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特表2022-526799イズロン酸２－スルファターゼを含むタンパク質分子の製剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-05-26
(54)【発明の名称】イズロン酸２－スルファターゼを含むタンパク質分子の製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 38/46 20060101AFI20220519BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20220519BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20220519BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20220519BHJP
A61K 47/18 20060101ALI20220519BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20220519BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20220519BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20220519BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20220519BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20220519BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20220519BHJP
C12N 9/16 20060101ALN20220519BHJP
C07K 19/00 20060101ALN20220519BHJP
C07K 16/00 20060101ALN20220519BHJP
【ＦＩ】
A61K38/46 ZNA
A61K9/08
A61K47/02
A61K47/12
A61K47/18
A61K47/26
A61K47/20
A61K9/10
A61K9/19
A61P3/00
A61K47/68
C12N9/16
C07K19/00
C07K16/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021558657
(86)(22)【出願日】2020-04-03
(85)【翻訳文提出日】2021-10-29
(86)【国際出願番号】 US2020026669
(87)【国際公開番号】W WO2020206320
(87)【国際公開日】2020-10-08
(31)【優先権主張番号】62/828,859
(32)【優先日】2019-04-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/832,032
(32)【優先日】2019-04-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】518086619
【氏名又は名称】デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｄｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】アンダーセン， ダナ
(72)【発明者】
【氏名】キャザーマン， アダム
(72)【発明者】
【氏名】ジース， ティナ
(72)【発明者】
【氏名】カナン， グナセカラン
(72)【発明者】
【氏名】カリオリス， ミハリス
(72)【発明者】
【氏名】マホーン， カタル
(72)【発明者】
【氏名】パテル， アンキット
【テーマコード（参考）】
4B050
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B050CC05
4B050DD11
4B050KK08
4B050KK12
4B050KK20
4B050LL01
4C076AA12
4C076AA16
4C076AA29
4C076AA95
4C076BB13
4C076CC21
4C076DD23
4C076DD24
4C076DD26Z
4C076DD41Z
4C076DD51Z
4C076DD55
4C076DD67Q
4C076EE23E
4C076EE23F
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF15
4C076FF16
4C076FF61
4C076FF63
4C076GG06
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA41
4C084BA44
4C084CA18
4C084CA53
4C084DC22
4C084MA05
4C084MA16
4C084MA44
4C084MA66
4C084NA12
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZC211
4C084ZC212
4C084ZC541
4C084ZC542
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045DA89
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
ある特定の実施形態は、ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチド及び修飾Ｆｃポリペプチドを含むタンパク質分子、緩衝液、等張剤、界面活性剤、及び安定剤を含む医薬組成物を提供し、医薬組成物のｐＨが約５．５～７．０であり、加えてその使用方法を提供する。ある特定の実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、リン酸緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液である。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
医薬組成物であって、ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）酵素に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む前記第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
【請求項2】
前記緩衝液が、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記リン酸緩衝液が、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記塩がナトリウム塩である、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記ナトリウム塩が、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記医薬組成物が界面活性剤をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記医薬組成物が、糖を含む安定剤をさらに含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１、２及び３からなる群から選択される配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、ＥＵ番号付けによる、アミノ酸残基３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１５、４１６、及び４２１位に置換を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記ＩＤＳアミノ酸配列が、前記第２ＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５のアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、ａ．３８０位にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、
ｂ．３８４位にＴｙｒ、
ｃ．３８６位にＴｈｒ、
ｄ．３８７位にＧｌｕ、
ｅ．３８８位にＴｒｐ、
ｆ．３８９位にＳｅｒまたはＡｌａ、
ｇ．３９０位にＳｅｒまたはＡｓｎ、
ｈ．４１３位にＴｈｒ、
ｉ．４１５位にＧｌｕ、
ｊ．４１６位にＧｌｕ、及び
ｋ．４２１位にＰｈｅ
を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項16】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６、７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項17】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項18】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：７のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項19】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：２５のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項20】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３０のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項21】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４１、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項22】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４１のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４２のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項24】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４４のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項25】
前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４９のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項26】
前記タンパク質分子の濃度が約５～５０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項27】
前記タンパク質分子の濃度が約１０～３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項28】
前記タンパク質分子の濃度が約１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項29】
前記タンパク質分子の濃度が約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項30】
前記タンパク質分子の濃度が約３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項31】
前記緩衝液の濃度が約５～５０ｍＭである、請求項１～３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項32】
前記緩衝液の濃度が約１０～３０ｍＭである、請求項１～３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項33】
前記緩衝液の濃度が約２０ｍＭである、請求項１～３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項34】
前記塩の濃度が約３０～１５０ｍＭである、請求項１～３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項35】
前記塩の濃度が約５０～１３７ｍＭである、請求項１～３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項36】
前記塩の濃度が約５０ｍＭである、請求項１～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項37】
前記塩の濃度が約１３７ｍＭである、請求項１～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項38】
前記界面活性剤の濃度が約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬである、請求項６～３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項39】
前記界面活性剤の濃度が約０．２～０．６ｍｇ／ｍＬである、請求項６～３８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項40】
前記界面活性剤の濃度が約０．４ｍｇ／ｍＬである、請求項６～３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項41】
前記界面活性剤の濃度が約０．６ｍｇ／ｍＬである、請求項６～３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項42】
前記界面活性剤がポリソルベートを含む、請求項６～４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項43】
前記界面活性剤が、ポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）及びポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）からなる群から選択される、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項44】
前記界面活性剤がポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）である、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項45】
前記界面活性剤がポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）である、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項46】
前記安定剤が、スクロースまたはトレハロースから選択される糖を含む、請求項７～４５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項47】
前記糖の濃度が約１００～２５０ｍＭである、請求項７～４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項48】
前記糖の濃度が約１７５ｍＭである、請求項７～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項49】
前記安定剤がスクロースを含む、請求項７～４８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項50】
前記組成物がメチオニンをさらに含む、請求項１～４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項51】
前記メチオニンの濃度が約５～２０ｍＭである、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項52】
前記メチオニンの濃度が約１０ｍＭである、請求項５０または５１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項53】
前記医薬組成物の前記ｐＨが約５．５～６．５である、請求項１～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項54】
前記医薬組成物の前記ｐＨが約６．５±０．５である、請求項１～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項55】
前記タンパク質分子が、約５．５～７．０のｐＨでインタクトなままである、請求項１～５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項56】
前記医薬組成物が、液体組成物として提供される、請求項１～５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項57】
前記医薬組成物が、凍結乾燥組成物として提供される、請求項１～５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項58】
ハンター症候群の処置を必要とする対象のハンター症候群の処置方法であって、請求項１～５７のいずれか１項に記載の医薬組成物を提供し、それを前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項59】
前記医薬組成物が静脈内投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項60】
ハンター症候群の処置を必要とする対象のハンター症候群の処置に使用するための、請求項１～５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項61】
ハンター症候群の処置を必要とする対象のハンター症候群を処置するための医薬の調製における、請求項１～５７のいずれか１項に記載されるような医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月３日出願の米国仮特許出願第６２／８２８，８５９号、及び２０１９年４月１０日出願の米国仮特許出願第６２／８３２，０３２号に対する優先権を主張する。上で参照される出願の内容全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年４月３日出願の米国仮特許出願第６２／８２８，８５９号、及び２０１９年４月１０日出願の米国仮特許出願第６２／８３２，０３２号に対する優先権を主張する。上で参照される出願の内容全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
リソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）は、リソソーム機能の欠陥に起因する比較的稀な遺伝性代謝性疾患である。ＬＳＤは通常、リソソーム内の代謝産物の分解に関与する単一酵素の欠損によって引き起こされる。酵素活性の欠如に起因する生成物の蓄積は、様々な器官系に影響を及ぼし、重篤な症状及び早期死亡につながり得る。大多数のＬＳＤが顕著な神経学的要素も有し、これは進行性神経変性及び重度の認知障害からてんかん、行動障害、及び精神障害にまでわたる。ＬＳＤにおいて欠損している酵素の組換え型が、障害の処置に使用され得るが、そのような療法は、血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて組換え酵素を送達することが困難なため、脳に対する効果はほとんど有しない可能性がある。したがって、これらの障害を処置するための新規組成物が必要である。特に、ハンター症候群を処置するための新規組成物が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0003】
ある特定の実施形態は、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含む医薬組成物を提供し、医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含む医薬組成物を提供し、医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である。
【0004】
ある特定の実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、リン酸緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液である。
【0005】
ある特定の実施形態では、塩はナトリウム塩である。ある特定の実施形態では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される。
【0006】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤をさらに含む。
【0007】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、糖を含む安定剤をさらに含む。
【0008】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、メチオニンをさらに含む。
【0009】
いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、または野生型ＩＤＳ、例えば、野生型ヒトＩＤＳの触媒活性バリアントもしくは断片である。
【0010】
いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、ＩＤＳバリアント、またはその触媒活性断片である。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、配列番号：１、２、３、１１及び２３のうちいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、配列番号：１、２、３、１１及び２３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【0011】
いくつかの実施形態では、第１または第２Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む。
【0012】
ある特定の実施形態はまた、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）アミノ酸配列に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、そのＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含む医薬組成物を提供し、医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）アミノ酸配列に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、そのＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含む医薬組成物を提供し、医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である。
【0013】
ある特定の実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、リン酸緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液である。
【0014】
ある特定の実施形態では、塩はナトリウム塩である。ある特定の実施形態では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される。
【0015】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤をさらに含む。
【0016】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、糖を含む安定剤をさらに含む。
【0017】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、メチオニンをさらに含む。
【0018】
ある特定の実施形態では、ＩＤＳアミノ酸配列は、配列番号：１、２、及び３からなる群から選択される配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳアミノ酸配列は、第２ＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。ある特定の実施形態では、ＩＤＳアミノ酸配列に連結される第２Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４または５のアミノ酸配列を含む。
【0019】
ある特定の実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、アミノ酸残基３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１５、４１６、及び４２１位に置換を含む。ある特定の実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。ある特定の実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒまたはＡｌａ、３９０位にＳｅｒまたはＡｓｎ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含む。
【0020】
ある特定の実施形態では、第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドは、二量体化する。
【0021】
ある特定の実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＤＳアミノ酸配列に連結される第２Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４または５の配列を含む。
【0022】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は液体組成物である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥組成物である。
【0023】
ある特定の実施形態はまた、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の処置を必要とする対象のＬＳＤを処置する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載される医薬組成物を提供し、それを対象に投与することを含む。
【0024】
ある特定の実施形態は、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の処置を必要とする対象のＬＳＤの処置に使用するための本明細書に記載される医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【0025】
ある特定の実施形態は、（ａ）ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＦｃポリペプチド（例えば、修飾Ｆｃポリペプチド）を含むタンパク質分子、（ｂ）緩衝液、ならびに（ｃ）塩などの等張剤を含む医薬組成物に加えて、そのような組成物の使用方法を提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の追加成分をさらに含む。例えば、ある特定の実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤、及び／または１つ以上の安定剤をさらに含む。したがって、ある特定の実施形態は、（ａ）ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＦｃポリペプチド（例えば、修飾Ｆｃポリペプチド）を含むタンパク質分子、（ｂ）緩衝液（例えば、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムを含む）、（ｃ）等張剤（例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウム）、（ｄ）界面活性剤、ならびに（ｅ）１つ以上の安定剤（例えば、糖を含む安定剤）を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、メチオニンをさらに含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は複数のタンパク質分子を含み、これらは同じであっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、それらが本明細書に記載されるタンパク質分子を安定化できるか、または代わりにそのタンパク質分子の劣化を遅延もしくは防止できるように製剤化されている。特に、製剤は、タンパク質分子が、保存時に、ならびにある特定のプロセス（凍結／解凍、機械的混合及び凍結乾燥など）（実施例を参照のこと）中でその物理的及び／または化学的整合性ならびに生物活性を保持するように開発されている。
【0026】
ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むタンパク質分子
本明細書に記載されるように、ある特定の実施形態は、ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むタンパク質分子を含む医薬組成物を提供する。ＥＲＴ酵素は、ＬＳＤにおいて欠損している任意の酵素であってよい。融合タンパク質中に組み込まれるＥＲＴ酵素は触媒活性がある、すなわち、それはＬＳＤにおいて欠損している酵素活性を保持する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素はイズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）であり、これはハンター症候群において欠損している。
本明細書に記載されるように、ある特定の実施形態は、ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むタンパク質分子を含む医薬組成物を提供する。ＥＲＴ酵素は、ＬＳＤにおいて欠損している任意の酵素であってよい。融合タンパク質中に組み込まれるＥＲＴ酵素は触媒活性がある、すなわち、それはＬＳＤにおいて欠損している酵素活性を保持する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素はイズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）であり、これはハンター症候群において欠損している。
【0027】
Ｆｃポリペプチドに連結されるＥＲＴ酵素を含む融合タンパク質を含むタンパク質分子のある特定の実施形態が以下に記載され、これらの融合タンパク質は、ＬＳＤの処置として本明細書に記載されるある特定の方法に使用されてよい。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は二量体Ｆｃポリペプチドを含み、Ｆｃポリペプチドモノマーの少なくとも１つがＥＲＴ酵素に連結されている。Ｆｃポリペプチドは酵素半減期を増加させ得、いくつかの場合には、タンパク質に追加の機能特性を付与するように修飾され得る。血液脳関門（ＢＢＢ）を越えるＥＲＴ酵素の送達を容易にする融合タンパク質を含むタンパク質分子もまた、本明細書に記載される。これらのタンパク質分子は、二量体を形成するＦｃポリペプチド及び修飾Ｆｃポリペプチド、ならびにＦｃ領域及び／または修飾Ｆｃ領域に連結されるＥＲＴ酵素を含む。修飾Ｆｃ領域は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）などのＢＢＢ受容体に特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、ＥＲＴアミノ酸配列は、全長ＥＲＴ配列である。他の実施形態では、ＥＲＴアミノ酸配列は、野生型ＥＲＴ、例えば、野生型ヒトＩＤＳの触媒活性バリアントまたは断片である。これらのタンパク質分子に関するある特定の実施形態は、ＥＲＴ酵素と組み合わせた酵素輸送ビヒクル（ＥＴＶ）、例えば、ＥＴＶ：ＩＤＳとして本明細書で言及される場合がある。
【0028】
いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、ＩＤＳバリアント、またはその触媒活性断片である。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１、２、３、１１及び２３のうちいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１、２、３、１１、及び２３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【0029】
いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１、２及び３のうちいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１、２及び３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【0030】
いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１のアミノ酸配列を含む。
【0031】
いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：２のアミノ酸配列を含む。
【0032】
いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：３のアミノ酸配列を含む。
【0033】
いくつかの態様では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、（ｉ）修飾（例えば、ヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾）を含有する場合があるか、または野生型Ｆｃポリペプチドの場合があるＦｃポリペプチド、及びＥＲＴ酵素アミノ酸配列、ならびに（ｉｉ）修飾（例えば、ヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾）を含有する場合があるか、または野生型Ｆｃポリペプチドの場合があるＦｃポリペプチド、及び場合により、ＥＲＴ酵素アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドが、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体、例えば、ＴｆＲへの結合をもたらす修飾を含有してよい。ＥＲＴ酵素は、ＬＳＤにおいて欠損している任意の酵素であってよい。融合タンパク質中に組み込まれるＥＲＴ酵素は触媒活性がある、すなわち、それはＬＳＤにおいて欠損している酵素活性を保持する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素はＩＤＳであり、これはハンター症候群において欠損している。
【0034】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ＩＤＳ酵素及び場合により、ＢＢＢ受容体に結合する修飾Ｆｃポリペプチド、例えば、野生型ＩＤＳの触媒活性断片またはバリアントを含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：１、２、３、１１及び２３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含むＩＤＳタンパク質のバリアントまたは触媒活性断片である。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素の触媒活性バリアントまたは断片は、野生型ＩＤＳ酵素の活性の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれを超える活性を有する。
【0035】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質中に存在するＥＲＴ酵素、例えば、ＩＤＳ、またはその触媒活性バリアントもしくは断片は、ＦｃポリペプチドまたはＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドに連結されない場合の酵素の活性と比較して、その活性の少なくとも２５％を保持する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素、またはその触媒活性バリアントもしくは断片は、ＦｃポリペプチドまたはＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドに連結されない場合の酵素の活性と比較して、その活性の少なくとも１０％、または少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％を保持する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素、またはその触媒活性バリアントもしくは断片は、ＦｃポリペプチドまたはＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドに連結されない場合の酵素の活性と比較して、その活性の少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％を保持する。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドへの融合は、ＥＲＴ酵素、またはその触媒活性バリアントもしくは断片の活性を減少させない。いくつかの実施形態では、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドへの融合は、ＥＲＴ酵素の活性を減少させない。
【0036】
血液脳関門（ＢＢＢ）受容体結合のためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの態様では、分子は、血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて輸送できる。そのようなタンパク質は、ＢＢＢ受容体に結合する修飾Ｆｃポリペプチドを含む。ＢＢＢ受容体は、ＢＢＢ内皮に加えて、他の細胞型及び組織型上で発現される。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ受容体は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）である。
いくつかの態様では、分子は、血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて輸送できる。そのようなタンパク質は、ＢＢＢ受容体に結合する修飾Ｆｃポリペプチドを含む。ＢＢＢ受容体は、ＢＢＢ内皮に加えて、他の細胞型及び組織型上で発現される。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ受容体は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）である。
【0037】
様々なＦｃ修飾において指定されるアミノ酸残基は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチド中に導入されるものを含めて、本明細書ではＥＵインデックス番号付けを使用して番号付けされる。任意のＦｃポリペプチド、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチドは、本明細書に記載されるような１つ以上の位置に修飾、例えば、アミノ酸置換を有してよい。
【0038】
本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する修飾（例えば、ヘテロ二量体化及び／またはＢＢＢ受容体結合を増強させる）Ｆｃポリペプチドは、天然Ｆｃ領域配列あるいはその断片、例えば、少なくとも５０アミノ酸長もしくは少なくとも１００アミノ酸長、またはそれを超えるアミノ酸長の断片と少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態では、天然Ｆｃアミノ酸配列は、配列番号：８のＦｃ領域配列である。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：８のアミノ酸１～１１０と、または配列番号：８のアミノ酸１１１～２１７と、あるいはその断片、例えば、少なくとも５０アミノ酸長もしくは少なくとも１００アミノ酸長、またはそれを超えるアミノ酸長の断片と少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：８のアミノ酸１～２１６、あるいはその断片、例えば、少なくとも５０アミノ酸長もしくは少なくとも１００アミノ酸長、またはそれを超えるアミノ酸長の断片と少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する。
【0039】
いくつかの実施形態では、修飾（例えば、ヘテロ二量体化及び／またはＢＢＢ受容体結合を増強させる）Ｆｃポリペプチドは、天然Ｆｃ領域アミノ酸配列に対応する、少なくとも５０アミノ酸、または少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、もしくは９５以上、または少なくとも１００アミノ酸、あるいはそれを超えるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、天然Ｆｃ領域アミノ酸配列、例えば、配列番号：８などに対応する、少なくとも２５連続アミノ酸、または少なくとも３０、３５、４０、もしくは４５連続アミノ酸、または５０連続アミノ酸、または少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、もしくは９５以上の連続アミノ酸、または１００以上の連続アミノ酸を含む。
【0040】
いくつかの実施形態では、ＢＢＢ受容体結合活性のために修飾されるドメインは、ヒトＩｇ ＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインなどである。ＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のものであり得る。ＩｇＧ１抗体との関連において、ＣＨ３ドメインは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるように３４１位付近～４４７位付近のアミノ酸のセグメントを指す。
【0041】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する修飾（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、アミノ酸３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１位に少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、少なくとも４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つの置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する修飾（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、参照配列、例えば、配列番号：８中において、ＥＵ番号付けスキームによる、アミノ酸３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１位に少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、少なくとも４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つの置換を含む。
【0042】
ＦｃＲｎ結合部位
