▶ ビー － ポータル バイオロジクス、インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-06-10
(54)【発明の名称】融合構築物及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 19/00 20060101AFI20220603BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20220603BHJP
C07K 7/04 20060101ALI20220603BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20220603BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220603BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220603BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20220603BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20220603BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20220603BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220603BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20220603BHJP
A61K 47/62 20170101ALI20220603BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220603BHJP
A61K 39/44 20060101ALI20220603BHJP
A61K 38/02 20060101ALI20220603BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20220603BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20220603BHJP
【ＦＩ】
C07K19/00 ZNA
C12N15/62 Z
C07K7/04
C12N15/13
A61P25/28
A61P25/00
A61P25/16
A61P25/02
A61P21/00
A61P43/00 111
A61K47/64
A61K47/62
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K39/44
A61K38/02
C07K16/18
C12N15/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021560384
(86)(22)【出願日】2020-04-02
(85)【翻訳文提出日】2021-11-29
(86)【国際出願番号】 US2020026349
(87)【国際公開番号】W WO2020206093
(87)【国際公開日】2020-10-08
(31)【優先権主張番号】62/829,776
(32)【優先日】2019-04-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521441102
【氏名又は名称】ビー － ポータル バイオロジクス、インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000855
【氏名又は名称】特許業務法人浅村特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】チェイン、ダニエル
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076CC01
4C076CC41
4C076EE59
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA07
4C084BA41
4C084BA42
4C084BA44
4C084DC50
4C084NA13
4C084ZA021
4C084ZA151
4C084ZA161
4C084ZA221
4C084ZA941
4C084ZC411
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB50
4C085CC03
4C085CC31
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG06
4C085GG08
4C085GG10
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA21
4H045FA74
(57)【要約】
融合構築物が説明される。融合構築物は、ペプチド又はタンパク質（例えば、抗体）に融合される、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８のペプチドを含有する。ペプチド又はタンパク質と比較すると、融合構築物はＢＢＢを通過する向上した透過性を呈し、後管腔表面取込み後に、ＢＢＢの反管腔側表面上にて放出される。融合構築物は、疾患の創薬、診断、予防及び処置に使用され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉ：Ｍ－Ｌ－Ｃ
（式Ｉ）
の融合構築物であって、式中、Ｍは抗体、プロネクチン、アフィボディー、アフィリン、アンチカリン、アトリマー、アビマー、ＤＡＲＰイン、フィノマー、二重環状ペプチド、及び他の非抗体タンパク質からなる群から選択され、
Ｌは任意のリンカーであり、
Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである、融合構築物。
【請求項2】
Ｍが抗体である、請求項１に記載の融合構築物。
【請求項3】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号３９のペプチドのアミノ末端が、前記抗体の軽鎖又は重鎖のカルボキシル末端又はアミノ末端のいずれかに融合される、請求項２に記載の融合構築物。
【請求項4】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８のペプチドのアミノ末端が、前記抗体の前記重鎖の前記カルボキシル末端に融合される、請求項３に記載の融合構築物。
【請求項5】
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号３９のペプチドのアミノ末端が、前記抗体の軽鎖又は重鎖のカルボキシル末端及びアミノ末端の両方に融合される、請求項２に記載の融合構築物。
【請求項6】
前記抗体が、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、配列ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項２に記載の融合構築物。
【請求項7】
前記抗体が、１×１０－９～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～１×１０－２ ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、並びに１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない、請求項６に記載の融合構築物。
【請求項8】
前記抗体が、配列番号１との検出可能な結合を示さない、請求項７に記載の融合構築物。
【請求項10】
前記融合構築物がタウオパチーの処置用である、請求項１～８のいずれか一項に記載の融合構築物。
【請求項11】
前記タウオパチーが、ピック病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭葉変性症、前頭側頭型認知症、外傷性脳損傷、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症及び多発性硬化症からなる群から選択される、請求項１０に記載の融合構築物。
【請求項12】
前記タウオパチーがアルツハイマー病である、請求項１１に記載の融合構築物
【請求項13】
血液脳関門（ＢＢＢ）を横断してペプチドを送達する方法であって、ペプチドのカルボキシル末端を、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有するペプチドのアミノ末端に、直接、又はリンカーを介して融合することと、前記ＢＢＢと接触した状態で、結果として得られた融合構築物を配置することと、を含む、方法。
【請求項14】
前記結果として得られた融合構築物が、請求項１～８のいずれか一項に記載の構築物である、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、参照として本明細書に組み入れられる２０１９年４月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８２９，７７６号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【0002】
多くの抗体が、中枢神経系（ＣＮＳ）障害を処置するために開発されてきた。ただし現在まで、全身投与後に脳で有効性を示す、米国食品医薬品局により認可されたモノクローナル抗体は存在していない。主な理由は、治療用モノクローナル抗体及び他の組換えタンパク質治療の生物学的活性が、血液脳関門（「ＢＢＢ」）を通過するその能力により制限されているという事実に起因する可能性が高い。
【0003】
「血液脳関門」は、脳の微小血管系固有の特性を説明するために使用される用語である。脳血管系は連続した非有窓性血管であるが、血液と脳の間の分子、イオン及び細胞の移動を厳格に調節する一連の追加特性をも含有する。この厳重に拘束する関門能力により、ＢＢＢ血管内皮細胞はＣＮＳ恒常性を厳格に調節する。これは、適切な神経機能を可能とし、並びに毒物、病原体、炎症、傷害、及び疾患からＣＮＳを保護する上で重要である。ただし、ＢＢＢの拘束性質はまた、ＣＮＳへの薬物送達、特に抗体といった大きなタンパク質にとっては障壁にもなる。通常、末梢投与後には、ＩｇＧの注入投与量の０．１％未満が脳に到達する。つまり、治療応答を生み出すために、脳内で十分な濃度の抗体を得ることは困難である。薬理学的に適切なレベルで脳を透過可能である抗体の開発は、多くのＣＮＳ障害の処置にとっては重要な治療目標である。
【0004】
抗体を含む様々な種類の生物製剤への脳のばく露を向上させ、患者の入院を必要とし、高度に侵襲的で感染症を容易に引き起こし得る、脳脊髄液体への直接注射の必要を回避するために様々な方法が発明されてきた。最も直接的なアプローチは、傍細胞通過を可能とする密接結合を破壊することである。しかしこのアプローチは、治療薬だけではなく、脳環境にとって害となり得る他の血液成分にとってもまた侵入を可能とするため、大きな分子の侵入にとっては選択できない手技である。同様のアプローチは、マンニトール、脳血管内皮細胞の縮みを引き起こす浸透物質を使用することである。しかし、この薬剤は迅速で広範なＢＢＢ開放を誘発し、循環器系の毒性があると考えられる成分に脳組織をばく露する。別の同様のアプローチは、集束超音波の使用である。これは、特定の脳領域でＢＢＢの透過性を過渡的に向上させる方法である。ただし、これもまたＢＢＢの非選択的交差を可能とし、そのために害があると考えられる血液由来の物質にばく露することになる。
【0005】
モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）といった巨大分子は、脳血管内皮細胞を横断する３種類の小胞を利用可能である。これはすなわち、（ｉ）クラスリン被覆小胞、（ｉｉ）脂質ラフトから生成されるカベオラドメイン、及び（ｉｉｉ）マクロ飲作用小胞である。クラスリン被覆小胞を主に使用する大きな分子のトランスサイトーシスに関して、受容体が、脳血管内皮細胞を横断した取込み及び輸送に必要とされる。このプロセスは、「受容体媒介性トランスサイトーシス」（「ＲＭＴ」）と呼ばれている。これは、結合時に特異的な受容体によって協調されることから、カーゴ送達にて選択的である、唯一公知の小胞系である。この固有の選択性は非常に有利な点であり、これにより、ＢＢＢを横断して大きな分子を輸送しようとする大半の試みはＲＭＴに基づくアプローチを使用してきた。例えば、トランスフェリン含有ナノ粒子又は受容体に対する腕及び治療標的に対する第２の腕から構成される、二重特異性抗体を使用することによるアプローチである。
【0006】
ジスルフィド結合により共に結合される２つ以上のポリペプチド鎖から構成される多量体タンパク質のように、抗体はＲＭＴ、及びＢＢＢを介する輸送に対して特別な課題を提示する。
【0007】
ＲＭＴを使用する二重特異性抗体は、脳実質に到達するｍＡｂの量において、比較的わずかな増加（大半の場合、注入量の約１％の量）をもたらす。更に、一価の抗体は治療標的に対する有効性を低下させる可能性がある。加えて、二重特異性抗体は開発の複雑性及び製造コストを著しく増加させる。受容体に対する抗体リガンド（すなわち、二重特異性抗体の受容体に対する腕）を必要とせず、天然リガンドの結合、例えば、トランスフェリン受容体に対するトランスフェリンの結合に干渉しない方法を有することが望ましい。これは、トランスフェリンの場合には鉄の輸送といった受容体の生理学的輸送機能に干渉することが理由である。
【0008】
重要なことには、細胞及びインビボデータに基づく論文は、抗体のアビディティー（Ｗｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、親和性（Ｂｉｅｎ－Ｌｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４）及び原子価（Ｎｉｅｗｏｅｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４）が脳血管内皮細胞を横断する輸送効率において重大な効果を有するという、ＢＢＢ受容体結合の方法の重要性を説明する。データはまた、内在リガンド結合は、異なるエピトープに結合し得る遺伝子操作されたｍＡｂと比較して受容体に様々に影響する可能性があることを示している。これらの論文は、トランスサイトーシス受容体との係合が細胞内選別に直接影響を及ぼし、特定の形式では、脳血管内皮細胞のエンドソーム系内の非生産的な輸送及び捕捉をもたらすという強力な証拠を提供する。この非生産的なＢＢＢの交差は、伝統的なｍＡｂを使用して説明される（Ｍｏｏｓ ａｎｄ Ｍｏｒｇａｎ，２００１；Ｍａｎｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。したがって、ＢＢＢ内腔でのリガンドと受容体間の初期相互作用は、インターナライズされた複合体の運命を決定する。こうした知見は、脳血管内皮細胞を通り、脳の実質空間へとうまく局在化される構築物を生成するために、リガンド－カーゴ受容体複合体の細胞内輸送を理解する必要性に焦点をあてる。
【0009】
巨大分子トランスサイトーシスを研究する際には、ＢＢＢは「ブラックボックス」として捉えられてきており、脳血管内皮細胞を横断する細胞内輸送を理解しようとする点ではほとんど関心を持たれてはこなかった。したがって、脳血管内皮細胞におけるトランスサイトーシス経路を介した細胞内輸送の制御は、未だにその多くが明らかにされていないままである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
ＢＢＢを横断してタンパク質を送達する方法を提供することが、本発明の目的である。
【0011】
ＢＢＢを横断してペプチドを送達する方法を提供することが、本発明の更なる目的である。
【0012】
ＢＢＢを横断して抗体を送達する方法を提供することが、本発明の追加の目的である。
【0013】
ＢＢＢを横断して非抗体タンパク質を送達する方法を提供することが、本発明の追加の目的である。
【0014】
疾患の創薬、診断、予防及び処置における使用について、融合構築物を提供することが、本発明の追加の目的である。
【0015】
トランスフェリンと競合せず（したがって、鉄輸送に干渉してはならない）、二重特異性抗体の開発及び製造に関連する複雑性及びコストを回避する合成融合ペプチドを提供することが、本発明の追加の目的である。
【0016】
カルボキシル末端又はアミノ末端において、アミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号２）、アミノ酸配列ＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号３）、アミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷ（配列番号４）、アミノ酸配列ＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷ（配列番号５）、又はアミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号２８）に融合されるペプチド又はタンパク質（例えば、抗体）を提供することが、本発明の更なる目的である。
【課題を解決するための手段】
【0017】
上記目的及び他の目的の助長に関して、本発明は、カルボキシル末端又はアミノ末端においてアミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号２）、アミノ酸配列ＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号３）、アミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷ（配列番号４）、アミノ酸配列ＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷ（配列番号５）、又はアミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号２８）を含有又はこれらからなるペプチドに、直接、又はリンカーを介して、融合されるペプチド又はタンパク質（例えば、抗体）を含む融合構築物に部分的に関する。アミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号２）、アミノ酸配列ＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号３）、アミノ酸配列ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷ（配列番号４）、アミノ酸配列ＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷ（配列番号５）、又はアミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号２８）は、ＢＢＢを介したペプチド又はタンパク質の輸送、及び／又はＢＢＢの反管腔側側面にてペプチド又はタンパク質の放出を調節する。非修飾ペプチド又はタンパク質と比較すると、融合構築物は、（ｉ）血管内皮エンドソーム－リソソーム系において捕捉を逃れることができる、若しくはより低速で分解することができる、（ｉｉ）向上したＢＢＢ透過性を有することができる、及び／又は（ｉｉｉ）向上した脳貯留を有することができる。融合構築物は、疾患の創薬、診断、予防及び処置に使用されてもよい。融合構築物はまた、診断アッセイにて使用されてもよく、及び／又はキットの一部として含まれてもよい。
【0018】
ほとんど取り込まれず、次いでリソソーム系により迅速に除去される非修飾ペプチド又はタンパク質と比較すると、融合構築物は、リソソーム系における捕捉及び／又は分解を逃れ、後管腔表面取込み後に反管腔側表面上にて放出される。同等の投与量の非修飾ペプチド又はタンパク質と比較すると、例えばリソソームによる融合構築物の除去又は捕捉が減少することから、融合構築物はしたがって、ＢＢＢに融合構築物をばく露、及び／又は融合構築物により長く（例えば、少なくとも約１０％長く）ばく露してから、脳内において（例えば、約３時間、６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間などで）、診断抗体及び治療抗体を含むより高濃度のペプチド又はタンパク質を提供することができる。したがって、融合構築物は非修飾ペプチド又はタンパク質よりも治療有効投与量が少量であり得る。
【0019】
加えて、非修飾ペプチド又はタンパク質と比較すると、本発明の融合構築物は、エンドソーム－リソソーム系にて実質的に捕捉されることなく、ＢＢＢの反管腔側表面上にて放出される。
【0020】
本発明は、式Ｉ：
Ｍ－Ｌ－Ｃ
（式Ｉ）
の融合構築物に特に関し、
式中、Ｍはペプチド又はタンパク質であり、
Ｌは任意のリンカーであり、
Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。Ｍは、直接又はＬを介して、そのカルボキシル末端又はアミノ末端に、又はその両方に、２価又は１価のいずれかで、Ｃへと融合されてもよい。Ｍは、例えば、約２ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ～約９００ｋＤａ、約５０ｋＤａ～約８００ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約７００ＫＤａ、約７０ｋＤａ～約６００ｋＤａ、約８０ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約９０ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、又は約１００ｋＤａ～約２００ｋＤａの分子量を有してもよい。Ｌは、例えば配列ＧＧＧＳ（配列番号６）のペプチドであってよく、又はこれを含まなくてもよい。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、捕捉を回避し、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した脳貯留を有する。特定の実施形態において、Ｍは例えば、抗体又は完全長タウタンパク質又は翻訳後に修飾されるタウタンパク質を標的とする非抗体タンパク質であってよく、抗体及び非抗体タンパク質は治療用であり、例えばタウオパチー（例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソン病、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）など）、タウ病態に関連する別の神経変性疾患（例えば、パーキンソン病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症）、並びに加齢関連性認知障害の処置、又は診断に使用されてもよい。また、インビボ及び／又はインビトロアッセイ及びキットに使用されてもよい。
