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特表2022-532157大員環キレータ及びその使用方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-13

(54)【発明の名称】大員環キレータ及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

C07D 413/14 20060101AFI20220706BHJP

A61K 31/555 20060101ALI20220706BHJP

A61K 47/68 20170101ALI20220706BHJP

A61K 33/24 20190101ALI20220706BHJP

A61K 51/10 20060101ALI20220706BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20220706BHJP

【ＦＩ】

C07D413/14 CSP

A61K31/555

A61K47/68

A61K33/24

A61K51/10 100

A61P35/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021566438

(86)(22)【出願日】2020-05-08

(85)【翻訳文提出日】2022-01-05

(86)【国際出願番号】 IB2020054381

(87)【国際公開番号】W WO2020229974

(87)【国際公開日】2020-11-19

(31)【優先権主張番号】62/846,044

(32)【優先日】2019-05-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509087759

【氏名又は名称】ヤンセンバイオテツク，インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林純子

(74)【代理人】

【識別番号】100196966

【弁理士】

【氏名又は名称】植田渉

(72)【発明者】

【氏名】ソルター，リース

(72)【発明者】

【氏名】ダドゥキン，ヴァディム

(72)【発明者】

【氏名】ソン，フェンビン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ゴールドバーグ，シャロム

(72)【発明者】

【氏名】キース，ジョン

【テーマコード（参考）】

4C063

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C063AA03

4C063CC59

4C063DD12

4C063EE01

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA12

4C084NA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB26

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC76

4C086HA28

4C086HA30

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA05

4C086NA05

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZB26

(57)【要約】

アクチニウム－２２５などのα線放出放射性金属イオンのキレート化のための大員環キレータ（Ｉ）が提供される。配位結合により大員環キレータに結合したα線放出放射性金属イオンを含む放射性金属錯体、及び抗体又はその抗原結合フラグメントなどの標的化リガンドに共有結合した放射性金属錯体を含む放射性免疫コンジュゲートも提供される。放射性免疫コンジュゲートは、クリックケミストリー反応によって生成することができる。放射線治療のために腫瘍性細胞を選択的に標的化するため、並びに腫瘍性疾患及び障害を治療するために放射性錯体及び放射性免疫コンジュゲートを使用する方法も記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）のキレータであって、

【化1】

式中、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、前記キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂ上に存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、キレータ。

【請求項2】

式（ＩＩ）のキレータであり、

【化2】

式中、
Ａ_１は、Ｎ若しくはＣＲ_１であるか、又は存在せず、
Ａ_２は、Ｎ又はＣＲ_２であり、
Ａ_３は、Ｎ又はＣＲ_３であり、
Ａ_４は、Ｎ又はＣＲ_４であり、
Ａ_５は、Ｎ又はＣＲ_５であり、
Ａ_６は、Ｎ若しくはＣＲ_６であるか、又は存在せず、
Ａ_７は、Ｎ又はＣＲ_７であり、
Ａ_８は、Ｎ又はＣＲ_８であり、
Ａ_９は、Ｎ又はＣＲ_９であり、
Ａ_１０は、Ｎ又はＣＲ_１０であり、
但し、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの３つ以下がＮであり、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの３つ以下がＮであり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０の各々が、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択されるか、
あるいは、任意の２つの直接隣接するＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０が、それらが結合している原子と一緒になって、５員又は６員の置換又は非置換炭素環又は窒素含有環を形成し、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分又は求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、前記キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちのいずれか１つがＸである場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、請求項１に記載のキレータ。

【請求項3】

式（ＩＩＩ）のキレータであり、

【化3】

式中、
各Ａ_１１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ又はＮＨであり、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
各Ｒ_１８は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択され、
但し、前記キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１８がＸである場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、請求項１に記載のキレータ。

【請求項4】

前記キレータが、

【化4】

からなる群から選択され、
式中、
Ｌ_１が、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１が、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２が、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２が、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である、請求項１に記載のキレータ。

【請求項5】

Ｒ_１１が、－ＮＨ_２、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ_３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ_１３、－ＣＯＯＲ_１３、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン又はトランス－シクロオクテンである、請求項１～４のいずれか一項に記載のキレータ。

【請求項6】

Ｒ_１１が、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である、請求項５に記載のキレータ。

【請求項7】

Ｒ_１１が、ＤＢＣＯ又はＢＣＮである、請求項６に記載のキレータ。

【請求項8】

Ｒ_１１が、標的化リガンドを含み、前記標的化リガンドが、抗体若しくはその抗原結合フラグメント、スキャフォルドタンパク質、小分子又はアプタマーを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のキレータ。

【請求項9】

Ｌ１が、

【化5】

からなる群から選択され、
式中、ｎは、０～１０の整数、好ましくは１～４の整数であり、ｍは、０～１２の整数、好ましくは０～６の整数である、請求項１～８のいずれか一項に記載のキレータ。

【請求項10】

【化6】

からなる群から選択されるキレータ。

【請求項11】

前記キレータが、配位結合により前記キレータに結合した放射性金属イオンを含み、それにより放射性金属錯体を形成する、請求項１～１０のいずれか一項に記載のキレータ。

【請求項12】

配位結合によりα線放出放射性金属イオンに結合したキレータを含む放射性金属錯体であって、前記放射性金属錯体が、式（Ｉ－ｍ）の構造を有し、

【化7】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分又は求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、前記放射性金属錯体は少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂ上に存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、放射性金属錯体。

【請求項13】

式（ＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体であり、

【化8】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、
Ａ_１は、Ｎ若しくはＣＲ_１であるか、又は存在せず、
Ａ_２は、Ｎ又はＣＲ_２であり、
Ａ_３は、Ｎ又はＣＲ_３であり、
Ａ_４は、Ｎ又はＣＲ_４であり、
Ａ_５は、Ｎ又はＣＲ_５であり、
Ａ_６は、Ｎ若しくはＣＲ_６であるか、又は存在せず、
Ａ_７は、Ｎ又はＣＲ_７であり、
Ａ_８は、Ｎ又はＣＲ_８であり、
Ａ_９は、Ｎ又はＣＲ_９であり、
Ａ_１０は、Ｎ又はＣＲ_１０であり、
但し、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの３つ以下がＮであり、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの３つ以下がＮであり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０の各々は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択されるか、
あるいは、任意の２つの直接隣接するＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０が、それらが結合している原子と一緒になって、５員又は６員の置換又は非置換炭素環又は窒素含有環を形成し、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、前記放射性金属錯体が少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちのいずれか１つがＸである場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、請求項１２に記載の放射性金属錯体。

【請求項14】

式（ＩＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体であり、

【化9】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、
各Ａ_１１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ又はＮＨであり、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
各Ｒ_１８は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択され、
但し、前記放射性金属錯体は少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１８がＸの場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、請求項１２に記載の放射性金属錯体。

【請求項15】

前記放射性金属錯体が、

【化10】

からなる群から選択され、
式中、
Ｍは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の放射性金属錯体。

【請求項16】

抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされた請求項１２～１５のいずれか一項に記載の放射性金属錯体を含む、放射性免疫コンジュゲート。

【請求項17】

前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、トリアゾール部分を介して前記放射性錯体のＲ_１１に結合されている、請求項１６に記載の放射性免疫コンジュゲート。

【請求項18】

【化11】

からなる群から選択される構造を有する放射性免疫コンジュゲートであって、
式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、
Ｌ_１は、リンカーであり、
ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である、放射性免疫コンジュゲート。

【請求項19】

前記放射性免疫コンジュゲートが、

【化12】

からなる群から選択され、
式中、ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、好ましくは、腫瘍抗原に特異的に結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、前記ｍＡｂは、ＰＳＭＢ１２７、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ハーセプチン及びＨ１１Ｂ６から選択される、請求項１８に記載の放射性免疫コンジュゲート。

【請求項20】

放射性免疫コンジュゲートを調製する方法であって、請求項８に記載のキレータを放射性金属イオンと接触させ、それにより標的化リガンドに結合した放射性金属錯体を形成することを含む、方法。

