特表 2022-529536 悪性および非悪性血液疾患の治療のための免疫枯渇の組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-22

(54)【発明の名称】悪性および非悪性血液疾患の治療のための免疫枯渇の組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 51/10 20060101AFI20220615BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220615BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220615BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220615BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220615BHJP

   A61K 101/02 20060101ALN20220615BHJP

   A61K 103/00 20060101ALN20220615BHJP

   A61K 103/10 20060101ALN20220615BHJP

   A61K 103/32 20060101ALN20220615BHJP

   A61K 103/40 20060101ALN20220615BHJP

【ＦＩ】

A61K51/10

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K35/17 Z

A61K101:02

A61K103:00

A61K103:10

A61K103:32

A61K103:40

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021563248

(86)(22)【出願日】2020-04-24

(85)【翻訳文提出日】2021-12-21

(86)【国際出願番号】 US2020029887

(87)【国際公開番号】W WO2020219928

(87)【国際公開日】2020-10-29

(31)【優先権主張番号】62/838,646

(32)【優先日】2019-04-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517405552

【氏名又は名称】アクティニウム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100218578

【弁理士】

【氏名又は名称】河井 愛美

(72)【発明者】

【氏名】ラディック デール

(72)【発明者】

【氏名】ゲイガン アイリーン

【テーマコード（参考）】

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB01

4C085CC23

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087NA05

4C087ZB26

(57)【要約】

対象の免疫細胞の特定のサブセットの一過性免疫枯渇のための組成物および方法が開示される。本方法は、概して、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５２、またはそれらの組み合わせに対する、有効量の放射標識された抗体を対象に投与することを含む。有効量の放射標識された抗体は、標的化免疫細胞の少なくとも５０％、および対象の幹細胞の２０％未満を枯渇させる。単独で使用される場合、これらの方法は、リンパ腫、白血病、および骨髄腫を標的化し得、かつ／または自己免疫疾患を有する患者における非自己反応性免疫細胞の再増殖をさらに可能にし得る。これらの方法がある特定の細胞ベースの療法、例えば、養子細胞療法および／または造血幹細胞療法に先行する場合、本方法は、有害効果を最小限に抑えながら、細胞ベースの療法の転帰を高めることができる。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象の免疫細胞の特定のサブセットの標的化免疫枯渇のための方法であって、前記方法が、
ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせに対する、有効量の放射標識された抗体を前記対象に投与することを含み、
前記有効量の前記放射標識された抗体が、前記標的化免疫細胞の少なくとも５０％、または前記標的化免疫細胞の少なくとも７０％、または前記標的化免疫細胞の少なくとも８０％を枯渇させ、前記有効量の前記放射標識された抗体が、前記対象の幹細胞の２０％未満、または前記対象の幹細胞の１０％未満を枯渇させ、
前記放射標識された抗体が、¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁸⁹Ｓｒ、¹⁵³Ｓｍ、³²Ｐ、²²⁵Ａｃ、²¹³Ｂｉ、²¹³Ｐｏ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、²¹³Ｂｉ、²²³Ｒａ、²²⁷Ｔｈ、¹⁴⁹Ｔｂ、¹³⁷Ｃｓ、²¹²Ｐｂ、または¹⁰³Ｐｄで標識されている、方法。

【請求項2】

前記放射標識された抗体が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５２、またはそれらの組み合わせに対するものである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記放射標識された抗体が、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１受容体、およびＢ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせに対するものである、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記対象の免疫細胞の前記特定のサブセットが、リンパ系由来であるが幹細胞ではない細胞、または骨髄系由来であるが幹細胞ではない細胞を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記放射標識された抗体が、リンパ系由来標的および骨髄系由来標的を含む、二重特異性抗体である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記標的のうちの少なくとも１つが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、またはＣＤ５２を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記リンパ系標的が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ９６、ＣＤ１２２、ＣＤ１５２、もしくはＣＤ１５４であるか、または前記骨髄系標的が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３３、もしくはＣＤ１１６である、請求項５に記載の方法。

【請求項8】

前記放射標識された抗体が、¹³¹Ｉで標識されており、前記有効量が、１０ｍＣｉ～２００ｍＣｉである、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

前記放射標識された抗体が、²²⁵Ａｃで標識されており、前記有効量が、０．１μＣｉ／ｋｇ（対象体重）～５．０μＣｉ／ｋｇ（対象体重）である、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記有効量の前記放射標識された抗体が、前記対象において骨髄破壊を誘導しない、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記有効量の前記放射標識された抗体が、単回用量として投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記有効量の前記放射標識された抗体が、骨髄に２Ｇｙ以下の放射線量を提供する、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記対象が、自己免疫疾患に罹患しており、前記対象の免疫細胞の前記特定のサブセットが、Ｂ細胞、形質細胞、またはそれら両方の組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記対象が、がんに罹患しており、かつ前記がんを治療するために養子細胞療法を受けるところである、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

前記対象に対して養子細胞療法を実施することをさらに含み、前記養子細胞療法が、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体（ＣＡＲ／ＴＣＲ）を発現する有効量の細胞集団を前記対象に投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記養子細胞療法が、前記放射標識された抗体の投与の６、７、または８日後に実施される、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記養子細胞療法が、自己細胞療法、または同種細胞療法である、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

前記養子細胞療法が、遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞の投与を含み、前記遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞が、少なくとも１つのチェックポイント受容体および／または少なくとも１つのＴ細胞受容体を適切に発現し損なう、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

前記ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する前記細胞集団が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ－１、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＭＡＧＥＡ３、ＭＡＧＥＡ３／Ａ６、ＫＲＡＳ、ＣＬＬ１、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、ＥｐＣａｍ、ＧＤ２、ＧＰＣ３、ＧＰＡ７、ＰＳＣＡ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＲＯＲ１、メソテリン、ＣＤ３３／ＩＬ３Ｒａ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＤ３７、ＰＳＭＡ、糖脂質Ｆ７７、ＧＤ－２、ｇｐ１００、ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲ、ＦＲアルファ、ＣＤ２４、ＣＤ４４、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＣＡ－１２５、ＨＥ４、オーバル、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、ｕＰＡ、ＰＡＩ－１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、もしくはＵＬＢＰ６、またはそれらの組み合わせを標的化する、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

前記ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する前記細胞集団が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、またはそれらの組み合わせを標的化する、請求項１５に記載の方法。

【請求項21】

製造物品であって、
（ａ）ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、もしくはそれらの組み合わせに対する放射標識された抗体を含む、医薬組成物と、
（ｂ）前記医薬組成物を、対象に、前記対象の標的化免疫細胞の少なくとも５０％、および前記対象の幹細胞の２０％未満を枯渇させるのに有効な量で単回用量として投与するよう使用者に指示する標識と、を含むか、または前記抗体の量が、前記対象の標的化免疫細胞の少なくとも９０％、および前記対象の幹細胞の１０％未満を枯渇させるのに有効である、製造物品。

【請求項22】

前記放射標識された抗体が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５２、またはそれらの組み合わせに対するものである、請求項２１に記載の物品。

【請求項23】

前記放射標識された抗体が、リンパ系由来標的および骨髄系由来標的を含む二特異性抗体である、請求項２１に記載の物品。

【請求項24】

前記標的のうちの少なくとも１つが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、またはＣＤ５２を含む、請求項２３に記載の物品。

【請求項25】

前記リンパ系標的が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ９６、ＣＤ１２２、ＣＤ１５２、もしくはＣＤ１５４であるか、または前記骨髄系標的が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３３、もしくはＣＤ１１６である、請求項２３に記載の物品。

【請求項26】

前記抗体が、¹³¹Ｉで放射標識され、かつ１０ｍＣｉ～２００ｍＣｉの量で投与されるか、または前記抗体が、²²⁵Ａｃで放射標識され、かつ０．１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ（対象体重）の量で投与される、請求項２１に記載の物品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／８３８，６４６号に対する優先権の利益を主張し、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、幹細胞を標的化することなく、特定の系統の細胞を選択的に標的化および枯渇させる組成物、ならびにこれらの組成物を使用する、例えば養子細胞療法前の、一過性免疫枯渇のための方法に関する。

【背景技術】

【0003】

免疫枯渇は、幹細胞区画をそのまま残しながら、免疫系の細胞を一過性に減少させるプロセスである。免疫枯渇は、養子細胞療法の文脈において有用かつ必要なプロセスであり得、内因性宿主細胞は、自己細胞または同種細胞の移植前に最初に枯渇されなければならない。この現象は、骨髄移植の分野で確立されており、かつＣＡＲ－Ｔなどの他の養子細胞療法の有効性に対する広範な要件でもある。これらの養子移植された細胞は、操作されていない（血液がんの治療のための骨髄移植）か、または養子移植された細胞を受けている人の病原状態を改善するように操作されている（自己幹細胞移植前に自己反応性細胞を除去することによる自己免疫疾患の補正、またはがん治療のための操作されたＣＡＲ－Ｔ細胞）かのいずれかであり得る。幹細胞は、免疫系の骨髄系区画およびリンパ系区画の両方の新たな造血前駆細胞を継続的に生成するため、より分化した細胞の除去は一時的であり、これらの枯渇した細胞は、幹細胞に由来する発生期の成熟細胞によって最終的には置換される。免疫枯渇はまた、例えば、分化した自己反応性細胞が枯渇され、次いで機能性非自己反応性免疫細胞が健康な幹細胞から再増殖される自己免疫疾患の場合、養子細胞療法に続くことなく、潜在的に使用され得る。

【0004】

化学療法ベースの免疫枯渇
ＣＡＲ－Ｔなどの養子細胞療法方法の前に、患者を免疫枯渇（すなわち、リンパ球枯渇）させるために、細胞毒性が高い化学療法剤、特にシクロホスファミドおよびフルダラビンの組み合わせを使用することが一般的である。これらの薬剤は、リンパ系細胞数を減少させる。しかしながら、それらは毒性が高い。それらは、非標的化の様式で免疫系を枯渇させるだけでなく、他の正常な細胞および組織にも損傷を与え得る。すべての患者がそれらに耐容できるわけではない。さらに、特にＣＡＲ Ｔ細胞療法において、持続的な奏効率は、典型的には５０％未満である。多くの患者は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法を受けた後に最終的には再発し、さらなる治療的介入または幹細胞移植（例えば、骨髄移植）を必要とする。

【0005】

抗体ベースの免疫枯渇
抗体は、化学療法剤よりも大きな細胞標的化特異性を有する。したがって、免疫細胞特異的抗原に対する抗体は、免疫枯渇剤としての化学療法剤の潜在的な代替物として着目されている。ネイキッド抗体は、ある程度のレベルの細胞殺滅を達成することができる場合があるが、免疫細胞を枯渇させるためのより有効な様式は、放射性核種を抗体または抗体断片にコンジュゲートする形態の放射活性の強力な細胞毒性活性を利用することであろう。これは、細胞表面上で目的のタンパク質を発現する細胞に対する放射性核種の細胞殺滅能力を、効果的かつ特異的に標的化し得る。

【0006】

したがって、有効性を改善し得、既知の免疫枯渇レジメン、およびＣＡＲ－Ｔなどの養子細胞療法の毒性を低減し得、かつ／または現在の養子細胞療法プロトコルのある特定の副作用を低減し得る、代替的な方法および療法プロトコルが必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、標的化免疫枯渇および一過性免疫枯渇に有用な組成物、ならびに悪性および非悪性血液疾患の治療における、または養子細胞療法の投与前の、これらの組成物の使用方法を提供することによって、前述の問題に対する解決策を提供する。

【0008】

組成物は、細胞のある特定の血液学的系統に固有であるが、他の系統には固有ではない抗原（例えば、細胞表面マーカー）に対する抗体を含む。表面マーカーのこの差次的な発現を利用して、幹細胞などの他の免疫細胞に影響を与えないまま、特定の系統の細胞を選択的に枯渇させることができる。幹細胞を標的化することなく免疫細胞の別個のサブセットを枯渇させるために使用され得る例示的な表面マーカーには、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせのうちのいずれかが含まれる。

【0009】

したがって、本発明は、概して、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせのうちのいずれかに対する抗体を含む、組成物に関する。抗体は、放射標識、例えば、¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁸⁹Ｓｒ、¹⁵³Ｓｍ、³²Ｐ、²²⁵Ａｃ、²¹³Ｂｉ、²¹³Ｐｏ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、²¹³Ｂｉ、²²³Ｒａ、²²⁷Ｔｈ、¹⁴⁹Ｔｂ、¹³⁷Ｃｓ、²¹²Ｐｂ、および¹⁰³Ｐｄのうちのいずれかを含み得る。

【0010】

本発明はさらに、有効量の前述の組成物のいずれかを患者に投与することを含む、血液細胞のサブセットの一過性免疫枯渇のための方法に関する。免疫枯渇は、ＣＡＲ／ＴＣＲまたはＴＩＬを発現する細胞集団の投与などの養子細胞療法の前、後、または前と後の両方に提供され得る。ＣＡＲ／ＴＣＲまたはＴＩＬを発現する細胞集団は、自己細胞、別のヒト患者に由来する同種細胞、または異なる種の動物に由来する異種細胞であり得る。

【0011】

本発明のある特定の態様によれば、ＣＡＲ／ＴＣＲまたはＴＩＬを発現する細胞集団は、自己細胞の場合のように、白血球アフェレーシスにより単離され、投与のおよそ４週間前に形質導入および選択され得るか、またはいわゆる「既製」の同種ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の場合のように、健康なドナーから単離され、１人以上の患者のために、事前に調製してから凍結調製物などとして保存され得る。ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団は、抗原を認識するＣＡＲ／ＴＣＲを発現する活性化Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または樹状細胞集団を含み得る。樹状細胞は、抗原提示能力、ならびに腫瘍を直接殺滅する能力を有する。さらに、細胞集団は、様々な異なる血液細胞型に分化することができる多能性幹細胞集団であり得る。

【0012】

ある特定の態様によれば、放射標識は、¹³¹Ｉまたは²²⁵Ａｃであり得、¹³¹Ｉで標識された抗体の有効量は、２５ｍＣｉ～２００ｍＣｉ（例えば、５０ｍＣｉ、１００ｍＣｉ、または１５０ｍＣｉ）であり得、²²⁵Ａｃで標識された抗体の有効量は、０．１μＣｉ／ｋｇ（対象体重）～５．０μＣｉ／ｋｇ（対象体重）であり得る。

【0013】

これらの方法は、悪性および非悪性血液疾患の治療転帰を改善し得、かつ／または神経毒性、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、低ガンマグロブリン血症、血球減少症、毛細管漏出症候群（ＣＬＳ）、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）、およびそれらの組み合わせなどの養子細胞療法に関連する副作用を低減し得る。

【0014】

本発明の様々な態様は、添付の特許請求の範囲に具体的に概説される組み合わせによって実現および達成されるであろう。前述の概略的な説明ならびに後述の本発明の詳細な説明および実施例は、本発明の様々な態様を例証するために提供され、説明される実施形態のいずれをも限定するものとして見なされるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1A】白血球アフェレーシス、標準化学療法剤を使用した細胞切除、ＣＡＲ／ＴＣＲ Ｔ細胞注入、および任意選択の造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）のための準備における骨髄コンディショニングの可能性を含む、先行技術養子細胞療法プロトコルを示す。

【図1B】標準細胞切除剤の代わりに、またはそれに加えて、放射標識された抗体の投与を含む、本発明の自己または同種養子細胞療法を示す。

【図1C】ＨＳＣＴ前の骨髄コンディショニング剤としての放射標識された抗体の投与を含む、本発明の自己または同種の養子細胞療法を示す。

【図1D】標準細胞切除剤の代わりに、またはそれに加えて、放射標識された抗体の投与と、ＨＳＣＴ前の骨髄コンディショニング剤としての放射標識された抗体の投与と、を含む、本発明の自己または同種養子細胞療法を示す。

【図1E】本開示の発明によるリンパ球枯渇プロトコルの例示的なクリアランスおよび投与時間を実証する薬物動態データを示す。

【図2】 ¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５（すなわち、¹³¹Ｉ－ＢＣ８）を用いた投与後の絶対好中球数の変化中央値を示す。

【図3A-3E】サロゲート抗ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１を使用するマウスモデルにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞分析の結果を示す。

