特表 2022-526011 多価免疫療法組成物、ＷＴ１陽性癌を処置するための使用及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-05-20

(54)【発明の名称】多価免疫療法組成物、ＷＴ１陽性癌を処置するための使用及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20220513BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20220513BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20220513BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220513BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220513BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20220513BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20220513BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220513BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20220513BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20220513BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20220513BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20220513BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20220513BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20220513BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20220513BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20220513BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20220513BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220513BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20220513BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H

A61P37/04

A61K38/08

A61K38/16

A61K38/10

A61P43/00 121

A61P43/00 111

A61P35/00

A61P35/02

A61P7/00

A61K45/00

A61K39/395 N

A61K39/39

A61K48/00

A61P43/00 105

A61K31/7088

A61K35/17 Z

A61K35/76

C07K7/06 ZNA

C07K7/08

C07K14/00

C12N15/12

C12N5/0783

C12N5/078

C12N15/86 Z

C12N15/85 Z

C12N5/10

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021559623

(86)(22)【出願日】2020-04-10

(85)【翻訳文提出日】2021-12-07

(86)【国際出願番号】 US2020027681

(87)【国際公開番号】W WO2020210632

(87)【国際公開日】2020-10-15

(31)【優先権主張番号】62/832,244

(32)【優先日】2019-04-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521172848

【氏名又は名称】エスエルエスジー リミテッド エルエルシー

(71)【出願人】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター

(74)【代理人】

【識別番号】110003339

【氏名又は名称】特許業務法人南青山国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ステルギオウ，アンジェロス，エム．

(72)【発明者】

【氏名】サーリス，ニコラス，ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】シェインバーグ，デイビッド，エー．

(72)【発明者】

【氏名】ダオ，タオ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA13

4C084AA19

4C084AA24

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA17

4C084BA18

4C084BA23

4C084CA53

4C084DC50

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA511

4C084ZA512

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC412

4C084ZC75

4C085AA04

4C085AA14

4C085AA38

4C085BB01

4C085BB11

4C085CC03

4C085DD62

4C085EE03

4C085EE06

4C085FF02

4C085FF03

4C085FF11

4C085FF13

4C086AA01

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA51

4C086ZB09

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC41

4C086ZC75

4C087AA01

4C087BB37

4C087BB65

4C087BC83

4C087MA02

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZA51

4C087ZB09

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC41

4C087ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA15

4H045BA17

4H045CA40

4H045DA76

4H045DA86

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、YMFPNAPYL、RSDELVRHHNMHQRNMTKL、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG、SGQAYMFPNAPYLPSCLES、NLMNLGATL、WNLMNLGATLKGVAA及びWNYMNLGATLKGVAAを含むＷＴ１ペプチドの組み合わせ又はＷＴ１ペプチドの組み合わせにより誘導される細胞毒性Ｔ細胞を投与することにより、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を減少させ、そしてそれに対する免疫応答を誘導する方法を提供する。ＷＴ１ペプチドの組み合わせは、ペプチドの形態で、ＷＴ１ペプチドをコードする核酸の形態で、又はＷＴ１ペプチドをコードする核酸を含む、及び／又はＷＴ１ペプチドを含むもしくは提示する免疫細胞の形態で、ＷＴ１送達剤を介して対象に投与される。ＷＴ１送達剤又はＣＴＬは、単一の組成物（７価の免疫療法組成物として）又は複数の組成物で対象に投与され、７つの全てのＷＴ１ペプチドが送達され、ＷＴ１発現癌に対する免疫応答が誘導される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）
からなる少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせ（ａ）、
（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸（ｂ）、又は
（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸を含む、及び／又は前記（ａ）の少なくとも７つのペプチドを含む又は提示する免疫細胞（ｃ）、又は
（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせによって誘導される細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）（ｄ）、又は
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）のうちの２つ、３つ、又は４つ全ての組み合わせ（ｅ）を含む、
免疫療法組成物。

【請求項2】

前記組成物は、
YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）
からなる少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせ（ａ）を含む、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項3】

前記組成物は、
YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）
の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸（ｂ）
を含む、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項4】

前記（ｂ）の核酸は、ウイルスベクター又は非ウイルスベクター中にあるか、又はそれに関連している、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項5】

前記組成物は、
YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）
（ａ）の少なくとも７つのペプチドの組み合わせをコードする核酸を含む、及び／又は（ａ）の少なくとも７つのペプチドを含む又は提示する（ｃ）免疫細胞を含む、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項6】

前記組成物は、（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせによって誘導されるＣＴＬ（ｄ）を含み、前記ＣＴＬは、in vitroで生成、ex vivoで生成、又はin vivoで生成され、ドナーから得られる、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項7】

前記組成物は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）のうちの２つ、３つ、又は４つ全ての組み合わせ（ｅ）を含む、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項8】

前記組成物は、ＷＴ１発現腫瘍を処置するために、又はＷＴ１発現癌に特異的なＴ細胞の形成及び増殖をin vitro、ex vivo又はin vivoで誘導するために有用であり、前記組み合わせは、前記の１つ以上に対して相乗効果を有する、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項9】

前記ペプチドの組み合わせは、７つの単離されたペプチドのみからなる、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項10】

抗原提示細胞、キャリア、ビヒクル、希釈剤、又はアジュバントをさらに含む、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項11】

前記組成物は、アジュバントをさらに含み、前記アジュバントは、ＱＳ２１、フロイント不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、ＢＣＧ、ミョウバン、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、インターロイキン、モンタニドＩＳＡ５１、又はＧＭ－ＣＳＦである、
請求項１０に記載の免疫療法組成物。

【請求項12】

前記７つのペプチドは、等量で存在する、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項13】

前記７つのペプチドは、等量で存在しない、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項14】

前記ペプチドの組み合わせは、クラスＩ応答及びクラスＩＩ応答を誘導する、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項15】

前記ペプチドの組み合わせは、ＣＤ４＋応答、ＣＤ８＋応答、又はそれらの組み合わせを誘導する、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項16】

Ｔ細胞は、ＨＬＡ＊Ａ０２、ＨＬＡ＊Ａ０３、ＨＬＡ＊Ｂ０７、ＨＬＡ＊Ａ２４、又はこれらの２つ以上の任意の組み合わせを有する対象において形成される、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項17】

７つのペプチドの比率は、０．１～１０部のYMFPNAPYL（配列番号１２４）、０．１～１０部のRSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、０．１～１０部のPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、０．１～１０部のSGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、０．１～１０部のNLMNLGATL（配列番号１０３）、０．１～１０部のWNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）、０．１～１０部のWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）を含む、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項18】

７つのペプチドの互いの比は、１つ以上の予測アルゴリズム（例えば、ＢＩＭＡＳ、ＲＡＮＫＰＥＰ、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ、Ｎｅｔ ＭＣＨ）からの７つのペプチドのＨＬＡ結合スコアの相対強度に比例する、
請求項１に記載の免疫療法組成物。

【請求項19】

ＷＴ１発現癌を処置する、ＷＴ１発現癌の発生率を低下させる、又はＷＴ１発現癌に対する免疫応答を誘導するための方法であって、これらを必要とする対象に
YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）
からなる少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせ（ａ）、
前記（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸（ｂ）、又は
前記（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸を含む、及び／又は前記（ａ）の少なくとも７つのペプチドを含む又は提示する免疫細胞（ｃ）、又は
前記（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせによって誘導される、ＷＴ１発現癌に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）（ｄ）、又は
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）のうちの２つ、３つ、又は４つ全ての組み合わせ（ｅ）
のうち少なくとも１つを投与することを含む、方法。

【請求項20】

（ａ）が前記対象に投与され、前記少なくとも７つの単離されたＷＴ１ペプチドが単一の組成物で投与される、
請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

（ａ）が前記対象に投与され、前記少なくとも７つの単離されたＷＴ１ペプチドが複数の組成物で投与され、各組成物が７つの単離されたＷＴ１ペプチドのうちの１つ以上を含む、
請求項１９に記載の方法。

【請求項22】

（ｂ）が前記対象に投与され、前記核酸が単一の組成物で投与される、
請求項１９に記載の方法。

【請求項23】

（ｂ）が前記対象に投与され、前記核酸が複数の組成物で投与され、各組成物が、前記７つの単離されたＷＴ１ペプチドのうちの１つ以上をコードする核酸を含む、
請求項１９に記載の方法。

【請求項24】

（ｂ）の前記核酸は、ウイルスベクター又は非ウイルスベクター中にあるか、又はそれに関連している、
請求項１９に記載の方法。

【請求項25】

（ｃ）は前記対象に投与され、前記免疫細胞は単一の組成物で投与される、
請求項１９に記載の方法。

【請求項26】

（ｃ）は前記対象に投与され、前記免疫細胞は複数の組成物で投与され、各組成物は、（ａ）の前記少なくとも７つのペプチドのうちの１つ以上をコードする核酸を含む、及び／又は（ａ）の前記少なくとも７つのペプチドのうちの１つ以上を含むか又は提示する免疫細胞を含む、
請求項１９に記載の方法。

【請求項27】

（ｄ）が前記対象に投与され、前記ＣＴＬがin vitroで生成、ex vivoで生成、又はin vivoで生成され、ドナーから得られる、
請求項１９に記載の方法。

【請求項28】

（ｅ）が前記対象に投与される、
請求項１９に記載の方法。

【請求項29】

前記ＷＴ１発現癌は、固形腫瘍である、
請求項１９に記載の方法。

【請求項30】

前記ＷＴ１発現癌は、血液悪性腫瘍である、
請求項１９に記載の方法。

【請求項31】

前記ＷＴ１発現癌は、白血病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞腫瘍、卵巣癌、子宮癌、甲状腺癌、肝癌、腎癌、カポジ肉腫、肉腫、肝細胞癌、ウィルムス腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫（例えば悪性胸膜中皮腫）、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、
請求項１９記載の方法。

【請求項32】

少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を前記対象に投与することをさらに含む、
請求項１９に記載の方法。

【請求項33】

前記チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１キナーゼ及びＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、並びにＢ－７ファミリーリガンドから選択されるチェックポイントタンパク質をブロック又は阻害する、
請求項３２記載の方法。

【請求項34】

前記チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、ＭＥＤＩ６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＡＵＮＰ－１２、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ９３５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７、ＢＭＳ－９８６０１６、ＧＳＫ２８３１７８１、ＩＭＰ３２１、リルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）、ＩＰＨ２１０１（１－７Ｆ９）、インドキシモド（ＮＬＧ９１８９）、ＮＬＧ９１９、ＩＮＣＢ０２４３６０、ＰＦ－０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）、及びＭＥＤＩ６４６９から選択される、
請求項３２記載の方法。

【請求項35】

対象におけるＷＴ１発現癌に特異的なＴ細胞の形成及び増殖を誘導する方法であって、
YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）
からなる少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせ（ａ）、
前記（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸（ｂ）、又は
前記（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸を含む、及び／又は前記（ａ）の少なくとも７つのペプチドを含む又は提示する免疫細胞（ｃ）、又は
（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）のうちの２つ、又は３つの組み合わせ（ｄ）
であるＷＴ１送達剤のうちの１つ以上を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項36】

（ａ）が前記対象に投与され、前記少なくとも７つの単離されたＷＴ１ペプチドが単一の組成物で投与される、
請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

（ａ）が前記対象に投与され、前記少なくとも７つの単離されたＷＴ１ペプチドが複数の組成物で投与され、各組成物が７つの単離されたＷＴ１ペプチドのうちの１つ以上を含む、
請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

（ｂ）が前記対象に投与され、前記核酸が単一の組成物で投与される、
請求項３５に記載の方法。

【請求項39】

（ｂ）が前記対象に投与され、前記核酸が複数の組成物で投与され、各組成物が、７つの単離されたＷＴ１ペプチドのうちの１つ以上をコードする核酸を含む、
請求項３５に記載の方法。

【請求項40】

（ｂ）の前記核酸が、ウイルスベクター又は非ウイルスベクター中にあるか、又はそれに関連している、
請求項３５に記載の方法。

【請求項41】

（ｃ）が前記対象に投与され、前記免疫細胞が単一組成物で投与される、
請求項３５に記載の方法。

【請求項42】

（ｃ）が前記対象に投与され、前記免疫細胞が複数の組成物で投与され、各組成物が、（ａ）の前記少なくとも７つのペプチドのうちの１つ以上をコードする核酸を含む、及び／又は（ａ）の少なくとも７つのペプチドのうちの１つ以上を含むか又は提示する免疫細胞を含む、
請求項３５に記載の方法。

【請求項43】

（ｄ）が前記対象に投与される、
請求項３５に記載の方法。

【請求項44】

前記ＷＴ１発現癌は、固形腫瘍である、
請求項３５に記載の方法。

【請求項45】

前記ＷＴ１発現癌は、血液悪性腫瘍である、
請求項３５に記載の方法。

【請求項46】

前記ＷＴ１発現癌は、白血病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞腫瘍、卵巣癌、子宮癌、甲状腺癌、肝癌、腎癌、カポジ肉腫、肉腫、肝細胞癌、ウィルムス腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫（例えば悪性胸膜中皮腫）、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、
請求項３５記載の方法。

【請求項47】

少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を、前記対象に投与することをさらに含む、
請求項３５に記載の方法。

【請求項48】

前記チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１キナーゼ、ＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、Ｂ－７ファミリーリガンドの中から選択されるチェックポイントタンパク質をブロック又は阻害する、
請求項４７記載の方法。

【請求項49】

前記チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ、ＭＥＤＩ６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＡＵＮＰ－１２、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ９３５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７、ＢＭＳ－９８６０１６、ＧＳＫ２８３１７８１、ＩＭＰ３２１、リルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）、ＩＰＨ２１０１（１－７Ｆ９）、インドキシモド（ＮＬＧ９１８９）、ＮＬＧ９１９、ＩＮＣＢ０２４３６０、ＰＦ－０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）、及びＭＥＤＩ６４６９の中から選択される、
請求項４７記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願を相互参照
本出願は、２０１９年４月１０日出願の米国仮出願第６２／８３２，２４４号の優先権を主張するものであり、図表、核酸配列、アミノ酸配列を含む内容を参照することにより組み込まれる。

【0002】

本出願の配列表は、２０２０年４月９日に作成され、４７ＫＢである「Seq－List.txt」とラベル付けされたものである。配列表の全内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

本発明は、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を減少させ、そしてそれに対する免疫応答を誘導する方法、及び同じ目的に有用な組成物を提供する。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0004】

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【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明はＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を減少させ、そしてそれに対する免疫応答を誘導する方法、及び同じ目的に有用な免疫原性組成物を含む組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象に、少なくとも以下の７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせを投与することを含むそのような使用のための方法を提供する：YMFPNAPYL（配列番号１２４）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、NLMNLGATL（配列番号２１）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）。いくつかの実施形態において、７つ全てのペプチドは、多価（７価）免疫療法組成物として、対象に投与される組成物中に存在する。

【0006】

少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、１つ以上のＷＴ１送達剤を対象に投与することによって対象に投与することができ、その結果、ＷＴ１ペプチドの組み合わせの送達及びＷＴ１発現癌に対する免疫応答が誘導される。使用されるこれらのＷＴ１送達剤の例には、（ｉ）１つ以上の単離されたＷＴ１ペプチド自体、（ｉｉ）ＷＴ１ペプチドをコードする１つ以上の核酸、及び（ｉｉｉ）ＷＴ１ペプチド又はＷＴ１ペプチドの組み合わせをコードする核酸の組み合わせを含むか又は提示する１つ以上の免疫細胞、あるいは（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）の２つ又は３つの任意の組み合わせが含まれる。

【0007】

ＷＴ１ペプチドをコードする核酸のような他の形態のＷＴ１送達剤を介して、又はＷＴ１ペプチドを含むかもしくは提示する免疫細胞を介して、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドのうちの１つ以上をペプチドとして投与し、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドのうちの他のものを投与することが所望される。従って、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドは、ペプチドの形態で、又はペプチドをコードする核酸の形態で、又はＷＴ１ペプチドもしくはコード核酸を含む、もしくは提示する免疫細胞の形態で、又はこれらの形成のうちの２つもしくは３つ全て（すなわち、ペプチド及び核酸、ペプチド及び免疫細胞、核酸及び免疫細胞、又はペプチド、核酸、及び免疫細胞）で投与される。このように、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組合せは、（ｉ）個別に又は任意の１つ以上の組合せで、７つ以上のペプチドとして、又は（ｉｉ）個別に又は任意の１つ以上の組合せで、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組合せをコードする核酸として、又は（ｉｉｉ）個別に又は任意の１つ以上の組合せで、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド又は少なくとも７つ以上のペプチドの組合せをコードする核酸の組合せを含む又は提示する免疫細胞として投与されてもよい。いくつかの実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドは、これらの形態のうちの２つ又は３つ全ての組み合わせとして投与される（すなわち、（ｉ）及び（ｉｉ）、又は（ｉ）及び（ｉｉｉ）、又は（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）、又は（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）））。

【0008】

任意で、ＷＴ１発現癌に対するＷＴ１送達剤（ペプチド、ペプチドをコードする核酸、及び免疫細胞）の代わりに、又はそれに加えて、ＷＴ１発現癌に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を対象に投与することができ、ＣＴＬは、少なくとも７つの単離ペプチド:YMFPNAPYL（配列番号１２４）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、NLMNLGATL（配列番号２１）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）の組み合わせによって誘導される。

【0009】

任意で、７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせ、７つのＷＴ１ペプチドをコードする核酸、７つのＷＴ１ペプチドを含むか又は提示する免疫細胞、及び／又はＷＴ１ペプチドをコードする核酸を含む及び／又はＷＴ１ペプチドをコードする核酸を含む又は提示する免疫細胞、あるいは７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬに加えて、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチド、又は１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬが、組成物に含まれてもよく、又は対象に投与されてもよい。１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１タンパク質のフラグメントである天然ペプチドであってもよく、又はそれらはその免疫原性を増強する１つ以上の修飾を有するペプチドであってもよく、又は混合物であってもよい。このような修飾はアミノ酸変化（例えば、ヘテロクリティックペプチド）、又は任意の他の修飾である。１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１送達剤を介して対象に投与されてもよく、又はＷＴ１発現癌に対するＣＴＬであって、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドによって誘導されたものが投与されてもよい。

【0010】

任意で、ＷＴ１送達剤及び／又はＣＴＬの投与前、投与中、又は投与後に、１つ以上のチェックポイント阻害剤を対象に投与してもよい。１つ以上のチェックポイント阻害剤（免疫チェックポイント阻害剤としても知られる）は、免疫チェックポイントタンパク質をブロック又は阻害する化合物又は薬剤である。チェックポイント阻害剤である化合物又は薬剤の例としては、小分子、ペプチド、及び抗体が挙げられるがこれらに限定されるものではない。抗体の例としては、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＡＵＮＰ－１２、ＢＭＳ９３６５５９、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ９３５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７、ＢＭＳ－９８６０１６、ＧＳＫ２８３１７８１、ＩＭＰ３２１、リルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）、ＩＰＨ２１０１（１－７Ｆ９）、インドキシモド（ＮＬＧ９１８９）、ＮＬＧ９１９、ＩＮＣＢ０２４３６０、ＰＦ－０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0011】

一実施形態において、１つ以上のＷＴ１送達剤又はＣＴＬ、及び１つ以上のチェックポイント阻害剤が、対象に最大限利点を与えるスケジュールに従って、それぞれ対象に投与される方法が具体化される。従って、１つ以上のＷＴ１送達剤又はＣＴＬ及び１つ以上のチェックポイント阻害剤は、必ずしも同時に、又は同じ組成物中で、又はそれぞれ同じ期間にわたって、又はそれぞれ同じ経路によって投与されるわけではない。各ＷＴ１ペプチドは、各チェックポイント阻害剤と同様に、特定のスケジュールに従って投与することができる。一実施形態において、少なくとも１つのＷＴ１ペプチド及び少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の投薬スケジュールが同時である。一実施形態において、少なくとも１つのＷＴ１ペプチド及び少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の投薬スケジュールは重複する。一実施形態において、少なくとも１つのＷＴ１送達剤又はＣＴＬ及び少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、同じ組成物中に存在する。一実施形態において、本明細書に具体化される方法は、ＷＴ１送達剤又はＣＴＬ及びチェックポイント阻害剤単独よりも、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を減少させ、そしてそれに対する免疫応答を誘導するための増強又は増加した能力を提供する。一実施形態において、本明細書に記載の方法によって提供される、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を低下させ、その免疫応答を誘導する能力は、ＷＴ１送達剤又はＣＴＬ単独及びチェックポイント阻害剤単独の効果の組み合わせよりも大きい。

【0012】

ＷＴ１送達剤、又はＣＴＬの用量レベル及び投薬スケジュール、チェックポイント阻害剤の用量レベル及び投薬スケジュール、投与経路、ならびに他の投与態様は、対象に対する最大の利益のために最適化される。本明細書中の実施形態は、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を減少させ、そしてそれに対する免疫応答を誘導する改善された方法、及び同じ目的に有用な改善された組成物を提供する。

【0013】

本明細書中に具体化される方法に従う癌は、ＷＴ１タンパク質又はそのフラグメントを発現する任意の癌である。一実施形態において、癌は卵巣癌である。他の実施形態において、癌は乳癌である。他の実施形態において、癌は、結腸癌又は結腸直腸癌である。他の実施形態において、癌は、中皮腫である。他の実施形態において、癌は、白血病である。他の実施形態において、癌は、ウィルムス腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、黒色腫、中皮腫（例えば、悪性胸膜中皮腫）、胃癌、前立腺癌、胆道癌、泌尿器系癌、膠芽腫、軟部組織肉腫、骨肉腫、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本発明は、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を減少させ、そしてそれに対する免疫応答を誘導する方法、及び同じ目的に有用な免疫原性組成物を含む組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド又はそれに対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の組み合わせを投与することを含む、そのような使用のための方法を提供する。ここで、組み合わせはYMFPNAPYL（配列番号１２４、ＷＴ１－Ａ１とも呼ばれる）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１、ＷＴ１－４２７ロングとも呼ばれる）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２、ＷＴ１－３３１ロングとも呼ばれる）、SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５、ＷＴ－１２２Ａ１ロングとも呼ばれる）、NLMNLGATL（配列番号２１、ＮＬＭショートとも呼ばれる）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６、ＷＮＬＭ又はＮＬＭロングとも呼ばれる）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５、ＷＮＹＭ又はＮＹＭロングとも呼ばれる）の各々を含む。７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、１つ以上のチェックポイント阻害剤を伴って、又は伴わずに投与される。いくつかの実施形態において、免疫療法組成物は、ＷＴ１発現腫瘍を処置したり、ＷＴ１発現癌に特異性Ｔ細胞の形成及び増殖をin vitro、ex vivo又はin vivoで誘導するために使用され、組合せが前述の１つ又は複数に対して相乗効果を有する。

【0015】

少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせの送達及びＷＴ１発現癌に対する免疫応答の誘導をもたらす１つ以上の薬剤を対象に投与することによって（すなわち、１つ以上のＷＴ１送達剤）、対象に投与することができる。少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの各々は、１つ以上の同じ又は異なるＷＴ１送達剤において、及び１つ以上のそれらの組み合わせにおいて送達される。使用されるこれらのＷＴ１送達剤の例としては、（ｉ）単離されたＷＴ１ペプチド、（ｉｉ）少なくとも１つのＷＴ１ペプチドをコードする核酸、及び（ｉｉｉ）少なくとも１つのＷＴ１ペプチド又は少なくとも１つのＷＴ１ペプチドをコードする核酸を含むか又は提示する免疫細胞が挙げられる。従って、いくつかの実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、７つの単離されたＷＴ１ペプチドの形態で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は対象に投与され、組成物は７つ全ての単離されたＷＴ１ペプチドを含む。

