特表 2022-531201 ウイルス導入ベクターに対する既存の免疫を伴う対象の処置のための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-06

(54)【発明の名称】ウイルス導入ベクターに対する既存の免疫を伴う対象の処置のための方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/76 20150101AFI20220629BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220629BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20220629BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 47/51 20170101ALI20220629BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20220629BHJP

   A61K 47/30 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 47/04 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20220629BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20220629BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20220629BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20220629BHJP

【ＦＩ】

A61K35/76

A61K45/00

A61P37/06

A61K35/761

A61P43/00 111

A61K31/436

A61K47/51

A61K47/44

A61K47/30

A61K47/02

A61K47/04

A61K47/42

A61K47/34

A61K47/36

A61K47/10

A61K48/00

A61K9/107

A61K9/14

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021564364

(86)(22)【出願日】2020-04-28

(85)【翻訳文提出日】2021-12-24

(86)【国際出願番号】 US2020030217

(87)【国際公開番号】W WO2020223205

(87)【国際公開日】2020-11-05

(31)【優先権主張番号】62/981,555

(32)【優先日】2020-02-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/924,103

(32)【優先日】2019-10-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/839,771

(32)【優先日】2019-04-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．プルロニック

(71)【出願人】

【識別番号】511254321

【氏名又は名称】セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＥＬＥＣＴＡ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ，ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】６５ Ｇｒｏｖｅ Ｓｔｒｅｅｔ，Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ，ＭＡ ０２４７２，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ

(74)【代理人】

【識別番号】100102842

【弁理士】

【氏名又は名称】葛和 清司

(72)【発明者】

【氏名】キシモト，タカシ ケイ

(72)【発明者】

【氏名】イリンスキー，ピョートル

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C076AA17

4C076AA29

4C076AA95

4C076CC07

4C076CC41

4C076DD01

4C076DD21

4C076EE01

4C076EE20

4C076EE23

4C076EE24

4C076EE25

4C076EE26

4C076EE30

4C076EE41

4C076EE51

4C076FF02

4C076FF43

4C084AA13

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA05

4C084MA22

4C084MA43

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZB08

4C084ZC41

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB22

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA22

4C086MA43

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZB08

4C086ZC41

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087MA05

4C087MA22

4C087MA43

4C087NA05

4C087NA13

4C087ZB08

4C087ZC41

(57)【要約】

対象に、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを伴うウイルスベクターを投与するための方法、および関連する組成物が、本明細書に提供される。かかる対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を伴う対象でもよい。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下：
対象に、ウイルスベクターと混合した免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与すること、ここで、前記対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して、既存の免疫を有する、を含む方法。

【請求項2】

対象が、既存の免疫に起因して、さもなければウイルスベクターによる処置から除外されるものである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

対象が、母性移入抗体を伴う新生児である、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

ウイルスベクターが、対象に、あらかじめ投与されていない、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

ウイルスベクターが、対象に、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと随伴して、あらかじめ投与されていない、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、対象に、あらかじめ投与されていない、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびウイルスベクターの、少なくとも１つのその後の随伴投与をさらに含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびウイルスベクターのその後の随伴投与が、繰り返される、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

その後の随伴投与の免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、ウイルスベクターと混合される、請求項７または８に記載の方法。

【請求項10】

１以上のその後の随伴投与が、対象への先行投与の後２ヵ月以内に出現する、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

１以上のその後の随伴投与が、対象への先行投与の後１ヵ月以内に出現する、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

１以上のその後の随伴投与が、対象への先行投与の後１週間以内に出現する、請求項７～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

１以上のその後の随伴投与が、対象への先行投与の少なくとも１ヵ月後に出現する、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

１以上のその後の随伴投与が、対象への先行投与の少なくとも１週間後に出現する、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

対象への、ウイルスベクターを伴う免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの、いずれかの投与に先行して、対象における、ウイルスベクターに対する既存の免疫のレベルを決定することをさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

決定が、対象への投与に先行して、対象における抗ウイルスベクター抗体のレベルを測定することを含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

決定が、対象への投与に先行して、対象における、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する、Ｔ細胞応答のレベルを測定することを含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

ウイルスベクターの量が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと随伴して投与されるが、混合して投与されない場合に、別の対象における、ウイルスベクターの導入遺伝子発現を増加させるウイルスベクターの量より少なく、任意に、ここで、前記別の対象が、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を有する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの量が、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を伴わない対象にウイルスベクターと共に投与された場合に、ウイルスベクターの導入遺伝子発現を増加させ、および／または、抗体などの、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する、免疫反応の減少に結果としてなる、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの量より多い、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

量が、少なくとも２倍多い、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

量が、少なくとも３倍多い、請求項１９に記載の方法。

【請求項22】

ウイルスベクターを伴う免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与、および／または１以上のその後の随伴投与が、静脈内投与によるものである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

ウイルスベクターが、１つ以上の発現制御配列を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

１つ以上の発現制御配列が、肝臓特異的プロモーターを含む、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

１つ以上の発現制御配列が、構成的プロモーターを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

アデノ随伴ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

合成ナノキャリアの免疫抑制剤が、ＮＦ－ｋｂの経路の阻害剤である免疫抑制剤を含む、請求項１～２８に記載のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

免疫抑制剤が、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

ｍＴＯＲ阻害剤が、ラパマイシンまたはラパログである、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

免疫抑制剤が、合成ナノキャリアにカップリングされている、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

免疫抑制剤が、合成ナノキャリア中にカプセル化されている、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

合成ナノキャリアが、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子またはペプチドもしくはタンパク質粒子を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

合成ナノキャリアが、ポリマーナノ粒子を含む、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、ポリエーテルに結合したポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

ポリマーナノ粒子が、ポリエステルまたはポリエーテルに結合したポリエステルを含む、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

ポリエステルが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸－コーグリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む、請求項３６または３７に記載の方法。

【請求項39】

ポリマーナノ粒子が、ポリエステルおよびポリエーテルに結合したポリエステルを含む、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

ポリエーテルが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む、請求項３６～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

合成ナノキャリアの集団の動的光散乱を用いて得られる粒子サイズ分布の平均が、１１０ｎｍより大きな直径である、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

直径が、１５０ｎｍより大きい、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

直径が、２００ｎｍより大きい、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

直径が、２５０ｎｍより大きい、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

直径が、５μｍより小さい、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

直径が、４μｍより小さい、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

直径が、３μｍより小さい、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

直径が、２μｍより小さい、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

直径が、１μｍより小さい、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

直径が、７５０ｎｍより小さい、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

直径が、５００ｎｍより小さい、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

直径が、４５０ｎｍより小さい、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

直径が、４００ｎｍより小さい、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

直径が、３５０ｎｍより小さい、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

直径が、３００ｎｍより小さい、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の負荷量が、合成ナノキャリア全体の平均で、０．１％～５０％（重量／重量）である、請求項１～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

負荷量が、０．１％～２５％である、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

負荷量が、少なくとも４％であるが、４０％より少ない、請求項５６に記載の方法。

【請求項59】

負荷量が、２％～２５％である、請求項５７に記載の方法。

【請求項60】

合成ナノキャリアの集団のアスペクト比が、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７、または１：１０より大きいかまたは等しい、請求項１～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

請求項１～６０のいずれか一項に記載のウイルスベクターと混合した免疫抑制剤を含む、組成物。

【請求項62】

１つ以上の時点において対象におけるウイルスベクターに対するＩｇＧまたはＩｇＭまたは中和抗体応答を評価することをさらに含む、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

ＩｇＧまたはＩｇＭまたは中和抗体応答を評価する時点の少なくとも１つが、ウイルスベクターを伴う免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与の後である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

１つ以上の時点において、対象の導入遺伝子発現のレベルを測定することをさらに含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

導入遺伝子発現のレベルを測定する時点の少なくともの１つが、ウイルスベクターを伴う免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与の後である、請求項６４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０１９年４月２８日に出願の米国仮出願第６２／８３９，７７１号、２０１９年１０月２１日に出願の米国仮出願第６２／９２４，１０３号；および、２０２０年２月２６日に出願の米国仮出願第６２／９８１，５５５号の米国特許法§１１９（ｅ）の下での優先権の利益を主張し；それぞれの全内容は、本明細書に参照によって組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

発明の分野
本発明は、少なくとも部分的には、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと混合されたウイルスベクターを投与するための方法、および関連する組成物に関する。いくつかの態様において、本明細書に提供される方法および組成物は、ウイルスベクターに対する既存の免疫を伴う対象においてなどの、ウイルスベクターに対する下方制御された免疫応答などの、増加した導入遺伝子発現、および／または減少した免疫応答を、達成する。

【発明の概要】

【0003】

一側面において、対象に、ウイルスベクターと混合される免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与することを含む方法が、提供される。一態様において、対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して、既存の免疫を有する。

【0004】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、対象中のウイルスベクターに対する既存の免疫のレベルに起因して、さもなければウイルスベクターによる処置から除外されたであろうものである。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、ＡＡＶベクター（例として、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと混合されない）などの、ウイルスベクターによる処置のための適格性のための閾値レベルを超える、抗ウイルスベクター抗体などの、既存の免疫の力価またはレベルを伴うものである。閾値は、本明細書に提供される既存の免疫のレベルのいずれか１つであってもよく、さもなければ、臨床医などの、当業者によって理解されるであろうものであってもよい。

【0005】

本明細書において提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、小児であるか青少年の対象である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、ウイルスベクターの１以上の抗原に対する母性移入抗体を伴う小児であるか青少年の対象である。本明細書において提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、新生児である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、ウイルスベクターの１以上の抗原に対する母性移入抗体を伴う新生児である。

【0006】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、中和抗体などの、ウイルスベクターに対する既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、中和抗体および総抗ＡＡＶカプシド抗体の組み合わせなどの、ウイルスベクターに対する既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、中和抗体および抗ＡＡＶカプシドＩｇＧ抗体の組み合わせなどの、ウイルスベクターに対する既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターに対する既存の免疫は、中和抗体、抗ＡＡＶ ＩｇＧ、および抗ＡＡＶカプシドＩｇＭ抗体の組み合わせなどの、既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、ウイルスベクターのウイルスカプシドに対する既存の抗体を含む。

【0007】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、ウイルスベクターの投与の前などに、対象中の既存の免疫レベルを決定することを、さらに含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する、既存の免疫の中程度のレベルを、有する。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、ウイルスベクターの対象への投与より前に、対象において、既存の抗ウイルスベクター抗体のレベルを測定することを、さらに含む。一態様において、対象は、ＡＡＶベクター（例として、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと混合せずに）などの、ウイルスベクターによる処置のための適格性のための閾値レベルを超える、抗ウイルスベクター抗体の力価またはレベルを伴うものである。閾値は、本明細書に提供される既存の免疫のレベルのいずれか１つであってもよく、さもなければ、臨床医などの当業者に公知であるものであってもよい。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、閾値レベルにより決定される対象中の既存の免疫のレベルを比較することを、さらに含む。

【0008】

一側面において、対象に、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与することを含む方法が提供され、ここで、ウイルスベクターの量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとともに投与されない場合に、ウイルスベクターの導入遺伝子発現を増加させるウイルスベクターの量より少ない。一側面において、対象に、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与することを含む方法が提供され、ここで、ウイルスベクターの量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとともに随伴して投与されない場合に、ウイルスベクターの導入遺伝子発現を増加させるウイルスベクターの量より少ない。一側面において、対象に、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与することを含む方法が提供され、ここで、ウイルスベクターの量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとともに混合して投与されない場合に、ウイルスベクターの導入遺伝子発現を増加させるウイルスベクターの量より少ない。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、投与のための対象である対象は、第１の対象であり、そして、もう１つの量との比較は、第２の対象へのもう１つの量の投与に基づく。

【0009】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、第１の対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して既存の免疫を有し、そして、第２の対象も、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して既存の免疫を有する。

【0010】

一側面において、対象に、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与することを含む方法、ここで、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの量は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する、既存の免疫を伴わない対象にウイルスベクターと共に投与された場合に、ウイルスベクターの導入遺伝子発現を増加させ、および／または免疫反応の減少に結果としてなる免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの量より、多い。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、投与のための対象である対象は、第１の対象であり、そして、もう１つの量との比較は、第２の対象へのもう１つの量の投与に基づく。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、第１の対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して既存の免疫を有し、そして、第２の対象は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して既存の免疫を有さない。

【0011】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、第１のおよび／または第２の対象にあらかじめ投与されず、または、免疫抑制剤およびウイルスのベクターを含む合成ナノキャリアは、第１のおよび／または第２の対象にあらかじめ随伴して投与されず、または、免疫抑制剤およびウイルスベクターを含む合成ナノキャリアは、第１のおよび／または第２の対象に混合されて、あらかじめ投与されない。

【0012】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターの用量は、さもなければ、同じか同様のレベルの導入遺伝子発現などの、同じかまたは同様のレベルの有効性の結果になるのに必要であると予想されるものより、低い用量である。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターの用量は、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍またはそれより多い。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、前述の用量は、ウイルスベクターの投与の全部の、少なくとも１以上のための用量である。

【0013】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの用量は、さもなければ、ウイルスのベクターに対する既存の免疫を伴わない対象に送達された場合と、同じかまたは同様のレベルの有効性の結果になるのに必要であると予想されるものより、多い用量である。提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの用量は、少なくとも２倍または３倍以上、より多い。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、前述の用量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与の全部の、少なくとも１以上のための用量である。

【0014】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含むウイルスベクターおよび合成ナノキャリアの少なくとも第１の投与が、または第１の投与のみが、ウイルスベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの混合された組成物である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのあらゆる投与は、ウイルスベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの混合された組成物である。
提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターと免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとが、各々の随伴投与のために混合される。

【0015】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、ウイルスベクターと混合され、そして、混合物は、対象に、少なくとも第１の同時投与として、投与される。

【0016】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、ウイルスベクターと混合され、そして、混合物は、対象に、少なくとも第１および第２の同時投与として、投与される。

【0017】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、ウイルスベクターと混合され、そして、混合物は、対象に、少なくとも第１、第２および第３の同時投与として、投与される。

【0018】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、および／または、少なくとも１つの反復用量の投与は、静脈内投与によるものである。

【0019】

提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、ウイルスベクターは、１以上の発現制御配列を含む。提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、１以上の発現制御配列は、肝臓特異的プロモーターを、含む。提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、１以上の発現制御配列は、構成的プロモーターを、含む。
提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、肝臓における導入遺伝子発現のためである。

【0020】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、１以上の時点での、対象におけるウイルスベクターに対する導入遺伝子発現、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ応答、および／または中和抗体応答を評価することを、さらに含む。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ応答および／または中和抗体を評価する時点の少なくとも１つは、同時投与の後である。

【0021】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターである。

【0022】

提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。提供される方法のいずれか１つの一態様において、アデノ随伴ウイルスベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１アデノ随伴ウイルスベクターである。提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクターは、組み換えであるか、合成であるか、改変されたか、またはキメラのベクターである。

【0023】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスのベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、および／または、１以上のこれに続く随伴投与（単数または複数）、または１以上の反復用量（単数または複数）の免疫抑制剤は、ＮＦ－ｋｂ経路の阻害剤である。提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、同時投与および／または反復用量の免疫抑制剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシンまたはラパマイシン類似体である。
提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアに連結される。

【0024】

提供される方法のいずれか１つの中で一態様において、免疫抑制剤は、合成ナノキャリア中に封入される。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、および／または１以上のこれに続く随伴投与（単数または複数）、または、１以上の反復用量（単数または複数）の合成ナノキャリアは、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子、またはペプチドまたはタンパク質粒子を、含む。

【0025】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアは、ポリマーナノ粒子を含む。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステル、ポリエーテルに接着したポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステル、またはポリエーテルに接着したポリエステルを含む。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ポリエステルは、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステル、およびポリエーテルに接着したポリエステルを含む。提供される方法のいずれか１つの一態様において、ポリエーテルは、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む。

【0026】

本明細書において提供される方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの集団の動的光散乱を使用して得られた粒子サイズ分布の平均は、１１０ｎｍより大きい直径である。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、１５０ｎｍより大きい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、２００ｎｍより大きい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、２５０ｎｍより大きい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、５μｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、４μｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、３μｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、２μｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、１μｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、７５０ｎｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、５００ｎｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、４５０ｎｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、４００ｎｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、３５０ｎｍより小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、直径は、３００ｎｍより小さい。

【0027】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の負荷量（ｌｏａｄ）は、合成ナノキャリア全体の平均で、０．１％と５０％（重量／重量）との間である。提供される方法のいずれか１つの一態様において、負荷量は、０．１％と４０％との間である。提供される方法のいずれか１つの一態様において、負荷量は４％より大きいが、４０％より小さい。提供される方法のいずれか１つの一態様において、負荷量は、２％と２５％との間である。

【0028】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの集団のアスペクト比は、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０に等しいか、それよりも大きい。

【0029】

提供される方法のいずれか１つの一態様において、酵素などのタンパク質のいずれか１つをコードするウイルスベクターの導入遺伝子は、本明細書に提供される。
提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、ウイルスベクターの導入遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を必要とするものである。
提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、メチルマロン酸血症またはＯＴＣ欠損を伴うものである。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】図１は、ヒトドナー８、３１、３５、４４、および４５からの血清中の中和活性およびＩｇＧＡＡＶ抗体のレベルを、示す。中和活性は、ルシフェラーゼ発現（正規化ＲＬＵ）として、棒でプロットされ、ルシフェラーゼ発現の高いレベルは、低い中和抗体活性に対応し、ルシフェラーゼ発現の低いレベルは、高い中和抗体活性に対応する。抗ＡＡＶ ＩｇＧ中和抗体は、線でプロットされる。

【図2】図２は、中和抗体を含有するヒト血清を伴う未治療のマウスの処置を示し、ＡＡＶ－ＳＥＡＰベクターまたはＡＡＶ－ＳＥＡＰベクターとラパマイシンを含む合成ナノキャリアによる注入が続く（図のいくつかにおいてＩｍｍＴＯＲ）。血清ＳＥＡＰ活性が、注入の後測定された。棒より上の数字は、ラパマイシンを含む合成ナノキャリアを投与されていないマウスと、ラパマイシンを含む合成ナノキャリアを投与されたマウス間の、血清ＳＥＡＰ活性における変化を、指し示す。点線は、血清ＳＥＡＰ活性レベルを正規化するために、使用された。

【図3】図３は、ＡＡＶ－ＳＥＡＰベクターまたはＡＡＶ－ＳＥＡＰベクターと抗ＡＡＶ中和抗体を含有する血清の１：１００の希釈物と混合されたラパマイシンを含む合成ナノキャリアによる、未治療のマウスの注入を示す。棒より上の数字は、血清によって注入されていないマウスと比較した、血清ＳＥＡＰ活性レベルを、指し示す。点線は、血清ＳＥＡＰ活性レベルを正規化するために、使用された。

【図4】図４は、Ａｎｃ８０－Ｍｕｔで処置されたＭｃｋ－ＭＵＴマウスの子孫の、母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧを、示す。

