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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-06-08
(54)【発明の名称】工学的に操作されたＩｇＡ抗体および使用方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220601BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20220601BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20220601BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20220601BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20220601BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220601BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20220601BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20220601BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20220601BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220601BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220601BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220601BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/02 C
C07K16/28
C07K16/18
A61K39/395 V
A61K45/00
A61P35/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021557277
(86)(22)【出願日】2020-03-27
(85)【翻訳文提出日】2021-11-22
(86)【国際出願番号】 NL2020050217
(87)【国際公開番号】W WO2020197400
(87)【国際公開日】2020-10-01
(31)【優先権主張番号】62/824,864
(32)【優先日】2019-03-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】506362417
【氏名又は名称】ユーエムシー ユトレヒト ホールディング ビー．ブイ．
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】レーセン， イェアネッテ ヘンリカ ウィルヘルミナ
(72)【発明者】
【氏名】エフェアス， ヨハネス ヘーラルトゥス マリア
(72)【発明者】
【氏名】ファン テーテリング， ヘールト ヤン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG26
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065AC20
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA19
4C084NA05
4C084ZB26
4C085AA13
4C085BB11
4C085DD35
4C085DD61
4C085EE01
4C085EE03
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG06
4C085GG08
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA75
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA21
(57)【要約】
改変されたＩｇＡ重鎖定常領域を含む工学的に操作された抗体、医薬組成物、および使用方法が本明細書で提供される。本明細書に記載の工学的に操作された抗体は、ＩｇＡドメインの定常領域に１つまたは複数のアミノ酸置換または欠失を含む。がんを含めた障害を本明細書に記載の工学的に操作されたＩｇＡ抗体を投与することによって処置する方法も本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸残基：Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２に非保存的アミノ酸置換を含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩｇＡ ＣＨ２領域およびＩｇＡ ＣＨ３領域を含み、
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応するＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比較して、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含み、
前記少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位のそれぞれが、前記ＩｇＡ ＣＨ２領域内または前記ＩｇＡ ＣＨ３領域内に存在する、抗体またはその機能性断片。
【請求項2】
前記少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位が、２つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位である、請求項１に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項3】
前記少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項4】
前記改変が、前記少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位のうちの一方または両方のアミノ酸置換、またはアミノ酸欠失を含む、請求項１から３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項5】
前記アミノ酸置換が、非保存的アミノ酸置換である、請求項４に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項6】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ１１４およびＮ１３５、
ｉｉ．Ｎ１１４およびＮ１５．２、または
ｉｉｉ．Ｎ１３５およびＮ１５．２
にアミノ酸置換を含む、
請求項１から５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項7】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換およびＮ１３５Ｑアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換ならびにＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、または
ｉｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換およびＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群からのアミノ酸置換
を含む、請求項１から６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項8】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも３つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む、請求項１から８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項9】
前記少なくとも３つの天然に存在するグリコシル化部位が、３つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位である、請求項８に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項10】
前記少なくとも３つの天然に存在するグリコシル化部位が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を含む、請求項８または９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項11】
前記改変が、アミノ酸置換またはアミノ酸欠失である、請求項８から１０までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項12】
前記アミノ酸置換が、非保存的置換である、請求項１１に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項13】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２にアミノ酸置換を含む、請求項８から１２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項14】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、および
ｉｉｉ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換
を含む、請求項８から１３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項15】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩｇＡ ＣＨ１領域をさらに含む、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項16】
前記重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、前記ＩｇＡ ＣＨ２領域内の少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、前記ＩｇＡ ＣＨ３領域内の少なくとも１つの天然に存在するグリコシル化部位、および前記ＩｇＡ ＣＨ１領域内の少なくとも１つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む、請求項１５に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項17】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２、Ｎ１１４、およびＮ１３５、または
ｉｉ．Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、およびＮ１３５、
にアミノ酸置換を含む、請求項１５または１６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項18】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、およびＮ１３５Ｑアミノ酸置換；または
ｉｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、ならびにＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換
を含む、請求項１７に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項19】
前記重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、前記ＩｇＡ ＣＨ２領域内の少なくとも２つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、および前記ＩｇＡ ＣＨ１領域内の少なくとも１つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む、請求項１７に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項20】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ｉ．Ｎ４５．２、Ｎ１１４、およびＮ１５．２Ｇ
にアミノ酸置換を含む、請求項１９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項21】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、および
ｉｉｉ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換
を含む、請求項２０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項22】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を示す、請求項１から２１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項23】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す、請求項１から２２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項24】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す、請求項１から２３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項25】
ＩｇＧ重鎖定常領域を含む対応する抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害を誘導する、請求項１から２４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項26】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して増大した熱安定性を示す、請求項１から２５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項27】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少したグリコシル化を示す、請求項１から２６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項28】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、免疫エフェクター細胞上に発現されたＦｃαＲに対して、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して増大した親和性での結合を示す、請求項１から２７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項29】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む、請求項１から２８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項30】
前記少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位が、４つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位である、請求項２９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項31】
前記少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位が、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を含む、請求項２９または３０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項32】
前記重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、前記ＩｇＡ ＣＨ２領域内の少なくとも２つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、前記ＩｇＡ ＣＨ３領域内の少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、および前記ＩｇＡ ＣＨ１領域内の少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位の改変を含む、請求項２９から３１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項33】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、アミノ酸残基：Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２にアミノ酸置換を含む、請求項２９から３２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項34】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸残基：Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２に非保存的アミノ酸置換を含む請求項２９から３３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項35】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、および
ｉｖ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換
を含む、請求項２９から３４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項36】
少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を示す、請求項２９から３５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項37】
ＩｇＧ ＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ ＣＨ３ドメインを含む対応する抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、請求項２９から３６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項38】
少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して増大した熱安定性を示す、請求項２９から３７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項39】
少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して減少したグリコシル化を示す、請求項２９から３８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項40】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、免疫エフェクター細胞上に発現されたＦｃαＲに対して、少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して増大した親和性での結合を示す、請求項２９から３９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項41】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から４０までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項42】
前記改変が、前記少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換またはアミノ酸欠失である、請求項４１に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項43】
前記アミノ酸置換が、前記少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である、請求項４２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項44】
前記少なくとも１つの天然に存在するシステインアミノ酸残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７またはＣ８６である、請求項４１から４３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項45】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換を含む、請求項４４に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項46】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７の欠失を含む、請求項４４から４５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項47】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体またはその機能性断片と比較して減少した凝集を示す、請求項４４から４６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項48】
対応するＷＴ ＩｇＡ構築物と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す、請求項４４から４７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項49】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項４４から４８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項50】
前記改変が、前記少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の一方または両方のアミノ酸置換を含む、請求項４９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項51】
前記改変が、前記少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の一方または両方の欠失を含む、請求項４９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項52】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、前記少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のうちの１つのアミノ酸置換、および前記少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のうちの１つの欠失を含む、請求項４９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項53】
前記少なくとも２つの天然に存在するシステインアミノ酸残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７およびＣ８６である、請求項４９から５２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項54】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７の欠失を含む、請求項５３に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項55】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６のアミノ酸置換を含む、請求項５３に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項56】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、天然に存在するＣ８６アミノ酸残基のアミノ酸置換、および天然に存在するＣ１４７アミノ酸残基の欠失を含む、請求項５３に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項57】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換を含む、請求項５６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項58】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す、請求項４９から５７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項59】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す、請求項４９から５８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項60】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から５９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項61】
前記改変が、前記少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失である、請求項６０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項62】
前記アミノ酸置換が、ＷＴ ＩｇＡ抗体と比較した、前記少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸突然変異である、請求項６０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項63】
前記少なくとも１つのチロシン残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｙ１４８である、請求項６０から６２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項64】
ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、アミノ酸Ｙ１４８が欠失している、請求項６３に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項65】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す、請求項６０から６４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項66】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す、請求項６０から６５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項67】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡ抗体と比較して少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から６６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項68】
前記改変が、対応する野生型ＩｇＡ抗体と比較して前記少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項６７に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項69】
前記アミノ酸置換が、前記少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である、請求項６８に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項70】
前記少なくとも１つの天然に存在するトレオニンアミノ酸残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１１６またはＴ１６である、請求項６７から６９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項71】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す、請求項６７から７０までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項72】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す、請求項６７から７１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項73】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から７２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項74】
前記改変が、前記少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の一方または両方のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項７３に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項75】
前記アミノ酸置換が、前記少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の一方または両方の非保存的アミノ酸置換である、請求項７４に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項76】
前記少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１１６またはＴ１６である、請求項７３から７５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項77】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換を含む、請求項７６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項78】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１６Ｓアミノ酸置換を含む、請求項７６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項79】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から７８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項80】
前記改変が、前記少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項７９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項81】
前記アミノ酸置換が、前記少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む、請求項８０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項82】
前記少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｉ１１５である、請求項７９から８１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項83】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換を含む、請求項８２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項84】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から８３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項85】
前記改変が、前記少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項８４に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項86】
前記アミノ酸置換が、前記少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である、請求項８５に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項87】
前記少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｌ１５．３である、請求項８４から８６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項88】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１～３のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換を含む、請求項８７に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項89】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の改変を含む、請求項１から８８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項90】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、前記少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項８９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項91】
前記アミノ酸置換が、前記少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である、請求項８９に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項92】
前記少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）残基が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｐ１２４である、請求項８９から９１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項93】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換を含む、請求項９２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項94】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して高い安定性を示す、請求項８９から９３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項95】
対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して高い重鎖と軽鎖の間の安定性を示す、請求項８９から９４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項96】
前記重鎖と前記軽鎖の間に共有結合性の連結を有する、請求項８９から９５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項97】
前記重鎖のシステイン（Ｃ）アミノ酸残基と前記軽鎖のシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の間にジスルフィド結合を含む、請求項８９から９６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項98】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、配列番号１６～２１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１から９７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項99】
前記抗体が、アロタイプＩｇＡ２ｍ（１）抗体またはＩｇＡ２ｍ（２）である、請求項１から９８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項100】
前記抗体が、アロタイプコーカサスＩｇＡ２ｍ（１）抗体である、請求項１から９９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項101】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型ＩｇＡと比較してＣ末端ＩｇＡ尾部片の改変を含む、請求項１から１００までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項102】
前記改変が、前記Ｃ末端の２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１２、１０、８、６、４、または２アミノ酸の欠失を含む、請求項１から１０１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項103】
前記改変が、前記Ｃ末端の１８アミノ酸の欠失を含む、請求項１から１０２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項104】
前記改変が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ末端アミノ酸残基１３１～１４８の欠失を含む、請求項１から１０３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項105】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む、請求項１から１０４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項106】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ１定常領域を含む、請求項１から１０５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項107】
前記ＩｇＡ１定常領域が、ＩｇＡ１ ＣＨ１領域をさらに含む、請求項１０６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項108】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２定常領域を含む、請求項１から１０６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項109】
前記ＩｇＡ２定常領域が、ＩｇＡ２ ＣＨ１領域をさらに含む、請求項１０８に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項110】
前記抗原結合性ドメインならびにＩｇＧ ＣＨ２領域およびＩｇＧ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体の循環半減期の１％以内、５％以内、１０％以内、２０％以内、または３０％以内の循環半減期を示す、請求項１から１０９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項111】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む、抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含む対応するＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比較して、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項112】
前記重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、および
ｖ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換
をさらに含む、請求項１１１に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項113】
前記重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｃ１４７の欠失、
ｉｖ．Ｙ１４８の欠失、
ｖ．Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、
ｖｉ．Ｔ１６Ｓアミノ酸置換または
ｖｉｉ．これらの組合せ
をさらに含む、請求項１１１または１１２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項114】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む、抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、および
ｖ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項115】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、
ｖｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、
ｖｉｉ．Ｃ１４７の欠失、および
ｖｉｉｉ．Ｙ１４８の欠失
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項116】
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、配列番号１６と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１５に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項117】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、および
ｖｉ．Ｃ末端尾部片の欠失
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項118】
前記Ｃ末端尾部片の欠失が、前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む、請求項１１７に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項119】
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、配列番号１７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１７または１１８に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項120】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、
ｖ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、
ｖｉ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、
ｖｉｉ．Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、および
ｖｉｉｉ．Ｔ１６Ｓアミノ酸置換
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項121】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、
ｖ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、
ｖｉ．Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、
ｖｉｉ．Ｔ１６Ｓアミノ酸置換、および
ｖｉｉｉ．Ｃ末端アミノ酸Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項122】
ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｃ１４７の欠失、
ｉｖ．Ｙ１４８の欠失、または
ｖ．これらの組合せ
をさらに含む、請求項１２１に記載の構造を有する抗体。
【請求項123】
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、配列番号１８～２１のいずれか１つから選択される配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２１または１２２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項124】
グリコシル化されていない、請求項１２１から１２３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項125】
前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡよりも延長した循環半減期を有する、請求項１２１から１２４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項126】
ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応する抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、請求項１２１から１２５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項127】
前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して増大した熱安定性を示す、請求項１２１から１２６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項128】
前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して減少したグリコシル化を示す、請求項１２１から１２７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項129】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、免疫エフェクター細胞上に発現されたＦｃαＲに対して、前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して増大した親和性での結合を示す、請求項１２１から１２８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項130】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、ヒンジ領域をさらに含む、請求項１から１２９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項131】
前記ヒンジ領域が、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくは断片を含む、請求項１３０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項132】
前記ヒンジ領域が、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくは断片を含む、請求項１３１に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項133】
前記ヒンジが、ＩｇＡ１ヒンジまたはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくは断片である、請求項１３０または１３１に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項134】
前記定常ドメインが、軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１から１３３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項135】
前記軽鎖定常領域が、カッパ軽鎖定常領域であり、前記カッパ軽鎖定常領域が、配列番号３１の配列を含む、請求項１３４に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項136】
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が、１つまたは複数のアルブミン結合性領域をさらに含む、請求項１から１３５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項137】
１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインが、前記ＣＨ３領域のＣ末端と融合している、請求項１３６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項138】
前記定常領域が、前記軽鎖定常領域を含み、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインが、前記軽鎖定常領域と融合している、請求項１３６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項139】
前記１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインを含まない対応するＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を有する、請求項１３６から１３８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項140】
適切なｉｎ ｖｉｔｒｏ ＣＤＣアッセイで測定した場合に、ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応する抗体と比較して低減した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す、請求項１から１３９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項141】
適切なｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイで測定した場合に、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示す、請求項１から１４０までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項142】
前記抗原結合性ドメインが、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１から１４１までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項143】
前記重鎖可変領域が、相補性決定領域（ＣＤＲ）：配列番号３３～４０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、
配列番号４１～４８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および
配列番号４９～５６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含む、請求項１４２に記載の抗体またはその機能性断片
【請求項144】
前記軽鎖可変領域が、相補性決定領域（ＣＤＲ）：配列番号５７～６４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；
配列番号６５～７２のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および
配列番号７３～８０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含む、請求項１４２または１４３に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項145】
前記重鎖可変領域が、配列番号４、７、８１～８６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、請求項１４２から１４４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項146】
前記軽鎖可変領域が、配列番号５、８、９５～１００のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、請求項１４２から１４５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項147】
前記重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲのそれぞれがＩｇＧ抗体に由来するものである、請求項１４３から１４６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項148】
前記重鎖可変領域が、４つのフレームワーク領域（ＦＷ）：ＨＣ－ＦＷ１、ＨＣ－ＦＷ２、ＨＣ－ＦＷ３、およびＨＣ－ＦＷ４をさらに含む、請求項１４２から１４７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項149】
前記軽鎖可変領域が、４つのフレームワーク領域（ＦＷ）：ＬＣ－ＦＷ１、ＬＣ－ＦＷ２、ＬＣ－ＦＷ３、およびＬＣ－ＦＷ４をさらに含む、請求項１４２から１４８までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項150】
前記重鎖ＦＷ領域および軽鎖ＦＷ領域のそれぞれがＩｇＧ抗体に由来するものである、請求項１４８から１４９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項151】
前記重鎖ＦＷ領域および軽鎖ＦＷ領域のそれぞれがＩｇＡ抗体に由来するものである、請求項１４８から１４９までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項152】
請求項１から１５０までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項153】
前記抗体が、キメラ抗体、重鎖抗体、単鎖抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、モノクローナル抗体、脱免疫抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、多価抗体またはこれらの組合せである。
【請求項154】
前記抗原結合性断片が、抗体断片から形成されるＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦＶ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン、または多重特異性抗体を含む、請求項１から１５２までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項155】
前記可変ドメインが、ＧＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５に特異的に結合する、請求項１から１５３までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項156】
酵素、基質、補助因子、蛍光マーカー、化学発光マーカー、ペプチドタグ、磁気粒子、薬物、毒素、放射性核種、二次抗体の結合性部位、金属結合性ドメイン、またはこれらの組合せをさらに含む、請求項１から１５４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項157】
請求項１から１５５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項158】
それを必要とする対象を処置する方法であって、前記対象に、請求項１から１５５までのいずれか一項に記載の抗体もしくはその機能性断片または請求項１５６に記載の医薬組成物を治療用量で投与することを含む方法。
【請求項159】
前記抗体もしくはその機能性断片または前記医薬組成物が、標的細胞に対する細胞溶解性を持つものである、請求項１５６または１５７に記載の方法。
【請求項160】
標的細胞が、がん細胞である、請求項１５８に記載の方法。
【請求項161】
前記抗体もしくはその機能性断片または前記医薬組成物が、腫瘍成長を阻害するものである、請求項１５７から１５９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項162】
前記抗体もしくはその機能性断片または前記医薬組成物が、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口的、筋肉内または頭蓋内に投与される、請求項１５７から１６０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項163】
前記抗体もしくはその機能性断片または前記医薬組成物が、前記対象に第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１５７から１６１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項164】
前記第２の治療剤が、抗がん剤、化学療法剤、放射線療法、細胞傷害性薬剤、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、抗酸化剤などの栄養補助剤、またはこれらの組合せを含む、請求項１６２に記載の方法。
【請求項165】
前記第２の治療剤が、前記抗体もしくはその機能性断片または前記医薬組成物の投与の前に、それと同時に、またはその後に投与される、請求項１６２から１６３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項166】
請求項１から１５５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片をコードする単離された核酸。
【請求項167】
重鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子であって、ＩｇＡ重鎖定常領域をコードする第１の核酸配列を含み、前記第１の核酸配列が、配列番号２５～３２のうちのいずれか１つから選択される、単離された核酸分子。
【請求項168】
可変重鎖領域をコードする第２の核酸配列をさらに含み、前記第２の核酸配列が、配列番号８７～８４のうちのいずれか１つから選択される、請求項１６６に記載の単離された核酸分子。
【請求項169】
請求項１６５から１６７までのいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
【請求項170】
請求項１６５から１６７までのいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項171】
軽鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子をさらに含み、前記軽鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子が可変軽鎖領域をコードする核酸配列を含み、前記核酸配列が配列番号１０１～１０８のうちのいずれか１つから選択される、請求項１６９に記載の宿主細胞。
【請求項172】
前記軽鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子が、カッパ軽鎖定常領域をコードする核酸配列をさらに含み、前記核酸配列が配列番号３２の配列を含む、請求項１７０に記載の宿主細胞。
【請求項173】
請求項１から１５５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片を発現する宿主細胞。
【請求項174】
細菌細胞または哺乳動物細胞である、請求項１６９から１７２までのいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項175】
ＣＨＯ細胞、またはＨＥＫ２９３細胞である、請求項１７３に記載の宿主細胞。
【請求項176】
抗体またはその機能性断片を産生する方法であって、（ａ）請求項１６９から１７４までのいずれか一項に記載の宿主細胞を、培地中、前記単離された核酸分子によってコードされるポリペプチドの発現および前記抗体またはその機能性断片のアセンブルを可能にする条件下で培養するステップと、
（ｂ）前記培養された宿主細胞または前記宿主細胞の前記培地から前記抗体またはその機能性断片を精製するステップと
を含む方法。
【請求項177】
前記精製するステップが、分子ふるいクロマトグラフィーによるものである、請求項１７５に記載の方法。
【請求項178】
ＣＤ２０ポリペプチドまたはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに
（ｂ）配列番号３３の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４１のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号４９のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；
（ｃ）配列番号５７の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６５のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７３のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または
（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖
を含む抗体またはその機能性断片。
【請求項179】
前記可変重鎖が、配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、前記可変軽鎖が、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１７７に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項180】
ＧＤ２タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに
（ｂ）配列番号３４の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４２のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５０のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；
（ｃ）配列番号５８の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６６のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７４のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または
（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項181】
前記可変重鎖が、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、前記可変軽鎖が、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１８０に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項182】
Ｈｅｒ２タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに
（ｂ）配列番号３５の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４３のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５１のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；
（ｃ）配列番号５９の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６７のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７５のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または
（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項183】
前記可変重鎖が、配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、前記可変軽鎖が、配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１８２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項184】
ｇｐ７５タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに
（ｂ）配列番号３６の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４４のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５２のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；
（ｃ）配列番号６０の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６８のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７６のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または
（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項185】
前記可変重鎖が、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、前記可変軽鎖が、配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１８４に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項186】
ＣＴＬＡ４タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに
（ｂ）配列番号３７の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４５のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５３のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；
（ｃ）配列番号６１の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６９のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７７のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または
（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項187】
前記可変重鎖が、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、前記可変軽鎖が、配列番号９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１８６に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項188】
ＣＤ４７タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに
（ｂ）配列番号３８の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４６のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５４のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；
（ｃ）配列番号６２の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号７０のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７８のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または
（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項189】
前記可変重鎖が、配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、前記可変軽鎖が、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１８８に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項190】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｃ１４７の欠失、および
ｉｖ．Ｙ１４８の欠失
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項191】
ａ．抗原結合性ドメインと；ｂ．ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインと
を含む抗体またはその機能性断片であって、
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、
ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、
ｉｖ．Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、
ｖ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、および
ｖｉ．Ｃ末端アミノ酸Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失
を含む、抗体またはその機能性断片。
【請求項192】
ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、
ｉｉ．Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換、
ｉｉｉ．Ｃ１４７の欠失、
ｉｖ．Ｙ１４８の欠失、
ｖ．Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、
ｖｉ．Ｔ１６Ｓアミノ酸置換または
ｖｉｉ．これらの組合せ
をさらに含む、請求項１９１に記載の構造を有する抗体。
【請求項193】
前記ＩｇＡ２重鎖定常領域が、配列番号１８～２１のいずれか１つから選択される配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１９１または１９２に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項194】
グリコシル化されていない、請求項１９１から１９４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項195】
前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡよりも延長した循環半減期を有する、請求項１９１から１９４までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項196】
ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応する抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する、請求項１２１から１２５までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項197】
前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して増大した熱安定性を示す、請求項１２１から１２６までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【請求項198】
前記ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して減少したグリコシル化を示す、請求項１２１から１２７までのいずれか一項に記載の抗体またはその機能性断片。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１９年３月２７日出願の米国仮出願第６２／８２４，８６４号の利益を主張するものである。
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１９年３月２７日出願の米国仮出願第６２／８２４，８６４号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【0002】
腫瘍抗原を標的とするＩｇＧアイソタイプのモノクローナル抗体は、種々のがんに対する有効な処置であることが証明されている。長年にわたり、異なる腫瘍抗原を標的とするますます多くのモノクローナル抗体ががん治療への使用に関して認可されてきた。しかし、特に単剤療法としてのそれらの臨床的な有効性および副作用に関しては未だ不十分である。したがって、臨床的な有効性の増大、新規の標的化モダリティもしくは作用様式ならびに／または副作用の数および重症度の低減を有する新しい抗体治療を開発することが目的である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0003】
抗原結合性ドメインと；免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ重鎖定常領域が、ＩｇＡ ＣＨ２領域およびＩｇＡ ＣＨ３領域を含み、ＩｇＡ重鎖定常領域が、対応する野生型（ＷＴ）ＩｇＡ重鎖定常領域と比較して少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含み、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位のそれぞれが、ＩｇＡ ＣＨ２領域内またはＩｇＡ ＣＨ３領域内に存在する、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0004】
一部の実施形態では、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位は、２つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位である。一部の実施形態では、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位のうちの１つまたは複数は、本明細書に開示される工学的に操作された抗体では対応する野生型ＩｇＡと比較して改変されている天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位のうちの一方または両方のアミノ酸置換、またはアミノ酸欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含む対応するＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ１１４およびＮ１３５、ｉｉ．Ｎ１１４およびＮ１５．２、またはｉｉｉ．Ｎ１３５およびＮ１５．２にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含む対応するＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換およびＮ１３５Ｑアミノ酸置換、ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換ならびにＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、またはｉｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換およびＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群からのアミノ酸置換を含む。
【0005】
一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも３つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む。一部の実施形態では、少なくとも３つの天然に存在するグリコシル化部位は、３つのＮ結合グリコシル化部位である。一部の実施形態では、３つの天然に存在するグリコシル化部位は、それぞれが、本明細書に記載の抗体では改変されているアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を含む。
【0006】
一部の実施形態では、改変は、アミノ酸置換またはアミノ酸欠失である。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、非保存的置換である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、ｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、およびｉｉｉ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0007】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩｇＡ ＣＨ１領域をさらに含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、ＩｇＡ ＣＨ２領域内の少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、ＩｇＡ ＣＨ３領域内の少なくとも１つの天然に存在するグリコシル化部位、およびＩｇＡ ＣＨ１領域内の少なくとも１つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２、Ｎ１１４、およびＮ１３５、またはｉｉ．Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、およびＮ１３５にアミノ酸置換を含む。
【0008】
一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、およびＮ１３５Ｑアミノ酸置換；またはｉｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、ならびにＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0009】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、ＩｇＡ ＣＨ２領域内の少なくとも２つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、およびＩｇＡ ＣＨ１領域内の少なくとも１つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ｉ．Ｎ４５．２、Ｎ１１４、およびＮ１５．２Ｇにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、およびｉｉｉ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