【0016】

任意で、ＷＴ１送達剤（ペプチド、ペプチドをコードする核酸、及び免疫細胞）の代わりに、又はこれに加えて、ＷＴ１発現癌に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を対象に投与してもよく、ＣＴＬは、少なくとも７つの単離ペプチド：YMFPNAPYL（配列番号１２４）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、NLMNLGATL（配列番号２１）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）の組み合わせによって誘導される。ＣＴＬは、in vitro又はex vivoで作製されるか、又はドナーにおいてin vivoで作製され、ドナーから得られるＷＴ１特異的ＣＴＬを含む。

【0017】

ＷＴ１送達剤又はＣＴＬは、キャリア、賦形剤、又は希釈剤を含む組成物で提供されてもよく、その中でアジュバントであってもよい。本明細書中に具体化される方法及び組成物において使用されるペプチド成分の選択を後述するが、これらに限られるものではない。

【0018】

卵巣癌は、最も一般的な婦人科悪性腫瘍の１つであり、米国の女性における癌による死亡原因の第５位となっている。毎年２２，０００を超える症例が診断され、年間１５，５００人の死亡が推定される［１］。患者の大半は、発症時に広範囲に病変が認められている［２］。進行期症例の５年生存率は３０％未満にとどまっている［１］。初期化学療法後の完全な臨床的寛解は、多くの患者で期待されるが、ルーチンのケアの問題として実施されることの多いセカンドルック開腹術のレビューでは、実際に無病状態である患者は５０％未満であることが示されている［３］。さらに、セカンドルック手術が陰性であった患者の半数近くが再発し、追加処置が必要となる［４］。多くの患者は、追加の化学療法により２回目の臨床的完全奏効を達成する。しかしながら、ほぼ全ての患者が９～１１ヵ月の短い寛解間隔の後に再発する［５］。その後の寛解は、化学療法抵抗性が広範に発現するまでの期間が徐々に短くなるため、寛解期間を延長する、又は再発を予防するための効果的な戦略が必要である［２］。

【0019】

抗体及びＴ細胞エフェクターはいずれも、卵巣癌モデルにおいて利益をもたらすことが示されている。抗体は、早期の組織浸潤を抑制することが注目されている［６］。前臨床モデルでも、受動的に投与された抗体とワクチン誘導抗体の両方の使用により、循環腫瘍細胞のクリアランス及び全身性微小転移の排除が実証されている。Ｔ細胞エフェクターに関しては、全般的に活性化された免疫応答が、進行性卵巣癌患者において、臨床転帰の改善と関連していることが示されている。Ｚｈａｎｇらは、腫瘍細胞島内に腫瘍浸潤性Ｔ細胞が存在すると、無増悪生存期間、全生存期間共に改善に関連したことを示した［７］。逆に、Ｔ調節細胞の浸潤は予後を悪くする［８］。

【0020】

二次以上の寛解期にある卵巣癌患者のデータから、予測可能な形で再発することが確認されている［９］。近年、卵巣癌は、様々な新規免疫に基づくアプローチにより標的化されている。抗体療法には、ＣＡ１２５抗原を標的としたモノクローナル抗体療法であるオレゴボマブ［１０］、ＣＡ－１２５を標的とした抗イディオタイプ抗体であるアバゴボマブ［１１］、モノクローナルヒト化抗ＨＥＲ２抗体であるトラスツズマブ［１２］が含まれている。他の戦略には、インターフェロン－γ［１３、１４］及びＩＬ－２［１５］等のサイトカイン療法が含まれている。Ｌｅｗｉｓ ｙ［１６］、ＭＵＣ１［１７］、ＨＬＡ制限ペプチドＮＹ－ＥＳＯ－１ｂ［１８］及びＫＨ－１－ＫＬＨコンジュゲート等の他の抗原による能動免疫化も評価されている。これまでの戦略は無効であり、現在利用可能な治療法では効果的に治療されていない卵巣癌だけでなく、他の多数の癌に対する治療法の有効性を高めるために、新たな治療法が必要とされている。

【0021】

ＷＴ１は、ウィルムス腫瘍１又はＷＴ１遺伝子の遺伝子産物を指す。ウィルムス腫瘍抑制遺伝子ＷＴ１は、小児腎腫瘍で初めて同定されたが、ＷＴ１は、他の複数の血液悪性腫瘍や中皮腫を含む固形腫瘍でも高発現している［１９，２０］。ＷＴ１は、元々、染色体１１ｐ１３の領域へのｃＤＮＡマッピングによって同定された。ＷＴ１ ｃＤＮＡは、４つのＫｒｕｐｐｅｌジンクフィンガーを含むタンパク質をコードし、４つの異なる転写因子を生じる選択的スプライシングの複雑なパターンを含む。各ＷＴ１アイソフォームは、異なるＤＮＡ結合と転写活性を有しており［２１］、細胞増殖、分化、アポトーシス、臓器発生及び性決定に関与する様々な遺伝子を正又は負に調節することができる。ＷＴ１は、通常、腎臓、性腺、心臓、中皮及び脾臓を含む胚発生中の中胚葉起源の組織で発現される［２２］。通常成人組織では、ＷＴ１の発現は、通常ＣＤ３４＋造血幹細胞、筋上皮前駆細胞、腎足細胞及び精巣や卵巣の一部の細胞の核では低レベルに限られている［２３］。ＷＴ１は、マウス及びヒトにおいて高度に相同であり（アミノ酸レベルで９６％）、そして類似の組織分布及び機能を有する［２４、２５］。元々は癌抑制遺伝子として記述されていたが、ＷＴ１タンパク質は腫瘍形成に関与しているようにみうけられる。

【0022】

提案された作用機序と相まって卵巣癌におけるＷＴ１蛋白質の強い発現は、中皮腫、白血病、ウィルムス腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、メラノーマ、胃癌、前立腺癌、胆道癌、泌尿器系癌、膠芽腫、軟部組織肉腫、骨肉腫、及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）等のＷＴ１蛋白質も発現するが、これらに限定されない多くの他の癌の中でも、免疫療法の合理的な対象となっている。卵巣癌では、その発現頻度が非常に高いため、病理医は、ＷＴ１の免疫組織化学染色（発現を記述し、「陽性」又は「陰性」と判定するための標準化された規約を用いて）をルーチンに用いて、上皮性卵巣癌と他の腫瘍との鑑別に役立てている。ＷＴ１は、漿液性卵巣癌のマーカーとして特に感度・特異度が高い［２６］。卵巣組織マイクロアレイは、漿液性卵巣癌の７０～８０％がＷＴ１を発現することを示唆しており、その結果、患者の大半が標的を有し、研究参加に適格となる。

【0023】

７つのＷＴ１ペプチドと組み合わせて使用される１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１タンパク質のフラグメントである天然ペプチドである。一実施形態において、さらなる１つ以上のＷＴ１ペプチドは、LVRHHNMHQRNMTKL（配列番号３）又はNKRYFKLSHLQMHSR（配列番号４）である。他の実施形態において、１つ以上のさらなるペプチドは、SGQARMFPNAPYLPSCLES（配列番号５）又はQARMFPNAPYLPSCL（配列番号６）である。他の実施形態において、さらなる１つ以上のペプチドは、RMFPNAPYL（配列番号７）、SLGEQQYSV（配列番号８）、ALLPAVPSL（配列番号９）、NLGATLKGV（配列番号１０）、DLNALLPAV（配列番号１１）、GVFRGIQDV（配列番号１２）、KRYFKLSHL（配列番号１３）、ALLLRTPYS（配列番号１４）、CMTWMQMNL（配列番号１５）、NMHQRNMTK（配列番号１６）、QMNLGATLK（配列番号１７）、FMCAYPGCNK（配列番号１８）又はKLSHLQMHSR（配列番号１９）の中から選択される。

【0024】

他の実施形態において、さらなる１つ以上のＷＴ１ペプチドは、NQMNLGATL（配列番号２０）、NYMNLGATL（配列番号２２）、CMTWNQMNLGATLKG（配列番号２３）、CMTWNLMNLGATLKG（配列番号２４）、WNQMNLGATLKGVAA（配列番号２５）、MTWNQMNLGATLKGV（配列番号２７）、TWNQMNLGATLKGVA（配列番号２８）、CMTWNLMNLGATLKG（配列番号２９）、MTWNLMNLGATLKGV（配列番号３０）、TWNLMNLGATLKGVA（配列番号３１）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号３２）、MTWNYMNLGATLKGV（配列番号３３）、TWNYMNLGATLKGVA（配列番号３４）、CMTWNQMNLGATLKGVA（配列番号３５）、WNQMNLGAT（配列番号３６）、TWNQMNLGA（配列番号３７）、MTWNQMNLG（配列番号３８）、CMTWNLMNLGATLKGVA（配列番号３９）、WNLMNLGAT（配列番号４０）、MNLGATLKG（配列番号４１）、MTWNQMNLG（配列番号４２）、CMTWNYMNLGATLKGVA（配列番号４３）、MNLGATLKG（配列番号４４）、MTWNQMNLG（配列番号４５）、GALRNPTAC（配列番号４６）、GYLRNPTAC（配列番号４７）、GALRNPTAL（配列番号４８）、YALRNPTAC（配列番号４９）、GLLRNPTAC（配列番号５０）、RQRPHPGAL（配列番号５１）、RYRPHPGAL（配列番号５２）、YQRPHPGAL（配列番号５３）、RLRPHPGAL（配列番号５４）、RIRPHPGAL（配列番号５５）、GALRNPTAC（配列番号５６）、GALRNPTAL（配列番号５７）、RQRPHPGAL（配列番号５８）、RLRPHPGAL（配列番号５９）、RIRPHPGAL（配列番号６０）、QFPNHSFKHEDPMGQ（配列番号６１）、QFPNHSFKHEDPMGQ（配列番号６２）、HSFKHEDPM（配列番号６３）、HSFKHEDPY（配列番号６４）、HSFKHEDPK（配列番号６５）、KRPFMCAYPGCYKRY（配列番号６６）、SEKRPFMCAYPGCNK（配列番号６７）、KRPFMCAYPGCNK（配列番号６８）、FMCAYPGCN（配列番号６９）、FMCAYPGCY（配列番号７０）又はFMCAYPGCK（配列番号７１）の中から選択される。

【0025】

他の実施形態において、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、RQRPHPGAL（配列番号７２）、GALRNPTAC（配列番号７３）、PLPHFPPSL（配列番号７４）、HFPPSLPPT（配列番号７５）、THSPTHPPR（配列番号７６）、AILDFLLLQ（配列番号７７）、PGCLQQPEQ（配列番号７８）、PGCLQQPEQQG（配列番号７９）、KLGAAEASA（配列番号８０）、ASGSEPQQM（配列番号８１）、RDLNALLPAV（配列番号８２）、GGCALPVSGA（配列番号８３）、GAAQWAPVL（配列番号８４）、LDFAPPGAS（配列番号８５）、LDFAPPGASAY（配列番号８６）、SAYGSLGGP（配列番号８７）、PAPPPPPPP（配列番号８８）、ACRYGPFGP（配列番号８９）、SGQARMFPN（配列番号９０）、RMFPNAPYL（配列番号９１）、PSCLESQPA（配列番号９２）、NQGYSTVTF（配列番号９３）、HHAAQFPNH（配列番号９４）、HSFKHEDPM（配列番号９）、CHTPTDSCT（配列番号９６）、CTGSQALLL（配列番号９７）、TDSCTGSQA（配列番号９８）、RTPYSSDNL（配列番号９９）、NLYQMTSQLE（配列番号１００）、WNQMNLGAT（配列番号１０１）、NQMNLGATL（配列番号１０２）、WNQMNLGATLK（配列番号１０３）、CMTWNQMNLGATLKG（配列番号１０４）、NLGATLKGV（配列番号１０５）、LGATLKGVAA（配列番号１０６）、TLGVAAGS（配列番号１０７）、GYESDNHTT（配列番号１０８）、FMCAYPGCNK（配列番号１０９）、KRPFMCAYPGC（配列番号１１０）、RKFSRSDHL（配列番号１１１）、LKTHTTRTHT（配列番号１１２）、NMHQRNHTKL（配列番号１１３）、LLAAILDFL（配列番号１１４）、CLQQPEQQGV（配列番号１１５）、DLNALLPAV（配列番号１１６）、ALLPAVPSL（配列番号１１７）、VLDFAPPGA（配列番号１１８）、CMTWNQMNL（配列番号１１９）、QARMFPNAPY（配列番号１２０）、ALRNPTACPL（配列番号１２１）、YPGCNKRYF（配列番号１２２）又はAPVLDFAPPGASAYG（配列番号１２３）の中から選択される。

【0026】

他の実施形態において、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＷＯ２０１７０８７８５７号、ＷＯ２０１４１１３４９０号、又はＷＯ２０１９００６４０１号に記載されている任意のペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0027】

他の実施形態において、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＷＯ２００５０５３６１８号、ＷＯ２００７０４７７６３号、ＷＯ２００７０４７７６４号、ＷＯ２００７１２０６７３号、ＵＳ２００６００８４６０９号、ＷＯ２０１４１１３４９０号及びＷＯ２０１３１０６８３４号に記載されている任意の天然ＷＴ１ペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0028】

他の実施形態において、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＵＳ２０１１００７０２５１Ａ１号、ＵＳ７，０６３，８５４Ｂ１号、ＵＳ７，０６３，８５４号、ＵＳ７９０１６９３号、ＵＳ７６６２３８６号、ＵＳ７，０６３，８５４号、ＵＳ７１１５２７２号、ＵＳ７３６８１１９号、ＵＳ７３２９４１０号、ＵＳ７１４４５８１号、ＵＳ７３２３１８１号、ＵＳ７６５５５２４９号、ＵＳ７５５３４９４号、ＵＳ７６０８６８５号、ＵＳ７３８０８７１号、ＵＳ７０３０２１２号、ＵＳ７８０７７９２号、ＵＳ７５１７９５０号、ＵＳ２０１０／０１６６７３８号、ＵＳ２０１１／００７０２５１号、ＵＳ２００９／０１４３２９１号及びＷＯ２００３０３７０６０号に記載されている任意の天然ＷＴ１ペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0029】

他の実施形態において、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＵＳ７６６６６９８５Ｂ２号、ＵＳ２００８００７０８３５Ａ１号、ＵＳ２００７０１２８２０７Ａ１号、ＵＳ７９１５３９Ｂ２号、ＵＳ２０１１０１３６１４１Ａ１号、ＵＳ７５９８２２１Ｂ２号、ＵＳ２０１００１１１９８６Ａ１号、ＵＳ２０１０００９２５２２Ａ１号、ＵＳ２００３００８２１９４９４Ａ１号及びＷＯ２００１０２５２７３Ａ２号に記載されている任意の天然ＷＴ１ペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0030】

１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、天然のペプチド配列に対する免疫原性を増強するための１つ以上のヘテロクリティック修飾を含むような、修飾ＷＴ１ペプチドフラグメントであってもよい。他の実施形態において、さらなるＷＴ１ペプチドは、ＱＡＹＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬ（配列番号１２６）である。他の実施形態において、１つ以上のさらなるペプチドは、YLGEQQYSV（配列番号１２７）、YLLPAVPSL（配列番号１２８）、YLGATLKGV（配列番号１２９）、YLNALLPAV（配列番号１３０）、GLRRGIQDV（配列番号１３１）、KLYFKLSHL（配列番号１３２）、ALLLRTPYV（配列番号１３３）、YMTWNQMNL（配列番号１３４）、NMYQRNMTK（配列番号１３５）、NMHQRVMTK（配列番号１３６）、NMYQRVMTK（配列番号１３７）、QMYLGATLK（配列番号１３８）、QMNLGVTLK（配列番号１３９）、QMYLGVTLK（配列番号 １４０）、FMYAYPGCNK（配列番号１４１）、FMCAYPFCNK（配列番号１４２）、FMYAYPFCNK（配列番号１４３）、KLYHLQMHSR（配列番号１４４）KLSHLQMHSK（配列番号１４５）及びKLYHLQMHSK（配列番号１４６）のうちの任意のものである。

【0031】

他の実施形態において、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、NQMNLGATL（配列番号１４７）、NYMNLGATL（配列番号１４９）、CMTWNQMNLGATLKG（配列番号１５０）、CMTWNLMNLGATLKG（配列番号１５１）、WNQMNLGATLKGVAA（配列番号１５２）、MTWNQMNLGATLKGV（配列番号１５４）、TWNQMNLGATLKGVA（配列番号１５５）、CMTWNLMNLGATLKG（配列番号１５６）、MTWNLMNLGATLKGV（配列番号１５７）、TWNLMNLGATLKGVA（配列番号１５８）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号１５９）、MTWNYMNLGATLKGV（配列番号１６０）、TWNYMNLGATLKGVA（配列番号１６１）、CMTWNQMNLGATLKGVA（配列番号１６２）、WNQMNLGAT（配列番号１６３）、TWNQMNLGA（配列番号１６４）、MTWNQMNLG（配列番号１６５）、CMTWNLMNLGATLKGVA（配列番号１６６）、WNLMNLGAT（配列番号１６７）、MNLGATLKG（配列番号１６８）、MTWNQMNLG（配列番号１６９）、CMTWNYMNLGATLKGVA（配列番号１７０）、MNLGATLKG（配列番号１７１）、MTWNQMNLG（配列番号１７２）、GALRNPTAC（配列番号１７３）、GYLRNPTAC（配列番号１７４）、GALRNPTAL（配列番号１７５）、YALRNPTAC（配列番号１７６）、GLLRNPTAC（配列番号１７７）、RQRPHPGAL（配列番号１７８）、RYRPHPGAL（配列番号１７９）、YQRPHPGAL（配列番号１８０）、RLRPHPGAL（配列番号１８１）、RIRPHPGAL（配列番号１８２）、GALRNPTAC（配列番号１８３）、GALRNPTAL（配列番号１８４）、RQRPHPGAL（配列番号１８５）、RLRPHPGAL（配列番号１８６）、RIRPHPGAL（配列番号１８７）、QFPNHSFKHEDPMGQ（配列番号１８８）、QFPNHSFKHEDPMGQ（配列番号１８９）、HSFKHEDPM（配列番号１９０）、HSFKHEDPY（配列番号１９１）、HSFKHEDPK（配列番号１９２）、KRPFMCAYPGCYKRY（配列番号１９３）、SEKRPFMCAYPGCNK（配列番号１９４）、KRPFMCAYPGCNK（配列番号１９５）、FMCAYPGCN（配列番号１９６）、FMCAYPGCY（配列番号１９７）はFMCAYPGCK（配列番号１９８）のうちの任意の修飾ＷＴ１ペプチドである。

【0032】

他の実施形態において、ＷＴ１ペプチドは、ＷＯ２００５０５３６１８号、ＷＯ２００７０４７７６３号、ＷＯ２００７０４７７６４号、ＷＯ２００７１２０６７３号、ＵＳ２００６００８４６０９号、ＷＯ２０１４１１３４９０号及びＷＯ２０１３１０６８３４号に記載されている任意の修飾ＷＴ１ペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0033】

他の実施形態において、ＷＴ１ペプチドは、ＵＳ２０１１００７０２５１Ａ１号、ＵＳ７，０６３，８５４Ｂ１号、ＵＳ７，０６３，８５４号、ＵＳ７９０１６９３、ＵＳ７６６２３８６号、７，０６３，８５４号、ＵＳ７１１５２７２号、ＵＳ７３６８１１９号、ＵＳ７３２９４１０号、ＵＳ７１４４５８１号、ＵＳ７３２３１８１号、ＵＳ７６５５５２４９号、ＵＳ７５５３，４９４号、ＵＳ７６０８６８５号、ＵＳ７３８０８７１号、ＵＳ７０３０２１２号、ＵＳ７８０７７９２号、ＵＳ７５１７９５０号、ＵＳ２０１０／０１６６７３８号、ＵＳ２０１１／００７０２５１号、ＵＳ２００９／０１４３２９１号及びＷＯ２００３０３７０６０号に記載されている任意の修飾ＷＴ１ペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0034】

他の実施形態において、ＷＴ１ペプチドは、ＵＳ７６６６６９８５Ｂ２号、ＵＳ２００８００７０８３５Ａ１号、ＵＳ２００７０１２８２０７Ａ１号、ＵＳ７９１５３９Ｂ２号、ＵＳ２０１１０１３６１４１Ａ１号、ＵＳ７５９８２２１Ｂ２号、ＵＳ２０１００１１１９８６Ａ１号、ＵＳ２０１０００９２５２２Ａ１号、ＵＳ２００３００８２１９４９４Ａ１号及びＷＯ２００１０２５２７３Ａ２号に記載されている任意の修飾ＷＴ１ペプチドである。上記は、その全体が本明細書に援用される。

【0035】

本明細書中に記載される目的に有用な１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、単一のペプチド又はペプチドの組み合わせである。１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドはそれぞれ、天然のＷＴ１ペプチド又は修飾されたＷＴ１ペプチドである。２つ以上のペプチドが使用される場合、それぞれ、個別に（別々の処方で）又は別の１つ以上のペプチドとの組み合わせで（同じ処方で）投与される。１つ以上のペプチドは、キャリア、希釈剤又は賦形剤と組み合わせて投与される。一実施形態において、ペプチドは、アジュバントと組み合わせて投与される。各ペプチドは、異なるアジュバント又はアジュバントの組み合わせと共に投与されてもよく、又は、複数のペプチドは、複数のアジュバントを組み合わせたアジュバントと共に、２つ以上のペプチドの組み合わせで投与されてもよい。１つ又は複数のペプチドを含有する免疫原又は組成物は、本明細書ではワクチン、ペプチドワクチン、ＷＴ１ワクチン等と呼ぶ。

【0036】

アジュバントは、ミョウバン塩及び他のミネラルアジュバント、細菌産物又は細菌由来アジュバント、テンソアクティブ剤（例えば、サポニン）、水中油（ｏ／ｗ）及び油中水（ｗ／ｏ）エマルジョン、リポソームアジュバント、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１２、及びＩＦＮ－ガンマ）、アルファ－ガラクトシルセラミド類似体のような任意の部類のものであってよい。アジュバントの例としては、モンタニド乳剤、ＱＳ２１、フロイント完全又は不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、及びミョウバンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、アジュバントは、ＷＴ１ペプチドに対する免疫系のＣＴＬ応答を増強する薬剤、例えば、オリーブ油由来の植物グレード（ＶＧ）オレイン酸を含有する界面活性剤マンニドモノオレエート（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ５１ ＶＧ ｗ／ｏエマルジョン）である。アジュバントは、１つ以上のＷＴ１ペプチドと同じ組成物で、又は１つ以上のチェックポイント阻害剤と同じ組成物で、又は１つ以上のＷＴ１ペプチド及び１つ以上のチェックポイント阻害剤の両方と同じ組成物で、又は１つ以上のＷＴ１ペプチド及び１つ以上のチェックポイント阻害剤とは別の組成物で投与される。

【0037】

他の実施形態において、前述のペプチドのいずれか（７つのＷＴ１ペプチド、及び、任意で、１つ又は複数のさらなるＷＴ１ペプチドの組合せ）は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの一次又は二次アンカー残基に１つ又は複数の点突然変異を有する。一実施形態において、ペプチドは、クラスＩ結合モチーフの２位又は９位、又はクラスＩ結合モチーフの２次アンカー残基１位、３位、４位、５位、６位、７位又は８位に点突然変異を有する。一実施形態において、ペプチド、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの位置１はグリシン、トレオニン又はフェニルアラニンに変更される。一実施形態において、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの２位は、ロイシン又はイソロイシンに変更される。一実施形態において、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの６位は、バリン、グルタミン又はヒスチジンに変更される。一実施形態において、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの９位は、バリン、アラニン、トレオニン、イソロイシン、又はシステインに変更される。