Ｍ－Ｌ－Ｃ
（式Ｉ）
の融合構築物に特に関し、
式中、Ｍはペプチド又はタンパク質であり、
Ｌは任意のリンカーであり、
Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。Ｍは、直接又はＬを介して、そのカルボキシル末端又はアミノ末端に、又はその両方に、２価又は１価のいずれかで、Ｃへと融合されてもよい。Ｍは、例えば、約２ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ～約９００ｋＤａ、約５０ｋＤａ～約８００ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約７００ＫＤａ、約７０ｋＤａ～約６００ｋＤａ、約８０ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約９０ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、又は約１００ｋＤａ～約２００ｋＤａの分子量を有してもよい。Ｌは、例えば配列ＧＧＧＳ（配列番号６）のペプチドであってよく、又はこれを含まなくてもよい。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、捕捉を回避し、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した脳貯留を有する。特定の実施形態において、Ｍは例えば、抗体又は完全長タウタンパク質又は翻訳後に修飾されるタウタンパク質を標的とする非抗体タンパク質であってよく、抗体及び非抗体タンパク質は治療用であり、例えばタウオパチー（例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソン病、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）など）、タウ病態に関連する別の神経変性疾患（例えば、パーキンソン病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症）、並びに加齢関連性認知障害の処置、又は診断に使用されてもよい。また、インビボ及び／又はインビトロアッセイ及びキットに使用されてもよい。
【0021】
追加的な態様において、本発明は式Ｉ：
Ｍ－Ｌ－Ｃ
（式Ｉ）
の融合構築物に関し、
式中、Ｍは抗体、アドネクチン、プロネクチン、アフィボディー、アフィリン、アンチカリン、アトリマー、アビマー、ＤＡＲＰイン、フィノマー、ノッチン、クニッツドメイン、β－ヘアピン模倣物、二重環状ペプチド、及び他の非抗体タンパク質からなる群から選択され、Ｌは存在しない、又は任意のリンカー（例えば、配列ＧＧＧＳ（配列番号６）のペプチド）であり、Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、捕捉を回避し、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、上昇した脳貯留を有する。Ｍは、例えば抗体であってよく、ペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号３９のアミノ末端は、カルボキシル末端、又は抗体の軽鎖及び／又は重鎖のアミノ末端のいずれかに、２価又は１価でのいずれかで、直接融合される。換言すると、ペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８のアミノ末端は、抗体の重鎖のカルボキシル末端に融合され、又はペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号３９のアミノ末端は、抗体の軽鎖又は重鎖のカルボキシル末端及びアミノ末端の両方に、２価又は１価のいずれかで融合されてもよい。抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。したがって、抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と同一であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と同一であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と同一であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と同一であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と同一であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と同一であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体はまた、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と相同であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と相同であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と相同であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と相同であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と相同であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と相同であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体は、１×１０－９～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～１×１０－２ ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有してもよく、又は配列番号１との検出可能な結合を有さなくてもよい。特定の実施形態において、抗体は配列番号１との検出可能な結合を示さない。融合構築物は、疾患の創薬、診断、予防及び処置に使用されてもよい。特定の実施形態において、Ｃは交差種反応性を有し、例えばヒト、サル及びマウスを含む、異なる種において融合構築物のトランスサイトーシスを促進させる。これらの実施形態において、異なる種における融合構築物の交差反応性により、例えば動物モデルにおける薬物動態（ＰＫ）研究及び薬力学的（ＰＤ）研究での融合構築物の使用、並びにヒトに対する動物モデルにおけるこの研究結果のその後の外挿が可能となる。
Ｍ－Ｌ－Ｃ
（式Ｉ）
の融合構築物に関し、
式中、Ｍは抗体、アドネクチン、プロネクチン、アフィボディー、アフィリン、アンチカリン、アトリマー、アビマー、ＤＡＲＰイン、フィノマー、ノッチン、クニッツドメイン、β－ヘアピン模倣物、二重環状ペプチド、及び他の非抗体タンパク質からなる群から選択され、Ｌは存在しない、又は任意のリンカー（例えば、配列ＧＧＧＳ（配列番号６）のペプチド）であり、Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、捕捉を回避し、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、上昇した脳貯留を有する。Ｍは、例えば抗体であってよく、ペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号３９のアミノ末端は、カルボキシル末端、又は抗体の軽鎖及び／又は重鎖のアミノ末端のいずれかに、２価又は１価でのいずれかで、直接融合される。換言すると、ペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８のアミノ末端は、抗体の重鎖のカルボキシル末端に融合され、又はペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号３９のアミノ末端は、抗体の軽鎖又は重鎖のカルボキシル末端及びアミノ末端の両方に、２価又は１価のいずれかで融合されてもよい。抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。したがって、抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と同一であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と同一であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と同一であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と同一であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と同一であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と同一であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体はまた、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と相同であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と相同であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と相同であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と相同であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と相同であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と相同であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体は、１×１０－９～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～１×１０－２ ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有してもよく、又は配列番号１との検出可能な結合を有さなくてもよい。特定の実施形態において、抗体は配列番号１との検出可能な結合を示さない。融合構築物は、疾患の創薬、診断、予防及び処置に使用されてもよい。特定の実施形態において、Ｃは交差種反応性を有し、例えばヒト、サル及びマウスを含む、異なる種において融合構築物のトランスサイトーシスを促進させる。これらの実施形態において、異なる種における融合構築物の交差反応性により、例えば動物モデルにおける薬物動態（ＰＫ）研究及び薬力学的（ＰＤ）研究での融合構築物の使用、並びにヒトに対する動物モデルにおけるこの研究結果のその後の外挿が可能となる。
【0022】
本発明は式ＩＩ：
Ａ－Ｌ－Ｃ
（式ＩＩ）
の融合構築物に特に関し、
式中、Ａは抗体であり、
Ｌは任意のリンカーであり、
Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。Ａは、１価で、又は２価のいずれかで、直接又はＬを介して、軽鎖、重鎖又はその両方のカルボキシル末端又はアミノ末端でＣに融合してもよい。Ｌは例えば、配列番号６のペプチドであってもよい。抗体は例えば、約４０ｋＤａ～約９００ｋＤａ、約５０ｋＤａ～約８００ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約７００ＫＤａ、約７０ｋＤａ～約６００ｋＤａ、約８０ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約９０ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、又は約１００ｋＤａ～約２００ｋＤａの分子量を有してもよい。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、捕捉を回避し、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、上昇した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、上昇した脳貯留を有する。ほとんど取り込まれず、次いでリソソーム系により補足され得る非修飾抗体と比較すると、融合構築物は、リソソーム系における捕捉及び／又は分解を逃れ、後管腔表面取込み後に反管腔側表面上にて放出される。同等の投与量の非修飾ペプチド又はタンパク質と比較すると、例えばリソソームによる融合構築物の除去又は捕捉が減少することから、融合構築物はしたがって、ＢＢＢに融合構築物をばく露、及び／又は融合構築物により長く（例えば、少なくとも約１０％長く）ばく露してから、脳内において（例えば、約３時間、６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間などで）、より高濃度の抗体を提供する。したがって、融合構築物は非修飾抗体よりも治療有効投与量が少量であり得る。
Ａ－Ｌ－Ｃ
（式ＩＩ）
の融合構築物に特に関し、
式中、Ａは抗体であり、
Ｌは任意のリンカーであり、
Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。Ａは、１価で、又は２価のいずれかで、直接又はＬを介して、軽鎖、重鎖又はその両方のカルボキシル末端又はアミノ末端でＣに融合してもよい。Ｌは例えば、配列番号６のペプチドであってもよい。抗体は例えば、約４０ｋＤａ～約９００ｋＤａ、約５０ｋＤａ～約８００ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約７００ＫＤａ、約７０ｋＤａ～約６００ｋＤａ、約８０ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約９０ｋＤａ～約４００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、又は約１００ｋＤａ～約２００ｋＤａの分子量を有してもよい。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、捕捉を回避し、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、上昇した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、上昇した脳貯留を有する。ほとんど取り込まれず、次いでリソソーム系により補足され得る非修飾抗体と比較すると、融合構築物は、リソソーム系における捕捉及び／又は分解を逃れ、後管腔表面取込み後に反管腔側表面上にて放出される。同等の投与量の非修飾ペプチド又はタンパク質と比較すると、例えばリソソームによる融合構築物の除去又は捕捉が減少することから、融合構築物はしたがって、ＢＢＢに融合構築物をばく露、及び／又は融合構築物により長く（例えば、少なくとも約１０％長く）ばく露してから、脳内において（例えば、約３時間、６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、約２４時間などで）、より高濃度の抗体を提供する。したがって、融合構築物は非修飾抗体よりも治療有効投与量が少量であり得る。
【0023】
本発明は、式ＩＩＩ：
Ｔ－Ｌ－Ｃ
（式ＩＩＩ）
の融合構築物に更に関し、
式中、Ｔは抗タウＣ３抗体であり、
Ｌは任意のリンカーであり、Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。Ｌは例えば、配列番号６のペプチドであってもよい。ペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、又は配列番号５のアミノ末端は、直接又はＬを介して、Ｔの重鎖若しくは軽鎖、又はＴの両方のカルボキシル末端又はアミノ末端に融合されてもよい。いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有するペプチドのアミノ末端は、抗タウＣ３抗体の重鎖のカルボキシル末端に融合される。融合構築物は好ましくは、抗タウＣ３抗体の結合特異性を保持する（すなわち、１０－９Ｍ以上のタウＣ３に対する平衡定数ＫＤを有し、これはＦＬＴ（配列番号１）に対する抗体の平衡定数ＫＤよりも約２～約３桁高く、好ましくはＦＬＴ（配列番号１）よりも約１０００倍高い）。抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを通過する向上した透過性を有してもよく、抗タウＣ３抗体と同等の投与量よりも、例えばリソソームによる融合構築物の除去の減少により、脳において高濃度かつ効果の持続性を提供する。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した脳貯留を有する。好ましい実施形態において、抗体は約４０℃～約６７℃の温度で１０分間供された後、結合能を保持し、また血清（例えばマウス）における３７℃で２１日間のインキュベーション後、結合能を保持する。抗タウＣ３抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、約５０ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１７０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１４０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１３０ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１４０ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約１３０ｍｇ／ｍｌ）の水溶性を有してもよい。
Ｔ－Ｌ－Ｃ
（式ＩＩＩ）
の融合構築物に更に関し、
式中、Ｔは抗タウＣ３抗体であり、
Ｌは任意のリンカーであり、Ｃは配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドである。Ｌは例えば、配列番号６のペプチドであってもよい。ペプチド配列番号２、配列番号３、配列番号４、又は配列番号５のアミノ末端は、直接又はＬを介して、Ｔの重鎖若しくは軽鎖、又はＴの両方のカルボキシル末端又はアミノ末端に融合されてもよい。いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有するペプチドのアミノ末端は、抗タウＣ３抗体の重鎖のカルボキシル末端に融合される。融合構築物は好ましくは、抗タウＣ３抗体の結合特異性を保持する（すなわち、１０－９Ｍ以上のタウＣ３に対する平衡定数ＫＤを有し、これはＦＬＴ（配列番号１）に対する抗体の平衡定数ＫＤよりも約２～約３桁高く、好ましくはＦＬＴ（配列番号１）よりも約１０００倍高い）。抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを通過する向上した透過性を有してもよく、抗タウＣ３抗体と同等の投与量よりも、例えばリソソームによる融合構築物の除去の減少により、脳において高濃度かつ効果の持続性を提供する。融合構築物は好ましくは、（ｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、血管内皮エンドソーム－リソソーム系において、低速で分解し、及び／又は（ｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した血液脳関門透過性を有し、及び／又は（ｉｉｉ）配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２８を含有若しくはこれらからなるペプチドに結合されないＭに比べ、向上した脳貯留を有する。好ましい実施形態において、抗体は約４０℃～約６７℃の温度で１０分間供された後、結合能を保持し、また血清（例えばマウス）における３７℃で２１日間のインキュベーション後、結合能を保持する。抗タウＣ３抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、約５０ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１７０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１４０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１３０ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１４０ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約１３０ｍｇ／ｍｌ）の水溶性を有してもよい。
【0024】