【0010】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ重鎖定常領域を含む同等の抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）を誘導する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して増大した熱安定性を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少したグリコシル化を示す。
【0011】
一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、免疫エフェクター細胞上に発現されたＦｃαＲに対して、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して増大した親和性での結合を示す。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位の改変を含む。一部の実施形態では、少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位は、４つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位である。一部の実施形態では、少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位は、それぞれが、天然に存在するアスパラギン（Ｎ）アミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、ＩｇＡ ＣＨ２領域内の少なくとも２つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、ＩｇＡ ＣＨ３領域内の少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位、およびＩｇＡ ＣＨ１領域内の少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位の改変を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、アミノ酸残基：Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２にアミノ酸置換を含む。
【0012】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸残基：Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１３５、およびＮ１５．２に非保存的アミノ酸置換を含む。
【0013】
一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、ｉ．Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、ｉｉ．Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、ｉｉｉ．Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、ならびにｉｖ．Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ ＣＨ３ドメインを含む対応する同等の抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して増大した熱安定性を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して減少したグリコシル化を示す。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、免疫エフェクター細胞上に発現されたＦｃαＲに対して、少なくとも１つの天然に存在するＮ結合グリコシル化部位を含む対応するＩｇＡ抗体と比較して増大した親和性での結合を示す。
【0014】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のアミノ酸置換またはアミノ酸欠失である。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、少なくとも１つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、少なくとも１つの天然に存在するシステインアミノ酸残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７またはＣ８６である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７の欠失を含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体またはその機能性断片と比較して減少した凝集を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ構築物と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す。
【0015】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の一方または両方のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の一方または両方の欠失を含む。
【0016】
一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のうちの１つのアミノ酸置換、および少なくとも２つの天然に存在するシステイン（Ｃ）アミノ酸残基のうちの１つの欠失を含む。一部の実施形態では、少なくとも２つの天然に存在するシステインアミノ酸残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７およびＣ８６である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ１４７の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６のアミノ酸置換を含む。
【0017】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、天然に存在するＣ８６アミノ酸残基のアミノ酸置換、および天然に存在するＣ１４７アミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す。
【0018】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失である。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、ＷＴ ＩｇＡ抗体と比較した、少なくとも１つの天然に存在するチロシン（Ｙ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸突然変異である。一部の実施形態では、少なくとも１つのチロシン残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｙ１４８である。一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、アミノ酸Ｙ１４８が欠失している。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す。
【0019】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡ抗体と比較して少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、対応する野生型ＩｇＡ抗体と比較して少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、少なくとも１つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、少なくとも１つの天然に存在するトレオニンアミノ酸残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１１６またはＴ１６である。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の一方または両方のアミノ酸置換または欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基の一方または両方の非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、少なくとも２つの天然に存在するトレオニン（Ｔ）アミノ酸残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１１６またはＴ１６である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｔ１６Ｓアミノ酸置換を含む。
【0020】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの天然に存在するイソロイシン（Ｉ）残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｉ１１５である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、少なくとも１つの天然に存在するロイシン（Ｌ）残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｌ１５．３である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換を含む。
【0021】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較して、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の改変を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基のアミノ酸置換または欠失を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）アミノ酸残基の非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、少なくとも１つの天然に存在するプロリン（Ｐ）残基は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｐ１２４である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して高い安定性を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して高い重鎖と軽鎖の間の安定性を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、重鎖と軽鎖の間に共有結合性の連結を有する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、重鎖のシステイン（Ｃ）アミノ酸残基と軽鎖のシステイン（Ｃ）アミノ酸残基の間にジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号１６～２１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
【0022】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、アロタイプＩｇＡ２ｍ（１）抗体またはＩｇＡ２ｍ（２）の改変されたＩｇＡの重鎖領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、アロタイプコーカサスＩｇＡ２ｍ（１）抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、対応する野生型ＩｇＡと比較してＣ末端ＩｇＡ尾部片の改変を含む。一部の実施形態では、改変は、Ｃ末端の２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１２、１０、８、６、４、または２アミノ酸の欠失を含む。一部の実施形態では、改変は、Ｃ末端の１８アミノ酸の欠失を含む。一部の実施形態では、改変は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ末端アミノ酸残基１３１～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む。
【0023】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩｇＡ１ ＣＨ２領域およびＩｇＡ１ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ１定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ１定常領域は、ＩｇＡ１ ＣＨ１領域をさらに含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２定常領域は、ＩｇＡ２ ＣＨ１領域をさらに含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、抗原結合性ドメインならびにＩｇＧ ＣＨ２領域およびＩｇＧ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ重鎖定常領域を含む対応する抗体の循環半減期の１％以内、５％以内、１０％以内、２０％以内、または３０％以内の循環半減期を示す。
【0024】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含む対応するＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比較して、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0025】
一部の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、ならびにＮ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換をさらに含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換、Ｃ１４７の欠失、Ｙ１４８の欠失、Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、Ｔ１６Ｓアミノ酸置換、またはこれらの組合せをさらに含む。
【0026】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ２領域およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、およびＮ１３５Ｑアミノ酸置換を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0027】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、Ｃ１４７の欠失、およびＹ１４８の欠失を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号１６と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0028】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、およびＣ末端尾部片の欠失を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0029】
一部の実施形態では、Ｃ末端尾部片の欠失は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む。
【0030】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号１７に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６、９９．７％、９９．８％、９９．９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0031】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、ならびにＴ１６Ｓアミノ酸置換を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0032】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、Ｔ１６Ｓアミノ酸置換、ならびにＣ末端アミノ酸Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0033】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換、Ｃ１４７の欠失、Ｙ１４８の欠失、またはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号１８～２１のいずれか１つから選択される配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、グリコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡよりも延長した循環半減期を有する。
【0034】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応する抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して増大した熱安定性を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して減少したグリコシル化を示す。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、免疫エフェクター細胞上に発現されたＦｃαＲに対して、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して増大した親和性での結合を示す。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ヒンジ領域をさらに含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくは断片を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＡヒンジアミノ酸配列またはそのバリアントもしくは断片を含む。一部の実施形態では、ヒンジは、ＩｇＡ１ヒンジまたはＩｇＡ２ヒンジ、またはそのバリアントもしくは断片である。一部の実施形態では、定常ドメインは、軽鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、軽鎖定常領域はカッパ軽鎖定常領域であり、カッパ軽鎖定常領域は、配列番号３１の配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、１つまたは複数のアルブミン結合性領域をさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインは、ＣＨ３領域のＣ末端と融合している。一部の実施形態では、定常領域は、軽鎖定常領域を含み、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインは、軽鎖定常領域と融合している。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインを含まない対応するＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を有する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、適切なｉｎ ｖｉｔｒｏ ＣＤＣアッセイで測定した場合に、ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応する抗体と比較して低減した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す。
【0035】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその機能性断片は、適切なｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイで測定した場合に、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）を示す。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）：配列番号３３～４０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号４１～４８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および配列番号４９～５６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む。
【0036】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）：配列番号５７～６４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；配列番号６５～７２のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および配列番号７３～８０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む。
【0037】
一部の実施形態では、記載の抗体の重鎖可変領域は、配列番号４、７、８１～８６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％または１００％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５、８、９５～１００のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％または１００％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲはそれぞれＩｇＧ抗体に由来するものである。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、４つのフレームワーク領域（ＦＷ）：ＨＣ－ＦＷ１、ＨＣ－ＦＷ２、ＨＣ－ＦＷ３、およびＨＣ－ＦＷ４をさらに含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、４つのフレームワーク領域（ＦＷ）：ＬＣ－ＦＷ１、ＬＣ－ＦＷ２、ＬＣ－ＦＷ３、およびＬＣ－ＦＷ４をさらに含む。
【0038】
一部の実施形態では、重鎖ＦＷ領域および軽鎖ＦＷ領域はそれぞれＩｇＧ抗体に由来するものである。一部の実施形態では、重鎖ＦＷ領域および軽鎖ＦＷ領域はそれぞれＩｇＡ抗体に由来するものである。
【0039】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその機能性断片は、キメラ抗体、重鎖抗体、単鎖抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、モノクローナル抗体、脱免疫（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、多価抗体またはこれらの組合せである。
【0040】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体の抗原結合性断片は、抗体断片から形成されるＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、直鎖状抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＨＨドメイン、または多重特異性抗体を含む。一部の実施形態では、可変ドメインは、ＧＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ２５に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、酵素、基質、補助因子、蛍光マーカー、化学発光マーカー、ペプチドタグ、磁気粒子、薬物、毒素、放射性核種、二次抗体の結合性部位、金属結合性ドメイン、またはこれらの組合せをさらに含む。
【0041】
上の態様のいずれか１つの抗体またはその機能性断片および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【0042】
それを必要とする対象を処置する方法またはそれを必要とする対象の処置に使用するための組成物であって、対象に上の態様のいずれか１つの抗体もしくはその機能性断片または上に開示されている医薬組成物を治療用量で投与することを含む、方法または組成物が本明細書で提供される。
【0043】
一部の実施形態では、抗体もしくはその機能性断片または医薬組成物は、標的細胞に対する細胞溶解性を持つ。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、抗体もしくはその機能性断片または医薬組成物は、腫瘍成長を阻害する。一部の実施形態では、抗体もしくはその機能性断片または医薬組成物は、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口的、筋肉内または頭蓋内に投与される。一部の実施形態では、抗体もしくはその機能性断片または医薬組成物は、対象に第２の治療剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗がん剤、化学療法剤、放射線療法、細胞傷害性薬剤、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、抗酸化剤などの栄養補助剤、またはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗体もしくはその機能性断片または医薬組成物の投与の前に、それと同時に、またはその後に投与される。
【0044】
上の態様のいずれか１つの抗体またはその機能性断片をコードする単離された核酸が本明細書で提供される。
【0045】
重鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子であって、ＩｇＡ重鎖定常領域をコードする第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列が、配列番号２５～３２のうちのいずれか１つから選択される、単離された核酸分子が本明細書で提供される。一部の実施形態では、上の態様の単離された核酸分子は、可変重鎖領域をコードする第２の核酸配列をさらに含み、第２の核酸配列は、配列番号８７～８４のうちのいずれか１つから選択される。
【0046】
上の態様のいずれか１つの単離された核酸分子を含むベクターが本明細書で提供される。
【0047】
上の態様のいずれか１つの単離された核酸分子を含む宿主細胞が本明細書で提供される。一部の実施形態では、上の態様のいずれか１つの宿主細胞は、軽鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子をさらに含み、軽鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子は、可変軽鎖領域をコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１０１～１０８のうちのいずれか１つから選択される。一部の実施形態では、軽鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸分子は、カッパ軽鎖定常領域をコードする核酸配列をさらに含み、核酸配列は、配列番号３２の配列を含む。
【0048】
上の態様のいずれか１つの抗体またはその機能性断片を発現する宿主細胞が本明細書で提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、細菌細胞または哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、またはＨＥＫ２９３細胞である。
【0049】
抗体またはその機能性断片を産生させる方法であって、（ａ）上の態様のいずれか１つの宿主細胞を、培地中、単離された核酸分子によってコードされるポリペプチドの発現および抗体またはその機能性断片のアセンブルを可能にする条件下で培養するステップと、（ｂ）培養された宿主細胞または宿主細胞の培地から抗体またはその機能性断片を精製するステップとを含む方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、精製するステップは、分子ふるいクロマトグラフィーによるものである。
【0050】
ＣＤ２０ポリペプチドまたはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに（ｂ）配列番号３３の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４１のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号４９のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；（ｃ）配列番号５７の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６５のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７３のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域；または（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖を含む抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、可変重鎖は配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、可変軽鎖は配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【0051】
ＧＤ２タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに（ｂ）配列番号３４の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４２のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５０のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；（ｃ）配列番号５８の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６６のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７４のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、可変重鎖は配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、可変軽鎖は配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【0052】
Ｈｅｒ２タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに（ｂ）配列番号３５の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４３のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５１のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；（ｃ）配列番号５９の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６７のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７５のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、可変重鎖は配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、可変軽鎖は配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【0053】
ｇｐ７５タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに（ｂ）配列番号３６の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４４のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５２のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；（ｃ）配列番号６０の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６８のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７６のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、可変重鎖は配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、可変軽鎖は配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【0054】
ＣＴＬＡ４タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに（ｂ）配列番号３７の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４５のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５３のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；（ｃ）配列番号６１の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号６９のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７７のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、可変重鎖は配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、可変軽鎖は配列番号９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【0055】
ＣＤ４７タンパク質またはそのバリアントに選択的に結合する抗体またはその機能性断片であって、（ａ）配列番号１６～２１から選択されるアミノ酸配列を含むＩｇＡ重鎖定常領域；ならびに（ｂ）配列番号３８の相補性決定領域重鎖１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、配列番号４６のＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５４のＨＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変重鎖領域；（ｃ）配列番号６２の相補性決定領域軽鎖１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、配列番号７０のＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７８のＬＣ－ＣＤＲ３のうちの少なくとも１つを含む可変軽鎖領域、または（ｄ）（ｂ）の可変重鎖および（ｃ）の可変軽鎖を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、可変重鎖は配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、可変軽鎖は配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。
【0056】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１３５Ｑアミノ酸置換、Ｃ１４７の欠失、およびＹ１４８の欠失を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0057】
抗原結合性ドメインと；ＩｇＡ２ ＣＨ１領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２領域、およびＩｇＡ２ ＣＨ３領域を含むＩｇＡ２重鎖定常領域を含む定常ドメインとを含む抗体またはその機能性断片であって、ＩｇＡ２重鎖定常領域が、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｎ４５．２Ｇアミノ酸置換、Ｎ１１４Ｔアミノ酸置換、Ｉ１１５Ｌアミノ酸置換、Ｔ１１６Ｓアミノ酸置換、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、およびＮ１５．２Ｔからなる群から選択されるアミノ酸置換、およびＣ末端アミノ酸Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む、抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。
【0058】
一部の実施形態では、上の態様の抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１のアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域と比べて、Ｃ８６Ｓアミノ酸置換、Ｐ１２４Ｒアミノ酸置換、Ｃ１４７の欠失、Ｙ１４８の欠失、Ｌ１５．３Ｉアミノ酸置換、Ｔ１６Ｓアミノ酸置換またはこれらの組合せをさらに含む。
【0059】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号１８～２１のいずれか１つから選択される配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、グリコシル化されていない。
【0060】
一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡよりも延長した循環半減期を有する。
【0061】
一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応する抗体と比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して、増大した熱安定性を示す。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして野生型アミノ酸残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１５．２のうちの１つもしくは複数、またはＣ末端アミノ酸残基Ｐ１３１～Ｙ１４８を含む対応するＩｇＡと比較して減少したグリコシル化を示す。
参照による組込み
参照による組込み
【0062】
本明細書において言及されている刊行物、特許および特許出願は全て、個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的にかつ個別に参照により組み込まれることが示されたものと同じく参照により本明細書に組み込まれる。
【0063】
本開示の特色は、添付の特許請求の範囲において詳細に記載されている。本開示の原理が利用される例示的な実施形態が記載されている以下の詳細な説明および付属図を参照することにより本開示の特色および利点のより良い理解が得られよう。
【図面の簡単な説明】
【0064】
【0065】
【0066】
【0067】
【0068】
図４Ｂは、工学的に操作されたＩｇＡ３．０＋（プラス）バリアントの描写を示す。工学的に操作されたＩｇＡ３．０＋バリアントは、ＩｇＡ２ｍ１抗体を、ＣＨ１－Ｐ１２４Ｒ突然変異による安定化された重鎖と軽鎖の連結、２つの遊離のシステインの除去であって、１つがセリンへの突然変異（ＣＨ２－Ｃ８６Ｓ）であり、第２のシステインが尾部片の最後の２アミノ酸の欠失によって除去されたものである（ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｃ１４７ｄｅｌ）、２つの遊離のシステインの除去を含有するように工学的に操作することによって生成される。さらに、３つのＮ－グリコシル化モチーフ内の極めて重要なアミノ酸の置換によって３つのＮ結合グリコシル化部位が除去されている。３つのＮ－グリコシル化モチーフの突然変異は、ＣＨ１－Ｎ４５．２Ｇ；ＣＨ２－Ｎ１１４Ｔ－Ｉ１１５Ｌ－Ｔ１１６Ｓ；ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｎ１３５Ｑを含む。
【0069】
図４Ｃは、尾部片全体の欠失（ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｐ１３１－Ｙ１４８ｄｅｌ）を含有する工学的に操作されたＩｇＡ３．０－またはＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントの描写を示す。ＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントは、安定化された重鎖と軽鎖の連結（ＣＨ１－Ｐ１２４Ｒ突然変異）、尾部片全体の欠失（ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｐ１３１－Ｙ１４８ｄｅｌ）、２つの遊離のシステインの欠如であって、１つがセリンへの突然変異（ＣＨ２－Ｃ８６Ｓ）であり、第２のシステインが尾部片の欠失（ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｃ１４７ｄｅｌ）である、２つの遊離のシステインの欠如を含有する。さらに、２つのＮ－グリコシル化モチーフ内の極めて重要なアミノ酸の置換、すなわち、ＣＨ１－Ｎ４５．２ＧおよびＣＨ２－Ｎ１１４Ｔ－Ｉ１１５Ｌ－Ｔ１１６Ｓ、ならびに尾部片の欠失によるＣＨ３－ＣＨＳ－Ｎ１３５Ｑｄｅｌの欠失によって３つのＮ結合グリコシル化部位が除去されている。
【0070】
図４Ｄは、ＩｇＡ３．０ｍｉｎの特色の全てを含有し、最後のＮ結合グリコシル化モチーフＣＨ２－Ｎ１５．２の突然変異をさらに含有する工学的に操作されたＩｇＡ４．０バリアントの描写を示す。したがって、ＩｇＡ４．０バリアントは、安定化された重鎖と軽鎖の連結（ＣＨ１－Ｐ１２４Ｒ突然変異）、尾部片全体の欠失（ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｐ１３１－Ｙ１４８ｄｅｌ）、２つの遊離のシステインの欠如であって、１つがセリンへの突然変異（ＣＨ２－Ｃ８６Ｓ）であり、第２のシステインが尾部片の欠失（ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｃ１４７ｄｅｌ）である、２つの遊離のシステインの欠如を含有する。さらに、４つのＮ－グリコシル化モチーフ内の極めて重要なアミノ酸（ＣＨ１－Ｎ４５．２Ｇ；ＣＨ２－Ｎ１１４Ｔ－Ｉ１１５Ｌ－Ｔ１１６Ｓ；ＣＨ３－ＣＨＳ－Ｎ１３５Ｑ；およびＣＨ２－Ｎ１５．２Ｇ；ＣＨ２－Ｎ１５．２Ｑ；；ＣＨ２－Ｎ１５．２Ｔ；またはＣＨ２－Ｎ１５．２Ｔ－Ｌ１５．３Ｉ－Ｔ１６Ｓのうちの１つ）の置換によって４つのＮ結合グリコシル化部位が除去されている。ＩｇＡ４．０バリアントは、グリコシル化されていないＩｇＡである。
【0071】
【0072】
図５Ａは、種々の重鎖（ＨＣ）：軽鎖（ＬＣ）：ｐＡｄｖａｎｔａｇｅ比でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｆ細胞の上清に対するＥＬＩＳＡによって決定される抗Ｈｅｒ２ ＩｇＡ抗体、すなわちＩｇＡ２－Ｈｅｒ２の濃度を示すグラフである。
【0073】
図５Ｂは、種々の重鎖（ＨＣ）：軽鎖（ＬＣ）：ｐＡｄｖａｎｔａｇｅ比でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｆ細胞の上清に対するＥＬＩＳＡによって決定される、抗ＣＤ４７ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ抗体、すなわち抗ＣＤ４７可変ドメインを含有するＩｇＡ３．０ｍｉｎ抗体（ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｃ４７Ａ８－ＣＱ）の濃度を示すグラフである。可変ドメインはＣ４７Ａ８－ＣＱ抗体から得たものである。
【0074】
【0075】
図６Ａは、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞における抗ＣＤ２０ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体の産生率とＥｘｐｉＣＨＯ細胞における抗ＣＤ２０ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体の産生率の比較を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体は、オビヌツズマブ（Ｏｂｉ）可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する。
【0076】
図６Ｂは、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞における抗Ｈｅｒ２ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２抗体の産生率とＥｘｐｉＣＨＯ細胞における抗Ｈｅｒ２ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２抗体の産生率の比較を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２抗体は、抗Ｈｅｒ２可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する。
【0077】
図６Ｃは、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞における抗ｍＣＴＬＡ４ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｍＣＴＬＡ４抗体の産生率とＥｘｐｉＣＨＯ細胞における抗ｍＣＴＬＡ４ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｍＣＴＬＡ４抗体の産生率の比較を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｍＣＴＬＡ４は、抗ｍＣＴＬＡ４可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する。
【0078】
【0079】
図７Ａは、抗ＧＤ２ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｃｈ１４．１８抗体の濃度を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｃｈ１４．１８抗体は、ｃｈ１４．１８可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する。
【0080】
図７Ｂは、抗ｇｐ７５ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＴＡ９９抗体の濃度を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＴＡ９９抗体は、ＴＡ９９可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する。
【0081】
図７Ｃは、抗Ｈｅｒ２ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２抗体の濃度を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２抗体は、抗Ｈｅｒ２可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する（抗Ｈｅｒ２可変ドメインは抗Ｈｅｒ２抗体トラスツズマブに由来するものであった）。
【0082】
図７Ｄは、抗ＣＤ２０ ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体の濃度を示すグラフである。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体は、オビヌツズマブ（Ｏｂｉ）可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎを含有する。
【0083】
図８Ａ～８Ｄは、種々の重鎖（ＨＣ）：軽鎖（ＬＣ）：ｐＡｄｖａｎｔａｇｅ比でトランスフェクトしたＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞におけるＩｇＡ４．０抗体バリアントの産生率を示すグラフである。
【0084】
【0085】
【0086】
【0087】
【0088】
【0089】
【0090】
【0091】
【0092】
【0093】
【0094】
図１２Ａ～１２Ｅは、フローサイトメトリーによる、ＩｇＡ３．０＋－ＯｂｉおよびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＯｂｉのＣＤ２０陽性Ｄａｕｄｉ細胞への結合を示すグラフである。
【0095】
【0096】
【0097】
【0098】
【図12-4】図１２Ｄは、ＩｇＡ３．０＋－Ｏｂｉ（上清）を用いて染色したＤａｕｄｉ細胞を示すグラフである。図１２Ｅは、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ（上清）を用いて染色したＤａｕｄｉ細胞を示すグラフである。図１２Ｄ～１２Ｅは、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＯｂｉまたはＩｇＡ３．０＋－ＯｂｉをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｆ細胞由来の上清を用いて染色したＤａｕｄｉ細胞を示すグラフである。バリアント、ＩｇＡ３．０＋－Ｏｂｉ（図１２Ｄ）およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ（図１２Ｅ）のどちらもＣＤ２０陽性ＤａｕｄｉにＩｇＡ Ｏｂｉ（図１２Ｃ）と同じ程度に結合する。
【図12-5】同上。
【0099】
【0100】
【0101】
【0102】
図１６Ａ～１６Ｄは、ＩｇＡバリアントにより標的細胞に対するＰＭＮ媒介性ＡＤＣＣが誘導されることを示すグラフである。
【0103】
【0104】
【0105】
【図16-3】図１６Ｄは、ＩｇＡバリアントによるＤａｕｄｉ細胞に対するＡＤＣＣの誘導を示すグラフである。精製ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉをトランスフェクトした細胞由来の上清、ＩｇＡ４．０＿ＮＧ－Ｏｂｉをトランスフェクトした細胞由来の上清、ＩｇＡ４．０＿ＮＱ－Ｏｂｉをトランスフェクトした細胞由来の上清、ＩｇＡ４．０＿ＮＴ－Ｏｂｉをトランスフェクトした細胞由来の上清、およびＩｇＡ４．０＿ＮＬＴ－ＴＩＳ－Ｏｂｉをトランスフェクトした細胞由来の上清では、精製ＩｇＧ１－Ｏｂｉと比較してＡＤＣＣの増大が示される。ＩｇＡ４．０－ｏｂｉバリアント；ＩｇＡ４．０＿ＮＧ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ４．０＿ＮＱ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ４．０＿ＮＴ－Ｏｂｉ、およびＩｇＡ４．０＿ＮＬＴ－ＴＩＳ－Ｏｂｉでは、精製ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ－３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉをトランスフェクトした細胞由来の上清と比較して同様のレベルのＡＤＣＣ誘導が示される。
【0106】
図１７Ａ～１７Ｃは、ＩｇＡバリアントの熱安定性を示すグラフである。ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅ熱シフトアッセイを使用し、ＩｇＡ３．０ｍｉｎおよびＩｇＡ４．０の熱安定性を決定した。図１７Ａは、工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアント；Ｏｂｉ可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎおよび２．３Ｄ１１可変ドメインを有するＩｇＡ３．０ｍｉｎでは、野生型ＩｇＡ２（ｍ１）、すなわち、ｃｈ１４．１８可変ドメインを有するＩｇＡ２およびＨｅｒ２可変ドメインを有するＩｇＡ２と比較して増大した熱安定性が示されることを実証するグラフである。
【0107】
【0108】
【0109】
【0110】
【図18】図１８は、ＰＮＧａｓｅ Ｆ処理による、工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントおよび工学的に操作されたＩｇＡ４．０バリアントの野生型ＩｇＡ２と比較した脱グリコシル化の影響を示す図である。野生型ＩｇＡ２；ＩｇＡ２（ｍ１）－ＵＭＡＢ１０では最大シフトが示されるが、一方、工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアント；ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉでは軽微なシフトが示され、これにより、野生型ＩｇＡ２と比較して減少したグリコシル化が示される。工学的に操作されたＩｇＡ４．０バリアント；ＩｇＡ４．０＿ＮＧ－Ｏｂｉではシフトが示されず、これにより、工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントおよび野生型ＩｇＡ２と比較して減少したグリコシル化が示される。
【0111】
図１９Ａ～１９Ｇは、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳを用いて決定された、野生型ＩｇＡ２および工学的に操作されたＩｇＡバリアントの総グリコシル化プロファイルを示す図である。
【0112】
【0113】
【0114】
【0115】
【0116】
図２０Ａ～２０Ｂは、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの薬物動態および薬物分布分析を示すグラフである。１００μｇの量の野生型－ＩｇＧ１－ジヌツキシマブ、野生型－ＩｇＡ２－ジヌツキシマブおよびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ジヌツキシマブ、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－オビヌツズマブ、ＩｇＡ４．０－オビヌツズマブをＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、血液を示されている時点でＥＬＩＳＡによって分析した。
【0117】
【0118】
【0119】
【0120】
【0121】
【図23】図２３は、確立された腫瘍モデルにおける、工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアント；ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２を投与した際の腫瘍成長の阻害を示すグラフである。０日目にＡ４３１－Ｌｕｃ２－Ｈｅｒ２細胞をｈＣＤ８９トランスジェニックまたは非トランスジェニックＳＣＩＤマウスに腹腔内注射し、その後、６日目にｐｅｇＧ－ＣＳＦを皮下注射した。生物発光シグナルを６日目以降測定し、その日にマウスを異なる処置群にランダムに入れ、重要なシグナルを測定した。７日目に処置を開始し、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２、１０ｕｇを毎日、１０日間にわたって腹腔内注射した。生物発光シグナルを示されている時点で測定した。
【発明を実施するための形態】
【0122】
以下の説明および実施例は、本開示の実施形態を詳細に例示するものである。本開示は本明細書に記載の特定の実施形態に限定されず、したがって、変動し得ることが理解されるべきである。本開示の多数の変形形態および改変形態が存在し、それらが本開示の範囲内に包含されることが当業者には理解されよう。
【0123】
用語は全て当業者に理解される通り理解されることが意図されている。別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、本開示が関係する分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【0124】
本明細書で使用される節の見出しは、単に構成目的のものであり、記載の主題を限定するものとは解釈されない。
【0125】
本開示の種々の特色が単一の実施形態に関して記載されている場合があるが、特色はまた、別々にまたは任意の適切な組合せでも提供され得る。逆に、本開示は明確にするために別々の実施形態に関して本明細書に記載されている場合があるが、本開示を単一の実施形態で実施することもできる。
定義
定義
【0126】
以下の定義は当業者を補うものであり、本出願を対象とし、いかなる関連するまたは関連しない場合、例えば、いかなる共同所有の特許または出願にも帰するものではない。本明細書に記載の方法および材料と類似した、またはそれと等しい任意の方法および材料を本開示の試験のための実施に使用することができるが、本明細書には、好ましい材料および方法が記載されている。したがって、本明細書において使用される用語法は、単に特定の実施形態を説明することを目的とし、限定的なものではない。
【0127】
本出願では、他に特に指定がなければ、単数形の使用は複数形を含む。本明細書において使用される通り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により明確に別段の規定がなされない限り、複数の指示対象を包含することに留意しなければならない。本出願では、別段の指定のない限り、「または（ｏｒ）」の使用は、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定されるものではない。
【0128】
本明細書における「一部の実施形態」、「ある実施形態」、「一実施形態」または「他の実施形態」への言及は、その実施形態に関連して記載されている特定の特色、構造、または特徴が少なくとも一部の実施形態に含まれるが、必ずしも本開示の全ての実施形態に含まれるのではないことを意味する。
【0129】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語（および含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）の任意の形態、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」など）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という単語（および有する（ｈａｖｉｎｇ）の任意の形態、例えば、「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」）など、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という単語（および含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）の任意の形態、例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」など）または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という単語（および含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の任意の形態、例えば、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」など）は、包括的またはオープンエンドであり、追加的な、記載されていない要素または方法のステップを排除するものではない。本明細書において考察されている任意の実施形態を本開示の任意の方法または組成物に関して実施でき、逆もまた同じであることが意図されている。さらに、本開示の方法を実現するために本開示の組成物を使用することができる。
【0130】
「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値について許容される誤差範囲内に入ることを意味し、許容される誤差範囲は、その値の測定または決定の仕方、すなわち、測定系の限界に一部依存する。例えば、「約」は、当技術分野における実施につき、１または１よりも大きな標準偏差内に入ることを意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の２０％まで、１０％まで、５％まで、または１％までの範囲を意味し得る。別の例では、「約１０」量は、１０および９から１１までの任意の量を含む。
【0131】
さらに別の例では、「約」という用語は、参照数値との関連では、その値からプラスマイナス１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％の値の範囲も含み得る。あるいは、特に生物系またはプロセスに関しては、「約」という用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。本出願および特許請求の範囲において特定の値が記載されている場合、別段の指定のない限り、特定の値についての許容される誤差範囲内に入ることを意味する「約」という用語が仮定される。
【0132】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、天然のものであるかまたは部分的にもしくは完全に合成により作製されたものであるかに関わらず、免疫グロブリン（Ｉｇ）を指す。この用語はまた、抗原結合性ドメインであるまたはそれと相同である結合性ドメインを有する任意のポリペプチドまたはタンパク質も包含する。この用語は、「抗原結合性断片」もしくは「その機能性断片」、または「抗体の断片」、「抗体断片」、「抗体の機能性断片」および下記のものなどの同様の結合性断片に対する他の交換可能な用語をさらに含む。
【0133】
抗体は、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、組換え抗体、化学的に操作された抗体、脱免疫抗体、親和性成熟抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および多重反応性抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体断片、およびこれらの組合せ（例えば、脱免疫もされているモノクローナル抗体、脱免疫もされているヒト化抗体など）を含む。
【0134】
抗体は、例えば、マウス、キメラ、ヒト化、ヘテロコンジュゲート、二重特異性、ダイアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、またはテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）であり得る。抗原結合性断片は、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ＦＶ、ｒｌｇＧ、ｓｃＦＶ、ｈｃＡｂ（重鎖抗体）、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、ｓｄＡｂ、またはナノボディを含み得る。
【0135】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｂ細胞の単一のクローンによって産生され、同じエピトープに結合する抗体を指す。対照的に、「ポリクローナル抗体」は、異なるＢ細胞によって産生され、同じ抗原の異なるエピトープに結合する抗体の集団を指す。全抗体は、一般には、４つのポリペプチド：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一のコピーおよび軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一のコピーからなる。重鎖はそれぞれが１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域と３つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）領域を含有し、軽鎖はそれぞれが１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域と１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含有する。軽鎖と重鎖の各対の可変領域は抗体の抗原結合性部位を形成する。ＶＨおよびＶＬ領域は同様の一般構造を有し、各領域が４つのフレームワーク領域を含み、それらの配列は比較的保存されたものである。フレームワーク領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続されている。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３として公知であり、抗原結合に関与する抗体の「超可変領域」を形成する。
【0136】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、２つの異なる種または２つの異なる供給源に由来するアミノ酸配列を含む抗体であり、合成分子を含む。非限定的な例として、非ヒトＣＤＲおよびヒト可変領域フレームワークまたは定常もしくはＦｃ領域を含む抗体、２つの異なるモノクローナル抗体由来の結合性ドメインを有する抗体、または抗体の一部の生物活性もしくは結合を増大もしくは低減するための１つもしくは複数のアミノ酸残基の突然変異を含む抗体が挙げられる。ある特定の実施形態では、組換え抗体を組換えＤＮＡ分子から作製するまたは合成する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は１つまたは複数のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドである。
【0137】
本明細書で使用される場合、「認識する」とは、抗原結合性ドメインと抗原の関連または結合を指す。本明細書で使用される場合、「抗原」とは、宿主における免疫応答を誘発し得る抗原性物質を指す。抗原性物質は、宿主における免疫応答を誘発し得る共刺激分子などの分子であり得る。
【0138】
本明細書で使用される場合、「抗体構築物」は、抗原結合性ドメインおよびＦｃドメインを含有する構築物を指す。
【0139】
本明細書で使用される場合、「結合性ドメイン」は、抗体または非抗体ドメインを指す。
【0140】
本明細書で使用される場合、「抗原結合性ドメイン」は、抗原に結合することができる、抗体由来または非抗体由来の結合性ドメインを指す。抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原結合性ドメインまたは抗原提示細胞上の抗原（例えば、分子など）に結合することができる結合性ドメインであり得る。所与のコンジュゲートまたは抗体構築物内に１つよりも多くの抗原結合性ドメインが存在する場合、抗原結合性ドメインに番号付けすることができる（例えば、第１の抗原結合性ドメイン、第２の抗原結合性ドメイン、第３の抗原結合性ドメインなど）。同じコンジュゲートまたは構築物内の異なる抗原結合性ドメインは、同じ抗原または異なる抗原を標的とし得る（例えば、腫瘍抗原に結合し得る第１の抗原結合性ドメイン、抗原提示細胞上の分子（ＡＰＣ抗原）に結合し得る第２の抗原結合性ドメイン、およびＡＰＣ抗原に結合し得る第３の抗原結合性ドメイン）。「抗原結合性ドメイン」という用語は、エピトープに特異的に結合し、抗原の一部または全部に相補的である領域を含む抗体の断片を指す。抗原結合性ドメインは、例えば、１つまたは複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも称される）によってもたらされ得る。特に、抗原結合性ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【0141】
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、抗体上の認識部位と反応することができる分子または分子の一部を意味する。「抗原」という用語はまた、それ自体でまたはアジュバントもしくは担体と併せてのいずれかで、免疫応答を引き出すことができる分子または分子の一部（「免疫原」とも称される）も含む。「抗原」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体の産生を引き出すことができるまたは抗体に結合することができる分子または分子の一部（エピトープ）を含む。この用語は、抗体と強力に反応し、抗体に対して高い特異性を有する材料を包含し、また、抗体と弱く反応し、かつ／または抗体に対して低親和性を有する材料も包含する。
【0142】
「エピトープ」という用語は、本明細書で使用される場合、パラトープとして公知の、抗体分子の可変領域内の特異的な抗原結合性部位と相互作用する抗原性決定因子を指す。単一の抗原が１つよりも多くのエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体が抗原上の異なる領域に結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、コンフォメーショナルまたは直鎖状のいずれかであり得る。コンフォメーショナルエピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸が空間的に並置されることによって生じる。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接するアミノ酸残基によって生じるエピトープである。ある特定の状況では、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基部分を含み得る。当業者に公知の種々の技法を使用して、抗体の抗原結合性ドメインがポリペプチドまたはタンパク質内の「１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定することができる。例示的な技法としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．， ＮＹ）に記載されているものなどの常套的な交差遮断アッセイ、アラニンスキャニング変異性分析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ， ２００４， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８： ４４３－４６３）、およびペプチド切断分析が挙げられる。さらに、エピトープ切り出し、エピトープ抽出および抗原の化学修飾などの方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ， ２０００， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９： ４８７－４９６）。抗体の抗原結合性ドメインが相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。一般に述べると、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識し、その後、重水素標識されたタンパク質に抗体を結合させることを伴う。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体によって保護されている残基（重水素標識されたままになる）以外の全ての残基における水素重水素交換が起こるようにする。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断および質量分析に供し、それにより、抗体と相互作用する特異的なアミノ酸に対応する重水素標識された残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ （１９９９） Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７ （２）： ２５２－２５９；Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ （２００１） Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ７３： ２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。抗原／抗体複合体のＸ線結晶構造解析もエピトープマッピングのために使用することができる。
【0143】
本明細書で使用される場合、「抗体抗原結合性ドメイン」は、抗原に結合することができる、抗体由来の結合性ドメインを指す。
【0144】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」は、Ｆｃ受容体に結合することができる、抗体由来または非抗体由来のＦｃドメインを指す。本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」および「Ｆｃを含むドメイン」は互換的に使用され得る。
【0145】
本明細書で使用される場合、「標的結合性ドメイン」は、抗原に結合することができる、抗体由来または非抗体由来の抗原結合性ドメインを含有する構築物を指す。
【0146】
本明細書で使用される場合、天然のｌ－鏡像異性アミノ酸に対する略語は従来のものであり、以下の通りであり得る：アラニン（Ａ、Ａｌａ）；アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）；システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）；グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；グルタミン（Ｑ、Ｇｉｎ）；グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉ、Ｈｅ）；ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）；リシン（Ｋ、Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）；セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）；トレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）；チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；バリン（Ｖ、Ｖａｌ）。別段の指定がない限り、Ｘは任意のアミノ酸を示し得る。一部の態様では、Ｘは、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、ヒスチジン（Ｈ）、リシン（Ｋ）、またはアルギニン（Ｒ）であり得る。
【0147】
「薬学的に許容される」という句は、本明細書では、良好な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わない、妥当なベネフィット／リスク比に見合う、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適した化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために使用される。
【0148】
「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」という句は、本明細書で使用される場合、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合し、かつ、患者に対して有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体としての機能を果し得る材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロースなど；（２）デンプン、例えばトウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなど；（３）セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなど；（４）粉末化トラガント；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオバターおよび坐薬ワックスなど；（９）油、例えばピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油など；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコールなど；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなど；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなど；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなど；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張性生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；ならびに（２１）医薬製剤に使用される他の無毒性の適合する物質が挙げられる。
【0149】
「がん」、「腫瘍」、「増殖性疾患」、「悪性腫瘍」または「悪性疾患」という用語は、調節解除された細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理的状態に関する。がんは、細胞の群が制御されない成長または望ましくない成長を示す疾患のクラスである。がん細胞は他の場所に拡散し得、それにより転移の形成が導かれ得る。体内のがん細胞の拡散は、例えば、リンパ液または血液を介して起こり得る。制御されない成長、侵入および転移形成は、がんの悪性特性とも称される。これらの悪性特性により、がんと、一般には浸潤も転移もしない良性腫瘍が区別される。
【0150】
「抗原認識部分」または「抗体認識ドメイン」は、抗原に特異的に結合する分子または分子の一部を指す。一実施形態では、抗原認識部分は、抗体、抗体様分子またはその断片であり、抗原は、腫瘍抗原または感染性疾患抗原である。
【0151】
「抗体の断片」、「抗体断片」、「抗体の機能性断片」、「抗原結合性部分」という用語またはそれらの文法上の等価物は、本明細書では互換的に使用され、抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の断片または一部を意味する（一般に、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ，２３ （９）： １１２６－１１２９ （２００５）を参照されたい）。抗体断片は、例えば、１つまたは複数のＣＤＲ、可変領域（もしくはその一部）、定常領域（もしくはその一部）、またはこれらの組合せを含むことが望ましい。抗体断片の例としては、これだけに限定されないが、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）柄領域においてジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）２つのドメインを単一のポリペプチド鎖として合成することを可能にする合成リンカーによって接合したＦｖ断片の２つのドメイン（すなわち、ＶＬおよびＶＨ）からなる一価の分子である単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２： ４２３－４２６ （１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８５： ５８７９－５８８３ （１９８８）；およびＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １６： ７７８ （１９９８）を参照されたい）ならびに（ｖ）ポリペプチド鎖の二量体であるダイアボディであって、各ポリペプチド鎖が、同じポリペプチド鎖上のＶＨとＶＬの対形成が可能になるには短すぎ、それにより、異なるＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖上の相補的なドメイン間の対形成を駆動して、二官能性抗原結合性部位を有する二量体分子を生成するペプチドリンカーによってＶＨとＶＬが接続した、ダイアボディが挙げられる。抗体断片は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第８，６０３，９５０号により詳細に記載されている。他の抗体断片は、重鎖抗体の可変性断片（ＶＨＨ）を含み得る。
【0152】
「保存的アミノ酸置換」または「保存的突然変異」という用語は、１つのアミノ酸を、共通の特性を有する別のアミノ酸によって置き換えることを指す。個々のアミノ酸間の共通の特性を定義するための機能的なやり方は、相同な生物体の対応するタンパク質間でのアミノ酸の変化の正規化された頻度を分析することである（Ｓｃｈｕｌｚ， Ｇ． Ｅ． ａｎｄ Ｓｃｈｉｒｍｅｒ， Ｒ．． Ｈ．， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９７９））。そのような分析に従って、群内のアミノ酸が優先的に互いに交換され、したがって、互いにそれらの全体的なタンパク質構造に対する影響がほぼ同様であるアミノ酸の群を定義することができる（Ｓｃｈｕｌｚ， Ｇ． Ｅ． ａｎｄ Ｓｃｈｉｒｍｅｒ， Ｒ．． Ｈ． ， ｓｕｐｒａ）。保存的突然変異の例としては、上記の亜群内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、正電荷を維持することができる、リシンによるアルギニンの置換か、または逆に、アルギニンによるリシンの置換；負電荷を維持することができる、グルタミン酸によるアスパラギン酸の置換か、または逆にアスパラギン酸によるグルタミン酸の置換；遊離の－ＯＨを維持することができる、セリンによるトレオニンの置換；および遊離の－ＮＨ２を維持することができる、グルタミンによるアスパラギンの置換が挙げられる。その代わりにまたはそれに加えて、治療用ＩｇＡ抗体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を伴う参照タンパク質のアミノ酸配列を含み得る。
