特表 2022-525594 ＨＥＲ２を標的とする免疫結合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-05-18

(54)【発明の名称】ＨＥＲ２を標的とする免疫結合体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20220511BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220511BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20220511BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220511BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20220511BHJP

   A61K 47/58 20170101ALI20220511BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20220511BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220511BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20220511BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

A61K39/395 T

A61K39/39

A61P35/00

A61K47/54

A61K47/58

A61K47/68

A61P43/00 121

A61K31/519

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021555172

(86)(22)【出願日】2020-03-13

(85)【翻訳文提出日】2021-10-27

(86)【国際出願番号】 US2020022645

(87)【国際公開番号】W WO2020190725

(87)【国際公開日】2020-09-24

(31)【優先権主張番号】62/819,356

(32)【優先日】2019-03-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521086291

【氏名又は名称】ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド

(71)【出願人】

【識別番号】503115205

【氏名又は名称】ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100151301

【弁理士】

【氏名又は名称】戸崎 富哉

(72)【発明者】

【氏名】アッカーマン、シェリー エリン

(72)【発明者】

【氏名】アロンソ、マイケル エヌ．

(72)【発明者】

【氏名】ジャクソン、デイヴィッド ワイ．

(72)【発明者】

【氏名】リー、アーサー

(72)【発明者】

【氏名】エングルマン、エドガー ジョージ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB11

4C076CC27

4C076EE59

4C076FF70

4C085AA14

4C085AA38

4C085BB01

4C085CC23

4C085DD51

4C085EE01

4C085EE06

4C085FF17

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB05

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC41

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA51

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA50

(57)【要約】

本発明は、式：

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、下付き文字ｎは、約２から約２５の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）の免疫結合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はさらに、該免疫結合体を含む組成物および該免疫結合体を用いて癌を治療する方法を提供する。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式：

【化1】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、下付き文字ｎは、約２から約２５の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

下付き文字ｒが１から６の整数である、請求項１の免疫結合体。

【請求項3】

下付き文字ｒが１から４の整数である、請求項１の免疫結合体。

【請求項4】

下付き文字ｒが１である、請求項１の免疫結合体。

【請求項5】

下付き文字ｒが２である、請求項１の免疫結合体。

【請求項6】

下付き文字ｒが３である、請求項１の免疫結合体。

【請求項7】

下付き文字ｒが４である、請求項１の免疫結合体。

【請求項8】

下付き文字ｎが６から１２の整数である、請求項１～７のいずれか一項の免疫結合体。

【請求項9】

下付き文字ｎが８から１２の整数である、請求項８の免疫結合体。

【請求項10】

免疫結合体が式：

【化2】

【化3】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１の免疫結合体。

【請求項11】

免疫結合体が式：

【化4】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１の免疫結合体。

【請求項12】

免疫結合体が式：

【化5】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１の免疫結合体。

【請求項13】

免疫結合体が式：

【化6】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１の免疫結合体。

【請求項14】

免疫結合体が式：

【化7】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１の免疫結合体。

【請求項15】

「Ａｂ」がトラスツズマブ、そのバイオシミラー、またはそのバイオベターである、請求項１～１４のいずれか一項の免疫結合体。

【請求項16】

「Ａｂ」がペルツズマブ、そのバイオシミラー、またはそのバイオベターである、請求項１～１４のいずれか一項の免疫結合体。

【請求項17】

「Ａｂ」がトラスツズマブである、請求項１５の免疫結合体。

【請求項18】

「Ａｂ」がトラスツズマブのバイオシミラーである、請求項１５の免疫結合体。

【請求項19】

請求項１～１８のいずれか一項に記載の複数の免疫結合体を含む組成物。

【請求項20】

アジュバント対抗体構築物の平均比が約０．０１から約１０である、請求項１９の組成物。

【請求項21】

アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約１０である、請求項２０の組成物。

【請求項22】

アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約６である、請求項２１の組成物。

【請求項23】

アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約４である、請求項２２の組成物。

【請求項24】

アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約３である、請求項２３の組成物。

【請求項25】

治療有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫結合体または請求項１９～２４のいずれか一項に記載の組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療する方法。

【請求項26】

癌がＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニズムによって誘発される炎症誘発性反応の影響を受けやすい、請求項２５の方法。

【請求項27】

癌がＨＥＲ２発現癌である、請求項２５または２６の方法。

【請求項28】

癌が乳癌である、請求項２５～２７のいずれか一項の方法。

【請求項29】

乳癌がＨＥＲ２過剰発現乳癌である、請求項２８の方法。

【請求項30】

癌が胃癌である、請求項２５～２７のいずれか一項の方法。

【請求項31】

胃癌がＨＥＲ２過剰発現胃癌である、請求項３０の方法。

【請求項32】

癌が胃食道接合部腺癌である、請求項２５～２７、３０、または３１のいずれか一項の方法。

【請求項33】

癌を治療するための、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫結合体または請求項１９～２４のいずれか一項に記載の組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本特許出願は、２０１９年３月１５日付で出願された米国仮特許出願番号６２／８１９，３５６号の優先権を主張し、かかる仮出願は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子的に提出された資料の参照による組み込み
本明細書と同時に提出され、以下のように２０２０年３月１０日に作成された「７４７２３５＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と名付けられた１つの２８，６０２バイトのＡＳＣＩＩ（Ｔｅｘｔ）ファイルとして特定されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
腫瘍増殖には免疫回避を促進する突然変異の獲得が必要であることが現在では十分に認識されている。それでも、腫瘍形成は、エクスビボ刺激後に宿主免疫系により容易に認識される、突然変異した抗原、すなわちネオアンチゲンの蓄積をもたらす。免疫系がネオアンチゲンを認識することができない理由およびしくみは、解明され始めている。Ｃａｒｍｉらによるパイオニア的研究（Ｎａｔｕｒｅ、５２１：９９－１０４（２０１５））は、抗体－腫瘍免疫複合体を介して、活性化した樹状細胞にネオアンチゲンを送達することによって、免疫無知が克服され得ることを示した。これらの研究では、腫瘍内注射による腫瘍結合抗体と樹状細胞アジュバントとの同時送達は、強固な抗腫瘍免疫をもたらした。アクセス不可能な腫瘍に到達し、および／または癌患者および他の対象のための治療選択肢を拡張するために、抗体および樹状細胞アジュバントの送達のための新規組成物および方法が必要とされている。本発明は、そのような組成物および方法を提供する。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、式：

【0005】

【化1】

【0006】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、下付き文字ｎは、約２から約２５の整数であり、および「Ａｂ」は、蛋白質ヒト上皮増殖因子受容体２（「ＨＥＲ２」）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］の免疫結合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0007】

本発明は、本明細書において記載される複数の免疫結合体を含む組成物を提供する。

【0008】

本発明は、治療有効量の本明細書において記載される免疫結合体または組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌を治療する方法を提供する。
図面のいくつかのビューの簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1A】図１Ａは、ＨＣＣ１９５４ヒト乳管癌腫瘍細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。共刺激分子ＣＤ４０（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）の蛍光強度の中央値を、フローサイトメトリーによって測定し、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について示す。

【図1B】図１Ｂは、ＨＣＣ１９５４ヒト乳管癌腫瘍細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。共刺激分子ＣＤ８６（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）の蛍光強度の中央値を、フローサイトメトリーによって測定し、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について示す。

【図1C】図１Ｃは、ＨＣＣ１９５４ヒト乳管癌腫瘍細胞を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。ＴＮＦα分泌を、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について、サイトカインビーズアレイ（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）によって測定した。

【図1D】図１Ｄは、ＪＩＭＴ－１ヒト乳管癌腫瘍細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。共刺激分子ＣＤ４０（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）の蛍光強度の中央値を、フローサイトメトリーによって測定し、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について示す。

【図1E】図１Ｅは、ＪＩＭＴ－１ヒト乳管癌腫瘍細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。共刺激分子ＣＤ８６（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）の蛍光強度の中央値を、フローサイトメトリーによって測定し、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について示す。

【図1F】図１Ｆは、ＪＩＭＴ－１ヒト乳管癌腫瘍細胞を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。ＴＮＦα分泌を、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について、サイトカインビーズアレイ（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）によって測定した。

【図1G】図１Ｇは、ＣＯＬＯ ２０５ヒト結腸腺癌細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。共刺激分子ＣＤ４０（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）の蛍光強度の中央値を、フローサイトメトリーによって測定し、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について示す。

【図1H】図１Ｈは、ＣＯＬＯ ２０５ヒト結腸腺癌細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。共刺激分子ＣＤ８６（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）の蛍光強度の中央値を、フローサイトメトリーによって測定し、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について示す。

【図1I】図１Ｉは、ＣＯＬＯ ２０５ヒト結腸腺癌細胞株を使用した、骨髄性ＡＰＣ腫瘍共培養における骨髄活性化に対する免疫結合体Ａの効果を示す。ＴＮＦα分泌を、トラスツズマブ（点線、円）、トラスツズマブ＋化合物７（破線、三角形）または免疫結合体Ａ（実線、四角）について、サイトカインビーズアレイ（生存可能なＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ－ＤＲ＋上でゲートされた細胞）によって測定した。

【図2A】図２Ａは、免疫結合体ＢがＣＤ１４のダウンレギュレーションによって示される骨髄分化を誘発することを示す。

【図2B】図２Ｂは、免疫結合体ＢがＣＤ４０のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。

【図2C】図２Ｃは、免疫結合体ＢがＣＤ８６のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。

【図2D】図２Ｄは、免疫結合体Ｂとの１８時間のインキュベーション後の骨髄細胞からのＴＮＦα分泌を示す。

【図3A】図３Ａは、免疫結合体ＣがＣＤ１４のダウンレギュレーションによって示される骨髄分化を誘発することを示す。

【図3B】図３Ｂは、免疫結合体ＣがＣＤ４０のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。

【図3C】図３Ｃは、免疫結合体ＣがＣＤ８６のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。

【図3D】図３Ｄは、免疫結合体Ｃとの１８時間のインキュベーション後の骨髄細胞からのＴＮＦα分泌を示す。

【発明を実施するための形態】

【0010】

発明の詳細な説明
本発明は、式：

【0011】

【化2】

【0012】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、下付き文字ｎは、約２から約２５の整数であり、および「Ａｂ」は、ヒト上皮増殖因子受容体２（「ＨＥＲ２」）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0013】

１つ以上の式：

【0014】

【化3】

【0015】

のアジュバントに連結されたＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物を含む、本発明の抗体アジュバント免疫結合体は、従来の抗体結合体よりも優れた薬理学的特性を示す。ポリエチレングリコールベースのリンカー（「ＰＥＧリンカー」）は、免疫結合体の適切な精製および単離を提供し、１つ以上のアジュバント部分および抗体構築物の機能を維持し、免疫結合体の理想的な薬物動態（「ＰＫ」）特性を生み出すための好ましいリンカーである。本発明の抗体アジュバント免疫結合体のさらなる実施態様および利点は、本明細書における説明から明らかになるであろう。

【0016】

定義
本明細書において使用するとき、用語「免疫結合体」は、リンカーを介してアジュバント部分に共有結合で結合された抗体構築物を指す。

【0017】

本明細書において使用するとき、語句「抗体構築物」は、（ｉ）抗原結合ドメインおよび（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体または融合蛋白質を指す。

【0018】

本明細書において使用するとき、用語「抗体」は、ＨＥＲ２に特異的に結合しそれを認識する、免疫グロブリン遺伝子またはその断片に由来する抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含むポリペプチドを指す。

【0019】

例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一の対のポリペプチド鎖で構成されており、各対は、ジスルフィド結合によって結合した１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する。各鎖は、構造ドメインで構成され、これらは、免疫グロブリンドメインと呼ばれる。これらのドメインは、サイズおよび機能によって異なるカテゴリー、例えば、軽鎖および重鎖上の可変ドメインまたは領域（それぞれ、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ）、並びに軽鎖および重鎖上の定常ドメインまたは領域（それぞれ、Ｃ_ＬおよびＣ_Ｈ）に分類される。各鎖のＮ末端は、約１００から１１０個以上のアミノ酸の可変領域を定義付け、抗原認識に主に関与する、すなわち、抗原結合ドメインであるパラトープと呼ばれる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、これは次に免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥをそれぞれ定義する。ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖で構成される約１５０ｋＤａの大きな分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスのγ重鎖および約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖、すなわち四量体四次構造を含有する。２つの重鎖は、互いに、そしてそれぞれジスルフィド結合によって軽鎖に連結されている。得られる四量体は、一緒になってＹ字状形状を形成する２つの同一の半体を有する。枝の各端部は、同一の抗原結合ドメインを含有する。ヒトにおいては、血清中のそれらの豊富さの順に命名される４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）が存在する（すなわち、ＩｇＧ１が最も豊富である）。典型的には、抗体の抗原結合ドメインは、癌細胞への結合の特異性および親和性において最も重要であろう。

