特表 2022-529505 上皮および関門の完全性を保護するための組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-22

(54)【発明の名称】上皮および関門の完全性を保護するための組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20220615BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220615BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220615BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20220615BHJP

   A61K 31/353 20060101ALI20220615BHJP

   C07K 7/00 20060101ALN20220615BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P27/02

A61P43/00 111

A61K38/10

A61K31/353

C07K7/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021563013

(86)(22)【出願日】2020-04-23

(85)【翻訳文提出日】2021-12-22

(86)【国際出願番号】 US2020029594

(87)【国際公開番号】W WO2020219730

(87)【国際公開日】2020-10-29

(31)【優先権主張番号】62/837,697

(32)【優先日】2019-04-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517062333

【氏名又は名称】オキュネクシス セラピューティクス， インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】508037005

【氏名又は名称】オークランド ユニサービシズ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ムギショー， オドゥナヨ オモローラ ボルワリン

(72)【発明者】

【氏名】グリーン， コリン リチャード

(72)【発明者】

【氏名】ダフト， ブラッドフォード ジェイムズ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA17

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA18

4C084BA23

4C084BA44

4C084CA59

4C084MA52

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZC411

4C084ZC412

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA08

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA66

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZC41

4H045AA30

4H045BA16

4H045EA20

4H045FA10

(57)【要約】

本発明は、対象者におけるＢＲＢの完全性および機能、ＲＰＥの完全性および機能、密着結合の完全性および機能、ＺＯ－１内部移行、ギャップ結合の内部移行、および／またはＩＶ型コラーゲンレベルを調節するためのヘミチャネル遮断剤の使用に関する。網膜の色素上皮層、または網膜色素上皮（ＲＰＥ）は、網膜視細胞を養う神経感覚網膜のすぐ外側の色素細胞層であり、下にある脈絡膜および下にある網膜視細胞にしっかりと付着している。網膜色素上皮および血液網膜関門の浸透性の増大は、数多くの疾患、障害および状態に関与する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象者における血液網膜関門（ＢＲＢ）の完全性を調節する方法であって、有効量のヘミチャネル遮断剤を前記対象者に投与することを含む、方法。

【請求項2】

対象者における網膜色素上皮（ＲＰＥ）の完全性を調節する方法であって、有効量のヘミチャネル遮断剤を前記対象者に投与することを含む、方法。

【請求項3】

対象者における密着結合の完全性を調節する方法であって、有効量のヘミチャネル遮断剤を前記対象者に投与することを含む、方法。

【請求項4】

対象者におけるＩＶ型コラーゲン産生の完全性を調節する方法であって、有効量のヘミチャネル遮断剤を前記対象者に投与することを含む、方法。

【請求項5】

対象者における細胞内でのギャップ結合プラーク内部移行を調節する方法であって、有効量のヘミチャネル遮断剤を前記対象者に投与することを含む、方法。

【請求項6】

前記ヘミチャネル遮断剤がコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤である、請求項１～４または５のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

前記ヘミチャネル遮断剤が、式Ｉによる小分子ヘミチャネル遮断剤である、請求項１～４または５のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

前記小分子ヘミチャネル遮断剤が、Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロミン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド（Ｘｉｆｌａｍ）である、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記小分子ヘミチャネル遮断剤が、Ｘｉｆｌａｍプロドラッグである、請求項７に記載の方法。

【請求項10】

前記ヘミチャネル遮断剤が、ペプチド模倣体コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤である、請求項１～４または５のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

前記ペプチド模倣体コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤がＰｅｐｔｉｄｅ５である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記ヘミチャネル遮断剤が、約１０～約２５０マイクロモルの範囲の前記ヘミチャネル遮断剤の最終循環濃度を達成するために投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記ヘミチャネル遮断剤が注射によって投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記ヘミチャネル遮断剤が経口投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

前記ヘミチャネル遮断剤が、必要に応じて（ＰＲＮ）、または所定のスケジュール、あるいはその両方で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記対象者がヒトである、請求項１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連する特許出願）
本出願は、２０１９年４月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／８３７，６９７号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、概して網膜に関し、特に網膜色素上皮および血液網膜関門に関する。
参照による組み込み

【0003】

本明細書に言及された全ての米国特許、米国特許出願公開公報、国外特許、国外およびＰＣＴ公開出願、論文および他の文書、参照文献および刊行物、ならびに本明細書から発行されたいずれかの１件または複数件の特許に引用参照文献として一覧に挙げられたもの全てが、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。組み込まれる情報は、出願において、すべてのテキストおよび他の内容が繰り返されたかのように、本出願の一部であり、出願された本出願のテキストおよびコンテンツの一部として扱われる。

【背景技術】

【0004】

以下は、本願発明を理解する際に有用となりうる情報を含む。本明細書に具体的にまたは暗黙的に参照される情報、刊行物、または文書のいずれも、ここに記載されるかまたは特許請求の範囲に記載される発明に対し、先行技術であること、または不可欠であることを、自認するものではない。

【0005】

コネキシンは、ギャップ結合を形成するタンパク質であり、二つの隣接する細胞の細胞質を結合し、ヘミチャネルと呼ばれる二つのギャップ結合のハーフチャネルのドッキング後の細胞間のイオン、代謝物およびシグナル伝達分子の移動を可能にする細胞間チャネルである。様々なコネキシンアイソタイプが、最も一般的なＣｏｎｎｅｘｉｎ４３とともにヒトの体内で発現される。研究では、Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３チャネルが、炎症、細胞遊走、および心筋細胞収縮の協調などの生理学的役割などのプロセスに寄与することが示されている。

【0006】

コネキシンチャネルは、成熟骨格筋細胞および精子や赤血球などの可動性細胞のタイプを例外として、身体の実質上全ての組織で発現されている。１つのギャップ結合は、隣接する細胞間の細胞間隙を横切って接続し、細胞内分子がそれらの細胞間で流れることを可能にする、２つのコネクソン（またはヘミチャネル）から構成される。ギャップ結合の各コネクソンは、隣接する細胞膜に存在し、６個の個々のコネキシン（Ｃｘ）タンパク質の共有結合オリゴマー化によって形成される。機能的ギャップ結合の形成の必須要件は、コネキシンタンパク質をヘミチャネル内に集合させ、それを膜内に挿入することである。細胞間通信については、一つの細胞のヘミチャネルは、一方の細胞から他方の細胞へのギャップ結合を介した分子の伝達を可能にするために、隣接する細胞の対向する膜上の対応物にドッキングしなければならない。

【0007】

遍在的に発現された４３ｋＤａタンパク質であるｃｏｎｎｅｘｉｎ４３も、いくつかの病理学的状態とリンクしており、いくつもの研究により、ギャップ結合チャネル自体ではなく、ドッキング解除されたｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルが、様々なｃｏｎｎｅｘｉｎ４３を媒介した有害なプロセスを促進するという証拠が示されている。これらには、イオン不均衡とカルシウム波の発症、細胞外空間から細胞への細胞毒性分子の流入、およびインフラマソーム経路をトリガーする開放ヘミチャネルを介したＡＴＰ放出が含まれる。インフラマソームは、様々なストレス因子を感知すると集合する多量体タンパク質複合体である。これらの形成は、炎症反応を誘発する炎症促進性サイトカインプロインターロイキン（ＩＬ）－１ＢおよびＩＬ－１８のカスパーゼ－１媒介性の活性化および分泌をもたらす。

【0008】

一部の報告は、コネキシンヘミチャネルが、主に虚血性または低酸素性ストレスなどの病理学的状態の間にのみ開通することを示している。最近の研究は、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルの開通が、網膜虚血および脊髄損傷などの損傷後の病変の拡散に寄与する可能性があるという考えを裏付けている。Ｃｈｅｎ ＹＳ， ｅｔ ａｌ． （２０１５） Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌａｕｃｏｍａ － Ａ ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓ． Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ ９５ （Ｐｔ Ｂ）：１８２－１９３； Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ＨＶ， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｍｉｍｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｄｕｃｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｒｅｔｉｎａｌ ｉｓｃｈａｅｍｉａ． Ｂｒａｉｎ １３５ （Ｐｔ ２）：５０６－５２０； Ｇｕｏ ＣＸ， ｅｔ ａｌ ． （２０１６） Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｄｕｃｅｓ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｌｉｇｈｔ－Ｄａｍａｇｅｄ Ａｌｂｉｎｏ Ｒａｔ Ｍｏｄｅｌ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ５７ （１０）：３９６１－３９７３； Ｋｅｒｒ ＮＭ， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｉｓｃｈａｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｃａｕｓｅｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｌｏｓｓ． Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ ２３４ （１）：１４４－１５２； Ｚｈａｎｇ Ｊ， ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ． Ｉｎ： Ｃｏｎｎｅｘｉｎ Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ Ｃｈａｎｎｅｌｓ： Ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ． Ｔａｙｌｏｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ， ｐｐ ２７３－３０５．を参照。

【0009】

網膜では、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３は、血管内皮細胞、グリア細胞、および網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞によって発現される。これらは、内側および外側の血液網膜関門（ＢＲＢ）を構成する細胞型である。外側ＢＲＢは、特に、網膜の残りの部分から、網膜血液供給の８０％を提供する、高度に血管化された脈絡膜を分離するという、網膜において重要な役割を果たしている。ＲＰＥ細胞もまた生理学的に重要であり、網膜グルコース恒常性、血管新生バランス、および光受容体機能を調節する。ＲＰＥ細胞の病態は、数多くの網膜疾患に関連付けられてきており、これには、その後期段階でＢＲＢ漏出および新しい漏出性血管の形成を伴う血管新生で特徴付けられる、高血糖関連血管病態が原因で発症する慢性網膜疾患である糖尿病性網膜症が含まれる。Ｄｕｒｈａｍ ＪＴ， Ｈｅｒｍａｎ ＩＭ （２０１１） Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ． Ｃｕｒｒ Ｄｉａｂ Ｒｅｐ １１ （４）：２５３－２６４．

【0010】

研究では、糖尿病性網膜症に特徴的な病理学的事象は、主に高血糖症と炎症の両方の存在下で発生すること、およびｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルを遮断することで、ＲＰＥ細胞における炎症促進性サイトカイン放出とＮＬＲＰ３インフラマソーム活性化から保護できることが示されている。Ｍｕｇｉｓｈｏ ＯＯ， ｅｔ ａｌ． （２０１８） Ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｐｅｒｐｅｔｕａｔｅｄ ｉｎ ａｎ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｍａｎｎｅｒ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ＡＴＰ ｒｅｌｅａｓｅ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １８６２ （３）：３８５－３９３を参照。
しかしながら、これらの所見にもかかわらず、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３がＲＰＥ細胞の関門特性に影響を与えるかどうか、およびどのように影響するかは、未だ不明である。このことは、ＲＰＥ媒介性ＢＲＢの完全性の喪失は、視力喪失を誘発する糖尿病性網膜症の結果である糖尿病性黄斑浮腫の重要な特徴であるため、特に重要である。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】Ｃｈｅｎ ＹＳ， ｅｔ ａｌ． （２０１５） Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌａｕｃｏｍａ － Ａ ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒｓ． Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ ９５ （Ｐｔ Ｂ）：１８２－１９３

【非特許文献2】Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ＨＶ， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｍｉｍｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｄｕｃｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｒｅｔｉｎａｌ ｉｓｃｈａｅｍｉａ． Ｂｒａｉｎ １３５ （Ｐｔ ２）：５０６－５２０

【非特許文献3】Ｇｕｏ ＣＸ， ｅｔ ａｌ ． （２０１６） Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ Ｍｉｍｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｄｕｃｅｓ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｌｉｇｈｔ－Ｄａｍａｇｅｄ Ａｌｂｉｎｏ Ｒａｔ Ｍｏｄｅｌ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ５７ （１０）：３９６１－３９７３

【非特許文献4】Ｋｅｒｒ ＮＭ， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｉｓｃｈａｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｃａｕｓｅｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｌｏｓｓ． Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ ２３４ （１）：１４４－１５２

【非特許文献5】Ｚｈａｎｇ Ｊ， ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ． Ｉｎ： Ｃｏｎｎｅｘｉｎ Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ Ｃｈａｎｎｅｌｓ： Ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ． Ｔａｙｌｏｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ， ｐｐ ２７３－３０５．

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0012】

本明細書に記載され特許請求される本発明は、多くの特質および実施形態を有し、そのようなものとしては、以下に限定されないが、この簡潔な概要に明記または記載または参照されるものが挙げられる。包括的であることは意図されていないため、本明細書に記載され特許請求される本発明は、制限ではなく説明の目的で含まれているに過ぎず、この概要に特定される特長または実施形態に、またはそれによって、限定されるものではない。

【0013】

網膜の色素上皮層、または網膜色素上皮（ＲＰＥ）は、網膜視細胞を養う神経感覚網膜のすぐ外側の色素細胞層であり、下にある脈絡膜および下にある網膜視細胞にしっかりと付着している。網膜色素上皮および血液網膜関門の浸透性の増大は、数多くの疾患、障害および状態に関与する。

【0014】

本特許は、網膜色素上皮および血液網膜関門の完全性の破壊を減弱するためのヘミチャネル遮断剤の使用について説明している。

【0015】

特許はまた、ＺＯ－１内部移行を減弱するためのヘミチャネル遮断剤の使用についても説明している。

【0016】

この特許はまた、コネキシン、特にコネキシン４３の内部移行を減弱させるためのヘミチャネル遮断剤の使用についても説明している。

【0017】

特許はまた、コラーゲンＩＶの上方制御を減弱するためのヘミチャネル遮断剤の使用についても説明している。

【0018】

本発明は、一態様では、例えば、ＲＰＥ完全性の喪失によって全体的または部分的に特徴付けられる状態を含む、対象者におけるＲＰＥ浸透性を調節するためのヘミチャネル遮断剤の使用に関する。

【0019】

別の態様では、対象者におけるＢＲＢ完全性を調節するための方法が提供される。

【0020】

別の態様では、対象者における密着結合の完全性を調節するための方法が提供される。

【0021】

別の態様では、対象者においてＩＶ型コラーゲンを調節する方法が提供される。

【0022】

別の態様では、本明細書に記載のアッセイを使用して、ＲＰＥ浸透性、ＢＲＢ浸透性、ＺＯ－１内部移行、コラーゲンＩＶ調節、および／またはコネキシンヘミチャネル内部移行を調節するのに有用な化合物の活性を、確認、測定、または評価するための方法が提供される。アッセイには、ＡＲＰＥ－１９細胞を使用した試験が含まれる。Ｄｕｎｎ ＫＣ， ｅｔ ａｌ．， ＡＲＰＥ－１９， ａ ｈｕｍａｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． １９９６ Ｆｅｂ；６２（２）：１５５－６９を参照。一つの実施形態では、試験アッセイは、例えば、既知または潜在的なヘミチャネル遮断剤の存在下でのＲＰＥ層浸透性を測定するために、ＡＲＰＥ－１９単層にわたる経上皮抵抗（ＴＥＥＲ）およびＦＩＴＣ－デキストラン染料リークを使用した、ＡＲＰＥ－１９細胞ＲＰＥ破壊アッセイである。

【0023】

本特許は、部分的には、コネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルを調節して、ＲＰＥ浸透性を遮断または調節し、ＲＰＥ完全性を改善または維持するための化合物および方法の使用について説明している。

【0024】

本特許はまた、部分的には、コネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルを調節してＢＲＢ浸透性を遮断または調節し、ＢＲＢ完全性を改善または維持するための化合物および方法の使用についても説明している。

【0025】

本発明の方法は、コネキシンヘミチャネル遮断剤を、そこから利益を得ることになる対象者に投与することによって、対象者において異常、上昇、調節異常、および／または望ましくないレベルのＲＰＥ浸透性を減弱するのに有用である。本発明の方法はまた、コネキシンヘミチャネル遮断剤を、そこから利益を得ることになる対象者に投与することによって、対象者におけるＢＲＢ浸透性の異常、上昇、調節不全、および／またはそれ以外の望ましくないレベルの減弱にも有用である。

【0026】

本発明の方法は、コネキシンヘミチャネル遮断剤を、そこから利益を得ることになる対象者に投与することによって、対象者におけるコラーゲンＩＶの異常、上昇、調節異常、および／または別の方法で望ましくないレベルの減弱に有用である。例えば、ＶＩ型コラーゲン形成は、１型糖尿病の人々の動脈剛性の高さと関連付けられ、本発明の化合物および組成物で治療することができる。１型糖尿病は、心血管疾患のリスクを増加させる。大動脈の硬化は、心血管リスクおよび動脈硬化の重要な決定因子であり、死亡率および心血管転帰の強力な予測因子であることが示されている。動脈の硬化は、大動脈の中膜におけるエラスチン線維の断片化および喪失、ならびにコラーゲン線維の蓄積を反映する。しかしながら、これまで動脈の硬化を引き起こす機序は未だ完全には理解されていない。これらは、高グルコースおよびベースライン炎症に直面したヘミチャネルの開通に少なくとも部分的に基づいており、動脈硬直は、例として、本明細書に記載のコラーゲンＩＶを減少させるヘミチャネルの開通の調節因子で治療されてもよい。

【0027】

本発明の方法は、コネキシンヘミチャネル遮断剤を、そこから利益を得ることになる対象者に投与することによって、対象者におけるＺＯ－１および／または密着結合破壊の異常、上昇、調節異常、および／または別の方法で望ましくないレベルの減弱に有用である。本発明の方法はまた、コネキシンヘミチャネル遮断剤を、そこから利益を得ることになる対象者に投与することによって、対象者におけるコネキシンヘミチャネルの異常、上昇、調節不全、および／またはそれ以外の望ましくないレベルの減弱にも有用である。これらには、例えば、炎症腸疾患および結腸直腸癌に関連する炎症性腸疾患を有する対象者が含まれ、これらの疾患は、上皮性関門の完全性を損なう炎症を特徴とし、また上皮性関門機能の維持および傍細胞浸透性の制御において頂端の密着結合タンパク質が重要である。

【0028】

本発明の目的は、コネキシンヘミチャネル遮断剤を、そこから利益を得ることになる対象者に投与することによって、対象者において、異常な、上昇する、調節異常、および／またはその他の望ましくないレベルのＲＰＥ浸透性、ＢＲＢ浸透性、密着結合破壊、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行、またはＩＶ型コラーゲン産生を減弱するための方法を提供することである。

【0029】

本発明の別の目的は、ＲＰＥ完全性を維持または強化するために、ＲＰＥ浸透性の調節から利益を得る疾患、障害および状態の治療のための化合物、組成物、製剤、キットおよび方法を提供することである。

【0030】

本発明の別の目的は、ＢＲＢ完全性を維持または強化するために、ＢＲＢ浸透性の調節から利益を得る疾患、障害および状態の治療のための化合物、組成物、製剤、キットおよび方法を提供することである。本発明の目的はまた、密着結合破壊、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の調節から利益を得ることになる疾患、障害および状態の治療のための化合物、組成物、製剤、キットおよび方法を提供することを含む。

【0031】

一部の態様では、治療方法は、哺乳動物、例えば、ヒトに適用される。

【0032】

別の態様では、本発明は、本明細書に記載されるように一つ以上の疾患、障害、および状態の治療のためのヘミチャネル遮断剤を提供する。

【0033】

本発明において有用なヘミチャネル遮断剤としては、式Ｉの化合物、例えば、Ｘｉｆｌａｍ、および／または前述の化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、またはペプタゴン（別名Ｐｅｐｔｉｄｅ５もしくはその類似体もしくはプロドラッグなどのペプチド模倣体、または別のヘミチャネル遮断剤、ならびに本明細書に参照により記載または援用される他のヘミチャネル遮断剤化合物が挙げられる。

