特表 2022-532082 オルガノイド培養のためのシステムおよび方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-13

(54)【発明の名称】オルガノイド培養のためのシステムおよび方法

(51)【国際特許分類】

   C12M 3/00 20060101AFI20220706BHJP

   C12M 1/00 20060101ALI20220706BHJP

   C12M 1/34 20060101ALI20220706BHJP

【ＦＩ】

C12M3/00 A

C12M1/00 A

C12M1/34 B

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021565933

(86)(22)【出願日】2020-05-07

(85)【翻訳文提出日】2021-12-09

(86)【国際出願番号】 IB2020054357

(87)【国際公開番号】W WO2020225777

(87)【国際公開日】2020-11-12

(31)【優先権主張番号】16/407,026

(32)【優先日】2019-05-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519091306

【氏名又は名称】モレキュラー デバイシーズ （オーストリア） ゲーエムベーハー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】アツラー， ヨーゼフ

(72)【発明者】

【氏名】ケンダ， アンドレアス

(72)【発明者】

【氏名】スピラ， フェリックス

(72)【発明者】

【氏名】シレンコ， オクサナ

【テーマコード（参考）】

4B029

【Ｆターム（参考）】

4B029AA02

4B029BB11

4B029CC02

4B029CC13

4B029FA01

(57)【要約】

本開示は、オルガノイドを培養、監視、および／または分析するための方法ならびに装置を含む、システムを提供する。オルガノイド培養の例示的方法では、本方法は、開放側を有するレセプタクル内に足場を配置するステップを含み得る。シール部材が、チャンバを生成するように、レセプタクルの開放側に接着され得る。オルガノイドが、足場を使用して、チャンバ内に形成され得る。流体および／または少なくとも１つの物質が、オルガノイドとの接触のために、上を覆うリザーバからチャンバの中に導入され得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

オルガノイド培養の方法であって、前記方法は、
開放側を有するレセプタクル内に足場を配置することと、
シール部材を前記レセプタクルの開放側に接着し、チャンバを生成することと、
前記足場を使用して、前記チャンバ内にオルガノイドを形成することと
を含む、方法。

【請求項2】

接着することは、事前作製されたシール部材を前記レセプタクルに接着することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

接着することは、少なくとも部分的に前記レセプタクル内でシール材料を凝固させることによって、前記シール部材を形成することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記レセプタクルと一体的に形成される上を覆うリザーバから前記チャンバの中に流体および／または少なくとも１つの物質を導入することをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

足場を配置することは、前記レセプタクル内に足場を３Ｄ印刷することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記オルガノイドが前記チャンバ内に位置している間に、前記オルガノイドの少なくとも一部の画像を捕捉することをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

捕捉することは、ライトシート顕微鏡検査によって画像を捕捉することを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

オルガノイド培養の方法であって、前記方法は、
レセプタクルの壁上に足場を配置することと、
シール部材を前記壁の反対側に位置する前記レセプタクルの開放側に取り付け、チャンバを生成することと、
前記シール部材が前記チャンバの底部に位置している間に、前記足場を使用して、前記チャンバ内にオルガノイドを形成することと
を含む、方法。

【請求項9】

足場を配置することは、前記レセプタクル内に前記足場を３Ｄ印刷することを含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

３Ｄ印刷することは、幹細胞を前記足場の中に組み込むことを含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

シール部材を取り付けることは、前記シール部材を前記レセプタクルの開放側に接着することを含む、請求項８に記載の方法。

【請求項12】

前記チャンバの上壁に開口部を生成することと、
器具の端部を前記開口部から前記チャンバの中に挿入することと
をさらに含む、請求項８に記載の方法。

【請求項13】

前記器具は、針、光源に動作可能に接続される光導体、内視鏡、電極、ＡＴＲプローブ、バルーンに結合される空気圧／油圧源、および磁石から成る群から選択される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

オルガノイド培養の方法であって、前記方法は、
レセプタクルの壁上に足場を配置することと、
シール部材を前記レセプタクルに取り付け、チャンバを生成することと、
前記足場を使用して、前記チャンバ内にオルガノイドを形成することと、
前記オルガノイドとの接触のために、上を覆うリザーバから前記壁を通して前記チャンバの中に流体および／または少なくとも１つの物質を導入することと
を含む、方法。

【請求項15】

導入することは、前記上を覆うリザーバおよび前記チャンバの中間に位置する壁を通して延在するチャネルを介して、前記流体および／または少なくとも１つの物質を前記チャンバの中に通過させることを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

導入することは、前記チャンバの上壁を通して栄養素を通過させ、前記オルガノイドに補給することを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項17】

導入することは、前記チャンバの上壁を通して１つ以上の固化剤および／または清澄剤を通過させることを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項18】

導入することは、重力を用いて前記リザーバから前記チャンバの中に流体を駆動することを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項19】

導入することは、前記チャンバの入口から出口まで流体を駆動することを含み、前記入口および前記出口はそれぞれ、前記チャンバの上壁を通して延在するチャネルを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項20】

対応する複数のチャンバ内に複数のオルガノイドを形成することと、
異なる処置を前記オルガノイドのそれぞれに適用することと
をさらに含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項21】

異なる処置を適用することは、異なる試験化合物を前記複数のチャンバのうちの各チャンバの中に導入することを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

異なる処置を適用することは、ゲノム編集によって、その個別のチャンバ内の各オルガノイドの遺伝物質を改変することを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

異なる処置を適用することは、少なくとも１つのゲノム遺伝子座を生体内標識すること、または１つ以上のＤＮＡ結合剤を使用して、その個別のチャンバ内の各オルガノイドの遺伝子発現プロファイルを改変することを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項24】

前記複数のオルガノイドのうちの各オルガノイドに関してデータを収集し、前記オルガノイドへの影響に関して前記異なる処置を試験することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項25】

データを収集することは、その個別のチャンバ内の原位置で各オルガノイドを撮像することを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

データを収集することは、被分析物に関して、各オルガノイドと関連付けられる個別の流体を化学分析することを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

データを収集することは、そのチャンバから各オルガノイドを除去し、そのチャンバからの除去後に前記オルガノイドからのデータを収集することを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項28】

データを収集することは、そのチャンバからの除去後に、各オルガノイドを物理的に切片化することを含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

第１のリザーバおよび第２のリザーバは、前記チャンバの上を覆い、前記チャンバと別個に流体連通し、前記方法はさらに、前記第１のリザーバにわたって可撓性膜を配置することと、圧力を前記可撓性膜の上側に印加し、前記チャンバを介して前記第１のリザーバから前記第２のリザーバまで流体を駆動することとを含む、請求項１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本願は、その内容が参照することによってその全体として本明細書に組み込まれる、２０１９年５月８日に出願された米国仮出願第１６／４０７，０２６号の優先権を主張する。

【0002】

オルガノイド（「ミニ器官」）は、生体外で産生され、器官特有の組織の現実的な組織学を呈すること等の器官とのある類似点を有する、異なるタイプの３次元細胞塊である。細胞塊は、基質に少数の幹細胞を播種することによって発生されることができる。幹細胞は、次いで、基質を足場として使用しながら、基質内で増殖、分化、および自己組織化する。本アプローチを用いて、とりわけ、脳、心臓、腸、腎臓、肝臓、および胃からの組織に類似するオルガノイドが、これまで発生されてきた。これらの有望な結果は、オルガノイド培養が、器官発達および機能への新しい洞察を提供し、かつ生体外で薬物スクリーニングを可能にする疾患モデルを再現する潜在性を有することを示唆する。オルガノイドは、薬物が発見され、医学が個人化される方法を革命的に変化させ得る。

【0003】

オルガノイドを完全に活用する研究者の能力を限定する、いくつかの問題が存在する。第１に、オルガノイドがサイズを増加させるにつれて、それらは、内側および外側の両方から補給される必要があり得、課題を提起する。第２に、各異なるタイプのオルガノイドが、機能するオルガノイドの適切な成長および発達を可能にするために、最適化された３次元基質足場構造、その構造のために適切な培地交換（補給）、および可能性として、機械的抵抗または制御された力を被る能力さえも要求し得る。第３に、大型オルガノイドを異なるタイプの試薬に暴露し、スクリーニングを可能にするために最適化される容器が存在しない。第４に、撮像方法によって、原位置で大型オルガノイドを監視するために最適化される容器が存在しない。代わりに、オルガノイドは、多くの場合、物理的に固定および切片化された後に撮像される。故に、システムおよび方法が、大型オルガノイドを効率的に成長させ、監視し、分析する能力を提供すること等によって、オルガノイド培養を改良するために必要とされる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

本開示は、オルガノイドまたは他の組織化された多細胞構造を培養、監視、および／または分析するための方法ならびに装置を含む、システムを提供する。オルガノイド培養の例示的方法では、本方法は、開放側を有するレセプタクル内に足場を配置するステップを含み得る。シール部材が、チャンバを生成するように、レセプタクルの開放側に接着され得る。オルガノイドが、足場を使用して、チャンバ内に形成され得る。流体および／または少なくとも１つの物質が、オルガノイドとの接触のために、上を覆うリザーバからチャンバの中に導入され得る。

【図面の簡単な説明】

【0005】

【図1】図１は、容器が液体培養培地に沈められたオルガノイドを保持し、容器の前および後壁が可視ではない状態で得られた、オルガノイドを形成、培養、監視、および分析するための例示的容器の概略側面図である。

【図2】図２は、容器が空である間に得られた、図１の容器の分解側面図である。

【図3】図３は、単独で得られ、図４－１０に図示されるように、容器内のオルガノイドを培養、監視、および／または分析する方法の実施の前に図２に対して反転された、図２の容器の本体の側面図である。

【図4】図４および５は、それぞれ、３Ｄ印刷またはピペット操作による容器のレセプタクル内の足場の生成の間および後に得られた、図３の容器本体の側面図である。

【図5】図４および５は、それぞれ、３Ｄ印刷またはピペット操作による容器のレセプタクル内の足場の生成の間および後に得られた、図３の容器本体の側面図である。

【図6】図６は、事前作製されたシール部材が、レセプタクルの開放側をシールし、足場を含有するチャンバを生産するように容器本体に接着された後に得られた、図５の容器本体の側面図である。

【図7】図７は、容器本体が、オルガノイド培養配向に反転され、少なくとも１つの液体培地が、足場を含有するチャンバの中およびチャンバと流体連通する上を覆うリザーバの中に導入され、容器の蓋が、リザーバの開放上部を被覆した後に得られた、図６の容器本体およびシール部材の側面図である。

【図8】図８は、オルガノイドを発生させるための足場内の幹細胞の増殖および分化後に得られた、図７の容器の側面図である。

【図9】図９は、発達中のオルガノイドによる足場の再形成／置換後に得られた、図８の容器の側面図である。

【図10】図１０は、オルガノイドがライトシート顕微鏡検査によって撮像されるにつれて得られた、図９の容器の側面図である。

【図11】図１１－１３は、レセプタクル内の原位置でシール部材を形成することによって、容器本体のレセプタクルの開放側をシールし、チャンバを生産することへの代替アプローチを図示する、図５の容器本体および足場の側面図である。

【図12】図１１－１３は、レセプタクル内の原位置でシール部材を形成することによって、容器本体のレセプタクルの開放側をシールし、チャンバを生産することへの代替アプローチを図示する、図５の容器本体および足場の側面図である。

【図13】図１１－１３は、レセプタクル内の原位置でシール部材を形成することによって、容器本体のレセプタクルの開放側をシールし、チャンバを生産することへの代替アプローチを図示する、図５の容器本体および足場の側面図である。

【図14】図１４は、撮像対物レンズの存在下で、容器本体が、オルガノイド培養配向に反転され、少なくとも１つの液体培地が、足場を含有するチャンバの中およびチャンバと流体連通する上を覆うリザーバの中に導入され、容器の蓋が、リザーバの開放上部を被覆した後に得られた、図１３の容器本体、シール部材、および足場の側面図である。

【図15】図１５は、レセプタクル内の原位置でシール部材を形成することによって、容器本体のレセプタクルの開放側をシールし、チャンバを生産することへの修正されたアプローチを図１３に対して図示する、図１２の容器本体および足場の側面図である。

【図16】図１６は、容器ストリップが相互に直接接続された容器のセットを有する、オルガノイドのアレイを形成、培養、監視、および／または分析するための例示的容器ストリップの概略側面図である。

【図17】図１７は、オルガノイドの培養の間に得られ、容器ストリップの各容器内のリザーバの間に液体培地を移送するための例示的ポンプ構成を図示する、図１６の容器ストリップの概略側面図である。

