特表 2022-526565 コンパートメント、特にＣＮＳへの局所送達のためのＦｃ修飾生物学的製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-05-25

(54)【発明の名称】コンパートメント、特にＣＮＳへの局所送達のためのＦｃ修飾生物学的製剤

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20220518BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 19/06 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 31/06 20060101ALI20220518BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20220518BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20220518BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20220518BHJP

   C07K 14/54 20060101ALN20220518BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20220518BHJP

   C07K 16/24 20060101ALN20220518BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20220518BHJP

   C07K 14/52 20060101ALN20220518BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20220518BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20220518BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

A61K38/20 ZNA

A61P25/00

A61P35/00

A61P25/28

A61P25/16

A61P25/08

A61P31/14

A61P31/12

A61P11/00

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P17/00

A61P17/06

A61P19/06

A61P7/04

A61P31/00

A61P31/16

A61P31/06

A61P31/04

C07K19/00

C12N15/86 Z

C07K14/54

C07K16/28

C07K16/24

C07K16/18

C07K14/52

C07K14/705

C07K14/47

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021557798

(86)(22)【出願日】2020-03-27

(85)【翻訳文提出日】2021-11-25

(86)【国際出願番号】 EP2020058876

(87)【国際公開番号】W WO2020201167

(87)【国際公開日】2020-10-08

(31)【優先権主張番号】19166231.1

(32)【優先日】2019-03-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】19186619.3

(32)【優先日】2019-07-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】507396301

【氏名又は名称】ウニヴェルズィテート チューリッヒ

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】特許業務法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】フォム・ベルク，ヨハネス

(72)【発明者】

【氏名】モルガー，ダミアン

(72)【発明者】

【氏名】シェルハマー，リンダ

(72)【発明者】

【氏名】ベフフィンガー，ミハウ

(72)【発明者】

【氏名】ブーフ，トルステン

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA07

4C084BA41

4C084DA12

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA061

4C084ZA062

4C084ZA151

4C084ZA152

4C084ZA161

4C084ZA162

4C084ZA221

4C084ZA222

4C084ZA531

4C084ZA532

4C084ZA551

4C084ZA552

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB151

4C084ZB152

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB321

4C084ZB322

4C084ZB331

4C084ZB332

4C084ZB351

4C084ZB352

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA01

4H045DA76

4H045EA21

4H045FA72

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、疾患、具体的には中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含むポリペプチドに関する。ポリペプチドは、影響されたコンパートメント、具体的には中枢神経系に局所的に投与される。Ｆｃ領域は、修飾を有し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらし、その結果、ポリペプチドの血清に対する脳の濃度増加がもたらされる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす疾患、具体的には原発性および二次性脳がんの予防または処置に使用するための、ＩＬ－１２およびＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含む融合ポリペプチドであって、
前記Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、
前記ポリペプチドは脳に投与される、融合ポリペプチド。

【請求項2】

前記ポリペプチドの血清または血漿対脳内濃度比が、ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体への頭蓋内注射、具体的には頭蓋内ボーラス注射またはＣＥＤの２４時間後に測定可能である、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドの前記血清もしくは血漿対脳内濃度比の最大２／３、または
ｂ．Ｆｃ領域もペプチドリンカーも含まない同一ポリペプチドの前記血清もしくは血漿対脳内濃度比の最大１／８
から選択される所定の閾値未満である、請求項１に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチド。

【請求項3】

前記ポリペプチドのＦｃＲｎに対する前記親和性の低下が、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付ける解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較して、少なくとも２倍、具体的には少なくとも３倍、より具体的には少なくとも４倍、さらにより具体的には少なくとも５倍増加したＫ_Ｄ、および
ｂ．異なる修飾を受けたＦｃ領域、すなわちＩＡＱおよびＡＡＡから選択される１つの突然変異体を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも１．５倍、具体的には少なくとも２倍増加したＫ_Ｄ
から選択されるＫ_Ｄによって特徴付けられる、上記請求項のいずれか１項に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチド。

【請求項4】

前記頭蓋内送達が、
ａ．対流増強送達（ＣＥＤ）を含む単回、断続的もしくは連続的な局所注入、
ｂ．髄腔内または脳室内投与、
ｃ．前記ポリペプチドのインサイチュでの生成、
ｄ．埋め込み型徐放性製剤からの放出、
ｅ．前記ＣＮＳへの分子輸送、
ｆ．前記ＣＮＳへの細胞輸送、または
ｇ．鼻腔内適用後の前記ＣＮＳへの輸送
から選択される方法によって行われる、上記請求項のいずれか１項に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の処置または予防に使用するためのポリペプチド。

【請求項5】

中枢神経系に影響を及ぼす前記疾患が、悪性疾患、具体的には神経膠腫、より具体的には高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である、上記請求項のいずれか１項に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の処置または予防に使用するためのポリペプチド。

【請求項6】

前記Ｆｃ領域がヒトＦｃ領域、またはヒトアミノ酸配列を含むキメラＦｃ領域であり、２５３位の突然変異、具体的にはＩ２５３ＡまたはＩ２５３Ｎ、より具体的にはＩ２５３Ｎを有する、上記請求項のいずれか１項に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための前記ポリペプチド。

【請求項7】

前記Ｆｃ領域が、配列番号００２（ＩＡＱ）、配列番号００３（ＡＨＱ）、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号００７（ＡＨＨ）、配列番号００８（ＮＨＨ）、配列番号００９（ＡＡＨ）、配列番号０１０（ＮＡＨ）、配列番号０１１（ＮＡＡ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）、配列番号０１３（ＡＡＡ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む、上記請求項のいずれか１項に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための前記ポリペプチド。

【請求項8】

前記Ｆｃ領域が、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含み、具体的には前記Ｆｃ領域が配列番号００４（ＮＨＱ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む、上記請求項のいずれか１項に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための前記ポリペプチド。

【請求項9】

ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、好ましくはＩＬ－１２；またはＶＥＧＦＲ、Ａｎｇ２、ＴＮＦα、ＩＬ－１７、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１のいずれか１つに結合するポリペプチド、より好ましくはＶＥＧＦＲ、Ａｎｇ２、ＴＮＦα、ＩＬ－１７のいずれか１つに結合するポリペプチドをさらに含む、眼に影響を及ぼす疾患、具体的には眼に影響を及ぼす腫瘍性疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドであって、前記Ｆｃ領域は、前記新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、前記Ｆｃは、前記突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑおよび３１０位にＨを含み、前記ポリペプチドは、眼内投与によって眼に送達される、ポリペプチド。

【請求項10】

ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、好ましくはＩＬ－１２；またはＴＮＦα、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６、ＣＤ２７、ＩＬ－２２、ＩＬ－１７、ＣＤ２７のいずれか１つに結合するポリペプチド、より好ましくは、ＴＮＦα、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６、ＣＤ２７のいずれか１つに結合するポリペプチドをさらに含む、関節に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドであって、前記Ｆｃ領域は、前記新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、前記Ｆｃは、前記突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑおよび３１０位にＨを含み、前記ポリペプチドは、関節内投与によって前記関節に送達される、ポリペプチド。

【請求項11】

ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、好ましくはＩＬ－１２もしくはＩＬ－１０、またはＩＬ－４ＲＡ、ＴＮＦα、ＩＬ－５、ＩＬ－６Ｒ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－８、ＩＬ－２１Ｒ、ＣＤ２５、ＣＤ２０、ＮＦ－ｋＢのいずれか１つに結合するポリペプチド；より好ましくはＩＬ－４ＲＡ、ＴＮＦα、ＩＬ－５、ＩＬ－６Ｒ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４のいずれか１つに結合するポリペプチドをさらに含む、肺に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドであって、前記Ｆｃ領域は、前記新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、前記Ｆｃは、前記突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑおよび３１０位にＨを含み、前記ポリペプチドは、吸入により肺に送達される、ポリペプチド。

【請求項12】

ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、具体的にはＩＬ－１２をさらに含む、医薬として使用するためのポリペプチドであって、前記Ｆｃ領域が、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、前記Ｆｃが、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑおよび３１０位にＨを含む、ポリペプチド。

【請求項13】

前記Ｆｃ領域が配列番号００４（ＮＨＱ）であるかまたはそれを含む、請求項９～１２のいずれか１項に記載の疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチド。

【請求項14】

ＩｇＧのＦｃ領域を含むポリペプチドであって、前記Ｆｃ領域が、前記新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、前記Ｆｃ領域は、配列番号００２（ＩＡＱ）、配列番号００３（ＡＨＱ）、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号００７（ＡＨＨ）、配列番号００８（ＮＨＨ）、配列番号００９（ＡＡＨ）、配列番号０１０（ＮＡＨ）、配列番号０１１（ＮＡＡ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）、配列番号０１３（ＡＡＡ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含むポリペプチド。

【請求項15】

前記Ｆｃ領域が、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）または配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含み、具体的には前記Ｆｃ領域が配列番号００４（ＮＨＱ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む、請求項１４に記載のポリペプチド。

【請求項16】

前記ポリペプチドが、
ａ．ｉ．エフェクターポリペプチド、および
ｉｉ．前記Ｆｃ領域
を含む融合タンパク質；または
ｂ．前記Ｆｃ領域を含む抗体もしくは抗体様分子
から選択される、請求項１４または１５に記載のポリペプチド。

【請求項17】

前記エフェクターポリペプチドが、ｈＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ－１５、ＴＮＦα、ＣＴＬＡ－４、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＧＤＮＦ、ｈＩＬ－３５、ＣＤ９５、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＳＩＲＰα、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＦＳ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＧＩＴＲＬ、４－１ＢＢＬ、ＥｐｈｒｉｎＡ１、ＥｐｈｒｉｎＢ２、およびＥｐｈｒｉｎＢ５、ＢＤＮＦ、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＮＲＴＮ、ＡＲＴＮ、ＰＳＰＮ、ＣＮＴＦ、ＴＲＡＩＬ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＬ－４、ＩＬ－３、ＩＬ－１、ＩＬ－５、ＩＬ－８、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１６、ＣＸ３ＣＬ１、ならびにＣＸＣＬ１６から選択され、具体的には前記エフェクターポリペプチドがｈＩＬ－１２である、請求項１６に記載のポリペプチド。

【請求項18】

前記抗体または抗体様分子が、ＰＤ－Ｌ１、ＴＮＦα、ヒストン、ＩＦＮγ、ＣＸＣＬ１０、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＴＲＥＭ２、ＩＬ－６、ＣＸ３ＣＲ１、Ｎｏｇｏ－Ａ、ＣＤ２７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｒｂ１、ＩＬ－２３、ＣＤ４７、ＴＧＦβ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｈｅｒ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＩＬ－４、ＩＬ－４ＲＡ、ＴｆＲ、ＬｆＲ、ＩＲ、ＬＤＬ－Ｒ、ＬＲＰ－１、ＣＤ１３３、ＣＤ１１１、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ－Ａ、Ａｎｇ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１３Ｒα２、α－シヌクレイン、ＣＳＦ１Ｒ、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、４－１ＢＢ、ＣＣＬ２、ＩＬ－１ ｏｒ ＩＬ－１Ｒ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、およびＥｐｈＢ４、ＬＩＮＧＯ－１、Ｌ１ＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ＣＤ１４７、ＳＯＤ－１、ＳＩＧＭＡＲ－１、ＳＩＧＭＡＲ－２、ＴＤＰ－４３、Ａβ、Ｔａｕ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＴＲＰＭ４、ＡＳＩＣ１、ＶＧＣＣｓ、ＣＢ_１、ＴＴＲ、ＨＴＴ、ＪＣＶ、およびＣ９ｏｒｆ７２から選択される分子に特異的に結合する抗体または抗体様分子から選択され、具体的には前記抗体または抗体様分子が、ＰＤ－Ｌ１、ＯＸ４０、ＣＤ４７、およびＮｏｇｏ－Ａから選択される分子に特異的に結合する抗体である、請求項１６に記載のポリペプチド。

【請求項19】

前記ポリペプチドが、前記Ｆｃ領域を含むかもしくはそれに連結された抗体または抗体様分子であり、好ましくは、前記抗体または抗体様分子が、同時に２つの抗原に結合することができる二重特異性構築物であり、具体的には前記二重特異性抗体または抗体様分子が、アゴニスト様式でＰＤ－Ｌ１およびＩＬ－１２受容体に結合する、請求項１４～１８のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項20】

脳がん、脳卒中、認知症、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、てんかん、および外傷性ＣＮＳ損傷から選択される疾患の処置に使用するための、請求項１４～１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項21】

コロナウイルス疾患２０１９、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）によって引き起こされる疾患、重症急性呼吸器症候群、喘息、アレルギー性喘息、重篤なコントロール不良の喘息、線維症、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、インフルエンザ、肺水腫、サルコイドーシス、肺がん、結核、ヒトオルトニューモウイルス、腺ペスト、肺ペスト、炭疽、肺における侵襲性真菌疾患、肺線維症、呼吸器合胞体ウイルス、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎、間質性肺疾患、特発性肺線維症、および肺パラコクシジオイデス症によって引き起こされる疾患から選択される疾患の処置に使用するための、請求項１１または請求項１４～１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項22】

関節リウマチ、若年性関節リウマチ、痛風、偽痛風、変形性関節症、慢性血友病性滑膜炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎から選択される疾患の処置に使用するための、請求項１０または請求項１４～１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項23】

ブドウ膜黒色腫、ブドウ膜炎、および湿性黄斑変性から選択される疾患の処置に使用するための、請求項９または請求項１４～１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項24】

請求項１４～２３のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸。

【請求項25】

請求項２４に記載の核酸を含むウイルスベクター。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対して低い親和性を有するＦｃポリペプチドによって特徴付けられる局所的に送達される生物学的医薬、具体的には神経疾患における使用に関する。

【背景技術】

【0002】

現在、ヨーロッパと米国における神経疾患の発生率は、人口１０万人あたり２００例を超えており、人口の高齢化により、さらに増加することが予想されている。前臨床研究の進歩は、サイトカイン療法（例えば、脳腫瘍ではＩＬ－１２、ＭＳではＩＬ－１０）、ならびに中和抗体（例えば、ＭＳにおけるインターロイキン（ＩＬ）－１２／２３ｐ４０に対する、パーキンソン病およびアルツハイマー病における腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）に対する）または免疫チェックポイント遮断分子（例えば、脳腫瘍におけるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸の遮断）を含む神経疾患の局所処置のための多くの有望な標的を提供する。

【0003】

免疫療法は、脳腫瘍処置において最も有望な方向の１つである。インターロイキン（ＩＬ）－１２は炎症誘発性サイトカインであり、前臨床モデルにおいて脳腫瘍に対して強力な抗腫瘍効果を有する。有望な前臨床試験の結果に基づき、ＩＬ－１２を用いた静脈内（ｉ．ｖ．）適用した全身処置として９０年代後半に臨床試験が急速に開始された。しかしながら、第ＩＩ相臨床試験では重篤な有害事象が報告され、１７人の患者のうち１２人が入院し、２人が死亡した。これらの有害作用は、その後、ＩＬ－１２下流のエフェクターサイトカインであるインターフェロン（ＩＦＮ）－γの高全身レベルの急速な誘導に起因している。

【0004】

全身的に適用されるＩＬ－１２の毒性および腫瘍部位での高濃度の必要性を考慮すると、組織中のＩＬ－１２レベルを厳密に制御することは、臨床適用の必須の前提条件である。脳への局所投与は、最近、対流増強送達（ＣＥＤ）などの新しい神経外科技術を用いることによって可能になった。しかしながら、局所頭蓋内送達は、その後の全身性漏出を除外しない。

【0005】

ＩＬ－１２の一本鎖融合タンパク質であるマウスＩＬ－１２Ｆｃ、および免疫グロブリンＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）は、非修飾の組換えＩＬ－１２と比較して、薬理学的安定性の増加、生物学的利用能の増加、および脳からの受動的漏出の減少を示す。しかしながら、脳への局所送達後、脳脊髄液からのＦｃ領域を含むすべてのタンパク質の排出を仲介する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）により、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して能動的に排出される。ＦｃＲｎはまた、内皮細胞および赤脾髄マクロファージにおいても活性であり、分解を防止し、Ｆｃ含有分子および血清アルブミンの血清半減期を延長する。したがって、非修飾ＩＬ－１２と比較して、ＩＬ－１２Ｆｃは全身蓄積の増加を示す。

【0006】

ＦｃＲｎ結合に関与することが公知であるＩｇＧ Ｆｃ残基（イソロイシン２５３－Ｉ２５３、ヒスチジン３１０－Ｈ３１０およびヒスチジン４３５－Ｈ４３５）、ならびにこれら残基とＦｃＲｎの間の相互作用のｐＨ依存性は、技術水準から公知である（Ｐｙｚｉｋら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１９年）１０巻：１５４０頁）。

【0007】

例えば、Ｂｉｔｏｎｔｉらは、野生型ＩｇＧのＦｃドメイン中の残基Ｉ２５３、Ｈ３１０およびＨ４３５をそれぞれアラニン２５３－Ａ２５３、Ａ３１０およびＡ４３５（ＡＡＡ）に突然変異させると、ｐＨ６でのＦｃＲｎ結合の無効をもたらすことを報告した（Ｂｉｔｏｎｔｉら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００４年）１０１巻（２６号）：９７６３～９７６８頁）。

【0008】

しかしながら、アミノ酸のアラニンへの置換は、目的のタンパク質内の所定の位置における機能的役割をスクリーニングする一般的な生化学的方法である。この１つの特定の突然変異（ＡＡＡ）とは別に、本論文は、ＦｃＲｎへの結果として生じる結合特性について結論を引き出すことができる他のいずれの突然変異も開示していない。さらに、本論文は、ヒト以外の霊長類の肺において、赤血球産生を刺激する糖タンパク質ホルモン剤であるエリスロポエチン（Ｅｐｏ）を含むＦｃ融合タンパク質のＦｃＲｎ媒介輸送を扱う。本論文は、ＩＬ－１２を含む融合ポリペプチドへの結果の適用性および脳へのＦｃ融合ポリペプチドの投与に関して、それぞれ何ら言及していない。

【0009】

ＩＬ－１２を含む融合ポリペプチドおよびそれらの血清半減期を増加させる方法を実際に扱った刊行物がある。

【0010】

例えば、Ｊｕｎｇらは、Ｆｃγ受容体への親和性を低下させるＡ１０７突然変異対を有するＩＬ－１２およびヒトＩｇＧ４ベースのヘテロ二量体Ｆｃを含む融合ポリペプチドの生成および抗腫瘍活性を記載する（Ｊｕｎｇら、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７巻（７号）：ｅ１４３８８００）。

【0011】

しかしながら、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）ファミリーは、抗体の定常領域、すなわち、構造の相違はあるがＦｃ部分への結合、Ｆｃ部分における非重複結合部位、細胞の異なるコンパートメントにおける局在（細胞内対細胞外）、ｐＨ依存性結合（酸性対中性）、および全体的機能によって特徴付けられるタンパク質の機能的なグループであるため、ＦｃＲｎはＦｃγＲと同等ではないことが明らかである。

【0012】

最新技術の別の例では、組織保持および全身循環への漏出に関して、組換えＩＬ－１２とＩＬ－１２Ｆｃの間で比較がなされている（Ｂｅｆｆｉｎｇｅｒら、Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２０１７年）、１９（補遺６）、ｖｉ２７３）。そこでは、著者らは、ＩＬ－１２Ｆｃが、組換えＩＬ－１２と比較して、頭蓋内適用の２４時間後に高い脳内濃度を示したと述べている。

【0013】

しかしながら、本研究は、ＩｇＧのＦｃ領域に突然変異を有する融合ポリペプチド、またはＦｃＲｎへの結合における効果を開示していない。

【0014】

Ｃｏｏｐｅｒらは、野生型ＩｇＧのＦｃと比較して、ＦｃＲｎ結合の増加（ＩｇＧ１アスパラギン４３４からアラニンへ、Ｎ４３４Ａ）またはＦｃＲｎ結合の減少（ＩｇＧ１ヒスチジン４３５からアラニンへ、Ｈ４３５Ａ）のいずれかを有する組換えヒトＩｇＧ１ ｍＡｂの２つのバリアントの局所送達によるラット脳からのＩｇＧ排出におけるＦｃＲｎの役割を研究した（Ｃｏｏｐｅｒら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３年）１５３４巻：１３～２１頁）。突然変異体は、それぞれ４３４および４３５アミノ酸位置に突然変異を組み込むことによって得られた。本研究は、ヒト抗体を用いてラットにおいて実施された。

【0015】

Ｆｃ突然変異体のＦｃＲｎのマウスおよびヒト型に対する結合特性に関して、Ａｎｄｅｒｓｅｎらは、Ｉｌｅ２５３、Ｈｉｓ３１０およびＨｉｓ４３５のレベルで突然変異を有する５つの異なるＦｃ突然変異体、すなわち、Ｈ４３５Ｑ、Ｈ４３５Ｒ、Ｈ３１０Ａ、Ｉ２５３Ａ、およびＨ３１０Ａ／Ｈ４３５Ｑを開示した（Ａｎｄｅｒｓｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１２年）２８７巻（２７号）：２２９２７～２２９３７頁）。ヒトＦｃＲｎに対する最も低い親和性を特徴とするバリアントは、Ｈ３１０ＡとＨ４３５Ｑ突然変異（ＩＡＱ）の両方を有する突然変異体であった。

【0016】

本明細書において言及される最後の２つの研究は、ＦｃＲｎがラット脳からのＩｇＧの排出において重要な役割を果たし、それぞれＦｃＲｎに対する親和性が低下した別個の突然変異体を開示することを示したとしても、これらの研究のいずれも、ＩＬ－１２Ｆｃの存在がＦｃＲｎへの結合にどのように影響を及ぼしたかを評価するための根拠として役立たない。さらに、最大脳対血中濃度勾配を生成するという概念は開示されていない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

上述の技術水準に基づいて、本発明の目的は、特定のコンパートメント、具体的には脳に局所的に送達される医薬品の治療ウインドウを拡大し、上記コンパートメント、具体的には脳からの排出と全身蓄積の両方を防止し、それによってコンパートメント対血清比、具体的には脳対血清比を増加させる手段および方法を提供することである。この目的は、本明細書の特許請求の範囲によって達成される。

【課題を解決するための手段】

【0018】

本明細書の文脈において、結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域という用語は、ジスルフィド結合によってまたは単一の重鎖断片に共有結合された２つの同一の重鎖断片を含むＩｇＧ抗体の画分を指す。重鎖断片は、定常ドメイン（ＩｇＧ抗体イソタイプにおけるＣ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメイン）から構成される。

【0019】

本明細書の文脈において、ＥＵ番号付けシステム（Ｅｄｅｌｍａｎら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ（１９６９年）６３巻（１号）：７８～８５頁）は、Ｆｃ領域のアミノ酸残基の番号付けに使用される。ＥＵ番号付けスキームは、一貫した方法で抗体中の残基に番号付けするために広く採用されている標準である。

【0020】

アミノ酸配列はアミノ末端からカルボキシル末端へ与えられる。配列位置について大文字は、１文字コードのＬ－アミノ酸を指す（Ｓｔｒｙｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、２１頁）。アミノ酸配列の位置について小文字は、対応するＤ－または（２Ｒ）－アミノ酸を指す。

【0021】

アミノ酸残基Ｉ２５３、Ｈ３１０およびＨ４３５は、Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３ドメイン界面に位置し、ヒトＩｇＧ３におけるＲ４３５を除き、種内のＩｇＧサブクラスにわたって、およびげっ歯類とヒトの両方に見られるＩｇＧ分子間で保存されている（Ｍｉｙａｋａｗａら、ＲＮＡ（２００８年）１４巻：１１５４～１１６３頁）。本発明によれば、修飾Ｆｃ領域またはそれらの断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４免疫グロブリンに由来することができ、ＥＵ番号付けシステムに従って、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃドメインの少なくともアミノ酸残基２５３、３１０および４３５を含む必要がある。

