特表 2022-531328 脳虚血再灌流傷害の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-06

(54)【発明の名称】脳虚血再灌流傷害の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20220629BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20220629BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P9/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021564795

(86)(22)【出願日】2020-04-30

(85)【翻訳文提出日】2021-10-29

(86)【国際出願番号】 US2020030643

(87)【国際公開番号】W WO2020226993

(87)【国際公開日】2020-11-12

(31)【優先権主張番号】62/843,182

(32)【優先日】2019-05-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】507324681

【氏名又は名称】ユニバーシティ・オブ・チューリッヒ

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＺＵＲＩＣＨ

(71)【出願人】

【識別番号】521475738

【氏名又は名称】エックスバイオテク ユーエスエイ，インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＸＢＩＯＴＥＣＨ ＵＳＡ，ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001302

【氏名又は名称】特許業務法人北青山インターナショナル

(72)【発明者】

【氏名】カミチ，ジョバンニ，グイド

(72)【発明者】

【氏名】リベラル，ルカ

(72)【発明者】

【氏名】リビー，ピーター

(72)【発明者】

【氏名】シマード，ジョン

【テーマコード（参考）】

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085BB17

4C085CC23

4C085EE01

(57)【要約】

脳虚血再灌流傷害の続発症は、薬学的に許容される担体およびＩＬ－１αに選択的に結合する治療有効量の剤を含む医薬組成物を対象に投与することにより低減される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

脳虚血再灌流傷害を治療する方法であって、インターロイキン－１α（ＩＬ－１α）に特異的に結合する抗体を対象に投与するステップを含む、方法。

【請求項2】

ＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体が、前記対象が脳虚血を発症した後に前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳梗塞の体積を低減させる方法であって、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を前記対象に投与するステップを含む、方法。

【請求項4】

ＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体が、前記対象が脳虚血を発症した後に前記対象に投与される、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記対象における前記閉塞性発作の結果としてもたらされた前記脳梗塞の前記体積が、前記対象がＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体を投与されなかった場合に前記閉塞性発作の結果としてもたらされたであろう脳梗塞の体積よりも少なくとも２０％小さい、請求項３に記載の方法。

【請求項6】

対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた神経学的欠損を低減させる方法であって、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を前記対象に投与するステップを含む、方法。

【請求項7】

ＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体が、前記対象が脳虚血を発症した後に前記対象に投与される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳損傷の虚血性ペナンブラ中の活性化マクロファージの数を低減させる方法であって、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を前記対象に投与するステップを含む、方法。

【請求項9】

ＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体が、前記対象が脳虚血を発症した後に前記対象に投与される、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

脳虚血再灌流傷害を治療するための、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体の使用。

【請求項11】

対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳梗塞の体積を低減させるための、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体の使用。

【請求項12】

前記対象において前記閉塞性発作の結果としてもたらされた前記脳梗塞の前記体積が、前記対象がＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体を投与されていない場合に前記閉塞性発作の結果としてもたらされたであろう脳梗塞の体積よりも少なくとも２０％小さい、請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた神経学的欠損を低減させるための、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体の使用。

【請求項14】

対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳損傷の虚血性ペナンブラ中の活性化マクロファージの数を低減させるための、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体の使用。

【請求項15】

ＩＬ－１αに特異的に結合する前記抗体が、前記対象が脳虚血を発症した後に前記対象に投与される、請求項１１、１２、１３、または１４に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年５月３日に出願された「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｒａｉｎ Ｉｓｃｈｅｍｉａ－Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｉｎｊｕｒｙ」というタイトルの米国仮特許出願第６２／８４３，１８２号の優先権を主張する。

【0002】

連邦政府により支援された研究に関する声明
該当せず

【0003】

発明の分野
本発明は、概しては医学、神経学、および免疫学の分野に関する。より特には、本発明は、中枢神経系（例えば、脳）に対する虚血再灌流傷害の様々な続発症を低減させるためのインターロイキン－１α（ＩＬ－１α）に特異的に結合する抗体（Ａｂ）の使用に関する。

【背景技術】

【0004】

虚血発作は死および能力障害の大きな原因である。それは、罹患した組織への血流が回復されるように組織プラスミノーゲン活性化剤または機械的な血栓切除術を使用して閉塞した血管からクロットを除去することにより治療される。血流の回復は、しかしながら、興奮毒性神経伝達物質の放出、細胞内Ｃａ２＋の蓄積、フリーラジカル損傷、ニューロンのアポトーシス、神経炎症、および虚血再灌流傷害に繋がる脂肪分解を誘導する。