ある特定の態様では、修飾（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチド、またはＢＢＢ受容体に特異的に結合しない、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＦｃポリペプチドはまた、ＦｃＲｎ結合部位を含み得る。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、Ｆｃポリペプチドまたはその断片内に存在する。
ある特定の態様では、修飾（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチド、またはＢＢＢ受容体に特異的に結合しない、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＦｃポリペプチドはまた、ＦｃＲｎ結合部位を含み得る。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、Ｆｃポリペプチドまたはその断片内に存在する。
【0043】
いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、天然ＦｃＲｎ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、天然ＦｃＲｎ結合部位のアミノ酸配列と比較してアミノ酸変化を含まない。いくつかの実施形態では、天然ＦｃＲｎ結合部位は、ＩｇＧ結合部位、例えば、ヒトＩｇＧ結合部位である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、ＦｃＲｎ結合を変化させる修飾を含む。
【0044】
いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、変異している、例えば、置換されている１つ以上のアミノ酸残基を有し、その変異（複数可）は、血清半減期を増加させるか、または血清半減期を実質的には減少させない（すなわち、変異した位置に野生型残基を有する対応する修飾Ｆｃポリペプチドと比較して、同じ条件下でアッセイされる場合に血清半減期を２５％以下で減少させる）。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、ＥＵ番号付けスキームによる、２５０～２５６、３０７、３８０、４２８、及び４３３～４３６位で置換される１つ以上のアミノ酸残基を有する。
【0045】
いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位の、またはその近傍の１つ以上の残基は、修飾ポリペプチドの血清半減期を延長させるために、天然ヒトＩｇＧ配列と比較して変異している。いくつかの実施形態では、変異は、ＥＵ番号付けスキームによる、２５２、２５４、及び２５６位のうち１つ、２つ、または３つに導入される。いくつかの実施形態では、変異は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、変異Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅをさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、Ｔ３０７、Ｅ３８０、及びＮ４３４位のうち１つ、２つ、または３つ全てに置換を含む。いくつかの実施形態では、変異は、Ｔ３０７Ｑ及びＮ４３４Ａである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、変異Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、及びＮ４３４Ａを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、Ｔ２５０及びＭ４２８位に置換を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、変異Ｔ２５０Ｑ及び／またはＭ４２８Ｌを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、Ｍ４２８及びＮ４３４位に置換を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ変異を含む。
【0046】
トランスフェリン受容体結合Ｆｃポリペプチド
本節は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合し、血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて輸送できる、本明細書に記載される修飾Ｆｃポリペプチドの生成について記載する。
本節は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合し、血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて輸送できる、本明細書に記載される修飾Ｆｃポリペプチドの生成について記載する。
【0047】
ＣＨ３ドメインに変異を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ３ドメインに置換を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合活性のために修飾されるヒトＩｇ ＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ ＣＨ３ドメインなどを含む。ＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のものであり得る。ＩｇＧ抗体との関連において、ＣＨ３ドメインは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるように３４１位付近～４４７位付近のアミノ酸のセグメントを指す。
いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ３ドメインに置換を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合活性のために修飾されるヒトＩｇ ＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ ＣＨ３ドメインなどを含む。ＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のものであり得る。ＩｇＧ抗体との関連において、ＣＨ３ドメインは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるように３４１位付近～４４７位付近のアミノ酸のセグメントを指す。
【0048】
いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲのアピカルドメインに結合し、トランスフェリンとＴｆＲとの結合をブロックする、またはさもなければ阻害することなくＴｆＲに結合する可能性がある。いくつかの実施形態では、トランスフェリンとＴｆＲとの結合は、実質的に阻害されない。いくつかの実施形態では、トランスフェリンとＴｆＲとの結合は、約５０％未満（例えば、約４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）で阻害される。いくつかの実施形態では、トランスフェリンとＴｆＲとの結合は、約２０％未満（例えば、約１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％未満）で阻害される。
【0049】
いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１位に少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、参照配列、例えば、配列番号：８中において、ＥＵ番号付けスキームによる、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１位に少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つの置換を含む。いくつかの実施形態では、３８８及び／または４２１位のアミノ酸は、芳香族アミノ酸、例えば、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒである。いくつかの実施形態では、３８８位のアミノ酸はＴｒｐである。いくつかの実施形態では、４２１位の芳香族アミノ酸は、ＴｒｐまたはＰｈｅである。
【0050】
いくつかの実施形態では、以下のような少なくとも１つの位置が置換されている：３８４位のＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、もしくはＶａｌ、３８６位のＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ、３８７位のＶａｌ、Ｐｒｏ、もしくは酸性アミノ酸、３８８位の芳香族アミノ酸、例えば、Ｔｒｐ、３８９位のＶａｌ、Ｓｅｒ、もしくはＡｌａ、４１３位の酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、もしくはＰｒｏ、４１６位のＴｈｒもしくは酸性アミノ酸、または４２１位のＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、セット内の位置のうち１つ以上における特定のアミノ酸の保存的置換、例えば、同じ電荷分類、疎水性分類、側鎖環構造分類（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ分類、及び／または極性もしくは非極性分類中のアミノ酸を含んでよい。したがって、例えば、Ｉｌｅは３８４位、３８６位、及び／または４１３位に存在する場合がある。いくつかの実施形態では、３８７、４１３、及び４１６位のうち１つ、２つ、または各々の位置における酸性アミノ酸は、Ｇｌｕである。他の実施形態では、３８７、４１３、及び４１６位のうち１つ、２つまたは各々における酸性アミノ酸は、Ａｓｐである。いくつかの実施形態では、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１６、及び４２１位のうち２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つ全てが、本段落中で規定されるようなアミノ酸置換を有する。
【0051】
いくつかの実施形態では、前２つの段落に記載されるように修飾されるＦｃポリペプチドは、３９０位に天然Ａｓｎを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３９０位にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＡｓｐを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、３８０、３９１、３９２、及び４１５を含む位置に１つ、２つ、３つ、または４つの置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎは、３８０位に存在する場合がある。いくつかの実施形態では、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅは、３９１位に存在する場合がある。いくつかの実施形態では、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓは、３９２位に存在する場合がある。いくつかの実施形態では、Ｇｌｕは、４１５位に存在する場合がある。
【0052】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の置換を含む。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に少なくとも８つの置換を含む。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に少なくとも９つの置換を含む。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に少なくとも１０の置換を含む。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に１１の置換を含む。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１５、４１６、及び４２１位に置換を含む。
【0053】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下：３８０位のＴｒｐ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｕ、３８４位のＴｙｒもしくはＰｈｅ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、もしくはＡｓｎ、３９０位のＳｅｒもしくはＡｓｎ、４１３位のＴｈｒもしくはＳｅｒ、４１５位のＧｌｕもしくはＳｅｒ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅから選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の位置を含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、３８４位にＴｙｒまたはＰｈｅ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎ、３９０位にＳｅｒまたはＡｓｎ、４１３位にＴｈｒまたはＳｅｒ、４１５位にＧｌｕまたはＳｅｒ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0054】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下：３８０位のＴｒｐ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｕ、３８４位のＴｙｒ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒもしくはＡｌａ、３９０位のＳｅｒもしくはＡｓｎ、４１３位のＴｈｒ、４１５位のＧｌｕ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅから選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の位置を含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒまたはＡｌａ、３９０位にＳｅｒまたはＡｓｎ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0055】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下：３８０位のＴｒｐ、３８４位のＴｙｒ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、３９０位のＳｅｒ、４１３位のＴｈｒ、４１５位のＧｌｕ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅから選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の位置を含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、３９０位にＳｅｒ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0056】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下：３８０位のＬｅｕ、３８４位のＴｙｒ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＡｌａ、３９０位のＳｅｒ、４１３位のＴｈｒ、４１５位のＧｌｕ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅから選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の位置を含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＬｅｕ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、３９０位にＳｅｒ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0057】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下：３８０位のＧｌｕ、３８４位のＴｙｒ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＡｌａ、３９０位のＡｓｎ、４１３位のＴｈｒ、４１５位のＧｌｕ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅから選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の位置を含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＧｌｕ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、３９０位にＡｓｎ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0058】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下：３８０位のＬｅｕ、３８４位のＴｙｒ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、３９０位のＳｅｒ、４１３位のＴｈｒ、４１５位のＧｌｕ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅから選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、または１１の位置を含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＬｅｕ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、３９０位にＳｅｒ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0059】
ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８４位にＬｅｕもしくはＭｅｔ、３８６位にＬｅｕ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ、３８７位にＶａｌ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＶａｌもしくはＡｌａ、４１３位にＰｒｏ、４１６位にＴｈｒ、及び／または４２１位にＴｒｐを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる、３９１位にＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅをさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または３９２位にＧｌｎ、Ｐｈｅ、もしくはＨｉｓをさらに含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐが、ＥＵ番号付けによる３８０位に存在し、及び／またはＧｌｎが３９２位に存在する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる３８０位にＴｒｐを有しない。
【0060】
他の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕもしくはＶａｌ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒもしくはＴｈｒ、４１６位にＧｌｕ、及び／または４２１位にＰｈｅを含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けによる３９０位に天然Ａｓｎを含む。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または４１５位にＧｌｕをさらに含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐ及び／または４１５位にＧｌｕをさらに含み、位置はＥＵ番号付けによるものである。
【0061】
追加の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、４１４、４２４、及び４２６を含む位置に１つ、２つ、または３つの置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、４１４位はＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、もしくはＰｒｏであり、４２４位はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、もしくはＬｙｓであり、及び／または４２６位はＳｅｒ、Ｔｒｐ、もしくはＧｌｙである。
【0062】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下の置換：ＥＵ番号付けスキームによる、３８０位にＴｒｐ、３８６位にＴｈｒ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＶａｌ、４１３位にＴｈｒもしくはＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、及び／または４２１位にＰｈｅのうち１つ以上を含む。
【0063】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、追加の変異、例えば、以下に記載される変異などを含み、これらとしてはノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、及び／または血清安定性もしくは血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、もしくは（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。実例として、配列番号：６、７、２５、２８、２９、３０、４１、４２、４４、４７、４８及び４９は、これらの追加の変異のうち１つ以上を含む、ＣＨ３ドメイン中に変異を有する修飾Ｆｃポリペプチドの非限定的な例を提供する。
【0064】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）ならびにエフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６、７、２５、２８、２９、３０、４１、４２、４４、４７、４８または４９の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６、７、２５、２８、２９または３０の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４１、４２、４４、４７、４８または４９の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する。
【0065】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）ならびに血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を含む。
【0066】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、ならびに血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を含む。
【0067】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を含む。
【0068】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）ならびにエフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））を含む。
【0069】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）ならびに血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を含む。
【0070】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、ならびに血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を含む。
【0071】
いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによる、３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０位に少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つの置換を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、４３７位にＧｌｙ、４３８位にＰｈｅ、及び／または４４０位にＡｓｐを含む。いくつかの実施形態では、Ｇｌｕは４４０位に存在する。ある特定の実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、以下のような位置：３４５位のＰｈｅもしくはＩｌｅ、３４６位のＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、もしくはＬｙｓ、３４７位のＴｙｒ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、もしくはＡｓｐ、３４９位のＴｈｒもしくはＡｌａ、４３７位のＧｌｙ、４３８位のＰｈｅ、４３９位のＨｉｓ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、もしくはＰｈｅ、または４４０位のＡｓｐに少なくとも１つの置換を含む。いくつかの実施形態では、３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０位うち２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つ全てが、本段落中で規定されるような置換を有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、セット内の位置のうち１つ以上における特定のアミノ酸の保存的置換、例えば、同じ電荷分類、疎水性分類、側鎖環構造分類（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ分類、及び／または極性もしくは非極性分類中のアミノ酸を含んでよい。
【0072】
追加のＦｃポリペプチド変異
いくつかの態様では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、独立して選択される修飾を各々含む場合があるか、または野生型Ｆｃポリペプチド、例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドの場合がある２つのＦｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドが、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する。一方または両方のＦｃポリペプチドに導入され得る他の変異の非限定的な例としては、例えば、Ｆｃポリペプチドの血清安定性もしくは血清半減期を増加させる変異、エフェクター機能を調節する変異、グリコシル化に影響を与える変異、ヒトの免疫原性を減少させる変異、及び／またはノブ及びホールヘテロ二量体化をもたらす変異が挙げられる。
いくつかの態様では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、独立して選択される修飾を各々含む場合があるか、または野生型Ｆｃポリペプチド、例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドの場合がある２つのＦｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドが、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する。一方または両方のＦｃポリペプチドに導入され得る他の変異の非限定的な例としては、例えば、Ｆｃポリペプチドの血清安定性もしくは血清半減期を増加させる変異、エフェクター機能を調節する変異、グリコシル化に影響を与える変異、ヒトの免疫原性を減少させる変異、及び／またはノブ及びホールヘテロ二量体化をもたらす変異が挙げられる。
【0073】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子中に存在するＦｃポリペプチドは独立して、対応する野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチド）と少なくとも約７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有する。
【0074】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子中に存在するＦｃポリペプチドはノブ及びホール変異を含み、これらはヘテロ二量体の形成を促進し、ホモ二量体の形成を妨害する。一般に、本修飾は、第１ポリペプチドの界面に突起（「ノブ」）を導入し、第２ポリペプチドの界面に対応する空洞（「ホール」）を導入することで、ヘテロ二量体の形成を促進し、それゆえホモ二量体の形成を妨害するように突起が空洞内に配置され得る。突起は、第１ポリペプチドの界面からの小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。突起と同一または同様のサイズの補完的空洞は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって第２ポリペプチドの界面に作製される。いくつかの実施形態では、そのような追加の変異は、ポリペプチドとＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲとの結合に悪影響を及ぼさない、Ｆｃポリペプチド中の位置に存在する。
【0075】
二量体化のためのノブ及びホールアプローチの例示的な一実施形態では、タンパク質分子中に存在するＦｃポリペプチドの一方の３６６位（ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされる）が、天然スレオニンの代わりにトリプトファンを含む。二量体中の他方のＦｃポリペプチドは、天然チロシンの代わりに４０７位（ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされる）にバリンを有する。他方のＦｃポリペプチドは、３６６位（ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされる）の天然スレオニンがセリンで置換されている置換及び３６８位（ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされる）の天然ロイシンがアラニンで置換されている置換をさらに含む場合がある。したがって、本明細書に記載されるタンパク質分子のＦｃポリペプチドの一方は、Ｔ３６６Ｗノブ変異を有し、他方のＦｃポリペプチドはＹ４０７Ｖ変異を有していて、これは通常、Ｔ３６６Ｓ及びＬ３６８Ａホール変異を伴う。
【0076】
いくつかの実施形態では、血清半減期を増強するための修飾が導入されてよい。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるように、２５２位にチロシン、２５４位にスレオニン、及び２５６位にグルタミン酸を含んでよい。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ置換を有してよい。あるいは、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるように、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ置換を有してよい。あるいは、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ置換を有してよい。
【0077】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を減少させる修飾、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞上に発現されるＦｃ受容体に結合する際、ある特定の生物学的機能を誘導する能力が減少している修飾を含んでよい。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられるが、これらに限定されない。エフェクター機能は、抗体クラスによって変化する場合がある。例えば、天然ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞上に存在する適切なＦｃ受容体に結合するとＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を誘発し得、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫細胞上に存在する適切なＦｃ受容体に結合するとＡＤＣＰ機能を誘発し得る。
【0078】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドはまた、ヘテロ二量体化を目的とした他の修飾、例えば、自然に帯電しているＣＨ３－ＣＨ３界面内の接触残基の静電的操作または疎水性パッチ修飾を含有するように操作されてもよい。
【0079】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を調節する追加の修飾を含んでよい。
【0080】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を減少させるか、または除去する修飾を含んでよい。エフェクター機能を減少させる例示的なＦｃポリペプチド変異としては、ＣＨ２ドメイン中の、例えば、ＥＵ番号付けスキームによる、２３４及び２３５位での置換が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３４及び２３５位にアラニン残基を含み得る。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）置換を有してよい。
【0081】
エフェクター機能を調節する追加のＦｃポリペプチド変異としては、以下が挙げられるが、これに限定されない：３２９位に、プロリンがグリシンもしくはアルギニンで、またはＦｃのプロリン３２９とＦｃγＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面を破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換されている変異を有する場合があること。追加の例示的な置換としては、ＥＵ番号付けスキームによる、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、及びＰ３３１Ｓが挙げられる。複数の置換、例えば、ＥＵ番号付けスキームによる、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域のＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａ、ならびにヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３６Ｅも存在する場合がある。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、ＥＵ番号付けスキームによる２９８、３３３、及び／または３３４位での置換を有してよい。
【0082】
追加の変異を含む例示的なＦｃポリペプチド
非限定的な例として、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、及び／または血清安定性もしくは血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、もしくは（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を含む、追加の変異を含んでよい。
非限定的な例として、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、及び／または血清安定性もしくは血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、もしくは（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を含む、追加の変異を含んでよい。
【0083】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0084】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））を有してよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0085】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0086】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｗ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0087】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0088】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0089】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、血清または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0090】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、血清安定性または血清半減期を増加させる変異（例えば、（ｉ）ＥＵ番号付けを参照して番号付けされるようなＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるようなＭ４２８Ｌを伴う、もしくはそれを伴わないＮ４３４Ｓ）を有してよい（例えば、配列番号：８の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する）。
【0091】
ＥＲＴ酵素を含む例示的なタンパク質分子
いくつかの態様では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドを含み、いずれかがＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結され、第１Ｆｃポリペプチドは第２ＦｃポリペプチドとＦｃ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖及び／または軽鎖可変領域配列あるいはその抗原結合部分を含まない。いくつかの実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドであり、及び／または第２Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第２Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、他方のＦｃポリペプチドとのそのヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、エフェクター機能を減少させる１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、血清半減期を延長する１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する。
いくつかの態様では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドを含み、いずれかがＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結され、第１Ｆｃポリペプチドは第２ＦｃポリペプチドとＦｃ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖及び／または軽鎖可変領域配列あるいはその抗原結合部分を含まない。いくつかの実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドであり、及び／または第２Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第２Ｆｃポリペプチドは修飾Ｆｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、他方のＦｃポリペプチドとのそのヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、エフェクター機能を減少させる１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、血清半減期を延長する１つ以上の修飾を含有する。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する。
【0092】
他の態様では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドを含む第１ポリペプチド鎖、及び修飾Ｆｃポリペプチドと二量体化してＦｃ二量体を形成するＦｃポリペプチドを含む第２ポリペプチド鎖を含む。ＥＲＴ酵素は、第１または第２ポリペプチド鎖のいずれかに連結されてよい。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、第２ポリペプチド鎖に連結されている。いくつかの実施形態では、タンパク質は２つのＥＲＴ酵素を含み、各々がポリペプチド鎖の一方に連結されている。いくつかの実施形態では、第２ポリペプチド鎖のＦｃポリペプチドは、第１ポリペプチド鎖の修飾Ｆｃポリペプチドと同じＢＢＢ受容体に特異的に結合する、ＢＢＢ受容体結合ポリペプチドであってよい。いくつかの実施形態では、第２ポリペプチド鎖のＦｃポリペプチドは、ＢＢＢ受容体に特異的に結合しない。
【0093】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドを含む第１ポリペプチド鎖及びＦｃポリペプチドを含む第２ポリペプチド鎖を含み、修飾Ｆｃポリペプチド及びＦｃポリペプチドは、二量体化してＦｃ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、第１ポリペプチド鎖に連結されている。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、第２ポリペプチド鎖に連結されている。いくつかの実施形態では、第２ポリペプチド鎖のＦｃポリペプチドは、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに特異的に結合しない。
