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特表2022-528158コンジュゲート化莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物、それを含むキットおよびその使用

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-08

(54)【発明の名称】コンジュゲート化莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物、それを含むキットおよびその使用

(51)【国際特許分類】

A61K 39/09 20060101AFI20220601BHJP

A61K 39/12 20060101ALI20220601BHJP

A61K 39/145 20060101ALI20220601BHJP

A61K 39/29 20060101ALI20220601BHJP

A61K 39/02 20060101ALI20220601BHJP

A61P 37/04 20060101ALI20220601BHJP

A61P 31/12 20060101ALI20220601BHJP

A61P 31/04 20060101ALI20220601BHJP

【ＦＩ】

A61K39/09

A61K39/12

A61K39/145

A61K39/29

A61K39/02

A61P37/04

A61P31/12

A61P31/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021559526

(86)(22)【出願日】2020-04-06

(85)【翻訳文提出日】2021-11-22

(86)【国際出願番号】 IB2020053280

(87)【国際公開番号】W WO2020208502

(87)【国際公開日】2020-10-15

(31)【優先権主張番号】62/832,245

(32)【優先日】2019-04-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田理愛

(72)【発明者】

【氏名】アナリーサシビルアンダーソン

(72)【発明者】

【氏名】イシスカネフスキー

(72)【発明者】

【氏名】ファリドラティフカーン

(72)【発明者】

【氏名】チャールズハロルドジョーンズ

(72)【発明者】

【氏名】ジョンマイケルマクラフリン

【テーマコード（参考）】

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C085AA03

4C085BA14

4C085BA38

4C085BA55

4C085BA88

4C085BA89

4C085CC07

4C085CC08

4C085FF01

4C085FF02

4C085FF11

4C085FF17

(57)【要約】

本発明は、コンジュゲート化肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖抗原（糖コンジュゲート）を含む新規免疫原性組成物、前記免疫原性組成物を含むキットおよびその使用に関する。本発明の免疫原性組成物は、典型的には、ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）および／またはＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）には見出されない肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。本発明はまた、前記新規免疫原性組成物を使用する、肺炎球菌感染に対する、ヒト対象、特に、乳児および高齢者のワクチン接種に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からなる群から選択される少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記組成物。

【請求項2】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｃ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の糖コンジュゲート、および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の糖コンジュゲートを含み、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項3】

前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされる、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項4】

前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項5】

前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８莢膜多糖の総量と比較して、約５０％未満の遊離血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８莢膜多糖を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項6】

前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つのコンジュゲーション度が、２～１５である、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項7】

前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、還元的アミノ化を使用して調製される、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項8】

前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項9】

前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項10】

【請求項11】

前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、０．１μｇ～１００μｇのそれぞれの血清型の多糖を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項12】

前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１．０μｇ～１０μｇのそれぞれの血清型の多糖を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項13】

前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、それぞれの血清型の糖コンジュゲートについて、約１．０μｇ、約１．２μｇ、約１．４μｇ、約１．６μｇ、約１．８μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０μｇ、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇまたは約６．０μｇの多糖を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項14】

ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、百日咳抗原（Ｐ）、無細胞百日咳抗原（Ｐａ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲート化インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、および不活化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）からなる群から選択される少なくとも１つの抗原をさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項15】

リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油エマルジョン、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．５％ｗ／ｖポリソルベート８０、０．５％ｗ／ｖソルビタントリオレエート）、油中水エマルジョン、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）マイクロ粒子およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）ナノ粒子からなる群から選択される少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項16】

ＣｐＧオリゴヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項17】

５．５～７．５のｐＨを有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項18】

血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む第２の免疫原性組成物と同時に、同時発生的に、併用的に、または連続的に投与される、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項19】

前記第２の免疫原性組成物が、１０、１１、１２、１３、１４または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、請求項１８に記載の免疫原性組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１９年４月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／８３２，２４５号の優先権の利益を主張する。

【0002】

本発明の分野
本発明は、コンジュゲート化莢膜糖抗原（糖コンジュゲート）を含む新規免疫原性組成物、免疫原性組成物を含むキット、およびその使用に関する。本発明の免疫原性組成物は、典型的には、糖が肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する糖コンジュゲートを含む。本発明はまた、新規免疫原性組成物およびキットを使用する、肺炎球菌感染に対する、ヒト対象、特に、乳児および高齢者対象のワクチン接種に関する。

【背景技術】

【0003】

肺炎球菌によって引き起こされる感染は、世界中で罹患と死亡の主な原因である。肺炎、熱性菌血症および髄膜炎は侵襲性肺炎球菌疾患の最も一般的な症状であるが、気道内での細菌拡散は、中耳感染、副鼻腔炎または反復性気管支炎をもたらし得る。侵襲性疾患と比較して、非侵襲性症状は通常、あまり重篤ではないが、かなりより一般的である。

【0004】

欧州および米国では、肺炎球菌性肺炎は、最も一般的な市中細菌性肺炎であり、毎年、成人１００，０００人あたり約１００人が罹患すると見積もられている。熱性菌血症および髄膜炎に関する、対応する統計は、それぞれ、１００，０００人あたり１５～１９人および１００，０００人あたり１～２人である。１つまたは複数のこれらの症状のリスクは、乳児および高齢者ならびに全ての年齢の免疫障害を有する人々においてはるかにより高い。経済的に発達した地域であっても、侵襲性肺炎球菌疾患は死亡率が高い；肺炎球菌性肺炎を有する成人については、死亡率は平均で１０％～２０％であるが、高リスク群では、それは５０％を超える可能性がある。肺炎は、世界で肺炎球菌による死亡の圧倒的に最も一般的な原因である。

【0005】

肺炎球菌疾患の原因菌である、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）は、多糖莢膜によって取り囲まれた、グラム陽性被包性球菌である。この莢膜の組成における差異は、約９１種の莢膜型間の血清学的差異を可能にし、その一部は肺炎球菌疾患と関連することが多いが、他は稀である。侵襲性肺炎球菌感染は、肺炎、髄膜炎および熱性菌血症を含む；中でも、一般的な非侵襲性症状は、中耳炎、副鼻腔炎および気管支炎である。肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）によって引き起こされる疾患に対して防御するために使用される肺炎球菌ワクチンである。現在、世界市場で利用可能な３種のＰＣＶワクチンがある：ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（一部の国では、ＰＲＥＶＥＮＡＲ（登録商標））（７価ワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）（１０価ワクチン）およびＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）（一部の国では、ＰＲＥＶＥＮＡＲ１３（登録商標））（１３価ワクチン）。

【0006】

必須の抗生物質に対する幅広い微生物耐性の最近の発生および免疫障害を有する人々の数の増加は、さらにより広い防御を示す肺炎球菌ワクチンの必要性を強調する。

【0007】

特に、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）には見出されない血清型に起因する肺炎球菌疾患の範囲に関する残っている満たされない医学的必要性および非ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）血清型の出現の可能性に対処する必要がある。ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）における１３を超える疾患を引き起こす特定の血清型は、地域、集団によって変化し、抗生物質耐性の獲得、肺炎球菌ワクチン導入および未知の起源の長期的傾向に起因して時間と共に変化し得る。ヒト、特に、２歳未満の小児においてさらなる肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に対する免疫応答を誘導するために使用することができる免疫原性組成物が必要である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明の新規免疫原性組成物の目的は、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）には見出されない肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に対する適切な防御を提供することである。一態様では、本発明の免疫原性組成物の目的は、ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（７価ワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）および／またはＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）によって現在包含される血清型に対する免疫応答を維持しながら、前記ワクチンには見出されない肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に対する適切な防御を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0009】

これらの必要性および他の必要性を満たすために、本発明は、新規免疫原性組成物、それを含むキットおよびその使用に関する。以下の条項は、本発明の一部の態様および実施形態を記載する。

【0010】

１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からなる群から選択される少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記組成物。

【0011】

２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0012】

３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｃ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0013】

４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0014】

５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0015】

６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0016】

７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0017】

８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0018】

９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0019】

１０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0020】

１１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0021】

１２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0022】

１３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0023】

１４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0024】

１５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0025】

１６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0026】

１７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、条項１に記載の免疫原性組成物。

【0027】

１８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｃ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の糖コンジュゲート、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の糖コンジュゲート、および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の糖コンジュゲートを含み、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、条項１～１７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0028】

１９．前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされる、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0029】

２０．前記糖コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされる、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0030】

２１．前記糖コンジュゲートが、ＴＴに個別にコンジュゲートされる、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0031】

２２．前記糖コンジュゲートが、ＤＴに個別にコンジュゲートされる、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0032】

２３．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0033】

２４．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８莢膜多糖の総量と比較して、約５０％未満の遊離血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８の莢膜多糖を含む、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0034】

２５．血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0035】

２６．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つのコンジュゲーション度が、２～１５である、条項１～１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0036】

２７．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つの担体タンパク質が、ＣＲＭ_１９７である、条項１～２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0037】

２８．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、還元的アミノ化を使用して調製される、条項１～２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0038】

２９．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの分子量を有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0039】

３０．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0040】

３１．前記血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８糖コンジュゲートの少なくとも１つが、還元的アミノ化を使用して調製される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0041】

３２．前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、０．１μｇ～１００μｇのそれぞれの血清型の多糖を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0042】

３３．前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１．０μｇ～１０μｇのそれぞれの血清型の多糖を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0043】

３４．前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、それぞれの血清型の糖コンジュゲートについて、約１．０μｇ、約１．２μｇ、約１．４μｇ、約１．６μｇ、約１．８μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０μｇ、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇまたは約６．０μｇの多糖を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0044】

３５．前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、存在する場合、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来のそれぞれの糖コンジュゲートについて、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0045】

３６．前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0046】

３７．前記免疫原性組成物のそれぞれの用量が、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１１μｇ、約１２μｇ、約１３μｇ、約１４μｇ、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、約６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇまたは約７５μｇの担体タンパク質を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0047】

３８．他の病原体由来の少なくとも１つの抗原をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0048】

３９．ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、百日咳抗原（Ｐ）、無細胞百日咳抗原（Ｐａ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲート化インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、および不活化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）からなる群から選択される少なくとも１つの抗原をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0049】

４０．Ｄ、ＴおよびＰａをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0050】

４１．Ｄ、Ｔ、ＰａおよびＨｉｂをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0051】

４２．Ｄ、Ｔ、ＰａおよびＩＰＶをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0052】

４３．Ｄ、Ｔ、ＰａおよびＨＢｓＡｇをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0053】

４４．Ｄ、Ｔ、Ｐａ、ＨＢｓＡｇおよびＩＰＶをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0054】

４５．Ｄ、Ｔ、Ｐａ、ＨＢｓＡｇおよびＨｉｂをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0055】

４６．Ｄ、Ｔ、Ｐａ、ＨＢｓＡｇ、ＩＰＶおよびＨｉｂをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0056】

４７．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0057】

４８．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0058】

４９．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0059】

５０．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0060】

５１．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）およびコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0061】

５２．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0062】

５３．コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0063】

５４．少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0064】

５５．リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油エマルジョン、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．５％ｗ／ｖポリソルベート８０、０．５％ｗ／ｖソルビタントリオレエート）、油中水エマルジョン、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）マイクロ粒子およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）ナノ粒子からなる群から選択される少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0065】

５６．リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムからなる群から選択される少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0066】

５７．アジュバントとしてリン酸アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0067】

５８．アジュバントとして硫酸アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0068】

５９．アジュバントとして水酸化アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0069】

６０．アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0070】

６１．アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で０．２ｍｇ／ｍＬ～０．３ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0071】

６２．アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で約０．２５ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0072】

６３．ＣｐＧオリゴヌクレオチドをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0073】

６４．液体形態で製剤化される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0074】

６５．凍結乾燥形態で製剤化される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0075】

６６．水性液体形態で製剤化される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0076】

６７．１つまたは複数の緩衝剤、塩、二価カチオン、非イオン性界面活性剤、糖などの凍結保護剤、およびフリーラジカルスカベンジャーもしくはキレート剤などの酸化防止剤、またはそれらの任意の組合せを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0077】

６８．緩衝剤を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0078】

６９．前記緩衝剤が、約３．５～約７．５のｐＫａを有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0079】

７０．前記緩衝剤が、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジンまたはクエン酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0080】

７１．前記緩衝剤が、１．０ｍＭ～１０ｍＭの最終濃度のコハク酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0081】

７２．前記緩衝剤が、約５．０ｍＭの最終濃度のコハク酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0082】

７３．塩を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0083】

７４．前記塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0084】

７５．前記塩が、塩化ナトリウムである、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0085】

７６．前記塩が、約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0086】

７７．界面活性剤を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0087】

７８．前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５、トリトンＮ－１０１、トリトンＸ－１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレイン酸、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアリン酸、ポリオキシエチレン－３５－リシノール酸、大豆レシチンおよびポロキサマーからなる群から選択される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0088】

７９．前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５およびポロキサマーの群から選択される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0089】

８０．前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0090】

８１．界面活性剤が、少なくとも０．０００１重量％～１０重量％（ｗ／ｗ）の最終濃度のポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0091】

８２．界面活性剤が、少なくとも０．００１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）の最終濃度のポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0092】

８３．界面活性剤が、少なくとも０．０１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）の最終濃度のポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0093】

８４．界面活性剤が、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）の最終濃度のポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0094】

８５．５．５～７．５のｐＨを有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0095】

８６．５．６～７．０のｐＨを有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0096】

８７．５．８～６．０のｐＨを有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0097】

８８．（ａ）条項１～１６５のいずれか一項に記載の前記免疫原性組成物を含む第１の免疫原性組成物；ならびに（ｂ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む第２の免疫原性組成物を含むキット。

【0098】

８９．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0099】

９０．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0100】

９１．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0101】

９２．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0102】

９３．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆおよび２２Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0103】

９４．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0104】

９５．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0105】

９６．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび２２Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0106】

９７．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0107】

９８．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、条項８８に記載のキット。

【0108】

９９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0109】

１００．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0110】

１０１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0111】

１０２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0112】

１０３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0113】

１０４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0114】

１０５．前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に全て個別にコンジュゲートされる、条項１６６～１８２のいずれか一項に記載のキット。

【0115】

１０６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0116】

１０７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖コンジュゲートが、ＴＴにコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0117】

１０８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＤＴにコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0118】

１０９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートがＰＤに個別にコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖コンジュゲートがＴＴにコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の前記糖コンジュゲートがＤＴにコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0119】

１１０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0120】

１１１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0121】

１１２．前記第２の免疫原性組成物が、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0122】

１１３．前記第２の免疫原性組成物が、１０、１１、１２、１３、１４または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0123】

１１４．前記第２の免疫原性組成物が、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0124】

１１５．前記第２の免疫原性組成物が、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１価コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0125】

１１６．前記第２の免疫原性組成物が、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１価コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0126】

１１７．前記第２の免疫原性組成物が、１２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１２価コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0127】

１１８．前記第２の免疫原性組成物が、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１３価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0128】

１１９．前記第２の免疫原性組成物が、１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0129】

１２０．前記第２の免疫原性組成物が、１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0130】

１２１．前記第２の免疫原性組成物が、１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１５価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0131】

１２２．第２の免疫原性組成物の前記糖コンジュゲートが全て、還元的アミノ化によって担体タンパク質にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0132】

１２３．前記第２の免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１．０μｇ～１０μｇのそれぞれの血清型の多糖を含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0133】

１２４．前記第２の免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質を含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0134】

１２５．前記第２の免疫原性組成物のそれぞれの用量が、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇまたは約５０μｇの担体タンパク質を含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0135】

１２６．前記第２の免疫原性組成物が、他の病原体由来の少なくとも１つの抗原をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0136】

１２７．前記第２の免疫原性組成物が、少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0137】

１２８．前記第２の免疫原性組成物が、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムからなる群から選択される少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0138】

１２９．前記第２の免疫原性組成物が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0139】

１３０．前記第２の免疫原性組成物が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で０．２ｍｇ／ｍＬ～０．３ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0140】

１３１．前記第２の免疫原性組成物が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で約０．２５ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0141】

１３２．前記第２の免疫原性組成物が、緩衝剤をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0142】

１３３．前記緩衝剤が、約３．５～約７．５のｐＫａを有する、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0143】

１３４．前記緩衝剤が、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジンまたはクエン酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0144】

１３５．前記緩衝剤が、約５．０ｍＭの最終濃度のコハク酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0145】

１３６．前記第２の免疫原性組成物が、塩をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0146】

１３７．前記塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0147】

１３８．前記第２の免疫原性組成物が、１５０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウムを含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0148】

１３９．前記第２の免疫原性組成物が、界面活性剤をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0149】

１４０．前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0150】

１４１．ポリソルベート８０の最終濃度が、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％（ｗ／ｗ）である、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0151】

１４２．前記第２の免疫原性組成物が、５．８～６．０のｐＨを有する、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0152】

１４３．前記第１の免疫原性組成物と、前記第２の免疫原性組成物とが、別々の容器中にある、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0153】

１４４．前記第１および第２の免疫原性組成物が、液体形態で製剤化される、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0154】

１４５．前記第１および第２の免疫原性組成物が、凍結乾燥形態で製剤化される、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0155】

１４６．前記第１の免疫原性組成物が液体形態にあり、前記第２の免疫原性組成物が凍結乾燥形態にある、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0156】

１４７．前記第１の免疫原性組成物が凍結乾燥形態にあり、前記第２の免疫原性組成物が液体形態にある、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0157】

１４８．前記免疫原性組成物が、第２の免疫原性組成物と同時に、同時発生的に、併用的に、または連続的に投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0158】

１４９．第２の免疫原性組成物との同時、同時発生的、併用的、または連続的投与のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0159】

１５０．上のセクション３に開示された免疫原性組成物のいずれかとの同時、同時発生的、併用的、または連続的投与のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0160】

１５１．前記第２の免疫原性組成物が、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0161】

１５２．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0162】

１５３．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0163】

１５４．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0164】

１５５．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0165】

１５６．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆおよび２２Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0166】

１５７．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0167】

１５８．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0168】

１５９．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび２２Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0169】

１６０．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0170】

１６１．前記第２の免疫原性組成物が、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0171】

１６２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0172】

１６３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0173】

１６４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0174】

１６５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0175】

１６６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0176】

１６７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0177】

１６８．前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に全て個別にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0178】

１６９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0179】

１７０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖コンジュゲートが、ＴＴにコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0180】

１７１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＤＴにコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0181】

１７２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートがＰＤに個別にコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の前記糖コンジュゲートがＴＴにコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の前記糖コンジュゲートがＤＴにコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0182】

１７３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0183】

１７４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の前記糖コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0184】

１７５．前記第２の免疫原性組成物が、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0185】

１７６．前記第２の免疫原性組成物が、１０、１１、１２、１３、１４または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0186】

１７７．前記第２の免疫原性組成物が、１３、１４または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0187】

１７８．前記第２の免疫原性組成物が、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0188】

１７９．前記第２の免疫原性組成物が、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１価コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0189】

１８０．前記第２の免疫原性組成物が、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１価コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0190】

１８１．前記第２の免疫原性組成物が、１２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１２価コンジュゲートが、ＰＤに個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0191】

１８２．前記第２の免疫原性組成物が、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１３価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0192】

１８３．前記第２の免疫原性組成物が、１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0193】

１８４．前記第２の免疫原性組成物が、１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0194】

１８５．前記第２の免疫原性組成物が、１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１５価コンジュゲートが、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0195】

１８６．第２の免疫原性組成物の前記糖コンジュゲートが全て、還元的アミノ化によって担体タンパク質にコンジュゲートされる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0196】

１８７．前記第２の免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１～１０μｇのそれぞれの血清型の多糖を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0197】

１８８．前記第２の免疫原性組成物のそれぞれの用量が、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0198】

１８９．前記第２の免疫原性組成物のそれぞれの用量が、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇまたは約５０μｇの担体タンパク質を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0199】

１９０．前記第２の免疫原性組成物が、他の病原体由来の抗原をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0200】

１９１．前記第２の免疫原性組成物が、少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0201】

１９２．前記第２の免疫原性組成物が、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムからなる群から選択される少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0202】

１９３．前記第２の免疫原性組成物が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0203】

１９４．前記第２の免疫原性組成物が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で０．２ｍｇ／ｍＬ～０．３ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0204】

１９５．前記第２の免疫原性組成物が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムの形態で約０．２５ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0205】

１９６．前記第２の免疫原性組成物が、緩衝剤をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0206】

１９７．前記第２の免疫原性組成物が、約３．５～約７．５のｐＫａを有する緩衝剤を含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0207】

１９８．前記第２の免疫原性組成物の前記緩衝剤が、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジンまたはクエン酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0208】

１９９．前記第２の免疫原性組成物の前記緩衝剤が、約５．０ｍＭの最終濃度のコハク酸塩である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0209】

２００．前記第２の免疫原性組成物が、塩をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0210】

２０１．前記第２の免疫原性組成物の前記塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0211】

２０２．前記第２の免疫原性組成物が、１５０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウムを含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0212】

２０３．前記第２の免疫原性組成物が、界面活性剤をさらに含む、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0213】

２０４．前記第２の免疫原性組成物の前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0214】

２０５．前記第２の免疫原性組成物中のポリソルベート８０の最終濃度が、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％（ｗ／ｗ）である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0215】

２０６．前記第２の免疫原性組成物が、５．８～６．０のｐＨを有する、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0216】

２０７．ワクチン接種スケジュールが単回用量スケジュールである、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0217】

２０８．ワクチン接種スケジュールが複数回用量スケジュールである、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0218】

２０９．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0219】

２１０．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約６ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0220】

２１１．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0221】

２１２．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0222】

２１３．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約６ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0223】

２１４．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0224】

２１５．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約４ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0225】

２１６．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0226】

２１７．ワクチン接種スケジュールが、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回または３回用量シリーズ、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0227】

２１８．ワクチン接種スケジュールが、２ヶ月齢で開始して、約２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズ、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0228】

２１９．ワクチン接種スケジュールが、２、４、６および１２～１５ヶ月齢で投与される４回の用量のワクチンからなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0229】

２２０．ワクチン接種スケジュールが、０日目で与えられる初回用量および約２～約２４週の範囲の間隔で与えられる１つまたは複数の追加用量からなる、ワクチン接種における使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【0230】

２２１．第１および第２の免疫原性組成物の同時、同時発生的、併用的、または連続的投与のための、前記条項のいずれか一項に記載のキット。

【0231】

２２２．第１および第２の免疫原性組成物の同時投与の方法における使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0232】

２２３．前記同時投与のワクチン接種スケジュールが単回用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0233】

２２４．前記同時投与のワクチン接種スケジュールが複数回用量スケジュールである、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0234】

２２５．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0235】

２２６．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0236】

２２７．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0237】

２２８．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0238】

２２９．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0239】

２３０．前記複数回用量スケジュールが、それぞれの用量が約１、２、３または４ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0240】

２３１．前記複数回用量スケジュールが、１歳で少なくとも１回の用量（例えば、１回、２回または３回の用量）、次いで、少なくとも１回の幼児用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0241】

２３２．前記複数回用量スケジュールが、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回または３回用量シリーズ（例えば、用量間は２８～５６日）、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0242】

２３３．前記複数回用量スケジュールが、２、４、６、および１２～１５ヶ月齢で投与される４回用量シリーズのワクチンからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0243】

２３４．前記複数回用量スケジュールが、０日目で与えられる初回用量および約２～約２４週間の範囲の間隔、好ましくは、４～８週間の投与間隔で与えられる１つまたは複数の追加用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0244】

２３５．前記複数回用量スケジュールが、０日目で与えられる初回用量および約３ヶ月後に与えられる追加用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0245】

２３６．第１および第２の免疫原性組成物の併用的投与の方法における使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0246】

２３７．前記併用的投与のワクチン接種スケジュールが単回用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0247】

２３８．前記併用的投与のワクチン接種スケジュールが複数回用量スケジュールである、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0248】

２３９．第１および第２の免疫原性組成物の同時発生的投与の方法における使用のための、条項２２６～２８４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物または条項２９９に記載のキット。

【0249】

２４０．前記同時発生的投与のワクチン接種スケジュールが単回用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0250】

２４１．前記同時発生的投与のワクチン接種スケジュールが複数回用量スケジュールである、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0251】

２４２．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0252】

２４３．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0253】

２４４．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0254】

２４５．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0255】

２４６．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約４ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0256】

２４７．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0257】

２４８．前記複数回用量スケジュールが、１歳で少なくとも１回の用量（例えば、１回、２回または３回の用量）、次いで、少なくとも１回の幼児用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0258】

２４９．前記複数回用量スケジュールが、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回または３回用量シリーズ（例えば、用量間は２８～５６日）、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0259】

２５０．前記複数回用量スケジュールが、２、４、６、および１２～１５ヶ月齢で投与される４回用量シリーズのワクチンからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0260】

２５１．前記複数回用量スケジュールが、０日目で与えられる初回用量および約２～約２４週間の範囲の間隔、好ましくは、４～８週間の投与間隔で与えられる１つまたは複数の追加用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0261】

２５２．前記複数回用量スケジュールが、０日目で与えられる初回用量および約３ヶ月後に与えられる追加用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0262】

２５３．第１および第２の免疫原性組成物の連続的投与の方法における使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0263】

２５４．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、２回、３回、４回、５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0264】

