▶ ヴォリューション イミュノ ファーマシューティカルズ エスエイの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-06-27
(54)【発明の名称】治療法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/17 20060101AFI20220620BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220620BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20220620BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220620BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220620BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20220620BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20220620BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20220620BHJP
A61K 31/365 20060101ALI20220620BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220620BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20220620BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20220620BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20220620BHJP
C07K 14/435 20060101ALN20220620BHJP
【ＦＩ】
A61K38/17
A61P27/02
A61P27/06
A61P43/00 121
A61K45/00
A61K48/00
A61P43/00 105
A61P43/00 111
A61K31/573
A61K31/519
A61K31/365
A61K39/395 N
A61K39/395 U
A61K38/16
A61K31/7088
C12N15/12 ZNA
C07K14/435
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021563064
(86)(22)【出願日】2020-03-04
(85)【翻訳文提出日】2021-12-21
(86)【国際出願番号】 EP2020055741
(87)【国際公開番号】W WO2020216513
(87)【国際公開日】2020-10-29
(31)【優先権主張番号】1905810.6
(32)【優先日】2019-04-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(31)【優先権主張番号】2000955.1
(32)【優先日】2020-01-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り （１）▲１▼ウェブサイトの掲載日： ２０１９年３月５日 ウェブサイトのアドレス：ｈｔｔｐｓ：／／ｅｖｅｎｔｐｉｌｏｔ．ｕｓ／ｗｅｂ／ｐａｇｅ．ｐｈｐ？ｎａｖ＝ｆａｌｓｅ＆ｐａｇｅ＝ＩｎｔＨｔｍｌ＆ｐｒｏｊｅｃｔ＝ＡＲＶＯ１９＆ｉｄ＝３１５３９０６ ▲２▼学会開催日： ２０１９年４月２８日～５月２日 （２）ウェブサイトの掲載日： ２０１９年３月２７日 ウェブサイトのアドレス：ｈｔｔｐ：／／ｉｎｖｅｓｔｏｒ．ａｋａｒｉｔｘ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ－ｒｅｌｅａｓｅｓ／ｎｅｗｓ－ｒｅｌｅａｓｅ－ｄｅｔａｉｌｓ／ａｋａｒｉ－ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ－ｐｒｏｖｉｄｅ－ｕｐｄａｔｅ－ｉｔｓ－ｅｙｅ－ｄｉｓｅａｓｅ－ｐｒｏｇｒａｍ－ｄｕｒｉｎｇ
(71)【出願人】
【識別番号】514058533
【氏名又は名称】ヴォリューション イミュノ ファーマシューティカルズ エスエイ
(74)【代理人】
【識別番号】100149076
【弁理士】
【氏名又は名称】梅田 慎介
(74)【代理人】
【識別番号】100119183
【弁理士】
【氏名又は名称】松任谷 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100162503
【弁理士】
【氏名又は名称】今野 智介
(72)【発明者】
【氏名】ウェストン－デヴィズ，ワイン エイチ
(72)【発明者】
【氏名】コールダー，ヴァージニア
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA13
4C084AA19
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA21
4C084BA22
4C084BA23
4C084BA41
4C084CA49
4C084DC50
4C084MA58
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZB211
4C084ZB212
4C084ZC201
4C084ZC202
4C084ZC411
4C084ZC412
4C084ZC75
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB17
4C085EE03
4C085GG10
4C086AA01
4C086BA17
4C086CB07
4C086CB09
4C086DA10
4C086EA16
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA58
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA33
4C086ZB21
4C086ZC41
4C086ZC75
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA50
4H045EA20
(57)【要約】
本発明は、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象に、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法。
【請求項2】
対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤。
【請求項3】
対象に、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物をコードする核酸分子である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法。
【請求項4】
増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物をコードする核酸分子である薬剤。
【請求項5】
薬剤が、最大で５０のアミノ酸置換、挿入または欠失がなされた、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列を含むタンパク質であるか、またはそれをコードし、タンパク質が、Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合し、
配列番号４に示される成熟ノマコパン分子の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々が保持されており、ＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々、およびＣ５結合残基の少なくとも５、１０または１５または２０または各々が、保持されているかまたは保存的改変を受けており、
ＬＴＢ４結合残基が、Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５であり（配列番号４による番号付け）、Ｃ５結合残基が、Ｖａｌ２６、Ｖａｌ２８、Ａｒｇ２９、Ａｌａ４４、Ｇｌｙ４５、Ｇｌｙ６１、Ｔｈｒ６２、Ｓｅｒ９７、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ｍｅｔ１１４、Ｍｅｔ１１６、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｌｅｕ１２２、Ｇｌｕ１２３、Ｖａｌ１２４、Ｇｌｕ１２５、Ｇｌｕ１２７、Ｈｉｓ１４６、Ｌｅｕ１４７およびＡｓｐ１４９である（配列番号４による番号付け）、
請求項１もしくは３のいずれか一項に記載の方法または請求項２もしくは４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項6】
ＬＴＢ４およびＣ５結合残基の最大で２、３、４、５、１０、１５、２０が、保存的改変を受けている、請求項５に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項7】
ＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々、およびＣ５結合残基の少なくとも５、１０または１５または２０または各々が保持されている、請求項５または６に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項8】
ＬＴＢ４結合残基の各々およびＣ５結合残基の各々が、保持されているかまたは保存的改変を受けている、請求項５～７のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項9】
ＬＴＢ４結合残基の各々およびＣ５結合残基の各々が保持されているかまたは保存的改変を受けており、Ｃ５および／またはＬＴＢ４結合残基の最大で２、３、４、５、１０、１５、２０が、保存的改変を受けている、請求項５～８のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項10】
ＬＴＢ４結合残基の各々およびＣ５結合残基の各々が、保持されている、請求項５～９のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項11】
薬剤が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むタンパク質であるか、またはそれをコードし、前記タンパク質が、
（ｉ）Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合するか、または
（ｉｉ）ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合活性を有するかまたはＣ５結合活性を有しない、
請求項１もしくは３のいずれか一項に記載の方法または請求項２もしくは４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項12】
薬剤が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むタンパク質であるか、またはそれをコードし、前記タンパク質が、
（ｉ）Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合するか、または
（ｉｉ）ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合活性を有するかまたはＣ５結合活性を有しない、
請求項１、３もしくは１１のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは１１のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項13】
薬剤が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むタンパク質であるか、またはそれをコードし、前記タンパク質が、
（ｉ）Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合するか、または
（ｉｉ）ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合活性を有するかまたはＣ５結合活性を有しない、
請求項１、３、もしくは１１～１２のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４、もしくは１１～１２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項14】
薬剤が、ＬＴＢ４結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示すかまたはＣ５結合性を示さないタンパク質であるか、またはそれをコードし、前記タンパク質が、１～３０のアミノ酸置換がなされている配列番号４を含むかまたはそれからなり、（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている
の１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号４のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている、
請求項１、３、もしくは１１のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４、もしくは１１のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項15】
薬剤が、請求項１４に規定されるタンパク質であるか、またはそれをコードし、ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒで置換されており；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａで置換されており；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されており；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｐで置換されている、
請求項１、３、１１もしくは１４のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４、１１もしくは１４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項16】
薬剤が、請求項１４または１５のいずれかに規定されるタンパク質であるか、またはそれをコードし、配列番号４の１１４～１２４位において、
ｆ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されており；
ｇ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されており；
ｈ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されており；
ｉ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されており；
ｊ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている、
請求項１、３、１１もしくは１４～１５のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４、１１もしくは１４～１５のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項17】
薬剤が、請求項１４～１６のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、Ｔｒｐ１１５が置換されていないタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～１６のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～１６のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項18】
薬剤が、請求項１４～１７のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０およびＶａｌ１２４が置換されていないタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～１７のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～１７のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項19】
薬剤が、請求項１４～１８のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、配列番号２８に示されるように配列番号４のアミノ酸１１４～１２４位の間にループ配列を有し、配列番号２３に示されているもの以外に、配列番号４と比較して１～２０の追加的な置換を有するタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～１８のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５もしくは１４～１８のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項20】
薬剤が、請求項１４～１９のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、配列番号２３に示されているもの以外に、配列番号４と比較して２～１５の追加的な置換を有するタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～１９のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～１９のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項21】
薬剤が、請求項１４～２０のいずれかに規定されるタンパク質であって、配列番号２３に示されているもの以外に、配列番号４と比較して３～１０の追加的な置換を有するタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２０のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項22】
薬剤が、請求項１４～２１のいずれかに規定されるタンパク質であって、配列番号４のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されているタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２１のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２１のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項23】
薬剤が、請求項１４～２２のいずれかに規定されるタンパク質であって、配列番号４のＡｌａ４４がＡｓｎで置換されているタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２２のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項24】
薬剤が、請求項１４～２３のいずれかに規定されるタンパク質であって、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されているタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２３のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２３のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項25】
薬剤が、請求項１４～２４のいずれかに規定されるタンパク質であって、配列番号４のＡｌａ４４がＡｓｎで置換されており、配列番号４のＡｓｐ１４９がＧｌｙで置換されているタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２４のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項26】
薬剤が、請求項１４～２５のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸が、未改変形態に保持されているタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２５のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２５のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項27】
薬剤が、請求項１４～２５のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、以下のアミノ酸：Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５の１または２以上が置換されていないタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２６のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２６のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項28】
薬剤が、請求項１４～２７のいずれか一項に規定されるタンパク質であって、以下のアミノ酸：Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５の全てが置換されていないタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２７のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２７のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項29】
薬剤が、請求項１４～２７いずれか一項に規定されるタンパク質であって、ａ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６９～８１、８３、８４、８６、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていないか、または
ｂ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４３、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていないか、または
ｃ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２５、２７、３０～３２、３５～４１、４３、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９８、１００、１０２～１０４、１１２～１１３、１１５、１２６、１２８～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていない
タンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは５、１１もしくは１４～２７のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５、１１もしくは１４～２７のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項30】
薬剤が、（ｉ）配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列、（ｉｉ）配列番号２２、（ｉｉｉ）配列番号２３、（ｉｖ）配列番号２４または（ｖ）配列番号２５を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードし、好ましくは、薬剤が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列または配列番号２３を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードする、
請求項１、３もしくは５～１３のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは５～１３のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項31】
薬剤が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３、５～１３、もしくは３０のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４、５～１３もしくは３０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項32】
薬剤が、配列番号２２（バリアント１）を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは１４もしくは３０のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは１４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項33】
薬剤が、配列番号２３（バリアント２）を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは１４～３０のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは１４～３０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項34】
薬剤が、配列番号２４（バリアント３）を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは１４もしくは３０のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは１４もしくは３０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項35】
薬剤が、配列番号２５（バリアント４）を含むかもしくはそれからなるタンパク質であるか、またはそれをコードする、請求項１、３もしくは１４もしくは３０のいずれか一項に記載の方法または請求項２、４もしくは１４もしくは３０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項36】
薬剤が、請求項１、２または５～３５のいずれかに規定されるタンパク質の断片であるか、またはそれをコードし、タンパク質が、（ｉ）Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合するか、または
（ｉｉ）ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合活性を有するかまたはＣ５結合活性を有しない、
前記請求項のいずれかに記載の方法または前記請求項のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項37】
配列番号２のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質の機能的等価物が、（ａ）請求項５～３５のいずれかに記載されているかまたは請求項３６に記載されている断片からなる配列および（ｂ）第２の配列を含む融合タンパク質であり、前記融合タンパク質が、（ｉ）Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合するか、または
（ｉｉ）ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合活性を有するかまたはＣ５結合活性を有しない、
前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項38】
前記第２の配列が、ＰＡＳ配列である、請求項３７に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項39】
前記融合タンパク質が、ＡＳＰＡＡＰＡＰＡＳＰＡＡＰＡＰＳＡＰＡ（配列番号１５）；ＡＡＰＡＳＰＡＰＡＡＰＳＡＰＡＰＡＡＰＳ（配列番号１６）；ＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳ（配列番号１７）、ＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号１８）、ＳＳＰＳＡＰＳＰＳＳＰＡＳＰＳＰＳＳＰＡ（配列番号１９）、ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号２０）およびＡＳＡＡＡＰＡＡＡＳＡＡＡＳＡＰＳＡＡＡ（配列番号２１）のうちの１つの複数コピー、好ましくは配列番号１５～２１のうちの１つの２０～３０または３０コピーを含む、請求項３７または３８に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項40】
前記融合タンパク質が、（ａ）（ｉ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８、または（ｉｉ）配列番号２２、２３、２４もしくは２５、好ましくは、配列番号２のアミノ酸１９～１６８または配列番号２２からなるタンパク質を含む、請求項３７～３９のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項41】
前記融合タンパク質が、配列番号１５の３０コピーからなるＰＡＳ配列を含む、請求項４０に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項42】
前記融合タンパク質が、配列番号３０を含むか、またはそれからなる、請求項３７～４１のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項43】
前記融合タンパク質が、配列番号３１を含むか、またはそれからなる、請求項３７～４１のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項44】
薬剤が、眼に局所的にまたは眼内に直接的に投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項45】
薬剤が、眼に局所的に投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項46】
薬剤が、眼内に直接的に、例えば、硝子体内にまたは脈絡膜上に投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項47】
対象が、ヒトである、前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項48】
増殖性網膜疾患が、自己免疫性ブドウ膜炎、感染性ブドウ膜炎、湿性加齢性黄斑変性症（脈絡膜血管新生）、乾性加齢性黄斑変性症（地図状萎縮）、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、視神経炎（例えば、緑内障関連視神経炎）、網膜静脈閉塞症および未熟児網膜症から選択され、好ましくは自己免疫性ブドウ膜炎である、前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項49】
第２の増殖性網膜疾患治療の投与をさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項50】
第２の増殖性網膜疾患治療が、抗炎症医薬、免疫調節療法（ＩＭＴ）薬、生物学的応答修飾物質（ＢＲＭ）薬、抗ＶＥＧＦ治療、および図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である第２の薬剤から選択される、請求項４９に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項51】
（ａ）抗炎症医薬が、コルチコステロイドなどのステロイドであり、（ｂ）ＩＭＴ薬が、メトトレキサート、アザチオプリン、またはミコフェノレートから選択され、
（ｃ）ＢＲＭ薬が、抗ＴＮＦ剤、例えば、インフリキシマブまたはアダリムマブなどの抗ＴＮＦアルファ抗体またはその断片であり、
（ｄ）抗ＶＥＧＦ治療が、ベバシズマブ（アバスチン）もしくはラニビズマブ（ルセンティス）などの抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体もしくはその断片、ペガプタニブ（マクジェン）などの抗ＶＥＧＦアプタマー、またはアフリベルセプト（アイリーア）などの別の抗ＶＥＧＦアンタゴニストであり、
（ｅ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である第２の薬剤が、請求項１～４３のいずれか一項に記載されている通りである、
請求項５０に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項52】
請求項５～３６のいずれかに記載の薬剤を眼に局所的に投与すること、および第２の増殖性網膜疾患治療を眼内に直接的に、例えば硝子体内にまたは脈絡膜上に投与することを含む、請求項４９～５１のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項53】
第２の増殖性網膜疾患治療が、請求項３７～４３のいずれかに記載の融合タンパク質である薬剤である、請求項５２に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項54】