【0094】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ＴｆＲに結合し、Ｔ３６６Ｗ（ノブ）置換を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む第１ポリペプチド鎖、ならびにＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ホール）置換を含むＦｃポリペプチドを含む第２ポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（ＹＴＥ）置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）置換ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（ＹＴＥ）置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、２３４、２３５、２５２、２５４、２５６、及び３６６位にヒトＩｇＧ１野生型残基を含む。
【0095】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６、２８、２９、４１、４７及び４８のうちいずれか１つに指定されるようなノブ及びＬＡＬＡ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：６、２８、２９、４１、４７及び４８のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つに指定されるようなノブ及びＬＡＬＡ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つに指定されるようなノブ及びＬＡＬＡ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：１４～１７のうちいずれか１つに指定されるようなホール、ＬＡＬＡ、及び／またはＹＴＥ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：１４～１７のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：５４～５７のうちいずれか１つに指定されるようなホール、ＬＡＬＡ、及び／またはＹＴＥ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：５４～５７のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６、２８、２９、４１、４７及び４８のうちいずれか１つを含み、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：１４、１５、１６、１７、５４、５５、５６及び５７のうちいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つを含み、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：１４～１７のうちいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つを含み、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：５４、５５、５６及び５７のうちいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：７、２５、３０、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：７、２５、３０、４２、４４及び４９のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：７、２５及び３０のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４２、４４及び４９のうちいずれか１つの配列を含む。
【0096】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ＴｆＲに結合し、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ホール）置換を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む第１ポリペプチド鎖、ならびにＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｔ３６６Ｗ（ノブ）置換を含むＦｃポリペプチドを含む第２ポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（ＹＴＥ）置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）置換ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（ＹＴＥ）置換をさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような、２３４、２３５、２５２、２５４、２５６、及び３６６位にヒトＩｇＧ１野生型残基を含む。
【0097】
いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、ホール、ＬＡＬＡ、及びＹＴＥ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：１８～２１のうちいずれか１つに指定されるようなノブ、ＬＡＬＡ、及びＹＴＥ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：１８～２１のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、配列番号：５８～６１のうちいずれか１つに指定されるようなノブ、ＬＡＬＡ、及びＹＴＥ変異を含み、各々の配列と少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：５８～６１のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。
【0098】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：１４～１７のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：１４～１７のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：１４～１７及び配列番号：５４～５７のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：１４～１７及び配列番号：５４～５７のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、ＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、柔軟なリンカーなどのリンカー、及び／またはヒンジ領域もしくはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）によってＦｃポリペプチドに連結される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ配列は、配列番号：１、２、３及び２３のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：１、２、３及び２３のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４、５、２４、２６、３１、３３、３９、４０、４３、４５、５０及び５２のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４、５、２４、２６、３１、３３、３９、４０、４３、４５、５０及び５２のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４、５、２４、２６、３１及び３３のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４、５、２４、２６、３１及び３３のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９、４０、４３、４５、５０及び５２のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３９、４０、４３、４５、５０及び５２のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：６、２８、２９、４１、４７及び４８のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：６、２８、２９、４１、４７及び４８のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド及び／または修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：７、２５、３０、４２、４９及び５０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：７、２５、３０、４２、４９及び５０のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：７、２５及び３０のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４２、４９及び５０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４２、４９及び５０のうちいずれか１つの配列を含む。
【0099】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：１４～１７のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：１４～１７のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：５４～５７のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：５４～５７のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、ＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、柔軟なリンカーなどのリンカー、及び／またはヒンジ領域もしくはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）によってＦｃポリペプチドに連結される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ配列は、配列番号：１、２及び３のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：１、２及び３のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４、５、３９及び４０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４、５、３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：６と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：６の配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：４１の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド及び／または修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：７と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：７の配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４２の配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：２５と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：２５の配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４４の配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：３０と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３０の配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４９と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４９の配列を含む。
【0100】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：６と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：６の配列を含む。
【0101】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：６の配列を含む。
【0102】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４１の配列を含む。
【0103】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：４１の配列を含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：７と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：７の配列を含む。
【0105】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：７の配列を含む。
【0106】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４２の配列を含む。
【0107】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：４２の配列を含む。
【0108】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：２５と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：２５の配列を含む。
【0109】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：２５の配列を含む。
【0110】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４４の配列を含む。
【0111】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：４４の配列を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：３０と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３０の配列を含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４及び５のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：３０の配列を含む。
【0114】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは、配列番号：４９と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４９の配列を含む。
【0115】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：３９及び４０のうちいずれか１つの配列を含み、修飾Ｆｃポリペプチドは配列番号：４９の配列を含む。
【0116】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：２４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：２９及び３０のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：３０）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。他の実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：２４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：７及び２８のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：７）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：２４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：６の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含み、修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端が、場合によりＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：２４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：２５の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。
【0117】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４３の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：４８及び４９のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：４９）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。他の実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４３の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：４２及び４７のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：４２）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４３の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：４１の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含み、修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端が、場合によりＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４３の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：４４の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。
【0118】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：２９及び３０のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：３０）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。他の実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：７及び２８のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：７）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：６の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含み、修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端が、場合によりＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：２５の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。
【0119】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：３９の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：４８及び４９のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：４９）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。他の実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：３９の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：４２及び４７のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：４２）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：３９の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：４１の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含み、修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端が、場合によりＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：３９の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：４４の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。
【0120】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：５の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：２９及び３０のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：３０）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。他の実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：５の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：７及び２８のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：７）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：５の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：６の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含み、修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端が、場合によりＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：５の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：２５の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。
【0121】
いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４０の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：４８及び４９のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：４９）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。他の実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４０の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、ならびに配列番号：４２及び４７のうちいずれか１つの配列（例えば、配列番号：４２）を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４０の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：４１の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含み、修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端が、場合によりＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：４０の配列を含むＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号：４４の配列を含む修飾Ｆｃポリペプチドを含む。
【0122】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：１８～２１のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：１８～２１のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：５８～６１のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：５８～６１のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、柔軟なリンカーなどのリンカー、及び／またはヒンジ領域もしくはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）によってＦｃポリペプチドに連結される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：２、３及び２３のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むか、または配列番号：２、３及び２３のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：２７、３２、及び３４のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：２７、３２、及び３４のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドに連結されるＩＤＳ配列は、配列番号：４６、５１、及び５３のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するか、または配列番号：４６、５１、及び５３のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド及び／または修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。
【0123】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：６、２８及び２９のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子中に存在するＩＤＳ酵素は、配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有する修飾Ｆｃポリペプチドを含むか、または配列番号：４１、４７及び４８のうちいずれか１つの配列を含むポリペプチド鎖に連結される（例えば、融合ポリペプチドとして）。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、柔軟なリンカーなどのリンカー、及び／またはヒンジ領域もしくはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）によって修飾Ｆｃポリペプチドに連結される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳ酵素は、配列番号：２、３及び２３のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＩＤＳ配列を含むか、または配列番号：２、３及び２３のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：１４～１７のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：１４～１７のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、配列番号：５４～５７のうちいずれか１つと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するＦｃポリペプチドを含むか、または配列番号：５４～５７のうちいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾Ｆｃポリペプチド及び／またはＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を含む。
【0124】
Ｆｃポリペプチドに連結されるＥＲＴ酵素
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、本明細書に記載されるような２つのＦｃポリペプチドを含み、Ｆｃポリペプチドの一方または両方が、部分的または完全なヒンジ領域をさらに含んでよい。ヒンジ領域は、任意の免疫グロブリンサブクラスまたはアイソタイプに由来し得る。例示的な免疫グロブリンヒンジはＩｇＧヒンジ領域であり、例えば、ＩｇＧ１ヒンジ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１ヒンジのアミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号：１２）またはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）などである。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＦｃポリペプチドのＮ末端領域に存在する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、本明細書に記載されるような２つのＦｃポリペプチドを含み、Ｆｃポリペプチドの一方または両方が、部分的または完全なヒンジ領域をさらに含んでよい。ヒンジ領域は、任意の免疫グロブリンサブクラスまたはアイソタイプに由来し得る。例示的な免疫グロブリンヒンジはＩｇＧヒンジ領域であり、例えば、ＩｇＧ１ヒンジ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１ヒンジのアミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号：１２）またはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）などである。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＦｃポリペプチドのＮ末端領域に存在する。
【0125】
いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、リンカー、例えば、ペプチドリンカーによってＥＲＴ酵素に連結される。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ペプチド結合によって、またはペプチドリンカーによってＥＲＴ酵素に連結され、例えば、Ｆｃポリペプチドは融合ポリペプチドである。ペプチドリンカーは、それが連結しているＦｃポリペプチドに対してＥＲＴ酵素の回転を可能にするように構成されてよく、及び／またはプロテアーゼによる消化に耐性がある。ペプチドリンカーは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはそれらの組合せを含有してよい。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、例えば、アミノ酸、例えば、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａなどを含有する柔軟なリンカーであってよい。そのようなリンカーは、既知のパラメータを使用して設計され、任意の長さのものであってよく、任意の数の、任意の長さの反復単位（例えば、Ｇｌｙ及びＳｅｒ残基の反復単位）を含有する。例えば、リンカーは、反復、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくはそれを超えるＧｌｙ４－Ｓｅｒ（配列番号：３６）反復などまたは単一のＧｌｙ４－Ｓｅｒ（配列番号：３６）を有してよい。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、例えば、中枢神経系中に存在する酵素によって切断可能なプロテアーゼ切断部位を含んでよい。
【0126】
いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、例えば、Ｇｌｙ４－Ｓｅｒリンカー（配列番号：３６）または（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）２リンカー（配列番号：３７）によってＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、リンカーに連結されているか、またはＥＲＴ酵素に直接連結されているヒンジ配列または部分的ヒンジ配列をＮ末端に含んでよい。
【0127】
いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、例えば、Ｇｌｙ４－Ｓｅｒリンカー（配列番号：３６）または（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）２リンカー（配列番号：３７）によってＦｃポリペプチドのＣ末端に連結される。いくつかの実施形態では、ＦｃポリペプチドのＣ末端は、ＥＲＴ酵素に直接連結される。
【0128】
いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素は、化学架橋剤によってＦｃポリペプチドに連結される。そのような複合体は、周知の化学架橋試薬及びプロトコールを使用して生成され得る。例えば、当業者に既知であり、ポリペプチドを目的の作用物質と架橋させるのに有用な多数の化学架橋剤が存在する。例えば、架橋剤はヘテロ二官能性架橋剤であり、これは段階的な手法で分子を連結するために使用され得る。ヘテロ二官能性架橋剤は、タンパク質を複合化するより特異的なカップリング法を設計する能力を提供し、それによって、ホモタンパク質ポリマーなどの望ましくない副反応の発生を減少させる。多種多様なヘテロ二官能性架橋剤が当該技術分野において既知であり、それらとしては、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）またはその水溶性類似体のＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミド（スルホ－ＮＨＳ）、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、スクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－ａ－メチル－ａ－（２－ピリジルジチオ）－トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、及びスクシンイミジル６－［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート］ヘキサノエート（ＬＣ－ＳＰＤＰ）が挙げられる。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド部分を有するこれらの架橋剤は、一般により高い水溶性を有するＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミド類似体として得られ得る。加えて、連結鎖内にジスルフィド架橋を有するこれらの架橋剤は、インビボでのリンカー切断の量を減少させるために、代わりにアルキル誘導体として合成され得る。ヘテロ二官能性架橋剤に加えて、ホモ二官能性及び光反応性架橋剤を含む、多数の他の架橋剤が存在する。スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）及びジメチルピメリミデート．２ＨＣｌ（ＤＭＰ）は、有用なホモ二官能性架橋剤の例であり、ビス－［Ｂ－（４－アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）及びＮ－スクシンイミジル－６（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（ＳＡＮＰＡＨ）は、有用な光反応性架橋剤の例である。
【0129】
タンパク質分子の濃度
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物（例えば、水性、凍結乾燥前、凍結乾燥または再構成形態の）におけるタンパク質分子の濃度は、約５～５０ｍｇ／ｍＬ、５～４５ｍｇ／ｍＬ、５～４０ｍｇ／ｍＬ、５～３５ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～４０ｍｇ／ｍＬまたは１０～３０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される水性／液体医薬組成物中におけるタンパク質分子の濃度は、約５～５０ｍｇ／ｍＬ、５～４５ｍｇ／ｍＬ、５～４０ｍｇ／ｍＬ、５～３５ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～４０ｍｇ／ｍＬまたは１０～３０ｍｇ／ｍＬである。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物（例えば、水性、凍結乾燥前、凍結乾燥または再構成形態の）におけるタンパク質分子の濃度は、約５～５０ｍｇ／ｍＬ、５～４５ｍｇ／ｍＬ、５～４０ｍｇ／ｍＬ、５～３５ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～４０ｍｇ／ｍＬまたは１０～３０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される水性／液体医薬組成物中におけるタンパク質分子の濃度は、約５～５０ｍｇ／ｍＬ、５～４５ｍｇ／ｍＬ、５～４０ｍｇ／ｍＬ、５～３５ｍｇ／ｍＬ、５～３０ｍｇ／ｍＬ、１０～４０ｍｇ／ｍＬまたは１０～３０ｍｇ／ｍＬである。
【0130】
ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、または５０ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、または５０ｍｇ／ｍＬである。
【0131】
ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約３０ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約３５ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約４０ｍｇ／ｍＬ±２ｍｇ／ｍＬである。
【0132】
ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約３０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約３５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子濃度は、約４０ｍｇ／ｍＬである。
【0133】
緩衝液
医薬組成物のｐＨは、水性製剤中、または凍結乾燥前もしくは再構成製剤中の治療剤（例えば、酵素またはタンパク質）の溶解度を変えることができる。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、組成物の最適ｐＨを約５．０～７．５の間に維持するのに十分な量の緩衝液を含む。
医薬組成物のｐＨは、水性製剤中、または凍結乾燥前もしくは再構成製剤中の治療剤（例えば、酵素またはタンパク質）の溶解度を変えることができる。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、組成物の最適ｐＨを約５．０～７．５の間に維持するのに十分な量の緩衝液を含む。
【0134】
したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．０～７．５、または約５．０～７．０、または約５．５～７．０である。
【0135】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．０、５．５、６．０、６．５、または７．０±０．５である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５、６．０、６．５、または７．０±０．３である。
【0136】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０±０．２である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０である。
【0137】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５±０．５、５．８±０．５、６．０±０．５、６．２±０．５、６．５±０．５、または６．８±０．５．である。
【0138】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５±０．３、５．８±０．３、６．０±０．３、６．２±０．３、６．５±０．３、または６．８±０．３．である。
【0139】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５±０．２、５．８±０．２、６．０±０．２、６．２±０．２、６．５±０．２、または６．８±０．２．である。
【0140】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．０である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．５である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約５．８である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約６．０である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約６．２である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約６．５である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約６．８である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のｐＨは、約７．０である。
【0141】