【請求項21】

前記標的化リガンドが、抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

放射性免疫コンジュゲートを調製する方法であって、前記方法が、
（ｉ）アジド基に共有結合した抗体又はその抗原結合フラグメントを含む修飾ポリペプチドを提供することと、
（ｉｉ）アルキニル基又はシクロアルキニル基に共有結合したキレータを含むキレータ錯体を提供することと、
（ｉｉｉ）前記アジド基が前記アルキニル基又はシクロアルキニル基と反応することを可能にする条件下で、前記修飾ポリペプチドを前記キレータ錯体と接触させて、それにより免疫コンジュゲートを形成することと、
（ｉｖ）前記免疫コンジュゲートをα線放出放射性金属イオンと接触させて、それにより前記放射性免疫コンジュゲートを形成することと、を含み、前記放射性免疫コンジュゲートが、前記キレータに結合した前記α線放出放射性金属イオンを含む放射性錯体を含み、前記放射性錯体が、式（Ｉ－ｍ）の構造を有し、

【化13】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１はアルキニル基又はシクロアルキニル基であり、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、前記放射性金属錯体は少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂに存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、方法。

【請求項23】

放射性免疫コンジュゲートを調製する方法であって、前記方法が、
（ｉ）アジド基に共有結合した抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを提供することと、
（ｉｉ）配位結合によりキレータに結合したα線放出放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することであって、前記キレータが、アルキニル基又はシクロアルキニル基に共有結合している、提供することと、
（ｉｉｉ）前記アジド基が前記アルキニル基又はシクロアルキニル基と反応することを可能にする条件下で、前記修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを前記放射性錯体と接触させ、それにより、前記放射性免疫コンジュゲートを調製することと、を含み、
前記放射性錯体が、式（Ｉ－ｍ）の構造を有し、

【化14】

式中、
Ｍは、α線放出放射性金属イオンであり、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、アルキニル基又はシクロアルキニル基であり、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、前記放射性金属錯体は少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂに存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない、方法。

【請求項24】

【請求項25】

請求項１６～１９のいずれか一項に記載の放射性免疫コンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項26】

放射線治療を必要とする対象において放射線治療のために腫瘍性細胞を選択的に標的化する方法であって、治療有効量の請求項２５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項27】

腫瘍性疾患又は障害の治療を必要とする対象において腫瘍性疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項２５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項28】

癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項２５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１９年５月１０日に出願された米国特許仮出願第６２／８４６，０４４号の優先権の利益を主張するものであり、その米国特許仮出願は、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ファイル名が「ＪＢＩ６０７２ＷＯＰＣＴ１＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」であり、２０２０年５月１日に作成され、２６ｋｂのサイズを有する、ＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂにより電子的に提出された配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂにより提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

α粒子放出放射性核種は、高エネルギーと短距離作用との組み合わせのため癌治療法に非常に有望であり、ほとんどが腫瘍細胞に限局されて、強力に殺傷する可能性を提供する（Ｋｉｍ，Ｙ．Ｓ．ａｎｄＭ．Ｗ．Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌ，Ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｔａｒｇｅｔｅｄａｌｐｈａｔｈｅｒａｐｙ．ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ，２０１２．３３（３）：ｐ．５７３－９０）。抗体、スキャフォルドタンパク質、小分子リガンド、アプタマー、又は癌抗原に特異的な他の結合部分を使用する、α線放出体の標的化送達は、腫瘍への放射線核種の選択的送達の方法を提供して、それらの効力を強化し、オフターゲット効果を軽減する方法を提供する。一般的な実施では、結合部分をα線放出放射性金属に結合するキレータに付着させて、放射性錯体を生成する。多くのこのような例は、標的化リガンドとしてモノクローナル抗体（monoclonal antibody、ｍＡｂ）を使用し、放射性免疫コンジュゲートとして既知のものを生成する。

【0004】

アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）は、医療用途で特に関心が持たれているα線放出放射性同位体である（Ｍｉｅｄｅｒｅｒｅｔａｌ．，ＲｅａｌｉｚｉｎｇｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｔｈｅＡｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅｇｅｎｅｒａｔｏｒｉｎｔａｒｇｅｔｅｄａｌｐｈａｐａｒｔｉｃｌｅｔｈｅｒａｐｙａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＡｄｖＤｒｕｇＤｅｌｉｖＲｅｖ，２００８．６０（１２）：７１－８２）。^２２５Ａｃの１０日半減期は、放射性コンジュゲートの生成を促進するのに十分な長さであるが、抗体などの送達ビヒクルの循環薬物動態と一致させるために十分短い。そのため、^２２５Ａｃの放射性免疫コンジュゲートは、特に関心が持たれている。加えて、^２２５Ａｃは、安定した同位体^２０９Ｂｉに達する前に最終的に４つのα粒子を放出する一連の工程で減衰することで効力が増す。医療用途で関心が持たれている別の放射性同位体は、画像化に適したγ線照射及び放射線治療に適した中エネルギーβ線照射の両方を放出する、ルテチウム－１７７（^１７７Ｌｕ）である。^１７７Ｌｕ標識ペプチドは正常組織の損傷の低減を示し、^１７７Ｌｕ標識化は、治療及び画像化の両方に単一の放射性標識化剤の使用を可能にすることが示されている（ＫｗｅｋｋｅｂｏｏｍＤＪ，ｅｔａｌ．［^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡ^０，Ｔｙｒ^３］ｏｃｔｒｅｏｔａｔｅ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈ［^１１１Ｉｎ－ＤＴＰＡ^０］ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ．ＥｕｒＪＮｕｃｌＭｅｄ．２００１；２８：ｐ．１３１９－１３２５）。治療用途に使用される他の放射性同位体としては、例えば、β線放出体又はα線放出体、例えば、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１５３Ｓｍ，^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２５５Ｆｍ及び^２２７Ｔｈなどが挙げられる。画像化用途に使用される他の放射性同位体としては、例えば、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ及び^１１１Ｉｎなどのγ線放出放射性同位体が挙げられる。

【0005】

現在最も広く使用されているアクチニウム－２２５及びランタニドのためのキレータは、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸；テトラキサテン）であり、以前の臨床及び前臨床プログラムは、アクチニウムキレート化のために１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）を主に使用してきた。しかしながら、アクチニウムのＤＯＴＡキレート化は、課題があり得ることが知られている（Ｄｅａｌ，Ｋ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄｉｎｖｉｖｏｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆａｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９９９．４２（１５）：ｐ．２９８８－９２）。例えば、ＤＯＴＡは、タンパク質又は抗体などの標的化リガンドに結合したとき、最大＞５００：１ＤＯＴＡ：アクチニウム－２２５のキレート化比しか可能とならず、厳しい条件又は抗体あたり高レベルのＤＯＴＡのいずれかを必要とすることが多い。ランタニド及びアクチニウム－２２５のための他の大員環キレータは、例えば、国際特許出願公開第２０１８／１８３９０６号、Ｔｈｉｅｌｅｅｔａｌ．「ＡｎＥｉｇｈｔｅｅｎ－ＭｅｍｂｅｒｅｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＬｉｇａｎｄｆｏｒＡｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ＴａｒｇｅｔｅｄＡｌｐｈａＴｈｅｒａｐｙ」Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．（２０１７）５６，１４７１２－１４７１７、Ｒｏｃａ－Ｓａｂｉｏｅｔａｌ．「ＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＲｅｃｅｐｔｏｒＥｘｈｉｂｉｔｉｎｇＵｎｐｒｅｃｅｄｅｎｔｅｄＳｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｆｏｒＬｉｇｈｔＬａｎｔｈａｎｉｄｅｓ」Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００９）１３１，３３３１－３３４１に記載されている。

【0006】

部位特異性は、ランダムコンジュゲーションと比較して、部位特異的方法により、ＡＤＣの有効性と安全性の両方を高められることが実証されていることから、抗体－薬物コンジュゲート（antibody-drug conjugate、ＡＤＣ）分野において主要な注目領域となっている（Ａｇａｒｗａｌ，Ｐ．ａｎｄＣ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：ｔｈｅｎｅｘｕｓｏｆｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｒｏｔｅｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ａｎｄｄｒｕｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇＣｈｅｍ，２０１５．２６（２）：ｐ．１７６－９２）。同様の安全性及び有効性の利益が、放射性免疫コンジュゲートに関して達成され得ると考えられる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

したがって、放射性金属、好ましくはアクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）などのα線放出放射性金属を結合し、高比活性（specific activity）及び高収率を有する安定した放射性免疫コンジュゲートを生成するために使用することができる、新規なキレータが当該技術分野で必要とされている。本発明は、比活性又は最も一般的な金属不純物に関係なく、α線放出放射性金属、特に^２２５Ａｃなどの放射性金属に結合することができる大員環キレータを提供することにより、この必要性を満たす。本発明のキレータは、抗体、タンパク質、アプタマー、小分子などの標的化リガンドに、好ましくは「クリックケミストリー」を用いた部位特異的な様式で、標的化リガンドにコンジュゲートすることにより、インビトロ及びインビボで高い安定性を有する放射性免疫コンジュゲートを生成するために使用することができる。本発明のキレータを標的化リガンドにコンジュゲートさせることによって生成される放射性免疫コンジュゲートは、腫瘍性細胞の標的化放射線治療及び／又は癌を含む腫瘍性疾患若しくは障害の標的化治療などの標的化治療に使用することができる。