【0022】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１２はインターロイキン１２を指す。
本明細書の文脈において、ｈＩＬ－１２はヒトＩＬ－１２に関する。

【0023】

本明細書の文脈において、ｍＩＬ－１２はマウスＩＬ－１２に関する。
本明細書の文脈において、ｒｈＩＬ－１２は組換えヒトＩＬ－１２に関する。

【0024】

本明細書の文脈において、ｒｍＩＬ－１２は組換えマウスＩＬ－１２に関する。
本明細書の文脈において、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴは、野生型の非修飾Ｆｃ領域に、具体的にはＧｌｙ－Ｓｅｒ－リンカーによるｐ４０とｐ３５の融合によって、またはＩｇＧ４タグの添加によって、連結されたＩＬ－１２に関する。

【0025】

本明細書の文脈において、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴは、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４のヒト野生型Ｆｃ領域に連結されたマウスＩＬ－１２に関する。

【0026】

本明細書の文脈において、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱは、ＮＨＱ突然変異と同様に、セリン２２８からプロリン－Ｓ２２８Ｐを含有するＩｇＧ４のヒト野生型Ｆｃ領域に連結されたマウスＩＬ－１２に関する。

【0027】

本明細書の文脈において、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：抗ＰＤ－Ｌ１二官能性分子は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃに連結され、完全ヒトＰＤ－Ｌ１結合ＩｇＧ１抗体の半分子（１つの重鎖および１つの軽鎖）で二量化されたマウスＩＬ－１２に関する。得られた分子のＦｃ部分は、ＮＨＱ突然変異を含む。

【0028】

本明細書の文脈において、ＦｃＲｎ^ｔｇは、機能的マウスＦｃＲｎを欠損し、対立遺伝子記号Ｔｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒにより記載される天然のヒト調節エレメントの制御下でヒトＦｃＲｎα鎖の発現のための導入遺伝子を担持するマウス株に関する。

【0029】

本発明の文脈において、ＩＬ－１２ポリペプチドは、ｐ３５（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ ２９４５９）の配列またはその機能的相同体を含み、およびｐ４０（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ２９４６０）の配列またはその機能的相同体を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドである。一実施形態では、ＩＬ－１２ポリペプチドは、同じ連続アミノ酸鎖の一部として、ｐ３５とｐ４０配列またはそれらの相同体を含むアミノ酸配列を有する。上記連続アミノ酸鎖において、Ｎ末端ポリペプチド（ｐ４０）機能的相同体のみがシグナルペプチドを保持する。別の実施形態では、ＩＬ－１２ポリペプチドは、２つの異なるアミノ酸鎖を含み、１つはｐ３５配列を含み、別の１つはｐ４０配列を含み、両方とも個々のシグナルペプチドを有する。ＩＬ－１２ポリペプチドは、ＩＬ－１２の生物学的活性を有する。本発明の文脈におけるＩＬ－１２の生物学的活性は、上記ＩＬ－１２ポリペプチドによるＮＫまたはＴ細胞の刺激、最も具体的にはパーフォリンを介して作用するＴエフェクター細胞の刺激を含む。

【0030】

本明細書の文脈において、配列同一性なる用語および配列同一性のパーセンテージなる用語は、２つの整列された配列を比較することによって決定される値を指す。比較のために配列を整列させる方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の整列は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．、２巻：４８２頁（１９８１年）の局所相同アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８巻：４４３頁（１９７０年）のグローバル整列アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８５巻：２４４４頁（１９８８年）の類似性法の検索によって、またはこれらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装によって行うことができ、限定されないが、ＣＬＵＳＴＡＬ、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡが含まれる。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ－Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じて公衆に利用可能である。

【0031】

アミノ酸配列の比較の一例は、デフォルト設定：期待閾値：１０；ワードサイズ：３；クエリー範囲における最大マッチ：０；マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在：１１、拡張：１；組成調整：条件付き組成スコアマトリックス調整を使用するＢＬＡＳＴＰアルゴリズムである。核酸配列の比較のためのこのような例の１つは、デフォルト設定：期待閾値：１０；ワードサイズ：２８；クエリー範囲における最大マッチ：０；マッチ／ミスマッチスコア：１．－２；ギャップコスト：リニアを使用するＢＬＡＳＴＮアルゴリズムである。

【0032】

特に断らない限り、本明細書で提供される配列同一性値は、プログラムのＢＬＡＳＴスイート（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５巻：４０３～４１０頁（１９９０年））を使用して得られる値を指し、それぞれタンパク質および核酸の比較のために、上記で同定されたデフォルトパラメーターを使用する。

【0033】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１０はインターロイキン１０を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１０は、炎症、自己免疫炎症、認知症または脳卒中の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－１０を中和することは、肺パラコクシジオイデス症の処置に採用される。

【0034】

本明細書の文脈において、ＩＬ－２はインターロイキン２を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－２は、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0035】

本明細書の文脈において、ＩＬ－７はインターロイキン７を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－７は、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0036】

本明細書の文脈において、ＩＦＮγはインターフェロンガンマを指す。ある種の実施形態では、ＩＦＮγは、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0037】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１５はインターロイキン１５を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１５は、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0038】

本明細書の文脈において、ＩＬ－２３はインターロイキン２３を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－２３は、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0039】

本明細書の文脈において、ＴＮＦαは腫瘍壊死因子アルファを指し、悪液質（cachexin）または悪液質（cachectin）としても公知である。ある種の実施形態では、ＴＮＦαは、がんおよび感染症の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＮＦαを遮断することは、炎症、自己免疫炎症および関節炎の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＮＦαの遮断は、ブドウ膜炎の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＮＦαの遮断は、関節リウマチの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＮＦαの遮断は、サルコイドーシスの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＮＦαを遮断することは、嚢胞性線維症の処置に採用される。

【0040】

本明細書の文脈において、ＣＴＬＡ－４は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４を指し、ＣＤ１５２としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＴＬＡ－４を遮断することは、がんの処置に採用される。ある種の実施形態、ＣＴＬＡ－４の遮断は、肺がんの処置に採用される。

【0041】

本明細書の文脈において、ＴＧＦβは形質転換増殖因子ベータを指す。ある種の実施形態では、ＴＧＦβを遮断することは、がんおよび感染症の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＧＦβは、炎症、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＧＦβアンタゴニストは、嚢胞性線維症の処置に採用される。

【0042】

本明細書の文脈において、ＴＧＦαは形質転換成長因子アルファを指す。ある種の実施形態では、ＴＧＦαアンタゴニストは、嚢胞性線維症の処置に採用される。

【0043】

本明細書の文脈において、ＴＧＦβＲＩＩは、形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩを指すある種の実施形態では、ＴＧＦβＲＩＩを遮断することまたはＴＧＦβＲＩＩ－Ｆｃを使用することは、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0044】

本明細書の文脈において、ＧＤＮＦはグリア細胞株由来の神経栄養因子を指す。ある種の実施形態では、ＧＤＮＦは、多発性硬化症、パーキンソン病、認知症、脳卒中および遺伝性障害の処置に採用される。

【0045】

本明細書の文脈において、ＩＬ－３５はインターロイキン３５を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－３５は、炎症、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。

【0046】

本明細書の文脈において、ＣＤ９５はＦａｓを指し、ＦａｓＲ、アポトーシス抗原１、ＡＰＯ－１、ＡＰＴ、またはＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー６としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＤ９５を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0047】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１ＲＡはインターロイキン１受容体アンタゴニストを指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１ＲＡは、炎症、自己免疫炎症、関節リウマチ、痛風、偽痛風認知症および脳卒中の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－１ＲＡの遮断は、関節リウマチの処置に採用される。

【0048】

本明細書の文脈において、ＩＬ－４はインターロイキン４を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－４は、炎症、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。

【0049】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１３はインターロイキン１３を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１３は、炎症、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。ある種の実施形態では、中和抗ＩＬ－１３は、重篤なコントロール不良の喘息の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－１３を遮断することおよび／または中和することは、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－１３アンタゴニストは、特発性肺線維症の処置に採用される。

【0050】

本明細書の文脈において、ＴＳＬＰは、サイトカインファミリーに属するタンパク質である胸腺間質リンホポエチンを指す。ある種の実施形態では、ＴＳＬＰを中和することは、アレルギー性喘息の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＴＳＬＰを遮断することおよび／または中和することは、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎の処置に採用される。

【0051】

本明細書の文脈において、ＳＩＲＰαはシグナル調節タンパク質アルファを指す。ある種の実施形態では、ＳＩＲＰαは、がんの処置に採用される。

【0052】

本明細書の文脈において、Ｇ－ＣＳＦは、顆粒球－コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦまたはＧＣＳＦ）を指し、コロニー刺激因子３（ＣＳＦ３）としても公知である。ある種の実施形態では、Ｇ－ＣＳＦは、がんの処置に採用される。

【0053】

本明細書の文脈において、ＧＭ－ＣＳＦは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を指し、コロニー刺激因子２（ＣＳＦ２）としても公知である。ある種の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦは、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦを遮断することは、多発性硬化症の処置に採用される。

【0054】

本明細書の文脈において、ＧＭ－ＣＳＦＲは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子受容体（ＧＭ－ＣＳＦＲ）を指し、ＣＤ１１６（分化抗原群１１６）としても公知であり、白血球の生産を刺激する顆粒球－マクロファージコロニー刺激に対する受容体を指す。ある種の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦＲを遮断することは、関節リウマチの処置に使用される。

【0055】

本明細書の文脈において、ＯＸ４０Ｌは、ＯＸ４０のリガンドを指し、ＣＤ１３４のリガンドとしても公知である。ある種の実施形態では、ＯＸ４０Ｌは、がんの処置に採用される。

【0056】

本明細書の文脈において、ＣＤ８０はＢ７－１を指し、Ｂ７．１としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＤ８０は、がんの処置に採用される。

【0057】

本明細書の文脈において、ＣＤ８６はＢ７－２を指し、Ｂ７．２としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＤ８６は、がんの処置に使用される。

【0058】

本明細書の文脈において、ＧＩＴＲＬは、ＴＮＦＳＦ１８、ＡＩＴＲＡＩＬ、ＴＬ６、ＴＮＬＧ２Ａ、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１８を指す。ある種の実施形態では、ＧＩＴＲＬは、がんの処置に採用される。

【0059】

本明細書の文脈において、４－１ＢＢＬは４－１ＢＢのリガンドを指し、ＩＬＡのリガンドまたはＣＤ１３７のリガンドまたはＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー９のリガンドとしても公知である。ある種の実施形態では、４－１ＢＢは、がんの処置に採用される。

【0060】

本明細書の文脈において、ＥｐｈｒｉｎＡ１はＥＦＮＡ１を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈｒｉｎＡ１は、がんの処置に採用される。

【0061】

本明細書の文脈において、ＥｐｈｒｉｎＢ２はＥＦＮＢ２を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈｒｉｎＢ２は、がんの処置に採用される。

【0062】

本明細書の文脈において、ＥｐｈｒｉｎＢ５はＥＦＮＢ５を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈｒｉｎＢ５は、がんの処置に採用される。

【0063】

本明細書の文脈において、ＰＤ－Ｌ１は、プログラムされた細胞死リガンド１を指し、ＣＤ２７４またはＢ７ホモログ１またはＢ７－Ｈ１としても公知である。ある種の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１遮断は、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１の遮断は、ブドウ膜黒色腫の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＰＤ－１の遮断は、肺がんの処置に採用される。

【0064】

本明細書の文脈において、ヒストンは、ヒストンファミリーＨ１／Ｈ５、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４に属するタンパク質を指す。ある種の実施形態では、ヒストンを結合することは、がんの処置に採用される。

【0065】

本明細書の文脈において、ＣＸＣＬ１０は、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン１０を指し、インターフェロンガンマ誘導タンパク質１０（ＩＰ－１０）または小型誘導性サイトカインＢ１０としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＸＣＬ１０は、がんの処置に採用される。

【0066】

本明細書の文脈において、ＰＤ－１は、プログラムされた細胞死タンパク質１を指し、ＣＤ２７９としても公知である。ある種の実施形態では、ＰＤ－１を結合することは、がんの処置に採用される。ある種の他の実施形態では、ＰＤ－１を結合することは、認知症の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＰＤ－１の遮断は、ブドウ膜黒色腫の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＰＤ－１の遮断は、肺がんの処置に採用される。

【0067】

本明細書の文脈において、ＴＲＥＭ２は、骨髄細胞２上に発現されるトリガー受容体を指す。ある種の実施形態では、ＴＲＥＭ２を遮断することは、炎症、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。

【0068】

本明細書の文脈において、ＩＬ－６はインターロイキン６を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－６を遮断することは、炎症、自己免疫性炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。

【0069】

本明細書の文脈において、ＩＬ－６Ｒはインターロイキン６受容体を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－６Ｒを遮断することは、炎症、自己免疫炎症、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、および成人発症型スチル病の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－６Ｒを遮断することおよび／または中和することは、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）および／または重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）によって引き起こされる疾患の処置に採用される。

【0070】

本明細書の文脈において、Ｃｘ３ｃｒ１は、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体１を指し、フラクタルカイン受容体またはＧタンパク質共役受容体１３（ＧＰＲ１３）としても公知である。ある種の実施形態では、Ｃｘ３ｃｒ１を結合することは、がん、認知症、炎症、自己免疫炎症および脳卒中の処置に採用される。

【0071】

ある種の実施形態では、ＣＤ２７を遮断することは、炎症または自己免疫炎症の処置に採用される。

【0072】

ある種の実施形態では、ＣＤ２７を活性化することは、がんの処置に採用される。
ある種の実施形態では、ＣＤ２５を遮断することは、炎症、自己免疫炎症および多発性硬化症の処置に採用される。

【0073】

ある種の実施形態では、ＣＤ２５を結合させることは、がんの処置に採用される。
ある種の実施形態では、ＣＤ２８を活性化することは、がんの処置に採用される。

【0074】

本明細書の文脈において、Ｎｏｇｏ－Ａとは、軸索伸長阻害剤を指し、ＮＯＧＯまたはＮＳＰまたはＮＳＰ－ＣＬレチクロン４としても公知である。ある種の実施形態では、Ｎｏｇｏ－Ａを遮断することは、自己免疫性炎症、外傷性ＣＮＳ損傷および脳卒中の処置に採用される。

【0075】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１２Ｒｂ１はインターロイキン－１２受容体ベータ１サブユニットを指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１２Ｒｂ１を遮断することは、炎症、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。

【0076】

本明細書の文脈において、ＣＤ４７はインテグリン会合タンパク質（ＩＡＰ）を指す。ある種の実施形態では、ＣＤ４７を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0077】

本明細書の文脈において、ＣＤ１４７は、バシギン（ＢＳＧ）を指し、細胞外マトリックスメタロプロテイナーゼ誘導因子（ＥＭＭＰＲＩＮ）としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＤ１４７を遮断することは、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＣＤ１４７を遮断することは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）によって引き起こされる疾患の処置に採用される。本明細書の文脈において、ＥＧＦＲは、上皮細胞増殖因子受容体を指し、ＥｒｂＢ－１としても公知である。ある種の実施形態では、ＥＧＦＲを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0078】

本明細書の文脈において、ＥＧＦＲｖＩＩＩは、上皮細胞増殖因子受容体のｖＩＩＩ突然変異体を指し、ＥｒｂＢ－１のｖＩＩＩ突然変異体としても公知である。ある種の実施形態では、ＥＧＦＲｖＩＩＩを遮断することは、がんの処置に使用される。

【0079】

本明細書の文脈において、Ｈｅｒ２は、受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂＢ－２を指し、ＣＤ３４０またはプロトオンコジーンＮｅｕとしても公知である。ある種の実施形態では、Ｈｅｒ２を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0080】

本明細書の文脈において、ＰＤＧＦＲは、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦ－Ｒ）を指す。ある種の実施形態では、ＰＤＧＦ－Ｒを遮断することは、がんの処置に使用される。

【0081】

本明細書の文脈において、ＦＧＦＲは線維芽細胞成長因子受容体を指す。ある種の実施形態では、ＦＧＦＲを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0082】

本明細書の文脈において、ＩＬ－４ＲＡは、インターロイキン４受容体を指し、ＩＬ－４ＲまたはＣＤ１２４としても公知である。ある種の実施形態では、ＩＬ－４ＲＡを遮断することは、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－４Ｒを遮断することは、喘息の処置に採用される。

【0083】

本明細書の文脈において、ＴｆＲはトランスフェリン受容体を指す。ある種の実施形態では、ＴｆＲを結合することは、炎症、自己免疫炎症、認知症、外傷性ＣＮＳ損傷、がんおよび脳卒中の処置に採用される。

【0084】

本明細書の文脈において、ＬｆＲは、ラクトフェリン受容体を指し、オメンチンまたは腸ラクトフェリン受容体としても公知である。ある種の実施形態では、ＬｆＲを結合することは、炎症、自己免疫炎症、認知症、外傷性ＣＮＳ損傷、がんおよび脳卒中の処置に採用される。

【0085】

本明細書の文脈において、ＩＲはインシュリン受容体を指す。ある種の実施形態では、ＩＲを結合することは、炎症、自己免疫炎症、認知症、外傷性ＣＮＳ損傷、がんおよび脳卒中の処置に採用される。

【0086】

本明細書の文脈において、ＬＤＬ－Ｒは、低密度リポタンパク質受容体を指す。ある種の実施形態では、ＬＤＬ－Ｒを結合することは、炎症、自己免疫炎症、認知症、外傷性ＣＮＳ損傷、がんおよび脳卒中の処置に採用される。

【0087】

本明細書の文脈において、ＬＲＰ－１は、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１（ＬＲＰ１）を指し、アルファ－２－マクログロブリン受容体（Ａ２ＭＲ）またはアポリポタンパク質Ｅ受容体（ＡＰＯＥＲ）またはＣＤ９１としても公知である。ある種の実施形態では、ＬＲＰ－１を結合することは、炎症、自己免疫炎症、認知症、外傷性ＣＮＳ損傷、がんおよび脳卒中の処置に採用される。

【0088】

本明細書の文脈において、ＣＤ１３３はプロミニン－１を指す。ある種の実施形態では、ＣＤ１３３を結合することは、がんの処置に採用される。

【0089】

本明細書の文脈において、ＣＤ１１１は、ポリオウイルス受容体関連１（ＰＶＲＬ１）を指し、ネクチン－１としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＤ１１１を結合することは、がんの処置に採用される。

【0090】

本明細書の文脈において、ＶＥＧＦＲは、血管内皮増殖因子に対する受容体を指す。ある種の実施形態では、ＶＥＧＦＲを遮断することは、がんまたは湿性ＡＭＤ、糖尿病性黄斑浮腫または網膜色素変性の処置に採用される。

【0091】

本明細書の文脈において、ＶＥＧＦ－Ａは、血管内皮増殖因子Ａを指す。ある種の実施形態では、ＶＥＧＦ－Ａを遮断することは、がんまたは湿性ＡＭＤ、糖尿病性黄斑浮腫、網膜色素変性または慢性血友病性滑膜炎の処置に採用される。

【0092】

本明細書の文脈において、Ａｎｇ－２はアンギオポエチン２を指す。ある種の実施形態では、ＶＥＧＦ－Ａを遮断することは、がんまたは湿性ＡＭＤ、糖尿病性黄斑浮腫または網膜色素変性の処置に採用される。

【0093】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１０Ｒは、インターロイキン１０受容体を指し、サイトカイン合成阻害因子に対する受容体としても公知である。ある種の実施形態では、ＩＬ－１０Ｒを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0094】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１３Ｒα２は、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２を指し、ＣＤ２１３Ａ２としても公知である。ある種の実施形態では、ＩＬ－１３Ｒα２を結合することは、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－１３Ｒα２は、がんの処置に採用される。

【0095】

ある種の実施形態では、α－シヌクレインを結合することは、パーキンソン病の処置に採用される。

【0096】

本明細書の文脈において、ＣＳＦ１Ｒは、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）を指し、マクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ）およびＣＤ１１５としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0097】

本明細書の文脈において、ＧＩＴＲは、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質を指し、ＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）または活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体またはＡＩＴＲとしても公知である。ある種の実施形態では、ＧＩＴＲを結合することは、がんの処置に採用される。

【0098】

本明細書の文脈において、ＣＤ２２は分化抗原群２２を指す。ある種の実施形態では、ＣＤ２２を遮断することは、神経変性疾患、自己免疫炎症、認知症および脳卒中の処置に採用される。

【0099】

本明細書の文脈において、ＴＩＭ－３は、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３を指し、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２（ＨＡＶＣＲ２）としても公知である。ある種の実施形態では、ＴＩＭ－３を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0100】

本明細書の文脈において、ＬＡＧ－３は、リンパ球活性化遺伝子３を指す。ある種の実施形態では、ＬＡＧ－３を遮断することは、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＬＡＧ－３を遮断することは、肺がんの処置に採用される。

【0101】

本明細書の文脈において、ＴＩＧＩＴは、Ｉｇおよび免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフドメインを有するＴ細胞免疫受容体を指す。ある種の実施形態では、ＴＩＧＩＴを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0102】

本明細書の文脈において、ＢＴＬＡは、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーターを指し、ＣＤ２７２としても公知である。ある種の実施形態では、ＢＴＬＡを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0103】

本明細書の文脈において、ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子を指す。ある種の実施形態では、ＶＩＳＴＡを遮断することは、がんの処置に採用される。

【0104】

本明細書の文脈において、ＣＤ９６は、Ｔ細胞活性化、増加した後期発現を指し、ＴＡＣＴＩＬＥとしても公知である。ある種の実施形態では、ＣＤ９６を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0105】

本明細書の文脈において、４－１ＢＢは、ＣＤ１３７を指し、ＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー９としても公知であり、またはリンパ球活性化もしくはＩＬＡによって誘導される。ある種の実施形態では、４－１ＢＢの結合は、がんの処置に採用される。

【0106】

本明細書の文脈において、ＣＣＬ－２は、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）を指し、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）または小さな誘導性サイトカインＡ２としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＣＬ－２は、がん、脳卒中、および認知症の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＣＣＬ－２のブロッキングは、自己免疫炎症およびがんの処置に採用される。

【0107】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１はＩＬ－１サイトカインファミリーのメンバーを指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１の遮断は、多発性硬化症の処置に採用される。

【0108】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１Ｒは、ＩＬ－１サイトカインファミリーのサイトカインに対する受容体を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１Ｒの遮断は、多発性硬化症の処置に採用される。

【0109】

本明細書の文脈において、ＥｐｈＡ２はエフリンＡ型受容体２を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈＡ２を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0110】

本明細書の文脈において、ＥｐｈＡ３はエフリンＡ型受容体３を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈＡ３を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0111】

本明細書の文脈において、ＥｐｈＢ２は、エフリン型Ｂ受容体２を指し、ＥＲＫとしても公知である。ある種の実施形態では、ＥｐｈＢ２を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0112】

本明細書の文脈において、ＥｐｈＢ３はエフリン型Ｂ受容体３を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈＢ３を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0113】

本明細書の文脈において、ＥｐｈＢ４はエフリン型Ｂ受容体４を指す。ある種の実施形態では、ＥｐｈＢ４を遮断することは、がんの処置に採用される。

【0114】

本明細書の文脈において、ＯＸ４０は、ＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー４を指し、ＣＤ１３４またはＯＸ４０受容体としても公知である。ある種の実施形態では、ＯＸ４０を結合することは、がんの処置に採用される。

【0115】

本明細書の文脈において、ＬＩＮＧＯ－１は、ロイシンリッチリピートおよび免疫グロビン様ドメイン含有タンパク質１を指す。ある種の実施形態では、ＬＩＮＧＯ－１を遮断することは、多発性硬化症、外傷性脳ＣＮＳ損傷または脳卒中の処置に採用される。