２５５．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、２回、３回、または４回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0265】

２５６．第１の免疫原性組成物が１回目に投与され、第２の免疫原性組成物が２回目に投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0266】

２５７．第２の免疫原性組成物が１回目に投与され、第１の免疫原性組成物が２回目に投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0267】

２５８．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0268】

２５９．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0269】

２６０．１回目および２回目の用量が、１歳で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0270】

２６１．１回目の用量が１歳で投与され、２回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0271】

２６２．前記幼児用量が、１２～１８ヶ月齢で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0272】

２６３．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0273】

２６４．前記スケジュールが、それぞれの用量が約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0274】

２６５．前記スケジュールが、それぞれの用量が約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0275】

２６６．１回目および２回目の用量が１歳で投与され、３回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0276】

２６７．１回目および２回目の用量が、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられ（例えば、用量間は２８～５６日）、３回目の用量が１２～１８ヶ月齢での幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0277】

２６８．第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0278】

２６９．第２の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0279】

２７０．第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0280】

２７１．第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0281】

２７２．第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0282】

２７３．第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0283】

２７４．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、４回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0284】

２７５．１回目、２回目、および３回目の用量が、約１ヶ月～約４ヶ月の間隔で隔てられ、次いで、４回目の用量が、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0285】

２７６．１回目、２回目、および３回目の用量が、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられ、次いで、４回目の用量が、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0286】

２７７．１回目、２回目、および３回目の用量が１歳で投与され、４回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0287】

２７８．１回目、２回目、および３回目の用量が、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられ（例えば、用量間は２８～５６日）、４回目の用量が１２～１８ヶ月齢での幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0288】

２７９．第１の免疫原性組成物が１回目、２回目、および３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0289】

２８０．第２の免疫原性組成物が１回目、２回目、および３回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0290】

２８１．第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0291】

２８２．第２の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0292】

２８３．第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0293】

２８４．第２の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0294】

２８５．第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目、３回目、および４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0295】

２８６．第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が２回目、３回目、および４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0296】

２８７．第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0297】

２８８．第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0298】

２８９．第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0299】

２９０．第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0300】

２９１．第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0301】

２９２．第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0302】

２９３．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、５回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0303】

２９４．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約３ヶ月の間隔で隔てられた４回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の５回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0304】

２９５．１回目、２回目、３回目、および４回目の用量が１歳で投与され、５回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0305】

２９６．第１の免疫原性組成物（第１のＩＣ）および第２の免疫原性組成物（第２のＩＣ）が、以下のスケジュールのいずれかに従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0306】

【表1】

【0307】

２９７．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、６回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0308】

２９８．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた５回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の６回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0309】

２９８．１回目、２回目、３回目、４回目、および５回目の用量が１歳で投与され、６回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0310】

２９９．第１の免疫原性組成物と、第２の免疫原性組成物とが、条項３７４に記載のスケジュールのいずれか、次いで、６回目の用量に従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0311】

３００．本発明による第１の免疫原性組成物が、６回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0312】

３０１．本発明による第２の免疫原性組成物が、６回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0313】

３０２．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、７回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0314】

３０３．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月の間隔で隔てられた６回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の７回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0315】

３０４．１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、および６回目の用量が１歳で投与され、７回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0316】

３０５．第１の免疫原性組成物と、第２の免疫原性組成物とが、条項３７９または３８０に記載のスケジュールのいずれか、次いで、７回目の用量に従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0317】

３０６．本発明による第１の免疫原性組成物が、７回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0318】

３０７．本発明による第２の免疫原性組成物が、７回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0319】

３０８．前記連続的投与のワクチン接種スケジュールが、８回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0320】

３０９．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月の間隔で隔てられた７回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の８回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0321】

３１０．１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、６回目、および７回目の用量が１歳で投与され、７回目の用量が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0322】

３１１．第１の免疫原性組成物と、第２の免疫原性組成物とが、条項３８５または３８６に記載のスケジュールのいずれか、次いで、８回目の用量に従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0323】

３１２．本発明による第１の免疫原性組成物が、８回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0324】

３１３．本発明による第２の免疫原性組成物が、８回目の用量として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0325】

３１４．ワクチン接種スケジュールが、第１の免疫原性組成物の連続的投与および第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0326】

３１５．ワクチン接種スケジュールが、２回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0327】

３１６．ワクチン接種スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた２回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0328】

３１７．第１の免疫原性組成物が１回目に投与され、併用的または同時発生的投与が２回目に投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0329】

３１８．併用的または同時発生的投与が１回目に投与され、第１の免疫原性組成物が２回目に投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0330】

３１９．１回目および２回目の投与が、１歳で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0331】

３１０．１回目の投与が１歳で投与され、２回目の投与が幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0332】

３１１．前記幼児投与が、１２～１８ヶ月齢で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0333】

３１２．ワクチン接種スケジュールが、３回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0334】

３１３．前記スケジュールが、約１ヶ月～約１２ヶ月の間隔で隔てられた３回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0335】

３１４．１回目および２回目の投与が１歳で投与され、３回目の投与が幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0336】

３１５．１回目および２回目の投与が、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられ（例えば、投与間は２８～５６日）、３回目の投与が１２～１８ヶ月齢での幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0337】

３１６．第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が３回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0338】

３１７．併用的または同時発生的投与が１回目および２回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0339】

３１８．第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が２回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0340】

３１９．併用的または同時発生的投与が１回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が２回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が３回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0341】

３２０．第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が２回目および３回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0342】

３２１．併用的または同時発生的投与が１回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0343】

３２２．ワクチン接種スケジュールが、４回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0344】

３２３．１回目、２回目および３回目の投与が、約１ヶ月～約４ヶ月の間隔で隔てられ、次いで、４回目の投与が、１回目の投与の約１０ヶ月～約１３ヶ月後である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0345】

３２４．１回目、２回目および３回目の投与が、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられ、次いで、４回目の投与が、１回目の投与の約１０ヶ月～約１３ヶ月後である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0346】

３２５．１回目、２回目および３回目の投与が１歳で投与され、４回目の投与が幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0347】

３２６．１回目、２回目および３回目の投与が、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられ（例えば、投与間は２８～５６日）、４回目の投与が１２～１８ヶ月齢での幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0348】

３２７．第１の免疫原性組成物が１回目、２回目および３回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0349】

３２８．併用的または同時発生的投与が１回目、２回目および３回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0350】

３２９．第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が３回目および４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0351】

３３０．併用的または同時発生的投与が１回目および２回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0352】

３３１．第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が３回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0353】

３３２．併用的または同時発生的投与が１回目および２回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0354】

３３３．第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が２回目、３回目および４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0355】

３３４．併用的または同時発生的投与が１回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が２回目、３回目および４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0356】

３３５．第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が２回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0357】

３３６．併用的または同時発生的投与が１回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が２回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が３回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0358】

３３７．第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が２回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0359】

３３８．併用的または同時発生的投与が１回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が２回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が３回目および４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0360】

３３９．第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が２回目および３回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0361】

３４０．併用的または同時発生的投与が１回目の投与で投与され、第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の投与で投与され、併用的または同時発生的投与が４回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0362】

３４１．ワクチン接種スケジュールが、５回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0363】

３４２．スケジュールが、それぞれの用量が約１ヶ月～約３ヶ月の間隔で隔てられた４回投与シリーズ、次いで、１回目の投与の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の５回目の投与からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0364】

３４３．１回目、２回目、３回目および４回目の投与が１歳で投与され、５回目の投与が幼児用量である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0365】

３４４．第１の免疫原性組成物（第１のＩＣ）および第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与（第１のＩＣ／第２のＩＣ）が、以下のスケジュールのいずれかに従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0366】

【表2-1】

【0367】

【表2-2】

【0368】

３４５．ワクチン接種スケジュールが、６回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0369】

３４６．スケジュールが、それぞれの投与が約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた５回投与シリーズ、次いで、１回目の投与の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の６回目の投与からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0370】

３４７．１回目、２回目、３回目、４回目および５回目の投与が１歳で投与され、６回目の投与が幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0371】

３４８．第１の免疫原性組成物および第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与が、条項４３３に記載のスケジュールのいずれか、次いで、６回目の投与に従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0372】

３４９．第１の免疫原性組成物が、６回目の投与として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0373】

３５０．第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与が、６回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0374】

３５１．ワクチン接種スケジュールが、７回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0375】

３５２．ワクチン接種スケジュールが、それぞれの投与が約１ヶ月の間隔で隔てられた６回投与シリーズ、次いで、１回目の投与の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の７回目の投与からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0376】

３５３．１回目、２回目、３回目、４回目、５回目および６回目の投与が１歳で投与され、７回目の投与が幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0377】

３５４．第１の免疫原性組成物および第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が、前記条項のいずれか一項に記載のスケジュール、次いで、７回目の投与に従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0378】

３５５．第１の免疫原性組成物が、７回目の投与として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0379】

３５６．第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与が、７回目の投与で投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0380】

３５７．ワクチン接種スケジュールが、８回投与シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0381】

３５８．ワクチン接種スケジュールが、それぞれの投与が約１ヶ月の間隔で隔てられた７回投与シリーズ、次いで、１回目の投与の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の８回目の投与からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0382】

３５９．１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、６回目および７回目の投与が１歳で投与され、７回目の投与が幼児投与である、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0383】

３６０．第１の免疫原性組成物および第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与が、前記条項のいずれか一項に記載のスケジュールのいずれか、次いで、８回目の投与に従って投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0384】

３６１．第１の免疫原性組成物が、８回目の投与として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0385】

３６２．第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与が、８回目の投与として投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0386】

３６３．ワクチン接種スケジュールが、
第２の免疫原性組成物および
第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的または同時発生的投与
の連続的投与からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0387】

３６４．前記スケジュールが、条項３９４～４５１に記載のスケジュールのいずれか１つであり、（ａ）の前記第２の免疫原性組成物の投与が、前記条項における（ａ）の第１の免疫原性組成物の投与と置き換える、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0388】

３６５．医薬としての使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0389】

３６６．ワクチンとしての使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0390】

３６７．対象における細菌感染、疾患または状態を防止する、処置する、または改善するための方法における使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0391】

３６８．対象における細菌感染、疾患または状態を防止するための方法における使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0392】

３６９．全身または粘膜経路によって前記免疫原性組成物を投与することによって、肺炎球菌感染に罹りやすいヒトを保護または処置するための方法における使用のための、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0393】

３７０．前記免疫原性組成物が、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下経路によって投与される、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0394】

３７１．ワクチン接種される対象が、１歳未満のヒトである、ワクチンとしての使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0395】

３７２．ワクチン接種される対象が、２歳未満のヒトである、ワクチンとしての使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0396】

３７３．ワクチン接種される対象が、５０歳またはそれより高齢の成人である、ワクチンとしての使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0397】

３７４．ワクチン接種される対象が、免疫障害のあるヒトである、ワクチンとしての使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0398】

３７５．単回用量スケジュールにおける使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0399】

３７６．複数回用量スケジュールにおける使用のための前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0400】

３７７．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0401】

３７８．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0402】

３７９．前記複数回用量スケジュールが、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、次いで、１回目の用量の約１０ヶ月～約１３ヶ月後の４回目の用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0403】

３８０．前記複数回用量スケジュールが、１歳で少なくとも１回の用量、次いで、少なくとも１回の幼児用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0404】

３８１．前記複数回用量スケジュールが、２ヶ月齢で開始して、約１ヶ月～約２ヶ月の間隔で隔てられた２回または３回用量シリーズ、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【0405】

３８２．前記複数回用量スケジュールが、２、４、６、および１２～１５ヶ月齢で投与される４回用量シリーズのワクチンからなる、前記条項のいずれか一項に記載の免疫原性組成物またはキット。

【発明を実施するための形態】

【0406】

１．本発明の糖コンジュゲート
本発明の免疫原性組成物は、典型的には、糖が肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する、コンジュゲート化莢膜糖抗原（糖コンジュゲートとも称される）を含む。

【0407】

タンパク質担体が組成物中で２つ以上の糖について同じである場合、糖を、タンパク質担体（２つ以上の異なる糖がそれにコンジュゲートされる担体分子）の同じ分子にコンジュゲートすることができる（例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１を参照されたい）。

【0408】

ある実施形態では、糖は、タンパク質担体の異なる分子にそれぞれ個別にコンジュゲートされる（１つの型の糖がそれにコンジュゲートされるタンパク質担体のそれぞれの分子のみ）。この実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされると言われる。

【0409】

本発明の目的のために、用語「糖コンジュゲート」は、担体タンパク質に共有的に連結された莢膜糖を示す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に直接連結される。別の実施形態では、細菌糖は、スペーサー／リンカーを介してタンパク質に連結される。

【0410】

１．１本発明の担体タンパク質
本発明の糖コンジュゲートの成分は、糖がコンジュゲートされた担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書では互換的に使用することができる。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順に適しているべきである。

【0411】

ある実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ_１９７（ジフテリア毒素の非毒性的であるが、抗原的に同一のバリアント）、他のＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３またはＣＲＭ１０７；およびＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、ＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙＥｎｇｉｎｅｅｒｅｄＴｏｘｉｎｓ、編：Ｆｒａｎｋｅｌ、ＭａｅｃｅｌＤｅｋｋｅｒＩｎｃ．（１９９２）によって記載された他の突然変異；Ｇｌｕ－１４８からＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒへの、および／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または突然変異ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および第４，９５０，７４０号に開示された他の突然変異；Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／またはＬｙｓ５３４の少なくとも１つまたは複数の残基の突然変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および第６，４５５，６７３号に開示された他の突然変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片、一部の様式で解毒されたｐｌｙ、例えば、ｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）もしくはｄＰＬＹ－ホルモルを含む、肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ６３：２７０６～２７１３）、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤもしくはＰｈｔＥの配列はＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）を含むＰｈｔＸおよびＰｈｔタンパク質の融合物、例えば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、ＰｈｔＡ－Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、通常、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＥＰ０３７２５０１）から抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）、またはその免疫学的に機能的な等価物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ３１：３８１６～３８２４）、例えば、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ７２：４８８４～４８８７）肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特に、その非毒性突然変異体（グルタミン酸５５３に置換を担持する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１））から選択される。オブアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も、担体タンパク質として使用することができる。他の好適な担体タンパク質としては、コレラトキソイド（例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１に記載されている）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａなどの不活化細菌毒素が挙げられる。

【0412】

ある実施形態では、糖タンパク質の担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ_１９７など）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特に、ＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７に記載のもの）、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡから選択される。

【0413】

ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）である。

【0414】

別の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）。

【0415】

ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、ＣＲＭ_１９７タンパク質にコンジュゲートする。ＣＲＭ_１９７タンパク質は、ジフテリア毒素の非毒性形態であるが、ジフテリア毒素と免疫学的に識別不可能である。ＣＲＭ_１９７は、毒素原性コリネファージベータのニトロソグアニジン突然変異誘発によって創出された非毒素原性ファージβ１９７^ｔｏｘ－により感染したコリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）ＮａｔｕｒｅＮｅｗＢｉｏｌｏｇｙ２３３：８～１１）。ＣＲＭ_１９７タンパク質は、ジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、構造遺伝子中の単一の塩基変化（グアニンからアデニンへの）によってそれと異なる。この単一の塩基変化は、成熟タンパク質中のアミノ酸置換（グルタミン酸からグリシンへの）を引き起こし、ジフテリア毒素の有毒性を除去する。ＣＲＭ_１９７タンパク質は、糖のための安全かつ有効なＴ細胞依存的担体である。ＣＲＭ_１９７およびその産生に関するさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号に見出すことができる。

【0416】

ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、ＣＲＭ_１９７タンパク質またはＣＲＭ_１９７のＡ鎖にコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、遺伝子組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現を介して得られるＣＲＭ_１９７のＡ鎖にコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、全てＣＲＭ_１９７にコンジュゲートする。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、全てＣＲＭ_１９７のＡ鎖にコンジュゲートする。

【0417】

したがって、１つまたは複数の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、担体タンパク質としてＣＲＭ_１９７を含み、莢膜多糖はＣＲＭ_１９７に共有的に連結される。

【0418】

また、１つまたは複数の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、担体タンパク質としてＴＴを含み、莢膜多糖はＴＴに共有的に連結される。

【0419】

１．２本発明の莢膜糖
本明細書を通して、用語「糖」は、多糖またはオリゴ糖を示してもよく、多糖とオリゴ糖の両方を含む。１つまたは複数の実施形態では、糖は、多糖、特に、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖である。

【0420】

莢膜多糖は、当業者に公知の標準的な技術によって調製される。

【0421】

本発明では、莢膜多糖を、例えば、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８から調製することができる。典型的には、莢膜多糖を、それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を培地（例えば、大豆ベースの培地）中で増殖させることによって産生させた後、細菌培養物から多糖を調製する。本発明の糖コンジュゲートにおいて使用されるそれぞれの多糖を作製するために使用される肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の細菌株を、確立された菌株保存機関または臨床標本から得ることができる。

【0422】

生物（それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型）の集団は、種バイアルから種ボトルへとスケールアップされることが多く、生産規模の発酵容量に達するまで、大容量の１または複数の種発酵器を介して継代される。増殖サイクルの終わりに、細胞を溶解した後、溶解物ブロスを下流の（精製）処理のために採取する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／１１８７５２、ならびに米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００８／０１０２４９８号および第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。

【0423】

個々の多糖を、典型的には、遠心分離、沈降、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーによって精製する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３５２およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。

【0424】

精製された多糖を活性化（例えば、化学的に活性化）して、それらが反応できるようにした後（例えば、ｅＴＥＣスペーサーと）、本明細書でさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲート中に組み込むことができる。

【0425】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖は、最大で８個の糖残基を含有してもよい反復オリゴ糖単位を含む。

【0426】

ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、１つのオリゴ糖単位、または反復オリゴ糖単位の天然の長さよりも短い糖鎖であってもよい。ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、関連する血清型の１つの反復オリゴ糖単位である。

【0427】

ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、オリゴ糖であってもよい。オリゴ糖は、少数の反復単位（典型的には、５～１５の反復単位）を有し、典型的には、合成的に、または多糖の加水分解によって誘導される。

【0428】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の、および本発明の免疫原性組成物中の、全ての莢膜糖は、多糖である。高分子量の莢膜多糖は、抗原性表面上に存在するエピトープのため、ある特定の抗体免疫応答を誘導することができる。高分子量の莢膜多糖の単離および精製は、本発明のコンジュゲート、組成物および方法においても使用される。

【0429】

１つまたは複数の実施形態では、コンジュゲーション前の精製された多糖は、１０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。１つまたは複数の実施形態では、多糖は、５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、多糖は、５０ｋＤａ～３，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0430】

多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少するようになってもよい。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。機械的または化学的サイジングを用いることもできる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。機械的サイジングを、高圧ホモジェナイゼーション剪断を使用して行うことができる。上記の分子量範囲は、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。

【0431】

ある実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、または３８由来の莢膜多糖であり、莢膜多糖は、本明細書に記載の分子量範囲の１つの範囲内にある分子量を有する。

【0432】

本明細書で使用される場合、多糖または担体タンパク質－多糖コンジュゲートの用語「分子量」とは、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせた、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって算出される分子量を指す。

【0433】

１つまたは複数の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の肺炎球菌糖の少なくとも１つは、Ｏ－アセチル化される。１つまたは複数の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の肺炎球菌糖の２つ以上は、Ｏ－アセチル化される。

【0434】

１つまたは複数の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の肺炎球菌糖の少なくとも１つは、脱Ｏ－アセチル化される。１つまたは複数の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の肺炎球菌糖の２つ以上は、脱Ｏ－アセチル化される。

【0435】

本明細書に記載の精製された多糖を化学的に活性化して、担体タンパク質と反応することができる糖にすることができる。これらの肺炎球菌コンジュゲートは、別々のプロセスによって調製され、以下に記載の単一用量製剤に製剤化される。

【0436】

１．２．１肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の肺炎球菌多糖
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の莢膜糖を、当業者に公知の標準的な技術によって調製することができる（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１を参照されたい）。莢膜多糖を、それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を培地中で増殖させることによって産生させることができる；増殖周期の終わりに、細胞を溶解した後、溶解物ブロスを、下流の（精製）処理のために採取する。個々の多糖を、典型的には、遠心分離、沈降、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーによって精製する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３５２およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。精製された多糖を、本明細書でさらに記載されるようにさらに処理して、本発明の糖コンジュゲートを調製することができる。

【0437】

１つまたは複数の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、多糖は、５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａまたは５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、多糖は、５０ｋＤａ～３，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0438】

多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少するようになってもよい。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。

【0439】

１．２．２肺炎球菌多糖血清型６Ｃ
血清型６Ｃ糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0440】

血清型６Ｃの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0441】

１つまたは複数の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。

【0442】

１つまたは複数のさらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0443】

【0444】

１．２．３肺炎球菌多糖血清型７Ｃ
血清型７Ｃ糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0445】

血清型７Ｃの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0446】

１つまたは複数の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｃ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。

【0447】

【0448】

【0449】

１．２．４肺炎球菌多糖血清型９Ｎ
血清型９Ｎ糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0450】

血清型９Ｎの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0451】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型９Ｎ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型９Ｎ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型９Ｎ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なる属性によって特徴付けることができる。

【0452】

１つまたは複数の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。

【0453】

さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0454】

【0455】

ある実施形態では、精製された血清型９Ｎ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセスストリームをポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給ストリームを再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。

【0456】

高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型９Ｎ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。

【0457】

精製、単離もしくは活性化された血清型９Ｎ莢膜多糖または血清型９Ｎ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0458】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の精製された多糖は、前記血清型９Ｎ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0459】

１．２．５肺炎球菌多糖血清型１５Ａ
血清型１５Ａの肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0460】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の莢膜糖を、当業者に公知の標準的な技術によって調製する。典型的には、莢膜多糖を、それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を培地（例えば、大豆ベースの培地）中で増殖させることによって産生させた後、細菌培養物から多糖を調製する。生物（肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ）の集団は、種バイアルから種ボトルへとスケールアップされることが多く、生産規模の発酵容量に達するまで、大容量の１または複数の種発酵器を介して継代される。増殖サイクルの終わりに、細胞を溶解した後、溶解物ブロスを下流の（精製）処理のために採取する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１およびＷＯ２００８／１１８７５２、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００８／０１０２４９８号および第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。多糖を、典型的には、遠心分離、沈降、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーによって精製する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３５２およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。

【0461】

血清型１５Ａ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0462】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、９０ｋＤａ～２５０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１５０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１２０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１２０ｋＤａ；７０ｋＤａ～１００ｋＤａ；７０ｋＤａ～１１０ｋＤａ；７０ｋＤａ～１２０ｋＤａ；７０ｋＤａ～１３０ｋＤａ；７０ｋＤａ～１４０ｋＤａ；７０ｋＤａ～１５０ｋＤａ；７０ｋＤａ～１６０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１１０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１２０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１３０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１４０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１５０ｋＤａ；８０ｋＤａ～１６０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１１０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１２０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１３０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１４０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１５０ｋＤａ；９０ｋＤａ～１６０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１２０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１３０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１４０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１６０ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0463】

【0464】

１．２．６肺炎球菌多糖血清型１５Ｂ
血清型１５Ｂ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。１５Ｂ多糖を、当業者に公知の合成プロトコールを使用して生産することもできる。

【0465】

血清型１５Ｂ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡなど）（例えば、寄託株番号ＡＴＣＣ１０３５４）もしくはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ、ＵＳＡ））から、または臨床標本から得ることができる。

【0466】

細菌細胞を、培地、好ましくは、大豆ベースの培地中で増殖させる。肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ莢膜多糖を産生する細菌細胞の発酵後、細菌細胞を溶解させて、細胞溶解物を生産する。次いで、血清型１５Ｂ多糖を、遠心分離、深層濾過、沈降、限外濾過、活性炭処理、透析濾過および／またはカラムクロマトグラフィーの使用を含む、当技術分野で公知の精製技術を使用して細胞溶解物から単離することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。次いで、精製された血清型１５Ｂ莢膜多糖を、免疫原性コンジュゲートの調製のために使用することができる。

【0467】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１５Ｂ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られた、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭを含む異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0468】

好ましくは、有利な濾過特性および／または収率を示す１５Ｂコンジュゲートを生成するために、担体タンパク質へのコンジュゲーションの前に、標的分子量範囲への多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【0469】

ある実施形態では、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセスストリームをポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給ストリームを再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。

【0470】

高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。

【0471】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、および１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0472】

血清型１５Ｂ多糖は、Ｏ－アセチル化されており、Ｏ－アセチル化の総量は、多糖反復単位あたり約０．８～０．９個のＯ－アセチル基である。多糖のＯ－アセチル化度を、当技術分野で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲにより決定することができる（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0473】

精製、単離もしくは活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖または血清型１５Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0474】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0475】

グリセロールリン酸側鎖の存在は、多糖のフッ化水素酸（ＨＦ）を用いた処理によるその放出後の、パルスアンペロメトリック検出を用いた高速陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定によって決定される。精製、単離もしくは活性化された血清型１５Ｂ多糖または血清型１５Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のグリセロールの存在は、血清型１５Ｂ多糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭ数として表される。

【0476】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0477】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0478】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0479】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0480】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0481】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0482】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0483】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0484】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0485】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0486】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0487】