【0008】

一般的な一態様では、本発明は、式（Ｉ）のキレータに関し、

【0009】

【化1】

式中、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂ上に存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない。

【0010】

代替的な実施形態では、環Ａ及び環Ｂの各々は、任意選択で置換されたヘテロシクリル環、例えば、オキサゾリンであることが企図される。

【0011】

一実施形態では、本発明のキレータは、式（ＩＩ）のキレータであり、

【0012】

【化2】

式中、
Ａ_１は、Ｎ若しくはＣＲ_１であるか、又は存在せず、
Ａ_２は、Ｎ又はＣＲ_２であり、
Ａ_３は、Ｎ又はＣＲ_３であり、
Ａ_４は、Ｎ又はＣＲ_４であり、
Ａ_５は、Ｎ又はＣＲ_５であり、
Ａ_６は、Ｎ若しくはＣＲ_６であるか、又は存在せず、
Ａ_７は、Ｎ又はＣＲ_７であり、
Ａ_８は、Ｎ又はＣＲ_８であり、
Ａ_９は、Ｎ又はＣＲ_９であり、
Ａ_１０は、Ｎ又はＣＲ_１０であり、
但し、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの３つ以下がＮであり、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの３つ以下がＮであり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０の各々は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択されるか、
あるいは、任意の２つの直接隣接するＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０は、それらが結合している原子と一緒になって、５員又は６員の置換又は非置換炭素環又は窒素含有環を形成し、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちのいずれか１つがＸである場合、Ｌ_１はリンカーである。

【0013】

一実施形態では、本発明のキレータは、式（ＩＩＩ）のキレータであり、

【0014】

【化3】

式中、
各Ａ_１１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ又はＮＨであり、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
各Ｒ_１８は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択され、
但し、キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１８がＸである場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない。

【0015】

特定の実施形態では、キレータは、

【0016】

【化4】

であり、式中、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又はＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0017】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、－ＮＨ_２、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ_３、アルキニル、シクロアルキニル、Ｃ（Ｏ）Ｒ_１３、－ＣＯＯＲ_１３、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン又はトランス－シクロオクテンである。

【0018】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（bicyclononynyl、ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（difluorinated cyclooctynyl、ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（dibenzocyclooctynyl、ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（biarylazacyclooctynonyl、ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（dibenzoazacyclooctynyl、ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（dimethoxyazacyclooctynyl、ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（difluorobenzocyclooctynyl、ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（monobenzocyclooctynyl、ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（tetramethoxy dibenzocyclooctynyl、ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である。

【0019】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、ＤＢＣＯ又はＢＣＮである。

【0020】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、その抗体若しくは抗原結合フラグメント、スキャフォルドタンパク質、小分子又はアプタマーを含む。

【0021】

特定の実施形態では、標的化リガンドは、抗体又はその抗原結合フラグメントである。

【0022】

別の態様では、本発明は、配位結合によりキレータに結合した放射性金属イオンを含む、本発明のキレータを含む放射性金属錯体に関する。

【0023】

一実施形態では、本発明の放射性金属錯体は、式（Ｉ－ｍ）の構造を有し、

【0024】

【化5】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオンであり、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、放射性金属錯体が少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂに存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない。

【0025】

代替的な実施形態では、環Ａ及び環Ｂの各々は、任意選択で置換されたヘテロシクリル環、例えば、オキサゾリンであることが企図される。

【0026】

一実施形態では、本発明の放射性金属錯体は、式（ＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体であり、

【0027】

【化6】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオンであり、
Ａ_１は、Ｎ若しくはＣＲ_１であるか、又は存在せず、
Ａ_２は、Ｎ又はＣＲ_２であり、
Ａ_３は、Ｎ又はＣＲ_３であり、
Ａ_４は、Ｎ又はＣＲ_４であり、
Ａ_５は、Ｎ又はＣＲ_５であり、
Ａ_６は、Ｎ若しくはＣＲ_６であるか、又は存在せず、
Ａ_７は、Ｎ又はＣＲ_７であり、
Ａ_８は、Ｎ又はＣＲ_８であり、
Ａ_９は、Ｎ又はＣＲ_９であり、
Ａ_１０は、Ｎ又はＣＲ_１０であり、
但し、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの３つ以下がＮであり、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの３つ以下がＮであり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０の各々が、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択されるか、
あるいは、任意の２つの直接隣接するＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０が、それらが結合している原子と一緒になって、５員又は６員の置換又は非置換炭素環又は窒素含有環を形成し、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、放射性金属錯体は少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちのいずれか１つがＸである場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又は少なくとも１つ又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７は水素ではない。

【0028】

一実施形態では、本発明の放射性金属錯体は、式（ＩＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体であり、

【0029】

【化7】

式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオンであり、
各Ａ_１１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ又はＮＨであり、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
各Ｒ_１８は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択され、
但し、放射性金属錯体は少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１８がＸの場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない。

【0030】

特定の実施形態では、α線放出放射性金属イオンは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）である。

【0031】

特定の実施形態では、本発明の放射性金属錯体は、

【0032】

【化8】

及び

【0033】

【化9】

からなる群から選択され、
式中、
Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、Ｌ_１は存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又はＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0034】

別の一般的な態様では、本発明は、Ｒ_１１を介して標的化リガンド、好ましくは抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合した本発明のキレータを含む免疫コンジュゲートに関する。

【0035】

更に別の一般的態様では、本発明は、Ｒ_１１を介して標的化リガンド、好ましくは抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合した本発明の放射性金属錯体を含む、放射性免疫コンジュゲートに関する。

【0036】

一実施形態では、放射性免疫コンジュゲートは、トリアゾール部分を介して標的化リガンド、特に抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合した本発明の放射性金属錯体を含む。

【0037】

特定の実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲートは、

【0038】

【化10】

からなる群から選択され、
式中、Ｌ_１は、リンカーであり、ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、好ましくは、ｍＡｂは、腫瘍細胞、より好ましくは、前立腺特異的膜抗原（prostate-specific membrane antigen、ＰＳＭＡ）、ＢＣＭＡ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、Ｃｄ７９ｂ及びネクチン－４からなる群から選択される腫瘍抗原に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントであり、各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0039】

別の一般的な態様では、本発明は、本発明のキレータ又は放射性金属錯体を標的化リガンドと共有結合させること、好ましくはキレータ又は放射性金属錯体のＲ_１１を介して抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合させることを含む、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートを調製する方法に関する。

【0040】

特定の実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲートを調製する方法は、
（ｉ）第１のクリック反応パートナー（例えば、アジド基）に共有結合したポリペプチド（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）を含む修飾ポリペプチドを提供することと、
（ｉｉ）第２のクリック反応パートナー（例えば、アルキニル基又はシクロアルキニル基）に共有結合した本発明のキレータを含むキレータ錯体を提供することと、
（ｉｉｉ）第１のクリック反応パートナー（例えば、アジド基）を第２のクリック反応パートナー（例えば、アルキニル基又はシクロアルキニル基）と反応させることを可能とする条件下で、修飾ポリペプチドをキレータ錯体と接触させて、それよりポリペプチド－キレータ錯体（すなわち、免疫コンジュゲート）を形成することと、
（ｉｖ）ポリペプチド－キレータ錯体を放射性金属イオンと接触させて、それにより放射性免疫コンジュゲートを調製すること（放射性免疫コンジュゲートは、放射性金属イオンで標識化されたポリペプチド、例えば、配位結合によりキレータに結合したα線放出放射性金属イオンで標識化された修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを含む）と、を含む、「１工程直接放射性標識化」方法（例えば、図２Ｃに示される）を含む。

【0041】

特定の実施形態によれば、工程（ｉｖ）は、金属のない条件下で実施される。好ましくは、方法は、本明細書に記載されるような部位特異的な様式で実施される。

【0042】

代替の実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲートを調製する方法は、
（ｉ）アジド基に共有結合した抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを提供することと、
（ｉｉ）配位結合によりキレータに結合したα線放出放射性金属イオンを含む本発明の放射性錯体を提供することであって、キレータがアルキニル基又はシクロアルキニル基に共有結合している、提供することと、
（ｉｉｉ）アジド基がアルキニル基又はシクロアルキニル基と反応することを可能する条件下で、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性錯体と接触させて、それにより放射性免疫コンジュゲートを調製することと、を含む、「クリック放射性標識化」方法（例えば、図２Ｄに示される）を含む。