【0153】
「非保存的突然変異」または「非保存的アミノ酸置換」という用語は、異なる群間のアミノ酸置換、例えば、リシンによるトリプトファンの置換、またはフェニルアラニンによるセリンの置換などに関与し、この場合、非保存的アミノ酸置換は、治療用ＩｇＡ抗体の生物活性に干渉しないまたはそれを阻害しないものであることが好ましい。非保存的アミノ酸置換により治療用ＩｇＡ抗体の生物活性を増強することができ、したがって、治療用ＩｇＡ抗体の生物活性が野生型治療用ＩｇＡ抗体と比較して増大する。
【0154】
本明細書で使用される場合、「ヒト化」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最低限含有する特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、抗体のＦＶ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または他の抗原結合性部分配列など）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、所望の特異性、親和性、および能力を有する、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）の相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基がマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられたものである。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見いだされないが、抗体の性能をさらに精密にし、最適化するために含められる残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、一般には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの全てまたは実質的に全てに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の全てまたは実質的に全てである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の、一般にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分も含むことが最適である。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体由来の１つまたは複数のＣＤＲに「由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも称される、元の抗体に対して変更される１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有する。
【0155】
本明細書で使用される場合、「単離された抗体」は、その天然の環境の構成成分から分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の夾雑構成成分は、抗体の診断的または治療的使用に干渉すると思われる材料であり、それらとして、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性構成成分を挙げることができる。好ましい実施形態では、抗体を、（１）ローリー法によって決定して、抗体が９５重量％よりも多く、最も好ましくは９９重量％よりも多くなるまで；（２）スピニングカップシークエネーターを使用して、Ｎ末端または内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで；または（３）還元条件下または非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、クーマシーブルー、または、好ましくは、銀染色を使用して均一性が示されるまで精製する。単離された抗体は、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの抗体を含み、これは、抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないからである。しかし、普通は、単離された抗体は少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【0156】
「実質的に精製された」とは、抗体またはその機能性断片が、それが由来する細胞または組織供給源に由来する細胞性材料もしくは他の夾雑タンパク質を実質的に含まないこと、または、化学的に合成されたものである場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないことを意味する。この言葉は、抗体が単離されたまたは組換えによって産生された細胞の細胞構成成分から分離された抗体の調製物を含む。したがって、細胞性材料を実質的に含まない抗体は、夾雑タンパク質および培養培地が約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満または約５％未満（乾燥重量で）である調製物を含む。一部の実施形態では、抗体は、クロマトグラフィー、例えば、分子ふるいクロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーによって精製することができる。
【0157】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」（ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）という用語は、抗原結合のためにその存在が必要である、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指す。一般には、各可変ドメインがＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と識別される３つのＣＤＲ領域を有する。可変重鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３であり得る。可変軽鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３であり得る。例示的な超可変ループはアミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、および９６～１０１（Ｈ３）に存在する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６： ９０１－９１７ （１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１はアミノ酸残基２４～３４、Ｌ２はアミノ酸残基５０～５６、Ｌ３はアミノ酸残基８９～９７、Ｈ１はアミノ酸残基３１～３５Ｂ、Ｈ２はアミノ酸残基５０～６５、およびＨ３はアミノ酸残基９５～１０２に存在する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ ｅｄ． （１９９１））。したがって、別段の指定のない限り、ＨＶは対応するＣＤＲ内に含まれ得、本明細書ではＶＨの「超可変ループ」と称され、ＶＬドメインは対応するＣＤＲも包含するものと解釈されるべきであり、逆もまた同じである。可変ドメインのより高度に保存された領域は、下で定義される通り、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれが４つのＦＲ（それぞれＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含み、これらは、大部分が［ベータ］－シート立体配置をとり、３つの超可変ループによって接続されている。各鎖内の超可変ループはＦＲによって極めて近傍にまとめて保持され、他の鎖由来の超可変ループと共に抗体の抗原結合性部位の形成に寄与する。抗体の構造解析により、配列間の関係および相補性決定領域によって形成される結合性部位の形状が明らかになった（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７： ７９９－８１７ （１９９２））；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ、２１５： １７５－１８２ （１９９０））。配列変動性が大きいにもかかわらず、６つのループのうちの５つが取る主鎖コンフォメーションのレパートリーはほんの小さなものであり、「標準構造」と称される。これらのコンフォメーションは、まず第１にループの長さによって決定され、第２に、ループ内およびフレームワーク領域内のある特定の位置における、パッキング、水素結合または普通でない主鎖コンフォメーションをとる能力を通じてコンフォメーションを決定する重要な残基の存在によって決定される。
【0158】
抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を単独で、または組み合わせて指す。重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれが、超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖内のＣＤＲはＦＲによって極めて近傍にまとめて保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に抗体の抗原結合性部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための技法が少なくとも２つ存在する：（１）異種間での配列変動性に基づく手法（すなわち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， （５ｔｈ ｅｄ．， １９９１， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄ．））；および（２）抗原抗体複合体の結晶学的試験に基づく手法（Ａｌｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ （１９９７） Ｊ． Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ． ２７３： ９２７－９４８））。ＣＤＲは、いずれかの手法によってまたは両方の手法の組合せによって定義されるＣＤＲを指し得る。
【0159】
抗体の「定常領域」は、抗体軽鎖の定常領域、すなわち軽鎖定常領域、または抗体重鎖の定常領域、すなわち重鎖定常領域を単独で、または組み合わせて指す。定常領域は抗原特異性に対して変動しない。
【0160】
本明細書で使用される場合、「重鎖領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖の定常ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。重鎖領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中部、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそのバリアントもしくは断片のうちの少なくとも１つを含む。ある実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域（例えば、ヒンジ部分、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン）を含み得る。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも定常ドメインのある領域（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を欠く。ある特定の実施形態では、定常ドメインの少なくとも１つ、好ましくは全てがヒト免疫グロブリン重鎖に由来するものである。例えば、好ましい一実施形態では、重鎖領域は完全ヒトヒンジドメインを含む。他の好ましい実施形態では、重鎖領域は完全ヒトＦｃ領域（例えば、ヒト免疫グロブリン由来のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン配列）を含む。ある特定の実施形態では、重鎖領域の構成物である定常ドメインは異なる免疫グロブリン分子に由来するものである。例えば、ポリペプチドの重鎖領域は、ＩｇＡ分子に由来するドメインおよびＩｇＡ１またはＩｇＡ２分子に由来するヒンジ領域を含み得る。他の実施形態では、定常ドメインは、異なる免疫グロブリン分子の領域を含むキメラドメインである。例えば、ヒンジは、ＩｇＡ１分子由来の第１の領域およびＩｇＡ２分子由来の第２の領域を含み得る。上記の通り、重鎖領域の定常ドメインを改変することができ、したがって、重鎖領域の定常ドメインのアミノ酸配列が天然に存在する（野生型）免疫グロブリン分子から変動することが当業者には理解されよう。すなわち、本明細書に開示される本発明のポリペプチドは、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２もしくはＣＨ３）および／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）の１つまたは複数の変更または改変を含み得る。例示的な改変としては、１つまたは複数のドメイン内の１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失または置換が挙げられる。一部の実施形態では、改変は、表２の改変から選択される。
【0161】
本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、長さが少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長であるＣＤＲ３領域を含み得る。本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも約１８アミノ酸長であるＣＤＲ３領域を含み得る。
【0162】
本明細書で使用される場合、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを接合する重鎖分子の領域を含む。ヒンジ領域は、およそ２５残基を含み得、また、柔軟であり、したがって、２つのＮ末端抗原結合性領域が独立に移動することが可能である。ヒンジ領域は３つの別個のドメイン：上部、中部、および下部ヒンジドメインに細分することができる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９８ １６１： ４０８３）。
【0163】
本明細書で使用される場合、「Ｆｖ」という用語は、完全な抗原認識および結合性部位を含有する最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが密接に非共有結合により会合した二量体からなる。
【0164】
これらの２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が発する。しかし、単一可変ドメイン（または抗原に特異的なＣＤＲを３つしか含まない、Ｆｖの半分）であっても、親和性は結合性部位全体よりも低いが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【0165】
「重鎖可変領域」または「ＶＨ」は、抗体に関しては、３つのＣＤＲを含有し、フレームワーク領域として公知のＣＤＲを挟むひと続きが介在する重鎖の断片を指し、これらのフレームワーク領域は、一般に、ＣＤＲよりも高度に保存されたものであり、ＣＤＲを支持するための足場を形成する。
【0166】
「軽鎖可変領域」または「ＶＬ」は、抗体に関しては、３つのＣＤＲを含有し、フレームワーク領域として公知のＣＤＲを挟むひと続きが介在する軽鎖の断片を指し、これらのフレームワーク領域は、一般に、ＣＤＲよりも高度に保存されたものであり、ＣＤＲを支持するための足場を形成する。
【0167】
６つの超可変ループ（重鎖および軽鎖からそれぞれ３つのループ）は、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一可変ドメイン（または抗原に特異的なＣＤＲを３つしか含まない、Ｆｖの半分）であっても、親和性は結合性部位全体よりも低いが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【0168】
「フレームワーク」またはＦＲ残基は、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【0169】
抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続した少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を有する糖タンパク質またはその抗原結合性部分であることが当技術分野において理解される。重鎖は重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）で構成される。軽鎖は軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）で構成される。重鎖および軽鎖のどちらの可変領域も、フレームワーク領域（ＦＲまたはＦＷＲ）および超可変領域（ＨＶＲ）を含む。ＨＶＲは抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基である。超可変領域は、一般には、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、最も高い配列変動性を有し、かつ／または抗原認識に関与する。ＶＨのＣＤＲ１を例外として、ＣＤＲは、一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、省略－ＣＤＲ、またはａ－ＣＤＲと称されるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ－ＣＤＲ（ａ－ＣＤＲ－Ｌ１、ａ－ＣＤＲ－Ｌ２、ａ－ＣＤＲ－Ｌ３、ａ－ＣＤＲ－Ｈ１、ａ－ＣＤＲ－Ｈ２、およびａ－ＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１はアミノ酸残基３１～３４、Ｌ２はアミノ酸残基５０～５５、Ｌ３はアミノ酸残基８９～９６、Ｈ１はアミノ酸残基３１～３５Ｂ、Ｈ２はアミノ酸残基５０～５８、およびＨ３はアミノ酸残基９５～１０２に存在する（例えば、Ｆｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３： １６１９－１６３３ （２００８）を参照されたい）
【0170】
別段の指定のない限り、ＨＶＲ残基および可変ドメイン内の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書ではＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａに従って番号付けされている。可変領域は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインである（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ． Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ６ｔｈ ｅｄ．， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．， ｐ．９１ （２００７）を参照されたい）。抗原結合特異性を付与するためには単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、抗原に結合する抗体由来のＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる（例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５０： ８８０－８８７ （１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３５２： ６２４－６２８ （１９９１）を参照されたい）。４つのＦＷＲ領域は、一般にはより保存されたものであり、一方、ＣＤＲ領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）は超可変領域を表し、ＮＨ２末端からＣＯＯＨ末端まで以下の通り配置される：ＦＷＲ１、ＣＤＲ１、ＦＷＲ２、ＣＤＲ２、ＦＷＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＷＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域が抗原と相互作用する結合性ドメインを含有するが、アイソタイプに応じて、定常領域が免疫グロブリンの宿主組織または因子への結合を媒介し得る。抗体はまた、キメラ抗体、ヒト化抗体、および組換え抗体、トランスジェニック非ヒト動物から生成されるヒト抗体、ならびに当業者が利用可能な富化技術を使用してライブラリーから選択される抗体を含む。
【0171】
「抗体重鎖」という用語は、抗体分子の天然に存在するコンフォメーションで抗体分子内に存在する２つの型のポリペプチド鎖のうちの大きい方を指し、通常、それにより、抗体が属するクラスが決定される。
【0172】
「抗体軽鎖」という用語は、抗体分子の天然に存在するコンフォメーションで抗体分子内に存在する２つの型のポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。カッパ（「κ」）およびラムダ（「λ」）軽鎖は２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【0173】
抗体またはその抗原結合性断片は、標的に、無関係のポリペプチド上のエピトープに結合するよりも大きな親和性および／または結合活性で結合する場合、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。抗体または抗原結合性断片またはその一部の特異性は、親和性および／または結合活性に基づいて決定することができる。そのような特異的な結合を決定するための方法は当技術分野でも周知である。本開示のある特定の実施形態によると、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトがん抗原に結合し得るが、他の種由来のがん抗原には結合しない。あるいは、抗体またはその抗原結合性断片は、ある特定の実施形態では、ヒトがん抗原に結合し、１つまたは複数の非ヒト種由来のがん抗原にも結合する。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトがん抗原に結合し得、場合によって、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザルまたはチンパンジーがん抗原のうちの１つまたは複数にも結合し得る、またはそれには結合しない。
【0174】
抗原と抗原結合性タンパク質の解離（ＫＤ）についての平衡定数によって表される親和性は、抗原性決定因子と抗原結合性タンパク質上の抗原結合性部位の結合強度の評価基準である：ＫＤの値が小さいほど抗原性決定因子と抗原結合性分子の結合強度が強力である。あるいは、親和性は、１／ＫＤである親和定数（ＫＡ）として表すこともできる。当業者には明らかになる通り、親和性は、特定の目的の抗原に応じて、それ自体が公知の様式で決定することができる。したがって、本明細書で定義される抗体またはその抗原結合性断片は、第１の抗原に、前記アミノ酸配列またはポリペプチドが別の標的またはポリペプチドに結合する親和性の少なくとも５０倍、例えば、少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、最大１０，０００倍またはそれよりも大きな親和性（上記の通りであり、例えばＫＤ値として適切に表される）で結合する場合、第２の標的または抗原と比較して第１の標的または抗原に対して「特異的」であると言える。抗体またはその抗原結合性断片が標的または抗原に対して別の標的または抗原と比較して「特異的」である場合、抗体またはその抗原結合性断片は、標的または抗原に結合し得るが、他の標的または抗原には結合しないことが好ましい。しかし、当業者には理解される通り、一部の実施形態では、標的上の結合性部位が多数の異なるリガンドに共有されるまたは部分的に共有される場合、抗体またはその抗原結合性断片は、がん関連抗原などの標的に特異的に結合し得、例えば腫瘍増悪の阻害／防止という機能的効果を有する。
【0175】
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体の解離定数（ＫＤ）は、約１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭまたはそれ未満（例えば、１０－８Ｍまたはそれ未満、例えば１０－８Ｍから１０－１３Ｍまで、例えば１０－９Ｍから１０－１３Ｍまで）である。本発明の別の態様では、その標的に対する親和性が増大した抗体またはその抗原結合性断片、例えば、親和性成熟した抗体が提供される。親和性成熟した抗体は、そのような変更を有さない親抗体と比較して、１つまたは複数の超可変領域（ＨＶＲ）に１つまたは複数の変更を伴う抗体であり、そのような変更の結果、抗体の抗原に対する親和性が改善される。これらの抗体は、抗原に約５×１０－９Ｍ、２×１０－９Ｍ、１×１０－９Ｍ、５×１０－１０Ｍ、２×１０－１０Ｍ、１×１０－１０Ｍ、５×１０－１１Ｍ、１×１０－１１Ｍ、５×１０－１２Ｍ、１×１０－１２Ｍ、またはそれ未満のＫＤで結合することができる。一部の実施形態では、本開示は、重鎖配列および軽鎖配列を含有するＷＴ ＩｇＡ抗体またはＷＴ ＩｇＧ抗体または両方と比較して親和性が少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍またはそれよりも大きく増大した抗体またはその抗原結合性断片を提供する。他の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその機能性断片は、可変ドメインが由来する対応する抗体と同じエピトープへの結合について競合する。一部の実施形態では、ある抗体と同じエピトープに結合し、かつ／または同じエピトープへの結合について競合する抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＡＤＣＣ活性を含めたＦｃ媒介性細胞性細胞傷害性などのエフェクター機能活性を示す。
【0176】
ＫＤは、任意の適切なアッセイによって測定することができる。例えば、ＫＤは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定することができる（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２９３： ８６５－８８１ （１９９９）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５７： ４５９３－４５９９ （１９９７）を参照されたい）。例えば、ＫＤは、表面プラズモン共鳴アッセイを使用して（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００を使用して）測定することができる。例えば、ＫＤは、競合ＥＬＩＳＡを使用して測定することができる。
【0177】
結合活性は、抗原結合性分子と関係する抗原の結合の強度の評価基準である。結合活性は、抗原性決定因子と抗原結合性分子上のその抗原結合性部位の親和性、および抗原結合性分子上に存在する関係する結合性部位の数の両方に関連する。一般には、抗原結合性タンパク質は、それらの同類のまたは特異的な抗原に１０－５～１０－１２モル／リットルまたはそれ未満、好ましくは１０－７～１０－１２モル／リットルまたはそれ未満、より好ましくは１０－８～１０－１２モル／リットルの解離定数（ＫＤ）（すなわち、１０５～１０１２リットル／モルまたはそれよりも大きい、好ましくは１０７～１０１２リットル／モルまたはそれよりも大きい、またはさらに好ましくは１０８～１０１２リットル／モルの会合定数（ＫＡ））で結合する。１０－４モル／リットルよりも大きなＫＤ値はいずれも（または１０４Ｍ－１未満のＫＡ値はいずれも）、一般に、非特異的な結合を示すものとみなされる。意味のある（例えば、特異的である）とみなされる生物学的相互作用についてのＫＤは、一般には、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）～１０－５Ｍ（１００００ｎＭ）の範囲内に入る。相互作用が強力であるほどそのＫＤが小さくなる。本明細書に記載の抗ＬＡＰ抗体またはその抗原結合性断片上の結合性部位は、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満、例えば、５００ｐＭ未満の親和性で結合することが好ましい。抗原結合性タンパク質の抗原または抗原性決定因子への特異的結合は、例えば、スキャッチャード解析および／またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびサンドイッチ競合アッセイなどの競合結合アッセイ、および当技術分野においてそれ自体が公知の種々のその変形；ならびに本明細書で言及されている他の技法を含めた、それ自体が公知の任意の適切な様式で決定することができる。
【0178】
「ｋｏｎ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその抗原結合性断片と抗原の会合についての速度定数を指すものとする。
【0179】
「Ｋｏｆｆ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその抗原結合性断片の抗体／抗原複合体からの解離についての速度定数を指すものとする。
【0180】
「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックまたはトランス染色体動物（例えば、マウス）またはそれから調製されたハイブリドーマ（下にさらに記載されている）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、創出または単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、創出または単離される全てのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域が本明細書に開示される免疫グロブリン配列に由来するものである可変領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体をｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物を使用する場合にはｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）に供することができ、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト免疫グロブリンＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それに関連するものであるが、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然には存在しない配列である。
【0181】
抗体またはその抗原結合性断片に関しては、「特異性」または「特異的」という用語は、特定の抗体またはその抗原結合性断片が結合することができる異なる型の抗原または抗原性決定因子の数を指す。抗体または抗原結合性断片またはその一部の特異性は、親和性および／または結合活性に基づいて決定することができる。親和性は、抗原と抗原結合性タンパク質の解離の平衡定数（ＫＤ）によって表され、抗原性決定因子と抗原結合性タンパク質上の抗原結合性部位の結合強度の評価基準である：ＫＤの値が小さいほど抗原性決定因子と抗原結合性分子の結合強度が強力である。あるいは、親和性は、１／ＫＤである親和定数（ＫＡ）として表すこともできる。当業者には明らかになる通り、親和性は、特定の目的の抗原に応じて、それ自体が公知の様式で決定することができる。したがって、本明細書で定義される抗体またはその抗原結合性断片は、第１の抗原に、前記アミノ酸配列またはポリペプチドが別の標的またはポリペプチドに結合する親和性よりも少なくとも５０倍、例えば、少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、最大１０，０００倍またはそれよりも大きな親和性（上記の通りであり、例えばＫＤ値として適切に表される）で結合する場合、第２の標的または抗原と比較して第１の標的または抗原に対して「特異的」であると言える。抗体またはその抗原結合性断片が標的または抗原に対して別の標的または抗原と比較して「特異的」である場合、抗体またはその抗原結合性断片は、標的または抗原に結合し得るが、他の標的または抗原には結合しないことが好ましい。
【0182】
しかし、当業者には理解される通り、一部の実施形態では、標的上の結合性部位が多数の異なるリガンドに共有されるまたは部分的に共有される場合、抗体またはその抗原結合性断片は、標的抗原に特異的に結合し、例えば腫瘍増悪の阻害／防止という機能的効果を有する。
【0183】
結合活性は、抗原結合性分子と関係する抗原の結合の強度の評価基準である。結合活性は、抗原性決定因子と抗原結合性分子上のその抗原結合性部位の親和性、および抗原結合性分子上に存在する関係する結合性部位の数の両方に関連する。一般には、抗原結合性タンパク質は、それらの同類のまたは特異的な抗原に、１０－５～１０－１２モル／リットルまたはそれ未満、好ましくは１０－７～１０－１２モル／リットルまたはそれ未満、より好ましくは１０－８～１０－１２モル／リットルの解離定数（ＫＤ）（すなわち、１０５～１０１２リットル／モルまたはそれよりも大きい、好ましくは１０７～１０１２リットル／モルまたはそれよりも大きい、またはさらに好ましくは１０８～１０１２リットル／モルの会合定数（ＫＡ））で結合する。１０－４モル／リットルよりも大きなＫＤ値はいずれも（または１０４Ｍ－１未満のＫＡ値はいずれも）、一般に、非特異的な結合を示すものとみなされる。意味のある（例えば、特異的である）とみなされる生物学的相互作用についてのＫＤは、一般には、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）～１０－５Ｍ（１００００ｎＭ）の範囲内に入る。相互作用が強力であるほどそのＫＤが小さくなる。本明細書に記載の抗ＬＡＰ抗体またはその抗原結合性断片上の結合性部位は、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満、例えば、５００ｐＭ未満の親和性で結合することが好ましい。抗原結合性タンパク質の抗原または抗原性決定因子への特異的結合は、例えば、スキャッチャード解析および／またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびサンドイッチ競合アッセイなどの競合結合アッセイ、および当技術分野においてそれ自体が公知の種々のその変形；ならびに本明細書で言及されている他の技法を含めた、それ自体が公知の任意の適切な様式で決定することができる。
【0184】
「融合タンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその断片のアミノ酸配列と異種ポリペプチド（すなわち、無関係のポリペプチド）のアミノ酸配列とを含むポリペプチドを指す。
【0185】
一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」（ｓｄＡｂ）または「単一可変ドメイン（ＳＶＤ）抗体」とは、一般に、抗体－抗原結合を付与することができる単一の可変領域（ＶＨまたは’）を指す。言い換えれば、単一可変ドメインは、別の可変領域と相互作用することにより標的抗原を認識する必要がない。単一ドメイン抗体単量体単一アーム各抗体可変領域による抗原結合（ＶＨ＊ＶＪ組成）。単一ドメイン抗体の例としては、ラクダ科の動物（ラクダおよびラマ）および軟骨魚類（例えば、テンジクザメ）抗体に由来する抗体およびそれらの抗体（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ， Ｎａｔｕｒｅ （１９８９） ３４１： ５４４－５４６； Ｄｏｏｌｅｙ ａｎｄ Ｆｌａｊｎｉｋ， Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００６） ３０： ４３－５６；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ， ＴｒｅｎｄＢｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ （２００１） ２６： ２３０－２３５；Ｈｏｌｔ ｅｔ， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ （２００３）：２１： ４８４－４９０；Ｗ０２００５／０３５５７２；ＴＯ０３／０３５６９４；Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ， Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔ （１９９４） ３３９： ２８５－２９０；Ｗ０００／２９ ００４；Ｗ００２／０５１８７０）が挙げられ、単一ドメイン抗体可変領域または可変ドメイン以外の抗体の単一可変領域は、抗原結合性アームに存在する（例えば、ホモ多量体またはヘテロ多量体）。
【0186】
本明細書で使用される場合、「改変」という用語は、ＷＴ抗体のＷＴ重鎖定常領域と比較した、抗体の重鎖定常領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基のアミノ酸置換またはアミノ酸欠失を指す。一部の実施形態では、改変は、重鎖定常領域のＩｇＡ ＣＨ１領域内のアミノ酸残基におけるものである。一部の実施形態では、改変は、重鎖定常領域のＩｇＡ ＣＨ２領域内のアミノ酸残基におけるものである。一部の実施形態では、改変は、重鎖定常領域のＩｇＡ ＣＨ３領域内のアミノ酸残基におけるものである。一部の実施形態では、改変は、表２から選択される。一部の実施形態では、本明細書に開示される１つまたは複数の改変の結果、１つまたは複数の改変を含む抗体に対応するＷＴ抗体と比較して改善された特性がもたらされる。
【0187】
「改善された特性」という用語は、１つまたは複数の改変を含まない親ＷＴ抗体と比較して改善された、本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含む抗体に関連する特徴を意味する。そのような改善された特性としては、これだけに限定されないが、増大した熱安定性、延長した循環半減期、ＡＤＣＣの増大、減少した凝集、減少した血清タンパク質との凝集、増大した腫瘍標的化、増大した安定性、減少したグリコシル化、免疫細胞上に発現されるＦｃαＲとの増大した結合が挙げられる。一部の実施形態では、改善された特性は、対応するＷＴ ＩｇＡと比較した、抗体またはその機能性断片の１つまたは複数のエフェクター機能の増大である。エフェクター機能は、抗体のアイソタイプによって変動する抗体のＦｃ領域に起因する生物活性である。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシスが挙げられる。
【0188】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片（例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域内に本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含む）は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体または対応するＷＴ ＩｇＧ抗体と比較して、少なくとも２％、３％、４％、５％、７％、８％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または少なくとも１００％の１つまたは複数の改善された特性を有する。
【0189】
本明細書で使用される場合、「対応する」改変されていない抗体という用語は、特に重鎖定常領域に本明細書に開示される１つまたは複数の選択された改変を含む抗体と配列が同じであるが、本明細書に記載の１つまたは複数の選択された改変を伴わない野生型抗体を意味する。一部の実施形態では、対応する抗体は、ＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域を含むＷＴ ＩｇＡ抗体であり得る。一部の実施形態では、対応する抗体は、ＷＴ ＩｇＧ重鎖定常領域を含むＷＴ ＩｇＧ抗体であり得る。一部の実施形態では、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体は、ＷＴ ＩｇＡ１抗体である。一部の実施形態では、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体は、ＷＴ ＩｇＡ２抗体である。一部の実施形態では、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、対応するＷＴ ＩｇＡ２抗体は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＡ２重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるアミノ酸改変は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域（例えば、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域）内の選択された位置のアミノ酸残基と比べたものである。
【0190】
一部の実施形態では、ＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるアミノ酸改変は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域（例えば、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域）内の選択された位置のアミノ酸残基と比べたものである。
【0191】
一部の実施形態では、ＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域は、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるアミノ酸改変は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域（例えば、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域）内の選択された位置のアミノ酸残基と比べたものである。
【0192】
「Ｆａｂ」という用語は、本明細書で使用される場合、重鎖および軽鎖のそれぞれの１つの定常ドメインと１つの可変ドメインで構成される（一価抗原結合性断片）が、重鎖がＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを欠くように短縮されており（すなわち、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ）、ヒンジ領域の一部または全部も欠く場合がある、抗体の領域を指すものとする。Ｆａｂは、全抗体を酵素パパインで消化することによって作製することができる。Ｆａｂは、単離されたこの領域、または全長抗体、免疫グロブリン構築物もしくはＦａｂ融合タンパク質の状況でのこの領域を指し得る。
【0193】
Ｆａｂ’という用語は、本明細書で使用される場合、全抗体をペプシンで処理し、その後、還元して、インタクトな軽鎖とＶＨおよび単一の定常ドメインを含む重鎖の一部とからなる分子を得ることによって得ることができる。このように処理された抗体から２つのＦａｂ’断片が得られる。
【0194】
「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＦＩドメインおよびＶＬドメインを含む抗体断片を意味し、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖内に存在する。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、５，２６０，２０３号、５，４５５，０３０号、および５，８５６，４５６号を参照されたい。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に、ｓｃＦｖが抗原結合性のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ （１９９４） Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｖｏｌ １１３ ｅｄ． Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ） ｐｐ ２６９－３１５を参照されたい。Ｆｖ断片のＶＦＩドメインとＶＬドメインの複合体は、ジスルフィド結合によって安定化することもできる（米国特許第５，７４７，６５４号）。
【0195】
「ｉｎ ｖｉｖｏ半減期」または「循環半減期」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその機能性断片の所与の動物における循環を指し、動物に投与された数量の半分が循環から取り除かれるのに要する時間によって表される。
【0196】
「延長した循環半減期」という用語は、本明細書で使用される場合、本発明に従って提供されるＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて１つまたは複数の改変を含む抗体は、同じ改変を含有しない同じ抗体、すなわち、ＷＴ抗体、例えばＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて、血清または血漿中での持続性がより大きく、かつ／または測定される血清または血漿中最大濃度が半減するまでの期間がより長い。
【0197】
「増大した熱安定性」という用語は、ある温度でのインキュベーション期間後に、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて、本明細書に開示される抗体または機能性断片の生物活性、例えば、ＡＤＣＣ、抗原への結合、ＦｃαＲへの結合がより大きく保持されることを意味する。増大した熱安定性は、例えば、１つまたは複数の（例えば、いくつかの）温度の条件下で評価することができる。例えば、１つまたは複数の（例えば、いくつかの）温度は、バリアントが残留する活性を保持するような、３～９の範囲内、例えば、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、または９．０（または中間）の１つまたは複数の（例えば、いくつかの）ｐＨで、適切なインキュベーション期間（時間）、例えば、１分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、４５分、または６０分（または中間、例えば、２３分、３７分など）にわたる、４５℃～９５℃の範囲内、例えば、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、または９５℃（または中間、例えば、６２℃、６８℃、７２℃など）の任意の温度であり得る。しかし、より長いインキュベーション期間を使用することもできる。「増大した熱安定性」という用語は、「改善された熱安定性」と互換的に使用され得る。
【0198】
本明細書で使用される場合、「天然に存在する」という用語は、ＩｇＡ重鎖定常領域内のグリコシル化部位またはアミノ酸残基に関する場合、グリコシル化部位またはアミノ酸残基を天然にＩｇＡ重鎖定常領域内に見いだすことができる、例えば、天然の供給源から単離することができ、実験室においてヒトによって（ウイルスを含む）意図的に改変されていないという事実を指す。生物体内に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する配列である。
【0199】
「疾患」、「障害」、または「状態」という用語は、本明細書では互換的に使用され、体もしくは器官のいくつかの状態のあらゆる変更、機能の遂行の妨害もしくは撹乱および／または患っている人または人と接触している人に不快感、機能障害、窮迫、もしくはさらには死亡などの症状が引き起こされることを指す。疾患または障害は、不調、慢性的に病的な状態にあること、慢性的な軽症の病気、慢性病、障害、病的状態、疾病、愁訴、または見せかけにも関連し得る。
【0200】
「それを必要とする」という用語は、治療的または予防的処置に関しては、疾患を有する、疾患を有すると診断されている、または、例えば疾患が発生するリスクがある者について疾患を防止する必要があることを意味する。したがって、それを必要とする対象は、疾患を処置または防止することを必要とする対象であり得る。
【0201】
本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、化合物（例えば、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片）を対象内に所望の部位への薬剤の少なくとも部分的な送達をもたらす方法または経路によって入れることを指す。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物は、これだけに限定されないが、静脈内、動脈内、組織実質への直接の注射または注入などを含めた、対象における有効な処置をもたらす任意の妥当な経路によって投与することができる。必要または所望であれば、投与は、例えば、脳室内（「ｉｃｖ」）投与、鼻腔内投与、頭蓋内投与、腔内投与、小脳内投与、またはくも膜下腔内投与を含み得る。
【0202】
「がん」という用語は、異所性細胞の急速かつ制御されない成長を特徴とする疾患を指す。がん細胞は、局所的にまたは血流およびリンパ系を通じて体の他の部分に拡散し得る。
【0203】
「抗腫瘍効果」という用語は、これだけに限定されないが、例えば、腫瘍体積の縮小、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の延長、腫瘍細胞の増殖の低減、腫瘍細胞生存の低減、またはがん性の状態に付随する種々の生理的症状の好転を含めた、種々の手段によって証明することができる生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞および抗体の第１の場所における腫瘍の発生を防止する能力によって証明することもできる。
【0204】
本明細書で使用される場合、「対象」、「患者」、「個体」および同様の用語は互換的に使用され、脊椎動物、哺乳動物、霊長類、またはヒトを指す。哺乳動物としては、限定することなく、ヒト、霊長類、齧歯類、野生化動物、農場動物、競技動物、および愛玩動物を含めた野生動物または飼育動物が挙げられる。霊長類としては、例えば、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、およびマカク、例えば、アカゲザルが挙げられる。齧歯類としては、例えば、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギおよびハムスターが挙げられる。飼育動物および狩猟動物としては、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、スイギュウ、ネコ科の動物種、例えば、飼育ネコ、およびイヌ科の動物種、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、トリ種、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、および魚、例えば、マス、ナマズおよびサケが挙げられる。「個体」、「患者」および「対象」という用語は、本明細書では互換的に使用される。対象は雄であっても雌であってもよい。
【0205】
一部の実施形態では、対象は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物を、制御されない細胞成長（例えばがん）の状態または障害の動物モデルを表す対象として有利に使用することができる。非限定的な例として、マウス腫瘍モデルが挙げられる。さらに、本明細書に記載の組成物および方法を、飼育動物および／または愛玩動物を処置するために使用することができる。対象は、がんに罹患していることが以前に診断または同定された対象であり得る。対象は、診断され、現在処置を受けている、または処置、モニタリング、既存の治療的処置の調整もしくは改変を求めている、または所与の障害（例えばがん）が発生するリスクがある対象であり得る。
【0206】
「細胞傷害性薬剤」は、細胞に対する細胞傷害効果および／または細胞増殖抑制効果を有する薬剤を指す。「細胞傷害効果」は、標的細胞の枯渇、消失および／または死滅を指す。「細胞増殖抑制効果」は、細胞増殖の阻害を指す。
【0207】
本明細書で使用される場合、「タンパク質」、「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は、互換的に使用され、隣接する残基のアルファ－アミノ基とカルボキシ基の間のペプチド結合によって互いに接続した一連のアミノ酸残基を示す。「タンパク質」、「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は、そのサイズまたは機能にかかわらず、修飾されたアミノ酸（例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化など）およびアミノ酸類似体を含めたアミノ酸のポリマーを指す。「タンパク質」および「ポリペプチド」は、多くの場合、比較的大きなポリペプチドに関して使用され、一方、「ペプチド」という用語は、多くの場合、小さなポリペプチドに関して使用されるが、当技術分野におけるこれらの用語の使用は重複している。「タンパク質」、「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書では、遺伝子産物およびその断片について言及する場合、互換的に使用される。これらの用語は、例えば、ネイティブなタンパク質および人工タンパク質、タンパク質配列のタンパク質断片およびポリペプチド類似体（例えば、突然変異タンパク質、バリアント、および融合タンパク質など）、ならびに翻訳後に、または他の点では共有結合により、または非共有結合により修飾されたタンパク質を包含する。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、単量体またはポリマーであり得る。ポリペプチドは、任意の哺乳動物に由来する天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有し得る。そのようなネイティブな配列のポリペプチドは、天然から単離することもでき、組換えまたは合成手段によって作製することもできる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、「バリアント」である。「バリアント」は、ネイティブな配列のポリペプチドに対して、配列をアラインメントし、必要であれば最大のパーセント配列同一性を実現するためにギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさずに、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する生物活性のあるポリペプチドを意味する。そのようなバリアントとしては、例えば、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端において１つまたは複数のアミノ酸残基が付加された、または欠失したポリペプチドが挙げられる。一部の実施形態では、バリアントは、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施形態では、バリアントは、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施形態では、バリアントは、ネイティブな配列のポリペプチドに対して少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有する。ポリペプチドの「誘導体」は、例えば、別の化学的部分（例えば、ポリエチレングリコールまたはアルブミン、例えば、ヒト血清アルブミンなど）のコンジュゲーション、リン酸化、およびグリコシル化によって化学修飾されたポリペプチド（例えば、抗体）である。
【0208】
「増大した／延長した／上昇した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」、「増大させる／延長させる／上昇させる（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」、または「増強する（ｅｎｈａｎｃｅ）」という用語は全て本明細書では、一般に、統計学的に有意な量の増大を意味するように使用される。誤解を避けるために、「増大した／延長した／上昇した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」、「増大させる／延長させる／上昇させる（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」、または「増強する（ｅｎｈａｎｃｅ）」という用語は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の上昇、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％もしくは最大１００％および１００％を含めた上昇、または参照レベルと比較して１０～１００％の任意の上昇、または、少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍もしくは少なくとも約１０倍の上昇、または参照レベルと比較して２倍から１０倍またはそれよりも大きい倍数の間の任意の上昇を意味する。
【0209】
「融合タンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその断片のアミノ酸配列と異種ポリペプチド（すなわち、無関係のポリペプチド）のアミノ酸配列とを含むポリペプチドを指す。
【0210】
「減少させる／低減する／低下させる／縮小する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」、「減少させる／低減する／低下させる／縮小する（ｒｅｄｕｃｅ）」、「減少／低減／低下／縮小（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」、「減少させる／低減する／低下させる／縮小する（ｌｏｗｅｒ）」または「減少／低減／低下／縮小（ｌｏｗｅｒｉｎｇ）」または「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」という用語は全て、本明細書では、一般に、統計的に有意な量の減少／低減／低下／縮小を意味するように使用される。例えば、「減少させる／低減する／低下させる／縮小する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」、「減少させる／低減する／低下させる／縮小する（ｒｅｄｕｃｅ）」、「減少／低減／低下／縮小（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」、または「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」という用語は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の低下、例えば、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％もしくは最大１００％の低下および１００％を含めた低下（例えば、処置前の参照レベルと比較した処置後の腫瘍サイズ）、または参照レベルと比較して１０～１００％の任意の低下を意味する。マーカーまたは症状に関しては、これらの用語は、そのようなレベルの統計的に有意な低下を意味する。低下は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％またはそれよりも大きい低下であり得、所与の疾患を有さない個体に関して正常な範囲内に入る許容されるレベルまで下がることが好ましい。低減／低下／縮小するまたは阻害するとは、例えば、処置される障害の症状、転移または微小転移の存在またはサイズ、原発腫瘍のサイズ、休止状態の腫瘍の存在またはサイズを指し得る。
【0211】
「合成ポリヌクレオチド」、「合成遺伝子」または「合成ポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、対応するポリヌクレオチド配列もしくはその一部、またはアミノ酸配列もしくはその一部が、等価の天然に存在する配列と比較して新規のまたは改変された、設計されたまたは合成された配列に由来することを意味する。合成ポリヌクレオチド（抗体または抗原結合性断片）または合成遺伝子は、これだけに限定されないが、核酸またはアミノ酸配列の化学合成を含めた当技術分野で公知の方法によって調製することができる。合成遺伝子は、一般には、天然に存在する遺伝子とアミノ酸レベルまたはポリヌクレオチドレベル（または両方）で異なり、一般には、合成発現制御配列との関連で位置する。合成遺伝子ポリヌクレオチド配列は、必ずしも天然の遺伝子と比較してアミノ酸が異なるタンパク質をコードしない場合があり、例えば、異なるコドンが組み入れられているが同じアミノ酸をコードする合成ポリヌクレオチド配列も包含し得る（すなわち、ヌクレオチドの変化がアミノ酸レベルではサイレント突然変異である）。
ＩｇＡ抗体
ＩｇＡ抗体
【0212】
ＩｇＡは、２つのサブクラス（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を有し、単量体形態ならびに二量体形態かつ分泌型として産生され得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は単量体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、１つまたは複数のＩｇＡ１アミノ酸配列を含み得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、１つまたは複数のＩｇＡ２アミノ酸配列を含み得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、１つまたは複数のＩｇＡ１アミノ酸配列および１つまたは複数のＩｇＡ２アミノ酸配列を含み得る。
【0213】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アロタイプ：ＩｇＡ２ｍ（１）、ＩｇＡ２（ｍ）２、またはＩｇＡ２ｎのＩｇＡ２抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＡ２ｍ（１）抗体は、コーカサスＩｇＡ２ｍ（１）抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＡ２ｍ（２）抗体は、アフリカＩｇＡ２ｍ（２）抗体またはアジアＩｇＡ２ｍ（２）抗体である。
【0214】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＩｇＡアミノ酸を含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、少なくとも５０、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のＩｇＡアミノ酸を含む軽鎖定常領域を含む。
【0215】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ ＣＨ３領域、ＩｇＡ ＣＨ２、またはＩｇＡ ＣＨ１領域のうちの１つもしくは複数、またはこれらの任意の組合せを含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ ＣＨ１領域を含む軽鎖領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む軽鎖領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＧ ＣＨ３領域、ＩｇＧ ＣＨ２、またはＩｇＧ ＣＨ１領域またはその任意の組合せの１つまたは複数のアミノ酸を含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ ＣＨ３領域、ＩｇＡ ＣＨ２、およびＩｇＡ ＣＨ１領域、またはこれらの任意の組合せを含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ ＣＨ３領域、ＩｇＡ ＣＨ２、およびＩｇＧ ＣＨ１領域、またはこれらの任意の組合せを含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩｇＡ２ ＣＨ３領域、ＩｇＡ２ ＣＨ２、またはＩｇＡ２ ＣＨ１領域のうちの１つもしくは複数、またはこれらの任意の組合せを含む重鎖定常領域を含む。
【0216】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＧ軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＧ重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＧ軽鎖可変領域およびＩｇＧ重鎖可変領域を含む。
【0217】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ヒト化抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、キメラ抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ヒト抗体であり得る。
【0218】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、単一特異性抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、二重特異性抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、三重特異性抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、多重特異性抗体であり得る。
【0219】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、二重特異性抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、細胞表面で２つの抗原と同時会合する。一部の実施例では、ＩｇＡ抗体の２つの異なる抗原との結合は逐次的である。例えば、ＩｇＡ抗体の第１の抗原との結合が最初に生じ、それにより、第２の抗体アームによって探索される空間が制限される。結果として、第２の抗原の局所的な濃度が有意に上昇し、それにより、第２の抗体アームの結合が容易になり得る。
【0220】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、Ｆｃドメインの少なくとも一部分を含み得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ１ドメインを含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＨ１を含む軽鎖定常領域を含む。
【0221】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、多形核好中球（ＰＭＮ）媒介性腫瘍細胞溶解を誘導する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、カスパーゼ非依存性経路を介したプログラム細胞死（ＰＣＤ）を誘導する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、好中球によって媒介される抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。
【0222】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のために好中球を動員する能力が対応するＩｇＧ抗体と比較して優れている。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、より低いエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比を必要とし得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、他の型の抗体（例えば、ＩｇＧ）と比較して低い腫瘍オプソニン化抗体濃度を必要とし得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ抗体－好中球会合後に腫瘍細胞の好中球媒介性ファゴサイトーシスまたはトロゴサイトーシスを誘発し得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩｇＡ抗体－好中球会合後に腫瘍細胞のトロゴプトーシスを誘発し得る。この腫瘍細胞を死滅させる機構は、主に、ＩｇＡに関しては最もよく特徴付けられているＩｇＡ受容体であるＦｃ受容体（ＦｃαＲＩ；ＣＤ８９）と相互作用することによって媒介される。ＦｃαＲＩは、単球、マクロファージ、顆粒球、樹状細胞のサブセット、およびクッパー細胞上に発現され、単量体ＩｇＡアイソフォームおよび二量体ＩｇＡアイソフォームの両方に中間の親和性で結合する。ＩｇＡがＦｃαＲＩと結合することにより、ファゴサイトーシス、酸化バースト、サイトカイン放出、抗原提示、およびＡＤＣＣなどのエフェクター機能が媒介される。ヒトでは、２つのＩｇＡアイソタイプ、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２、ならびに３つのアロタイプ、ＩｇＡ２ｍ（１）、ＩｇＡ２ｍ（２）およびＩｇＡ２ｎが識別されている。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、多形核細胞（ＰＭＮ）媒介性ＡＤＣＣをＩｇＧ抗体よりも効率的に誘発する。
【0223】
一部の実施形態では、ＩｇＡは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、血小板、および／または赤血球には結合しない。例えば、一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は低免疫原性を有し得る。
【0224】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、治療用抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、組換え抗体であり得る。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、細胞株で作られる。一部の実施形態では、細胞株はＣＨＯである。一部の実施形態では、細胞株はＳＰ２０である。一部の実施形態では、細胞株はＨＥＫ２３９細胞株である。一部の実施形態では、ＨＥＫ２９３細胞株はＨＥＫ２９３Ｆである。
【0225】
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその機能性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ抗体由来の可変重鎖ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ抗体由来の可変軽鎖ドメインを含む。可変ドメインは、例えば、ジヌツキシマブ、オビヌツズマブ、Ｕｎｉｔｕｘｉｎ、ＴＡ９９、２．３Ｄ１１、Ｃ４７Ａ８－ＣＱ、ＵＭＡＢ１０、およびトラスツズマブおよびリツキサン（リツキシマブ）に由来するものであり得、本発明の範囲に包含される治療活性を有する他の抗体としては、これだけに限定されないが、アバスチン、ハーセプチン、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴール、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトックス、アニフロルマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃＢＲ９６－ドキソルビシン免疫コンジュゲート、ＣＣ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトクス、シクツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、コンシズマブ、ＣＲ６２６１、クレネズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デムシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エルデルマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴル、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファーレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、イミシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、ラムパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リジェリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マルジェツキシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マブリリムマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスードトクス、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オヅリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピジリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレヅマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セヴィルマブ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、ティガツズマブ、チルドラキズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バンチクツマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ヴォロシキシマブ、ボルセツズマブマホドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ｈｕ１４．１８Ｋ３２２Ａ、ゾリモマブアリトクス、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＣＤ２０）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、ＣＤ５２）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、ＣＤ２０）トシツモマブ－Ｉ－１３１（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）：ＣＤ２０）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）、ＥＧＦＲ）、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）、ＣＤ２０）、イピリムマブ（Ｙｐｅｒｖｏｙ（登録商標）、ＣＴＬＡ－４）、ブレンツキシマブ（ｂｒｅｎｔｉｕｘｉｍａｂ）ベドチン（Ａｄｅｃｔｒｉｓ（登録商標）、ＣＤ３０）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｃｔａ（登録商標）、ＨＥＲ２）、アドトラスツズマブ、エムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、ＨＥＲ２）、オビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ（登録商標）、ＣＤ２０）、ニボルマブおよびペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１ｓ）が挙げられる。
【0226】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４、７、８１～８６のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体は、ＷＴ抗体と同じ抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号４、７、８１～８６のいずれか１つのアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体は、配列番号４、７、８１～８６のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の１つまたは複数の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３３～４０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４１～４８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号４９～５６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0227】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５、８、９５～１００のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、ＷＴ抗体と同じ抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号５、８、９５～１００のいずれか１つのアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５、８、９５～１００のいずれか１つのＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５７～６４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６５～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７３～８０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0228】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号４、７、８１～８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号５、８、９５～１００のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、必要に応じてこれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【0229】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表９中の任意のＶＨから選択されるＶＨを含む。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表９中の任意のＶＬから選択されるＶＬを含む。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表９中の任意のＶＨから選択されるＶＨおよび表９中の任意のＶＬから選択されるＶＬを含む。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表９中の任意のＶＨから選択されるＶＨおよび表９中の任意のＶＬから選択されるＶＬを含み、選択されるＶＨとＶＬは、表９に従って対になる。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表５中の任意のＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＨＣ－ＣＤＲ３および表６中の任意のＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＬＣ－ＣＤＲ３を含み、選択されるＨＣ－ＣＤＲ３とＬＣ－ＣＤＲ３は、表９に従って対になる。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表５中の任意のＣＤＲ－Ｈ２から選択されるＨＣ－ＣＤＲ２および表６中の任意のＣＤＲ－Ｌ２から選択されるＬＣ－ＣＤＲ２を含み、選択されるＨＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ２は、表９に従って対になる。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表５中の任意のＨＣ－ＣＤＲ１から選択されるＨＣ－ＣＤＲ１および表６中の任意のＬＣ－ＣＤＲ１から選択されるＬＣ－ＣＤＲ１を含み、選択されるＨＣ－ＣＤＲ１とＬＣ－ＣＤＲ１は、表９に従って対になる。一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、表５中の任意のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３ならびに表６中の任意のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、選択されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表９に従って対になる。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表５中の任意のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３のいずれか１つ、ならびに配列番号１６～２１から選択される任意のＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表６中の任意のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３のいずれか１つ、ならびに配列番号１６～２１から選択される任意のＩｇＡ重鎖定常領域を含む。