【0116】

本明細書の文脈において、Ｌ１ＣＡＭは、Ｌ１細胞接着分子を指し、Ｌ１としても公知である。ある種の実施形態では、Ｌ１を遮断することは、多発性硬化症、外傷性脳ＣＮＳ損傷または脳卒中の処置に採用される。

【0117】

本明細書の文脈において、ＮＣＡＭは神経細胞接着分子を指す。ある種の実施形態では、ＮＣＡＭを遮断することは、多発性硬化症、外傷性脳ＣＮＳ損傷または脳卒中の処置に採用される。

【0118】

本明細書の文脈において、ＳＯＤ－１はスーパーオキシドジスムターゼ１を指す。ある種の実施形態では、ＳＯＤ－１を遮断することは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の処置に採用される。

【0119】

本明細書の文脈において、ＳＩＧＭＡＲ－１はシグマ－１受容体を指す。ある種の実施形態では、ＳＩＧＭＡＲ－１を遮断することは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の処置に採用される。

【0120】

本明細書の文脈において、ＳＩＧＭＡＲ－２はシグマ－２受容体を指す。ある種の実施形態では、ＳＩＧＭＡＲ－２を遮断することは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の処置に採用される。

【0121】

本明細書の文脈において、ＴＤＰ－４３は、ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３を指す。ある種の実施形態では、ＴＤＰ－４３を結合することは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の処置に採用される。

【0122】

本明細書の文脈において、アミロイドβはアミロイドベータを指す。ある種の実施形態では、アミロイドβを結合することは、アルツハイマー病（ＡＤ）の処置に採用される。

【0123】

本明細書の文脈において、Ｔａｕはタウタンパク質を指す。ある種の実施形態では、Ｔａｕを結合することは、アルツハイマー病（ＡＤ）の処置に採用される。

【0124】

本明細書の文脈において、ＩＦＮαはインターフェロン－αを指す。ある種の実施形態では、ＩＦＮαは、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0125】

本明細書の文脈において、ＩＦＮβはインターフェロン－ベータを指す。ある種の実施形態では、ＩＦＮβは、がんおよび感染症の処置に採用される。

【0126】

本明細書の文脈において、ＴＲＰＭ４は、一過性受容体電位陽イオンチャネルサブファミリーＭメンバー４を指す。ある種の実施形態では、ＴＲＰＭ４を遮断することは、多発性硬化症の処置に採用される。

【0127】

本明細書の文脈において、ＡＳＩＣ１は、酸感受性イオンチャネル１を指し、アミロライド感受性カチオンチャネル２、ニューロン（ＡＣＣＮ２）または脳ナトリウムチャネル２（ＢＮａＣ２）としても公知である。ある種の実施形態では、ＡＳＩＣ１を遮断することは、多発性硬化症の処置に採用される。

【0128】

本明細書の文脈において、ＶＧＣＣは、電圧依存性（Voltage-gated）カルシウムチャネルを指し、電圧依存性（voltage-dependent）カルシウムチャネル（ＶＤＣＣ）としても公知である。ある種の実施形態では、ＶＧＣＣを遮断することは、多発性硬化症の処置に採用される。

【0129】

本明細書の文脈において、ＣＢ_１はカンナビノイド受容体１型を指し、カンナビノイド受容体１としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＢ_１を遮断することは、多発性硬化症の処置に採用される。

【0130】

本明細書の文脈において、ＴＴＲはトランスチレチンを指す。ある種の実施形態では、ＴＴＲを遮断することは、トランスチレチンアミロイドーシスの処置に採用される。

【0131】

本明細書の文脈において、ＨＴＴは、ハンチンチンタンパク質を指す。ある種の実施形態では、ＨＴＴを遮断することは、ハンチントン病の処置に採用される。

【0132】

本明細書の文脈において、ＪＣＶは、ＪＣウイルスまたはＪｏｈｎ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルスを指す。ある種の実施形態では、ＪＣＶの主要カプシドタンパク質ＶＰ１（ウイルスタンパク質１）を遮断することは、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の処置に採用される。

【0133】

本明細書の文脈において、Ｃ９ｏｒｆ７２は、第９染色体のオープンリーディングフレーム７２遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。ある種の実施形態では、Ｃ９ｏｒｆ７２は、認知症の処置に採用される。ある種の実施形態では、Ｃ９ｏｒｆ７２を遮断することは、認知症の処置に採用される。

【0134】

本明細書の文脈において、ＢＤＮＦは脳由来の神経栄養因子を指す。ある種の実施形態では、ＢＤＮＦは、多発性硬化症、パーキンソン病、認知症、脳卒中および遺伝性障害の処置に採用される。

【0135】

本明細書の文脈において、ＮＲＴＮはニューツリンを指す。ある種の実施形態では、ＮＲＴＮは、多発性硬化症、パーキンソン病、認知症、脳卒中および遺伝性障害の処置に採用される。

【0136】

本明細書の文脈において、ＡＲＴＮはアルテミンを指す。ある種の実施形態では、ＡＲＴＮは、多発性硬化症、パーキンソン病、認知症、脳卒中および遺伝性障害の処置に採用される。

【0137】

本明細書の文脈において、ＰＳＰＮはペルセフィンを指す。ある種の実施形態では、ＰＳＰＮは、多発性硬化症、パーキンソン病、認知症、脳卒中および遺伝性障害の処置に採用される。

【0138】

本明細書において、ＣＮＴＦは毛様体神経栄養因子を指す。ある種の実施形態では、ＣＮＴＦは、多発性硬化症、パーキンソン病、認知症、脳卒中および遺伝性障害の処置に採用される。

【0139】

本明細書の文脈において、ＴＲＡＩＬは、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンドを指し、ＣＤ２５３または腫瘍壊死因子スーパーファミリー、メンバー１０としても公知である。ある種の実施形態では、ＴＲＡＩＬは、がんの処置に採用される。

【0140】

本明細書の文脈において、ＨＡは、インフルエンザウイルスの表面に見出されるホモ三量体糖タンパク質である血球凝集素（hemagglutinin）（または血球凝集素（haemagglutinin））を指す。ある種の実施形態では、ＨＡを中和することは、インフルエンザの処置に採用される。

【0141】

本明細書の文脈において、ＩＬ－３はインターロイキン３を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－３は、がんの処置に採用される。

【0142】

本明細書の文脈において、ＩＬ－５はインターロイキン５を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－５は、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－５の遮断は、喘息の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－５の遮断は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の処置に採用される。

【0143】

本明細書の文脈において、ＩＬ－８は、インターロイキン８を指し、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド８またはＣＸＣＬ８としても公知である。ある種の実施形態では、ＩＬ－８は、がんの処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－８の遮断は、肺水腫の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＩＬ－８アンタゴニストは、嚢胞性線維症の処置に採用される。

【0144】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１７はインターロイキン１７を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１７の中和は、ブドウ膜炎の処置に採用される。本明細書の文脈において、ＩＬ－１７Ａは、インターロイキン１７Ａを指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－１７Ａの中和は、関節リウマチおよび／または乾癬性関節炎および／または強直性脊椎炎の処置に採用される。

【0145】

本明細書の文脈において、ＩＬ－１８は、インターロイキン１８を指し、インターフェロン－ガンマ誘導因子としても公知である。ある種の実施形態では、ＩＬ－１８は、がんの処置に採用される。

【0146】

本明細書の文脈において、ＩＬ－２１はインターロイキン２１を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－２１は、がんの処置に採用される。

【0147】

本明細書の文脈において、ＩＬ－２１Ｒはインターロイキン２１受容体を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－２１Ｒの遮断は、アレルギー性喘息の処置に採用される。

【0148】

本明細書の文脈において、ＩＬ－２２はインターロイキン２２を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－２２を中和することは、関節リウマチの処置に採用される。

【0149】

本明細書の文脈において、ＩＬ－２５はインターロイキン２５（インターロイキン１７ＥまたはＩＬ－１７Ｅとしても公知である）を指す。ある種の実施形態では、ＩＬ－２５を中和することは、アレルギー性喘息の処置に採用される。

【0150】

本明細書の文脈において、ＣＤ２０は、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０を指す。ある種の実施形態では、ＣＤ２０結合抗体は、間質性肺疾患の処置に採用される。ある種の実施形態では、ＣＤ２０結合抗体は、がんの処置に採用される。本明細書の文脈において、ＣＣＬ５は、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド５を指す。ある種の実施形態では、ＣＣＬ５は、がんの処置に採用される。

【0151】

本明細書の文脈において、ＣＣＬ２１はケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１を指す。ある種の実施形態では、ＣＣＬ２１は、がんの処置に採用される。

【0152】

本明細書の文脈において、ＣＣＬ１０は、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１０を指し、ＣＣＬ９またはケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド９としても公知である。ある種の実施形態では、ＣＣＬ１０は、がんの処置に採用される。

【0153】

本明細書の文脈において、ＣＣＬ１６はケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１６を指す。ある種の実施形態では、ＣＣＬ１６は、がんの処置に採用される。

【0154】

本明細書の文脈において、ＣＸ３ＣＬ１は、ケモカイン（Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフ）リガンド１を指し、フラクタルカインとしても公知である。ある種の実施形態では、ＣＸ３ＣＬ１は、がんの処置に採用される。

【0155】

本明細書の文脈において、ＣＸＣＬ１６はケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１６を指す。ある種の実施形態では、ＣＸＣＬ１６は、がんの処置に採用される。

【0156】

本明細書の文脈において、ＮＦ－ｋＢは、活性化Ｂ細胞の核因子カッパ－軽鎖エンハンサーを指す。ある種の実施形態では、ＮＦ－ｋＢアンタゴニストは、嚢胞性線維症の処置に採用される。

【0157】

本明細書の文脈において、ＮＲＡは、非リウマチ性関節炎を指す。ある種の実施形態では、抗神経増殖因子（ＮＧＦ）抗体または抗体様分子は、炎症、自己免疫炎症、関節炎および変形性関節症の処置に採用され得る。ある種の実施形態では、ＮＧＦの遮断は、変形性関節症の処置に採用され得る。本明細書の文脈において、抗体なる用語は、Ｇ型の抗体（ＩｇＧ）、そのいずれかの抗原結合断片または一本鎖、および関連または誘導された構築物を指す。抗体全体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）で構成される。重鎖定常領域は、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略す）および軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインであるＣ_Ｌで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。本明細書の文脈において、抗体という用語は、２つのＨ鎖および２つのＬ鎖を含む抗体全体だけでなく、１つのＨ鎖および１つのＬ鎖のみを含む異常な抗体、またはただ１つのＨ鎖のみからなる抗体さえも含むことを意味する。

【0158】

本明細書の文脈において特異的に結合するという用語は、高親和性／Ｋｄ≦１０Ｅ^－８ｍｏｌ／ｌでの結合を指す。

【0159】

本明細書の文脈において用語「抗体様分子」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ断片の少なくとも一部およびＦｃ断片に直接的または間接的に融合された少なくとも１つの標的結合エレメントを含有する分子を指し、とりわけ重鎖および軽鎖可変領域、一本鎖可変断片、二重親和性再標的化タンパク質、または二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。抗体様分子は、高親和性／Ｋｄ≦１０Ｅ^－８ｍｏｌ／ｌで別の分子または標的に特異的に結合することができる。抗体様分子は、抗体の特異的結合と同様にその標的に結合する。

【0160】

当業者は、本発明が、抗体または抗体様分子がＦｃ領域を含むかまたはＦｃ領域に融合されることを必要とすることを認識する。

【0161】

本明細書の文脈において、解離定数（Ｋ_Ｄ）という用語は、［ほとんど２つの］異なる成分で構成される複合体がその構成成分に可逆的に解離する傾向を測定する平衡定数を指す。この複合体は、例えば、抗体Ａｂおよび抗原Ａｇで構成される抗体－抗原複合体ＡｂＡｇであり得る。Ｋ_Ｄはモル濃度［ｍｏｌ／ｌ］で表され、［Ａｇ］の結合部位の半分が占められる［Ａｂ］の濃度に対応する。換言すると、結合していない［Ａｂ］の濃度は［ＡｂＡｇ］複合体の濃度に等しい。解離定数は、次式により算出することができる：

【0162】

【数1】

【0163】

［Ａｂ］：抗体の濃度；［Ａｇ］：抗原の濃度；［ＡｂＡｇ］：抗体抗原複合体の濃度
本明細書の文脈において、オフレート（Ｋｏｆｆ；［１／ｓｅｃ］）およびオンレート（Ｋｏｎ；［１／ｓｅｃ^＊Ｍ］）という用語は、化学および物理学の分野において公知である意味において使用され、それらは、５の抗体のその標的抗原との解離（Ｋｏｆｆ）または会合（Ｋｏｎ）を測定する速度定数を指す。Ｋ_ｏｆｆおよびＫ_ｏｎは、当該技術分野で十分に確立された方法を用いて実験的に決定することができる。抗体のＫｏｆｆおよびＫｏｎを決定する方法は、表面プラズモン共鳴を採用する。これは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）またはＰｒｏｔｅＯｎ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムの背後にある原理である。それらはまた、次式を用いて解離定数Ｋ_Ｄを求めることができる：

【0164】

【数2】

【0165】

本明細書の文脈において、Ｋ_Ｄはまた、当該技術分野において十分に確立された方法を用いて決定された実験データの平衡解析によって決定することができる。これは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）またはＰｒｏｔｅＯｎ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用して行うことができる。

【0166】

本明細書の文脈において、高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）とは、ＷＨＯ悪性度ＩＶの神経膠腫または多形神経膠芽腫を指す。

【0167】

本明細書の文脈において、「ＮＨＱ」と称するＦｃ領域とは、２５３位、３１０位および４３５位（ＥＵ番号付けシステムによって指定される）が、指示されたアミノ酸残基、すなわち、２５３位にＮ、３１０位にＨ、および４３５位にＱを含むＦｃ領域を指す。これはＩ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑの２つの突然変異を持つＦｃ領域に相当する。したがって、「ＩＡＱ」と称するＦｃ領域は、２５３位にＩ、３１０位にＡ、および４３５位にＱを有するＦｃ領域（すなわち、突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑを有するＦｃ領域）を指す。表１は、修飾Ｆｃ領域のいくつかの例を示す。

【0168】

本発明の第１の態様は、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、ＩＬ－１２およびＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含む融合ポリペプチドを提供する。Ｆｃ領域は修飾を受け、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への親和性が低下する。ポリペプチドは脳に投与される。

【0169】

脳への投与は、頭蓋内送達によって行うことができる。頭蓋内送達は連続的であるかまたは間欠的であるかまたは非再発性であり得る。「脳への投与」という表現はまた、手術後に切除空洞をすすぐことを含むことを意味する。投与には髄腔内または実質内であり得る。

【0170】

Ｆｃ領域の修飾は、ポリペプチドの血清対脳内濃度比の減少をもたらす。血清対脳内濃度の減少は、高い局所濃度が脳内で達成され、一方、高い全身濃度による負の副作用が防止されるという利点を有する。

【0171】

ある種の実施形態では、ポリペプチドの血清または血漿対脳内濃度比は、所定の閾値未満である。所定の閾値は、ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体への頭蓋内注射、具体的には頭蓋内ボーラス注射またはＣＥＤの２４時間後に測定可能である、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチド、具体的にはＩＬ－１２ＦｃＷＴの血清または血漿対脳内濃度比の最大２／３、
ｂ．Ｆｃ領域もペプチドリンカーも含まない同一ポリペプチド、具体的にはｒｈＩＬ－１２の血清または血漿対脳内濃度比の最大１／８
から選択される。

【0172】

ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体内に平滑末端２６ｓＧハミルトンシリンジまたはＣＥＤを用いて１μｌ／分の１μｇを頭蓋内注射後２４時間に測定を行う（内径０．１ｍｍ、壁厚０．０３２５ｍｍの溶融シリカ製の先端１ｍｍステップを有する２７Ｇ平滑末端針ならびに、５分間０．２μｌ／分、４分間０．５μｌ／分および２．５分間０．８μｌ／分；総体積５μｌ、総量１μｇのランプアップ注射レジメンを用いる）。

【0173】

本発明の第１の態様による融合ポリペプチドは、非修飾Ｆｃ領域に連結されたＩＬ－１２（ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ）よりも低い血清対脳内濃度比を有する。ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴは、循環血液中でのＦｃＲｎ媒介リサイクルにより、長い血清半減期を有する。

【0174】

本発明の第１の態様による融合ポリペプチドは、脳からの高い受動的漏出を示すｒｈＩＬ－１２よりも低い血清対脳内濃度比を有する。

【0175】

ある種の実施形態では、ＦｃＲｎに対する上記ポリペプチドの低下した親和性は、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも２倍増加するＫ_Ｄ、および
ｂ．異なる修飾を受けたＦｃ領域を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも１．５倍増加したＫａ_Ｄ、すなわち、ＩＡＱ（突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４５Ｑを有する）およびＡＡＡ（突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａを有する）から選択された１つの突然変異体
から選択される解離定数（Ｋ_Ｄ）によって特徴付けられる。

【0176】

ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも３倍増加する。ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも４倍増加する。ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも５倍増加する。

【0177】

ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、異なる修飾を受けた上記Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも２倍増加する。

【0178】

ある種の実施形態では、異なる修飾を受けたＦｃ領域は、２５３位にＩ、３１０位にＡ、および４３５位にＱ（ＩＡＱ）を有するＦｃ領域である。

【0179】

ある種の実施形態では、異なる修飾を受けたＦｃ領域は、２５３位にＡ、３１０位にＡ、および４３５位にＡ（ＡＡＡ）を有するＦｃ領域である。

【0180】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、対流増強送達（ＣＥＤ）またはその変形によって行われる。ＣＥＤとは、脳（腫瘍）実質に薬物を直接送達する技術を指す。ＣＥＤ手法は、脳への侵襲性を最小限に抑えた外科的照射を伴い、続いて小径カテーテルを直接脳内に留置し、それによって血液脳関門をバイパスする。通常のボーラス注射および拡散駆動注入レジメンとの主な相違は、組織内のバルク流に達するまで注射を上昇させることによって生じる圧力勾配である。ここで、注入速度ではなく持続時間が、到達した組織の範囲を決定する。このアプローチは、脳（腫瘍）組織内で効果的に高濃度に到達するために通常は脳に入らない高分子薬物の送達を可能にする。

【0181】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、髄腔内送達によって行われる。髄腔内投与とは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に薬物を直接投与することを指す。髄腔内投与は、脳内（例えば、オマヤリザーバーを介して）または脊髄におけるくも膜下腔内に、くも膜下膜の下への物質適用として定義される。非限定的な例は、軟髄膜がん腫症および原発性Ｈｅｒ２／神経陽性脳腫瘍、ならびにＣＤ２０陽性ＣＮＳリンパ腫および眼内リンパ腫をそれぞれトラスツズマブまたはリツキシマブを用いて処置するための髄腔内送達である。別の例は、急性脊髄損傷、多発性硬化症または脳卒中の処置のための抗ＮｏｇｏＡ抗体の髄腔内投与である。このアプローチは、通常は脳に入らない高分子薬物の送達を可能にし、軟髄膜または脳実質において効果的に高濃度に到達する。

【0182】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、上記ポリペプチドの脳室内送達によって行われる。脳室内投与とは、カテーテルを用いて脳室内腔に薬物を脳脊髄液（ＣＳＦ）に直接投与することを指す。

【0183】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、上記ポリペプチドのインサイチュでの産生によって行われる。インサイチュでの産生は、専らもしくは実質的に脳内または脳腫瘍内でのポリペプチドの局所的産生に関する。非限定的な例として、局所産生は、ＤＮＡ製剤、ｍＲＮＡ、修飾ｍＲＮＡ、自己複製ｍＲＮＡ、ウイルスベクター、カプセル化修飾産生細胞、または修飾Ｔ細胞から生じることができる。局所的産生に対する空間的制御は、ポリペプチドをコードする分子もしくはベクターの局所的送達によって、またはポリペプチド産生の局所的活性化によって達成することができる。ポリペプチドをコードする分子またはベクターの局所的送達による局所的産生、およびその後のポリペプチド産生の局所的活性化は、転写抑制解除剤または条件発現カセットの転写活性化剤として作用する薬剤の局所的または全身的投与によって達成することができる。例としては、限定されないが、エクジソン受容体／無脊椎動物レチノイドｘ受容体ベースの誘導性遺伝子発現系またはテトラサイクリン調節転写調節剤が挙げられる。

【0184】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、腫瘍またはＣＮＳへのホーミング能力を有する上記ポリペプチドを産生するように修飾された細胞の全身送達によって行われる。ポリペプチドは、構成的または誘導的な様式で産生され得る。例としては、限定されないが、修飾Ｔ細胞または間葉系幹細胞が挙げられる。

【0185】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、移植された徐放性（slow-release）／徐放性（extended-release）／徐放性（sustained-release）／放出制御製剤からの放出によって行われる。本明細書の文脈において、このような製剤は、副作用を最小限に抑えながら特定の期間、一定の薬物濃度を維持するために、所定の速度で薬物を放出するように設計された剤形に関する。当業者は、種々の適切な製剤を知っている。非限定的な例は、リポソーム、薬物－ポリマーコンジュゲート、ヒドロゲル、ウエイバーまたは被覆ナノ粒子である。

【0186】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、上記ポリペプチドの鼻腔内送達によって行われる。

【0187】

ある種の実施形態では、頭蓋内送達は、上記ポリペプチドに対する受容体媒介トランスサイトーシスによって行われる。非限定的な例は、ＴｆＲに結合する二重特異性構築物、ならびに疾患脳実質、具体的にはアルツハイマー病（ＡＤ）におけるＡβプラークに見出される標的である。

【0188】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は悪性疾患である。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は神経膠腫である。

【0189】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である。

【0190】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、脳転移としても公知である二次脳腫瘍である。

【0191】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は虚血性脳損傷である。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、脳梗塞、脳卒中、脳低酸素－虚血、頭蓋内塞栓症または頭蓋内血栓症である。

【0192】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患はてんかんである。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は外傷性脳損傷である。

【0193】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は脊髄損傷である。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は認知症である。

【0194】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患はパーキンソン病（ＰＤ）である。

【0195】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患はレーヴィ小体を伴う認知症である。

【0196】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患はアルツハイマー病（ＡＤ）である。ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は家族性アルツハイマー病（ＡＤ）である。

【0197】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は前頭側頭認知症（ＦＴＤ）である。

【0198】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は家族性前頭側頭認知症（ＦＴＤ）である。

【0199】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、ルーゲーリッグ病としても公知である筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。

【0200】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、伝達性海綿状脳症、具体的にはクロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、クル、スクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）である。

【0201】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は遺伝性障害である。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、遺伝性障害、具体的には皮質下梗塞および白質脳症を伴う大脳常染色体優性動脈疾患（ＣＡＤＡＳＩＬ）である。

【0202】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響する疾患は、遺伝性障害、具体的にはハンチントン病である。

【0203】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、遺伝性障害、具体的には自閉症、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）、例えば、アスペルガー症候群である。

【0204】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、遺伝性白質ジストロフィー、具体的には異染性白質ジストロフィー、クラブ病、カナバン病、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、アレキサンダー病である。

【0205】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、遺伝性代謝障害、具体的にはテイ－サックス病またはウィルソン病である。

【0206】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、精神障害、具体的には記憶消失、注意欠陥多動性障害、精神病、不安障害、双極性障害、うつ病、躁病、知的発達障害、全般的発達遅延、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、解離性障害である。

【0207】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患はてんかんである。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は自己免疫脳炎である。

【0208】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は多発性硬化症である。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である。

【0209】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、自己免疫性脳炎、具体的には抗ＮＭＤＡＲ脳炎、辺縁系脳炎、ＬＧＩ１／ＣＡＳＰＲ２抗体脳炎、橋本脳症、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、ビンスワンガー病（皮質下白質脳症）、ラスムセン脳炎である。