【図17A】図１７Ａおよび１７Ｂは、オルガノイドの培養の間に得られ、反対回転方向に容器ストリップを傾転させることが、各チャンバ内で個別の反対方向に流動を駆動し得る様子を図示する、図１６の容器ストリップの概略側面図。

【図17B】図１７Ａおよび１７Ｂは、オルガノイドの培養の間に得られ、反対回転方向に容器ストリップを傾転させることが、各チャンバ内で個別の反対方向に流動を駆動し得る様子を図示する、図１６の容器ストリップの概略側面図。

【図18】図１８は、オルガノイドの培養の間に得られ、容器ストリップの異なる容器のリザーバの間で液体培地を移送するための例示的ポンプ構成を図示する、容器のアレイを有する例示的容器ストリップの別の実施形態の概略側面図である。

【図19】図１９は、図２の容器のための容器本体の例示的実施形態の図である。

【図20】図２０は、図１９の容器本体の正面図である。

【図21】図２１は、容器本体が反転され、事前作製されたシール部材が容器本体のレセプタクルから分解された状態で得られた、図１９の容器本体の図である。

【図22】図２２は、概して、図２０の線２２－２２に沿って得られた、図１９の容器本体の底面図である。

【図23】図２３は、概して、図２０の線２３－２３に沿って得られた、図１９の容器本体の上面図である。

【図24】図２４は、概して、図２３の線２４－２４に沿って得られた、図１９の容器本体の断面図である。

【図25】図２５は、概して、図２３の線２５－２５に沿って得られた、図１９の容器本体の別の断面図である。

【図26】図２６は、図２５のものと異なる容器本体の下側部分のみことを除いて、概して、図２５のように得られた、容器本体の別の実施形態の部分断面図である。

【図27】図２７は、多孔質管が容器本体のチャネルの間に３Ｄ印刷によって形成された後に得られた、図２６の容器本体の部分断面図である。

【図28】図２８は、容器本体が容器本体のレセプタクルと動作可能に関連付けられる電磁石を含む状態で、図２５のように得られた、容器本体のさらに別の実施形態の断面図である。

【図29】図２９は、足場がチャンバの天井に接続され、細胞がチャンバの床上に位置し、細胞が強磁性であり、電磁石がオフにされた状態で、チャンバを生成するようにシール部材に接着された図２８の容器本体の部分図である。

【図30】図３０は、強磁性標識細胞が磁力によって足場の中に引動されているように、電磁石がオンにされた状態で得られた、図２９の容器本体、シール部材、足場、および細胞の別の部分図である。

【図31】図３１は、各容器が図１９の実施形態に対応する容器本体を含む、足場生成およびオルガノイド形成ならびに培養の間にストリップとして容器の直線的に配列されたセットを保持するための例示的ラックの上面図である。

【図32】図３２は、ストリップを生成するように図１９の実施形態に対応する容器本体のセットと組み立てられた、図３１のラックの上面図である。

【図33】図３３は、図３２のストリップの側面図である。

【図34】図３４は、図１９の実施形態に対応する容器本体の２次元アレイを保持し、ストリップを生成するための別の例示的ラックの上面図である。

【図35】図３５は、容器本体の開放底端が、チャンバを形成するようにシール部材を用いてシールされ、容器本体が、突破可能な障壁によってその底端において閉鎖されるアクセス管を画定し、磁石が、突破可能な障壁に隣接して（かつその上方に）磁石の作業端を設置するようにアクセス管の中に挿入された状態で、概して、（関連実施形態に関して）図２５のように得られた、図１および２の容器のための容器本体のなおもさらに別の実施形態の断面図である。

【図36】図３６は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、突破可能な障壁を穿刺し、オルガノイドに進入した先端を有する針によって置換された状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図37】図３７は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、突破可能な障壁を穿刺し、オルガノイドに進入した感知／刺激端領域を有するセンサ／電極によって置換された状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図38】図３８－４０は、突破器具の先端がアクセス管から障壁を通してチャンバの中に通過する前、間、および後の突破可能な障壁の周囲で得られた、図３５の容器本体の部分断面図である。

【図39】図３８－４０は、突破器具の先端がアクセス管から障壁を通してチャンバの中に通過する前、間、および後の突破可能な障壁の周囲で得られた、図３５の容器本体の部分断面図である。

【図40】図３８－４０は、突破器具の先端がアクセス管から障壁を通してチャンバの中に通過する前、間、および後の突破可能な障壁の周囲で得られた、図３５の容器本体の部分断面図である。

【図41】図４１は、突破器具が、３つのアクセス管内に配置され、突破器具のうちの１つのみが、アクセス管の下方のチャンバの中に延在する状態で、３つのアクセス管が可視であるように、概して、（関連実施形態に関して）図２４のように得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図42】図４２－４４は、突破器具の先端がアクセス管から突破可能な障壁を通して通過する前、間、および後に、図が突破可能な障壁の周囲で得られた、突破可能な障壁が易壊性ウェブにおいて裂けるように構成される、図３５の容器本体の修正された実施形態の部分断面図である。

【図43】図４２－４４は、突破器具の先端がアクセス管から突破可能な障壁を通して通過する前、間、および後に、図が突破可能な障壁の周囲で得られた、突破可能な障壁が易壊性ウェブにおいて裂けるように構成される、図３５の容器本体の修正された実施形態の部分断面図である。

【図44】図４２－４４は、突破器具の先端がアクセス管から突破可能な障壁を通して通過する前、間、および後に、図が突破可能な障壁の周囲で得られた、突破可能な障壁が易壊性ウェブにおいて裂けるように構成される、図３５の容器本体の修正された実施形態の部分断面図である。

【図45】図４５は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、突破可能な障壁を穿刺し、オルガノイドに進入した先端を有する減衰全反射（ＡＴＲ）光ファイバプローブによって置換された状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図46】図４６は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、突破可能な障壁を通して通過し、オルガノイドに進入した前部レンズを有する撮像光ファイバプローブによって置換された状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図47】図４７は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、オルガノイドに進入した遠位端を有する照明プローブによって置換された状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図48】図４８は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、内部機械的歪みを生成するようにオルガノイドの内側に位置する拡張可能バルーンを有する空気圧デバイスによって置換された状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図49】図４９は、オルガノイドが、チャンバ内に存在し、磁石が、外部機械的歪みを生成するようにオルガノイドの外側に位置する拡張可能バルーンを有する一対の空気圧デバイスによって置換された状態で得られた、（関連実施形態に関して）図２４のように得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図50】図５０および５１は、一対の磁石が、対応するアクセス管を介してチャンバの中に延在し、磁力を介して事前製造された足場構造またはバイオチップを磁石に搭載する状態で、概して、（類似実施形態に関して）それぞれ、図２５および２４のように得られた、図３５の容器本体およびシール部材の図である。

【図51】図５０および５１は、一対の磁石が、対応するアクセス管を介してチャンバの中に延在し、磁力を介して事前製造された足場構造またはバイオチップを磁石に搭載する状態で、概して、（類似実施形態に関して）それぞれ、図２５および２４のように得られた、図３５の容器本体およびシール部材の図である。

【図52】図５２および５３は、キャップが容器本体の上部に搭載され、それを密閉してシールし、交互に反対方向にチャンバを通して液体を駆動するように、一対のリザーバにわたって交互に印加される外部圧力によって変形されている、可撓性部材を提供する状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【図53】図５２および５３は、キャップが容器本体の上部に搭載され、それを密閉してシールし、交互に反対方向にチャンバを通して液体を駆動するように、一対のリザーバにわたって交互に印加される外部圧力によって変形されている、可撓性部材を提供する状態で得られた、図３５の容器本体およびシール部材の断面図である。

【発明を実施するための形態】

【0006】

本開示は、とりわけ、オルガノイドまたは発達中もしくは完全に発達した多細胞生物、組織生検、および／または一次患者物質等の他の組織化された多細胞構造を培養、監視、ならびに／もしくは分析するための方法および装置を含む、システムを提供する。オルガノイド培養の例示的方法では、本方法は、開放側を有するレセプタクル内に足場を配置するステップを含み得る。シール部材が、チャンバを生成するように、レセプタクルの開放側に接着され得る。オルガノイドが、足場を使用して、チャンバ内に形成され得る。流体および／または少なくとも１つの物質が、オルガノイドとの接触のために、上を覆うリザーバからチャンバの中に導入され得る。

【0007】

本開示は、とりわけ、オルガノイドまたは発達中もしくは完全に発達した多細胞生物、組織生検、および／または一次患者物質等の他の組織化された多細胞構造の形成、培養、監視、ならびに／もしくは分析のための容器を説明する。容器は、消費可能（すなわち、単回使用後に使い捨て）であり得る、および／または標準形状を有してもよい。容器は、開放側を有するレセプタクルを画定する容器本体を含んでもよい。シール部材が、レセプタクルからチャンバを形成するように、容器本体に取り付けられ（例えば、接着され）てもよい。シール部材は、とりわけ、レセプタクルに事前形成または形成されてもよい。

【0008】

３次元（３Ｄ）構造（すなわち、足場であり得る、少なくとも１つの基質）が、その開放側がシールされる前に、レセプタクル内に配置されてもよい。３Ｄ構造は、３Ｄプリンタによってレセプタクルに形成されてもよい。３Ｄプリンタは、インクが３Ｄ構造を発生させるように堆積される前に、または堆積されるにつれて、細胞と混合され得る、１つ以上の凝固可能なバイオインクを分注してもよい。代替として、細胞は、３Ｄ構造と別個にレセプタクルまたはチャンバの中に導入されてもよい。他の実施形態では、３Ｄ構造は、少なくとも部分的または完全にレセプタクルの外側に形成され、次いで、その中に配置されてもよい。

【0009】

生成されるにつれて、または生成された後に基質足場の中に導入され得る、好適な細胞は、分化していない幹細胞、すでに分化しており、分化し続けるであろう幹細胞、細胞集合体、小型オルガノイド、および／または同等物を含んでもよい。

【0010】

３Ｄプリンタはまた、接着剤および／またはシール流体を容器本体に適用し、印刷プロセスの終わりに透明なシール部材を用いたレセプタクルの開放側のシールを可能にするために利用されてもよい。基質成分を分注するために好適であり得る、例示的印刷技法は、バイオインクを使用する液滴ベースのバイオプリンティングまたはレーザベースのバイオプリンティング（例えば、パルスレーザを用いたレーザ誘起前方転写（ＬＩＦＴ）による、細胞、酵素等を印刷するためのレーザベースの直接書込）を含む。

【0011】

足場および／または他の基質は、１つ以上のヒドロゲルによって提供されてもよい。各ヒドロゲルは、温度依存性様式で基質を協調的に形成する、とりわけ、マトリゲル、アルギン酸塩、ナノ線維状セルロース、コラーゲン、フィブリン、および／またはポリエチエレングリコール等の１つ以上の熱可塑性構造成分を含んでもよい。

【0012】

いくつかの実施形態では、２つ以上の異なるヒドロゲル／基質が、レセプタクル内に配置されてもよい。ヒドロゲル／基質は、溶融温度、酵素分解に対する抵抗、溶解度、細胞誘引および／または細胞反発特性、ならびに／もしくは同等物等の任意の好適なパラメータと異なり得る。

【0013】

各ヒドロゲル／基質は、任意の好適な成分を含んでもよい。例示的成分は、１つ以上の多糖類（例えば、グリコサミノグリカン（コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸等のＧＡＧ）、プロテオグリカン（例えば、アグリカン、アグリン、ブレビカン、ＸＶＩＩＩ型コラーゲン、レプレカン、ニューロカン、ペルレカン、小型ロイシン豊富プロテオグリカン、ベルシカン、または同等物を形成するように（そのセリンを介して等）コアタンパク質に結合されるＧＡＧ）、線維性タンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン等）、および／または同等物を含む。（例えば、足場メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）のための）プロテアーゼ認識部位が、細胞による分解／再形成を可能にするようにヒドロゲル／基質の中に組み込まれてもよい。そのような部位の頻度は、各部位の配列とともに、好適な量の分解／再形成を許容するように選択されてもよい。

【0014】

１つ以上の成長因子が、形成されるときに基質に含まれてもよい、または形成後に液体培地内に導入されてもよい。好適であり得る例示的成長因子は、アンジオポイエチン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、毛様体神経栄養因子、コロニー刺激因子、エフリン、上皮成長因子、エリトロポエチン、線維芽細胞成長因子、グリア由来神経栄養因子、肝細胞成長因子、インスリン、インスリン様成長因子、インターロイキン、白血病抑制因子、ケラチノサイト成長因子、ニューレグリン、ニューロトロフィン、血小板由来成長因子、形質転換成長因子、腫瘍壊死因子（アルファ）、血管内皮成長因子、および／または同等物を含む。