【0230】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表５中の任意のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３のいずれか１つ、ならびに表６中の任意のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３のいずれか１つ、ならびに配列番号１６～２１から選択される任意のＩｇＡ重鎖定常領域を含み、選択されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、選択されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３および選択されるＩｇＡ重鎖定常領域は、表９に従って対になる。
ＩｇＡ抗体の改変
ＩｇＡ抗体の改変
【0231】
１つまたは複数のアミノ酸置換および／または１つまたは複数のアミノ酸欠失を含むＩｇＡ抗体が本明細書に記載されている。
【0232】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＡ抗体のアミノ酸の番号付けは、ＣドメインおよびＣ様ドメインについてのＩＭＧＴ独自の番号付けに従って示されている（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる”ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｃ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ．” Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００５； ２９ （３）： １８５－２０３に開示されている通り）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるアミノ酸改変は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含むＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域（例えば、ＷＴ ＩｇＡ２重鎖定常領域）内の選択された位置のアミノ酸残基と比べたものである。その全体が本明細書に組み込まれるＵＳ６２／８２４，８６４にも、ＩＭＧＴ番号付けスキームに従って番号を付された、改変されたＩｇＡ重鎖定常領域を含む抗体および抗体構築物が含まれることに留意する。その中でいくつかのアミノ酸は不注意で違う表示がなされており、ＵＳ６２／８２４，８６４に記載されている特定のアミノ酸位は、以下の本明細書に提示される特定のアミノ酸位に対応する。ＵＳ６２／８２４，８６４において言及されているＣ９２位、Ｎ１２０位、Ｉ１２１位、およびＴ１２２位は、ＩＭＧＴ番号付けスキーム（位置の番号付けのみの参照に関しては表１１に示されているＩＭＧＴ番号付け）の通り正確に表示されている本明細書に記載の抗体のアミノ酸残基Ｃ８６、Ｎ１１４、Ｉ１１５、およびＴ１１６に対応する。ＵＳ６２／８２４，８６４に開示されているこれらの抗体の参照野生型重鎖定常領域配列と本出願の参照野生型重鎖定常領域配列は同じである、すなわち、図１に示されている配列番号１である。そのように、ＵＳ６２／８２４，８６４における、残基Ｃ８６、Ｎ１１４、Ｉ１１５、およびＴ１１６のＩＭＧＴ命名スキームでのＣ９２、Ｎ１２０、Ｉ１２１、およびＴ１２２という不注意の違う表示は当業者には明らかであろう。
【0233】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体は、定常領域内の少なくとも４つのグリコシル化部位の欠失を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体は、抗体の定常領域内の少なくとも３つのＮ結合グリコシル化部位の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体の定常領域内の少なくとも３つのＮ結合グリコシル化部位および抗体の定常領域内の少なくとも１つのＯ結合グリコシル化部位の欠失を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体または機能性断片は、ＩｇＡ重鎖定常領域内に本明細書（例えば、表２）に開示される１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体または機能性断片は、本明細書（例えば、表２）に開示される１つまたは複数の改変をＩｇＡ１重鎖定常領域内に含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体または本明細書に開示される機能性断片は、本明細書（例えば、表２）に開示される１つまたは複数の改変をＩｇＡ２重鎖定常領域内に含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の改変は、ＩｇＡ１重鎖定常領域のＣＨ１領域、ＣＨ２領域および／またはＣＨ３領域内のアミノ酸残基におけるものである。一部の実施形態では、
【0234】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、欠失した尾部片を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の改変は、ＩｇＡ２重鎖定常領域のＣＨ１領域、ＣＨ２領域および／またはＣＨ３領域内のアミノ酸残基におけるものである。一部の実施形態では、ＩｇＡ ＣＨ１領域は、配列番号１０９に記載されているアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ ＣＨ２領域は、配列番号１１０に記載されているアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ ＣＨ２領域は、配列番号１１１に記載されているアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片は、３～２０個、３～１９個、３～１８個、３～１７個、３～１６個、３～１５個、３～１４個、３～１３個、３～１２個、３～１１個、３～１０個、３～９個、３～８個、３～７個、３～６個、３～５個、３～４個のＣ末端アミノ酸の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、３～２０個、３～１９個、３～１８個、３～１７個、３～１６個、３～１５個、３～１４個、３～１３個、３～１２個、３～１１個、３～１０個、３～９個、３～８個、３～７個、３～６個、３～５個、３～４個のＣ末端アミノ酸の欠失を含む。一部の実施形態では、Ｃ末端アミノ酸は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＩｇＡ２抗体のアミノ酸１３１～１４８からのものである。
【0235】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３１～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４７～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４６～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４５～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４４～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４３～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４２～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４１～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１４０～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３９～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３８～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３７～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３６～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３５～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３４～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３３～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３２～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸１３１～１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む。
【0236】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、Ｃ末端アスパラギン（Ｎ）アミノ酸の突然変異を含む。一部の実施形態では、突然変異は、非保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、突然変異により、ＩｇＡのＣ末端アスパラギン（Ｎ）アミノ酸のグリコシル化部位が欠失する。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１３５の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１３５の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１３５Ｑ突然変異を含む。
【0237】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片は、ＩｇＡ重鎖定常領域内の少なくとも２つの天然に存在するグリコシル化部位における改変を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片は、ＩｇＡ重鎖定常領域内の少なくとも３つの天然に存在するグリコシル化部位における改変を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片は、少なくとも４つの天然に存在するグリコシル化部位における改変を含む。一部の実施形態では、グリコシル化部位は、Ｎ結合グリコシル化部位を含む。一部の実施形態では、グリコシル化部位は、天然に存在するアスパラギン残基を含む。一部の実施形態では、グリコシル化部位は、ＣＨ２領域内、ＣＨ３領域内、および／またはＣＨ１領域内にある。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、Ｎ１３５、またはこれらの組合せにおける改変を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、Ｎ１５．２Ｔ、Ｌ１５．３Ｉ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、Ｎ１３５Ｑ、またはこれらの組合せであるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、ＩｇＡ２重鎖定常領域内の４つ全ての天然に存在するグリコシル化部位における改変を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるグリコシル化されていない抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、残基；Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、およびＮ１３５における改変を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるグリコシル化されていない抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、残基；Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、およびＮ１３５における改変を含む。
【0238】
一部の実施形態では、本明細書で提供されるグリコシル化されていない抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、残基；Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６における改変、およびＣ末端尾部片残基Ｐ１３１～Ｙ１４８の欠失を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるグリコシル化されていない抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、残基；Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、およびＰ１３１～Ｙ１４８における改変を含む。
【0239】
一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、残基Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、Ｌ１５．３、Ｔ１６、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、およびＮ１３５における改変を含む抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、残基Ｎ４５．２、Ｎ１５．２、Ｎ１１４、Ｉ１１５、Ｔ１１６、およびＮ１３５における改変を含む抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｑ、Ｌ１５．３Ｉ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｔ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＩｇＡ重鎖定常領域内にＮ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換の組合せを含む抗体は、グリコシル化されていない抗体である。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｇ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓであるアミノ酸置換の組合せ、およびＣ末端尾部片の欠失を含む。
【0240】
一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＩｇＡ重鎖定常領域にＮ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｑ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換の組合せを含む抗体は、グリコシル化されていない抗体である。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｑ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓであるアミノ酸置換の組合せ、およびＣ末端尾部片の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＩｇＡ重鎖定常領域内にＮ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｔ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換の組合せを含む抗体は、グリコシル化されていない抗体である。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｔ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓであるアミノ酸置換の組合せ、およびＣ末端尾部片の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＩｇＡ重鎖定常領域内にＮ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｔ、Ｌ１５．３Ｉ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、およびＮ１３５Ｑであるアミノ酸置換の組合せを含む抗体は、グリコシル化されていない抗体である。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、Ｎ４５．２Ｇ、Ｎ４５．２Ａ、Ｎ１５．２Ｔ、Ｌ１５．３Ｉ、Ｔ１６Ｓ、Ｔ１６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓであるアミノ酸置換の組合せ、およびＣ末端尾部片の欠失を含む。
【0241】
一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、少なくとも１つのグリコシル化部位（例えば、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＷＴ残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１５．２．およびＮ１３５）を含む対応する抗体または対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて延長した循環半減期を示す。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、少なくとも１つのグリコシル化部位（例えば、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＷＴ残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１５．２．およびＮ１３５）を含む対応する抗体またはＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて減少した凝集を示す。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、少なくとも１つのグリコシル化部位（例えば、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＷＴ残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１５．２．およびＮ１３５）を含む対応する抗体または対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて減少した血清タンパク質との凝集を示す。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、少なくとも１つのグリコシル化部位（例えば、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＷＴ残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１５．２．およびＮ１３５）を含む対応する抗体または対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて減少した凝集を示す。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、少なくとも１つのグリコシル化部位（例えば、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、ＷＴ残基Ｎ４５．２、Ｎ１１４、Ｎ１５．２．およびＮ１３５）を含む対応する抗体または対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて増大した熱安定性を示す。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、Ｆｃ受容体に対して、対応するＷＴ ＩｇＡと比べて増大した結合親和性での結合を示す。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、標的細胞のＡＤＣＣを誘導する。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は標的抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、グリコシル化されていない抗体は、標的細胞に特異的に結合する。
【0242】
一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｎ４５．２アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0243】
一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｐ１２４の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｐ１２４の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｐ１２４Ｒを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｐ１２４アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｐ１２４アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して増大した安定性を有する。
【0244】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ８６（上記の通り、その全体が本明細書に組み込まれるＵＳ６２／８２４，８６４では不注意でＣ９２と称されている）の突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ８６の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ８６Ｓを含む。一部の実施形態では、抗体は、Ｃ８６アミノ酸に突然変異を有さない抗体と比較して減少した凝集を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｃ８６アミノ酸に突然変異を有さない抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｃ８６アミノ酸に突然変異を有さない抗体と比較して減少したｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおける凝集を有する。
【0245】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って、Ｃ８６の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ８６の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ８６Ｓを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｃ８６アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して減少した凝集を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｃ８６アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｃ８６アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して減少したｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおける凝集を有する。
【0246】
一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１１４（上記の通り、その全体が本明細書に組み込まれるＵＳ６２／８２４，８６４では不注意でＮ１２０と称されている）の突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１１４の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１１４Ｔを含む。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ１１４アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0247】
一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｉ１１５（上記の通り、その全体が本明細書に組み込まれるＵＳ６２／８２４，８６４では不注意でＩ１２１と称されている）の突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｉ１１５の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｉ１１５Ｌを含む。一部の実施形態では、抗体は、Ｉ１１５アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0248】
一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１１６（上記の通り、その全体が本明細書に組み込まれるＵＳ６２／８２４，８６４では不注意でＴ１２２と称されている）の突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１１６の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１１６Ｓを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｔ１１６アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0249】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１１４の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１１４の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１４Ｔを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｎ１１４アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0250】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って、Ｉ１１５の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｉ１１５の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｉ１１５Ｌを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｉ１１５アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0251】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１１６の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１１６の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１１６Ｓを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｔ１１６アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0252】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って、Ｎ１５．２の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１５．２の非保存的突然変異を含む 。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ１５．２Ｇ、Ｎ１５．２Ｑ、またはＮ１５．２Ｔを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｎ１５．２アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0253】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って、Ｌ１５．３の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｌ１５．３の非保存的突然変異を含む 。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｌ１５．３Ｉを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｌ１５．３アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0254】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って、Ｔ１６の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１６の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｔ１６Ｓを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｔ１６Ｓアミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。
【0255】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ１４７の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｃ１４７の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸Ｃ１４７の欠失を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、Ｃ１４７アミノ酸に突然変異を有さないＩｇＡ２抗体と比較して減少した凝集を有する。
【0256】
一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｙ１４８の突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｙ１４８の非保存的突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、アミノ酸Ｙ１４８の欠失を含む。
【0257】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインはＩｇＡ定常領域の軽鎖または重鎖と融合している。一部の実施形態では、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインは、ＩｇＡ定常領域の重鎖と融合している。一部の実施形態では、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインは、ＩｇＡ定常領域の重鎖のＣＨ３領域のＣ末端領域と融合している。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインを含まないＩｇＡ２抗体と比較して延長した循環半減期を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインを含み、対応するＩｇＧ抗体の循環半減期の１％以内、５％以内、または１０％以内の循環半減期を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ２抗体は、１つまたは複数のアルブミン結合性ドメインを含み、対応するＩｇＧ抗体の循環半減期よりも長い循環半減期を有する。
【0258】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、Ｌｏｈｓｅ Ｓ． ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１５； ７６ （２）： ４０３－１７； Ｍｅｙｅｒ Ｓ． ｅｔ ａｌ． ｍＡｂｓ． ２０１６； ８ （１）： ８７－９８；またはＬｅｕｓｅｎ Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． ２０１５； ６８： ３５－３９に記載されている１つまたは複数の突然変異を含む。
【0259】
一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異または欠失の結果、ＩｇＡ抗体の循環半減期の延長または短縮がもたらされる。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異または欠失の結果、ＩｇＡ抗体の循環半減期の延長がもたらされる。例えば、１つまたは複数の突然変異により、ヒトにおけるＩｇＡ抗体の血清中半減期が２１日またはそれよりも長くまで延長し得る。さらに、１つまたは複数の突然変異により、マウスにおけるＩｇＡ抗体の血清中半減期が９日またはそれよりも長くまで延長し得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異により、ＩｇＡ抗体の血清中半減期が免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子の血清中半減期と同等のレベルまで延長し得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異または欠失の結果、ＩｇＡ抗体の循環半減期の短縮がもたらされる。
【0260】
一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異により、ＩｇＡ抗体の血清中半減期が少なくとも約７日～約３０日またはそれよりも長く延長し得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異により、ＩｇＡ抗体の血清中半減期が少なくとも約７日延長し得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異により、ＩｇＡ抗体の血清中半減期が最大で約３０日延長し得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異により、ＩｇＡ抗体の血清中半減期が約７日～約８日、約７日～約９日、約７日～約１０日、約７日～約１５日、約７日～約２０日、約７日～約２５日、約７日～約３０日、約８日～約９日、約８日～約１０日、約８日～約１５日、約８日～約２０日、約８日～約２５日、約８日～約３０日、約９日～約１０日、約９日～約１５日、約９日～約２０日、約９日～約２５日、約９日～約３０日、約１０日～約１５日、約１０日～約２０日、約１０日～約２５日、約１０日～約３０日、約１５日～約２０日、約１５日～約２５日、約１５日～約３０日、約２０日～約２５日、約２０日～約３０日、または約２５日～約３０日延長し得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異により、ＩｇＡ抗体の血清中半減期が約７日、約８日、約９日、約１０日、約１５日、約２０日、約２５日、または約３０日延長し得る。したがって、一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して長い循環半減期を示す。一部の実施形態では、抗体は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて少なくとも約２％、５％、１０％、１２％、１５％、２０％、２５％、５０％、６５％、７０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９９％、１００％、１５０％、および２００％長い循環半減期を示す。
【0261】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、増大した安定性を示す。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異および／または１つまたは複数の欠失の結果、１つまたは複数の突然変異および／または１つまたは複数の欠失を含まない対応するＩｇＡ抗体と比較して、ＩｇＡ抗体の安定性の増大がもたらされる。
【0262】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、減少した凝集を示す。抗体の凝集は、物理的不安定性のより一般的な顕在化である。タンパク質凝集体は、エピトープの多重度および／またはコンフォメーションの変化が原因で一般に低下した活性を有し、より重要なことに、より大きな免疫原性の潜在性を有する。免疫グロブリン凝集体は、重篤な腎不全ならびに頭痛、発熱、および悪寒などのアナフィラキシー様反応を引き起こすことが公知である。したがって、抗体治療薬における凝集を減少させることが有利である。さらに、市販の静脈注射用免疫グロブリン製品における凝集体レベルはＷｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）規格に基づいて５％未満に制限されている。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異の結果、凝集の減少がもたらされる。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異および／または１つまたは複数の欠失の結果、１つまたは複数の突然変異および／または１つまたは複数の欠失を含まない対応するＩｇＡ抗体と比較してＩｇＡ抗体の凝集の減少がもたらされる。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した凝集を示す。一部の実施形態では、抗体は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて少なくとも約２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、および少なくとも２００％減少した凝集を示す。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少した血清タンパク質との凝集を示す。一部の実施形態では、抗体は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、および少なくとも２００％減少した凝集を示す。
【0263】
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＩｇＡ抗体は、少なくとも約０．１％から最大で約５％までにわたる凝集体レベルを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＩｇＡ抗体は、少なくとも約０．１％からにわたる凝集体レベルを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＩｇＡ抗体は、最大で約５％からにわたる凝集体レベルを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＩｇＡ抗体は、約０．１％～約０．５％、約０．１％～約１％、約０．１％～約２％、約０．１％～約３％、約０．１％～約４％、約０．１％～約５％、約０．５％～約１％、約０．５％～約２％、約０．５％～約３％、約０．５％～約４％、約０．５％～約５％、約１％～約２％、約１％～約３％、約１％～約４％、約１％～約５％、約２％～約３％、約２％～約４％、約２％～約５％、約３％～約４％、約３％～約５％、または約４％～約５％にわたる凝集体レベルを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＩｇＡ抗体は、約０．１％、約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、または約５％からにわたる凝集体レベルを有する。
【0264】
本明細書に開示される治療用抗体は、１つまたは複数の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。そのような合成アミノ酸は当技術分野で公知であり、それらとして、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－およびトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リシン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リシン、６－ヒドロキシリシン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、およびα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。
【0265】
アミノ酸を置換するまたは欠失させる方法は当技術分野で公知である。例えば、アミノ酸の置換または欠失は、部位特異的突然変異誘発によって行うことができる（例えば、Ｚｏｌｌｅｒ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １０： ６４８７ （１９８２））。突然変異誘発は、改変される抗体の定常ドメインの配列内に１つまたは複数の改変を有するオリゴヌクレオチドを合成することによって実施することができる。本開示の抗体（例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域内に１つまたは複数の改変を含む）は、例えば、部位特異的突然変異誘発、合成遺伝子構築、半合成遺伝子構築、ランダム突然変異誘発、シャッフリングなどの、当技術分野で公知の任意の突然変異誘発手順を使用して調製することができる。部位特異的突然変異誘発により、所望の突然変異のＤＮＡ配列をコードする特異的なオリゴヌクレオチド配列、ならびに横断される欠失接合部の両側に安定な２重鎖が形成されるのに十分なサイズおよび配列の複雑さのプライマー配列をもたらすための十分な数の隣接オリゴヌクレオチドを使用することによって突然変異体を生じさせることが可能になる。一般には、変更される配列の接合部の両側に約１０～約２５個またはそれよりも多くの残基を有する約１７～約７５ヌクレオチドの長さまたはそれよりも長いプライマーが好ましい。１つまたは複数の位置に種々の異なる突然変異を導入するいくつかのそのようなプライマーを使用して、突然変異体のライブラリーを生成することができる。
【0266】
部位特異的突然変異誘発の技法は当技術分野において周知である（例えば、Ｋｕｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，， １５４： ３６７－８２， １９８７を参照されたい）。一般に、部位特異的突然変異誘発は、まず所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列を配列内に含む一本鎖ベクターを得ることまたは二本鎖ベクターの２本の鎖を融解させて離すことによって実施される。所望の突然変異した配列を有するオリゴヌクレオチドプライマーは、一般に合成によって調製される。次いで、このプライマーを一本鎖ベクターとアニーリングし、突然変異を有する鎖を完全に合成するために、Ｔ７ ＤＮＡポリメラーゼなどのＤＮＡ重合酵素に供する。したがって、一方の鎖が元の突然変異していない配列をコードし、第２の鎖が所望の突然変異を有するヘテロ二本鎖が形成される。次いで、このヘテロ二本鎖ベクターを使用してＥ．ｃｏｌｉ細胞などの妥当な細胞を形質転換またはトランスフェクトし、突然変異した配列配置を有する組換えベクターを含むクローンを選択する。理解される通り、当該技法では、一般には、一本鎖形態および二本鎖形態の両方で存在するファージベクターを使用する。部位特異的突然変異誘発に有用な典型的なベクターとしては、Ｍ１３ファージなどのベクターが挙げられる。これらのファージは容易に商業的に入手可能であり、それらの使用は当業者には一般的に周知である。二本鎖プラスミドも部位特異的突然変異誘発において常套的に使用され、それにより、目的の遺伝子をプラスミドからファージに移行するステップが排除される。部位特異的突然変異誘発はまた、Ｋｉｍ Ｊｉｎ－Ｋｙｏｏ ｅｔ ａｌ．， （１９９４） Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４： ５４２－５４８）に記載されている通り、マウスｌｇＧ１ヒンジ－Ｆｃ断片の血漿クリアランスに影響を及ぼすアミノ酸残基を同定するためにも使用されている。
【0267】
あるいは、Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼなどの市販の熱安定性酵素を用いたＰＣＲの使用を使用して、変異原性オリゴヌクレオチドプライマーを増幅したＤＮＡ断片に組み入れることができ、次いでそれを妥当なクローニングまたは発現ベクターにクローニングすることができる。ＰＣＲ媒介性突然変異誘発の手順に関しては、例えば、Ｔｏｍｉｃ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １８（６）： １６５６， １９８７、およびＵｐｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， １８ （１）： ２９－３０， ３２， １９９５を参照されたい。熱安定性ポリメラーゼに加えて熱安定性リガーゼを使用するＰＣＲを使用して、リン酸化された変異原性オリゴヌクレオチドを増幅したＤＮＡ断片に組み入れることもでき、次いでそれを妥当なクローニングまたは発現ベクターにクローニングすることができる（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１６ （３）： ４１０－２， １９９４を参照されたい）。
【0268】
抗体のＦｃ領域またはそのＦｃＲ結合性ドメインの配列バリアントを作製する、当業者に公知の他の方法を使用することができる。例えば、抗体の定常ドメインまたはその断片のアミノ酸配列をコードする組換えベクターをヒドロキシルアミンなどの突然変異誘発物質で処理して、配列バリアントを得ることができる。望ましい特性、例えばＡＤＣＣの増大、凝集の減少、ＦｃＲに対する親和性の増大および／またはｉｎ ｖｉｖｏ半減期の延長をもたらす突然変異体を、後に記載されているものなどの常套的なアッセイを使用してスクリーニングすることができる。
【0269】
合成遺伝子構築には、目的のポリペプチドをコードするように設計されたポリヌクレオチド分子のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける合成が必要である。遺伝子合成は、Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２００４， Ｎａｔｕｒｅ ４３２： １０５０－１０５４）によって記載されているマルチプレックスのマイクロチップに基づく技術、およびオリゴヌクレオチドを合成し、光プログラム可能なマイクロ流体チップ上にアセンブルする同様の技術などのいくつかの技法を利用して実施することができる。単一のまたは多数のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を、突然変異誘発、組換え、および／またはシャッフリングの公知の方法を使用して行い、その後、Ｒｅｉｄｈａａｒ－Ｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１： ５３－５７；Ｂｏｗｉｅ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ，１９８９， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６： ２１５２－２１５６；ＷＯ９５／１７４１３；またはＷＯ９５／２２６２５に開示されているものなどの関連するスクリーニング手順を使用して試験することができる。使用することができる他の方法としては、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ（例えば、Ｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０： １０８３２－１０８３７；米国特許第５，２２３，４０９号；ＷＯ９２／０６２０４）および領域特異的突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｇｅｎｅ ４６： １４５； Ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９８８， ＤＮＡ ７： １２７）が挙げられる。
【0270】
突然変異誘発／シャッフリング法をハイスループットの自動化されたスクリーニング方法と組み合わせて、宿主細胞によって発現されるクローニングされた突然変異誘発されたポリペプチドの活性を検出することができる（Ｎｅｓｓ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １７： ８９３－８９６）。活性なポリペプチドをコードする突然変異誘発されたＤＮＡ分子を宿主細胞から回収し、当技術分野における標準の方法を使用して迅速に配列決定することができる。これらの方法により、ポリペプチド内の個々のアミノ酸残基の重要性を迅速に決定することが可能になる。
【0271】
半合成遺伝子構築は、合成遺伝子構築、および／または部位特異的突然変異誘発、および／またはランダム突然変異誘発、および／またはシャッフリングの態様を組み合わせることによって実現される。半合成構築は、合成されるポリヌクレオチド断片をＰＣＲ技法と組み合わせて利用するプロセスによって典型的に表される。したがって、遺伝子の規定された領域を新規に合成することができ、一方、他の領域を部位特異的変異原性プライマーを使用して増幅することができ、一方、さらに他の領域をエラープローンＰＣＲまたは非エラープローンＰＣＲ増幅に供することができる。次いで、ポリヌクレオチド部分配列をシャッフルすることができる。
他の共有結合性の改変
他の共有結合性の改変
【0272】
抗体の共有結合性の改変も本発明の範囲内に包含される。抗体の共有結合性の改変は、該当する場合、抗体の化学合成によって、または酵素的もしくは化学的切断によって行うことができる。抗体の共有結合性の改変の他の型は、抗体の標的化アミノ酸残基を選択された側鎖またはＮ末端残基またはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることによって分子に導入される。
【0273】
最も一般的に、システイニル残基をクロロ酢酸またはクロロアセトアミドなどのハロ酢酸（および対応するアミン）と反応させて、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を生じさせる。システイニル残基はまた、ブロモトリフルオロアセトン、アルファ－ブロモ－（５イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルリン酸、Ｎ－アルキルマレイミド、３－ニトロ－２－ピリジルジスルフィド、メチル２－ピリジルジスルフィド、ｐ－クロロメルクリベンゾエート、２－クロロメルクリ－４－ニトロフェノール、またはクロロ－７－ニトロベンゾ－２－オキサ－１，３－ジアゾールとの反応によっても誘導体化される。
【0274】
ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５～７．０のジエチルピロカルボネートとの反応によって誘導体化され、これは、この薬剤がヒスチジル側鎖に比較的特異的であるからである。パラ－ブロモフェナシルブロミドも有用である；反応を０．１Ｍのカコジル酸ナトリウム下、ｐＨ６．０で実施することが好ましい。リジニルおよびアミノ末端残基は、コハク酸または他のカルボン酸の酸無水物と反応する。これらの薬剤を用いた誘導体化には、リジニル残基の電荷を逆転させる効果がある。アルファアミノ含有残基を誘導体化するための他の適切な試薬としては、メチルピコリンイミデートなどのイミドエステル、ピリドキサールリン酸、ピリドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、メチルイソ尿素、２，４－ペンタンジオン、およびグリオキシル酸とのトランスアミナーゼにより触媒される反応が挙げられる。
【0275】
アルギニル残基は、１つまたはいくつかの従来の試薬、とりわけ、フェニルグリオキサール、２，３－ブタンジオン、１，２－シクロヘキサンジオン、およびニンヒドリンとの反応によって改変される。アルギニン残基の誘導体化には、反応をアルカリ性条件下で実施する必要があり、これは、グアニジン官能基のｐＫａが高いからである。さらに、これらの試薬は、リシンの基ならびにアルギニンイプシロンアミノ基と反応し得る。
【0276】
チロシル残基の特定の改変は、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によって分光標識をチロシル残基に導入することへの特定の関心を持って行うことができる。最も一般的に、０－アセチルチロシル種および３－ニトロ誘導体を形成するために、それぞれＮ－アセチルイミジゾールおよびテトラニトロメタンが使用される。チロシル残基は、ラジオイムノアッセイに使用するための標識タンパク質を調製するために、１２５Ｉまたは１３１Ｉを使用してヨウ素化される。カルボキシル側鎖（アスパルチルまたはグルタミル）はカルボジイミド（Ｒ－Ｎ．ｄｂｄ．Ｃ．ｄｂｄ．Ｎ－Ｒ’）との反応によって選択的に改変され、ここで、ＲおよびＲ’は、異なるアルキル基、例えば、１－シクロヘキシル－３－（２－モルホリニル－４－エチル）カルボジイミドまたは１－エチル－３－（４－アゾニア－４，４－ジメチルペンチル）カルボジイミドなどである。さらに、アスパルチルおよびグルタミル残基はアンモニウムイオンとの反応によってアスパラギニルおよびグルタミニル残基に変換される。
【0277】
グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、頻繁に脱アミドされて、それぞれ対応するグルタミルおよびアスパルチル残基になる。これらの残基は、中性または塩基性条件下で脱アミドされる。これらの残基の脱アミドされた形態は本発明の範囲内に入る。他の改変としては、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルのヒドロキシル基、またはトレオニル残基のリン酸化、リシン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のアルファアミノ基のメチル化（Ｔ． Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．， Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， ｐｐ． ７９－８６ （１９８３））、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【0278】
別の型の共有結合性の改変には、配糖体を抗体と化学的または酵素的にカップリングすることが伴う。これらの手順は、Ｎ結合またはＯ結合グリコシル化のためのグリコシル化能を有する宿主細胞における抗体の産生を必要としないので、有利である。使用されるカップリング方式に応じて、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離のカルボキシル基、（ｃ）システインのものなどの遊離のスルフヒドリル基、（ｄ）セリン、トレオニン、もしくはヒドロキシプロリンのものなどの遊離のヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンのものなどの芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に糖を付着させることができる。これらの方法は、１９８７年９月１１日公開のＷ０８７１０５３３０、およびＡｐｌｉｎ ａｎｄ Ｗｒｉｓｔｏｎ， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ｐｐ． ２５９－３０６ （１９８１）に記載されている。
【0279】
抗体に存在する任意の炭水化物部分の除去を化学的にまたは酵素的に実現することができる。化学的な脱グリコシルには、抗体を化合物トリフルオロメタンスルホン酸、または相当する化合物に曝露させることが必要である。この処理の結果、連結している糖（Ｎ－アセチルグルコサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミン）以外の大多数または全ての糖の切断がもたらされる一方で、抗体はインタクトなまま残る。化学的な脱グリコシルは、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ， ｅｔ ａｌ． Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ２５９： ５２ （１９８７）およびＥｄｇｅ ｅｔ ａｌ． Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １１８： １３１ （１９８１）により記載されている。抗体の炭水化物部分の酵素による切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ． Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌ． １３８： ３５０ （１９８７）に記載されている通り、種々のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼを使用することによって実現することができる。
【0280】
抗体の共有結合性の改変の別の型は、抗体を種々の非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール、ポリオキシアルキレン、またはデキストランなどの多糖ポリマーの１つと連結することを含む。そのような方法は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号、同第４，１７９，３３７号、同第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号、同第４，６０９，５４６号またはＥＰ ３１５ ４５６を参照されたい。
【0281】
ＩｇＡ抗体の標的
【0282】
本明細書に記載のＩｇＡ抗体を使用して、細胞の表面上に発現される抗原を標的化することができる。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、標的細胞（例えば、がん細胞）の表面上に発現される抗原に特異的に結合する抗原結合性領域を含む。一部の実施形態では、抗原は、ヒト抗原である。一部の実施形態では、標的細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、以下のタンパク質のうちの１つである抗原に特異的に結合する抗原結合性ドメインを含む：ＣＤ２０、ＧＤ２、ＣＤ４７、ＣＤ３８、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、ＣＤ２１、ＣＤ６４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ７０、ＣＤ２７４、ＣＤ４５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ２、ＦＢＰ、ＦＡＰ、ＣＥＡ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＴＡＧ７２、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＰＡＰ、ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、ＬＡＧＥ－ｌａ、ｐ５３、ＮＫＧ２Ｄリガンド、Ｂ７－Ｈ６、ＩＬ－１３ Ｒ α ２、ＩＬ－１１ Ｒ α、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＣＡ９、ＧＤ３、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＣＤ１７１、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＨＬＡ－ＡＩ ＭＡＧＥ Ａ１、ＨＬＡ－Ａ２ ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＣ１、ＰＣＴＡ－１、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ｈＴＥＲＴ、ＷＴ１、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＲＧＬ４、ＭｅｌａｎＡ、ＭＡＲＴ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＢＣＲ、ＡＢＬ、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＢＯＲＩＳ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＥｐｈＡ２、グリピカン－３、５Ｔ４、８Ｈ９、ανβ６ インテグリン、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＡ９、ＣＳＰＧ４、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥｒｂＢ３／４、ＦＡＰ、ＦＡＲ、ＦＢＰ、ＫＤＲ、ＭＣＳＰ、Ｍｕｃｌ、Ｍｕｃｌ６、ＮＣＡＭ、ＰＲＡＭＥ、ＲＯＲ１、ＣＤ４４ｖ７／８、８Ｈ９、ＮＣＡＭ、ＶＥＧＦ－Ｒ、ＴＡＧ７２、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、胎児ＡｃｈＲ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ １、ｔｉｅ ２、ＰＤＧＦＲ－β、カリクレイン４、ＰＢＦ、ＰＲＡＭＥ、ＨＳＤＬ１、ＣＡ１２５、ＴＡＤＧ－１２、ＭＵＣ１６、マンナン－ＭＩＣ－１、ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ、ＫＫ－ＬＣ－１、ＫＭ－ＨＮ－１、ＬＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＳＰ１７、ＳＳＸ４、ＴＡＧ１、ＴＡＧ２、ＥＮＡＨ、マンマグロビン－Ａ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＢＡＧＥ－１、ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ、ＫＫ－ＬＣ－１、ＫＭ－ＫＮ－１、ＬＡＧＥ１、ＭＡＧＥ１Ａ、ＭＡＧＥＡ２、ムチンｋ、ＴＲＡＧ３、ｃ－ｍｙｃ、サイクリン Ｂ１、ｐ６２、ＤＫＫ１、ＲＵ２ＡＳ、ｋ－ｒａｓ、ＭＥ１、ＮＦＹＣ、ＳＴＥＡＰ１、ＦＧＦ５、ＲＵ２ＡＳ、ｈｓｐ７０－２、ＡＲＴＣ１、Ｂ－ＲＡＦ、ベータカテニン、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ４、ＣＤＫ１２、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＬＰＰ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＦＮ１、ＧＡＳ７、ＧＰＮＭＢ、ＨＡＵＳ３、ＬＤＬＲ－フコシルトランスフェラーゼ、ＭＡＲＴ２、ＭＡＴＮ、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ネオＰＡＰ、ミオシン、ＰＰＰ１Ｒ３Ｂ、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰＲＫ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＯＡ１、ＲＡＢ３８、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２、メランＡ、ＢＡＧＥ１、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ２、ＧＡＧＥ８、ＧＡＧＥ３、ＧＡＧＥ４、ＧＡＧＥ５、ＧＡＧＥ６、ＧＡＧＥ７、ＧＮＴＶＦ、ＬＹ６Ｋ、ＴＲＡＧ３、ＣＡＳＰ８、ＳＡＧＥ、ＤＥＫ－ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２、ＦＬＴ３－ＩＴＤ、サイクリンＡ１、ＦＮＤＣ３Ｂ、ＭＡＧＥＡＧ、Ｇ２５０、ヘプシン、腸カルボキシルエステラーゼ、ＰＢＦ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ１、ＯＧＴ、ＯＳ９、ＣＡＬＣＡ、ＭＤＭ２、アルファアクチニン４、延長因子２、ｆｏｓ関連抗原１、レグマイン、精子タンパク質１７、炭酸脱水素酵素ＩＸ、葉酸受容体－α、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、神経膠腫関連抗原、β－ヒト絨毛膜ゴナドトロピン、アルファフェトプロテインサイログロブリン、テロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシエステラーゼ、プロステイン、またはサバイビン。
ガングリオシドＧ２
ガングリオシドＧ２
【0283】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片（すなわち、ＩｇＡ重鎖定常領域内に本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含む抗体）は、ＧＤ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、Ｏ－アセチル化ＧＤ２に結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＧＤ２に結合し、Ｏ－アセチル化ＧＤ２には結合しない。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、Ｏ－アセチル化ＧＤ２に結合し、ＧＤ２には結合しない。一部の実施形態では、抗体は、ＧＤ２に結合し、かつＯ－アセチル化ＧＤ２に結合する。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、ヒトＧＤ２ポリペプチドに特異的に結合する。ヒト起源のおよびいくつかの動物のＧＤ２のポリペプチドおよびコードする核酸配列は、例えばＮＣＢＩウェブサイトから公的に入手可能である。
【0284】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖の少なくともＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ、および抗体ｃｈ１４．１８の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、および抗体ｃｈ１４．１８の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖の少なくともＣＤＲ３およびＩｇＡヒンジを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、およびＣＨ２ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ｃｈ１４．１８の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、ＣＨ２ ＩｇＡ領域、およびＣＨ３ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸配列：ＥＶＱＬＬＱＳＧＰＥＬＥＫＰＧＡＳＶＭＩＳＣＫＡＳＧＳＳＦＴＧＹＮＭＮＷＶＲＱＮＩＧＫＳＬＥＷＩＧＡＩＤＰＹＹＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＨＬＫＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＶＳＧＭＥＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ［配列番号４］を含む重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸配列：ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫ ＬＬＩＨＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＳＴＨＶＰＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ［配列番号５］を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸配列：ＥＶＱＬＬＱＳＧＰＥＬＥＫＰＧＡＳＶＭＩＳＣＫＡＳＧＳＳＦＴＧＹＮＭＮＷＶＲＱＮＩＧＫＳＬＥＷＩＧＡＩＤＰＹＹＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＨＬＫＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＶＳＧＭＥＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ［配列番号４］を含む重鎖可変領域、およびアミノ酸配列：ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＨＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＳＴＨＶＰＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ［配列番号５］を含む軽鎖可変領域を含む。
【0285】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸配列：ＥＦＴＦＴＤＹＹ［配列番号１０］を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＩＲＮＲＡＮＧＹＴＴ［配列番号１１］を含むＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＡＲＶＳＮＷＡＦＤＹ［配列番号１２］を含むＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含む可変重鎖を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸配列：ＱＳＬＬＫＮＮＧＮＴＦＬ［配列番号１３］を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＫＶＳ［配列番号１４］を含むＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＱＳＴＨＩＰＹＴ［配列番号１５］を含むＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含む可変軽鎖を含む。
【0286】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸配列：ＥＦＴＦＴＤＹＹ［配列番号１０］を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＩＲＮＲＡＮＧＹＴＴ［配列番号１１］を含むＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＡＲＶＳＮＷＡＦＤＹ［配列番号１２］を含むＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含む可変重鎖；およびアミノ酸配列：ＱＳＬＬＫＮＮＧＮＴＦＬ［配列番号１３］を含むＣＤＲ１；アミノ酸配列：ＫＶＳ［配列番号１４］を含むＣＤＲ２；アミノ酸配列：ＳＱＳＴＨＩＰＹＴ［配列番号１５］を含むＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含む可変軽鎖を含む。
【0287】
一部の実施形態では、抗ＧＤ２ ＩｇＡ抗体は、３Ｆ８抗体のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。一部の実施形態では、抗ＧＤ２抗体は、３Ｆ８抗体の可変重鎖および／または可変軽鎖を含む。
【0288】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0289】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0290】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0291】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0292】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0293】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0294】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0295】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号４のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0296】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号５のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0297】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号５のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
ＣＤ２０
ＣＤ２０
【0298】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ２０に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＩＩ型またはＩ／ＩＩ型ＣＤ２０結合性領域を含む抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、ヒトＣＤ２０ポリペプチドに特異的に結合する。ヒト起源のおよびいくつかの動物のＣＤ２０のポリペプチドおよびコードする核酸配列は、例えばＮＣＢＩウェブサイトから公的に入手可能である。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ２０エピトープに特異的に結合する抗原結合性ドメインを含み、前記ＣＤ２０エピトープは、以下のアミノ酸配列：ＹＮＣＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰＳＴＱＹＣＹＳ［配列番号６］内に存在する。
【0299】
一部の実施形態では、ＣＤ２０抗体の可変領域は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴＮＬ２０１７０５０５８１に記載されている。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列：ＱＡＹＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＳＹＮＬＨＷＶＫＱＴＰＲＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＲＬＴＳＥＤ ＳＡＶＹＦＣＡＲＳＮＳＹＧＳＴＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ［配列番号７］内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３の１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列：ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＶＬＦＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＲＳＳＶＳＹＭＤＷＹＱＱＫＰＲＳＳＰＫＰＷＩＹＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＴＳＮＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳ［配列番号８］内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３の１つ、２つ、または３つを含む。
【0300】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列：ＱＡＹＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＬＨＷＶＫＱＴＰＲＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＲＬＴＳＥＤ ＳＡＶＹＦＣＡＲＳＮＳＹＧＳＴＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ［配列番号７］を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、以下のアミノ酸配列：ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＶＬＦＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＲＳＳＶＳＹＭＤＷＹＱＱＫＰＲＳＳＰＫＰＷＩＹＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＴＳＮＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳ［配列番号８］を含む。
【0301】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ、および抗体オビヌツズマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、および抗体オビヌツズマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３およびＩｇＡヒンジを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、およびＣＨ２ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体オビヌツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、ＣＨ２ ＩｇＡ領域、およびＣＨ３ ＩｇＡ領域を含む。
【0302】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ２０エピトープＥＰＡＮＰＳＥＫに特異的に結合する。
【0303】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ２０に特異的に結合するものであり、同じアイソタイプの定常領域を有するリツキシマブと比較して増大したプログラム細胞死（ＰＣＤ）機能を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ２０に特異的に結合するものであり、同じアイソタイプの定常領域を有するリツキシマブと比較して増大した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能性を有する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ２０に特異的に結合するものであり、同じアイソタイプの定常領域を有するリツキシマブと比較して増大した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）機能性を有する。
【0304】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、対応するＩｇＧ抗体と比較して短い循環半減期を有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０ ＩｇＡ抗体の投与に付随する、Ｂ細胞枯渇による副作用は、対応するＩｇＧ抗体と比較して少ない。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与に付随するＢ細胞補給は対応するＩｇＧ抗体と比較して速い。
【0305】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0306】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0307】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0308】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0309】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0310】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0311】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0312】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８１のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８１のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0313】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号９５のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９５のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0314】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号９５のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