【0020】

抗体は、インタクトな免疫グロブリンとして、またはさまざまなペプチダーゼでの分解によって産生される多数の十分に特徴付けられた断片として存在し得る。すなわち、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合の下で抗体を分解して、それ自体がジスルフィド結合によってＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１に結合された軽鎖であるＦ_ａｂの二量体であるＦ（_ａｂ）’_２を産生する。Ｆ（_ａｂ）’_２は、穏和な条件下で還元され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合が切断され、それによって、Ｆ（_ａｂ）’_２二量体がＦ_ａｂ’モノマーに変換されてもよい。Ｆ_ａｂ’モノマーは、本質的にヒンジ領域の部分を有するＦ_ａｂである（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，ｅｄｉｔｏｒ，７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２）を参照されたい）。さまざまな抗体断片は、インタクトな抗体の分解に関連して定義されるが、そのような断片は、化学的にまたは組み換えＤＮＡ方法を使用してのいずれかで、改めて合成されてもよい。すなわち、本明細書において使用するとき、抗体という用語はまた、全抗体の修飾により産生された抗体断片、または組み換えＤＮＡ方法を使用して改めて合成された抗体断片（例えば、単鎖Ｆｖ）、若しくはファージディスプレイライブラリーを使用して同定された抗体断片（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２－５５４（１９９０）を参照されたい）のいずれも含む。

【0021】

用語「抗体」は、具体的には、所望の生物活性を示す、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を含む。

【0022】

本明細書において使用するとき、用語「エピトープ」は、抗原結合ドメインが結合する（すなわち、抗原結合ドメインのパラトープで）抗原の任意の抗原決定基またはエピトープ決定基を意味する。抗原決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団からなり、通常、特定の三次元構造特性、並びに特定の電荷特性を有する。

【0023】

本明細書において使用するとき、「ＨＥＲ２」は、蛋白質ヒト上皮増殖因子受容体２（配列番号１）、または配列番号１と最少で約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくはそれ以上の配列同一性を有する抗原を指す。

【0024】

配列のパーセント（％）同一性は、例えば、１００×［（同一位置）／最小（ＴＧ_Ａ，ＴＧ_Ｂ）］（式中、ＴＧ_ＡおよびＴＧ_Ｂは、ＴＧ_ＡおよびＴＧ_Ｂを最小化するアラインメントにおけるペプチド配列ＡおよびＢにおける残基および内部ギャップ位置の数の合計である）として計算することができる。例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２４４：３３２－３５０（１９９４）を参照されたい。

【0025】

本明細書において使用するとき、用語「アジュバント」は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。語句「アジュバント部分」は、例えば、リンカーを介して、本明細書において記載される抗体構築物に共有結合で結合された、アジュバントを指す。アジュバント部分は、免疫結合体を対象に投与した後、抗体構築物に結合されたまま、または抗体構築物からの切断（例えば、酵素的切断）後に、免疫応答を誘発することができる。

【0026】

本明細書において使用するとき、用語「Ｔｏｌｌ様受容体」および「ＴＬＲ」は、病原体関連分子パターンを認識し、自然免疫における主要なシグナル伝達要素として作用する、高度に保存された哺乳類蛋白質の１つのファミリーの任意のメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンリッチ反復を有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む、特徴的構造を共有する。

【0027】

用語「Ｔｏｌｌ様受容体７」および「ＴＬＲ７」は、公的に利用可能なＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９９０２６、またはネズミＴＬＲ７ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７６と、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。

【0028】

用語「Ｔｏｌｌ様受容体８」および「ＴＬＲ８」は、公的に利用可能なＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９５４４１、またはネズミＴＬＲ８ポリペプチドについてのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７７と、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。

【0029】

「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８）に直接または間接的に結合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する物質である。ＴＬＲシグナル伝達におけるいずれの検出可能な差も、アゴニストがＴＬＲを刺激または活性化することを示すことができる。シグナル伝達の差異は、例えば、標的遺伝子の発現における、シグナル伝達成分のリン酸化における、核内因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）などの下流要素の細胞内局在における、ある成分（ＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）などの）と他の蛋白質若しくは細胞内構造との関連性における、またはキナーゼ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）などの）などの成分の生化学的活性における変化として、明白にされ得る。

【0030】

本明細書において使用するとき、「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベターを指す。

【0031】

本明細書において使用するとき、用語「バイオシミラー」は、以前に承認された抗体構築物（例えば、トラスツズマブ）と同様の活性特性を有する承認された抗体構築物を指す。

【0032】

本明細書において使用するとき、用語「バイオベター」は、以前に承認された抗体構築物（例えば、トラスツズマブ）の改良である承認された抗体構築物を指す。バイオベターは、以前に承認された抗体構築物に対して、１つ以上の修飾（例えば、変更されたグリカンプロファイル、または固有のエピトープ）を有することができる。

【0033】

本明細書において使用するとき、用語「アミノ酸」は、ペプチド、ポリペプチド、または蛋白質に組み込まれ得る任意のモノマー単位を指す。アミノ酸は、天然に生じるα－アミノ酸およびそれらの立体異性体、並びに非天然（非天然に生じる）アミノ酸およびそれらの立体異性体を含む。与えられたアミノ酸の「立体異性体」は、同じ分子式および分子内結合を有するが、結合および原子の異なる三次元配置を有する異性体（例えば、Ｌ－アミノ酸および対応するＤ－アミノ酸）を指す。アミノ酸は、グリコシル化（例えば、Ｎ－連結グリカン、Ｏ－連結グリカン、ホスホグリカン、Ｃ－連結グリカン、またはグリピエーション）または脱グリコシル化され得る。

【0034】

天然に生じるアミノ酸は、遺伝コードによってコードされたアミノ酸、並びに後に修飾されるそれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、およびＯ－ホスホセリンである。天然に生じるα－アミノ酸は、限定されることなく、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、およびそれらの組合せを含む。天然に生じるα－アミノ酸の立体異性体は、限定されることなく、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－スレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、およびそれらの組合せを含む。

【0035】

非天然（非天然に生じる）アミノ酸は、限定されることなく、天然に生じるアミノ酸と同様の様式で機能する、Ｌ－またはＤ－配置のいずれかである、アミノ酸類似体、アミノ酸模倣体、合成アミノ酸、Ｎ－置換グリシン、およびＮ－メチルアミノ酸を含む。例えば、「アミノ酸類似体」は、天然に生じるアミノ酸と同じ基本化学構造（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基に結合している炭素）を有するが、修飾された側鎖基または修飾されたペプチド骨格を有する非天然アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、およびメチオニンメチルスルホニウムであり得る。「アミノ酸模倣体」は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に生じるアミノ酸と同様の様式で機能する化学的化合物を指す。

【0036】

アミノ酸は、本明細書において、一般に知られている３文字記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかによって参照されてもよい。

【0037】

本明細書において使用するとき、用語「リンカー」は、化合物または材料中の２つ以上の部分を共有結合で結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、免疫結合体中の抗体構築物にアジュバント部分を共有結合で結合するために役立つことができる。

【0038】

本明細書において使用するとき、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、軽減；寛解；症状の減少、または症状、傷害、病的状態、若しくは状態を患者にとってより忍容可能なものにすること；症状の進行速度の低減；症状または状態の頻度または持続時間の軽減；または、いくつかの状況では、症状の発症の予防；などの、任意の客観的または主観的パラメータを含む、傷害、病的状態、状態（例えば、癌）、または症状（例えば、認知障害）の治療または改善における成功の任意の兆候を指す。症状の治療または改善は、例えば、身体検査の結果を含む、任意の客観的または主観的パラメータに基づくことができる。

【0039】

用語「癌」、「新生物」、および「腫瘍」は、本明細書においては、細胞が細胞増殖に対する制御の有意な喪失に特徴付けされる異常な増殖表現型を示すような、自律的で無秩序な増殖を示す細胞を指すのに使用される。本発明の文脈における検出、分析、および／または治療の対象の細胞は、癌細胞（例えば、癌を有する個体からの癌細胞）、悪性癌細胞、前転移性癌細胞、転移性癌細胞、および非転移性癌細胞を含む。事実上全ての組織の癌が知られている。語句「癌の負担」は、対象における癌細胞の量または癌の体積を指す。従って、癌の負担を減らすことは、対象における癌細胞の数または癌細胞の体積を減らすことを指す。本明細書において使用される用語「癌細胞」は、癌細胞である（例えば、個体が治療され得る任意の癌からの、例えば、癌を有する個体から単離された）、または癌細胞に由来する、例えば、癌細胞のクローン、任意の細胞を指す。例えば、癌細胞は、確立された癌細胞株に由来することができる、癌を有する個体から単離された初代細胞であり得る、癌を有する個体から単離された初代細胞からの子孫細胞であり得る、等々。いくつかの実施態様においては、この用語はまた、細胞内部分、細胞膜部分、または癌細胞の細胞溶解物などの癌細胞の一部を指すことができる。癌腫、肉腫、神経膠芽腫、黒色腫、リンパ腫、および骨髄腫などの固形腫瘍、ならびに白血病などの循環癌を含む、多くの種類の癌が当業者に知られている。

【0040】

本明細書において使用するとき、用語「癌」は、最小限の残存病変を含み、原発性および転移性の両方の腫瘍を含む、固形腫瘍癌（例えば、肺、前立腺、乳房、胃、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、神経膠芽腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌腫、黒色腫、および神経内分泌）および液体癌（例えば、血液癌）；癌腫；軟部組織腫瘍；肉腫；奇形腫；黒色腫；白血病；リンパ腫；および脳癌を含むがこれらに限定されない任意の形態の癌を含む。ＨＥＲ２を発現するいずれの癌も、本対象の方法および組成物によって治療されるのに適した癌である。本明細書において使用するとき、「ＨＥＲ２発現」は、細胞の表面上にＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、細胞の表面上に約２０，０００から約５０，０００のＨＥＲ２受容体を有し得る。本明細書において使用するとき、「ＨＥＲ２過剰発現」は、約５０，０００を超えるＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、対応する非癌細胞と比較して、２、５、１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、または１，０００，０００倍の数のＨＥＲ２受容体の細胞（例えば、約１００万または２００万のＨＥＲ２受容体）。ＨＥＲ２は、乳癌の約２５％から約３０％において過剰発現していると見積もられている。

【0041】

癌腫は、上皮組織に起因する悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外面を覆い、内部の空洞を裏打ちし、腺組織の裏打ちを形成する。癌腫の例は、腺癌腫（乳房、膵臓、肺、前立腺、胃、胃食道接合部、および結腸の癌などの腺（分泌）細胞で始まる癌）副腎皮質癌腫、肝細胞癌腫；腎細胞癌腫；卵巣癌腫；上皮内癌腫；乳管癌腫；乳房の癌腫；基底細胞癌腫；扁平上皮癌腫；移行上皮癌腫；結腸癌腫；鼻咽頭癌腫；多房性嚢胞性腎細胞癌腫；オート麦細胞癌腫；大細胞肺癌腫；小細胞肺癌腫；非小細胞肺癌腫；などを含むが、これらに限定されない。癌腫は、前立腺、膵臓、結腸、脳（通常は二次転移として）、肺、乳房、および皮膚に見られるかもしれない。