【図3F-3H】サロゲート抗ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１を使用するマウスモデルにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞分析の結果を示す。

【図4A】マウスにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞集団の免疫表現型検査からの結果を示す。

【図4B】マウスにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞集団の免疫表現型検査からの結果を示す。

【図4C】マウスにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞集団の免疫表現型検査からの結果を示す。

【図4D】マウスにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞集団の免疫表現型検査からの結果を示す。

【図4E】マウスにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化免疫枯渇後の免疫細胞集団の免疫表現型検査からの結果を示す。

【図5A】脾臓Ｔ－ｒｅｇ細胞の枯渇を示す。

【図5B】骨髄系由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の枯渇を示す。

【図5C】マウスにおける¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体を用いた標的化免疫枯渇後の骨髄ＨＳＣの保存を示す。

【図6】Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する患者に対する自己抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の選択された公開治験を示す。

【図7】特定の免疫細胞型における免疫枯渇応答を調査する低用量¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法（サロゲート３０Ｆ１１）のマウスにおける効果の前臨床研究の概略図を示す。対照には、化学療法によるリンパ球枯渇治療、シクロホスファミド（Ｃｙ）またはシクロホスファミド／フルダラビン（Ｆｌｕ／Ｃｙ）、およびリンパ球枯渇治療なしが含まれる。

【図8】マウスにおける抗ＣＤ４５放射性免疫療法介在性コンディショニング／免疫枯渇後の養子Ｔ細胞移植の前臨床モデルを示す。このモデルでは、Ｅ．Ｇ７リンパ腫腫瘍担持マウスは、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の養子細胞移植の前に、単一選択用量の¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法によってコンディショニングされ、移植された細胞の生着およびその結果として生じる抗腫瘍応答についてモニタリングされる。

【図9】ヒト患者におけるリンパ球枯渇を実証する低用量¹³¹Ｉ－ＢＣ８研究からの臨床データを示す。

【図10】ヒト患者における¹³¹Ｉ－ＢＣ８の１００ｍＣｉ注入のクリアランス速度（２５ｃＧｙ未満）を実証する薬物動態データを示す。

【図11】 ¹³¹Ｉ－ＢＣ８の１００ｍＣｉ注入の投与後のヒト患者の脾臓に対する¹³¹Ｉ－ＢＣ８の累積線量を実証する薬物動態データを示す。

【図12】 ¹³¹Ｉ－ＢＣ８の１００ｍＣｉ注入の投与後のヒト患者からの¹³¹Ｉ－ＢＣ８の血液クリアランスを示す。

【図13A】Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ腫瘍が生着したマウスについて、４日目のＯＴ Ｉ ＯＶＡ反応性Ｔ細胞を用いた養子細胞療法の前の¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５標的化免疫枯渇からの結果を示す。

【図13B】Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ腫瘍が生着したマウスについて、４日目のＯＴ Ｉ ＯＶＡ反応性Ｔ細胞を用いた養子細胞療法の前の¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５標的化免疫枯渇からの結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本発明は、対象を免疫枯渇させるための放射標識された抗体ベースの方法、ならびに関連する組成物および製造物品を提供する。これらの方法がある特定の細胞ベースの療法に先行する場合、本方法は、有害効果を最小限に抑えながら、細胞ベースの療法の転帰を高めることができる。

【0017】

定義
本出願では、ある特定の用語が使用され、これらは以下に記載される意味を有する。

【0018】

単数形「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」等には、文脈上別途明確に指示されない限り、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「ａｎ」抗体への言及には、単一抗体および複数の異なる抗体の両方が含まれる。

【0019】

数字表示、例えば、温度、時間、量、および濃度の前に使用される場合の「約」という用語は、±１０％、±５％、または±１％変動し得る近似値を示す。

【0020】

本明細書で使用される場合、抗体に関する「投与する」は、抗体送達に適した任意の既知の方法を介して抗体を対象の体に送達することを意味する。特定の投与様式には、静脈内、経皮、皮下、腹腔内、髄腔内、および腫瘍内投与が含まれるが、これらに限定されない。抗体の例示的な投与方法は、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／１８７５１４号に実質的に記載されるとおりであり得る。

【0021】

さらに、本発明では、抗体は、１つ以上の日常的に使用される薬学的に許容される担体を使用して製剤化することができる。そのような担体は、当業者に周知である。例えば、注射可能な薬物送達系には、溶液、懸濁液、ゲル、ミクロスフェア、および高分子注射剤が含まれ、可溶性改変剤（例えば、エタノール、プロピレングリコール、およびスクロース）およびポリマー（例えば、ポリカプリラクトンおよびＰＬＧＡ）などの賦形剤を含むことができる。

【0022】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語には、（ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、かつ抗原を認識する、免疫グロブリン分子、（ｂ）ポリクローナルおよびモノクローナル免疫グロブリン分子、（ｃ）それらの一価および二価の断片（例えば、Ｆａｂ、ジ－Ｆａｂ）、ならびに（ｄ）それらの二重特異性形態が含まれるが、これらに限定されない。免疫グロブリン分子は、一般的に既知のクラスのいずれかに由来し得、これらのクラスには、ＩｇＡ、分泌ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭが含まれるが、これらに限定されない。ＩｇＧサブクラスもまた当業者に周知であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が含まれるが、これらに限定されない。抗体は、天然および非天然起源（例えば、ＩｇＧ－Ｆｃ－サイレント）の両方であり得る。さらに、抗体には、キメラ抗体、完全合成抗体、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一および二重ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、ならびにそれらの断片が含まれる。抗体は、ヒト、ヒト化、または非ヒトであり得る。

【0023】

「モノクローナル抗体」は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一結合特異性および親和性を示すか、または多重特異性モノクローナル抗体の場合、２つ以上の別個のエピトープに対する結合特異性を示す。したがって、「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去などの、可能性のある周知の変化を除いて、各重鎖および各軽鎖に単一アミノ酸組成物を有する抗体集団を指す。モノクローナル抗体は、抗体集団内に異種グリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性もしくは多重特異性であり得るか、または一価、二価、もしくは多価であり得る。

【0024】

本明細書で使用される場合、「抗ＣＤＸＸ抗体」は、ＣＤＸＸの任意の利用可能なエピトープに特異的に結合する抗体であり、ＸＸは、２、３、５、１１ａ、１１ｂ、１１ｃ、１４、１８、１９、２０、２８、３３、３８、４５ＲＡ、４９ａ、５２、９６、１１６、１２２、１３２、１５２、１５４、２４４、２７２、または３０５（すなわち、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、またはＣＤ３０５）であり得る。ＣＤＸＸはまた、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、またはＢ７－ＨＡを指す場合もある。ある特定の好ましい態様によれば、ＸＸは、１９、２０、３３、３８、４５、または５２（すなわち、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ５２）であり得る。

【0025】

抗ＣＤＸＸ抗体は、２つの異なるエピトープに結合する二重特異性抗体であり得、エピトープは、少なくともＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ５２のうちのいずれか１つと、別の関連するエピトープとであり得るか、または単一の細胞表面標的の２つの異なるエピトープ（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、またはＣＤ５２のうちのいずれか１つの２つの異なるエピトープ）であり得る。二重特異性抗体は、リンパ系由来細胞を標的化するが幹細胞を標的化しない抗体、および／または骨髄系由来細胞を標的化するが幹細胞を標的化しない抗体であり得る。リンパ系標的は、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ９６、ＣＤ１２２、ＣＤ１５２、もしくはＣＤ１５４であり得、かつ／または骨髄系標的は、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３３、もしくはＣＤ１１６であり得る。二重特異性抗体は、組み換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または抗体断片であり得る。

【0026】

「特異的結合」という用語は、少なくとも１０⁶Ｍ^-1、通常は約１０⁶Ｍ^-1～約１０⁸Ｍ^-1の高い結合親和性を有する特性を指す。

【0027】

本明細書で使用される場合、「がん」には、固形がん（例えば、腫瘍）および血液悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。

【0028】

対象の免疫細胞に関して本明細書で使用される場合、「枯渇させること」または「標的化枯渇」は、本発明の態様による特定の抗体の投与によって、対象の免疫細胞（すなわち、標的化免疫細胞）の少なくとも１つのタイプの集団を減少させることを意味するものとする。例えば、標的化免疫細胞は、少なくともＢ細胞、例えば、プロＢ細胞、プレＢ細胞、および形質細胞（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０抗原を含む細胞）；骨髄系由来細胞、例えば、骨髄系共通前駆細胞、骨髄系樹状細胞、マスト細胞、顆粒球マクロファージ前駆細胞、単球、マクロファージ、骨髄芽球、好中球、好酸球、および好塩基球（例えば、ＣＤ３３）；ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、形質細胞、Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、樹状細胞、骨髄系共通前駆細胞、顆粒球マクロファージ前駆細胞、骨髄芽球、好塩基球、単球、巨核球赤血球前駆細胞、赤血球、巨核球（例えば、ＣＤ３８）；リンパ系前駆細胞、ダブルネガティブ（ＣＤ４－ ＣＤ８－）Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球／単球前駆体、好中球、活性化単球／マクロファージ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ）；成熟ＢおよびＴリンパ球、単球、ＮＫ細胞、ならびに樹状細胞（例えば、ＣＤ５２）を含み得る。好ましい態様によれば、対象の免疫細胞を枯渇させることは、造血幹細胞（「ＨＳＣ」、すなわち、多能性造血幹細胞、また血球芽球とも称される）などの幹細胞集団も減少させることなく、免疫細胞集団を低下させることを意味する。

【0029】

本開示の発明のある特定の好ましい態様によれば、対象の免疫細胞の減少または枯渇は、対象の末梢血中の特定の免疫細胞集団を測定することによって決定される。例えば、対象の末梢血リンパ球の少なくとも１つのタイプの集団が９９％以下減少する場合、対象の末梢血リンパ球集団は枯渇されている。例えば、対象の末梢血Ｔ細胞レベルが５０％低下し、対象の末梢血ＮＫ細胞レベルが４０％低下し、かつ／または対象の末梢血Ｂ細胞レベルが３０％低下する場合、対象のリンパ球は枯渇されている。この例では、好中球などの別の免疫細胞型のレベルが低下していなくても、対象のリンパ球は枯渇されている。ある特定の態様によれば、対象のリンパ球の枯渇は、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の末梢血リンパ球集団の減少によって反映される。ある特定の態様によれば、対象のＨＳＣ集団は、２０％以下、例えば１０％以下枯渇されている。

【0030】

末梢血免疫細胞集団を測定する方法は、定例である。それらは、例えば、特定の細胞表面マーカーに対して向けられた蛍光抗体を用いた標識に基づいて、特定の細胞型の数を決定するための全血試料におけるフローサイトメトリーを含む。例えば、リンパ球数は、ＣＤ４５、ＣＤ４、またはＣＤ８などのマーカーを使用して決定され得、好中球数は、Ｌｙ６Ｇなどのマーカーを使用して決定され得る。ＨＳＣ集団を測定するための方法は、定例であり、例えば、フローサイトメトリー、ならびにＬｉｎ、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、およびＨＬＡ ＤＲなどの細胞表面マーカー（すなわち、幹細胞を認識するマーカー、例えばＣＤ３４、および幹細胞を特異的に除外するマーカー、例えば、ＣＤ４５ＲＡ）に対して向けられた蛍光抗体の使用を含む。

【0031】

本明細書で使用される場合、放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体の量は、投与された場合に、対象の標的化免疫細胞が、例えば少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％枯渇される場合、「有効」である。放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体の量は、投与された場合に、対象の標的化免疫細胞が、対象の幹細胞の枯渇なしに枯渇されるか、または対象の幹細胞の２０％または１０％未満の減少を伴って枯渇される場合、「有効」である。

【0032】

ある特定の態様によれば、放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体が¹³¹Ｉで標識されている場合、有効量は、例えば、３００ｍＣｉ未満である（すなわち、対象に投与される¹³¹Ｉ－抗ＣＤＸＸの量が、３００ｍＣｉ未満の全身放射線量を送達する）。ある特定の態様によれば、抗体が¹³¹Ｉ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、２５０ｍＣｉ未満、２００ｍＣｉ未満、１５０ｍＣｉ未満、１００ｍＣｉ未満、５０ｍＣｉ未満、４０ｍＣｉ未満、３０ｍＣｉ未満、２０ｍＣｉ未満、または１０ｍＣｉ未満である。ある特定の態様によれば、抗体が¹³¹Ｉ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、１ｍＣｉ～１０ｍＣｉ、１ｍＣｉ～２００ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～２０ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～３０ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～４０ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～５０ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～１５０ｍＣｉ、１０ｍＣｉ～２００ｍＣｉ、２０ｍＣｉ～３０ｍＣｉ、３０ｍＣｉ～４０ｍＣｉ、４０ｍＣｉ～５０ｍＣｉ、５０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、５０ｍＣｉ～１５０ｍＣｉ、５０ｍＣｉ～２００ｍＣｉ、６０ｍＣｉ～１４０ｍＣｉ、７０ｍＣｉ～１３０ｍＣｉ、８０ｍＣｉ～１２０ｍＣｉ、９０ｍＣｉ～１１０ｍＣｉ、１００ｍＣｉ～１５０ｍＣｉ、１５０ｍＣｉ～２００ｍＣｉ、または２００ｍＣｉ～２５０ｍＣｉである。ある特定の態様によれば、抗体が¹³¹Ｉ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、１０ｍＣｉ～１２０ｍＣｉ、２０ｍＣｉ～１１０ｍＣｉ、２５ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、３０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、４０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、または７５ｍＣｉ～１００ｍＣｉである。ある特定の態様によれば、抗体が¹³¹Ｉ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、１ｍＣｉ、１０ｍＣｉ、２０ｍＣｉ、３０ｍＣｉ、４０ｍＣｉ、５０ｍＣｉ、６０ｍＣｉ、７０ｍＣｉ、８０ｍＣｉ、９０ｍＣｉ、１００ｍＣｉ、１１０ｍＣｉ、１２０ｍＣｉ、１３０ｍＣｉ、１４０ｍＣｉ、１５０ｍＣｉ、または２００ｍＣｉである。

【0033】

ある特定の態様によれば、放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体が²²⁵Ａｃで標識されている場合、有効量は、例えば、５．０μＣｉ／ｋｇ未満である（すなわち、対象に投与される²²⁵Ａｃ－抗ＣＤＸＸの量が、対象の体重１キログラム当たり５．０μＣｉ未満の放射線量を送達する）。ある特定の態様によれば、抗体が²²⁵Ａｃ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、４．５μＣｉ／ｋｇ、４．０μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ、２．０μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ、０．１μＣｉ／ｋｇ、または０．０５μＣｉ／ｋｇ未満である。ある特定の態様によれば、抗体が²²⁵Ａｃ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、０．０５μＣｉ／ｋｇ～０．１μＣｉ／ｋｇ、０．１μＣｉ／ｋｇ～０．２μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ～０．３μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ～０．４μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ～０．５μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ～０．６μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ～０．７μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ～０．８μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ～０．９μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ～２．０μＣｉ／ｋｇ、２．０μＣｉ／ｋｇ～２．５μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ～３．５μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ～４．０μＣｉ／ｋｇ、４．０μＣｉ／ｋｇ～４．５μＣｉ／ｋｇ、または４．５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇである。ある特定の態様によれば、抗体が²²⁵Ａｃ－抗ＣＤＸＸである場合、有効量は、０．０５μＣｉ／ｋｇ、０．１μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ、２．０μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ、４．０μＣｉ／ｋｇ、または４．５μＣｉ／ｋｇである。

【0034】

放射性同位元素で標識された抗体では、対象に投与される組成物の大部分は、典型的には、標識されていない抗体からなり、標識された抗体は少数である。標識されていない抗体に対する標識された抗体の比は、既知の方法を使用して調節することができる。したがって、本発明のある特定の態様によれば、放射標識された抗体は、標識された画分および標識されていない画分を含み得る。放射標識された抗体は、単回用量として提供され得、単回用量の放射標識された抗体は、標識：非標識が０．１：１０～１：１の量で抗体を含み得る。総タンパク質量は、最大６０ｍｇ、例えば５ｍｇ～４５ｍｇであり得るか、または総タンパク質量は、０．２ｍｇ／ｋｇ（患者体重）～０．６ｍｇ／ｋｇ（患者体重）であり得る。

