異常型前頭側頭型認知症（ＢＶＦＴＤ）異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤに罹患している対象は、ＦＴＬＤの意味性認知症（ＳＤ）異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤに罹患している対象は、ＦＴＬＤの進行性非能弁性失語症（ＰＮＡ）異型を有し得る。
【0040】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、バッテン病異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、クーフス病異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、Ｆｉｎｎｉｓｈ遅発型小児性異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、異型遅発型小児性異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、ＣＬＮ７異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、ＣＬＮ８異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、ＣＬＮ１０異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、ＣＬＮ１１異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、Ｔｕｒｋｉｓｈ遅発型小児性異型を有し得る。一部の実施形態では、ＰＧＲＮ関連ＮＣＬに罹患している対象は、９型異型を有し得る。
【0041】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子は、野生型ヒトＰＧＲＮまたはＧＲＮ（例えば、配列番号１～９のいずれか１つ）をコードする。一部の実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、少なくとも２つのＧＲＮドメイン（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のＧＲＮドメイン）、例えば、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＧＲＮドメインを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、野生型ヒトＰＧＲＮにおいて観察されるのと同じ順序で配置された少なくとも２つのＧＲＮドメイン（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のＧＲＮドメイン）を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子は、野生型ヒトＰＧＲＮとは別の順序で配置された少なくとも２つのＧＲＮドメイン（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のＧＲＮドメイン）を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子は、配列番号１～８のいずれか１つの配列を有するポリペプチドのいずれかと比べて、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０またはそれ以上のアミノ酸置換、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０またはそれ以上の保存的アミノ酸置換）を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
【0042】
一部の実施形態では、細胞は、万能性細胞である。一部の実施形態では、万能性細胞は、ＥＳＣである。一部の実施形態では、万能性細胞は、ｉＰＳＣである。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。一部の実施形態では、細胞は、多能性細胞である。一部の実施形態では、多能性細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、造血幹細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、骨髄性前駆細胞である。一部の実施形態では、細胞は、血液系前駆細胞（ＢＬＰＣ）である。一部の実施形態では、ＢＬＰＣは、単球である。一部の実施形態では、細胞は、マクロファージである。一部の実施形態では、細胞は、ミクログリア前駆細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ミクログリアである。
【0043】
一部の実施形態では、対象への組成物の投与前に、対象の内因性ミクログリアの集団を除去しておく。一部の実施形態では、前記方法は、組成物を対象に投与する前に、対象の内因性ミクログリアの集団を除去することを含む。一部の実施形態では、ミクログリアを、ブスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、トレオスルファン、及びクロドロネートリポソームからなる群から選択される薬剤を使用して、放射線療法またはそれらの組み合わせにより除去する。
【0044】
一部の実施形態では、前記組成物を対象に全身投与する。一部の実施形態では、前記組成物を、静脈内注射により対象に投与する。一部の実施形態では、前記組成物を、対象の中枢神経系に直接投与する。一部の実施形態では、前記組成物を対象に、脳脊髄液へと直接投与する。例えば、前記組成物を、脳室内注射、髄腔内注射、定位注射、またはそれらの組み合わせにより対象に投与することができる。一部の実施形態では、前記組成物を、実質内注射により対象に投与することができる。
【0045】
一部の実施形態では、前記組成物を、対象の骨髄に直接的に、例えば、骨内注射により投与する。
【0046】
一部の実施形態では、前記組成物を、骨髄移植により対象に投与する。
【0047】
一部の実施形態では、前記組成物を、脳室内注射により対象に投与する。一部の実施形態では、前記組成物を、静脈内注射により対象に投与する。
【0048】
一部の実施形態では、前記組成物を、対象の中枢神経系への直接投与及び全身投与により対象に投与する。一部の実施形態では、前記組成物を、脳室内注射及び静脈内注射により対象に投与する。一部の実施形態では、前記組成物を、髄腔内注射及び静脈内注射により対象に投与する。一部の実施形態では、前記組成物を、実質内注射及び静脈内注射により対象に投与する。
【0049】
一部の実施形態では、前記方法は、細胞の集団を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、細胞の集団を、前記組成物の投与前に対象に投与する。一部の実施形態では、細胞の集団を、前記組成物の投与後に対象に投与する。一部の実施形態では、細胞を、胚性幹細胞、人工万能性幹細胞、造血幹細胞、及び骨髄性前駆細胞からなる群から選択する。一部の実施形態では、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するように改変しない。一部の実施形態では、細胞を、対象に全身投与する。一部の実施形態では、細胞を、静脈内注射により対象に投与する。
【0050】
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、対象への前記組成物の投与前に、細胞で破壊する。
【0051】
一部の実施形態では、細胞を、細胞における内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ核酸の切断を触媒するヌクレアーゼと接触させることにより、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する。一部の実施形態では、ヌクレアーゼはＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９である。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａである。一部の実施形態では、ヌクレアーゼは、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである。
【0052】
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、例えば、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を破壊するために十分な時間及び量で、細胞を阻害性ＲＮＡ分子と接触させることにより破壊する。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはｍｉＲＮＡである。
【0053】
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、対象への前記組成物の投与前に、対象において破壊する。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、阻害性ＲＮＡ分子を対象に投与することにより破壊する。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、対象への前記組成物の投与前に、対象のニューロンの集団において破壊する。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、例えば、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を破壊するために十分な時間及び量で、ニューロンの集団を阻害性ＲＮＡ分子と接触させることにより、ニューロンの集団において破壊する。一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡである。
【0054】
一部の実施形態では、細胞は自家細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は同種異系細胞である。
【0055】
一部の実施形態では、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入する。
【0056】
一部の実施形態では、細胞を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、及びレトロウイルス科ウイルスを含む群から選択されるウイルスベクターで形質導入する。
【0057】
一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス科ウイルスベクターである。一部の実施形態では、レトロウイルス科ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、レトロウイルス科ウイルスベクターは、アルファレトロウイルスベクターである。一部の実施形態では、レトロウイルス科ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルスベクターである。一部の実施形態では、レトロウイルス科ウイルスベクターは、中央ポリプリン路、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶ Ｐｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む。
【0058】
一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶＳ、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４を含む群から選択されるＡＡＶである。
【0059】
一部の実施形態では、ウイルスベクターは、偽型ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、偽型ＡＡＶ、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ウイルスである。
【0060】
一部の実施形態では、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトする。
【0061】
一部の実施形態では、細胞を、カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチル－デキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び磁気ビーズを含む群から選択される薬剤；またはエレクトロポレーション、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ、スクイーズ－ポレーション、ソノポレーション、光学トランスフェクション、Ｍａｇｎｅｔｏｆｅｃｔｉｏｎ、及びインペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）を含む群から選択される技術を使用してトランスフェクトする。
【0062】
一部の実施形態では、細胞におけるＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を、ユビキタスプロモーターを使用して媒介する。例示的なユビキタスプロモーターは、伸長因子１－アルファプロモーター及びホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーターである。一部の実施形態では、細胞におけるＰＧＲＮの発現を、細胞系統特異的プロモーターを使用して媒介する。例示的な細胞系統特異的プロモーターは、ＰＧＲＮプロモーター、ＣＤ１１ｂプロモーター、ＣＤ６８プロモーター、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１プロモーター、同種移植炎症因子１プロモーター、プリン受容体Ｐ２Ｙ１２プロモーター、膜貫通タンパク質１１９プロモーター、及びコロニー刺激因子１受容体プロモーターである。
【0063】
一部の実施形態では、前記組成物を、対象の脳におけるＭ１ミクログリアの量と比べて、対象の脳においてＭ２ミクログリアの量を増加させるために、対象の脳における１種または複数の炎症誘発性サイトカインのレベルを低下させるために、対象の脳における１種または複数の抗炎症性サイトカインのレベルを上昇させるために、対象の認知処理能力を改善するために、対象の運動機能を改善するために、対象におけるニューロン喪失を減少させるために、及び／または対象におけるα－シヌクレインタンパク質、タウタンパク質、ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）陽性封入体、サルコーマ融合（ｆｕｓｅｄ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａ；ＦＵＳ）陽性封入体、及び／またはユビキチン陽性封入体及び封入体、またはそれらの凝集体のレベルを低下させるために十分な量で、対象に投与する。
【0064】
一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【0065】
別の態様では、本開示は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含有する薬学的組成物を提供する。
【0066】
先行する態様の一部の実施形態では、細胞は、万能性細胞である。一部の実施形態では、万能性細胞は、ＥＳＣである。一部の実施形態では、万能性細胞は、ｉＰＳＣである。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。一部の実施形態では、細胞は、多能性細胞である。一部の実施形態では、多能性細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、造血幹細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、骨髄性前駆細胞である。一部の実施形態では、細胞は、血液系前駆細胞（ＢＬＰＣ）である。一部の実施形態では、ＢＬＰＣは、単球である。一部の実施形態では、細胞は、マクロファージである。一部の実施形態では、細胞は、ミクログリア前駆細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ミクログリアである。
【0067】
一部の実施形態では、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入する。一部の実施形態では、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトする。
【0068】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＰＧＲＮなどの全長ＰＧＲＮ、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する（例えば、配列番号１に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する）そのバリアントである。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する少なくとも２つ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮペプチドまたはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、配列番号２～９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも２つ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも３つ（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも４つ（例えば、少なくとも４、５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも５つ（例えば、少なくとも５、６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも６つ（例えば、少なくとも６、７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも７つ（例えば、少なくとも７、８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、少なくとも８つ（例えば、少なくとも８またはそれ以上）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～１６（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～１２（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～８（例えば、２、３、４、５、６、７、または８）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～４（例えば、２、３、または４）のＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２つのＧＲＮドメインを含む。
【0069】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有する。
【0070】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。
【0071】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【0072】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【0073】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を有する。
【0074】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有する。
【0075】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を有する。
【0076】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一であるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有する。
【0077】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、配列番号２～９のアミノ酸配列のいずれか１つを有するＧＲＮなどの全長ＧＲＮまたはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、配列番号２～９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮは、パラ－ＧＲＮまたは配列番号２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮは、配列番号２に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮは、配列番号２に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、パラ－ＧＲＮは、配列番号２のアミノ酸配列を有する。
【0078】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－１または配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１は、配列番号３に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１は、配列番号３に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－１は、配列番号３のアミノ酸配列を有する。
【0079】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－２または配列番号４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２は、配列番号４に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２は、配列番号４に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【0080】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－３または配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３は、配列番号５に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３は、配列番号５に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－３は、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【0081】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－４または配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４は、配列番号６に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４は、配列番号６に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－４は、配列番号６のアミノ酸配列を有する。
【0082】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－５または配列番号７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５は、配列番号７に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５は、配列番号７に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－５は、配列番号７のアミノ酸配列を有する。
【0083】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－６または配列番号８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６は、配列番号８に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６は、配列番号８に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－６は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。
【0084】
一部の実施形態では、ＧＲＮは、ＧＲＮ－７または配列番号９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７は、配列番号９に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７は、配列番号９に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＧＲＮ－７は、配列番号９のアミノ酸配列を有する。
【0085】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮポリペプチド内のＧＲＮドメインの順序は、野生型ヒトＰＧＲＮにおいて観察されるのと同じ順序で生じる。一部の実施形態では、ＰＧＲＮポリペプチド内のＧＲＮドメインの順序は、野生型ヒトＰＧＲＮにおいて見い出される順序とは異なる順序で生じる。
【0086】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、分泌シグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、ＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドである。
【0087】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質は、ＡｐｏＥのＲｂドメインを含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む。一部の実施形態では、Ｒｂドメインは、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む。
【0088】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子はさらに、３’－ＵＴＲにｍｉＲＮＡターゲティング配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡターゲティング配列は、ｍｉＲ－１２６ターゲティング配列である。
【0089】
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを細胞内で破壊する。
【0090】
一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、対象に全身投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、静脈内注射により対象に投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、対象の中枢神経系に投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、脳脊髄液へと対象に投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、脳室内注射、髄腔内注射、定位注射、またはそれらの組み合わせにより対象に投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、実質内注射により対象に投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、対象の骨髄に直接投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、骨内注射により対象に投与するために製剤化する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、薬学的組成物を含む骨髄移植により対象に投与する。一部の実施形態では、前記薬学的組成物を、脳室内注射及び静脈内注射により対象に投与するために製剤化する。
【0091】
一部の実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、ＮＣＤを有すると診断されている。一部の実施形態では、ＮＣＤは、重度ＮＣＤである。一部の実施形態では、重度ＮＣＤは、対象の自立及び／または正常な日常機能（例えば、社会的、職業的、または学術的機能、個人衛生、身だしなみ、身支度、トイレ衛生、機能的運動性（例えば、歩行能力、ベッドへの出入り）、及び自己給仕）を妨害する。一部の実施形態では、重度ＮＣＤは、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で対象により得られるスコアと関連している。一部の実施形態では、ＮＣＤは、軽度ＮＣＤである。一部の実施形態では、軽度ＮＣＤは、対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない。一部の実施形態では、軽度ＮＣＤは、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差１～２離れている、認知検査で対象により得られるスコアと関連している。一部の実施形態では、認知検査は、ＡＤ８、ＡＷＶ、ＧＰＣＯＧ、ＨＲＡ、ＭＩＳ、ＭＭＳＥ、ＭｏＣＡ、ＳＬＵＭＳ、及びＳｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＮＣＤは、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連する。一部の実施形態では、ＮＣＤは、せん妄または他の精神障害（例えば、統合失調症、双極性障害、または大うつ病）によるものではない。一部の実施形態では、基準集団は、一般集団である。一部の実施形態では、基準集団は、対象の年齢、病歴、教育、社会経済的状況、及び生活様式に基づき選択される。一部の実施形態では、ＮＣＤは、前頭側頭骨ＮＣＤである。一部の実施形態では、前頭側頭骨ＮＣＤは、ＦＴＬＤである。一部の実施形態では、ＮＣＤは、リソソーム疾患によるものである。一部の実施形態では、リソソーム疾患は、ＮＣＬである。
【0092】
追加の一態様では、本開示は、上の態様及び実施形態のいずれかによる組成物と、添付文書とを含むキットを提供する。一部の実施形態では、添付文書は、キットのユーザーに、上の態様及び実施形態のいずれかによる方法を実行するように指示する。
【0093】
追加の本発明の実施形態を、下に列挙するパラグラフにおいて提供する。
【0094】
Ｅ１．
神経認知障害（ＮＣＤ）を有すると診断されている対象を処置する方法であって、前記対象に、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含む組成物を投与することを含む、前記方法。
神経認知障害（ＮＣＤ）を有すると診断されている対象を処置する方法であって、前記対象に、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含む組成物を投与することを含む、前記方法。
【0095】
Ｅ２．
前記ＮＣＤが重度ＮＣＤである、Ｅ１に記載の方法。
前記ＮＣＤが重度ＮＣＤである、Ｅ１に記載の方法。
【0096】
Ｅ３．
前記重度ＮＣＤが、前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害する、Ｅ２に記載の方法。
前記重度ＮＣＤが、前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害する、Ｅ２に記載の方法。
【0097】
Ｅ４．
前記重度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ２またはＥ３に記載の方法。
前記重度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ２またはＥ３に記載の方法。
【0098】
Ｅ５．
前記ＮＣＤが軽度ＮＣＤである、Ｅ１に記載の方法。
前記ＮＣＤが軽度ＮＣＤである、Ｅ１に記載の方法。
【0099】
Ｅ６．
前記軽度ＮＣＤが前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない、Ｅ５に記載の方法。
前記軽度ＮＣＤが前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない、Ｅ５に記載の方法。
【0100】
Ｅ７．
前記軽度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから標準偏差１～２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ５またはＥ６に記載の方法。
前記軽度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから標準偏差１～２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ５またはＥ６に記載の方法。
【0101】
Ｅ８．
前記基準集団が、一般集団である、Ｅ４またはＥ７に記載の方法。
前記基準集団が、一般集団である、Ｅ４またはＥ７に記載の方法。
【0102】
Ｅ９．
前記認知検査が、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）からなる群から選択される、Ｅ４、Ｅ７、またはＥ８に記載の方法。
前記認知検査が、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）からなる群から選択される、Ｅ４、Ｅ７、またはＥ８に記載の方法。
【0103】
Ｅ１０．
前記ＮＣＤが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連している、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の方法。
前記ＮＣＤが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連している、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の方法。
【0104】
Ｅ１１．
前記ＮＣＤが、せん妄または他の精神障害によるものではない、Ｅ１～Ｅ１０のいずれか１つに記載の方法。
前記ＮＣＤが、せん妄または他の精神障害によるものではない、Ｅ１～Ｅ１０のいずれか１つに記載の方法。
【0105】
Ｅ１２．
前記ＮＣＤが前頭側頭骨ＮＣＤである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の方法。
前記ＮＣＤが前頭側頭骨ＮＣＤである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の方法。
【0106】
Ｅ１３．
前記前頭側頭骨ＮＣＤが前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）である、Ｅ１２に記載の方法。
前記前頭側頭骨ＮＣＤが前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）である、Ｅ１２に記載の方法。
【0107】
Ｅ１４．
前記ＮＣＤがリソソーム疾患によるものである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の方法。
前記ＮＣＤがリソソーム疾患によるものである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の方法。
【0108】
Ｅ１５．
前記リソソーム疾患が神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）である、Ｅ１４に記載の方法。
前記リソソーム疾患が神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）である、Ｅ１４に記載の方法。
【0109】
Ｅ１６．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが分泌シグナルペプチドを含む、Ｅ１～Ｅ１５のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが分泌シグナルペプチドを含む、Ｅ１～Ｅ１５のいずれか１つに記載の方法。
【0110】
Ｅ１７．
前記分泌シグナルペプチドがＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドである、Ｅ１６に記載の方法。
前記分泌シグナルペプチドがＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドである、Ｅ１６に記載の方法。
【0111】
Ｅ１８．
前記細胞が、前記ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、前記ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つに記載の方法。
【0112】
Ｅ１９．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８に記載の方法。
【0113】
Ｅ２０．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも３つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも３つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９に記載の方法。
【0114】
Ｅ２１．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも４つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２０に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも４つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２０に記載の方法。
【0115】
Ｅ２２．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも５つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２１に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも５つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２１に記載の方法。
【0116】
Ｅ２３．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも６つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２２に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも６つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２２に記載の方法。
【0117】
Ｅ２４．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも７つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２３に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも７つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２３に記載の方法。
【0118】
Ｅ２５．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも８つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２４に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも８つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２４に記載の方法。
【0119】
Ｅ２６．
前記ＰＧＲＮが、２～１６のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１～Ｅ２５のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、２～１６のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１～Ｅ２５のいずれか１つに記載の方法。
【0120】
Ｅ２７．
前記ＰＧＲＮが、２～１２のＧＲＮドメインを含む、Ｅ２６に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、２～１２のＧＲＮドメインを含む、Ｅ２６に記載の方法。
【0121】
Ｅ２８．
前記ＰＧＲＮが、２～８つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２７に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、２～８つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２７に記載の方法。
【0122】
Ｅ２９．
前記ＰＧＲＮが、２～４つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２８に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、２～４つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２８に記載の方法。
【0123】
Ｅ３０．
前記ＰＧＲＮが、２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２９に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ２９に記載の方法。
【0124】
Ｅ３１．
前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか１つに記載の方法。
【0125】
Ｅ３２．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３１に記載の方法。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３１に記載の方法。
【0126】
Ｅ３３．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３２に記載の方法。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３２に記載の方法。
【0127】
Ｅ３４．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、Ｅ３３に記載の方法。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、Ｅ３３に記載の方法。
【0128】
Ｅ３５．
前記ＰＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
【0129】
Ｅ３６．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３５に記載の方法。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３５に記載の方法。
【0130】
Ｅ３７．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３６に記載の方法。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３６に記載の方法。
【0131】
Ｅ３８．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ３７に記載の方法。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ３７に記載の方法。
【0132】
Ｅ３９．
前記ＰＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ３８のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ３８のいずれか１つに記載の方法。
【0133】
Ｅ４０．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ３９に記載の方法。
【0134】
Ｅ４１．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４０に記載の方法。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４０に記載の方法。
【0135】
Ｅ４２．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ４１に記載の方法。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ４１に記載の方法。
【0136】
Ｅ４３．
前記ＰＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ４２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ４２のいずれか１つに記載の方法。
【0137】
Ｅ４４．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４３に記載の方法。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４３に記載の方法。
【0138】
Ｅ４５．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４４に記載の方法。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４４に記載の方法。
【0139】
Ｅ４６．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ４５に記載の方法。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ４５に記載の方法。
【0140】
Ｅ４７．
前記ＰＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ４６のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ４６のいずれか１つに記載の方法。
【0141】
Ｅ４８．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４７に記載の方法。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４７に記載の方法。
【0142】
Ｅ４９．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４８に記載の方法。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ４８に記載の方法。
【0143】
Ｅ５０．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ４９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ４９に記載の方法。
【0144】
Ｅ５１．
前記ＰＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ５０のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ５０のいずれか１つに記載の方法。
【0145】
Ｅ５２．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５１に記載の方法。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５１に記載の方法。
【0146】
Ｅ５３．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５２に記載の方法。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５２に記載の方法。
【0147】
Ｅ５４．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ５３に記載の方法。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ５３に記載の方法。
【0148】
Ｅ５５．
前記ＰＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ５４のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ５４のいずれか１つに記載の方法。
【0149】
Ｅ５６．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５５に記載の方法。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５５に記載の方法。
【0150】
Ｅ５７．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５６に記載の方法。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５６に記載の方法。
【0151】
Ｅ５８．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ４９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ４９に記載の方法。
【0152】
Ｅ５９．
前記ＰＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ５８のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む、Ｅ１～Ｅ５８のいずれか１つに記載の方法。
【0153】
Ｅ６０．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ５９に記載の方法。
【0154】
Ｅ６１．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６０に記載の方法。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６０に記載の方法。
【0155】
Ｅ６２．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ６１に記載の方法。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ６１に記載の方法。
【0156】
Ｅ６３．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１～Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１～Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
【0157】
Ｅ６４．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６３に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６３に記載の方法。
【0158】
Ｅ６５．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６４に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６４に記載の方法。
【0159】
Ｅ６６．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、Ｅ６５に記載の方法。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、Ｅ６５に記載の方法。
【0160】
Ｅ６７．
前記ＰＧＲＮが全長ＰＧＲＮである、Ｅ１～Ｅ６６のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮが全長ＰＧＲＮである、Ｅ１～Ｅ６６のいずれか１つに記載の方法。
【0161】
Ｅ６８．
前記細胞が、前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１～Ｅ６７のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１～Ｅ６７のいずれか１つに記載の方法。
【0162】
Ｅ６９．
前記ＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインである、Ｅ１～Ｅ６８のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインである、Ｅ１～Ｅ６８のいずれか１つに記載の方法。
【0163】
Ｅ７０．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６９に記載の方法。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ６９に記載の方法。
【0164】
Ｅ７１．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７０に記載の方法。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７０に記載の方法。
【0165】
Ｅ７２．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＥ７１に記載の方法。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有するＥ７１に記載の方法。
【0166】
Ｅ７３．
前記ＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインである、Ｅ１～Ｅ７２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインである、Ｅ１～Ｅ７２のいずれか１つに記載の方法。
【0167】
Ｅ７４．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７３に記載の方法。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７３に記載の方法。
【0168】
Ｅ７５．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７４に記載の方法。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７４に記載の方法。
【0169】
Ｅ７６．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ７５に記載の方法。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ７５に記載の方法。
【0170】
Ｅ７７．
前記ＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインである、Ｅ１～Ｅ７６のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインである、Ｅ１～Ｅ７６のいずれか１つに記載の方法。
【0171】
Ｅ７８．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７７に記載の方法。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７７に記載の方法。
【0172】
Ｅ７９．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７８に記載の方法。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ７８に記載の方法。
【0173】
Ｅ８０．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ７９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ７９に記載の方法。
【0174】
Ｅ８１．
前記ＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインである、Ｅ１～Ｅ８０のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインである、Ｅ１～Ｅ８０のいずれか１つに記載の方法。
【0175】
Ｅ８２．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８１に記載の方法。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８１に記載の方法。
【0176】
Ｅ８３．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８２に記載の方法。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８２に記載の方法。
【0177】
Ｅ８４．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ８３に記載の方法。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ８３に記載の方法。
【0178】
Ｅ８５．
前記ＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインである、Ｅ１～Ｅ８４のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインである、Ｅ１～Ｅ８４のいずれか１つに記載の方法。
【0179】
Ｅ８６．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８５に記載の方法。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８５に記載の方法。
【0180】
Ｅ８７．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８６に記載の方法。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８６に記載の方法。
【0181】
Ｅ８８．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ８７に記載の方法。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ８７に記載の方法。
【0182】
Ｅ８９．