【0042】

軟部組織腫瘍は、結合組織に由来するまれな腫瘍の非常に多様なグループである。軟部組織腫瘍の例は、胞巣状軟部肉腫；血管腫様線維性組織球腫；コンドロミオキシド線維腫；骨格軟骨肉腫；骨格外粘液型軟骨肉腫；明細胞肉腫；線維形成性の小さな円形細胞腫瘍；隆起性皮膚線維肉腫；子宮内膜間質腫瘍；ユーイング肉腫；線維腫症（デスモイド）；線維肉腫、乳児；消化管間質腫瘍；骨巨細胞腫瘍；腱鞘巨細胞腫；炎症性筋線維芽細胞腫瘍；子宮平滑筋腫；平滑筋肉腫；脂肪芽細胞腫；典型的な脂肪腫；紡錘細胞または多形性脂肪腫；非定型脂肪肉腫；軟骨脂肪腫；高分化型脂肪肉腫；粘液型/円形細胞脂肪肉腫；多形性脂肪肉腫；粘液様悪性線維性組織球腫；高悪性度の悪性線維性組織球腫；粘液線維肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍；中皮腫；神経芽細胞腫；骨軟骨腫；骨肉腫；原始神経外胚葉性腫瘍；胞巣状横紋筋肉腫；胚性横紋筋肉腫；良性または悪性神経鞘腫；滑膜肉腫；エヴァンの腫瘍；結節性筋膜炎；デスモイド型線維腫症；孤立性線維性腫瘍；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；血管肉腫；類上皮血管内皮腫；腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）；色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）；線維性骨異形成症；粘液線維肉腫；線維肉腫；滑膜肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍；神経線維腫；軟部組織の多形腺腫；並びに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞/内皮細胞、および神経鞘細胞に由来する新生物を含むが、これらに限定されない。

【0043】

肉腫は、間葉系起源の細胞、例えば、軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、または他の結合若しくは支持組織を含む骨または体の軟部組織に発生するまれなタイプの癌である。異なるタイプの肉腫は、癌がどこで形成するかに基づく。例えば、骨肉腫は骨で形成し、脂肪肉腫は脂肪で形成し、横紋筋肉腫は筋肉で形成する。肉腫の例は、アスキン腫瘍；肉腫ボトリオイデス；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；悪性血管内皮腫；悪性神経鞘腫；骨肉腫；および軟部組織肉腫（例えば、肺胞軟部肉腫；血管肉腫；嚢胞肉腫フィロデス皮膚線維肉腫隆起（ＤＦＳＰ）；デスモイド腫瘍；線維形成性小円形細胞腫瘍；類上皮肉腫；骨格外軟骨肉腫；骨格外骨肉腫；線維肉腫；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；血管周囲細胞腫；血管肉腫（より一般的には「血管肉腫」と呼ばれる）；カポジ肉腫；平滑筋肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；神経線維肉腫；滑膜肉腫；および未分化多形性肉腫）を含むが、これらに限定されない。

【0044】

奇形腫は、例えば、髪、筋肉および骨を含む、いくつかの異なるタイプの組織（例えば、内胚葉、中胚葉、および外胚葉の３つの胚葉のいずれかおよび／または全てに由来する組織を含み得る）を含有するかもしれない胚細胞腫瘍のタイプである。奇形腫は、女性の卵巣、男性の睾丸、および子供の尾骨で最も頻繁に生じる。

【0045】

黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを作る細胞）で始まる癌の一形態である。黒色腫は、ほくろ（皮膚黒色腫）で始まるかもしれないが、目や腸などの他の色素性組織でも始まり得る。

【0046】

白血病は、骨髄などの造血組織で始まり、多数の異常な血球が産生されて血流に入ることを引き起こす癌である。例えば、白血病は、通常は血流中で成熟する骨髄由来細胞に起因し得る。白血病は、病気がいかに速く進展および進行するか（例えば：急性対慢性）並びに影響を受ける白血球の種類（例えば：骨髄性対リンパ性）によって名付けられている。骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病は、骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病は、リンパ芽球性白血病またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞は、腫らみ得るリンパ節に集まるかもしれない。白血病の例は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない。

【0047】

リンパ腫は、免疫系の細胞で始まる癌である。例えば、リンパ腫は、通常はリンパ系で成熟する骨髄由来細胞に起因し得る。リンパ腫には、２つの基本的なカテゴリーが存在する。リンパ腫の１つのカテゴリーは、リードシュテルンベルク細胞と呼ばれるタイプの細胞の存在によって特徴付けられるホジキンリンパ腫（ＨＬ）である。現在、６つのタイプのＨＬが認識されている。ホジキンリンパ腫の例は、結節性硬化症の古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞性ＣＨＬ、リンパ球枯渇ＣＨＬ、リンパ球に富むＣＨＬ、および結節性リンパ球優位型ＨＬを含む。

【0048】

リンパ腫の他のカテゴリーは、免疫系細胞の癌の大きく多様なグループを含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。非ホジキンリンパ腫は、さらに、緩徐な（ゆっくり増殖する）過程を有する癌と、攻撃的な（速く増殖する）過程を有する癌に分けることができる。現在、６１のタイプのＮＨＬが認識されている。非ホジキンリンパ腫の例は、エイズ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小非切断細胞リンパ腫）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマデルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、治療関連Ｔ細胞リンパ腫、およびウォルデンストロームマクログロブリン血症を含むが、これらに限定されない。

【0049】

脳腫瘍は、脳組織の任意の癌を含む。脳腫瘍の例は、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、および前庭性シュワン腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）を含むが、これらに限定されない。

【0050】

癌の「病的状態」は、患者の幸福を損なう全ての現象を含む。これは、限定されることなく、異常または制御不能な細胞増殖、転移、隣接細胞の正常な機能への干渉、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、炎症性または免疫学的応答の抑制または悪化、新生物、前癌状態、悪性腫瘍、およびリンパ節などの周囲または離れた組織若しくは器官の浸潤を含む。

【0051】

本明細書において使用するとき、語句「癌再発」および「腫瘍再発」、並びにそれらの文法的変形は、癌の診断後の腫瘍性または癌性細胞のさらなる増殖を指す。特に、癌性組織においてさらなる癌性細胞増殖が生じるとき、再発が生じるかもしれない。同様に、「腫瘍の拡散」は、腫瘍の細胞が局所的なまたは離れた組織および器官に広がるときに生じ、従って、腫瘍の拡散は、腫瘍の転移を含む。「腫瘍浸潤」は、腫瘍の増殖が局所的に拡散し、圧縮、破壊、または正常な器官機能の阻害によって関与する組織の機能を損なうときに生じる。

【0052】

本明細書において使用するとき、用語「転移」は、元の癌性腫瘍の器官に直接繋がっていない器官または身体部分における癌性腫瘍の増殖を指す。転移は、元の癌性腫瘍の器官に直接繋がっていない器官または身体部分における検出不可能な量の癌性細胞の存在である微小転移を含むと理解されるであろう。転移はまた、元の腫瘍部位からの癌細胞の離脱、並びに身体の他の部分への癌細胞の移動および／または浸潤などのプロセスのいくつかのステップとして定義され得る。

【0053】

本明細書において使用するとき、語句「有効量」および「治療有効量」は、そのために投与される治療効果を生む免疫結合体などの物質の用量を指す。正確な用量は、治療の目的に依存し、既知の技術を用いて当業者により確認可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３、１９９２）；Ｌｌｏｙｄ、Ｔｈｅ Ａｒｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ、Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１１^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００６）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２）を参照されたい）。

【0054】

本明細書において使用するとき、用語「受容者」、「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」は、交換可能に使用され、診断、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、または治療（ｔｈｅｒａｐｙ）が望まれる任意の哺乳動物対象（例えば、ヒト）を指す。治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の目的での「哺乳動物」は、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｉｍａｌ）および家畜（ｆａｒｍ ａｎｉｍａｌ）、並びに犬、馬、猫、牛、羊、山羊、豚、ラクダなどの動物園、スポーツ、またはペット動物を含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。特定の実施態様においては、哺乳動物はヒトである。

【0055】

この発明の文脈における語句「相乗的アジュバント」または「相乗的組合せ」は、それらが組み合わされて、単独で投与されるそれぞれと比較して免疫に対する相乗効果を誘発する、受容体アゴニスト、サイトカイン、およびアジュバントポリペプチドなどの２つの免疫モジュレーターの組合せを含む。特に、本明細書において開示される免疫結合体は、本請求の範囲のアジュバントおよび抗体構築物の相乗的な組合せを含む。投与時のこれらの相乗的組合せは、例えば、抗体構築物またはアジュバントが他の部分の非存在下で投与されるときと比較して、免疫に対するより大きな効果を誘発する。さらに、抗体構築物またはアジュバントのいずれかが単独で投与されるときと比較して、減少した量の免疫結合体が投与されるかもしれない（抗体構築物の総数または免疫結合体の一部として投与されるアジュバントの総数によって測定される）。

【0056】

本明細書において使用するとき、用語「投与する」は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病巣内、鼻腔内、若しくは皮下投与、経口投与、坐剤としての投与、局所的接触、髄腔内投与、または遅延放出用装置、例えば、ミニ浸透圧ポンプの対象への移植を指す。

【0057】

数値を修飾するために本明細書において使用される用語「約」および「周辺」は、数値を取り囲む近い範囲を示す。すなわち、「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」または「Ｘ周辺」は、０．９Ｘから１．１Ｘ、例えば０．９５Ｘから１．０５Ｘまたは０．９９Ｘから１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」または「Ｘ周辺」への言及は、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、および１．０５Ｘを具体的に示す。従って、「約Ｘ」および「Ｘ周辺」は、例えば「０．９８Ｘ」のクレーム限定に対する書面による説明のサポートを教示および提供することが意図される。

【0058】

抗体アジュバント結合体
本発明は、式：

【0059】

【化4】

【0060】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、下付き文字ｎは、約２から約２５（例えば、約２から約１６、約６から約２５、約６から約１６、約８から約２５、約８から約１６、約６から約１２、または約８から約１２）の整数であり、および「Ａｂ」は、ヒト上皮増殖因子受容体２（「ＨＥＲ２」）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。「Ａｂ」は、例えば、トラスツズマブおよびペルツズマブなどの、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する任意の適切な抗体構築物であり得る。特定の実施態様においては、「Ａｂ」は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベターである。例えば、「Ａｂ」は、ＭＹＬ－１４０１０、ＡＢＰ ９８０、ＢＣＤ－０２２、ＣＴ－Ｐ６、ＥＧ１２０１４、ＨＤ２０１、ＯＮＳ－１０５０、ＰＦ－０５２８００１４、オントゥルザント（Ｏｎｔｒｕｚａｎｔ）、サイピューティング（Ｓａｉｐｕｔｉｎｇ）、ハーツマ（Ｈｅｒｚｕｍａ）、またはＨＬＸ０２であり得る。好ましい実施態様においては、「Ａｂ」は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）である。

【0061】

一般に、本発明の免疫結合体は、下付き文字「ｒ」で示されるように、各アジュバントがＰＥＧリンカーを介して抗体構築物に連結された約１から約１０のアジュバントを含む。ＰＥＧリンカーを介して抗体構築物に連結されたアジュバントのそれぞれは、抗体構築物のリジン残基のアミンで抗体構築物に接合されている。一つの実施態様においては、ＰＥＧリンカーを介して抗体構築物に連結された単一のアジュバントが存在するように、ｒは、１である。いくつかの実施態様においては、ｒは、約２から約１０（例えば、約２から約９、約３から約９、約４から約９、約５から約９、約６から約９、約３から約８、約３から約７、約３から約６、約４から約８、約４から約７、約４から約６、約５から約６、約１から約６、約１から約４、約２から約４、または約１から約３）である。従って、免疫結合体は、ＰＥＧリンカーを介して連結された１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアジュバントを有することができる（すなわち、下付き文字「ｒ」が当該数字であり得る）。好ましい実施態様においては、免疫結合体は、ＰＥＧリンカーを介して連結された１、２、３、または４個のアジュバントを有する（すなわち、下付き文字「ｒ」が当該数字であり得る）。抗体構築物に対する望ましいアジュバントの比（すなわち、下付き文字「ｒ」の値）は、治療の所望の効果に応じて当業者によって決定され得る。