１．２．７肺炎球菌多糖血清型１５Ｃ
血清型１５Ｃ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。１５Ｃ多糖を、当業者に公知の合成プロトコールを使用して生産することもできる。

【0488】

血清型１５Ｃ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡなど）（例えば、寄託株番号ＡＴＣＣ１０３５４）もしくはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ、ＵＳＡ））から、または臨床標本から得ることができる。

【0489】

細菌細胞を、培地、好ましくは、大豆ベースの培地中で増殖させる。肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ莢膜多糖を産生する細菌細胞の発酵後、細菌細胞を溶解させて、細胞溶解物を生産する。次いで、血清型１５Ｃ多糖を、遠心分離、深層濾過、沈降、限外濾過、活性炭処理、透析濾過および／またはカラムクロマトグラフィーの使用を含む、当技術分野で公知の精製技術を使用して細胞溶解物から単離することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。次いで、精製された血清型１５Ｃ莢膜多糖を、免疫原性コンジュゲートの調製のために使用することができる。

【0490】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１５Ｃ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られた、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭを含む異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0491】

好ましくは、有利な濾過特性および／または収率を示す１５Ｃコンジュゲートを生成するために、担体タンパク質へのコンジュゲーションの前に、標的分子量範囲への多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１５Ｃ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ｃ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【0492】

ある実施形態では、精製された血清型１５Ｃ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセスストリームをポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給ストリームを再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。

【0493】

高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型１５Ｃ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。

【0494】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、および１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0495】

血清型１５Ｃ多糖は、Ｏ－アセチル化されており、Ｏ－アセチル化の総量は、多糖反復単位あたり約０．８～０．９個のＯ－アセチル基である。多糖のＯ－アセチル化度を、当技術分野で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲにより決定することができる（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0496】

精製、単離もしくは活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖または血清型１５Ｃ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0497】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0498】

グリセロールリン酸側鎖の存在は、多糖のフッ化水素酸（ＨＦ）を用いた処理によるその放出後の、パルスアンペロメトリック検出を用いた高速陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定によって決定される。精製、単離もしくは活性化された血清型１５Ｃ多糖または血清型１５Ｃ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のグリセロールの存在は、血清型１５Ｃ多糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭ数として表される。

【0499】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0500】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0501】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0502】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0503】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0504】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0505】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0506】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0507】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0508】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0509】

ある実施形態では、単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0510】

１．２．８肺炎球菌多糖血清型１６Ｆ
血清型１６Ｆ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0511】

血清型１６Ｆ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0512】

血清型１６Ｆ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0513】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１６Ｆ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型１６Ｆ莢膜多糖を、例えば、分子量および前記血清型１６Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0514】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0515】

【0516】

精製、単離もしくは活性化された血清型１６Ｆ莢膜多糖または血清型１６Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0517】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の精製された多糖は、前記血清型１６Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0518】

１．２．９肺炎球菌多糖血清型１７Ｆ
血清型１７Ｆ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0519】

血清型１７Ｆ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0520】

血清型１７Ｆ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0521】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１７Ｆ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型１７Ｆ莢膜多糖を、例えば、分子量および前記血清型１７Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0522】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0523】

【0524】

精製、単離もしくは活性化された血清型１７Ｆ莢膜多糖または血清型１７Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0525】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の精製された多糖は、前記血清型１７Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0526】

１．２．１０肺炎球菌多糖血清型２０
血清型２０多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0527】

血清型２０肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0528】

血清型２０由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0529】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型２０多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型２０莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型２０莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0530】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0531】

【0532】

精製、単離もしくは活性化された血清型２０莢膜多糖または血清型２０多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0533】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の精製された多糖は、前記血清型２０莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0534】

１．２．１１肺炎球菌多糖血清型２３Ａ
血清型２３Ａ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0535】

血清型２３Ａ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0536】

血清型２３Ａ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0537】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型２３Ａ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型２３Ａ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型２３Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0538】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0539】

【0540】

精製、単離もしくは活性化された血清型２３Ａ莢膜多糖または血清型２３Ａ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0541】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の精製された多糖は、前記血清型２３Ａ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0542】

１．２．１２肺炎球菌多糖血清型２３Ｂ
血清型２３Ｂ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0543】

血清型２３Ｂ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0544】

血清型２３Ｂ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0545】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型２３Ｂ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型２３Ｂ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型２３Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0546】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0547】

【0548】

精製、単離もしくは活性化された血清型２３Ｂ莢膜多糖または血清型２３Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0549】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の精製された多糖は、前記血清型２３Ｂ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0550】

１．２．１３肺炎球菌多糖血清型３１
血清型３１多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0551】

血清型３１肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0552】

血清型３１由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0553】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３１多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３１莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型３１莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0554】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0555】

【0556】

精製、単離もしくは活性化された血清型３１莢膜多糖または血清型３１多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0557】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１由来の精製された多糖は、前記血清型３１莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0558】

１．２．１４肺炎球菌多糖血清型３４
血清型３４多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0559】

血清型３４肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0560】

血清型３４由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0561】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３４多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３４莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型３４莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0562】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0563】

【0564】

精製、単離もしくは活性化された血清型３４莢膜多糖または血清型３４多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0565】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の精製された多糖は、前記血清型３４莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0566】

１．２．１５肺炎球菌多糖血清型３５Ｂ
血清型３５Ｂ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0567】

血清型３５Ｂ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0568】

血清型３５Ｂ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0569】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３５Ｂ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３５Ｂ莢膜多糖を、例えば、分子量および前記血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0570】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0571】

【0572】

精製、単離もしくは活性化された血清型３５Ｂ莢膜多糖または血清型３５Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0573】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の精製された多糖は、前記血清型３５Ｂ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0574】

１．２．１６肺炎球菌多糖血清型３５Ｆ
血清型３５Ｆ多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0575】

血清型３５Ｆ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0576】

血清型３５Ｆ由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0577】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３５Ｆ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３５Ｆ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型３５Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0578】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0579】

【0580】

精製、単離もしくは活性化された血清型３５Ｆ莢膜多糖または血清型３５Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0581】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の精製された多糖は、前記血清型３５Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0582】

１．２．１７肺炎球菌多糖血清型３８
血清型３８多糖を、当業者に公知の単離手順を使用して細菌から直接得ることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。

【0583】

血清型３８肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＲｅｆｅｒｅｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から得ることができる。

【0584】

血清型３８由来の精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。

【0585】

肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３８多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３８莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型３８莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。

【0586】

一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0587】

【0588】

精製、単離もしくは活性化された血清型３８莢膜多糖または血清型３８多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。

【0589】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の精製された多糖は、前記血清型３８莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。

【0590】

１．３本発明の糖コンジュゲート
精製された糖を化学的に活性化して、担体タンパク質と反応することができる糖（すなわち、活性化された糖）にする。活性化されたら、それぞれの莢膜糖を、担体タンパク質に別々にコンジュゲートして、糖コンジュゲートを形成させる。一実施形態では、それぞれの莢膜糖は、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされる。糖の化学的活性化およびその後の担体タンパク質へのコンジュゲーションを、本明細書に開示される活性化およびコンジュゲーション方法によって達成することができる。

【0591】

１．３．１肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の糖コンジュゲート
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の莢膜多糖を、当業者に公知の標準的な技術によって調製することができる（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／１１８７５２、ＷＯ２００６／１１０３５２、ならびに米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００８／０１０２４９８号および第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。

【0592】

ある実施形態では、多糖を、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて活性化して、シアン酸エステルを形成させる。次いで、活性化された多糖を、担体タンパク質（好ましくは、ＣＲＭ_１９７）上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングする。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化された担体タンパク質（例えば、Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を使用する）またはハロアセチル化された担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、Ｎ－スクシンイミジルブロモ酢酸（ＳＢＡ；ＳＩＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸（スルホ－ＳＩＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、もしくはスクシンイミジル３－［ブロモアセトアミド］プロピオン酸（ＳＢＡＰ）を使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合によって担体にカップリングすることができるチオール化された多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0593】

コンジュゲーションのための他の好適な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ－ニトロ安息香酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ－ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。多くは、国際特許出願公開番号ＷＯ９８／４２７２１に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基と、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）との反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら（１９７９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：２５７２～２５７４；Ｈｅａｒｎら（１９８１）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９～５１８を参照されたい）、次いで、タンパク質と反応させてカルバメート結合を形成させることによって形成させることができるカルボニルリンカーを含んでもよい。これは、アノマー末端の第一級ヒドロキシル基への還元、必要に応じた、第一級ヒドロキシル基の保護／脱保護、ＣＤＩカルバメート中間体を形成させるための第一級ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応およびＣＤＩカルバメート中間体と、タンパク質上のアミノ基とのカップリングを含んでもよい。

【0594】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の少なくとも１つの莢膜多糖は、還元的アミノ化（米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００７／０２３１３４０号、第２００７／０１８４０７１号および第２００７／０１８４０７２号、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、およびＷＯ２００８／１４３７０９などに記載されている）によって担体タンパク質にコンジュゲートされる。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の莢膜多糖は全て、還元的アミノ化によって担体タンパク質にコンジュゲートされる。

【0595】

還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質との還元を含む。酸化の前に、多糖を加水分解してもよい。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。酸化ステップは、過ヨウ素酸塩との反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。

【0596】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の莢膜多糖を、メタ過ヨウ素酸塩の存在下、または過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）の存在下で酸化させる。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の莢膜多糖を、オルト過ヨウ素酸塩の存在下、または過ヨウ素酸の存在下で酸化させる。

【0597】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。活性化された多糖および担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。一実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。別の実施形態では、活性化された多糖および担体タンパク質は、独立に凍結乾燥される。

【0598】

一実施形態では、凍結乾燥は、非還元糖の存在下で行い、あり得る非還元糖としては、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットが挙げられる。

【0599】

コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化と称される）である。好適である還元剤としては、シアノ水素化ホウ素ナトリウムなどのシアノ水素化ホウ素、ボラン－ピリジン、またはホウ化水素交換樹脂が挙げられる。一実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。

【0600】

ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行され、別の実施形態では、反応は、非プロトン性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された活性化された多糖および担体タンパク質を再構成させることができる。

【0601】

還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。コンジュゲーション（還元反応および必要に応じて、キャッピング）後、糖コンジュゲートを精製することができる。糖コンジュゲートを、透析濾過および／またはイオン交換クロマトグラフィーおよび／またはサイズ排除クロマトグラフィーによって精製することができる。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、透析濾過またはイオン交換クロマトグラフィーまたはサイズ排除クロマトグラフィーによって精製される。一実施形態では、糖コンジュゲートは、滅菌濾過される。

【0602】

１つまたは複数の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８由来の糖コンジュゲートは、１０％～１００％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、７５％～１００％、８０％～１００％、９０％～１００％、５０％～９０％、６０％～９０％、７０％～９０％または８０％～９０％のＯ－アセチル化度を有する糖を含む。他の実施形態では、Ｏ－アセチル化度は、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、もしくは９０％以上、または約１００％である。

【0603】

一部の実施形態では、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８由来の糖コンジュゲートは、Ｏ－アセチル化される。一部の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８由来の糖コンジュゲートはＯ－アセチル化され、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８由来の糖コンジュゲートは、脱Ｏ－アセチル化される。

【0604】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、実施例１、２および３ならびにＷＯ２０１４／０２７３０２などに記載された、ｅＴＥＣコンジュゲーション（本明細書では以後、「ｅＴＥＣ結合糖コンジュゲート」）を使用して調製される。６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、１つまたは複数のｅＴＥＣスペーサーを介して担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされた糖を含み、糖はカルバメート結合を介してｅＴＥＣスペーサーに共有的にコンジュゲートされ、担体タンパク質はアミド結合を介してｅＴＥＣスペーサーに共有的にコンジュゲートされる。本発明のｅＴＥＣ結合糖コンジュゲートを、一般式（ＩＩＩ）：

【0605】

【化1】

（式中、ｅＴＥＣスペーサーを含む原子は中央の囲みに含まれる）
によって表すことができる。

【0606】

ｅＴＥＣスペーサーは、７個の線状原子（すなわち、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－）を含み、糖と担体タンパク質との間に安定なチオエーテルおよびアミド結合を提供する。ｅＴＥＣ結合糖コンジュゲートの合成は、チオール化された糖を提供するための糖へのカルバメート結合を形成する、糖の活性化されたヒドロキシル基と、チオアルキルアミン試薬、例えば、シスタミンもしくはシステインアミンまたはその塩のアミノ基との反応を含む。１つまたは複数の遊離スルフヒドリル基の生成は、活性化されたチオール化された糖を提供するための還元剤との反応によって達成される。活性化されたチオール化された糖の遊離スルフヒドリル基と、アミン含有残基上に１つまたは複数のα－ハロアセトアミド基を有する活性化された担体タンパク質との反応は、チオエーテル結合を生成してコンジュゲートを形成し、担体タンパク質は、アミド結合を介してｅＴＥＣスペーサーに結合する。

【0607】

本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートにおいて、糖は多糖またはオリゴ糖であってもよい。担体タンパク質を、本明細書に記載の、または当業者に公知の任意の好適な担体から選択することができる。１つまたは複数の実施形態では、糖は多糖である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。一部のそのような実施形態では、ｅＴＥＣ結合糖コンジュゲートは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８莢膜多糖を含む。

【0608】

１つまたは複数の実施形態では、ｅＴＥＣ結合糖コンジュゲートは、ｅＴＥＣスペーサーを介してＣＲＭ_１９７に共有的にコンジュゲートされる、Ｐｎ－６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８莢膜多糖を含む（血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８のｅＴＥＣ結合糖コンジュゲート）。

【0609】

一部の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0610】

一部の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0611】

さらなる実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～9，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～8，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0612】

ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～２０、４～１６、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０である。別の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～１６である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0613】

ある実施形態では、担体タンパク質は、３９個のリシン残基を含有するＣＲＭ_１９７を含む。一部の実施形態では、ＣＲＭ_１９７は、糖に共有的に連結された、３９個のうちの４～１６個のリシン残基を含んでもよい。このパラメーターを表現するための別の方法は、ＣＲＭ_１９７リシンの約１０％～約４１％が糖に共有的に連結されているというものである。別の実施形態では、ＣＲＭ_１９７は、糖に共有的に連結された、３９個のうちの２～２０個のリシン残基を含んでもよい。このパラメーターを表現するための別の方法は、ＣＲＭ_１９７リシンの約５％～約５０％が糖に共有的に連結されているというものである。一部の実施形態では、ＣＲＭ_１９７は、糖に共有的に連結された、３９個のうちの約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４日、約１５個、または約１６個のリシン残基を含んでもよい。

【0614】

１つまたは複数の実施形態では、担体タンパク質は、担体タンパク質上のリシン残基の１つまたは複数のε－アミノ基へのアミド結合を介してｅＴＥＣスペーサーに共有的にコンジュゲートされる。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、糖に共有的にコンジュゲートした、２～２０個のリシン残基を含む。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、糖に共有的にコンジュゲートした、４～１６個のリシン残基を含む。

【0615】

本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートはまた、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２～４．０（例えば、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、１．０～２．５である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．４～１．７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0616】

担体タンパク質上のリシンへの糖鎖の結合の頻度は、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートを特徴付けるための別のパラメーターである。例えば、一部の実施形態では、担体タンパク質と、多糖との間の少なくとも１つの共有結合は、多糖の４糖反復単位毎に存在する。別の実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１０糖反復単位毎に少なくとも１回存在する。別の実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１５糖反復単位毎に少なくとも１回存在する。さらなる実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の２５糖反復単位毎に少なくとも１回存在する。

【0617】

１つまたは複数の実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７であり、ＣＲＭ_１９７と多糖との間のｅＴＥＣスペーサーを介する共有結合は、多糖の４、１０、１５または２５糖反復単位あたり少なくとも１回存在する。

【0618】

他の実施形態では、コンジュゲートは、５～１０糖反復単位毎に；２～７糖反復単位毎に；３～８糖反復単位毎に；４～９糖反復単位毎に；６～１１糖反復単位毎に；７～１２糖反復単位毎に；８～１３糖反復単位毎に；９～１４糖反復単位毎に；１０～１５糖反復単位毎に；２～６糖反復単位毎に；３～７糖反復単位毎に；４～８糖反復単位毎に；６～１０糖反復単位毎に；７～１１糖反復単位毎に；８～１２糖反復単位毎に；９～１３糖反復単位毎に；１０～１４糖反復単位毎に；１０～２０糖反復単位毎に；４～２５糖反復単位毎に、または２～２５糖反復単位毎に、担体タンパク質と糖との間に少なくとも１個の共有結合を含む。よくある実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0619】

別の実施形態では、担体タンパク質と糖との間の少なくとも１個の結合は、多糖の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５糖反復単位毎に存在する。ある実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0620】

コンジュゲーション中の重要な考慮は、糖エピトープの一部を形成し得るＯ－アシル、リン酸またはグリセロールリン酸側鎖などの、個々の成分の潜在的に感受性の非糖置換官能基の保持を可能にする条件の開発である。

【0621】

一実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、１０％～１００％のＯ－アセチル化度を有する糖を含む。一部のそのような実施形態では、糖は、５０％～１００％のＯ－アセチル化度を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７５％～１００％のＯ－アセチル化度を有する。さらなる実施形態では、糖は、７０％より高いか、またはそれに等しい（７０％以上の）Ｏ－アセチル化度を有する。

【0622】

ある実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0623】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0624】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８の多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８の多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、または０．９５である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８の多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８の多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８の多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８の多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0625】

血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0626】

一部の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％または５％未満の遊離血清型３３Ｆ多糖を含む。血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、１５％未満の遊離糖、１０％未満の遊離糖、または５％未満の遊離糖を含む。ある実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖を含む。別の実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖を含む。ある実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖を含む。

【0627】

１つまたは複数の実施形態では、本発明は、以下の特徴の１つまたは複数を単独で、または組み合わせて有する血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートを提供する：多糖が、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する；糖コンジュゲートが、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する；担体タンパク質が、糖に共有的に連結された、２～２０個のリシン残基を含む；糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が０．２～４．０である；糖コンジュゲートが、多糖の４、１０、１５または２５糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１個の共有結合を含む；糖が、７５％～１００％のＯ－アセチル化度を有する；コンジュゲートが、全多糖に対して約１５％未満の遊離多糖を含む；担体タンパク質がＣＲＭ_１９７である。

【0628】

血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、上記のように、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。

【0629】

ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの少なくとも１５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0630】

別の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの少なくとも３５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの少なくとも７０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0631】

ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの４０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの５０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0632】

１．３．２肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0633】

他の好適な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ－ニトロ安息香酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ－ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。多くは、国際特許出願公開番号ＷＯ９８／４２７２１に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基と、ＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら（１９７９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：２５７２～２５７４；Ｈｅａｒｎら（１９８１）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９～５１８を参照されたい）、次いで、タンパク質と反応させてカルバメート結合を形成させることによって形成させることができるカルボニルリンカーを含んでもよい。これは、アノマー末端の第一級ヒドロキシル基への還元、必要に応じた、第一級ヒドロキシル基の保護／脱保護、ＣＤＩカルバメート中間体を形成させるための第一級ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応およびＣＤＩカルバメート中間体と、タンパク質上のアミノ基とのカップリングを含んでもよい。

【0634】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【0635】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型６Ｃ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型６Ｃ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型６Ｃ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【0636】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型６Ｃ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型６Ｃ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【0637】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型６Ｃ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型６Ｃ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0638】

一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。

【0639】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【0640】

【化2】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【0641】

一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。

【0642】

一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。

【0643】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【0644】

一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有的に連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。

【0645】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【0646】

【化3】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【0647】

ある実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。ある実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。

【0648】

別の実施形態では、単離された血清型６Ｃ多糖は、
（ａ）単離された血清型６Ｃ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型６Ｃ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【0649】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【0650】

ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、精製される。活性化された血清型６Ｃ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された６Ｃ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0651】

別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【0652】

ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【0653】

別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0654】

ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0655】

ある実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0656】

活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。

【0657】

別の実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【0658】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型６Ｃ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0659】

コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。

【0660】

活性化された血清型６Ｃ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型６Ｃ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型６Ｃ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型６Ｃ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0661】

ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。別の実施形態では、反応は、非プロトン性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された活性化された多糖および担体タンパク質を再構成させることができる。

【0662】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型６Ｃ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0663】

ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅ^ｉＰｒＮ－ＢＨ_３、ベンジルアミン－ＢＨ_３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。

【0664】

還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）である。

【0665】

血清型６Ｃ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0666】

一部の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0667】

一部の実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0668】

さらなる実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0669】

さらなる実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0670】

糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。

【0671】

ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0672】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0673】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型６Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0674】

本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0675】

本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型６Ｃ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型６Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0676】

本発明の血清型６Ｃ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0677】

ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型６Ｃ多糖を含む。別の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型６Ｃ多糖を含む。ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型６Ｃ多糖を含む。ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型６Ｃ多糖を含む。別の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型６Ｃ多糖を含む。

【0678】

血清型６Ｃ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【0679】

ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型６Ｃ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0680】

１．３．３肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｃ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0681】

【0682】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【0683】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型７Ｃ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型７Ｃ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型７Ｃ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【0684】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型７Ｃ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型７Ｃ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【0685】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型７Ｃ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型７Ｃ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0686】

【0687】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【0688】

【化4】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【0689】

【0690】

【0691】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【0692】

【0693】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【0694】

【化5】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【0695】

【0696】

別の実施形態では、単離された血清型７Ｃ多糖は、
（ａ）単離された血清型７Ｃ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型７Ｃ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【0697】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【0698】

ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、精製される。活性化された血清型７Ｃ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された７Ｃ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0699】

別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【0700】

ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【0701】

別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0702】

ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0703】

ある実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0704】

【0705】

別の実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【0706】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型７Ｃ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0707】

【0708】

活性化された血清型７Ｃ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型７Ｃ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型７Ｃ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型７Ｃ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0709】

【0710】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型７Ｃ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0711】

【0712】

【0713】

血清型７Ｃ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0714】

一部の実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0715】

一部の実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0716】

さらなる実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0717】

さらなる実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0718】

【0719】

ある実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0720】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0721】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型７Ｃ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0722】

本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0723】

本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型７Ｃ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型７Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0724】

本発明の血清型７Ｃ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0725】

ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型７Ｃ多糖を含む。別の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型７Ｃ多糖を含む。ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型７Ｃ多糖を含む。ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型７Ｃ多糖を含む。別の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートは、血清型７Ｃ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型７Ｃ多糖を含む。

【0726】

血清型７Ｃ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【0727】

ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型７Ｃ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0728】

１．３．４肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0729】

【0730】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【0731】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型９Ｎ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型９Ｎ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型９Ｎ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【0732】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型９Ｎ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型９Ｎ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【0733】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型９Ｎ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型９Ｎ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0734】

【0735】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【0736】

【化6】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【0737】

【0738】

【0739】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【0740】

【0741】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【0742】

【化7】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【0743】

【0744】

別の実施形態では、単離された血清型９Ｎ多糖は、
（ａ）単離された血清型９Ｎ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型９Ｎ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【0745】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【0746】

ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、精製される。活性化された血清型９Ｎ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された９Ｎ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0747】

別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【0748】

ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【0749】

別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0750】

ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0751】

ある実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0752】

【0753】

別の実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【0754】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型９Ｎ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0755】

【0756】

活性化された血清型９Ｎ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型９Ｎ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型９Ｎ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型９Ｎ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0757】

【0758】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型９Ｎ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0759】

【0760】

【0761】

血清型９Ｎ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0762】

一部の実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0763】

一部の実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0764】

さらなる実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0765】

さらなる実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0766】

【0767】

ある実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0768】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0769】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型９Ｎ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【0770】

本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0771】

本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型９Ｎ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型９Ｎ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0772】

本発明の血清型９Ｎ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0773】

ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型９Ｎ多糖を含む。別の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型９Ｎ多糖を含む。ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型９Ｎ多糖を含む。ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型９Ｎ多糖を含む。別の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートは、血清型９Ｎ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型９Ｎ多糖を含む。

【0774】

血清型９Ｎ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【0775】

ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型９Ｎ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0776】

１．３．５肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された多糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0777】

【0778】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質との還元を含む。

【0779】

好ましくは、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型１５Ａ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１５Ａ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ａ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる（上のセクション１．２．６を参照されたい）。

【0780】

酸化ステップは、過ヨウ素酸塩との反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、血清型１５Ａ莢膜多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。ある実施形態では、血清型１５Ａ莢膜多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0781】

ある実施形態では、多糖を、０．０１～１０．０、０．０５～５．０、０．１～１．０、０．５～１．０、０．７～０．８、０．０５～０．５、０．１～０．３モル当量の酸化剤と反応させる。ある実施形態では、多糖を、約０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５モル当量の酸化剤と反応させる。別の実施形態では、多糖を、約０．１５モル当量の酸化剤と反応させる。さらに別の実施形態では、多糖を、約０．２５モル当量の酸化剤と反応させる。さらに別の実施形態では、多糖を、約０．５モル当量の酸化剤と反応させる。ある実施形態では、多糖を、約０．６モル当量の酸化剤と反応させる。別の実施形態では、多糖を、約０．７モル当量の酸化剤と反応させる。

【0782】

ある実施形態では、反応の持続期間は、１時間～５０時間、１０時間～３０時間、１５時間～２０時間、１５時間～１７時間または約１６時間である。

【0783】

別の実施形態では、反応の温度は、１５℃～４５℃、１５℃～３０℃、２０℃～２５℃に維持される。さらに別の実施形態では、反応の温度は、約２３℃に維持される。

【0784】

別の実施形態では、酸化反応は、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）またはＢｉｓ－Ｔｒｉｓから選択される緩衝液中で実行される。ある実施形態では、緩衝液は、リン酸カリウムである。