特定の実施形態において、Ｔは、２０２０年４月２日に出願された米国特許出願番号１６／８３８，２３５号に記載の抗体である。これらの実施形態の一部において、抗体は、特に毒性があり、核形成し、プレタングルであり、細胞内及び優先的に分泌され、初期アルツハイマー病及び神経原線維変化の進行が全体的に見られる患者において、認知機能低下と高度に相関する、アスパルタート４２１にて終端するＣ末端切断型タウ断片であるタウＣ３を標的とする、極度に効力の高いヒト化されたｍＡｂである。タウＣ３は、完全長タウ（ＦＬＴ）（２Ｎ４Ｒ）（配列番号１）と比較すると低い存在量で存在するが、アルツハイマー病の脳の抽出物における大部分のタウ播種反応に寄与する、不釣合いに大きな病理学的効果を発揮することが示された。ＴＢＬ－１００のマウス前駆体（すなわち、本明細書に参照として組み入れられる、Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｓ．Ｂ．，Ｓ．Ｌ．ＤｅＶｏｓ，Ｃ．Ｃｏｍｍｉｎｓ，Ｃ．Ｎｏｂｕｈａｒａ，Ｒ．Ｅ．Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｄ．Ｌ．Ｃｏｒｊｕｃ，Ｅ．Ｍａｕｒｙ，ｅｔ ａｌ．２０１７．「タウＣ３抗体の特徴及びタウ伝播をブロックするその能力の証明（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＴａｕＣ３ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｂｌｏｃｋ ｔａｕ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）」 ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（５：ｅ０１７７９１４．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１７７９１４にて特徴付けられる抗体）は、この活性をブロッキングすることを示し、アルツハイマー病の患者の脳においてタウ伝播を阻止する可能性を表した。
【0025】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体、又はその抗原結合断片は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。これらの実施形態の一部において、抗体は、１×１０－９～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～１×１０－２ ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない。
【0026】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体、又はその抗原結合断片は、
（ａ）配列ＬＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＳ－ＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＭＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＧＧＧＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）又は配列番号１３と相同である配列を含む、可変重鎖、及び
（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＫＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４）又は配列番号１４に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５）又は配列番号１５に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１６）又は配列番号１６に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＫＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１７）又は配列番号１７に相同である配列、並びに
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＩＫＲＬＩＹＧＡＦＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）又は配列番号１８に相同である配列、からなる群から選択される配列を含む可変軽鎖、を含む。
（ａ）配列ＬＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＳ－ＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＭＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＧＧＧＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）又は配列番号１３と相同である配列を含む、可変重鎖、及び
（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＫＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４）又は配列番号１４に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５）又は配列番号１５に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１６）又は配列番号１６に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＫＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１７）又は配列番号１７に相同である配列、並びに
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＩＫＲＬＩＹＧＡＦＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）又は配列番号１８に相同である配列、からなる群から選択される配列を含む可変軽鎖、を含む。
【0027】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される抗タウＣ３抗体は、配列番号１３の可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド及び配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８の可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。
【0028】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体、又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチドであって、配列番号１３と少なくとも７０％配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドであって配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも７０％配列同一性を有する可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチドを含む。
【0029】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される抗タウＣ３抗体は、配列番号１３と少なくとも７５％配列同一性を有するＶＬ鎖ポリペプチド、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも７５％配列同一性を有するＶＨ鎖ポリペプチドを含む、ヒト化抗体である。
【0030】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される抗タウＣ３抗体は、配列番号１３と少なくとも８０％配列同一性を有するＶＬ鎖ポリペプチド、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも８０％配列同一性を有するＶＨ鎖ポリペプチドを含む。
【0031】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される抗タウＣ３抗体は、配列番号１３と少なくとも８５％配列同一性を有するＶＬ鎖ポリペプチド、配列番号１４，配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも８５％配列同一性を有するＶＨ鎖ポリペプチドを含む。
【0032】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される抗タウＣ３抗体は、配列番号１３と少なくとも９０％配列同一性を有するＶＬ鎖ポリペプチド、配列番号１４，配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９０％配列同一性を有するＶＨ鎖ポリペプチドを含む。
【0033】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される抗タウＣ３抗体は、配列番号１３と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ鎖ポリペプチド、配列番号１４，配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ鎖ポリペプチドを含む。
【0034】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体であり、これは１×１０－１０～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～５．４×１０－４又は５．５×１０－４～１×１０－３ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない。
【0035】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と相同であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と相同であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と相同であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と相同であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と相同であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体であり、これは１×１０－１０～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～５．４×１０－４又は５．５×１０－４～１×１０－３ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない。
【0036】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と同一であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と同一であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と同一であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と同一であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と同一であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と同一であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体であり、これは１×１０－１０～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～５．４×１０－４又は５．５×１０－４～１×１０－３ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない。
【0037】
いくつかの実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むキメラ抗体であり、これは１×１０－１０～１×１０－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－３以下（例えば、１×１０－４～５．４×１０－４又は５．５×１０－４～１×１０－３ｓ－１）であるオフレート（Ｋｄ）、及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない。
【0038】
抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを横断する透過性が向上し、並びに／又は１つ以上のリソソーム系及び／若しくはエンドソーム系による除去及び／若しくは分解が減少している。
【0039】
特定の実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体は、重鎖可変領域：
ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＭＶＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＧＷＧＱＧＴＡＬＴＶＳＳ（配列番号２３）、
及び軽鎖可変領域：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＥＲＶＳＬＴＣＷＦＱＱＫＰＤＧＴＩＫＲＬＩＹＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＳＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＳＥＤＦＡＤＹＹＣＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２９）を含む。
抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを横断する透過性が向上し、並びに／又は１つ以上のリソソーム系及び／若しくはエンドソーム系による除去及び／若しくは分解が減少している。
ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＭＶＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＧＷＧＱＧＴＡＬＴＶＳＳ（配列番号２３）、
及び軽鎖可変領域：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＥＲＶＳＬＴＣＷＦＱＱＫＰＤＧＴＩＫＲＬＩＹＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＳＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＳＥＤＦＡＤＹＹＣＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２９）を含む。
抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを横断する透過性が向上し、並びに／又は１つ以上のリソソーム系及び／若しくはエンドソーム系による除去及び／若しくは分解が減少している。
【0040】
特定の実施形態において、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに融合される、抗タウＣ３抗体は、
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＧＴＴＧＴＴＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＡＡＧＧＧＴＣＡＴＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＡＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＴＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＴＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＧＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＣＡＡＡＧＣＡＴＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＴＧＧＧＡＧＧＧＧＧＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＧＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２４）
によってコードされる重鎖可変領域、及び
ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＡＣＧＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＣＴＴＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＴＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴＣＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＡＡＴＴＡＧＴＧＴＴＴＡＣＴＴＡＡＧＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＴＡＴＴＡＡＡＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＣＧＣＡＴＴＣＡＣＴＴＴＡＧＡＴＴＣＴＧＧＴＧＴＣＣＣＡＡＡＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＡＧＧＴＣＴＧＧＧＴＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＴＧＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＡＴＡＴＧＴＴＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号２５）
によってコードされる軽鎖可変領域を含む。
抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを横断する透過性が向上し、並びに／又は１つ以上のリソソーム系及び／若しくはエンドソーム系による除去及び分解が減少している。
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＧＴＴＧＴＴＧＡＧＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＡＡＧＧＧＴＣＡＴＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＡＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＴＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＴＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＧＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＣＡＡＡＧＣＡＴＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＴＧＧＧＡＧＧＧＧＧＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＧＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２４）
によってコードされる重鎖可変領域、及び
ＡＴＧＧＡＣＡＴＧＡＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＡＣＧＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＣＴＴＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＴＴＡＴＣＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴＣＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＡＡＴＴＡＧＴＧＴＴＴＡＣＴＴＡＡＧＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＴＡＴＴＡＡＡＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＣＧＣＡＴＴＣＡＣＴＴＴＡＧＡＴＴＣＴＧＧＴＧＴＣＣＣＡＡＡＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＡＧＧＴＣＴＧＧＧＴＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＴＧＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＡＴＡＴＧＴＴＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号２５）
によってコードされる軽鎖可変領域を含む。
抗タウＣ３抗体と比較すると、融合構築物はＢＢＢを横断する透過性が向上し、並びに／又は１つ以上のリソソーム系及び／若しくはエンドソーム系による除去及び分解が減少している。
【0041】
特定の実施形態において、融合構築物は、抗タウＣ３抗体重鎖のＮ末端又はＣ末端のいずれかに融合される配列番号２を含む。例えば、融合構築物は重鎖：
ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＭＶＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＧＧＧＤＦＷＧＱＧＴＡＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＳＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号２６）
及び軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＥＲＶＳＬＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳＷＦＱＱＫＰＤＧＴＩＫＲＬＩＹＧＡＦＴＬＤＳＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＳＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＳＥＤＦＡＤＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）
を含んでもよい。
ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＭＶＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＧＧＧＤＦＷＧＱＧＴＡＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＳＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号２６）
及び軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＥＲＶＳＬＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳＷＦＱＱＫＰＤＧＴＩＫＲＬＩＹＧＡＦＴＬＤＳＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＳＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＳＥＤＦＡＤＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）
を含んでもよい。
【0042】
特定の実施形態において、融合構築物は、例えばＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ｇ（ＤＡＮＧ）変異を組み込むことにより、Ｆｃ－γ受容体を結合しないように修飾されているＦｃ領域を含んでもよい。Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ｇ（ＤＡＮＧ）変異は、霊長類におけるエフェクタ機能を減弱させる点で有効であることが報告されている。
【0043】
式ＩＩ及び式ＩＩＩの融合構築物は、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）などを含む、例えば様々なタウオパチーの診断及び処置に使用されてもよい。加えて、本発明の抗タウＣ３融合構築物は、タウ病態に関連する、例えば、パーキンソン病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症といった他の神経変性疾患にて使用されてもよい。加えて、本発明の抗タウＣ３融合構築物は加齢関連性認知障害の治療に使用されてもよい。
【0044】
本発明は、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有又はこれらからなるペプチドに、直接、又はリンカーを介して、ペプチド又はタンパク質を融合することを含む、ＢＢＢを通ってペプチド又はタンパク質の透過を向上させる方法に更に関する。融合は、ペプチド若しくはタンパク質のカルボキシル末端、ペプチド若しくはタンパク質のアミノ末端、又はペプチド若しくはタンパク質の内部配列に存在してもよい（ペプチド又はタンパク質の活性及び結合性に干渉しない場合）。
【0045】
本発明は、抗体の軽鎖、重鎖又はその両方のカルボキシル末端を、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８の配列を含有するペプチドのアミノ末端に、直接、又はリンカーを介して融合することを含む、抗体の血液脳関門透過を向上させる方法に更に関する。
【0046】
本発明は、ペプチド又はタンパク質のカルボキシル末端を、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号３９を含有するペプチドのアミノ末端に、直接、又はリンカーを介して融合すること、及びＢＢＢと接触した状態で、結果として得られた融合構築物を配置することを含む、ＢＢＢを横断してペプチド及びタンパク質を送達する方法に更に関する。
【0047】
本発明は、抗体の軽鎖、重鎖（又はその両方）のカルボキシル末端及び／又はアミノ末端を、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、又は配列番号２８を含有するペプチドのアミノ末端に、直接、又はリンカーを介して融合すること、及びＢＢＢと接触した状態で、結果として得られた融合構築物を配置することを含む、ＢＢＢを横断して抗体を送達する方法に更に関する。
【0048】
本発明は、トランスサイトーシスの有効性を向上させる方法に更に関する。この方法は、トランスフェリンと競合しない（つまり鉄輸送に干渉してはならない）式Ｉ、式ＩＩ、及び式ＩＩＩの合成融合ペプチドを使用し、二重特異性抗体の開発及び製造に関連する複雑性及びコストを回避し、トランスフェリンの使用を回避する。
【0049】
定義
本明細書で使用される「抗体」は、無変化分子（すなわち、完全長抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ））及びそれらの断片、並びに例えばＦａｂ（Ｆａｂ’２）、及びＦ∨断片を含まない、又はｐＩＩＩ又はｐＶＩＩＩ又は他の表面タンパク質の糸状ファージの表面上、若しくは抗原に結合可能であるバクテリアの表面上に発現する、それらの合成誘導体及び生物学的誘導体を含有することを意味する。Ｆａｂ（Ｆａｂ’２）及びＦ∨断片は、無変性抗体のＦＣ断片を欠損しており、循環により更に迅速に除去する。加えてこれは、抗体の非特異的組織結合をほとんど含まない。抗体はモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。組換え抗体は用語「抗体」によって包含される。用語「抗体」は、キメラ抗体及びヒト化抗体を更に包含する。抗体はまた、完全ヒト抗体（例えば、遺伝子導入マウス又はファージ由来）であってもよい。
本明細書で使用される「抗体」は、無変化分子（すなわち、完全長抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ））及びそれらの断片、並びに例えばＦａｂ（Ｆａｂ’２）、及びＦ∨断片を含まない、又はｐＩＩＩ又はｐＶＩＩＩ又は他の表面タンパク質の糸状ファージの表面上、若しくは抗原に結合可能であるバクテリアの表面上に発現する、それらの合成誘導体及び生物学的誘導体を含有することを意味する。Ｆａｂ（Ｆａｂ’２）及びＦ∨断片は、無変性抗体のＦＣ断片を欠損しており、循環により更に迅速に除去する。加えてこれは、抗体の非特異的組織結合をほとんど含まない。抗体はモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。組換え抗体は用語「抗体」によって包含される。用語「抗体」は、キメラ抗体及びヒト化抗体を更に包含する。抗体はまた、完全ヒト抗体（例えば、遺伝子導入マウス又はファージ由来）であってもよい。
【0050】
本明細書で使用される用語「ヒト化抗体」は、マウス又は他の非ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）がヒト抗体のフレームワーク上へと移植される抗体を指す。ヒト抗体フレームワークは、ＣＤＲを除外する完全ヒト抗体を意味する。
【0051】
本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、完全配列がヒト遺伝子レパートリー（例えば、遺伝子導入マウス又はファージ）から誘導される抗体を指す。
【0052】
用語「ＴＢＬ－１１０」は、例１の融合構築物を意味する。
【0053】
本出願における用語「ＴＢＬ－１００」及び「マウスの抗タウＣ３抗体」は、Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｓ．Ｂ．，Ｓ．Ｌ．ＤｅＶｏｓ，Ｃ．Ｃｏｍｍｉｎｓ，Ｃ．Ｎｏｂｕｈａｒａ，Ｒ．Ｅ．Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｄ．Ｌ．Ｃｏｒｊｕｃ，Ｅ．Ｍａｕｒｙ，ｅｔ ａｌ．２０１７．「タウＣ３抗体の特徴及びタウ伝播をブロックするその能力の証明（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＴａｕＣ３ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｂｌｏｃｋ ｔａｕ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）」 ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（５）：ｅ０１７７９１４．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１７７９１４に特徴付けられる「マウス抗タウ３」を意味する。
【0054】
本明細書に使用される用語「相同である」は、配列が、相同である配列に少なくとも８０％同一であり、１つ以上の相同な配列を含む重合体のペプチド（例えば抗体）が、相同である１つ以上の配列を含む重合体のペプチドと実質的に同じ生物学的活性を有することを意味する。例えば、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体、並びに１つ以上のＣＤＲ配列が１つ以上の相同な配列により置換される抗体の両方が、１×１０－１０～１×１０－１２であるタウＣ３に関する結合親和性（ＫＤ）及び１×１０－４～１×１０－８Ｍである配列番号１に関する結合親和性（ＫＤ）を有するか、又は配列番号１との検出可能な結合を有さない。定義により、相同抗体は実質的に同様の三次元形状を有する。
【0055】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は「相補性決定領域」を意味する。ＣＤＲは高頻度可変領域とも呼ばれてもよい。特段指定しない限り、本明細書に開示されるＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴナンバリングシステムにより定義される。
【0056】
本明細書で使用される場合、ＣＤＲ配列を参照した「配列番号により表される」は、ＣＤＲの配列が列挙される配列番号と同一又はこれに相同であることを意味する。
【0057】
本明細書で使用される用語「キメラ抗体」は、マウス抗体又はラット抗体の可変領域の全体が、ヒト定常領域に従って発現される抗体を指す。
【0058】
本明細書で使用される場合、「軽鎖」は、抗体の小さなポリペプチドサブユニットである。典型的な抗体は２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む。
【0059】
本明細書にあるように、「同等の投与量」は、重量単位において等しい投与量を意味する。例えば、１ｍｇのタンパク質の投与量の「同等の投与量」は、１ｍｇの投与量の融合構築物である。
【0060】
本明細書で使用される場合、「重鎖」は、抗体の大きなポリペプチドサブユニットである。抗体の重鎖は、少なくとも１つの可変ドメイン及び少なくとも１つの定常ドメインと共に、一連の免疫グロブリンドメインを含有する。
【0061】
本明細書で使用される用語「親和性」は、抗体分子がそのエピトープに結合する強度、又は非抗体タンパク質（例えばアフィボディー）がその足場に結合する強度を指す。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される。
【0062】
本明細書で使用される用語「ＫＤ」は、平衡解離定数（ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ、この場合Ｋｄは解離速度定数であり、Ｋａは会合速度定数である）を指す。
【0063】
用語「病理学的タウ」は、タウＣ３、タウＣ３を含む原線維、及びタウＣ３を含む凝集物（例えば、完全長タウを含む異種起源の集団、タウオリゴマー及び／又は翻訳後修飾タウ（切断又はリン酸化される））を包含する。タウＣ３に加えて、病理学的タウは、完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）の異種起源の集団、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されるタウ（切断又は高リン酸化される）を含んでもよい。
【0064】
用語「播種」は、タウＣ３及び／又はタウＣ３を含む原線維、及び／又はタウＣ３を含む凝集物が細胞により取り込まれる後に細胞内で起こる活性を指す。
【0065】
用語「アドネクチン」は、フィブロネクチンタイプＩＩＩ（１０Ｆｎ３）の１０番目のドメインから誘導された９４アミノ酸熱安定性（Ｔｍは８０℃超）結合タンパク質断片を意味する。
【0066】
用語「アフィリン」又は「アンチカリン」は、リポカリンから誘導されたタンパク質断片を意味する。
【0067】
用語「アビマー」は、様々な細胞表面受容体（すなわち、低密度関連タンパク質（ＬＲＰ）及び超低密度リポタンパク質受容体（ＶＬＤＬＲ））のＡ－ドメインから誘導された結合タンパク質断片のクラスを意味する。
【0068】
用語「フィノマー」は、ＦＹＮチロシンキナーゼのＳｒｃ相同３（ＳＨ３）ドメインのアミノ酸８３～１５６から誘導され、リガンド結合の部位である２つの可撓性ループにより接合された逆平行βシートの対から構成されるタンパク質を意味する。
【0069】
用語「ノッチン」は、可変長のループ及び複数のジスルフィド結合のループにより接続された、３つの逆平行βストランドから構成された安定した３０アミノ酸タンパク質の折り畳み（４ｋＤａ未満）を意味する。ノッチンのサブクラスは、タンパク質のＮ末端及びＣ末端が翻訳後に接合されて環状分子を形成するサイクロチドである。
【0070】
用語「アフィボディー」は、３つのヘリックスバンドルモチーフに適合し、システインを含有しない黄色ブドウ菌タンパク質ＡのＩｇ結合領域のＺドメインから誘導されたタンパク質断片を意味する。
【0071】
用語「β－ヘアピン模倣物」は、機能性天然タンパク質エピトープの立体構造特性及び電子特性を再生産するようにデザインされた単一のβ－ヘアピンモチーフを意味する（Ｓｉｍｅｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ２０１８，９（１）：３－１４）。
【0072】
略語「ＤＡＲＰイン」は、デザインされたアンキリン繰り返しタンパク質を意味する。ＤＡＲＰインは、アンキリン繰り返し（ＡＲ）タンパク質に基づく人工タンパク質足場である。
【0073】
用語「タウＣ３」は、ｈｔａｕ４０（配列番号１）のアスパルタート４２１にて終わるＣ末端切断型タウ断片を意味する。
【0074】
本明細書で使用される場合、「ＦＬＴ」は完全長タウ（すなわち、ｈｔａｕ４０（配列番号１））に対する略語である。
【0075】
本明細書で使用される場合、用語「治療有効量」及び「有効量」は、治療薬（例えば、抗タウＣ３抗体アナログ）又は患者において測定可能な臨床効果を引き起こす組成物の量を意味する。治療薬の有効量は、投与される化合物、投与経路、処置されている症状の状態、並びにいくつかの考慮の中でもとりわけ同様の患者及び投与状態の考慮を含む、この症例を取り巻く状況によって決定される。「有効量」は、本明細書に説明される抗タウＣ３抗体アナログの約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇを一般には含む。特定の実施形態において、「有効量」は１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇが使用される。特定の実施形態において、約０．２％、約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、又は約１０％より多い投与量がＣＳＦに到達する。
【図面の簡単な説明】
【0076】
【図1A】例１の融合構築物のＳＤＳ－Ｐａｇｅを示す。レーンＭ１：タンパク質マーカ、ＴａＫａＲａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．３４５２。レーン１：還元条件。レーン２：非還元条件。
【0077】
【図1B】例１の融合構築物のウェスタンブロット解析を示す。レーンＭ２：タンパク質マーカ、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｍ００５２１。レーン１：還元条件。レーン２：非還元条件。レーンＰ：ポジティブコントロールとして、ヒトＩｇＧ１、Ｋａｐｐａ（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｉ５１５４）。
【0078】
【図2】インキュベーションの２４時間時点でのＴＢＬ－１００の画像を含有する。
【0079】
【図3】インキュベーションの２４時間時点でのＴＢＬ－１１０の画像を含有する。
【0080】
【図4】インキュベーションの２４時間時点でのＴＢＬ－１００の画像を含有する。トランスフェリン、受容体及びＬＡＭＰ２についての同様の染色パターンにも関わらず、それぞれからの信号は特有の配置で検出され得る。ＬＡＭＰ２信号はトランスフェリン受容体と共局在しない。
【0081】
【図5】インキュベーションの２４時間時点でのＴＢＬ－１１０の画像を含有する。トランスフェリン、受容体及びＬＡＭＰ２についての同様の染色パターンにも関わらず、それぞれからの信号は特有の配置で検出され得る。トランスフェリン受容体シグナルはＬＡＭＰ２と共局在しない。
【0082】
【図6】インキュベーションの２４時間時点でのＴＢＬ－１１０の画像を含有する。ＴＢＬ－１１０信号のパターンは、対応するトランスフェリン受容体及びＬＡＭＰ２信号に比べてより拡散されることが明らかとなっている。これは、代替的な機構による取込み後の放出又はインターナリゼーションを示唆し得る。
【0083】
【図7】インキュベーションの２４時間時点でのＴＢＬ－１１０の画像を含有する。ＴＢＬ－１１０信号のパターンは、対応するトランスフェリン受容体及びＬＡＭＰ２信号に比べてより拡散されることが明らかとなっている。これは、代替的な機構による、すなわちエンドソーム－リソソーム系による取込み後の放出又はインターナリゼーションを示唆し得る。拡散したＴＢＬ－１１０信号は、斑点と共局在しない。
【0084】
【図8】ＴＢＬ－１００対ＴＢＬ－１１０の２４時間のインキュベーションの画像を含有する。
【0085】
【図9】統計学的有意性の計算を示す。
【0086】
【図10】３時間の試験物質インキュベーションにて、細胞内部に保持される抗体強度を示す。
【0087】
【図11】６時間の試験物質インキュベーションにて、細胞内部に保持される抗体強度を示す。
【0088】
【図12】２４時間の試験物質インキュベーションにて、細胞内部に保持される抗体強度を示す。
【0089】
【図13】２４時間の試験物質インキュベーションにて、細胞内部に保持される抗体強度を示す。（リソソーム分解を破壊する）バフィロマイシン処理後、ＴＢＬ－１００の向上した保持は、インターナライズされた時に入り込み、リソソームによって除去されることを示唆する。
【0090】
【図14】２４時間の試験物質インキュベーションにて、細胞内部に保持される抗体強度を示す。バフィロマイシン処置の存在（．．．．）及びそれが存在しない（）両方の場合におけるＴＢＬ－１１０のより高次のレベルは、これがＴＢＬ－１００よりも更に容易にインターナライズされ、保持されることを示す。
【0091】
【図15】３時間時点、６時間時点、及び２４時間時点で保持されるＴＢＬ－１００強度を示す。
【0092】
【図16】３時間時点、６時間時点、及び２４時間時点で保持されるＴＢＬ－１１０強度を示す。
【0093】
【図17】２４時間でのトランスフェリン受容体とのＴＢＬ１００／ＴＢＬ１１０共局在を示す。２４時間時点でトランスフェリン受容体の強度に基づいて描かれたマスクにおける、ＴＢＬ－１００又はＴＢＬ－１１０のいずれかの強度において有意な差異が見られないことは、いずれの試験物質も優先的に受容体と共局在しないことを示唆する。
【0094】
【図18】３時間時点でのインキュベーション及び６時間時点でのインキュベーションでの、トランスフェリン受容体とのＴＢＬ１００／ＴＢＬ１１０共局在を示す。６時間時点でのトランスフェリン受容体とのＴＢＬ－１００共局在における有意な上昇のパターンは、この機構による細胞内への迅速な輸送を示唆する。
【0095】
【図19】２４時間の試験物質インキュベーションにおける、ＬＡＭＰ２とのＴＢＬ－１００／ＴＢＬ－１１０共局在を示す。
【0096】
【図20】２４時間の試験物質インキュベーションにおける、ＬＡＭＰ２とのＴＢＬ－１００／ＴＢＬ－１１０共局在を示す。細胞全体で定量化されたＴＢＬ－１００及びＴＢＬ－１１０のトレンドと同様、より高次レベルの両方の試験物質は、バフィロマイシン処理後のＬＡＭＰ２信号と共局在した。これは、高次レベルの試験物質が細胞内に蓄積する際に、この物質がリソソームに標的化されていることを示す。
【0097】
【図21】３時間及び６時間の試験物質インキュベーションにおける、ＬＡＭＰ２とのＴＢＬ－１００／ＴＢＬ－１１０共局在を示す。これらの早期時点でのＬＡＭＰ２とのＴＢＬ－１００のより高次レベルの共局在は、インターナライズされると、この試験物質の迅速な除去を示す。ＴＢＬ－１１０は、容易にリソソームにより除去されることなく、こうして蓄積することができる。
【0098】
【図22】３時間の試験インキュベーションにおける、細胞ごとの相対的なトランスフェリン受容体強度を示す。試験物質及びバフィロマイシン処理の様々な組合せのいずれの後にも、細胞ごとのトランスフェリン受容体強度における有意な差異は存在しない。
【0099】
【図23】６時間の試験インキュベーションにおける、細胞ごとの相対的なトランスフェリン受容体強度を示す。試験物質及びバフィロマイシン処理の様々な組合せのいずれの後にも、細胞ごとのトランスフェリン受容体強度における有意な差異は存在しない。