【発明の概要】

【0005】

ＩＬ－１αに特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、脳虚血再灌流傷害後に起こる病理学的続発症を寛解させるために有用であることが発見された。

【0006】

よって、対象において脳虚血再灌流傷害後に起こり得る病理学的事象の１つまたは複数を低減させる方法が本明細書に記載される。これらの方法は、薬学的に許容される担体、ならびに対象において浮腫、出血性変化、頭蓋内圧、血液脳関門の破壊、結果としてもたらされた梗塞の体積、および結果としてもたらされた神経学的欠損を低減させるために有効な量のＩＬ－１αに選択的に結合する剤を含む医薬組成物を対象に投与するステップを含むことができる。剤は、抗ＩＬ－１α抗体、例えば（例えば、ＩｇＧ１アイソタイプの）モノクローナル抗体であることができる。医薬組成物は、対象に注射により、皮下に、静脈内に、筋肉内に、または髄腔内に投与することができる。方法において、用量は少なくとも５０ｍｇ（例えば、少なくとも５０、７５、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、または８００ｍｇ）であることができる。好ましくは、最初の用量は、虚血発作の最初の症状の観察後１、２、３、４、５、もしくは６時間以内、または対象が医療専門家による治療を求めた後１０、２０、３０、もしくは６０分以内に投与される。その後、追加の用量（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）が、例えば、先行する投与後約２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、または４週間に、対象に投与されてもよい。

【0007】

インターロイキン－１α（ＩＬ－１α）に特異的に結合する抗体を対象に投与することにより対象において脳虚血再灌流傷害を治療する方法；ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を対象に投与することにより対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳梗塞の体積を低減させる方法；ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を対象に投与することにより対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた神経学的欠損を低減させる方法；およびＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を対象に投与することにより対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳損傷の虚血性ペナンブラ中の活性化マクロファージの数を低減させる方法が本明細書にさらに記載される。上記および本明細書中の方法において、ＩＬ－１αに特異的に結合する抗体は、対象が脳虚血を発症した後に対象に投与することができる。対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳梗塞の体積を低減させる方法において、対象において閉塞性発作の結果としてもたらされた脳梗塞の体積は、対象がＩＬ－１αに特異的に結合する抗体を投与されなかった場合に閉塞性発作の結果としてもたらされたであろう脳梗塞の体積よりも少なくとも２０％（例えば、少なくとも２０、３０、４０、または５０％）小さいものであることができる。

【0008】

他に定義されなければ、本明細書において使用される全ての技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。生物学的用語の一般的に理解される定義は、Ｒｉｅｇｅｒら、Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ：Ｃｌａｓｓｉｃａｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１年；およびＬｅｗｉｎ、Ｇｅｎｅｓ Ｖ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９４年において見出すことができる。医学用語の一般的に理解される定義は、Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、２７^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００年において見出すことができる。

【0009】

本明細書において使用される場合、「抗体」または「Ａｂ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、同一もしくは不均質なＩｇの溶液、またはＩｇの混合物である。「Ａｂ」はまた、Ｉｇの断片および操作されたバージョン、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）_２断片；ならびにｓｃＦｖ、ヘテロコンジュゲートＡｂ、および抗原特異性を付与するためにＩｇ由来ＣＤＲを用いる類似した人工分子を指すことができる。「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、１つのクローン性Ｂ細胞系により発現されるＡｂまたは特定の抗原の特定のエピトープと免疫反応を起こすことができる１種のみの抗原結合性部位を含有するＡｂ分子の集団である。「ポリクローナルＡｂ」は不均質なＡｂの混合物である。典型的には、ポリクローナルＡｂは、特定の抗原に結合する無数の異なるＡｂ分子を含み、異なるＡｂの少なくとも一部は、抗原の異なるエピトープと免疫反応を起こす。本明細書において使用される場合、ポリクローナルＡｂは、２つまたはそれより多くのｍＡｂの混合物であることができる。

【0010】

Ａｂの「抗原結合性部分」は、ＡｂのＦａｂ部分の可変領域内に含有され、Ａｂに抗原特異性を付与するＡｂの部分（すなわち、典型的にはＡｂの重鎖および軽鎖のＣＤＲにより形成される三次元ポケット）である。「Ｆａｂ部分」または「Ｆａｂ領域」は、そのＩｇの抗原結合性部分を含有するパパイン消化されたＩｇのタンパク質分解断片である。「非Ｆａｂ部分」は、Ｆａｂ部分内にないＡｂの部分、例えば、「Ｆｃ部分」または「Ｆｃ領域」である。Ａｂの「定常領域」は、可変領域の外側のＡｂの部分である。免疫応答を促す他の免疫系成分への結合の原因となるＡｂの部分であるＡｂの「エフェクター部分」は定常領域に一般に包含される。そのため、例えば、（その抗原結合性部分を介さずに）補体成分またはＦｃ受容体に結合するＡｂ上の部位はそのＡｂのエフェクター部分である。