【0315】
一部の実施形態では、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその機能性断片が本発明で提供される。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖の少なくともＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ、および抗体ＵＭＡＢ１０の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、および抗体ＵＭＡＢ１０の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖の少なくともＣＤＲ３およびＩｇＡヒンジを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、およびＣＨ２ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＵＭＡＢ１０の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、ＣＨ２ ＩｇＡ領域、およびＣＨ３ ＩｇＡ領域を含む。
【0316】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0317】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0318】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0319】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0320】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0321】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0322】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0323】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0324】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0325】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号８のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
Ｈｅｒ２
Ｈｅｒ２
【0326】
一部の実施形態では、Ｈｅｒ２に特異的に結合する抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ、および抗体トラスツズマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、および抗体トラスツズマブの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３およびＩｇＡヒンジを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、およびＣＨ２ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体トラスツズマブの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、ＣＨ２ ＩｇＡ領域、およびＣＨ３ ＩｇＡ領域を含む。
【0327】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0328】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0329】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0330】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0331】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0332】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0333】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0334】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８２のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８２のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0335】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号９６のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９６のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0336】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号９６のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
ｇｐ７５
ｇｐ７５
【0337】
一部の実施形態では、ｇｐ７５またはチロシン関連タンパク質１に特異的に結合する抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、ヒトｇｐ７５ポリペプチドに特異的に結合する。ヒト起源のおよびいくつかの動物のｇｐ７５のポリペプチドおよびコードする核酸配列は、例えばＮＣＢＩウェブサイトから公的に入手可能である。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖の少なくともＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ、および抗体ＴＡ９９の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、および抗体ＴＡ９９の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖の少なくともＣＤＲ３およびＩｇＡヒンジを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、およびＣＨ２ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体ＴＡ９９の重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、ＣＨ２ ＩｇＡ領域、およびＣＨ３ ＩｇＡ領域を含む。
【0338】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0339】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0340】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0341】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0342】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0343】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0344】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0345】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８３のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８３のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0346】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号９７のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0347】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号９７のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
ＣＴＬＡ４
ＣＴＬＡ４
【0348】
一部の実施形態では、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）に特異的に結合する抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、ヒトＣＴＬＡ４ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、マウスＣＴＬＡ４ポリペプチドに特異的に結合する。ヒト起源のおよびいくつかの動物のＣＴＬＡ４のポリペプチドおよびコードする核酸配列は、例えばＮＣＢＩウェブサイトから公的に入手可能である。
【0349】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0350】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0351】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0352】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0353】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0354】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0355】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0356】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８４のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８４のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0357】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号９８のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９８のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0358】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号９８のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
ＣＤ４７
ＣＤ４７
【0359】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドに特異的に結合する。ヒト起源のおよびいくつかの動物のポリペプチドおよびコードする核酸配列ＣＤ４７は、例えばＮＣＢＩウェブサイトから公的に入手可能である。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体により、がん細胞の表面上に発現されるＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合が減少する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に、対応する野生型抗体と比較して、約０．５μＭ～約９９９μＭにわたる結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に、対応する野生型抗体と比較して、約１ｍＭ～約１０００ｍＭにわたる結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ヒトＣＤ４７とシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、前記ヒトＣＤ４７と前記ＳＩＲＰαの相互作用の阻害により、前記ＩｇＡ抗体の潜在性が増大する。一部の実施形態では、前記ヒトＣＤ４７と前記ＳＩＲＰαの相互作用の阻害により、腫瘍部位におけるがん細胞のファゴサイトーシスおよびクリアランスが増加する。一部の実施形態では、がん細胞は、ＩｇＡオプソニン化がん細胞である。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に結合する抗原結合性ドメインおよび腫瘍関連抗原（例えば、本明細書に記載のもの）に特異的に結合する抗原結合性ドメインを含む。
【0360】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体により、がん細胞へのＣＤ４７の結合が減少する。例えば、ＩｇＡ抗体は、ヒトＣＤ４７とシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）の相互作用を阻害し得る。さらに、ヒトＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用の阻害により、ＩｇＡ抗体の潜在性が増大し得る。ヒトＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用の阻害により、腫瘍部位におけるがん細胞のファゴサイトーシスおよびクリアランスが増加し得る。例えば、がん細胞は、ＩｇＡオプソニン化がん細胞であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に対して低親和性の結合性を有し、それにより、ＩｇＡ抗体のがん細胞以外の細胞上のＣＤ４７への結合が防止される。一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＡ抗体の低親和性ＣＤ４７アームは、ＣＤ４７を発現する腫瘍細胞に結合する。一部の実施例では、本明細書に記載のＩｇＡ抗体の低親和性ＣＤ４７アームは、腫瘍細胞ではない、ＣＤ４７を発現する細胞には結合しない。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に少なくとも約０．０１マイクロモル（μＭ）～約９９９μＭまたはそれよりも高い結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に少なくとも約０．０１μＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に最大で約９９９μＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．０１μＭ～約０．５μＭ、約０．０１μＭ～約１μＭ、約０．０１μＭ～約５μＭ、約０．０１μＭ～約１０μＭ、約０．０１μＭ～約５０μＭ、約０．０１μＭ～約１００μＭ、約０．０１μＭ～約２００μＭ、約０．０１μＭ～約３００μＭ、約０．０１μＭ～約５００μＭ、約０．０１μＭ～約９９９μＭ、約０．１μＭ～約０．５μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約０．１μＭ～約５μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．１μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１００μＭ、約０．１μＭ～約２００μＭ、約０．１μＭ～約３００μＭ、約０．１μＭ～約５００μＭ、約０．１μＭ～約９９９μＭ、約０．５μＭ～約１μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．５μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５０μＭ、約０．５μＭ～約１００μＭ、約０．５μＭ～約２００μＭ、約０．５μＭ～約３００μＭ、約０．５μＭ～約５００μＭ、約０．５μＭ～約９９９μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１μＭ～約５０μＭ、約１μＭ～約１００μＭ、約１μＭ～約２００μＭ、約１μＭ～約３００μＭ、約１μＭ～約５００μＭ、約１μＭ～約９９９μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約５μＭ～約５０μＭ、約５μＭ～約１００μＭ、約５μＭ～約２００μＭ、約５μＭ～約３００μＭ、約５μＭ～約５００μＭ、約５μＭ～約９９９μＭ、約１０μＭ～約５０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１０μＭ～約２００μＭ、約１０μＭ～約３００μＭ、約１０μＭ～約５００μＭ、約１０μＭ～約９９９μＭ、約５０μＭ～約１００μＭ、約５０μＭ～約２００μＭ、約５０μＭ～約３００μＭ、約５０μＭ～約５００μＭ、約５０μＭ～約９９９μＭ、約１００μＭ～約２００μＭ、約１００μＭ～約３００μＭ、約１００μＭ～約５００μＭ、約１００μＭ～約９９９μＭ、約２００μＭ～約３００μＭ、約２００μＭ～約５００μＭ、約２００μＭ～約９９９μＭ、約３００μＭ～約５００μＭ、約３００μＭ～約９９９μＭ、または約５００μＭ～約９９９μＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約０．５μＭ、約１μＭ、約５μＭ、約１０μＭ、約５０μＭ、約１００μＭ、約２００μＭ、約３００μＭ、約５００μＭ、または約９９９μＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。
【0361】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に約１ｍＭ～約１，０００ミリモル（ｍＭ）の結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に少なくとも約１ｍＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に最大で約１，０００ｍＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約５０ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約２００ｍＭ、約１ｍＭ～約３００ｍＭ、約１ｍＭ～約４００ｍＭ、約１ｍＭ～約５００ｍＭ、約１ｍＭ～約６００ｍＭ、約１ｍＭ～約８００ｍＭ、約１ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５ｍＭ～約２００ｍＭ、約５ｍＭ～約３００ｍＭ、約５ｍＭ～約４００ｍＭ、約５ｍＭ～約５００ｍＭ、約５ｍＭ～約６００ｍＭ、約５ｍＭ～約８００ｍＭ、約５ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１０ｍＭ～約３００ｍＭ、約１０ｍＭ～約４００ｍＭ、約１０ｍＭ～約５００ｍＭ、約１０ｍＭ～約６００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８００ｍＭ、約１０ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約５０ｍＭ～約５００ｍＭ、約５０ｍＭ～約６００ｍＭ、約５０ｍＭ～約８００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約１００ｍＭ～約２００ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１００ｍＭ～約５００ｍＭ、約１００ｍＭ～約６００ｍＭ、約１００ｍＭ～約８００ｍＭ、約１００ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約５００ｍＭ、約２００ｍＭ～約６００ｍＭ、約２００ｍＭ～約８００ｍＭ、約２００ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約３００ｍＭ～約４００ｍＭ、約３００ｍＭ～約５００ｍＭ、約３００ｍＭ～約６００ｍＭ、約３００ｍＭ～約８００ｍＭ、約３００ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約４００ｍＭ～約５００ｍＭ、約４００ｍＭ～約６００ｍＭ、約４００ｍＭ～約８００ｍＭ、約４００ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約５００ｍＭ～約６００ｍＭ、約５００ｍＭ～約８００ｍＭ、約５００ｍＭ～約１，０００ｍＭ、約６００ｍＭ～約８００ｍＭ、約６００ｍＭ～約１，０００ｍＭ、または約８００ｍＭ～約１，０００ｍＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、ＣＤ４７に約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約２００ｍＭ、約３００ｍＭ、約４００ｍＭ、約５００ｍＭ、約６００ｍＭ、約８００ｍＭ、または約１，０００ｍＭの結合親和性（Ｋｄ）で結合する。
【0362】
一部の実施形態では、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその機能性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖の少なくともＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ、および抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３、および抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖の少なくともＣＤＲ３およびＩｇＡヒンジを含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、およびＣＨ２ ＩｇＡ領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体は、抗体２．３Ｄ１１または抗体Ｃ４７Ａ８－ＣＱの重鎖の少なくともＣＤＲ３、ＩｇＡヒンジ、ＣＨ１ ＩｇＡ領域、ＣＨ２ ＩｇＡ領域、およびＣＨ３ ＩｇＡ領域を含む。
【0363】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0364】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0365】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0366】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0367】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0368】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0369】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0370】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８５のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８５のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0371】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号９９のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９９のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0372】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号９９のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
【0373】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＨ、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ、および（ｃ）これらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0374】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0375】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに（ｄ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0376】
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全て；ならびに配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0377】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0378】
一態様では、本明細書の開示は、（ａ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＬ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択されるＶＨ ＣＤＲ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0379】
一態様では、本開示は、ＣＤＲ：（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【0380】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号８６のアミノ酸配列内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８６のアミノ酸配列のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0381】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号１００のアミノ酸配列のいずれか１つの合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域内（例えば、ＦＲ内）に存在する。必要に応じて、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１００のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾も含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
【0382】
一態様では、抗体またはその抗原結合性断片が提供され、ここで、抗体またはその抗原結合性断片は、上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＨおよび上に提示されている実施形態のいずれかと同様のＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１００のＶＬ配列を、これらの配列の翻訳後修飾も含めて含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するＩｇＡ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のカッパ軽鎖定常領域を含む。
ＩｇＡ抗体の特性および機能の改善
ＩｇＡ抗体の特性および機能の改善
【0383】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応する野生型ＩｇＡ抗体と比べて改善された安定性を示す。「増大した安定性」という用語は、本明細書で使用される場合、増大した熱安定性および／または減少した凝集を含む。増強または改善された安定性は、例えば、加速安定性試験によって決定することができる。例示的な加速安定性試験としては、これだけに限定されないが、保管温度の上昇を特徴とする試験が挙げられる。抗体に関して観察される凝集体の形成が対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して減少することにより、増大した安定性が示される。本開示の抗体およびその機能性断片の安定性は、抗体の融解温度遷移の対応する野生型ＩｇＡ抗体と比較した変化を測定することによって試験することができる。そのような実施形態では、増大した安定性または増大した熱安定性は、抗体またはその機能性断片の融解温度遷移が対応するＷＴ ＩｇＡまたはその機能性断片と比べて増大することによって明らかになる。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体よりも融解温度が高い。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片の融解温度は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体よりも少なくとも約０．２倍、０．３倍、０．４倍、０．５倍、０．６倍、０．８倍、１．０倍高いまたはそれよりも高い。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片の融解温度は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体よりも少なくとも約１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１２℃、１５℃高いまたはそれよりも高い。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片の融解温度は、少なくとも約６０℃、６５℃、７０℃、７５℃、８０℃、８５℃、９０℃であるまたはそれよりも高い。一部の実施形態では、この増大した安定性は、追加的なジスルフィド結合の非存在下におけるものである。具体的には、増大した安定性は、ＩｇＡ重鎖定常領域内の追加的なジスルフィド結合の非存在下におけるものである。一実施形態では、本明細書に開示される抗体のＣＨ３ドメインは、野生型ＣＨ３ドメインと比較して追加的なジスルフィド結合を含有しない。代替の実施形態では、本明細書に開示される抗体のＣＨ３ドメインは、野生型ＣＨ３ドメインと比較して少なくとも１つのジスルフィド結合を含有する。
【0384】
タンパク質凝集を測定するための追加的な方法は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第１０／１７６，８０９号、およびＵＳ２００３００２２２４３Ａ１に記載されている。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技法は、下で概説されているものなど、当技術分野において利用可能である：Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ， ２４７－３０１， Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ． ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｐｕｂｓ．， １９９１；およびＪｏｎｅｓ， Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０： ２９－９０， １９９３。安定性は、選択された温度で選択された時間にわたって測定することができる。安定性は、凝集体の形成の決定（例えば、分子ふるいクロマトグラフィーを使用した、または濁度および／もしくは目視検査を測定することによる）を含めた様々な異なるやり方で定性的にかつ／または定量的に決定される。方法は以下の通りである：陽イオン交換クロマトグラフィーまたはキャピラリーゾーン電気泳動を使用した電荷の不均一性の評価；アミノ末端またはカルボキシ末端配列の分析；質量分析；還元または完全抗体ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の比較；ペプチドマッピング（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ－Ｃ）分析；抗体の生物活性または抗原結合機能の決定。不安定性は、以下のいずれかの１つまたは複数を含む：凝集、酸化（例えばＭｅｔ酸化）、異性化（例えばＡｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシングなど。「減少した凝集」という用語は、本開示の抗体またはその機能性断片の他の抗体分子および／またはアルブミンなどの血清タンパク質を含めた他の巨大分子との凝集の、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体によって示される凝集と比較した減少を指す。
【0385】
抗体の、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体またはそのバリアントと比べて増大した熱安定性は、当技術分野における標準の方法を使用した示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定することができる（例えば、Ｓｔｕｒｔｅｖａｎｔ， １９８７，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３８： ４６３－４８８を参照されたい）。抗体の、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体またはそのバリアントと比べて増大した熱安定性はまた、タンパク質の熱によるアンフォールディングの分析を使用して決定することもできる。あるいは、抗体の、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体またはそのバリアントと比べて増大した熱安定性は、抗体の性能をＷＴと比較する、抗体に対する任意の適用アッセイを使用して決定することができる。例えば、標的細胞のＡＤＣＣ、抗原への結合、または免疫細胞上のＦｃαＲへの結合。
ＩｇＡ抗体の免疫エフェクター機能
ＩｇＡ抗体の免疫エフェクター機能
【0386】
ＷＴ重鎖定常領域を含む対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて重鎖定常領域内に１つまたは複数の改変を含む、工学的に操作されたＩｇＡバリアントまたは抗体が本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含む抗体）は、改善された特性を示す。
【0387】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体またはその機能性断片と比較して少なくとも１つのエフェクター機能の増大を示す。エフェクター機能は、抗体のアイソタイプによって変動する抗体のＦｃ領域に起因する生物活性である。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシスが挙げられる。例えば、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体もしくはその機能性断片または対応するＷＴ ＩｇＧ抗体と比較して少なくとも１つのエフェクター機能の増大を示す。抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）は、抗体のＩｇＡ Ｆａｂ部分と細胞表面上の抗原の間の複合体の形成およびＦｃ部分と免疫エフェクター細胞上のＦｃ受容体（ＦｃαＲ）の結合の結果である。例えば、エフェクター機能の増大は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃαＲ）に対する結合親和性の増大、ＡＤＣＣの増大；細胞性免疫の増大；細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞との結合の増大；ＮＫ細胞との結合の増大；マクロファージとの結合の増大；多形核細胞との結合の増大；単球との結合の増大；マクロファージとの結合の増大；大型顆粒リンパ球との結合の増大；顆粒球との結合の増大；アポトーシスを誘導する直接シグナル伝達；樹状細胞成熟化の増大；またはＴ細胞予備刺激の増大、オプソニン化の増大、もしくはオプソニン化ファゴサイトーシスの増大であり得る。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、がん細胞の溶解を誘導する。溶解は、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス、または細胞アポトーシスの直接誘導などのエフェクター機能を媒介することによるものなどの任意の機構によって誘導され得る。
ＡＤＣＣ
ＡＤＣＣ
【0388】
「ＡＤＣＣ活性」は、ＡＤＣＣ反応を引き出す抗体の能力を指す。ＡＤＣＣは、ＦｃＲを発現する抗原非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞の表面に結合した抗体を認識し、その後、その標的細胞（例えばがん細胞）の溶解を引き起こす（すなわち、「死滅させる」）、細胞媒介性反応である。主要なメディエーター細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球であり得る。ＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、実施例およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７６： ６５９１－６６０４に記載されている末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）および／もしくはＮＫエフェクター細胞を使用した５１Ｃｒ放出アッセイ、または当技術分野で公知の別の適切な方法を使用して直接評価することができる。ＡＤＣＣ活性は、標的細胞の溶解が最大半量になる抗体の濃度として表すことができる。したがって、一部の実施形態では、溶解レベルが野生型対照による最大半量溶解レベルと同じになる本開示の抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、野生型対照自体の濃度の少なくとも２分の１、３分の１、５分の１、１０分の１、２０分の１、５０分の１、１００分の１である。
【0389】
さらに、一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片は、対応する野生型ＩｇＡと比較して高い最大標的細胞溶解を示し得る。例えば、本開示の抗体またはその機能性断片の最大標的細胞溶解は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体または対応するＷＴ ＩｇＧ抗体の最大標的細胞溶解よりも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％またはそれよりも高くなり得る。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む対応するＷＴ ＩｇＧ抗体と比較して増大したＡＤＣＣを誘導する。一部の実施形態では、ＡＤＣＣは、対応するＷＴ ＩｇＧ抗体と比べて少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、および少なくとも２００％増大する。
ＣＤＣ
ＣＤＣ
【0390】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、分子の、補体の存在下で標的（例えばがん細胞）を溶解させる能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）が、同族抗原と複合体を形成した分子（例えば抗体）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２： １６３ （１９９６）に記載されているＣＤＣアッセイを実施することができる。
Ｆｃ受容体結合
Ｆｃ受容体結合
【0391】
一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、Ｆｃ受容体に結合する。一部の実施形態では、Ｆｃ受容体は、免疫エフェクター細胞上に発現される。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片は、免疫エフェクター細胞上のＦｃ受容体に結合し、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／または標的細胞（例えばがん細胞）の細胞溶解などのエフェクター機能を誘導する。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片は、ＩｇＡ受容体に結合する。一実施形態では、ＩｇＡ受容体は、ヒトＩｇＡに対するＦｃαＲなどのＦｃ－アルファ受容体（ＦｃαＲ）である。一部の実施形態では、ＦｃαＲは免疫エフェクター細胞上に発現される。ＦｃαＲは、免疫エフェクター細胞、例えば、単球、マクロファージ、好中球、および他の骨髄細胞上に存在する。ＦｃαＲはまた、後骨髄球、骨髄球、前骨髄球およびいくつかの骨髄芽球、例えば、骨髄由来の骨髄芽球にも見いだされる。そのような受容体はまた、骨髄細胞株、例えば、Ｕ９３７細胞、ＰＬＢ９８５細胞、およびＨＬ６０細胞にも見いだされる。ＦｃαＲがリンパ球に存在することも示唆されている。ＦｃαＲの発現は、骨髄細胞の活性化によって増大し得る。例えば、Ｕ９３７細胞およびＰＬＢ９８５細胞をホルボールミリスチンアセテート（ＰＭＡ）で刺激することにより、ＦｃαＲの細胞表面レベルが数倍に上昇する（Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｊ Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １７２： １６６５）。ＦｃαＲの表面レベルを上昇させることができる他の薬剤としては、カルシトリオール、１－２５ジヒドロキシビタミンＤ３、およびインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）が挙げられる。
【0392】
ＦｃαＲは、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２と、単量体、二量体、およびポリマーの形態で相互作用することができる。本開示の抗体またはその機能性断片がこれらの受容体を有する免疫エフェクター細胞（例えば、好中球）に結合することにより、ファゴサイトーシス、抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）、炎症性メディエーター放出、リゾチーム産生、および超酸化物アニオン産生などの種々のエフェクター機能が誘導される（Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｊ Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １７２： １６６５）。
【0393】
したがって、本開示の抗体またはその機能性断片（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数の改変を含む抗体）は、少なくとも１つのＦｃ－受容体媒介性エフェクター細胞機能を誘発することができる。「Ｆｃ－受容体媒介性エフェクター細胞機能」という用語は、免疫グロブリン、例えばＩｇＡがエフェクター免疫細胞上のＦｃ受容体に結合することによって誘発される、上記のものなどのエフェクター機能を含むものとする。エフェクター免疫細胞は、免疫応答の認知相および活性化相とは対照的に免疫応答のエフェクター相に関与する細胞である。エフェクター免疫細胞は、リンパ球（例えば、細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含めたＢ細胞およびＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、肥満細胞、ならびに好塩基球を含む。エフェクター免疫細胞は、標的抗原、標的細胞、または微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）を貪食し得る。エフェクター免疫細胞はまた、標的細胞または微生物を溶解させ得る。
【0394】
一部の実施形態では、エフェクター免疫細胞は、ＡＤＣＣ依存性細胞を誘導することができるものである（例えば、好中球はＡＤＣＣを誘導することができる）。例えば、ＦｃＲを発現する単球、マクロファージは、標的細胞を特異的に死滅させるものであり、免疫系の他の構成成分への抗原の提示、または抗原提示細胞との結合に関与する。別の実施形態では、エフェクター免疫細胞は、標的抗原、標的細胞、または微生物に対するファゴサイトーシスを誘導するものであり得る。エフェクター免疫細胞は、標的抗原もしくは標的細胞に対するマクロファージ活性または可溶性を誘導するマクロファージであり得る。
【0395】
「標的細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、本開示の抗体またはその機能性断片の標的とすることができる細胞を指す。一部の実施形態では、標的細胞は、本開示の抗体またはその機能性断片によって特異的に認識される抗原を発現または過剰発現する細胞である。標的細胞は、任意の細胞を指す。他の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞を含む。腫瘍細胞は、例えば、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、肺がん、結腸がん、直腸がん、膵がん、肝がん、ＣＮＳがん、腎がん、頭部がん、頸部がん、血液がんおよびリンパのがんを含めたがんにおける腫瘍細胞のあらゆる型のものであり得る。腫瘍細胞に加えて、標的細胞は、例えば、リンパ球またはアレルギーを標的とするもしくはそれらの産生のための自己抗体の処置に関して、または自己免疫疾患の処置に関しては、ＩｇＥを産生するリンパ球であり得る。さらに、標的は、微生物（細菌もしくはウイルス）または可溶性抗原（例えば、同様のリウマチ因子、または異なる自己抗体および毒素など）であり得る。微生物は、病原体（例えば、ウイルス、細菌、真菌、原生動物）を含む。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球、例えば、ＣＤ２０を発現するＢ細胞であり得る。
【0396】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、対応するＷＴ ＩｇＡと比べて、エフェクター免疫細胞上のＦｃ受容体に対して少なくとも約２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれよりも大きく増大した結合親和性を示す。
標的抗原との結合
標的抗原との結合
【0397】
一部の実施形態では、本開示の抗体およびその機能性断片は、特異的な標的抗原に結合する。「抗原」という用語は、任意の天然または合成の免疫原性物質、免疫原性物質、免疫原性物質の断片もしくは一部、ペプチドエピトープまたはハプテン（ハプテン）を指す。「抗原」という用語はまた、非免疫原性の形態の、複合型免疫原性と比較した場合の非複合材料にも含まれる。「非複合型」という用語は本発明の分子複合体を形成するために接続され、材料の移行を含む。「複合」に接続される用語は、本発明の分子複合体を形成する物質を含む。一部の実施形態では、標的抗原は、標的細胞上に発現または過剰発現される。一部の実施形態では、抗体またはその機能性断片が標的抗原に結合することにより、標的抗原を発現する標的細胞のＦｃ媒介性細胞溶解が誘導される（例えばＡＤＣＣによって）。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片が標的抗原に結合することにより、標的抗原の「中和活性」が誘導される。「中和活性」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその機能性断片の、同類のリガンドが標的抗原に結合することを遮断する能力を指す。
グリコシル化の減少
グリコシル化の減少
【0398】
一部の実施形態では、本開示の抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡと比較して減少したグリコシル化を示す。抗体は、完全にグリコシル化されていないものまたは部分的にグリコシル化されていないものであり得る。「グリコシル化」という用語は、１つまたは複数の炭水化物のポリペプチドへの共有結合性の連結を指す。一般には、グリコシル化は、細胞の細胞内環境または細胞由来の抽出物において起こり得る翻訳後事象である。グリコシル化という用語は、例えば、Ｎ結合グリコシル化（１つもしくは複数の糖がアスパラギン残基に連結している）および／またはＯ結合グリコシル化（１つもしくは複数の糖がヒドロキシル基を有するアミノ酸残基（例えばセリンもしくはトレオニンに連結している）を含む。好ましい実施形態では、グリコシル化は、Ｎ結合グリコシル化を指す。一部の実施形態では、天然に存在するグリコシル化部位内のアスパラギン残基を改変することにより、グリコシル化の減少を実現することができる。一部の実施形態では、天然に存在するグリコシル化モチーフまたは天然に存在するグリコシル化部位、例えば、アミノ酸配列ＮＸＴまたはＮＸＳを含有するＮ結合グリコシル化部位の付近またはその中のアミノ酸残基を改変することにより、グリコシル化の減少を実現する。一部の実施形態では、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはそれよりも多くの天然に存在するグリコシル化部位を改変することにより、グリコシル化の減少を実現する。一部の実施形態では、天然に存在するグリコシル化部位は、ＣＨ２領域内にある。一部の実施形態では、天然に存在するグリコシル化部位は、ＣＨ３領域内にある。一部の実施形態では、天然に存在するグリコシル化部位は、ＣＨ１領域内にある。コンセンサスモチーフ、すなわち、種々のグリコシルトランスフェラーゼによって認識されるアミノ酸配列が記載されている。例えば、Ｎ結合グリコシル化モチーフのコンセンサスモチーフは、ＮＸＴまたはＮＸＳである頻度が高く、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸であり得る。したがって、抗体またはＦｃ含有断片内の潜在的なグリコシル化部位を同定するために、抗体の配列を、例えば、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓによって提供されるウェブサイトなどの公的に入手可能なデータベースを使用することによって調査する（Ｎ結合グリコシル化部位の予測に関してはｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＮＧｌｙｃ／およびＯ結合グリコシル化部位の予測に関してはｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＯＧｌｙｃ／を参照されたい）。グリコシル化を測定するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＲｏｔｈ ｅｔ ａｌ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ２０１２， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ６４０９２３、およびＷＯ２００３１０２０１８Ａ２を参照されたい。
【0399】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、対応するＷＴ ＩｇＡと比べて少なくとも約２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれよりも大きく減少したグリコシル化を示す。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体または機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて、例えば、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％未満またはそれより少なく、部分的にグリコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて完全にグリコシル化されている。
体内分布
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて増大した体内分布を示す。本明細書で使用される場合、「体内分布」という用語は、対象に投与または送達される本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片の細胞内分布および／または組織内分布および／または器官内分布を指す。本明細書で使用される場合、「増大した体内分布」という用語は、一般に、標的部位への増大した分布を有する本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片の、例えば、ビヒクルまたは対応するＷＴ ＩｇＡ抗体のいずれかによって引き起こされる応答と比較した、腫瘍または腫瘍細胞を標的とする能力を指す。これだけに限定されないが、核医学、全身オートラジオグラフィー、マイクロオートラジオグラフィー；リン光体イメージング、クリオイメージング、ナノ二次イオン質量分析（ナノＳＩＭＳ）、マトリックス支援レーザー脱離イメージング（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）、Ｘ線撮影法（Ｘ線）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、マイクロ超音波単一光子放射ＣＴ（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）などを含めた、当業者に公知の様々な方法を使用して細胞または組織の増大した体内分布を評価することができる。抗体の標的部位への増大した体内分布は、ビヒクルまたはＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、またはそれよりも大きな増大を含む。「増大した」または「増強した」組織分布または体内分布は、一般には、「統計的に有意な」増大であり、ビヒクルまたは対照組成物の分布の１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍またはそれよりも大きな（例えば、５００倍、１０００倍）（間に入る１を超える全ての整数および少数、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）増大を含み得る。
抗体の作出方法：
体内分布
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片は、対応するＷＴ ＩｇＡ抗体と比べて増大した体内分布を示す。本明細書で使用される場合、「体内分布」という用語は、対象に投与または送達される本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片の細胞内分布および／または組織内分布および／または器官内分布を指す。本明細書で使用される場合、「増大した体内分布」という用語は、一般に、標的部位への増大した分布を有する本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片の、例えば、ビヒクルまたは対応するＷＴ ＩｇＡ抗体のいずれかによって引き起こされる応答と比較した、腫瘍または腫瘍細胞を標的とする能力を指す。これだけに限定されないが、核医学、全身オートラジオグラフィー、マイクロオートラジオグラフィー；リン光体イメージング、クリオイメージング、ナノ二次イオン質量分析（ナノＳＩＭＳ）、マトリックス支援レーザー脱離イメージング（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）、Ｘ線撮影法（Ｘ線）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、マイクロ超音波単一光子放射ＣＴ（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）などを含めた、当業者に公知の様々な方法を使用して細胞または組織の増大した体内分布を評価することができる。抗体の標的部位への増大した体内分布は、ビヒクルまたはＷＴ ＩｇＡ抗体と比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、またはそれよりも大きな増大を含む。「増大した」または「増強した」組織分布または体内分布は、一般には、「統計的に有意な」増大であり、ビヒクルまたは対照組成物の分布の１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍またはそれよりも大きな（例えば、５００倍、１０００倍）（間に入る１を超える全ての整数および少数、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）増大を含み得る。
抗体の作出方法：
【0400】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を宿主細胞において調製する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を宿主細胞から単離する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を無細胞系で調製する。本開示の抗体、一部またはポリペプチドをコードする単離された核酸分子を、ベクターＤＮＡ（例えば、発現ベクター）を用い、ライゲーション用の平滑末端または付着末端、妥当な末端をもたらすための制限酵素消化、必要に応じて、付着末端の充填、望ましくない接合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、および妥当なリガーゼを用いたライゲーションを含む従来の技法に従って組み換えることができる。そのような操作のための技法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ｌａｂ． Ｍａｎｕａｌ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ． Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ， １９８２ ａｎｄ １９８９）、およびＡｕｓｕｂｅｌ， １９８７， １９９３によって開示されており、抗体分子またはその抗原結合性領域をコードする核酸配列を構築するために使用することができる。したがって、本開示は、本明細書に記載の単離された核酸を含むベクターまたは発現ベクターを提供する。一実施形態では、軽鎖をコードする核酸および重鎖をコードする核酸を上で概説した手順によって別々に単離する。一実施形態では、軽鎖をコードする単離された核酸および重鎖をコードする単離された核酸を別々の発現プラスミドに挿入することもでき、それぞれが適切なプロモーター下および翻訳制御下にある限りは、同じプラスミドに一緒に挿入することもできる。
【0401】
単離された核酸分子を発現ベクターに入れたら、次いでその発現ベクターを、そうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、ヒト胎児由来腎臓２９３細胞（例えば、２９３Ｅ細胞）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞における抗体またはその抗原結合性断片の合成を得る。抗体の組換え産生は当技術分野において周知である。多くのベクターが利用可能である。ベクター構成成分は、一般に、これだけに限定されないが、以下のうちの１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製開始点、１つまたは複数の選択マーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
【0402】
単離された核酸分子を、ベクターＤＮＡ内の発現制御配列に作動可能に（ｏｐｅｒａｂｌｙ）連結する。発現制御配列は、特定の宿主生物体内のコード配列に作動可能に連結した、発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列としては、例えば、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、およびリボソーム結合性部位が挙げられる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが公知である。「作動可能に連結」または「転写制御」という用語は、異種核酸配列の発現をもたらす、調節配列と異種核酸配列の間の機能的連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列との機能的な関係に置かれている場合、第１の核酸配列は第２の核酸配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、そのプロモーターはコード配列に作動可能に連結している。作動可能に連結したＤＮＡ配列は、例えば、必要であれば２つのタンパク質コード領域を同じ読み枠内で接合するために、互いに連続させることができる。
【0403】
核酸が別の核酸配列との機能的関係に置かれている場合、その核酸は作動可能に連結している。例えば、プロモーターもしくはエンハンサーが配列の転写に影響を及ぼす場合、そのプロモーターもしくはエンハンサーはコード配列に作動可能に連結している；またはリボソーム結合性部位が、翻訳が促進されるように位置付けられている場合、リボソーム結合性部位はコード配列に作動可能に連結している。一般に、作動可能に連結とは、連結しているＤＮＡ配列が連続している、および／または連続しておりかつ読み取り相内にあり得ることを意味する。しかし、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、都合のよい制限部位におけるライゲーションによって実現される。そのような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを従来の実施に従って使用する。
【0404】
細胞、細胞株、および細胞培養物は、多くの場合互換的に使用され、本明細書におけるそのような名称は全て、後代を含む。形質転換体および形質転換された細胞は、対象の初代細胞およびそれに由来する培養物を、移行の数に関係なく含む。意図的なまたは不注意の突然変異に起因して、全ての後代のＤＮＡ含有量が正確に同一ではない可能性があることも理解される。最初の形質転換された細胞についてスクリーニングして同じ機能または生物活性を有する突然変異体の後代も含まれる。別個の名称が意図されている場合には、文脈から明らかになろう。代替の実施形態では、適切なコード核酸配列を、普遍的なコドン表に従い、目的の免疫グロブリンの公知のアミノ酸配列に基づいて設計することができる。
【0405】
所望の抗体のアミノ酸配列バリアントを、妥当なヌクレオチドの変化をコードするＤＮＡに導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。そのようなバリアントとしては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終的な構築物が所望の特徴を有するのであれば、欠失、挿入、および置換の任意の組合せを行って最終的な構築物に到達することができる。アミノ酸の変化により、例えば、グリコシル化部位の数または位置の変化など、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはバリアント抗体の翻訳後プロセスを変更することもできる。
【0406】
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、様々な方法によって調製される。これらの方法としては、これだけに限定されないが、天然の供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）、または、オリゴヌクレオチド媒介性（もしくは部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、およびによる抗体の以前の調製されたバリアントまたは非バリアントバージョンのカセット変異導入が挙げられる。
【0407】
本開示は、必要に応じて宿主細胞によって認識される調節制御配列に作動可能に連結した、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子、核酸を含むベクターおよび宿主細胞、ならびに抗体を産生するための組換え技法であって、核酸が発現されるように宿主細胞を培養し、必要に応じて、抗体を宿主細胞培養物または培養培地から回収することを含み得る技法も提供する。
【0408】
抗体またはその抗原結合性断片の組換え産生のために、抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために、複製可能なベクターに挿入することができる。したがって、単離された抗体またはその抗原結合性断片が本明細書で提供される。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片は組換え抗体であり得る。「組換え抗体」という用語は、抗体のコード配列を含む発現ベクター（または場合によって１つよりも多くの発現ベクター、一般には２つの発現ベクター）であって、前記コード配列が細胞に天然には付随しないものである、発現ベクターをトランスフェクトした細胞または細胞株から発現された抗体を指す。一実施形態では、組換え抗体は、天然に存在している場合の同じ配列を有する抗体のグリコシル化パターンとは異なるグリコシル化パターンを有する。一実施形態では、組換え抗体をヒト宿主細胞ではない哺乳動物宿主細胞において発現させる。特に、個々の哺乳動物宿主細胞が独特のグリコシル化パターンを有する。
【0409】
一部の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合性断片は合成されたものである。本開示のポリペプチドは、タンパク質化学の分野で一般に公知のタンパク質の単離／精製方法によって精製することができる。
【0410】
一態様では、本明細書に記載の単離された核酸分子または本明細書に記載の前記単離された核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞が本明細書で提供される。ベクターは、クローニングベクターまたは発現ベクターであり得る。本発明明細書のベクター内のＤＮＡをクローニングするまたは発現させるために適した宿主細胞は、上記の原核生物、酵母、または高等真核生物細胞である。この目的のために適した原核生物としては、真正細菌、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物体、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、例えばＥ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えばＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えばＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、およびＳｈｉｇｅｌｌａ、ならびにＢａｃｉｌｌｉ、例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ（例えば、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ ２６６，７１０に開示されているＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ４１ Ｐ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、例えばＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、ならびにＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが挙げられる。１つの好ましいＥ．ｃｏｌｉクローニング宿主はＥ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）であるが、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘｌ ７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）、およびＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）などの他の株も適する。これらの実施例は限定ではなく、例示的なものである。
【0411】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）が抗体をコードするベクターの適切なクローニングまたは発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、または一般的なパン酵母が下等真核宿主微生物の中で最も一般的に使用されている。しかし、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ；Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ宿主、例えば、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ． ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、およびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ；ｙａｒｒｏｗｉａ（ＥＰ４０２，２２６）など；Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｓ（ＥＰ１８３，０７０）；Ｃａｎｄｉｄａ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ（ＥＰ２４４，２３４）；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ；Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ、例えば、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓなど；ならびに糸状菌、例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ宿主、例えば、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒなどのいくつかの他の属、種、および株が本明細書で一般に利用可能であり、有用である。
【0412】
無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株およびバリアントならびにＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（イモムシ）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ショウジョウバエ）、およびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉなどの宿主由来の対応する許容昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクション用の種々のウイルス株、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ－１バリアントおよびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ＮＰ＼７のＢｍ－５株が公的に入手可能であり、そのようなウイルスを本明細書においてウイルスとして本発明に従って、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用することができる。
【0413】
綿、トウモロコシ（ｃｏｍ）、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、タバコ、アオウキクサ、および他の植物細胞の植物細胞培養物も宿主として利用することができる。しかし、脊椎動物細胞に対する関心が最大であり、培養（組織培養）下での脊椎動物細胞の繁殖が常套的な手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＣＨＯＫ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ６１）、ＤＸＢ－１１、ＤＧ－４４、およびチャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７： ４２１６ （１９８０））を含めたチャイニーズハムスター卵巣細胞；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児由来腎臓株（懸濁培養下での成長のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、［Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｅｎ Ｖｉｒａｌ． ３６： ５９ （１９７７）］；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ， Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ． ２３： ２４３－２５１ （１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲ０－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ３８３： ４４－６８ （１９８２））；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒトヘパトーマ株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
【0414】
宿主細胞に対して抗体産生のために上記の発現またはクローニングベクターを用いて形質転換またはトランスフェクトを行い、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために、必要に応じて改変した従来の栄養培地で培養する。さらに、新規のベクター、および選択マーカーによって分離された転写ユニットの多数のコピーを有するトランスフェクトされた細胞株が本明細書に記載の抗体の発現のために特に有用であり、好ましい。
【0415】
発現ベクターのトランスフェクションおよび本明細書に記載のキメラ抗体、ヒト化抗体、または複合ヒト抗体の産生に関して、レシピエント細胞株は、骨髄腫細胞であり得る。骨髄腫細胞は、トランスフェクトされた免疫グロブリン核酸配列によってコードされる免疫グロブリンを合成し、アセンブルし、分泌することができ、また、免疫グロブリンをグリコシル化するための機構を有する。例えば、一部の実施形態では、レシピエント細胞は、組換えＩｇ産生骨髄腫細胞ＳＰ２／０（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ ８２８７）である。ＳＰ２／０細胞は、トランスフェクトされた遺伝子によってコードされる免疫グロブリンのみを産生する。骨髄腫細胞は、培養物中またはマウスの腹膜腔内で成長させることができ、マウスの腹膜腔内で成長させる場合には、分泌された免疫グロブリンを腹水から得ることができる。他の適切なレシピエント細胞としては、ヒト起源もしくは非ヒト起源のＢリンパ球などのリンパ系細胞、ヒト起源もしくは非ヒト起源のハイブリドーマ細胞、または種間ヘテロハイブリドーマ細胞が挙げられる。本明細書に記載のキメラ、ヒト化、または複合ヒト抗体構築物または抗体ポリペプチドを保有する発現ベクターを妥当な宿主細胞に形質転換、トランスフェクション、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、およびジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストランなどのポリカチオンの適用などの生化学的手段、ならびに電気穿孔、直接マイクロインジェクション、および微粒子銃などの機械的な手段を含めた種々の適切な手段のいずれかによって導入することができる。当業者に公知のＪｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２４０ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５３８ （１９８８）。
【0416】
酵母により、免疫グロブリンＨ鎖およびＬ鎖の産生に関して細菌と比べてある特定の利点がもたらされる。酵母では、グリコシル化を含めた翻訳後ペプチド修飾が行われる。酵母における所望のタンパク質の産生のために使用することができる強力なプロモーター配列および高コピー数プラスミドを利用するいくつかの組換えＤＮＡ戦略が存在する。酵母は、クローニングされた哺乳動物遺伝子産物のリーダー配列を認識し、リーダー配列を有するペプチド（すなわち、プレペプチド）を分泌する。Ｈｉｔｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １１ｔｈ Ｉｎｔｌ． Ｃｏｎｆ． Ｙｅａｓｔ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ＆ Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ． （Ｍｏｎｔｐｅｌｉｅｒ， Ｆｒａｎｃｅ， １９８２）。酵母遺伝子発現系を、抗体ポリペプチドまたはその抗原結合性断片ペプチドならびにアセンブルされたキメラ、ヒト化、または複合ヒト抗体、その断片および領域の産生、分泌および安定性のレベルについて常套的に評価することができる。酵母をグルコースに富む培地で成長させた場合に多量に産生される解糖酵素をコードする活発に発現される遺伝子由来のプロモーターおよび終結エレメントが組み入れられた一連の酵母遺伝子発現系のいずれかを利用することができる。公知の解糖遺伝子によっても非常に効率的な転写制御シグナルがもたらされ得る。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）遺伝子のプロモーターおよびターミネーターシグナルを利用することができる。酵母においてクローニングされた免疫グロブリンｃＤＮＡを発現させるために最適な発現プラスミドを評価するためにいくつかの手法を取ることができる。
【0417】
細菌株も本明細書に記載の抗体分子またはその断片の産生のための宿主として利用することができ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７３２５）などのＥ．ｃｏｌｉ Ｋ１２株、Ｂａｃｉｌｌｕｓ種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍまたはＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓなどの腸内細菌、および種々のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種を使用することができる。宿主細胞と適合する種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターをこれらの細菌宿主と併せて使用する。ベクターは、複製部位、ならびに形質転換された細胞の表現型の選択をもたらすことができる特定の遺伝子を保有する。発現プラスミドを、細菌におけるクローニングされた免疫グロブリンｃＤＮＡまたはＣＤＲにコードされるキメラ、ヒト化、または複合ヒト化抗体およびその断片の産生について評価するために、いくつかの手法を取ることができる（Ｇｌｏｖｅｒ， １９８５； Ａｕｓｕｂｅｌ， １９８７， １９９３；Ｓａｍｂｒｏｏｋ， １９８９；Ｃｏｌｌｉｇａｎ， １９９２－１９９６を参照されたい）。
【0418】
宿主哺乳動物細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで成長させることができる。哺乳動物細胞により、リーダーペプチド除去、フォールディングおよびＨ鎖とＬ鎖のアセンブリ、抗体分子のグリコシル化、および機能的な抗体タンパク質の分泌を含めた免疫グロブリンタンパク質分子に対する翻訳後修飾がもたらされる。上記のリンパ系起源の細胞に加えて、抗体タンパク質の産生のための宿主として有用であり得る哺乳動物細胞として、Ｖｅｒｏ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８１）またはＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ６１）細胞などの、線維芽細胞起源の細胞が挙げられる。ポリペプチドを発現させるために使用することができる例示的な真核細胞としては、これだけに限定されないが、ＣＯＳ ７細胞を含めたＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含めた２９３細胞；ＣＨＯ－Ｓ細胞およびＤＧ４４細胞を含めたＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６．（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；およびＮＳＯ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、特定の真核生物宿主細胞を、可変重鎖および／または可変軽鎖に対して所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択する。例えば、一部の実施形態では、ＣＨＯ細胞により、２９３細胞において産生される同じポリペプチドよりも高レベルのシアリル化を有するポリペプチドが産生される。