【0043】

いくつかの実施形態では、シクロアルキニル基は、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である。

【0044】

別の一般的な態様において、本発明は、本発明の放射性免疫複コンジュゲート及び薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物に関する。医薬組成物はまた、１つ又は２つ以上の薬学的に許容される担体を含み得る。

【0045】

更に別の一般的な態様では、本発明は、標的化放射線治療のために、本発明の放射性免疫コンジュゲート及び医薬組成物を使用する方法に関する。

【0046】

一実施形態では、放射線治療を必要とする対象において放射線治療のために腫瘍性細胞を選択的に標的化する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0047】

一実施形態では、本発明は、腫瘍性疾患又は障害の治療を必要とする対象において腫瘍性疾患又は障害を治療する方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0048】

上述の「発明の概要」及び以降の「発明を実施するための形態」は、添付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される正確な実施形態に限定されない点が理解される必要がある。

【0049】

図面は、以下のとおりである。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1A】実施例１に記載のＬａ^３＋によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。混合（上部）前及びＬａ^３＋との混合後のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルのＨＰＬＣクロマトグラムを示し、Ｌａ^３＋との混合後の１４．１３７分間から１２．０４７分間への保持時間のシフトは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルによるＬａ^３＋の迅速なキレート化を示す。

【図1B】実施例１に記載のＬａ^３＋によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。混合（上部）前及びＬａ^３＋との混合後のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルのＨＰＬＣクロマトグラムを示し、Ｌａ^３＋との混合後の１７．１８１分間から１５．７５１分間への保持時間のシフトは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルによるＬａ^３＋の迅速なキレート化を示す。

【図2】ランダムコンジュゲーション方法（例えば、リジン残基、システイン残基などの標識化方法）又は部位特異的コンジュゲーション方法（例えば、グリカン特異的方法、コンジュゲーションタグ方法又は工学操作システイン方法）による、本発明の実施形態による放射性免疫コンジュゲートを生成するための抗体の放射性標識化の概略図を示す。Ａは、１工程直接放射性標識化によるランダムコンジュゲーションを示す。Ｂは、クリック放射性標識化によるランダムコンジュゲーションを示す。Ｃは、１工程直接放射性標識化による部位特異的コンジュゲーションを示す。Ｄは、クリック放射性標識化による部位特異的コンジュゲーションを示す。

【発明を実施するための形態】

【0051】

背景技術において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載する。これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。

【0052】

別の定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に全般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で引用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によって恰もその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。

【0053】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。

【0054】

本明細書及び以下の特許請求の範囲を通して、文脈上必要としない限り、用語「含む（comprise）」並びに「含む（comprises）」及び「含む（comprising）」などの変形は、指定の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群を含むが、任意の他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群を除外するものではないことを意味すると理解されるであろう。本明細書で使用するとき、用語「含む（comprising）」は、用語「含有する（containing）」又は「含む（including）」に置き換えることができ、又はときに本明細書で使用するとき、用語「有する（having）」に置き換えることもできる。

【0055】

本明細書で使用するとき、「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲の要素において指定されていない任意の要素、工程、又は成分を除外する。本明細書で使用するとき、「から本質的になる（consisting essentially of）」は、特許請求の範囲の基本的かつ新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程は除外しない。本発明の態様又は実施形態に関連して本明細書で使用するとき、本開示の範囲を変化させるために、「含む（comprising）」、「含有する（containing）」、「含む（including）」、及び「有する」という上記用語のいずれかを、用語「からなる」又は「から本質的になる」に置き換えることができる。

【0056】

本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の接続的な用語「及び／又は」は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしの第１の要素の適用性を指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書で使用されるとき、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。

【0057】

本出願の読者を助けるため、明細書の記載は、様々な段落若しくはセクションに分けられているか、又は本出願の様々な実施形態に向けられている。これらの分離は、段落又はセクション又は実施形態の実体を別の段落又はセクション又は実施形態の実体から切り離すものと見なされるべきではない。反対に、当業者であれば、本明細書の記載が広範な用途を有し、想到され得る様々な段落、パラグラフ、及び文章の全ての組み合わせを包含することを理解するであろう。任意の実施形態の考察は、単なる例示であることを意味するものであり、特許請求の範囲を含む本開示の範囲がこれらの実施例に限定されることを示唆することを意図するものではない。

【0058】

特に断らない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」なる語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、「１０倍」の記載は、９倍及び１１倍を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。

【0059】

本明細書で使用するとき、「対象」とは、本発明の放射性免疫コンジュゲートが投与されるか又は投与された、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書で使用するとき、用語「哺乳動物」は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル又は類人猿などの非ヒト霊長類（non-human primate、ＮＨＰ）、ヒト等、より好ましくはヒトが挙げられる。

【0060】

本明細書で使用するとき、用語「アルキル」は、飽和の一価非分枝鎖又は分枝鎖炭化水素鎖を意味する。アルキル基の例としては、メチル（methyl、Ｍｅ）、エチル（ethyl、Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル）及びペンチル（例えば、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0061】

用語「シクロアルキル」は、環中に３～１２個、より好ましくは３～８個の炭素原子を有する単環又は多環式アルキル基を指す。単環式シクロアルキル環としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0062】

本明細書で使用するとき、用語「アルコキシ」は、－Ｏ－アルキル基又は－ＯＲ基を指し、式中、Ｒはアルキルであり、アルキルは上記で定義したとおりである。アルコキシ基は、酸素原子を介して親分子に結合される。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ）、ブトキシ（例えば、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ）、ペンチルオキシ（例えば、ｎ－ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ）などが挙げられる。アルコキシ基は、非置換であるか、又は１つ若しくは２つ以上の好適な置換基で置換することができる。同様に、「アルキルチオ」又は「チオアルコキシ」は、－ＳＲ基を指し、式中、Ｒは、硫黄架橋を介して親分子に結合したアルキル、例えば、－Ｓ－メチル、－Ｓ－エチルなどである。アルキルチオの代表的な例としては、－ＳＣＨ_３、－ＳＣＨ_２ＣＨ_３などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0063】

本明細書で使用するとき、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。相応して、用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。

【0064】

用語「ヒドロキシ」及び「ヒドロキシル」は、互換的に使用することができ、－ＯＨを指す。

【0065】

用語「カルボキシ」は、－ＣＯＯＨを指す。

【0066】

用語「シアノ」は、－ＣＮを指す。

【0067】

用語「ニトロ」は、－ＮＯ_２を指す。

【0068】

用語「イソチオシアネート」は、－Ｎ＝Ｃ＝Ｓを指す。

【0069】

用語「イソシアネート」は、－Ｎ＝Ｃ＝Ｏを指す。

【0070】

用語「アジド」は、－Ｎ_３を指す。

【0071】

用語「アルケニル」は、２～１０個の炭素原子などの少なくとも２個の炭素原子を有し、かつ、２個の炭素原子間に少なくとも１つの二重結合を含む、直鎖又は分枝鎖炭化水素鎖を指す。アルケニルは、１つの炭素－炭素二重結合又は２、３、４個又はそれ以上の炭素－炭素二重結合などの複数の炭素－炭素二重結合を有することができる。アルケニル基の例としては、メテニル、エテニル、プロペニル、ブテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0072】

用語「シクロアルケニル」は、環中に３～１２個、より好ましくは３～８個の炭素原子を有し、かつ、２個の炭素原子間に少なくとも１つの二重結合を含む、単環式又は多環式アルキル基を指す。シクロアルケニルは、１つの炭素－炭素二重結合又は２、３、４個又はそれ以上の炭素－炭素二重結合などの複数の炭素－炭素二重結合を有することができる。シクロアルケニル基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロヘプテニル、シクロヘキセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0073】