【図5】図５は、既存の母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧ：ＭＭＡを伴うＭｃｋ－ＭＵＴマウスにおける、高用量Ａｎｃ８０－ＭＵＴおよびＩｍｍＴＯＲを、示す。

【図6】図６は、既存の母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧ：ＭＭＡを伴うＭｃｋ－ＭＵＴマウスにおける、高用量Ａｎｃ８０－ＭＵＴおよびＩｍｍＴＯＲを、示す。

【図7】図７は、既存の母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧ：ＭＭＡを伴うＭｃｋ－ＭＵＴマウスにおける、高用量Ａｎｃ８０－ＭＵＴおよびＩｍｍＴＯＲを、示す。

【図8】図８（図８Ａ－８Ｂ）は、Ａｎｃ８０－ＭＵＴ±ＩｍｍＴＯＲで反復して処置された既存の母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧを伴うＭｃｋ－ＭＵＴマウスの生存を、示す。

【0031】

発明の詳細な説明
本発明を詳細に記載する前に、本発明は特に例示された材料またはプロセスに限定されず、パラメーターのようなものは無論変化し得ることが理解されるべきである。また、本明細書において用いられる用語は、本発明の特定の態様のみを記載することを目的とし、本発明を記載する代替的用語の使用を限定することを意図しないことが理解されるべきである。

【0032】

上記または下記のいずれであっても、本明細書において引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、その全体において全ての目的のために本明細書により参考として援用される。かかる参考としての援用は、本明細書において引用される援用された刊行物、特許および特許出願のいずれかが先行技術を構成するという承認であることを意図しない。

【0033】

本明細書および添付の請求の範囲において用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、内容が明らかに他を支持しない限り、複数の参照対象を含む。例えば、「ポリマー（ａ ｐｏｌｙｍｅｒ）」についての言及は、２以上のかかる分子の混和物または異なる分子量の単一のポリマー種の混和物を含み、「合成ナノキャリア（ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ）」についての参照は、２以上のかかる合成ナノキャリアの混和物または複数のかかる合成ナノキャリアを含み、「ＤＮＡ分子（ａ ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」についての参照は、２以上のかかるＤＮＡ分子の混合物または複数のかかるＤＮＡ分子を含み、「免疫抑制剤（ａｎ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓａｎｔ）」についての言及は、２以上のかかる免疫抑制剤分子の混和物または複数のかかる免疫抑制剤分子などを含む。

【0034】

本明細書において用いられる場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのそのバリエーションは、任意の列記される完全体（ｉｎｔｅｇｅｒ）（例えば、特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）または完全体の群（例えば特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）の包含を示すが、任意の他の完全体または完全体の群の除外を示すものではないと読まれるべきである。したがって、本明細書において用いられる場合、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、包括的であり、さらなる列記されていない完全体または方法／プロセスステップを除外しない。

【0035】

本明細書において提供される組成物および方法のいずれかの態様において、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」で置き換えることができる。

【0036】

句「から本質的になる」は、本明細書において、特定された完全体（単数または複数）またはステップ、ならびに請求される発明の特徴または機能に実質的には影響を及ぼさないものを要求するために用いられる。本明細書において用いられる場合、用語「からなる」は、列記される完全体（例えば特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）または完全体の群（例えば特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）単独での存在を示すために用いられる。

【0037】

Ａ．序論
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくものなどのウイルスベクターは、遺伝子治療などの治療の適用において大きな可能性を示した。しかしながら、遺伝子治療およびその他の応用におけるウイルスベクターの使用は、ウイルス抗原曝露の結果としての既存の免疫などにより、限定された。ＡＡＶに対する既存の抗体は、天然に存在する野生型ＡＡＶ感染に応答して、またはＡＡＶ感作母体から彼女の新生児への、抗体の母性移送を介して、形成することができる。実際に、ウイルスベクターに対する既存の免疫は、例として、減少された導入遺伝子発現によって示されるとおり、ウイルスベクターのウイルスベクターに対する免疫応答、および減少された有効性に、結果としてなることができる。ウイルスベクターに対する細胞性および液性免疫応答の両方は、有効性を減弱させ、および／またはかかる治療法を使用する能力を減少させることができる。これらの免疫応答は、抗体、Ｂ細胞、およびＴ細胞応答を含み、そして、ウイルスカプシドまたはコートタンパク質またはそれらのペプチドなどの、ウイルスベクターのウイルス抗原に特異的であることができる。本発明者らは、驚くべきことに、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、ウイルスベクターのウイルス抗原（単数または複数）に対する既存の免疫を伴うものにおいてさえ、ウイルスベクターと組み合わされて使用されることができるということを、発見した。本明細書に提供されるとおりの免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、ウイルスベクターを伴うかかる対象の処置可能にし得る。

【0038】

本発明者らは、驚くべきことに、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、対象において、例として、ウイルスベクターに対する既存の免疫を伴う対象において、改善された導入遺伝子発現を達成することができるということも、発見した。投与が、ウイルスベクターの第１の投与である場合に、免疫応答減少および／または導入遺伝子発現のかかる改善は、著しい。

【0039】

加えて、驚くべきことに、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターのかかる混合された投与が、ウイルスベクターの第１の投与上の改善された導入遺伝子発現を達成する一方で、混合が、免疫抑制剤およびウイルスベクターを含む合成ナノキャリアの続く投与の有効性のために、必ずしも要求されるというわけではないことが、さらに分かった。

【0040】

加えて、驚くべきことに、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターのかかる混合された投与が、導入遺伝子発現を減少させることなく、ウイルスベクターの減少された用量を達成するために、使用されることができるということが、発見された。ウイルスベクターの減少された用量を投与することは、ウイルスベクターの投与と関連する好ましくない効果を、緩和することができる。

【0041】

さらに、驚くべきことに、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのより高用量が、ウイルスベクターに対する既存の免疫を伴う対象におけるウイルスベクターの有効な投与を達成することにおいて、助けになることができることも、分かった。

【0042】

それゆえ、本発明者らは、驚くべきことに、かつ予想外のことに、上記の問題および制限は、本明細書において開示される発明を実施することにより克服することができることを、発見した。処置のためのウイルスベクターの効果的な使用に対する前述の障害に対する解決方法を提供する方法および組成物が提供される。合成ナノキャリアと混合されたなどの、本明細書に提供されるウイルスベクター構築物のいずれか１つを含むウイルスベクターで、対象を処置するための方法および組成物は、本明細書において提供される。提供される方法および関連された組成物は、ウイルスベクターのより幅広いおよび改善された使用を可能とし得、望ましくない免疫応答の減少に結果としてなり、および／または増加した導入遺伝子発現によってなどの、改善された有効性に結果としてなることができる。
本発明をここで、以下により詳細に記載する。

【0043】

Ｂ．定義
「投与すること」または「投与」または「投与する」とは、材料を、薬理学的に有用である様式において、対象に与えるかまたは分配することを意味する。当該用語は、「投与させること（ｃａｕｓｉｎｇ ｔｏ ｂｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）」を含むことを意図される。「投与させること」とは、別の当事者が材料を投与することを、直接的または間接的に、引き起こすこと、駆り立てること、奨励すること、補助すること、誘導することまたは指示することを含む。投与の間の時間が言及される場合、該時間は、他に記載された場合を除いて、投与の開始の間の時間である。

【0044】

本明細書に使用されるとき「混合する」は、２以上の構成要素が、一緒に組成物中に存在し、そして、組成物の投与が、対象に２以上の構成要素を提供するような、２以上の構成要素の混和を、指す。本明細書に提供される方法のいずれか１つの同時投与のいずれか１つは、混合物として投与されることができる。いくつかの態様において、２つの構成要素を混和することは、例として、ウイルス導入ベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアなどの、２つの構成要素を溶解すること、分散させること、懸濁すること、組み合わせること、結合すること、またはブレンドすることを含む。混合の方法は、当業者に公知で、液体－液体混和、粉末－粉末混和、液体－粉末混和などの、標準医薬混和方法を含むが、これに限定されるものではない。いくつかの態様において、結果として生じる混和物は、均一な混和物であり；すなわち、ウイルスベクターは、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと一様に混合されてもよい。他の態様において、結果として生じる混和物は、不均一な混和物であり；すなわち、ウイルスベクターは、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと一様に混合されない。

【0045】

提供される方法のいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアに、ウイルスベクターに随伴した免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの１以上の投与、および／または、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの１以上のその後の投与が続く（それぞれ、その後の１以上の随伴投与（単数または複数）、または１以上の反復用量（単数または複数））。提供される方法のいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターの、その後の随伴投与または反復用量は、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与の１週、２週、３週、１ヵ月、２ヵ月、またはそれ以上後に投与される。

【0046】

本明細書に提供の、対象への投与のための組成物の文脈における「有効量」は、対象における１以上の所望された結果、例えば、ウイルスベクターに対する、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ免疫応答などの、免疫応答の減少または除去、および／または有効であるか増加した導入遺伝子発現を生成する組成物の量を、指す。有効量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの目的のためのものであってよい。ｉｎ ｖｉｖｏでの目的のために、量は、医師が、ウイルスベクターの投与の結果として望ましくない免疫応答を経験するであろう対象について臨床的利益を有するであろうと考えるものであることができる。本明細書において提供される方法のいずれか１つにおいて、投与される組成物（単数または複数）は、本明細書において提供されるような有効量のうちのいずれか１つにおけるものであってよい。

【0047】

有効量は、望ましくない免疫応答のレベルを低下させることを含み得るが、いくつかの態様において、それは、望ましくない免疫応答を完全に予防することを含む。有効量はまた、望ましくない免疫応答の発生を遅延させることを含んでもよい。有効量は、所望される治療的エンドポイントまたは所望される治療効果をもたらす量であってもよい。提供される組成物および方法のいずれか１つのいくつかの態様において、有効量は、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ応答などの、ウイルスベクターに対する免疫応答の減少または除去、および／または有効であるか増大した導入遺伝子発現の発生などの、所望された免疫応答であるものである。前述のもののいずれかの達成は、慣用的な方法によりモニタリングすることができる。

【0048】

有効量は、無論、処置された特定の対象；状態、疾患または障害の重篤度；年齢、身体条件、サイズおよび体重を含む個々の患者のパラメーター；処置の期間；併用治療の性質（あれば）；投与の特定の経路、ならびに保健実施者の知識および経験の範囲内の類似の要因に依存するであろう。これらの要因は、当業者に周知であり、慣用的な実験のみを用いて取り組むことができる。

【0049】

提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアなしで投与されるウイルスベクターの有効量は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を伴わない対象において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を有する対象においてよりも少ない。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと混合されて投与された場合のウイルスベクターの有効量は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を有する対象などの、対象において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと随伴して投与されるが、混合されないなどの、混合されない、または免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアなしの場合のウイルスベクターの有効量より、少ない。いくつかの態様において、対象は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよび／またはウイルスベクターを、あらかじめ投与されていなかった。

【0050】

「免疫応答を評価すること」は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの免疫応答のレベル、存在または不在、減少、増加などの任意の測定または決定を指す。かかる測定または決定は、対象から得られた１以上の試料に対して行うことができる。かかる評価は、ＥＬＩＳＡベースのアッセイを含む、本明細書において提供されるかまたは当該分野において公知の他の方法のいずれか１つにより行うことができる。評価は、対象からの試料においてなどの、ウイルスベクターに特異的なものなどの、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ抗体などの、抗体の数またはパーセンテージを評価していてもよい。評価はまた、免疫応答に関連する任意の効果を評価すること、例えばサイトカインの存在または不在、細胞表現型などを測定することであってもよい。本明細書において提供される方法のいずれか１つは、ウイルスベクターまたはその抗原に対する免疫応答を評価するステップを含んでもよく、またはこれをさらに含んでもよい。評価は、直接的に行われても間接的に行われてもよい。当該用語は、別の当事者が免疫応答を評価することを、引き起こすか、駆り立てるか、奨励するか、補助するか、誘導するかまたは指示する行為を含むことを意図する。
「平均」とは、本明細書において用いられる場合、他に記述されないかぎり、算術平均を指す。

【0051】

「随伴して（ｃｏｎｃｏｍｉｎｔａｎｔｌｙ）」とは、対象に、時間的に相関する、好ましくは、免疫応答の調節を提供するために時間的に十分に相関する様式において、２以上の材料／剤を投与すること、およびさらにより好ましくは２以上の材料／剤が組み合わせて投与されることを意味する。態様において、随伴投与は、２以上の材料／剤の、特定された期間内、好ましくは１か月間以内、より好ましくは１週間以内、なおより好ましくは１日以内、さらにより好ましくは１時間以内の投与を包含してもよい。態様において、材料／剤は、繰り返し随伴投与してもよい；それは、例において提供されるような、１回より多くの機会における随伴投与である。

【0052】

「カップリングする」または「カップリングされた」（など）は、１つの実体（例えば部分）を別のものに化学的に会合させることを意味する。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、カップリングは、共有結合的であり、付着が、２つの実体の間の共有結合の存在の文脈において出現することを意味する。非共有的態様において、非共有的カップリングは、限定されないが以下を含む非共有的相互作用により媒介される：電荷相互作用、アフィニティー相互作用、金属配位、物理的吸着、主客相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワース相互作用、磁性相互作用、静電相互作用、双極子－双極子相互作用、および／またはそれらの組み合わせを含む。提供される方法または組成物のいずれか１つの態様において、カプセル化は、カップリングの一形態である。

【0053】

「用量」とは、所与の時間にわたる対象への投与のための特定の量の薬理学的および／または免疫学的に活性な材料を指す。一般に、キットを含む、本発明の方法および組成物における、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよび／またはウイルスベクターの用量は、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の量、および／または、別に定めがある場合を除いたウイルスベクターの量を、指す。あるいは、用量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの用量を指す場合の例において、免疫抑制剤の所望の量を提供する合成ナノキャリアの数に基づいて、投与されることができる。用量が、反復投薬に関して用いられる場合、用量とは、反復用量の各々の量を指し、これらは同じであっても異なっていてもよい。

【0054】

「封入する」とは、合成ナノキャリア内の物質の少なくとも一部を囲い込むことを意味する。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、物質は、完全に合成ナノキャリアの中に封じ込まれる。提供される方法または組成物のいずれか１つの他の態様において、封入される物質のほとんどまたは全てが、合成ナノキャリアの外部の局所環境に、暴露されるというわけではない。提供される方法または組成物のいずれか１つの他の態様において、わずか５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、または５％（重量／重量）が、局所環境に暴露される。封入は、吸収とは別のものであり、吸収は、物質の殆どまたは全てを合成ナノキャリアの表面上に配置し、物質を合成ナノキャリアの外部の局所環境に暴露させる。

【0055】

「発現制御配列」は、発現に影響を及ぼすことができ、かつプロモーター、エンハンサー、およびオペレーターを含むことができる、いずれかの配列である。ベクターの中の発現制御配列または制御要素は、適切な核酸転写、翻訳、ウイルスパッケージング等々を、促進することができる。一般に、制御要素は、シスにおいて作用するが、しかし、それらは、トランスにおいて働いてもよい。提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、発現制御配列は、構成的プロモーターまたは組織特異的プロモーターなどの、プロモーターである。「構成的プロモーター」は、また、遍在するか無差別のプロモーターと呼ばれるが、一般に活性であり、そして特定の細胞に、独占的または優先的でないものである。「組織特異的プロモーター」は、特別な細胞タイプまたは組織において活性であるものであり、かかる活性は、特別な細胞タイプまたは組織に独占的でもよい。本明細書に提供される核酸またはウイルスベクターのいずれか１つにおいて、プロモーターは、本明細書に提供のプロモーターのいずれか１つでもよい。本明細書に提供される核酸またはウイルスベクターのいずれか１つにおいて、プロモーターは、肝臓特異的プロモーターでもよい。

【0056】

「ウイルスベクターに対する免疫応答」等は、抗体（例として、ＩｇＭまたはＩｇＧ）または細胞性応答などの、ウイルスベクターに対するいかなる望ましくない免疫応答も、指す。いくつかの態様において、望ましくない免疫応答は、ウイルスベクターまたはその抗原に対する抗原特異的免疫応答である。いくつかの態様において、免疫応答は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して特異的である。他の態様において、免疫応答は、ウイルスベクターの導入遺伝子によりコードされるタンパク質またはペプチドに対して特異的である。

【0057】

いくつかの態様において、免疫応答は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対して特異的であり、ウイルスベクターの導入遺伝子によりコードされるタンパク質またはペプチドに対しては特異的でない。

【0058】

いくつかの態様において、対象における減少された抗ウイルスベクター応答は、本明細書に提供の投与がないウイルスベクターのこの他の対象への投与に沿った、試験対象などの別の対象から得られた生体試料を使用して測定された抗ウイルス性ベクター免疫応答と比較した、本明細書に提供の投与に沿った、対象から得られた生体試料を使用して測定された抗ウイルス性ベクター免疫応答を、含む。いくつかの態様において、抗ウイルスベクター免疫応答は、本明細書に提供の投与がないウイルスベクターの他の対象への投与に沿った、試験対象などの別の対象から得られた生体試料の上に遂行されたウイルスベクターのｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗原投与において検出された抗ウイルスベクター免疫応答と比較した、対象の生体試料の上に遂行された続くウイルスベクターのｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗原投与における、本明細書に提供の投与に沿った、対象から得られた生体試料における、減少した抗ウイルスベクター免疫応答である。他の態様において、免疫応答は、試験対象からの試料中などの、別の対象において評価されることができ、ここで、他の対象に関する結果は、スケーリングすることの有無にかかわらず、何が、問題の対象において出現しているかまたは出現したかが、暗示されることが予想されるだろう。いくつかの態様において、対象における減少された抗ウイルスベクター応答は、例えば、本明細書に提供の投与に先立つ、本明細書に提供の投与を伴わない時においてなどの、種々の点での、対象から得られた生体試料を使用して測定された抗ウイルスベクター免疫応答と比較した、本明細書に提供の投与後の対象から得られた生体試料を使用して測定された、減少された抗ウイルスベクター免疫応答を含む。

【0059】

「免疫抑制剤」は、好ましくはＡＰＣに対する効果を通して、免疫寛容原性効果を引き起こすことができる化合物を意味する。免疫寛容原性効果は、一般に、ＡＰＣまたは他の免疫細胞による、全身性および／または局所的な調節であって、耐久的な様式において抗原に対する望ましくない免疫応答を阻害または予防するものを指す。提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、１以上の免疫エフェクター細胞における調節性表現型を推進するために、ＡＰＣを引き起こすものである。例えば、調節性の表現型は、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の産生、誘導、刺激または動員の阻害、抗原特異的抗体の産生の阻害、Ｔｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の産生、誘導、刺激または動員などにより特徴づけられ得る。このことは、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の調節性の表現型への変換の結果であってもよい。このことはまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、マクロファージおよびｉＮＫＴ細胞などの他の免疫細胞におけるＦｏｘＰ３の誘導の結果であってもよい。提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、抗原を処理したあと、ＡＰＣの応答に影響を及ぼすものである。提供される方法または組成物のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は、抗原を処理することを妨げるものではない。提供される方法または組成物のいずれか１つのさらなる態様において、免疫抑制剤は、アポトーシスシグナル伝達分子ではない。提供される方法または組成物のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は、ホスホリピドではない。