【0011】

タンパク質分子、例えばＡｂを指す場合、「精製された」は、そのような分子に天然に随伴する成分から分離されていることを意味する。典型的には、Ａｂまたはタンパク質は、それが天然に付随する非Ａｂタンパク質または他の天然に存在する有機分子を重量で少なくとも約１０％（例えば、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．９％、および１００％）含まない場合に、精製されている。純度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析により測定することができる。化学的に合成されたタンパク質またはそれが天然に存在する細胞種以外の細胞種中で産生された他の組換えタンパク質は「精製され」ている。

【0012】

「～に結合する」（ｂｉｎｄ）、「～に結合する」（ｂｉｎｄｓ）、または「～と反応する」は、１つの分子が試料中の特定の第２の分子を認識して付着するが、試料中の他の分子を認識することもそれに付着することも実質的にないことが意味される。一般に、別の分子に「特異的に結合する」Ａｂは、該他の分子に対して約１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、または１０^１２リットル／モルより高いＫ_ｄを有する。第１の分子に「選択的に結合する」Ａｂは、第１のエピトープにおいて第１の分子に特異的に結合するが、第１のエピトープを有しない他の分子に特異的に結合しない。例えば、ＩＬ－１アルファに選択的に結合するＡｂは、ＩＬ－１アルファ上のエピトープに特異的に結合するが、ＩＬ－１ベータ（該エピトープを有しない）に特異的に結合しない。

【0013】

「治療有効量」は、治療される動物またはヒトにおいて医学的に望ましい効果（例えば、疾患または疾患の症状の寛解または予防）を生じさせることができる量である。

【0014】

本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が以下に記載される。本明細書において言及される全ての出願および刊行物は参照により全体が組み込まれる。矛盾がある場合、定義を含めて本明細書が優先される。追加的に、以下において議論される特定の実施形態は実例的なものに過ぎず、限定的であることは意図されない。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】図１は、一過性中大脳動脈閉塞（ｔＭＣＡＯ）を行った後にアイソタイプ対照抗体を投与されたマウスにおける脳の同側半球と対比した対側半球中の組織ＩＬ－１αレベルを示すグラフである。

【図2】図２は、アイソタイプ対照抗体を用いて治療された対象と比較して抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療された対象における梗塞体積の低減を示すグラフである。

【図3】図３は、アイソタイプ対照抗体を用いて治療された対象と比較して抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療された対象におけるベダーソン（Ｂｅｄｅｒｓｏｎ）指数スコアにおける改善を示すグラフである。

【図4】図４は、アイソタイプ対照抗体を用いて治療された対象と比較して抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療された対象におけるロータロッド試験における落下潜時の低減を示すグラフである。

【図5】図５は、抗ＩＬ－１α抗体またはアイソタイプ対照抗体を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスの血液脳関門におけるＰ－セレクチンおよびＶＥ－カドヘリンの発現を示す一連の顕微鏡写真（上）、ならびにアイソタイプ対照抗体を用いて治療された対象と比較して抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療された対象におけるより低いＰ－セレクチン発現を示すグラフ（下）である。

【図6】図６は、抗ＩＬ－１α抗体またはアイソタイプ対照抗体を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスの脳内皮におけるＩＣＡＭ－１発現の発現を示す一連の顕微鏡写真（上）、およびアイソタイプ対照抗体を用いて治療された対象と比較して抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療された対象におけるより低いＩＣＡＭ－１発現を示すグラフ（下）である。

【図7】図７は、抗ＩＬ－１α抗体またはアイソタイプ対照抗体を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスの脳内皮におけるＶＣＡＭ－１発現の発現を示す一連の顕微鏡写真（上）、およびアイソタイプ対照抗体を用いて治療された対象と比較して抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療された対象におけるより低いＶＣＡＭ－１発現を示すグラフ（下）である。

【図8】図８は、アイソタイプ対照を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスと比較して抗ＩＬ－１α抗体を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスの発作区画中の活性化マクロファージの数の減少を示す一連の顕微鏡写真（上）、およびそれを示すグラフ（下）である。

【図9】図９は、アイソタイプ対照を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスと比較して抗ＩＬ－１α抗体を投与されたｔＭＣＡＯ処置マウスのペナンブラ区画中のより低いＭＭＰ９発現を示す一連の顕微鏡写真（上）、およびそれを示すグラフ（下）である。