【0785】

さらに別の実施形態では、緩衝液は、１ｍＭ～５００ｍＭ、１ｍＭ～３００ｍＭ、または５０ｍＭ～２００ｍＭの濃度を有する。さらに別の実施形態では、緩衝液は、約１００ｍＭの濃度を有する。

【0786】

ある実施形態では、酸化反応は、４．０～８．０、５．０～７．０、または５．５～６．５のｐＨで実行される。別の実施形態では、ｐＨは、約６．０である。

【0787】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬの単離された血清型１５Ａ莢膜多糖と、０．２～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩とを、２０℃～２５℃の温度で反応させることによって得られる。

【0788】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、精製される。活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された莢膜多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0789】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の酸化度は、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、または１５～２０である。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１２、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、または１８～２０である。

【0790】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有する。

【0791】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0792】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0793】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0794】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0795】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0796】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0797】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、凍結乾燥された活性化された莢膜多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合することができる。

【0798】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0799】

活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖を、
（ａ）活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖と、担体タンパク質とを混合するステップ、および
（ｂ）混合された活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１５Ａ莢膜多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0800】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下する水性溶液中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。別の実施形態では、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0801】

ある実施形態では、ステップ（ａ）は、担体タンパク質およびＤＭＳＯを含む溶液中に、凍結乾燥された血清型１５Ａ莢膜多糖を溶解することを含む。ある実施形態では、ステップ（ａ）は、ＤＭＳＯ中に、同時凍結乾燥された血清型１５Ａ莢膜多糖および担体タンパク質を溶解することを含む。

【0802】

ステップ（ａ）および（ｂ）が水性溶液中で実行される場合、ステップ（ａ）および（ｂ）は、好ましくは、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ、Ｂｉｓ－トリス、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＴＥＡ、ＥＰＰＳ、ビシンまたはＨＥＰＢから選択される緩衝液中、６．０～８．５、７．０～８．０または７．０～７．５のｐＨで実行される。ある実施形態では、緩衝液は、ＰＢＳである。ある実施形態では、ｐＨは、約７．３である。

【0803】

ある実施形態では、ステップ（ｂ）における活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、または０．５ｍｇ／ｍＬから２ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、ステップ（ｂ）における活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の濃度は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９または３．０ｍｇ／ｍＬである。

【0804】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比（重量／重量）は、５：１～０．１：１、２：１～０．１：１、２：１～１：１、１．５：１～１：１、０．１：１～１：１、０．３：１～１：１、または０．６：１～１：１である。

【0805】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．６：１～１：１である。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．６：１～１．５：１である。そのような初期入力比は、糖コンジュゲート中の低レベルの遊離多糖を得るのに特に好適である。

【0806】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１または２：１である。

【0807】

ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。ある実施形態では、還元剤は、２－ピコリンボランナトリウムである。

【0808】

別の実施形態では、ステップ（ｂ）において使用される還元剤の量は、約０．１～１０．０モル当量、０．５～５．０モル当量、または１．０～２．０モル当量である。ある実施形態では、ステップ（ｂ）において使用される還元剤の量は、約１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２．０モル当量である。

【0809】

さらに別の実施形態では、ステップ（ｂ）の持続期間は、１時間～６０時間、１０時間～５０時間、４０時間～５０時間、または４２時間～４６時間である。ある実施形態では、ステップ（ｂ）の持続期間は、約４４時間である。

【0810】

さらに別の実施形態では、ステップ（ｂ）における反応の温度は、１０℃～４０℃、１５℃～３０℃または２０℃～２６℃に維持される。別の実施形態では、ステップ（ｂ）における反応の温度は、約２３℃に維持される。

【0811】

ある実施形態では、担体タンパク質に共有的に連結された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ莢膜多糖を含む糖コンジュゲートの調製のためのプロセスは、ＮａＢＨ_４の添加によって未反応のアルデヒドを捕捉する（クエンチングする）ステップ（ステップ（ｃ））をさらに含む。

【0812】

さらに別の実施形態では、ステップ（ｃ）において使用されるＮａＢＨ_４の量は、０．１～１０モル当量、０．５～５．０モル当量、または１．０～３．０モル当量である。さらに別の実施形態では、ステップ（ｃ）において使用されるＮａＢＨ_４の量は、約２．０モル当量である。

【0813】

別の実施形態では、ステップ（ｃ）の持続期間は、０．１時間～１０時間、０．５時間～５時間、または２時間～４時間である。ある実施形態では、ステップ（ｃ）の持続期間は、約３時間である。

【0814】

別の実施形態では、ステップ（ｃ）における反応の温度は、１５℃～４５℃、１５℃～３０℃または２０℃～２６℃に維持される。さらに別の実施形態では、ステップ（ｃ）における反応の温度は、約２３℃に維持される。

【0815】

別の実施形態では、コンジュゲーションステップの収率は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｂ）の収率は、６０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｂ）の収率は、７０％よりも高い。収率は、（コンジュゲート中の血清型１５Ａ多糖の量／コンジュゲーションステップにおいて使用される活性化された多糖の量）ｘ１００である。

【0816】

ある実施形態では、担体タンパク質に共有的に連結された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ莢膜多糖を含む糖コンジュゲートの調製のためのプロセスは、
（ａ）高圧ホモジェナイゼーションによって精製された血清型１５Ａ多糖をサイジングするステップ；
（ｂ）サイジングされた血清型１５Ａ多糖と、酸化剤とを反応させるステップ；
（ｃ）活性化された血清型１５Ａ多糖と、担体タンパク質とを混合するステップ；
（ｄ）混合された活性化された血清型１５Ａ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１５Ａ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ；ならびに
（ｅ）ＮａＢＨ_４の添加によって未反応のアルデヒドを捕捉する（クエンチングする）ステップ
を含む。

【0817】

さらに別の実施形態では、上記プロセスのコンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％よりも高い。別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、６０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、７０％よりも高い。収率は、（コンジュゲート中の血清型１５Ａ多糖の量／コンジュゲーションステップにおいて使用される活性化された多糖の量）ｘ１００である。

【0818】

血清型１５Ａ莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、多糖－タンパク質コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過、沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0819】

ある実施形態では、担体タンパク質は、セクション１．１で定義された通りである。ある実施形態では、担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ＣＲＭ_１９７、他のＤＴ突然変異体、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）、またはその免疫学的に機能的な等価物からなる群において選択される。ある実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【0820】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）にコンジュゲートされ、５ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００～２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；または２００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ～１６，０００ｋＤａまたは１０，０００ｋＤａ～１６，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0821】

１つまたは複数のさらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、約１，０００ｋＤａ、約１，５００ｋＤａ、約２，０００ｋＤａ、約２，５００ｋＤａ、約３，０００ｋＤａ、約３，５００ｋＤａ、約４，０００ｋＤａ、約４，５００ｋＤａ、約５，０００ｋＤａ、約５，５００ｋＤａ、約６，０００ｋＤａ、約６，５００ｋＤａ、約７，０００ｋＤａ、約７，５００ｋＤａ、約８，０００ｋＤａ、約８，５００ｋＤａ、約９，０００ｋＤａ、約９，５００ｋＤａ、約１０，０００ｋＤａ、約１０，５００ｋＤａ、約１１，０００ｋＤａ、約１１，５００ｋＤａ、約１２，０００ｋＤａ、約１２，５００ｋＤａ、約１３，０００ｋＤａ、約１３，５００ｋＤａ、約１４，０００ｋＤａ、約１４，５００ｋＤａ、約１５，０００ｋＤａ、約１５，５００ｋＤａ、約１６，０００ｋＤａ、約１６，５００ｋＤａ、約１７，０００ｋＤａ、約１７，５００ｋＤａ、約１８，０００ｋＤａ、約１８，５００ｋＤａ、約１９，０００ｋＤａ、約１９，５００ｋＤａまたは約２０，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0822】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0823】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0824】

糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。ある実施形態では、前記血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0825】

本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．４～２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．５～１．０、１．０～１．５、１．０～２．０である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．７～０．９である。

【0826】

本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0827】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１５Ａ莢膜多糖を含む。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１５Ａ莢膜多糖を含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１５Ａ莢膜多糖を含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型１５Ａ莢膜多糖を含む。

【0828】

血清型１５Ａ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、上記のように、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。

【0829】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートの少なくとも２０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫｄを有する。別の実施形態では、免疫原性コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫｄを有する。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートの少なくとも７０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0830】

ある実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲートの４０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲートの５０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0831】

さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0832】

別の実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。さらに別の実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。さらに別の実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0833】

ある実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。さらに別の実施形態では、血清型１５Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。ある実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0834】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0835】

本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。

【0836】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ａ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～５である。

【0837】

１．３．６肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された多糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0838】

【0839】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質との還元を含む。

【0840】

好ましくは、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型１５Ｂ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる（上のセクション１．２．６を参照されたい）。

【0841】

酸化ステップは、過ヨウ素酸塩との反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、血清型１５Ｂ莢膜多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型１５Ｂ莢膜多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0842】

【0843】

【0844】

【0845】

【0846】

【0847】

【0848】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬの単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖と、０．２～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩とを、２０℃～２５℃の温度で反応させることによって得られる。

【0849】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、精製される。活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された莢膜多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0850】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の酸化度は、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、または１５～２０である。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１２、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、または１８～２０である。

【0851】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有する。

【0852】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0853】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0854】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0855】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0856】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0857】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0858】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、凍結乾燥された活性化された莢膜多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合することができる。

【0859】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0860】

活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖を、
（ａ）活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖と、担体タンパク質とを混合するステップ、および
（ｂ）混合された活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１５Ｂ莢膜多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0861】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下する水性溶液中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。別の実施形態では、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0862】

ある実施形態では、ステップ（ａ）は、担体タンパク質およびＤＭＳＯを含む溶液中に、凍結乾燥された血清型１５Ｂ莢膜多糖を溶解することを含む。ある実施形態では、ステップ（ａ）は、ＤＭＳＯ中に、同時凍結乾燥された血清型１５Ｂ莢膜多糖および担体タンパク質を溶解することを含む。

【0863】

【0864】

ある実施形態では、ステップ（ｂ）における活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、または０．５ｍｇ／ｍＬから２ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、ステップ（ｂ）における活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の濃度は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９または３．０ｍｇ／ｍＬである。

【0865】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比（重量／重量）は、５：１～０．１：１、２：１～０．１：１、２：１～１：１、１．５：１～１：１、０．１：１～１：１、０．３：１～１：１、または０．６：１～１：１である。

【0866】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．６：１～１：１である。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．６：１～１．５：１である。そのような初期入力比は、糖コンジュゲート中の低レベルの遊離多糖を得るのに特に好適である。

【0867】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１または２：１である。

【0868】

【0869】

【0870】

【0871】

【0872】

ある実施形態では、担体タンパク質に共有的に連結された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ莢膜多糖を含む糖コンジュゲートの調製のためのプロセスは、ＮａＢＨ_４の添加によって未反応のアルデヒドを捕捉する（クエンチングする）ステップ（ステップ（ｃ））をさらに含む。

【0873】

さらに別の実施形態では、ステップ（ｃ）において使用されるＮａＢＨ_４の量は、約０．１～１０モル当量、０．５～５．０モル当量、または１．０～３．０モル当量である。さらに別の実施形態では、ステップ（ｃ）において使用されるＮａＢＨ_４の量は、約２．０モル当量である。

【0874】

別の実施形態では、ステップ（ｃ）の持続期間は、０．１時間～１０時間、０．５時間～５時間、または２時間～４時間である。ある実施形態では、ステップ（ｂ）の持続期間は、約３時間である。

【0875】

【0876】

別の実施形態では、コンジュゲーションステップの収率は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｂ）の収率は、６０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｂ）の収率は、７０％よりも高い。収率は、（コンジュゲート中の血清型１５Ｂ多糖の量／コンジュゲーションステップにおいて使用される活性化された多糖の量）ｘ１００である。

【0877】

ある実施形態では、担体タンパク質に共有的に連結された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ莢膜多糖を含む糖コンジュゲートの調製のためのプロセスは、
（ａ）高圧ホモジェナイゼーションによって精製された血清型１５Ｂ多糖をサイジングするステップ；
（ｂ）サイジングされた血清型１５Ｂ多糖と、酸化剤とを反応させるステップ；
（ｃ）活性化された血清型１５Ｂ多糖と、担体タンパク質とを混合するステップ；
（ｄ）混合された活性化された血清型１５Ｂ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１５Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ；ならびに
（ｅ）ＮａＢＨ_４の添加によって未反応のアルデヒドを捕捉する（クエンチングする）ステップ
を含む。

【0878】

さらに別の実施形態では、上記プロセスのコンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％よりも高い。別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、６０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、７０％よりも高い。収率は、（コンジュゲート中の血清型１５Ｂ多糖の量／コンジュゲーションステップにおいて使用される活性化された多糖の量）ｘ１００である。

【0879】

血清型１５Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、多糖－タンパク質コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過、沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0880】

【0881】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）にコンジュゲートされ、５ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００～２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；または２００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ～１６，０００ｋＤａまたは１０，０００ｋＤａ～１６，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0882】

１つまたは複数のさらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、約１，０００ｋＤａ、約１，５００ｋＤａ、約２，０００ｋＤａ、約２，５００ｋＤａ、約３，０００ｋＤａ、約３，５００ｋＤａ、約４，０００ｋＤａ、約４，５００ｋＤａ、約５，０００ｋＤａ、約５，５００ｋＤａ、約６，０００ｋＤａ、約６，５００ｋＤａ、約７，０００ｋＤａ、約７，５００ｋＤａ、約８，０００ｋＤａ、約８，５００ｋＤａ、約９，０００ｋＤａ、約９，５００ｋＤａ、約１０，０００ｋＤａ、約１０，５００ｋＤａ、約１１，０００ｋＤａ、約１１，５００ｋＤａ、約１２，０００ｋＤａ、約１２，５００ｋＤａ、約１３，０００ｋＤａ、約１３，５００ｋＤａ、約１４，０００ｋＤａ、約１４，５００ｋＤａ、約１５，０００ｋＤａ、約１５，５００ｋＤａ、約１６，０００ｋＤａ、約１６，５００ｋＤａ、約１７，０００ｋＤａ、約１７，５００ｋＤａ、約１８，０００ｋＤａ、約１８，５００ｋＤａ、約１９，０００ｋＤａ、約１９，５００ｋＤａまたは約２０，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0883】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0884】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0885】

糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。ある実施形態では、前記血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0886】

本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．４～２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．５～１．０、１．０～１．５、１．０～２．０である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．７～０．９である。

【0887】

本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0888】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１５Ｂ莢膜多糖を含む。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１５Ｂ莢膜多糖を含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１５Ｂ莢膜多糖を含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型１５Ｂ莢膜多糖を含む。

【0889】

血清型１５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、上記のように、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。

【0890】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも２０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫｄを有する。別の実施形態では、免疫原性コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫｄを有する。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも７０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0891】

ある実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの４０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0892】

さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0893】

別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。さらに別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。さらに別の実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0894】

ある実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。さらに別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。ある実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0895】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0896】

本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。

【0897】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～５である。

【0898】

１．３．７肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された多糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0899】

【0900】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質との還元を含む。

【0901】

好ましくは、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型１５Ｃ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１５Ｃ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ｃ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる（上のセクション１．２．６を参照されたい）。

【0902】

酸化ステップは、過ヨウ素酸塩との反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、血清型１５Ｃ莢膜多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型１５Ｃ莢膜多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0903】

【0904】

【0905】

【0906】

【0907】

【0908】

【0909】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬの単離された血清型１５Ｃ莢膜多糖と、０．２～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩とを、２０℃～２５℃の温度で反応させることによって得られる。

【0910】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、精製される。活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された莢膜多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0911】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の酸化度は、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、または１５～２０である。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１２、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、または１８～２０である。

【0912】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有する。

【0913】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0914】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0915】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0916】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0917】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0918】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。

【0919】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、凍結乾燥された活性化された莢膜多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合することができる。

【0920】

別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0921】

活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖を、
（ａ）活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖と、担体タンパク質とを混合するステップ、および
（ｂ）混合された活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１５Ｃ莢膜多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0922】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下する水性溶液中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。別の実施形態では、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0923】

ある実施形態では、ステップ（ａ）は、担体タンパク質およびＤＭＳＯを含む溶液中に、凍結乾燥された血清型１５Ｃ莢膜多糖を溶解することを含む。ある実施形態では、ステップ（ａ）は、ＤＭＳＯ中に、同時凍結乾燥された血清型１５Ｃ莢膜多糖および担体タンパク質を溶解することを含む。

【0924】

【0925】

ある実施形態では、ステップ（ｂ）における活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、または０．５ｍｇ／ｍＬから２ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、ステップ（ｂ）における活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の濃度は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９または３．０ｍｇ／ｍＬである。

【0926】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比（重量／重量）は、５：１～０．１：１、２：１～０．１：１、２：１～１：１、１．５：１～１：１、０．１：１～１：１、０．３：１～１：１、または０．６：１～１：１である。

【0927】

さらに別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．６：１～１：１である。別の実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．６：１～１．５：１である。そのような初期入力比は、糖コンジュゲート中の低レベルの遊離多糖を得るのに特に好適である。

【0928】

ある実施形態では、活性化された血清型１５Ｃ莢膜多糖の、担体タンパク質に対する初期入力比は、約０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１または２：１である。

【0929】

【0930】

【0931】

【0932】

【0933】

ある実施形態では、担体タンパク質に共有的に連結された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ莢膜多糖を含む糖コンジュゲートの調製のためのプロセスは、ＮａＢＨ_４の添加によって未反応のアルデヒドを捕捉する（クエンチングする）ステップ（ステップ（ｃ））をさらに含む。

【0934】

【0935】

【0936】

【0937】

別の実施形態では、コンジュゲーションステップの収率は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｂ）の収率は、６０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｂ）の収率は、７０％よりも高い。収率は、（コンジュゲート中の血清型１５Ｃ多糖の量／コンジュゲーションステップにおいて使用される活性化された多糖の量）ｘ１００である。

【0938】

ある実施形態では、担体タンパク質に共有的に連結された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ莢膜多糖を含む糖コンジュゲートの調製のためのプロセスは、
（ａ）高圧ホモジェナイゼーションによって精製された血清型１５Ｃ多糖をサイジングするステップ；
（ｂ）サイジングされた血清型１５Ｃ多糖と、酸化剤とを反応させるステップ；
（ｃ）活性化された血清型１５Ｃ多糖と、担体タンパク質とを混合するステップ；
（ｄ）混合された活性化された血清型１５Ｃ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１５Ｃ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ；ならびに
（ｅ）ＮａＢＨ_４の添加によって未反応のアルデヒドを捕捉する（クエンチングする）ステップ
を含む。

【0939】

さらに別の実施形態では、上記プロセスのコンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％よりも高い。別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、６０％よりも高い。さらに別の実施形態では、コンジュゲーションステップ（ステップｄ）の収率は、７０％よりも高い。収率は、（コンジュゲート中の血清型１５Ｃ多糖の量／コンジュゲーションステップにおいて使用される活性化された多糖の量）ｘ１００である。

【0940】

血清型１５Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、多糖－タンパク質コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過、沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0941】

【0942】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）にコンジュゲートされ、５ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００～２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；または２００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ～１６，０００ｋＤａまたは１０，０００ｋＤａ～１６，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0943】

１つまたは複数のさらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、約１，０００ｋＤａ、約１，５００ｋＤａ、約２，０００ｋＤａ、約２，５００ｋＤａ、約３，０００ｋＤａ、約３，５００ｋＤａ、約４，０００ｋＤａ、約４，５００ｋＤａ、約５，０００ｋＤａ、約５，５００ｋＤａ、約６，０００ｋＤａ、約６，５００ｋＤａ、約７，０００ｋＤａ、約７，５００ｋＤａ、約８，０００ｋＤａ、約８，５００ｋＤａ、約９，０００ｋＤａ、約９，５００ｋＤａ、約１０，０００ｋＤａ、約１０，５００ｋＤａ、約１１，０００ｋＤａ、約１１，５００ｋＤａ、約１２，０００ｋＤａ、約１２，５００ｋＤａ、約１３，０００ｋＤａ、約１３，５００ｋＤａ、約１４，０００ｋＤａ、約１４，５００ｋＤａ、約１５，０００ｋＤａ、約１５，５００ｋＤａ、約１６，０００ｋＤａ、約１６，５００ｋＤａ、約１７，０００ｋＤａ、約１７，５００ｋＤａ、約１８，０００ｋＤａ、約１８，５００ｋＤａ、約１９，０００ｋＤａ、約１９，５００ｋＤａまたは約２０，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0944】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0945】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0946】

糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。ある実施形態では、前記血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0947】

本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．４～２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．５～１．０、１．０～１．５、１．０～２．０である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．７～０．９である。

【0948】

本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【0949】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１５Ｃ莢膜多糖を含む。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１５Ｃ莢膜多糖を含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１５Ｃ莢膜多糖を含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型１５Ｃ莢膜多糖を含む。

【0950】

血清型１５Ｃ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、上記のように、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。

【0951】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも２０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫｄを有する。別の実施形態では、免疫原性コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫｄを有する。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの少なくとも７０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0952】

ある実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの４０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの５０％～９０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【0953】

さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。さらに別の実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0954】

別の実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。さらに別の実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。さらに別の実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0955】

ある実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。別の実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。さらに別の実施形態では、血清型１５Ｃ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。ある実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。

【0956】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。さらに別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｃ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。

【0957】

本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。

【0958】

ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。別の実施形態では、本発明の血清型１５Ｃ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～５である。

【0959】

１．３．８肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【0960】

【0961】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【0962】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型１６Ｆ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１６Ｆ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型１６Ｆ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【0963】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型１６Ｆ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１６Ｆ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【0964】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型１６Ｆ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型１６Ｆ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【0965】

【0966】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【0967】

【化8】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【0968】

【0969】

【0970】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【0971】

【0972】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【0973】

【化9】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【0974】

【0975】

別の実施形態では、単離された血清型１６Ｆ多糖は、
（ａ）単離された血清型１６Ｆ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１６Ｆ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【0976】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【0977】

ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、精製される。活性化された血清型１６Ｆ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された１６Ｆ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【0978】

別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【0979】

ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【0980】

別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0981】

ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0982】

ある実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【0983】

【0984】

別の実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【0985】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１６Ｆ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【0986】

【0987】

活性化された血清型１６Ｆ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型１６Ｆ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型１６Ｆ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１６Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【0988】

【0989】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１６Ｆ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【0990】

【0991】

【0992】

血清型１６Ｆ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【0993】

一部の実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【0994】

一部の実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0995】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【0996】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【0997】

【0998】

ある実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【0999】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1000】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１６Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1001】

本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1002】

本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１６Ｆ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１６Ｆ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1003】

本発明の血清型１６Ｆ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1004】

ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１６Ｆ多糖を含む。別の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型１６Ｆ多糖を含む。ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１６Ｆ多糖を含む。ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１６Ｆ多糖を含む。別の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１６Ｆ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型１６Ｆ多糖を含む。

【1005】

血清型１６Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1006】

ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１６Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1007】

１．３．９肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1008】

【1009】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1010】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型１７Ｆ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型１７Ｆ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型１７Ｆ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1011】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型１７Ｆ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１７Ｆ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1012】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型１７Ｆ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型１７Ｆ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1013】

【1014】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1015】

【化10】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1016】

【1017】

【1018】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1019】

【1020】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1021】

【化11】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1022】

【1023】

別の実施形態では、単離された血清型１７Ｆ多糖は、
（ａ）単離された血清型１７Ｆ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１７Ｆ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1024】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1025】

ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、精製される。活性化された血清型１７Ｆ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された１７Ｆ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1026】

別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1027】

ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1028】

別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1029】

ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1030】

ある実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1031】

【1032】

別の実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1033】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１７Ｆ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1034】

【1035】

活性化された血清型１７Ｆ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型１７Ｆ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型１７Ｆ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型１７Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1036】

【1037】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１７Ｆ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1038】

【1039】

【1040】

血清型１７Ｆ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1041】

一部の実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1042】

一部の実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1043】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1044】

さらなる実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1045】

【1046】

ある実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1047】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1048】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型１７Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1049】

本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1050】

本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１７Ｆ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型１７Ｆ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1051】

本発明の血清型１７Ｆ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1052】

ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１７Ｆ多糖を含む。別の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型１７Ｆ多糖を含む。ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１７Ｆ多糖を含む。ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１７Ｆ多糖を含む。別の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１７Ｆ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型１７Ｆ多糖を含む。

【1053】

血清型１７Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1054】

ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型１７Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1055】

１．３．１０肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1056】

【1057】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1058】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型２０多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型２０多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型２０多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1059】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型２０多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２０多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1060】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型２０多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型２０多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1061】

【1062】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1063】

【化12】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1064】

【1065】

【1066】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1067】

【1068】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1069】

【化13】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1070】

【1071】

別の実施形態では、単離された血清型２０多糖は、
（ａ）単離された血清型２０多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２０多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1072】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1073】

ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、精製される。活性化された血清型２０多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された２０多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1074】