【0038】

任意で、７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、ＷＯ２０１４１１３４９０号に開示されている１つ又は複数の天然又は修飾ＷＴ１ペプチド、例えば、NQMNLGATL（配列番号１４７）、NLMNLGATL（配列番号）、NYMNLGATL（配列番号１４９）、CMTWNQMNLGATLKG（配列番号１５０）、CMTWNLMNLGATLKG（配列番号１５１）、WNQMNLGATLKGVAA（配列番号１５２）、MTWNQMNLGATLKGV（配列番号１５４）、TWNQMNLGATLKGVA（配列番号１５５）、CMTWNLMNLGATLKG（配列番号１５６）、MTWNLMNLGATLKGV（配列番号１５７）、TWNLMNLGATLKGVA（配列番号１５８）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号１５９）、MTWNYMNLGATLKGV（配列番号１２６０）、TWNYMNLGATLKGVA（配列番号１６１）、CMTWNQMNLGATLKGVA（配列番号１６２）、WNQMNLGAT（配列番号１６３）、TWNQMNLGA（配列番号１６４）、MTWNQMNLG（配列番号１６５）、CMTWNLMNLGATLKGVA（配列番号１６６）、WNLMNLGAT（配列番号１６７）、MNLGATLKG（配列番号１６８）、MTWNQMNLG（配列番号１６９）、CMTWNYMNLGATLKGVA（配列番号１７０）、MNLGATLKG（配列番号１７１）、MTWNQMNLG（配列番号１７２）、GALRNPTAC（配列番号１７３）、GYLRNPTAC（配列番号１７４）、GALRNPTAL（配列番号１７５）、YALRNPTAC（配列番号１７６）、GLLRNPTAC（配列番号１７７）、RQRPHPGAL（配列番号１７８）、RYRPHPGAL（配列番号１７９）、YQRPHPGAL（配列番号１８０）、RLRPHPGAL（配列番号１８１）、RIRPHPGAL（配列番号１８２）、GALRNPTAC（配列番号１８３）、GALRNPTAL（配列番号１８４）、RQRPHPGAL（配列番号１８５）、RLRPHPGAL（配列番号１８６）、RIRPHPGAL（配列番号１８７）、QFPNHSFKHEDPMGQ（配列番号１８８）、QFPNHSFKHEDPMGQ（配列番号１８９）、HSFKHEDPM（配列番号１９０）、HSFKHEDPY（配列番号１９１）、HSFKHEDPK（配列番号１９２）、KRPFMCAYPGCYKRY（配列番号１９４）、SEKRPFMCAYPGCNK（配列番号１９４）、KRPFMCAYPGCNK（配列番号１９５）、FMCAYPGCN（配列番号１９６）、FMCAYPGCY（配列番号１９７）又はFMCAYPGCK（配列番号１９８）をさらに含む。

【0039】

組み合わせの各ペプチドは、それ自体の処方内で別々に投与されてもよく、又は組み合わせの２、３、４、５、６、もしくは７以上のペプチドが同じ処方内で共に投与されてもよい。一実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、同じ処方内で投与される。

【0040】

各ペプチドの用量レベル、各個別の投与頻度、又は７つまで、又はそれ以上のペプチドの１つもしくは複数の組み合わせの投与頻度、投与期間及び７つ以上のＷＴ１ペプチドによる免疫化の他の態様は、患者の臨床像、疾患の期間又は経過、共存症、及び臨床ケアの他の態様に応じて最適化される。本発明は、本明細書中に具体化された方法の免疫化成分の特定の態様に関して、限定するものではない。

【0041】

一実施形態において、多価免疫療法組成物は、７つの前述のペプチドYMFPNAPYL（配列番号１２４）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、NLMNLGATL（配列番号２１）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）を、それぞれ２８０ｍｃｇ含む。一実施形態において、組成物が１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドをさらに含む。一実施形態において、組成物は、さらなるＷＴ１ペプチドを含まない。一実施形態において、組成物は、さらなるペプチドを含まない。

【0042】

一実施形態において、２００ｍｃｇの各ペプチドを各用量（０．５ｍｌ）で投与する。一実施形態において、１００～２０００ｍｃｇの各ペプチドを各用量で投与する。一実施形態において、前述の用量が１０週間にわたって１週間おきに投与される（すなわち、６回の投与）。一実施形態において、投与は皮下である。一実施形態において、アジュバントは、投与前にワクチンと混合（乳化）される。一実施形態において、０．５ｍＬの免疫療法組成物（すなわち、各ペプチド２００ｍｃｇ）を、投与前に１．０ｍＬのアジュバントと乳化させる。他の実施形態において、アジュバントは、免疫療法組成物が注入される前又は後に、ワクチンと同じ部位に注入される。一実施形態において、アジュバントはエマルジョンである。一実施形態において、エマルジョンはモンタニド（Montanide）エマルジョンである。一実施形態において、モンタニドエマルジョンは、免疫学的アジュバントであるモンタニドＩＳＡ５１ＶＧである。任意で、本発明の実施において、１つ以上のチェックポイント阻害剤もまた、以下にさらに記載されるように、免疫療法組成物と共に対象に投与される。

【0043】

上記のように、７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせを含むか、又はそれらからなる免疫療法組成物は、ＷＴ１発現癌に対する免疫応答を誘発するための免疫原性組成物として投与されてもよく、又は他の実施形態において、ＷＴ１ペプチドの組み合わせは、in vitro又はex vivo方法を使用してＷＴ１特異的ＣＴＬを調製するために使用されてもよく、ＣＴＬは患者への投与時に、ＷＴ１発現癌に対して向けられる。一実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、例えば、細胞株由来の細胞を使用して、in vitroでＣＴＬの生成を誘導するために使用される。他の実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせを使用して、患者から採取した細胞のサンプル中のＣＴＬの生成を誘導し、ex vivoで誘導されたＣＴＬを、それを必要とする同じ患者に注入して戻す。他の実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせを使用して、ドナーから採取された細胞のサンプル中のＣＴＬの生成を誘導し、ここで、ex vivoで誘導されたＣＴＬはドナーではない、それを必要とする患者に注入される。他の実施形態において、治療を必要とする患者ではない対象に、ＣＴＬの形成を誘導するために、本明細書に記載の７つ以上のＷＴ１ペプチドの組み合わせを投与し、次いで、これをドナーから患者に移す。これらの実施形態の各々は本発明の他の態様、及び本明細書に記載されるように、癌を処置すること、又は癌の発生率もしくはその再発を減少させることにおいて有用なＷＴ１特異的細胞の供給源である。前述の実施形態のいずれかにおいて、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの各々に対するＣＴＬは、個別に又は組み合わせて調製される。個々に調製されるＣＴＬは対象に別々に投与することができ、又は対象に投与する前に組み合わせることができる。

【0044】

前述の方法のいずれかにおいて、ＷＴ１発現癌に対するＣＴＬ応答を誘導するために患者に免疫療法を実施するか、又は、患者又は患者ではないドナーの細胞株からの免疫細胞を用いるin vitro又はex vivoの方法によりドナーからＷＴ１特異的ＣＴＬを得るかにかかわらず、チェックポイント阻害剤の併用は、本明細書中で任意で具体化することができ、癌の治療、癌の発生率又はその再発率を低下させるための方法が、それらを必要としている対象を７つ以上のＷＴ１ペプチドの組合せで免疫化することによるか、又はin vitroでex vivo又はドナー対象においてＣＴＬを生成することによるかにかかわらない。これらの方法のいずれにおいても、１つ以上のチェックポイント阻害剤の併用は、本明細書中で任意で具体化されてもよい。１つ以上のチェックポイント阻害剤は、１つ以上のＷＴ１ペプチドで免疫化されている患者に投与されてもよい。チェックポイント阻害剤は、その後患者に注入されるＷＴ１特異的ＣＴＬの形成を増強するために、in vitro又はex vivoで使用される。１つ以上のチェックポイント阻害剤は、ドナー対象において使用されて、次いで患者に移されるＷＴ１特異的ＣＴＬの形成を増強する。チェックポイント阻害剤は、in vitro、ex vivo、又はドナーがチェックポイント阻害剤も投与されたか否かにかかわらず、in vitro、ex vivo、又はドナーにおいて調製されたＣＴＬを受ける患者において使用される。後者の実施形態において、同じ又は異なる１つ以上のチェックポイント阻害剤を、in vitro、ex vivo又はドナー対象、及び患者において使用してよい。

【0045】

免疫チェックポイントは、免疫系におけるＴ細胞機能を調節する。Ｔ細胞は、細胞性免疫において中心的な役割を果たしている。チェックポイントタンパク質は、信号をＴ細胞に送り、本質的にＴ細胞機能をオフにするか又は阻害する特定のリガンドと相互作用する。癌細胞は、その表面にチェックポイントタンパク質の高レベルの発現を駆動することにより、腫瘍微小環境に入ったＴ細胞の表面にチェックポイントタンパク質を発現するＴ細胞が制御され、抗癌免疫応答を抑制することにより、この系を利用する。このように、チェックポイントタンパク質の阻害は、Ｔ細胞機能を修復し、癌細胞に対する免疫応答をもたらす。免疫チェックポイント阻害剤（又はチェックポイント阻害剤）は、免疫チェックポイントタンパク質をブロック又は阻害する（すなわち、チェックポイント受容体又はチェックポイント受容体リガンドをブロック又は阻害する）化合物又は薬剤である。チェックポイントタンパク質の例としては、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２系列の分子に属し、全てのＮＫ細胞、及びメモリＣＤ８^＋Ｔ細胞で発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１及びＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、及び様々なＢ－７系列リガンドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。プログラム死－１（ＰＤ－１）は、Ｔ細胞活性化の規制に関与する分子の免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩＧＳＦ）の一員である。ＰＤ－１は、細胞死を起こすＴ細胞ハイブリドーマにおいてアップレギュレートされる遺伝子として１９９２年に同定されたときに、「プログラム死」という名称がついた。ＰＤ－１の構造は、１つのＩＧＳＦドメイン、膜貫通ドメイン、及び免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）と免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含む細胞内ドメインから構成されている［３８］。ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１、ＣＤ２７４）とＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ、ＣＤ２７３）の２つの結合パートナーを有する。ＰＤ－Ｌ１は、造血系と非造血系の両系統に広く発現している［３９，４０］。Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、ＤＣ、肥満細胞のほか、末梢組織にも認められる［４１，４２］。ＰＤ－１関与は、腫瘍が免疫サーベイランス及びクリアランスを回避する１つの手段を表す［４３］。免疫正常マウス癌モデルで活性を示すニボルマブにより、ＰＤ－１経路の遮断が証明されている［４４］。

【0046】

チェックポイント阻害剤の例としては、小分子、ペプチド、及び抗体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。抗体の例としては、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＡＵＮＰ－１２、ＢＭＳ ９３６５５９、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ９３５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７、ＢＭＳ－９８６０１６、ＧＳＫ２８３１７８１、ＩＭＰ３２１、リルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）、ＩＰＨ２１０１（１－７Ｆ９）、インドキシモド（ＮＬＧ ９１８９）、ＮＬＧ９１９、ＩＮＣＢ０２４３６０、ＰＦ－０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0047】

ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）は、活性化Ｔ及びＢリンパ球上のＰＤ－１受容体を標的とした完全ヒト型ＩｇＧ４モノクローナル抗体である［４７］。ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）は、ＰＤ－１を標的とする抗体の別の非限定的な例である。チェックポイントタンパク質をブロック、阻害、又は標的とする他の化合物及び薬剤には、試験中の化合物が含まれ、まだ市販されていない。本発明は、特定のチェックポイント阻害剤に限定されない。使用されるチェックポイント阻害剤の例を表１にリストするが、これらに限定されるものではない。

【0048】

【表1】

【表2】

【0049】

一実施形態において、２つ以上のチェックポイント阻害剤の組み合わせが対象に投与される。一実施形態において、チェックポイント阻害剤の組み合わせは表１のもの中から選択される。２つ以上のチェックポイント阻害剤は、互いに関して、及び１つ以上のＷＴ１ペプチドに関して、同時に又は連続的に投与することができる。さらなる実施形態において、２つ以上のチェックポイント阻害剤の組み合わせは、２つの異なるチェックポイントタンパク質、例えば、ＰＤ－１（例えば、ニボルマブ又は他のＰＤ－１阻害剤）及びＣＴＬＡ－４（例えば、イピルムマブ又は他のＣＴＬＡ－４阻害剤）を標的とし、互いに関して、及び１つ以上のＷＴ１ペプチドに関して、同時に又は連続して対象に投与される。一実施形態において、２つ以上のチェックポイント阻害剤の組み合わせは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１キナーゼ、ＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、及びＢ－７ファミリーリガンドの２つ以上の異なるチェックポイントタンパク質を標的とする。一実施形態において、２つ以上の異なるチェックポイントタンパク質を標的とする２つ以上のチェックポイント阻害剤の組み合わせは、表１の中から選択される。

【0050】

チェックポイント阻害剤の投薬レベル、投薬頻度、投薬期間及び投与のその他態様は、患者の臨床症状、疾患の期間又は経過、合併症、及び臨床ケアの他の態様に応じて最適化される。本発明は、本明細書中に具体化された方法のチェックポイント阻害剤成分の特定の態様に関して、限定するものではない。

【0051】

一実施形態において、ニボルマブの用量及び３ｍｇ／ｋｇのスケジュール選択は、１２週間のコースにわたって２週間ごとに行われる。一実施形態において、投与は静脈内である。一実施形態において、チェックポイント阻害剤投与の過程は、ＷＴ１ワクチン投与の過程と同時である。一実施形態において、チェックポイント阻害剤投与の過程は、ＷＴ１ワクチン投与の過程と重複する。一実施形態において、チェックポイント阻害剤投与の過程は、ＷＴ１ワクチン投与の過程とほぼ同時に開始される。

【0052】

一実施形態において、免疫療法組成物は、２００ｍｃｇのペプチドYMFPNAPYL（配列番号１２４）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、NLMNLGATL（配列番号２１）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）を、１．０ｍＬのモンタニドＩＳＡ５１ＶＧで乳化され、６回の投与のために２週間毎に皮下投与される０．５ｍＬの総容量で組み合わせて含み、ニボルマブ３ｍｇ／ｋｇは、ＷＴ１免疫療法と同時に開始して、２週間毎に６０分間の注入によって、７回の投与のために静脈内投与される。

【0053】

一実施形態において、７つ以上のＷＴ１ペプチドの組み合わせ、及び、任意で、１つ以上のチェックポイント阻害剤が、患者に最大限に利益をもたらすスケジュールに従って、それぞれ対象に投与される方法が、本明細書において具体化される。従って、１つ以上のＷＴ１ペプチド及び１つ以上のチェックポイント阻害剤は、必ずしも同時に、又は同じ組成物中で、又はそれぞれ同じ期間にわたって投与されるわけではない。各ＷＴ１ペプチド、又はＷＴ１ペプチドの組み合わせは、各チェックポイント阻害剤のように、特定のスケジュールに従って投与される。一実施形態において、７つ以上のＷＴ１ペプチドと１つ以上のチェックポイント阻害剤との組み合わせは、同じ組成物中に存在するがこれに限定されるものではない。

【0054】

本明細書中に記載されるように、用量レベル及び投薬スケジュールは、ＷＴ１ペプチド（別々に又は共に投与される）の頻度及び期間、１つ以上のチェックポイント阻害剤（別々に又は共に投与される）の用量レベル及び投薬スケジュール、投与経路、及び他の投与態様を含み、患者対象に対する最大の利益のために最適化される。ドナー対象が、患者に投与するためのＷＴ１特異的ＣＴＬを生成する目的のためのＷＴ１ペプチド及びチェックポイント阻害剤のレシピエントである場合、同じ態様も考えられる。

【0055】

一実施形態において、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組み合わせを含む組成物が提供される。一実施形態において、組成物中のＷＴ１ペプチドは、本明細書に開示されているものである。一実施形態において、チェックポイント阻害剤は、本明細書に開示されているものである。一実施形態において、組成物は、チェックポイント阻害剤ニボルマブ、ペンブロリズマブ、又はそれらの組み合わせを含む。組成物は、賦形剤、希釈剤又はキャリアをさらに含んでもよい。組成物はまた、１つ以上のアジュバントを含んでもよい。

【0056】

前述の実施形態は、ＷＴ１発現癌を処置し、その発生率を低下させ、それに対する免疫応答を誘導する改善された方法、及び同じ目的に有用な組成物を提供する。本発明の他の態様を、以下にさらに記載する。

【0057】

一実施形態において、修飾ＷＴ１ペプチドは、１つ以上の修飾されたアミノ酸を有し、本明細書中では突然変異ＷＴ１ペプチドと称す。一実施形態において、突然変異ＷＴ１ペプチドは、（ａ）ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ分子の結合モチーフ、及び（ｂ）ＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフの１つ以上のアンカー残基に点突然変異を含むＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフを含む。他の実施形態において、ペプチドは、１１以上のアミノ酸長である。特定の他の実施形態において、ペプチドは、長さが１１～２２、１１～３０、１６～２２又は１６～３０アミノ酸である。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１～３アンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１つのアンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの２つのアンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１～２アンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの２～３アンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１～４アンカー残基にある。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0058】

他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組合せを対象に投与することを含み、それによってＷＴ１発現癌を有する対象を処置する。

【0059】

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌又はその再発の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は対象に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組み合わせを投与することを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌又はその再発の発生率を減少させる。

【0060】

他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、リンパ球集団を、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド及び、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組み合わせと接触させ、それによって、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導することを含む。

【0061】

他の実施形態において、本発明は、（ａ）ＷＴ１タンパク質特異性ＣＤ８^＋リンパ球、及び（ｂ）ＷＴ１タンパク質に特異性なＣＤ４^＋リンパ球の形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、リンパ球集団を、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、及び、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組合せと接触させ、それによって（ａ）ＷＴ１タンパク質特異性ＣＤ８^＋リンパ球、及び（ｂ）ＷＴ１タンパク質に特異性なＣＤ４⁺リンパ球の形成及び増殖を誘導することを含む。

【0062】

一実施形態において、ＷＴ１発現癌を処置し、ＷＴ１発現癌の発生率を減少させ、又はＷＴ１タンパク質特異的Ｔ細胞応答の形成及び増殖を誘導する前述の方法は、そのような方法が少なくとも７つのＷＴ１ペプチド単独又はチェックポイント阻害剤単独の組み合わせのみを使用する場合よりも大きな効果が達成される。一実施形態において、ＷＴ１免疫療法の投与過程及び１つ以上のチェックポイント阻害剤の投与過程は、ワクチンに対する生物学的反応が１つ以上のチェックポイント阻害剤の投与によって増強されるように、同時、重複、又は同時である。同時投与は、ＷＴ１特異的ＣＴＬを誘導するためのＷＴ１免疫療法のコース、及び癌に対するＣＴＬの活性を増強するための１つ以上のチェックポイント阻害剤の投与を含む。一実施形態において、ＷＴ１免疫療法投与によって誘発されるＣＴＬの有効性がチェックポイント阻害剤療法によって増強される限り、ＷＴ１ワクチン投与のコースは、チェックポイント阻害剤療法のコースが始まる前に終了させることができる。一実施形態において、チェックポイント阻害剤療法の最初の投与が最後のＷＴ１免疫療法投与と同日である。一実施形態において、ＷＴ１免疫療法の終了及びチェックポイント阻害剤療法の開始は、１～７日又は１～４週間離れている。

【0063】

本明細書中に記載されるように、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１タンパク質の天然のフラグメント又は連続するアミノ酸配列であるか、又は、それらは、ペプチドに対する免疫原性又は任意の他の有益な特性及びＷＴ１発現癌に対する免疫の発生を増強するために、アミノ酸配列の１つ以上の修飾を有していてよい。特定の実施形態において、１つ又は複数のアミノ酸は、免疫原性を増強するために変更される。一実施形態において、使用方法は、（ａ）ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ分子の結合モチーフ、及び（ｂ）ＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフの１つ以上のアンカー残基に点突然変異を有するＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフを含む、単離された突然変異ＷＴ１ペプチドを使用する。他の実施形態において、ペプチドは、長さが１１以上のａａである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0064】

「点突然変異」は、他の実施形態において、フラグメントがタンパク質の天然配列に対して突然変異しており、従ってＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフを作り出していることを示している。他の実施形態において、「点突然変異」が、天然配列に存在するＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの結合能力を強化する。各可能性は、本発明の使用方法の別個の実施形態に相当する。

【0065】

他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１～３アンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１つのアンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの２つのアンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１～２アンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの２～３アンカー残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフの１～４アンカー残基にある。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0066】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、長さが１１～４５３アミノ酸（ＡＡ）である。他の実施形態において、長さは１２～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１３～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１７～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１９～４５３ＡＡである。他の実施形態において、長さは２０～４５３ＡＡである。

【0067】

他の実施形態において、長さは１１～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１２～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１３～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１７～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１９～４４９ＡＡである。他の実施形態において、長さは２０～４４９ＡＡである。

【0068】

他の実施形態において、長さは１１～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～２２ＡＡである。他の実施形態において、長さは１９ＡＡである。他の実施形態において、ペプチドの長さは１５～２３ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～２４ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～２５ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～２６ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～２７ＡＡである。他の実施形態において、長さは１５～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～２９ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～２６ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～２４ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～２２ＡＡである。他の実施形態において、長さは１４～２０ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～２６ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～２４ＡＡである。他の実施形態において、長さは１６～２２ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～２６ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～２４ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～２２ＡＡである。他の実施形態において、長さは１８～２０ＡＡである。他の実施形態において、長さは２０～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは２０～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは２０～２６ＡＡである。他の実施形態において、長さは２０～２４ＡＡである。他の実施形態において、長さは２２～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは２２～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは２２～２６ＡＡである。他の実施形態において、長さは２４～３０ＡＡである。他の実施形態において、長さは２４～２８ＡＡである。他の実施形態において、長さは２４～２６ＡＡである。

【0069】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物に有用なペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ分子（他の実施形態において約１２ＡＡ）に結合するための最小長よりも長い。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドの長さを増加させると、２つ以上のＨＬＡクラスＩＩ分子への結合が可能になる。他の実施形態において、長さを増加させると、その結合モチーフが知られていないＨＬＡクラスＩＩ分子への結合が可能になる。他の実施形態において、長さを増加させると、ＨＬＡクラスＩ分子への結合が可能になる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフは知られている。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフは知られていない。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0070】

上記のペプチド長の各々は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0071】

他の実施形態において主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子として知られるＨＬＡ分子はペプチドに結合し、それらを免疫細胞に提示する。従って、他の実施形態において、ペプチドの免疫原性は、ＨＬＡ分子に対するその親和性によって部分的に決定される。ＨＬＡクラスＩ分子は、通常、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）に存在するＣＤ８分子と相互作用する。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、通常、ヘルパーＴリンパ球上に存在するＣＤ４分子と相互作用する。

【0072】

他の実施形態において、本発明のペプチドは免疫原性である。他の実施形態において、「免疫原性」という用語は、免疫応答を刺激する、誘発する、又は関与する能力をいう。他の実施形態において、誘発される免疫応答は、細胞媒介免疫応答である。他の実施形態において、免疫応答は、細胞性応答と体液性応答との組み合わせである。

【0073】

他の実施形態において、ＨＬＡ分子－ペプチド複合体に結合するＴ細胞は、活性化され、そしてペプチドを含むタンパク質を発現する細胞を増殖及び溶解するように誘導される。Ｔ細胞は、典型的には、最初に「プロフェッショナル」抗原提示細胞（「ＡＰＣ」、例えば、樹状細胞、単球、及びマクロファージ）によって活性化され、これらは、アネルギー又はアポトーシスよりもむしろＴ細胞活性化を促進する共刺激分子を提示する。他の実施形態において、応答は、本明細書中に記載されるように、ヘテロクリティックであり、その結果、ＣＴＬは、本発明のペプチドに相同なＡＡ配列を有するタンパク質、又はＴ細胞を最初に刺激するために使用されるペプチドとは異なるペプチドを発現する新生物細胞を溶解する。

【0074】

他の実施形態において、Ｔ細胞と本発明のペプチドとの遭遇は、エフェクター及び／又はメモリーＴ細胞へのその分化を誘導する。エフェクター又はメモリーＴ細胞と同じペプチドとの間、又は、他の実施形態においては、本発明のヘテロクリティックペプチドとのその後の遭遇がより速く、より強力な免疫応答をもたらす。このような応答は、他の実施形態において、ペプチドに曝露されたＴ細胞集団の増殖の程度を測定することによって測定される。他の実施形態において、このような応答は、本明細書中で以下に列挙される方法のいずれかによって測定される。