【0062】

一般に、本発明の免疫結合体は、下付き文字「ｎ」で示されるように、約２から約２５（例えば、約２から約１６、約６から約２５、約６から約１６、約８から約２５、約８から約１６、約６から約１２、または約８から約１２）のエチレングリコール単位を含む。従って、本発明の免疫結合体は、少なくとも２つのエチレングリコール基（例えば、少なくとも３つのエチレングリコール基、少なくとも４つのエチレングリコール基、少なくとも５つのエチレングリコール基、少なくとも６つのエチレングリコール基、少なくとも７つのエチレングリコール基、少なくとも８つのエチレングリコール基、少なくとも９つのエチレングリコール基、または少なくとも１０個のエチレングリコール基）を含み得る。従って、免疫結合体は、約２つから約２５個のエチレングリコール単位、例えば、約６つから約２５個のエチレングリコール単位、約６つから約１６個のエチレングリコール単位、約８つから約２５個のエチレングリコール単位、約８つから約１６個のエチレングリコール単位、約８つから約１２個のエチレングリコール単位、または約８つから約１２個のエチレングリコール単位を含み得る。特定の実施態様においては、免疫結合体は、ジ（エチレングリコール）基、トリ（エチレングリコール）基、テトラ（エチレングリコール）基、５つのエチレングリコール基、６つのエチレングリコール基、７つのエチレングリコール基、８つのエチレングリコール基、９つのエチレングリコール基、１０個のエチレングリコール基、１１個のエチレングリコール基、１２個のエチレングリコール基、１３個のエチレングリコール基、１４個のエチレングリコール基、１５個のエチレングリコール基、１６個のエチレングリコール基、２４個のエチレングリコール基、または２５個のエチレングリコール基を含む。好ましい実施態様においては、免疫結合体は、６つのエチレングリコール基、８つのエチレングリコール基、１０個のエチレングリコール基、または１２個のエチレングリコール基（すなわち、約６つのエチレングリコール基から約１２個のエチレングリコール基）を含む。

【0063】

ＰＥＧリンカーは、抗体構築物のリジン残基のアミンを介してＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、およびそれらのバイオベター）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物に連結され得る。従って、本発明の免疫結合体は、以下の式：

【0064】

【化5】

【0065】

（式中、

【0066】

【化6】

【0067】

は、抗体構築物のリジン残基を表す残基

【0068】

【化7】

【0069】

を有する、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物であり、ここで、

【0070】

【化8】

【0071】

は、リンカーへの接続点を表す）によって表され得る。

【0072】

アジュバントは、ＰＥＧリンカーを介して抗体構築物の任意の適切な残基に連結され得るが、望ましくは、抗体構築物の任意のリジン残基に連結される。例えば、アジュバントは、ＰＥＧリンカーを介して、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用してナンバリングされる、抗体構築物の軽鎖のＫ１０３、Ｋ１０７、Ｋ１４９、Ｋ１６９、Ｋ１８３、および／またはＫ１８８のうちの１つ以上に連結され得る。あるいは、またはさらに、アジュバントは、ＰＥＧリンカーを介して、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用してナンバリングされる、抗体構築物の重鎖のＫ３０、Ｋ４３、Ｋ６５、Ｋ７６、Ｋ１３６、Ｋ２１６、Ｋ２１７、Ｋ２２５、Ｋ２９３、Ｋ３２０、Ｋ３２３、Ｋ３３７、Ｋ３９５、および／またはＫ４１７のうちの１つ以上に連結され得る。一般に、アジュバントは主に、ＰＥＧリンカーを介して、抗体構築物の軽鎖のＫ１０７若しくはＫ１８８、または抗体構築物の重鎖のＫ３０、Ｋ４３、Ｋ６５、若しくはＫ４１７で連結される。特定の実施態様においては、アジュバントは、ＰＥＧリンカーを介して、抗体構築物の軽鎖のＫ１８８、および任意に抗体構築物の１つ以上の他のリジン残基で連結される。

【0073】

本明細書において記載される免疫結合体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の予想外に増加した活性化応答を提供することができる。この増加した活性化は、インビトロまたはインビボで検出することができる。いくつかの実施態様においては、増加したＡＰＣ活性化は、特定のレベルのＡＰＣ活性化を達成するための短縮された時間の形で検出することができる。例えば、インビトロアッセイにおいて、％ＡＰＣ活性化は、それ以外は同一の濃度および条件下で、非結合抗体構築物およびアジュバントの混合物でのＡＰＣ活性化と同じまたは同様のパーセンテージを得るのに必要な時間の約１％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％以内で、免疫結合体を用いて同等の用量で達成することができる。いくつかの実施態様においては、免疫結合体は、短縮された時間でＡＰＣ（例えば、樹状細胞）および／またはＮＫ細胞を活性化することができる。例えば、いくつかの実施態様においては、非結合抗体構築物およびアジュバントの混合物は、２、３、４、５、１－５、２－５、３－５、または４－７日の混合物とのインキュベーション後にＡＰＣ（例えば、樹状細胞）および／若しくはＮＫ細胞を活性化し、並びに／または樹状細胞の分化を誘導することができるところ、対照的に、本明細書において記載される免疫結合体は、それ以外は同一の濃度および条件下で、４時間、８時間、１２時間、１６時間、または１日以内に活性化および／または分化を誘導することができる。あるいは、増加したＡＰＣ活性化は、ＡＰＣ活性化のある量（例えば、パーセントＡＰＣ）、レベル（例えば、好適なマーカーのアップレギュレーションのレベルによって測定される）または速度（例えば、活性化に必要なインキュベーション時間によって検出される）を達成するために必要な免疫結合体の低下した濃度の形で検出することができる。

【0074】

いくつかの実施態様においては、本発明の免疫結合体は、それ以外は同一の条件下で、非結合抗体構築物およびアジュバントの混合物と比較して、約５％を超える活性の増加を提供する。他の実施態様においては、本発明の免疫結合体は、それ以外は同一の条件下で、非結合抗体構築物およびアジュバントの混合物と比較して、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、または約７０％を超える活性の増加を提供する。活性の増加は、任意の好適な手段によって評価することができ、それらの多くは、当業者に知られており、骨髄活性化、サイトカイン分泌による評価、またはそれらの組合せを含み得る。

【0075】

いくつかの実施態様においては、本発明は、式：

【0076】

【化9】

【0077】

【化10】

【0078】

（式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、「Ａｂ」は、ヒト上皮増殖因子受容体２（「ＨＥＲ２」）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である）の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0079】

特定の実施態様においては、本発明は、式：

【0080】

【化11】

【0081】

【化12】

【0082】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、「Ａｂ」は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、およびそれらのバイオベターである。例えば、「Ａｂ」は、ＭＹＬ－１４０１０、ＡＢＰ ９８０、ＢＣＤ－０２２、ＣＴ－Ｐ６、ＥＧ１２０１４、ＨＤ２０１、ＯＮＳ－１０５０、ＰＦ－０５２８００１４、オントゥルザント（Ｏｎｔｒｕｚａｎｔ）、サイピューティング（Ｓａｉｐｕｔｉｎｇ）、ハーツマ（Ｈｅｒｚｕｍａ）、またはＨＬＸ０２である］の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0083】

好ましい実施態様においては、本発明は、式：

【0084】

：

【化13】

【0085】

【化14】

【0086】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、「Ａｂ」は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）である］の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0087】

アジュバント
本発明の免疫結合体は、式：

【0088】

【化15】

【0089】

（式中、破線

【0090】

【化16】

【0091】

は、アジュバント部分のリンカーへの接合点を表す）のアジュバント部分を含む。

【0092】

本明細書において記載されるアジュバント部分は、ＴＬＲアゴニストである。

【0093】

抗原結合ドメインおよびＦｃドメイン
本発明の免疫結合体は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを含む抗体構築物を含む。いくつかの実施態様においては、抗体構築物は、Ｆｃドメインをさらに含む。特定の実施態様においては、抗体構築物は、抗体である。特定の実施態様においては、抗体構築物は、融合蛋白質である。

【0094】

抗原結合ドメインは、一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）であり得る。合成ペプチドを介して軽抗体鎖のＶドメインに連結した抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを含む短縮型Ｆａｂ断片である一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）は、通常の組換えＤＮＡ技術を使用して生成できる。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製できる。

【0095】

本発明の一つの実施態様は、ＨＥＲ２（配列番号１）を特異的に認識してそれに結合する抗体構築物または抗原結合ドメインを提供する。抗体構築物または抗原結合ドメインは、抗ＨＥＲ２抗体の抗原結合ドメインの１つ以上の可変領域（例えば、２つの可変領域）を含み得、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。

【0096】

本発明の一つの実施態様は、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインを提供する。これに関して、抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（第１の可変領域のＣＤＲ１）、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（第１の可変領域のＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（第１の可変領域のＣＤＲ３）を含む第１の可変領域、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（第２の可変領域のＣＤＲ１）、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（第２の可変領域のＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（第２の可変領域のＣＤＲ３）を含む第２の可変領域を含み得る。これに関して、抗体構築物は、（ｉ）配列番号２～４の全て、（ｉｉ）配列番号５～７の全て、または（ｉｉｉ）配列番号２～７の全てを含むことができる。好ましくは、抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号２～７の全てを含む。

【0097】

本発明の一つの実施態様においては、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインは、トラスツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。これに関して、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列（第１の可変領域のフレームワーク領域（「ＦＲ」）１）、配列番号９のアミノ酸配列（第１の可変領域のＦＲ２）、配列番号１０のアミノ酸配列（第１の可変領域のＦＲ３）、配列番号１１のアミノ酸配列（第１の可変領域のＦＲ４）、配列番号１２のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ２）、配列番号１４のアミノ酸配列（第２の可変領域領域のＦＲ３）、および配列番号１５のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ４）をさらに含む。これに関して、抗体構築物または抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号２～４および８～１１の全て、（ｉｉ）配列番号５～７および１２～１５の全て；または（ｉｉｉ）配列番号２～７および８～１５の全てを含むことができる。

【0098】

本発明の一つの実施態様は、トラスツズマブの一方または両方の可変領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインを提供する。これに関して、第１の可変領域は、配列番号１６を含み得る。第２の可変領域は、配列番号１７を含み得る。従って、本発明の一つの実施態様においては、抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号１６、配列番号１７、または配列番号１６および１７の両方を含む。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号１６～１７の両方を含む。

【0099】

本発明の一つの実施態様は、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインを提供する。これに関して、抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（第１の可変領域のＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（第１の可変領域のＣＤＲ２）、および配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（第１の可変領域のＣＤＲ３）を含む第１の可変領域、並びに配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（第２の可変領域のＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（第２の可変領域のＣＤＲ２）、および配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（第２の可変領域のＣＤＲ３）を含む第２の可変領域を含み得る。これに関して、抗体構築物は、（ｉ）配列番号１８～２０の全て、（ｉｉ）配列番号２１～２３の全て、または（ｉｉｉ）配列番号１８～２３の全てを含むことができる。好ましくは、抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号１８～２３の全てを含む。

【0100】

本発明の一つの実施態様においては、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインは、ペルツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。これに関して、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列（第１の可変領域のフレームワーク領域（「ＦＲ」）１）、配列番号２５のアミノ酸配列（第１の可変領域のＦＲ２）、配列番号２６のアミノ酸配列（第１の可変領域のＦＲ３）、配列番号２７のアミノ酸配列（第１の可変領域のＦＲ４）、配列番号２８のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ１）、配列番号２９のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ２）、配列番号３０のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ３）、および配列番号３１のアミノ酸配列（第２の可変領域のＦＲ４）をさらに含む。これに関して、抗体構築物または抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号１８～２０および２４～２６の全て、（ｉｉ）配列番号２１～２３および２７～３１の全て；または（ｉｉｉ）配列番号１８～２１および２４～３１の全てを含むことができる。

【0101】

本発明の一つの実施態様は、ペルツズマブの一方または両方の可変領域を含む抗体構築物または抗原結合ドメインを提供する。これに関して、第１の可変領域は、配列番号３２を含み得る。第２の可変領域は、配列番号３３を含み得る。従って、本発明の一つの実施態様においては、抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号３２、配列番号３３、または配列番号３２および３３の両方を含む。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号３２～３３の両方を含む。

【0102】

本発明の実施態様の範囲に含まれるのは、本明細書において記載される抗体構築物または抗原結合ドメインの機能的変異体である。本明細書において使用される用語「機能的変異体」は、親抗体構築物または抗原結合ドメインと実質的または有意な配列同一性または類似性を有する抗原結合ドメインを有する抗体構築物を指し、この機能的変異体は、それがその変異体である抗体構築物または抗原結合ドメインの生物学的活性を保持する。機能的変異体は、例えば、ＨＥＲ２を発現する標的細胞を親抗体構築物または抗原結合ドメインと同様の程度、同じ程度に、またはより高い程度で認識する能力を保持する、本明細書において記載される抗体構築物または抗原結合ドメイン（親抗体構築物または抗原結合ドメイン）の変異体を包含する。

【0103】

抗体構築物または抗原結合ドメインに関して、機能的変異体は、例えば、アミノ酸配列において少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上、抗体構築物または抗原結合ドメインと同一であり得る。

