▶ ２セブンティ バイオ インコーポレイテッドの特許一覧 ▶ インヒブリックス， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-07-08
(54)【発明の名称】ＣＤ３３標的免疫療法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20220701BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220701BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20220701BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20220701BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20220701BHJP
C12N 15/861 20060101ALI20220701BHJP
C12N 15/869 20060101ALI20220701BHJP
C12N 15/867 20060101ALI20220701BHJP
C12N 15/863 20060101ALI20220701BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20220701BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220701BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20220701BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220701BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220701BHJP
C07K 14/705 20060101ALN20220701BHJP
C12N 5/0783 20100101ALN20220701BHJP
C07K 14/085 20060101ALN20220701BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20220701BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20220701BHJP
C12P 21/02 20060101ALN20220701BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z
C12N5/10 ZNA
C07K19/00
C12N15/63 Z
C12N15/864 100Z
C12N15/861 Z
C12N15/869 Z
C12N15/867 Z
C12N15/863 Z
A61K35/17 Z
A61P35/00
A61P31/00
A61P29/00
A61P35/02
C07K14/705
C12N5/0783
C07K14/085
C07K16/28
C12P21/08
C12P21/02 C
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021566152
(86)(22)【出願日】2020-05-07
(85)【翻訳文提出日】2021-12-09
(86)【国際出願番号】 US2020031780
(87)【国際公開番号】W WO2020227474
(87)【国際公開日】2020-11-12
(31)【優先権主張番号】62/845,304
(32)【優先日】2019-05-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/898,392
(32)【優先日】2019-09-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521438515
【氏名又は名称】２セブンティ バイオ インコーポレイテッド
(71)【出願人】
【識別番号】518283218
【氏名又は名称】インヒブリックス， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ジャージョル， ジョーダン
(72)【発明者】
【氏名】ポグソン， マーク
(72)【発明者】
【氏名】レオン， ワイ－ハン
(72)【発明者】
【氏名】ジョーンズ， カイル
(72)【発明者】
【氏名】クラゴ， ウィリアム
(72)【発明者】
【氏名】サナブリア， アンジェリカ
(72)【発明者】
【氏名】ホランズ， アンドリュー
(72)【発明者】
【氏名】ガノ， ジェイコブ
(72)【発明者】
【氏名】マ， ミルトン
(72)【発明者】
【氏名】ティマー， ジョン シー．
(72)【発明者】
【氏名】エクケルマン， ブレンダン ピー．
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG20
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA94X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB43
4C087BB65
4C087CA16
4C087NA14
4C087ZB07
4C087ZB11
4C087ZB26
4C087ZB27
4C087ZB33
4C087ZB35
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患および免疫不全の少なくとも一つの症状、もしくはそれらと関連する状態を治療、予防または改善するための養子Ｔ細胞療法の改善されたＣＤ３３標的ポリペプチドおよび組成物を提供する。
【選択図】図１Ａ
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
非天然細胞であって、（ａ）ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、第一のポリペプチドと、
（ｂ）配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、およびＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含む第二のポリペプチド、を含み、
架橋因子は、前記非天然細胞表面上のポリペプチド複合体の形成を促進し、前記架橋因子は、前記第一および第二のポリペプチドの多量体形成ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される、非天然細胞。
【請求項2】
前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項１に記載の非天然細胞。
【請求項3】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである、請求項１または請求項２に記載の非天然細胞。
【請求項4】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項5】
前記第一のポリペプチドが、シグナルペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項6】
前記第二のポリペプチドが、シグナルペプチドおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項7】
前記第二のポリペプチドが、共刺激ドメインを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項8】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される、請求項７に記載の非天然細胞。
【請求項9】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである、請求項７または請求項８に記載の非天然細胞。
【請求項10】
前記第二のポリペプチドが、配列番号２２～３１のいずれか一つに記載される配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項11】
非天然細胞であって、（ａ）ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、第一のポリペプチドと、
（ｂ）配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、およびＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含む、第二のポリペプチドと、
（ｃ）前記第一および第二のポリペプチドの多量体形成ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される架橋因子、を含むポリペプチド複合体を含む、非天然細胞。
【請求項12】
前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項１１に記載の非天然細胞。
【請求項13】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである、請求項１１または請求項１２に記載の非天然細胞。
【請求項14】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項15】
前記第一のポリペプチドが、シグナルペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項16】
前記第二のポリペプチドが、シグナルペプチドおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含む、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項17】
前記第二のポリペプチドが、共刺激ドメインを含む、請求項１１～１６のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項18】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される、請求項１７に記載の非天然細胞。
【請求項19】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである、請求項１７または請求項１８に記載の非天然細胞。
【請求項20】
前記第二のポリペプチドが、配列番号２２～３１のいずれか一つに記載される配列を含む、請求項１１～１９のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項21】
前記細胞が、造血細胞である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項22】
前記細胞が、Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、またはγδ Ｔ細胞である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項23】
前記細胞が、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項24】
前記細胞が、免疫エフェクター細胞である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項25】
前記細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項26】
前記細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項27】
前記細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項28】
前記ＦＲＢ多量体形成ドメインおよび前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、前記第一のポリペプチドおよび前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項29】
融合ポリペプチドであって、（ａ）ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、第一のポリペプチドと、
（ｂ）ポリペプチド切断シグナル、ならびに
（ｃ）配列番号２～２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、およびＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含む、第二のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項30】
前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項２９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項31】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである、請求項２９または請求項３０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項32】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項33】
前記第一のポリペプチドが、シグナルペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項34】
前記第二のポリペプチドが、シグナルペプチドおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含む、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項35】
前記融合ポリペプチドが、配列番号３２～４１のいずれか一つに記載の配列を含む、請求項２９～３４のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項36】
前記第二のポリペプチドが、共刺激ドメインを含む、請求項２９～３５のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項37】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項38】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである、請求項３６または請求項３７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項39】
前記ポリペプチド切断シグナルが、ウイルス自己切断ポリペプチドである、請求項２９～３８のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項40】
前記ポリペプチド切断シグナルが、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである、請求項２９～３９のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項41】
前記ポリペプチド切断シグナルは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス－１（ＰＴＶ－１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである、請求項２９～４０のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項42】
前記融合ポリペプチドが、配列番号４２～６１のいずれか一つに記載の配列を含む、請求項２９～４１のいずれか一項に記載の非天然細胞。
【請求項43】
前記ＦＲＢ多量体形成ドメインおよび前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、前記第一のポリペプチドおよび前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項２９～４２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項44】
ポリペプチド複合体であって、（ａ）ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、第一のポリペプチドと、
（ｂ）配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、およびＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含む、第二のポリペプチドと、
（ｃ）前記第一および第二のポリペプチドの前記多量体形成ドメインと関連付けられ、それらの間に配置される架橋因子、を含む、ポリペプチド複合体。
【請求項45】
前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、ＦＫＢＰ１２である、請求項４４に記載のポリペプチド複合体。
【請求項46】
前記ＦＲＢポリペプチドが、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである、請求項４４または請求項４５に記載のポリペプチド複合体。
【請求項47】
前記架橋因子が、ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスからなる群から選択される、請求項４４～４６のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項48】
前記第一のポリペプチドが、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項４４～４７のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項49】
前記第二のポリペプチドが、ＣＤ４膜貫通ドメインを含む、請求項４４～４８のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項50】
前記第二のポリペプチドが、共刺激ドメインを含む、請求項４４～４９のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項51】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される、請求項５０に記載のポリペプチド複合体。
【請求項52】
前記第二のポリペプチドの前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである、請求項５０または請求項５１に記載のポリペプチド複合体。
【請求項53】
前記細胞が、造血細胞である、請求項４４～５２のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項54】
前記細胞が、Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、またはγδ Ｔ細胞である、請求項４４から請求項５３のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項55】
前記細胞が、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋細胞である、請求項４４～５４のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項56】
前記細胞が、免疫エフェクター細胞である、請求項４４～５５のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項57】
前記細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、請求項４４～５６のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項58】
前記細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項４４～５７のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項59】
前記細胞の源が、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である、請求項４４～５８のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項60】
前記ＦＲＢ多量体形成ドメインおよび前記ＦＫＢＰ多量体形成ドメインが、前記第一のポリペプチドおよび前記第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する、請求項４４～５９のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項61】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、ａ）配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、
ｂ）ヒンジドメイン、
ｃ）膜貫通ドメイン、
ｄ）一つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、および／または
ｅ）一次シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項62】
前記ＣＡＲが、５’～３’に：ａ）配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、
ｂ）ヒンジドメイン、
ｃ）膜貫通ドメイン、
ｄ）一つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、および／または
ｅ）一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項６１に記載のＣＡＲ。
【請求項63】
前記ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＡＭＮ、およびＰＤ１から単離される、請求項６１または請求項６２に記載のＣＡＲ。
【請求項64】
前記一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、およびＣＤ２７８からなる群から選択される共刺激分子から単離される、請求項６１～６３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項65】
前記ＣＡＲが、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ１３４共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む、６１～６４のいずれか一つに記載のＣＡＲ。
【請求項66】
配列番号６２～８１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含むＣＡＲ。
【請求項67】
請求項１～２８のいずれか一項に記載の第一または第二のポリペプチド、請求項２９～４３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド、または請求項６１～６６のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項68】
請求項１～２８のいずれか一項に記載の第一または第二のポリペプチド、請求項２９～４３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド、または請求項６１～６６のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、ｃＤＮＡ。
【請求項69】
請求項１～２８のいずれか一項に記載の第一または第二のポリペプチド、請求項２９～４３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド、または請求項６１～６６のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、ＲＮＡ。
【請求項70】
請求項６７～６９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項71】
前記ベクターが、発現ベクターである、請求項７０に記載のベクター。
【請求項72】
前記ベクターが、トランスポゾンである、請求項７０に記載のベクター。
【請求項73】
前記ベクターが、ｐｉｇｇｙＢＡＣトランスポゾンまたはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである、請求項７２に記載のベクター。
【請求項74】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項７０に記載のベクター。
【請求項75】
前記ベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターである、請求項７４に記載のベクター。
【請求項76】
前記レトロウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項７５に記載のベクター。
【請求項77】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）、ヒト免疫不全ウイルス２（ＨＩＶ－２）、ビスナ－マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群から選択される、請求項７６に記載のベクター。
【請求項78】
請求項１～２８のいずれか一項に記載の第一または第二のポリペプチド、請求項２９～４３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド、または請求項６１～６６のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む、細胞。
【請求項79】
前記細胞が造血細胞である、請求項７８に記載の細胞。
【請求項80】
前記細胞が免疫エフェクター細胞である、請求項７８または７９に記載の細胞。
【請求項81】
前記細胞が、Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、またはγδ Ｔ細胞である、請求項７８～８０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項82】
前記細胞が、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはその組み合わせを発現する、請求項７８～８１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項83】
前記細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、請求項７８～８２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項84】
前記細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項７８～８３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項85】
請求項１～２８および７８～８４のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項86】
生理学的に許容可能な担体および請求項１～２８および７８～８４のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項87】
請求項８５または請求項８６に記載の組成物の有効量を対象に投与することを含む、その必要のある前記対象を治療する方法。
【請求項88】
癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患および免疫不全の少なくとも一つの症状、もしくはそれらと関連する状態を治療、予防または改善する方法であって、請求項８５または請求項８６に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項89】
請求項８５または請求項８６に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、固形癌を治療する方法。
【請求項90】
前記固形癌が、肺癌、扁平上皮癌、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、食道癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、または脳癌からなる群から選択される、請求項８９に記載の方法。
【請求項91】
前記固形癌が、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、食道癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、神経膠腫、神経膠芽腫、または乏突起神経膠腫である、請求項８９または請求項９０に記載の方法。
【請求項92】
請求項８５または請求項８６に記載の組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、悪性血液疾患を治療する方法。
【請求項93】
前記悪性血液疾患は、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項９２に記載の方法。
【請求項94】
前記悪性血液疾患が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項９２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９（ｅ）の定めのもと、２０１９年９月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／８９８，３９２号明細書、および２０１９年５月８日に出願された米国仮特許出願第６２／８４５，３０４号明細書の利益を主張するものであり、当該出願はそれぞれ、その全体で参照により本明細書に援用される。
本出願は、米国特許法第１１９（ｅ）の定めのもと、２０１９年９月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／８９８，３９２号明細書、および２０１９年５月８日に出願された米国仮特許出願第６２／８４５，３０４号明細書の利益を主張するものであり、当該出願はそれぞれ、その全体で参照により本明細書に援用される。
【0002】
配列リストに関する記載
本出願に関する配列表は紙媒体の代わりにテキストフォーマットで提出され、参照により本明細書に援用される。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＢＬＢＤ＿１１９＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは３０２ＫＢであり、２０２０年５月５日に作成され、本明細書の出願と同時にＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出される。
本出願に関する配列表は紙媒体の代わりにテキストフォーマットで提出され、参照により本明細書に援用される。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＢＬＢＤ＿１１９＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは３０２ＫＢであり、２０２０年５月５日に作成され、本明細書の出願と同時にＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出される。
【0003】
本開示は、ＣＤ３３に向けられた改善された養子細胞療法に関する。より詳細には、本開示は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ含有の化学的に制御されたシグナル伝達分子、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ含有キメラ抗原受容体、細胞、およびそれを用いた関連する治療方法に関する。
【背景技術】
【0004】
関連分野に関する記載
世界中で癌は１９７５年～２０００年の間に倍増した。世界における罹患と死亡の２番目の主因は癌であり、２０１２年にはおよそ１４１０万人が新たに発症し、８２０万人が癌関連で死亡している。最も多い癌は乳癌、肺および気管支の癌、前立腺癌、結腸および直腸の癌、膀胱癌、皮膚のメラノーマ、非ホジキンリンパ腫、甲状腺癌、腎臓および腎盂の癌、子宮内膜癌、白血病、ならびに膵臓癌である。新たな癌症例件数は、今後２０年以内で２２００万件に上昇すると予想される。
世界中で癌は１９７５年～２０００年の間に倍増した。世界における罹患と死亡の２番目の主因は癌であり、２０１２年にはおよそ１４１０万人が新たに発症し、８２０万人が癌関連で死亡している。最も多い癌は乳癌、肺および気管支の癌、前立腺癌、結腸および直腸の癌、膀胱癌、皮膚のメラノーマ、非ホジキンリンパ腫、甲状腺癌、腎臓および腎盂の癌、子宮内膜癌、白血病、ならびに膵臓癌である。新たな癌症例件数は、今後２０年以内で２２００万件に上昇すると予想される。
【0005】
養子細胞療法は、複雑な生物シグナルを伝達して癌を治療する強力なパラダイムとして浮上した。低分子医薬や生物医薬とは対照的に、養子細胞療法は多種多様な感覚性および反応性のプログラム、そしてさらに明確化された遺伝子制御メカニズムによって、固有の治療タスクを発揮する可能性を有している。既存の方法は、主にｓｃＦｖベースのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に焦点を当ててきた。ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、不十分なＣＡＲ発現、ＣＡＲ Ｔ細胞のインビボでの増殖、注入後の細胞の急速な消失、期待外れの臨床活性、および抗原の逃避により、限られた成功しか達成されていない。
【0006】
局所的生理学的環境に関連する化学的および／または生物学的情報を感知および統合するための改善されたＣＡＲアーキテクチャ（ＣＡＲｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｓ）および／または改善された機構を有する免疫エフェクター細胞を改造する必要性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示は、概して、部分的には、ＶＨＨベースの二量体化剤調節免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ）およびＣＤ３３に向けられたＶＨＨベースのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、それをコードするポリヌクレオチド、その組成物、ならびに癌治療のためのそれを作製および使用する方法に関する。
【0008】
特定の実施形態では、ＶＨＨ ＤＡＲＩＣまたはＶＨＨ ＣＡＲは、全長ＣＤ３３に結合する。特定の実施形態では、ＶＨＨ ＤＡＲＩＣまたはＶＨＨ ＣＡＲは、ＣＤ３３スプライスバリアントに結合する。特定の実施形態では、ＣＤ３３スプライスバリアントは、ヒトＣＤ３３遺伝子のエクソン２によってコードされる１２４アミノ酸を欠く（ＣＤ３３ Ｃ２バリアント）。特定の実施形態では、ＣＤ３３スプライスバリアントは、エクソン７ａに存在する早期翻訳停止シグナルのために５４個のカルボキシ末端アミノ酸を欠く。特定の実施形態では、ＣＤ３３スプライスバリアントは、エクソン７ａに存在する早期翻訳停止シグナルのために、エクソン２および５４個のカルボキシ末端アミノ酸によってコードされる１２４個のアミノ酸を欠く。
【0009】
特定の実施形態では、ＶＨＨ ＤＡＲＩＣまたはＶＨＨ ＣＡＲは、全長ＣＤ３３およびＣＤ３３スプライスバリアントの両方に結合する。
【0010】
様々な実施形態において、非天然細胞は、ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチドと、配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体を含む第二のポリペプチド、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、ならびにＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメインを含み、架橋因子が、非天然細胞の表面上でのポリペプチド複合体の形成を促進し、架橋因子は、第一および第二のポリペプチドの多量体形成ドメインに会合し、それらの間に配置される。
【0011】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0012】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0013】
特定の実施形態において、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【0014】
いくつかの実施形態において、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである。
【0015】
ある実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムス。
【0016】
様々な実施形態において、第一のポリペプチドは、シグナルペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0017】
特定の実施形態において、第二のポリペプチドは、シグナルペプチドおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含む。
【0018】
さらなる実施形態において、第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。
【0019】
いくつかの実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される。
【0020】