【0060】

免疫抑制剤として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：スタチン；ラパマイシンまたはラパマイシンアナログ（すなわち、ラパログ（ｒａｐａｌｏｇ））などのｍＴＯＲ阻害剤；ＴＧＦ－βシグナル伝達剤；ＴＧＦ－β受容体アゴニスト；トリコスタチンＡなどのヒストンデアセチラーゼ阻害剤；副腎皮質ステロイド；ロテノンなどのミトコンドリアの機能の阻害剤；Ｐ３８阻害剤；６Ｂｉｏ、デキサメタゾン、ＴＣＰＡ－１、ＩＫＫ ＶＩＩなどのＮＦ－κβ阻害剤；アデノシン受容体アゴニスト；ミソプロストールなどのプロスタグランジンＥ２アゴニスト（ＰＧＥ２）；ホスホジエステラーゼ阻害剤、ロリプラムなどのホスホジエステラーゼ４阻害剤（ＰＤＥ４）；プロテアソーム阻害剤；キナーゼ阻害剤；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；糖質コルチコイド；レチノイド；サイトカイン阻害剤；サイトカイン受容体阻害剤；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；カルシニューリン阻害剤；ホスファターゼ阻害剤；ＴＧＸ－２２１などのＰＩ３ＫＢ阻害剤；３－メチルアデニンなどのオートファジー阻害剤；アリール炭化水素受容体阻害剤；プロテアソーム阻害剤Ｉ（ＰＳＩ）；ならびにＰ２Ｘ受容体遮断薬などの酸化ＡＴＰ。免疫抑制剤はまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、レチノイン酸、シクロスポリンＡなどのシクロスポリン、アリール炭化水素受容体阻害剤、レスベラトロール、アザチオプリン（Ａｚａ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、６－チオグアニン（６－ＴＧ）、ＦＫ５０６、サングリフェリンＡ、サルメテロール、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、アスピリンおよび他のＣＯＸ阻害剤、ニフルミン酸、エストリオールならびにトリプトライドを含む。他の例示的な免疫抑制剤として、限定されないが、低分子薬、天然生成物、抗体（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ４に対する抗体）、生物製剤ベースの薬物、炭水化物ベースの薬物、ＲＮＡｉ、アンチセンス核酸、アプタマー、メトトレキサート、ＮＳＡＩＤ；フィンゴリモド；ナタリズマブ；アレムツズマブ；抗ＣＤ３；タクロリムス（ＦＫ５０６）、アバタセプト、ベラタセプトなどが挙げられる。「ラパログ」は、本明細書に使用されているように、構造的にラパマイシン（シロリムス）の（類似体）に関する分子を、指す。ラパログの例として、限定することなく、テムシロリムス（ＣＣＩ－７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、リダフォロリムス（ＡＰ－２３５７３）、およびゾタロリムス（ＡＢＴ－５７８）が挙げられる。ラパログのさらなる例は、例えばＷＯ公開ＷＯ１９９８／００２４４１および米国特許第８，４５５，５１０号において見出すことができ、それらのラパログは、本明細書においてその全体において参考として援用される。さらなる免疫抑制剤は、当業者に公知であり、本発明は、この点において限定されない。提供される方法または組成物のいずれか１つの態様において、免疫抑制剤は、前述のいずれか１つなどの、本明細書に提供の剤のいずれか１つを含んでもよい。

【0061】

「導入遺伝子発現を増加させること」とは、対象におけるウイルスベクターの導入遺伝子発現のレベルを増加させることを指し、導入遺伝子は、ウイルスベクターにより送達される。いくつかの態様において、導入遺伝子発現のレベルは、対象における目的の多様な組織または系における導入遺伝子タンパク質濃度を測定することにより決定することができる。あるいは、導入遺伝子発現産物が核酸である場合、導入遺伝子発現のレベルは、導入遺伝子核酸産物により測定することができる。導入遺伝子発現を増加させることは、例えば、対象から得られた試料中の導入遺伝子発現の量を測定すること、およびそれを前の試料と比較することにより決定することができる。試料は、組織試料であってよい。いくつかの態様において、導入遺伝子発現は、フローサイトメトリーを用いて決定することができる。他の態様において、増加した導入遺伝子発現は、試験対象からの試料中などの、別の対象において評価されることができ、ここで、他の対象に関する結果は、スケーリングすることの有無にかかわらず、何が、問題の対象において出現しているかまたは出現したかが、暗示されることが予想されるだろう。本明細書に提供される方法のいずれか１つは、増加した導入遺伝子発現に結果としてなってもよい。

【0062】

それらに連結される場合などの、免疫抑制剤が、合成ナノキャリアに含まれる場合に、「負荷量」は、全体の合成ナノキャリアにおける材料の全乾燥処方重量に基づく、合成ナノキャリアにおける免疫抑制剤の量である（重量／重量）。一般に、かかる負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均として計算される。提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア全体の平均上の負荷量は、０．１％と９９％の間にある。提供される方法または組成物のいずれか１つの別の態様において、負荷量は、０．１％と５０％の間にある。提供される方法または組成物のいずれか１つの別の態様において、負荷量は、０．１％と２０％の間にある。提供される方法または組成物のいずれか１つのさらなる態様において、負荷量は、０．１％と１０％の間にある。依然として提供される方法または組成物のいずれか１つのさらなる態様において、負荷量は、１％と１０％の間にある。依然として提供される方法または組成物のいずれか１つのさらなる態様において、負荷量は、７％と２０％の間にある。提供される方法または組成物のいずれか１つのさらに別の態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均で少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。提供される方法または組成物のいずれか１つそのうえさらなる態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均で、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％である。いくつかの上の態様のいずれか１つのいくつかの態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均で、２５％以下である。提供される方法または組成物のいずれか１つの態様において、負荷量は、当該技術分野で周知のとおりに算出される。

【0063】

「合成ナノキャリアの最大寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定されるナノキャリアの最大寸法を意味する。「合成ナノキャリアの最小寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定される合成ナノキャリアの最小寸法を意味する。例えば、球体の合成ナノキャリアについて、合成ナノキャリアの最大および最小寸法は、実質的に同一であり、その直径のサイズである。同様に、立方状合成ナノキャリアについて、合成ナノキャリアの最小寸法は、その高さ、幅または長さのうちの最小のものであり、一方、合成ナノキャリアの最大寸法は、その高さ、幅または長さのうちの最大のものである。

【0064】

一態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍと等しいか、またはこれより大きい。一態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、５μｍと等しいか、またはこれより小さい。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１１０ｎｍより大きく、より好ましくは１２０ｎｍより大きく、より好ましくは１３０ｎｍより大きく、より好ましくはなお、１５０ｎｍより大きい。合成ナノキャリアの最大および最小寸法のアスペクト比は、態様に依存して変化し得る。例えば、合成ナノキャリアの最小寸法に対する最大寸法のアスペクト比は、１：１～１，０００，０００：１、好ましくは１：１～１００，０００：１、より好ましくは１：１～１０，０００：１、より好ましくは１：１～１０００：１、なおより好ましくは１：１～１００：１、およびさらにより好ましくは１：１～１０：１の間で変化し得る。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、３μｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは２μｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは１μｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは８００ｎｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは６００ｎｍと等しいか、またはこれより小さく、およびより好ましくはなお、５００ｎｍと等しいか、またはこれより小さい。好ましい態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、より好ましくは１２０ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、より好ましくは１３０ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、より好ましくは１４０ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、およびより好ましくはなお、１５０ｎｍと等しいか、またはこれより大きい。合成ナノキャリアの寸法（例えば有効直径）の測定は、いくつかの態様において、合成ナノキャリアを液体（通常は水性）媒体中に懸濁して、動的光散乱（ＤＬＳ）を用いること（例えばＢｒｏｏｋｈａｖｅｎ ＺｅｔａＰＡＬＳ装置を用いること）により、得ることができる。例えば、合成ナノキャリアの懸濁液を、約０．０１～０．１ｍｇ／ｍＬの最終合成ナノキャリア懸濁液濃度を達成するために、水性バッファーから精製水中で希釈することができる。希釈された懸濁液は、ＤＬＳ分析のために好適なキュベット中で直接調製しても、またはこれに移してもよい。キュベットを、次いで、ＤＬＳ内に置き、制御された温度まで平衡化させて、次いで、媒体の粘度および試料の屈折率のための適切なインプットに基づいて、安定で再現性のある分布を得るために十分な時間にわたりスキャンすることができる。有効直径、または分布の平均を、次いで報告させる。高アスペクト比または非球形の合成ナノキャリアの有効サイズを決定することは、より正確な測定値を得るために、電子顕微鏡法などの増強技術を必要とする場合がある。合成ナノキャリアの「次元」または「寸法」または「直径」は、例えば動的光散乱を用いて得られる粒子サイズ分布の平均を意味する。

【0065】

「あらかじめ投与されない」は、対象にこれまでまったく投与されなかったか、処置のためにウイルスベクターを投与するための投与療法が、開始される場合の時間での薬力学的効果に結果としてなる時間枠の範囲内で投与されなかった組成物を、指す。

【0066】

「薬学的に許容し得る賦形剤」または「薬学的に許容し得るキャリア」とは、組成物を処方するために薬理学的に活性な材料と一緒に用いられる薬理学的に不活性な材料を意味する。薬学的に許容し得る賦形剤は、当該分野において公知の多様な材料を含み、これは、限定されないが、糖（例えばグルコース、ラクトースなど）、抗菌剤などの保存剤、再構成補助剤、色素、食塩水（例えばリン酸緩衝化食塩水）およびバッファーを含む。

【0067】

「反復用量」または「反復投与」等は、同じ材料のより初期の用量または投与に続いて、対象に投与される材料（単数または複数）または一組の材料の少なくとも１つの追加の用量または投与を、意味する。材料は同じであってよいが、一方で、反復用量または投与中の材料の量は、異なっていてもよい。

【0068】

「ウイルスベクターに対する既存の免疫」とは、その細胞が、ウイルスベクターの抗原に対する、または交差反応性抗原（他のウイルスを含むがこれに限定されない）に対する以前の暴露により、以前にプライミングされている対象における、抗体、Ｔ細胞および／またはＢ細胞の存在を指す。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、ウイルスベクターのウイルスカプシドに対する。用語は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する母性移入抗体を伴う対象を含むことを意味し、および、このように、本明細書に提供の対象は、ウイルスのベクターに対する母性移入抗体を伴う新生児を、含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、中和抗体などの、ウイルスベクターに対する既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、中和抗体および総抗ＡＡＶカプシド抗体の組み合わせなどの、ウイルスベクターに対する既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、既存の免疫は、中和抗体および抗ＡＡＶカプシドＩｇＧ抗体の組み合わせなどの、ウイルスベクターに対する既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターに対する既存の免疫は、中和抗体、抗ＡＡＶ ＩｇＧ、および抗ＡＡＶカプシド免疫グロブリンＭ抗体の組み合わせなどの、既存の抗体を含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターに対する母性移入抗体は、ウイルスベクターに対する中和抗体を含む。いくつかの態様において、この既存の免疫は、ウイルスベクターの有効性を損なう抗ウイルスベクター免疫応答（単数または複数）に結果としてなることが予測されるレベルである。いくつかの態様において、この既存の免疫は、さもなければ対象を、ウイルスベクターによる処置から除外するレベルである。

【0069】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫のレベルは、１：５の力価でのＡＡＶなどのウイルスベクター形質導入の２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％を中和するのに十分である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫のレベルは、１：１０の力価でのＡＡＶなどのウイルスベクター形質導入の２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％を中和するのに十分である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫のレベルは、１：２０の力価でのＡＡＶなどのウイルスベクター形質導入の２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％を中和するのに十分である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫のレベルは、１：１００の力価でのＡＡＶなどのウイルスベクター形質導入の２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％を中和するのに十分である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫のレベルは、１：５、１：１０、１：２０、１：５０、１：１００の力価で、５０％を中和するのに十分である。本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、対象は、前述の既存の免疫のレベルのいずれか１つを、有する。本明細書に提供される方法のいずれか１つの態様において、前述のいずれか１つは、閾値レベルである。

【0070】

いくつかの態様において、この既存の免疫は、ウイルス導入ベクターに対するその後の暴露により、抗ウイルスベクター免疫応答（単数または複数）に結果としてなることが、予測されるレベルである。既存の免疫は、対象からの血液試料などの試料中に存在するウイルスベクターに対する中和抗体などの抗体のレベルを決定することにより、評価することができる。中和抗体などの抗体のレベルを評価するためのアッセイは、本明細書において少なくとも例において記載され、また、当業者には公知である。かかるアッセイは、細胞ベースのアッセイであることができる。ＩｇＭまたはＩｇＭまたは中和抗体などの、抗体のレベルを評価するためのアッセイ。かかるアッセイは、ＥＬＩＳＡアッセイであることができる。既存の免疫はまた、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＡＰＣにより提示されたウイルスベクター抗原またはＭＨＣクラスＩもしくはＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示されたウイルス抗原エピトープで刺激された、ＢまたはＴ細胞などの免疫細胞の抗原リコール応答を決定することにより、評価されることができる。抗原特異的リコール応答のためのアッセイとして、これらに限定されないが、ＥＬＩＳｐｏｔ、細胞内サイトカイン染色、細胞増殖、およびサイトカイン産生アッセイが挙げられる。一般に、これらのおよび他のアッセイは、当業者に公知である。いくつかの態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を示さない対象は、中和抗体、またはメモリーＢもしくはＴ細胞などの抗ウイルスベクター抗体のレベルが陰性であると考えられるものである。他の態様において、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を示さない対象は、抗ウイルスベクター応答のレベルが、陰性対照の平均値＋３×標準偏差以下であるものである。

【0071】

「対象」とは、ヒトおよび霊長類などの温血哺乳動物；鳥類；ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマおよびブタなどの家庭内または家畜動物；マウス、ラットおよびモルモットなどの実験動物；魚類；爬虫類；動物園および野生の動物などを含む動物を意味する。本明細書において用いられる場合、対象は、本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つを必要としてもよい。本明細書に使用されるとき、対象は、母性移入抗体を伴う新生児、または、既存の免疫のレベルが、対象をウイルスベクターによる処置からさもなければ除外するものである。本明細書に提供される「第２の対象」または「別の対象」は、投与が提供されている対象とは異なる、別の対象を指す。この対象は、試験対象などの他のいかなる対象であることもでき、その対象は、同じであるか異なる種類でもよい。いくつかの態様において、この第２の対象は、ウイルスベクターに対する既存の免疫を伴うものである。いくつかの態様において、この第２の対象は、ウイルスベクターに対する既存の免疫を伴わないものである。他の態様において、この第２の対象は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを伴わない、または、同様にして投与された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを伴わないウイルスベクターが（随伴したが、混合されなかったなどの異なる方法で）、投与されたものである。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、第２または他の対象が、異なる種類であるときに、その量は、投与を受けるために、その対象の種類のために適切な様に、スケーリングされることができ、そのスケーリングされた量は、本明細書に提供される総量として、使用されることができる。たとえば、相対成長率または他のスケーリング方法が、使用されることができる。第２の対象または他の対象における免疫応答ならび導入遺伝子発現が、当業者に公知の、さもなければ本明細書に提供の、ルーチンな方法を使用して、評価されることができる。本明細書に提供される方法のいずれか１つは、本明細書に記載の第２のまたは他の対象における、これらの総計の１以上を決定することを含んでもよいかまたはさらに含んでも、よい。

【0072】

「合成ナノキャリア（単数または複数）」とは、天然では見出されない個別の物体であって、サイズが５マイクロメートルより小さいか、またはこれと等しい、少なくとも１つの寸法を有するものを意味する。アルブミンナノ粒子は、一般に合成ナノキャリアとして含まれるが、しかし、ある態様においては、合成ナノキャリアは、アルブミンナノ粒子を含まない。態様において、合成ナノキャリアは、キトサンを含まない。他の態様において、合成ナノキャリアは、脂質ベースのナノ粒子ではない。さらなる態様において、合成ナノキャリアは、リン脂質を含まない。

【0073】

合成ナノキャリアは、これらに限定されないが、１つまたは複数の脂質ベースのナノ粒子（また本明細書において液体ナノ粒子、すなわち、それらの構造を構成する材料の大部分が脂質であるナノ粒子としても言及される）、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子（すなわち、主にウイルスの構造タンパク質からなるが、感染性ではないか、低い感染性を有する粒子）、ペプチドまたはタンパク質ベースの粒子（また本明細書において、タンパク質粒子、すなわち、それらの構造を構成する材料の大部分がペプチドもしくはタンパク質である粒子としても言及される）（アルブミンナノ粒子など）および／または脂質－ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを用いて開発されるナノ粒子であってもよい。合成ナノキャリアは、多様な異なる形状であってよく、これは、限定されないが、球体、立方状、錐体、長方形、円柱状、ドーナツ型などを含む。本発明による合成ナノキャリアは、１以上の表面を含む。本発明の実施における使用のために適応させることができる例示的な合成ナノキャリアは、以下を含む：（１）Grefらに対する米国特許５，５４３，１５８において開示される生分解性ナノ粒子、（２）Saltzmanらに対する米国特許出願公開２００６０００２８５２のポリマーナノ粒子、（３）DeSimoneらに対する米国特許出願公開２００９００２８９１０のリソグラフィーにより構築されるナノ粒子、（４）von Andrianらに対するＷＯ２００９／０５１８３７の開示、（５）Penadesらに対する米国特許出願公開２００８／０１４５４４１において開示されるナノ粒子、（６）ｄｅ ｌｏｓ Ｒｉｏｓらに対する米国特許出願公開２００９０２２６５２５において開示されるタンパク質ナノ粒子、（７）Sebbelらに対する米国特許出願公開２００６０２２２６５２において開示されるウイルス様粒子、（８）Bachmannらに対する米国特許出願公開２００６０２５１６７７において開示される核酸結合ウイルス様粒子、（９）ＷＯ２０１００４７８３９Ａ１またはＷＯ２００９１０６９９９Ａ２において開示されるウイルス様粒子、（１０）P. Paolicelli et al., 「Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles」Nanomedicine. 5(6): 843-853 (2010)において開示されるナノ沈殿させたナノ粒子、（１１）米国公開２００２／００８６０４９において開示されるアポトーシス細胞、アポトーシス小体または合成もしくは半合成模倣物、あるいは（１２）Look et al., Nanogel-based delivery of mycophenolic acid ameliorates systemic lupus erythematosus in mice」J. Clinical Investigation 123(4): 1741-1749 (2013)のもの。

【0074】

いくつかの態様において、約１００ｎｍと等しいかこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかこれより小さい最小寸法を有する、本発明に従う合成ナノキャリアは、補体を活性化するヒドロキシル基を伴う表面を含まないか、あるいは、補体を活性化するヒドロキシル基ではない部分から本質的になる表面を含む。好ましい態様において、約１００ｎｍと等しいかこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を実質的に活性化する表面を含まないか、あるいは、補体を実質的に活性化しない部分から本質的になる表面を含む。より好ましい態様において、約１００ｎｍと等しいかこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化する表面を含まないか、あるいは、補体を活性化しない部分から本質的になる表面を含む。態様において、合成ナノキャリアは、ウイルス様粒子を除外する。態様において、合成ナノキャリアは、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７より高いか等しい、または１：１０より高いアスペクト比を有してもよい。