【0015】

任意の好適な細胞が、最初に足場に密集してもよい。これらの細胞は、幹細胞（例えば、多能性幹細胞）、支持細胞、および／または同等物を含んでもよい。細胞は、とりわけ、バイオインク液滴印刷、マイクロコンタクト印刷、フォトリソグラフィ、ディップペンナノリソグラフィ、および／またはピペット操作を含む、任意の好適な技法によって足場内に堆積されてもよい。

【0016】

容器は、リザーバとチャンバとの間の共有壁に形成され得る、チャネルを介してチャンバと流体連通する、複数のリザーバを提供してもよい。本構成は、標準補給インターフェースとして説明され得る。いくつかの実施形態では、３Ｄ印刷は、任意の好適な印刷された構造への容器の内側の標準補給インターフェースの接続を提供し、異なるタイプのオルガノイドの成長を可能にする。

【0017】

印刷された３Ｄ構造は、オルガノイドに発達するにつれて、適切なタイプの細胞のための一時的足場を提供することができる。細胞は、自己組織化し、足場の一部または全てに取って代わり得る、それらの独自の細胞外基質を産生し得る。同じことが、内部補給に当てはまり得、すなわち、容器は、随意に、３Ｄ印刷によって修正され得る、一般的インターフェースを提供してもよく、細胞は、組織化し、本修正されたインターフェースを最良に使用してもよい。

【0018】

足場（細胞の有無を問わず）は、容器本体のレセプタクル内に配置されてもよく、チャンバは、容器が上下逆である間に、レセプタクルから形成されてもよい。いったんこれらのプロセスが完了すると、容器は、右側を上に（そのオルガノイド培養配向に）向けられてもよく、チャンバの上を覆う少なくとも１つのリザーバが、補給液体で充填されてもよい。まだ足場の内側にいずれの細胞も存在しない場合、好適な細胞が、補給液体の中に設置され、上を覆うリザーバから補給液体とともに足場の中に導入されてもよい（または細胞が、アクセス管を介して導入されてもよい（例えば、実施例７参照））。

【0019】

形成するオルガノイドは、具体的補給プロトコルが開始され得る前に、初期インキュベーション時間を必要とし得る。補給プロトコルは、所定のスケジュールに従って、および／またはオルガノイドの発達段階もしくは条件に基づいて、リザーバに好適な培地を装填し、次いで、リザーバから培地を除去することを伴い得る。補給プロトコルは、足場の形状ならびに形成されることになるオルガノイドのタイプに依存し得る。

【0020】

容器は、シール部材によって提供され得る、チャンバの底部窓を介してオルガノイド監視を可能にするように構造化されてもよい。いくつかの実施形態では、オルガノイドは、インキュベータの内側に留まっている間に監視されてもよい。故に、インキュベータは、オルガノイド監視のための撮像システムを含んでもよい。

【0021】

容器は、ライトシート３Ｄ撮像を可能にし得る。容器のチャンバは、２つ、３つ、またはそれを上回る光学窓を有してもよく、光が、各窓を介してチャンバの中および／または外に伝搬してもよい。例えば、容器は、それぞれが平面的であり得る、底部窓と、１つ以上の側方窓とを有してもよい。いくつかの実施形態では、容器は、相互の反対側に配列される一対の側面窓を有してもよい。

【0022】

複数の容器本体（容器）が、ストリップとして組織化されてもよい。ストリップは、製造の間に線形または２次元アレイ内で容器本体を相互に事前に取り付けることによって（例えば、射出成型等によって、相互と一体的に容器本体を接着または形成することによって）生成されてもよい。代替として、ストリップは、好適なストリップホルダと個々の容器本体を組み立てることによって、製造の間に、またはユーザによって生成されてもよい。いくつかの実施形態では、ストリップホルダは、１つだけのストリップまたは２つのストリップを保持し、撮像対物レンズのための余地を可能にするように構成されてもよい。容器本体のストリップが、プリンタが容器本体のそれぞれに足場を印刷する、および／またはそれにシール部材を追加することを可能にするように、３Ｄプリンタの中に装填されてもよい。

【0023】

本開示は、内側および外側でオルガノイドに異なる培地を補給することによって、大型の機能的オルガノイドの発生を可能にする。大型オルガノイドは、とりわけ、平均直径または最大直径が、約０．１、０．２、０．５、１、または２ミリメートルを上回り得る。大型オルガノイドを用いた作業は、依然として、困難であり、研究者は、２つの主要な限界に直面している。第１に、各タイプのオルガノイドは、具体的ヒドロゲル、基材としての基質、またはさらに培地流による剪断力のような機械的性質のような異なる培養条件を必要とする。第２に、大型オルガノイドの顕微鏡検査は、非常に困難である。最先端の方法は、依然として、オルガノイド材料の薄片化、染色、および共焦点走査型顕微鏡またはさらにスライドリーダを使用する固定されたサンプルの画像入手である。

【0024】

本開示は、一方または両方の障害物を克服することを促進するためのシステムおよび方法を提供する。重力流による培地交換とともに、３Ｄ印刷の組み合わせ（足場および／または細胞）を使用することによって、ユーザは、オルガノイドのタイプ毎に最適化される一意の３Ｄ環境を発生させてもよい。広範囲の異なるオルガノイドタイプが、成長されてもよい。補給および廃棄物除去は、容器のチャンバと上を覆うリザーバとの間の流体連通によって対処され得る。励起光の入射のために少なくとも１つ、放出光の出射のためにもう１つ、光学窓を各容器の中に統合することは、ライトシート顕微鏡検査によってオルガノイドの生体細胞を監視することを可能にする。代替として、または加えて、オルガノイドは、窓のうちの１つ以上のものを介して、古典的広視野顕微鏡検査によって撮像されてもよい。したがって、本明細書に開示される容器は、発達中および／または発達したオルガノイドの生体細胞顕微鏡検査の実施を可能にし得る。高コンテンツおよび／または高スループット顕微鏡検査が、オルガノイドに実施されてもよい。

【0025】

本開示のさらなる側面が、以下の節、すなわち、（Ｉ）オルガノイド形成、培養、監視、および／または分析のための容器、（ＩＩ）オルガノイド形成、培養、監視、および／または分析の方法、ならびに（ＩＩＩ）実施例に説明される。

【0026】

Ｉ．オルガノイド形成、培養、監視、および／または分析のための容器
本節は、オルガノイド５２（または他の組織化された多細胞構造）の形成、培養、監視、および／または分析のための例示的容器５０を説明する。図１および２を参照されたい。容器５０は、ここでは、閉鎖される（図１）、または開放している（図２）容器の上および底側を区別するように、前および後壁が可視ではない状態で、図式的に示される。

【0027】

図１は、オルガノイドが培地５６（例えば、オルガノイド成長および発達を促すための液体または半固体培養培地）に沈められた、チャンバ５４内にオルガノイド５２を含有する容器５０を示す。オルガノイド５２は、その上壁５８等のチャンバ５４の上側領域に取り付けられてもよい。（上壁は、同義的に天井と呼ばれる。）チャンバの側方壁６０および底壁６２は、障壁を提供し、流体を通過させ、それによって、上壁５８の下方のチャンバの全てを液密にし得る。

【0028】

容器５０は、チャンバ５４にわたって位置する複数のコンパートメント６３を画定する。各コンパートメント６３は、壁をチャンバ５４と共有してもよく、最初にチャンバと流体連通する場合とそうではない場合がある。例示的コンパートメントは、リザーバと、アクセス管とを含む（実施例７参照）。ここで、容器５０は、チャンバ５４にわたって個別の液体培地６６ａ、６６ｂを保持するための（少なくとも）２つのリザーバ６４ａ、６４ｂを含む。各リザーバ６４ａ、６４ｂは、対応する専用チャネル６８ａ、６８ｂを介して、各他方のリザーバから独立してチャンバ５４と流体連通してもよい。各チャネル６８ａ、６８ｂは、リザーバ６４ａ、６４ｂのうちの１つからチャンバ５４まで上壁５８を通して延在してもよく、上壁５８の上および底側と同一平面であり得る、または環状突出部の管腔として上壁５８の上側および／または底側から突出してもよい（例えば、実施例４参照）。他の実施例では、容器５０は、それぞれ、上壁５８を通して、および／または各他方のリザーバから独立して、チャンバ５４と流体連通し得る、少なくとも、もしくは正確に、３つ、４つ、５つ、６つ、以上の上を覆うリザーバを有してもよい（例えば、実施例３参照）。

【0029】

容器５０の２つ以上のリザーバは、チャンバ５４に供給されるべき任意の好適な物質を保持してもよい。例示的物質は、とりわけ、栄養素、作用因子、および試薬を含む。好適な栄養素は、チャンバ５４の内側で、細胞の健全性および増殖、したがって、オルガノイド５２の成長および発達を促進するための任意の物質を含む。例示的栄養素は、糖類（グルコース等）、アミノ酸、タンパク質、ヌクレオチド、ビタミン、鉱物、脂肪酸等を含んでもよい。作用因子は、プロセスまたは作用（分化、タンパク質合成、遊走等）を活性化、制御、もしくは不活性化する、任意の分子（誘導因子または抑制因子等）を含む。例示的作用因子は、抗癌化合物、成長因子、分化因子、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ、または同等物を含む。試薬は、オルガノイドの分析を促進する任意の化合物を含む。例示的試薬は、とりわけ、標識、固化剤、および清澄剤を含む。標識は、染料（例えば、可視染色剤および／または光輝性染料）を含んでもよい。光輝性染料は、励起光による照射に応答して発光する、任意の物質である。

【0030】

各リザーバ６４ａ、６４ｂは、側方に流体を含有するための側方壁７０を有してもよい。少なくとも１つの側方壁が、図１に描写されるように、少なくとも一対の隣接するリザーバの間で共有されてもよい。他の実施例では、同一または異なる容器の少なくとも一対のリザーバが、リザーバの間で共有される壁７０に形成されるチャネルを介して等、チャンバ５４から独立して、側方に相互と流体連通してもよい（例えば、実施例２参照）。

【0031】

各リザーバ６４ａ、６４ｂは、流体移送デバイス（例えば、ピペットまたは他のポンプ）を用いた流体の導入および除去を促進するための開放上部７２を有してもよい。容器５０は、容器にわたって嵌合し、インキュベータ内のインキュベーションの間に各リザーバ６４ａ、６４ｂの開放上部７２を被覆する、単一の除去可能な蓋７４を含んでもよい。代替として、容器は、相互から独立して除去可能であり、リザーバの全てを集合的に被覆する、２つ以上の蓋を含んでもよい。各蓋７４は、各リザーバの上端に垂直に重複し、随意に、緊密な嵌合を生成することなく、リザーバを被覆するときに蓋の側方運動を制限するように構成される、フランジ７６を有してもよい。いくつかの実施形態では、蓋は、１つ以上のリザーバの上部に液密シールを形成する、キャップであってもよい（例えば、実施例８参照）。

【0032】

図２は、容器が空である、図１の容器５０の分解図を示す。容器５０は、蓋７４と、容器本体７８と、シール部材８０とを含んでもよい。容器本体７８は、リザーバ６４ａ、６４ｂ、およびリザーバの下のレセプタクル８２を画定し得る。レセプタクル８２は、チャンバ５４の上壁５８および側方壁６０を提供する。しかしながら、レセプタクル８２は、オルガノイド形成を支持するための足場８６がレセプタクル８２内に配置された後に、チャンバ５４を生成するように平坦なシール部材８０を用いてシールされ得る、開放底側８４を有してもよい（図１および第ＩＩ節参照）。シール部材は、チャンバ５４を生成するようにレセプタクル８２（および／または容器本体７８）の底端に接着されることができる。他の実施形態では、シール部材は、レセプタクル８２の底側８４をシールするように原位置で形成されることができる（第ＩＩ節参照）。

【0033】

容器５０は、撮像を促進するための１つ以上の光学窓を有してもよい（図１参照）。各光学窓は、チャンバの中に光を伝搬するために、チャンバ５４の少なくとも一部を照明するために、または撮像のため等にチャンバから光を受光するために、使用されてもよい。

【0034】

例示的実施形態では、容器５０は、シール部材８０によって提供される底部窓８８と、容器本体７８によって提供される１つ以上の側方窓９０とを有する。各光学窓は、透明および／または平面的であり得る。底部窓８８は、各側方窓９０を横断し（例えば、直交し）得、側方窓は、チャンバ５４の反対の側方壁６０によって形成されてもよい。（本明細書で使用されるような用語「光」は、紫外線放射、可視放射（すなわち、可視光）、および／または赤外線放射を含む、光学的放射を意味する。）