請求項５～３１または３６のいずれかに記載の薬剤を眼に局所的に投与すること、および請求項３７～４２のいずれかに記載の融合タンパク質である薬剤である第２の増殖性網膜疾患治療を眼内に直接的に投与することを含み、前記薬剤および前記融合タンパク質は各々、Ｃ５に結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、かつＬＴＢ４に結合する、請求項５２または５３に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項55】
図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むか、またはそれからなるタンパク質を眼に局所的に投与すること、および請求項４２に記載の融合タンパク質を眼内に直接的に投与することを含む、請求項５４に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項56】
請求項５～３０または３２～３６のいずれかに記載の薬剤を眼に局所的に投与すること、および請求項３７～４１または４３のいずれかに記載の融合タンパク質である薬剤である第２の増殖性網膜疾患治療を眼内に直接的に投与することを含み、前記薬剤および前記融合タンパク質は各々、ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合活性を有するかまたはＣ５結合活性を有しない、請求項５２または５３のいずれかに記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項57】
請求項３２に規定されるタンパク質を眼に局所的に投与すること、および請求項４３に記載の融合タンパク質を眼内に直接的に投与することを含む、請求項５６に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項58】
請求項５～３０または３２～３６のいずれかに記載の薬剤を眼に局所的に投与すること、および抗ＶＥＧＦ治療である第２の増殖性網膜疾患治療を眼内に直接的に投与することを含む、請求項５２に記載の方法または使用のための薬剤。
【請求項59】
前記抗ＶＥＧＦ治療が、ベバシズマブ（アバスチン）もしくはラニビズマブ（ルセンティス）などの抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体もしくはその断片、ペガプタニブ（マクジェン）などの抗ＶＥＧＦアプタマー、またはアフリベルセプト（アイリーア）などの別の抗ＶＥＧＦアンタゴニストである、請求項５８に記載の方法または使用のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、増殖性網膜疾患を治療および予防する方法に関する。
【0002】
本文中に言及され、本明細書の最後に記載される全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれている。
【背景技術】
【0003】
補体
補体系は、外敵の侵入に対抗する身体の自然防御メカニズムの欠くことのできない一部であり、炎症過程にも関与する。血清中および細胞表面の３０種を超えるタンパク質が補体系の機能発揮および調節に関与している。近年、有益な過程および病的過程の両方に関連し得る補体系の約３５の公知の成分だけでなく、補体系自体が、血管新生、血小板活性化および止血、グルコース代謝および精子形成のように多様な機能を有する少なくとも８５の生物学的経路と相互作用することが明らかになった。
補体系は、外敵の侵入に対抗する身体の自然防御メカニズムの欠くことのできない一部であり、炎症過程にも関与する。血清中および細胞表面の３０種を超えるタンパク質が補体系の機能発揮および調節に関与している。近年、有益な過程および病的過程の両方に関連し得る補体系の約３５の公知の成分だけでなく、補体系自体が、血管新生、血小板活性化および止血、グルコース代謝および精子形成のように多様な機能を有する少なくとも８５の生物学的経路と相互作用することが明らかになった。
【0004】
補体系は、免疫系によって非自己として認識される物質の存在によって活性化される。（１）ＩｇＭおよびＩｇＧ複合体によって、または糖質の認識によって活性化される古典的経路；（２）非自己表面（特異的調節分子を欠如する）および細菌エンドトキシンによって活性化される第二経路；ならびに（３）病原体表面のマンノース残基へのマンナン結合性レクチン（ＭＢＬ）の結合によって活性化されるレクチン経路という３つの活性化経路が存在する。これら３つの経路は、細胞表面の類似のＣ３１コンバターゼおよびＣ５コンバターゼの形成による補体活性化の産生を招く、平行する連鎖的なイベントを含み、その結果、急性期炎症メディエーター（Ｃ３ａおよびＣ５ａ）の放出および膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を生じる。古典的経路（本明細書では、Ｃ１ｑによる場合は古典的であり、ＭＢＬによる場合はレクチンであると定義される）および第二経路に関与する、平行する連鎖を図１に示す。（１補体経路の成分を文字「Ｃ」に続く「３」などの数字で表し、それにより補体タンパク質Ｃ３を表すようにすることが慣例である。これらの成分の一部は、補体系の活性化時に切断され、切断産物は数字の後に小文字で示される。したがって、Ｃ５は、慣例的にＣ５ａおよびＣ５ｂと呼ばれる断片に切断される。補体タンパク質は、必ずしも数字の順番で作用するわけでないので、数字は、必ずしも作用の順番を示すわけではない。この呼称の慣例が、本出願に使用される。）
【0005】
古典的補体経路、第二補体経路およびレクチン補体経路は、本明細書においてまとめて補体経路と呼ばれる。Ｃ５ｂは、補体活性化の「後期」または「最終」イベントを開始する。これらは、最終補体成分が相互作用してＭＡＣを形成する一連の重合反応を含み、ＭＡＣは、一部の病原体の細胞膜に孔を開け、そのことが病原体の死に繋がり得るか、または溶解を引き起こさずに身体自体の細胞を活性化する。最終補体成分には、Ｃ５ｂ（膜侵襲システムの集合を開始する）、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９が含まれる。
【0006】
ＬＴＢ４
ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）は、記載された、最も強力な走化性および化学運動性エイコサノイドであり、インテグリンのアップレギュレーションを介して好中球の血管内皮への接着を促進する［１］。ＬＴＢ４は、また、好中球に関する完全な分泌促進物質であり、その凝集を誘導し、微小血管透過性を増加させる。ＬＴＢ４は、ナチュラルキラー細胞、単球および好酸球を動員および活性化する。ＬＴＢ４は、スーパーオキシドラジカルの形成を増加させ［２］、組織の炎症を増強および延長するおそれがある、いくつかの炎症促進性サイトカインおよびメディエーターの産生を含む遺伝子発現をモジュレートする［３、４］。ＬＴＢ４は、また、適応免疫応答の誘導および管理に役割を果たす。例えば、流入領域リンパ節への樹状細胞の輸送の調節［５、６］、肺Ｔ細胞からのＴｈ２サイトカインＩＬ－１３の産生［７］、抗原特異的エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞の動員［８］ならびにヒトＢリンパ球の活性化および増殖［９］である。
ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）は、記載された、最も強力な走化性および化学運動性エイコサノイドであり、インテグリンのアップレギュレーションを介して好中球の血管内皮への接着を促進する［１］。ＬＴＢ４は、また、好中球に関する完全な分泌促進物質であり、その凝集を誘導し、微小血管透過性を増加させる。ＬＴＢ４は、ナチュラルキラー細胞、単球および好酸球を動員および活性化する。ＬＴＢ４は、スーパーオキシドラジカルの形成を増加させ［２］、組織の炎症を増強および延長するおそれがある、いくつかの炎症促進性サイトカインおよびメディエーターの産生を含む遺伝子発現をモジュレートする［３、４］。ＬＴＢ４は、また、適応免疫応答の誘導および管理に役割を果たす。例えば、流入領域リンパ節への樹状細胞の輸送の調節［５、６］、肺Ｔ細胞からのＴｈ２サイトカインＩＬ－１３の産生［７］、抗原特異的エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞の動員［８］ならびにヒトＢリンパ球の活性化および増殖［９］である。
【0007】
ＬＴＢ４およびヒドロキシエイコサノイドは、ＢＬＴ１およびＢＬＴ２ Ｇタンパク質共役受容体を経由してそれらの効果を媒介する［１０、１１］。ヒトＢＬＴ１は、ＬＴＢ４に特異的な高親和性受容体であり（Ｋｄ ０．３９～１．５ｎＭ；［１２］）、競合結合研究で２０－ヒドロキシＬＴＢ４および１２－エピＬＴＢ４だけがＬＴＢ４と置き換わることができる［１３］。ヒトＢＬＴ２は、ＢＬＴ１と比べてＬＴＢ４に対して２０分の１の親和性（Ｋｄ ２３ｎＭ）を有し、１２－エピＬＴＢ４、２０－ヒドロキシＬＴＢ４、１２（Ｓ）－ＨＥＴＥ、１５（Ｓ）－ＨＥＴＥ、１２（Ｓ）－ＨＰＥＴＥおよび１５（Ｓ）－ＨＰＥＴＥを含む、より広い範囲のエイコサノイドと結合することによって活性化される［１３］。ヒトＢＬＴ２は、ヒトおよびマウスＢＬＴ１と４５．２および４４．６％のアミノ酸同一性を有し、一方で、ヒトＢＬＴ２とマウスＢＬＴ２とは、９２．７％の同一性を有する［１１］。
【0008】
ヒトＢＬＴ１は、内皮細胞および血管平滑筋細胞で発現すると最近記載されたものの、主として白血球の表面で発現する。ヒトＢＬＴ２は、より広い範囲の組織および細胞型で発現する。ヒト好中球の活性化、血管外遊出およびアポトーシスを阻害し［１４］、炎症性関節炎［１５］および腎虚血再灌流［１６］のマウスモデルにおいて好中球浸潤によって起こる徴候（ｓｙｍｐｔｏｍ）を軽減する、ＢＬＴ１およびＢＬＴ２のいくつかの特異的アンタゴニストが記載されている。ＢＬＴ１およびＢＬＴ２の両方は、ＬＴＢ４およびヒドロキシエイコサノイドを経由して病的作用を媒介することができるが［１７］、ＢＬＴ１が、マウスにおけるコラーゲン誘発関節炎などのいくつかの病状に疑いなく優位な役割を果たすことが、ますます多くの研究によって示されている［１８］。ＢＬＴ１－／－欠損マウスは、また、炎症応答において好中球の遊走を方向づけることにＢＬＴ１が重要であることを強調した。特に、５ＬＯ欠損マウス系統を使用して、好中球上のＢＬＴ１のオートクリン活性化が、関節炎を起こした関節への好中球の動員に必要であることが示された［１９］。
【0009】
いくつかの市販薬が、エイコサノイドを標的とする。これらには、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）をモジュレートし、それにより、エイコサノイド前駆体であるアラキドン酸（ＡＡ）の放出を阻害するグルココルチコイド［２０］、ならびにプロスタグランジンおよびトロンボキサンの合成を防止する非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）および他のＣＯＸ２阻害剤が含まれる［２１］。ＬＴＢ４合成および他のロイコトリエンに必要な５－ＬＯＸ酵素を阻害する（ジロートン；［２２］）か、またはシステイニルロイコトリエンの効果を媒介するＣｙｓＬＴ１受容体に拮抗する（ザフィルルカストおよびモンテルカスト）［２３］かのいずれかの、いくつかのロイコトリエン（ＬＫ）調節物質もある。ＬＫ調節物質は、経口的に利用可能であり、例えば喘息の治療に使用するためにＦＤＡによって承認されている。ＬＴＢ４またはその受容体に特異的に作用する薬物は、まだ販売されていない。
【0010】
眼症状
背景
本発明は、網膜での血管形成を伴う網膜症状である増殖性網膜疾患の治療に関する。例えば、血管は、網膜虚血によって引き起こされる血液供給の減少に応答して生成され得る。この新血管形成は、一般的に、視神経乳頭または網膜表面において新しい血管の生成を刺激する成長ホルモン血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に応答して生じる。しかし、これらの新しい血管は、特に脆弱であり、漏れ易く、容易に破裂して出血および重度視力喪失を招く可能性がある。
背景
本発明は、網膜での血管形成を伴う網膜症状である増殖性網膜疾患の治療に関する。例えば、血管は、網膜虚血によって引き起こされる血液供給の減少に応答して生成され得る。この新血管形成は、一般的に、視神経乳頭または網膜表面において新しい血管の生成を刺激する成長ホルモン血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に応答して生じる。しかし、これらの新しい血管は、特に脆弱であり、漏れ易く、容易に破裂して出血および重度視力喪失を招く可能性がある。
【0011】
このような疾患には、自己免疫性ブドウ膜炎、感染性ブドウ膜炎、湿性加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）（脈絡膜血管新生）、乾性加齢性黄斑変性症（地図状萎縮）、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、視神経炎（例えば、緑内障関連視神経炎）、網膜静脈閉塞症および未熟児網膜症が含まれる。スタルガルト病およびポリープ状脈絡膜血管障害も含まれる。ブドウ膜炎が特に興味深い。
【0012】
これらの症状のある特定のものには現行の治療法が存在する。例えば、非感染性ブドウ膜炎の場合、治療は、抗炎症医薬、例えば、点眼薬として投与されるか、または眼にもしくはその周囲に注射されるか、経口で（口を介して）、または静脈内に投与されるステロイド（例えば、コルチコステロイド）、あるいは免疫調節療法（ＩＭＴ）薬（例えば、メトトレキサート、アザチオプリン、およびミコフェノレート）、生物学的応答調節物質（ＢＲＭ）薬（インフリキシマブまたはアダリムマブなどのＴＮＦアルファに結合する抗体またはそれらの断片であり得る抗ＴＮＦアルファ剤）による、眼炎症の制御に焦点が当てられている。湿性ＡＭＤの場合、糖尿病性黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病性網膜症の現行治療には、抗ＶＥＧＦ治療が含まれる。これらには、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体またはそれらの断片（ベバシズマブ（アバスチン）、ラニビズマブ（ルセンティス）など）、抗ＶＥＧＦアプタマー（ペガプタニブ（マクジェン）など）、ならびにヒトＩｇＧ１イムノグロブリンのＦｃ部分に融合されている、ヒトＶＥＧＦ受容体１および２の細胞外ドメインに由来する血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合性部分からなる組換え融合タンパク質であるアフリベルセプト（アイリーア）などの他のＶＥＧＦアンタゴニストが含まれる。このような抗ＶＥＧＦ薬は、約１～２ヶ月毎に硝子体内に注射することができる。これらの治療は、未熟児網膜症に対しても提案されている。
【0013】
増殖性網膜疾患は、依然として満たされていない臨床ニーズである。
【0014】
補体阻害剤
ＷＯ２００４／１０６３６９（Ｅｖｏｌｕｔｅｃ Ｌｉｍｉｔｅｄ［２４］）は、補体阻害剤に関する。開示される補体阻害剤の特定のサブセットは、Ｃ５に方向づけられ、補体活性化経路のいずれかによりＣ５がＣ５ａおよびＣ５ｂに開裂されるのを防止する。このようなＣ５開裂阻害剤の特定の例は、Ｏｒｎｉｔｈｄｏｒｏｓ ｍｏｕｂａｔａ種のマダニによって産生されるタンパク質であり、このタンパク質は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８からなるタンパク質である。ＷＯ２００４／１０６３６９では、このタンパク質は、名称「ｒＶＡ５７６」、「ＥＶ５７６」および「ＯｍＣＩタンパク質」で知られており、より最近には、「コバーシン（Ｃｏｖｅｒｓｉｎ）」として知られている［２５］。このタンパク質は、本明細書では「ノマコパン（ｎｏｍａｃｏｐａｎ）」と称され、この名称は、このタンパク質のＩＮＮである。
ＷＯ２００４／１０６３６９（Ｅｖｏｌｕｔｅｃ Ｌｉｍｉｔｅｄ［２４］）は、補体阻害剤に関する。開示される補体阻害剤の特定のサブセットは、Ｃ５に方向づけられ、補体活性化経路のいずれかによりＣ５がＣ５ａおよびＣ５ｂに開裂されるのを防止する。このようなＣ５開裂阻害剤の特定の例は、Ｏｒｎｉｔｈｄｏｒｏｓ ｍｏｕｂａｔａ種のマダニによって産生されるタンパク質であり、このタンパク質は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８からなるタンパク質である。ＷＯ２００４／１０６３６９では、このタンパク質は、名称「ｒＶＡ５７６」、「ＥＶ５７６」および「ＯｍＣＩタンパク質」で知られており、より最近には、「コバーシン（Ｃｏｖｅｒｓｉｎ）」として知られている［２５］。このタンパク質は、本明細書では「ノマコパン（ｎｏｍａｃｏｐａｎ）」と称され、この名称は、このタンパク質のＩＮＮである。
【0015】
マダニにおいて、ノマコパンは、成熟ノマコパンタンパク質のＮ末端に、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１～１８を含むリーダー配列を有するプレタンパク質として発現する。リーダー配列は、発現後に開裂除去される。成熟タンパク質は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４および本出願の図２に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８からなる配列を有する。
【0016】
ノマコパンは、また、ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）活性を阻害する能力を有する。ＬＴＢ４と結合する能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによって、例えば、標識ＬＴＢ４への結合を競合するノマコパンと抗ＬＴＢ４抗体との間の競合ＥＬＩＳＡによって、等温滴定熱量測定によって、または蛍光滴定によって、実証され得る。
【0017】
ＷＯ２００７／０２８９６８、ＷＯ２００８／０２９１６７、ＷＯ２００８／０２９１６９、ＷＯ２０１１／０８３３１７およびＷＯ２０１６／１９８１３３などの、様々な適用におけるノマコパンまたはその機能的等価物の使用に関するいくつかのさらなる特許出願がある。増殖性網膜疾患の治療におけるノマコパンまたはその任意の機能的等価物の有効性が確認されている実験的証拠は、これらの応用では存在しない。
【0018】
本発明に至る研究において、本発明者らは、網膜結合タンパク質（ＲＢＰ３）の注射によってこの疾患を誘導した実験的自己免疫性ブドウ膜炎モジュールで使用したマウスの網膜内にある細胞上に、ＬＴＢ４受容体およびＣ５ａ受容体が共に存在していることを示した。これらの細胞の少なくとも一部は、網膜損傷の領域へと遊走し、そこでＬＴＢ４刺激に応答してＶＥＧＦを放出することが知られているＭ２マクロファージであると考えられる。さらに、硝子体内に注射すると、上記のような分子ノマコパン（ＬＴＢ４に結合し、また、Ｃ５に結合することによって補体経路を阻害する）、ならびに本明細書ではＰＡＳ－ノマコパンおよびＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンと称される、ノマコパンおよびＬＴＢ４特異的ノマコパン（または「Ｌ－ノマコパン」、これは、ＬＴＢ４には結合するが、Ｃ５に結合することによって補体経路を阻害することはない）の両方の長期作用型バージョンは、実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）モデルの臨床スコアおよび複合組織学的スコアを改善することが示された。これらの分子は、また、Ｔｈ１７細胞（およびＩＬ－１７）の集団を減少させた。Ｔｈ１７サブセットは、ヒトブドウ膜炎で検出されており、ＥＡＵにおいて疾患を媒介する。また、ノマコパン、Ｌ－ノマコパンおよび長期作用型ノマコパンは、局所投与したところ、これらのマウスの臨床スコアに対して効果を示した。これは、この分子が角膜を透過できるとは考えられていなかったため、驚くべきことであるとみなされる。
【0019】
本発明者らは、また、ＥＡＵの別のマウスモデルにおいて、ＲＢＰ３（ＩＲＢＰとしても公知である）による誘導が、網膜組織におけるＶＥＧＦレベルの有意な増加を招くことを示した。ノマコパン型タンパク質の硝子体内注射は、抗ＶＥＧＦ抗体の硝子体内注射と同様に、ＶＥＧＦレベルの減少を招く（実施例４および図７Ａ）。ノマコパンおよびそのバリアントがＶＥＧＦに対して直接的効果を及ぼすことは一切知られていないため、これは、少なくとも、このモデルにおけるＶＥＧＦの主な供給源であると考えられる上述のＭ２マクロファージのＬＴＢ４活性化の阻害による間接的効果であることが示唆される。ノマコパン型タンパク質によって好中球からＬＴＢ４をスカベンジすることは、また、網膜から末梢血へのＬＴＢ４濃度勾配を減少させ、それによりＴｈ１７細胞（実施例３に示されるように）およびマクロファージの炎症細胞輸送を減少させる効果を有すると考えられる。
【0020】
ノマコパンは、ＬＴＢ４を阻害する能力を有し、したがって、単独または他の治療との組合せにおいて、増殖性網膜疾患の予防および治療に特に有利である。さらに、ノマコパンは、補体経路を阻害することができ（Ｃ５を阻害することによって）、例えば、補体経路が疾患病理に関与している場合、ある特定の利点を有する。ＬＴＢ４を阻害するがＣ５を阻害しないノマコパンの改変バージョンも有用であり得、また、特に補体経路を阻害することが望ましくない可能性がある場合に有用であり得る。
【0021】
ノマコパンは、眼表面症状（例えば、眼の表面にこのタンパク質を投与することによるアトピー性角結膜炎、例えば、ＷＯ２０１８１９３１２０を参照）の潜在的な治療として以前に開示されているが、この分子が角膜を透過し、したがって眼表面症状ではない眼症状を治療するために局所的に適用し得ることは以前は知られておらず、この分子が、眼内に直接的に投与すると有効であり得ることも以前は知られていなかった。例えば、治療用分子は、眼内に直接的に投与した場合でさえ、様々な障壁（内境界膜およびブルッフ膜など）が存在するので、効果的であるように作用を及ぼす必要がある場所に到達できない可能性がある。実際に、様々な以前の補体阻害剤分子が眼症状に関して以前に試験されているが、有効であるとは見出されていない（例えば、［２６］を参照）。
【0022】
したがって、本研究前は、ノマコパン型タンパク質が、局所投与または眼内への直接導入のいずれかによって増殖性網膜疾患を治療するために使用することができることは知られていなかった。さらに、ノマコパン型タンパク質を使用して、網膜組織のＶＥＧＦレベルを減少させることができることは知られていなかった。
【発明の概要】
【0023】
ノマコパン型タンパク質は、局所投与するとまたは眼内に直接的に導入することによって、実験的自己免疫性ブドウ膜炎マウスモデルの臨床スコアを減少させることがここに示されている。これは、ブドウ膜炎の治療に有用であるそのようなタンパク質の能力を実証するだけでなく、増殖性網膜疾患を治療するために、単独または他の治療との組合せにおいてそのようなタンパク質を使用することを支持する。ノマコパンは、さらに、補体経路（Ｃ５を阻害することによる）およびまたＬＴＢ４の両方を阻害する能力を有し、したがって、単独または他の治療との組合せにおいて、補体成分も存在する増殖性網膜疾患の予防および治療に特に有利である。このタンパク質の二重機能は、さらに、ＬＴＢ４に結合するがＣ５には結合しないその改変バージョン（例えば、Ｌ－ノマコパン）が、補体成分が存在せずおよび／または補体系の阻害が不利であり得る増殖性網膜疾患の予防および治療に特に有利であり得るように操作することができる。この場合も、これは、単独または他の治療との組合せであり得る。
【0024】
実施例１では、ノマコパン型タンパク質の局所投与は、マウスモデルにおける実験的自己免疫性ブドウ膜炎の臨床スコアを減少させる。その後の例では、ノマコパン型タンパク質の硝子体内投与は、マウスモデルにおける実験的自己免疫性ブドウ膜炎の臨床スコアを減少させる。
【0025】
本発明者らは、それゆえ、マダニタンパク質ノマコパン（当技術分野および本明細書においてＥＶ５７６およびＯｍＣＩとも称され［２４］、以前には「コバーシン」と称されている）およびそのバリアントの投与を、自己免疫性ブドウ膜炎および他の増殖性網膜疾患を治療または予防するために使用できることを実証した。
【0026】
本発明は、それゆえ、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法を提供する。
【0027】
本発明は、また、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0028】
本発明は、また、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物をコードする核酸分子である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法を提供する。
【0029】
本発明は、また、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物をコードする核酸分子である薬剤を提供する。
【0030】
本発明は、また、対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法であって、（ａ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量、および（ｂ）第２の増殖性網膜疾患治療を、前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【0031】
本発明は、また、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、（ａ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤、および（ｂ）第２の増殖性網膜疾患治療を提供する。
【0032】
本発明は、また、（ａ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物をコードする核酸分子である薬剤の治療または予防有効量、および（ｂ）第２の増殖性網膜疾患治療を投与することを含む、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法を提供する。
【0033】
本発明は、また、増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、（ａ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物をコードする核酸分子である薬剤、および（ｂ）第２の増殖性網膜疾患治療を提供する。
【0034】
本発明は、また、増殖性網膜疾患を治療もしくは予防するために必要とされる第２の増殖性網膜疾患治療の量を減少させるか、または増殖性網膜疾患を治療もしくは予防するために必要とされる第２の増殖性網膜疾患治療による治療期間を減少させる方法であって、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質もしくはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤または前記薬剤をコードする核酸分子の治療または予防有効量、および前記第２の増殖性網膜疾患治療を投与することを含む方法を提供する。
【0035】
実施例４は、ノマコパン型タンパク質が、ＥＡＵのマウスモデルにおいてＶＥＧＦレベルを効果的に減少させることができることを示す。ノマコパンおよびそのバリアントがＶＥＧＦに対して直接的効果を及ぼすことは一切知られていないため、これは、このモデルにおけるＶＥＧＦの主な供給源であると考えられる上述のＭ２マクロファージのＬＴＢ４活性化の阻害による間接的効果であることが示唆される。
【0036】
したがって、本発明の薬剤および方法は、本明細書の他の箇所に記載のように、例えば網膜組織におけるＶＥＧＦレベルを減少させることにより、増殖性網膜疾患を予防または治療することができる。例えば、網膜組織におけるＶＥＧＦシグナル伝達の減少による。そのような減少の効果は、ひいては、例えば、血管新生の減少および／または血管透過性の減少を起こす。
【0037】
本発明の薬剤および方法は、また、本明細書の他の箇所に記載のように、Ｍ２マクロファージのＬＴＢ４活性化を減少させることにより、増殖性網膜疾患を予防または治療することができる。
【発明を実施するための形態】
【0038】
疾患
増殖性網膜疾患は、網膜での血管形成を伴う網膜症状である。例えば、血管は、網膜虚血によって引き起こされる血液供給の減少に応答して生成され得る。この新血管形成は、一般的に、視神経乳頭または網膜表面において新しい血管の生成を刺激する成長ホルモン血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に応答して生じる。しかし、これらの新しい血管は、特に脆弱であり、漏れ易く、容易に破裂して出血および重度視力喪失を招く可能性がある。考え得る増殖性網膜疾患には、自己免疫性ブドウ膜炎、感染性ブドウ膜炎、湿性加齢性黄斑変性症（脈絡膜血管新生）、乾性加齢性黄斑変性症（地図状萎縮）、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、視神経炎（例えば、緑内関連）、網膜静脈閉塞症および未熟児網膜症が含まれる。他の増殖性網膜疾患には、スタルガルト病およびポリープ状脈絡膜血管障害が含まれる。
増殖性網膜疾患は、網膜での血管形成を伴う網膜症状である。例えば、血管は、網膜虚血によって引き起こされる血液供給の減少に応答して生成され得る。この新血管形成は、一般的に、視神経乳頭または網膜表面において新しい血管の生成を刺激する成長ホルモン血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に応答して生じる。しかし、これらの新しい血管は、特に脆弱であり、漏れ易く、容易に破裂して出血および重度視力喪失を招く可能性がある。考え得る増殖性網膜疾患には、自己免疫性ブドウ膜炎、感染性ブドウ膜炎、湿性加齢性黄斑変性症（脈絡膜血管新生）、乾性加齢性黄斑変性症（地図状萎縮）、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、視神経炎（例えば、緑内関連）、網膜静脈閉塞症および未熟児網膜症が含まれる。他の増殖性網膜疾患には、スタルガルト病およびポリープ状脈絡膜血管障害が含まれる。
【0039】
本発明者らは、実験的自己免疫性ブドウ膜炎のマウスモデルにおける実験において、ノマコパン、Ｌ－ノマコパン、ＰＡＳ－ノマコパンおよびＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンを試験した。ある特定の分子は局所的に投与した。ある特定の分子は硝子体内に投与した。実施例１および３に示されるように、ノマコパン型タンパク質は、このマウスモデルにおいて臨床スコアを減少させ得ることが示された。以下に提示されるデータは、これらの分子が、Ｔｈ－１７細胞の集団を減少させ、それによりＩＬ－１７レベルを減少させ得ることも実証する。本発明者らは、また、ＬＴＢ４受容体（ＢＬＴ１）が、このマウスモデルのマウス網膜内に浸潤する細胞で観察され得ることを示した。さらに、これらのノマコパン型分子は、ＬＴＢ４に結合し、その作用を阻害することができる。
【0040】
試験した分子がＬＴＢ４シグナル伝達を減少させる能力は、網膜が損傷するとＭ２マクロファージが遊走して網膜の損傷領域に付着するという観察結果と一致する。これらのＭ２マクロファージは、その後、ＬＴＢ４刺激に応答してＶＥＧＦを放出し、それにより新しい血管の生成が刺激される［３５］。したがって、いかなる理論にも束縛されることは望まないが、ノマコパン型タンパク質の投与は、ＶＥＧＦのレベルの減少を招き、それにより新しい血管の生成を減少および／または防止すると考えられる。この理論は、ノマコパン型タンパク質の投与がＥＡＵのマウスモデルにおいて網膜組織のＶＥＧＦレベルを有意に減少させることを実証する実施例４および図７Ａのデータと一致する。
【0041】
したがって、ノマコパン型タンパク質は、増殖性網膜疾患の治療または予防に有用であり得る。したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における増殖性網膜疾患を予防または治療する方法を提供する。加えて、本発明は、増殖性網膜疾患の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0042】
これらの疾患の存在は、当技術分野において十分に理解されている日常的な診断によって決定され得る。ある特定の症状の重症度をスコア付けすることもでき、それは、ある特定の治療が有効か否かの評価に有用である。
【0043】
ブドウ膜炎
自己免疫性ブドウ膜炎は、自己抗原に対する自己免疫反応によるか、または外部刺激による二次的な先天性炎症反応によって引き起こされるブドウ膜成分（虹彩、毛様体および脈絡膜）の炎症過程である。自己免疫性ブドウ膜炎は、前部、中間部、後部またはびまん性など、様々な解剖学的形態で存在し得る。前部ブドウ膜炎は、虹彩を冒す虹彩炎としてまたは毛様体を冒す虹彩毛様体炎として現れる、この疾患の最もよく見られる形態である。中間部ブドウ膜炎または硝子体炎は硝子体腔に関与し、毛様体扁平部に関与し得、後部ブドウ膜炎は、脈絡膜炎、脈絡網膜炎、および網脈絡膜炎の３つの種類に分けられる。網脈絡膜炎は、通常、トキソプラズマ症などの感染症を伴う。網脈絡膜炎は、びまん性病変の場合またはブドウ膜炎が多数の領域を冒す場合、全ブドウ膜炎と呼ばれる。
自己免疫性ブドウ膜炎は、自己抗原に対する自己免疫反応によるか、または外部刺激による二次的な先天性炎症反応によって引き起こされるブドウ膜成分（虹彩、毛様体および脈絡膜）の炎症過程である。自己免疫性ブドウ膜炎は、前部、中間部、後部またはびまん性など、様々な解剖学的形態で存在し得る。前部ブドウ膜炎は、虹彩を冒す虹彩炎としてまたは毛様体を冒す虹彩毛様体炎として現れる、この疾患の最もよく見られる形態である。中間部ブドウ膜炎または硝子体炎は硝子体腔に関与し、毛様体扁平部に関与し得、後部ブドウ膜炎は、脈絡膜炎、脈絡網膜炎、および網脈絡膜炎の３つの種類に分けられる。網脈絡膜炎は、通常、トキソプラズマ症などの感染症を伴う。網脈絡膜炎は、びまん性病変の場合またはブドウ膜炎が多数の領域を冒す場合、全ブドウ膜炎と呼ばれる。
【0044】
ブドウ膜炎の種類は、国際ブドウ膜炎研究グループ（ＩＵＳＧ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ）分類を使用して分類でき、ブドウ膜炎用語体系標準化（ＳＵＮ、Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）グループを使用して、ブドウ膜炎の発症、期間、および経過の基準を定義することができる［２７］。ブドウ膜炎は、主に２０～５０歳の人々が罹患するが、どの年齢でも生じる可能性があり、子供でさえ罹患する。ブドウ膜炎は、６５歳またはそれよりも高齢の患者でも発症率が高い。