別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1075】

ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1076】

別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1077】

ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1078】

ある実施形態では、活性化された血清型２０多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1079】

【1080】

別の実施形態では、活性化された血清型２０多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1081】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型２０多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1082】

【1083】

活性化された血清型２０多糖を、
（ｃ）活性化された血清型２０多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型２０多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型２０多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1084】

【1085】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型２０多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1086】

【1087】

【1088】

血清型２０多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1089】

一部の実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1090】

一部の実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1091】

さらなる実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1092】

さらなる実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1093】

【1094】

ある実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートは、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２０多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1095】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1096】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２０多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1097】

本発明の血清型２０糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型２０糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1098】

本発明の血清型２０糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２０多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型２０莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1099】

本発明の血清型２０糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1100】

ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、血清型２０多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２０多糖を含む。別の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、血清型２０多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型２０多糖を含む。ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、血清型２０多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型２０多糖を含む。ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、血清型２０多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型２０多糖を含む。別の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートは、血清型２０多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型２０多糖を含む。

【1101】

血清型２０糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1102】

ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型２０糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1103】

１．３．１１肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1104】

【1105】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1106】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型２３Ａ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型２３Ａ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型２３Ａ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1107】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型２３Ａ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２３Ａ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1108】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型２３Ａ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型２３Ａ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1109】

【1110】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1111】

【化14】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1112】

【1113】

【1114】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1115】

【1116】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1117】

【化15】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1118】

【1119】

別の実施形態では、単離された血清型２３Ａ多糖は、
（ａ）単離された血清型２３Ａ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２３Ａ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1120】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1121】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、精製される。活性化された血清型２３Ａ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された２３Ａ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1122】

別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1123】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1124】

別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1125】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1126】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1127】

【1128】

別の実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1129】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型２３Ａ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1130】

【1131】

活性化された血清型２３Ａ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型２３Ａ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型２３Ａ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型２３Ａ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1132】

【1133】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型２３Ａ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1134】

【1135】

【1136】

血清型２３Ａ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1137】

一部の実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1138】

一部の実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1139】

さらなる実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1140】

さらなる実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1141】

【1142】

ある実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1143】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1144】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２３Ａ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1145】

本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1146】

本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型２３Ａ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1147】

本発明の血清型２３Ａ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1148】

ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２３Ａ多糖を含む。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型２３Ａ多糖を含む。ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型２３Ａ多糖を含む。ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型２３Ａ多糖を含む。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型２３Ａ多糖を含む。

【1149】

血清型２３Ａ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1150】

ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型２３Ａ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1151】

１．３．１２肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1152】

【1153】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1154】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型２３Ｂ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型２３Ｂ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型２３Ｂ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1155】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型２３Ｂ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２３Ｂ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1156】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型２３Ｂ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型２３Ｂ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1157】

【1158】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1159】

【化16】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1160】

【1161】

【1162】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1163】

【1164】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1165】

【化17】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1166】

【1167】

別の実施形態では、単離された血清型２３Ｂ多糖は、
（ａ）単離された血清型２３Ｂ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２３Ｂ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1168】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1169】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、精製される。活性化された血清型２３Ｂ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された２３Ｂ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1170】

別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1171】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1172】

別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1173】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1174】

ある実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1175】

【1176】

別の実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1177】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型２３Ｂ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1178】

【1179】

活性化された血清型２３Ｂ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型２３Ｂ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型２３Ｂ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型２３Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1180】

【1181】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型２３Ｂ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1182】

【1183】

【1184】

血清型２３Ｂ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1185】

一部の実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1186】

一部の実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1187】

さらなる実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1188】

さらなる実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1189】

【1190】

ある実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1191】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1192】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型２３Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1193】

本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1194】

本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ｂ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型２３Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1195】

本発明の血清型２３Ｂ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1196】

ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２３Ｂ多糖を含む。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型２３Ｂ多糖を含む。ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型２３Ｂ多糖を含む。ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型２３Ｂ多糖を含む。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型２３Ｂ多糖を含む。

【1197】

血清型２３Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1198】

ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型２３Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1199】

１．３．１３肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1200】

【1201】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1202】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型３１多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型３１多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型３１多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1203】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型３１多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３１多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1204】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型３１多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型３１多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1205】

【1206】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1207】

【化18】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1208】

【1209】

【1210】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1211】

【1212】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1213】

【化19】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1214】

【1215】

別の実施形態では、単離された血清型３１多糖は、
（ａ）単離された血清型３１多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３１多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1216】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1217】

ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、精製される。活性化された血清型３１多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された３１多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1218】

別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1219】

ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1220】

別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1221】

ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1222】

ある実施形態では、活性化された血清型３１多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1223】

【1224】

別の実施形態では、活性化された血清型３１多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1225】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型３１多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1226】

【1227】

活性化された血清型３１多糖を、
（ｃ）活性化された血清型３１多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型３１多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型３１多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1228】

【1229】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型３１多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1230】

【1231】

【1232】

血清型３１多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1233】

一部の実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1234】

一部の実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1235】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1236】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1237】

【1238】

ある実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートは、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３１多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1239】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1240】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３１多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1241】

本発明の血清型３１糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型３１糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1242】

本発明の血清型３１糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３１多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型３１莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1243】

本発明の血清型３１糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1244】

ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、血清型３１多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３１多糖を含む。別の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、血清型３１多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型３１多糖を含む。ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、血清型３１多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３１多糖を含む。ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、血清型３１多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３１多糖を含む。別の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートは、血清型３１多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型３１多糖を含む。

【1245】

血清型３１糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1246】

ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３１糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1247】

１．３．１４肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1248】

【1249】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1250】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型３４多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型３４多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型３４多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1251】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型３４多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３４多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1252】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型３４多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型３４多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1253】

【1254】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1255】

【化20】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1256】

【1257】

【1258】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1259】

【1260】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1261】

【化21】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1262】

【1263】

別の実施形態では、単離された血清型３４多糖は、
（ａ）単離された血清型３４多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３４多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1264】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1265】

ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、精製される。活性化された血清型３４多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された血清型３４多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1266】

別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1267】

ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1268】

別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1269】

ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1270】

ある実施形態では、活性化された血清型３４多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1271】

【1272】

別の実施形態では、活性化された血清型３４多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1273】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型３４多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1274】

【1275】

活性化された血清型３４多糖を、
（ｃ）活性化された血清型３４多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型３４多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型３４多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1276】

【1277】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型３４多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1278】

【1279】

【1280】

血清型３４多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1281】

一部の実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1282】

一部の実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1283】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1284】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1285】

【1286】

ある実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートは、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３４多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1287】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1288】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３４多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1289】

本発明の血清型３４糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型３４糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1290】

本発明の血清型３４糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３４多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型３４莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1291】

本発明の血清型３４糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1292】

ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、血清型３４多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３４多糖を含む。別の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、血清型３４多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型３４多糖を含む。ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、血清型３４多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３４多糖を含む。ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、血清型３４多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３４多糖を含む。別の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートは、血清型３４多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型３４多糖を含む。

【1293】

血清型３４糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1294】

ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３４糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1295】

１．３．１５肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1296】

【1297】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1298】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型３５Ｂ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型３５Ｂ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型３５Ｂ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1299】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型３５Ｂ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３５Ｂ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1300】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型３５Ｂ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型３５Ｂ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1301】

【1302】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1303】

【化22】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1304】

【1305】

【1306】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1307】

【1308】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1309】

【化23】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1310】

【1311】

別の実施形態では、単離された血清型３５Ｂ多糖は、
（ａ）単離された血清型３５Ｂ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３５Ｂ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1312】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1313】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、精製される。活性化された血清型３５Ｂ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された３５Ｂ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1314】

別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1315】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1316】

別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1317】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1318】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1319】

【1320】

別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1321】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型３５Ｂ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1322】

【1323】

活性化された血清型３５Ｂ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型３５Ｂ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型３５Ｂ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型３５Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1324】

【1325】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型３５Ｂ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1326】

【1327】

【1328】

血清型３５Ｂ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1329】

一部の実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1330】

一部の実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1331】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1332】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1333】

【1334】

ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1335】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1336】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1337】

本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1338】

本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｂ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型３５Ｂ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1339】

本発明の血清型３５Ｂ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1340】

ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３５Ｂ多糖を含む。別の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型３５Ｂ多糖を含む。ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３５Ｂ多糖を含む。ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３５Ｂ多糖を含む。別の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型３５Ｂ多糖を含む。

【1341】

血清型３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1342】

ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1343】

１．３．１６肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1344】

【1345】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1346】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型３５Ｆ多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型３５Ｆ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型３５Ｆ多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1347】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型３５Ｆ多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３５Ｆ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1348】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型３５Ｆ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型３５Ｆ多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1349】

【1350】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1351】

【化24】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1352】

【1353】

【1354】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1355】

【1356】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1357】

【化25】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1358】

【1359】

別の実施形態では、単離された血清型３５Ｆ多糖は、
（ａ）単離された血清型３５Ｆ多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３５Ｆ多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1360】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1361】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、精製される。活性化された血清型３５Ｆ多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された３５Ｆ多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1362】

別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1363】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1364】

別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1365】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1366】

ある実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1367】

【1368】

別の実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1369】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型３５Ｆ多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1370】

【1371】

活性化された血清型３５Ｆ多糖を、
（ｃ）活性化された血清型３５Ｆ多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型３５Ｆ多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型３５Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1372】

【1373】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型３５Ｆ多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1374】

【1375】

【1376】

血清型３５Ｆ多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1377】

一部の実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1378】

一部の実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1379】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1380】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1381】

【1382】

ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1383】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1384】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３５Ｆ多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1385】

本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1386】

本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３５Ｆ多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型３５Ｆ莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1387】

本発明の血清型３５Ｆ糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1388】

ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３５Ｆ多糖を含む。別の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型３５Ｆ多糖を含む。ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３５Ｆ多糖を含む。ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３５Ｆ多糖を含む。別の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｆ多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型３５Ｆ多糖を含む。

【1389】

血清型３５Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1390】

ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３５Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1391】

１．３．１７肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の糖コンジュゲート
ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて多糖を活性化して、シアン酸エステルを形成させることによって得られる。活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、ＳＩＢ、ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、もしくはＳＢＡＰを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってもよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製されてもよい）は、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングされ、アミノ誘導体化された糖は、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。

【1392】

【1393】

１つまたは複数の実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。還元的アミノ化は、２つのステップ：（１）個々の６糖単位中の隣接ジオールからアルデヒド官能基を生成するための多糖の酸化および（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された多糖と担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）との還元を含む。

【1394】

ある実施形態では、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への血清型３８多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型３８多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。ある実施形態では、精製された血清型３８多糖のサイズを、本明細書に記載の機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。

【1395】

ある実施形態では、血清型多糖は、
（ａ）単離された血清型３８多糖を、酸化剤と反応させるステップ；および
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３８多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）される。

【1396】

ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ_４ ^－）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ_６ ^５－）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、血清型３８多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。別の実施形態では、血清型３８多糖の酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。

【1397】

【1398】

一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：

【1399】

【化26】

（式中、Ｒ^１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。

【1400】

【1401】

【1402】

一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。

【1403】

【1404】

１つまたは複数の実施形態では、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：

【1405】

【化27】

（式中、Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。

【1406】

【1407】

別の実施形態では、単離された血清型３８多糖は、
（ａ）単離された血清型３８多糖と過ヨウ素酸塩とを反応させるステップ；および
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３８多糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化される。

【1408】

多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されると言われ、本明細書では「活性化された多糖」と称される。

【1409】

ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、精製される。活性化された血清型３８多糖は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者に公知の方法に従って精製される。例えば、活性化された３８多糖は、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製される。

【1410】

別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。

【1411】

ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。

【1412】

別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1413】

ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有し、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1414】

ある実施形態では、活性化された血清型３８多糖は、４００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量、１２～２０の酸化度を有し、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。

【1415】

【1416】

別の実施形態では、活性化された血清型３８多糖を、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された多糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。

【1417】

別の実施形態では、活性化された多糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型３８多糖を、担体タンパク質と混合し、必要に応じて、糖の存在下で凍結乾燥する。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットから選択される。ある実施形態では、糖は、スクロースである。次いで、同時凍結乾燥された多糖と担体タンパク質とを、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。

【1418】

【1419】

活性化された血清型３８多糖を、
（ｃ）活性化された血清型３８多糖と担体タンパク質とを混合するステップ；および
（ｄ）混合された活性化された血清型３８多糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、血清型３８多糖－担体タンパク質コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって、担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。

【1420】

【1421】

ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型３８多糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、多糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低下し得る水相中での還元的アミノ化と比較して、多糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、１つまたは複数の実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。

【1422】

【1423】

【1424】

血清型３８多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技術によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。

【1425】

一部の実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する糖を含む。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～１０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。一部のそのような実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。

【1426】

一部の実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1427】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。

【1428】

さらなる実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。

【1429】

【1430】

ある実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートは、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。ある実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。別の実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３８多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。

【1431】

別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、単離された多糖中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1432】

ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９または０．９５である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．７である。別の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭの、活性化された多糖中の血清型３８多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭに対する比は、少なくとも０．９である。

【1433】

本発明の血清型３８糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされるようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ_１９７）中のリシン残基の数によるものである。多糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン修飾に関する証拠を、当業者に公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用されるＣＲＭ_１９７タンパク質出発材料と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。ある実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。ある実施形態では、本発明の血清型３８糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1434】

本発明の血清型３８糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３８多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。ある実施形態では、コンジュゲート中の血清型３８莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ_１９７である。

【1435】

本発明の血清型３８糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有的に会合していてもよい（すなわち、非共有的に結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。

【1436】

ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、血清型３８多糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３８多糖を含む。別の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、血清型３８多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型３８多糖を含む。ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、血清型３８多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３８多糖を含む。ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、血清型３８多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３８多糖を含む。別の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートは、血清型３８多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型３８多糖を含む。

【1437】

血清型３８糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋ_ｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、小さい分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋ_ｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ_０）、（Ｋ_ｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖ_ｉ）、（Ｋ_ｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料属性に達する画分（Ｖ_ｅ）を、式Ｋ_ｄ＝（Ｖ_ｅ－Ｖ_０）／（Ｖ_ｉ－Ｖ_０）によってＫ_ｄと関連付ける。

【1438】

ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。別の実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。ある実施形態では、血清型３８糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より低い、またはそれに等しいＫ_ｄを有する。

【1439】

２．本発明の免疫原性組成物
ある実施形態では、免疫原性組成物の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖の数は、１個の血清型（または「ｖ」、価）～１６個の異なる血清型（１６ｖ）の範囲であり得る。一実施形態では、１個の血清型が存在する。別の実施形態では、２個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、３個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、
４個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、５個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、６個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、７個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、８個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、９個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１０個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１１個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１２個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１３個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１４個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１５個の異なる血清型が存在する。別の実施形態では、１６個の異なる血清型が存在する。莢膜糖は担体タンパク質にコンジュゲートされて、本明細書に記載の糖コンジュゲートを形成する。

【1440】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の糖コンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。そのような糖コンジュゲートとしては、上記セクション１．３．２から１．３．１７に記載のものが挙げられる。

【1441】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、以下からなる群から選択される２つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む：６Ｃおよび７Ｃ、６Ｃおよび９Ｎ、６Ｃおよび１５Ａ、６Ｃおよび１５Ｂ、６Ｃおよび１５Ｃ、６Ｃおよび１６Ｆ、６Ｃおよび１７Ｆ、６Ｃおよび２０、６Ｃおよび２３Ａ、６Ｃおよび２３Ｂ、６Ｃおよび３１、６Ｃおよび３４、６Ｃおよび３５Ｂ、６Ｃおよび３５Ｆ、６Ｃおよび３８、７Ｃおよび９Ｎ、７Ｃおよび１５Ａ、７Ｃおよび１５Ｂ、７Ｃおよび１５Ｃ、７Ｃおよび１６Ｆ、７Ｃおよび１７Ｆ、７Ｃおよび２０、７Ｃおよび２３Ａ、７Ｃおよび２３Ｂ、７Ｃおよび３１、７Ｃおよび３４、７Ｃおよび３５Ｂ、７Ｃおよび３５Ｆ、７Ｃおよび３８、９Ｎおよび１５Ａ、９Ｎおよび１５Ｂ、９Ｎおよび１５Ｃ、９Ｎおよび１６Ｆ、９Ｎおよび１７Ｆ、９Ｎおよび２０、９Ｎおよび２３Ａ、９Ｎおよび２３Ｂ、９Ｎおよび３１、９Ｎおよび３４、９Ｎおよび３５Ｂ、９Ｎおよび３５Ｆ、９Ｎおよび３８、１５Ａおよび１６Ｆ、１５Ａおよび１７Ｆ、１５Ａおよび２０、１５Ａおよび２３Ａ、１５Ａおよび２３Ｂ、１５Ａおよび３１、１５Ａおよび３４、１５Ａおよび３５Ｂ、１５Ａおよび３５Ｆ、１５Ａおよび３８、１５Ｂおよび１６Ｆ、１５Ｂおよび１７Ｆ、１５Ｂおよび２０、１５Ｂおよび２３Ａ、１５Ｂおよび２３Ｂ、１５Ａおよび３１、１５Ａおよび３４、１５Ａおよび３５Ｂ、１５Ａおよび３５Ｆ、１５Ｂおよび３８、１５Ｃおよび１６Ｆ、１５Ｃおよび１７Ｆ、１５Ｃおよび２０、１５Ｃおよび２３Ａ、１５Ｃおよび２３Ｂ、１５Ｃおよび３１、１５Ｃおよび３４、１５Ｃおよび３５Ｂ、１５Ｃおよび３５Ｆ、１５Ｃおよび３８、１６Ｆおよび１７Ｆ、１６Ｆおよび２０、１６Ｆおよび２３Ａ、１６Ｆおよび２３Ｂ、１６Ｆおよび３１、１６Ｆおよび３４、１６Ｆおよび３５Ｂ、１６Ｆおよび３５Ｆ、１６Ｆおよび３８、１７Ｆおよび２０、１７Ｆおよび２３Ａ、１７Ｆおよび２３Ｂ、１７Ｆおよび３１、１７Ｆおよび３４、１７Ｆおよび３５Ｂ、１７Ｆおよび３５Ｆ、１７Ｆおよび３８、２０および２３Ａ、２０および２３Ｂ、２０および３１、２０および３４、２０および３５Ｂ、２０および３５Ｆ、２０および３８、２３Ａおよび３１、２３Ａおよび３４、２３Ａおよび３５Ｂ、２３Ａおよび３５Ｆ、２３Ａおよび３８、２３Ｂおよび３１、２３Ｂおよび３４、２３Ｂおよび３５Ｂ、２３Ｂおよび３５Ｆ、２３Ｂおよび３８、３１および３４、３１および３５Ｂ、３１および３５Ｆ、３１および３８、３４および３５Ｂ、３４および３５Ｆ、３４および３８、３５Ｂおよび３８、ならびに３５Ｆおよび３８。

【1442】

上記免疫原性組成物のすべての糖コンジュゲートは、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされていてもよい。

【1443】

本明細書における免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。

【1444】

上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にすべて個別にコンジュゲートされている。

【1445】

本明細書における免疫原性組成物のいずれかの別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートは、ＰＤにすべて個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートは、ＴＴにすべて個別にコンジュゲートされている。さらに別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートは、ＤＴにすべて個別にコンジュゲートされている。

【1446】

本明細書における免疫原性組成物のいずれかの別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８由来の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。

【1447】

上記免疫原性組成物のいずれかの別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＤＴに個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のその他の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＴＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲート少なくとも１つは、ＴＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＤＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。

【1448】

上記免疫原性組成物のいずれかの別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のその他の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＤＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＴＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。

【1449】

ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１～１６個の異なる血清型を含む。一実施形態では、上記免疫原性組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【1450】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来のコンジュゲート化肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖を含む。

【1451】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物の糖コンジュゲートは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃ、７Ｃ、９Ｎ、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、３１、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８由来の糖コンジュゲートからなる。

【1452】

ある実施形態では、本発明のすべての免疫原性組成物の糖コンジュゲートは、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされている。

【1453】

ある実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。ある実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。ある実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。ある実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。

【1454】

ある実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＤＴに個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のその他の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＴＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＴＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＤＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。

【1455】

別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来のその他の糖コンジュゲートは、ＤＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＴＴに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＤＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＴＴに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。別の実施形態では、免疫原性組成物の糖コンジュゲートの少なくとも１つは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、その他の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートされている。

【1456】

莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲートション後、様々な技法によって糖コンジュゲートを精製する（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化させる）。これらの技法としては、濃縮／透析濾過操作、沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー、および深層濾過が挙げられる（例えば、米国特許公開第２００７／０１８４０７２号またはＷＯ２００８／０７９６５３号を参照）。個々の糖コンジュゲートを精製した後、これらを配合して本発明の免疫原性組成物を製剤化する。

【1457】

ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、他の病原体由来、特に本明細書に開示される細菌および／またはウイルス由来の抗原をさらに含む。

【1458】

ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、本明細書に開示される１つまたは複数のアジュバントをさらに含む。

【1459】

ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、本明細書に開示されるように製剤化される。

【1460】

３．本発明の免疫原性組成物と組み合わせて使用し得る免疫原性組成物
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、第２の免疫原性組成物と組み合わせて使用する。

【1461】

ある実施形態では、第２の免疫原性組成物は、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆ、および３３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。

【1462】

ある実施形態では、第２の免疫原性組成物は、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。

【1463】

１．ある実施形態では、第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）。

【1464】

２．別の実施形態では、第２の免疫原性組成物は、上記１に加えて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）。

【1465】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物のすべての糖コンジュゲートは、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされている。

【1466】

上記第２の免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記第２の免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記第２の免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記第２の免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。

【1467】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。

【1468】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされている。

【1469】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされている。

【1470】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされている。

【1471】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物のいずれかの、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。

【1472】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７～１５個の異なる血清型を含む。一実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の異なる血清型由来の糖コンジュゲートを含む。一実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１０～１５個の異なる血清型由来の糖コンジュゲートを含む。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。

【1473】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は７価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記７個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の７個の糖コンジュゲートからなる。

【1474】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１０個のコンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ならびにＤＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1475】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１個のコンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1476】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１個のコンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1477】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１２個のコンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲート、ならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1478】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１３個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1479】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、および２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1480】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1481】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１５個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1482】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性物質の投薬量は以下に開示される通りである。

【1483】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、他の病原体由来、特に下記セクション６で開示されるものなどの細菌および／またはウイルス由来の抗原をさらに含む。

【1484】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、下記セクション７で開示される１つまたは複数のアジュバントをさらに含む。

【1485】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、下記セクション８で開示されるように製剤化される。

【1486】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物（上記セクション２のもののいずれかなど）を、ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ（登録商標））（７価ワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）（１０価ワクチン）、および／またはＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ１３（登録商標））（１３価ワクチン）と組み合わせて使用する。

【1487】

４．本発明のキット
ある態様では、本発明は、（ａ）上記セクション２で定義した第１の免疫原性組成物と、（ｂ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆ、および３３Ｆから選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む第２の免疫原性組成物とを含むキットを提供する。

【1488】

ある態様では、本発明は、（ａ）上記セクション２で定義した第１の免疫原性組成物と、（ｂ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆから選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む第２の免疫原性組成物とを含むキットを提供する。

【1489】

ある態様では、本発明は、（ａ）上記セクション２で定義した第１の免疫原性組成物と、（ｂ）上記セクション３で定義した第２の免疫原性組成物とを含むキットを提供する。

【1490】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む。

【1491】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む。

【1492】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）。

【1493】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）。

【1494】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ、および２２Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１および１．３．２の糖コンジュゲートなど）。

【1495】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１および１．３．３の糖コンジュゲートなど）。

【1496】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１、１．３．２、および１．３．３の糖コンジュゲートなど）。

【1497】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、および２２Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１および１．３．２の糖コンジュゲートなど）。

【1498】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１および１．３．３の糖コンジュゲートなど）。

【1499】

ある実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを含む（上記セクション１．３．１、１．３．２、および１．３．３の糖コンジュゲートなど）。

【1500】

キットの第２の免疫原性組成物のすべての糖コンジュゲートは、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされていてもよい。

【1501】

上記キットのいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記キットのいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記キットのいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。上記キットのいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。

【1502】

ある実施形態では、上記キットのいずれかの糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にすべて個別にコンジュゲートされている。

【1503】

別の実施形態では、上記キットのいずれかの、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされている。

【1504】

ある実施形態では、上記キットのいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされている。

【1505】

ある実施形態では、上記キットのいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされている。

【1506】

【1507】

ある実施形態では、上記キットのいずれかの、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートされている。

【1508】

【1509】

【1510】

【1511】

【1512】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１１個のコンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1513】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１２個のコンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＴＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲート、ＤＴにコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆ由来の糖コンジュゲート、ＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ由来の糖コンジュゲート、ならびにＣＲＭ_１９７にコンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1514】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１３個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1515】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、および２２Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1516】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１４個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1517】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物であり、前記１５個のコンジュゲートは、ＣＲＭ_１９７に個別にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。

【1518】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、他の病原体由来、特に本明細書に開示される細菌および／またはウイルス由来の抗原をさらに含む。

【1519】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、本明細書に開示される１つまたは複数のアジュバントをさらに含む。