【0210】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、ウイルス、具体的には狂犬病ウイルス、ヒトヘルペスウイルス、発疹を引き起こすウイルス、昆虫媒介ウイルス、ダニ媒介ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる感染性脳脊髄炎である。

【0211】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、細菌によって引き起こされる感染性脳脊髄炎である。

【0212】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、寄生虫によって引き起こされる感染性脳脊髄炎である。

【0213】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、ＪＣポリオーマウイルス（通常、ＪＣＰｙＶまたはＪＣＶと略称される）によって引き起こされる進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）である。

【0214】

ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、感染後脳脊髄炎である。
ある種の実施形態では、中枢神経系に影響を及ぼす疾患は、血管新生に関連した加齢黄斑変性（湿式ＡＭＤ）および糖尿病性黄斑浮腫または網膜色素変性である。

【0215】

本発明のさらなる態様では、本発明によるポリペプチドは、肺に影響を及ぼす疾患の予防または処置のために使用され、上記疾患は、コロナウイルス疾患２０１９、重症急性呼吸器症候群、喘息、アレルギー性喘息、重症なコントロール不良の喘息、線維症、嚢胞性線維症、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、インフルエンザ、肺水腫、サルコイドーシス、肺がん、結核、ヒトオルトニューモウイルス、腺ペスト、肺ペスト、炭疽、肺における侵襲性真菌疾患、肺パラコクシジオイデス症、間質性肺疾患、特発性肺線維症、および鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎から選択される。

【0216】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされるコロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）である。

【0217】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。

【0218】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、ウイルス、具体的にはコロナウイルスによって引き起こされる重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。

【0219】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、喘息、アレルギー性喘息、重篤なコントロール不良の喘息、またはそれらの組み合わせである。

【0220】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。

【0221】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、線維症、嚢胞性線維症、肺線維症、またはそれらの組み合わせである。

【0222】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、インフルエンザウイルスによって引き起こされるインフルエンザである。

【0223】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、サルコイドーシス（Ｂｅｓｎｉｅｒ－Ｂｏｅｃｋ－Ｓｃｈａｕｍａｎｎ病としても公知である）である。

【0224】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、肺がんである。
ある種の実施形態では、一般的な用語において、肺に影響を及ぼす疾患は、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫によって引き起こされる。

【0225】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、結核菌（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（通常、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｔｂと略称される）によって引き起こされる結核である。

【0226】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、合胞体ウイルスヒトオルトニューモウイルス（ヒト呼吸器合胞体ウイルス、またはＨＲＳＶ、または単にＲＳＶとしても公知である）によって引き起こされる気道感染である。

【0227】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）という細菌によって引き起こされる腺ペストである。

【0228】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、ペスト菌によって引き起こされる肺ペストである。

【0229】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、炭疽であり、炭疽菌という細菌によって引き起こされる感染である。

【0230】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、アスペルギルス、クリプトコッカス、ニューモシスチス、および流行性真菌などの肺真菌病原体によって引き起こされる侵襲性真菌疾患（真菌肺疾患としても公知である）である。

【0231】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）という真菌によって引き起こされる肺パラコクシジオイデス真菌症（典型的にはＰＣＭと略称される）である。

【0232】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎（典型的には、ＣＲＳｗＮＰと略称される）、慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳ）のサブグループである。

【0233】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、肺水腫である。
ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、間質性肺疾患である。

【0234】

ある種の実施形態では、肺に影響を及ぼす疾患は、特発性肺線維症である。
本発明のさらなる態様では、本発明によるポリペプチドは、少なくとも１つの関節に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用され、上記疾患は、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、痛風、偽痛風、変形性関節症、慢性血友病性滑膜炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎から選択される。

【0235】

ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は関節リウマチ（ＲＡ）である。ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は若年性関節リウマチである。

【0236】

ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は、痛風であり、血液中の尿酸レベルの持続的上昇によって引き起こされる炎症性関節炎の一形態である。ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は、偽痛風である。

【0237】

ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は、関節軟骨およびその下にある骨の破壊に起因する変形性関節症（ＯＡ）である。

【0238】

ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は、慢性血友病性滑膜炎である。
ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は、乾癬性関節炎、自己免疫疾患である乾癬に罹患した人に起こる長期炎症性関節炎である。

【0239】

ある種の実施形態では、関節に影響を及ぼす疾患は、強直性脊椎炎（Ｂｅｋｈｔｅｒｅｖ病、Ｂｅｃｈｔｅｒｅｗ病、またはｍｏｒｂｕｓ Ｂｅｃｈｔｅｒｅｗとしても公知である）である。

【0240】

本発明のさらなる態様では、本発明によるポリペプチドは、眼に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用され、上記疾患は、ブドウ膜黒色腫およびブドウ膜炎から選択される。

【0241】

ある種の実施形態では、眼に影響を及ぼす疾患は、虹彩、毛様体、または脈絡膜（まとめてブドウ膜と呼ばれる）を伴う眼のがん（黒色腫）であるブドウ膜黒色腫である。

【0242】

ある種の実施形態では、眼に影響を及ぼす疾患は、ブドウ膜炎、すなわちブドウ膜の炎症である。

【0243】

本発明のポリペプチドは、複数の疾患または本明細書に開示される疾患の組み合わせの予防または処置に、同時におよび／または連続して用いることができることが理解される。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトまたはヒト化アミノ酸配列を含むキメラＦｃ領域である。

【0244】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトまたはヒト化Ｆｃ領域である。
ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号１に対して２５３位に突然変異を有する。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は突然変異Ｉ２５３Ａを有する。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は突然変異Ｉ２５３Ｎを有する。

【0245】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号１に対して４３５位に突然変異を有する。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は突然変異Ｈ４３５Ｑを有する。

【0246】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号１に対して４３５位に突然変異を有さない。したがって、Ｆｃ領域は４３５位にＨを有する。

【0247】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号１に対して３１０に突然変異を有さない。したがって、Ｆｃ領域は３１０位にＨを有する。

【0248】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＡＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、ならびに３１０および４３５位のＨ（ＡＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、ならびに３１０および４３５位のＨ（ＮＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＡＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＮＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＮＡＡ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＡＡＡ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む。

【0249】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む。

【0250】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位にＨを含む。

【0251】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）を含む。

【0252】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）を含む。

【0253】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）を含む。

【0254】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）を含む。

【0255】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００２（ＩＡＱ）、配列番号００３（ＡＨＱ）、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号００７（ＡＨＨ）、配列番号００８（ＮＨＨ）、配列番号００９（ＡＡＨ）、配列番号０１０（ＮＡＨ）、配列番号０１１（ＮＡＡ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）、配列番号０１３（ＡＡＡ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれらを含む。

【0256】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む。

【0257】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００４（ＮＨＱ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む。

【0258】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００６（ＮＡＱ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む。

【0259】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号０１２（ＮＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む。

【0260】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む。
処置に使用するための結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含むポリペプチド
本発明のより広い態様は、疾患の予防または処置に使用するための、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含むポリペプチドを提供する。Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への親和性の低下をもたらす修飾を有し、ポリペプチドは、疾患により影響を及ぼされた組織への局所投与によって送達される。

【0261】

ある種の実施形態では、ポリペプチドは、眼内投与によって眼に送達される。
ある種の実施形態では、ポリペプチドは、関節内投与によって関節に送達される。

【0262】

ある種の実施形態では、ポリペプチドは、吸入を介して肺に送達される。
本発明は、さらに、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、好ましくは、さらに、
－ＩＬ－１２；または
－ＶＥＧＦＲ、Ａｎｇ２、ＴＮＦα、ＩＬ－１７、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１のいずれか１つに結合するポリペプチド、より好ましくはＶＥＧＦＲ、Ａｎｇ２、ＴＮＦα、ＩＬ－１７のいずれか１つに結合するポリペプチド
を含む、眼に影響を及ぼす疾患、具体的には眼に影響を及ぼす新生児疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドであって、上記Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、上記Ｆｃは、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位にＨ（ＮＨＱ）を含み、上記ポリペプチドは、眼内投与によって眼に送達される、ポリペプチドを提供する。

【0263】

本発明は、さらに、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、好ましくは、さらに
－ＩＬ－１２；または
－ＴＮＦα、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６、ＣＤ２７、ＩＬ－２２、ＩＬ－１７、ＣＤ２７のいずれか１つに結合するポリペプチド、より好ましくは、ＴＮＦα、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６、ＣＤ２７のいずれか１つに結合するポリペプチド
を含む、関節に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドであって、上記Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、上記Ｆｃは、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位にＨを含み、上記ポリペプチドは、関節内投与によって上記関節に送達される、ポリペプチドを提供する。

【0264】

本発明は、さらに、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、好ましくは、さらに、
－ＩＬ－１２；または
－ＩＬ－１０；または
－ＩＬ－４ＲＡ、ＴＮＦα、ＩＬ－５、ＩＬ－６Ｒ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－８、ＩＬ－２１Ｒ、ＣＤ２５、ＣＤ２０、ＮＦ－ｋＢのうちのいずれか１つに結合するポリペプチド；より好ましくはＩＬ－４ＲＡ、ＴＮＦα、ＩＬ－５、ＩＬ－６Ｒ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４のうちのいずれか１つに結合するポリペプチドを含む、肺に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドであって、上記Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、上記Ｆｃは、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位にＨを含み、上記ポリペプチドは、吸入によって肺に送達される、ポリペプチドを提供する。

【0265】

本発明は、さらに、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含み、具体的にはＩＬ－１２をさらに含む、医薬として使用するための融合ポリペプチドであって、上記Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、上記Ｆｃは、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位にＨを含む、融合ポリペプチドを提供する。

【0266】

ある種の実施形態では、疾患の予防または処置に使用するためのポリペプチドの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域は、配列番号００４（ＮＨＱ）であるかまたはそれを含む。ある種の実施形態では、医薬として使用するための融合ポリペプチドの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域は、配列番号００４（ＮＨＱ）であるかまたはそれを含む。

【0267】

局所投与後、ＦｃＲｎに対する親和性の低下は、循環血液中への輸送および全身の濃縮が低下し、それによってポリペプチドのいずれもの全身毒性副作用を低下することを確実にする。

【0268】

ある種の実施形態では、ポリペプチドは、
ａ．ｉ．エフェクターポリペプチドおよび
ｉｉ．上記Ｆｃ領域
を含む融合タンパク質；または
ｂ．上記Ｆｃ領域を含むかもしくはそれに連結された抗体または抗体様分子
から選択される。

【0269】

処置に使用するための結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含むポリペプチドのさらなる実施形態は、下記の「項目」セクションに見出すことができる。

【0270】

処置に使用するためのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸を標的とする
本発明の別の態様は、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、プログラムされた細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）またはプログラムされた細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に特異的に結合する抗体または抗体様分子を提供する。抗体または抗体様分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子は、中枢神経系、具体的には脳に投与される。

【0271】

処置に使用するための抗ＯＸ４０
本発明の別の態様は、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、ＣＤ１３４、ＯＸ４０またはＯＸ４０受容体としても公知である、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）に特異的に結合する抗体または抗体様分子を提供する。抗体または抗体様分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子は脳に投与される。

【0272】

処置に用いる抗ＣＤ４７
本発明の別の態様は、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、インテグリン会合タンパク質（ＩＡＰ）としても公知であるＣＤ４７に特異的に結合する抗体または抗体様分子を提供する。本発明のさらに別の態様は、ＣＤ４７のリガンド、具体的にはＦｃ領域と融合したＳＩＲＰαまたはトロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）を提供する。抗体または抗体様分子またはＦｃ－融合分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子またはＦｃ融合分子は脳に投与される。

【0273】

処置に使用するための抗Ｎｏｇｏ－Ａ
本発明の別の態様は、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、Ｎｏｇｏ－Ａに特異的に結合する抗体または抗体様分子を提供する。本発明のさらに別の態様は、Ｎｏｇｏ－Ａのリガンド、具体的にはＦｃ領域と融合したＮｏｇｏ－６６受容体１（ＮｇＲ１）としても公知であるＮｏｇｏ－６６受容体を提供する。抗体または抗体様分子またはＦｃ－融合分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子またはＦｃ融合分子が脳に投与される。

【0274】

処置に使用するための二重特異性抗体に関与するＴ細胞
本発明の別の態様は、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合した場合、がん細胞上のＴＡＡに特異的に結合し、同時にＴ細胞受容体非依存性ポリクローナル活性化を提供するＴ細胞上のＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体または抗体様分子に関与するＴ細胞を提供する。本発明のさらに別の態様は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、同時にＴ細胞上の４－１ＢＢに特異的に結合する二重特異性抗体または抗体様分子を提供する。本発明のなおさらなる態様は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、同時にＴ細胞上のＣＤ２８に特異的に結合する二重特異性抗体または抗体様分子を提供する。抗体または抗体様分子またはＦｃ－融合分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子またはＦｃ融合分子は脳に投与される。

【0275】

処置に使用するための武装化抗体および標的抗体
本発明の別の態様は、がん細胞上の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍脈管構造中に存在する抗原、もしくは腫瘍の壊死性コア中に存在する抗原に特異的に結合する武装化抗体または抗体様分子を提供する。上記抗体または抗体様分子はまた、中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するためのエフェクター分子、具体的にはサイトカイン、放射性同位元素または細胞毒性物質を担持する。武装化抗体または抗体様分子またはＦｃ－融合分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子またはＦｃ融合分子は脳に投与される。

【0276】

腫瘍条件抗体または組織条件抗体
本発明の別の態様は、がん細胞上の第１の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍微小環境中に存在する抗原、または腫瘍の壊死性コア中に存在する抗原、または標的組織中に存在する抗原に特異的に結合する抗体または抗体様分子を提供する。上記抗体または抗体様分子はまた、第２のエフェクター分子、具体的にはサイトカインを含み、または中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、第１の抗原とは異なる第２の抗原に結合する少なくとも１つ以上の抗体または抗体様分子を有する二重特異性または多重特異性抗体である。このような構築物において、第２の抗体または抗体様ドメインは、遮蔽され、その標的抗原に結合することができない。遮蔽ドメインは、プロテアーゼ感受性リンカーペプチドを介して第２の抗体または抗体様構築物に連結され、これは、主にまたは専らそこに見出されるプロテアーゼによって腫瘍または標的組織において切断される。遮蔽ドメインは、第１の抗原に結合する抗体または抗体様分子であり得る。標的組織または腫瘍微小環境における遮蔽ドメインの切断に際して、第２の抗体または抗体様分子は、その標的抗原に結合するか、またはサイトカインまたはケモカインの場合にはその受容体に結合する。腫瘍条件抗体もしくは組織条件抗体または抗体様分子またはＦｃ－融合分子は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有するＦｃ領域を含む。抗体または抗体様分子またはＦｃ融合分子は脳に投与される。

【0277】

当業者は、抗体の場合、抗体自体が既にＦｃ領域を含むことを認識する。抗体様分子の場合、抗体様分子またはＦｃ融合分子はＦｃ領域に連結される。

【0278】

処置に使用するための結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含む抗体または抗体様分子またはＦｃ融合分子のさらなる実施形態は、下記の「項目」セクションに見出すことができる。

【0279】

ＦｃＲｎに対する親和性が低下した（Ｋ_Ｄが増加した）Ｆｃ領域を含むポリペプチド
本発明の第２の態様は、ＩｇＧのＦｃ領域を含むポリペプチドを提供し、上記Ｆｃ領域は、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドの親和性と比較して、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有する。

【0280】

ある種の実施形態では、ＦｃＲｎに対する上記ポリペプチドの低下した親和性は、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付ける解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較して少なくとも２倍増加するＫ_Ｄ、および
ｂ．異なる修飾を受けたＦｃ領域、すなわち、ＩＡＱ（突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４５Ｑを有する）およびＡＡＡ（突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａを有する）から選択された１つの突然変異体を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して少なくとも１．５倍増加したＫ_Ｄ
から選択されるＫ_Ｄによって特徴付けられる。

【0281】

ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して少なくとも３倍増加する。ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して少なくとも４倍増加する。ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、非修飾Ｆｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して少なくとも５倍増加する。

【0282】

ある種の実施形態では、Ｋ_Ｄは、上記の異なる修飾を受けたＦｃ領域を含む同じポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して少なくとも２倍増加する。

【0283】

ある種の実施形態では、ポリペプチドは、
ａ．ｉ．エフェクターポリペプチドおよび
ｉｉ．上記Ｆｃ領域
を含む融合タンパク質；または
ｂ．上記Ｆｃ領域を含むかもしくはそれに連結された抗体または抗体様分子
から選択される。

【0284】

当業者は、抗体の場合、抗体自体が既にＦｃ領域を含むことを認識する。抗体様分子の場合、抗体様分子はＦｃ領域に連結される。

【0285】

ある種の実施形態では、エフェクターポリペプチドは、
ａ．サイトカインもしくはホルモンもしくは増殖因子、
ｂ．サイトカイン受容体もしくはホルモン受容体もしくは増殖因子受容体、または
ｃ．代謝産物
の機能を有し、疾患、具体的には中枢神経系に影響を及ぼす疾患に対して治療効果または予防効果を有することが公知である。

【0286】

ある種の実施形態では、エフェクターポリペプチドは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に特異的に結合することができ、疾患、具体的には中枢神経系に影響を及ぼす疾患に対して治療効果または予防効果を有することが公知である。ある種の実施形態では、エフェクターポリペプチドは、ＲＮＡに特異的に結合することができ、疾患、具体的には中枢神経系に影響を及ぼす疾患に対して治療効果または予防効果を有することが公知である。

【0287】

ある種の実施形態では、エフェクターポリペプチドは、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ－１５、ＴＮＦα、ＣＴＬＡ－４、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＧＤＮＦ、ＩＬ－３５、ＣＤ９５、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－３３、ＩＬ－２３、ＳＩＲＰα、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＧＩＴＲＬ、４－１ＢＢＬ、ＥｐｈｒｉｎＡ１、ＥｐｈｒｉｎＢ２、ＥｐｈｒｉｎＢ５、ＢＤＮＦ、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＮＲＴＮ、ＡＲＴＮ、ＰＳＰＮ、ＣＮＴＦ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ－４、ＩＬ－３、ＩＬ－１、ＩＬ－５、ＩＬ－８、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１６、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１６を含む群から選択され、具体的には上記エフェクターポリペプチドはＩＬ－１２である。

【0288】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、アゴニスト的またはアンタゴニスト的にＰＤ－Ｌ１、ＴＮＦα、Ｈｉｓｔｏｎｅ、ＩＦＮγ、ＣＸＣＬ１０、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、ＣＤ３、ＯＸ４０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＴＲＥＭ２、ＩＬ－６、ＣＸ３ＣＲ１、Ｎｏｇｏ－Ａ、ＣＤ２７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｒｂ１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１７、ＣＤ４７、ＴＧＦβ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｈｅｒ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＩＬ－４ＲＡ、ＴｆＲ、ＬｆＲ、ＩＲ、ＬＤＬ－Ｒ、ＬＲＰ－１、ＣＤ１３３、ＣＤ１１１、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ－Ａ、Ａｎｇ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１３Ｒα２、α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ、ＣＳＦ１Ｒ、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ１４７、４－１ＢＢ、ＣＣＬ２、ＩＬ－１またはＩＬ－１Ｒ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、ＬＩＮＧＯ－１、Ｌ１ＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ＳＯＤ－１、ＳＩＧＭＡＲ－１、ＳＩＧＭＡＲ－２、ＴＤＰ－４３、Ａβ、Ｔａｕ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＴＲＰＭ４、ＡＳＩＣ１、ＶＧＣＣｓ、ＣＢ_１，ＴＴＲ、ＨＴＴ、ＪＣＶ、Ｃ９ｏｒｆ７２に特異的に結合する抗体または抗体様分子から選択される。

【0289】

本発明の上記態様による抗体または抗体様分子は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の生理学的リガンドの認識部位または完全抗体に由来する抗体様分子であり得る。このような抗体または抗体様分子は、それぞれ、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２への結合について、生理学的リガンドと競合する。具体的には、非アゴニスト性ＰＤ－１抗体もしくは抗体様分子、または非アゴニスト性ＰＤ－Ｌ１抗体もしくは抗体様分子、または非アゴニスト性ＰＤ－Ｌ２抗体もしくは抗体様分子は、Ｔ細胞上の表面上のＰＤ－１に結合した場合、減弱したＴ細胞活性をもたらさない。

【0290】

いくつかの実施形態では、本発明において使用される非アゴニスト性ＰＤ－１抗体または抗体様分子は、ＰＤ－１に結合した場合、ＰＤ－１とその結合パートナーであるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２との相互作用を立体的に遮断することができる。

【0291】

いくつかの実施形態では、上記非アゴニストＰＤ－１抗体または抗体様分子は、ＰＤ－１に結合するガンマ免疫グロブリンであり、ＰＤ－１の結合パートナーであるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２とのＰＤ－１相互作用の生理学的応答を引き起こさない。

【0292】

いくつかの実施形態では、上記非アゴニストＰＤ－Ｌ１（ＰＤ－Ｌ２）抗体または抗体様分子は、ＰＤ－Ｌ１（ＰＤ－Ｌ２）に結合するガンマ免疫グロブリンであり、ＰＤ－１の結合パートナーであるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２とのＰＤ－１相互作用の生理学的応答を引き起こさない。

【0293】

ＰＤ－１抗体の非限定的な例は、臨床的に承認された抗体ペンブロリズマブ（ＣＡＳ番号１３７４８５３－９１－４）およびニボルマブ（ＣＡＳ番号９４６４１４－９４－４）である。

【0294】

ＰＤ－Ｌ１抗体の非限定的な例は、臨床的に承認された抗体アテゾリズマブ（ＣＡＳ番号１３８０７２３－４４－３）、デュルバルマブ（ＣＡＳ番号１４２８９３５－６０－７）およびアベルマブ（ＣＡＳ番号１５３７０３２－８２－８）である。

【0295】

現在臨床開発中のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２抗体の非限定的な例は、抗体ＭＤＸ－１１０５／ＢＭＳ－９３６５５９またはＡＭＰ－２２４である。ＩＬ－１２／２３に特異的に結合する抗体の非限定的な例は、ウステキヌマブ（ＣＡＳ番号８１５６１０－６３－０）である。

【0296】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体である。

【0297】

いくつかの実施形態では、本発明において使用されるアゴニスト性ＯＸ４０抗体または抗体様分子は、ＯＸ４０への結合時およびＯＸ４０リガンドの非存在下で、ＯＸ４０発現細胞においてシグナル伝達カスケードを引き起こすことができる。

【0298】

ＯＸ４０抗体の非限定的な例は、現在臨床開発中の抗体ＰＦ－０４５１８６００／ＰＦ－８６００ｍ ＢＭＳ－９８６１７８、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＯＸＲ０９１６、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９、バボリマブ／ＭＥＤＩ０５６２である。

【0299】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体である。

【0300】

いくつかの実施形態では、本発明において使用される抗体または抗体様分子は、がん細胞の食作用を妨げるＣＤ４７とＳＩＲＰαシグナルの間の相互作用を遮断することができる。

【0301】

ＣＤ４７遮断抗体またはＳＩＲＰα融合タンパク質の非限定的な例は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４、ＣＣ－９０００２／ＩＮＢＲＸ－１０３、ＩＢＩ１８８、ＯＳＥ－１７２、ＮＩ－１８０１、ＤＳＰ１０７、ＴＴＩ－６２２、ＴＴＩ－６２１、ＡＬＸ１４８およびＳＲＦ２３１である。

【0302】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、Ｎｏｇｏ－Ａに特異的に結合する抗体である。

【0303】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、２つの抗原を同時に結合することができる二重特異性構築物である。

【0304】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、三重特異性構築物である。
ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、多重特異性構築物である。