【0075】

他の実施形態において、本明細書に記載されるように、対象は、発現される天然タンパク質とは異なる本発明のペプチド、又はペプチドを含む組成物／細胞集団に曝露され、その後、天然タンパク質／抗原と交差反応性の宿主免疫応答が生じる。

【0076】

他の実施形態において、本発明のペプチド、組成物、及びワクチンは、腫瘍細胞溶解を生じる免疫応答を刺激する。前述の実施形態の全てにおいて、チェックポイント阻害剤の同時使用は、腫瘍に対する免疫応答を増強する。

【0077】

他の実施形態において、本発明のペプチドのＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフは、ペプチドのＨＬＡクラスＩＩ分子結合モチーフ内に含まれる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフは、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合モチーフと重複する。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフは、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合モチーフと重複しない。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0078】

結合モチーフが本発明のペプチドに含まれるＨＬＡクラスＩＩ分子は、他の実施形態において、ＨＬＡ－ＤＲ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＰ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＱ分子である。

【0079】

他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＤＲＢ１０１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＤＲＢ３０１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子はＤＲＢ４０１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＤＲＢ７０１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＤＲＢ１１０１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＤＲＢ１５０１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、当該分野で公知の任意の他のＨＬＡ－ＤＲＢ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＡ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子がＨＬＡ－ＤＱＡ１分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＱＢ１分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＰＡ１分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＰＢ１分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＭＡ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＭＢ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、がＨＬＡ－ＤＯＡ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＯＢ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、当該分野で公知の任意の他のＨＬＡクラスＩＩ分子である。

【0080】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、２つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、３つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、４つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、５つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、６つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、６個を超える別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。

【0081】

他の実施形態において、本発明のペプチドによって結合されるＨＬＡクラスＩＩ分子は、所与のＨＬＡクラスＩＩ遺伝子座における２つ以上の異なる対立遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、遺伝子座において３つの異なる対立遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、遺伝子座において４つの異なる対立遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、遺伝子座において５つの異なる対立遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、遺伝子座において６つの異なる対立遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子が遺伝子座において６つより多い別個の対立遺伝子によってコードされる。

【0082】

他の実施形態において、ペプチドによって結合されるＨＬＡクラスＩＩ分子は、２つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、２つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、３つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、３つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、４つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、４つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、５つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、５つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、６つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、６つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、６を超える別個の遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0083】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、２つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、３つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、４つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、５つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、６つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、６個を超える別個のＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。

【0084】

他の実施形態において、ＷＴ１ペプチドによって結合されたＨＬＡクラスＩＩ分子は、２つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、結合したＨＬＡ分子は、２つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、結合したＨＬＡ分子は、３つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、結合したＨＬＡ分子は、３つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、結合したＨＬＡ分子は、４つの異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、結合したＨＬＡ分子は、４つ以上の異なる遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、結合したＨＬＡ分子は、４つを超える別個の遺伝子座でＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。他の実施形態において、遺伝子座は、ＨＬＡ－ＤＲＢ遺伝子座から選択される。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＲＡ結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＱＡ１結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＱＢ１結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＰＡ１結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＰＢ１結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＭＡ結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＭＢ結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＯＡ結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡ－ＤＯＢ結合ペプチドである。他の実施形態において、ペプチドは、当該分野で公知の任意の他のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0085】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１、ＤＲＢ７０１、ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される２つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１、ＤＲＢ７０１、ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される３つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１、ＤＲＢ７０１、ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される４つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１、ＤＲＢ７０１、ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される５つの異なるＨＬＡ－ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、以下のＨＬＡ－ＤＲＢ対立遺伝子、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１、ＤＲＢ７０１、ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１のそれぞれによってコードされるＨＬＡ－ＤＲＢ分子に結合する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0086】

上記のＨＬＡクラスＩＩ分子、型、クラス、及びそれらの組み合わせの各々は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0087】

結合モチーフが本発明のペプチドに含まれるＨＬＡクラスＩ分子は、他の実施形態においてＨＬＡ－Ａ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ｂ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ｃ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ０２０１分子である。他の実施形態において、分子はＨＬＡ Ａ１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ａ２である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ａ２．１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ａ３である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ａ３．２である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ａ１１である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ａ２４である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ｂ７である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ｂ２７である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ Ｂ８である。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0088】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のＨＬＡクラスＩ分子結合ＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子のスーパーファミリーに結合する。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ａ２スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ａ３スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ａ２４スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ｂ７スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ｂ２７スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ｂ４４スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ｃ１スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、Ｃ４スーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーは、当技術分野で知られている任意の他のスーパーファミリーである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0089】

他の実施形態において、本発明のペプチドのＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフは、ペプチドの非突然変異対応物と比較して、ＨＬＡクラスＩ分子に対して、増加した親和性を示す。他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ分子に対する単離された突然変異ＷＴ１ペプチドの親和性を増加させる。他の実施形態において、親和性の増加は、単離された突然変異ＷＴ１ペプチドが誘導された、単離された非突然変異ＷＴ１ペプチドの親和性（同じＨＬＡクラスＩ分子に対する）に関連している。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0090】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のＨＬＡクラスＩ分子結合ＷＴペプチドは、９～１３ＡＡの長さを有する。他の実施形態において、長さは８～１３ＡＡである。他の実施形態において、ペプチドは、本明細書中に列挙される本発明のペプチドの長さのいずれかを有する。

【0091】

他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子結合ＷＴペプチドは、８ＡＡの長さを有する。他の実施形態において、ペプチドは９ＡＡの長さを有する。他の実施形態において、ペプチドは１０ＡＡの長さを有する。本明細書中に提供されるように、９～１０ＡＡの天然及びヘテロクリティックペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子への実質的な結合及びＣＴＬによるサイトカイン分泌及び細胞溶解を誘発する能力を示した。

【0092】

他の実施形態において、本発明のＷＴ１ペプチド内に埋め込まれたＨＬＡクラスＩ分子結合ＷＴ１ペプチドは、上記の長さの１を有する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。一実施形態において、ＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子結合ＷＴ１ペプチドよりも長い長さのペプチドである。より長い長さのペプチドは、細胞によって、ＨＬＡクラス１分子によって提示される適切な長さに分解される。

【0093】

他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子結合ＷＴ１ペプチドによって結合されるＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ２分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子がＨＬＡ－Ａ３分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ１１分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ｂ８分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－０２０１分子である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、当該分野で公知の任意の他のＨＬＡクラスＩ分子に結合する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0094】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、本発明のペプチドが誘導された単離されたＷＴ１ペプチドによって示されるように、複数のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する能力を保持する。

【0095】

本明細書中の全ての態様において、本明細書中のワクチンにおいて、又はin vitro、ex vivoもしくはドナーにおいてＣＴＬを生成するために有用な１つ以上のＷＴ１ペプチドは、患者又はドナーのＨＬＡ型（単数又は複数）に一致するように、天然であろうと修飾されようと、ペプチド又はペプチド配列の選択が本明細書中に具体化される。

【0096】

本発明のペプチドが由来し得るＷＴ１分子は、他の実施形態において、配列MGSDVRDLNALLPAVPSLGGGGGCALPVSGAAQWAPVLDFAPPGASAYGSLGGPAPPPAPPPPPPPPPHSFIKQEPSWGGAEPHEEQCLSAFTVHFSGQFTGTAGACRYGPFGPPPPSQASSGQARMFPNAPYLPSCLESQPAIRNQGYSTVTFDGTPSYGHTPSHHAAQFPNHSFKHEDPMGQQGSLGEQQYSVPPPVYGCHTPTDSCTGSQALLLRTPYSSDNLYQMTSQLECMTWNQMNLGATLKGVAAGSSSSVKWTEGQSNHSTGYESDNHTTPILCGAQYRIHTHGVFRGIQDVRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTGEKPYQCDFKDCERRFSRSDQLKRHQRRHTGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLKTHTRTHTGKTSEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRHHNMHQRNMTKLQLAL（配列番号１９９、GenBank受託番号ＡＹ２４５１０５）を有する。

【0097】

他の実施形態において、ＷＴ１分子は、以下の配列
AAEASAERLQGRRSRGASGSEPQQMGSDVRDLNALLPAVPSLGGGGGCALPVSGAAQWAPVLDFAPPGASAYGSLGGPAPPPAPPPPPPPPPHSFIKQEPSWGGAEPHEEQCLSAFTVHFSGQFTGTAGACRYGPFGPPPPSQASSGQARMFPNAPYLPSCLESQPAIRNQGYSTVTFDGTPSYGHTPSHHAAQFPNHSFKHEDPMGQQGSLGEQQYSVPPPVYGCHTPTDSCTGSQALLLRTPYSSDNLYQMTSQLECMTWNQMNLGATLKGHSTGYESDNHTTPILCGAQYRIHTHGVFRGIQDVRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTGEKPYQCDFKDCERRFSRSDQLKRHQRRHTGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLKTHTRTHTGEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRHHNMHQRNMTKLQLAL（配列番号２００、GenBank受託番号ＮＭ＿０００３７８）を有する。

【0098】

他の実施形態において、ＷＴ１分子は、以下の配列
MQDPASTCVPEPASQHTLRSGPGCLQQPEQQGVRDPGGIWAKLGAAEASAERLQGRRSRGASGSEPQQMGSDVRDLNALLPAVPSLGGGGGCALPVSGAAQWAPVLDFAPPGASAYGSLGGPAPPPAPPPPPPPPPHSFIKQEPSWGGAEPHEEQCLSAFTVHFSGQFTGTAGACRYGPFGPPPPSQASSGQARMFPNAPYLPSCLESQPAIRNQGYSTVTFDGTPSYGHTPSHHAAQFPNHSFKHEDPMGQQGSLGEQQYSVPPPVYGCHTPTDSCTGSQALLLRTPYSSDNLYQMTSQLECMTWNQMNLGATLKGVAAGSSSSVKWTEGQSNHSTGYESDNHTTPILCGAQYRIHTHGVFRGIQDVRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTGEKPYQCDFKDCERRFSRSDQLKRHQRRHTGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLKTHTRTHTGEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRHHNMHQRNMTKLQLAL（配列番号２０１、GenBank受託番号ＮＰ＿０７７７４２）を有する。

【0099】

他の実施形態において、ＷＴ１分子は、以下の配列
MGHHHHHHHHHHSSGHIEGRHMRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTGEKPYQCDFKDCERRFFRSDQLKRHQRRHTGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLKTHTRTHTGEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRHHNMHQRNMTKLQLAL（配列番号２０２）を有する。

【0100】

他の実施形態において、ＷＴ１タンパク質は、以下のGenBank受託番号：ＮＭ＿０２４４２６、ＮＭ＿０２４４２５、ＮＭ＿０２４４２４、ＮＭ＿０００３７８、Ｓ９５５３０、Ｄ１３６２４、Ｄ１２４９６、Ｄ１２４９７、ＡＨ００３０３４、又はＸ７７５４９のうちの１つに規定される配列のうちの１つを含む。他の実施形態において、ＷＴ１タンパク質は、上記のGenBank受託番号の１つに規定される配列の１つを有する。他の実施形態において、ＷＴ１タンパク質は、当該分野で公知の任意のＷＴ１タンパク質である。他の実施形態において、ＷＴ１タンパク質は、当該分野で公知の任意の他のＷＴ１配列を有する。

【0101】

他の実施形態において、本発明の目的に有用なペプチドは、ＷＴ１タンパク質のフラグメントに由来する。他の実施形態において、誘導のプロセスは、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフのアンカー残基における点突然変異の導入を含む。他の実施形態において、誘導のプロセスは、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフのアンカー残基における点突然変異の導入からなる。他の実施形態において、本発明のペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフアンカー残基における点突然変異によってのみ、ＷＴ１タンパク質の対応するフラグメントと異なる。他の実施形態において、本発明のペプチドのＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフは、アンカー残基における点突然変異によってのみ、対応するＷＴ１配列と異なる。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0102】

他の実施形態において、本発明のペプチドの誘導プロセスは、アミノ酸（ＡＡ）のＡＡ類似体への１つ以上の修飾をさらに含む。他の実施形態において、誘導のプロセスは、２つ以上のＡＡを連結する１つ以上のペプチド結合の修飾をさらに含む。他の実施形態において、ＡＡ類似体又はペプチド結合修飾は、以下に列挙するＡＡ類似体又はペプチド結合修飾の１つである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0103】

本発明のペプチド（野生型配列における「対応物」）が由来するＷＴ１タンパク質の非突然変異フラグメントは、他の実施形態において、配列SGQARMFPNAPYLPSCLES（配列番号５）を有する。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、配列QARMFPNAPYLPSCL（配列番号６）を有する。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、配列LVRHHNMHQRNMTKL（配列番号３）を有する。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、配列RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）を有する。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、配列NKRYFKLSHLQMHSR（配列番号４）を有する。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、配列PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）を有する。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合モチーフを含む任意の他のＷＴ１フラグメントである。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、ＨＬＡ－ＤＲ分子結合モチーフを含む任意の他のＷＴ１フラグメントである。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、複数のＨＬＡ－ＤＲ分子結合モチーフを含む。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、ＨＬＡ－ＤＲＢ分子結合モチーフを含む任意の他のＷＴ１フラグメントである。他の実施形態において、非突然変異ＷＴ１フラグメントは、複数のＨＬＡ－ＤＲＢ分子結合モチーフを含む。他の実施形態において、本発明のペプチドは、それが含有する点突然変異においてのみ、その対応物と異なる。他の実施形態において、本発明のペプチドは、ＨＬＡクラスＩアンカー残基における突然変異においてのみ、その対応物と異なる。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0104】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、ペプチドが誘導された非突然変異ＷＴ１フラグメントによって示されるように、ＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する能力を保持する。他の実施形態において、本発明のペプチドは、非突然変異ＷＴ１フラグメントによって示されるように、複数のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する能力を保持する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0105】

他の実施形態において、本発明は、ＡＡ配列GATLKGVAAGSSSSVKWT（配列番号２０３）及びLKGVAAGSSSSVKWT（配列番号２０４）を含む単離されたペプチドを提供する。

【0106】

本発明の方法及び組成物の他の実施形態における「ペプチド」は、ペプチド結合によって連結されたサブユニットＡＡの化合物を指す。他の実施形態において、ペプチドは、ＡＡ類似体を含む。他の実施形態において、ペプチドは、ペプチド模倣体である。他の実施形態において、本発明のペプチドは、以下に列挙されるＡＡ類似体の１つを含む。サブユニットは、他の実施形態において、ペプチド結合によって連結される。他の実施形態において、サブユニットは、別のタイプの結合、例えば、エステル、エーテル等によって連結される。他の実施形態において、本発明のペプチドは、以下に列挙されるペプチド模倣物のタイプの１つである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0107】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のペプチドは、その結合モチーフがその中に含まれるＨＬＡクラスＩ分子に高い親和性で結合する。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ分子は、本明細書に列挙される任意のＨＬＡクラスＩ分子である。他の実施形態において、ペプチドは、中程度の親和性でＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、大きな親和性でＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、測定可能な親和性でＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子への安定な結合を示す。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0108】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のペプチドは、その結合モチーフがその中に含まれるＨＬＡクラスＩＩ分子に高い親和性で結合する。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、本明細書に列挙される任意のＨＬＡクラスＩＩ分子である。他の実施形態において、ペプチドは、１を超えるＨＬＡクラスＩＩ分子に高い親和性で結合する。他の実施形態において、ペプチドは、中程度の親和性でＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、１を超えるＨＬＡクラスＩＩ分子に中程度の親和性で結合する。他の実施形態において、ペプチドが大きな親和性でＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、１を超えるＨＬＡクラスＩＩ分子に大きな親和性で結合する。他の実施形態において、ペプチドは、測定可能な親和性でＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、１を超えるＨＬＡクラスＩＩ分子に測定可能な親和性で結合する。他の実施形態において、ペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ分子への安定な結合を示す。他の実施形態において、ペプチドは、１を超えるＨＬＡクラスＩＩ分子への安定な結合を示す。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0109】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子とＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に大きな親和性で結合する。他の実施形態において、ペプチドは、高親和性でＨＬＡクラスＩ分子とＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、中程度の親和性で、ＨＬＡクラスＩ分子とＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に結合する。他の実施形態において、ペプチドは、測定可能な親和性で、ＨＬＡクラスＩ分子とＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に結合する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0110】

他の実施形態において、「フラグメント」とは、長さが１１以上のＡＡのペプチドを指す。他の実施形態において、本発明のペプチドフラグメントは、１６以上のＡＡ長である。他の実施形態において、フラグメントは、１２以上のＡＡ長である。他の実施形態において、フラグメントは１３以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは、１４以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは１５以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは、１７以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは、１８以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは１９以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは２２以上のＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは８～１２ＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは約８～１２ＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは１６～１９ＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは約１６～１９ＡＡである。他の実施形態において、フラグメント１０～２５ＡＡ。他の実施形態において、フラグメントは約１０～２５ＡＡである。他の実施形態において、フラグメントは、任意の他の長さを有する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0111】

一実施形態において、本発明は、
YMFPNAPYL（配列番号１２４）、
RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１）、
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２）、
SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５）、
NLMNLGATL（配列番号２１）、
WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６）及び
WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５）からなる少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせ（ａ）、又は
（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせをコードする核酸（ｂ）、又は
（ａ）の少なくとも７つのペプチドの組み合わせをコードする核酸を含む、及び／又は（ａ）の少なくとも７つのペプチドを含む、又は提示する免疫細胞（ｃ）、又は
（ａ）の少なくとも７つの単離されたペプチドの組み合わせによって誘導される細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）（ｄ）、又は
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）のうちの２つ、３つ、又は４つ全ての組み合わせ（ｅ）、含む組成物を提供する。

【0112】

一実施形態において、組成物は、YMFPNAPYL（配列番号１２４、ＷＴ１－Ａ１とも呼ばれる）、RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１、ＷＴ１－４２７ロングとも呼ばれる）、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２とも呼ばれる、配列番号１２５、ＷＴ１－１２２Ａ１ロングとも呼ばれる）、NLMNLGATL（配列番号２１、ＮＬＭショートとも呼ばれる）、WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６、ＷＮＬＭ又はＮＬＭロングとも呼ばれる）、及びWNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５、ＷＮＹＭ又はＮＹＭロングとも呼ばれる）の各々を含むＷＴ１ペプチドの組み合わせを含む。任意で、組成物は、少なくとも１つのさらなるＷＴ１ペプチドをさらに含む。特定の実施形態において、本発明の少なくとも２つの異なる単離ペプチドを含む組成物が提供される。特定の実施形態において、本発明の少なくとも３つ又は少なくとも４つの異なる単離ペプチドを含む組成物が提供される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。特定の実施形態において、本発明の組成物はワクチンである。

【0113】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物の各ペプチドは、大きな親和性でＨＬＡクラスＩＩ分子に独立して結合し、一方、元のペプチドに由来する各ペプチドは、大きな親和性でＨＬＡクラスＩ分子に独立して結合し、そして組み合わせを含む各ペプチドに独立して関係する。

【0114】

他の実施形態において、「親和性」とは、示されたＭＨＣ分子への標準ペプチドの結合を５０％阻害するために必要なペプチドの濃度を指す。他の実施形態において「高親和性」とは、約５００ナノモル（ｎＭ）以下の濃度のペプチドが、標準ペプチドの結合を５０％阻害するために必要とされるような親和性を指す。他の実施形態において、約４００ｎＭ以下の濃度のペプチドが必要とされる。他の実施形態において、結合親和性は３００ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は２００ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は１５０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は１００ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は８０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は６０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は４０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は３０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は２０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は１５ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は１０ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は８ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は６ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は４ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は３ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は２ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は１．５ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は１ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は０．８ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は０．６ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は０．５ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は０．４ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は０．３ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は０．３ｎＭ未満である。

【0115】

他の実施形態において、「親和性」とは、ＭＨＣ分子に対する結合強度の尺度を指す。他の実施形態において、親和性は、競合結合親和性を測定するために、当該分野で公知の方法を使用して測定される。他の実施形態において、親和性は、相対的結合親和性を測定するために、当該分野で公知の方法を使用して測定される。他の実施形態において、この方法は、競合結合アッセイである。他の実施形態において、この方法は、ラジオイムノアッセイ又はＲＩＡである。他の実施形態において、この方法は、ＢｉａＣｏｒｅ分析である。他の実施形態において、この方法は、当該分野で公知の任意の他の方法である。他の実施形態において、本方法は、既知の親和性の参照ペプチドのＩＣ５０に関連してＩＣ５０を生じる。

【0116】

親和性の各タイプ及び親和性の測定方法は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0117】

他の実施形態において、「高親和性」とは、０．５～１００ｎＭのＩＣ５０を指す。他の実施形態において、ＩＣ５０は１～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は１．５～２００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は２～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は３～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は４～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は６～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は１０～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は３０～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は３～８０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は４～６０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は５～５０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は６～５０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は８～５０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は１０～５０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は２０～５０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は６～４０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は８～３０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は１０～２５ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は１５～２５ｎＭである。各親和性及び親和性の範囲は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0118】

他の実施形態において、「中程度の親和性」とは、１００～５００ｎＭのＩＣ５０を指す。他の実施形態において、ＩＣ５０は１００～３００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は１００～２００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は５０～１００ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は５０～８０ｎＭである。他の実施形態において、ＩＣ５０は５０～６０ｎＭである。各親和性及び親和性の範囲は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0119】

「大きな親和性」とは、他の実施形態において、ＭＨＣ分子－ペプチド複合体を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞による標的細胞の認識を媒介するのに十分な親和性を指す。他の実施形態において、この用語は、ＭＨＣ分子－ペプチド複合体を認識するＴＣＲを有するＴ細胞による癌細胞の認識を媒介するのに十分な親和性を指す。他の実施形態において、この用語は、ペプチドを提示する樹状細胞によるナイーブＴ細胞の活性化を媒介するのに十分な親和性を指す。他の実施形態において、この用語は、ペプチドを提示するＡＰＣによるナイーブＴ細胞の活性化を媒介するのに十分な親和性を指す。他の実施形態において、この用語は、ペプチドを提示する樹状細胞によるメモリーＴ細胞の再活性化を媒介するのに十分な親和性を指す。他の実施形態において、この用語は、ペプチドを提示するＡＰＣによるメモリーＴ細胞の再活性化を媒介するのに十分な親和性を指す。他の実施形態において、この用語は、ペプチドを提示する体細胞によるメモリーＴ細胞の再活性化を媒介するのに十分な親和性を指す。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0120】

「測定可能な親和性」とは、他の実施形態において、免疫学的アッセイによって測定可能である十分な親和性を指す。他の実施形態において、免疫学的アッセイは、本明細書中に列挙される任意のアッセイである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0121】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のペプチドは、ＨＬＡ分子のスーパーファミリーに結合する。ＨＬＡ分子のスーパーファミリーは、非常によく似たあるいは同一の結合モチーフを共有している。他の実施形態において、スーパーファミリーはＨＬＡクラスＩスーパーファミリーである。他の実施形態において、スーパーファミリーはＨＬＡクラスＩＩスーパーファミリーである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0122】