【1520】

ある実施形態では、上記第２の免疫原性組成物は、本明細書に開示されるように製剤化される。

【1521】

【1522】

本発明のある態様では、キットは２つの容器の形態をとる。したがって、本発明の一実施形態では、キットの免疫原性組成物のそれぞれ（すなわち、第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物）は別個の容器に含まれる。

【1523】

一実施形態では、キットの第１の免疫原性組成物（キットのパート（ａ））は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、バッグ、広口瓶、アンプル、カートリッジ、および使い捨てのペンからなる群から選択される容器に含まれる。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理されている。

【1524】

一実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、バッグ、広口瓶、アンプル、カートリッジ、および使い捨てのペンからなる群から選択される容器に含まれる。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理されている。

【1525】

ある実施形態では、容器は、ガラス、金属（例えば、スチール、ステンレス鋼、アルミニウムなど）、および／またはポリマー（例えば、熱可塑性、エラストマー、熱可塑性エラストマー）から作られる。ある実施形態では、容器はガラスから作られる。

【1526】

一実施形態では、キットの第１および第２の免疫原性組成物はシリンジまたは使い捨てのペンに含まれる。一実施形態では、キットの第１および第２の免疫原性組成物はシリンジに含まれる。ある特定の実施形態では、シリンジはシリコン処理されている。ある特定の実施形態では、シリコン処理されたシリンジはガラスから作られる。

【1527】

ある実施形態では、キットの第１および第２の免疫原性組成物は、同時投与のために即席で混合される。

【1528】

ある実施形態では、第１および第２の免疫原性組成物は液体形態であり、好ましくは２つの容器に含有される。一実施形態では、第１および第２の容器は、始動された際に第１の容器中の溶液が第２の容器内に導入されるように、二屋シリンジ中の別個の部屋である。その後、生じる混合物がシリンジを出ることができる。２つの免疫原性組成物は、混合の準備ができるまで別個に保つ。

【1529】

ある実施形態では、キットの第１および／または第２の免疫原性組成物は凍結乾燥形態である。

【1530】

ある実施形態では、キットの第１の免疫原性組成物は凍結乾燥形態であり、第２の免疫原性組成物は液体形態である。別の実施形態では、キットの第２の免疫原性組成物は凍結乾燥形態であり、第１の免疫原性組成物は液体形態である。前記実施形態では、両方の免疫原性組成物の同時投与のために、凍結乾燥免疫原性組成物を、液体免疫原性組成物を用いて即席で再構成することができる。

【1531】

前記実施形態では、キットは２つの容器を含有し、１つの容器は再構成のための液体材料を含み、第２の容器は凍結乾燥材料を含む。一実施形態では、第２の容器は密閉シールされている。ある実施形態では、液体材料は第１の針を介して第２の容器内に導入され、それによって、凍結乾燥材料が液体形態へと再構成される。生じる混合物を、その後、患者に投与するために容器（シリンジなど）内に引き出す。一実施形態では、引出しステップは第１の針を介するものである。別の実施形態では、引出しステップは第２の針を介するものである。ある実施形態では、引出しステップに使用する針は、患者の注射に使用するものと同じ針である。別の実施形態では、引出しステップに使用する針は、患者の注射に使用する針とは異なる。

【1532】

一実施形態では、第２の容器はバイアルである。さらなる実施形態では第１および第２の容器は、始動された際に液体材料が第１の容器から第２の容器内へと導入されるように、二屋シリンジ中の別個の部屋である。生じる混合物は液体形態でシリンジを出る。一実施形態では、凍結乾燥材料および液体材料は、混合の準備ができるまで別個に保つ。

【1533】

ある実施形態では、キットは、既に満たされたシリンジおよびバイアルを含む。一実施形態では、シリンジは単一用量の第１の免疫原性組成物を含み、バイアルは単一用量の第２の免疫原性組成物を含む。一実施形態では、シリンジは単一用量の第２の免疫原性組成物を含み、バイアルは単一用量の第１の免疫原性組成物を含む。別の実施形態では、シリンジおよびバイアルは複数用量を含む。

【1534】

５．免疫原性組成物の投薬量
それぞれの用量中の糖コンジュゲートの量は、典型的なワクチン接種を受けた者において顕著な有害副作用なしに免疫保護応答を誘導する量として選択される。そのような量は、どの特定の免疫原を用いるか、およびそれをどのように提示するかに応じて変動する。

【1535】

５．１糖コンジュゲート量
免疫原性組成物中の特定の糖コンジュゲートの量は、そのコンジュゲートの全多糖（コンジュゲートしたものおよびコンジュゲートしていないもの）に基づいて計算することができる。例えば、２０％の遊離多糖を有する糖コンジュゲートは、１００μｇの多糖用量中に約８０μｇのコンジュゲート化した多糖および約２０μｇのコンジュゲート化していない多糖を有する。糖コンジュゲートの量は、肺炎球菌血清型に応じて変動する場合がある。糖濃度はウロン酸アッセイによって決定することができる。

【1536】

免疫原性組成物中の様々な多糖構成成分の「免疫原性量」は発散していてよく、それぞれ、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、または約１００μｇの任意の特定の多糖抗原を含み得る。

【1537】

一般に、それぞれの用量は、所定の血清型について０．１μｇ～１００μｇ、具体的には０．５μｇ～２０μｇ、より具体的には１．０μｇ～１０μｇ、さらにより具体的には２．０μｇ～５．０μｇの多糖を含む。上記範囲のいずれかの内にある任意の自然整数が本開示の一実施形態として企図される。

【1538】

ある実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の糖コンジュゲートについて、約１．０μｇ、約１．２μｇ、約１．４μｇ、約１．６μｇ、約１．８μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０μｇ、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇ、または約６．０μｇの多糖を含む。

【1539】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆ由来の糖コンジュゲートについて、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。

【1540】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来の糖コンジュゲートについて、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。

【1541】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂ由来の糖コンジュゲートについて、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇ、または約６．０μｇの多糖を含む。

【1542】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆ由来のそれぞれの糖コンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂ由来の糖コンジュゲートについて約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。

【1543】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆ由来のそれぞれの糖コンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂ由来の糖コンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。

【1544】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆ由来のそれぞれの糖コンジュゲートから約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂ由来の糖コンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。

【1545】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来のそれぞれの糖コンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。

【1546】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来のそれぞれの糖コンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。

【1547】

ある実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆ、および３３Ｆ由来のそれぞれの糖コンジュゲートについて約２．２μｇの多糖を含む。

【1548】

５．２担体量
一般に、本発明の免疫原性組成物のそれぞれの用量は、１μｇ～１５０μｇの担体タンパク質、具体的には１０μｇ～１００μｇの担体タンパク質、より具体的には１５μｇ～５０μｇの担体タンパク質、さらにより具体的には１６μｇ～４０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ_１９７である。

【1549】

ある実施形態では、それぞれの用量は、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１１μｇ、約１２μｇ、約１３μｇ、約１４μｇ、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、約６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇ、または約７５μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ_１９７である。

【1550】

ある実施形態では、それぞれの用量は、約約１０μｇ、約１１μｇ、約１２μｇ、約１３μｇ、約１４μｇ、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、または約３０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ_１９７である。

【1551】

６．さらなる抗原
本明細書に開示される免疫原性組成物は、コンジュゲート化肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖抗原（糖コンジュゲート）を含む。これらは、他の病原体由来、特に細菌および／またはウイルス由来の少なくとも１つの抗原もさらに含み得る。

【1552】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、百日咳抗原（Ｐ）、無細胞百日咳抗原（Ｐａ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲート化インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、および不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）からなる群から選択される少なくとも１つの抗原をさらに含む。

【1553】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－Ｈｉｂ、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＩＰＶ、またはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－Ｈｉｂを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶ－Ｈｉｂを含む。

【1554】

百日咳抗原：百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は百日咳を引き起こす。ワクチン中の百日咳抗原は細胞性（全細胞、不活性化百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）細胞の形態）または無細胞性のどちらかである。細胞性百日咳抗原の調製は十分に文書化されている（例えば、これは百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の第Ｉ相培養物の熱不活性化によって得られ得る）。しかし、好ましくは、本発明では無細胞抗原を使用する。無細胞抗原を使用する場合、以下の抗原の１つ、２つ、または（好ましくは）３つを使用することが好ましい：（１）解毒化百日咳毒素（百日咳トキソイド、すなわちＰＴ）、（２）繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、（３）ペルタクチン（６９キロダルトンの外膜タンパク質としても知られる）。ＦＨＡおよびペルタクチンは、本発明に従って使用前にホルムアルデヒドで処理してもよい。ＰＴは、好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドを用いた処理によって解毒する。無細胞百日咳抗原は、好ましくは、１つまたは複数のアルミニウム塩アジュバント上に吸着させる。代替方法として、これらを未吸着の状態で加えてもよい。ペルタクチンを加える場合、好ましくは、これは既に水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着されている。ＰＴおよびＦＨＡは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウム上に吸着させ得る。ＰＴ、ＦＨＡ、およびペルタクチンすべての水酸化アルミニウムへの吸着が最も好ましい。

【1555】

不活性化ポリオウイルスワクチン：ポリオウイルスは灰白髄炎を引き起こす。経口ポリオウイルスワクチンを使用するのではなく、本発明の実施形態はＩＰＶを使用する。患者に投与する前に、ポリオウイルスを不活性化させなければならず、これはホルムアルデヒドを用いた処理によって達成することができる。灰白髄炎は、３種類のポリオウイルスの１種によって引き起こされることができる。この３種類は類似しており、同一の症状を引き起こすが、抗原性が異なっており、１つの種による感染は他のものによる感染から保護しない。したがって、本発明において３つのポリオウイルス抗原を使用することが好ましい：１型ポリオウイルス（例えばマホニー（Ｍａｈｏｎｅｙ）株）、２型ポリオウイルス（例えばＭＥＦ－１株）、および３型ポリオウイルス（例えばサウケット（Ｓａｕｋｅｔｔ）株）。ウイルスは、好ましくは個別に成長させ、精製し、不活性化させ、その後、一緒に合わせて、本発明で使用するためのバルクの三価混合物が得られる。

【1556】

ジフテリアトキソイド：ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｉｒｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）はジフテリアを引き起こす。ジフテリア毒素は、（例えばホルマリンまたはホルムアルデヒドを使用して）処理して、注射後に特異的抗毒素抗体を誘導する能力を保持したまま、毒性を除去することができる。これらのジフテリアトキソイドはジフテリアワクチン中で使用される。ジフテリアトキソイドはホルムアルデヒド処理によって調製されるものである。ジフテリアトキソイドは、ジフテリア菌（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）を成長培地中で成長させ、次いで、ホルムアルデヒド処理、限外濾過、および沈殿を行うことによって得ることができる。その後、トキソイド化した材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理し得る。ジフテリアトキソイドは、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着されている。

【1557】

破傷風トキソイド：破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ）は破傷風を引き起こす。破傷風毒素を処理して、保護的トキソイドを得ることができる。トキソイドは破傷風ワクチン中で使用される。破傷風トキソイドはホルムアルデヒド処理によって調製されるものである。破傷風トキソイドは、破傷風菌（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）を成長培地中で成長させ、次いで、ホルムアルデヒド処理、限外濾過、および沈殿を行うことによって得ることができる。その後、材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理し得る。

【1558】

Ａ型肝炎ウイルス抗原：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす既知の病原体の１つである。ＨＡＶ構成成分は不活性化ウイルスに基づいており、不活性化はホルマリン処理によって達成することができる。

【1559】

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす既知の病原体の１つである。カプシドの主要な構成成分は、ＨＢＶ表面抗原、またはより一般的にはＨＢｓＡｇとして知られるタンパク質であり、これは、典型的には、約２４ｋＤａの分子量を有する２２６個のアミノ酸のポリペプチドである。すべての存在するＢ型肝炎ワクチンはＨＢｓＡｇを含有しており、この抗原をワクチン接種を受けた健常者に投与した場合、これは、ＨＢＶ感染に対して保護する抗ＨＢｓＡｇ抗体の産生を刺激する。

【1560】

ワクチン製造には、ＨＢｓＡｇは２つの方法、すなわち、慢性Ｂ型肝炎保因者の血漿由来の粒子形態の抗原の精製、または組換えＤＮＡ法（例えば酵母細胞中での組換え発現）によるタンパク質の発現で作製されてきた。ネイティブＨＢｓＡｇ（すなわち血漿精製産物におけるものなど）とは異なり、酵母で発現させたＨＢｓＡｇは一般にグリコシル化されておらず、これが、本発明で使用するためのＨＢｓＡｇの最も好ましい形態である。

【1561】

コンジュゲート化インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型抗原：インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）は細菌性髄膜炎を引き起こす。Ｈｉｂワクチンは、典型的には、その調製が十分に文書化されている莢膜糖抗原に基づく。Ｈｉｂ糖は、特に小児において、その免疫原性を増強させるために担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。典型的な担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ_１９７、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、および血清群Ｂ髄膜炎菌由来の外膜タンパク質複合体である。コンジュゲートの糖部分は、Ｈｉｂ細菌、および／または完全長ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）の断片から調製される、完全長ＰＲＰを含み得る。Ｈｉｂコンジュゲートは、アルミニウム塩アジュバントに吸着されていてもされていなくてもよい。

【1562】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。

【1563】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。

【1564】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。

【1565】

本発明のある態様は、上記さらなる抗原のいずれかが、第１の免疫原性組成物（キットのパート（ａ））の一部である、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1566】

本発明のある態様は、上記さらなる抗原のいずれかが、第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））の一部である、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1567】

本発明のある態様は、上記さらなる抗原のいずれかが、第１の免疫原性組成物（キットのパート（ａ））の一部であり、上記さらなる抗原のいずれかが、第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））の一部である、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1568】

７．アジュバント
１つまたは複数の実施形態において、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１つ、２つ、または３つのアジュバントをさらに含み得る。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として作用し得る、主に免疫変調剤として作用し得る、または両方の強力な特長を有し得る。適切なアジュバントとしては、ヒトを含めた哺乳動物における使用に適したものが挙げられる。

【1569】

ヒトにおいて使用することができる既知の適切な送達系型のアジュバントの例としては、それだけには限定されないが、ミョウバン（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖのスクアレン、０．５％ｗ／ｖのポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）などの水中油エマルジョン、０．５％ｗ／ｖのトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８５））、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）などの油中水エマルジョン、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）マイクロ粒子またはナノ粒子が挙げられる。

【1570】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてアルミニウム塩（ミョウバン）を含む（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬまたは０．２ｍｇ／ｍＬ～０．３ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをリン酸アルミニウムの形態で含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、約０．２５ｍｇ／ｍＬの元素アルミニウムをリン酸アルミニウムの形態で含む。

【1571】

ヒトにおいて使用することができる既知の適切な免疫変調型アジュバントの例としては、それだけには限定されないが、アクイラ（Ａｑｕｉｌｌａ）樹木の樹皮から抽出したサポニン（ＱＳ２１、ＱＵＩＬＡ（登録商標））、ＭＰＬ（モノホスホリル脂質Ａ）、３ＤＭＰＬ（３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ）、またはＧＬＡ－ＡＱ等のＴＬＲ４アゴニスト、ＬＴ／ＣＴ突然変異体、様々なインターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１２）またはＧＭ－ＣＳＦ等のサイトカインなどが挙げられる。

【1572】

ヒトにおいて使用することができる、送達および免疫変調の特長の両方を有する既知の適切な免疫変調型アジュバントの例としては、それだけには限定されないが、ＩＳＣＯＭＳ（例えば、Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ｊ．ＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉｏｌ．、６４：７１３、ＷＯ９０／０３１８４号、ＷＯ９６／１１７１１号、ＷＯ００／４８６３０号、ＷＯ９８／３６７７２号、ＷＯ００／４１７２０号、ＷＯ２００６／１３４４２３号、およびＷＯ２００７／０２６１９０号を参照）、またはＴＬＲ４アゴニストと水中油エマルジョンとの組合せであるＧＬＡ－ＥＭが挙げられる。

【1573】

それだけには限定されないが動物実験を含めた獣医学的応用には、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）、ＥＭＵＬＳＩＧＥＮ（登録商標）、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ｎｏｒ－ムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ＣＧＰ１１６３７、ｎｏｒ－ＭＤＰと呼ばれる）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ、ＭＴＰ－ＰＥと呼ばれる）、ならびに、細菌から抽出した３つの構成成分であるモノホスホリル脂質Ａ、トレハロースジミコレート、および細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を２％のスクアレン／ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０エマルジョン中に含有するＲＩＢＩ（商標）を使用することができる。

【1574】

本明細書に開示される肺炎球菌ワクチンの有効性を増強させるためのさらなる例示的なアジュバントとしては、それだけには限定されないが、（１）例えば、（ａ）サブミクロンエマルジョンへと微小流動化した、またはボルテックスをかけてより大きな粒径のエマルジョンを作製した、１０％のスクワラン、０．４％のＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、５％のプルロニック（登録商標）ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに、（ｂ）２％のスクアレンと、０．２％のＴＷＥＥＮ（登録商標）８０と、モノホスホリル脂質（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｌｉｐｉｄ）Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）などの１つまたは複数の細菌細胞壁構成成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））を含有する、ＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（ＲｉｂｉＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、モンタナ州Ｈａｍｉｌｔｏｎ）などの、水中油エマルジョン製剤（ムラミルペプチド（以下参照）または細菌細胞壁構成成分などの他の特定の免疫賦活剤を含むまたは含まない）、（２）ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、マサチューセッツ州Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ）、ＡＢＩＳＣＯ（登録商標）（Ｉｓｃｏｎｏｖａ、スウェーデン）、またはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）（ＣｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈＳｅｒｕｍＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストラリア）などのサポニンアジュバントを使用し得る、または、ＩＳＣＯＭｓ（免疫刺激複合体）などのそれから作製された粒子であり、ＩＳＣＯＭＳは追加の洗剤を欠いていてよい（例えばＷＯ００／０７６２１号）、（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（４）インターロイキンなどのサイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（例えばＷＯ９９／４４６３６号））、インターフェロン（例えばガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など、（５）必要に応じて、肺炎球菌糖と共に使用した場合はミョウバンの実質的な非存在下の、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ－２２２０２２１号、ＥＰ０６８９４５４号を参照）（例えばＷＯ００／５６３５８号を参照）、（６）３ｄＭＰＬと、例えばＱＳ２１および／または水中油エマルジョンとの組合せ（例えば、ＥＰ０８３５３１８号、ＥＰ０７３５８９８号、ＥＰ０７６１２３１号を参照）、（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えばＷＯ９９／５２５４９号を参照）、（８）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（例えばＷＯ０１／２１２０７号）、またはオクトキシノールなどの少なくとも１つの追加の非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（例えばＷＯ０１／２１１５２号）、（９）サポニンおよび免疫賦活性オリゴヌクレオチド（例えばＣｐＧオリゴヌクレオチド）（例えばＷＯ００／６２８００号）、（１０）免疫賦活剤および金属塩粒子（例えばＷＯ００／２３１０５号を参照）、（１１）サポニンおよび水中油エマルジョン（例えばＷＯ９９／１１２４１号）、（１２）サポニン（例えばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（必要に応じて＋ステロール）（例えばＷＯ９８／５７６５９号）、（１３）免疫賦活剤として作用して組成物の有効性を増強させる他の物質が挙げられる。ムラミルペプチドとしては、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミンＭＴＰ－ＰＥ）などが挙げられる。

【1575】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドをアジュバントとして含む。本明細書で使用される場合、ＣｐＧオリゴヌクレオチドとは免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧＯＤＮ）を指し、したがって、別段に指定しない限りは、これらの用語は互換性があるように使用される。免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、必要に応じて特定の塩基コンテキスト内において、メチル化されていないシトシン－グアニンジヌクレオチドである１つまたは複数の免疫賦活性ＣｐＧモチーフを含有する。ＣｐＧ免疫賦活性モチーフのメチル化状態とは、一般に、ジヌクレオチド中のシトシン残基を指す。少なくとも１つのメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、リン酸結合によって３’グアニンに連結された５’非メチル化シトシンを含有しており、トール様受容体９（ＴＬＲ－９）との結合を通じて免疫系を活性化させるオリゴヌクレオチドである。別の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９を通じて免疫系を活性化させるが、ＣｐＧモチーフがメチル化されていない場合ほど強力ではない、１つまたは複数のメチル化されたＣｐＧジヌクレオチドを含有し得る。ＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の回文構造を含んでいてよく、回文構造はＣｐＧジヌクレオチドを包含していてよい。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，１９４，３８８号、第６，２０７，６４６号、第６，２１４，８０６号、第６，２１８，３７１号、第６，２３９，１１６号、および第６，３３９，０６８号を含めた、いくつかの発行された特許、公開特許出願、および他の出版物中に記載されている。

【1576】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の第３頁、第２２行から第１２頁、第３６行に記載されているＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかを含む。

【1577】

様々なクラスのＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドが同定されている。これらはＡ、Ｂ、Ｃ、およびＰクラスと呼ばれ、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の第３頁、第２２行から第１２頁、第３６行により詳細に記載されている。本発明の方法は、これらの様々なクラスのＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。

【1578】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＡクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、本発明の「Ａクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：５’ＧＧＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧ３’（配列番号１）。Ａクラスオリゴヌクレオチドの一部の非限定的な例としては、以下が挙げられる：５’Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｇ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ３’（配列番号２）［式中、「^＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］。

【1579】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、本発明において使用するためのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも以下の式によって表されるＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドである：

【1580】

５’Ｘ_１Ｘ_２ＣＧＸ_３Ｘ_４３’［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はヌクレオチドである］。一実施形態では、Ｘ_２は、アデニン、グアニン、またはチミンである。別の実施形態では、Ｘ_３は、シトシン、アデニン、またはチミンである。

【1581】

本発明のＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、上記に幅広く記載されているもの、ならびに、ＷＯ９６／０２５５５号、ＷＯ９８／１８８１０号、および米国特許第６，１９４，３８８号、第６，２０７，６４６号、第６，２１４，８０６号、第６，２１８，３７１号、第６，２３９，１１６号、第６，３３９，０６８号に開示されているものである。例示的な配列としては、それだけには限定されないが、これらの後者の出願および特許中に開示されているものが挙げられる。

【1582】

ある実施形態では、本発明の「Ｂクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ３’（配列番号３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ３’（配列番号４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’（配列番号５）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’（配列番号６）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ３’（配列番号７）。

【1583】

これらの配列のいずれかにおいて、すべての連結は、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、これらの配列のいずれかにおいて、連結の１つまたは複数が、リン酸ジエステル、好ましくはＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間のものであってよく、半軟ＣｐＧオリゴヌクレオチドを作る。これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンが５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモ－ウリジンまたはヨード－ウリジン置換が挙げられる。

【1584】

Ｂクラスオリゴヌクレオチドの一部の非限定的な例としては、以下が挙げられる：
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ３’（配列番号８）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ３’（配列番号９）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ３’（配列番号１０）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ３’（配列番号１１）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ａ３’（配列番号１２）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指す］。

【1585】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＣクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、本発明の「Ｃクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１４）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１５）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１６）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１７）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１８）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１９）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２０）、または
５’ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２１）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２２）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ３’（配列番号２３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ３’（配列番号２４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号２５）。

【1586】

これらの配列のいずれかにおいて、すべての連結は、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、これらの配列のいずれかにおいて、連結の１つまたは複数が、リン酸ジエステル、好ましくはＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間のものであってよく、半軟ＣｐＧオリゴヌクレオチドを作る。

【1587】

Ｃクラスオリゴヌクレオチドの一部の非限定的な例としては、以下が挙げられる：
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号２６）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号２７）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号２８）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号２９）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３０）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３１）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３２）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３３）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３４）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３５）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３６）、または
５’Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号３７）、または
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｔ３’（配列番号３８）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］。

【1588】

これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンが５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモ－ウリジンまたはヨード－ウリジン置換が挙げられる。

【1589】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、本発明において使用するためのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’ＴＬＲ活性化ドメインおよび少なくとも２つの回文構造領域を含有するＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドであり、１つの回文構造領域は、少なくとも６個のヌクレオチドの長さの５’回文構造領域であり、少なくとも８個のヌクレオチドの長さの３’回文構造領域と、直接またはスペーサーを介して接続されており、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つのＹｐＲジヌクレオチドを含む。一実施形態では、前記オリゴヌクレオチドはＴ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ（配列番号２７）ではない。一実施形態では、ＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドは少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＹｐＲ、ＴＴＹｐＲ、ＴＴＴＹｐＲ、ＵＣＧ、ＵＵＣＧ、ＵＵＵＣＧ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴである。さらに別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは５’回文構造領域内にある。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは５’回文構造領域のすぐ５’側である。

【1590】

ある実施形態では、本発明の「Ｐクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号３９）。

【1591】

前記配列において、すべての連結は、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、連結の１つまたは複数が、リン酸ジエステル、好ましくはＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間のものであってよく、半軟ＣｐＧオリゴヌクレオチドを作る。これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンが５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモ－ウリジンまたはヨード－ウリジン置換が挙げられる。

【1592】

Ｐクラスオリゴヌクレオチドの非限定的な例としては、以下が挙げられる：
５’Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ａ^＊Ｔ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ＿Ｇ^＊Ｃ^＊Ｇ^＊Ｃ^＊Ｃ^＊Ｇ３’（配列番号４０）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］。

【1593】

一実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間連結がホスホロチオエート連結である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つのリン酸ジエステル様連結を含む。別の実施形態では、リン酸ジエステル様連結はリン酸ジエステル連結である。別の実施形態では、親油性基がオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされている。一実施形態では、親油性基はコレステロールである。