【0045】
ノマコパン型タンパク質は、実施例１および３に示されるように、自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）のマウスモデルにおいて臨床スコアおよび組織学的スコアを減少させることが示された。
【0046】
さらに、ＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットであるＴｈ１７細胞は、感染性および非感染性ブドウ膜炎のいくつかの形態に関与することが示されている炎症促進性サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ）－１７を産生する。ＩＬ－１７は、ＩＬ－６、顆粒球コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＴＧＦ－β、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－αなどの他の炎症性サイトカインの産生を誘導する［２８］。本実施例は、また、ノマコパン型タンパク質が、ＩＬ－１７を発現するＣＤ４＋細胞のパーセンテージを減少させ得ることを実証する。いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、これらの分子は、ＩＬ－１７産生Ｔｈ１７細胞のレベルを減少させることができ、それはブドウ膜の炎症減少を招き、それによりブドウ膜炎の進行を減少させる。このように、ノマコパン型タンパク質は、自己免疫性ブドウ膜炎または感染性ブドウ膜炎の治療または予防に特に有用であり得る。
【0047】
ＶＥＧＦは、血管新生を促進し、血管透過性を増加させることによって、炎症過程に重要な役割を果たす。ＶＥＧＦの発現は、ＮＦκＢを含む、炎症カスケードのいくつかの主要なサイトカインに関連付けられる。網膜血管新生の発生におけるＶＥＧＦの重要性は十分に確立されている［２９］。ノマコパン型タンパク質は、ＬＴＢ４に結合し、その作用を阻害することができ、それによりＭ２マクロファージによるＶＥＧＦ発現のレベルが減少すると提案されている。これは、ノマコパン型タンパク質が網膜組織のＶＥＧＦレベルを減少させることを示す実施例４および図７ＡのＥＡＵマウスモデルで実証されている。結果として生じるＶＥＧＦレベルの減少は、新しい血管の生成を防止する。このように、ノマコパン型タンパク質は、自己免疫性ブドウ膜炎または感染性ブドウ膜炎の治療または予防に特に有用であり得る。
【0048】
好ましい実施形態では、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における自己免疫性ブドウ膜炎を予防または治療する方法を提供する。加えて、本発明は、自己免疫性ブドウ膜炎の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0049】
ある特定の実施形態では、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における感染性ブドウ膜炎を予防または治療する方法を提供する。加えて、本発明は、感染性ブドウ膜炎の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0050】
ある特定の実施形態では、自己免疫性ブドウ膜炎は、前部、中間部、後部またはびまん性ブドウ膜炎であり得る。好ましい実施形態では、本発明は、対象における前部ブドウ膜炎を予防または治療する方法を提供する。対象における前部ブドウ膜炎の予防または治療における使用のための、本発明の組成物も提供される。
【0051】
自己免疫性ブドウ膜炎を発生する危険がある対象は、自己免疫性ブドウ膜炎を予防するために本明細書において言及される薬剤の投与から利益を受け得る。ブドウ膜炎の危険因子には喫煙が含まれる。自己免疫性ブドウ膜炎の治療または予防に関しては、喫煙者であるかまたは喫煙者だったことがある対象が好ましい。一部の実施形態では、対象は、これらの危険因子のうち１または２以上を有し得るが、臨床徴候を一切示さない可能性がある。
【0052】
治療しようとする対象は、２０歳から５０歳の間であり得る。一部の実施形態では、対象は、６５歳よりも高齢である。一部の実施形態では、対象は、１８歳またはそれよりも高齢である。他の実施形態では、対象は年齢が１８歳未満である。
【0053】
加齢性黄斑変性症
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、進行性で不可逆的な重度の中心視力喪失を引き起こす変性網膜眼疾患である。この疾患は、視力が最も高い領域である黄斑を損ない、６０歳またはそれよりも高齢のアメリカ人の失明の主因の１つである。
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、進行性で不可逆的な重度の中心視力喪失を引き起こす変性網膜眼疾患である。この疾患は、視力が最も高い領域である黄斑を損ない、６０歳またはそれよりも高齢のアメリカ人の失明の主因の１つである。
【0054】
ＡＭＤには、湿性ＡＭＤおよび乾性ＡＭＤの２種類がある。湿性ＡＭＤ（新生血管性ＡＭＤとも呼ばれる）は、急速に悪化する視力および重度障害を伴う。湿性ＡＭＤでは視覚機能が重度に損なわれ、最終的には炎症および瘢痕化により、罹患網膜の視覚機能の永続的な喪失が引き起こされる。湿性ＭＤには、「古典的」および「不顕性」の２つのサブタイプがある。古典的サブタイプでは、血管造影法を使用すると眼科医が新しい血管をはっきりと視認できるが、不顕性サブタイプでは、漏出血管は不明瞭である。患者は、不顕性ＣＮＶおよび古典的ＣＮＶの両方の組合せを呈し得る［３０］。
【0055】
湿性ＡＭＤは、特に、様々な刺激に応答した神経網膜内および神経網膜下の異常な血管新生によって特徴づけられる。この異常な血管成長は、出血することが多い漏出性血管の形成に繋がる。異常な血管成長は、ＶＥＧＦによって活性化される。ノマコパン型タンパク質は、ＶＥＧＦを活性化することが公知であるＬＴＢ４に結合し、それを阻害することができる。したがって、ノマコパン型タンパク質は、湿性ＡＭＤの治療に特に有効であり得る。
【0056】
乾性ＡＭＤ（萎縮性ＡＭＤとも呼ばれる）は、症例の約８０％を占め、一般的にゆっくりと進行し、両眼を同時に冒すことが多い。乾性ＡＭＤは、通常、軽度の視力喪失を引き起こすに過ぎない。乾性ＡＭＤは、網膜の背後に脂肪が沈着し、黄斑が薄くなって乾燥することによって特徴づけられる。
【0057】
ＡＭＤは、ＳＴＡＲＳ質問票を使用して自己評価することができる［３１］。ＡＭＤは、５５歳よりも高齢の個人の中心窩の２乳頭直径内で評価される眼底病変に基づいて分類され得る。視認性のドルーゼンまたは色素異常を有しない対象は、ＡＭＤの所見を有しないとみなされるべきである。小核果とも称される小さなドルーゼン（＜６３μｍ）を有する人は、正常な加齢性変化を有し、後にＡＭＤを発生する臨床的に意義のある危険増加はないとみなされるべきである。中程度のドルーゼン（≧６３～＜１２５μｍ）を有するが、ＡＭＤに関連すると考えられる色素異常を有しない人は、初期ＡＭＤを有するとみなされるべきである。大きなドルーゼンを有するかまたは少なくとも中程度のドルーゼンを伴う色素異常を有する人は、中等度のＡＭＤを有するとみなされるべきである。新生血管性ＡＭＤまたは地図状萎縮に関連する病変を有する人は、後期ＡＭＤを有するとみなされるべきである［３２］。
【0058】
ＡＭＤでは、局所的および全身的補体活性化の増加が観察されている。いくつかの補体遺伝子の多型は、ＡＭＤの危険を増加させる［３３］。ノマコパンは、補体活性化因子Ｃ５を阻害することが公知である。したがって、Ｃ５に結合するノマコパン型タンパク質は、補体経路の活性化を阻害するため、ＡＭＤの治療に有効であり得る。
【0059】
ＬＴＢ４受容体は、湿性型ＡＭＤのマウスモデルにおいてレーザー誘導性脈絡膜血管新生を促進することが示されており、ＶＥＧＦ ｍＲＮＡの発現は、網膜虚血のいくつかの動物モデルにおいて、血管新生と空間的および時間的に相関する［３４、３５］。前述のように、ノマコパン型タンパク質は、ＬＴＢ４を阻害することができる。これは、ＶＥＧＦレベルの減少を招き得、それにより新しい血管の生成が防止される。したがって、ノマコパン型タンパク質は、ＡＭＤの治療または予防に有用であり得る。
【0060】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における湿性加齢性黄斑変性症を予防または治療する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、湿性加齢性黄斑変性症の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。湿性加齢性黄斑変性症は、不顕性、古典的またはそれらの組合せであり得る。
【0061】
さらに、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における乾性加齢性黄斑変性症を予防または治療する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、乾性加齢性黄斑変性症の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0062】
好ましい実施形態では、治療しようとする対象は６０歳またはそれよりも高齢である。
【0063】
ＡＭＤを発生する危険がある対象は、ＡＭＤを予防するために本明細書において言及される薬剤の投与から利益を受け得る。ＡＭＤの危険因子には、喫煙、日光、人工脂肪（部分的に水素化された植物油など）、加工食品が多く新鮮な野菜が少ない食事、管理されていない高血圧および高コレステロール、糖尿病、高齢（６０歳よりも高齢の患者は、より若年の患者よりも危険が大きい）および肥満が含まれる。
【0064】
これらの危険因子のうち１または２以上を有する対象が、ＡＭＤの治療または予防に関して好ましい。一部の実施形態では、対象は、これらの危険因子のうち１または２以上を有し得るが、臨床徴候を示さない可能性がある。
【0065】
糖尿病性網膜症
糖尿病は、ほぼ全ての組織の微小血管系に深刻な影響を及ぼす。糖尿病性網膜症は、微小動脈瘤、硬性白斑、出血および静脈異常によって特徴づけられる。高血糖は、霧視、暗色点または光の点滅、および突然の視力喪失に繋がる微小血管性網膜変化を誘導する［３６］。
糖尿病は、ほぼ全ての組織の微小血管系に深刻な影響を及ぼす。糖尿病性網膜症は、微小動脈瘤、硬性白斑、出血および静脈異常によって特徴づけられる。高血糖は、霧視、暗色点または光の点滅、および突然の視力喪失に繋がる微小血管性網膜変化を誘導する［３６］。
【0066】
糖尿病性網膜症には、背景網膜症（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性黄斑症および増殖性網膜症の３つの異なる種類がある。単純網膜症としても公知である背景網膜症は、血管壁のごく小さな腫れを伴う。それらは、ブレブとして公知であり、網膜上に小さな点として現れ、通常は、滲出液（血液タンパク質）の黄色い斑点を伴う。糖尿病性黄斑症は、黄斑が何らかの形態の損傷を受けた場合である。黄斑損傷のそのような原因の１つは、黄斑付近の血管が液体またはタンパク質を黄斑へと漏出させることによる糖尿病性黄斑浮腫である。増殖性網膜症は、網膜が閉塞して異常血管の成長を引き起こす、糖尿病性網膜症の進行性段階である。異常血管は、その後、眼内に出血し、網膜の剥離を引き起こし、視力に深刻な損傷を与える可能性がある。治療せずに放置すると、失明を引き起こす可能性がある［３６］。
【0067】
ＶＥＧＦは、糖尿病性網膜症の発生における重要な因子である。ノマコパン型タンパク質は、ＬＴＢ４に結合し、それを阻害することができ、それはＶＥＧＦレベルの減少を招き得る。したがって、ノマコパン型タンパク質は、糖尿病性網膜症の治療または予防に有用であり得る。
【0068】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における糖尿病性網膜症を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、糖尿病性網膜症の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。糖尿病性網膜症は、背景網膜症、糖尿病性黄斑症または増殖性網膜症であり得る。
【0069】
治療を必要とする対象は、１型または２型糖尿病を有していてもよい。対象が糖尿病を罹患している期間が長くなるほど、および血糖レベルの管理が不十分な場合、糖尿病性網膜症を罹患する可能性がより高くなる。一部の実施形態では、対象は、少なくとも５、１０、２０、３０または４０年間にわたって糖尿病を罹患している。
【0070】
他の危険因子には、高血圧、高コレステロール、妊娠、タバコ使用およびアフリカ系アメリカ人、ヒスパニック系または先住民族であることが含まれる。
【0071】
糖尿病性網膜症を発生する危険のある対象は、糖尿病性網膜症を予防するために本明細書において言及される薬剤の投与から利益を受け得る。これらの危険因子のうち１または２以上を有する対象が、糖尿病性網膜症の治療または予防に関して好ましい。一部の実施形態では、対象は、これらの危険因子のうち１または２以上を有し得るが、臨床徴候を示さない可能性がある。
【0072】
視神経症
視神経症は、視神経の損傷後に生じる。視神経症の典型的な臨床所見は、視野欠損、色弱、および異常乳頭応答である。主な徴候は視力喪失であり、罹患した眼では色がかすかに色あせて見える。多くの場合、罹患するのは片方の目のみであり、患者は、医師が健康な目を覆うように指示するまで、色覚の喪失に気付かない可能性がある。
視神経症は、視神経の損傷後に生じる。視神経症の典型的な臨床所見は、視野欠損、色弱、および異常乳頭応答である。主な徴候は視力喪失であり、罹患した眼では色がかすかに色あせて見える。多くの場合、罹患するのは片方の目のみであり、患者は、医師が健康な目を覆うように指示するまで、色覚の喪失に気付かない可能性がある。
【0073】
視神経症の急激な発症は、視神経炎、虚血性視神経症、炎症性（非脱髄性）および外傷性視神経症の特徴である。圧迫毒性／栄養性視神経症では、徴候の漸進的進行が観察される。
【0074】
視神経症には、以下のものを含むいくつかの種類がある：
（ａ）視神経への血流が不十分である虚血性視神経症。虚血性視神経症には、視神経乳頭を冒し、視神経乳頭の腫れを引き起こす前部虚血性視神経症、および乳頭の腫れを伴わない後部虚血性視神経症が含まれる；
（ｂ）視神経の炎症であり、視神経を覆っているミエリン鞘の腫れおよび破壊を伴う視神経炎。視神経炎は、単一孤立性視神経炎、再発性孤立性視神経炎、慢性再発性炎症性視神経症、視神経脊髄炎スペクトル障害、多発性硬化症関連視神経炎および分類された視神経炎形態に分類することができる。視神経炎は、緑内障にも関連している可能性がある；
（ｃ）圧迫性視神経症。これは、眼窩内およびまれに視神経管内に病変を引き起こす腫瘍、感染症および炎症過程に起因する。病変は、視神経を圧迫し、視神経乳頭の腫れおよび進行性視力喪失を招く。関与する眼窩障害には、視神経膠腫、髄膜腫、血管腫、リンパ管腫、類皮嚢胞、癌腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、炎症性眼窩偽腫瘍、および甲状腺眼症が含まれる；
（ｄ）浸潤性視神経症。この場合、視神経は、腫瘍、炎症、および感染症を含む様々な過程によって浸潤される。視神経に浸潤する最も多く見られる炎症性障害は、サルコイドーシスである。日和見真菌、ウイルス、および細菌も、視神経に浸潤する可能性がある。浸潤が神経の近位部分で生じる場合、視神経が盛り上がる（ｅｌｅｖａｔｅｄ）可能性がある。検査時の神経外観は、罹患している神経の部分に依存する；
（ｅ）直接または間接傷害への曝露時に視神経が損傷する外傷性視神経症。転倒も多く見られる原因であり、視神経症は、多系統外傷および重度脳傷害に関連する意識喪失がある場合に、最も多く生じる；
（ｆ）ミトコンドリア視神経症。ミトコンドリアは、網膜神経節細胞のライフサイクルを維持する上で中心的な役割を果たす。というのは、網膜神経節細胞はエネルギー依存性が高いためである。ミトコンドリアＤＮＡの遺伝子変異、ビタミンの枯渇、アルコールおよびタバコの乱用、およびある特定の薬物の使用は、ミトコンドリアの効率的な輸送に混乱を引き起こす可能性があり、それにより一次または二次視神経症が引き起こされる可能性がある；
（ｇ）患者の食事に栄養が不足していることに起因する栄養性視神経症。栄養不足は、全身に影響を及ぼすため、栄養性視神経症を有する患者には、腕および脚の疼痛および感覚喪失（末梢神経障害）がよく見られる；
（ｈ）毒性視神経症。その最も多く見られる原因は、メタノール中毒である；
（ｉ）遺伝性視神経症。これは、典型的には、対称性両側性中心視力喪失として現れる。考え得る遺伝性視神経症には、レーバー遺伝性視神経症、優性視神経萎縮、ベール症候群、Ｂｅｒｋ－Ｔａｂａｔｚｎｉｋ症候群が含まれる。
（ａ）視神経への血流が不十分である虚血性視神経症。虚血性視神経症には、視神経乳頭を冒し、視神経乳頭の腫れを引き起こす前部虚血性視神経症、および乳頭の腫れを伴わない後部虚血性視神経症が含まれる；
（ｂ）視神経の炎症であり、視神経を覆っているミエリン鞘の腫れおよび破壊を伴う視神経炎。視神経炎は、単一孤立性視神経炎、再発性孤立性視神経炎、慢性再発性炎症性視神経症、視神経脊髄炎スペクトル障害、多発性硬化症関連視神経炎および分類された視神経炎形態に分類することができる。視神経炎は、緑内障にも関連している可能性がある；
（ｃ）圧迫性視神経症。これは、眼窩内およびまれに視神経管内に病変を引き起こす腫瘍、感染症および炎症過程に起因する。病変は、視神経を圧迫し、視神経乳頭の腫れおよび進行性視力喪失を招く。関与する眼窩障害には、視神経膠腫、髄膜腫、血管腫、リンパ管腫、類皮嚢胞、癌腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、炎症性眼窩偽腫瘍、および甲状腺眼症が含まれる；
（ｄ）浸潤性視神経症。この場合、視神経は、腫瘍、炎症、および感染症を含む様々な過程によって浸潤される。視神経に浸潤する最も多く見られる炎症性障害は、サルコイドーシスである。日和見真菌、ウイルス、および細菌も、視神経に浸潤する可能性がある。浸潤が神経の近位部分で生じる場合、視神経が盛り上がる（ｅｌｅｖａｔｅｄ）可能性がある。検査時の神経外観は、罹患している神経の部分に依存する；
（ｅ）直接または間接傷害への曝露時に視神経が損傷する外傷性視神経症。転倒も多く見られる原因であり、視神経症は、多系統外傷および重度脳傷害に関連する意識喪失がある場合に、最も多く生じる；
（ｆ）ミトコンドリア視神経症。ミトコンドリアは、網膜神経節細胞のライフサイクルを維持する上で中心的な役割を果たす。というのは、網膜神経節細胞はエネルギー依存性が高いためである。ミトコンドリアＤＮＡの遺伝子変異、ビタミンの枯渇、アルコールおよびタバコの乱用、およびある特定の薬物の使用は、ミトコンドリアの効率的な輸送に混乱を引き起こす可能性があり、それにより一次または二次視神経症が引き起こされる可能性がある；
（ｇ）患者の食事に栄養が不足していることに起因する栄養性視神経症。栄養不足は、全身に影響を及ぼすため、栄養性視神経症を有する患者には、腕および脚の疼痛および感覚喪失（末梢神経障害）がよく見られる；
（ｈ）毒性視神経症。その最も多く見られる原因は、メタノール中毒である；
（ｉ）遺伝性視神経症。これは、典型的には、対称性両側性中心視力喪失として現れる。考え得る遺伝性視神経症には、レーバー遺伝性視神経症、優性視神経萎縮、ベール症候群、Ｂｅｒｋ－Ｔａｂａｔｚｎｉｋ症候群が含まれる。
【0075】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における視神経症症状を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、視神経症症状の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0076】
一部の実施形態では、視神経症症状は、視神経が損傷している任意の症状を含む。視神経症症状は、視神経炎、虚血性視神経症、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、外傷性視神経症、ミトコンドリア視神経症、栄養性視神経症、毒性視神経症および遺伝性視神経症から選択することができる。好ましい実施形態では、視神経症症状は、緑内障関連視神経炎である。
【0077】
網膜静脈閉塞症
網膜静脈閉塞症は、網膜の血管障害である。これは、糖尿病性網膜症に次いで２番目に多く見られる失明の原因であり、主に６０歳よりも高齢の患者で生じる。網膜静脈閉塞症には３つの種類がある。１つ目は、４つの網膜静脈のうちの１つが閉塞することによって引き起こされる網膜静脈分枝閉塞症である。２つ目は、主網膜静脈の閉塞によって引き起こされる網膜中心静脈閉塞症であり、３つ目は、網膜静脈の遠位枝で閉塞が生じる網膜静脈分枝閉塞症である。網膜中心静脈閉塞症は、通常、より重度の視力喪失を招く。網膜静脈閉塞症は、網膜毛細血管虚血の量に応じて、非虚血性型および虚血性型にさらに細分化することができる［３７］。
網膜静脈閉塞症は、網膜の血管障害である。これは、糖尿病性網膜症に次いで２番目に多く見られる失明の原因であり、主に６０歳よりも高齢の患者で生じる。網膜静脈閉塞症には３つの種類がある。１つ目は、４つの網膜静脈のうちの１つが閉塞することによって引き起こされる網膜静脈分枝閉塞症である。２つ目は、主網膜静脈の閉塞によって引き起こされる網膜中心静脈閉塞症であり、３つ目は、網膜静脈の遠位枝で閉塞が生じる網膜静脈分枝閉塞症である。網膜中心静脈閉塞症は、通常、より重度の視力喪失を招く。網膜静脈閉塞症は、網膜毛細血管虚血の量に応じて、非虚血性型および虚血性型にさらに細分化することができる［３７］。
【0078】
網膜静脈閉塞症は、光干渉断層撮影法を使用して診断することができる。これは、解像度が５ミクロンの走査型検眼鏡を使用して、網膜の高精細画像を撮影することを含む。これらの画像は、網膜の厚さを測定することによって、腫れおよび浮腫の存在を決定することができる。検眼鏡検査および蛍光眼底造影法を使用して、それぞれ網膜および網膜血管を検査することによって網膜静脈閉塞症を診断することもできる。
【0079】
網膜静脈閉塞症の２つの主な合併症は、虹彩および網膜血管新生に繋がる黄斑浮腫および網膜虚血である。網膜静脈に閉塞が生じると毛細血管に圧力が蓄積し、出血ならびに液体および血液の漏出に繋がる。その後、血管新生、新たな異常血管成長が生じ、そのため、血管新生性緑内障、硝子体出血、および後期または重症の場合には網膜剥離を招き得る［３７］。ＶＥＧＦは、網膜静脈閉塞症病態形成に主要な役割を果たす。というのは、虚血が発生するとＶＥＧＦが分泌され、それがさらなる血管漏出および網膜浮腫を招くからである［３８］。
【0080】
ノマコパン型タンパク質は、ＬＴＢ４に結合し、それを阻害することができ、それはＶＥＧＦレベルの減少を招き得る。したがって、ノマコパン型タンパク質は、糖尿病性網膜症の治療または予防に有用であり得る。したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における網膜静脈閉塞症を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、網膜静脈閉塞症の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。網膜静脈閉塞症は、網膜静脈分枝閉塞症、網膜中心静脈閉塞症または網膜半中心静脈閉塞症（ｈｅｍｉｃｅｎｔｒａｌ ｒｅｔｉｎａｌ ｖｅｉｎ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）であり得る。
【0081】
一部の実施形態では、対象は、６０歳もしくはそれよりも高齢であるか、６５歳もしくはそれよりも高齢であるか、７０歳もしくはそれよりも高齢であるか、または８０歳もしくはそれよりも高齢である。好ましい実施形態では、対象は、６５歳またはそれよりも高齢である。
【0082】
末熟児網膜症
未熟児網膜症（ＲＯＰ）は、小児失明の主因の１つであり、最終的には牽引性網膜剥離を繋がり得る網膜血管新生により特徴づけられる。ＲＯＰは、未熟児で生まれた乳児の約２０％が罹患する。これは、主に、妊娠３２週より前に生まれたか、または生まれたときの体重が１５００ｇ未満の乳児に生じる。
未熟児網膜症（ＲＯＰ）は、小児失明の主因の１つであり、最終的には牽引性網膜剥離を繋がり得る網膜血管新生により特徴づけられる。ＲＯＰは、未熟児で生まれた乳児の約２０％が罹患する。これは、主に、妊娠３２週より前に生まれたか、または生まれたときの体重が１５００ｇ未満の乳児に生じる。
【0083】
ＲＯＰには外見上の徴候がないため、妊娠３２週より前に生まれたか、または体重が１．５ｋｇ未満の全ての未熟児は、眼科医によって毎週または２週間毎にスクリーニングされる。ＲＯＰの範囲および重症度は、伝統的に、ＲＯＰ定義の国際分類に従って［３９］、場所（ゾーン；Ｉ～ＩＩＩ）、重症度（ステージ、１～５）、範囲（時計時間；１～１２）、ならびに血管膨張および捻れ（および疾患）の点で記述される。
【0084】
血管は、通常、妊娠１６～３６週の間に発生し、ＶＥＧＦは、胎児の血管新生において重要な役割を果たす。正常発生中に、網膜組織のより高い酸素需要に応答してＶＥＧＦが放出され、それが血管の発生に繋がる。しかし、早産児ではＶＥＧＦのレベルが上昇し、それは異常な血管増殖に繋がる［４０］。
【0085】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における末熟児網膜症を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、末熟児網膜症の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0086】
一部の実施形態では、対象は、在胎週数２７週より前に生まれたか、在胎週数２７週から３２週の間にまたは在胎週数＞３２週で生まれたが出生時体重が＜１５０１グラムの未熟児である。
【0087】
前増殖性網膜疾患
対象は、前増殖性網膜疾患を有し得るか、有する疑いがあり得るか、または発生する危険があり得る。例えば、対象は、前増殖性網膜症を有し得る。前増殖性網膜症は、毛細血管の閉塞による慢性網膜虚血が起こったことを示す。前増殖性網膜症の臨床所見には、複数の綿花状白斑、静脈ビーディングおよび／またはルーピング（ｖｅｎｏｕｓ ｂｅａｄｉｎｇ ａｎｄ／ｏｒ ｌｏｏｐｉｎｇ）、複数の深い円形およびしみ状の出血、ならびに網膜内微小血管異常が含まれる。
対象は、前増殖性網膜疾患を有し得るか、有する疑いがあり得るか、または発生する危険があり得る。例えば、対象は、前増殖性網膜症を有し得る。前増殖性網膜症は、毛細血管の閉塞による慢性網膜虚血が起こったことを示す。前増殖性網膜症の臨床所見には、複数の綿花状白斑、静脈ビーディングおよび／またはルーピング（ｖｅｎｏｕｓ ｂｅａｄｉｎｇ ａｎｄ／ｏｒ ｌｏｏｐｉｎｇ）、複数の深い円形およびしみ状の出血、ならびに網膜内微小血管異常が含まれる。
【0088】
以前に言及されているように、増殖性網膜疾患は、ＶＥＧＦによって活性化される血管新生によって特徴づけられる。ＶＥＧＦは、血管透過性および血管新生を促進し、増殖性網膜疾患では血管の異常生成に繋がり得る。ノマコパン型タンパク質は、ＬＴＢ４に結合し、それを阻害することができ、それによりＶＥＧＦレベルが減少し得る。これは、例えば、実施例４に示されている。
【0089】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象における前増殖性網膜疾患を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、前増殖性網膜疾患の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0090】
スタルガルト病
スタルガルト病は、網膜輸送タンパク質をコードするＡＢＣＡ４遺伝子の変異によって引き起こされる遺伝性黄斑ジストロフィーである。スタルガルト病は、小児における黄斑変性症の最も多い形態であり、有病率は、米国では１０万人あたり約１０～１２．５人と推定されている。スタルガルト病を有する患者は、生後１０年または２０年以内に重度視力喪失を発生させ、ほとんど全ての症例で不可逆的な視力低下へと進行する［４１］。
スタルガルト病は、網膜輸送タンパク質をコードするＡＢＣＡ４遺伝子の変異によって引き起こされる遺伝性黄斑ジストロフィーである。スタルガルト病は、小児における黄斑変性症の最も多い形態であり、有病率は、米国では１０万人あたり約１０～１２．５人と推定されている。スタルガルト病を有する患者は、生後１０年または２０年以内に重度視力喪失を発生させ、ほとんど全ての症例で不可逆的な視力低下へと進行する［４１］。
【0091】
病理には、脈絡膜血管新生が含まれ得、その場合は、硝子体内抗ＶＥＧＦ注射が実施される［４２］。本発明者らは、ノマコパン型タンパク質が、増殖性網膜疾患におけるＶＥＧＦレベルを減少させ得ることを示した。
【0092】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象におけるスタルガルト病を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、スタルガルト病の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。
【0093】
ポリープ状脈絡膜血管障害
ポリープ状脈絡膜血管障害（ＰＣＶ）は、脈絡膜血管系の疾患である。ポリープ状脈絡膜血管障害は、多くの民族の男性および女性の両方に存在し、色素上皮の漿液性剥離および一般的に網膜下線維症に繋がり得る滲出性変化によって特徴づけられる。証拠は、ＰＣＶを有する徴候性患者が、光線力学療法および抗ＶＥＧＦ治療により、重度視力喪失を起こすことなく完全な回復を示し得ることを支持する［４３］。本発明者らは、ノマコパン型タンパク質が、増殖性網膜疾患におけるＶＥＧＦレベルを減少させ得ることを示した。
ポリープ状脈絡膜血管障害（ＰＣＶ）は、脈絡膜血管系の疾患である。ポリープ状脈絡膜血管障害は、多くの民族の男性および女性の両方に存在し、色素上皮の漿液性剥離および一般的に網膜下線維症に繋がり得る滲出性変化によって特徴づけられる。証拠は、ＰＣＶを有する徴候性患者が、光線力学療法および抗ＶＥＧＦ治療により、重度視力喪失を起こすことなく完全な回復を示し得ることを支持する［４３］。本発明者らは、ノマコパン型タンパク質が、増殖性網膜疾患におけるＶＥＧＦレベルを減少させ得ることを示した。
【0094】
したがって、本発明は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含む、対象におけるポリープ状脈絡膜血管障害を予防または治療する方法を提供する。さらに、本発明は、ポリープ状脈絡膜血管障害疾患の予防または治療における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を提供する。一部の実施形態では、薬剤は、光線力学療法と組み合わせて投与される。
【0095】
投与成績
対象は、治療の結果として、徴候の発生率の減少、徴候の軽減、徴候の発生もしくは再発生の阻害もしくは遅延、またはその組合せを有し得る。好ましくは、治療は、典型的な疾患症状の徴候の減少を生じる。例えば、増殖性網膜疾患治療のためのいくつかの臨床研究のエンドポイントとして視力が使用される。したがって、本発明による治療は、視力の改善を生じ得る。
対象は、治療の結果として、徴候の発生率の減少、徴候の軽減、徴候の発生もしくは再発生の阻害もしくは遅延、またはその組合せを有し得る。好ましくは、治療は、典型的な疾患症状の徴候の減少を生じる。例えば、増殖性網膜疾患治療のためのいくつかの臨床研究のエンドポイントとして視力が使用される。したがって、本発明による治療は、視力の改善を生じ得る。
【0096】
治療の結果として、対象は、例えば、特定の疾患の１つに関して上述の方法の１つを使用して、それらの臨床スコアの改善を示し得る。
【0097】
さらに、治療の結果として、対象は、血管新生の減少または血管増殖（例えば、眼内）の減少を示し得る。他の結果には、視力の改善、視力喪失の減少、視覚回復の増加、網膜中心厚の減少、および／または糖尿病性網膜症の重症度スコアの改善が含まれ得る。さらに、治療は、硝子体出血、虹彩または隅角の血管新生、血管新生性緑内障および／または網膜剥離の減少を招き得る。活性薬剤の投与後に観察される減少は、健康な個体、関連する増殖性網膜疾患のより重度形態または活性薬剤による治療前の患者で観察されるより重度形態を有する個体と比較して測定することができる。
【0098】
治療は、網膜炎症の減少、Ｔｈ１７細胞数の減少、ＲＯＲｇｔ／Ｔｂｅｔを発現するＣＤ４＋細胞数の減少（例えば、ブドウ膜炎において）を招き得る。
【0099】
治療は、また、必要とされる第２の疾患治療の量、またはそれによる治療の期間、または頻度の減少を招き得る。
【0100】
したがって、本発明のさらなる実施形態では、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質もしくはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤または前記薬剤をコードする核酸分子の治療または予防有効量を投与することを含む、網膜増殖性疾患を有する対象において、視力を改善し、臨床スコアを改善し、血管新生もしくは血管増殖（例えば、眼内の）を減少させ、視力喪失を減少させ、視覚回復を増加させ、網膜中心厚を減少させおよび／もしくは糖尿病性網膜症の重症度スコアを改善し、硝子体出血を減少させ、虹彩もしくは隅角の血管新生を減少させ、血管新生性緑内障および／もしくは網膜剥離を減少させ、炎症を減少させ、Ｔｈ１７細胞数を減少させ、ならびに／またはＲＯＲｇｔ／Ｔｂｅｔを発現するＣＤ４＋細胞数を減少させる（例えば、ブドウ膜炎において）方法が提供される。これは、単独の場合または第２の網膜増殖性疾患治療を伴い得る。
【0101】
本発明は、また、網膜増殖性疾患を有する対象において、視力を改善し、臨床スコアを改善し、血管新生もしくは血管増殖（例えば、眼内）を減少させ、視力喪失を減少させ、視覚回復を増加させ、網膜中心厚を減少させおよび／もしくは糖尿病性網膜症の重症度スコアを改善し、硝子体出血を減少させ、虹彩もしくは隅角の血管新生を減少させ、血管新生性緑内障および／もしくは網膜剥離を減少させ、炎症を減少させ、Ｔｈ１７細胞数を減少させ、ならびに／またはＲＯＲｇｔ／Ｔｂｅｔを発現するＣＤ４＋細胞数を減少させる（例えば、ブドウ膜炎において）方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質もしくはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤または前記薬剤をコードする核酸分子を提供する。