【0034】

いくつかの好ましいヘミチャネル遮断剤には、小分子ヘミチャネル遮断剤（例えば、例えば、Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサト））が含まれる。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｘｉｆｌａｍ以外の小分子であり、例えば、米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号（Ｃｏｌｉｎ Ｇｒｅｅｎ， ｅｔ ａｌ．）の式Ｉまたは式ＩＩに記載されているヘミチャネル遮断剤であり、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。様々な好ましい実施形態は、ヘミチャネルの開通を遮断もしくは改善するか、またはそれ以外の方法で拮抗もしくは阻害して、少なくとも部分的に、異常な、高い、調節不全の、および／またはそれ以外に望ましくない、不必要な、または有害なレベルのＲＰＥもしくはＢＲＢまたは密着結合の完全性によって特徴づけられる、疾患、障害、および状態を治療する、小分子の使用を含み、これには、本明細書に記載または言及されているもの、ならびに、ＲＰＥもしくはＢＲＢまたは密着結合の完全性、 密着結合破壊、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の調節から利益を得る、疾患、障害および状態の治療が含まれる。各種の実施形態では、ヘミチャネルの開通を遮断または改善もしくは阻害する小分子は、Ｘｉｆｌａｍのプロドラッグまたはその類似体である。

【0035】

その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤には、ペプチドおよびペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤（例えば、ペプタゴン、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド模倣体））、ならびにアミノ酸配列ＳＲＰＴＥＫＴ、ならびに例えば、ギャップ１９など、その他のペプチドヘミチャネル調節剤を含む、または本質的にそれらからなる、またはそれらからなる、他のペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤が含まれる。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｐｅｐｔｉｄｅ５、ＧＡＰ９、ＧＡＰ１９、ＧＡＰ２６、ＧＡＰ２７、またはα－コネキシンカルボキシ末端（ＡＣＴ）ペプチド、例えば、ＡＣＴ－１または他の活性抗ヘミチャネルペプチド模倣体である。本発明の態様のいずれにおいても、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシンペプチドまたはペプチド模倣体であり、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、およびコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるペプチドまたはペプチド模倣体を含む。コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体は、修飾されてもよく、または修飾されなくてもよい。コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体は、化学的に、合成的に、またはその他の方法で製造される。一部の実施形態では、コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体は、Ｃｘ４３ペプチドまたはペプチド模倣体である。一部の態様では、治療的に有効な修飾または非修飾ペプチドまたはペプチド模倣体は、例えば、Ｃｘ４３細胞外ループ２の一部分およびＣｘ４５細胞外ループ２の一部分を含む、コネキシン細胞外ループ２の一部分といった、コネキシン（Ｃｘ４３またはＣｘ４５など）の細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。

【0036】

別の態様では、本発明は、本明細書に記述または言及される一つ以上の疾患、障害、および状態の治療に使用するための薬剤の製造におけるヘミチャネル遮断剤の使用を提供する。薬剤は、ヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。一つの実施形態では、薬剤は、ペプチドヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。一つの実施形態では、薬剤は、ペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。一つの実施形態では、薬剤は、小分子ヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。一つの実施形態では、薬剤は、米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号の式Ｉまたは式ＩＩによる化合物を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。一つの実施形態では、薬剤は、Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサト）を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。

【0037】

「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）という用語は、「含む」（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、「含む」（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）または「特徴付けられる」（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）と同義語であり、包括的またはオープンエンド型であり、薬剤（または方法の場合、工程）から追加的な未列挙の構成要素または成分を排除するものではない。「からなる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）という語句は、薬剤（または方法の場合には、工程）に指定されていない任意の要素、工程、または成分を除外する。「から本質的になる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）という語句は、指定された材料、および薬剤の基本的および新規の特性（または方法の場合、工程）に実質的に影響しない材料を指す。本発明の基本的および新規の特徴は、本明細書全体を通して説明があり、また場合により、コネキシンギャップ結合ヘミチャネルを遮断または調節し、ＢＲＢ完全性、ＲＰＥ完全性、密着結合完全性、ＢＲＢ破壊、ＲＰＥ破壊、密着結合破壊、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行、および／またはＩＶ型コラーゲン産生のうちの一つ以上を調節する、本発明の薬剤および方法の能力を含む。本発明の基本的および新規の特性における重要な変化は、本明細書に記述される薬剤および方法を含めて、不必要な、または臨床的に望ましくない、有害である、不利益である、またはヘミチャネル調節物質の有害な減少、および／またはＢＲＢ完全性、ＲＰＥ完全性、密着結合の完全性、ＢＲＢ破壊、ＲＰＥ破壊、密着結合破壊、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行、および／またはＩＶ型コラーゲン産生のうち一つ以上の調節、場合によっては、ＢＲＢ破壊、ＲＰＥ破壊、密着結合破壊、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行のうち一つ以上の調節を含む。一つの実施形態では、薬剤は、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤、例えば、ペプチド模倣体または小分子コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。好ましい一つの実施形態では、薬剤は、Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサト）、または式Ｉの別の化合物を含むか、または本質的にそれからなる。

【0038】

別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの調節、および／または本明細書に記述または言及される疾患、障害、および／または状態のいずれかの治療のための、医薬（または一つ以上の医薬および／または容器を含有するパッケージまたはキット、および使用指示の有無に関わらず）の製造におけるヘミチャネル遮断剤の使用を提供する。一態様では、例えば、本発明は、本明細書で説明されている目的でのヘミチャネルの調節が有益でありうる障害の治療のための、薬剤またはパッケージまたはキットの製造における、コネキシンヘミチャネル遮断剤、例えば、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体もしくはペプタゴンまたはその類似体の使用を提供する。一つの実施形態では、薬剤は、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤、例えば、ペプチド模倣体または小分子コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。一つの実施形態では、本発明に有用なヘミチャネル遮断剤組成物は、薬学的に許容可能な担体を含んでもよく、例えば、丸剤、溶液、ミクロスフェア、ナノ粒子、インプラント、基質、またはヒドロゲル製剤として製剤化されてもよく、または凍結乾燥形態で提供されてもよい。

【0039】

本明細書に記載される目的のために調節されるヘミチャネルは、その目的に応じた所定の任意のコネキシンであってもよい。

【0040】

腸内では、例えば、コネキシンの範囲には、コネキシン２６（Ｃｘ２６）、コネキシン３２（Ｃｘ３２）、コネキシン３６（Ｃｘ３６）、コネキシン３７（Ｃｘ３７）、コネキシン４３（Ｃｘ４３）、およびコネキシン４５（Ｃｘ４５）が含まれる。

【0041】

各種の実施形態では、例として、調節されるヘミチャネルは、Ｃｘ２６、コネキシン３０（Ｃｘ３０）、Ｃｘ３２、Ｃｘ３７、コネキシン４０（Ｃｘ４０）、Ｃｘ４３、およびＣｘ４５のうちの一つ以上を含む。一つの実施形態では、調節されるヘミチャネルは、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、またはＣｘ４３タンパク質のうちの一つ以上を含む。一つの特定の実施形態では、ヘミチャネルおよび／または調節されるヘミチャネルは、Ｃｘ４３を含む。一部の実施形態では、調節されるヘミチャネルは、前述のコネキシンのいずれかを含んでもよく、または除外してもよい。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｃｘ３７ヘミチャネル、Ｃｘ４３ヘミチャネル、Ｃｘ４０ヘミチャネル、および／またはＣｘ４５ヘミチャネルの遮断剤である。一定の望ましい実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤である。本明細書に特徴付けられる使用のいずれかのための本発明の医薬組成物はまた、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３２、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、または任意の他のコネキシン、またはコネキシンヘミチャネルを阻害または遮断しうるヘミチャネル遮断剤を含んでもよい。一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、血管内のコネキシンヘミチャネルを遮断する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、微小血管中のコネキシンヘミチャネルを遮断する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、毛細血管中のコネキシンヘミチャネルを遮断する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、内皮中のコネキシンヘミチャネルを遮断する。

【0042】

本発明のこの態様の別の実施形態は、小分子または他のヘミチャネル遮断剤を含む医薬パックを提供する。一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｘｉｆｌａｍである。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、ペプタゴンである。

【0043】

本発明の別の態様では、対象におけるヘミチャネル遮断剤治療の効果は、ＲＰＥ完全性またはＢＲＢ完全性、密着結合の完全性、またはコラーゲンＩＶ産生を監視するための方法を使用して評価または監視される。

【0044】

ヘミチャネル遮断剤の活性は、特定の生物学的アッセイを使用して評価されてもよい。既知または候補のヘミチャネル遮断剤の分子運動に対する効果は、以下の実施例に記載される方法、またはコネキシンヘミチャネルを介した化合物の通過を決定するための、当技術分野に公知または同等の他の方法を使用して、特定、評価、またはスクリーニングすることができる。検出マーカーで標識された分子の転写などの染料転写実験、ならびにヘミチャネルの機能状態を研究するために広く使用されている小さな蛍光浸透性トレーサーの膜貫通通過を含む、様々な方法が当技術分野で公知である。本発明のこの態様の様々な実施形態が、ヘミチャネルを遮断する化合物の能力の特定または評価における使用のための方法を含めて、本明細書に記述されており、この方法は、 （ａ）検定試料と検定システムを結合させることであって、前記検定試料が、一つ以上の検定化合物を含み、また前記検定システムがヘミチャネル遮断を評価するためのシステムを含み、前記システムが、例えば、染料もしくは標識化された代謝物の、例えば、前記システムへの低酸素症または虚血の導入、炎症の媒介物、またはヘミチャネルの開通を誘導する他の化合物または事象（細胞外Ｃａ^２＋の低下など）に応答しての移動の増大を示すことで特徴付けられる、ことと、（ｂ）増大の存在または量を、例えば、前記システム中の前記染料または他の標識化された代謝物内で決定することと、を含む。陽性および／または陰性対照も使用されうる。随意に、所定量のヘミチャネル遮断剤（例えば、ペプタゴンまたはＸｉｆｌａｍ）を検定システムに追加してもよい。本明細書に記述されるように、一つの実施形態では、例えば、ペプタゴンおよびＸｉｆｌａｍなどのヘミチャネル遮断剤は、約１～５ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満、より好ましくは約５０ｐＭ未満の順序でインビトロアッセイで活性を示す。インビボアッセイでは、これらの化合物は、好ましくは、約１０～１００マイクロモル（μＭ）未満の濃度で、より好ましくは、約５０μＭ未満の濃度で、ヘミチャネル遮断を示す。他のヘミチャネル遮断剤は、これらの範囲内であってもよく、また約２００ｐＭ未満の範囲内であってもよい。アッセイ法は、本明細書に記載されるような有用なヘミチャネル調節化合物の活性を、確認、測定、または評価するために提供される。アッセイには、ＡＲＰＥ－１９細胞を使用した試験が含まれる。Ｄｕｎｎ ＫＣ， ｅｔ ａｌ．， ＡＲＰＥ－１９， ａ ｈｕｍａｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． １９９６ Ｆｅｂ；６２（２）：１５５－６９を参照。一つの実施形態では、試験アッセイは、例えば、既知または潜在的なヘミチャネル遮断剤の存在下でのＲＰＥ層浸透性を測定するために、ＡＲＰＥ－１９単層にわたる経上皮抵抗（ＴＥＥＲ）およびＦＩＴＣ－デキストラン染料リークを使用した、ＡＲＰＥ－１９細胞ＲＰＥ破壊アッセイである。

【図面の簡単な説明】

【0045】

【図1】図１ａ～図１ｂは、Ｐｅｐｔｉｄｅ５を用いたヘミチャネル遮断を用いた処置が、ＡＲＰＥ－１９細胞におけるＨＧおよびサイトカイン後のＴＥＥＲの減少およびＦＩＴＣ－デキストラン浸透性の増加を防止したことを示す。（図１ａ）ＨＧとサイトカインの組み合わせで細胞を培養すると、４８ｈ（ｐ＝０．０００７）および７２ｈ（ｐ＝０．００３０）でＴＥＥＲが統計的に有意な減少をもたらした。Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置は、両方の時点でＴＥＥＲの減少を妨げ、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置済み細胞と基底細胞の間に統計的に有意な差はなかった。統計解析は、ダネットの多重比較検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った。（図１ｂ）ＨＧとサイトカインの組み合わせで細胞を培養すると、７２ｈ（ｐ＝０．００１６）で細胞単層にわたるＦＩＴＣ－デキストランの浸透性も増加したが、これは基底状態と比較してＰｅｐｔｉｄｅ５処置で防止された。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計解析を実施した。ｎ＝３、＊＊ ｐ≦０．０１、＊＊＊ ｐ≦０．００１

【図2】図２ａ～図２ｂは、ヘミチャネル遮断Ｐｅｐｔｉｄｅ５を使用した処置が、ＨＧおよびサイトカイン適用後の細胞膜の不安定化を防止したことを示す。ＨＧおよびサイトカインは細胞死を誘発しなかったが、わずかではあるが有意なＬＤＨの放出をもたらした（ｐ＜０．０００１）。しかし、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置は、基底状態と比較してＬＤＨ放出を妨げた。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計解析を実施した。＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、ｎ＝３、スケールバー＝１００μｍ。

【図3】図３は、細胞膜でのＺＯ－１（緑色）局在化の喪失から保護されたヘミチャネル遮断Ｐｅｐｔｉｄｅ５を使用した処置を示す。基底的に、ＺＯ－１を細胞膜に局在化させた（白色矢印）。ＨＧおよびサイトカインでは、膜の局在化の喪失と、細胞質へのＺＯ－１の内部移行の増加があった。ところが、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置は、基底状態と同様の細胞膜へのＺＯ－１局在化を維持した。スケールバー＝５０ μｍ。

【図4】図４は、Ｐｅｐｔｉｄｅ５を用いたヘミチャネル遮断を用いた処置が、ＨＧおよびサイトカイン適用後のコラーゲンＩＶ（赤色）の上方制御を防止したことを示す。ＨＧおよびサイトカインは、基底状態と比較してコラーゲンＩＶの上方制御をもたらした（ｐ＝０．０１８０）。Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置では、コラーゲンＩＶ発現は、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置済み細胞と基底細胞間の発現に差異のない基底レベルに維持された。スケールバー＝１００μｍ、ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを用いて統計解析を実施した。＊ ｐ＜０．０５、ｎ＝３。

【図5】図５ａ～図５ｃは、外因的に添加されたＡＴＰが、ＨＧおよびサイトカインの適用後に、Ｐｅｐｔｉｄｅ５によって付与される保護を逆転させることを示す。（図５ａ）ＨＧおよびサイトカインは、基底状態と比較してＡＴＰ放出を増加させた（ｐ＝０．００１４）一方、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置は、ＡＴＰ放出を減少させることができた（ｐ＝０．０００３）ため、基底状態とＰｅｐｔｉｄｅ５処置状態の間に差異はなかった。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計解析を実施した。＊＊ ｐ≦０．０１、＊＊＊ ｐ≦０．００１、ｎ．ｓ．＝有意ではない、ｎ＝３。（図５ｂ）ＨＧおよびサイトカインによって誘導されたＬＤＨ放出が、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置によって減少した（ｐ＜０．０００１）。ところが、ＡＴＰの存在下では、ＬＤＨレベルは損傷レベルまで上昇し、ＨＧとサイトカイン損傷細胞とＨＧ、サイトカイン、Ｐｅｐｔｉｄｅ５、およびＡＴＰ損傷細胞の間に有意差はなかった。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計解析を実施した。＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、ｎ．ｓ．＝有意ではない、ｎ＝３。（図５ｃ）Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置が、細胞膜プラークからのｃｏｎｎｅｘｉｎ４３タンパク質（緑色）の再分配を保護した。基底的に、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３タンパク質を細胞膜に局在化させた（白色の矢印）。ＨＧおよびサイトカインでは、膜プラークの局在化の喪失、および細胞へのｃｏｎｎｅｘｉｎ４３の内部移行の増加があった。ところが、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置は、基底状態と同様に、主にギャップ結合プラークにおいてｃｏｎｎｅｘｉｎ４３を維持した。外因的に添加されたＡＴＰの存在下ではまた、細胞膜において、ＨＧおよびサイトカイン群と類似したｃｏｎｎｅｘｉｎ４３の喪失があった。スケールバー＝５０μｍ。

【発明を実施するための形態】

【0046】

網膜色素上皮（ＲＰＥ）は、神経網膜と脈絡毛細血管の間にある特殊な上皮であり、ここで外側の血液網膜関門（ＢＲＢ）を形成する。ＲＰＥの主な機能は、（１）栄養素、イオン、および水の輸送、（２）光の吸収および光酸化に対する保護、（３）視覚サイクルに重要な１１－シス－網膜への全－トランス－網膜の再異性体化、（４）脱落光受容体膜の食作用、および（５）網膜の構造の完全性のための必須因子の分泌である。

【0047】

健康な眼では、ＲＰＥは、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）を分泌し、これは、神経保護因子として、および内皮細胞増殖を阻害し、脈絡毛細血管の内皮を安定化させることができる抗血管新生因子として、といった二つの方法で網膜ならびに脈絡毛細血管構造を維持するのに役立つ。Ｓｉｍｏ Ｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ： Ｓｏｍｅｔｈｉｎｇ Ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ａ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ－Ｒｅｔｉｎａｌ Ｂａｒｒｉｅｒ－Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ２０１０， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ １９０７２４（１５ページ）にレビューがある。 ＲＰＥにより合成される別の血管作動性因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）であり、これは、内皮細胞アポトーシスを防止する健康な眼においてＲＰＥにより低濃度で分泌され、脈絡毛細血管の無傷の内皮に必須であり、また内皮の開窓を安定化する浸透性因子として作用する。同文献。健康な眼では、ＰＥＤＦおよびＶＥＧＦは、ＲＰＥの反対側で分泌される。ＰＥＤＦは、ニューロンおよび光受容体に作用する頂端側に分泌されるのに対し、ＶＥＧＦのほとんどは脈絡膜内皮に作用する基底側に分泌される。同文献。ＶＥＧＦの過剰産生は、増殖性糖尿病性網膜症および糖尿病性黄斑浮腫の進展において説明されており、培養ヒトＲＰＥ細胞におけるグルコース濃度上昇によるＰＥＤＦ発現の下方制御が観察されており、糖尿病性網膜症に対する新たな治療アプローチとしてのＶＥＧＦの遮断またはＰＥＤＦの刺激の戦略の提案につながっている。

【0048】

本出願は、ヘミチャネルの開通の調節の驚くべき発見に関し、ＲＰＥ完全性およびＢＲＢ完全性の維持および向上に直接的かつ即時の影響を与える。下記の実施例１～６を参照のこと。驚くべきことに、コネキシンヘミチャネルは、ＢＲＢ完全性およびＲＰＥ完全性において重要な役割を果たし、またＢＲＢおよび／またはＲＰＥ完全性の喪失によって全体的または部分的に特徴付けられる様々な疾患、障害および状態、ならびに重要なことにその浸透性の増加の治療において重要な影響を与えることが見出された。

【0049】

また、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤を含むヘミチャネル遮断剤を使用して、ＺＯ－１内部移行を減弱できることも発見されている。したがって、このようなヘミチャネル遮断剤を、病態における関門機能不全を防止するための関門浸透性を調節する方法に使用することができる。

【0050】

また、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤を含むヘミチャネル遮断剤を使用して、ＩＶ型コラーゲンの上方制御を減弱できることも発見されている。したがって、ヘミチャネル遮断剤を、病態におけるコラーゲンＩＶの上方制御を調節する方法に使用することができる。

【0051】

発明者らは、高グルコース（ＨＧ）およびサイトカインの適用が、経上皮抵抗（ＴＥＥＲ）の低減およびＲＰＥ細胞の単層にわたるＦＩＴＣ－デキストラン染料リークの増加をもたらすことを示した。さらに、結果は、このＲＰＥ関門の完全性の喪失は細胞死によるものではなく、密着結合タンパク質ＺＯ－１の内部移行によって引き起こされ、コラーゲンＩＶの上方制御をもたらしたことを示す。

【0052】

重要なことに、実施例１～６に示すように、コネキシン４３ヘミチャネル遮断は、ＴＥＥＲの低減、ＦＩＴＣ－デキストラン染料リークの増加、ＺＯ－１の内部移行、およびコラーゲンＩＶ沈着の上方制御に対して保護することが見出された。研究では、対照と比較して、ヒトＤＭＥ患者におけるコラーゲンＩＶ分泌の増加が報告されている。Ｍｕｇｉｓｈｏ ＯＯ， ｅｔ ａｌ． （２０１８） Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｎｏｎ－ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ： Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ｓｉｇｎｓ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ １３ （８）：ｅ０２０２１５６．