【0104】

機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体構築物または抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含み得る。あるいは、またはさらに、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体構築物または抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含み得る。この場合において、非保存的アミノ酸置換が機能的変異体の生物学的活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性が親抗体構築物または抗原結合ドメインと比較して増加しているように、機能的変異体の生物学的活性を増強し得る。

【0105】

本発明の抗体構築物または抗原結合ドメインのアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は、当技術分野において知られており、特定の物理的および／または化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されているアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸の代わりに置換された酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸の代わりに置換された非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌ等）、別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸の代わりに置換された塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ等）、極性側鎖を有する別の非荷電アミノ酸の代わりに置換された極性側鎖を有する非荷電アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）、ベータ分岐側鎖を有する別のアミノ酸の代わりに置換されたベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、およびＶａｌ）、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸の代わりに置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、およびＴｙｒ）等であり得る。

【0106】

抗体構築物または抗原結合ドメインは、他の成分、例えば、他のアミノ酸が抗体構築物または抗原結合ドメインの機能的変異体の生物学的活性を実質的に変化させないように、本質的に本明細書において記載される特定のアミノ酸配列または複数の配列からなり得る。

【0107】

本発明の実施態様の抗体構築物および抗原結合ドメイン（機能的部分および機能的変異体を含む）は、任意の長さであり得る、すなわち、抗体構築物（またはその機能的部分若しくは機能的変異体）がそれらの生物学的活性、例えば、ＨＥＲ２に特異的に結合する、哺乳動物における癌細胞を検出する、または哺乳動物における癌を治療若しくは予防する能力等を保持する限り、任意の数のアミノ酸を含み得る。例えば、抗体構築物または抗原結合ドメインは、長さにおいて５０、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、またはそれ以上のアミノ酸などの、約５０から約５，０００アミノ酸長であり得る。

【0108】

本発明の実施態様の抗体構築物および抗原結合ドメイン（本発明の機能的部分および機能的変異体を含む）は、１つ以上の天然に生じるアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含むことができる。そのような合成アミノ酸は、当技術分野において知られており、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、アルファ－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－およびトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、ベータ－フェニルセリン ベータ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、アルファ－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、アルファ－アミノシクロペンタンカルボン酸、アルファ－アミノシクロヘキサンカルボン酸、アルファ－アミノシクロヘプタンカルボン酸、アルファ－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、アルファ，ガンマ－ジアミノ酪酸、アルファ，ベータ－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、およびアルファ－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンを含む。

【0109】

本発明の実施態様の抗体構築物（機能的部分および機能的変異体を含む）は、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ－アシル化、例えば、ジスルフィド架橋を介して環化するか、若しくは酸付加塩に変換するか、および／または任意に二量体化若しくは重合し得る。

【0110】

いくつかの実施態様においては、抗体構築物は、定義されたサブクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、またはＩｇＡ_２）のモノクローナル抗体である。抗体の組合せが使用される場合、抗体は同じサブクラス由来または異なるサブクラス由来であり得る。典型的には、抗体構築物はＩｇＧ_１抗体である。異なる相対比率での異なるサブクラスのさまざまな組合せが、当業者によって得られ得る。いくつかの実施態様においては、特定のサブクラスまたは異なるサブクラスの特定の組合せは、癌治療または腫瘍サイズの低減に特に効果的であり得る。従って、本発明のいくつかの実施態様は、抗体がモノクローナル抗体である免疫結合体を提供する。いくつかの実施態様においては、モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。

【0111】

いくつかの実施態様においては、抗体構築物または抗原結合ドメインは、非癌細胞上の対応するＨＥＲ２抗原よりも高い親和性で、癌または免疫細胞上のＨＥＲ２に結合する。例えば、抗体構築物または抗原結合ドメインは、非癌上の対応する野生型ＨＥＲ２の認識と比較して、癌または免疫細胞上に見い出される多型を含有するＨＥＲ２を優先的に認識するかもしれない。いくつかの実施態様においては、抗体構築物または抗原結合ドメインは、非癌細胞よりも高い活性で癌細胞に結合する。例えば、癌細胞は、より高密度のＨＥＲ２を発現することができ、それにより、多価抗体の癌細胞へのより高い親和性の結合を提供する。

【0112】

いくつかの実施態様においては、抗体構築物または抗原結合ドメインは、非癌抗原に有意には結合しない（例えば、抗体は、ＨＥＲ２よりも少なくとも１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、または１，０００，０００倍低い親和性（高いＫｄ）で１つ以上の非癌抗原に結合する）。いくつかの実施態様においては、対応する非癌細胞は、過剰増殖性またはいずれにしても癌性ではない同じ組織または起源の細胞である。ＨＥＲ２は、他の細胞と比較して癌細胞に特異的である必要はなくまたは癌細胞中で豊富である必要さえない（例えば、ＨＥＲ２は他の細胞によって発現され得る）。すなわち、語句「癌細胞の抗原に特異的に結合する抗体構築物」において、用語「特異的に」は、抗体構築物の特異性を指し、その特定の細胞型におけるＨＥＲ２の存在の独自性を指すのではない。

【0113】

修飾されたＦｃ領域
いくつかの実施態様においては、免疫結合体中の抗体は、修飾されたＦｃ領域を含有し、ここで、修飾は、１つ以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。

【0114】

用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体には３つの主要なクラス：（１）ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、（２）ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、および（３）ＩｇＥに結合するＦｃεＲがある。ＦｃγＲファミリーは、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）などのいくつかのメンバーを含む。Ｆｃγ受容体は、ＩｇＧに対するその親和性において異なり、またＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）に対して異なる親和性を有する。

【0115】

いくつかの実施態様においては、免疫結合体中の抗体（例えば、少なくとも２つのアジュバント部分に接合された抗体）は、Ｆｃ領域において１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、および／または置換）を含有し、これにより、Ｆｃ領域の突然変異を欠く天然抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、および／またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））への調節された結合（例えば、結合の増加または結合の減少）をもたらす。いくつかの実施態様においては、免疫結合体中の抗体は、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢへの結合を低減させるＦｃ領域における１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、および／または置換）を含有する。いくつかの実施態様においては、免疫結合体中の抗体は、Ｆｃ領域の突然変異を欠く天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、および／またはＦｃＲγＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への同じ結合を維持または結合を増加させながら、抗体のＦｃγＲＩＩＢへの結合を低減させる抗体のＦｃ領域における１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、および／または置換）を含有する。いくつかの実施態様においては、免疫結合体中の抗体は、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢへの結合を増加させるＦｃ領域における１つ以上の修飾を含有する。

【0116】

いくつかの実施態様においては、調節された結合は、抗体の天然Ｆｃ領域と比較した抗体のＦｃ領域における突然変異によって提供される。突然変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組合せにおいてあり得る。「天然Ｆｃ領域」は、「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、天然に見い出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるか、または天然抗体（例えば、トラスツズマブ）に見い出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、および天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、並びにそれらの天然に生じる変異体を含む。天然配列Ｆｃは、Ｆｃのさまざまなアロタイプを含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，１（４）：３３２－３３８（２００９）を参照されたい）。

【0117】

いくつかの実施態様においては、１つ以上のＦｃ受容体への調節された結合をもたらすＦｃ領域の突然変異は、以下の突然変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、およびＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）の１つ以上、並びに／または以下のアミノ酸：Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８およびＡ３３０での１つ以上の突然変異を含み得る。Ｆｃ受容体結合を調節するための追加のＦｃ領域修飾は、例えば、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３５０号並びに米国特許第７，４１６，７２６号および第５，６２４，８２１号に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0118】

いくつかの実施態様においては、免疫結合体の抗体のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域の変更されたグリコシル化パターンを有するように修飾される。

【0119】

ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメインのＡｓｎ２９７残基でグリコシル化されている。このＮ－結合オリゴ糖は、コアの七糖であるＮ－アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）から構成されている。エンドグリコシダーゼまたはＰＮＧａｓｅ Ｆでの七糖の除去は、活性化させるＦｃγＲに対する抗体結合親和性を大幅に減少させ、エフェクター機能の低下につながり得る抗体Ｆｃ領域のコンフォメーション変化につながることが知られている。コア七糖は、しばしばガラクトース、二等分ＧｌｃＮＡｃ、フコース、またはシアル酸で修飾され、これらは、活性化させるおよび抑制性ＦｃγＲへのＦｃの結合に異なる影響を与える。さらに、α２，６－シアル化はインビボで抗炎症活性を増強するが、一方で脱フコシル化はＦｃγＲＩＩＩａ結合の改善並びに抗体依存性細胞毒性および抗体依存性食作用の１０倍の増加につながることが実証されてきた。従って、特定のグリコシル化パターンは、炎症性エフェクター機能を制御するために使用され得る。

【0120】

いくつかの実施態様においては、グリコシル化パターンを変更するための修飾は、突然変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換。いくつかの実施態様においては、Ａｓｎ２９７はグルタミンに変異している（Ｎ２９７Ｑ）。ＦｃγＲ調節シグナル伝達を調節する抗体で免疫応答を制御する方法は、例えば、米国特許第７，４１６，７２６号並びに米国特許出願公開第２００７／００１４７９５号および第２００８／０２８６８１９号に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0121】

いくつかの実施態様においては、免疫結合体の抗体は、非天然に生じるグリコシル化パターンを有する操作されたＦａｂ領域を含有するように修飾されている。例えば、ハイブリドーマは、ＦｃＲγＩＩＩａ結合およびエフェクター機能の増加を可能にする特定の突然変異を有するアフコシル化ｍＡｂ、脱シアル化ｍＡｂまたは脱グリコシル化Ｆｃを分泌するように遺伝子操作され得る。いくつかの実施態様においては、免疫結合体の抗体は、アフコシル化されるように操作されている。

【0122】

いくつかの実施態様においては、免疫結合体中の抗体構築物の全Ｆｃ領域が、抗体のＦａｂ領域が非天然Ｆｃ領域に接合されるように、異なるＦｃ領域と交換されている。例えば、通常はＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むトラスツズマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＡに接合され得、または通常はＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、またはＩｇＧ２に接合され得る。いくつかの実施態様においては、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、記載されたＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４ Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ突然変異などの１つ以上のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施態様においては、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、ＦｃＲへのＦｃ結合を調節する、本明細書において記載される１つ以上のアミノ酸修飾を含む。

【0123】

いくつかの実施態様においては、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を変化させない。他の実施態様においては、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を増加させる。

【0124】

リンカー
本明細書において開示される免疫結合体のいくつかは、同じアジュバント、同じ抗体構築物、および異なるＰＥＧリンカー長（例えば、ＰＥＧ６からＰＥＧ１２対ＰＥＧ２またはＰＥＧ２５）を含む免疫結合体よりも精製が容易であり得る。いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、本明細書において記載されるＰＥＧ６からＰＥＧ１２の免疫結合体は、精製プロセスを促進するために疎水性および親水性の良好なバランスを提供すると考えられる。本明細書において開示される免疫結合体のいくつかは、同じアジュバント、同じ抗体構築物、および異なるＰＥＧリンカー長（例えば、ＰＥＧ６からＰＥＧ１２対ＰＥＧ２またはＰＥＧ２５）を含む免疫結合体よりも可溶化が容易であり得る。いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、本明細書において記載されるＰＥＧ６からＰＥＧ１２の免疫結合体は、溶解性を維持し、生物学的条件下で効果的であるために疎水性および親水性の良好なバランスを提供すると考えられる。ＰＥＧ６からＰＥＧ１２の免疫結合体は、容易に可溶化されるのに十分な親水性を維持しながら、容易に精製および／または単離されるのに十分な疎水性を提供するのに望ましい数のＰＥＧユニットを含むとも考えられる。好ましい実施態様においては、免疫結合体は、ＰＥＧ１０リンカーを含む。

【0125】

免疫結合体組成物
本発明は、本明細書において記載される複数の免疫結合体および任意にそのための担体、例えば、薬学的に許容される担体を含む、組成物、例えば、薬学的に許容される組成物または製剤を提供する。免疫結合体は、組成物において同じであり得、または異なりもし得、すなわち、組成物は、抗体構築物上の同じ位置に連結された同じ数のアジュバントを有する免疫複合体、および／または抗体構築物上の異なる位置に連結された同じ数のアジュバントを有する、抗体構築物上の同じ位置に連結された異なる数のアジュバントを有する、若しくは抗体構築物上の異なる位置に連結された異なる数のアジュバントを有する免疫複合体を含み得る。

