特表 2022-528152 ＮＫ細胞免疫チェックポイントを標的とすることによる感染症処置のための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-08

(54)【発明の名称】ＮＫ細胞免疫チェックポイントを標的とすることによる感染症処置のための方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20220601BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20220601BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20220601BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20220601BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20220601BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 38/07 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 38/06 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/4709 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/4725 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/7072 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 31/4178 20060101ALI20220601BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220601BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61K45/06

A61P31/12

A61P31/18

A61P31/14

A61P31/20

A61K31/7105

A61K31/713

A61K38/07

A61K38/06

A61K31/4709

A61K31/4725

A61K31/7072

A61K31/7068

A61K31/4178

A61P43/00 121

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021559469

(86)(22)【出願日】2020-03-20

(85)【翻訳文提出日】2021-11-04

(86)【国際出願番号】 CN2020080365

(87)【国際公開番号】W WO2020192572

(87)【国際公開日】2020-10-01

(31)【優先権主張番号】201910219951.0

(32)【優先日】2019-03-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521437895

【氏名又は名称】チャイニーズ・アカデミー・オブ・サイエンシーズ、アンスティテュ・パストゥール・オブ・シャンハイ

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＰＡＳＴＥＵＲ ＯＦ ＳＨＡＮＧＨＡＩ， ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥＳ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(74)【代理人】

【識別番号】100157956

【弁理士】

【氏名又は名称】稲井 史生

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(74)【代理人】

【識別番号】100221545

【弁理士】

【氏名又は名称】白江 雄介

(72)【発明者】

【氏名】タン，ホン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，チャオ

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ハイロン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084AA18

4C084BA01

4C084BA10

4C084BA15

4C084BA16

4C084BA23

4C084CA59

4C084MA02

4C084MA17

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4C084MA23

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

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4C084ZC751

4C086AA01

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4C086EA16

4C086EA17

4C086GA07

4C086GA10

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB33

4C086ZC75

(57)【要約】

本開示は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤を対象に投与するステップを含む、対象における感染症を予防または処置する方法に関する。本開示はまた、感染症の処置における、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用、およびＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤を含む医薬組成物の使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象がウイルス感染に起因する感染症に罹患している、または罹患のリスクがある、対象においてＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転するための医薬組成物の製造における、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用。

【請求項2】

対象においてウイルス感染に起因する感染症を予防または処置するための医薬組成物の製造における、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用。

【請求項3】

該ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）から選択される、請求項１または２に記載の使用。

【請求項4】

該ウイルスが、ＨＣＶである、請求項３に記載の使用。

【請求項5】

該感染症が慢性感染期にある、請求項１－４の何れか１項に記載の使用。

【請求項6】

該ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子が、ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴおよびＫＬＲＧ１から選択される、請求項１－５の何れか１項に記載の使用。

【請求項7】

該アンタゴニストが、該免疫チェックポイント分子に対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１－６の何れか１項に記載の使用。

【請求項8】

該ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＮＫＧ２Ａであり、および該アンタゴニストがＮＫＧ２ＡまたはそのリガンドＨＬＡ－Ｅに対して指向性を持つ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項７に記載の使用。

【請求項9】

該アンタゴニストが免疫チェックポイント分子の対応するリガンド／受容体またはそのフラグメントの可溶性形態である、請求項１－６の何れか１項に記載の使用。

【請求項10】

該免疫チェックポイント分子がＮＫＧ２Ａであり、および該アンタゴニストがＨＬＡ－Ｅまたはそのフラグメントの可溶性形態である、請求項９に記載の使用。

【請求項11】

該発現阻害剤がｍｉｃｒｏＲＮＡおよびｓｉＲＮＡから選択される、請求項１－６の何れか１項に記載の使用。

【請求項12】

該医薬組成物がウイルスの排除を促進するためのものである、請求項１－１１の何れか１項に記載の使用。

【請求項13】

該対象が、ヒトまたは非ヒトの霊長類である、請求項１－１２の何れか１項に記載の使用。

【請求項14】

該医薬組成物がさらに１以上の追加の治療剤を含む、請求項１－１３の何れか１項に記載の使用

【請求項15】

該追加の治療剤が、ＮＫ細胞活性化受容体のアゴニスト、ＮＫ細胞抑制性受容体のアンタゴニスト、またはＮＫ細胞を活性化するサイトカインまたはケモカインなどの、ＮＫ細胞活性化剤である、請求項１４に記載の使用

【請求項16】

該追加の治療剤が直接作用型抗ウイルス（ＤＡＡ）薬から選択される、請求項１４に記載の使用。

【請求項17】

該ウイルスがＨＣＶであり、該ＤＡＡ薬が、テラプレビル、ボセプレビル、シメプレビル、アスナプレビル、ソフォスブビル、メリシタビン（ＲＧ－７１２８）、ＡＣＨ－３４２２、ＭＫ－３６８２、およびダクラタスビルから選択される、請求項１６に記載の使用。

【請求項18】

該対象がＤＤＡ薬処置に不応答性である、または耐性がある、請求項１－１３の何れか１項に記載の使用。

【請求項19】

該ウイルスがＨＣＶであり、および該ＤＡＡ薬がテラプレビル、ボセプレビル、シメプレビル、アスナプレビル、ソフォスブビル、メリシタビン（ＲＧ－７１２８）、ＡＣＨ－３４２２、ＭＫ－３６８２、およびダクラタスビルから選択される、請求項１８に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

優先権
本出願は、２０１９年３月２２日に出願された、中国出願第２０１９１０２１９９５１．０号の優先権を主張するものであり、ここに本明細書の一部として参照によりその全体を援用する。

【0002】

技術分野
本開示は免疫療法の分野に関する。特に、本開示はＮＫ細胞免疫チェックポイントを標的とすることによる感染症の予防または処置のための方法に関する。本開示はまた、感染症の処置における、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用、およびＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤を含む医薬組成物の使用に関する。

【背景技術】

【0003】

背景技術
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を含むウイルスの感染による感染症は世界中で蔓延している。人々の性別、年齢、および人種が異なれば、これらのウイルスに対する感受性の程度は異なる。例えば、世界保健機関の統計によれば、世界中で約１億８千５百万人の人（総人口の約３％）がＨＣＶに感染しているとされている（Ｍｏｈｄ Ｈａｎａｆｉａｈ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｏｂａｌ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：Ｎｅｗ ｅｓｔｉｍａｔｅｓ ｏｆ ａｇｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ＨＣＶ ｓｅｒｏｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１３．５７（４）：ｐ．１３３３－１３４２）。中国では現在３千万人以上のＨＣＶ感染症患者がいると推定されており、その数は年々増加する傾向にある。

【0004】

ウイルス感染の急性期においてウイルスを迅速に排除し得ない場合、それはしばしば感染の慢性期へと進行する。ＨＣＶ感染症の場合、急性感染症患者の最大８０％がウイルスを排除できず、および慢性感染症へと進行する。さらに、慢性ＨＣＶ感染症の主な症状には、肝硬変、門脈圧亢進症、および肝臓がんが含まれる。ＷＨＯの２０１５年のデータによると、毎年約３５万件の死亡が直接的にＨＣＶに関係しており、および肝硬変の約２７％、および肝臓がんの約２５％はＨＣＶ感染症が原因だとされている。加えて、ＨＣＶ感染症は患者の生活の質（ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ）を著しく低下させる原因となり得る。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