【0053】

ヘミチャネルがこれらのプロセスを媒介する機序をより良く理解するために、Ｐｅｐｔｉｄｅ５ヘミチャネル遮断剤の存在下で、ＡＴＰを培地に復元した。結果から、ＡＴＰは、ヘミチャネル遮断によってもたらされる保護を逆転させ、それにより、ＨＧおよびサイトカイン単独の細胞と、ＨＧ、サイトカイン、Ｐｅｐｔｉｄｅ５およびＡＴＰの細胞の間に、ＬＤＨ放出およびｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ギャップ結合プラークの局在化に関して差異をなくすようにすることを示した。

【0054】

定義
「小分子」は、本明細書では、約６００～９００ダルトン未満の分子量を有するように定義され、概して有機化合物である。小分子は、ヘミチャネル遮断剤プロドラッグの活性薬剤とすることができる。一つの実施形態では、小分子は、６００ダルトン未満である。別の実施形態では、小分子は、９００ダルトン未満である。

【0055】

本明細書で使用される場合、「治療」（および「治療する」または「治療すること」などのその文法的変形）は、治療される個体、組織または細胞の自然経過を変えるための臨床介入を指し、予防のためまたは臨床病理の間に実施することができる。治療の望ましい効果には、疾患、障害または状態の発生または再発の防止、徴候または症状の軽減、疾患の直接的または間接的な病理学的帰結の減少、疾患進行の速度の減少、病状の改善または緩和、ならびに寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本発明の化合物、方法、および組成物は、疾患、障害、または状態の発現を遅らせるために、または疾患、障害または状態の進行を遅らせるために使用することができる。この用語は、必ずしも、対象が完全に回復するまで治療されることを暗示するものではない。したがって、「治療」は、特定の疾患、障害または状態の症状もしくは重症度を低減、軽減、もしくは改善すること、または特定の疾患、障害、もしくは状態を発症するリスクを防止またはその他の方法で低減することを含む。また、状態の完全または部分的な寛解状態の維持または促進を含んでもよい。本明細書で使用される場合、「治療」はまた、ヘミチャネル遮断剤の投与後の、対象者におけるＲＰＥ完全性、ＢＲＢ完全性、および密着結合の完全性の改善、および／または対象者におけるコラーゲンＩＶ産生の低減も含む。

【0056】

疾患、状態、または障害などを「治療する」という用語は、障害、疾患、または状態を予防、緩徐化、低減、減少、停止、および／または逆転させること、ならびに／またはＲＰＥもしくはＢＲＢの完全性、密着結合の完全性、ＲＰＥもしくはＢＲＢもしくは密着結合破壊の減弱、ＺＯ－１内部移行、コネキシン内部移行、および／またはコラーゲンＩＶ産生の維持もしくは改善を指しうる。

【0057】

「防止する」という用語は、全体または一部を防止する、または改善もしくは制御することを意味する

【0058】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、望ましい治療的または予防的結果を達成するために、必要な投与量での、および必要な期間にわたっての有効な量を指す。例えば、制限する目的ではないが、本明細書に開示される「有効量」は、ＢＲＢ完全性の障害、ＲＰＥ完全性の障害、密着結合の完全性の障害、またはコラーゲンＩＶ産生の増大、および本明細書に記載されるものなどが関与する疾患、障害または状態の徴候および／または症状を治療できる化合物または組成物の量を指してもよく、あるいは、ＢＲＢ完全性の障害、ＲＰＥ完全性の障害、密着結合の完全性の障害、またはコラーゲンＩＶ産生の増大を有益に調節することができるヘミチャネル化合物または組成物の量を指してもよい。

【0059】

本明細書で使用される場合、本発明の物質／分子、作動薬または拮抗薬の「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびに個体において所望の応答を誘発するための物質／分子、作動薬または拮抗薬の能力に応じて変化しうる。治療有効量はまた、好ましくは、物質／分子、作動薬、または拮抗薬の任意の毒性または有害な効果を、治療上有益な効果が上回る量である。治療有効量のヘミチャネル遮断剤は、対象者において、ＢＲＢ完全性の障害、ＲＰＥ完全性の障害、密着結合の完全性の障害、および／またはコラーゲンＩＶ産生の増大を有益に調節する。

【0060】

本明細書で使用される場合、「予防的有効量」は、望ましい予防的結果を達成するために、必要な投与量での、および必要な期間にわたっての有効な量を指す。典型的には、ただし必ずしもではないが、予防用量は疾患、障害、または状態の前または早期段階で対象者に使用されるため、予防的有効量は、治療有効量よりも少なくなる。

【0061】

「医薬製剤」という用語は、その中に含有される活性成分（例えばヘミチャネル遮断剤）の生物活性を有効にすることができ、製剤が投与される対象者に対して許容できないほどに毒性を有する追加的な成分を含有しないような形態の調製物を指す。

【0062】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」は、対象に安全に投与されうる有効成分以外の、医薬製剤の成分を指す。薬学的に許容可能な担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、および防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。

【0063】

本明細書で使用される場合、「対象者」という用語、またはこれに類した用語は、「個人」や「患者」を含めて、それら全ては本明細書では互換的に使用されうるが、これらの用語は、ヒト、飼育動物や家畜、ならびに動物園の動物、自然動物公園の動物、競技用動物、または愛玩用動物（犬、馬、猫、羊、ブタ、ウシなど）を含む、任意の哺乳動物を指す。好適な哺乳動物は、成人、小児、および高齢者を含めたヒトである。好適な競技用動物とは、ウマおよびイヌである。好適な愛玩用動物とは、イヌおよびネコである。対象者は、例えば、イルカ、クジラ、アザラシ、またはセイウチなどの水生公園動物であってもよい。特定の実施形態では、対象者、個人、または患者は、ヒトである。

【0064】

本明細書で使用される場合、「ヘミチャネル」という用語は、ギャップ結合の一部であり（二つのヘミチャネルまたはコネクソンは、隣接する細胞間の細胞間隙を横切って接続してギャップ結合を形成する）、典型的には、相同または異種のコネキシンタンパク質、すなわちコネキシンタンパク質のホモマー／ヘテロマーの六量体のいくつかのコネキシンタンパク質から構成され、それらは、二つの隣接する細胞の細胞質間のギャップ結合の細孔を形成する。ヘミチャネルは、接合部の一方の側の細胞によって供給され、対向する細胞からの２つのヘミチャネルは通常一緒になって完全な細胞間ヘミチャネルを形成する。ところが、一部の細胞において、および一部の状況下での細胞において、ヘミチャネル自体は、細胞質と細胞外空間との間の導管として活性であり、イオンおよび小分子の伝達を可能にする。

【0065】

式Ｉの化合物、例えば、Ｘｉｆｌａｍ、および／または前述の化合物のいずれかの類似体またはプロドラッグは、ヘミチャネルの機能および／または活性を調節することができ、好ましくは、任意のタイプのコネキシンタンパク質を含む化合物である。したがって、文脈から別段の解釈が要求されない限り、「ヘミチャネル」への言及は、多数の異なるコネキシンタンパク質のいずれか一つ以上を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるヘミチャネルを含むように解釈されるべきである。ところが、一例として、ヘミチャネルは、上記に具体的に言及したものを含む、任意のコネキシンのうちの一つ以上を含みうる。一つの実施形態では、ヘミチャネルは前述のコネキシンのうちの一つからなる。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、コネキシン２６、３０、３２、３６、３７、４０、４５および４７のうちの一つ以上を含む。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、コネキシン３７、４０、または４３のうちの一つからなる。一つの実施形態では、ヘミチャネルはコネキシン４３ヘミチャネルである。一つの実施形態では、ヘミチャネルは血管ヘミチャネルである。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、血管内皮細胞に見られるコネキシンヘミチャネルである。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、血管平滑筋細胞に見られるコネキシンヘミチャネルである。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、脈管構造外部の内皮細胞または上皮細胞（例えば、腸内皮または上皮）に見られるコネキシンヘミチャネルである。一つの特定の実施形態では、ヘミチャネルは、コネキシン３０、３７、およびコネキシン４３のうちの一つ以上を含む。一つの特定の実施形態では、ヘミチャネルはコネキシン３０からなる。一つの特定の実施形態では、ヘミチャネルはコネキシン３７からなる。一つの特定の実施形態では、ヘミチャネルはコネキシン４３からなる。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、コネキシン２６を除く一つ以上のコネキシンを含む。一つの実施形態では、組成物は、前述を含む任意のコネキシンのヘミチャネル遮断剤を含むか、または除外することができる。

【0066】

ヘミチャネルおよびヘミチャネルは、任意のタイプの細胞中に存在しうる。したがって、文脈上別段の要求がない限り、「ヘミチャネル」または「ヘミチャネル」への言及は、任意の細胞型に存在するヘミチャネルまたはヘミチャネルへの言及を含むように、解釈されるべきである。本発明の一つの実施形態では、ヘミチャネルまたはヘミチャネルは、器官内の細胞、または癌もしくは腫瘍に存在する。一つの実施形態では、ヘミチャネルは血管ヘミチャネルである。一つの実施形態では、ヘミチャネルは、血管内皮細胞および／または血管平滑筋細胞に見られるコネキシンヘミチャネルである。

【0067】

本明細書で使用される場合、「ヘミチャネルの調節」は、ヘミチャネルの一つ以上の機能および／または活性の調節であり、典型的には、ヘミチャネルを通した細胞間の分子の流れである。こうした機能および活性には、例えば、細胞外空間または環境からのヘミチャネルを介した細胞への分子の流れ、および／または細胞内空間または細胞の環境から細胞外空間または環境へのヘミチャネルを介した分子の流れが含まれる。ヘミチャネルの調節に有用な化合物は、「ヘミチャネル調節物質」と呼んでもよい。

【0068】

ヘミチャネルの機能の調節は、任意の手段によって行われてもよい。しかしながら、一例としてのみであるが、調節は、ヘミチャネルの閉鎖を誘発または促進すること、ヘミチャネルの開通を防止、遮断、阻害または減少すること、ヘミチャネルおよび／またはギャップ結合の細胞内部移行を発動、誘発または促進することのうちの一つ以上によって生じうる。「遮断」、「阻害」、「防止」、「減少」、「拮抗」などの用語の使用は、完全な遮断、阻害、防止、または拮抗を暗示するものではないが、これは好ましい場合もあり、またヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルの機能または活性を少なくとも低減するために、部分的な遮断、阻害、防止、または拮抗を含むように解釈されるものとする。同様に、「誘発する」または「促進する」は、ヘミチャネル（またはヘミチャネル群）の完全な内部移行を暗示するように解釈されるべきではなく、ヘミチャネルの機能または活性を少なくとも低減するために、部分的な内部移行を含むように解釈されるべきである。

【0069】

本明細書で使用される場合、「ヘミチャネル遮断剤」という用語は、コネキシンヘミチャネルを通した分子の通過に干渉する化合物である。ヘミチャネル遮断剤は、ヘミチャネルの開通を遮断または減少させ、ヘミチャネルを通して細胞外空間への分子の放出を遮断または減少させ、および／またはヘミチャネルを通して細胞内空間への分子の侵入を遮断または減少させうる。ヘミチャネル遮断剤には、ヘミチャネル漏れまたは細胞外空間へのまたは細胞外空間からの分子の通過を完全にまたは部分的に遮断する化合物が含まれる。ヘミチャネル遮断剤はまた、ヘミチャネルの開通確率を減少させる化合物を含む。開通確率は、チャネルが開いた状態の時間に対する閉じた状態の時間の比率である（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ＧＳ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １６６２ （２００４） ９６－１０１にレビューがある）。ヘミチャネル遮断剤の例としては、ペプチド、小分子、抗体、および抗体断片が挙げられる。ヘミチャネル遮断剤には、ヘミチャネル調節物質が含まれる。ヘミチャネル遮断剤は、コネキシンヘミチャネルを介した分子の通過を直接または直接干渉しうる。

【0070】

本明細書で使用される場合、「ＲＰＥ完全性の調節」および「ＢＲＢ完全性の調節」という用語は、完全性および／または機能の維持もしくは改善、またはＲＰＥもしくはＢＲＢの完全性および／または機能の減少の緩徐化を指す。また、これは、例えば、浸透性を向上させること、すなわち、望ましくない増加を低減することを指す。ＲＰＥまたはＢＲＢの完全性調節は、ヘミチャネル遮断剤を用いて達成され、またＲＰＥもしくはＢＲＢの完全性および／または機能の、病理学的、異常な、またはそれ以外に好ましくない、もしくは望ましくない低下によって全体的または部分的に特徴付けられる、疾患、障害および状態の治療に有用である。ＲＰＥまたはＢＲＢの完全性の調節に有用な化合物は、「ＲＰＥ調節因子またはＢＲＢ調節因子」と称されうる。本発明の化合物は、ＲＰＥまたはＢＲＢの完全性を調節するための治療方法で使用されてもよく、例えば、ＲＰＥまたはＢＲＢの完全性が調節されて、ＲＰＥまたはＢＲＢの完全性が改善、均等化および／または平滑化され、これにはＲＰＥまたはＢＲＢの完全性の病的、異常であるか、またはそれ以外に好ましくない、もしくは望ましくない下降によって特徴付けられる、疾患、障害、または状態の全部または一部の治療方法での使用が含まれる。ＲＰＥおよびＢＲＢの完全性は、細胞間接着および細胞間の密着結合によって生成される関門にわたる材料の未制御のリークを防止するために不可欠である。

【0071】

本明細書で使用される場合、「密着結合の完全性の調節」および「密着結合の完全性を調節する」という用語は、完全性および／または機能の維持もしくは改善、または密着結合の完全性および／または機能の減少の緩徐化を指す。また、これは、例えば、浸透性を向上させること、すなわち、望ましくない増加を低減することを指す。密着結合の完全性調節は、ヘミチャネル遮断剤を用いて達成され、また密着結合の完全性および／または機能の、病理学的、異常な、またはそれ以外に好ましくない、もしくは望ましくない低下によって全体的または部分的に特徴付けられる、疾患、障害および状態の治療に有用である。密着結合の完全性の調節に有用な化合物は、「密着結合調節物質」と称されてもよい。本発明の化合物は、密着結合の完全性を調節するための治療方法で使用されてもよく、例えば、密着結合の完全性が調節されて、密着結合の完全性が改善、均等化および／または平滑化され、これには密着結合の完全性の病的、異常であるか、またはそれ以外に好ましくない、もしくは望ましくない下降によって特徴付けられる、疾患、障害、または状態の全部または一部の治療方法での使用が含まれる。

【0072】

本明細書で使用される場合、「ＩＶ型コラーゲンの調節」および「ＩＶ型コラーゲンの調節」という用語は、ＩＶ型コラーゲン産生の増加を低減または緩徐化することを指す。また、ＩＶ型コラーゲン産生を改善すること、すなわち、望ましくない増加を低減することを指す。ＩＶ型コラーゲン産生の調節は、ヘミチャネル遮断剤を用いて達成され、ＩＶ型コラーゲン産生の病理学的、異常、またはそれ以外の好ましくないもしくは望ましくない増加によって全体的または部分的に特徴付けられる、疾患、障害および状態の治療に有用である。ＩＶ型コラーゲン産生の調節に有用な化合物は、「ＩＶ型コラーゲン調節物質」と称されてもよい。本発明の化合物は、ＩＶ型コラーゲン産生を調節するための治療方法で使用されてもよく、ここで、ＩＶ型コラーゲン産生が調節（例えば、ＩＶ型コラーゲン産生が減少、遅延、均等化および／または平滑化される）され、これには、病的、異常、またはその他の好ましくないもしくは望ましくないＩＶ型コラーゲン産生の増加によって全体的または部分的に特徴付けられる疾患、障害、または状態の治療方法が含まれる。

【0073】

インフラマソームは、カスパーゼ１、ＰＹＣＡＲＤ、ＮＡＬＰ、および随意にカスパーゼ５（カスパーゼ１１またはＩＣＨ－３としても知られる）を含む多タンパク質複合体である。インフラマソームの正確な組成は、インフラマソームの集合を開始する活性化因子に依存する。インフラマソームは、炎症性サイトカインインターロイキン１β（ＩＬ－１β）およびインターロイキン１８（ＩＬ－１８）の成熟を促進する。本発明によるヘミチャネル遮断剤は、インフラマソーム活性およびインフラマソーム経路活性化を調節または制御することができる。ヘミチャネル遮断剤の標的インフラマソームには、ＮＬＲＰ３インフラマソームが含まれる。

【0074】

「ペプチド」、「ペプチド模倣体」および「模倣体」という用語は、それらが模倣するタンパク質領域の実質的に同じ構造的および機能的特徴を有しうる合成または遺伝子操作された化合物を含む。コネキシンヘミチャネルの場合、これらは、例えば、ヘミチャネルコネキシンの細胞外ループを模倣しうる。

【0075】

本明細書で使用される場合、「類似体」または「ペプチド類似体」という用語は、鋳型ペプチドに類似した特性を持つ化合物を指し、非ペプチド薬剤でもよい。「ペプチド模倣体」（「模倣ペプチド）としても知られる）とは、ペプチドベースの化合物を含むが、ペプチド類似体などの非ペプチドベースの化合物も含む。治療的に有用なペプチドに構造的に類似したペプチド模倣体が、同等のまたは増強された治療的または予防的な効果を生じるために、使用されることがある。ペプチドおよびペプチド模倣体は、一部の態様では、修飾でもよく、非修飾でもよい。一般に、ペプチド模倣体は、模範ポリペプチド（すなわち、生物学的または薬理学的な機能または活性を有するポリペプチド）に構造的に同一であるかまたは類似しているが、また、例えば－ＣＨ_２ＮＨ－、－ＣＨ_２Ｓ－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ）、－ＣＯＣＨ_２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－、および－ＣＨ_２ＳＯ－からなる群から選択される連結によって任意選択的に置換される、１つまたは複数のペプチド連結も有することができる。この模倣体は、全体が天然のアミノ酸、合成化合物、もしくはアミノ酸の非天然類似体のいずれかで構成されてもよく、または、部分的に天然のペプチドアミノ酸と部分的にアミノ酸の非天然類似体とのキメラ分子である。この模倣体はまた、任意の量の天然アミノ酸の保存された置換を、そのような置換が模倣的な活性を実質的に変えない限りにおいて含むことができる。コネキシンヘミチャネルの場合、これらは、例えば、コネクソン－コネクソンドッキングおよび細胞－細胞チャネル形成に関与するヘミチャネル細胞外ループを模倣することができる。ペプチド模倣体は、本明細書に記載されるもの、ならびに当該技術分野で既知でありうるものも包含するが、それらは、現在既知であるか、または後に開発されるものであるかは問わない。ペプチドおよびペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤は、安定性を増加させ、生物学的利用能を改善し、および／または細胞膜浸透性を増加させるように修飾されてもよい。

【0076】

特許は、ＢＲＢ完全性および機能、ＲＰＥ完全性および機能、密着結合の完全性および機能、ならびにＩＶ型コラーゲン産生を調節するための新しい方法が記載している。ＢＲＢ完全性、ＲＰＥ完全性、密着結合の完全性、およびＩＶ型コラーゲン産生は、異常、調節不全、または障害であり、本発明の方法によって、いくつかの疾患、障害、または状態において改善されてもよく、その一部は、ＢＲＢ浸透性、ＲＰＥ浸透性、密着結合破壊、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の望ましくないまたは病理学的レベルによって特徴付けられる。

【0077】

ヘミチャネル遮断剤を含むヘミチャネルの開通の遮断剤には、低分子ペプチドおよび小分子遮断剤が含まれる。

【0078】

本発明は、とりわけ、ＲＰＥの調節、ＢＲＢ調節、密着結合の調節および／またはＩＶ型コラーゲン調節が有益でありうる疾患、障害または状態の治療のために、ヘミチャネル遮断剤（ペプタゴンなど）、および／またはその類似体、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および／または前述の任意の化合物の類似体またはプロドラッグの投与による、ＢＲＢ完全性、ＲＰＥ完全性、密着結合の完全性、ＩＶ型コラーゲン産生の調節のための方法である。