【0102】
本発明のさらなる実施形態では、対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法であって、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質もしくはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤または前記薬剤をコードする核酸分子の治療または予防有効量を投与することを含み、薬剤は、例えば網膜組織においてＶＥＧＦレベルの減少を生じ、および／または薬剤は、例えば網膜組織においてＶＥＧＦシグナル伝達の減少を生じる、方法が提供される。
【0103】
本発明は、また、対象における増殖性網膜疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質もしくはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤または前記薬剤をコードする核酸分子である薬剤であって、薬剤は、例えば網膜組織においてＶＥＧＦレベルの減少を生じさせ、および／または薬剤は、例えば網膜組織においてＶＥＧＦシグナル伝達の減少を生じさせる、薬剤を提供する。
【0104】
本発明の薬剤は、上述のように、他の網膜増殖性疾患治療と組み合わせて使用することができる。本発明の薬剤と他の（本明細書において「第２の」と称される）網膜増殖性疾患治療との組合せは、本発明の薬剤による治療の非存在下で使用される量と比較して第２の薬剤の量が減少するか、または本発明の薬剤による治療の非存在下で使用される治療期間と比較して第２の薬剤による治療期間が減少するか、または第２の薬剤の投与が必要とされる頻度が減少するようなものであり得る。これは、ある特定の公知の治療の副作用に照らして有利である。したがって、第２の治療の量を減少させるか、第２の治療の投与頻度を減少させるか、または第２の治療の期間を減少させる方法であって、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質もしくはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤の治療または予防有効量を投与することを含み、必要に応じて前記第２の治療を投与することをさらに含む方法も提供される。
【0105】
第２の網膜増殖性疾患治療が使用される場合、好ましくは、第２の網膜増殖性疾患治療は、以下のものから選択される：抗炎症医薬、例えば、コルチコステロイドなどのステロイド、ＩＭＴ薬、例えばメトトレキサート、アザチオプリン、およびミコフェノレート、ＢＲＭ薬（例えば、抗ＴＮＦアルファ剤、例えば、インフリキシマブまたはアダリムマブなどの、ＴＮＦアルファに結合する抗体またはその断片）、抗ＴＮＦアルファ抗体またはその断片などの抗ＶＥＧＦ治療（ベバシズマブ、ラニビズマブ（ルセンティス）、抗ＶＥＧＦアプタマー（ペガプタニブ（マクジェン）など）、またはアフリベルセプト（アイリーア、ヒトＩｇＧ１イムノグロブリンのＦｃ部分に融合されている、ヒトＶＥＧＦ受容体１および２の細胞外ドメインに由来する血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合性部分からなる組換え融合タンパク質）などの別のＶＥＧＦアンタゴニスト。
【0106】
ノマコパン型タンパク質および第２の薬剤を使用する場合、それらは、一緒にまたは別々に投与することができる。まずノマコパン型タンパク質を投与し、次に第２の網膜増殖性疾患治療を投与してもよく、またはその逆であってもよい。
【0107】
したがって、本発明の薬剤が、１または２以上の他の網膜増殖性疾患治療と組み合わせて使用される場合、例えば、上記の方法では、これは、（ｉ）第２の網膜増殖性疾患治療により網膜増殖性疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤、または（ｉｉ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤により網膜増殖性疾患を治療または予防する方法における使用のための第２の網膜増殖性疾患治療、または（ｉｉｉ）網膜増殖性疾患を治療または予防する方法における使用のための、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤および第２の網膜増殖性疾患治療、として説明することができる。（ｉ）～（ｉｉｉ）の各々では、前記方法は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤を投与すること、および第２の網膜増殖性疾患治療を投与することを含む。
【0108】
一部の実施形態では、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤は、局所的に投与され、第２の網膜増殖性疾患治療は、局所的にまたは眼内に直接的に、例えば硝子体内にまたは脈絡膜上に、好ましくは、眼内に直接的に、例えば硝子体内にまたは脈絡膜上に投与される。
【0109】
一部の実施形態では、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤は、眼内に直接的に、例えば硝子体内にまたは脈絡膜上に投与され、第２の網膜増殖性疾患治療は、局所的に、または眼内に直接的に、例えば硝子体内にまたは脈絡膜上に投与される。
【0110】
一部の実施形態では、第２の網膜増殖性疾患治療も、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤である。
【0111】
治療が、第２の網膜増殖性疾患治療の量または期間における減少を生じる場合、減少は、本発明の薬剤の非存在下で使用される第２の治療の量と比較して、最大でまたは少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０％であり得る。
【0112】
治療が、第２の網膜増殖性疾患治療による治療の頻度における減少を生じる場合、これは、第２の網膜増殖性疾患治療の投与間の時間の最大で約１、２、３、４、５、６、７または８週間の増加を招き得る。
【0113】
対象
好ましい対象、薬剤、用量およびその他は、本明細書に開示される通りである。
好ましい対象、薬剤、用量およびその他は、本明細書に開示される通りである。
【0114】
いかなる減少または増加へのいかなる参照も、治療がない場合における前記対象と比較される疾患パラメーターにおける減少または増加である。好ましくは、パラメーターは、定量でき、この場合、増加または減少は、好ましくは統計的に有意である。例えば、増加または減少は、治療の非存在下（例えば、前記治療が開始される前）のパラメーターと比較して、少なくとも３、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０％またはそれよりも大きくてもよい。
【0115】
本発明の実施において薬剤が投与される対象は、好ましくは哺乳動物であり、好ましくはヒトである。薬剤が投与される対象は、増殖性網膜疾患の危険があるか、または増殖性網膜疾患を有する対象である。
【0116】
本発明の方法は、また、（ｉ）対象が網膜増殖性疾患の危険を有するか、または網膜増殖性疾患を有するかどうかを判定すること、（ｉｉ）本発明の薬剤の投与前および／または後に実施され得る、網膜増殖性疾患の重症度を決定することの、１または２以上の追加的なステップを含み得る。
【0117】
本発明に使用すべき薬剤
本発明の一実施形態により、薬剤は、ノマコパン自体またはその機能的等価物である。以下において、「ノマコパン型タンパク質」という用語は、「図２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物」についての略記として使用される。
本発明の一実施形態により、薬剤は、ノマコパン自体またはその機能的等価物である。以下において、「ノマコパン型タンパク質」という用語は、「図２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物」についての略記として使用される。
【0118】
ノマコパンは、マダニＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ ｍｏｕｂａｔａの唾液腺から単離された。ノマコパンは、リポカリンファミリーの遠いメンバーであり、補体活性化を阻害することが示された最初のリポカリンファミリーのメンバーである。ノマコパンは、Ｃ５に結合し、Ｃ５コンバターゼによるＣ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂を防止することによって、古典的補体経路、第二補体経路、およびレクチン補体経路を阻害することで、活性（例えば炎症促進性）ペプチドであるＣ５ａの産生およびＭＡＣの形成の両方を阻害する。ノマコパンは、ラット、マウスおよびヒト血清中でＣ５に結合し、Ｃ５コンバターゼによるＣ５の開裂を約０．０２ｍｇ／ｍｌのＩＣ５０で防ぐことが実証されている。
【0119】
したがって、ノマコパン型タンパク質は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８または図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１～１６８を含むか、またはそれからなっていてもよい。図２に示されるタンパク質配列の最初の１８アミノ酸は、Ｃ５の結合またはＬＴＢ４結合活性に必要とされないシグナル配列を形成するので、これは、必要に応じて、例えば組換えタンパク質産生の効率のために、省かれ得る。
【0120】
ノマコパンのＣ５結合特性
ノマコパンタンパク質は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定された１ｎＭのＫｄでＣ５に結合することが実証されている［４４］。ノマコパン型ペプチド（例えば、ノマコパンタンパク質の機能的等価物）は、好ましくは、好適には３６０ｎＭ未満、より好適には３００ｎＭ未満、最も好適には２５０ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１５０ｎＭ未満、最も好ましくは１００ｎＭ未満、さらにより好ましくは５０、４０、３０、２０、または１０ｎＭ未満、有利には５ｎＭ未満のＫｄでＣ５と結合する能力を保持し、その際、前記Ｋｄは、好ましくは［４４］に記載された方法により、表面プラズモン共鳴を使用して決定される。
ノマコパンタンパク質は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定された１ｎＭのＫｄでＣ５に結合することが実証されている［４４］。ノマコパン型ペプチド（例えば、ノマコパンタンパク質の機能的等価物）は、好ましくは、好適には３６０ｎＭ未満、より好適には３００ｎＭ未満、最も好適には２５０ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１５０ｎＭ未満、最も好ましくは１００ｎＭ未満、さらにより好ましくは５０、４０、３０、２０、または１０ｎＭ未満、有利には５ｎＭ未満のＫｄでＣ５と結合する能力を保持し、その際、前記Ｋｄは、好ましくは［４４］に記載された方法により、表面プラズモン共鳴を使用して決定される。
【0121】
ノマコパンは、古典的補体経路、第二補体経路およびレクチン補体経路を阻害する。好ましくは、ノマコパン型タンパク質は、Ｃ５の全体的コンフォメーションを安定化するが、３つの活性化経路のＣ５コンバターゼによって標的化されるＣ５開裂部位を直接には遮断しないように、Ｃ５に結合する。Ｃ５へのノマコパンの結合は、Ｃ５の全体的コンフォメーションの安定化を招くが、コンバターゼ開裂部位を遮断しない。ノマコパンの機能的等価物も、好ましくはこれらの特性を共有する。
【0122】
Ｃ５は、Ｃ５コンバターゼ酵素によって開裂される（図１）。この開裂の産物は、アナフィラトキシンＣ５ａおよび溶解複合体Ｃ５ｂを含み、Ｃ５ｂは、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）としても公知の、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９の複合体の形成を促進する。Ｃ５ａは、好中球および好酸球の走化性、好中球の活性化、毛細血管の透過性増加および好中球アポトーシスの阻害を含む多くの病的炎症過程に意味づけられている高度に炎症促進性のペプチドである［４５］。
【0123】
Ｃ５と結合してそれを阻害するモノクローナル抗体および小分子が、様々な疾患、特に、ＰＮＨ、乾癬、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスおよび移植片拒絶を治療するために開発されている［４６］。しかし、これらのモノクローナル抗体の一部は、Ｃ５多型を有する対象からのある特定のＣ５タンパク質に結合せず、したがって、これらの対象には無効である［４７］。好ましくは、ノマコパン型タンパク質は、野生型Ｃ５だけでなく、Ｃ５多型（エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の効力を減少させる）を有する対象からのＣ５にも結合し、その開裂を阻害する。「Ｃ５多型」という用語は、野生型Ｃ５と比較して、どれも１または２以上であり得る挿入、欠失、アミノ酸置換、フレームシフト、短縮化、またはこれらの変化の１または２以上の組合せによって変化された任意のバージョンのＣ５を含む。ヒト対象において、野生型Ｃ５は、受託番号ＮＰ＿００１７２６．２；バージョンＧＩ：３８０１６９４７を有するＣ５タンパク質と考えられている。Ｃ５多型の例には、ｍＡｂエクリズマブの有効性を減少させる、アミノ酸位置８８５での多型、例えば、Ａｒｇ８８５Ｃｙｓ（ｃ．２６５３Ｃ＞Ｔによってコードされる）、ｐ．Ａｒｇ８８５Ｈｉｓ（ｃ．２６５４Ｇ＞Ａによってコードされる）およびＡｒｇ８８５Ｓｅｒが含まれる［４７］。
【0124】
Ｃ５多型、例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５を含む、Ｃ５と結合する薬剤の能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、表面プラズモン共鳴、またはタンパク質をゲル上で標識Ｃ５と共にインキュベーションした後のウエスタンブロットにより決定され得る。好ましくは、ノマコパン型タンパク質は、野生型Ｃ５および／またはＣ５多型、例えば、エクリズマブによる治療を無効にする、もしくはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５のいずれかであるＣ５と、３６０ｎＭ未満、より好適には３００ｎＭ未満、最も好適には２５０ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１５０ｎＭ未満、最も好ましくは１００ｎＭ未満、さらにより好ましくは５０、４０、３０、２０、または１０ｎＭ未満、有利には５ｎＭ未満のＫｄで結合し、その際、前記Ｋｄは、表面プラズモン共鳴を使用して、好ましくは［４４］に記載される方法により決定される。
【0125】
これは、野生型Ｃ５およびＣ５多型、例えばエクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５に対して、より高い、より低いまたは同じ親和性を示し得る。
【0126】
ノマコパン型タンパク質が補体活性化を阻害する能力は、また、薬剤が血清中で補体活性化を阻害する能力を測定することによって決定され得る。例えば、血清中の補体の活性は、当技術分野において公知または本明細書に記載される任意の手段によって測定することができる。
【0127】
ノマコパンのＬＴＢ４結合特性
ノマコパン型タンパク質は、また、エイコサノイド活性を阻害する機能を有すると定義され得る。ノマコパンは、また、ＬＴＢ４と結合すると実証されている。ノマコパンタンパク質の機能的等価物もまた、ノマコパンタンパク質と類似の親和性でＬＴＢ４と結合する能力を保持し得る。
ノマコパン型タンパク質は、また、エイコサノイド活性を阻害する機能を有すると定義され得る。ノマコパンは、また、ＬＴＢ４と結合すると実証されている。ノマコパンタンパク質の機能的等価物もまた、ノマコパンタンパク質と類似の親和性でＬＴＢ４と結合する能力を保持し得る。
【0128】
ノマコパン型タンパク質がＬＴＢ４と結合する能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、標識ＬＴＢ４への結合を競合するノマコパンと抗ＬＴＢ４抗体との間の競合ＥＬＩＳＡ、等温滴定熱量測定または蛍光滴定によって決定され得る。蛍光滴定を使用して得られるデータは、ノマコパンがＬＴＢ４に、２００から３００ｐＭの間のＫｄで結合することを示している。例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＬＴＢ４（Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ、ＵＳＡ）に対する結合活性は、分光蛍光計、例えば、ＬＳ ５０ Ｂ分光蛍光計（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、ＵＳＡ）で定量することができる。これは、以下のように実施され得る。
【0129】
ＰＢＳ２ｍＬ中の１００ｎＭ精製ノマコパン溶液を、磁器スターラーを備える石英キュベット（１０ｍｍ経路長；Ｈｅｌｌｍａ、Ｍｕｈｌｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中に加えた。温度を２０℃に調整し、平衡に達した後、タンパク質のＴｙｒ／Ｔｒｐの蛍光を２８０ｎｍで励起させた（スリット幅：１５ｎｍ）。最大発光に対応する蛍光発光を３４０ｎｍで測定した（スリット幅：１６ｎｍ）。ＰＢＳ中の３０μＭ ＬＴＢ４リガンド溶液を、最大体積２０μＬ（全試料体積の１％）まで段階的に添加し、３０秒インキュベーション後に定常状態の蛍光を測定した。ＫＤ値の計算のために、初期蛍光強度１００％に対してデータを規準化し、３μＭ Ｎ－アセチル－トリプトファンアミド溶液の滴定を使用してインナーフィルター効果を補正し、対応するリガンド濃度に対してデータをプロットした。次に、二分子複合体の形成に関する質量作用の法則に基づく非線形最小二乗回帰を使用して、公表された式（Ｂｒｅｕｓｔｅｄｔら、２００６）［４８］を用いてＯｒｉｇｉｎソフトウェアバージョン８．５（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）によりデータをフィットした。
【0130】
ノマコパンは、１ｎＭ未満、より好適には０．９ｎＭ未満、最も好適には０．８ｎＭ未満、好ましくは０．７ｎＭ未満、より好ましくは０．６ｎＭ未満、最も好ましくは０．５ｎＭ未満、さらにより好ましくは０．４ｎＭ未満、有利には０．３ｎＭ未満のＫｄでＬＴＢ４と結合し得、その際、前記Ｋｄは、蛍光滴定を使用して、好ましくは上記方法により決定される。ノマコパン型タンパク質は、好ましくはこれらの特性を共有する。
【0131】
Ｃ５およびＬＴＢ４の両方に結合する分子
本発明の一実施形態により、ノマコパン型タンパク質は、Ｃ５およびＬＴＢ４の両方に（例えば、野生型Ｃ５ならびにエクリズマブによる治療を無効にするかまたはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５の両方に、ならびにＬＴＢ４に）結合し得る。
本発明の一実施形態により、ノマコパン型タンパク質は、Ｃ５およびＬＴＢ４の両方に（例えば、野生型Ｃ５ならびにエクリズマブによる治療を無効にするかまたはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５の両方に、ならびにＬＴＢ４に）結合し得る。
【0132】
したがって、コバーシン型タンパク質は、Ｃ５コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止するように、ならびにまたＬＴＢ４活性を阻害するように作用し得る。Ｃ５およびＬＴＢ４の両方に結合する薬剤を使用することが有利であり得る。Ｃ５およびエイコサノイド経路は、いずれも、増殖性網膜疾患で観察される病理であり得る。したがって、増殖性網膜疾患に関与する複数の経路を阻害する単一薬剤を使用することによって、単一の経路だけを阻害する薬剤を使用することと比較して、増強した効果を達成することができる。さらに、単一の分子を投与することに関連する実用上の利点がある。
【0133】
ＬＴＢ４に結合するが、Ｃ５に結合しないかまたはＣ５に対する結合の減少を示す分子
Ｃ５に結合しないかまたはＣ５に対する結合の減少を示すが、ＬＴＢ－４結合活性を保持するノマコパン型タンパク質は、例えば、ＷＯ２０１８／１９３１２１に開示されており、これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれている。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこのようなノマコパン型タンパク質は、本発明の全ての態様に使用され得る。
Ｃ５に結合しないかまたはＣ５に対する結合の減少を示すが、ＬＴＢ－４結合活性を保持するノマコパン型タンパク質は、例えば、ＷＯ２０１８／１９３１２１に開示されており、これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれている。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこのようなノマコパン型タンパク質は、本発明の全ての態様に使用され得る。
【0134】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこのようなノマコパン型タンパク質は、以下の配列を含むか、またはそれからなっていてもよい。
【0135】
配列番号２２（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号５）は、配列番号４が、Ｍｅｔ１１４をＧｌｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ａｓｐ１１８をＡｓｎに、Ａｌａ１１９をＧｌｙに、Ｇｌｙ１２０をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｓｐにおよびＶａｌ１２４をＬｙｓに変更するように改変された改変ノマコパンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント１）
【0136】
配列番号２３（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号６）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｌａにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変ノマコパンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント２）
【0137】
配列番号２４（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号７）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変ノマコパンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント３）
【0138】
配列番号２５（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号８）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに変更するように改変された改変ノマコパンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント４）。
【0139】
未改変ノマコパンポリペプチドと比較してＣ５に対する結合能力の減少を示す改変ノマコパンポリペプチドは、一部の好ましい実施形態では、Ｃ５に対する検出可能な結合を示さない可能性がある。
【0140】
Ｃ５結合は、例えば、配列番号４の未改変ノマコパンポリペプチドによって示される結合と比べて少なくとも２分の１、５分の１、１０分の１、１５分の１、２０分の１、５０分の１、１００分の１に減少または消失し得る。
【0141】
一部の実施形態では、Ｃ５結合性は、配列番号４の未改変ノマコパンポリペプチドと比べて少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少する。
【0142】
そのようなポリペプチドは、例えば、［４９］に記載される方法、またはＷＯ２０１８１９３１２１の実施例２に示される方法に従って、表面プラズマ共鳴（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍａ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）によって決定されるとき、１マイクロモルよりも大きなＫＤでＣ５に結合し得、および／または［５０］において実施されたものに従ってまたは［５０］において実施されたものと同様に実施されるＣＨ５０溶解アッセイにおいて、全プール正常血清中に０．０２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在すると、ヒツジ赤血球溶解を１０％未満に阻害し得る。Ｃ５に結合するそのようなポリペプチドの能力はまた、血清中の補体活性化を阻害する薬剤の能力を測定することによって決定され得る。
【0143】
ある特定の好ましい実施形態では、バリアント２が使用される。
【0144】
これらの分子は、ＬＴＢ４に結合する分子の能力を共有するが、Ｃ５に結合しないか、またはＣ５に対して結合の減少を示すノマコパンの機能的バリアントである分子の例である。
【0145】
したがって、ノマコパンの機能的等価物は、（ｉ）Ｃ５に結合するその能力を保持し、Ｃ５がＣ５コンバターゼによりＣ５ａおよびＣ５ｂへと開裂されることを防止する、および／または（ｉｉ）ＬＴＢ４に結合する能力を保持する、ノマコパンの相同体または断片であり得る。ある特定の実施形態では、機能的等価物は、特性（ｉ）および（ｉｉ）を有する。他の実施形態では、機能的等価物は、特性（ｉｉ）を有するが、Ｃ５に対する結合が減少しているかまたはＣ５に結合しない（例えば、ノマコパンバリアント１～４のうちの１つ）。
【0146】
一部の実施形態では、本発明の薬剤は、吸血性節足動物に由来する。「吸血性節足動物」という用語は、適切な宿主から餌として血を吸う、昆虫、マダニ、シラミ、ノミおよびダニなどの全ての節足動物を含む。好ましくは、本薬剤は、マダニ、好ましくは、マダニＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ ｍｏｕｂａｔａに由来する。
【0147】
相同体は、例えば、Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ、Ｒｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ、Ｒ．ｂｕｒｓａ、Ａ．ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ、Ａ．ｃａｊｅｎｎｅｎｓｅ、Ａ．ｈｅｂｒａｅｕｍ、Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ ｍｉｃｒｏｐｌｕｓ、Ｂ．ａｎｎｕｌａｔｕｓ、Ｂ．ｄｅｃｏｌｏｒａｔｕｓ、Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｓ、Ｄ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉ、Ｄ．ｍａｒｇｉｎａｔｕｓ、Ｄ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｉｓ ｉｎｅｒｍｉｓ、Ｈａ．ｌｅａｃｈｉｉ、Ｈａ．ｐｕｎｃｔａｔａ、Ｈｙａｌｏｍｍａ ａｎａｔｏｌｉｃｕｍ ａｎａｔｏｌｉｃｕｍ、Ｈｙ．ｄｒｏｍｅｄａｒｉｉ、Ｈｙ．ｍａｒｇｉｎａｔｕｍ ｍａｒｇｉｎａｔｕｍ、Ｉｘｏｄｅｓ ｒｉｃｉｎｕｓ、Ｉ．ｐｅｒｓｕｌｃａｔｕｓ、Ｉ．ｓｃａｐｕｌａｒｉｓ、Ｉ．ｈｅｘａｇｏｎｕｓ、Ａｒｇａｓ ｐｅｒｓｉｃｕｓ、Ａ．ｒｅｆｌｅｘｕｓ、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ ｅｒｒａｔｉｃｕｓ、Ｏ．ｍｏｕｂａｔａ ｍｏｕｂａｔａ、Ｏ．ｍ．ｐｏｒｃｉｎｕｓ、およびＯ．ｓａｖｉｇｎｙｉ．を含む他のマダニ種からのノマコパンタンパク質配列を含む、図２に明示的に特定されるノマコパン配列のパラログおよびオルソログを含む。
【0148】
「相同体」という用語は、また、イエカ属（Ｃｕｌｅｘ）、ハマダラカ属（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ）およびヤブカ属（Ａｅｄｅｓ）の種、特にＣｕｌｅｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉおよびＡｎｏｐｈｅｌｅｓ ｇａｍｂｉａｅを含むカ種；ノミ種、例えばＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｆｅｌｉｓ（ネコノミ）；アブ；スナバエ；ブユ；ツェツェバエ；シラミ；ダニ；ヒル；および扁虫からの同等のノマコパンタンパク質配列を含むことが意味される。ネイティブなノマコパンタンパク質は、Ｏ．ｍｏｕｂａｔａにおいて約１８ｋＤａの別の３つの形態で存在すると考えられており、「相同体」という用語は、ノマコパンのこれらの代替形態を含むことが意味される。
【0149】
図２に示されるノマコパン配列の相同体を同定する方法は、当業者に明らかであろう。例えば、相同体は、公的配列データベースおよび非公的配列データベースの両方の相同性検索によって同定され得る。好適には、公的に入手可能なデータベースが使用され得る。とはいえ、非公的または商業的に利用可能なデータベースは、特に、それらが公的データベースに表されていないデータを含むならば、等しく有用である。一次データベースは、一次ヌクレオチド配列または一次アミノ酸配列データの寄託サイトであり、公的または商業的に利用可能であり得る。公的に利用可能な一次データベースの例には、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）、ＥＭＢＬデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／）、ＤＤＢＪデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴタンパク質データベース（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｈｃｕｇｅ．ｃｈ／）、ＰＩＲ（ｈｔｔｐ：／／ｐｉｒ．ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ．ｅｄｕ／）、ＴｒＥＭＢＬ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／）、ＴＩＧＲデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｉｇｒ．ｏｒｇ／ｔｄｂ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ参照）、ＮＲＬ－３Ｄデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｂｒｆａ．ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ．ｅｄｕ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｂ）、ＮＲＤＢデータベース（ｆｔｐ：／／ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂ／ｎｒｄｂ／ＲＥＡＤＭＥ）、ＯＷＬデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／ｂｓｍ／ｄｂｂｒｏｗｓｅｒ／ＯＷＬ／）および二次データベースＰＲＯＳＩＴＥ（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｈｃｕｇｅ．ｃｈ／ｓｐｒｏｔ／ｐｒｏｓｉｔｅ．ｈｔｍｌ）、ＰＲＩＮＴＳ（ｈｔｔｐ：／／ｉｕｐａｂ．ｌｅｅｄｓ．ａｃ．ｕｋ／ｂｍｂ５ｄｐ／ｐｒｉｎｔｓ．ｈｔｍｌ）、Ｐｒｏｆｉｌｅｓ（ｈｔｔｐ：／／ｕｌｒｅｃ３．ｕｎｉｌ．ｃｈ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ＰＦＳＣＡＮ＿ｆｏｒｍ．ｈｔｍｌ）、Ｐｆａｍ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ｐｆａｍ）、Ｉｄｅｎｔｉｆｙ（ｈｔｔｐ：／／ｄｎａ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／ｉｄｅｎｔｉｆｙ／）およびＢｌｏｃｋｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｌｏｃｋｓ．ｆｈｃｒｃ．ｏｒｇ）データベースが含まれる。商業的に利用可能なデータベースまたは非公的データベースの例には、ＰａｔｈｏＧｅｎｏｍｅ（Ｇｅｎｏｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．）およびＰａｔｈｏＳｅｑ（以前はＩｎｃｙｔｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．のもの）が含まれる。
【0150】
典型的には、２つのポリペプチドの間の（好ましくは、活性部位などの特定領域にわたる）３０％よりも大きい同一性は、機能的等価性の指標、したがって、２つのタンパク質が相同性である指標であると考えられる。好ましくは、相同体であるタンパク質は、図２で特定されるノマコパンタンパク質配列（配列番号２）と６０％よりも大きい配列同一性を有する。より好ましい相同体は、図２に示されるノマコパンタンパク質配列（配列番号２）とそれぞれ７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％よりも大きい同一性を有する。本明細書において言及される同一性パーセンテージは、ＢＬＡＳＴバージョン２．１．３を使用して、ＮＣＢＩ（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって明示されるデフォルトパラメーター［Ｂｌｏｓｕｍ ６２行列；ギャップ開始ペナルティー＝１１およびギャップ伸長ペナルティー＝１］を使用して決定されるものである。％同一性は、関連参照配列（例えば配列番号２のアミノ酸１～１６８または配列番号２のアミノ酸１９～１６８）の完全長にわたり得る。