好適な緩衝液としては、例えば、酢酸、アルギニン、クエン酸、ヒスチジン、リン酸、コハク酸、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（「Ｔｒｉｓ」）及び他の有機酸が挙げられる。ある特定の実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、約１ｍＭ～約１５０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭ、または約１５ｍＭ～約５０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、または約２５ｍＭ～約５０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭの範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、好適な緩衝剤は、およそ１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、１２５ｍＭまたは１５０ｍＭの濃度で存在する。
【0142】
リン酸ナトリウム及び他のリン酸ベースの緩衝液、例えば、リン酸カリウム緩衝液などは、ＩＤＳ酵素を可逆的な不活性状態に維持することによって、適切な保存条件下で（例えば、本明細書に開示されるようなｐＨ範囲で、２℃～２５℃の範囲の温度で）酵素の安定性を保持するのに有用であり得る。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、リン酸を含む緩衝液（すなわち、リン酸緩衝液）を含む。
【0143】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、リン酸ナトリウムを含む緩衝液を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるリン酸ナトリウム緩衝液の濃度は、約５～５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１０～５０ｍＭ、５～４５ｍＭ、５～４０ｍＭ、５～３５ｍＭ、５～３０ｍＭ、１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１０～２５ｍＭまたは１５～２５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１０～５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１０～４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１０～３０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１５～２５ｍＭである。
【0144】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるリン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、または５０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、または５０ｍＭである。
【0145】
ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約２０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約２５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約３０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約３５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約４０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約４５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約５０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約１５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約２０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約２５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約３０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約３５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約４５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウム緩衝液濃度は、約５０ｍＭである。
【0146】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、リン酸カリウムを含む緩衝液を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるリン酸カリウム緩衝液の濃度は、約５～５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１０～５０ｍＭ、５～４５ｍＭ、５～４０ｍＭ、５～３５ｍＭ、５～３０ｍＭ、１０～４０ｍＭ、１０～３０ｍＭ、１０～２５ｍＭまたは１５～２５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１０～５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１０～４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１０～３０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１５～２５ｍＭである。
【0147】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるリン酸カリウム緩衝液濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、または５０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、または５０ｍＭである。
【0148】
ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約２０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約２５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約３０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約３５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約４０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約４５ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約５０ｍＭ±３ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約１５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約２０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約２５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約３０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約３５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約４５ｍＭである。ある特定の実施形態では、リン酸カリウム緩衝液濃度は、約５０ｍＭである。
【0149】
等張剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、水性、凍結乾燥前、凍結乾燥または再構成形態のいずれかで、組成物を等張に維持するために１つ以上の等張剤を含む。典型的には、「等張」とは、目的の製剤がヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張製剤は一般に、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有することになる。等張性は、例えば、蒸気圧または凝固点型浸透圧計を使用して測定され得る。例示的な等張剤としては、グリシン、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム及びアルギニンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、好適な等張剤は、約０．０１～５重量％（例えば、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．３、０．４、０．５、０．７５、１．０、１．２５、１．５、２．０、２．５、３．０、４．０または５．０重量％）の濃度で水性及び／または凍結乾燥前製剤中に存在してよい。いくつかの実施形態では、凍結乾燥用の製剤は、凍結乾燥前製剤または再構成製剤を等張に維持するために等張剤を含有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、水性、凍結乾燥前、凍結乾燥または再構成形態のいずれかで、組成物を等張に維持するために１つ以上の等張剤を含む。典型的には、「等張」とは、目的の製剤がヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張製剤は一般に、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有することになる。等張性は、例えば、蒸気圧または凝固点型浸透圧計を使用して測定され得る。例示的な等張剤としては、グリシン、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム及びアルギニンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、好適な等張剤は、約０．０１～５重量％（例えば、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．３、０．４、０．５、０．７５、１．０、１．２５、１．５、２．０、２．５、３．０、４．０または５．０重量％）の濃度で水性及び／または凍結乾燥前製剤中に存在してよい。いくつかの実施形態では、凍結乾燥用の製剤は、凍結乾燥前製剤または再構成製剤を等張に維持するために等張剤を含有する。
【0150】
リン酸ナトリウム及び他のリン酸ベースの緩衝液と同様に、ある特定の塩は、ＩＤＳ酵素を可逆的な不活性状態に維持することによって、適切な保存条件下で（例えば、本明細書に開示されるようなｐＨ範囲で、２℃～２５℃の範囲の温度で）酵素の安定性を保持するのに有用であり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、ナトリウム塩などの塩を含む。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度は、約２０～１７５ｍＭ、２０～１７０ｍＭ、２０～１６５ｍＭ、２０～１６０ｍＭ、２０～１５５ｍＭ、２５～１５０ｍＭ、３０～１５０ｍＭ、３０～１４５ｍＭ、３０～１４０ｍＭ、３０～１３５ｍＭ、３０～１３０ｍＭ、３０～１２５ｍＭ、３０～１２０ｍＭ、３０～１１５ｍＭ、３０～１１０ｍＭ、３０～１０５ｍＭ、３０～１００ｍＭ、３０～９５ｍＭ、３０～９０ｍＭ、３０～８５ｍＭ、３０～８０ｍＭ、３０～７５ｍＭ、３０～７０ｍＭ、３０～６５ｍＭ、３０～６０ｍＭまたは４０～６０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約４０～１５０ｍＭ、４０～１４５ｍＭ、４０～１４０ｍＭ、４０～１３５ｍＭ、４０～１３０ｍＭ、４０～１２５ｍＭ、４０～１２０ｍＭ、４０～１１５ｍＭ、４０～１１０ｍＭ、４０～１０５ｍＭ、４０～１００ｍＭ、４０～９５ｍＭ、４０～９０ｍＭ、４０～８５ｍＭ、４０～８０ｍＭ、４０～７５ｍＭ、４０～７０ｍＭまたは４０～６５ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約３０～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約４０～１４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約５０～１３７ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約４０～１００ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９または１４０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩（例えば、ナトリウム塩）濃度は、約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９または１４０ｍＭである。
【0151】
ある特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、及び酢酸第二銅からなる群から選択される塩であってよい。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、ナトリウム塩、例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウムなどを含む。
【0152】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、塩化ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中における塩化ナトリウム濃度は、約２０～１７５ｍＭ、２０～１７０ｍＭ、２０～１６５ｍＭ、２０～１６０ｍＭ、２０～１５５ｍＭ、２５～１５０ｍＭ、３０～１５０ｍＭ、３０～１４５ｍＭ、３０～１４０ｍＭ、３０～１３５ｍＭ、３０～１３０ｍＭ、３０～１２５ｍＭ、３０～１２０ｍＭ、３０～１１５ｍＭ、３０～１１０ｍＭ、３０～１０５ｍＭ、３０～１００ｍＭ、３０～９５ｍＭ、３０～９０ｍＭ、３０～８５ｍＭ、３０～８０ｍＭ、３０～７５ｍＭ、３０～７０ｍＭ、３０～６５ｍＭ、３０～６０ｍＭまたは４０～６０ｍＭである。
【0153】
ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０～１５０ｍＭ、４０～１４５ｍＭ、４０～１４０ｍＭ、４０～１３５ｍＭ、４０～１３０ｍＭ、４０～１２５ｍＭ、４０～１２０ｍＭ、４０～１１５ｍＭ、４０～１１０ｍＭ、４０～１０５ｍＭ、４０～１００ｍＭ、４０～９５ｍＭ、４０～９０ｍＭ、４０～８５ｍＭ、４０～８０ｍＭ、４０～７５ｍＭ、４０～７０ｍＭまたは４０～６５ｍＭである。
【0154】
ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約３０～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０～１４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約５０～１３７ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０～１００ｍＭである。
【0155】
ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９または１４０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９または１４０ｍＭである。
【0156】
ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４５ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約５０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約５５ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約４５ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約５５ｍＭである。
【0157】
ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１３０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１３５ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１３７ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１４０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１４５ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１３０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１３５ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１３７ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１４０ｍＭである。ある特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１４５ｍＭである。
【0158】
界面活性剤
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１つ以上の界面活性剤を含む。例示的な界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０及びそれらの組合せ）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、Ｔｒｉｔｏｎなど、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、またはステアリル－スルホベタイン、ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－またはステアリル－サルコシン、リノレイル－、ミリスチル－、またはセチル－ベタイン、ラウロアミドプロピル－、コカミドプロピル－、リノールアミドプロピル－、ミリスタミドプロピル－、パルミドプロピル－、またはイソステアラミドプロピル－ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタミドプロピル－、パルミドプロピル－、またはイソステアラミドプロピル－ジメチルアミン、ココイルメチルタウリンナトリウム、またはオレイルメチルタウリン二ナトリウム、ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１つ以上の界面活性剤を含む。例示的な界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０及びそれらの組合せ）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、Ｔｒｉｔｏｎなど、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、またはステアリル－スルホベタイン、ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－またはステアリル－サルコシン、リノレイル－、ミリスチル－、またはセチル－ベタイン、ラウロアミドプロピル－、コカミドプロピル－、リノールアミドプロピル－、ミリスタミドプロピル－、パルミドプロピル－、またはイソステアラミドプロピル－ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタミドプロピル－、パルミドプロピル－、またはイソステアラミドプロピル－ジメチルアミン、ココイルメチルタウリンナトリウム、またはオレイルメチルタウリン二ナトリウム、ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）が挙げられる。
【0159】
ある特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベートを含む。ある特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）及びポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）である。ある特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）である。
【0160】
ある特定の実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマーを含む。
【0161】
典型的には、添加される界面活性剤の量は、それがタンパク質の凝集を減少させ、微粒子または発泡の形成を最小限に抑えるような量である。例えば、界面活性剤は、約０．０１～５ｍｇ／ｍＬ（例えば、約０．０５～０．５ｍｇ／ｍＬ、または約０．０５～０．１ｍｇ／ｍＬ）の濃度で医薬組成物中に存在してよい。特に、界面活性剤は、およそ０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、または５．０ｍｇ／ｍＬなどの濃度で医薬組成物中に存在してよい。あるいは、または加えて、界面活性剤は、凍結乾燥製剤、凍結乾燥前製剤及び／または再構成製剤に添加されてよい。
【0162】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中における界面活性剤濃度は、約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．９ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．８ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．７ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．６ｍｇ／ｍＬ、０．１～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．２～１．０ｍｇ／ｍＬ、０．２～０．９ｍｇ／ｍＬ、０．２～０．８ｍｇ／ｍＬ、０．２～０．７ｍｇ／ｍＬ、０．２～０．６ｍｇ／ｍＬ、０．３～０．８ｍｇ／ｍＬ、０．３～０．７ｍｇ／ｍＬ、０．３～０．６ｍｇ／ｍＬ、０．３～０．５ｍｇ／ｍＬ、０．４～０．８ｍｇ／ｍＬ、０．４～０．７ｍｇ／ｍＬ、０．５～０．８ｍｇ／ｍＬまたは０．５～０．７ｍｇ／ｍＬである。
【0163】
ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｍｇ／ｍＬである。
【0164】
ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．２ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．３ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．４ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．６ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．７ｍｇ／ｍＬ±０．１ｍｇ／ｍＬである。
【0165】
ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．２ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．３ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．４ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．６ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、界面活性剤濃度は、約０．７ｍｇ／ｍＬである。
【0166】
ある特定の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート界面活性剤であり、本明細書に記載される医薬組成物中におけるポリソルベート界面活性剤の濃度は、約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ポリソルベート界面活性剤濃度は、約０．４ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ポリソルベート界面活性剤濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ポリソルベート界面活性剤濃度は、約０．６ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ポリソルベート界面活性剤濃度は、約０．７ｍｇ／ｍＬである。
【0167】
安定剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、タンパク質を保護するために、１つ以上の安定化剤、凍結保護剤、もしくは凍結乾燥保護剤、またはそれらの組合せを含有してよい。典型的には、好適な安定化剤は糖、非還元糖及び／またはアミノ酸である。例示的な糖としては、デキストラン、ラクトース、マンニトール、マンノース、ソルビトール、ラフィノース、スクロース及びトレハロースが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアミノ酸としては、アルギニン、グリシン及びメチオニンが挙げられるが、これらに限定されない。追加の安定化剤としては、塩化ナトリウム、ヒドロキシエチルデンプン及びポリビニルピロリドンを挙げてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、タンパク質を保護するために、１つ以上の安定化剤、凍結保護剤、もしくは凍結乾燥保護剤、またはそれらの組合せを含有してよい。典型的には、好適な安定化剤は糖、非還元糖及び／またはアミノ酸である。例示的な糖としては、デキストラン、ラクトース、マンニトール、マンノース、ソルビトール、ラフィノース、スクロース及びトレハロースが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアミノ酸としては、アルギニン、グリシン及びメチオニンが挙げられるが、これらに限定されない。追加の安定化剤としては、塩化ナトリウム、ヒドロキシエチルデンプン及びポリビニルピロリドンを挙げてもよい。
【0168】
いくつかの実施形態では、液体製剤は非晶質材料を含有する。いくつかの実施形態では、液体製剤は、相当量の非晶質材料を含有する（例えば、スクロースベースの製剤）。いくつかの実施形態では、液体製剤は、部分的に結晶性／部分的に非晶質材料を含有する。
【0169】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、塩化ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中における塩化ナトリウム濃度は、上に開示される通りである。例えば、塩化ナトリウム濃度は、約２０～１７５ｍＭ、２０～１７０ｍＭ、２０～１６５ｍＭ、２０～１６０ｍＭ、２０～１５５ｍＭ、２５～１５０ｍＭ、３０～１５０ｍＭ、３０～１４５ｍＭ、３０～１４０ｍＭ、３０～１３５ｍＭ、３０～１３０ｍＭ、３０～１２５ｍＭ、３０～１２０ｍＭ、３０～１１５ｍＭ、３０～１１０ｍＭ、３０～１０５ｍＭ、３０～１００ｍＭ、３０～９５ｍＭ、３０～９０ｍＭ、３０～８５ｍＭ、３０～８０ｍＭ、３０～７５ｍＭ、３０～７０ｍＭ、３０～６５ｍＭ、３０～６０ｍＭ、４０～６０ｍＭ、または本明細書に開示されるような任意の他の範囲もしくは濃度であり得る。
【0170】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は糖を含む。ある特定の実施形態では、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ある特定の実施形態では、糖はスクロースである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、メチオニンを含む。
【0171】
凍結乾燥製剤中の安定化剤の量は一般に、製剤が等張となるような量である。しかしながら、高張再構成製剤も好適な場合がある。加えて、安定化剤の量は、許容できない量の治療剤の分解／凝集が生じるほど少ない量であるべきではない。製剤中における例示的な安定化剤濃度は、約１ｍＭ～約４００ｍＭ（例えば、約３０ｍＭ～約３００ｍＭ、及び約５０ｍＭ～約１００ｍＭ）、または代わりに、０．１重量％～１５重量％（例えば、１重量％～１０重量％、５重量％～１５重量％、５重量％～１０重量％）の範囲であってよい。いくつかの実施形態では、安定化剤及び治療剤の質量比は、約１：１である。他の実施形態では、安定化剤及び治療剤の質量比は、約０．１：１、０．２：１、０．２５：１、０．４：１、０．５：１、１：１、２：１、２．６：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、または２０：１であり得る。いくつかの実施形態では、凍結乾燥に好適な安定化剤は、凍結乾燥保護剤でもある。
【0172】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中における糖濃度は、約３０～３００ｍＭ、５０～３００ｍＭ、７５～３００ｍＭ、１００～３００ｍＭ、１００～２７５ｍＭ、１００～２５０ｍＭ、１２５～２５０ｍＭ、１５０～２５０ｍＭ、１５０～２２５ｍＭまたは１５０～２００ｍＭである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中における糖濃度は、約１００～２５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中における糖濃度は、約１５０～２００ｍＭである。
【0173】
ある特定の実施形態では、糖濃度は、約１７０±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、糖濃度は、約１７５±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、糖濃度は、約１８０±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、糖濃度は、約１７０ｍＭである。ある特定の実施形態では、糖濃度は、約１７５ｍＭである。ある特定の実施形態では、糖濃度は、約１８０ｍＭである。
【0174】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、スクロースを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるスクロース濃度は、約３０～３００ｍＭ、５０～３００ｍＭ、７５～３００ｍＭ、１００～３００ｍＭ、１００～２７５ｍＭ、１００～２５０ｍＭ、１２５～２５０ｍＭ、１５０～２５０ｍＭ、１５０～２２５ｍＭまたは１５０～２００ｍＭである。
【0175】
ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９または２００ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９または２００ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１７０±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１７５±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１８０±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１７０ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１７５ｍＭである。ある特定の実施形態では、スクロース濃度は、約１８０ｍＭである。
【0176】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、メチオニンを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるメチオニン濃度は、約２～５０ｍＭである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中におけるメチオニン濃度は、約５～５０ｍＭ、５～４５ｍＭ、５～４０ｍＭ、５～３５ｍＭ、５～３０ｍＭ、５～２５ｍＭ、５～２０ｍＭまたは５～１５ｍＭである。
【0177】
ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍＭである。
【0178】
ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約８ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約９ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約１０ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約１１ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約１２ｍＭ±２ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約８ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約９ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約１０ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約１１ｍＭである。ある特定の実施形態では、メチオニン濃度は、約１２ｍＭである。
【0179】
増量剤
いくつかの実施形態では、凍結乾燥に好適な製剤は、１つ以上の増量剤をさらに含んでよい。「増量剤」は、凍結乾燥混合物に質量を追加し、凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する化合物である。例えば、増量剤は、凍結乾燥ケーキの外観を改善する場合がある（例えば、本質的に均一の凍結乾燥ケーキ）。好適な増量剤としては、塩化ナトリウム、ラクトース、マンニトール、グリシン、スクロース、トレハロース、ヒドロキシエチルデンプンが挙げられるが、これらに限定されない。増量剤の例示的な濃度は、約１％～約１０％（例えば、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、９．５％、及び１０．０％）である。
いくつかの実施形態では、凍結乾燥に好適な製剤は、１つ以上の増量剤をさらに含んでよい。「増量剤」は、凍結乾燥混合物に質量を追加し、凍結乾燥ケーキの物理的構造に寄与する化合物である。例えば、増量剤は、凍結乾燥ケーキの外観を改善する場合がある（例えば、本質的に均一の凍結乾燥ケーキ）。好適な増量剤としては、塩化ナトリウム、ラクトース、マンニトール、グリシン、スクロース、トレハロース、ヒドロキシエチルデンプンが挙げられるが、これらに限定されない。増量剤の例示的な濃度は、約１％～約１０％（例えば、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、９．５％、及び１０．０％）である。
【0180】
追加の薬剤
他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されているものなどは、本明細書に記載される医薬組成物（及び／または凍結乾燥製剤及び／または再構成製剤）中に含まれてよいが、ただし、それらが組成物の所望の特性に悪影響を与えないことを条件とする。許容される担体、賦形剤または安定剤は、用いられる投与量及び濃度ではレシピエントにとって非毒性であり、それらとしては、追加の緩衝剤、防腐剤、共溶媒、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、ポリエステルなどの生分解性ポリマー、及び／またはナトリウムなどの塩形成対イオンが挙げられるが、これらに限定されない。
他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されているものなどは、本明細書に記載される医薬組成物（及び／または凍結乾燥製剤及び／または再構成製剤）中に含まれてよいが、ただし、それらが組成物の所望の特性に悪影響を与えないことを条件とする。許容される担体、賦形剤または安定剤は、用いられる投与量及び濃度ではレシピエントにとって非毒性であり、それらとしては、追加の緩衝剤、防腐剤、共溶媒、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、ポリエステルなどの生分解性ポリマー、及び／またはナトリウムなどの塩形成対イオンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0181】
液体及び凍結乾燥製剤
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、液体製剤である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、凍結乾燥した乾燥粉末として製剤化される。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、液体製剤である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、凍結乾燥した乾燥粉末として製剤化される。
【0182】
凍結乾燥
典型的には、凍結乾燥前製剤は、目的の化合物が凍結乾燥及び保管中に劣化（例えば、タンパク質凝集、脱アミド、及び／または酸化）するのを防ぐために、賦形剤または他の成分、例えば、安定剤、緩衝剤、増量剤、及び界面活性剤などの適切な選択肢をさらに含有する。凍結乾燥用の製剤は、１つ以上の追加成分、例えば、凍結乾燥保護剤または安定化剤、緩衝液、増量剤、等張剤及び界面活性剤を含むものを含み得る。
典型的には、凍結乾燥前製剤は、目的の化合物が凍結乾燥及び保管中に劣化（例えば、タンパク質凝集、脱アミド、及び／または酸化）するのを防ぐために、賦形剤または他の成分、例えば、安定剤、緩衝剤、増量剤、及び界面活性剤などの適切な選択肢をさらに含有する。凍結乾燥用の製剤は、１つ以上の追加成分、例えば、凍結乾燥保護剤または安定化剤、緩衝液、増量剤、等張剤及び界面活性剤を含むものを含み得る。
【0183】
目的の物質及び任意の追加成分が共に混合された後、製剤は凍結乾燥される。凍結乾燥は一般に、主に３つの段階：凍結、一次乾燥及び二次乾燥を含む。水を氷に、または一部の非晶質製剤成分を結晶形に変換するには、凍結が必要である。一次乾燥は、低圧及び低温での直接昇華によって凍結生成物から氷が除去されるプロセスステップである。二次乾燥は、蒸発表面への残留水の拡散を利用して、結合した水が生成物マトリックスから除去されるプロセスステップである。二次乾燥中の生成物温度は通常、一次乾燥中よりも高い。Ｔａｎｇ Ｘ．ｅｔ ａｌ．（２００４）“Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｄｖｉｃｅ，”Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１：１９１－２００、Ｎａｉｌ Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）“Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ，”ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｎａｉｌ Ｓ．Ｌ．ｅｄｉｔｏｒ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ｐｐ２８１－３５３、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０００）“Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，２０３：１－６０、Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｎ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）“Ｔｈｅ ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ａ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ．” Ｊ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，３８：４８－５９を参照のこと。
【0184】
いくつかの実施形態では、アニーリングステップは、生成物の最初の凍結中に導入されてよい。アニーリングステップによって、全体的なサイクル時間が短縮される場合がある。いかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、アニーリングステップは、過冷却中に形成される小さな結晶の再結晶化によって、賦形剤の結晶化及びより大きな氷晶の形成を促進するのに役立ち、それにより、再構成が改善され得ると企図される。典型的には、アニーリングステップは、凍結中に温度の間隔または変動を含む。例えば、凍結温度は－４０℃であってよく、アニーリングステップによって、温度が例えば、－１０℃に上昇し、この温度が設定された期間維持されることになる。アニーリングステップ時間は、０．５時間～８時間（例えば、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３、４、６、及び８時間）の範囲であってよい。アニーリング温度は、凍結温度と０℃との間であってよい。
【0185】
凍結乾燥は、容器、例えば、チューブ、バッグ、ボトル、トレイ、バイアル（例えば、ガラスバイアル）、シリンジまたは任意の他の好適な容器などで実施されてよい。容器は使い捨てであってよい。凍結乾燥はまた、大規模または小規模で実施されてもよい。いくつかの場合では、移し替えステップを回避するために、タンパク質の再構成が行われる容器内でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい場合がある。この場合の容器は、例えば、３、４、５、１０、２０、５０または１００ｃｃのバイアルであってよい。
【0186】
この目的のために、多くの異なる凍結乾燥機が利用可能であり、例えば、Ｈｕｌｌパイロットスケール乾燥機（ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＵＳＡ）、Ｇｅｎｅｓｉｓ（ＳＰ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）実験室用凍結乾燥機、または所与の凍結乾燥プロセスパラメータを制御できる任意の凍結乾燥機などである。凍結乾燥は、製剤を凍結し、続いて一次乾燥に適した温度で凍結内容物から氷を昇華させることによって達成される。最初の凍結によって、製剤が、通常は約４時間以内（例えば、約３時間以内、約２．５時間以内、約２時間以内）に約－２０℃未満（例えば、－５０℃、－４５℃、－４０℃、－３５℃、－３０℃、－２５℃など）の温度になる。この条件下では、生成物温度は通常、製剤の共晶点または崩壊温度を下回る。典型的には、一次乾燥のための棚温度は、通常は約２０～２５０ｍＴｏｒｒの範囲である好適な圧力で、約－３０～２５℃の範囲であることになる（生成物が一次乾燥中に融点未満のままであることを条件として）。製剤、試料を保持する容器（例えば、ガラスバイアル）のサイズ及び種類ならびに液体の量によって、主に乾燥に必要な時間が決定されることになり、これは数時間から数日間の範囲であり得る。二次乾燥段階は、主に容器の種類及びサイズならびに用いられる治療用タンパク質の種類に応じて、約０～６０℃で実施される。ここでも、液体の量によって主に乾燥に必要な時間が決定されることになり、これは数時間から数日間の範囲であり得る。
【0187】