ＨＣＶ処置の標準的なレジメンは、長時間作用型のインターフェロンの注射と、リバビリンの経口投与の併用である。ＨＣＶサブタイプの違いを考慮すると、約５０％の患者が処置を通じてウイルス学的著効（ＳＶＲ）を達成し得る。近年では、直接作用型抗ウイルス薬（ＤＡＡ）が非常に進歩してきており、かつ新しいＤＡＡ薬が徐々に臨床的に使用されてきている。しかし、ＤＡＡ薬には、以下を含む限界がある；（１）薬剤耐性、（２）従来のリバビリン／長時間作用型インターフェロン併用療法のようなＤＡＡ薬では、再感染を効果的に防ぐ事ができず、および中期または後期の慢性感染症に入った患者においては有効性が限定的である事、（３）現在、ＤＡＡ薬は種類が少なく、かつ高価であるため、患者の経済的負担が著しく増加する事。

【0006】

したがって、当分野ではＨＣＶを含むウイルス感染に起因する感染症に対する、特に感染症の慢性期における、効率的かつ経済的な処置方法が依然必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0007】

発明の概要
驚くべきことに、本発明者らは、ＮＫ細胞上に発現される免疫チェックポイント分子を標的とすることで（例えば、対応するアンタゴニストまたは発現阻害剤を用いて）、ウイルス感染による感染症患者において、ＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転させる事が可能である事を見出した。上記の処理はさらにウイルスの迅速な排除を促進し、これによって感染症を予防または処置し得る。

【0008】

したがって１つの態様では、本開示は対象におけるＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害および／または逆転させるための方法であって、ここで該対象がウイルス感染に起因する感染症に罹患している、または罹患のリスクがあり、該方法が該対象に対して有効量の、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤を投与するステップを含む、方法に関する。

【0009】

別の態様では、本開示は対象におけるウイルス感染に起因する感染症の予防または処置の方法であって、該方法が該対象に対してＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対する有効量のアンタゴニストまたは発現阻害剤を投与するステップを含む、方法に関する。

【0010】

上記のウイルスの種類は特に限定されず、および感染症を成立させ得る任意の種類のウイルスを含んでいてよい。いくつかの実施形態では、該ウイルスはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）から選択されてよい。いくつかの実施形態では、該ウイルスはＨＣＶである。

【0011】

ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に起因する一連の疾患である。ＨＩＶにはＨＩＶ－１およびＨＩＶ－２を含み、これらはレトロウイルスである。ＨＩＶは、ヘルパーＴ細胞（特にＣＤ４＋Ｔ細胞）、マクロファージ、および樹状細胞などのヒトの免疫系において不可欠な細胞に感染する。ＨＩＶ感染は様々なメカニズムを通じてＣＤ４＋Ｔ細胞の発現低下を引き起こすが、これには感染Ｔ細胞のアポトーシス、非感染隣接細胞のアポトーシス、ウイルス感染細胞の直接的な傷害、およびＣＤ８＋細胞傷害性リンパ球細胞による感染ＣＤ４＋Ｔ細胞の傷害、などを含む。ＣＤ４＋Ｔ細胞の数が致命的なレベル以下にまで減少すると、細胞介在性の免疫が消失し、および生体は日和見感染を受けやすくなるので、ＡＩＤＳの発症につながる。

【0012】

ほとんどの場合、ＨＩＶは血液、精液および膣液との接触またはその移動を介して起こる性感染症である。これらの体液中において、ＨＩＶは遊離のウイルス粒子および感染した免疫細胞中のウイルスの両方として存在する。加えて、感染した母親と赤ん坊の間での垂直感染も起こり得る。

【0013】

ＨＩＶ感染症の初期段階を、急性ＨＩＶ（ａｃｕｔｅ ＨＩＶまたはｐｒｉｍａｒｙ ＨＩＶ）と呼ぶ。多くの人が感染後２－４週間後にインフルエンザ様の症状または単核球症様の症状を発症するが、明らかな症状がない人もいる。最も一般的な症状には発熱、リンパ節腫脹、喉の炎症、発疹、頭痛、疲労、および／または口内および陰部の潰瘍を含む。一部の患者はこの段階で日和見感染も発症する。症状の持続期間は様々だが、通常は１または２週間である。これらの症状の非特異性のために、これら症状はしばしばＨＩＶの兆候として認識されないことがある。

【0014】

初期症状の後の第２段階は、臨床潜伏期／慢性感染期、無症候性ＨＩＶ、または慢性ＨＩＶ期と呼ばれる。ＨＩＶ感染症の第２段階は約３－２０年間続き得る（平均で約８年）。しかし通常、最初は症状がわずかであるかまたは症状が見られず、この段階が進行するにつれて多くの人が発熱、体重減少、胃腸障害、および筋肉痛を発症し、および５０－７０％の人では、持続的な全身性のリンパ腫脹も生じる。ＨＩＶ－１に感染したほとんどの人が検出可能なウイルス量を有しており、処置しないと最終的にＡＩＤＳを発症する。免疫系の破綻の進行によって、ＡＩＤＳ患者は様々なウイルス感染症およびがんのリスクが増加する。処置しない場合、患者の平均生存期間は９年から１１年である。

【0015】

Ｂ型肝炎は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染に起因し、肝臓に影響を与える疾患である。これは急性および慢性の感染症を引き起こし得る。世界人口の約３分の１がその生涯のどこかの時点でＨＢＶに感染し、およびそのうち約３億４千３百万人は慢性感染症である。７５万人を超える人が毎年Ｂ型肝炎によって亡くなっており、そのうち約３０万人は肝臓がんが原因である。この疾患は他の非ヒトの類人猿にも感染し得る。ＨＢＶ感染は主に感染性の血液または血液を含む体液への暴露を介して起こり、ＨＩＶに比して５０から１００倍の感染力がある。有り得る感染の形態には、性的接触、輸血および他人の血液製剤の注入、汚染した針およびシリンジの再使用、ならびに出産時の母親から子供への垂直感染などを含む。このウイルスは感染後３０日から６０日以内には検出できるようになり、そして持続し、および慢性Ｂ型肝炎へと発展し得る。

【0016】

急性ＨＢＶ感染は、急性ウイルス性肝炎を引き起こし、これは、全身の健康状態の悪化、食欲不振、吐き気、嘔吐、全身の痛み、微熱、および濃い尿に始まり、そして黄疸へと進行する。ほとんどの感染者では、疾患は数週間続き、そして徐々に改善する。わずかな人々がより重度の肝疾患、劇症肝不全、を発症し、結果として死亡する事もあり得る。急性感染症は、完全に無症候性である事、および認識できない事もあり得る。

【0017】

ＨＢＶの慢性感染症は無症候性であるか、または肝臓の慢性炎症（慢性肝炎）と関連し得る場合があり、数年間続く肝硬変を引き起こし得る。この種類の感染症は肝細胞がんの発症率を顕著に増加させる。ヨーロッパ全体では、Ｂ型およびＣ型肝炎は肝細胞がんの約５０％を引き起こす。肝硬変および肝臓がんを含むこれらの合併症によって、慢性ＨＢＶ感染症の患者の１５から２５％が亡くなる。