前記ＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインである、Ｅ１～Ｅ８８のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインである、Ｅ１～Ｅ８８のいずれか１つに記載の方法。
【0183】
Ｅ９０．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ８９に記載の方法。
【0184】
Ｅ９１．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９０に記載の方法。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９０に記載の方法。
【0185】
Ｅ９２．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ９１に記載の方法。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ９１に記載の方法。
【0186】
Ｅ９３．
前記ＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインである、Ｅ１～Ｅ９２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインである、Ｅ１～Ｅ９２のいずれか１つに記載の方法。
【0187】
Ｅ９４．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９３に記載の方法。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９３に記載の方法。
【0188】
Ｅ９５．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９４に記載の方法。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９４に記載の方法。
【0189】
Ｅ９６．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ９５に記載の方法。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ９５に記載の方法。
【0190】
Ｅ９７．
前記ＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインである、Ｅ１～Ｅ９６のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインである、Ｅ１～Ｅ９６のいずれか１つに記載の方法。
【0191】
Ｅ９８．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９７に記載の方法。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９７に記載の方法。
【0192】
Ｅ９９．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９８に記載の方法。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ９８に記載の方法。
【0193】
Ｅ１００．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ９９に記載の方法。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ９９に記載の方法。
【0194】
Ｅ１０１．
前記ＧＲＮが全長ＧＲＮを含む、Ｅ１～Ｅ１００のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＲＮが全長ＧＲＮを含む、Ｅ１～Ｅ１００のいずれか１つに記載の方法。
【0195】
Ｅ１０２．
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１～Ｅ１０１のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１～Ｅ１０１のいずれか１つに記載の方法。
【0196】
Ｅ１０３．
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１０２に記載の方法。
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１０２に記載の方法。
【0197】
Ｅ１０４．
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１０３に記載の方法。
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１０３に記載の方法。
【0198】
Ｅ１０５．
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１０４に記載の方法。
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１０４に記載の方法。
【0199】
Ｅ１０６．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である、Ｅ１～Ｅ１０５のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である、Ｅ１～Ｅ１０５のいずれか１つに記載の方法。
【0200】
Ｅ１０７．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）の受容体結合（Ｒｂ）ドメインを含む、Ｅ１０６に記載の方法。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）の受容体結合（Ｒｂ）ドメインを含む、Ｅ１０６に記載の方法。
【0201】
Ｅ１０８．
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む、Ｅ１０７に記載の方法。
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む、Ｅ１０７に記載の方法。
【0202】
Ｅ１０９．
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む、Ｅ１０７またはＥ１０８に記載の方法。
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む、Ｅ１０７またはＥ１０８に記載の方法。
【0203】
Ｅ１１０．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮをコードする前記導入遺伝子がさらに、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）ターゲティング配列を３’－ＵＴＲに含む、Ｅ１～Ｅ１０９のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮをコードする前記導入遺伝子がさらに、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）ターゲティング配列を３’－ＵＴＲに含む、Ｅ１～Ｅ１０９のいずれか１つに記載の方法。
【0204】
Ｅ１１１．
前記ｍｉＲＮＡターゲティング配列が、ｍｉＲ－１２６ターゲティング配列である、Ｅ１１０に記載の方法。
前記ｍｉＲＮＡターゲティング配列が、ｍｉＲ－１２６ターゲティング配列である、Ｅ１１０に記載の方法。
【0205】
Ｅ１１２．
前記対象に前記組成物を投与すると、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが前記対象の血液脳関門を透過する、Ｅ１～Ｅ１１１のいずれか１つに記載の方法。
前記対象に前記組成物を投与すると、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが前記対象の血液脳関門を透過する、Ｅ１～Ｅ１１１のいずれか１つに記載の方法。
【0206】
Ｅ１１３．
前記ＦＴＬＤまたはＮＣＬがＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬである、Ｅ１３～Ｅ１１２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＦＴＬＤまたはＮＣＬがＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬである、Ｅ１３～Ｅ１１２のいずれか１つに記載の方法。
【0207】
Ｅ１１４．
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの行動異常型前頭側頭型認知症異型である、Ｅ１１３に記載の方法。
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの行動異常型前頭側頭型認知症異型である、Ｅ１１３に記載の方法。
【0208】
Ｅ１１５．
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの意味性認知症異型である、Ｅ１１３に記載の方法。
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの意味性認知症異型である、Ｅ１１３に記載の方法。
【0209】
Ｅ１１６．
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの進行性非能弁性失語症異型である、Ｅ１１３に記載の方法。
前記ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤがＦＴＬＤの進行性非能弁性失語症異型である、Ｅ１１３に記載の方法。
【0210】
Ｅ１１７．
前記ＰＧＲＮ関連ＮＣＬがバッテン病である、Ｅ１１３に記載の方法。
前記ＰＧＲＮ関連ＮＣＬがバッテン病である、Ｅ１１３に記載の方法。
【0211】
Ｅ１１８．
前記細胞がＥＳＣである、Ｅ１～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞がＥＳＣである、Ｅ１～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
【0212】
Ｅ１１９．
前記細胞がｉＰＳＣである、Ｅ１～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞がｉＰＳＣである、Ｅ１～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
【0213】
Ｅ１２０．
前記細胞がＣＤ３４＋細胞である、Ｅ１～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞がＣＤ３４＋細胞である、Ｅ１～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
【0214】
Ｅ１２１．
前記ＣＤ３４＋細胞がＨＳＣである、Ｅ１２０に記載の方法。
前記ＣＤ３４＋細胞がＨＳＣである、Ｅ１２０に記載の方法。
【0215】
Ｅ１２２．
前記ＣＤ３４＋細胞がＭＰＣである、Ｅ１２０に記載の方法。
前記ＣＤ３４＋細胞がＭＰＣである、Ｅ１２０に記載の方法。
【0216】
Ｅ１２３．
前記組成物の投与前に、前記対象における内因性ミクログリアの集団を除去しておく、Ｅ１～Ｅ１２２のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物の投与前に、前記対象における内因性ミクログリアの集団を除去しておく、Ｅ１～Ｅ１２２のいずれか１つに記載の方法。
【0217】
Ｅ１２４．
前記対象に前記組成物を投与する前に、前記対象における内因性ミクログリアの集団を除去することを含む、Ｅ１～Ｅ１２２のいずれか１つに記載の方法。
前記対象に前記組成物を投与する前に、前記対象における内因性ミクログリアの集団を除去することを含む、Ｅ１～Ｅ１２２のいずれか１つに記載の方法。
【0218】
Ｅ１２５．
前記ミクログリアを、ブスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、トレオスルファン、及びクロドロネートリポソームからなる群から選択される薬剤を使用して、放射線療法により、またはそれらの組み合わせで除去する、Ｅ１２３またはＥ１２４に記載の方法。
前記ミクログリアを、ブスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、トレオスルファン、及びクロドロネートリポソームからなる群から選択される薬剤を使用して、放射線療法により、またはそれらの組み合わせで除去する、Ｅ１２３またはＥ１２４に記載の方法。
【0219】
Ｅ１２６．
前記組成物を前記対象に全身投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を前記対象に全身投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0220】
Ｅ１２７．
前記組成物を、静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１２６に記載の方法。
前記組成物を、静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１２６に記載の方法。
【0221】
Ｅ１２８．
前記組成物を、前記対象の中枢神経系に直接投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、前記対象の中枢神経系に直接投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0222】
Ｅ１２９．
前記組成物を、脳脊髄液への直接投与により前記対象に投与する、Ｅ１２８に記載の方法。
前記組成物を、脳脊髄液への直接投与により前記対象に投与する、Ｅ１２８に記載の方法。
【0223】
Ｅ１３０．
前記組成物を、脳室内注射、髄腔内注射、定位注射、またはそれらの組み合わせにより前記対象に投与する、Ｅ１２８またはＥ１２９に記載の方法。
前記組成物を、脳室内注射、髄腔内注射、定位注射、またはそれらの組み合わせにより前記対象に投与する、Ｅ１２８またはＥ１２９に記載の方法。
【0224】
Ｅ１３１．
前記組成物を、実質内注射により前記対象に投与する、Ｅ１２８に記載の方法。
前記組成物を、実質内注射により前記対象に投与する、Ｅ１２８に記載の方法。
【0225】
Ｅ１３２．
前記組成物を、前記対象の骨髄に直接投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、前記対象の骨髄に直接投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0226】
Ｅ１３３．
前記組成物を、骨内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３２に記載の方法。
前記組成物を、骨内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３２に記載の方法。
【0227】
Ｅ１３４．
前記組成物を、前記組成物を含む骨髄移植により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、前記組成物を含む骨髄移植により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0228】
Ｅ１３５．
前記組成物を、脳室内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、脳室内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0229】
Ｅ１３６．
前記組成物を、髄腔内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、髄腔内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0230】
Ｅ１３７．
前記組成物を、実質内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、実質内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0231】
Ｅ１３８．
前記組成物を、静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0232】
Ｅ１３９．
前記組成物を、前記対象の中枢神経系に直接的に投与することにより、及び全身投与により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、前記対象の中枢神経系に直接的に投与することにより、及び全身投与により前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の方法。
【0233】
Ｅ１４０．
前記組成物を、脳室内注射及び静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３９に記載の方法。
前記組成物を、脳室内注射及び静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３９に記載の方法。
【0234】
Ｅ１４１．
前記組成物を、髄腔内注射及び静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３９に記載の方法。
前記組成物を、髄腔内注射及び静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３９に記載の方法。
【0235】
Ｅ１４２．
前記組成物に、実質内注射及び静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３９に記載の方法。
前記組成物に、実質内注射及び静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１３９に記載の方法。
【0236】
Ｅ１４３．
細胞の集団を前記対象に投与することをさらに含む、Ｅ１～Ｅ１４２のいずれか１つに記載の方法。
細胞の集団を前記対象に投与することをさらに含む、Ｅ１～Ｅ１４２のいずれか１つに記載の方法。
【0237】
Ｅ１４４．
前記組成物の投与前に、前記細胞の集団を前記対象に投与する、Ｅ１４３に記載の方法。
前記組成物の投与前に、前記細胞の集団を前記対象に投与する、Ｅ１４３に記載の方法。
【0238】
Ｅ１４５．
前記組成物の投与後に、前記細胞の集団を、前記対象に投与する、Ｅ１４３に記載の方法。
前記組成物の投与後に、前記細胞の集団を、前記対象に投与する、Ｅ１４３に記載の方法。
【0239】
Ｅ１４６．
前記細胞が、万能性細胞、ＥＳＣ、ＩＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、及びミクログリアからなる群から選択される、Ｅ１４３～Ｅ１４５のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、万能性細胞、ＥＳＣ、ＩＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、及びミクログリアからなる群から選択される、Ｅ１４３～Ｅ１４５のいずれか１つに記載の方法。
【0240】
Ｅ１４７．
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するように改変されていない、Ｅ１４３～Ｅ１４６のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するように改変されていない、Ｅ１４３～Ｅ１４６のいずれか１つに記載の方法。
【0241】
Ｅ１４８．
前記細胞を、前記対象に全身投与する、Ｅ１４３～Ｅ１４７のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞を、前記対象に全身投与する、Ｅ１４３～Ｅ１４７のいずれか１つに記載の方法。
【0242】
Ｅ１４９．
前記細胞を、静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１４８に記載の方法。
前記細胞を、静脈内注射により前記対象に投与する、Ｅ１４８に記載の方法。
【0243】
Ｅ１５０．
前記対象への前記組成物の投与前に、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを前記細胞において破壊する、Ｅ１～Ｅ１４９のいずれか１つに記載の方法。
前記対象への前記組成物の投与前に、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを前記細胞において破壊する、Ｅ１～Ｅ１４９のいずれか１つに記載の方法。
【0244】
Ｅ１５１．
前記対象への前記組成物の投与前に、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを前記対象において破壊する、Ｅ１～Ｅ１５０のいずれか１つに記載の方法。
前記対象への前記組成物の投与前に、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを前記対象において破壊する、Ｅ１～Ｅ１５０のいずれか１つに記載の方法。
【0245】
Ｅ１５２．
前記対象への前記組成物の投与前に、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、前記対象のニューロンの集団において破壊する、Ｅ１５１に記載の方法。
前記対象への前記組成物の投与前に、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、前記対象のニューロンの集団において破壊する、Ｅ１５１に記載の方法。
【0246】
Ｅ１５３．
前記細胞を、前記細胞中の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ核酸の切断を触媒するヌクレアーゼと接触させることにより、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する、Ｅ１５０に記載の方法。
前記細胞を、前記細胞中の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ核酸の切断を触媒するヌクレアーゼと接触させることにより、前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する、Ｅ１５０に記載の方法。
【0247】
Ｅ１５４．
前記ヌクレアーゼが、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質である、Ｅ１５３に記載の方法。
前記ヌクレアーゼが、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質である、Ｅ１５３に記載の方法。
【0248】
Ｅ１５５．
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）である、Ｅ１５４に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）である、Ｅ１５４に記載の方法。
【0249】
Ｅ１５６．
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）である、Ｅ１５４に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質１２ａ（Ｃａｓ１２ａ）である、Ｅ１５４に記載の方法。
【0250】
Ｅ１５７．
前記ヌクレアーゼが、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである、Ｅ１５３に記載の方法。
前記ヌクレアーゼが、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである、Ｅ１５３に記載の方法。
【0251】
Ｅ１５８．
前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、阻害性ＲＮＡ分子を前記細胞、前記対象、または前記ニューロンの集団に投与することにより破壊する、Ｅ１５０～Ｅ１５２のいずれか１つに記載の方法。
前記内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、阻害性ＲＮＡ分子を前記細胞、前記対象、または前記ニューロンの集団に投与することにより破壊する、Ｅ１５０～Ｅ１５２のいずれか１つに記載の方法。
【0252】
Ｅ１５９．
前記阻害性ＲＮＡ分子が短鎖干渉ＲＮＡ、短鎖ヘアピンＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡである、Ｅ１５８に記載の方法。
前記阻害性ＲＮＡ分子が短鎖干渉ＲＮＡ、短鎖ヘアピンＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡである、Ｅ１５８に記載の方法。
【0253】
Ｅ１６０．
前記細胞が自家細胞である、Ｅ１～１５９のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が自家細胞である、Ｅ１～１５９のいずれか１つに記載の方法。
【0254】
Ｅ１６１．
前記細胞が同種異系細胞である、Ｅ１～１５９のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が同種異系細胞である、Ｅ１～１５９のいずれか１つに記載の方法。
【0255】
Ｅ１６２．
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入されている、Ｅ１～１６１のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入されている、Ｅ１～１６１のいずれか１つに記載の方法。
【0256】
Ｅ１６３．
前記細胞を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、及びレトロウイルス科ウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターで形質導入する、Ｅ１６２に記載の方法。
前記細胞を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、及びレトロウイルス科ウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターで形質導入する、Ｅ１６２に記載の方法。
【0257】
Ｅ１６４．
前記ウイルスベクターがレトロウイルス科ウイルスベクターである、Ｅ１６３に記載の方法。
前記ウイルスベクターがレトロウイルス科ウイルスベクターである、Ｅ１６３に記載の方法。
【0258】
Ｅ１６５．
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、Ｅ１６４に記載の方法。
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、Ｅ１６４に記載の方法。
【0259】
Ｅ１６６．
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、アルファレトロウイルスベクターである、Ｅ１６４に記載の方法。
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、アルファレトロウイルスベクターである、Ｅ１６４に記載の方法。
【0260】
Ｅ１６７．
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、ガンマレトロウイルスベクターである、Ｅ１６４に記載の方法。
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、ガンマレトロウイルスベクターである、Ｅ１６４に記載の方法。
【0261】
Ｅ１６８．
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、中央ポリプリン路、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶ Ｐｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、Ｅ１６４～Ｅ１６７のいずれか１つに記載の方法。
前記レトロウイルス科ウイルスベクターが、中央ポリプリン路、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント、５’－ＬＴＲ、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶ Ｐｓｉシグナル５’－スプライス部位、デルタ－ＧＡＧエレメント、３’－スプライス部位、及び３’－自己不活性化ＬＴＲを含む、Ｅ１６４～Ｅ１６７のいずれか１つに記載の方法。
【0262】
Ｅ１６９．
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４からなる群から選択されるＡＡＶである、Ｅ１６３に記載の方法。
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶｒｈ７４からなる群から選択されるＡＡＶである、Ｅ１６３に記載の方法。
【0263】
Ｅ１７０．
前記ウイルスベクターが偽型ウイルスベクターである、Ｅ１６３～Ｅ１６９のいずれか１つに記載の方法。
前記ウイルスベクターが偽型ウイルスベクターである、Ｅ１６３～Ｅ１６９のいずれか１つに記載の方法。
【0264】
Ｅ１７１．
前記偽型ウイルスベクターが、偽型ＡＡＶ、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ウイルスからなる群から選択される、Ｅ１７０に記載の方法。
前記偽型ウイルスベクターが、偽型ＡＡＶ、偽型アデノウイルス、偽型パルボウイルス、偽型コロナウイルス、偽型ラブドウイルス、偽型パラミクソウイルス、偽型ピコルナウイルス、偽型アルファウイルス、偽型ヘルペスウイルス、偽型ポックスウイルス、及び偽型レトロウイルス科ウイルスからなる群から選択される、Ｅ１７０に記載の方法。
【0265】
Ｅ１７２．
前記細胞を、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトする、Ｅ１～Ｅ１６１のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞を、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトする、Ｅ１～Ｅ１６１のいずれか１つに記載の方法。
【0266】
Ｅ１７３．
前記細胞を、ａ）カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチル－デキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び磁気ビーズからなる群から選択される薬剤；またはｂ）エレクトロポレーション、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ、スクイーズ－ポレーション、ソノポレーション、光学トランスフェクション、Ｍａｇｎｅｔｏｆｅｃｔｉｏｎ、及びインペールフェクションからなる群から選択される技術を使用してトランスフェクトする、Ｅ１７２に記載の方法。
前記細胞を、ａ）カチオン性ポリマー、ジエチルアミノエチル－デキストラン、ポリエチレンイミン、カチオン性脂質、リポソーム、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、及び磁気ビーズからなる群から選択される薬剤；またはｂ）エレクトロポレーション、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ、スクイーズ－ポレーション、ソノポレーション、光学トランスフェクション、Ｍａｇｎｅｔｏｆｅｃｔｉｏｎ、及びインペールフェクションからなる群から選択される技術を使用してトランスフェクトする、Ｅ１７２に記載の方法。
【0267】
Ｅ１７４．
前記細胞における前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、ユビキタスプロモーターにより媒介する、Ｅ１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞における前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、ユビキタスプロモーターにより媒介する、Ｅ１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。
【0268】
Ｅ１７５．
前記ユビキタスプロモーターが、伸長因子１－アルファプロモーター及びホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１７４に記載の方法。
前記ユビキタスプロモーターが、伸長因子１－アルファプロモーター及びホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１７４に記載の方法。
【0269】
Ｅ１７６．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、細胞系統特異的プロモーターにより媒介する、Ｅ１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、細胞系統特異的プロモーターにより媒介する、Ｅ１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。
【0270】
Ｅ１７７．
前記細胞系統特異的プロモーターが、ＰＧＲＮプロモーター、ＣＤ１１ｂプロモーター、ＣＤ６８プロモーター、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１プロモーター、同種移植炎症因子１プロモーター、プリン受容体Ｐ２Ｙ１２プロモーター、膜貫通タンパク質１１９プロモーター、及びコロニー刺激因子１受容体プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１７６に記載の方法。
前記細胞系統特異的プロモーターが、ＰＧＲＮプロモーター、ＣＤ１１ｂプロモーター、ＣＤ６８プロモーター、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１プロモーター、同種移植炎症因子１プロモーター、プリン受容体Ｐ２Ｙ１２プロモーター、膜貫通タンパク質１１９プロモーター、及びコロニー刺激因子１受容体プロモーターからなる群から選択される、Ｅ１７６に記載の方法。
【0271】
Ｅ１７８．
前記細胞における前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、合成プロモーターにより媒介する、Ｅ１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞における前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮの発現を、合成プロモーターにより媒介する、Ｅ１～Ｅ１７３のいずれか１つに記載の方法。
【0272】
Ｅ１７９．
前記組成物を、ａ）前記対象の脳におけるＭ１ミクログリアの量と比べて、前記対象の脳においてＭ２ミクログリアの量を増加させるために；ｂ）前記対象の脳における１種または複数の炎症誘発性サイトカインのレベルを低下させるために；ｃ）前記対象の脳における１種または複数の抗炎症性サイトカインのレベルを上昇させるために、；ｄ）前記対象の認知性能を改善するために；ｅ）前記対象の運動機能を改善するために；ｆ）前記対象におけるニューロン喪失を減少させるために；及び／またはｇ）前記対象におけるα－シヌクレインタンパク質、タウ陽性ニューロン封入体、ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）陽性封入体、サルコーマ融合（ＦＵＳ）陽性封入体、及び／またはユビキチン陽性封入体、またはそれらの凝集体のレベルを低下させるために十分な量で前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１７８のいずれか１つに記載の方法。
前記組成物を、ａ）前記対象の脳におけるＭ１ミクログリアの量と比べて、前記対象の脳においてＭ２ミクログリアの量を増加させるために；ｂ）前記対象の脳における１種または複数の炎症誘発性サイトカインのレベルを低下させるために；ｃ）前記対象の脳における１種または複数の抗炎症性サイトカインのレベルを上昇させるために、；ｄ）前記対象の認知性能を改善するために；ｅ）前記対象の運動機能を改善するために；ｆ）前記対象におけるニューロン喪失を減少させるために；及び／またはｇ）前記対象におけるα－シヌクレインタンパク質、タウ陽性ニューロン封入体、ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）陽性封入体、サルコーマ融合（ＦＵＳ）陽性封入体、及び／またはユビキチン陽性封入体、またはそれらの凝集体のレベルを低下させるために十分な量で前記対象に投与する、Ｅ１～Ｅ１７８のいずれか１つに記載の方法。
【0273】
Ｅ１８０．
前記対象がヒトである、Ｅ１～Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
前記対象がヒトである、Ｅ１～Ｅ１７９のいずれか１つに記載の方法。
【0274】
Ｅ１８１．
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含み、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または添加剤をさらに含む、薬学的組成物。
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を含み、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または添加剤をさらに含む、薬学的組成物。
【0275】
Ｅ１８２．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが分泌シグナルペプチドを含む、Ｅ１８１に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが分泌シグナルペプチドを含む、Ｅ１８１に記載の薬学的組成物。
【0276】
Ｅ１８３．
前記分泌シグナルペプチドがＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドである、Ｅ１８２に記載の薬学的組成物。
前記分泌シグナルペプチドがＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドである、Ｅ１８２に記載の薬学的組成物。
【0277】
Ｅ１８４．
前記細胞が、前記ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１８１～Ｅ１８３のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞が、前記ＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１８１～Ｅ１８３のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0278】
Ｅ１８５．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８４に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８４に記載の薬学的組成物。
【0279】
Ｅ１８６．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも３つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８５に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも３つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８５に記載の薬学的組成物。
【0280】
Ｅ１８７．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも４つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８６に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも４つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８６に記載の薬学的組成物。
【0281】
Ｅ１８８．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも５つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８７に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも５つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８７に記載の薬学的組成物。
【0282】
Ｅ１８９．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも６つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８８に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも６つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８８に記載の薬学的組成物。
【0283】
Ｅ１９０．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも７つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８９に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも７つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８９に記載の薬学的組成物。
【0284】
Ｅ１９１．
前記ＰＧＲＮが、少なくとも８つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９０に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、少なくとも８つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９０に記載の薬学的組成物。
【0285】
Ｅ１９２．
前記ＰＧＲＮが、２～１６のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ１９１のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、２～１６のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ１９１のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0286】
Ｅ１９３．
前記ＰＧＲＮが、２～１２のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９２に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、２～１２のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９２に記載の薬学的組成物。
【0287】
Ｅ１９４．
前記ＰＧＲＮが、２～８のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９３に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、２～８のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９３に記載の薬学的組成物。
【0288】
Ｅ１９５．
前記ＰＧＲＮが、２～４のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９４に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、２～４のＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９４に記載の薬学的組成物。
【0289】
Ｅ１９６．
前記ＰＧＲＮが、２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９５に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、２つのＧＲＮドメインを含む、Ｅ１９５に記載の薬学的組成物。
【0290】
Ｅ１９７．
前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ１９６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ１９６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0291】
Ｅ１９８．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１９７に記載の薬学的組成物。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１９７に記載の薬学的組成物。
【0292】
Ｅ１９９．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１９８に記載の薬学的組成物。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１９８に記載の薬学的組成物。
【0293】
Ｅ２００．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、Ｅ１９９に記載の薬学的組成物。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、Ｅ１９９に記載の薬学的組成物。
【0294】
Ｅ２０１．
前記ＰＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２００のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２００のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0295】
Ｅ２０２．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０１に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０１に記載の薬学的組成物。
【0296】
Ｅ２０３．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０２に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０２に記載の薬学的組成物。
【0297】
Ｅ２０４．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ２０３に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ２０３に記載の薬学的組成物。
【0298】
Ｅ２０５．
前記ＰＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２０４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２０４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0299】
Ｅ２０６．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０５に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０５に記載の薬学的組成物。
【0300】
Ｅ２０７．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０６に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０６に記載の薬学的組成物。
【0301】
Ｅ２０８．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ２０７に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ２０７に記載の薬学的組成物。
【0302】
Ｅ２０９．
前記ＰＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２０８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２０８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0303】
Ｅ２１０．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０９に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２０９に記載の薬学的組成物。
【0304】
Ｅ２１１．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１０に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１０に記載の薬学的組成物。
【0305】
Ｅ２１２．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ２１１に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ２１１に記載の薬学的組成物。
【0306】
Ｅ２１３．
前記ＰＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２１２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－４ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２１２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0307】
Ｅ２１４．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１３に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１３に記載の薬学的組成物。
【0308】
Ｅ２１５．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１４に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１４に記載の薬学的組成物。
【0309】
Ｅ２１６．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ２１５に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ２１５に記載の薬学的組成物。
【0310】
Ｅ２１７．
前記ＰＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２１６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２１６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0311】
Ｅ２１８．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１７に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１７に記載の薬学的組成物。
【0312】
Ｅ２１９．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１８に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２１８に記載の薬学的組成物。
【0313】
Ｅ２２０．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ２１９に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ２１９に記載の薬学的組成物。
【0314】
Ｅ２２１．
前記ＰＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２２０のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２２０のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0315】
Ｅ２２２．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２１に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２１に記載の薬学的組成物。
【0316】
Ｅ２２３．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２２に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２２に記載の薬学的組成物。
【0317】
Ｅ２２４．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ２２３に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ２２３に記載の薬学的組成物。
【0318】
Ｅ２２５．
前記ＰＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２２４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインを含む、Ｅ１８１～Ｅ２２４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0319】
Ｅ２２６．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２５に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２５に記載の薬学的組成物。
【0320】
Ｅ２２７．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２６に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２２６に記載の薬学的組成物。
【0321】
Ｅ２２８．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ２２６に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ２２６に記載の薬学的組成物。
【0322】
Ｅ２２９．
前記ＰＧＲＮが全長ＰＧＲＮである、Ｅ１８１～Ｅ２２８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが全長ＰＧＲＮである、Ｅ１８１～Ｅ２２８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0323】
Ｅ２３０．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１８１～Ｅ２２９に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１８１～Ｅ２２９に記載の薬学的組成物。
【0324】
Ｅ２３１．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３０に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３０に記載の薬学的組成物。
【0325】
Ｅ２３２．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３１に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３１に記載の薬学的組成物。
【0326】
Ｅ２３３．
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、Ｅ２３２に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、Ｅ２３２に記載の薬学的組成物。
【0327】
Ｅ２３４．
前記細胞が、前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１８１～Ｅ２３３のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞が、前記ＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む、Ｅ１８１～Ｅ２３３のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0328】
Ｅ２３５．
前記ＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２３４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するパラ－ＧＲＮドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２３４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0329】
Ｅ２３６．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３５に記載の薬学的組成物。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３５に記載の薬学的組成物。
【0330】
Ｅ２３７．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３６に記載の薬学的組成物。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３６に記載の薬学的組成物。
【0331】
Ｅ２３８．
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、Ｅ２３７に記載の薬学的組成物。
前記パラ－ＧＲＮドメインが、配列番号２のアミノ酸配列を有する、Ｅ２３７に記載の薬学的組成物。
【0332】
Ｅ２３９．
前記ＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２３８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－１ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２３８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0333】
Ｅ２４０．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３９に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２３９に記載の薬学的組成物。
【0334】
Ｅ２４１．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４０に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４０に記載の薬学的組成物。
【0335】
Ｅ２４２．