【0035】

養子細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、もしくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞の投与を含み得るか、または腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を含み得る。ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団は、抗原を認識するＣＡＲ／ＴＣＲを発現する活性化Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または樹状細胞集団を含み得る。樹状細胞は、抗原提示能力、ならびに腫瘍を直接殺滅する能力を有する。ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団は、遺伝子編集された細胞集団を含み得る。

【0036】

本明細書で使用される場合、「遺伝子編集された」ＣＡＲ Ｔ細胞という用語は、「遺伝子操作された」ＣＡＲ Ｔ細胞および「操作された」ＣＡＲ Ｔ細胞という用語と同義である。チェックポイント受容体（例えば、ＰＤ１、Ｌａｇ３、またはＴＩＭ３）を「適切に発現し損なう」遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞は、全長の機能性チェックポイント受容体を発現しない。例えば、ＰＤ１を適切に発現し損なう遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞は、（ｉ）細胞のＰＤ１遺伝子が破壊されているため、または（ｉｉ）細胞のＰＤ１遺伝子が、完全にもしくは部分的にでも機能性のＰＤ１産物を産生しないように他の方法で改変されているため、ＰＤ１を適切に発現し損なう場合があるが、原因はこれらに限定されない。換言すれば、ある特定の態様によれば、ＰＤ１を適切に発現し損なう遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞は、細胞のＰＤ１遺伝子がＰＤ１発現を減少させるように改変されているため、ＰＤ１を適切に発現し損なう場合がある。同様に、Ｔ細胞受容体を「適切に発現し損なう」遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞は、全長の機能性Ｔ細胞受容体を発現しない。

【0037】

ある特定の態様によれば、機能性内因性Ｔ細胞受容体は、外因的に形質導入されたＣＡＲまたは組み換えＴＣＲの天然ＴＣＲ座位への「ノックイン」による編集によって置換される。遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞には、以下：（ｉ）ＰＤ１を適切に発現し損なうが、他のすべてのチェックポイント受容体およびＴ細胞受容体を適切に発現する、同種遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞、（ｉｉ）特定のＴ細胞受容体を適切に発現し損なうが、すべてのチェックポイント受容体および他のすべてのＴ細胞受容体を適切に発現する、同種遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞、ならびに（ｉｉｉ）ＰＤ１を適切に発現し損ない、かつ特定のＴ細胞受容体を適切に発現し損なうが、他のすべてのチェックポイント受容体および他のすべてのＴ細胞受容体を適切に発現する、同種遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0038】

同種ユニバーサルＣＡＲ Ｔ細胞を生成するためのＴ細胞遺伝子編集の例には、Ｅｙｑｕｅｍおよび共同研究者らの研究（Ｅｙｑｕｅｍ，ｅｔ．ａｌ．，２０１７，Ｎａｔｕｒｅ．５４３：１１３－１１７）が含まれる。その研究では、内因性Ｔ細胞受容体アルファ定常座位（ＴＲＡＣ）は、組み換えＣＡＲ遺伝子構築物によって効果的に置換された。本方法では、組み換えＣＡＲは、細胞の天然ＴＣＲ調節シグナルの制御下に置かれた。この同じ戦略によって、ＣＡＲまたは組み換えＴＣＲは、Ｔ細胞受容体ベータ定常遺伝子座（ＴＲＢＣ）またはベータ－２マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）ＭＨＣ－Ｉ関連遺伝子座へのノックインによって効果的に挿入され得、これはすべてのＴ細胞で発現されることが知られている。別の例には、Ｒｅｎおよび共同研究者らの研究（Ｒｅｎ，ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２３：２２５５－２２６６）が含まれる。チェックポイント受容体が免疫抑制性であり、外因性自己または同種ＣＡＲ Ｔ細胞の刺激を鈍化させ得ることを認識することにより、この群は、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９技術を利用して内因性ＴＣＲαおよびβ座位（ＴＲＡＣおよびＴＲＢＣ）ならびにＢ２Ｍ遺伝子を破壊し、また一方では内因性ＰＤ１遺伝子をサイレンシングした。このアプローチでは、操作された細胞は移植片対宿主病を誘発しなかったが、免疫チェックポイント受容体の抑制に抵抗した。

【0039】

血液がんとしても知られる「血液悪性腫瘍」または「悪性血液疾患」は、骨髄または免疫系の他の細胞などの血液形成組織において発生するがんである。血液悪性腫瘍には、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性混合系統白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、および大顆粒リンパ球性白血病）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、原発性骨髄線維症、および慢性骨髄性白血病）、リンパ腫、多発性骨髄腫、ＭＧＵＳ、および類似の障害、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、リンパ球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、および他のＢ細胞悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。

【0040】

「固形がん」には、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭部または頸部のがん、皮膚または眼球内の悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、前立腺がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、卵管のがん、子宮内膜がん、子宮頸のがん、膣のがん、外陰部のがん、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟部組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児腫瘍、膀胱のがん、腎臓または尿管のがん、腎盂のがん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、アスベストによって誘発されるものを含む環境誘発性がんが含まれるが、これらに限定されない。

【0041】

「非悪性血液疾患」または「非がん性障害」には、ヘモグロビン異常症（例えば、ＳＣＤおよびβ－サラセミア）、先天性免疫不全症（例えば、ＳＣＩＤおよびファンコーニ貧血）、およびウイルス感染症（例えば、ＨＩＶ感染症）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の態様によれば、障害は、ＳＣＤであり、療法は、遺伝子編集されたβ－グロビン造血幹細胞療法である。ある特定の態様によれば、障害は、ＳＣＩＤであり、療法は、遺伝子編集された造血幹細胞療法であり、編集された遺伝子は、共通ガンマ鎖（γｃ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）遺伝子、および／またはヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）遺伝子である。幹細胞療法は、例えば、同種または自己であり得る。

【0042】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語には、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ、ラット、およびマウスなどの哺乳動物が含まれるが、これらに限定されない。対象がヒトである場合、対象は、任意の年齢であり得る。例えば、対象は、６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、８０歳以上、８５歳以上、または９０歳以上であり得る。あるいは、対象は、５０歳以下、４５歳以下、４０歳以下、３５歳以下、３０歳以下、２５歳以下、または２０歳以下であり得る。がんに罹患したヒト対象の場合、対象は、新たに診断され得るか、または再発および／もしくは難治性であり得るか、または寛解期にあり得る。

【0043】

本明細書で使用される場合、放射標識された抗体を対象に投与した後、かつ対象に対して養子細胞療法を実施する前の「適切な期間」は、投与された抗体が対象のリンパ球を枯渇させるのに十分な、かつ／または対象のリンパ球が枯渇したままである期間である。ある特定の態様によれば、適切な期間は、１０日未満、９日未満、８日未満、７日未満、６日未満、５日未満、４日未満、または３日未満である。ある特定の態様によれば、適切な期間は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、または１５日超である。

【0044】

本明細書で使用される場合、「放射性同位元素」は、アルファ放出同位元素、ベータ放出同位元素、および／またはガンマ放出同位元素であり得る。放射性同位元素の例には、以下：¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁸⁹Ｓｒ、¹⁵³Ｓｍ、³²Ｐ、²²⁵Ａｃ、²¹³Ｂｉ、²¹³Ｐｏ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、²¹³Ｂｉ、²²³Ｒａ、²²⁷Ｔｈ、¹⁴⁹Ｔｂ、¹³⁷Ｃｓ、²¹²Ｐｂ、および¹⁰³Ｐｄが含まれる。放射性同位元素を抗体に付着させる（すなわち、放射性同位元素を用いて抗体を「標識する」）ための方法は、周知である。これらの方法のいくつかは、例えば、国際特許出願公開第２０１７／１５５９３７号に記載されている。

【0045】

本明細書で使用される場合、悪性または非悪性血液疾患に罹患した対象を「治療すること」には、（ｉ）疾患の進行を遅延、停止、もしくは逆転させること、（ｉｉ）疾患の症状の進行を遅延、停止、もしくは逆転させること、および／または（ｉｉｉ）疾患の再発の可能性を低減することが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の態様によれば、がんに罹患した対象を治療することは、（ｉ）がんの進行を、理想的には、がんが排除される時点まで、逆転させること、および／または（ｉｉ）がんの症状の進行を、理想的には、症状が排除される時点まで、逆転させること、および／または（ｉｉｉ）再発の可能性を低減もしくは排除すること（すなわち、コンソリデーション、これは、理想的には、あらゆる残存するがん細胞の破壊をもたらす）を意味する。

【0046】

本出願全体を通して、様々な刊行物が引用されている。これらの刊行物の開示は、本発明が関連する先行技術をより完全に説明するために、本出願への参照により本明細書に組み込まれる。別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を本明細書に記載の実施または試験で使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。

【0047】

本発明の態様
標的化免疫枯渇
本発明は、免疫細胞の特異的標的化サブセットを一過性に免疫枯渇させるための予想外に優れた方法を提供することにより、当該技術分野におけるまだ満たされていないニーズを解決するものである。造血系の細胞は、多くの場合、細胞のある特定の系統上に現れるが、他の系統上には現れない、特定の表面マーカーを発現する。表面マーカーのこの差次的な発現を利用して、他の免疫細胞に影響を与えないまま、特定の系統の細胞を選択的に枯渇させることができる。幹細胞を標的化することなく免疫細胞の別個のサブセットを効果的に枯渇させることができる、いくつかの潜在的に有用な表面マーカーには、少なくとも以下：ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ５２が含まれる。

【0048】

ＣＤ１９は、Ｂ細胞分化の早期に発現され、かつＢ細胞が最終的に分化することを誘因されるまで発現され続ける（すなわち、最初にプロＢ細胞上で発現され、形質細胞への発生を通して発現される）、膜受容体である。ＣＤ１９は、Ｂリンパ球の細胞表面上に見出されるタンパク質複合体の一部である。タンパク質複合体には、ＣＤ１９、ＣＤ２１（補体受容体、２型）、ＣＤ８１（ＴＡＰＡ－１）、およびＣＤ２２５（Ｌｅｕ－１３）が含まれる。ＣＤ１９は、Ｂ細胞における膜貫通シグナルの重要な調節因子である。ＣＤ１９の細胞表面密度の増加または減少は、Ｂ細胞の発生および機能に影響を与え、自己免疫または低ガンマグロブリン血症などの疾患をもたらす。ＣＤ１９に対する例示的な市販の抗体には、ブリナツムマブが含まれる。

【0049】

ＣＤ２０は、Ｂリンパ球の表面上に発現される膜貫通タンパク質である。これは、プレＢ細胞期の早期から、ＣＤ２０発現が消失する段階である形質細胞への最終分化まで、Ｂリンパ球の発生中に発現される。ＣＤ２０はまた、悪性Ｂ細胞上でも発現される。特に、ＣＤ２０は、９０％超のＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞、および９５％超のＢ型慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）細胞上で発現される。機能は不明であるが、これは、Ｂ細胞活性化、Ｂ細胞増殖の調節、および膜貫通カルシウム流束に関与すると考えられている。ＣＤ２０に対する例示的な市販の抗体には、リツキシマブが含まれる。

【0050】

ＣＤ３３は、シアル酸依存性細胞接着分子として機能し得るＩ型膜貫通受容体糖タンパク質である。早期骨髄系前駆細胞、骨髄系樹状細胞、マスト細胞、顆粒球マクロファージ前駆細胞、単球、マクロファージ、骨髄芽球、好中球、好酸球、および好塩基球上で発現され、ＣＤ３３は幹細胞上で発現されない。ＣＤ３３に対する例示的な市販の抗体には、リンツズマブ（ＨｕＭ１９５）、ゲムツズマブ、またはバダスツキシマブが含まれる。

【0051】

ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有するＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ⁺の環状ＡＤＰリボース（ｃＡＤＰＲ）への変換、およびｃＡＤＰＲのＡＤＰリボースへの変換を触媒することができる二官能性細胞外酵素であり、したがって細胞外ＮＡＤ⁺濃度を調節する。さらに、ｃＡＤＰＲは、細胞内Ｃａ²⁺動員のための第２のメッセンジャーであることが示されている。したがって、ＣＤ３８は、細胞内Ｃａ²⁺流束の調節に必要不可欠な構成要素であり得る。ＣＤ３８は、前立腺の腺上皮、膵臓の島細胞、耳下腺を含む腺の導管上皮、気管支上皮細胞、精巣および卵巣の細胞、ならびに直腸結腸腺がんの腫瘍上皮を含む、異なる起源の上皮／内皮細胞について記載されている。ＣＤ３８に対する例示的な市販の抗体には、ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、またはＳＡＲ６５０９８４が含まれる。

【0052】

ＣＤ４５は、幹細胞を含む造血系の細胞上でのみ発現されるタンパク質である。１３１ヨウ素（¹³¹Ｉ）にコンジュゲートされた汎ＣＤ４５抗体は、多くの臨床治験において骨髄移植前の造血細胞の完全破壊のために既に利用されている。さらに、汎ＣＤ４５抗体は、低用量で使用される場合、免疫枯渇のための良好な候補として企図されており、その結果、より高いレベルのＣＤ４５発現を有するより分化した細胞が優先的に枯渇される。ＣＤ４５ＲＯ（汎特異的）、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢを含む、ＣＤ４５の複数のアイソフォームが存在する。理想的には、ＣＤ４５標的化戦略は、ＣＤ４５ＲＡなどの幹細胞上に発現されないＣＤ４５のアイソフォームを使用する。したがって、放射標識されたＣＤ４５ＲＡ抗体は、より分化した免疫細胞を枯渇させるが、幹細胞には影響を及ぼさない。

【0053】

ＣＤ５２は、成熟リンパ球上に見出される膜糖タンパク質であるが、これらのリンパ球の由来となる幹細胞上には見出されない。タンパク質は、９５％超の末梢血リンパ球上で発現され、Ｂリンパ球よりもＴリンパ球上でより高い密度で見出される。ＣＤ５２に対する例示的な市販の抗体には、アレムツズマブ（Ｌｅｍｔｒａｄａ、Ｃａｍｐａｔｈ）が含まれる。

【0054】

これらの標的、およびそれらが枯渇し得る細胞は、表１に列挙される（すなわち、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ５２）。本発明の様々な態様で有用であり得る追加の標的、およびそれらが枯渇し得る細胞は、表２に列挙される（すなわち、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１受容体、およびＢ７－ＨＡ）。

【0055】

さらに、標的の組み合わせを使用することにより、治療に有用な様式で複数の細胞型の合理的な枯渇も可能となり得る。例えば、一方のアームがリンパ系マーカーに結合し、他方が骨髄系マーカーに結合し、そのいずれも幹細胞上に存在しない、二重特異性抗体の生成は、理想的な免疫枯渇標的であろう。そのような潜在的な組み合わせ戦略には、ＣＤ３およびＣＤ１１ｃの二重特異性標的化が含まれ得る。ＣＤ３の標的化によりＴ細胞を除去し、一方ＣＤ１１ｃの標的化により単球および骨髄系樹状細胞を含む多数の骨髄系細胞を枯渇させ、これらのマーカーのいずれも幹細胞上に発現されないため、より分化した免疫細胞の一過性枯渇、および幹細胞による造血系の最終的な再増殖をもたらす。サブセットまたはすべてのリンパ系細胞の他の潜在的マーカーには、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ９６、ＣＤ１２２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４が含まれる。サブセットまたはすべての骨髄系細胞の潜在的マーカーには、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３３、ＣＤ１１６が含まれる。列挙されたリンパ系マーカーまたは骨髄系マーカーの任意の組み合わせは、潜在的に、所望の免疫細胞サブセットの合理的な枯渇のために組み合わされ得る。

【0056】

そのような細胞表面マーカーに対する放射標識された抗体を用いた治療は、細胞表面上で目的のタンパク質を発現する細胞に対する放射性核種の細胞殺滅能力を特異的に標的化するための有効な手段を提供する。

【0057】

したがって、本発明は、放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体、例えば、放射標識された抗ＣＤ１９、もしくは抗ＣＤ２０、もしくは抗ＣＤ３３、もしくは抗ＣＤ３８、もしくは抗ＣＤ４５ＲＡ、もしくは抗ＣＤ５２抗体、またはそれらの組み合わせを用いる。