一般的な提案として、凍結乾燥は、その含水量が約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、及び約０．５％未満である凍結乾燥製剤をもたらすことになる。
【0188】
再構成
本明細書に記載される医薬組成物は一般に、対象への投与時に水性形態であるが、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は凍結乾燥されている。そのような組成物は、対象に投与する前に、組成物に１つ以上の希釈剤を添加することによって再構成されなければならない。所望の段階で、典型的には患者に投与する前の適切な時間に、凍結乾燥製剤は、再構成製剤中のタンパク質濃度が望ましくなるように希釈剤で再構成されてよい。
本明細書に記載される医薬組成物は一般に、対象への投与時に水性形態であるが、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は凍結乾燥されている。そのような組成物は、対象に投与する前に、組成物に１つ以上の希釈剤を添加することによって再構成されなければならない。所望の段階で、典型的には患者に投与する前の適切な時間に、凍結乾燥製剤は、再構成製剤中のタンパク質濃度が望ましくなるように希釈剤で再構成されてよい。
【0189】
様々な希釈剤が、本明細書に記載されるように使用されてよい。いくつかの実施形態では、再構成に好適な希釈剤は水である。希釈剤として使用される水は、逆浸透、蒸留、脱イオン、濾過（例えば、活性炭、精密濾過、ナノ濾過）及びこれらの処理方法の組合せを含む、様々な方法で処理され得る。一般に、水は注射に適しているべきであり、これとしては注射用滅菌水または静菌水が挙げられるが、これらに限定されない。
【0190】
追加の例示的な希釈剤としては、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、エリオット溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。好適な希釈剤は、場合により防腐剤を含有してよい。例示的な防腐剤としては、芳香族アルコール、例えば、ベンジルまたはフェノールアルコールなどが挙げられる。用いられる防腐剤の量は、タンパク質との適合性について異なる防腐剤濃度を評価し、防腐剤の有効性を試験することによって決定される。例えば、防腐剤が芳香族アルコール（ベンジルアルコールなど）である場合、それは約０．１～２．０％、約０．５～１．５％、または約１．０～１．２％の量で存在し得る。
【0191】
好適な希釈剤としては、様々な添加剤、例えば、ｐＨ緩衝剤（例えば、Ｔｒｉｓ、ヒスチジン）、塩（例えば、塩化ナトリウム）及び上に記載されるもの（例えば、安定化剤、等張剤）を含む他の添加剤（例えば、スクロース）を含むが、これらに限定されない添加剤が挙げられてよい。
【0192】
本明細書に記載されるように、凍結乾燥物質（例えば、タンパク質）は、例えば、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ）の濃度及びその中間の任意の範囲における濃度に再構成され得る。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物質（例えば、タンパク質）は、約１ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌ～５０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ～約２５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ～約７５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ～約３０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ～約７５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ～約７５ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ～約７５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌ）の範囲の濃度に再構成されてよい。いくつかの実施形態では、再構成製剤中におけるタンパク質の濃度は、凍結乾燥前製剤中の濃度よりも高い場合がある。いくつかの実施形態では、再構成製剤中におけるタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤の約２～５０倍（例えば、約２～２０倍、約２～１０倍、または約２～５倍）であってよい。いくつかの実施形態では、再構成製剤中におけるタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤の少なくとも約２倍（例えば、少なくとも約３、４、５、１０、２０、４０倍）であってよい。
【0193】
再構成は、任意の容器内で実施されてよい。例示的な容器としては、チューブ、バイアル、シリンジ（例えば、シングルチャンバーまたはデュアルチャンバー）、バッグ、ボトル、及びトレイなどが挙げられるが、これらに限定されない。好適な容器は、任意の材料、例えば、ガラス、プラスチック、金属などで作製されてよい。容器は、使い捨てまたは再利用可能であってよい。再構成はまた、大規模または小規模で実施されてもよい。
【0194】
いくつかの場合では、移し替えステップを回避するために、タンパク質の再構成が行われる容器内でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい場合がある。この場合の容器は、例えば、３、４、５、１０、２０、５０または１００ｃｃのバイアルであってよい。いくつかの実施形態では、凍結乾燥及び再構成に好適な容器は、デュアルチャンバーシリンジ（例えば、Ｌｙｏ－Ｊｅｃｔ（登録商標）（Ｖｅｔｔｅｒ）シリンジ）である。例えば、デュアルチャンバーシリンジは、凍結乾燥物質及び希釈剤の両方を、それぞれ別個のチャンバー中に、栓によって分離された状態で含有してよい。再構成するために、プランジャーが希釈剤側の栓に取り付けられ、押されることで希釈剤を生成物チャンバーに移動させ得、その結果、希釈剤が凍結乾燥物質と接触でき、本明細書に記載されるように再構成が行われる可能性がある。
【0195】
安定性
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、それらが、共に製剤化される治療剤（すなわち、本明細書に記載されるタンパク質分子）を安定化できるか、または代わりにその劣化を遅延もしくは防止できるように製剤化されている。本明細書で使用される場合、「安定した」という用語は、本明細書に記載されるタンパク質分子が、その治療有効性（例えば、その意図される生物活性及び／または生理化学的整合性の全てまたは大部分）を長期間にわたって維持する能力を指す。治療剤の安定性、及びそのような治療剤の安定性を維持するための医薬組成物の能力は、長期間にわたって（例えば、少なくとも１、３、６、１２、１８、２４、３０、３６か月以上の間）評価されてよい。製剤との関連において、安定した製剤は、その中の治療剤が、保存時に、ならびにプロセス（凍結／解凍、機械的混合及び凍結乾燥など）中にその物理的及び／または化学的整合性ならびに生物活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質安定性については、例えば、高分子量（ＨＭＷ）凝集体の形成、酵素活性の喪失、ペプチド断片の生成及び電荷プロファイルのシフトによって測定され得る。ある特定の実施形態では、医薬組成物の安定性は、本明細書に記載されるアッセイまたは一連の条件を使用して評価される（例えば、実施例を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、それらが、共に製剤化される治療剤（すなわち、本明細書に記載されるタンパク質分子）を安定化できるか、または代わりにその劣化を遅延もしくは防止できるように製剤化されている。本明細書で使用される場合、「安定した」という用語は、本明細書に記載されるタンパク質分子が、その治療有効性（例えば、その意図される生物活性及び／または生理化学的整合性の全てまたは大部分）を長期間にわたって維持する能力を指す。治療剤の安定性、及びそのような治療剤の安定性を維持するための医薬組成物の能力は、長期間にわたって（例えば、少なくとも１、３、６、１２、１８、２４、３０、３６か月以上の間）評価されてよい。製剤との関連において、安定した製剤は、その中の治療剤が、保存時に、ならびにプロセス（凍結／解凍、機械的混合及び凍結乾燥など）中にその物理的及び／または化学的整合性ならびに生物活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質安定性については、例えば、高分子量（ＨＭＷ）凝集体の形成、酵素活性の喪失、ペプチド断片の生成及び電荷プロファイルのシフトによって測定され得る。ある特定の実施形態では、医薬組成物の安定性は、本明細書に記載されるアッセイまたは一連の条件を使用して評価される（例えば、実施例を参照のこと）。
【0196】
治療剤の安定性は、長期間にわたる治療剤の生物活性または生理化学的整合性と比較してさらに評価されてよい。例えば、所与の時点での安定性が、より早い時点（例えば、製剤化０日目）での安定性と、または製剤化されていない治療剤と比較され、この比較の結果はパーセンテージで表されてよい。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、長期間にわたる（例えば、少なくとも約６～１２か月にわたって室温で、または短期保存条件下で測定されるような）治療剤の生物活性または生理化学的整合性の少なくとも１００％、少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９７％少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％または少なくとも５０％を維持する。
【0197】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、様々な条件（例えば、通常の保存条件またはストレス条件）下で安定している。例えば、医薬組成物の安定性は、経時的に、ある範囲の温度で、または凍結／解凍サイクル中に、様々な要因、例えば、本明細書に記載されるタンパク質分子のｐＨ、濁度または切断／クリッピングなどを検査することによって評価されてよい。さらに、組成物は、製品の品質分析、再構成時間（凍結乾燥される場合）、再構成の品質（凍結乾燥される場合）、高分子量の含有量（分子凝集を表す）、低分子量の含有量（分子安定性を表す）水分、及びガラス転移温度に基づいて評価され得る。典型的には、タンパク質品質及び生成物分析は生成物劣化速度分析を含み、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）、陽イオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）、変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、多角度光散乱法（ＭＡＬＳ）、蛍光、紫外線吸収、比濁法、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及びそれらの組合せを含むが、これらに限定されない方法を使用する。いくつかの実施形態では、生成物の評価は、外観（液体またはケーキ外観のいずれか）を評価するステップを含んでよい。
【0198】
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、一定期間（例えば、約１か月、３か月、６か月、１２か月など）の間、約２～８℃（例えば、２、３、４、５、６、７または８℃）の温度範囲で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、一定期間（例えば、約１か月、３か月、６か月、１２か月など）の間、約２～８℃（例えば、２、３、４、５、６、７または８℃）の温度範囲で安定したままである。
【0199】
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、一定期間（例えば、約１週間、２週間、３週間、４週間など）の間、約２０～４０℃の温度範囲で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２５～４０℃の温度範囲で安定したままである。
【0200】
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約１週間、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２週間、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約３週間、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約４週間、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。
【0201】
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２５℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約３０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約３５℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約４０℃の温度で安定したままである。
【0202】
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約１週間、約２５℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約１週間、約３０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約１週間、約３５℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約１週間、約４０℃の温度で安定したままである。
【0203】
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２週間、約２５℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２週間、約３０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２週間、約３５℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約２週間、約４０℃の温度で安定したままである。
【0204】
ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、例えば、経時的に、及び／または様々な温度で安定したままである。濁度を評価する方法は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載されている（例えば、実施例を参照のこと）。
【0205】
ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、約２～４０℃の温度範囲で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、一定期間（例えば、約１週間、２週間、３週間、４週間など）の間、約２～４０℃の温度範囲で安定したままである。
【0206】
ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、約１週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、約２週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、約３週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。ある特定の実施形態では、医薬組成物の濁度は、約４週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度で安定したままである。
【0207】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、例えば、経時的に、温度の範囲にわたって、ｐＨ値の範囲にわたって、及び／または凍結－解凍サイクル中にインタクトなままである（すなわち、切断または「クリップ」されない）。タンパク質切断またはクリッピングを評価する方法は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載されている（例えば、実施例を参照のこと）。
【0208】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約２～４０℃の温度範囲にわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、一定期間（例えば、約１週間、２週間、３週間、４週間など）の間、約２～４０℃の温度範囲にわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約２～８℃の温度範囲にわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、一定期間（例えば、約１か月、３か月、６か月、１２か月など）の間、約２～８℃の温度範囲にわたってインタクトなままである。
【0209】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度でインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約１週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度でインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約２週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度でインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約３週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度でインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約４週間、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０℃の温度でインタクトなままである。
【0210】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、凍結－解凍サイクル中にインタクトなままである。例えば、ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０回以上の凍結－解凍サイクル中にインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、５回以上の凍結－解凍サイクル中にインタクトなままである。
【0211】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ｐＨ値の範囲にわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．０～約７．５のｐＨ範囲にわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．０～７．０のｐＨ範囲にわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．５～７．０のｐＨ範囲にわたってインタクトなままである。
【0212】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０±０．２のｐＨにわたってインタクトなままである。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０のｐＨにわたってインタクトなままである。
【0213】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ｐＨ値の範囲にわたってコロイド的に安定している。コロイド安定性を測定する方法は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載されている（例えば、実施例を参照のこと）。
【0214】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約５．５～約７．５のｐＨ範囲にわたってコロイド的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．５～７．０のｐＨ範囲にわたってコロイド的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．０～７．０のｐＨ範囲にわたってコロイド的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．５～７．０のｐＨ範囲にわたってコロイド的に安定している。
【0215】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０±０．２のｐＨにわたってコロイド的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０のｐＨにわたってコロイド的に安定している。
【0216】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ｐＨ値の範囲にわたって立体構造的に安定している。立体構造安定性を測定する方法は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載されている（例えば、実施例を参照のこと）。
【0217】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約５．５～約７．５のｐＨ範囲にわたって立体構造的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．５～７．０のｐＨ範囲にわたって立体構造的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．０～７．０のｐＨ範囲にわたって立体構造的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．５～７．０のｐＨ範囲にわたって立体構造的に安定している。
【0218】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０±０．２のｐＨにわたって立体構造的に安定している。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０のｐＨにわたって立体構造的に安定している。
【0219】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、ｐＨ値の範囲にわたって凝集しないか、または限定的な凝集を有する（例えば、対照タンパク質もしくは参照値と比較して）。凝集を測定する方法は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載されている（例えば、実施例を参照のこと）。
【0220】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約５．５～約７．５のｐＨ範囲にわたって凝集しないか、または限定的な凝集を有する。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約５．５～７．０のｐＨ範囲にわたって凝集しないか、または限定的な凝集を有する。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．０～７．０のｐＨ範囲にわたって凝集しないか、または限定的な凝集を有する。
【0221】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０±０．２のｐＨにわたって凝集しないか、または限定的な凝集を有する。ある特定の実施形態では、タンパク質分子は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９または７．０のｐＨにわたって凝集しないか、または限定的な凝集を有する。
【0222】
処置の方法
ＬＳＤは、未消化または部分的に消化された巨大分子の蓄積を特徴とする遺伝性代謝性疾患であり、これは最終的に細胞機能障害及び臨床的異常をもたらす。古典的には、ＬＳＤは、蓄積した基質によって一般に分類されるリソソーム機能の欠損として定義されていて、これらとしては、スフィンゴリピドーシス、オリゴ糖症（ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｅｓ）、ムコリピドーシス、ムコ多糖症、リポタンパク質蓄積障害、神経セロイドリポフスチン症などが挙げられる。これらの障害の分類は、最近では、巨大分子の蓄積をもたらす他のタンパク質、例えば、リソソーム酵素の正常な翻訳後修飾に必要なタンパク質、または適切なリソソーム輸送に重要なタンパク質などの欠損または欠陥を含むものにまで広がっている。
ＬＳＤは、未消化または部分的に消化された巨大分子の蓄積を特徴とする遺伝性代謝性疾患であり、これは最終的に細胞機能障害及び臨床的異常をもたらす。古典的には、ＬＳＤは、蓄積した基質によって一般に分類されるリソソーム機能の欠損として定義されていて、これらとしては、スフィンゴリピドーシス、オリゴ糖症（ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｅｓ）、ムコリピドーシス、ムコ多糖症、リポタンパク質蓄積障害、神経セロイドリポフスチン症などが挙げられる。これらの障害の分類は、最近では、巨大分子の蓄積をもたらす他のタンパク質、例えば、リソソーム酵素の正常な翻訳後修飾に必要なタンパク質、または適切なリソソーム輸送に重要なタンパク質などの欠損または欠陥を含むものにまで広がっている。
【0223】
本明細書に記載される医薬組成物は、ＬＳＤに罹患している、またはＬＳＤに罹患しやすい個体を処置するために使用されてよい。したがって、ある特定の実施形態は、ＬＳＤの処置を必要とする対象のＬＳＤを処置する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載される医薬組成物を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態はまた、ＬＳＤの処置を必要とする対象のＬＳＤを処置する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載される医薬組成物を提供し、それを対象に投与することを含む。
【0224】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、液体組成物として提供される。
【0225】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥組成物として提供される。そのような実施形態では、医薬組成物は、投与前に再構成される。
【0226】
ある特定の実施形態では、本方法は、第２治療剤の投与をさらに含む。
【0227】
ある特定の実施形態はまた、ＬＳＤの処置を必要とする対象のＬＳＤを処置するための本明細書に記載される医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態は、ＬＳＤの処置を必要とする対象のＬＳＤを処置するための医薬の調製における、本明細書に記載される医薬組成物の使用を提供する。
【0228】
ある特定の実施形態では、ＬＳＤはハンター症候群である。
【0229】
「処置する」または「処置」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患と関連する１つ以上の症状を改善すること、疾患に関する１つ以上の症状の発症を予防もしくは遅延させること、及び／または疾患に関する１つ以上の症状の重症度もしくは頻度を低下させることを含む。
【0230】
いくつかの実施形態では、処置は、ＬＳＤを有する患者の神経障害の部分的または完全な緩和、改善、軽減、阻害、発症の遅延、重症度及び／または発生率の減少を指す。本明細書で使用される場合、「神経障害」という用語は、中枢神経系（例えば、脳及び脊髄）の障害と関連する様々な症状を含む。神経障害の症状としては、例えば、例えば、とりわけ、認知障害、白質病変、脳実質、神経節、脳梁、及び／または脳幹の拡大血管周囲腔、萎縮、及び／または脳室拡大が挙げられてよい。
【0231】
いくつかの実施形態では、処置は、様々な組織中におけるリソソーム蓄積の（例えば、ＧＡＧの）減少を指す。いくつかの実施形態では、処置は、脳標的組織、脊髄ニューロン、及び／または末梢標的組織中におけるリソソーム蓄積の減少を指す。ある特定の実施形態では、リソソーム蓄積は、対照と比較した場合に約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、リソソーム蓄積は、対照と比較した場合に少なくとも１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１または１０分の１に減少する。いくつかの実施形態では、リソソーム蓄積は、リソソーム蓄積顆粒（例えば、ゼブラストライプ形態）の存在によって測定される。リソソーム蓄積顆粒の存在は、当該技術分野において既知の様々な手段によって、例えば、組織学的分析などによって測定され得る。
【0232】
いくつかの実施形態では、処置は、ニューロン（例えば、プルキンエ細胞を含有するニューロン）における空胞化の減少を指す。ある特定の実施形態では、ニューロンの空胞化は、対照と比較した場合に約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、空胞化は、対照と比較した場合に少なくとも１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１または１０分の１に減少する。空胞化の存在及びその減少は、当該技術分野において既知の様々な手段によって、例えば、組織学的分析などによって測定され得る。
【0233】
いくつかの実施形態では、処置は、様々な組織中におけるＥＲＴ酵素活性の増加を指す。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素活性は、対照と比較した場合に約５％～約１００％、または約１０％～約１００％、または約２０％～約１００％、または約３０％～約１００％、または約４０％～約１００％、または約５０％～約１００％、または約６０％～約１００％、または約７０％～約１００％、または約８０％～約１００％増加する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素活性は、対照と比較した場合に約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％またはそれを超えて増加する。いくつかの実施形態では、ＥＲＴ酵素活性は、対照と比較した場合に少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍増加する。いくつかの実施形態では、増加したＥＲＴ酵素活性は、少なくともおよそ１０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／時間／ｍｇ、６００ｎｍｏｌ／時間／ｍｇまたはそれを超える。
【0234】
いくつかの実施形態では、処置は、認知能力喪失の進行の減少を指す。ある特定の実施形態では、認知能力喪失の進行は、対照（例えば、未処置の対象）と比較した場合に約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、処置は、発達遅延の減少を指す。ある特定の実施形態では、発達遅延は、対照（例えば、未処置の対象）と比較した場合に約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはそれを超えて減少する。
【0235】
いくつかの実施形態では、処置は、生存（例えば、生存期間）の増加を指す。例えば、処置は、患者の余命の増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、本発明による処置は、同様の疾患を有するが、処置を行わない１以上の対照個体の平均余命と比較した場合に、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、約１５０％、約１５５％、約１６０％、約１６５％、約１７０％、約１７５％、約１８０％、約１８５％、約１９０％、約１９５％、約２００％超、またはそれを超える患者の余命の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明による処置は、同様の疾患を有するが、処置を行わない１以上の対照個体の平均余命と比較した場合に、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、約１０年超、またはそれを超えて患者の余命の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明による処置は、患者の長期生存をもたらす。本明細書で使用される場合、「長期生存」という用語は、約４０年、４５年、５０年、５５年、６０年超、またはそれよりも長い生存期間または余命を指す。
【0236】
「改善する」、「増加する」または「減少する」という用語は、本明細書で使用される場合、対照と比較した値を示す。いくつかの実施形態では、好適な対照は、ベースライン測定値、例えば、本明細書に記載される処置の開始前における同じ個体での測定値、または本明細書に記載される処置を行わない場合の対照個体（もしくは複数の対照個体）での測定値などである。「対照個体」は、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）に罹患している個体であり、その個体は（処置される個体及び対照個体（複数可）の疾患段階が同等であることを確実にするために）処置されている個体とほぼ同じ年齢及び／または性別である。
【0237】
投与
本明細書に記載される医薬組成物は、治療有効量または用量で対象に投与されてよい。例示的な投与量としては、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量範囲が挙げられ、これらが使用され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの１週用量範囲で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、少なくとも約５００単位（Ｕ）／ｍｇ、約１，０００Ｕ／ｍｇ、または少なくとも約１，５００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、もしくは１０，０００Ｕ／ｍｇの酵素活性を有する。いくつかの実施形態では、酵素活性は、少なくとも約１１，０００Ｕ／ｍｇ、または少なくとも約１２，０００、１３，０００、１４，０００、１５，０００、１６，０００、１７，０００、１８，０００、１９，０００、２０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、４５０００、もしくは５０，０００Ｕ／ｍｇ、あるいは約５００Ｕ／ｍｇ～約５０，０００Ｕ／ｍｇの範囲のいずれかの箇所である。しかしながら、投与量は、いくつかの要因、例えば、選択した投与経路、組成物の製剤、患者応答、状態の重症度、対象の体重、対象の年齢、対象の頭の大きさ及び／または頭の大きさ対身長の比、ならびに処方医の判断を含む要因によって変動してよい。投与量は、個々の患者の必要に応じて、経時的に増加または減少させることができる。いくつかの実施形態では、患者には最初に低用量が投与され、次いで患者が忍容できる有効な投与量まで増加させる。有効量の決定は、当業者の能力の範囲内で十分に行われる。
本明細書に記載される医薬組成物は、治療有効量または用量で対象に投与されてよい。例示的な投与量としては、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量範囲が挙げられ、これらが使用され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの１週用量範囲で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子は、少なくとも約５００単位（Ｕ）／ｍｇ、約１，０００Ｕ／ｍｇ、または少なくとも約１，５００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、もしくは１０，０００Ｕ／ｍｇの酵素活性を有する。いくつかの実施形態では、酵素活性は、少なくとも約１１，０００Ｕ／ｍｇ、または少なくとも約１２，０００、１３，０００、１４，０００、１５，０００、１６，０００、１７，０００、１８，０００、１９，０００、２０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、４５０００、もしくは５０，０００Ｕ／ｍｇ、あるいは約５００Ｕ／ｍｇ～約５０，０００Ｕ／ｍｇの範囲のいずれかの箇所である。しかしながら、投与量は、いくつかの要因、例えば、選択した投与経路、組成物の製剤、患者応答、状態の重症度、対象の体重、対象の年齢、対象の頭の大きさ及び／または頭の大きさ対身長の比、ならびに処方医の判断を含む要因によって変動してよい。投与量は、個々の患者の必要に応じて、経時的に増加または減少させることができる。いくつかの実施形態では、患者には最初に低用量が投与され、次いで患者が忍容できる有効な投与量まで増加させる。有効量の決定は、当業者の能力の範囲内で十分に行われる。
【0238】
様々な実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質分子（例えば、本明細書に記載される医薬組成物中に存在する）は、非経口投与される。いくつかの実施形態では、タンパク質分子（例えば、本明細書に記載される医薬組成物中に存在する）は、静脈内投与される。静脈内投与は、例えば、約１０～約３０分間にわたる注入、または少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、もしくは１０時間にわたる注入によるものであり得る。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、約２０分～６時間、または約３０分～４時間にわたって静脈内投与される。いくつかの実施形態では、タンパク質分子は、静脈内ボーラスとして投与される。注入及びボーラス投与の組合せも使用されてよい。
【0239】
いくつかの非経口的な実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、腹腔内、皮下、皮内、または筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、皮内または筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、硬膜外投与などによる髄腔内投与、または脳室内投与される。
【0240】
キット及びパッケージ
本明細書に記載されるような医薬組成物を含む、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の処置に使用するためのキットもまた提供される。本明細書に記載されるような医薬組成物を含む、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の処置に使用するためのパッケージもまた提供される。
本明細書に記載されるような医薬組成物を含む、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の処置に使用するためのキットもまた提供される。本明細書に記載されるような医薬組成物を含む、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の処置に使用するためのパッケージもまた提供される。
【0241】
ある特定の実施形態では、キット／パッケージは、本明細書に記載される医薬組成物を保持する容器（例えば、アンプルまたはバイアル、例えば、６Ｒガラスバイアルなど）を含む。典型的には、医薬組成物は溶液として、または無水形態のいずれかで提供される。
【0242】
ある特定の実施形態では、キット／パッケージ内に含まれる医薬組成物は液体形態で提供され、タンパク質分子は、本明細書に記載される濃度、例えば、３０ｍｇ／ｍｌなどで存在する。ある特定の実施形態では、０．５ｍｌ、１．０ｍｌ、１．５ｍｌ、２．０ｍｌ、２．５ｍｌ、３．０ｍｌ、３．５ｍｌ、４．０ｍｌ、４．５ｍｌ、５．０ｍｌ、５．５ｍｌ、６．０ｍｌ、６．５ｍｌ、７．０ｍｌ、７．５ｍｌ、８．０ｍｌ、８．５ｍｌ、９．０ｍｌ、９．５ｍｌ、１０ｍｌ、１５ｍｌ、２０ｍｌ、２５ｍｌ、３０ｍｌ、３５ｍｌ、４０ｍｌ、４５ｍｌ、５０ｍｌの、またはそれを超える医薬組成物が提供される。ある特定の実施形態では、５ｍｌの本明細書に記載される医薬組成物が提供される（例えば、５ｍｌの液体中に１５０ｍｇのタンパク質分子を含む）。
【0243】
いくつかの実施形態では、キット／パッケージは、１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、キット／パッケージは、本明細書に記載されるような医薬組成物を含み、ＬＳＤ（例えば、ハンター症候群）の神経症状の処置に使用するための１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、１つ以上の追加の治療剤は、別個の容器で提供される。
【0244】
いくつかの実施形態では、キット／パッケージは、本明細書に記載される方法を実施するための指示（すなわち、プロトコール）を含有する説明資料（例えば、本明細書に記載される組成物を投与するためにキット／パッケージを使用するための説明書）をさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、医薬組成物が凍結乾燥されている場合の再水和の指示を含む。さらに、ある特定の実施形態では、説明書は、投与前に医薬組成物を適切な投与量に希釈するための指示を含む。例えば、医薬組成物は、生理食塩水（例えば、１００ｍｌの生理食塩水）中で希釈されてよい。説明資料は通常、書面または印刷物を含むが、それらはそのようなものに限定されない。そのような説明書を保管し、それらをエンドユーザーに伝達できる任意の媒体が、本開示により企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。そのような媒体は、そのような説明資料を提供するインターネットサイトへのアドレスを含んでよい。
【0245】
ある特定の実施形態
実施形態１．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
実施形態１．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
【0246】
実施形態２．前記緩衝液が、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される、実施形態１に記載の医薬組成物。
【0247】
実施形態３．前記リン酸緩衝液が、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液である、実施形態２に記載の医薬組成物。
【0248】
実施形態４．前記塩がナトリウム塩である、実施形態１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0249】
実施形態５．前記ナトリウム塩が、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される、実施形態４に記載の医薬組成物。
【0250】
実施形態６．前記医薬組成物が界面活性剤をさらに含む、実施形態１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0251】
実施形態７．前記医薬組成物が、糖を含む安定剤をさらに含む、実施形態１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0252】
実施形態８．前記医薬組成物がメチオニンをさらに含む、実施形態１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0253】