【0419】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片のポリペプチドは、当該ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸分子を用いて工学的に操作されたまたはトランスフェクトされた動物においてｉｎ ｖｉｖｏで、任意の適切な方法に従って産生させることができる。
【0420】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を無細胞系で産生させる。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４９８： ２２９－４４ （２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２２： ５３８－４５ （２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ａｄｖ． ２１： ６９５－７１３ （２００３）に記載されている。
【0421】
哺乳動物細胞におけるＨ鎖およびＬ鎖核酸配列の発現のために多くのベクター系が利用可能である（Ｇｌｏｖｅｒ， １９８５を参照されたい）。完全なＨ２Ｌ２抗体を得るために種々の手法に従うことができる。上記の通り、Ｈ鎖およびＬ鎖を同じ細胞において同時発現させて、Ｈ鎖とＬ鎖の完全な四量体Ｈ２Ｌ２抗体および／または抗原結合性断片ペプチドへの細胞内での会合および連結を実現することが可能である。同時発現は、同じプラスミドまたは異なるプラスミドのいずれかを同じ宿主において使用することによって行うことができる。Ｈ鎖およびＬ鎖の両方ならびに／またはＣＤＲ３領域ペプチドの遺伝子を同じプラスミド内に入れ、次いでそれを細胞にトランスフェクトし、それにより、両方の鎖を発現する細胞を直接選択することができる。あるいは、細胞にまず一方の鎖、例えばＬ鎖をコードするプラスミドをトランスフェクトし、その後、得られた細胞株に第２の選択可能なマーカーを含有するＨ鎖プラスミドをトランスフェクトする。抗原結合性ペプチド断片および／またはＨ２Ｌ２分子をいずれかの経路を介して産生する細胞株に、ペプチド、Ｈ鎖、Ｌ鎖、またはＨ鎖プラスＬ鎖の追加的なコピーをコードするプラスミドを追加的な選択可能なマーカーと併せてトランスフェクトして、アセンブルされたＨ２Ｌ２抗体分子のより多くの産生またはトランスフェクトされた細胞株の増強された安定性などの増強された特性を有する細胞株を生成することができる。
【0422】
さらに、微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）または動物細胞の大規模培養に基づく組換え抗体産生のための主流の発現系に対する、都合がよく、安全であり、かつ経済的な代替として植物が出現している。抗体を植物細胞培養物において、または慣習的に成長させた植物において発現させることができる。植物における発現は、植物体全体にわたり得る、細胞内色素体に限定され得る、または種子（内胚乳）に限定され得る。いくつかの植物由来の抗体は開発が進んだ段階まで達している（例えば、Ｂｉｏｌｅｘ， ＮＣを参照されたい）。
【0423】
一部の態様では、ヒト化抗体の軽鎖をコードする第１の発現ベクターおよびヒト化抗体の重鎖をコードする第２の発現ベクターを用いて形質転換した宿主を各鎖が発現される様な条件下で維持するステップと、そのように発現された鎖のアセンブリによって形成されたヒト化抗体を単離するステップとを含むプロセスによって調製されるヒト化抗体を産生するための方法およびシステムが本明細書で提供される。第１の発現ベクターおよび第２の発現ベクターは同じベクターであり得る。ヒト化抗体の軽鎖または重鎖をコードするＤＮＡ配列；前記ＤＮＡ配列が組み入れられた発現ベクター；および前記発現ベクターで形質転換された宿主も本明細書に提示される。本明細書に提示される配列および情報からのヒト化抗体の生成は、当業者が過度な実験を伴わずに実施することができる。１つの手法では、４つの一般的なステップを使用して、モノクローナル抗体をヒト化する。これらは、（１）出発抗体軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインのヌクレオチドおよび予測されるアミノ酸配列を決定するステップ；（２）ヒト化抗体を設計する、すなわち、ヒト化プロセスの間にいずれの抗体フレームワーク領域を使用するかを決定するステップ；（３）実際のヒト化方法体系／技法のステップ；および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現ステップである。
精製
精製
【0424】
「単離された」という用語は、天然の状態から変更されたまたは取り出されたことを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはポリペプチド（例えば、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片）は「単離されていない」が、その天然の状態で共存する材料から部分的にまたは完全に分離された同じ核酸またはポリペプチドは、「単離された」ものである。単離された核酸分子またはポリペプチドは、実質的に精製された形態で存在し得る、または、例えば宿主細胞などのネイティブではない環境に存在し得る。単離されたポリペプチドは、その天然の環境の構成成分から分離および／または回収されたものである。その天然の環境の夾雑構成成分は、ポリペプチドの診断的または治療的使用に干渉すると思われる材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性のまたは非タンパク質性構成成分が含まれ得る。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、適切な方法によって精製することができる。好ましい実施形態では、ポリペプチドを、（１）ローリー法によって決定して、９５重量％を超える、最も好ましくは９９重量％を超えるポリペプチドまで；（２）スピニングカップシークエネーターを使用して、Ｎ末端または内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで；または（３）還元条件下または非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、クーマシーブルー、または、好ましくは、銀染色を使用して均一性が示されるまで、精製する。単離された抗体は、ポリペプチドの天然の環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないので、組換え細胞内でポリペプチドをｉｎ ｓｉｔｕで含む。しかし、普通は、単離されたポリペプチドを少なくとも１回の精製ステップによって調製する。一態様では、本明細書で提供される精製された抗体または抗原結合性断片が本明細書に開示される。
【0425】
発現されたら、本発明の全抗体、それらの二量体、個々の軽鎖および重鎖、または他の免疫グロブリン形態を公知の技法、例えば、免疫吸着またはイムノアフィニティークロマトグラフィー、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）などのクロマトグラフィー法、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、またはこれらの任意の組合せによって回収し、精製することができる。一般に、Ｓｃｏｐｅｓ， ＰＲＯＴＥＩＮ ＰＵＲＩＦ． （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， ＮＹ， １９８２）を参照されたい。特に医薬用途に関しては、９８％～９９％またはそれよりも大きな均一性を有するものなど、均一性が少なくとも約９０％～９５％である実質的に純粋な免疫グロブリンが有利である。組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内に産生され得る、ペリプラズム空間内に産生され得る、または、微生物培養物からを含め、培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、第１のステップとして、粒子デブリ、宿主細胞または溶解断片のいずれかを、例えば遠心分離または限外濾過によって除去する。Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０： １０４１－１０４３ （１９８８）；ＩＣＳＵ Ｓｈｏｒｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０： １０５ （１９９０）；およびＰｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０： ４５７－４６１ （１９９３）には、Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズム空間内に分泌された抗体を単離する手順が記載されている（［Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０： １６３－１６７ （１９９２）も参照されたい］。
【0426】
微生物細胞または哺乳動物細胞から単離された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーカチオンまたは陰イオン交換クロマトグラフィー（ａｖｉａｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技法である。プロテインＡの親和性リガンドとしての適合性は、抗体に存在する任意の免疫グロブリンＦｅドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトｙｌ、ｙ２、またはｙ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． ６２： １－１３ （１９８３））。全てのマウスアイソタイプおよびヒトｙ３に対してはプロテインＧが推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ５： １５６７１５７５ （１９８６））。親和性リガンドを付着させるマトリックスはアガロースであることが最も多いが、他のマトリックスも利用可能である。制御されたポアガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスにより、アガロースを用いて実現することができるものよりも速い流速および短いプロセス時間が可能になる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、精製にはＢａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ． Ｔ． Ｂａｋｅｒ， Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ， Ｎ．Ｊ．）が有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製の他の技法も、回収される抗体に応じて利用可能である。部分的にまたは所望の均一性まで精製されたら、次いで、ヒト化または複合ヒト抗体を、治療的にまたはアッセイ手順の開発および実施、免疫蛍光染色などに使用することができる。一般に、Ｖｏｌｓ． Ｉ ＆ ＩＩ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． （Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ ＆ Ｐｅｒｎｉｓ， ｅｄｓ．， Ａｃａｄ． Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ， １９７９ ａｎｄ １９８１）を参照されたい。
【0427】
本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片の機能活性。そのような機能活性としては、生物活性およびがん細胞抗原に結合する能力が挙げられる。さらに、機能活性を有するポリペプチドとは、例えば、生物検定などの特定のアッセイで測定して、用量依存性を伴ってまたは伴わずに、成熟形態を含めた本明細書に記載の抗体の活性と同様であるが必ずしも同一ではない活性を示すポリペプチドを意味する。用量依存性が存在する場合では、本開示の抗体の用量依存性と同一であることが必要なのではなく、所与の活性の用量依存性が本明細書に記載の抗体と比較して実質的に同様である（すなわち、候補ポリペプチドは、本明細書に記載の抗体と比べてより大きな活性を示す、または約２５分の１以下、約１０分の１以下、または約３分の１以下の活性を示す）。
抗体をコードする核酸分子
抗体をコードする核酸分子
【0428】
当業者は、本明細書に提示される情報、例えば、抗体の核酸およびアミノ酸配列を使用して、抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を容易に得ることができる。そのような核酸分子は、例えば、当技術分野に開示されている従来の方法を使用して得ることができる。本開示の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくは任意の他の形態などのＲＮＡの形態であり得る、または、これだけに限定されないが、クローニングによって得られたもしくは合成により作製されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ、もしくはこれらの任意の組合せを含めたＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、三重鎖、二重鎖または一本鎖、またはこれらの任意の組合せであり得る。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１つの鎖の任意の部分はセンス鎖としても公知のコード鎖であり得る、またはアンチセンス鎖としても公知のアンチセンス鎖であり得る。
【0429】
本明細書では互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸分子」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは塩基、および／もしくはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み入れることができる任意の基質であり得る。核酸分子は、メチル化されたヌクレオチドおよびそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーのアセンブリの前、またはその後に付与することができる。ヌクレオチドの配列に非ヌクレオチド構成成分が割り込み得る。ポリヌクレオチドを重合後に、標識構成成分とのコンジュゲーションによってなど、さらに修飾することができる。他の型の修飾としては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドの１つまたは複数の類似体での置換、例えば、非荷電連結を有するもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）および荷電連結を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリＬリシンなど）などのペンダント部分を含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾連結（例えば、アルファアノマー核酸など）を有するもの、ならびに修飾されていない形態のポリヌクレオチドが挙げられる。さらに、糖内に普通に存在するヒドロキシル基のいずれかを、例えば、標準の保護基によって保護されたホスホネート基、リン酸基によって置き換える、または活性化して、追加的なヌクレオチドとの追加的な連結を調製することができる、または、固体支持体とコンジュゲートすることができる。５’末端および３’末端ＯＨをリン酸化すること、または１～２０炭素原子のアミンまたは有機キャップ形成基部分で置換することができる。他のヒドロキシルも標準の保護基に誘導体化することができる。ポリヌクレオチドはまた、例えば、２’－Ｏ－メチル－、２’－Ｏ－アリル、２’－フルオロ－または２’－アジド－リボース、炭素環式糖類似体、α－アノマー糖、アラビノース、キシロースまたはリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体およびメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシド類似体を含めた、当技術分野で一般に公知の類似の形態のリボースまたはデオキシリボース糖も含み得る。１つまたは複数のリン酸ジエステル連結を代替連結基によって置き換えることができる。これらの代替連結基としては、これだけに限定されないが、リン酸がＰ（Ｏ）Ｓで置き換えられた実施形態（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓで置き換えられた実施形態（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ２で置き換えられた実施形態（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒで置き換えられた実施形態、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’で置き換えられた実施形態、ＣＯで置き換えられた実施形態またはＣＨ２で置き換えられた実施形態（「ホルムアセタール」）が挙げられ、ここで、各ＲまたはＲ’は、独立に、Ｈ、またはエーテル（－Ｏ－）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルもしくはアラルジルを必要に応じて含有する置換もしくは非置換アルキル（１～２０Ｃ）である。ポリヌクレオチド内の連結の全てが同一である必要はない。単離された核酸、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めた本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに前述の説明が当てはまる。
【0430】
本発明に関しては、一般に存在する核酸塩基に対する以下の略語を使用する。「Ａ」はアデノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジンを指し、「Ｕ」はウリジンを指す。一部の実施形態では、核酸分子は単離された核酸を含む。
【0431】
核酸は、全細胞内に、細胞溶解物中に、または部分的に精製されたもしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸分子は、他の細胞構成成分または他の夾雑物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から、これだけに限定されないが、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当技術分野で周知のその他を含めた標準の技法によって精製されている場合、「単離された」または「実質的に純粋になった」ものである。Ｆ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．， ｅｄ． （１９８７） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。少なくとも本開示の一部の実施形態による核酸は、例えば、ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよく、イントロン配列を含有してもよく含有しなくてもよい。好ましい実施形態では、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【0432】
本開示の別の態様は、本明細書に記載の抗体ポリペプチドもしくはその機能性断片またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列を含む核酸分子に関する。一部の実施形態では、単離された核酸分子は、改変されたＩｇＡ重鎖定常領域をコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、改変されたＩｇＡ重鎖定常領域をコードする核酸配列は、配列番号２５～３２のいずれか１つから選択される配列を含む。一部の実施形態では、可変重鎖ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号８７～８４から選択される。一部の実施形態では、単離された核酸分子は、抗体の軽鎖可変領域ポリペプチドをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０１～１０８から選択される。
【0433】
ＶＨセグメントおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られたら、これらのＤＮＡ断片を、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するために、標準の組換えＤＮＡ技法によってさらに操作することができる。これらの操作では、ＶＬをコードするＤＮＡ断片またはＶＨをコードするＤＮＡ断片を抗体定常領域または柔軟なリンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に連結する。「作動可能に連結」という用語は、これに関連して使用される場合、２つのＤＮＡ断片が、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままになるように接合していることを意味するものとする。ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡを、ＶＨをコードするＤＮＡと重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子を作動可能に連結することによって全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１－３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片を標準のＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２定常領域であり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子に関しては、ＶＨをコードするＤＮＡを重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結することができる。
【0434】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡを、ＶＬをコードするＤＮＡと軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結することによって全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１－３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片を標準のＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ定常領域であってもラムダ定常領域であってもよいが、カッパ定常領域であることが最も好ましい。
【0435】
ｓｃＦｖ遺伝子を創出するために、ＶＨをコードするＤＮＡ断片およびＶＬをコードするＤＮＡ断片を、柔軟なリンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ－４－Ｓｅｒ）３をコードする別の断片と作動可能に連結し、その結果、ＶＨ配列とＶＬ配列を、ＶＬ領域とＶＨ領域が柔軟なリンカーによって接合した連続した単鎖タンパク質として発現させることができ（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２： ４２３－４２６； Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５： ５８７９－５８８３； ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．， （１９９０） Ｎａｔｕｒｅ ３４８： ５５２－５５４を参照されたい）。
【0436】
本開示の単離された核酸分子は、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、必要に応じて１つまたは複数のイントロン、例えば、これだけに限定されないが、少なくとも１つの軽鎖の少なくともＣＤＲの、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つの指定の部分を伴う核酸分子；本明細書に開示されるがん関連抗体または可変領域、例えば軽鎖の可変領域のコード配列を含む核酸分子；ならびに上記のものとは実質的に異なるが、遺伝暗号の縮退に起因して、それでもなお本明細書に記載のおよび／または当技術分野で公知の少なくとも抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含み得る。当然、遺伝暗号は当技術分野において周知である。したがって、本開示の特定の抗体をコードするそのような縮退核酸バリアントの生成は当業者には常套的であろう。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，上記を参照されたい。また、そのような核酸バリアントは本発明に含まれる。
【0437】
抗体の１つまたは複数の鎖をコードする核酸配列を含む核酸分子が本明細書で提供される。一部の実施形態では、核酸分子は、抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、抗体の重鎖をコードする核酸配列および軽鎖をコードする核酸配列の両方を含む。一部の実施形態では、第１の核酸分子は重鎖をコードする第１の核酸配列を含み、第２の核酸分子は軽鎖をコードする第２の核酸配列を含む。
【0438】
一部の実施形態では、重鎖および軽鎖を、１つの核酸分子から、または２つの別々の核酸分子から２つの別々のポリペプチドとして発現させる。抗体がｓｃＦＶである場合などの一部の実施形態では、単一の核酸配列は、連結した重鎖と軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。
【0439】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲのうちの少なくとも３つをコードする配列を含む。一部の実施形態では、抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲのうちの少なくとも６つをコードする配列を含む。一部の実施形態では、抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列は、翻訳された際に重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。リーダー配列は、ネイティブな重鎖もしくは軽鎖リーダー配列であり得る、または別の異種リーダー配列であり得る。「リーダー配列」という用語は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を容易にする、ポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。リーダー配列を哺乳動物細胞からのポリペプチドの移出の際に切断し、それにより、成熟タンパク質を形成することができる。リーダー配列は天然であっても合成であってもよく、また、それらを付着させるタンパク質に対して異種であっても相同であってもよい。
【0440】
一部の実施形態では、核酸分子は、本明細書の表７～８の可変軽鎖および可変重鎖のアミノ酸配列のいずれかをコードするものである。一部の実施形態では、核酸配列は、本明細書の表７～８の可変軽鎖および可変重鎖のアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のものである。一部の実施形態では、核酸は、本明細書に提示される核酸配列のいずれか１つまたは複数とハイブリダイズするものである。実施形態の一部では、ハイブリダイゼーションは、中等度の条件下におけるものである。一部の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、６５℃で少なくとも約６×ＳＳＣおよび１％ＳＤＳ、約４２℃で０．１×ＳＳＣ中約２０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを用いた１０分間の第１の洗浄、および６５℃で０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳを用いたその後の洗浄などの高度にストリンジェントな条件下におけるものである。
【0441】
核酸分子は、従来の当技術分野における組換えＤＮＡ技法を使用して構築することができる。一部の実施形態では、核酸分子を、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクター内に入れる。
【0442】
本明細書の抗体または抗原結合性断片をコードする核酸分子を含むベクターが提供される。重鎖および／または軽鎖をコードする核酸分子を含むベクターも提供される。そのようなベクターとしては、これだけに限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられる。一実施形態では、軽鎖をコードする核酸および重鎖をコードする核酸を、上で概説した手順によって別々に単離する。一実施形態では、軽鎖をコードする単離された核酸および重鎖をコードする単離された核酸を別々の発現プラスミドに挿入することもでき、それぞれが適切なプロモーターおよび翻訳制御下にある限りは同じプラスミドに一緒に挿入することもできる。一部の実施形態では、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合には、重鎖および軽鎖を単一のポリペプチドの一部として発現させる。
【0443】
一部の実施形態では、第１のベクターは重鎖をコードする核酸分子を含み、第２のベクターは軽鎖をコードする核酸分子を含む。一部の実施形態では、第１のベクターおよび第２のベクターを宿主細胞に同様の量（例えば、同様のモル量または同様の質量など）でトランスフェクトする。一部の実施形態では、第１のベクターと第２のベクターを５：１から１：５の間のモル比または質量比で宿主細胞にトランスフェクトする。一部の実施形態では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターを１：１から１：５の間の質量比で使用する。一部の実施形態では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターを１：２の質量比で使用する。一部の実施形態では、ＣＨＯ細胞もしくはＣＨＯ由来の細胞、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターを選択する。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｐｒｏｇ．２０： ８８０－８８９ （２００４）に記載されている。
【0444】
一態様では、本開示は、がんを処置または防止するための方法であって、遺伝子治療として核酸分子を投与するステップを含み、核酸分子が、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨのＣＤＲ３領域またはＶＬのＣＤＲ３領域またはその抗原結合性断片をコードし、核酸分子が、本明細書に開示される（例えば表３または表４）配列を含む、方法を提供する。遺伝子治療は、発現されたまたは発現可能な核酸を対象に投与することによって実施される治療を指す。本発明のこの実施形態では、核酸により、予防効果または治療効果を媒介する、それらにコードされるタンパク質が産生される。当技術分野において利用可能な遺伝子治療のための方法のいずれかを本明細書の実施形態に従って使用することができる。
【0445】
遺伝子治療の方法の一般的な概説に関しては、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２： ４８８－５０５； Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ， １９９１， Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３： ８７－９５； Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ， １９９３， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ． ３２： ５７３－５９６； Ｍｕｌｌｉｇａｎ， １９９３， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０： ９２６－９３２；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ， １９９３， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６２： １９１－２１７； Ｍａｙ， １９９３， ＴＩＢＴＥＣＨ １１ （５）： １５５－２１５を参照されたい。使用することができる、組換えＤＮＡ技術の分野で一般的に公知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， １９９３， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ， １９９０， Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹに記載されている。妥当な細胞への治療用抗体の送達は、物理的なＤＮＡ移入法（例えば、リポソームもしくは化学的処理）の使用によるもの、またはウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、もしくはレトロウイルス）の使用によるものを含めた、当技術分野で公知の任意の適切な手法を使用することにより、ｅｘ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、またはｉｎ ｖｉｖｏにおける遺伝子治療によって行うことができる。例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ治療に関しては、所望の抗体をコードする核酸を、単独で、またはベクター、リポソーム、もしくは沈殿物と併せて対象に直接注射することができ、一部の実施形態では、抗体化合物の発現が望まれる部位に注射することができる。ｅｘ ｖｉｖｏ処置に関しては、対象の細胞を取り出し、これらの細胞に核酸を導入し、改変された細胞を対象に直接、または、例えば多孔質膜に封入し、それを患者に埋め込んで戻す。例えば、米国特許第４，８９２，５３８号および同第５，２８３，１８７号を参照されたい。核酸を生存細胞に導入するために利用可能な様々な技法が存在する。技法は、核酸を培養細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏで移入するか、または意図された宿主の細胞においてｉｎ ｖｉｖｏで移入するかに応じて変動する。核酸を哺乳動物細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏで移入するための適切な技法としては、リポソームの使用、電気穿孔、微量注射、細胞融合、ＤＥＡＥ－デキストラン、およびリン酸カルシウム沈殿が挙げられる。核酸のｅｘ ｖｉｖｏ送達に一般に使用されるベクターはレトロウイルスである。
【0446】
「宿主細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸分子がトランスフェクトされた特定の対象の細胞およびそのような細胞の後代または潜在的な後代を指す。そのような細胞の後代は、次の世代で生じ得る突然変異もしくは環境の影響または核酸分子が宿主細胞のゲノム内に組み入れることに起因して、核酸分子がトランスフェクトされた親細胞と同一ではない可能性がある。
【0447】
他のｉｎ ｖｉｖｏ核酸移入技法としては、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、単純ヘルペスＩウイルス、またはアデノ随伴ウイルスなど）を用いたトランスフェクションおよび脂質に基づく系が挙げられる。核酸およびトランスフェクション薬剤には必要に応じて微小粒子が付随する。例示的なトランスフェクション薬剤としては、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈澱、ＤＥＡＥデキストラン媒介性トランスフェクション、第四級アンモニウム両親媒性物質ＤＯＴＭＡ（（ジオレオイルオキシプロピル）トリメチルアンモニウムブロミド、ＧＩＢＣＯ－ＢＲＬによりＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎとして商品化されている））（Ｆｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ， （１９８７） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８４， ７４１３－７４１７；Ｍａｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６ ６０７７－６０８１）；ペンダントトリメチルアンモニウム頭部を有する親油性グルタミン酸ジエステル（Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ １０２３， １２４－１３２）；カチオン性脂質ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミルスペルミン（ＤＰＰＥＳ）などの代謝可能な親脂質（Ｊ． Ｐ． Ｂｅｈｒ （１９８６） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ２７， ５８６１－５８６４； Ｊ． Ｐ． Ｂｅｈｒ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６， ６９８２－６９８６）；代謝可能な四級アンモニウム塩（ＤＯＴＢ、Ｎ－（１－［２，３－ジオレオイルオキシ］プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムメチル硫酸（ＤＯＴＡＰ）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ジオレオイルエステル、ＣｈｏＴＢ、ＣｈｏＳＣ、ＤＯＳＣ）（Ｌｅｖｅｎｔｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｉｎｔｅｒ． ２２， ２３５－２４１）；３ベータ［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）／３ベータ［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロールＤＣ－Ｃｈｏｌ、１対１混合物（Ｇａｏ ｃｔ ａｌ．， （１９９１） Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ １０６５， ８－１４）、スペルミン、スペルミジン、リポポリアミン（Ｂｅｈｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ， １９９４， ５： ３８２－３８９）、親油性ポリリシン（ＬＰＬＬ）（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．， （１９９１） Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ９３９， ８－１８）、過剰のホスファチジルコリン／コレステロールを伴う［［（１，１，３，３テトラメチルブチル）クレソキシ］エトキシ］エチル］ジメチルベンジル（ｄｉｍｅｔｈｌｂｎｚｙｌ）アンモニウム水酸化物（ＤＥＢＤＡ水酸化物）（Ｂａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ９３９， ８－１８）、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）／ＤＯＰＥ混合物（Ｐｉｎｎａｄｕｗａｇｅ ｅｔ ａｌ， （１９８９） Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ９８５， ３３－３７）、ホスファチジルエタノールアミンとの混和物中にＤＯＰＥ、ＣＴＡＢ、ＤＥＢＤＡ、ジドデシルアンモニウム臭化物（ＤＤＡＢ）、およびステアリルアミンを伴うグルタミン酸の親油性ジエステル（ＴＭＡＧ）（Ｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ．， （１９９１） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅ １０， ５２０－５２５）、ＤＤＡＢ／ＤＯＰＥ（ＴｒａｎｓｆｅｃｔＡＣＥ、ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）、ならびにオリゴガラクトースを有する脂質が挙げられる。移入の効率を上昇させる例示的なトランスフェクション増強剤としては、例えば、ＤＥＡＥ－デキストラン、ポリブレン、リソソーム分裂ペプチド（Ｏｈｍｏｒｉ Ｎ Ｉ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ Ｊｕｎ． ２７， １９９７； ２３５ （３）： ７２６－９）、コンドロイチン（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔａｎ）に基づくプロテオグリカン、硫酸化プロテオグリカン、ポリエチレンイミン、ポリリシン（Ｐｏｌｌａｒｄ Ｈ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， １９９８ ２７３ （１３）： ７５０７－１１）、インテグリン結合性ペプチドＣＹＧＧＲＧＤＴＰ、直鎖状デキストランノナサッカライド、グリセロール、オリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオシド間連結に係留されたコレステリル基（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ， Ｒ． Ｌ． １９８９ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６： （１７）： ６５５３－６）、リゾホスファチド、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、および１－オレオイルリゾホスファチジルコリンが挙げられる。
【0448】
一部の状況では、核酸を含有するベクターを標的細胞に方向付ける薬剤を用いて核酸を送達することが望ましい場合がある。そのような「ターゲティング」分子としては、標的細胞上の細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体、または標的細胞上の受容体のリガンドが挙げられる。リポソームを使用する場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質をターゲティングのためにおよび／または取り込みを容易にするために使用することができる。そのようなタンパク質の例としては、特定の細胞型に対する向性をもつカプシドタンパク質およびその断片、循環中に内部移行するタンパク質に対する抗体、および細胞内局在化を標的とし、細胞内半減期を増強するタンパク質が挙げられる。他の実施形態では、受容体媒介性エンドサイトーシスを使用することができる。そのような方法は、例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， １９８７またはＷａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９０に記載されている。現在公知の遺伝子マーキングおよび遺伝子治療プロトコールの概説に関しては、Ａｎｄｅｒｓｏｎ １９９２を参照されたい。ＷＯ９３／２５６７３およびそこで引用されている参考文献も参照されたい。
キメラ抗原受容体
キメラ抗原受容体
【0449】
一態様では、本明細書の開示は、本明細書に開示される抗原結合性断片、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体を提供する。「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」、または「キメラ免疫受容体」という用語は、本明細書で使用される場合、任意の特異性を免疫エフェクター細胞に移植する工学的に操作された受容体を指す。ＣＡＲは、一般には、抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメインを含む細胞外ドメイン（外部ドメイン）、および細胞内（エンドドメイン）ドメインを含む。「シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内に情報を伝達して、規定されたシグナル伝達経路を介して二次メッセンジャーを生成することによって細胞の活性を調節することによって、またはそのようなメッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することによって作用するタンパク質の機能的部分を指す。
【0450】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用される場合、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えばＣＡＲＴ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性およびサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。
【0451】
ある実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインとしては、一次刺激、または抗原依存性シミュレーションに関与する分子に由来するものが挙げられる。ある実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナル、または抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、ＣＡＲＴの場合では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、補助受容体または共刺激分子由来の細胞質配列を含み得る。
【0452】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含有する一次細胞質内シグナル伝達配列の例としては、これだけに限定されないが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄ ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。
【0453】
「ゼータ」あるいは「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」または「ＴＣＲ－ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎ Ａｃｃ．Ｎｏ．ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、または非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿など由来の等価の残基と定義され、「ゼータ刺激ドメイン」あるいは「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」または「ＴＣＲ－ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化のために必要な最初のシグナルを機能的に伝達するために十分であるゼータ鎖の細胞質ドメイン由来のアミノ酸残基と定義される。一態様では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．Ｎｏ．ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２から１６４までまたはその機能的なオルソログである非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、類人猿など由来の等価の残基を含む。
【0454】
「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それにより、これだけに限定されないが、増殖などの、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上の同類の結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、これだけに限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられる。
【0455】
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分に由来するものであり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーで表される：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、および活性化ＮＫ細胞受容体。そのような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
【0456】
細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の、細胞内部分全体、またはネイティブな細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその機能性断片を含み得る。
【0457】
別の態様では、抗原結合性断片は、ヒト化抗体または抗体断片を含む。一実施形態では、抗原結合性断片は、本明細書に記載の抗体の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ－ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ－ＣＤＲ３）のうちの１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ全て）、ならびに本明細書に記載の抗体の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ－ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ－ＣＤＲ３）のうちの１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ全て）を含む。
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメイン
【0458】
膜貫通ドメインに関しては、種々の実施形態では、ＣＡＲを、ＣＡＲの細胞外ドメインに付着した膜貫通ドメインを含むように設計することができる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接する１つまたは複数の追加的なアミノ酸、例えば、膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域に付随する１つもしくは複数のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、最大１５アミノ酸）および／または膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域に付随する１つもしくは複数の追加的なアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、最大１５アミノ酸）を含み得る。一態様では、膜貫通ドメインは、使用されるＣＡＲの他のドメインのうちの１つに付随するものである。一部の場合では、例えば、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするために、そのようなドメインの同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとの結合が回避されるように膜貫通ドメインを選択することまたはアミノ酸置換によって改変することができる。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ Ｔ細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体を形成することができる。異なる態様では、同じＣＡＲ Ｔ細胞に存在するネイティブな結合パートナーの結合性ドメインとの相互作用を最小限にするために、膜貫通ドメインのアミノ酸配列を改変または置換することができる。
【0459】
膜貫通ドメインは、天然の供給源または組換え供給源のいずれかに由来するものであり得る。供給源が天然である場合、膜貫通ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来するものであり得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときに細胞内ドメインへのシグナル伝達を行うことができるものである。膜貫通ドメインは、例えば、例えば、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４のアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖の少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【0460】
一部の場合では、膜貫通ドメインを、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合性ドメインに、ヒンジ、例えばヒトタンパク質由来のヒンジを介して付着させることができる。例えば、一実施形態では、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、またはＣＤ８ａヒンジであり得る。一態様では、ヒンジまたはスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。
細胞質ドメイン
細胞質ドメイン
【0461】
ＣＡＲの細胞質ドメインまたは領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般に、ＣＡＲが導入された免疫細胞の通常のエフェクター機能のうちの少なくとも１つの活性化に関与する。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含めた細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを変換し、細胞を特殊化された機能を実施するように方向付けるタンパク質の部分を指す。通常は細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分が使用される範囲では、そのような短縮された部分によりエフェクター機能シグナルが変換される限りは、そのような短縮された部分をインタクトな鎖の代わりに使用することができる。したがって、細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを変換するために十分なあらゆる細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分を含むものとする。
【0462】
本発明のＣＡＲに使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、抗原受容体会合後に協力して作用してシグナルトランスダクションを開始させるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と補助受容体の細胞質配列、ならびに同じ機能的能力を有するこれらの配列の任意の誘導体またはバリアントおよび任意の組換え配列が挙げられる。
【0463】
ＴＣＲ単独で生成されるシグナルはＴ細胞の完全な活性化のためには不十分であること、ならびに二次および／または共刺激シグナルも必要であることが公知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞質内シグナル伝達配列：ＴＣＲを通じて抗原依存性一次活性化を開始するもの（一次細胞内シグナル伝達ドメイン）および抗原非依存的に作用して二次または共刺激シグナルをもたらすもの（二次的な細胞質内シグナル伝達ドメイン、例えば、共刺激ドメイン）によって媒介されると言うことができる。
【0464】
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性に、または阻害性に調製する。刺激性に作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含有し得る。
【0465】
本発明において特に有用なＩＴＡＭを含有する一次細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄのものが挙げられる。一実施形態では、本発明のＣＡＲ、例えば、ＣＡＲは、ＣＤ３－ゼータの細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、一次シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ネイティブなＩＴＡＭドメインと比較して変更された（例えば、増大したまたは低下した）活性を有する改変されたＩＴＡＭドメイン、例えば、突然変異したＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、改変されたＩＴＡＭを含有する一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化されたおよび／または短縮されたＩＴＡＭを含有する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれよりも多くのＩＴＡＭモチーフを含む。
【0466】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインをそれ自体で含み得る、または、ＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを本発明のＣＡＲに関して有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせることができる。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分および共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部を指す。共刺激分子は、抗原受容体以外の細胞表面分子またはリンパ球の、抗原に対する効率的な応答に必要なリガンドである。そのような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトＣＡＲＴ細胞の増大、エフェクター機能、および生存を増強し、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるヒトＴ細胞の持続性および抗腫瘍活性を強化することが実証されている（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｂｌｏｏｄ． ２０１２； １１９ （３）： ６９６－７０６）。
【0467】
本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列を互いにランダムなまたは指定の順序で連結することができる。必要に応じて、例えば、２アミノ酸から１０アミノ酸の間（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）の長さの短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーにより、細胞内シグナル伝達配列間に連結を形成することができる。一実施形態では、グリシン－セリンダブレットを適切なリンカーとして使用することができる。一実施形態では、単一のアミノ酸、例えば、アラニン、グリシンを適切なリンカーとして使用することができる。
【0468】
一態様では、細胞内シグナル伝達ドメインを、２つまたはそれよりも多く、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれよりも多くの共刺激シグナル伝達ドメインを含むように設計する。ある実施形態では、２つまたはそれよりも多く、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれよりも多くの共刺激シグナル伝達ドメインをリンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子によって分離する。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、リンカー分子はグリシン残基である。一部の実施形態では、リンカーはアラニン残基である。
【0469】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、実際には抗原全体を認識するのではない；その代わりに、抗原の表面の一部、抗原性決定因子またはエピトープと称される領域にのみ結合する。
【0470】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、グリコシル化された、アミド化された、カルボキシル化された、リン酸化された、エステル化された、Ｎ－アシル化された、例えばジスルフィド架橋によって環化された、もしくは酸付加塩に変換された、および／または必要に応じて二量体を形成したもしくは重合した、もしくはコンジュゲートしたものを含む（その機能的部分および機能的バリアントを含めて）。
免疫コンジュゲート
免疫コンジュゲート
【0471】
本開示の一態様では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、腫瘍に対する強力な免疫応答を開始し得る、かつ／または細胞傷害性を方向付けることができる。この点について、本明細書の抗体またはその抗原結合性断片は、どちらも免疫グロブリン分子のインタクトなＦｅ部分がエフェクター細胞Ｆｅ受容体部位または補体タンパク質と相互作用するために必要である補体媒介性細胞傷害機構または抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）機構のいずれかによって腫瘍細胞溶解を引き出し得る。さらに、腫瘍成長に対する直接的な生物学的効果を発揮する抗体が本開示の実施に有用である。そのような直接的に細胞傷害性の抗体が作用し得る潜在的な機構としては、細胞成長の阻害、細胞分化のモジュレーション、腫瘍血管新生因子プロファイルのモジュレーション、およびアポトーシスの誘導が挙げられる。本明細書に開示される特定の抗体またはその抗原結合性断片が抗腫瘍効果を発揮する機構は、当技術分野で一般に公知の通り、ＡＤＣＣ、ＡＤＭＭＣ、補体媒介性細胞溶解などを決定するために設計された任意の数のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して評価することができる。
【0472】
本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、それらの「ネイキッド」またはコンジュゲートしていない形態で投与することもでき、治療剤をコンジュゲートすることもできる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を放射線増感剤として使用する。そのような実施形態では、抗体または抗原結合性断片を、放射線増感物質とコンジュゲートする。「放射線増感剤」という用語は、本明細書で使用される場合、動物に、細胞の電磁放射線に対する放射線増感の感受性を増大させるため、および／または電磁放射線を用いて処置可能な疾患の処置を促進するために治療有効量で投与される分子、好ましくは低分子量分子と定義される。電磁放射線を用いて処置可能な疾患としては、新生物疾患、良性および悪性腫瘍、ならびにがん性細胞が挙げられる。
【0473】
「電磁放射線」および「放射線」という用語は、本明細書で使用される場合、これだけに限定されないが、１０－２０～１００メートルの波長を有する放射線を含む。本開示の好ましい実施形態では、例えば、電磁放射線：ガンマ線ｃ１０－２０～１０－１３ｍ）、Ｘ線照射（１０－１２～１０－９ｍ）、紫外線（１０ｎｍ～４００ｎｍ）、可視光線（４００ｎｍ～７００ｎｍ）、赤外線（７００ｎｍ～１．０ｍｍ）、およびマイクロ波照射（１ｍｍ～３０ｃｍ）を使用することができる。
【0474】
放射線増感剤は、電磁放射線の毒作用に対するがん性細胞の感受性を増大させることが公知である。多くのがん処置プロトコールでは、現在、Ｘ線の電磁放射線によって活性化された放射線増感剤が使用されている。Ｘ線により活性化された放射線増感剤の例としては、これだけに限定されないが、以下が挙げられる：メトロニダゾール、ミソニダゾール、脱メチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ １０６９、ＳＲ ４２３３、Ｅ０９、ＲＢ ６１４５、ニコチンアミド、５－ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５－ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦＵｄＲ）、ヒドロキシウレア、シスプラチン、ならびにその治療的に有効な類似体および誘導体。
【0475】
がんの光線力学的療法（ＰＤＴ）では、増感物質の放射線活性化因子として可視光線を使用する。光線力学的放射線増感剤の例としては、以下が挙げられるが、これだけに限定されない：ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフリン（登録商標）、ベンゾポルフィリン誘導体、ＮＰｅ６、スズエチオポルフィリン（ＳｎＥＴ２）、フェオボルビド－ａ、バクテリオクロロフィル－ａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、ならびにその治療的に有効な類似体および誘導体。
【0476】
別の実施形態では、抗体を、腫瘍予備標的化に利用するために受容体（ストレプトアビジンなど）とコンジュゲートすることができ、その場合、抗体－受容体コンジュゲートを患者に投与し、その後、結合しなかったコンジュゲートを除去剤を使用して循環から除去し、次いで、細胞傷害性薬剤（例えば、放射性核種）とコンジュゲートしたリガンド（例えば、アビジン）を投与する。
【0477】
本開示は、さらに、検出可能に標識された形態の上記の抗体または抗原結合性断片を提供する。放射性同位元素、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジンなど）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなど）蛍光または発光または生物発光標識（例えば、ＦＩＴＣまたはローダミンなど）、常磁性原子などを使用することにより、抗体を検出可能に標識することができる。そのような標識を実現するための手順は当技術分野で周知である；例えば、（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ， Ｌ． Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ． Ｃｙｔｏｃｈｅｍ． １８： ３１５ （１９７０）； Ｂａｙｅｒ， Ｅ． Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍ． ６２： ３０８ （１９７９）； Ｅｎｇｖａｌ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌ． １０９： １２９ （１９７２）； Ｇｏｄｉｎｇ， Ｊ．Ｗ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． １３： ２１５ （１９７６））を参照されたい。
【0478】
「標識」は、抗体に直接または間接的にコンジュゲートした検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能なものであってよい（例えば、放射性同位元素標識もしくは蛍光標識）、または、酵素標識の場合では、基質である化合物または組成物の検出可能な化学的変質を触媒し得る。あるいは、標識は、それ自体が検出可能なものでなくてよいが、検出可能な別の薬剤が結合するエレメントであり得る（例えば、エピトープタグ、または例えばビオチン－アビジンなどの結合パートナー対の一方）。したがって、抗体は、その単離を容易にする標識またはタグを含んでよく、抗体を同定するための本発明の方法は、抗原／抗体を標識またはタグとの相互作用によって単離するステップを含む。
【0479】
例示的な治療用免疫コンジュゲートは、化学療法剤、毒素（例えば、細菌起源、真菌起源、植物起源または動物起源の酵素的に活性な毒素、もしくはその断片）、または放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート）などの細胞傷害性薬剤とコンジュゲートした本明細書に記載の抗体を含む。融合タンパク質を以下にさらに詳細に記載する。
【0480】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体およびその抗原結合性断片を、化学療法用細胞毒、例えば、細胞増殖抑制剤もしくは細胞破壊薬剤（例えば、パクリタキソール、サイトカラシンＢまたはジフテリア毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンおよびその類似体もしくはホモログ）、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）、ならびに抗有糸分裂薬、血栓性もしくは抗血管新生剤または放射性標識などの治療剤とコンジュゲートすることができる。免疫コンジュゲートを形成するための適切な細胞傷害性薬剤および化学療法剤の例は、当技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい）。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体およびその抗原結合性断片を、例えば、酵素、蛍光マーカー、化学発光マーカー、生物発光材料、または放射性材料などの、検出可能な基質とコンジュゲートする。本明細書に記載の態様の一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体およびその抗体断片を、毒素（例えば、細菌起源、真菌起源、植物起源もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、もしくはその断片）、小分子、ｓｉＲＮＡ、ナノ粒子、標的薬剤（例えば、微小気泡）、または放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート）とコンジュゲートする。そのようなコンジュゲートを本明細書では「免疫コンジュゲート」と称する。そのような免疫コンジュゲートは、例えば、診断方法、セラノスティクス方法、または標的化方法に使用することができる。
【0481】
使用することができる酵素的に活性な毒素およびその断片としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテシンが挙げられる。種々の放射性同位元素が放射性コンジュゲート抗体の作製のために利用可能である。例としては、これだけに限定されないが、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが挙げられる。
【0482】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害性薬剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアン酸（例えば、トリエン２，６－ジイソシアン酸など）、およびビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの、種々の二官能性タンパク質カップリング剤のいずれかを使用して作出することができる。例えば、リシン免疫毒素をＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．， ２３８ Ｓｃｉｅｎｃｅ １０９８ （１９８７）に記載されている通り調製することができる。炭素１４で標識された１－イソチオシアネートベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は放射性ヌクレオチドと抗体のコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。
【0483】
他の実施形態では、抗体またはその一部を、腫瘍予備標的化に利用するために、「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）とコンジュゲートすることができ、その場合、抗体－受容体コンジュゲートを対象に投与し、その後、結合しなかったコンジュゲートを除去剤を使用して循環から除去し、次いで、細胞傷害性薬剤（例えば、放射性ヌクレオチド）とコンジュゲートした「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。一部の実施形態では、抗体またはその抗体断片をビオチンとコンジュゲートすることができ、ビオチンとコンジュゲートした抗体またはその抗体断片を、ストレプトアビジンを結合させたまたはコーティングした薬剤と、例えば、例えば血管新生の分子イメージングに使用するために、ストレプトアビジンをコーティングした微小気泡などと、さらにコンジュゲートまたは連結することができる。
【0484】
そのような治療用部分を抗体とコンジュゲートするための技法は周知であり、例えば、Ａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．， ”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ２４３－５６ （Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． １９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， ”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”、ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．） ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．） ，ｐｐ． ６２３－５３ （Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ． １９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ， ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４： Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．） ，ｐｐ． ４７５－５０６ （１９８５）；”Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｒｅｓｕｌｔｓ， Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．） ，ｐｐ． ３０３－１６ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， ”Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ． ， ６２： １１９－５８ （１９８２）を参照されたい。
【0485】
免疫コンジュゲートの作製は、米国特許第６，３０６，３９３号に記載されている。免疫コンジュゲートは、治療剤と抗体構成成分を間接的にコンジュゲートすることによって調製することができる。一般的な技法は、Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ４１ ：８３２－８３９ （１９８８）；Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ４６： １１０１－１１０６ （１９９０）；およびＳｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，０５７，３１３号に記載されている。一般的な方法は、酸化した炭水化物部分を有する抗体構成成分を、少なくとも１つの遊離のアミン官能基を有し、複数の薬物、毒素、キレーター、ホウ素アデンド（ｂｏｒｏｎ ａｄｄｅｎｄ）、または他の治療剤が負荷されている担体ポリマーと反応させることを伴う。この反応の結果、最初のシッフ塩基（イミン）連結がもたらされ、これを二級アミンに還元して最終的なコンジュゲートを形成することによって安定化することができる。
【0486】
担体ポリマーは、アミノデキストランまたは少なくとも５０アミノ酸残基のポリペプチドであることが好ましいが、他の実質的に等価のポリマー担体も使用することができる。最終的な免疫コンジュゲートは、治療における使用のための投与のしやすさおよび有効なターゲティングのために、哺乳動物の血清などの水溶液に可溶性であることが好ましい。したがって、担体ポリマーに対する可溶化機能により、最終的な免疫コンジュゲートの血清溶解性が増強される。特に、アミノデキストランが好ましい。
【0487】
アミノデキストラン担体との免疫コンジュゲートを調製するためのプロセスは、一般には、デキストランポリマー、有利に、平均分子量が約１０，０００～１００，０００であるデキストランを用いて開始される。デキストランの炭水化物環の一部の制御された酸化に影響を及ぼしてアルデヒド基を生成するために、デキストランを酸化剤と反応させる。ＮａＩ０４などの解糖化学的試薬を用い、従来の手順に従って都合よく酸化に影響を及ぼす。
【0488】
次いで、酸化されたデキストランをポリアミン、好ましくはジアミン、より好ましくはモノヒドロキシジアミンまたはポリヒドロキシジアミンと反応させる。適切なアミンとしては、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、または他の同様のポリメチレンジアミン、ジエチレントリアミンまたは同様のポリアミン、１，３－ジアミノ－２－ヒドロキシプロパン、または他の同様のヒドロキシル化されたジアミンまたはポリアミンなどが挙げられる。アルデヒド官能基のシッフ塩基基への実質的に完全な変換を確実にするために、デキストランのアルデヒド基に対して過剰のアミンを使用する。
【0489】
ＮａＢＨ４、ＮａＢＨ３ＣＮなどの還元剤を使用して、得られたシッフ塩基中間体の還元的安定化を行う。得られた付加生成物を、従来のサイズ選別カラムを通過させて、架橋結合したデキストランを除去することによって精製することができる。アミン官能基を導入するために、デキストランを誘導体化する他の従来の方法、例えば、臭化シアンとの反応後のジアミンとの反応も使用することができる。次いで、アミノデキストランを、負荷される特定の薬物、毒素、キレーター、免疫モジュレーター、ホウ素アデンド、または他の治療剤の、従来の手段によって、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはその水溶性バリアントを使用して調製された活性化形態、好ましくはカルボキシル活性化誘導体と反応させて、中間付加生成物を形成する。
【0490】
あるいは、例えばヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質またはリシンＡ鎖などのポリペプチド毒素をアミノデキストランとグルタルアルデヒド縮合によって、またはタンパク質の活性化されたカルボキシル基とアミノデキストランのアミンの反応によってカップリングすることができる。放射性金属に対するキレーターまたは磁気共鳴増強剤は当技術分野で周知である。エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）およびジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体が典型的なものである。これらのキレーターは、一般には、キレーターを担体に付着させることができる基を側鎖上に有する。そのような基としては、例えば、ＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを担体のアミン基にカップリングすることができるベンジルイソチオシアネートが挙げられる。あるいは、キレーター上のカルボキシル基またはアミン基を担体に活性化または事前誘導体化によってカップリングし、次いで、全て周知の手段によってカップリングすることができる。
【0491】
カルボランなどのホウ素アデンドは、従来の方法によって抗体構成成分に付着させることができる。例えば、カルボランは、当技術分野で周知の通りペンダント側鎖上のカルボキシル官能基を用いて調製することができる。そのようなカルボランの担体、例えばアミノデキストランへの付着は、カルボランのカルボキシル基の活性化、および担体上のアミンと縮合して中間コンジュゲートを作製することによって実現することができる。次いで、下記の通り、そのような中間コンジュゲートを抗体構成成分に付着させて治療的に有用な免疫コンジュゲートを作製する。
【0492】
ポリペプチド担体をアミノデキストランの代わりに使用することができるが、ポリペプチド担体は鎖内に少なくとも５０アミノ酸残基、好ましくは１００～５０００アミノ酸残基を有するべきである。アミノ酸の少なくとも一部はリシン残基またはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸残基であるべきである。リシン残基のペンダントアミンならびにグルタミンおよびアスパラギン酸のペンダントカルボン酸は、薬物、毒素、免疫モジュレーター、キレーター、ホウ素アデンドまたは他の治療剤を付着させるために都合がよい。得られる負荷された担体および免疫コンジュゲートに望ましい溶解特性を付与するために、適切なポリペプチド担体の例としては、ポリリシン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、それらの共重合体、およびこれらのアミノ酸とその他、例えばセリンの混合ポリマーが挙げられる。