【発明を実施するための形態】

【0016】

対象において脳虚血再灌流傷害の１つまたは複数の続発症を低減させるための組成物および方法が本明細書に記載される。以下に記載される好ましい実施形態は、これらの組成物および方法を適合させたものを説明する。それにもかかわらず、これらの実施形態の記載から、以下に提供される記載に基づいて本発明の他の態様を製造および／または実施することができる。

【0017】

一般的方法論
従来の免疫学的および分子生物学的技術を伴う方法が本明細書に記載される。免疫学的方法（例えば、抗原－Ａｂ複合体の検出および局在性についてのアッセイ、免疫沈降、ならびにイムノブロッティングなど）は、当該技術分野において一般に公知であり、方法論の専門書、例えばＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて記載されている。分子生物学の技術は、専門書、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ ｅｄ．、ｖｏｌ．１～３、Ｓａｍｂｒｏｏｋら編、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、２００１年；およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて詳細に記載されている。Ａｂの方法は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｂｓ、Ｄｕｂｅｌ，Ｓ．編、Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００７年において記載されている。医学的治療の一般的方法は、ＭｃＰｈｅｅおよびＰａｐａｄａｋｉｓ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ２０１０、４９^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｍｅｄｉｃａｌ、２０１０年；ならびにＦａｕｃｉら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１７^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ、２００８年において記載されている。神経学における方法は、Ｄａｒｏｆｆ Ｒ．、Ｂｒａｄｌｅｙ’ｓ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、２－Ｖｏｌｕｍｅ Ｓｅｔ ７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２０１５年において記載されている。

【0018】

治療
本明細書に記載の組成物は、対象における状態の少なくとも１つの特徴（例えば、対象における浮腫、出血性変化、頭蓋内圧、血液脳関門の破壊、梗塞体積、および結果としてもたらされた神経学的欠損）を改善するために有効な量の抗ＩＬ－１α Ａｂを含む医薬組成物を哺乳動物対象に投与することにより該対象において脳虚血再灌流傷害を治療するために有用である。脳虚血再灌流傷害の治療の成功は、確立された方法にしたがって評価することができる。これらとしては、神経学的検査、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴イメージング、および脳血管造影が挙げられる。改善は、対象が有効量の抗ＩＬ－１α Ａｂを投与されなかった場合と比較して（例えば、遺伝学的にマッチした対象または類似した傷害を有する対象の歴史的なデータから推定されるものと比較して）傷害の開始後の所与の時点（例えば、傷害の開始後１、２、３、４、５、７、１０、もしくは３０日；または１、２、３、４、５、６、１２もしくは２４か月）における脳虚血再灌流傷害の続発症を評価するために使用された試験における少なくとも１０％（例えば、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、または７０％）より良好なスコアとして評価することができる。

【0019】

脳虚血再灌流傷害後の脳梗塞体積は、例えばＬｏｖｂｌａｄら、Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ．４２：１６４～１７０頁、１９９７年において記載されるような磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）により生きた対象において決定することができる。好ましくはこれは、最終梗塞体積に達したとき（例えば、傷害後少なくとも３０日）に行われる。対象における脳虚血再灌流傷害の結果としてもたらされた神経学的欠損の量および／または質は、公知の方法、例えばＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｔｒｏｋｅ Ｓｃａｌｅ（ＮＩＨＳＳ）により決定することができ、ＮＩＨＳＳは、１５項目スケール（表１）またはＣａｎａｄｉａｎ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃａｌｅを使用して神経学的障害を測定する。脳虚血再灌流傷害の結果としてもたらされた脳損傷の虚血性ペナンブラ中の活性化マクロファージ／小膠細胞の数は、超小型超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ）がマクロファージ／小膠細胞特異的造影剤として使用されるＭＲＩまたは他の公知の方法により生きた対象において評価することができる。