【1594】

ある実施形態では、本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間連結がリン酸ジエステル結合である（ＷＯ２００７／０２６１９０号に記載の「軟」オリゴヌクレオチド）。別の実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは分解に対して耐性を与えられている（例えば安定化されている）。「安定化オリゴヌクレオチド」とは、ｉｎｖｉｖｏ分解（例えばエキソまたはエンドヌクレアーゼを介したもの）に対して比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを指す。核酸の安定化は、主鎖修飾を介して達成することができる。ホスホロチオエート連結を有するオリゴヌクレオチドが最大の活性を提供し、オリゴヌクレオチドを細胞内エキソまたはエンドヌクレアーゼによる分解から保護する。

【1595】

免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステルとホスホロチオエート連結との組合せを有するキメラ主鎖を有し得る。本発明の目的のために、キメラ主鎖とは、少なくとも１つのヌクレオチド間連結がリン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様であり、少なくとも１つの他のヌクレオチド間連結が安定化ヌクレオチド間連結であり、少なくとも１つのリン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様連結と少なくとも１つの安定化連結とが異なる、部分的に安定化された主鎖を指す。リン酸ジエステル連結がＣｐＧモチーフ内に優先的に位置する場合は、そのような分子は、ＷＯ２００７／０２６１９０号に記載のように「半軟」と呼ばれる。

【1596】

他の修飾オリゴヌクレオチドとしては、リン酸ジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、および／またはｐ－エトキシ連結の組合せが挙げられる。

【1597】

混合主鎖修飾ＯＤＮは、ＷＯ２００７／０２６１９０号に記載のように合成し得る。

【1598】

ＣｐＧオリゴヌクレオチドの大きさ（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さに沿ったヌクレオチド残基の数）もオリゴヌクレオチドの刺激活性に寄与し得る。細胞内への取り込みを容易にするために、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、好ましくは、最小で６個のヌクレオチド残基の長さを有する。より大きなオリゴヌクレオチドは細胞内で分解されるため、十分な免疫賦活性モチーフが存在する場合は、６個ヌクレオチドより大きい任意の大きさのオリゴヌクレオチドが（多数ｋｂの長さでさえも）、免疫応答を誘導することができる。ある特定の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６～１００個のヌクレオチドの長さ、優先的には８～３０個のヌクレオチドの長さである。重要な実施形態では、本発明の核酸およびオリゴヌクレオチドはプラスミドまたは発現ベクターではない。

【1599】

ある実施形態では、本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＷＯ２００７／０２６１９０号の段落番号第１３４～１４７に記載の塩基および／または糖などのように、置換または修飾を含む。

【1600】

ある実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは化学修飾されている。化学修飾の例は公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎら（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、９０：５４３、Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ、米国Ｔｏｔｏｗａ、１９９３、Ｃｒｏｏｋｅら（１９９６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、３６：１０７～１２９、およびＨｕｎｚｉｋｅｒら（１９９５）Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、７：３３１～４１７に記載されている。本発明によるオリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾を有していてよく、それぞれの修飾は、特定のリン酸ジエステルヌクレオシド間橋、および／または特定のβ－Ｄ－リボース単位、および／または、天然のＤＮＡもしくはＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドを比較して特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。

【1601】

本発明の一部の実施形態では、ＣｐＧ含有核酸は、当業者に公知の方法に従って、単に免疫原性担体と混合してもよい（例えばＷＯ０３／０２４４８０号を参照）。

【1602】

本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかは、２μｇ～１００ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．１ｍｇ～５０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．２ｍｇ～１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは０．５～２ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは０．７５～１．５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかは約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。

【1603】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物（上記セクション２で定義したものなど）は、上記定義したアジュバント、好ましくは、アルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）を含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。

【1604】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物（上記セクション３で定義したものなど）と組み合わせて使用し得る免疫原性組成物は、上記定義したアジュバント、好ましくは、アルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）を含む。ある実施形態では、前記免疫原性組成物は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。

【1605】

本発明のある態様は、第１の免疫原性組成物（キットのパート（ａ））のみが上記定義したアジュバントを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1606】

本発明のある態様は、第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））のみが上記定義したアジュバントを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1607】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が上記定義したアジュバントを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1608】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、および水酸化アルミニウムからなる群から選択されるアジュバントを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1609】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が、アジュバントとしてリン酸アルミニウムを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1610】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が、アジュバントとして水酸化アルミニウムを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1611】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が、アジュバントとして硫酸アルミニウムを含む、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1612】

８．製剤
本明細書に開示される免疫原性組成物は、液体形態（すなわち、溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で製剤化し得る。液体製剤は、有利には、その包装形態から直接投与してよく、したがって、それ以外の場合の凍結乾燥組成物では必要となる、水性媒体中での再構成の必要性なしに注射するために理想的である。

【1613】

本明細書に開示される免疫原性組成物の製剤は、当分野で認識されている方法を使用して達成することができる。例えば、個々の肺炎球菌コンジュゲートは、生理的に許容されるビヒクルを用いて製剤化して組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例としては、それだけには限定されないが、水、緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびデキストロース溶液が挙げられる。

【1614】

本開示は、本明細書に開示される糖コンジュゲートと薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤との任意の組合せを含む免疫原性組成物を提供する。

【1615】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は液体形態であり、好ましくは水性液体形態である。

【1616】

本開示の免疫原性組成物は、緩衝剤、塩、二価カチオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結保護剤、およびフリーラジカル捕捉剤やキレート化剤などの抗酸化剤の１つもしくは複数、またはその任意の組合せを含み得る。

【1617】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は緩衝剤を含む。ある実施形態では、前記緩衝剤は約３．５～約７．５のｐＫａを有する。一部の実施形態では、緩衝剤は、ホスフェート、スクシネート、ヒスチジン、またはシトレートである。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、１ｍＭ～１０ｍＭの最終濃度のスクシネートである。特定の一実施形態では、スクシネート緩衝剤の最終濃度は約５ｍＭである。

【1618】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される。特定の一実施形態では、塩は塩化ナトリウムである。特定の一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は塩化ナトリウムを１５０ｍＭで含む。

【1619】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は界面活性剤を含む。ある実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｎ－１０１、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、オクストキシノール４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、ＳｏｌｕｔｏｌＨ１５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、大豆レシチン、およびポロキサマーからなる群から選択される。特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート８０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。

【1620】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、５．５～７．５のｐＨ、より好ましくは５．６～７．０のｐＨ、さらにより好ましくは５．８～６．０のｐＨを有する。

【1621】

一実施形態では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかで満たされた容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、バッグ、広口瓶、アンプル、カートリッジ、および使い捨てのペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理されている。

【1622】

ある実施形態では、本発明の容器は、ガラス、金属（例えば、スチール、ステンレス鋼、アルミニウムなど）、および／またはポリマー（例えば、熱可塑性、エラストマー、熱可塑性エラストマー）から作られる。ある実施形態では、本発明の容器はガラスから作られる。

【1623】

一実施形態では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかで満たされたシリンジを提供する。ある特定の実施形態では、シリンジは、シリコン処理されているおよび／またはガラスから作られる。

【1624】

注射のための本明細書に開示される免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬの体積、より好ましくは０．２ｍＬ～１ｍＬ、さらにより好ましくは約０．５ｍＬの体積を有する。

【1625】

したがって、上記定義した容器またはシリンジは、０．１ｍＬ～２ｍＬの体積、より好ましくは０．２ｍＬ～１ｍＬ、さらにより好ましくは約０．５ｍＬの体積の、本明細書で定義した免疫原性組成物のいずれかで満たされる。

【1626】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物（上記セクション２で定義したものなど）は、上記に開示されているように製剤化される。

【1627】

ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物（上記セクション３で定義したものなど）と組み合わせて使用し得る免疫原性組成物は、上記に開示されているように製剤化される。

【1628】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が上述のように製剤化される、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1629】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が液体形態で製剤化される、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1630】

本発明のある態様は、両方の免疫原性組成物（キットのパート（ａ）および（ｂ））が凍結乾燥形態で製剤化される、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1631】

本発明のある態様は、第１の免疫原性組成物（キットのパート（ａ））が液体形態であり、第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））が凍結乾燥形態である、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1632】

本発明のある態様は、第１の免疫原性組成物（キットのパート（ａ））が凍結乾燥形態であり、第２の免疫原性組成物（キットのパート（ｂ））が液体形態である、上記セクション４で定義したキットを提供する。

【1633】

９．本発明の免疫原性組成物およびキットの使用
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物およびキットは、医薬として使用される。

【1634】

本明細書に記載の免疫原性組成物およびキットは、対象における細菌感染、疾患、または状態を防止する、処置する、または寛解させるための様々な治療的または予防的方法において使用し得る。特に、本明細書に記載の免疫原性組成物およびキットは、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または寛解させるために使用し得る。

【1635】

１つまたは複数の実施形態において、本発明は、免疫学的有効量の本明細書に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に関連する感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または寛解させる方法を提供する。

【1636】

一部のそのような実施形態では、感染症、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。

【1637】

ある実施形態では、本発明は、免疫学的有効量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。

【1638】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物およびキットは、ワクチンとして使用するためのものである。そのような実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物およびキットは、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症を防止するために使用し得る。したがって、一態様では、本発明は、免疫学的有効量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染症を防止する方法を提供する。一部のそのような実施形態では、感染症は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、ワクチン接種される対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。

【1639】

一態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物およびキットは、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に関連する感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または寛解させる方法において使用するためのものである。一部のそのような実施形態では、感染症、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。

【1640】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物およびキットは、ワクチンとして使用するためのものである。そのような実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物およびキットは、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症を防止するために使用し得る。したがって、一態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物およびキットは、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染症を防止する方法において使用するためのものである。一部のそのような実施形態では、感染症は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、ワクチン接種される対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。

【1641】

本発明の免疫原性組成物およびキットは、全身性または粘膜経路を介して免疫原性組成物を投与することによって、肺炎球菌感染症に罹りやすいヒトを保護または処置するために使用することができる。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下経路によって投与される。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下注射によって投与される。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、筋肉内または皮下注射によって投与される。

【1642】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、対象に投与した場合に、標準ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１５Ｂ、１５Ａ、および／または１５Ｃと結合することができる抗体の形成を誘導することができる。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、対象に投与した場合に、標準ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１５Ｂおよび１５Ｃと結合することができる抗体の形成を誘導することができる。

【1643】

ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）方法では、ワクチン接種した対象の血清由来の抗体を、固体支持体に吸着させた多糖と共にインキュベートする。結合した抗体を、酵素にコンジュゲート化させた二次検出抗体を使用して検出する。

【1644】

ある実施形態では、前記標準ＥＬＩＳＡアッセイは、ＷＨＯによって「ＴｒａｉｎｉｎｇｍａｎｕａｌｆｏｒＥｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｓｅｒｏｔｙｐｅｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＧ（ＰｎＰＳＥＬＩＳＡ）．」（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖａｃｃｉｎｅ．ｕａｂ．ｅｄｕ／ＥＬＩＳＡ％２０ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｐｄｆでアクセス可能、２０１４年３月３１日に最終アクセス）において定義された、標準化された（ＷＨＯ）ＥＬＩＳＡアッセイである。

【1645】

ＥＬＩＳＡは、ヒト血清中に存在する型特異的ＩｇＧ抗肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖（ＰＳ）抗体を測定する。ヒト血清の希釈液を型特異的莢膜ＰＳをコーティングしたマイクロタイタープレートに加えた際、その莢膜ＰＳに特異的な抗体がマイクロタイタープレートに結合する。プレートに結合した抗体を、ヤギ抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼで標識した抗体、次いでｐ－ニトロフェニルリン酸基質を使用して検出する。有色の最終産物光学密度は、血清中に存在する抗莢膜ＰＳ抗体の量に比例する。

【1646】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定して少なくとも０．０５、０．１、０．２、０．３、０．３５、０．４、または０．５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ多糖と結合することができるＩｇＧ抗体を誘発することができる。

【1647】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定して少なくとも０．０５、０．１、０．２、０．３、０．３５、０．４、または０．５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃ多糖と結合することができるＩｇＧ抗体を誘発することができる。

【1648】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定して少なくとも０．０５、０．１、０．２、０．３、０．３５、０．４、または０．５μｇ／ｍｌの濃度で、ヒトにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂおよび１５Ｃ多糖と結合することができるＩｇＧ抗体を誘発することができる。

【1649】

【1650】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、本明細書に開示されるＯＰＡアッセイ（実施例１２のＯＰＡアッセイなど）において試験した場合に、コンジュゲート化していないネイティブ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１５Ｂ莢膜多糖を用いて得られたＯＰＡ力価よりも高いＯＰＡ力価を有する。

【1651】

ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、対象に投与した場合に、本明細書に開示されるオプソノファゴサイトーシスアッセイ（実施例１２のＯＰＡアッセイなど）において、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１５Ｃを死滅させることができる抗体の形成を誘導することができる。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲート（上記セクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）を含む本開示の免疫原性組成物は、本明細書に開示されるＯＰＡアッセイ（実施例１２のＯＰＡアッセイなど）において試験した場合に、コンジュゲート化していないネイティブ肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１５Ｂ莢膜多糖を用いて得られたＯＰＡ力価よりも高いＯＰＡ力価を有する。

【1652】

機能的抗体および補体の存在下で食作用エフェクター細胞による肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞の死滅を測定する、肺炎球菌オプソノファゴサイトーシスアッセイ（ＯＰＡ）は、肺炎球菌ワクチンの有効性を評価するための重要な代理方法とみなされている。

【1653】

オプソノファゴサイトーシスアッセイ（ＯＰＡ）は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞、試験する熱不活性化ヒト血清、分化ＨＬ－６０細胞（食細胞）、および外因性補体源（例えば仔ウサギ補体）の混合物を一緒にインキュベートすることによって、実施することができる。オプソノファゴサイトーシスがインキュベーション中に進行し、抗体および補体でコーティングされた細菌細胞はオプソノファゴサイトーシスの際に死滅させられる。アッセイ混合物を平板培養することによって、オプソノファゴサイトーシスを回避した生存細菌のコロニー形成単位（ｃｆｕ）が決定される。ＯＰＡ力価は、試験血清なしの対照ウェルに対して細菌数の５０％の低下をもたらす希釈率の逆数として定義される。ＯＰＡ力価は、この５０％の死滅カットオフを包含する２つの希釈率から内挿される。

【1654】

１：８以上のエンドポイント力価が、これら死滅型ＯＰＡにおける陽性結果とみなされる。

【1655】

さらなる態様では、本開示は、治療または予防有効量の、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物のいずれかを投与するステップを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／または１５Ｃに関連する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、疾患、または状態を処置または防止する方法を提供する。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物は、対象に投与した場合に、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ、１５Ａ、および／または１５Ｃと結合することができる抗体の形成を誘導する。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物は、対象に投与した場合に、本明細書に開示されるオプソノファゴサイトーシスアッセイにおいて、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ、１５Ｃ、および／または１５Ａを死滅させることができる抗体の形成を誘導する。

【1656】

本開示の一実施形態は、免疫原性量の、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物のいずれかを対象に投与することを含む、対象を肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃの感染症から保護する方法、または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃの感染症を防止する方法、または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃによって引き起こされる感染症に関連する少なくとも１つの症状の重症度を低下させるもしくはその開始を遅延させる方法を提供する。本開示の一実施形態は、治療または予防有効量の、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物のいずれかを対象に投与するステップを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／または１５Ｃに関連する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、疾患、または状態を処置または防止する方法を提供する。別の実施形態は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物のいずれかからポリクローナルまたはモノクローナル抗体調製物を作製し、前記抗体調製物を使用して対象に受動免疫を与えることを含む、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／または１５Ｃに関連する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、疾患、または状態を処置または防止する方法を提供する。

【1657】

一実施形態では、本開示は、対象を肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染症から保護するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染症を防止するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって引き起こされる感染症に関連する少なくとも１つの症状の重症度を低下させるもしくはその開始を遅延させるため、ならびに／または対象を肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／もしくは１５Ｃの感染症から保護するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／もしくは１５Ｃの感染症を防止するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／もしくは１５Ｃによって引き起こされる感染症に関連する少なくとも１つの症状の重症度を低下させるもしくはその開始を遅延させるための医薬を製造するための、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物のいずれかの使用に関する。

【1658】

一実施形態では、本開示は、対象を肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染症から保護するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染症を防止するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって引き起こされる感染症に関連する少なくとも１つの症状の重症度を低下させるもしくはその開始を遅延させるため、ならびに／または対象を肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／もしくは１５Ｃの感染症から保護するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／または１５Ｃの感染症を防止するため、ならびに／または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａ、１５Ｂ、および／もしくは１５Ｃによって引き起こされる感染症に関連する少なくとも１つの症状の重症度を低下させるもしくはその開始を遅延させるための、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む本開示の免疫原性組成物のいずれかの使用に関する。

【1659】

１０．本発明の免疫原性組成物およびキットで処置される対象
本明細書に開示されるように、本明細書に記載の免疫原性組成物およびキットは、対象における細菌感染、疾患、または状態を防止する、処置する、または寛解させるための様々な治療的または予防的方法において使用し得る。

【1660】

ある実施形態では、前記対象はヒトである。最も好ましい実施形態では、前記対象は新生児（すなわち３カ月齢未満）、乳児（すなわち３カ月齢～１歳）、または幼児（すなわち１歳～４歳）である。

【1661】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物およびキットは、ワクチンとして使用するためのものである。

【1662】

そのような実施形態では、ワクチン接種される対象は１歳未満であり得る。例えば、ワクチン接種される対象は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２カ月齢であり得る。ある実施形態では、ワクチン接種される対象は、約２、約４、または約６カ月齢である。別の実施形態では、ワクチン接種される対象は２歳未満である。例えば、ワクチン接種される対象は約１２～約１５カ月齢であり得る。一部の事例では、少なければ１回用量の本発明による免疫原性組成物のみが必要であるが、一部の状況下においては、２回目、３回目、または４回目の用量を与え得る（下記セクション１１を参照）。

【1663】

本発明のある実施形態では、ワクチン接種される対象は、５０歳以上のヒト成人、より好ましくは５５歳以上のヒト成人である。ある実施形態では、ワクチン接種される対象は、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、または８０歳以上のヒト成人である。

【1664】

ある実施形態では、ワクチン接種される対象は、免疫無防備状態の個体、特にヒトである。免疫無防備状態の個体は、一般に、感染性因子によって誘発される、正常な液性または細胞性の防御を開始する能力が減弱または低下しているヒトとして定義される。

【1665】

本発明のある実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、免疫系を損なわせ、肺炎球菌疾患に対して保護するまたはそれを処置するためには不十分な抗体応答をもたらす疾患または状態を患っている。

【1666】

ある実施形態では、前記疾患は原発性免疫不全障害である。好ましくは、前記原発性免疫不全障害は、複合ＴおよびＢ細胞免疫不全、抗体欠損、明確に定義された症候群、免疫調節不全疾患、食細胞障害、自然免疫不全、自己炎症性障害、および補体欠損からなる群から選択される。ある実施形態では、前記原発性免疫不全障害は、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の第２４頁、第１１行から第２５頁、第１９行に開示されているものから選択される。

【1667】

本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、がん、慢性心臓または肺障害、鬱血性心不全、真性糖尿病、慢性肝疾患、アルコール依存症、硬変、髄液漏、心筋症、慢性気管支炎、気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能不全（鎌状赤血球症など）、脾臓機能欠如（無脾症）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群、および喘息からなる群から選択される疾患を患っている。

【1668】

本発明のある実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は栄養失調を患っている。

【1669】

本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、感染症に対する身体の耐性を下げる薬物または処置を受けている。ある実施形態では、前記薬物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の第２６頁、第３３行から第２６頁、第４行に開示されているものから選択される。

【1670】

本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は喫煙者である。

【1671】

本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、５×１０^９個の細胞／リットル未満、または４×１０^９個の細胞／リットル未満、または３×１０^９個の細胞／リットル未満、または２×１０^９個の細胞／リットル未満、または１×１０^９個の細胞／リットル未満、または０．５×１０^９個の細胞／リットル未満、または０．３×１０^９個の細胞／リットル未満、または０．１×１０^９個の細胞／リットル未満の白血球数（ロイコサイト数）を有する。

【1672】

白血球数（ロイコサイト数）：血液中の白血球（ＷＢＣ）の数。ＷＢＣは通常、ＣＢＣ（全血球数）の一部として測定される。白血球は、血液中の感染と闘う細胞であり、赤血球として知られる赤い（酸素運搬）血液細胞とは明確に異なる。様々な種類の白血球が存在し、好中球（多形核ロイコサイト、ＰＭＮ）、桿状核細胞（わずかに未成熟な好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球、および好塩基球が挙げられる。全種類の白血球が白血球数に反映される。白血球数の正常範囲は通常、１立方ミリメートルの血液あたり４，３００～１０，８００個の細胞である。これはロイコサイト数とも呼ぶことができ、国際単位で４．３～１０．８×１０^９個の細胞／リットルとして表すことができる。

【1673】

本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は好中球減少症を患っている。本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、２×１０^９個の細胞／リットル未満、または１×１０^９個の細胞／リットル未満、または０．５×１０^９個の細胞／リットル未満、または０．１×１０^９個の細胞／リットル未満、または０．０５×１０^９個の細胞／リットル未満の好中球数を有する。

【1674】

低い白血球数または「好中球減少症」とは、循環血液中の異常に低いレベルの好中球によって特徴付けられる状態である。好中球は、感染症を防止してそれと闘うことを助ける、特殊な種類の白血球である。がん患者が好中球減少症を経験する最も一般的な原因は、化学療法の副作用としてである。化学療法誘導性好中球減少症は、患者の感染症の危険性を増加させ、がん処置を乱す。

【1675】

本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、５００／ｍｍ^３未満のＣＤ４＋細胞数、または３００／ｍｍ^３未満のＣＤ４＋細胞数、または２００／ｍｍ^３未満のＣＤ４＋細胞数、１００／ｍｍ^３未満のＣＤ４＋細胞数、７５／ｍｍ^３未満のＣＤ４＋細胞数、または５０／ｍｍ^３未満のＣＤ４＋細胞数を有する。

【1676】

ＣＤ４細胞試験は通常、ｍｍ^３中の細胞数として報告される。正常なＣＤ４数は５００～１，６００であり、ＣＤ８数は３７５～１，１００である。ＣＤ４数はＨＩＶを有する人において劇的に下落する。

【1677】

本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫無防備状態の対象のいずれかは、男性のヒトまたは女性のヒトである。

【1678】

１１．免疫化スケジュール
一部の事例では、少なければ１回用量の本発明による免疫原性組成物のみが必要であるが、より高い免疫不全または免疫未成熟の状態などの一部の状況下においては、２回目、３回目、または４回目の用量を与え得る。初回ワクチン接種の後、対象は、十分に間隔をあけた１回または数回のブースター免疫化を受けることができる。

【1679】

ある実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種スケジュールは単一用量である。特定の実施形態では、前記単一用量スケジュールは少なくとも２歳の健康な人用である。

【1680】

ある実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種スケジュールは複数用量スケジュールである。複数用量スケジュールは、多くの場合、免疫不全（ヒトの高齢者もしくはヒトの免疫無防備状態の個体など）または免疫未成熟（ヒトの新生児（すなわち３カ月齢未満）、乳児（すなわち３カ月齢～１歳）、もしくは幼児（すなわち１歳～４歳など））等の状態において使用する。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。

【1681】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。

【1682】

特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。

【1683】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。

【1684】

特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。

【1685】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約４カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、または４カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量、または、それぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。

【1686】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、１歳で少なくとも１回の用量（例えば、１回、２回、または３回の用量）、次いで少なくとも１回の幼児用量からなる。

【1687】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）２回または３回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記複数用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）３回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。

【1688】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢でのワクチンの４回用量シリーズからなる。

【1689】

ある実施形態では、プライム用量を０日目に与え、１つまたは複数のブースター用量を、用量間が約２～約２４週間の範囲である間隔、好ましくは４～８週間の投薬間隔で与える。

【1690】

ある実施形態では、プライム用量を０日目に与え、ブーストを約３カ月後に与える。

【1691】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。

【1692】

特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。

【1693】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。

【1694】

本発明のある態様は、第２の免疫原性組成物との同時、同時発生的、併用的、または連続的投与のための、本発明の任意の免疫原性組成物に関する。本発明のある態様は、同時、同時発生的、併用的、または連続的投与のための、本明細書に開示される任意のキットに関する。

【1695】

「同時投与」とは、単一の単位剤中での治療有効用量の第１および第２の免疫原性組成物の投与を意味する。

【1696】

「同時発生的投与」とは、同じアクセス部位を介するが、別個の単位剤形で、互いに短い期間内で、治療有効用量の第１および第２の免疫原性組成物を投与することを意味する。同時発生的投与は、本質的に、２つの免疫原性組成物を、ほぼ同時であるが別個の剤形で、同じアクセス部位を介して投与することである。第１および第２の免疫原性組成物の同時発生的投与は多くの場合、同じ医師の外来診療中に起こる。