【0493】
中間コンジュゲートと抗体構成成分のコンジュゲーションを、抗体構成成分の炭水化物部分を酸化させ、得られたアルデヒド（およびケトン）カルボニルを、薬物、毒素、キレーター、免疫モジュレーター、ホウ素アデンド、または他の治療剤の負荷後に担体上の残りのアミン基と反応させることによって行う。あるいは、中間コンジュゲートを、酸化させた抗体構成成分に、治療剤の負荷後に中間コンジュゲートに導入されたアミン基を介して付着させることができる。酸化は、化学的に、例えば、ＮａＩ０４もしくは他の解糖試薬を用いて、または酵素的に、例えばノイラミニダーゼおよびガラクトースオキシダーゼを用いてのいずれかで都合よく行うことができる。アミノデキストラン担体の場合では、一般には、アミノデキストランのアミンの全てが治療剤の負荷に使用されるとは限らない。アミノデキストランの残りのアミンを酸化させた抗体構成成分と縮合させてシッフ塩基付加生成物を形成し、次いで、これを、通常はホウ化水素還元剤を用いて還元的に安定化させる。
【0494】
類似の手順を使用して本発明による他の免疫コンジュゲートを作製することができる。負荷されたポリペプチド担体は、酸化した抗体構成成分の炭水化物部分との縮合のために残っている遊離のリシン残基を有することが好ましい。ポリペプチド担体上のカルボキシルを、必要であれば、例えば、ＤＣＣを用いた活性化および過剰のジアミンとの反応によってアミンに変換することができる。
【0495】
最終的な免疫コンジュゲートを、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００でのサイズ選別クロマトグラフィーまたは１つもしくは複数のＣＤ８４Ｈｙエピトープを使用したアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の技法を使用して精製する。あるいは、免疫コンジュゲートを、抗体構成成分と治療剤を直接コンジュゲートすることによって調製することができる。一般的な手順は、治療剤を酸化させた抗体構成成分に直接付着させる以外は間接的なコンジュゲーション方法と同様である。他の治療剤で本明細書に記載のキレーターを置換することができることが理解されよう。当業者は過度な実験を伴わずにコンジュゲーションスキームを考案することができよう。
【0496】
さらなる例示として、治療剤を還元した抗体構成成分のヒンジ領域にジスルフィド結合の形成によって付着させることができる。例えば、ペプチドの抗体構成成分への付着に使用される単一のシステイン残基を有する破傷風トキソイドペプチドを構築することができる。代替として、そのようなペプチドを抗体構成成分にＮ－サクシニル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）などのヘテロ二官能性架橋剤を使用して付着させることができる。Ｙｕ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ５６： ２４４ （１９９４）。そのようなコンジュゲーションのための一般的な技法は当技術分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ， Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ－Ｌｉｎｋｉｎｇ （ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９１）；Ｕｐｅｓｌａｃｉｓ ｅｔ ａｌ．， ”Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｂｉｒｃｈ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．） ， ｐａｇｅｓ １８７－２３０ （Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． １９９５）；Ｐｒｉｃｅ， ”Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ， Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．） ， ｐａｇｅｓ ６０－８４ （Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９９５）を参照されたい。
【0497】
抗体と細胞傷害性薬剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ）など）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアン酸（例えば、トリエン２，６－ジイソシアン酸など）、およびビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの種々の二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作出する。例えば、リシン免疫毒素をＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８： １０９８ （１９８７）に記載されている通り調製することができる。炭素１４で標識された１－イソチオシアネートベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は放射性核種と抗体のコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である（例えば、Ｗ０９４／１１０２６を参照されたい）。
【0498】
上記の通り、抗体のＦｃ領域内の炭水化物部分を治療剤とのコンジュゲーションに使用することができる。しかし、抗体断片を免疫コンジュゲートの抗体構成成分として使用する場合にはＦｃ領域が存在しない可能性がある。それにもかかわらず、炭水化物部分を抗体または抗体断片の軽鎖可変領域に導入することが可能である。例えば、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４： ５９１９ （１９９５）； Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，４４３，９５３号を参照されたい。それでは、工学的に操作された炭水化物部分を治療剤への付着に使用する。［０４０４］さらに、コンジュゲーション方法の多数の可能性のある変形形態が当業者には理解されよう。例えば、インタクトな抗体またはその抗原結合性断片の血液、リンパ液、または他の細胞外液中での半減期を延長するために、炭水化物部分を使用してポリエチレングリコールを付着させることができる。さらに、治療剤を炭水化物部分および遊離のスルフヒドリル基に付着させることにより、「二価免疫コンジュゲート」を構築することが可能である。そのような遊離のスルフヒドリル基は、抗体構成成分のヒンジ領域内に位置し得る。
【0499】
一部の実施形態では、標的抗原に関連する状態を診断または処置するための方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗原に関連する状態は、抗原の発現または生物活性の増大に起因した結果である。一部の実施形態では、抗原に関連する状態は、抗原の発現または生物活性の低下に起因した結果である。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、抗原に結合し、それにより、抗原の発現および／または少なくとも１つの生物活性を部分的にまたは実質的に阻害する。本明細書に開示される抗原の発現および／または少なくとも１つの生物活性を部分的にまたは好ましくは実質的に阻害する抗体または指定の部分またはそのバリアントは、タンパク質抗原またはその断片に結合し、それにより、抗原、例えば特定の抗原と結合することが当技術分野で公知の１つまたは複数の受容体またはリガンドとの抗原の結合を通じて媒介される活性を阻害し得る。一部の実施形態では、抗体は、抗原活性を、約２０～１２０％、好ましくは少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％またはそれよりも大きく阻害し得る。本明細書に開示される抗原の発現および／または少なくとも１つの生物活性を部分的にまたは好ましくは実質的に増大させる抗体または指定の部分またはそのバリアントは、タンパク質抗原またはその断片に結合し、それにより、抗原を通じて媒介される活性を増大させ得る。一部の実施形態では、抗体は、抗原活性を約２０～１２０％、好ましくは少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％またはそれよりも大きく増大させ得る。
【0500】
抗原依存性活性を増大させる抗体の能力を、本明細書に記載されており、かつ／または当技術分野で公知の少なくとも１つの適切なアッセイによって評価することが好ましい。一部の実施形態では、抗原に関係する状態は、免疫に関係する疾患、心血管疾患、感染性疾患、悪性疾患または神経疾患であり得る。
処置方法
処置方法
【0501】
一部の実施形態では、それを必要とする対象を処置する方法であって、対象に本明細書に記載の治療用ＩｇＡ抗体または本明細書に記載の前記治療用ＩｇＡ抗体を含む医薬組成物を治療用量で投与することを含む方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、対象は、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患を有する。
【0502】
一部の実施形態では、対象は、がんを有する。一部の実施形態では、対象は、炎症性障害を有する。一部の実施形態では、がんは、本明細書に記載の腫瘍関連抗原の発現に関連するものである。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ４７、ＣＤ２０、ＧＤ２、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２の発現に関連するものである。
【0503】
一部の実施形態では、本明細書に記載の治療用ＩｇＡ抗体または医薬組成物を、ＣＤ２０の過剰発現に関連するがんを有する対象に投与する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、本明細書に記載の治療用ＩｇＡ抗体または医薬組成物を、ＧＤ２の過剰発現に関連するがんを有する対象に投与する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、本明細書に記載の治療用ＩｇＡ抗体または医薬組成物を、メソテリンの過剰発現に関連するがんを有する対象に投与する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、改変されたエフェクター細胞を、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＵＣ１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２の過剰発現に関連するがんを有する対象に投与する方法が本明細書に開示される。
【0504】
一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。他の実施形態では、がんは、再燃したまたは難治性がんである。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍または血液の悪性腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。他の実施形態では、がんは、血液の悪性腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の実施形態では、がんは、再燃したまたは難治性がんである。
【0505】
一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。例示的な固形腫瘍としては、これだけに限定されないが、肛門がん；虫垂癌；胆管がん（すなわち、胆管細胞癌）；膀胱がん；脳腫瘍；乳がん；子宮頸がん；結腸がん；原発不明がん（ＣＵＰ）；食道がん；眼がん；卵管がん；消化器がん；腎がん；肝がん；肺がん；髄芽腫；黒色腫；口腔がん；卵巣がん；膵がん；副甲状腺疾患；陰茎がん；下垂体腫瘍；前立腺がん；直腸のがん；皮膚がん；胃がん；精巣がん；咽頭がん；甲状腺がん；子宮がん；膣がん；外陰がん；または神経膠芽腫が挙げられる。
【0506】
一部の実施形態では、がんは、血液の悪性腫瘍である。一部の実施形態では、血液の悪性腫瘍は、リンパ腫、白血病、骨髄腫、またはＢ細胞悪性腫瘍を含む。一部の実施形態では、血液の悪性腫瘍は、リンパ腫、白血病または骨髄腫を含む。一部の実施形態では、例示的な血液悪性腫瘍として、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、高リスクＣＬＬ、非ＣＬＬ／ＳＬＬリンパ腫、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞性前リンパ性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。一部の実施形態では、血液の悪性腫瘍は、骨髄性白血病を含む。一部の実施形態では、血液の悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む。
【0507】
一部の実施形態では、抗体またはその断片は、ＧＤ２、ＡＬＫ、ｈＮＥＴ、ＧＤ３、およびＣＤ２０のうちの１つまたは複数に結合する。一部の実施形態では、ＧＤ２陽性腫瘍は、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、黒色腫、小細胞肺がん、神経膠芽腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、平滑筋肉腫、およびこれらの任意の組合せである。ある態様では、抗体またはその断片は、神経芽細胞腫細胞に結合する。一部の実施形態では、ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）陽性腫瘍は、未分化大細胞リンパ腫、肺腺癌、神経芽細胞腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、腎細胞癌、食道の扁平上皮癌、乳がん、結腸腺癌、多形神経膠芽腫または甲状腺未分化がんである。一部の実施形態では、ｈＮＥＴ（ヒトノルエピネフリン輸送体）陽性腫瘍は、膀胱腫瘍、乳腺腫瘍、前立腺腫瘍、癌腫、白血病、肝がん、肺がん、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣腫瘍、膵腫瘍または網膜芽細胞腫である。一部の場合では、ＧＤ３陽性腫瘍は、中枢神経系の神経外胚葉性腫瘍、神経膠腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上衣腫、肉腫、黒色腫、乳がん、卵巣がん、神経膠芽腫、ユーイング肉腫、または小細胞肺癌である。一部の実施形態では、ＣＤ２０陽性腫瘍は、白血病、リンパ腫または神経芽細胞腫である。
【0508】
他の実施形態では、感染性疾患に起因する感染症を有する対象に投与する方法が本明細書に開示される。感染性疾患は、細菌感染、ウイルス感染または真菌感染に起因する疾患であり得る。他の実施形態では、例示的なウイルス病原体として、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、ＨＳＶ、ＨＨＶ科のウイルス、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、ポリオーマウイルス、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、およびＴｏｇａｖｉｒｉｄａｅの科のウイルス病原体が挙げられる。例示的な病原性ウイルスは、天然痘、インフルエンザ、流行性耳下腺炎、麻疹、水痘、エボラ、および風疹を引き起こすものである。例示的な病原性真菌としては、Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、およびＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓが挙げられる。例示的な病原性細菌としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｓｐｉｒｏｃｈｅｔｅｓ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａが挙げられる。
【0509】
一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体を１つまたは複数の追加的な治療剤と一緒に投与する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体と１つまたは複数の追加的な治療剤を同時投与する。一部の実施形態では、ＩｇＡ抗体と１つまたは複数の追加的な治療剤を逐次的に投与する。
【0510】
一部の実施形態では、併用療法は、本開示の１つまたは複数の抗体と、それと共に製剤化され、かつ／または同時投与される、１つまたは複数の追加的な治療剤、例えば、化学療法薬または抗悪性腫瘍剤、例えば、サイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤などを含み得る。「併用」という用語は、この文脈では、薬剤が、同時かまたは逐次的に、実質的に同時期にもたらされることを意味する。例示的な化学療法剤としては、これだけに限定されないが、アルデスロイキン、アルトレタミン、アミホスチン、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クラドリビン、シサプリド、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドロナビノール、デュオカルマイシン、エトポシド、フィルグラスチム、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、グラニセトロン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロンアルファ、イリノテカン、ランソプラゾール、レバミソール、ロイコボリン、メゲストロール、メスナ、メトトレキサート、メトクロプラミド、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、オメプラゾール、オンダンセトロン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標））、ピロカルピン、プロクロルペラジン、サプロイン、タモキシフェン、タキソール、トポテカン塩酸塩、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよび酒石酸ビノレルビンが挙げられる。
【0511】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＡ抗体を、有効用量の、これだけに限定することなく、以下のＦＤＡに認可されたモノクローナル抗体を含めた、がんの処置に使用されている他の抗体と組み合わせることができる：リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＣＤ２０：キメラＩｇＧ１）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ＨＥＲ２：キメラＩｇＧ１）、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、ＣＤ５２：ヒト化ＩｇＧ１）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、ＣＤ２０：マウス、ＩｇＧ１、放射標識されたもの（イットリウム９０）、トシツモマブ－Ｉ－１３１（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）：ＣＤ２０、マウス、ＩｇＧ２ａ、放射標識されたもの（ヨウ素１３１））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、ＥＧＦＲ：キメラ（ｃｊｉｍｅｒｉｃ）、ＩｇＧ１）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ：ヒト化、ＩｇＧ４）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）、ＥＧＦＲ：ヒトＩｇＧ２）、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）、ＣＤ２０：ヒトＩｇＧ１）、イピリムマブ（Ｙｐｅｒｖｏｙ（登録商標）、ＣＴＬＡ－４：ヒトＩｇＧ１）、ブレンツキシマブベドチン（Ａｄｅｃｔｒｉｓ（登録商標）、ＣＤ３０：キメラ、ＩｇＧ１、薬物－コンジュゲート）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｃｔａ（登録商標）、ＨＥＲ２：ヒト化ＩｇＧ１、薬物コンジュゲート）、アドトラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、ＨＥＲ２：ヒト化、ＩｇＧ１、薬物－コンジュゲート）、オビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ（登録商標）、ＣＤ２０：ヒト化およびグリコールで工学的に操作されたもの）、ニボルマブおよびペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１ｓ）など。トラスツズマブはＨＥＲ－２抗原を標的とする。
【0512】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７ ＩｇＡ抗体をＨＥＲ２阻害剤、抗ＨＥＲ２抗体、ＥＧＦＲ阻害剤、抗ＥＧＦＲ抗体と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、抗ＣＤ４７ ＩｇＡ抗体をトラスツズマブと組み合わせて投与する。一部の実施形態では、抗ＣＤ４７ ＩｇＡ抗体をｃ－ｋｉｔ阻害剤と組み合わせて投与する。
投薬量
投薬量
【0513】
疾患（例えばがん）を処置（防止を含む）するための、ＩｇＡ抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物が本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。組成物を、がんの処置（予防を含む）のために有効な量で投与する。一部の実施形態では、組成物（例えば、抗体もしくはその抗原結合性断片または前記抗体もしくはその抗原結合性断片をコードする核酸分子）を、対象における免疫応答の増強および／またはＴ細胞活性化の増大のために有効な量で投与する。組成物は、非経口投与などの任意の利用可能な手段による対象へのｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するためのものである。対象への投与に関しては、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物または医薬は無菌であり得、これは、滅菌濾過膜を通した濾過、または当業者に公知の他の方法によって容易に実現することができる。一実施形態では、組成物または医薬は、発熱物質または内毒素を含まないように処理されたものである。医薬組成物または医薬を発熱物質または内毒素について試験すること、および発熱物質もしくは内毒素を含まない医薬組成物もしくは医薬を調製すること、または内毒素を臨床的に許容されるレベルで含む医薬組成物もしくは医薬を調製することは、当業者には十分に理解される。医薬組成物または医薬を発熱物質または内毒素について試験するために市販のキットが利用可能である。
【0514】
本明細書に記載の方法において非経口投与などのｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するための組成物は滅菌されたものであり得、これは、滅菌濾過膜を通した濾過、または当業者に公知の他の方法によって容易に実現される。
【0515】
本明細書に記載のＩｇＡ抗体またはその抗原結合性断片は、高い水準の医療（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）に合致する様式で製剤化、用量設定、および投与される。これに関連して考慮される因子としては、処置される特定の障害、処置を受ける特定の対象、個々の対象の臨床的状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール、および医療実践者に公知の他の因子が挙げられる。物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの個体における所望の応答を引き出す能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量はまた、物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストのあらゆる毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。治療有効量は、１回または複数回の投与で送達することができる。治療有効量は、所望の治療結果および／または予防結果を実現するために必要な投薬量でそれに必要な期間にわたって有効な量を指す。投与される「治療有効量」は、そのような考慮事項によって支配され、がんを好転させる、処置する、もしくは安定化するため；増悪までの時間（無増悪生存期間の持続時間）を延長するため、または腫瘍、休止状態の腫瘍、もしくは微小転移の出現もしくは再発を処置もしくは防止するために必要な最小量を指す。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、必要に応じて、がんまたがんが発生するリスクを防止または処置するために現在使用されている１つまたは複数の追加的な治療剤と共に製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体またはその抗原結合性断片の量、障害または処置の型、および上記の他の因子に依存する。これらは、一般に、同じ投薬量で本明細書において前に使用されている投与経路を用いて、または今までに使用された投薬量のおよそ１％から９９％までで使用される。
【0516】
抗体の用量は、投与を受ける対象の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変動し得る。好ましい用量は、一般には、体重または体表面積に従って算出される。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片を成体患者における状態または疾患を処置するために使用する場合、本発明の抗体を通常は体重１ｋｇ当たり約０．０１～約２０ｍｇ、より好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．０２～約７ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０３～約５ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約０．０５～約３ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約７．５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約１５ｍｇの単一用量で静脈内投与することが有利であり得る。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。投与のための有効な投薬量およびスケジュールは経験的に決定することができる；例えば、患者の進行を定期的な評価によってモニタリングし、それに応じて用量を調整することができる。さらに、当技術分野において周知の方法を使用して投薬量の種間スケーリングを実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ． Ｒｅｓ． ８： １３５１）。
【0517】
一部の実施形態では、本明細書の組成物は、例えば、がんのリスクがあるまたは疾患のより早い段階にある対象に投与する場合、予防有効量を含み得る。「予防有効量」は、所望の予防結果を実現するために必要な投薬量でそれに必要な期間にわたって有効な量を指す。一般には、予防用量は対象に疾患の前または疾患のより早い段階で使用されるので、予防用量は治療用量よりも少ない。
【0518】
有利に、上記の経口使用または非経口使用のための医薬組成物を、活性成分の用量に適合させるのに適した単位用量の剤形に調製する。そのような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、ピル、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。
【0519】
投与は、例えば、１つまたは複数の別々の投与によるもの、または連続した注入によるものであり得る。数日間またはそれよりも長くにわたる反復投与に関しては、状態に応じて、例えば、当技術分野で公知の方法によって測定して、がんが処置されるまで処置を持続する。しかし、他の投薬量レジメンも有用であり得る。１つの非限定的な例では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片を週に１回、２週間に１回、または３週間に１回、これだけに限定されないが、５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇを含めた、約５ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇまでの用量範囲で投与する。本明細書に記載の方法の使用の進行を従来の技法およびアッセイによって容易にモニタリングすることができる。本明細書に記載の方法を使用した治療の持続時間は、医学的に必要が示される限り、または所望の治療効果（例えば、本明細書に記載のもの）が実現されるまで継続する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の１つもしくは複数の抗体もしくはその抗原結合性断片、または組成物の投与を１カ月、２カ月、４カ月、６カ月、８カ月、１０カ月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、２０年、または対象の寿命に至るまで何年にもわたって継続する。
処置の有効性
処置の有効性
【0520】
例えばがんに対する、本開示のＩｇＡ抗体もしくはその抗原結合性断片、または医薬組成物を投与することを含む処置方法の有効性は、これだけに限定されないが、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの縮小、増悪までの時間、生存の持続時間、無増悪生存期間、全奏効率、応答の持続時間、および生活の質を含めた、がん処置の評価に一般に使用される種々のエンドポイントによって測定することができる。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片には、独特の評価基準および薬物に対する臨床応答の定義が必要であり得る。がんの場合では、治療有効量の本明細書に開示される抗体、その抗原結合性断片、またはそれを含む組成物により、がん細胞の数を減少させること；腫瘍サイズを縮小すること；がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害する（すなわち、いくらかの程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）こと；腫瘍転移を阻害する（すなわち、いくらかの程度まで遅らせる、好ましくは停止させる）こと；腫瘍成長をいくらかの程度まで阻害すること；および／または障害に付随する症状の１つもしくは複数をいくらかの程度まで軽減することができる。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片が既存のがん細胞の成長を防止し、かつ／または死滅させるように作用する範囲では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であり得る。がん治療に関しては、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性を、例えば、生存の持続時間、無増悪生存期間の持続時間（ＰＦＳ）、奏効率（ＲＲ）、応答の持続時間、および／または生活の質を評価することによって測定することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片により、処置を受けていない対象と比べて腫瘍成長が少なくとも約２％、３％、５％、６％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも大きく阻害される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片により、腫瘍生着が、処置を受けていない対象と比べて少なくとも約２％、３％、５％、６％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも大きく阻害される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片により、腫瘍細胞の細胞溶解が誘導される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片により、対応するＷＴ ＩｇＡと比べて腫瘍細胞の細胞溶解の少なくとも約２％、３％、５％、６％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも大きな増大が誘導される。
【0521】
他の実施形態では、がん、例えば皮膚黒色腫などの皮膚がんにかかりやすいまたはその診断を受けたヒト対象の無増悪生存期間を延長するための方法が本明細書に記載されている。疾患増悪までの時間は、薬物の投与から疾患増悪または死亡までの時間と定義される。好ましい実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片と１つまたは複数の化学療法剤を使用する本発明の併用処置により、化学療法単独での処置と比較して、無増悪生存期間が少なくとも約１カ月、１．２カ月、２カ月、２．４カ月、２．９カ月、３．５カ月、例えば、約１カ月～約５カ月など、有意に延長される。別の実施形態では、本明細書に記載の方法により、種々の治療薬を用いた処置を受けているがんにかかりやすいまたはその診断を受けたヒト対象の群における奏効率が有意に上昇し得る。奏効率は、処置に応答した、処置を受けた対象のパーセンテージと定義される。一実施形態では、組換え抗体またはその抗原結合性断片などの本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片と１つまたは複数の化学療法剤を使用する本明細書に記載の併用処置により、処置を受けた対象群では、化学療法を単独で用いた処置を受けた群と比較して奏効率が有意に上昇する。
【0522】
本明細書で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「好転（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）」という用語は、治療的処置を指し、目的は、疾患または障害に関連する状態の増悪または重症度を逆転させる、緩和する、好転させる、阻害する、遅らせるまたは停止させることである。「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、これだけに限定されないが、慢性感染症またはがんなどの慢性免疫状態に関連する状態、疾患または障害の少なくとも１つの有害作用または症状を低減または緩和することを含む。処置は、一般に、１つまたは複数の症状または臨床マーカーが低減すれば「有効」である。あるいは、処置は、疾患の増悪が低減するか止まれば「有効」である。すなわち、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、単に症状またはマーカーの改善だけでなく、処置を行わない場合に予測される症状の進行または悪化を少なくとも遅らせる休止も含む。有益なまたは所望の臨床結果としては、これだけに限定されないが、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず１つまたは複数の症状の緩和、疾患の程度の減弱、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）、疾患増悪の遅延または減速、病態の好転または一時的緩和、および寛解（部分寛解であるか完全寛解であるかにかかわらず）が挙げられる。疾患の「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語はまた、疾患の症状または副作用の軽減（緩和処置を含む）も含む。
【0523】
例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、疾患、例えばがんの症状を緩和するために、対象に本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を有効量で投与することを含む。本明細書で使用される場合、「がんの症状を緩和すること」とは、疾患に付随する任意の状態または症状を好転させるまたは低減することである。等価の無処置対照と比較して、そのような低減、または防止の程度は、任意の標準の技法によって測定して、少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、９５％、または１００％である。理想的には、がんは、当技術分野で公知の任意の標準方法によって検出して、完全に取り除かれ、その場合、がんが処置されたとみなされる。がんに対する処置を受けている患者は、そのような状態を有するという診断を医療実践者から受けた患者である。診断は、任意の適切な手段によるものであってよい。診断およびモニタリングには、例えば、生体試料中のがん細胞のレベルを検出すること（例えば、組織またはリンパ節生検、血液検査、または尿検査）、生体試料中のがんの代理マーカーのレベルを検出すること、特定のがんに付随する症状を検出すること、またはそのようながんに典型的な免疫応答に関与する免疫細胞を検出することを伴い得る。
【0524】
「有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患または障害の少なくとも１つまたは複数の症状を緩和するために必要な抗体またはその抗原結合性断片またはそれを含む組成物の量を指し、所望の効果をもたらすために十分な量の薬理学的組成物に関する。したがって、「治療有効量」という用語は、典型的な対象に投与された場合に特定の効果をもたらすために十分である、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片の量を指す。有効量は、本明細書で使用される場合、疾患の症状の発生を遅らせる、疾患の症状の過程を変更する（例えば、これだけに限定されないが、疾患の症状の増悪を遅らせる）、または疾患の症状を逆転させるために十分な量も含む。したがって、正確な「有効量」を指定することは不可能である。しかし、いかなる所与の場合に関しても、妥当な「有効量」は、当業者が常套的な実験のみを使用して決定することができる。
【0525】
有効量、毒性、および治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための細胞培養物または実験動物における標準の薬学的手順によって決定することができる。投薬量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて変動し得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる－大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。また、用量は、動物モデルにおいて、細胞培養物において、または妥当な動物モデルにおいて決定して症状の最大半量阻害を実現するＩＣ５０（すなわち、抗体またはその抗原結合性断片の濃度）を含む循環血漿中濃度範囲が実現されるように策定することができる。血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。任意の特定の投薬量の効果は、適切なバイオアッセイによってモニタリングすることができる。投薬量は医師が決定することができ、必要に応じて、観察される処置効果に合うように調整することができる。
【0526】
がんの処置および／または防止としては、これだけに限定されないが、がんに付随する症状の緩和、がんの増悪の阻害、がんの退縮の促進、免疫応答の促進、腫瘍成長の阻害、腫瘍サイズの阻害、転移の阻害、がん細胞成長の阻害、がん細胞増殖の阻害、またはがん細胞死を引き起こすことが挙げられる。
投与形式
投与形式
【0527】
本明細書に記載のＩｇＡ抗体またはその抗原結合性断片は、それを必要とする対象に、対象における有効な処置をもたらす任意の妥当な経路によって投与することができる。本明細書で使用される場合、「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」および「導入すること（ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ）」という用語は、互換的に使用され、抗体またはその抗体部分を対象にそのような薬剤の炎症部位またはがんなどの所望の部位への少なくとも部分的な局在をもたらす方法または経路によって置き、その結果、所望の効果を生じさせることを指す。
【0528】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれを含む組成物を、阻害すべきがんを有する対象に、薬剤を全身的にまたは所望の表面または標的に送達する任意の投与形式によって投与し、投与形式は、これだけに限定されないが、注射、注入、滴下注入、および吸入投与を含み得る。経口投与形態も本明細書において意図されている。「注射」は、これだけに限定することなく、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、莢膜下、くも膜下、頭蓋内、脊髄内、脳脊髄内、および胸骨内注射および注入を含む。
【0529】
「非経口投与」および「非経口的に投与」という句は、本明細書で使用される場合、経腸および局部投与以外の投与形式、通常は注射によるものを指す。「全身投与」、「全身的に投与」、「末梢投与」および「末梢性に投与」という句は、本明細書で使用される場合、二重特異性または多重特異性ポリペプチド薬剤の、腫瘍部位などの標的部位、組織、または器官への直接投与以外の投与を指し、したがって、当該薬剤は対象の循環系に入り、したがって、代謝および他の同様のプロセスに供される。
【0530】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれを含む組成物は、静脈内投与によってボーラスとして、またはある期間にわたって連続した注入により、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、関節内経路、滑液包内経路、くも膜下腔内経路、経口経路、局部経路、または吸入経路によって投与することができる。本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれを含む組成物の使用に広範囲にわたる副作用または毒性が付随する場合には、例えば血管新生が生じている腫瘍またはがん部位への局所投与が特に望ましい。一部の実施形態ではｅｘ ｖｉｖｏ戦略を治療への適用に使用することもできる。ｅｘ ｖｉｖｏ戦略には、対象から得た細胞に本明細書に開示される核酸配列をトランスフェクトまたは形質導入することが伴う。次いで、トランスフェクトされたまたは形質導入された細胞を対象に戻す。細胞は、これだけに限定することなく、造血細胞（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｔ細胞、またはＢ細胞）、線維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、または筋肉細胞を含めた広範囲の型のいずれかであり得る。
【0531】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれを含む組成物を、非経口投与、皮下投与、腹腔内投与、肺内投与、および鼻腔内投与、ならびに局所的な免疫抑制処置のために所望であれば病巣内投与を含めた任意の適切な手段によって投与する。
【0532】
非経口注入としては、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が挙げられる。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片または組成物をパルス注入により、特に抗体の用量を漸減しながら適切に投与する。投薬は注射によって行うことが好ましく、投与が短期的なものであるか長期的なものであるかに一部依存して、静脈内または皮下注射が最も好ましい。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片または組成物を、障害または腫瘍の場所により許容される場合には、局所的に、例えば直接注射によって投与し、注射を定期的に繰り返すことができる。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片または組成物を、例えば休止状態の腫瘍または微小転移の局所的な再発または転移を低減または防止するために、対象に全身的に、または腫瘍細胞に、例えば腫瘍にもしくは腫瘍の外科的切除後の腫瘍床に直接送達することもできる。
【0533】
本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片を含む治療用組成物の有効性および効力を増強するために、本明細書に記載の腫瘍を阻害するための方法の一部の実施形態において抗体ターゲティングソノポレーション法を使用することが意図されている。本明細書で使用される場合、「ソノポレーション」は、細胞原形質膜の透過性を一時的に改変し、したがって、治療剤などの大きな分子の取り込みを可能にするための、好ましくは超音波振動数での音、または超音波と造影剤（例えば、安定化された微小気泡）の相互作用の使用を指す。ソノポレーションによって引き起こされる膜透過性は一過性であり、超音波曝露後に薬剤は細胞の内側にトラップされたまま残る。ソノポレーションでは、微小気泡の音響キャビテーションを使用して大きな分子の送達を増強する。
【0534】
したがって、本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、微小気泡などの超音波造影剤と混合した抗体またはその抗原結合性断片を、がんに対する処置を必要とする対象に局所的にまたは全身的に注射することができ、超音波をカップリングし、さらには、規定された領域、例えば腫瘍部位に集束させて、ターゲティング送達を実現することができる。一部の実施形態では、方法では、集束超音波法を使用してターゲティング送達を実現する。本明細書で使用される場合、ＨＩＦＵまたは「高強度集束超音波」は、上にあるまたは周囲の健康組織に対する損傷を引き起こすことなく悪性または病原性組織を熱し、破壊するために高強度超音波を使用する非侵襲的治療方法を指す。Ｋｈａｉｂｕｌｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．， ４９ Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ２９５ （２００８）およびＷＯ２０１０１２７３６９に記載されている通り、ＨＩＦＵを抗体またはその抗体断片などの治療剤を送達する手段として使用することもできる。
【0535】
造影超音波（ＣＥＵＳ）を使用する方法も本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片との使用が意図されている。造影超音波（ＣＥＵＳ）は、超音波造影媒体および超音波造影剤を従来の医学的超音波検査に適用することを指す。超音波造影剤とは、物質間の接触面からの音波の反射を種々のやり方に依拠する薬剤を指す。本明細書に記載の組成物および方法と使用するための種々の微小気泡造影剤が入手可能である。微小気泡は、それらの殻の構成、ガスコアの構成、およびターゲティングされるか否かが異なる。血管新生障害に特徴的な受容体に結合するターゲティングリガンドを微小気泡とコンジュゲートし、それにより、微小気泡複合体が、疾患にかかっているまたは異常な組織などの目的の領域内に選択的に蓄積することを可能にすることができる。この形態の分子イメージングはターゲティング造影超音波として公知であり、ターゲティング微小気泡が目的の領域内に結合した場合にのみ強力な超音波シグナルを生成する。ターゲティング造影超音波には、医学的診断および医学的治療のどちらにも多くの適用がある。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を、がんまたは腫瘍に対する処置を必要とする対象に、標的化超音波送達を使用して投与する。
医薬組成物および剤形
医薬組成物および剤形
【0536】
ある特定の実施形態では、対象への投与のための、本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその機能性断片を含む医薬組成物が本明細書に開示される。
【0537】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩｇＡ抗体を含む医薬組成物を、活性化合物を処理して薬学的に使用することができる調製物にすることを容易にする賦形剤および助剤を含む１つまたは複数の生理的に許容される担体を使用して従来の様式で製剤化する。適当な製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書に記載の医薬組成物の要約は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ （Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．： Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ， Ｊｏｈｎ Ｅ． ， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ． ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９７５； Ｌｉｂｅｒｍａｎ， Ｈ．Ａ． ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ， Ｌ． ， Ｅｄｓ． ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．， １９８０；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄ． （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ １９９９）に見いだされる。
【0538】
医薬組成物は、必要に応じて、従来の様式で、例えば、単に例として、従来の混合、溶解、造粒、糖剤形成、研和、乳化、カプセル封入、封入または圧縮プロセスによって製造される。
【0539】
ある特定の実施形態では、組成物は、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウムおよびトリス－ヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基；ならびにクエン酸／ブドウ糖、炭酸水素ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの緩衝剤を含めた１つまたは複数のｐＨ調整剤または緩衝剤も含み得る。そのような酸、塩基および緩衝剤は、組成物のｐＨを許容される範囲内に維持するために必要な量で含められる。
【0540】
他の実施形態では、組成物は、組成物の重量オスモル濃度を許容される範囲内にするために必要な量の１つまたは複数の塩も含み得る。そのような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム陽イオンおよび塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、炭酸水素、硫酸、チオ硫酸またはバイサルファイト陰イオンを有するものが挙げられる；適切な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウムおよび硫酸アンモニウムが挙げられる。
【0541】
本明細書に記載の医薬組成物は、これだけに限定されないが、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内、関節内、腹腔内、または頭蓋内）、鼻腔内、頬側、舌下、または直腸内投与経路を含めた任意適切な投与経路によって投与される。一部の実施形態では、医薬組成物を非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内、関節内、腹腔内、または頭蓋内）投与用に製剤化する。
【0542】
本明細書に記載の医薬組成物は、これだけに限定されないが、処置を受ける個体が経口摂取するための水性経口分散、液剤、ゲル剤、シロップ剤、エリキシル剤、スラリー剤、懸濁剤など、固形経口剤形、エアロゾル、制御放出製剤、高速融解製剤、発泡性製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、散剤、ピル、糖剤、カプセル剤、遅延放出製剤、延長放出製剤、パルス放出製剤、多微粒子製剤、および即時放出と制御放出の混合製剤を含めた任意の適切な剤形に製剤化される。
【0543】
一部の実施形態では、医薬組成物をカプセル剤に製剤化する。一部の実施形態では、医薬組成物を溶液に製剤化する（例えば、ＩＶ投与用）。一部の実施形態では、医薬組成物を注入剤として製剤化する。一部の実施形態では、医薬組成物を注射剤として製剤化する。
【0544】
本明細書に記載の医薬固体剤形は、必要に応じて、本明細書に記載の化合物、および適合性担体、結合剤、充填剤、懸濁化剤、香味剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面活性物質、滑沢剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、加湿剤、可塑剤、安定剤、透過増強剤、湿潤剤、消泡剤、抗酸化剤、保存剤、またはこれらの１つまたは複数の組合せなどの１つまたは複数の薬学的に許容される添加剤を含む。
【0545】
さらに他の態様では、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （２０００）に記載されているものなどの標準のコーティング手順を使用して、組成物の周囲にフィルムコーティングを提供する。一部の実施形態では、組成物を粒子に製剤化し（例えば、カプセル剤による投与用）、粒子の一部または全部をコーティングする。一部の実施形態では、組成物を粒子に製剤化し（例えば、カプセル剤による投与用）、粒子の一部または全部をマイクロカプセルに封入する。一部の実施形態では、組成物を粒子に製剤化し（例えば、カプセル剤による投与用）、粒子の一部または全部をマイクロカプセルに封入せず、コーティングもしない。
【0546】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、微生物の活性を阻害するために、１つまたは複数の保存剤も含み得る。適切な保存剤としては、メルフェンおよびチオメルサールなどの水銀含有物質；安定化された二酸化塩素；ならびに塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウムおよび塩化セチルピリジニウムなどの四級アンモニウム化合物が挙げられる。
【0547】
「増殖性疾患」は、本明細書で言及される場合、細胞の過剰な増殖および細胞マトリックスのターンオーバーが、がんを含めたいくつかの疾患の病理発生に有意に寄与するという統一概念が提示されることを意味する。
【0548】
「患者」または「対象」は、本明細書で使用される場合、生理的状態、例えば、がんまたは自己免疫性状態または感染と診断されたまたはそれを有するもしくはそれが発生する疑いがある哺乳動物対象を指す。一部の実施形態では、「患者」という用語は、がんが発生する可能性が平均より高い哺乳動物対象を指す。例示的な患者は、本明細書に開示される治療が有益であり得るヒト、類人猿、イヌ、ブタ、ウシ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、齧歯類および他の哺乳動物であり得る。例示的なヒト患者は、男性および／または女性であり得る。「それを必要とする患者」または「それを必要とする対象」は、本明細書では、疾患または障害、例えば、これだけに制限されないが、がんなどの増殖性障害と診断されたまたはそれを有する疑いがある患者と称される。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍または血液の悪性腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。他の実施形態では、がんは、血液の悪性腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の実施形態では、がんは、再燃したまたは難治性がんである。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。例示的な固形腫瘍としては、これだけに限定されないが、肛門がん；虫垂がん；胆管がん（すなわち、胆管細胞癌）；膀胱がん；脳腫瘍；乳がん；子宮頸がん；結腸がん；原発不明がん（ＣＵＰ）；食道がん；眼がん；卵管がん；消化器がん；腎がん；肝がん；肺がん；髄芽腫；黒色腫；口腔がん；卵巣がん；膵がん；副甲状腺疾患；陰茎がん；下垂体腫瘍；前立腺がん；直腸がん；皮膚がん；胃がん；精巣がん；咽頭がん；甲状腺がん；子宮がん；膣がん；外陰がん；または神経膠芽腫が挙げられる。一部の実施形態では、白血病は、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）であり得る。
【0549】
「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」は、本明細書では、本開示の組成物を患者に提供することと称される。例として、限定するものではなく、組成物の投与、例えば注射は、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、皮下（ｓ．ｃ．）注射、皮内（ｉ．ｄ．）注射、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射、または筋肉内（ｉ．ｍ．）注射によって実施することができる。１つまたは複数のそのような経路を使用することができる。非経口投与は、例えば、ボーラス注射によるもの、または経時的な段階的灌流によるものであり得る。あるいは、または同時に、投与は、経口経路によるものであり得る。さらに、投与はまた、細胞のボーラスもしくはペレットの外科的沈着、または医療機器の設置によるものであり得る。ある実施形態では、本開示の組成物は、本明細書に記載の核酸配列を発現する工学的に操作された細胞もしくは宿主細胞、または本明細書に記載の核酸配列を少なくとも１つ含むベクターを、増殖性障害を処置または防止するために有効な量で含み得る。医薬組成物は、本明細書に記載の標的細胞集団を、１つまたは複数の薬学的にまたは生理的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含み得る。そのような組成物は、例えば中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチドまたはアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および保存剤を含み得る。
【0550】
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語およびその文法上の等価物は、所望の薬理的効果および／または生理的効果を得ることを指す。複数の実施形態では、効果は、治療的なものである、すなわち、効果により、疾患および／または疾患に起因する有害な症状が部分的にまたは完全に治る。この目的のために、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の核酸配列を発現する宿主細胞、または本明細書に記載の核酸配列を含むベクターを含む組成物を「治療有効量」で投与することを含む。
【0551】
「治療有効量」、「治療量」、「免疫学的に有効な量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」という用語またはそれらの文法上の等価物は、所望の結果を実現するために必要な投薬量でそれに必要な期間にわたって有効な量を指す。治療有効量は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに本明細書に記載の組成物の個体における所望の応答を引き出す能力などの因子に応じて変動し得る。投与される本開示の組成物の厳密な量は、医師が患者（対象）の年齢、重量、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および状態の個体差を考慮して決定することができる。
【0552】
あるいは、本明細書に記載の１つまたは複数の組成物を患者または対象に投与することの薬理的効果および／または生理的効果は、「予防的」なものであり得る、すなわち、効果により疾患またはその症状が完全にまたは部分的に防止される。
【0553】
「予防有効量」は、所望の予防結果（例えば、疾患の発症の防止）を実現するために必要な投薬量でそれに必要な期間にわたって有効な量を指す。
【0554】
「消泡薬剤」は、水性分散の凝固、完成したフィルム内の気泡をもたらす、または処理を一般に損なう処理中の泡立ちを減少させるものである。例示的な消泡剤としては、ケイ素エマルションまたはセスキオレイン酸ソルビタンが挙げられる。
【0555】
抗酸化剤としては、例えば、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびトコフェロールが挙げられる。ある特定の実施形態では、必要な場合、抗酸化剤により化学的安定性を増強する。
【0556】
本明細書に記載の製剤には、抗酸化剤、金属キレート剤、チオール含有化合物および他の一般的な安定化剤が有益であり得る。そのような安定化剤の例としては、これだけに限定されないが、：（ａ）約０．５％～約２％ｗ／ｖのグリセロール、（ｂ）約０．１％～約１％ｗ／ｖのメチオニン、（ｃ）約０．１％～約２％ｗ／ｖのモノチオグリセロール、（ｄ）約１ｍＭ～約１０ｍＭのＥＤＴＡ、（ｅ）約０．０１％～約２％ｗ／ｖのアスコルビン酸、（ｆ）０．００３％～約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０、（ｇ）０．００１％～約０．０５％ｗ／ｖのポリソルベート２０、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）デキストラン硫酸、（ｋ）シクロデキストリン、（ｌ）ペントサンポリサルフェートおよび他のヘパリノイド、（ｍ）マグネシウムおよび亜鉛などの二価陽イオン；または（ｎ）これらの組合せが挙げられる。
【0557】
「結合剤」は、粘着質を与えるものであり、結合剤としては、例えば、アルギン酸およびその塩；セルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標））、エチルセルロース（例えば、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、および微結晶セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標））など；微結晶性ブドウ糖；アミロース；ケイ酸アルミニウムマグネシウム；多糖酸；ベントナイト；ゼラチン；ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体；クロスポビドン；ポビドン；デンプン；アルファ化デンプン；トラガント、デキストリン、糖、例えば、スクロース（例えば、Ｄｉｐａｃ（登録商標））、グルコース、ブドウ糖、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール（例えば、Ｘｙｌｉｔａｂ（登録商標））、およびラクトースなど；天然または合成ゴム、例えば、アラビアゴム、トラガント、ガティガム、イサポールハスクの粘液、ポリビニルピロリドン（例えば、Ｐｏｌｙｖｉｄｏｎｅ（登録商標）ＣＬ、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＣＬ、Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）ＸＬ－１０）、カラマツアラボガラクタン、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）、ポリエチレングリコール、ワックス、アルギン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【0558】
「担体」または「担体材料」は、製薬に一般に使用される任意の賦形剤を含み、イブルチニブおよび抗がん剤の化合物などの本明細書に開示される化合物との適合性、および所望の剤形の放出プロファイル特性に基づいて選択されるべきである。例示的な担体材料としては、例えば、結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性物質、可溶化剤、安定剤、滑沢剤、湿潤剤、希釈剤などが挙げられる。「薬学的に適合性の担体材料」としては、これだけに限定されないが、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル、カゼイン酸ナトリウム、ダイズレシチン、タウロコール酸、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、二カリウムリン酸、セルロースおよびセルロースコンジュゲート、糖ナトリウムステアロイルラクチレート、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファ化デンプンなどを挙げることができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ （Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．： Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ， Ｊｏｈｎ Ｅ．， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９７５； Ｌｉｂｅｒｍａｎ， Ｈ．Ａ． ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ， Ｌ． ， Ｅｄｓ． ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．， １９８０；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄ． （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）を参照されたい。
【0559】
「分散剤」および／または「粘度調整剤」は、液体媒体または顆粒化法もしくは混和法によって薬物の拡散および均一性を制御する材料を含む。一部の実施形態では、これらの薬剤はまた、コーティングまたは浸食マトリックスの効果を助長する。例示的な拡散促進剤／分散剤としては、例えば、親水性ポリマー、電解質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０または８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；商業的にはＰｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）として公知）、ならびに炭水化物に基づく分散剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、ＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、およびＨＰＣ－Ｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えば、ＨＰＭＣ Ｋ１００、ＨＰＭＣ Ｋ４Ｍ、ＨＰＭＣ Ｋ１５Ｍ、およびＨＰＭＣ Ｋ１００Ｍ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸ステアリン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＡＳ）、非晶質セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、エチレンオキシドおよびホルムアルデヒドを伴う４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）－フェノールポリマー（チロキサポールとしても公知）、ポロキサマー（例えば、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロック共重合体であるＰｌｕｒｏｎｉｃｓ Ｆ６８（登録商標）、Ｆ８８（登録商標）、およびＦ１０８（登録商標））；およびポロキサミン（例えば、エチレンジアミンへのプロピレンオキシドおよびエチレンオキシドの逐次的な付加に由来する四官能性ブロック共重合体であるＴｅｔｒｏｎｉｃ ９０８（登録商標）、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ ９０８（登録商標）としても公知（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．））、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ３０、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ－６３０）、ポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコールの分子量は約３００～約６０００、または約３３５０～約４０００、または約７０００～約５４００であり得る、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば、トラガントゴムおよびアラビアゴム、グアーガム、キサンタンガムを含めたキサンタンなど、糖、セルロース系誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなど、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドン、カルボマー、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、アルギン酸、キトサンおよびこれらの組合せが挙げられる。セルロースまたはトリエチルセルロースなどの可塑剤も分散剤として使用することができる。リポソーム分散および自己乳化型分散に特に有用な分散剤は、ジミリストイルホスファチジルコリン、卵由来の天然のホスファチジルコリン、卵由来の天然のホスファチジルグリセロール、コレステロールおよびミリスチン酸イソプロピルである。
【0560】
１つまたは複数の浸食促進剤と１つまたは複数の拡散促進剤の組合せを本組成物に使用することもできる。
【0561】
「希釈剤」という用語は、目的の化合物を送達前に希釈するために使用される化学化合物を指す。化合物を安定化するためにも希釈剤を使用することができ、これは、希釈剤により、より安定な環境をもたらすことができるからである。当技術分野では、これだけに限定されないが、リン酸緩衝食塩水溶液を含めた、緩衝液中に溶解させた塩（ｐＨの制御または維持ももたらすことができる）が希釈剤として利用される。ある特定の実施形態では、希釈剤により、組成物の容積を増大させて、圧縮を容易にするまたは均一の混和物に対してカプセル充填のために十分な容積を創出する。そのような化合物としては、例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、ブドウ糖、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）などの微結晶セルロース；第二リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物；リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム；無水ラクトース、噴霧乾燥させたラクトース；アルファ化デンプン、Ｄｉ－Ｐａｃ（登録商標）（Ａｍｓｔａｒ）などの圧縮糖；マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸ステアリン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロースに基づく希釈剤、粉砂糖；一塩基硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物；乳酸カルシウム三水和物、デキストレート；穀類加水分解固形物、アミロース；粉末セルロース、炭酸カルシウム；グリシン、カオリン；マンニトール、塩化ナトリウム；イノシトール、ベントナイトなどが挙げられる。
【0562】
「充填剤」としては、例えば、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶セルロース、セルロース粉末、ブドウ糖、デキストレート、デキストラン、デンプン、アルファ化デンプン、スクロース、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコールなどの化合物が挙げられる。
【0563】
「滑沢剤」および「滑剤」は、材料の接着または摩擦を防止、低減または阻害する化合物である。例示的な滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、ステアリルフマル酸ナトリウム、炭化水素、例えば鉱油または水素化ダイズ油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標））などの硬化植物油、高級脂肪酸およびそれらのアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩、例えばアルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タルク、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ－４０００）またはＣａｒｂｏｗａｘ（商標）などのメトキシポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、マグネシウムまたはラウリル硫酸ナトリウム、Ｓｙｌｏｉｄ（商標）などのコロイドシリカ、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌ（登録商標）、トウモロコシデンプンなどのデンプン、シリコーン油、界面活性物質などが挙げられる。
【0564】
「可塑剤」は、マイクロカプセル封入材料またはフィルムコーティングを軟化して脆さを低減するために使用される化合物である。適切な可塑剤としては、例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、およびＰＥＧ８００などのポリエチレングリコール、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、トリエチルセルロースおよびトリアセチンが挙げられる。一部の実施形態では、可塑剤は、分散剤または湿潤剤としても機能する。
【0565】
「可溶化剤」としては、例えば、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ドキュセートナトリウム、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ｎ－ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆汁酸塩、ポリエチレングリコール２００－６００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコール、およびジメチルイソソルビドなどの化合物が挙げられる。
【0566】
「安定剤」としては、例えば、抗酸化剤、緩衝剤、酸、保存剤などの化合物が挙げられる。
【0567】
「懸濁化剤」としては、例えば、ポリビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ３０、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、ポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコールの分子量は約３００～約６０００、または約３３５０～約４０００、または約７０００～約５４００であり得る、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸ステアリン酸ヒドロキシメチルセルロース、ポリソルベート－８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば、トラガントゴムおよびアラビアゴム、グアーガム、キサンタンガムを含めたキサンタンなど、糖、セルロース系誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドンなどの化合物が挙げられる。
【0568】
「界面活性物質」としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ドキュセートナトリウム、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０または８０、トリアセチン、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポロキサマー（ｐｏｌａｘｏｍｅｒ）、胆汁酸塩、モノステアリン酸グリセリン、エチレンオキシドとプロピレンオキシドの共重合体、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＢＡＳＦ）などの化合物が挙げられる。いくつかの他の界面活性物質として、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植物油、例えば、ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油；ならびにポリオキシエチレンアルキルエーテルおよびアルキルフェニルエーテル、例えば、オクトキシノール１０、オクトキシノール４０が挙げられる。一部の実施形態では、物理的安定性を増強するためまたは他の目的で界面活性物質を含めることができる。
【0569】
「粘度増強剤」としては、例えば、メチルセルロース、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸ステアリン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸、アラビアゴム、キトサンおよびこれらの組合せが挙げられる。
【0570】
「湿潤剤」としては、例えば、オレイン酸、モノステアリン酸グリセリン、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ドキュセートナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクセートナトリウム、トリアセチン、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、アンモニウム塩などの化合物が挙げられる。
【0571】
必要に応じて、本明細書に記載の組成物を含む製剤は、薬学的に許容される塩、一般には、例えば塩化ナトリウムを、好ましくはほぼ生理的濃度で含有する。必要に応じて、本発明の製剤は、薬学的に許容される保存剤を含有し得る。一部の実施形態では、保存剤の濃度は、一般にはｖ／ｖで０．１％から２．０％までにわたる。適切な保存剤としては、製薬技術分野で公知の保存剤が挙げられる。ベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、メチルパラベン、およびプロピルパラベンが保存剤の例である。必要に応じて、本発明の製剤は、薬学的に許容される界面活性物質を０．００５～０．０２％の濃度で含み得る。
【0572】
本明細書に記載の組成物を、抗体またはその抗原結合性断片を対象に以下のために適合させたものを含めた固体、液体またはゲルの形態で投与するために特別に製剤化することができる：（１）非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射により、例えば、滅菌溶液もしくは懸濁液、または持続放出製剤として；（２）局部適用、例えば、皮膚に適用するクリーム剤、軟膏剤、または制御放出パッチもしくは噴霧剤として；（３）膣内または直腸内、例えば、膣坐薬、クリーム剤またはフォーム剤として；（４）眼；（５）経皮；（６）経粘膜；または（７）経鼻。さらに、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片または組成物を患者に埋め込むこと、または薬物送達システムを使用して注射することができる。例えば、Ｕｒｑｕｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．， ２４ Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ． １９９ （１９８４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ （Ｌｅｗｉｓ， ｅｄ．， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８１）；米国特許第３，７７３，９１９号、同第３，２７０，９６０号を参照されたい。
【0573】