【0035】

容器５０の構成要素は、任意の好適な手順によって任意の好適な材料から形成されてもよい。例示的実施形態では、容器本体７８は、透明ポリマー等のポリマーから形成されてもよい。容器本体は、いずれの除去可能／可動部品も有していなくてもよい、および／または容器本体の構造（例えば、コンパートメント）の全てが相互と一体的に形成されるように、射出成型等によって単一の部品として形成されてもよい。故に、レセプタクル８２（および／またはチャンバ５４）ならびにリザーバ６４ａ、６４ｂは、相互に対して固定された位置を有してもよい、ならびに／もしくは相互と除去不可能に／堅く取り付けられてもよい。シール部材８０は、とりわけ、ガラスまたはポリマーから形成されてもよく、少なくとも部分的または完全にレセプタクル８２の内側で、原位置に事前形成もしくは形成されてもよい。

【0036】

チャンバ５４（および／またはレセプタクル８２）ならびに各リザーバ６４ａ、６４ｂは、任意の好適なサイズを有してもよい。チャンバ５４は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．７、または１ｍＬの容積を有してもよい。チャンバは、とりわけ、少なくとも約０．２、０．５、１、２、３、４、または５ｍｍの直径を有する、オルガノイド等の任意の好適なサイズ（例えば、最大サイズ）のオルガノイドを含有するように定寸されてもよい。例示的実施形態では、容器の各上を覆うリザーバは、とりわけ、少なくとも約０．５、１、２、４、または６ｍＬ等のチャンバ５４（および／またはレセプタクル８２）の容積と少なくとも同程度に大きい、または約２、５、もしくは１０倍である。

【0037】

容器５０および／またはそのコンパートメントのうちのいずれかは、任意の好適な幾何学形状を有してもよい。例えば、レセプタクル８２、チャンバ５４、および／または各リザーバ（例えば、リザーバ６４ａ、６４ｂ）はそれぞれ、独立して、断面に多角形（例えば、長方形）、楕円形（例えば、円形）、卵形、ロゼット、または他の形状を（例えば、水平面に）を有してもよい。故に、レセプタクル８２、チャンバ５４、および／または各リザーバは、独立して、とりわけ、円筒形、円錐台形、長方形の角柱、テーパ状の角柱、またはそれらの組み合わせであってもよい。

【0038】

オルガノイド形成、培養、監視、および／または分析のために好適であり得る、容器５０のさらなる側面が、下記に説明される。

【0039】

ＩＩ．オルガノイド形成、培養、監視、および／または分析の方法
本節は、本開示の容器内にオルガノイド（または他の組織化された多細胞構造）を形成、培養、監視、および／または分析する方法を説明する。図３－１５を参照されたい。本節に説明される方法ステップは、本明細書の他の場所に説明される容器、容器特徴、および／または手順のうちのいずれかを使用して、任意の好適な順序もしくは組み合わせで実施されてもよい。

【0040】

図３－１０は、オルガノイド培養および分析の方法の実施によって生産される、容器５０、オルガノイド５２、および培地５６、６６ａ、６６ｂの例示的構成を図示する。少なくとも１つの容器５０の少なくとも１つの容器本体７８が、使用のために選択されてもよい。いくつかの実施形態では、容器本体７８の線形もしくは２次元アレイが、選択されてもよい（例えば、実施例１および６参照）、またはアレイは、下記のステップの少なくともサブセットが実施された後に生成されてもよい。

【0041】

図３は、選択され、レセプタクル８２が上部で開放している反転配向に設置された、容器本体７８を示す。換言すると、上壁５８は、開放底側８４の下に位置付けられる。本配向は、側方壁６０がレセプタクル８２から外への側方流体流を防止している間に、重力を利用し、上壁５８上への流体の送達を促す。

【0042】

オルガノイド形成のために使用されるべき足場８６が、レセプタクル８２の内側に配置されてもよい。足場は、図４および５に示されるように、少なくとも部分的に原位置で生成されるヒドロゲル９２に含まれてもよい。例えば、ヒドロゲル９２の足場８６は、３Ｄプリンタ９４によって上壁５８上に３次元で印刷されてもよい。３Ｄプリンタ９４は、任意の好適な技術を利用し、足場の成分を送達してもよい。いくつかの実施形態では、３Ｄプリンタは、インクジェット技術を利用し、足場構造成分、細胞９６、管、ケージ化作用因子、成長因子等を含有し得る、流体の液滴（液滴９５等）を送達してもよい。代替として、または加えて、３Ｄプリンタ９４は、とりわけ、レーザ誘起前方転写を利用し、成分（例えば、細胞９６）を送達してもよい。他の実施形態では、足場８６の少なくとも一部が、容器本体７８と別個に生成され、レセプタクル８２の中に設置され（例えば、上壁５８に取り付けられ）てもよい。

【0043】

ヒドロゲル９２は、熱可逆性ゲルである場合とそうではない場合がある。ヒドロゲルは、足場が印刷されるにつれて、ヒドロゲルの足場が冷却を通して形成されるように、オルガノイドのための培養温度を上回るゲル点（ゲル化温度）を有してもよい。代替として、または加えて、ヒドロゲルを形成するための重合が、とりわけ、紫外線光または可視光等の光学的放射を用いて光誘起されてもよい。

【0044】

足場８６（および／またはヒドロゲル９２）は、１つ以上のチャネル６８ａ、６８ｂの底端に水平に重複してもよい。例えば、描写される実施形態では、チャネル６８ｂによって画定される貫通軸（例えば、垂直軸）が、ヒドロゲル９２に交差し、足場８６を通して延在する。他の実施形態では、足場８６（および／またはヒドロゲル９２）は、複数のチャネル６８ａ、６８ｂに重複してもよい。

【0045】

１つ以上のチャネル６８ａ、６８ｂが、オルガノイド形成および培養の間に、栄養素および／または作用因子をヒドロゲル９２ならびにその中の細胞９６に供給することを促進するように、ヒドロゲル９２内の足場８６の生成の間に３Ｄ印刷によって延在されてもよい。結果として生じるチャネル延在部は、ヒドロゲル９２に埋め込まれる１つ以上の側方に浸透性の管であってもよく、ヒドロゲルの内側にチャネル網を形成するように分岐されてもよい。ヒドロゲル９２に埋め込まれるチャネル網および／または側方に浸透性の管は、容器本体７８の少なくとも一対のチャネル６８ａ、６８ｂの間に延在してもよい。作用因子（分化因子等）が、より制御された幹細胞分化およびオルガノイド形成のためにヒドロゲルの内側で濃度勾配を確立するように、チャネル網を介して供給されてもよい。管は、とりわけ、光誘起または熱重合によって生成されてもよい。事前形成された管はまた、または代替として、ヒドロゲル／足場内の液体流の付加的促進のために、ヒドロゲルもしくは足場の中に組み込まれてもよい。

【0046】

レセプタクル８２の開放側が、その中にヒドロゲル９２および足場８６を含有するチャンバ５４を生産するように、密閉してシールされてもよい。シール部材８０が、図６に示されるように、レセプタクル８２の端部に接着されてもよい。代替として、下記に説明されるように、シール部材８０は、少なくとも部分的にレセプタクル８２の内側で、シール流体の重合および／または凝固によって原位置で生成されてもよい。レセプタクル８２は、細胞９６がレセプタクルの中に設置される前もしくは後に、および／または培地５６がヒドロゲル９２の周囲のレセプタクル８２（ならびに／もしくはチャンバ５４）の中に入れられる前もしくは後に、シールされてもよい。

【0047】

培地５６、６６ａ、６６ｂは、容器５０のチャンバ５４および各リザーバ６４ａ、６４ｂ内に配置されてもよい。図７を参照されたい。同一の培地が、各チャンバおよびリザーバの中に導入されてもよい、または異なる培地が、導入されてもよく、これは、１つ以上の栄養素および／または作用因子の濃度勾配を生成し得る。上記に解説されるように、培地５６は、レセプタクルがチャンバ５４を生成するようにシールされる前に、最初にレセプタクル８２の開放側を介して導入されてもよい。チャンバ５４が生成される前に、１つ以上のチャネル６８ａ、６８ｂを介したレセプタクル８２からの培地５６の漏出を防止するために、各チャネルの端部が、ヒドロゲル９２（または異なるヒドロゲル）で被覆されてもよい。異なるヒドロゲルは、オルガノイド形成および培養のためにインキュベーション温度（３７℃等）を下回って溶融するように構成されてもよい。代替として、培地５６は、少なくとも１つのチャネル６８ａ、６８ｂを介して少なくとも１つのリザーバ６４ａ、６４ｂから（チャンバが形成された後に）チャンバ５４の中に導入されてもよい。

【0048】

重力が、リザーバ内の流体レベルが異なる場合、リザーバのうちの１つからチャンバ５４の中に、および／またはチャンバを介してリザーバの間で、流体を駆動してもよい。例えば、図７では、リザーバ６４ａ内の培地６６ａの上部は、リザーバ６４ｂ内の培地６６ｂの上部よりも高い。故に、重力は、チャネル６８ａ（入口として機能する）を介してチャンバ５４の中に、かつチャネル６８ｂ（出口として機能する）を介してチャンバ５４から外に、培地６６ａの流動を駆動する。経時的に、培地６６ａ、６６ｂのレベルは、均等化する傾向があろう。故に、流体が、同一または逆方向にさらなる流体流を駆動するように、リザーバのうちの１つ以上のものに追加される、および／またはそこから除去されてもよい、もしくは容器５０の垂直線が、周期的に変化されてもよい（例えば、実施例２参照）。

【0049】

図８および９は、オルガノイド５２を含有する容器５０を示す。オルガノイドは、ヒドロゲル９２内の細胞９６の増殖および分化によって形成される。図９では、オルガノイド５２のサイズおよび形状は、足場８６がオルガノイドの細胞によって再形成されるにつれて、図８に対して変化している。他の実施形態では、オルガノイド５２の最終サイズおよび形状は、形成されたときの足場８６のサイズおよび形状によって実質的に画定され得る。

【0050】

図１０は、ライトシート顕微鏡検査によってオルガノイド５２の画像１０２を捕捉するための例示的撮像システム１００を示す。撮像システムは、ライトシート１０８のための光を発生させるための光源１０６を含む、照明アセンブリ１０４を含んでもよい。ライトシートは、図１０に描写されるように、水平に配向されてもよく、側方窓９０のうちの１つからオルガノイド５２を通して伝搬してもよい。代替として、ライトシート１０８は、垂直に配向されてもよく、底部窓８８から垂直にオルガノイドを通して伝搬してもよい。光が、画像センサ１１２による捕捉のために対物レンズ１１０を用いてオルガノイド５２から集光されてもよい。底部窓８８を通して伝搬する光は、描写される実施形態のように集光されてもよい、または光は、側方窓９０のうちの１つから集光されてもよい。ライトシート１０８は、画像のスタックの捕捉を許容し、それによって、オルガノイドに関して３次元画像データを提供するように、照明アセンブリ１０４（または容器５０）の対応する運動によって移動されてもよい。オルガノイド５２が、もはや存続可能である必要がなくなる場合、オルガノイドは、チャンバ５４の上壁５８を通してリザーバ６４ａ、６４ｂのうちの１つ以上のものから固定および清澄試薬を供給することによって、撮像の前に固定および清澄されてもよい。

【0051】

図１１－１３は、レセプタクル８２の開放側８４をシールし、チャンバ５４を生産することへの代替的な原位置アプローチを図示する。図１１は、足場８６を含むヒドロゲル９２の形成後に反転された容器本体７８を示す。充填材ヒドロゲル１１３もまた、開放側８４を介して開放レセプタクル８２の中に分注されており、これは、チャネル６８ａを通したレセプタクル８２からの漏出を防止し得る。充填材ヒドロゲルは、いったんオルガノイド培養が開始すると、溶融または溶解するように構成されてもよい。図１２は、レセプタクル８２の中にシール液体１１４を分注する、３Ｄプリンタ９４を示す。図１３は、凝固し、レセプタクル８２の開放側を密閉してシールし、チャンバ５４を生成する、シール液体１１４を示す。

【0052】

シール液体は、凝固され、とりわけ、熱可塑性ポリマーまたは熱硬化性ポリマーを産生するように構成されてもよい。例示的熱可塑性ポリマーは、好ましくは、１００℃未満の融点を有する、熱可塑性エラストマまたはワックスを含む。より低い融点が、望ましいが、少なくとも約５０℃であり得る。熱可塑性ポリマーは、層が冷却してシール部材８０を生成するにつれて硬化する、シール層１１６を形成するように、ポリマーの溶融温度を上回る温度において充填材ヒドロゲル１１３の表面上に液体形態で分注されてもよい。