【0018】

Ｃ型肝炎はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に起因する感染症であり、主に肝臓に影響する。世界保健機関の統計によると、世界中で約１億８千５百万人（総人口の約３％）の人がＨＣＶに感染しているとされる。推計によると、中国では現在３千万人を超えるＨＣＶ感染症患者がいるとされており、その数は年々増加する傾向にある。ＨＣＶは主に血液を介して感染し、およびその感染経路もまた、性行為による感染、母親から子供への感染などを含む。ＨＣＶは一般的にヒトおよびチンパンジーに感染すると考えられている。ＨＣＶ感染症の中でも、急性ＨＣＶ感染症の患者の最大８０％がウイルスを排除できずに慢性感染症へ進行する。さらに、慢性感染症の主な症状には、肝硬変、門脈圧亢進症、および肝臓がんを含む。ＷＨＯの２０１５年のデータによると、毎年約３５万人の死亡がＨＣＶに直接関係しているとされる。加えて、ＨＣＶ感染症は患者の生活の質（ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ）を著しく低下させる原因となり得る。

【0019】

ＨＣＶ感染はその約１５％の場合において急性症状を引き起こす。症状は通常穏やかであり、食欲不振、疲労、吐き気、筋肉痛または関節痛、および体重減少、そして稀な急性肝不全を含む。ウイルスの自然除去は、ＨＣＶ感染症の１５％～２０％の場合のみでしか起こらない。

【0020】

ＨＣＶにさらされた人の約８０％は、慢性感染症へと変わり、これは少なくとも６ヶ月間検出可能なウイルスの複製が存在する事と定義されている。慢性感染症の初めの数年間は、ほとんどの人で症状がわずかであるかまたは症状が見られない。しかし、慢性感染症は数年後に肝硬変または肝臓がんを引き起こし得る。世界中で、肝硬変の約２７％、および肝臓がんの約２５％はＨＣＶ感染症が原因である。ＨＣＶ感染症患者の約１０－３０％が３０年以内に肝硬変を発症する。肝硬変患者は正常な人に比べて肝細胞がんになる可能性が２０倍高い。この転換の発生率は年間１－３％である。加えて、肝硬変は門脈圧亢進症、腹水、あざができやすい、または出血しやすい、静脈瘤、黄疸、および認知障害症候群（肝性脳症）などの症状の原因となり得る。

【0021】

いくつかの実施形態では、上記の方法は、ウイルス（例えばＨＩＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶ）感染に起因する感染症を、この感染症の発症リスクのある対象において予防するためのものである。例えば該対象は、血液感染、性感染、および母子感染を含む、対応するウイルスの感染経路を介して、ウイルス（例えばＨＩＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶ）に感染した人またはキャリアと接触している

【0022】

いくつかの実施形態では、上記の方法は、ウイルス（例えばＨＩＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶ）感染に起因する対象における感染症を処置するためのものである。いくつかの実施形態では、この感染症は急性感染期にある。その他の実施形態では、この感染症は慢性感染期にある。

【0023】

例えば、いくつかの実施形態では、この感染症は慢性感染期にあるＨＣＶ感染症である。

【0024】

種々の感染症について上記に議論したように、ウイルス感染とは通常、病原体と宿主免疫が戦う過程である。感染症は急性感染症および慢性感染症の段階に分けることができる。急性感染症は通常、一時的なものであって、病原体の侵入が免疫系を活性化させ、生体は自然免疫または適応免疫応答を通じて迅速に病原体を排除し、恒常性を回復する。慢性感染症では、病原体は潜伏を保ち、宿主免疫から逃避し得る。慢性感染症は、細胞症の誘発、継続的な炎症の誘発、および免疫寛容の確立によって宿主細胞に影響を与え、免疫力の低下、臓器の病変やがん化、さらには死などの深刻な結果をもたらし得る。この過程では、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの免疫エフェクター細胞の枯渇を伴うことが多い。

【0025】

上記の方法の任意の実施形態では、ＮＫ免疫チェックポイント分子はＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、およびＫＬＲＧ１から選択されてよい。

【0026】

ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）は、ＮＫ細胞および少しのＴ細胞において発現されるＩ型膜貫通型糖タンパク質ファミリーである。ＫＩＲは有核細胞種において発現する腫瘍組織適合性遺伝子（ＭＨＣ）クラスＩ分子（ヒトではＨＬＡ－Ａ）との相互作用を介して、これらの細胞の細胞傷害性機能を調節する。ほとんどのＫＩＲは抑制性であり、つまりそれらがＭＨＣ分子を認識すると、それらが発現しているＮＫ細胞の細胞傷害活性を阻害する事を意味する。ＮＫ細胞上のＫＩＲの初期発現はランダムだが、ＮＫ細胞の成熟に従ってＫＩＲの発現は変化し、免疫防御と自己寛容のバランスをとる。そのＮＫ細胞の活性を阻害する性質のために、ＫＩＲはウイルス感染症、自己免疫疾患、およびがんの発生などに広く関与する。

【0027】

ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）はＩＩ型膜貫通型タンパク質である、Ｃ型レクチン受容体ファミリーである。ＮＫＧ２Ａは主にＮＫ細胞および一部のＣＤ８＋Ｔ細胞の亜集団の表面に発現する。ＮＫＧ２Ａは、非古典的ＭＨＣ糖タンパク質クラスＩ（ヒトではＨＬＡ－Ｅであり、およびマウスではＱａ－１分子）を認識し、そのリガンドと結合した後、ＮＫ細胞の細胞傷害活性を阻害する。

【0028】

ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）は、一部のＮＫ細胞およびＴ細胞に存在する抑制性の免疫受容体である。ＴＩＧＩＴは樹状細胞（ＤＣ）上、マクロファージおよびその他の細胞上のＣＤ１５５（ＰＶＲ）と高親和性で結合し得る、かつＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）とも低親和性で結合し得る。ＴＩＧＩＴはリンパ球の活性を阻害する一方、ＤＮＡＭ－１受容体は活性化する受容体である。ＴＩＧＩＴはＣＤ１５５リガンドへの結合についてＤＮＡＭ－１と競合することでＤＮＡＭ－１を介したＮＫ細胞の活性化を阻害する。ＴＩＧＩＴを遮断することで、ＮＫ細胞の一部の機能は回復し得る。

【0029】

ＫＬＲＧ１（キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＧメンバーＩ）はリンパ球共抑制の、または免疫チェックポイントの受容体であって、および分化後期のエフェクター、エフェクターおよびメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞ならびにＮＫ細胞で主に発現する。ＫＬＲＧ１のリガンドは、同程度の親和性でもってＥ－カドヘリンおよびＮ－カドヘリンであり、これらはそれぞれ上皮細胞および間葉系細胞のマーカーである。