【0075】

「ウイルスベクターの導入遺伝子」または「導入遺伝子」等とは、細胞中に輸送するためにウイルスベクターが用いられる核酸材料であって、好ましくはいくつかの態様において、一旦細胞中に入ると、発現して、それぞれ、本明細書において記載の治療的適用のためなどの、タンパク質または核酸分子を産生するものを指す。「発現される」または「発現」または類似のものは、導入遺伝子が細胞中に形質導入されて、形質導入された細胞によりプロセッシングされた後の、機能的（すなわち、所望される目的のために生理学的に活性な）遺伝子産物の合成を指す。かかる遺伝子産物はまた、本明細書において「導入遺伝子発現産物」としても言及される。発現された産物は、したがって、導入遺伝子によりコードされた結果としてのタンパク質または核酸、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは治療用ＲＮＡである。

【0076】

「ウイルスベクター」は、細胞に、核酸（単数または複数）などのペイロードを送達することができるかまたは送達するウイルスベースのデリバリーシステムを、意味する。一般に、用語は、カプシドおよび／またはコートタンパク質などの、ウイルスの構成要素を伴うウイルスベクター構築物を指し、それは、ペイロードを含むこともできるかまたはペイロードもまた含む（そして、そのように適合されている）。いくつかの態様において、ペイロードは、導入遺伝子をコード化する。いくつかの態様において、導入遺伝子は、治療用タンパク質、ＤＮＡ結合タンパク質またはエンドヌクレアーゼなどの本明細書において提供されるタンパク質を、コードするものである。他の態様において、導入遺伝子は、ガイドＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｎＲＮＡ、ＲＮＡｉ分子（例として、ｄｓＲＮＡもしくはｓｓＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、または三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）等々をコードする。

【0077】

他の態様において、ペイロードは、それ自体治療用の核酸（単数または複数）であり、そして、送達された核酸（単数または複数）の発現は、要求されない。たとえば、核酸（単数または複数）は、合成ｓｉＲＮＡなどのｓｉＲＮＡでもよい。いくつかの態様において、ペイロードは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）、マーカー等々などの他の構成要素をコード化してもよい。ペイロードは、発現制御配列を含んでもよい。発現制御ＤＮＡ配列は、プロモーター、エンハンサーおよびオペレーターを含み、一般に、発現コンストラクトが利用されるべき発現系に基づいて選択される。いくつかの態様において、プロモーターおよびエンハンサー配列は、遺伝子発現を増大する能力のために選択され、一方、オペレーター配列は、遺伝子発現を調節する能力のために選択され得る。いくつかの態様において、ペイロードはまた、宿主細胞中での相同組み換えを容易にする、および好ましくは促進する、配列を含んでもよい。

【0078】

例示的な発現制御配列は、プロモーター配列、例えば、サイトメガロウイルスプロモーター；ラウス肉腫ウイルスプロモーター；およびサルウイルス４０プロモーター；ならびに本明細書において他の場所で開示されるか当該分野において他に公知の任意の他の型のプロモーターを含む。一般に、プロモーターは、所望される発現産物をコードする配列の上流（すなわち５’）で、作動的に連結される。ペイロードはまた、コード配列の下流（すなわち３’）で作動可能に連結された好適なポリアデニル化配列（例として、ＳＶ４０またはヒト成長ホルモン遺伝子ポリアデニル化配列）を含んでもよい。

【0079】

一般に、ウイルスベクターは、１以上の所望される核酸を細胞中に形質導入することができるように操作される。加えて、本明細書に提供の治療の適用のために、ウイルスベクターが、複製欠陥があることが好ましいことが、理解されるだろう。ウイルスベクターは、限定することなく、レトロウイルス（例えば、マウスレトロウイルス、トリレトロウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーヴェイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、アルファウイルスなどに基づくものであってよい。他の例は、本明細書において他の場所において提供されるか、当該分野において公知である。ウイルスベクターは、ウイルスの天然のバリアント、株、または血清型、例えば本明細書において提供されるもののいずれか１つに基づくものであってよい。ウイルスベクターは、分子進化をとおして選択されるウイルスに、基づいてもよい（例として、J.T. Koerber et al, Mol. Ther. 17(12):2088-2095 and U.S. Pat. No. 6,09,548参照）。

【0080】

ウイルスベクターは、限定されるものではなく、ＡＡＶ８またはＡＡＶ２などのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくことができる。ウイルスベクターは、Ａｎｃ８０に基づくこともできる。よって、本明細書に提供されるＡＡＶベクターまたはＡｎｃ８０ベクターは、それぞれＡＡＶまたはＡｎｃ８０に基づくウイルスベクターであり、そして、カプシドおよび／またはコートタンパク質などの、ウイルス構成要素を有し、それらから、送達のために、核酸材料をパッケージすることができる。ＡＡＶベクターの他の例は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８、またはそれらのバリアントに基づいたものを含むが、これらに限定されるものではない。ウイルスベクターはまた、操作されたベクター、組み換えベクター、変異体ベクター、またはハイブリッドベクターであってよい。かかるベクターを発生させる方法は、当業者に明らかである。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、「キメラウイルスベクター」である。かかる態様において、このことは、ウイルスベクターが、１種より多くのウイルスまたはウイルスベクターに由来するウイルス成分からなることを意味する。例として、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／０９１８０２およびＷＯ１４／１６８９５３、および米国特許第６，４６８，７７１号を参照。かかるウイルスベクターは、たとえば、ＡＡＶ８／Ａｎｃ８０またはＡＡＶ２／Ａｎｃ８０ウイルスベクターでもよい。

【0081】

追加のウイルスベクター要素は、シスまたはトランスにおいて、機能してもよい。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、標的（ドナー）配列のその５’または３’末端に隣接する１以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列も含むベクターゲノム、転写を推進する発現制御要素（例として、プロモーターまたはエンハンサー）、イントロン配列、スタッファー／フィラーポリヌクレオチド配列（一般に、不活性配列）、および／または標的（ドナー）の３’末端に位置するポリ（Ａ）配列を、含む。

【0082】

Ｃ．本発明の方法における使用のための組成物
重要なことに、本明細書に提供される方法および組成物は、ウイルスベクターのウイルス抗原に対する既存の免疫を伴う対象への、ウイルスベクターの投与のために、および／または、ウイルスベクターの投与による改善された効果を、提供する。よって、本明細書に提供される方法および組成物は、母性移入抗体を伴う新生児、および、既存の免疫のレベルに起因して、さもなければウイルスベクターを有する処置から除外される対象を含む、ウイルスベクターによる対象の処置のために、有用である。かかるウイルスベクターは、遺伝子治療のため等々を含む、様々な目的のための核酸を送達するために、使用されることができる。上記のとおり、ウイルスベクターに対する既存の免疫は、その有効性に逆の影響を与えることができ、その再投与を妨げることもできる。重要なことに、本明細書に提供される方法および組成物が、導入遺伝子の改善された発現を達成し、および／またはウイルスベクターに対する免疫応答を減少させることによって、前述の障壁に打ち勝つことが、わかってきた。本発明者らは、驚くべきことに、ウイルスベクターと混合された免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、ウイルスベクターが、対象にあらかじめ投与されなかった場合などの、対象において、例として、ウイルスベクターに対する既存の免疫を伴う対象において、改善された導入遺伝子発現を達成することができるということを、発見した。加えて、驚くべきことに、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターのかかる混合された投与が、ウイルスベクターの第１の投与上の改善された導入遺伝子発現を達成する一方で、混合が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターの続く投与の有効性のために、必ずしも要求されるというわけではないことが、分かった。さらに、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの高用量が、既存の免疫を伴う対象の処置も、可能にし得ることが、分かった。

【0083】

また上記の通り、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターの混合された投与が、導入遺伝子発現を減少させることなく、ウイルスベクターの減少された用量を達成するために、使用されることができるということが、発見された。

【0084】

導入遺伝子
ウイルスベクターのペイロードは、導入遺伝子でもよい。たとえば、導入遺伝子は、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質混和物、ＤＮＡ、相補ＤＮＡ、機能性ＲＮＡ分子（例として、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ、ＲＮＡレプリコン、または他の関連する生成物などの所望の発現生成物を、コードしてもよい。

【0085】

たとえば、導入遺伝子の発現生成物は、疾患または障害を伴うものなどの対象に有益な、タンパク質またはそれらの部分でもよい。タンパク質は、細胞外、細胞内、または膜結合タンパク質であってよい。導入遺伝子は、たとえば、インターロイキンおよびインターフェロン、血液凝固剤、成長因子、神経伝達物質、腫瘍サプレッサー、アポリポタンパク質、抗原、および抗体などの、酵素、血液誘導体、ホルモン、リンフォカインを、コードしてもよい。対象は、疾患または障害を有するかまたはそれを疑われてもよく、それにより、タンパク質の患者の内在バージョンが、不完全であるか、または限定量において生成されるか、または全くない。提供される方法または組成物のいずれか１つの他の態様において、導入遺伝子の発現生成物は、対象に有益である、遺伝子またはそれらの部分でもよい。

【0086】

治療用タンパク質の例として、これらに限定されないが、注入可能なまたは注射可能な治療用タンパク質、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液または血液凝固因子、サイトカインおよびインターフェロン、増殖因子、アディポカインなどが挙げられる。

【0087】

注入可能なまたは注射可能な治療用タンパク質の例として、例えば、トシリズマブ（Ｒｏｃｈｅ／Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標））、アルファ－１アンチトリプシン（Ｋａｍａｄａ／ＡＡＴ）、Ｈｅｍａｔｉｄｅ（登録商標）（ＡｆｆｙｍａｘおよびＴａｋｅｄａ、合成ペプチド）、アルブインターフェロンアルファ－２ｂ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｚａｌｂｉｎ（商標））、Ｒｈｕｃｉｎ（登録商標）（Ｐｈａｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ、Ｃ１阻害剤補充療法）、テサモレリン（Ｔｈｅｒａｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｅｇｒｉｆｔａ、合成成長ホルモン放出因子）、オクレリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、ＲｏｃｈｅおよびＢｉｏｇｅｎ）、ベリムマブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ／Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標））、ペグロチカーゼ（Ｓａｖｉｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｋｒｙｓｔｅｘｘａ（商標））、タリグルセラーゼアルファ（Ｐｒｏｔａｌｉｘ／Ｕｐｌｙｓｏ）、アガルシダーゼアルファ（Ｓｈｉｒｅ／Ｒｅｐｌａｇａｌ（登録商標））、ならびにベラグルセラーゼアルファ（Ｓｈｉｒｅ）が挙げられる。

【0088】

酵素の例として、リゾチーム、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、グリコシダーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリナーゼ、ヘパラナーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、溶解素およびリガーゼが挙げられる。

【0089】

酵素の他の例は、酵素補充療法のために用いられるものを含み、これは、限定されないが、イミグルセラーゼ（例えば、ＣＥＲＥＺＹＭＥ（商標））、ａ－ガラクトシダーゼＡ（ａ－ｇａｌ Ａ）（例えば、アガルシダーゼベータ、ＦＡＢＲＹＺＹＭＥ（商標））、酸ａ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）（例えば、アルグルコシダーゼアルファ、ＬＵＭＩＺＹＭＥ（商標）、ＭＹＯＺＹＭＥ（商標））、およびアリールスルファターゼＢ（例えば、ラロニダーゼ、ＡＬＤＵＲＡＺＹＭＥ（商標）、イデュルスルファーゼ、ＥＬＡＰＲＡＳＥ（商標）、アリールスルファターゼＢ、ＮＡＧＬＡＺＹＭＥ（商標））を含む。ホルモン類の例は、メラトニン（Ｎアセチル－５－メトキシトリプタミン）、セロトニン、チロキシン（またはテトラヨードサイロニン）（甲状腺ホルモン）、トリヨードサイロニン（甲状腺ホルモン）、エピネフリン（またはアドレナリン）、ノルエピネフリン（またはノルアドレナリン）、ドーパミン（またはプロラクチン抑制ホルモン）、アンチミューラリアンホルモン（またはミュラー抑制因子またはホルモン）、アディポネクチン、副腎皮質刺激ホルモン（または副腎皮質刺激ホルモン）、アンギオテンシノーゲンおよびアンギオテンシン、抗利尿ホルモン（またはバゾプレシン、アルギニンバソプレシン）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（またはアトリオペプチン）、カルシトニン、コレシストキニン、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、エリスロポイエチン、卵胞刺激ホルモン、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様のペプチド（ＧＬＰ－１）、ＧＩＰ、生殖腺刺激ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ヒト柔毛膜性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトゲン、成長ホルモン、インヒビン、インシュリン、インスリン様増殖因子（またはソマトメジン）、レプチン、黄体形成ホルモン、ＭＳＨ、オレキシン、オキシトシン、副甲状腺ルモン、プロラクチン、リラキシン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポイエチン、甲状腺刺激ホルモン（またはチロトロピン）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、コルチゾール、アルドステロン、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、ジヒドロテストステロン、エストラジオール、エストロン、エストリオール、プロゲステロン、カルシトリオール（１、２５－ジヒドロキシビタミンＤ３）、Ｃａｌｃｉｄｉｏｌ（２５－ヒドロキシビタミンＤ３）、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、プロラクチンを放出しているホルモン、リポトロピン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、ニューロペプチドＹ、ヒスタミン、エンドセリン、膵臓ポリペプチド、レニン、およびエンケファリンを含む。

【0090】

血液または血液凝固因子の例として、第Ｉ因子（フィブリノーゲン）、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、組織因子、第Ｖ因子（プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩＩ因子（安定因子、プロコンバーチン）、第ＶＩＩＩ因子（抗血友病性グロブリン）、第ＩＸ因子（クリスマス因子または血漿トロンボプラスチン成分）、第Ｘ因子（スチュアート・プロワー因子）、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子（ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィルブランド因子、フォン・ヘルデブラント因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子キニノーゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、フィブリン、トロンビン、アンチトロンビンＩＩＩなどのアンチトロンビン、ヘパリンコファクターＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関連プロテアーゼ阻害剤（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２－アンチプラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－２（ＰＡＩ２）、癌凝血原（ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ）、およびエポエチンアルファ（Ｅｐｏｇｅｎ、Ｐｒｏｃｒｉｔ）が挙げられる。

【0091】

サイトカインの例として、リンフォカイン、インターロイキン、ならびにケモカイン、ＩＦＮ－γ、ＴＧＦ－βなどの１型サイトカイン、ならびにＩＬ－４、ＩＬ－１０およびＩＬ－１３などの２型サイトカインが挙げられる。

【0092】

増殖因子の例として、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンギオポエチン（Ａｎｇ）、自己分泌型細胞運動刺激因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、グリア細胞由来神経栄養因子受容体（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、増殖分化因子－９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、肝細胞腫由来増殖因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、遊走刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ－８）、神経増殖因子（ＮＧＦ）および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ－α）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、Ｗｎｔシグナル伝達経路、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、［（ウシ胎仔ソマトトロフィン）］（ＦＢＳ）、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６およびＩＬ－７が挙げられる。
アディポカインの例として、レプチンおよびアディポネクチンが挙げられる。

【0093】

治療用タンパク質のさらなる例として、これらに限定されないが、受容体、シグナル伝達タンパク質、細胞骨格タンパク質、足場タンパク質、転写因子、構造タンパク質、膜タンパク質、細胞質タンパク質、結合タンパク質、核タンパク質、分泌型タンパク質、ゴルジ体タンパク質、小胞体タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、および小胞タンパク質などが挙げられる。

【0094】

導入遺伝子は、代謝性肝臓疾患、例として、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）および非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）；または遺伝代謝異常、例として、アラジル症候群、アルファ－１抗トリプシン欠乏症、クリグラー－ナジャー症候群、ガラクトース血症、Ｇａｕｃｈｅｒ病、ギルバート症候群、ヘモクロマトーシス、リゾリーマル酸リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、有機酸血症、ライ症候群、Ｉ型グリコーゲン蓄積症、尿素周期障害、およびウィルソン病を処置するために、酵素をコードするものでもよい。

【0095】

本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象は、前述のいずれか１つを有するものである。たとえば、対象は、メチルマロン酸血症（ＭＭＡ）などの有機酸血症、またはオルニチンカルバミラーゼ欠損症などの尿素周期障害を、伴うものでもよい。

【0096】

よって、いくつかの態様の導入遺伝子は、メチルマロノイル－コエンザイムＡムターゼ（ＭＵＴ）またはオルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）を、コードする。

【0097】

提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、発現生成物は、標的遺伝子、または標的遺伝子の部分を、破壊、修正／修復、または置き換えるために、用いられてもよい。たとえば、Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔ／Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）システムは、精密なゲノム編集のために、使用されることができる。該システムにおいて、単一ＣＲＩＳＰＲ関連ヌクレアーゼ（Ｃａヌクレアーゼ）は、特異的ＤＮＡ標的を認識するように、ガイドＲＮＡ（短いＲＮＡ）によってプログラムされてもよく、それは、塩基配列の短い反復を含有するＤＮＡ遺伝子座を、含む。各ＣＲＩＳＰＲ座は、スペーサーＤＮＡの短いセグメントによって隣接され、それは、ウイルスのゲノム材料に、由来する。タイプＩＩ ＣＲＩＳＰＲシステム、最も一般的なシステム、において、スペーサーＤＮＡは、トランス活性化型ＲＮＡ（ｔｒａｃＲＮＡ）とハイブリダイズし、ここで、それは、ＣＲＩＳＰＲ－ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）に処理されて、そしてその後、Ｃａｓヌクレアーゼと会合し、ＲＮＡアーゼＩＩＩ処理を開始する複合体を形成して、外来性ＤＮＡの分解に、結果としてなる。標的配列は、認識されるために、その３′末端上のプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列を好ましくは含有する。該システムは、多数の方法で修飾されることができ、たとえば、合成ガイドＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲベクターに融合してもよく、そして、様々な種々のガイドＲＮＡ構造および要素が、可能である（ヘアピンおよび足場配列を含む）。

【0098】

提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、導入遺伝子配列は、レポーター配列などの、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａシステムのいかなる１以上の構成要素も、コードしてもよく、それは、発現されるときに、検出可能なシグナルを生成する。

【0099】

かかるレポーター配列の例は、β－ラクタマーゼ、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、膜結合タンパク質、たとえば、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８、およびインフルエンザ血球凝集素タンパク質を含むが、これに限定されるものではない。他のレポーターは、当業者に公知である。

【0100】

提供される方法または組成物のいずれか１つの別の例において、導入遺伝子は、ｔＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、トランススプライシング、ＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡなどの、ＲＮＡ生成物を、コードしてもよい。たとえば、特異的ＲＮＡ配列は、対象における標的核酸配列の発現を阻害するかまたは消すために、発生されることができる。
好適な標的配列は、たとえば、腫瘍標的およびウイルス疾患を含む。