【0020】

対象は、脳虚血（例えば、虚血発作、一過性虚血発作、またはくも膜下出血）を患った、患っている、またはそれを発症するリスクがある、ヒトを含めて、哺乳動物、例えばヒト、齧歯動物、ネコ、イヌ、ウマ、ヒツジ、またはブタであることができる。ヒト対象は、男性、女性、成人、子供、高齢者（６５歳およびより高齢）、ならびに他の疾患または脳虚血のリスク因子（例えば、高血圧、糖尿病、心臓疾患、人種／民族性、脳虚血の個人もしくは家族歴、脳動脈瘤、および／または脳動静脈奇形）を有する者であってもよい。非限定的な例として、対象は、脳血管閉塞を有すると診断されたヒトまたは一過性虚血発作を有するヒトであることができる。対象はまた、（例えば、急性脳血管閉塞を有すると診断された後に）組織プラスミノーゲン活性化剤を投与されたヒトであることができる。ＩＬ－１αに結合する剤の初期用量は、虚血発作の症状の開始の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２４、３６、または４８時間以内に投与することができる。虚血発作を発症するリスクが高い対象（例えば、一過性虚血発作を経験しているまたは血栓症を有する対象）のために、ＩＬ－１αに結合する剤は、リスクが減少する（例えば、一過性虚血発作が止まるまたは血栓症が解消される）まで１日１回、または２、３、４、５、６、７、もしくは１４日毎に１回の頻度で、予防的に投与することができる。真にヒトのＡｂ（例えば、ヒト対象において天然に発現されるもの）である抗ＩＬ－１α Ａｂを伴う治療抗体の以前の投与に起因してヒト抗ヒト抗体応答を発生した対象を治療することは好ましい。

【0021】

ＩＬ－１αを標的化する抗体および他の剤
対象において脳虚血再灌流傷害の１つまたは複数の続発症を特異的に低減させる任意の好適な種類のＡｂが本明細書に記載の方法において使用されてもよい。例えば、使用される抗ＩＬ－１α Ａｂは、ｍＡｂ、ポリクローナルＡｂ、ｍＡｂの混合物、またはＡｂ断片もしくは操作されたＡｂ様分子、例えばｓｃＦｖであってもよい。ＡｂのＫａは、好ましくは、少なくとも１×１０^９Ｍ^－１またはより高い（例えば、９×１０^１０Ｍ^－１、８×１０^１０Ｍ^－１、７×１０^１０Ｍ^－１、６×１０^１０Ｍ^－１、５×１０^１０Ｍ^－１、４×１０^１０Ｍ^－１、３×１０^１０Ｍ^－１、２×１０^１０Ｍ^－１、または１×１０^１０Ｍ^－１より高い）ものである。好ましい実施形態において、Ａｂは、（ｉ）ヒトＩＬ－１αに対して非常に高い結合親和性（例えば、少なくともナノまたはピコモル濃度）を呈する抗原結合性可変領域および（ｉｉ）定常領域を含む完全ヒトｍＡｂである。ヒトＡｂは好ましくはＩｇＧ１であるが、異なるアイソタイプ、例えばＩｇＭ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＥ、またはサブクラス、例えばＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４であってもよい。有用なｍＡｂとしては、ＩＬ－１αを中和するもの（例えば、ＩＬ－１αがＩＬ－１α受容体に結合するのを予防するもの）が挙げられる。

【0022】

ヒトＩＬ－１αに特異的なＩｇを発現するＢリンパ球はヒト中に天然に存在するので、ｍＡｂを産生させるための現在好ましい方法は、最初にそのようなＢリンパ球を対象から単離し、次にそれを不死化させて、培養で連続的に複製可能にすることである。ヒトＩＬ－１αに特異的なＩｇを発現する多数の天然に存在するＢリンパ球を欠いた対象を１つまたは複数のヒトＩＬ－１α抗原を用いて免疫化して、そのようなＢリンパ球の数を増加させてもよい。ヒトｍＡｂは、ヒトＡｂ分泌細胞（例えば、ヒト血漿細胞）を不死化させることにより調製される。例えば、米国特許第４，６３４，６６４号明細書を参照。

【0023】

例示的な方法において、１または複数（例えば、５、１０、２５、５０、１００、１０００、またはより多く）のヒト対象が、血液中のそのようなヒトＩＬ－１α特異的Ａｂの存在についてスクリーニングされる。所望のＡｂを発現する対象を次にＢリンパ球ドナーとして使用することができる。１つの可能な方法において、ヒトＩＬ－１α特異的Ａｂを発現するＢリンパ球を持つヒトドナーから末梢血が得られる。そのようなＢリンパ球が次に、例えば、ヒトＩＬ－１α特異的Ｉｇを発現するＢリンパ球を選択するための細胞選別（例えば、蛍光活性化細胞選別、「ＦＡＣＳ」；または磁気ビーズ細胞選別）により、血液試料から単離される。これらの細胞は次に、（例えば、ＥＢＶを使用する）ウイルス形質転換によりまたは公知の技術にしたがって別の不死化細胞、例えばヒト骨髄腫への融合により不死化させることができる。ヒトＩＬ－１αに特異的なＩｇを発現するこの集団内のＢリンパ球は次に、限界希釈法により単離することができる（例えば、ヒトＩＬ－１αに特異的なＩｇについて陽性のマイクロタイタープレートのウェル中の細胞が選択され、継代培養され、所望のクローン系を単離できるまで該処理が繰り返される）。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、ＭＡｂｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９～１０３頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８６年を参照。ヒトＩＬ－１αに対して少なくともナノモル濃度またはピコモル濃度の結合親和性を有するＩｇを発現するクローン細胞系が好ましい。これらのクローン細胞系により分泌されるＭＡｂは、従来のＩｇ精製手順、例えば塩析（ｓａｌｔ ｃｕｔｓ）、サイズ排除、イオン交換分離、およびアフィニティークロマトグラフィーにより培養培地または体液（例えば、腹水）から精製することができる。