追加の実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである。
【0021】
さらなる実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２２～３１のいずれか一つに記載される配列を含む。
【0022】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号３０に記載の配列を含む。
【0023】
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含む。
【0024】
様々な実施形態において、非天然細胞は、ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチドと、配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体を含む第二のポリペプチド、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、ならびにＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに、第一および第二のポリペプチドの多量体形成ドメインに会合し、それらの間に配置される架橋因子を含むポリペプチド複合体を含む。
【0025】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0026】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0027】
特定の実施形態において、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【0028】
ある特定の実施形態において、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである。
【0029】
いくつかの実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムス。
【0030】
追加の実施形態において、第一のポリペプチドは、シグナルペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0031】
特定の実施形態において、第二のポリペプチドは、シグナルペプチドおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含む。
【0032】
いくつかの実施形態において、第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。
【0033】
様々な実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される。
【0034】
追加の実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである。
【0035】
さらなる実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２２～３１のいずれか一つに記載される配列を含む。
【0036】
特定の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号３０に記載の配列を含む。
【0037】
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含む。
【0038】
特定の実施形態では、細胞は、造血細胞である。
【0039】
特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、またはγδ Ｔ細胞である。
【0040】
さらなる実施形態において、細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋細胞である。
【0041】
いくつかの実施形態において、細胞は、免疫エフェクター細胞である。
【0042】
いくつかの実施形態において、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である。
【0043】
追加の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【0044】
様々な実施形態では、細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である。
【0045】
特定の実施形態において、ＦＲＢ多量体形成ドメインおよびＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する。
【0046】
いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナルを含む第一のポリペプチドと、配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアントを含む第二のポリペプチド、ならびにＣＤ４膜貫通ドメインまたはＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。
【0047】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0048】
特定の実施形態において、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【0049】
ある特定の実施形態において、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである。
【0050】
いくつかの実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムス。
【0051】
追加の実施形態において、第一のポリペプチドは、シグナルペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0052】
特定の実施形態において、第二のポリペプチドは、シグナルペプチドおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含む。
【0053】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号３２～４１のいずれか一つに記載の配列を含む。
【0054】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号４０に記載の配列を含む。
【0055】
さらなる実施形態において、第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。
【0056】
様々な実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される。
【0057】
追加の実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである。
【0058】
ある実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ポリペプチドである。
【0059】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断２Ａポリペプチドである。
【0060】
様々な実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、以下からなる群から選択されるウイルス自己切断ポリペプチドである：口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス－１（ＰＴＶ－１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチド。
【0061】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４２～６１のいずれか一つに記載の配列を含む。
【0062】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号５０または６０のいずれか一つに記載の配列を含む。
【0063】
さらなる実施形態において、ＦＲＢ多量体形成ドメインおよびＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する。
【0064】
様々な実施形態において、ポリペプチド複合体は、ＦＲＢ多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、ＣＤ８α膜貫通ドメインもしくはＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、および／またはＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む第一のポリペプチドと、配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体を含む第二のポリペプチド、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインポリペプチドまたはそのバリアント、ならびにＣＤ４膜貫通ドメインもしくはＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに、第一および第二のポリペプチドの多量体形成ドメインに会合し、それらの間に配置される架橋因子を含む。
【0065】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0066】
特定の実施形態において、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、ＦＫＢＰ１２である。
【0067】
追加の実施形態において、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌである。
【0068】
特定の実施形態では、架橋因子は、以下からなる群から選択される：ＡＰ２１９６７、シロリムス、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムス。
【0069】
特定の実施形態において、第一のポリペプチドは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0070】
様々な実施形態において、第二のポリペプチドは、ＣＤ４膜貫通ドメインを含む。
【0071】
さらなる実施形態において、第二のポリペプチドは、共刺激ドメインを含む。
【0072】
いくつかの実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＲＦＳ２５、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）からなる群から選択される共刺激分子から選択される。
【0073】
特定の実施形態において、第二のポリペプチドの共刺激ドメインは、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２から単離された共刺激ドメインである。
【0074】
特定の実施形態では、細胞は、造血細胞である。
【0075】
様々な実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、またはγδ Ｔ細胞である。
【0076】
様々な実施形態では、細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋の細胞である。
【0077】
追加の実施形態において、細胞は、免疫エフェクター細胞である。
【0078】
いくつかの実施形態において、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である。
【0079】
特定の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【0080】
追加的実施形態では、細胞の源は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍である。
【0081】
さらなる実施形態において、ＦＲＢ多量体形成ドメインおよびＦＫＢＰ多量体形成ドメインは、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドが発現されるとき、細胞外に局在する。
【0082】
好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含む。
【0083】
特定の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、配列番号２～２１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、一つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0084】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0085】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0086】
様々な実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２～２１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、一つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを５’から３’に含む。
【0087】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0088】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ抗体は、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を有する。
【0089】
特定の実施形態では、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＡＭＮ、およびＰＤ１から単離される。
【0090】
追加的な実施形態では、一つ以上の共刺シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される共刺激分子から単離される：ＣＤ２８、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、およびＣＤ２７８。
【0091】
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ１３４共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0092】
さらなる実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６２～８１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含む。
【0093】
さらなる実施形態では、ＣＡＲは、配列番号７０または８０のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を含む。
【0094】
いくつかの実施形態では、第一または第二のポリペプチド、融合ポリペプチド、または本明細書に企図されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドが提供される。
【0095】
様々な実施形態では、第一または第二のポリペプチド、融合ポリペプチド、または本明細書に企図されるＣＡＲをコードするｃＤＮＡが提供される。
【0096】
様々な実施形態では、第一または第二のポリペプチド、融合ポリペプチド、または本明細書に企図されるＣＡＲをコードするＲＮＡが提供される。
【0097】
様々な実施形態では、本明細書に企図されるポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。
【0098】
特定の実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。
【0099】
特定の実施形態では、ベクターは、トランスポゾンである。
【0100】
さらなる実施形態では、ベクターは、ｐｉｇｇｙＢＡＣトランスポゾン、またはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである。
【0101】
特定の実施形態において、ベクターは、ウイルスベクターである。
【0102】
特定の実施形態では、ベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターである。
【0103】
追加の実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。
【0104】
様々ン実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）、ヒト免疫不全ウイルス２（ＨＩＶ－２）、ビスナ－マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群から選択される。
【0105】
さらなる実施形態では、第一または第二のポリペプチド、融合ポリペプチド、または本明細書に企図されるＣＡＲを含む細胞が提供される。
【0106】
特定の実施形態において、細胞は、造血細胞である。
【0107】
特定の実施形態では、細胞は、免疫エフェクター細胞である。
【0108】
様々な実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、αβ Ｔ細胞、またはγδ Ｔ細胞である。
【0109】
いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはそれらの組み合わせを発現する。
【0110】
一部の実施形態では、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である。
【0111】
さらなる実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【0112】
特定の実施形態では、組成物は、本明細書で企図される細胞を含む。
【0113】
特定の実施形態では、組成物は、生理学的に許容可能な担体と、本明細書で企図される細胞とを含む。
【0114】
追加の実施形態において、有効量の本明細書で企図される組成物を対象に投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法。
【0115】
特定の実施形態において、癌、感染性疾患、自己免疫性疾患、炎症性疾患、および免疫不全、またはそれらに関連する状態の少なくとも一つの症状を治療、予防、または緩和する方法は、有効量の本明細書で企図される組成物を対象に投与することを含む。
【0116】
いくつかの実施形態において、固形癌を治療する方法は、有効量の本明細書で企図される組成物を対象に投与することを含む。
【0117】
様々な実施形態において、固形癌は、肺癌、肝癌、胃癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膵癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、皮膚癌およびメラノーマからなる群から選択される。
【0118】
特定の実施形態では、悪性血液疾患を治療する方法は、本明細書に予期される組成物の有効量を対象に投与することを含む。
【0119】
様々な実施形態では、悪性血液疾患は、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である。
【0120】
特定の実施形態において、悪性血液疾患は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【図面の簡単な説明】
【0121】
【図4A】図４Ａは、２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、ＣＤ３３＋ ＴＨＰ－１細胞で培養されたＣＤ３３ ＶＨＨ１－５ ＤＡＲＩＣまたは対照細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図4B】図４Ｂは、２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、ＣＤ３３＋ ＴＨＰ－１細胞で培養されたＣＤ３３ ＶＨＨ９－１０ ＤＡＲＩＣまたは対照細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図4C】図４Ｃは、２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、全長ＣＤ３３（ＣＤ３３Ｍ）またはＣＤ３３スプライスバリアント（ＣＤ３３ｍ、Ｃ２）を発現する改変された２９３Ｔ細胞で培養されたＣＤ３３ ＶＨＨ９－１０ ＤＡＲＩＣまたは対照細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図5B】図５Ｂは、２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、ＭＶ４－１１細胞またはＣＤ３３－ＫＯ細胞で共培養された抗ＣＤ３３ ＶＨＨ９ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞またはＵＴＤ Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図5C】図５Ｃは、２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、ＵＴＤ Ｔ細胞、抗ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞、ＣＤ３３ｍスプライスバリアント（ＣＤ３３－ＫＯ－Ｃ２細胞、右パネル）を発現するように操作されたＭＶ４－１１細胞（左パネル）またはＣＤ３３－ＫＯ細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図6】図６は、２４時間、可溶性ＣＤ３３（ＣＤ３３－Ｆｃ）およびＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、ＣＤ３３＋ ＴＨＰ－１細胞で共培養された抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図7】図７は、２４時間、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、異なる量のｍＲＮＡコードＣＤ３３コードでトランスフェクトされたＣＤ３３ｎｅｇ ２９３Ｔ細胞と共培養された抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ抗細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【0122】
配列識別子の簡単な説明
配列番号１は、完全長ヒトＣＤ３３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２～２１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインのアミノ酸配列を記載する。
配列番号２２～３１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３２～４１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４２～５１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ．ＯＸ４０融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５２～６１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ．ＴＮＦＲ２融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６２～８１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲのアミノ酸配列を記載する。
配列番号８２は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素のアミノ酸配列を記載する。
配列番号８３は、Ｋｏｚａｋ配列のポリヌクレオチド配列を記載する。
配列番号８４～９４は、様々なリンカーのアミノ酸配列を記載する。
配列番号９５～１１９は、プロテアーゼ切断部位および自己切断性ポリペプチドの切断部位のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１は、完全長ヒトＣＤ３３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２～２１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインのアミノ酸配列を記載する。
配列番号２２～３１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３２～４１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４２～５１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ．ＯＸ４０融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５２～６１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ．ＴＮＦＲ２融合タンパク質のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６２～８１は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲのアミノ酸配列を記載する。
配列番号８２は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素のアミノ酸配列を記載する。
配列番号８３は、Ｋｏｚａｋ配列のポリヌクレオチド配列を記載する。
配列番号８４～９４は、様々なリンカーのアミノ酸配列を記載する。
配列番号９５～１１９は、プロテアーゼ切断部位および自己切断性ポリペプチドの切断部位のアミノ酸配列を記載する。
【0123】
前述の配列において、Ｘａａは存在する場合、任意のアミノ酸またはアミノ酸の非存在を指してもよい。好ましい実施形態では、ＸａａＸａａはアミノ酸配列ＳＳまたはＫＰを指す。
【発明を実施するための形態】
【0124】
Ａ．概要
癌は、世界の主要な死因の一つである。がんの約１０％は、白血病、リンパ腫、および骨髄腫を含む悪性血液疾患である。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、成人において最も一般的で致死的な悪性血液疾患である。過去４０年間における大規模な科学的発見と新規の治療法にもかかわらず、特に成人患者集団におけるＡＭＬの治療転帰は依然として陰鬱なものである。標準的な化学療法は、選択された患者に完全寛解を誘発することができるが、患者の大部分が最終的に再発し、疾患に屈する。２０１２年、ＡＭＬの世界的な発生率は約３５１，９６５人であり、約２６５，４６１人がＡＭＬにより死亡した。
癌は、世界の主要な死因の一つである。がんの約１０％は、白血病、リンパ腫、および骨髄腫を含む悪性血液疾患である。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、成人において最も一般的で致死的な悪性血液疾患である。過去４０年間における大規模な科学的発見と新規の治療法にもかかわらず、特に成人患者集団におけるＡＭＬの治療転帰は依然として陰鬱なものである。標準的な化学療法は、選択された患者に完全寛解を誘発することができるが、患者の大部分が最終的に再発し、疾患に屈する。２０１２年、ＡＭＬの世界的な発生率は約３５１，９６５人であり、約２６５，４６１人がＡＭＬにより死亡した。
【0125】
ＣＤ３３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）白血病芽球の大部分、およびおそらくは白血病幹細胞に発現する。ＣＤ３３は、その低発現および遅い内部移行のため、困難な標的であり、これらの特徴は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害および細胞内薬物蓄積、ならびに結果として非標識および毒素運搬抗体の活性を制限する。
【0126】
本開示は概して、ＣＤ３３に結合する二量体形成剤調節免疫受容体複合体（ＤＡＲＩＣ）を使用して、養子細胞療法の空間的、時間制御を調節する改善された組成物および方法に関する。特定の学説のいずれにも拘束されることは望まないが、本明細書に予期されるＤＡＲＩＣ組成物および方法は、当分野において既存のＣＡＲ Ｔ細胞療法に、限定されないが免疫エフェクター細胞のシグナル伝導性結合およびシグナル伝達活性に対する空間的および時間的の両方の制御をはじめとする多くの利益をもたらす。ＤＡＲＩＣの時間的制御は、ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の架橋因子介在性会合を通じて、シグナル伝達のＤＡＲＩＣ機構を誘発する。ＤＡＲＩＣの空間的制御は、ＤＡＲＩＣ結合構成要素のＤＡＲＩＣ結合ドメインによるＣＤ３３の認識を通じて、シグナル伝達機構に従事する。このようにして、ＤＡＲＩＣ免疫エフェクター細胞は、ＣＤ３３を発現する標的細胞と架橋因子の両方が存在する場合に活性化状態になる。
【0127】
本開示はまた、限定されないが、ｔｏｎｉｃ ｓｉｇｎａｌｉｎｇまたは抗原非依存性シグナル伝達、発現不良および／または治療量以下の活性を含む、既存のＣＡＲ Ｔ療法の潜在的な限界を克服する、改善された抗ＣＤ３３ ＣＡＲアーキテクチャに関する。
【0128】
様々な実施形態では、本開示は、例えばＣＤ３３、例えば、全長ＣＤ３３および／またはＣＤ３３スプライスバリアントを発現する癌、例えばＡＭＬに対して抗癌反応を生成する抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣまたは抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを企図する。
【0129】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣは、多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアント、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含むポリペプチド（ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素）、ならびに抗ＣＤ３３ ＶＨＨ、多量体形成ドメインポリペプチドもしくはそのバリアントを含むポリペプチド（ＤＡＲＩＣ結合要素）、膜貫通ドメイン、ならびに任意に共刺激ドメインを含む。架橋因子の存在下で、ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、架橋因子を通じて互いに会合して、ＣＤ３３を発現する細胞を標的にする機能的に活性なＤＡＲＩＣを形成する。
【0130】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の多量体形成ドメインは、細胞外に配置される。多量体形成ドメインの細胞外配置によって、限定されないが、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインのより効率的な配置、架橋因子制御に対するより高い時間的感受性、および特定の架橋因子の非免疫抑制性用量を使用することによるより低い毒性を含む、細胞内配置を超える多くの利点が提供される。
【0131】
ＤＡＲＩＣ、ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をコードするポリヌクレオチド；ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＤＡＲＩＣタンパク質複合体、ＤＡＲＩＣ融合タンパク質；ＤＡＲＩＣ、ＤＡＲＩＣ結合構成要素、およびＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をコードするポリヌクレオチドを含み、かつ／またはそれらを発現する細胞；ならびに免疫障害を治療するためのそれらの使用方法が本明細書で企図される。
【0132】
組み換え（すなわち、操作された）ＤＮＡ、ペプチドおよびオリゴヌクレオチド合成、免疫アッセイ、組織培養、形質変換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、精製ならびに関連する技術および手法は、本明細書を通じて引用され、考察される、微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学および免疫学における様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されるように一般的に行われてもよい。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、３ｄ ｅｄ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、ｕｐｄａｔｅｄ Ｊｕｌｙ ２００８）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ ＵＳＡ，１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ ２００１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）；Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｊｕｌｉｅ Ｌｏｇａｎ，Ｋｉｒｓｔｉｎ Ｅｄｗａｒｄｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，２００９，Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）；Ｇｕｔｈｒｉｅ ａｎｄ Ｆｉｎｋ，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，Ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｎｅｘｔ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｊａｎｉｔｚ，２００８ Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ）；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｐａｒｋ，Ｅｄ．，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ ＣＣ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）；Ｒｏｉｔｔ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８８）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）；Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ならびに例えばＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどの雑誌の研究論文を参照のこと。
【0133】
Ｂ．定義
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書で使用されるべきある特定の用語の定義を提供することは、その理解に役立ち得る。
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書で使用されるべきある特定の用語の定義を提供することは、その理解に役立ち得る。
【0134】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似した、または均等の方法および材料を、特定の実施形態の実施または検証に使用することができるが、本明細書においては好ましい組成物、方法および材料の実施形態を開示している。本開示の目的に対し、以下の用語を、以下に規定する。
【0135】
「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」といった冠詞は、本明細書において、当該冠詞の文法上の対象の一つまたは複数（すなわち少なくとも一つ、または一つもしくは複数）を指すために使用される。例示として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」とは、一つの要素、または一つもしくは複数の要素を意味する。
【0136】
選択肢（例えば「または」）の使用は、いずれか一つ、両方、またはその選択肢の任意の組み合わせを意味すると理解されたい。
【0137】
「および／または」という用語は、いずれか一つ、またはその選択肢の両方を意味すると理解されたい。
【0138】
本明細書において使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さに対し、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％までも変化する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さを指す。一つの実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さに関し、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％または±１％の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さの範囲を指す。
【0139】