【0305】

ある種の実施形態では、抗体または抗体様分子は、ＩＬ－１２またはＩＬ－２で武装化された、腫瘍の壊死性コアに存在するヒストンに対する抗体である。ある種の場合では、武装化抗体は免疫サイトカインである。免疫サイトカインとしての武装化抗体の非限定的な例は、ＮＨＳ－ＩＬ－１２、ＮＨＳ－ＩＬ２ＬＴ、Ｈｕ１４．１８－ＩＬ２、ＨｕＫＳ－ＩＬ２、ｈｕＢＣ１－ＩＬ－１２である。

【0306】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトアミノ酸配列を含むキメラＦｃ領域である。
ある種の実施形態では、Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域である。

【0307】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、２５３位に突然変異を有する。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ａを有する。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ｎを有する。

【0308】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、４３５位に突然変異を有する。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｈ４３５Ｑを有する。

【0309】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、４３５位に突然変異を有さない。したがって、Ｆｃ領域は４３５位にＨを有する。

【0310】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、３１０位に突然変異を有さない。したがって、Ｆｃ領域は３１０位にＨを有する。

【0311】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＡＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、ならびに３１０および４３５位のＨ（ＡＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、ならびに３１０および４３５位のＨ（ＮＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＡＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＮＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＮＡＡ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＡＡＡ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む。

【0312】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む。

【0313】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位にＨを含む。

【0314】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）を含む。

【0315】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）を含む。

【0316】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）を含む。

【0317】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）を含む。

【0318】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００２（ＩＡＱ）、配列番号００３（ＡＨＱ）、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号００７（ＡＨＨ）、配列番号００８（ＮＨＨ）、配列番号００９（ＡＡＨ）、配列番号０１０（ＮＡＨ）、配列番号０１１（ＮＡＡ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）、配列番号０１３（ＡＡＡ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれらを含む。

【0319】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む。

【0320】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００４によって特徴付けられる配列（ＮＨＱ）であるかまたはそれを含む。

【0321】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号００６によって特徴付けられる配列（ＮＡＱ）であるかまたはそれを含む。

【0322】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号０１２によって特徴付けられる配列（ＮＡＥ）であるか、またはそれを含む。

【0323】

ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号０１４によって特徴付けられる配列（ＡＡＥ）であるか、またはそれを含む。

【0324】

核酸
本発明の別の態様は、本発明の上記の態様によるポリペプチドをコードする核酸を提供する。

【0325】

ウイルス
本発明の別の態様は、本発明の上記の態様による核酸を含むウイルスベクターを提供する。ウイルスベクターは、処置中の患者への適用に適した複製または非複製ウイルスであり得る。

【0326】

本発明のいずれかの態様のある種の実施形態では、本発明による修飾Ｆｃ領域を含むポリペプチドは、ＦｃＲｎ遮断抗体と組み合わせて使用される。ＦｃＲｎ遮断抗体は、Ｆｃを含むポリペプチドとＦｃＲｎの間の結合を阻害することができ、したがって、本発明の技術的効果を模倣する。ＦｃＲｎ遮断抗体との組み合わせは、本発明による修飾Ｆｃ領域を含むポリペプチドの記載された利点を増強することができる。

【0327】

本発明の任意の態様のある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ領域である。ＩｇＧはヒトの体液性免疫応答の主要なエフェクター分子である。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４と称されるヒトＩｇＧの４つの異なるサブグループがある。４つのサブクラスは、重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列において９５％を超える相同性を示すが、ヒンジ領域の構造および可撓性、特にこのドメインにおける重鎖間ジスルフィド結合の数に関しては異なる。ＩｇＧサブクラス間の構造的相違はまた、タンパク質分解酵素、具体的にはパパイン、プラスミン、トリプシンおよびペプシンに対するそれらの感受性に反映される。

【0328】

本発明のいずれかの態様のある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＦｃ領域である。ヒトＩｇＧ４のアイソフォームは１つしか知られていない。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３とは対照的に、ヒトＩｇＧ４は補体を活性化しない。さらに、ＩｇＧ４はＩｇＧ２およびＩｇＧ３と比較してタンパク質分解酵素に対する感受性が低い。これらの予想に反して、実際には、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑを有するＩｇＧ１全長抗体構築物は、対応するＩｇＧ４全長抗体構築物と比較して決定された血漿対脳比がより高い解離定数によって例示されるように、ＦｃＲｎに対するより低い親和性を特徴とすることが驚くべきことに見出された。

【0329】

同様に、本発明の範囲内には、悪性新生物性疾患、具体的には固形組織腫瘍、より具体的には神経膠腫を、それを必要とする患者において処置または予防するための使用が含まれ、上記される本発明の態様の１つに従って修飾Ｆｃ領域を含むポリペプチド、またはポリペプチドをコードする核酸、もしくはポリペプチドをコードする核酸を含むウイルスベクターを患者に投与することを含む。

【0330】

同様に、悪性新生物性疾患、具体的には固形組織腫瘍、より具体的には神経膠腫の予防または処置のための剤形が提供され、上記される本発明の態様の１つによる修飾Ｆｃ領域を含むポリペプチド、またはポリペプチドをコードする核酸、もしくはポリペプチドをコードする核酸を含むウイルスベクターを含む。

【0331】

単一の分離可能な特徴に対する選択肢が、本明細書において「実施形態」として示されるどのような場合でも、このような選択肢は、自由に組み合わされて、本明細書において開示される本発明の別個の実施形態を形成することができることが理解されるべきである。

【0332】

本発明は、以下の実施例および図面によってさらに例示され、そこからさらに別の実施形態および利点を引き出すことができる。これらの実施例は、本発明を例証することを意図しているが、その範囲を限定するものではない。

【図面の簡単な説明】

【0333】

【図1A】ヒトＩＬ－１２Ｆｃは、ＩＬ－１２よりも良好な組織保持を有する。Ａ．マウスＩＬ－１２Ｆｃの概略構造。ｒｈＩＬ－１２－組換えヒトＩＬ－１２、ｈＩＬ－１２Ｆｃ－ヒトＩＬ－１２Ｆｃ。ＩｇＧ４ Ｆｃ－ヒトＩｇＧ４の断片の結晶化可能な領域。Ｂ．実験の概略図。ＩＬ－１２ＦｃのＩＬ－１２をＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、注射されたタンパク質の残存量を脳において評価し、血清中に存在する量と比較した。Ｃ．ＥＬＩＳＡにより評価した血清対脳内ＩＬ－１２量の比。ＥＬＩＳＡは、ＩＬ－１２Ｆｃの一般的な尺度としてｈＩＬ－１２を測定した。対になっていないスチューデントｔ検定。^＊＊ｐ＜０．００５。平均値±ＳＤ。

【図1B】ヒトＩＬ－１２Ｆｃは、ＩＬ－１２よりも良好な組織保持を有する。Ａ．マウスＩＬ－１２Ｆｃの概略構造。ｒｈＩＬ－１２－組換えヒトＩＬ－１２、ｈＩＬ－１２Ｆｃ－ヒトＩＬ－１２Ｆｃ。ＩｇＧ４ Ｆｃ－ヒトＩｇＧ４の断片の結晶化可能な領域。Ｂ．実験の概略図。ＩＬ－１２ＦｃのＩＬ－１２をＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、注射されたタンパク質の残存量を脳において評価し、血清中に存在する量と比較した。Ｃ．ＥＬＩＳＡにより評価した血清対脳内ＩＬ－１２量の比。ＥＬＩＳＡは、ＩＬ－１２Ｆｃの一般的な尺度としてｈＩＬ－１２を測定した。対になっていないスチューデントｔ検定。^＊＊ｐ＜０．００５。平均値±ＳＤ。

【図1C】ヒトＩＬ－１２Ｆｃは、ＩＬ－１２よりも良好な組織保持を有する。Ａ．マウスＩＬ－１２Ｆｃの概略構造。ｒｈＩＬ－１２－組換えヒトＩＬ－１２、ｈＩＬ－１２Ｆｃ－ヒトＩＬ－１２Ｆｃ。ＩｇＧ４ Ｆｃ－ヒトＩｇＧ４の断片の結晶化可能な領域。Ｂ．実験の概略図。ＩＬ－１２ＦｃのＩＬ－１２をＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、注射されたタンパク質の残存量を脳において評価し、血清中に存在する量と比較した。Ｃ．ＥＬＩＳＡにより評価した血清対脳内ＩＬ－１２量の比。ＥＬＩＳＡは、ＩＬ－１２Ｆｃの一般的な尺度としてｈＩＬ－１２を測定した。対になっていないスチューデントｔ検定。^＊＊ｐ＜０．００５。平均値±ＳＤ。

【図2A】ＩＬ－１２Ｆｃは、ＦｃＲｎを介して脳から放出されている。Ａ．脳腫瘍を有するｗｔおよびＦｃＲｎ^ｔｇマウスに、１２．５μｇ／ｋｇ／日のマウスＩＬ－１２Ｆｃを腫瘍病変に直接送達する浸透圧ポンプを移植した。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定したマウスＩＬ－１２レベル。ｗｔ ｍＩＬ－１２Ｆｃ対ＦｃＲｎ^ｔｇ ｍＩＬ－１２Ｆｃ群の対になっていないスチューデントｔ検定。平均値±ＳＤ。一方向ＡＮＯＶＡとＴｕｋｅｙの多重比較検定。Ｂ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中に存在するＩＬ－１２の量。平均値±ＳＤ。Ｃ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中のＩＦＮγのレベル。平均値±ＳＤ。Ｄ．７日目のＩＦＮ－γレベル、実験Ａ、平均値±ＳＤ。

【図2B】ＩＬ－１２Ｆｃは、ＦｃＲｎを介して脳から放出されている。Ａ．脳腫瘍を有するｗｔおよびＦｃＲｎ^ｔｇマウスに、１２．５μｇ／ｋｇ／日のマウスＩＬ－１２Ｆｃを腫瘍病変に直接送達する浸透圧ポンプを移植した。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定したマウスＩＬ－１２レベル。ｗｔ ｍＩＬ－１２Ｆｃ対ＦｃＲｎ^ｔｇ ｍＩＬ－１２Ｆｃ群の対になっていないスチューデントｔ検定。平均値±ＳＤ。一方向ＡＮＯＶＡとＴｕｋｅｙの多重比較検定。Ｂ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中に存在するＩＬ－１２の量。平均値±ＳＤ。Ｃ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中のＩＦＮγのレベル。平均値±ＳＤ。Ｄ．７日目のＩＦＮ－γレベル、実験Ａ、平均値±ＳＤ。

【図2C】ＩＬ－１２Ｆｃは、ＦｃＲｎを介して脳から放出されている。Ａ．脳腫瘍を有するｗｔおよびＦｃＲｎ^ｔｇマウスに、１２．５μｇ／ｋｇ／日のマウスＩＬ－１２Ｆｃを腫瘍病変に直接送達する浸透圧ポンプを移植した。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定したマウスＩＬ－１２レベル。ｗｔ ｍＩＬ－１２Ｆｃ対ＦｃＲｎ^ｔｇ ｍＩＬ－１２Ｆｃ群の対になっていないスチューデントｔ検定。平均値±ＳＤ。一方向ＡＮＯＶＡとＴｕｋｅｙの多重比較検定。Ｂ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中に存在するＩＬ－１２の量。平均値±ＳＤ。Ｃ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中のＩＦＮγのレベル。平均値±ＳＤ。Ｄ．７日目のＩＦＮ－γレベル、実験Ａ、平均値±ＳＤ。

【図2D】ＩＬ－１２Ｆｃは、ＦｃＲｎを介して脳から放出されている。Ａ．脳腫瘍を有するｗｔおよびＦｃＲｎ^ｔｇマウスに、１２．５μｇ／ｋｇ／日のマウスＩＬ－１２Ｆｃを腫瘍病変に直接送達する浸透圧ポンプを移植した。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定したマウスＩＬ－１２レベル。ｗｔ ｍＩＬ－１２Ｆｃ対ＦｃＲｎ^ｔｇ ｍＩＬ－１２Ｆｃ群の対になっていないスチューデントｔ検定。平均値±ＳＤ。一方向ＡＮＯＶＡとＴｕｋｅｙの多重比較検定。Ｂ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中に存在するＩＬ－１２の量。平均値±ＳＤ。Ｃ．図２Ａのように処理したマウス。ビーズベースのアレイを用いて血清中で測定した場合、処置開始の２４時間後の循環中のＩＦＮγのレベル。平均値±ＳＤ。Ｄ．７日目のＩＦＮ－γレベル、実験Ａ、平均値±ＳＤ。

【図3A】熱シフトアッセイを用いて測定したタンパク質の安定性。タンパク質をＰＢＳ（Ａ）または人工脳脊髄液（ａＣＳＦ、Ｂ）中でインキュベートした。ＩＬ－１２Ｆｃバリアントあたり５回の測定。Ｗｈｉｓｋｅｒは、最小および最大スプレッドを表す。

【図3B】熱シフトアッセイを用いて測定したタンパク質の安定性。タンパク質をＰＢＳ（Ａ）または人工脳脊髄液（ａＣＳＦ、Ｂ）中でインキュベートした。ＩＬ－１２Ｆｃバリアントあたり５回の測定。Ｗｈｉｓｋｅｒは、最小および最大スプレッドを表す。

【図4A】ＩＬ－１２ＦｃのＦｃ断片における突然変異は、ＩＬ－１２の生物学的活性に影響を及ぼさない。Ａ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したＩＬ－１２の生物活性。ＥＣ５０－濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍｌの範囲でＩＬ－１２Ｆｃで刺激されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２レポーター細胞からの最大シグナルの５０％をもたらす有効濃度。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定した。各点は、独立した実験の結果を示す。平均値±ＳＤ。Ｂ．１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３、および１０ｎｇ／ｍｌの組換えＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＦｃＲｎ親和性を低下させるように設計された３種のバリアントで１時間刺激された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＳＴＡＴ－４のリン酸化。平均値±ＳＤ。Ｃ．１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３、および指示された濃度の組換えＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＦｃＲｎ親和性を低下させるように設計された３種のバリアントで２４時間刺激されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生。

【図4B】ＩＬ－１２ＦｃのＦｃ断片における突然変異は、ＩＬ－１２の生物学的活性に影響を及ぼさない。Ａ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したＩＬ－１２の生物活性。ＥＣ５０－濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍｌの範囲でＩＬ－１２Ｆｃで刺激されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２レポーター細胞からの最大シグナルの５０％をもたらす有効濃度。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定した。各点は、独立した実験の結果を示す。平均値±ＳＤ。Ｂ．１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３、および１０ｎｇ／ｍｌの組換えＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＦｃＲｎ親和性を低下させるように設計された３種のバリアントで１時間刺激された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＳＴＡＴ－４のリン酸化。平均値±ＳＤ。Ｃ．１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３、および指示された濃度の組換えＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＦｃＲｎ親和性を低下させるように設計された３種のバリアントで２４時間刺激されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生。

【図4C】ＩＬ－１２ＦｃのＦｃ断片における突然変異は、ＩＬ－１２の生物学的活性に影響を及ぼさない。Ａ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したＩＬ－１２の生物活性。ＥＣ５０－濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍｌの範囲でＩＬ－１２Ｆｃで刺激されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２レポーター細胞からの最大シグナルの５０％をもたらす有効濃度。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定した。各点は、独立した実験の結果を示す。平均値±ＳＤ。Ｂ．１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３、および１０ｎｇ／ｍｌの組換えＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＦｃＲｎ親和性を低下させるように設計された３種のバリアントで１時間刺激された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＳＴＡＴ－４のリン酸化。平均値±ＳＤ。Ｃ．１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３、および指示された濃度の組換えＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＦｃＲｎ親和性を低下させるように設計された３種のバリアントで２４時間刺激されたＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生。

【図5A】ヒトＩＬ－１２Ｆｃバリアントは、ＦｃＲｎ親和性が低下している。Ａ．表面に固定化したヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩＬ－１２ＦｃバリアントとのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴに正規化したデータ。Ｂ．ヒトＦｃＲｎに結合するＩＬ－１２Ｆｃバリアント。ｐＨ＝６．０でＥＬＩＳＡにより測定した。平均値±ＳＤ。

【図5B】ヒトＩＬ－１２Ｆｃバリアントは、ＦｃＲｎ親和性が低下している。Ａ．表面に固定化したヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩＬ－１２ＦｃバリアントとのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴに正規化したデータ。Ｂ．ヒトＦｃＲｎに結合するＩＬ－１２Ｆｃバリアント。ｐＨ＝６．０でＥＬＩＳＡにより測定した。平均値±ＳＤ。

【図6A】血中および注射された半球中のＩＬ－１２Ｆｃ濃度比。Ａ．１μｇのＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＮＨＱバリアントをＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＩＬ－１２の量を注射された脳半球および血清中でＥＬＩＳＡにより評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群のそれらに正規化した。各群４匹。対になっていないスチューデントｔ検定。^＊ｐ＜０．０５。平均値±ＳＤ。Ｂ．対流増強送達（ＣＥＤ）を用いて、１μｇのＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱをＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＩＬ－１２の量をＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中で評価し、それらの比率を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群のそれらに正規化した。各群７～８匹のマウス。Ｔｕｋｅｙ多重比較検定を用いた一方向ＡＮＯＶＡ。平均値±ＳＤ。

【図6B】血中および注射された半球中のＩＬ－１２Ｆｃ濃度比。Ａ．１μｇのＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＮＨＱバリアントをＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＩＬ－１２の量を注射された脳半球および血清中でＥＬＩＳＡにより評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群のそれらに正規化した。各群４匹。対になっていないスチューデントｔ検定。^＊ｐ＜０．０５。平均値±ＳＤ。Ｂ．対流増強送達（ＣＥＤ）を用いて、１μｇのＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱをＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＩＬ－１２の量をＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中で評価し、それらの比率を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群のそれらに正規化した。各群７～８匹のマウス。Ｔｕｋｅｙ多重比較検定を用いた一方向ＡＮＯＶＡ。平均値±ＳＤ。

【図7】ＩＬ－１２Ｆｃバリアントによる局所処置後の脳保持。ＦｃＲｎ^ｔｇマウスに１μｇのＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱを対流増強送達（ＣＥＤ）を用いて線条体に注射した。脳組織中に残存するＩＬ－１２Ｆｃの量をＥＬＩＳＡにより注射の６時間後に測定し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴに正規化した。Ｔｕｋｅｙ多重比較検定を用いた一方向ＡＮＯＶＡ。異常除去。平均値±ＳＤ。

【図8A】Ａ．天然ならびにｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ｗｔ、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ＮＨＱおよびｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ１：抗ｈＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱの概略構造。Ｂ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したマウスＩＬ－１２構築物の生物活性。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）レポーター細胞は、５～８の希釈段階を用いて、濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍＬの範囲のＩＬ－１２またはＩＬ－１２Ｆｃバリアントで刺激された。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定する。Ｘ軸値：対応するＩＬ－１２分子量としてｐｍｏｌ／ｍｌでプロットした濃度。２つの個別実験の代表。Ｃ．完全な抗ＰＤ－Ｌ１（アテゾリズマブ）抗体と比較した細胞上のＰＤ－Ｌ１への結合。ＧＬ－２６１：ｌｕｃまたはＰＤ－Ｌ１欠損ＧＬ－２６１：ｌｕｃ（ＰＤ－Ｌ１ ＫＯ）細胞を、マウスインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）で刺激して、ＰＤ－Ｌ１発現を刺激し、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはｈ／ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱバリアントで染色した。抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ二次抗体を用いた細胞結合抗体の検出。Ｄ．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）で測定した場合のＷＴと比較したＮＨＱバリアントのＦｃＲｎに対する親和性。表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎおよび液相中のＰＤ－Ｌ１結合剤。ｐＨ＝６で測定した親和性。ｎＭの親和性定数Ｋ_Ｄ。

【図8B】Ａ．天然ならびにｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ｗｔ、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ＮＨＱおよびｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ１：抗ｈＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱの概略構造。Ｂ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したマウスＩＬ－１２構築物の生物活性。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）レポーター細胞は、５～８の希釈段階を用いて、濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍＬの範囲のＩＬ－１２またはＩＬ－１２Ｆｃバリアントで刺激された。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定する。Ｘ軸値：対応するＩＬ－１２分子量としてｐｍｏｌ／ｍｌでプロットした濃度。２つの個別実験の代表。Ｃ．完全な抗ＰＤ－Ｌ１（アテゾリズマブ）抗体と比較した細胞上のＰＤ－Ｌ１への結合。ＧＬ－２６１：ｌｕｃまたはＰＤ－Ｌ１欠損ＧＬ－２６１：ｌｕｃ（ＰＤ－Ｌ１ ＫＯ）細胞を、マウスインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）で刺激して、ＰＤ－Ｌ１発現を刺激し、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはｈ／ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱバリアントで染色した。抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ二次抗体を用いた細胞結合抗体の検出。Ｄ．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）で測定した場合のＷＴと比較したＮＨＱバリアントのＦｃＲｎに対する親和性。表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎおよび液相中のＰＤ－Ｌ１結合剤。ｐＨ＝６で測定した親和性。ｎＭの親和性定数Ｋ_Ｄ。

【図8C】Ａ．天然ならびにｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ｗｔ、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ＮＨＱおよびｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ１：抗ｈＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱの概略構造。Ｂ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したマウスＩＬ－１２構築物の生物活性。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）レポーター細胞は、５～８の希釈段階を用いて、濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍＬの範囲のＩＬ－１２またはＩＬ－１２Ｆｃバリアントで刺激された。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定する。Ｘ軸値：対応するＩＬ－１２分子量としてｐｍｏｌ／ｍｌでプロットした濃度。２つの個別実験の代表。Ｃ．完全な抗ＰＤ－Ｌ１（アテゾリズマブ）抗体と比較した細胞上のＰＤ－Ｌ１への結合。ＧＬ－２６１：ｌｕｃまたはＰＤ－Ｌ１欠損ＧＬ－２６１：ｌｕｃ（ＰＤ－Ｌ１ ＫＯ）細胞を、マウスインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）で刺激して、ＰＤ－Ｌ１発現を刺激し、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはｈ／ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱバリアントで染色した。抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ二次抗体を用いた細胞結合抗体の検出。Ｄ．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）で測定した場合のＷＴと比較したＮＨＱバリアントのＦｃＲｎに対する親和性。表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎおよび液相中のＰＤ－Ｌ１結合剤。ｐＨ＝６で測定した親和性。ｎＭの親和性定数Ｋ_Ｄ。

【図8D】Ａ．天然ならびにｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ｗｔ、ｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ４ ＮＨＱおよびｍＩＬ－１２ｈＩｇＧ１：抗ｈＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱの概略構造。Ｂ．ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１２アッセイを用いて測定したマウスＩＬ－１２構築物の生物活性。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）レポーター細胞は、５～８の希釈段階を用いて、濃度あたり２回反復して、０～５０ｎｇ／ｍＬの範囲のＩＬ－１２またはＩＬ－１２Ｆｃバリアントで刺激された。比色法を用いて、分泌されたアルカリホスファターゼの活性を用いて測定する。Ｘ軸値：対応するＩＬ－１２分子量としてｐｍｏｌ／ｍｌでプロットした濃度。２つの個別実験の代表。Ｃ．完全な抗ＰＤ－Ｌ１（アテゾリズマブ）抗体と比較した細胞上のＰＤ－Ｌ１への結合。ＧＬ－２６１：ｌｕｃまたはＰＤ－Ｌ１欠損ＧＬ－２６１：ｌｕｃ（ＰＤ－Ｌ１ ＫＯ）細胞を、マウスインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）で刺激して、ＰＤ－Ｌ１発現を刺激し、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはｈ／ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱバリアントで染色した。抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ二次抗体を用いた細胞結合抗体の検出。Ｄ．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）で測定した場合のＷＴと比較したＮＨＱバリアントのＦｃＲｎに対する親和性。表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎおよび液相中のＰＤ－Ｌ１結合剤。ｐＨ＝６で測定した親和性。ｎＭの親和性定数Ｋ_Ｄ。