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ２４１に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－１ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、Ｅ２４１に記載の薬学的組成物。
【0336】
Ｅ２４３．
前記ＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２４２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－２ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２４２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0337】
Ｅ２４４．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４３に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４３に記載の薬学的組成物。
【0338】
Ｅ２４５．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４４に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４４に記載の薬学的組成物。
【0339】
Ｅ２４６．
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ２４５に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－２ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、Ｅ２４５に記載の薬学的組成物。
【0340】
Ｅ２４７．
前記ＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２４６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－３ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２４６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0341】
Ｅ２４８．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４７に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４７に記載の薬学的組成物。
【0342】
Ｅ２４９．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４８に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２４８に記載の薬学的組成物。
【0343】
Ｅ２５０．
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ２４９に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－３ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、Ｅ２４９に記載の薬学的組成物。
【0344】
Ｅ２５１．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１８１～Ｅ２５０のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ１８１～Ｅ２５０のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0345】
Ｅ２５２．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５１に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５１に記載の薬学的組成物。
【0346】
Ｅ２５３．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５２に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５２に記載の薬学的組成物。
【0347】
Ｅ２５４．
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ２５３に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－４ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を有する、Ｅ２５３に記載の薬学的組成物。
【0348】
Ｅ２５５．
前記ＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２５４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－５ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２５４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0349】
Ｅ２５６．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５５に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５５に記載の薬学的組成物。
【0350】
Ｅ２５７．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５６に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５６に記載の薬学的組成物。
【0351】
Ｅ２５８．
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ２５７に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－５ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を有する、Ｅ２５７に記載の薬学的組成物。
【0352】
Ｅ２５９．
前記ＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２５８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－６ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２５８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0353】
Ｅ２６０．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５９に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２５９に記載の薬学的組成物。
【0354】
Ｅ２６１．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２６０に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２６０に記載の薬学的組成物。
【0355】
Ｅ２６２．
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ２６１に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－６ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を有する、Ｅ２６１に記載の薬学的組成物。
【0356】
Ｅ２６３．
前記ＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２６２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有するＧＲＮ－７ドメインである、Ｅ１８１～Ｅ２６２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0357】
Ｅ２６４．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２６３に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２６３に記載の薬学的組成物。
【0358】
Ｅ２６５．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２６４に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｅ２６４に記載の薬学的組成物。
【0359】
Ｅ２６６．
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ２６５に記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮ－７ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を有する、Ｅ２６５に記載の薬学的組成物。
【0360】
Ｅ２６７．
前記ＧＲＮが全長ＧＲＮである、Ｅ１８１～Ｅ２６６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＧＲＮが全長ＧＲＮである、Ｅ１８１～Ｅ２６６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0361】
Ｅ２６８．
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１８１～Ｅ２６７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＰＧＲＮ導入遺伝子を含む、Ｅ１８１～Ｅ２６７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0362】
Ｅ２６９．
前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、Ｅ２６８に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、Ｅ２６８に記載の薬学的組成物。
【0363】
Ｅ２７０．
前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、Ｅ２６９に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、Ｅ２６９に記載の薬学的組成物。
【0364】
Ｅ２７１．
前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列を有する、Ｅ２７０に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮ導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列を有する、Ｅ２７０に記載の薬学的組成物。
【0365】
Ｅ２７２．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である、Ｅ１８１～Ｅ２７１のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮが、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質である、Ｅ１８１～Ｅ２７１のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0366】
Ｅ２７３．
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、ＡｐｏＥのＲｂドメインを含む、Ｅ２７２に記載の薬学的組成物。
前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮ融合タンパク質が、ＡｐｏＥのＲｂドメインを含む、Ｅ２７２に記載の薬学的組成物。
【0367】
Ｅ２７４．
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む、Ｅ２７３に記載の薬学的組成物。
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの部分を含む、Ｅ２７３に記載の薬学的組成物。
【0368】
Ｅ２７５．
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む、Ｅ２７３またはＥ２７４に記載の薬学的組成物。
前記Ｒｂドメインが、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する領域を含む、Ｅ２７３またはＥ２７４に記載の薬学的組成物。
【0369】
Ｅ２７６．
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする前記導入遺伝子がさらに、ｍｉＲＮＡターゲティング配列を３’－ＵＴＲに含む、Ｅ１８１～Ｅ２７５のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする前記導入遺伝子がさらに、ｍｉＲＮＡターゲティング配列を３’－ＵＴＲに含む、Ｅ１８１～Ｅ２７５のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0370】
Ｅ２７７．
前記ｍｉＲＮＡターゲティング配列がｍｉＲ－１２６ターゲティング配列である、Ｅ２７６に記載の薬学的組成物。
前記ｍｉＲＮＡターゲティング配列がｍｉＲ－１２６ターゲティング配列である、Ｅ２７６に記載の薬学的組成物。
【0371】
Ｅ２７８．
前記細胞がＥＳＣである、Ｅ１８１～Ｅ２７７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞がＥＳＣである、Ｅ１８１～Ｅ２７７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0372】
Ｅ２７９．
前記細胞がｉＰＳＣである、Ｅ１８１～Ｅ２７７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞がｉＰＳＣである、Ｅ１８１～Ｅ２７７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0373】
Ｅ２８０．
前記細胞がＣＤ３４＋細胞である、Ｅ１８１～Ｅ２７７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞がＣＤ３４＋細胞である、Ｅ１８１～Ｅ２７７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0374】
Ｅ２８１．
前記ＣＤ３４＋細胞がＨＳＣである、Ｅ２８０に記載の薬学的組成物。
前記ＣＤ３４＋細胞がＨＳＣである、Ｅ２８０に記載の薬学的組成物。
【0375】
Ｅ２８２．
前記ＣＤ３４＋細胞がＭＰＣである、Ｅ２８０に記載の薬学的組成物。
前記ＣＤ３４＋細胞がＭＰＣである、Ｅ２８０に記載の薬学的組成物。
【0376】
Ｅ２８３．
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトされている、Ｅ１８１～Ｅ２８２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボでトランスフェクトされている、Ｅ１８１～Ｅ２８２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0377】
Ｅ２８４．
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入されている、Ｅ１８１～Ｅ２８２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記細胞が、前記ＰＧＲＮまたは前記ＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入されている、Ｅ１８１～Ｅ２８２のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0378】
Ｅ２８５．
ヒト対象に全身投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
ヒト対象に全身投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0379】
Ｅ２８６．
静脈内注射によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８５に記載の薬学的組成物。
静脈内注射によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８５に記載の薬学的組成物。
【0380】
Ｅ２８７．
ヒト対象に、前記対象の神経系に直接投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
ヒト対象に、前記対象の神経系に直接投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0381】
Ｅ２８８．
脳脊髄液へとヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８７に記載の薬学的組成物。
脳脊髄液へとヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８７に記載の薬学的組成物。
【0382】
Ｅ２８９．
脳室内注射、髄腔内注射、定位注射、またはそれらの組み合わせによりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８７またはＥ２８８に記載の薬学的組成物。
脳室内注射、髄腔内注射、定位注射、またはそれらの組み合わせによりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８７またはＥ２８８に記載の薬学的組成物。
【0383】
Ｅ２９０．
実質内注射によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８７に記載の薬学的組成物。
実質内注射によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２８７に記載の薬学的組成物。
【0384】
Ｅ２９１．
ヒト対象の骨髄に直接投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
ヒト対象の骨髄に直接投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0385】
Ｅ２９２．
骨内注射によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２９１に記載の薬学的組成物。
骨内注射によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ２９１に記載の薬学的組成物。
【0386】
Ｅ２９３．
前記組成物を含む骨髄移植によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記組成物を含む骨髄移植によりヒト対象に投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0387】
Ｅ２９４．
ヒト対象に全身投与するために、及びヒト対象の中枢神経系に直接投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
ヒト対象に全身投与するために、及びヒト対象の中枢神経系に直接投与するために製剤化されている、Ｅ１８１～Ｅ２８４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0388】
Ｅ２９５．
脳室内注射及び静脈内注射により投与するために製剤化されている、Ｅ２９４に記載の薬学的組成物。
脳室内注射及び静脈内注射により投与するために製剤化されている、Ｅ２９４に記載の薬学的組成物。
【0389】
Ｅ２９６．
髄腔内注射及び静脈内注射により投与するために製剤化されている、Ｅ２９４に記載の薬学的組成物。
髄腔内注射及び静脈内注射により投与するために製剤化されている、Ｅ２９４に記載の薬学的組成物。
【0390】
Ｅ２９７．
実質内注射及び静脈内注射により投与するために製剤化されている、Ｅ２９４に記載の薬学的組成物。
実質内注射及び静脈内注射により投与するために製剤化されている、Ｅ２９４に記載の薬学的組成物。
【0391】
Ｅ２９８．
前記ヒト対象が、ＮＣＤを有すると診断されている、Ｅ２８５～Ｅ２９７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ヒト対象が、ＮＣＤを有すると診断されている、Ｅ２８５～Ｅ２９７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0392】
Ｅ２９９．
前記ＮＣＤが重度ＮＣＤである、Ｅ２９８に記載の薬学的組成物。
前記ＮＣＤが重度ＮＣＤである、Ｅ２９８に記載の薬学的組成物。
【0393】
Ｅ３００．
前記重度ＮＣＤが、前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害する、Ｅ２９９に記載の薬学的組成物。
前記重度ＮＣＤが、前記対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害する、Ｅ２９９に記載の薬学的組成物。
【0394】
Ｅ３０１．
前記重度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ２９９またはＥ３００に記載の薬学的組成物。
前記重度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ２９９またはＥ３００に記載の薬学的組成物。
【0395】
Ｅ３０２．
前記ＮＣＤが軽度ＮＣＤである、Ｅ２９８に記載の薬学的組成物。
前記ＮＣＤが軽度ＮＣＤである、Ｅ２９８に記載の薬学的組成物。
【0396】
Ｅ３０３．
前記軽度ＮＣＤが対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない、Ｅ３０２に記載の薬学的組成物。
前記軽度ＮＣＤが対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害しない、Ｅ３０２に記載の薬学的組成物。
【0397】
Ｅ３０４．
前記軽度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差１～２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ３０２またはＥ３０３に記載の薬学的組成物。
前記軽度ＮＣＤが、基準集団の平均スコアから少なくとも標準偏差１～２離れている、認知検査で前記対象により得られるスコアと関連している、Ｅ３０２またはＥ３０３に記載の薬学的組成物。
【0398】
Ｅ３０５．
前記基準集団が、一般集団である、Ｅ３０１またはＥ３０４に記載の薬学的組成物。
前記基準集団が、一般集団である、Ｅ３０１またはＥ３０４に記載の薬学的組成物。
【0399】
Ｅ３０６．
前記認知検査が、ＡＤ８、ＡＷＶ、ＧＰＣＯＧ、ＨＲＡ、ＭＩＳ、ＭＭＳＥ、ＭｏＣＡ、ＳＬＵＭＳ、及びＳｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥからなる群から選択される、Ｅ３０１、Ｅ３０４、またはＥ３０５に記載の薬学的組成物。
前記認知検査が、ＡＤ８、ＡＷＶ、ＧＰＣＯＧ、ＨＲＡ、ＭＩＳ、ＭＭＳＥ、ＭｏＣＡ、ＳＬＵＭＳ、及びＳｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥからなる群から選択される、Ｅ３０１、Ｅ３０４、またはＥ３０５に記載の薬学的組成物。
【0400】
Ｅ３０７．
前記ＮＣＤが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連している、Ｅ２９８～Ｅ３０６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＮＣＤが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知のうちの１つまたは複数における機能障害と関連している、Ｅ２９８～Ｅ３０６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0401】
Ｅ３０８．
前記ＮＣＤが、せん妄または他の精神障害によるものではない、Ｅ２９８～Ｅ３０７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＮＣＤが、せん妄または他の精神障害によるものではない、Ｅ２９８～Ｅ３０７のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0402】
Ｅ３０９．
前記ＮＣＤが前頭側頭骨ＮＣＤである、Ｅ２９８～Ｅ３０８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＮＣＤが前頭側頭骨ＮＣＤである、Ｅ２９８～Ｅ３０８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0403】
Ｅ３１０．
前記前頭側頭骨ＮＣＤがＦＴＬＤである、Ｅ３０９に記載の薬学的組成物。
前記前頭側頭骨ＮＣＤがＦＴＬＤである、Ｅ３０９に記載の薬学的組成物。
【0404】
Ｅ３１１．
前記ＮＣＤがリソソーム疾患によるものである、Ｅ２９８～Ｅ３０８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
前記ＮＣＤがリソソーム疾患によるものである、Ｅ２９８～Ｅ３０８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【0405】
Ｅ３１２．
前記リソソーム疾患がＮＣＬである、Ｅ３１１に記載の薬学的組成物。
前記リソソーム疾患がＮＣＬである、Ｅ３１１に記載の薬学的組成物。
【0406】
Ｅ３１３．
Ｅ１８１～Ｅ３１２のいずれか１つに記載の薬学的組成物と添付文書とを含むキット。
Ｅ１８１～Ｅ３１２のいずれか１つに記載の薬学的組成物と添付文書とを含むキット。
【0407】
Ｅ３１４．
前記添付文書が、前記キットのユーザーに、Ｅ１～Ｅ１８０のいずれか１つに記載の方法を実行するように指示する、Ｅ３１３に記載のキット。
前記添付文書が、前記キットのユーザーに、Ｅ１～Ｅ１８０のいずれか１つに記載の方法を実行するように指示する、Ｅ３１３に記載のキット。
【0408】
Ｅ３１５．
前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質が、ＰＧＲＮまたはＧＲＮと、ＧＩＬＴタグとを含む、Ｅ１～Ｅ１８０のいずれか１つに記載の方法。
前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質が、ＰＧＲＮまたはＧＲＮと、ＧＩＬＴタグとを含む、Ｅ１～Ｅ１８０のいずれか１つに記載の方法。
【0409】
Ｅ３１６．
前記ＧＩＬＴタグを、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＮ末端に作動可能に連結させる、Ｅ３１５に記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグを、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＮ末端に作動可能に連結させる、Ｅ３１５に記載の方法。
【0410】
Ｅ３１７．
前記ＧＩＬＴタグを、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＣ末端に作動可能に連結させる、Ｅ３１５に記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグを、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＣ末端に作動可能に連結させる、Ｅ３１５に記載の方法。
【0411】
Ｅ３１８．
前記ＧＩＬＴタグが、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩのアミノ酸配列（配列番号１２）に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含む、Ｅ３１５～３１７のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩのアミノ酸配列（配列番号１２）に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含む、Ｅ３１５～３１７のいずれか１つに記載の方法。
【0412】
Ｅ３１９．
前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、かつ前記変異が、少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を破壊する、Ｅ３１５～３１８のいずれか１つに記載の方法。
前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、かつ前記変異が、少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を破壊する、Ｅ３１５～３１８のいずれか１つに記載の方法。
【0413】
Ｅ３２０．
前記変異が、アミノ酸置換、欠失、及び／または挿入である、Ｅ３１９に記載の方法。
前記変異が、アミノ酸置換、欠失、及び／または挿入である、Ｅ３１９に記載の方法。
【0414】
Ｅ３２１．
前記変異が、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である、Ｅ３２０に記載の方法。
前記変異が、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である、Ｅ３２０に記載の方法。
【0415】
Ｅ３２２．
前記変異が、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０からなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換、及びそれらの組み合わせである、Ｅ３２０に記載の方法。
前記変異が、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０からなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換、及びそれらの組み合わせである、Ｅ３２０に記載の方法。
【0416】
Ｅ３２３．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
【0417】
Ｅ３２４．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
【0418】
Ｅ３２５．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
【0419】
Ｅ３２６．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
【0420】
Ｅ３２７．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
【0421】
Ｅ３２８．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３１５～Ｅ３２２のいずれか１つに記載の方法。
【0422】
Ｅ３２９．
前記細胞が、万能性細胞（例えば、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ）、多能性細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＨＳＣまたはＭＰＣなど）、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアである、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３１５～Ｅ３２８のいずれか１つに記載の方法。
前記細胞が、万能性細胞（例えば、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ）、多能性細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＨＳＣまたはＭＰＣなど）、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアである、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３１５～Ｅ３２８のいずれか１つに記載の方法。
【0423】
Ｅ３３０．
前記導入遺伝子が、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３１５～Ｅ３２９のいずれか１つに記載の方法。
前記導入遺伝子が、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３１５～Ｅ３２９のいずれか１つに記載の方法。
【0424】
Ｅ３３１．
前記導入遺伝子がコドン最適化導入遺伝子である、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３１５～Ｅ３３０のいずれか１つに記載の方法。
前記導入遺伝子がコドン最適化導入遺伝子である、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３１５～Ｅ３３０のいずれか１つに記載の方法。
【0425】
Ｅ３３２．
前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む、Ｅ３３１に記載の方法。
前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む、Ｅ３３１に記載の方法。
【0426】
Ｅ３３３．
前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質が、ＰＧＲＮまたはＧＲＮとＧＩＬＴタグとを含む、Ｅ１８１～Ｅ３１２のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質が、ＰＧＲＮまたはＧＲＮとＧＩＬＴタグとを含む、Ｅ１８１～Ｅ３１２のいずれか１つに記載の組成物。
【0427】
Ｅ３３４．
前記ＧＩＬＴタグが、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＮ末端に作動可能に連結している、Ｅ３３３に記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＮ末端に作動可能に連結している、Ｅ３３３に記載の組成物。
【0428】
Ｅ３３５．
前記ＧＩＬＴタグが、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＣ末端に作動可能に連結している、Ｅ３３３に記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、前記ＰＧＲＮまたはＧＲＮのＣ末端に作動可能に連結している、Ｅ３３３に記載の組成物。
【0429】
Ｅ３３６．
前記ＧＩＬＴタグが、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩ（配列番号１２）のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含む、Ｅ３３３～Ｅ３３５のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩ（配列番号１２）のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有するヒトＩＧＦ－ＩＩムテインを含む、Ｅ３３３～Ｅ３３５のいずれか１つに記載の組成物。
【0430】
Ｅ３３７．
前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、かつ前記変異が少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を破壊する、Ｅ３３３～Ｅ３３６のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＩＧＦ－ＩＩムテインが、配列番号１２のアミノ酸３０～４０に対応する領域内に変異を含み、かつ前記変異が少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を破壊する、Ｅ３３３～Ｅ３３６のいずれか１つに記載の組成物。
【0431】
Ｅ３３８．
前記変異が、アミノ酸置換、欠失、及び／または挿入である、Ｅ３３７に記載の組成物。
前記変異が、アミノ酸置換、欠失、及び／または挿入である、Ｅ３３７に記載の組成物。
【0432】
Ｅ３３９．
前記変異が、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である、Ｅ３３８に記載の組成物。
前記変異が、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置でのＬｙｓまたはＡｌａアミノ酸置換である、Ｅ３３８に記載の組成物。
【0433】
Ｅ３４０．
前記変異が、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０からなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換、及びそれらの組み合わせである、Ｅ３３８に記載の組成物。
前記変異が、配列番号１２の３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３３～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０からなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置換、及びそれらの組み合わせである、Ｅ３３８に記載の組成物。
【0434】
Ｅ３４１．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
【0435】
Ｅ３４２．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
【0436】
Ｅ３４３．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
【0437】
Ｅ３４４．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
【0438】
Ｅ３４５．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
【0439】
Ｅ３４６．
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
前記ＧＩＬＴタグが、配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列を有する、Ｅ３３３～Ｅ３４０のいずれか１つに記載の組成物。
【0440】
Ｅ３４７．
前記細胞が、万能性細胞（例えば、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ）、多能性細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＨＳＣまたはＭＰＣなど）、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアである、Ｅ１８１～Ｅ３１２またはＥ３３３～Ｅ３４６のいずれか１つに記載の組成物。
前記細胞が、万能性細胞（例えば、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ）、多能性細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＨＳＣまたはＭＰＣなど）、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアである、Ｅ１８１～Ｅ３１２またはＥ３３３～Ｅ３４６のいずれか１つに記載の組成物。
【0441】
Ｅ３４８．
前記導入遺伝子が、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る、Ｅ１８１～Ｅ３１２またはＥ３３３～Ｅ３４７のいずれか１つに記載の組成物。
前記導入遺伝子が、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る、Ｅ１８１～Ｅ３１２またはＥ３３３～Ｅ３４７のいずれか１つに記載の組成物。
【0442】
Ｅ３４９．
前記導入遺伝子がコドン最適化導入遺伝子である、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３３３～Ｅ３４８のいずれか１つに記載の組成物。
前記導入遺伝子がコドン最適化導入遺伝子である、Ｅ１～Ｅ１８０またはＥ３３３～Ｅ３４８のいずれか１つに記載の組成物。
【0443】
Ｅ３５０．
前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む、Ｅ３４９に記載の組成物。
前記コドン最適化導入遺伝子が、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む、Ｅ３４９に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【0444】
【図1A】ヒトプログラニュリン（ＰＧＲＮ）タンパク質をコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターでのヒト細胞の形質導入を示す一連のプロットである。１０、５０、１００、または２００の感染多重度（ＭＯＩ）で、ＰＧＲＮ（ＭＮＤ．ＧＲＮ）または緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ；ＭＮＤ．ＧＦＰ）をコードするレンチウイルスベクターで形質導入されたヒト２３９Ｔ細胞から、細胞溶解産物を生成した。別のセットの対照細胞は形質導入しなかった（ＮＴＣ）。デンシトメトリーを使用して、アクチンに対してＰＧＲＮレベルを定量化した。
【図1B】ヒトＰＧＲＮに対して生じる抗体を用いるウェスタンブロットは、２３９Ｔ細胞における安定なＰＧＲＮ発現を示し、最大の発現がＭＯＩ２００で観察された。ＮＴＣ細胞及びＭＯＩ１０ＧＦＰ細胞についてを除いて、すべての群が統計学的に有意な差で示された。統計的解析は、ＡＮＯＶＡを使用して行った。
【図2】ヒトＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクター（すなわち、ＭＮＤ．ＧＲＮベクター）で形質導入されたマウス系列陰性（Ｌｉｎ－）細胞におけるヒトＰＧＲＮの発現を示すウェスタンブロットである。ヒトＰＧＲＮに対して生じる抗体を用いるウェスタンブロットを使用して、形質導入されていない（－）またはＭＮＤ．ＧＲＮレンチウイルスベクターで形質導入されている（＋）Ｌｉｎ－マウス細胞から生成された馴化培地を分析すると、形質導入細胞による増殖培地へのヒトＰＧＲＮタンパク質の放出を示した。
【図3】ヒトＰＧＲＮをコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターで形質導入された不死化細胞系がＮ連結グリコシル化されることを示すウェスタンブロットである。形質導入されていない（ＮＴ１、ＮＴ２、ＮＴ３、及びＮＴ４）、または４つの独立したラウンドの形質導入で生成されたヒトＰＧＲＮをコードするレンチウイルスベクター（ＭＮＤ．ＧＲＮ－１、ＭＮＤ．ＧＲＮ－２、ＭＮＤ．ＧＲＮ－３、及びＭＮＤ．ＧＲＮ－４）で形質導入されたヒト２３９Ｔ細胞系から、細胞溶解産物を生成した。細胞溶解産物をＥｎｄｏＨ（Ｅ．）もしくはＰＮＧアーゼ（Ｐ．）酵素のいずれかで酵素的消化するか、または加熱（Ｈ．）し、かつヒトプログラニュリンに対して生じる抗体を用いるウェスタンブロットを使用して分析した。ＥｎｄｏＨ及びＰＮＧアーゼによる酵素的消化は、形質導入された細胞により産生されるヒトＰＧＲＮタンパク質がＮ連結グリコシル化されていることを示している。
【発明を実施するための形態】
【0445】
定義
本明細書で使用する場合、「除去する」、「除去すること」、「除去」などの用語は、インビボまたはエクスビボでの細胞の集団における１つまたは複数の細胞の枯渇を指す。本開示の一部の実施形態では、前記対象に治療用の細胞の集団を投与する前に、対象（例えば、本明細書に記載の疾患、例えば、神経認知障害（ＮＣＤ；例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）についての処置を受ける対象）内の内因性細胞を除去することが望ましいことがある。これは、例えば、新たに投与される細胞に、細胞が生着し得る環境を提供するために有利であり得る。細胞の集団の除去は、例えば、ターゲット細胞上に発現される抗原に結合し、続いて、ターゲット細胞の死滅を生じさせる抗体－薬物コンジュゲートを使用して、特異的細胞型を選択的に標的とする手法で行うことができる。加えて、または別法では、除去は、特定の細胞型に集中するのではなく、代わりに、様々な異なる細胞に、それらの細胞毒性作用を発揮し得る細胞毒素を使用する非特異的手法で行うことができる。対象における内因性細胞の集団、例えば、ＮＣＤの処置について治療を施される対象における内因性ミクログリアまたはミクログリア前駆体細胞の集団などを除去するために使用することができる例示的な薬剤は、ブスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、トレオスルファン、クロドロネートリポソーム、及びそれらの組み合わせである。除去の例には、インビボまたはインビトロでの細胞の集団における細胞の少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれ以上）の枯渇が含まれる。細胞のサンプル内の細胞数の定量化は、様々な細胞計数技術を使用して、例えば、計数チャンバー、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター、フローサイトメトリー、または当技術分野で公知の他の細胞計数方法の使用により行うことができる。
本明細書で使用する場合、「除去する」、「除去すること」、「除去」などの用語は、インビボまたはエクスビボでの細胞の集団における１つまたは複数の細胞の枯渇を指す。本開示の一部の実施形態では、前記対象に治療用の細胞の集団を投与する前に、対象（例えば、本明細書に記載の疾患、例えば、神経認知障害（ＮＣＤ；例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）についての処置を受ける対象）内の内因性細胞を除去することが望ましいことがある。これは、例えば、新たに投与される細胞に、細胞が生着し得る環境を提供するために有利であり得る。細胞の集団の除去は、例えば、ターゲット細胞上に発現される抗原に結合し、続いて、ターゲット細胞の死滅を生じさせる抗体－薬物コンジュゲートを使用して、特異的細胞型を選択的に標的とする手法で行うことができる。加えて、または別法では、除去は、特定の細胞型に集中するのではなく、代わりに、様々な異なる細胞に、それらの細胞毒性作用を発揮し得る細胞毒素を使用する非特異的手法で行うことができる。対象における内因性細胞の集団、例えば、ＮＣＤの処置について治療を施される対象における内因性ミクログリアまたはミクログリア前駆体細胞の集団などを除去するために使用することができる例示的な薬剤は、ブスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、トレオスルファン、クロドロネートリポソーム、及びそれらの組み合わせである。除去の例には、インビボまたはインビトロでの細胞の集団における細胞の少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれ以上）の枯渇が含まれる。細胞のサンプル内の細胞数の定量化は、様々な細胞計数技術を使用して、例えば、計数チャンバー、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター、フローサイトメトリー、または当技術分野で公知の他の細胞計数方法の使用により行うことができる。
【0446】
本明細書で使用する場合、「投与」は、任意の有効な経路により、治療薬（例えば、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたはミクログリアにおいて発現し得る導入遺伝子）を含む細胞、例えば、万能性細胞（例えば、胚性幹細胞（ＥＳＣ）または人工万能性幹細胞（ＩＳＰＣ））、多能性細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞、例えば、造血幹細胞（ＨＳＣ）または骨髄前駆細胞（ＭＰＣ）など）、血液系統前駆細胞（ＢＬＰＣＳ；例えば、単球）、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を対象に提供または与えることを指す。例示的な投与経路を、本明細書において、及び以下に記載する（例えば、脳室内（ＩＣＶ）注射、静脈内（ＩＶ）注射、髄腔内（ＩＴ）注射、実質内（ＩＰ）注射、及び定位注射）。
【0447】
本明細書で使用する場合、「同種異系」とは、同じ種の異なる対象から採取された、または由来する細胞、組織、ＤＮＡ、または因子を意味する。例えば、形質導入されたＰＧＲＮ発現またはＧＲＮ発現細胞がＮＣＤを処置するために対象に投与される状況では、同種異系細胞は、その対象ではない対象から得られ、次いで、ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を指示するベクターで形質導入またはトランスフェクトされた細胞であり得る。「発現を指示する」という語句は、発現される分子をコードする配列を含むポリヌクレオチドに関する。前記ポリヌクレオチドは、目的の分子の発現を増強する追加の配列を含み得る。
【0448】
本明細書で使用する場合、「自家」とは、個体自身の組織、細胞、またはＤＮＡから採取された、または由来する細胞、組織、ＤＮＡ、または因子に関する。例えば、形質導入されたＰＧＲＮ発現またはＧＲＮ発現細胞がＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を処置するために対象に投与される状況では、自家細胞は、その対象から得られ、次いで、ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を指示するベクターで形質導入またはトランスフェクトされた細胞であり得る。
【0449】
本明細書で使用する場合、「ＡｐｏＥ」という用語は、脂質輸送に関与するタンパク質のクラスのメンバーであるアポリポタンパク質Ｅを指す。アポリポタンパク質Ｅは、キロミクロン及び中密度リポタンパク質（ＩＤＬ）の一部である脂肪結合タンパク質（アポリポタンパク質）である。これらは、トリグリセリドに富むリポタンパク質の正常なプロセシング（異化作用）に必須である。ＡｐｏＥはＡＰＯＥ遺伝子によりコードされる。「ＡｐｏＥ」という用語はまた、野生型ＡｐｏＥタンパク質のバリアント、例えば、配列番号１１で示される野生型ＡｐｏＥのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性、またはそれ以上）を有するタンパク質を指す。
【0450】
本明細書で使用する場合、「血液系統前駆細胞」または「ＢＬＰＣ」という用語は、造血性（すなわち、血液）細胞の１種または複数（例えば、２、３、４、５種またはそれ以上）の型に分化し得る任意の細胞（例えば、哺乳動物細胞）を指す。ＢＬＰＣは、赤血球、白血球（例えば、顆粒球（例えば、好塩基球、好酸球、好中球、及び肥満細胞）または無顆粒球（例えば、リンパ球及び単球）など）、または血小板に分化し得る。ＢＬＰＣには、別の血液細胞型（例えば、マクロファージ）にさらに分化し得る分化した血液細胞（例えば、単球）も含まれ得る。
【0451】
本明細書で使用する場合、「細胞型」という用語は、遺伝子発現データに基づいて統計的に区別可能な表現型を共有する細胞のグループを指す。例えば、細胞型が共通する細胞は、類似した遺伝子活性化パターン及び抗原提示プロファイルなどの類似した構造及び／または機能的特徴を共有し得る。細胞型が共通する細胞には、共通の組織（例えば、上皮組織、神経組織、結合組織、または筋肉組織）から単離されるもの、及び／または共通の臓器、組織系、血管、または生体の他の構造及び／または領域から単離されるものが含まれ得る。
【0452】
本明細書で使用する場合、「コドン最適化」は、コーディングＤＮＡにおける同義コドン（例えば、同じアミノ酸をコードするコドン）の出現頻度が異なる種では偏っているという原則に従って、核酸配列を改変するプロセスを指す。そのようなコドン縮重は、同一のポリペプチドが様々なヌクレオチド配列によりコードされることを可能にする。このようにして改変された配列は、本明細書では「コドン最適化」と称される。このプロセスは、発現または安定性を増強するために、本明細書に記載の配列のいずれで行われてもよい。コドン最適化は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，５６１，９７２号、第７，５６１，９７３号、及び第７，８８８，１１２号に記載されているような様式で行うことができる。翻訳開始部位を取り巻く配列は、既知の方法に従ってコンセンサスコザック配列に変換することができる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＫｏｚａｋ ｅｔ ａｌ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５： ８１２５－８１４８（１９８９）を参照されたい。複数の停止コドンを組み込むことができる。
【0453】
本明細書で使用する場合、「認知検査」という用語は、ヒト及び他の動物の認知能力を評価するために当業専門家が行うことができる検査を指す。認知検査は、帰納的推論スキル、知能指数、認知開発、記憶、知識組織化、メタ認知、思考、心的時間測定を評価するために使用することができる。認知検査は、限定されないが、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知を含む複数の認知ドメインにわたる対象の処理能力を評価するために使用することができる。認知検査の例には、限定されないが、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）が含まれる。当業専門家は、当技術分野で周知の他の認知検査も、対象において認知機能を評価するために使用することができることを認めるであろう。
【0454】
本明細書で使用する場合、「複雑性注意」という用語は、情報を記憶に短時間維持する、及びその情報を操作（例えば、暗算）する対象の（例えば、ヒト対象の）能力を説明する認知機能を指す。複雑性注意における機能障害は、会話に集中することについての困難、望ましくない情報の遮断についての困難、前方視的記憶（例えば、後で何かを思い出すための記憶）の問題、及び新たな情報についての非効率的記憶をもたらし得る。
【0455】
本明細書で使用する場合、「前処置」及び「前処置すること」という用語は、細胞を含む移植片を受け取るために対象が準備されるプロセスを指す。そのような手順は、例えば、内因性ミクログリアまたは造血幹細胞を選択的に枯渇させ、それにより外因性細胞移植片により満たされる空孔を作ることにより、細胞移植片の生着を促進する。本明細書に記載の方法によれば、対象を、細胞移植療法のために、内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞または前駆細胞を除去することができる１つまたは複数の薬剤（例えば、ブスルファン、トレオスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、及びクロドロネートリポソーム）、放射線療法、またはそれらの組み合わせを対象に投与することにより、前処置することができる。前処置は、骨髄破壊的または非骨髄破壊的であってよい。当技術分野で周知の他の細胞除去薬及び方法（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）を使用することもできる。
【0456】
本明細書で使用する場合、「保存的変異」、「保存的置換」、及び「保存的アミノ酸置換」という用語は、極性、静電荷、及び立体体積などの類似の物理化学的特性を示す１つまたは複数の異なるアミノ酸で１つまたは複数のアミノ酸を置換することを指す。これらの特性を、２０種の天然に存在するアミノ酸のそれぞれについて、下の表１にまとめる。
【0457】
【表1】
【0458】
この表から、保存的アミノ酸ファミリーには（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ及びＩ；（ｉｉ）Ｄ及びＥ；（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ及びＴ；（ｉｖ）Ｈ、Ｋ及びＲ；（ｖ）Ｎ及びＱ；（ｖｉ）Ｆ、Ｙ、及びＷが含まれることが分かるであろう。したがって、保存的変異または置換は、同じアミノ酸ファミリーのメンバーを１つのアミノ酸で置換するものである（例えば、ＴｈｒをＳｅｒに、ＡｒｇをＬｙｓに置換）。
【0459】
本明細書で使用する場合、「せん妄または他の精神障害」という用語は、神経認知障害とは別個で、かつ認知機能障害を中核症状として示さない、せん妄（すなわち、短期間（例えば数時間から数日）で発症する注意、意識、及び認知の障害を含む症候群）または精神の別の障害（例えば、統合失調症、双極性障害、及び大うつ病）などの状態を指す。例えば、せん妄または別の精神障害などの状態は、認知機能障害が疾患と関連する症状ではあり得るが、その疾患の中核的な特徴ではないという点でＮＣＤとは異なり得る。せん妄または別の精神障害は、発症までの時間（例えば、ＮＣＤでの数か月から数年に対して、せん妄では数時間から数日）、病因（例えば、物質誘導性せん妄）、症状の長さ（例えば、せん妄は数日から数時間であり得るが、ＮＣＤは数年間にわたって続き得る）、及び解消（例えば、せん妄は完全に解消し得るが、ＮＣＤは多くの場合に解消しない）に関してＮＣＤとは異なり得る。
【0460】
本明細書で使用する場合、遺伝子に関して「破壊する」という用語は、機能的遺伝子産物の形成を阻止することを指す。遺伝子産物は、その正常な（野生型）機能を満たしていれば機能的である。遺伝子の破壊は、遺伝子によりコードされる機能的因子の発現を阻止し、遺伝子によりコードされる配列及び／または動物における遺伝子の発現に必要なプロモーター及び／またはオペレーターにおける１つまたは複数の塩基の挿入、削除、または置換を含む。破壊される遺伝子は、例えば、動物のゲノムからの遺伝子の少なくとも一部の除去、遺伝子によりコードされる機能的因子の発現を阻止するような遺伝子の改変、干渉ＲＮＡ、または外因性遺伝子によるドミナントネガティブ因子の発現により破壊されてもよい。１つまたは複数の遺伝子の発現を破壊するための、細胞を遺伝子改変するための材料及び方法は、それぞれの開示がその全体で参照により本明細書に組み込まれる（矛盾する場合、本明細書が優先される）ＵＳ８，５１８，７０１；ＵＳ９，４９９，８０８；及びＵＳ２０１２／０２２２１４３に詳述されている。
【0461】
本明細書で使用する場合、本明細書に記載の組成物、ベクター構築物、ウイルスベクター、または細胞の「有効量」、「治療有効量」、及び「十分量」という用語は、哺乳動物、例えばヒトを含む対象に投与したときに、臨床結果を含む有益または所望の結果をもたらすために十分な量を指す。したがって、「有効量」またはその同義語は、それが適用される状況に依存する。例えば、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）の処置の文脈では、それは、組成物、ベクター構築物、ウイルスベクター、または細胞を投与しなかった場合に得られる応答と比較して、処置応答を達成するために十分な組成物、ベクター構築物、ウイルスベクター、または細胞の量である。そのような量に対応する本明細書に記載の所与の組成物の量は、所与の薬剤、医薬製剤、投与経路、疾患もしくは障害の種類、対象のアイデンティティ（例えば、年齢、性別、体重）または処置される受容者などの様々な因子に応じて変化するが、それにもかかわらず、当業者はルーチン的に決定することができる。また、本明細書で使用する場合、本開示の組成物、ベクター構築物、ウイルスベクター、または細胞の「治療有効量」は、対照と比較して、対象において有益または所望の結果をもたらす量である。本明細書で定義されるとおり、本開示の組成物、ベクター構築物、ウイルスベクター、または細胞の治療有効量は、当業者により、当技術分野で公知のルーチン的な方法により容易に決定され得る。投薬計画を、最適な治療応答が得られるように調節することができる。