一つの実施形態では、例えば１～５、約１～５、または約１～約５といった範囲は、当該範囲に包含される各数値を指す。例えば一つの非限定的で、単なる例示的な実施形態において、「１～５」という範囲は、１、２、３、４、５；または１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、もしくは５．０；または１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、もしくは５．０という表現と同等である。
【0140】
本明細書において使用される場合、「実質的に」という用語は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さと比較して、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上である数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さを指す。一つの実施形態において、「実質的に同一」とは、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さとおよそ同じである、例えば生理学的効果などの効果を生じさせる数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さを指す。
【0141】
本明細書全体を通じて、別段であることが要求されない限り、「含む」および「含むこと」という文言は、記載される工程、または要素、または工程もしくは要素の群の含有を示唆するが、任意の他の工程、または要素、または工程もしくは要素の群の除外は示唆しないことを理解されたい。「～からなる」とは、「～からなる」という文言に続くものを含むが、それらに限定されることを意味する。ゆえに、「～からなる」という文言は、列記される要素が必要または義務であり、他の要素は存在し得ないことを示す。「本質的に～からなる」とは、当該文言の後に列記される任意の要素、および列記される要素に関して本開示中に特定される活性もしくは作用に干渉しない、または寄与しない他の要素に限定される任意の要素を含むことを意味する。ゆえに、「本質的に～からなる」という文言は、列記される要素が必須または義務であり、しかし列記される要素の活性または作用に実質的に影響を与える他の要素は存在しないことを示す。
【0142】
本明細書全体を通じて「一つの実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある実施形態」、「追加的な実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはそれらの組み合わせに対する参照は、当該実施形態と関連付けて記載される特定の性質、構造または特徴が、少なくとも一つの実施形態に含まれることを意味する。ゆえに本明細書全体の様々な箇所での前述の文言の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指しているわけではない。さらに特定の性質、構造または特徴は、一つ以上の実施形態において任意の適切な様式で組み合わされ得る。さらに、一つの実施形態でのある性質の肯定的な列挙は、特定の実施形態では当該性質の除外の根拠として機能することを理解されたい。
【0143】
「抗原（Ａｇ）」とは、動物へ注射される、または動物に吸収される組成物（例えば癌特異的タンパク質を含む組成物など）を含む、動物において抗体産生またはＴ細胞反応を刺激し得る化合物、組成物または物質を指す。抗原の例としては限定されないが、脂質、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ペプチドまたは核酸が挙げられる。抗原は、例えば本開示抗原などの異種抗原により誘導される産物を含む、特異的な液性免疫または細胞性免疫の産物と反応する。
【0144】
「標的抗原」または「目的の標的抗原」は、本明細書で企図される結合ドメインが結合するように設計される、ＣＤ３３の一部を指す。特定の実施形態では、標的抗原は、配列番号１に記載されるアミノ酸配列のエピトープである。
【0145】
「ＣＤ３３」は、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン３（ＳＩＧＬＥＣ－３）またはＧＰ６７としても知られる細胞表面受容体を指す。ＣＤ３３遺伝子は、染色体１９上に位置し、約６７ｋＤのグリコシル化タンパク質を産生する。ＣＤ３３は、二つのＩｇ様ドメイン、一つのＶセットドメインと一つのＣ２セットドメインを有する。ＣＤ３３は、細胞間相互作用を媒介し、免疫細胞を静止状態に維持する役割を担う。ＣＤ３３は、アルファ－２，３、およびより熱心にアルファ－２，６結合シアル酸担持グリカンを認識し結合する。Ｃ１ｑまたはシアル酸付加糖タンパク質等のリガンドの結合において、ＣＤ３３細胞質側末端に位置する二つの免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）が、ＬＣＫ等のＳｒｃ様キナーゼによってリン酸化される。これらのリン酸化は、タンパク質－チロシンホスファターゼＰＴＰＮ６／ＳＨＰ－１およびＰＴＰＮ１１／ＳＨＰ－２の動員および活性化のためのドッキング部位を提供する。ＣＤ３３はまた、少なくとも三つの識別されたスプライスバリアントを有する。ＣＤ３３ΔＥ２スプライスバリアントは、ヒトＣＤ３３遺伝子のエクソン２（全長ＣＤ３３のアミノ酸１３～１３９、例えば、ＮＰ＿００１０７６０８７．１、Ｃ２）によってコードされるアミノ酸配列を欠く。ＣＤ３３７ａスプライスバリアントは、エクソン７ａ（例えば、ＮＰ＿００１１７１０７９．１）に存在する早期翻訳停止シグナルにより、５４個のカルボキシ末端アミノ酸を欠く。ＣＤ３３ΔＥ２／７ａは、エクソン２および５４カルボキシ末端アミノ酸によってコードされるアミノ酸を欠く。ＣＤ３３は通常、正常なＢ細胞および活性化されたＴ細胞およびナチュラルキラー細胞のサブセット上で発現されるが、造血幹細胞上または造血系外では発現されない。全長ＣＤ３３および／またはＣＤ３３スプライスバリアントの両方は、大多数のＡＭＬ患者において急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）芽球細胞でも発現する。
【0146】
「抗体」とは、抗原のエピトープを特異的に認識し、結合する少なくとも軽鎖または重鎖の免疫グロブリン可変領域を含有するポリペプチドである結合物質を指し、そうした抗原としては例えば免疫細胞により認識される抗原決定基を含有する、脂質、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ペプチドまたは核酸が挙げられる。
【0147】
「ＶＨ」または「ＶＨ」への言及は、免疫グロブリン重鎖またはその抗原結合断片の可変領域を指す。
【0148】
「重鎖抗体」は、二つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．方法２３１：２５－３８（１９９９）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。「カメリド抗体」は、二つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない、ラクダ、アルパカ、またはリャマから単離された抗体を指す。「ヒト化ＶＨＨ」または「ヒト化ラクダ様抗体」は、ヒトレシピエントにおける抗体の潜在的免疫原性を低減するためにヒト化を受けた非ヒトＶＨＨまたはラクダ様抗体を指す。
【0149】
本明細書で使用される場合、「ＶＨＨ」、「ＶＨＨ抗体」または「ＶＨＨドメイン」は、重鎖抗体の可変領域の最も小さい既知の抗原結合単位を含む抗体断片を指す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ，ｅｔ ａｌ、ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２１：３４９０－３４９８（２００７））。
【0150】
「リンカー」とは、様々なポリペプチドドメイン間の複数のアミノ酸残基を指し、分子の適切な間隔および立体構造のために付加される。特定の実施形態において、リンカーは、一つ以上のＶＨＨドメイン、ヒンジドメイン、多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを分離する。
【0151】
本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適したリンカーの例示としては、限定されないが、以下のアミノ酸配列が挙げられる：ＧＧＧ；ＤＧＧＧＳ（配列番号８４）；ＴＧＥＫＰ（配列番号８５）（例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ５５２５－５５３０（１９９７）を参照のこと）；ＧＧＲＲ（配列番号８６）（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ ｅｔ ａｌ．１９９５，ｓｕｐｒａ）；（ＧＧＧＧＳ）ｎ 、式中、ｎ＝１、２、３、４または５（配列番号８７）（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９３，１１５６－１１６０（１９９６．）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号８８）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：１０６６－１０７０）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号８９）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号９０）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号９１）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号９２）；ＬＲＱＫＤ（ＧＧＧＳ）２ ＥＲＰ（配列番号９３）。あるいは、可塑性リンカーを、ＤＮＡ結合部位とペプチド自体の両方をモデル化することができるコンピュータープログラム（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ ＆ Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ ９０：２２５６－２２６０（１９９３），ＰＮＡＳ ９１：１１０９９－１１１０３（１９９４）を使用して、またはファージディスプレイ法により合理的に設計することができる。一つの実施形態では、リンカーは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号９４）（Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ、１０１（４）：１６３７－１６４４（２００３））。
【0152】
「スペーサードメイン」とは、二つのドメインを分離させるポリペプチドを指す。一実施形態では、スペーサードメインは、エフェクター細胞の表面からＶＨＨドメインを離れさせ、適切な細胞／細胞の接触、抗原結合、および活性化を可能にする（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９９；６：４１２－４１９）。特定の実施形態では、スペーサードメインは、一つ以上のＶＨＨドメイン、多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを分離させる。スペーサードメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。ある実施形態では、スペーサードメインは、一つ以上の重鎖定常領域、例えばＣＨ２およびＣＨ３などを含む免疫グロブリン部分である。スペーサードメインは、天然免疫グロブリンヒンジ領域、または改変免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでもよい。
【0153】
「ヒンジドメイン」とは、エフェクター細胞の表面から抗原結合ドメインを離れて配置させ、適切に細胞／細胞を接触させる、抗原結合させる、および活性化させることに重要な役割を果たすポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ポリペプチドは、結合ドメインと多量体形成ドメインの間、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）の間、または多量体形成ドメインと膜貫通ドメインの間に一つ以上のヒンジドメインを含んでもよい。ヒンジドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。ヒンジドメインは、天然免疫グロブリンヒンジ領域、または改変免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでもよい。
【0154】
本明細書において使用される場合、「多量体形成ドメイン」とは、別の異なるポリペプチドと直接、または例えば化学誘導性二量体形成剤などの架橋分子を介して優先的に相互作用する、または会合するポリペプチドを指し、この場合において異なる多量体形成ドメインの相互作用は、多量体形成に大きく貢献し、または多量体形成を効率的に促進する（すなわち、二量体、三量体または多分節複合体の形成であり、それらはホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ多量体、ヘテロ多量体であり得る）。多量体形成ドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【0155】
本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適した多量体形成ドメインの例示としては、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＦＫＢＰ－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、カルシニューリンポリペプチドもしくはそのバリアント、シクロフィリンポリペプチドもしくはそのバリアント、細菌ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＰＹＲ１－ｌｉｋｅ １（ＰＹＬ１）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ １（ＡＢＩ１）ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＧＩＢ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＧＡＩポリペプチドもしくはそのバリアントが挙げられる。
【0156】
本明細書において使用される場合、「ＦＫＢＰ－ラパマイシン結合ポリペプチド」という用語は、ＦＲＢポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合ポリペプチドである。本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適したＦＲＢポリペプチドは概して少なくとも約８５～約１００アミノ酸残基を含有する。ある実施形態では、ＦＲＢポリペプチドは、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｌ３４０７５．１に関して、Ｉｌｅ－２０２１～Ｌｙｓ－２１１３の９３アミノ酸配列を含み、およびＴ２０９８Ｌの変異を含む。本明細書において予期されるＦＲＢポリペプチドは、架橋因子を介してＦＫＢＰポリペプチドに結合し、それにより三重複合体を形成する。
【0157】
本明細書において使用される場合、「ＦＫ５０６結合タンパク質」という用語は、ＦＫＢＰポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＦＫＢＰポリペプチドは、ＦＫＢＰ１２ポリペプチド、またはＦ３６Ｖ変異を含むＦＫＢＰ１２ポリペプチドである。ある実施形態では、ＦＫＢＰドメインは、「ラパマイシン結合ドメイン」とも呼称される場合がある。様々なＦＫＢＰ種のヌクレオチド配列、クローニング、および他の態様に関する情報は、当分野に公知である（例えば、Ｓｔａｅｎｄａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４６：６７１，１９９０（ｈｕｍａｎ ＦＫＢＰ１２）；Ｋａｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１４：３６１，１９９６を参照のこと）。本明細書において予期されるＦＫＢＰポリペプチドは、架橋因子を介してＦＲＢポリペプチドに結合し、それにより三重複合体を形成する。
【0158】
「架橋因子」とは、二つ以上の多量体形成ドメインと会合し、それらの間に配置される分子を指す。特定の実施形態では、多量体形成ドメインは架橋因子の存在下でのみ、ポリペプチド複合体の形成に大きく貢献し、または効率的に促進する。特定の実施形態では、多量体形成ドメインは、架橋因子の非存在下では、ポリペプチド複合体の形成に貢献せず、または効率的に促進しない。本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適した架橋因子の例としては限定されないが、ＡＰ２１９６７、ラパマイシン（シロリムス）もしくはそのラパログ（ｒａｐａｌｏｇ）、クーママイシン（ｃｏｕｍｅｒｍｙｃｉｎ）もしくはその誘導体、ジベレリンもしくはその誘導体、アブシジン酸（ＡＢＡ：ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ）もしくはその誘導体、メトトレキサートもしくはその誘導体、シクロスポリンＡもしくはその誘導体、ＦＫＣｓＡもしくはその誘導体、トリメトプリム（Ｔｍｐ）－ＦＫＢＰの合成リガンド（ＳＬＦ：ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ＦＫＢＰ）もしくはその誘導体、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【0159】
ラパマイシン類似体（ラパログ）としては限定されないが、米国特許第６，６４９，５９５号に記載されるものが挙げられる。ラパログ構造は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、架橋因子は、ラパマイシンと比較して免疫抑制性効果が大きく減少したラパログである。好ましい実施形態では、ラパログは、ＡＰ２１９６７（Ｃ－１６－（Ｓ）－７－メチルインドールラパマイシンとしても知られている、ＩＣ５０＝１０ｎＭ、化学的に改変された非免疫抑制性ラパマイシンアナログ）である。本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適したラパログの他の例としては限定されないが、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ）およびゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）が挙げられる。
【0160】
「免疫抑制性効果が大きく減少した」とは、臨床的に測定される、もしくはインビトロで適切に測定される（例えばＴ細胞増殖の阻害など）、またはヒト免疫抑制活性のインビボサロゲートで測定される、同じ投与量に対して観察される、または予測される免疫抑制性効果の少なくとも０．１～０．００５倍未満を指す。
【0161】
「膜貫通ドメイン」または「ＴＭドメイン」は、ポリペプチドを細胞膜に固定させるドメインである。ＴＭドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【0162】
「エフェクター機能」または「エフェクター細胞機能」という用語は、免疫エフェクター細胞の専門的な機能を指す。エフェクター機能としては限定されないが、活性化、サイトカイン産生、増殖、および細胞傷害性因子の放出を含む細胞障害活性、または免疫エフェクター細胞上に発現される受容体への抗原結合で惹起される他の細胞反応が挙げられる。
【0163】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」または「エンドドメイン（ｅｎｄｏｄｏｍａｉｎ）」とは、エフェクター機能性シグナルを伝達するタンパク質部分を指し、細胞に専門的機能を実行するよう指示を出す。通常は細胞内シグナル伝達ドメインの全体が採用され得るが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される範囲について、エフェクター機能シグナルが伝達される限りにおいて、ドメイン全体に代わり、そうした切断部分が使用されてもよい。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能性シグナルの伝達に必要な、または充分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことが意図される。
【0164】
ＴＣＲによって生成されたシグナル単独ではＴ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次的すなわち共刺激性のシグナルも必要であることが知られている。したがって、Ｔ細胞活性化は、二つの明確に異なるクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン、すなわち、ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）によって抗原依存性一次活性化を開始する一次シグナル伝達ドメインと、抗原依存様式で作用して二次的すなわち共刺激性のシグナルを提供する共刺激シグナル伝達ドメインとによって媒介されると言うことができる。
【0165】
「一次シグナル伝達ドメイン」とは、刺激性または阻害性のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する細胞内シグナル伝達ドメインを指す。刺激性に作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ）またはＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含有してもよい。特定の実施形態での使用に適したＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメインの例としては限定されないが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。
【0166】
本明細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激分子は、抗原に結合するとＴリンパ球の効率的な活性化および機能に必要とされる第二のシグナルを提供する、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。共刺激ドメインが単離され得るかかる共刺激分子の例示的な例としては、Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳ１４；ＨＶＥＭ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳ１８；ＧＩＴＲ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー２５（ＴＮＦＲＳ２５；ＤＲ３）、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）。
【0167】
「免疫障害」とは、免疫系からの反応を引き起こす疾患を指す。特定の実施形態では、「免疫障害」という用語は、癌、自己免疫性疾患、または免疫不全を指す。
【0168】
本明細書において使用される場合、「癌」という用語は概して、異常な細胞が制御されずに分裂し、近傍組織へと浸潤し得る、ある種の疾患または状態に関連する。
【0169】
本明細書において使用される場合、「悪性」という用語は、腫瘍細胞群が制御不能な増殖（すなわち正常限界を超える分裂）、浸潤（すなわち隣接組織への侵入と破壊）、および転移（すなわちリンパまたは血液を介して身体の他の場所へ拡散）のうちの一つ以上を呈する癌を指す。本明細書において使用される場合、「転移する」という用語は、身体の一部分から、別の部分へと癌が拡散することを指す。拡散された細胞により形成された腫瘍は、「転移腫瘍」または「転移癌」と呼ばれる。転移腫瘍は、元の腫瘍（原発腫瘍）の細胞と似た細胞を含有する。
【0170】
本明細書において使用される場合、「良性」または「非悪性」という用語は、大きく成長し得るが、身体の他の部分に拡散しない腫瘍を指す。良性腫瘍は自己限定的であり、多くの場合、浸潤せず、または転移しない。
【0171】
「癌細胞」とは、癌性増殖または癌性組織の個々の細胞を指す。癌細胞には、固形癌と液性癌の両方が含まれる。「腫瘍」または「腫瘍細胞」とは概して、細胞の異常な増殖による膨張、または細胞の異常な増殖により形成された病変を指し、良性、前癌性、または悪性であり得る。殆どの癌は腫瘍を形成するが、例えば白血病などの液性癌は必ずしも腫瘍を形成するわけではない。腫瘍を形成する癌について、癌（細胞）という用語、および腫瘍（細胞）という用語は相互交換可能に使用される。個体中の腫瘍の量は、「全身腫瘍組織量（ｔｕｍｏｒ ｂｕｒｄｅｎ）」であり、腫瘍の数、体積または重量として測定することができる。
【0172】
「再発」という用語は、ある期間の改善または寛解の後に、癌の復活の診断、または癌の復活の徴候および症状の診断がされたことを指す。
【0173】
「寛解」とは、「臨床的寛解」とも呼称され、部分寛解と完全寛解の両方を含む。部分寛解では、すべてではなく一部の癌の徴候および症状が消失する。完全寛解では、すべての癌の徴候および症状が消失するが、癌はまだ体内に存在する場合がある。
【0174】
「難治性」とは、特定の治療剤を用いた療法に抵抗性である、または非反応性である癌を指す。癌は、治療の開始時から難治性である場合（すなわち治療剤の初回暴露に非反応性）、または最初の治療期間、もしくはその後の治療期間のいずれかのうちに治療剤に対して抵抗性を発現した結果として難治性となる場合がある。
【0175】
本明細書において使用される場合、「個体」および「対象」という用語はしばしば相互交換可能に使用され、本明細書において別段に予期される組成物および方法で治療され得る癌の症状または他の免疫性障害の症状を呈する任意の動物を指す。適切な対象（例えば、患者）としては、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）、家畜（ｆａｒｍ ａｎｉｍａｌ、ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｉｍａｌ）、またはペット（例えば、ネコまたはイヌ）が挙げられる。非ヒト霊長類、好ましくはヒト患者も含まれる。典型的な対象としては、癌もしくは別の免疫性障害を有する、またはそのリスクのある、または診断されたヒト患者が挙げられる。
【0176】
本明細書において使用される場合、「患者」という用語は、本明細書の別段に開示される組成物および方法で治療され得る癌または別の免疫障害と診断された対象を指す。
【0177】
本明細書で使用される「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」には、疾患または病態の症状もしくは病理に対する、あらゆる有益な作用または望ましい作用を含み、治療される疾患または状態の一つ以上の測定可能なマーカーの最小の低減さえも含み得る。治療には、任意で、疾患もしくは状態の減少、または疾患もしくは状態の進行の遅延、例えば腫瘍増生の遅延が含まれてもよい。「治療」は必ずしも、疾患もしくは状態、またはその関連症状の完全な排除または治癒を示すものではない。
【0178】
本明細書において使用される場合、「予防する」、および例えば「予防される」、「予防すること」といった類似の文言は、疾患もしくは状態の予防、阻害、または発生もしくは再発の可能性の低下を目的としたアプローチを示す。さらに、疾患もしくは状態の発生または再発の遅延、または疾患もしくは状態の症状の発生または再発の遅延も指す。本明細書において使用される場合、「予防」およびその類似文言も、疾患もしくは症状の発生または再発の前の、疾患もしくは状態の強度、作用、症状、および／または負荷量の低下を含む。
【0179】
本明細書において使用される場合、「～の少なくとも一つの症状の改善」とは、対象が治療される疾患もしくは状態の一つ以上の症状の減少を指す。特定の実施形態では、治療される疾患または状態は、癌であり、この場合において改善される一つ以上の症状としては限定されないが、脱力、疲労、息切れ、あざができやすい、および出血しやすい、頻発する感染、リンパ節の拡張、腹部膨張または腹部疼痛（膨張した腹部臓器が原因）、骨または関節の疼痛、骨折、予期せぬ体重減少、食欲低下、寝汗、持続性の微熱、および排尿減少（腎機能の障害が原因）が挙げられる。
【0180】
「強化する」、または「促進する」、または「増加する」、または「拡張する」とは概して、本明細書において予期される組成物が、ビヒクルまたは対照の分子／組成物による反応と比較して、大きな生理学的反応（すなわち下流効果）をもたらす、惹起させる、または発生させる能力を指す。測定可能な生理学的反応としては特にＴ細胞の拡張、活性化、持続性、サイトカイン分泌、および／または癌細胞殺傷能力の増加が挙げられ、当分野および本明細書の記載の理解から明白である。「増加した」または「強化された」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、ビヒクルまたは対照組成物によりもたらされる反応の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれ以上（例えば５００倍、１０００倍）（その間および１を超えるすべての整数および小数点を含む、例えば１．５、１．６、１．７、１．８など）である増加を含む場合がある。
【0181】
「減少する」、または「下げる」、または「低める」、または「低下する」、または「弱める」とは概して、本明細書において予期される組成物が、ビヒクルまたは対照の分子／組成物による反応と比較して、小さな生理学的反応（すなわち下流効果）をもたらす、惹起させる、または発生させる能力を指す。「減少」または「低下した」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、ビヒクル、対照組成物によりもたらされる反応、または特定の細胞株での反応の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれ以上（例えば５００倍、１０００倍）（その間および１を超えるすべての整数および小数点を含む、例えば１．５、１．６、１．７、１．８など）である減少を含む場合がある。
【0182】
「維持する」、または「保存する」、または「維持」、または「変化がない」、または「実質的な変化がない」、または「実質的な減少が無い」とは概して、本明細書において予期される組成物が、ビヒクル、対照の分子／組成物により生じた反応、または特定の細胞株での反応と比較して、細胞において実質的に類似した、または同等の生理学的反応（すなわち、下流効果）をもたらす、惹起させる、または生じさせる能力を指す。同等の反応は、基準反応と実質的に違わない、または測定可能な程度に違わない反応である。
【0183】
追加の定義は、本開示全体を通じて記載されている。
【0184】
Ｃ．ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ
特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞の細胞傷害性をＣＤ３３を発現する癌細胞に向ける抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインを含むＤＡＲＩＣ受容体が企図される。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ受容体」、「抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ受容体」「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ」、または「抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ」は互換的に使用され、全長ＣＤ３３またはＣＤ３３スプライスバリアントを発現する標的細胞および多量体形成剤または架橋因子への曝露時に、免疫エフェクター細胞において免疫刺激シグナルを形質導入する一つ以上の非天然由来のポリペプチドを指し、例えば、免疫エフェクター細胞の活性および機能を刺激すること、炎症促進性サイトカインの産生および／または分泌を増加させる。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および全長ＣＤ３３および／またはＣＤ３３スプライスバリアントを認識するＶＨＨドメインを含むＤＡＲＩＣ結合伝達構成要素を含む、多重鎖キメラ受容体である。
特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞の細胞傷害性をＣＤ３３を発現する癌細胞に向ける抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインを含むＤＡＲＩＣ受容体が企図される。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ受容体」、「抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ受容体」「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ」、または「抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ」は互換的に使用され、全長ＣＤ３３またはＣＤ３３スプライスバリアントを発現する標的細胞および多量体形成剤または架橋因子への曝露時に、免疫エフェクター細胞において免疫刺激シグナルを形質導入する一つ以上の非天然由来のポリペプチドを指し、例えば、免疫エフェクター細胞の活性および機能を刺激すること、炎症促進性サイトカインの産生および／または分泌を増加させる。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および全長ＣＤ３３および／またはＣＤ３３スプライスバリアントを認識するＶＨＨドメインを含むＤＡＲＩＣ結合伝達構成要素を含む、多重鎖キメラ受容体である。
【0185】
一実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素およびＤＡＲＩＣ結合構成要素は、同じ細胞から発現される。別の実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素およびＤＡＲＩＣ結合構成要素は、異なる細胞から発現される。特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、細胞から発現され、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ポリペプチドとして外因的に供給される。一実施形態において、架橋因子を前負荷されたＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現する細胞に外因的に供給される。
【0186】
１．ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素
「ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素」、「ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素」、「ＤＡＲＩＣシグナル伝達ポリペプチド」、または「ＤＡＲＩＣシグナル伝達ポリペプチド」は、同義に使用され、一つ以上の多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、および一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを指す。特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、第一の多量体形成ドメイン、第一の膜貫通ドメイン、第一の共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含む。
「ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素」、「ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素」、「ＤＡＲＩＣシグナル伝達ポリペプチド」、または「ＤＡＲＩＣシグナル伝達ポリペプチド」は、同義に使用され、一つ以上の多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、および一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを指す。特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、第一の多量体形成ドメイン、第一の膜貫通ドメイン、第一の共刺激ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0187】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、一つ以上の多量体形成ドメインを含む。
【0188】
本明細書において企図される特定のＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適した多量体形成ドメインの例としては限定されないが、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）ポリペプチドまたはそのバリアント、ＦＫＢＰ－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ポリペプチドまたはそのバリアント、カルシニューリンポリペプチドまたはそのバリアント、シクロフィリンポリペプチドまたはそのバリアント、細菌ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）ポリペプチドまたはそのバリアント、ＰＹＲ１様１（ＰＹＬ１）ポリペプチドまたはそのバリアント、およびａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ １（ＡＢＩ１）ポリペプチドまたはそのバリアントが挙げられる。