【図9A】脳がんの局所処置のための最適化されたＩＬ－１２ Ｆｃ融合体は、治療効果に影響を及ぼすことなく全身曝露の低下をもたらす。 Ａ．腫瘍注射後の日数での実験スケジュール。ＧＬ－２６１：ｌｕｃ脳腫瘍を有する動物は、２０日目に生物発光イメージング（ＢＬＩ）を介して同等の腫瘍負荷の処置群に系統的に割り当てられ、対流増強送達（ＣＥＤ）を介して、緩衝液のみ（対照）または１μｇのｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：抗ＰＤ－Ｌ１二官能性分子、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで、腫瘍移植後２１日目および２８日目に処置された。ＣＥＤ注射の０、６、２４、７２時間後、７日後、ならびに２回目のＣＥＤ注射の１４日後の時間点での血漿のための採血。 Ｂ．生物発光イメージングによりモニターされた処置時の腫瘍進行。処置コホートによりグループ化された個々の動物の目的とする領域（ＲＯＩ）からのプロットされた平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ^２／ｓｒ）。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｃ．処置に応答にしたＩＬ－１２（黒線、左Ｙ軸）およびＩＦＮγ（灰色線、右Ｙ軸）の血漿レベル。ビーズベースのサイトカインアレイにより所定の時間点で測定する。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｄ．２１日目のＣＥＤの６時間後の血漿ＩＬ－１２レベルのＦｃＲｎ親和性依存性差。ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで注射されたマウス。Ａ～Ｃに示された実験からのデータ。 Ｅ．Ａ－Ｄからの処置されたマウスの生存のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｙｅｒ分析。各群６～７匹のマウス。

【図9B】脳がんの局所処置のための最適化されたＩＬ－１２ Ｆｃ融合体は、治療効果に影響を及ぼすことなく全身曝露の低下をもたらす。 Ａ．腫瘍注射後の日数での実験スケジュール。ＧＬ－２６１：ｌｕｃ脳腫瘍を有する動物は、２０日目に生物発光イメージング（ＢＬＩ）を介して同等の腫瘍負荷の処置群に系統的に割り当てられ、対流増強送達（ＣＥＤ）を介して、緩衝液のみ（対照）または１μｇのｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：抗ＰＤ－Ｌ１二官能性分子、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで、腫瘍移植後２１日目および２８日目に処置された。ＣＥＤ注射の０、６、２４、７２時間後、７日後、ならびに２回目のＣＥＤ注射の１４日後の時間点での血漿のための採血。 Ｂ．生物発光イメージングによりモニターされた処置時の腫瘍進行。処置コホートによりグループ化された個々の動物の目的とする領域（ＲＯＩ）からのプロットされた平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ^２／ｓｒ）。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｃ．処置に応答にしたＩＬ－１２（黒線、左Ｙ軸）およびＩＦＮγ（灰色線、右Ｙ軸）の血漿レベル。ビーズベースのサイトカインアレイにより所定の時間点で測定する。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｄ．２１日目のＣＥＤの６時間後の血漿ＩＬ－１２レベルのＦｃＲｎ親和性依存性差。ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで注射されたマウス。Ａ～Ｃに示された実験からのデータ。 Ｅ．Ａ－Ｄからの処置されたマウスの生存のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｙｅｒ分析。各群６～７匹のマウス。

【図9C】脳がんの局所処置のための最適化されたＩＬ－１２ Ｆｃ融合体は、治療効果に影響を及ぼすことなく全身曝露の低下をもたらす。 Ａ．腫瘍注射後の日数での実験スケジュール。ＧＬ－２６１：ｌｕｃ脳腫瘍を有する動物は、２０日目に生物発光イメージング（ＢＬＩ）を介して同等の腫瘍負荷の処置群に系統的に割り当てられ、対流増強送達（ＣＥＤ）を介して、緩衝液のみ（対照）または１μｇのｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：抗ＰＤ－Ｌ１二官能性分子、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで、腫瘍移植後２１日目および２８日目に処置された。ＣＥＤ注射の０、６、２４、７２時間後、７日後、ならびに２回目のＣＥＤ注射の１４日後の時間点での血漿のための採血。 Ｂ．生物発光イメージングによりモニターされた処置時の腫瘍進行。処置コホートによりグループ化された個々の動物の目的とする領域（ＲＯＩ）からのプロットされた平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ^２／ｓｒ）。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｃ．処置に応答にしたＩＬ－１２（黒線、左Ｙ軸）およびＩＦＮγ（灰色線、右Ｙ軸）の血漿レベル。ビーズベースのサイトカインアレイにより所定の時間点で測定する。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｄ．２１日目のＣＥＤの６時間後の血漿ＩＬ－１２レベルのＦｃＲｎ親和性依存性差。ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで注射されたマウス。Ａ～Ｃに示された実験からのデータ。 Ｅ．Ａ－Ｄからの処置されたマウスの生存のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｙｅｒ分析。各群６～７匹のマウス。

【図9D】脳がんの局所処置のための最適化されたＩＬ－１２ Ｆｃ融合体は、治療効果に影響を及ぼすことなく全身曝露の低下をもたらす。 Ａ．腫瘍注射後の日数での実験スケジュール。ＧＬ－２６１：ｌｕｃ脳腫瘍を有する動物は、２０日目に生物発光イメージング（ＢＬＩ）を介して同等の腫瘍負荷の処置群に系統的に割り当てられ、対流増強送達（ＣＥＤ）を介して、緩衝液のみ（対照）または１μｇのｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：抗ＰＤ－Ｌ１二官能性分子、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで、腫瘍移植後２１日目および２８日目に処置された。ＣＥＤ注射の０、６、２４、７２時間後、７日後、ならびに２回目のＣＥＤ注射の１４日後の時間点での血漿のための採血。 Ｂ．生物発光イメージングによりモニターされた処置時の腫瘍進行。処置コホートによりグループ化された個々の動物の目的とする領域（ＲＯＩ）からのプロットされた平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ^２／ｓｒ）。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｃ．処置に応答にしたＩＬ－１２（黒線、左Ｙ軸）およびＩＦＮγ（灰色線、右Ｙ軸）の血漿レベル。ビーズベースのサイトカインアレイにより所定の時間点で測定する。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｄ．２１日目のＣＥＤの６時間後の血漿ＩＬ－１２レベルのＦｃＲｎ親和性依存性差。ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで注射されたマウス。Ａ～Ｃに示された実験からのデータ。 Ｅ．Ａ－Ｄからの処置されたマウスの生存のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｙｅｒ分析。各群６～７匹のマウス。

【図9E】脳がんの局所処置のための最適化されたＩＬ－１２ Ｆｃ融合体は、治療効果に影響を及ぼすことなく全身曝露の低下をもたらす。 Ａ．腫瘍注射後の日数での実験スケジュール。ＧＬ－２６１：ｌｕｃ脳腫瘍を有する動物は、２０日目に生物発光イメージング（ＢＬＩ）を介して同等の腫瘍負荷の処置群に系統的に割り当てられ、対流増強送達（ＣＥＤ）を介して、緩衝液のみ（対照）または１μｇのｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：抗ＰＤ－Ｌ１二官能性分子、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで、腫瘍移植後２１日目および２８日目に処置された。ＣＥＤ注射の０、６、２４、７２時間後、７日後、ならびに２回目のＣＥＤ注射の１４日後の時間点での血漿のための採血。 Ｂ．生物発光イメージングによりモニターされた処置時の腫瘍進行。処置コホートによりグループ化された個々の動物の目的とする領域（ＲＯＩ）からのプロットされた平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ^２／ｓｒ）。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｃ．処置に応答にしたＩＬ－１２（黒線、左Ｙ軸）およびＩＦＮγ（灰色線、右Ｙ軸）の血漿レベル。ビーズベースのサイトカインアレイにより所定の時間点で測定する。ＣＥＤによる処理を縦の点線で示す。 Ｄ．２１日目のＣＥＤの６時間後の血漿ＩＬ－１２レベルのＦｃＲｎ親和性依存性差。ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱで注射されたマウス。Ａ～Ｃに示された実験からのデータ。 Ｅ．Ａ－Ｄからの処置されたマウスの生存のＫａｐｌａｎ－Ｍｅｙｅｒ分析。各群６～７匹のマウス。

【図10A】抗体 Ａ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ１バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ１抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する３つの追加のＩｇＧ１臨床グレード抗体（ＩｇＧ１＿０１イピリムマブ、ＩｇＧ１＿０２アテゾリズマブ、ＩｇＧ１＿０３リツキシマブ）を追加の参照として使用した。平均値±ＳＤ。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｂ．１μｇのＩｇＧ１ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。 Ｃ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ４バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｄ．１μｇのＩｇＧ４ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。

【図10B】抗体 Ａ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ１バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ１抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する３つの追加のＩｇＧ１臨床グレード抗体（ＩｇＧ１＿０１イピリムマブ、ＩｇＧ１＿０２アテゾリズマブ、ＩｇＧ１＿０３リツキシマブ）を追加の参照として使用した。平均値±ＳＤ。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｂ．１μｇのＩｇＧ１ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。 Ｃ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ４バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｄ．１μｇのＩｇＧ４ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。

【図10C】抗体 Ａ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ１バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ１抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する３つの追加のＩｇＧ１臨床グレード抗体（ＩｇＧ１＿０１イピリムマブ、ＩｇＧ１＿０２アテゾリズマブ、ＩｇＧ１＿０３リツキシマブ）を追加の参照として使用した。平均値±ＳＤ。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｂ．１μｇのＩｇＧ１ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。 Ｃ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ４バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｄ．１μｇのＩｇＧ４ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。

【図10D】抗体 Ａ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ１バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ１抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する３つの追加のＩｇＧ１臨床グレード抗体（ＩｇＧ１＿０１イピリムマブ、ＩｇＧ１＿０２アテゾリズマブ、ＩｇＧ１＿０３リツキシマブ）を追加の参照として使用した。平均値±ＳＤ。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｂ．１μｇのＩｇＧ１ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。 Ｃ．表面に固定化されたヒト組換えＦｃＲｎと液相中のＩｇＧ４バリアントのＦｃＲｎ親和性の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定。ｐＨ＝６．０で測定した親和性。非修飾Ｆｃ（ＷＴ）でＩｇＧ４抗体に正規化されたデータ。非修飾Ｆｃ部分を有する第２のＩｇＧ４抗体（ニボルマブ）を追加の参照（ＩｇＧ４）として使用した。平均値±ＳＤ。 Ｄ．１μｇのＩｇＧ４ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡまたはＮＨＱバリアントを、対流増強送達（ＣＥＤ）を用いてＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体に注射した。２４時間後、ＥＬＩＳＡにより、注射された脳半球および血漿中のヒトＩｇＧ量を評価し、それらの比を計算し、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ群の比に正規化した。各群５匹のマウス。平均値±ＳＤ。

【発明を実施するための形態】

【0334】

実施例１：材料および方法
動物
Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから得た。ｍＦｃＲｎ^－／－ｈＦｃＲｎ^{ｔｇ（３２）}（ＦｃＲｎ^ｔｇ）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（在庫番号０１４５６５）から入手した。すべての動物は、施設のガイドラインに従って、特定の病原体を含まない（ＳＰＨ）条件下で、食物および水を自由に与えて、１２時間の明／暗サイクルで飼育した。すべての動物実験は、施設のガイドラインに従って実施され、スイスの州獣医局（免許番号２４６／２０１５）により承認された。

【0335】

腫瘍細胞株
ＧＬ－２６１細胞は、スイスのチューリッヒにあるチューリッヒ大学の実験メイン疫学のＡ．Ｆｏｎｔａｎａにより提供され、１０％熱不活化ウシ胎児血清およびＬ－グルタミンを補充したＤＭＥＭ中で培養された（すべてＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃのものである）。マウスＧＬ－２６１脳腫瘍細胞株（Ｃ５７ＢＬ／６と同系）をｐＧｌ３－ｃｔｒｌおよびｐＧＫＰｕｒｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で安定にトランスフェクトし、ピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で選択して、ルシフェラーゼ安定性ＧＬ－２６１細胞を作製した。ＧＬ－２６１：ｌｕｃ ＰＤ－Ｌ１ ＫＯ腫瘍細胞を生成するために、細胞を以下のｓｇＲＮＡ、５’－ＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＡＡＣＧＴＣＡＣＧＡ－３’を発現するように修飾された連鎖球菌Ｃａｓ９ Ｐ２Ａ ＧＦＰ－単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）発現ベクター（ｐＸ４５８；Ａｄｄｇｅｎｅ）を用いて一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションの３日後、ＧＦＰ陽性、ＰＤ－Ｌ１ ＫＯ細胞を４８時間のＩＦＮ－γ刺激（１０ｎｇ／ｍｌ）後にＰＤ－Ｌ１陰性細胞をゲートすることによってフローサイトメトリーにより精製した。単一クローンをさらに増幅し、実験に使用する前にフローサイトメトリーによりＰＤ－Ｌ１発現の消失を再確認した。

【0336】

外科的処置
神経膠腫接種のために、６～１０週齢のマウスをフェンタニル（Ｈｅｌｖｅｐｈａｒｍ ＡＧ）、ミダゾラム（Ｒｏｃｈｅ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ）およびメデトミジン（Ｏｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ）の混合物を用いて麻酔した。ＧＬ２６１細胞を、定位固定ロボット（Ｎｅｕｒｏｓｔａｒ）を用いて、右半球に頭蓋内（ｉ．ｃ．）に注射した。簡単に説明すると、平滑末端シリンジ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ；７５Ｎ、２６ｓ／２’’／２．５μｌ）をブレグマの外側１．５ｍｍおよび前頭１ｍｍに配置した。針を硬膜表面の下４ｍｍの深さまで穿頭孔に下ろし、１ｍｍ引き込んで小さなリザーバーを形成した。注射は１μｌ／分で２μｌの体積で行った。針を所定の位置に２分間放置した後、１ｍｍ／分で引き戻した。穿頭孔を骨ワックス（Ａｅｓｃｕｌａｐ、Ｂｒａｕｎ）で閉じ、頭皮創傷を組織接着剤（Ｉｎｄｅｒｍｉｌ、Ｈｅｎｋｅｌ）でシールした。フルマゼニル（Ｌａｂａｔｅｃ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ）とブプレノルフィン（Ｉｎｄｉｖｉｏｒ Ｓｃｈｗｅｉｚ ＡＧ）の混合物を用いて麻酔を中断し、２０分後にアチパメゾールを注射した（Ｊａｎｓｓｅｎ）。周術期鎮痛にはＣａｒｐｒｏｆｅｎ（Ｐｆｉｚｅｒ ＡＧ）を使用した。

【0337】

７～１４日後、浸透圧ポンプ（モデル２００４、０．２５μｌ／時；Ａｌｚｅｔ）をマウスＩＬ－１２Ｆｃ（１２．５μｇ／ｋｇ／２４時間）またはＰＢＳ単独で充填し、ＰＢＳ中３７℃でプライムした。マウスを上記のように麻酔し、神経膠腫注射の前回の穿頭孔を位置させ、骨ワックスおよび骨膜骨を除去し、注入カニューレを、腫瘍の推定中心に３ｍｍの穿頭孔を通して下降させた。Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒチューブを使用し、製造業者（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）の指示に従って、ポンプ移植の－１日目から開始して、尾静脈から血液サンプリングにより２日ごとに血清試料を採取した。

【0338】

ボーラス注射後のＩＬ－１２およびＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ血清対脳内濃度比の比較のために、マウスを麻酔し、腫瘍細胞注射のために上述したように定位固定ロボット（Ｎｅｕｒｏｓｔａｒ）を用いて右半球に頭蓋内注射した。マウスは、１００ｎｇの組換えヒトＩＬ－１２（Ｐｒｏｓｐｅｃ）または同量のＩＬ－１２Ｆｃ（６９ｎｇ／マウス）を受けた。投与量は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２生物活性アッセイに基づいて算出した。２４時間後に、コントロールされたＣＯ_２窒息により動物を屠殺した。血液試料を心臓穿刺によって採取し、マウスを２０ｍｌの氷冷ＰＢＳで潅流した。血清を上記のように単離し、脳組織を液体窒素中でスナップ凍結した。

【0339】

ボーラス注射後のＩＬ－１２ ＷＴおよびＩＬ－１２Ｆｃ ＮＨＱ血清対脳内濃度比の比較のために、マウスを麻酔し、腫瘍細胞注射のために上記したように定位固定ロボット（Ｎｅｕｒｏｓｔａｒ）を用いて右半球内に頭蓋内注射した。マウスは、１μｇのヒトＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＩＬ－１２Ｆｃ ＮＨＱを受けた。２４時間後に、コントロールされたＣＯ_２窒息により動物を屠殺した。血液試料を心臓穿刺によって採取し、マウスを２０ｍｌの氷冷ＰＢＳで潅流した。血清を上記のように単離し、脳組織を液体窒素中でスナップ凍結した。

【0340】

脳内へのタンパク質の対流増強送達（ＣＥＤ）のために、マウスを麻酔し、定位固定ロボット（Ｎｅｕｒｏｓｔａｒ）を用いて右半球内に頭蓋内注射し、内径０．１ｍｍおよび壁厚０．０３２５ｍｍの溶融シリカで作製した先端に１ｍｍステップの２７Ｇ平滑末端針を用いて作製したカテーテルを使用した。簡単に説明すると、ブレグマの前後１ｍｍおよび内外側２ｍｍの位置に穿頭孔を作製した。カテーテルを硬膜表面下３．５ｍｍの深さまで穿頭孔に下降させた。注射は、０．２μｌ／分で５μｌの体積で、次に０．５μｌ／分で２μｌ、および０．８μｌ／分で２μｌで行った。針を所定の位置に２分間放置した後、１ｍｍ／分で引き戻した。マウスに１μｇの組換えヒトＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、ＩＬ－１２Ｆｃ ＩＡＱ、ＩＬ－１２Ｆｃ ＡＡＡ、ＩＬ－１２Ｆｃ ＮＨＱもしくはｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴ、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＨＮＱ、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱ、Ｆｌｕ ＨＡ３．１ ＷＴ、Ｆｌｕ ＨＡ３．１ ＩＡＱ、Ｆｌｕ ＨＡ３．１ ＡＡＡ、Ｆｌｕ ＨＡ３．１ ＮＨＱもしくはアテゾリズマブＷＴ、アテゾリズマブＩＡＱ、アテゾリズマブＡＡＡ、またはアテゾリズマブＮＨＱを受けた。６時間後、コントロールされたＣＯ_２窒息により動物を屠殺した。同側脳半球を液体窒素中でスナップ凍結した。

【0341】

インビボ生物発光イメージング
腫瘍を有するマウスにｄ－ルシフェリン（１５０ｍｇ／ｋｇ体重；ＸｅｎｏＬｉｇｈｔ ｄ－ルシフェリンカリウム塩；ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ ７９０３－１Ｇ；ＰＢＳ中１５ｍｇ／ｍＬ）を注射した。動物をＸｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）イメージングシステムの暗室に移し、１～２分間、培地ビニングで発光を記録した（４）。その後、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．７．１ソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いてデータを分析した。腫瘍部位の周囲に円形の目的とする領域（ＲＯＩ；直径１．５ｃｍ）を画定し、この領域の光子束を読み出し、プロットした。

【0342】

ＢＬＩおよび系統的なグループ配分
ＧＬ－２６１ｌｕｃ神経膠腫細胞の移植から２０日後に、腫瘍を有する動物を同等の平均ＢＬＩの実験群に分布させた。

【0343】

採血
血液試料は、ＣＥＤの１０分前、またはＣＥＤ注射の６時間、２４時間、７２時間、７日後に採取した。２０～５０μＬの血液を尾静脈から、乾燥したＫ２－ＥＤＴＡ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を含有するマイクロタイナー中に採取した。５分間、１０’０００ｇで遠心分離した後、血漿を新鮮なチューブに移し、凍結した。

【0344】

ＦｃＲｎＥＬＩＳＡ
ＩＬ－１２Ｆｃバリアント、または対照として機能する組換えヒトＩｇＧ４抗ＧＦＰ抗体（クローン５１５、ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）をマイクロウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）上に被覆した。ヒスチジン結合ＦｃＲｎ（Ｒ＆Ｄシステム）を、ｐＨ＝６．０のＥＬＩＳＡ希釈剤（Ｍａｂｔｅｃｈ）中の濃度を増加させてインキュベートした。ＦｃＲｎは、ビオチン化抗Ｈｉｓ抗体（クローン１３／４５／３１－２、Ｄｉａｎｏｖａ）、ストレプトアビジン結合西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｍａｂｔｅｃｈ）および比色基質（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ－ＴＭＢ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出された。波長４５０ｎｍにおける光密度を分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて測定した。

【0345】

ビーズベースのサイトカインアレイ
ｍＩＬ－１２およびｍＩＦＮγの血清レベルは、製造業者の指示に従い、Ｌｅｇｅｎｄｐｌｅｘマウス炎症パネル（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて測定した。試料はＬＳＲＩＩ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を用いて取得した。データ分析は、ＦｌｏｗＪｏバージョン１０．６（ツリースター）を用いて行った。

【0346】

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２生物活性アッセイ
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を、ノルモシン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を含有する培地中、５０，０００細胞／ウェルの密度で平底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上に播種した。細胞を、増加量のＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、または減少したＦｃＲｎ親和性のために設計されたバリアントとともに１７時間インキュベートした。培地を回収し、Ｑｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ検出試薬（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）の存在下で２時間インキュベートした。吸光度は、テーブルトップ分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて６４０ｎｍで測定した。

【0347】

脳への注射後の脳、血漿および血清中のヒトＩＬ－１２の検出、ならびに血清または血漿対脳内濃度比の計算
試料を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０および０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中で希釈し、ＩＬ－１２レベルをｈＩＬ－１２ｐ７０についてＥＬＩＳＡ（Ｍａｂｔｅｃｈ）により評価した。血清または血漿対脳内濃度比を計算するために、血清または血漿中のＩＬ－１２濃度をｐｇ／ｍｌで記載したが、脳中の濃度は、タンパク質抽出の有効性を補正した脳から抽出したＩＬ－１２の総量を半球の重量（ｐｇ／ｍｇ脳組織）で割って計算した。

【0348】

脳内注射後の脳および血漿中のヒトＩｇＧ検出および血漿対脳内濃度比の計算
試料を０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０および０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中で希釈し、ＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡにより評価した。簡単に説明すると、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０および０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳでブロックしたポリクローナルロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で被覆した。分析物をポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で検出し、ポリクローナルロバ抗ヤギＨＲＰ結合抗体（Ｐｒｏｍｅｇａ）で増幅した。血漿対脳比の計算のために、血漿および脳中のヒトＩｇＧの濃度をｐｇ／ｍｌで記載した。

【0349】

ヒトＩｇＧ１バリアント、ＩｇＧ４バリアントｈＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱの産生
ＩｇＧ４バリアントは、一過性にトランスフェクトされたヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞培養物中で発現された。ＩｇＧ１バリアント、ｈＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱおよびｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱを、一過性にトランスフェクトしたチャイネスハムスター卵巣（ＣＨＯ）または細胞培養物によって産生した。簡単に説明すると、培養上清を回収し、アフィニティークロマトグラフィー（プロテインＧ）によってタンパク質を精製した。タンパク質をさらにイオン交換（ＩＥＣ）およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製した。タンパク質をスピンカラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、３０ｋＤａカットオフ）を用いて濃縮した。タンパク質を２０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ＝６．０緩衝液中に貯蔵した。品質は、ゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって評価され、その後、標準的なプロトコールに従ってクマシー染色を行った。ニボルマブ、アテゾリズマブ、イピリムマブおよびリツキシマブは市販されている。

【0350】

ＩＬ－１２Ｆｃで刺激されたリンパ球によるＩＦＮ－γ産生
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、１００ｎｇ／ｍｌ抗ＣＤ３抗体の存在下で、ＦｃＲｎ親和性が低下したＩＬ－１２、ＩＬ－１２ＦｃまたはＩＬ－１２Ｆｃバリアントの濃度を増加させて２４時間刺激した。上清中のＩＦＮ－γレベルは、製造業者の指示に従ってＥＬＩＳＡにより測定した（Ｍａｂｔｅｃｈ）。