【0053】

他の実施例では、層は、熱硬化性ポリマーを生成するように凝固可能であり得る。

【0054】

図１３は、シール層１１６が、照明アセンブリ１０４からの光学的放射（例えば、紫外線光）による照射によって熱硬化性ポリマーに凝固される、実施例を示す。照明アセンブリは、紫外線光でシール層１１６を優先的に照射し、それによって、すでにレセプタクル８２に存在している足場８６および／または細胞９６への光損傷を最小限にする、ライトシート１０８を形成する。

【0055】

図１４は、シール層１１６が、チャンバ５４およびリザーバ６４ａ、６４ｂ内にシール部材８０および培地５６、６６ａ、６６ｂを形成するように凝固された状態で、そのオルガノイド培養配向に反転された容器本体７８を示す。撮像システムの対物レンズ１１０は、チャンバ５４から光を集光し、画像を形成している。培地５６およびシール層１１６は、画質を改良するように、実質的に同一の屈折率を有してもよい。

【0056】

図１５は、（図１３と比較して）容器本体７８のレセプタクル８２の開放側をシールするための修正された原位置アプローチを図示する。放射線遮断層１１８が、熱硬化性シール液体の層１１６がレセプタクル８２に追加される前に、充填材ヒドロゲル１１３の表面上に形成されてもよい。層１１６は、層１１６の凝固を促し、シール部材８０を形成するように、容器本体７８の上方に位置付けられる光源１２０からの光学的放射で照射されてもよい。放射線遮断層１１８は、光損傷からヒドロゲル９２を遮蔽する。

【実施例】

【0057】

ＩＩＩ．実施例
本節は、オルガノイド形成、培養、監視、および／または分析のためのシステムならびに方法のさらなる実施形態を説明する。これらの実施形態は、例証のためのみに意図され、本開示の範囲全体を限定するべきではない。

【0058】

（実施例１）オルガノイド培養のためのストリップ
本実施例は、オルガノイドのアレイを形成、培養、監視、および／または分析するための例示的ストリップ１３０を説明する。図１６を参照されたい。

【0059】

ストリップ１３０は、相互に接続される容器本体７８のアレイを含んでもよい。容器本体は、相互と一体的に形成される、または別個に形成され、次いで、形成後に（および／またはレセプタクル８２がチャンバ５４を形成するようにシールされた後に）相互に接続されてもよい（図１も参照）。別個に形成された容器本体７８が、とりわけ、接着、締まり嵌め、締結具、またはホルダによって、相互に接続されてもよい（例えば、実施例６参照）。容器本体は、レセプタクル８２の線形または少なくとも２次元アレイを生成するように、相互に接続されてもよい。

【0060】

（実施例２）容器リザーバとの間の流体移送
本実施例は、同一または異なる容器５０のリザーバ６４ａ、６４ｂの間で流体を移送するための例示的構成を説明する。図１７、１７Ａ、１７Ｂ、および１８を参照されたい。

【0061】

図１７は、チャンバ５４内のオルガノイド５２の培養の間のストリップ１３０を示す。各容器５０は、矢印１３２、１３４によって示される別個の流動サイクルを有する。チャネル６８ｂと６８ａとの間の各チャンバ５４を通した流動１３２は、個別のリザーバ６４ａ、６４ｂ内の培地６６ａ、６６ｂのレベルの差異の結果として、重力によって駆動される。リザーバ６４ａからリザーバ６４ｂへの補充流１３４は、ポンプ１３６によって駆動される。ポンプ１３６の流率は、流体が実質的に一定の率でチャンバ５４を通して通過するように、培地６６ａ、６６ｂの個別のレベルを実質的に一定に保つように調節されることができる。本流動は、オルガノイド５２に圧力を印加し得、その成長および発達を助長し得る。他の実施例では、ポンプ１３６の流率は、オルガノイド５２に種々の圧力を印加するように変動されることができる。

【0062】

他の実施形態では、ポンプ１３６は、図１７Ａおよび１７Ｂで容器ストリップ１３０に関して示されるように、排除されることができる。ストリップ１３０は、重力駆動流１３２の方向を周期的に逆転させるために、好適な率で垂直からホルダを傾転させるように揺動されてもよい。換言すると、ホルダは、各容器５０内でリザーバ６４ａから６４ｂまで流体を駆動するように１つの方向に傾転され、次いで、チャネル６８ａ、６８ｂを介して、各容器５０内でリザーバ６４ｂから６４ａまで駆動するように反対回転方向に傾転されてもよい。

【0063】

図１８は、チャンバ５４内のオルガノイド５２の培養の間の別のストリップ１４０を示す。ストリップ１４０は、流動１３２が各容器５０のチャネル６８ａ、６８ｂの間で駆動された、図１６および１７のストリップ１３０に類似する。しかしながら、個別のチャネル１４２が、隣接する各対の容器５０の間に流体連通を提供する。より具体的には、各チャネル１４２は、流体が、流動矢印１４４によって示されるように、１つの容器５０のリザーバ６４ａから隣接する容器５０のリザーバ６４ｂまで直接、またはその逆も同様に流動することを可能にする。流体循環を維持するために、ストリップ１４０は、ホルダの一端に向かって左から右に流体を駆動するように（図１８のように）周期的に傾転され、次いで、ホルダの反対端に向かって右から左に流体を駆動するように反対回転方向に傾転されることができる。ポンプ１４６は、１４８における流動矢印によって示される、ストリップ１４０の反対端に位置するリザーバ６４ａ、６４ｂの間に培地を移送してもよい。ポンプは、ストリップ１４０を周期的に傾転させる代わりに、またはそれに加えて、使用されることができる。

【0064】

（実施例３）容器実施形態
本実施例は、４つのリザーバ６４ａ－６４ｄを射出成型および画定することによって形成される容器本体７８を有する、第Ｉ節の容器５０の例示的実施形態１５０を説明する。図１９－２５を参照されたい。

【0065】

各リザーバ６４ａ－６４ｄは、レセプタクル８２（および／またはチャンバ５４）の上壁５８を通して延在する対応するチャネル６８ａ－６８ｄを介して、レセプタクル８２（および／またはチャンバ５４）と流体連通してもよい（図２３および２５参照）。各チャネルの上端は、上壁５８と同一平面であり得る（図２５参照）。

【0066】

種々の光学窓が、容器１５０の中に組み込まれてもよい。平面的シール部材８０（例えば、顕微鏡カバースリップに類似する）が、シール部材が容器本体７８の底端表面１５２に接着された後にチャンバ５４の底部窓８８を提供してもよい（図２１参照）。容器本体は、射出成型による製造を促進するように垂直から若干傾斜され得る（図２４参照）、一対の側方窓９０（図１９－２１参照）を含んでもよい。

【0067】

（実施例４）管を伴う容器
本実施例は、原位置で事前形成および／または形成される管を有する、例示的容器を説明する。図２６および２７を参照されたい。

【0068】

図２６は、図２５の容器１５０との比較のために、容器５０の別の実施形態１６０を示す。容器１６０のチャネル６８ａ－６８ｄは、容器１５０のものと異なる。より具体的には、チャネル６８ｂおよび６８ｃは、レセプタクル８２（および／またはチャンバ５４）の上壁５８の底側から突出する、環状突出部１６２によって部分的に画定される。チャネルのうちのいずれかまたは全ての管腔は、環状突出部によって少なくとも部分的に形成されてもよい。

【0069】

図２７は、３Ｄ印刷によって１つ以上の環状突出部１６２上に原位置で形成され得る、側方に多孔質の管状延在部１６４を示す。各管状延在部は、分岐される場合とそうではない場合がある。描写される実施形態では、管状延在部１６４は、チャネル６８ｂおよび６８ｃを相互に接続する。他の実施形態では、チャネルの任意の好適なサブセットまたは全てを相互に接続し得る、多孔質管状網が、形成されてもよい。各管状延在部１６４は、ヒドロゲル９２によって支持される、および／またはそれに埋め込まれてもよい（第ＩＩ節参照）。管状延在部は、ヒドロゲルと同一の組成を有してもよい、もしくは、例えば、とりわけ、細胞付着および／または再形成を最小限にする／助長するための異なる組成を有してもよい。

【0070】

（実施例５）電磁石を伴う容器
本実施例は、電磁石が通電される（すなわち、オンにされる）ときに強磁性標識細胞１７４を引き付けるように位置付けられる電磁石１７２を有する、容器５０の例示的実施形態１７０を説明する。図２８－３０を参照されたい。

【0071】

容器１７０は、容器１５０と同様に構築されてもよく、本明細書に開示される容器特徴の任意の好適な組み合わせを有してもよい（図２８参照）。電磁石１７２は、チャネル６４ａ－６４ｄのうちの少なくとも１つに近いレセプタクル８２および／またはチャンバ５４の非常に近傍に、もしくはその中に位置する、作業端１７６を有してもよい。描写される実施形態では、作業端１７６は、チャネル６４ｂと６４ｃとの間に心合される。電磁石は、その上端１７８を介して通電されてもよい。

【0072】

図２９および３０は、電磁石１７２が強磁性標識細胞１７４をチャンバ５４内のヒドロゲル９２および／または足場８６に引き付けるために利用され得る様子を図示する。足場８６およびヒドロゲル９２は、上記に説明されるように形成されてもよい。強磁性標識細胞１７４は、レセプタクルがチャンバ５４を形成するようにシールされる前に、もしくは１つ以上のチャネル６８ａ－６８ｄを介して１つ以上の上を覆うリザーバからシールした後に、培地５６を伴うレセプタクルの中に導入されてもよい。いずれの場合も、強磁性標識細胞１７４は、最初に、ヒドロゲル９２の外側にあり、電磁石がオンにされる前に、図２９のように、底部チャンバ５４に沈殿してもよい。図３０は、電磁石を通電させることが強磁性標識細胞１７４を足場８６に、および／またはその中に引き付ける様子を示す。強磁性標識細胞は、細胞がレセプタクル／チャンバの中に導入される前に、強磁性材料（例えば、とりわけ、鉄、コバルト、および／またはニッケルを含有する化合物）と関連付けられてもよい。例えば、細胞は、細胞を強磁性にするように強磁性粒子（酸化鉄粒子等）を補給されてもよい、または、とりわけ、強磁性プローブでコーティングされてもよい。

【0073】

（実施例６）容器モジュールのためのラック
本実施例は、それぞれ、線形アレイまたは２次元アレイ内で容器１５０を保持し、ストリップ１３０を形成するための例示的ラック１８０、１８２を説明する。図３１－３４を参照されたい。

【0074】

各ラック１８０、１８２（同義的にホルダと呼ばれる）は、容器１５０の容器本体７８を受容するための一連の開口部１８４を有する。開口部１８４は、とりわけ、同一の線に沿って（ラック１８０）、または長方形グリッドパターン（ラック１８２）で配列されてもよい。各容器本体７８は、開口部１８４の中に除去可能に設置されてもよい。開口部は、容器本体が完全に開口部を通して通過しないように防止するように、定寸および成形されてもよい。容器本体は、とりわけ、スナップ嵌合または別個の保定装置を含む、任意の好適な機構によって開口部１８４に結合されてもよい。

【0075】

（実施例７）アクセス管を伴う容器
本実施例は、アクセス管を含む例示的容器、および種々の器具を受容するためのアクセス管の使用を説明する。図３５－５１を参照されたい。

【0076】

図３５は、チャンバ５４を形成するようにシール部材８０を用いてその底端においてシールされる容器本体７８を含む、容器５０の実施形態１９０を示す。容器本体７８は、容器本体が少なくとも１つのアクセス管１９２を画定することを除いて、容器１６０に関して上記に説明されるもの（図２６参照）に類似する。アクセス管は、その上端１９４において開放しているが、障壁１９６によって閉鎖される底端を有してもよい。障壁は、アクセス管１９２とチャンバ５４との間で共有され、障壁が無傷である間に、アクセス管とチャンバとの間の流体連通を防止する、チャンバの上壁５８の壁領域であってもよい。チャンバ５４およびリザーバ６４ａ、６４ｂは、図面を単純化するように、実施例７の図のうちのいずれにも流体（例えば、培地または他の液体）を含有するものとして示されていない。

【0077】

障壁１９６は、下記にさらに説明されるように、鋭的または鈍的器具によって突破され、チャンバ５４にアクセスするように構成されてもよい。故に、障壁は、図３５に示されるように、上壁５８の隣接する領域よりも薄くあり得る、および／または障壁が好適な器具を用いて優先的に引裂もしくは別様に突破され得る、所定の構造（例えば、より少ない厚さの所定の易壊性領域）を含んでもよい。