【0189】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢポリペプチドを含む。
【0190】
特に好ましい実施形態において、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、Ｔ２０９８Ｌ変異またはそのバリアントを含むＦＲＢポリペプチドを含む。ある特定の好ましい実施形態において、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドまたはそのバリアントを含む。
【0191】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素はヒンジドメインを含む。
【0192】
本明細書に記載されるＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素における使用に適したヒンジドメインの例示としては、ＣＤ２８、ＣＤ８αおよびＣＤ４等の１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域が挙げられ、これら分子の野生型ヒンジ領域であってもよく、または改変されてもよい。
【0193】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、膜貫通ドメインを含む。
【0194】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインを含む。
【0195】
本明細書で企図される特定のＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素において使用するのに好適な膜貫通ドメインの例示的な例としては、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、ガンマ、またはデルタ鎖の膜貫通領域、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、アムニオンレス（ＡＭＮ）、およびプログラム細胞死１（ＰＤＣＤ１）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメインを含む。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。
【0196】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、膜貫通ドメインのＣ末端と、細胞内シグナル伝達ドメインのＮ末端を連結するリンカーを含む。様々な好ましい実施形態では、短オリゴペプチドリンカー、またはポリペプチドリンカー、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の長さのリンカーが、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを連結する。グリシン－セリンを基にしたリンカーが、特に適切なリンカーを提供する。
【0197】
本明細書の特定の実施形態において予期されるＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。一実施形態において、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む。一つの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ：ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ）を含有する。
【0198】
本明細書において企図される特定のＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適したＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメインの例示としては限定されないが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成構成要素は、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインおよび一つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。主要シグナル伝達および共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに膜貫通ドメインのカルボキシル末端に連結され得る。
【0199】
本明細書に予期される特定のＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適した共刺激ドメインの例としては限定されないが、以下の共刺激性分子から単離されたドメインが挙げられる：Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳ１４；ＨＶＥＭ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳ１８；ＧＩＴＲ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー２５（ＴＮＦＲＳ２５；ＤＲ３）、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）。
【0200】
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、シグナルペプチドを含む。特定のＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素での使用に適したシグナルペプチドの例示としては限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、Ｉｇκ軽鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、またはヒトＧＭ－ＣＳＦ受容体アルファシグナルポリペプチドが挙げられる。様々な好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ８αシグナルポリペプチドを含む。
【0201】
特定の実施形態において、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４からなる群から選択される一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態において、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４からなる群から選択される一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインと、を含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＣＤ１３７共刺激ドメインと、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0202】
好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌ多量体形成ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含有する。
【0203】
好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含む。
【0204】
２．ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣ結合構成要素
「ＤＡＲＩＣ結合構成要素」、「ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチド」、「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素」、または「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチド」は互換的に使用され、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、および一つ以上の多量体形成ドメインを含むポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、多量体形成ドメイン、および膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、第二の多量体形成ドメイン、および第二の膜貫通ドメインを含む。他の特定の実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、および一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、第二の多量体形成ドメイン、および第二の膜貫通ドメイン、および第二の共刺激ドメインを含む。
「ＤＡＲＩＣ結合構成要素」、「ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチド」、「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素」、または「ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合ポリペプチド」は互換的に使用され、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、および一つ以上の多量体形成ドメインを含むポリペプチドを指す。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、多量体形成ドメイン、および膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、第二の多量体形成ドメイン、および第二の膜貫通ドメインを含む。他の特定の実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、多量体形成ドメイン、膜貫通ドメイン、および一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、第二の多量体形成ドメイン、および第二の膜貫通ドメイン、および第二の共刺激ドメインを含む。
【0205】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、一つ以上の抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインを含む。
【0206】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインは、ヒト化ラクダＶＨＨである。特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨドメインは、完全長ＣＤ３３（例えば、配列番号１）の一つ以上のエピトープ、またはＣＤ３３スプライスバリアントの一つ以上のエピトープに結合するヒト化ラクダ様ＶＨＨである。特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインは、完全長ＣＤ３３とＣＤ３３スプライスバリアントの両方に示される同じ一つ以上のエピトープに結合するヒト化ラクダ様ＶＨＨである。
【0207】
特に好ましい実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインは、配列番号３～６、１０～１１、１３～１６、および２０～２１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化ラクダ様ＶＨＨである。特に好ましい実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインは、１０に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化ラクダ様ＶＨＨである。特に好ましい実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメインは、２０に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化ラクダ様ＶＨＨである。
【0208】
特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、一つ以上の多量体形成ドメインを含む。
【0209】
本明細書において企図される特定のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素での使用に適した多量体形成ドメインの例としては限定されないが、ＦＫＢＰポリペプチドまたはそのバリアント、ＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアント、カルシニューリンポリペプチドまたはそのバリアント、シクロフィリンポリペプチドまたはそのバリアント、ＤＨＦＲポリペプチドまたはそのバリアント、ＰＹＬ１ポリペプチドまたはそのバリアント、およびＡＢＩ１ポリペプチドまたはそのバリアントが挙げられる。
【0210】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアントを含み、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＫＢＰポリペプチドまたはそのバリアントを含む。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、Ｔ２０９８Ｌ変異を含むＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアントを含み、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドまたはそのバリアントを含む。
【0211】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰポリペプチドまたはそのバリアントを含み、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアントを含む。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドまたはそのバリアントを含み、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、Ｔ２０９８Ｌ変異を含むＦＲＢポリペプチドまたはそのバリアントを含む。
【0212】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合伝達構成要素はヒンジドメインを含む。
【0213】
本明細書に記載されるＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル結合構成要素における使用に適したヒンジドメインの例示としては、ＣＤ２８、ＣＤ８αおよびＣＤ４等の１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域が挙げられ、これら分子の野生型ヒンジ領域であってもよく、または改変されてもよい。
【0214】
特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態では、ＤＡＲＩＣ結合伝達構成要素は、ヒンジドメインおよび膜貫通ドメインを含む。一つの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素で使用される膜貫通ドメインと同じであってもよい。一つの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素で使用される膜貫通ドメインとは異なってもよい。
【0215】
本明細書で企図される特定のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素において使用するのに好適な膜貫通ドメインの例示的な例としては、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、ガンマ、またはデルタ鎖の膜貫通領域、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、アムニオンレス（ＡＭＮ）、およびプログラム細胞死１（ＰＤＣＤ１）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ４膜貫通ドメインを含む。
【0216】
様々な好ましい実施形態では、短オリゴペプチドリンカー、またはポリペプチドリンカー、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の長さのリンカーが、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを結合する。グリシン－セリンを基にしたリンカーが、特に適切なリンカーを提供する。
【0217】
本明細書の特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣ結合構成要素は、一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【0218】
他の特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素が一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む好ましい実施形態において、これらのドメインは、同種のＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素に存在する細胞内シグナル伝達ドメインとは異なる。一実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【0219】
本明細書に予期される特定のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合伝達構成要素での使用に適した共刺激ドメインの例としては限定されないが、以下の共刺激性分子から単離されたドメインが挙げられる：Ｔｏｌｌ様受容体１（ＴＬＲ１）、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、カスパーゼ動員ドメインファミリーメンバー１１（ＣＡＲＤ１１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、Ｔ細胞ファミリーメンバー１の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）、７６ｋＤのＳＨ２ドメイン含有白血球タンパク質（ＳＬＰ７６）、Ｔ細胞受容体関連膜貫通アダプター１（ＴＲＡＴ１）、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳ１４；ＨＶＥＭ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳ１８；ＧＩＴＲ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー２５（ＴＮＦＲＳ２５；ＤＲ３）、およびＴ細胞受容体関連タンパク質キナーゼ７０のゼータ鎖（ＺＡＰ７０）。好ましい実施形態では、共刺激ドメインは、ＴＮＦＲ２またはＯＸ４０に由来し、それらから取得され、または単離される。
【0220】
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＤＡＲＩＣ結合構成要素は、シグナルペプチドを含む。特定のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素での使用に適したシグナルペプチドの例示としては限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、Ｉｇκ軽鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、またはヒトＧＭ－ＣＳＦ受容体アルファシグナルポリペプチドが挙げられる。様々な好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ８αシグナルポリペプチドを含有する。
【0221】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ３３に結合するＶＨＨドメイン、ＦＫＢＰ１２多量体形成ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、および任意に共刺激ドメインを含有する。
【0222】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ３３に結合するＶＨＨ、およびＦＫＢＰ１２多量体形成ドメインを含む。
【0223】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号２～２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメイン、ＦＫＢＰ１２多量体形成ドメイン、およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意選択で、共刺激ドメインを含む。
【0224】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号１０または配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメイン、ＦＫＢＰ１２多量体形成ドメイン、およびＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意選択で、共刺激ドメインを含む。
【0225】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号２～２１のいずれか一つに記載のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメイン、およびＦＫＢＰ１２多量体形成ドメインを含む。
【0226】
特定の実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号１０または配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメイン、およびＦＫＢＰ１２多量体形成ドメインを含む。
【0227】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号２２～３１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含む。
【0228】
いくつかの実施形態において、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。
【0229】
３．架橋因子
本明細書の特定の実施形態において企図される架橋因子は、各構成要素中の多量体形成ドメインを通じて、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素に会合することを介在または促進する。架橋因子は、多量体形成ドメインと関連付けられ、およびその間に配置されて、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素に会合することを促進する。架橋因子の存在下で、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は会合し、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素が標的細胞に発現されたＣＤ３３に結合したときに、標的細胞に対する免疫エフェクター細胞活性を開始する。架橋因子の非存在下では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素と会合せず、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは不活性である。
本明細書の特定の実施形態において企図される架橋因子は、各構成要素中の多量体形成ドメインを通じて、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素に会合することを介在または促進する。架橋因子は、多量体形成ドメインと関連付けられ、およびその間に配置されて、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素をＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素に会合することを促進する。架橋因子の存在下で、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は会合し、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素が標的細胞に発現されたＣＤ３３に結合したときに、標的細胞に対する免疫エフェクター細胞活性を開始する。架橋因子の非存在下では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素と会合せず、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは不活性である。
【0230】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素およびＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰおよびＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）、ＦＫＢＰおよびカルシニューリン、ＦＫＢＰおよびシクロフィリン、ＦＫＢＰおよび細菌ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）、カルシニューリンおよびシクロフィリン、ならびにＰＹＲ１様１（ＰＹＬ１）およびアブシジン酸非感受性１（ＡＢＩ １）からなる群から選択される多量体形成ドメインの同種対を含む。
【0231】
ある実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素とＤＡＲＩＣ結合構成要素の多量体形成ドメインは、以下からなる群から選択される架橋因子と会合する：ラパマイシンまたはそのラパログ、クーママイシンまたはその誘導体、ジベレリンまたはその誘導体、アブシジン酸（ＡＢＡ）またはその誘導体、メトトレキサートまたはその誘導体、シクロスポリンＡまたはその誘導体、ＦＫ５０６／シクロスポリンＡ（ＦＫＣｓＡ）またはその誘導体、およびトリメトプリム（Ｔｍｐ）－ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）の合成リガンド（ＳＬＦ）またはその誘導体。
【0232】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素およびＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、一つ以上のＦＲＢおよび／またはＦＫＢＰ多量体形成ドメイン、またはそのバリアントを含む。ある実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢ多量体形成ドメインまたはそのバリアントを含有し、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰ多量体形成ドメインまたはそのバリアントを含む。特定の好ましい実施形態では、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素は、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌ多量体形成ドメインまたはそのバリアントを含み、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、ＦＫＢＰ１２もしくはＦＫＢＰ１２ Ｆ３６Ｖ多量体形成ドメインまたはそのバリアントを含む。
【0233】
本明細書において予期される特定の実施形態での使用に適した架橋因子の例示としては限定されないが、ＡＰ１９０３、ＡＰ２０１８７、ＡＰ２１９６７（Ｃ－１６－（Ｓ）－７－メチルインドールラパマイシンとしても知られている）、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、架橋因子は、ＡＰ２１９６７である。ある好ましい実施形態では、架橋因子は、非免疫抑制用量のシロリムス（ラパマイシン）である。
【0234】
Ｄ．抗ＣＤ３３キメラ抗原受容体
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、標的抗原（例えば腫瘍抗原）に対する抗体系の特異性と、Ｔ細胞受容体活性化細胞内ドメインを組み合わせて、特異的な抗腫瘍細胞性免疫活性を呈するキメラタンパク質を生成する分子である。本明細書において使用される場合、「キメラ」という用語は、異なる起源に由来する異なるタンパク質部分またはＤＮＡ部分から構成されるものを表す。
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、標的抗原（例えば腫瘍抗原）に対する抗体系の特異性と、Ｔ細胞受容体活性化細胞内ドメインを組み合わせて、特異的な抗腫瘍細胞性免疫活性を呈するキメラタンパク質を生成する分子である。本明細書において使用される場合、「キメラ」という用語は、異なる起源に由来する異なるタンパク質部分またはＤＮＡ部分から構成されるものを表す。
【0235】
特定の実施形態では、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを導入することによって操作される。
【0236】
特定の実施形態では、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを導入することによって操作される。
【0237】
様々な実施形態では、抗ＣＤ３３ ＣＡＲは、ＣＤ３３、膜貫通ドメイン、および一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインに結合するＶＨＨドメインを含む。ＣＡＲの主な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を再指向化させる能力であり、この能力によって、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシス、または標的抗原発現細胞の細胞死を、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）非依存性の様式で介在し得る分子の産生が誘発され、モノクローナル抗体、可溶性リガンドまたは細胞特異的コレセプターの細胞特異的標的化能力が引き出される。
【0238】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、スペーサードメインを含む。特定の実施形態では、スペーサードメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４またはＩｇＤのＣＨ２およびＣＨ３を含む。
【0239】
本明細書に記載される抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲにおける使用に適したヒンジドメインの例示としては、ＣＤ２８、ＣＤ８α、およびＣＤ４といった１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域が挙げられ、これら分子の野生型ヒンジ領域であってもよく、または改変されてもよい。別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含有する。
【0240】
ＣＡＲの膜貫通（ＴＭ）ドメインは、細胞外結合部分と細胞内シグナル伝達ドメインを結合させ、ＣＡＲを、免疫エフェクター細胞の細胞膜に固定する。ＴＭドメインは、天然源、合成源、半合成源、または組み換え源のいずれかから誘導されてもよい。
【0241】
例示的なＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、ガンマ、またはデルタ鎖の少なくとも膜貫通領域、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＡＭＮ、およびＰＤＣＤ１に由来し得る（すなわち、それらを含む。
【0242】
一実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、ＣＤ８α由来のＴＭドメインを含む。別の実施形態では、本明細書において予期されるＣＡＲは、ＣＤ８α由来のＴＭドメインと、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸の長さの短オリゴリンカーまたはポリペプチドリンカーを含有し、当該リンカーは、ＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを連結させる。グリシン－セリンリンカーが、特に適切なリンカーを提供する。
【0243】
好ましい実施形態において、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【0244】
刺激性に作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ）またはＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含有してもよい。
【0245】
特定の実施形態で企図される抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲにおける使用に適したＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達ドメインの例示としては、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特に好ましい実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインと一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。細胞内一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに膜貫通ドメインのカルボキシル末端と連結され得る。
【0246】
特定の実施形態において、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および拡大を強化するための一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【0247】
特定の実施形態において企図される抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲにおいて使用するのに好適なかかる共刺激分子の例示的な例としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ９４、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＳＬＰ７６、ＴＲＡＴ１、ＴＮＦＲ２、およびＺＡＰ７０が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４からなる群から選択される一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインとを含む。
【0248】
様々な実施形態において、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、ＣＤ３３に結合するＶＨＨ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１５４、およびＰＤ－１からなる群から選択されるポリペプチドから単離された膜貫通ドメイン、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群から選択されるポリペプチドから単離された一つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびに ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドから単離されるシグナル伝達ドメインを含む。
【0249】
様々な実施形態において、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、ＣＤ３３に結合するＶＨＨ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１５４、およびＰＤ－１からなる群から選択されるポリペプチドから単離された膜貫通ドメイン、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群から選択されるポリペプチドから単離された一つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびに ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドから単離されるシグナル伝達ドメインを含む。
【0250】
好ましい実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、配列番号２～２１のうちのいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含むＶＨＨ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0251】
好ましい実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨＨ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
【0252】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、配列番号６２～８１のいずれか一つに記載される配列を含む。