【0351】

脳タンパク質の単離
安楽死させ、頭蓋冠を注意深く除去した後、脳を単離した。小脳および嗅球を除去し、正中線に沿って半球を分離し、注射された（同側の）半球を液体窒素中でスナップ凍結した。Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する氷冷溶解緩衝液（Ｃｅｌｌシグナル伝達）中での均質化により脳溶解物を調製した。脳組織１０ｍｇあたり０．１ｍｌの溶解緩衝液を添加した。脳組織をハサミで切り刻み、次に、２０Ｇ針を通し、最終的に２０秒間超音波処理した。試料を１０分間、１５０００ｇで４℃にて遠心分離し、上清を新鮮なチューブに移した。タンパク質濃度はＰｉｅｒｃｅ ＢＣＡアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて測定し、このデータを用いて各実験におけるタンパク質抽出効率を補正した。

【0352】

すべてのヒトおよびマウスＩＬ－１２ＦｃバリアントをＨＥＫ２３９Ｔに発現させた。プロテインＧ親和性を保持するバリアントを、プロテインＧセファロース（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ）を用いたアフィニティークロマトグラフィーおよびＰＢＳによる一晩透析により培養上清から精製した。プロテインＧ親和性を失ったバリアントを５０％飽和の硫酸アンモニウム（ＶＩ）で沈殿させ、次に沈殿物をＰＢＳで溶解し、セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ）カラム（ＩＩ型、４０μｍ Ｂｉｏ－Ｒａｄ）上で精製することにより精製した。プロテインＧまたはＣＨＴクロマトグラフィー後、試料をさらに、ＡＫＴＡピュアクロマトグラフィーシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で、アニオナイトとして、ジエチルアミノエタノール結合セファロース（ＨｉＴｒａｐ ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラム、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いるイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。最後に、すべてのＩＬ－１２Ｆｃバリアントを、ＡＫＴＡクロマトグラフィーシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で、予め充填されたＳｕｐｅｒｏｓｅ ６カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いるサイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製された。二量体画分を、３０ｋＤａカットオフを有するＶｉｖａｓｐｉｎ ２ｍｌスピンカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて濃縮した。タンパク質の純度は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動、続いてクーマシーブリリアントブルー（ＶＷＲライフサイエンス）による染色により検証した。タンパク質濃度は、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびＩＬ－１２ｐ７０用のＥＬＩＳＡ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を用いて測定した。

【0353】

ＩＬ－１２Ｆｃで刺激したリンパ球によるＳＴＡＴ－４のリン酸化
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３の存在下で、ＦｃＲｎ親和性が低下した１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１２、ＩＬ－１２ＦｃまたはＩＬ－１２Ｆｃバリアントで１時間刺激した。次に、Ｐｉｅｒｃｅ ＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて細胞を溶解した。試料をＳＤＳ－Ｐａｇｅ電気泳動により分析し、次に、Ｔｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ Ｔｕｒｂｏ Ｂｌｏｔｔｉｎｇシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて転写し、抗ＳＴＡＴ４ ｐＹ６９３（クローン３８／ｐ－Ｓｔａｔ４、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）で染色した。バンド可視化は、ＥＣＬ透明基質（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）およびＢｉｏＲａｄ ＭＰＣＤイメージャー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて行われた。

【0354】

表面プラズモン共鳴
ＳＰＲは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて行われ、約８０応答ユニット（ＲＵ）にＰｒｏｔｅＯｎ ＮＬＣセンサーチップ上にヒト組換えビオチン化ＦｃＲｎ（Ｉｍｍｕｎｉｔｒａｃｋ）を被覆した。ＩＬ－１２Ｆｃバリアントを、１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ＝６．０において、７２９ｎＭから９ｎＭまでの濃度を３倍段階で減少させて泳動した。解離時間は６００秒であった。分析は、注射時間に対するデータ正規化、スポット間バックグラウンド除去およびビルドインアーティファクト除去機能を用いて、ＰｒｏｔｅＯｎ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて行われた。Ｋｄは均衡分析モデルを用いて計算された。

【0355】

サーマルシフトアッセイ
簡単に説明すると、０．２ｍｇ／ｍｌのタンパク質試料を、１：１０００に希釈したＳｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ染色液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合し、ＣＦＸ３８４サーモサイクラー（Ｂｉｏｒａｄ）上で、２０℃から９５℃まで３０秒ごとに０．２℃の温度上昇を伴い、読み取りとして蛍光を用いて泳動した。変性温度を温度にわたる蛍光の一次微分として決定した。実験は、溶媒としてＰＢＳおよび人工脳脊髄液（ａＣＳＦ；１２５ｍＭ ＮａＣｌ、２６ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、１．２５ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_３、および２．５ｍＭ ＫＣｌ）中で行われた。

【0356】

統計分析
統計分析はＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアを用いて行われた。Ｇｒｕｂｂ検定に従い、最終分析から異常値を除いた（４９）。スチューデントｔ検定を用いて２群を比較した。一方向ＡＮＯＶＡとＴｕｋｅｙ多重比較検定を用いて、２群以上を比較した。

【0357】

フローサイトメトリーＰＤ－Ｌ１結合アッセイ
ＧＬ２６１：ｌｕｃＥ９またはＧＬ２６１：ｌｕｃＥ９：ＰＤ－Ｌ１ＫＯ細胞を、２０ｎｇ／ｍＬの最終濃度でマウスインターフェロン－ガンマを添加して一晩培養した。翌日、細胞をＤＰＢＳで洗浄した。トリプシン－ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ２５３００－０５４）をフラスコに添加し、再度、直ちに除去した。細胞をフラスコから離すために２～５分間放置した。それらを培地で洗浄し、３５０×ｇ、４℃で５分間遠心分離した。その後、細胞を１００’０００細胞／ウェルで丸底９６ウェルプレートにプレーティングし、ＤＰＢＳで２回洗浄した。

【0358】

染色は、１：２００に希釈したＺｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ固定可能生存率キット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、および０．１ｍｇ／ｍＬの最終濃度でヒト抗ＰＤ－Ｌ１（アテゾリズマブ）またはｍ／ｈＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱのいずれかを含有するＰＢＳ、ウェルあたり２５μＬで行われた。細胞を暗所で２０分間、４℃で染色した。ＰＢＳによる洗浄工程後、細胞は、０．２ｍｇ／ｍＬで二次抗体抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ－ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０９３０４、ロットＢ２６０８６８）または抗マウスＰＤ－Ｌ１－ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１２４３１５；ロットＢ２２８１４９）対照抗体（データを示さず）とともに、ＰＢＳ中、３０分間、４℃で暗所にてインキュベートさせた。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、４０μｍメッシュを通して濾過し、ＬＳＲＩＩ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ）を用いて獲得した。データ分析は、ＦｌｏｗＪｏバージョン１０．６（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を用いて行われた。

【0359】

生存分析
腫瘍を有する動物の神経症状を調べ、腫瘍細胞移植後の２１日目まで週１回体重を測定した。２１日目以降、モニタリング頻度を毎日のチェックおよび週１回の生物発光イメージング（ＢＬＩ）に増やした。小郡の獣医当局（ＺＨ１９４／１９）に従い、予め定義された中止基準（最大体重の２０％を超える体重減少および／または瀕死状態）に達した時点で、コントロールされたＣＯ_２による窒息により動物を安楽死させた。

【0360】

実施例２：ヒトＩＬ－１２の頭蓋内注射はｈＩＬ－１２Ｆｃよりも高い全身漏出を有する
脳腫瘍の局所処置のためのＩＬ－１２Ｆｃは非常に有望である。しかしながら、臨床試験で使用するために、同様の特性を示す必要があるヒトバージョンのＩＬ－１２Ｆｃが要求される。マウスＩＬ－１２ＩｇＧ３に対するヒト類似体を得るために、本発明者らは、ヒト免疫グロブリンＧ４（ｈＩｇＧ４）の結晶化可能な断片（Ｆｃ）に一本鎖ヒトＩＬ－１２を融合させた（図１Ａ）。ｍＩｇＧ３と同様に、ｈＩｇＧ４は抗体依存性の細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）を支持せず、補体系を活性化しない。ヒトＩＬ－１２Ｆｃ（ｈＩＬ－１２Ｆｃ）対組換えヒトＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）の漏出および安定性を試験するために、本発明者らは、マウスＦｃＲｎ欠損バックグラウンド（ＦｃＲｎｔｇ）上でヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスの線条体に単回ボーラスを注射した（Ｐｏｓｔｏｗら、２０１５年、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７２巻：２００６～２０１７頁；Ｋａｍｒａｎら、２０１６年、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ １６巻：１２４５～１２６４頁）。２４時間後、本発明者らは、注射部位での安定性および保持（残留濃度）ならびに血流への漏出速度についてより詳しく知るために、同側半球の溶解物および血清中のヒトＩＬ－１２濃度を分析した（図１Ｂ）。各マウスについて、本発明者らは、組織保持の推定値として、血清中濃度対注射部位での濃度の比を計算した。血清レベルと注射部位での局所濃度と比較して、ｈＩＬ－１２Ｆｃは、本発明者らがかなり低い比を観察したため、ｒｈＩＬ－１２よりも優れた組織保持を示した（図１Ｃ）。局所ＧＢ処理について、ヒトＩＬ－１２Ｆｃ融合サイトカインは、その高い組織保持、安定性および溶解性のために、その天然の対応物と比較して優れた化合物であると考えられる。

【0361】

実施例３：ＦｃＲｎ結合はＩＬ－１２Ｆｃの全身的蓄積をもたらす
内皮細胞および赤脾髄マクロファージにおける新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）ベースのエンドソームリサイクルシステムは、ＩｇＧの急速な分解およびクリアランスを防止する。エンドソームの酸性ｐＨによって促進される飲作用後、ＦｃＲｎはＩｇＧと結合し、細胞表面にリサイクルされ、中性ｐＨが放出を誘導する。局所的に注射した場合、ＩＬ－１２Ｆｃは、そのＦｃタグのために、ＦｃＲｎ媒介様式で脳から漏出することができる。脳からの漏出はＩＬ－１２Ｆｃの血清蓄積を引き起こし、最終的には毒性レベルに達することがある。ＦｃＲｎベースのリサイクルが実際に血清中のｈＩＬ－１２Ｆｃの蓄積を促進するかどうかを試験するために、本発明者らは、マウスＦｃＲｎ欠損バックグラウンド（ＦｃＲｎｔｇ）上にヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスを利用した。ヒトＦｃＲｎはマウスＩｇＧに対して弱い親和性を有するが、正常なアルブミンリサイクリングを促進するため、このマウスモデルではマウスＩｇＧリサイクリングのみが障害される。したがって、マウスＩＬ－１２Ｆｃは、これらのＦｃＲｎヒト化マウスにおいて、ＦｃＲｎへの結合がかなり少ない。したがって、本発明者らは、浸透圧ミニポンプを介して局所マウスＩＬ－１２Ｆｃで処理されていた、神経膠腫を有する野生型（ｗｔ）およびＦｃＲｎｔｇマウスの血清ｍＩＬ－１２レベルを比較した。実際、１週間後、本発明者らは、ＦｃＲｎｔｇマウスではそれほど顕著ではないｗｔマウスにおいてＩＬ－１２レベルが増加し（図２Ａ）、その後、ＩＦＮ－γレベルが増加したことを観察した（図２Ｄ）。本発明者らは、ポンプ移植後の１日という早い時期に、いくつかのマウスの血清中のＩＬ－１２レベルの上昇さえ観察した（図２Ｂ）。その結果、これは、ｗｔマウスではＩＦＮ－γの血清中濃度お顕著な上昇をもたらしたが、ＦｃＲｎｔｇコホートではその症例ではなかった（図２Ｃ）。マウスＩＬ－１２Ｆｃと同様に、ヒトＩＬ－１２Ｆｃもまた漏出し、蓄積する可能性が高く、全身性の副作用の恐れがある。さらに、ＩＦＮ－γは、ＩＬ－１２関連副作用の主要なメディエーターの１つであり（Ｌｅｏｎａｒｄら、１９９７頁、Ｂｌｏｏｄ ９０巻：２５４１～２５４８頁）、その持続性の全身存在は毒性であり得る（Ｗｅｉｓｓら、２００７年、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ ７巻：１７０５～１７２１頁）。まとめると、本発明者らは、処置部位からの微量のＩＬ－１２Ｆｃの漏出でさえ、検出可能な血清ＩＦＮ－γレベルを誘発するのに十分であると結論付ける。

【0362】

実施例４：改良された組織保持のために設計されたヒトＩＬ－１２Ｆｃバリアントの作製
ＦｃＲｎ結合の低下が、脳からの排出を潜在的に無効にし、脳からの漏出時の劇的に低下したリサイクルをもたらすという観察は、ｈＩＬ－１２Ｆｃの安全域を増加させるために利用できる。したがって、本発明者らは、ｈＩＬ－１２ＦｃのＦｃ部分のヒトＦｃＲｎへの結合を低下させることに着手した。Ｆｃ部分のＦｃＲｎ結合界面の正電荷を増加させることにより、酸性ｐＨでのこの相互作用－したがってリサイクル－は無効にされ得、これは免疫グロブリンの血清半減期を減少させることが示された。本発明者らは、漏出の場合のその血清半減期を減少させることを目的として、ｈＩＬ－１２ＦｃのＦｃＲｎ結合部位において、多数の突然変異をｈＩＬ－１２Ｆｃに導入した（表１）。

【0363】

本発明者らは、ＩＡＱ、ＡＨＨおよびＡＡＡと呼ばれるＦｃＲｎ親和性が低下した以前に公開された抗体と類似した突然変異を有する３つのＩＬ－１２Ｆｃバリアントを作製した。さらに、本発明者らは、２５３位のイソロイシンをアラニンではなく、側鎖の単純な短縮を表すものに置換したが、代わりにそれをアスパラギン（Ｉ２５３Ｎ）に変更した。アスパラギンは極性アミノ酸であり、その側鎖はイソロイシンと同様の長さを有する。本発明者らはまた、３１０位のヒスチジンをアラニンに、４３５位のヒスチジンをグルタミン、アラニンまたはグルタミン酸に修飾した。

【0364】

すべてのバリアントをヒト胚性腎２９３Ｔ細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）培養物中に発現させた。すべてのバリアントの発現レベルは類似していた。

【0365】

実施例５：ヒトＩＬ－１２Ｆｃバリアントは類似のタンパク質安定性を有する
第１に、本発明者らは、Ｆｃに導入された変化が全体的なタンパク質の安定性に影響を及ぼすかどうかを検証した。この目的のために、本発明者らは、ＰＢＳおよび人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）中で行われる熱シフトアッセイにおいて、変性温度をバリアントの各々について測定した。すべてのバリアントの変性温度は６０℃付近で振動した（図３Ａ）。ａＣＳＦで行われた測定は、全変性温度は約５７℃と低いものの、すべてのバリアントが同様の安定性を有することを確認した（図３Ｂ）。

【0366】

実施例６：ヒトＩＬ－１２Ｆｃバリアントはそれらの生物学的活性を維持する
本発明者らは、ｈＩＬ－１２ＦｃのＦｃＲｎへの結合を低下させることを目的としたとしても、本発明者らは、これらの変化がＩＬ－１２の生物学的活性に影響を及ぼしたことを排除することはできなかった。これは、まず、ＩＬ－１２シグナル伝達成分および比色反応を触媒する下流酵素で安定にトランスフェクトされたＨＥＫ細胞株を用いて試験された。ＮＡＱバリアントのみがＩＬ－１２Ｆｃと比較して約２倍の活性低下を示したが、他のすべてはＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴの範囲でＥＣ５０を示した（図４Ａ）。重要なことに、ＩＬ－１２ＦｃはインビトロでｒＩＬ－１２と同等の活性を有していた。

【0367】

ＩＬ－１２Ｆｃバリアントの活性をさらに検証するために、本発明者らは、３つの異なるｈＩＬ－１２Ｆｃバリアント、すなわち、ＩＡＱ、ＡＨＱおよびＮＨＱを用いて末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の活性化を行い、次にＳＴＡＴ－４リン酸化の分析を行った（図４Ｂ）。さらに重要なことに、このＳＴＡＴ－４リン酸化は２４時間後にＩＦＮ－γの強力な産生に翻訳され（図４Ｃ）、すべてのバリアントがｒｈＩＬ－１２の活性を保持していることを示した。

【0368】

実施例７：ヒトＩＬ－１２ＦｃバリアントはプロテインＧへの結合において異なる
プロテインＡおよびＧアフィニティークロマトグラフィーは、組換え抗体およびＦｃ融合タンパク質の精製に使用される標準的な方法の１つである。ＦｃとＦｃＲｎの間の界面を修飾することは、プロテインＡ結合を無効にすることが公知であり、これは本発明者らがＩＬ－１２Ｆｃバリアントでも確認した観察である。スケールアッププロセスにおける生産の実現可能性を確認するために、本発明者らは、プロテインＧアフィニティーカラムを介してＩＬ－１２Ｆｃバリアントを精製する可能性を検証することを決定した。本発明者らのバリアントの大部分はプロテインＧに対する親和性を保持していたが、本発明者らに意外なことには、Ｉ２５３Ｎと、Ｈ３１０Ａ突然変異をともに含むすべてのバリアントはプロテインＧ精製に適さなかった（表２）。この効果は、４３５位における追加の突然変異とは無関係であった。さらなる研究のために、本発明者らは、保持されたプロテインＧ親和性を有するバリアントに注目してきた。

【0369】

実施例８：ヒトＩＬ－１２ＦｃバリアントはＦｃＲｎ親和性を低下している
ＦｃＲｎに対するＩＬ－１２Ｆｃバリアントの親和性を検証するために、本発明者らは、タンパク質－タンパク質相互作用を特徴付けるための標識不使用方法である表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用した。本発明者らは、ヒトＦｃＲｎを固定化し、種々の濃度でリソソームｐＨ範囲（ｐＨ＝６．０）におけるＩＬ－１２Ｆｃバリアントの結合を測定した（４３）。図５Ａに示されるように、修飾ＩＬ－１２Ｆｃバリアントの大部分は、ヒトＦｃＲｎに対する親和性が低下しており、ＮＨＱバリアントが最も強い減少（約８倍低い）を示す。本発明者らは、市販のヒトモノクローナル抗ＧＦＰ ＩｇＧ４抗体を対照として使用した。

【0370】

さらに、本発明者らは、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、抗ＧＦＰ ＩｇＧ４および公表されたバリアントＩＡＱを参照として用いて、ＮＨＱ構築物に関するＥＬＩＳＡデータによりこれらのデータを裏付けた。ＩＡＱとＮＨＱはいずれも結合が低下し、ＮＨＱは最も低い親和性を有することを示した（図５Ｂ）。したがって、本発明者らは、置換のＮＨＱ組み合わせが、ＦｃＲｎへの結合を最も劇的に低下させるようであると結論付けた。これは、Ｈ３１０ＡとＨ４３５Ｑの組み合わせによる突然変異が、低ｐＨでのＦｃＲｎへの結合の最も強い低下の原因であることを示唆したＫｅｎａｎｏｖａおよび同僚の結果（Ｋｅｎａｎｏｖａら、２００５年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６５巻：６２２～６３１頁）とは対照的である。

【0371】

実施例９：ＮＨＱ突然変異の導入は局所的に送達されたｈＩＬ－１２Ｆｃへの全身曝露を低下させる
本発明者らは、ＦｃＲｎ親和性の低下が、ＣＮＳにおけるｈＩＬ－１２Ｆｃの保持を増加し、同時にその全身的蓄積が妨げられるという仮説を立てた。これは、ｈＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴおよび組換えヒトＩＬ－１２の比較と同様の方法で対処された（図１Ｂ）。ＦｃＲｎ^ｔｇマウスに１μｇのＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴまたはＮＨＱバリアントを単回注射し、ＥＬＩＳＡによりＩＬ－１２を同側脳半球および血清中で測定した。ＮＨＱバリアントを注射されたマウスは、ｈＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴを注射されたマウスと比較して血清対脳比の低下を示した（図６Ａ）。本発明者らは、これは、ＦｃＲｎ媒介リサイクルによるＣＮＳにおける保持の増加と全身蓄積の減弱の両方の効果であり得ると仮定する。

【0372】

さらに、ボーラス注射の代わりにＣＥＤを使用して、本発明者らは、血漿中のｈＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、ＩＡＱ、ＡＡＡおよびＮＨＱの濃度をＣＥＤの２４時間後に注射された半球と比較し、ＮＨＱバリアントはボーラス注射と比較して最適化された送達設定においても、最も有意に低下した血漿対脳比（図６Ｂ）を示すことを観察した。このようなＣＮＳ保持の増加は、全身曝露の低下と併せて、局所ＩＬ－１２Ｆｃ療法の安全性プロファイルを改善する可能性があり得る。

【0373】

実施例１０：ＩＬ－１２ＦｃバリアントＮＨＱは他の低親和性バリアントよりも高い脳組織保持を有する
最後に、本発明者らは、タンパク質の頭蓋内送達後の組織保持を測定した。この目的のために、本発明者らは、１μｇの非修飾ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴ、すなわち、ＦｃＲｎ親和性が低下した以前に公開された２つのバリアント、すなわち、ＩＡＱおよびＡＡＡ、ならびに本発明者らの測定による最も低いＦｃＲｎ親和性を有するバリアントであるＮＨＱを注射した（図５Ａ）。タンパク質溶液のボーラス注射の代わりに、脳半球の最大潅流を確実にするために、本発明者らは、ステップカテーテルおよびランプアップ注射レジメンを備えたＣＥＤプロトコールを使用した。最も生理学的な設定においてＦｃＲｎ結合界面における異なる修飾の影響を研究するために、本発明者らはＦｃＲｎ^ｔｇマウスを採用した。前述したように、ＦｃＲｎはＣＮＳからの排出と血清中のＦｃ含有分子の蓄積の両方に重要である。２つの効果を切り離し、ＣＮＳからの輸送を防ぐことにのみ焦点をあてる試みとして、本発明者らは、ＣＥＤの６時間後に脳内に残されたタンパク質の量を測定した。マウスを安楽死させ、ＰＢＳで潅流し、同側半球中の総タンパク質を単離し、ｈＩＬ－１２をＥＬＩＳＡにより測定した。図７に示されるように、ＩＬ－１２Ｆｃ ＮＨＱは、ＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴと比較して優れた組織保持を有する。重要なことに、また、ＦｃＲｎ親和性が低下した他の２つのバリアントであるＩＡＱおよびＡＡＡよりも良好であった。驚くべきことに、ＩＡＱおよびＡＡＡはＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴと有意差がなかった。

【0374】

実施例１１：インビボでの抗腫瘍効果
ヒトＩＬ－１２は、マウスＩＬ－１２受容体との交差反応性が単に低い。これは、マウスモデルにおけるインビボでの抗腫瘍効果を研究するために、代理分子が使用されなければならないことを意味する。ＦｃＲｎに対する低下した親和性の効果を試験するために、本発明者らは、ｈＩＬ－１２Ｆｃに対するのと同じヒトＩｇＧ４ Ｆｃに一本鎖マウスＩＬ－１２を融合させた（図８Ａ）。

【0375】

ＩＬ－１２は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの標的細胞においてＩＦＮγの発現を誘導する（Ｔｕｇｕｅｓら、Ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（２０１５年）２２巻：２３７～２４６頁））。順次、ＩＦＮγは、適応耐性と呼ばれる過程において、骨髄細胞および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１の上方制御を導くことができる（Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．（２０１７年）（９巻）、ｅａａａ０９８４．）。したがって、本発明者らは、ＰＤ－Ｌ１が、ＩＬ－１２組織保持をさらに増加させるための誘導アンカーとして役立つと推論した。