【0079】

一部の実施形態では、本発明は、Ｃｘ４３ヘミチャネルを直接的かつ直ちに遮断し、ＲＰＥ完全性、ＢＲＢ完全性、密着結合の完全性、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の調節の濃度および時間依存的な調節を引き起こすために、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および／または前述の化合物のいずれかの類似体またはプロドラッグの使用を特徴とする。

【0080】

コネキシン
各種の実施形態では、調節されるヘミチャネルは、任意のコネキシンヘミチャネルである。ある特定の実施形態では、調節されるヘミチャネルは、ヘミチャネル、コネキシン２６（Ｃｘ２６）ヘミチャネル、コネキシン３０（Ｃｘ３０）ヘミチャネル、コネキシン３２（Ｃｘ３２）ヘミチャネル、コネキシン３６（Ｃｘ３６）ヘミチャネル、コネキシン３７（Ｃｘ３７）ヘミチャネル、コネキシン４０（Ｃｘ４０）ヘミチャネル、コネキシン４０．１（Ｃｘ４０．１）、コネキシン４３（Ｃｘ４３）ヘミチャネル、コネキシン４５（Ｃｘ４５）ヘミチャネル、コネキシン４６（Ｃｘ４６）ヘミチャネル、コネキシン４７（Ｃｘ４７）ヘミチャネル（Ｃｘ４０）である。一つの実施形態では、調節されるヘミチャネルは、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３２、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５および／またはＣｘ４７タンパク質のうちの一つ以上を含む。一つの特定の実施形態では、調節されるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルは、Ｃｘ３７および／またはＣｘ４０および／またはＣｘ４３ヘミチャネルである。一つの特定の実施形態では、調節されるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルは、Ｃｘ３０および／またはＣｘ４３および／またはＣｘ４５ヘミチャネルである。一部の実施形態では、調節されるヘミチャネルは、前述のコネキシンタンパク質のいずれかを含んでもよく、または除外してもよい。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｃｘ４３ヘミチャネル、Ｃｘ４０ヘミチャネル、および／またはＣｘ４５ヘミチャネルの遮断剤である。一定の望ましい実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４３遮断剤である。本明細書に特徴付けられる使用のいずれかに対する本発明の医薬組成物はまた、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、またはＣｘ５７ヘミチャネル、または任意の他のコネキシンヘミチャネル（相同ヘミチャネルおよび異種ヘミチャネルを含む）を阻害または遮断しうるヘミチャネル遮断剤を含んでもよい。一部の実施形態では、調節されるヘミチャネルは、前述のコネキシンヘミチャネルのいずれかを含んでもよく、または除外してもよく、またはヘテロマーヘミチャネルでもよい。

【0081】

本発明の任意の投与、併用投与、組成物、キット、または治療方法で使用されるヘミチャネル遮断剤は、一つの実施形態では、Ｃｘ４３ヘミチャネル遮断剤である。他の実施形態としては、Ｃｘ４５ヘミチャネル遮断剤、Ｃｘ３０ヘミチャネル遮断剤、Ｃｘ３７ヘミチャネル遮断剤、Ｃｘ４０ヘミチャネル遮断剤、およびＣｘ２６、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ５０、および／またはＣｘ５７ヘミチャネルの遮断剤、または上述または本明細書に記述される任意の他のコネキシンを含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるヘミチャネルの遮断剤が挙げられる。一部の実施形態は、前述のコネキシンもしくはヘミチャネル、または本特許に記載されるその他のもののいずれかを含んでもよく、または除外してもよい。

【0082】

ヘミチャネル遮断剤
小分子ヘミチャネル遮断剤
ヘミチャネル遮断剤の例としては、小分子ヘミチャネル遮断剤（例えば、Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサト））が挙げられる。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、例えば、式Ｉに記載されるヘミチャネル遮断剤など、Ｘｉｆｌａｍ以外の小分子である。様々な好ましい実施形態は、本明細書に記載されるまたは参照される疾患、障害、および状態を治療するために、ヘミチャネルの開通を遮断または改善するか、またはそれ以外の方法で拮抗または阻害する小分子の使用を含む。各種の実施形態では、ヘミチャネルの開通を遮断または改善もしくは阻害する小分子は、Ｘｉｆｌａｍのプロドラッグまたはその類似体である。

【0083】

一部の実施形態では、本発明は、例えば、Ｘｉｆｌａｍなどの式Ｉの化合物、および／または前述の化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグを含む小分子ヘミチャネル遮断剤の使用を特徴とし、例えば、Ｃｘ４３ヘミチャネルを遮断し、ＲＰＥの完全性および機能、ＢＲＢの完全性および機能、密着結合の完全性および機能ならびにＩＶ型コラーゲン産生の機能および／または調節 の集中および時間依存的な調節を引き起こす。

【0084】

一例として、ヘミチャネル遮断剤Ｘｉｆｌａｍは、Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロミン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド、または（３Ｓ－シス）－Ｎ－（６－アセチル－３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－２，２－（ジメチル－ｄ６）－２Ｈ－１－ベンゾピラン－４－イル）－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドといったＩＵＰＡＣ名で知られている。

【0085】

一つの実施形態では、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体もしくはプロドラッグは、式Ｉを有する化合物の群から選択される。

【化1】

式中、
Ｙは、Ｃ－Ｒ_１であり、
Ｒ_１はアセチルであり、
Ｒ_２は水素であり、Ｃ_３－８シクロアルキル、Ｃ_１－６アルキルは、任意選択的に酸素によって中断されるか、またはヒドロキシによって置換され、Ｃ_１－６アルコキシまたは置換アミノカルボニル、Ｃ_１－６アルキルカルボニル、Ｃ_１－６アルコキシカルボニル、Ｃ_１－６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ_１－６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、トリフルオロメチル、またはＣＦ_３Ｓであるか；または基ＣＦ_３－Ａ－、式中、Ａは－ＣＦ_２－、－ＣＯ－、－ＣＨ_２－、ＣＨ（ＯＨ）、ＳＯ_２、ＳＯ、ＣＨ_２－Ｏ－、またはＣＯＮＨであるか；または基ＣＦ_２Ｈ－Ａ’－ 式中、Ａ’は酸素であり、硫黄、ＳＯ、ＳＯ_２、ＣＦ_２またはＣＦＨ；トリフルオロメトキシ、Ｃ_１－６アルキルスルフィニル、ペルフルオロ、Ｃ_２－６アルキルスルホニル、Ｃ_１－６アルキルスルホニル、Ｃ_１－６アルコキシスルフィニル、Ｃ_１－６アルコキシスルホニル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ホスホノ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アリールスルホニル、またはヘテロアリールスルホニルであって、任意の芳香族部分が任意で置換されていて、Ｃ_１－６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ_１－６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ_１－６アルキル－チオカルボニル、Ｃ_１－６アルコキシ－チオカルボニル、Ｃ_１－６アルキル－チオカルボニルオキシ、１－メルカプトＣ_２－７アルキル、ホルミル、またはアミノスルフィニル、アミノスルホニルまたはアミノカルボニル、任意のアミノ部分が、１つまたは２つのＣ_１－６アルキル基によって任意で置換され、またはＣ_１－６アルキルスルフィニルアミノ、Ｃ_１－６アルキルスルホニルアミノ、Ｃ_１－６アルコキシスルフィニルアミノまたはＣ_１－６アルコキシスルフォニルアミノ、またはＣ_１－６アルキルカルボニルで末端置換されたエチルエニル基と、を含み、ニトロまたはシアノ、または－Ｃ（Ｃ_１－６ アルキル）ＮＯＨまたは－Ｃ（Ｃ_１－６アルキル）ＮＮＨ_２であるか、または１個もしくは２個のＣ_１－６アルキルまたはＣ_２－７アルカノイルにより任意で置換されるアミノと、Ｒ_３およびＲ_４のうちの一つは水素またはＣ_１－４アルキルであり、他方はＣ_１－４アルキルであり、ＣＦ_３またはＣＨ_２×^ａはフルオロであり、クロロ、ブロモ、ヨード、Ｃ_１－４アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_１－４アルキルカルボニルオキシ、－Ｓ－Ｃ_１－４アルキル、ニトロ、アミノは、１個または２個のＣ_１－４アルキル基で任意で置換され、シアノまたはＣ_１～４アルコキシカルボニルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は共に、Ｃ_１－４アルキルで任意選択的に置換されるＣ_２－５ポリメチレンであり、
Ｒ_５は、Ｃ_１－６アルキルカルボニルオキシ、ベンゾイルオキシ、ＯＮＯ_２、ベンジルオキシ、フェニルオキシ、またはＣ_１－６アルコキシであり、Ｒ_６およびＲ_９は水素であるか、Ｒ_５はヒドロキシであり、Ｒ_６は水素またはＣ_１－２アルキルであり、Ｒ_９は水素であり、
Ｒ_７はヘテロアリールまたはフェニルであり、そのどちらも、Ｃ_１－４アルキル、シアノ、アジド、Ｃ_１－４アルコキシ、トリフルオロメトキシ、およびトリフルオロメチルによって１回または２回随意的に置換されるクロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、アミノから選択される基または原子で独立して１回以上、独立して随意的に置換され、
Ｒ_８は、水素、Ｃ_１－６アルキル、ＯＲ_１１またはＮＨＣＯＲ_１０であり、式中、Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１－６アルキル、ホルミル、Ｃ_１－６アルカノイル、アロイルまたはアリール－Ｃ_１－６アルキル、Ｒ_１０は、水素、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルコキシ、モノまたはジＣ_１－６アルキルアミノ、アミノ、アミノ－Ｃ_１－６アルキル、ヒドロキシ－Ｃ_１－６アルキル、ハロ－Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アシルオキシ－Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルコキシカルボニル－Ｃ_１－６－アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ_８－Ｎ－ＣＯ－Ｒ_７基はＲ_５基に対してｃｉｓであり；Ｘは酸素またはＮＲ_１２で、式中Ｒ_１２は水素またはＣ_１－６アルキルである。

【0086】

上述のＭａｒｋｕｓｈ群のいずれかについて、その群は、その群について列挙された種のいずれかを含んだり、または除外したりすることができる。本発明の方法で使用するためのヘミチャネル遮断剤は、これらの化合物のいずれかが含まれてもよく、または除外されてもよい。

【0087】

別の実施形態では、式Ｉの類似体は、化合物ｃａｒａｂｅｒｓａｔ、（Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロミン－４－イル］－４－フルオロベンズアミド）またはトランス－（＋）－６－アセチル－４－（Ｓ）－（４－フルオロベンゾイルアミノ）－３，４－ジヒドロ－２，２－ジメチル－２Ｈ－１－ベンゾ［ｂ］ピラン－３Ｒ－オール，ヘミ水和物である。

【0088】

特定の実施形態では、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体は、遊離塩基または薬学的に許容可能な塩の形態である。その他の実施形態では、一つ以上の多形、一つ以上の異性体、および／または一つ以上のＸｉｆｌａｍの溶媒和物および／またはその類似体が使用されてもよい。

【0089】

別の実施形態では、ヘミチャネル調節化合物は、式ＩＩを有する化合物の群から選択される。

【化2】

式中、
Ｑは、Ｏまたは式＝ＮＨＯＲ_４３のオキシムであり、式中、Ｒ_４３は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ_１－４フルオロアルキル、または随意的に置換されたＣ_１－４アルキルから選択されるか、または
（ｉｉ）－Ａ_３００－Ｒ_３００であり、式中、
Ａ_３００は、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ＊－、または－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ＊－であり、式中、＊印のある原子はＲ_３００に直接接続され、
Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ、フルオロ、Ｃ_１－４アルキル、またはＣ_１－４フルオロアルキルから独立して選択され、または
Ｒ_３およびＲ_４は、それらが結合される原子と共にシクロプロピル基を形成し、
Ｒ_３００は、群［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］または［６］から選択され、
Ｒ_２は、ＨまたはＢ－Ｒ_２１であり、
Ａは、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ＊－、または－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ＊－であり、式中、＊印のある原子は、Ｒ_１に直接的に結合し、Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ、フルオロ、またはＣ_１－４フルオロアルキルから独立的に選択されるか、またはＲ_３およびＲ_４は、付加されている原子と共にシクロプロピル基を形成する。
Ｒ_１は、群［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］および［６］から選択され、ここで＊＊印のある原子は、Ａに直接的に結合し、

【化3】

Ｒ_５およびＲ_６はそれぞれ独立的に、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_１－４フルオロアルキル、および
ベンジルから選択され、
Ｒ_７は独立的に、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、およびＣ_１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ_８は、以下から選択される：
（ｉ）Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、またはＣ_１－４フルオロアルキル、
（ｉｉ）天然もしくは非天然のアルファアミノ酸の側鎖、または本明細書に記載されるペプチド、および
（ｉｉｉ）ビオチン、またはビオチンに化学的に結合したもの、
Ｒ_９は、Ｈ、－Ｎ（Ｒ_１１）（Ｒ_１２）、－Ｎ^＋（Ｒ_{１１）（Ｒ}１２_）（Ｒ_１３）Ｘ^‐、および－Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１４から選択され、
式中_、Ｒ_１１、Ｒ_１２、およびＲ_１３は独立的に、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、およびＣ_１－４
フルオロアルキルから選択され、
Ｒ_１４は、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、またはＣ_１－４フルオロアルキルであり、
Ｒ_１５は、Ｃ_１－４アルキルおよびＣ_１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｘ^－は、薬学的に許容可能なアニオンであり、

式中、
Ｂは、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｒ_２３）（Ｒ_２４）Ｏ＊、Ｃ（Ｏ）Ｏ Ｃ（Ｒ_２３）（Ｒ_２４）＊、または
Ｃ（Ｒ_２３）（Ｒ_２４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ＊であり、式中、＊印のある原子は、Ｒ_２１に直接接続され、
Ｒ_２３およびＲ_２４は、独立的に、Ｈ、フルオロ、Ｃ_１－４アルキル、およびＣ_１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ_２１は、群［２１］、［２２］、［２２Ａ］、［２３］、［２４］、［２５］および［２６］から選択され、式中、＊＊印がある原子は、Ｂに直接的に接続される。

【化4】

本発明の方法で使用するヘミチャネル遮断剤は、例えば、式Ｉ、式ＩＩの任意の「ギャップ」化合物を含んでもよく、または除外されてもよい。

【0090】

ペプチドおよびペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤
その他の実施形態では、本発明は、コネキシンヘミチャネルを遮断する、ペプチドヘミチャネル遮断剤、例えば、ペプタゴンなど、ペプチド模倣体化合物の使用を特徴とし、ＲＰＥ完全性、ＢＲＢ完全性、密着結合の完全性、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の調節の集中および時間依存的な減少をもたらす。ヘミチャネル遮断剤は、Ｅ１（Ｇａｐ２６ペプチド）の保存されたＱＰＧモチーフおよびＳＨＶＲモチーフ、ならびにＥ２（Ｇａｐ２７ペプチド）のＳＲＰＴＥＫモチーフが関与する細胞外ループＥ１およびＥ２内や、細胞質ループ（Ｇａｐ１９ペプチド）内の特定の配列に対応するペプチドを含みうる。本発明の方法で使用するヘミチャネル遮断剤は、任意の「ギャップ」化合物を含むか、または除外しうる。最も強力なペプチド模倣体は、ペプタゴン（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）（配列番号１）である。好ましいペプチド模倣体化合物は、ＳＲＰＴＥＫＴ、７量体モチーフを含む。

【0091】

一部の実施形態では、ペプチドおよび／またはペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤（例えば、ペプタゴン）は、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、およびコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む。コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体は、修飾されてもよく、または改変されなくてもよい。コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体は、化学的に、合成的に、またはその他の方法で製造される。一部の実施形態では、コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体は、Ｃｘ４３ペプチドまたはペプチド模倣体である。一部の態様では、治療的に有効な修飾または非修飾ペプチドまたはペプチド模倣体は、Ｃｘ４３細胞外ループ２の一部分およびＣｘ４５細胞外ループ２の一部分を含むコネキシン細胞外ループ２の一部分であるコネキシン（例えば、Ｃｘ４３またはＣｘ４５など）のコネキシン細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。一部の態様では、ペプチドまたはペプチド模倣体は、コネキシンＣｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または本明細書に記述された別のコネキシンの細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部を含む。Ｃｘ４３細胞外ループ２の一部分に対応するペプチド模倣体が、現在のところ好ましい。

【0092】

ペプタゴンは、用量依存的に動作することができるヘミチャネル遮断剤であり、より低い用量でギャップ結合のヘミチャネルの開通を遮断し、より高い用量で細胞間のギャップ結合を分離する。例えば、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ．， ２００８を参照。低用量を持続的に適用すると、ギャップ結合カップリングの漸進的な喪失もあり、これはヘミチャネルドッキングとのペプチド干渉であると考えられる（通常の代謝回転中に既存のギャップ結合の漸進的な除去と並行したもの）。ペプタゴンは、数多くのインビトロ、エキソビボ、およびインビボ（動物）の研究において効果的であることが証明されている（例えば、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ， ２０１２； Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ， ２０１２； Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ， ２０１３を参照）。

【0093】

一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、Ｃｘ４３ヘミチャネル遮断剤は、ペプチドを含みうる。ヘミチャネル遮断剤ペプチド配列は、例えば、以下の配列、ＳＲＰＴＥＫＴ「Ｍｏｄ３」（配列番号２）、「ペプチド１」ＡＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３）、「ペプチド２」ＶＡＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４）、「ペプチド１１」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＡＫＴ （配列番号５）、「ペプチド１２」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＡＴ （配列番号６）、「ペプチド５」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１）、「Ｍｏｄ１」ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７）、「Ｍｏｄ２」ＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号８）のうちの一つ以上を含むことができ、本質的にそれらからなることができ、またはそれらからなりうる。一部の実施形態では、カルボキシ末端を修飾することができる。一部の態様では、カルボキシ末端修飾は、随意に水素または他の部分にさらに連結されうるｎ－アルキル鎖を含みうる。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤ペプチドは、上記に列挙されたまたは本明細書に開示されるペプチドのいずれかを含んでもよく、または除外してもよい。

【0094】

一態様では、本発明は、単独で、またはキット、パッケージ、もしくは他の製造品内での、本明細書に記述された疾患、障害、または状態を治療するための方法における医薬組成物の使用、ならびに例えば、ＲＰＥ完全性の低下もしくは障害、ＢＲＢ完全性、密着結合の完全性、および／またはＩＶ型コラーゲンの産生の増加もしくは障害によって特徴付けられるものに関する。本明細書の方法は、特に本明細書に記述されるように、ＲＰＥ完全性、ＢＲＢ完全性、密着結合の完全性、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の調節に十分な量で、ヘミチャネル遮断剤を有する対象者の治療を提供する。一部の好ましい態様では、ヘミチャネル遮断剤はコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤である。他の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン３６ヘミチャネル遮断剤である。さらに他の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン３７ヘミチャネル遮断剤である。他の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４５ヘミチャネル遮断剤である。上述のように、他のコネキシンヘミチャネルの遮断剤は本発明の範囲内である。

【0095】

一部の実施形態では、「プロ部分」（ｐｒｏｍｏｉｅｔｙ）は、活性薬剤内の官能基をマスクし、それによって活性薬剤をプロドラッグに変換する保護基として作用する種を指す。典型的には、促進性は、インビボで酵素的または非酵素的手段によって切断される結合を介して薬物に付加され、それによってプロドラッグをその活性形態に変換する。一部の実施形態では、プロ部分はまた、活性薬剤であってもよい。一部の実施形態では、プロ部分、ヘミチャネル遮断剤に結合されてもよい。一部の実施形態では、プロ部分は、例えば、ペプチド、ペプチド模倣体、または小分子ヘミチャネル遮断剤のいずれかに結合されてもよい。一部の実施形態では、促進性は、式Ｉの化合物に結合されてもよい。一部の実施形態では、プロドラッグは、別のヘミチャネル化合物、例えば、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， 米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号、Ｓａｖｏｒｙ， ｅｔ ａｌ．， 米国特許出願公開第２０１６０３１８８９１号、またはＳａｖｏｒｙ， ｅｔ ａｌ．， 米国特許出願公開第２０１６０３１８８９２号に記載がある。