【0253】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、配列番号７０又は配列番号８０に記載の配列を含む。
【0254】
Ｅ．ポリペプチド
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、およびそれらの断片を含むがこれに限定されない様々なポリペプチドが本明細書に企図される。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２～８２のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含む。「ポリペプチド」「ペプチド」、および「タンパク質」は、相互交換可能に使用され、反対であることが明記されない限り、従来的な意味に従う。すなわちアミノ酸配列として使用される。一つの実施形態では、「ポリペプチド」は、融合ポリペプチドおよび他のバリアントを含む。ポリペプチドは、様々な公知の組み換え技術および／または合成技術のいずれかを使用して調製され得る。ポリペプチドは特定の長さに限定されない。例えばポリペプチドは、全長タンパク質配列、全長タンパク質の断片、または融合タンパク質を含有してもよい。ポリペプチドは、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化などのポリペプチドの翻訳後修飾を含んでもよく、ならびに当分野に公知の天然および非天然の他の修飾を含んでもよい。特定の好ましい実施形態では、融合ポリペプチド、ポリペプチド、断片、およびそれらの他のバリアントは、一つ以上のヒトポリペプチドから調製され、取得され、または単離される。
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、およびそれらの断片を含むがこれに限定されない様々なポリペプチドが本明細書に企図される。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２～８２のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含む。「ポリペプチド」「ペプチド」、および「タンパク質」は、相互交換可能に使用され、反対であることが明記されない限り、従来的な意味に従う。すなわちアミノ酸配列として使用される。一つの実施形態では、「ポリペプチド」は、融合ポリペプチドおよび他のバリアントを含む。ポリペプチドは、様々な公知の組み換え技術および／または合成技術のいずれかを使用して調製され得る。ポリペプチドは特定の長さに限定されない。例えばポリペプチドは、全長タンパク質配列、全長タンパク質の断片、または融合タンパク質を含有してもよい。ポリペプチドは、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化などのポリペプチドの翻訳後修飾を含んでもよく、ならびに当分野に公知の天然および非天然の他の修飾を含んでもよい。特定の好ましい実施形態では、融合ポリペプチド、ポリペプチド、断片、およびそれらの他のバリアントは、一つ以上のヒトポリペプチドから調製され、取得され、または単離される。
【0255】
本明細書において使用される場合、「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは、細胞環境からの、および細胞の他の構成要素との会合からの、ペプチド分子またはポリペプチド分子のインビトロでの単離および／または精製を指す。すなわち、インビボでの物質と実質的に関連づけられていない。特定の実施形態では、単離ポリペプチドは、合成ポリペプチド、半合成ポリペプチド、もしくは組み換え源から取得された、または誘導されたポリペプチドである。
【0256】
ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、一つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入により、天然ポリペプチドとは異なっている場合がある。そうしたバリアントは、例えば、スプライスバリアントといった天然であってもよく、または例えば上述のポリペプチド配列の一つ以上を改変することにより合成的に生成されてもよい。例えば特定の実施形態では、一つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入をポリペプチドに導入することにより、ポリペプチドの結合アフィニティおよび／または他の生物学的性質を改善することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書において予期される参照配列のいずれかに対し、少なくとも約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含み、典型的には、当該バリアントは、参照配列の少なくとも一つの生物学的活性を維持している。特定の実施形態では、生物学的活性は、結合アフィニティである。特定の実施形態では、生物学的活性は、細胞溶解活性である。
【0257】
ポリペプチドバリアントには、生物学的に活性な「ポリペプチド断片」が含まれる。生物学的に活性なポリペプチド断片の例としては、抗ＣＤ３３ ＶＨＨドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインなどが挙げられる。本明細書において使用される場合、「生物学的に活性な断片」または「最小の生物学的に活性な断片」という用語は、天然ポリペプチドの少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％の活性を保持するポリペプチド断片を指す。ある実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５～約１７００アミノ酸の長さのアミノ酸鎖を含有し得る。ある実施形態では、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、またはそれ以上のアミノ酸の長さである。
【0258】
特定の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、「Ｘ」または「Ｘａａ」と表される一つ以上のアミノ酸を含んでもよく、同義に使用される。アミノ酸の配列番号に存在する場合、「Ｘ」は、任意の一つ以上のアミノ酸を指す。特定の実施形態では、融合タンパク質を示す配列番号は、任意のアミノ酸配列を累積的に表す、連続するＸ残基の配列を含有する。特定の実施形態では、「ＸＸ」は、任意の二つのアミノ酸の組み合わせを表す。特定の実施形態では、「ＸＸ」は、二つのセリン、ＳＳを表す。特定の実施形態では、「ＸＸ」は、免疫原性を減少させる任意の二つのアミノ酸の組み合わせを表す。
【0259】
好ましい実施形態では、「ＸＸ」はアミノ酸ＫＰを表す。
【0260】
上述のように、ポリペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、切断および挿入を含む、様々な方法で改変されてもよい。そうした操作のための方法は、当分野において一般的に公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の変異により作製され得る。変異誘導およびヌクレオチド配列改変のための方法は、当分野に公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８－４９２），Ｋｕｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．，（１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７－３８２）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．、（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびそれらにおいて引用される参照文献を参照のこと。対象となるタンパク質の生物活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出され得る。
【0261】
ある実施形態では、ポリペプチドバリアントは、一つ以上の保存的置換を含有する。「保存的置換」は、アミノ酸が、類似した性能を有する別のアミノ酸に置換される置換であり、ペプチド化学分野の当業者であれば、そうした置換によって、当該ポリペプチドの二次構造および疎水親水的性質が実質的に変化しないと予測するであろう。特定の実施形態において予期されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造に改変を行ってもよく、それでも所望の特徴を有するバリアントポリペプチドまたは誘導体ポリペプチドをコードする機能性分子が取得される。ポリペプチドのアミノ酸配列を変更し、同等な、または改善されたバリアントポリペプチドを生成することが望ましい場合、当業者は、例えば表１に従い、コードＤＮＡ配列のコドンのうちの一つ以上を変えることができる。
【表1】
【0262】
どのアミノ酸残基が、生物活性を無効化することなく置換、挿入または欠失させ得るかを決定するガイダンスは、当分野に公知のコンピュータープログラム、例えばＤＮＡＳＴＡＲ、ＤＮＡ Ｓｔｒｉｄｅｒ、Ｇｅｎｅｉｏｕｓ、Ｍａｃ Ｖｅｃｔｏｒ、またはＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩソフトウェアなどを使用して見出すことができる。本明細書に開示されるタンパク質バリアント中のアミノ酸の変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち類似した荷電アミノ酸、または非荷電アミノ酸の置換であることが好ましい。保存的アミノ酸変化には、その側鎖で関連付けられているアミノ酸ファミリーの一つの置換を含む。天然アミノ酸は一般的に以下の四つのファミリーに分けられる：酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、合わせて芳香族アミノ酸として分類される場合もある。ペプチドまたはタンパク質において、アミノ酸の適切な保存的置換は当業者に公知であり、一般的に得られる分子の生物活性を変化させることなく行うことができる。当業者であれば、ポリペプチドの非必須領域中の一アミノ酸置換は概して、生物活性を大きくは変化させないと認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８７，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４を参照のこと）。
【0263】
一つの実施形態では、二つ以上のポリペプチドの発現が望ましい場合、それらをコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書において別段に開示されるようにＩＲＥＳ配列またはポリヌクレオチド配列により分離されてもよい。
【0264】
特定の実施形態において予期されるポリペプチドは、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチド、および融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。融合ポリペプチドおよび融合タンパク質とは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上のポリペプチドセグメントを有するポリペプチドを指す。好ましい実施形態では、融合ポリペプチドは、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素を含む。他の好ましい実施形態では、融合ポリペプチドは、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣを含む。
【0265】
別の実施形態において、二つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素および／またはポリペプチドは、本明細書の他の箇所で開示されるポリペプチド間に一つ以上の自己切断ペプチド配列を含む融合タンパク質として発現され得る。
【0266】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、自己切断ポリペプチド配列またはリボソームスキップ配列、およびＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含む。
【0267】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、自己切断ポリペプチド配列またはリボソームスキップ配列、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、別の自己切断ポリペプチド配列またはリボソームスキップ配列、および別の標的抗原に対して向けられる別のＤＡＲＩＣ結合構成要素を含む。
【0268】
融合ポリペプチドは、限定されないが、シグナルペプチド、細胞透過性ペプチドドメイン（ＣＰＰ：ｃｅｌｌ ｐｅｒｍｅａｂｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅ）、結合ドメイン、シグナル伝達ドメインなど、エピトープタグ（例えば、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ＨＩＳ６、ＭＹＣ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＶＳＶ－Ｇ、およびＨＡ）、ポリペプチドリンカー、およびポリペプチド切断シグナルをはじめとする一つ以上のポリペプチドドメインまたはポリペプチドセグメントを含有してもよい。融合ポリペプチドは、典型的にはＣ末端～Ｎ末端で連結されるが、Ｃ末端～Ｃ末端、Ｎ末端～Ｎ末端、またはＭ末端～Ｃ末端で連結されることもできる。特定の実施形態では、融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順序であってもよい。融合ポリペプチドまたは融合タンパク質は、保存的に改変されたバリアント、多型バリアント、アレル、変異体、下位配列、および種間ホモログを含み得るが、ただし融合ポリペプチドの望ましい活性は保存されるものとする。融合ポリペプチドは、化学合成法により、または二つの部分の間の化学的結合により作製されてもよく、または他の標準的な方法を使用して一般的に調製されてもよい。融合ポリペプチドを含むライゲーションされたＤＮＡ配列は、本明細書において別段に開示されるように適切な転写制御因子または翻訳制御因子に操作可能に連結される。
【0269】
融合ポリペプチドは任意で、一つ以上のリンカーを含んでもよく、それらリンカーを使用して、一つ以上のポリペプチド、またはポリペプチド内のドメインを連結することができる。ペプチドリンカー配列を採用して任意の二つ以上のポリペプチド構成要素を、各ポリペプチドが適切な二次構造および三次構造へとフォールディングされるために充分な距離をとって分離させてもよく、それによりポリペプチドドメインが、その望ましい機能を発揮することが可能となる。そうしたペプチドリンカー配列は、当分野において標準的な技術を使用して融合ポリペプチドへと組み込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、以下の因子に基づき選択されてもよい：（１）柔軟な拡張立体構造をとる能力、（２）第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチド上の機能性エピトープと相互作用し得る二次構造をとらない能力、および（３）ポリペプチドの機能性エピトープと反応する可能性がある疎水性または荷電性の残基の欠落。特定の実施形態では、好ましいペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ａｓｎ残基およびＳｅｒ残基を含有する。他の近しい中性アミノ酸、例えばＴｈｒやＡｌａなどもリンカー配列に使用され得る。リンカーとして有用に採用され得るアミノ酸配列は、Ｍａｒａｔｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ４０：３９－４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：８２５８－８２６２，１９８６、米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に記載されるものが挙げられる。特定の融合ポリペプチドセグメントが非必須Ｎ末端アミノ酸領域を含有し、当該領域を使用して機能性ドメインを分離させ、立体干渉を防ぐことができる場合には、リンカー配列は必要ない。特定の実施形態では、好ましいリンカーは、典型的には、柔軟性のあるアミノ酸下位配列であり、当該配列は組み換え融合タンパク質の一部として合成される。リンカーポリペプチドは、１～２００アミノ酸の長さ、１～１００アミノ酸の長さ、または１～５０アミノ酸の長さであってもよく、当該数値の間のすべての整数値が含まれる。
【0270】
ポリペプチド切断シグナルの例としては、例えばプロテアーゼ切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例えば、稀な制限酵素認識部位、自己切断リボザイム認識部位）、および自己切断ウイルスオリゴペプチド（ｄｅＦｅｌｉｐｅ ａｎｄ Ｒｙａｎ，２００４．Ｔｒａｆｆｉｃ，５（８）；６１６－２６を参照のこと）といったポリペプチド切断認識部位が挙げられる。
【0271】
適切なプロテアーゼ切断部位および自己切断ペプチドは、当業者に公知である（例えば、Ｒｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７．Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８，６９９－７２２；Ｓｃｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．５，５８９－５９４を参照のこと）。プロテアーゼ切断部位の例としては限定されないが、ポチウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えばタバコエッチ病ウイルスプロテアーゼ）、ポチウイルスＨＣプロテアーゼ、ポチウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ－２－コードプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ワイカウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子、およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられる。切断ストリンジェンシーが高いために、一つの実施形態ではＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）プロテアーゼ切断部位、例えばＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号９５）、例えばＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号９６）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号９７）が好ましく、式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表している（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧの間、またはＱとＳの間で発生する）。
【0272】
特定の実施形態では、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断ペプチドまたはリボソームスキッピング配列である。
【0273】
リボソームスキッピング配列の実例には、２Ａもしくは２Ａ様部位、配列またはドメインが挙げられるが、これらに限定されない（Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、２００１年、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７～１０４１を参照）。特定の実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、アフトウイルス２Ａペプチド、ポチウイルス２Ａペプチド、またはカルジオウイルス２Ａペプチドである。
【0274】
一実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）２Ａペプチド、ゾセアアシグナウイルス（ＴａＶ）２Ａペプチド、ブタテスコウイルス－１（ＰＴＶ－１）２Ａペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される。
【0275】
２Ａ部位の例示を表２に提示する。
【表2】
【0276】
好ましい実施形態において、ポリペプチドまたは融合ポリペプチドは、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣまたは抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む。
【0277】
好ましい実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および自己切断ポリペプチド配列によって分離されたＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素を含む。
【0278】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号３２～６１のいずれか１つに記載の配列を含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４０、５０または６０のいずれか一つに記載の配列を含む。
【0279】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌ多量体形成ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメインおよびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ウイルス自己切断２Ａポリペプチド、ならびに抗ＣＤ３３を含むＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＦＫＢＰ１２多量体形成ドメインポリペプチド、ならびにＣＤ４膜貫通ドメインを含む。
【0280】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号３２～４１のいずれか一つに記載の配列を含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４０に記載の配列を含む。
【0281】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＦＲＢ Ｔ２０９８Ｌ多量体形成ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメインおよびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ウイルス自己切断２Ａポリペプチド、ならびに抗ＣＤ３３ ＶＨＨ、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ならびに任意にＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ１４、ＴＮＦＲＳ１８、ＴＮＦＲＳ２５、ＯＸ４０またはＴＮＦＲ２共刺激ドメインを含む。
【0282】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号４２～５１のいずれか一つに記載の配列を含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号５０に記載の配列を含む。
【0283】
特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号５２～６１のいずれか一つに記載の配列を含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号６０に記載の配列を含む。
【0284】
Ｆ．ポリヌクレオチド
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、およびそれらの断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、およびＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であってもよく、および組み換え、合成または単離されていてもよい。ポリヌクレオチドとして、限定されるものではないが、プレメッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、合成ＲＮＡ、合成ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＰＣＲ増幅ＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成ＤＮＡ、または組み換えＤＮＡが挙げられる。ポリヌクレオチドとは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、または少なくとも１５０００以上のヌクレオチドの長さのヌクレオチドの多量体型を指し、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチド、またはいずれかタイプのヌクレオチドの改変型、ならびにすべての中間の長さのものを指す。本文脈において、「中間の長さ」とは、例えば６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など、１５１、１５２、１５３など、２０１、２０２、２０３などの引用されている値の間の任意の長さを意味すると容易に理解されるであろう。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはバリアントは、参照配列に対し、少なくとも、もしくは約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％，７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、およびそれらの断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、およびＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であってもよく、および組み換え、合成または単離されていてもよい。ポリヌクレオチドとして、限定されるものではないが、プレメッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、合成ＲＮＡ、合成ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＰＣＲ増幅ＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成ＤＮＡ、または組み換えＤＮＡが挙げられる。ポリヌクレオチドとは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、または少なくとも１５０００以上のヌクレオチドの長さのヌクレオチドの多量体型を指し、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチド、またはいずれかタイプのヌクレオチドの改変型、ならびにすべての中間の長さのものを指す。本文脈において、「中間の長さ」とは、例えば６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など、１５１、１５２、１５３など、２０１、２０２、２０３などの引用されている値の間の任意の長さを意味すると容易に理解されるであろう。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはバリアントは、参照配列に対し、少なくとも、もしくは約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％，７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【0285】
本明細書において使用される場合、「単離ポリヌクレオチド」とは、自然状態で隣接する配列から精製されたポリヌクレオチドを指し、例えば、通常では当該断片と隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す。特定の実施形態において、「単離されたポリヌクレオチド」はまた、自然界には存在せず、人為的に作製された、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えＤＮＡ、または他のポリヌクレオチドも指す。特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、合成ポリヌクレオチド、半合成ポリヌクレオチド、または組み換え源から取得された、もしくは誘導されたポリヌクレオチドである。
【0286】
様々な実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書において予期されるポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含有する。ある実施形態では、ｍＲＮＡは、キャップ、一つ以上のヌクレオチド、そしてポリ（Ａ）尾部を含有する。
【0287】
特定の実施形態では、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ抗をコードするポリヌクレオチドは、コドン最適化されてもよい。本明細書において使用される場合、「コドン最適化された」という用語は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド中のコドンを置換して、当該ポリペプチドの発現、安定性および／または活性を向上させることを指す。コドン最適化に影響を与える要因には、（ｉ）二つ以上の生物または遺伝子間のコドンバイアスの変動、または合成的に構築されたバイアステーブル、（ｉｉ）生物、遺伝子、または遺伝子セット内のコドンバイアスの程度の変動、（ｉｉｉ）文脈を含むコドンの系統的変動、（ｉｖ）それらの解読ｔＲＮＡによるコドンの変動、（ｖ）全体的または三重項のいずれか一つの位置での、ＧＣ％によるコドンの変動、（ｖｉ）参照配列、例えば、天然に存在する配列との類似性の程度の変動、（ｖｉｉ）コドン頻度カットオフの変動、（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列から転写されたｍＲＮＡの構造特性、（ｉｘ）コドン置換セットの設計が基づくべき、ＤＮＡ配列の機能に関する先行知識、（ｘ）各アミノ酸に対するコドンセットの系統的変動、および／または（ｘｉ）スプリアス翻訳開始部位の単離除去の一つまたは複数が挙げられるが、これらに限定されない。
【0288】
本明細書で使用される、用語「ヌクレオチド」は、リン酸化糖とＮ－グリコシド結合した複素環式窒素塩基を指す。ヌクレオチドは、天然塩基、および当分野に認識される広範な改変塩基を含むと理解される。そうした塩基は一般的に、ヌクレオチド糖部分の１’位に配置される。ヌクレオチドは一般的に、塩基、糖およびリン酸基を含有する。リボ核酸（ＲＮＡ）では、糖はリボースであり、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）では、糖はデオキシリボースである。すなわち、デオキシリボースは、リボース中に存在するヒドロキシル基を欠いた糖である。
【0289】
ポリヌクレオチドの例示としては限定されないが、配列番号２～８２に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが挙げられる。
【0290】
様々な実施形態において、本明細書において企図されるポリヌクレオチドとしては限定されないが、一つ以上の ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素をコードするポリヌクレオチド、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ受容体、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、融合ポリペプチド、発現ベクター、ウイルスベクター、および本明細書に企図されるポリヌクレオチドを含むトランスファープラスミドが挙げられる。
【0291】
本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」などの用語は、参照ポリヌクレオチド配列と相当の配列同一性を呈するポリヌクレオチド、または本明細書において規定されるストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドを指す。これらの用語には、少なくとも一つのヌクレオチドの付加、欠失、置換または改変によって参照ポリヌクレオチドと識別されるポリヌクレオチドも包含される。従って、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」という用語には、一つ以上のヌクレオチドが付加もしくは欠失もしくは改変され、または別のヌクレオチドと置換されたポリヌクレオチドが含まれる。この点に関し、当分野において、参照ポリヌクレオチドに対し、変異、付加、欠失および置換を含むある変更が為され、変更されたポリヌクレオチドは、参照ポリヌクレオチドの生物学的機能または生物活性を保持し得ると理解されている。
【0292】
「配列同一性」、または例えば「～に対して５０％同一の配列」を含む、という文章は、本明細書において使用される場合、比較ウインドウ上で配列が、ヌクレオチド毎で同一である、またはアミノ酸ごとで同一である程度を指す。ゆえに「配列同一性の百分率」は、比較ウインドウ上の二つの最適アライメント配列を比較する工程、同一核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一アミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が、両方の配列中に存在する位置の数を決定して、合致位置数を算出する工程、合致位置数を、比較ウインドウ中の総位置数（すなわちウインドウサイズ）で割る工程、および結果に１００を掛けて、配列同一性の百分率を算出する工程、により計算されてもよい。本明細書に記載の参照配列のいずれかに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチドおよびポリペプチドが含まれる。
【0293】
本明細書において想定されるポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さにかかわらず、本明細書の他の箇所に開示されるか当該技術分野で知られている、プロモーターおよび／またはエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、シグナル配列、コザック配列、ポリアデニル化シグナル、付加的な制限酵素部位、多重クローニング部位、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例えば、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、およびＡｔｔ部位）、終止コドン、転写終結シグナル、および自己切断型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、エピトープタグなどの他のＤＮＡ配列と組み合わされてもよく、その結果、それらの全体的な長さが大幅に変動してもよい。ゆえに、ほとんどすべての長さのポリヌクレオチド断片が採用され得ること、好ましくは全体の長さは調製の容易さ、および意図される組み換えＤＮＡプロトコールでの用途により制限されることが予期される。
【0294】
ポリヌクレオチドは、当分野で公知および利用可能な様々な確立された技術のいずれかを使用して調製され、操作され、発現され、および／または送達されてもよい。所望のポリペプチドを発現するために、当該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、適切なベクターに挿入されてもよい。
【0295】
ベクターの例示としては限定されないが、プラスミド、自己複製配列、および転移性因子、例えばＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ、ＰｉｇｇｙＢａｃなどが挙げられる。
【0296】
ベクターの追加的な例示としては限定されないが、プラスミド、ファージミド、コスミド、例えば酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、例えばラムダファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージ、および動物ウイルスが挙げられる。
【0297】
ベクターとして有用なウイルスの例示としては限定されないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴型ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えばＳＶ４０）が挙げられる。
【0298】
発現ベクターの例示としては限定されないが、哺乳動物細胞での発現用のｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）、哺乳動物細胞でのレンチウイルス介在型遺伝子移送および発現用のｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、およびｐＬｅｎｔｉ６．２／Ｖ５－ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドのコード配列は、哺乳動物細胞でのポリペプチドの発現のために、そうした発現ベクター内にライゲートされてもよい。
【0299】