【表1】

【表2】

【0058】

本発明は、表２に列挙されるものなどの放射標識された抗体をさらに提供し、これらには、放射標識された抗ＣＤ２、もしくは抗ＣＤ５、もしくは抗ＣＤ１１ａ、もしくは抗ＣＤ１８、もしくは抗ＣＤ４９ａ、もしくは抗ＣＤ１２２、もしくは抗ＣＤ１３２、もしくは抗ＣＤ２４４、もしくは抗ＣＤ２７２、もしくは抗ＣＤ３０５、もしくは抗ＣＬＡ、もしくは抗ＩＬ－２１受容体、もしくは抗Ｂ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせなどの放射標識された抗体が含まれる。

【0059】

本発明は、放射標識された抗ＣＤ２、もしくは抗ＣＤ３、もしくは抗ＣＤ１１ｂ、もしくは抗ＣＤ１１ｃ、もしくは抗ＣＤ１４、もしくは抗ＣＤ２８、もしくは抗ＣＤ９６、もしくは抗ＣＤ１１６、もしくは抗ＣＤ１２２、もしくは抗ＣＤ１５２、もしくは抗ＣＤ１５４抗体、またはそれらの組み合わせなどのリンパ系細胞または骨髄系細胞を特異的に標的化する放射標識された抗体をまたさらに提供する。

【0060】

この抗体は、驚くほど低用量のタンパク質および放射線で対象を免疫枯渇させることができる。したがって、このアプローチは、幹細胞に影響を与えることなく特定の免疫細胞集団を標的化するため、化学療法剤またはビーム放射線のようなより特異性の低い薬剤によって引き起こされるある特定の有害効果を回避する。さらに、抗体を標識するために選択される本発明の放射性同位元素は、周囲組織への有害効果を最小限に抑えながら、それらの特定の免疫細胞集団の標的化殺滅を提供する。

【0061】

自己免疫疾患のための標的化免疫枯渇
幹細胞は、免疫系の骨髄系区画およびリンパ系区画の両方の新たな造血前駆細胞を継続的に生成するため、より分化した細胞の除去は一時的であり、これらの枯渇した細胞は、幹細胞に由来する発生期の成熟細胞によって最終的には置換される。したがって、免疫枯渇はまた、分化した自己反応性細胞が枯渇され、機能性非自己反応性免疫細胞が健康な幹細胞から再増殖される自己免疫疾患の場合にも使用され得る。

【0062】

したがって、本発明はまた、放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体、例えば、放射標識された抗ＣＤ１９、もしくは抗ＣＤ２０、もしくは抗ＣＤ３３、もしくは抗ＣＤ３８、もしくは抗ＣＤ４５ＲＡ、もしくは抗ＣＤ５２抗体、またはそれらの組み合わせ、あるいはリンパ系マーカーおよび骨髄系マーカーを認識した放射標識された二重特異性抗体を投与して、自己免疫疾患に罹患している対象を免疫枯渇することによって、対象を免疫枯渇するための組成物および方法に関する。さらに、本発明は、自己免疫疾患に罹患している患者の体内で病理学的抗体を産生するＢ細胞または形質細胞の量を低減する（すなわち、患者のＢ細胞および／または形質細胞の数を減少させる）ための方法に関し、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ５２のうちのいずれか１つ以上に対する特異的結合を有する治療有効量の抗体を用いて患者を治療することを含む。

【0063】

「病理学的抗体」という用語は、自己抗原に対する特異的結合を示す抗体（すなわち、抗体が自己反応性である）、または分化した自己反応性細胞を枯渇させ得る抗体を指す。

【0064】

本方法は、追加の薬学的に活性な薬剤、治療的上有効な治療、または他の補助療法を用いて患者を治療することをさらに含むことができる。追加の薬学的に活性な活性剤は、化学療法剤、補体活性化阻害剤、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート）、ステロイド、トレラゲン、抗Ｂ細胞剤、または抗凝固剤（ヘパリン、クマジン）、抗血小板剤、例えば、アセチルサリチル酸、ＴＩＣＬＩＤ（登録商標）（チクロピジンＨＣｌ）、ＰＬＡＶＩＸ（登録商標）（クロピドグレルビス硫酸塩）、または静脈内免疫グロブリンであり得る。治療上有効な治療には、血漿交換または白血球アフェレーシスが含まれる。

【0065】

養子細胞療法と組み合わせた標的化免疫枯渇
免疫枯渇は、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞療法またはＴＣＲ細胞療法などの細胞ベースの療法の前に、リンパ球の枯渇、すなわち、リンパ球枯渇などの特定の免疫細胞の枯渇が望ましい、後続療法の転帰を改善するために有用であり得る。

【0066】

この方法のある特定の態様によれば、対象は、悪性血液疾患に罹患し、かつ疾患（例えば、多発性骨髄腫などの血液疾患、または固形腫瘍などの悪性腫瘍）を治療するために養子細胞療法を受けるところである。養子細胞療法は既知であり、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞療法（例えば、自己細胞療法および同種細胞療法）を含む。承認されたＣＡＲ－Ｔ細胞療法の例には、ＮＨＬおよびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を治療するためのＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）（チサゲンレクロイセル）、およびＮＨＬを治療するためのＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）（アキシカブタゲンシロロイセル）が含まれるが、これらに限定されない。

【0067】

これらの本開示の方法は、固形腫瘍を含む血液悪性腫瘍の治療転帰を改善し得、かつ／またはＣＡＲ－Ｔ細胞療法であるＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）および／もしくはＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）などの養子細胞療法に関連する副作用を低減し得る。例えば、養子細胞療法の副作用には、神経毒性、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、低ガンマグロブリン血症、血球減少症、毛細血管漏出症候群（ＣＬＳ）、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）、およびそれらの組み合わせが含まれる。さらに、本開示の方法は、放射標識された抗ＣＤ４５抗体の投与を含まない方法と比較した場合、ＣＡＲ／ＴＣＲまたはＴＩＬを発現する細胞集団の持続性を延長し得る。

【0068】

本方法のある特定の態様によれば、対象は、がん（例えば、血液悪性腫瘍または固形がん）に罹患しており、かつがんを治療するために養子細胞療法を受けるところである。養子細胞療法は既知であり、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞療法（例えば、自己細胞療法および同種細胞療法）を含む。養子細胞療法は、対象におけるがんの退縮を促進する方法を提供し、概して、（ｉ）自己Ｔ細胞を採取すること（白血球アフェレーシス）、（ｉｉ）Ｔ細胞を増殖させること（培養すること）、（ｉｉｉ）非骨髄破壊的リンパ球枯渇化学療法を対象に投与すること、および（ｉｖ）非骨髄破壊的リンパ球枯渇化学療法の投与後に、増殖Ｔ細胞を対象に投与することを含む（１Ａを参照されたい）。

【0069】

本開示の発明の方法は、リンパ球枯渇化学療法の代わりに（図１Ｂ）、増殖細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞など）の投与後に（図１Ｃ）、またはリンパ球枯渇するための増殖細胞の投与前と増殖細胞の投与後の両方（図１Ｄ）に、放射標識された抗体を使用することを含む。放射標識された抗体の後期投与（すなわち、増殖細胞の投与後）は、自己幹細胞（ＨＳＣＴ）の移植、または第２の有効量の増殖細胞の投与のための準備に使用され得る。

【0070】

したがって、本発明は、放射標識された抗体の投与および養子細胞療法を含む、血液悪性腫瘍または固形がんなどの増殖性疾患の治療のための方法を提供する。養子細胞療法は、概して、放射標識された抗ＣＤ４５抗体によるリンパ球枯渇後の再注入（ＣＡＲ Ｔ細胞療法などの養子細胞療法）の前に遺伝子編集され得る自己細胞のアフェレーシスを含み得る。あるいは、同種細胞は、リンパ球枯渇後に再注入されて、養子細胞療法を提供し得る。本発明の方法によれば、放射標識された抗体は、図１Ｅに示されるように、養子細胞療法の３～９日前、例えば６～８日前に、単回用量として提供され得る。

【0071】

したがって、本発明は、がんに罹患した対象を治療するための方法を提供し、この方法は、（ｉ）対象のリンパ球を枯渇させるのに有効な、ある量の放射標識された抗体を対象に投与することと、（ｉｉ）適切な期間の後、対象のがんを治療するために対象に対して養子細胞療法を実施することと、を含む。好ましくは、対象は、ヒトである。

【0072】

免疫抑制細胞の標的化免疫枯渇
本発明は、調節性Ｔ（Ｔ－ｒｅｇ）細胞および骨髄系由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）などの免疫抑制細胞の標的化免疫枯渇のための方法をさらに提供する。両方の細胞型（すなわち、Ｔ－ｒｅｇおよびＭＤＳＣ）は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の活性化および有効性を減衰させることができる。さらに、本発明はまた、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）およびＣＡＲ Ｔ細胞関連神経毒性などの毒性に寄与するサイトカイン放出に関与している単球および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）などの免疫抑制細胞の標的化リンパ球枯渇のための方法も提供する。

【0073】

固形および液体の両方の腫瘍は、永続化および増殖するための手段として、免疫系をハイジャックおよび／または回避するための方法を進化させている。これは、敵対的な腫瘍免疫微小環境（ＴＭＥ）と呼ばれている。古典的かつ適切な例は、Ｔ細胞の表面上のＰＤ１に結合する腫瘍細胞表面上のリガンドＰＤ－Ｌ１の上方制御された発現であり、免疫細胞活性化の下方調節をもたらす。興味深いことに、この機序の遮断は、いくつかの異なる種類のがんにおいて顕著な奏効率および持続的な生存をもたらしたが、ほとんどの患者はこの療法形態（すなわち、抗ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１）に応答せず、腫瘍微小環境における免疫回避が、多面的かつ複雑であることを示唆している。これを受けて、腫瘍は、発がん性発現、シグナル伝達、およびサイトカイン産生を部分的に介して、免疫系に課題を与え、有効な抗腫瘍応答の定着を妨げ得る。これは、酸化ストレス、栄養枯渇、酸性ｐＨ、および低酸素症を特徴とする環境をもたらし得る。さらに、これらの抑制性免疫細胞（Ｔ－ｒｅｇおよびＭＤＳＣ）、ならびに腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の存在は、抑制性可溶性因子およびサイトカインの直接的な接触または放出を介して免疫細胞活性化を効果的に鈍化させ得る。

【0074】

患者の内因性免疫系は、このような環境に遭遇し、易感染性の抗腫瘍免疫応答をもたらし得るが、ＣＡＲ Ｔ細胞療法などの養子細胞療法もまた、これらの免疫抑制機序の影響を受けやすく、腫瘍に対する有効な応答を定着させるこれらの新規の細胞療法の能力を制限し得る。

【0075】

ＣＡＲ Ｔ療法、および養子細胞療法全般は、臨床研究から浮かび上がる最も有望な抗がん戦略の１つを表す。奏効率は、これらの腫瘍にわたって８０％の範囲において並外れているが、持続的な応答は、約４０～５０％の範囲のみであった（例えば、図６を参照されたい）。それにもかかわらず、これらの結果は、これらの患者の転帰において有意な改善を表す。なぜ一部の患者は応答し、他の患者が応答しないのかは不明であるが、腫瘍免疫微小環境が細胞療法に対する応答を調節する一因である可能性が高い。

【0076】

これを受けて、前臨床および臨床研究は、調節性Ｔ細胞（Ｔ－ｒｅｇ）が、黒色腫に罹患しているマウスおよび患者における養子細胞療法に対する応答に影響を与えることを示している（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，ｅｔ ａｌ．，２００５，ＪＥＭ，２０２：９０７、Ｙａｏ，ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｂｌｏｏｄ，１１９：５６８８）。これらの研究では、Ｔ－ｒｅｇの枯渇は、意図的な枯渇によるのか、または外部ビーム放射線を用いたコンディショニングによるのかにかかわらず、養子細胞療法に対する抗腫瘍応答に対して好ましい影響を及ぼした。興味深いことに、これらの研究および他の研究は、Ｔ－ｒｅｇの枯渇が、化学療法によって誘発されるコンディショニングに対して、放射線を用いた処置後により持続していることを示唆し、ここで、前者の化学療法コンディショニングではＴ－ｒｅｇの急速なリバウンドが見られ、転帰が不良であった。

【0077】

ＭＤＳＣおよびＴＡＭは、不良な腫瘍免疫微小環境の生成に関与する他の細胞型である。インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アデノシンＡ２Ａ受容体、およびＣＤ７３などの代謝遺伝子発現の上方調節を介して、腫瘍は、Ｔ細胞活性化を鈍化させ得る腫瘍環境における栄養枯渇を効果的に生み出すことができる。例えば、腫瘍およびＭＤＳＣからのＩＤＯによるトリプトファン代謝は、Ｔ細胞アネルギーおよび死、ならびに腫瘍部位でのＴ－ｒｅｇ蓄積をもたらす。さらに、これらの免疫抑制細胞は、ＴＧＦ－βなどの免疫調節性サイトカインを分泌し得、これはまた、Ｔ細胞活性化に対して負の影響も及ぼし得る。

【0078】

敵対的な腫瘍免疫微小環境の負の影響は、液体腫瘍および固形腫瘍の両方に対して存在し得るが、固形腫瘍ではさらに顕著であり得る。これを受けて、早期臨床結果は、リンパ腫などの液体腫瘍におけるＣＡＲ－Ｔ療法に対する頑強な応答が、固形腫瘍において観察されていないことを示唆しており、これは、有効なＣＡＲ－Ｔ介在性免疫応答の定着に対する物理的または代謝的な障壁を提示し得る固形腫瘍において、因子または条件が存在することを示唆している（Ｎｅｗｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．－Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ，３：１６００６、Ｄ’Ａｌｏｉａ，ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ．９：２８２－２９３）。

【0079】

腫瘍免疫微小環境はまた、ＣＡＲ－Ｔ投与に関連する２つの主要な有害事象、すなわち、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）および神経毒性にも関与している。最近の前臨床研究は、ＣＲＳまたは神経毒性をもたらすサイトカイン放出が、ＣＡＲ－Ｔおよび腫瘍細胞の部位への動員後の活性化マクロファージに起因することを示している。マウス研究結果。（Ｇｉａｖａｄｒｉｓ，ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２４：７３１）は、マクロファージが、腫瘍部位におけるＣＡＲ－Ｔ細胞による動員および活性化後にＩＬ－１またはＩＬ－６を分泌することを実証した。

【0080】

コンディショニングは、免疫ホメオスタシス環境を改善して、養子細胞療法、または注入後のＣＡＲ－Ｔ生着およびインビボでの増殖の成功を可能にすることが示されている。しかしながら、細胞毒性非特異的化学療法の使用は、標的外毒性を誘発する可能性があり、ＣＡＲ－Ｔ投与後のＣＲＳおよび神経毒性の危険因子として特定されている。興味深いことに、ほとんどのＣＡＲ－Ｔプログラムは、ＣＡＲ－Ｔ前のコンディショニングレジメンとして、フルダラビンとシクロホスファミドとの組み合わせ（ｆｌｕ／ｃｙ）の利用を利用する。これらの薬剤は、多くの場合、養子細胞療法の注入の２～７日前に、２～５日間の療法コースを使用して投与される。

【0081】

本発明のコンディショニングのための標的化療法は、ＣＡＲ－Ｔによる転帰を強化するための非常に改善された戦略を提供する。本明細書に記載される発明では、リンパ球が枯渇のために標的化され得るだけでなく、敵対的な腫瘍免疫微小環境を媒介することに関与する免疫細胞型、ならびにＣＲＳおよび神経毒性などのＣＡＲ－Ｔ有害事象に関与する免疫細胞型も標的化され得る。本発明は、Ｔ－ｒｅｇ、ＭＤＳＣ、ＴＡＭ、ならびにＩＬ－１および／またはＩＬ－６を分泌する活性化マクロファージを含む、正常な免疫細胞を標的化する。そうすることにより、本発明のプロトコルおよび方法は、ＣＡＲ－Ｔ転帰および安全性の劇的な改善を提供し得る。