【0030】

「免疫チェックポイント分子」、とは当業者に理解されるように、典型的にはリガンド－受容体のペアとして存在し、機能する。ここでは、免疫チェックポイントタンパク質受容体およびそのリガンドをまとめて免疫チェックポイント分子と呼ぶ。例えば、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子については、リガンド－受容体ペアの受容体が、通常ＮＫ細胞で発現し、一方対応するリガンドは他の種類の細胞で発現する。ＮＫ細胞の活性化および免疫エフェクター機能は、受容体－リガンド相互作用によって阻害される。したがって、「免疫チェックポイント分子」と呼ぶ場合、リガンドと受容体の両方が包含される。例えば、ＮＫＧ２Ａに言及する場合、ＮＫＧ２ＡとそのリガンドであるＨＬＡ－Ｅ（ヒト）およびＱａ－１（マウス）が包含される。

【0031】

いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、受容体および対応するリガンドを含む免疫チェックポイント分子に対する抗体または抗原結合フラグメントである。

【0032】

本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの抗原認識部位を含み、および抗原に特的に結合し得る免疫グロブリン分子を指す。本明細書で言及する場合の「抗体」という用語は、その最も広い意味で理解され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、少なくとも２つの異なる抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含む。抗体にはまた、マウス由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体および他に由来する抗体を含む。本開示の抗体は、任意の動物に由来していてよく、これには、ヒト、非ヒトの霊長類、マウス、またはラットなどの免疫グロブリン分子を含むが、これらに限定されない。抗体は、非天然アミノ酸残基、Ｆｃエフェクター機能の変異、およびグリコシル化部位の変異などのさらなる修飾を含んでいてもよい。また、抗体は、その抗体が所望の生物学的活性を示す限りにおいて、翻訳語修飾された抗体、複数の抗体の抗原決定基を含む融合タンパク質、および抗原認識部位のその他の任意の修飾を含む免疫グロブリン分子を含む。

【0033】

「抗原結合フラグメント」という用語には、ＶＬ、ＣＬ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦａｂフラグメント；ＣＨ１ドメインのＣ末端に１以上のシステイン残基を有するＦａｂフラグメントであるＦａｂ’フラグメント；ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント；ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し、およびＣＨ１ドメインのＣ末端に１以上のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント；抗体の片腕のＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖフラグメント；ＶＨドメインまたはＶＬドメインからなるｄＡｂフラグメント；単離されたＣＤＲ領域；ヒンジ領域においてジスルフィド架橋で連結されていた２つのＦａｂ’フラグメントの二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）_２フラグメント：一本鎖抗体分子（例えば、一本鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）；同じポリペプチド鎖内で、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を持つ「ダイアボディ」；相補的な軽鎖ポリペプチドと一緒になって１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む「直鎖状抗体」；および抗原結合活性を保持している、任意の前述の物質の改変体などを含むが、これらに限定されない。

【0034】

上記の方法のいくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＮＫＧ２Ａであり、およびアンタゴニストは、ＮＫＧ２ＡまたはそのリガンドＨＬＡ－Ｅに指向性を持つ抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＫＩＲであり、およびアンタゴニストはＫＩＲまたはそのリガンドＨＬＡ－Ａに指向性をもつ抗体または抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＴＩＧＩＴであり、およびアンタゴニストはＴＩＧＩＴまたはそのリガンドＣＤ１５５（ＰＶＲ）／ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）に指向性をもつ抗体または抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＫＬＲＧ１であり、およびアンタゴニストはＫＬＲＧ１またはそのリガンドＥ－カドヘリン／Ｎ－カドヘリンに指向性をもつ抗体または抗原結合フラグメントである。

【0035】

その他の実施形態では、アンタゴニストは免疫チェックポイント分子の対応するリガンド／受容体またはそのフラグメントの可溶性形態である。例えば、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＮＫＧ２Ａであるとき、このアンタゴニストはＮＫＧ２Ａ／ＨＬＡ－Ｅまたはそのフラグメントの可溶性形態であってもよい。ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＫＩＲであるとき、このアンタゴニストはＫＩＲ／ＨＬＡ－Ａまたはそのフラグメントの可溶性形態であってもよい。ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＴＩＧＩＴであるとき、このアンタゴニストはＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５（ＰＶＲ）／ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）またはそのフラグメントに対する可溶性形態であってもよい。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＫＬＲＧ１であり、そのアンタゴニストはＫＬＲＧ１／Ｅ－カドヘリン／Ｎ－カドヘリンまたはそのフラグメントの可溶性形態である。このアンタゴニストはまた、受容体／リガンドまたはそのフラグメントを含む融合タンパク質の可溶性形態であってもよい。

【0036】

上記の方法のいくつかの実施形態では、発現阻害剤は対応する免疫チェックポイント分子（受容体およびその対応リガンドを含む）の発現を阻害するｍｉｃｒｏＲＮＡまたはｓｉＲＮＡであり、これにはｍｉｃｒｏＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの様々な改変体を含む。

【0037】

いくつかの実施形態では、本開示のＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤は、ウイルスの排除を促進し得る。

【0038】

本開示の方法の任意の実施形態では、対象には、非ヒトの霊長類およびヒトを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0039】

いくつかの実施形態では、該方法は、１以上の追加の治療剤を対象に投与するステップをさらに含む。

【0040】

いくつかの実施形態では、例えば、この追加の治療剤は、ＮＫ細胞活性化受容体のアゴニスト、ＮＫ細胞抑制性受容体のアンタゴニスト、またはＮＫ細胞を活性化するサイトカインまたはケモカインなどの、ＮＫ細胞活性化剤から選択される。いくつかの実施形態では、この追加の治療剤は、Ｔ細胞活性化受容体のアゴニスト、Ｔ細胞抑制性受容体のアンタゴニスト、またはＴ細胞を活性化するサイトカインまたはケモカインなどの、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）活性化剤から選択される。その他の実施形態では、この治療剤は直接作用型抗ウイルス（ＤＡＡ）薬から選択される。

【0041】

当分野では多くのＤＡＡ薬が開発されてきた。ＨＢＶ感染症の場合、例えば現在一般的に使用されているＤＡＡ薬にはインターフェロンや、ならびにラミブジン、アデホビルジピボキシル、テルビブジン、エンテカビル、テノホビルジソプロキシル、およびクレブジンなどのヌクレオシドアナログが含まれる。ＨＣＶ感染症の場合、現在のＤＡＡ薬には、テラプレビル、ボセプレビル、シメプレビル、およびアスナプレビルなどのＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼ阻害剤、ソフォスブビル、メリシタビン（ＲＧ－７１２８）、ＡＣＨ－３４２２、およびＭＫ－３６８２などのＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤、ダクラタスビルを含むＮＳ５Ａ複製複合体タンパク質阻害剤が含まれる。

【0042】

ＨＩＶ感染症の場合、現在一般的に使用されている治療は、カクテル療法としても知られている、ＤＡＡ薬を用いた抗レトロウイルス治療薬との効果の高い併用療法である。例えば、２種類のヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）と１種類の非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）の組み合わせや、２種類のＮＲＴＩと１種類の強化型ＰＩ（リトナビルを含む）の組み合わせなどが用いられている。