特定の実施形態では、ベクターは、エピソーム性ベクター、または染色体外で維持されるベクターである。本明細書において使用される場合、「エピソーム性」という用語は、宿主の染色体ＤＮＡに統合されることなく複製することができるベクターであり、宿主細胞の分裂により徐々に減少することがないということは、当該ベクターが染色体外で、またはエピソーム性に複製することも意味している。
【0300】
発現ベクター中に存在する「発現制御配列」、「制御因子」、または「制御性配列」は、ベクターの非翻訳領域であり、複製起源、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（Ｓｈｉｎｅ Ｄａｌｇａｒｎｏ配列またはＫｏｚａｋ配列）、イントロン、ポリアデニル化配列、５’および３’の非翻訳領域が挙げられ、それらはすべて宿主の細胞タンパク質と相互作用して、転写と翻訳を実行する。そうした因子は、その強度および特異性を変化させてもよい。利用するベクターシステムおよび宿主に応じて、ユビキタスプロモーターおよび誘導性プロモーターをはじめとする任意の数の適切な転写因子および翻訳因子を使用してもよい。
【0301】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、限定されないが、発現ベクターおよびウイルスベクターをはじめとするベクターを含有する。ベクターは、一つ以上の外因性、内因性、または異種の制御配列、例えばプロモーターおよび／またはエンハンサーを含有してもよい。「内因性制御配列」は、ゲノム中で所与の遺伝子と本来連結される配列である。「外因性制御配列」は、遺伝子操作手段（すなわち分子生物学的技術）により、遺伝子に並置して置かれる配列であり、当該遺伝子の転写は、その連結したエンハンサー／プロモーターにより誘導される。「異種制御配列」は、遺伝子操作される細胞とは異なる種に由来する外因性配列である。「合成」制御配列は、特定の療法に対し最適なプロモーター活性および／またはエンハンサー活性を提供する、一つ以上の内因性および／または外因性の配列の因子、ならびに／またはインビトロもしくはインシリコで決定された配列の因子を含有してもよい。
【0302】
本明細書において使用される場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに操作可能に連結されたポリヌクレオチドの転写を開始させる。特定の実施形態では、哺乳動物細胞で動作するプロモーターは、転写が開始される部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴ－リッチ領域、および／または転写開始部位から７０～８０塩基上流に存在する別の配列であるＣＮＣＡＡＴ領域を含有し、式中、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る。
【0303】
「エンハンサー」という用語は、転写の強化を提供することができる配列を含むＤＮＡセグメントを指し、一部の場合では、別の制御配列に対する方向性に関係なく機能することができる。エンハンサーは、プロモーター因子および／または他のエンハンサー因子と協働して、または相加的に機能することができる。「プロモーター／エンハンサー」という用語は、プロモーター機能とエンハンサー機能の両方を提供することができる配列を含むＤＮＡセグメントを指す。
【0304】
「操作可能に連結した」という用語は、記載される構成要素が、それらが意図された様式で機能することができるような関係にある並置を意味する。一つの実施形態では、当該用語は、核酸発現制御配列（例えばプロモーター、および／またはエンハンサー）と、第二のポリヌクレオチド配列、例えば対象となるポリヌクレオチドとの間の機能的連結を指し、この場合において当該発現制御配列は、第二の配列に対応する核酸の転写を誘導する。
【0305】
本明細書において使用される場合、「構造的発現制御配列」という用語は、操作可能に連結された配列の継続的な、または連続的な転写を可能にするプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーを指す。構造的発現制御配列は、様々な細胞型と組織型での発現を可能にする「ユビキタス」なプロモーター、エンハンサー、プロモーター／エンハンサーであってもよく、または限定的な細胞型および組織型での発現を可能にする、それぞれ「細胞特異的」、「細胞型特異的」、「細胞株特異的」、または「組織特異的」なプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーであってもよい。
【0306】
特定の実施形態における使用に適したユビキタス発現制御配列の例示としては限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ウイルス性シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば初期または後期）、モロニ－マウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＨ５、Ｐ７．５およびＰ１１プロモーター、伸長因子１α（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答タンパク質１（ＥＧＲ１：ｅａｒｌｙ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ １）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド三リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、真核細胞翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、ヒートショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、ヒートショックタンパク質９０ｋＤａ ベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、ヒートショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β－キネシン（β－ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ ２６座位（Ｉｒｉｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２５，１４７７－１４８２（２００７））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ－アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β－アクチンプロモーターおよび骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、ネガティブ制御領域欠失型、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）Ｕ３プロモーター（Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２００３；７７（１７）：９４３９－９４５０）が挙げられる。
【0307】
一つの実施形態では、ベクターは、ＭＮＤＵ３プロモーターを含有する。
【0308】
一つの実施形態では、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第一イントロンを含むＥＦ１ａプロモーターを含有する。
【0309】
一つの実施形態では、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第一イントロンを欠くＥＦ１ａプロモーターを含有する。
【0310】
特定の実施形態では、細胞、細胞型、細胞株、または組織に特異的な発現制御配列を使用して、所望のポリヌクレオチド配列の細胞型特異的、細胞株特異的、または組織特異的な発現を実現することが望ましい場合もある（例えば特定のポリペプチドをコードする核酸を、細胞型、細胞株、または組織のサブセットにおいてのみ、または発生の特定のステージでのみ発現させる）。
【0311】
特定の実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーターであるポリヌクレオチドを発現させることが望ましい場合がある。
【0312】
本明細書において使用される場合、「条件付き発現」とは、限定されないが、誘導性発現、抑制性発現、特定の生理学的状態、生物学的状態もしくは疾患状態にある細胞または組織での発現をはじめとする条件付き発現の任意の型を指す場合がある。この定義は、細胞型または組織に特異的な発現を除外することは意図されない。ある実施形態は、対象となるポリヌクレオチドの条件付き発現を提供するものであり、例えば発現は、細胞、組織、生物体を、ポリヌクレオチドが発現される処理または条件、または対象となるポリヌクレオチドにコードされるポリヌクレオチドの発現が増加もしくは減少する処理または条件に曝すことにより制御される。
【0313】
誘導性プロモーター／システムの例示としては限定されないが、ステロイド誘導性プロモーター、例えばグルココルチコイド受容体またはエストロゲン受容体をコードする遺伝子のプロモーター（対応するホルモンの処理で誘導可能）、メタロチオネインプロモーター（様々な重金属の処理で誘導可能）、ＭＸ－１プロモーター（インターフェロンで誘導可能）、「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストン制御性システム（Ｓｉｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｇｅｎｅ，３２３：６７）、クミン酸塩（ｃｕｍａｔｅ）誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存性制御システムなどが挙げられる。誘導物質としては限定されないが、グルココルチコイド、エストロゲン、ミフェプリストン（ＲＵ４８６）、金属、インターフェロン、低分子、クミン酸塩、テトラサイクリン、ドキシサイクリンおよびそれらのバリアントが挙げられる。
【0314】
本明細書において使用される場合、「内部リボソーム侵入部位」または「ＩＲＥＳ」とは、シストロン（タンパク質コード領域）の例えばＡＴＧなどの開始コドンに内部リボソームが直接侵入することを促進し、キャップ非依存性の遺伝子翻訳を生じさせる因子を指す。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ １５（１２）：４７７－８３）およびＪａｃｋｓｏｎ ａｎｄ Ｋａｍｉｎｓｋｉ．１９９５．ＲＮＡ １（１０）：９８５－１０００を参照のこと。当業者により一般的に採用されるＩＲＥＳの例としては、米国特許第 第６，６９２，７３６号に記載されるものが挙げられる。当分野に公知の「ＩＲＥＳ」のさらなる例としては限定されないが、ピコルナウイルスから取得可能なＩＲＥＳ（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０）、および例えば免疫グロブリン重鎖結合タンパク質（ＢｉＰ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などのウイルスｍＲＮＡまたは細胞ｍＲＮＡを源として取得可能なＩＲＥＳ（Ｈｕｅｚ ｅｔ ａｌ．１９９８．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１８（１１）：６１７８－６１９０）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ－２）、およびインスリン様増殖因子（ＩＧＦＩＩ）、翻訳開始因子のｅＩＦ４Ｇ、ならびに酵母転写因子のＴＦＩＩＤおよびＨＡＰ４、Ｎｏｖａｇｅｎ社から販売されている脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）（Ｄｕｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ ６６（３）：１６０２－９）およびＶＥＧＦ ＩＲＥＳ（Ｈｕｅｚ ｅｔ ａｌ．，１９９８．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １８（１１）：６１７８－９０）が挙げられる。ＩＲＥＳは、ピコルナウイルス科、ジシストロウイルス科、およびフラビウイルス科の種のウイルスゲノム、ならびにＨＣＶ、フレンドマウス白血病ウイルス（ＦｒＭＬＶ）、およびモロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）においても報告されている。
【0315】
一つの実施形態では、本明細書において予期されるポリヌクレオチドに使用されるＩＲＥＳは、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳである。
【0316】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、コンセンサスＫｏｚａｋ配列。本明細書において使用される場合、「Ｋｏｚａｋ配列」という用語は、リボソーム小サブユニットへのｍＲＮＡの初期結合を大きく促進し、翻訳を増加させる短いヌクレオチド配列を指す。コンセンサスＫｏｚａｋ配列は、（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧ（配列番号８３）であり、、Ｒはプリン（ＡまたはＧ）である（Ｋｏｚａｋ，１９８６．Ｃｅｌｌ．４４（２）：２８３－９２、およびＫｏｚａｋ，１９８７．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５（２０）：８１２５－４８）。
【0317】
異種核酸転写物の効率的な終止とポリアデニル化を誘導する因子は、異種遺伝子の発現を増加させる。転写終止シグナルは、一般的にポリアデニル化シグナルの下流に存在する。特定の実施形態では、ベクターは、発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’側にポリアデニル化配列を含有する。本明細書において使用される場合、「ポリＡ部位」または「ポリＡ配列」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによる初期ＲＮＡ転写物の終止とポリアデニル化の両方を誘導するＤＮＡ配列を示す。ポリアデニル化配列は、ポリＡ尾部をコード配列の３’末端に付加することでｍＲＮＡの安定性を促進し、それにより翻訳効率の増強に寄与することができる。切断およびポリアデニル化は、ＲＮＡ中のポリ（Ａ）配列により誘導される。哺乳動物のプレｍＲＮＡのコアポリ（Ａ）配列は、切断－ポリアデニル化部位に隣接する二つの認識因子を有する。典型的には、ほぼ不変のＡＡＵＡＡＡ六量体が、Ｕ残基またはＧＵ残基が豊富な、より可変性の高い因子の上流２０～５０ヌクレオチドに存在する。初期転写物の切断はこれら二つの因子の間で発生し、５’切断産物に最大で２５０個のアデノシンが付加される。特定の実施形態では、コアポリ（Ａ）配列は、最良のポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）である。特定の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、ＳＶ４０のポリＡ配列、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ－グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、それらのバリアント、または当分野に公知の別の適切な異種または内因性ポリＡ配列である。特定の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、合成である。
【0318】
特定の実施形態では、一つ以上のポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に、非ウイルス法およびウイルス法の両方により導入されてもよい。特定の実施形態では、一つ以上のポリヌクレオチドの送達は、同じ方法もしくは異なる方法で提供されてもよく、および／または同じベクターもしくは異なるベクターで提供されてもよい。
【0319】
「ベクター」という用語は、本明細書において、もう一つの核酸分子を移送または輸送することができる核酸分子を指すために使用される。伝達された核酸は、一般的に、例えば、ベクター核酸分子に挿入される。ベクターは、細胞内で自己複製を指示する配列を含んでもよく、または宿主細胞ＤＮＡへの組み込みを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。特定の実施形態では、非ウイルスベクターを使用して、本明細書で意図される一つまたは複数のポリヌクレオチドをＴ細胞に送達する。
【0320】
非ウイルス性ベクターの例示としては限定されないが、プラスミド（例えばＤＮＡプラスミドまたはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、および細菌人工染色体が挙げられる。
【0321】
特定の実施形態で予期されるポリヌクレオチドの非ウイルス性の送達法の例示としては限定されないが、エレクトロポレーション法、ソノポレーション法、リポフェクション法、マイクロインジェクション法、バイオリステック法、ウイロゾーム法、リポソーム法、免疫リポソーム法、ナノ粒子法、ポリカチオンまたは脂質：核酸複合体、ネイキッドＤＮＡ法、人工ビリオン、ＤＥＡＥ－デキストラン介在移送、遺伝子銃、およびヒートショックが挙げられる。
【0322】
特定の実施形態において予期される特定の実施形態での使用に適したポリヌクレオチド送達システムの例示としては限定されないが、Ａｍａｘａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｘｃｙｔｅ，Ｉｎｃ．、ＢＴＸ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、およびＣｏｐｅｒｎｉｃｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．により提供されるシステムが挙げられる。リポフェクション試薬は市販されている（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））。ポリヌクレオチドの効率的な受容体－認識リポフェクションに適したカチオン性脂質および中性脂質は、文献に記載されている。例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．１０：１８０－１８７；およびＢａｌａｚｓ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ． ２０１１：１－１２を参照のこと。抗体標的化送達、細菌誘導送達、非生物ナノセル系送達も特定の実施形態において予期される。
【0323】
特定の実施形態において予期されるポリヌクレオチドを含有するウイルスベクターは、個々の患者に投与することにより、典型的には以下に記載されるように全身投与（例えば静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または頭蓋内点滴）または局所適用することによりインビボで送達され得る。あるいはベクターは、例えば個々の患者から外植された細胞（例えば動員（ｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）された末梢血、リンパ球、骨髄吸引液、組織生検等）またはユニバーサルドナーの造血幹細胞などの細胞に生体外で送達されてもよく、その後、患者に当該細胞を再移植してもよい。
【0324】
一つの実施形態では、本明細書において予期されるポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは生物体に直接投与され、インビボで細胞に形質導入される。あるいはネイキッドＤＮＡが投与されてもよい。投与は、分子を導入して血液または組織細胞と最終的に接触させるために通常に使用される経路のいずれかによるものであり、限定されないが、注射、点滴、局所適用およびエレクトロポレーションが挙げられる。そうした核酸の適切な投与方法は当業者に利用可能および公知であるが、複数の経路を使用して特定の組成物を投与してもよく、特定の経路はしばしば、別の経路よりも即時性で高い効果的反応を提供することができる。
【0325】
特定の実施形態において予期される特定の実施形態での使用に適したウイルスベクター系の例示としては限定されないが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびワクシニアウイルスのベクターが挙げられる。
【0326】
様々な実施形態では、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素および／または本明細書において予期される他のポリペプチドをコードする一つ以上のポリヌクレオチドが、当該一つ以上のポリヌクレオチドを含有する組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）とともに細胞に形質導入されることで、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に導入される。
【0327】
ＡＡＶは、小さな（約２６ｎｍ）の複製能力を欠いた、主にエピソーム性の非エンベロープウイルスである。ＡＡＶは、分裂細胞と非分裂細胞の両方に感染することができ、そのゲノムを宿主細胞のゲノムに組み込む場合がある。組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は典型的には、最小で導入遺伝子とその制御配列、ならびに５’および３’のＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）から構成される。ＩＴＲ配列は約１４５ｂｐの長さである。特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０から単離されたＩＴＲとカプシド配列を含有する。
【0328】
一部の実施形態では、キメラｒＡＡＶが使用される。ＩＴＲ配列は、一つのＡＡＶ血清型から単離され、カプシド配列は別のＡＡＶ血清型から単離される。例えばＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列と、ＡＡＶ６由来のカプシド配列を含むｒＡＡＶは、ＡＡＶ２／ＡＡＶ６と呼ばれる。特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲと、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶ１０のいずれか一つに由来するカプシドタンパク質を含有してもよい。好ましい実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列と、ＡＡＶ６由来のカプシド配列を含有する。好ましい実施形態では、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列と、ＡＡＶ２由来のカプシド配列を含有する。
【0329】
一部の実施形態では、操作と選択の方法をＡＡＶカプシドに行って、それらが対象となる細胞に形質導入される確率を高くしてもよい。
【0330】
ｒＡＡＶベクターの構築、産生、および精製は、例えば米国特許第９，１６９，４９４号、第９，１６９，４９２号、第９，０１２，２２４号、第８，８８９，６４１号、第８，８０９，０５８号、および第８，７８４，７９９号に開示されている。それら文献はその全体で参照により本明細書に援用される。
【0331】
様々な実施形態では、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素および／または本明細書において予期される他のポリペプチドをコードする一つ以上のポリヌクレオチドは、当該一つ以上のポリヌクレオチドを含有する例えばレンチウイルスなどのレトロウイルスとともに細胞に形質導入されることで、例えばＴ細胞などの免疫エフェクター細胞に導入される。
【0332】
本明細書において使用される場合、「レトロウイルス」という用語は、自身のゲノムＲＮＡを直線的二本鎖ＤＮＡコピーへと逆転写し、次いで自身のゲノムＤＮＡを宿主ゲノムへと共有結合的に統合させるＲＮＡウイルスを指す。特定の実施形態における使用に適したレトロウイルスの例示としては限定されないが、以下が挙げられる：モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ－ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、およびレンチウイルス。
【0333】
本明細書において使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、複合的なレトロウイルスの群（または属）を指す。レンチウイルスの例としては限定されないが、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含む）、ビスナ－マエディウイルス（ＶＭＶ）、ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる。一つの実施形態では、ＨＩＶをベースとしたベクター骨格（すなわちＨＩＶシス作用性配列因子）が好ましい。
【0334】
様々な実施形態では、本明細書に予期されるレンチウイルスベクターは、一つ以上のＬＴＲ、および以下のアクセサリー因子のうちの一つ以上またはすべてを含有する：ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージシグナル、輸出因子（ｅｘｐｏｒｔ ｅｌｅｍｅｎｔ）、ポリ（Ａ）配列。および任意で、本明細書において別段に検討されるように、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥ、インシュレーター因子、選択マーカー、および細胞自殺遺伝子を含有してもよい。
【0335】
特定の実施形態では、本明細書において予期されるレンチウイルスベクターは、統合的、または非統合的、または統合能力を欠くレンチウイルスであってもよい。本明細書において使用される場合、「統合能力を欠くレンチウイルス」または「ＩＤＬＶ」という用語は、ウイルスゲノムを宿主細胞ゲノムに統合させる能力を欠くインテグラーゼを有するレンチウイルスを指す。統合能力のないウイルスベクターは、特許出願ＷＯ２００６／０１０８３４に記載されており、当該出願はその全体で参照により本明細書に援用される。
【0336】
インテグラーゼ活性の低下に適したＨＩＶ－１ ｐｏｌ遺伝子中の変異の例としては限定されないが、以下が挙げられる：Ｈ１２Ｎ、Ｈ１２Ｃ、Ｈ１６Ｃ、Ｈ１６Ｖ、Ｓ８１ Ｒ、Ｄ４１Ａ、Ｋ４２Ａ、Ｈ５１Ａ、Ｑ５３Ｃ、Ｄ５５Ｖ、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ６９Ａ、Ｋ７１Ａ、Ｅ８５Ａ、Ｅ８７Ａ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｋ１６０Ａ、Ｒ１６６Ａ、Ｄ１６７Ａ、Ｅ１７０Ａ、Ｈ１７１Ａ、Ｋ１７３Ａ、Ｋ１８６Ｑ、Ｋ１８６Ｔ、Ｋ１８８Ｔ、Ｅ１９８Ａ、Ｒ１９９ｃ、Ｒ１９９Ｔ、Ｒ１９９Ａ、Ｄ２０２Ａ、Ｋ２１１Ａ、Ｑ２１４Ｌ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２２１ Ｌ、Ｗ２３５Ｆ、Ｗ２３５Ｅ、Ｋ２３６Ｓ、Ｋ２３６Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｇ２４７Ｗ、Ｄ２５３Ａ、Ｒ２６２Ａ、Ｒ２６３ＡおよびＫ２６４Ｈ。
【0337】
「長末端反復（ＬＴＲ：ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ）」という用語は、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置する塩基対のドメインを指し、本来の配列ではＬＴＲはダイレクトリピートであり、Ｕ３、ＲおよびＵ５領域を含有する。
【0338】
本明細書において使用される場合、「ＦＬＡＰ因子」、または「ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ」という用語は、その配列が、例えばＨＩＶ－１およびＨＩＶ－２などのレトロウイルスの中心ポリプリン帯（ｃｅｎｔｒａｌ ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ ｔｒａｃｔ）と中心末端配列（ｃｅｎｔｒａｌ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）（ｃＰＰＴおよびＣＴＳ）を含む核酸を指す。適切なＦＬＡＰ因子は、米国特許第６，６８２，９０７号およびＺｅｎｎｏｕ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：１７３に記載されている。
【0339】
本明細書において使用される場合、「パッケージシグナル」または「パッケージ配列」という用語は、レトロウイルスゲノム内に位置するｐｓｉ［Ψ］配列を指し、ウイルスカプシドまたはウイルス粒子内にウイルスＲＮＡを挿入するために必要とされる。例えば、Ｃｌｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５．Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４；ｐｐ．２１０１－２１０９を参照のこと。
【0340】
「輸出因子」という用語は、シス作用性の転写後制御因子を指し、細胞の核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を制御する。ＲＮＡ輸出因子の例としては限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のｒｅｖ反応性因子（ＲＲＥ）（例えば、Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：１０５３；およびＣｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｃｅｌｌ ５８：４２３を参照のこと）およびＢ型肝炎ウイルスの転写後制御因子（ＨＰＲＥ）が挙げられる。
【0341】
特定の実施形態では、ウイルスベクター中の異種配列の発現は、転写後制御因子、効率的ポリアデニル化部位、および任意で転写終止シグナルをベクターに組み込むことで増加する。様々な転写後制御因子が、タンパク質での異種核酸の発現を増加させることができる。例えばウッドチャック肝炎ウイルスの転写後制御因子（ＷＰＲＥ；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３：２８８６）；Ｂ型肝炎ウイルス中に存在する転写後制御因子（ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３８６４）；など（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，９：１７６６）が挙げられる。
【0342】
レンチウイルスベクターは、ＬＴＲ改変の結果として、いくつかの安全性強化因子を含有することが好ましい。「自己不活化」（ＳＩＮ：ｓｅｌｆ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）ベクターとは、複製能力を欠いたベクターを指し、例えば右（３’）ＬＴＲエンハンサー－プロモーター領域はＵ３領域として知られているが、この領域が（例えば欠失または置換により）改変されて、ウイルス複製の最初のラウンドを超えたウイルス転写が阻害される、レトロウイルスまたはレンチウイルスのベクターなどがある。自己不活化は、ベクターＤＮＡ、すなわちベクターＲＮＡを生成するために使用されるＤＮＡの３’ＬＴＲのＵ３領域に欠失を導入することで実現されることが好ましい。そうすることで、逆転写の間にこの欠失がプロウイルスＤＮＡの５’ＬＴＲに移送される。特定の実施形態では、Ｕ３配列を充分に除去して、ＬＴＲの転写活性を大きく減少させる、または完全に無効化させることが望ましく、それにより形質導入された細胞において全長ベクターＲＮＡの産生が大きく減少または無効化される。ＨＩＶをベースにしたレンチベクターの場合、そうしたベクターは、ＬＴＲ ＴＡＴＡ ｂｏｘの除去（例えば－４１８～－１８の欠失）を含む大幅なＵ３欠失に耐用性があり、ベクター力価の大きな低下は伴わないことが判明している。
【0343】
追加的な安全性の強化は、５’ＬＴＲのＵ３領域を、ウイルス粒子の産生中にウイルスゲノムの転写を誘導する異種プロモーターと置き換えることで提供される。使用され得る異種プロモーターの例としては例えば、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば初期または後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば前初期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）のプロモーターが挙げられる。
【0344】
本明細書において使用される場合、「偽型」または「偽型の」という用語は、そのウイルスエンベロープタンパク質が、好ましい特性を有する別のウイルスのエンベロープと置き換えられたウイルスを指す。例えば、ＨＩＶエンベロープタンパク質（ｅｎｖ遺伝子にコードされる）は通常、ＣＤ４＋提示細胞に対してウイルスを標的化するが、水泡性口炎ウイルスのＧ－タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）エンベロープタンパク質でＨＩＶを偽型化することで、広範な細胞にＨＩＶが感染できるようになる。
【0345】
ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、公知の方法により産生される。例えば、Ｋｕｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９；９：１０．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７２－６７５０－９－１０；Ｋｕｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２００９；４（４）：４９５－５０５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２００９．２２を参照のこと。
【0346】
本明細書に予期されるある特定の実施形態によると、ほとんど、またはすべてのウイルスベクターの骨格配列は、例えばＨＩＶ－１などのレンチウイルスに由来する。しかしながら、レトロウイルスおよび／もしくはレンチウイルス配列の多くの異なる源を使用することができるか、またはある特定のレンチウイルス配列の組み合わせられた多数の置換および改変が、移入ベクターの本明細書に記載される機能を行う能力を損なうことなく適応され得ることが理解されるべきである。さらに、様々なレンチウイルスベクターが当分野に公知である。Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９６ａ，１９９６ｂ，ａｎｄ １９９８）；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）；Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９８、米国特許第 ６，０１３，５１６号および第５，９９４，１３６号を参照のこと。それらの多くが、本明細書に予期されるウイルスベクターまたはトランスファープラスミドの産生に適合され得る。
【0347】
様々な実施形態では、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素および／または本明細書において予期される他のポリペプチドをコードする一つ以上のポリヌクレオチドが、当該一つ以上のポリヌクレオチドを含有するアデノウイルスとともに細胞に形質導入されることで、免疫エフェクター細胞に導入される。
【0348】
アデノウイルス系のベクターは、多くの細胞型で非常に高い効率で形質導入を行うことができ、そして細胞分裂を必要としない。そうしたベクターを用いることで、高い力価と、高レベルの発現が得られる。このベクターは、比較的シンプルなシステムで大量に作製することができる。ほとんどのアデノウイルスベクターが、導入遺伝子がＡｄ Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、および／またはＥ３遺伝子を置換するよう操作されている。その結果、複製能力を欠くベクターはヒト２９３細胞中で増幅され、当該細胞が失われた遺伝子機能をトランスで供給する。Ａｄベクターは、例えば肝臓、腎臓および筋肉中に存在する細胞などの非分裂細胞、分化細胞を含む、複数のタイプの組織にインビボで形質導入することができる。従来的なＡｄベクターは、大きな運搬能力を有している。
【0349】
複製能力を欠く現在のアデノウイルスベクターの作製と増幅は、２９３と呼ばれるユニークなヘルパー細胞株を利用する場合がある。この細胞株は、ヒト胚腎臓細胞からＡｄ５ ＤＮＡ断片により形質転換されたものであり、Ｅ１タンパク質を構造的に発現している（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９７７）。アデノウイルスゲノムのＥ３領域は必須ではないため（Ｊｏｎｅｓ ＆ Ｓｈｅｎｋ，１９７８）、現在のアデノウイルスベクターは、２９３細胞の補助を得て、Ｅ１、Ｄ３またはその両方の領域に外来性ＤＮＡを担持している（Ｇｒａｈａｍ ＆ Ｐｒｅｖｅｃ，１９９１）。アデノウイルスベクターは、真核細胞遺伝子の発現（Ｌｅｖｒｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９１；Ｇｏｍｅｚ－Ｆｏｉｘ ｅｔ ａｌ．，１９９２）およびワクチン開発（Ｇｒｕｎｈａｕｓ ＆ Ｈｏｒｗｉｔｚ，１９９２；Ｇｒａｈａｍ ＆ Ｐｒｅｖｅｃ，１９９２）に使用されている。組み換えアデノウイルスを様々な組織に投与する実験としては、気管滴下（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９２）、筋肉注射（Ｒａｇｏｔ ｅｔ ａｌ．，１９９３）、末梢静脈注射（Ｈｅｒｚ ＆ Ｇｅｒａｒｄ，１９９３）、および脳内への定位性接種（Ｌｅ Ｇａｌ Ｌａ Ｓａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９９３）が挙げられる。臨床試験におけるＡｄベクターの使用例には、筋肉内注射を用いた抗腫瘍免疫を目的としたポリヌクレオチド療法が含まれる（Ｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１０８３－９（１９９８））。