「ＨＬＡ結合ペプチド」、「ＨＬＡクラスＩ分子結合ペプチド」、及び「ＨＬＡクラスＩＩ分子結合ペプチド」という用語は、他の実施形態において、測定可能な親和性でＨＬＡ分子に結合するペプチドを指す。他の実施形態において、この用語は、高親和性でＨＬＡ分子に結合するペプチドを指す。他の実施形態において、この用語は、Ｔ細胞前駆体を活性化するのに十分な親和性でＨＬＡ分子に結合するペプチドを指す。他の実施形態において、この用語は、Ｔ細胞による認識を媒介するのに十分な親和性でＨＬＡ分子に結合するペプチドを指す。ＨＬＡ分子は、他の実施形態において、本明細書に列挙されるＨＬＡ分子のいずれかである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0123】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のペプチドは、ヘテロクリティックである。「ヘテロクリティック」とは、他の実施形態において、ヘテロクリティックペプチドが由来する元のペプチド（例えば、アンカー残基突然変異を含まないペプチド）を認識する免疫反応を生じるペプチドを指す。他の実施形態において、「元のペプチド」とは、配列SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２４）を有する「ＷＴ１１２２Ａ１」と呼ばれるペプチドを、残基５のアルギニンへの突然変異によって、野生型ＷＴ１ペプチドSGQARMFPNAPYLPSCLES（配列番号５）から生成した。ヘテロクリティック突然変異は、ＣＤ８⁺ＷＴ１ペプチドRMFPNAPYL（配列番号７）ペプチド生成YMFPNAPYL（配列番号１２４）を導入した。他の実施形態において、「ヘテロクリティック」とは、ヘテロクリティックペプチドが由来する元のペプチドを認識する免疫応答を生成するペプチドを指し、ここで、ヘテロクリティックペプチドによるワクチン接種によって生成される免疫応答は、元のペプチドによるワクチン接種によって生成される免疫応答よりも大きい。他の実施形態において、「ヘテロクリティック」免疫応答とは、改善されたペプチドが由来する元のペプチドを認識する免疫応答（例えば、アンカー残基突然変異を含まないペプチド）を指す。他の実施形態において、「ヘテロクリティック」免疫応答とは、ヘテロクリティックペプチドが由来する元のペプチドを認識する免疫応答を指し、ここで、ヘテロクリティックペプチドによるワクチン接種によって生成される免疫応答は、元のペプチドによるワクチン接種によって生成される免疫応答よりも大きい。他の実施形態において、ヘテロクリティックペプチドでのワクチン接種によって生成される免疫応答の大きさは、元のペプチドでのワクチン接種に対する応答に実質的に等しい免疫応答よりも大きい。他の実施形態において、ヘテロクリティックペプチドでのワクチン接種によって生成される免疫応答の大きさは、元のペプチドでのワクチン接種に対する応答よりも小さい免疫応答よりも大きい。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0124】

他の実施形態において、本発明のヘテロクリティックペプチドは、ヘテロクリティックペプチドが由来するＷＴ１ペプチド（「天然ペプチド」）と比較して少なくとも２倍増加した免疫応答を誘導する。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して３倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して５倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して７倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して１０倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して１５倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して２０倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して３０倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して５０倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して１００倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して１５０倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して２００倍である。他の実施形態において、この増加は天然ペプチドに対して３００倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して５００倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して１０００倍である。他の実施形態において、増加は天然ペプチドに対して１０００倍を超える。各可能性は本発明の別個の実施形態を表し、組み合わせにおいて、それぞれのヘテロクリティック、及びそれから誘導される天然ペプチドに独立して関連する。

【0125】

他の実施形態において、本発明のヘテロクリティックペプチドはＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドである。他の実施形態において、本発明のヘテロクリティックペプチドはＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドである。他の実施形態において、本発明の異種クラスＩＩペプチドはクラスＩＩ結合残基において突然変異される。他の実施形態において、本発明のヘテロクリティッククラスＩＩペプチドは本明細書中に例示されるように、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドの同定及び試験と類似の様式で同定及び試験される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0126】

「アンカーモチーフ」又は「アンカー残基」とは、他の実施形態において、ＨＬＡ結合配列の特定の位置における１つ又は１組の好ましい残基を指す。例えば、１、２、３、６、及び９位の残基をアンカー残基として使用する。他の実施形態において、ＨＬＡ結合配列はＨＬＡクラスＩＩ結合配列である。他の実施形態において、ＨＬＡ結合配列はＨＬＡクラスＩ結合配列である。他の実施形態において、アンカーモチーフに対応する位置は、ＨＬＡ分子の結合において重要な役割を果たす位置である。他の実施形態において、アンカー残基は、一次アンカーモチーフである。他の実施形態において、アンカー残基は二次アンカーモチーフである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0127】

他の実施形態において、「アンカー残基」は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１、３、６、及び９位の残基である。他の実施形態において、この用語はＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１、２、６、及び９位を指す。他の実施形態において、この用語はＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１、６、及び９位を指す。他の実施形態において、この用語はＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１、２、及び９位を指す。他の実施形態において、この用語はＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１、３、及び９位を指す。他の実施形態において、この用語はＨＬＡクラスＩ結合モチーフの２及び９位を指す。他の実施形態において、この用語はＨＬＡクラスＩ結合モチーフの６及び９位を指す。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0128】

ＭＨＣクラスＩＩエピトープを同定するための方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープはＴＥＰＩＴＯＰＥを使用して予測される（Ｍｅｉｓｔｅｒ ＧＥ、Ｒｏｂｅｒｔｓ ＣＧら、Ｖａｃｃｉｎｅ １９９５ １３：５８１－９１）。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープはＥｐｉＭａｔｒｉｘ（Ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ＡＳ、Ｊｅｓｄａｌｅ ＢＭら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ １９９７ １３：５２９－３１）を使用して同定される。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープはＰｒｅｄｉｃｔ Ｍｅｔｈｏｄ（Ｙｕ Ｋ、Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ Ｎら、Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２００２ ８：１３７－４８）を用いて同定される。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープはＳＹＦＰＥＩＴＨＩエピトープ予測アルゴリズムを使用して同定される。ＳＹＦＰＥＩＴＨＩは、クラスＩ及びクラスＩＩのＭＨＣ分子に結合することが知られている４５００を超えるペプチド配列を含むデータベースである。ＳＹＦＰＥＩＴＨＩは、ＭＨＣ結合溝に沿った一定の位置に特定のアミノ酸が存在することに基づくスコアを提供する。理想的なアミノ酸アンカーは１０点で評価され、異常なアンカーは６～８点の価値があり、補助アンカーは４～６点の価値があり、好ましい残基は１～４点の価値があり、－１と－３の間の結合スコアに対する負のアミノ酸効果である。ＨＬＡ－Ａ＊０２０１の最大スコアは３６である。

【0129】

他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、Ｒａｎｋｐｅｐを使用して同定される。Ｒａｎｋｐｅｐは、ＭＨＣ－ペプチド結合の予測因子として、位置特異的スコアリングマトリックス（ＰＳＳＭ）又は所与のＭＨＣ分子に結合することが知られている整列したペプチドのセットからのプロファイルを使用する。Ｒａｎｋｐｅｐは、選択されたプロファイルを用いて、ペプチドのスコア、及び最大スコアを生じるコンセンサス配列のスコアに対する予測ペプチドの最適％又はパーセンタイル値スコアについての情報を含む。Ｒａｎｋｐｅｐには、ＭＨＣ Ｉ及びＭＨＣ ＩＩ分子へのペプチド結合の予測のための、それぞれ１０２及び８０のＰＳＳＭの選択が含まれる。異なるサイズのペプチドバインダーの予測のためのいくつかのＰＳＳＭは、通常、各ＭＨＣ Ｉ分子について利用可能である。

【0130】

他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、ＳＶＭＨＣ（Ｄｏｎｎｅｓ Ｐ、Ｅｌｏｆｓｓｏｎ ＡＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ、ｕｓｉｎｇ ＳＶＭＨＣＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００２Ｓｅｐ １１、 ３：２５）を用いて同定される。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、当該分野で公知の任意の他の方法を使用して同定される。上記の方法は、他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩ結合が、ＷＴ１配列へのＭＨＣクラスＩアンカー残基突然変異の導入によって乱されることを同定するために利用される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0131】

ＭＨＣクラスＩエピトープを同定するための方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩエピトープは、ＢＩＭＡＳソフトウェアを使用して予測される。ＢＩＭＡＳスコアは、ペプチド結合親和性の尺度である、ＭＨＣ－Ｉ／β₂－ミクログロブリン／ペプチド複合体の理論値半減期の算出に基づく。このプログラムは、長さ８～１０アミノ酸のＨＬＡ－Ｉペプチドに関する情報を使用する。ＭＨＣに対するペプチドの結合親和性が高いほど、このペプチドがエピトープを表す可能性が高くなる。ＢＩＭＡＳアルゴリズムは、ペプチド中の各アミノ酸がクラスＩ分子への結合に独立して寄与すると仮定する。結合に重要な優性アンカー残基は、表中で１よりもかなり高い係数を有する。好ましくないアミノ酸は、１未満の正の係数を有する。アミノ酸が結合に好ましい又は好ましくない寄与をすることが知られていない場合、値１が割り当てられる。アミノ酸に割り当てられた全ての値を乗算し、得られたランニングスコアに定数を乗じて、解離の半減期の推定値を得る。

【0132】

他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩエピトープは、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩを使用して同定される。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩエピトープは、ＳＶＭＨＣ（Ｄｏｎｎｅｓ Ｐ、Ｅｌｏｆｓｓｏｎ ＡＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ、ｕｓｉｎｇ ＳＶＭＨＣＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００２ Ｓｅｐ １１、３：２５）を用いて同定される。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩエピトープは、ＮｅｔＭＨＣ－２．０を使用して同定される（「Ｑｕｅｒｙ ｂｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ」人工ニューラルネットワークアプローチによるペプチド－ＭＨＣ結合の高感度定量予測、Ｂｕｕｓ Ｓ、Ｌａｕｅｍｏｌｌｅｒ ＳＬ、Ｗｏｒｎｉｎｇ Ｐ、Ｋｅｓｍｉｒ Ｃ、Ｆｒｉｍｕｒｅｒ Ｔ、Ｃｏｒｂｅｔ Ｓ、Ｆｏｍｓｇａａｒｄ Ａ、Ｈｉｌｄｅｎ Ｊ、Ｈｏｌｍ Ａ、Ｂｒｕｎａｋ Ｓ． Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ、６２：３７８－８４、２００３）。他の実施形態において、ＭＨＣクラスＩエピトープは、当該分野で公知の任意の他の方法を使用して同定される。上記の方法は、他の実施形態において、ＷＴ１配列へのアンカー残基突然変異の導入によって作製できるＭＨＣクラスＩエピトープを同定するために利用される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0133】

他の実施形態において、ＭＨＣ結合を増強する突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１位の残基にある。他の実施形態において、残基をチロシンに変える。他の実施形態において、残基をグリシンに変える。他の実施形態において、残基をトレオニンに変える。他の実施形態において、残基をフェニルアラニンに変える。他の実施形態において、残基を、当該分野で公知の任意の他の残基に変える。他の実施形態において、１位における置換（例えば、チロシンへの）は、２位アンカー残基の結合を安定化する。

【0134】

他の実施形態において、突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの２位にある。他の実施形態において、残基をロイシンに変える。他の実施形態において、残基をバリンに変える。他の実施形態において、残基をイソロイシンに変える。他の実施形態において、残基をメチオニンに変える。他の実施形態において、残基を、当該分野で公知の任意の他の残基に変える。

【0135】

他の実施形態において、突然変異がＨＬＡクラスＩ結合モチーフの６位にある。他の実施形態において、残基をバリンに変える。他の実施形態において、残基をシステインに変える。他の実施形態において、残基をグルタミンに変える。他の実施形態において、残基をヒスチジンに変える。他の実施形態において、残基を、当該分野で公知の任意の他の残基に変える。

【0136】

他の実施形態において、突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの９位にある。他の実施形態において、突然変異は、Ｃ末端位置で残基を変化させる。他の実施形態において、残基をバリンに変える。他の実施形態において、残基をトレオニンに変える。他の実施形態において、残基をイソロイシンに変える。他の実施形態において、残基をロイシンに変える。他の実施形態において、残基をアラニンに変える。他の実施形態において、残基をシステインに変える。他の実施形態において、残基を、当該分野で公知の任意の他の残基に変える。

【0137】

他の実施形態において、点突然変異は、一次アンカー残基にある。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ一次アンカー残基は、２及び９位である。他の実施形態において、点突然変異は、二次アンカー残基にある。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ二次アンカー残基は、１及び８位である。他の実施形態において、ＨＬＡクラスＩ二次アンカー残基は、１、３、６、７、及び８位である。他の実施形態において、点突然変異は、４、５、及び８位から選択される位置にある。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0138】

他の実施形態において、点突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１、２、８、及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、１、３、６、及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、１、２、６、及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、１、６、及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、１、２、及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、１、３、及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、２及び９位から選択される位置の１つ以上の残基にある。他の実施形態において、点突然変異は、６及び９位から選択される１つ以上の残基にある。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。他の実施形態において、突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの４位にある。他の実施形態において、突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの５位にある。他の実施形態において、突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの７位にある。他の実施形態において、突然変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの８位にある。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0139】

上記のアンカー残基及び置換の各々は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0140】

他の実施形態において、本発明のペプチドにおけるＨＬＡクラスＩＩ結合部位は、ＨＬＡクラスＩＩモチーフアンカー残基の突然変異によって作製又は改善される。他の実施形態において、修飾されたアンカー残基はＰ１位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ２位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ６位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ９位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ１、Ｐ２、Ｐ６、及びＰ９位から選択される。他の実施形態において、アンカー残基はＰ３位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ４位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ５位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ６位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ８位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ１０位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ１１位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ１２位にある。他の実施形態において、アンカー残基はＰ１３位にある。他の実施形態において、アンカー残基が当該分野で公知のＨＬＡクラスＩＩ分子の任意の他のアンカー残基にある。他の実施形態において、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ６、及びＰ９以外の残基は二次アンカー残基として働く。従って、それらを突然変異させることはＨＬＡクラスＩＩ結合を改善し得る。他の実施形態において、上記残基の任意の組み合わせを突然変異させる。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0141】

他の実施形態において、本発明は、対象に抗ＷＴ１発現癌免疫応答を誘導する方法を提供し、この方法は本明細書中に開示される免疫療法組成物を、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に対象に投与し、それによって対象において抗ＷＴ１発現癌免疫応答を誘導するステップを含む。

【0142】

他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は本明細書に開示される免疫療法組成物を対象に、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与し、それによってＷＴ１発現癌を有する対象を処置するステップを含む。

【0143】

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌又はその再発の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は本明細書中に開示される免疫療法組成物を、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に対象に投与し、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌又はその再発の発生率を減少させるステップを含む。

【0144】

「相同性」、「相同性の」等の用語は、任意のタンパク質又はペプチドに関して、他の実施形態において、最大パーセント相同性を達成するために、配列を整列させ、必要であれば、ギャップを導入した後、対応する天然ポリペプチドの残基と同一である候補配列中のＡＡ残基のパーセンテージを指し、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮しない。整列のための方法及びコンピュータプログラムは当該分野で周知である。

【0145】

他の実施形態において、「相同性」という用語は、任意の核酸配列に関して、同様に、対応する天然核酸配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセンテージを指す。

【0146】

相同性は、他の実施形態において、当該分野で十分に記載された方法によって、配列整列のためのコンピュータアルゴリズムによって決定される。他の実施形態において、核酸配列相同性のコンピュータアルゴリズム分析には、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＤＯＭＡＩＮ、ＢＥＡＵＴＹ（ＢＬＡＳＴ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｕｔｉｌｉｔｙ）、ＧＥＮＰＥＰＴ及びＴＲＥＭＢＬパッケージのような、利用可能な任意の数のソフトウェアパッケージの利用が含まれる。

【0147】

２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数、及び２つの配列の最適な整列のために導入される必要がある各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の総数×１００）。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、配列分析ソフトウェアにおける数学的アルゴリズムを使用して達成される。タンパク質分析ソフトウェアは、様々な置換、欠失、及び保存的アミノ酸置換を含む他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して、類似の配列をマッチさせる。

【0148】

２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（www.gcg.comで入手可能）中のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、そして１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ重量及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重量を使用して決定される。ポリペプチド配列はまた、ＦＡＳＴＡを使用して、デフォルト又は推奨されるパラメータを適用して比較される。ＧＣＧバージョン６．１のプログラム、ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、クエリ配列と検索配列との間の最良の重複領域の整列及びパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９９０；１８３：６３－９８；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ＭｏｌＢｉｏｌ．２０００；１３２：１８５－２１９）。２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティー及び４のギャップペナルティーを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥＭｅｙｅｒｓ及びＷＭｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，１９８８；１１－１７）のアルゴリズムを使用して決定される。

【0149】

配列を、データベースに含まれる他の配列と比較するための別のアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にｂｌａｓｔｐである。例えば、それぞれ、本明細書に援用されるＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９０；２１５：４０３－４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９７、２５：３３８９－４０２（１９９７）を参照のこと。本発明のタンパク質配列は、例えば、関連する配列を同定するために、公共データベースに対する検索を行うための「クエリー配列」として使用できる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０（前出）のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のＷＴ１ペプチドに相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム（スコア＝５０、ワード長＝３）を用いて行うことができる。比較目的でギャップ整列を得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７（前出）に記載されるように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。

【0150】

他の実施形態において、相同配列に関する「相同性」は、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％より大きい本明細書に開示された配列に対するパーセント同一性を指す。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0151】

他の実施形態において、本発明は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬの組み合わせを送達するための１つ以上のＷＴ１送達剤と、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤とを含む組成物を提供する。他の実施形態において、組成物は、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む。他の実施形態において、組成物は、アジュバントをさらに含む。他の実施形態において、組成物は、本発明の２つ以上のペプチドを含む。他の実施形態において、組成物は、以下に記載する添加剤、化合物、又は賦形剤のいずれかをさらに含む。他の実施形態において、アジュバントは、ミョウバン塩又は他のミネラルアジュバント、細菌産物又は細菌由来アジュバント、テンソアクティブ剤（例えば、サポニン）、ｏ／ｗ又はｗ／ｏエマルジョン、リポソームアジュバント、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１２、及びＩＦＮ－ガンマ）、又はアルファ－ガラクトシルセラミド類似体である。他の実施形態において、アジュバントは、ＱＳ２１、フロイント完全又は不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、ＢＣＧ又はミョウバンである。他の実施形態において、キャリアは、本明細書に列挙される任意のキャリアである。他の実施形態において、アジュバントは、本明細書に列挙される任意のアジュバントである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0152】

他の実施形態において、本発明は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド又はＣＴＬの組み合わせを送達するための１つ以上のＷＴ１送達剤と、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤とを含むワクチンを提供する。他の実施形態において、ワクチンは、キャリアをさらに含む。他の実施形態において、ワクチンは、アジュバントをさらに含む。他の実施形態において、ワクチンは、キャリアとアジュバントの組み合わせをさらに含む。他の実施形態において、ワクチンは、ＡＰＣをさらに含む。他の実施形態において、ワクチンは、ＡＰＣとキャリア又はアジュバントとの組み合わせをさらに含む。他の実施形態において、ワクチンは、細胞ベースの組成物である。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0153】

他の実施形態において、本発明は、本発明のペプチド及び少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を含む免疫原性組成物を提供する。他の実施形態において、免疫原性組成物は、キャリアをさらに含む。他の実施形態において、免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む。他の実施形態において、免疫原性組成物は、キャリアとアジュバントの組み合わせをさらに含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0154】

他の実施形態において、「ワクチン」という用語は、対象に導入された場合に、特定の疾患、状態、又はその症状に対する予防的又は治療的応答を提供する材料又は組成物を指す。他の実施形態において、本発明は、ペプチドベースのワクチンを含み、ペプチドは、本明細書に列挙される任意の実施形態を含み、任意で、サイトカイン、アジュバント等の免疫調節化合物をさらに含む。

【0155】

他の実施形態において、本発明の方法の組成物又はワクチン、及び組成物は、アジュバントをさらに含む。他の実施形態において、アジュバントは、モンタニドＩＳＡ５１である。モンタニドＩＳＡ５１は、天然の代謝可能な油及び精製された乳化剤を含有する。他の実施形態において、アジュバントは、ＧＭ－ＣＳＦである。他の実施形態において、アジュバントは、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）であり、これは、ペプチド抗原にコンジュゲートされるか、又はペプチドと共に投与されてもよい。組換えＧＭ－ＣＳＦは、他の実施形態において、酵母（S.cerevisiae）ベクター中で増殖させたヒトタンパク質である。ＧＭ－ＣＳＦは、造血前駆細胞、ＡＰＣ、及び樹状細胞とＴ細胞のクローン性増殖と分化を促進する。

【0156】

他の実施形態において、アジュバントはサイトカインである。他の実施形態において、アジュバントは増殖因子である。他の実施形態において、アジュバントは細胞集団である。他の実施形態において、アジュバントはＱＳ２１である。他の実施形態において、アジュバントはフロイント不完全アジュバントである。他の実施形態において、アジュバントはリン酸アルミニウムである。他の実施形態において、アジュバントは水酸化アルミニウムである。他の実施形態において、アジュバントはＢＣＧである。他の実施形態において、アジュバントはミョウバンである。他の実施形態において、アジュバントはインターロイキンである。他の実施形態において、アジュバントはケモカインである。他の実施形態において、アジュバントは当該分野で公知の任意の他のタイプのアジュバントである。他の実施形態において、ＷＴ１ワクチンは、上記のアジュバントのうちの２つを含む。他の実施形態において、ＷＴ１ワクチンは、３つ以上の上記アジュバントを含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0157】

他の実施形態において、本発明の方法において使用されるＷＴ１ワクチンは、本発明の１つ以上のＷＴ１ペプチドをコードする１つ以上の核酸分子（ＤＮＡ又はＲＮＡ）である。この実施形態の実施において、１つ以上のＷＴ１ペプチドをコードする核酸分子を含むワクチン（核酸ワクチン）が投与され、そして１つ以上のチェックポイント阻害剤が患者に投与される。本発明の全ての他の実施形態において、核酸ワクチンは、ペプチドワクチンの代わりに使用できる。核酸は単独で、ウイルスキャリアの一部として、又は細胞の内部に、おそらくプラスミドとして、又は細胞の核酸に組み込まれて導入される。細胞キャリアは、患者から除去された患者の細胞、又はドナーからの細胞、又は細胞株である。細胞は、樹状細胞又は単球／マクロファージ系細胞のような抗原提示細胞であってよい。細胞ベクターは、自家細胞、同種細胞、細胞株、樹状細胞又は抗原提示細胞等の細胞、又は上記細胞のいずれかのハイブリッド細胞への融合からなる群から選択される。

【0158】

ＷＴ１ペプチド又はそれをコードする核酸、又は本明細書中に記載される形態のいずれかにおけるそのキャリアは、ＣＴＬのex vivo又はin vivoに曝露される。in vitro又はex vivoの場合、細胞を成長又は増殖してから患者に導入することができる。

【0159】

本明細書中で区別なく使用される「核酸」、「核酸分子」、「オリゴヌクレオチド」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖又は二本鎖形態のいずれかの２つ以上のヌクレオチドのＲＮＡ、ＤＮＡ、又はＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド配列を含む。用語は、限定ではなく例として、（ａ）代替連結基、（ｂ）プリンの類似形成、（ｃ）ピリミジンの類似形成、又は（ｄ）類似糖を含む、少なくとも１つの修飾を含む「修飾ヌクレオチド」を含む。類似の連結基、プリン、ピリミジン、及び糖の例については、例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／０４０６４号を参照されたい。本発明の核酸配列は、合成、組換え、ex vivo生成、又はそれらの組み合わせを含む任意の公知の方法によって、ならびに当該分野で公知の任意の精製方法を利用して調製される。本明細書中で使用される場合、「核酸ワクチン」という用語は、ＤＮＡワクチン及びＲＮＡワクチン、ならびにウイルス又は非ウイルスベクターを含むワクチンを含む。

【0160】

他の実施形態において、本発明の使用は、核酸分子（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を含むベクターを提供する。他の実施形態において、本発明の実施において使用される組成物又はワクチンは、本発明のＷＴ１ペプチドの実施形態及びそれらの組み合わせのいずれかを含むことができる。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0161】

他の実施形態において、本発明の実施に使用されるワクチン又は本発明の組成物は、同じＷＴ１フラグメントに由来する２つのペプチドを含み、それぞれが異なるＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドを含有する。他の実施形態において、２つのＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドは、異なるＨＬＡクラスＩ分子アンカー残基に突然変異を含む。他の実施形態において、２つのＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドは、同じアンカー残基に異なる突然変異を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0162】