【0126】

本明細書において記載されるように、アジュバントは、ＰＥＧリンカーを介して、抗体構築物の任意の適切な残基、望ましくは抗体構築物のリジン残基に連結され得る。すなわち、例えば、組成物は、複数の免疫結合体を含むことができ、ここで、各免疫結合体について、１つ以上のアジュバントは、ＰＥＧリンカーを介して、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用してナンバリングされる、抗体構築物の軽鎖のＫ１０３、Ｋ１０７、Ｋ１４９、Ｋ１６９、Ｋ１８３、およびＫ１８８、並びに抗体構築物の重鎖のＫ３０、Ｋ４３、Ｋ６５、Ｋ７６、Ｋ１３６、Ｋ２１６、Ｋ２１７、Ｋ２２５、Ｋ２９３、Ｋ３２０、Ｋ３２３、Ｋ３３７、Ｋ３９５、およびＫ４１７から選択される１つ以上のリジン残基に連結される。いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、組成物は一般に、好ましい結合部位の所与のプロファイルを有する平均的なアジュバント対抗体構築物比が存在するような結合部位の分布を有する。いくつかの実施態様においては、リジン連結の合計の少なくとも約４０％（例えば、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％）は、抗体構築物の軽鎖のＫ１８８で発生する。

【0127】

本発明の免疫結合体の組成物は、約０．４、０．６、０．８、１、１．２、１．４、１．６、１．８、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７、７．２、７．４、７．６、７．８、８、８．２、８．４、８．６、８．８、９、９．２、９．４、９．６、９．８、若しくは１０、または前述の値の任意の２つによって囲まれた範囲内の平均アジュバント対抗体構築物比を有することができる。当業者は、抗体構築物に結合されたアジュバントの数が、本発明の複数の免疫結合体を含む組成物において免疫結合体毎に変化し得、すなわち、アジュバント対抗体構築物（例えば、抗体）比を平均として測定できることを認識するであろう。アジュバント対抗体構築物（例えば、抗体）比は、その多くは当技術分野において知られている任意の適切な手段によって評価することができる。

【0128】

いくつかの実施態様においては、組成物は、さらに１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。例えば、本発明の免疫結合体は、ＩＶ投与または器官の体腔若しくは内腔への投与などの非経口投与用に製剤化することができる。あるいは、免疫結合体は、腫瘍内に注入することができる。注射用組成物は、一般に、薬学的に許容される担体中に溶解した免疫結合体の溶液を含むであろう。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水および塩化ナトリウムなどの１つ以上の塩の等張溶液、例えばＲｉｎｇｅｒ溶液がある。加えて、滅菌固定油は、従来、溶媒または懸濁媒体として使用され得る。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激固定油を使用することができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸も同様に、注射剤の調製に使用することができる。これらの組成物は望ましくは無菌であり、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができる。組成物は、おおよその生理学的条件に求められる、ｐＨ調整および緩衝剤、毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど、などの薬学的に許容される補助物質を含有することができる。

【0129】

組成物は、任意の適切な濃度の免疫結合体を含有することができる。組成物中の免疫結合体の濃度は、広く異なり得、選択される特定の投与モードおよび患者の必要性に従って、主として流体体積、粘度、体重などに基づいて選択されるであろう。特定の実施態様においては、注射用の溶液製剤中の免疫結合体の濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）から約１０％（ｗ／ｗ）の範囲であろう。

【0130】

免疫結合体を使用する方法
本発明は、癌を治療する方法を提供する。本方法は、治療有効量の本明細書において記載される免疫結合体（例えば、本明細書において記載される組成物として）を、それを必要とする対象、例えば、癌を有し、癌の治療を必要とする対象に投与することを含む。

【0131】

トラスツズマブおよびペルツズマブ、それらのバイオシミラー、並びにそれらのバイオベターは、癌、特に乳癌、特にＨＥＲ２過剰発現乳癌、胃癌、特にＨＥＲ２過剰発現胃癌、および胃食道接合部腺癌の治療において有用であることが知られている。本明細書において記載される免疫結合体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、およびそれらのバイオベターと同じタイプの癌、特に乳癌、特にＨＥＲ２過剰発現乳癌、胃癌、特にＨＥＲ２過剰発現胃癌、および胃食道接合部腺癌を治療するために使用することができる。

【0132】

免疫複合体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、およびそれらのバイオベターについて利用される投薬レジメンなどの任意の適切な投薬レジメンを使用して、それを必要とする対象に任意の治療有効量で投与される。例えば、本方法は、約１００ｎｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するように免疫結合体を投与することを含み得る。免疫結合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫結合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫結合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫結合体の用量はまた、特定の結合体並びに治癒される癌の種類および重症度に応じて、これらの範囲外であることができる。投与頻度は、１週間あたり単回投与から複数回投与までの範囲であるか、またはより頻繁であり得る。いくつかの実施態様においては、免疫結合体は、１ヶ月あたり約１回から１週間あたり約５回投与される。いくつかの実施態様においては、免疫結合体は、１週間あたり１回投与される。

【0133】

別の実施態様においては、本発明は癌を予防する方法を提供する。本方法は、治療有効量の免疫結合体（例えば、上記の組成物として）を、それを必要とする対象に投与することを含む。特定の実施態様においては、対象は予防されるべき特定の癌にかかりやすい。例えば、本方法は、約１００ｎｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するように免疫結合体を投与することを含み得る。免疫結合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫結合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫結合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫結合体の用量はまた、特定の結合体並びに治療される癌の種類および重症度に応じて、これらの範囲外であることもできる。投与頻度は、１週間あたり単回投与から複数回投与までの範囲であるか、またはより頻繁であり得る。いくつかの実施態様においては、免疫結合体は、１ヶ月あたり約１回から１週間あたり約５回投与される。いくつかの実施態様においては、免疫結合体は、１週間あたり１回投与される。

【0134】

本発明のいくつかの実施態様は、癌が乳癌である、上記の癌を治療する方法を提供する。乳癌は、乳房の異なる領域に由来し得、多くの異なるタイプの乳癌が特徴付けられてきた。例えば、本発明の免疫結合体は、非浸潤性（ｉｎ ｓｉｔｕ）乳管癌腫、浸潤性乳管癌腫（例えば、管状癌腫、髄様癌腫、粘液性癌腫、乳頭癌腫、または乳房の篩状癌腫）、非浸潤性（ｉｎ ｓｉｔｕ）小葉癌腫、浸潤性小葉癌腫、炎症性乳癌、および他の形態の乳癌を治療するために使用することができる。いくつかの実施態様においては、乳癌を治療する方法は、ＨＥＲ２に結合することができる抗体構築物（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、およびそれらのバイオベター）を含有する免疫結合体を投与することを含む。

【0135】

本発明のいくつかの実施態様は、癌が胃癌である、上記の癌を治療する方法を提供する。胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌は、胃における異なる細胞に由来し得、腺癌、カルシノイド腫瘍、扁平上皮癌、小細胞癌、平滑筋肉腫、および胃腸間質腫瘍を含む、いくつかのタイプの胃癌が特徴づけられてきた。いくつかの実施態様においては、胃癌を治療する方法は、ＨＥＲ２に結合することができる抗体構築物（例えば、トラスツズマブ）を含有する免疫結合体を投与することを含む。

【0136】

本発明のいくつかの実施態様は、癌が胃食道接合部癌腫である、上記の癌を治療する方法を提供する。この癌腫は、食道が胃を肉にする（ｍｅａｔｓ）領域において発生する。３つのタイプの胃食道接合部癌腫がある。タイプ１においては、癌は、上から下に胃食道接合部の中に増殖する。食道の下端の通常の裏打ちは、突然変異（バレット食道とも呼ばれる）によって置き換えられる。タイプ２においては、癌は、胃食道接合部でそれ自体で増殖する。タイプ３においては、癌は、胃から上向きに胃食道接合部の中に増殖する。いくつかの実施態様においては、胃食道接合部癌腫を治療する方法は、ＨＥＲ２に結合することができる抗体構築物（例えば、トラスツズマブ）を含有する免疫結合体を投与することを含む。

【0137】

いくつかの実施態様においては、癌は、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８によって誘発される炎症誘発性反応の影響を受けやすい。

【0138】

本開示の非限定的一面の例
本明細書において記載される本発明の実施態様を含む一面は、１つ以上の他の面または実施態様と共に、単独でまたは組み合わせて、有益であるかもしれない。前述の説明を限定することなく、１～３３と番号付けされた本開示の特定の非限定的な一面が以下に提供される。この開示を読むと当業者に明らかであろうように、個々に番号付けされた一面のそれぞれは、使用されるかもしれないし、先行するまたは後続する個々に番号付けされた一面の任意のものと組み合わせられるかもしれない。これは、全てのそのような一面の組合せのための支持を提供することが意図されるものであり、以下に明示的に提供される一面の組合せに限定されない。

【0139】

１．式：

【0140】

【化17】

【0141】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、下付き文字ｎは、約２から約２５の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］の免疫結合体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0142】

２．下付き文字ｒが１から６の整数である、一面１の免疫結合体。
３．下付き文字ｒが１から４の整数である、一面２の免疫結合体。
４．下付き文字ｒが１である、一面３の免疫結合体。
５．下付き文字ｒが２である、一面３の免疫結合体。

【0143】

６．下付き文字ｒが３である、一面３の免疫結合体。
７．下付き文字ｒが４である、一面３の免疫結合体。
８．下付き文字ｎが６から１２の整数である、一面１～７のいずれか一つの免疫結合体。
９．下付き文字ｎが８から１２の整数である、一面８の免疫結合体。
１０．免疫結合体が式：

【0144】

【化18】

【0145】

【化19】

【0146】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］、またはその薬学的に許容される塩である、一面１の免疫結合体。
１１．免疫結合体が式：

【0147】

【化20】

【0148】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］、またはその薬学的に許容される塩である、一面１の免疫結合体。
１２．免疫結合体が式：

【0149】

【化21】

【0150】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］、またはその薬学的に許容される塩である、一面１の免疫結合体。
１３．免疫結合体が式：

【0151】

【化22】

【0152】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］、またはその薬学的に許容される塩である、一面１の免疫結合体。
１４．免疫結合体が式：

【0153】

【化23】

【0154】

［式中、下付き文字ｒは、１から１０の整数であり、および「Ａｂ」は、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）としても知られている）、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物である］、またはその薬学的に許容される塩である、一面１の免疫結合体。
１５．「Ａｂ」がトラスツズマブ、そのバイオシミラー、またはそのバイオベターである、一面１～１４のいずれか一つの免疫結合体。

【0155】

１６．「Ａｂ」がペルツズマブ、そのバイオシミラー、またはそのバイオベターである、一面１～１４のいずれか一つの免疫結合体。
１７．「Ａｂ」がトラスツズマブである、一面１５の免疫結合体。
１８．「Ａｂ」がトラスツズマブのバイオシミラーである、一面１５の免疫結合体。
１９．一面１～１８のいずれか一つに記載の複数の免疫結合体を含む組成物。
２０．アジュバント対抗体構築物の平均比が約０．０１から約１０である、一面１９の免疫結合体。

【0156】

２１．アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約１０である、一面２０の免疫結合体。
２２．アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約６である、一面２１の免疫結合体。
２３．アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約４である、一面２２の免疫結合体。
２４．アジュバント対抗体構築物の平均比が約１から約３である、一面２３の免疫結合体。
２５．治療有効量の一面１～１８のいずれか一つに記載の免疫結合体または一面１９～２４のいずれか一つに記載の組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療する方法。

【0157】

２６．癌がＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニズムによって誘発される炎症誘発性反応の影響を受けやすい、一面２５の方法。
２７．癌がＨＥＲ２発現癌である、一面２５または２６の方法。
２８．癌が乳癌である、一面２５～２７のいずれか一つの方法。
２９．乳癌がＨＥＲ２過剰発現乳癌である、一面２８の方法。
３０．癌が胃癌である、一面２５～２７のいずれか一つの方法。

【0158】

３１．胃癌がＨＥＲ２過剰発現胃癌である、一面３０の方法。
３２．癌が胃食道接合部腺癌である、一面２５～２７、３０、または３１のいずれか一つの方法。
３３．癌を治療するための、一面１～１８のいずれか一つに記載の免疫結合体または一面１９～２４のいずれか一つに記載の組成物の使用。