【0043】

したがって、いくつかの実施形態では、ウイルスはＨＢＶであり、および本方法には対象にＮＫ細胞免疫チェックポイントに対するアンタゴニストまたは発現阻害剤、およびＤＡＡ薬を併用して投与するステップを含み、ここでＤＡＡ薬はインターフェロン、およびラミブジン、アデホビルジピボキシル、テルビブジン、エンテカビル、テノホビルジソプロキシル、クレブジンなどといったヌクレオシドアナログから選択される。

【0044】

いくつかの実施形態では、ウイルスはＨＣＶであり、および本方法には対象にＮＫ細胞免疫チェックポイントに対するアンタゴニストまたは発現阻害剤、およびＤＡＡ薬を併用して投与するステップを含み、ここでＤＡＡ薬はテラプレビル、ボセプレビル、シメプレビル、アスナプレビル、ソフォスブビル、メリシタビン（ＲＧ－７１２８）、ＡＣＨ－３４２２、ＭＫ－３６８２ およびダクラタスビルから選択される。

【0045】

いくつかの実施形態では、本開示のアンタゴニストまたは発現阻害剤は、ＤＡＡ薬処置に不応答性である、または耐性がある対象において、ＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転させる、またはウイルス感染に起因する感染症を予防または処置することにおいて使用するためのものであって、ここで、ＤＡＡ薬は、例えば上記のものである。

【0046】

１つの態様では、本開示は、対象におけるＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転させるためのＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用に関し、ここで、該対象はウイルス感染に起因する感染症を罹患している、または罹患するリスクがある。

【0047】

別の態様では、本開示は対象におけるＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転させるための医薬組成物の製造における、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用に関し、ここで、該対象はウイルス感染に起因する感染症を罹患している、または罹患するリスクがある。

【0048】

１つの態様では、本開示は、対象におけるウイルス感染に起因する感染症の予防または処置のための、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用に関する。

【0049】

別の態様では、本開示は対象におけるウイルス感染に起因する感染症の予防または処置のための医薬組成物の製造における、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤の使用に関する。

【0050】

１つの態様では、本開示はＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストまたは発現阻害剤、および任意には１以上の医薬的に許容できるキャリア、賦形剤、および／または希釈剤を含む医薬組成物に関し、ここで、該医薬組成物は対象におけるＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転させるために使用され、およびここで、該対象はウイルス感染に起因する感染症を罹患している、または罹患するリスクがある。

【0051】

別の態様では、本開示はＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニスト、および任意には１以上の医薬的に許容できるキャリア、賦形剤、および／または希釈剤を含む医薬組成物に関し、ここで、該医薬品組成物は対象におけるウイルス感染に起因する感染症の予防または処置のために使用される。

【0052】

「医薬的に許容できる」という用語は、それらの成分、物質、組成物、および／または剤形が、合理的な医学的判断の範囲内でヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適しており、過度な毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題、または合併症を生じさせず、および合理的な利益／リスク比を持つものである事を意味する。本明細書で用いられる場合、「医薬的に許容できるキャリア、賦形剤および／または希釈剤」という用語は、本開示のアンタゴニストの安定性、可溶性、または活性を維持する、液体または個体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、培地、カプセル化材料、製造補助剤、または溶剤カプセル化材料などの、医薬的に許容できる物質、組成物またはビヒクルを指す。

【0053】

本開示の医薬組成物は、さまざまな経路を通じて投与され得る、および異なる投与経路に従って製剤化される。好ましくは、医薬品組成物は皮下注射、静脈注射（ボーラス注射を含む）、筋肉内注射および動脈内注射などを含むが、これらに限定されない非経口経路で投与される。非経口投与剤での投与は通常、汚染物質に対する患者の自然防御を迂回するため、非経口投与剤は、好ましくは無菌であるか、または患者への投与前に滅菌し得る。非経口投与剤の例としては、注射可能な溶液、医薬的に許容できる注射ビヒクルに溶解または懸濁可能な乾燥製品、注射可能な懸濁液、徐放性の非経口投与剤、およびエマルジョンを含むが、これらに限定されない。

【0054】

上記の使用および医薬組成物のいくつかの実施形態では、ウイルスはＨＩＶ、ＨＢＶ、およびＨＣＶから選択され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ウイルスはＨＣＶである。

【0055】

いくつかの実施形態では、アンタゴニストもしくは発現阻害剤、または医薬組成物は、ウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶ）感染者またはキャリアと接触があったなどの、ウイルス感染症に罹患するリスクがある対象における、ウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶ）感染に起因する感染症の予防において使用するためのものである。

【0056】

いくつかの実施形態では、アンタゴニストもしくは発現阻害剤、または医薬組成物は、対象におけるウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶ）感染に起因する感染症の処置において使用するためのものである。いくつかの実施形態では、この感染症は急性感染期にある。その他の実施形態では、この感染症は慢性感染期にある。例えば、いくつかの実施形態では、この感染症は慢性感染期のＨＣＶ感染症である。

【0057】

上記の使用のいくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ、およびＫＬＲＧ１から選択され得る。

【0058】

いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、対応するリガントを含む免疫チェックポイント分子に対する抗体または抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＮＫＧ２Ａであり、およびアンタゴニストはＮＫＧ２Ａまたはそのリガンド、ＨＬＡ－Ｅに指向性を持つ抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＫＩＲであり、およびアンタゴニストはＫＩＲまたはそのリガンド、ＨＬＡ－Ａに指向性をもつ抗体または抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＴＩＧＩＴであり、およびアンタゴニストはＴＩＧＩＴまたはそのリガンド、ＣＤ１５５（ＰＶＲ）／ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）に指向性をもつ抗体または抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＫＬＲＧ１であり、およびアンタゴニストはＫＬＲＧ１またはそのリガンド、Ｅ－カドヘリン／Ｎ－カドヘリンに指向性をもつ抗体または抗原結合フラグメントである。

【0059】

その他の実施形態では、アンタゴニストは免疫チェックポイント分子の対応するリガンド／受容体またはそのフラグメントの可溶性形態である。例えば、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＮＫＧ２Ａであるとき、そのアンタゴニストはＮＫＧ２Ａ／ＨＬＡ－Ｅまたはそのフラグメントの可溶性形態であってもよい。ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＫＩＲであるとき、そのアンタゴニストはＫＩＲ／ＨＬＡ－Ａまたはそのフラグメントの可溶性形態であってもよい。ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子がＴＩＧＩＴであるとき、そのアンタゴニストはＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５（ＰＶＲ）／ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）またはそのフラグメントの可溶性形態であってもよい。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子はＫＬＲＧ１であり、およびそのアンタゴニストはＫＬＲＧ１／Ｅ－カドヘリン／Ｎ－カドヘリンの可溶性形態である。このアンタゴニストはまた、受容体／リガンドまたはそのフラグメントを含む融合タンパク質の可溶性形態であってもよい。

【0060】

上記の使用のいくつかの実施形態では、発現阻害剤は対応する免疫チェックポイント分子（受容体およびその対応リガンドを含む）の発現を阻害するｍｉｃｒｏＲＮＡまたはｓｉＲＮＡであり、これにはｍｉｃｒｏＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの様々な改変体を含む

【0061】

いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子に対するアンタゴニストもしくは発現阻害剤、または医薬組成物は、ウイルスの排除を促進するためのものである。

【0062】

上記の使用の任意の実施形態では、対象には、非ヒトの霊長類およびヒトを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0063】