【0100】
【図24】２４時間の試験インキュベーションにおける、細胞ごとの相対的なトランスフェリン受容体強度を示す。試験物質及びバフィロマイシン処理の様々な組合せのいずれの後にも、細胞ごとのトランスフェリン受容体強度における有意な差異は存在しない。
【0101】
【図25】３時間の試験物質インキュベーションにおける、細胞ごとの相対的なＬＡＭＰ２強度を示す。試験物質及びバフィロマイシン処理の様々な組合せのいずれの後にも、細胞ごとのＬＡＭＰ２強度における有意な差異は、存在しない。
【0102】
【図26】６時間の試験物質インキュベーションにおける、細胞ごとの相対的なＬＡＭＰ２強度を示す。試験物質及びバフィロマイシン処理の様々な組合せのいずれの後にも、細胞ごとのＬＡＭＰ２強度における有意な差異は、存在しない。
【0103】
【図27】２４時間の試験物質インキュベーションにおける、細胞ごとの相対的なＬＡＭＰ２強度を示す。試験物質及びバフィロマイシン処理の様々な組合せのいずれの後にも、細胞ごとのＬＡＭＰ２強度における有意な差異は、存在しない。
【0104】
【図28】タンパク質足場の模式構造を示すものであり、Ｓｉｍｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ２０１８．９（１）：３－１４から採用された。
【0105】
【図29A】例４において作製される免疫組織化学的画像を示す。
【図29B】例４において作製される免疫組織化学的画像を示す。
【図29C】例４において作製される免疫組織化学的画像を示す。
【図29D】例４において作製される免疫組織化学的画像を示す。
【0106】
【図30】例４の統計学的有意性について解析される免疫組織化学的画像の量的表示である。
【発明を実施するための形態】
【0107】
短ペプチドは、抗体の立体構造又は効力に影響することなく、抗体軽鎖又は重鎖（又はその両方）のＮ末端又はＣ末端に融合され得る。
【0108】
式Ｉの融合構築物の「Ｍ」
特定の実施形態において、式Ｉの融合構築物のＭは、プロネクチン（例えばアンギオセプト（ａｎｇｉｏｃｅｐｔ）、アフィボディー（例えば、ＡＢＹ－０２５、ＳＯＢＩ００２、ＡＢＹ－０３５）、アフィリン（例えば、ＰＲＳ－０１０、ＰＲＳ－０５０）、アンチカリン（例えば、ＰＲＳ－０８０、ＰＲＳ－０６０、ＰＲＳ－１１０、ＰＲＳ－３４３）、アトリマー（例えば、ＡＴＸ３１０５）、アビマー（例えば、ＡＭＧ２２０）、ＤＡＲＰイン（例えば、ＭＰ０１１２、ＭＰ０２６０、ＭＰ０２５０、ＭＰ０２７４）、フィノマー（例えば、ＣＯＶＡ３２２、ＣＯＶＡ２０８、ノッチン、クニッツドメイン）、二重環状ペプチド、及び他の非抗体タンパク質を含有又はこれらからなる群から選択される。
特定の実施形態において、式Ｉの融合構築物のＭは、プロネクチン（例えばアンギオセプト（ａｎｇｉｏｃｅｐｔ）、アフィボディー（例えば、ＡＢＹ－０２５、ＳＯＢＩ００２、ＡＢＹ－０３５）、アフィリン（例えば、ＰＲＳ－０１０、ＰＲＳ－０５０）、アンチカリン（例えば、ＰＲＳ－０８０、ＰＲＳ－０６０、ＰＲＳ－１１０、ＰＲＳ－３４３）、アトリマー（例えば、ＡＴＸ３１０５）、アビマー（例えば、ＡＭＧ２２０）、ＤＡＲＰイン（例えば、ＭＰ０１１２、ＭＰ０２６０、ＭＰ０２５０、ＭＰ０２７４）、フィノマー（例えば、ＣＯＶＡ３２２、ＣＯＶＡ２０８、ノッチン、クニッツドメイン）、二重環状ペプチド、及び他の非抗体タンパク質を含有又はこれらからなる群から選択される。
【0109】
式ＩＩの融合構築物の「Ａ」
特定の実施形態において、式ＩＩの融合構築物のＡは、２３９８８５２（デザミズマブ）、ＡＡＢ－００１（バピネウズマブ）、ＡＢＢＶ－０６６（リサンキズマブ）、ＡＢＢＶ－３２３、ＡＢＢＶ－３２３、ＡＢＢＶ－８Ｅ１２（Ｃ２Ｎ ８Ｅ１２）、ＡＢＬ－００１（アシミニブ）、ＡＢＬ３０１、ＡＢＰ－７１０（インフリキシマブ）、ＡＢＴ－１６５、ＡＢＴ－４１４（デパツキシズマブ）、ＡＣＺ８８５（カナキヌマブ）、ＡＤＣ－１０１３、ＡＤＣＴ－４０２、ＡＬＤ４０３（エピチネズマブ）、ＡＬＸ００６１（ボバリリズマブ）、ＡＭＧ３０１（エイモビグ）、ＡＭＧ３３０、ＡＮＢ０２０、ＡＲＧＸ－１１０、ＡＲＧＸ－１１１、ＡＳＫＰ１２４０（ブレセルマブ）、ＡＴＮ－１０３（オゾラリズマブ）、ＢＡＮ０８０５（ＡＢＢＶ－０８０５）、ＢＡＮ２４０１（マブ１５８）、ＢＡＹ１３５１（ネレリモマブ）、Ｂ－Ｅ８（エルシリモマブ）、ベルチリムマブ、ＢＩ６５５０６４、ＢＩ６５５０６６、ＢＩ６９５５００、ＢＩ６９５５０１、ＢＩＩＢ０３７（アデュカヌマブ）、ＢＩＩＢ０３３（オピチヌマブ）、ＢＩＩＢ０５４（シンパネマブ）、ＢＩＩＢ０７４（ビクソトリジン）、ＢＩＩＢ０７６、ＢＭＳ－９３６５６１、ブロルシズマブ、ＢＴ－０６１（トレガリズマブ）、Ｃ２２５（セツキシマブ）、ＣＡＴ－１９２（メテリムマブ）、ＣＣ－９０００２（ＩＮＢＲＸ－１０３）、ＣＬＮＨ１１（プリツムマブ）、ｃｍｔ４１２（プリリキシマブ）、ＤＢ０００２８（ガムネックス）、ＤＢ０００７３（リツキシマブ）、ＤＢ０００９５（エファリズマブ）、ＤＢ００１０８（ナタリズマブ）、ＤＢ０５４５９（ブリアキヌマブ）、ＤＢ０５６５６（ベルツズマブ）、ＤＢ０６１６２（ルミリキシマブ）、ＤＢ０６２４１（クレノリキシマブ）、ＤＢ０６６０６（テプリズマブ）、ＤＢ０６６５０（オファツムマブ）、ＤＢ０８９３５（オビヌツズマブ）、ＤＢ０９０５２（ブリナツモマブ）、ＤＢ１１７６７（サリルマブ）、ＤＢ１１８０３（シルクマブ）、ＤＢ１１９８８（オクレリズマブ）、ＤＢ１２０５３（ビシリズマブ）、ＤＢ１２１６９（トラロキヌマブ）、ＤＢ１２２９４（アンルキンズマブ）、ＤＢ１２６３６（サマリズマブ）、ＤＢ１２８４９（クラザキズマブ）、ＤＢ１３１２７（オロキズマブ）、ＤＢ１４００４（チルドラキズマブ）、ＤＢ１４０３９（エレヌマブ）、ＤＢ１４０４１（フレマネズマブ）、ＤＩ－Ｌｅｕ１６－ＩＬ２）、ファシヌマブ、ＧＣ－１００８（フレソリムマブ）、ＧＳＥ６４３８２（イトリズマブ）、ＧＳＫ２８６２２７７、ＧＳＫ３０５０００２、ＧＳＫ３１７４９９８、ＧＳＫ３７７２８４７、ＧＺ４０２６６８、ＨＬＸ０１、ＨＬＸ０３（アダリムマブ）、ハーセプチン、Ｈｕｍａｘ（登録商標）－ＴＡＣ－ＡＤＣ、Ｈｕｍａｘ－ＴＡＣ－ＰＢＤ、イネビリズマブ、イノリモマブ、ＩＰＨ３３、ＩＰＨ５２、ＪＮＪ－６３７０９１７８、ＪＮＪ－６３７３３６５７、ＪＮＪ－６４００７９５７、ＫＨＫ４０８３、ＫＨＫ６６４０、ＬＹ２０６２４３０（ソラネズマブ）、ＬＹ２５９９６６６、ＬＹ２９５１７４２（ガルカネズマブ）、ＬＹ３３０３５６０、ＭＣＬＡ－１１７、ＭＥＤＩ１３４１、ＭＥＤＩ１８１４、ＭＥＤＩ２０７０（ブラジクマブ）、ＭＥＮ１１２、モガムリズマブ、ＮＥＯＤ００１、ネスバクマブ、オヅリモマブ、ＰＦ－０４３６０３６５（ポネズマブ）、ＰＭＮ３１０、ＰＲＸ００２／ＲＯ７０４６０１５、ＱＡＸ５７６、ＲＥＧＮ１９７９、ＲＥＧＮ３５００、ＲＧ１４５０（ガンテネルマブ）、ＲＧ６０２６、ＲＧ６１００、ＲＧ６１６８、ＲＧ７４１２（クレネズマブ）、ＲＧ７７１６、ＲＧ７８２８、ＲＧ７８７６、ＲＧ７９３５、ＲＮ６２４（タネズマブ）、ＲＯ７１０５７０５、ロンタリズマブ、ＲＹＩ００８（ゲルリリムズマブ）、ＳＡＲ２２８８１０、ＳＡＲ３４１９（コルツキシマブラブタンシン）、ＳＡＲ６５０９８４（イサツキシマブ）、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ｂ、ＳＧＮ－ＣＤ７０Ａ、Ｓｙｍ００４（モドツキシマブ）、ＴＡＢ－１０７（セデリズマブ）、ＴＡＢ－２６２（テネリキシマブ）、ＴＡＢ－Ｈ１６（ダピロリズマブペゴル）、ＴＡＫ－５７３、ＴＧ－１１０（ウブリツキシマブ）、ＵＣＢ４１４４、ＶＸ１５／２５０３（ペピネマブ）、ｘｍａｂ５５７４（ＣＤ１９）、Ｘｍａｂ５８７１、Ｘｏｍａ０５２（ゲボキズマブ）、及びザノリムマブからなる群から選択されてもよい。
特定の実施形態において、式ＩＩの融合構築物のＡは、２３９８８５２（デザミズマブ）、ＡＡＢ－００１（バピネウズマブ）、ＡＢＢＶ－０６６（リサンキズマブ）、ＡＢＢＶ－３２３、ＡＢＢＶ－３２３、ＡＢＢＶ－８Ｅ１２（Ｃ２Ｎ ８Ｅ１２）、ＡＢＬ－００１（アシミニブ）、ＡＢＬ３０１、ＡＢＰ－７１０（インフリキシマブ）、ＡＢＴ－１６５、ＡＢＴ－４１４（デパツキシズマブ）、ＡＣＺ８８５（カナキヌマブ）、ＡＤＣ－１０１３、ＡＤＣＴ－４０２、ＡＬＤ４０３（エピチネズマブ）、ＡＬＸ００６１（ボバリリズマブ）、ＡＭＧ３０１（エイモビグ）、ＡＭＧ３３０、ＡＮＢ０２０、ＡＲＧＸ－１１０、ＡＲＧＸ－１１１、ＡＳＫＰ１２４０（ブレセルマブ）、ＡＴＮ－１０３（オゾラリズマブ）、ＢＡＮ０８０５（ＡＢＢＶ－０８０５）、ＢＡＮ２４０１（マブ１５８）、ＢＡＹ１３５１（ネレリモマブ）、Ｂ－Ｅ８（エルシリモマブ）、ベルチリムマブ、ＢＩ６５５０６４、ＢＩ６５５０６６、ＢＩ６９５５００、ＢＩ６９５５０１、ＢＩＩＢ０３７（アデュカヌマブ）、ＢＩＩＢ０３３（オピチヌマブ）、ＢＩＩＢ０５４（シンパネマブ）、ＢＩＩＢ０７４（ビクソトリジン）、ＢＩＩＢ０７６、ＢＭＳ－９３６５６１、ブロルシズマブ、ＢＴ－０６１（トレガリズマブ）、Ｃ２２５（セツキシマブ）、ＣＡＴ－１９２（メテリムマブ）、ＣＣ－９０００２（ＩＮＢＲＸ－１０３）、ＣＬＮＨ１１（プリツムマブ）、ｃｍｔ４１２（プリリキシマブ）、ＤＢ０００２８（ガムネックス）、ＤＢ０００７３（リツキシマブ）、ＤＢ０００９５（エファリズマブ）、ＤＢ００１０８（ナタリズマブ）、ＤＢ０５４５９（ブリアキヌマブ）、ＤＢ０５６５６（ベルツズマブ）、ＤＢ０６１６２（ルミリキシマブ）、ＤＢ０６２４１（クレノリキシマブ）、ＤＢ０６６０６（テプリズマブ）、ＤＢ０６６５０（オファツムマブ）、ＤＢ０８９３５（オビヌツズマブ）、ＤＢ０９０５２（ブリナツモマブ）、ＤＢ１１７６７（サリルマブ）、ＤＢ１１８０３（シルクマブ）、ＤＢ１１９８８（オクレリズマブ）、ＤＢ１２０５３（ビシリズマブ）、ＤＢ１２１６９（トラロキヌマブ）、ＤＢ１２２９４（アンルキンズマブ）、ＤＢ１２６３６（サマリズマブ）、ＤＢ１２８４９（クラザキズマブ）、ＤＢ１３１２７（オロキズマブ）、ＤＢ１４００４（チルドラキズマブ）、ＤＢ１４０３９（エレヌマブ）、ＤＢ１４０４１（フレマネズマブ）、ＤＩ－Ｌｅｕ１６－ＩＬ２）、ファシヌマブ、ＧＣ－１００８（フレソリムマブ）、ＧＳＥ６４３８２（イトリズマブ）、ＧＳＫ２８６２２７７、ＧＳＫ３０５０００２、ＧＳＫ３１７４９９８、ＧＳＫ３７７２８４７、ＧＺ４０２６６８、ＨＬＸ０１、ＨＬＸ０３（アダリムマブ）、ハーセプチン、Ｈｕｍａｘ（登録商標）－ＴＡＣ－ＡＤＣ、Ｈｕｍａｘ－ＴＡＣ－ＰＢＤ、イネビリズマブ、イノリモマブ、ＩＰＨ３３、ＩＰＨ５２、ＪＮＪ－６３７０９１７８、ＪＮＪ－６３７３３６５７、ＪＮＪ－６４００７９５７、ＫＨＫ４０８３、ＫＨＫ６６４０、ＬＹ２０６２４３０（ソラネズマブ）、ＬＹ２５９９６６６、ＬＹ２９５１７４２（ガルカネズマブ）、ＬＹ３３０３５６０、ＭＣＬＡ－１１７、ＭＥＤＩ１３４１、ＭＥＤＩ１８１４、ＭＥＤＩ２０７０（ブラジクマブ）、ＭＥＮ１１２、モガムリズマブ、ＮＥＯＤ００１、ネスバクマブ、オヅリモマブ、ＰＦ－０４３６０３６５（ポネズマブ）、ＰＭＮ３１０、ＰＲＸ００２／ＲＯ７０４６０１５、ＱＡＸ５７６、ＲＥＧＮ１９７９、ＲＥＧＮ３５００、ＲＧ１４５０（ガンテネルマブ）、ＲＧ６０２６、ＲＧ６１００、ＲＧ６１６８、ＲＧ７４１２（クレネズマブ）、ＲＧ７７１６、ＲＧ７８２８、ＲＧ７８７６、ＲＧ７９３５、ＲＮ６２４（タネズマブ）、ＲＯ７１０５７０５、ロンタリズマブ、ＲＹＩ００８（ゲルリリムズマブ）、ＳＡＲ２２８８１０、ＳＡＲ３４１９（コルツキシマブラブタンシン）、ＳＡＲ６５０９８４（イサツキシマブ）、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ｂ、ＳＧＮ－ＣＤ７０Ａ、Ｓｙｍ００４（モドツキシマブ）、ＴＡＢ－１０７（セデリズマブ）、ＴＡＢ－２６２（テネリキシマブ）、ＴＡＢ－Ｈ１６（ダピロリズマブペゴル）、ＴＡＫ－５７３、ＴＧ－１１０（ウブリツキシマブ）、ＵＣＢ４１４４、ＶＸ１５／２５０３（ペピネマブ）、ｘｍａｂ５５７４（ＣＤ１９）、Ｘｍａｂ５８７１、Ｘｏｍａ０５２（ゲボキズマブ）、及びザノリムマブからなる群から選択されてもよい。
【0110】
特定の実施形態において、式ＩＩの融合構築物のＡは、アルツハイマー病（ＡＤ）の処置のためのモノクローナル抗体である。ＡＤは、家族性の遺伝的原因を有する小さな母集団では初期発生から始まり、明確な遺伝的基盤がない、より大きな母集団では、人生の後半で始まる、慢性的な神経変性進行性疾患である。この疾患に関連する大半の共通の症状は、間欠的な記憶喪失であり、深刻な認知機能低下の進行である。ＡＤの潜在的な原因は未だ知られていない。ＡＤは、脳皮質及び特定の皮質下領域中のニューロン及びシナプスの消失により特徴付けられる。ＡＤは、この疾患の２つの古典的で顕著な特徴である、脳内の異常に折り畳まれたアミロイドβ（Ａβ）ペプチド及びタウタンパク質のプラーク及び濃縮体堆積を生じさせるタンパク質ミスフォールド障害であるといった強力な遺伝的エビデンスが存在する（Ｃｏａｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９９１；Ｈａｒｄｙ ａｎｄ Ｍｕｌｌａｎ，１９９２）。現在、疾患の進行を遅延又は抑止するための、認可済の処置は存在しない。影響力の大きい研究により、アジュバントと組み合わせた、完全長Ａβに対する能動免疫は、ＡＤ遺伝子導入マウスモデルにおいてアミロイドプラーク負荷を低減させたことが示された（Ｓｃｈｅｎｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。続いて多くの研究が、発症前のＡＤマウスモデルにおいて、能動及び受動Ａβ免疫療法の有効性を実証してきた。ただし、これらの成功した臨床前研究から派生した早期楽観主義にも関わらず、このアプローチはヒトにおいて、未だ疾患修飾療法へと発展できていない。例えば、２０１２年には抗Ａβマブである、バピネウズマブ及びソラネズマブの２種類の第３相治験は、認知機能改善の初期臨床エンドポイントに合致することができなかった（Ｄｏｏｄｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｓａｌｌｏｗａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。重要なことには、バピネウズマブは、アミロイド関連画像異常と命名される血管の副作用を引き起こした。これは高投与量群の中止につながり、最適以下の脳ばく露による臨床効果の欠如を説明することができる。期待外れの臨床結果にも関わらず、他のｍＡｂは現在もＡＤ予防治験において試験されている。ここで近年の治験は、Ａβペプチドの凝集形態に対するｍＡｂは、脳内でアミロイドプラークの用量依存的減少及び時間依存的減少を生み出し、これはまた、臨床的有用性につながる可能性があることを実証している。最も有望な臨床データは、初期（前駆）ＡＤ又は軽度ＡＤである患者において観察されており、これは、実際のところ疾患のこの段階にある患者を見つけることは極度に困難であるものの、初期介入が重要であることを示唆している。
【0111】
ヒト治験では、ＡＤに関して試験されている最大数で臨床的有用性を確立するように、脳実質空間内部の治療濃度に到達させる目的のために、いくつかのｍＡｂが存在する。
【0112】
特定の実施形態において、式ＩＩの融合構築物のＡは、ソラネズマブ、アデュカヌマブ、ガンテネルマブ、ＢＡＮ２４０１、ＬＹ３３７２９９３、ＳＡＲ２５５９５２、ドナネマブ（ａｋａ Ｎ３ｐＧ）ＬＹ３２０２６２６、ＲＯ７１０５７０５、ＢＩＩＢ０７６、Ｃ２Ｎ ８Ｅ１２、ｌＬＹ３３０３５６０からなる群から選択される。
【0113】
式ＩＩＩの融合構築物の「Ｔ」
本発明のＴは、タウＣ３のＣ末端に特異的であるキメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体を包含する（「抗タウＣ３抗体」）。抗タウＣ３抗体は、１×１０－１０～１×１０－１２のタウＣ３に対する結合親和性（ＫＤ）、１×１０－４～１×１０－８Ｍの完全長タウ（「ＦＬＴ」）（配列番号１）に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。例えば抗タウＣ３抗体は、約５×１０－１２Ｍ～約１．２×１０－１０Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約１×１０－１０Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約９×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約８×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約７×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約６×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約５×１０－１１Ｍ、又は約１×１０－１１Ｍ～約４×１０－１１ＭのタウＣ３に対する結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－４～１×１０－８ＭのＦＬＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有してもよい。好ましい実施形態において、抗体は、約４０℃～約６７℃の温度に１０分間供された後、その結合能力を保持し、３７℃で２１日間、血清（例えば、マウス）におけるインキュベーション後のその結合能力もまた保持する。抗タウＣ３抗体の高結合能力により、抗体はＦＬＴの標準的な生理学的機能を損なうことなくタウＣ３を標的とすることが可能である。いくつかの実施形態において、抗体の特異性により、最も有毒種のタウのみを標的とすることが可能となり、この特異性により、特異的ではなくタウの異なる種間を区別できない抗体と比較すると、治療有効投与量を潜在的に減少させることができる。抗タウＣ３抗体、及びそれらの抗原結合断片は、例えば脳内のタウＣ３の病理学的活性に関連する、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などを含む神経変性障害の診断及び処置において、使用され得る。抗タウＣ３抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１７０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１４０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１３０ｍｇ／ｍｌ、又は約６０ｍｇ／ｍＬ～約１３０ｍｇ／ｍＬ）の水溶性を有してもよい。
本発明のＴは、タウＣ３のＣ末端に特異的であるキメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体を包含する（「抗タウＣ３抗体」）。抗タウＣ３抗体は、１×１０－１０～１×１０－１２のタウＣ３に対する結合親和性（ＫＤ）、１×１０－４～１×１０－８Ｍの完全長タウ（「ＦＬＴ」）（配列番号１）に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。例えば抗タウＣ３抗体は、約５×１０－１２Ｍ～約１．２×１０－１０Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約１×１０－１０Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約９×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約８×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約７×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約６×１０－１１Ｍ、約１×１０－１１Ｍ～約５×１０－１１Ｍ、又は約１×１０－１１Ｍ～約４×１０－１１ＭのタウＣ３に対する結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０－４～１×１０－８ＭのＦＬＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有してもよい。好ましい実施形態において、抗体は、約４０℃～約６７℃の温度に１０分間供された後、その結合能力を保持し、３７℃で２１日間、血清（例えば、マウス）におけるインキュベーション後のその結合能力もまた保持する。抗タウＣ３抗体の高結合能力により、抗体はＦＬＴの標準的な生理学的機能を損なうことなくタウＣ３を標的とすることが可能である。いくつかの実施形態において、抗体の特異性により、最も有毒種のタウのみを標的とすることが可能となり、この特異性により、特異的ではなくタウの異なる種間を区別できない抗体と比較すると、治療有効投与量を潜在的に減少させることができる。抗タウＣ３抗体、及びそれらの抗原結合断片は、例えば脳内のタウＣ３の病理学的活性に関連する、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などを含む神経変性障害の診断及び処置において、使用され得る。抗タウＣ３抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１７０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１４０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１３０ｍｇ／ｍｌ、又は約６０ｍｇ／ｍＬ～約１３０ｍｇ／ｍＬ）の水溶性を有してもよい。
【0114】
特定の実施形態において、式ＩＩＩの融合構築物はＴＢＬ－１００又はタウＣ３抗体である。
【0115】
タウオパチー
タウタンパク質（２Ｎ４Ｒ）（配列番号１）は、多くの場合、完全長タウ（ＦＬＴ）と呼ばれ、主に軸索に分布する微小管関連タンパク質である。タウタンパク質は、ニューロン中の微小管（ＭＴ）の集合体、空間的構成及び挙動を調節する働きを担う。ＦＬＴは、タンパク質のＣ末端に近接する残基４２１にてカスパーゼ－３により優先的に切断され、タウＣ３として公知のタンパク質の切断形態を形成する。