【0462】
本明細書で使用する場合、「胚性幹細胞」及び「ＥＳ細胞」という用語は、適切な条件下でインビトロ培養で維持することができる胚盤胞の内部細胞塊に由来する、胚由来の全能性または万能性幹細胞を指す。ＥＳ細胞は３つの脊椎動物の胚葉、例えば、内胚葉、外胚葉、及び中胚葉のいずれの細胞にも分化することができる。ＥＳ細胞は、適切なインビトロ培養条件下で無期限に増殖するその能力によっても特徴付けられる。例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２：１１４５ （１９９８）を参照されたい。
【0463】
本明細書で使用する場合、「内因性」という用語は、特定の生物（例えば、ヒト）または生物内の特定の場所（例えば、臓器、組織、またはヒト細胞などの細胞）において天然に見い出される分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を説明している。
【0464】
本明細書で使用する場合、「生着する」及び「生着」という用語は、造血幹細胞及び前駆細胞（そのような細胞は、身体内で内因性に産生されるか、または本明細書に記載の投与方法（例えば静脈内注射、脳室内注射、骨内注射、及び／または骨髄移植）のいずれかを使用して移植されるかのいずれか）を組織に再入植させるプロセスを指す。この用語は、生着に関するか、またはそれをもたらすすべての事象、例えば、細胞の組織ホーミング及び目的の組織内での細胞のコロニー形成を包含する。
【0465】
本明細書で使用する場合、「実行機能」という用語は、対象（例えば、ヒト）において行動の認知制御を容易にする一連の認知機能を指す。実行機能は、例えば、目標指向行動の選択及び監視、注意制御、認知抑制、抑制制御、作業記憶、ならびに認知柔軟性を包含する。個体は、生涯を通じて実行機能を正常に獲得するか、または完成させるが、このプロセスは、実行機能に不利な影響を与え得る対象におけるＮＣＤの発症により脱線し得る。
【0466】
本明細書で使用する場合、「発現する」という用語は、次の事象のうちの１つまたは複数を指す：（１）（例えば転写による）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生；（２）（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’エンドプロセシングによる）ＲＮＡ転写物のプロセシング；（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳；及び（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。対象における目的の遺伝子の発現は、例えば、対象から得られたサンプルにおける、対応するタンパク質をコードするｍＲＮＡの量または濃度の増加（例えば、本明細書に記載か、または定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）及びＲＮＡ ｓｅｑ技術などの当技術分野で公知のＲＮＡ検出手順を使用して評価される）、対応するタンパク質の量または濃度の増加（例えば、本明細書に記載か、またはとりわけ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの当技術分野で公知のタンパク質検出方法を使用して評価される）、及び／または対応するタンパク質の活性の上昇（例えば、酵素の場合、本明細書に記載か、または当技術分野で公知の酵素活性アッセイを使用して評価される）を検出することにより明らかにすることができる。
【0467】
本明細書で使用する場合、「外因性」という用語は、特定の生物（例えば、ヒト）または生物内の特定の場所（例えば、臓器、組織、またはヒト細胞などの細胞）において天然には見い出されない分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を説明する。外因性物質には、外部供給源から生物または生物から抽出された培養物に提供されるものが含まれる。
【0468】
本明細書で使用する場合、造血幹細胞などの幹細胞に関連する「機能的可能性」という用語は、１）多能性（限定されないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）を含む複数の異なる血液細胞系に分化する能力を指す）、２）自己再生（母細胞と同等の能力を有し、さらにこの能力が消耗することなく個人の生涯を通じて繰り返し発生し得る娘細胞を生じさせる幹細胞の能力を指す）、及び３）幹細胞またはその後代が移植レシピエントに再導入されると、幹細胞ニッチェに帰着し、生産的で持続的な細胞の成長と分化を再確立する能力を含む幹細胞の機能的特性を指す。
【0469】
本明細書で使用する場合、「フーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテイン」という用語は、野生型ヒトＩＧＦ－ＩＩペプチドと比較して、フーリン切断が阻止、阻害、低減、または減速されるように、少なくとも１つの天然フーリンプロテアーゼ切断部位を無効にするか、または天然フーリンプロテアーゼ切断部位に近いか、または隣接する配列を変更する、野生型ＩＧＦ－ＩＩ（配列番号１２）と比較して変化したアミノ酸配列を含むインスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ－ＩＩ）ベースのペプチドを指す。本明細書で使用する場合、フーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、フーリンに対して抵抗性であるＩＧＦ－ＩＩムテインとも称される。例示的なフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、配列番号１２のＡｒｇ３７及び／またはＡｒｇ４０に対応する位置にアミノ酸置換を含む。
【0470】
本明細書で使用する場合、「フーリンプロテアーゼ切断部位」（「フーリン切断部位」または「フーリン切断配列」とも称される）という用語は、フーリンまたはフーリン様プロテアーゼによる酵素的プロテアーゼ切断の認識配列として機能するペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列を指す。典型的には、フーリンプロテアーゼ切断部位は、コンセンサス配列Ａｒｇ－Ｘ－Ｘ－Ａｒｇを有し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。切断部位は、配列中のカルボキシ末端アルギニン（Ａｒｇ）残基の後に位置する。一部の実施形態では、フーリン切断部位はコンセンサス配列Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ｘ－Ｘ－Ｘ－Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ａｒｇを有し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。切断部位は、配列中のカルボキシ末端アルギニン（Ａｒｇ）残基の後に位置する。
【0471】
本明細書で使用する場合、「フーリン」という用語は、フーリンまたはフーリン様プロテアーゼを含む、本明細書で定義するとおりのフーリンプロテアーゼ切断部位を認識及び切断することができる任意のプロテアーゼを指す。フーリンはまた、対塩基性アミノ酸切断酵素（ＰＡＣＥ）としても知られている。フーリンはサブチリシン様プロタンパク質転換酵素ファミリーに属する。フーリンをコードする遺伝子は、ＦＵＲ（ＦＥＳ Ｕｐｓｔｒｅａｍ Ｒｅｇｉｏｎ）として知られている。
【0472】
本明細書で使用する場合、「グリコシル化非依存性リソソームターゲティング」または「ＧＩＬＴ」という用語は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）非依存性であるリソソームターゲティングを指す。ＧＩＬＴタグは、ＧＩＬＴタグ付き融合タンパク質（例えば、ＩＧＦ－ＩＩムテインに結合されたＧＢＡ融合タンパク質）として発現されるタンパク質（例えば、ＧＢＡ）をリソソームにターゲティングするために使用することができる。
【0473】
本明細書で互換的に使用する場合、「カチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体（ＣＩ－ＭＰＲ）」、「Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体」、「ＣＩ－ＭＰＲ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体」、「ＩＧＦ－ＩＩ受容体」もしくは「ＩＧＦ２受容体」という用語、またはそれらの略語は、Ｍ６Ｐ及びＩＧＦ－ＩＩの両方に結合する細胞受容体を指す。
【0474】
本明細書で使用する場合、「前頭側頭骨大葉変性」及び「ＦＴＬＤ」という用語は、大脳皮質の前頭葉及び側頭葉内の脳組織の変性により特徴づけられる複合臨床症候群を指す。「前頭側頭骨大葉変性」及び「ＦＴＬＤ」という用語は、次を含むＦＴＬＤの３つの臨床的に別個の異型のうちのいずれか１つを指し得る：１）行動及び人格の変化、感情鈍麻、社会的離脱、固執行動、注意欠陥、抑制消失、及び前頭葉の顕著な変性により特徴づけられる行動異常型前頭側頭型認知症（ＢＶＦＴＤ）。加えて、ＢＶＦＴＤは、筋萎縮性側索硬化症と強い関係を有する；２）意味性認知症（ＳＤ）は、能弁健忘性失語、言葉、物体、及び概念の意味的知識の進行性喪失ならびに前側頭葉の顕著な変性により特徴づけられる。さらに、ＦＴＬＤのＳＤ異型は、平坦な情動、社会性欠如、固執行動、及び抑制消失を示し；３）進行性非能弁性失語症（ＰＮＡ）は、音声生成における運動障害、言語表現の減少、及びペリシルビアン皮質の顕著な変性により特徴づけられる。ＦＴＬＤ患者の組織病理学的プロファイルは一般に、（ｉ）微小管関連タウタンパク質封入体；（ｉｉ）タウ陰性、ユビキチン及びＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）陽性タンパク質封入体、または（ｉｉｉ）ユビキチン及びサルコーマ融合（ＦＵＳ）陽性タンパク質封入体の凝集及び沈着を示すものを含む３つの幅広い表現型のうちの１つに該当する。ＦＴＬＤの臨床症状及び組織病理学の包括的な説明については、その開示が全体で参照により本明細書に組み込まれるＲａｂｉｎｏｖｉｃｉ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ， ＣＮＳ Ｄｒｕｇｓ ２４：３７５－３９８（２０１０）を参照されたい。
【0475】
本明細書で使用する場合、「一般集団」という用語は、目的の特定の特徴（例えば、特に、年齢、病歴、教育、社会経済的状況、または生活様式）を有する個体の集団全体を指す。別法では、「一般集団」という用語は、例えば、規定のサンプルサイズを有する無作為サンプルなど、目的の特定の特徴を有する個体の集団全体のサブセットを指し得る。本明細書に開示の方法では、一般集団は、測定変項を比較することができる実用基準（例えば、基準集団）として役立ち得る。例えば、ＮＣＤを有すると診断されている対象をそれらの認知について、本明細書に開示の認知検査を使用して評価することができ、その試験で対象が得たスコアを、同じ検査での一般集団（例えば、一般集団全体または一般集団の無作為サンプル）における個体の成績と比較することができる。一般集団の無作為サンプルのサイズは、当技術分野で周知の方法を使用して当業専門家が決定することができる。例えば、当業専門家は、データを収集する前に（例えば、対象で認知検査を行う前に）検出力分析を行って、所望のレベルの信頼度で統計学的に有意な作用を検出するために必要な最小サンプルを決定することができる。
【0476】
本明細書で使用する場合、「グラニュリン」及び「ＧＲＮ」という用語は、前駆タンパク質ＰＧＲＮの切断から生じるペプチド生成物を指す。ＧＲＮペプチドは、発生、免疫、細胞生存及び増殖、ならびに腫瘍形成を含む様々な生物学的機能に関係する。全長野生型ヒトＰＧＲＮペプチドは、７．５のＧＲＮドメイン（例えば、７つのＧＲＮドメイン、それぞれ約６０アミノ酸長）、及びプロテアーゼにより個々に切断され得る３０アミノ酸パラグラニュリン（パラ－ＧＲＮ）ドメインを有する。「グラニュリン」及び「ＧＲＮ」という用語はまた、野生型ヒトグラニュリンペプチド及びそれをコードする核酸のバリアント、例えば、野生型ＧＲＮペプチドのアミノ酸配列のいずれか（例えば、配列番号２～９のいずれか１つ）に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性、またはそれ以上）を有するバリアントタンパク質を指すが、ただし、コードされるＧＲＮバリアントは、野生型ＧＲＮの治療機能を維持することを条件とする。「グラニュリン」及び「ＧＲＮ」という用語は、天然分泌シグナルペプチドが存在するＧＲＮタンパク質も指し得る。加えて、「グラニュリン」及び「ＧＲＮ」という用語は、ＧＲＮが別のポリペプチド、半減期改変薬、または治療薬、例えば、ＡｐｏＥ受容体結合（Ｒｂ）ドメイン（例えば、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＲｂドメイン）に作動可能に連結しているタンパク質である「ＧＲＮ融合タンパク質」を指し得る。本明細書で使用する場合、「ＧＲＮ」という用語は、当業者には分かるであろうとおり、状況に応じてペプチドまたはこのタンパク質をコードする遺伝子を指し得る。
【0477】
本明細書で使用する場合、「造血幹細胞」及び「ＨＳＣ」という用語は、限定されないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）を含む、自己複製し、かつ多様な細胞系の成熟血液細胞に分化する能力を有する未熟血液細胞を指す。そのような細胞はＣＤ３４＋細胞を含んでも、または含まなくてもよいことが当技術分野で知られている。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未熟細胞である。ヒトでは、ＣＤ３４＋細胞には、前記で定義した幹細胞特性を持つ細胞の亜集団が含まれると考えられるが、マウスでは、ＨＳＣはＣＤ３４－である。加えて、ＨＳＣは、長期再増殖ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）及び短期再増殖ＨＳＣ（ＳＴ－ＨＳＣ）も指す。ＬＴ－ＨＳＣ及びＳＴ－ＨＳＣは、機能的可能性及び細胞表面マーカーの発現に基づき区別される。例えば、ヒトＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ９０＋、ＣＤ４９Ｆ＋、及びｌｉｎ－（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ２３５Ａを含む成熟細胞系マーカーについて陰性）である。マウスでは、骨髄ＬＴ－ＨＳＣは、ＣＤ３４－、ＳＣＡ－１＋、Ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５－、Ｓｌａｍｆ１／ＣＤ１５０＋、ＣＤ４８－及びｌｉｎ－（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ－７ｒａなどの成熟細胞系マーカーについて陰性）であるが、ＳＴ－ＨＳ Ｃａｒｅは、ＣＤ３４＋、ＳＣＡ－１＋、Ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５－、Ｓｌａｍｆ１／ＣＤ１５０＋、及びｌｉｎ－（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ－７ｒａを含む成熟細胞系マーカーについて陰性）である。加えて、ＳＴ－ＨＳＣは、恒常性条件下でＬＴ－ＨＳＣよりも静止しておらず（すなわち、よりアクティブであり）、より増殖性である。しかしながら、ＬＴ－ＨＳＣは、より高い自己再生能力（すなわち、成人期を通じて存続し、継代レシピエントを通じて連続して移植することができる）を有するが、ＳＴ－ＨＳＣは、限られた自己再生能力を有する（すなわち、限られた期間しか生存せず、かつ連続移植能力を持たない）。これらのＨＳＣのいずれも、本明細書に記載の方法のいずれかで使用することができる。任意選択で、ＳＴ－ＨＳＣは、非常に増殖性が高く、したがって分化した後代をより迅速に生じさせることができるため、有用である。
【0478】
本明細書で使用する場合、「ＨＬＡマッチの」という用語は、造血幹細胞移植療法を必要とするレシピエントに造血幹細胞移植片を提供するドナーなど、ドナーとレシピエントとの間でＨＬＡ抗原のいずれもミスマッチしないドナー－レシピエントのペアを指す。ＨＬＡマッチの（すなわち、６つの対立遺伝子すべてがマッチする）ドナー－レシピエントのペアは、内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が外来移植片を異物として認識する可能性が低く、したがって移植片に対する免疫応答を開始する可能性が低いため、移植片拒絶のリスクが低い。
【0479】
本明細書で使用する場合、「ＨＬＡミスマッチの」という用語は、造血幹細胞移植療法を必要とするレシピエントに造血幹細胞移植片を提供するドナーなど、ドナーとレシピエントとの間で特にＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、及びＨＬＡ－ＤＲに関して、少なくとも１つのＨＬＡ抗原がミスマッチしているドナー－レシピエントのペアを指す。一部の実施形態では、一方のハプロタイプは一致し、他方はミスマッチする。ＨＬＡミスマッチのドナー－レシピエントのペアの場合には内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が、外来移植片を異物として認識する可能性が高く、したがってそのようなＴ細胞及びＮＫ細胞が移植片に対する免疫応答を開始する可能性がより高いので、ＨＬＡミスマッチのドナー－レシピエントのペアは、ＨＬＡマッチのドナー－レシピエントのペアと比較して、移植片拒絶のリスクが高くなり得る。
【0480】
本明細書で使用する場合、「自立及び／または正常な日常機能」という語句は、介護者またはソーシャルワーカーの支援を伴わずに、毎日の活動を成功裏に行うことができる対象（例えば、ヒト）の能力を指す。個体が日常機能を自立して実施することを可能にする活動の非限定的例には、例えば、社会的、職業的、または学術的機能、個人衛生、身だしなみ、身支度、トイレ衛生、機能的運動性（例えば、歩行能力、ベッドへの出入り）、及び自己給仕が含まれる。重度ＮＣＤを有すると診断されている対象は、正常な日常機能を自立して実行することに困難を有し得るが、軽度ＮＣＤを有すると診断されている対象は、正常な日常機能を自立して実行することに困難を有さないこともある。
【0481】
本明細書で使用する場合、「人工万能性幹細胞」、「ｉＰＳ細胞」、及び「ｉＰＳＣ」という用語は、分化した体細胞に直接由来し得る万能性幹細胞を指す。ヒトｉＰＳ細胞は、例えば、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘファミリー転写因子（例えば、Ｓｏｘ１、Ｓｏｘ２、Ｓｏｘ３、Ｓｏｘ１５）、Ｍｙｃファミリー転写因子（例えば、ｃ－Ｍｙｃ、１－Ｍｙｃ、ｎ－Ｍｙｃ）、クルッペル様ファミリー（ＫＬＦ）転写因子（例えば、ＫＬＦ１、ＫＬＦ２、ＫＬＦ４、ＫＬＦ５）、及び／またはＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８などの関連転写因子及び／またはＧｌｉｓ１が含まれ得る、特異的なセットの再プログラミング因子を非万能性細胞に導入することにより生成することができる。ヒトｉＰＳ細胞は、例えば、ｍｉＲＮＡ、転写因子の作用を模倣する小分子、または細胞系指定子の使用により生成することもできる。ヒトｉＰＳ細胞は、３つの脊椎動物の胚葉、例えば内胚葉、外胚葉、または中胚葉の任意の細胞に分化するそれらの能力により特徴づけられる。ヒトｉＰＳ細胞は、適切なインビトロ培養条件下で無期限に増殖するそれらの能力によっても特徴づけられる。例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｙａｍａｎａｋａ， Ｃｅｌｌ １２６：６６３ （２００６）を参照されたい。
【0482】
本明細書で使用する場合、「ＩＲＥＳ」という用語は、内部リボソーム進入部位を指す。一般に、ＩＲＥＳ配列は、真核生物のリボソームがｍＲＮＡ転写物に結合し、５’キャップ末端に結合せずに翻訳を開始することを可能にする機能である。ＩＲＥＳ配列を含むｍＲＮＡは２つの翻訳産物を生成し、１つはｍＲＮＡの５’末端から開始し、もう１つはＩＲＥＳにより媒介される内部翻訳機構から開始する。
【0483】
本明細書で使用する場合、「言語」という用語は、複雑なコミュニケーションのシステムを学習及び使用する、またはこれらのシステムを支配する規則、もしくはそのような規則から生成され得る発語の集合を説明する対象の認知能力を指す。ＮＣＤを有する対象が、とりわけ例えば、限られた語彙、複雑な文法を生成できない、頻繁な語彙の間違い、または失語を示す場合、その対象において言語能力が損なわれていることがある。
【0484】
本明細書で使用する場合、「学習及び記憶」という語句は、技能または知識の獲得及び獲得した技能または知識の表現（例えばそれぞれ、新たな言葉を言うための学習及び新たな言葉の発語）を包含する認知能力を指す。「学習及び記憶」は、１）新たな技能または知識の獲得（すなわち、学習）；及び２）学習した技能または知識の処理、記憶、及び想起（すなわち、記憶）の２つの独立したプロセスを指し得て、これらは、時間尺度（学習は一般に、記憶の想起または学習した技能の実行よりも時間がかかり、努力を必要とする）及び神経生物学的基礎により異なり得る。ＮＣＤを有すると診断されている対象は、健康な対象と比べて、学習及び記憶が損なわれていることがある。
【0485】
本明細書で使用する場合、「リソソーム病」という用語は、異常なリソソーム機能に起因する約５０の遺伝的代謝障害の大きなセットを指す。脂質（例えば、プログラニュリン遺伝子）、糖タンパク質、またはムコ多糖の代謝に関係する遺伝子の異常が、リソソーム病に共通する原因である。細胞におけるこれらの分子の蓄積が最終的に、細胞死をもたらす。リソソーム病の共通する症状は高度に可変的であり、特定の疾患に依存するが、発育遅延、運動障害、発作、認知症、聴覚及び／または視覚機能障害、肝臓または脾臓の肥大、肺及び心臓の問題、及び異常な骨発生が含まれ得る。リソソーム病の非限定的例には、神経セロイドリポフスチン症、スフィンゴ脂質症、ガラクトシアリドーシス、ガングリオシドーシス、ファーバー病、クラッベ病、ゴーシェ病、リソソーム酸リパーゼ欠損症、ニーマン－ピック病、スルファチドーシス、ムコ多糖症、ムコ多糖症、リポドーズ（ｌｉｐｏｄｏｓｅｓ）、アルファ－マンノシドーシス、ベータ－マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、フコシドーシス、リソソーム転送疾患、糖原病、及びコレステリルエステル貯蔵疾患が含まれる。
【0486】
本明細書で使用する場合、「マクロファージ」という用語は、食作用と呼ばれるプロセスにおいて、細胞デブリ、外来物質、微生物、がん細胞、及び健康な体細胞に特異的なタンパク質の種類をその表面上に持たない他の任意のものを抱き込んで消化する白血球の１種を指す。マクロファージは本質的にすべての組織において見い出され、そこで、アメーバ状の運動により潜在的な病原体をパトロールしている。それらは、全身で様々な形態を（様々な名称で）（例えば、組織球、クッパー細胞、肺胞マクロファージ、ミクログリアなど）取っているが、すべて、単核食細胞系の一部である。食作用の他に、これらは、非特異的防御（先天免疫）において重要な役割を果たし、かつ他の免疫細胞、例えばリンパ球を動員することにより、特異的防御機構（適応免疫）の開始も助ける。例えば、これらは、Ｔ細胞に対する抗原提示因子として重要である。炎症の増大及び免疫系の刺激の他に、マクロファージはまた、重要な抗炎症性の役割を果たし、かつサイトカインの放出を介して免疫反応を低下させ得る。
【0487】
本明細書で使用する場合、「ミクログリア」または「小神経膠細胞」という用語は、定住マクロファージ細胞及び中枢神経系における免疫防御の主軸として機能する脳及び脊髄において見い出される神経膠細胞の１つの型を指す。小神経膠細胞の主要な機能には、免疫学的監視、食作用、細胞外シグナル伝達（例えば、サイトカイン、ケモカイン、プロスタグランジン、及び活性酸素種の産生及び放出）、抗原提示、ならびに組織修復及び再生の促進が含まれる。
【0488】
本明細書で使用する場合、「ミクログリア前駆細胞」という用語は、小神経膠細胞を生じさせる前駆細胞を指す。ミクログリア前駆細胞は、胚発生の限られた期間中の卵黄嚢で生じ、脳間葉に浸潤し、かつ生涯にわたって自身を永続的に更新する。
【0489】
本明細書で使用する場合、「ｍｉＲＮＡターゲティング配列」という用語は、ハイブリダイズし得るように特異的ｍｉＲＮＡ分子（例えば、ｍｉＲ－１２６）と相補的であり、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体依存性及びダイサー依存性ｍＲＮＡ不安定化及び／または切断を促進し、それにより、ｍＲＮＡ転写物の発現を阻止する、ターゲットｍＲＮＡ分子の３’－ＵＴＲに位置するヌクレオチド配列を指す。
【0490】
本明細書で使用する場合、「単球」という用語は、マクロファージ及び骨髄系列樹状細胞に分化し得る白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（すなわち、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ））の１つの型を指す。単球は、脊椎動物適応免疫応答の重要な成分を構成している。３つの異なる型の単球が存在することが公知であり、ＣＤ１４細胞表面受容体の強発現及びＣＤ１６無発現により特徴づけられる古典的単球（すなわち、ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６－）、低レベルのＣＤ１４発現及びＣ１６の同時発現を示す非古典的単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋＋）、ならびに高レベルのＣＤ１４発現及び低レベルのＣ１６発現を示す中間単球（ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６＋）が含まれる。単球は、食作用、抗原提示、及びサイトカイン分泌を含む免疫系に役立つ様々な機能を実行する。
【0491】
本明細書で使用する場合、「多能性細胞」という用語は、すべてではないが、複数（例えば、２、３、４、５、またはそれ以上）の分化細胞型へと発展する能力を持つ細胞を指す。多能性細胞の非限定的例には、造血系統（例えば、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）の細胞が含まれる。多能性細胞の例は、ＣＤ３４＋細胞である。
【0492】
本明細書で使用する場合、「変異」という用語は、遺伝子のヌクレオチド配列の変化を指す。遺伝子における変異は、例えば、ＤＮＡ複製の誤り、ＤＮＡ修復、放射線、及び発がん物質への曝露の結果として自然に起こり得るか、または変異を、変異遺伝子を発現する導入遺伝子の投与の結果として誘導することができる。変異の例には、フレームシフト型、ナンセンス型、ミスセンス型、挿入型、欠失型、及び転換型変異が含まれ得る。フレームシフト型変異は、ｍＲＮＡ上のリボソームリーディングフレームの位置がシフトして、ＲＮＡの不適切な翻訳が生じるようなヌクレオチド配列における変化を指し得る。ナンセンス型変異は、転写物内に未成熟停止コドンをもたらす、遺伝子の単一ヌクレオチドにおける変化を指し得る。未成熟停止コドンは、短縮化タンパク質産物の翻訳または転写物のナンセンス媒介崩壊をもたらし得る。ミスセンス型変異は、タンパク質産物の物理化学的特性を変化させ得る、及び／またはそれを非機能性にし得る異なるアミノ酸をコードするコドンをもたらす、遺伝子内での単一ヌクレオチド変化を指し得る。挿入型変異は、フレームシフト及び典型的には、未成熟停止コドンの産生をもたらし得る、遺伝子のコード領域への１つまたは複数のヌクレオチドの導入を指し得る。欠失型変異は、フレームシフト、一般に未成熟停止コドンをもたらし得る、遺伝子のＤＮＡ配列からの１つまたは複数のヌクレオチドの除去を指し得る。転換型変異は、単一ピリミジンヌクレオチド（例えば、シトシン、チミン）への単一プリンヌクレオチド（例えば、アデニン、グアニン）の変化を指し得る。転換型変異は、翻訳されるタンパク質産物に変化をもたらし得ない（例えば、サイレント変異）か、または単一コドン内でアミノ酸同一性を変化させ得、それにより、翻訳されるタンパク質産物の物理化学的特性及び機能を変更する。変異及び配列多様性についての命名法は、「基準配列コード」形式を使用し、その際、基準配列は、コーディングＤＮＡを表す「ｃ」、ゲノムＤＮＡを表す「ｇ」、ミトコンドリアＤＮＡを表す「ｍ」、ＲＮＡを表す「ｒ」、またはタンパク質を表す「ｐ」であり得、コードは、置換を表す「＞」、範囲を表す「＿」、１つの対立遺伝子におけるさらなる変化を表す「；」、さらなる転写物／モザイク現象を表す「，」、不明の変化を表す「（）」、対立遺伝子を表す「［］」、欠失を表す「ｄｅｌ」、重複を表す「ｄｕｐ」、挿入を表す「ｉｎｓ」、逆位を表す「ｉｎｖ」、変換を表す「ｃｏｎｖ」、伸長を表す「ｅｘｔ」、停止コドンを表す「Ｘ」、停止コドンをもたらすフレームシフトを表す「ｆｓＸ」、逆鎖を表す「ｏ」、及び転座を表す「ｔ」を含む記号を含み得る。例えば、ＰＧＲＮ遺伝子におけるｐ．Ｔ３８２ＮｆｓＸ３２変異は、フレームシフト変異の結果としてアスパラギンがスレオニンによって置換されていて、フレームシフトの長さが、停止コドンを含めて３２ヌクレオチド塩基対である、アミノ酸３８２でのタンパク質における変化に対応する。
【0493】
本明細書で使用する場合、「骨髄破壊的」または「骨髄破壊」という用語は、典型的には細胞毒性薬（例えば、ブスルファン）または放射線への曝露により、造血系を実質的に損傷または破壊する前処置レジメンを指す。骨髄破壊は、造血系を破壊する高用量の細胞毒性剤または全身照射によりもたらされる完全な骨髄破壊を含む。
【0494】
本明細書で使用する場合、「神経認知障害」または「ＮＣＤ」という用語は、例えば、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知における欠陥など、主要な臨床的障害が認知機能である一連の臨床的障害または症候群を指す。ＮＣＤは、発育上の状態ではなく、後天的状態と特徴づけられる。例えば、ＮＣＤは、誕生または超若齢期以来、破壊された認知が明白でなかった状態であり、したがって、ＮＣＤにおける認知機能が既に獲得されていたレベルから減退したことを必要とする。ＮＣＤは、患者が認知機能障害を示す他の障害から識別され、ＮＣＤは、中核障害が認知である障害のみを含む。ＮＣＤは、「重度ＮＣＤ」または「軽度ＮＣＤ」であり得る。「重度ＮＣＤ」は、個人の自立及び／または正常な日常機能を妨害し、かつせん妄または他の精神障害によるものではない著しい認知低下により特徴づけられる。軽度ＮＣＤは、個人の自立及び／または正常な日常機能を妨害せず、かつせん妄または他の精神障害によるものではない中等度の認知低下により特徴づけられる。重度及び軽度ＮＣＤは、前記の特異的認知機能のいずれか１つでの定量的認知検査に基づき区別することもできる。例えば、重度ＮＣＤは、ＮＣＤを有するか、または発症するリスクがあると同定されている対象により認知検査で得られたスコアが、基準集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から標準偏差２よりも離れていること、またはスコアが基準集団のスコアの分布の第３パーセンタイルにあることにより特徴づけられ得る。軽度ＮＣＤは、ＮＣＤを有するか、または発症するリスクがあると同定されている対象により認知検査で得られたスコアが、基準集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から標準偏差１～２離れていること、またはスコアが基準集団のスコアの分布の第３～１６パーセンタイルの間にあることにより特徴づけられ得る。ＮＣＤ患者を重度または軽度ＮＣＤのいずれかを有すると分類するために使用することができる認知検査の非限定的例には、ＡＤ８、ＡＷＶ、ＧＰＣＯＧ、ＨＲＡ、ＭＩＳ、ＭＭＳＥ、ＭｏＣＡ、ＳＬＵＭＳ、及びＳｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥが含まれる。さらに、ＮＣＤ（例えば、重度または軽度ＮＣＤ）には、ＮＣＤの特定の病因、例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）またはリソソーム病（例えば、神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）などを表す症候群サブタイプが含まれる。本明細書で使用する場合、「前頭側頭骨ＮＣＤ」及び「リソソーム病によるＮＣＤ」という用語は、それぞれ前頭側頭骨大葉変性及びリソソーム病（例えば、ＮＣＬ）に起因するＮＣＤに対応する。
【0495】
本明細書で使用する場合、「神経セロイドリポフスチン症」及び「ＮＣＬ」という用語は、ニューロン、肝臓、脾臓、心筋層、及び腎臓細胞などの身体の細胞内でのリポフスチンの蓄積に起因する少なくとも８つの臨床的に認識されるリソソーム貯蔵障害の集合を指す。ＮＣＬは臨床的に、顕著な神経変性ならびに運動及び認知能力の進行性及び不可逆的喪失を示すが、疾患重症度及び臨床症状は、特定のＮＣＬ異型に依存し得る。ＮＣＬの既知の異型には、Ｓａｎｔｏｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病（ＳＨＤ）としても公知の小児性異型、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病（ＪＢＤ）としても公知の遅発型小児性異型、Ｆｉｎｎｉｓｈ遅発型小児性異型（ＦＬＩ）、変異遅発型小児性（ＶＬＩ）、ＣＬＮ７異型（ＣＬＮ７）、ＣＬＮ８異型（ＣＬＮ８）、Ｔｕｒｋｉｓｈ遅発型小児性異型（ＴＬＩ）、９型異型（Ｔ９）、ＣＬＮ１０異型（ＣＬＮ１０）、バッテン病（ＢＤ）としても公知の若年性異型、及びクーフス病（ＫＤ）としても公知の成人性異型が含まれる。ＳＨＤは、進行して２歳までに完全な網膜失明となる早期視力低下、続く、３歳での植物状態、及び４歳までの脳死と関連する。この異型は、てんかん発作の自然発生とも関連する。ＪＢＤ異型は、２～４歳の間に発生し、運動失調、てんかん発作、進行性認知低下、及び異常な発語発達と関連し、典型的には、８歳までに死をもたらす。ＢＤは典型的には、４～１０歳の間に発生し、視力喪失、てんかん発作、認知機能障害、及び早期死亡などの症状を含む。ＫＤ異型を有するＮＣＬ患者は一般に、ＳＨＤ及びＢＤ異型よりも軽度な症状を示し、約４０年の平均余命を有する。ＮＣＬの包括的な説明については、その開示が全体で参照により本明細書に組み込まれるＭｉｎｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２８：１１０１－５（２０１３）、Ｎｉｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ １８：７３－８８（２０１６）、及びＭｏｌｅ ＆ Ｃｏｔｍａｎ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １８５２：２２３７－４１（２０１５）を参照されたい。
【0496】
本明細書で使用する場合、「非骨髄破壊性」または「骨髄抑制性」という用語は、宿主起源の実質的にすべての造血細胞を排除しない前処置レジメンを指す。
【0497】
本明細書で使用する場合、「万能性細胞」という用語は、造血細胞系（例えば、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）の細胞型などの１種よりも多い分化細胞型に成長する能力を有する細胞を指す。細胞の例は、ＥＳＣ及びｉＰＳＣである。
【0498】
本明細書で使用する場合、「プラスミド」という用語は、追加のＤＮＡセグメントがライゲートされ得る染色体外環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す。プラスミドはベクターの１種であり、連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ある特定のプラスミドは、それらが導入された宿主細胞において自己複製することができる（例えば、細菌起源の複製を有する細菌プラスミド及びエピソーム性哺乳動物プラスミド）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）が、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよく、それにより、宿主ゲノムと共に複製される。ある特定のプラスミドは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。
【0499】
本明細書で使用する場合、「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、グラニュリンのための分泌型栄養因子及び前駆ペプチドを指す。遺伝子は染色体１７ｑ２１．３１に位置し、グラニュリン前駆体、プロエピテリン、ＰＥＰＩ、ＰＣ細胞由来成長因子、グラニュリン－エピテリン、ＣＬＮ１１、ＰＣＤＦＧＦ、ＧＰ８８、ＧＥＰ、グラニュリン、アクログラニンとしても公知である。「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、野生型ヒトＰＧＲＮペプチド及びそれをコードする核酸のバリアント、例えば、野生型ＰＧＲＮペプチド（例えば、配列番号１）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性、またはそれ以上）を有するバリアントタンパク質、または野生型ＰＧＲＮ遺伝子（例えば、配列番号２）の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性、またはそれ以上）を有するポリヌクレオチドも指すが、ただし、コードされるＰＧＲＮバリアントが野生型ＰＧＲＮの治療上の機能を維持していることを条件とする。「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上）のグラニュリン（ＧＲＮ）ドメインを有するＰＧＲＮのバリアントも指し得る。「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する２～１６（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６）のＧＲＮドメインを有するＰＧＲＮのバリアントも指し得る。「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、天然分泌シグナルペプチドが存在するＰＧＲＮタンパク質も指し得る。加えて、「プログラニュリン」及び「ＰＧＲＮ」という用語は、ＰＧＲＮが別のポリペプチド、半減期改変薬、または治療薬、例えば、ＡｐｏＥ受容体結合（Ｒｂ）ドメイン（例えば、配列番号１１の残基２５～１８５、５０～１８０、７５～１７５、１００～１７０、１２５～１６０、または１３０～１５０のアミノ酸配列を有するＲｂドメイン）に作動可能に連結しているタンパク質である「ＰＧＲＮ融合タンパク質」を指し得る。本明細書で使用する場合、「ＰＧＲＮ」という用語は、当業者には分かるであろうとおり、状況に応じてペプチドまたはこのタンパク質をコードする遺伝子を指し得る。
【0500】
本明細書で使用する場合、「プログラニュリン関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬ」及び「ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬ」に罹患している患者は、ＦＴＬＤまたはＮＣＬを有すると診断されており、かつＰＧＲＮ遺伝子に有害な変異も含む患者である。７０を超える病原性変異がＰＧＲＮ遺伝子において報告されており、その大部分が、未成熟停止コドン及び短縮化ＰＧＲＮ ｍＲＮＡのナンセンス媒介崩壊をもたらす。ＰＧＲＮ変異は、その開示がヒトＰＧＲＮ変異に関するので、参照により本明細書に組み込まれるＧｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ２９：１３７３－１３８６（２０１２）及びＰｏｔｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １３８：３２－５３（２０１６）に記載されている。
【0501】
本明細書で使用する場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するＤＮＡ上の認識部位を指す。ポリメラーゼは導入遺伝子の転写を駆動する。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するために適した例示的なプロモーターは、例えば、その開示が核酸調節エレメントに関係するため、参照により本明細書に組み込まれるＳａｎｄｅｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８：４２４ （２００７）に記載されている。加えて、「プロモーター」という用語は、生物系に天然に存在しない制御ＤＮＡ配列である合成プロモーターを指し得る。合成プロモーターは、天然に存在するプロモーターの一部を、天然に存在しないポリヌクレオチド配列と合わせて含み、かつ様々な導入遺伝子、ベクター、及びターゲット細胞種を使用して組換えＤＮＡを発現するように最適化され得る。
【0502】
参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に関する「配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインさせ、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パーセントを達成した後に、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列における核酸またはアミノ酸と同一である候補配列における核酸またはアミノ酸のパーセンテージと定義される。核酸及びアミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的でのアラインメントは、当業者の能力の範囲内である様々な方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアなどの公共利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするために適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント値を、配列比較コンピュータープログラムＢＬＡＳＴを使用して生成することができる。一例示として、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与の核酸またはアミノ酸配列Ａの配列同一性パーセント（代替的に、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定の配列同一性パーセントを有する所与の核酸またはアミノ酸配列Ａとも表現され得る）は、次のように算出される：
１００掛ける（分数Ｘ／Ｙ）
ここで、Ｘは、Ａ及びＢのプログラムのアラインメントで、配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）により同一のマッチとしてスコア付けされたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂの核酸の総数である。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントに等しくないことは分かるであろう。
１００掛ける（分数Ｘ／Ｙ）
ここで、Ｘは、Ａ及びＢのプログラムのアラインメントで、配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）により同一のマッチとしてスコア付けされたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂの核酸の総数である。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントに等しくないことは分かるであろう。
【0503】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題となる合併症を伴うことなく哺乳動物（例えば、ヒト）などの対象の組織と接触させるために適した、妥当なベネフィット／リスク比に見合う化合物、材料、組成物及び／または剤形を指す。
【0504】
本明細書で使用する場合、強力な「ＡｐｏＥ由来の受容体結合ペプチド（Ｒｂ）」は、融合タンパク質として操作された場合、タンパク質をＢＢＢを超えて脳に移動させる能力を有する。したがって、この方法は、融合タンパク質として操作された場合、治療薬（例えば、可溶性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）のためにＢＢＢを選択的に開けるように機能し得る。このペプチドは、ＡｐｏＥタンパク質全体ではなく、ＡｐｏＥのＲｂドメインを利用するため、生物学的機能を危険にさらしたり、またはＡｐｏＥの重要な生物学的機能を妨害したりすることなく、診断薬または治療薬に容易に結合させることができる。この経路はまた、脳実質におけるＬＤＬＲｆメンバーの広範な発現により、薬剤がＣＮＳに到達した後のさらなる／二次的脳内分布を促進することができる代替の取り込み経路である。例示的なＲｂドメインは、ＡｐｏＥのＮ末端において見い出され得る。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて有用なＲｂドメインは、配列番号１１の残基１～１９１のアミノ酸配列、配列番号１１の残基２５～１８５、配列番号１１の残基５０～１８０、配列番号１１の残基７５～１７５、配列番号１１の残基１００～１７０、または配列番号１１の残基１２５～１６５を有するポリペプチド、さらにはこれらの配列のいずれかに関して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するポリペプチドなどのそのバリアントである。例示的なＲｂドメインは、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列を有するＡｐｏＥの領域である。
【0505】
本明細書で使用する場合、「調節配列」という用語には、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれる。そのような調節配列は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅｒｄｅｗ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ （Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ， （２０１４））に記載されている。
【0506】
本明細書で使用する場合、「サンプル」という用語は、対象から単離された検体（例えば、血液、血液成分（例えば、血清または血漿））、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤または皮膚）、膵液、絨毛膜絨毛サンプル、及び細胞）を指す。
【0507】
本明細書で使用する場合、「分泌シグナルペプチド」という用語は、前駆体タンパク質の分泌物を宿主の細胞質から細胞周辺腔または細胞外腔へと向ける、前駆体タンパク質内の短い（通常は１６～６０アミノ酸）ペプチド領域を指す。そのような分泌シグナルペプチドは一般に、前駆体タンパク質のアミノ末端に配置される。一部の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、アミノ末端に連結されている。典型的には、分泌シグナルペプチドは、細胞分泌経路を通過する間に切断される。分泌されたタンパク質がその望ましい活性を保持している限り、切断は必須ではない。例示的な分泌シグナルペプチドには、ＰＧＲＮ分泌シグナルペプチドが含まれる。
【0508】
本明細書で使用する場合、「社会的認知」という用語は、対象（例えば、ヒト）が他の同種対象（例えば、他のヒト）及び社会状況についての情報を処理し、記憶し、かつ適応する方法を決定する一連の技能を包含する認知機能を指す。社会的認知の非限定的例には、例えば、社会的刺激に対する情動応答、心の理論タスクに対する処理能力、顔を認識する能力、社会的状況における衝動制御、及び共同注意が含まれる。ＮＣＤを有すると診断されている対象は、健康な対象と比べて損なわれた社会的認知を示し得る。
【0509】
本明細書で使用する場合、「幹細胞」及び「未分化細胞」という用語は、複数の細胞型に分化する発生能を有する未分化または部分的に分化した状態の細胞を指す。幹細胞は、その機能的可能性を維持しながら増殖して、より多くのそのような幹細胞を生じさせることができる。幹細胞は非対称的に分裂することができ、これは義務的非対称分化として知られ、一方の娘細胞は親幹細胞の機能的能力を保持し、他方の娘細胞は、親細胞とは多少異なる他の特異的な機能、表現型及び／または発生能を発現する。親の発生能を有する１つまたは複数の細胞も保持しながら増殖し、かつ１つまたは複数の成熟した細胞タイプに後で分化する後代を生じるように、娘細胞そのものを誘導することができる。分化細胞は、それ自体が多能性細胞に由来する多能性細胞などに由来してもよい。別法では、集団中の幹細胞の一部は２つの幹細胞に対称的に分裂することができる。したがって、「幹細胞」という用語は、特定の状況下では、より特殊化または分化した表現型に分化する発生能を有し、ある特定の状況下では、実質的に分化することなく増殖する能力を保持している細胞の任意のサブセットを指す。一部の実施形態では、幹細胞という用語は一般的に、その子孫（子孫細胞）が、分化によって、例えば、胚細胞及び組織の徐々に進行する多様化において起こるように、完全にそれぞれ異なる特徴を獲得することによって特殊化する、多くの場合に種々の方向に特殊化する、天然に存在する親細胞を指す。一部の分化細胞は、より優れた発生能の細胞を生じる能力も持つ。このような能力は天然でもよいし、または様々な因子で処理することで人為的に誘導されてもよい。幹細胞として始まった細胞は、分化表現型に進み得るが、「逆戻り」させ、次いで、幹細胞表現型を再発現するように誘導することができ、この用語は、当業者によって「脱分化」または「リプログラミング」または「逆分化」と呼ばれることが多い。
【0510】
本明細書で使用する場合、「トランスフェクション」という用語は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞に導入するために一般に使用される多種多様な技術のいずれか、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクション、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ、スクイーズ－ポレーション、ソノポレーション、光学トランスフェクション、Ｍａｇｎｅｔｏｆｅｃｔｉｏｎ、インペールフェクションなどを指す。
【0511】
本明細書で使用する場合、「導入遺伝子」という用語は、遺伝子産物（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）をコードする組換え核酸（例えば、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ）を指す。遺伝子産物は、ＲＮＡ、ペプチド、またはタンパク質であり得る。遺伝子産物のコード領域に加えて、導入遺伝子は、プロモーター、エンハンサー（複数可）、不安定化ドメイン（複数可）、応答エレメント（複数可）、レポーターエレメント（複数可）、インスレーターエレメント（複数可）、ポリアデニル化シグナル（複数可）及び／または他の機能エレメントなどの発現を促進または増強する１つまたは複数のエレメントを含むか、またはそれらに作動可能に連結していてもよい。本開示の実施形態は、任意の公知の適切なプロモーター、エンハンサー（複数可）、不安定化ドメイン（複数可）、応答エレメント（複数可）、レポーターエレメント（複数可）、インスレーターエレメント（複数可）、ポリアデニル化シグナル（複数可）、及び／または他の機能的エレメントを利用してもよい。
【0512】
本明細書で使用する場合、「対象」または「患者」という用語は、動物（例えば、ヒトなどの哺乳動物）を指す。本明細書に記載の方法に従って処置される対象は、ＮＣＤと診断されている対象、またはこれらの状態を発症するリスクのある対象であり得る。診断は、当技術分野で公知の任意の方法または技法により行うことができる。当業者は、本開示に従って処置される対象が、標準検査を受けていてもよいし、または検査なしに、病気や状態に関連する１つまたは複数のリスク因子の存在によってリスクのあるものとして同定されていてもよいことを理解するであろう。
【0513】
本明細書で使用する場合、「形質導入」及び「形質導入する」という用語は、ウイルスベクター構築物またはその一部を細胞に導入する方法、及びベクター構築物またはその一部によりコードされる導入遺伝子の細胞中でのその後の発現を指す。
【0514】
本明細書で使用する場合、「処置」または「処置する」は、有益または所望の結果、例えば臨床結果を得るためのアプローチを指す。有益または所望の結果には、限定されないが、検出可能または検出不可能にかかわらず、１つまたは複数の症状または状態の緩和または改善；疾患または状態の程度の縮小；疾患、障害、または状態の状況の安定化（すなわち、悪化しない）；疾患または状態の進展の予防；疾患または状態の進行の遅延または減速；疾患または状態の改善または緩和；及び寛解（部分的か、または完全かにかかわらず）が含まれる。疾患または状態を「改善すること」または「緩和すること」は、処置がない場合の程度または時間経過と比較して、疾患、障害、または状態の程度及び／または望ましくない臨床兆候が減少し、及び／または進行の時間経過が減速または延長されることを意味する。「処置」はまた、処置を受けない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。処置を必要とする者には、状態もしくは障害を既に有する者、さらには状態もしくは障害を有しやすい者、または病態もしくは障害を予防する必要がある者が含まれる。
【0515】
本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語には、核酸ベクター、例えば、プラスミドなどのＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、ウイルス、または他の適切なレプリコン（例えば、ウイルスベクター）が含まれる。外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを原核細胞または真核細胞に送達するための様々なベクターが開発されている。そのような発現ベクターの例は、例えば、目的の遺伝子の発現に適したベクターに関連するため、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ１９９４／０１１０２６に開示されている。本明細書に記載の組成物及び方法での使用に適した発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、さらには例えば、タンパク質の発現及び／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの組み込みに使用される追加の配列エレメントを含む。本明細書に記載のＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現に使用することができる、ある特定のベクターには、プロモーター及びエンハンサー領域など、遺伝子転写を指示する調節配列を含むプラスミドが含まれる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現のための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を高める、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列エレメントには、例えば、発現ベクターで運ばれる遺伝子の効率的な転写を指示するために、５’及び３’非翻訳領域、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及びポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するために適した発現ベクターはまた、そのようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。適切なマーカーの例は、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ヌーセオトリシン、またはゼオシンなどの抗生物質に対する抵抗性をコードする遺伝子である。
【0516】
詳細な説明
対象（哺乳動物対象、例えば、ヒトなど）において神経認知障害（ＮＣＤ）、例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）などを処置するための組成物及び方法を本明細書に記載する。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、ＰＧＲＮまたはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る導入遺伝子）を含む細胞、例えば、万能性細胞、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、人工万能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄性前駆細胞（ＭＰＣ）、血液系前駆細胞（ＢＬＰＣ）、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアを投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）においてＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ（例えば、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬ））を処置することができる。例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボで改変されている細胞を含有する組成物を本明細書に記載する。次のセクションでは、ＮＣＤを処置するために有用な組成物及び方法をさらに詳細に記載する。
対象（哺乳動物対象、例えば、ヒトなど）において神経認知障害（ＮＣＤ）、例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）などを処置するための組成物及び方法を本明細書に記載する。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、ＰＧＲＮまたはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る導入遺伝子）を含む細胞、例えば、万能性細胞、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、人工万能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄性前駆細胞（ＭＰＣ）、血液系前駆細胞（ＢＬＰＣ）、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリアを投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）においてＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ（例えば、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬ））を処置することができる。例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボで改変されている細胞を含有する組成物を本明細書に記載する。次のセクションでは、ＮＣＤを処置するために有用な組成物及び方法をさらに詳細に記載する。