いくつかの実施形態では、アンタゴニストまたは発現阻害剤は、１以上の追加の治療剤と併用して使用するためのものであり、または医薬組成物は１以上の追加の治療剤をさらに含む。

【0064】

いくつかの実施形態では、この追加の治療剤は、ＮＫ細胞活性化受容体のアゴニスト、ＮＫ細胞抑制性受容体のアンタゴニスト、またはＮＫ細胞を活性化するサイトカインまたはケモカインなどの、ＮＫ細胞活性化剤から選択される。いくつかの実施形態では、この追加の治療剤は、Ｔ細胞活性化受容体のアゴニスト、Ｔ細胞抑制性受容体のアンタゴニスト、またはＴ細胞を活性化するサイトカインまたはケモカインなどの、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）活性化剤から選択される。その他の実施形態では、この治療剤はＤＡＡ薬から選択される。このＤＡＡ薬は、例えば、本開示の方法に関して上記に記載したものから選択され得る。

【0065】

いくつかの実施形態では、本開示のアンタゴニストもしくは発現阻害剤、または医薬組成物は、ＤＡＡ薬処置に不応答性である、または耐性がある対象において、ＮＫ細胞の枯渇を阻止、阻害、および／または逆転させる、またはウイルス感染に起因する感染症を予防または処置することにおいて使用するためのものである。このＤＡＡ薬は上記のものである

【図面の簡単な説明】

【0066】

図面の説明

【図1】図１は、ＨＣＶ感染モデルの確立と確認を示す。図１Ａは、ｑＰＣＲによる、尾静脈へのＨＣＶ注入後、異なる時点でのＣ／Ｏ－Ｔｇマウスおよび野生型同腹仔コントロールマウスの肝臓組織におけるＨＣＶゲノムのコピー数の結果を示し（各時点でｎ≧６）、検出の最下限は１００コピー／ｍｇである。図１Ｂは、Ｌｕｍｉｎｅｘによる、感染後の異なる時点でのマウス血清中のＩＬ－２、ＩＬ１２ｐ４０、およびＩＦＮ－γの発現量の結果を示す。

【0067】

【図2】図２は、ＨＣＶ感染時の、Ｔ細胞免疫チェックポイント分子の発現プロファイルおよびこれらの分子を標的とした結果を示す。図２Ａおよび２Ｂは、感染後の異なる時点における、肝臓および末梢血のＣＤ８＋Ｔ細胞表面のＰＤ－１およびＴｉｍ－３の発現量の結果を示す。図２Ｃは、ｑＰＣＲによる、ＰＤ－１抗体またはコントロール抗体でマウスを処置した後の末梢血および肝臓組織におけるＨＣＶのコピー数の結果を示す。図２Ｄは、ｑＰＣＲによる、Ｔｉｍ－３抗体と併用したＰＤ－１抗体、またはコントロール抗体でマウスを処置した後の末梢血および肝臓組織におけるＨＣＶのコピー数の結果を示す。

【0068】

【図3】図３は、ＨＣＶ感染時の、免疫寛容およびＮＫ細胞の枯渇の結果を示す。図３Ａは、感染後の異なる時点における、肝臓ＮＫ細胞を標的細胞Ｙａｃ１と共培養した後での、フローサイトメトリーによるＮＫ細胞のＩＦＮ－γおよびＣＤ１０７ａの発現のプロファイルの結果を示す。図３Ｂは、ＮＫ細胞活性化受容体Ｌｙ４９Ｄ、Ｌｙ４９Ｈ、およびＮＫＧ２Ｄの発現の結果を示す。図３Ｃは、ＮＫ細胞免疫チェックポイント分子、ＮＫＧ２Ａ、ＫＬＲＧ１、およびＴＩＧＩＴの発現プロファイルの結果を示す。

【0069】

【図4】図４は感染結果が異なるマウスにおけるＮＫＧ２Ａの発現量の結果を示す。図４Ａは、ＨＣＶ感染から１月後の血清中のウイルスコピー数の変化から、Ｃ／Ｏ－Ｔｇマウスを自己限定性感染および慢性感染に分類し得ることを示す。図４Ｂは感染から１月後の、マウスの血清中のウイルスのコピー数とＮＫ細胞におけるＮＫＧ２Ａの発現プロファイルの相関を示す。

【0070】

【図5】図５は、ＮＫＧ２Ａ抗体による、ＨＣＶの慢性感染の確立の阻害の結果を示す。図５Ａは、抗体を用いたマウスの処置の概要をフローチャートで示し、抗体はＨＣＶ注入の１日前から投与を開始した。図５Ｂは、ＮＫＧ２Ａ抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから１週間および２週間後の、血清および肝臓組織中のウイルスのコピー数の結果を示す。図５Ｃは、ＮＫＧ２Ａ抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから１週間および２週間後の、肝臓ＮＫ細胞を標的細胞Ｙａｃ－１と共培養した後での、フローサイトメトリーによる、ＮＫ細胞のＣＤ１０７ａ、グランザイムＢ、およびＩＦＮ－γの発現プロファイルの結果を示す。

【0071】

【図6】図６は、確立した慢性感染における、ＮＫＧ２Ａ抗体によるＨＣＶ排除の促進の結果を示す。図６Ａは、抗体を用いたマウスの処置の概要をフローチャートで示し、抗体はＨＣＶ注入の２週間後から投与を開始した。図６Ｂは、ＮＫＧ２Ａ抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから４週間後の、血清および肝臓組織中のウイルスのコピー数の結果を示す。図６Ｃは、ＮＫＧ２Ａ抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから４週間後の、肝臓ＮＫ細胞を標的細胞Ｙａｃ－１と共培養した後での、フローサイトメトリーによる、ＮＫ細胞のＣＤ１０７ａおよびグランザイムＢの発現プロファイルの結果を示す。図６Ｄは、ＥＬＩＳＰＯＴによる、ＮＫＧ２Ａ抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから４週間後のＨＣＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能の結果を示す。

【0072】

【図7】図７は、Ｑａ－１抗体による、ＨＣＶの慢性感染の確立の阻害の結果を示す。図７Ａは、ｑＰＣＲによる、ＨＣＶ感染の異なる時点における、肝臓組織中のＱａ－１のｍＲＮＡ量の結果を示す。図７Ｂは、Ｑａ－１抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから２週間後の、血清および肝臓組織中のウイルスのコピー数の結果を示す。図７Ｃは、Ｑａ－１抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから２週間後の、肝臓ＮＫ細胞を標的細胞Ｙａｃ－１と共培養した後での、フローサイトメトリーによる、ＮＫ細胞のＣＤ１０７ａおよびＩＦＮ－γの発現プロファイルの結果を示す。図７Ｄは、ＥＬＩＳＰＯＴによる、Ｑａ－１抗体またはコントロール抗体での処置を開始してから２週間後のＨＣＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能の結果を示す。