【0151】
したがって、ノマコパン型タンパク質は、参照配列、例えば図２、配列番号２のアミノ酸１９～１６８または図２、配列番号２のアミノ酸１～１６８に対するある特定のアミノ酸配列同一性％への参照により、例えば、図２、配列番号２のアミノ酸１９～１６８または図２、配列番号２のアミノ酸１～１６８と少なくとも６０％，７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有する配列を含むか、またはそれからなるタンパク質として記載することができる）。ノマコパン型タンパク質が前記配列を含む場合、ノマコパン型タンパク質は、融合タンパク質（例えば第２のタンパク質、例えば異種タンパク質との）であり得る。適切な第２のタンパク質を以下に述べる。
【0152】
本開示の様々な態様および実施形態では、改変ノマコパンポリペプチド（例えば、ノマコパン型タンパク質）は、配列番号２および配列番号４の未改変ノマコパンポリペプチドと、１～５０、２～４５、３～４０、４～３５、５～３０、６～２５、７～２０、８～２５、９～２０、１０～１５アミノ酸、最大で１、２、３、４、５、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０アミノ酸が異なっていてもよい。これらは、置換、挿入または欠失であり得るが、好ましくは置換である。欠失がなされる場合、欠失は、好ましくは、最大で１、２、３、４、５、７または１０アミノ酸の欠失（例えば、ＮまたはＣ末端からの欠失）である。したがって、変異体には、アミノ酸置換、例えばタンパク質の機能または活性に不利に影響しない保存的アミノ酸置換を含むタンパク質が含まれる。本用語は、また、天然生物学的バリアント（例えば、ノマコパンタンパク質が由来する種内の対立遺伝子バリアントまたは地理的変異）を含むことが意図される。野生型Ｃ５および／またはエクリズマブによる治療を無効にする、もしくはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５ならびに／またはＬＴＢ４と結合する改善された能力を有する変異体は、また、タンパク質配列中の特定の残基の系統的または定方向変異により設計され得る。
【0153】
これらの改変は、配列番号２および配列番号４に示されるノマコパンポリペプチドに対してなすことができ、分子は、依然として有用なままであり、結果として生じる改変ノマコパンポリペプチドが、（ｉ）ＬＴＢ４結合活性ならびに／またはさらに（ｉｉ）配列番号２および配列番号４に示されるノマコパンポリペプチドと同等のＣ５結合性を保持する限り、機能的バリアントであると見なされ、結合性は、例えば、本明細書の他で言及される試験を使用して決定することができる（例えば、これらの一方または両方に対する結合性は、未改変ノマコパンポリペプチドと比較して、少なくとも８０、８５、９０、９５％の結合性である）。本明細書の他に述べられるように、ノマコパンおよびＬ－ノマコパンは両方とも、自己免疫性ブドウ膜炎のマウスモデルの治療に有効であることが示されている。Ｌ－ノマコパンはＬＴＢ４に結合するが、Ｃ５には結合しない。ノマコパン様タンパク質は、Ｃ５に結合する能力および／またはＬＴＢ４に結合する能力を参照することによって定義され得る。ＬＴＢ４に結合するものは、本発明において特に有用である。ＬＴＢ４およびＣ５に結合するものも、本発明において特に有用である。
【0154】
ＬＴＢ４に結合し、かつ、必要に応じてＣ５にも結合する機能的バリアントの要件を考慮して、改変をなす際に、ある特定の残基が改変から除外されるべきである。これらには、保存されているシステイン残基が含まれる。
【0155】
他の残基は、改変から除外されるべきであるか、または置換の場合は保存的な改変のみを受けるべきである。それらはＬＴＢ４結合残基である。機能的バリアントがＬＴＢ４およびＣ５に結合する実施形態では、以下に定義されるＣ５結合残基も、好ましくは改変から除外されるべきであり、または置換の場合は好ましくは保存的改変のみを受けるべきである。ＬＴＢ４およびＣ５の結合性は比較的良好に理解されていることを考慮すると、ノマコパンに対して約６５％の同一性パーセンテージを有し得るが、変更がＬＴＢ４結合性におよび必要に応じてＣ５結合性にも関与しない残基に限定されている分子を設計することは可能である。
【0156】
ＬＴＢ４結合バリアントの場合、一部の実施形態では、成熟ノマコパン分子（例えば、シグナル配列を含む全長タンパク質の残基１９～１６８に対応する配列番号４に示されている）の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、以下に示されるＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けている。
【0157】
ＬＴＢ４結合バリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けており、以下に示されるＬＴＢ４結合残基の最大で２、３、４、５、１０、１５、２０は保存的改変を受けている。
【0158】
ＬＴＢ４結合バリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、以下に示されるＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々は保持されている。
【0159】
ＬＴＢ４結合バリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、以下に示されるＬＴＢ４結合残基の各々は保持されているかまたは保存的改変を受けている。
【0160】
ＬＴＢ４結合バリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、以下に示されるＬＴＢ４結合残基の各々は保持されているかまたは保存的改変を受けており、ＬＴＢ４結合残基の最大で２、３、４、５、１０、１５、２０は保存的改変を受けている。
【0161】
ＬＴＢ４結合バリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、以下に示されるＬＴＢ４結合残基の各々は保持されている。
【0162】
Ｃ５およびＬＴＢ４に結合するバリアントの場合、一部の実施形態では、成熟ノマコパン分子（例えば、シグナル配列を含む全長タンパク質の残基１９～１６８に対応する配列番号４に示されている）の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けており、以下に示されるＣ５結合残基の少なくとも５、１０または１５または２０または各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けている。
【0163】
Ｃ５およびＬＴＢ４に結合するバリアントの場合、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々、および以下に示されるＣ５結合残基の少なくとも５、１０または１５または２０または各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けており、ＬＴＢ４結合残基およびＣ５結合残基の最大で２、３、４、５、１０、１５、２０は保存的改変を受けている。
【0164】
Ｃ５およびＬＴＢ４に結合するバリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の少なくとも５、１０または１５または各々、および以下に示されるＣ５結合残基の少なくとも５、１０または１５または２０または各々は、保持されている。
【0165】
Ｃ５およびＬＴＢ４に結合するバリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の各々、および以下に示されるＣ５結合残基の各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けている。
【0166】
Ｃ５およびＬＴＢ４に結合するバリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の各々、および以下に示されるＣ５結合残基の各々は、保持されているかまたは保存的改変を受けており、Ｃ５結合残基および／またはＬＴＢ４結合残基の最大で２、３、４、５、１０、１５、２０は、保存的改変を受けている。
【0167】
Ｃ５およびＬＴＢ４に結合するバリアントの場合、一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸の各々は保持されており、ＬＴＢ４結合残基の各々、および以下に示されるＣ５結合残基の各々は、保持されている。
【0168】
これらの領域の外部になされる改変は、保存的または非保存的であり得る。
【0169】
これらの実施形態の各々では、これらの６つのシステインアミノ酸残基間の間隔は、分子の全体的な構造を保存するために保持されていることが好ましい（例えば、分子は、図２のアミノ酸配列のアミノ酸１～１６８による配列のアミノ末端からカルボキシル末端に配列したときに３２アミノ酸離れた、６２アミノ酸離れた、２８アミノ酸離れた、１アミノ酸離れたおよび２１アミノ酸離れた距離で相互に間隔が空いた６つのシステイン残基を含む）。
【0170】
ＬＴＢ４結合残基
ＬＴＢ４との結合に関与すると考えられており、好ましくは未改変形態に保持されているか、または配列番号２もしくは配列番号４と比べて改変されている任意の分子の配列において保存的変更のみを受けている残基は、Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５である（配列番号４による番号付け）。
ＬＴＢ４との結合に関与すると考えられており、好ましくは未改変形態に保持されているか、または配列番号２もしくは配列番号４と比べて改変されている任意の分子の配列において保存的変更のみを受けている残基は、Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５である（配列番号４による番号付け）。
【0171】
Ｃ５結合残基
Ｃ５との結合に関与すると考えられており、配列番号２もしくは配列番号４と比べて改変されている任意の分子の配列において未改変形態に保持され得る残基は、Ｖａｌ２６、Ｖａｌ２８、Ａｒｇ２９、Ａｌａ４４、Ｇｌｙ４５、Ｇｌｙ６１、Ｔｈｒ６２、Ｓｅｒ９７、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ｍｅｔ１１４、Ｍｅｔ１１６、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｌｅｕ１２２、Ｇｌｕ１２３、Ｖａｌ１２４、Ｇｌｕ１２５、Ｇｌｕ１２７、Ｈｉｓ１４６、Ｌｅｕ１４７およびＡｓｐ１４９である（配列番号４による番号付け）。これらの残基は、ＬＴＢ４に結合するが、Ｃ５に対する結合が減少するように改変されているノマコパンバリアントにおいて改変される残基である。
Ｃ５との結合に関与すると考えられており、配列番号２もしくは配列番号４と比べて改変されている任意の分子の配列において未改変形態に保持され得る残基は、Ｖａｌ２６、Ｖａｌ２８、Ａｒｇ２９、Ａｌａ４４、Ｇｌｙ４５、Ｇｌｙ６１、Ｔｈｒ６２、Ｓｅｒ９７、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ｍｅｔ１１４、Ｍｅｔ１１６、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｌｅｕ１２２、Ｇｌｕ１２３、Ｖａｌ１２４、Ｇｌｕ１２５、Ｇｌｕ１２７、Ｈｉｓ１４６、Ｌｅｕ１４７およびＡｓｐ１４９である（配列番号４による番号付け）。これらの残基は、ＬＴＢ４に結合するが、Ｃ５に対する結合が減少するように改変されているノマコパンバリアントにおいて改変される残基である。
【0172】
ＬＴＢ４および／またはＣ５結合残基
２つのヒスチジン残基Ｈｉｓ９９およびＨｉｓ１０１は、ＬＴＢ４結合およびＣ５結合の両方に関与する。したがって、ＬＴＢ４結合および／またはＣ５結合に関与する残基のリストは、Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ｖａｌ２６、Ｖａｌ２８、Ａｒｇ２９、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ａｌａ４４、Ｇｌｙ４５、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｇｌｙ６１、Ｔｈｒ６２、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｓｅｒ９７、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ｍｅｔ１１６、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｌｅｕ１２２、Ｇｌｕ１２３、Ｖａｌ１２４、Ｇｌｕ１２５、Ｇｌｕ１２７、Ｈｉｓ１４６、Ｌｅｕ１４７、Ａｓｐ１４９である（配列番号４による番号付け）。
２つのヒスチジン残基Ｈｉｓ９９およびＨｉｓ１０１は、ＬＴＢ４結合およびＣ５結合の両方に関与する。したがって、ＬＴＢ４結合および／またはＣ５結合に関与する残基のリストは、Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ｖａｌ２６、Ｖａｌ２８、Ａｒｇ２９、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ａｌａ４４、Ｇｌｙ４５、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｇｌｙ６１、Ｔｈｒ６２、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｓｅｒ９７、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ｍｅｔ１１６、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｌｅｕ１２２、Ｇｌｕ１２３、Ｖａｌ１２４、Ｇｌｕ１２５、Ｇｌｕ１２７、Ｈｉｓ１４６、Ｌｅｕ１４７、Ａｓｐ１４９である（配列番号４による番号付け）。
【0173】
ＬＴＢ４に結合するが、Ｃ５に対する結合の減少を示すかまたはＣ５に結合しない分子のさらなる例
上述のように、Ｃ５に結合しないかまたはＣ５に対する結合の減少を示すが、ＬＴＢ－４結合活性を保持するノマコパン型タンパク質は、例えば、ＷＯ２０１８／１９３１２１に開示されており、これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれている。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこのようなノマコパン型タンパク質は、本発明の全ての態様に使用され得る。
上述のように、Ｃ５に結合しないかまたはＣ５に対する結合の減少を示すが、ＬＴＢ－４結合活性を保持するノマコパン型タンパク質は、例えば、ＷＯ２０１８／１９３１２１に開示されており、これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれている。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこのようなノマコパン型タンパク質は、本発明の全ての態様に使用され得る。
【0174】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能力を保持する４つの例示的なノマコパン型タンパク質は、ＷＯ２０１８／１９３１２１に開示されており、具体的には、配列番号２２（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号５、バリアント１）、配列番号２３（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号６、バリアント２）、配列番号２４（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号７、バリアント３）および配列番号２５（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号８、バリアント４）に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である。本実施例で言及されるＬ－ノマコパンは、バリアント２である。
【0175】
このようなタンパク質は、ノマコパン型タンパク質であり、したがってノマコパンと機能的に等価であるとみなされるが、それらのＬＴＢ４結合特性のみを共有し、Ｃ５に対する結合の減少を示すかまたはＣ５に結合しない。
【0176】
ＷＯ２０１８／１９３１２１において定義されているノマコパン型タンパク質は、以下により詳細に説明されており、本発明で使用することができる。
【0177】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこれらのタンパク質は、以下の配列を含むか、またはそれからなっていてもよい。
配列番号２２（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号５）は、配列番号４が、Ｍｅｔ１１４をＧｌｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ａｓｐ１１８をＡｓｎに、Ａｌａ１１９をＧｌｙに、Ｇｌｙ１２０をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｓｐにおよびＶａｌ１２４をＬｙｓに変更するように改変された改変ノマコパンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント１）
配列番号２３（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号６）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｌａにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント２）
配列番号２４（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号７）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント３）
配列番号２５（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号８）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント４）
配列番号２６（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号９）は、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２７（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号１０）は、ノマコパンバリアント１における配列番号４（配列番号２２）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２８（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号１１）は、ノマコパンバリアント２における配列番号４（配列番号２３）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２９（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号１２）は、ノマコパンバリアント３における配列番号４（配列番号２４）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２２（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号５）は、配列番号４が、Ｍｅｔ１１４をＧｌｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ａｓｐ１１８をＡｓｎに、Ａｌａ１１９をＧｌｙに、Ｇｌｙ１２０をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｓｐにおよびＶａｌ１２４をＬｙｓに変更するように改変された改変ノマコパンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント１）
配列番号２３（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号６）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｌａにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント２）
配列番号２４（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号７）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント３）
配列番号２５（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号８）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（ノマコパンバリアント４）
配列番号２６（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号９）は、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２７（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号１０）は、ノマコパンバリアント１における配列番号４（配列番号２２）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２８（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号１１）は、ノマコパンバリアント２における配列番号４（配列番号２３）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号２９（ＷＯ２０１８／１９３１２１の配列番号１２）は、ノマコパンバリアント３における配列番号４（配列番号２４）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
【0178】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するノマコパン型ポリペプチドは、改変ノマコパンポリペプチド（例えば、ロイコトリエンまたはヒドロキシエイコサノイド結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示す、またはＣ５結合性を示さない）として記載され得る。「改変ノマコパンポリペプチド」への言及は、配列番号２または配列番号４のいずれかの改変バージョン、すなわち、配列番号２のＮ末端に見られる１８アミノ酸のシグナル配列を有するか、または有さないノマコパンポリペプチドへの言及として理解されたい。したがって、それらはノマコパン型タンパク質とみなすことができる。
【0179】
このようなポリペプチドは、ロイコトリエンまたはヒドロキシエイコサノイド結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示すか、またはＣ５結合性を示さなくてもよく、１～３０のアミノ酸置換がなされた配列番号４、但し、
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている］
または改変ノマコパンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片を含み得る。
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている］
または改変ノマコパンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片を含み得る。
【0180】
本明細書に使用されるＬＫ／Ｅ結合活性は、ＬＴＢ４、Ｂ４イソロイコトリエンおよびその任意のヒドロキシル化誘導体、ＨＥＴＥ、ＨＰＥＴＥならびにＥＥＴを含むが、それに限定されないロイコトリエンおよびヒドロキシエイコサノイドに結合する能力を表す。ＬＴＢ４結合性が、特に関心対象である。
【0181】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドは、下の説明により改変された、配列番号２もしくは４からなっているか、または下の説明により改変された配列番号２もしくは４を含んでいてもよい。
【0182】
配列番号２および配列番号４におけるノマコパンポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間のループを特徴とする。このループは、以下に示される配列を有する：
－Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－ （配列番号２６）
最初のＭｅｔは、配列番号４の１１４位および配列番号２の１３２位にある。
－Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－ （配列番号２６）
最初のＭｅｔは、配列番号４の１１４位および配列番号２の１３２位にある。
【0183】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないがＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドにおいて、配列番号２または配列番号４のノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒまたはＡｌａで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＧｌｙまたはＡｓｎで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＳｅｒまたはＡｓｎで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｎで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐまたはＡｌａで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐ、Ａｌａ、ＧｌｎまたはＡｓｎで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＬｙｓまたはＡｌａで置換されている
のうち１または２以上がなされるように改変されている。
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒまたはＡｌａで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＧｌｙまたはＡｓｎで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＳｅｒまたはＡｓｎで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｎで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐまたはＡｌａで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐ、Ａｌａ、ＧｌｎまたはＡｓｎで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＬｙｓまたはＡｌａで置換されている
のうち１または２以上がなされるように改変されている。
【0184】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないがＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドにおいて、配列番号２または配列番号４におけるノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、またはＡｌａで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている
のうち１または２以上がなされるように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、またはＡｌａで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている
のうち１または２以上がなされるように改変することができる。
【0185】
改変ノマコパンポリペプチドにおいて、置換（ａ）～（ｊ）のうち２、３、４、５、６、７、８、９、または１０が存在する。好ましくは、置換（ａ）～（ｊ）のうち２つ以上、５つ以上または８つ以上が存在する。
【0186】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないがＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドにおいて、配列番号２または配列番号４におけるノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている
が存在するように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている
が存在するように改変することができる。
【0187】
必要に応じて、上述の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、Ｔｒｐ１１５は置換されていない。好ましい改変ノマコパンポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間に、配列Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ（配列番号２７）を有するループを有する。
【0188】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐで置換されている
が存在するように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐで置換されている
が存在するように改変することができる。
【0189】
より詳細な実施形態では；
ａ． Ｍｅｔ１１６は、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７は、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１は、Ａｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２は、Ａｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３は、Ａｌａで置換されている。
ａ． Ｍｅｔ１１６は、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７は、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１は、Ａｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２は、Ａｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３は、Ａｌａで置換されている。
【0190】
必要に応じて、上述のこの改変ノマコパンポリペプチドでは、Ｔｒｐ１１５は置換されていない。必要に応じて、この実施形態では、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０およびＶａｌ１２４は、置換されていない、または本明細書の他で言及されたように保存的置換で置換されている。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないがＬＴＢ－４結合能を保持する好ましい改変ノマコパンポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間に、配列Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ（配列番号２８）を有するループを有する。
【0191】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位で以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている；
が存在するように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている；
が存在するように改変することができる。
【0192】
より詳細な実施形態では；
ａ． Ｍｅｔ１１６は、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２は、Ａｓｐで置換されている。
ａ． Ｍｅｔ１１６は、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２は、Ａｓｐで置換されている。
【0193】
必要に応じて、上述のこの改変ノマコパンポリペプチドにおいて、Ｔｒｐ１１５は、置換されていない。必要に応じて、この実施形態では、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｇｌｕ１２３およびＶａｌ１２４は、置換されていない。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する好ましい改変ノマコパンポリペプチドは、配列Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌを有する配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２９）のベータＨとアルファ２との間にループを有する。
【0194】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４中のＡｌａ４４（配列番号２中のＡｌａ６２）がＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されるように改変することができる。
【0195】
好ましい実施形態では、配列番号４中のＡｌａ４４は、Ａｓｎで置換されている。