タウタンパク質（２Ｎ４Ｒ）（配列番号１）は、多くの場合、完全長タウ（ＦＬＴ）と呼ばれ、主に軸索に分布する微小管関連タンパク質である。タウタンパク質は、ニューロン中の微小管（ＭＴ）の集合体、空間的構成及び挙動を調節する働きを担う。ＦＬＴは、タンパク質のＣ末端に近接する残基４２１にてカスパーゼ－３により優先的に切断され、タウＣ３として公知のタンパク質の切断形態を形成する。
【0116】
タウＣ３は、ＦＬＴと比較すると低い存在量で存在する（１％未満と考えられる）が、例えば、ＡＤ脳におけるタウ伝播の大半について、おそらく核形成によるタウフィラメント形成を駆動することで不釣合いに大きな病理学的効果を発揮することが示された。タウＣ３は極度に毒性の強いタンパク質である。タウＣ３は、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病（ＰｉＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）などを含む、様々なタウオパチー及び神経変性障害に関係している。タウＣ３は、例えばパーキンソン病、多発性硬化症、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）にもまた関係している可能性がある。ＳＮＰ（ｒｓ１７６８２０８ Ｃ／Ｔ）は、ＰＳＰの強固なリスク因子であることが同定されており、ＰＳＰ患者におけるアポトーシス促進性タンパク質であるアポプトシンのレベルを上昇させることが示されている。アポプトシンの上昇は、活性化されたカスパーゼ－３及びタウＣ３レベルと相関する。
【0117】
タウＣ３に選択的に結合し、ＦＬＴ（配列番号１）への実質的な結合を呈さない融合構築物は、ＦＬＴの生理学的機能を損なうことなく様々なタウオパチーを処置するために使用されてもよい。
【0118】
式ＩＩＩの融合構築物の投与は、例えばタウオパチーを処置する、又はタウオパチーから免疫化するための療法として使用され得る。
【0119】
式ＩＩＩの融合構築物は、タウオパチーを処置するために治療有効量でヒトへと投与されてもよい。投与は、中枢神経系への末梢的（すなわち、中枢神経系への投与によるものではない）又は局所的なものを含む、標準的で有効な技術を使用して実施される。末梢投与としては、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、肺投与、経皮投与、筋肉内投与、経鼻投与、頬側投与、舌下投与、又は坐薬投与が挙げられるがこれらに限定されない。中枢神経系（ＣＮＳ）へと直接投与するものを含む、局所投与としては、腰椎を介した投与、脳室内カテーテル、又は実質内カテーテル、又は外科的に植え込まれ制御される放出製剤の使用が挙げられるが、これらに限定されない。
【0120】
処置を受け入れられる人間としては、疾患の危険性はあるが症状が現れていない個体、及び現在症状が現れている患者が挙げられる。アルツハイマー病の場合には、実質的には、アルツハイマー病に罹患している危険性がある人間である。したがって、現在の方法は一般的な母集団へと予防的に投与され得る。こうした予防的な投与は、例えば５０歳以上の年齢で開始することができる。現在の方法は、タウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の公知の遺伝的な危険性を有さない個体にも特に有用である。こうした個体としては、この疾患を経験したことある親類を有する人々、及び遺伝的マーカ又は生物化学的マーカの分析によりその危険性が測定される人々が挙げられる。例えば、アルツハイマー病に対する危険性の遺伝的マーカとしては、ＡＰＰ遺伝子における変異、特にＨａｒｄｙ及びＳｗｅｄｉｓｈ変異とそれぞれ呼ばれる、位置７１７及び位置６７０及び６７１における変異が挙げられる。危険性を示す他のマーカは、プレセニリン遺伝子における変異であるＰＳ１及びＰＳ２、並びにＡｐｏＥ４、家族歴、高コレステロール血症又はアテローム性動脈硬化である。現在アルツハイマー病に罹患している個体は、上記のリスク因子が存在していることによる特徴的な認知症により認識され得る。加えて、ＡＤを有する個体を同定するために多くの診断検査が利用可能である。こうした診断検査としては、画像化、並びに／又はＣＳＦタウ及びＡＪ３４２レベルの測定が挙げられる。タウレベルの上昇及びＡＪ３４２レベルの減少は、ＡＤの存在を意味する。アルツハイマー病に罹患している個体は、アルツハイマー病及び関連する障害の関連基準によっても診断され得る。
【0121】
無症状性患者においては、処置は任意の年齢（例えば、１０歳、２０歳、３０歳、４０歳、５０歳、又は６０歳）で開始することができる。ただし、通常は、患者が４０歳、５０歳、６０歳、７０歳、７５歳、又は８０歳に到達するまでは、処置を開始する必要はない。処置は通常、一定の期間にわたって複数回の投薬を必要とする。処置は、抗体、又は経時的な治療薬に対する活性化されたＴ細胞若しくはＢ細胞の応答をアッセイすることによりモニタリングされ得る。応答が減少する場合、ブースター投薬を提示する。ダウン症候群の可能性がある患者の場合には、処置は、母親への治療薬投与により出産前に、又は誕生後速やかに開始可能である。
【0122】
予防用途では、本発明による抗タウ抗体アナログを含む医薬組成物は、疾患に罹患しやすい、又はタウオパチーの危険性にある患者へ、リスクを除去又は減少させる、重症度を低下させる、又は疾患の生物化学的、組織学的、及び／又は行動学的症状、合併症及び疾患の発症中に表われる病理学的な中間表現型を含む疾患の開始を遅らせるのに十分な量で投与される。治療用途では、式ＩＩＩの融合構築物を含む組成物は、これらの疾患が疑われる、又はこれらの疾患に既に罹患している患者へと、その合併症及び疾患の発症中に表われる病理学的な中間表現型を含む疾患の生物化学的、組織学的、及び／又は行動学的症状を治癒、又は少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で投与される。いくつかの方法において、薬剤の投与により軽度の認知障害が低減又は除去される。治療処置又は予防処置を達成するのに適切な量は、治療的に効果的な投与量若しくは量、又は予防的に効果的な投与量若しくは量として規定される。予防的及び治療的管理体制の両方において、薬剤は通常、十分な免疫応答が得られるまでは複数回の投薬にて投与される。通常、免疫応答をモニタリングし、免疫応答が衰え始めた場合には繰り返し投薬が行われる。
【0123】
上記状態の処置を目的とする式ＩＩＩの融合構築物の有効投与量は、多くの異なる因子に応じて変化する。この因子には、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、投与される他の薬物療法、及び処置が予防的なものか治療的なものかというものが含まれる。処置投薬は、治験において個々の場合に応じて検査される必要があり、多くの場合には安全性及び有効性を最適化するために用量設定される必要がある。特定の実施形態において、本発明の式ＩＩＩの融合構築物の追加的な利点は、同等の質量の投薬について、式ＩＩＩの融合構築物の投薬が、式ＩＩＩの融合構築物に比べてタウＣ３への特異性が少ない抗体を含む組成物よりも、除去及び／又は「不活性化」において有効な、より高い分子投薬量の抗体を含有するということであり得る。通常、式ＩＩＩの融合構築物は、静脈内注入又は皮下注射により投与され得る。静脈内注入による投与のための式ＩＩＩの融合構築物の量は、患者当たり０．５ｍｇ～１０ｍｇで変化し得る。皮下注射は一般には、十分な量で脳に到達させるためにはより高い投与量を必要とする。抗体（例えば、ＩｇＧの全体分子）は、１ヶ月に１回投与され得る。
【0124】
投薬及び頻度は、患者における式ＩＩＩの融合構築物の半減期に応じて変化する。一般には、ヒト化抗体を含む融合構築物は、最も長い半減期を示し、キメラ抗体を含む融合構築物、非ヒト抗体を含む融合構築物がこれに続く。投薬及び投与頻度は、処置が予防的又は治療的かに応じて変化し得る。予防用途では、長期期間にわたり相対的には頻繁ではない間隔で、相対的に低量の投薬が投与される。一部の患者は、生涯にわたって処置を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が落ち着く、又は終了するまで、好ましくは患者が疾患症状の部分的又は完全な寛解を示すまでは、相対的に短い間隔で相対的に高い投薬量が時に必要とされる。その後、患者は予防的な管理体制で投与され得る。
【0125】
いくつかの方法において、融合構築物の投薬は、１～１０００μｇ／ｍＬの血漿抗体濃度を得るように調節され、いくつかの方法では、これは２５～３００μｇ／ｍＬである。代替的には、それほど頻繁な投与な必要ではない場合には、抗体は徐放性製剤として投与され得る。
【0126】
タウＣ３播種をブロックするための式ＩＩＩの融合構築物の投与量は、タウＣ３凝集を阻害するための式ＩＩＩの融合構築物の投与量と必ずしも同じである必要はない。本明細書にて提供される情報といった観点で、当業者は日常的な試験により特定の投与量を決定することができる。
【0127】
投与／処置の有効性は、血漿及び／又はＣＳＦ中の病理学的タウ又はリン酸中タウのレベルを測定することにより評価され得る。この評価に基づき、投与量及び／又は投与頻度をそれに合うように調節してもよい。
【0128】
特定の実施形態において、認知における効果もまた評価されてもよい。
【0129】
ＭＲＩによって測定されるように、有効性は脳萎縮の程度によっても評価されてもよい。
【0130】
投与／処置の安全性は、参加者が経験する有害事象（ＡＥ）の数、深刻なＡＥ、臨床検査における異常、バイタルサイン、ＥＣＧ、ＭＲＩ、理学的検査及び神経学的検査、並びに認知の悪化により評価されてもよい。この評価に基づき、投与量及び／又は投与頻度をそれに合うように調節してもよい。
【0131】
式ＩＩＩの融合構築物は、経鼻的に、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注入により、経皮的に、頬側になど、又は以下詳細に説明するようなものにより投与されてもよい。
【0132】
病理学的タウ凝集の伝播をブロッキングする方法
追加的な態様において、本発明は一方のニューロンから他方のニューロンへ、又は脳の一部から別の部分への、病理学的タウの伝播をブロッキングする方法に関する。
追加的な態様において、本発明は一方のニューロンから他方のニューロンへ、又は脳の一部から別の部分への、病理学的タウの伝播をブロッキングする方法に関する。
【0133】
追加的な態様において、本発明は患者の脳内でのタウＣ３播種活性をブロッキングする方法に関する。
【0134】
本発明はまた、患者の脳内での病理学的タウ凝集の伝播を減少させる方法にも関する。
【0135】
本発明は、患者の脳内で、タウＣ３を含む凝集物の伝播を減少させる方法に更に関する。
【0136】
本発明は、患者の脳内で、タウＣ３を含む原線維の伝播を減少させる方法に更に関する。
【0137】
本発明の更なる態様において、本発明はタウＣ３及びタウＣ３原線維の細胞内取込みにより誘発されるタウの細胞内凝集を減少させる方法に関する。
【0138】
各態様において、この方法は、治療有効量の式ＩＩＩの融合構築物をヒトに投与することを含む。式ＩＩＩの融合構築物は、ＦＬＴの標準的な生理学的機能に大きく影響することなく、病理学的タウの凝集形態を固有に認識することが可能である。一実施形態において、式ＩＩＩの融合構築物のエピトープの本質的な部分は、タウＣ３（配列番号１８、ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ）の最終１０のＣ末端残基に対応するペプチドのＣ末端残基でネオエピトープを形成するカルボキシ基である。式ＩＩＩの融合構築物は、ＦＬＴ（配列番号１）に対する抗体平衡定数ＫＤよりも約２～約３桁高い、タウＣ３に対する平衡定数ＫＤを好ましくは有する。式ＩＩＩの融合構築物は、１×１０－１０Ｍ～１×１０－１１Ｍの平衡定数ＫＤを有するタウＣ３に結合するが、１×１０－４Ｍ～１×１０－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）に関する平衡定数ＫＤを有するか、又はＦＬＴ（配列番号１）に検出可能な結合を示さない。好ましい実施形態において、式ＩＩＩの融合構築物は、１×１０－１１Ｍ～９×１０－１１Ｍの平衡定数ＫＤを有するタウＣ３に結合し、１×１０－８Ｍ～９×１０－８Ｍの平衡定数ＫＤを有するＦＬＴ（すなわち、２Ｎ４Ｒ）（配列番号１）に結合するか、又はＦＬＴ（すなわち、２Ｎ４Ｒ）（配列番号１）に検出可能な結合を示さない。式ＩＩＩの融合構築物は、好ましくはタウＣ３からの非常に低速なオフレート（すなわち、９，０００，０００ １／Ｍｓ～１４，０００，０００ １／ＭＳの会合定数（ｋａ））を有し、実質的に２Ｎ４Ｒへの親和性を有さない（すなわち、１００，０００ １／ＭＳ未満のｋａ）。抗体は例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体又は前述のいずれかの免疫学的断片であってもよい。
【0139】
ヒトは、治療有効量の式ＩＩＩの融合構築物の投与前に、タウ凝集に関連する症状を有しても有さなくてもよい。換言すると、ヒトはタウ播種及び／又は凝集に関連する症状を経験してもしなくてもよい。当業者は、病理学的タウ播種及び凝集は、タウ凝集に関連する症状の診断又は発症の前におそらく開始することを理解するであろう。いくつかの実施形態において、ヒトはタウ播種及び／又は凝集に関連する症状を有している。他の実施形態において、ヒトはタウ播種及び／又は凝集に関連する症状を有していない。更なる他の実施形態において、ヒトは検出可能なタウ病態を有するが、タウ症状及び／又は凝集に関連する任意の他の症状を有さない。本発明による治療薬及び医薬組成物を投与することによる、ヒトの脳内においてタウ凝集の伝播を低下させることは、タウの病理学的播種及び／又は凝集に関連する発症及び／又は症状の進行を低下させることができる。
【0140】
病理学的タウ凝集の拡散の予防、阻害又は遅延はしたがって、タウ凝集物の生成及び伝播に関連する病態の処置において使用されてもよい。タウ凝集に関連する症状を有する例示的な障害としては、進行性核上性麻痺、拳闘家認知症（慢性外傷性脳症）、前頭側頭型認知症及び第１７染色体に結合されたパーキンソニズム、リティコ・ボディグ病（グアムのパーキンソン認知症複合）、神経原線維変化型老年期認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハラーフォルデン－シュパッツ症候群、リポフスチン沈着症、ピック病、大脳皮質基底核変性症、嗜銀性顆粒病（ＡＧＤ）、前頭側頭葉変性症、アルツハイマー病、及び前頭側頭型認知症が挙げられるが、これらに限定されない。これらの障害を診断するための方法は、当技術分野において公知である。
【0141】
タウ播種又はタウ凝集に関連する症状を有する例示的な障害としては、例えば障害された認知機能、変性された挙動、感情の調節不全、てんかん発作、及び障害された神経系構造又は機能が挙げられる。障害された認知機能には、記憶、注意力、集中力、原語、抽象的な思考、創造性、実行機能、計画、及び体型付けに関する困難さが挙げられるがこれらに限定されない。変性された挙動としては、身体的又は言語的な攻撃性、衝動性、低下された抑圧性、感情鈍麻、低下された惹起、性格の変化、アルコール、タバコ又は薬物の濫用、及び中毒関連挙動が挙げられるがこれらに限定されない。感情の調節不全としては、うつ病、不安、躁病、易刺激性、及び感情失禁が挙げられるがこれらに限定されない。てんかん発作としては、全般強直関代性てんかん発作、複雑部分発作、及び心因性非てんかん性発作が挙げられるが、これらに限定されない。障害された神経系構造又は機能としては、水頭症、パーキンソニズム、睡眠障害、精神障害、バランス及び協調性の機能障害が挙げられるがこれらに限定されない。これは、不全単麻痺、不全片麻痺、四肢不全麻痺、運動失調、バリズム及び振戦といった運動機能障害を含む。これはまた、感覚消失又は嗅覚、触覚、味覚、視覚及び聴覚といった感覚機能を含む機能不全を含む。更には、これは腸機能不全、膀胱機能不全、性機能不全、血圧及び温度調節不全といった自律神経系機能障害を含む。最終的には、これは成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、小胞刺激ホルモン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、プロラクチン、並びに多数の他のホルモン及び修飾因子の欠乏及び機能障害といった視床下部及び脳下垂体腺の機能不全に起因し得るホルモン障害を含む。タウ凝集に関連する症状を検出及び評価するための方法は、当技術分野において公知である。
【0142】
いくつかの実施形態において、タウ凝集に関連する症状は認知症を指す。認知症はそれ自体特定の疾患ではなく、毎日の活動を実施する人間の能力を十分低下させるほど深刻な記憶又は他の思考スキルにおける低下に関連する広範な症状を説明する全体的な用語である。認知症はまた、タウ凝集に関連する多くの疾患の共通する臨床的特徴でもある。当業者は、認知症の重症度を診断するのに利用可能な多くの方法に精通しているだろう。例えば、認知症に関する複数の認知検査及びスクリーニングアンケート調査が当技術分野において公知であり、その全ては感受性及び特異性の変化度を伴う。非限定的な例としては、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、略式メンタルテストのスコア（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ ｍｅｎｔａｌ ｔｅｓｔ ｍａｙ ｓｃｏｒｅ、ＡＭＴＳ）、変更されたミニメンタルステート検査（３ＭＳ）、認知能力スクリーニング手法（ＣＡＳＩ）、トレイル・メイキング・テスト、時計描画試験、老年層における認知機能低下に関する情報アンケート調査（ｔｈｅ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｌｄｅｒｌｙ）、認知に関する一般的な開業医評価、臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）、加齢及び認知を区別する８項目の情報インタビュー（ＡＤ８）が挙げられる。
【0143】
いくつかの実施形態において、認知症の症状の重症度は、臨床的認知症尺度を使用して定量化される。臨床的認知症尺度を使用した場合、スコア０は症状が見られないことを示し、スコア０．５は非常に軽度の症状が見られることを示し、スコア１は軽度の症状を示し、スコア２は中程度の症状を示し、スコア３は重度の症状を示す。したがって、ヒトについての臨床的認知症尺度スコアの任意の上昇は、認知の悪化及び認知症の上昇を示す。更に、０から０超の臨床的認知症尺度における変化は、認知症の発症又は発生を示す。
【0144】
いくつかの実施形態において、タウ播種又はタウ凝集に関連する症状は、タウ病態又はタウオパチーを指す。用語「タウ病態」又は「タウオパチー」は、タウの病理学的播種又はタウの凝集を指す。いくつかの実施形態において、タウ病態は神経原線維変化タングルを指す。他の実施形態において、タウ病態は高リン酸化タウを指す。更なる他の実施形態において、タウ病態は、血中、血漿中、血清中、ＣＳＦ中、又はＩＳＦ中で検出可能な高レベルのタウ凝集物を指し、いずれも疾患を含まない個体で検出されるものよりも２～およそ４０倍高い。
【0145】
医薬組成物
本発明に従う医薬組成物は、式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの融合構築物、及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。
本発明に従う医薬組成物は、式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの融合構築物、及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【0146】
式ＩＩＩの融合構築物は、１×１０－１０Ｍ～１×１０－１１Ｍの平衡定数ＫＤを有するタウＣ３に結合するが、１×１０－４Ｍ～１×１０－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）に関する平衡定数ＫＤを有するか、又はＦＬＴ（配列番号１）に検出可能な結合を示さない。好ましい実施形態において、式ＩＩＩの融合構築物は、１×１０－１１Ｍ～９×１０－１１Ｍの平衡定数ＫＤを有するタウＣ３に結合し、１×１０－８Ｍ～９×１０－８Ｍの平衡定数ＫＤを有するＦＬＴ（配列番号１）に結合するか、又はＦＬＴ（配列番号１）に検出可能な結合を示さない。式ＩＩＩの融合構築物は、好ましくはタウＣ３からの非常に低速なオフレート（すなわち、９，０００，０００ １／Ｍｓ～１４，０００，０００ １／ＭＳの会合定数（ｋａ））を有し、実質的にＦＬＴ（配列番号１）への親和性を有さない（すなわち、１００，０００ １／ＭＳ未満のｋａ）。式ＩＩＩの融合構築物のＡは、例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体又はヒト抗体（例えば、ｔｇマウス由来）を含んでもよい。
【0147】
医薬組成物は、投与の選択方式にとって適切であるように設計され、適合する分散剤、緩衝液、界面活性物質、保存剤、可溶化剤、等張化剤、安定剤などといった薬学的に許容される賦形剤は適切なものとして使用される。
【0148】
静脈内注射又は皮下注射による末梢性の効果的な全身性送達は、生存している患者に対して好ましい投与方法である。こうした注射にとって好適な媒介物は単純なものである。
【0149】
投与されるべき製剤中の式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの融合構築物の濃度は、有効量であり、約０．１重量％と同等の低さから、約９５重量％又は約９９．９重量％までの範囲である。所望の場合には選択される特定の投与方式に従い、この範囲は流体体積、粘度などに基づいて本来は選択される。特定の実施形態においては、式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの融合構築物は、約１５重量％～約２０重量％の組成物を含んでもよい。
【0150】
患者へと注射するための組成物は、リン酸緩衝生理食塩水の１～２５０ｍＬの緩衝滅菌水及び約１～約５０００ｍｇの式Ｉ、式ＩＩ又は式ＩＩＩの融合構築物のうちいずれか１つ又はそれらの組合せを含有するように構成され得る。製剤は、製剤を作製した後に滅菌ろ過され得る。又はそれ以外の場合には、微生物学的に許容可能なものとされる。静脈内注入のための典型的な組成物は、滅菌リンガー溶液などの、１～２５０ｍＬの流体の体積を有し、これは抗タウ抗体アナログ濃度についてはｍＬあたり１～１００ｍｇ以上を有し得る。この発見に関する治療薬は、貯蔵のために冷凍又は凍結乾燥されることができ、使用前に好適な滅菌担体中で再構成され得る。凍結乾燥及び再構成は、抗体活性消失度を変化させることができる（例えば、従来の免疫グロブリンを伴い、ＩｇＭ抗体はＩｇＧ抗体よりも大きな活性消失を有する傾向がある）。