【0073】

【図8】図８は、Ｑａ－１発現をｓｉＲＮＡ干渉することによる、ＨＣＶの慢性感染の確立の阻害の結果を示す。図８Ａは、Ｑａ－１ ｓｉＲＮＡまたはコントロールｓｉＲＮＡを用いたマウスの処置の概要をフローチャートで示し、ｓｉＲＮＡはＨＣＶ注入の１日前に投与を開始した。図８Ｂは、Ｑａ－１ ｓｉＲＮＡまたはコントロールｓｉＲＮＡでの処置を開始してから２週間後の、肝臓細胞における異なる細胞成分のＱａ－１ ｍＲＮＡの発現量の結果を示す。図８Ｃは、Ｑａ－１ ｓｉＲＮＡまたはコントロールｓｉＲＮＡでの処置を開始してから２週間後の、血清および肝臓組織中のウイルスのコピー数の結果を示す。図８Ｄは、Ｑａ－１ ｓｉＲＮＡまたはコントロールｓｉＲＮＡでの処置を開始してから２週間後の、肝臓ＮＫ細胞を標的細胞Ｙａｃ－１と共培養した後での、フローサイトメトリーによる、ＮＫ細胞のＣＤ１０７ａおよびＩＦＮ－γの発現プロファイルの結果を示す。

【0074】

【図9】図９は、ＮＫ細胞を介した、ＮＫＧ２Ａ抗体の機能の結果を示す。図９Ａは、ＮＫ細胞の枯渇の結果を示す。図９Ｂは、ＥＬＩＳＰＯＴによる、ＮＫ細胞の存在下または枯渇下で、ＮＫＧ２Ａ抗体による処置を開始してから２週間後の、ＨＣＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能の結果示す。図９Ｃは、ＮＫ細胞枯渇またはＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇の場合における、ＮＫＧ２Ａ抗体での処置を開始してから２週間後の、血清および肝臓組織中のウイルスのコピー数の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【実施例】

【0075】

実施例
本発明は、具体的な実施例を参照して以下でさらに説明される。本発明の利点および特徴は、この説明によってより明確になるだろう。しかしながら、これらの実施例は単なる例示であり、本発明の範囲を何ら制限するものではない。当業者は、本発明の技術的な解決策の詳細および形態は、本発明の精神および範囲から逸脱する事なく改変または置換され得るが、しかしこれらの改変および置換も本発明の保護範囲に入ることを理解するべきである。

【0076】

実施例１。ＨＣＶマウスモデルの確立および確認
ＨＣＶ感染時、急性ＨＣＶ感染症はＴ細胞反応の開始の著しい遅れによって特徴づけられる。先行研究では、ヒトＣＤ８１およびＯＣＬＮ肝臓特異的２重トランスジェニックマウス（Ｃ／Ｏ－Ｔｇマウス）がＩＣＲマウスの系統において構築されており、これは慢性ＨＣＶ感染を補助し、かつ慢性Ｃ型肝炎における免疫寛容、脂肪症、肝繊維症、および肝硬変などの疾患の進行を模倣し得る（Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｚｈａｏ Ｙ，Ｚｈａｎｇ Ｃ，Ｃｈｅｎ Ｈ，Ｆｅｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．２０１４．Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ－ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｍｉｃｅ．Ｃｅｌｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ２４：１０５０）。

【0077】

このＨＣＶ感染症のマウスモデルについて、最初に再現および確認を行った。Ｃ／Ｏ－Ｔｇマウスおよび野生型の同腹仔コントロールマウスにおいて、ＨＣＶ（Ｊ３９９ＥＭ、１ｍＬ、ＴＣＩＤ_５０＝２ｘ１０^７）を用いて、尾静脈に注入した。ＨＣＶ注入後の異なる時点でのマウス肝臓におけるＨＣＶゲノムのコピー数の検出によって、Ｃ／Ｏ－ＴｇマウスのＨＣＶ感染、および急性感染期から慢性完成期へと転換する過程が見られたが、一方野生型のコントロールマウスにおいてＨＣＶゲノムは検出されなかった（図１Ａ）。血清サイトカインのＬｕｍｉｎｅｘ測定によって、感染の経過に沿って典型的な遅延したＴｈ１（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２およびＩＬ－１２ｐ４０）、およびＴｈ２応答の欠如が示された（図１Ｂ）。上記の結果は、ＨＣＶに感染した患者における観察と一致する（Ｆａｈｅｙ Ｓ，Ｄｅｍｐｓｅｙ Ｅ，Ｌｏｎｇ Ａ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１，２５ （２０１４））。

【0078】

実施例２。Ｔ細胞免疫チェックポイントの遮断はＨＣＶによる慢性感染に影響しない。
一般的にＣＤ８＋Ｔ細胞がウイルス感染およびその除去において重要な役割を担うと考えられるため、ＨＣＶ感染時のＣＤ８＋Ｔ免疫チェックポイント分子の発現プロファイルを第１に試験した。マウスをＨＣＶに感染させた後、慢性感染の確立に伴い、Ｔ細胞免疫チェックポイント分子ＰＤ－１（図２Ａ）およびＴｉｍ－３（図２Ｂ）の発現が増加することが示された。これに基づいて、Ｔ細胞免疫チェックポイント分子を標的にすることで慢性感染の過程を阻害し得るかどうか試験した。しかし、図２Ｃおよび２Ｄの結果に示すように、単独のＰＤ－１遮断抗体（ハイブリドーマから作成した、クローン番号Ｇ４）、またはＰＤ－１およびＴｉｍ－３遮断抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌから購入した、クローン番号ＢＥ０１１５）の併用は、効果的にウイルスの排除を促進しなかった。上記の結果は、Ｔ細胞免疫チェックポイント分子を標的としても、効果的に慢性感染の過程を阻害し得ず、およびＨＣＶの排除を促進し得ない事を示す。

【0079】

実施例３。ＮＫ細胞の枯渇がＨＣＶの持続的な感染につながる
続いて、ＨＣＶ感染がＮＫ細胞機能に与える影響を試験した。ｉｎ ｖｉｔｒｏのＮＫ機能アッセイによって、ＨＣＶ感染時の肝臓ＮＫ細胞の枯渇を試験した。その結果、ＨＣＶに感染したＣ／Ｏ－Ｔｇマウスの肝臓ＮＫ細胞は標的細胞Ｙａｃ－１によって刺激され、そしてＩＦＮ－γ分泌能およびＣＤ１０７ａ脱顆粒量がＨＣＶ注入後４日以内に上昇し、その後急速に非感染肝臓ＮＫ細胞と同程度の基準値まで減少する事を示した（図３Ａ）。さらなる研究から、ＨＣＶ注入後４日以内に、ＮＫ活性化受容体Ｌｙ４９Ｄ、ＬＹ４９ＨおよびＮＫＧ２Ｄの発現が増加することが示された（図３Ｂ）。これらの結果は、ＨＣＶ感染に応じた一過性の肝臓への浸潤とＮＫ細胞の活性化を示す。しかし、これらの活性化受容体は、ＨＣＶ注入の４日後には肝臓のＮＫ細胞で減少したが、免疫チェックポイント分子ＫＬＲＧ１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴの発現は増加し、ＨＣＶ注入の２ヶ月後にも維持されていた（図３Ｃ）。