【0196】
配列番号４の４４位（または配列番号２の６２位）でのこの置換は、本明細書に記載される他の置換のいずれかと組み合わせてなされ得る。
【0197】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないがＬＴＢ－４結合能を保持する別の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａ、例えばＧｌｎで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａ、例えばＧｌｎで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒまたはＡｌａ、例えばＳｅｒで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＧｌｙまたはＡｓｎ、例えばＧｌｙで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＳｅｒまたはＡｓｎ、例えばＳｅｒで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｎ、例えばＡｌａで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐまたはＡｌａ、例えばＡｓｐで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐ、Ａｌａ、ＧｌｎまたはＡｓｎ、例えばＡｓｐまたはＡｌａで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＬｙｓまたはＡｌａ、例えばＬｙｓで置換されている
のうち１または２以上が存在し、かつ追加的に、配列番号４中のＡｌａ４４（配列番号２中のＡｌａ６２）が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｎで置換されるように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａ、例えばＧｌｎで置換されている；
ｂ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａ、例えばＧｌｎで置換されている；
ｃ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒまたはＡｌａ、例えばＳｅｒで置換されている；
ｄ． Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｎで置換されている；
ｅ． Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＧｌｙまたはＡｓｎ、例えばＧｌｙで置換されている；
ｆ． Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＳｅｒまたはＡｓｎ、例えばＳｅｒで置換されている；
ｇ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｎ、例えばＡｌａで置換されている；
ｈ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐまたはＡｌａ、例えばＡｓｐで置換されている；
ｉ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐ、Ａｌａ、ＧｌｎまたはＡｓｎ、例えばＡｓｐまたはＡｌａで置換されている；
ｊ． Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＬｙｓまたはＡｌａ、例えばＬｙｓで置換されている
のうち１または２以上が存在し、かつ追加的に、配列番号４中のＡｌａ４４（配列番号２中のＡｌａ６２）が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｎで置換されるように改変することができる。
【0198】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている
が存在し、かつ配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換されるように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている
が存在し、かつ配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換されるように改変することができる。
【0199】
本実施形態の好ましい態様では、配列番号４の１１４～１２４位に対応するアミノ酸残基は、配列番号２８に示される通りである。
【0200】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている
が存在し、かつ配列番号４中のＡｌａ４４がＡｓｎで置換されるように改変されている。
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている
が存在し、かつ配列番号４中のＡｌａ４４がＡｓｎで置換されるように改変されている。
【0201】
本実施形態の好ましい態様では、配列番号４の１１４～１２４位に対応するアミノ酸残基は、配列番号２９に示される通りである。
【0202】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４中のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されるように改変することができる。一部の実施形態では、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４のＡｓｐ１４９がＧｌｙで置換されるように改変される。配列番号４の１４９位（配列番号２の１６７位）でのこの置換は、本明細書に記載される他の置換のうちいずれかと組み合わせてなされ得る。
【0203】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている
が存在し、配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換され、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ１４９で置換されるように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ． Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｄ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｅ． Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている
が存在し、配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換され、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ１４９で置換されるように改変することができる。
【0204】
本実施形態の好ましい態様では、配列番号４の１１４～１２４位に対応するアミノ酸残基は、配列番号２８に示される通りである。
【0205】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、ノマコパンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位で以下の置換：
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている
が存在し、
配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換され、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ１４９で置換されるように改変することができる。
ａ． Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ． Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている
が存在し、
配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換され、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ１４９で置換されるように改変することができる。
【0206】
本実施形態の好ましい態様では、配列番号４の１１４～１２４位に対応するアミノ酸残基は、配列番号２９に示される通りである。
【0207】
本開示の様々な態様および実施形態では、減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドは、配列番号２および配列番号４における未改変ノマコパンポリペプチドと１～３０のアミノ酸が異なる。配列番号２および配列番号４におけるノマコパンポリペプチドに任意の修復がなされ得るが、但し、結果として生じる改変ノマコパンポリペプチドが、未改変ノマコパンポリペプチドと比較してＬＫ／Ｅ結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示す、またはＣ５結合性を示さない。
【0208】
一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸は、本発明の改変ノマコパンポリペプチドに保持されている。
【0209】
一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、配列番号４中のＡｓｎ６０およびＡｓｎ８４は、それぞれＧｌｎで置換されている。この改変は、ポリペプチドを酵母において発現させた場合に、Ｎ結合型高グリコシル化を防止するために部位特異的変異誘発により実施することができる。
【0210】
一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、配列番号４中の以下のアミノ酸：Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５のうち１または２以上が、ＬＴＢ４との結合に関与すると考えられ、したがって、未改変形態で保持され得る。一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、これらのアミノ酸のうち少なくとも５、１０もしくは１５、または全てが、本発明の改変ノマコパンポリペプチドにおいて未改変形態で保持されている。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、これらのアミノ酸のうち１または２以上が、保存的に置換され得る。減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、これらのアミノ酸のうち最大で５、１０もしくは１５、または全てが、本発明の改変ノマコパンポリペプチドにおいて保存的に置換されている。
【0211】
配列番号４中の以下の位置：５、６、１１、１３～１５、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６９～８１、８３、８４、８６、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０のアミノ酸は、ノマコパンとＴＳＧＰ２およびＴＳＧＰ３との間で高度に保存されている。
【0212】
配列番号４中の以下の位置：５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４３、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０のアミノ酸は、ＬＴＢ４への結合に関与すると考えられ、および／またはノマコパンとＴＳＧＰ２およびＴＳＧＰ３との間で高度に保存されている。
【0213】
配列番号４中の以下の位置：５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２５、２７、３０～３２、３５～４１、４３、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９８、１００、１０２～１０４、１１２～１１３、１１５、１２６、１２８～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０のアミノ酸は、ＬＴＢ４への結合に関与すると考えられ、および／またはノマコパンとＴＳＧＰ２およびＴＳＧＰ３との間で高度に保存されている。
【0214】
したがって、減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する一部の改変ノマコパンポリペプチドにおいて、上記アミノ酸は、未改変形態で保持されている。一部の実施形態では、これらのアミノ酸のうち少なくとも５、１０もしくは１５、または全てが、本発明の改変ノマコパンポリペプチドにおいて未改変形態で保持されている。一部の実施形態では、これらのアミノ酸のうち１または２以上が、保存的に置換され得る。一部の実施形態では、これらのアミノ酸のうち最大で５、１０もしくは１５、２０、２５、３０、４０、５０または全てが、本発明の改変ノマコパンポリペプチドにおいて保存的に置換されている。
【0215】
本明細書に記載される改変ノマコパンポリペプチドは、典型的には、配列番号２または配列番号４と１～３０、好ましくは２～２５、より好ましくは３～２０、さらにより好ましくは４～１５のアミノ酸が異なる。典型的には、差異は、５～１２、または６～１０のアミノ酸変化である。例えば、１～３０、または２～２５、３～３０、４～１５、５～１２、または６～１０のアミノ酸置換が、配列番号２または配列番号４になされ得る。
【0216】
配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間に配列番号２７に示されるようなループを有する改変ノマコパンポリペプチドは、このループが存在する結果として配列番号４と比較して１０のアミノ酸置換を有する。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される改変ノマコパンポリペプチドは、好ましくは、配列番号２２に示される置換以外に配列番号４と比較して（例えば配列番号２７のループ中に）１～１５、２～１０、３～５、または最大で２、３、４もしくは５の追加的な置換を有する。
【0217】
配列番号２８に示されるような、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間にループを有する改変ノマコパンポリペプチドは、このループが存在する結果として配列番号４と比較して５のアミノ酸置換を有する。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される改変ノマコパンポリペプチドは、好ましくは、配列番号２３に示される置換以外に配列番号４と比較して（例えば、配列番号２８のループ中に）１～２０、２～１５、３～１０、または最大で２、３、４、５、６、７、８、９、１０の追加的な置換を有する。追加的な置換には、好ましくは、本明細書の他の箇所に示されるような４４位および１４９位の置換が含まれる。
【0218】
配列番号２９に示されるように配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間にループを有する改変ノマコパンポリペプチドは、このループが存在する結果として配列番号４と比較して２のアミノ酸置換を有する。したがって、一部の実施形態では、改変ノマコパンポリペプチドは、好ましくは、配列番号２４に示される置換以外に配列番号４と比較して１～２５、２～１２、３～１５、または最大で２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５の追加的な置換（例えば、配列番号２９のループ中の置換）を有する。追加的な置換には、好ましくは、本明細書の他の箇所に示されるような４４位および１４９位の置換が含まれる。
【0219】
本明細書の他の箇所に示されるように配列番号４の４４位に置換を有する改変ノマコパンポリペプチドは、好ましくは、配列番号４と比較して、１～２５、２～１２、３～１５、または最大で２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５の追加的な置換を有する。
【0220】
上記で明確に述べられる置換以外の置換は、好ましくは、例えば次の表による保存的置換である。第２列の同じブロック内、好ましくは第３列の同じ行にあるアミノ酸は、相互に置換され得る。
【0221】
【表1】
【0222】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する好ましい改変ノマコパンポリペプチドは、配列番号２２、２３、２４、２５のうち１つに示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなっていてもよい。
【0223】
減少したＣ５結合活性を有するか、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変ノマコパンポリペプチドの例には、以下が含まれる。
【0224】
１．ロイコトリエンまたはヒドロキシエイコサノイド結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示すか、またはＣ５結合性を示さない改変ノマコパンポリペプチドであって、１～３０のアミノ酸置換がなされた配列番号４を含み、但し、
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号３のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている、
改変ノマコパンポリペプチド；
または改変ノマコパンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片。
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号３のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている、
改変ノマコパンポリペプチド；
または改変ノマコパンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片。
【0225】
２．
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、またはＡｌａで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている；
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号３のＡｌａ４４が、Ａｓｎ４４で置換されている
第１項に記載の改変ノマコパンポリペプチド；
または改変ノマコパンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片。
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、またはＡｌａで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている；
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号３のＡｌａ４４が、Ａｓｎ４４で置換されている
第１項に記載の改変ノマコパンポリペプチド；
または改変ノマコパンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片。
【0226】
３．配列番号４の１１４～１２４位に置換（ａ）～（ｊ）の１または２以上が存在する、第１項または第２項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0227】
４．置換（ａ）～（ｊ）の２または３以上が存在する、第３項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0228】
５．置換（ａ）～（ｊ）の５または６以上が存在する、第４項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0229】
６．置換（ａ）～（ｊ）の各々が存在し、必要に応じてＴｒｐ１１５が置換されていない、第５項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0230】
７．第２項に定義されている置換（ａ）～（ｊ）の各々が存在し、必要に応じてＴｒｐ１１５が置換されていない、第５項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0231】
８．Ｇｌｕ１２３がＡｓｐで置換されている、第７項に記載の改変ポリペプチドまたはその断片。
【0232】
９．配列番号２７に示されるように配列番号４のアミノ酸１１４～１２４位の間にループ配列を有し、配列番号２２に示されているもの以外に、配列番号４と比較して１～１５の追加的な置換を有する、第１項～第８項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0233】
１０．配列番号２２に示されているもの以外に、配列番号２７と比較して２～１０の追加的な置換を有する、第９項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0234】
１１．配列番号２２に示されているもの以外に、配列番号２７と比較して３～５の追加的な置換を有する、第９項または第１０項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0235】
１２．配列番号２２からなるか、またはそれを含む、第１項～第８項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチド。
【0236】
１３．
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒで置換されており；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａで置換されており；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されており；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｐで置換されている、
第１項～第５項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒで置換されており；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａで置換されており；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されており；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｐで置換されている、
第１項～第５項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0237】
１４．配列番号４の１１４～１２４位において、
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されており；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されており；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されており；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている、
第１３項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されており；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されており；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されており；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている、
第１３項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0238】
１５．Ｔｒｐ１１５が置換されていない、第１３項または第１４項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0239】
１６．Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０およびＶａｌ１２４が置換されていない、第１３項、第１４項または第１５項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0240】
１７．配列番号２８に示されるように配列番号４のアミノ酸１１４～１２４位の間にループ配列を有し、配列番号２３に示されているもの以外に、配列番号４と比較して１～２０の追加的な置換を有する、第１項～第５項または第１３項～第１６項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0241】
１８．配列番号２３に示されているもの以外に、配列番号４と比較して２～１５の追加的な置換を有する、第１７項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0242】
１９．配列番号２３に示されているもの以外に、配列番号４と比較して３～１０の追加的な置換を有する、第１７項または第１８項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0243】
２０．配列番号２３からなるか、またはそれを含む、第１項～第５項または第１３項～第１６項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチド。
【0244】
２１．
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている、
第１項～第４項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている、
第１項～第４項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0245】
２２．
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている、
第２１項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されており；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている、
第２１項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0246】
２３．Ｔｒｐ１１５が置換されていない、第２１項または第２２項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0247】
２４．Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｇｌｕ１２３およびＶａｌ１２４が置換されていない、第２１項、第２２項または第２３項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0248】
２５．配列番号２９に示されるように配列番号４のアミノ酸１１４～１２４位の間にループ配列を有し、配列番号２４に示されているもの以外に、配列番号４と比較して１～２５の追加的な置換を有する、第１項～第４項または第２１項～第２４項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0249】
２６．配列番号２４に示されているもの以外に、配列番号４と比較して２～１２の追加的な置換を有する、第２５項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0250】
２７．配列番号２４に示されているもの以外に、配列番号４と比較して３～１５の追加的な置換を有する、第２５項または第２６項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0251】
２８．配列番号２４からなるか、またはそれを含む、第１項～第４項または第２１項～第２４項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチド。
【0252】
２９．配列番号４のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている、第１項～第１１項または第１３項～第２８項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0253】
３０．配列番号４のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換されている、第２９項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0254】
３１．配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている、第１項～第１１項または第１３項～第３０項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0255】
３２．配列番号４のＡｌａ４４がＡｓｎで置換されており、配列番号４のＡｓｐ１４９がＧｌｙで置換されている、第３０項または第３１項に記載の改変ノマコパンポリペプチド。
【0256】
３３．配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸が、未改変形態に保持されている、前記項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0257】
３４．Ａｓｎ６０およびＡｓｎ８４が各々Ｇｌｎで置換されている、第１項～第１１項、第１３項～第１９項または第２１項～第２７項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチド。
【0258】
３５．以下のアミノ酸：Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５のうち１または２以上が置換されていない、前記項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0259】
３６．以下のアミノ酸：Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５の全てが置換されていない、第３５項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0260】
３７．
ａ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６９～８１、８３、８４、８６、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていないか；または
ｂ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４３、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていないか；または
ｃ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２５、２７、３０～３２、３５～４１、４３、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９８、１００、１０２～１０４、１１２～１１３、１１５、１２６、１２８～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていない、
第１項～第３６項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
ａ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６９～８１、８３、８４、８６、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていないか；または
ｂ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４３、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていないか；または
ｃ．配列番号４のアミノ酸５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２５、２７、３０～３２、３５～４１、４３、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９８、１００、１０２～１０４、１１２～１１３、１１５、１２６、１２８～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０がいずれも置換されていない、
第１項～第３６項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0261】
３８．配列番号２５を含むか、またはそれからなる、第１項または第２項に記載の改変ノマコパンポリペプチド。
【0262】
３９．ＬＴＢ４に結合する、前記項のいずれか一項に記載の改変ノマコパンポリペプチドまたはその断片。
【0263】
断片
ノマコパンの機能的等価物には、ノマコパンタンパク質の断片が含まれ、但し、そのような断片は、（ｉ）ＬＴＢ４および／または（ｉｉ）Ｃ５（例えば、野生型Ｃ５、および／またはエクリズマブによる治療を無効にするかもしくはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）に結合する能力を保持する。好ましくは、機能的断片は、特性（ｉ）および（ｉｉ）を有する。他の好ましい実施形態では、機能的断片は、特性（ｉ）を有するが、減少したＣ５結合性を有するかまたはＣ５結合性を有さない。