【0078】

図３５は、アクセス管１９２の中に挿入される例示的器具１９８を示す。ここで、器具１９８は、磁石の極２０２が障壁１９６に隣接している、永久磁石２００である。他の実施形態では、磁石は、電磁石または本明細書に開示される他の器具のうちのいずれかであり得る。磁石２００は、障壁１９６が無傷である間に、チャンバ５４の中に延在する磁場を形成するために十分に強力であり得る。他の場合では、磁石２００の底端は、障壁１９６が突破された後にチャンバ５４の中に挿入されてもよい（かつ障壁を突破さえしてもよい）。磁石がチャンバ５４に進入するかどうかにかかわらず、磁石は、引力をチャンバ５４の内側の強磁性アイテム（例えば、強磁性標識細胞）に印加することができる。磁石は、格納式／除去可能であり得る、および／またはアクセス管１９２に堅く取り付けられてもよい。

【0079】

図３６は、オルガノイド５２が、チャンバ５４内に存在し、磁石２００が、（図３５と比較して）針２０４として構造化された器具１９８によって置換された状態で得られた、容器１９０を示す。針２０４の鋭い先端２０６が、障壁１９６（ここでは突破された障壁１９６’と称される）を穿刺し、オルガノイド５２に進入している。針は、中空または中実であり得る。いずれの場合も、針は、オルガノイドの生検のために、オルガノイド５２のサンプルが収集され、アクセス管１９２を介してチャンバ５４から除去されることを可能にし得る。代替として、または加えて、針は、とりわけ、流体、細胞、および／または作用因子をオルガノイド５２ならびにチャンバ５４の中に導入するために使用されてもよい。例えば、針は、組織または細胞がオルガノイドに移植されることを可能にし、異種移植、自家移植、または同種移植を達成し得る。

【0080】

図３７は、図３６のような容器１９０を示すが、器具１９８は、電気コネクタ２１０（例えば、１つ以上の導電性ワイヤ）を含む、センサ／電極２０８である。センサ／電極２０８の感知／刺激端領域２１２が、障壁１９６（ここでは突破された障壁１９６’と称される）を穿刺し、オルガノイド５２に進入している。他の実施形態では、障壁１９６は、最初に、専用突破器具等の異なる器具１９８によって突破され、次いで、センサ／電極２０８（または、とりわけ、本明細書に開示される他の器具のうちのいずれか）によって置換されてもよい。センサ／電極２０８は、オルガノイド５２の電気刺激のために少なくとも１つの電極または電極のアレイを含んでもよい。代替として、または加えて、センサ／電極２０８は、電気センサ（例えば、静電容量センサ）、ｐＨを測定するためのｐＨセンサ、電気化学センサ、酸素センサ、ＣＯ_２センサ、および／または同等物等の任意の好適なセンサを含んでもよい。

【0081】

図３８－４０は、アクセス管１９２の底端における障壁１９６が穿刺される前、間、および後の突破器具２１４として構造化された器具１９８を示す。図３８では、突破器具２１４の尖端２１６は、２１８における運動矢印によって示される、下向きに進行しており、障壁１９６にほぼ到達している。図３９では、先端２１６は、障壁１９６と接触し、変形力を障壁に印加している。図４０では、先端２１６は、完全に障壁を通して通過し、チャンバ５４に進入している。障壁１９６を形成する壁領域は、障壁が穿刺された後に、突破器具２１４との半径方向接触を維持するために十分に弾性であり得る。本半径方向接触は、（突破された障壁２１６’における）容器本体７８と突破器具２１４との間に液密シール２２０を形成してもよく、これは、チャンバ５４内の流体がアクセス管１９２の中に上向きに進行しないように実質的に防止し得る。

【0082】

容器１９０は、１つのみまたは複数のアクセス管１９２を有してもよい。例えば、図４１は、３つのアクセス管１９２が可視であるように、概して、図２４のように区分化された容器１９０を示す。各アクセス管１９２は、上記に説明されるように、個別の障壁１９６において終端してもよい。さらに、各障壁１９６は、対応するアクセス管１９２およびチャンバ５４の中間に位置する、および／またはその間で共有される、上壁５８の壁領域であってもよい。故に、壁領域は、共通壁領域である場合とそうではない場合がある。描写される実施形態では、個別の突破器具２１４が、３つのアクセス管１９２のそれぞれの中に配置され、突破器具のうちの１つのみが、チャンバ５４の中に延在する。（突破された障壁が１９６’で示される。）他の実施形態では、任意の好適な数の障壁１９６が、器具１９８の任意の好適な組み合わせを用いてチャンバ５４へのアクセスを提供するように突破されてもよい。

【0083】

図４２－４４は、障壁１９６が突破器具２１４を用いて突破される前、間、および後に、図３８－４０のように得られた、容器５０の異なる実施形態２３０の部分断面図を示す。容器２３０の障壁１９６は、障壁が、突破器具２１４によって印加される圧力に応答して優先的に引裂される、易壊性ウェブ２３２を有する。図４４では、突破器具２１４の端部は、チャンバ５４に進入している。流体は、チャンバ５４から上向きにアクセス管１９２の中に進行してもよい、もしくは本流体は、とりわけ、アクセス管１９２との突破器具２１４の密接な半径方向嵌合および／またはアクセス管１９２の上部における突破器具の周囲の密閉シールによって制限され得る。

【0084】

図４５は、アクセス管１９２内に配置され、チャンバ５４内のオルガノイド５２の中に延在する、減衰全反射（ＡＴＲ）光ファイバプローブ２３４を伴う容器１９０を示す。ＡＴＲプローブ２３４は、２３８において示される、光を光源からプローブ２３４の底端に指向するための照明ファイバ２３６と、２４２において示される、光を底端から光学センサ（例えば、分光計、光度計、または同等物）に指向するためのセンサファイバ２４０とを有する。プローブ２３４は、（例えば、オルガノイドの化学分析のための）ＩＲ分光法、ラマン分光法（表面増強ラマン分光法等）、または同等物を許容し得る。

【0085】

図４６は、アクセス管１９２内に配置され、チャンバ５４内のオルガノイド５２の中に延在する、光ファイバ撮像プローブ２４４を伴う容器１９０を示す。撮像プローブ２４４は、内視鏡前部レンズ２４６と、前部レンズ２４６から画像センサへの光の伝搬のためのファイバ束２４８とを有してもよい。撮像プローブは、とりわけ、内視鏡撮像、共焦点撮像、および／または（例えば、ファイバ束２４８に結合されていない画像センサを用いた撮像、光遺伝学等のための）照明のみを許容し得る。

【0086】

図４７は、アクセス管１９２内に配置され、チャンバ５４内のオルガノイド５２の中に延在する、照明デバイス２５０を伴う容器１９０を示す。照明デバイス２５０は、光を光源２５４から光ファイバ２５２の遠位端における出口開口２５６に指向するための光ファイバ２５２を含んでもよい。照明デバイス２５０のための例示的を使用は、光ファイバ２５２に結合されていない画像センサによる撮像のため、波面感知（適応光学系）のための光源として、光遺伝学のための光源として等、オルガノイド５２を照明することを含む。

【0087】

図４８は、アクセス管１９２内に位置する空気圧デバイス２５８を伴う容器１９０を示す。空気圧デバイス２５８は、オルガノイド５２の内側に位置する拡張可能バルーン２６０を有する。バルーンは、バルーン２６０を膨張させ、２６４において示される、オルガノイド５２に内部機械的歪みを生成し得る、ポンプ２６２等の圧力変調デバイスに動作可能に接続される。空気圧デバイス２５８は、バルーン２６０を膨張および収縮させ、必要に応じて、それを拡張および縮小することができる。バルーン２６０は、足場８６とともに印刷され、後に、空気圧デバイス２５８の管２６６に接続されてもよい。他の実施形態では、バルーン２６０は、針または他の鋭い物体を介してオルガノイド５２の中に導入されてもよい。

【0088】

図４９は、図４１のような容器１９０を示すが、一対の空気圧デバイス２５８ａ、２５８ｂが個別のアクセス管１９２内に配置される。空気圧デバイスはそれぞれ、オルガノイド５２の反対側に外部機械的歪みを生成するようにオルガノイドの外側に位置する拡張可能バルーン２６０を有することを除いて、図４８のものに類似する。

【0089】

図５０および５１は、それぞれ、図３５および３６のように視認される容器１９０を示すが、一対の搭載磁石２７０ａ、２７０ｂが、対応するアクセス管１９２を介してチャンバ５４の中に延在する。磁石２７０ａ、２７０ｂは、磁力を介して事前製造された足場構造２７４またはバイオチップにすでに取り付けられている、個別の磁石２７２ａ、２７２ｂを磁気的に引き付ける。

【0090】

（実施例８）可撓性膜を伴う容器
本実施例は、１つ以上の可撓性膜（同義的にダイヤフラムと呼ばれる）を利用し、容器内に流体流を駆動する、例示的容器１９０を説明する。図５２および５３を参照されたい。

【0091】

容器１９０は、容器本体７８の上部の上に搭載されるキャップ２８２を含む。キャップ２８２は、容器本体７８と密閉シールを形成する。キャップは、容器本体７８の上縁の上に緊密に嵌合する、フレーム２８４を含む。少なくとも１つの可撓性膜２８６が、フレーム２８４に搭載され、少なくとも２つのリザーバ（例えば、６４ａ、６４ｂ）を被覆する。可撓性膜の変形されていない構成が、２８８において鎖線で示される。圧力２９０が、２９２において示される、膜を押し下げるように、リザーバ６４ａまたは６４ｂにわたって可撓性膜２８６に印加されることができる。本圧力は、矢印２９４、２９６によって示される、チャンバ５４を介して一方のリザーバから他方のリザーバに流体を駆動する。可撓性膜２８６は、応答して、２９８によって示される、上向きに偏向してもよい。圧力は、リザーバの間で反対方向に流体を駆動するように、図５２および５３に示されるように、代替として、リザーバ６４ａ、６４ｂにわたって可撓性膜２８６に印加されてもよい。

【0092】

（実施例９）選択された実施形態
本実施例は、一連のインデックス付きの段落として、本開示の選択された実施形態を説明する。

【0093】

段落Ａ１．オルガノイド培養の方法および／または分析の方法であって、（ａ）レセプタクルの開放側をシールし、チャンバを生成するステップと、（ｂ）チャンバ内にオルガノイドを形成するステップとを含む、方法。

【0094】

段落Ａ２．シールするステップは、シール部材をレセプタクルの開放側に取り付けるステップを含む、段落Ａ１に記載の方法。

【0095】

段落Ａ３．シール部材を取り付けるステップは、シール部材をレセプタクルに接着するステップを含む、段落Ａ２に記載の方法。

【0096】

段落Ａ４．接着するステップは、事前作製されたシール部材をレセプタクルに接着するステップを含む、段落Ａ３に記載の方法。

【0097】

段落Ａ５．シールするステップは、少なくとも部分的にレセプタクル内でシール材料を硬化／凝固させ、シール部材を形成するステップを含む、段落Ａ２またはＡ３に記載の方法。

【0098】

段落Ａ６．シール材料は、熱硬化性樹脂を含む、段落Ａ５に記載の方法。

【0099】

段落Ａ７．シールするステップは、レセプタクル内に熱硬化性樹脂の層を形成し、熱硬化性樹脂の層を紫外線光等の電磁放射で照射するステップと、熱硬化性樹脂を硬化させるステップとを含む、段落Ａ６に記載の方法。

【0100】

段落Ａ８．レセプタクルは、オルガノイド形成を助長するための足場を含有し、照射するステップは、足場に対して熱硬化性樹脂の層を優先的に照射するように位置付けられ、配向される、ライトのシートを用いて実施される、段落Ａ７に記載の方法。

【0101】

段落Ａ９．レセプタクルは、オルガノイド形成を助長するための足場を含有し、また、熱硬化性樹脂の層および足場の中間に一致する光遮断層を含有し、照射するステップは、光が、熱硬化性樹脂の層を通して、光から足場を実質的に遮蔽する光遮断層まで伝搬するように実施される、段落Ａ７に記載の方法。

【0102】

段落Ａ１０．熱硬化性樹脂の層を形成するステップは、レセプタクル内に位置するヒドロゲル上に、３Ｄプリンタを用いて熱硬化性樹脂を堆積させるステップを含む、段落Ａ７－Ａ９のいずれかに記載の方法。