【0517】
神経認知障害
神経認知障害（ＮＣＤ）は、中核症状として認知機能障害を特徴とし、かつ発達機能障害ではなく、以前のより高いレベルの認知と比べて認知低下（例えば、後天性機能障害）を示す障害の集合として定義される。ＮＣＤは、対象において診断されている機能障害の程度に基づき、重度または軽度の症候群（例えば、重度ＮＣＤ及び軽度ＮＣＤ）に大きく区分される。さらに、ＮＣＤは、それらの病因に基づき分類され得る。例えば、ＮＣＤの非限定的例には、前頭側頭骨ＮＣＤ、リソソーム病によるＮＣＤ（例えば、ＮＣＬ）、ＡＤによるＮＣＤ、血管ＮＣＤ、レビー小体を含むＮＣＤ、パーキンソン病によるＮＣＤ、前頭側頭骨ＮＣＤ、外傷性脳損傷によるＮＣＤ、ＨＩＶ感染によるＮＣＤ、物質／薬物誘導ＮＣＤ、ハンチントン病によるＮＣＤ、プリオン病によるＮＣＤ、別の医学的状態によるＮＣＤ、複数の病因によるＮＣＤ、及び詳細不明ＮＣＤが含まれ得る。本明細書に開示の組成物及び方法は、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を処置するために有用である。
神経認知障害（ＮＣＤ）は、中核症状として認知機能障害を特徴とし、かつ発達機能障害ではなく、以前のより高いレベルの認知と比べて認知低下（例えば、後天性機能障害）を示す障害の集合として定義される。ＮＣＤは、対象において診断されている機能障害の程度に基づき、重度または軽度の症候群（例えば、重度ＮＣＤ及び軽度ＮＣＤ）に大きく区分される。さらに、ＮＣＤは、それらの病因に基づき分類され得る。例えば、ＮＣＤの非限定的例には、前頭側頭骨ＮＣＤ、リソソーム病によるＮＣＤ（例えば、ＮＣＬ）、ＡＤによるＮＣＤ、血管ＮＣＤ、レビー小体を含むＮＣＤ、パーキンソン病によるＮＣＤ、前頭側頭骨ＮＣＤ、外傷性脳損傷によるＮＣＤ、ＨＩＶ感染によるＮＣＤ、物質／薬物誘導ＮＣＤ、ハンチントン病によるＮＣＤ、プリオン病によるＮＣＤ、別の医学的状態によるＮＣＤ、複数の病因によるＮＣＤ、及び詳細不明ＮＣＤが含まれ得る。本明細書に開示の組成物及び方法は、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を処置するために有用である。
【0518】
前頭側頭骨大葉変性
ＦＴＬＤは、大脳皮質の前頭葉及び側頭葉内の進行性神経変性により特徴づけられる臨床症候群である。ＦＴＬＤの症状発現は、複雑かつ不均質であり、かつ次を含むＦＴＬＤの３つの臨床的に別個の異型のうちのいずれか１つとして表れ得る：１）行動及び人格の変化、感情鈍麻、社会的離脱、固執行動、注意欠陥、抑制消失、及び前頭葉の顕著な変性により特徴づけられる行動異常型前頭側頭型認知症（ＢＶＦＴＤ）；２）能弁健忘性失語、言葉、物体、及び概念の意味的知識の進行性喪失ならびに前側頭葉の顕著な変性により特徴づけられる意味性認知症（ＳＤ）。さらに、ＦＴＬＤのＳＤ異型は、平坦な情動、社会性欠如、固執行動、及び抑制消失を示す；または３）音声生成における運動障害、言語表現の減少、及びペリシルビアン皮質の顕著な変性により特徴づけられる進行性非能弁性失語症（ＰＮＡ）。ＦＴＬＤ患者の脳におけるニューロン喪失は、３つの別個の神経病理のうちの１つと関連している：１）タウ陽性ニューロン及び神経膠封入体の存在；２）ユビキチン（ｕｂ）陽性及びＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ４３）陽性、しかしタウ陰性の封入体；または３）ｕｂ及びサルコーマ融合（ＦＵＳ）陽性、しかしｔａｕ及びＴＤＰ－４３陰性の封入体。これらの神経病理は、ＦＴＬＤの病因において重要であると判断される。
ＦＴＬＤは、大脳皮質の前頭葉及び側頭葉内の進行性神経変性により特徴づけられる臨床症候群である。ＦＴＬＤの症状発現は、複雑かつ不均質であり、かつ次を含むＦＴＬＤの３つの臨床的に別個の異型のうちのいずれか１つとして表れ得る：１）行動及び人格の変化、感情鈍麻、社会的離脱、固執行動、注意欠陥、抑制消失、及び前頭葉の顕著な変性により特徴づけられる行動異常型前頭側頭型認知症（ＢＶＦＴＤ）；２）能弁健忘性失語、言葉、物体、及び概念の意味的知識の進行性喪失ならびに前側頭葉の顕著な変性により特徴づけられる意味性認知症（ＳＤ）。さらに、ＦＴＬＤのＳＤ異型は、平坦な情動、社会性欠如、固執行動、及び抑制消失を示す；または３）音声生成における運動障害、言語表現の減少、及びペリシルビアン皮質の顕著な変性により特徴づけられる進行性非能弁性失語症（ＰＮＡ）。ＦＴＬＤ患者の脳におけるニューロン喪失は、３つの別個の神経病理のうちの１つと関連している：１）タウ陽性ニューロン及び神経膠封入体の存在；２）ユビキチン（ｕｂ）陽性及びＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ４３）陽性、しかしタウ陰性の封入体；または３）ｕｂ及びサルコーマ融合（ＦＵＳ）陽性、しかしｔａｕ及びＴＤＰ－４３陰性の封入体。これらの神経病理は、ＦＴＬＤの病因において重要であると判断される。
【0519】
ＦＴＬＤ患者のほぼ半数が、認知症、ＡＬＳ、またはパーキンソン病を有する一親等の家族を有し、この疾患の原因に対する強い遺伝的関連を示唆している。染色体１７ｑ２１のいくつかの変異が、ＦＴＬＤ提示に関連している。
【0520】
神経セロイドリポフスチン症
ＮＣＬは、ニューロン、肝臓、脾臓、心筋層、及び腎臓細胞などの身体の細胞内でのリポフスチンの蓄積に起因するリソソーム貯蔵障害の少なくとも８つの臨床的に認識される集合を指す総称である。ＮＣＬは臨床的に、顕著な神経変性ならびに運動及び認知能力の進行性及び不可逆的喪失を示すが、疾患重症度及び臨床症状は、特定のＮＣＬ異型に依存し得る。
ＮＣＬは、ニューロン、肝臓、脾臓、心筋層、及び腎臓細胞などの身体の細胞内でのリポフスチンの蓄積に起因するリソソーム貯蔵障害の少なくとも８つの臨床的に認識される集合を指す総称である。ＮＣＬは臨床的に、顕著な神経変性ならびに運動及び認知能力の進行性及び不可逆的喪失を示すが、疾患重症度及び臨床症状は、特定のＮＣＬ異型に依存し得る。
【0521】
ＮＣＬの既知の異型には、Ｓａｎｔｏｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病（ＳＨＤ）としても公知の小児性異型、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病（ＪＢＤ）としても公知の遅発型小児性異型、Ｆｉｎｎｉｓｈ遅発型小児性異型（ＦＬＩ）、変異遅発型小児性（ＶＬＩ）、ＣＬＮ７異型（ＣＬＮ７）、ＣＬＮ８異型（ＣＬＮ８）、Ｔｕｒｋｉｓｈ遅発型小児性異型（ＴＬＩ）、９型異型（Ｔ９）、ＣＬＮ１０異型（ＣＬＮ１０）、バッテン病（ＢＤ）としても公知の若年性異型、及びクーフス病（ＫＤ）としても公知の成人性異型が含まれる。ＳＨＤは、進行して２歳までに完全な網膜失明となる早期視力低下、続く、３歳での植物状態、及び４歳までの脳死と関連する。この異型は、てんかん発作の自然発生とも関連する。ＪＢＤ異型は、２～４歳の間に発生し、運動失調、てんかん発作、進行性認知低下、及び異常な発語発達と関連し、典型的には、８歳までに死をもたらす。ＢＤは典型的には、４～１０歳の間に発生し、視力喪失、てんかん発作、認知機能障害、及び早期死亡などの症状を含む。ＫＤ異型を有するＮＣＬ患者は一般に、ＳＨＤ及びＢＤ異型よりも軽度な症状を示し、約４０年の平均余命を有する。
【0522】
プログラニュリン関連前頭側頭型認知症及び神経セロイドリポフスチン症
染色体１７ｑ２１とＦＴＬＤとの間の関連を調査する研究が、ＰＧＲＮ遺伝子におけるいくつかのＦＴＬＤ関連変異を見出している。これらの変異は多くの場合に、ＦＴＬＤ患者の脳においてｕｂ陽性、ＴＤＰ４３陽性、ｔａｕ陰性神経病理学的封入体の凝集及び蓄積をもたらす。ＰＧＲＮは、いくつかの成熟ＧＲＮタンパク質に対する分泌型前駆ペプチドであり、かつ主に神経栄養成長因子として機能すると考えられ、ニューロン分化及び生存を促進する。ＰＧＲＮは、抗炎症及び神経保護機能に役立つことも実証されている。ＰＧＲＮは遍在発現されるが、ＦＴＬＤとのその関連の結果として、ＰＧＲＮが神経細胞、神経膠細胞、及び内皮細胞を含む複数の細胞型で発現される中枢神経系（ＣＮＳ）に多大な注意が向けられている。ＦＴＬＤでは、ＰＧＲＮ遺伝子において７０を超える機能喪失型変異が同定されており、そのかなり大部分がハプロ不全及び５０％超の血清中ＰＧＲＮレベルの低下をもたらす。ＰＧＲＮ変異は、その開示がヒトＰＧＲＮ変異に関係するため、参照により本明細書に組み込まれるＧｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ２９：１３７３－８６（２００８）に記載されている。機能性ＰＧＲＮタンパク質が完全に欠如した同型接合型患者がＮＣＬを発症するので、ＰＧＲＮ変異の作用は用量依存的であり、正常なリソソーム機能におけるこのタンパク質の追加の役割を示唆している。ＮＣＬ及び関連遺伝子変異の包括的な記載については、それらの開示が全体で参照により本明細書に組み込まれるＭｉｎｋ ｅｔ ａｌ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２８：１１０１－５（２０１３）、Ｎｉｔａ ｅｔ ａｌ． Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ １８：７３－８８（２０１６）、及びＭｏｌｅ ＆ Ｃｏｔｍａｎ， Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １８５２：２２３７－４１（２０１５）、及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９（３８５）：ｅａａｈ５６４２を参照されたい。
染色体１７ｑ２１とＦＴＬＤとの間の関連を調査する研究が、ＰＧＲＮ遺伝子におけるいくつかのＦＴＬＤ関連変異を見出している。これらの変異は多くの場合に、ＦＴＬＤ患者の脳においてｕｂ陽性、ＴＤＰ４３陽性、ｔａｕ陰性神経病理学的封入体の凝集及び蓄積をもたらす。ＰＧＲＮは、いくつかの成熟ＧＲＮタンパク質に対する分泌型前駆ペプチドであり、かつ主に神経栄養成長因子として機能すると考えられ、ニューロン分化及び生存を促進する。ＰＧＲＮは、抗炎症及び神経保護機能に役立つことも実証されている。ＰＧＲＮは遍在発現されるが、ＦＴＬＤとのその関連の結果として、ＰＧＲＮが神経細胞、神経膠細胞、及び内皮細胞を含む複数の細胞型で発現される中枢神経系（ＣＮＳ）に多大な注意が向けられている。ＦＴＬＤでは、ＰＧＲＮ遺伝子において７０を超える機能喪失型変異が同定されており、そのかなり大部分がハプロ不全及び５０％超の血清中ＰＧＲＮレベルの低下をもたらす。ＰＧＲＮ変異は、その開示がヒトＰＧＲＮ変異に関係するため、参照により本明細書に組み込まれるＧｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ２９：１３７３－８６（２００８）に記載されている。機能性ＰＧＲＮタンパク質が完全に欠如した同型接合型患者がＮＣＬを発症するので、ＰＧＲＮ変異の作用は用量依存的であり、正常なリソソーム機能におけるこのタンパク質の追加の役割を示唆している。ＮＣＬ及び関連遺伝子変異の包括的な記載については、それらの開示が全体で参照により本明細書に組み込まれるＭｉｎｋ ｅｔ ａｌ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２８：１１０１－５（２０１３）、Ｎｉｔａ ｅｔ ａｌ． Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ １８：７３－８８（２０１６）、及びＭｏｌｅ ＆ Ｃｏｔｍａｎ， Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １８５２：２２３７－４１（２０１５）、及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９（３８５）：ｅａａｈ５６４２を参照されたい。
【0523】
ＦＴＬＤの臨床管理では主に、ＦＴＬＤに付随する情動及び行動の変化を管理するために、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）及び抗精神病薬を使用している。同様に、ＮＣＬ病理をターゲティングする介入処置の大部分は、疾患症状、例えば、てんかん発作、運動障害の重症度の低下、免疫応答の増強、及び疼痛管理を目指している。しかしながら、この戦略は、その発症及び進行に対処することなく、疾患の症状を寛解することをターゲティングしている。これらの処置とは異なり、本明細書に記載の組成物及び方法は、ＮＣＤ、例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬの発症の根底にあり得る別の生化学的現象を処置するという利点を提供する。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法は、疾患の生理学的原因をターゲティングし、治癒的治療の可能性を表す。
【0524】
本明細書に記載の組成物及び方法は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る導入遺伝子など）を含む細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を投与することにより、ＮＣＤを処置するために使用することができる。これらの組成物及び方法を使用すると、いずれの病因、例えば、遺伝子変異、環境毒素、または散発性によるＮＣＤも処置することができる。これらの組成物及び方法はまた、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬを有する対象を処置するために使用することもできる。本明細書に記載の組成物及び方法は、正常なＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性、低下したＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性を有する対象、及びそのＰＧＲＮ変異状態及び／またはＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性レベルが不明な対象を処置するために使用することができる。本明細書に記載の組成物及び方法は、ＮＣＤを発症するリスクのある対象、例えば、ＰＧＲＮ変異を有する対象、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性が低下した対象、及びＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）と関連する遺伝子のうちの１つまたは複数に変異を有する対象に予防的処置として投与することもできる。
【0525】
プログラニュリン及びグラニュリン構築物
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる導入遺伝子含有構築物は、野生型ヒトＰＧＲＮ（そのアミノ酸配列は配列番号１として下に示されている）、またはそのバリアント、例えば、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する少なくとも２つのＧＲＮドメイン（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のＧＲＮドメイン）を含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～１６のＧＲＮドメイン（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６のＧＲＮドメイン）を含む。
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる導入遺伝子含有構築物は、野生型ヒトＰＧＲＮ（そのアミノ酸配列は配列番号１として下に示されている）、またはそのバリアント、例えば、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する少なくとも２つのＧＲＮドメイン（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のＧＲＮドメイン）を含む。一部の実施形態では、ＰＧＲＮは、２～１６のＧＲＮドメイン（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６のＧＲＮドメイン）を含む。
【0526】
一部の実施形態では、野生型ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドは、下に詳細に記載されるとおりの内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを指向するヌクレアーゼ及び阻害性ＲＮＡによる分解に対する抵抗性を付与するようにコドン最適化されたポリヌクレオチドであってよい。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするコドン最適化導入遺伝子は、配列番号１９の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するポリヌクレオチドを含む。
【0527】
野生型ヒトＰＧＲＮタンパク質は、以下のアミノ酸配列を有する（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００２０７８．１）：
ＭＷＴＬＶＳＷＶＡＬＴＡＧＬＶＡＧＴＲＣＰＤＧＱＦＣＰＶＡＣＣＬＤＰＧＧＡＳＹＳＣＣＲＰＬＬＤＫＷＰＴＴＬＳＲＨＬＧＧＰＣＱＶＤＡＨＣＳＡＧＨＳＣＩＦＴＶＳＧＴＳＳＣＣＰＦＰＥＡＶＡＣＧＤＧＨＨＣＣＰＲＧＦＨＣＳＡＤＧＲＳＣＦＱＲＳＧＮＮＳＶＧＡＩＱＣＰＤＳＱＦＥＣＰＤＦＳＴＣＣＶＭＶＤＧＳＷＧＣＣＰＭＰＱＡＳＣＣＥＤＲＶＨＣＣＰＨＧＡＦＣＤＬＶＨＴＲＣＩＴＰＴＧＴＨＰＬＡＫＫＬＰＡＱＲＴＮＲＡＶＡＬＳＳＳＶＭＣＰＤＡＲＳＲＣＰＤＧＳＴＣＣＥＬＰＳＧＫＹＧＣＣＰＭＰＮＡＴＣＣＳＤＨＬＨＣＣＰＱＤＴＶＣＤＬＩＱＳＫＣＬＳＫＥＮＡＴＴＤＬＬＴＫＬＰＡＨＴＶＧＤＶＫＣＤＭＥＶＳＣＰＤＧＹＴＣＣＲＬＱＳＧＡＷＧＣＣＰＦＴＱＡＶＣＣＥＤＨＩＨＣＣＰＡＧＦＴＣＤＴＱＫＧＴＣＥＱＧＰＨＱＶＰＷＭＥＫＡＰＡＨＬＳＬＰＤＰＱＡＬＫＲＤＶＰＣＤＮＶＳＳＣＰＳＳＤＴＣＣＱＬＴＳＧＥＷＧＣＣＰＩＰＥＡＶＣＣＳＤＨＱＨＣＣＰＱＧＹＴＣＶＡＥＧＱＣＱＲＧＳＥＩＶＡＧＬＥＫＭＰＡＲＲＡＳＬＳＨＰＲＤＩＧＣＤＱＨＴＳＣＰＶＧＱＴＣＣＰＳＬＧＧＳＷＡＣＣＱＬＰＨＡＶＣＣＥＤＲＱＨＣＣＰＡＧＹＴＣＮＶＫＡＲＳＣＥＫＥＶＶＳＡＱＰＡＴＦＬＡＲＳＰＨＶＧＶＫＤＶＥＣＧＥＧＨＦＣＨＤＮＱＴＣＣＲＤＮＲＱＧＷＡＣＣＰＹＲＱＧＶＣＣＡＤＲＲＨＣＣＰＡＧＦＲＣＡＡＲＧＴＫＣＬＲＲＥＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ
（配列番号１）
ＭＷＴＬＶＳＷＶＡＬＴＡＧＬＶＡＧＴＲＣＰＤＧＱＦＣＰＶＡＣＣＬＤＰＧＧＡＳＹＳＣＣＲＰＬＬＤＫＷＰＴＴＬＳＲＨＬＧＧＰＣＱＶＤＡＨＣＳＡＧＨＳＣＩＦＴＶＳＧＴＳＳＣＣＰＦＰＥＡＶＡＣＧＤＧＨＨＣＣＰＲＧＦＨＣＳＡＤＧＲＳＣＦＱＲＳＧＮＮＳＶＧＡＩＱＣＰＤＳＱＦＥＣＰＤＦＳＴＣＣＶＭＶＤＧＳＷＧＣＣＰＭＰＱＡＳＣＣＥＤＲＶＨＣＣＰＨＧＡＦＣＤＬＶＨＴＲＣＩＴＰＴＧＴＨＰＬＡＫＫＬＰＡＱＲＴＮＲＡＶＡＬＳＳＳＶＭＣＰＤＡＲＳＲＣＰＤＧＳＴＣＣＥＬＰＳＧＫＹＧＣＣＰＭＰＮＡＴＣＣＳＤＨＬＨＣＣＰＱＤＴＶＣＤＬＩＱＳＫＣＬＳＫＥＮＡＴＴＤＬＬＴＫＬＰＡＨＴＶＧＤＶＫＣＤＭＥＶＳＣＰＤＧＹＴＣＣＲＬＱＳＧＡＷＧＣＣＰＦＴＱＡＶＣＣＥＤＨＩＨＣＣＰＡＧＦＴＣＤＴＱＫＧＴＣＥＱＧＰＨＱＶＰＷＭＥＫＡＰＡＨＬＳＬＰＤＰＱＡＬＫＲＤＶＰＣＤＮＶＳＳＣＰＳＳＤＴＣＣＱＬＴＳＧＥＷＧＣＣＰＩＰＥＡＶＣＣＳＤＨＱＨＣＣＰＱＧＹＴＣＶＡＥＧＱＣＱＲＧＳＥＩＶＡＧＬＥＫＭＰＡＲＲＡＳＬＳＨＰＲＤＩＧＣＤＱＨＴＳＣＰＶＧＱＴＣＣＰＳＬＧＧＳＷＡＣＣＱＬＰＨＡＶＣＣＥＤＲＱＨＣＣＰＡＧＹＴＣＮＶＫＡＲＳＣＥＫＥＶＶＳＡＱＰＡＴＦＬＡＲＳＰＨＶＧＶＫＤＶＥＣＧＥＧＨＦＣＨＤＮＱＴＣＣＲＤＮＲＱＧＷＡＣＣＰＹＲＱＧＶＣＣＡＤＲＲＨＣＣＰＡＧＦＲＣＡＡＲＧＴＫＣＬＲＲＥＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ
（配列番号１）
【0528】
野生型ヒトパラグラニュリン（パラ－ＧＲＮ）は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＴＲＣＰＤＧＱＦＣＰＶＡＣＣＬＤＰＧＧＡＳＹＳＣＣＲＰＬＬＤ
（配列番号２）
ＴＲＣＰＤＧＱＦＣＰＶＡＣＣＬＤＰＧＧＡＳＹＳＣＣＲＰＬＬＤ
（配列番号２）
【0529】
野生型ヒトグラニュリン－１（ＧＲＮ－１）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＧＧＰＣＱＶＤＡＨＣＳＡＧＨＳＣＩＦＴＶＳＧＴＳＳＣＣＰＦＰＥＡＶＡＣＧＤＧＨＨＣＣＰＲＧＦＨＣＳＡＤＧＲＳＣＦ
（配列番号３）
ＧＧＰＣＱＶＤＡＨＣＳＡＧＨＳＣＩＦＴＶＳＧＴＳＳＣＣＰＦＰＥＡＶＡＣＧＤＧＨＨＣＣＰＲＧＦＨＣＳＡＤＧＲＳＣＦ
（配列番号３）
【0530】
野生型ヒトグラニュリン－２（ＧＲＮ－２）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＡＩＱＣＰＤＳＱＦＥＣＰＤＦＳＴＣＣＶＭＶＤＧＳＷＧＣＣＰＭＰＱＡＳＣＣＥＤＲＶＨＣＣＰＨＧＡＦＣＤＬＶＨＴＲＣＩ
（配列番号４）
ＡＩＱＣＰＤＳＱＦＥＣＰＤＦＳＴＣＣＶＭＶＤＧＳＷＧＣＣＰＭＰＱＡＳＣＣＥＤＲＶＨＣＣＰＨＧＡＦＣＤＬＶＨＴＲＣＩ
（配列番号４）
【0531】
野生型ヒトグラニュリン－３（ＧＲＮ－３）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＶＭＣＰＤＡＲＳＲＣＰＤＧＳＴＣＣＥＬＰＳＧＫＹＧＣＣＰＭＰＮＡＴＣＣＳＤＨＬＨＣＣＰＱＤＴＶＣＤＬＩＱＳＫＣＬ
（配列番号５）
ＶＭＣＰＤＡＲＳＲＣＰＤＧＳＴＣＣＥＬＰＳＧＫＹＧＣＣＰＭＰＮＡＴＣＣＳＤＨＬＨＣＣＰＱＤＴＶＣＤＬＩＱＳＫＣＬ
（配列番号５）
【0532】
野生型ヒトグラニュリン－４（ＧＲＮ－４）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＶＫＣＤＭＥＶＳＣＰＤＧＹＴＣＣＲＬＱＳＧＡＷＧＣＣＰＦＴＱＡＶＣＣＥＤＨＩＨＣＣＰＡＧＦＴＣＤＴＱＫＧＴＣＥ
（配列番号６）
ＤＶＫＣＤＭＥＶＳＣＰＤＧＹＴＣＣＲＬＱＳＧＡＷＧＣＣＰＦＴＱＡＶＣＣＥＤＨＩＨＣＣＰＡＧＦＴＣＤＴＱＫＧＴＣＥ
（配列番号６）
【0533】
野生型ヒトグラニュリン－５（ＧＲＮ－５）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＶＰＣＤＮＶＳＳＣＰＳＳＤＴＣＣＱＬＴＳＧＥＷＧＣＣＰＩＰＥＡＶＣＣＳＤＨＱＨＣＣＰＱＧＹＴＣＶＡＥＧＱＣＱ
（配列番号７）
ＶＰＣＤＮＶＳＳＣＰＳＳＤＴＣＣＱＬＴＳＧＥＷＧＣＣＰＩＰＥＡＶＣＣＳＤＨＱＨＣＣＰＱＧＹＴＣＶＡＥＧＱＣＱ
（配列番号７）
【0534】
野生型ヒトグラニュリン－６（ＧＲＮ－６）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＩＧＣＤＱＨＴＳＣＰＶＧＱＴＣＣＰＳＬＧＧＳＷＡＣＣＱＬＰＨＡＶＣＣＥＤＲＱＨＣＣＰＡＧＹＴＣＮＶＫＡＲＳＣＥ
（配列番号８）
ＩＧＣＤＱＨＴＳＣＰＶＧＱＴＣＣＰＳＬＧＧＳＷＡＣＣＱＬＰＨＡＶＣＣＥＤＲＱＨＣＣＰＡＧＹＴＣＮＶＫＡＲＳＣＥ
（配列番号８）
【0535】
野生型ヒトグラニュリン－７（ＧＲＮ－７）ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＤＶＥＣＧＥＧＨＦＣＨＤＮＱＴＣＣＲＤＮＲＱＧＷＡＣＣＰＹＲＱＧＶＣＣＡＤＲＲＨＣＣＰＡＧＦＲＣＡＡＲＧＴＫＣＬ
（配列番号９）
ＤＶＥＣＧＥＧＨＦＣＨＤＮＱＴＣＣＲＤＮＲＱＧＷＡＣＣＰＹＲＱＧＶＣＣＡＤＲＲＨＣＣＰＡＧＦＲＣＡＡＲＧＴＫＣＬ
（配列番号９）
【0536】
野生型ヒトＰＧＲＮ（ＣＣＤＳ識別子：１１４８３．１）は、以下の核酸配列を有する：
ＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＣＡＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＴＣＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＡＡＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＧＧＣＣＡＣＴＣＣＴＧＣＡＴＣＴＴＴＡＣＣＧＴＣＴＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＧＧＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＣＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＧＣＧＡＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＧＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＴＣＡＧＴＴＣＧＡＡＴＧＣＣＣＧＧＡＣＴＴＣＴＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＴＧＴＴＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＧＣＡＣＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＡＣＣＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＧＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＧＧＴＣＡＴＧＴＧＴＣＣＧＧＡＣＧＣＡＣＧＧＴＣＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＧＴＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＴＧＣＣＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＧＴＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＡＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＣＴＡＣＣＡＣＧＧＡＣＣＴＣＣＴＣＡＣＴＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＡＡＡＴＧＴＧＡＣＡＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＧＣＧＧＧＧＴＴＴＡＣＧＴＧＴＧＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＧＧＧＧＣＣＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＴＧＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＣＴＣＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＧＴＧＴＡＧＣＴＧＡＧＧＧＧＣＡＧＴＧＴＣＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＧＧＧＣＴＴＣＣＴＴＡＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＧＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＧＡＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＣＣＧＴＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＧＡＣＡＡＣＣＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＧＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＣＣＧＣＴＧＣＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＧＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＴＴＴＧＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡ
（配列番号１０）
ＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＣＡＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＧＧＡＡＣＧＣＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＴＣＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＡＡＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＧＧＣＣＡＣＴＣＣＴＧＣＡＴＣＴＴＴＡＣＣＧＴＣＴＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＡＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＧＧＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＣＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＧＧＧＣＧＡＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＧＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＴＣＡＧＴＴＣＧＡＡＴＧＣＣＣＧＧＡＣＴＴＣＴＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＴＧＴＴＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＧＣＡＣＧＧＴＧＣＣＴＴＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＴＴＣＡＣＡＣＣＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＡＣＣＣＡＣＧＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＧＧＴＣＡＴＧＴＧＴＣＣＧＧＡＣＧＣＡＣＧＧＴＣＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＧＴＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＴＧＣＣＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡＧＡＣＡＣＴＧＴＧＴＧＴＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＡＡＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＣＴＡＣＣＡＣＧＧＡＣＣＴＣＣＴＣＡＣＴＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＡＡＡＴＧＴＧＡＣＡＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＧＣＧＧＧＧＴＴＴＡＣＧＴＧＴＧＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＣＡＧＧＧＧＣＣＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＴＧＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＣＴＣＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＣＴＡＣＡＣＧＴＧＴＧＴＡＧＣＴＧＡＧＧＧＧＣＡＧＴＧＴＣＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＧＧＧＣＴＴＣＣＴＴＡＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＧＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＧＣＣＣＣＡＴＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＣＧＡＧＧＡＴＣＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＧＧＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＣＣＧＴＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＴＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＧＡＣＡＡＣＣＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＧＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＣＣＧＣＴＧＣＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＧＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＴＴＴＧＡＧＧＧＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡ
（配列番号１０）
【0537】
コドン最適化ヒトＰＧＲＮは、以下の核酸配列を有する：
ＡＴＧＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＴＣＡＴＧＧＧＴＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＣＣＣＣＧＡＴＧＧＡＣＡＧＴＴＴＴＧＣＣＣＣＧＴＣＧＣＴＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＡＧＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＣＣＧＣＣＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＴＧＣＣＡＧＧＴＧＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＧＴＴＣＣＧＣＣＧＧＡＣＡＣＴＣＴＴＧＣＡＴＣＴＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＣＧＡＣＧＧＡＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＧＣＣＧＧＴＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＧＣＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＣＣＡＧＴＴＣＧＡＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＴＧＴＧＡＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＣＣＣＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＧＧＡＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＴＣＴＡＧＡＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＡＴＧＣＣＡＡＡＣＧＣＣＡＣＡＴＧＣＴＧＴＴＣＣＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＡＴＣＴＧＡＴＣＣＡＧＴＣＴＡＡＧＴＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＡＧＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＴＡＴＧＧＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＡＴＧＧＧＧＡＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＴＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＧＣＧＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＣＡＣＡＴＧＣＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣＣＴＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＧＡＴＡＡＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＧＡＴＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＣＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＡＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＣＡＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＡＧＧＡＧＡＧＣＡＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＴＧＧＧＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＡＣＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＧＧＡＴＡＡＴＡＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＡＴＡＧＧＣＡＧＧＧＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＣＡＧＡＴＡＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＧＧＣＴＴＴＡＧＧＴＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＡＡＣＣＡＡＧＴＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＣＣＧＧＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＴＧＡ
（配列番号１９）
ＡＴＧＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＴＣＡＴＧＧＧＴＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＣＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＣＣＣＣＧＡＴＧＧＡＣＡＧＴＴＴＴＧＣＣＣＣＧＴＣＧＣＴＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＡＧＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＣＣＧＣＣＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＴＧＣＣＡＧＧＴＧＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＧＴＴＣＣＧＣＣＧＧＡＣＡＣＴＣＴＴＧＣＡＴＣＴＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＴＧＣＧＧＣＧＡＣＧＧＡＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＧＣＣＧＧＴＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＧＣＧＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＣＣＡＧＴＴＣＧＡＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＧＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＡＧＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＴＧＴＧＡＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＣＧＣＴＧＣＡＴＣＡＣＣＣＣＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＡＧＧＡＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＴＧＣＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＴＣＴＡＧＡＴＧＣＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＡＴＧＣＣＡＡＡＣＧＣＣＡＣＡＴＧＣＴＧＴＴＣＣＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＴＧＴＧＣＧＡＴＣＴＧＡＴＣＣＡＧＴＣＴＡＡＧＴＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＡＧＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＴＡＴＧＧＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＴＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＡＴＧＧＧＧＡＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＴＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＧＣＧＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＣＡＣＡＴＧＣＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣＣＴＣＡＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＧＡＴＡＡＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＧＡＴＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＣＧＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＡＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＣＡＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＡＧＧＡＧＡＧＣＡＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＣＧＧＣＴＧＴＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＴＧＧＧＡＧＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＡＣＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＡＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＣＴＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＧＧＡＴＡＡＴＡＧＡＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＡＴＡＧＧＣＡＧＧＧＣＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＣＡＧＡＴＡＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＡＧＧＣＴＴＴＡＧＧＴＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＡＡＣＣＡＡＧＴＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＧＣＣＣＣＣＣＧＧＴＧＧＧＡＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＧＡＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＧＡＴＧＡ
（配列番号１９）
【0538】
本明細書に記載の方法によれば、対象に、配列番号１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、または配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または配列番号１と比べて１つまたは複数の保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０またはそれ以上の保存的アミノ酸置換）を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または配列番号２～９のいずれか１つのアミノ酸配列もしくは配列番号２～９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するそのバリアントを有する１つまたはそれ以上のＧＲＮドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を投与することができるが、ただし、コードされるＰＧＲＮまたはＧＲＮバリアントが野生型ＰＧＲＮまたはＧＲＮの治療上の機能を維持していることを条件とする。野生型ＰＧＲＮの神経栄養活性は、神経栄養サポート及びリソソーム機能の維持に重要である。ＰＧＲＮの喪失は、用量依存的に神経変性及びリソソーム蓄積症をもたらす。
【0539】
宿主細胞
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる細胞には、細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、またはミクログリア前駆細胞）または分化細胞（例えば、マクロファージまたはミクログリア）が含まれる。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用することができる細胞の１つの型は、万能性細胞である。万能性細胞は、１種よりも多い分化した細胞型に成長する能力を有する細胞である。万能性細胞の例は、ＥＳＣ及びｉＰＳＣである。ＥＳＣ及びｉＰＳＣは、皮膚及び神経系を生じさせる外胚葉、消化管及び気道、内分泌腺、肝臓、及び膵臓を形成する内胚葉、ならびに骨、軟骨、筋肉、結合組織、及びほとんどの循環器系を形成する中胚葉の細胞に分化する能力を有する。本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる別の型の細胞は、多能性細胞である。多能性細胞は、すべてではないが、複数の細胞型に分化する能力を持つ細胞である。多能性細胞の非限定的例は、ＣＤ３４＋細胞（例えば、ＨＳＣまたはＭＰＣ）である。
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる細胞には、細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、またはミクログリア前駆細胞）または分化細胞（例えば、マクロファージまたはミクログリア）が含まれる。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と組み合わせて使用することができる細胞の１つの型は、万能性細胞である。万能性細胞は、１種よりも多い分化した細胞型に成長する能力を有する細胞である。万能性細胞の例は、ＥＳＣ及びｉＰＳＣである。ＥＳＣ及びｉＰＳＣは、皮膚及び神経系を生じさせる外胚葉、消化管及び気道、内分泌腺、肝臓、及び膵臓を形成する内胚葉、ならびに骨、軟骨、筋肉、結合組織、及びほとんどの循環器系を形成する中胚葉の細胞に分化する能力を有する。本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる別の型の細胞は、多能性細胞である。多能性細胞は、すべてではないが、複数の細胞型に分化する能力を持つ細胞である。多能性細胞の非限定的例は、ＣＤ３４＋細胞（例えば、ＨＳＣまたはＭＰＣ）である。
【0540】
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる細胞には、ＨＳＣ及びＭＰＣが含まれる。ＨＳＣは、自己再生し、かつ限定されないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞）を含む多様な細胞系を含む成熟血液細胞に分化する能力を有する未熟血液細胞である。ヒトＨＳＣは、ＣＤ３４＋である。加えて、ＨＳＣはまた、長期再増殖ＨＳＣ（ＬＴ－ＨＳＣ）及び短期再増殖ＨＳＣ（ＳＴ－ＨＳＣ）も指す。これらのＨＳＣのいずれも、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる。
【0541】
ＨＳＣは、ＣＤ３４＋でもある骨髄性前駆細胞に分化することができる。骨髄系前駆細胞はさらに、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、及び血小板）、単球（例えば、単球及びマクロファージ）、樹状細胞、及びミクログリアに分化することができる。一般的な骨髄系前駆細胞は、細胞表面分子により特徴づけることができ、ｌｉｎ－、ＳＣＡ１－、ｃ－ｋｉｔ＋、ＣＤ３４＋、及びＣＤ１６／３２ｍｉｄであることが公知である。
【0542】
ＨＳＣ及び骨髄前駆細胞は血液製剤から得ることができる。血液製剤は、造血起源の細胞を含む身体または身体の臓器から得られる製品である。そのような供給源には、分画されていない骨髄、臍帯、胎盤、末梢血、または動員末梢血が含まれる。前述の粗製または未分画の血液製剤はすべて、いくつかの方法で、ＨＳＣまたは骨髄系前駆細胞の特徴を有する細胞について富化することができる。例えば、それらが発現する細胞表面分子に基づき、より成熟した分化細胞を選択することができる。血液製剤は、ＣＤ３４＋細胞を正で選択することにより分画することができ、これには、自己再生、多分化能が可能で、移植レシピエントに再導入されると造血幹細胞ニッチェに帰着し得て、生産的かつ持続的な造血を再確立することができる造血幹細胞の亜集団が含まれる。このような選択は、例えば、市販の磁性抗ＣＤ３４ビーズ（Ｄｙｎａｌ， Ｌａｋｅ Ｓｕｃｃｅｓｓ， ＮＹ）を使用して達成される。骨髄系前駆細胞は、それらが発現するマーカーに基づいて単離することもできる。未分画の血液製剤は、ドナーから直接入手するか、凍結保存保管庫から回収することができる。ＨＳＣ及び骨髄前駆細胞を、ＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞、または他の再プログラムされた成熟細胞型の分化により取得することもできる。
【0543】
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる細胞には、同種細胞及び自家細胞が含まれる。前述の細胞型はすべて、ミクログリアに分化し得る。本明細書に記載の細胞は、ミクログリア前駆細胞またはミクログリア幹細胞に分化することもある。分化は、エクスビボまたはインビボで起こってよい。ヒトＥＳＣ及びｉＰＳＣのエクスビボ分化のための方法は当業者に知られており、その開示が細胞をミクログリアに分化させる方法に関するため、参照により本明細書に組み込まれるＭｕｆｆａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２２：１３５８－１３６７ （２０１６）及びＰａｎｄｙａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ （２０１７）（印刷前にｅｐｕｂ）に記載されている。
【0544】
ミクログリア
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる細胞には、ミクログリアに分化することができるものまたは分化ミクログリアである細胞が含まれる。ミクログリアは、中枢神経系の免疫細胞または常在マクロファージとして機能する骨髄由来細胞である。ミクログリアは、遺伝的にも機能的にもマクロファージに非常に類似しており、炎症誘発性状態と抗炎症性状態との間を動的にシフトする能力を共有している。炎症誘発性状態は古典的活性化、またはＭ１として公知であり、抗炎症状態は代替活性化、またはＭ２と呼ばれる。ミクログリアは、細胞外シグナル、例えばとりわけ、隣接するニューロンまたは星状細胞、細胞片、毒素、感染症、虚血、及び外傷などからのシグナルにより、２つの状態の間でシフトされ得る。Ｍ１ミクログリアは多くの場合に、罹患した脳において、特にＦＴＬＤまたはＮＣＬなどの神経炎症を伴う疾患において観察される。古典的活性化Ｍ１表現型は、プログラニュリンヌルマウス、ＣＬＮ３（Δｅｘ７／８）マウス、及びＣＬＮ６ｎｃｌｆマウスなどのＦＴＬＤ及びＮＣＬのマウスモデルにおいても観察される。Ｍ１ミクログリアが神経炎症の原因または結果であるかどうかは不明であるが、ミクログリアが古典的に活性化されると、炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、及びＩＬ－６、ケモカイン、一酸化窒素を分泌し得て、これらが、持続的な炎症、ニューロンの損傷、及びＭ１ミクログリアのさらなる活性化につながり得る。この正のフィードバックループは、脳組織に有害であり得るので、したがって、Ｍ１活性化を低下させる、及び／またはＭ２活性化を上昇させる方法は、神経炎症を特徴とする疾患、例えば、ＮＣＤの患者の助けとなり得る。
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用することができる細胞には、ミクログリアに分化することができるものまたは分化ミクログリアである細胞が含まれる。ミクログリアは、中枢神経系の免疫細胞または常在マクロファージとして機能する骨髄由来細胞である。ミクログリアは、遺伝的にも機能的にもマクロファージに非常に類似しており、炎症誘発性状態と抗炎症性状態との間を動的にシフトする能力を共有している。炎症誘発性状態は古典的活性化、またはＭ１として公知であり、抗炎症状態は代替活性化、またはＭ２と呼ばれる。ミクログリアは、細胞外シグナル、例えばとりわけ、隣接するニューロンまたは星状細胞、細胞片、毒素、感染症、虚血、及び外傷などからのシグナルにより、２つの状態の間でシフトされ得る。Ｍ１ミクログリアは多くの場合に、罹患した脳において、特にＦＴＬＤまたはＮＣＬなどの神経炎症を伴う疾患において観察される。古典的活性化Ｍ１表現型は、プログラニュリンヌルマウス、ＣＬＮ３（Δｅｘ７／８）マウス、及びＣＬＮ６ｎｃｌｆマウスなどのＦＴＬＤ及びＮＣＬのマウスモデルにおいても観察される。Ｍ１ミクログリアが神経炎症の原因または結果であるかどうかは不明であるが、ミクログリアが古典的に活性化されると、炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、及びＩＬ－６、ケモカイン、一酸化窒素を分泌し得て、これらが、持続的な炎症、ニューロンの損傷、及びＭ１ミクログリアのさらなる活性化につながり得る。この正のフィードバックループは、脳組織に有害であり得るので、したがって、Ｍ１活性化を低下させる、及び／またはＭ２活性化を上昇させる方法は、神経炎症を特徴とする疾患、例えば、ＮＣＤの患者の助けとなり得る。
【0545】
哺乳動物細胞におけるプログラニュリンまたはグラニュリンの発現
ＦＴＬＤ及びＮＣＬの患者では、ＰＧＲＮ活性が低下しており、ＦＴＬＤ脳は、古典的活性化Ｍ１ミクログリアを含む。本明細書に記載の組成物及び方法は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る導入遺伝子）を含む細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を投与することにより、これらの機能障害をターゲティングする。ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）の処置における治療用途でこれらの薬剤を利用するために、これらの薬剤は、細胞の内部に、特定の例では、特定のオルガネラに向けられ得る。そのようなタンパク質を哺乳動物細胞に送達するために、かつ哺乳動物細胞においてそのようなタンパク質をコードする遺伝子を安定発現させるために、幅広い方法が確立されている。
ＦＴＬＤ及びＮＣＬの患者では、ＰＧＲＮ活性が低下しており、ＦＴＬＤ脳は、古典的活性化Ｍ１ミクログリアを含む。本明細書に記載の組成物及び方法は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたは小神経膠細胞において発現し得る導入遺伝子）を含む細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を投与することにより、これらの機能障害をターゲティングする。ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）の処置における治療用途でこれらの薬剤を利用するために、これらの薬剤は、細胞の内部に、特定の例では、特定のオルガネラに向けられ得る。そのようなタンパク質を哺乳動物細胞に送達するために、かつ哺乳動物細胞においてそのようなタンパク質をコードする遺伝子を安定発現させるために、幅広い方法が確立されている。
【0546】
プログラニュリンまたはグラニュリンをコードするポリヌクレオチド
哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）でＰＧＲＮまたはＧＲＮの治療上有効な細胞内濃度を達成するために使用することができるプラットフォームの１つは、これらの薬剤をコードする遺伝子の安定発現によるものである（例えば、哺乳動物細胞の核またはミトコンドリアゲノムへの統合により）。これらの遺伝子は、対応するタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。そのような外来遺伝子を哺乳動物細胞に導入するために、これらの遺伝子をベクターに組み込むことができる。ベクターは、形質転換、トランスフェクション、直接取り込み、プロジェクタイル衝撃法（ｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）を含む様々な方法により、及びリポソーム中でのベクターの封入により、細胞に導入することができる。細胞をトランスフェクトまたは形質転換する適切な方法の例は、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、感染、リポフェクション、及び直接取り込みである。そのような方法は、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれる Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （２０１４））；及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （２０１５））にさらに詳細に記載されている。
哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）でＰＧＲＮまたはＧＲＮの治療上有効な細胞内濃度を達成するために使用することができるプラットフォームの１つは、これらの薬剤をコードする遺伝子の安定発現によるものである（例えば、哺乳動物細胞の核またはミトコンドリアゲノムへの統合により）。これらの遺伝子は、対応するタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。そのような外来遺伝子を哺乳動物細胞に導入するために、これらの遺伝子をベクターに組み込むことができる。ベクターは、形質転換、トランスフェクション、直接取り込み、プロジェクタイル衝撃法（ｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）を含む様々な方法により、及びリポソーム中でのベクターの封入により、細胞に導入することができる。細胞をトランスフェクトまたは形質転換する適切な方法の例は、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、感染、リポフェクション、及び直接取り込みである。そのような方法は、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれる Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （２０１４））；及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （２０１５））にさらに詳細に記載されている。
【0547】
ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、そのような薬剤をコードする遺伝子を含むベクターを細胞膜リン脂質にターゲティングすることにより、哺乳動物細胞に導入することもできる。例えば、ベクター分子を、すべての細胞膜リン脂質に親和性を持つウイルスタンパク質であるＶＳＶ－Ｇタンパク質に連結させることにより、ベクターを細胞膜の細胞外表面上のリン脂質にターゲティングすることができる。そのような構築物は、当業者に周知の方法を使用して生成することができる。
【0548】
哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼによるＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドの認識及び結合が、遺伝子発現には重要である。したがって、これは、ＲＮＡポリメラーゼを動員する転写因子について高い親和性を示し、転写開始部位での転写複合体のアセンブリを促進する配列エレメントをポリヌクレオチド内に含むことができる。そのような配列エレメントには、例えば、その配列が特異的な転写開始因子及び最終的にはＲＮＡポリメラーゼにより認識及び結合され得る哺乳動物プロモーターが含まれる。哺乳動物プロモーターの例は、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｓｙｓ． Ｂｉｏｌ．， ３：７３（２００７） ｏｎｌｉｎｅ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎに記載されている。
【0549】
本明細書に記載の組成物及び方法で使用するために適したポリヌクレオチドには、哺乳動物プロモーターの下流でＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするものも含まれる。哺乳動物細胞におけるＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現に有用なプロモーターには、例えば、伸長因子１－アルファ（ＥＦ１α）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ）プロモーター、ＣＤ６８分子（ＣＤ６８）プロモーター（ＰＧＲＮを発現するためのＰＧＫ及びＣＤ６８プロモーターの使用に関連するため、参照により本明細書に組み込まれるＤａｈｌ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２３：８３５ （２０１５）を参照されたい）、ＣＤ１１ｂプロモーター、ＰＧＲＮプロモーター、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１）プロモーター、同種移植炎症因子１（ＡＩＦ１）プロモーター、プリン作動性受容体Ｐ２Ｙ１２（Ｐ２Ｙ１２）プロモーター、膜貫通タンパク質１１９（ＴＭＥＭ１１９）プロモーター、及びコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）プロモーターが含まれる。別法では、ウイルスゲノムに由来するプロモーターも、哺乳動物細胞におけるこれらの薬剤の安定発現のために使用することができる。これらの薬剤の哺乳動物発現を促進するために使用することができる機能的ウイルスプロモーターの例は、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のｔｋプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のロングターミナルリピート（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルスのプロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。別法では、哺乳動物細胞において使用するために最適化された合成プロモーターを、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子の安定発現のために使用することができる。
【0550】
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドが哺乳動物細胞の核ＤＮＡに組み込まれたら、このポリヌクレオチドの転写を、当技術分野で公知の方法により誘導することができる。例えば、哺乳動物細胞を、転写因子、及び／またはＲＮＡポリメラーゼの哺乳動物プロモーターへの結合を調節して、遺伝子発現を調節する薬剤などの外部化学試薬に曝露することにより、発現を誘導することができる。化学試薬は、例えばプロモーターに結合したリプレッサータンパク質を除去することにより、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子の哺乳動物プロモーターへの結合を促進するために役立つ。別法では、化学試薬は、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子についての哺乳動物プロモーターの親和性を上昇させて、プロモーターの下流に配置された遺伝子の転写率が化学試薬の存在下で上昇するようにするために役立ち得る。前記の機構によりポリヌクレオチド転写を増強する化学試薬の例は、テトラサイクリン及びドキシサイクリンである。これらの試薬は市販されており（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、確立されたプロトコルに従って遺伝子発現を促進するように哺乳動物細胞に投与することができる。
【0551】
本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのポリヌクレオチドに含めることができる他のＤＮＡ配列エレメントは、エンハンサー配列である。エンハンサーは、ＤＮＡが転写開始部位で転写因子及びＲＮＡポリメラーゼの結合に好都合な３次元配向を採用するように、目的の遺伝子を含むポリヌクレオチドのコンフォメーション変化を誘導する調節エレメントの別のクラスを表す。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのポリヌクレオチドには、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードし、追加的に哺乳動物エンハンサー配列を含むものが含まれる。多くのエンハンサー配列が哺乳動物遺伝子から現在公知であり、例は、哺乳動物グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリンをコードする遺伝子に由来するエンハンサーである。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するためのエンハンサーには、真核細胞に感染することができるウイルスの遺伝物質に由来するものも含まれる。例は、複製起点の後半側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後半側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーである。真核生物の遺伝子転写の活性化を誘導する追加のエンハンサー配列は、Ｙａｎｉｖ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ２９７：１７ （１９８２）に開示されている。エンハンサーは、例えば、この遺伝子の５’または３’位で、水形成ＮＡＤＨオキシダーゼをコードするポリヌクレオチドを含むベクターにスプライシングされ得る。好ましい配向では、エンハンサーはプロモーターの５’側に位置し、次いでこれは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドに対して５’側に配置される。
【0552】
細胞特異的遺伝子発現
干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）は、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を細胞に送達して相補的ｍＲＮＡの分解を引き起こすことにより内因性遺伝子の発現をノックダウンするために広く使用されている。追加の適用は、人工ｍｉＲＮＡターゲット配列でタグ付けされた外因的に導入された導入遺伝子の発現を負に調節するために、内因性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の多様性を利用することである。これらのｍｉＲＮＡターゲットタグ付き導入遺伝子は、組織、細胞系、活性化、または分化段階に特異的であり得る所与のｍｉＲＮＡの活性に応じて、負に調節され得る。これらの人工ｍｉＲＮＡターゲット配列（ｍｉＲＴ）は、特異的ｍｉＲＮＡによりターゲットとして認識されて、転写後遺伝子サイレンシングを誘導し得る。ターゲティングされた細胞での強力な導入遺伝子発現は有益な治療結果をもたらし得るが、ＨＳＰＣまたは他の前駆細胞での異所性または無秩序な導入遺伝子発現などのオフターゲット発現は、細胞毒性効果を有し得、細胞挙動の変化及び治療効果の低下につながる導入遺伝子含有細胞の対抗選択をもたらし得る。ＨＳＰＣ及び前駆細胞では広く発現しているが、骨髄細胞系の細胞には存在しないｍｉＲＮＡのためのｍｉＲＴの組み込みにより、ＨＳＰＣ及び他の前駆細胞での導入遺伝子発現の抑制が可能になり、導入遺伝子含有造血後代のサイレントで長期の貯留が可能になる一方で、成熟分化ターゲット細胞での強力な導入遺伝子発現が可能になる。ｍｉＲ－１２６は、ＨＳＰＣ、他の前駆細胞、及び赤血球細胞系の細胞で高度に発現するが、骨髄細胞系の細胞（例えば、マクロファージ及びミクログリア）には存在しない（Ｇｅｎｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． ２：５８ｒａ３４ （２０１０））。例えば、導入遺伝子内に組み込まれたｍｉＲ－１２６ターゲティング配列は、骨髄細胞系の細胞における導入遺伝子のターゲティングされた発現及びＨＳＰＣ及び他の前駆細胞における発現の抑制を可能にし、したがって、オフターゲットの細胞毒性効果を最小限にする。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ剤をコードする導入遺伝子はｍｉＲ－１２６ターゲティング配列を含んでもよい。
干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）は、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を細胞に送達して相補的ｍＲＮＡの分解を引き起こすことにより内因性遺伝子の発現をノックダウンするために広く使用されている。追加の適用は、人工ｍｉＲＮＡターゲット配列でタグ付けされた外因的に導入された導入遺伝子の発現を負に調節するために、内因性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の多様性を利用することである。これらのｍｉＲＮＡターゲットタグ付き導入遺伝子は、組織、細胞系、活性化、または分化段階に特異的であり得る所与のｍｉＲＮＡの活性に応じて、負に調節され得る。これらの人工ｍｉＲＮＡターゲット配列（ｍｉＲＴ）は、特異的ｍｉＲＮＡによりターゲットとして認識されて、転写後遺伝子サイレンシングを誘導し得る。ターゲティングされた細胞での強力な導入遺伝子発現は有益な治療結果をもたらし得るが、ＨＳＰＣまたは他の前駆細胞での異所性または無秩序な導入遺伝子発現などのオフターゲット発現は、細胞毒性効果を有し得、細胞挙動の変化及び治療効果の低下につながる導入遺伝子含有細胞の対抗選択をもたらし得る。ＨＳＰＣ及び前駆細胞では広く発現しているが、骨髄細胞系の細胞には存在しないｍｉＲＮＡのためのｍｉＲＴの組み込みにより、ＨＳＰＣ及び他の前駆細胞での導入遺伝子発現の抑制が可能になり、導入遺伝子含有造血後代のサイレントで長期の貯留が可能になる一方で、成熟分化ターゲット細胞での強力な導入遺伝子発現が可能になる。ｍｉＲ－１２６は、ＨＳＰＣ、他の前駆細胞、及び赤血球細胞系の細胞で高度に発現するが、骨髄細胞系の細胞（例えば、マクロファージ及びミクログリア）には存在しない（Ｇｅｎｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． ２：５８ｒａ３４ （２０１０））。例えば、導入遺伝子内に組み込まれたｍｉＲ－１２６ターゲティング配列は、骨髄細胞系の細胞における導入遺伝子のターゲティングされた発現及びＨＳＰＣ及び他の前駆細胞における発現の抑制を可能にし、したがって、オフターゲットの細胞毒性効果を最小限にする。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ剤をコードする導入遺伝子はｍｉＲ－１２６ターゲティング配列を含んでもよい。
【0553】
分泌シグナルペプチド
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドは、分泌シグナルペプチドをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含んでもよい。分泌シグナルペプチドは、５～３０残基長のアミノ酸配列を有してよく、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドの上流（すなわち、５’側）に配置されていてよい。これらの分泌シグナルペプチドは、シグナル認識粒子による合成中の新生ポリペプチドの認識を可能にし、ＥＲへの移行、輸送小胞へのパッケージング、そして最後に分泌をもたらす。タンパク質分泌のための例示的な分泌シグナルペプチドは、ＰＧＲＮ、ＩＧＦ－ＩＩ、アルファ－１アンチトリプシン、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＣＤ５、免疫グロブリン、トリプシノーゲン、血清アルブミン、プロラクチン、エラスチン、組織プラスミノーゲン活性化シグナルペプチド（ｔＰＡ－ＳＰ）、及びインスリンに由来するものである。一部の実施形態では、分泌型のＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を、失ったタンパク質を血流に注入することによりタンパク質欠損（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）を補正するための治療戦略として利用することができる。血液が患者の組織を灌流すると、ＰＧＲＮまたはＧＲＮが細胞により取り込まれ、その活動部位に輸送される。
ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドは、分泌シグナルペプチドをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含んでもよい。分泌シグナルペプチドは、５～３０残基長のアミノ酸配列を有してよく、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドの上流（すなわち、５’側）に配置されていてよい。これらの分泌シグナルペプチドは、シグナル認識粒子による合成中の新生ポリペプチドの認識を可能にし、ＥＲへの移行、輸送小胞へのパッケージング、そして最後に分泌をもたらす。タンパク質分泌のための例示的な分泌シグナルペプチドは、ＰＧＲＮ、ＩＧＦ－ＩＩ、アルファ－１アンチトリプシン、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＣＤ５、免疫グロブリン、トリプシノーゲン、血清アルブミン、プロラクチン、エラスチン、組織プラスミノーゲン活性化シグナルペプチド（ｔＰＡ－ＳＰ）、及びインスリンに由来するものである。一部の実施形態では、分泌型のＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を、失ったタンパク質を血流に注入することによりタンパク質欠損（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）を補正するための治療戦略として利用することができる。血液が患者の組織を灌流すると、ＰＧＲＮまたはＧＲＮが細胞により取り込まれ、その活動部位に輸送される。
【0554】
分泌型プログラニュリンまたはグラニュリンの血液脳関門透過のためのＡｐｏＥタグ
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質）を、血液脳関門（ＢＢＢ）を透過するように改変する。ＢＢＢ透過を媒介するための改変は、当技術分野で周知である。例示的な改変は、ＡｐｏＥのＲｂドメイン（配列番号１１のアミノ酸残基１４８～１７３）を含むタグの使用である。完全なＡｐｏＥペプチド配列を下に示す。
ＭＫＶＬＷＡＡＬＬＶＴＦＬＡＧＣＱＡＫＶＥＱＡＶＥＴＥＰＥＰＥＬＲＱＱＴＥＷＱＳＧＱＲＷＥＬＡＬＧＲＦＷＤＹＬＲＷＶＱＴＬＳＥＱＶＱＥＥＬＬＳＳＱＶＴＱＥＬＲＡＬＭＤＥＴＭＫＥＬＫＡＹＫＳＥＬＥＥＱＬＴＰＶＡＥＥＴＲＡＲＬＳＫＥＬＱＡＡＱＡＲＬＧＡＤＭＥＤＶＣＧＲＬＶＱＹＲＧＥＶＱＡＭＬＧＱＳＴＥＥＬＲＶＲＬＡＳＨＬＲＫＬＲＫＲＬＬＲＤＡＤＤＬＱＫＲＬＡＶＹＱＡＧＡＲＥＧＡＥＲＧＬＳＡＩＲＥＲＬＧＰＬＶＥＱＧＲＶＲＡＡＴＶＧＳＬＡＧＱＰＬＱＥＲＡＱＡＷＧＥＲＬＲＡＲＭＥＥＭＧＳＲＴＲＤＲＬＤＥＶＫＥＱＶＡＥＶＲＡＫＬＥＥＱＡＱＱＩＲＬＱＡＥＡＦＱＡＲＬＫＳＷＦＥＰＬＶＥＤＭＱＲＱＷＡＧＬＶＥＫＶＱＡＡＶＧＴＳＡＡＰＶＰＳＤＮＨ
（配列番号１１）
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質）を、血液脳関門（ＢＢＢ）を透過するように改変する。ＢＢＢ透過を媒介するための改変は、当技術分野で周知である。例示的な改変は、ＡｐｏＥのＲｂドメイン（配列番号１１のアミノ酸残基１４８～１７３）を含むタグの使用である。完全なＡｐｏＥペプチド配列を下に示す。
ＭＫＶＬＷＡＡＬＬＶＴＦＬＡＧＣＱＡＫＶＥＱＡＶＥＴＥＰＥＰＥＬＲＱＱＴＥＷＱＳＧＱＲＷＥＬＡＬＧＲＦＷＤＹＬＲＷＶＱＴＬＳＥＱＶＱＥＥＬＬＳＳＱＶＴＱＥＬＲＡＬＭＤＥＴＭＫＥＬＫＡＹＫＳＥＬＥＥＱＬＴＰＶＡＥＥＴＲＡＲＬＳＫＥＬＱＡＡＱＡＲＬＧＡＤＭＥＤＶＣＧＲＬＶＱＹＲＧＥＶＱＡＭＬＧＱＳＴＥＥＬＲＶＲＬＡＳＨＬＲＫＬＲＫＲＬＬＲＤＡＤＤＬＱＫＲＬＡＶＹＱＡＧＡＲＥＧＡＥＲＧＬＳＡＩＲＥＲＬＧＰＬＶＥＱＧＲＶＲＡＡＴＶＧＳＬＡＧＱＰＬＱＥＲＡＱＡＷＧＥＲＬＲＡＲＭＥＥＭＧＳＲＴＲＤＲＬＤＥＶＫＥＱＶＡＥＶＲＡＫＬＥＥＱＡＱＱＩＲＬＱＡＥＡＦＱＡＲＬＫＳＷＦＥＰＬＶＥＤＭＱＲＱＷＡＧＬＶＥＫＶＱＡＡＶＧＴＳＡＡＰＶＰＳＤＮＨ
（配列番号１１）
【0555】
ＡｐｏＥは脂質輸送に関与する重要なタンパク質であり、その細胞内在化は、ＬＤＬ受容体、超低密度リポタンパク質受容体（ＶＬＤＬＲ）、及びＬＤＬ受容体関連タンパク質（ＬＲＰ１、ＬＲＰ２、及びＬＲＰ８を含むＬＲＰ）を含む、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体遺伝子ファミリーのいくつかのメンバーにより媒介される。ＬＤＬ受容体は、脳毛細血管内皮細胞（ＢＣＥＣ）で高度に発現されることが見い出されており、末梢血管では発現の下方制御が観察されている。ＢＣＥＣ、ニューロン、グリア細胞で検出した場合、肝臓及び脳でも、ＬＲＰとＶＬＤＬＲの発現の制限が顕著に示されている。ＬＤＬＲを除いて、ＬＲＰ１及びＶＬＤＬＲを含む低密度リポタンパク質受容体ファミリー（ＬＤＬＲｆ）タンパク質のいくつかのメンバーは、ＢＢＢを形成するＢＣＥＣで高度に発現される。これらのタンパク質はＡｐｏＥに結合して、ＢＢＢの反管腔側へのそれらのトランスサイトーシスを促進し得る。
【0556】
加えて、ＬＲＰ１及びＶＬＤＬＲの両方のアンタゴニスト及びリガンドである受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）は、インビボ及びインビトロでトランスフェリンよりもＢＢＢを超えての透過性が高いことが示されており（Ｐａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ． １１７：５０７１－８ （２００４））、これは、これらのリポタンパク質受容体（ＬＤＬＲｆ）が、トランスフェリン受容体よりも発現が低いにもかかわらず、効率的なＢＢＢ送達ターゲットであり得ることを示している。本明細書に記載のとおり、ＡｐｏＥに由来する強力な受容体結合ペプチド（Ｒｂ）は、融合タンパク質として操作された場合、タンパク質をＢＢＢを超えて脳に移動させる能力を有する。したがって、この方法は、融合タンパク質として操作された場合、治療薬のためにＢＢＢを選択的に開くように機能し得る。このペプチドは、ＡｐｏＥタンパク質全体ではなく、ＡｐｏＥのＲｂドメインを利用するため、それらの生物学的機能を危険にさらしたり、またはＡｐｏＥの重要な生物学的機能を妨害したりすることなく、診断薬または治療薬に容易に結合させることができる。この経路はまた、脳実質におけるＬＤＬＲｆメンバーの広範な発現により、薬剤がＣＮＳに到達した後のさらなる／二次的脳内分布を促進することができる代替の取り込み経路である。投与戦略、例えば酵素補充療法または細胞ベース遺伝子ベースの治療にかかわらず、脳実質内の治療薬の量と分布の両方が、疾患処置の臨床成果に大きな影響を有するはずである。ＢＢＢを超えるタンパク質のターゲティング化送達におけるＡｐｏＥのＲｂドメインの開発及び使用の詳細な説明は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４０２１９９７４号において見出すことができる。
【0557】
一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質は、配列番号１１のＬＤＬＲｆ Ｒｂドメインを含むペプチド配列、またはその断片、バリアント、もしくはオリゴマーを有する。例示的な受容体結合ドメインは、ＡｐｏＥのＮ末端、例えば、配列番号１１のアミノ酸残基１～１９１の間、配列番号１１のアミノ酸残基２５～１８５の間、配列番号１１のアミノ酸残基５０～１８０の間、配列番号１１のアミノ酸残基７５～１７５の間、配列番号１１のアミノ酸残基１００～１７０の間、または配列番号１１のアミノ酸残基１２５～１６５の間で見出すことができる。例示的な受容体結合ドメインは、配列番号１１の残基１５９～１６７のアミノ酸配列を有する。
【0558】
一部の実施形態では、ＡｐｏＥの受容体結合ドメインを含むペプチド配列は、少なくとも１つのアミノ酸変異、欠失、付加、または置換を含んでよい。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、２つ以上の変異、欠失、付加、または置換の組み合わせであってよい。一部の実施形態では、少なくとも１つの置換は保存的置換である。一部の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸付加は、ＡｐｏＥのＲｂドメインに既に見出される選択された配列の付加を含む。当業者は、ＢＢＢを超えての輸送のために、ある程度の生化学的活性を保持しながら配列に対して行うことができる適切な改変を認識するであろう。
【0559】
グリコシル化非依存性リソソームターゲティング
グリコシル化非依存性リソソームターゲティング（ＧＩＬＴ）技術を利用して、治療用酵素（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）をリソソームにターゲティングすることができる。具体的には、ＧＩＬＴ技術は、リソソームターゲティングでＣＩ－ＭＰＲに係合するために、Ｍ６Ｐの代わりにペプチドタグを使用する。典型的には、ＧＩＬＴタグは、マンノース－６－リン酸非依存的な様式でＣＩ－ＭＰＲに結合するタンパク質、ペプチド、または他の部分である。有利なことに、この技術は、リソソーム酵素を取り込むための通常の生物学的機構を模倣するが、マンノース－６－リン酸に非依存的な様式で模倣する。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ及びＧＩＬＴタグを含有するＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質として分泌される。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮタンパク質のＮ末端に融合している。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮタンパク質のＣ末端に融合している。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、ヒトインスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦＩＩ）に由来する。ヒトＩＧＦ－ＩＩはＣＩ－ＭＰＲの高親和性リガンドであり、ＩＧＦ－ＩＩ受容体とも称される。Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体へのＧＩＬＴタグ付き治療用酵素の結合は、エンドサイトーシス経路を介してタンパク質をリソソームにターゲティングする。ＧＩＬＴ技術及びＧＩＬＴタグの詳細な説明は、それらすべての教示が、その全体で参照により本明細書に組み込まれる米国公開番号２００３００８２１７６、２００４０００６００８、２００４０００５３０９、２００５０２８１８０５、及び２００９０４３２０７において見い出すことができる。
グリコシル化非依存性リソソームターゲティング（ＧＩＬＴ）技術を利用して、治療用酵素（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）をリソソームにターゲティングすることができる。具体的には、ＧＩＬＴ技術は、リソソームターゲティングでＣＩ－ＭＰＲに係合するために、Ｍ６Ｐの代わりにペプチドタグを使用する。典型的には、ＧＩＬＴタグは、マンノース－６－リン酸非依存的な様式でＣＩ－ＭＰＲに結合するタンパク質、ペプチド、または他の部分である。有利なことに、この技術は、リソソーム酵素を取り込むための通常の生物学的機構を模倣するが、マンノース－６－リン酸に非依存的な様式で模倣する。一部の実施形態では、ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ及びＧＩＬＴタグを含有するＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質として分泌される。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮタンパク質のＮ末端に融合している。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮタンパク質のＣ末端に融合している。一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、ヒトインスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦＩＩ）に由来する。ヒトＩＧＦ－ＩＩはＣＩ－ＭＰＲの高親和性リガンドであり、ＩＧＦ－ＩＩ受容体とも称される。Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体へのＧＩＬＴタグ付き治療用酵素の結合は、エンドサイトーシス経路を介してタンパク質をリソソームにターゲティングする。ＧＩＬＴ技術及びＧＩＬＴタグの詳細な説明は、それらすべての教示が、その全体で参照により本明細書に組み込まれる米国公開番号２００３００８２１７６、２００４０００６００８、２００４０００５３０９、２００５０２８１８０５、及び２００９０４３２０７において見い出すことができる。
【0560】
フーリン抵抗性ＧＩＬＴタグ
ＩＧＦ－ＩＩ由来のＧＩＬＴタグは、哺乳動物細胞における産生中にフーリンによるタンパク質分解切断を受けることがある。フーリンプロテアーゼは典型的に、コンセンサス配列Ａｒｇ－Ｘ－Ｘ－Ａｒｇを有する切断部位を認識及び切断し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。切断部位は、配列のカルボキシ末端アルギニン（Ａｒｇ）残基の後に位置する。一部の実施形態では、フーリン切断部位は、コンセンサス配列Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ｘ－Ｘ－Ｘ－Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ａｒｇを有し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。切断部位は、配列のカルボキシ末端アルギニン（Ａｒｇ）残基の後に位置する。成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩペプチド配列を下に示す。
ＡＹＲＰＳＥＴＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＲＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ
（配列番号１２）
ＩＧＦ－ＩＩ由来のＧＩＬＴタグは、哺乳動物細胞における産生中にフーリンによるタンパク質分解切断を受けることがある。フーリンプロテアーゼは典型的に、コンセンサス配列Ａｒｇ－Ｘ－Ｘ－Ａｒｇを有する切断部位を認識及び切断し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。切断部位は、配列のカルボキシ末端アルギニン（Ａｒｇ）残基の後に位置する。一部の実施形態では、フーリン切断部位は、コンセンサス配列Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ｘ－Ｘ－Ｘ－Ｌｙｓ／Ａｒｇ－Ａｒｇを有し、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。切断部位は、配列のカルボキシ末端アルギニン（Ａｒｇ）残基の後に位置する。成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩペプチド配列を下に示す。
ＡＹＲＰＳＥＴＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＲＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ
（配列番号１２）
【0561】
成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩは、残基３４～４０（太字）の間に２つの潜在的な重複するフーリン切断部位を含む。フーリンによる切断に抵抗性のある改変ＧＩＬＴタグは、マンノース－６－リン酸非依存的な様式でＣＩ－ＭＰＲに結合する能力をまだ保持している。具体的には、フーリン抵抗性ＧＩＬＴタグは、その変異が少なくとも１つのフーリン切断部位を無効にするように、１つまたは複数のフーリン切断部位でアミノ酸配列を変異させることにより設計することができる。したがって、一部の実施形態では、フーリン抵抗性ＧＩＬＴタグは、フーリン切断が野生型ＩＧＦ－ＩＩペプチド（例えば、野生型ヒト成熟ＩＧＦ－ＩＩ）と比較して阻止される、阻害される、低減される、または減速されるように、少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を無効にするか、またはフーリンプロテアーゼ切断部位に隣接する配列を変更する変異を含むフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインである。適切な変異は、フーリン抵抗性ＧＩＬＴタグがヒトカチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体に結合する能力に影響を与えない。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適したフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、マンノース－６－リン酸非依存的な様式で、ｐＨ７．４で１０－７以下（例えば、１０－８、１０－９、１０－１０、１０－１１、またはそれ以下）の解離定数で、ヒトカチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体に結合する。一部の実施形態では、フーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、配列番号１２のアミノ酸３０～４０（例えば、３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３２～３９、３３～３９、３４～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０）に対応する領域内に変異を含む。一部の実施形態では、適切な変異は、少なくとも１つのフーリンプロテアーゼ切断部位を無効にする。変異は、アミノ酸の置換、欠失、または挿入であってよい。例えば、配列番号１２の残基３０～４０（例えば、３１～４０、３２～４０、３３～４０、３４～４０、３０～３９、３１～３９、３２～３９、３４～３７、３２～３９、３３～３９、３４～３９、３５～３９、３６～３９、３７～４０、３４～４０）に対応する領域内の任意の１つのアミノ酸を、他の任意のアミノ酸で置換するか、または欠失させることができる。例えば、３４位での置換は、最初の切断部位のフーリン認識に影響を及ぼし得る。各認識部位内に１つまたは複数の追加のアミノ酸を挿入すると、一方または両方のフーリン切断部位を無効にすることができる。縮重位置の残基のうちの１個または複数の残基を欠失させて、両方のフーリン切断部位を無効にすることもできる。
【0562】
一部の実施形態では、フーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、配列番号１２のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、フーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、Ａｒｇ３７またはＡｒｇ４０位にＬｙｓまたはＡｌａ置換を含む。３７位と４０位の両方でのＬｙｓ及び／またはＡｌａ変異の組み合わせ、またはＬｙｓもしくはＡｌａ以外のアミノ酸の置換を含む、他の置換が可能である。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適したフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、追加の変異を含んでもよい。例えば、配列番号１２の残基のうちの最大３０％またはそれ以上が変更されていてもよい（例えば、最大１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％またはそれ以上の残基が変更されていてもよい）。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適したフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、配列番号１２と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％を含めて少なくとも７０％同一なアミノ酸配列を有してよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適したフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインを、特異的にＣＩ－ＭＰＲにターゲティングする。ＣＩ－ＭＰＲには高い親和性で（例えば、ｐＨ７．４で１０－７Ｍ以下の解離定数で）結合するが、ＩＧＦ－ＩＩが結合することが公知の他の受容体には天然ＩＧＦ－ＩＩと比較して低い親和性で結合するタンパク質をもたらすＩＧＦ－ＩＩポリペプチドの変異は、特に有用である。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適したフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインを、ＩＧＦ－Ｉ受容体についての天然に存在するヒトＩＧＦ－ＩＩの親和性と比較して、ＩＧＦ－Ｉ受容体についての結合親和性が低いように改変することができる。追加の変異戦略が利用されており、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００９０４３２０７号において詳細に論述されている。例えば、ＩＧＦ－ＩＩ残基Ｔｙｒ２７をＬｅｕで、Ｌｅｕ４３をＶａｌで、またはＳｅｒ２６をＰｈｅで置換すると、ＩＧＦ－Ｉ受容体についてのＩＧＦ－ＩＩの親和性がそれぞれ９４倍、５６倍、及び４倍低下する（Ｔｏｒｒｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２４８（２）：３８５－４０１ （１９９５））。ヒトＩＧＦ－ＩＩの残基１～７を欠失させると、ヒトＩＧＦ－Ｉ受容体についての親和性が３０倍低下し、それに伴ってラットＩＧＦ－ＩＩ受容体についての親和性が１２倍上昇した（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７０（３０）：１８０１３－８ （１９９５））。ＩＧＦ－ＩＩのＮＭＲ構造は、Ｔｈｒ７が残基４８Ｐｈｅ及び５０Ｓｅｒの近く、さらには９Ｃｙｓ－４７Ｃｙｓジスルフィド橋の近くに配置されていることを示している。Ｔｈｒ７とこれらの残基との相互作用が、ＩＧＦ－Ｉ受容体結合に必要な柔軟なＮ末端ヘキサペプチドを安定化させ得ると考えられる（Ｔｅｒａｓａｗａ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． １３（２３）５５９０－７ （１９９４））。同時に、この相互作用はＩＧＦ－ＩＩ受容体への結合を調節することができる。ＩＧＦ－ＩＩのＣ末端の短縮化（残基６２～６７）も、ＩＧＦ－Ｉ受容体についてのＩＧＦ－ＩＩの親和性を５倍低下させるようである（Ｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． １８１（２）：９０７－１４ （１９９１））。ＩＧＦ－Ｉ及びカチオン非依存性Ｍ６Ｐ受容体の結合面は、ＩＧＦ－ＩＩの別々の面にある。構造及び変異データに基づき、ヒトＩＧＦ－ＩＩよりも大幅に小さい機能的カチオン非依存性Ｍ６Ｐ結合ドメインを構築することができる。例えば、アミノ末端アミノ酸（例えば、１～７または２～７）及び／またはカルボキシ末端残基６２～６７を欠失させる、または置換することができる。加えて、ポリペプチドの残りのフォールディングを変更したり、またはカチオン非依存性Ｍ６Ｐ受容体に結合したりすることなく、アミノ酸２９～４０をおそらく削除または置き換えることができる。したがって、アミノ酸８～２８及び４１～６１を含むターゲティング部分を構築することができる。アミノ酸のこれらのストレッチはおそらく、直接結合され得るか、またはリンカーにより分離され得るであろう。別法では、アミノ酸８～２８及び４１～６１を別々のポリペプチド鎖上に提供することができる。ＩＧＦ－ＩＩと相同であり、ＩＧＦ－ＩＩの構造と密接に関連する三次構造を持つインスリンの比較可能なドメインは、別々のポリペプチド鎖に存在する場合でも適切な三次構造への適正なリフォールディングを許容する十分な構造情報を有する（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ． １６（８）：２７９－２８１ （１９９１））。したがって、例えば、アミノ酸８～２８、またはその保存的置換バリアントをリソソーム酵素に融合させることができる；得られた融合タンパク質を、アミノ酸４１～６１、またはその保存的置換バリアントと混合し、患者に投与することができるであろう。ＩＧＦ－ＩＩ／ＧＩＬＴ構築物の隔離を回避するために、ＩＧＦ－ＩＩを、血清ＩＧＦ結合タンパク質への結合を最小限にするように改変することもできる（Ｂａｘｔｅｒ， Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ． ２７８（６）：９６７－７６（２０００））。多くの研究が、ＩＧＦ結合タンパク質への結合に必要なＩＧＦ－ＩＩ中の残基を位置特定している。これらの残基に変異を有する構築物を、Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体に結合する高い親和性の維持、及びＩＧＦ結合タンパク質についての低い親和性についてスクリーニングすることができる。例えば、ＩＧＦ－ＩＩのＰｈｅ ２６をＳｅｒに置き換えると、ＩＧＦＢＰ－１及び－６についてのＩＧＦ－ＩＩの親和性は低下するが、Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体への結合については作用がないと報告されている。（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８（１３）：９２４６－５４ （１９９３））。Ｇｌｕ９ではＬｙｓなどの他の置換も有利であり得る。ＩＧＦ－ＩＩと高度に保存されているＩＧＦ－Ｉの領域での類似の変異は、別々に、または組み合わせで、ＩＧＦ－ＢＰ結合の大幅な減少をもたらす（Ｍａｇｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３８（４８）：１５８６３－７０ （１９９９））。
【0563】
代替のアプローチは、Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体に高い親和性で結合し得るＩＧＦ－ＩＩの最小領域を同定することである。Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体へのＩＧＦ－ＩＩの結合に関係している残基はほとんど、ＩＧＦ－ＩＩの片面に集まっている（Ｔｅｒａｓａｗａ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． １３（２３）：５５９０－７ （１９９４））。ＩＧＦ－ＩＩ三次構造は通常３つの分子内ジスルフィド結合により維持されるが、ＩＧＦ－ＩＩのＭ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体結合表面上のアミノ酸配列を組み込んだペプチドを、適正にフォールドし、結合活性を有するように設計することができる。そのような最小の結合ペプチドは、非常に好ましいリソソームターゲティングドメインである。例えば、好ましいリソソームターゲティングドメインは、ヒトＩＧＦ－ＩＩのアミノ酸８～６７である。Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体に結合する、アミノ酸４８～５５の周りの領域に基づいて設計されたペプチドも、望ましいリソソームターゲティングドメインである。別法では、ペプチドのランダムライブラリーを、酵母ツーハイブリッドアッセイまたはファージディスプレイタイプアッセイのいずれかにより、Ｍ６Ｐ／ＩＧＦ－ＩＩ受容体に結合する能力についてスクリーニングすることができる。
【0564】
本明細書に記載の多くのフーリン抵抗性ＩＧＦ－ＩＩムテインは、インスリン受容体についての結合親和性が低下または減少している。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適したペプチドタグは、インスリン受容体についての天然に存在するヒトＩＧＦ－ＩＩの親和性と比較して、インスリン受容体についての結合親和性が低下または減少している。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法と併せて使用するために適した、インスリン受容体についての結合親和性が低下または減少しているペプチドタグには、野生型成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩの結合親和性よりも、インスリン受容体についての結合親和性が１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１２倍、１４倍、１６倍、１８倍、２０倍、５０倍、１００倍超低いペプチドタグが含まれる。インスリン受容体についての結合親和性は、当技術分野で公知の様々なインビトロ及びインビボアッセイを使用して測定することができる。
【0565】
一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、下に示すとおりの配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。
ＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＰＳＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＡＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号１３）
ＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＰＳＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＡＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号１３）
【0566】
一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、下に示すとおりの配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。
ＧＡＰＧＧＧＳＰＡＰＡＰＴＰＡＰＡＰＴＰＡＰＡＧＧＧＰＳＧＡＰＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＡＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号１４）
ＧＡＰＧＧＧＳＰＡＰＡＰＴＰＡＰＡＰＴＰＡＰＡＧＧＧＰＳＧＡＰＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＡＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号１４）
【0567】
一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、下に示すとおりの配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。
ＧＡＰＧＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＧＰＳＧＡＰＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＡＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号１５）
ＧＡＰＧＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＧＰＳＧＡＰＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＡＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号１５）
【0568】
一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、下に示すとおりの配列番号１６の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列によりコードされる。
ＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＴＧＴＧＴＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＴＣＴＡＧＡＧＧＡＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＴＧ
（配列番号１６）
ＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＴＧＴＧＴＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＴＣＴＡＧＡＧＧＡＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＴＧ
（配列番号１６）
【0569】
一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、下に示すとおりの配列番号１７の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列によりコードされる。
ＧＧＡＧＣＡＣＣＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣＧＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＣＴＣＴＴＴＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＴＧＴＧＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＴＣＴＡＧＡＧＧＣＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＴＧＡ
（配列番号１７）
ＧＧＡＧＣＡＣＣＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣＧＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＣＴＣＴＴＴＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＴＧＴＧＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＴＣＴＡＧＡＧＧＣＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＴＧＡ
（配列番号１７）
【0570】
一部の実施形態では、ＧＩＬＴタグは、下に示すとおりの配列番号１８の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性）を有する核酸配列によりコードされる。
ＧＧＡＧＣＡＣＣＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＣＡＧＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＴＡＣＣＧＡＧＧＡＡＧＧＣＡＣＡＡＧＣＧＡＧＴＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＡＧＣＧＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＣＣＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＡＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＣＡＣＴＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＴＣＴＡＧＡＧＧＡＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＴＧＡ
（配列番号１８）
ＧＧＡＧＣＡＣＣＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＣＡＧＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＴＡＣＣＧＡＧＧＡＡＧＧＣＡＣＡＡＧＣＧＡＧＴＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＡＧＣＧＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＣＣＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＡＧＧＡＣＣＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＣＡＣＴＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＴＣＴＡＧＡＧＧＡＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＴＧＡ
（配列番号１８）
【0571】
プログラニュリンまたはグラニュリンの発現用ベクター
高い転写及び翻訳率を達成することに加えて、哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）における外因性遺伝子の安定発現を、遺伝子を含むポリヌクレオチドを哺乳動物細胞の核ゲノムに組み込むことにより達成することができる。外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを哺乳動物細胞の核ＤＮＡに送達及び組み込むための様々なベクターが開発されている。発現ベクターの例は、例えば、ＷＯ１９９４／０１１０２６に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するための発現ベクターは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチド配列、さらには例えば、これらの薬剤の発現及び／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの組み込みに使用される追加の配列エレメントを含む。ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現に使用することができるある特定のベクターには、プロモーター及びエンハンサー領域などの遺伝子転写を指示する調節配列を含むプラスミドが含まれる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現に有用な他のベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を高める、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性または核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列エレメントには、例えば、発現ベクター上で運ばれる遺伝子の効率的な転写を指示するために、５’及び３’非翻訳領域、ＩＲＥＳ、及びポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するために適した発現ベクターはまた、そのようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。適切なマーカーの例は、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ヌーセオトリシンなどの抗生物質に対する抵抗性をコードする遺伝子である。
高い転写及び翻訳率を達成することに加えて、哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）における外因性遺伝子の安定発現を、遺伝子を含むポリヌクレオチドを哺乳動物細胞の核ゲノムに組み込むことにより達成することができる。外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを哺乳動物細胞の核ＤＮＡに送達及び組み込むための様々なベクターが開発されている。発現ベクターの例は、例えば、ＷＯ１９９４／０１１０２６に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するための発現ベクターは、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチド配列、さらには例えば、これらの薬剤の発現及び／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの組み込みに使用される追加の配列エレメントを含む。ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現に使用することができるある特定のベクターには、プロモーター及びエンハンサー領域などの遺伝子転写を指示する調節配列を含むプラスミドが含まれる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現に有用な他のベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を高める、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性または核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列エレメントには、例えば、発現ベクター上で運ばれる遺伝子の効率的な転写を指示するために、５’及び３’非翻訳領域、ＩＲＥＳ、及びポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法で使用するために適した発現ベクターはまた、そのようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。適切なマーカーの例は、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ヌーセオトリシンなどの抗生物質に対する抵抗性をコードする遺伝子である。
【0572】
プログラニュリンまたはグラニュリンを発現させるためのウイルスベクター
ウイルスゲノムは、哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）への外因性遺伝子の効率的な送達に使用することができるベクターの豊富な供給源を提供する。ウイルスゲノムは、そのようなゲノム内に含まれるポリヌクレオチドが典型的に、一般化または特殊化された形質導入により哺乳動物細胞の核ゲノムに組み込まれるため、遺伝子送達に特に有用なベクターである。これらのプロセスは、天然のウイルス複製サイクルの一部として生じ、遺伝子統合を誘導するために追加のタンパク質または試薬を必要としない。ウイルスベクターの例は、レトロウイルス（例えば、レトロウイルス科ウイルスベクター）、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルソミクソウイルスなどのマイナス鎖ＲＮＡウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、ピコルナウイルス及びアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス、ならびにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘、カナリア痘）を含む二本鎖ＤＮＡウイルスである。他のウイルスには、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト泡沫状ウイルス、及び肝炎ウイルスが含まれる。レトロウイルスの例は、トリ白血病肉腫、トリＣ型ウイルス、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、オンコレトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶグループ、レンチウイルス、アルファレトロウイルス、ガンマレトロウイルス、スプマウイルスである（Ｃｏｆｆｉｎ， Ｊ． Ｍ．， Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ： Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （１９９６）））。他の例は、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳房腫瘍ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内因性ウイルス、ギボンサル白血病ウイルス、メイソンファイザーサルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス及びレンチウイルスである。ベクターの他の例は、例えば、その教示が参照により本明細書に組み込まれるＭｃＶｅｙ ｅｔ ａｌ．， （ＵＳ ５，８０１，０３０）に記載されている。