ノマコパンの機能的等価物には、ノマコパンタンパク質の断片が含まれ、但し、そのような断片は、（ｉ）ＬＴＢ４および／または（ｉｉ）Ｃ５（例えば、野生型Ｃ５、および／またはエクリズマブによる治療を無効にするかもしくはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）に結合する能力を保持する。好ましくは、機能的断片は、特性（ｉ）および（ｉｉ）を有する。他の好ましい実施形態では、機能的断片は、特性（ｉ）を有するが、減少したＣ５結合性を有するかまたはＣ５結合性を有さない。
【0264】
断片には、例えば、１５０アミノ酸未満、１４５アミノ酸未満であり、但しこれらの断片がＬＴＢ４におよび必要に応じてＣ５にも結合する能力を保持する、ノマコパンタンパク質配列（または相同体）に由来するポリペプチドが含まれ得る。
【0265】
断片には、例えば、少なくとも１５０アミノ酸、少なくとも１４５アミノ酸であり、但しこれらの断片がＬＴＢ４におよび必要に応じてＣ５にも結合する能力を保持する、ノマコパンタンパク質配列（または相同体）に由来するポリペプチドが含まれ得る。
【0266】
任意の機能的等価物またはその断片は、好ましくは、ノマコパン中に見出されるシステイン残基のパターンを保持する。例えば、前記機能的等価物は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１～１６８による配列のアミノ末端からカルボキシル末端に配列したときに３２アミノ酸離れた、６２アミノ酸離れた、２８アミノ酸離れた、１アミノ酸離れたおよび２１アミノ酸離れた距離で相互に間隔が空いた６つのシステイン残基を含む。ノマコパンタンパク質の例示的な断片は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４に開示されている。対応する断片をコードするＤＮＡは、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３に開示されている。
【0267】
そのような断片としては、図２において本明細書に明示的に特定されるＯ．ｍｏｕｂａｔａノマコパンタンパク質の断片だけでなく、上記のようなこのタンパク質の相同体（例えば、バリアント）の断片も含まれる。相同体のこのような断片は、典型的には図２におけるノマコパンタンパク質配列の断片と６０％よりも大きい同一性を有するが、相同体のより好ましい断片は、図２におけるノマコパンタンパク質配列の断片とそれぞれ７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％よりも大きい同一性を示す。好ましくは、このような断片は、上述のシステイン間隔を保持する。改善された特性を有する断片は、もちろん、野生型配列の系統的変異または断片化に続く適切な活性アッセイによって合理的に設計され得る。断片は、ノマコパンと同様のまたはそれよりも大きなＬＴＢ４に対する親和性を示し、必要に応じてノマコパンと同様のまたはそれよりも大きなＣ５に対する親和性を示し得る。これらの断片は、ノマコパンタンパク質の断片について上記されたサイズであり得る。
【0268】
上述のように、ノマコパン型タンパク質は、好ましくはＬＴＢ４に結合し、必要に応じてＣ５にも結合する。
【0269】
保守的置換
あらゆる置換は、好ましくは、例えば以下の表に記載の保存的置換である。第２列の同じブロック内にあり、好ましくは第３列の同じ行にあるアミノ酸は、相互に置換され得る。
あらゆる置換は、好ましくは、例えば以下の表に記載の保存的置換である。第２列の同じブロック内にあり、好ましくは第３列の同じ行にあるアミノ酸は、相互に置換され得る。
【0270】
【表2】
【0271】
融合タンパク質
本発明により使用される機能的等価物は、例えば、ノマコパンタンパク質またはその機能的等価物をコードするポリヌクレオチドを、異種タンパク質配列のコード配列に対してインフレームでクローニングすることによって得られる融合タンパク質であり得る。
本発明により使用される機能的等価物は、例えば、ノマコパンタンパク質またはその機能的等価物をコードするポリヌクレオチドを、異種タンパク質配列のコード配列に対してインフレームでクローニングすることによって得られる融合タンパク質であり得る。
【0272】
本明細書に使用される「異種」という用語は、ノマコパンタンパク質またはその機能的等価物以外の任意のポリペプチドを表すことが意図される。可溶性融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端のいずれかに含まれ得る異種配列の例は、以下：膜結合タンパク質の細胞外ドメイン、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ領域）、ＰＡＳもしくはＸＴＥＮもしくは類似の構造不定のポリペプチド、多量体化ドメイン、細胞外タンパク質のドメイン、シグナル配列、搬出配列、またはアフィニティークロマトグラフィーによる精製を可能にする配列である。これらの異種配列の多くは、発現プラスミドに挿入して市販されており、それは、これらの配列と融合されたタンパク質の特異的生物学的活性を顕著に損なうことなく追加的な特性を提供するために、これらの配列が一般的に融合タンパク質に含まれるからである［５１］。このような追加的な特性の例は、体液中でより長く持続する半減期（例えば、Ｆｃ領域の付加またはＰａｓ化（Ｐａｓｙｌａｔｉｏｎ）［５２］の結果として生じる）、細胞外局在、またはヒスチジン、ＧＳＴ、ＦＬＡＧ、アビジンもしくはＨＡタグなどのタグによって可能になるような、より簡単な精製手順である。融合タンパク質は、追加的に、リンカー配列（例えば１～５０アミノ酸長を含有し得、それにより、構成成分がこのリンカーによって分離される。
【0273】
したがって、融合タンパク質は、ノマコパン様タンパク質を含むタンパク質の例であり、これらには、具体例としてＰＡＳ配列およびノマコパン型タンパク質配列を含むタンパク質が含まれる。ＰＡＳ配列は、例えば、Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ Ｍら［５２］、およびＥＰ２１７３８９０に記載されており、ＰＡＳ化ノマコパン分子は、Ｋｕｈｎら［５３］に記載されている。ＰＡＳ化（登録商標）は、タンパク質と、アミノ酸Ｐｒｏ、Ａｌａ、および／またはＳｅｒから構成されるコンフォメーション的に無秩序なポリペプチド配列との遺伝的融合を説明している。これは、ＸＬ Ｐｒｏｔｅｉｎ（ｈｔｔｐ：／／ｘｌ－ｐｒｏｔｅｉｎ．ｃｏｍ／）によって開発された技法であり、溶媒和したランダム鎖を大きな流体力学的体積で、それと融合されるタンパク質に結合させる簡単な方法を提供する。ポリペプチド配列は、ランダムコイル構造を採る。したがって、結果として生じる融合タンパク質の見かけの分子量は、融合タンパク質の実際の分子量よりも非常に大きい。これにより、生体システムにおける腎臓濾過によるクリアランス速度が大幅に減少する。適切なＰＡＳ配列は、ＥＰ２１７３８９０および［５２］に記載されている。任意の適切なＰＡＳ配列が、融合タンパク質に使用され得る。例には、ランダムコイルコンフォメーションを形成し、アラニン、セリンおよびプロリン残基からなるかまたはから本質的になる（またはプロリンおよびアラニン残基からなるかまたはから本質的になる）少なくとも約１００のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列が含まれる。これは、複数のアミノ酸リピートを含んでいてもよく、その際、前記リピートは、Ａｌａ、Ｓｅｒ、およびＰｒｏ残基（またはプロリンおよびアラニン残基）からなるかまたはから本質的になり、同一アミノ酸残基の連続は、６つ以下である。プロリン残基は、配列のアミノ酸の４％よりも大きく４０％未満を構成し得る。配列は、
ＡＳＰＡＡＰＡＰＡＳＰＡＡＰＡＰＳＡＰＡ（配列番号１５）；
ＡＡＰＡＳＰＡＰＡＡＰＳＡＰＡＰＡＡＰＳ（配列番号１６）；
ＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳ（配列番号１７）；
ＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号１８）；
ＳＳＰＳＡＰＳＰＳＳＰＡＳＰＳＰＳＳＰＡ（配列番号１９）；
ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号２０）；および
ＡＳＡＡＡＰＡＡＡＳＡＡＡＳＡＰＳＡＡＡ（配列番号２１）
または、これらの配列の全体もしくは部分としてのこれらの配列の環状並び替えバージョンもしくは多量体から選択されるアミノ酸配列を含み得る。例えば、ＰＡＳ配列中に存在するリピートのうち１つの５～４０、１０～３０、１５～２５、１８～２０、好ましくは、２０～３０または３０コピー、すなわち配列番号１５～２１のうち１つ、好ましくは配列番号１５が存在し得る。好ましくは、ＰＡＳ配列は、配列番号１５の３０コピーを含むか、またはそれからなる。好ましくは、ＰＡＳ配列は、ノマコパン型タンパク質のＮ末端と（直接またはリンカー配列を介して）融合される。
ＡＳＰＡＡＰＡＰＡＳＰＡＡＰＡＰＳＡＰＡ（配列番号１５）；
ＡＡＰＡＳＰＡＰＡＡＰＳＡＰＡＰＡＡＰＳ（配列番号１６）；
ＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳ（配列番号１７）；
ＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号１８）；
ＳＳＰＳＡＰＳＰＳＳＰＡＳＰＳＰＳＳＰＡ（配列番号１９）；
ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号２０）；および
ＡＳＡＡＡＰＡＡＡＳＡＡＡＳＡＰＳＡＡＡ（配列番号２１）
または、これらの配列の全体もしくは部分としてのこれらの配列の環状並び替えバージョンもしくは多量体から選択されるアミノ酸配列を含み得る。例えば、ＰＡＳ配列中に存在するリピートのうち１つの５～４０、１０～３０、１５～２５、１８～２０、好ましくは、２０～３０または３０コピー、すなわち配列番号１５～２１のうち１つ、好ましくは配列番号１５が存在し得る。好ましくは、ＰＡＳ配列は、配列番号１５の３０コピーを含むか、またはそれからなる。好ましくは、ＰＡＳ配列は、ノマコパン型タンパク質のＮ末端と（直接またはリンカー配列を介して）融合される。
【0274】
ある特定の好ましい実施形態では、ノマコパン型タンパク質は、配列番号２のアミノ酸１９～１６８を含むか、またはそれからなっていてもよい（例えば、融合タンパク質は、（ａ）配列番号１５の３０コピーからなるＰＡＳ配列および（ｂ）配列番号２のアミノ酸１９～１６８を含み、その際、（ａ）は、（ｂ）のＮ末端に直接またはリンカー配列を介して融合されている）。例示的な配列は、図２Ｄおよび配列番号３０に提供されている。
【0275】
別の好ましい実施形態では、ノマコパン型タンパク質は、配列番号２２、２３、２４または２５を含むかまたはそれからなり得る（例えば、融合タンパク質は、（ａ）配列番号１５の３０コピーからなるＰＡＳ配列、および（ｂ）配列番号２２、２３、２４または２５を含み、（ａ）は、（ｂ）のＮ末端に直接的にまたはリンカー配列を介して融合されている）。好ましいバージョンは、配列番号２２を含む。例示的な配列は、図２Ｅおよび配列番号３１に提供されている。
【0276】
融合タンパク質は、追加的に、リンカー配列（例えば、１～５０、２～３０、３～２０、５～１０、２～４、３～５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０アミノ酸長）を含み得、成分は、このリンカーによって分離される。一実施形態では、リンカー配列は、単一のアラニン残基であり得る。
【0277】
本明細書の「ＰＡＳ－ノマコパン」は、例えば上記のような、ＰＡＳ化されているノマコパンの機能的等価物を指すことが意図されており、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンは、ＬＴＢ４に結合するがＣ５には結合しない、ＰＡＳ化されているノマコパンの機能的等価物を指すことが意図されている。実施例において試験したＰＡＳ－ノマコパン分子の配列は、図２Ｄおよび配列番号３０に示されている。実施例において試験したＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン分子の配列は、図２Ｅおよび配列番号３１に示されている。ＰＡＳ－ノマコパンおよびＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンは、各々がより長い半減期を有するため投与頻度を少なくすることが可能であるという利点を有し、それは患者にとってより好適である。したがって、ＰＡＳ－ノマコパンは、Ｃ５依存性経路およびＬＴＢ４依存性経路を両方とも阻害するという点でノマコパンの利点を兼ね備えているが、ノマコパンよりも投与頻度を少なくすることができるため、投与上の利点を提供する。したがって、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンは、ＬＴＢ４依存性経路を阻害するがＣ５依存性経路を阻害しないという点でＬ－ノマコパンの利点を兼ね備えているが、Ｌ－ノマコパンよりも投与頻度を少なくすることができるため、投与上の利点を提供する。
【0278】
薬剤の調製
タンパク質およびその機能的等価物は、宿主細胞における発現により組換え形態として調製され得る。このような発現方法は、当業者に公知であり、［５４］および［５５］によって詳細に記載されている。ノマコパンタンパク質およびその機能的等価物の組換え形態は、好ましくは、グリコシル化されていない。好ましくは、宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。
タンパク質およびその機能的等価物は、宿主細胞における発現により組換え形態として調製され得る。このような発現方法は、当業者に公知であり、［５４］および［５５］によって詳細に記載されている。ノマコパンタンパク質およびその機能的等価物の組換え形態は、好ましくは、グリコシル化されていない。好ましくは、宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。
【0279】
ノマコパンタンパク質およびその機能的等価物は、好ましくは、例えばそれがその中で発現される宿主細胞および／または細胞増殖培地の少なくとも１つの成分から分離された、単離形態である。一部の実施形態では、ノマコパンタンパク質またはその機能的等価物は、例えば、電気泳動またはクロマトグラフィーによって決定される、少なくとも９０％、９５％、または９９％の純度に精製される。本発明のタンパク質および断片は、また、タンパク質化学の通例の技法を使用して調製することができる。例えば、タンパク質断片は、化学合成によって調製され得る。融合タンパク質を生成する方法は、当技術分野において標準的であり、熟練の読者に公知である。例えば、大部分の一般分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技法および免疫学的技法は、［５４］または［５６］に見出すことができる。
【0280】
核酸分子としての薬剤
本発明のさらなる実施形態によると、薬剤は、ノマコパン型タンパク質をコードする核酸分子であり得る。例えば、対象において関連細胞によるノマコパン型タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏのいずれかの内因性産生を引き起こすために遺伝子療法が採用され得る。別のアプローチは、治療用遺伝子が血流または筋組織中に直接注射される、「裸のＤＮＡ」の投与である。
本発明のさらなる実施形態によると、薬剤は、ノマコパン型タンパク質をコードする核酸分子であり得る。例えば、対象において関連細胞によるノマコパン型タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏのいずれかの内因性産生を引き起こすために遺伝子療法が採用され得る。別のアプローチは、治療用遺伝子が血流または筋組織中に直接注射される、「裸のＤＮＡ」の投与である。
【0281】
好ましくは、このような核酸分子は、図２におけるヌクレオチド配列（配列番号１）の塩基５５～５０７を含むか、またはそれからなる。このヌクレオチド配列は、シグナル配列を有さない図２におけるノマコパンタンパク質をコードする。図２におけるヌクレオチド配列の最初の５４塩基は、補体阻害活性またはＬＴＢ４結合活性に必要とされないシグナル配列をコードする。あるいは、核酸分子は、シグナル配列を有するタンパク質をコードする、図２における核酸配列の塩基１～５０７を含むか、またはそれからなっていてもよい。
【0282】
投与様式
ノマコパン型タンパク質は、眼に直接的に投与してもよくまたは全身的に投与してもよい。ノマコパン型タンパク質は、好ましくは、眼の表面に直接的に、例えば局所的に（例えば、点眼剤または軟膏の形態で）、または眼内への直接導入（例えば、強膜によって画成される眼の境界内部への直接投与）によって投与される。眼の境界内部への直接投与の例には、硝子体内投与および脈絡膜上投与が含まれる。硝子体内投与（例えば、硝子体内注射）は当技術分野で周知である。脈絡膜上投与も実施され得る。
ノマコパン型タンパク質は、眼に直接的に投与してもよくまたは全身的に投与してもよい。ノマコパン型タンパク質は、好ましくは、眼の表面に直接的に、例えば局所的に（例えば、点眼剤または軟膏の形態で）、または眼内への直接導入（例えば、強膜によって画成される眼の境界内部への直接投与）によって投与される。眼の境界内部への直接投与の例には、硝子体内投与および脈絡膜上投与が含まれる。硝子体内投与（例えば、硝子体内注射）は当技術分野で周知である。脈絡膜上投与も実施され得る。
【0283】
局所投与
本発明者らは、眼に対するノマコパン型タンパク質の局所投与が、実験的ＵＡＥに影響を及ぼすことを観察した。これは、そのようなタンパク質が角膜を通過できるとは以前には考えられていなかったため、驚くべきことである。実施例１に示されるように、Ｌ－ノマコパン、ノマコパンおよびＰＡＳ－ノマコパンは全て、使用したＵＡＥマウスモデルにおいて臨床スコアをある程度減少させた。これは、これらの分子が角膜を通過し眼内で効果を発揮することできることと一致する。
本発明者らは、眼に対するノマコパン型タンパク質の局所投与が、実験的ＵＡＥに影響を及ぼすことを観察した。これは、そのようなタンパク質が角膜を通過できるとは以前には考えられていなかったため、驚くべきことである。実施例１に示されるように、Ｌ－ノマコパン、ノマコパンおよびＰＡＳ－ノマコパンは全て、使用したＵＡＥマウスモデルにおいて臨床スコアをある程度減少させた。これは、これらの分子が角膜を通過し眼内で効果を発揮することできることと一致する。
【0284】
ノマコパン型タンパク質による局所治療が、網膜増殖性疾患、つまり病理学的影響が眼内である疾患に効果を有するという事実は、ある特定の実施形態では、ノマコパン型タンパク質のいずれかを単独で、網膜増殖性疾患の治療に使用することができることを意味する。本発明のある特定の実施形態では、ノマコパン型タンパク質は、例えば、毎日、または１日２～５、３～４回、局所投与される。
【0285】
眼内への直接的投与
本発明の薬剤を眼内に直接的に導入すること、例えば、強膜によって画成される眼の境界内部に直接的に投与することは有利であり得る。ある特定の実施形態では、本発明の薬剤は、硝子体内に導入される。他の実施形態では、本発明の薬剤は、脈絡膜上に導入される。
本発明の薬剤を眼内に直接的に導入すること、例えば、強膜によって画成される眼の境界内部に直接的に投与することは有利であり得る。ある特定の実施形態では、本発明の薬剤は、硝子体内に導入される。他の実施形態では、本発明の薬剤は、脈絡膜上に導入される。
【0286】
ある特定の実施形態では、本発明の薬剤は、硝子体内に導入される。硝子体内投与は当技術分野で周知である。本発明のある特定の実施形態では、硝子体内投与は、約４～６、４～８、４～１０週間に１回実施される。
【0287】
他の実施形態では、本発明の薬剤は、脈絡膜上に導入される。脈絡膜上腔（ＳＣＳ）は、強膜と脈絡膜との間にあり、後眼部の周囲を横切る潜在的な空間である。ＳＣＳ内への薬剤導入は、脈絡膜、網膜色素上皮、および網膜を高い生物学的利用能で標的にしつつ、眼の他の場所では低レベルが維持される。実際、第ＩＩＩ相臨床試験では、ＳＣＳ薬物送達の安全性および有効性が調査されている。薬剤は、皮下注射針、マイクロニードル、マイクロステントを用いてＳＣＳに投与することができる［５７］。本発明のある特定の実施形態では、脈絡膜上投与は、約４～６、４～８、４～１０週間に１回実施される。
【0288】
眼内への直接投与と組み合わせた局所投与
ノマコパン型タンパク質は、また、本明細書の他に述べられるように、第２の薬剤と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、眼内に直接的に導入される。この利点は、前記第２の薬剤の眼内への直接投与の実施が必要とされる頻度を減少させ得ることである。眼内への直接投与は、一般的に安全であるが、合併症の危険をある程度有する（例えば、感染症、眼内への主動脈の閉塞、網膜剥離、眼の出血および眼の水晶体に対する損傷）。さらに、これは、患者の通院が要求される医療処置である。網膜増殖性疾患を治療するため、そのような投与は、例えば、１～２ヶ月に１回実施され得る。したがって、これらの投与が実施される頻度を減少させることは有利だろう。
ノマコパン型タンパク質は、また、本明細書の他に述べられるように、第２の薬剤と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、眼内に直接的に導入される。この利点は、前記第２の薬剤の眼内への直接投与の実施が必要とされる頻度を減少させ得ることである。眼内への直接投与は、一般的に安全であるが、合併症の危険をある程度有する（例えば、感染症、眼内への主動脈の閉塞、網膜剥離、眼の出血および眼の水晶体に対する損傷）。さらに、これは、患者の通院が要求される医療処置である。網膜増殖性疾患を治療するため、そのような投与は、例えば、１～２ヶ月に１回実施され得る。したがって、これらの投与が実施される頻度を減少させることは有利だろう。
【0289】
したがって、ある特定の実施形態では、対象における網膜増殖性疾患を治療または予防する方法は、（ｉ）本明細書で定義されるノマコパン型タンパク質を局所投与することおよび（ｉｉ）第２の網膜増殖治療を前記対象の眼内に直接的に投与することを含む。第２の網膜増殖治療は、本明細書の他の箇所で定義されている通りであってもよく、またはそれ自体がノマコパン型タンパク質であってもよい（例えば、第２の網膜増殖治療は、局所投与されるノマコパン型タンパク質と同じノマコパン型タンパク質であってもよく、または第２のノマコパン型タンパク質であってもよい）。
【0290】
第２の網膜増殖治療の例には、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ（アバスチン）、ラニビズマブ（ルセンティス）などの抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体またはその断片）、抗ＶＥＧＦアプタマー（ペガプタニブ（マクジェン）など））、またはアフリベルセプト（アイリーア、ヒトＩｇＧ１イムノグロブリンのＦｃ部分に融合されている、ヒトＶＥＧＦ受容体１および２の細胞外ドメインに由来する血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合性部分からなる組換え融合タンパク質）などの別のＶＥＧＦアンタゴニスト、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）、免疫調節療法（ＩＭＴ）薬（例えばメトトレキサート、アザチオプリンまたはミコフェノレート）、生物学的応答修飾物質（ＢＲＭ）薬（抗ＴＮＦアルファ剤、例えば、インフリキシマブまたはアダリムマブなどのＴＮＦアルファに結合する抗体またはその断片）が含まれる。好ましくは、前記第２の薬剤は、抗ＶＥＧＦ剤である。
【0291】
ノマコパン型タンパク質が局所的に投与され、第２のノマコパン型タンパク質が眼内に直接的に投与される実施形態では、局所的に投与される薬剤は、長期作用型タンパク質（例えば、クリアランス時間を減少させるように設計されている配列を含む融合タンパク質）である必要はない。したがって、局所的に投与される薬剤は、例えば、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質であって、最大で１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０アミノ酸（好ましくは最大で１５０アミノ酸）長であるタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である薬剤であり得る。例えば、局所的に投与される薬剤は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物である薬剤であり得、前記タンパク質が機能的等価物である場合、前記タンパク質は、融合タンパク質ではない（例えば、前記タンパク質は、前記タンパク質の相同体、前記タンパク質の断片、または本明細書の他の箇所で定義されている通りの相同体の断片である機能的等価物であり得る）。これらの実施形態では、眼内に直接的に投与される薬剤は、本明細書の他の箇所で定義されている融合タンパク質である機能的等価物であり得る。例として、局所的に投与される薬剤は、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８、配列番号２２、２３、２４、２５、好ましくは配列番号２のアミノ酸１９～１６８または配列番号２２からなるタンパク質であり得、および／または眼内に直接的に投与される薬剤は、（ｉ）図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８、配列番号２２、２３、２４、２５、好ましくは配列番号２のアミノ酸１９～１６８または配列番号２２および（ｉｉ）本明細書で定義されているＰＡＳ配列、例えば配列番号１５の３０コピーからなる配列を含む融合タンパク質である。
【0292】
他の実施形態では、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはこのタンパク質の機能的等価物である１つの薬剤は、局所的に投与され、第２の網膜増殖性疾患治療は、眼内に直接的に投与される。第２の網膜増殖疾患治療には、例えば、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ（アバスチン）、ラニビズマブ（ルセンティス）などの抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体またはその断片）、抗ＶＥＧＦアプタマー（ペガプタニブ（マクジェン）など）、またはアフリベルセプト（アイリーア、ヒトＩｇＧ１イムノグロブリンのＦｃ部分に融合されている、ヒトＶＥＧＦ受容体１および２の細胞外ドメインに由来する血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合性部分からなる組換え融合タンパク質）などの別のＶＥＧＦアンタゴニスト、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）、免疫調節療法（ＩＭＴ）薬（例えばメトトレキサート、アザチオプリンまたはミコフェノレート）、生物学的応答修飾物質（ＢＲＭ）薬（抗ＴＮＦアルファ剤、例えば、インフリキシマブまたはアダリムマブなどの、ＴＮＦアルファに結合する抗体またはその断片）が含まれ得る。好ましくは、前記第２の薬剤は、抗ＶＥＧＦ剤である。好ましくは、局所的に投与される薬剤は、図２（配列番号２）のアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８、配列番号２２、２３、２４、２５、好ましくは配列番号２のアミノ酸１９～１６８または配列番号２２からなるタンパク質である。
【0293】
全身的投与
他の実施形態では、ノマコパン型タンパク質または薬剤は、全身的に、例えば皮下に投与される。
他の実施形態では、ノマコパン型タンパク質または薬剤は、全身的に、例えば皮下に投与される。
【0294】
治療または予防有効量
薬剤は、治療または予防有効量で投与される。「治療有効量」という用語は、関連症状、例えば網膜増殖性疾患を治療するために必要な薬剤の量を表す。これに関連して、「治療すること」は、障害の重症度を減少させることを含む。
薬剤は、治療または予防有効量で投与される。「治療有効量」という用語は、関連症状、例えば網膜増殖性疾患を治療するために必要な薬剤の量を表す。これに関連して、「治療すること」は、障害の重症度を減少させることを含む。
【0295】
本明細書に使用される「予防有効量」という用語は、関連する症状、例えば網膜増殖性疾患を予防するために必要な薬剤の量を表す。これに関連して、「予防すること」は、例えば、薬剤の投与が開始される前には障害の存在が検出されない場合に、障害の重症度を減少させることを含む。障害重症度の減少は、例えば、視力の改善であり得る。
【0296】
減少または改善は、投与を行わず、本明細書に記載の薬剤もない場合の結果に対するものである。結果は、このような患者を評価するために使用される標準的な基準により評価される。これを定量できる範囲で、相対基準に少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％の減少または改善がある。
【0297】
全身的投与の場合、ノマコパン分子に基づいて算出される用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日～１０ｍｇ／ｋｇ／日（患者の質量と比較した薬物の質量）、例えば、０．２～５、０．２５～２、または０．１～１ｍｇ／ｋｇ／日である。融合タンパク質（例えば、本明細書で述べられているような）はノマコパン分子よりも大きいため、そのようなタンパク質にはモル当量を使用することができる。したがって、ノマコパンの機能的等価物の場合、上述の用量のモル当量を使用することができる。例えば、ノマコパンおよび約６００アミノ酸のＰＡＳ部分または本明細書で定義されるＰＡＳ部分を含む融合タンパク質、例えばＰＡＳ－ノマコパンの場合、０．１ｍｇ／ｋｇ／日のモル当量は、０．４ｍｇ／ｋｇ／日であり、したがって、用量は、０．４ｍｇ／ｋｇ／日～４０ｍｇ／ｋｇ／日（患者の質量と比較した薬物の質量）、例えば、０．８～２０、１～８、または０．４～４ｍｇ／ｋｇ／日であり得る。あるいは、これらの融合タンパク質の半減期がより長いことを考慮して、１用量あたり量をより大きくし、その用量をより低頻度で、例えば４０ｍｇ～２ｇ、５０ｍｇ～１．５ｇ、７５ｍｇ～１ｇを１週間の期間にわたって、例えば週１回または２回の投与で投与し得る。
【0298】
治療または予防有効量は、追加的に、終末補体の阻害の点から定義することができ、例えば、終末補体活性（ＴＣＡ）が、治療の非存在下での終末補体活性と比較して少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％減少していることを意味する量であり得る。用量および回数は、終末補体活性を所望のレベルに維持するために調整されてもよく、そのレベルは、治療の非存在下での終末補体活性と比較して例えば１０％以下、例えば９、８、７、６、５、４、３、２、１％以下であり得る。
【0299】
治療または予防有効量は、追加的に、血漿中のＬＴＢ４レベル減少の点から定義することができ、例えば、血漿中のＬＴＢ４レベルが、治療の非存在下での血漿中のＬＴＢ４レベルと比較して少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％減少することを意味するか、またはＬＴＢ４レベルを正常レベルのある特定の範囲内（例えば、正常値の９０～１１０％、正常値の８５～１１５％）にする量である。用量および頻度は、血漿中のＬＴＢ４レベルを所望のレベルに維持するために調整することができ、所望のレベルは、治療の非存在下での血漿中のＬＴＢ４レベルと比較して、例えば９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％またはそれ未満、例えば９、８、７、６、５、４、３、２、１％またはそれ未満であり得るか、または正常レベルのある特定の範囲内（例えば、正常値の９０～１１０％、正常値の８５～１１５％）である。ＬＴＢ４レベルは、日常的な方法によって決定することができる（例えば、イムノアッセイ。例えば、連続競合的結合技法（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）［５８］に基づく市販のＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ アッセイを参照）。
【0300】
用量が示されるとき、これは、タンパク質またはその機能的等価物である薬剤の用量に関するものである。核酸分子である薬剤に適した用量を使用して、これらのレベルが生じ得る。用量は、存在する不活性タンパク質の存在を考慮して変えることができる（例えば、６００アミノ酸ＰＡＳ部分を有するＰＡＳ－ノマコパンは、ノマコパンの約４倍の分子量を有するため、モル当量はノマコパンの量の約４倍になる）。ノマコパンに関して提供される任意の用量のモル当量を、追加的な配列を含むその任意のノマコパン機能的等価物に使用することができる。モル当量は、日常的な方法を使用して算出することができる。
【0301】
終末補体活性は、当技術分野において公知の標準的なアッセイによって、例えば、Ｑｕｉｄｅｌ ＣＨ５０溶血アッセイおよびヒツジ赤血球溶解ＣＨ５０アッセイを使用して測定することができる。
【0302】
用量を投与する必要がある回数は、関与する薬剤の半減期に依存する。ノマコパンタンパク質またはその機能的等価物は、例えば１日２回ベースで、毎日ベースで、または２、３、４日、５、６、もしくは７日毎にもしくはより頻繁に、例えば１日２回ベースでもしくは毎日ベースで投与され得る。半減期が延長されたバージョン、例えばＰＡＳ化ノマコパン分子は、より少ない頻度で投与され得る（例えば、２、３、４日、５、６、７、１０、１５または２０日毎にまたはそれよりも頻繁に、例えば、１日１回または２日もしくはそれ以上に１回、または毎週）。
【0303】
用量の正確な投薬量および回数は、また、投与時での患者の症状に依存し得る。投薬量を決定する場合に考慮され得る要因には、治療または予防の必要性、患者における病状の重症度、患者の全身の健康状態、年齢、体重、性別、食事、投与の時間および回数、薬物の組合せ、反応の感受性および治療に対する患者の抵抗性または応答が含まれる。正確な量は、日常的な実験により決定することができるが、最終的には医師の判断にあり得る。
【0304】
投薬レジメンは、また、最初の「アブレーションレジメン（ａｂｌａｔｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎ）」に続く、１または２以上の後続用量（例えば、維持用量）の形態を採り得る。一般的に、アブレーションレジメンは、後続用量よりも大きい。ノマコパンを例にすると、これは、０．６～１．２ｍｇ／ｋｇ、次に０．３～０．６ｍｇ／ｋｇのアブレーションレジメンに続き、８～１８、１０～１４、または１１～１３時間（例えば、約１２時間）後の、例えば１日１回投与し得る０．４５～０．９ｍｇ／ｋｇの維持用量であり得る。