【0151】
投与される投薬量は、示される目的に対する有効量であり、調節されて補償されなければならない場合がある。一般には医薬品グレード品質である製剤のｐＨは、抗体安定性（化学的及び物理的）の均衡を保つように選択され、投与時に患者にとって安心なものである。一般には、４～８のｐＨを許容する。投与量は、順調な投与を受ける個体の、サイズ、重量、及び他の物理生物学的特徴に基づき個人によって変化する。
【0152】
一態様において、典型的な投与量は約０．１ｍｇ～１０ｍｇの式Ｉ、式ＩＩ、又は式ＩＩＩの融合構築物を含有する。特定の実施形態において、投与量は約０．５ｍｇ～約１０ｍｇである。投与量は約０．５５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。全てのＩｇＧ抗体を用いて投与する頻度は、通常月ごとである。一方で、抗体断片は、その半減期が短いという観点から、症状を効果的に処置するために必要な場合には、更に頻繁に投与する必要がある。
【0153】
疾患自体に対する処置の投与のタイミング、及び処置の継続時間は、症例を取り巻く環境によって決定される。処置は、タウ凝集に関連する疾患の診断後に開始させることが可能である。代替的には、処置はタウ凝集に関連する症状の臨床確認後に開始させることが可能である。更には、処置はタウ病態の検出後に開始させることが可能である。処置は病院又はクリニックで速やかに、又は病院から退院した後の時点で、又は外来患者用のクリニックで確認した後に開始させることができる。処置の継続時間は、適時に投与される単回投与から、生涯にわたる一連の治療処置までの範囲である。
【0154】
前述の方法は、好適に順応することでヒト化抗体といったタンパク質の投与にとって、最も簡便であり、最も適切であり、有効であろうが、適切な製剤がそこで利用された場合には、例えば脳室内投与、経皮投与及び経口投与といった投与にとって他の効果的な技術が使用されてもよい。
【0155】
典型的な有効量又は投与量は、標準的な臨床技術を使用して決定及び最適化され得、これは本明細書にて提供される情報及び当技術分野において利用可能な知識といった観点から、投与方式によって左右される。
【0156】
例１（ＴＢＬ－１１０）
融合構築物を調製した。融合構築物の重鎖配列及び軽鎖配列は以下の通りだった：
完全長重鎖：
ＥｃｏＲＩ－－Ｋｏｚａｋ配列－－人工信号ペプチド－－タウＣ３重鎖可変領域－－ヒトＩｇＧ１定常領域（Ｐ０１８５７）－リンカー－ペプチド－－停止コドン－－ＨｉｎｄＩＩＩ
重鎖配列：４８０ａａ
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ－ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮ－ＴＹＡＭＮ－ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ－ＲＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ－ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＭＶＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＧ－ＧＧＤＦ－ＷＧＱＧＴＡＬＴＶＳＳ－ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ－ＧＧＧＳ－ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ．（配列番号１９）
ＤＮＡ配列：１４６７ｂｐ
ＧＡＡＴＴＣ－ＣＣ－ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ－ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＣＴ－ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＧＴＣＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＣＣＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＣＡＡＴＴＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ－ＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴ－ＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＴＣＣＡＡＴＧＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＴＧＴＧＧＣＣＴ－ＴＧＡ－ＴＡＡＧＣＴＴ（配列番号２０）
完全長軽鎖：
ＥｃｏＲＩ－－Ｋｏｚａｋ配列－－人工信号ペプチド－－タウＣ３軽鎖可変領域－－ヒトＩｇκ定常領域（Ｐ０１８３４）－－停止コドン－－ＨｉｎｄＩＩＩ
軽鎖配列：２３３ａａ
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ－ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＥＲＶＳＬＴＣ－ＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳ－ＷＦＱＱＫＰＤＧＴＩＫＲＬＩＹ－ＧＡＦＴＬＤＳ－ＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＳＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＳＥＤＦＡＤＹＹＣ－ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ－ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ－ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ．（配列番号２１）
ＤＮＡ配列：７２６ｂｐ
ＧＡＡＴＴＣ－ＣＣ－ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ－ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＧＣ－ＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＴＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＧＧＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＣＧＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＡＣＡＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ－ＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ－ＴＧＡ－Ｔ－ＡＡＧＣＴＴ．（配列番号２２）
融合構築物を調製した。融合構築物の重鎖配列及び軽鎖配列は以下の通りだった：
完全長重鎖：
ＥｃｏＲＩ－－Ｋｏｚａｋ配列－－人工信号ペプチド－－タウＣ３重鎖可変領域－－ヒトＩｇＧ１定常領域（Ｐ０１８５７）－リンカー－ペプチド－－停止コドン－－ＨｉｎｄＩＩＩ
重鎖配列：４８０ａａ
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ－ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮ－ＴＹＡＭＮ－ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ－ＲＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ－ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＭＶＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＧ－ＧＧＤＦ－ＷＧＱＧＴＡＬＴＶＳＳ－ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ－ＧＧＧＳ－ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ．（配列番号１９）
ＤＮＡ配列：１４６７ｂｐ
ＧＡＡＴＴＣ－ＣＣ－ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ－ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＣＴ－ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＧＴＣＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＣＣＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＣＡＡＴＴＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ－ＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＴＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣＣＴＡＧＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴ－ＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＴＣＣＡＡＴＧＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＴＧＴＧＧＣＣＴ－ＴＧＡ－ＴＡＡＧＣＴＴ（配列番号２０）
完全長軽鎖：
ＥｃｏＲＩ－－Ｋｏｚａｋ配列－－人工信号ペプチド－－タウＣ３軽鎖可変領域－－ヒトＩｇκ定常領域（Ｐ０１８３４）－－停止コドン－－ＨｉｎｄＩＩＩ
軽鎖配列：２３３ａａ
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ－ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＥＲＶＳＬＴＣ－ＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳ－ＷＦＱＱＫＰＤＧＴＩＫＲＬＩＹ－ＧＡＦＴＬＤＳ－ＧＶＰＫＲＦＳＧＳＲＳＧＳＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＳＥＤＦＡＤＹＹＣ－ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ－ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ－ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ．（配列番号２１）
ＤＮＡ配列：７２６ｂｐ
ＧＡＡＴＴＣ－ＣＣ－ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ－ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＧＣ－ＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＴＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＧＧＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＣＧＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＡＣＡＣＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ－ＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ－ＴＧＡ－Ｔ－ＡＡＧＣＴＴ．（配列番号２２）
【0157】
図１Ａ及び図１Ｂのそれぞれに表される、得られた構築物のＳＤＳ－Ｐａｇｅ及びウェスタンブロット解析。レーンＭ１：タンパク質マーカ、ＴａＫａＲａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．３４５２。レーンＭ２：タンパク質マーカ、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｍ００５２１。レーン１：還元条件。レーン２：非還元条件。
【0158】
以下の一般的な手順を使用した：
【0159】
プラスミド調製：
１）標的ＤＮＡ配列を設計、最適化、かつ合成した；
２）完全配列をｐｃＤＮＡ３．４ベクターにサブクローニングした；
３）トランスフェクショングレードのプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞発現のために最大限調製した。
１）標的ＤＮＡ配列を設計、最適化、かつ合成した；
２）完全配列をｐｃＤＮＡ３．４ベクターにサブクローニングした；
３）トランスフェクショングレードのプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞発現のために最大限調製した。
【0160】
細胞培養及び一過性トランスフェクション：
１）Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞を、血清を含まないＥｘｐｉ２９３（商標）発現培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で増殖させた。
２）細胞を、オービタルシェーカ（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で、３７℃で８％のＣＯ２を含む三角フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．）中に維持した。
３）トランスフェクションの前日に、細胞をＣｏｒｎｉｎｇ社製の三角フラスコ中で適切な密度にて播種させた。
４）トランスフェクション当日、ＤＮＡ及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬を最適な比率で混合し、次いでトランスフェクションの準備をした細胞と共に、フラスコに加えた。
５）標的抗体をコードする組換えプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞培養の懸濁液中へと過渡的に同時導入した。トランスフェクション後およそ１６～１８時間で、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサ１及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサ２を各フラスコに加えた。６日目に採取された細胞培養物の上清を精製するために使用した。
１）Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞を、血清を含まないＥｘｐｉ２９３（商標）発現培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で増殖させた。
２）細胞を、オービタルシェーカ（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で、３７℃で８％のＣＯ２を含む三角フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．）中に維持した。
３）トランスフェクションの前日に、細胞をＣｏｒｎｉｎｇ社製の三角フラスコ中で適切な密度にて播種させた。
４）トランスフェクション当日、ＤＮＡ及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３試薬を最適な比率で混合し、次いでトランスフェクションの準備をした細胞と共に、フラスコに加えた。
５）標的抗体をコードする組換えプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞培養の懸濁液中へと過渡的に同時導入した。トランスフェクション後およそ１６～１８時間で、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサ１及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサ２を各フラスコに加えた。６日目に採取された細胞培養物の上清を精製するために使用した。
【0161】
精製及び分析：
１）細胞培養ブロスを遠心分離し、その後ろ過した。
２）ろ過された細胞培養物の上清を、適切な流速にてアフィニティー精製カラム上へと充填した。
３）適切な緩衝液で洗浄及び溶出した後、溶出された画分をプールし、緩衝液を最終調合用緩衝液（ｆｉｎａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ）に交換した。
４）精製されたタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウェスタンブロッティングにより解析し、分子量及び純度を測定した。
５）Ａ２８０法により濃度を測定した。
１）細胞培養ブロスを遠心分離し、その後ろ過した。
２）ろ過された細胞培養物の上清を、適切な流速にてアフィニティー精製カラム上へと充填した。
３）適切な緩衝液で洗浄及び溶出した後、溶出された画分をプールし、緩衝液を最終調合用緩衝液（ｆｉｎａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ）に交換した。
４）精製されたタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウェスタンブロッティングにより解析し、分子量及び純度を測定した。
５）Ａ２８０法により濃度を測定した。
【0162】
神経毒性指標として、ミトコンドリア形態のタウＣ３誘発変化を予防する抗タウＣ３抗体の能力を、タウＣ３プラスミドで遺伝子導入された培養ニューロンを使用するか、又はＦＬＴ（配列番号１）のカスパーゼ３切断を誘発するため、アポトーシス侵襲に細胞をばく露することで試験した。
【0163】
免疫組織化学を使用して、抗タウＣ３抗体－タウＣ３複合体を同定し、高解像蛍光顕微鏡法により、培養ニューロンでのそれらの細胞内局在及び脳スライスを調査した。
【0164】
例２
マウスの抗タウＣ３抗体（「ＴＢＬ－１００」）のインターナリゼーション及び保持と、例１の融合構築物を比較した。
マウスの抗タウＣ３抗体（「ＴＢＬ－１００」）のインターナリゼーション及び保持と、例１の融合構築物を比較した。
【0165】
例１の融合構築物のインターナリゼーション及び保持の速度は、マウスの抗タウＣ３抗体の速度よりも大きいように見えた。
【0166】
リソソームマーカを用いた融合構築物の共局在化、及びバフィロマイシンを用いた処置後の試験物質の保持の上昇は、インターナライズされたマウスの抗タウＣ３抗体を、例１の融合構築物よりも、リソソーム活性により更に効率的に除去することができることを示唆する。
【0167】
プロジェクト方法論の概要
細胞
ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＢＭＶＥＣ）（ｉＸ細胞）を、３８４ウェルプレートのウェルごとに１５００細胞にて蒔き、バフィロマイシンの存在下及びこれを含まない状態の両方にて、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物（「試験物質」）のそれぞれを用いた処置の前に２４時間にわたり培養する。
細胞
ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＢＭＶＥＣ）（ｉＸ細胞）を、３８４ウェルプレートのウェルごとに１５００細胞にて蒔き、バフィロマイシンの存在下及びこれを含まない状態の両方にて、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物（「試験物質」）のそれぞれを用いた処置の前に２４時間にわたり培養する。
【0168】
処置
マウスの抗タウＣ３抗体及び融合構築物試験抗体を、１：５００、１：１００、１：２０の３点用量反応にて３時間、６時間及び２４時間の処置ばく露で試験する。同じプレート上の並行ウェルを、０．１％のＤＭＳＯ又は１００ｎＭのバフィロマイシンのいずれかでもまた処理し、試験物質のインターナリゼーション後のリソソーム活性の効果を測定する。３つの時点のそれぞれについて適切な時間経過の後、細胞をＰＦＡ溶液中で固定及び透過処理し、ヤギブロック緩衝液中にて一晩ブロックする。
マウスの抗タウＣ３抗体及び融合構築物試験抗体を、１：５００、１：１００、１：２０の３点用量反応にて３時間、６時間及び２４時間の処置ばく露で試験する。同じプレート上の並行ウェルを、０．１％のＤＭＳＯ又は１００ｎＭのバフィロマイシンのいずれかでもまた処理し、試験物質のインターナリゼーション後のリソソーム活性の効果を測定する。３つの時点のそれぞれについて適切な時間経過の後、細胞をＰＦＡ溶液中で固定及び透過処理し、ヤギブロック緩衝液中にて一晩ブロックする。
【0169】
分析
神経突起伸長の自動化された定量分析及び神経細胞の健康状態に関連する標準的な計量は、Ｔｈｅｒｍｏ ＣＸ７ ＨＣＳを使用する。機器使用及び分析一式２０倍の対物レンズを使用し、１ウェルごとに９視野を取得し、条件ごとに最低４反復ウェル。
プロジェクト方法論の詳細
１．ＨＢＭＶＥＣ細胞（ＩＸ細胞）を解離し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ ＩＩセルカウンタを使用して計数する。