ウイルスゲノムは、哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）への外因性遺伝子の効率的な送達に使用することができるベクターの豊富な供給源を提供する。ウイルスゲノムは、そのようなゲノム内に含まれるポリヌクレオチドが典型的に、一般化または特殊化された形質導入により哺乳動物細胞の核ゲノムに組み込まれるため、遺伝子送達に特に有用なベクターである。これらのプロセスは、天然のウイルス複製サイクルの一部として生じ、遺伝子統合を誘導するために追加のタンパク質または試薬を必要としない。ウイルスベクターの例は、レトロウイルス（例えば、レトロウイルス科ウイルスベクター）、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルソミクソウイルスなどのマイナス鎖ＲＮＡウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、ピコルナウイルス及びアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス、ならびにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘、カナリア痘）を含む二本鎖ＤＮＡウイルスである。他のウイルスには、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト泡沫状ウイルス、及び肝炎ウイルスが含まれる。レトロウイルスの例は、トリ白血病肉腫、トリＣ型ウイルス、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、オンコレトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶグループ、レンチウイルス、アルファレトロウイルス、ガンマレトロウイルス、スプマウイルスである（Ｃｏｆｆｉｎ， Ｊ． Ｍ．， Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ： Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （１９９６）））。他の例は、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳房腫瘍ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内因性ウイルス、ギボンサル白血病ウイルス、メイソンファイザーサルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス及びレンチウイルスである。ベクターの他の例は、例えば、その教示が参照により本明細書に組み込まれるＭｃＶｅｙ ｅｔ ａｌ．， （ＵＳ ５，８０１，０３０）に記載されている。
【0573】
レトロウイルスベクター
本明細書に記載の方法及び組成物で使用される送達ベクターは、レトロウイルスベクターであってもよい。本明細書に記載の方法及び組成物で使用することができるレトロウイルスベクターの１つの型は、レンチウイルスベクターである。レトロウイルスのサブセットであるレンチウイルスベクター（ＬＶ）は、広範囲の分裂細胞型及び非分裂細胞型を高効率で形質導入し、導入遺伝子の安定した長期発現をもたらす。ＬＶをパッケージング及び形質導入するための最適化戦略の概要は、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＤｅｌｅｎｄａ， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６： Ｓ１２５ （２００４）に提示されている。
本明細書に記載の方法及び組成物で使用される送達ベクターは、レトロウイルスベクターであってもよい。本明細書に記載の方法及び組成物で使用することができるレトロウイルスベクターの１つの型は、レンチウイルスベクターである。レトロウイルスのサブセットであるレンチウイルスベクター（ＬＶ）は、広範囲の分裂細胞型及び非分裂細胞型を高効率で形質導入し、導入遺伝子の安定した長期発現をもたらす。ＬＶをパッケージング及び形質導入するための最適化戦略の概要は、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＤｅｌｅｎｄａ， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６： Ｓ１２５ （２００４）に提示されている。
【0574】
レンチウイルスベースの遺伝子導入技術の使用は、目的の導入遺伝子が収容されている高度に欠失したウイルスゲノムを運ぶ組換えレンチウイルス粒子のインビトロ生成に依存している。特に、組換えレンチウイルスは、（１）パッケージング構築物、すなわち、Ｇａｇ－Ｐｏｌ前駆体をＲｅｖと共に発現するベクター（代替では、トランスで発現）；（２）一般に異種の性質のエンベロープ受容体を発現するベクター；及び（３）すべてのオープンリーディングフレームが除去されているが、複製、キャプシド形成、及び発現に必要な配列を維持し、発現されるべき配列が挿入されているウイルスｃＤＮＡであるトランスファーベクターの許容細胞株でのイントランス共発現により回収される。
【0575】
本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるＬＶは、５’－長末端反復（ＬＴＲ）、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶ Ｐｓｉシグナル５’－スプライス部位（ＳＤ）、デルタ－ＧＡＧエレメント、Ｒｅｖレスポンシブエレメント（ＲＲＥ）、３’－スプライス部位（ＳＡ）、伸長因子（ＥＦ）１－アルファプロモーター及び３’－自己不活性化ＬＴＲ（ＳＩＮ－ＬＴＲ）のうちの１つまたは複数を含んでもよい。レンチウイルスベクターは、その開示がＷＰＲＥに関連するため参照により本明細書に組み込まれるＵＳ６，１３６，５９７に記載されているとおり、中央ポリプリン路（ｃＰＰＴ）及びウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を任意選択で含む。レンチウイルスベクターは、例えば下に示すとおりのものを含み得るｐＨＲ’主鎖をさらに含んでもよい。
【0576】
Ｌｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６：９６３ （２００４）に記載のレンチゲンＬＶを使用して、ＤＮＡ分子を発現させる、及び／または細胞を形質導入することもできる。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるＬＶは、５’－長末端反復（ＬＴＲ）、ＨＩＶシグナル配列、ＨＩＶ Ｐｓｉシグナル５’－スプライス部位（ＳＤ）、デルタ－ＧＡＧエレメント、Ｒｅｖレスポンシブエレメント（ＲＲＥ）、３’－スプライス部位（ＳＡ）、伸長因子（ＥＦ）１－アルファプロモーター及び３’－自己不活性化ＬＴＲ（ＳＩＮ－ＬＴＲ）を含んでもよい。任意選択で、これらの領域の１つまたは複数が、同様の機能を実行する別の領域で置換されることは、当業者には容易に明らかであろう。
【0577】
ＰＧＲＮまたはＧＲＮは、十分に高いレベルで発現する必要がある。導入遺伝子の発現は、プロモーター配列により駆動される。任意選択で、ＬＶは、ＣＭＶプロモーターを含む。プロモーターは、ＥＦ１αまたはＰＧＫプロモーターであってもよい。別の実施形態では、プロモーターは、ミクログリア特異的プロモーター、例えば、ＣＤ６８プロモーター、ＣＸ３ＣＲ１プロモーター、ＣＤ１１ｂプロモーター、ＡＩＦ１プロモーター、Ｐ２Ｙ１２プロモーター、ＴＭＥＭ１１９プロモーター、またはＣＳＦ１Ｒプロモーターである。任意選択で、ＬＶは、哺乳動物細胞において使用するために最適化された合成プロモーターを含む。当業者は、本明細書に記載のベクター構築物において適切である多くのプロモーターに精通しているであろう。
【0578】
改変ＤＮＡ分子の発現を増加させる、またはレンチウイルスの組み込み効率を高めるために、エンハンサーエレメントを使用することができる。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるＬＶは、ｎｅｆ配列を含んでもよい。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるＬＶは、ベクター統合を増強するｃＰＰＴ配列を含んでもよい。ｃＰＰＴは、（＋）－鎖ＤＮＡ合成の第２の起点として機能し、その天然ＨＩＶゲノムの中央に部分的なストランドオーバーラップを導入する。トランスファーベクター主鎖にｃＰＰＴ配列を導入すると、核輸送及びターゲット細胞のＤＮＡに組み込まれるゲノムの総量が大幅に増加した。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるＬＶは、ウッドチャック転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含んでもよい。ＷＰＲＥは、転写物の核輸出を促進することにより、及び／または新生転写物のポリアデニル化の効率を高めることにより、転写レベルで機能し、したがって、細胞内のｍＲＮＡの総量を増加させる。ＬＶにＷＰＲＥを付加すると、インビトロ及びインビボの両方で、いくつかの異なるプロモーターからの導入遺伝子発現レベルが大幅に改善される。本明細書に記載される方法及び組成物において使用されるＬＶは、ｃＰＰＴ配列及びＷＰＲＥ配列の両方を含んでもよい。ベクターはまた、単一のプロモーターからの複数のポリペプチドの発現を可能にするＩＲＥＳ配列を含んでもよい。
【0579】
ＩＲＥＳ配列に加えて、複数のポリペプチドの発現を可能にする他のエレメントが有用である。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるベクターは、１種よりも多いポリペプチドの発現を可能にする複数のプロモーターを含んでもよい。本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるベクターは、１種よりも多いポリペプチドの発現を可能にするタンパク質切断部位を含んでもよい。１種よりも多いポリペプチドの発現を可能にするタンパク質切断部位の例は、それらの開示が１種よりも多いポリペプチドの発現を可能にするタンパク質切断部位に関するため、参照により本明細書に組み込まれるＫｌｕｍｐ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．；８：８１１ （２００１）、Ｏｓｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：５６９ （２００５）、Ｓｚｙｍｃｚａｋ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ． ５：６２７ （２００５）、及びＳｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２２：５８９ （２００４）に記載されている。当業者には、将来同定される複数のポリペプチドの発現を可能にする他のエレメントが有用であり、本明細書に記載の組成物及び方法での使用に適したベクターで利用することができることは容易に明らかであろう。
【0580】
本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるベクターは、臨床グレードのベクターであってもよい。
【0581】
ウイルス調節エレメント
ウイルス調節エレメントは、核酸分子を宿主細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）に導入するために使用される送達担体の成分である。ウイルス調節エレメントは任意選択で、レトロウイルス調節エレメントである。例えば、ウイルス調節エレメントは、ＨＳＣ１またはＭＳＣＶからのＬＴＲ及びｇａｇ配列であってもよい。レトロウイルス調節エレメントはレンチウイルスに由来してもよいし、または他のゲノム領域から同定される異種配列であってもよい。当業者は、他のウイルス調節エレメントが同定されたとき、それらを本明細書に記載の核酸分子と共に使用することができることも理解するであろう。
ウイルス調節エレメントは、核酸分子を宿主細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）に導入するために使用される送達担体の成分である。ウイルス調節エレメントは任意選択で、レトロウイルス調節エレメントである。例えば、ウイルス調節エレメントは、ＨＳＣ１またはＭＳＣＶからのＬＴＲ及びｇａｇ配列であってもよい。レトロウイルス調節エレメントはレンチウイルスに由来してもよいし、または他のゲノム領域から同定される異種配列であってもよい。当業者は、他のウイルス調節エレメントが同定されたとき、それらを本明細書に記載の核酸分子と共に使用することができることも理解するであろう。
【0582】
核酸送達のためのアデノ随伴ウイルスベクター
本明細書に記載の組成物及び方法の核酸を、細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）へのそれらの導入を容易にするために、ｒＡＡＶベクター及び／またはビリオンに組み込むことができる。ＡＡＶベクターは中枢神経系で使用することができ、適切なプロモーター及び血清型は、その開示がＣＮＳ遺伝子治療において有用なプロモーター及びＡＡＶ血清型に関するため参照により本明細書に組み込まれるＰｉｇｎａｔａｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ （２０１７）（印刷前にｅｐｕｂ）において論述されている。本明細書に記載の組成物及び方法において有用なｒＡＡＶベクターは、（１）発現されるべき異種配列（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチド）及び（２）異種遺伝子の統合及び発現を促進するウイルス配列を含む組換え核酸構築物である。ウイルス配列は、ビリオンへのＤＮＡの複製及びパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶの配列を含んでよい。そのようなｒＡＡＶベクターはまた、マーカーまたはレポーター遺伝子を含んでもよい。有用なｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ＷＴ遺伝子の１つまたは複数を全体的または部分的に欠失しているが、機能的隣接ＩＴＲ配列は保持する。ＡＡＶ ＩＴＲは、特定の用途に適した任意の血清型のものであってよい。ｒＡＡＶベクターを使用する方法は、例えば、それぞれの開示が遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関係するため、参照により本明細書に組み込まれる Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｓｃｉ． ７：２７９ （２０００）、及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ， Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４ （２０００）に記載されている。
本明細書に記載の組成物及び方法の核酸を、細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）へのそれらの導入を容易にするために、ｒＡＡＶベクター及び／またはビリオンに組み込むことができる。ＡＡＶベクターは中枢神経系で使用することができ、適切なプロモーター及び血清型は、その開示がＣＮＳ遺伝子治療において有用なプロモーター及びＡＡＶ血清型に関するため参照により本明細書に組み込まれるＰｉｇｎａｔａｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ （２０１７）（印刷前にｅｐｕｂ）において論述されている。本明細書に記載の組成物及び方法において有用なｒＡＡＶベクターは、（１）発現されるべき異種配列（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチド）及び（２）異種遺伝子の統合及び発現を促進するウイルス配列を含む組換え核酸構築物である。ウイルス配列は、ビリオンへのＤＮＡの複製及びパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶの配列を含んでよい。そのようなｒＡＡＶベクターはまた、マーカーまたはレポーター遺伝子を含んでもよい。有用なｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ＷＴ遺伝子の１つまたは複数を全体的または部分的に欠失しているが、機能的隣接ＩＴＲ配列は保持する。ＡＡＶ ＩＴＲは、特定の用途に適した任意の血清型のものであってよい。ｒＡＡＶベクターを使用する方法は、例えば、それぞれの開示が遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関係するため、参照により本明細書に組み込まれる Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｓｃｉ． ７：２７９ （２０００）、及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ， Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４ （２０００）に記載されている。
【0583】
本明細書に記載の核酸及びベクターを、細胞への核酸またはベクターの導入を容易にするために、ｒＡＡＶビリオンに組み込むことができる。ＡＡＶのキャプシドタンパク質は、ビリオンの外側の非核酸部分を構成し、ＡＡＶ ｃａｐ遺伝子によりコードされる。ｃａｐ遺伝子は、ビリオンのアセンブリに必要な３つのウイルスコートタンパク質、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３をコードする。ｒＡＡＶビリオンの構築は、例えば、それぞれの開示が遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連するため、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ５，１７３，４１４；ＵＳ５，１３９，９４１；ＵＳ５，８６３，５４１；ＵＳ５，８６９，３０５；ＵＳ６，０５７，１５２；及びＵＳ６，３７６，２３７さらにはＲａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７６：７９１ （２００２）及びＢｏｗｌｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７７：４２３ （２００３）に記載されている。
【0584】
本明細書に記載の組成物及び方法と併せて有用なｒＡＡＶビリオンには、ＡＡＶ １、２、３、４、５、６、７、８、９、１０及びｒｈ７４を含む様々なＡＡＶ血清型に由来するものが含まれる。中枢神経系に配置されている、または中枢神経系に送達される細胞をターゲティングするためには、ＡＡＶ２、ＡＡＶ９、及びＡＡＶ１０が特に有用であり得る。種々の血清型のＡＡＶベクター及びＡＡＶタンパク質の構築及び使用は、例えば、それぞれの開示が遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連するため、参照により本明細書に組み込まれるＣｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ２：６１９ （２０００）；Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９７：３４２８ （２０００）；Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７２：２２２４ （１９９８）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７４：１５２４ （２０００）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７５：６６１５ （２００１）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ｍｏｌｅｃ． Ｇｅｎｅｔ． １０：３０７５ （２００１）に記載されている。
【0585】
偽型ｒＡＡＶベクターも、本明細書に記載される組成物及び方法と併せて有用である。偽型ベクターには、所与の血清型以外の血清型に由来するキャプシド遺伝子で偽型化された所与の血清型のＡＡＶベクターが含まれる（例えば、とりわけＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、及びＡＡＶ１０）。偽型ｒＡＡＶビリオンの構築及び使用に関する技術は当技術分野で知られており、例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７５：７６６２ （２００１）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７４：１５２４ （２０００）；Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２８：１５８ （２００２）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ｍｏｌｅｃ． Ｇｅｎｅｔ． １０：３０７５ （２００１）に記載されている。
【0586】
ビリオンキャプシド内に変異を有するＡＡＶビリオンを使用して、非変異型キャプシドビリオンよりも効果的に特定の細胞型を感染させることができる。例えば、適切なＡＡＶ変異体は、特異的な細胞型へのＡＡＶのターゲティングを容易にするためのリガンド挿入変異を有してもよい。挿入変異体、アラニンスクリーニング変異体、及びエピトープタグ変異体を含むＡＡＶキャプシド変異体の構築及び特徴づけは、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７４：８６３５ （２０００）に記載されている。本明細書に記載の方法で使用することができる他のｒＡＡＶビリオンには、ウイルスの分子育種により、さらにはエクソンシャッフリングにより生成されるキャプシドハイブリッドが含まれる。例えば、Ｓｏｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ．， ２５：４３６ （２０００）及びＫｏｌｍａｎ ａｎｄ Ｓｔｅｍｍｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １９：４２３ （２００１）を参照されたい。
【0587】
ターゲット細胞に外因性核酸を送達するための方法
コドン最適化ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、化学改変ＲＮＡ）などのポリヌクレオチドを哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）に導入するために使用することができる技術は、当技術分野で周知である。例えば、エレクトロポレーションを使用して、目的の細胞に静電位を印加することにより、哺乳動物細胞（例えば、ヒトターゲット細胞）を透過性にすることができる。この様式で外部電場にかけられたヒト細胞などの哺乳動物細胞はその後、外因性核酸を取り込みやすくなる。哺乳動物細胞のエレクトロポレーションは、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：１３１１ （１９８７）に詳細に記載されている。同様の技術であるＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）は、真核細胞の核への外因性ポリヌクレオチドの取り込みを刺激するために、印加電場を利用する。Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）及びこの技術を実行するために有用なプロトコルは、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれるＤｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １４：３１５ （２００５）、さらにはＵＳ２０１０／０３１７１１４に詳細に記載されている。
コドン最適化ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、化学改変ＲＮＡ）などのポリヌクレオチドを哺乳動物細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）に導入するために使用することができる技術は、当技術分野で周知である。例えば、エレクトロポレーションを使用して、目的の細胞に静電位を印加することにより、哺乳動物細胞（例えば、ヒトターゲット細胞）を透過性にすることができる。この様式で外部電場にかけられたヒト細胞などの哺乳動物細胞はその後、外因性核酸を取り込みやすくなる。哺乳動物細胞のエレクトロポレーションは、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：１３１１ （１９８７）に詳細に記載されている。同様の技術であるＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）は、真核細胞の核への外因性ポリヌクレオチドの取り込みを刺激するために、印加電場を利用する。Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）及びこの技術を実行するために有用なプロトコルは、例えば、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれるＤｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １４：３１５ （２００５）、さらにはＵＳ２０１０／０３１７１１４に詳細に記載されている。
【0588】
ターゲット細胞のトランスフェクションに有用な追加の技術は、スクイーズ－ポレーション法である。この技術は、加えられたストレスに応答して形成される膜孔を通して外因性ＤＮＡの取り込みを刺激するために、細胞の急速な機械的変形を誘導する。この技術は、ヒトターゲット細胞などの細胞への核酸の送達にベクターが必要とされないということにおいて有利である。スクイーズ－ポレーションは、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＳｈａｒｅｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ８１：ｅ５０９８０ （２０１３）に詳細に記載されている。
【0589】
リポフェクションは、ターゲット細胞のトランスフェクションに有用な別の技術である。この方法は、多くの場合に第４級またはプロトン化アミンなどのカチオン性官能基をリポソーム外部に向かって提示するリポソームに、核酸を負荷することを伴う。これは、細胞膜のアニオン性の性質により、リポソームと細胞との間の静電相互作用を促進し、最終的に、例えば、リポソームと細胞膜の直接融合により、または複合体のエンドサイトーシスにより、外因性核酸の取り込みにつながる。リポフェクションは、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，４４２，３８６号に詳細に記載されている。細胞膜とのイオン相互作用を利用して外来核酸の取り込みを誘発する同様の技術は、細胞をカチオン性ポリマー－核酸複合体と接触させることである。ポリヌクレオチドと会合して細胞膜との相互作用に好ましい正電荷を付与する例示的なカチオン性分子は、活性化デンドリマー（例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＤｅｎｎｉｇ， Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２２８：２２７ （２００３）に記載）ポリエチレンイミン、及びジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）－デキストランであり、トランスフェクション剤としてのその使用は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＧｕｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４０：１：９．２：９．２．１ （１９９７）に詳細に記載されている。磁気ビーズは、穏やかで効率的な様式でターゲット細胞をトランスフェクトするために使用することができる別のツールである。それというのも、この方法は、核酸の取り込みを指示するため印加された磁場を利用するためである。この技術は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１０／０２２７４０６で詳細に説明されている。
【0590】
ターゲット細胞による外因性核酸の取り込みを誘導するための別の有用なツールは、光トランスフェクションとも呼ばれるレーザーフェクションであり、これは細胞を穏やかに透過性にし、ポリヌクレオチドを細胞膜に透過させるために、細胞を特定の波長の電磁放射線に曝露することを含む技術である。この技術の生物活性は、エレクトロポレーションと同様であり、場合によっては、エレクトロポレーションより優れているとみられる。
【0591】
インペールフェクションは、遺伝物質をターゲット細胞に送達するために使用することができる別の技術である。これは、カーボンナノファイバー、カーボンナノチューブ、ナノワイヤーなどのナノ材料の使用に依存している。針状のナノ構造を、基質の表面に対して垂直に合成する。細胞内送達が意図されている遺伝子を含むＤＮＡを、ナノ構造表面に付着させる。次いで、これらの針のアレイを備えたチップを細胞または組織に押し付ける。ナノ構造を突き刺された細胞は、送達された遺伝子（複数可）を発現することができる。この技術の例は、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＳｈａｌｅｋ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ １０７：２５ １８７０ （２０１０）に記載されている。
【0592】
マグネトフェクションも、核酸をターゲット細胞に送達するために使用することができる。マグネトフェクションの原理は、核酸をカチオン性磁性ナノ粒子と会合させることである。磁性ナノ粒子は、完全に生分解性である酸化鉄から作製され、用途に応じて変化する特異的なカチオン性独自の分子（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）でコーティングされる。遺伝子ベクター（ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ウイルスベクターなど）とのそれらの会合は、塩誘導性コロイド凝集及び静電相互作用により達成される。次いで、磁石により生じる外部磁場の影響により、磁性粒子がターゲット細胞で濃縮される。この技術は、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＳｃｈｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ９：１０２ （２００２）に詳細に説明されている。
【0593】
ターゲット細胞による外因性核酸の取り込みを誘導するための別の有用なツールは、ソノポレーションであり、これは、細胞原形質膜の透過性を変更するために音（典型的には超音波周波数）を使用して細胞を透過性にし、ポリヌクレオチドが細胞膜を透過することを可能にする技術である。この技術は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＲｈｏｄｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ８２：３０９ （２００７）に詳細に説明されている。
【0594】
微小胞は、本明細書に記載の方法に従ってターゲット細胞のゲノムを改変するために使用され得る別の潜在的な担体を表す。例えば、糖タンパク質ＶＳＶ－Ｇと、例えばヌクレアーゼなどのゲノム改変タンパク質との同時過剰発現により誘導される微小胞を使用して、後で内因性ポリヌクレオチド配列の部位特異的切断を触媒するタンパク質を細胞に効率的に送達して、遺伝子または調節配列などの目的のポリヌクレオチドの共有結合的組み込みのために細胞のゲノムを準備することができる。真核細胞の遺伝子改変ではジェシクルとも称されるそのような小胞の使用は、例えば、Ｑｕｉｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｒｇｅｔ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｄｉｒｅｃｔ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ［ａｂｓｔｒａｃｔ］： Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ［ａｂｓｔｒａｃｔ］ ： Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １８ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ；２０１５ Ｍａｙ １３， Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ． １２２に詳細に記載されている。
【0595】
遺伝子編集技術を使用した遺伝子発現の調節
内因性プログラニュリンまたはグラニュリンの破壊
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する（例えば、処置中の対象のニューロンの集団においてなど、処置を受けている対象において、または対象に投与される細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）において）。内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ発現を破壊するための例示的な方法は、阻害性ＲＮＡ分子を対象に投与するか、または対象のニューロンの集団または対象に投与される細胞の集団と接触させる方法である。阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊するように機能し得る、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を介して作用し得る。阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現レベル（例えば、タンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベル）を低下させ得る。例えば、阻害性ＲＮＡ分子には、全長の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮをターゲティングする短鎖干渉ＲＮＡ、短鎖ヘアピンＲＮＡ、及び／またはマイクロＲＮＡが含まれる。ｓｉＲＮＡは、典型的には約１９～２５塩基対の長さを持つ二本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、ＲＮＡｉを介してターゲット遺伝子の発現を減少させるヘアピンターンを含むＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、プラスミド、例えば、ウイルスまたは細菌ベクターなどの形態で、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション、または形質導入により細胞に送達することができる。マイクロＲＮＡは、典型的には約２２ヌクレオチドの長さを有する非コーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ分子上のターゲット部位に結合し、例えば、ｍＲＮＡの切断、ｍＲＮＡの不安定化、またはｍＲＮＡの翻訳の阻害を引き起こすことにより、ｍＲＮＡをサイレンシングする。阻害性ＲＮＡ分子は、改変ヌクレオチド、例えば、２’－フルオロ、２’－ｏ－メチル、２’－デオキシ、アンロックド核酸、２’－ヒドロキシ、ホスホロチオエート、２’－チオウリジン、４’－チオウリジン、２’－デオキシウリジンを含むように改変することができる。理論に束縛されることはないが、ある特定の改変はヌクレアーゼ抵抗性及び／または血清安定性を上昇させることができるか、または免疫原性を低下させることができると考えられる。
内因性プログラニュリンまたはグラニュリンの破壊
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する（例えば、処置中の対象のニューロンの集団においてなど、処置を受けている対象において、または対象に投与される細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）において）。内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ発現を破壊するための例示的な方法は、阻害性ＲＮＡ分子を対象に投与するか、または対象のニューロンの集団または対象に投与される細胞の集団と接触させる方法である。阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊するように機能し得る、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を介して作用し得る。阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現レベル（例えば、タンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベル）を低下させ得る。例えば、阻害性ＲＮＡ分子には、全長の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮをターゲティングする短鎖干渉ＲＮＡ、短鎖ヘアピンＲＮＡ、及び／またはマイクロＲＮＡが含まれる。ｓｉＲＮＡは、典型的には約１９～２５塩基対の長さを持つ二本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、ＲＮＡｉを介してターゲット遺伝子の発現を減少させるヘアピンターンを含むＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、プラスミド、例えば、ウイルスまたは細菌ベクターなどの形態で、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション、または形質導入により細胞に送達することができる。マイクロＲＮＡは、典型的には約２２ヌクレオチドの長さを有する非コーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ分子上のターゲット部位に結合し、例えば、ｍＲＮＡの切断、ｍＲＮＡの不安定化、またはｍＲＮＡの翻訳の阻害を引き起こすことにより、ｍＲＮＡをサイレンシングする。阻害性ＲＮＡ分子は、改変ヌクレオチド、例えば、２’－フルオロ、２’－ｏ－メチル、２’－デオキシ、アンロックド核酸、２’－ヒドロキシ、ホスホロチオエート、２’－チオウリジン、４’－チオウリジン、２’－デオキシウリジンを含むように改変することができる。理論に束縛されることはないが、ある特定の改変はヌクレアーゼ抵抗性及び／または血清安定性を上昇させることができるか、または免疫原性を低下させることができると考えられる。
【0596】
一部の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮのレベル及び／または活性もしくは機能を低下させる。実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を阻害する。他の実施形態では、阻害性ＲＮＡ分子は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの分解を増加させる、及び／または内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの安定性を低下させる。阻害性ＲＮＡ分子を、化学的に合成するか、またはインビトロで転写することができる。
【0597】
一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、例えば、本明細書に記載の遺伝子編集技術を使用して、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子を含む細胞において破壊する。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、例えば、本明細書に記載の遺伝子編集技術を使用して、対象において全体的に破壊する。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、例えば、本明細書に記載の遺伝子編集技術を使用して、対象のニューロンの集団で破壊する。一部の実施形態では、対象、ニューロン、及び／またはＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子を含む細胞における内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの破壊を、細胞を対象に投与する前に行う。
【0598】
リボザイム、ＲＮＡｓｅ Ｐ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどの非コーディングＲＮＡに基づく阻害性治療薬の作製及び使用も、例えば、Ｓｉｏｕｄ， ＲＮＡ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ： Ｆｕｎｃｔｉｏｎ， Ｄｅｓｉｇｎ， ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ （２０１０）に記載のとおり、当技術分野で公知である。
【0599】
ヌクレアーゼ媒介遺伝子調節
細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）のゲノムへのターゲット遺伝子の破壊及び／または統合のための別の有用なツールは、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓシステムであり、これは、元々はウイルス感染に対する細菌と古細菌における適応防御機構として進化したシステムである。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、プラスミドＤＮＡ及びＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質（Ｃａｓ；例えば、Ｃａｓ９またはＣａｓ１２ａ）内の回文リピート配列を含む。このＤＮＡ及びタンパク質の集合体は、最初に外来ＤＮＡをＣＲＩＳＰＲ遺伝子座に組み込むことにより、ターゲット配列の部位特異的ＤＮＡ切断を指示する。次いで、これらの外来配列及びＣＲＩＳＰＲ遺伝子座のリピート－スペーサーエレメントを含むポリヌクレオチドを宿主細胞に転写してガイドＲＮＡを作製し、その後これを、ターゲット配列にアニーリングし、Ｃａｓヌクレアーゼをこの部位に局在化させることができる。このように、ＣａｓをターゲットＤＮＡ分子に近接させる相互作用はＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションに支配されるので、高度に部位特異的なＣａｓ媒介ＤＮＡ切断を外来ポリヌクレオチドにおいて操作することができる。結果として、理論的にはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを、目的の任意のターゲットＤＮＡ分子（例えば、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）を切断するために設計することができる。この技術は、真核生物のゲノムを編集するために利用されており（その開示が参照により本明細書に組み込まれるＨｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１：２２７ （２０１３））、細胞ゲノムを部位特異的に編集して、ターゲット遺伝子をコードする遺伝子の取り込み前にＤＮＡ切断をするための効率的な手段として使用することができる。遺伝子発現を調節するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓの使用は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ８，６９７，３５９に記載されている。細胞に目的の遺伝子を組み込む前に、ゲノムＤＮＡを部位特異的に切断することによりターゲットＤＮＳを破壊するための代替方法には、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）及び転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）の使用が含まれる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムとは異なり、これらの酵素は、特異的なターゲット配列に局在化するための誘導ポリヌクレオチドを含まない。代わりに、ターゲット特異性は、これらの酵素内のＤＮＡ結合ドメインにより制御される。ゲノム編集用途でのＺＦＮ及びＴＡＬＥＮの使用は、例えば、その両方の開示が参照により本明細書に組み込まれるＵｒｎｏｖ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １１：６３６ （２０１０）；及びＪｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １４：４９ （２０１３）に記載されている。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、本明細書に記載のこれらの遺伝子編集技術を使用して、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子を含む細胞において破壊することができる。
細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、または小神経膠細胞）のゲノムへのターゲット遺伝子の破壊及び／または統合のための別の有用なツールは、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓシステムであり、これは、元々はウイルス感染に対する細菌と古細菌における適応防御機構として進化したシステムである。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、プラスミドＤＮＡ及びＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質（Ｃａｓ；例えば、Ｃａｓ９またはＣａｓ１２ａ）内の回文リピート配列を含む。このＤＮＡ及びタンパク質の集合体は、最初に外来ＤＮＡをＣＲＩＳＰＲ遺伝子座に組み込むことにより、ターゲット配列の部位特異的ＤＮＡ切断を指示する。次いで、これらの外来配列及びＣＲＩＳＰＲ遺伝子座のリピート－スペーサーエレメントを含むポリヌクレオチドを宿主細胞に転写してガイドＲＮＡを作製し、その後これを、ターゲット配列にアニーリングし、Ｃａｓヌクレアーゼをこの部位に局在化させることができる。このように、ＣａｓをターゲットＤＮＡ分子に近接させる相互作用はＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションに支配されるので、高度に部位特異的なＣａｓ媒介ＤＮＡ切断を外来ポリヌクレオチドにおいて操作することができる。結果として、理論的にはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを、目的の任意のターゲットＤＮＡ分子（例えば、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮ）を切断するために設計することができる。この技術は、真核生物のゲノムを編集するために利用されており（その開示が参照により本明細書に組み込まれるＨｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１：２２７ （２０１３））、細胞ゲノムを部位特異的に編集して、ターゲット遺伝子をコードする遺伝子の取り込み前にＤＮＡ切断をするための効率的な手段として使用することができる。遺伝子発現を調節するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓの使用は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ８，６９７，３５９に記載されている。細胞に目的の遺伝子を組み込む前に、ゲノムＤＮＡを部位特異的に切断することによりターゲットＤＮＳを破壊するための代替方法には、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）及び転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）の使用が含まれる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムとは異なり、これらの酵素は、特異的なターゲット配列に局在化するための誘導ポリヌクレオチドを含まない。代わりに、ターゲット特異性は、これらの酵素内のＤＮＡ結合ドメインにより制御される。ゲノム編集用途でのＺＦＮ及びＴＡＬＥＮの使用は、例えば、その両方の開示が参照により本明細書に組み込まれるＵｒｎｏｖ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １１：６３６ （２０１０）；及びＪｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １４：４９ （２０１３）に記載されている。一部の実施形態では、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、本明細書に記載のこれらの遺伝子編集技術を使用して、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子を含む細胞において破壊することができる。
【0600】
トランスポゾン媒介遺伝子調節
ウイルスベクターに加えて、外因性遺伝子を細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）に組み込むために使用することができる様々な追加のツールが開発されている。ターゲット遺伝子をコードするポリヌクレオチドを細胞に組み込むために使用することができるそのような方法の１つは、トランスポゾンの使用を含む。トランスポゾンは、トランスポザーゼ酵素をコードするポリヌクレオチドであり、目的のポリヌクレオチド配列または遺伝子を５’及び３’切除部位に隣接して含む。トランスポゾンが細胞に送達されると、トランスポザーゼ遺伝子の発現が始まり、トランスポゾンから目的の遺伝子を切断する活性酵素が生じる。この活性は、トランスポザーゼによるトランスポゾン切除部位の部位特異的認識により媒介される。ある特定の場合には、これらの切除部位は、末端リピートまたは逆位末端リピートであってもよい。トランスポゾンから切除されると、目的の遺伝子は、細胞の核ゲノム内に存在する同様の切除部位のトランスポザーゼ触媒切断により、哺乳動物細胞のゲノムに統合され得る。これにより、目的の遺伝子が相補的切除部位で切断された核ＤＮＡに挿入されることが可能になり、その後、目的の遺伝子を哺乳動物細胞ゲノムのＤＮＡに結合するホスホジエステル結合の共有ライゲーションで、組み込みプロセスは完了する。ある特定の場合には、トランスポゾンはレトロトランスポゾンであってもよく、その結果、ターゲット遺伝子をコードする遺伝子は、最初にＲＮＡ産物に転写され、次いで、哺乳動物細胞ゲノムへの組み込み前にＤＮＡに逆転写される。トランスポゾンシステムには、ピギーバックトランスポゾン（例えば、ＷＯ２０１０／０８５６９９に詳細に記載）及びスリーピングビューティートランスポゾン（例えば、ＵＳ２００５／０１１２７６４に詳細に記載）が含まれ、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれる。
ウイルスベクターに加えて、外因性遺伝子を細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）に組み込むために使用することができる様々な追加のツールが開発されている。ターゲット遺伝子をコードするポリヌクレオチドを細胞に組み込むために使用することができるそのような方法の１つは、トランスポゾンの使用を含む。トランスポゾンは、トランスポザーゼ酵素をコードするポリヌクレオチドであり、目的のポリヌクレオチド配列または遺伝子を５’及び３’切除部位に隣接して含む。トランスポゾンが細胞に送達されると、トランスポザーゼ遺伝子の発現が始まり、トランスポゾンから目的の遺伝子を切断する活性酵素が生じる。この活性は、トランスポザーゼによるトランスポゾン切除部位の部位特異的認識により媒介される。ある特定の場合には、これらの切除部位は、末端リピートまたは逆位末端リピートであってもよい。トランスポゾンから切除されると、目的の遺伝子は、細胞の核ゲノム内に存在する同様の切除部位のトランスポザーゼ触媒切断により、哺乳動物細胞のゲノムに統合され得る。これにより、目的の遺伝子が相補的切除部位で切断された核ＤＮＡに挿入されることが可能になり、その後、目的の遺伝子を哺乳動物細胞ゲノムのＤＮＡに結合するホスホジエステル結合の共有ライゲーションで、組み込みプロセスは完了する。ある特定の場合には、トランスポゾンはレトロトランスポゾンであってもよく、その結果、ターゲット遺伝子をコードする遺伝子は、最初にＲＮＡ産物に転写され、次いで、哺乳動物細胞ゲノムへの組み込み前にＤＮＡに逆転写される。トランスポゾンシステムには、ピギーバックトランスポゾン（例えば、ＷＯ２０１０／０８５６９９に詳細に記載）及びスリーピングビューティートランスポゾン（例えば、ＵＳ２００５／０１１２７６４に詳細に記載）が含まれ、それぞれの開示が参照により本明細書に組み込まれる。
【0601】
診断方法
当技術分野で周知の方法、例えば、Ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１１ｔｈ Ｒｅｖｉｓｉｏｎに記載の方法などを使用して、対象を、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有すると診断することができる。例えば、対象におけるＮＣＤの診断は、対象における認知機能障害の程度を評価する神経心理学的検査によりガイドされ得る。対象の認知機能を、限定されないが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知を含む１つまたは複数の認知ドメインにわたる処理能力を評価する認知検査を実行することにより評価することができる。対象における認知機能を、対象の年齢、病歴、教育、社会経済的状況、及び生活様式に適した規格（例えば、基準集団、例えば、一般集団など）に対して比較して、対象におけるＮＣＤに関する診断を決定することができる。対象を、重度ＮＣＤまたは軽度ＮＣＤを有すると診断することができる。重度ＮＣＤは、個人の自立及び／または正常な日常機能を妨害し、せん妄または他の精神障害によるものではない重大な認知低下により特徴づけられる。軽度ＮＣＤは、対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害せず、せん妄または他の精神障害によるものではない中等度の認知低下により特徴づけられる。重度ＮＣＤは、対象により認知検査で得られたスコアが、基準集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から標準偏差２よりも離れていること、またはスコアが基準集団のスコアの分布の第３パーセンタイルにあることにより特徴づけられ得る。軽度ＮＣＤは、対象により認知検査で得られたスコアが、基準集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から標準偏差１～２離れていること、またはスコアが基準集団のスコアの分布の第３～１６パーセンタイルであることにより特徴づけられ得る。認知検査の非限定的例には、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）が含まれる。加えて、または別法では、Ｆ１８－フルオロデオキシグルコースＰＥＴスキャンまたはＭＲＩスキャンの使用も、ＮＣＤを有する対象における神経変性の存在を決定するために使用することができる。
当技術分野で周知の方法、例えば、Ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１１ｔｈ Ｒｅｖｉｓｉｏｎに記載の方法などを使用して、対象を、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有すると診断することができる。例えば、対象におけるＮＣＤの診断は、対象における認知機能障害の程度を評価する神経心理学的検査によりガイドされ得る。対象の認知機能を、限定されないが、複雑性注意、実行機能、学習及び記憶、言語、知覚運動機能、ならびに社会的認知を含む１つまたは複数の認知ドメインにわたる処理能力を評価する認知検査を実行することにより評価することができる。対象における認知機能を、対象の年齢、病歴、教育、社会経済的状況、及び生活様式に適した規格（例えば、基準集団、例えば、一般集団など）に対して比較して、対象におけるＮＣＤに関する診断を決定することができる。対象を、重度ＮＣＤまたは軽度ＮＣＤを有すると診断することができる。重度ＮＣＤは、個人の自立及び／または正常な日常機能を妨害し、せん妄または他の精神障害によるものではない重大な認知低下により特徴づけられる。軽度ＮＣＤは、対象の自立及び／または正常な日常機能を妨害せず、せん妄または他の精神障害によるものではない中等度の認知低下により特徴づけられる。重度ＮＣＤは、対象により認知検査で得られたスコアが、基準集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から標準偏差２よりも離れていること、またはスコアが基準集団のスコアの分布の第３パーセンタイルにあることにより特徴づけられ得る。軽度ＮＣＤは、対象により認知検査で得られたスコアが、基準集団の平均スコア（例えば、一般集団の平均スコア）から標準偏差１～２離れていること、またはスコアが基準集団のスコアの分布の第３～１６パーセンタイルであることにより特徴づけられ得る。認知検査の非限定的例には、Ｅｉｇｈｔ－ｉｔｅｍ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ ｔｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＡＤ８）、Ａｎｎｕａｌ Ｗｅｌｌｎｅｓｓ Ｖｉｓｉｔ（ＡＷＶ）、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＧＰＣＯＧ）、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＨＲＡ）、Ｍｅｍｏｒｙ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ（ＭＩＳ）、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ）、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＳＬＵＭＳ）、及びＳｈｏｒｔ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｌｄｅｒｌｙ（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）が含まれる。加えて、または別法では、Ｆ１８－フルオロデオキシグルコースＰＥＴスキャンまたはＭＲＩスキャンの使用も、ＮＣＤを有する対象における神経変性の存在を決定するために使用することができる。