【0024】

不死化されたＢリンパ球は、ｍＡｂを直接的に製造するためにｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物中で使用されてもよいが、ある特定の場合において、ｍＡｂを製造するために異種発現系を使用することが望ましいことがある。例えば、米国特許出願第１１／７５４，８９９号明細書に記載の方法を参照。例えば、ヒトＩＬ－１αに特異的なｍＡｂをコードする遺伝子がクローニングされ、異種宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、骨髄腫細胞、およびＥ． ｃｏｌｉ細胞）中での発現のために発現ベクター（例えば、プラスミドベースの発現ベクター）に導入されてもよい。ＩｇはＨ_２Ｌ_２構成で重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を含むので、それぞれをコードする遺伝子は別々に単離され、異なるベクター中で発現されてもよい。

【0025】

対象が抗Ａｂ応答を発生するより高い可能性に起因して一般により低い好ましさであるが、異なる動物種に由来する異なる部分を有する抗原結合性分子であるキメラｍＡｂ（例えば、「ヒト化」ｍＡｂ）（例えば、ヒトＩｇの定常領域に融合したマウスＩｇの可変領域）が使用されてもよい。そのようなキメラＡｂは、当該技術分野において公知の方法により調製することができる。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１、１９８４年；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：６０４、１９８４年；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４：４５２、１９８４年を参照。同様に、Ａｂは、当該技術分野において公知の方法によりヒト化させることができる。例えば、所望の結合特異性を有するｍＡｂは、様々なベンダーによりまたは米国特許第５，６９３，７６２号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書、もしくは同第５，５８５，０８９号明細書に記載されるようにヒト化させることができる。

【0026】

本明細書に記載のｍＡｂは、公知の方法、例えばＶＨおよびＶＬドメインシャッフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９～７８３頁、１９９２年）、超可変領域（ＨＶＲ）および／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発（Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９～３８１３頁、１９９４年；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ １６９：１４７～１５５頁、１９９５年；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４～２００４頁、１９９５年；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０～９頁、１９９５年；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９～８９６頁、１９９２年）によりそれらの結合特異性を増強または他に変更するために親和性成熟させてもよい。Ａｂのアミノ酸配列バリアントは、Ａｂをコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することにより調製されてもよい。追加的に、ｍＡｂをコードする核酸配列に対する改変は、ある特定の発現系におけるｍＡｂの製造を増強するために（例えば、ｍＡｂのアミノ酸配列を変化させることなく）変更されてもよい（例えば、イントロンの排除および／または所与の発現系のためのコドン最適化）。本明細書に記載のｍＡｂはまた、別のタンパク質（例えば、別のｍＡｂ）または非タンパク質分子への共役により改変することができる。例えば、ｍＡｂは、水溶性ポリマー、例えばポリエチレングリコールまたはカーボンナノチューブに共役させてもよい（例えば、Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００～１１６０５頁、２００５年を参照）。米国特許出願第１１／７５４，８９９号明細書を参照。

【0027】

好ましくは、高い力価のヒトＩＬ－１α特異的ｍＡｂを最小の有害効果と共に対象に投与できることを確実にするために、ｍＡｂ組成物は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９またはそれより高い重量パーセントで純粋（任意の賦形剤を除く）であるべきである。ｍＡｂ組成物は、単一の種類のみのｍＡｂ（すなわち、単一クローンＢリンパ球系から産生されたもの）を含んでもよく、または２つもしくはそれより多く（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれより多く）の異なる種類のｍＡｂの混合物を含んでもよい。