【1697】

「併用的投与」とは、別個の単位剤形で、互いに短い期間内、異なる解剖学的部位で、治療有効用量の第１および第２の免疫原性組成物を投与することを意味する。併用的投与は、本質的に、２つの免疫原性組成物を、ほぼ同時であるが別個の剤形で、かつ異なる解剖学的部位に投与することである。第１および第２の免疫原性組成物の併用的投与は多くの場合、同じ医師の外来診療中に起こる。

【1698】

「連続的投与」とは、治療有効用量の第１または第２の免疫原性組成物の単独で投与し、次いで、少なくとも約１カ月の間隔後に治療有効用量の残りの免疫原性組成物を投与することを意味する。例えば、一実施形態では、第１の免疫原性組成物が単一剤形で投与され、その後、少なくとも約１カ月の間隔後に、第２の免疫原性組成物が別個の単一剤形で投与される。代替実施形態では、第２の免疫原性組成物が単一剤形で投与され、その後、少なくとも約１カ月の間隔後に、第１の免疫原性組成物が別個の単一剤形で投与される。第１および第２の免疫原性組成物の連続的投与は多くの場合、異なる医師の外来診療で起こる。

【1699】

本発明のある態様では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）を、第２の免疫原性組成物と同時に、同時発生的に、併用的に、または連続的に投与される。ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1700】

したがって、本発明の態様は、第２の免疫原性組成物と同時に、同時発生的に、併用的に、または連続的に使用するための、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）に関する。ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1701】

一部の事例では、少なければ１回用量の免疫原性組成物のそれぞれのみが必要であるが、一部の状況下においては、２回目、３回目、または４回目の用量の、免疫原性組成物の１つまたはそれぞれを与え得る。初回ワクチン接種の後、対象は、十分に間隔をあけた１回または数回のブースター免疫化を受けることができる。

【1702】

ある実施形態では、本発明は、第２の免疫原性組成物との同時投与のための、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）に関する。ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1703】

ある実施形態では、前記同時投与のワクチン接種スケジュールは単一用量である。特定の実施形態では、前記単一用量スケジュールは少なくとも２歳の健康な人用である。

【1704】

ある実施形態では、前記同時投与のワクチン接種スケジュールは複数用量スケジュールである。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。

【1705】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。

【1706】

特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。

【1707】

【1708】

【1709】

【1710】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢で投与するワクチンの４回用量シリーズからなる。

【1711】

【1712】

ある実施形態では、プライム用量を０日目に与え、ブースター用量を約３カ月後に与える。

【1713】

特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている５回、６回、７回、または８回用量シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。

【1714】

ある実施形態では、本発明は、第２の免疫原性組成物との併用的投与のための、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）に関する。ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1715】

ある実施形態では、前記併用的投与のワクチン接種スケジュールは単一用量である（第１および第２の免疫原性組成物の投与は、別個の単位剤形であるが、免疫化スケジュールを定義する目的のために単一用量としてみなされる）。特定の実施形態では、前記単一用量スケジュールは少なくとも２歳の健康な人用である。

【1716】

ある実施形態では、前記併用的投与のワクチン接種スケジュールは複数用量スケジュールである（第１および第２の免疫原性組成物の投与は、別個の単位剤形であるが、免疫化スケジュールを定義する目的のために単一用量としてみなされる）。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。

【1717】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。

【1718】

【1719】

別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約４カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、または４カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量、または、それぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。

【1720】

【1721】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）２回または３回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）３回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、約２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。

【1722】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢で投与するワクチンの４回用量シリーズからなる。

【1723】

ある実施形態では、プライム用量を０日目に与え、１つまたは複数のブースター用量を、約２～約２４週間の範囲である間隔、好ましくは４～８週間の投薬間隔で与える。

【1724】

ある実施形態では、プライム用量を０日目に与え、ブーストを約３カ月後に与える。

【1725】

【1726】

別の実施形態では、本発明は、第２の免疫原性組成物との同時発生的投与のための、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）に関する。ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1727】

ある実施形態では、前記同時発生的投与のワクチン接種スケジュールは単一用量である（第１および第２の免疫原性組成物の投与は、別個の単位剤形であるが、免疫化スケジュールを定義する目的のために単一用量としてみなされる）。特定の実施形態では、前記単一用量スケジュールは少なくとも２歳の健康な人用である。

【1728】

ある実施形態では、前記同時発生的投与のワクチン接種スケジュールは、複数用量スケジュール、特に、併用的投与について上記に開示されている複数スケジュールのいずれかである。

【1729】

ある実施形態では、本発明は、第２の免疫原性組成物との連続的投与のための、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）に関する。ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1730】

ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目に投与され、第２の免疫原性組成物が２回目に投与される。別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目に投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目に投与される。

【1731】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、２回、３回、４回、５回、６回、７回、または８回用量シリーズからなる。

【1732】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、２回、３回、または４回用量シリーズからなる。

【1733】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、２回用量シリーズからなる。ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている２回用量シリーズからなる。

【1734】

前記２回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目に投与され、第２の免疫原性組成物が２回目に投与される。別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目に投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目に投与される。

【1735】

前記２回用量スケジュールのある実施形態では、１回目および２回目の用量が１歳で投与される。前記２回用量スケジュールのある実施形態では、１回目の用量が１歳で投与され、２回目の用量は幼児用量である。ある実施形態では、前記幼児用量は１２～１８カ月齢で投与される。ある実施形態では、前記幼児用量は１２～１５カ月齢で投与される。

【1736】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズからなる。

【1737】

前記３回用量スケジュールのある実施形態では、１回目および２回目の用量が１歳で投与され、３回目の用量は幼児用量である。ある実施形態では、１回目および２回目の用量は、２カ月齢で開始し、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられており（例えば用量間が２８～５６日間である）、３回目の用量は、１２～１８カ月齢での幼児用量である。ある実施形態では、１回目および２回目の用量は、２カ月齢で開始し、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられており（例えば用量間が２８～５６日間である）、３回目の用量は、１２～１５カ月齢での幼児用量である。

【1738】

前記３回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が最初の２回の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される。

【1739】

前記３回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が最初の２回の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される。

【1740】

前記３回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される。

【1741】

前記３回用量スケジュールのさらに別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与される。

【1742】

前記３回用量スケジュールのさらに別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与される。

【1743】

前記３回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与される。

【1744】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、４回用量シリーズからなる。

【1745】

特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約１２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズからなる。

【1746】

前記４回用量スケジュールのある実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約４カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、または４カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量、または、それぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている３回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。

【1747】

前記４回用量スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、および３回目の用量が１歳で投与され、４回目の用量は幼児用量である。

【1748】

ある実施形態では、前記４回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）３回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）３回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。

【1749】

ある実施形態では、複数用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢でのワクチンの４回用量シリーズからなる。

【1750】

前記４回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が最初の３回の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1751】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が最初の３回の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1752】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される。

【1753】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される。

【1754】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1755】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目および２回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1756】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目、３回目および４回目の用量として投与される。

【1757】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目、３回目および４回目の用量として投与される。

【1758】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1759】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1760】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される。

【1761】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が３回目および４回目の用量として投与される。

【1762】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1763】

前記４回用量スケジュールの別の実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の用量として投与され、第２の免疫原性組成物が４回目の用量として投与される。

【1764】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、５回用量シリーズからなる。

【1765】

特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約１２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズからなる。

【1766】

ある実施形態では、前記５回用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約３カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の用量、または、それぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている４回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の用量からなる。

【1767】

前記５回用量スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目および４回目の用量が１歳で投与され、５回目の用量は幼児用量である。ある実施形態では、前記５回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）４回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）４回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。

【1768】

前記５回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど、以下の表中で第１のＩＣと示す）および第２の免疫原性組成物（上記セクション３に開示されているものなど、以下の表中で第２のＩＣと示す）は以下の順序で投与し得る：

【1769】

【表3】

【1770】

上記表は、様々な用量について第１および第２の免疫原性組成物（それぞれ第１のＩＣおよび第２のＩＣと示す）の投与順序を提供し、例えば、スケジュール番号１は以下のように読む：前記５回用量スケジュールの実施形態では、第２の免疫原性組成物が１回目、２回目、３回目、および４回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が５回目の用量として投与される。

【1771】

ある実施形態では、第１および第２の免疫原性組成物の投与順序は、スケジュール１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１６、１７、１８、１９、２０、または２１に従うものである。

【1772】

ある実施形態では、前記連続的用量のワクチン接種スケジュールは、６回用量シリーズからなる。

【1773】

特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約１２カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約２カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズからなる。

【1774】

ある実施形態では、前記６回用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の６回目の用量からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の６回目の用量、または、それぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている５回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の６回目の用量からなる。

【1775】

前記６回用量スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目、４回目、および５回目の用量が１歳で投与され、６回目の用量は幼児用量である。ある実施形態では、前記６回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）５回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）５回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。

【1776】

前記６回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）および第２の免疫原性組成物（上記セクション３に開示されているものなど）は、５回用量スケジュールについて提供した３０個のスケジュールのいずれかに従った順序（上記表参照、スケジュール１～３０）、次いで６回目の用量で投与される。ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物は６回目の用量として投与される。別の実施形態では、第２の免疫原性組成物は６回目の用量として投与される。

【1777】

ある実施形態では、前記連続的用量のワクチン接種スケジュールは、７回用量シリーズからなる。

【1778】

特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約１２カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約２カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズからなる。

【1779】

ある実施形態では、前記７回用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている６回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の７回目の用量からなる。

【1780】

前記７回用量スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、および６回目の用量が１歳で投与され、７回目の用量は幼児用量である。ある実施形態では、前記７回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～４０日間である）６回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～４０日間である）６回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。

【1781】

前記７回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）および第２の免疫原性組成物（上記セクション３に開示されているものなど）は、６回用量スケジュールについて提供したスケジュールのいずれかに従った順序（上記参照）、次いで７回目の用量で投与される。ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物は７回目の用量として投与される。別の実施形態では、第２の免疫原性組成物は７回目の用量として投与される。

【1782】

ある実施形態では、前記連続的用量のワクチン接種スケジュールは、８回用量シリーズからなる。

【1783】

特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約１２カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１～約２カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズ、またはそれぞれの用量が約２カ月の間隔によって隔てられている８回用量シリーズからなる。

【1784】

ある実施形態では、前記８回用量スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている７回用量シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の８回目の用量からなる。

【1785】

前記８回用量スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、６回目、および７回目の用量が１歳で投与され、８回目の用量は幼児用量である。ある実施形態では、前記８回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～４０日間である）７回用量シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～４０日間である）７回用量シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。

【1786】

前記８回用量スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）および第２の免疫原性組成物（上記セクション３に開示されているものなど）は、７回用量スケジュールについて提供したスケジュールのいずれかに従った順序（上記参照）、次いで８回目の用量で投与される。ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物は８回目の用量として投与される。別の実施形態では、第２の免疫原性組成物は８回目の用量として投与される。

【1787】

ある実施形態では、本発明は、
（ａ）本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）、および
（ｂ）本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）と第２の免疫原性組成物との併用的投与
の連続的投与に関する。

【1788】

ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1789】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、２回投与シリーズからなる。ある実施形態では、ワクチン接種スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズからなる。ある実施形態では、ワクチン接種スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズ、または約２カ月の間隔によって隔てられている２回投与シリーズからなる。

【1790】

前記スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目に投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目に投与される。別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目に投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目に投与される。

【1791】

前記２回投与スケジュールのある実施形態では、１回目および２回目の投与が１歳で投与される。前記２回投与スケジュールのある実施形態では、１回目の投与が１歳で投与され、２回目の投与は幼児投与である。ある実施形態では、前記幼児投与は１２～１８カ月齢で投与される。ある実施形態では、前記幼児投与は１２～１５カ月齢で投与される。

【1792】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、３回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズ、またはそれぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズからなる。

【1793】

前記３回投与スケジュールのある実施形態では、１回目および２回目の投与が１歳で投与され、３回目の投与は幼児投与である。ある実施形態では、１回目および２回目の投与は、２カ月齢で開始し、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられており（例えば投与間が２８～５６日間である）、３回目の投与は１２～１８カ月齢での幼児投与である。ある実施形態では、１回目および２回目の投与は、２カ月齢で開始し、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられており（例えば投与間が２８～５６日間である）、３回目の投与は１２～１５カ月齢での幼児投与である。

【1794】

前記３回投与スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が３回目の投与で投与される。

【1795】

前記３回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目および２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与される。

【1796】

前記３回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与される。

【1797】

前記３回投与スケジュールのさらに別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が３回目の投与で投与される。

【1798】

前記３回投与スケジュールのさらに別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目および３回目の投与で投与される。

【1799】

前記３回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の投与で投与される。

【1800】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、４回投与シリーズからなる。

【1801】

ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズ、またはそれぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズからなる。

【1802】

前記４回投与スケジュールのある実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約４カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の投与からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、または４カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の投与からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の投与からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の投与、または、それぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている３回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の投与からなる。

【1803】

前記４回投与スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目および３回目の投与が１歳で投与され、４回目の投与は幼児投与である。ある実施形態では、前記４回投与スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～５６日間である）３回投与シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児投与からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～５６日間である）３回投与シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児投与からなる。

【1804】

ある実施形態では、前記４回投与スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢での投与シリーズからなる。

【1805】

前記４回投与スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目、２回目および３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が４回目の投与で投与される。

【1806】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目、２回目、および３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される。

【1807】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が３回目および４回目の投与で投与される。

【1808】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目および２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の投与で投与される。

【1809】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目および２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される。

【1810】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目および２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が４回目の投与で投与される。

【1811】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目、３回目および４回目の投与で投与される。

【1812】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目、３回目および４回目の投与で投与される。

【1813】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が４回目の投与で投与ｖる。

【1814】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される。

【1815】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が３回目および４回目の投与で投与される。

【1816】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が３回目および４回目の投与で投与される。

【1817】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が２回目および３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が４回目の投与で投与される。

【1818】

前記４回投与スケジュールの別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が２回目および３回目の投与で投与され、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が４回目の投与で投与される。

【1819】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、５回投与シリーズからなる。

【1820】

ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズ、またはそれぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズからなる。

【1821】

ある実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月～約３カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の投与からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズ、次いで１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の投与からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの用量が約１カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の投与、または、それぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている４回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の５回目の投与からなる。

【1822】

前記５回投与スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目および４回目の投与が１歳で投与され、５回目の投与は幼児用量である。ある実施形態では、前記５回投与スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）４回投与シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児投与からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば用量間が２８～５６日間である）４回投与シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児投与からなる。

【1823】

前記５回投与スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（以下の表中で第１のＩＣと示す）、および本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与（以下の表で第１のＩＣ／第２のＩＣと示す）は、以下の順序で投与し得る：

【1824】

【表4-1】

【1825】

【表4-2】

【1826】

上記表は、様々な用量について、本発明による第１の免疫原性組成物（以下の表中で第１のＩＣと示す）、および本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与（以下の表で第１のＩＣ／第２のＩＣと示す）の投与順序を提供し、例えば、スケジュール番号１は以下のように読む：前記５回投与スケジュールの実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与が１回目、２回目、３回目、および４回目の用量として投与され、本発明による第１の免疫原性組成物が５回目の用量として投与される。

【1827】

ある実施形態では、投与順序は、スケジュール１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２２、または２３に従うものである。

【1828】

ある実施形態では、前記連続的用量のワクチン接種スケジュールは、６回投与シリーズからなる。

【1829】

ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズ、またはそれぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズからなる。

【1830】

ある実施形態では、前記６回投与スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の６回目の投与からなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の６回目の投与、または、それぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている５回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の６回目の投与からなる。

【1831】

前記６回投与スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目、４回目、および５回目の投与が１歳で投与され、６回目の投与は幼児投与である。ある実施形態では、前記６回投与スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～５６日間である）５回投与シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児投与からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～５６日間である）５回投与シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児投与からなる。

【1832】

前記６回投与スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物、および本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与は、５回投与スケジュールについて提供した３０個のスケジュールのいずれかに従った順序（上記表参照、スケジュール１～３０）、次いで６回目の投与で投与される。ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物は６回目の投与で投与される。別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与は６回目の投与で投与される。

【1833】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、７回投与シリーズからなる。

【1834】

ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズ、またはそれぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズからなる。

【1835】

ある実施形態では、前記７回投与スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている６回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の７回目の投与からなる。

【1836】

前記７回投与スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、および６回目の投与が１歳で投与され、７回目の投与は幼児投与である。ある実施形態では、前記７回投与スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～４０日間である）６回投与シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児投与からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～４０日間である）６回投与シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児投与からなる。

【1837】

前記７回投与スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）、および本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与は、６回投与スケジュールについて提供したスケジュールのいずれかに従った順序（上記参照）、次いで７回目の投与で投与される。ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物は７回目の投与で投与される。別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与は７回目の投与で投与される。

【1838】

ある実施形態では、前記連続的投与のワクチン接種スケジュールは、８回投与シリーズからなる。

【1839】

ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約１２カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月～約６カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズからなる。特定の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１、２、３、４、５、または６カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズからなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズからなる。別の実施形態では、前記スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズ、またはそれぞれの投与が約２カ月の間隔によって隔てられている８回投与シリーズからなる。

【1840】

ある実施形態では、前記８回投与スケジュールは、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている７回投与シリーズ、次いで１回目の投与の約１０カ月～約１３カ月後の８回目の投与からなる。

【1841】

前記８回投与スケジュールのある実施形態では、１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、６回目、および７回目の投与が１歳で投与され、８回目の投与は幼児投与である。ある実施形態では、前記８回投与スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～４０日間である）７回投与シリーズ、次いで１２～１８カ月齢での幼児投与からなる。ある実施形態では、前記スケジュールは、２カ月齢で開始する、それぞれの投与が約１カ月の間隔によって隔てられている（例えば投与間が２８～４０日間である）７回投与シリーズ、次いで１２～１５カ月齢での幼児投与からなる。

【1842】

前記８回投与スケジュールのある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）、および本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与は、７回投与スケジュールについて提供したスケジュールのいずれかに従った順序（上記参照）、次いで８回目の用量で投与される。ある実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物は８回目の用量で投与される。別の実施形態では、本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与は８回目の用量で投与される。

【1843】

ある実施形態では、上記に開示されている投与スケジュールにおいて、併用的投与は同時発生的投与によって置き換えられる。

【1844】

ある実施形態では、本発明は、
（ａ）第２の免疫原性組成物（上記セクション３のものなど）、および
（ｂ）本発明による第１の免疫原性組成物（上記セクション２のものなど）と前記第２の免疫原性組成物との併用的投与
の連続的投与に関する。

【1845】

ある実施形態では、前記第２の免疫原性組成物は、上記セクション３に開示されている免疫原性組成物のいずれかである。

【1846】

ある実施形態では、投与スケジュールは、本発明による第１の免疫原性組成物の連続的投与、および本発明による第１の免疫原性組成物と第２の免疫原性組成物との併用的投与について上記に開示されているスケジュールのいずれか１つ（第１５１頁の下～第１６４頁の上）であり、前記スケジュール中において、（ａ）の前記第２の免疫原性組成物の投与で（ａ）の第１の免疫原性組成物の投与を置き換える。

【1847】

ある実施形態では、上記に開示されている投与スケジュールのいずれかにおいて、併用的投与は同時発生的投与によって置き換えられる。

【1848】

ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は筋肉内または皮下注射によって投与される。

【1849】

ある実施形態では、免疫原性組成物は大腿または腕への筋肉内注射によって投与される。ある実施形態では、注射部位は大腿前外側筋または三角筋である。

【1850】

ある実施形態では、免疫原性組成物は大腿または腕への皮下注射によって投与される。ある実施形態では、注射部位は、大腿前外側筋の上部の脂肪組織または三頭筋の上部の脂肪組織である。

【1851】

併用的投与の場合、１回目の注射を一方の大腿に行い、２回目を他方の大腿に行うことができる（好ましくは大腿前外側筋中）。または、１回目の注射を一方の腕に行い、２回目を他方の腕に行うことができる（好ましくは三角筋中）。また、１回目の注射を大腿に行い、２回目を腕に行う、または１回目の注射を腕に行い、２回目を大腿に行うこともできる。

【1852】

ある態様では、本発明は、上記に開示されている免疫化スケジュールのいずれかにおいて使用するための、本発明のキット（上記セクション４のものなど）に関する。

【1853】

本明細書で使用される場合、用語「約」は、記述された濃度範囲、時間枠、分子量、温度またはｐＨなどの、統計的に意味のある値の範囲内にあることを意味する。そのような範囲は、所与の値または範囲の１桁分以内、典型的には、２０％以内、より典型的には、１０％以内、さらにより典型的には、５％以内または１％以内であってもよい。時には、そのような範囲は、所与の値または範囲の測定および／または決定のために使用される標準的な方法に典型的な実験誤差以内であってもよい。用語「約」によって包含される許容可能な変動は、試験下の特定の系に依存し、当業者であれば容易に理解できる。本出願内である範囲が記載される場合はいつでも、その範囲内の全整数も、本開示の実施形態として企図される。

【1854】

本明細書における用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、全ての例において、それぞれ、用語「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆ）」と置換可能であってもよいことが本発明者らによって意図される。

【1855】

本明細書でそれぞれ互換的に使用される、「免疫原性量」、「免疫学的有効量」、「治療有効量」、「予防有効量」、または「用量」は、一般的には、当業者に公知の標準的なアッセイによって測定した場合、細胞性（Ｔ細胞）または体液性（Ｂ細胞もしくは抗体）応答のいずれか、またはその両方である免疫応答を惹起するのに十分な抗原または免疫原性組成物の量を指す。

【1856】

本特許明細書内で引用される全ての参考文献または特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【1857】

本発明は、添付の実施例に例示される。以下の実施例は、そうでなければ詳細に説明される場合を除いて、当業者には周知であり、日常的である標準的な技術を使用して実行される。実施例は、例示的であるが、本発明を限定するものではない。

【1858】

ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳは、多糖および多糖－タンパク質コンジュゲートの分子量の決定のために使用される。ＳＥＣは、流体力学的体積によって多糖を分離するために使用される。屈折率（ＲＩ）および多角度レーザー光散乱（ＭＡＬＬＳ）検出器は、分子量の決定のために使用される。光が物質と相互作用する時、それは散乱し、散乱光の量は、濃度、ｄｎ／ｄｃ（比屈折率増分）の平方、および物質のモル質量と関連する。分子量測定値は、ＭＡＬＬＳ検出器からの散乱光シグナルおよびＲＩ検出器からの濃度シグナルからの読取り値に基づいて算出される。

【1859】

本明細書に開示される肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に特異的なマウス血清中の機能的抗体を測定するためには、オプソノファゴサイトーシス活性（ＯＰＡ）アッセイが使用される。試験血清は、莢膜多糖特異的免疫グロブリンが、細菌をオプソニン化し、補体沈着を誘発することによって、食細胞による細菌のファゴサイトーシスおよび死滅を容易にする能力を測定するアッセイ反応において設定される。ＯＰＡ力価は、試験血清を含まない対照ウェルと比較して細菌数の５０％の減少をもたらす希釈率の逆数と定義される。ＯＰＡ力価は、この５０％死滅カットオフを包含する２つの希釈率から内挿される。

【1860】

ＯＰＡ手順は、以下の改変を伴う、Ｈｕら（２００５）ＣｌｉｎＤｉａｇｎＬａｂＩｍｍｕｎｏｌ１２（２）：２８７～２９５に記載の方法に基づくものである。試験血清を、２．５倍に段階希釈し、マイクロタイターアッセイプレートに添加する。生きた血清型標的細菌株をウェルに添加し、プレートを２５℃で３０分間振とうする。次いで、分化したＨＬ－６０細胞（食細胞）および子ウサギ血清（３～４週齢、ＰＥＬ－ＦＲＥＥＺ（登録商標）、１２．５％最終濃度）をウェルに添加し、プレートを３７℃で４５分間振とうする。反応を終結させるために、８０μＬの０．９％ＮａＣｌを全てのウェルに添加し、混合し、１０μＬアリコートを、２００μＬの水を含有するＭＵＬＴＩＳＣＲＥＥＮ（登録商標）ＨＴＳＨＶフィルタープレート（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ（登録商標））のウェルに移す。液体を減圧下でプレートを通して濾過し、１５０μＬのＨＹＳＯＹ（登録商標）培地を各ウェルに添加し、濾過する。次いで、フィルタープレートを３７℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした後、ＤｅｓｔａｉｎＳｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）で固定する。次いで、プレートをクマシーブルーで染色し、１回脱色する。コロニーを画像化し、ＣｅｌｌｕｌａｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｉｍｉｔｅｄ（ＣＴＬ）（ＳｈａｋｅｒＨｅｉｇｈｔｓ，ＯＨ）ＩＭＭＵＮＯＳＰＯＴ（登録商標）Ａｎａｌｙｚｅｒ上で計数する。生のコロニー数を使用して、死滅曲線をプロットし、ＯＰＡ力価を算出する。

【1861】

本明細書に記載された全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当業者のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物または特許出願が、参照により組み込まれると具体的かつ個別的に示されたのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【1862】

前記発明を明確に理解するために図表および例によっていくらか詳細に記載してきたが、ある特定の変化および改変を、添付の特許請求の範囲内で実施することができる。

【国際調査報告】

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