実施形態９．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．リン酸ナトリウムを含む緩衝液、
ｃ．塩化ナトリウム、
ｄ．界面活性剤、ならびに
ｅ．糖を含む安定剤
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．リン酸ナトリウムを含む緩衝液、
ｃ．塩化ナトリウム、
ｄ．界面活性剤、ならびに
ｅ．糖を含む安定剤
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
【0254】
実施形態１０．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．リン酸ナトリウムを含む緩衝液、
ｃ．塩化ナトリウム、
ｄ．界面活性剤、
ｅ．糖を含む安定剤、ならびに
ｆ．メチオニン
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．第１Ｆｃポリペプチド、及び
ｉｉ．酵素補充療法（ＥＲＴ）酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結される第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．リン酸ナトリウムを含む緩衝液、
ｃ．塩化ナトリウム、
ｄ．界面活性剤、
ｅ．糖を含む安定剤、ならびに
ｆ．メチオニン
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
【0255】
実施形態１１．前記ＥＲＴ酵素が、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、及びＩＤＳバリアント、またはその触媒活性断片である、実施形態１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0256】
実施形態１２．前記ＥＲＴ酵素がＩＤＳアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0257】
実施形態１３．前記ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１、２及び３からなる群から選択される配列を含む、実施形態１２に記載の医薬組成物。
【0258】
実施形態１４．前記第１Ｆｃポリペプチドまたは前記第２Ｆｃポリペプチドが、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む、実施形態１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0259】
実施形態１５．前記第１Ｆｃポリペプチドが、ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む、実施形態１４に記載の医薬組成物。
【0260】
実施形態１６．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）酵素に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む前記第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）酵素に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む前記第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．緩衝液、ならびに
ｃ．塩
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
【0261】
実施形態１７．前記緩衝液が、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、及びヒスチジン緩衝液からなる群から選択される、実施形態１６に記載の医薬組成物。
【0262】
実施形態１８．前記リン酸緩衝液が、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液である、実施形態１７に記載の医薬組成物。
【0263】
実施形態１９．前記塩がナトリウム塩である、実施形態１６～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0264】
実施形態２０．前記ナトリウム塩が、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される、実施形態１９に記載の医薬組成物。
【0265】
実施形態２１．前記医薬組成物が界面活性剤をさらに含む、実施形態１６～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0266】
実施形態２２．前記医薬組成物が、糖を含む安定剤をさらに含む、実施形態１６～２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0267】
実施形態２３．前記医薬組成物がメチオニンをさらに含む、実施形態１６～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0268】
実施形態２４．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）酵素に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む前記第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．リン酸ナトリウムを含む緩衝液、
ｃ．塩化ナトリウム、
ｄ．界面活性剤、ならびに
ｅ．糖を含む安定剤
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．ＥＵ番号付けによる、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１からなる群から選択される少なくとも９つのアミノ酸残基位置に置換を含む第１Ｆｃポリペプチド、ならびに
ｉｉ．イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）酵素に連結される第２Ｆｃポリペプチドであって、ＩＤＳアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む前記第２Ｆｃポリペプチド、
ｂ．リン酸ナトリウムを含む緩衝液、
ｃ．塩化ナトリウム、
ｄ．界面活性剤、ならびに
ｅ．糖を含む安定剤
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約５．５～７．０である、前記医薬組成物。
【0269】
実施形態２５．メチオニンをさらに含む、実施形態２４に記載の医薬組成物。
【0270】
実施形態２６．前記第１Ｆｃポリペプチドが、ＥＵ番号付けによる、アミノ酸残基３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１５、４１６、及び４２１位に置換を含む、実施形態１５～２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0271】
実施形態２７．前記ＩＤＳアミノ酸配列が、前記第２ＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される、実施形態１１～２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0272】
実施形態２８．前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４、５、３９または４０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0273】
実施形態２９．前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４、５、３９または４０のアミノ酸配列を含む、実施形態１１～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0274】
実施形態３０．前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の前記アミノ酸配列を含む、実施形態１１～２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0275】
実施形態３１．前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の前記アミノ酸配列を含む、実施形態１１～２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0276】
実施形態３２．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６または４１と少なくとも９０％の同一性（例えば、９５％の同一性）を有する配列を含む、実施形態１～３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0277】
実施形態３３．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0278】
実施形態３４．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４１と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0279】
実施形態３５．前記第１Ｆｃポリペプチドが、
ａ．３８０位にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、
ｂ．３８４位にＴｙｒ、
ｃ．３８６位にＴｈｒ、
ｄ．３８７位にＧｌｕ、
ｅ．３８８位にＴｒｐ、
ｆ．３８９位にＳｅｒまたはＡｌａ、
ｇ．３９０位にＳｅｒまたはＡｓｎ、
ｈ．４１３位にＴｈｒ、
ｉ．４１５位にＧｌｕ、
ｊ．４１６位にＧｌｕ、及び
ｋ．４２１位にＰｈｅ
を含む、実施形態１～３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
ａ．３８０位にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、
ｂ．３８４位にＴｙｒ、
ｃ．３８６位にＴｈｒ、
ｄ．３８７位にＧｌｕ、
ｅ．３８８位にＴｒｐ、
ｆ．３８９位にＳｅｒまたはＡｌａ、
ｇ．３９０位にＳｅｒまたはＡｓｎ、
ｈ．４１３位にＴｈｒ、
ｉ．４１５位にＧｌｕ、
ｊ．４１６位にＧｌｕ、及び
ｋ．４２１位にＰｈｅ
を含む、実施形態１～３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0280】
実施形態３６．前記第１Ｆｃポリペプチド及び前記第２Ｆｃポリペプチドが二量体化する、実施形態１～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0281】
実施形態３７．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６、７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１～３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0282】
実施形態３８．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：６のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、実施形態３７に記載の医薬組成物。
【0283】
実施形態３９．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：７のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、実施形態３７に記載の医薬組成物。
【0284】
実施形態４０．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：２５のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、実施形態３７に記載の医薬組成物。
【0285】
実施形態４１．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３０のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４または５の配列を含む、実施形態３７に記載の医薬組成物。
【0286】
実施形態４２．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４１、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１～３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0287】
実施形態４３．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４１のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、実施形態４２に記載の医薬組成物。
【0288】
実施形態４４．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４２のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、実施形態４２に記載の医薬組成物。
【0289】
実施形態４５．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４４のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、実施形態４２に記載の医薬組成物。
【0290】
実施形態４６．前記第１Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４９のアミノ酸配列を含み、前記ＩＤＳアミノ酸配列に連結される前記第２Ｆｃポリペプチドが、配列番号：３９または４０の配列を含む、実施形態４２に記載の医薬組成物。
【0291】
実施形態４７．前記タンパク質分子の濃度が約５～５０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１～４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0292】
実施形態４８．前記タンパク質分子の濃度が約１０～４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0293】
実施形態４９．前記タンパク質分子の濃度が約１０～３０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１～４８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0294】
実施形態５０．前記タンパク質分子の濃度が約１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１～４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0295】
実施形態５１．前記タンパク質分子の濃度が約２０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１～４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0296】
実施形態５２．前記タンパク質分子の濃度が約３０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１～４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0297】
実施形態５３．緩衝液の濃度が約５～５０ｍＭである、実施形態１～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0298】
実施形態５４．前記緩衝液の濃度が約１０～５０ｍＭである、実施形態１～５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0299】
実施形態５５．前記緩衝液の濃度が約１０～４０ｍＭである、実施形態１～５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0300】
実施形態５６．前記緩衝液の濃度が約１０～３０ｍＭである、実施形態１～５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0301】
実施形態５７．前記緩衝液の濃度が約１５～２５ｍＭである、実施形態１～５６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0302】
実施形態５８．前記緩衝液の濃度が約２０ｍＭである、実施形態１～５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0303】
実施形態５９．前記緩衝液が、約５～５０ｍＭの濃度を有するリン酸ナトリウム緩衝液である、実施形態１～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0304】
実施形態６０．前記緩衝液が、約１０～５０ｍＭの濃度を有するリン酸ナトリウム緩衝液である、実施形態１～５２及び５９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0305】
実施形態６１．前記緩衝液が、約１０～４０ｍＭの濃度を有するリン酸ナトリウム緩衝液である、実施形態１～５２及び５９～６０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0306】
実施形態６２．前記緩衝液が、約１０～３０ｍＭの濃度を有するリン酸ナトリウム緩衝液である、実施形態１～５２及び５９～６１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0307】
実施形態６３．前記緩衝液が、約１５～２５ｍＭの濃度を有するリン酸ナトリウム緩衝液である、実施形態１～５２及び５９～６２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0308】
実施形態６４．前記緩衝液が、約２０ｍＭの濃度を有するリン酸ナトリウム緩衝液である、実施形態１～５２及び５９～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0309】
実施形態６５．前記塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度が約３０～１５０ｍＭである、実施形態１～６４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0310】
実施形態６６．前記塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度が約４０～１４０ｍＭである、実施形態１～６５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0311】
実施形態６７．前記塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度が約５０～１３７ｍＭである、実施形態１～６６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0312】
実施形態６８．前記塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度が約４０～１００ｍＭである、実施形態１～６６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0313】
実施形態６９．前記塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度が約５０ｍＭである、実施形態１～６８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0314】
実施形態７０．前記塩（例えば、ナトリウム塩）の濃度が約１３７ｍＭである、実施形態１～６７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0315】
実施形態７１．前記塩が、約３０～１５０ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである、実施形態１～６４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0316】
実施形態７２．前記塩が、約４０～１４０ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである、実施形態１～６４及び７１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0317】
実施形態７３．前記塩が、約５０～１３７ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである、実施形態１～６４及び７１～７２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0318】
実施形態７４．前記塩が、約４０～１００ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである、実施形態１～６４及び７１～７２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0319】
実施形態７５．前記塩が、約５０ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである、実施形態１～６４及び７１～７４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0320】
実施形態７６．前記塩が、約１３７ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである、実施形態１～６４及び７１～７３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0321】
実施形態７７．前記界面活性剤の濃度が約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0322】
実施形態７８．前記界面活性剤の濃度が約０．２～０．８ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0323】
実施形態７９．前記界面活性剤の濃度が約０．２～０．６ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0324】
実施形態８０．前記界面活性剤の濃度が約０．２ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0325】
実施形態８１．前記界面活性剤の濃度が約０．４ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0326】
実施形態８２．前記界面活性剤の濃度が約０．５ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0327】
実施形態８３．前記界面活性剤の濃度が約０．６ｍｇ／ｍＬである、実施形態６～１５及び２１～７９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0328】
実施形態８４．前記界面活性剤がポリソルベートを含む、実施形態６～１５及び２１～８３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0329】
実施形態８５．前記界面活性剤が、ポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）及びポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）からなる群から選択される、実施形態８４に記載の医薬組成物。
【0330】
実施形態８６．前記界面活性剤がポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）である、実施形態８５に記載の医薬組成物。
【0331】
実施形態８７．前記界面活性剤がポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）である、実施形態８５に記載の医薬組成物。
【0332】
実施形態８８．前記界面活性剤がポロキサマーを含む、実施形態６～１５及び２１～８３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0333】
実施形態８９．前記安定剤が、スクロースまたはトレハロースから選択される糖を含む、実施形態７～１５及び２２～８８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0334】
実施形態９０．前記糖の濃度が約５０～３００ｍＭである、実施形態７～１５及び２２～８９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0335】
実施形態９１．前記糖の濃度が約１００～２５０ｍＭである、実施形態７～１５及び２２～９０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0336】
実施形態９２．前記糖の濃度が約１５０～２００ｍＭである、実施形態７～１５及び２２～９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0337】
実施形態９３．前記糖の濃度が約１７５ｍＭである、実施形態７～１５及び２２～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0338】
実施形態９４．前記安定剤がスクロースを含む、実施形態７～１５及び２２～９３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0339】
実施形態９５．前記メチオニンの濃度が約５～２５ｍＭである、実施形態８～１５、２３及び２５～９４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0340】
実施形態９６．前記メチオニンの濃度が約５～２０ｍＭである、実施形態８～１５、２３及び２５～９５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0341】
実施形態９７．前記メチオニンの濃度が約５～１５ｍＭである、実施形態８～１５、２３及び２５～９６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0342】
実施形態９８．前記メチオニンの濃度が約１０ｍＭである、実施形態８～１５、２３及び２５～９７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0343】
実施形態９９．前記医薬組成物の前記ｐＨが約５．５～６．５である、実施形態１～９８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0344】
実施形態１００．前記医薬組成物の前記ｐＨが約５．５±０．５である、実施形態１～９９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0345】
実施形態１０１．前記医薬組成物の前記ｐＨが約５．５である、実施形態１００に記載の医薬組成物。
【0346】
実施形態１０２．前記医薬組成物の前記ｐＨが約６．０±０．５である、実施形態１～９９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0347】
実施形態１０３．前記医薬組成物の前記ｐＨが約６．０である、実施形態１０２に記載の医薬組成物。
【0348】
実施形態１０４．前記医薬組成物の前記ｐＨが約６．５±０．５である、実施形態１～９９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0349】
実施形態１０５．前記医薬組成物の前記ｐＨが約６．５である、実施形態１０４に記載の医薬組成物。
【0350】
実施形態１０６．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：６、７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：４または５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、ならびに
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：６、７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：４または５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、ならびに
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
【0351】
実施形態１０７．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：６のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：６のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
【0352】
実施形態１０８．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：７のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：７のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
【0353】
実施形態１０９．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：２５のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：２５のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
【0354】
実施形態１１０．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：３０のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：３０のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
【0355】
実施形態１１１．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：４１、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：３９または４０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、ならびに
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：４１、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：３９または４０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、ならびに
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
【0356】
実施形態１１２．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４１のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４１のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
【0357】
実施形態１１３．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４２のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４２のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
【0358】
実施形態１１４．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４４のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４４のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
【0359】
実施形態１１５．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４９のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４９のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
【0360】
実施形態１１６．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：６、７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：４または５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース、ならびに
ｆ．約５～２５ｍＭのメチオニン
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：６、７、２５及び３０のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：４または５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース、ならびに
ｆ．約５～２５ｍＭのメチオニン
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
【0361】
実施形態１１７．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：６のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：６のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
【0362】
実施形態１１８．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：７のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：７のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
【0363】
実施形態１１９．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：２５のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：２５のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
【0364】
実施形態１２０．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：３０のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：３０のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：４または５のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
【0365】
実施形態１２１．医薬組成物であって、
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：４１、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：３９または４０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース、ならびに
ｆ．約５～２５ｍＭのメチオニン
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
ａ．以下を含むタンパク質分子：
ｉ．配列番号：４１、４２、４４及び４９のうちいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、ならびに
ｉｉ．配列番号：３９または４０と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド、
ｂ．約１０～３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート界面活性剤、
ｅ．約１５０～２００ｍＭのスクロース、ならびに
ｆ．約５～２５ｍＭのメチオニン
を含み、前記医薬組成物のｐＨが、約６．５±０．５である、前記医薬組成物。
【0366】
実施形態１２２．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４１のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４１のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
【0367】
実施形態１２３．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４２のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４２のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
【0368】
実施形態１２４．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４４のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４４のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
【0369】
実施形態１２５．前記タンパク質分子が、
ｉ．配列番号：４９のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
ｉ．配列番号：４９のアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド、及び
ｉｉ．配列番号：３９または４０のアミノ酸配列を含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を含む融合ポリペプチド
を含む、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
【0370】
実施形態１２６．前記医薬組成物の前記ｐＨが約６．５±０．２である、実施形態１０６～１２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0371】
実施形態１２７．前記タンパク質分子が、約５～５０ｍｇ／ｍＬで前記組成物中に存在する、実施形態１０６～１２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0372】
実施形態１２８．前記タンパク質分子が、約１０～４０ｍｇ／ｍＬで前記組成物中に存在する、実施形態１０６～１２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0373】
実施形態１２９．前記タンパク質分子が、約１０～３０ｍｇ／ｍＬで前記組成物中に存在する、実施形態１０６～１２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0374】
実施形態１３０．前記リン酸ナトリウム緩衝液の濃度が約１５～２５ｍＭである、実施形態１０６～１２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0375】
実施形態１３１．前記リン酸ナトリウム緩衝液の濃度が約２０ｍＭである、実施形態１０６～１３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0376】
実施形態１３２．前記塩化ナトリウムの濃度が約４０～１００ｍＭである、実施形態１０６～１３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0377】
実施形態１３３．前記塩化ナトリウムの濃度が約５０ｍＭである、実施形態１０６～１３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0378】
実施形態１３４．前記ポリソルベート界面活性剤の濃度が約０．４ｍｇ／ｍＬである、実施形態１０６～１３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0379】
実施形態１３５．前記ポリソルベート界面活性剤の濃度が約０．５ｍｇ／ｍＬである、実施形態１０６～１３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0380】
実施形態１３６．前記ポリソルベート界面活性剤の濃度が約０．６ｍｇ／ｍＬである、実施形態１０６～１３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0381】
実施形態１３７．前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）及びポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）からなる群から選択される、実施形態１０６～１３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0382】
実施形態１３８．前記ポリソルベート界面活性剤がポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）である、実施形態１３７に記載の医薬組成物。
【0383】
実施形態１３９．前記ポリソルベート界面活性剤がポリソルベート－８０（ＰＳ－８０）である、実施形態１３７に記載の医薬組成物。
【0384】
実施形態１４０．前記スクロースの濃度が約１７５ｍＭである、実施形態１０６～１３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0385】
実施形態１４１．前記メチオニンの濃度が約５～２０ｍＭである、実施形態１１６～１４０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0386】
実施形態１４２．前記メチオニンの濃度が約５～１５ｍＭである、実施形態１１６～１４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0387】
実施形態１４３．前記メチオニンの濃度が約１０ｍＭである、実施形態１１６～１４２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0388】
実施形態１４４．
ａ．約５～５０ｍｇ／ｍＬの前記タンパク質分子、
ｂ．約２０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約５０ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．６ｍｇ／ｍＬ）のポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）、
ｅ．約１７５ｍＭのスクロース、及び
ｆ．約１０ｍＭのメチオニン
を含み、前記医薬組成物の前記ｐＨが、約６．５±０．２である、実施形態１１６～１２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
ａ．約５～５０ｍｇ／ｍＬの前記タンパク質分子、