【実施例】

【0159】

以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、もちろん、その範囲を制限するいかなる趣旨にも解釈されるべきではない。

【0160】

実施例１：化合物２の合成

【0161】

【化24】

【0162】

室温でジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１００ｍＬ）中の６－ブロモ－２，４－ジクロロ－３－ニトロキノリン（５．６ｇ、１７．４ｍｍｏｌ、１当量）および固体Ｋ_２ＣＯ_３（３．６ｇ、２６ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、ニートの２，４－ジメトキシベンジルアミン（３．５ｇ、２０．１ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。混合物を１５分間撹拌し、水（３００ｍＬ）を加え、次いで混合物を５分間撹拌した。得られた固体を濾取し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解した。溶液を水（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、分離し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、次いで濾過し、真空中で濃縮した。褐色の固体を１：１のヘキサン／ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）でトリチュレートし、濾過して、６－ブロモ－２－クロロ－４－（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ－３－ニトロキノリン（６．９ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、８８％）を黄色の固体として得た。化合物は、さらに精製することなく使用した。

【0163】

実施例２：化合物３の合成

【0164】

【化25】

【0165】

ＮｉＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ（０．３６ｇ、１．５ｍｍｏｌ、０．１当量）を、０℃でメタノール（２００ｍＬ）中の６－ブロモ－２－クロロ－４－（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ－３－ニトロキノリン（６．９ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、８８％）に加えた。水素化ホウ素ナトリウム（ペレット、１．４２ｇ、３８ｍｍｏｌ、２．５当量）を加え、反応物を０℃で１時間撹拌し、次いで室温に温め、さらに１５分間撹拌した。約５のｐＨが得られるまで、氷酢酸（５ｍＬ）を加えた。溶媒を真空中で蒸発させ、粗固体を酢酸エチル（１５０ｍＬ）に再溶解し、次いで珪藻土の床を通して濾過して黒色の不溶性物質を除去した。酢酸エチルを、真空中で除去した。暗褐色の固体をエーテル（７５ｍＬ）でトリチュレートし、次いで濾過して、３－アミノ－６－ブロモ－２－クロロ－４－（２，４－ジメトキシベンジル）アミノキノリン（５．８１ｇ、１３．７ｍｍｏｌ、９０％）を黄褐色の固体として得た。化合物は、さらに精製することなく使用した。

【0166】

実施例３：化合物４の合成

【0167】

【化26】

【0168】

ニートの吉草酸クロリド（２．０ｍＬ、２．０ｇ、１６ｍｍｏｌ、１．２当量）を、室温で撹拌しながら、トリエチルアミン（２．１ｇ、２．８ｍＬ、２０ｍｍｍｏｌ、１．５当量）を含有するジクロロメタン（１００ｍＬ）中の３－アミノ－６－ブロモ－２－クロロ－４－（２，４－ジメトキシベンジル）アミノキノリン（５．７５ｇ、１３．６ｍｍｍｏｌ、１当量）の溶液に加えた。混合物を水（１５０ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、分離し、次いで乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、そして濃縮した。固体をエーテルでトリチュレートし、濾過し、次いで真空下で乾燥させた。Ｎ－（６－ブロモ－２－クロロ－４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）キノリン－３－イル）ペンタンアミドを、褐色の固体として得た（５．８ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、８４％）。化合物は、さらに精製することなく使用した。

【0169】

実施例４：化合物５の合成

【0170】

【化27】

【0171】

１００ｍＬのビーカーにおいて、Ｎ－（６－ブロモ－２－クロロ－４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）キノリン－３－イル）ペンタンアミド（５．８ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、１当量）および２－クロロ安息香酸（０．９０ｇ、５．７ｍｍｏｌ、０．５当量）の混合物を、５０ｍＬのトルエン中で２時間煮沸した。トルエンを、容量が２５ｍＬに達するたびに５０ｍＬまで加えた。２，４－ジメトキシベンジルアミン（９．５ｇ、５７ｍｍｏｌ、５当量）を加え、反応物を１２０℃で２時間維持した。反応物を室温に冷却し、水（８０ｍＬ）次いで酢酸（３．５ｍＬ）を加えた。上澄みをデカントし、粗生成物を水（８０ｍＬ）で洗浄した。湿った固体をメタノール（１００ｍＬ）でトリチュレートして、８－ブロモ－２－ブチル－Ｎ，１－ビス（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミン（４．８０ｇ、７．７ｍｍｏｌ、６８％）をオフホワイトの固体として得た。化合物はさらに精製することなく使用した。

【0172】

実施例５：化合物６の合成

【0173】

【化28】

【0174】

８－ブロモ－２－ブチル－Ｎ，１－ビス（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミン（０．３１ｇ、０．５ｍｍｏｌ、１当量）およびｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート（０．１９ｇ、１ｍｍｏｌ、２当量）の混合物をトルエン（２ｍＬ）中で混合し、次いでアルゴンで脱気した。Ｐｄ_２ｄｂａ_３（４５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、０．１当量）、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィンテトラフルオロボレート（２９ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、０．２当量）およびナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１４４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を、蓋付きバイアル中で１１０℃で３０分間加熱した。混合物を冷却し、次いで酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲル（２０ｇ）上で精製し、次いで５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出して、ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－ブチル－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．２８ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、７８％）をオフホワイトの固体として得た。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７２５．４０（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７２５．６７（実測値）。

【0175】

実施例６：化合物７の合成

【0176】

【化29】

【0177】

ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－ブチル－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．２８ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）をＴＦＡ（３ｍＬ）に溶解し、５分間加熱還流した。ＴＦＡを真空中で除去し、粗生成物をアセトニトリルに溶解し、濾過し、次いで濃縮して、２－ブチル－８－（ピペラジン－１－イル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミンのＴＦＡ塩（０．１６ｇ、０．３７ｍｍｏｌ、９５％）をオフホワイトの固体として得た。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３２５．２１（計算値）； ＬＣ／Ｍ ［Ｍ＋Ｈ］３２５．５１（実測値）。

【0178】

実施例７：化合物８の合成

【0179】

【化30】

【0180】

窒素でフラッシュされた４０ｍＬのバイアル中に、塩化オキサリル（１．８４ｇ、１．２４ｍＬ、１４．５ｍｍｏｌ、２．５当量）次いでジクロロメタン（１０ｍＬ）を加えた。溶液を、－７８℃に冷却した。ジクロロメタン（９ｍＬ）中のＤＭＳＯ（２．２６ｇ、２．０５ｍＬ、２９ｍｍｏｌ、５当量）の溶液を滴下し、混合物を１５分間撹拌した。ジクロロメタン（９ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル１－ヒドロキシ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－オエート（３．４ｇ、５．８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を滴下し、混合物を－７８℃で３０分間撹拌した。トリエチルアミン（４．４ｇ、６．０ｍＬ、４３．５ｍｍｏｌ、７．５当量）を滴下した。この混合物を－７８℃で３０分間撹拌し、次いで３０分かけて室温まで温めた。ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の２－ブチル－８－（ピペラジン－１－イル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミン塩酸塩（２．１ｇ、５．８ｍｍｏｌ、１当量）およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（５．５ｇ、２６ｍｍｏｌ、４．５当量）を含有する１００ｍＬの丸底フラスコに、ｔｅｒｔ－ブチル１－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－オエート（理論量５．８ｍｍｏｌ、１当量）をゆっくりと加え、反応物を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタンを減圧下で除去し、次いで２０％Ｎａ_２ＣＯ_３（２０ｍＬ）を加え、混合物を１５分間激しく撹拌した。溶媒の全てを除去し、固形物を１０％メタノール／ジクロロメタン中に懸濁して超音波処理し、次いで珪藻土を通して濾過した。フィルターケーキを１０％メタノール／ジクロロメタンで洗浄し、合わせた濾液を濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（８０ｇ ＲＥＤＩＳＥＰ（商標）ゴールドシリカカラム）による精製を、２～２０％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン＋０．１％トリエチルアミン（５５ｍＬ／分）グラジエントを使用して２８分かけて実施した。純粋な画分を合わせて濃縮し、ｔｅｒｔ－ブチル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－オエート（３．９ｇ、４．４ｍｍｏｌ、７５％）をわずかに金色のシロップとして得た。含有する不純な画分を再精製し、次いで合わせて最終質量（４．２６ｇ、４．８ｍｍｏｌ、８３％）を得た。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８９３．５５（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８９３．９８（実測値）。

【0181】

実施例８：化合物９の合成

【0182】

【化31】

【0183】

ｔｅｒｔ－ブチル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－オエート（４．２６ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を３Ｍ ＨＣｌ水溶液およびジオキサンの１：１混合物（１００ｍＬ）に溶解し、６０℃で６０分間加熱した。加水分解が完了した後、溶媒を減圧下で除去した。得られた１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－酸塩酸塩をアセトニトリル（７５ｍＬ）を用いて４回共沸させ、次いでアセトニトリル（７５ｍＬ）に懸濁し、４０００ｒｐｍで４分間遠心分離した。このプロセスを、繰り返した。固体をアセトニトリルの入った１００ｍＬの丸底フラスコに移し、減圧下で濃縮して、黄色の吸湿性固体（４．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ、９５％）を得て、これを次の反応においてそのまま使用した。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８３７．４９（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８３７．８４（実測値）。

【0184】

実施例９：化合物１０の合成

【0185】

【化32】

【0186】

１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－酸塩酸塩（４．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ、１当量）を含有する２５０ｍＬの丸底フラスコに、無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の２，３，５，６－テトラフルオロフェノール（１．６４ｇ、１０ｍｍｏｌ、２．４当量）およびＥＤＣ（２．０ｇ、１１ｍｍｏｌ、２．３当量）の懸濁液を加え、混合物を室温で３０分間撹拌させた。次いで混合物を、５０℃で３０分間加熱した。ＤＭＦのほとんど（～９０％）を、浴温を５０℃に設定して減圧下でトルエン（８０ｍＬ）を用いた共沸によって除去した。この粗物質にジエチルエーテル（１００ｍＬ）を加え、ペースト状の固体を激しく攪拌した。上澄みを、廃棄した。このプロセスを、繰り返した。粗物質を、４０ｍＬの酢酸エチル／アセトン／酢酸／水（６：２：１：１）に溶解した。粗溶液を２つの等しい部分に分割し、それぞれを４０ｇのＲＥＤＩＳＥＰ（商標）ゴールドシリカカラム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ、Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）上で、イソクラティック溶離液の酢酸エチル／アセトン／酢酸／水（６：２：１：１）を使用して精製し、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサトリトリアコンタン－３３－オエート（３．３４ｇ、３．４ｍｍｏｌ、７４％）をオレンジ色のペーストとして得た。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９８５．４９（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９８５．７１（実測値）。

【0187】

実施例１０：化合物１１の合成

【0188】

【化33】

【0189】

２－ブチル－８－（ピペラジン－１－イル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミンを、実施例７に記載の手順に従ってｔｅｒｔ－ブチル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキサヘンイコサン－２１－オエートに変換した。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７１７．４５（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］７１７．７５（実測値）。

【0190】

実施例１１：化合物１２の合成

【0191】

【化34】

【0192】

ｔｅｒｔ－ブチル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキサヘンイコサン－２１－オエートを、実施例８に記載の手順に従って１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキサヘンイコサン－２１－酸に変換した。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６６１．３９（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６６１．６０（実測値）。

【0193】

実施例１２：化合物１３の合成

【0194】

【化35】

【0195】

１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキサヘンイコサン－２１－酸を、実施例９に記載の手順に従って２，３，５，６－テトラフルオロフェニル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキサヘンイコサン－２１－オエートに変換した。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８０９．３９（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８０９．６２（実測値）。

【0196】

実施例１３：化合物１４の合成

【0197】

【化36】

【0198】

２－ブチル－８－（ピペラジン－１－イル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミンを、実施例７に記載の手順に従ってｔｅｒｔ－ブチル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－オエートに変換した。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９８１．６１（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９８１．８６（実測値）。

【0199】

実施例１４：化合物１５の合成

【0200】

【化37】

【0201】

ｔｅｒｔ－ブチル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－オエートを、実施例８に記載の手順に従って１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－酸に変換した。化合物は、さらに精製することなく使用した。

【0202】

実施例１５：化合物１６の合成

【0203】

【化38】

【0204】

１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－酸を、実施例９に記載の手順に従って２，３，５，６－テトラフルオロフェニル１－（４－（４－アミノ－２－ブチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－８－イル）ピペラジン－１－イル）－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６－ドデカオキサノナトリアコンタン－３９－オエートに変換した。 ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０７３．５４（計算値）； ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０７３．８１（実測値）。