他の実施形態において、本発明において使用される組成物中のペプチドは、２つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは３つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは４つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは５つの異なるＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは５つを超える別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。他の実施形態において、組成物中のペプチドは同じＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。

【0163】

他の実施形態において、本発明の組成物又は使用方法におけるペプチドの各々は、ＨＬＡクラスＩＩ分子のセットに結合する。他の実施形態において、ペプチドの各々は、ＨＬＡクラスＩＩ分子の別個のセットに結合する。他の実施形態において、組成物中のペプチドはＨＬＡクラスＩＩ分子の同じセットに結合する。他の実施形態において、ペプチドのうちの２つは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の異なる重複するセットに結合する。他の実施形態において、２つ以上のペプチドはＨＬＡクラスＩＩ分子の同じセットに結合し、一方、別のペプチドは、異なるセットに結合する。他の実施形態において、２つ以上のペプチドはＨＬＡクラスＩＩ分子の重複セットに結合し、一方、別のペプチドは、別個のセットに結合する。

【0164】

他の実施形態において、本発明の実施又は本発明の組成物において使用するためのペプチドは、２つの異なるＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは３つの異なるＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは４つの異なるＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは５つの異なるＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、ペプチドは５つを超える別個のＨＬＡクラスＩ分子に結合する。他の実施形態において、組成物中のペプチドは同じＨＬＡクラスＩ分子に結合する。

【0165】

他の実施形態において、本発明の実施又は本発明の組成物において使用するためのペプチドの各々は、ＨＬＡクラスＩ分子のセットに結合する。他の実施形態において、ペプチドの各々は、ＨＬＡクラスＩ分子の別個のセットに結合する。他の実施形態において、組成物中のペプチドはＨＬＡクラスＩ分子の同じセットに結合する。他の実施形態において、ペプチドのうちの２つは、ＨＬＡクラスＩ分子の異なるが重複するセットに結合する。他の実施形態において、２つ以上のペプチドはＨＬＡクラスＩ分子の同じセットに結合し、一方、別のペプチドは、異なるセットに結合する。他の実施形態において、２つ以上のペプチドはＨＬＡクラスＩ分子の重複セットに結合し、一方、別のペプチドは、別個のセットに結合する。

【0166】

他の実施形態において、「ＨＬＡクラスＩＩ分子のセット」又は「ＨＬＡクラスＩ分子のセット」は、特定の遺伝子座において異なる対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ分子をいう。他の実施形態において、この用語は、特定の結合特異性を有するＨＬＡ分子を指す。他の実施形態において、この用語は、特定のペプチドコンセンサス配列を有するＨＬＡ分子を指す。他の実施形態において、この用語は、ＨＬＡクラスＩＩ分子のスーパーファミリーをいう。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0167】

上記の組成物及び組成物のタイプのそれぞれは、本発明の別個の実施形態を表す。

【0168】

本発明のペプチド、核酸、組成物、及びワクチンに関して本明細書に記載される任意の実施形態は、本発明の任意の方法において使用される。ペプチド、核酸、組成物、又はワクチンと方法との各組み合わせは、その別個の実施形態を表す。

【0169】

他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は、本明細書中に記載されるようなＷＴ１免疫療法組成物、及び、任意でチェックポイント阻害剤を対象に投与し、それによって、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置することを含む。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療する方法を提供し、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのペプチドによって誘導されるＣＴＬ、及び、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組合せを送達するための少なくともＷＴ１送達剤を含む本発明の組成物を対象に投与し、それによってＷＴ１発現癌を有する対象を処置することを含む。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は、ワクチン等の免疫原性組成物、及び、任意で、チェックポイント阻害剤を対象に投与し、それによってＷＴ１発現癌を有する対象を処置することを含む。

【0170】

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の進行を抑制又は停止する方法を提供し、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬ、及び、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組み合わせを送達するために、１つ以上のＷＴ１送達剤を対象に投与することを含み、それによってＷＴ１発現癌の進行を抑制又は停止する。他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の進行を抑制又は停止する方法を提供し、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組合せを含む組成物を対象に投与することを含み、それによってＷＴ１発現癌の進行を抑制又は停止する。他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の進行を抑制又は停止する方法を提供し、この方法は、本発明の免疫療法組成物等の免疫原性組成物を対象に投与することを含み、この組成物は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組合せを含み、それによってＷＴ１発現癌の進行を抑制又は停止する。

【0171】

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は、対象に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのペプチドによって誘導されるＣＴＬ、及び、任意で、及び少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組み合わせを送達するために、１つ以上のＷＴ１送達剤を投与することを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させる。他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は、１つ以上のＷＴ１送達剤を含む本発明の組成物を対象に投与して、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬ、及び、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組合せを送達し、それによって対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させることを含む。他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組み合わせを含む本発明の組成物を対象に投与することを含み、それによって対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させる。

【0172】

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の再発の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬ、及び、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組み合わせを送達するために、１つ以上のＷＴ１送達剤を含む組成物を対象に投与することを含み、それによって対象におけるＷＴ１発現癌の再発の発生率を減少させる。他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の再発の発生率を減少させる方法を提供し、この方法は、対象に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、及び、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組み合わせを含む本発明の組成物を投与することを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の再発の発生率を減少させる。

【0173】

他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌に対する対象のＴ細胞トレランスを克服する方法を提供し、この方法は、対象に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬ、及び、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組合せを送達するための１つ又は複数のＷＴ１送達剤を投与し、それによってＷＴ１発現癌に対するＴ細胞トレランスを克服することを含む。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌に対する対象のＴ細胞トレランスを克服する方法を提供し、この方法は、本発明の組成物を対象に投与する工程を含み、この組成物は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、及び、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の組み合わせを含み、それによって、ＷＴ１発現癌に対するＴ細胞トレランスを克服する。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１発現癌に対する対象のＴ細胞トレランスを克服する方法を提供し、この方法は、対象に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組み合わせを含む、本発明の免疫療法組成物等の免疫原性組成物を投与することを含み、それによって、ＷＴ１発現癌に対するＴ細胞トレランスを克服する。

【0174】

他の実施形態において、本発明は、（ａ）本発明の方法によって癌の悪性細胞を認識するヒト細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のドナー形成及び増殖を誘導し、（ｂ）ヒトＣＴＬを対象に注入し、それによって癌を有する対象を治療することを含む、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置する方法を提供する。一実施形態において、ドナーに少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせを投与し、前記ドナーからのＣＴＬを対象に注入し、任意で、対象にチェックポイント阻害剤を投与し、それによって癌を有する対象を処置する。一実施形態において、ドナーに少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組み合わせが投与され、前記ドナーからのＣＴＬは対象に注入され、それによって癌を有する対象を処置する。一実施形態において、ドナーに少なくとも７つのＷＴ１ペプチドと、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤との組み合わせが投与され、前記ドナーからのＣＴＬは対象に注入され、任意で、対象にチェックポイント阻害剤が投与され、それによって癌を有する対象が治療される。

【0175】

他の実施形態において、本発明は、（ａ）本発明の方法によって癌の悪性細胞を認識するヒトＣＴＬのex vivo形成及び増殖を誘導し、ヒト免疫細胞はドナーから得られ、ｂ）ヒトＣＴＬを対象に注入し、それによって癌を有する対象を処置することを含む、ＷＴ１発現癌を有する対象を処置する方法を提供する。一実施形態において、チェックポイント阻害剤が、ex vivo工程に含まれる。他の実施形態において、チェックポイント阻害剤が対象に投与される。他の実施形態において、ex vivo工程の両方がチェックポイント阻害剤を含み、対象にもチェックポイント阻害剤が投与される。

【0176】

ex vivo免疫療法の方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｄａｖｉｓ ＩＤら（Ｆｌｔ３リガンドとＣＤ４０リガンドプライムＣＤ８＋Ｔ細胞により効率的に癌患者に生成される血液樹状細胞、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏ ２００６年９月－１０月２９（５）：４９９－５１１）及びＭｉｔｃｈｅｌｌ ＭＳら（ＨＬＡ－Ａ＊０２０１制限ＭＵＣ１シグナルシークエンスエピトープのペプチド類似体に対するサイトメックスＴ細胞応答、Ｍ１．２．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６年７月２８日）に記載されている。各方法は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0177】

他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、リンパ球集団を、免疫原性組成物（例えば、本発明の免疫療法組成物）と、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に接触させ、それによって、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導することを含む。他の実施形態において、免疫原性組成物は、本発明のペプチドに関連する抗原提示細胞（ＡＰＣ）及びチェックポイント阻害剤を含む。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、リンパ球集団を、本発明のペプチド又は組成物と、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に接触させ、それによって、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導することを含む。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、リンパ球集団を、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に本発明のワクチンと接触させ、それによって、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する工程を含む。他の実施形態において、ＣＴＬは、ＷＴ１発現細胞に特異的である。他の実施形態において、標的細胞は、ＷＴ１発現癌の細胞である。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0178】

他の実施形態において、本発明は、対象においてＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、対象を、本発明の免疫療法組成物等の免疫原性組成物と、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に接触させ、それによって、対象において、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導することを含む。他の実施形態において、免疫原性組成物は、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される、本発明の少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの混合物に関連するＡＰＣを含む。他の実施形態において、本発明は、対象においてＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、対象を、少なくとも１つの本発明のチェックポイント阻害剤、又は組成物と共に、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせと接触させ、それによって、対象においてＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導することを含む。他の実施形態において、本発明は、ＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの対象における形成及び増殖を誘導する方法を提供し、この方法は、対象を、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に、本発明のワクチンと接触させ、それによって、対象においてＷＴ１タンパク質特異性ＣＴＬの形成及び増殖を誘導することを含む。他の実施形態において、標的細胞は、ＷＴ１発現癌の細胞である。他の実施形態において、対象は、ＷＴ１発現癌を有する。他の実施形態において、ＣＴＬは、ＷＴ１発現細胞に特異的である。

【0179】

他の実施形態において、本発明は、対象においてヘテロクリティック免疫応答を生成する方法を提供し、ここで、ヘテロクリティック免疫応答は、ＷＴ１発現癌に対して向けられ、この方法は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせを、任意で、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤又は本発明の組成物と共に、対象に投与し、それによってヘテロクリティック免疫応答を生成することを含む。他の実施形態において、本発明は、対象においてヘテロクリティック免疫応答を生成する方法を提供し、ここで、ヘテロクリティック免疫応答は、ＷＴ１発現癌に対して向けられ、この方法は、本発明のワクチンのような免疫原性組成物を、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に対象に投与し、それによって、ヘテロクリティック免疫応答を生成することを含む。他の実施形態において、本発明は、対象においてヘテロクリティック免疫応答を生成する方法を提供し、ここで、ヘテロクリティック免疫応答はＷＴ１発現癌に対して向けられ、この方法は、本発明のワクチンを、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に対象に投与し、それによって、ヘテロクリティック免疫応答を生成することを含む。

【0180】

各方法は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0181】

他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）に関連する。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌はＭＤＳである。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は食道扁平上皮癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は骨又は軟組織肉腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌はウィルムス腫瘍である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は白血病である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は血液癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌はリンパ腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は線維形成性小円形細胞腫瘍である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は中皮腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は悪性中皮腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は胃癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は結腸癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は肺癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は乳癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は生殖細胞腫瘍である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は悪性胸膜中皮腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は多発性骨髄腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は骨髄性白血病である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は星状細胞癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は結腸直腸腺癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は卵巣癌（例えば、漿液性、上皮性、又は子宮内膜）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は乳癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌はメラノーマである。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は頭頸部扁平上皮癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は膵管細胞癌腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は神経芽細胞腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は子宮癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は甲状腺癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は肝細胞癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は甲状腺癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は肝臓癌である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は腎癌（例えば、腎細胞癌）である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌はカポジ肉腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は肉腫である。他の実施形態において、ＷＴ１発現癌が任意の他の癌腫又は肉腫である。

【0182】

他の実施形態において、ＷＴ１発現癌は固形腫瘍である。他の実施形態において、固形腫瘍はＷＴ１発現癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は肺癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は乳癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は結腸直腸癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は前立腺癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は卵巣癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は腎癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は膵臓癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は脳癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は胃腸癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍は、皮膚癌に関連する。他の実施形態において、固形腫瘍はメラノーマに関連する。

【0183】

他の実施形態において、本発明の方法によって処置される癌又は腫瘍は、ＷＴ１を発現することが疑われる。他の実施形態において、ＷＴ１発現は、実際の腫瘍サンプルの試験によって検証されていない。他の実施形態において、癌又は腫瘍は、多くの場合、ＷＴ１を発現することが知られているタイプのものである。他の実施形態において、このタイプは、大多数の症例においてＷＴ１を発現する。

【0184】

ＷＴ１発現癌又は腫瘍、及びＷＴ１を発現することが疑われる癌又は腫瘍のそれぞれのタイプは、本発明の別個の実施形態を表す。

【0185】

本発明の組成物及び方法を使用して処置される癌型の非網羅的なリストを、表２に提供する。

【0186】

【表3】

【表4】

【表5】

【0187】

他の実施形態において、本発明の複数のペプチドは、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に、本発明の方法において免疫応答を刺激するために使用される。

【0188】

本明細書中に提供される、抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘発するヘテロクリティックペプチドは、本発明の方法を使用して作製される。複数のＨＬＡクラスＩＩ分子に対するＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘発するＷＴ１ペプチドを同定することができる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、ＡＰＣ上のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合したペプチドを認識する。他の実施形態において、抗原特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答は、ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答の誘発及び維持を補助する。

【0189】

他の実施形態において、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される本発明のペプチドは、ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に結合する能力のために、ＣＴＬ応答を誘発する増強された能力を示す。他の実施形態において、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される本発明のペプチドは、ＷＴ１特異的ＣＴＬの生存及び増殖を増加させるチェックポイント阻害剤の能力のために、ＣＴＬ応答を誘発する増強された能力を示す。他の実施形態において、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される本発明のワクチンは、ＷＴ１抗原を認識するＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方を活性化又は誘発するという長所を有する。他の実施形態において、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方の活性化又は誘発は、いずれかの集団単独の活性化と比較して、相乗的な抗ＷＴ１免疫応答を提供する。他の実施形態において、本発明のペプチドが複数のＨＬＡクラスＩＩサブタイプに結合する能力に起因して、本発明のペプチドの増強された免疫原性が複数のＨＬＡクラスＩＩサブタイプの個々において示される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0190】

他の実施形態において、活性化ＣＤ４^＋細胞は、樹状細胞をライセンスすることによって免疫を増強し、それによって細胞傷害性Ｔ細胞の活性化及び生存を維持する。他の実施形態において、活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、腫瘍細胞との直接的な接触によって、又はアポトーシス経路の活性化によって、腫瘍細胞死を誘導する。例えば、中皮腫腫瘍細胞は、ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ分子のコンテキストにおいて抗原を処理し、提示することができる。

【0191】

本明細書に開示される方法は、ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に結合することができる他のＷＴ１由来ペプチドの設計を可能にすることが当業者によって理解される。本方法はさらに、本発明のＷＴ１由来ペプチドを組み合わせた免疫原性組成物及びワクチンの設計を可能にする。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0192】

他の実施形態において、本発明の少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される方法、ペプチド、ワクチン、及び／又は免疫原性組成物は、多数の異なるＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子を含むＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化又は誘発するという長所を有する。他の実施形態において、ワクチンは、集団の実質的な比率でＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化又は誘発するという長所を有する。他の実施形態において、ペプチドは集団の１０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の１５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の２０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の２５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の３０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の３５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の４０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の４５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の５０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の５５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の６０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の７０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の７５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の８０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の８５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の９０％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の９５％においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ペプチドは集団の９５％超においてＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化する。他の実施形態において、ワクチンは特定の集団（例えば、アメリカ白人）のかなりの割合でＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化又は誘発する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0193】

他の実施形態において、本発明の方法は、対象によって既に開始されている免疫応答の向上を提供する。他の実施形態において、本発明の方法は、ペプチド、組成物、又はワクチンを、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に、１回以上又は２回以上投与することを含む。他の実施形態において、ペプチドは、それらの組成物、濃度、又はそれらの組み合わせにおいて変化する。他の実施形態において、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与されるペプチドは、対象の抗原に対する免疫応答がまだ開始されていない対象において、対象の抗原に対する免疫応答の開始を提供する。他の実施形態において、誘導されるＣＴＬは、ＡＰＣ又は癌細胞上のペプチドの提示に応答して増殖する。他の実施形態において、免疫応答の調節には、免疫系の体液性アーム及び細胞媒介アームのいずれか又は両方を含み、これはそれぞれＴｈ２及びＴｈ１ Ｔヘルパー細胞の存在を伴い、又は、他の実施形態において各アームを個別に伴う。

【0194】

他の実施形態において、腫瘍の成長に影響を及ぼす方法は、（１）腫瘍細胞分裂の直接的な阻害、又は（２）免疫細胞媒介性腫瘍細胞溶解、又はその両方をもたらし、これは、腫瘍細胞の正味の成長の抑制をもたらす。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与されるペプチド又はワクチンの使用は、チェックポイント阻害剤を使用しない場合よりも、腫瘍細胞分裂の直接的阻害、免疫細胞媒介性細胞溶解、又はその両方を増加させる。

【0195】

これら２つのメカニズムのいずれかによる腫瘍増殖の阻害は、多くある周知の方法に基づいて当業者によって容易に決定される。他の実施形態において、腫瘍阻害は、ある期間にわたって実際の腫瘍サイズを測定することによって決定される。他の実施形態において、腫瘍阻害は、当業者に周知の方法を利用して、（ある期間にわたって）腫瘍のサイズを推定することによって決定される。より具体的には、様々な放射線画像診断法（例えば、単一光子及び陽電子放出コンピュータ断層撮影、「臨床腫瘍学における核医学」、Ｗｉｎｋｌｅｒ、Ｃ．（編）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｉｌｏｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８６を参照）を利用して、腫瘍サイズを推定することができる。このような方法はまた、例えば、従来のイメージング剤（例えば、クエン酸ガリウム－６７）、ならびに代謝産物イメージング、受容体イメージング、又は免疫学的イメージングのための特殊化された試薬（例えば、放射線標識モノクローナル抗体腫瘍マーカー）を含む、様々なイメージング剤を利用することができる。さらに、超音波（「腫瘍の超音波鑑別診断」、Ｋｏｓｓｏｆｆ及びＦｕｋｕｄａ（編）、Ｉｇａｋｕ－Ｓｈｏｉｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８４を参照のこと）のような非放射性方法もまた、腫瘍のサイズを推定するために利用することができる。

【0196】

上記の腫瘍阻害を決定するためのin vivo方法に加えて、in vivo腫瘍阻害を決定するために、様々なin vitro方法を利用することができる。代表的な例としては、例えば、^５１Ｃｒ放出アッセイ、腫瘍従属リンパ球増殖（Ｉｏａｎｎｉｄｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６（５）：１７００－１７０７、１９９１）、腫瘍特異的抗体のin vitro生成（Ｈｅｒｌｙｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．７３：１５７－１６７、１９８４）、細胞（例えば、ＣＴＬ、ヘルパーＴ細胞）又は体液性（例えば、抗体）媒介細胞増殖阻害in vitro（Ｇａｚｉｔら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３５：１３５－１４４、１９９２）によって決定されるリンパ球媒介抗腫瘍細胞溶解活性、及びこれらのアッセイのいずれかについて、細胞前駆体頻度の決定（Ｖｏｓｅ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ３０：１３５－１４２（１９８２））等が挙げられる。

【0197】

他の実施形態において、腫瘍増殖を抑制する方法は、本発明の少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と接触しないか、又は共に投与されたペプチドに曝露されない増殖と比較して、減少した増殖状態を示す。腫瘍細胞増殖は、腫瘍の大きさを測定すること、腫瘍細胞が増殖しているかどうかを^３Ｈ－チミジン取り込みアッセイを用いて決定すること、又は腫瘍細胞を計数することを含むが、これらに限定されない、当該分野で公知の任意の手段によって評価することができる。腫瘍細胞増殖を「抑制する」とは、他の実施形態において、腫瘍増殖を遅らせる、遅延させる、もしくは停止させること、又は腫瘍収縮をいう。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0198】

本発明の方法及び組成物の他の実施形態において、ＷＴ１発現は、処置の投与前、処置の投与後、又は処置の投与前後の両方で測定される。他の実施形態において、ＷＴ１転写産物発現が測定される。他の実施形態において、腫瘍細胞又は癌細胞におけるＷＴ１タンパク質レベルが測定される。他の実施形態において、癌細胞又は腫瘍細胞から循環液又は尿等の他の体液に放出されるＷＴ１タンパク質又はペプチドが測定されるが、これらに限定されない。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0199】

本発明の方法及び組成物の他の実施形態において、対象に投与される１つ以上のチェックポイント阻害剤によって標的化されるチェックポイントタンパク質の発現は、腫瘍又は癌細胞において、又は全血、血清、又は血漿において、処置の投与前（基線）、処置の投与後、又は処置の投与前後の両方で（転写レベル又はタンパク質レベルで）測定される。本発明の方法及び組成物の一実施形態において、１つ以上のチェックポイントタンパク質は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１キナーゼ、ＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、及びＢ－７ファミリーリガンドの中から選択される。本発明の方法及び組成物の一実施形態において、ＰＤ１、ＰＤ２、ＣＴＬＡ４、又は上記の２つ以上の組み合わせの発現は、処置の投与前、処置の投与後、又は処置の投与前後の両方で測定される。一実施形態において、チェックポイントタンパク質発現は、原発腫瘍部位で測定される。他の実施形態において癌は転移性であり、チェックポイントタンパク質発現は、転移部位、又は原発腫瘍部位、又はその両方で測定される。

【0200】

本発明の方法及び組成物の他の実施形態において、以下のマーカー：単球性骨髄由来サプレッサー細胞（ｍ－ＭＤＳＣ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、絶対リンパ球、絶対リンパ球、及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のうちの１つ以上が、処置の投与前（基線）、処置の投与後、又は処置の投与前後の両方で測定される。他の実施形態において、チェックポイント調節に対する応答性を予測又は同定するための１つ以上のマーカーの使用は、本明細書に包含される。

【0201】

免疫応答の存在及び大きさを決定する方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、リンパ球増殖アッセイでは、放射性物質（例えば、^３Ｈ－チミジン）のＴ細胞取り込みが、細胞増殖の関数として測定される。他の実施形態において、Ｔ細胞増殖の検出は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）製造、Ｃａ^２＋フラックス、又は３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニル－テトラゾリウム等の色素取り込みの増加を測定することによって達成される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0202】

他の実施形態において、ＣＴＬ刺激は、細胞増殖、サイトカイン生成及びその他の検知を含む、当業者に公知の手段によって決定される。リガンドドパルス標的に接触した際にＴ細胞によって分泌されるサイトカインの型及び量の分析は、機能的活性の尺度である。サイトカインは、サイトカイン生産率及び総量を決定するために、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ又は蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって測定される。（Ｆｕｊｉｈａｓｈｉ Ｋら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：１８１；Ｔａｎｇｕａｙ Ｓ及びＫｉｌｌｉｏｎ Ｊ．Ｊ．（１９９４）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１３：２５９）。

【0203】

他の実施形態において、ＣＴＬ活性は、^５１Ｃｒ放出溶解アッセイによって決定される。抗原特異的Ｔ細胞によるペプチドパルス^５１Ｃｒ標識対象の溶解を、対照ペプチドでパルスした対象細胞について比較することができる。他の実施形態において、Ｔ細胞は、本発明のペプチドで刺激され、ＭＨＣのコンテキストにおいて天然ペプチドを発現する標的細胞の溶解が決定される。他の実施形態において、リガンド性能を評価するために、固定された時点（例えば、４時間）での溶解の動力学ならびに全体的な標的溶解が使用される。（Ｗａｒｅ Ｃ．Ｆ．ら（１９８３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３１： １３１２）。

【0204】

ＨＬＡ分子に対するペプチドの親和性を決定する方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、親和性は、ＴＡＰ安定化アッセイによって決定される。