【0096】

一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤としては、例えば、抗体または抗体断片、ナノボディ、ペプチドまたはペプチド模倣体、組換え融合タンパク質、アプタマー、小分子、またはコネキシンヘミチャネルに結合する単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、および本明細書中で注目される他のものが挙げられる。現在のところ好ましい一つの実施形態では、コネキシンヘミチャネルはＣｘ４３ヘミチャネルである。

【0097】

その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣体であり、時にはヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体とも呼ばれ、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、およびコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなる、修飾または非修飾のＣｘペプチドまたはペプチド模倣体を含む。一部の態様では、治療的に有効な修飾または非修飾ペプチドまたはペプチド模倣体は、コネキシン４３またはコネキシン４５の細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。コネキシン４３のタンパク質配列を以下に示す。

【化5-1】

【化5-2】

【0098】

表１は、コネキシン４３およびコネキシン４５の細胞外ループを示す。一部の実施形態では、治療的に有効な修飾または非修飾ペプチドまたはペプチド模倣体は、コネキシン４３またはコネキシン４５、好ましくはコネキシン４３などのコネキシン（細胞外ループ２）のＥ２細胞外ドメインの一部分を含む。一部の実施形態では、治療的に有効な修飾または非修飾ペプチドまたはペプチド模倣体は、コネキシン４３またはコネキシン４５、好ましくはコネキシン４３などのコネキシンのＣ末端ドメインの一部分を含む。ペプチドまたはペプチド模倣体遮断剤が、コネキシンの細胞内ドメインの一部分を含む場合、ペプチドは、一部の実施形態では、細胞内部移行トランスポーターに共役されてもよく、一部の実例では、コネキシン４３に結合する閉塞帯（ＺＯ－１）を遮断してもよい。

【表1】

【0099】

種々のコネキシンアイソタイプのＥ２ドメインの配列は、表２に太字で示すペプチド配列番号１４およびペプチド配列番号１５に相同なアミノ酸とともに示されている。ペプチド配列番号１５の最後の４つのアミノ酸は、第四の膜ドメインの一部であることが注目される。

【0100】

表２は、本明細書に記載のペプチドヘミチャネル遮断剤を調製するために使用されうるコネキシンファミリーメンバーのための細胞外ドメインを提供する。表２に提供されるペプチドおよびその断片は、特定の非限定的な実施形態では、ペプチドヘミチャネル遮断剤として使用される。他の非限定的な実施形態では、この表中のペプチドの約８～約１５、または約１１～約１３個の隣接アミノ酸を含む、本質的にからなる、または約１５個からなる、または約１１～約１３個からなるヘミチャネル遮断ペプチドは、本発明のペプチドヘミチャネル遮断剤である。その他の実施形態では、保存的アミノ酸の変化がペプチドまたはその断片に対して行われる。

【表2】

【0101】

他のペプチドヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４３の細胞質ループ（アミノ酸１１９～１４４）Ｌ２ペプチドおよびコネキシン４３のＬ２ペプチドのサブパーツ由来である。一部の実施形態では、これらのペプチドは、例えば、Ｇａｐ１９の９つのアミノ酸配列、ＫＱＩＥＩＫＫＦＫ（配列番号１９）、天然Ｇａｐ１９配列、ＤＧＶＮＶＥＭＨＬＫＱＩＥＩＫＫＦＫＹＧＩＥＥＨＧＫ（配列番号２０）、Ｇａｐ１９のＨｉｓ１４４→Ｇｌｕ Ｌ２誘導体（Ｓｈｉｂａｙａｍａの報告による（Ｓｈｉｂａｙａｍａ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｊ． ９１， ４０５４０４０６３， ２００６））、ＤＧＶＮＶＥＭＨＬＫＱＩＥＩＫＫＦＫＹＧＩＥＥＱＧＫ（配列番号２１）、ＴＡＴ－Ｇａｐ１９配列、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＫＱＩＥＩＫＫＦＫ（配列番号２２）、ＳＨ３結合ドメイン、ＣＳＳＰＴＡＰＬＳＰＭＳＰＰＧＹＫ（配列番号２３）、またはそのサブパートＰＴＡＰＬＳＰＭＳＰＰ（配列番号２４）、ＣＴ９ペプチドもしくはＣＴ１０ペプチドのＣ末端配列（細胞浸透を増大させるためのＴＡＴリーダー配列の有無を問わない）、ＲＰＲＤＤＥＩ（配列番号２５）、ＳＲＰＲＤＤＬＥＩ（配列番号２６）、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＳＲＰＲＤＤＥＩ（配列番号２７）、またはＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＲＰＲＤＤＥＩ（配列番号２８）を含んでもよく、除外してもよい。本明細書に開示される方法、キット、または製造品における使用のために組成物中に含めうるか、または除外されうる他のペプチド模倣体配列には、Ｄｈｅｉｎの報告によるもの（Ｄｈｅｉｎ， Ｓ．， Ｎａｕｎｙｎ－Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ． Ｐｈａｒｍ．， ３５０： １７４－１８４， １９９４）、ＡＡＰ１０ペプチド、Ｈ_２Ｎ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－４Ｈｙｐ－Ｐｒｏ Ｔｙｒ－ＣＯＮＨ_２（配列番号２９）、およびＺＰ１２３ペプチド（ロチガペプチド）、Ａｃ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｄ－４Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｄ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－ＮＨ_２（配列番号３１０）、（Ｄｈｅｉｎ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎ． Ａｄｈｅｓ． １０， ３７１－３７８， ２０１３）がある。ロチガペプチドは、天然Ｌ型ペプチドに対する有効性を高めるためのＤ型ペプチドを含む。

【0102】

本開示の特定の実施形態で含有または除外されうるコネキシン４３（Ｃｘ４３）またはＣｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３０．３、Ｃｘ３１、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３２、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０．１、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６、Ｃｘ４６．６、またはＣｘ４０ペプチド遮断剤の例を、下記の表３に示す（Ｅ２およびＴ２は、例えば、第二の細胞外ドメインまたは第二の膜貫通ドメイン内でのペプチドの位置を示す）。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0103】

一部の実施形態では、コネキシン４３遮断剤は、例えば、配列番号２（ＳＲＰＴＥＫＴ）を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるペプチドまたはペプチド模倣体を含んでもよい。ペプチドまたはペプチド模倣体はまた、例えば、配列番号１（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）を含んでもよい。ペプチドは、一つ以上の修飾アミノ酸、アミノ酸類似体を含有してもよく、またはそれ以外の方法で生物学的利用能を向上させるか、または細胞膜にわたる浸透性を高めるために修飾されてもよい。例えば、配列番号１は、配列番号２０～２５および２７を取得するために修飾されてもよい。一部の態様では、例えば、配列番号２（ＳＲＰＴＥＫＴ）または配列番号２（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるペプチドまたはペプチド模倣体は、７～４０アミノ酸またはアミノ酸類似体を含み、Ｃ末端ペプチドを含まない。一部の実施形態では、ペプチドはまた、プロ部分として使用されてもよい。

【0104】

一部の態様では、コネキシン４５遮断剤は、コネキシン－コネキシン相互作用を拮抗または阻害するか、あるいは遮断する、コネキシン４５タンパク質の部分を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるペプチドまたはペプチド模倣体であってもよい。コネキシン４５ペプチドおよびペプチド模倣体遮断剤の例示的なペプチド配列を表４に示す。

【表4】

【0105】

一部の実施形態では、コネキシン４５遮断剤は、例えば、コネキシン４５のＥ２またはＣ末端ドメインの一部分を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる、例えば、配列番号１５０（ＳＲＰＴＥＫＴ）を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるペプチドまたはペプチド模倣体を含んでもよい。ペプチドまたはペプチド模倣体はまた、例えば、配列番号１４９（ＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ）を含んでもよい。一部の実施形態では、ペプチドは、ＳＲＬ、ＰＣＨ、ＬＣＰ、ＣＨＰ、ＩＹＹ、ＳＫＦ、ＱＰＣ、ＶＣＹ、ＡＰＬ、ＨＶＲを含む、３アミノ酸長のみ、またはそれ以上の長さであってもよい。

【0106】

一部の態様では、コネキシン４０ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４０タンパク質の部分を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるペプチドまたはペプチド模倣体であってもよい。一部の実施形態では、コネキシン４３遮断剤は、例えば、配列番号２（ＳＲＰＴＥＫＴ）、配列番号１（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）、またはＮ末端の二つのドデシル基にリンカーを介して共役された配列番号１を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるものでもよい。ペプチドは、一つ以上の修飾アミノ酸、アミノ酸類似体を含有してもよく、またはそれ以外の方法で、例えば、細胞内部移行トランスポーターに共役または結合されて修飾されてもよい。

【0107】

別の非限定的であるが好ましい実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、またはＣｘ２６、Ｃｘ３７、もしくはＣｘ４０などのコネキシンの膜貫通領域の一部分に対応するアミノ酸配列を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるペプチドを含む。特に非限定的な実施形態では、抗コネキシン化合物は、コネキシン（例えば、コネキシン４３または４５）タンパク質配列の約３～約３０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、コネキシンタンパク質配列の約５～約２０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、コネキシンタンパク質配列の約８～約１５個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、またはコネキシンタンパク質配列の約１１個、１２個または１３個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである。他の非限定的な実施形態は、コネキシンタンパク質配列の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、または３０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである抗コネキシン化合物を含む。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、前述のいずれかを含んでもよく、または除外してもよい。

【0108】

他の抗コネキシン化合物では、模倣体ペプチドは、コネキシン４３タンパク質配列の３７～７６位および１７８～２０８位のアミノ酸に対応するコネキシン４３の細胞外ドメインに基づく。したがって、本明細書に記載される特定のペプチドは、コネキシン４３タンパク質配列の位置３７～７６および１７８～２０８の領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、コネキシン４３タンパク質配列のそれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、保存的アミノ酸の変化は、ペプチドが本明細書に記載され、また当技術分野で公知のアッセイにおいて結合活性または機能的活性を保持するように行われてもよい。その他の実施形態では、模倣体ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質内のペプチド標的領域（例えば、３７～７６位および１７８～２０８位に相当しないコネキシン４３タンパク質配列の部分）に基づく。

【0109】

非限定的であるが好ましい実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４５の膜貫通領域の一部分またはコネキシン４５のＣ末端領域に対応するアミノ酸配列を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるペプチドを含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。特に非限定的な実施形態では、例えば、抗コネキシン化合物は、既知のコネキシン４５配列の約３～約３０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドであり、既知のコネキシン４５配列の約５～約２０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドと、既知のコネキシン４５配列の約８～約１５個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドと、または既知のコネキシン４５配列の約１１個、１２、１３個の隣接アミノ酸を有するペプチドを含む。他の非限定的な実施形態は、既知のコネキシン４５配列の少なくとも約３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、２０個、２５個、または３０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである抗コネキシン化合物を含む。本明細書に提供される特定の抗コネキシン化合物では、模倣体ペプチドは、既知のコネキシン４５配列の４６～７５位および１９９～２２８位のアミノ酸に対応するコネキシン４５の細胞外ドメインに基づく。したがって、本明細書に記載される特定のペプチドは、既知のコネキシン４５配列の位置４６～７５および１９９～２２８の領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、既知のコネキシン４５配列のそれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はない。保存的アミノ酸の変化は、ペプチドが、本明細書に記載されるアッセイや、それ以外に当該技術分野で公知であるアッセイにおいて、結合活性または機能的活性を保持するように行われてもよい。その他の実施形態では、模倣体ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質内のペプチド標的領域（例えば、４６～７５位および１９９～２２８位に相当しない既知のコネキシン４５配列の一部）に基づく。様々なコネキシン配列を開示したＷＯ２００６／１３４４９４を参照によりその全体を組み込む。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、前述のいずれかを含んでもよく、または除外してもよい。

【0110】

その他のコネキシンヘミチャネル遮断剤
ヘミチャネル遮断剤、例えば、ペプチド、ペプチド模倣体、抗体、抗体断片などを含むコネキシン３６、３７、４３または４５の遮断剤も、適切なヘミチャネル遮断剤である。例示的なヘミチャネル遮断剤としては、ポリペプチド（例えば、抗体、その結合断片、および合成構築物）、および他のギャップ結合遮断剤、およびギャップ結合タンパク質リン酸化剤が挙げられるが、これらに限定されない。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７の遮断剤である。ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン３６、３７、４３または４５遮断剤には、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片を含む）；単鎖抗体；単鎖Ｆｖｓ；ならびに例えば、結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、組換え抗体、および特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、概してエピトープと呼ばれる分子の部分）を結合する能力のある抗体断片を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるものなどの単鎖結合分子が含まれる。抗体、抗体断片などを含むこれらの結合タンパク質は、キメラまたはヒト化であってもよく、またはそれ以外の方法でそれらが投与される対象者において免疫原性がより少なくなるように作製されてもよく、また合成されてもよく、組換え的に産生されてもよく、または発現ライブラリ内で産生されてもよい。本明細書に参照されるもの、および／または当技術分野でより詳細に記載するものなど、当技術分野で公知のまたは後に発見される任意の結合分子が想定される。例えば、結合タンパク質は、抗体などだけでなく、リガンド、受容体、ペプチド模倣体、または標的（例えば、コネキシン、ヘミチャネル、または関連分子）に結合する他の結合断片もしくは分子（例えば、ファージディスプレイによって産生される）も含む。

【0111】

結合分子は、概して、結合特異性、および所望の親和性を含むがこれに限定されない、所望の特異性を有する。親和性は、例えば、約１０^４Ｍ－１以上、約１０^６Ｍ－１以上、約１０^７Ｍ－１以上、約１０^８Ｍ－１以上のＫａであってもよい。約１０^８Ｍ－１よりもさらに大きな親和性が好適であり、例えば、約１０^９Ｍ－１、約１０^１０Ｍ－１、約１０^１１Ｍ－１、および約１０^１２Ｍ－１と等しいか、またはそれを超える親和性が好適である。本発明による結合タンパク質の親和性は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９４９） Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ５１： ６６０に記載のあるものを用いて簡単に決定されうる。

【0112】

ギャップ結合の閉鎖に使用される例示的化合物（例えば、コネキシン４３チロシンおよび／またはセリン残基のホスホル化）は、米国特許第７，１５３，８２２号および米国特許第７，２５０，３９７号に報告されている。例示的なペプチドおよびペプチド模倣体は、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， ＷＯ２００６１３４４９４に報告されている。ＷＯ２００６０６９１８１およびＷＯ２００３０３２９６４も参照。ギャップ結合の閉鎖に使用される他の薬剤の例としては、抗コネキシン剤、例えば、抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、コネキシン阻害剤、例えばアルファ－１コネキシンオリゴデオキシヌクレオチドなど）、抗コネキシンペプチド（例えば、抗体および抗体結合断片）およびペプチド模倣体（例えば、アルファ－１抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣体、ギャップ結合の閉鎖または遮断用化合物、ヘミチャネル化合物の閉鎖または遮断用の化合物、およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド（例えば、ＺＯ－１もしくはＺＯ－１結合部位に結合することが報告されているポリペプチド）が挙げられる。

【0113】

本発明で有用な他のヘミチャネル遮断剤には、コネキシンヘミチャネルを遮断するが、コネキシンギャップ結合機能を維持する化合物も含まれるか、またはこれと組み合わせることができる。例えば、直鎖ペプチドＲＲＮＹＲＲＮＹ、環状ペプチドＣｙＲＰ－７１、およびペプチド模倣体分子ＺＰ２５１９は、Ｃｘ４３カルボキシ末端ドメインを標的とし、低ｐＨ条件下でＣｘ４３ベースのギャップ結合閉鎖を防止することが示された（Ｖｅｒｍａ Ｖ， ｅｔ ａｌ． Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｔｈａｔ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ａｃｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｌｏｓｕｒｅ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ． Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ７：１４９１－１４９８ （２０１０）、Ｖｅｒｍａ Ｖ， ｅｔ ａｌ． Ｎｏｖｅｌ ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅｓ ｏｆ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ”ＲＸＰ” ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｃｘ４３－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ． Ｃｉｒｃ． Ｒｅｓ． １０５：１７６－１８４ （２００９））。これらの物質は、ギャップ結合の閉鎖を防止するための潜在的な並進運動値である。さらに、これらの分子は、潜在的なヘミチャネル遮断剤であり、それゆえ、ギャップ結合の閉鎖を防止し、ヘミチャネルの開通を阻害することに向けられた両面の作用を有しうる。

【0114】

抗コネキシン剤は、コネキシン４３（配列番号１９）などのコネキシンタンパク質隣接アミノ酸の約５～２０個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、コネキシン４３の約８～１５個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、またはコネキシン４３の約１１～１３個の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の抗コネキシン剤は、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約２０個、少なくとも約２５個、または少なくとも約３０個の、コネキシン４３の隣接アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。他の抗コネキシン４３遮断剤は、例えば、ＳＲＰＴＥＫＴまたはＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴを含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなるペプチドまたはペプチド模倣体などのコネキシン４３の細胞外ドメインを含む。他の抗コネキシン４３遮断剤は、コネキシン４３のＣ末端領域を含み、ＷＯ２００６／０６９１８１、またはその改正版を参照のこと。

【0115】

ペプチド化学修飾
一定の実施形態では、本発明のコネキシン４３遮断剤ペプチドは、アミノ末端またはカルボキシ末端で細胞内在化トランスポーターに連結することができる。本発明のコネキシン４３遮断剤ペプチドに連結された細胞内在化トランスポーターは、当技術分野に公知のもしくは新たに発見された任意の内部移行配列、またはその保存されたバリアントでもよい。細胞内在化トランスポーターおよび配列の非限定的な例としては、アンテナペディア配列、ＴＡＴ、ＨＩＶ－Ｔａｔ、ペネトラチン、Ａｎｔｐ－３Ａ（Ａｎｔｐ変異体）、ブフォリンＩＩ、トランスポータン、ＭＡＰ（モデル両親媒性ペプチド）、Ｋ－ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ－１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ－７、ＨＮ－１、ＢＧＳＣ（ビス－グアニジウム－スペルミジン－コレステロール、およびＢＧＴＣ（ビスグアニジウム－トレン－コレステロール）が挙げられる。

【0116】

例示的な細胞内在化ペプチドの配列を下記の表５に示す。

【表5-1】

【表5-2】

【0117】

本願発明の一つの実施形態では、コネキシン４３遮断剤ペプチドのアミノ酸配列は、本明細書に一覧にされている任意のペプチドの配列番号、またはそれらの保存されたバリアントからなる群から選択することができる。本願発明のさらなる実施形態では、コネキシン４３遮断剤ペプチドは、配列番号３０～９０のアミノ酸配列を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなりうる。本願発明の別の実施形態では、コネキシン４３遮断剤ペプチドは、細胞内在化トランスポーターをさらに含む。さらなる実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ペプチドは、アミノ末端で細胞内在化トランスポーターに連結することができる。

【0118】

本明細書で特定のタンパク質に言及される場合、誘導体、バリアント、および断片が企図される。タンパク質誘導体およびバリアントは、当業者によく理解されており、アミノ酸配列修飾に関与しうる。例えば、アミノ酸配列修飾は、挿入バリアント、置換バリアント、または欠失バリアントの３つのクラスのうちの一つ以上に当てはまりうる。挿入には、アミノ末端および／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。挿入は、アミノ末端またはカルボキシル末端融合物よりも小さな挿入であってもよく、例えば、１～４個程度の残基であってもよい。欠失は、タンパク質配列から一つ以上のアミノ酸残基を除去することで特徴付けられる。置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせを組み合わせて、最終構築物に至ってもよい。置換バリアントは、少なくとも一つの残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されたバリアントである。こうした置換は、保存的置換と称される。一つのアミノ酸残基を、生物学的および／または化学的に類似した別のアミノ酸残基と置換することは、保存的置換として当業者に公知である。保存的置換は、一つの疎水性残基を別のものに、または一つの極性残基を別のものに置き換えることができる。明示的に開示された各配列の保存的に置換されたバリエーションが、本明細書に提供されるペプチド内に含まれる。保存的置換は、典型的には、結果として生じるポリペプチドの生物活性には、ほとんどまたは全く影響を与えない。保存的置換は、ペプチドの生物学的機能に実質的に影響しないペプチドにおけるアミノ酸置換でありうる。ペプチドは、一つ以上のアミノ酸置換、２～１０個の保存的置換、２～５個の保存的置換、または４～９個の保存的置換を含みうる。