【0103】

段落Ａ１１．ヒドロゲルは、オルガノイド形成を支持するための足場を含む、段落Ａ１０に記載の方法。

【0104】

段落Ａ１２．ヒドロゲルは、オルガノイド形成を助長するための第１のヒドロゲルと、熱硬化性樹脂の層を一時的に支持するための第２のヒドロゲルとを含み、第２のヒドロゲルは、チャンバがオルガノイド培養のために使用されるときに、実質的に溶融または溶解するように構成される、段落Ａ１１に記載の方法。

【0105】

段落Ａ１３．レセプタクルは、オルガノイド形成を助長するための足場を含有し、シールするステップは、足場を含有するヒドロゲルにわたって熱可塑性材料の層を形成するステップと、冷却し、レセプタクルの開放側を密閉してシールすることによって、熱可塑性材料の層を硬化させるステップとを含む、段落Ａ１－Ａ３およびＡ５のいずれかに記載の方法。

【0106】

段落Ａ１４．レセプタクルは、容器本体によって画定され、シールするステップは、シール部材を容器本体の底端に取り付けるステップを含む、段落Ａ１－Ａ１３のいずれかに記載の方法。

【0107】

段落Ａ１５．本方法はさらに、（オルガノイドとの接触のために）上を覆うリザーバからチャンバの中に流体および／または少なくとも１つの物質を導入するステップを含み、随意に、チャンバおよび上を覆うリザーバは、相互と一体的に形成される、段落Ａ１－Ａ１４のいずれかに記載の方法。

【0108】

段落Ａ１６．導入するステップは、上を覆うリザーバからチャンバまで延在するチャネルを介して、流体および／または少なくとも１つの物質をチャンバの中に通過させるステップを含み、随意に、チャネルは、上を覆うリザーバおよびチャンバと一体的に形成される、段落Ａ１５に記載の方法。

【0109】

段落Ａ１７．導入するステップは、チャンバの上壁を通して栄養素を通過させ、オルガノイドに補給するステップを含む、段落Ａ１５またはＡ１６に記載の方法。

【0110】

段落Ａ１８．導入するステップは、チャンバの上壁を通して標識を通過させ、オルガノイドの少なくとも一部を標識するステップを含む、段落Ａ１５－Ａ１７のいずれかに記載の方法。

【0111】

段落Ａ１９．導入するステップは、
（ｉ）チャンバの上壁を通して１つ以上の作用因子を通過させるステップであって、１つ以上の作用因子は、分化因子、成長因子、抗癌化合物、発現ベクター、ウイルス、オリゴヌクレオチド、メッセンジャーＲＮＡ、および低分子干渉ＲＮＡから成る群から選択される、ステップ、および／または
（ｉｉ）チャンバの上壁を通して分子を通過させるステップであって、分子は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム、ＴＡＬＥＮシステム、または同等物を使用するゲノム編集等のオルガノイドのゲノム編集（例えば、オルガノイドの細胞内の標的配列の１つ以上のヌクレオチドの削除、挿入、もしくは代用）のために構成される、ステップ、ならびに／もしくは
（ｉｉｉ）チャンバの上壁を通して分子を通過させ、生体内でオルガノイドの１つ以上のゲノム遺伝子座を標識する、および／またはそれらの遺伝子に結合することによって、１つ以上の遺伝子の発現を改変するステップであって、分子は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム、ＴＡＬＥＮシステム、または同等物に基づく、ステップ、
を含む、段落Ａ１５－Ａ１８のいずれかに記載の方法。

【0112】

上記の（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の分子は、ガイドＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ発現のためのエフェクタ分子、ガイドＲＮＡおよび／またはＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムタンパク質のための発現ベクターを含有するウイルス、もしくはＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓタンパク質の任意の組み合わせを含んでもよい。

【0113】

段落Ａ２０．導入するステップは、チャンバの上壁を通して１つ以上の固化剤および／または清澄剤を通過させるステップを含む、段落Ａ１５またはＡ１９のいずれかに記載の方法。

【0114】

段落Ａ２１．導入するステップは、重力を用いてリザーバからチャンバの中に流体を駆動するステップを含む、段落Ａ１５－Ａ２０のいずれかに記載の方法。

【0115】

段落Ａ２２．導入するステップは、チャンバの入口から出口まで流体を駆動するステップを含み、入口および出口はそれぞれ、チャンバの上壁を通して延在する個別のチャネルを含む、段落Ａ１５－Ａ２１のいずれかに記載の方法。

【0116】

段落Ａ２３．チャンバは、第１および第２の上を覆うリザーバと別個に流体連通し、導入するステップは、第１および第２の上を覆うリザーバのそれぞれからチャンバの中に流体および／または少なくとも１つの物質を導入するステップを含む、段落Ａ１５－Ａ２２のいずれかに記載の方法。

【0117】

段落Ａ２４．オルガノイドは、チャンバ内でオルガノイドの内側に位置する内部空間およびオルガノイドの外側に位置する外部空間を画定し、第１の上を覆うリザーバによって保持される流体は、内部空間に供給され、第２の上を覆うリザーバによって保持される流体は、外部空間に供給される、段落Ａ２３に記載の方法。

【0118】

段落Ａ２５．チャンバは、第１および第２の上を覆うリザーバと別個に流体連通し、本方法はさらに、ポンプを用いて第２のリザーバから第１のリザーバに流体を移送し、チャンバを介して第１のリザーバから第２のリザーバまでの重力駆動流を助長するステップを含む、段落Ａ１５－Ａ２４のいずれかに記載の方法。

【0119】

段落Ａ２６．ポンプは、重力駆動流の率に実質的に合致する率において第２のリザーバから第１のリザーバに流体を移送する、段落Ａ２５に記載の方法。

【0120】

段落Ａ２７．チャンバは、容器本体によって画定される第１および第２の上を覆うリザーバと別個に流体連通し、本方法はさらに、容器本体を前後に傾転させ、第１のリザーバから第２のリザーバに、および第２のリザーバから第１のリザーバに、交互に重力駆動流を産生するステップを含む、段落Ａ２６に記載の方法。

【0121】

段落Ａ２８．第１および第２のリザーバは、個別の第１および第２のチャネルを介してチャンバと流体連通し、第１および第２のリザーバは、チャンバの上壁の上方にあり、それから離間される第３のチャネルを介して、相互と直接流体連通する、段落Ａ１５－Ａ２７のいずれかに記載の方法。

【0122】

段落Ａ２９．第１のリザーバおよび第２のリザーバは、チャンバの上を覆い、チャンバと別個に流体連通し、本方法はさらに、第１のリザーバにわたって可撓性膜を配置するステップと、圧力を可撓性膜の上側に印加し、チャンバを介して第１のリザーバから第２のリザーバまで流体を駆動するステップとを含む、段落Ａ１５－Ａ２８のいずれかに記載の方法。

【0123】

段落Ａ３０．可撓性膜を配置するステップは、第１および第２のリザーバのそれぞれにわたって可撓性膜を配置するステップを含み、圧力を印加するステップは、圧力を、第１のリザーバにわたって可撓性膜の上側に、および第２のリザーバにわたって可撓性膜の上側に交互に印加し、代替として、反対方向に第１のリザーバと第２のリザーバとの間で流体を駆動するステップを含む、段落Ａ２９に記載の方法。

【0124】

段落Ａ３１．レセプタクルの開放側がシールされる前に、レセプタクルの内側に足場を配置するステップをさらに含み、足場は、オルガノイド形成を助長するように構成される、段落Ａ１－Ａ３０のいずれかに記載の方法。

【0125】

段落Ａ３２．足場を配置するステップは、レセプタクルの内側に足場を生成するステップを含む、段落Ａ３１に記載の方法。

【0126】

段落Ａ３３．足場を配置するステップは、レセプタクルの中に事前作製された足場を設置するステップを含む、段落Ａ３１に記載の方法。

【0127】

段落Ａ３４．レセプタクルの開放側がシールされる前に、生物学的細胞をレセプタクルの中に導入するステップをさらに含む、段落Ａ３１－Ａ３３のいずれかに記載の方法。

【0128】

段落Ａ３５．生物学的細胞は、幹細胞を含む、段落Ａ３４に記載の方法。

【0129】

段落Ａ３６．生物学的細胞は、足場が生成されるにつれて足場の中に導入される、段落Ａ３４またはＡ３５に記載の方法。

【0130】

段落Ａ３７．足場を生成するステップは、３Ｄ印刷によって実施される、段落Ａ３２およびＡ３４－Ａ３６のいずれかに記載の方法。

【0131】

段落Ａ３８．足場を生成するステップは、レセプタクル内に少なくとも２つの異なるヒドロゲルを３Ｄ印刷するステップを含む、段落Ａ３７に記載の方法。

【0132】

段落Ａ３９．ヒドロゲルのうちの少なくとも１つは、いったん３Ｄ印刷されると、具体的オルガノイドの形成を助長する恣意的に成形された３Ｄ足場を実現するための細胞を含有する、段落Ａ３８に記載の方法。

【0133】

段落Ａ４０．レセプタクルは、開放側の反対側に壁を有し、足場は、壁に取り付けられる、段落Ａ３１－Ａ３９のいずれかに記載の方法。

【0134】

段落Ａ４１．レセプタクルの開放側がチャンバを生成するようにシールされた後に、オルガノイドを形成するための生物学的細胞をチャンバの中に導入するステップをさらに含む、段落Ａ３１－Ａ４０のいずれかに記載の方法。

【0135】

段落Ａ４２．チャンバは、上壁を有し、オルガノイドは、形成されたときに上壁によって支持される、段落Ａ３１－Ａ４１のいずれかに記載の方法。

【0136】

段落Ａ４３．チャンバは、チャネルを介して複数の上を覆うリザーバと流体連通し、本方法はさらに、３Ｄ印刷によって、チャネルのうちの１つ以上のものの延在部を生成するステップと、随意に、ヒドロゲルに延在部を埋め込むステップとを含む、段落Ａ３１－Ａ４２のいずれかに記載の方法。

【0137】

段落Ａ４４．３Ｄ印刷によって各延在部を伸長および分岐させ、物質をヒドロゲルの内側の細胞に供給するための１つ以上の側方に浸透性の管を生成するステップをさらに含む、段落Ａ４３に記載の方法。

【0138】

段落Ａ４５．１つ以上の側方に浸透性の管を介して、１つ以上の作用因子を供給し、より制御された幹細胞分化およびオルガノイド形成のために、チャンバの内側の作用因子の１つ以上の濃度勾配を確立するステップをさらに含む、段落Ａ４４に記載の方法。

【0139】

段落Ａ４６．ポリマーまたは金属微細管をヒドロゲルの中に組み込み、流体流を促進するステップをさらに含む、段落Ａ４３－Ａ４５のいずれかに記載の方法。

【0140】

段落Ａ４７．本方法はさらに、オルガノイドがチャンバ内に留まっている間に、オルガノイドに関連するデータを収集するステップを含む、段落Ａ１－Ａ４６のいずれかに記載の方法。

【0141】

段落Ａ４８．データを収集するステップは、オルガノイドの少なくとも一部の画像を捕捉するステップを含む、段落Ａ４７に記載の方法。

【0142】

段落Ａ４９．捕捉するステップは、ライトシート顕微鏡検査によって画像を捕捉するステップを含む、段落Ａ４８に記載の方法。

【0143】

段落Ａ５０．捕捉するステップは、オルガノイドからフォトルミネセンスを検出するステップを含む、段落Ａ４８またはＡ４９に記載の方法。

【0144】

段落Ａ５１．捕捉するステップは、オルガノイドの少なくとも一部の３Ｄ構造を表す、画像のスタックを捕捉するステップを含む、段落Ａ４８－Ａ５０のいずれかに記載の方法。

【0145】

段落Ａ５２．捕捉するステップは、チャンバの側方窓を介してオルガノイドの少なくとも一部を照明するステップと、チャンバの底部窓を介してチャンバから外に、または逆も同様に伝搬した光学的放射を検出するステップとを含む、段落Ａ５１に記載の方法。

【0146】

段落Ａ５３．データを収集するステップは、被分析物に関して、チャンバまたは上を覆うコンパートメントからの流体を化学分析するステップを含む、段落Ａ４７－Ａ５２のいずれかに記載の方法。

【0147】

段落Ａ５４．データを収集するステップは、少なくとも部分的にチャンバの内側に位置するセンサを用いて実施される、段落Ａ４７－Ａ５３のいずれかに記載の方法。

【0148】

段落Ａ５５．データを収集するステップは、その底部がシールされたままである間に、チャンバから除去される細胞および／または流体からデータを収集するステップを含む、段落Ａ４７－Ａ５４のいずれかに記載の方法。