【0205】

他の実施形態において、親和性は、競合ラジオイムノアッセイによって決定される。他の実施形態において、以下のプロトコルが利用される。標的細胞は、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｆａｉｒｌａｗｎ、ＮＪ）を含むＰＢＳ中で２回洗浄される。細胞を氷上１０^７／ｍｌで再懸濁し、天然の細胞表面結合ペプチドを、３ｍｇ／ｍｌベータ_２ミクログロブリンの存在下でクエン酸－リン酸緩衝液を用いて０℃で２分間ストリッピングする。３ｍｇ／ｍｌのベータ_２ミクログロブリン及び３０ｍｇ／ｍｌのデオキシリボヌクレアーゼの存在下、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中、５×１０^６細胞／ｍｌでペレットを再懸濁し、２００ｍｌのアリコートを、ＨＬＡ特異的ペプチドの存在下又は非存在下、２０℃で１０分間、次いで^１２５Ｉ標識ペプチドと共に２０℃で３０分間インキュベートする。全結合^１２５Ｉは、ＰＢＳ／２％ＢＳＡで２回洗浄し、ＰＢＳで１回洗浄した後に測定する。相対親和性は、既知の結合ペプチドに対する試験ペプチドの漸増濃度の比較によって決定される。

【0206】

他の実施形態において、生細胞（例えば、ＳＫＬＹ－１６細胞）の表面上のＨＬＡへのペプチドの結合の特異性分析を行って、結合が適切なＨＬＡ分子に対するものであることを確認し、その制限を特定する。これは、他の実施形態において、同じ又は異なるＨＬＡ分子に結合することが知られている過剰の非標識ペプチドとの競合、及び同じ又は異なるＨＬＡ型を発現する標的細胞の使用を含む。他の実施形態において、このアッセイは、生きた新鮮な又は０．２５％パラホルムアルデヒド固定ヒトＰＢＭＣ、白血病細胞株及び特定のＨＬＡ型のＥＢＶ形質転換Ｔ細胞株に対して行われる。特異的細胞上のＭＨＣ分子に結合することが見出されたペプチドの相対的結合活性は、関連するＨＬＡ分子、例えば、チロシナーゼ又はＨＢＶペプチド配列に対する既知の高親和性の^１２５Ｉ標識ペプチドに対する上記のような競合アッセイによってアッセイされる。

【0207】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物において使用される任意のＷＴ１ペプチドは、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボキシレート（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉら（１９９１）Ｊ．Ａｍ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：２２７５－２２８３）、（２Ｓ，３Ｓ）－メチル－フェニルアラニン、（２Ｓ，３Ｒ）－メチル－フェニルアラニン、（２Ｒ，３Ｓ）－メチル－フェニルアラニン及び（２Ｒ，３Ｒ）－メチル－フェニルアラニン（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ及びＨｒｕｂｙ（１９９１）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３２（４１）：５７６９－５７７２）、２－アミノテトラヒドロナフタレン－２－カルボン酸（Ｌａｎｄｉｓ（１９８９）Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｒｉｚｏｎａ）、ヒドロキシ－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボキシレート（Ｍｉｙａｋｅら（１９８４）Ｊ．Ｔａｋｅｄａ Ｒｅｓ．Ｌａｂｓ．４３：５３－７６）ヒスチジンイソキノリンカルボン酸（Ｚｅｃｈｅｌら（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３８（２）：１３１－１３８）及びＨＩＣ（ヒスチジン環状尿素）、（Ｄｈａｒａｎｉｐｒａｇａｄａら（１９９３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．４２（１）：６８－７７）（（１９９２）Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔ．、Ｃｒｙｓｔａｌ Ｓｔｒｕｃ．Ｃｏｍｍ．４８（ＩＶ）：１２３９－１２４）のような１つ以上の非古典的アミノ酸を含む。このような非古典的アミノ酸は、本発明の修飾ペプチドにおいて具体化される。

【0208】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物において使用される任意のペプチドは１つ以上のＡＡ類似体を含むか、又はペプチド模倣体であり、これは、他の実施形態において、特定の二次構造を誘導するか、又はそれに有利である。このようなペプチドは、他の実施形態において、以下を含む。ＬＬ－Ａｃｐ（ＬＬ－３－アミノ－２－プロペニドン－６－カルボン酸）、β－ターン誘導ジペプチド類似体（Ｋｅｍｐら（１９８５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５０：５８３４－５８３８）、β－シート誘導類似体（Ｋｅｍｐら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２９：５０８１－５０８２）、β－ターン誘導類似体（Ｋｅｍｐら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｆｔ．２９：５０５７－５０６０）、アルファヘリックス誘導類似体（Ｋｅｍｐら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｆｔ．２９：４９３５－４９３８）、ガンマ－ターン誘導類似体（Ｋｅｍｐら（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：１０９：１１５）、以下の参考文献によって提供される類似体：Ｎａｇａｉ及びＳａｔｏ（１９８５）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｆｔ．２６：６４７－６５０及びＤｉＭａｉｏら（１９８９）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．ｐ．１６８７、Ｇｌｙ－Ａｌａターン類似体（Ｋａｈｎら（１９８９）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３０：２３１７）、アミド結合アイソステレ（Ｊｏｎｅｓら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｆｔ．２９（３１）：３８５３－３８５６）、トレトラゾール（Ｚａｂｒｏｃｋｉら（１９８８）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：５８７５－５８８０）、ＤＴＣ（Ｓａｍａｎｅｎら（１９９０）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｅｐ．Ｒｅｓ．３５：５０１：５０９）及びＯｌｓｏｎら（１９９０）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１１２：３２３－３３３及びＧａｒｖｅｙら（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５（３）：９３６－９４０に教示された類似体。ベータターン及びベータバルジの立体配置的に制限された模倣物、ならびにそれらを含有するペプチドは、１９９５年８月８日Ｋａｈｎ発行米国特許第５，４４０，０１３号に記載されている。

【0209】

他の実施形態において、本発明の方法で使用される任意のペプチドは、以下に記載されるように、共有結合又は非共有結合（複合体化）を介した各種の他の分子のうちの１つにコンジュゲートされ、その性質は、他の実施形態において特定の目的に応じて変化する。他の実施形態において、ペプチドは、天然及び合成ポリマー、タンパク質、多糖類、ポリペプチド（アミノ酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、及び脂質を含むがこれらに限定されない、高分子キャリア（例えば、免疫原性キャリア）に共有結合的又は非共有結合的に複合体化される。他の実施形態において、本発明のペプチドは、基質に連結される。他の実施形態において、ペプチドは、リポソームへの導入のために、脂肪酸にコンジュゲートされる（米国特許第５，８３７，２４９号）。他の実施形態において、本発明のペプチドは、固体支持体と共有結合又は非共有結合で複合体化され、その様々なものが当該分野で公知である。他の実施形態において、キャリア、基質、脂肪酸、又は固体支持体へのペプチドの結合は、誘発された免疫応答を増加させるのに役立つ。

【0210】

他の実施形態において、キャリアは、チログロブリン、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、破傷風トキソイド、ポリ（リジン：グルタミン酸）等のポリアミノ酸、インフルエンザタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスコアタンパク質、キーホールリンペットヘモシアニン、アルブミン、又は別のキャリアタンパク質もしくはキャリアペプチド、Ｂ型肝炎ウイルス組換えワクチン、又はＡＰＣである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0211】

他の実施形態において、「アミノ酸」という用語は、天然の、又は他の実施形態において非天然又は合成のＡＡを指し、他の実施形態において、グリシン、Ｄ－又はＬ光学異性体、ＡＡ類似体、ペプチド模倣体、又はそれらの組合せを含むことができる。

【0212】

他の実施形態において、「癌」、「新生物」、「新生物の」又は「腫瘍」という用語は区別なく使用され、宿主生物に対して病的にする悪性形質転換を受けた細胞を指す。癌は、番号の付いた病期分類システム内のいずれかの病期（例えば、０期、１期、２期、３期、又は４期）であり、ＴＮＭ病期分類システム内のいずれかの病期である。原発性癌細胞（すなわち、悪性形質転換部位の近くから得られた細胞）は、十分に確立された技術、特に、組織学的検査により、非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義は、原発癌細胞だけでなく、癌細胞祖先に由来する任意の細胞も含む。これには、転移した癌細胞、及び癌細胞に由来するin vitro培養物及び細胞株が含まれる。他の実施形態において、腫瘍は腫瘍塊に基づいて検出可能であり、例えば、ＣＡＴスキャン、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、Ｘ線、超音波、又は触診等の手順によって検出可能であり、他の実施形態において、生化学的又は免疫学的得られた知見によって同定され、後者は他の実施形態において癌性細胞を同定するためにも使用される。腫瘍は、固形腫瘍又は非固形腫瘍である。

【0213】

ペプチドを合成するための方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、本発明のペプチドは、適切な固相合成手順を使用して合成される（例えば、Ｓｔｅｗａｒｄ及びヤング、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｆｒｅｅｍａｎｔｌｅ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９６８）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６７）Ｒｅｃｅｎｔ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｓ ２３：４５１を参照のこと）。これらのペプチドの活性は、他の実施形態において、本明細書中に記載されるようなアッセイを使用して試験される。

【0214】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差動溶解度を含む標準的な方法によって、又はタンパク質精製のための任意の他の標準的な技術によって精製される。他の実施形態において、イムノアフィニティークロマトグラフィーが使用され、それにより、エピトープはそのペプチド又は本発明の関連ペプチドに対して生成された抗体を含むアフィニティーカラムに結合することによって単離され、そして固定支持体に付着する。

【0215】

他の実施形態において、ヘキサ－Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、マルトース結合ドメイン（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、インフルエンザコート配列（Ｋｏｌｏｄｚｉｅｊら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９４：５０８－５０９）、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ等の親和性タグを本発明のペプチドに結合させて、適切なアフィニティーカラムを通過させることによって容易に精製することができる。単離されたペプチドはまた、他の実施形態において、タンパク質分解、核磁気共鳴、及びｘ線結晶学のような技術を使用して、物理的に特定される。

【0216】

他の実施形態において、本発明のペプチドは当業者に明らかであるように、公知の技術を介して、in vitro翻訳によって生成される。他の実施形態において、ペプチドは、翻訳中又は翻訳後に、例えば、リン酸化、グリコシル化、架橋、アシル化、タンパク質分解開裂、抗体分子、膜分子又は他のリガンドへの結合によって、差次的に修飾される（Ｆｅｒｇｕｓｏｎら（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７:２８５－３２０）。

【0217】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、検出可能な標識をさらに含み、これは他の実施形態において蛍光性であり、又は他の実施形態において発光性であり、又は他の実施形態において放射性であり、又は他の実施形態において高電子密度である。他の実施形態において、検出可能な標識は、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＤＳ－Ｒｅｄ（赤色蛍光タンパク質）、分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）、ベータ－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、^３２Ｐ、^１２５Ｉ、^３Ｈ及び^１４Ｃ、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル及びウンベリフェロン、ルシフェリン、又は当業者に公知の任意の数の他のこのような標識を含む。使用される特定の標識は、使用されるイムノアッセイの型に依存する。

【0218】

他の実施形態において、本発明のペプチドは基質に連結され、これは、他の実施形態においてキャリアとして役立つ。他の実施形態において、基質へのペプチドの連結は、誘発された免疫応答を増加させるのに役立つ。

【0219】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、カルボジミド等の従来の架橋剤を使用して、本明細書に記載されるように、他の分子に連結される。カルボジミドの例を挙げると、１－シクロヘキシル－３－（２－モルホリニル－（４－エチル）カルボジイミド（ＣＭＣ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及び１－エチル－３－（４－アゾニア－４４－ジメチルペンチル）カルボジイミドである。

【0220】

他の実施形態において、架橋剤は、臭化シアン、グルタルアルデヒド及び無水コハク酸を含む。一般に、ホモ二官能性アルデヒド、ホモ二官能性エポキシド、ホモ二官能性イミドエステル、ホモ二官能性Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ホモ二官能性マレイミド、ホモ二官能性アルキルハライド、ホモ二官能性ピリジルジスルフィド、ホモ二官能性アリールハライド、ホモ二官能性ヒドラジド、ホモ二官能性ジアゾニウム誘導体及びホモ二官能性光反応性化合物を含む多数のホモ二官能性剤のいずれかを使用することができる。また、他の実施形態において、ヘテロ二官能性化合物、例えば、アミン反応性基及びスルフヒドリル反応性基を有する化合物、アミン反応性基及び光反応性基を有する化合物、カルボニル反応性基及びスルフヒドリル反応性基を有する化合物も想定される。

【0221】

他の実施形態において、ホモ二官能性架橋剤は、二官能性Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）、スベリン酸ジスクシンイミジル、酒石酸ジスクシンイミジル、二官能性イミドエステルジメチルアジピミデート、ジメチルピメリミデート、ジメチルスベリミデート、二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤１，４－ジ－［３'－（２'－ピリジルチオ）プロピオンアミド］ブタン、ビスマレイミドヘキサン、ビス－Ｎ－マレイミド－１，８－オクタン、二官能性アリールハライド１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、４，４'－ジフルオロ－３，３'－ジニトロフェニルスルホン、二官能性光反応剤、例えば、ビス－［ｂ－（４－アジドサリシルアミド）エチル］ジスルフィド、二官能性アルデヒドホルムアルデヒド、マロンジアルデヒド、スクシンアルデヒド、グルタルアルデヒド、アジパルデヒド、二官能性エポキシド、例えば、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、二官能性ヒドラジドアジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、及びコハク酸ジヒドラジド、二官能性ジアゾニウムｏ－トリジン、ジアゾ化及びビス－ジアゾ化ベンジジン、二官能性アルキルハライドＮ１Ｎ'－エチレン－ビス（ヨードアセトアミド）、Ｎ１Ｎ'－ヘキサメチレン－ビス（ヨードアセトアミド）Ｎ１Ｎ'－ウンデカメチレン－ビス（ヨードアセトアミド）、及びベンジルハライド及びハロマスタード、例えば、ａ１ａ'－ジヨード－ｐ－キシレンスルホン酸及びトリ（２－クロロエチル）アミンを含む。

【0222】

他の実施形態において、本明細書中に記載されるように、ペプチドを他の分子に連結するために使用されるヘテロ二官能性架橋剤は、これらに限定されるものではないが、ＳＭＣＣ（スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート）、ＭＢＳ（ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＳＩＡＢ（Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアクチル）アミノ安息香酸）、ＳＭＰＢ（スクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート）、ＧＭＢＳ（Ｎ－（ガンマ－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミドエステル）、ＭＰＢＨ（４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド）、Ｍ２Ｃ２Ｈ（４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシル－ヒドラジド）、ＳＭＰＴ（スクシンイミジルオキシカルボニル－ａ－メチル－ａ－（２－ピリジルジチオ）トルエン）及びＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）を含む。

【0223】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、イオン性、吸着性、又は生物特異的相互作用によるモノマーの非共有付加物として処方される。高度に正又は負に荷電した分子を有するペプチドの複合体は、他の実施形態において、脱イオン水中等の低イオン強度環境下での塩橋形成により得ることができる。他の実施形態において、多数の負電荷及び正電荷をそれぞれ含むポリ－（Ｌ－グルタミン酸）又はポリ－（Ｌ－リジン）等の荷電ポリマーを使用して、大きな複合体を生成することができる。他の実施形態において、ペプチドが微粒子ラテックスビーズ等の表面又は他の疎水性ポリマーに吸着され、他の実施形態において、架橋又は化学重合タンパク質を効果的に模倣する非共有結合ペプチド－超抗原複合体を形成する。他の実施形態において、ペプチドは、他の分子間の生体特異的相互作用の使用を介して非共有結合される。例えば、アビジン又はストレプトアビジン又はそれらの誘導体のようなタンパク質に対するビオチンの強い親和性を利用して、ペプチド複合体を形成することができる。この態様によれば、他の実施形態において、ペプチドは、利用可能なアミン基と反応する、Ｄ－ビオチン（ＮＨＳ－ビオチン）のＮ－ヒドロキシスクシンイミジルエステルのような一般的なビオチン化試薬を使用して、ビオチン基を有するように修飾される。

【0224】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、キャリアに連結されている。他の実施形態において、キャリアはＫＬＨである。他の実施形態において、キャリアは、例えば、チログロブリン、ヒト血清アルブミン等のアルブミン、破傷風トキソイド、ポリ（リジン：グルタミン酸）等のポリアミノ酸、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルスコアタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルス組換えワクチン等を含む、当該分野で公知の任意の他のキャリアである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0225】

他の実施形態において、本発明のペプチドは、脂質（例えば、Ｐ３ ＣＳＳ）にコンジュゲートされる。他の実施形態において、本発明のペプチドは、ビーズにコンジュゲートされる。

【0226】

前述の実施形態のいずれかにおいて、ペプチド、架橋ペプチド、結合ペプチド、又は任意の他の形態のペプチドが、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に本発明の方法において使用される。

【0227】

他の実施形態において、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の使用に加えて、本発明の方法及び組成物は、免疫調節化合物をさらに含む。他の実施形態において、免疫調節化合物は、免疫系アクセサリー又は接着分子、それらの受容体、又はそれらの組み合わせの発現を増強するサイトカイン、ケモカイン、又は補体成分である。いくつかの実施形態において、免疫調節化合物は、インターロイキン、例えば、インターロイキン１～１５、インターフェロンアルファ、ベータ又はガンマ、腫瘍壊死因子、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ケモカイン、例えば、好中球活性化タンパク質（ＮＡＰ）、マクロファージ走化性因子及び活性化因子（ＭＣＡＦ）、ＲＡＮＴＥＳ、マクロファージ炎症性ペプチドＭＩＰ－１ａ及びＭＩＰ－１ｂ、補体成分、又はそれらの組合せを含む。他の実施形態において、免疫調節化合物が、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ（ｇｐ３４）、リンホタクチン、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＴＲＡＰ、ＩＣＡＭ－１、２もしくは３、サイトカイン受容体、又はそれらの組み合わせの発現を刺激するか、又は発現を増強する。

【0228】

他の実施形態において、免疫調節化合物は、いくつかの実施形態において、免疫応答に関与する共刺激分子の発現を誘導又は増強する。

【0229】

一実施形態において、本発明によるＷＴ１ワクチン及びチェックポイント阻害剤を投与された患者にはまた、最初のワクチン接種の前又はその日に、又はそれらの組み合わせでＧＭ－ＣＳＦも投与される。一実施形態において、患者は、最初のワクチン投与の２日前及びその日に、７０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦを皮下に投与される。

【0230】

他の実施形態において、組成物は、水、分散液培地、細胞培養培地、等張剤等を含む溶媒を含む。他の実施形態において、溶剤は、約７．０のｐＨを有する水性等張緩衝溶液である。他の実施形態において、組成物は、水、リン酸緩衝生理食塩水、又は生理食塩水等の希釈剤を含む。他の実施形態において、組成物は、プロピルエチレングリコール、ポリエチレングリコール及び植物油等の非水性である溶媒を含む。

【0231】

他の実施形態において、組成物は、当業者に公知の多くの技術のいずれかによる投与のために処方される。例えば、本発明は、医薬組成物の非経口、静脈内、皮下、皮内、粘膜内、局所、経口、又は吸入による投与を提供する。

【0232】

他の実施形態において、本発明の、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド、又は少なくとも７つのＷＴ１ペプチドによって誘導されるＣＴＬの組み合わせを送達するための１つ以上のＷＴ１送達剤を含むワクチンの使用において、ワクチンは、他の実施形態において、リンパ球、単球、マクロファージ、樹状細胞、内皮細胞、幹細胞、又はそれらの組み合わせを含み、他の実施形態において、互いに対して自己、同系、又は同種異系である細胞集団をさらに含む。他の実施形態において、細胞集団は、本発明のペプチドを含む。他の実施形態において、細胞集団はペプチドを取り込む。一実施形態において、細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。さらなる実施形態において、ＡＰＣはプロフェッショナルＡＰＣである。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0233】

他の実施形態において、本発明の細胞集団は、in vivo供給源、例えば、末梢血、白血球除去血液産物、アフェレーシス血液産物、末梢リンパ節、腸関連リンパ組織、脾臓、胸腺、臍帯血、腸間膜リンパ節、肝臓、免疫病変部位（例えば、滑液、膵臓、脳脊髄液、腫瘍サンプル、肉芽腫組織）、又はこのような細胞が得られる任意の他の供給源、から得られる。他の実施形態において、細胞集団は、ヒト供給源から得られ、これは、他の実施形態において、ヒト胎児、新生児、子供、又は大人供給源である。他の実施形態において、本発明の細胞集団は、動物供給源（例えば、ブタもしくはサル、又は任意の他の目的の動物）から得られる。他の実施形態において、本発明の細胞集団は、正常であるか、又は他の実施形態において、罹患しているか、又は他の実施形態において、当該の疾患に罹患しやすい対象から得られる。

【0234】

他の実施形態において、本発明の細胞集団は、アフィニティーベースの分離方法によって分離される。アフィニティー分離のための技術は、他の実施形態において、抗体被覆磁気ビーズを使用する磁気分離、アフィニティークロマトグラフィー、モノクローナル抗体に連結された細胞毒性剤、又はモノクローナル抗体（例えば、補体及び細胞毒素）と組み合わせた使用、プレートのような固体マトリックスに付着した抗体を用いた「パニング」、又は任意の他の簡便な技術を含む。他の実施形態において、分離技術は、多色チャネル、低角度及び鈍角光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネル等、様々な程度の精巧さを有する蛍光活性化細胞選別器の使用を含む。他の実施形態において、本発明の細胞集団の分離を可能にする任意の技術が使用され、それは本発明の一部として考慮されるべきである。

【0235】

他の実施形態において、樹状細胞は、様々なリンパ組織及び非リンパ組織において見出される形態学的に類似した細胞型の多様な集団に由来する（Ｓｔｅｉｎｍａｎ（１９９１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２７１－２９６）。他の実施形態において、本発明で使用される樹状細胞は、骨髄から単離され、又は、他の実施形態において、骨髄前駆細胞に由来する、又は、他の実施形態において、末梢血から単離される／由来する、又は、他の実施形態において、細胞株に由来する、又は細胞株である。

【0236】

他の実施形態において、本明細書に記載される細胞集団は、哺乳動物（例えば、マウス、サル又はヒト）の白血球分画から単離される（例えば、ＷＯ９６／２３０６０号参照）。白血球分画は、他の実施形態において、哺乳動物の末梢血から単離することができる。

【0237】

樹状細胞を単離する方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、ＤＣは、以下のステップを含む方法を介して単離される。（ａ）白血球除去療法のような当該分野で公知の方法によって哺乳動物供給源から得られる白血球分画を提供するステップ、（ｂ）向流遠心分離エルトリエーションによってステップ（ａ）の白血球分画を４つ以上のサブ分画に分離するステップ、（ｃ）ステップ（ｂ）の単球の樹状細胞への変換を、細胞をカルシウムイオノフォア、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－１３又はＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－４と接触させることによって刺激するステップ、（ｄ）ステップ（ｃ）からの樹状細胞富化分画を同定するステップ、ステップ（ｄ）の富化分画を、好ましくは約４℃で収集するステップ。

【0238】

他の実施形態において、樹状細胞富化分画は、蛍光活性化細胞選別によって同定され、これは、他の実施形態において、以下のマーカーのうち少なくとも１つ：ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、又はＢ７．２を同定するものであり、以下のマーカー：ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、５６、５７、及びＣＤ１９、２０は同時非存在である。

【0239】

他の実施形態において、細胞集団はリンパ球を含み、これは、他の実施形態において、Ｔ細胞であり、又は、他の実施形態において、Ｂ細胞である。Ｔ細胞は、他の実施形態において、ＮＫ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ＴＩＬ、ナイーブＴ細胞、又はこれらの組み合わせである。一次Ｔ細胞、又は細胞株、クローン等は、本発明の一部とみなすべきと考えられる。他の実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＴＬ、又はＣＴＬ株、ＣＴＬクローン、又は腫瘍、炎症性、又は他の浸潤物から単離されたＣＴＬである。