【0205】

実施例１６：免疫結合体Ａの合成

【0206】

【化39】

【0207】

この実施例は、抗体構築物としてトラスツズマブ（Ｔｒａｓ）を用いた免疫結合体Ａの合成を実証する。

【0208】

トラスツズマブを、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、１００ｍＭホウ酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含有するｐＨ８．３の結合緩衝液に緩衝液交換した。次いで、溶出液を、緩衝液を使用してそれぞれ６ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。６ｍｇ／ｍｌのトラスツズマブを３０℃に予熱し、７モル当量の化合物１０と急速に混合した。反応を３０℃で１６時間進行させ、免疫結合体Ａを、２回の連続したｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水中で平衡化したＧ－２５脱塩カラムにかけることによって反応物から分離した。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標） Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続したＡＣＱＵＩＴＹ（商標） ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）上のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定した。免疫複合体Ａは、２．５のＤＡＲを有していた。

【0209】

実施例１７：免疫結合体Ｂの合成

【0210】

【化40】

【0211】

この実施例は、抗体構築物としてトラスツズマブ（Ｔｒａｓ）を用いた免疫結合体Ｂの合成を実証する。

【0212】

トラスツズマブを、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、１００ｍＭホウ酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含有するｐＨ８．３の結合緩衝液に緩衝液交換した。次いで、溶出液を、緩衝液を使用してそれぞれ６ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。６ｍｇ／ｍｌのトラスツズマブを３０℃に予熱し、８．５モル当量の化合物１３と急速に混合した。反応を３０℃で１６時間進行させ、免疫結合体Ｂを、２回の連続したｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水中で平衡化したＧ－２５ＳＥＰＨＡＤＥＸＴＭ脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）にかけることによって反応物から分離した。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標） Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続したＡＣＱＵＩＴＹ（商標） ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）上のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定した。免疫複合体Ｂは、２．３７のＤＡＲを有していた。

【0213】

実施例１８：免疫結合体Ｃの合成

【0214】

【化41】

【0215】

この実施例は、抗体構築物としてトラスツズマブ（Ｔｒａｓ）を用いた免疫結合体Ｃの合成を実証する。

【0216】

トラスツズマブを、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、１００ｍＭホウ酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含有するｐＨ８．３の結合緩衝液に緩衝液交換した。次いで、溶出液を、緩衝液を使用してそれぞれ６ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。６ｍｇ／ｍｌのトラスツズマブを３０℃に予熱し、６モル当量の化合物１６と急速に混合した。反応を３０℃で１６時間進行させ、免疫結合体Ｃを、２回の連続したｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水中で平衡化したＧ－２５脱塩カラムにかけることによって反応物から分離した。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標） Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続したＡＣＱＵＩＴＹ（商標） ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定した。免疫複合体Ｃは、２．１５のＤＡＲを有していた。

【0217】

実施例１９．インビボでの免疫結合体活性の評価

【0218】

この実施例は、免疫結合体Ａ、免疫結合体Ｂ、および免疫結合体Ｃが骨髄活性化を誘発するのに効果的であり、従って癌の治療に有用であることを示す。

【0219】

ヒト抗原提示細胞の単離． ヒト骨髄性抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、およびＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含有するＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）ヒト単球濃縮カクテル（Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ）（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、バンクーバー、カナダ）を使用した密度勾配遠心分離により、健康な献血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ、パロアルト、カリフォルニア）から得られたヒト末梢血からネガティブに選択した。その後、未成熟ＡＰＣは、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、およびＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含有するＣＤ１６枯渇のない、ＥＡＳＹＳＥＰ（商標）ヒト単球濃縮キット（Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ）（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用したネガティブ選択により、＞９７％の純度に精製した。

【0220】

腫瘍細胞の調製． ３つの腫瘍細胞株を使用した：ＨＣＣ１９５４、ＪＩＭＴ－１、およびＣＯＬＯ ２０５。ＨＣＣ１９５４（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）は、リンパ節転移のない原発性ステージＩＩＡ、グレード３の浸潤性乳管癌腫に由来した。ＨＣＣ１９５４は、上皮細胞特異的マーカーである上皮糖タンパク質２およびサイトケラチン１９については陽性であり、エストロゲン受容体（ＥＲ）およびプロゲステロン受容体（ＰＲ）の発現については陰性である。ＨＣＣ１９５４は、ＨＥＲ２を過剰発現する（酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によって決定されるように）。ＪＩＭＴ－１（ＤＳＭＺ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）は、術後放射線照射後の乳管癌（グレード３浸潤性、ステージＩＩＢ）を有する女性の胸水に由来した。ＪＩＭＴ－１は、「中」レベルの過剰発現であると考えられるレベルでＨＥＲ２を過剰発現するが、ＨＥＲ２阻害薬（例えばトラスツズマブ）には反応しない。ＣＯＬＯ ２０５（ＡＴＣＣ）は、結腸の癌腫を有する男性の腹水に由来した。ＣＯＬＯ ２０５は、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ケラチン、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）を発現し、比較的「低」レベルの過剰発現でＨＥＲ２を過剰発現すると考えられる。

【0221】

各細胞株からの腫瘍細胞を、０．１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＰＢＳ中に１～１０×１０^６細胞／ｍＬで別々に再懸濁した。続いて、細胞を、１μＭの最終濃度を得るために２μＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）とともにインキュベートした。反応物を、２分後、１０％ＦＢＳを含む１０ｍＬの完全培地の添加を介してクエンチし、完全培地で２回洗浄した。細胞は、使用前に、２％パラホルムアルデヒド中で固定し、ＰＢＳで３回洗浄するか、生存したままにしておいた。

【0222】

ＡＰＣ－腫瘍共培養． ２×１０^５のＡＰＣを、５：１と１０：１との間のエフェクター対標的（腫瘍）細胞比のＣＦＳＥ標識腫瘍細胞とともに（例えば、図１Ａ～１Ｉ）またはなしで（例えば、図２Ａ～３Ｄ）、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、並びに、示された場合、さまざまな濃度の非結合ＨＥＲ２抗体、本発明の免疫結合体Ａ、免疫結合体Ｂ、および免疫結合体Ｃ（上記の実施例に従って調製された）を補充したｉｓｃｏｖｅ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を含有する９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中でインキュベートした。細胞および無細胞上清を、１８時間後にフローサイトメトリーまたはＥＬＩＳＡを介して分析した。

【0223】

このアッセイの結果を、図、例えば、ＨＣＣ１９５４細胞株上の免疫結合体Ａについては図１Ａ（ＣＤ４０）および図１Ｂ（ＣＤ８６）に、ＪＩＭＴ－１細胞株上の免疫結合体Ａについては図１Ｄ（ＣＤ４０）および図１Ｅ（ＣＤ８６）に、並びにＣＯＬＯ ２０５細胞株上の免疫結合体Ａについては図１Ｇ（ＣＤ４０）および図１Ｈ（ＣＤ８６）に示す。

【0224】

図２Ａは、免疫結合体ＢがＣＤ１４のダウンレギュレーションによって示される骨髄分化を誘発することを示す。図２Ｂは、免疫結合体ＢがＣＤ４０のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。図２Ｃは、免疫結合体ＢがＣＤ８６のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。図３Ａは、免疫結合体ＣがＣＤ１４のダウンレギュレーションによって示される骨髄分化を誘発することを示す。図３Ｂは、免疫結合体ＣがＣＤ４０のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。図３Ｃは、免疫結合体ＣがＣＤ８６のアップレギュレーションによって示される骨髄活性化を誘発することを示す。

【0225】

ＣＤ４０およびＣＤ８６などのＴ細胞刺激分子の発現は、効果的なＴ細胞活性化に必要であるが、ＡＰＣはまた、炎症誘発性サイトカインの分泌を通して続く免疫応答の性質に影響を与える。従って、刺激後にヒトＡＰＣにおいてサイトカイン分泌を誘発する免疫結合体の能力を調査した。データは、免疫結合体で刺激した細胞が高レベルのＴＮＦαを分泌したことを示す。ＨＣＣ１９５４細胞株と共培養した免疫結合体Ａについては図１Ｃを、ＪＩＭＴ－１細胞株と共培養した免疫結合体Ａについては図１Ｆを、およびＣＯＬＯ ２０５細胞株と共培養した免疫結合体Ａについては図１Ｉを参照されたい。図２Ｄは、免疫結合体Ｂとの１８時間のインキュベーション後の骨髄細胞からのＴＮＦα分泌を示す。図３Ｄは、免疫結合体Ｃとの１８時間のインキュベーション後の骨髄細胞からのＴＮＦα分泌を示す。

【0226】

実施例２０．免疫結合体Ｂおよび免疫結合体Ｃの薬物動態（ＰＫ）特性の評価

【0227】

この実施例は、免疫結合体Ｂおよび免疫結合体Ｃが好ましいＰＫ特性を有することを示す。

【0228】

カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に、１０ｍｇ／ｋｇの免疫結合体Ｂ、免疫結合体Ｃ、スキーム１に示す免疫結合体Ｄ、免疫結合体Ｅ、免疫結合体Ｆ、または免疫結合体Ｇを投与し、ＰＫ特性を投与後２８日間評価した

【0229】

【化42】

【0230】

トラスツズマブＰＫアッセイは、ＨＣＡ１６９抗イディオタイプｍＡｂでトラスツズマブを捕捉し、ペルオキシダーゼ標識ＨＣＡ１７６（ＨＣＡ１７６Ｐ）で検出するように構成された。抗体薬物結合体アッセイは、ＨＣＡ１６９抗イディオタイプｍＡｂでトラスツズマブを捕捉し、Ａ１０３に対するウサギｍＡｂで検出した後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧで検出するように構成された。免疫結合体Ｂおよび免疫結合体Ｃは、免疫結合体Ｄ、免疫結合体Ｅ、免疫結合体Ｆ、および免疫結合体Ｇと比較して、両方のＰＫアッセイにおいてより高い血清レベルを示した。

【0231】

本明細書において引用される刊行物、特許出願、および特許を含む全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照により組み込まれることが個別にかつ具体的に示され、その全体が本明細書において記載されているかのように、同じ程度に参照により本明細書に組み込まれる。

【0232】

本発明を説明する文脈における（特に、以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」および「少なくとも１つの」並びに類似の指示対象の使用は、本明細書において別途示されない限りまたは文脈と明確に矛盾しない限り、単数および複数の両方をカバーするものと解釈されるべきである。１つ以上の項目のリストに伴われる用語「少なくとも１つ」（例えば、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」）の使用は、本明細書において別途示されない限りまたは文脈と明確に矛盾しない限り、列挙された項目から選択される１つの項目（Ａ若しくはＢ）、または列挙された項目の２つ以上の任意の組合せ（ＡおよびＢ）を意味すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、別途記載のない限り、オープンエンド用語（すなわち、「含むが、限定されない」を意味する）として解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書において別途示されない限り、単に、範囲内に入る各別個の値に個別に言及する簡略化方法として役立つことが意図され、それぞれの別個の値は、本明細書において個別に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書において記載される全ての方法は、本明細書において別途示されない限りまたは文脈によって明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書において提供される任意のおよび全ての実施例、または例示的な文言（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をよりよく明確化することが意図されるものであり、別途特許請求の範囲で請求されない限り、本発明の範囲に制限を課すものではない。本明細書中のいかなる文言も、本発明の実施に必須の非請求のいかなる要素を示すものとしても解釈されるべきではない。

【0233】

本発明者らに既知の本発明を実施するための最良の様式を含む、本発明の好ましい実施態様が、本明細書において記載されている。これらの好ましい実施態様の変形例は、前述の説明を読むと、当業者には明らかとなるであろう。本発明者らは、当業者が適宜そのような変形例を使用することを期待しており、本発明者らは、本明細書において具体的に記載されているのとは別の方法で本発明が実施されることを意図している。従って、この発明は、適用可能な法律によって認められるように本明細書に添付の特許請求の範囲に記載された主題の全ての修飾物および均等物を含む。さらに、本明細書において別途示されない限りまたは文脈によって明確に矛盾しない限り、その全ての可能な変形例における上記の要素の任意の組合せが、本発明に包含される。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図1G】

【図1H】

【図1I】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【配列表】

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【国際調査報告】