【0082】

さらに、本発明は、主に造血腫瘍において患者のがん細胞を標的化して、腫瘍量を減少させ、ＣＡＲ－Ｔ抗腫瘍応答の確率を増加させる。より具体的には、本発明は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ５２抗原を標的化する治療戦略を提供する。例えば、ＣＤ４５はまた、ほとんどのリンパ系および白血病腫瘍細胞上で発現される。本発明の放射標識された抗ＣＤ４５抗体は、ＣＡＲ－Ｔ応答の調節に関与する免疫細胞の顕著かつ持続的な抑制に影響を与えるであろう。このように、放射線は、正常な組織に対する影響を抑制しながら、ＣＤ４５細胞集団を標的化し、かつそれに対して影響を及ぼす。より具体的には、放射標識された抗ＣＤ４５抗体は、脾臓、リンパ節、および末梢血内の循環免疫細胞を枯渇させるのに十分に有効なレベルで単回用量として提供され得るが、骨髄中の造血幹細胞に対する影響は限定的である。重要なことに、リンパ球枯渇に加えて、マクロファージ、ＭＤＳＣ、およびＴ－ｒｅｇを枯渇して、ＣＡＲ－Ｔ療法に対する活性化および応答を改善し、有害事象であるＣＲＳおよび神経毒性を軽減する。

【0083】

放射標識された抗体
本開示の発明の抗ＣＤＸＸ抗体は、患者に静脈内、筋肉内、または皮下投与され得る。組成物の例示的な投与量および速度は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／１８７５１４に実質的に記載されるとおりであり得る。

【0084】

循環免疫細胞の安全な枯渇において有効と見なされる用量は、２Ｇｙ以下を骨髄に送達し、それによって造血幹細胞に対する負の影響を低減する用量である。そのような用量は、リンパ球、敵対的な免疫腫瘍微小環境に関与する免疫細胞、および腫瘍細胞を枯渇させるはずであり、すべてがＡＣＴまたはＣＡＲ－Ｔ療法に対する応答の強化をもたらす。表１に示されるように、¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５（¹³¹Ｉ－ＢＣ８）を受けている患者において実施された線量測定からの計算は、１００ｍＣｉ未満の用量が、用量制限器官である骨髄への、２００ｃＧｙ（２Ｇｙ）の範囲での標的化放射線量の送達をもたらすことを示す。そのような用量はまた、標的化リンパ球枯渇のために、脾臓、リンパ系および骨髄系細胞の部位に、より高い量の放射線を送達することが見出されている（表２ならびに図３Ａ～３Ｈおよび４Ａ～４Ｅを参照されたい）。

【0085】

この方法のある特定の態様によれば、本発明で想定される放射標識された抗ＣＤＸＸ抗体は、これらに限定されないが、¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁸⁹Ｓｒで標識されている。¹⁵³Ｓｍ、³²Ｐ、²²⁵Ａｃ、²¹³Ｂｉ、²¹³Ｐｏ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、²¹³Ｂｉ、²²³Ｒａ、²²⁷Ｔｈ、¹⁴⁹Ｔｂ、¹³¹Ｉ、¹³⁷Ｃｓ、²¹²Ｐｂ、および¹⁰³Ｐｄ、またはそれらの任意の組み合わせ。好ましくは、放射標識¹³¹Ｉまたは²²⁵Ａｃ。抗体は、国際特許出願公開第２０１７／１５５９３７号に詳述される方法を使用して標識され得る。

【0086】

この方法のある特定の態様によれば、¹³¹Ｉ抗体の有効量は、１０ｍＣｉ～２００ｍＣｉである。有効量の例には、５０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、５０ｍＣｉ～１５０ｍＣｉ、５０ｍＣｉ～２００ｍＣｉ、６０ｍＣｉ～１４０ｍＣｉ、７０ｍＣｉ～１３０ｍＣｉ、８０ｍＣｉ～１２０ｍＣｉ、９０ｍＣｉ～１１０ｍＣｉ、１００ｍＣｉ～１５０ｍＣｉ、５０ｍＣｉ、６０ｍＣｉ、７０ｍＣｉ、８０ｍＣｉ、９０ｍＣｉ、１００ｍＣｉ、１１０ｍＣｉ、１２０ｍＣｉ、１３０ｍＣｉ、１４０ｍＣｉ、１５０ｍＣｉ、または２００ｍＣｉが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の態様によれば、抗体が¹³¹Ｉで標識されている場合、有効量は、１０ｍＣｉ～１２０ｍＣｉ、２０ｍＣｉ～１１０ｍＣｉ、２５ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、３０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、４０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、５０ｍＣｉ～１００ｍＣｉ、または７５ｍＣｉ～１００ｍＣｉである。これらの¹³¹Ｉの低リンパ球枯渇用量は、３００ｍＣｉ～１，２００ｍＣｉなど、¹³¹Ｉの既知の骨髄破壊用量に対して驚くべきものである。例えば、これらの低用量がリンパ球レベルの低下をもたらすことは予想外であった。さらに、これらの低用量により、患者は、¹³¹Ｉが投与された直後に帰宅することが可能となる。これは、例えば、患者と物理的に近接している他者に提起される放射線リスクのため、１，２００ｍＣｉの用量を受けている患者には不可能なことである。

【0087】

本方法のある特定の態様によれば、²²⁵Ａｃ抗体の有効量は、０．０５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ（対象体重）である。有効量の例には、０．０５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ、例えば、０．１μＣｉ／ｋｇ～０．２μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ～０．３μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ～０．４μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ～０．５μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ～０．６μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ～０．７μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ～０．８μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ～０．９μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ～２．０μＣｉ／ｋｇ、２．０μＣｉ／ｋｇ～２．５μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ～３．５μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ～４．０μＣｉ／ｋｇ、４．０μＣｉ／ｋｇ～４．５μＣｉ／ｋｇ、または４．５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇが含まれるが、これらに限定されない。

【0088】

有効量の放射標識された抗体は、単回用量として提供され得る。対象に投与される抗体の大部分は、典型的には、標識されていない抗体からなり、標識された抗体は少数である。標識されていない抗体に対する標識された抗体の比は、既知の方法を使用して調節することができる。したがって、本発明のある特定の態様によれば、抗体は、最大１００ｍｇ、例えば、６０ｍｇ未満、もしくは５ｍｇ～４５ｍｇの総タンパク質量、または０．１ｕｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ（患者体重）、例えば、１ｕｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは１０ｕｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは１００ｕｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは０．１ｕｇ／ｋｇ～１００ｕｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは０．１ｕｇ／ｋｇ～５０ｕｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは０．１ｕｇ／ｋｇ～１０ｕｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは０．１ｕｇ／ｋｇ～４０ｕｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは１ｕｇ／ｋｇ～４０ｕｇ／ｋｇ（患者体重）、もしくは０．１ｍｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ（患者体重）、例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ（患者体重）～０．６ｍｇ／ｋｇ（患者体重）の総タンパク質量で提供され得る。

【0089】

本発明のある特定の態様によれば、放射標識された抗体は、標識された画分と標識されていない画分とを含み得、標識された画分：標識されていない画分の比は、約０．０１：１０～１：１、例えば、０．１：１０～１：１の標識された画分：標識されていない画分であり得る。

【0090】

さらに、放射標識された抗体は、特定の患者に特化した単回用量の組成物として、すなわち、患者特異的治療用組成物として提供され得、組成物中の標識されたおよび標識されていない抗体の量は、少なくとも患者の体重、身長、体表面積、年齢、性別、および／または病状もしくは健康状態に依存し得る。このように、患者特異的治療用組成物の総体積は、１つの治療セッションで患者にすべて投与されるように構成されるバイアル中に提供され得、その結果、組成物は、投与後にバイアル中にほとんどまたは全く残らない。

【0091】

養子細胞療法
養子細胞療法は、がんを治療するための強力なアプローチであるが、感染症および移植片対宿主病などの他の疾患を治療するための強力なアプローチでもある。養子細胞療法は、エクスビボで増殖した細胞、最も一般的には免疫由来細胞の、宿主への受動的な移植であり、移植物の免疫学的機能および特徴を移行することを目標とする。

【0092】

養子細胞療法は、養子Ｔ細胞療法において一般的であるように、自己である（例えば、白血球アフェレーシスにより単離され、投与の直前のおよそ４週間で形質導入され、選択される）か、または感染症もしくは移植片対宿主病の治療において典型的であるように、同種である。さらに、ＡＣＴは、異種であり得る。

【0093】

養子細胞療法はまた、黒色腫および血液悪性腫瘍などの進行型固形腫瘍を有する患者を治療するために使用され得る、自己腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）の移植も含み得る。

【0094】

養子細胞療法はまた、黒色腫および血液悪性腫瘍などの進行型固形腫瘍を有する患者を治療するために使用され得る、健康なドナーから単離され、調製され、および保存された（例えば、凍結された）「既製」の同種リンパ球の移植も含み得る。

【0095】

養子細胞療法は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、デルタガンマＴ細胞、調節性Ｔ細胞、樹状細胞、および末梢血単核細胞などの細胞型を使用し得る。養子細胞療法は、腫瘍抗原との接触に続いて樹状細胞への分化を誘導する目的で、単球を使用し得る。単球が固定有糸分裂指数を有することを考慮すると、宿主の永久的な操作は減少し得る。

【0096】

ある特定の態様によれば、養子細胞療法は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法であり得る。ＣＡＲ Ｔ細胞は、腫瘍細胞上の抗原に特異的に結合する所望の抗原結合ドメインを操作することによって、目的の腫瘍抗原を標的化するように操作され得る。本発明の文脈において、「腫瘍抗原」または「増殖性障害抗原」または「増殖性障害に関連する抗原」は、がんなどの特定の増殖性障害に共通する抗原を指す。本明細書で考察される抗原は、単に例示として含まれているに過ぎず、排他的であることを意図するものではなく、当業者にはさらなる例が容易に明らかとなるであろう。

【0097】

ある特定の態様によれば、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ－１、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＭＡＧＥＡ３、ＭＡＧＥＡ３／Ａ６、ＫＲＡＳ、ＣＬＬ１、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、ＥｐＣａｍ、ＧＤ２、ＧＰＣ３、ＧＰＡ７、ＰＳＣＡ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＲＯＲ１、メソテリン、ＣＤ３３／ＩＬ３Ｒａ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＤ３７、ＰＳＭＡ、糖脂質Ｆ７７、ＧＤ－２、ｇｐ１００、ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲ、ＦＲアルファ、ＣＤ２４、ＣＤ４４、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＣＡ－１２５、ＨＥ４、オーバル、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、ｕＰＡ、ＰＡＩ－１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、もしくはＵＬＢＰ６、またはそれらの組み合わせ（例えば、ＣＤ３３とＣＤ１２３の両方）を標的化する、ＣＡＲ Ｔ細胞を用いる。本発明では、ある特定の態様によれば、がんに罹患した対象は、サイトカイン放出症候群などの有害事象の発生率がより高く、ＣＡＲ Ｔ後の長期生存がより短い、疾患負担がより高い（５％以上の骨髄芽球）患者であることが想定されている。

【0098】

ＣＡＲ Ｔ細胞は、２つ以上の異なる抗原を標的化する能力（すなわち、二重特異性または二価、三重特異性または三価、四重特異性など）を有する抗原結合ドメインを含み得る。したがって、ＣＡＲ Ｔ細胞は、第１の抗原に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含み得る（例えば、タンデムＣＡＲ）。例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９結合ドメインおよびＣＤ２２結合ドメインを含み得、ひいてはＣＤ１９およびＣＤ２２の両方を認識および結合し得る。またはさらに、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９結合ドメインおよびＣＤ２０結合ドメインを含み得、ひいてはＣＤ１９およびＣＤ２０の両方を認識および結合し得る。

【0099】

あるいは、細胞集団の各細胞、または細胞集団全体は、複数の別個のＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、構築物）を含み得、各ＣＡＲ Ｔ細胞構築物は、異なる抗原を認識し得る。例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞集団は、例えば、ＨＥＲ２、ＩＬ１３Ｒα２、およびＥｐｈＡ２などの３つの抗原を標的化し得る。

【0100】

本発明のある特定の態様によれば、自己または同種にかかわらず、細胞集団は、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９（クラスター化され規則的に間隔が空いた短い回文配列リピート／ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）などの遺伝子編集技術を使用して操作され得る。遺伝子工学の技術分野において認識および実践されているこれらの技術は、標的化配列の選択的な編集、破壊、または挿入を可能にして、対象の細胞のゲノムを改変する。したがって、本発明において実践される養子移植のための単離された自己細胞または同種細胞は、既知の遺伝子または配列を欠失または置換するように編集され得る。例えば、同種Ｔ細胞集団におけるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、レシピエント患者における移植片対宿主病を除去するための手段としてのＣＡＲ－Ｔ形質導入の前または後に、欠失または置換され得る。

【0101】

本発明のある特定の態様によれば、細胞集団は、ＣＡＲを発現するＴ細胞、ＮＫ細胞、または樹状細胞の集団を含み得、ＣＡＲは、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインもしくはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つ以上の細胞質共刺激シグナル伝達ドメインを含む、細胞外抗体または抗体断片を含む。細胞集団は、ＣＡＲを発現する細胞の集団を含み得、ＣＡＲは、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ヒト化抗ＣＤ２２結合ドメイン、および／もしくはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメインなどの２つ以上の結合ドメイン、ならびに膜貫通ドメイン、ならびに１つ以上の細胞質共刺激シグナル伝達ドメインを含む、細胞外抗体または抗体断片を含む。

【0102】

ＣＡＲ細胞療法は、進行型Ｂ細胞悪性腫瘍において前例のない初期奏効率を示しているが、ＣＡＲ細胞注入後の再発、および固形腫瘍における限定的な治療成功は、ＣＡＲレジメンの成功における大きなハードルである。この後者の制限は、主に、固形腫瘍の敵対的な微小環境に起因する。腫瘍間質などの解剖学的障壁、ならびに注入されたＣＡＲ改変細胞の腫瘍部位への浸潤に対して有害である免疫抑制サイトカインおよび免疫細胞は、両者ともにＣＡＲ細胞療法の成功を制限する。装甲されたＣＡＲを使用して、これらの制限のいくつかを回避し得る。これらのＣＡＲ細胞は、Ｔ細胞活性化および動員を刺激し得、ひいては腫瘍微小環境との闘いを支援し得る、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、またはＩＬ－１５）などの免疫調節性タンパク質を発現するようにさらに改変される。したがって、本発明のある特定の態様によれば、細胞集団は、ＣＡＲを発現し、かつ、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、またはＩＬ－１５などの免疫調節性タンパク質をさらに発現する細胞集団を含み得る。

【0103】

本発明の養子細胞療法は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞集団を含む。ＴＣＲは、抗原提示細胞または任意の有核細胞（例えば、赤血球を除く体内のすべてのヒト細胞）の表面上の主要な組織適合性複合体（ＭＨＣ）の産物の文脈において提示される抗原性ペプチドを認識することに関与する抗原特異的分子である。対照的に、抗体は、典型的には、可溶性抗原または細胞表面抗原を認識し、ＭＨＣによる抗原の提示を必要としない。この系は、Ｔ細胞に、それらのＴＣＲを介して、短いペプチドに細胞内で処理され、細胞内ＭＨＣ分子に結合され、かつペプチド－ＭＨＣ複合体として表面に送達される細胞（ウイルスタンパク質を含む）によって発現される細胞内抗原のアレイ全体を認識する潜在的な能力を付与する。この系は、実質的に任意の外来性タンパク質（例えば、変異がん抗原またはウイルスタンパク質）または異常に発現されたタンパク質が、Ｔ細胞の標的としての役割を果たすことを可能にする。

【0104】

上記に示されるように、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）に典型的な標的特異的かつ組織外の有害事象が、養子細胞療法で観察されている。リスクを最小限に抑えながらこれらの革新的な治療の利点を維持するために、ＣＡＲ発現またはＴＣＲ発現細胞の活性レベルを制御し得る、調整可能な安全スイッチが組み込まれ得る。すなわち、ＣＡＲまたはＴＣＲの持続的かつ調節された制御を可能にし得る、誘導性共刺激キメラポリペプチドが含まれ得る。リガンド誘導剤は、例えば、細胞内シグナル伝達経路を誘導し得る、誘導性キメラシグナル伝達分子を多量体化することによって、ＣＡＲ発現またはＴＣＲ発現細胞を活性化し得、標的細胞（Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＴＩＬ、樹状細胞）の活性化をもたらす。リガンド誘導剤の非存在下では、標的細胞は静止しているか、または基本レベルの活性を有する。