本明細書で使用するとき、用語「アルキニル」、「アルキン基」又は「アルキン部分」は、２～１０個の炭素原子などの少なくとも２個の炭素原子を有し、２個の炭素原子間に少なくとも１つの三重結合を含む、直鎖又は分枝鎖炭化水素鎖を指す。アルキニル基は、末端アルキニル基又は環状アルキニル基であり得る。末端アルキンは、三重結合炭素原子に結合した少なくとも１個の水素原子を有する。「環状アルキン」又は「シクロアルキニル」は、２個の炭素原子間に少なくとも１つの三重結合を含むシクロアルキル環である。環状アルキン又はシクロアルキニル基の例としては、シクロオクチン及びシクロオクチン誘導体、例えば、ビシクロノニン（bicyclononyne、ＢＣＮ）、二フッ素化シクロオクチン（difluorinated cyclooctynyl、ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチン（dibenzocyclooctynyl、ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノン（biarylazacyclooctynonyl、ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチン（dibenzoazacyclooctyne、ＤＩＢＡＣ）、ジメトキシアザシクロオクチン（dimethoxyazacyclooctynyl、ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチン（difluorobenzocyclooctyne、ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチン（monobenzocyclooctynyl、ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシＤＩＢＯ（ＴＭＤＩＢＯ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0074】

用語「アミノ」は、ＮＨ_２を表す。用語「アルキルアミノ」は、窒素に結合した水素原子の１つ又は両方がアルキル基で置換されているアミノ基を指す。アルキルアミン基は、－ＮＲ_２として表すことができ、式中、各Ｒは、独立して、水素又はアルキル基である。例えば、アルキルアミンは、メチルアミン（－ＮＨＣＨ_３）、ジメチルアミン（－Ｎ（ＣＨ_３）_２）、－ＮＨＣＨ－_２ＣＨ_３などが挙げられる。本明細書で使用するとき、用語「アミノアルキル」は、１つ又は２つ以上のアミノ基で置換された分枝鎖及び直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を含むことを意図する。アミノアルキル基の代表的な例としては、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２及び－ＣＨ_２ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_３が挙げられるが、これらに限定されない。

【0075】

本明細書で使用するとき、「アミド」は、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２を指し、式中、各Ｒは、独立して、アルキル基又は水素である。アミドの例としては、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ_３及び－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）_２が挙げられるが、これらに限定されない。

【0076】

用語「ヒドロキシルアルキル」及び「ヒドロキシアルキル」は、互換的に使用され、１つ又は２つ以上のヒドロキシル基で置換されたアルキル基を指す。アルキルは、分枝鎖又は直鎖脂肪族炭化水素であり得る。ヒドロキシルアルキルの例としてはヒドロキシルメチル（－ＣＨ_２ＯＨ）、ヒドロキシルエチル（－ＣＨ_２ＣＨ２ＯＨ）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0077】

本明細書で使用するとき、用語「アリール」は、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントラニルなどを含むがこれらに限定されない、任意の炭素系芳香族基を含む基である。アリール部分は周知であり、例えば、Ｌｅｗｉｓ，Ｒ．Ｊ．，ｅｄ．，Ｈａｗｌｅｙ’ｓＣｏｎｄｅｎｓｅｄＣｈｅｍｉｃａｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ，第１３版，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９７）に記載されている。アリール基は、単一の環構造（すなわち、単環式）であるか、又は縮合環構造である複数の環構造（すなわち、多環式）を含むことができる。好ましくは、アリール基は、単環式アリール基である。

【0078】

本明細書で使用するとき、用語「ヘテロシクリル」は、硫黄、酸素又は窒素などの少なくとも１個のヘテロ原子環員を含む安定な単環式及び多環式炭化水素を含む。本明細書で使用するとき、用語「ヘテロアリール」は、硫黄、酸素又は窒素などの少なくとも１個のヘテロ原子環員を含む安定な単環式及び多環式芳香族炭化水素を含む。ヘテロアリールは、単環式又は多環式、例えば、二環式又は三環式であり得る。ヘテロ原子を含むヘテロシクリル又はヘテロアリール基の各環は、１個又は２個の酸素原子又は硫黄原子及び／又は１～４個の窒素原子を含むことができ、但し、各環中のヘテロ原子の総数は４個以下であり、各環は少なくとも１個の炭素原子を有する。多環式、例えば二環式又は三環式であるヘテロアリール基は、少なくとも１つの完全芳香環を含む必要があるが、他の縮合環又は環は芳香族又は非芳香族であり得る。ヘテロシクリル又はヘテロアリール基は、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基のうちの任意の環の任意の利用可能な窒素又は炭素原子に結合することができる。好ましくは、用語「ヘテロアリール」は、環のうちの少なくとも１つに少なくとも１個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ又はＮ）を有する５員又は６員の単環式基及び９員又は１０員の二環式基を指し、ヘテロ原子含有環は、好ましくは、１、２又は３個のヘテロ原子を有し、より好ましくは、Ｏ、Ｓ及び／又はＮから選択される１又は２個のヘテロ原子を有する。ヘテロアリールの窒素ヘテロ原子は、置換又は非置換であり得る。更に、ヘテロアリールの窒素及び硫黄ヘテロ原子は、任意選択で酸化することができる（すなわち、Ｎ→Ｏ及びＳ（Ｏ）_ｒであり、式中、ｒは、０、１又は２である）。

【0079】

用語「エステル」は、－Ｃ（Ｏ）_２Ｒを指し、式中、Ｒはアルキルである。

【0080】

用語「カルバメート」は、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ_２を指し、式中、各Ｒは、独立して、アルキル又は水素である。

【0081】

用語「アルデヒド」は、－Ｃ（Ｏ）Ｈを指す。

【0082】

用語「炭酸塩」は、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲを指し、（式中、Ｒはアルキルである。

【0083】

用語「マレイミド」は、化学式Ｈ_２Ｃ_２（ＣＯ）_２ＮＨを有する基を指す。用語「マレイミド」は、別の基又は分子に共有結合したマレイミド基を指す。好ましくは、マレイミド基は、例えばＮ－結合される。

【0084】

【化11】

【0085】

用語「ハロゲン化アシル」は、－Ｃ（Ｏ）Ｘを指し、式中、Ｘはハロ（例えば、Ｂｒ、Ｃｌ）である。例示的なハロゲン化アシルとしては、塩化アシル（－Ｃ（Ｏ）Ｃｌ）及び臭化アシル（－Ｃ（Ｏ）Ｂｒ）が挙げられる。

【0086】

本明細書で言及するとき、用語「置換された」は、全ての通常の原子価が維持され、置換が安定した化合物をもたらすという条件で、少なくとも１つの水素原子が非水素基で置換されていることを意味する。特定の基が「置換される」場合、その基は置換基の列挙から独立して選択される、１個又は２個以上の置換基、好ましくは１～５個の置換基、より好ましくは１～３個の置換基、最も好ましくは１～２個の置換基を有することができる。用語「独立して」は、置換基に関して使用されるとき、２つ以上のそのような置換基が可能である場合、そのような置換基は互いに同じ又は異なる得ることを意味する。本明細書に記載の置換基のいずれか（例えば、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリールなど）は、非置換であるか、又は１つ若しくは２つ以上の好適な置換基で置換され得る。好適な置換基の例としては、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミド、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、カルボキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0087】

当該技術分野で使用される慣用に従って、

【0088】

【化12】

が、キレータ又は標的化リガンドなど、コア、親又は骨格構造への部分、官能基又は置換基の結合点である結合を示すために、本明細書における構造式において使用される。

【0089】

任意の変数が、化合物の任意の構成又は式において２回以上発生する場合、各発生におけるその定義は、他の全ての発生におけるその定義とは無関係である。したがって、例えば、０～３個のＲ基で置換されることが示されている場合、この基は、最大３個のＲ基で任意選択で置換することができ、各々の場合に、Ｒは、Ｒの定義から独立して選択される。

【0090】

置換基への結合が環中の２つの原子を結合する結合を横断するように示される場合、そのような置換基は、環上の任意の原子に結合することができる。

【0091】

本明細書で使用するとき、用語「放射性金属イオン」又は「放射活性金属イオン」は、粒子及び／又は光子を放出する元素の１つ又は２つ以上の同位体を指す。本開示を考慮して当業者に既知の任意のキレータを本発明で使用することができる。本発明での使用に好適な放射性金属の例としては、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７７Ａｓ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１１１Ｉｎ、^１１７Ｓｎ、^１３１Ｉ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１５３Ｓｍ、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ及び^２５５Ｆｍが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、放射性金属イオンは、治療用途において有用な放射性金属イオンを意味する「治療用放射体」である。治療用放射体の例としては、限定されないが、β線又はα線放出、例えば、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１５３Ｓｍ、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２５５Ｆｍ及び^２２７Ｔｈが挙げられる。好ましくは、本発明で使用される放射性金属イオンは、α線放出放射性金属イオン、例えば、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）である。