【0101】

提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、導入遺伝子配列は、レポーター配列をコード化してもよく、それは、発現されるときに検出可能なシグナルを生成し、または、導入遺伝子配列は、疾患の動物モデルを作成するために使用されることができるタンパク質または機能性ＲＮＡを、コードしてもよい。提供される方法または組成物のいずれか１つの別の例において、導入遺伝子は、研究目的、例として、導入遺伝子を収容する体性トランスジェニック動物モデルを作成するために、例として、導入遺伝子生成物の機能を研究するために、使用されることが意図されるタンパク質または機能性ＲＮＡを、コードする提供される方法または組成物のいずれか１つの他の態様において、かかる発現産物の意図は、処置のためにある。導入遺伝子の他の使用は、当業者に明白である。

【0102】

導入遺伝子の配列はまた、発現制御配列を含んでもよい。発現制御配列は、プロモーター、エンハンサーおよびオペレーターを含み、一般に、発現コンストラクトが利用されるべき発現系に基づいて選択される。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、プロモーターおよびエンハンサー配列は、遺伝子発現を増加させる能力のために選択され、その一方で、オペレーター配列は、遺伝子発現を規制する能力のために選択されてもよい。典型的には、プロモーター配列は、所望された発現生成物をコードする核酸配列の上流（すなわち、５’）に位置され、そして、隣接する配列に作動可能に連結され、それによって、プロモーターなしで発現される量と比較して、発現される所望された生成物の量を、増加させる。エンハンサー配列、一般にプロモーター配列の上流に位置される、は、所望された生成物の発現を、さらに増加させることができる。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、エンハンサー配列（単数または複数）は、プロモーターの下流に、および／または導入遺伝子の範囲内に、位置されてもよい。導入遺伝子はまた、宿主細胞および／またはパッケージング中での相同組み換えを容易にする、および好ましくは促進する、配列を含んでもよい。導入遺伝子はまた、宿主細胞中での複製のために必要である配列を含んでもよい。

【0103】

例示の発現制御配列は、本明細書に提供されてもよいいずれか１つなどの、肝臓特異的プロモーター配列および構成的プロモーター配列を含む。他の組織特異的プロモーターは、数ある中で、眼球、網膜、中枢神経系、脊髄を、含む、。遍在するか雑多なプロモーターおよびエンハンサーの例は、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター／エンハンサー配列、ニワトリ肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター／エンハンサー配列、および様々な哺乳類の細胞タイプまたは合成要素において活性な他のウイルスのプロモーター／エンハンサー、または天然に存在しない合成要素（例として、Boshart et al, Cell, 41 :521-530 (1985)参照）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）プロモーター、細胞質β－アクチンプロモーター、および燐酸グリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含むが、これに限定されるものではない。

【0104】

オペレーターまたは調節可能な要素は、シグナルまたは刺激に応答し、それは、作動可能に連結された核酸の発現を、増減することができる。誘導可能な要素は、シグナルまたは刺激、例えば、ホルモン誘導性プロモーターに応答して、作動可能に連結された核酸の発現を増加させるものである。抑制可能な要素は、シグナルまたは刺激に応答して、作動可能に連結された核酸の発現を減少させるものである。典型的には、抑制可能および誘導可能な要素は、シグナルまたは刺激の量に比例して応答する。提供される方法または組成物のいずれか１つにおいて、導入遺伝子は、かかる配列を含んでもよい。
導入遺伝子は、コード配列の下流（すなわち、３’）に作動可能に連結された、好適なポリアデニル化配列を、含んでもよい。

【0105】

例えば、遺伝子治療のための、導入遺伝子を送達する方法は、当該技術分野において公知である（例として、Smith. Int. J. Med. Sci. 1(2): 76-91 (2004); Phillips. Methods in Enzymology: Gene Therapy Methods. Vol. 346. Academic Press (2002)参照）。本明細書に記載の導入遺伝子のいずれも、当該技術分野において公知である方法を使用して、本明細書に記載のウイルスベクターのいずれかの中に、組み込まれ、たとえば、米国特許第７，６２９，１５３号を参照。

【0106】

ウイルスベクター
ウイルスは、それらが感染する細胞内部で、それらのゲノムを運搬するために斬新で特殊な機構を有する；かかるウイルスに基づくウイルスベクターは、特殊な適用に細胞を変換するように手直しされることができる。本明細書において提供されるとおり用いることができるウイルスベクターの例は、当該分野において公知であるか、本明細書において記載される。好適なウイルスベクターとして、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に基づくベクター、アデノウイルスに基づくベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくベクター、およびＡＡＶ－アデノウイルスキメラベクターが挙げられる。

【0107】

本明細書において提供されるウイルスベクターは、レトロウイルスに基づくものであってもよい。レトロウイルスは、一本鎖陽方向鎖ＲＮＡウイルスである。レトロウイルスベクターは、ウイルス複製能力を失うように操作することができる。したがって、レトロウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏでの安定な遺伝子導入のために特に有用であると考えられる。レトロウイルスベクターの例は、例えば、米国公開番号２０１２０００９１６１、２００９０１１８２１２および２００９００１７５４３において見出すことができ、そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。

【0108】

レンチウイルスベクターは、本明細書において提供されるウイルスベクターの作製のために用いることができるレトロウイルスベクターの例である。レンチウイルスの例として、ＨＩＶ（ヒト）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）およびビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）が挙げられる。レンチウイルスベクターの例は、例えば、米国公開番号２０１５０２２４２０９、２０１５０２０３８７０、２０１４０３３５６０７、２０１４０２４８３０６、２００９０１４８９３６および２００８０２５４００８において見出すことができ、そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。

【0109】

単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に基づくウイルスベクターもまた、本明細書において提供される使用のために好適である。多くの複製欠損ＨＳＶベクターは、複製を防止するために、１以上の最初期（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ－ｅａｒｌｙ）遺伝子を取り除く欠失を含む。ＨＳＶに基づくベクターの記載については、例えば、米国特許第５，８３７，５３２号、同第５，８４６，７８２号、同第５，８４９，５７２号および同第５，８０４，４１３号、ならびに国際特許出願ＷＯ９１／０２７８８、ＷＯ９６／０４３９４、ＷＯ９８／１５６３７およびＷＯ９９／０６５８３を参照；そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法の記載は、その全体において参考として援用される。

【0110】

ウイルスベクターは、アデノウイルスに基づいていてもよい。ウイルスベクターの基礎となるアデノウイルスは、任意の起源、任意のサブグループ、任意のサブタイプ、サブタイプの混合物、または任意の血清型からのものであってよい。例えば、アデノウイルスは、サブグループＡ（例えば、血清型１２、１８および３１）、サブグループＢ（例えば、血清型３、７、１１、１４、１６、２１、３４、３５および５０）、サブグループＣ（例えば、血清型１、２、５および６）、サブグループＤ（例えば、血清型８、９、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２～３０、３２、３３、３６～３９および４２～４８）、サブグループＥ（例えば、血清型４）、サブグループＦ（例えば、血清型４０および４１）、未分類の血清群（例えば、血清型４９および５１）、または任意の他のアデノウイルス血清型のものであってよい。アデノウイルス血清型１～５１は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖａ．）から入手可能である。非Ｃ群アデノウイルス、および非ヒトアデノウイルスですら、複製欠損アデノウイルスベクターを調製するために用いることができる。非Ｃ群アデノウイルスベクター、非Ｃ群アデノウイルスベクターを作製する方法、および非Ｃ群アデノウイルスベクターを用いる方法は、例えば、米国特許第５，８０１，０３０号、同第５，８３７，５１１号および同第５，８４９，５６１号、ならびに国際特許出願ＷＯ９７／１２９８６およびＷＯ９８／５３０８７において開示される。任意のアデノウイルス、キメラアデノウイルスですら、アデノウイルスベクターのためのウイルスゲノムのソースとして用いることができる。例えば、ヒトアデノウイルスを、複製欠損アデノウイルスベクターのためのウイルスゲノムのソースとして用いることができる。アデノウイルスベクターのさらなる例は、米国公開番号２０１５００９３８３１、２０１４０２４８３０５、２０１２０２８３３１８、２０１００００８８８９、２００９０１７５８９７および２００９００８８３９８において見出すことができ、そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法の記載は、その全体において参考として援用される。

【0111】

本明細書において提供されるウイルスベクターはまた、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づいていてもよい。ＡＡＶベクターは、本明細書において記載されるもののような治療的適用における使用のために、特に関心を集めて来た。ＡＡＶベースのベクターの記載のために、たとえば、米国特許番号８，６７９，８３７、８，６３７，２５５、８，４０９，８４２、７，８０３，６２２、および７，７９０，４４９、および米国公開Ｎｏ．２０１５００６５５６２、２０１４０１５５４６９、２０１４００３７５８５、２０１３００９６１８２、２０１２０１００６０６、および２００７００３６７５７を参照。ＡＡＶベクターは、組み換えＡＡＶベクターであってよい。ＡＡＶベクターはまた、自己相補的（ｓｃ）ＡＡＶベクターであってよく、これは、例えば、米国特許公開２００７／０１１１０７２４および２００４／００２９１０６、ならびに米国特許第７，４６５，５８３号および同第７，１８６，６９９号において記載され、そのウイルスベクターおよび方法またはその作製は、その全体において本明細書に参照により組み込まれる。

【0112】

ウイルスベクターの基礎となるアデノ随伴ウイルスは、任意の血清型または血清型の混合物のものであってよい。ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０およびＡＡＶ１１を含む。例えば、ウイルスベクターが血清型の混合物に基づく場合、ウイルスベクターは、ＡＡＶ血清型の１つ（例えばＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１のいずれか１つから選択される）から取得されるカプシドシグナル配列、ならびに異なる血清型（例えばＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１のいずれか１つから選択される）からのパッケージング配列を含んでもよい。したがって、本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／８ベースのベクターである。本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つの他の態様において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／５ベースのベクターである。
提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターの基礎となるウイルスは、Ａｎｃ８０などの合成でもよい。

【0113】

提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターは、ＡＡＶ８／Ａｎｃ８０ベクターまたはＡＡＶ２／Ａｎｃ８０ベクターなどの、ＡＡＶ／Ａｎｃ８０ベクターである。

【0114】

ベクターの基礎となることができる他のウイルスは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈｌ０、ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８、およびそれらのバリアントを、含む。

【0115】

本明細書において提供されるウイルスベクターはまた、アルファウイルスに基づいていてもよい。アルファウイルスとして、シンドビス（およびＶＥＥＶ）ウイルス、アウラ（Ａｕｒａ）ウイルス、ババンキ（Ｂａｂａｎｋｉ）ウイルス、バーマフォレストウイルス、ベバル（Ｂｅｂａｒｕ）ウイルス、カバソウ（Ｃａｂａｓｓｏｕ）ウイルス、チクングニアウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エバーグレード（Ｅｖｅｒｇｌａｄｅｓ）ウイルス、フォートモーガン（Ｆｏｒｔ Ｍｏｒｇａｎ）ウイルス、ゲタウイルス、ハイランドＪ（Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ Ｊ）ウイルス、キジラガチ（Ｋｙｚｙｌａｇａｃｈ）ウイルス、マヤロウイルス、メトリ（Ｍｅ Ｔｒｉ）ウイルス、ミデルバーグ（Ｍｉｄｄｅｌｂｕｒｇ）ウイルス、モッソダスペドラス（Ｍｏｓｓｏ ｄａｓ Ｐｅｄｒａｓ）ウイルス、ムカンボウイルス、ヌドゥムウイルス、オニョンニョンウイルス、ピクスナウイルス、リオネグロウイルス、ロスリバーウイルス、サケ膵臓病ウイルス、セムリキ森林ウイルス、南部ゾウアザラシ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｅｌｅｐｈａｎｔ ｓｅａｌ）ウイルス、トナテ（Ｔｏｎａｔｅ）ウイルス、トロカラ（Ｔｒｏｃａｒａ）ウイルス、ウナウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、およびワタロアウイルスが挙げられる。アルファウイルスベクターの例は、米国公開Ｎｏ．２０１５００５０２４３、２００９０３０５３４４、および２００６０１７７８１９において見いだされることができ；そのベクターおよびその作成方法は、その全体においてに、本明細書に参照によって組み込まれる。
本明細書に提供されるウイルスベクターのいずれか１つは、本明細書に提供される方法のいずれか１つにおける使用のためであってもよい。

【0116】

免疫抑制剤
免疫抑制剤は、スタチンを含むが、これに限定されるものではない；ラパマイシンまたはラパマイシンアナログなどのｍＴＯＲ阻害剤；ＴＧＦ－βシグナル伝達剤；ＴＧＦ－β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤；副腎皮質ステロイド；ロテノンなどのミトコンドリアの機能の阻害剤；Ｐ３８阻害剤；ＮＦ－κβ阻害剤；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼ４阻害剤などのホスホジエステラーゼ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；キナーゼ阻害剤；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；糖質コルチコイド；レチノイド；サイトカイン阻害剤；サイトカイン受容体阻害剤；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；カルシニューリン阻害剤；ホスファターゼ阻害剤ならびに酸化ＡＴＰ。免疫抑制剤はまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡ、アリール炭化水素受容体阻害剤、レスベラトロール、アザチオプリン、６－メルカプトプリン、アスピリン、ニフルミン酸、エストリオール、トリポリド（ｔｒｉｐｏｌｉｄｅ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１０）、シクロスポリンＡ、サイトカインまたはサイトカイン受容体などを標的とするｓｉＲＮＡを含む。

【0117】

スタチンの例として、アトロバスチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、ＴＯＲＶＡＳＴ（登録商標））、セリバスタチン、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）、ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）ＸＬ）、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、ＡＬＴＯＣＯＲ（登録商標）、ＡＬＴＯＰＲＥＶ（登録商標））、メバスタチン（ＣＯＭＰＡＣＴＩＮ（登録商標））、ピタバスタチン（ＬＩＶＡＬＯ（登録商標）、ＰＩＡＶＡ（登録商標））、ロスバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）、ＳＥＬＥＫＴＩＮＥ（登録商標）、ＬＩＰＯＳＴＡＴ（登録商標））、ロスバスタチン（ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標））、およびシンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）、ＬＩＰＥＸ（登録商標））が挙げられる。

【0118】

ｍＴＯＲ阻害剤の例として、ラパマイシンおよびそのアナログ（例えば、ＣＣＬ－７７９、ＲＡＤ００１、ＡＰ２３５７３、Ｃ２０－メタリルラパマイシン（Ｃ２０－Ｍａｒａｐ）、Ｃ１６－（Ｓ）－ブチルスルホンアミドラパマイシン（Ｃ１６－ＢＳｒａｐ）、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン（Ｃ１６－ｉＲａｐ）（Bayle et al. Chemistry & Biology 2006、13:99-107）、ＡＺＤ８０５５、ＢＥＺ２３５（ＮＶＰ－ＢＥＺ２３５）、クリソファン酸（クリソファノール）、デフォロリムス（ＭＫ－８６６９）、エベロリムス（ＲＡＤ０００１）、ＫＵ－００６３７９４、ＰＩ－１０３、ＰＰ２４２、テムシロリムス、およびＷＹＥ－３５４（Ｓｅｌｌｅｃｋ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡから入手可能）が挙げられる。

【0119】

ＴＧＦ－βシグナル伝達剤の例として、ＴＧＦ－βリガンド（例えば、アクチビンＡ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１１、骨形態形成タンパク質、ｎｏｄａｌ、ＴＧＦ－β）およびそれらの受容体（例えば、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ１Ｃ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ）、Ｒ－ＳＭＡＤＳ／ｃｏ－ＳＭＡＤＳ（例えば、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ８）、ならびにリガンド阻害剤（例えば、フォリスタチン、ノギン、コーディン、ＤＡＮ、レフティー、ＬＴＢＰ１、ＴＨＢＳ１、デコリン）が挙げられる。

【0120】

ミトコンドリアの機能の阻害剤の例として、アトラクチロシド（二カリウム塩）、ボンクレキン酸（三アンモニウム塩）、カルボニルシアニドｍ－クロロフェニルヒドラゾン、カルボキシアトラクチロシド（例えばＡｔｒａｃｔｙｌｉｓ ｇｕｍｍｉｆｅｒａ由来のもの）、ＣＧＰ－３７１５７、（－）－デグエリン（例えばＭｕｎｄｕｌｅａ ｓｅｒｉｃｅａ由来のもの）、Ｆ１６、ヘキソキナーゼＩＩ ＶＤＡＣ結合ドメインペプチド、オリゴマイシン、ロテノン、Ｒｕ３６０、ＳＦＫ１、およびバリノマイシン（例えばＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｌｖｉｓｓｉｍｕｓ由来のもの）（ＥＭＤ４Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）が挙げられる。

【0121】

Ｐ３８阻害剤の例として、ＳＢ－２０３５８０（４－（４－フルオロフェニル）－２－（４－メチルスルフィニルフェニル）－５－（４－ピリジル）１Ｈ－イミダゾール）、ＳＢ－２３９０６３（トランス－１－（４ヒドロキシシクロヘキシル）－４－（フルオロフェニル）－５－（２－メトキシ－ピリミジン－４－イル）イミダゾール）、ＳＢ－２２００２５（５－（２アミノ－４－ピリミジニル）－４－（４－フルオロフェニル）－１－（４－ピペリジニル）イミダゾール））、およびＡＲＲＹ－７９７が挙げられる。

【0122】

ＮＦ（例えば、ＮＫ－κβ）阻害剤の例として、ＩＦＲＤ１、２－（１，８－ナフチリジン－２－イル）－フェノール、５－アミノサリチル酸、ＢＡＹ１１－７０８２、ＢＡＹ１１－７０８５、ＣＡＰＥ（コーヒー酸フェニルエステル）、マレイン酸ジエチル、ＩＫＫ－２阻害剤ＩＶ、ＩＭＤ０３５４、ラクタシスチン、ＭＧ－１３２［Ｚ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－ＣＨＯ］、ＮＦκＢ活性化阻害剤ＩＩＩ、ＮＦ－κＢ活性化阻害剤ＩＩ、ＪＳＨ－２３、パルテノライド、フェニルアルシンオキシド（ＰＡＯ）、ＰＰＭ－１８、ピロリジンジチオカルバミン酸アンモニウム塩、ＱＮＺ、ＲＯ１０６－９９２０、ロカグラミド、ロカグラミドＡＬ、ロカグラミドＣ、ロカグラミドＩ、ロカグラミドＪ、ロカグラオール、（Ｒ）－ＭＧ－１３２、サリチル酸ナトリウム、トリプトライド（ＰＧ４９０）、およびウェデロラクトンが挙げられる。
アデノシン受容体アゴニストの例として、ＣＧＳ－２１６８０およびＡＴＬ－１４６ｅが挙げられる。
プロスタグランジンＥ２アゴニストの例として、Ｅ－プロスタノイド２およびＥ－プロスタノイド４が挙げられる。