【0105】

したがって、本発明のある特定の態様によれば、ＣＡＲまたはＴＣＲ（すなわち、安全スイッチＣＡＲもしくはＴＣＲ、ｇｏＣＡＲもしくはｇｏＴＣＲ）を起動するスイッチが追加され得る。ＣＡＲまたはＴＣＲ発現細胞は、がん細胞（例えば、標的抗原）および化学薬剤（例えば、リミデュシド、ラパマイシン）の両方に曝露された場合にのみ完全に活性化されるように設計され得、したがって、化学薬剤の投与スケジュールを調整することによって、ＣＡＲまたはＴＣＲ細胞の活性化の度合いを制御する手段を提供する。ＣＡＲまたはＴＣＲは、依然として標的の様式で作用するが、制御可能なスケジュールにおいて作用し、養子細胞療法のある特定の副作用を低減し得る。したがって、本発明のある特定の態様によれば、ＡＣＴは、ｇｏＣＡＲまたはｇｏＴＣＲ細胞療法を含み得る。

【0106】

本発明のある特定の態様によれば、操作されたＣＡＲ細胞は、健康なドナーからの同種細胞であり得、かつＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９、ＺＦＮ、またはＴＡＬＥＮなどの遺伝子編集技術によって内因性ＴＣＲを破壊または置換するようにさらに操作され得、内因性ＴＣＲの欠失は、ＣＡＲ駆動型移植片対宿主病を除去するのに役立つ。

【0107】

本発明のある特定の態様によれば、自己細胞（例えば、Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞または樹状細胞）は、対象から採取され得る。これらの細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、脊髄血液、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む、いくつかの供給源から取得され得る。本発明のある特定の態様によれば、同種細胞または異種細胞が使用され得、典型的には、健康なドナーから単離される。Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、または多能性幹細胞が同種細胞または異種細胞である場合、当該技術分野において利用可能な任意の数の細胞株が使用され得る。

【0108】

細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に既知の任意のいくつかの技術を使用して、対象から採取された血液単位から取得することができる。本発明のある特定の態様によれば、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシスによって取得され得る。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含む、リンパ球を含有する。

【0109】

陰性選択による細胞集団の富化は、陰性選択された細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組み合わせを用いて達成することができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する、陰性磁気免疫粘着またはフローサイトメトリーを介した細胞選別および／または選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。本発明のある特定の態様によれば、細胞集団を富化するか、または陽性選択することが望ましい場合がある。例えば、調節性Ｔ細胞の陽性富化は、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋に対する陽性選択を使用し得る。

【0110】

採取された細胞は、当該技術分野において既知のいくつかの方法のうちのいずれかによって、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように操作され得る。さらに、操作された細胞は、当該技術分野において既知のいくつかの方法のうちのいずれかによって増殖され得る。上記に詳述されるように、ＣＡＲまたはＴＣＲは、二重特異性、三重特異性、または四重特異性であり得、ＣＡＲまたはＴＣＲは、ｇｏＣＡＲもしくはｇｏＴＣＲなどのスイッチ、または安全スイッチＣＡＲもしくはＴＣＲを含み得、ＣＡＲまたはＴＣＲは、装甲されたＣＡＲもしくはＴＣＲなどの免疫調節性タンパク質を発現し得る。

【0111】

骨髄を抑制することが既知であるか、またはリンパ球枯渇に対して作用し得るか、または腫瘍の微小環境を変化させ得る追加の薬剤を、上記に示される放射標識された抗体と組み合わせて使用してもよい。例えば、ゲムシタビンは、骨髄系由来抑制細胞および／または骨髄を枯渇させ得るが、一方、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ３、もしくはＬＡＧ－３拮抗薬抗体、ＧＩＴＲもしくはＯＸ４０共刺激抗体、ＩＤＯ阻害剤、Ａ２ａＲ拮抗薬、またはＣＤ７３拮抗薬は、腫瘍微小環境を変化またはシフトさせ得る。追加の薬剤が抗体である場合、これは、別個の薬剤もしくは組成物として、または本明細書に列挙される抗体標的（すなわち、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５２）のうちのいずれかと組み合わせた二重特異性抗体の１つのアームとして提供され得る。

【0112】

本発明のある特定の態様によれば、対象からの血液試料またはアフェレーシス産物の採取は、本明細書に記載されるような増殖された細胞が必要とされ得る時点より前の、任意の期間であり得る。したがって、操作および増殖される（またはＴＩＬの場合、単に増殖される）細胞の供給源は、必要な任意の時点で採取することができ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、またはＴＩＬなどの所望の細胞は、単離して、本明細書に記載の養子細胞療法などの養子細胞療法における後の使用のために凍結することができる。

【0113】

したがって、本発明のある特定の態様によれば、血液試料またはアフェレーシスは、概して健康な対象、または疾患を発症するリスクがあるが、まだ疾患を発症していない、概して健康な対象からのものであり得、目的の細胞は、単離され、後の使用のために凍結され得る。細胞は、増殖、凍結、および後に使用され得る。ある特定の事例では、細胞試料は、本明細書に記載される特定の疾患の診断の直後に、ただし任意の治療の前に、対象から採取され得る。

【0114】

本発明のある特定の態様によれば、細胞は、本発明の放射標識された抗体のうちのいずれかを使用したリンパ球枯渇と併せて（例えば、リンパ球枯渇の前、同時、または後に）、対象から単離され、新鮮なまま使用され得るか、または後の使用のために凍結され得る。

【0115】

本発明のある特定の態様によれば、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団は、線量分割法によって対象に投与され得、総用量の第１の割合が、治療の１日目に投与され、総用量の第２の割合が、治療の翌日に投与され、任意選択的に、総用量の第３の割合が、さらに治療の後日に投与される。

【0116】

例示的な総用量は、１０³～１０¹¹細胞／ｋｇ（対象体重）、例えば、１０³～１０¹⁰細胞／ｋｇ（対象体重）、または１０³～１０⁹細胞／ｋｇ（対象体重）、または１０³～１０⁸細胞／ｋｇ（対象体重）、または１０³～１０⁷細胞／ｋｇ（対象体重）、１０³～１０⁶細胞／ｋｇ（対象体重）、または１０³～１０⁵細胞／ｋｇ（対象体重）を含む。さらに、例示的な総用量は、１０⁴～１０¹¹細胞／ｋｇ（対象体重）、例えば、１０⁵～１０¹¹細胞／ｋｇ（対象体重）、または１０⁶～１０¹¹細胞／ｋｇ（対象体重）、または１０⁷～１０¹¹細胞／ｋｇ（対象体重）を含む。

【0117】

例示的な総用量は、患者の体重ではなく、体表面積に基づいて投与され得る。したがって、総用量は、１０³～１０¹³細胞／ｍ²を含み得る。

【0118】

例示的な用量は、体重または体表面積ではなく、定量または固定された投与スケジュールに基づき得る。定量固定投与により、潜在的な用量計算ミスを回避し得る。さらに、遺伝子型解析および表現型解析戦略、ならびに治療薬剤モニタリングを使用して、適切な用量を計算し得る。すなわち、投与は、患者の免疫抑制細胞（例えば、Ｔ－ｒｅｇ、ＭＤＳＣ）の免疫レパートリー、および／または疾患負荷に基づき得る。したがって、総用量は、１０³～１０¹³個の総細胞を含み得る。

【0119】

本発明のある特定の態様によれば、細胞は、治療直後に対象から取得され得る。これに関して、ある特定のがんの治療後、特に、免疫系を損傷する薬剤を用いた治療後、対象が通常治療から回復するであろう期間の間で治療からまもなく、取得されたある特定の細胞（例えば、Ｔ細胞）の質が、エクスビボで増殖するそれらの能力に関して最適であり得るか、または改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用したエクスビボ操作の後、これらの細胞は、強化された生着およびインビボ増殖に関して好ましい状態であり得る。したがって、この回復期の間に、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、または造血系の他の細胞を含む血球を採取することが、本発明の文脈内で企図されている。

【0120】

本発明のある特定の態様によれば、放射標識された抗体は、ＣＡＲ／ＴＣＲ、またはＴＩＬを発現する細胞集団の有効用量の投与後に投与され得る。放射標識された抗体の有効量は、対象においてリンパ球枯渇を誘導するのに十分な量であり得る。ある特定の態様によれば、放射標識された抗体の有効量は、対象において骨髄破壊を誘導するのに十分な量であり得る。

【0121】

本発明のある特定の態様によれば、放射標識された抗体は、ＣＡＲ／ＴＣＲ、またはＴＩＬを発現する細胞集団の投与の１～３か月後に投与され得、放射標識された抗体の有効量は、対象においてリンパ球枯渇を誘導するのに十分な量である。そのようなことは、自己幹細胞の移植のための準備、またはＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団の第２の有効量の投与において行われ得る。

【0122】

本発明のある特定の態様によれば、放射標識された抗体は、養子細胞療法の前と後の両方に対象に投与され得る。すなわち、本方法は、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現するように操作され、増殖された細胞集団を採取するためのアフェレーシスステップと、それに続く有効量の放射標識された抗体の第１の用量の投与を含み得る。次いで、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団を対象に投与し、続いて、有効量の放射標識された抗体の第２の用量を投与し得る。次いで、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団の第２の用量が投与され得る。ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団のこの第２の用量は、第１の用量と同一であり得るか、または異なり得る。すなわち、第１および第２の用量は、同じＣＡＲ／ＴＣＲを発現する同じ細胞集団の用量であり得る。あるいは、第２の用量は、同じＣＡＲ／ＴＣＲを発現する同じ細胞集団の異なる有効量であり得る。

【0123】

本発明のある特定の態様によれば、第２の用量は、同じまたは異なるＣＡＲ／ＴＣＲを発現する異なる細胞集団の同じまたは異なる有効量であり得る。ＣＡＲ／ＴＣＲの差異は、例えば、異なる結合ドメインもしくは抗原認識ドメイン、または共刺激ドメインなどのＣＡＲ／ＴＣＲの任意の態様にあり得る。第２の用量は、追加的または代替的に、ＩＬ－１２を有する分泌細胞を含み得るか、または細胞療法注入と同時もしくは順次のいずれかで、ＢＴＫ、Ｐ１３Ｋ、ＩＤＯ阻害剤などの小分子阻害剤を用いたアジュバント免疫療法さえ含み得る。

【0124】

したがって、本発明のある特定の態様によれば、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団の第２の用量は、第２のＣＡＲ／ＴＣＲを発現する第２の細胞集団を含み得、第２のＣＡＲ／ＴＣＲは、第１の用量でのＣＡＲ／ＴＣＲとは異なる。例えば、第２の用量は、第２のＣＡＲ／ＴＣＲを発現する活性化Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞または樹状細胞の第２の集団を含み得、第２のＣＡＲ／ＴＣＲは、第１の用量でのＣＡＲとは異なる細胞外、膜貫通、または細胞質共刺激シグナル伝達ドメインのうちの１つ以上を有する第２のＣＡＲを含み得る。例として、第２のＣＡＲは、異なる抗原を認識し得るか、または異なる細胞型上で発現され得るか、または異なる細胞質共刺激シグナル伝達ドメインを含み得るか、等である。

【0125】

ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団が投与された後の、放射標識された抗体の第２の用量の投与は、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団の投与後に完全応答（ＣＲ）を示していない対象に使用され得る。さらに、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団の投与後の放射標識された抗体の第２の用量の投与は、対象が、ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団の投与後に、抗原陽性疾患（例えば、ＣＤ－１９＋）または抗原陰性疾患（ＣＤ－１９－）などを再発しているか、または再発していると特定された場合に使用され得る。

【0126】

本発明のある特定の態様によれば、方法は、１つ以上の追加の治療剤の投与を含み得る。例示的な治療剤には、化学療法剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、またはそれらの組み合わせが含まれる。

【0127】

治療剤は、当該技術分野において既知の任意の標準的な用量レジメンに従って投与され得る。例示的な化学療法剤には、タキサン（例えば、ドセタキシンおよびパクリタキセル）およびビンカアルカロイド（例えば、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびビノレルビン）などの、有糸分裂阻害剤が含まれる。例示的な化学療法剤には、トポテカンなどのトポイソメラーゼ阻害剤が含まれる。

【0128】

例示的な化学療法剤には、増殖因子阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、Ｐ３８ａ ＭＡＰキナーゼ阻害剤、血管形成、新血管形成、および／または他の血管新生の阻害剤、コロニー刺激因子、赤血球造血剤、抗アネルギー剤、免疫抑制および／または免疫調節剤、ウイルス、ウイルスタンパク質、免疫チェックポイント阻害剤、ＢＣＲ阻害剤（例えば、ＢＴＫ、Ｐ１３Ｋ等）、免疫代謝剤（例えば、ＩＤＯ、アルギナーゼ、グルタミナーゼ阻害剤等）が含まれる。本発明のある特定の態様によれば、１つ以上の治療剤は、抗骨髄腫剤を含み得る。例示的な抗骨髄腫剤には、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドミド、プレドニゾン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、およびサリドマイドが含まれ、それらのうちのいくつかは、化学療法剤、抗炎症剤、または免疫抑制剤として上記に示される。

【実施例】

【0129】

以下の実施例は、本発明による放射標識された抗体のうちの１つ：抗ＣＤ４５（モノクローナル抗体はＢＣ８である）を使用した本発明の組成物および方法の実験設計および特定の結果を提供する。

【0130】

実施例１－¹³¹Ｉ－ＢＣ８（Ｉｏｍａｂ－Ｂ）
Ｉｏｍａｂ－Ｂ医薬品は、放射性ヨウ素化抗ＣＤ４５マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（¹³¹Ｉ－ＢＣ８）である。これは、造血ＣＤ４５抗原に特異的である。Ｉｏｍａｂ－Ｂ医薬品は、脱パイロジェン処理された１型の５０ｍＬガラスバイアル、滅菌された灰色のクロロブチルゴム栓、およびオープントップスタイルのアルミニウムシールからなる容器施栓系に含有される滅菌製剤として供給される。各用量バイアルはまた、５０ｍＬバイアル中に４５ｍＬの医薬品充填体積を含有する。同様に、これは、静脈内投与中の完全注入のための単回使用用量として提供され得、１ｍＣｉ～２００ｍＣｉ（例えば、１００ｍＣｉまたは１５０ｍＣｉ）の¹³¹Ｉ、および６～６０ｍｇ（例えば、６～４５ｍｇ）のＢＣ８の患者特異的放射活性を含有する。ＢＣ８抗体用量は、０．５ｍｇ／ｋｇのレベルで理想体重に従って決定され得る。医薬品は、０．９％塩化ナトリウム注射液ＵＳＰ（正常生理食塩水）と順次に、１：９の医薬品対生理食塩水の比率で患者に同時投与される。注入速度は４５ｍＬの医薬品充填体積中のＢＣ８抗体の量に依存するため、およそ４３０～４５０ｍＬの総医薬品および生理食塩水注入体積は、様々な期間にわたって投与される。

【0131】

国際公開第２０１７／１５５９３７号は、ＢＣ８の全構造、および¹³¹Ｉ－ＢＣ８を作製するための方法を教示している。

【0132】

実施例２－²²⁵Ａｃ－ＢＣ８
抗ＣＤ４５ ＢＣ８のＤＯＴＡとのコンジュゲートおよびその後の²²⁵Ａｃでの標識：抗体ＢＣ８（２ｍｇ）を、コンジュゲーション緩衝液（１ｍＭのＥＤＴＡを含むＮａ炭酸緩衝液、ｐＨ＝８．５～９．０）を用いて、ＭＷカットオフ５０，０００のＣｅｎｔｒｉｃｏｎフィルターまたはＭＷカットオフ５０，０００のＶｉｖａｓｐｉｎ限外濾過管を使用する、４回の限外濾過スピンにより平衡化した。スピン当たり１．５ｍｌのコンジュゲーション緩衝液を使用した。各スピンについて、抗体を、５３，０００ＲＰＭで、かつ４℃で、残留保持体積が１００～２００μｌになるまで５～２０分間スピンした。抗体を、２回目および３回目のスピン後、４℃で３０分間インキュベートして、平衡化を可能にした。ＤＯＴＡコンジュゲーションについて、０．１５ＭのＮＨ₄ＯＡｃ中、３ｍｇ／ｍｌのＳ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０テトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｚ－ＤＯＴＡ、ＭＷ＝６８７）の溶液を、溶解およびボルテックスにより調製した。ＤＯＴＡ－Ｂｚ－ｐＳＣＮおよびＢＣ８抗体（５ｍｇ／ｍｌ超）を、エッペンドルフ管中、７．５モル比（ＤＯＴＡ：抗体）で一緒に混合し、室温で１５時間インキュベートした。ＤＯＴＡ－抗体コンジュゲートの精製について、未反応のＤＯＴＡ－Ｂｚ－ｐＳＣＮを、１．５ｍｌの０．１５ＭのＮＨ₄ＯＡｃ緩衝液（ｐＨ＝６．５）を用いた７ラウンドの限外濾過によって除去し、およそ１００μｌの体積にした。最終洗浄後、０．１５ＭのＮＨ₄ＯＡｃ緩衝液を添加して、材料をおよそ１ｍｇ／ｍｌの最終濃度にした。ＤＯＴＡ－ＢＣ８コンジュゲートの最終濃度を測定し、抗体にコンジュゲートされたＤＯＴＡ分子の数を、抗体に対して１．２～１．５ＤＯＴＡであると決定した。