【0240】

他の実施形態において、造血幹細胞又は初期前駆細胞は、本発明において使用される細胞集団を含む。他の実施形態において、このような集団は、白血球アフェレーシスによって単離又は誘導される。他の実施形態において、白血球アフェレーシスは、骨髄、末梢血（ＰＢ）又は新生児臍帯血からのサイトカイン投与に続いて起こる。他の実施形態において、幹細胞又は前駆細胞は、ＣＤ３４^＋として知られる表面抗原マーカーの表面発現、及び表面系列抗原マーカーＬｉｎ－の発現の排除によって特徴付けられる。

【0241】

他の実施形態において、対象に、本発明のペプチド、組成物又はワクチンを骨髄細胞と共に投与する。他の実施形態において、骨髄細胞実施形態と共の投与は、対象における癌を抑制、阻害、又は処置するために、治療過程の一部として、対象の前の照射に続いてなされる。

【0242】

他の実施形態において「細胞に接触する」又は「集団に接触する」という言い回しは、露光の方法を指し、これは、他の実施形態において直接的又は間接的である。他の実施形態において、このような接触は、マイクロ注入等の当該分野で周知の任意の手段による細胞の直接注入を含む。また、他の実施形態において、細胞への供給は、例えば、細胞を取り囲む培養培地中での供給により、又は対象への投与を介して、当該分野で周知の任意の経路を介して、そして本明細書に記載されるように、間接的であることが想定される。

【0243】

他の実施形態において、本発明の方法のＣＴＬ生成はin vivoで達成され、そして、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される、in vitroで本発明のペプチドと接触させた抗原提示細胞を対象に導入することによって達成される（例えば、Ｐａｇｌｉａら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３:３１７－３２２）を参照のこと）。

【0244】

他の実施形態において、本発明の方法及び組成物のペプチドは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に送達される。

【0245】

他の実施形態において、ペプチドは、ペプチドをコードするｃＤＮＡの形態でＡＰＣに送達される。他の実施形態において、「抗原提示細胞」という用語は、樹状細胞（ＤＣ）、単球／マクロファージ、Ｂリンパ球、又は提示されたペプチドのＴ細胞認識を有効に可能にする、必要なＭＨＣ／共刺激分子を発現する他の細胞型を指す。他の実施形態において、ＡＰＣは癌細胞である。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。各実施形態において、患者又は対象へのワクチン又はＡＰＣ又は任意の形態のペプチド送達は、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される。本明細書に記載されるように、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の投与は、ＷＴ１ワクチン又はその代替形態の同じワクチン、製剤、投与部位又は投与時間にある必要はない。本明細書に具体化されるように、ＷＴ１ワクチンと同時にチェックポイント阻害剤をその様々な実施形態のいずれかで投与すると、それを必要とする対象におけるＷＴ１特異的ＣＴＬの形成が増強される。

【0246】

他の実施形態において、ＣＴＬは、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に、２つ以上の抗原提示細胞集団と接触する。他の実施形態において、２つ以上の抗原提示細胞集団は、異なるペプチドを提示する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0247】

他の実施形態において、ＡＰＣのサイトゾル（例えば、ＤＣ）における抗原の発現を導く技術が、ペプチドをＡＰＣに送達するために使用される。ＡＰＣ上で抗原を発現させるための方法は、当該分野で周知である。他の実施形態において、この技術は、（１）本発明のペプチドをコードするネイキッドＤＮＡのＡＰＣへの導入、（２）本発明のペプチドを発現する組換えベクターでのＡＰＣの感染、及び（３）リポソームを使用するＡＰＣのサイトゾルへの本発明のペプチドの導入を含む。（Ｂｏｃｚｋｏｗｓｋｉ Ｄら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：４６５－４７２；Ｒｏｕｓｅら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：５６８５－５６８９；及びＮａｉｒら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：６０９－６１２を参照のこと）。

【0248】

他の実施形態において、ヒト細胞株１７４ｘＣＥＭ．Ｔ２に由来するもの等のフォスター抗原提示細胞（Ｔ２と呼ばれ、内因性ペプチドと細胞表面ＭＨＣクラスＩ分子との関連を制限するその抗原プロセシング経路における突然変異を含む）（Ｚｗｅｅｒｉｎｋら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０:１７６３－１７７１）は、本明細書に例示されるように使用される。

【0249】

他の実施形態において、本明細書に記載される方法のいずれかは、in vitroで誘発されるＣＴＬを誘発するために使用される。他の実施形態において、ＣＴＬは、ex vivoで誘発される。他の実施形態において、ＣＴＬは、in vitroで誘発される。得られたＣＴＬは、他の実施形態において、対象に投与され、それによって、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に投与される、ペプチド、ペプチドを含む発現産物、又はその相同体に関連する症状を処置する。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0250】

他の実施形態において、本発明の方法は、本発明の少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせをコードする遺伝子配列の導入を伴う。核酸は、１つ以上のベクター内に含まれるため、他の実施形態において、本方法は、本発明のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクターを対象に投与することを含む（Ｔｉｎｄｌｅ、ＲＷ．ら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９４）２００：５４）。他の実施形態において、本方法は、ペプチドをコードするネイキッド核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）、又は他の実施形態において、本発明の２つ以上のペプチドを対象に投与することを含む（Ｎａｂｅｌら、ＰＮＡＳ－ＵＳＡ（１９９０）９０： １１３０７）。他の実施形態において、マルチエピトープ、類似体ベースの癌ワクチンが利用される（Ｆｉｋｅｓら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．，２００３，Ｓｅｐ；３（６）：９８５－９９３）。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。前述の実施形態のそれぞれにおいて、核酸は、各ＷＴ１ペプチドを個別に、又は７つまで、もしくはそれ以上のＷＴ１ペプチドの組み合わせをコードすることができる。ＷＴ１ペプチドをコードする核酸は、ＷＴ１送達剤の１つの形態を表す。少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせは、１つの形態のＷＴ１送達剤、例えば、ペプチド、もしくは核酸、又は免疫細胞、又は上記の２つもしくは３つの任意の組み合わせによって送達される。

【0251】

核酸は、７つのＷＴ１ペプチドのうちの単一のＷＴ１ペプチドをコードしてもよく、又は、核酸は７つのＷＴ１ペプチドのうちの複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つ全てのＷＴ１ペプチド）をコードしてもよい。同様に、核酸は、利用される場合、１つ以上のさらなるＷＴ１ペプチドをコードしてもよい。従って、本発明の組成物及び方法は、単一の核酸又は複数の核酸を使用して、ＷＴ１送達剤として働く。本発明の組成物及び方法は、単一のベクターを使用して、少なくとも７つのＷＴ１ペプチド又は複数のベクターを送達する。

【0252】

核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）は、非経口的又は静脈内投与を含む、当該分野で公知の任意の手段を介して、又は他の実施形態において、遺伝子銃の手段によって、対象に投与される。他の実施形態において、核酸は、他の実施形態において本明細書に列挙される任意の実施形態に対応する組成物で投与される。ＤＮＡ又はＲＮＡは、ネイキッド核酸として対象に投与されるか、又はベクターによって保持される。

【0253】

本発明の方法に従った使用のためのベクターは、他の実施形態において、in vitro又はin vivoで細胞における本発明のペプチド（例えば、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドのうちの１つ以上）の発現を促進する、又は可能にする任意のベクターを含むことができる。「ベクター」という用語は、コード配列情報（例えば、ＷＴ１ペプチドをコードする核酸配列）を細胞又は対象に移すのに使用可能な任意の分子（例えば、核酸、プラスミド、粒子）を指すのに用いられる。いくつかの癌のための核酸ワクチンは、臨床試験に入っている（Ｗａｈｒｅｎ Ｂら、「ＤＮＡ Ｖａｃｃｉｎｅｓ：Ｒｅｃｅｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ」、Ｖａｃｃｉｎｅｓ、２０１４、２：７８５－７９６；Ｆｉｏｒｅｔｔｉ Ｄ．ら、「ＤＮＡ Ｖａｃｃｉｎｅｓ：Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ Ｎｅｗ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃａｎｃｅｒ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０（９３８）：１７４３７８）。ＤＮＡワクチンを用いた増殖機能性ＷＴ１特異的Ｔ細胞についての戦略は知られている。（Ｃｈａｉｓｅ Ｃら［ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ＷＴ１－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ」、Ｂｌｏｏｄ，２００８，１１２（７）：２９５６－２９６４）。他の実施形態において、ベクターは非ウイルスベクターである。一実施形態において、非ウイルスベクターは、プラスミドＤＮＡ又はｍＲＮＡベクターのような核酸ベクターである（例えば、Ｗｅｉｄｅ Ｂ．ら、「Ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ－ ａｎｄ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ－ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉ－Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ、２００８、１１５（１）：３３－４２）、Ｋｉｍ Ｈ．ら、「Ｓｅｌｆ－Ａｓｓｅｍｂｌｅｄ Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ｍＲＮＡ－ＮＰ）ｆｏｒ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｓｃｉ Ｒｅｐ、２０１５、５：１２７３７）、Ｕｌｍｅｒ Ｊ．Ｂ．ら、「ＲＮＡ－ｂａｓｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、Ｖａｃｃｉｎｅ、２０１２、３０：４４１４－４４１８を参照のこと）。他の実施形態において、「ベクター」は、本明細書に援用される、第４，７２２，８４８号に記載されているようなワクシニアや鶏痘のような弱毒化ウイルスを含む。他の実施形態において、ベクターは、Ｓｔｏｖｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ ３５１：４５６－４６０（１９９１））に記載されるようなＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ）である。本発明のペプチドの治療的投与又は免疫化に有用な他のベクター（例えば、チフス菌ベクター等）は、本明細書の記載から当業者に明らかである。核酸分子を対象にin vivo及びin vitroで投与するために使用されるベクターの例としては、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、プラスミド、カチオン性脂質、リポソーム、及びナノ粒子が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0254】

「コード配列」は、ｍＲＮＡに転写され、及び／又はポリペプチドに翻訳される核酸配列である。コード配列の境界は、５'末端にある翻訳開始コドンと３'末端にある翻訳終結コドンとによって決定される。コード配列としては、これらに限定されるものではないが、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、及び組換えポリヌクレオチド配列が挙げられる。変形又は類似体は、コード配列の一部の欠失によって、配列の挿入によって、及び／又は配列内の１つ以上のヌクレオチドの置換によって作製される。核酸配列を修飾するための技術、例えば、部位特異的突然変異誘発、は当業者に周知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｖｏｌｓ．Ｉ及びＩＩ，Ｄ．ＮＧｌｏｖｅｒ編、１９８５を参照のこと）。任意で、本発明の核酸配列、及びそのようなポリヌクレオチドを利用する本発明の組成物及び方法は、非コード配列を含むことができる。

【0255】

「作動可能に連結された」という用語は、本明細書中では、そのように記載されたフランキング配列がそれらの通常の機能を実行するように構成又は組み立てられる、フランキング制御配列の配置を指すために使用される。従って、コード配列に作動可能に連結されたフランキング制御配列は、制御配列と適合性の条件下で、コード配列の複製、転写及び／又は翻訳に影響を及ぼす。例えば、プロモーターがそのコード配列の転写を指示することができる場合、コード配列はプロモーターに作動可能に連結される。フランキング配列は、それが正しく機能する限り、コード配列と連続している必要はない。従って、例えば、介在する非翻訳ではあるが転写されている配列がプロモーター配列とコード配列との間に存在することができ、プロモーター配列はなおコード配列と「操作可能に連結されている」と考えられる。ポリペプチド（例えば、ＷＴ１ペプチド）をコードする各核酸配列は、典型的には、それ自体の作動可能に連結されたプロモーター配列を有する。

【0256】

他の実施形態において、ベクターは、本明細書に記載されるように、免疫調節化合物をさらにコードする。他の実施形態において、本発明のペプチドをコードするベクターを対象に投与する前又は後に、連続的に、対象をコードする追加のベクターを対象に投与する。

【0257】

他の実施形態において、本発明のＷＴ１送達剤、ＣＴＬ、組成物、及びワクチンは、対象に投与されるか、又は本発明の方法において、他の抗癌化合物及び化学療法剤（代替の癌抗原に対するモノクローナル抗体、又は、他の実施形態において、本発明のペプチドが由来するものに対応するか、又は部分的にそれに対応するＡＡ配列からなるエピトープを含む）と組み合わせて利用される。これは、本発明の様々な実施形態における少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の使用に追加されるものである。

【0258】

他の実施形態において、本発明は、対象におけるＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を検出する方法を提供し、この方法は、対象に本発明のＷＴ１送達剤、ワクチン、又は組成物を投与することを含む。他の実施形態において、遅延型過敏症試験を用いて、ＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を検出する。他の実施形態において、本発明のペプチドは、対象において、ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導する点で、その非突然変異対応物よりも優れている。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0259】

本明細書で使用される「患者」、「対象」及び「個体」という用語は、区別なく使用され、ヒト及び非ヒト動物種を含むことが意図される。例えば、対象は、ヒト又は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態において、対象は、非ヒト動物モデル又は患畜である。対象は、任意の年齢又は性別である。

【0260】

本発明の方法及び組成物の免疫原性組成物は、他の実施形態において、本発明の１つ以上のＷＴ１送達剤及び／又はＣＴＬに関連するＡＰＣを含む。他の実施形態において、免疫原性組成物は、本発明の１つ以上のＷＴ１送達剤及び／又はＣＴＬに関連するＡＰＣからなる。他の実施形態において、免疫原性組成物は、少なくとも７つのＷＴ１ペプチドの組み合わせと関連するＡＰＣを含む、又はそれからなる。

【0261】

本発明の方法及び組成物の組成物は、他の実施形態において、免疫原性組成物である。他の実施形態において、組成物は、医薬組成物である。他の実施形態において、組成物は、当該分野で公知の任意の他のタイプの組成物である。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。各組成物は、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤をさらに含む。

【0262】

用量範囲の様々な実施形態が、本発明によって意図される。他の実施形態において、用量は１日あたり２０μｇ／ペプチドである。他の実施形態において、用量は１０μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は３０μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は４０μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は６０μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は８０μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は１００μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は１５０μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は２００μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は３００μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は４００μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は６００μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は８００μｇ／ペプチド／日である。他の実施形態において、用量は１０００μｇ／ペプチド／日である。

【0263】

他の実施形態において、用量は１０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は３０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は４０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は６０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は８０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は１００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は１５０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は２００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は３００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は４００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は６００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は８００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は１０００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。

【0264】

他の実施形態において、用量は１０～２０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は２０～３０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は２０～４０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は３０～６０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は４０～８０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は５０～１００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は５０～１５０μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は１００～２００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は２００～３００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は３００～４００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は４００～６００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は５００～８００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。他の実施形態において、用量は８００～１０００μｇ／ペプチド／ドーズ量である。

【0265】

他の実施形態において、ドーズ量当たり又は１日当たりのペプチドの総量は上記の量のうちの１つである。他の実施形態において、ドーズ量当たりの総ペプチドドーズ量は上記の量のうちの１つである。

【0266】

上記ドーズ量の各々は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0267】

他の実施形態において、本発明は、本発明のペプチド、組成物又はワクチンを、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と共に含むキットを提供する。他の実施形態において、キットは、ラベル又はパッケージングインサートをさらに含む。他の実施形態において、キットは、遅延型過敏症試験の使用を介してＷＴ１特異的ＣＤ４応答を検出するために使用される。他の実施形態において、キットは、本明細書中に列挙される任意の他の方法のために使用される。他の実施形態において、キットは、当該分野で公知の任意の他の方法のために使用される。各可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。

【0268】

実施例
卵巣癌患者におけるニボルマブと共に投与される７価ＷＴ１免疫療法組成物の有効性の評価
卵巣癌と診断された適格患者は、化学療法終了後４カ月以内にワクチン接種スケジュールを開始する。患者は、最初に１２週間にわたり６回のＷＴ１ペプチドのワクチン接種を受け、１４週間にわたり７回の免疫チェックポイント阻害剤ニボルマブの注入を受ける。毒性評価は、ワクチンの各ドーズ量、１５週目の治療終了から３週間後に実施する。患者は、治療後３０分間、試験スタッフが観察する。ドーズ量増加は計画されていない。ルーチンの毒性評価は治験期間を通じて継続される。

【0269】

１５週目の評価時に病勢進行が認められなかった患者には、約８週間毎に４回の追加のワクチンを接種することが許容される。この維持ワクチンコースは、１９週目に開始される。

【0270】

ヘパリン添加血液サンプル４０ｍｌにより、基線（同意取得時及び初回投与前、基線の変動を確認するため）、最後のニボルマブ注入の５週後、６週後、３週後の６時点で免疫応答を評価する。可能であれば、３ヵ月の追跡調査時に追加の採血を行う。

【0271】

ＥＬＩＳＡを用いて、ワクチン中の４つのＷＴ１ペプチドに対して生成された抗体レベルを測定する。抗体は、一般に、４回目のワクチン接種の完了まで存在する。Ｔ細胞増殖応答アッセイは、以下を含む末梢血リンパ球について実施する。すなわち、白血球サブセット分析を含むＦＡＣＳによる表現型分析のためのフローサイトメトリー、Ｔ調節細胞アッセイ（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸＰ３、ＩＣＯＳ及びＰＤ１を含む）、及び末梢血中及び腫瘍中（任意の生検が得られた場合）における骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ、ＣＤ１４＋ＨＬＡ－ＤＲｌｏｗ細胞）。ＷＴ１ Ｔ細胞固有ＣＤ４及びＣＤ８増殖応答は、多機能性細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）及びＩＦＮ－ガンマ生成により測定された機能性を有するＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍを用いたフローサイトメトリーに基づく細胞傷害性アッセイを用いて測定される。血液サンプル処理、Ｔ細胞モニタリング、抗体ＥＬＩＳＡ及び多機能Ｔ細胞アッセイのための詳細な手順は、［２９］に記載されている。

【0272】

基線値及びＴ細胞応答の結果は、臨床的寛解の期間と相関する。

【0273】

１５週以前に患者を試験から除外した場合は、試験後の免疫学的試験用の血液を採取する。基線時及び１５週目（医学的に必要と判断された場合はこれより早く）にＣＴスキャンを実施し、その後は病勢進行まで最長１年間、３ヵ月毎にＣＴスキャンを実施する。腹部及び骨盤部ＣＴの代わりに、腹部及び骨盤のＭＲＩを用いてもよい。参照放射線科医は、疾患進行の判定に免疫関連反応基準を用いる［５７］。ＣＡ１２５は、基線時、６週目及び１５週目、その後は３ヵ月毎に、病勢進行まで最長１年間にわたって測定する。ＣＡ１２５は、ワクチン接種患者における炎症の可能性が交絡しているため、疾患進行の判定には使用しない。患者は、進行、許容できない毒性の発現、ワクチン接種シーケンスの完了又は患者の離脱が認められるまで治験を継続する。

【0274】

ＷＴ１ワクチン：本試験で使用するワクチンには、７種類の別のＷＴ１ペプチドが含まれている：
・YMFPNAPYL（配列番号１２４、ＷＴ１－Ａ１）：ＣＤ８＋応答を刺激するための突然変異アミノ酸Ｒ１２６Ｙを有するＨＬＡクラスＩペプチド。
・SGQAYMFPNAPYLPSCLES（配列番号１２５、ＷＴ１－１２２Ａ１ロング）：前臨床試験及びフェーズ１試験からのデータに従って、ＣＤ４＋応答及びＣＤ８＋応答の両方を刺激するために、より長いペプチド内に埋込ＷＴ１－Ａ１ヘテロクリティック配列を含むＨＬＡクラスＩＩペプチド。
・RSDELVRHHNMHQRNMTKL（配列番号１、ＷＴ１－４２７ロング）及びPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG（配列番号２、ＷＴ１－３３１ロング）：ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の長期持続を助けるＣＤ４＋応答を誘導するＨＬＡクラスＩＩペプチド。
・NLMNLGATL（配列番号２１、ＮＬＭショート）
・WNLMNLGATLKGVAA（配列番号２６、ＮＬＭロング）
・WNYMNLGATLKGVAA（配列番号２０５、ＮＬＭロング）。

【0275】

薬剤製品：７つのペプチドを、ワクチン製品（「ＷＴ１Ｖａｘ」）を製造するために、リン酸緩衝生理食塩水を含む滅菌溶液中に提供する。各バイアルは、０．７ｍｌ（０．４ｍｇ／ｍｌの各ペプチド、４０％の過剰充填）の総容量で２８０ｍｃｇの各ペプチドを含有する。ＧＭＰ条件下でのバイアル及び無菌試験を実施した。ワクチンエマルジョンは、使用前に個別に調製される。これは、ペプチド溶液と免疫学的アジュバントモンタニドＩＳＡ５１ＶＧとの混合物を必要とする。

【0276】

意図されるドーズ量：各ペプチドについて２００ｍｃｇのドーズ量が選択されるが、それは他に使用される安全及び活性ドーズ量の範囲内にあるからである。ペプチドワクチンは、ドーズ量－応答関係の明確な証拠なしに、広範囲のドーズ量（１００～２０００ｍｃｇ注入）内で免疫及び臨床応答を生じている。より高ドーズ量では、Ｔ細胞上の低親和性ＴＣＲを刺激し、応答を低下させるという理論上の可能性がある［３０、３３、３４］。バイアルサイズ：各単回投与バイアルは０．７ｍｌ、投与経路：皮下。ニボルマブ：予定ドーズ量： ３ｍｇ／ｋｇ、バイアルサイズ：１０ｍＬ、投与経路：静脈内。ニボルマブは３ｍｇ／ｋｇで投与され、２週間に１回６０分間静脈内注入により静脈投与される。注入の終わりに、十分な量の生理食塩水でラインをフラッシュする。対象の体重が、必要なドーズ量を計算するために使用された以前の体重と＞１０％異なる場合、必要な用量、補正されたドーズ量を計算すべきである。ニボルマブの増量や減量は認められない。初回のニボルマブ処置に推奨される前投薬はない。

【0277】

対象者は、ニボルマブ投与間に１２日以上、予定されている投与日の後に３日以下で投与される。３日間の時間枠の後の投与は、投与延期とみなされる。前回の投与から最長６週間、処置を延期することがある。

【0278】

ＣＴ又はＭＲＩによる腫瘍評価は、投与が遅れてもプロトコルに従って継続すべきである。

【0279】

処置／介入計画
・患者は外来患者として処置される。
・ＷＴ１ワクチンは０、２、４、６、８及び１０週目に投与する。
・注入は全て、四肢間を回転させた部位に皮下投与する。
・全患者にサルグラモスチム（ＧＭ－ＣＳＦ）７０ｍｃｇを０日目と－２日目に皮下注入する。患者がＳＱ注入投与について適切に指導されていれば、ＧＭ－ＣＳＦを自己投与してもよい。患者には、注入部位での刺激といった予想される反応について知らせておく。患者は、注入の時間と場所に記録した記録簿を保管する。
・患者はまた、１．０ｍｌのＷＴ１ペプチドとモンタニドとのエマルジョンも受ける。ＧＭ－ＣＳＦと同じ解剖学的部位の皮下に、看護師が投与する（自己管理しない場合もある）。
・ワクチン接種後約３０分間、患者を観察する。
・０、２、４、６、８、１０及び１２週目に、６０分間の注入としてニボルマブを投与する。対象者には、ニボルマブ投与間に１２日以上、予定されている投与日の後に３日以下で投与される。３日間の時間枠の後の投与は、投与延期とみなされる。前回の投与から最長６週間、処置を延期することがある。

【0280】

ＷＴ１ワクチンとニボルマブの併用処置は、ＷＴ１ワクチン単独又はニボルマブ単独治療と比較して、患者におけるＷＴ１特異的ＣＴＬ集団を増加させ、ＷＴ１発現腫瘍に対する活性を増加させることが期待される。

【配列表】

2022526011000001.app

【国際調査報告】