【0028】

上記のＩＬ－１α特異的Ａｂは使用のために好ましいが、一部の場合において、ＩＬ－１αを特異的に標的化する他の剤は、それらの投与が、本明細書に記載の方法において使用された場合に対象における脳虚血再灌流傷害の１つまたは複数の続発症における低減に繋がる限り、使用されてもよい。一部のＩＬ－１α特異的Ａｂは、ＩＬ－１受容体（ＩＬ－１Ｒ１）とのＩＬ－１αの相互作用を予防することによりＩＬ－１αの作用を遮断することが示されているので、様々な病理学的状態の治療におけるこの作用機序に基づいて、ＩＬ－１αがＩＬ－１Ｒ１と相互作用することを同様に遮断する他のＡｂまたは非Ａｂ剤もまた使用することができる（例えば、ＩＬ－１αがＩＬ－１Ｒ１と相互作用することを遮断する他の抗ＩＬ－１ａ Ａｂまたは抗ＩＬ－１Ｒ１ Ａｂ）。これらのＡｂは、上記の方法にしたがって作ることができる。非Ａｂ剤としては、ＩＬ－１αがＩＬ－１Ｒ１と相互作用することを遮断する抗ＩＬ－１α Ａｂの産生を引き起こすワクチン、ＩＬ－１αに結合してＩＬ－１αがＩＬ－１Ｒ１と相互作用することを遮断するタンパク質またはペプチド、およびＩＬ－１αを特異的に標的化してＩＬ－１αがＩＬ－１Ｒ１と相互作用することを遮断する小有機分子を挙げることができる。ＩＬ－１βに特異的に結合しないものが好ましい。特定の剤が対象において脳虚血再灌流傷害の１つまたは複数の続発症を低減させることができるのかどうかは、以下の実施例セクションに記載の方法により決定することができる。

【0029】

医薬組成物および方法
抗ＩＬ－１α Ａｂ組成物（およびＩＬ－１αを特異的に標的化する他の剤）は、薬学的に許容される担体（例えば、無菌食塩水）中で動物またはヒトに投与されてもよく、該担体は、投与のモードおよび経路ならびに標準的な薬学的プラクティスに基づいて選択される。薬学的に許容される担体の他に薬学的製剤のリストは、この分野における標準的なテキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、およびＵＳＰ／ＮＦにおいて見出すことができる。組成物を安定化させかつ／もしくは保存するため、および／または対象へのそれらの投与を促すために他の物質を組成物に加えることおよび他のステップを行うことができる。

【0030】

例えば、Ａｂ組成物は、凍結乾燥させてもよく（Ｄｒａｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１８１：３７、１９９５年；およびＰＣＴ／ＵＳ９０／０１３８３を参照）；ナトリウムおよび塩化物イオンを含む溶液中に溶解させてもよく；１つもしくは複数の安定化剤、例えばアルブミン、グルコース、マルトース、スクロース、ソルビトール、ポリエチレングリコール、およびグリシンを含む溶液中に溶解させてもよく；（例えば、０．４５および／もしくは０．２ミクロンフィルターを使用して）濾過されてもよく；ベータ－プロピオラクトンと接触させてもよく；かつ／または殺菌剤（例えば、界面活性剤、有機溶媒、ならびに界面活性剤および有機溶媒の混合物）を含む溶液中に溶解させてもよい。

【0031】

Ａｂ組成物は、任意の好適な技術により動物またはヒトに投与されてもよい。典型的には、そのような投与は非経口的（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、髄腔内、または腹腔内導入）である。組成物はまた、例えば、Ｘ線ガイダンスを使用してカテーテルを使用する適用により、標的部位（例えば、脳または病変部位）に直接的に投与されてもよい。送達の他の方法、例えば、リポソーム送達または組成物を含浸させたデバイスからの拡散は、当該技術分野において公知である。組成物は、単一のボーラス中、複数の注射中、または（例えば、静脈内へのもしくは腹膜透析による）連続注入により投与されてもよい。

【0032】

治療有効量は、治療された動物またはヒトにおいて医学的に望ましい結果を生じさせることができる量である。抗ＩＬ－１α Ａｂ組成物の有効量は、脳虚血再灌流傷害の１つまたは複数の続発症の低減による測定で患者において臨床的有効性を示す量である。医学分野において周知のように、任意の１の動物またはヒトのための投薬量は多くの要因に依存し、該要因としては、対象のサイズ、身体表面積、年齢、投与される特定の組成物、性別、投与の時間および経路、全般的健康状態、ならびに並行して投与されている他の薬物が挙げられる。好ましい用量は、約３～１００（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の場合において、単回用量が有効なことがある。他の場合において、用量は、例えば、先行する投与後２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、または４週間に繰り返し与えられてもよい。