【0350】
様々な実施形態では、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素および／または本明細書において予期される他のポリペプチドをコードする一つ以上のポリヌクレオチドが、当該一つ以上のポリヌクレオチドを含有する例えばＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２といった単純ヘルペスウイルスとともに細胞に形質導入されることで、免疫エフェクター細胞に導入される。
【0351】
成熟ＨＳＶビリオンは、１５２ｋｂの直線型二本鎖ＤＮＡ分子からなるウイルスゲノムを含む、エンベロープ型正２０面体カプシドからなる。一つの実施形態では、ＨＳＶをベースとしたウイルスベクターは、一つ以上の必須または非必須のＨＳＶ遺伝子が欠落している。一つの実施形態では、ＨＳＶをベースとしたウイルスベクターは、複製能力を欠く。殆どの複製能力を欠くＨＳＶベクターは、一つ以上の中間－初期、初期、または後期のＨＳＶ遺伝子を除去するための欠失を含有し、複製が阻害されている。例えばＨＳＶベクターは、以下からなる群から選択される前初期遺伝子が欠落していてもよい：ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、およびそれらの組み合わせ。ＨＳＶベクターの利点は、後期ステージに入り、長期的にＤＮＡ発現を生じさせることができる能力と、最大２５ｋｂもの外因性ＤＮＡインサートを収容できる、その巨大なウイルスＤＮＡゲノムである。ＨＳＶ系のベクターは、例えば米国特許第５，８３７，５３２号、第５，８４６，７８２号および第５，８０４，４１３号、ならびに国際特許出願ＷＯ９１／０２７８８、ＷＯ９６／０４３９４、ＷＯ９８／１５６３７およびＷＯ９９／０６５８３に記載されており、それらはその全体で参照により本明細書に援用される。
【0352】
Ｇ．遺伝子改変細胞
様々な実施形態では、細胞は、癌治療における使用を目的として、本明細書において企図されるＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、および／または融合タンパク質を発現するよう改変される。細胞は、本明細書において予期されるポリペプチドのうちの一つ以上を発現するよう非遺伝的に改変されてもよく、または特定の好ましい実施形態では、細胞は、本明細書において予期されるポリペプチドの一つ以上を発現するよう遺伝的に改変されてもよい。本明細書において使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝的に改変された」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態の追加的な遺伝物質を、細胞中の総遺伝物質に加えることを指す。「遺伝的に改変された細胞」、「改変細胞」、および「再指向化細胞」という用語は、特定の実施形態において相互交換可能に使用される。
様々な実施形態では、細胞は、癌治療における使用を目的として、本明細書において企図されるＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、および／または融合タンパク質を発現するよう改変される。細胞は、本明細書において予期されるポリペプチドのうちの一つ以上を発現するよう非遺伝的に改変されてもよく、または特定の好ましい実施形態では、細胞は、本明細書において予期されるポリペプチドの一つ以上を発現するよう遺伝的に改変されてもよい。本明細書において使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝的に改変された」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態の追加的な遺伝物質を、細胞中の総遺伝物質に加えることを指す。「遺伝的に改変された細胞」、「改変細胞」、および「再指向化細胞」という用語は、特定の実施形態において相互交換可能に使用される。
【0353】
特定の実施形態では、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に導入および発現され、免疫エフェクター細胞の有効性を改善する。
【0354】
「免疫エフェクター細胞」は、一つ以上のエフェクター機能（例えば細胞傷害性の細胞殺傷活性、サイトカイン分泌、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの誘導など）を有する免疫系の任意の細胞である。本明細書において予期される免疫エフェクター細胞の例示は、Ｔリンパ球であり、限定されないが細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＴＩＬ、およびヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）が挙げられる。特定の実施形態では、細胞は、αβＴ細胞を含む。特定の実施形態では、細胞は、γδＴ細胞を含む。一つの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。一つの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を含む。免疫エフェクター細胞は、自己（ｓｅｌｆ）または非自己（ｎｏｎ－ｓｅｌｆ、例えば同種、同系または異種）であってもよい。
【0355】
本明細書において使用される場合、「自己」とは、同じ対象に由来する細胞を指す。本明細書において使用される場合、「同種」とは、比較した細胞と遺伝的に異なる同じ種の細胞を指す。本明細書において使用される場合、「同系」とは、比較した細胞と遺伝的に同一である、異なる対象の細胞を指す。本明細書において使用される場合、「異種」とは、比較した細胞と異なる種の細胞を指す。好ましい実施形態では、細胞は、ヒトの自己免疫エフェクター細胞である。
【0356】
本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲの導入に適した免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔリンパ球が挙げられる。「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」という用語は、当分野において認識されており、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球を含むことが意図される。Ｔ細胞は、例えばＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞またはＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞などのＴヘルパー（Ｔｈ）細胞であってもよい。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ：ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体を発現する。Ｔ細胞受容体は、二つのサブユニット、つまりアルファ鎖とベータ鎖のサブユニット（αβＴＣＲ）、またはガンマ鎖とデルタ鎖のサブユニット（γδＴＣＲ）を含有し、それら各々が、各Ｔ細胞ゲノムの組み換え事象により生成される固有タンパク質である。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、αβＴＣＲ Ｔ細胞（αβ Ｔ細胞）である。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、γδＴＣＲ Ｔ細胞（γδ Ｔ細胞）である。特定の実施形態における使用に適したＴ細胞群の他の例としては、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞が挙げられる。
【0357】
当業者に理解されるように、他の細胞も、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞として使用され得る。特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球およびマクロファージも含む。免疫エフェクター細胞は、エフェクター細胞の前駆体も含み、この場合においてそうした前駆細胞は、インビボまたはインビトロで免疫エフェクター細胞に分化するように誘導されてもよい。したがって特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、例えば臍帯血、骨髄または動員末梢血に由来する細胞のＣＤ３４＋集団内に含有される造血幹細胞（ＨＳＣ）などの免疫エフェクター細胞の前駆体を含み、それらは対象に投与されたときに成熟免疫エフェクター細胞へと分化し、またはインビトロで誘導されて成熟免疫エフェクター細胞へと分化してもよい。
【0358】
本明細書において使用される場合、「ＣＤ３４＋細胞」という用語は、その細胞表面上にＣＤ３４タンパク質を発現する細胞を指す。本明細書において使用される場合、「ＣＤ３４」とは、細胞－細胞接着因子として作用することが多く、リンパ節へのＴ細胞の侵入に関与する細胞表面糖タンパク質（例えばシアロムチンタンパク質）を指す。ＣＤ３４＋細胞集団は、造血幹細胞（ＨＳＣ）を含有し、ＨＳＣは患者に投与されたときに分化し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、および単球／マクロファージ系統の細胞を含むすべての造血系の元となる。
【0359】
本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を作成する方法は、特定の実施形態に提示される。一つの実施形態では、方法は個体から単離された免疫エフェクター細胞をトランスフェクトまたは形質導入することを含み、一つ以上の核酸および／またはベクター、例えばレンチウイルスベクターを有する免疫エフェクター細胞は、本明細書に企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードする核酸を含む。一つの実施形態では、方法は、個体から単離された免疫エフェクター細胞をトランスフェクトまたは形質導入することを含み、免疫エフェクター細胞は、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを発現する。ある実施形態では、免疫エフェクター細胞は、インビトロでのさらなる操作を伴わずに個体から単離され、および遺伝子改変される。次いでそうした細胞を当該個体に直接再投与してもよい。さらなる実施形態では、免疫エフェクター細胞は最初にインビトロで活性化され、そして刺激されて増殖し、その後、遺伝子改変される。これに関し、免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される前、および／または遺伝子改変された後に培養され得る。
【0360】
特定の実施形態では、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞のインビトロ操作または遺伝子改変の前に、対象から細胞源が取得される。特定の実施形態では、改変免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含有する。
【0361】
Ｔ細胞は、限定されないが、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む多くの源から取得されることができる。ある実施形態では、Ｔ細胞は、例えばＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの沈殿作用といった当業者に公知の技術を任意の回数使用して対象から採取された血液ユニットから取得されることができる。
【0362】
他の実施形態では、単離された、または精製されたＴ細胞群が使用される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの単離後、細胞傷害性Ｔリンパ球とヘルパーＴリンパ球の両方を、活性化、拡張および／もしくは遺伝子改変の前または後に、ナイーブＴ細胞亜群、メモリーＴ細胞亜群およびエフェクターＴ細胞亜群へとソーティングしてもよい。
【0363】
一実施形態において、単離または精製されたＴ細胞集団は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない、マーカーのうちの一つ以上を発現する。
【0364】
ある実施形態では、Ｔ細胞は個体から単離され、インビトロで最初に活性化および刺激されて増殖した後に改変されて、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを発現する。
【0365】
Ｔ細胞組成物の充分な治療投与量を獲得するために、しばしばＴ細胞に、一ラウンド以上の刺激、活性化および／または拡張が行われる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は一般的に、例えば米国特許第６，３５２，６９４号、第６，５３４，０５５号、第６，９０５，６８０号、第６，６９２，９６４号、第５，８５８，３５８号、第６，８８７，４６６号、第６，９０５，６８１号、第７，１４４，５７５号、第７，０６７，３１８号、第７，１７２，８６９号、第７，２３２，５６６号、第７，１７５，８４３号、第５，８８３，２２３号、第６，９０５，８７４号、第６，７９７，５１４号、および第６，８６７，０４１号に記載される方法を使用して活性化および拡張され得る。それら特許はその全体で参照により本明細書に援用される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、約６時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間、活性化および拡張され、その後、本明細書に企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするベクターまたはポリヌクレオチドを導入する。
【0366】
Ｈ．組成物および製剤
本明細書で企図される組成物は、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨ ＤＡＲＩＣ構成または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、上記を含むベクター、遺伝子改変免疫エフェクター細胞、架橋因子などを含み得る。組成物としては限定されないが、医薬組成物が挙げられる。「医薬組成物」とは、細胞または動物への投与に対し、薬学的に許容可能な溶液または生理学的に許容可能な溶液中で、単独で、または一つ以上の他の治療モダリティと併用されて製剤化される組成物を指す。所望の場合には、組成物は、例えばサイトカイン、増殖因子、ホルモン、低分子、化学療法剤、プロドラッグ、薬剤、抗体、または他の様々な薬学的に活性な剤などの他の剤も同様に併用されて投与され得ることも理解されたい。事実上、組成物に含有され得る他の構成要素に制限はないが、追加される剤は、意図される療法を送達する組成物の能力に有害な影響を与えないものとする。
本明細書で企図される組成物は、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲ、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨ ＤＡＲＩＣ構成または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、上記を含むベクター、遺伝子改変免疫エフェクター細胞、架橋因子などを含み得る。組成物としては限定されないが、医薬組成物が挙げられる。「医薬組成物」とは、細胞または動物への投与に対し、薬学的に許容可能な溶液または生理学的に許容可能な溶液中で、単独で、または一つ以上の他の治療モダリティと併用されて製剤化される組成物を指す。所望の場合には、組成物は、例えばサイトカイン、増殖因子、ホルモン、低分子、化学療法剤、プロドラッグ、薬剤、抗体、または他の様々な薬学的に活性な剤などの他の剤も同様に併用されて投与され得ることも理解されたい。事実上、組成物に含有され得る他の構成要素に制限はないが、追加される剤は、意図される療法を送達する組成物の能力に有害な影響を与えないものとする。
【0367】
本明細書において、「薬学的に許容可能」という文言は、適切な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して使用することに適し、合理的な利益／リスク比に見合った、それら化合物、物質、組成物および／または剤型を指すために採用される。
【0368】
「薬学的に許容可能な担体」という用語は、架橋因子、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、それらを含むベクター、または遺伝子改変された免疫エフェクター細胞と一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。薬学的な担体の例示は、例えば細胞培養培地、水および油などの滅菌された液体であってもよく、石油、動物、植物または合成を起源とするものが挙げられ、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ごま油などがある。生理食塩水およびブドウ糖液およびグリセロール溶液も、特に注射用溶液に関して液性担体として採用され得る。特定の実施形態における適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、白墨、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。任意の従来的な媒または剤が、活性成分と不適合である場合を除き、治療組成物中でのその使用が予期される。補足的な活性成分も、組成物内に組み込まれ得る。
【0369】
一つの実施形態では、薬学的に許容可能な担体を含む組成物が、対象への投与に適している。特定の実施形態では、担体を含む組成物は、例えば血管内（静脈内または動脈内）投与、腹腔内投与または筋肉内投与などの非経口投与に適している。特定の実施形態では、薬学的に許容可能な担体を含む組成物は、脳室内投与、髄腔内投与またはくも膜腔内投与に適している。薬学的に許容可能な担体としては、滅菌水溶液、細胞培養培地または分散液が挙げられる。薬学的に活性な物質に対する、そのような媒および剤の使用は、当分野に公知である。任意の従来的な媒または剤が、架橋因子、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、それらを含むベクター、または遺伝子改変された免疫エフェクター細胞と不適合である場合を除き、医薬組成物におけるそれらの使用が予期される。
【0370】
特定の実施形態において、本明細書で企図される組成物は、遺伝子修飾されたＴ細胞および薬学的に許容可能な担体を含む。本明細書において予期される細胞をベースとした組成物を含有する組成物は、腸内投与または非経口投与により別個に投与されてもよく、または所望の治療目的を果たすための他の適切な化合物と併用して投与されてもよい。
【0371】
特定の実施形態では、本明細書において予期される組成物は、架橋因子と、薬学的に許容可能な担体を含む。
【0372】
薬学的に許容可能な担体は、充分に高い純度のものでなくてはならず、そして治療されるヒト対象への投与に適するよう、充分に毒性が低いものでなければならない。さらに組成物の安定性を維持または増加させなければならない。薬学的に許容可能な担体は、液体または固体であってもよく、予定される投与様式を踏まえ、組成物の他の構成要素と混合されたときに、望ましい体積、濃度を提供するよう選択される。例えば薬学的に許容可能な担体は、限定されないが、結合剤（例えば前ゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、充填剤（例えばラクトースおよび他の糖類、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、リン酸水素カルシウムなど）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、滑石、シリカ、コロイド状二酸化シリコン、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、水素化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）、崩壊剤（例えば、デンプン、グリコール酸ナトリウムデンプンなど）、または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウムなど）であってもよい。本明細書において予期される組成物に適切な他の薬学的に許容可能な担体としては限定されないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、滑石、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【0373】
そうした担体溶液は、緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加剤を含んでもよい。本明細書において使用される場合、「緩衝剤」という用語は、その化学組成が、ｐＨに大きな変化を与えることなく酸または塩基を中和する溶液または液体を指す。本明細書において予期される緩衝剤の例としては限定されないが、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル溶液、５％ブドウ糖溶液（Ｄ５Ｗ）、正常／生理学的生理食塩水（０．９％ ＮａＣｌ）が挙げられる。
【0374】
薬学的に許容可能な担体は、組成物のｐＨを約７に維持するために充分な量で存在してもよい。あるいは組成物は、約６．８～約７．４の範囲のｐＨ、例えば６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３および７．４のｐＨを有する。さらに別の実施形態では、組成物は約７．４のｐＨを有する。
【0375】
本明細書において予期される組成物は、非毒性の薬学的に許容可能な培地を含有してもよい。組成物は、懸濁液であってもよい。本明細書において使用される場合、「懸濁液」という用語は、細胞が固形支持体に結合しない非接着性の状態を指す。例えば懸濁液として維持される細胞は、攪拌またはかき混ぜられてもよく、例えば培養皿などの支持体に接着しない。
【0376】
特定の実施形態において、本明細書で企図される組成物は、懸濁液中で製剤化され、ここで、修飾されたＴ細胞が静脈注射用（ＩＶ）袋などの中で、許容される液体培地または溶液、例えば、生理食塩水または血清不含培地中に分散される。受容可能な希釈剤としては限定されないが、水、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム溶液（生理食塩水）、無血清細胞培養培地、および極低温保存に適した培地、例えばＣｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）培地が挙げられる。
【0377】
ある実施形態では、薬学的に許容可能な担体は、ヒトまたは動物を起源とする天然タンパク質を実質的に含まず、改変Ｔ細胞群を含む組成物の保存に適している。治療用組成物は、ヒト患者への投与が意図されており、そのため例えばウシ血清アルブミン、ウマ血清およびウシ胎児血清などの細胞培養成分を実質的に含まない。
【0378】
一部の実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な細胞培養培地中で製剤化される。そうした組成物は、ヒト対象への投与に適している。特定の実施形態では、薬学的に許容可能な細胞培養培地は、無血清培地である。
【0379】
無血清培地は、血清含有培地を超える利点をいくつか有しており、シンプルでより明白な組成、汚染物質量の低下、感染性実体の源となる可能性の排除、およびコスト低下が挙げられる。様々な実施形態では、無血清培地は、動物質を含まず、任意で無タンパク質であってもよい。任意で培地はバイオ医薬品的に受容可能な組み換えタンパク質を含有してもよい。「動物質を含まない」培地とは、構成要素が非動物源に由来する培地を指す。組み換えタンパク質は、動物質を含まない培地中で天然動物性タンパク質を置き換え、その栄養素は合成、植物または微生物の源から取得される。「タンパク質を含まない」培地は、対照的に、実質的にタンパク質を含まないと規定される。
【0380】
特定の組成物において使用される無血清培地の例示としては限定されないが、ＱＢＳＦ－６０（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）、ＳｔｅｍＰｒｏ－３４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）、およびＸ－ＶＩＶＯ １０が挙げられる。
【0381】
一つの実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ中で製剤化される。
【0382】
様々な実施形態では、改変Ｔ細胞を含む組成物は、凍結保存培地中で製剤化される。例えば凍結保存剤を含む凍結保存培地を使用して、融解後の高い細胞活性成績を維持してもよい。特定の組成物において使用される凍結保存培地の例示としては限定されないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ５、およびＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ２が挙げられる。
【0383】
一つの実施形態では、組成物は、５０：５０のＰｌａｓｍａＬｙｔｅ ＡとＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０を含む溶液中で製剤化される。
【0384】
特定の実施形態では、組成物は、マイコプラズマ、エンドトキシンおよび微生物汚染を実質的に含まない。エンドトキシンに関して「実質的に含まない」とは、生物製剤に関してＦＤＡにより許可されるよりも低い細胞投与量当たりのエンドトキシンであることを意味し、１日当たり、５ＥＵ／体重ｋｇの総エンドトキシンであり、平均７０ｋｇのヒトに対し、細胞総投与量当たり３５０ＥＵである。特定の実施形態では、本明細書において予期される組成物は、約０．５ＥＵ／ｍｌ～約５．０ＥＵ／ｍｌ、または約０．５ＥＵ／ｍｌ、１．０ＥＵ／ｍｌ、１．５ＥＵ／ｍｌ、２．０ＥＵ／ｍｌ、２．５ＥＵ／ｍｌ、３．０ＥＵ／ｍｌ、３．５ＥＵ／ｍｌ、４．０ＥＵ／ｍｌ、４．５ＥＵ／ｍｌ、もしくは５．０ＥＵ／ｍｌを含有する。
【0385】
特定の実施形態では、薬学的に許容可能な担体溶液の製剤は、当分野に公知であり、例えば腸内および非経口、例えば血管内、静脈内、動脈内、骨内、脳室内、大脳内、頭蓋内、髄腔内、クモ膜下腔内、および髄内の投与ならびに製剤を含む様々な治療レジメンにおける、本明細書に記載の特定の組成物の使用に関する適切な投薬レジメンおよび治療レジメンの開発も同様である。当業者であれば、本明細書において予期される特定の実施形態は、例えば薬学分野で公知であり、そして例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｖｏｌｕｍｅ Ｉ ａｎｄ ｖｏｌｕｍｅ ＩＩ． ２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｌｏｙｄ Ｖ．Ａｌｌｅｎ Ｊｒ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ；２０１２に記載される製剤などの他の製剤を含んでもよいことを理解するであろう。当該文献はその全体で参照により本明細書に援用される。
【0386】
特定の実施形態において、組成物は、本明細書で企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む免疫エフェクター細胞の量を含む。特定の実施形態では、組成物は、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の量を含む。本明細書において使用される場合、「量」という用語は、架橋因子の存在下で、臨床結果を含む有益な、もしくは所望の予防的結果または治療的結果を実現する、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む細胞の「有効な量」または「有効量」を指す。
【0387】
「予防有効量」とは、架橋因子の存在下で、所望の予防的結果を達成するのに有効な、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む細胞の量を指す。必ずではないが典型的には、予防的投与量は、疾患の早期ステージの前、または早期ステージの対象において使用されるため、予防的有効量は、治療的有効量よりも少ない。
【0388】
「治療有効量」とは、架橋因子の存在下で対象（例えば患者）を「治療する」のに有効な、本明細書においてキロされる一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む細胞の量を指す。治療的な量が示されている場合、投与される組成物、細胞、架橋因子などの正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍の大きさ、感染または転移の程度、および状態における個々の差を考慮し、医師により決定され得る。
【0389】
一般的に、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞を含む医薬組成物は、１０２～１０１０細胞／体重ｋｇ、好ましくは１０５～１０６細胞／体重ｋｇの用量で、当該範囲内のすべての整数値を含み、投与され得ると言える。細胞数は、組成物の意図される最終用途、組成物中に含有される細胞のタイプに依存する。本明細書において提示される用途に関し、細胞は一般的に、リットル以下の量であり、５００ｍｌ以下、さらには２５０ｍｌまたは１００ｍｌ以下であり得る。ゆえに所望される細胞の密度は、多くの場合、１０６細胞／ｍｌ超であり、一般的には、１０７細胞／ｍｌ超、一般的には１０８細胞／ｍｌ以上である。臨床的に関連する免疫細胞数は、複数回の点滴に分けられてもよく、累積的には１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１または１０１２細胞以上となる。一部の実施形態では、具体的には注入される全細胞は特定の標的抗原へと再指向化されるため、１０６／キログラム（患者当たり１０６－１０１１）の範囲の少ない数の細胞が投与される場合がある。
【0390】
望ましい場合、治療は、本明細書に記載されるようにマイトージェン（例えばＰＨＡ）またはリンホカイン、サイトカインおよび／もしくはケモカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－１８、およびＴＮＦ－ベータ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与も含み、免疫反応の誘導を強化してもよい。
【0391】
一般的に、本明細書に記載されるように活性化および拡張された細胞を含む組成物は、免疫不全状態の個体で生じる疾患の治療および予防に活用されてもよい。特に本明細書において予期される組成物は、癌の治療に使用される。特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、単独で投与されてもよく、または担体、希釈剤、賦形剤を併用した医薬組成物として、および／または例えばＩＬ－２もしくは他のサイトカインもしくは他の細胞群などの他の構成要素を併用した医薬組成物として投与されてもよい。
【0392】
特定の実施形態では、医薬組成物は、遺伝子改変されたＴ細胞の量を、一つ以上の薬学的もしくは生理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と併用して含有する。
【0393】
特定の実施形態では、医薬組成物は、架橋因子の量を、一つ以上の薬学的もしくは生理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と併用して含有する。
【0394】
特定の実施形態では、組成物は、本明細書において予期される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞の有効量を、単独で、または架橋因子、および／または一つ以上の治療剤、例えば放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光線力学的療法などと併用して含有する。組成物は、抗生物質と併用して投与されてもよい。そうした治療剤は、例えば特定の癌などの本明細書に記載の特定の疾患状態に対する標準治療として当分野において承認されている場合がある。予期される治療剤の例としては、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤｓ、ＤＭＡＲＤｓ、抗炎症剤、化学療法剤、放射線療法、治療用抗体、または他の活性で補助的な剤が挙げられる。
【0395】
特定の実施形態では、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド含む免疫エフェクター細胞の有効量を含む組成物が対象に投与され、および細胞組成物の前に、細胞組成物の間に、細胞組成物と併用されて、または細胞組成物に続いて、架橋因子の有効量を含む組成物が対象に投与され、任意で対象に反復投与される。
【0396】
ある実施形態では、本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の抗炎症剤、化学療法剤または治療用抗生物質等と併せて投与されてもよい。
【0397】
Ｉ．治療方法
本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを発現するよう改変された免疫エフェクター細胞は、免疫不全、例えば、癌、に関連する少なくとも一つの症状の予防、治療および改善に使用するための養子免疫療法の改善された方法、または予防、治療もしくは改善する方法を提供する。
本明細書において企図される一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを発現するよう改変された免疫エフェクター細胞は、免疫不全、例えば、癌、に関連する少なくとも一つの症状の予防、治療および改善に使用するための養子免疫療法の改善された方法、または予防、治療もしくは改善する方法を提供する。
【0398】
ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞は、免疫不全、例えば、癌、に関連する少なくとも一つの症状の予防、治療および改善に使用するための養子免疫療法の改善された方法、または予防、治療もしくは改善する方法を提供する。
【0399】
特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣを発現するよう改変された免疫エフェクター細胞は、標的抗原を発現する例えば腫瘍細胞などの標的細胞に対する細胞傷害性反応の安全性および有効性を安定させながら、オンターゲット抗原、オフターゲット細胞障害活性のリスク（正常な非標的細胞上の標的抗原を認識する）を減少させるための養子免疫療法の改善を提供する。
【0400】
特定の実施形態では、癌の少なくとも一つの症状を予防、治療または改善する方法は、対象に、治療有効量のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣまたは抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲの一つ以上の構成要素を含む改変された免疫エフェクター細胞またはＴ細胞を投与して、細胞を標的細胞に再指向することを含む。遺伝子改変された細胞は、化学的に制御可能な免疫刺激性シグナルを伝達するという点で、有効性および安全性の高い細胞免疫療法である。
【0401】
特定の実施形態では、例えばＴ細胞などの一つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素とＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の両方を発現するように改変される。この場合、改変された細胞は、その必要のある対象に投与され、免疫エフェクター細胞上に発現されたＣＤ３３ ＶＨＨ結合構成要素と、標的細胞上に発現されたＣＤ３３の相互作用を介して、標的細胞に誘導される。架橋因子は、改変細胞の前に、改変細胞とほぼ同じときに、または改変細胞が対象に投与された後に、対象に投与される。架橋因子の存在下では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、架橋因子、およびＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞傷害性反応が惹起される。
【0402】
特定の実施形態において、一つ以上の免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞は、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現するように修飾される。この場合、改変された細胞は、それを必要とする対象に投与される。ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、修飾された細胞が対象に投与される前に、修飾された細胞が対象に投与されるのとほぼ同時に、または修飾された細胞が対象に投与された後に対象に投与され得る。加えて、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、架橋因子との予め形成された複合体において、架橋因子と同時だが別個の組成物において、または架橋因子とは異なる時間に対象に投与することができる。ＣＤ３３ ＶＨＨ結合構成要素は、架橋因子の存在下または不在下のいずれかで、標的細胞上に発現されるＣＤ３３に結合する。架橋因子の存在下では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、架橋因子、およびＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞傷害性反応が惹起される。
【0403】