２．１４ｍＬの完全培地及び１．０５×１０６細胞の混合物を調製する。
３．低容量の３８４ウェルプレートの７００ウェルに十分（ウェルあたり２０μＬ／１５００細胞）。
４．細胞を３つのプレートのそれぞれへと配列（３時間、６時間、２４時間の試験物質処理）。
５．播種細胞を３７℃のインキュベータに２４時間にわたって返却。
６．２４時間の前培養後、８ｍＬの完全培地中で、ＴＢＬ－１００及びＴＢＬ－１１０（１：５００、１：１００、１：２０）の希釈液を調製。
・過剰量であることで、液体処理機器による完全培地の変更の実施が可能となる。
６．各希釈液を２つの同等の容量に分ける。
７．そのうちの１つに、バフィロマイシンストックを加え、１００ｎＭの最終濃度を得る。
８．Ａｐｒｉｃｏｔ液体処理プラットフォームを使用し、完全培地の変更を実施。
９．プレートをインキュベータに３時間、６時間、及び２４時間にわたり戻す。
１０．各時点のインキュベーションの終わりにあたり、４％のＰＢＳ中ＰＦＡ溶液を使用して２０分間固定し、ＰＢＳで洗浄し、細胞を透過処理する。
１１．ヤギブロック緩衝液中にて、一晩ブロックする。
１２．３つのプレート全てのそれぞれのウェルへ、一次抗体の以下の混合物を添加する。
・トランスフェリン受容体抗体（１：４００ウサギ一次）［細胞シグナリング技術 １３２０８Ｓ］
・ＬＡＭＰ２抗体（１：２００ラット一次）［Ａｂｃａｍ－ａｂ１３５２４］
１３．プレートを４℃の冷凍庫に一晩戻す
１４．二次抗体の以下の混合物を加え、室温で１時間にわたり標識化する前に、Ａｐｒｉｃｏｔを使用してプレートをＰＢＳでそれぞれ４回洗浄する。
・ヘキスト（１：１０００、核の検出用に３８６チャネルを占有）
・ヤギ抗マウス（１：１０００ ＴＢＬ１００／１１０の検出用に４８８チャネルを占有）、
・ヤギ抗ウサギ（１：１０００ トランスフェリンＲの検出用に５６０チャネルを占有）、
・ヤギ抗ラット（１：１０００ ＬＡＭＰ２の検出用に６５０チャネルを占有）
１５．Ａｐｒｉｃｏｔを使用して二次抗体混合物を除去し、抗菌薬／抗真菌薬及びアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳでウェルを充填する。
１６．プレートを密封し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ７機器及び２０倍の対物レンズを使用して画像化する。
神経突起伸長の自動化された定量分析及び神経細胞の健康状態に関連する標準的な計量は、Ｔｈｅｒｍｏ ＣＸ７ ＨＣＳを使用する。機器使用及び分析一式２０倍の対物レンズを使用し、１ウェルごとに９視野を取得し、条件ごとに最低４反復ウェル。
プロジェクト方法論の詳細
１．ＨＢＭＶＥＣ細胞（ＩＸ細胞）を解離し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ ＩＩセルカウンタを使用して計数する。
２．１４ｍＬの完全培地及び１．０５×１０６細胞の混合物を調製する。
３．低容量の３８４ウェルプレートの７００ウェルに十分（ウェルあたり２０μＬ／１５００細胞）。
４．細胞を３つのプレートのそれぞれへと配列（３時間、６時間、２４時間の試験物質処理）。
５．播種細胞を３７℃のインキュベータに２４時間にわたって返却。
６．２４時間の前培養後、８ｍＬの完全培地中で、ＴＢＬ－１００及びＴＢＬ－１１０（１：５００、１：１００、１：２０）の希釈液を調製。
・過剰量であることで、液体処理機器による完全培地の変更の実施が可能となる。
６．各希釈液を２つの同等の容量に分ける。
７．そのうちの１つに、バフィロマイシンストックを加え、１００ｎＭの最終濃度を得る。
８．Ａｐｒｉｃｏｔ液体処理プラットフォームを使用し、完全培地の変更を実施。
９．プレートをインキュベータに３時間、６時間、及び２４時間にわたり戻す。
１０．各時点のインキュベーションの終わりにあたり、４％のＰＢＳ中ＰＦＡ溶液を使用して２０分間固定し、ＰＢＳで洗浄し、細胞を透過処理する。
１１．ヤギブロック緩衝液中にて、一晩ブロックする。
１２．３つのプレート全てのそれぞれのウェルへ、一次抗体の以下の混合物を添加する。
・トランスフェリン受容体抗体（１：４００ウサギ一次）［細胞シグナリング技術 １３２０８Ｓ］
・ＬＡＭＰ２抗体（１：２００ラット一次）［Ａｂｃａｍ－ａｂ１３５２４］
１３．プレートを４℃の冷凍庫に一晩戻す
１４．二次抗体の以下の混合物を加え、室温で１時間にわたり標識化する前に、Ａｐｒｉｃｏｔを使用してプレートをＰＢＳでそれぞれ４回洗浄する。
・ヘキスト（１：１０００、核の検出用に３８６チャネルを占有）
・ヤギ抗マウス（１：１０００ ＴＢＬ１００／１１０の検出用に４８８チャネルを占有）、
・ヤギ抗ウサギ（１：１０００ トランスフェリンＲの検出用に５６０チャネルを占有）、
・ヤギ抗ラット（１：１０００ ＬＡＭＰ２の検出用に６５０チャネルを占有）
１５．Ａｐｒｉｃｏｔを使用して二次抗体混合物を除去し、抗菌薬／抗真菌薬及びアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳでウェルを充填する。
１６．プレートを密封し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ７機器及び２０倍の対物レンズを使用して画像化する。
【0170】
バフィロマイシン処理後のＴＢＬ－１００（マウスの抗タウＣ３抗体）の保持の上昇は、未処理の細胞では、リソソームによりこれが容易に除去されることを示唆した。
【0171】
両方の試験物質は、後の時点にて、トランスフェリン受容体（ＴＲ）を用いたものよりも高レベルのリソソームマーカであるＬＡＭＰ２との共局在を示すが、ＴＢＬ－１００（マウスの抗タウＣ３抗体）は、より早期の時点にて両方とより容易に共局在し、これはＴＲによる迅速な取込み及びリソソームによるその後の除去を示唆する。
【0172】
ＬＡＭＰ２又はＴＲのいずれとも共局在しない高レベルの細胞内ＴＢＬ－１１０（例１の融合構築物）は、この試験物質がインターナリゼーション時に放出され、代替的な機構により取り込まれることを示唆する。
【0173】
例３
例２の知見は、ヒト、サル及び脳微小血管細胞（ＨＢＭＶＥＣ）にて確認された。
例２の知見は、ヒト、サル及び脳微小血管細胞（ＨＢＭＶＥＣ）にて確認された。
【0174】
プロジェクト方法論の概要
細胞
Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏａｒｒａｙからのヒト、サル又はマウスの脳微小血管内皮細胞（ＢＭＶＥＣ）を、３８４ウェルプレートのウェルあたり１５００細胞で蒔き、１００ｎＭのバフィロマイシンの存在下及びこれを含まない状態の両方にて、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物のそれぞれを用いた処理の前に２４時間培養した。
細胞
Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏａｒｒａｙからのヒト、サル又はマウスの脳微小血管内皮細胞（ＢＭＶＥＣ）を、３８４ウェルプレートのウェルあたり１５００細胞で蒔き、１００ｎＭのバフィロマイシンの存在下及びこれを含まない状態の両方にて、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物のそれぞれを用いた処理の前に２４時間培養した。
【0175】
処置
マウスの抗タウＣ３抗体（ＴＢＬ－１００）及び例１の融合構築物（ＴＢＬ－１１０）（正確には「試験物質」）を、１：５００、１：１００、１：２０の３点用量反応にて２４時間の処置ばく露で試験した。同じプレート上の並行ウェルを、０．１％のＤＭＳＯ又は１００ｎＭのバフィロマイシンのいずれかでもまた処理し、試験物質のインターナリゼーション後のリソソーム活性の効果を測定した。３つの時点のそれぞれについて適切な時間経過の後、細胞をＰＦＡ溶液中で固定及び透過処理し、ヤギブロック緩衝液中にてブロックした。
マウスの抗タウＣ３抗体（ＴＢＬ－１００）及び例１の融合構築物（ＴＢＬ－１１０）（正確には「試験物質」）を、１：５００、１：１００、１：２０の３点用量反応にて２４時間の処置ばく露で試験した。同じプレート上の並行ウェルを、０．１％のＤＭＳＯ又は１００ｎＭのバフィロマイシンのいずれかでもまた処理し、試験物質のインターナリゼーション後のリソソーム活性の効果を測定した。３つの時点のそれぞれについて適切な時間経過の後、細胞をＰＦＡ溶液中で固定及び透過処理し、ヤギブロック緩衝液中にてブロックした。
【0176】
分析
標準的な計量の自動化された定量分析を、Ｔｈｅｒｍｏ ＣＸ７ ＨＣＳ機器及び分析一式を使用して実施した。４０倍の対物レンズを使用し、１ウェルごとに１６視野を取得し、条件ごとに最低８反復ウェル。
標準的な計量の自動化された定量分析を、Ｔｈｅｒｍｏ ＣＸ７ ＨＣＳ機器及び分析一式を使用して実施した。４０倍の対物レンズを使用し、１ウェルごとに１６視野を取得し、条件ごとに最低８反復ウェル。
【0177】
プロジェクト方法論の詳細
１．ＢＭＶＥＣ細胞を解離し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ ＩＩセルカウンタを使用して計数する。
２．２４時間の試験物質処理のために細胞をプレートへと配列。
３．播種細胞を３７℃のインキュベータに２４時間にわたって返却。
４．２４時間の前培養後、８ｍＬの完全培地中で、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物（１：５００、１：１００、１：２０）の希釈液を調製。
・過剰量であることで、液体処理機器による完全培地の変更の実施が可能となる。
５．各希釈液を２つの同等の容量に分ける。
６．そのうちの１つに、バフィロマイシンストックを加え、１００ｎＭの最終濃度を得る。
７．Ａｐｒｉｃｏｔ液体処理プラットフォームを使用し、完全培地の変更を実施。
８．プレートをインキュベータに２４時間にわたり戻す。
９．各時点のインキュベーションの終わりにあたり、４％のＰＢＳ中ＰＦＡ溶液を使用して２０分間固定し、ＰＢＳで洗浄し、細胞を透過処理する。
１０．ヤギブロック緩衝液中にて、室温で１時間ブロックする。
１１．３つのプレート全てのそれぞれのウェルへ、一次抗体の以下の混合物を添加する。
・トランスフェリン受容体抗体（１：２００ウサギ一次）［細胞シグナリング技術 １３２０８Ｓ］
・ＬＡＭＰ２抗体（１：２００ラット一次）［Ａｂｃａｍ－ａｂ１３５２４］
１２．プレートを４℃の冷凍庫に一晩戻す
１３．二次抗体の以下の混合物を加え、室温で１時間にわたり標識化する前に、Ａｐｒｉｃｏｔを使用してプレートをＰＢＳでそれぞれ５回洗浄する。
・ヘキスト（１：１０００、核の検出用に３８６チャネルを占有）
・ヤギ抗マウス（１：１０００ マウスの抗タウＣ３抗体／例１の融合構築物の検出用に４８８チャネルを占有）、
・ヤギ抗ウサギ（１：１０００ トランスフェリンＲの検出用に５６０チャネルを占有）、
・ヤギ抗ラット（１：１０００ ＬＡＭＰ２の検出用に６５０チャネルを占有）
１４．Ａｐｒｉｃｏｔを使用して二次抗体混合物を除去し、抗菌薬／抗真菌薬及びアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳでウェルを充填する。
１５．プレートを密封し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ７機器及び４０倍の対物レンズを使用して画像化する。
１．ＢＭＶＥＣ細胞を解離し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ ＩＩセルカウンタを使用して計数する。
２．２４時間の試験物質処理のために細胞をプレートへと配列。
３．播種細胞を３７℃のインキュベータに２４時間にわたって返却。
４．２４時間の前培養後、８ｍＬの完全培地中で、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物（１：５００、１：１００、１：２０）の希釈液を調製。
・過剰量であることで、液体処理機器による完全培地の変更の実施が可能となる。
５．各希釈液を２つの同等の容量に分ける。
６．そのうちの１つに、バフィロマイシンストックを加え、１００ｎＭの最終濃度を得る。
７．Ａｐｒｉｃｏｔ液体処理プラットフォームを使用し、完全培地の変更を実施。
８．プレートをインキュベータに２４時間にわたり戻す。
９．各時点のインキュベーションの終わりにあたり、４％のＰＢＳ中ＰＦＡ溶液を使用して２０分間固定し、ＰＢＳで洗浄し、細胞を透過処理する。
１０．ヤギブロック緩衝液中にて、室温で１時間ブロックする。
１１．３つのプレート全てのそれぞれのウェルへ、一次抗体の以下の混合物を添加する。
・トランスフェリン受容体抗体（１：２００ウサギ一次）［細胞シグナリング技術 １３２０８Ｓ］
・ＬＡＭＰ２抗体（１：２００ラット一次）［Ａｂｃａｍ－ａｂ１３５２４］
１２．プレートを４℃の冷凍庫に一晩戻す
１３．二次抗体の以下の混合物を加え、室温で１時間にわたり標識化する前に、Ａｐｒｉｃｏｔを使用してプレートをＰＢＳでそれぞれ５回洗浄する。
・ヘキスト（１：１０００、核の検出用に３８６チャネルを占有）
・ヤギ抗マウス（１：１０００ マウスの抗タウＣ３抗体／例１の融合構築物の検出用に４８８チャネルを占有）、
・ヤギ抗ウサギ（１：１０００ トランスフェリンＲの検出用に５６０チャネルを占有）、
・ヤギ抗ラット（１：１０００ ＬＡＭＰ２の検出用に６５０チャネルを占有）
１４．Ａｐｒｉｃｏｔを使用して二次抗体混合物を除去し、抗菌薬／抗真菌薬及びアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳでウェルを充填する。
１５．プレートを密封し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＣｅｌｌＩｎｓｉｇｈｔ ＣＸ７機器及び４０倍の対物レンズを使用して画像化する。
【0178】
結果概要
１．例１の融合構築物（ＴＢＬ－１１０）のインターナリゼーション及び保持の速度は、ヒト、サル、及びマウスＢＭＶＥＣ株におけるマウスの抗タウＣ３抗体（ＴＢＬ－１００）の速度よりも大きいように見える。
１．例１の融合構築物（ＴＢＬ－１１０）のインターナリゼーション及び保持の速度は、ヒト、サル、及びマウスＢＭＶＥＣ株におけるマウスの抗タウＣ３抗体（ＴＢＬ－１００）の速度よりも大きいように見える。
【0179】
２．マウスの抗タウＣ３抗体と比較すると、例１の融合構築物の保持の上昇は、バフィロマイシンが存在しない状態では最大であった（すなわち、バフィロマイシンの存在下で、試験濃度が最高である場合には、マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物の両方は、同様に高レベルの保持を有する）。
【0180】
３．バフィロマイシンの追加は、ヒト及びサルＢＭＶＥＣ細胞株について、例１の融合構築物よりもマウスの抗タウＣ３抗体の保持を優先的に上昇させた。
【0181】
４．トランスフェリン－Ｒ及びＬＡＭＰ２発現レベルは、いずれかの試験物質の増加した投与量により著しく影響されなかった。
【0182】
５．マウスの抗タウＣ３抗体及び例１の融合構築物の両方は、トランスフェリン受容体及びＬＡＭＰ２との部分的な共局在を示した。
【0183】
したがって、例１の構築物（ＴＢＬ－１１０）は、交差種反応性を示し、ヒト、サル及びマウス細胞株で機能する。この知見により、例えば、発症前の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）及び動物における融合構築物の毒性学的研究、ヒトに対する動物モデルにおける研究にて生成されたデータの考えられる外挿が可能となる。
【0184】
例４
タウＣ３を過剰発現したＡＡＶマウスモデルに、ＩｇＧ１又は重鎖のＣ末端にてＴｆｒ結合ペプチドに融合された抗タウＣ３ ＩｇＧ１（ＴＢＬ－１１０）ｍＡｂを用いて毎週６ヶ月間、腹腔内（ＩＰ）に注射した。脳切片を免疫組織化学により解析し、２つの異なる濃度のコントロールであるＩｇＧ又はＴＢＬ－１００の相対的な脳取込みを測定した。抗体染色した脳切片の画像を量的に解析し、統計学的有意性に関して比較した。画像を図２９Ａ～図２９Ｄで再現し、定量分析及び脳解析の結果を表１に提供し、図３０にこれを示す。結果は、コントロールであるＩｇＧと比較すると、例１の融合構築物であるＴＢＬ－１１０の有意な脳取込みを確認した。この取込みは、より高い投与量にて発生した最大取込みにより、用量依存的であったことも確認した。結果は以下の通りである。
タウＣ３を過剰発現したＡＡＶマウスモデルに、ＩｇＧ１又は重鎖のＣ末端にてＴｆｒ結合ペプチドに融合された抗タウＣ３ ＩｇＧ１（ＴＢＬ－１１０）ｍＡｂを用いて毎週６ヶ月間、腹腔内（ＩＰ）に注射した。脳切片を免疫組織化学により解析し、２つの異なる濃度のコントロールであるＩｇＧ又はＴＢＬ－１００の相対的な脳取込みを測定した。抗体染色した脳切片の画像を量的に解析し、統計学的有意性に関して比較した。画像を図２９Ａ～図２９Ｄで再現し、定量分析及び脳解析の結果を表１に提供し、図３０にこれを示す。結果は、コントロールであるＩｇＧと比較すると、例１の融合構築物であるＴＢＬ－１１０の有意な脳取込みを確認した。この取込みは、より高い投与量にて発生した最大取込みにより、用量依存的であったことも確認した。結果は以下の通りである。
【0185】
【表1】
【0186】
前述の明細書では、特定の例示的な実施形態及びその例を参照して本発明を説明した。しかしながら、添付の特許請求の範囲に記載される本発明のより広い精神及び範囲から逸脱することなく、様々な修正及び変更を行うことができることは明らかであろう。したがって、本明細書及び図面は、限定的な意味ではなく例示的な方法で考慮されるべきである。
【配列表フリーテキスト】
【0187】
配列表２ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表３ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表４ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表５ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表６ ＜２２３＞リンカー
配列表７ ＜２２３＞重鎖ＣＤＲ１（ＩＭＧＴ定義）
配列表８ ＜２２３＞重鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ定義）
配列表９ ＜２２３＞重鎖ＣＤＲ３（ＩＭＧＴ定義）
配列表１０ ＜２２３＞軽鎖ＣＤＲ１（ＩＭＧＴ定義）
配列表１１ ＜２２３＞軽鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ定義）
配列表１２ ＜２２３＞軽鎖ＣＤＲ３（ＩＭＧＴ定義）
配列表１３ ＜２２３＞重鎖 ＨＭ
配列表１４ ＜２２３＞軽鎖 ＫＥ
配列表１５ ＜２２３＞軽鎖 ＫＮ
配列表１６ ＜２２３＞軽鎖 ＫＯ
配列表１７ ＜２２３＞軽鎖 ＫＰ
配列表１８ ＜２２３＞軽鎖 ＫＭ
配列表１９ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２０ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２１ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 軽鎖可変領域
配列表２２ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 軽鎖可変領域
配列表２３ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２４ ＜２２３＞ＴＢＬ－１００ 重鎖可変領域
配列表２５ ＜２２３＞ＴＢＬ－１００ 軽鎖可変領域
配列表２６ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２７ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 軽鎖可変領域
配列表２８ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表３ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表４ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表５ ＜２２３＞輸送ペプチド
配列表６ ＜２２３＞リンカー
配列表７ ＜２２３＞重鎖ＣＤＲ１（ＩＭＧＴ定義）
配列表８ ＜２２３＞重鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ定義）
配列表９ ＜２２３＞重鎖ＣＤＲ３（ＩＭＧＴ定義）
配列表１０ ＜２２３＞軽鎖ＣＤＲ１（ＩＭＧＴ定義）
配列表１１ ＜２２３＞軽鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ定義）
配列表１２ ＜２２３＞軽鎖ＣＤＲ３（ＩＭＧＴ定義）
配列表１３ ＜２２３＞重鎖 ＨＭ
配列表１４ ＜２２３＞軽鎖 ＫＥ
配列表１５ ＜２２３＞軽鎖 ＫＮ
配列表１６ ＜２２３＞軽鎖 ＫＯ
配列表１７ ＜２２３＞軽鎖 ＫＰ
配列表１８ ＜２２３＞軽鎖 ＫＭ
配列表１９ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２０ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２１ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 軽鎖可変領域
配列表２２ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 軽鎖可変領域
配列表２３ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２４ ＜２２３＞ＴＢＬ－１００ 重鎖可変領域
配列表２５ ＜２２３＞ＴＢＬ－１００ 軽鎖可変領域
配列表２６ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 重鎖可変領域
配列表２７ ＜２２３＞ＴＢＬ－１１０ 軽鎖可変領域
配列表２８ ＜２２３＞輸送ペプチド
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29A】
【図29B】
【図29C】
【図29D】
【図29E】
【図】
【図30】
【配列表】
【国際調査報告】