【0092】

本明細書で使用するとき、用語「キレー」又は「キレート剤」は、金属、好ましくは放射性金属が、配位結合によりキレート化され得る化学化合物を指す。典型的な実施形態では、キレータは、１つ又は２つ以上のヘテロ原子、例えば、酸素及び／又は窒素を環原子として含む大員環である。好ましくは、キレータは、４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６の誘導体である。

【0093】

本明細書で使用される「放射性金属錯体」は、キレータと会合する放射性金属イオンを含む錯体を指す。典型的には、放射性金属イオンは、配位結合によりキレータに結合又は配位される。大員環のヘテロ原子は、キレータへの放射性金属イオンの配位結合に関与し得る。キレータは、１つ又は２つ以上の置換基で置換することができ、１つ又は２つ以上の置換基はまた、大員環のヘテロ原子に加えて又は代替的に、キレータへの放射性金属イオンの配位結合に関与し得る。

【0094】

本明細書で使用するとき、用語「クリックケミストリー」は、反応基を含む小さな単位を一緒に結合することによって共有結合を迅速かつ確実に生成するように調整された化学を説明する、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓによって導入された化学原理を指す（Ｋｏｌｂ，ｅｔａｌ．，ＡｎｇｅｗａｎｄｔｅＣｈｅｍｉｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ（２００１）４０：２００４－２０２１を参照されたい）。クリックケミストリーは、特定の反応を指すものではないが、自然界に見られる反応を模倣する反応を含むがこれらに限定されない概念を指す。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応はモジュール式であり、広範囲であり、高い化学収率が得られ、不活性の副生成物を生成し、立体特異的であり、単一の反応生成物との反応に有利になる大きな熱力学的駆動力を示し、かつ／又は生理学的条件下で実施することができる。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、単純な反応条件下で実施することができ、容易に利用可能な出発物質及び試薬を使用し、毒性溶媒を使用せず又は水などの無害な若しくは容易に除去される溶媒を使用し、かつ／又は結晶化若しくは蒸留などの非クロマトグラフィー法による単純な生成物の単離を提供する。

【0095】

クリックケミストリー反応は、天然に存在する生体分子には稀にしか見られず、生体分子に対して化学的に不活性である反応基を利用するが、クリックケミストリーパートナーが一緒に反応した場合、反応は、生物学的に関連する条件下、例えば、過剰な加熱及び／又は強過ぎる試薬が存在しないなどの細胞培養条件で効率的に起こり得る。一般に、クリックケミストリー反応は、互いに反応することができるクリック反応パートナーを含む、少なくとも２つの分子を必要とする。互いに反応性であるこのようなクリック反応パートナーは、本明細書ではクリックケミストリーハンドル対、又はクリックケミストリー対と呼ばれることがある。いくつかの実施形態では、クリック反応パートナーは、アジド及びシクロオクチン又はシクロオクチン誘導体などの歪みを有する（strained）アルキン又は任意の他のアルキンである。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、反応性ジエン及び好適なテトラジン求ジエン体である。例えば、トランス－シクロオクテン、ノルボルネン、又はビスシクロノネンは、クリック反応対として好適なテトラジン求ジエン体と対にすることができる。更に他の実施形態では、テトラゾールは、紫外線の存在下で活性化されていないアルケンと対になって、「光クリック」反応対と呼ばれるクリック反応対を作ることができる。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、システイン及びマレイミドである。例えば、ペプチドに由来するシステイン（例えば、ＧＧＧＣ）を、キレート剤（例えば、ＮＯＴＡ）に会合しているマレイミドと反応させることができる。他の好適なクリックケミストリーハンドルが当業者に知られている（例えば、Ｓｐｉｃｅｒｅｔａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．２０１４；５：ｐ．４７４０）。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、ホスフィン及びアジドなどのシュタウディンガーライゲーション成分である。他の実施形態では、クリック反応パートナーはジエン（例えば、テトラジン）及びアルケン（例えば、トランス－シクロオクテン（trans-cyclooctene、ＴＣＯ）又はノルボルネン）などのディールス・アルダー反応成分である。例示的なクリック反応パートナーは、米国特許出願公開第２０１３０２６６５１２号及び国際公開第２０１５０７３７４６号に記載されており、両方のクリック反応パートナーについての関連する説明は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0096】

好ましい実施形態によれば、クリックケミストリー反応は、クリックケミストリー対又は反応パートナーとして、アジド基及びアルキン基、より好ましくは、歪みを有するアルキン基、例えば、シクロオクチン又はシクロオクチン誘導体などのシクロアルキンを利用する。特定の実施形態では、クリックケミストリー反応は、１，２，３－トリアゾールリンカーを形成するためのアジド（－Ｎ_３）とアルキン又はアルキン部分との間のヒュスゲン環化付加又は１，３－双極子環化付加である。アルキンとアジドとの間のクリックケミストリー反応は、典型的には、１，３－シクロ付加反応を促進するために銅触媒の添加を必要とし、銅触媒アジド－アルキンシクロ付加（ＣｕＡＡＣ）反応として知られている。しかしながら、シクロオクチン又はシクロオクチン誘導体とアジドとの間のクリックケミストリー反応は、典型的には銅触媒の添加を必要とせず、代わりに、歪み促進型（strain-promoted）アジド－アルキン付加環化反応（strain-promoted azide-alkyne cycloaddition、ＳＰＡＡＣ）を介して進行する（Ｄｅｂｅｔｓ，Ｍ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｔｒａｉｎｅｄａｌｋｅｎｅｓａｎｄａｌｋｙｎｅｓ．ＡｃｃＣｈｅｍＲｅｓ，２０１１．４４（９）：ｐ．８０５－１５）。

【0097】

本明細書で使用するとき、用語「標的化リガンド」は、選択された標的、例えば、抗原、細胞、細胞種、組織、器官、身体の領域又はコンパートメント（例えば、細胞、組織又は器官コンパートメント）に対する親和性を高める任意の分子を指す。標的化リガンドとしては、抗体又はその抗原結合フラグメント、小分子、アプタマー、ポリペプチド及びスキャフォルドタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、標的化リガンドは、ポリペプチド、より好ましくはその抗体若しくは抗原結合フラグメント、操作されたドメイン又はスキャフォルドタンパク質である。

【0098】

本明細書で使用するとき、用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合を介して連結された、天然に存在する構造変異体、及びそれらの合成非天然起源のアナログで構成されるポリマーを指す。用語「ポリペプチド」は、任意のサイズ、構造、又は機能のポリペプチドを指す。典型的には、ポリペプチドは、少なくとも３個のアミノ酸長である。ポリペプチドは、天然起源、組み換え型、若しくは合成型、又はこれらの任意の組み合わせであり得る。合成ポリペプチドは、例えば、自動ポリペプチド合成装置を使用して合成することができる。好ましい実施形態によれば、ポリペプチドは、抗体、好ましくはモノクローナル抗体、又はそのフラグメント、その抗原結合フラグメント等である。好ましい実施形態によれば、抗体又はそのフラグメントは、癌抗原に特異的である。他の実施形態によれば、ポリペプチドは、遺伝子操作されたドメイン又はスキャフォルドタンパク質である。

【0099】

本明細書で使用する場合、用語「抗体」又は「免疫グロブリン」は広い意味で用いられ、ポリクローナル抗体を含む免疫グロブリン又は抗体分子、マウス、ヒト、ヒト適合、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体、並びにそれらの抗原結合フラグメントを含むモノクローナル抗体を含む。

【0100】

一般に、抗体は、特定の抗原に対して結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖であり、本明細書では「標的」と称する。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。したがって、本発明で使用される抗体は、５つの主要なクラス又は対応するサブクラスのいずれかのものであり得る。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。特定の実施形態によれば、本発明で使用される抗体としては、マウス抗体又はヒト抗体の重鎖及び／又は軽鎖定常領域が挙げられる。４つのＩｇＧサブクラスのそれぞれは、エフェクター機能として既知の異なる生物学的機能を有する。これらのエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用によって、又はＣ１ｑの結合及び補体の固定によって媒介される。ＦｃγＲへの結合は、抗体依存性細胞媒介性細胞溶解をもたらし得るが、補体因子への結合は、補体媒介性細胞溶解をもたらし得る。本発明に有用な抗体は、エフェクター機能を有さないか又は最小であってもよいが、ＦｃＲｎに結合するその能力を保持する。