特定の実施形態において、一つ以上の免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞は、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現するように修飾される。この場合、改変された細胞は、それを必要とする対象に投与される。ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、修飾された細胞が対象に投与される前に、修飾された細胞が対象に投与されるのとほぼ同時に、または修飾された細胞が対象に投与された後に対象に投与され得る。加えて、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、架橋因子との予め形成された複合体において、架橋因子と同時だが別個の組成物において、または架橋因子とは異なる時間に対象に投与することができる。ＣＤ３３結合構成要素は、架橋因子の存在下または不在下のいずれかで、標的細胞上に発現される標的抗原に結合する。架橋因子の存在下では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、架橋因子、およびＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素の間に三重複合体が形成される。三重複合体が形成されると、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣは、免疫刺激性シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、次いで、当該免疫エフェクター細胞から標的細胞に対して細胞傷害性反応が惹起される。特定の実施形態では、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ活性化は、寛解または退縮が不完全であり、状態が再発または治療に対し難治性となる場合に誘導され得る。
【0404】
特定の好ましい実施形態では、一次Ｔ細胞の特異性は、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ 構成要素を用いて、Ｔ細胞、例えば一次Ｔ細胞を遺伝子改変することにより、ＣＤ３３を発現する腫瘍または癌細胞に対して再指向される。
【0405】
特定の好ましい実施形態では、一次Ｔ細胞の特異性は、Ｔ細胞、例えば、一次Ｔ細胞を、標的抗原および一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素に再指向するように操作された抗原受容体で遺伝子改変することによって、ＣＤ３３を発現する腫瘍または癌細胞に再指向される。
【0406】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、固形腫瘍または癌の治療に使用される。
【0407】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、副腎癌、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形腫様腫瘍／非定型横紋筋様腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ癌、乳癌、気管支腫瘍、心臓腫瘍、子宮頸癌、胆管癌、軟骨肉腫、脊索腫、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜癌、上位腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼癌、卵管癌、線維性組織肉腫、線維肉腫、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、神経膠腫、グリア芽腫、頭頚部癌、血管芽細胞腫、肝細胞癌、下咽頭癌、眼内黒色腫、カポジ肉腫、腎癌、喉頭癌、平滑筋肉腫、舌癌、脂肪肉腫、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、胚カルチノイド腫瘍、悪性中皮腫、髄様癌、髄芽腫、髄膜腫、黒色腫、メルケル細胞癌、正中線癌、口腔癌（ｍｏｕｔｈ ｃａｎｃｅｒ）、粘液肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、鼻腔および副鼻腔の癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、乏突起神経膠腫、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ、ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｎｃｅｒ）、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵島細胞腫瘍、乳頭癌、傍神経節腫、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性胸膜腫、前立腺癌、直腸癌、網膜芽腫、腎細胞癌、腎盂および尿管の癌、横紋筋肉腫、唾液腺癌、皮脂腺癌、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、小腸癌、胃癌、汗腺癌、滑液腫瘍、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、血管癌、外陰癌、およびウィルムス腫瘍を含む固形腫瘍または癌の治療に使用される
【0408】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾された免疫エフェクター細胞は、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、食道癌、卵巣癌、胃癌 子宮内膜癌、神経膠腫、神経膠芽腫、および乏突起神経膠腫を含むが、これらに限定されない、固形腫瘍または癌の治療において使用される。
【0409】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾された免疫エフェクター細胞は、非小細胞肺癌、転移性結腸直腸癌、神経膠芽腫、頭頸部癌、膵癌、および乳癌を含むが、これらに限定されない、固形腫瘍または癌の治療において使用される。
【0410】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾された免疫エフェクター細胞は、神経膠芽腫の治療において使用される。。
【0411】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、液状の癌または血液の癌の治療に使用される。
【0412】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫を含むＢ細胞悪性腫瘍の治療に使用される。
【0413】
特定の実施形態では、本明細書において予期される改変免疫エフェクター細胞は、限定されないが、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫：急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、および真性多血症、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫、セザリー症候群、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、多発性骨髄腫、顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞白血病、非分泌性骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、および髄外形質細胞腫を含む液状の癌の治療に使用される。
【0414】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾された免疫エフェクター細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療に使用される。
【0415】
本明細書において予期される方法における使用に好ましい細胞としては、自己（ｓｅｌｆ）細胞、好ましくは造血細胞、より好ましくはＴ細胞、そしてより好ましくは免疫エフェクター細胞が挙げられる。
【0416】
特定の実施形態では、方法は、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素を発現する改変された免疫エフェクター細胞の治療有効量を、その必要のある患者に投与すること、および架橋因子を対象に投与することも含む。ある特定の実施形態において、細胞は、免疫障害を発症するリスクがある患者の治療に使用される。したがって、特定の実施形態は、治療有効量の本明細書で企図される修飾された免疫エフェクター細胞および架橋因子を、治療または予防または緩和を必要とする対象に投与することを含む、免疫障害、例えば癌の少なくとも一つの症状の治療または予防または緩和を含む。
【0417】
特定の実施形態では、方法は、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲを発現する治療有効量の改変された免疫エフェクター細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。ある特定の実施形態において、細胞は、免疫障害を発症するリスクがある患者の治療に使用される。したがって、特定の実施形態は、治療有効量の本明細書で企図される修飾された免疫エフェクター細胞および架橋因子を、治療または予防または緩和を必要とする対象に投与することを含む、免疫障害、例えば癌の少なくとも一つの症状の治療または予防または緩和を含む。
【0418】
特定の実施形態では、方法は、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素を発現する改変された免疫エフェクター細胞、またはそれらを含む組成物の治療有効量を、その必要のある患者に投与することを含み、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素および架橋因子も投与することを含み、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素は、対象への投与の前に架橋因子に結合される。ある特定の実施形態において、細胞は、免疫障害を発症するリスクがある患者の治療に使用される。したがって、特定の実施形態は、免疫障害、例えば癌の少なくとも一つの症状の治療または予防または緩和を含み、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素、および任意に操作された抗原受容体または別のＤＡＲＩＣ結合構成要素、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素、および架橋因子を発現する治療有効量の改変された免疫エフェクター細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【0419】
改変された免疫エフェクター細胞、ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣ ＶＨＨ結合構成要素、および／または架橋因子の投与の量ならびに頻度は、患者の状態、患者の疾患のタイプおよび重大度といった因子により決定されるが、適切な用量および投与スケジュールは、臨床試験により決定されてもよい。
【0420】
一つの例示的な実施形態では、対象に提供される改変免疫エフェクター細胞の有効量は、少なくとも２ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも３ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも４ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも５ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも６ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも７ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも８ｘ１０６細胞／ｋｇ、少なくとも９ｘ１０６細胞／ｋｇ、または少なくとも１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、またはそれ以上であり、すべてのその間の細胞投与量を含む。
【0421】
別の例示的な実施形態では、対象に提供される改変免疫エフェクター細胞の有効量は、約２ｘ１０６細胞／ｋｇ、約３ｘ１０６細胞／ｋｇ、約４ｘ１０６細胞／ｋｇ、約５ｘ１０６細胞／ｋｇ、約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、約９ｘ１０６細胞／ｋｇ、または約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、またはそれ以上であり、すべてのその間の細胞投与量を含む。
【0422】
別の例示的な実施形態では、対象に提供される改変免疫エフェクター細胞の有効量は、約２ｘ１０６細胞／ｋｇ～約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、約３ｘ１０６細胞／ｋｇ～約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、約４ｘ１０６細胞／ｋｇ～約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、約５ｘ１０６細胞／ｋｇ～約１０ｘ１０６細胞／ｋｇ、２ｘ１０６細胞／ｋｇ～約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、２ｘ１０６細胞／ｋｇ～約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、２ｘ１０６細胞／ｋｇ～約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、３ｘ１０６細胞／ｋｇ～約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、３ｘ１０６細胞／ｋｇ～約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、３ｘ１０６細胞／ｋｇ～約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、４ｘ１０６細胞／ｋｇ～約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、４ｘ１０６細胞／ｋｇ～約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、４ｘ１０６細胞／ｋｇ～約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、５ｘ１０６細胞／ｋｇ～約６ｘ１０６細胞／ｋｇ、５ｘ１０６細胞／ｋｇ～約７ｘ１０６細胞／ｋｇ、５ｘ１０６細胞／ｋｇ～約８ｘ１０６細胞／ｋｇ、または６ｘ１０６細胞／ｋｇ～約８ｘ１０６細胞／ｋｇであり、すべてのその間の細胞投与量を含む。
【0423】
当業者であれば、所望の治療効果を発揮させるために、特定の実施形態において予期される組成物の複数回の投与が必要とされる場合があることを認識するであろう。例えば組成物は、１週、２週、３週、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、１年、２年、５年、１０年またはそれ以上の期間にわたり、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回以上投与される場合がある。改変された免疫エフェクター細胞、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、および架橋因子は、同じ組成物もしくは異なる組成物中で、同時に一つ以上の組成物中で、または別の時に複数の組成物中で投与されてもよい。改変された免疫エフェクター細胞、ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素、および架橋因子は、同じ投与経路または異なる投与経路を介して投与されてもよい。
【0424】
ある実施形態では、対象に活性化Ｔ細胞が投与され、次いで対象から採血して（またはアフェレーシス療法を実施し）、それに由来するＴ細胞を活性化し、そしてこれら活性化および拡張されたＴ細胞を患者に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週ごとに複数回実施されてもよい。ある実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化されてもよい。ある実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、１００ｃｃ、１５０ｃｃ、２００ｃｃ、２５０ｃｃ、３００ｃｃ、３５０ｃｃ、または４００ｃｃ以上の採血から活性化される。学説には拘束されないが、複数回の採血／複数回の再注入のプロトコールを使用することで、Ｔ細胞のある群の選択に役立つ場合がある。
【0425】
一つの実施形態では、癌と診断された対象を治療する方法は、対象から免疫エフェクター細胞を採取すること、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素をコードする一つ以上のベクターを当該細胞に導入することにより免疫エフェクター細胞を改変すること、および改変された免疫エフェクター細胞群を生成すること、ならびに対象に、改変された免疫エフェクター細胞群を投与することを含む。好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含有する。
【0426】
一つの実施形態では、癌と診断された対象を治療する方法は、対象から免疫エフェクター細胞を採取すること、一つ以上の抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードする一つ以上のベクターを細胞に導入することにより免疫エフェクター細胞を改変すること、および改変された免疫エフェクター細胞群を生成すること、ならびに対象に、改変された免疫エフェクター細胞群を投与することを含む。好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含有する。
【0427】
特定の実施形態において予期される細胞組成物を投与する方法は、生体外で改変された免疫エフェクター細胞の再導入を生じさせるために有効である任意の方法、または対象への導入時に成熟免疫エフェクター細胞へと分化する免疫エフェクター細胞の改変前駆体の再導入を生じさせるために有効である任意の方法を含む。一つの方法は、一つ以上のＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ構成要素または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＣＡＲをコードする一つ以上のベクターを細胞に導入し、形質導入された細胞を対象に戻すことによって、末梢血Ｔ細胞をｅｘ ｖｉｖｏに改変することを含む。
【0428】
本明細書において引用される全ての刊行物、特許出願、および登録された特許は、あたかも個々の刊行物、特許出願、または登録された特許が、参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示したかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
前述の実施形態は、明確性および理解を目的として、図および実施例により詳細に記載されているが、本明細書に予期される教示に照らし、特定の変化および改変が、添付の請求の範囲の主旨または範囲から逸脱することなく実施され得ることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、解説のみを目的として提供されるものであり、限定ではない。当業者であれば、本質的に類似した結果を得るために特定の実施形態において変えられ得る、または改変され得る重要ではない様々なパラメーターが容易に認識されるであろう。
前述の実施形態は、明確性および理解を目的として、図および実施例により詳細に記載されているが、本明細書に予期される教示に照らし、特定の変化および改変が、添付の請求の範囲の主旨または範囲から逸脱することなく実施され得ることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、解説のみを目的として提供されるものであり、限定ではない。当業者であれば、本質的に類似した結果を得るために特定の実施形態において変えられ得る、または改変され得る重要ではない様々なパラメーターが容易に認識されるであろう。
【実施例】
【0429】
実施例１
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞が抗腫瘍応答を示す
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびシグナル伝達構成要素を設計、構築し、実証した。ＣＤ３３ 特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣレンチウイルスベクターは、以下をコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含んで構築された：ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素（ＣＤ８α－シグナルペプチド、ＦＲＢバリアント（Ｔ８２Ｌ）、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、細胞内４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）；Ｐ２Ａ配列；およびＤＡＲＩＣ結合構成要素（Ｉｇκ－シグナルペプチド、ＣＤ３３特異的ＶＨＨ結合ドメイン（ラクダ様またはヒト化）、Ｇ４Ｓリンカー、ＦＫＢＰ１２ドメイン、切断された細胞内ドメインを有するＣＤ４膜貫通ドメイン（図１Ｂ）。例えば、配列番号３２～４１を参照されたい。抗ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣレンチウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞は、図１Ａに示す膜結合ポリペプチドを発現する。抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖ ＣＡＲまたはＤＡＲＩＣ設計を対照として使用した。
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞が抗腫瘍応答を示す
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ結合構成要素およびシグナル伝達構成要素を設計、構築し、実証した。ＣＤ３３ 特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣレンチウイルスベクターは、以下をコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結されたＭＮＤＵ３プロモーターを含んで構築された：ＤＡＲＩＣシグナル伝達構成要素（ＣＤ８α－シグナルペプチド、ＦＲＢバリアント（Ｔ８２Ｌ）、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、細胞内４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）；Ｐ２Ａ配列；およびＤＡＲＩＣ結合構成要素（Ｉｇκ－シグナルペプチド、ＣＤ３３特異的ＶＨＨ結合ドメイン（ラクダ様またはヒト化）、Ｇ４Ｓリンカー、ＦＫＢＰ１２ドメイン、切断された細胞内ドメインを有するＣＤ４膜貫通ドメイン（図１Ｂ）。例えば、配列番号３２～４１を参照されたい。抗ＣＤ３３ ＤＡＲＩＣレンチウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞は、図１Ａに示す膜結合ポリペプチドを発現する。抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖ ＣＡＲまたはＤＡＲＩＣ設計を対照として使用した。
【0430】
３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なるＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ、抗ＣＤ３３ｓｃＦｖ ＤＡＲＩＣ、または抗ＣＤ３３ｓｃＦｖ ＣＡＲをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。非形質導入Ｔ細胞、抗ＣＤ３３ｓｃＦｖ対照構築物で形質導入されたＴ細胞、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞を、組換えＣＤ３３－Ｆｃ試薬で染色した。対照ＣＡＲおよびＤＡＲＩＣ Ｔ細胞のみが、ＣＤ３３－Ｆｃ染色で陽性に染色された（図２Ａ、底部パネル、図２Ｂ）。しかしながら、抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞の大部分は、ＶＨＨドメインに特異的なモノクローナル抗体で分析された場合、陽性に染色されたが、対照ＣＡＲまたはＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は染色されなかった（図２Ａ、上側パネル）。対照ＣＡＲおよびＤＡＲＩＣ Ｔ細胞ならびに抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞の両方は、部分的にＣＤ６２ＬおよびＣＤ４５ＲＡ染色によって決定された類似のＴ細胞表現型を有した（図３Ａおよび図３Ｂ）。
【0431】
非形質導入Ｔ細胞、抗ＣＤ３３ｓｃＦｖ対照構築物で形質導入されたＴ細胞、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞をＡＰ２１９６７の存在下または非存在下で１：１のＥ：Ｔ比で２４時間、ＣＤ３３＋ＴＨＰ－１細胞と共培養した。抗ＣＤ３３ｓｃＦｖ ＣＡＲ対照細胞は、ラパログの存在下または非存在下の両方で強力なサイトカイン産生を有した。抗ＣＤ３３ｓｃＦｖ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞および抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、ＡＰ２１９６７の存在下でＴＨＰ－１細胞で培養した時のみ、強固なサイトカイン応答を示した（図４Ａおよび図４Ｂ）。最小限のサイトカイン産生が、非形質導入対照で検出された。
【0432】
さらに、ＶＨＨ９およびＶＨＨ１０ ＤＡＲＩＣの特異性を、全長ＣＤ３３（ＣＤ３３Ｍ）ならびにより短く切断されたＣＤ３３（ＣＤ３３ｍ）を発現するスプライスバリアントに対して評価した。ヒト２９３Ｔ細胞を、全長ＣＤ３３ＭまたはスプライスバリアントＣＤ３３ｍのいずれかをコードするｍＲＮＡで電気穿孔した（図４Ｃ）。ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞を、改変２９３Ｔ細胞と、ＡＰ２１９６７の存在下または非存在下で１：１のＥ：Ｔ比を２４時間共培養し、サイトカイン分泌によって測定される活性化について評価した（図４Ｃ）。ＶＨＨ９ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、ＣＤ３３ＭまたはＣＤ３３ｍ ２９３Ｔ細胞のいずれかに対して、強いサイトカイン応答を示したが、ＶＨＨ１０ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、ＣＤ３３Ｍの存在下でのみ活性化された。
【0433】
実施例２
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞はＣＤ３３抗原に特異的に応答する
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なる抗ＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。対照には、非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞およびＣＤ３３ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞が含まれた。ＡＭＬ細胞株ＭＶ４－１１は、ＣＤ３３を正常に発現する。ＭＶ４－１１細胞を操作して、ＣＤ３３遺伝子をノックアウトした（ＣＤ３３－ＫＯ細胞）。結果として得られたＣＤ３３－ＫＯ細胞株は、細胞表面上にＣＤ３３発現を欠いていた。図５Ａ。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞を、二量体形成剤の存在下または非存在下で、１：１のＥ：Ｔ比で２４時間、ＭＶ４－１１細胞またはＣＤ３３－ＫＯ細胞と共培養した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、ＭＶ４－１１標的細胞の存在下でサイトカインを産生したが、ＣＤ３３－ＫＯ細胞の存在下では産生しなかった。図５Ｂ。
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞はＣＤ３３抗原に特異的に応答する
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なる抗ＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。対照には、非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞およびＣＤ３３ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞が含まれた。ＡＭＬ細胞株ＭＶ４－１１は、ＣＤ３３を正常に発現する。ＭＶ４－１１細胞を操作して、ＣＤ３３遺伝子をノックアウトした（ＣＤ３３－ＫＯ細胞）。結果として得られたＣＤ３３－ＫＯ細胞株は、細胞表面上にＣＤ３３発現を欠いていた。図５Ａ。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞を、二量体形成剤の存在下または非存在下で、１：１のＥ：Ｔ比で２４時間、ＭＶ４－１１細胞またはＣＤ３３－ＫＯ細胞と共培養した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、ＭＶ４－１１標的細胞の存在下でサイトカインを産生したが、ＣＤ３３－ＫＯ細胞の存在下では産生しなかった。図５Ｂ。
【0434】
ＣＤ３３－ＫＯ細胞株を改変して、ＣＤ３３ｍスプライスバリアント（ＣＤ３３－ＫＯ－Ｃ２）を発現させた。ＭＶ４－１１細胞およびＣＤ３３－ＫＯ－Ｃ２細胞を、二量体形成剤の存在または非存在下で、ＵＴＤ細胞、抗ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞、または抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞と共培養し、２４時間後にサイトカインの産生を分析した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ９ ＤＡＲＩＣは、正常なＣＤ３３およびＣＤ３３ｍスプライスバリアントの両方を認識し、ＭＶ４－１１細胞またはＣＤ３３－ＫＯ－Ｃ２細胞と共培養したときにサイトカインを産生した（図５Ｃ）。抗ＣＤ３３ＣＡＲ Ｔ細胞または抗ＣＤ３３ＶＨＨ２ ＤＡＲＩＣ対照Ｔ細胞は、ＭＶ４－１１標的細胞に対してのみ活性であった。
【0435】
実施例３
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は可溶性ＣＤ３３タンパク質によって阻害されない
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なる抗ＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞を、ラパマイシンの存在下または非存在下で、１：１のＥ：Ｔ比でＣＤ３３＋ＴＨＰ－１細胞と２４時間共培養した。共培養期間中、様々な量の組換えＣＤ３３－Ｆｃタンパク質を添加した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、組換え可溶性ＣＤ３３タンパク質の存在下および非存在下で、ラパマイシンの存在下で強固なサイトカイン応答を示した。図６。
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は可溶性ＣＤ３３タンパク質によって阻害されない
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なる抗ＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞を、ラパマイシンの存在下または非存在下で、１：１のＥ：Ｔ比でＣＤ３３＋ＴＨＰ－１細胞と２４時間共培養した。共培養期間中、様々な量の組換えＣＤ３３－Ｆｃタンパク質を添加した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、組換え可溶性ＣＤ３３タンパク質の存在下および非存在下で、ラパマイシンの存在下で強固なサイトカイン応答を示した。図６。
【0436】
実施例４
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は低いレベルのＣＤ３３抗原に応答する
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なる抗ＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞をＡＰ２１９６７二量体形成剤、およびＣＤ３３をコードする異なる量のｍＲＮＡでトランスフェクトしたＣＤ３３ｎｅｇ ２９３Ｔ細胞と共培養した。上清を２４時間後に収集し、サイトカイン産生を分析した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、非常に低いｍＲＮＡ濃度でも、ＣＤ３３トランスフェクトされた標的細胞との共培養後に、ＩＦＮγ産生の用量依存的な増加を示した（図７）。
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は低いレベルのＣＤ３３抗原に応答する
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。３名のドナーからのＴ細胞をそれぞれ、異なる抗ＣＤ３３特異的ＶＨＨ ＤＡＲＩＣをコードするＬＶＶで形質導入し、１０日間増殖させた。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞をＡＰ２１９６７二量体形成剤、およびＣＤ３３をコードする異なる量のｍＲＮＡでトランスフェクトしたＣＤ３３ｎｅｇ ２９３Ｔ細胞と共培養した。上清を２４時間後に収集し、サイトカイン産生を分析した。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、非常に低いｍＲＮＡ濃度でも、ＣＤ３３トランスフェクトされた標的細胞との共培養後に、ＩＦＮγ産生の用量依存的な増加を示した（図７）。
【0437】
実施例５
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、インビボでの腫瘍増殖を制御する
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。ＣＤ３３発現腫瘍は、ルシフェラーゼレポーターを発現するＨＬ６０ ＡＭＬ腫瘍細胞をマウスに接種することによって、免疫不全ＮＳＧマウスに定着した。腫瘍増殖を発光によって監視した。１０日後、マウスに、１０×１０６の抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞をビヒクルまたはラパマイシンと併用投与した。対照には、ラパマイシン単独または非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を受けたマウスが含まれた。腫瘍増殖は、処置群と対照群の両方で同等であった。図８Ａ。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞およびラパマイシンで処置されたマウスは、ＵＴＤ Ｔ細胞およびラパマイシンで処置されたマウスと比較して、腫瘍対照の増加を示した。図８Ｂ。
ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、インビボでの腫瘍増殖を制御する
抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞は、実施例１に記載されるように生成された。ＣＤ３３発現腫瘍は、ルシフェラーゼレポーターを発現するＨＬ６０ ＡＭＬ腫瘍細胞をマウスに接種することによって、免疫不全ＮＳＧマウスに定着した。腫瘍増殖を発光によって監視した。１０日後、マウスに、１０×１０６の抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞をビヒクルまたはラパマイシンと併用投与した。対照には、ラパマイシン単独または非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を受けたマウスが含まれた。腫瘍増殖は、処置群と対照群の両方で同等であった。図８Ａ。抗ＣＤ３３ ＶＨＨ ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞およびラパマイシンで処置されたマウスは、ＵＴＤ Ｔ細胞およびラパマイシンで処置されたマウスと比較して、腫瘍対照の増加を示した。図８Ｂ。
【0438】
全般に、以下の特許請求の範囲において、使用された用語は、特許請求の範囲を、本明細書および特許請求の範囲に開示されている特定の実施形態に限定させるものと解釈されるべきではないが、かかる特許請求の範囲が権利を与える等価物の完全な範囲と共に全ての可能な実施形態を含むものと解釈されるべきである。したがって、請求の範囲は、本開示により限定されない。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【配列表】
【国際調査報告】