【0119】

化学構造修飾
特定の実施形態では、ヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣体の化学構造は、活性または半減期を増加させるために合成的に修飾されうる。例えば、ペプチドまたはペプチド模倣体は、一部の実施形態では、リンカー部分を介してペプチドを疎水性化合物に共役することによって修飾されうる。疎水性化合物は、例えば、Ｃ６－Ｃ１４アルキル基でありうる一つ以上のｎ－アルキル基であってもよい。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｃｈｅｎ， ＹＳ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．， １０２： ２３２２－２３３１ （２０１３）に記載があるように、Ｎ末端で、一つまたは二つのドデシル（Ｃ１２）基に共役されてもよく、参照により本明細書に組み込む。一つの実施形態では、ペプチド配列ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴまたはＶＤ ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴは、二つのドデシル基に共役されて、コネキシン４３、「Ｃ１２－Ｃ１２－Ｃｘｎ４３ ＭＰ」を調節することができる修飾ペプチドを作製することができる。（配列番号１７１）。結果として生じる構造を以下に示す。

【化6】

構造： Ｃ１２－Ｃ１２－Ｃｘｎ４３ ＭＰの構造（配列番号１７１）。Ｒ_１およびＲ_２は、水素基またはアルキル基としうる。一部の態様では、Ｒ_１ ＝ Ｒ_２ ＝ ｎ－ドデシル鎖である。

【0120】

化学送達修飾
本発明に有用なヘミチャネル遮断剤はまた、微粒子（マイクロスフェア、Ｍｐｓ）またはナノ粒子（ナノスフェア、Ｎｐｓ）製剤、またはその両方に製剤化されてもよい。粒子状薬物送達システムには、ナノ粒子（１～１，０００ｎｍ）および微粒子（１～１，０００μｍ）が含まれ、これらはさらにナノスフェアおよびミクロスフェアおよびナノカプセルならびにナノカプセルおよびマイクロカプセルとして分類される。ナノカプセルおよびマイクロカプセルでは、薬剤粒子または液滴が高分子膜に閉じ込められる。粒子系は、注射による送達という利点を有し、そのサイズおよびポリマー組成物は、インビボでその生物学的挙動に著しく影響を与える。マイクロスフェアは、ナノスフェアよりもはるかに長い期間、硝子体内に留まり得るため、微粒子は、注射後にリザーバーのように作用する。ナノ粒子は急速に拡散し、組織および細胞内に内部移行される。

【0121】

ヘミチャネル遮断剤活性の評価 ヘミチャネル遮断剤の活性または有効性を評価するために、様々な方法が使用されうる。本発明の一態様では、対象者におけるヘミチャネル遮断剤治療の効果は、本明細書に記載されるように、一例として、ＲＰＥ完全性、ＢＲＢ完全性、密着結合の完全性、および／またはＩＶ型コラーゲン産生の調節のアッセイを例として使用して評価またはモニターされる。

【0122】

ヘミチャネル遮断剤の活性は、特定の生物学的アッセイを使用して評価されてもよい。既知または候補のヘミチャネル遮断剤の分子運動に対する効果は、以下の実施例に記載される方法、またはコネキシンヘミチャネルを介した化合物の通過を決定するための、当技術分野に公知または同等の他の方法を使用して、特定、評価、またはスクリーニングすることができる。検出マーカーで標識された分子の転写などの染料転写実験、ならびにヘミチャネルの機能状態を研究するために広く使用されている小さな蛍光浸透性トレーサーの膜貫通通路を含む、様々な方法が当技術分野で公知である。例えば、Ｓｃｈｌａｐｅｒ， ＫＡ， ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ Ｕｓｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌｓ． Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｄｈｅｓｉｏｎ １５：２０７－２１８ （２００８）を参照。インビボ方法が使用されてもよい。例えば、Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ， ＨＶ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｍｉｍｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｄｕｃｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｒｅｔｉｎａｌ ｉｓｃｈａｅｍｉａ． Ｂｒａｉｎ， １３５：５０６－５２０ （２０１２）； Ｄａｖｉｄｓｏｎ， ＪＯ， ｅｔ ａｌ． （２０１２）の方法を参照。コネキシンヘミチャネル遮断は、胎児虚血のモデルにおいて転帰を改善する。Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ７１：１２１－１３２ （２０１２）。

【0123】

ヘミチャネルを遮断する化合物の能力の特定または評価における使用のための一つの方法は、（ａ）検定試料と検定システムを結合させることであって、前記検定試料が、一つ以上の検定化合物を含み、また前記検定システムがヘミチャネル遮断を評価するためのシステムを含み、前記システムが、例えば、染料もしくは標識化された代謝物の、例えば、前記システムへの高グルコース、低酸素症または虚血の導入、炎症の媒介物、またはヘミチャネルの開通を誘導する他の化合物または事象（細胞外Ｃａ^２＋の低下など）に応答しての移動の増大を示すことで特徴付けられる、ことと、（ｂ）増大の存在または量を、例えば、前記システム中の前記染料または他の標識化された代謝物内で決定することと、を含む。陽性および／または陰性対照も使用されうる。随意に、所定量のヘミチャネル遮断剤（例えば、ペプタゴンまたはＸｉｆｌａｍ）を検定システムに追加してもよい。

【0124】

好ましくは、例えば、ペプタゴンおよびＸｉｆｌａｍなどのヘミチャネル遮断剤は、約１～５ｎＭ未満程度、好ましくは約１０ｎＭ未満程度、より好ましくは約５０ｐＭ未満程度でのインビトロアッセイで活性を示す。インビボアッセイでは、これらの化合物は、好ましくは、約１０～１００マイクロモル（μＭ）未満の濃度で、より好ましくは、約５０μＭ未満の濃度で、ヘミチャネル遮断を示す。他のヘミチャネル遮断剤は、これらの範囲内であってもよく、また約２００ｐＭ未満の範囲内であってもよい。

【0125】

一つの実施形態では、一つ以上のヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなる組成物が投与される。ヘミチャネル遮断剤は、ＱＤ、ＢＩＤ、ＴＩＤ、ＱＩＤ、または毎週の用量、例えば、ＱＩＷ、ＢＩＷ、ＱＷで投与されてもよい。それらはまた、ＰＲＮ（すなわち、必要に応じて）、およびＨＳ（ホラソムニ、すなわち、睡眠前）で投与されてもよい。

【0126】

剤形および製剤および投与
別段の明示的な記載がない限り、用量に関する全ての記載は、本発明のヘミチャネル遮断剤に適用される。

【0127】

ヘミチャネル遮断剤は、本明細書に記載されるように用量決定、投与、または製剤化することができる。

【0128】

ヘミチャネル遮断剤は、治療を必要とする対象者に投与することができる。したがって、本発明によれば、コネキシンヘミチャネル、例えばコネキシン４３ヘミチャネルまたはコネキシン４５ヘミチャネルを調節して、その開通確率を一過性かつ部位特異的な様式で減少させることができる製剤が提供されている。

【0129】

ヘミチャネル遮断剤は、実質的に単離された形態で製剤中に存在してもよい。生成物は、その生成物の意図されている目的に干渉することのない担体または希釈剤と混合されることがあり、それでもなお実質的に単離されているとみなされることが理解される。本発明の生成物はまた、実質的に精製された形態であってもよく、その場合、一般に、調製物の約８０％、８５％、または９０％、例えば、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、９５％、または９８％、または少なくとも約９９％のペプチド模倣体もしくは小分子ヘミチャネル遮断剤、例えば、または乾燥量を含む。

【0130】

対象者へのヘミチャネル遮断剤の投与は、対象者の体内の標的部位に薬剤を送達することができる任意の手段によって行われてもよい。一例として、ヘミチャネル遮断剤は、経口、局所的、全身的（例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、経皮、鼻腔内、または坐剤による）、非経口（例えば、筋肉内、皮下、または静脈内もしくは動脈内注射）、移植による、および浸透圧ポンプ、経皮パッチなどの装置を通した注入による、以下の経路のうちの一つによって投与されうる。投与経路の例は、Ｂｉｎｇｈｅ， Ｗ． ａｎｄ Ｂ． Ｗａｎｇ （２００５）． Ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ： ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｂｉｎｇｈｅ Ｗａｎｇ， Ｔｅｒｕｎａ Ｓｉａｈａａｎ， Ｒｉｃｈａｒｄ Ｓｏｌｔｅｒｏ， Ｈｏｂｏｋｅｎ， Ｎ．Ｊ． Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ｃ２００５にも記載がある。一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は全身的に投与される。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は経口投与される。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、例えば、当該の器官、癌もしくは腫瘍に局所的にまたは直接的に投与される。

【0131】

一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、インプラントとして、またはインプラントと併せて提供されてもよい。一部の態様では、持続的送達のために提供されうる。一部の実施形態では、マイクロニードル、針、イオン電気泳動装置またはインプラントが、ヘミチャネル遮断剤の投与に使用されうる。インプラントは、例えば、Ｓ． Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＡＣＳ Ｎａｎｏ， ９ （２）， ｐｐ １７４９－１７５８ （２０１５）に記載されるような溶解可能なディスク材料であってもよい。一部の態様では、本発明のヘミチャネル遮断剤、例えばコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤は、脳室内、および／または髄腔内、および／または硬膜外、および／または硬膜下、および／または硬膜外経路を介して投与されうる。

【0132】

ヘミチャネル遮断剤は、１回、または複数回、または定期的に投与されてもよい。また、ＰＲＮ（必要に応じて）で投与されてもよく、または所定のスケジュールで、もしくはその両方で投与されてもよい。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、毎日、毎週、毎月、隔月、または四半期ごとに、またはこれらの期間の任意の組み合わせで投与される。例えば、治療は、ある期間のあいだ毎日投与されて、その後、毎週および／または毎月などで投与されてもよい。遮断剤を投与する他の方法が本明細書に記載されている。一態様では、ヘミチャネル遮断剤は、１日目から５日目、１０日目、３０日目、４５日目、６０日目、７５日目、９０日目、または１００日目～１８０日目の間に、患者を治療するために十分な量で患者に投与される。

【0133】

例えば、ペプタゴンなどのヘミチャネル遮断剤、および／またはその類似体もしくはプロドラッグ、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、ならびに前述の任意の化合物の類似体もしくはプロドラッグ、または式ＩＩの化合物は、単独で、または一つ以上の追加的な成分と組み合わせて投与されてもよく、一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、および／または担体を含む医薬組成物に製剤化されてもよい。

【0134】

「薬学的に許容可能な希釈剤、担体、および／または賦形剤」は、医薬組成物を調製するのに有用な物質を含むことが意図されており、例えば、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、ならびに前述の任意の化合物の類似体、または式ＩＩの化合物と同時投与されてもよく、その意図された機能を実行することが可能であり、概して安全で、非毒性であり、生物学的にも、その他のかたちでも望ましくなくはない。薬学的に許容可能な希釈剤、担体、および／または賦形剤には、獣医学用途ならびにヒト医薬品用途に好適なものが含まれる。好適な担体および／または賦形剤は、当業者によって、例えば、シフラムなどの式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および前述の任意の化合物の類似体の性質に関して容易に理解される。ところが、一例として、希釈剤、担体および／または賦形剤は、溶液、溶媒、分散媒体、遅延剤、ポリマーおよび脂質剤、乳濁液およびこれに類するものを含む。さらなる例として、好適な液体担体は、特に注射溶液用に、水、生理食塩水、デキストロース水溶液などを含み、等張性溶液は、静脈内、脊髄内、および大槽内投与に好適であり、リポソームなどの媒体は、薬剤の投与に特に好適である。

【0135】

組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、半固体、粉末剤、徐放性製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアロゾル、注射用液体、ゲル、クリーム、経皮送達装置（例えば、経皮パッチ）、器官インサート（例えば、眼）などのインサート、または任意の他の適切な組成物を含む、任意の標準的な既知の剤形の形態を取り得る。本発明が関連する当業者であれば、治療される状態の性質、および任意の過度の実験なしに使用される活性剤を考慮すると、最も適切な剤形を容易に理解することになる。当然のことながら、ペプタゴンなどのヘミチャネル遮断剤、および／またはその類似体、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および前述の任意の化合物の類似体、および／または式ＩＩの化合物のうちの一つ以上は、単一の組成物に製剤化されうる。特定の実施形態では、好ましい剤形は、注射可能な溶液および経口製剤を含む。

【0136】

本発明に有用な組成物は、剤形および投与様式に関して、例えば、ペプタゴンなどの任意の適切なレベルのヘミチャネル遮断剤、および／またはその類似体、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および前述の任意の化合物の類似体、および／または式ＩＩの化合物を含有してもよい。ところが、一例として、本発明における使用組成物は、投与方法に応じて、重量で約０．１％～約９９％、好ましくは約１％～約６０％のヘミチャネル遮断剤を含有してもよい。

【0137】

標準的な希釈剤、担体および／または賦形剤に加えて、本発明による組成物は、一つ以上の追加的な成分で、あるいは、ヘミチャネル遮断剤（ペプタゴンなど）、および／またはその類似体、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および前述の任意の化合物の類似体、および／または式ＩＩの化合物の活性または生物学的利用能を高めるような方法や、完全性の保護またはその半減期もしくは保存可能期間の延長を助けるような方法や、対象者への投与時に徐放出を可能にするような方法や、または例えば、望ましいその他の利益を提供するような方法で、製剤化されてもよい。例えば、徐放性ビヒクルには、マクロマー、ポリ（エチレングリコール）、ヒアルロン酸、ポリ（ビニルピロリドン）、またはヒドロゲルが含まれる。さらなる例として、組成物はまた、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、緩衝剤などを含んでもよい。本発明が関連する当業者であれば、特定の目的のために望ましいかもしれないさらなる添加剤を特定することができる。

【0138】

ヘミチャネル遮断剤は、徐放性システムによって投与されてもよい。徐放性組成物の適切な例には、成形された物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態の半浸透性ポリマー基質が含まれる。徐放性基質には、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ ５８，４８１号）、Ｌ－グルタミン酸およびガンマ－エチル－Ｌ－グルタミン酸塩の共重合体、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ １３３，９８８号）。徐放性組成物はまた、リポソームに閉じ込められた化合物を含む。ヘミチャネル遮断剤を含有するリポソームは、例えば、 ＤＥ ３，２１８，１２１、ＥＰ ５２，３２２、ＥＰ ３６，６７６、ＥＰ ８８，０４６、ＥＰ １４３，９４９、ＥＰ １４２，６４１、日本特許出願第８３－１１８００８号、米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号、ならびにＥＰ １０２，３２４に記載されているものを含めた既知の方法により調製されてもよい。通常、リポソームは、脂質含有量が約３０モルパーセントのコレステロールよりも多い、小さな（または約２００～８００オングストロームの）単層型であり、選択された割合は、最も有効な療法に対して調整される。例えば、ＰＧＬＡナノ粒子もしくはマイクロ粒子、または原位置イオン活性化ゲル化システムを使用した徐放性送達も使用されうる。

【0139】

さらに、本発明に従って使用するためのヘミチャネル遮断剤医薬組成物は、特定の例において対象者に治療的またはその他の利益となりうる追加的な活性成分または薬剤と共に製剤化されうることが企図される。本発明が関連する当業者であれば、本明細書の発明の記述および治療される障害の性質を考慮した適切な追加的な活性成分を理解するであろう。

【0140】

組成物は、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ： Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０^ｔｈ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２０００といった標準的な参考文献にある、標準技術に従い製剤化されてもよい。しかしながら、さらなる例として、ＵＳ２０１３／０２８１５２４またはＵＳ５９４８８１１に提供される情報を使用してもよい。

【0141】

特定の実施形態では、本発明は、（ａ）ヘミチャネル遮断剤、および（ｂ）一つ以上の追加的な活性薬剤を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなる、組み合わせ生成物を提供し、ここで、構成要素（ａ）および（ｂ）は、同時または順次の投与に適合される。

【0142】

本発明の特定の実施形態では、本発明による組み合わせ生成物は、他の成分がまだ治療を受ける対象者に効果を有する間に、少なくとも一つの成分が投与されるような方法で使用される。

【0143】

医薬組成物の保存および／または投与に適した任意の容器が、本発明の方法で使用するヘミチャネル遮断剤製品に使用されうる。

【0144】

ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤は、一部の態様では、投与部位への制御および／または区画化された放出を提供するために製剤化されてもよい。本発明の一部の態様では、製剤は、即効性、または持続性または徐放性の剤形でもよい。一部の態様では、剤形は、即効性剤形と、持続性および／または徐放性の剤形と組み合わせたもの、の両方を含みうる。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤の即効性および持続性および／または徐放性はどちらも、例えば、修飾または非修飾ペプチドもしくはペプチド模倣体、または他のヘミチャネル遮断剤を、即効性の形態で組み合わせることによって取得することができる。本発明の一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、例えば、本開示のコネキシン４３遮断剤または他のヘミチャネル遮断剤である。本発明の一部の態様では、剤形は、例えば、生分解性または非生分解性インプラントなどのインプラントでもよい。

【0145】

本発明の一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤は、例えば、粒子のサイズまたはコーティングを調整することによって、遮断剤の区画化された放出のために製剤化されてもよい。例えば、一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３遮断剤の粒子製剤を、本発明の方法における使用のために投与することができる。粒子を含む薬物送達システムは、一部の態様では、１，０００ｎｍ未満（、例えば、１～１０００ｎｍ）の平均直径を有するナノ粒子、および／または１～１，０００μｍの間の平均直径を有する微粒子を含みうる。ナノ粒子または微粒子は、例えば、ナノスフェアまたはミクロスフェア、またはカプセル化されたナノカプセルおよびマイクロカプセルであってもよく、ここでヘミチャネル遮断剤がポリマーコーティングにカプセル化される。粒子製剤はまた、リポソームを含んでもよい。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、血管中のコネキシン４５、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、またはＣｘ５７ヘミチャネル、または任意の他のコネキシンヘミチャネルの遮断剤を含んでもよく、または除外されてもよい。好ましいコネキシン標的は、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４３、およびＣｘ４５ヘミチャネルである。特に好ましい標的は、Ｃｘ４３ヘミチャネルである。

【0146】

本発明は、様々な障害の治療のためのヘミチャネルの機能を調節する方法を含む。本発明の方法は、ヘミチャネル遮断剤を単独で、または要望に応じて、一つ以上の他の薬剤または療法と組み合わせて投与することを含む。

【0147】

別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、式ＩＩの化合物、ペプチドまたはペプチド模倣体ヘミチャネル遮断剤などのヘミチャネル遮断剤は、静脈内、動脈内、または腹腔内投与などによって、最終循環濃度が、約０．００１～約１５０マイクロモル、またはより高く最大で２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００マイクロモルになるように全身的に投与されてもよい。最終循環濃度は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１５０マイクロモル、または列挙した二つの数字の間の任意の濃度、または上述のとおりそれ以上の濃度、および記載した範囲内の任意の濃度としうる。本明細書で言及したように、本発明はまた、一つ以上の追加的な活性薬剤もまた対象者に投与される併用療法も含む。当業者は、その薬剤の性質および本明細書で以前に論じた原理を考慮した一つ以上の活性薬剤のための望ましい用量を理解するであろう。活性ヘミチャネル調節物質の好ましい最終循環濃度、またはコネキシンヘミチャネル標的（例えば、ｔｏｎａｂｅｒａｔ、式Ｉのヘミチャネル調節化合物、式ＩＩのヘミチャネル調節化合物、ペプチド模倣体（例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ５）など）で、もしくはその周辺でのヘミチャネル調節物質の濃度は、１０～２５０マイクロモル、１０～１００マイクロモル、１０～７５マイクロモル、１０～５０マイクロモル、１０～３５マイクロモル、１０～３０マイクロモル、１０～２５マイクロモルであり、２５マイクロモルを含む。

【0148】

ヘミチャネル遮断剤、および随意に一つ以上の他の活性薬剤の投与は、障害の進行中、または障害もしくは障害の一つ以上の症状の発症の前または後に、任意の時点で発生しうる。一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、症状の継続的な管理を支援するために、長期間定期的に投与される。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、障害の発症を防止または遅延させるために、長期間または生涯にわたって定期的に投与される。