【0149】

段落Ａ５６．データを収集するステップは、チャンバの上壁に開口部を形成するステップと、開口部を介してチャンバから細胞および／または流体を除去するステップとを含む、段落Ａ５５に記載の方法。

【0150】

段落Ａ５７．本方法はさらに、チャンバの壁に開口部を生成するステップと、開口部からチャンバの中に器具の端部を挿入するステップと含む、段落Ａ１－Ａ５６のいずれかに記載の方法。

【0151】

段落Ａ５８．複数の上を覆うコンパートメントは、共通壁をチャンバと共有し、開口部は、上を覆うコンパートメントのうちの１つの底端における共通壁に生成される、段落Ａ５７に記載の方法。

【0152】

段落Ａ５９．複数の上を覆うコンパートメントは、複数のリザーバと、１つ以上のアクセス管とを含み、開口部は、アクセス管のうちの１つの底端に生成される、段落Ａ５８に記載の方法。

【0153】

段落Ａ６０．開口部は、器具を用いて生成され、開口部を生成するステップは、器具の端部を用いて共通壁を突破するステップを含む、段落Ａ５８またはＡ５９に記載の方法。

【0154】

段落Ａ６１．器具の端部は、鋭い端部である、段落Ａ５７－Ａ６０のいずれかに記載の方法。

【0155】

段落Ａ６２．開口部を生成するステップは、器具と開口部における共通壁との間に液密シールを形成するステップを含む、段落Ａ６０またはＡ６１に記載の方法。

【0156】

段落Ａ６３．共通壁は、共通壁が、器具を介して共通壁に及ぼされる機械的圧力によって引裂されるように構成される、特徴を画定する、段落Ａ６０－Ａ６２のいずれかに記載の方法。

【0157】

段落Ａ６４．器具は、針、光源に動作可能に接続される光導体、内視鏡、電極、ＡＴＲプローブ、随意にバルーンに結合される空気圧／油圧源、および磁石から成る群から選択される、段落Ａ５７－Ａ６３のいずれかに記載の方法。

【0158】

段落Ａ６５．器具は、その端部に位置するセンサを含む、段落Ａ５７－Ａ６４のいずれかに記載の方法。

【0159】

段落Ａ６６．センサを使用して、チャンバおよび／またはオルガノイドのパラメータを感知するステップをさらに含む、段落Ａ６５に記載の方法。

【0160】

段落Ａ６７．器具は、オルガノイドを電気的に刺激するように構成される、電極を含む、段落Ａ５７－Ａ６６のいずれかに記載の方法。

【0161】

段落Ａ６８．本方法はさらに、電極を使用して、オルガノイドを電気的に刺激するステップを含む、段落Ａ６７に記載の方法。

【0162】

段落Ａ６９．器具は、光源に光学的に結合され、チャンバの中に導入される端部に開口を有する、光導体を含む、段落Ａ５７－Ａ６８のいずれかに記載の方法。

【0163】

段落Ａ７０．器具は、チャンバの中に導入される端部に位置する磁石を含む、段落Ａ５７－Ａ６９のいずれかに記載の方法。

【0164】

段落Ａ７１．器具は、減衰全反射（ＡＴＲ）プローブを含む、段落Ａ５７－Ａ７０のいずれかに記載の方法。

【0165】

段落Ａ７２．器具は、内視鏡を含む、段落Ａ５７－Ａ７１のいずれかに記載の方法。

【0166】

段落Ａ７３．器具は、空気圧または油圧源に結合される、段落Ａ５７－Ａ７２のいずれかに記載の方法。

【0167】

段落Ａ７４．試験化合物をチャンバの中に導入するステップをさらに含む、段落Ａ１－Ａ７３のいずれかに記載の方法。

【0168】

段落Ａ７５．本方法は、対応する複数のチャンバ内に複数のオルガノイドを形成するステップを含む、段落Ａ１－Ａ７４のいずれかに記載の方法。

【0169】

段落Ａ７６．異なる処置をオルガノイドのそれぞれに適用するステップをさらに含む、段落Ａ７５に記載の方法。

【0170】

段落Ａ７７．異なる処置を適用するステップは、異なる試験化合物を複数のチャンバのうちの各チャンバの中に導入するステップを含む、段落Ａ７６に記載の方法。

【0171】

段落Ａ７８．各異なる試験化合物は、潜在的抗癌剤である、段落Ａ７７に記載の方法。

【0172】

段落Ａ７９．１つ以上の細胞、随意に、癌細胞を、チャンバのそれぞれの中に導入するステップをさらに含む、段落Ａ７６－Ａ７８のいずれかに記載の方法。

【0173】

段落Ａ８０．１つ以上の細胞は、随意に、針を介して、チャンバ内のオルガノイドの中に導入され、随意に、針は、チャンバの上壁を穿刺する、段落Ａ７９に記載の方法。

【0174】

段落Ａ８１．複数のオルガノイドのうちのオルガノイド毎にデータを収集し、オルガノイドへの影響に関して異なる処置を試験するステップをさらに含む、段落Ａ７６－Ａ８０のいずれかに記載の方法。

【0175】

段落Ａ８２．データを収集するステップは、その個別のチャンバ内の原位置で各オルガノイドを撮像するステップを含む、段落Ａ８１に記載の方法。

【0176】

段落Ａ８３．データを収集するステップは、被分析物に関して、各オルガノイドと関連付けられる個別の流体を化学分析するステップを含む、段落Ａ８１またはＡ８２に記載の方法。

【0177】

段落Ａ８４．データを収集するステップは、随意に、シール部材を除去した後に、そのチャンバから各オルガノイドを除去するステップを含む、段落Ａ８１－Ａ８３のいずれかに記載の方法。

【0178】

段落Ａ８５．データを収集するステップは、そのチャンバからの除去後に各オルガノイドを撮像するステップを含む、段落Ａ８４に記載の方法。

【0179】

段落Ａ８６．データを収集するステップは、そのチャンバからの除去後に、各オルガノイドを物理的に切片化するステップと、随意に、物理的に切片化することによって産生される複数の切片の撮像とを含む、段落Ａ８５に記載の方法。

【0180】

段落Ｂ１．オルガノイド培養および／または分析の方法であって、（ａ）チャンバの内側にオルガノイドを形成するステップであって、アクセス管が、チャンバの上を覆い、アクセス管の底端が、チャンバの上壁領域によって閉鎖される、ステップと、（ｂ）栄養素をチャンバに供給し、オルガノイドに補給するステップと、（ｃ）上壁領域を通して開口部を形成するステップと、（ｄ）アクセス管からチャンバの中に器具の端部を挿入するステップとを含む、方法。

【0181】

段落Ｃ１．オルガノイド培養および／または分析の方法であって、（ａ）レセプタクルの開放側をシールし、チャンバを生成するステップと、（ｂ）チャンバの内側にオルガノイドを形成するステップと、（ｃ）物質／流体をチャンバに供給するステップと、（ｄ）オルガノイドがチャンバの壁によって封入されたままである間に、オルガノイドの少なくとも一部の画像を捕捉するステップとを含む、方法。

【0182】

段落Ｄ１．組織化された多細胞構造（例えば、オルガノイド）の培養および／または分析のためのデバイスであって、（ａ）レセプタクルおよび少なくとも２つのリザーバを画定する、本体であって、少なくとも２つのリザーバは、レセプタクルの上を覆い、個別のチャネルを介してレセプタクルと別個に流体連通する、本体と、（ｂ）多細胞構造のためのチャンバを生成するように、レセプタクルの開放側において本体に接着される、または接着可能である、シール部材とを備える、デバイス。

【0183】

段落Ｄ２．レセプタクルの壁に付着した生物学的細胞のための足場をさらに備える、段落Ｄ１に記載のデバイス。

【0184】

段落Ｄ３．足場は、ヒドロゲルに含まれる、段落Ｄ２に記載のデバイス。

【0185】

段落Ｄ４．ヒドロゲルは、生物学的細胞を含有する、段落Ｄ３に記載のデバイス。

【0186】

段落Ｄ５．生物学的細胞は、幹細胞を含む、段落Ｄ４に記載のデバイス。

【0187】

段落Ｄ６．ヒドロゲルは、薬物の堆積物を含有する、段落Ｄ３－Ｄ５のいずれかに記載のデバイス。

【0188】

段落Ｄ７．堆積物は、堆積物から薬物を解放するように光誘起放出によって開放されることができる、段落Ｄ６に記載のデバイス。

【0189】

段落Ｄ８．レセプタクルおよび少なくとも２つのリザーバは、相互と一体的に形成される、段落Ｄ１－Ｄ７のいずれかに記載のデバイス。

【0190】

段落Ｄ９．本体は、単一の部品として射出成型される、段落Ｄ１－Ｄ８のいずれかに記載のデバイス。

【0191】

段落Ｄ１０．少なくとも２つのリザーバのうちの各リザーバは、壁をレセプタクルと共有する、段落Ｄ１－Ｄ９のいずれかに記載のデバイス。

【0192】

段落Ｄ１１．各チャネルは、対応するリザーバおよびレセプタクルの中間に位置し、随意に、その間で共有される、壁を通して延在する、段落Ｄ１－Ｄ１０のいずれかに記載のデバイス。

【0193】

段落Ｄ１２．少なくとも２つのリザーバのうちの各リザーバの開放上部を被覆するように構成される、除去可能な蓋をさらに備える、段落Ｄ１－Ｄ１１のいずれかに記載のデバイス。

【0194】

段落Ｄ１３．本デバイスは、滅菌状態である、段落Ｄ１－Ｄ１２のいずれかに記載のデバイス。

【0195】

段落Ｄ１４．シール部材は、本体に接着される、段落Ｄ１－Ｄ１３のいずれかに記載のデバイス。

【0196】

段落Ｄ１５．オルガノイドが、チャンバに含有される、段落Ｄ１４に記載のデバイス。

【0197】

段落Ｄ１６．本体は、それぞれレセプタクルと流体連通して配置される、少なくとも４つのリザーバを画定する、段落Ｄ１－Ｄ１５のいずれかに記載のデバイス。

【0198】

段落Ｄ１７．シール部材は、チャンバに含有されるオルガノイドの少なくとも一部を撮像するための底部窓を提供するように構成される、段落Ｄ１－Ｄ１６のいずれかに記載のデバイス。

【0199】

段落Ｄ１８．本体は、一対の側方窓を提供し、側方窓のいずれか一方を介してチャンバに含有されるオルガノイドの少なくとも一部の照明を許容する、段落Ｄ１－Ｄ１７のいずれかに記載のデバイス。

【0200】

段落Ｄ１９．本体は、開放上端と、閉鎖底端とを有する、アクセス管を画定し、共有壁は、管の底端からチャンバを分離する、段落Ｄ１－Ｄ１８のいずれかに記載のデバイス。

【0201】

段落Ｄ２０．相互に接続される実質的に同じユニットの線形アレイをさらに備え、ユニットのうちの１つは、レセプタクルと、少なくとも２つのリザーバとを含む、段落Ｄ１－Ｄ１９のいずれかに記載のデバイス。

【0202】

本開示で使用されるような用語「例示的」は、「例証的」または「実施例としての役割を果たす」を意味する。同様に、用語「例示する」は、「実施例を挙げることによって図示する」を意味する。いずれの用語も、望ましさも優位性も含意しない。

【0203】

上記に記載される開示は、独立有用性を伴う複数の明確に異なる発明を包含し得る。これらの発明はそれぞれ、その好ましい形態で開示されているが、本明細書に開示および図示されるようなその具体的実施形態は、多数の変形例が可能性として考えられるため、限定的な意味で考慮されるものではない。本発明の主題は、本明細書に開示される種々の要素、特徴、機能、および／または性質の全ての新規かつ非自明の組み合わせならびに副次的組み合わせを含む。以下の請求項は、特に、新規かつ非自明と見なされる、ある組み合わせおよび副次的組み合わせを指摘する。特徴、機能、要素、および／または性質の他の組み合わせならびに副次的組み合わせで具現化される発明が、本願もしくは関連出願から優先権を主張する出願において請求され得る。そのような請求項は、異なる発明または同一の発明を対象とするかどうかにかかわらず、元の請求項に対して範囲がより広い、より狭い、等しい、または異なるかどうかにかかわらず、本開示の発明の主題内にも含まれると見なされる。さらに、識別される要素に関する第１、第２、または第３等の序数インジケータが、要素の間で区別するために使用され、別様に具体的に記述されない限り、そのような要素の特定の位置または順序を示さない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46】

【図47】

【図48】

【図49】

【図50】

【図51】

【図52】

【図53】

【国際調査報告】