【0123】

ホスホジエステラーゼ阻害剤（非選択的および選択的阻害剤）の例として、カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ（３－イソブチル－１－メチルキサンチン）、パラキサンチン、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリン、メチル化キサンチン、ビンポセチン、ＥＨＮＡ（エリスロ－９－（２－ヒドロキシ－３－ノニル）アデニン）、アナグレリド、エノキシモン（ＰＥＲＦＡＮ（商標））、ミルリノン、レボシメンダン、メセンブリン、イブジラスト、ピクラミラスト、ルテオリン、ドロタベリン、ロフルミラスト（ＤＡＸＡＳ（商標）、ＤＡＬＩＲＥＳＰ（商標））、シルデナフィル（ＲＥＶＡＴＩＯＮ（登録商標）、ＶＩＡＧＲＡ（登録商標））、タダラフィル（ＡＤＣＩＲＣＡ（登録商標）、ＣＩＡＬＩＳ（登録商標））、バルデナフィル（ＬＥＶＩＴＲＡ（登録商標）、ＳＴＡＸＹＮ（登録商標））、ウデナフィル、アバナフィル、イカリイン、４－メチルピペラジンおよびピラゾロピリミジン－７－１が挙げられる。
プロテアソーム阻害剤の例として、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテキン－３－ガラートおよびサリノスポラミドＡが挙げられる。

【0124】

キナーゼ阻害剤の例として、ベバシズマブ、ＢＩＢＷ２９９２、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、Ｅ７０８０、パゾパニブおよびムブリチニブが挙げられる。

【0125】

糖質コルチコイドの例として、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、酢酸コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン（ＤＯＣＡ）およびアルドステロンが挙げられる。

【0126】

レチノイドの例として、レチノール、レチナール、トレチノイン（レチノイン酸、ＲＥＴＩＮ－Ａ（登録商標））、イソトレチノイン（ＡＣＣＵＴＡＮＥ（登録商標）、ＡＭＮＥＳＴＥＥＭ（登録商標）、ＣＬＡＲＡＶＩＳ（登録商標）、ＳＯＴＲＥＴ（登録商標））、アリトレチノイン（ＰＡＮＲＥＴＩＮ（登録商標））、エトレチナート（ＴＥＧＩＳＯＮ（商標））およびその代謝物であるアシトレチン（ＳＯＲＩＡＴＡＮＥ（登録商標））、タザロテン（ＴＡＺＯＲＡＣ（登録商標）、ＡＶＡＧＥ（登録商標）、ＺＯＲＡＣ（登録商標））、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））およびアダパレン（ＤＩＦＦＥＲＩＮ（登録商標））が挙げられる。

【0127】

サイトカイン阻害剤の例として、ＩＬ１ｒａ、ＩＬ１受容体アンタゴニスト、ＩＧＦＢＰ、ＴＮＦ－ＢＦ、ウロモジュリン、アルファ－２－マクログロブリン、シクロスポリンＡ、ペンタミジンおよびペントキシフィリン（ＰＥＮＴＯＰＡＫ（登録商標）、ＰＥＮＴＯＸＩＬ（登録商標）、ＴＲＥＮＴＡＬ（登録商標））が挙げられる。

【0128】

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニストの例として、ＧＷ９６６２、ＰＰＡＲγアンタゴニストＩＩＩ、Ｇ３３５およびＴ００７０９０７（ＥＭＤ４Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）が挙げられる。

【0129】

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニストの例として、ピオグリタゾン、シグリタゾン、クロフィブラート、ＧＷ１９２９、ＧＷ７６４７、Ｌ－１６５，０４１、ＬＹ１７１８８３、ＰＰＡＲγアクチベーター、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ、トログリタゾンおよびＷＹ－１４６４３（ＥＭＤ４ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）が挙げられる。

【0130】

ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例として、トリコスタチンＡ、環状テトラペプチド（トラポキシンＢなど）およびデプシペプチドなどのヒドロキサム酸（またはヒドロキサマート）、ベンズアミド、求電子性ケトン、酪酸フェニルおよびバルプロ酸などの脂肪族酸性化合物、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＬＡＱ８２４およびパノビノスタット（ＬＢＨ５８９）などのヒドロキサム酸、エンチノスタット（ＭＳ－２７５）、ＣＩ９９４およびモセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）などのベンズアミド、ニコチンアミド、ＮＡＤの誘導体、ジヒドロクマリン、ナフトピラノン、ならびに２－ヒドロキシナフアルデヒドが挙げられる。
カルシニューリン阻害剤の例として、シクロスポリン、ピメクロリムス、ボクロスポリンおよびタクロリムスが挙げられる。

【0131】

ホスファターゼ阻害剤の例として、ＢＮ８２００２塩酸塩、ＣＰ－９１１４９、カリクリンＡ、カンタリジン酸、カンタリジン、シペルメトリン、エチル－３，４－デホスタチン、フォストリエシンナトリウム塩、ＭＡＺ５１、メチル－３，４－デホスタチン、ＮＳＣ ９５３９７、ノルカンタリジン（ｎｏｒｃａｎｔｈａｒｉｄｉｎ）、Ｐｒｏｒｏｃｅｎｔｒｕｍ ｃｏｎｃａｖｕｍ由来のオカダ酸アンモニウム塩、オカダ酸、オカダ酸カリウム塩、オカダ酸ナトリウム塩、フェニルアルシンオキシド、多様なホスファターゼ阻害剤カクテル、タンパク質ホスファターゼ１Ｃ、タンパク質ホスファターゼ２Ａ阻害剤タンパク質、タンパク質ホスファターゼ２Ａ１、タンパク質ホスファターゼ２Ａ２、およびオルトバナジン酸ナトリウムが挙げられる。

【0132】

合成ナノキャリア
本明細書に提供される方法は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与を、含む。一般に、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアの構造を構成する材料に加える要素である。たとえば、提供される方法または組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアが、１以上のポリマーのから構成される所で、免疫抑制剤は、１以上のポリマーに付属した、追加の、提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様における化合物である。合成ナノキャリアの材料も免疫寛容原性効果に結果としてなる実施態様において、免疫抑制剤は、免疫寛容原性効果に結果としてなる合成ナノキャリアの材料に加えて存在する要素である。

【0133】

多種多様な合成ナノキャリアは、本発明に従って使用されることができる。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、球体または球状体である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、扁平または平板状である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、立方体または立方である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、卵円または楕円である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、円柱、円錐または錐体である。

【0134】

いくつかの態様において、各々の合成ナノキャリアが類似の特性を有するように、サイズまたは形状に関して比較的均一である合成ナノキャリアの集団の使用が望ましい。例えば、提供される組成物または方法のいずれか１つの合成ナノキャリアの、合成ナノキャリアの合計数に基づいて、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、合成ナノキャリアの平均直径または平均寸法の５％、１０％、または２０％以内に該当する最小寸法または最大寸法を有していてもよい。

【0135】

合成ナノキャリアは、中実であっても中空であってもよく、１以上の層を含んでもよい。いくつかの態様において、各層は、他の層（単数または複数）と比較してユニークな組成およびユニークな特性を有する。一例のみを挙げると、合成ナノキャリアは、コア／シェル構造を有していてもよく、ここで、コアは１つの層であり（例えばポリマーのコア）、シェルは第２の層である（例えば脂質二重層または単層）。合成ナノキャリアは、複数の異なる層を含んでもよい。

【0136】

いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上の脂質を任意に含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、リポソームを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質二重層を含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質単層を含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、ミセルを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）に囲まれたポリマーマトリックスを含むコアを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）に囲まれた非ポリマー性のコア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子、タンパク質、核酸、炭水化物など）を含んでもよい。

【0137】

他の態様において、合成ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子などを含んでもよい。いくつかの態様において、非ポリマー性合成ナノキャリアは、金属原子（例えばとして金原子）の凝集物などの、非ポリマー性成分の凝集物である。

【0138】

いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上の両親媒体を任意に含んでもよい。いくつかの態様において、両親媒体は、増大した安定性、改善した均一性または増大した粘性により、合成ナノキャリアの製造を促進することができる。いくつかの態様において、両親媒体は、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）の内部表面に関連していてもよい。当該分野において公知の多くの両親媒体が、本発明による合成ナノキャリアを作製するために好適である。かかる両親媒性の実体は、ホスホグリセリドを含むが、これに限定されない；ホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；ジオレイルオキシプロピルトリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；ジオレオイルホスファチジルコリン；コレステロール；コレステロールエステル；ジアシルグリセロール；コハク酸ジアシルグリセロール；ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサンデカノール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの脂肪アルコール；ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル；パルミチン酸またはオレイン酸などの界面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸モノグリセリド；脂肪酸ジグリセリド；脂肪酸アミド；ソルビタントリオレアート（Ｓｐａｎ（登録商標）８５）グリココーレート；ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ（登録商標）２０）；ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）；ポリソルベート６０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）；ポリソルベート６５（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６５）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）；ポリソルベート８５（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８５）；ポリオキシエチレンモノステアレート；サーファクチン；

【0139】

ポロキサマー；ソルビタントリオレアートなどのソルビタン脂肪酸エステル；レシチン；リゾレシチン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリン；ホスファチジルエタノールアミン（セファリン）；カルジオリピン；ホスファチジン酸；セレブロシド；リン酸ジセチル；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール；ステアリルアミン；ドデシルアミン；ヘキサデシルアミン；パルミチン酸アセチル；グリセロールリシノレート；ヘキサデシルステアレート；ミリスチン酸イソプロピル；チロキサポール；ポリ（エチレングリコール）５０００－ホスファチジルエタノールアミン；ポリ（エチレングリコール）４００－モノステアレート；リン脂質；高い界面活性剤特性を有する合成および／または天然の洗剤；デオキシコラート；シクロデキストリン；カオトロピックな塩；イオン対化剤（ｉｏｎ ｐａｉｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）；およびこれらの組み合わせ。両親媒体成分は、異なる両親媒体の混合物であってもよい。当業者は、これは例示的な界面活性剤効果を有する物質のリストであって、包括的なものではないことを理解するであろう。本発明により用いられるべき合成ナノキャリアの製造において、任意の両親媒体を用いることができる。

【0140】

いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上の炭水化物を任意に含んでもよい。炭水化物は、天然であっても合成であってもよい。炭水化物は、誘導体化された天然の炭水化物であってもよい。ある態様において、炭水化物は、単糖または二糖を含み、これは、限定されないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セロビオース、マンノース、キシロース、アラビノース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミンおよびノイラミン酸を含む。ある態様において、炭水化物は多糖であり、これは、限定されないが、プルラン、セルロース、微晶質セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシセルロース（ＨＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギーナン、グリコン（ｇｌｙｃｏｎ）、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ－カルボキシルメチルキトサン、アルギン酸およびアルギニン酸、デンプン、キチン、イヌリン、コンニャク、グルコマンナン、プスツラン（ｐｕｓｔｕｌａｎ）、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードランおよびキサンタンを含む。

【0141】

態様において、合成ナノキャリアは、多糖などの炭水化物を含まない（または特に除外する）。ある態様において、炭水化物は、糖アルコールなどの炭水化物誘導体を含んでもよく、これは、限定されないが、マンニトール、ソルビトールキシリトール、エリスリトール、マルチトールおよびラクチトールを含む。

【0142】

いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上のポリマーを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである１以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）は、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全てが、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、非メトキシ末端のポリマーである１以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）は、非メトキシ末端のポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、非メトキシ末端のポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、プルロニックポリマーを含まない１以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）は、は、プルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、プルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、かかるポリマーは、コーティング層（例えば、リポソーム、脂質単層、ミセルなど）により囲まれていてもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアの要素は、ポリマーに接着していてもよい。

【0143】

免疫抑制剤は、多数の方法のうちのいずれかにより合成ナノキャリアにカップリングすることができる。一般に、接着は、免疫抑制剤と合成ナノキャリアとの間の接着の結果である。この結合により、免疫抑制剤の合成ナノキャリアの表面への接着、および／または合成ナノキャリア中での包含（封入）をもたらすことができる。いくつかの態様において、しかし、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアへの結合よりもむしろ合成ナノキャリアの構造の結果として、合成ナノキャリアにより封入される。好ましい態様において、合成ナノキャリアは、本明細書において提供されるポリマーを含み、免疫抑制剤はポリマーに接着している。

【0144】

接着が、免疫抑制剤と合成ナノキャリアとの間の結合の結果として生じる場合、接着は、カップリング部分を介して生じてもよい。カップリング部分は、それを通して免疫抑制剤が合成ナノキャリアに結合する任意の部分であってよい。かかる部分は、アミド結合またはエステル結合などの共有結合、ならびに免疫抑制剤を合成ナノキャリアに（共有的または非共有的に）結合する別の分子を含む。かかる分子は、リンカーまたはポリマーまたはその単位を含む。例えば、カップリング部分は、免疫抑制剤が静電気的に結合する荷電したポリマーを含んでもよい。別の例として、カップリング部分は、それが共有結合しているポリマーまたはその単位を含んでもよい。

【0145】

好ましい態様において、合成ナノキャリアは、本明細書において提供されるポリマーを含む。これらの合成ナノキャリアは、完全にポリマー性のものであっても、ポリマーと他の材料との混合物であってもよい。

【0146】

いくつかの態様において、合成ナノキャリアのポリマーは、会合してポリマーマトリックスを形成する。これらの態様のいくつかにおいて、免疫抑制剤などの成分は、ポリマーマトリックスの１以上のポリマーと共有的に会合することができる。いくつかの態様において、共有的会合は、リンカーにより媒介される。いくつかの態様において、成分は、ポリマーマトリックスの１以上のポリマーに、非共有的に会合していてもよい。例えば、いくつかの態様において、成分は、ポリマーマトリックス中に封入されていても、ポリマーマトリックスにより囲まれていても、および／またはポリマーマトリックス全体に分散していてもよい。あるいはまたは加えて、成分は、疎水性相互作用、電荷相互作用、ファン・デル・ワールス力などにより、ポリマーマトリックスの１以上のポリマーに会合することができる。それらからポリマーマトリックスを形成するための広範なポリマーおよび方法が、慣習的に知られている。

【0147】

ポリマーは、天然または非天然の（合成の）ポリマーであってよい。ポリマーは、ホモポリマーであっても、２以上のモノマーを含むコポリマーであってよい。配列に関して、コポリマーは、ランダムであっても、ブロックであっても、またはランダムおよびブロック配列の組み合わせを含んでもよい。典型的には、本発明によるポリマーは、有機ポリマーである。

【0148】

いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアミドまたはポリエーテル、またはこれらの単位を含む。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）コポリマー、またはポリカプロラクトン、またはこれらの単位を含む。いくつかの態様において、ポリマーは、生分解性であることが好ましい。したがって、これらの態様において、ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位などのポリエーテルを含む場合、ポリマーが生分解性となるように、ポリマーが、ポリエーテルのブロックコポリマーおよび生分解性ポリマーを含むことが好ましい。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはその単位などのポリエーテルまたはその単位を単独では含まない。

【0149】

本発明における使用のために好適なポリマーの他の例として、限定されないが、ポリエチレン、ポリカーボネート（例えばポリ（１，３－ジオキサン－２オン））、ポリ酸無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））、フマル酸ポリプロピル、ポリアミド（例えばポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコリド、ポリラクチド－グリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酸（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄ）（例えばポリ（β－ヒドロキシアルカノアート）））、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリウレア、ポリスチレンおよびポリアミン、ポリリジン、ポリリジン－ＰＥＧコポリマー、およびポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）－ＰＥＧコポリマーが挙げられる。

【0150】

いくつかの態様において、本発明に従うポリマーは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１７７．２６００下においてヒトにおける使用について承認されているポリマーを含み、これは、限定されないが、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）コポリマー、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３－ジオキサン－２オン））；ポリ酸無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））；ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）；ポリウレタン；ポリメタクリラート；ポリアクリラート；およびポリシアノアクリラートを含む。

【0151】

いくつかの態様において、ポリマーは、親水性であってよい。例えば、ポリマーは、アニオン基（例えば、リン酸基、硫酸基、カルボン酸基）；カチオン基（例えば、四級アミン基）；または極性基（例えば、ヒドロキシル基、チオール基、アミン基）を含んでもよい。いくつかの態様において、親水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア中に親水性環境を生じる。いくつかの態様において、ポリマーは、疎水性であってもよい。いくつかの態様において、疎水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア中に疎水性環境を生じる。ポリマーの親水性または疎水性の選択は、合成ナノキャリア中に組み込まれる材料の性質に対して影響を有し得る。

【0152】

いくつかの態様において、ポリマーは、１以上の部分および／または官能基により修飾されていてもよい。いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）により、炭水化物により、および／または多糖から誘導される非環式ポリアセタールにより修飾することができる（Papisov, 2001, ACS Symposium Series, 786:301）。ある態様は、Grefらに対する米国特許第５５４３１５８号またはVon AndrianらによるＷＯ公開ＷＯ２００９／０５１８３７の一般的教示を用いて行ってもよい。

【0153】

いくつかの態様において、脂肪酸群は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、またはリグノセリン酸の１以上であってもよい。いくつかの態様において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ－リノール酸、ガンマ－リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルカ酸の１以上であってよい。

【0154】

いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエステルであってよく、これは、乳酸およびグリコール酸の単位を含むコポリマー、例えばポリ（乳酸－コ－グリコール酸）およびポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（本明細書において集合的に「ＰＬＧＡ」として言及される）；ならびにグリコール酸単位を含むホモポリマー（本明細書において「ＰＧＡ」として言及される）、ならびにポリ－Ｌ－乳酸、ポリ－Ｄ－乳酸、ポリ－Ｄ，Ｌ－乳酸、ポリ－Ｌ－ラクチド、ポリ－Ｄ－ラクチド、およびポリ－Ｄ，Ｌ－ラクチド乳酸単位を含むホモポリマー（本明細書において集合的に「ＰＬＡ」として言及される）を含む。いくつかの態様において、例示的なポリエステルとして、例えば、ポリヒドロキシ酸；ＰＥＧコポリマーおよびラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ＰＬＡ－ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ－ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ－ＰＥＧコポリマー）およびそれらの誘導体が挙げられる。いくつかの態様において、ポリエステルとして、例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）－ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－Ｌ－リジン）コポリマー、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、ポリ［α－（４－アミノブチル）－Ｌ－グリコール酸］およびそれらの誘導体が挙げられる。

【0155】

いくつかの態様において、ポリマーは、ＰＬＧＡであってよい。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、ＰＬＧＡの多様な形態は、乳酸：グリコール酸の比により特徴づけられる。乳酸は、Ｌ－乳酸、Ｄ－乳酸またはＤ，Ｌ－乳酸であってよい。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸：グリコール酸比を変更することにより調節することができる。いくつかの態様において、本発明により用いられるべきＰＬＧＡは、約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５または約１５：８５の乳酸：グリコール酸の比により特徴づけられる。

【0156】

いくつかの態様において、ポリマーは、１以上のアクリル酸ポリマーであってよい。態様において、アクリル酸ポリマーとして、例えば、アクリル酸とメタクリル酸とのコポリマー、メチルメタクリラートコポリマー、エトキシエチルメタクリラート、シアノエチルメタクリラート、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（メタクリル酸無水物）、メチルメタクリラート、ポリメタクリラート、ポリ（メチルメタクリラート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、グリシジルメタクリラートコポリマー、ポリシアノアクリラート、および前述のポリマーの１以上を含む組み合わせが挙げられる。アクリル酸ポリマーは、低い含有量の四級アンモニウム基と共に、アクリル酸とメタクリル酸エステルとの完全に重合したコポリマーを含んでもよい。