【0133】

²²⁵ＡｃでのＤＯＴＡ－抗体コンジュゲートの放射標識：ＤＯＴＡ－ＢＣ８コンジュゲートを²²⁵Ａｃで標識するために、１５ｕＬの０．１５ＭのＮＨ₄ＯＡＣ緩衝液、ｐＨ＝６．５を、エッペンドルフ反応管中で２μＬ（１０μｇ）のＤＯＴＡ－ＢＣ８（５ｍｇ／ｍｌ）と混合した。０．０５ＭのＨＣｌ中、４μＬの²²⁵Ａｃ（１０μＣｉ）を順次添加し、管の内容物をピペットの先端で混合し、反応混合物を１００ｒｐｍで振とうしながら、３７℃で９０分間インキュベートした。インキュベーション期間の終了時に、３μＬの１ｍＭのＤＴＰＡ溶液を反応混合物に添加し、室温で２０分間インキュベートして、非複合体化²²⁵Ａｃを結合した。インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）を、１０ｃｍのシリカゲルストリップおよび１０ｍＭのＥＤＴＡ／正常生理食塩水移動相を用いて実施して、²²⁵Ａｃ－抗ＢＣ８の放射化学的純度を決定し、²²⁵Ａｃで標識されたＢＣ８を²²⁵Ａｃ－ＤＴＰＡから分離し、マルチチャネル分析器を備えたガンマ計数器で切片を計数した。数回の実行にわたる放射標識効率は、８０％超であると決定した。

【0134】

実施例３－絶対好中球数の変化
ＣＤ４５は、リンパ球と好中球の両方を含む、ほとんどの免疫細胞型において発現される細胞表面タンパク質である。Ｉｏｍａｂ－Ｂ（¹³¹Ｉ－ＢＣ８）放射性免疫療法は、そのベータ放出ペイロードを標的化し、かつそれをＣＤ４５陽性細胞に送達する。すべてのＣＤ４５陽性細胞型は、等しく、¹³¹Ｉ－ＢＣ８の投与後に枯渇の影響を受けやすいことが予想されている。図２に示すヒト臨床治験からのデータは、１０ｍＣｉ用量の¹³¹Ｉ－ＢＣ８投与後の様々な時点でのヒト対象の相対絶対好中球数を示し、これは倍率増加または減少として提示される。絶対リンパ球数は有意に減少し、経時的に持続的な枯渇を示したが、絶対好中球数の中央値は、¹³¹Ｉ－ＢＣ８投与後に最小限の減少を示し、急速な回復を示した。これは驚くべき発見である。¹³¹Ｉ－ＢＣ８の好中球に対する限定的な影響およびその急速なリバウンドは、そうでなければ起こる可能性のある感染症を防止することにより、患者に利益をもたらすことが予想される。

【0135】

実施例４－リンパ球枯渇およびクリアランスを実証する臨床データ
低用量レベルの¹³¹Ｉ－ＢＣ８を与えられた患者から得られた臨床データは、一貫した末梢リンパ球減少を示す。薬物動態データは、¹³¹Ｉ－ＢＣ８の高速クリアランスを示す。このクリアランスは、ＣＡＲ Ｔ製品との相互作用を制限する。疾患制御の増加およびリンパ球枯渇の持続により、¹³¹Ｉ－ＢＣ８投与とＣＡＲ Ｔ注入との間の時間窓がフレキシブルになり、これが次に毒性を防ぐ。例えば、図３Ａ～３Ｈに示されるように、¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体標的化リンパ球枯渇後の免疫細胞解析は、末梢血中のＷＢＣ（図３Ａ）および脾臓免疫細胞集団（図３Ｂ）の選択的な枯渇を、骨髄区画に対する最小限の影響（図３Ｃ）ならびにＲＢＣおよび血小板に対する影響の抑制（それぞれ、図３Ｄおよび３Ｅ）とともに示す。図３Ｆ～３Ｈは、同様の治験結果（２日目および４日目のみ）の棒グラフを提供する。やや驚くべきことに、脾臓Ｔ－ｒｅｇレベルは、２１日後でも持続的に下落している（枯渇されている）ことが分かった。図１２は、患者の循環血液からの¹³¹Ｉ－ＢＣ８の急速なクリアランスを示す。平均して、放射標識されたＢＣ８抗体の５９パーセントが、０．６５時間（３９分間）の生物学的半減期で血液から除去され、４１パーセントが、３１時間の生物学的半減期で除去された。

【0136】

実施例５－開発中の様々なＣＡＲ－Ｔ細胞療法、およびそのリンパ球枯渇レジメン
開発中のＣＡＲ－Ｔ細胞療法は多数存在し、各々が独自のリンパ球枯渇レジメンを有する。図６の図は、Ｂ細胞ＮＨＬを有する患者に対する抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の選択された公開治験を示す。これらの治験のほとんどは、化学療法によるリンパ球枯渇レジメンを用いる。

【0137】

実施例６－ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）前の¹³¹Ｉ－ＢＣ８ベースのリンパ球枯渇
この実施例では、本発明を使用して、ＮＨＬまたはＤＬＢＣＬに罹患したヒト対象を治療する。第１の事例では、この方法は、（ｉ）２５ｍＣｉ～２００ｍＣｉ（例えば、１００ｍＣｉまたは１５０ｍＣｉ）の¹³¹Ｉ－ＢＣ８をＮＨＬ患者に投与することと、（ｉｉ）６、７、または８日後に、患者に対してＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）（チサゲンレクロイセル）療法をその既知のプロトコルに従って実施することと、を含む。第２の事例では、この方法は、（ｉ）２５ｍＣｉ～２００ｍＣｉ（例えば、１００ｍＣｉまたは１５０ｍＣｉ）の¹³¹Ｉ－ＢＣ８をＤＬＢＣＬ患者に投与することと、（ｉｉ）６、７、または８日後に、患者に対してＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）療法をその既知のプロトコルに従って実施することと、を含む。

【0138】

実施例７－ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）前の¹³¹Ｉ－ＢＣ８ベースのリンパ球枯渇
この実施例では、本発明を使用して、ＮＨＬに罹患したヒト対象を治療する。この方法は、（ｉ）２５ｍＣｉ～２００ｍＣｉ（例えば、１００ｍＣｉまたは１５０ｍＣｉ）の¹³¹Ｉ－ＢＣ８をＮＨＬ患者に投与することと、（ｉｉ）６、７、または８日後に、患者に対してＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）（アキシカブタゲンシロロイセル）療法をその既知のプロトコルに従って実施することと、を含む。

【0139】

実施例８－抗ＣＤ４５放射性免疫療法介在性コンディショニング／リンパ球枯渇の前臨床モデリング
概要：操作された自己または同種ＣＡＲ Ｔ細胞などの養子細胞移植の用量を受ける前に、多くの場合、高用量化学療法を使用して、リンパ球枯渇ステップを実施することが一般的である。このプロセスは、免疫微小環境、例えば、骨髄内に十分な空間を作り、移植された細胞の生着を可能にするために重要であると考えられている。さらに、ドナーリンパ球の確立および増殖のための好ましいサイトカインプロファイルを誘発すると見られている。抗ＣＤ４５放射性免疫療法は、ＡＭＬ患者における同種造血細胞移植前の骨髄破壊的レジメンとして、第ＩＩＩ相臨床治験において調査されている。この治験からの結果は、低用量の¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法が、リンパ球枯渇には十分であるが、骨髄破壊には十分でない場合があることを示唆している。

【0140】

例として、単回用量の５０ｍＣｉ～２００ｍＣｉの¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体を受けているヒト患者の脾臓に吸収される累積放射線量を調査する研究が実施されている。表３に示すように、脾臓への残余吸収線量が２５ｃＧｙを超えないであろう時間は、¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体の総用量によって変動する。さらに、図１１は、１００ｍＣｉの¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体を注入により投与された患者の脾臓への累積線量率を示し、脾臓への線量率は、注入後の時間に対してプロットされている。

【表3】

【0141】

低用量の¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法（サロゲート３０Ｆ１１）の効果の前臨床研究が実施されている。この研究は、特定の免疫細胞型に対するリンパ球枯渇応答を調査しており、この形態のコンディショニングに対する応答におけるサイトカイン発現の変化は調査していない。例えば、図９は、５～２０ｍＣｉの¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体（１３人の患者の用量中央値８．４ｍＣｉ）を受けているヒト患者における一過性リンパ球枯渇を示す。そのような研究の結果は、自己または同種養子細胞移植（ＡＣＴ）の投与前に非骨髄破壊調節レジメンとして抗ＣＤ４５放射性免疫療法を利用したヒト臨床研究の開発および計画において支持的であろう。

【0142】

現行の研究には、ＡＣＴを受けるための調節レジメンとしてのＣＤ４５放射性免疫療法剤のモデリングのために、ＣＤ４５＋免疫細胞の骨髄および末梢血を枯渇させるためのＣＤ４５放射標識された（¹³¹Ｉ）抗マウス受容体抗体を使用した免疫担当性マウス（例えば、８～１２週齢のメスのＣ５７Ｂｌ／６マウス）が含まれる。コンパレータは、シクロホスファミド（Ｃｙ）とフルダラビン（Ｆｌｕ）の併用化学療法による治療である。治療後の最大３つの時点で、動物を犠牲にし、末梢血、脾臓、および骨髄試料を免疫表現型検査のために採取して、リンパ球枯渇についてリンパ系および骨髄系サブセットを評価し、血液（血清）を様々な治療レジメンに応答するサイトカインプロファイリングのために採取する。

【0143】

材料：マウス（各時点群当たり３匹）、例えば、メスの青年期のＣ５７Ｂｌ／６マウス（合計３０匹のマウス）。マウスサロゲート抗ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１（供給元：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ：ＭＡＢＦ３２１、ラットＩｇＧ２ｂ）。標識用¹³¹Ｉ。フルダラビン（Ｆｌｕ）＋シクロホスファミド（Ｃｙ）（処置：２５０ｍｇ／ｋｇのＣｙ＋５０ｍｇ／ｋｇのＦｌｕ）

【0144】

パートＩ：サロゲートＣＤ４５抗体３０Ｆ１１の標識およびインビトロ特性評価－３０Ｆ１１抗体のヨウ素化を実施すする；マウスＣＤ４５＋細胞に対する免疫反応性試験（例えば、Ｂ６－Ｌｙ５ａ脾臓細胞５ｎｇ／ｍｌで１時間：目標７０％超の免疫反応性）を実施する。

【0145】

パートＩＩ：（ａ）（ｉ）インビボ研究のための用量を準備する（２００μｌで投与された１００μｇ中０．５ｍＣｉ、Ｍａｔｔｈｅｗｓ，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｂｌｏｏｄ，２：７３７－７４５による）（ｉｉ）Ｍａｔｔｈｅｗｓ線量測定の結果：０．５ｍＣｉの用量：脾臓に対して５４Ｇｙ、骨髄に対して１７Ｇｙ、肺に対して８Ｇｙ、および肝臓に対して５Ｇｙ。他の研究では、１００μｇ中０．０５、０．１、および０．２ｍＣｉを投与して、用量応答を決定した。

【0146】

（ｂ）放射性免疫療法レジメンを、ＩＰ投与する。１群当たり９匹のマウスに、ＣＤ４５放射性免疫療法または併用化学療法（Ｃｙ／Ｆｌｕ）を投与する。１２匹のマウスが治療前であり、治療対照は存在しない。

【0147】

（ｃ）３つの時点（すなわち、２４時間、４８時間、および９６時間）でマウスを犠牲にし、試料を抽出する（骨髄、末梢血、および脾臓、ならびに血清を採取する）。図７を参照されたい。

【0148】

（ｄ）免疫表現型検査を骨髄および末梢血において実施し、（ｉ）Ｔｒｅｇ（ＣＤ４、ＣＤ２５、ＦｏｘＰ３）、（ｉｉ）ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞、Ｂ細胞 ＮＫ細胞：（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ３３５）、（ｉｉｉ）ＨＳＣ（Ｌｉｎ－、ｃ－ＫＩＴ、ＳＣＡ１）、ならびに（ｉｖ）ＭＤＳＣ、ＤＣ、ＭＡＣ、顆粒球：（ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２４４、ｓｙｇｌｅｃ Ｆ、Ｌｙ６Ｇ、Ｌｙ６Ｃ）を評価する。

【0149】

（ｅ）サイトカインプロファイリングを、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１５、ＭＩＰ１ａ、ＶＥＧＦ、およびＩＦＮｇを含む、Ｌｕｍｉｎｅｘによるパネル３１－Ｐｌｅｘ（ＭＤ３１）を使用して実施する。

【0150】

実施例９－マウスにおける抗ＣＤ４５放射性免疫療法介在性コンディショニング／リンパ球枯渇後の養子Ｔ細胞移植の前臨床モデル
概要：リンパ球枯渇は、ＣＡＲ Ｔなどの自己または同種細胞療法を受けるために患者をコンディショニングするための重要なステップであると考えられている。養子細胞移植のための準備において、マウスモデルにおける免疫細胞の選択的枯渇およびサイトカイン応答の調節に対する¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法の効果を評価するための研究が提案されている。本研究では、ＣＤ４５放射性免疫療法の使用は、養子Ｔ細胞移植前の非骨髄破壊的コンディショニングレジメンとして評価されるであろう。Ｅ．Ｇ７リンパ腫腫瘍担持マウスは、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の養子細胞移植前に、単回選択用量の¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法によってコンディショニングされ、移植された細胞の生着およびその結果として生じる抗腫瘍応答についてモニタリングされる。コンパレータは、ＣｙとＦｌｕの併用化学療法によるコンディショニング、または事前コンディショニングなしである。図８を参照されたい。

【0151】

材料：（ｉ）マウス（各群当たり５匹）、メスの青年期Ｃ５７Ｂｌ／６ ＣＤ４５．１マウス（３群、合計１５匹のマウス）。（ｉｉ）ドナーＣＤ４５．２ ＯＴ－１マウス（ドナーＴ細胞プールに十分な、約５匹のマウス）。（ｉｉｉ）Ｅ．Ｇ７腫瘍細胞株。（ｉｖ）マウスサロゲート抗ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１（供給元：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ：ＭＡＢＦ３２１ ２００μｇ、ラットＩｇＧ２ｂκ）。（ｖ）標識用¹¹¹Ｉｎ。（ｖｉ）フルダラビン＋シクロホスファミド（処置：２５０ｍｇ／ｋｇのＣｙ＋５０ｍｇ／ｋｇのＦｌｕ）。

【0152】

方法：（１）ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６マウスの各々に、２×１０⁶個のＥ．Ｇ７腫瘍細胞（Ｍａｔｒｉｇｅｌなし）を、およそ１００ｍｍ³の腫瘍体積に達するまで皮下注射する。

【0153】

（２）腫瘍細胞注射のおよそ７日後、マウスに対して、¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５放射性免疫療法（０．５ｍＣｉの¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体の単回腹腔内投与、２００μｌ中１００μｇの抗体）もしくはＦｌｕ／Ｃｙのいずれかによってリンパ球枯渇を行うか、またはコンディショニングを行わない。