ｂ．約２０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
ｃ．約５０ｍＭの塩化ナトリウム、
ｄ．約０．４～０．７ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．６ｍｇ／ｍＬ）のポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）、
ｅ．約１７５ｍＭのスクロース、及び
ｆ．約１０ｍＭのメチオニン
を含み、前記医薬組成物の前記ｐＨが、約６．５±０．２である、実施形態１１６～１２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0389】
実施形態１４５．前記ｐＨが、２５℃で２週間維持される、実施形態１～１４４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0390】
実施形態１４６．前記ｐＨが、４０℃で２週間維持される、実施形態１～１４４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0391】
実施形態１４７．前記ｐＨが、約２～８℃の温度で約１か月間維持される、実施形態１～１４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0392】
実施形態１４８．濁度が、約２～４０℃の温度で安定したままである、実施形態１～１４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0393】
実施形態１４９．濁度が、約２～８℃の温度で安定したままである、実施形態１４８に記載の医薬組成物。
【0394】
実施形態１５０．前記タンパク質分子が、約２～４０℃の温度でインタクトなままである、実施形態１～１４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0395】
実施形態１５１．前記タンパク質分子が、約２～８℃の温度でインタクトなままである、実施形態１５０に記載の医薬組成物。
【0396】
実施形態１５２．前記タンパク質分子が、凍結－解凍サイクル中にインタクトなままである、実施形態１～１５１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0397】
実施形態１５３．前記タンパク質分子が、約５．５～７．０のｐＨでインタクトなままである、実施形態１～１５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0398】
実施形態１５４．前記タンパク質分子が、約６．０～７．０のｐＨでコロイド的に、及び／または立体構造的に安定している、実施形態１～１５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0399】
実施形態１５５．前記医薬組成物が、液体組成物として提供される、実施形態１～１５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0400】
実施形態１５６．前記医薬組成物が、凍結乾燥組成物として提供される、実施形態１～１５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0401】
実施形態１５７．リソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）（例えば、ハンター症候群）の処置を必要とする対象のＬＳＤの処置方法であって、実施形態１～１５６のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【0402】
実施形態１５８．リソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）（例えば、ハンター症候群）の処置を必要とする対象のＬＳＤの処置方法であって、実施形態１～１５６のいずれか１項に記載の医薬組成物を提供し、それを前記対象に投与することを含む、前記方法。
【0403】
実施形態１５９．前記医薬組成物が静脈内投与される、実施形態１５７または１５８に記載の方法。
【0404】
実施形態１６０．リソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）（例えば、ハンター症候群）の処置を必要とする対象のＬＳＤの処置に使用するための、実施形態１～１５６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【0405】
実施形態１６１．リソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）（例えば、ハンター症候群）の処置を必要とする対象のＬＳＤを処置するための医薬の調製における、実施形態１～１５６のいずれか１項に記載されるような医薬組成物の使用。
【0406】
実施形態１６２．前記ＬＳＤがハンター症候群である、実施形態１５７～１６１のいずれか１項に記載の方法、医薬組成物または使用。
【0407】
ある特定の定義
「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書で交換可能に使用される場合、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、雌ウシ、ブタ、ウマ、ならびに他の哺乳動物種を含むが、これらに限定されない哺乳動物を指す。一実施形態では、患者はヒトである。
「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書で交換可能に使用される場合、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、雌ウシ、ブタ、ウマ、ならびに他の哺乳動物種を含むが、これらに限定されない哺乳動物を指す。一実施形態では、患者はヒトである。
【0408】
「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ヒトまたは動物での使用のために生物学的または薬理学的に適合した非医薬品有効成分を指し、例えば、緩衝液、担体、または防腐剤などであるが、これらに限定されない。
【0409】
「投与する」という用語は、薬剤（例えば、本明細書に記載されるタンパク質分子）、化合物、または組成物（例えば、医薬組成物）を、所望の生物学的作用部位に送達する方法を指す。これらの方法としては、経口、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、髄腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、静脈内投与される。
【0410】
「処置」、「処置する」などの用語は、一般に所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味するように本明細書で使用される。「処置すること」または「処置」は、リソソーム蓄積障害、例えば、ハンター症候群の処置または改善における成功の任意の徴候を指す場合があり、任意の客観的または主観的パラメータを含み、例えば、緩和、寛解、患者生存の改善、生存期間もしくは生存率の増加、症状の軽減もしくは障害に対する患者の忍容性を高めること、変性もしくは衰退の速度を遅くすること、または患者の身体的もしくは精神的健康を改善することなどである。症状の処置または改善は、客観的または主観的パラメータに基づき得る。処置の効果は、処置を受けていない個体もしくは個体のプールと、または処置前の、もしくは処置中の異なる時点での同じ患者と比較され得る。
【0411】
「有効量」という語句は、（ｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害を処置もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害のうち１つ以上の症状を減弱させる、改善する、もしくは排除する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載される特定の疾患、状態、もしくは障害のうち１つ以上の症状の発症を予防もしくは遅延させる本明細書に記載される化合物の量を意味する。
【0412】
本明細書に開示される物質／分子の「治療有効量」は、要因、例えば、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体中で所望の応答を誘発する物質／分子の能力などによって変動する場合がある。治療有効量は、物質／分子のあらゆる毒性または有害作用を、治療的に有益な効果が上回る量を包含する。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な投与量及び期間で有効な量を指す。必ずしもそうとは限らないが、通常、予防用量は疾患の前または疾患の初期段階で対象に使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも少ないことになる。
【0413】
「酵素補充療法酵素」または「ＥＲＴ酵素」は、リソソーム蓄積障害において欠損している酵素を指す。「ＥＲＴ酵素バリアント」は、野生型ＥＲＴ酵素またはその断片の、対立遺伝子及びスプライスバリアントを含む機能的バリアントを指し、ＥＲＴ酵素バリアントは、例えば、同一条件下でアッセイされる場合、対応する野生型ＥＲＴ酵素またはその断片の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の活性を有する。ＥＲＴ酵素の「触媒活性断片」は、全長ＥＲＴ酵素またはそのバリアントの一部を指し、触媒活性断片は、例えば、同一条件下でアッセイされる場合、対応する全長ＥＲＴ酵素またはそのバリアントの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の活性を有する。
【0414】
「イズロン酸スルファターゼ」、「イズロン酸－２－スルファターゼ」、または「ＩＤＳ」は、本明細書で使用される場合、イズロン酸２－スルファターゼ（ＥＣ ３．１．６．１３）を指し、これはグリコサミノグリカンであるヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸のリソソーム分解に関与する酵素である。ＩＤＳの欠損は、ハンター症候群としても知られているムコ多糖症ＩＩ型と関連している。Ｆｃポリペプチドを含むタンパク質の成分として本明細書で使用される場合の「ＩＤＳ」という用語は、触媒的に活性であり、野生型ＩＤＳまたはその断片の、対立遺伝子及びスプライスバリアントを含む機能的バリアントを包含する。ヒトＩＤＳアイソフォームＩの配列は、カノニカル配列として表されるヒト配列であり、ＵｎｉＰｒｏｔエントリーＰ２２３０４において利用可能で、Ｘｑ２８のヒトＩＤＳ遺伝子によってコードされる。全長配列は、配列番号：１１として提供される。「成熟」ＩＤＳ配列は、本明細書で使用される場合、天然に存在する全長ポリペプチド鎖のシグナル及びプロペプチド配列を欠いているポリペプチド鎖の形態を指す。成熟ヒトＩＤＳポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号：１として提供され、これは全長ヒト配列のアミノ酸３４～５５０に対応する。「切断型」ＩＤＳ配列は、本明細書で使用される場合、天然に存在する全長ポリペプチド鎖の触媒活性断片を指す。例示的な切断型ヒトＩＤＳポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号：２３として提供され、これは全長ヒト配列のアミノ酸２６～５５０に対応する。ヒトＩＤＳの構造は、十分に特徴付けされている。例示的な構造は、ＰＤＢアクセッションコード５ＦＱＬにおいて利用可能である。構造は、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．８：１５７８６ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１５７８６，２０１７にも記載されている。非ヒト霊長類ＩＤＳ配列も記載されていて、チンパンジー（ＵｎｉＰｒｏｔエントリーＫ７ＢＫＶ４）及びアカゲザル（ＵｎｉＰｒｏｔエントリーＨ９ＦＴＸ２）を含む。マウスＩＤＳ配列は、ＵｎｉｐｒｏｔエントリーＱ０８８９０において利用可能である。ＩＤＳバリアントは、例えば、同一条件下でアッセイされる場合、対応する野生型ＩＤＳまたはその断片の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の活性を有する。触媒活性ＩＤＳ断片は、例えば、同一条件下でアッセイされる場合、対応する全長ＩＤＳまたはそのバリアントの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の活性を有する。
【0415】
「トランスフェリン受容体」または「ＴｆＲ」は、本明細書で使用される場合、トランスフェリン受容体タンパク質１を指す。ヒトトランスフェリン受容体１ポリペプチド配列は、配列番号：１３に示されている。他の種に由来するトランスフェリン受容体タンパク質１配列も、知られている（例えば、チンパンジー、アクセッション番号ＸＰ＿００３３１０２３８．１、アカゲザル、ＮＰ＿００１２４４２３２．１、イヌ、ＮＰ＿００１００３１１１．１、ウシ、ＮＰ＿００１１９３５０６．１、マウス、ＮＰ＿０３５７６８．１、ラット、ＮＰ＿０７３２０３．１、及びニワトリ、ＮＰ＿９９０５８７．１）。「トランスフェリン受容体」という用語は、トランスフェリン受容体タンパク質１染色体座にある遺伝子によってコードされる例示的な参照配列、例えば、ヒト配列の対立遺伝子バリアントも包含する。全長トランスフェリン受容体タンパク質は、短いＮ末端細胞内領域、膜貫通領域、及び大きな細胞外ドメインを含む。細胞外ドメインは、３つのドメイン：プロテアーゼ様ドメイン、ヘリカルドメイン、及びアピカルドメインを特徴とする。ヒトトランスフェリン受容体１のアピカルドメイン配列は、配列番号：３５に示されている。
【0416】
「［ＥＲＴ酵素］－Ｆｃ融合タンパク質」、「ＥＴＶ：［ＥＲＴ酵素］タンパク質分子」、または「タンパク質分子」は、本明細書で使用される場合、第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドを含む二量体タンパク質を指し、第２Ｆｃポリペプチドは、ＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結（例えば、融合）され（例えば、「ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド」）、第１Ｆｃポリペプチドは第２ＦｃポリペプチドとＦｃ二量体を形成する。第１Ｆｃポリペプチドもまた、ＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結（例えば、融合）されてもよい。第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、ペプチド結合によって、またはポリペプチドリンカーによってＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結されてよい。第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、他方のＦｃポリペプチドとのそのヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、エフェクター機能を減少させる１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。第１Ｆｃポリペプチド及び／または第２Ｆｃポリペプチドは、血清半減期を延長する１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。「［ＥＲＴ酵素］－Ｆｃ融合タンパク質」、「ＥＴＶ：［ＥＲＴ酵素］タンパク質分子」、または「タンパク質分子」という用語は、単一のタンパク質分子または複数のタンパク質分子を指す場合がある。
【0417】
「融合ポリペプチド」または「［ＥＲＴ酵素］－Ｆｃ融合ポリペプチド」は、本明細書で使用される場合、ＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結（例えば、融合）されているＦｃポリペプチドを指す。Ｆｃポリペプチドは、ペプチド結合によって、またはポリペプチドリンカーによってＥＲＴ酵素、ＥＲＴ酵素バリアント、またはその触媒活性断片に連結されてよい。Ｆｃポリペプチドは、別のＦｃポリペプチドとのそのヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。Ｆｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。Ｆｃポリペプチドは、エフェクター機能を減少させる１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。Ｆｃポリペプチドは、血清半減期を延長する１つ以上の修飾を含有する修飾Ｆｃポリペプチドであってよい。
【0418】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃポリペプチド」という用語は、構造ドメインとしてＩｇフォールドを特徴とする、天然に存在する免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣ末端領域を指す。Ｆｃポリペプチドは、少なくともＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインを含む定常領域配列を含有し、少なくともヒンジ領域の一部を含有する場合がある。一般に、Ｆｃポリペプチドは可変領域を含有しない。
【0419】
「修飾Ｆｃポリペプチド」は、野生型免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド配列と比較した場合に、少なくとも１つの変異、例えば、置換、欠失または挿入を有するが、天然Ｆｃポリペプチドの全体的なＩｇフォールドまたは構造を保持するＦｃポリペプチドを指す。
【0420】
「ＦｃＲｎ」という用語は、胎児性Ｆｃ受容体を指す。ＦｃポリペプチドとＦｃＲｎとの結合によって、Ｆｃポリペプチドのクリアランスが減少し、血清半減期が増加する。ヒトＦｃＲｎタンパク質は、主要組織適合（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質に類似した約５０ｋＤａサイズのタンパク質及び約１５ｋＤａサイズのβ２－ミクログロブリンから構成されるヘテロ二量体である。
【0421】
本明細書で使用される場合、「ＦｃＲｎ結合部位」は、ＦｃＲｎに結合するＦｃポリペプチドの領域を指す。ヒトＩｇＧでは、ＦｃＲｎ結合部位は、ＥＵインデックスを使用して番号付けされるように、Ｔ２５０、Ｌ２５１、Ｍ２５２、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｒ２５５、Ｔ２５６、Ｔ３０７、Ｅ３８０、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、Ｈ４３５、及びＹ４３６を含む。これらの位置は、配列番号：８の２０～２６、７７、１５０、１９８、及び２０３～２０６位に対応する。
【0422】
本明細書で使用される場合、「天然ＦｃＲｎ結合部位」は、ＦｃＲｎに結合し、ＦｃＲｎに結合する天然に存在するＦｃポリペプチドの領域と同じアミノ酸配列を有するＦｃポリペプチドの領域を指す。
【0423】
「ＣＨ３ドメイン」及び「ＣＨ２ドメイン」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫グロブリン定常領域ドメインポリペプチドを指す。本出願の目的のために、ＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵによって番号付けされるような３４１位付近～４４７位付近のアミノ酸のセグメントを指し、ＣＨ２ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような２３１位付近～３４０位付近のアミノ酸のセグメントを指し、ヒンジ領域配列を含まない。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインポリペプチドはまた、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃチャート番号付け（ＩＭＧＴウェブサイト）によると、ＣＨ２ドメインの番号付けが１～１１０であり、ＣＨ３ドメインの番号付けが１～１０７であるＩＭＧＴ番号付けスキームによって番号付けされてもよい。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部である。Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けスキームによって番号付けされるような２３１位付近～４４７位付近のアミノ酸のセグメントを指すが、本明細書で使用される場合、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部を含み得る。例示的なヒンジ領域配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列のＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号：１２）である。
【0424】
「天然に存在する」、「天然」または「野生型」は、人工的に生成されるものとは異なるものとして天然に見られ得る対象物について記載するために使用される。例えば、生物（ウイルスを含む）中に存在するヌクレオチド配列は、天然源から単離され得るが、実験室において意図的に改変されていないものであり、すなわち、天然に存在する。さらに、「野生型」は、正常遺伝子、または任意の既知の変異を含まない天然に見られる生物を指す。例えば、ＣＨ３またはＣＨ２ドメインに関する「野生型」、「天然」、及び「天然に存在する」という用語は、天然に存在する配列を有するドメインを指すために本明細書で使用される。
【0425】
本明細書で使用される場合、変異体ポリペプチドまたは変異体ポリヌクレオチドに関する「変異体」という用語は、「バリアント」と交換可能に使用される。所与の野生型ＣＨ３またはＣＨ２ドメイン参照配列に関するバリアントは、天然に存在する対立遺伝子バリアントを含み得る。天然に「存在しない」ＣＨ３またはＣＨ２ドメインは、自然界で細胞中には存在せず、遺伝子改変によって、例えば、遺伝子工学技術または変異誘発技術を使用して作製される、天然ＣＨ３ドメインまたはＣＨ２ドメインポリヌクレオチドまたはポリペプチドのバリアントまたは変異体ドメインを指す。「バリアント」は、野生型に対して少なくとも１つのアミノ酸変異を含む任意のドメインを含む。変異は、置換、挿入、及び欠失を含んでよい。
【0426】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸に加えて、天然に存在するアミノ酸に類似した方法で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。
【0427】
天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるようなものに加えて、後で修飾されるようなアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸及びＯ－ホスホセリンである。「アミノ酸類似体」は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合しているα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾Ｒ基を有する（例えば、ノルロイシン）か、または修飾ペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。「アミノ酸模倣体」は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸に類似した方法で機能する化学化合物を指す。
【0428】
天然に存在するα－アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－スレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【0429】
アミノ酸は、それらの一般に既知の３文字の記号によって、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される１文字の記号によるいずれかで本明細書において称される場合がある。
【0430】
「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、一本鎖のアミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書では交換可能に使用される。本用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の化学的人工模倣体であるアミノ酸ポリマーに加えて、天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。アミノ酸ポリマーは、全てがＬ－アミノ酸のもの、全てがＤ－アミノ酸のもの、またはＬアミノ酸及びＤアミノ酸の混合物を含んでよい。
【0431】
「タンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドまたは一本鎖ポリペプチドの二量体（すなわち、２つ）もしくは多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。タンパク質の一本鎖ポリペプチドは、共有結合、例えば、ジスルフィド結合、または非共有結合性相互作用によって連結されてよい。
【0432】
「保存的置換」、「保存的変異」、または「保存的修飾バリアント」という用語は、アミノ酸と、類似した特徴を有すると分類され得る別のアミノ酸との置換をもたらす変化を指す。このようにして定義される保存的アミノ酸群の分類例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含む「荷電／極性群」、Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含む「芳香族群」、ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（スレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）を含む「脂肪族群」が挙げられ得る。各群内では、サブグループも確認され得る。例えば、荷電または極性アミノ酸の群は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓを含む「正荷電サブグループ」、Ｇｌｕ及びＡｓｐを含む「負荷電サブグループ」、ならびにＡｓｎ及びＧｌｎを含む「極性サブグループ」を含むサブグループに細分化され得る。別の例では、芳香族または環状群は、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ及びＴｒｐを含む「窒素環サブグループ」、ならびにＰｈｅ及びＴｙｒを含む「フェニルサブグループ」を含むサブグループに細分化され得る。さらに別の例では、脂肪族群は、サブグループ、例えば、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、及びＡｌａを含む「脂肪族非極性サブグループ」、ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＣｙｓを含む「わずかに極性のある脂肪族サブグループ」に細分化され得る。保存的変異の分類例としては、上記サブグループ内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、これらに限定されないが、正電荷が維持され得るように、ＡｒｇからＬｙｓへの置換または逆もまた同様、負電荷が維持され得るように、ＡｓｐからＧｌｕへの置換または逆もまた同様、遊離－ＯＨが維持され得るように、ＴｈｒからＳｅｒへの置換または逆もまた同様、及び遊離－ＮＨ２が維持され得るように、ＡｓｎからＧｌｎへの置換または逆もまた同様などが挙げられる。いくつかの実施形態では、疎水性アミノ酸は、疎水性を維持するために、例えば、活性部位の天然に存在する疎水性アミノ酸と置換される。
【0433】
「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、２つ以上のポリペプチド配列との関連において、配列比較アルゴリズムを使用して、または手動アラインメント及び目視検査によって測定される場合に同じか、または比較され、かつ比較ウィンドウ、もしくは指定の領域に対して最も対応するようにアラインメントされる場合に、特定の領域に対して同一であるアミノ酸残基の特定のパーセンテージ、例えば、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％以上を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。
【0434】
ポリペプチドの配列比較については、典型的には、１つのアミノ酸配列が参照配列として機能し、それが候補配列と比較される。アラインメントは、当業者に利用可能な様々な方法、例えば、視覚的アラインメントを使用して、または既知のアルゴリズムを使用して最大アラインメントを達成する公的に入手可能なソフトウェアを使用して実施され得る。そのようなプログラムとしては、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が挙げられる。最大アラインメントを達成するためにアラインメントに用いられるパラメータは、当業者によって決定され得る。本出願のためのポリペプチド配列の配列比較については、デフォルトパラメータを用いて２つのタンパク質配列をアラインメントするための、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムの標準タンパク質ＢＬＡＳＴが使用される。
【0435】
ポリペプチド配列中における所与のアミノ酸残基の同定に関して使用される場合、「に対応する」、「を参照して決定される」、または「を参照して番号付けされる」という用語は、所与のアミノ酸配列が参照配列と最大限にアラインメントされ、それと比較される場合に特定の参照配列の残基の位置を指す。したがって、例えば、修飾Ｆｃポリペプチド中のアミノ酸残基は、その残基が配列番号：８のアミノ酸とアラインメントする際に、配列番号：８に最適にアラインメントされる場合、配列番号：８のアミノ酸「に対応する」。参照配列にアラインメントされるポリペプチドは、参照配列と同じ長さである必要はない。
【0436】
「結合親和性」は、本明細書で使用される場合、２つの分子、例えば、ポリペプチド上の単一の結合部位と、それが結合する標的、例えば、トランスフェリン受容体との間の非共有結合性相互作用の強さを指す。したがって、例えば、本用語は、別段の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、ポリペプチドとその標的との間の１：１相互作用を指してよい。結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）を測定することによって定量化されてよく、これは結合速度定数（ｋａ、時間－１Ｍ－１）で除された解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を指す。ＫＤは、複合体形成及び解離の動態の測定、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システム、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外法、及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔ（登録商標）プラットフォームを使用する）を使用することによって決定され得る。本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、正式な結合親和性、例えば、ポリペプチドとその標的との間の１：１相互作用を反映するものなどだけでなく、強力な結合を反映する可能性のあるＫＤが算出される見かけの親和性も含む。
【0437】
本明細書で使用される場合、標的、例えば、ＴｆＲに「特異的に結合する」または「選択的に結合する」という用語は、本明細書に記載されるような操作されたＴｆＲ結合ポリペプチドまたはＴｆＲ結合ペプチドを指す場合、操作されたＴｆＲ結合ポリペプチドまたはＴｆＲ結合ペプチドは、それが構造的に異なる標的に結合するよりも、より高い親和性、より高いアビディティ、及び／またはより長い持続時間で標的に結合する結合反応を指す。典型的な実施形態では、操作されたＴｆＲ結合ポリペプチドまたはＴｆＲ結合ペプチドは、同じ親和性アッセイ条件下でアッセイされる場合に無関係な標的と比較して、特定の標的、例えば、ＴｆＲに対して少なくとも５倍、１０倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍の、またはそれを超える親和性を有する。特定の標的（例えば、ＴｆＲ）「との特異的結合」、「に特異的に結合する」、または「に特異的である」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、分子が結合する標的に対して、例えば、１０－４Ｍ以下、例えば、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、または１０－１２Ｍの平衡解離定数ＫＤを有する分子によって示され得る。いくつかの実施形態では、操作されたＴｆＲ結合ポリペプチドまたはＴｆＲ結合ペプチドは、種間で保存された（例えば、種間で構造的に保存された）、例えば、非ヒト霊長類種とヒト種との間で保存された（例えば、非ヒト霊長類種とヒト種との間で構造的に保存された）ＴｆＲ上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、操作されたＴｆＲ結合ポリペプチドまたはＴｆＲ結合ペプチドは、もっぱらヒトＴｆＲに結合する可能性がある。
【0438】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、生殖細胞系可変（Ｖ）遺伝子、多様性（Ｄ）遺伝子、または結合（Ｊ）遺伝子に由来し（定常（Ｃμ及びＣδ）遺伝子セグメントには由来せず）、かつ抗原への結合に対するその特異性を抗体に付与する抗体重鎖または軽鎖におけるドメインを指す。典型的には、抗体可変領域は、３つの超可変「相補性決定領域」が点在している４つの保存「フレームワーク」領域を含む。
【0439】
「抗原結合部分」及び「抗原結合断片」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、抗体の可変領域によって抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＬ（軽鎖可変領域）、ならびにＶＨ（重鎖可変領域）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0440】
本明細書で使用される場合、「希釈剤」という用語は、再構成製剤の調製に有用な薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与に対して安全かつ非毒性の）希釈物質を指す。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。
【0441】
本明細書で使用される場合、「凍結乾燥保護剤」という用語は、凍結乾燥及びその後の保管時にタンパク質または他の物質の化学的及び／または物理的不安定性を防止する、または減少させる分子を指す。例示的な凍結乾燥保護剤としては、糖、例えば、スクロースまたはトレハロースなど、アミノ酸、例えば、グルタミン酸モノナトリウムまたはヒスチジンなど、メチルアミン、例えば、ベタインなど、リオトロピック塩、例えば、硫酸マグネシウムなど、ポリオール、例えば、３価または高級糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールなど、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ならびにこれらの組合せが挙げられる。いくつかの実施形態では、凍結乾燥保護剤は、非還元糖、例えば、トレハロースまたはスクロースなどである。
【0442】
本明細書で使用される場合、「可溶性」という用語は、均一な溶液を形成する治療剤の能力を指す。いくつかの実施形態では、治療剤が投与され、それによって標的作用部位（例えば、脳の細胞及び組織）に輸送される溶液中の治療剤の溶解度は、治療有効量の治療剤を標的作用部位に送達することを可能にするのに十分である。いくつかの要因が治療剤の溶解度に影響を与え得る。例えば、タンパク質の溶解度に影響を与える可能性がある関連要因としては、イオン強度、アミノ酸配列及び他の共可溶化剤または塩（例えば、カルシウム塩）の存在が挙げられる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、カルシウム塩がそのような組成物から除外されるように製剤化される。いくつかの実施形態では、治療剤は、その対応する医薬組成物に可溶である。
【0443】
本明細書で使用される場合、「安定した」という用語は、治療剤（例えば、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子）が、その治療有効性（例えば、その意図される生物活性及び／または生理化学的整合性の全てまたは大部分）を長期間にわたって維持する能力を指す。治療剤の安定性、及びそのような治療剤の安定性を維持するための医薬組成物の能力は、長期間にわたって（例えば、少なくとも１、２、３もしくは４週間の間、または１、３、６、１２、１８、２４、３０、３６か月以上の間）評価されてよい。一般に、本明細書に記載される医薬組成物は、それらが、共に製剤化される１つ以上の治療剤（例えば、組換えタンパク質）を安定化できるか、または代わりにその劣化を遅延もしくは防止できるように製剤化されている。製剤との関連において、安定した製剤は、その中の治療剤が、保存時に、ならびにプロセス（凍結／解凍、機械的混合及び凍結乾燥など）中にその物理的及び／または化学的整合性ならびに生物活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質安定性については、例えば、高分子量（ＨＭＷ）凝集体の形成、低分子量粒子の形成（クリッピングを表す）、酵素活性の喪失、ペプチド断片の生成、電荷プロファイルのシフトまたは実施例に記載される他の要因によって測定され得る。
【0444】
以下の実施例は、非限定的であることを意図する。
【0445】
実施例１：ＩＤＳを含む融合タンパク質の構築。
設計及びクローニング
ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質を、（ｉ）成熟したヒトＩＤＳ酵素を、Ｆｃ領域を含むヒトＩｇＧ１断片に融合した融合ポリペプチド（「ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド」）、及び（ｉｉ）Ｆｃ領域中に、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）結合を付与する変異を含有する修飾ヒトＩｇＧ１断片（「修飾Ｆｃポリペプチド」）を含有するように設計した。特に、ＩＤＳ断片をヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＮ末端またはＣ末端のいずれかに融合したＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを作製した。いくつかの場合には、ＩＤＳ断片とＩｇＧ１断片との間にリンカーを配置し、２つの断片間のあらゆる立体障害を軽減した。全ての構築物で、カッパ鎖Ｖ－ＩＩＩ、アミノ酸１～２０のシグナルペプチド（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ０１６６１）を、融合体の上流に挿入して分泌を促進し、ＩＤＳを切断してアミノ酸Ｓ２６～Ｐ５５０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ２２３０４）で構成した。使用したヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の断片は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ Ｐ０１８５７の配列のアミノ酸Ｄ１０４～Ｋ３３０（２２１～４４７位、ＥＵ番号付け、これはヒンジの１０アミノ酸（２２１～２３０位）を含む）に対応する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１残基Ｄ１０４～Ｋ３３０に由来するが、ＩＤＳ融合を欠いている別のＦｃポリペプチドを、１つのＩＤＳ酵素（「モノザイム」）を有するヘテロ二量体融合タンパク質を生成するために、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドと共トランスフェクトした。一部の構築物では、ＩｇＧ１断片が追加の変異を含有し、２つのＦｃ領域のヘテロ二量体化を促進した。ＴｆＲ結合を付与する変異を欠いている対照ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質を同様に設計かつ構築したが、これらのタンパク質がＴｆＲ結合を付与する変異を欠いているという点で異なっていた。追加の対照として、Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグ（配列番号：３８）を有するＩＤＳポリペプチド（アミノ酸Ｓ２６～Ｐ５５０）を生成し、検出及び精製を容易にした。
設計及びクローニング
ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質を、（ｉ）成熟したヒトＩＤＳ酵素を、Ｆｃ領域を含むヒトＩｇＧ１断片に融合した融合ポリペプチド（「ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド」）、及び（ｉｉ）Ｆｃ領域中に、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）結合を付与する変異を含有する修飾ヒトＩｇＧ１断片（「修飾Ｆｃポリペプチド」）を含有するように設計した。特に、ＩＤＳ断片をヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＮ末端またはＣ末端のいずれかに融合したＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを作製した。いくつかの場合には、ＩＤＳ断片とＩｇＧ１断片との間にリンカーを配置し、２つの断片間のあらゆる立体障害を軽減した。全ての構築物で、カッパ鎖Ｖ－ＩＩＩ、アミノ酸１～２０のシグナルペプチド（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ０１６６１）を、融合体の上流に挿入して分泌を促進し、ＩＤＳを切断してアミノ酸Ｓ２６～Ｐ５５０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ２２３０４）で構成した。使用したヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の断片は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ Ｐ０１８５７の配列のアミノ酸Ｄ１０４～Ｋ３３０（２２１～４４７位、ＥＵ番号付け、これはヒンジの１０アミノ酸（２２１～２３０位）を含む）に対応する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１残基Ｄ１０４～Ｋ３３０に由来するが、ＩＤＳ融合を欠いている別のＦｃポリペプチドを、１つのＩＤＳ酵素（「モノザイム」）を有するヘテロ二量体融合タンパク質を生成するために、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドと共トランスフェクトした。一部の構築物では、ＩｇＧ１断片が追加の変異を含有し、２つのＦｃ領域のヘテロ二量体化を促進した。ＴｆＲ結合を付与する変異を欠いている対照ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質を同様に設計かつ構築したが、これらのタンパク質がＴｆＲ結合を付与する変異を欠いているという点で異なっていた。追加の対照として、Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグ（配列番号：３８）を有するＩＤＳポリペプチド（アミノ酸Ｓ２６～Ｐ５５０）を生成し、検出及び精製を容易にした。