【0157】

いくつかの態様において、ポリマーは、カチオン性ポリマーであってよい。一般的に、カチオン性ポリマーは、核酸の負に荷電した鎖を縮合および／または保護することができる。

【0158】

ポリ（リジン）などのアミン含有ポリマー（Zauner et al., 1998, Adv. Drug Del. Rev., 30:97；およびKabanov et al., 1995, Bioconjugate Chem., 6:7）、ポリ（エチレンイミン）（PEI; Boussif et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1995, 92:7297）、およびポリ（アミドアミン）デンドリマー（Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:4897;Tang et al., 1996, Bioconjugate Chem., 7:703;およびHaensler et al., 1993, Bioconjugate Chem., 4:372）は、生理学的ｐＨにおいて正に荷電しており、核酸とイオン対を形成する。態様において、合成ナノキャリアは、カチオン性ポリマーを含まなくともよい（またはこれを除外してもよい）。

【0159】

いくつかの態様において、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解性ポリエステルであってもよい（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658;Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115:11010;Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250;Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633;およびZhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）。これらのポリエステルの例として、ポリ（Ｌ－ラクチド－Ｌ－リジン）コポリマー（Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115:11010）、ポリ（セリンエステル）（Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658;およびLim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）、ならびにポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; and Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）が挙げられる。

【0160】

これらおよび他のポリマーの特性およびそれらを調製する方法は、当該技術分野において周知である（たとえば、米国特許第６，１２３，７２７号；５，８０４，１７８号；５，７７０，４１７号；５，７３６，３７２号；５，７１６，４０４号；６，０９５，１４８号；５，８３７，７５２号；５，９０２，５９９号；５，６９６，１７５号；５，５１４，３７８号；５，５１２，６００号；５，３９９，６６５号；５，０１９，３７９号；５，０１０，１６７号；４，８０６，６２１号；４，６３８，０４５号；および４，９４６，９２９号；Wang et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:9480; Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:2460; Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94; Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7; および Uhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181参照）。より一般的には、特定の好適なポリマーを合成するための多様な方法は、Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts、Goethals編、Pergamon Press, 1980; OdianによるPrinciples of Polymerization、John Wiley & Sons、第４版、2004;AllcockらによるContemporary Polymer Chemistry、Prentice-Hall、1981;Deming et al., 1997, Nature, 390:386において；および米国特許第６，５０６，５７７号、同第６，６３２，９２２号、同第６，６８６，４４６号および同第６，８１８，７３２号において記載される。

【0161】

いくつかの態様において、ポリマーは、直鎖状または分枝状ポリマーであってよい。いくつかの態様において、ポリマーは、デンドリマーであってよい。いくつかの態様において、ポリマーは、互いに実質的に架橋されていてもよい。いくつかの態様において、ポリマーは、実質的に架橋を含まなくてもよい。いくつかの態様において、ポリマーは、架橋するステップを経ることなく用いることができる。さらに、合成ナノキャリアは、前述のおよび他のポリマーのいずれかのブロックコポリマー、グラフトコポリマー、ブレンド、混合物および／または付加物を含んでもよいことが、理解されるべきである。当業者は、本明細書において列記されるポリマーは、本発明による使用のものである例示的なポリマーのリストを代表するが、包括的なものではないことを認識するであろう。

【0162】

いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、ポリマー成分を含まない。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子などを含んでもよい。いくつかの態様において、非ポリマー性合成ナノキャリアは、金属原子（例えばとして金原子）の凝集物などの、非ポリマー性成分の凝集物である。

【0163】

本発明による組成物は、保存剤、バッファー、食塩水またはリン酸緩衝化食塩水などの薬学的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な投与形態を達成するために、慣用的な医薬の製造および配合技術を用いて製造することができる。一態様において、組成物は、注射のために、無菌の食塩水溶液中で保存剤と一緒に懸濁される。

【0164】

Ｄ．組成物を使用および作製する方法
ウイルスベクターは、当業者に公知の、またはさもなければ、本明細書において記載される方法により作製することができる。例えば、ウイルスベクターは、例えば、米国特許第４，７９７，３６８号およびLaughlin et al., Gene, 23, 65-73(1983)において記載される方法を用いて構築および／または精製することができる。

【0165】

例として、複製欠損アデノウイルスベクターは、複製欠損アデノウイルスベクターにおいては存在しないが、ウイルスの伝播のために必要とされる遺伝子の機能を提供する補完細胞株において、高力価のウイルスベクターストックをもたらすために適切なレベルにおいて、作製することができる。補完細胞株は、全てのアデノウイルス機能を含む、ｅａｒｌｙ領域、ｌａｔｅ領域、ウイルスパッケージング領域、ウイルス関連ＲＮＡ領域、またはそれらの組み合わせによりコードされる、少なくとも１つの複製必須遺伝子の機能の欠損を補完することができる（例えば、アデノウイルスアンプリコンの伝播を可能にするために）。補完細胞株の構築は、Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual、第2版、Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、N.Y.(1989年)、およびAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology、Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons、New York、N.Y.(1994年)により記載されるような標準的な分子生物学および細胞培養技術を伴う。

【0166】

アデノウイルスベクターを作製するための補完細胞株は、これらに限定されないが、ＨＥＫ２９３細胞（例としてGraham et al., J. Gen. Virol., 36, 59-72 (1977)において記載される）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞（例として国際特許出願ＷＯ９７／００３２６、ならびに米国特許第５，９９４，１２８号および同第６，０３３，９０８号において記載される）、ならびに２９３－ＯＲＦ６細胞（例として国際特許出願ＷＯ９５／３４６７１およびBrough et al., J. Virol., 71, 9206-9213 (1997)において記載される）を含む。いくつかの例において、補完細胞は、全ての必要とされるアデノウイルス遺伝子機能を補完しない。ヘルパーウイルスは、アデノウイルスベクターの複製を可能にするために、細胞またはアデノウイルスのゲノムによりコードされていない遺伝子機能を、トランスに提供するために使用することができる。アデノウイルスベクターは、例えば、米国特許第５，９６５，３５８号、同第５，９９４，１２８号、同第６，０３３，９０８号、同第６，１６８，９４１号、同第６，３２９，２００号、同第６，３８３，７９５号、同第６，４４０，７２８号、同第６，４４７，９９５号および同第６，４７５，７５７号、米国特許出願公開番号２００２／００３４７３５Ａ１、ならびに国際特許出願ＷＯ９８／５３０８７、ＷＯ９８／５６９３７、ＷＯ９９／１５６８６、ＷＯ９９／５４４４１、ＷＯ００／１２７６５、ＷＯ０１／７７３０４およびＷＯ０２／２９３８８、ならびに本明細書において同定される他の参考文献において記載される材料および方法を用いて、構築するか、伝播させるか、および／または精製することができる。アデノウイルス血清型３５ベクターを含む非Ｃ群アデノウイルスベクターは、例えば、米国特許第５，８３７，５１１号および同第５，８４９，５６１号、ならびに国際特許出願ＷＯ９７／１２９８６およびＷＯ９８／５３０８７において記載される方法を用いて作製することができる。ＡＡＶベクターなどのウイルスベクターは、組み換え方法を使用して、生成されてもよい。たとえば、方法は、ＡＡＶカプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸配列；機能的ｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ末端逆位反復配列（ＩＴＲ）および導入遺伝子からなる組み換えＡＡＶベクター；ならびに組み換えＡＡＶベクターのＡＡＶカプシドタンパク質中へのパッケージングを可能にするために十分なヘルパー機能を含む宿主細胞を培養することを含む。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、以下からなる群から選択されるＡＡＶ血清型の反転末端反復（ＩＴＲ）を含んでもよい：ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびそれらのバリアント。

【0167】

ウイルスベクターをカプシド中にパッケージングするために宿主細胞において培養されるべき成分を、宿主細胞にトランスに提供してもよい。あるいは、必要とされる成分のいずれか１つまたは２つ以上（例えば、組み換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列および／またはヘルパー機能）を、当業者に公知の方法を用いて、必要とされる成分のいずれか１つまたは２つ以上を含むように操作された安定な宿主細胞により、提供してもよい。最も好適には、かかる安定な宿主細胞は、誘導性プロモーターの制御下において、必要とされる成分を含むことができる。しかし、必要とされる成分は、構成的プロモーターの制御下にあってもよい。本ウイルスのベクターを作製するために必要とされる組み換えウイルスベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、およびヘルパー機能は、任意の適切な遺伝子エレメントを用いてパッケージング宿主細胞に送達することができる。選択される遺伝子エレメントは、本明細書において記載されるものを含む任意の好適な方法により送達することができる。他の方法は、核酸操作における当業者に公知であり、遺伝子工学、組み換え工学、および合成技法を含む。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、N.Y.を参照。同様に、ｒＡＡＶウイルス粒子を作製する方法は、周知であり、好適な方法の選択は、本発明に対する限定ではない。例えば、K. Fisher et al, J. Virol., 70:520-532(1993)および米国特許第５，４７８，７４５号を参照。

【0168】

いくつかの態様において、組み換えＡＡＶ導入ベクターは、三重トランスフェクション方法を使用して生成されてもよい（例として、米国特許第６，００１，６５０号、米国特許第６，５９３，１２３号、ならびにs X. Xiao et al, J. Virol. 72:2224-2232 (1998)、およびT. Matsushita et al, Gene Ther. 5(7): 938-945 (1998)において詳細に記載され、三重トランスフェクション方法に関するその内容が、参照により本明細書に組み込まれる）。たとえば、組み換えＡＡＶは、宿主細胞を、ＡＡＶ粒子中にパッケージングされるべき組み換えＡＡＶベクター（導入遺伝子を含む）、ＡＡＶヘルパー機能ベクター、および補助機能ベクターでトランスフェクションすることにより作製されることができる。一般に、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、増殖性ＡＡＶの複製およびカプシド形成のためにトランスで機能する、ＡＡＶヘルパー機能配列（ｒｅｐおよびｃａｐ）をコードする。好ましくは、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、任意の検出可能な野生型ＡＡＶウイルス粒子（すなわち、機能的なｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子を含むＡＡＶウイルス粒子）を作製することなく、効率的なＡＡＶベクター作製を支持する。補助機能ベクターは、ＡＡＶが複製のために依存する、非ＡＡＶ由来のウイルスおよび／または細胞の機能のためのヌクレオチド配列をコードしていてもよい。補助機能は、ＡＡＶ複製のために必要とされる機能を含み、これは、限定することなく、ＡＡＶ遺伝子転写、ステージ特異的なＡＡＶのｍＲＮＡのスプライシング、ＡＡＶのＤＮＡの複製、ｃａｐ発現産物の合成、およびＡＡＶカプシドアセンブリーの活性化に関与する部分を含む。ウイルスに基づく補助機能は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス１型以外のもの）、およびワクシニアウイルスなどの既知のヘルパーウイルスのいずれかに由来してよい。
ウイルスベクターを生成するための他の方法は、当該技術分野において公知である。さらに、ウイルスベクターは市販されている。
免疫抑制剤に連結される合成ナノキャリアに関して、構成要素を合成ナノキャリアに付着させるための方法は、有用でもよい。

【0169】

態様において、たとえば、構成要素を合成ナノキャリアに付着させるための方法は、有用でもよい。ある態様において、接着は、共有的リンカーであってよい。態様において、本発明による免疫抑制剤は、外側表面に、アルキン基を含む免疫抑制剤とのアジド基の１，３－双極性環化付加反応により、またはアジド基を含む免疫抑制剤とのアルキンの１，３－双極性環化付加反応により形成された、１，２，３－トリアゾールリンカーを介して、共有的に接着していてもよい。かかる環化付加反応は、好ましくは、好適なＣｕ（Ｉ）－リガンドおよびＣｕ（ＩＩ）化合物を触媒活性Ｃｕ（Ｉ）化合物に還元するための還元剤と共に、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下において行う。このＣｕ（Ｉ）により触媒されたアジド－アルキン環化付加（ＣｕＡＡＣ）はまた、クリック反応としても言及される。

【0170】

加えて、共有的カップリングは、共有的リンカーを含んでもよく、これは、アミドリンカー、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、ヒドラゾンリンカー、ヒドラジドリンカー、イミンまたはオキシムリンカー、ウレアまたはチオウレアリンカー、アミジンリンカー、アミンリンカー、およびスルホンアミドリンカーを含む。

【0171】

アミドリンカーは、免疫抑制剤などの１つの成分上のアミンと、ナノキャリアなどの第２の成分のカルボン酸基との間のアミド結合を介して形成される。リンカー中のアミド結合は、Ｎ－ヒドロキシサクシニミドにより活性化されたエステルなどの好適に保護されたアミノ酸との慣用的なアミド結合形成反応のいずれかを用いて生成することができる。

【0172】

ジスルフィドリンカーは、例えばＲ１－Ｓ－Ｓ－Ｒ２の形態の２つの硫黄原子の間のジスルフィド（Ｓ－Ｓ）結合の形成を介して、生成することができる。ジスルフィド結合は、チオール／メルカプタン基（－ＳＨ）を含む成分の、別の活性化されたチオール基との、またはチオール／メルカプタン基を含む成分の、活性化されたチオール基を含む成分とのチオール交換により、形成させることができる。

【0173】

トリアゾールリンカー、特にＲ１およびＲ２が、任意の化学成分である、形態

【化1】

の、１，２，３－トリアゾールは、第１の成分に接着したアジドの、免疫抑制剤などの第２の成分に接着した末端アルキンによる１，３－双極性環化付加反応により生成することができる。１，３－双極性環化付加反応は、触媒を用いてまたはこれを用いずに、好ましくは１，２，３－トリアゾール官能基を通して２つの成分を連結するＣｕ（Ｉ）触媒を用いて行う。この化学は、Sharpless et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41(14), 2596, (2002)およびMeldal, et al, Chem. Rev., 2008, 108(8), 2952-3015において詳細に記載され、しばしば、「クリック」反応またはＣｕＡＡＣとして言及される。

【0174】

チオエーテルリンカーは、例えばＲ１－Ｓ－Ｒ２の形態における硫黄－炭素（チオエーテル）結合の形成により生成される。チオエーテルは、１つの成分上でのチオール／メルカプタン（－ＳＨ）基の、第２の成分上のハライドまたはエポキシドなどのアルキル化基によるアルキル化により、生成することができる。チオエーテルリンカーはまた、１つの成分上のチオール／メルカプタン基の、マイケルアクセプターとしてマレイミド基またはビニルスルホン基を含む第２の成分上の電子欠乏アルケン基に対するマイケル付加により、形成させることができる。別の方法において、１つの成分上のチオール／メルカプタン基の、第２の成分上のアルケン基によるラジカルチオール－エン反応により、チオエーテルリンカーを調製することができる。
ヒドラゾンリンカーは、１つの成分上のヒドラジド基の、第２の成分上のアルデヒド／ケトン基との反応により生成することができる。

【0175】

ヒドラジドリンカーは、１つの成分上のヒドラジン基の、第２の成分上のカルボン酸基との反応により生成することができる。かかる反応は、一般に、カルボン酸が活性化試薬により活性化される、アミド結合の形成に類似する化学を用いて行う。

【0176】

イミンまたはオキシムリンカーは、１つの成分上のアミンまたはＮ－アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基の、第２の成分上のアルデヒドまたはケトン基との反応により形成される。
ウレアまたはチオウレアリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のイソシアナートまたはチオイソシアナート基との反応により調製される。
アミジンリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のイミドエステル基との反応により調製される。

【0177】

アミンリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のハライド、エポキシドまたはスルホナートエステル基などのアルキル化基によるアルキル化反応により生成される。あるいは、アミンリンカーはまた、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元試薬による、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のアルデヒドまたはケトン基による還元性アミノ化により生成することができる。
スルホンアミドリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のスルホニルハライド（スルホニルクロリドなどの）基との反応により生成される。
スルホンリンカーは、ビニルスルホンへの求核試薬のマイケル付加により生成される。ビニルスルホンまたは求核試薬のいずれかは、ナノキャリアの表面上にあるか、成分に接着していてもよい。

【0178】

成分はまた、非共有的共役方法を介して共役させることができる。例えば、静電吸着を通して、負に荷電した免疫抑制剤を、正に荷電した成分に共役させることができる。金属配位子を含む成分はまた、金属－配位子錯体を介して金属錯体に共役させることができる。

【0179】

態様において、成分は、合成ナノキャリアのアセンブリーの前に、ポリマー、例えばポリ乳酸－ブロック－ポリエチレングリコールに接着していてもよく、合成ナノキャリアは、反応性または活性化可能な基により形成させることができる。後者の場合において、成分は、合成ナノキャリアの表面により提示される接着化学に適合性である基を用いて調製することができる。他の態様において、ペプチド成分は、好適なリンカーを用いてＶＬＰまたはリポソームに接着させることができる。リンカーは、２つの分子を一緒にカップリングすることができる化合物または試薬である。一態様において、リンカーは、Hermanson 2008において記載されるようなホモ二官能性またはヘテロ二官能性の試薬であってよい。例えば、表面上にカルボン酸基を含むＶＬＰまたはリポソーム合成ナノキャリアを、ＥＤＣの存在下において、ホモ二官能性リンカーであるアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で処置して、ＡＤＨリンカーを有する対応する合成ナノキャリアを形成させることができる。結果として生じるＡＤＨと連結された合成ナノキャリアを、次いで、ナノキャリア上のＡＤＨリンカーの他方の末端を介して、酸基を含むペプチド成分と共役させて、対応するＶＬＰまたはリポソームペプチドコンジュゲートを生成する。

【0180】

態様において、ポリマー鎖の末端側にまたはアルキン基を含むポリマーが、調製される。このポリマーを、次いで、複数のアルキンまたはアジド基がナノキャリアの表面上に位置するような様式において合成ナノキャリアを調製するために用いられる。あるいは、合成ナノキャリアを、別の経路により調製して、その後、アルキンまたはアジド基で官能化してもよい。成分は、アルキン（ポリマーがアジドを含む場合）またはアジド（ポリマーがアルキンを含む場合）基のいずれかの存在と共に調製される。成分を、次いで、１，３－双極性環化付加反応を介して、１，４－二置換１，２，３－トリアゾールリンカーを通して成分を粒子に共有的に接着させる触媒を用いてまたはこれを用いずに、ナノキャリアと反応させる。

【0181】

成分が低分子である場合、合成ナノキャリアのアセンブリーの前に成分をポリマーに接着させることは、有利であり得る。態様において、成分を合成ナノキャリアに接着させるために用いられる表面基を用いて、成分をポリマーに接着させるというよりはむしろこれらの表面基の使用を通して、合成ナノキャリアを調製し、次いで、このポリマーコンジュゲートを合成ナノキャリアの構築において用いることもまた、有利であり得る。

【0182】

利用可能な共役方法の詳細な記載については、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ＧＴ「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．刊行、２００８年を参照。共有的接着に加えて、成分は、予め形成された合成ナノキャリアに吸着させることにより接着させても、または合成ナノキャリアの形成の間の封入により接着させてもよい。