【0101】

本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ若しくは２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異的抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントなどの抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメントが結合する同じ抗原に結合することができる。本明細書で使用するとき、用語「単鎖抗体」は、約１５～約２０個のアミノ酸の短いペプチドによって接続される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、この分野における従来の単鎖抗体を指す。本明細書で使用するとき、用語「単一ドメイン抗体」は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むか、又は重鎖可変領域のみを含む、この分野における従来の単一ドメイン抗体を指す。

【0102】

本明細書で使用するとき、用語「スキャフォルド」又は「スキャフォルドタンパク質」は、標的結合ドメインを有し、標的に結合することができる任意のタンパク質を指す。スキャフォルドは、大部分が構造的である「フレームワーク」と、標的と接触して特異的結合を提供する「結合ドメイン」と、を含む。スキャフォルドの結合ドメインは、スキャフォルドの１つの連続配列によって定義される必要はない。特定の場合、スキャフォルドは、より大きい結合タンパク質の一部であってもよく、それ自体は、複数のスキャフォルドを含む多量体結合タンパク質の一部であってもよい。特定の結合タンパク質は、２つ又はそれ以上の異なるエピトープに結合することができるという点で、二重特異性又は多重特異性であってもよい。スキャフォルドは、単鎖抗体由来であってもよく、又はスキャフォルドは抗体由来でなくてもよい。

【0103】

本明細書で使用するとき、用語「アプタマー」は、高親和性でその標的に特異的に結合することができる一本鎖オリゴヌクレオチド（一本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）を指す。アプタマーは、様々な有機及び無機物質を標的化する分子として使用することができる。

【0104】

本明細書で使用するとき、用語「小分子リガンド」は、低分子量有機化合物を指す。本明細書で使用するとき、小分子リガンドは、約１０００ダルトン未満のサイズを有する化合物を指すことができ、実験室で合成され得るか、又は天然に見られ得る化合物を指すことができる。

【0105】

キレータ：
一般的な一態様では、本発明は、キレータ、好ましくは、放射性金属が配位結合によりキレート化されるキレータに関する。本発明の実施形態によれば、キレータは、式（Ｉ）の構造を有し、

【0106】

【化13】

式中、
環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールであり、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で任意選択で置換され、
Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４又は５であり、
各ｍは、独立して、１、２、３、４又は５であり、
各ｐは、独立して、０又は１であり、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、
各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルであり、
Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７の各々は、独立して、水素、アルキル又はＸであるか、
あるいは、Ｒ_１４及びＲ_１５並びに／又はＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｘで任意選択で置換された５員又は６員のシクロアルキル環を形成し、
但し、キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｘが環Ａ又は環Ｂ上に存在する場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない。

【0107】

本発明の実施形態によれば、キレータは、少なくとも１つのＸ基を含み、Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、式中、Ｌ_１は存在しないか、又はリンカーであり、Ｒ_１１は、求電子性部分若しくは求核性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含む。Ｒ_１１が求核性又は求電子性部分である場合、そのような部分は、リンカーを介して直接的又は間接的にキレータを標的化リガンドに結合するのに使用することができる。

【0108】

特定の実施形態では、キレータは、単一のＸ基を含み、好ましくは、Ｘ基のＬ_１はリンカーである。

【0109】

本発明のキレータは、大員環の炭素原子のいずれか１つ、Ｚ_１若しくはＺ_２位置、又は環Ａ若しくは環Ｂ上においてＸで置換することができ、但し、環又は環ＢがＸ基を含む場合、Ｌ_１は、リンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つは、水素ではない（すなわち、Ｚ_１、Ｚ_２の炭素原子及び／又は大員環の炭素のうちの少なくとも１つは、例えば、メチル又はエチルなどのアルキル基で置換される）。好ましくは、そのような位置での置換は、放射性金属イオン、特に^２２５Ａｃのキレータのキレート化効率に影響を及ぼさず、いくつかの実施形態では、置換はキレート化効率を高めることができる。

【0110】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、存在しない。Ｌ_１が存在しない場合、Ｒ_１１は、キレータに（例えば、共有結合を介して）直接結合される。

【0111】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、リンカーである。本明細書で使用するとき、用語「リンカー」は、キレータを求核性部分、求電子性部分又は標的化リガンドに結合させる化学部分を指す。本開示を考慮して当業者に既知の任意の好適なリンカーを本発明で使用することができる。リンカーは、例えば、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル部分、置換若しくは非置換アリール若しくはヘテロアリール、ポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）リンカー、ペプチドリンカー、糖ベースのリンカー、又は切断可能なリンカー、例えば、ジスルフィド結合又はプロテアーゼ切断部位、例えば、バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジル（p-aminobenzyl、ＰＡＢ）を含むことができる。本発明での使用に好適な例示的なリンカー構造としては、

【0112】

【化14】

が挙げられるが、これらに限定されず、式中、Ｎは０～１０の整数、好ましくは１～４の整数であり、ｍは０～１２の整数、好ましくは０～６の整数である。

【0113】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、求核性部分又は求電子性部分である。「求核性部分」又は「求核基」は、化学反応において共有結合を形成するために電子対を供与する官能基を指す。「求電子性部分」又は「求電子基」は、化学反応において共有結合を形成するために電子対を受容する官能基を指す。求核基は、化学反応において、新たな共有結合を形成するために求電子基と反応し、その逆もしかりである。本発明のキレータの求核基又は求電子基を標的化リガンド又は対応する反応パートナーを含む他の化学部分（例えば、リンカー）と反応させることにより、標的化リガンド又は化学部分を本発明のキレータに共有結合させることが可能となる。

【0114】

求核基の例示としては、アジド、アミン及びチオールが挙げられるが、これらに限定されない。求電子基の例示としては、アミン反応性基、チオール反応基、アルキニル及びシクロアルキニルが挙げられるが、これらに限定されない。アミン反応性基は、好ましくは、各ポリペプチド鎖のＮ末端及びリジン残基の側鎖に存在する第一級アミンを含む、第一級アミンと反応する。本発明での使用に好適なアミン反応性基の例としては、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（N-hydroxy succinimide、ＮＨＳ）、置換ＮＨＳ（スルホ－ＮＨＳなど）、イソチオシアネート（－ＮＣＳ）、イソシアネート（－ＮＣＯ）、エステル、カルボン酸、ハロゲン化アシル、アミド、アルキルアミド、並びにテトラフルオロフェニルエステル及びパーフルオロフェニルエステルが挙げられるが、これらに限定されない。チオール反応性基は、チオール又はスルフヒドリルと反応し、好ましくは、ポリペプチドのシステイン残基の側鎖に存在するチオールと反応する。本発明での使用に好適なチオール反応性基の例としては、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、ハロアセチル、ハロゲン化アシル、活性化ジスルフィド及びフェニルオキサジアゾールスルホンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0115】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、－ＮＨ_２、－ＮＣＳ（イソチオシアネート）、－ＮＣＯ（イソシアネート）、－Ｎ_３（アジド）、アルキニル、シクロアルキニル、カルボン酸、エステル、アミド、アルキルアミド、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン又はトランス－シクロオクテンであり、より具体的には、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ_３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ_１３、－ＣＯＯＲ_１３、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、マレイミド、ハロゲン化アシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｃｌ、－Ｃ（Ｏ）Ｂｒ）、テトラジン、又はトランスシクロオクテンであり、式中、各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルである。

【0116】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、アルキニル基、シクロアルキニル基又はアジド基であり、これにより、クリックケミストリー反応を用いて、キレータを標的化リガンド又は他の化学部分（例えば、リンカー）に結合させることが可能となる。そのような実施形態では、実施することができるクリックケミストリー反応は、１，２，４－トリアゾールリンカー又は部分を形成するためのアジド（－Ｎ_３）とアルキニル基又はシクロアルキニル基との間のヒュスゲン環化付加又は１，３－双極子環化付加である。一実施形態では、キレータはアルキニル基又はシクロアルキニル基を含み、標的化リガンド又は他の化学部分はアジド基を含む。別の実施形態では、キレータはアジド基を含み、標的化リガンド又は他の化学部分は、アルキニル基又はシクロアルキニル基を含む。

【0117】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、アルキニル基であり、より好ましくは、特に、歪み促進型アジド－アルキンシクロ環化付加（ＳＰＡＡＣ）によりアジド基と反応性である末端アルキニル基又はシクロアルキニル基である。ＳＰＡＡＣによりアジド基と反応することができるシクロアルキニル基の例としては、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0118】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、以下の構造を有するジベンゾアザシクロオクチニル（dibenzoazacyclooctynyl、ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）である。