【実施例】

【0033】

実施例１：
１２週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６野生型（ＷＴ）マウスに一過性中大脳動脈閉塞（ｔＭＣＡＯ）を４５分間行った。虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）脳傷害を誘導するために、図１に示されるように一過性中大脳動脈閉塞（ｔＭＣＡＯ）を行った。簡潔に述べれば、誘導および維持のためにそれぞれ３％および１．５％のイソフルランを使用してマウスを麻酔した。鎮痛のために、ブプレノルフィンＨＣｌを切開側面に浸潤させた（０．１ｍｇ／Ｋｇ）。総、内および外頸動脈の解剖後の左ＭＣＡの起点まで総頚動脈に６－０シリコーンコートフィラメントを挿入することにより虚血を誘導した。次に、異なる投薬量（１０または６５μｇ／ｇ）でマウス抗マウスＩＬ－１α抗体（すなわち、Ｆｌｏ１－２ａ）またはアイソタイプ対照のいずれかをマウスに無作為に与えた。患者が救急治療室に現れ、血栓溶解療法に適格である場合にそうであるように再灌流での虚血事象後にＩＬ－１α阻害を行った。より特には、動物を無作為化して、フィラメント引き取りの時点（すなわち、再灌流期間の開始）に尾静脈注射を介して抗ＩＬ－１α抗体または適切なアイソタイプ対照抗体のいずれかを与えた。

【0034】

ｔＭＣＡＯの４８時間後に、発作（梗塞）体積を２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）染色により決定し、神経学的欠損を４ポイントスケール神経学的スコア（ベダーソン指数；Ｂｅｄｅｒｓｏｎら、Ｓｔｒｏｋｅ．１９８６年；１７：４７２～４７６頁）の他にロータロッド試験により決定した。ｔＭＣＡＯに曝露された対照（アイソタイプマッチ）抗体治療マウスにおいて、組織ＩＬ－１αレベルが同側半球中で上昇し、発作についてのこのサイトカインの病態生理学的関連性を強調した（図１）。再灌流の４８時間後に、より低い用量の抗ＩＬ－１α抗体を用いて治療されたマウスは、ＴＴＣ染色による評価で梗塞体積の微小な低減を示したが、発作後の神経学的欠損は改善されなかった（図示せず）。より高い用量の抗ＩＬ－１α抗体を用いた治療は、アイソタイプ対照と比較して発作サイズを３６％低減させ、ベダーソンおよびロータロッド試験による決定で神経学的成績を改善させた（図２～４）。

【0035】

虚血後血液脳関門（ＢＢＢ）損傷は発作のアウトカムに重要な影響を及ぼす。ＩｇＧ血管外漏出の免疫組織化学分析は、抗ＩＬ－１α治療動物においてＢＢＢ透過性の増加へのわずかな（統計的に有意でない）傾向を実証した。同様に、巨視的に評価された出血性変化の速度は群間で異ならなかった。同様に、傍細胞ＢＢＢ透過性の調節因子であるオクルディン、クローディン５およびＶＥ－カドヘリンの内皮発現は治療群および対照群の間で異ならなかった。

【0036】

発作後に、損傷関連分子パターンおよび他の炎症性メディエーターの局所的な上昇は循環性白血球を損傷部位に動員し、それらのエフェクター機能を促す。白血球遊走は、セレクチン、免疫グロブリンスーパーファミリーの接着分子およびインテグリンを含めて、脳微小血管内皮細胞および白血球の両方により発現される接着分子の複雑なパターンに依存する。ペナンブラ区画の共焦点顕微鏡法は、対照同腹仔と比較してＩＬ－１α阻害抗体を用いて治療された動物においてＰ－セレクチン、ＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の内皮発現の減少を実証した（図５～７）。虚血後に、脳の内在性免疫細胞（すなわち、小膠細胞）の活性化の他に、循環性プールからの単球の浸潤は、脳組織損傷に対して重要な寄与を与える。虚血後のＩＬ－１αの中和は、Ｉｂａ－１免疫染色による評価で対照マウスと比較して発作区画中の活性化マクロファージの数を有意に減少させた（図８）。活性化されると、マクロファージはいくつかの炎症促進性メディエーター、例えばＴＮＦ－α、ＩＬおよびＭＭＰを分泌し、それにより脳実質損傷を悪化させる。これらの中で、ＭＭＰ９は直接的な神経毒性効果を発揮することができる。Ｉｂａ－１のデータと合致して、ペナンブラ区画のさらなる免疫組織化学分析は、対照と比較してＩＬ－１α中和抗体を与えた動物においてＭＭＰ９組織レベルの低減を明らかにした（図９）。

【0037】

他の実施形態
本発明をその詳細な説明と組み合わせて記載したが、以上の記載は実例を示すことが意図され、本発明の範囲を限定することは意図されず、該範囲は添付の請求項の範囲により定義されることが理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は以下の請求項の範囲内である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】