【0446】
ＴｆＲ結合タンパク質分子は、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドによって形成される二量体である。ＩＤＳ酵素がＦｃ領域のＮ末端に連結される二量体の場合、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号：４、５及び２４のうちいずれか１つの配列を有する場合がある。これらの配列では、ＩＤＳ配列に下線が引かれ、配列は５９位にホルミルグリシンに改変したシステイン（二重下線付き）を含有する。ＩＤＳを、ＧＧＧＧＳリンカー（配列番号：３６）によってＦｃポリペプチドに連結した。ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、配列番号：２２）を、ＦｃポリペプチドのＮ末端に含んだ。ＣＨ２ドメイン配列は、配列番号：４、５及び２４の５４１位から始まる。
【0447】
ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１は、配列番号：４、５及び２４のうちいずれか１つの配列を有するＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドならびに配列番号：２５の配列を有する、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドによって形成される二量体である。ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１を、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドが、配列番号：３９、４０及び４３のうちいずれか１つの配列を有し、及び／またはＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４４の配列を有するように、細胞培養作製中にさらに処理してもよい。したがって、本明細書で使用する場合、ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１という用語を、未処理の配列（すなわち、配列番号：４、５、２４及び２５）を有するタンパク質分子、１つ以上の処理配列（すなわち、配列番号：３９、４０、４３及び４４から選択される）を含むタンパク質分子、または処理及び未処理のタンパク質分子を含む混合物を指すために使用する場合がある。最初の１０アミノ酸は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部である。ＣＨ２ドメイン配列は、それぞれ配列番号：２５及び４４の１１位から始まる。
【0448】
ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１．１７．２は、配列番号：４、５及び２４のうちいずれか１つの配列を有するＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドならびに配列番号：３０の配列を有する、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドによって形成される二量体である。ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１．１７．２を、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドが、配列番号：３９、４０及び４３のうちいずれか１つの配列を有し、及び／またはＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４９の配列を有するように、細胞培養作製中にさらに処理してもよい。したがって、本明細書で使用する場合、ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１．１７．２という用語を、未処理の配列（すなわち、配列番号：４、５、２４及び３０）を有するタンパク質分子、１つ以上の処理配列（すなわち、配列番号：３９、４０、４３及び４９から選択される）を含むタンパク質分子、または処理及び未処理のタンパク質分子を含む混合物を指すために使用する場合がある。最初の１０アミノ酸は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部である。ＣＨ２ドメイン配列は、それぞれ配列番号：３０及び４９の１１位から始まる。
【0449】
ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２は、配列番号：４、５及び２４のうちいずれか１つの配列を有するＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドならびに配列番号：７の配列を有する、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドによって形成される二量体である。ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２を、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドが、配列番号：３９、４０及び４３のうちいずれか１つの配列を有し、及び／またはＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４２の配列を有するように、細胞培養作製中にさらに処理してもよい。したがって、本明細書で使用する場合、ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２という用語を、未処理の配列（すなわち、配列番号：４、５、２４及び７）を有するタンパク質分子、１つ以上の処理配列（すなわち、配列番号：３９、４０、４３及び４２から選択される）を含むタンパク質分子、または処理及び未処理のタンパク質分子を含む混合物を指すために使用する場合がある。最初の１０アミノ酸は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部である。ＣＨ２ドメイン配列は、それぞれ配列番号：７及び４２の１１位から始まる。
【0450】
ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１．１７は、配列番号：４、５及び２４のうちいずれか１つの配列を有するＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドならびに配列番号：６の配列を有する、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドによって形成される二量体である。ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質のＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１．１７を、ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドが、配列番号：３９、４０及び４３のうちいずれか１つの配列を有し、及び／またはＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドが、配列番号：４１の配列を有するように、細胞培養作製中にさらに処理してもよい。したがって、本明細書で使用する場合、ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２１．１７という用語を、未処理の配列（すなわち、配列番号：４、５、２４及び６）を有するタンパク質分子、１つ以上の処理配列（すなわち、配列番号：３９、４０、４３及び４１から選択される）を含むタンパク質分子、または処理及び未処理のタンパク質分子を含む混合物を指すために使用する場合がある。修飾ＦｃポリペプチドのＮ末端は、ＩｇＧ１ヒンジ領域の一部（例えば、配列番号：２２）を含む場合がある。
【0451】
タンパク質発現及び精製
Ｆｃ領域に融合した組換えＩＤＳ酵素を発現させるために、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯトランスフェクションキットを製造業者の指示（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って使用し、関連するＤＮＡ構築物でトランスフェクトした。細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）内で、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ中において３７℃、６％ＣＯ２及び１２０ｒｐｍで増殖させた。簡潔に述べると、対数増殖するＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞を、１ｍＬの培養液量あたり０．８μｇのＤＮＡプラスミドを用いて６×１０６細胞／ｍｌ密度でトランスフェクトした。トランスフェクション後、細胞を３７℃に戻し、トランスフェクションの１８～２２時間後に示したようにトランスフェクトした培養液にフィード培地を補充した。トランスフェクトした細胞培養上清を、トランスフェクションの１２０時間後に３，５００ｒｐｍで２０分間、遠心分離することによって回収した。清澄した上清を濾過し（０．２２μＭ膜）、４℃で保存した。エピトープタグ付きＩＤＳ酵素（対照として使用した）の発現を、わずかな変更を加えて上記の通りに実施した。簡潔に述べると、Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグ（配列番号：３８）を持つＩＤＳ酵素を、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で発現させた。
Ｆｃ領域に融合した組換えＩＤＳ酵素を発現させるために、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯトランスフェクションキットを製造業者の指示（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って使用し、関連するＤＮＡ構築物でトランスフェクトした。細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）内で、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ中において３７℃、６％ＣＯ２及び１２０ｒｐｍで増殖させた。簡潔に述べると、対数増殖するＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞を、１ｍＬの培養液量あたり０．８μｇのＤＮＡプラスミドを用いて６×１０６細胞／ｍｌ密度でトランスフェクトした。トランスフェクション後、細胞を３７℃に戻し、トランスフェクションの１８～２２時間後に示したようにトランスフェクトした培養液にフィード培地を補充した。トランスフェクトした細胞培養上清を、トランスフェクションの１２０時間後に３，５００ｒｐｍで２０分間、遠心分離することによって回収した。清澄した上清を濾過し（０．２２μＭ膜）、４℃で保存した。エピトープタグ付きＩＤＳ酵素（対照として使用した）の発現を、わずかな変更を加えて上記の通りに実施した。簡潔に述べると、Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグ（配列番号：３８）を持つＩＤＳ酵素を、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞中で発現させた。
【0452】
ＴｆＲ結合を付与する操作したＦｃ領域を含む（または含まない）ＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して細胞培養上清から精製した。上清を、ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅプロテインＡアフィニティーカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｋｔａ Ｐｕｒｅ Ｓｙｓｔｅｍを使用する）上にロードした。次いで、カラムを＞２０カラム体積（ＣＶ）のＰＢＳで洗浄した。結合したタンパク質を、１５０ｍＭ ＮａＣｌを含有する１００ｍＭクエン酸／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ３．０）を使用して溶出した。溶出直後に画分を、１Ｍアルギニン－６７０ｍＭコハク酸緩衝液（ｐＨ５．０）を（１：５希釈で）使用して中和した。溶出画分におけるＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質の均一性を、還元及び非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。
【0453】
ヘキサヒスタジンタグ付き（配列番号：３８）ＩＤＳ酵素を精製するために、トランスフェクトした上清を、１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する１５Ｌの２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）に対して一晩、徹底的に透析した。透析した上清を、ＨｉｓＴｒａｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｋｔａ Ｐｕｒｅ Ｓｙｓｔｅｍを使用する）に結合させた。結合後、カラムを２０ＣＶのＰＢＳで洗浄した。結合したタンパク質を、５００ｍＭイミダゾールを含有するＰＢＳを使用して溶出した。溶出画分におけるＩＤＳ酵素の均一性を、還元及び非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。ＩＤＳ酵素を含有するプールした画分を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中で１：１０に希釈し、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してさらに精製した。結合後、カラムを１０ＣＶの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）で洗浄した。結合したタンパク質を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）及び０．５Ｍ ＮａＣｌに対するリニアグラジエントを使用して溶出し、１ＣＶ画分に収集した。画分の純度を非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。精製によって、均一なＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質及びヘキサヒスチジンタグ付き（配列番号：３８）ＩＤＳ酵素が生成された。
【0454】
組換えＩＤＳ－Ｆｃ融合タンパク質も、安定した細胞株プールによって生成した。簡潔に述べると、関連するＤＮＡ構築物によるＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ－ＫＯ（商標）細胞（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ＰＬＣ）のトランスフェクションによって生成した安定した細胞株を、１０Ｌの攪拌槽型バイオリアクター内で増殖培地中において培養した。細胞培養培地を播種の２週間後に回収し、プロテインＡクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及び限外濾過／透析濾過を含む３ステッププロセスで精製してから２～８℃で保存した。
【0455】
実施例２：製剤開発及び評価。
以下の製剤及び条件を、以下に記載したように評価した。表２．１に示すように、市販の比較物であるＥｌａｐｒａｓｅ（試験緩衝液番号１）の緩衝液を含む、様々な緩衝液成分を試験した。別段の指示がない限り、１０ｍｇ／ｍＬの代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）を使用して各試験緩衝液を評価した。
以下の製剤及び条件を、以下に記載したように評価した。表２．１に示すように、市販の比較物であるＥｌａｐｒａｓｅ（試験緩衝液番号１）の緩衝液を含む、様々な緩衝液成分を試験した。別段の指示がない限り、１０ｍｇ／ｍＬの代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）を使用して各試験緩衝液を評価した。
【表2-1A】
【表2-1B】
【0456】
以下に記載したように、以下の特性を評価した：１）動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した、拡散相互作用パラメータｋＤによって示されるようなコロイド安定性、ならびに２）示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）及び静的光散乱（ＳＬＳ）によって測定した、Ｔｏｎ及びＴａｇｇによって示されるような立体構造安定性。
【0457】
試験緩衝液の評価
コロイド安定性（ＤＬＳ）の測定
ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の希釈系列を、１０ｍｇ／ｍＬから開始して調製した（１０、８、６、５、４、３、２ｍｇ／ｍＬ）。ＤＬＳシグナルを、Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩを使用して測定した。ｋＤ値及び標準偏差を線形回帰後に算出した。正のｋＤ値は、タンパク質分子間の反発力（すなわち、溶解度の増加）を示すのに対して、負のｋＤ値は、引力（すなわち、凝集の増加）を示している。反発力はコロイド安定性の増加と相関するため、有利となる。表２．２に示すように、試験緩衝液番号３及び６のｋＤ値が最も高く、これらの緩衝液がコロイド安定性に有利であることを示していた。
コロイド安定性（ＤＬＳ）の測定
ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の希釈系列を、１０ｍｇ／ｍＬから開始して調製した（１０、８、６、５、４、３、２ｍｇ／ｍＬ）。ＤＬＳシグナルを、Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＩＩを使用して測定した。ｋＤ値及び標準偏差を線形回帰後に算出した。正のｋＤ値は、タンパク質分子間の反発力（すなわち、溶解度の増加）を示すのに対して、負のｋＤ値は、引力（すなわち、凝集の増加）を示している。反発力はコロイド安定性の増加と相関するため、有利となる。表２．２に示すように、試験緩衝液番号３及び６のｋＤ値が最も高く、これらの緩衝液がコロイド安定性に有利であることを示していた。
【表2-2】
【0458】
立体構造安定性の測定（ＤＳＦ／ＳＬＳ）
ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を、５ｍｇ／ｍＬ、９μｌの試料体積で試験した。サーマルランプは１５～９５℃で、加熱速度は０．３３℃／分であった。ＴｍはＤＳＦによって決定し、ＴａｇｇはＳＬＳによって決定した。
ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を、５ｍｇ／ｍＬ、９μｌの試料体積で試験した。サーマルランプは１５～９５℃で、加熱速度は０．３３℃／分であった。ＴｍはＤＳＦによって決定し、ＴａｇｇはＳＬＳによって決定した。
【0459】
以下の表２．３に示すように、試験緩衝液５（Ｈｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ５．０）は、他の緩衝液よりも有意に低いＴｍ１を示した。他の緩衝液は、同等の立体構造安定性挙動を示した。
【表2-3A】
【表2-3B】
【0460】
ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子とＴｆＲとの間の結合速度も、様々な試験緩衝液中で評価した。緩衝液条件全体で有意な変化は観察しなかった。
【0461】
要約すると、表２．２に示すように、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子のコロイド安定性は、より高いｐＨの緩衝液６．５及び７．０（わずかに正のｋＤ値）で改善したことを見出した。タンパク質分子は一般に、良好な立体構造安定性を示したが、より低いｐＨ（約ｐＨ５．０）では大幅に損なわれることを見出した（表２．３）。それ以外の場合、立体構造安定性は、ｐＨ６．０～７．０の低い範囲の緩衝液タイプから大きな影響を受けることはなかった。コロイド及び立体構造安定性挙動に基づいて、６．０～７．０のｐＨ範囲がタンパク質分子に有利であると思われる。
【0462】
低ｐＨ及び高ｐＨ条件の評価
製剤開発にさらに情報を提供するために、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を、強制劣化条件下で低ｐＨ及び高ｐＨの様々な試験緩衝液中で評価した。各評価に使用した試料説明及び手法を、以下の表２．４にまとめる。
製剤開発にさらに情報を提供するために、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を、強制劣化条件下で低ｐＨ及び高ｐＨの様々な試験緩衝液中で評価した。各評価に使用した試料説明及び手法を、以下の表２．４にまとめる。
【表2-4A】
【表2-4B】
【0463】
ＳＥＣアッセイ
タンパク質分子を、時間０、２日目及び５日目に様々なｐＨ条件でＳＥＣによって評価した（表２．５を参照のこと）。対照は、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６）のタンパク質を指す。
タンパク質分子を、時間０、２日目及び５日目に様々なｐＨ条件でＳＥＣによって評価した（表２．５を参照のこと）。対照は、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６）のタンパク質を指す。
【0464】
表２．５に示すように、凝集体はストレスをかけた全ての試料においてｐＨ依存的様式で増加し、ｐＨ４及びｐＨ８で最高の凝集体レベルを観察した。しかしながら、ｐＨ７でもわずかな凝集の増加を観察した。以下の表では、ＨＭＷは高分子量含有量を示し、ＬＭＷは低分子量含有量を示している。
【表2-5A】
【表2-5B】
【0465】
ＲＰ－ＨＰＬＣアッセイ
ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の強制クリッピング及び酸化を評価した。以下の表２．６にまとめたように、ストレスをかけた試料中で有意な断片化を観察したが、対照（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６）中のタンパク質）は安定したままであった。クリッピングも、ストレスをかけた非還元試料中で観察し、これは酸化に関連している可能性がある。特に、ｐＨ４でのクリッピングのストレス条件は、メインピークの大幅な減少をもたらし、酸化ストレス条件では、メインピークの温度依存的減少を観察した。還元試料では、低ｐＨでの大幅な断片化の知見を確認した（データは示さず）。
ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の強制クリッピング及び酸化を評価した。以下の表２．６にまとめたように、ストレスをかけた試料中で有意な断片化を観察したが、対照（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６）中のタンパク質）は安定したままであった。クリッピングも、ストレスをかけた非還元試料中で観察し、これは酸化に関連している可能性がある。特に、ｐＨ４でのクリッピングのストレス条件は、メインピークの大幅な減少をもたらし、酸化ストレス条件では、メインピークの温度依存的減少を観察した。還元試料では、低ｐＨでの大幅な断片化の知見を確認した（データは示さず）。
【表2-6A】
【表2-6B】
【0466】
Ｃａｌｉｐｅｒアッセイ
Ｃａｌｉｐｅｒ試料を使用して、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の強制クリッピングを評価した。非還元試料の結果は、タンパク質分子がストレス条件下（４０℃）においてクリッピングに対して感度が高く、タンパク質は５０ｍＭ酢酸（ｐＨ４）中で５日後に完全に分解されたことを示した（表２．７）。対照を、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６）中のＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質で構成した。還元試料の結果は、分子の断片化が生じていたことを示した。
Ｃａｌｉｐｅｒ試料を使用して、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の強制クリッピングを評価した。非還元試料の結果は、タンパク質分子がストレス条件下（４０℃）においてクリッピングに対して感度が高く、タンパク質は５０ｍＭ酢酸（ｐＨ４）中で５日後に完全に分解されたことを示した（表２．７）。対照を、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６）中のＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質で構成した。還元試料の結果は、分子の断片化が生じていたことを示した。
【表2-7】
【0467】
要約すると、タンパク質分子に関する強制劣化ストレスパネルは、１）低ｐＨでのクリッピングにはリスクが高いこと、２）有意なｐＨ依存的凝集、及び３）酸化しやすい可能性を示している。
【0468】
実施例３：保存条件の評価
ｐＨ／緩衝液スクリーニングを、ｐＨ範囲５．５～６．５の３つの緩衝系で実施した。代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）の濃度を１０ｍｇ／ｍＬで試験した。試験した緩衝液のマトリックス及び特定の製剤を、それぞれ表３．１及び３．２に示す。関連する保存条件を表３．３に示す。試料を以下の通りに評価した：１）透明度／乳光、２）ｐＨ、３）サイズ排除（ＳＥ）－ＨＰＬＣ、４）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）、及び５）ＲＰ－ＨＰＬＣ。
ｐＨ／緩衝液スクリーニングを、ｐＨ範囲５．５～６．５の３つの緩衝系で実施した。代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）の濃度を１０ｍｇ／ｍＬで試験した。試験した緩衝液のマトリックス及び特定の製剤を、それぞれ表３．１及び３．２に示す。関連する保存条件を表３．３に示す。試料を以下の通りに評価した：１）透明度／乳光、２）ｐＨ、３）サイズ排除（ＳＥ）－ＨＰＬＣ、４）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）、及び５）ＲＰ－ＨＰＬＣ。
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3A】
【表3-3B】
【0469】
ｐＨ評価
様々な製剤のｐＨに対する保存条件の影響を評価した。表３．４及び３．５に示すように、試験した条件下では、有意なｐＨ偏差は観察しなかった。
様々な製剤のｐＨに対する保存条件の影響を評価した。表３．４及び３．５に示すように、試験した条件下では、有意なｐＨ偏差は観察しなかった。
【表3-4】
【表3-5】
【0470】
濁度分析
濁度に対する様々な保存条件の影響を、製剤の各々について評価した。試験したほとんどの系で濁度は低く、かつ安定していたが、しかしながら、４０℃の保存条件ではｐＨ５．５（表３．６）の緩衝系で濁度が増加した。
濁度に対する様々な保存条件の影響を、製剤の各々について評価した。試験したほとんどの系で濁度は低く、かつ安定していたが、しかしながら、４０℃の保存条件ではｐＨ５．５（表３．６）の緩衝系で濁度が増加した。
【表3-6】
【0471】
ＳＥ－ＨＰＬＣ分析
ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の強制クリッピングを評価した（表３．７）。ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子自体を、２～８℃で製剤Ｆ１～Ｆ８と比較するためのベースラインとして使用した。
ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して、ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の強制クリッピングを評価した（表３．７）。ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子自体を、２～８℃で製剤Ｆ１～Ｆ８と比較するためのベースラインとして使用した。
【0472】
Ｆ１及びＦ２の緩衝系を比較することによって示されるように、ＮａＣｌ濃度の上昇による影響は観察しなかった。より高いＬＭＷ（クリッピング）を、２５℃及び４０℃（例えば、Ｆ２及びＦ３の緩衝系）の両方でリン酸緩衝系のｐＨ６．５と比較してｐＨ６で観察した。さらに、ｐＨ依存的クリッピング効果を、Ｆ４、Ｆ５、及びＦ６に対してＨｉｓ－ＨＣｌ緩衝系で観察した（試験したより高いｐＨ値では、より低いクリッピングを観察した）。同様に、Ｆ８に対してＦ７を比較すると、Ｎａ－酢酸緩衝系ではより低いｐＨで高いＬＭＷレベルを観察した。ＨＭＷ種に対するわずかなｐＨ依存性を、２週間にわたって４０℃で観察するが、２～８℃及び２５℃では２週間にわたって観察していない。全体として、より高いｐＨ（６．５）はタンパク質分子にとってより良好な条件を提供し、Ｆ６及びＦ３緩衝系は最も良好な結果をもたらすと思われる。
【表3-7A】
【表3-7B】
【表3-7C】
【0473】
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）分析
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）を使用して、還元及び非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）を使用して、還元及び非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
【0474】
非還元試料の場合、タンパク質分子はより高いｐＨでより安定していると思われ、Ｆ３及びＦ６緩衝系が最も良好な結果をもたらす（表３．８）。還元試料の場合、種ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドのｐＨ依存的劣化（Ａ１％で示される）を観察した（表３．８）。
【表3-8A】
【表3-8B】
【0475】
ＲＰ－ＨＰＬＣアッセイ
ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、非還元及び還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を評価した（表３．９）。種Ａ１はＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを指し、Ａ２は修飾Ｆｃポリペプチドを指す。
ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、非還元及び還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を評価した（表３．９）。種Ａ１はＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを指し、Ａ２は修飾Ｆｃポリペプチドを指す。
【0476】
以下の表３．９に示すように、タンパク質は２～８℃の全ての緩衝系で安定している。メインピークのｐＨ依存的減少及びプレピークの増加は、クリッピングが生じていることを示している。ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド（Ａ１）の減少を、より低いｐＨで観察する。Ｆ３及びＦ６緩衝系は、分子の安定性を維持するための最適な環境を示していると思われる。
【表3-9A】
【表3-9B】
【表3-9C】
【表3-9D】
【0477】
実施例４：界面活性剤スクリーニング
界面活性剤スクリーニングを、２０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ、及びｐＨ６．５を有する緩衝系を使用して実施した。代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）の濃度を３０ｍｇ／ｍＬで試験した。表４．１に示すように、試験した界面活性剤は、様々な濃度のポリソルベート２０（ＰＳ－２０）及びポリソルベート８０（ＰＳ－８０）であった。
界面活性剤スクリーニングを、２０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ、及びｐＨ６．５を有する緩衝系を使用して実施した。代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）の濃度を３０ｍｇ／ｍＬで試験した。表４．１に示すように、試験した界面活性剤は、様々な濃度のポリソルベート２０（ＰＳ－２０）及びポリソルベート８０（ＰＳ－８０）であった。
【表4-1】
【0478】
これらの製剤を、振盪ストレス（２～８℃及び周囲温度、５日間、２００ＲＰＭで水平振盪）ならびに凍結／解凍（２５℃～≦－６５℃の間で変動しながら５回の連続サイクル）に供した（それぞれ表４．２及び４．３）。試料を以下の通りに評価した：１）透明度／乳光、２）可視粒子、３）非可視粒子、４）ＳＥ－ＨＰＬＣ、５）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）、及び６）界面活性剤含有量。
【表4-2】
【表4-3】
【0479】
可視粒子及び濁度
製剤Ｆ１～Ｆ４を、ストレス後の粒子形成（可視及び非可視）ならびに濁度について評価した。表４．４に示すように、ストレスパネルでは可視粒子の形成を観察しなかった。加えて、表４．５に示すように、振盪試験または凍結－解凍試験のいずれにおいても、非可視粒子では有意差を観察しなかった。最後に、濁度はストレス後の試料で未変化のままであった（表４．６）。
製剤Ｆ１～Ｆ４を、ストレス後の粒子形成（可視及び非可視）ならびに濁度について評価した。表４．４に示すように、ストレスパネルでは可視粒子の形成を観察しなかった。加えて、表４．５に示すように、振盪試験または凍結－解凍試験のいずれにおいても、非可視粒子では有意差を観察しなかった。最後に、濁度はストレス後の試料で未変化のままであった（表４．６）。
【表4-4】
【表4-5A】
【表4-5B】
【表4-6】
【0480】
ＳＥ－ＨＰＬＣ分析
ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して、攪拌及び凍結解凍ストレス後のＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して、攪拌及び凍結解凍ストレス後のＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
【0481】
全ての製剤が、ＳＥＣによって振盪ストレスで良好な安定性を示し、ＰＳ－８０よりもＰＳ－２０でわずかに良好な安定化特性を観察した（表４．７）。
【表4-7A】
【表4-7B】
【0482】
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）分析
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）を使用して、還元及び非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）を使用して、還元及び非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
【0483】
表４．８に示すように、タンパク質分子は全てのストレス試験で安定していると思われる。インタクトな（非還元）試料に加えて、断片の合計（Ａ１＝ＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチド、Ａ２＝修飾Ｆｃポリペプチド）の両方で安定した値を観察した。
【表4-8A】
【表4-8B】
【0484】
ある特定の実施形態では、界面活性剤の量は、製剤中のタンパク質の安定性に影響を与えることなく、最大で、例えば、１ｍｇ／ｍＬ（例えば、約０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ）まで増加できる。
【0485】
実施例５：製剤開発及び凍結乾燥製剤の評価
さらなる製剤評価のために、表５．１に列挙した緩衝系を試験した。凍結乾燥形態も試験した。代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）の濃度を２０ｍｇ／ｍＬで試験した。これらの製剤を、振盪ストレス（室温、５日間、２００ＲＰＭで水平振盪）及び凍結／解凍ストレス（２５℃～≦－６５℃の間で変動しながら５回の連続サイクル）に供した。試料を以下の通りに評価した：１）ＳＥ－ＨＰＬＣ、２）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）、及び３）界面活性剤含有量。
さらなる製剤評価のために、表５．１に列挙した緩衝系を試験した。凍結乾燥形態も試験した。代表的なＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質（ＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２、実施例１）の濃度を２０ｍｇ／ｍＬで試験した。これらの製剤を、振盪ストレス（室温、５日間、２００ＲＰＭで水平振盪）及び凍結／解凍ストレス（２５℃～≦－６５℃の間で変動しながら５回の連続サイクル）に供した。試料を以下の通りに評価した：１）ＳＥ－ＨＰＬＣ、２）ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）、及び３）界面活性剤含有量。
【表5-1】
【0486】
ＳＥ－ＨＰＬＣ分析
ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して、ストレス条件下におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して、ストレス条件下におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
【0487】
高温（４０℃）の液体製剤Ｆ１～Ｆ３で、有意なＨＭＷ及びＬＭＷ含有量を観察したが、しかしながら、凍結乾燥製剤Ｆ４は、全ての保存温度で安定したままであった（表５．２）。全ての製剤で、より低い温度（≦２５℃）で最大１か月間同様に実施した。
【表5-2A】
【表5-2B】
【0488】
ＲＰ－ＨＰＬＣアッセイ
ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、非還元及び還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を評価した。Ａ１はＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを指し、Ａ２は修飾Ｆｃポリペプチドを指す。
ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、非還元及び還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子を評価した。Ａ１はＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドを指し、Ａ２は修飾Ｆｃポリペプチドを指す。
【0489】
以下の表５．３に示すように、温度を上げると、メインピークの減少に加えて、プレピーク及びポストピークの両方の増加を観察した。
【表5-3A】
【表5-3B】
【0490】
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）分析
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）を使用して、還元及び非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
ＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ）を使用して、還元及び非還元試料中におけるＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質分子の安定性を評価した。
【0491】
表５．４に示すように、４０℃の保存条件でインタクトな分子の有意な減少を観察した。Ａ１はＩＤＳ－Ｆｃ融合ポリペプチドに対応し、Ａ２は修飾Ｆｃポリペプチドに対応する。
【表5-4】
【0492】
実施例６：安定性分析
製剤の安定性をさらに評価するために、以下を含有する製剤を、５℃及び４０℃で安定性について試験した：ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質濃度＝３０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１７５ｍＭスクロース、０．６ｍｇ／ｍＬのポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）、１０ｍＭ Ｌ－メチオニン、及びｐＨ６．５。この評価で試験したＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質をＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２で表し、実施例１に記載している。試料をＴ＝０、Ｔ＝２週間、及びＴ＝４週間で採取した。試料を以下の通りに評価した：１）可視粒子、２）非可視粒子（例えば、光遮蔽によって）、３）ＳＥ－ＨＰＬＣ、及び４）ポリソルベート含有量（ＦＭＡ、ＥＬＳＤ）。
製剤の安定性をさらに評価するために、以下を含有する製剤を、５℃及び４０℃で安定性について試験した：ＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質濃度＝３０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１７５ｍＭスクロース、０．６ｍｇ／ｍＬのポリソルベート－２０（ＰＳ－２０）、１０ｍＭ Ｌ－メチオニン、及びｐＨ６．５。この評価で試験したＥＴＶ：ＩＤＳタンパク質をＥＴＶ：ＩＤＳ ３５．２３．２で表し、実施例１に記載している。試料をＴ＝０、Ｔ＝２週間、及びＴ＝４週間で採取した。試料を以下の通りに評価した：１）可視粒子、２）非可視粒子（例えば、光遮蔽によって）、３）ＳＥ－ＨＰＬＣ、及び４）ポリソルベート含有量（ＦＭＡ、ＥＬＳＤ）。
【0493】
表６．１に示すように、様々な温度／時点では可視粒子の形成を観察しなかった。非可視粒子を、条件全体にわたって一定の低レベルで観察した。サイズ排除クロマトグラフィーの場合、試料は５℃で安定し、ＨＭＷ含有量の増加及びＬＭＷ含有量のわずかな増加を４０℃で観察した。ポリソルベート含有量も全ての条件で安定していることを見出した。
【表6-1A】
【表6-1B】
【0494】
実施例７．製剤開発及び評価
ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチド及び修飾Ｆｃポリペプチドを含むタンパク質分子を、実施例２～６のいずれか１つに記載したような製剤に含む場合があり、ＩＤＳアミノ酸配列が代替ＥＲＴアミノ酸配列で置き換えられている。そのような製剤を、実施例２～６に記載したようなアッセイを使用して評価してよい。
ＥＲＴ酵素－Ｆｃ融合ポリペプチド及び修飾Ｆｃポリペプチドを含むタンパク質分子を、実施例２～６のいずれか１つに記載したような製剤に含む場合があり、ＩＤＳアミノ酸配列が代替ＥＲＴアミノ酸配列で置き換えられている。そのような製剤を、実施例２～６に記載したようなアッセイを使用して評価してよい。
【表A-1】
【表A-2】
【表A-3】
【表A-4】
【表A-5】
【表A-6】
【表A-7】
【表A-8】
【表A-9】
【表A-10】
【表A-11】
【表A-12】
【表A-13】
【表A-14】
【表A-15】
【表A-16】
【表A-17】
【表A-18】
【表A-19】
【表A-20】
【0495】
全ての刊行物、特許、及び特許文献は、参照によって個別に組み込まれたかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。本開示は、様々な特定の、かつ好ましい実施形態及び技術に関連して記載されている。しかしながら、本発明の趣旨及び範囲内に留まりながら、多くの変更及び修正が行われてよいと理解すべきである。
【配列表】
【国際調査報告】