【0149】

一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤を、一つまたは複数の粒子を含む医薬組成物として投与することができる。一部の態様では、医薬組成物は、例えば、即放性製剤または放出制御製剤、例えば、遅延解除性粒子であってもよい。他の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、治療される領域への選択的な送達のために、粒子製剤、一つまたは複数の粒子で製剤化されうる。一部の実施形態では、粒子は、例えば、ナノ粒子、ナノスフェア、ナノカプセル、リポソーム、ポリマーミセル、またはデンドリマーであってもよい。一部の実施形態では、粒子は微粒子であってもよい。ナノ粒子または微粒子は、生分解性ポリマーを含みうる。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、インプラント、または基質として調製または投与されるか、または投与部位への区画化された放出を提供するように製剤化される。

【0150】

一部の実施形態では、製剤化されたヘミチャネル遮断剤は、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４３、またはコネキシン４５のヘミチャネル遮断剤である。コネキシン３７またはコネキシン４０またはコネキシン４３遮断剤が好ましい。最も好ましいのは、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤である。本明細書で使用される場合、「基質」は、例えば、ポリマー基質、生分解性または非生分解性基質などの基質、およびヘミチャネル遮断剤を送達するためのインプラントまたは適用された構造を作製するのに有用な他の担体を含む。インプラントには、リザーバーインプラントおよび生分解性基質インプラントが含まれる。

【0151】

一部の実施形態では、例えば、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３およびヘミチャネル遮断剤が、対象者に投与され、マイクロニードル、マイクロニードルアレイ、針、またはインプラントを使用して、治療有効量のコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤が、ヘミチャネル遮断剤の投与に使用されうる。一部の実施形態では、マイクロニードルは、ヘミチャネル遮断剤を投与するために使用されうる。一部の実施形態では、マイクロニードルの浸透は、組織または器官または器官区画内の所望の深さに制御されてもよい。一部の実施形態では、マイクロニードルはまた、ヘミチャネル遮断剤で、単独または他の薬剤で被覆されてもよい。一部の態様では、マイクロニードルによって投与されるヘミチャネル遮断剤および／または薬剤の容量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２９５、または３００ μｌ、または任意の二つの列挙された数の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された数の間の任意の容積でもよい。本発明の任意の適切な製剤は、例えば、ナノ粒子もしくは微粒子製剤、またはマイクロニードルにより注射可能な他の製剤を含む、マイクロニードル注射によって投与されうる。

【0152】

コネキシンヘミチャネル遮断剤の組み合わせの製造品／キット
本発明の別の実施形態では、上述の疾患および障害の治療に有用な材料を含有する、製造品または「キット」が提供される。キットは、コネキシンヘミチャネル遮断剤を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる容器を含む。キットはさらに、容器上に、または容器に関連付けられたラベルまたは添付文書を含んでもよい。「添付文書」という用語は、こうした治療用製品の使用に関する適応症、使用、用量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含む、治療用製品の市販パッケージに通例含まれる説明書を指すために使用される。適切な容器には、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、その状態を治療するのに有効であり、滅菌アクセスポートを有しうる、ヘミチャネル遮断剤またはその製剤を保持する（例えば、容器は、静脈溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。ラベルまたは添付文書は、組成物が、本明細書に記述または言及される任意の疾患、障害および／または状態である、選択された状態を治療するために使用されることを示す。また、ラベルまたは添付文書は、組成物が他の障害を治療するために使用されうることも示しうる。代替的に、または追加的に、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、およびデキストロース溶液などの薬学的に許容可能な緩衝液を含む第二の容器をさらに備えてもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含みうる。

【0153】

キットは、それを必要とする患者へのヘミチャネル遮断剤の投与の用法をさらに含みうる。

【0154】

製造品は、対象者の治療のためのヘミチャネル遮断剤化合物、組成物、または製剤、および説明書を含む容器を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなるものも提供される。例えば、別の態様では、本発明は、治療有効量の一つ以上のコネキシンヘミチャネル遮断ペプチドもしくはペプチド模倣体、および／または小分子を含む他のヘミチャネル遮断剤を含有する容器を、説明書とともに、対象者の治療のための使用を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなる製造品を含む。

【0155】

一部の態様では、製造品は、一つ以上のコネキシンヘミチャネル遮断ペプチドもしくはペプチド模倣体、または小分子ヘミチャネル遮断剤などの別のヘミチャネル遮断剤を、単独でまたは組み合わせて含む基質を含んでもよい。

【0156】

用量、量、および濃度
当然のことながら、投与されたヘミチャネル遮断剤の用量と、投与期間、そして、一般的な投与レジメンは、それが送達される標的部位、治療される対象者の任意の症状の重症度、治療される障害の種類、単位用量のサイズ、選択された投与方法、対象者の年齢、性別および／または全般的健康、ならびに当業者に公知の他の要因、などの変数に応じて、対象者間で異なりうる。

【0157】

本明細書で参照される疾患、障害、または状態の治療に使用されうる有効用量の例が説明されている。一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤の治療有効量は、約０．００１～約１．０マイクログラム／ｍＬ、または約０．００１～約０．０１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上、または列挙した用量の任意の二つの間の任意の範囲、または任意の二つの列挙した数値の間の任意の用量の濃度である。用量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００ｍｇ／ｍｌ、または列挙した用量の任意の二つの間の任意の範囲、または任意の二つの列挙した数値の間の任意の用量としうる。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤の治療有効量は、約０．５～約５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．３～約３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．１または１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．１または１．０～約０．３または３．０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0158】

一部の態様では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．００１～約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１～約１ｍｇ／ｋｇ、約１～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１０～約１００ｍｇ／ｋｇ、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の用量の治療的に有効な用量で投与されうる。一部の態様では、用量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００ｍｇ／ｍｌ、または列挙した用量の任意の二つの間の任意の範囲、または任意の二つの列挙した数値の間の任意の用量としうる。

【0159】

当然のことながら、投与は、１日１回の用量投与、分割された用量の数の投与、または適切な場合、連続投与を含みうる。例として、単位用量は、所望の総１日用量を達成するために、１日１回以上、例えば、一日に１回、２回、３回、４回、５回、または６回などで投与されてもよい。例として、ヘミチャネル遮断剤の単位用量は、単回の一日用量または何回かの個別の用量で投与されてもよく、または０．１～１０ｍｇ、１０～１００ｍｇ、１００～１０００ｍｇ、１０００～２０００ｍｇ、または２０００ｍｇ～５０００ｍｇ、０．１～約２０００ｍｇ、約０．１～約１０００ｍｇ、約１～約５００ｍｇ、約１～約２００ｍｇ、約１～約１００ｍｇ、約１～約５０ｍｇ、または約１～約２５ｍｇ、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の用量、といった一日用量を達成するために継続的に投与されてもよい。

【0160】

さらなる例として、ヘミチャネル遮断剤の単位用量は、一日の総用量が、約１～約１０００ｍｇ、例えば、約１～約１～約５００ｍｇ、または５００ｍｇ～１０００ｍｇ、１０００ｍｇ～２０００ｍｇ、または２０００ｍｇ～５０００ｍｇの範囲（７０ｋｇの成人について）、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の用量となるように、１日１回もしくは２回以上（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、または６回、典型的には１日１～４回）投与されてもよい。例えば、ヘミチャネル遮断剤（ペプタゴンなど）、および／またはその類似体、式Ｉの化合物（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）、および前述の任意の化合物の類似体は、約０．０１～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、約０．１～約６ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、約１～約６ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、６ｍｇ／ｋｇ／日～１００ｍｇ／ｋｇ／日、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の用量、の用量範囲で対象者に投与されてもよい。一つの実施形態では、Ｘｉｆｌａｍは、約２ｍｇ～約４０ｍｇの用量で１日１回経口投与されてもよい。

【0161】

一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤の用量は、作用部位で約０．００１マイクロモル～０．１マイクロモル、０．１マイクロモル、および最大約２００マイクロモルであり、あるいは循環内ではそれらの濃度を作用部位で達成するために、それ以上の濃度である。一例として、用量は、（限定はされないが）最終循環濃度が、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、または５００マイクロモル、または任意の二つの列挙された濃度の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された数字の間の任意の濃度でもよい。ヘミチャネルを遮断するが、ギャップ結合を結合解除しないと予想される用量のさらなる例は、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ， ２００８に記述されており、参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、例えば０．００１～２０マイクロモルなどの低用量でＸｉｆｌａｍを使用してもよい。低用量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０マイクロモルとしうる。

【0162】

一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、ペプタゴンおよび／またはその類似体の用量は、作用部位で約０．００１マイクロモル、最大約２００マイクロモル、または２００～２０００または５０００マイクロモルであり、あるいは循環内では、作用部位でそれらの濃度を達成するためにより高い用量である。一例として、用量は、約１、５、１０、２０、５０、１００、２００、２５０、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、または５０００マイクロモルの最終循環濃度、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の範囲、または任意の二つの列挙された用量の間の任意の用量でありうる（ただし、これらに限定されない）。ヘミチャネルを遮断するが、ギャップ結合を解除しない有効なペプタゴンの用量は、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ， ２００８で考察されている。

【0163】

一部の実施形態では、例えば、１～２０マイクロモル、１～５０マイクロモル、２０～３０、３０～４０、または４０～５０マイクロモルなどの低用量でＸｉｆｌａｍを使用してもよい。低用量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０マイクロモルとしうる。

【0164】

一部の実施形態では、そのヘミチャネル遮断剤の適切な治療的に有効な用量は、少なくとも約１．０ｍｇ／ｍＬのヘミチャネル遮断剤であってもよい。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤の治療的に有効な用量は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬであってもよい。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤の適切な治療的に有効な用量は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、もしくは約１００．０ｕｇ／ｍＬ、または列挙した用量の任意の二つの間の任意の範囲もしくは部分的範囲、または約０．１から約１００ｕｇ／ｍＬの範囲内の任意の用量としうる。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤の適切な治療的に有効な用量は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、もしくは約１００．０ｍｇ／ｍＬ、または列挙した用量の任意の二つの間の任意の範囲もしくは部分的範囲、または約０．１から約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の任意の用量としうる。一部の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．５～約５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．３～約３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．１または１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約０．１または１．０～約０．３または３．０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する。その他の実施形態では、コネキシン４３のヘミチャネル遮断剤、および／またはコネキシン４５のヘミチャネル遮断剤などのヘミチャネル遮断剤は、約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの態様のいずれにおいても、ヘミチャネル遮断剤は、コネキシン４３またはコネキシン４５ヘミチャネル遮断剤であってもよい。ヘミチャネル遮断剤が修飾または非修飾ペプチドまたはペプチド模倣体である場合、用量は、１～１０倍、２５～５０倍、１００～２００倍、または１０００倍減少されうる。

【0165】

特定の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤が、治療部位で、および／または治療部位に隣接して、最大約０．００１マイクロモル（μＭ）、または０．０５μＭ～約２００μＭ、または最大３００μＭ、または最大１０００μＭ、または最大２０００μＭまたは最大３２００μＭまたは最大３２００μＭ以上、例えば、最大約１０ｍＭ、２０ｍＭ、または３０ｍＭの最終濃度で、およびこれらの用量値の範囲内の任意の用量および用量範囲で、投与されうる。一つの実施形態では、ヘミチャネル遮断剤組成物は、約１０００μＭ超で適用される。好ましくは、ヘミチャネル遮断剤組成物は、約１０００μＭ～約１０ｍＭの最終濃度で適用され、より好ましくは、抗コネキシン剤組成物は、約３ｍＭ～約１０ｍＭの最終濃度で適用され、より好ましくは、ヘミチャネル遮断剤組成物は、約１～３ｍＭ～約５～１０ｍＭの最終濃度で適用される。ヘミチャネル遮断剤濃度は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００マイクロモル、あるいは０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００ミリモル、または列挙した用量の任意の二つの間の任意の範囲、または任意の二つの列挙した数値の間の任意の用量としうる。

【0166】

さらに、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤が、約１μＭ～約５０μＭの最終濃度で製剤中に存在してもよく、代替的に、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤は、例えば、約５μＭ～約２０μＭの最終濃度、または約１０～約１５μＭの最終濃度で存在する。ある一定のその他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約１０μＭの最終濃度で存在する。さらに別の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約１～１５μＭの最終濃度で存在する。その他の実施形態では、ヘミチャネル遮断剤は、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０～２００μＭ、２００～３００μＭ、３００～４００μＭ、４００～５００μＭ、５００～６００μＭ、６００～７００μＭ、７００～８００μＭ、８００～９００μＭ、９００～１０００または１０００～１５００μＭ、または１５００μＭ～２０００μＭ、２０００μＭ～３０００μＭ、３０００μＭ～４０００μＭ、４０００μＭ～５０００μＭ、５０００μＭ～６０００μＭ、６０００μＭ～７０００μＭ、７０００μＭ～８０００μＭ、８０００μＭ～９０００μＭ、９０００μＭ～１０，０００μＭ、１０，０００μＭ～１１，０００μＭ、１１，０００μＭ～１２，０００μＭ、１２，０００μＭ～１３，０００μＭ、１３，０００μＭ～１４，０００μＭ、１４，０００μＭ～１５，０００μＭ、１５，０００μＭ～２０，０００μＭ、２０，０００μＭ～３０，０００μＭ、３０，０００μＭ～５０，０００μＭで、もしくはそれ以上、または記載された用量のうち任意の二つの間の任意の範囲もしくは部分範囲で、または約２０μＭ～約５０，０００μＭの範囲内の任意の用量で存在する。

【0167】

本明細書に記載される各ヘミチャネル遮断剤の、１日当たり約１ナノグラム（ｎｇ）／ｋｇと約１ｍｇ／ｋｇ体重との間のさらに他の投薬レベル。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約１０ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ～約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約０．１マイクログラム～約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約２０ｎｇ～約１００ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇの範囲となる。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇとなる。２種以上のヘミチャネル遮断剤が使用される場合、各ヘミチャネル遮断剤の投薬量は、他方と同じ範囲にある必要はない。例えば、一方のコネキシンヘミチャネル遮断剤の投薬量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇの間であることがあり、別のコネキシンヘミチャネル遮断剤の投薬量は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、０．１～約１０、０．１～約２０、０．１～約３０、０．１～約４０、または体重１ｋｇ当たり約０．１と約５０ｍｇとの間であることがある。用量はまた、体重１ｋｇ当り、約０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００ｍｇ、または列挙された用量のいずれか二つの間の任意の範囲または部分範囲、または、体重１ｋｇ当り約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇの範囲の任意の用量でもよい。

【0168】

上述のように、ヘミチャネル遮断剤、例えば、コネキシン３７、４０、または４３のヘミチャネル遮断剤の用量は、単一または分割での使用で投与されてもよい。用量が１回投与されてもよいし、適用が繰り返されてもよい。典型的には、適用は、本明細書に記載される任意の疾患、障害、または状態を予防、緩徐化、または治療するために、必要に応じて、毎週、隔週、または３週間ごと、毎月、または２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１３か月、１４か月、１５か月、１６か月、１７か月、１８か月、１９か月、２０か月、２１か月、２２か月、２３か月、または２４か月ごと、またはそれ以上ごとに繰り返される。用量はまた、１２時間～７日おきに、またはそれ以上おきに適用されてもよい。例えば、用量は、１２時間、または１、２、３、４、５、６、または７日間隔、またはこれらの時間のうちの任意の２つの時間の間、または１２時間～７日の間の任意の時間間隔で適用されうる。コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤は、例えば、最大４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、または２６週間投与されうる。いくつかの適応症については、より頻繁な投与が用いられてもよい。

【0169】

製造および純度
式Ｉおよび式ＩＩの小分子ヘミチャネル遮断剤を包含する小分子ヘミチャネル遮断剤は、前述のように調製されてもよい。ペプチド模倣体およびペプチド類似体を含む、抗体および結合断片ならびにペプチドおよびポリペプチドを合成する方法は、適切な方法を使用して実施することができる。例えば、Ｌｉｈｕ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １； ９５（１８）： １０８３６－１０８４１ （Ｓｅｐｔ １ １９９８）； Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８８） “Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｅｌ” Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ； Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９９９） “Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ” Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｅｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照。

【0170】

一部の実施形態では、この発明の製剤は、実質的に純粋である。実質的に純粋なとは、製剤が約１０％未満、５％未満、または１％未満、および好ましくは約０．１％未満の不純度を含むことを意味する。一部の実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、１～１５％以下となる。一部の実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、２～１２％以下となる。一部の実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、３～１１％以下となる。一部の実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、４～１０％以下となる。

【実施例】

【0171】

これらの実施例に記載される作業は、ＢＲＢ完全性、ＲＰＥ完全性、密着結合の完全性、およびＺＯ－１内部移行に対するヘミチャネル遮断剤の肯定的な効果を評価し実証し、ＩＶ型コラーゲン産生の減少を示した。
（実施例１） 方法

【0172】

細胞培養－ヒト成人網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ－１９、、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、米国）を、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）および１ｘの抗生物質および抗真菌剤混合物（ＡＡ、１００ｘストック）を補充したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ－１２（ＤＭＥＭ－Ｆ１２、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．， 米国）中で、３７°Ｃで、加湿した５％のＣＯ_２インキュベータで培養した。細胞をＴ７５フラスコ中で増殖させ、培地を集密的になるまで週２回回交換した。

【0173】

ＨＧおよび／またはサイトカインチャレンジ － 継代６～１２で、細胞を、免疫組織化学研究用の８ウェルチャンバースライド、ＴＥＥＲおよびＦＩＴＣ－デキストラン研究用の６ウェルプレート、またはラクトースデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）およびＡＴＰ放出アッセイ用の９６ウェルプレートで、２．５×１０^５細胞／ｍＬで集密的になるまで播種し、その後、培養培地を２４時間にわたって１×ＡＡを含有する無血清ＤＭＥＭ－Ｆ１２中の処理に変更した。ＤＲ様の状態は、前述のように誘発された［２３，２０，２１］。簡潔に述べると、細胞を、３２．５ｍＭのＨＧと炎症誘発性サイトカイン、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α、１０ｎｇ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、米国）およびインターロイキン－１ベータ（ＩＬ－１β、１０ｎｇ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、米国）の組み合わせでチャレンジした。

【0174】

治療の適用 － Ｐｅｐｔｉｄｅ５（Ｈ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－ＯＨ、Ｃｈｉｎａ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、中国）を、ＨＧおよび炎症誘発性サイトカインの組み合わせと同時に２５μＭの濃度で細胞に投与した［２０］。細胞外ＡＴＰの効果を評価する実験については、損傷およびＰｅｐｔｉｄｅ５処置と同時に、外因性ＡＴＰ（１００ｎＭ）を細胞に加えた。

【0175】

経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定 － 細胞を、成長培地中のＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、米国）中のポリエステル膜上に２．５×１０^５細胞／ｍＬで播種し、７２時間インキュベートした。次いで、培地を、処置を含む無血清プレーティング培地に変更した。ＴＥＥＲ測定値は、ＥＶＯＭ２（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国）をＳＴＸ３電極を用いて使用した処置後、０、２４、４８、および７２時間で獲得された。正味ＴＥＥＲ値は、細胞を含有するチャンバーから取得された実験値から、細胞を含まないＴｒａｎｓｗｅｌｌインサートの抵抗を差し引くことによって計算した。正味のＴＥＥＲにインサートの面積を掛けて、ＴＥＥＲをΩ．ｃｍ^２単位で獲得した。ＴＥＥＲデータが、基底状態と比較して報告された。試料サイズはウェル当たり３回の測定値であり、別個の実験で３回繰り返された。

【0176】

ＦＩＴＣ－デキストラン傍細胞浸透性の測定 － ＡＲＰＥ－１９細胞間の密着接合部の完全性を、細胞の単層にわたる７０，０００Ｄａフルオレセインイソチオシネート（ＦＩＴＣ）－デキストラン（Ｄ１８２０、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、米国）の移動を測定することによって調べた。７２時間でのＴＥＥＲ測定後、インサート内の１０００μＬの使用済み培地を、１０００μＬのＦＩＴＣ－デキストラン（１０ μｇ／ｍｌ）で置換し、１時間インキュベートした。インサートを除去し、試料を９６ウェルプレートに移し、分光測光法（励起４９０ｎｍおよび放射５２０ｎｍ）による定量を行った。ＦＩＴＣ－デキストラン浸透性を、細胞も処置も含まないブランクウェルに対するパーセンテージとして表した。試料サイズはウェル当たり３回の測定値であり、別個の実験で３回繰り返された。