本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片を含む、本明細書に開示される組成物は、必要に応じて、処置される特定の適応症に対する１つよりも多くの活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさずに相補的な活性を有するものも含有し得る。例えば、組成物は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害剤および／またはＶＥＧＦＲアンタゴニストなどの血管新生阻害剤をさらに含み得る。そのような分子は、組み合わせて意図された目的のために有効な量で適切に存在する。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物の活性成分を、例えばコアセルベーション技法によってまたは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれコロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、微小粒子、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションにおけるヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに封入することもできる。そのような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （１６ｔｈ ｅｄ．， Ｏｓｏｌ、ｅｄ．， １９８０）に開示されている。医薬組成物を小胞、特にリポソームとして送達することもできる（Ｌａｎｇｅｒ １９９０ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９： １５２７－１５３３； Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ． （１９８９） ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．）， Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ３５３－３６５；Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ， ｉｂｉｄ． ， ｐｐ． ３１７－３２７を参照されたい；一般に、同書を参照されたい）。リポソームとしては、エマルション、泡、ミセル、不溶性単層、リン脂質分散、ラメラ層などが挙げられ、これらは、Ｍ－ＣＳＦ抗体を特定の組織にターゲティングするため、ならびに組成物の半減期を延長するためのビヒクルとしての機能を果し得る。例えば、当該特許が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，８３７，０２８号および同第５，０１９，３６９号に記載されている通り、リポソームの調製のために種々の方法が利用可能である。
【0574】
抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２： ３６８８ （１９８５）；Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７： ４０３０ （１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されているものなどの当技術分野で公知の方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームを、規定された孔径のフィルターを通して押出し成形して、所望の直径を有するリポソームを得る。本発明の抗体のＦａｂ’断片をリポソームとＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２５７： ２８６－２８８ （１９８２）に記載されている通り、ジスルフィド交換反応によってコンジュゲートすることができる。化学療法剤（例えば、ドキソルビシンなど）をリポソームに必要に応じて含有させる［例えば、Ｇａｂｉｚｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ８１ （１９）： １４８４ （１９８９）を参照されたい］。
【0575】
一部の実施形態では、持続放出調製物を使用することができる。持続放出調製物の適切な例としては、本開示の抗体または抗原結合性断片を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、マトリックスは、成形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリル酸）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とｙエチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸共重合体および酢酸リュープロリドで構成される注射可能なマイクロスフェア）などの分解性乳酸－グリコール酸共重合体、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン－酢酸ビニルおよび乳酸－グリコール酸などのポリマーは分子を１００日間を超えて放出することができるが、ある特定のハイドロゲルはタンパク質をより短い期間にわたって放出する。カプセル封入された抗体が体内に長時間留まる場合、３７℃で水分に曝露した結果として変性または凝集し得、その結果、生物活性の消失、および免疫原性の可能性のある変化が生じる。関与する機構に応じて、安定化するための合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集機構がチオジスルフィド交換を通じた分子間Ｓ－Ｓ結合形成であることが分かった場合、スルフヒドリル残基を修飾すること、酸性溶液から凍結乾燥させること、妥当な添加剤を使用して含水量を制御すること、および特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより、安定化を実現することができる。ある特定の状況では、医薬組成物を制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ， ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ １９８７ ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４： ２０１を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近傍に置くことができ、したがって、全身用量のほんの一部だけが必要になる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， １９８４， ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， ｓｕｐｒａ， ｖｏｌ． ２、ｐｐ． １１５－１３８を参照されたい）。
【0576】
本開示の医薬組成物は、例えば、標準の針およびシリンジを用いて皮下にまたは静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスが本発明の医薬組成物の送達に容易に適用される。そのようなペン型送達デバイスは再利用可能または使い捨てのものであり得る。再利用可能なペン型送達デバイスには、一般に、医薬組成物を含有する取り替え可能なカートリッジが利用される。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。それから、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスには取り替え可能なカートリッジがない。その代わりに、使い捨てペン型送達デバイスには、デバイス内のレザバー中に保持された医薬組成物が充填済みになっている。レザバーの医薬組成物が空になったら、デバイス全体を廃棄する。多数の再利用可能なペン型および自動注入装置送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される。例としては、これらの確実に限定されるものではないが、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ｐｅｎ（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＩＮ７０１３０（商標）ｐｅｎ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ｐｅｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、Ｎ．Ｊ．）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン型送達デバイスの例としては、これだけに確実に限定されるものではないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ｐｅｎ（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）が挙げられる。
【0577】
注射可能な調製物は、静脈内注射、皮下注射、皮内注射および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を含み得る。これらの注射可能な調製物は、公知の方法によって調製することができる。例えば、注射可能な調製物を、例えば、上記の抗体またはその塩を、注射に慣習的に使用される滅菌水性媒体または油性媒体に溶解させる、懸濁させるまたは乳化させることによって調製することができる。注射用の水性媒体としては、例えば、グルコースおよび他の補助薬剤などを含有する等張性溶液である生理的食塩水があり、これは、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性物質［例えば、ポリソルベート８０、硬化ヒマシ油のＨＣＯ－５０（ポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加生成物）］などの妥当な可溶化剤と組み合わせて使用することができる。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、これは、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用することができる。そのように調製された注射剤を妥当なアンプルに充填することが好ましい。
【0578】
本開示の組成物は、例えば、顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、エマルション、エリキシル剤、懸濁剤または溶液の形態であり得る。含有される前述の抗体の量は、単位用量の剤形当たり約５～約５００ｍｇであり得る；特に、注射の形態では、前述の抗体が約５～約１００ｍｇ含有されることが好ましく、他の剤形については約１０～約２５０ｍｇ含有されることが好ましい。
【0579】
経口、頬側、および舌下投与に関しては、固体剤形として散剤、懸濁剤、顆粒剤、錠剤、ピル、カプセル剤、ジェルキャップ、およびカプレットが許容される。これらは、例えば、本発明の１つまたは複数の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体をデンプンまたは他の添加剤などの少なくとも１つの添加剤と混合することによって調製することができる。適切な添加剤は、スクロース、ラクトース、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギン酸、キチン、キトサン、ペクチン、トラガントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成ポリマーまたはグリセリドである。必要に応じて、経口剤形は、不活性希釈剤、またはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、またはパラベンもしくはソルビン酸などの保存剤、またはアスコルビン酸、トコフェロールもしくはシステインなどの抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、香味剤または香料などの、投与に役立つ他の成分を含有し得る。錠剤およびピルを当技術分野で公知の適切なコーティング材料でさらに処理することができる。
【0580】
経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容されるエマルション、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤、および溶液の形態であり得、水などの不活性希釈剤を含有し得る。一部の実施形態では、医薬製剤および医薬を、例えば、これだけに限定されないが、油、水、アルコール、およびこれらの組合せなどの滅菌された液体を使用して液体懸濁液または水溶液として調製することができる。一部の実施形態では、医薬組成物を凍結乾燥形態で調製することができる。凍結乾燥調製物は、当技術分野で公知の凍結保護物質を含み得る。「凍結保護物質」という用語は、本明細書で使用される場合、一般に、タンパク質に凍結誘導性ストレスからの安定性をもたらす薬剤を含む。凍結保護物質の例としては、例えばマンニトールなどのポリオールが挙げられ、また、例えば、スクロースなどの糖類が挙げられ、例えば、ポリソルベート、ポロキサマーまたはポリエチレングリコールなどの界面活性物質も挙げられる。凍結保護物質はまた、製剤の張度にも寄与する。経口投与または非経口投与のために薬学的に適切な界面活性物質、懸濁化剤、乳化剤を添加することができる。
【0581】
上記の通り、懸濁液は、油を含み得る。そのような油としては、これだけに限定されないが、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油およびオリーブ油が挙げられる。懸濁調製物は、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリドおよびアセチル化脂肪酸グリセリドなどの脂肪酸のエステルも含み得る。懸濁製剤は、これだけに限定されないが、エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロールおよびプロピレングリコールなどのアルコールを含み得る。これだけに限定されないが、ポリ（エチレングリコール）などのエーテル、鉱油およびワセリンなどの石油炭化水素；および水も懸濁製剤に使用することができる。
【0582】
経鼻投与に関しては、医薬製剤および医薬は、妥当な溶媒、および必要に応じて、これだけに限定されないが、安定剤、抗菌剤、抗酸化剤、ｐＨ改変剤、界面活性物質、生物学的利用能改変剤およびこれらの組合せなどの他の化合物を含有する噴霧剤またはエアロゾルであり得る。エアロゾル製剤用の噴射剤は、圧縮空気、窒素、二酸化炭素、または炭化水素に基づく低沸点溶媒を含み得る。
【0583】
注射可能な剤形は、一般に、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して調製することができる水性懸濁液または油性懸濁液を含む。注射可能な形態は、溶媒または希釈剤を用いて調製される液相または懸濁剤の形態であり得る。許容される溶媒またはビヒクルとしては、滅菌水、リンゲル液、または等張性水性生理食塩水溶液が挙げられる。あるいは、滅菌油を溶媒または懸濁化剤として使用することができる。油または脂肪酸は、天然または合成油、脂肪酸、モノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリドを含めた非揮発性のものであることが好ましい。
【0584】
注射に関しては、医薬製剤および／または医薬は、上記の妥当な溶液を用いた再構成に適した粉末であり得る。それらの例としては、これだけに限定されないが、フリーズドライされた、回転式乾燥されたまたは噴霧乾燥された粉末、非結晶粉末、顆粒、沈殿物、または粒子が挙げられる。注射に関しては、製剤は、必要に応じて、安定剤、ｐＨ改変剤、界面活性物質、生物学的利用能改変剤およびこれらの組合せを含有し得る。
【0585】
直腸内投与に関しては、医薬製剤および医薬は、化合物を腸、Ｓ字湾曲部および／または直腸内に放出するための坐薬、軟膏剤、浣腸剤、錠剤またはクリーム剤の形態であり得る。肛門坐薬は、本発明の１つまたは複数の化合物または化合物の薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を、通常の保管温度では固相に存在し、直腸内などの体の内部への薬物の放出に適した温度では液相に存在する許容されるビヒクル、例えば、カカオバターまたはポリエチレングリコールと混合することによって調製される。軟ゼラチン型および坐剤の製剤の調製には油も使用することができる。ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたはカルボキシメチルセルロースなどの懸濁化剤、ならびに緩衝剤および保存剤も含有し得る懸濁製剤の調製には、水、生理食塩水、水性ブドウ糖および関連する糖溶液、ならびにグリセロールを使用することができる。
【0586】
これらの組成物中の抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、広範に、すなわち、約１０重量％未満から、通常少なくとも約２５重量％、７５重量％または９０重量％の程度まで変動させることができ、これは、選択される特定の投与形式に従って、主に流体体積、粘度などによって選択される。経口投与可能な組成物、局部投与可能な組成物および非経口投与可能な組成物の実際の調製方法は当業者には公知であるまたは明らかになり、また、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ． （１９９５）に詳しく記載されている。
【0587】
本発明の別の実施形態では、がんの処置を含めた、上記の疾患、障害または状態の処置に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器およびラベルを含む。適切な容器としては、例えば、ビン、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されたものであり得る。容器は、状態の処置に有効な組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は静脈内溶液バッグまたは皮下注射針で穴をあけることができる止め栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の活性薬剤は、本発明の抗体である。容器上のまたは容器に付随する標識には、組成物が選択された状態の処置に使用されるものであることが示されている。製造品は、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびブドウ糖溶液などの薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の容器をさらに含み得る。製造品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明を伴う添付文書を含めた商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。本明細書に記載の医薬組成物および医薬は、がん性疾患の処置に有用である。
診断への使用および他の使用
診断への使用および他の使用
【0588】
抗原の発現（正常な試料と比べた発現の増大もしくは低減のいずれか、ならびに／または通常はエピトープが発現されない組織および／もしくは細胞における発現の存在などの不適切な発現）に関連する疾患、障害または状態の検出、診断およびモニタリングのために抗体を使用する方法が本明細書で提供される。患者が抗体療法に応答するかどうかを決定する方法が本明細書で提供される。
【0589】
一部の実施形態では、方法は、患者が標的抗原を発現する細胞を有するかどうかを本明細書に開示される抗体を使用して検出することを含む。一部の実施形態では、検出方法は、試料を本開示の抗体またはその抗原結合性断片と接触させ、結合のレベルが参照または比較試料（例えば、対照など）の結合のレベルと異なるかどうかを決定することを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の抗体またはポリペプチドが対象に対して妥当な処置であるかどうかを決定するために有用であり得る。
【0590】
一部の実施形態では、細胞または細胞／組織溶解物を抗体と接触させ、抗体と細胞の結合を決定する。試験細胞が同じ組織型の参照細胞と比較して結合活性を示す場合、その対象に抗体を用いた処置が有益であることが示され得る。一部の実施形態では、試験細胞はヒト組織に由来するものである。一部の実施形態では、試験細胞はヒト血液に由来するものである。
【0591】
特定の抗体－抗原結合を検出するための当技術分野で公知の様々な方法を使用することができる。行うことができる例示的なイムノアッセイとしては、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、比濁分析阻害イムノアッセイ（ＮＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。指示部分、または標識群を対象抗体に付着させることができ、これは、多くの場合アッセイ設備および適合するイムノアッセイ手順の利用可能性によって要求される方法の種々の使用の必要性に見合うように選択される。
【0592】
妥当な標識としては、限定することなく、放射性核種（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、もしくは３２Ｐ）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、もしくはβ－ガラクトシダーゼ）、蛍光部分もしくはタンパク質（例えば、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン、ＧＦＰ、もしくはＢＦＰ）、または発光部分（例えば、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．によって供給されるＱｄｏｔ（商標）ナノ粒子）が挙げられる。上記の種々のイムノアッセイの実施に使用される一般的な技法は当業者に公知である。
【0593】
診断目的に関しては、抗体またはその抗原結合性断片を、これだけに限定されないが、放射性同位元素、蛍光標識、および当技術分野で公知の種々の酵素－基質標識を含めた検出可能部分で標識することができる。標識を抗体とコンジュゲートする方法は当技術分野で公知である。
【0594】
一部の実施形態では、抗体を標識する必要はなく、抗体の存在は、第１の抗体に結合する第２の標識された抗体を使用して検出することができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片を、がん関連抗原に対するアフィニティー精製剤として、またはがん関連抗原タンパク質に関する診断アッセイ、例えば、特定の細胞、組織、または血清におけるがん関連抗原タンパク質の発現の検出に使用することができる。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、ｉｎ ｖｉｖｏ診断アッセイにも使用することができる。一般に、これらの目的に関しては、抗体を放射性核種（例えば、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１４Ｃ、１３１Ｉ、１２ｓＩ、３Ｈ、３２ｐまたは３５Ｓなど）で標識し、したがって、免疫シンチグラフィーを使用して腫瘍の場所を突き止めることができる。
【0595】
本発明の抗体は、競合結合アッセイ、直接的および間接的サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどの、および免疫沈降アッセイなどの任意の公知のアッセイ方法に使用することができる。Ｚｏｌａ， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， ｐｐ． １４７－１５８ （ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ． １９８７）。抗体を、免疫組織化学的検査において、当技術分野で公知の方法を使用して腫瘍試料を標識するために使用することもできる。利便上、本発明の抗体をキット、すなわち、診断アッセイを実施するための説明書を伴う、所定量の試薬のパッケージングされた組合せとして提供することができる。抗体を酵素で標識する場合、キットは、酵素が必要とする基質および補助因子（例えば、検出可能な発色団またはフルオロフォアをもたらす基質前駆体）を含む。さらに、例えば、安定剤、緩衝剤（例えば、遮断緩衝剤または溶解緩衝剤）などの他の添加剤を含めることができる。アッセイの感度を実質的に最適化する溶液中の試薬の濃度をもたらすために、種々の試薬の相対量を広範に変動させることができる。特に、試薬は、溶解すると妥当な濃度を有する試薬溶液をもたらす賦形剤を含む、通常は凍結乾燥した乾燥散剤として提供することができる。
キット
キット
【0596】
本明細書に記載の方法のいずれかに使用するためのキット、薬、組成物、および単位剤形も本明細書で提供される。本明細書に開示されるＩｇＡ抗体またはその抗原結合性断片の少なくとも１つを治療有効量で含むキットが本明細書で提供される。一部の実施形態では、キットは、第２の治療剤（例えば、化学療法剤）をさらに含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、水性形態または凍結乾燥形態である。キットは、希釈剤または再構成用溶液をさらに含む。
【0597】
キットは、抗体（または単位剤形および／もしくは製造品）を含む１つまたは複数の容器を含み得る。一部の実施形態では、単位投薬量が提供され、単位投薬量は、抗体（例えば、治療有効量）を含む組成物を所定量で含有し、１つまたは複数の追加的な薬剤を伴うまたは伴わない。一部の実施形態では、そのような単位投薬量は注射用の使い捨ての充填済みシリンジとして供給される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物は、生理食塩水、スクロースなど；リン酸などの緩衝剤を含み得る；および／または安定かつ有効なｐＨ範囲内で製剤化される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を、妥当な液体、例えば滅菌水を添加すると再構成することができる凍結乾燥粉末として提供することができる。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、これだけに限定されないが、スクロースおよびアルギニンを含めた、タンパク質凝集を阻害する１つまたは複数の物質をさらに含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヘパリンおよび／またはプロテオグリカンをさらに含む。
【0598】
一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかに従ったがんの処置に関する使用説明書をさらに含む。キットは、適切な個体または処置の選択の説明をさらに含み得る。キット内に供給される説明書は、一般には、ラベルまたは添付文書上に書かれた説明書（例えば、キットに含まれる紙シート）であるが、機械可読の説明書（例えば、磁気または光学保存ディスク上に保持された説明書）も許容される。一部の実施形態では、キットは、別の治療剤（例えば、抗がん抗体または化学療法剤）をさらに含む。
【0599】
キットは、適切なパッケージング中に入れられている。適切なパッケージングとしては、これだけに限定されないが、バイアル、ビン、ジャー、軟質パッケージング（例えば、密閉Ｍｙｌａｒバッグまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。キットにより、必要に応じて、緩衝剤および説明情報などの追加的な構成成分も提供される。したがって、本出願は、バイアル（例えば、密閉バイアルなど）、ビン、ジャー、軟質パッケージングなどを含む製造品も提供する。
【実施例】
【0600】
（実施例１）
工学的に操作された治療用ＩｇＡ抗体
第１の野生型ＩｇＡ２抗体を工学的に操作して以下のアミノ酸置換および欠失を組み入れた：ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｐ１２４Ｒ、Ｃ８６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、Ｃ１４７の欠失、およびＹ１４８の欠失。
工学的に操作された治療用ＩｇＡ抗体
第１の野生型ＩｇＡ２抗体を工学的に操作して以下のアミノ酸置換および欠失を組み入れた：ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｐ１２４Ｒ、Ｃ８６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、Ｃ１４７の欠失、およびＹ１４８の欠失。
【0601】
第２の野生型ＩｇＡ２抗体を工学的に操作して１３５位のアスパラギンをグルタミンに突然変異させた。Ｎ１３５Ｑ突然変異は、ＩｇＡ２抗体のＮ－グリコシル化部位を欠失させるものである。Ｎ１３５Ｑ突然変異を、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｐ１２４Ｒ、Ｃ８６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、Ｃ１４７の欠失、およびＹ１４８の欠失という追加的な突然変異と組み合わせることができる。
【0602】
第３の野生型ＩｇＡ２抗体を工学的に操作してアミノ酸１３１～１４８（ＰＴＨＩＮＶＳＶＶＭＡＥＡＤＧＴＣＹ）（配列番号９）の尾部片全体を欠失させた。Ｎ１３５はＩｇＡ２抗体のＮ－グリコシル化部位である。尾部片の欠失を、ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして、Ｎ４５．２Ｇ、Ｐ１２４Ｒ、Ｃ８６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、およびＴ１１６Ｓという追加的な突然変異と組み合わせることができる。
【0603】
表１に、野生型ＩｇＡ２（ＩｇＡ２＿Ｖａｌｅｒｉｕｓ＿ｈｇｎｃ＿ｉｄ＝ＨＧＮＣ：５４７９）；以下のアミノ酸置換および欠失を含む工学的に操作されたＩｇＡ２抗体：Ｎ４５．２Ｇ、Ｐ１２４Ｒ、Ｃ８６Ｓ、Ｎ１１４Ｔ、Ｉ１１５Ｌ、Ｔ１１６Ｓ、Ｃ１４７の欠失、およびＹ１４８の欠失（ＩｇＡ２－２．０）（ＩＭＧＴスキームに従って番号付けして）；Ｎ１３５Ｑ突然変異を含む本明細書に記載の工学的に操作されたＩｇＡ２抗体（ＩｇＡ３．０グリコシル化突然変異ｈｇｎｃ ｉｄ＝ＨＧＮＣ：５４７０）；尾部片アミノ酸１３１～１４８の欠失を含む本明細書に記載の工学的に操作されたＩｇＡ２抗体（ＩｇＡ２－３．０＿尾部片＿ｄｅｌ＿）；ＩｇＡ２（ｔｒ｜ Ａ０Ａ０Ｇ２ＪＭＢ２ ｜Ａ０Ａ０Ｇ２ＪＭＢ２ ＨＵＭＡＮ）；ＩｇＡ２（ｓｐ｜Ｐ０１８７７｜ＩＧＨＡ２＿ＨＵＭＡＮ）；およびＩｇＡ２（ｔｒ ｜Ａ０Ａ２８６ＹＥＹ５ ｜Ａ０Ａ２８６ＹＥＹ５ ＨＵＭＡＮ）のパーセント同一性、パーセント陽性、ギャップ、および全長の比較を詳述する。
【0604】
表１． 工学的に操作された抗体のアミノ酸配列の比較
（実施例２）
工学的に操作されたＩｇＡバリアント
【表1】
工学的に操作されたＩｇＡバリアント
【0605】
タンパク質グリコシル化は、抗体の機能および循環中の血清中半減期において主要な役割を果たす。ＩｇＡの不完全なグリコシル化により、専用受容体によるクリアランスが導かれる。不完全にグリコシル化されたタンパク質の内部移行の主要な受容体は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＲＰ１）である。この受容体は、Ｎ－グリコシル化タンパク質の末端ガラクトースを認識し、血清からのＩｇＡクリアランスの重要なメディエーターである。ＩｇＡ２（ｍ１）抗体は、合計４つのＮ結合グリコシル化部位（ＣＨ１－Ｎ４５．２、ＣＨ２－Ｎ１５．２、ＣＨ２－Ｎ１１４、ＣＨ３＿ＣＨＳ－Ｎ１３５）によって形成される複雑なＮ結合グリコシル化パターンを有する。ＩｇＡ２（ｍ１）の半減期を増強するために、極めて重要なＮ－グリコシル化モチーフを、単一のＮ－グリコシル化モチーフのみを含有するかまたはＮ－グリコシル化モチーフを全く含有しないように工学的に操作した。単一のＮ結合グリコシル化部位により、半減期が延長され、その後、抗体クリアランスが低減するより徹底したグリコシル化プロファイルがもたらされた。さらに、完全にグリコシル化されていないＩｇＡはグリコシル化依存性クリアランスを全く受けず、それにより、半減期が大幅に強化される。さらに、このグリコシル化されていないバリアントは、下等生物体における産生が可能であり、収率が有意に上昇し、製造費用が低減する。したがって、単一グリコシル化抗体またはグリコシル化されていない抗体は、生物学的製剤の製造を単純化をするものであり、治療目的での理想的な候補である。
工学的に操作されたＩｇＡバリアントの設計
工学的に操作されたＩｇＡバリアントの設計
【0606】
ＩｇＡ２（ｍ１）重鎖の遺伝子配列がＩｇＡの工学的操作の骨格であり、Ｎ結合グリコシル化モチーフをサイレンシングし、安定化突然変異を導入した（表２；図４Ａ～４Ｄ）。これにより、一連の分子：ＩｇＡ３．０－（ｍｉｎ）、ＩｇＡ３．０＋（ｐｌｕｓ）およびＩｇＡ４．０がもたらされた。
ＩｇＡ３．０＋バリアント
ＩｇＡ３．０＋バリアント
【0607】
ＩｇＡ３．０＋分子をＣＨ１－Ｐ１２４Ｒ突然変異によって重鎖と軽鎖の間の共有結合が可能になるように改変した。血清タンパク質とのシステイン架橋の形成を防止し、それにより、二量体凝集体および／または複合体の形成を防止するために、２つのシステイン残基を改変または除去した（ＣＨ２－Ｃ８６Ｓ；ＣＨ３＿ＣＨＳ－Ｃ１４７ｄｅｌ＿Ｙ１４８ｄｅｌ）。さらに、これらのモチーフ内の極めて重要なアミノ酸を置換することによって３つのＮ結合グリコシル化モチーフをサイレンシングした（ＣＨ１－Ｎ４５．２Ｇ；ＣＨ２－Ｎ１１４Ｔ；ＣＨ３＿ＣＨＳ－Ｎ１３５Ｑ）。
ＩｇＡ３．０－またはＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアント
ＩｇＡ３．０－またはＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアント
【0608】
ＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子は、ＩｇＡ３．０＋におけるＣＨ１およびＣＨ２と同じ突然変異を含有するが、ＩｇＡ３．０＋とは対照的に、ＩｇＡ３．０ｍｉｎでは、尾部片のほぼ全体が欠失している（ＣＨ３＿ＣＨＳ－Ｐ１３１－Ｙ１４８ｄｅｌ）。
ＩｇＡ４．０バリアントまたはグリコシル化されていないバリアント
ＩｇＡ４．０バリアントまたはグリコシル化されていないバリアント
【0609】
ＩｇＡ４．０分子を、４つの別々のアミノ酸置換によって残りのＮ結合グリコシル化モチーフ（ＣＨ２－Ｎ１５．２）のみをサイレンシングし、それにより、４つの完全にグリコシル化されていないＩｇＡ２分子を創出することによって創出した。
表２に、工学的に操作されたＩｇＡバリアント；ＩｇＡ３．０＋、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ、およびＩｇＡ４．０を野生型（ＷＴ）ＩｇＡ２（ｍ１）と比較して突然変異を列挙する。
（実施例３）
方法
ＩｇＡ３．０／ＩｇＡ４．０のクローニング
表２に、工学的に操作されたＩｇＡバリアント；ＩｇＡ３．０＋、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ、およびＩｇＡ４．０を野生型（ＷＴ）ＩｇＡ２（ｍ１）と比較して突然変異を列挙する。
【表2-1】
【表2-2】
方法
ＩｇＡ３．０／ＩｇＡ４．０のクローニング
【0610】
ＩｇＡ３．０＋およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子をクローニングするために、ＩｇＡ３．０の定常領域全体（ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨＳ）を包含する合成ＤＮＡを注文し（Ｂａｓｅｃｌｅａｒ、Ｌｅｉｄｅｎ ＮＬ）、ｐＥＥ１４．４ベクターにクローニングし、ＩｇＡ２（ｍ１）配列と置き換えた。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子の一部の場合では、ＩｇＡ３．０ｍｉｎの可変領域と定常領域の両方（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨＳ）を包含するｇＢｌｏｃｋｓ（ＩＤＴ）をｐｃＤＮＡ３．４ベクターにクローニングした。ＩｇＡ３．０ｍｉｎベクターに基づいて、ｐｃＤＮＡ３．４ベクター内のＩｇＡ３．０ｍｉｎのＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨＳ領域をＩｇＡ４．０に対する適当な突然変異を含有するｇＢｌｏｃｋｓ（ＩＤＴ）で置き換えることにより、ＩｇＡ４．０分子をクローニングした。
産生
産生
【0611】
ＩｇＡ３．０＋およびＩｇＡ３．０ｍｉｎの産生のためにＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を製造者の指示に従って使用した。ＤＮＡ複合体形成のために、ＩｇＡ３．０＋重鎖（ＨＣ）またはＩｇＡ３．０ｍｉｎ重鎖（ＨＣ）のための別々のベクターを、カッパ軽鎖（ＬＣ）のためのベクターおよびｐＡｄｖａｎｔａｇｅ（ｐＡｄｖ；Ｐｒｏｍｅｇａ）と最適なＨＣ：ＬＣ：ｐＡｄｖ比で混合し、２９３ｆｅｃｔｉｎを用いて複合体形成した後、トランスフェクションを行った。
【0612】
ＩｇＡ３．０ｍｉｎおよびＩｇＡ４．０の産生のためにＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を製造者の指示に従って使用した。ＤＮＡ複合体形成のために、ＩｇＡ３．０＋重鎖またはＩｇＡ３．０ｍｉｎ重鎖またはＩｇＡ４．０重鎖のための別々のベクターを、カッパ軽鎖のためのベクターおよびｐＡｄｖａｎｔａｇｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）と最適なＨＣ：ＬＣ：ｐＡｄｖ比で混合し、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅを用いて複合体形成した後、トランスフェクションを行った。
精製
精製
【0613】
ＩｇＡを精製するための手順は全てのＩｇＡバリアントについて同一であり、カッパ軽鎖を、清澄化し濾過した細胞培養上清からＨｉＴｒａｐ ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたＦＰＣＬを使用して捕捉し、その後、ＨｉＰｒｅｐ ２６／６０ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００ ＨＲカラムを使用して分子ふるいクロマトグラフィー手順によって分離することによって実施する。
結合アッセイ
結合アッセイ
【0614】
工学的に操作された抗体の結合を決定するために、可変部分およびＦｃ部分の両方の結合を評価した。
【0615】
ＨＥＫ２９３Ｆ産生物由来のＩｇＡ３．０ｍｉｎ－オビヌツズマブ（ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ）またはＩｇＡ３．０＋－オビヌツズマブ（ＩｇＡ３．０＋－Ｏｂｉ）の清澄化した上清をＦＡＣＳ結合実験においてＣＤ２０を発現するＤａｕｄｉ細胞に対して試験した。ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ産生物由来のオビヌツズマブ－ＩｇＡ４．０の清澄化した上清を希釈せずにＦＡＣＳ結合実験に使用した。
【0616】
手短に述べると、上清を、Ｄａｕｄｉ細胞と一緒に氷上で１時間インキュベートした。洗浄後、細胞を、ＰＥ標識した抗ＩｇＡ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）と一緒に４５分間インキュベートした。洗浄後、細胞をＰＦＡで固定し、Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ）で測定した。ＣＤ２０を認識する対照抗体を５～１０ｕｇ／ｍＬの濃度で添加した。
【0617】
抗体Ｆｃ領域がＦｃαＲに結合することができるかどうかを決定するために、ＩｇＡ２（ｍ１）およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ（２５μｇ／ｍＬ）を炭酸緩衝剤ｐＨ９．０中、ＥＬＩＳＡプレートに終夜コーティングした。プレートを１％ＢＳＡでブロッキングし、その後、ＣＤ８９を発現するカルセイン標識した健康なドナー多形核好中球（ＰＭＮ）を３７℃で４５分にわたってプレートに結合させた。その後、２回の洗浄ステップ毎に、残りのシグナルとインプットシグナル（洗浄なし）を比較することによって結合を決定した。コーティング濃度が等しいかどうかを決定するための追加的な制御を、ＥＬＩＳＡプレートを段階的に希釈したＩｇＡ２（ｍ１）およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ抗体で終夜染色することによって実施し、その後、それらの存在を抗ｈＩｇＡ－ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて検出した。
ＡＤＣＣ
ＡＤＣＣ
【0618】
標的細胞に５１Ｃｒ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）を負荷し、２回洗浄し、段階的に希釈したＩｇＡ抗体および健康なドナーＰＭＮと一緒に４時間インキュベートした。上清中のクロム放出を測定し、次式：（（実験ｃｐｍ－基底のｃｐｍ）／（最大ｃｐｍ－基底ｃｐｍ））×１００を使用して特異的溶解を算出し、ここで、最大溶解は標識した細胞を１．２５％トリトンと一緒にインキュベートすることによって決定され、最小溶解は抗体およびエフェクター細胞の非存在下で決定される。ＩｇＡ４．０の場合では、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ産物の希釈していない上清を評価した。
熱安定性
熱安定性
【0619】
熱安定性を、Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して熱シフトアッセイで分析した。２５μＬのＰＢＳおよび３×ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅ（最終濃度）中に希釈した合計１２，５μｇの抗体を白色９６ウェルの薄壁ＰＣＲプレート（Ｒｏｃｈｅ）に移し、Ｏｐｔｉｃａｌ－Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｅａｌｉｎｇ Ｔａｐｅ（Ｒｏｃｈｅ）で密閉した。プレートをＶｉｉＡ７（Ｒｏｃｈｅ）で３７℃から９９℃まで毎秒１．６℃の加熱速度で、各温度において１分間インキュベートしながら加熱した。励起および放出波長としてそれぞれ４９０ｎｍおよび５７５ｎｍを使用して蛍光を同時に記録した。
【0620】
不安定化したＩｇＡ分子機能性を評価するために、ＰＢＳ中の抗体をサーマルサイクラーにおいて異なる温度（４℃、１２℃ずつ徐々に上昇させて２３℃～９５℃）で５分間インキュベートした。インキュベーション後、完全培地を添加し、抗体を最終濃度１０μｇ／ｍＬでＡＤＣＣに直接使用した。
グリコシル化分析
グリコシル化分析
【0621】
ＰＮＧａｓｅ Ｆ処理を製造者の指示に従って実施した（ＮＥＢ）。手短に述べると、抗体をまず１００℃で１０分にわたって変性させ、その後、ＮＰ－４０、ＧｌｙｃｏｂｕｆｆｅｒおよびＰＮＧａｓｅ Ｆ酵素を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。試料を、２０ｍＭのＤＴＴを伴うＬａｅｍｍｌｉ緩衝剤中に取り、１０％Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅａｎ ＴＧＸ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に流した。ゲルをＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ）で１０分にわたって染色し、水ですすいだ。
【0622】
グリカンの同定および数量化を質量分析によって決定した。Ｈｅｒ２－ＩｇＡ２（ｍ１）に関しては、連結特異的シアル酸誘導体化後のＩｇＡ２抗体の放出されたＮ－グリコシル化についてのリフレクトロン陽性モードＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ分析を以前に記載されている通り実施した（Ｍｅｙｅｒ， Ｎｅｄｅｒｅｎｄ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ、およびＩｇＡ４．０－Ｏｂｉバリアントに関しては、ＬＣ／ＭＳ２手法を取った。
【0623】
抗体を、ＧｌｕＣ（Ｒｏｃｈｅ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ））およびトリプシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ））を用いて変性させ、還元し、アルキル化し、タンパク質分解により消化した。このために、抗体１０μｇを１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ８．５）、５ｍＭのＴｒｉｓ（２－カルボキシエチル）－ホスフィン（ＴＣＥＰ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ））、３０ｍＭのクロロアセトアミド（ＣＡＡ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ））および１％デオキシコール酸（ｄｅｏｘｙｃｈｅｌａｔｅ）ナトリウム（ＳＤＣ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ））、水（ＭＱ）（Ｑ－ＰＯＤまたはＱ－Ｇａｒｄ １ ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を≧１８．２ＭΩで動作させて生成したもの）に入れた。この混合物をＧｌｕＣと酵素：タンパク質比１：７５ｗ／ｗで、３７℃で４時間インキュベートし、その後、トリプシンと一緒に（１：１００ｗ／ｗ）３７℃で終夜インキュベートした。その後、試料を０．５％トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｃ ａｃｉｄ）（ＴＦＡ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ））に入れ、最大スピードで１０分間遠心分離することによってＳＤＣを沈殿させた。上清を固相抽出（ＳＰＥ）のために収集した。
【0624】
ＳＰＥのために、真空マニホールド上に位置付けたＯａｓｉｓ μＥｌｕｔｉｏｎ ＨＬＢ ９６ウェルプレート（Ｗａｔｅｒｓ、Ｗｅｘｆｏｒｄ、Ｉｒｅｌａｎｄ）を使用した。プレートを、０．５％のＴＦＡを用いて平衡化したアセトニトリル（ＡＣＮ、ＢｉｏＳｏｌｖｅ Ｖａｌｋｅｎｓｗａａｒｄ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）で条件付けし、上清を負荷し、０．５％のＴＦＡで洗浄し、５０％ＡＣＮ ０．５％のＴＦＡを用いてペプチドを最終的に溶出させた。回収した溶出液を回転蒸発によって乾燥し、その後のＬＣ－ＭＳ２分析のために２％ギ酸中に再構成した。
【0625】
消化および脱塩した試料のそれぞれについて、１００ｎｇを、Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｔｒｉｂｒｉｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂｒｅｍｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）とハイフネートした、ナノフローを実現するためのフロースプリッターを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用することによって分析した。試料を、５０ｃｍの分析カラム（内径５０μｍ、２．７μｍのＰｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８を充填したもの；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａｍｓｔｅｌｖｅｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）とカップリングした２ｃｍのトラップカラム（内径１００μｍ、３μｍのＲｅｐｒｏＳｉｌ－Ｐｕｒ Ｃ１８－ＡＱを充填したもの；Ｄｒ．Ｍａｉｓｃｈ ＧｍｂＨ、Ａｍｍｅｒｂｕｃｈ－Ｅｎｔｒｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎ）で分離した。緩衝剤Ａは０．１％ギ酸からなり、緩衝剤Ｂは８０％ＡＣＮ中０．１％ギ酸からなった。ＬＣ勾配は以下の通りであった：０～５分間：１００％Ａ（残りはＢである）、５～５３分間：８７％Ａ～６０％Ａ、５３～５８分間：０％Ａ、５８～６５分間：１００％Ａ。
【0626】
質量分析を、陽イオンモードで、コーティングされた融合シリカエミッターからスプレー電圧２ｋＶでエレクトロスプレーイオン化することで実施した。各試料を、同じＭＳ１撮像法であるが異なるＭＳ２法を使用して３連で測定した。ＭＳ１スキャンに関しては、質量範囲を３５０ｍ／ｚから２０００ｍ／ｚまで、分解能６０，０００、ＡＧＣ標的４００，０００、最大注入時間５０ｍｓに設定した。３種のＭＳ２法のそれぞれでは、ＨＣＤフラグメンテーション（３０％正規化衝突エネルギー；ＮＣＥ）を、最高の電荷状態、最低ｍ／ｚシグナルで３秒間のサイクル時間内に開始し、３０秒間の排除時間を使用した。ＨＣＤによるＭＳ２を、分解能３０，０００で１２０ｍ／ｚから４０００ｍ／ｚまで、ＡＧＣ標的５０，０００および最大注入時間５０ｍｓで記録した。ＭＳ２法１に関しては、ＨＣＤフラグメンテーションのみを実施した。ＭＳ２法２に関しては、ＨＣＤスペクトル内での少なくとも３つのオキソニウムイオン（Ｈｅｘ：１２７．０３９０、１４５．０４９５、１６３．０６０１；ＨｅｘＮＡｃ：１３８．０５５０、１６８．０６５５、１８６．０７６１、２０４．０８６７；ＰｈｏｓｐｈｏＨｅｘ：２４３．０２６４；ＮｅｕＡｃ：２７４．０９２１、２９２．１０２７；複合体：３６６．１３９５、４０５．０７９３、４０７．１６６０、５１２．１９７４、６５７．２３４９）の検出により、同じ前駆シグナルに対するステッピング－ＨＣＤを誘発し、ＨＣＤ断片を１０％、２５％および４０％のＮＣＥと組み合わせた。ステッピング－ＨＣＤを分解能３０，０００で１２０ｍ／ｚから４０００ｍ／ｚまで、ＡＧＣ標的２００，０００および最大注入時間２５０ｍｓで記録した。ＭＳ２法３に関しては、オキソニウムイオンの検出によりＥＴｈｃＤ（３０％補足活性化）を誘発し、これを分解能３０，０００で１２０ｍ／ｚから４０００ｍ／ｚまで、ＡＧＣ標的２００，０００および最大注入時間２５０ｍｓで記録した。
【0627】
ボトムアップデータをＢｙｏｎｉｃ ｖ３．３．１１（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｒｉｃｓ Ｉｎｃ．）を用いて解釈した。生データをＡｒｇおよびＬｙｓ（トリプシン）、およびＧｌｕおよびＡｓｐ（ＧｌｕＣ）におけるＣ末端切断部位で検索した。前駆質量許容差１０ｐｐｍおよび断片質量許容差２０ｐｐｍを使用し、誤った切断を３つ許容した。Ｃｙｓカルバミドメチル化を固定された修飾として含め、Ｍｅｔ酸化を可変修飾として含めた。Ｎ－グリコシル化のために、Ｎ－グリカン生合成の経路に従って２７９種の組成物を含めた。
【0628】
Ｓｋｙｌｉｎｅ（ｖ３．７．０．１１３１７）を使用して相対的な数量化を実施した。このために、Ｂｙｏｎｉｃによりグリコシル化された状態で見いだされたペプチドのそれぞれを統合した。これには、主要な誤切断および酸化バリアントの全てが含まれた。これらのそれぞれについて、ＬＣ－ＭＳ２の各実行で上述の２７９種のグリカン組成物を統合した。その後、そのように得られた統合を以下の基準が順守されるようにキュレートした：１）理論的質量に対するエラーが≦５ｐｐｍであること、２）理論的な同位体パターンでｉｄｏｔｐが≧０．８５であること、３）そのペプチドについての平均保持時間±２分以内で溶出されること、４）明らかに重複する同位体パターンがないこと。得られたグリコペプチドの一覧はＢｙｏｎｉｃによるアノテーションと一致し、これを相対的な数量化のためにさらに使用した。キュレートされたペプチドグリコフォームのそれぞれについて、ＭＳ１領域を統合し、同じＮ－グリコシル化部位に通知されるペプチドを組み合わせた。数量化の代替的なやり方として、所与のグリコシル化部位に通知されるグリコペプチドの組合せそれぞれについてペプチドスペクトルマッチ（ＰＳＭ）の数を計数した。
【0629】
グリカン種の可視化に関しては、Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ ｆｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｌｙｃｏｍｉｃｓに従うことが推奨される。ＧｌｙｃｏＷｏｒｋｂｅｎｃｈ（ｖ２．１ ｂｕｉｌｄ １４６）を使用してグリカンカートゥーンを構築した。ネイティブＭＳ分析のために、抗体の緩衝剤を、Ｖｉｖａｓｐｉｎ ５００ ３０ ｋＤａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｃｕｔ－ｏｆｆ ｆｉｌｔｅｒ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用し、１５．０００×ｇで１０×１５分間遠心分離することによって１５０ｍＭの酢酸アンモニウムｐＨ７．５と交換した。緩衝剤の交換後、１５０ｍＭの酢酸アンモニウム、ｐＨ７．５を用いて抗体のおおよその濃度が３μＭになるように調整した。
【0630】
ネイティブＭＳを、広範な質量範囲（ＥＭＲ）を有するＥｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ Ｏｒｂｉｔｒａｐ機器（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂｒｅｍｅｎ）で実施し、２５ｍｇ／ｍＬのＣｓＩ溶液を使用して較正した。トランスポート多重極およびイオンレンズの電圧設定を、必要とされるｍ／ｚ範囲で良好な伝達がもたらされるように手動で最適化した。エレクトロスプレーイオン化を、金でコーティングされたガラスキャピラリーから、キャピラリー電圧１．２ｋＶを使用して実現し、一方、ＭＳを、２００ｍ／ｚで、ソースフラグメンテーション８０Ｖ、ソース温度２５０℃、衝突エネルギー８０Ｖ、および分解能３５０００で作動させた。ＨＣＤ細胞に窒素を気体の圧力がおよそ３．７×１０～１０バールに達するまで添加することにより、分子の脱溶媒和をさらに実現した。質量を、電荷を質量の最低標準偏差に当てはめることによって電荷状態分布から算出した（一般には１Ｄａ未満の質量エラーが生じる）。
薬物動態／薬力学的試験
薬物動態／薬力学的試験
【0631】
ＩｇＡの薬物動態学／薬力学的性質に関して、ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に抗体１００μｇ（１ｍｇ／ｍＬ）をｉ．ｖ．注射した。示されている時点で血液を収集し、遠心分離して血清を分離し、収集した。希釈した血清に対してＥＬＩＳＡを実施した。
体内分布
体内分布
【0632】
抗体をキレーターとコンジュゲートした後に放射性標識した。抗体を３０ｋＤａの遠心フィルターを通して１２，０００ｇで８分間、高速回転させた。その後、０．１Ｍの炭酸水素ナトリウム（ｐＨ８．２）５００μＬを遠心フィルターに添加し、１２，０００ｇで８分間、再度高速回転させた。遠心フィルターを新しい管の中にひっくり返し、１，０００ｇで２分間遠心分離し、それにより、約４０μＬを得、それに炭酸水素ナトリウム緩衝剤６０ｕＬを添加し、その結果、１００μＬを得た。２０倍モル過剰のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＴＰＡ（乾燥ＤＭＳＯ中２ｍｇ／ｍＬ（５００ｕｌ中１ｍｇを使用する））を添加し、３０秒間ボルテックスし、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＢｎＤＴＰＡ－ＩｇＧ１－ジヌツキシマブまたはＢｎＤＴＰＡ－ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ジヌツキシマブコンジュゲートをＧ５０カラムに流し、０．５ＭのＭＥＳ緩衝剤（ｐＨ５．４）を用いて、１００μＬの画分として１２画分に溶出させた。５つの最も濃縮された画分をプールし、３０ｋＤａの遠心フィルターを通して１２，０００ｇで８分間、高速回転させた。０．５ＭのＭＥＳ緩衝剤（ｐＨ５．４）を５００μＬの体積で遠心フィルターに添加し、１２，３００ｇでさらに８分間遠心分離した。遠心フィルターを新しい微量遠心管の中にひっくり返し、１，０００ｇで２分間遠心分離した。タンパク質濃度をＮａｎｏｄｒｏｐによって測定した。
【0633】
抗体を放射標識するために、インジウム溶液（５５．５ＭＢｑ）１５０ｕＬを微量遠心管中のＭＥＳ緩衝剤中抗体１５０ｕｇに添加し、室温で４５分間インキュベートした。反応混合物をＧ５０カラムに流し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いて溶出させた。試料を微量遠心管中、１００μＬの画分（３滴）として１６画分に収集し、活性を確認し、最高の画分を組み合わせた。
【0634】
放射標識した抗体の純度をｉＴＬＣストリップによって確認するために、合計２μＬの反応混合物をｉＴＬＣにピペットで移し、２分間乾燥させた。体積０．１Ｍのクエン酸緩衝剤を、底部を覆う測定シリンダーに添加した。ｉＴＬＣストリップを測定シリンダーに入れ、クエン酸緩衝剤を上部から約１ｃｍのところまで添加した。ストリップをとり出し、ラジオＴＬＣを使用してスキャンした。
ｉｎ ｖｉｖｏ ｉ．ｐモデル
ｉｎ ｖｉｖｏ ｉ．ｐモデル
【0635】
マウスをＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｕｔｒｅｃｈｔの動物施設において維持した。ＣＢ１７／ｌｃｒ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ｌｃｒｌｃｏｃｒｌ（Ｃｈａｒｌｅｓ ｒｉｖｅｒ）バックグラウンドに対して戻し交配した雌ｈＣＤ８９ ＴｇまたはｈＣＤ８９ ＮＴｇマウスを使用して実験を行った。マウスを５つの群に入れ、１２：１２明暗サイクル下、食物および水を自由に入手可能にして飼育した。実験は全て国際的なガイドラインに従って実施し、また、国のＣｅｎｔｒａｌ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ ｆｏｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｏｎ Ａｎｉｍａｌｓ（ＣＣＤ）および地域の実験動物福祉団体によって承認されたものであった。
【0636】
０日目に１×１０５個の量のＡ４３１－Ｌｕｃ２－Ｈｅｒ２細胞をｉ．ｐ．注入し、その後、６日目にｐｅｇＧ－ＣＳＦ（Ａｍｇｅｎ）２０ｕｇをｓ．ｃ．注射した。ＰＢＳ中ルシフェリン（Ｐｒｏｍｅｇａ）２．５ｍｇをｉ．ｐ．注射した１０分後に生物発光（ＢＬＩ）シグナルをＵ－ＯＩ ｓｙｓｔｅｍ（ＭｉＬａｂｓ）で測定した。６日目に、マウスを異なる処置群にランダムに入れた。７日目に処置を開始し、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２、１０μｇを１０日間にわたって毎日ｉ．ｐ．注射した。示されている時点でＢＬＩシグナルを測定した。
（実施例４）
結果
（実施例４）
結果
【0637】
種々の標的に対するＩｇＡ２分子、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子、ＩｇＡ３．０＋分子、およびＩｇＡ４．０分子をコードするプラスミドをＨＥＫ２９３Ｆ細胞および／またはＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクトした。図５Ａ～５Ｂに示されている通り、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞において異なるＨＣ：ＬＣ：ｐＡｄｖ比を試験した場合、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｃ４７Ａ８－ＣＱ抗体は野生型ＩｇＡ２（ｍ１）－Ｈｅｒ２と同様またはそれよりも良好なレベルで発現された。これはＩｇＡ３．０＋にも当てはまる。
【0638】
産生細胞株間の比較として、ＩｇＡ３．０－分子（例えば、それぞれ３つの異なる抗原、ＣＤ２０、Ｈｅｒ２、およびｍＣＴＬＡ４を標的とするＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｍＣＴＬＡ４）はＨＥＫ２９３Ｆ細胞およびＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞のどちらにおいても産生された。図６Ａ～６Ｃ。ＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子の発現レベルはＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞においてより高く、上清に対するサンドイッチＥＬＩＳＡによって決定して、ほぼ１ｇ／Ｌに達した。さらに、異なるＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子（それぞれ種々の抗原、ＧＤ２、ｇｐ７５、Ｈｅｒ２、ＣＤ２０を標的とするＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ｃｈ１４．１８、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＴＡ９９、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＯｂｉはＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞において首尾よく産生された（図７Ａ～７Ｄ）。これらのデータから、工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎおよびＩｇＡ３．０＋バリアントが産生系の選択に関係なく適当に発現されたことが示される。
【0639】
また、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞において発現された４種のグリコシル化されていないＩｇＡ４．０バリアントの全てについて、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ抗体と同様の発現レベルが示された（図８Ａ～８Ｄ）。これにより、導入された突然変異のいずれによっても工学的に操作されたＩｇＡ４．０バリアントの発現が妨げられなかったこと、および完全にグリコシル化されていないＩｇＡ抗体が適当に発現されたことが示される。
【0640】
その後のＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアント；ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ、（図９Ａ～９Ｂ））およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２（図１０Ａ～１０Ｂ）のカッパ軽鎖に依存的な精製、その後のそれらのそれぞれのＳＥＣ分離（ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉについての図９Ｃ～９Ｄ、およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２を実証する図１０Ｃ～１０Ｄ）により、野生型ＩｇＡ２（ｍ１）で尾部片のシステインに起因して通常見られる凝集体が存在しないことが明らかになった。このシステインの除去（ＩｇＡ３．０＋）または尾部片全体の除去（ＩｇＡ３．０ｍｉｎ）により、凝集が起こらなかった。同様に、ＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントと同様に尾部片を欠くＩｇＡ４．０バリアント；ＩｇＡ４．０－ＯｂｉのＳＥＣ分離では凝集体の形成は観察されなかった（図１１Ａ～１１Ｂ）。
【0641】
次に、ＩｇＡ３．０＋－Ｏｂｉ分子およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ分子の結合能をＤａｕｄｉ細胞に対するフローサイトメトリーによって決定した。予測通り、ＩｇＡ３．０＋－Ｏｂｉ抗体ならびにＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体のどちらもＤａｕｄｉ細胞上のＣＤ２０に結合することができ、これにより、それらのＦａｂ断片が適当にフォールディングされていることが示された（図１２Ａ～１２Ｅ）。次に、完全にグリコシル化されていないＩｇＡ４．０バリアントがそれでも標的抗原に結合することができるかどうかを評価するために、ＣＤ２０が補われたＳＫＢＲ３細胞を使用してフローサイトメトリーアッセイを実施した（図１５）。これらのＦＡＣＳ結合データから、工学的に操作されたＩｇＡ４．０バリアント（ＩｇＡ４．０＿ＮＴ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ４．０＿ＮＱ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ４．０＿ＮＧ－Ｏｂｉ、ＩｇＡ４．０＿ＮＧ－Ｏｂｉ、およびＩｇＡ４．０＿ＮＬＴ－ＴＩＳ－Ｏｂｉ）がＣＤ２０ならびに工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子に結合したことが示され、これにより、Ｆａｂ領域のフォールディングが工学的操作の影響を受けないことが確認される。
【0642】
Ｆｃ部分がなおＦｃαＲに結合する能力を保持するかどうかを評価するために、ＩｇＡ－ＦｃαＲ結合アッセイを実施し、ＩｇＡをコーティングしたプレートに好中球を結合させ、その後、一連の洗浄を行った。多数回の洗浄後に、好中球はなおＩｇＡ分子に結合することができ、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ＯｂｉについてはＩｇＡ２（ｍ１）と同様またはそれよりも良好な結合プロファイルが示された（図１３）。好中球に提示されるＩｇＡ分子の量が等価であることを確実にするために、ＩｇＡ検出ステップを実行し、それによりＩｇＡ２（ｍ１）およびＩｇＡ３．０ｍｉｎの抗体の濃度が等しいことが示された（図１４）。
【0643】
工学的に操作されたＩｇＡ分子が機能的なものであり、ＰＭＮ媒介性ＡＤＣＣを誘導することができることを実証するために、クロム放出アッセイを実施した。ＳＫＢＲ３－ＣＤ２０細胞に対して、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２抗体によりＡＤＣＣをＩｇＡ２（ｍ１）－Ｈｅｒ２と同じくらい良好にまたはそれよりも良好に誘導することができた（図１６Ａ）。さらに、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞において産生されたＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ抗体により、Ｄａｕｄｉ細胞およびＲａｍｏｓ細胞のどちらにおいてもＨＥＫ２９３Ｆにより産生された抗体と同じくらい効率的にＡＤＣＣが誘導された（図１６Ｂ～１６Ｃ）。さらに、完全にグリコシル化されていないＩｇＡ４．０バリアントでは、ＡＤＣＣがＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉと同様のレベルまで誘導され（図１６Ｄ）、これにより、死滅に関して完全な機能性が示される。これは、機能性が重度に損なわれるまたは除去されるグリコシル化されていないＩｇＧ１（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ２００９）とは全く対照的である。これらのデータから、ＩｇＡバリアントを工学的に操作するために導入された改変にもかかわらず、ＩｇＡ３．０ｍｉｎならびにＩｇＡ４．０のどちらも、なおＡＤＣＣの誘導に関する機能を保持することが示される。
【0644】
工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントおよびＩｇＡ４．０バリアントの熱安定性がより高いかどうかを調べるために、ＳＹＰＲＯ熱シフトを実行した。抗体を、サーマルサイクラー中、ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅの存在下でその温度をゆっくりと上昇させながらインキュベートした。タンパク質がアンフォールディングされると、ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅが疎水性ポケットに結合することができ、蛍光シグナルを検出することができる。図１７Ａは、２種の野生型ＩｇＡ２（ｍ１）抗体と、それに対して２種の工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子および４種の工学的に操作されたＩｇＡ４．０抗体の熱安定性プロファイルを示す。曲線のシフトから、ＩｇＡ３．０ｍｉｎバリアントおよびＩｇＡ４．０バリアントが野生型ＩｇＡ２（ｍ１）よりも高温でより安定であることが示される。非線形回帰分析によって算出されたＴｍ値を、評価を行った異なるＩｇＡ分子について平均した（図１７Ｂ）。どちらの型の工学的に操作されたＩｇＡバリアント（ＩｇＡ３．０ｍｉｎおよびＩｇＡ４．０）でも、野生型ＩｇＡ２（ｍ１）と比較して高温での安定性の改善が示された。
【0645】
観察された安定性を機能性に変換するために、抗ＣＤ２０ ＩｇＡ抗体；野生型ＩｇＡ２およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉをある特定の温度まで加熱し、Ｒａｊｉ細胞を使用してクロム放出ＡＤＣＣにおいて試験した（図１７Ｃ）。シグナルを４℃でインキュベートした抗体である対照に対して正規化した。熱に曝露させた抗体の死滅効率は、野生型ＩｇＡ２（ｍ１）と工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎ／ＩｇＡ４．０分子の間で異なった。野生型ＩｇＡ２（ｍ１）では４７℃またはそれよりも高い温度への曝露で漸減プロファイルが示され、一方、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ／ＩｇＡ４．０分子では、７１℃への曝露後になお５０％を超える活性が示された。試験した３種の抗体の全ての活性が８３℃よりも高い温度で失われた。これにより、機能性に関して抗体の安定性が重要であること、および野生型と比べた工学的に操作されたＩｇＡバリアントの熱安定性の改善が有利であることが示される。
【0646】
工学的に操作されたＩｇＡ３．０ｍｉｎ分子およびＩｇＡ４．０分子は野生型ＩｇＡ２（ｍ１）と比較してＮ結合グリコシル化の部位が少ないまたはそれを有さないので、ＰＮＧａｓｅ Ｆアッセイを実施して残りのＮ－グリコシル化を可視化した（図１８）。このために、ＩｇＡ分子を、最内側のＧｌｃＮａｃとアスパラギンの間を切断することによって全てのＮ結合グリコシル化を除去するＰＮＧａｓｅ Ｆを用いて処理した。その後、試料を還元性ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルに流した。予測通り、野生型ＩｇＡ２（ｍ１）（ＨＥＫ２９３Ｆにより産生されたもの）では４つのＮ結合グリカンが存在することに起因して分子量の主要なシフトが示され、一方、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｏｂｉ（ＨＥＫ２９３Ｆにより産生されたもの）のシフトは単一のグリコシル化事象のみであることに起因して軽微なものである。さらに、グリコシル化されていないＩｇＡ４．０バリアント（ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓにより産生されたもの）ではシフトは全く示されず、これにより、この抗体がグリコシル化されていないことが示される。
【0647】
グリコシル化プロファイルをより詳細に評価するために、抗体を質量分析によって分析した。野生型ＩｇＡ２（ｍ１）－Ｈｅｒ２およびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２のグリコシル化プロファイル（図１９Ａ～１９Ｂ）を分析した。ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ分析により、ＩｇＡ２（ｍ１）－Ｈｅｒ２ではいくつかのＮ－グリカン種が検出され、これは、４つのＮ結合グリコシル化モチーフの全体的なグリコシル化を反映する。さらに、ＬＣ／ＭＳ２分析から得られたＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２プロファイルのピークは残った単一のＮ結合グリコシル化モチーフのみに由来し、したがって、他の部位は改変されていないので、同様に全体的なグリコシル化プロファイルを反映する。ＬＣ／ＭＳ２により、ＨＥＫ２９３ＦおよびＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ抗体産生系に由来する抗体と比較した場合、グリコシル化プロファイルの実質的な差異が観察された（図１９Ｃ）。ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓでは、グリコシル化された抗体の大多数（＞５０％）が二分岐ＧｌｃＮａｃで終結し、一方、ＨＥＫ２９３Ｆでは、ハイブリッドまたは複合型のグリコシル化種のより多様なアレイが示された。好ましくない遊離のガラクトースはＨＥＫ２９３Ｆにより産生された抗体においてＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓにより産生された抗体よりも著しく多く存在した。これらの結果から、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓにより産生された抗体はより少ない異種遺伝子型グリコシル化を示し、ＡＳＧＰＲにより誘導されるクリアランスに関して、より良好な半減期特徴を有することが示された。グリコシル化事象がＩｇＡ４．０分子に存在するかどうかを決定するために、ネイティブＭＳ手法をとり、完全な、消化されていない抗体を分析した。４種全てのＩｇＡ４．０バリアントで理論的なペプチド骨格に極めて近い質量が示された（図１９Ｄ～１９Ｇ）。４種全てのバリアントの間で３６Ｄａの一貫した減少が存在し、一般にはグリカン当たり１５００～２５００Ｄａであるので、これをＮ－グリカン種に起因するものとすることはできない。観察された質量の差異は、３６Ｄａを構成する２つのピログルタミン酸の形成である可能性が高い。したがって、この分析により、ＩｇＡ４．０抗体バリアントがそれらの骨格にＮ－グリカンを欠くことが示され、これにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、グリコシル化されていないＩｇＡ抗体が完全に機能的であることが実証される。
【0648】
工学的に操作されたＩｇＡ３．０バリアントおよびＩｇＡ４．０バリアントにグリコシル化部位が存在しないことにより血清中半減期が長くなるかどうかを決定するために、薬物動態試験をセットアップした。ＢＡＬＢ／ｃマウスに抗体１００μｇをｉ．ｖ．注射し、血清試料を示されている時点でＥＬＩＳＡによって分析した。フォーマットが異なる２種の抗体、ジヌツキシマブおよびオビヌツズマブを評価した。検出された血清中の野生型ＩｇＧ１－ジヌツキシマブのレベルは、急速に取り除かれた野生型ＩｇＡ２－ジヌツキシマブのレベルよりも高かった（図２０Ａ）。２４時間時点でのＩｇＡ２とＩｇＡ３．０ｍｉｎの血清中レベルの差異は、注射後最初の１時間以内のＡＳＧＰＲによるクリアランスに起因し得る。これにより、ＩｇＡ３．０ｍｉｎでは、ＡＳＧＰＲによるＮ－グリコシル化依存性クリアランスが少ないことに起因して、分布相が明白でないことが実証された。データから、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ジヌツキシマブ抗体では野生型ＩｇＡ２－ジヌツキシマブと比較して延長した血清中半減期が観察されたことが示される。Ｉｇ４．０－オビヌツズマブの血清中半減期を評価すると、そのＩｇＡ３．０ｍｉｎ対応物であるＩｇＡ３．０ｍｉｎ－オビヌツズマブと比較して血清中半減期の明らかな延長が観察される（図２０Ｂ）。これにより、工学的に操作されたＩｇＡバリアントがそれらの野生型対応物ＩｇＡと比べて延長した血清中半減期を有し、したがって、より少ない抗体を使用して腫瘍に対する同様の効果を与えることができることが実証される。
【0649】
ＩｇＡ３．０ｍｉｎ抗体が腫瘍に分布するかどうかを定義するために、抗体を１１１インジウムで放射標識してそれらをｉｎ ｖｉｖｏでモニタリングする体内分布実験を実施した。このために、ＧＤ２を発現するＩＭＲ－３２神経芽細胞腫細胞をＮＳＧマウスに皮下注射した。４２日間成長させた後、マウスに放射標識した野生型ＩｇＧ１－ジヌツキシマブおよびＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ジヌツキシマブを静脈内注射した。マウスを注射の２４時間後および４８時間後にスクリーニングした（図２１Ａ～２１Ｂ）。肝臓および腫瘍のどちらにおいても放射性シグナルが観察され、これにより、抗体が腫瘍に浸潤することが示される。肝臓シグナルは、異化される血流からの蓄積した抗体を表す。腫瘍／肝臓比を決定することにより、腫瘍特異的シグナルがバックグラウンドに対して補正される。最初、２４時間後に観察されたシグナルは同様であるが、４８時間の時点ではＩｇＡ３．０ｍｉｎ－ジヌツキシマブシグナルがそのＩｇＧ１対応物よりも腫瘍特異的である（図２２）。
【0650】
次に、ＩｇＡ３．０ｍｉｎのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を決定した。このために、ｈＣＤ８９トランスジェニックおよび非トランスジェニックＳＣＩＤも用いて確立された腫瘍モデルを使用した（Ｂｒａｎｄｓｍａ， Ｔｅｎ Ｂｒｏｅｋｅ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。マウスにＡ４３１－ｌｕｃ２－Ｈｅｒ２細胞をｉ．ｐ．注射した。腫瘍が確立されたら、マウスを、ＰＢＳまたはＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２のいずれかをｉ．ｖ．投与することによって処置した（図２３）。示されている時点で腫瘍成長をＢＬＩによってモニタリングした。腫瘍はＰＢＳ群では指数関数的な成長を示した。しかし、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ－Ｈｅｒ２で処置したマウスでは腫瘍の成長は示されず、５８日後にがんが制御され、これにより、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの有効性が実証される。
【0651】
結果から、野生型ＩｇＡ２（ｍ１）と比較して、全ての工学的に操作されたＩｇＡバリアント；ＩｇＡ３．０＋、ＩｇＡ３．０ｍｉｎ、およびＩｇＡ４．０で改善された生物薬剤学的特性が示される一方でそれらの機能性がなお保持されることが実証された。工学的に操作されたＩｇＡバリアントは高レベルで発現され、凝集を伴わずに精製することができ、その結果、ｉｎ ｖｉｔｒｏならびにｉｎ ｖｉｖｏのどちらにおいても標的抗原に対する頑強な結合および標的細胞の効率的な死滅をなお示す純粋かつより安定なＩｇＡ抗体がもたらされる。
表３に、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの重鎖定常領域の例示的なアミノ酸配列および核酸配列を列挙する。
表３に、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの重鎖定常領域の例示的なアミノ酸配列および核酸配列を列挙する。
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【表3-4】
【表3-5】
【表3-6】
【表3-7】
【0652】
表４に工学的に操作されたＩｇＡバリアントのカッパ軽鎖定常ドメインの例示的なアミノ酸配列および核酸配列を列挙する。
表５に、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの可変重鎖の相補性決定領域のアミノ酸配列の例示的な一覧を列挙する。
表６に、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの可変軽鎖の相補性決定領域のアミノ酸配列の例示的な一覧を列挙する。
表７に、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの可変重鎖の例示的なアミノ酸配列および核酸配列を列挙する。ＣＤＲ領域が太字で示されている。
表８に、工学的に操作されたＩｇＡバリアントの可変軽鎖の例示的なアミノ酸配列および核酸配列を列挙する。ＣＤＲ領域が太字で示されている。
表９に、異なる抗原に結合することができる例示的なＩｇＡバリアント抗体を列挙する。この表には、ＩｇＡバリアント抗体の可変軽鎖、可変重鎖、ＩｇＡ重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域の配列の例示的な対形成が示されている。
表１０に、ＷＴ ＩｇＡ重鎖定常領域のＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインの例示的な配列を列挙する。
表１１
【表4】
【表5-1】
【表5-2】
【表6】
【表7-1】
【表7-2】
【表7-3】
【表8-1】
【表8-2】
【表8-3】
【表9-1】
【表9-2】
【表9-3】
【表9-4】
【表9-5】
【表10】
【表11-1】
【表11-2】
【0653】
本開示の好ましい実施形態が本明細書において示され、記載されているが、そのような実施形態が単に例として提供されていることは当業者には明白であろう。当業者は、本開示から逸脱することなく、多数の変形、変化および置換をすぐに思いつくであろう。本明細書に記載の実施形態の種々の代替、またはそこに記載のこれらの実施形態もしくは態様の１つまたは複数の組合せを本開示の実施に使用することができることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲により本開示の範囲が定義され、それにより、これらの特許請求の範囲内に入る方法および構造ならびにそれらの等価物が包含されるものとする。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【図8-3】
【図8-4】
【図9-1】
【図9-2】
【図10-1】
【図10-2】
【図11-1】
【図11-2】
【図12-1】
【図12-2】
【図12-3】
【図12-4】
【図12-5】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16-1】
【図16-2】
【図16-3】
【図17-1】
【図17-2】
【図17-3】
【図18】
【図19-1】
【図19-2】
【図19-3】
【図19-4】
【図20-1】
【図20-2】
【図21】
【図22】
【図23】
【配列表】
【国際調査報告】