【0080】

加えて、ＨＣＶ感染Ｃ／Ｏマウスのごく一部では、ＨＣＶの自然排除が観察され、自己限定性感染を形成していた（図４Ａ）。したがって、異なるＨＣＶ感染結果（すなわち、自己限定性感染または慢性感染）をもつＣ／Ｏ－Ｔｇマウス集団における、ＮＫ細胞の枯渇および免疫チェックポイント分子の発現プロファイルをさらに調査した。ＨＣＶを自然排除し得るマウスのＮＫ細胞は、非常に低いＮＫＧ２Ａ発現を示し、一方で持続的なＨＣＶ感染に発展したマウスのＮＫ細胞はより高いＮＫＧ２Ａの発現を示した（図４Ｂ）。上記の結果は、ＨＣＶ感染の急性感染期から慢性感染期への転換の間で、ＮＫＧ２Ａを含む免疫チェックポイント分子の発現上昇がＮＫ細胞の機能に影響し、およびＮＫ細胞の枯渇に寄与することで、急性感染期から慢性感染期へのＨＣＶ感染の進行が促進され、持続性の感染症をもたらすことを示唆する。

【0081】

実施例４。ＮＫＧ２Ａの遮断または阻害がＨＣＶの排除を促進する。
ＨＣＶの持続性感染まで進行したマウスにおいて、ＮＫＧ２Ａの発現が上昇していたため、本開示では、ＨＣＶ感染の予防または処置のための、ＮＫＧ２Ａを遮断するアンタゴニストの使用についてさらに試験した。第１に、ＨＣＶ（Ｊ３９９ＥＭ，１ｍＬ，ＴＣＩＤ５０＝２ｘ１０^７）をマウス（１群当たりのｎ数＝９匹）に注射するのと同時に、Ｃ／Ｏ－ＴｇマウスにＮＫＧ２Ａ遮断抗体（クローン番号２０Ｄ５、Ｔｈｅｒｍｏより購入）またはコントロール抗体（一回あたり５０μｇ、腹腔内注射）を処置し、さらにＨＣＶ注入後１週間または２週間の間、３日ごとに抗体を投与した（図５Ａ）。この結果は、１週間および２週間後の時点で、ＮＫＧ２Ａ遮断抗体を処置した群のマウスの血清および肝臓におけるウイルス量が、アイソタイプコントロールを処置した群に比して有意に減少する事を示した（図５Ｂ）。抗ＮＫＧ２Ａ抗体処置後のＨＣＶコピー数の減少は、ＮＫ細胞の傷害活性の上昇およびＮＫ細胞のＩＦＮ－γ分泌能の増強と関連していた（図５Ｃ）。

【0082】

慢性ＨＣＶ感染症に対するＮＫＧ２Ａ遮断の治療効果をさらに調べるために、マウスにＮＫＧ２Ａ遮断抗体をＨＣＶ感染から２週間後に投与した。２週間後の段階ではＮＫＧ２Ａ発現の上昇が観察され（図３Ｃ）、投与を２週間続けた（図６Ａ）。その結果、ＮＫＧ２Ａの遮断で肝臓および血清におけるウイルス量が減少し（図６Ｂ）、および、これは肝臓のＮＫ細胞活性の上昇（図６Ｃ）およびＴ細胞をＨＣＶペプチドＮＳ３、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ｂ、コアおよびＥ２で刺激した後のＩＦＮ－γ分泌量で示される、ＨＣＶ特異的Ｔ細胞応答（図６Ｄ）と関連していた。上記の結果は、ＮＫＧ２Ａを標的とすることで、ＮＫ細胞およびＨＣＶ特異的Ｔ細胞の不応答性を打ち破り、かつウイルスの排除に寄与し得ることを示す。

【0083】

ヒトではＨＬＡ－Ｅ、またはマウスではＱａ－１がＮＫＧ２Ａと相互作用してＮＫ機能を制限するリガンドであるため、ＨＣＶ感染時のＮＫＧ２Ａのリガンドの発現プロファイルをさらに試験した。マウスにＨＣＶを感染させた後の異なる時点での肝臓組織におけるＱａ－１の転写量の検出から、Ｑａ－１は免疫細胞よりも肝実質性細胞において主に発現すること、およびＨＣＶ感染後Ｑａ－１の発現量が有意に上昇する事が見出された（図７Ａ）。したがって、さらにＱａ－１抗体を用いたアンタゴニズムが、ＮＫ細胞の枯渇を阻害または逆転し得るかを試験した。その結果、コントロール群と比較して、Ｑａ－１遮断抗体（クローン番号６Ａ８．６Ｆ１０．１Ａ６、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎから購入）を投与によって、ＨＣＶを感染させたＣ／Ｏ－Ｔｇマウスにおいて、ＨＣＶの複製が阻害され（図７Ｂ）、それに伴って、ＮＫ細胞機能が回復し（図７Ｃ）、およびＣＤ８＋Ｔ細胞機能が回復した（図７Ｄ）。

【0084】

一方で、免疫チェックポイント分子の発現抑制がＨＣＶの排除を促進し得るかを調べた。これについて、ＨＣＶに感染させたＣ／Ｏ－Ｔｇマウスに、コレステロールとコンジュゲートしたＱａ－１（配列：ＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＵＡ、ＧｅｎｅＰｈａｒｍａが合成）に対するｓｉＲＮＡを、尾静脈注射で投与し（図８Ａ）、肝細胞におけるＱａ－１を選択的に発現抑制した（図８Ｂ）。その結果は、肝細胞におけるＱａ－１発現の抑制は、ＨＣＶの複製を阻害し（図８Ｃ）、およびＮＫ細胞の枯渇過程を逆転させることを示した（図８Ｄ）。まとめると、これらの結果は、免疫チェックポイント分子Ｑａ－１／ＮＫＧ２Ａの相互作用が、ＮＫ細胞機能を損ない、およびその枯渇をもたらし、持続性ＨＣＶ感染の確立が促進されること、および上記のように免疫チェックポイント分子を標的とすることで、この過程を逆転させ、ウイルスの排除を促進し得る事を示す。

【0085】

実施例５。Ｔ細胞に代えてＮＫ細胞上のＮＫＧ２Ａを標的とすることでＨＣＶの排除が促進される。
ＮＫＧ２ＡはＴ細胞の一部にも発現しているため、持続性ＨＣＶ感染の確立には、ＮＫ細胞またはＴ細胞でのＮＫＧ２Ａの発現が不可欠であるかどうかをさらに調べた。この過程におけるＮＫ細胞の役割を検証するために、抗ＮＫＧ２Ａの処置の前にＨＣＶに感染したＣ／Ｏ－ＴｇマウスのＮＫ細胞を欠失させた（図９Ａ）。その結果、ＮＫ細胞が存在しない場合、抗体によるＮＫＧ２Ａの遮断はＨＣＶ特異的なＴ細胞の活性を回復に失敗し（図９Ｂ）、マウスにおけるＨＣＶウイルスの量が有意に増加する事が示された（図９Ｃ）。ＮＫ細胞が存在する場合、ＮＫＧ２Ａ抗体はＨＣＶ特異的なＴ細胞活性を回復し、およびＨＣＶの排除を促進し得る。したがって、抗ＮＫＧ２ＡによるＨＣＶ特異的なＴ細胞の細胞傷害能の回復は、ＮＫ細胞に依存している。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】