【0183】

合成ナノキャリアは、当該分野において公知の広範な方法を用いて調製することができる。例えば、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿、流体チャネルを用いるフローフォーカシング（ｆｌｏｗ ｆｏｃｕｓｉｎｇ）、スプレー乾燥、シングルおよびダブルエマルション溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、製粉、マイクロエマルション法、微細加工（ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、ナノ加工（ｎａｎｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、犠牲層、単純および複合コアセルベーションなどの方法、ならびに当業者に周知の他の方法により形成することができる。あるいはまたは加えて、単分散半導体のための水性および有機性の溶媒合成、伝導性、磁性、有機および他のナノ材料が記載されている（Pellegrino et al., 2005, Small, 1:48; Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; and Trindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843）。さらなる方法は、文献において記載されている（例えば、Doubrow編、「Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy」、CRC Press, Boca Raton, 1992;Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5:13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275; ならびにMathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755；米国特許第５５７８３２５号および同第６００７８４５号；P. Paolicelli et al., 「Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles」Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)を参照）。

【0184】

材料を、望ましい場合には、限定されないが以下を含む多様な方法を用いて、合成ナノキャリア中に封入してもよい：C. Astete et al., 「Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles」J. Biomater. Sci. Polymer Edn、第17巻、第3号、pp. 247-289(2006);K. Avgoustakis「Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties and Possible Applications in Drug Delivery」Current Drug Delivery 1:321-333(2004);C. Reis et al., 「Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles」Nanomedicine 2:8- 21(2006);P. Paolicelli et al., 「Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles」Nanomedicine. 5(6): 843-853(2010)。材料を合成ナノキャリア中に封入するために好適な他の方法を用いてもよく、これらは、限定することなく、２００３年１０月１４日に発行されたUngerに対する米国特許第６，６３２，６７１号において開示される方法を含む。

【0185】

ある態様において、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿法またはスプレー乾燥により調製される。合成ナノキャリアを調製することにおいて用いられる条件は、所望されるサイズおよび特性（例えば、疎水性、親水性、外側の形態、「粘着性」、形状など）の粒子を得るために改変することができる。合成ナノキャリアを調製する方法および用いられる条件（例えば、溶媒、温度、濃度、気体の流速など）は、合成ナノキャリアに結合させるべき材料および／またはポリマーマトリックスの組成に依存し得る。

【0186】

上記の方法のいずれかにより調製される合成ナノキャリアが所望される範囲の外のサイズ範囲を有する場合、合成ナノキャリアを、例えば篩を用いて、サイズ分類することができる。

【0187】

合成ナノキャリアの要素は、例えば１以上の共有結合により合成ナノキャリア全体に接着させても、１以上のリンカーにより接着させてもよい。合成ナノキャリアを官能化するさらなる方法は、Saltzmanらに対する米国特許出願公開２００６／０００２８５２、DeSimoneらに対する米国特許出願公開２００９／００２８９１０、またはMurthyらに対する国際特許出願公開ＷＯ／２００８／１２７５３２Ａ１から適応させることができる。

【0188】

代替的にまたは加えて、合成ナノキャリアは、直接的または間接的に、非共有的相互作用を介して、成分に接着させることができる。非共有的態様において、非共有的接着は、限定されないが以下を含む非共有的相互作用により媒介される：電荷相互作用、アフィニティー相互作用、金属配位、物理的吸着、主客相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファン・デル・ワールス相互作用、磁性相互作用、静電相互作用、双極子－双極子相互作用、および／またはこれらの組み合わせを含む。

【0189】

かかる接着は、合成ナノキャリアの外部表面または内部表面上にあるように配置することができる。態様において、封入および／または吸収は、接着の形態である。

【0190】

本明細書において提供される組成物は、無機または有機の緩衝化剤（例えば、リン酸、炭酸、酢酸またはクエン酸のナトリウムまたはカリウム塩）およびｐＨ調整剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウムまたはカリウム、クエン酸または酢酸の塩、アミノ酸およびそれらの塩）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、アルファ－トコフェロール）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン９－１０ノニルフェノール、デオキシコール酸ナトリウム）、溶液および／または低温（ｃｒｙｏ）／凍結安定化剤（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、浸透圧調節剤（例えば、塩または糖）、抗菌剤（例えば、安息香酸、フェノール、ゲンタマイシン）、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサン、保存剤（例えば、チメロサール、２－フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ）、ポリマー性安定化剤および粘度調節剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー４８８、カルボキシメチルセルロース）および共溶媒（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール）を含んでもよい。

【0191】

本発明による組成物は、薬学的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な投与形態を達成するために、慣用的な医薬の製造および配合技術を用いて製造することができる。本発明の実施における使用のために好適な技術は、Handbook of Industrial Mixing: Science and Practice、Edward L. Paul, Victor A. Atiemo-ObengおよびSuzanne M. Kresta編、２００４年、John Wiley & Sons, Inc.; ならびにPharmaceutics: The Science of Dosage Form Design、第２版M. E. Auten編、２００１年、Churchill Livingstoneにおいて見出すことができる。一態様において、組成物を、注射のために、保存剤と共に、無菌の食塩水溶液中に懸濁する。

【0192】

本発明の組成物は任意の好適な様式において製造することができることが、理解されるべきであり、本発明は、本明細書において記載される方法を用いて製造することができる組成物に決して限定されない。適切な製造の方法の選択は、関連する特定の部分の特性に対する注意を必要とする場合がある。

【0193】

いくつかの態様において、組成物は、無菌条件下において製造されるか、最終的に無菌化される。このことにより、結果として生じる組成物が無菌であり、非感染性であることを確実にすることができ、それにより、非無菌の組成物と比較して安全性を改善する。このことは、特に組成物を投与されている対象が免疫欠損を有するか、感染症を罹患しているか、および／または感染に対して感受性である場合に、有益な安全性の指標を提供する。

【0194】

本発明による投与は、多様な経路によるものであってよく、これは、限定されないが、皮下、静脈内、筋肉内および腹腔内経路を含む。本明細書において言及される組成物は、混合物としてのいくつかの態様において、従来の方法を用いて、投与のために製造および調製されることができる。

【0195】

本発明の組成物は、有効量、例えば本明細書において他の場所で記載される有効量で投与することができる。投与形態は、多様な頻度において投与することができる。提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターを伴う、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの反復投与が、行われる。

【0196】

例
例１：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの合成（理論上）
ラパマイシンなどの免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、当業者に公知のいずれかの方法を使用して、産生することができる。好ましくは、本明細書に提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、米国公開番号ＵＳ２０１６／０１２８９８６Ａ１および米国公開番号ＵＳ２０１６／０１２８９８７Ａ１の方法のいずれか１つによって産生され、かかる産生および結果として生じる合成ナノキャリアの記載された方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。

【0197】

本明細書に提供される方法、または組成物のいずれか１つにおいて、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、かかる援用された合成ナノキャリアである。ＩｍｍＴＯＲ、ラパマイシンを封入している生物分解可能なＰＬＡ＋ＰＬＡ－ＰＥＧナノ粒子は、かかる合成ナノキャリアの例を指す（Kishimoto TK, Maldonado RA. Nanoparticles for the induction of antigen-specific immunological tolerance. Front Immunol. 2018; 9: 230. Sands E, Kivitz AJ, DeHaan W, et al. Update of SEL-212 phase 2 clinical data in symptomatic gout patients: SVP-rapamycin combined with pegadricase mitigates immunogenicity and enables sustained reduction of serum uric acid levels, low rate of gout flares and monthly dosing. Poster presentation at: 2018 American College of Rheumatology/Association of Reproductive Health Professionals (ACR/ARHP) Annual Meeting; October 19-24, 2018; Chicago, IL. Poster #2254）。

【0198】

例２：ＡＡＶベクターの免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアへの混合は、抗ＡＡＶ抗体を伴うマウスにおける導入遺伝子発現を救済する
抗ＡＡＶ抗体を伴うマウスにおける導入遺伝子発現を救済するためのラパマイシンを含む混合されたＡＡＶベクターおよび合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）の能力が、調査された。最初に、正常なヒトドナーからの血清を、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ＡＡＶに対する既存の中和およびＩｇＧ抗体の存在に関して、スクリーニングした。

【0199】

簡潔には、Ｈｕｈ７肝臓由来細胞を、正常なヒトドナーからの血清の存在下で、ＡＡＶ８－ルシフェラーゼとインキュベートした。ルシフェラーゼ発現を、Ｈｕｈ７細胞の形質導入に続いて評価した。ヒトドナー８からの血清とインキュベートした細胞は、ハイレベルのルシフェラーゼ活性を示し、著しいレベルの中和抗体の非存在を、指し示した。対照的に、ヒトドナー４５からの血清とインキュベートした細胞は、殆どまたは全くルシフェラーゼ発現を示さず、ハイレベルの中和抗体の存在を、指し示した。同じく、ヒトドナー４４からの血清とインキュベートした細胞は、殆どルシフェラーゼ発現を示さず、中からハイレベルの中和抗体の存在を、指し示した。ヒトドナー３１および３５からの血清とインキュベートした細胞は、ルシフェラーゼ発現の中間のレベルを示し、中レベルの中和抗体の存在を、指し示した。上で記載された機能的な中和抗体アッセイに基づく中和抗体の予測されたレベルが、抗ＡＡＶ ＩｇＧ抗体の観察されたレベルと相関するとわかった（図１）。

【0200】

ヒトドナー８、３１、３５、４４、および４５からの血清の８０マイクロリットル（８０μＬ）を、個々のマウスに静脈内注入によって移した。およそ２４時間後に、マウスに、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）の１００μｇと混合した、ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターの５．０Ｅ１１ｖｇ／ｋｇ、または、ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターの５．０Ｅ１１ｖｇ／ｋｇを、注入した。１２日後に、血清を、マウスから収集し、そして、血清ＳＥＡＰ活性レベルを、測定した。

【0201】

結果を図２に示す。ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターの後に、ヒトドナー８からの血清を受けたマウスは、ＡＡＶ８－ＳＥＡＰだけを受けた対照マウスと同様のレベルのＳＥＡＰ活性を示し、ヒトドナー８からの血清が、抗ＡＡＶ８抗体の有意なレベルを有していないことを確認した（対照の「血清なし」の白抜き棒グラフに対する、ドナー８の棒グラフを比較する）。ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターが続くヒトドナー３１および３５からの血清を受けているマウスは、血清がない対照マウスと比較して、およそ４６～４７％のＳＥＡＰ活性を示し、ヒトドナー３１および３５からの血清における中程度に中和する抗体の存在を確認した（白抜き対照「血清なし」棒グラフに対する、白抜きドナー３１および３５棒グラフを比較する）。しかしながら、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）とヒトドナー３１および３５からの血清を受けているマウスのＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターとの混合は、ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターのみを受けている血清なし対照マウスと比較して、だけを受けている血清制御マウスと同等でない、ＳＥＡＰ導入遺伝子発現および活性レベルを増強するとわかった（白抜き対照「血清なし」棒グラフに対する、濃いドナー３１および３５棒グラフを比較する）。これらの結果は、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例えば、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）とＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターの第１の用量との混合が、中和抗体の中程度のレベルを伴うマウスにおける導入遺伝子発現および活性を救済することができることを、指し示す。

【0202】

例３：ＡＡＶベクターと免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとの混合は、抗ＡＡＶ抗体を伴う未治療のマウスにおける導入遺伝子発現を救済する
ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターを、室温で２０分間、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）または生理食塩水５０μｇと当量で混合し、その後、室温で１時間、未治療正常マウス血清、または抗ＡＡＶ抗体を含有するマウス血清の１：１００の希釈物と混合した。結果として生じる混合物を、未治療のマウスに注入し、そして、３３日後に、ＳＥＡＰ導入遺伝子の血清発現を、測定した。ＳＥＡＰ導入遺伝子の血清発現を、血清と混合せずにＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターを注入した対照マウスと、比較した。

【0203】

その結果を、図３に示す。抗ＡＡＶ抗体を含有していない正常な血清に混合したＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターを注入したマウスは、対照マウスに匹敵する血清ＳＥＡＰ活性を示し、そして、抗ＡＡＶ抗体を含有している血清に混合したＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターを注入したマウスは、対照マウスと比較して、減少したＳＥＡＰ血清活性を、示した。対照的に、ラパマイシンを含む５０μｇ合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）の、抗ＡＡＶ抗体を含有している血清への混合の前の、ＡＡＶ８－ＳＥＡＰベクターへの混合は、血清なしの対照に匹敵するレベルに、ＳＥＡＰ発現を救済することが、わかった。

【0204】

例４：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、母性移入抗体を改善する
母性移入抗ＡＡＶを収容しているマウスの導入遺伝子発現を救うラパマイシン（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）を含む合成ナノキャリアの能力を、調査した。

【0205】

メチルマロノイル－ＣｏＡムターゼ（ＭＵＴ）の発現において欠損する、および筋特異的プロモーターの下でのＭＵＴに関する導入遺伝子を発現する低形質マウス（Ｍｃｋ－ＭＵＴマウス）を、使用した（Manoli et al., 2018）。これらのマウスは、メチルマロン酸血症の重篤な形態を、呈する。雌雄同種接合Ｍｃｋ－ＭＵＴマウスは、肝臓のＭＵＴ遺伝子発現欠損を修正するために、ＡＡＶ Ａｎｃ８０－ｈＡＡＴ－ＭＵＴベクターによる遺伝子治療を受けた。マウスを次いで飼育し、そして、それらの子孫からのすべての新生児の子は、既存の抗Ａｎｃ８０抗体を担持し、それは、おそらく子宮内で母体から移入された（図４）。

【0206】

およそ２６日齢で、Ｍｃｋ－ＭＵＴマウスは、母体に移入された抗Ａｎｃ８０抗体の有意なレベルを、依然として示した。マウスを無作為化し、５．０ｅ１２ｖｇ／ｋｇのＡｎｃ８０－ＭＵＴ単独で処置するか、または１００μｇまたは３００μｇのラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）と混合した。Ａｎｃ８０－ＭＵＴ単独で処置した４匹のマウスのうちの２匹は、遺伝子導入から数日以内に死んだ。ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）１００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した５匹のマウスのうちの３匹は、が遺伝子導入の直後に死んだ。その上、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例えば、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）３００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した全７匹の動物は、生き残った。

【0207】

これらのデータは、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例えば、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）の、ＡＡＶ Ａｎｃ８０－ｈＡＡＴ－ＭＵＴベクターの第１の用量への混合が、用量依存的なやり方におけるマウスの生存を、増強したことを、指し示す。

【0208】

例５：ＡＡＶ－ＭＵＴベクターで処置した母性移入抗体を伴うメチルマロン酸血症のマウスモデルにおける、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの効果
Ａｎｃ８０に対する既存のＩｇＧを伴う２３Ｍｃｋ－ＭＭＵＴマウスを、まとめて発生させた。これらのうち、６匹のマウスを、ＡＡＶ Ａｎｃ８０－ＭＭＵＴの５×１０１２ｖｇ／ｋｇで処置し、７匹のマウスを、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子の１００μｇと混合したＡＡＶ Ａｎｃ８０－ＭＭＵＴの同じ用量で処置し、そして、１０匹のマウスを、ＩｍｍＴＯＲの３００μｇと混合したＡＡＶ Ａｎｃ８０－ＭＭＵＴの同じ用量で処置した。

【0209】

ｐＭＭＡレベルによって測定したとおり、どの群も、最初の処置の後の利益を示さなかった。その上、Ａｎｃ８０－ＭＭＵＴ単独で処置した６匹のマウスのうち４匹、およびＩｍｍＴＯＲナノ粒子の１００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した７匹のマウスのうち４匹は、遺伝子導入の直後に、死んだ。同時に、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子の３００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した群における全１０匹のマウスは、２１日間生存し、その時点で、２回目の処置を、すべての生存しているマウスに投与した。今回、ＩｍｍＴＯＲの３００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置したマウスのおよそ半分は、第２の遺伝子移入の後９日で、ｐＭＭＡレベルの実質的減少を示し、その一方で、ＩｍｍＴＯＲの１００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した群における３匹の残存するマウスのうち１匹も、ｐＭＭＡ減少を、示した。数日以内に疾患に屈したこれらのマウスの１匹とともに、Ａｎｃ８０－ＭＭＵＴ単独で処置した残存する２匹のマウスにおいて利益は、なかった。

【0210】

ＩｍｍＴＯＲの３００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した１０匹のマウスのうち９匹は、ｐＭＭＡの高い変数レベルを呈するところで、３ヵ月以上生存し、最初の処置の１０１日後に、３回目を処置した。この介入は、この群のすべてのマウスにおけるｐＭＭＡレベルの劇的な減少につながり（対前処置１８％へ）、およびＩｍｍＴＯＲの１００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置したすべての生存しているマウスにおいても、同様だった。Ａｎｃ８０－ＭＭＵＴ単独で処置した１匹の生存マウスにおいては、利益が見られず、そして、それは、疾患にすぐに屈した。

【0211】

まとめると、ＩｍｍＴＯＲの３００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置した群と、Ａｎｃ８０－ＭＵＴ単独で処置した群（ｐ＜０．０００１）またはＩｍｍＴＯＲの１００μｇに混合した（ｐ＜０．０５）群の間に、生存において統計的に有意な差が、あった。

【0212】

その上、ＩｍｍＴＯＲの３００μｇに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴで処置したほとんど全てのマウス（９／１０）は、試験の１１５日目まで（すなわち、３回の処置の後）、ｄｅ ｎｏｖｏのＡｎｃ８０ ＩｇＧ形成の非存在を、示した。これらのデータは、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（例として、ＩｍｍＴＯＲナノ粒子）の、ＡＡＶ Ａｎｃ８０－ｈＡＡＴ－ＭＭＵＴベクターの第１の用量への混合が、用量依存的なやり方におけるマウスの生存を、増強し、反復投与後のｐＭＭＡのレベルを改善したことを、指し示す。データを、図５～８において示す。

【0213】

よって、合成ナノキャリアに混合したＡｎｃ８０－ＭＵＴの第１の用量については、再処置の後、血清ＭＭＡにおける１部分の減少を、観察した（Ａｎｃ８０－ＭＵＴ＋３００μｇ ＩｍｍＴＯＲで処置したマウスにおいて）。さらに、Ａｎｃ８０－ＭＵＴ＋３００μｇ ＩｍｍＴＯＲで処置したマウスにおける第２の再処置に続いて、結果は、血清ＭＭＡの一様な減少を示した。混合した免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを伴うＡｎｃ８０－ＭＵＴで、反復して処置した既存の母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧを伴うＭｃｋ－ＭＵＴマウスは、より高い初期の生存率を有した。母性移入抗Ａｎｃ８０ ＩｇＧを伴うマウスの既存の液性免疫は、ラパマイシンなどの、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与に起因するウイルスベクターでの処置を、排除しない。

【0214】

該データは、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのより高用量が、初期の生存を可能にすることができ、次いで反復投与で治療の有効性を提供することができ、その一方で、ｄｅ ｎｏｖｏのＩｇＧの形成を遅延させることも、示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【国際調査報告】