【0305】
ＰＡＳ化バージョン（例えば、ＰＡＳ－ノマコパン、例えば、本明細書の他の箇所に記載のような）の場合、適切なレジメンは、６～１２ｍｇ／ｋｇ（例えば、６００ｍｇ）、次に６～１２ｍｇ／ｋｇ（例えば、６００ｍｇ）のアブレーションレジメンに続いて、３～１０、４～８、５～７日、例えば約７日後に、例えば１日１回投与し得る４～８ｍｇ／ｋｇ（例えば、４００ｍｇ）の維持用量であり得る。
【0306】
１または２以上のアブレーション用量（ａｂｌａｔｉｎｇ ｄｏｓｅ）は、維持用量より少なくとも１．５、２、または５倍大きくてもよい。アブレーション用量は、単回用量として、または特定の時間枠内（例えば２用量）の１または２以上の用量として投与され得る。典型的には、負荷用量は、単一の２４時間中に投与される１、２、３、４または５用量である（または半減期が延長されたバージョンの場合、１週）。維持用量は、１２、２４、または４８時間毎（または半減期が延長されたバージョンの場合、毎週、または２週間毎）などの間隔で繰り返され得る。正確なレジメンは、日常的な実験により決定することができるが、最終的に医師の判断にあり得る。維持用量は、初回アブレーション用量の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００％、または初回アブレーション用量の最大２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００％であり得る。
【0307】
さらなる実施形態では、治療経過にわたり同じ用量が使用される（例えば毎日または１日２回又は毎週）。
【0308】
好ましくは、ノマコパン型タンパク質の局所用量は、１用量あたり５０から５００μｇの間、より好ましくは１用量あたり１００から４００μｇの間、最も好ましくは１用量あたり２００から３００μｇの間である。あるいは、用量は、１用量あたり５００～２０００、６００～１５００、７００～１２５０または約１２５０μｇであり得る。融合タンパク質の場合、用量は、モル当量の活性薬剤がもたらされるように選択することができ、例えばＰＡＳ－ノマコパンの場合は、１用量あたりの量が約４倍である（例えば、１用量あたり４００から１６００μｇの間、最も好ましくは１用量あたり８００～１２００μｇの間）。あるいは、用量は、１用量あたり２０００～８０００、２４００～６０００、２８００～５０００または約５０００μｇであり得る。
【0309】
組成物を局所的に適用する場合、通常は、ある特定の数の液滴またはある特定の長さの軟膏を眼に適用することが指示される。適用指示に従った際に正しい用量が確実に投与されるように、任意の組成物中のノマコパン型タンパク質の濃度を調整することは、当業者にとって日常的なことに過ぎない。例えば、１滴は通常約４０μｌであるため、０．５％重量／体積のノマコパンまたはＬ－ノマコパンを含む溶液の１滴は、２００μｇのノマコパンまたはＬ－ノマコパンを含む。同様に、２％重量／体積のＰＡＳ－ノマコパンまたはＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンを含む溶液の１滴は、８００μｇのＰＡＳ－ノマコパンまたはＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンを含む。ＰＡＳ－ノマコパンまたはＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンは、ノマコパンまたはＬ－ノマコパンの約４倍の分子量を有するため、２％重量／体積のＰＡＳ－ノマコパンまたはＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンを含む溶液、０．５％重量／体積のノマコパンまたはＬ－ノマコパンを含む溶液は体積が等しい場合、同じモル当量のタンパク質のノマコパン部分をもたらす。類似用量のノマコパン型分子を、眼内への直接投与に使用され得る。組成物を眼内に直接適用する場合、例えば、１０～５０μｌの体積を使用し得る。正しい用量が確実に投与されるように、任意の組成物中のノマコパン型タンパク質の濃度を調整することは、当業者にとって日常的なことに過ぎない。例えば、０．５％重量／体積のノマコパンまたはＬ－ノマコパンを含む溶液を５０μｌ使用する場合、これは、２５０μｇのノマコパンまたはＬ－ノマコパンを含む。同様に、２％重量／体積のＰＡＳ－ノマコパンまたはＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンを含む溶液の１滴は、１０００μｇのＰＡＳ－ノマコパンまたはＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンを含む。
【0310】
局所投与または眼内への直接投与用の組成物は、また、そのノマコパン型タンパク質濃度、例えば、０．１～２０％重量／体積、０．２～１５、０．２５～１０、０．５～５％重量／体積（例えば、そのＰＡＳ化バージョンの場合、０．４～８０、０．８～６０、１～４０、２～２０％重量／体積）の点から定義され得る。
【0311】
医薬製剤
薬剤は、一般的に、薬学的に許容される担体と共にまたは薬学的に許容される担体中にて投与される。「薬学的に許容される担体」という用語は、一般的に液体であるが、担体自体が毒性効果を誘導しないかもしくは医薬組成物を受け取る個体に有害な抗体の産生を引き起こさない限り他の薬剤を含み得る。薬学的に許容される担体は、例えば、水、生理食塩水、グリセロール、エタノールなどの液体または湿潤剤もしくは乳化剤などの補助物質、ｐＨ緩衝物質およびその他を含有し得る。したがって、採用される医薬担体は、投与経路に応じて様々である。薬学的に許容される担体の十分な議論は、［５９］から入手可能である。好ましい実施形態では、薬剤は、液体であり得る光学的に許容される組成物中にて、例えば水またはＰＢＳの溶液中にて投与される。
薬剤は、一般的に、薬学的に許容される担体と共にまたは薬学的に許容される担体中にて投与される。「薬学的に許容される担体」という用語は、一般的に液体であるが、担体自体が毒性効果を誘導しないかもしくは医薬組成物を受け取る個体に有害な抗体の産生を引き起こさない限り他の薬剤を含み得る。薬学的に許容される担体は、例えば、水、生理食塩水、グリセロール、エタノールなどの液体または湿潤剤もしくは乳化剤などの補助物質、ｐＨ緩衝物質およびその他を含有し得る。したがって、採用される医薬担体は、投与経路に応じて様々である。薬学的に許容される担体の十分な議論は、［５９］から入手可能である。好ましい実施形態では、薬剤は、液体であり得る光学的に許容される組成物中にて、例えば水またはＰＢＳの溶液中にて投与される。
【0312】
薬剤は、必要に応じて、コロイド送達系（例えば、リポソーム、ナノ粒子、またはマイクロ粒子（例えば、［６０］で論じられているような））を使用して送達され得る。これらの担体系の利点には、感受性タンパク質の保護、持続放出、投与頻度の減少、患者コンプライアンスおよび血漿レベルの制御が含まれる。
【0313】
リポソーム（例えば、合成および／または天然由来のリン脂質を含む）は、例えば、２０ｎｍ、１００または２００マイクロメートル、例えば小型単層ベシクル（２５～５０ｎｍ）、大型単層ベシクル（１００～２００ｎｍ）、巨大単層ベシクル（１～２μｍ）または多重層ベシクル（ＭＬＶ；１μｍ～２μｍ）であり得る。
【0314】
ナノ粒子（サイズが１０～１０００ｎｍのコロイド担体）は、脂質、ポリマーまたは金属で製造することができる。ポリマーナノ粒子は、天然または合成ポリマー（例えば、キトサン、アルギン酸塩、ＰＣＬ、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（グリコリド）、ＰＬＧＡ）からできていてもよく、ナノスフェア（分子がポリマーマトリックス内に均一に分布している）またはナノカプセル（ポリマー膜内に閉じ込められた薬物分子を保有する）として生成され得る。
【0315】
例えば、デンプン、アルギン酸塩、コラーゲン、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）でできているマイクロ粒子も使用され得る。
【0316】
代替的にまたは追加的にヒドロゲルが存在し得る。
【0317】
より大きな分子量の分子、例えば融合タンパク質の場合、例えば、より大きな体積（例えば、２～２０ｍｌ）の投与を可能にするために、ヒアルロニダーゼなどの追加的な賦形剤も使用され得る。
【0318】
治療期間
好ましくは、治療過程は、少なくとも１、２、３、４、５もしくは６週間、または少なくとも１、２、３、４、５もしくは６ヶ月、または少なくとも１、２、３、４、５もしくは６年間継続される。治療経過は、好ましくは、対象の症状が減少するまで継続される。したがって、治療経過は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０週間の薬剤の（例えば毎日、１日おきまたは毎週）投与であり得る。
好ましくは、治療過程は、少なくとも１、２、３、４、５もしくは６週間、または少なくとも１、２、３、４、５もしくは６ヶ月、または少なくとも１、２、３、４、５もしくは６年間継続される。治療経過は、好ましくは、対象の症状が減少するまで継続される。したがって、治療経過は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０週間の薬剤の（例えば毎日、１日おきまたは毎週）投与であり得る。
【図面の簡単な説明】
【0319】
【図1A】補体活性化の古典的経路および第二経路の模式図である。アナフィラトキシンを星形で囲む。
【図1B】エイコサノイド経路の模式図である。
【図2A】ノマコパンの一次配列を示す図である。シグナル配列に下線を付ける。システイン残基を太字で示す。ヌクレオチド番号およびアミノ酸番号を右に示す。
【図2B】ノマコパンバリアントの例を示す図である。
【図2C】ＬＴＢ４に結合するが、減少したＣ５結合性を示すかまたはＣ５結合性を示さないノマコパンバリアントの例を示す図である。
【図2D-2E】例示的なＰＡＳ－ノマコパン（Ｄ）およびＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンの配列（Ｅ）を示す図である。
【図3】免疫後２１日目の局所処置７日後の個々の眼（ｎ＝１２）の眼底検査の結果を示す図である。バーは、ＳＤまたはＳＥＭを示し、両側ノンパラメトリックｔ検定が適用されている。
【図4】実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）モデルで使用したマウスの網膜内の細胞上にあるＢＬＴ１（ＬＴＢ４受容体）およびＣ５ａ受容体を示す図である。画像は、硝子体に捕捉された浸潤細胞を示す。核は青色で、ＢＬＴ１は緑色で、Ｃ５ａ受容体は赤色で示されている。両受容体を発現している細胞が存在する（黄色）。細胞は矢印で示されている。
【図5】免疫後１５日目の処置前の、および免疫後１８日目のノマコパン型タンパク質の硝子体内投与後のＥＡＵマウスの臨床スコアを示す図である。疾患の眼底検査評価を、個々の眼（ｎ＝１６）について１５日目（処置前）および２２日目（処置後）に実施した。１５日目および１８日目に、ＥＡＵマウスを１～２ｕｌの表示化合物を用いて硝子体内で処置した。代表的な眼底および対応する組織病理学的画像が、処置したマウス（各グループでｎ＝３）の組織学的スコアを示す要約グラフと共に示されている（ノマコパン バーはＳＤまたはＳＥＭを示し、両側ノンパラメトリックｔ検定が適用されている）。
【図6】細胞のフローサイトメトリー分析の結果を示す図である。（Ａ～Ｂ）ＥＡＵマウスのＣＤ４＋浸潤細胞におけるＲＯＲｇｔ／Ｔ．ｂｅｔ＋発現（ｙ軸はＲＯＲｇｔ発現、ｘ軸はＴｂｅｔ発現）。（Ｃ～Ｄ）ＣＤ４＋細胞におけるＲＯＲｇｔ＋発現のみ（ｘ軸はＲＯＲｇｔ発現、ｙ軸はＦＳＣ－Ｈ）。（Ｅ～Ｆ）ＣＤ４＋細胞におけるＴ．ｂｅｔ発現のみ（ｘ軸はＴ．ｂｅｔ発現、ｙ軸はＦＳＣ－Ｈ）。（Ｇ～Ｈ）ＣＤ４＋細胞におけるＩＬ－１７Ａ発現（ｘ軸はＩＬ－１７Ａ発現、ｙ軸はＦＳＣ－Ｈ）。図６ｂ、６ｄ、６ｆおよび６ｈの各々において、各ページの結果の一番上の行は生理食塩水で処置したＥＡＵマウスであり、二番目はノマコパンで処置したマウスであり、三番目はＰＡＳ－ノマコパンで処置したマウスであり、四番目はＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンで処置したマウスであり、五番目はデキサメタゾンで処置したマウスである。図６Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇは、それぞれの発現レベルの要約グラフを示す。バーはＳＥＭを示す。グラフは、各群の８匹マウスの平均を示す（ＤＥＸ ｎ＝６）。
【図7】（Ａ）Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスを使用した、実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）のマウスモデルの網膜組織におけるＶＥＧＦレベルを示す図である。マウスの群を、ノマコパン（ｎｏｍａ）、ＰＡＳ－ノマコパン（ＰＡＳ－ｎｏｍａ）、抗ＶＥＧＦ抗体（抗ＶＥＧＦ）または生理食塩水で硝子体内処置した。誘導２１日後に網膜組織を回収した。未誘導で未処置の健常なマウスを、受動対照（「健常ｃｔ」）として使用した。１硝子体内注射群あたりのマウスは６匹であり、未誘導未処置（「健常ｃｔ」）は２匹だった。ＥＬＩＳＡアッセイを使用して網膜組織のＶＥＧＦレベルを分析した。全てのアッセイは、複製試料で２回実施した。（Ｂ）免疫後１５日目の処置前の、および免疫後１８日目のノマコパン型タンパク質の硝子体内投与後のＥＡＵマウスの臨床スコアを示す。１５日目および２６日目に評価を実施した。（Ｃ）は、積算臨床スコアを示す。
【実施例】
【0320】
実施例１～３の物質および方法
ＥＡＵ誘導
ＥＡＵを、以前の記載［６１］の通りに、Ｃ５７／Ｂｌ６マウス（雌、５～７週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ社）を、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｄｉｆｃｏ社、Ｖｏｉｇｔ Ｇｌｏｂａｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ社、ローレンス、カンザス州）で補完された完全フロイントアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＣＦＡ社、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、ギリンガム、英国）で乳化されたＰＢＳ中３００μｇの光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）１６１～１８０ペプチド（ＳＧＩＰＹＩＩＳＹＬＨＰＧＮＴＩＬＨＶＤ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ社、ケンブリッジ、英国）でｓ．ｃ．免疫することによって誘導した。マウスは、また、０．４μｇの百日咳（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）をｉ．ｐ．で受け取った。
ＥＡＵ誘導
ＥＡＵを、以前の記載［６１］の通りに、Ｃ５７／Ｂｌ６マウス（雌、５～７週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ社）を、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｄｉｆｃｏ社、Ｖｏｉｇｔ Ｇｌｏｂａｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ社、ローレンス、カンザス州）で補完された完全フロイントアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＣＦＡ社、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、ギリンガム、英国）で乳化されたＰＢＳ中３００μｇの光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）１６１～１８０ペプチド（ＳＧＩＰＹＩＩＳＹＬＨＰＧＮＴＩＬＨＶＤ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ社、ケンブリッジ、英国）でｓ．ｃ．免疫することによって誘導した。マウスは、また、０．４μｇの百日咳（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）をｉ．ｐ．で受け取った。
【0321】
処置
網膜炎症を、以前の研究［６２、］にしたがって１４日目以降からモニターしてスコア付けした（１４日目以降の網膜眼底検査によって評価して網膜炎症が検出された場合にのみマウスを研究に含めた）。マウスを、１、２および５日目に回収した（１群あたりｎ＝６）。
網膜炎症を、以前の研究［６２、］にしたがって１４日目以降からモニターしてスコア付けした（１４日目以降の網膜眼底検査によって評価して網膜炎症が検出された場合にのみマウスを研究に含めた）。マウスを、１、２および５日目に回収した（１群あたりｎ＝６）。
【0322】
硝子体内投与の場合、免疫後１５日目および１８日目に、マウスを、１～２μｌのノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、デキサメタゾンまたは生理食塩水で処置した。局所投与の場合、マウスを、２～５μｌのノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、Ｌ－ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、デキサメタゾン（マキシデックス；ＤＥＸ）または生理食塩水で１日２回７日間処置した。処置前および処置後の網膜眼底検査によって疾患進行を臨床的に等級付けし、組織学的にスコア付けした。
【0323】
ＥＡＵスコア付け
定期的な眼底観察によって（例えば、Ｍｉｃｒｏｎ ＩＩＩ眼底カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ社、プレザントン、カリフォルニア州）を使用））、マウスをＥＡＵの所見について以前に記載の通りに定期的に評価した。臨床スコア付けは、網膜視神経乳頭、網膜血管、網膜組織浸潤および構造的損傷の観察に基づいていた。
定期的な眼底観察によって（例えば、Ｍｉｃｒｏｎ ＩＩＩ眼底カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ社、プレザントン、カリフォルニア州）を使用））、マウスをＥＡＵの所見について以前に記載の通りに定期的に評価した。臨床スコア付けは、網膜視神経乳頭、網膜血管、網膜組織浸潤および構造的損傷の観察に基づいていた。
【0324】
実験の終わりに各マウスから片方の眼を回収し、組織学的スコア付けのために固定および包埋した（例えば、除核し、４％グルタルアルデヒドで１時間固定し、少なくとも２４時間１０％ホルムアルデヒドに移し、包埋し、Ｈ＆Ｅ染色のために処理し、組織学的に検査した）。免疫細胞浸潤のレベルおよび網膜損傷の程度に基づくＥＡＵスコア付けの基準に従って、以前に記載の通りに［６３］、スコアを０～５のスケールで割り当てた。単球、好中球およびＴ細胞浸潤の免疫蛍光染色を実施して、浸潤細胞集団に対するあらゆる変化を特定することができる。
【0325】
網膜フローサイトメトリーでは、網膜層を収集し、細かく切り刻み、濾過し、ｅｘ ｖｉｖｏ刺激のために培地に再懸濁し（４時間）、細胞表面および細胞内マーカーを染色した６４。
【実施例】
【0326】
ノマコパン型タンパク質の局所投与によるＥＡＵの治療
図３に示すように、ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、Ｌ－ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）の局所投与後、ＥＡＵマウスの臨床スコアは、生理食塩水のみで処置したマウスと比較してより低かった。こうした結果は、Ｌ－ノマコパンでは統計的に有意であった。ノマコパンおよびＰＡＳ－ノマコパン処置マウスの傾向を観察した。Ｌ－ノマコパン処置マウスの臨床スコアは、デキサメタゾン処置マウスの臨床スコアと一致していた。生理食塩水対照（１０．３３±０．６６６；ｎ＝１２；Ｐ＝０．０４８）と比べて、平均スコア±ＳＥＭ；８．０８３±０．８４８；ｎ＝１２）。処置マウスではＣＤ４＋Ｔ細胞数またはサブタイプに有意な変化はなかった。
図３に示すように、ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、Ｌ－ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）の局所投与後、ＥＡＵマウスの臨床スコアは、生理食塩水のみで処置したマウスと比較してより低かった。こうした結果は、Ｌ－ノマコパンでは統計的に有意であった。ノマコパンおよびＰＡＳ－ノマコパン処置マウスの傾向を観察した。Ｌ－ノマコパン処置マウスの臨床スコアは、デキサメタゾン処置マウスの臨床スコアと一致していた。生理食塩水対照（１０．３３±０．６６６；ｎ＝１２；Ｐ＝０．０４８）と比べて、平均スコア±ＳＥＭ；８．０８３±０．８４８；ｎ＝１２）。処置マウスではＣＤ４＋Ｔ細胞数またはサブタイプに有意な変化はなかった。
【0327】
これらの結果は、試験分子が角膜を通過できるとは以前には知られていなかったため、驚くべきものである。未ＰＡＳ化バージョンと比較して、ＰＡＳ－ノマコパンの有効性が減少しているのは、ＰＡＳ化バージョンの方が大型であるという事実を反映している可能性がある。
【実施例】
【0328】
マウス網膜細胞におけるＢＬＴ１およびＣ５ａ受容体の共発現
ＢＬＴ１およびＣ５ａ受容体を認識するモノクローナル抗体を使用し、ＤＡＰＩで対比染色した（示されている核に対して青色に）ＵＡＥマウスのマウス網膜切片の共焦点顕微鏡検査は、炎症細胞で両受容体が発現されたことを示す。一部の個々の細胞は、両受容体を共発現したが、単一受容体発現細胞も多く観察された。こうした細胞の少なくとも一部は、網膜損傷の領域へと遊走し、そこでＬＴＢ４刺激に応答してＶＥＧＦを放出することが公知であるＭ２マクロファージであると考えられる（図４、７および実施例４を参照）。
ＢＬＴ１およびＣ５ａ受容体を認識するモノクローナル抗体を使用し、ＤＡＰＩで対比染色した（示されている核に対して青色に）ＵＡＥマウスのマウス網膜切片の共焦点顕微鏡検査は、炎症細胞で両受容体が発現されたことを示す。一部の個々の細胞は、両受容体を共発現したが、単一受容体発現細胞も多く観察された。こうした細胞の少なくとも一部は、網膜損傷の領域へと遊走し、そこでＬＴＢ４刺激に応答してＶＥＧＦを放出することが公知であるＭ２マクロファージであると考えられる（図４、７および実施例４を参照）。
【0329】
これは、ノマコパン型タンパク質が、そのような疾患（例えば、ＬＴＢ４の関与および／または補体経路の関与がある疾患）の治療において有用な薬剤であり得るという本明細書で提示した他の結果と一致する。
【実施例】
【0330】
ノマコパン型タンパク質の硝子体内投与によるＥＡＵの治療
図５に示すように、１５日目および１８日目にノマコパン型タンパク質を硝子体内投与した後（ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、各々は１～２μｌの体積でＥＡＵマウスに投与された）、２２日目に観察された臨床スコアは、概して対照（生理食塩水処置）マウスよりも低く、２つの時点（１５日目および２２日目）間の臨床スコアの増加は、対照（生理食塩水処置）マウスよりも処置マウスの方が少なかった。ＰＡＳ－ノマコパンは、生理食塩水対照（１２．３６±１．０１４；ｎ＝１６；Ｐ＝０．０００１）と比べた臨床スコア付け（平均スコア±ＳＥＭ；３．８１３±１．０１４；ｎ＝１６）によって決定したところ、硝子体内投与後の疾患進行を軽減した。
図５に示すように、１５日目および１８日目にノマコパン型タンパク質を硝子体内投与した後（ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、各々は１～２μｌの体積でＥＡＵマウスに投与された）、２２日目に観察された臨床スコアは、概して対照（生理食塩水処置）マウスよりも低く、２つの時点（１５日目および２２日目）間の臨床スコアの増加は、対照（生理食塩水処置）マウスよりも処置マウスの方が少なかった。ＰＡＳ－ノマコパンは、生理食塩水対照（１２．３６±１．０１４；ｎ＝１６；Ｐ＝０．０００１）と比べた臨床スコア付け（平均スコア±ＳＥＭ；３．８１３±１．０１４；ｎ＝１６）によって決定したところ、硝子体内投与後の疾患進行を軽減した。
【0331】
図５は、また、様々な処置の複合組織学的スコアを示す。この場合も、ノモコパン（Ｎｏｍｏｃｏｐａｎ）型分子の各々による処置後の臨床スコアは、対照（生理食塩水処置）マウスと比較してより低く、対照（生理食塩水処置）マウスの複合組織学的スコアとＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）処置マウスの複合組織学的スコアとの間には統計的有意差があった。
【0332】
例として、図５にも示されているように、網膜の折れ曲がり（ｒｅｔｉｎａｌ ｆｏｌｄｉｎｇ）（複合組織学的スコアの成分の１つ）は、対照では、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）処置マウスと比較して、視覚的に非常に異なっている。
【0333】
これらのデータは、ノマコパン型タンパク質が、硝子体内に注射された場合に生物学的に活性であること（つまり、ノマコパン型タンパク質は、ブルッフ膜および／または内境界膜を透過して脈絡膜内に存在する細胞に影響を及ぼす能力を有すること）を初めて示す。これは、ランパリズマブ［６５］などの眼の治療のために試験されている他のタンパク性分子とは対照的である。
【0334】
また、ＥＡＵマウスのＣＤ４＋浸潤細胞におけるＲＯＲｇｔ／Ｔ．ｂｅｔ＋発現をフローサイトメトリーによって分析した（ＣＤ４＋細胞におけるＲＯＲｇｔ／Ｔ．ｂｅｔ細胞のパーセンテージを示す図６ａ～６ｂを参照。ｙ軸はＲＯＲｇｔ発現であり、ｘ軸はＴｂｅｔ発現である）。ＲＯＲｇｔおよびＴｂｅｔは、Ｔｈ１７細胞型およびＩＬ－１７発現に関連するＴ細胞マーカーである。ＥＡＵマウスのＣＤ４＋浸潤細胞におけるＲＯＲｇｔ／Ｔ．ｂｅｔ＋発現細胞のパーセンテージは、対照（生理食塩水処置）マウスよりもノマコパン型タンパク質処置マウスの方が低かった。ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）処置マウスのレベルが最も低く、これらのマウスにおけるレベルと対照（生理食塩水処置）マウスにおけるレベルとの差異は統計的に有意だった。２回の硝子体内処置（１５日目および１８日目）後、ＰＡＳ－ノマコパン処置ＥＡＵマウスでも、生理食塩水対照（２１．２８±３．５４４；ｎ＝８；Ｐ＝０．００３）と比較して網膜二重陽性Ｔｈ１／Ｔｈ１７（ＲＯＲγｔ＋Ｔ－ｂｅｔ＋）細胞の有意な減少（４．７１７±２．６２７；ｎ＝８）が観察されたが、他のＴ細胞サブセットの発現レベルには有意差はなかった（データ非表示）。
【0335】
これらの細胞においてＲＯＲｇｔ＋発現のみおよびＴ．ｂｅｔ発現のみも分析した（図６ｃ～６ｆを参照）。
【0336】
これらの細胞におけるＩＬ－１７Ａの発現も分析した（図６ｇ～６ｈを参照）。生理食塩水対照（２７．４７±３．４６１；ｎ＝８；Ｐ＝０．０２および０．０００７）と比べて、Ｔｈ１７（ＩＬ－１７Ａ＋ＣＤ４＋）細胞の減少が、ノマコパンおよびＰＡＳ－ノマコパン処置群において検出された（平均％±ＳＥＭ；それぞれ１４．６７±３．５３４および７．０１９±３．００５、ｎ＝８）。
【実施例】
【0337】
ＥＡＵマウスにおけるＶＥＧＦレベルおよびノマコパン型タンパク質の硝子体内投与による処置
材料および方法
ＥＡＵ誘導
Ｂ１０．ＲＩＩＩマウス（雌、５～７週齢、施設内繁殖させた集団）を３００μｇの光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）１６１～１８０ペプチド（ＳＧＩＰＹＩＩＳＹＬＨＰＧＮＴＩＬＨＶＤ）でｓ．ｃ．免疫することによってＥＡＵを誘導した。ＥＡＵの適切なプロトコールは［６１］に示されており、ＰＢＳ中のＩＲＢＰ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ社、ケンブリッジ、英国）を、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｄｉｆｃｏ社、Ｖｏｉｇｔ Ｇｌｏｂａｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ社、ローレンス、カンザス州）で補完された完全フロイントアジュバントで乳化する。このプロトコールでは、マウスは、また、０．４μｇの百日咳（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）をｉ．ｐ．で受け取った。
材料および方法
ＥＡＵ誘導
Ｂ１０．ＲＩＩＩマウス（雌、５～７週齢、施設内繁殖させた集団）を３００μｇの光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）１６１～１８０ペプチド（ＳＧＩＰＹＩＩＳＹＬＨＰＧＮＴＩＬＨＶＤ）でｓ．ｃ．免疫することによってＥＡＵを誘導した。ＥＡＵの適切なプロトコールは［６１］に示されており、ＰＢＳ中のＩＲＢＰ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ社、ケンブリッジ、英国）を、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｄｉｆｃｏ社、Ｖｏｉｇｔ Ｇｌｏｂａｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ社、ローレンス、カンザス州）で補完された完全フロイントアジュバントで乳化する。このプロトコールでは、マウスは、また、０．４μｇの百日咳（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）をｉ．ｐ．で受け取った。
【0338】
処置およびＶＥＧＦ測定
最初の実験では、誘導後に網膜組織を回収してＶＥＧＦレベルを測定した。ＥＬＩＳＡアッセイを使用して網膜組織のＶＥＧＦレベルを分析した。
最初の実験では、誘導後に網膜組織を回収してＶＥＧＦレベルを測定した。ＥＬＩＳＡアッセイを使用して網膜組織のＶＥＧＦレベルを分析した。
【0339】
その後の実験では、誘導２１日後に網膜組織を回収した。マウスの群を、誘導後１５日目および１８日目に、１～２μｌのノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、Ｌ－ノマコパン（５ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、ＰＡＳ－Ｌ－ノマコパン（２０ｍｇ／ｍｌ）、抗ＶＥＧＦ抗体（５０μｇ／ｍｌ）ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｕｌｔｒａ－Ｌｅａｆ精製抗マウスＶＥＧＦ Ａ抗体）または生理食塩水で硝子体内処置した。未誘導で未処置の健康なマウスを、受動対照として使用した（「健常ｃｔ」）。１硝子体内注射群あたりのマウスは６匹であり、未誘導で未処置の健常なマウス（健常ｃｔ」）は２匹だった。Ｒ＆Ｄ社の、マウスＶＥＧＦによるＥＬＩＳＡアッセイ（マウスＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ）を使用して、網膜組織のＶＥＧＦレベルを分析した。全てのアッセイを、複製試料で２回実施した。
【0340】
結果
これらの群の網膜組織におけるＶＥＧＦレベルは図７Ａに示されている。最初の実験では、ＩＲＢＰによる誘導は、正常対照と比較してＶＥＧＦレベルの有意な増加を招いた（データは示されていない）。「生理食塩水」を「健常ｃｔ」と比較すると図７Ａでも増加を見出すことができる。
これらの群の網膜組織におけるＶＥＧＦレベルは図７Ａに示されている。最初の実験では、ＩＲＢＰによる誘導は、正常対照と比較してＶＥＧＦレベルの有意な増加を招いた（データは示されていない）。「生理食塩水」を「健常ｃｔ」と比較すると図７Ａでも増加を見出すことができる。
【0341】
図７Ａは、ＰＡＳ－ノマコパンが、このＥＡＵモデルでは、網膜ＶＥＧＦ濃度の低減について抗ＶＥＧＦ抗体と少なくとも同じくらい有効であることを示す。ノマコパンおよびそのバリアントがＶＥＧＦに対して直接的効果を及ぼすことは一切知られていないため、ＶＥＧＦレベルの減少は、このモデルにおけるＶＥＧＦの主な供給源であると推定される［３５］Ｍ２マクロファージのＬＴＢ４に基づく活性化の阻害による間接的効果であると考えられる。
【0342】
Ｌ－ノマコパンおよびＰＡＳ－Ｌ－ノマコパンも試験したが、Ｌ－ノマコパンの利用可能な結果ははっきりしないものだった。結果がはっきりとしなかったのは実験誤差の結果であると考えられたため、本明細書には示されていない。
【0343】
ノマコパン型タンパク質により好中球からＬＴＢ４をスカベンジすることは、また、網膜から末梢血へのＬＴＢ４濃度勾配を減少させることにより炎症細胞輸送を減少させ、Ｔｈ１７細胞（実施例３に示される）およびマクロファージの活性化を阻害する効果を有すると考えられる。補体Ｃ５に対するノマコパンおよびＰＡＳ－ノマコパンの阻害効果による補体Ｃ５ａおよび膜侵襲複合体の追加的な減少は、また、Ｃ５ａ濃度勾配を減少させ、Ｔｈ細胞、好中球および単核／マクロファージを含む炎症細胞の活性化を減少させることにより、ＶＥＧＦの二次放出をさらに減少させ得る。好中球の輸送が減少すると、放出に使用可能なＬＴＢ４の量も減少し得る。
【0344】
図７Ｂおよび７Ｃに示されているような臨床スコアが得られた。
【0345】
抗ＶＥＧＦ抗体は、このモデルでは炎症に対してほとんどまたは全く効果を及ぼさなかったが、ある特定の試験分子では炎症の抑制が観察された。
【0346】
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【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図2E】
【図3】
【図4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図6a-1】
【図6a-2】
【図6b-1】
【図6b-2】
【図6b-3】
【図6c-1】
【図6c-2】
【図6d-1】
【図6d-2】
【図6d-3】
【図6e】
【図6f-1】
【図6f-2】
【図6f-3】
【図6g】
【図6h-1】
【図6h-2】
【図6h-3】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【配列表】
【国際調査報告】