【0376】

局所的に適用された抗ＰＤ－Ｌ１抗体療法と組み合わせたＩＬ－１２Ｆｃの有効性を評価するために、二重特異性Ｆｃ融合分子を作製した。それは、ｍＩＬ－１２ｈＦｃと、抗ＰＤ－Ｌ１半抗体と、ＮＨＱ突然変異を含むｈＩｇＧ１ Ｆｃとを組み合わせる。ノブ・イントゥ・ホール方法をヘテロ二量体重鎖アセンブリーに使用した（Ｒｉｄｇｗａｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ（１９９６年）、９巻：６１７～６２１頁）。抗ＰＤ－Ｌ１半分子は、臨床的に承認された抗体であり、マウスおよびヒトＰＤ－Ｌ１（米国特許第８，２１７，１４９Ｂ２号）と交差反応性であるアテゾリズマブに由来する（図８Ａ）。

【0377】

本発明者らは、インビトロでのｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱ分子の生物活性を確認した：ＩＬ－１２機能性について、ＩＬ－１２感受性レポーター細胞株を使用し、ＩＬ－１２は、分泌されたアルカリホスファターゼを導き、次に、比色反応を触媒する（図８Ｂ）。ＰＤ－Ｌ１を結合した細胞への結合は、細胞表面上のＰＤ－Ｌ１へのヘテロ二量体二官能性構築物の結合を検出するために、フローサイトメトリーにより確認された（図８Ｃ）。二官能性ヘテロ二量体構築物は、それらのＣ_Ｈ２ドメインおよびＣ_Ｈ３ドメインにＮＨＱバリアントを有し、したがって、表面プラズモン共鳴によって確認した場合、ＦｃＲｎ結合は無効にされ、非修飾抗ＰＤ－Ｌ１抗体と比較して比較的高いＫ_Ｄ値を有する（図８Ｄ）。

【0378】

インビトロでの特徴付け後、本発明者らは続けてインビボでその特性を測定した。マウス神経膠腫モデルＧＬ－２６１を用いて、インビボで抗腫瘍効果と全身分布をモニターした。簡単に説明すると、腫瘍を有するマウスに、ｒｍＩＬ－１２、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱ、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＷＴもしくはＮＨＱまたは賦形剤対照（注射緩衝液のみ）をＣＥＤを介して２回頭蓋内注射した（図９Ａ）。腫瘍サイズの変化を生物発光イメージングを用いてモニターし、臨床的影響を臨床スコアリングによりモニターした（図９Ｂ）。ＣＥＤ時の漏出および排出を評価するために、全身ＩＬ－１２およびＩＦＮγレベルを、様々な時間点で血漿中で測定した（図９Ｃ）。ｒｍＩＬ－１２またはｍＩＬ－１２ｈＦｃ ｗｔを受けた動物は、ＣＥＤ時に全身性ＩＬ－１２シグナルとその直後のＩＦＮγの急激な増加を示し、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱを受けた動物は、ベースラインに急速に戻り、ＩＦＮγシグナルを顕著に低下させた全身性ＩＬ－１２シグナルを強く低下させた（図９Ｃ）。ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ｗｔとｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱの間の組織保持の差は、ＣＥＤ１から既に６時間後には、より低い全身ＩＬ－１２シグナルを導く（図９Ｄ）。処置動物の臨床経過に関して、ＩＬ－１２構築物を受けた全群は、対照群と比較して、疾患が極端に進行した例外的に遅い時期であっても、腫瘍接種の３週間後には生存の顕著な増加を示した（図９Ｅ）。注目すべきことに、ＮＨＱ構築物（ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ＮＨＱまたはｍＩＬ－１２ｈＦｃ：ａＰＤ－Ｌ１ ＮＨＱ）を受けた群における処置反応は、ｍＩＬ－１２ｈＦｃ ｗｔまたはｒｍＩＬ－１２を受けた群と比較して、処置に少なくとも同等に良好に反応したが、全身性ＩＬ－１２およびＩＦＮｇの著しく低下を示した。

【0379】

実施例１２：ｈＦｃＲｎに対するＩＬ－１２ＦｃおよびＩｇＧバリアントの親和性測定
ＣＮＳへの局所送達における血漿対脳比に有利に影響を及ぼす低ＦｃＲｎ親和性の影響をさらに評価するために、ＩＡＱ、ＡＡＡ、およびＮＨＱバリアントを非修飾抗体と比較した（図１０）。本発明者らは、ＰＤ－Ｌ１に対して指向されるヒトＩｇＧ１（図１０Ａおよび図１０Ｂ、アテゾリズマブ）およびヒト抗インフルエンザＡ ＩｇＧ４抗体（図１０Ｃおよび図１０Ｄ、Ｆｌｕ ＨＡ３．１、米国特許出願公開第２０１４／０３７００３２Ａ１号）を選択した。

【0380】

ｈＩＬ－１２Ｆｃが機能的であり、ｒｈＩＬ－１２よりも高い組織保持性を有し、漏出が生じた場合には、全身のリサイクルを停止させることによって安全域を増加させることができるという知見は、任意のＦｃ含有分子の局所投与に広範な意味を持つ可能性がある。これらの修飾は、神経疾患の局所処置のための任意の抗体またはＦｃ－融合分子の安全であり、有効な局所送達を可能にする。

【0381】

全身経路（ｏｓまたはｉ．ｖ．のいずれか）を介したＣＮＳへの治療薬の投与は、主にＢＢＢのために－身体の残りと比較して－困難であり、今日の治療薬のごくわずかな選択が実際に脳に到達するだけである。残念ながら、抗体およびＦｃ含有生物学的製剤、具体的にはＦｃ融合タンパク質は、ＢＢＢを容易に通過せず、さらに積極的に排出される。ＢＢＢを介した抗体の脳実質への輸送を可能にすることは、例えば、トランスフェリンに対する受容体媒介トランスサイトーシスを利用することによって広範に研究されている。サイトカインは循環血中の半減期が短く、副作用のリスクが高く、それらの治療機会ウインドウを狭める。サイトカインは、それらが蓄積する腫瘍にホーミングする抗体に連結することができ、具体的にはＮＨＳ－ＩＬ－１２である。皮下投与後でさえ、これらの抗体は血流を介して腫瘍に移動する際にＩＦＮγ応答を誘導する。最初に、ＩＬ－１２の全身送達を非脳がんの処置のために評価した。しかしながら、これらの臨床試験は、有効用量で静脈内適用が死亡を含む重篤な有害事象を引き起こしたため、早期に中止しなければならなかった。主な理由の１つは、ＩＬ－１２によるＩＦＮγの誘導であると考えられる。

【0382】

タンパク質治療薬の血清半減期および溶解度は、抗体の結晶化可能な断片（Ｆｃ）と治療薬部分を直接融合させることによって改善することができる。解剖学的に異なる部位への直接局所適用のために、これは望ましくない効果をもたらし得る。これらのうちの１つは、免疫特権解剖学的部位、具体的には脳からのＦｃＲｎを介したＦｃ含有分子の排出、およびＩｇＧリサイクルに類似したそれらの血清蓄積であり得る。

【0383】

本発明者らは、脳内へのＩＬ－１２Ｆｃ融合サイトカインの局所投与が、ＢＢＢを介して循環内へのＩＬ－１２ＦｃのＦｃＲｎ依存性排出を引き起こすことを観察した。ＩＬ－１２Ｆｃは血液中に蓄積し、潜在的に危険なＩＦＮγ産生を引き起こす。

【0384】

本発明者らは、ＦｃＲｎ親和性が低下したＩＬ－１２Ｆｃが機能的であり、組換えＩＬ－１２および非修飾ＩＬ－１２Ｆｃよりも高い組織保持性を有することを見出した。脳組織保持実験において比較した場合、ＮＨＱ突然変異体はＩＬ－１２Ｆｃ ＷＴよりも保持が改善した唯一のものであった。驚くべきことに、ＦｃＲｎ結合が劇的に低下したことが報告された２つのバリアントであるＩＡＱおよびＡＡＡは、非修飾ＩＬ－１２Ｆｃと異ならず、これは、生物学的差異を得るためには、所定の閾値を超えてＦｃＲｎ親和性を低下させなければならず、ＮＨＱ修飾のみが到達することを示唆する。あるいは、ＮＨＱ突然変異が、ＦｃＲｎ非依存的な方法で組織保持を改善する他の特徴を導入することを除外することはできない。

【0385】

これは安全性プロファイルの改善につながり、脳腫瘍のＩＬ－１２Ｆｃ療法の治療ウインドウを広げる。さらに、本発明者らの所見は、局所的頭蓋内投与の強力な理論的根拠がある、主に治療用抗体を含む任意のＦｃ含有治療薬に翻訳することができる。このような適用経路は、全身的に投与された場合には効力が弱く、潜在的にはＢＢＢを通過する交差不良の効果があるため、または所望の治療効果が局所的に封じ込められるべきであるため好ましい。このような送達に最適化された生物学的製剤による局所療法は、全身毒性を排除し、したがって、薬物の安全性プロファイルを改善することができる。

【0386】

【表1】

【0387】

【表2】

【0388】

【表3】

【0389】

組み合わされた二重特異性分子は、配列番号１５と配列番号２１、配列番号１６と配列番号２１、配列番号１７と配列番号２２、配列番号１８と配列番号２２、配列番号１７と配列番号２３および配列番号２４、配列番号１８と配列番号２３および２４、配列番号１９と配列番号２２、配列番号２０と配列番号２２、配列番号１９と配列番号２３および配列番号２４、配列番号２０と配列番号２３および配列番号２４と記載される分子からなることができる。

【0390】

項目
１．医薬として使用する（医薬におけて使用する）ための、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含むポリペプチドであって、
上記Ｆｃ領域は、修飾を有し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらし、
上記ポリペプチドは、局所投与によって、疾患により影響を及ぼされた組織に送達される、ポリペプチド。

【0391】

２．上記ポリペプチドが
－頭蓋内投与によって、
－髄腔内投与によって、または
－眼内投与によって
送達される、項目１に記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0392】

３．上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチドであって、ポリペプチドが頭蓋内投与によって投与され、上記ポリペプチドの血清または血漿対脳内濃度比が、ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体への頭蓋内ボーラス注射の２４時間後に測定可能である、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドの血清もしくは血漿対脳内濃度比の最大２／３、または
ｂ．Ｆｃ領域もペプチドリンカーも含まない同一ポリペプチドの血清もしくは血漿対脳内濃度比の最大１／８
から選択される所定の閾値未満であるポリペプチド。

【0393】

４．ポリペプチドが脳室内またはくも膜下腔内投与によって投与され、上記ポリペプチドの血清または血漿対ＣＳＦ濃度比が、ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの脳室内または髄腔内注射から２４時間後に測定可能である、
ｃ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドの血清もしくは血漿対ＣＳＦ濃度比の最大２／３、
ｄ．Ｆｃ領域もペプチドリンカーも含まない同じポリペプチドの血清または血漿対ＣＳＦ濃度比の最大１／８
から選択される所定の閾値未満である、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0394】

５．上記ポリペプチドのＦｃＲｎに対する上記親和性の低下が、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付ける解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較して、少なくとも２倍、具体的には少なくとも３倍、より具体的には少なくとも４倍、さらにより具体的には少なくとも５倍増加したＫ_Ｄ、および
ｂ．異なる修飾を受けたＦｃ領域、すなわちＩＡＱ（突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑを有する）およびＡＡＡ（突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａを有する）から選択される１つの突然変異体を含む同一ポリペプチドへのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも１．５倍、具体的には少なくとも２倍増加したＫ_Ｄ
から選択されるＫ_Ｄによって特徴付けられる、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0395】

６．頭蓋内送達が、
ａ．対流増強送達（ＣＥＤ）を含む単回、断続的もしくは連続的な局所注入、
ｂ．髄腔内投与、
ｃ．上記ポリペプチドのインサイチュでの生成、
ｄ．埋め込み型徐放性製剤からの放出、
ｅ．ＣＮＳへの分子輸送、
ｆ．ＣＮＳへの細胞輸送、または
ｇ．鼻腔内適用後のＣＮＳへの輸送
から選択される方法によって行われる、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0396】

７．中枢神経系に影響を及ぼす疾患の処置または予防のために、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0397】

８．中枢神経系に影響を及ぼす上記疾患が、悪性疾患、具体的には神経膠腫、より具体的には高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である、項目７に記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0398】

９．上記Ｆｃ領域がヒトＦｃ領域、またはヒトアミノ酸配列を含むキメラＦｃ領域であり、２５３位の突然変異、具体的にはＩ２５３ＡまたはＩ２５３Ｎ、より具体的にはＩ２５３Ｎを有する、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0399】

１０．上記Ｆｃ領域が３１０位に突然変異を有さない、項目９に記載の医薬としての使用するためのポリペプチド。

【0400】

１１．上記Ｆｃ領域が、
－突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＩＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＡＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、ならびに３１０位および４３５位のＨ（ＡＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、ならびに３１０位および４３５位のＨ（ＮＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＡＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＮＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＮＡＡ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＡＡＡ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0401】

１２．上記Ｆｃ領域が、
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに位置３１０のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含み、具体的にはＦｃ領域が、突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０のＨ（ＮＨＱ）を含む、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0402】

１３．上記Ｆｃ領域が、配列番号００２（ＩＡＱ）、配列番号００３（ＡＨＱ）、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号００７（ＡＨＨ）、配列番号００８（ＮＨＨ）、配列番号００９（ＡＡＨ）、配列番号０１０（ＮＡＨ）、配列番号０１１（ＮＡＡ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）、配列番号０１３（ＡＡＡ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0403】

１４．上記Ｆｃ領域が、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）もしくは配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0404】

１５．上記ポリペプチドが、
ａ．ｉ．エフェクターポリペプチド、および
ｉｉ．上記Ｆｃ領域
を含む融合タンパク質；または
ｂ．上記Ｆｃ領域を含む抗体もしくは抗体様分子
から選択される、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0405】

１６．上記ポリペプチドが、
ａ．二重特異性、三重特異性もしくは多重特異性抗体または抗体様分子、具体的には
ｉ．ＣＤ３および腫瘍関連抗原、
ｉｉ．アゴニスト様式のヒストンおよびＩＬ１２受容体、
ｉｉｉ．ＰＤ－Ｌ１および４－１ＢＢ、
ｉｖ．ＰＤ－Ｌ１およびＣＤ２８、
ｖ．アゴニスト様式のＰＤ－Ｌ１およびＩＬ１２受容体、もしくは
ｖｉ．アゴニスト様式の腫瘍関連抗原およびＩＬ１２受容体
に特異的に結合する二重特異性抗体または抗体様分子、
ｂ．エフェクターポリペプチドを含む武装抗体または抗体様分子、あるいは
ｃ．遮蔽ドメインおよび切断可能なプロテアーゼ感受性リンカーペプチドを含む腫瘍条件抗体もしくは組織条件抗体または抗体様分子
から選択される、上記項目のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0406】

１７．上記ポリペプチドが、二重特異性、三重特異性もしくは多重特異性抗体または抗体様分子、具体的にはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する二重特異性抗体または抗体様分子であり、以下を含む、
ｉ．エフェクターポリペプチド、
ｉｉ．ＩＬ－１２Ｆｃ、
ｉｉｉ．配列番号０１５～０１６から選択される配列によって特徴付けられる分子と、配列番号０２１の配列によって特徴付けられる分子との組み合わせ、
ｉｖ．配列番号０１７～０２０から選択される配列によって特徴付けられる分子と、配列番号０２２の配列によって特徴付けられる分子との組み合わせ、または
ｖ．配列番号０１７～０２０から選択される配列によって特徴付けられる分子と、配列番号０２３の配列によって特徴付けられる分子と、配列番号０２４の配列によって特徴付けられる分子との組み合わせ
を含む、項目１６に記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0407】

１８．ポリペプチドが頭蓋内投与によって投与され、上記ポリペプチドの血清または血漿対脳内濃度比が、ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体への頭蓋内ボーラス注射の２４時間後に測定可能である、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドの血清もしくは血漿対脳内濃度比の最大１／８、または
ｂ．Ｆｃ領域もペプチドリンカーも含まない同一ポリペプチドの血清もしくは血漿対脳内濃度比の最大１／２０
から選択される所定の閾値未満である、項目１６に記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0408】

１９．上記エフェクターポリペプチドが、ｈＩＬ－１２、ｈＩＬ－１０、ｈＩＬ－２、ｈＩＬ－７、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ｈＩＬ－１５、ＴＮＦα、ＣＴＬＡ－４、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＧＤＮＦ、ｈＩＬ－３５、ＣＤ９５、ｈＩＬ－１ＲＡ、ｈＩＬ－４、ｈＩＬ－１３、ＳＩＲＰα、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＧＩＴＲＬ、４－１ＢＢＬ、ＥｐｈｒｉｎＡ１、ＥｐｈｒｉｎＢ２、ＥｐｈｒｉｎＢ５、ＢＤＮＦ、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＮＲＴＮ、ＡＲＴＮ、ＰＳＰＮ、ＣＮＴＦ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ－４、ＩＬ－３、ＩＬ－１、ＩＬ－５、ＩＬ－８、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１６、ＣＸ３ＣＬ１、およびＣＸＣＬ１６から選択され、具体的には上記エフェクターポリペプチドはｈＩＬ－１２である、項目１５～１８のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0409】

２０．上記抗体または抗体様分子が、ＰＤ－Ｌ１、ＴＮＦα、ヒストン、ＩＦＮγ、ＣＸＣＬ１０、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、ＯＸ４０ ＣＤ３、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＴＲＥＭ２、ＩＬ－６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ２５、Ｎｏｇｏ－Ａ、ＣＤ２７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ｒｂ１、ＩＬ－２３、ＣＤ４７、ＴＧＦβ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｈｅｒ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＩＬ－４ＲＡ、ＴｆＲ、ＬｆＲ、ＩＲ、ＬＤＬ－Ｒ、ＬＲＰ－１、ＣＤ１３３、ＣＤ１１１、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ－Ａ、Ａｎｇ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－１３Ｒα２、α－シヌクレイン、ＣＳＦ１Ｒ、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、４－１ＢＢ、ＣＣＬ２、ＩＬ－１もしくはＩＬ－１Ｒ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、ＬＩＮＧＯ－１、Ｌ１ＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ＳＯＤ－１、ＳＩＧＭＡＲ－１、ＳＩＧＭＡＲ－２、ＴＤＰ－４３、Ａβ、Ｔａｕ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＴＲＰＭ４、ＡＳＩＣ１、ＶＧＣＣｓ、ＣＢ_１、ＴＴＲ、ＨＴＴ、ＪＣＶ、またはＣ９ｏｒｆ７２に特異的に結合する抗体または抗体様分子から選択され、具体的には上記抗体または抗体様分子が、ＰＤ－Ｌ１、ＯＸ４０、ＣＤ４７またはＮｏｇｏ－Ａに特異的に結合する抗体である、項目１５～１８のいずれか１つに記載の医薬として使用するためのポリペプチド。

【0410】

２１．中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための、ＩｇＧの結晶化可能な断片（Ｆｃ）領域を含むアゴニスト様式でＯＸ４０に特異的に結合する抗体または抗体様分子であって、
上記Ｆｃ領域は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の低下をもたらす修飾を有し、
上記抗体または抗体様分子は脳に投与される抗体または抗体様分子。

【0411】

２２．上記抗体または抗体様分子の血清または血漿対脳内濃度比が、ＦｃＲｎ^ｔｇマウスの線条体への頭蓋内ボーラス注射またはＣＥＤの２４時間後に測定可能である、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一ポリペプチドの血清または血漿対脳内濃度比の最大２／３、
ｂ．Ｆｃ領域もペプチドリンカーも含まない同一ポリペプチドの血清または血漿対脳内濃度比の最大１／８
から選択される所定の閾値未満である、項目２１に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【0412】

２３．上記抗体または抗体様分子のＦｃＲｎに対する親和性の低下が、
ａ．非修飾Ｆｃ領域を含む同一抗体または抗体様分子へのＦｃＲｎの結合を特徴付ける解離定数（Ｋ_Ｄ）と比較して、少なくとも２倍、具体的には少なくとも３倍、より具体的には少なくとも４倍、さらにより具体的には少なくとも５倍増加したＫ_Ｄ、および
ｂ．異なる修飾を受けたＦｃ領域、すなわちＩＡＱ（突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑを有する）およびＡＡＡ（突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａを有する）から選択される１つの突然変異体を含む同一抗体または抗体様分子へのＦｃＲｎの結合を特徴付けるＫ_Ｄと比較して、少なくとも１．５倍、具体的には少なくとも２倍増加したＫ_Ｄ
から選択されるＫ_Ｄによって特徴付けられる、項目２１～２２のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾病の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【0413】

２４．上記頭蓋内送達が、
ａ．対流増強送達（ＣＥＤ）を含む単回、断続的もしくは連続的な局所注入、
ｂ．上記ポリペプチドのインサイチュでの生成、
ｃ 髄腔内または脳室内投与、
ｄ．埋め込み型徐放性製剤からの放出、
ｅ．ＣＮＳへの分子輸送、
ｆ ＣＮＳへの細胞輸送、または
ｇ．鼻腔内適用後のＣＮＳへの輸送
から選択される方法によって行われる、項目２１～２３のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の処置または予防に使用するための抗体または抗体様分子。

【0414】

２５．上記中枢神経系に影響を及ぼす疾患が、悪性疾患、具体的には神経膠腫、より具体的には高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である、項目２１～２４のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の処置または予防に使用するための抗体または抗体様分子。

【0415】

２６．上記Ｆｃ領域がヒトＦｃ領域、またはヒトアミノ酸配列を含むキメラＦｃ領域であり、２５３位［Ｋａｂａｔ番号付けシステム］に突然変異、具体的にはＩ２５３ＡまたはＩ２５３Ｎ、より具体的にはＩ２５３Ｎを有する、項目２１～２５のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の処置または予防に使用するための抗体または抗体様分子。

【0416】

２７．上記Ｆｃ領域が３１０位に突然変異を有さない、項目２６に記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【0417】

２８．上記Ｆｃ領域が、
－突然変異Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＩＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＡＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、ならびに３１０位および４３５位のＨ（ＡＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、ならびに３１０位および４３５位のＨ（ＮＨＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＡおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＡＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ３１０Ａ、ならびに４３５位のＨ（ＮＡＨ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＮＡＡ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ａ（ＡＡＡ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む、項目２１～２７のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【0418】

２９．上記Ｆｃ領域が、
－突然変異Ｉ２５３ＮおよびＨ４３５Ｑ、ならびに３１０位のＨ（ＮＨＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＡＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｑ（ＮＡＱ）；
－突然変異Ｉ２５３Ｎ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＮＡＥ）；または
－突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０ＡおよびＨ４３５Ｅ（ＡＡＥ）
を含む、項目２１～２８のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【0419】

３０．上記Ｆｃ領域が、配列番号００２（ＩＡＱ）、配列番号００３（ＡＨＱ）、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号００７（ＡＨＨ）、配列番号００８（ＮＨＨ）、配列番号００９（ＡＡＨ）、配列番号０１０（ＮＡＨ）、配列番号０１１（ＮＡＡ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）、配列番号０１３（ＡＡＡ）または配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれらを含む、項目２１～２９のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【0420】

３１．上記Ｆｃ領域が、配列番号００４（ＮＨＱ）、配列番号００５（ＡＡＱ）、配列番号００６（ＮＡＱ）、配列番号０１２（ＮＡＥ）または配列番号０１４（ＡＡＥ）によって特徴付けられる配列であるかまたはそれを含む、
項目２１～３０のいずれか１つに記載の中枢神経系に影響を及ぼす疾患の予防または処置に使用するための抗体または抗体様分子。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9A】

【図9B-1】

【図9B-2】

【図9C-1】

【図9C-2】

【図9D】

【図9E】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【配列表】

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【国際調査報告】