【0177】

ＡＴＰ放出アッセイ－細胞培地に放出されたＡＴＰを、ＡＴＰＬｉｔｅ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ＡＴＰ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、米国）を使用して、前述のように測定した［２０］。ＡＴＰ放出は、基底状態の割合として提示された。試料サイズは群当たり６ウェルであり、別個の実験で３回繰り返された。

【0178】

乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）アッセイ － 細胞を、９６ウェルプレート中で２．５×１０^５細胞／ｍＬで集密的になるまで播種し、その後、培養培地を７２時間にわたって１×ＡＡを含有する無血清ＤＭＥＭ－Ｆ１２中での処置に変更した。処置を含む培地中で７２時間インキュベーションした後、５０μＬの培地を各ウェルから採取して、ＬＤＨ放出を測定した。試料サイズは群当たり６ウェルであり、別個の実験で３回繰り返された。ＬＤＨアッセイキットを製造業者の説明書（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）に従い使用して、放出されたＬＤＨの量を評価した。簡潔に述べると、ＬＤＨはＮＡＤをＮＡＤ＋に減少させ、その後、テトラゾリウム染料を可溶性および有色のホルマザンに変換する。Ｓｙｎｅｒｇｙ ２マルチモードプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．， 米国）を使用して、４９０ｎｍ（ＯＤ４９０）での媒体中のホルマザン染料の吸光度を測定した。ＬＤＨ放出（％）を、基底状態に対して計算した。

【0179】

免疫組織化学 － 免疫組織化学実験のために、８ウェルチャンバースライドで２．５×１０^５細胞／ｍＬで細胞を播種した。処置培地中で７２時間インキュベーションした後、細胞を４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中０．１％のトリトンＸ－１００で１０分間透過化処理した。次いで細胞を、ウサギ抗ＺＯ－１（１：４００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）、ウサギ抗ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３（１：２０００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）、またはマウス抗コラーゲンＩＶ（１：１０００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）のいずれかと共に、４°Ｃで一晩インキュベートし、続いてＰＢＳ中で１５分間、３回洗浄した。ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ－４８８（１：５００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）またはヤギ抗マウスＣｙ３（１：５００、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、米国）二次抗体を適用し、室温で３時間インキュベートした。二次のみの対照では、非特異的な標識は示されなかった。細胞核をＤＡＰＩ（１：１０００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ）で染色し、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）退色防止試薬を使用してスライドを取り付けた。別個の実験で標識を３回繰り返した。

【0180】

画像分析およびコラーゲンＩＶ免疫標識の定量化－画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＦＶ１０００共焦点レーザー走査型顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、日本）上で撮影された。画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＦＶ－１０ ＡＳＷビューアおよびＩｍａｇｅＪソフトウェアのバージョン１．４６ｒ（国立衛生研究所、米国）を使用して処理された。ＺＯ－１およびｃｏｎｎｅｘｉｎ４３の両方の発現が、局在化の変化について定性的に評価された。コラーゲンＩＶ標識を、ウェル当たり４つの画像から定量化し、実験を３回繰り返した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して、各画像を赤色チャネルのコラーゲンＩＶでＲＧＢチャネルに分割した。画像は８ビットのバイナリ画像に変換され、背景を低減し、偏りを避けるために、等しい閾値がすべての画像に適用された。次いで、コラーゲンＩＶで覆われた総面積を、図Ｊの「測定」特徴を使用して定量した。コラーゲンＩＶの結果は、未処理（基底）細胞の割合として発現された。

【0181】

統計解析 － データは、算術平均±Ｓ．Ｄ．として提示される。群間の統計的比較は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡまたは二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、Ｄｕｎｎｅｔの多重補正の検定を用いて行った。各データセットに使用される特定の統計方法は、それぞれの図の凡例に提供されている。調整されたｐ＜０．０５は、統計的有意差を示すと考えられた。

（実施例２）ヘミチャネル遮断剤を用いた治療が、ＴＥＥＲの減少を防止し、それに対応する傍細胞浸透性の増加から保護した

【0182】

ＨＧとサイトカインの組み合わせは、基底状態と比較して４８時間（ｐ＝０．０００７）および７２時間（ｐ＝０．００３０）でＴＥＥＲの減少をもたらした（図１ａ）。これは、ＨＧおよび炎症性サイトカイン（３８．４２±１．８４％）の添加後７２時間で、基底状態（３２．７７±２．２３％）と比較して、ＦＩＴＣ－デキストラン浸透性（ｐ＝０．００１６）の有意な増加を伴っていた（図１ｂ）。Ｐｅｐｔｉｄｅ５処理を伴うヘミチャネル遮断は、両方の時点でＴＥＥＲの減少を低減させ、４８時間（ｐ＝０．２２３８）および７２時間（ｐ＝０．３７７８）の両方で、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置細胞と基底細胞の間に統計的有意差がないようにした。同様に、モデル遮断剤であるＰｅｐｔｉｄｅ５（３３．２±２．８７％）を使用してヘミチャネル遮断し、７２時間でＦＩＴＣ－デキストラン浸透性の増加から保護する。
（実施例３）ヘミチャネル遮断剤治療がコラーゲンＩＶ上方制御を防止した

【0183】

ＡＲＰＥ－１９細胞は、基底状態下で低レベルのコラーゲンＩＶを堆積させた（図 ４）。ＨＧおよび炎症性サイトカインの添加に伴い、基底細胞（３１．２５±３６．０６％）と比較して、コラーゲンＩＶ沈着の増加（６１８．５±３３２．３％、ｐ＝０．０１８０）があった。Ｐｅｐｔｉｄｅ５によるヘミチャネル遮断剤処置は、コラーゲンＩＶの上方制御を妨げ、Ｐｅｐｔｉｄｅ５処置（４０．３２±４３．１６％）と基底細胞（ｐ＝０．９９７６）との間に統計的有意差はなかった。
（実施例４）細胞膜でのＣｏｎｎｅｘｉｎ４３局在化の喪失に対して保護されるコネキシンヘミチャネル遮断

【0184】

基底的に、コネキシン４３タンパク質を、免疫組織化学的に標識されうるプラーク内の細胞膜に局在させた（図５ｃ）。ＨＧおよび炎症性サイトカインの添加に伴い、細胞膜でのコネキシン４３プラーク標識の喪失、およびタンパク質の細胞内局在化の増加があった。Ｐｅｐｔｉｄｅ５によるヘミチャネル遮断剤処理では、細胞膜から離れ、細胞質内への、コネキシン４３の局在化の再分布から保護された。
（実施例５）ＨＧおよびサイトカイン誘導性ＡＴＰ放出に対して保護されるＰｅｐｔｉｄｅ５

【0185】

ＨＧおよびサイトカイン（１９６．５±１２．１５％）は、基底状態と比較してＡＴＰ放出の増加を誘発した（９８．２５±２１．９１％、ｐ＝０．００１４）（図５ａ）。Ｐｅｐｔｉｄｅ５によるヘミチャネル遮断剤治療（６６．６７±２１．９１％）は、ＨＧおよびサイトカイン介在性ＡＴＰ放出を阻害し（ｐ＝０．０００３）、基底細胞とＰｅｐｔｉｄｅ５処置細胞の間に統計的有意差がないようにした。
（実施例６）ＡＴＰ依存性の方法でＨＧおよびサイトカイン誘導性細胞損傷から保護されるＰｅｐｔｉｄｅ５

【0186】

保護効果がヘミチャネル遮断剤治療に基づくことを確認するために、外因性ＡＴＰを、ＨＧおよび炎症性サイトカインならびにＰｅｐｔｉｄｅ５の存在下で細胞培地に添加した。前述したように、ＬＤＨ放出が増加し、ＨＧおよびサイトカインの添加により細胞質へのｃｏｎｎｅｘｉｎ４３の内部移行が増加するが、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３は正常なパターンで維持され、Ｐｅｐｔｉｄｅ５の存在下ではＬＤＨ放出は低いままである。しかしながら、外因的に添加されたＡＴＰは、再度増加したＬＤＨ放出（図５ｂ）およびｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ギャップ結合局在化の変化（図５ｃ）によって測定されるＰｅｐｔｉｄｅ５ヘミチャネル遮断剤によって与えられる保護を逆転させた。

【0187】

考察
ＴＥＥＲおよびＦＩＴＣ－デキストラン浸透性をマーカーとして使用し、損傷後のＡＲＰＥ－１９細胞の関門特性を、ＨＧと炎症誘発性サイトカインの組み合わせを用いて、ヘミチャネル遮断剤（この場合はＰｅｐｔｉｄｅ５ヘミチャネル遮断剤）を用いた処置がある場合と、ない場合について評価した。結果は、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルの遮断が、ＴＥＥＲのＨＧおよびサイトカイン介在性の減少およびＦＩＴＣ－デキストラン浸透性の増加を防ぐことができたことを示し、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルが、例えば、ＲＰＥおよびＢＲＢの完全性／機能の調節を介して、例えば、ＤＭＥにおいて、ＲＰＥの破損およびＢＲＢの破損を効果的に媒介できるという考えを裏付けている。重要なことに、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルの遮断は、密着結合の完全性を保護し、細胞膜でのＺＯ－１局在化を維持したことも実証された。

【0188】

細胞外基質成分の分泌の増加も、ストレスを受けたＲＰＥ細胞の特徴として報告されている。Ｔｒｕｄｅａｕとその同僚は、ＨＧとＩＬ－１βの組合せが、インビトロでＲＰＥ細胞によるコラーゲンＩＶ遺伝子とタンパク質の発現を増加させることを発見した。Ｔｒｕｄｅａｕ Ｋ， ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｆｅｎｏｆｉｂｒｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｄｕｃｅｓ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ ＩＶ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｍｉｍｉｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｌｉｅｕ： ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ５２ （９）：６３４８－６３５４． これは、ＡＲＰＥ－１９細胞によるコラーゲンＩＶ発現が、ＨＧおよびサイトカインに応答して増加したことを示す、本明細書における結果と一致する。さらに、高めのコラーゲンＩＶ発現が、正常なドナーと比較して、ＤＲ診断が確認されたドナーの基底膜で見出されており（Ｒｏｙ Ｓ， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ９３ （１）：４３８－４４２）、ヘミチャネル遮断剤処置が、コラーゲンＩＶ上方制御を防止するという本明細書での発見の重要性をさらに実証している。これまでの研究によると、コラーゲンＩＶの上方制御を低減すると、基底膜の肥厚が防止され、その結果、ＲＰＥ関門の破壊が防止されることが示されている。同文献。したがって、例えばコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤を用いて、ヘミチャネルを遮断すると、密着した接合部の保護を介してだけでなく、細胞恒常性の維持を助けることによって、ＲＰＥ完全性を保護することができる。これはまた、本明細書の発見により、ＡＲＰＥ－１９細胞からのＬＤＨ放出に関しても裏付けられる。示したＬＤＨ放出レベルは、細胞死とは対照的に細胞膜の完全性の喪失を示すが、ヘミチャネル遮断は、ＬＤＨ放出の増加に対して保護することができたが、これはまた、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネル遮断が細胞膜の完全性を維持するのに役立つという概念を裏付ける。まとめると、ＺＯ－１、コラーゲンＩＶ、およびＬＤＨの結果は、病理学的および非制御のコネキシン４３ヘミチャネルの開通によって誘導されるＡＴＰ依存性インフラマソーム活性化を遮断することにより、密着結合、基底膜、および細胞膜構造の維持をもたらすという考えを裏付ける。

【0189】

これらの結果に沿って、本明細書において、ギャップ結合ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３の局在化が、ＨＧとサイトカインの組み合わせによる損傷後に破壊されたという発見がある。それまでは、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３タンパク質の発現は、ＤＲのマウスモデルにおいて、およびＤＲ診断が確定したドナーにおいて、網膜において増加すると報告されていた。Ｍｕｇｉｓｈｏ ＯＯ， ｅｔ ａｌ． （２０１７） Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ａｎｄ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｏｎｏｒ Ｒｅｔｉｎａｓ． Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ １８ （１２）：２５６７． 本研究は、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ギャップ結合プラークも、細胞膜に再分配されるか、または疾患で内部移行されうるという考えを裏付ける。正常な細胞機能にはギャップ結合を介した細胞－細胞連通が必要であるため、細胞膜でのギャップ結合の喪失は、細胞恒常性の喪失をもたらす病理学的状態を示唆する。Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネル遮断は、細胞膜における正常なギャップ結合ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３分布、したがって細胞恒常性を維持した。Ｅｕｇｅｎｉｎ ＥＡ， ｅｔ ａｌ． （２０１２） Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ． Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７ （３）：４９９－５１８を参照。

【0190】

これまでの研究でも、細胞外ＡＴＰはＮＬＲＰ３インフラマソーム経路を開始する重要なシグナル伝達分子であることが報告されている。上記の実験では、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネル媒介性ＲＰＥ関門破壊におけるＡＴＰの役割を評価した。結果は、ＬＤＨ放出が増加し、ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ギャップ結合が、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤Ｐｅｐｔｉｄｅ５も培地中に存在するにもかかわらず、外因的に添加されたＡＴＰの存在下で破壊されたことを示した。これらの所見は、ＲＰＥ関門浸透性におけるｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルの役割が、ＡＴＰ放出の介在も伴う場合があることを示す。

【0191】

結論として、以前の研究は、ＲＰＥ関門の完全性の喪失は、主に、コネキシン４３活性とは独立した、ＺＯ－１（密着結合）関連欠損であることが示唆されてきた。Ｏｂｅｒｔ Ｅ， ｅｔ ａｌ． （２０１７） Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｉｇｈｔ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｚｏｎｕｌａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ－１， ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｍｉｍｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ， ａｌｐｈａＣＴ１， ｒｅｄｕｃｅｓ ＶＥＧＦ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＲＰＥ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ． Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ （Ｂｅｒｌ） ９５ （５）：５３５－５５２。本研究では、発生するＲＰＥおよびＢＲＢ完全性および機能の喪失、ならびに密着結合の完全性および機能の喪失が、例えば、特にコネキシンヘミチャネル、およびコネキシン４３ヘミチャネルの病理学的開通によって主に開始されることが示される。Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ヘミチャネルの開通は、ＡＴＰ放出をもたらし、これがＮＬＲＰ３インフラマソーム経路を活性化する。ここで、これが、コラーゲンＩＶ発現およびＬＤＨ放出によって反映される、関門の完全性および機能ならびに細胞恒常性の喪失に寄与する、細胞膜でのＺＯ－１およびギャップ結合ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３の局在化の喪失をもたらすことが見出された。これらの結果はさらに、ヘミチャネルを標的化することが、ＲＰＥおよびＢＲＢ完全性の喪失、ならびに様々な疾患、障害および状態で発生する密着結合の完全性の喪失、およびコラーゲンＩＶ産生の増加から保護しうるという概念を支持するものである。上述のように、好ましいコンンキシンヘミチャネル標的には、Ｃｘ４３ヘミチャネルだけでなく、網膜にも見られるＣｘ３６、Ｃｘ３７、およびＣｘ４５ヘミチャネルも含まれる。＊＊＊

【0192】

本明細書に記載および特許請求される本発明は、以下に限定されないが、この詳細な開示に規定または記載または参照されるものを含めて、数多くの特質および実施形態を有する。包括的であることは意図されておらず、本明細書に記載および特許請求される本発明は、制限ではなく説明の目的で含まれているこの詳細な開示に特定される、特長もしくは実施形態にまたはそれによって限定されるものではない。構成要素およびパラメーターの多くが、本発明の範囲を逸脱することなく、ある程度まで変わり得るかもしくは修飾されうるか、または公知の等価物に置換されうることを、当業者は容易に認識することになる。そのような修飾および等価物は、個別に記載されているがごとく本明細書に組み込まれることが理解されるべきである。また、この明細書に参照または標示されるステップ、特長、組成物、および化合物の全てを個別にまたは集合的に、ならびに任意の２つ以上の前記ステップまたは特長のうちいずれかまたは全てを、本発明は含む。

【0193】

本明細書に参照および記述される全ての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、ならびに他の文書および資料は、本発明の属する技術分野の当業者の技能のレベルを標示するものであり、そのような参照される文書および資料のそれぞれは、参照によりその全体を個別に組み入れられているかまたは本明細書にその全体を記載されているのと同じ程度に、ここに参照により組み込まれる。出願人は、任意のそのような特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および他の参照される資料または文書から得られるいずれかおよび全ての資料および情報を、この明細書中に物理的に組み込む権利を保持する。この明細書中でのいかなる出願、特許、および刊行物への参照も、それらが妥当な先行技術を構成するかまたは世界中のいずれかの国での一般常識の一部を形成するという自認または何らかの形態の示唆として、解されるものではなく解されるべきではない。

【0194】

本明細書に記載される具体的な方法および組成物は、好適な実施形態を代表するものであり、例示的なものであり、本発明の範囲上の限定として意図されるものではない。他の目的、態様、および実施形態は、この明細書の考慮の下で当業者に生じるものとなり、特許請求の範囲の範囲によって規定されるように、本発明の趣旨の内に包含される。様々な置換および修飾が、本発明の範囲および趣旨を逸脱することなく、本明細書に開示される本発明になされうることが、当業者には容易に明らかになろう。適切に本明細書に説明的に記載される本発明は、必須のものとして本明細書に具体的に開示されない、任意の１つもしくは複数の要素の不在下で、または１つもしくは複数の限定下で、実践されることがある。それゆえ、例えば、本明細書の各例において、本願発明の実施形態または例では、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」という用語はいずれも、本明細書の他の２つの用語のどちらかに置き換えられることがある。適切に本明細書に説明的に記載される方法およびプロセスは、様々なステップの指示で実践されることがあり、それらは必ずしも、本明細書または特許請求の範囲に標示されるステップの指示に制限されない。また、本明細書に使用される際に、および添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が特段に明確に示さない限り、複数の言及を含む。いかなる場合も、本特許は、本明細書に具体的に開示される具体的な例または実施形態または方法に限定されるものと解釈されないことがある。いかなる状況であっても、具体的に、かつ限定または留保なく、出願人による応答書面に明示的に援用されない限り、本特許は、特許商標庁のいかなる審査官またはいかなる他の職員もしくは従業員によって行われるいかなる陳述によっても限定されるものと解釈されないことがある。さらに、題名、見出しなどは、この文書に関する読み手の理解を高めるために提供され、本願発明の範囲を限定するものと読み取られるべきではない。本明細書に参照される本発明の態様、実施形態、または構成成分のいかなる例も、非限定的であるものとみなされることになる。

【0195】

採用されている用語および表現は、限定ではなく記載の用語として使用されるのであって、そのような用語および表現の使用に際して、呈示および記載される特長のいかなる等価物またはその一部も除外する意図はないが、様々な修飾は、特許請求の範囲にあるような本発明の範囲内にある可能性があることが認識される。ゆえに、本願発明が、好適な実施形態および任意選択的な特長によって具体的に開示されているのにも関わらず、本明細書に開示される概念の改変およびバリエーションが、当業者によって復元されることがあること；およびそのような改変およびバリエーションは、添付の特許請求の範囲によって規定されるようなこの発明の範囲内にあるものとみなされることを理解されたい。

【0196】

本発明は、本明細書に幅広く総称的に記載されている。この総称的な開示内にあるさらに狭い種および亜属のグループ分類のそれぞれもまた、本発明の一部を形成する。これは、条件付きの、またはその属から任意の主題を除外する否定的限定を伴う、本発明の総称的な記載を含み、その削除された材料が本明細書に具体的に記載されるか否かに関わるものではない。

【0197】

他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。さらに、本発明の特長または態様がマーカッシュ群の観点で記載されている場合、それによって本発明がまた、マーカッシュ群の任意の個別のメンバーまたはメンバーのサブグループの観点で記載されていることを、当業者は認識することになる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【配列表】

2022529505000001.app

【国際調査報告】