【0602】
さらに、対象を、目的の特定のＮＣＤに特異的なバイオマーカーの存在について検査することができる。例えば、対象を、対象がＦＴＬＤを有することを示すバイオマーカーの存在、例えば、タウ陽性ニューロン及びグリア封入体、ｕｂ陽性及びＴＤＰ４３陽性、しかしｔａｕ陰性の封入体、ｕｂ及びＦＵＳ陽性、しかしｔａｕ陰性の封入体、本明細書に開示のＰＧＲＮ遺伝子における変異及び／または本明細書に記載の染色体１７ｑ２１での変異などの存在について検査することができる。対象がＮＣＬを有するかどうかを決定するために、対象を、身体の細胞、例えば、ニューロン、肝臓、脾臓、心筋層、及び腎臓細胞内でのリポフスチン封入体の存在、ならびに１つまたは複数のＣＬＮ遺伝子またはＰＧＲＮ遺伝子における変異について検査することもできる。
【0603】
処置の方法
対象の選択
本明細書に記載のとおりに処置することができる対象は、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有するか、または発症するリスクのある対象である。ＦＴＬＤの型は、限定されないが、ＦＴＬＤの行動異常型前頭側頭型認知症、意味性認知症、及び進行性非能弁性失語症異型を含むＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤであり得る。ＮＣＬの型は、限定されないが、Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ 疾患、バッテン病、クーフス病、Ｆｉｎｎｉｓｈ遅発型小児性ＮＣＬ、異型遅発型小児性ＮＣＬ、ＣＬＮ７ ＮＣＬ、ＣＬＮ８ ＮＣＬ、Ｔｕｒｋｉｓｈ遅発型小児性ＮＣＬ、９型ＮＣＬ、ＣＬＮ１０ ＮＣＬ、及びＣＬＮ１１ ＮＣＬを含むＰＧＲＮ関連ＮＣＬであり得る。
対象の選択
本明細書に記載のとおりに処置することができる対象は、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有するか、または発症するリスクのある対象である。ＦＴＬＤの型は、限定されないが、ＦＴＬＤの行動異常型前頭側頭型認知症、意味性認知症、及び進行性非能弁性失語症異型を含むＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤであり得る。ＮＣＬの型は、限定されないが、Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ 疾患、バッテン病、クーフス病、Ｆｉｎｎｉｓｈ遅発型小児性ＮＣＬ、異型遅発型小児性ＮＣＬ、ＣＬＮ７ ＮＣＬ、ＣＬＮ８ ＮＣＬ、Ｔｕｒｋｉｓｈ遅発型小児性ＮＣＬ、９型ＮＣＬ、ＣＬＮ１０ ＮＣＬ、及びＣＬＮ１１ ＮＣＬを含むＰＧＲＮ関連ＮＣＬであり得る。
【0604】
加えて、ＮＣＤの型は、環境毒素、例えば、除草剤もしくは殺虫剤に起因する散発性ＮＣＤ、または非ＰＧＲＮ変異、例えば、ＮＣＤと関連する遺伝子のうちの１つもしくは複数の変異と関連するＮＣＤであり得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、正常なＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性、低下したＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性を有する対象、及びＰＧＲＮ変異状態及び／またはＰＧＲＮまたはＧＲＮ活性レベルが不明である対象を処置することができる。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、ＮＣＤを発症するリスクのある対象、例えば、ＰＧＲＮ変異を有する対象、ＰＧＲＮもしくはＧＲＮ活性が低下した対象、ＮＣＤと関連する遺伝子のうちの１つまたは複数の変異を有する対象、またはＮＣＤと関連する環境毒素に曝露された対象に予防的処置として投与することもできる。ＮＣＤのリスクのある対象は、初期症状を示し得るが、処置が施されたときにはまだ症状を示さない可能性がある。
【0605】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物を、例えば、フレームシフト型変異（例えば、ｐ．Ｃ３１ＬｆｓＸ３５、ｐ．Ｃ３１ＬｆｓＸ３５、ｐ．Ｓ８２ＶｆｓＸ１７４、ｐ．Ｌ２７１ＬｆｓＸ１７４、及び／またはｐ．Ｔ３８２ＮｆｓＸ３２変異）、ミスセンス型変異（ｐ．Ｃ５２１Ｙ、ｐ．Ａ９Ｄ、ｐ．Ｐ２４８Ｌ、ｐ．Ｒ４３２Ｃ、ｐ．Ｃ１３９Ｒ、ｐ．Ｃ５２１Ｙ、及び／またはｐ．Ｃ１３９Ｒ変異）、ナンセンス型変異（例えば、ｐ．Ｑ１２５Ｘまたはｐ．Ｒ４９３Ｘ変異）、挿入型変異（例えば、ｃ．１１４５ｉｎｓＡ変異）、及び／または転換型変異（例えば、ｐ．０（ＩＶＳ１＋５Ｇ＞Ｃ変異）を含むＰＧＲＮ変異を有する対象に投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物を、ＰＧＲＮ遺伝子において任意の他の病原性変異を持つ対象に投与することができる。例えば、ＰＧＲＮ遺伝子における病原性変異は、その開示がヒトＰＧＲＮ変異に関するので、参照により本明細書に組み込まれるＧｉｊｓｅｌｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ２９：１３７３－１３８６， （２０１２）において論述されている変異のいずれであってもよい。
【0606】
投与経路
本明細書に記載の細胞及び組成物は、脳室内、髄腔内、実質内、定位的、静脈内、骨内などの様々な経路により、または骨髄移植により、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有する対象に投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞及び組成物を、全身的に（例えば、静脈内）、中枢神経系（ＣＮＳ）に直接（例えば、脳室内、髄腔内、実質内、または定位的）、または骨髄に直接（例えば、骨内）投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞及び組成物を大脳側脳室へと脳室内で、対象に投与する（この方法の説明は、マウスモデルの大脳側脳室への造血幹細胞及び前駆細胞の脳室内注入に関連するため、参照により本明細書に組み込まれるＣａｐｏｔｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ ３：ｅ１７０１２１１ （２０１７）において見い出すことができる）。任意の所与の症例における最適な投与経路は、投与される特定の細胞または組成物、対象、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、対象の年齢、体重、性別、処置される疾患の重症度、対象の食事、及び対象の排泄速度に依存する。複数の投与経路を使用して、例えば、脳室内もしくは定位注射と静脈内注射、脳室内もしくは定位注射と骨内注射、脳室内もしくは定位注射と骨髄移植、脳室内もしくは定位注射と実質内注射、髄腔内注射と静脈内注射、髄腔内注射と骨内注射、髄腔内注射と骨髄移植、髄腔内注射と実質内注射、実質内注射と静脈内注射、実質内注射と骨内注射、または実質内注射と骨髄移植で、単一の対象を処置することができる。複数の投与経路を使用して、単一の対象を一度に処置することもできるし、または対象は、最初に１つの投与経路を介して処置を受け、２回目の受診時に、例えば１週間後、２週間後、１ヶ月後、６ヶ月後、または１年後に、別の投与経路を介して処置を受けてもよい。ＮＣＤの処置のために、細胞を対象に１回投与してもよいし、または細胞を対象に週、月、または年に１回または複数回（例えば２～１０回）投与してもよい。
本明細書に記載の細胞及び組成物は、脳室内、髄腔内、実質内、定位的、静脈内、骨内などの様々な経路により、または骨髄移植により、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を有する対象に投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞及び組成物を、全身的に（例えば、静脈内）、中枢神経系（ＣＮＳ）に直接（例えば、脳室内、髄腔内、実質内、または定位的）、または骨髄に直接（例えば、骨内）投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞及び組成物を大脳側脳室へと脳室内で、対象に投与する（この方法の説明は、マウスモデルの大脳側脳室への造血幹細胞及び前駆細胞の脳室内注入に関連するため、参照により本明細書に組み込まれるＣａｐｏｔｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ ３：ｅ１７０１２１１ （２０１７）において見い出すことができる）。任意の所与の症例における最適な投与経路は、投与される特定の細胞または組成物、対象、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、対象の年齢、体重、性別、処置される疾患の重症度、対象の食事、及び対象の排泄速度に依存する。複数の投与経路を使用して、例えば、脳室内もしくは定位注射と静脈内注射、脳室内もしくは定位注射と骨内注射、脳室内もしくは定位注射と骨髄移植、脳室内もしくは定位注射と実質内注射、髄腔内注射と静脈内注射、髄腔内注射と骨内注射、髄腔内注射と骨髄移植、髄腔内注射と実質内注射、実質内注射と静脈内注射、実質内注射と骨内注射、または実質内注射と骨髄移植で、単一の対象を処置することができる。複数の投与経路を使用して、単一の対象を一度に処置することもできるし、または対象は、最初に１つの投与経路を介して処置を受け、２回目の受診時に、例えば１週間後、２週間後、１ヶ月後、６ヶ月後、または１年後に、別の投与経路を介して処置を受けてもよい。ＮＣＤの処置のために、細胞を対象に１回投与してもよいし、または細胞を対象に週、月、または年に１回または複数回（例えば２～１０回）投与してもよい。
【0607】
前処置
細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）または組成物の投与前に、内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を枯渇または除去することが有利であり得る。ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞は、化学薬剤（例えば、ブスルファン、トレオスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、またはクロドロネートリポソーム）、照射、またはそれらの組み合わせを使用することで除去することができる。細胞除去に使用される薬剤は、ＢＢＢ透過性であってもよいし（例えば、ブスルファン）、またはＢＢＢを超える能力を欠いていてもよい（例えば、トレオスルファン）。例示的なミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞除去薬はブスルファン（その開示がミクログリアを除去するためのブスルファンの使用に関連するため、参照により組み込まれるＣａｐｏｔｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ １０９：１５０１８ （２０１２））、トレオスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、またはクロドロネートリポソームである。内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を枯渇させるための他の薬剤には、造血幹細胞により発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合断片に共有結合して抗体薬物複合体を形成することができる細胞毒素が含まれる。抗体薬物コンジュゲートに適した細胞毒素には、当技術分野で既知の中でも、ＤＮＡ挿入薬（例えば、アントラサイクリン）、有糸分裂紡錘体を破壊することができる薬剤（例えば、ビンカアルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、及びそれらの誘導体）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害薬（例えば、ａ－アマニチン及びその誘導体などのアマトキシン）、タンパク質生合成を妨害することができる薬剤（例えば、サポリン及びリシンＡ鎖などのｒＲＮＡ Ｎ－グリコシダーゼ活性を示す薬剤）が含まれる。除去はすべてのミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を排除してもよいし、またはミクログリア及び／または造血幹細胞と前駆細胞の数を少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上）減少させてもよい。ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を除去する１種または複数の薬剤を、本明細書に記載の細胞または組成物の投与の少なくとも１週間（例えば、１、２、３、４、５、または６週間以上）前に投与することができる。本明細書に記載の方法で投与された細胞は、除去されたミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞に取って代わることができ、脳室内、定位的、静脈内、または骨内注射後に、または骨髄移植後に、脳で再増殖し得る。静脈内、骨内、または骨髄移植により投与された細胞は、血液脳関門を通過して脳に入り、ミクログリアに分化し得る。脳に投与された細胞、例えば、脳室内または定位的に投与された細胞は、インビボでミクログリアに分化し得るか、エクスビボでミクログリアに分化し得る。
細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）または組成物の投与前に、内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を枯渇または除去することが有利であり得る。ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞は、化学薬剤（例えば、ブスルファン、トレオスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、またはクロドロネートリポソーム）、照射、またはそれらの組み合わせを使用することで除去することができる。細胞除去に使用される薬剤は、ＢＢＢ透過性であってもよいし（例えば、ブスルファン）、またはＢＢＢを超える能力を欠いていてもよい（例えば、トレオスルファン）。例示的なミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞除去薬はブスルファン（その開示がミクログリアを除去するためのブスルファンの使用に関連するため、参照により組み込まれるＣａｐｏｔｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ １０９：１５０１８ （２０１２））、トレオスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、またはクロドロネートリポソームである。内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を枯渇させるための他の薬剤には、造血幹細胞により発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合断片に共有結合して抗体薬物複合体を形成することができる細胞毒素が含まれる。抗体薬物コンジュゲートに適した細胞毒素には、当技術分野で既知の中でも、ＤＮＡ挿入薬（例えば、アントラサイクリン）、有糸分裂紡錘体を破壊することができる薬剤（例えば、ビンカアルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、及びそれらの誘導体）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害薬（例えば、ａ－アマニチン及びその誘導体などのアマトキシン）、タンパク質生合成を妨害することができる薬剤（例えば、サポリン及びリシンＡ鎖などのｒＲＮＡ Ｎ－グリコシダーゼ活性を示す薬剤）が含まれる。除去はすべてのミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を排除してもよいし、またはミクログリア及び／または造血幹細胞と前駆細胞の数を少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上）減少させてもよい。ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を除去する１種または複数の薬剤を、本明細書に記載の細胞または組成物の投与の少なくとも１週間（例えば、１、２、３、４、５、または６週間以上）前に投与することができる。本明細書に記載の方法で投与された細胞は、除去されたミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞に取って代わることができ、脳室内、定位的、静脈内、または骨内注射後に、または骨髄移植後に、脳で再増殖し得る。静脈内、骨内、または骨髄移植により投与された細胞は、血液脳関門を通過して脳に入り、ミクログリアに分化し得る。脳に投与された細胞、例えば、脳室内または定位的に投与された細胞は、インビボでミクログリアに分化し得るか、エクスビボでミクログリアに分化し得る。
【0608】
幹細胞の奪回
本明細書に記載の方法は、細胞の集団（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を対象に投与することを含み得る。これらの細胞は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するように改変されていない細胞であってもよい。これらの細胞が内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊していてもよい。本明細書に記載のとおりの前処置後に、細胞を全身的に（例えば、静脈内）、または骨髄移植により投与して、骨髄区画を再構成することができる。例えば、これらの細胞は幹細胞ニッチェに移動し、そのような部位で造血細胞系の細胞の量を例えば１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、３５ １７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％、またはそれ以上増加させることができる。投与を、本明細書に記載の組成物の投与前または後に行うことができる。
本明細書に記載の方法は、細胞の集団（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を対象に投与することを含み得る。これらの細胞は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を発現するように改変されていない細胞であってもよい。これらの細胞が内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊していてもよい。本明細書に記載のとおりの前処置後に、細胞を全身的に（例えば、静脈内）、または骨髄移植により投与して、骨髄区画を再構成することができる。例えば、これらの細胞は幹細胞ニッチェに移動し、そのような部位で造血細胞系の細胞の量を例えば１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、３５ １７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％、またはそれ以上増加させることができる。投与を、本明細書に記載の組成物の投与前または後に行うことができる。
【0609】
ドナー細胞の選択
一部の実施形態では、対象はドナーである。そのような場合、取り出された細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を（改変（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子の組み込み、及び／または内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの破壊）後に）対象に再注入することができ、その後、細胞は、造血組織に帰着し、生産的造血を確立することとなり、それにより、対象において欠陥または欠損している細胞株（例えば、ミクログリアの集団）を増殖または再増殖することができる。このシナリオでは、注入される細胞が対象に由来し、対象が発現するのと同じＨＬＡクラスｍｅ及びクラスＩＩ抗原を発現するので、移植された細胞は移植片拒絶を受ける可能性が最も低くなる。別法では、対象及びドナーは異なってもよい。一部の実施形態では、対象及びドナーは血縁があり、例えば、ＨＬＡマッチであってよい。本明細書に記載されているとおり、ＨＬＡマッチのドナー－レシピエントのペアは、移植レシピエント内の内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が外来造血幹細胞または前駆細胞を異物として認識する可能性が低く、したがって移植に対する免疫応答を開始する可能性が低いので、移植片拒絶のリスクが低い。例示的なＨＬＡマッチのドナー－レシピエントのペアは、家族内ドナー－レシピエントペア（例えば、兄弟ドナー－レシピエントペア）などの遺伝的に関連するドナー及びレシピエントである。一部の実施形態では、対象及びドナーはＨＬＡミスマッチであり、これは、特にＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－ＤＲに関して、少なくとも１つのＨＬＡ抗原がドナーとレシピエントとの間でミスマッチである場合に起こる。例えば、移植片拒絶の可能性を低下させるために、一方のハプロタイプがドナーとレシピエントとの間でマッチしてもよく、かつ他方はミスマッチであってもよい。
一部の実施形態では、対象はドナーである。そのような場合、取り出された細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を（改変（例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子の組み込み、及び／または内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの破壊）後に）対象に再注入することができ、その後、細胞は、造血組織に帰着し、生産的造血を確立することとなり、それにより、対象において欠陥または欠損している細胞株（例えば、ミクログリアの集団）を増殖または再増殖することができる。このシナリオでは、注入される細胞が対象に由来し、対象が発現するのと同じＨＬＡクラスｍｅ及びクラスＩＩ抗原を発現するので、移植された細胞は移植片拒絶を受ける可能性が最も低くなる。別法では、対象及びドナーは異なってもよい。一部の実施形態では、対象及びドナーは血縁があり、例えば、ＨＬＡマッチであってよい。本明細書に記載されているとおり、ＨＬＡマッチのドナー－レシピエントのペアは、移植レシピエント内の内因性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が外来造血幹細胞または前駆細胞を異物として認識する可能性が低く、したがって移植に対する免疫応答を開始する可能性が低いので、移植片拒絶のリスクが低い。例示的なＨＬＡマッチのドナー－レシピエントのペアは、家族内ドナー－レシピエントペア（例えば、兄弟ドナー－レシピエントペア）などの遺伝的に関連するドナー及びレシピエントである。一部の実施形態では、対象及びドナーはＨＬＡミスマッチであり、これは、特にＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－ＤＲに関して、少なくとも１つのＨＬＡ抗原がドナーとレシピエントとの間でミスマッチである場合に起こる。例えば、移植片拒絶の可能性を低下させるために、一方のハプロタイプがドナーとレシピエントとの間でマッチしてもよく、かつ他方はミスマッチであってもよい。
【0610】
薬学的組成物及び用量
本明細書に記載のとおりにＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ、例えば、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を処置するために対象に投与される細胞の数は、例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現レベル、対象、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、対象の年齢、体重、性別、処置を受ける疾患の重症度、及び対象が内因性ミクログリアを除去する薬剤で処置を受けたことがあるかどうかに依存し得る。投与される細胞の数は、例えば、１×１０６細胞／ｋｇ～１×１０１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上（例えば、１×１０７細胞／ｋｇ、１×１０８細胞／ｋｇ、１×１０９細胞／ｋｇ、１×１０１０細胞／ｋｇ、１×１０１１細胞／ｋｇ、１×１０１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上）であり得る。細胞を未分化状態で、またはミクログリアへの部分的もしくは完全な分化後に投与することができる。細胞の数を、前処置後に任意の適切な用量で投与することができる。用量の非限定的な例は、約１×１０５細胞／レシピエントｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ（例えば、約２×１０５細胞／ｋｇ～約９×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０５細胞／ｋｇ～約８×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０５細胞／ｋｇ～約７×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ～約６×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約９×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、及び約１×１０６細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ）である。追加の例示的な用量は、とりわけ約１×１０１０細胞／レシピエントｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ（例えば、約２×１０１０細胞／ｋｇ～約９×１０１１細胞／ｋｇ、約３×１０１０細胞／ｋｇ～約８×１０１１細胞／ｋｇ、約４×１０１０細胞／ｋｇ～約７×１０１１細胞／ｋｇ、約５×１０１０細胞／ｋｇ～約６×１０１１細胞／ｋｇ、約５×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約６×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約７×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約８×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約９×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、及び約１×１０１１細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ）である。
本明細書に記載のとおりにＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ、例えば、ＰＧＲＮ関連ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）を処置するために対象に投与される細胞の数は、例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現レベル、対象、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、対象の年齢、体重、性別、処置を受ける疾患の重症度、及び対象が内因性ミクログリアを除去する薬剤で処置を受けたことがあるかどうかに依存し得る。投与される細胞の数は、例えば、１×１０６細胞／ｋｇ～１×１０１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上（例えば、１×１０７細胞／ｋｇ、１×１０８細胞／ｋｇ、１×１０９細胞／ｋｇ、１×１０１０細胞／ｋｇ、１×１０１１細胞／ｋｇ、１×１０１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上）であり得る。細胞を未分化状態で、またはミクログリアへの部分的もしくは完全な分化後に投与することができる。細胞の数を、前処置後に任意の適切な用量で投与することができる。用量の非限定的な例は、約１×１０５細胞／レシピエントｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ（例えば、約２×１０５細胞／ｋｇ～約９×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０５細胞／ｋｇ～約８×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０５細胞／ｋｇ～約７×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ～約６×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約９×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、及び約１×１０６細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ）である。追加の例示的な用量は、とりわけ約１×１０１０細胞／レシピエントｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ（例えば、約２×１０１０細胞／ｋｇ～約９×１０１１細胞／ｋｇ、約３×１０１０細胞／ｋｇ～約８×１０１１細胞／ｋｇ、約４×１０１０細胞／ｋｇ～約７×１０１１細胞／ｋｇ、約５×１０１０細胞／ｋｇ～約６×１０１１細胞／ｋｇ、約５×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約６×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約７×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約８×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、約９×１０１０細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ、及び約１×１０１１細胞／ｋｇ～約１×１０１２細胞／ｋｇ）である。
【0611】
本明細書に記載の細胞及び組成物は、ＮＣＤにおける１つまたは複数の病理学的特徴を改善するために十分な量で投与することができる。本明細書に記載の細胞または組成物の投与は、対象の脳におけるＭ１ミクログリアの量と比較して、対象の脳におけるＭ２ミクログリアの量を増加させる、対象の脳における炎症誘発性サイトカインのレベルを低下させる、対象の脳における抗炎症性サイトカインのレベルを上昇させる、対象の認知能力を改善する、対象の運動機能を改善する、対象におけるα－シヌクレインタンパク質レベル、ｔａｕ陽性ニューロン封入体レベル、ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）陽性封入体レベル、サルコーマ融合（ＦＵＳ）陽性封入体レベル、及び／またはユビキチン陽性封入体レベルまたはその凝集を低減する、対象における脳組織の喪失を減少させる、視力を改善する、言語能力を改善する、及び／またはてんかん発作レベルの重症度または発生頻度を減少させることができる。Ｍ１及びＭ２ミクログリアの数を、処置前後の対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるサイトカイン、ケモカイン、ならびに他の炎症誘発性及び抗炎症性メディエーターのレベルを比較するためにＥＬＩＳＡを使用して、処置の前後に古典的活性化Ｍ１ミクログリアで高度に発現されるタンパク質であるトランスロケータータンパク質（ＴＳＰＯ）を、例えばＴＳＰＯ放射性リガンド１１Ｃ－（Ｒ）－ＰＫ１１１９５を使用して観察するためにＰＥＴイメージングを使用することにより、または標準的な技術、例えばウェスタンブロット分析、免疫組織化学分析、もしくは定量的ＲＴ－ＰＣＲを使用して組織サンプル中のＭ１及びＭ２関連遺伝子及びタンパク質のレベルを分析することにより評価することができる。認知と運動機能は、処置の前後に標準的な神経学的検査を使用して評価することができ、単量体及びオリゴマーのα－シヌクレインはＥＬＩＳＡを使用して血漿とＣＳＦで検出することができる。神経変性は、Ｆ１８－フルオロデオキシグルコースＰＥＴスキャンまたはＭＲＩスキャンを使用して評価することができる。対象を、処置に使用された投与経路に応じて、細胞の集団の投与から１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月またはそれ以上後に評価することができる。評価の結果に応じて、対象は追加の処置を受けることができる。
【0612】
キット
本明細書に記載の組成物を、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）の処置において使用するためのキットで提供することができる。組成物は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたはミクログリアにおいて発現し得る導入遺伝子）を含み、かつ任意選択で、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮが破壊されていてもよい本明細書に記載の宿主細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を含んでよい。細胞を、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、または別の凍結保護剤中で凍結保存することができる。前記キットは、医師などのキットのユーザーに本明細書に記載の方法を実施するように指示する添付文書を含むことができる。前記キットは任意選択で、組成物を投与するためのシリンジまたは他のデバイスを含んでもよい。
本明細書に記載の組成物を、ＮＣＤ（例えば、ＦＴＬＤまたはＮＣＬ）の処置において使用するためのキットで提供することができる。組成物は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたはミクログリアにおいて発現し得る導入遺伝子）を含み、かつ任意選択で、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮが破壊されていてもよい本明細書に記載の宿主細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を含んでよい。細胞を、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、または別の凍結保護剤中で凍結保存することができる。前記キットは、医師などのキットのユーザーに本明細書に記載の方法を実施するように指示する添付文書を含むことができる。前記キットは任意選択で、組成物を投与するためのシリンジまたは他のデバイスを含んでもよい。
【実施例】
【0613】
以下の実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法をどのように使用し、作製し、評価することができるかについての説明を当業者に提供するために記載するものであって、本開示を単に例示することを意図しており、本発明者らが本開示とみなす範囲を限定することを意図したものではない。
【0614】
実施例１．プログラニュリンまたはグラニュリンをコードする導入遺伝子を含む細胞の生成
本明細書に記載の組成物及び方法において使用するための、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞（例えば、万能性細胞、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、人工万能性幹細胞（ＩＳＰＣ）、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄前駆細胞（ＭＰＣ）、血液系統前駆細胞、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を作製するための例示的な方法は、形質導入によるものである。ＣＤ６８プロモーターなどのミクログリア特異的プロモーター、及びＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドを含むレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクター）を、当技術分野で公知の標準技術を使用して操作することができる。レトロウイルスベクターを操作した後、そのレトロウイルスを使用して細胞を形質導入すると、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現する細胞の集団を生成することができる。
本明細書に記載の組成物及び方法において使用するための、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）またはグラニュリン（ＧＲＮ）をコードする導入遺伝子を含む細胞（例えば、万能性細胞、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、人工万能性幹細胞（ＩＳＰＣ）、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄前駆細胞（ＭＰＣ）、血液系統前駆細胞、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を作製するための例示的な方法は、形質導入によるものである。ＣＤ６８プロモーターなどのミクログリア特異的プロモーター、及びＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドを含むレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター、アルファレトロウイルスベクター、またはガンマレトロウイルスベクター）を、当技術分野で公知の標準技術を使用して操作することができる。レトロウイルスベクターを操作した後、そのレトロウイルスを使用して細胞を形質導入すると、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現する細胞の集団を生成することができる。
【0615】
本明細書に記載の組成物及び方法で使用するための、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞を作製するための追加の例示的な方法は、トランスフェクションである。当技術分野で公知の分子生物学技術を使用して、ミクログリア特異的プロモーター（例えば、ＣＤ６８プロモーター）などのプロモーター、及びＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドＤＮＡを生成することができる。例えば、ＰＧＲＮ遺伝子を、当技術分野で公知のＰＣＲベースの技術を使用してヒト細胞株から増幅することができるか、またはＰＧＲＮまたはＧＲＮ遺伝子を、例えば、固相ポリヌクレオチド合成手順を使用して合成することができる。次いで、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ遺伝子及びプロモーターを、例えば、適切な制限エンドヌクレアーゼ媒介切断及びライゲーションプロトコルを使用して、目的のプラスミドにライゲートすることができる。プラスミドＤＮＡを操作した後、そのプラスミドを使用して、例えばエレクトロポレーションまたは本明細書に記載の別のトランスフェクション技術を使用して細胞をトランスフェクトし、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現する細胞の集団を生成することができる。本明細書に記載の両方の例示的な方法で、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質として発現させることができる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質は、血液脳関門を通過してのＰＧＲＮまたはＧＲＮ融合タンパク質の透過を可能にするように、ＡｐｏＥのＬＤＬＲｆ Ｒｂドメインを含むペプチド配列を含んでもよい。別法では、融合タンパク質は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮ及びグリコシル化非依存性リソソームターゲティング（ＧＩＬＴ）タグを含んでもよい。例示的なＧＩＬＴタグは、成熟ヒトＩＧＦ－ＩＩのアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有するヒトインスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ－ＩＩ）に由来するムテインである。これらのＩＧＦ－ＩＩムテインは、インスリン受容体についての天然に存在するヒトＩＧＦ－ＩＩの親和性と比較して、インスリン受容体についての結合活性が低下しており、フーリン切断に抵抗性があり、マンノース－６－リン酸非依存的な様式でヒトカチオン非依存性マンノース－６－リン酸受容体に結合する。ＧＩＬＴタグは、分泌型ＧＢＡ融合タンパク質のリソソームへの送達を容易にする。
【0616】
実施例２．神経認知障害に罹患している対象への、プログラニュリンまたはグラニュリンをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団の投与
本明細書に開示の方法によれば、当業医師は、例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）などの神経認知障害（ＮＣＤ）の症状を軽減または緩和するように、ヒト対象などの対象を処置することができる。この目的のために、当業医師は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたはミクログリアにおいて発現し得る導入遺伝子）を含む細胞の集団（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）をヒト対象に投与することができる。本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知の技術を使用して、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入またはトランスフェクトすることができる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を、例えば、全身的に（例えば、静脈内）、中枢神経系（ＣＮＳ）に直接的に（例えば、脳室内または定位的）、または骨髄に直接的に（例えば、骨内）対象に投与して、ＮＣＤを処置することができる。細胞を、複数の投与経路により、例えば静脈内及び脳室内で患者に投与することもできる。細胞を、１×１０６細胞／ｋｇ～１×１０１２細胞／ｋｇまたはそれ以上（例えば、１×１０７細胞／ｋｇ、１×１０８細胞／ｋｇ、１×１０９細胞／ｋｇ、１×１０１０細胞／ｋｇ、１×１０１１細胞／ｋｇ、１×１０１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上）などの治療有効量で投与する。
本明細書に開示の方法によれば、当業医師は、例えば、前頭側頭骨大葉変性（ＦＴＬＤ）または神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）などの神経認知障害（ＮＣＤ）の症状を軽減または緩和するように、ヒト対象などの対象を処置することができる。この目的のために、当業医師は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子（例えば、マクロファージまたはミクログリアにおいて発現し得る導入遺伝子）を含む細胞の集団（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）をヒト対象に投与することができる。本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知の技術を使用して、細胞を、ＰＧＲＮまたはＧＲＮを発現するようにエクスビボで形質導入またはトランスフェクトすることができる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を、例えば、全身的に（例えば、静脈内）、中枢神経系（ＣＮＳ）に直接的に（例えば、脳室内または定位的）、または骨髄に直接的に（例えば、骨内）対象に投与して、ＮＣＤを処置することができる。細胞を、複数の投与経路により、例えば静脈内及び脳室内で患者に投与することもできる。細胞を、１×１０６細胞／ｋｇ～１×１０１２細胞／ｋｇまたはそれ以上（例えば、１×１０７細胞／ｋｇ、１×１０８細胞／ｋｇ、１×１０９細胞／ｋｇ、１×１０１０細胞／ｋｇ、１×１０１１細胞／ｋｇ、１×１０１２細胞／ｋｇ、またはそれ以上）などの治療有効量で投与する。
【0617】
細胞の集団を対象に投与する前に、１つまたは複数の薬剤、例えば、ブスルファン、トレオスルファン、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ６４７、ＰＬＸ５６２２、及び／またはクロドロネートリポソームを対象に投与して、対象の内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を除去することもできる。照射など、当技術分野で周知の他の細胞除去方法を、単独で、または前述の薬剤の１つまたは複数と組み合わせて使用して、対象のミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を除去することができる。これらの薬剤及び／または処置は、当技術分野で公知のＰＥＴ画像化技術により評価した場合に、内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞を少なくとも５％（例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、またはそれ以上）除去し得る。ミクログリア除去後に、細胞の集団を対象に投与すると、細胞が脳で再増殖し、ミクログリアに分化する。細胞の集団を、例えば、ミクログリア除去から１週間から１ヶ月（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間）またはそれ以上後に対象に投与することができる。
【0618】
対象の内因性ミクログリア及び／または造血幹細胞及び前駆細胞の除去後に、細胞の集団を、対象に全身的に（例えば、静脈内）、または骨髄移植により投与して、骨髄区画を再構成することができる。細胞の数を、前処置後に任意の適切な用量で投与することができる。用量の非限定的な例は、約１×１０５細胞／レシピエントｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ（例えば、とりわけ約２×１０５細胞／ｋｇ～約９×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０５細胞／ｋｇ～約８×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０５細胞／ｋｇ～約７×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ～約６×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、約９×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ、または約１×１０６細胞／ｋｇ～約１×１０７細胞／ｋｇ）である。投与は、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の投与の前、または後に行うことができる。細胞の集団を、ＮＣＤの病理学的特徴の１つまたは複数を処置するために十分な量で対象に投与することができる。例えば、ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団を、対象の脳のＭ１ミクログリアの量と比較して、対象の脳のＭ２ミクログリアの量を増加させるために十分な量で投与することができる。相対的な増加は、当技術分野で公知の従来の技術を使用して、例えば処置の前後に対象のＣＳＦでＥＬＩＳＡを実行して、両方の時点でＭ１及びＭ２ミクログリアにより分泌される炎症誘発性及び抗炎症性サイトカインのレベルを評価することにより測定することができる。認知能力と運動機能の変化を評価するために、医師が標準的な神経学的検査を処置前後に行うこともできる。対象を、処置に使用される投与経路に応じて、細胞の集団の投与から例えば１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月またはそれ以上後に評価することもできる。ＰＧＲＮまたはＧＲＮをコードする導入遺伝子を含む細胞の集団の投与後の炎症誘発性サイトカインの減少、抗炎症性サイトカインの増加、認知または運動機能の改善、視力の改善、言語能力の改善、及び／またはてんかん発作の重症度または発生頻度の減少の所見は、処置がＮＣＤを成功裏に処置していることを示す。
【0619】
実施例３．神経認知障害に罹患している対象への投与前の細胞における内因性プログラニュリンまたはグラニュリンの破壊
本明細書に開示の方法のいずれかにおいて、投与される細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を、対象への投与前に内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊するように処理することができる。細胞の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する例示的な方法は、ＰＧＲＮ特異的ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ１２ａ）を使用して、１つまたは複数の二本鎖切断（ＤＳＢ）を誘導することである。ＤＳＢを修復するための非相同末端結合（ＮＨＥＪ）に続いて、新しく形成されたインデル変異の存在により、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの破壊が生じる。万能性幹細胞にＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子を組み込む前にゲノムＤＮＡを部位特異的に切断することにより内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊するための代替方法には、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）及び転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）の使用が含まれる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムとは異なり、これらの酵素は、特異的なターゲット配列に局在化するガイドポリヌクレオチドは含まないが、代わりに酵素内の内部ＤＮＡ結合ドメインに依存してターゲット特異性を媒介する。例示的な実施形態において、細胞は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を１０％またはそれ以上低下または減少させるために、ヌクレアーゼによりエクスビボで操作される（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）。
本明細書に開示の方法のいずれかにおいて、投与される細胞（例えば、万能性細胞、ＥＳＣ、ｉＰＳＣ、多能性細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＨＳＣ、ＭＰＣ、ＢＬＰＣ、単球、マクロファージ、ミクログリア前駆細胞、またはミクログリア）を、対象への投与前に内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊するように処理することができる。細胞の内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊する例示的な方法は、ＰＧＲＮ特異的ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ１２ａ）を使用して、１つまたは複数の二本鎖切断（ＤＳＢ）を誘導することである。ＤＳＢを修復するための非相同末端結合（ＮＨＥＪ）に続いて、新しく形成されたインデル変異の存在により、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの破壊が生じる。万能性幹細胞にＰＧＲＮまたはＧＲＮ導入遺伝子を組み込む前にゲノムＤＮＡを部位特異的に切断することにより内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮを破壊するための代替方法には、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）及び転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）の使用が含まれる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムとは異なり、これらの酵素は、特異的なターゲット配列に局在化するガイドポリヌクレオチドは含まないが、代わりに酵素内の内部ＤＮＡ結合ドメインに依存してターゲット特異性を媒介する。例示的な実施形態において、細胞は、内因性ＰＧＲＮまたはＧＲＮの発現を１０％またはそれ以上低下または減少させるために、ヌクレアーゼによりエクスビボで操作される（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）。
【0620】
実施例４．プログラニュリンを発現する哺乳動物細胞株の生成
レンチウイルスでコードされるコドン最適化ＰＧＲＮ導入遺伝子の、哺乳動物細胞株で安定発現する能力を評価するために、ヒト及びマウス細胞をインビトロで形質導入した。第１の実験では、ヒト２３９Ｔ細胞を、１０、５０、１００、または２００の感染多重度（ＭＯＩ）でヒトＰＧＲＮタンパク質（ＭＮＤ．ＧＲＮ）または緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ；ＭＮＤ．ＧＦＰ）をコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。別のセットの対照細胞は形質導入しなかった（ＮＴＣ）。デンシトメトリーを使用して、アクチンに対してＰＧＲＮレベルを定量化した（図１Ａ）。ヒトＰＧＲＮタンパク質に対して生じた抗体を使用してウェスタンブロットを行うと、ヒト細胞におけるヒトＰＧＲＮの安定発現が実証され、最高の発現はＭＯＩ２００で観察された（図１Ｂ）。
レンチウイルスでコードされるコドン最適化ＰＧＲＮ導入遺伝子の、哺乳動物細胞株で安定発現する能力を評価するために、ヒト及びマウス細胞をインビトロで形質導入した。第１の実験では、ヒト２３９Ｔ細胞を、１０、５０、１００、または２００の感染多重度（ＭＯＩ）でヒトＰＧＲＮタンパク質（ＭＮＤ．ＧＲＮ）または緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ；ＭＮＤ．ＧＦＰ）をコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。別のセットの対照細胞は形質導入しなかった（ＮＴＣ）。デンシトメトリーを使用して、アクチンに対してＰＧＲＮレベルを定量化した（図１Ａ）。ヒトＰＧＲＮタンパク質に対して生じた抗体を使用してウェスタンブロットを行うと、ヒト細胞におけるヒトＰＧＲＮの安定発現が実証され、最高の発現はＭＯＩ２００で観察された（図１Ｂ）。
【0621】
別の実験では、マウス系列陰性（Ｌｉｎ－）細胞を、ヒトＰＧＲＮタンパク質をコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクター（すなわち、ＭＮＤ．ＧＲＮベクター）で形質導入した。ＭＮＤ．ＧＲＮレンチウイルスベクターで形質導入されていない、または形質導入されたＬｉｎ－マウス細胞から生成した馴化培地を、ヒトＰＧＲＮタンパク質に対して生じた抗体を用いるウェスタンブロットを使用して分析すると、形質導入細胞による成長培地へのヒトＰＧＲＮタンパク質の放出を示した（図２）。
【0622】
別の実験では、４つの独立したラウンドの形質導入で、ヒト２３９Ｔ細胞を、ヒトＰＧＲＮタンパク質をコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。細胞溶解産物を、２３９Ｔ非形質導入細胞またはヒトＰＧＲＮをコードするレンチウイルスベクターで形質導入された細胞系から生成した。次いで、細胞溶解産物をＥｎｄｏＨまたはＰＮＧアーゼ酵素で酵素的に消化するか、または加熱し、ヒトＰＧＲＮタンパク質に対して生じる抗体を用いるウェスタンブロットを使用して分析した（図３）。ＥｎｄｏＨ及びＰＮＧアーゼによる酵素的消化は、形質導入細胞により産生されたヒトＰＧＲＮタンパク質がＮ結合グリコシル化されていることを示す。
【0623】
まとめると、上の結果は、ヒトＰＧＲＮタンパク質をコードする導入遺伝子を含むヒト及びマウス細胞のレンチウイルス媒介形質導入が、そうでなければＰＧＲＮ発現が存在しない細胞において、安定なＰＧＲＮ発現を達成することを示している。レンチウイルスによりコードされるＰＧＲＮでのマウス一次Ｌｉｎ－細胞の形質導入は、成長培地へのＰＧＲＮタンパク質の放出をもたらす。さらに、前記レンチウイルスベクターにより産生されるＰＧＲＮタンパク質は、Ｎ結合グリコシル化されている。これらの所見は、前記ＰＧＲＮコーディングベクターでのレンチウイルス形質導入がＰＧＲＮレベルを上昇させ、かつ造血細胞によるＰＧＲＮの放出を可能にすることを実証しており、それにより、ＰＧＲＮ遺伝子における変異に起因するか、または関係する疾患のための潜在的な治療アプローチを示唆している。
【0624】
他の実施形態
前記開示の様々な改変及び変形が、本開示の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本開示を、具体的な実施形態との関係において説明してきたが、特許請求の範囲に記載のとおりの本開示は、そのような具体的な実施形態に過度に限定されるべきでないことは理解されるべきである。実際に、当業者に明らかである、本開示を実施するための記載の様式の様々な改変が本開示の範囲内であることが意図されている。他の実施形態は、特許請求の範囲に見出される。
前記開示の様々な改変及び変形が、本開示の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本開示を、具体的な実施形態との関係において説明してきたが、特許請求の範囲に記載のとおりの本開示は、そのような具体的な実施形態に過度に限定されるべきでないことは理解されるべきである。実際に、当業者に明らかである、本開示を実施するための記載の様式の様々な改変が本開示の範囲内であることが意図されている。他の実施形態は、特許請求の範囲に見出される。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【配列表】
【国際調査報告】