【0154】

（３）ＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＤ４５．２ ＯＴ－１トランスジェニックマウスから単離し、インビトロで培養および活性化する。

【0155】

（４）リンパ球枯渇の４日後、２×１０⁶個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、尾静脈注射を介して各コホートに投与する。

【0156】

（５）腫瘍体積および体重を、行動および健康状態の評価とともに、毎日測定する。

【0157】

（６）Ｈｓｕ，ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，６：４４１３４－４４１５０に基づき、腫瘍応答は、Ｔ細胞投与後１０日以内に記録する。１０日目の測定後、マウスを犠牲にし、血液および腫瘍を採取する。

【0158】

（７）腫瘍を切片化し、Ｈ＆Ｅ、ＣＤ８＋細胞、およびＴｒｅｇを染色する。

【0159】

（８）血液は、生着したＣＤ８細胞（ＣＤ４５．２＋）ならびにＴｒｅｇおよびＭＤＳＣの集団の存在について、順に評価される。

【0160】

（９）サイトカインプロファイリングを実施して、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、およびＩＦＮｇの末端レベルを評価する。

【0161】

実施例１０－遺伝子編集されたＴ細胞
本実施例は、遺伝子編集されたＴ細胞を含有する養子細胞療法の１回以上の用量の投与に先行する、がん患者におけるリンパ球枯渇に関する。

【0162】

ＣＡＲ Ｔ細胞は、臨床的にかなりの有望性を示しており、難治性リンパ腫患者集団における奏効率は８０％を超え、治療された患者のほぼ５０％において６か月以上持続する持続的な応答を有する。

【0163】

しかしながら、これらの操作されたＴ細胞は、ＰＤ１、Ｌａｇ３、またはＴＩＭ３のような免疫チェックポイント受容体の上方調節などの免疫調節制御の影響を受けやすいままである。これらの受容体は、消耗の状態を媒介し、操作された細胞の活性化潜在能力を制限する。同種ＣＡＲ Ｔ細胞の場合、これらの外因的に投与された細胞は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を誘発するリスクを伴う。このリスクは、操作された同種Ｔ細胞上に存在する天然Ｔ細胞受容体による不適合の主要な組織適合抗原の認識によって引き起こされる。

【0164】

これらの有害事象は、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９などの遺伝子編集技術によって効果的に軽減され得る。例えば、ＰＤ１をコードする遺伝子の破壊は、ＣＡＲ Ｔ抗腫瘍応答のチェックポイント調節の潜在能力を排除する。さらに、同種ＣＡＲ Ｔ細胞調製物中の内因性ＴＣＲ座位を破壊するための遺伝子編集は、ＧＶＨＤを効果的に防止する（Ｒｅｎ，ｅｔ ａｌ．）。リンパ球枯渇は、投与されたＣＡＲ Ｔ細胞の生着、増殖、および持続性を成功裏に可能にする重要なステップである。しかしながら、非特異的化学療法および放射線の使用を置き換えるには、リンパ球枯渇に対するより安全かつより有効な方法（例えば、対象の方法）が必要である。既知の非特異的レジメンは、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）などのＣＡＲ Ｔ関連毒性の出現に寄与する可能性があり、遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞は、このリスクから除外されない。対象のＣＤ４５ベースのリンパ球枯渇法は、ＣＡＲ Ｔ細胞がチェックポイント受容体または内因性ＴＣＲを破壊されているかどうかにかかわらず、遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔの前にリンパ球を枯渇させるための、より安全な、標的化された、かつより有効な方法である。

【0165】

実施例１１－Ｉｏｍａｂ－Ｂの多施設ピボタル第３相研究における赤色骨髄の線量測定および活性レベル低下までの時間
計算を実施して、¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体（Ｉｏｍａｂ－Ｂ）の活性レベルが、赤血球における放射線量の効果を最小化して、後続の細胞骨髄回復療法を可能にし、促進するために必要とされる、低下されたまたは仮定された「安全な」レベルまで低下するための、注入後の時間を評価した。

【0166】

Ｉｏｍａｂ－Ｂの投与後、放射標識された抗体の活性は、取り込みの著しい主要器官の各々から指数関数的に減少する。理論に拘束されることを望まないが、１つの可能な説明は、生物学的クリアランスと放射性崩壊との複合効果によって、赤色骨髄への線量率が経時的に指数関数的に減少することであり、その結果、無限時間を通して骨髄への残余総線量が２５ｃＧｙの値を超えない時点に到達し得る。値２５ｃＧｙは、高用量Ｉｏｍａｂ－Ｂを用いた前療法後の赤色骨髄細胞の再生および回復に悪影響を与えない、比較的「安全な」吸収線量の１つの推定値を表す。

【0167】

データ概説：臨床治験において¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体（¹³¹Ｉ－ＢＣ８）を投与されている２５人の患者のサブセットにおいて、赤色骨髄における¹³¹Ｉ－ＢＣ８の平均初期取り込みは１７．４％であり、これは、４５．１時間の平均有効半減期で除去された。図１０は、１００ｍＣｉの注入に対するＩｏｍａｂ－Ｂ患者における赤色骨髄に対する平均線量率（ｃＧｙ／時間）を示す。骨髄への線量率は、注入後の時間に対してプロットされている。消失曲線は、４５．１時間の滞留半減期を有する単一の指数関数を表す。注入後１５４時間（約６．５日）で、曲線下面積は、すべての残余時間の間に、２５ｃＧｙを超えない総吸収線量が赤色骨髄に付与されるであろうことを示す（総線量２７１ｃＧｙ約９％を表す）。

【0168】

図１０はまた、赤色骨髄に対する平均初期線量率が４．１６ｃＧｙ／時であったことを示す。２５ｃＧｙ点に到達するまでの時間は、注入される活性の増加とともに増加する。表４は、５０ｍＣｉ、７５ｍＣｉ、１００ｍＣｉ、１５０ｍＣｉ、および２００ｍＣｉの¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体の注入についての２５ｃＧｙ時点を示す。

【表4】

【0169】

予備的な結論：これらのデータから、細胞回復療法（ＡＣＴ）の開始のための¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体の注入後、投与された用量に応じて、６～８日の待機期間が十分である可能性が高いと見られる。安全性を追加するために、かつ体内動態の取り込みおよびクリアランス半減期が平均値よりも大きい患者を考慮するために、¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体の注入後、安全性期間が１～２日（２００ｍＣｉで９～１０日）延長され得る。

【0170】

個々の患者の変動性：患者は、Ｉｏｍａｂの体内分布およびクリアランス動態において異なった。赤色骨髄の平均初期取り込みは、総注入量の１７．４％であったが、注入後に観察された最も高い赤色骨髄の取り込みは、１人の患者において３６％であった。骨髄からの平均クリアランス半減期は、４５．１時間であったが、観察された最も長いクリアランス半減期は、７１時間であった。赤色骨髄に対する平均吸収線量は、２．７１ｃＧｙ／ｍＣｉ ¹³¹Ｉであったが、現在のプロトコルで観察された最も高い値は、４．２４ｃＧｙ／ｍＣｉであった。

【0171】

実施例１２－マウスにおける¹³¹Ｉ－ＢＣ８標的化免疫枯渇後のＴ－ｒｅｇ細胞の免疫表現型検査。
放射性免疫療法に向けた¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体を使用したマウスにおける標的化免疫枯渇の研究は、骨髄に対する影響を効果的に抑制しながら、Ｔ－ｒｅｇを含むリンパ球を枯渇のために標的化することができる用量を定義する能力を示している。図４Ａ～４Ｅおよび５Ａ～５Ｃは、５０～２００μＣｉの用量の¹³¹Ｉ－ＢＣ８が、リンパ球およびＴ－ｒｅｇを枯渇させ、かつ骨髄細胞に対して明らかな効果を有さないことを実証する。μリンパ球枯渇に対して評価されたものよりも１．５～４倍高い用量レベルが、Ｂ細胞リンパ腫のマウス腫瘍モデルにおいて示されており、抗腫瘍効果を指し示している。本発明のより低いリンパ球枯渇用量はまた、ＣＤ４５陽性腫瘍細胞を標的化し、抗腫瘍効果に寄与し、ＰＤ１陽性腫瘍を含む腫瘍量を減少させ、ＡＣＴまたはＣＡＲ－Ｔ転帰を改善する。要約すると、ＡＣＴの調製に使用される場合、本発明は、免疫抑制性腫瘍微小環境を標的化し、ＡＣＴ生着、応答、および抗腫瘍転帰の改善をもたらす。

【0172】

実施例１３－ＣＤ４５標的化免疫枯渇は、養子細胞療法に安全である。
放射性免疫療法に向けた¹³¹Ｉ－抗ＣＤ４５抗体を使用したマウスにおける標的化免疫枯渇の研究は、そのような形態の免疫枯渇が、養子細胞療法の前に安全であることを示している。Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ腫瘍生着を有するマウスを、１００ｕＣｉの¹³¹Ｉ－ＣＤ４５でコンディショニングし、１×１０⁶ ＯＴ Ｉ ＯＶＡ反応性Ｔ細胞を４日目に投与した。図１３Ａおよび１３Ｂに示されるように、養子移植された細胞は、脾臓内に存続することができ、かつ腫瘍増殖を制御することができた。

【0173】

以下の態様が本出願に開示される。

【0174】

態様１．対象の免疫細胞の特定のサブセットの標的化免疫枯渇のための方法であって、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、もしくはそれらの組み合わせ、またはＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５２、もしくはそれらの組み合わせ、またはＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１受容体、およびＢ７－ＨＡ、もしくはそれらの組み合わせに対する、有効量の放射標識された抗体を対象に投与することを含む、方法。

【0175】

態様２．放射標識された抗体が、リンパ系由来標的および骨髄系由来標的を含む、二重特異性抗体であり、リンパ系標的が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ９６、ＣＤ１２２、ＣＤ１５２、もしくはＣＤ１５４であり、かつ／または骨髄系標的が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３３、もしくはＣＤ１１６である、態様１に記載の方法。

【0176】

態様３．有効量の放射標識された抗体が、標的化免疫細胞の少なくとも５０％、または標的化免疫細胞の少なくとも７０％、または標的化免疫細胞の少なくとも８０％を枯渇させ、有効量の放射標識された抗体が、対象の幹細胞の２０％未満、または対象の幹細胞の１０％未満を枯渇させる、態様１または態様２に記載の方法。

【0177】

態様４．放射標識された抗体が、¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、⁹⁰Ｙ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、⁸⁹Ｓｒ、¹⁵³Ｓｍ、³²Ｐ、²²⁵Ａｃ、²¹³Ｂｉ、²¹³Ｐｏ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｂｉ、²¹³Ｂｉ、²²³Ｒａ、²²⁷Ｔｈ、¹⁴⁹Ｔｂ、¹³⁷Ｃｓ、²¹²Ｐｂ、または¹⁰³Ｐｄで標識されている、態様１～３のいずれか１つに記載の方法。

【0178】

態様５．対象の免疫細胞の特定のサブセットが、リンパ系由来であるが幹細胞ではない細胞を含む、態様１～４のいずれか１つに記載の方法。

【0179】

態様６．対象の免疫細胞の特定のサブセットが、骨髄性由来であるが幹細胞ではない細胞を含む、態様１～５のいずれか１つに記載の方法。

【0180】

態様７．放射標識された抗体が、¹³¹Ｉで標識されており、有効量が、１０ｍＣｉ～２００ｍＣｉであるか、または有効量が、２００ｍＣｉ未満であるか、または有効量が、１００ｍＣｉ未満である、態様１～６のいずれか１つに記載の方法。

【0181】

態様８．放射標識された抗体が、²²⁵Ａｃで標識されており、有効量が、０．１μＣｉ／ｋｇ（対象体重）～５．０μＣｉ／ｋｇ（対象体重）である、態様１～６のいずれか１つに記載の方法。

【0182】

態様９．有効量の放射標識された抗体が、対象において骨髄破壊を誘導しない、態様１～８のいずれか１つに記載の方法。

【0183】

態様１０．有効量の放射標識された抗体が、単回用量として投与される、態様１～９のいずれか１つに記載の方法。

【0184】

態様１１．有効量の放射標識された抗体が、骨髄に２Ｇｙ以下の放射線量を提供する、態様１～１０のいずれか１つに記載の方法。

【0185】

態様１２．対象が、がんに罹患しており、かつがんを治療するために養子細胞療法を受けるところである、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0186】

態様１３．対象に対して養子細胞療法を実施することをさらに含み、養子細胞療法が、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体（ＣＡＲ／ＴＣＲ）を発現する有効量の細胞集団を対象に投与することを含む、態様１～１２のいずれか１つに記載の方法。

【0187】

態様１４．養子細胞療法が、放射標識された抗体の投与の６、７、または８日後に実施される、態様１１または１３に記載の方法。

【0188】

態様１５．養子細胞療法が、自己細胞療法であるか、または養子細胞療法が、同種細胞療法である、態様１１～１４のいずれか１つに記載の方法。

【0189】

態様１６．養子細胞療法が、遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞の投与を含み、遺伝子編集されたＣＡＲ Ｔ細胞が、少なくとも１つのチェックポイント受容体および／または少なくとも１つのＴ細胞受容体を適切に発現し損なう、態様１１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0190】

態様１７．ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ－１、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＭＡＧＥＡ３、ＭＡＧＥＡ３／Ａ６、ＫＲＡＳ、ＣＬＬ１、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、ＥｐＣａｍ、ＧＤ２、ＧＰＣ３、ＧＰＡ７、ＰＳＣＡ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＲＯＲ１、メソテリン、ＣＤ３３／ＩＬ３Ｒａ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＤ３７、ＰＳＭＡ、糖脂質Ｆ７７、ＧＤ－２、ｇｐ１００、ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲ、ＦＲアルファ、ＣＤ２４、ＣＤ４４、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＣＡ－１２５、ＨＥ４、オーバル、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、ｕＰＡ、ＰＡＩ－１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、もしくはＵＬＢＰ６、またはそれらの組み合わせを標的化する、態様１１～１６のいずれか１つに記載の方法。

【0191】

態様１８．ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞集団が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、またはそれらの組み合わせを標的化する、態様１１～１７のいずれか１つに記載の方法。

【0192】

態様１９．対象が、自己免疫疾患に罹患しており、対象の免疫細胞の特定のサブセットが、Ｂ細胞、形質細胞、またはそれら両方の組み合わせを含む、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

【0193】

態様２０．（ａ）ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ９６、ＣＤ１１６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１、Ｂ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせに対する放射標識された抗体、ならびに（ｂ）対象に、対象の標的化免疫細胞の少なくとも５０％、および対象の幹細胞の２０％未満を枯渇させるのに有効なある量の抗体を投与するよう使用者に指示する標識と、を含むか、または抗体の量が、対象の標的化免疫細胞の少なくとも９０％、および対象の幹細胞の１０％未満を枯渇させるのに有効である、製造物品。

【0194】

態様２１．放射標識された抗体が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５２、またはそれらの組み合わせに対するものである、態様２０に記載の製造物品。

【0195】

態様２２．放射標識された抗体が、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ２４４、ＣＤ２７２、ＣＤ３０５、ＣＬＡ、ＩＬ－２１受容体、およびＢ７－ＨＡ、またはそれらの組み合わせに対するものである、態様２０に記載の製造物品。

【0196】

態様２３．放射標識された抗体が、リンパ系由来標的および骨髄系由来標的を含む二特異性抗体である、態様２０に記載の製造物品。

【0197】

態様２４．標的のうちの少なくとも１つが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、またはＣＤ５２を含む、態様２３に記載の製造物品。

【0198】

態様２５．リンパ系標的が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ９６、ＣＤ１２２、ＣＤ１５２、もしくはＣＤ１５４であり、かつ／または骨髄系標的が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３３、もしくはＣＤ１１６である、態様２３に記載の製造物品。

【0199】

態様２６．抗体が、¹³¹Ｉで放射標識され、かつ１０ｍＣｉ～２００ｍＣｉの量で投与されるか、または抗体が、²²⁵Ａｃで放射標識され、かつ０．１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ（対象体重）の量で投与される、態様２０～２５のいずれか１つに記載の製造物品。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図2】

【図3A-3E】

【図3F-3H】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【国際調査報告】