【0119】

【化15】

【0120】

Ｒ_１１がＤＢＣＯであるそのような実施形態では、ＤＢＣＯは、リンカーを介して直接的又は間接的にキレータに共有結合することができ、好ましくは、リンカーを介して間接的にキレータに結合される。

【0121】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、標的化リガンドを含む。標的化リガンドは、共有結合により直接的に又はリンカーを介して間接的にキレータに結合することができる。標的化リガンドは、ポリペプチド、例えば、抗体若しくはその抗原結合フラグメント、小分子、アプタマー又はスキャフォルドタンパク質などであり得る。好ましい実施形態では、標的化リガンドは、抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＢＣＭＡ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７９ｂ又はネクチン－４であり得る癌抗原などの腫瘍性疾患又は障害に関連する抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）又はその抗原結合フラグメントである。

【0122】

本発明の実施形態によれば、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールである。代替的な実施形態では、環Ａ及び環Ｂの各々は、任意選択で置換されたヘテロシクリル環、例えば、オキサゾリンであることが企図される。環Ａ及び環Ｂの各々は、任意選択でかつ独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で置換され得る。この目的に好適な６～１０員のアリール基の例としては、フェニル及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。この目的に好適な５～１０員のヘテロアリール基の例としては、ピリジニル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル及びイミダゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。５～１０員のヘテロアリール及び６～１０員のアリール基の好適な置換基の例としては、－ＣＯＯＨ、テトラゾリル及び－ＣＨ_２ＣＯＯＨが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、置換基は、－ＣＯＯＨ、又は－ＣＯＯＨのアイソスターであるテトラゾリルである。

【0123】

特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立してかつ任意選択で－ＣＯＯＨ及び－ＣＨ_２ＣＯＯＨを含むがこれらに限定されない１つ又は２つ以上のカルボキシル基で置換される。

【0124】

特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立してかつ任意選択でテトラゾリルで置換されている。

【0125】

一実施形態では、環Ａ及び環Ｂは同じであり、例えば、環Ａ及び環Ｂの両方がピリジニルである。別の実施形態では、環Ａ及び環Ｂは異なり、例えば、環Ａ及び環のうちの１つがピリジニルであり、他方がフェニルである。

【0126】

特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの両方は、－ＣＯＯＨで置換されたピリジニルである。

【0127】

特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの両方は、テトラゾリルで置換されたピリジニルである。

【0128】

別の特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの両方は、以下の構造を有するピコリン酸基である。

【0129】

【化16】

【0130】

本発明の実施形態によれば、Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、各Ｒ_１２は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル又はヘテロアリールであり、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、又は５であり、各ｍは、独立して、１、２、３、４、又は５である。

【0131】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１２は、独立して、水素又はアルキル、より好ましくは水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0132】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１２は、水素である。

【0133】

いくつかの実施形態では、Ｚ_１及びＺ_２の両方が－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、式中、各ｍは好ましくは１である。そのような実施形態では、大員環、環Ａ又は環Ｂの炭素原子は、Ｘ基で置換される。

【0134】

いくつかの実施形態では、Ｚ_１及びＺ_２のうちの１つは、－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、他方が－（ＣＨ_２）_ｍ－である。

【0135】

いくつかの実施形態では、Ｚ_１及びＺ_２のうちの１つが－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、他方が－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、各ｎは、０であり、ｍは、１であり、Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、Ｌ_１は、リンカーである。

【0136】

いくつかの実施形態では、Ｚ_１及びＺ_２の両方が、－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、各ｍは、独立して、０、１、２、３、４、又は５であり、好ましくは、各ｍは１であり、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７のうちの１つはＸであり、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６及びＲ_１７のうちの残りはそれぞれ水素である。

【0137】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１４及びＲ_１５は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員のシクロアルキル環（すなわち、シクロペンチル又はシクロヘキシル）を形成する。そのような５員又は６員のシクロアルキル環は、Ｘ基で置換することができる。

【0138】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員のシクロアルキル環（すなわち、シクロペンチル又はシクロヘキシル）を形成する。そのような５員又は６員のシクロアルキル環は、Ｘ基で置換することができる。

【0139】

特定の実施形態では、キレータは、式（ＩＩ）の構造を有し、

【0140】

【化17】

【0141】

いくつかの実施形態では、任意の２つの直接隣接するＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０は、それらが結合している原子と一緒になって、５員又は６員の置換又は非置換炭素環又は窒素含有環を形成する。形成することができるそのような炭素環の例としては、ナフチルが挙げられるが、これに限定されない。形成することができるそのような窒素含有環の例としては、キノリニルが挙げられるが、これに限定されない。炭素環又は窒素含有環は、非置換であってもよく、又は１つ若しくは２つ以上の好適な置換基、例えば、－ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、テトラゾリルなどで置換されてもよい。

【0142】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、存在しない。Ｌ_１が存在しない場合、Ｒ_１１は、キレータに（例えば、共有結合を介して）直接結合される。

【0143】

いくつかの実施形態では、Ｌ_１は、リンカーである。上記のものなどの、本開示を考慮して当業者に既知の任意の好適なリンカーを本発明で使用することができる。

【0144】

いくつかの実施形態では、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの１つは窒素であり、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの１つは、－ＣＯＯＨで置換された炭素であり、残りはＣＨであり、すなわち、カルボン酸で置換されたピリジニル環を形成する。

【0145】

いくつかの実施形態では、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの１つは窒素であり、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの１つは、－ＣＯＯＨで置換された炭素であり、残りはＣＨであり、すなわち、カルボン酸で置換されたピリジニル環を形成する。

【0146】

一実施形態では、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５のうちの少なくとも１つは－ＣＯＯＨである。一実施形態では、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちの少なくとも１つは－ＣＯＯＨである。別の実施形態では、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５のうちの少なくとも１つは－ＣＯＯＨであり、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちの少なくとも１つは－ＣＯＯＨである。

【0147】

いくつかの実施形態では、Ａ_１及びＡ_１０の各々は、窒素であり、Ａ_２はＣＲ_２であり、Ｒ_２は－ＣＯＯＨであり、
Ａ_９はＣＲ_９であり、Ｒ_９は－ＣＯＯＨであり、Ａ_３～Ａ_８の各々は、それぞれＣＲ_２、ＣＲ_３、ＣＲ_４、ＣＲ_５、ＣＲ_６、ＣＲ_７及びＣＲ_８であり、Ｒ_３～Ｒ_８の各々は水素である。

【0148】

いくつかの実施形態では、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの１つは窒素であり、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４及びＡ_５のうちの１つはテトラゾリルで置換された炭素であり、残りはＣＨである。

【0149】

いくつかの実施形態では、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの１つは窒素であり、Ａ_６、Ａ_７、Ａ_８、Ａ_９及びＡ_１０のうちの１つはテトラゾリルで置換された炭素であり、残りはＣＨである。

【0150】

一実施形態では、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５のうちの少なくとも１つはテトラゾリルである。一実施形態では、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちの少なくとも１つはテトラゾリルである。別の実施形態では、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５のうちの少なくとも１つはテトラゾリルであり、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１０のうちの少なくとも１つはテトラゾリルである。

【0151】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１２は、水素である。

【0152】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、アルキニル基又はシクロアルキニル基、好ましくはシクロオクチニル又はシクロオクチニル誘導体、例えばＤＢＣＯである。

【0153】

式（ＩＩ）のキレータの特定の実施形態では、
Ａ_１及びＡ_１０の各々は、窒素であり、
Ａ_２はＣＲ_２であり、Ｒ_２は－ＣＯＯＨであり、
Ａ_９はＣＲ_９であり、Ｒ_９は－ＣＯＯＨであり、
Ａ_３～Ａ_８の各々は、それぞれＣＲ_２、ＣＲ_３、ＣＲ_４、ＣＲ_５、ＣＲ_６、ＣＲ_７及びＣＲ_８であり、
Ｒ_３～Ｒ_８の各々は、水素であり、
Ｚ_１及びＺ_２のうちの１つは－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、Ｚ_１及びＺ_２のうちの他方は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
Ｒ_１２は、水素であり、
ｍは、１であり、
各ｎは、０であり、
Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、式中、Ｌ_１はリンカーであり、－Ｒ_１１は、求電子基、例えば、シクロオクチニル、又はＤＢＣＯなどのシクロオクチニル誘導体であり、
Ｒ_１４～Ｒ_１７の各々は、水素であるか、あるいはＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって５員又は６員のシクロアルキル環を形成する。

【0154】

特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＩＩ）の構造を有し、

【0155】

【化18】

式中、
各Ａ_１１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ又はＮＨであり、
各Ｒ_１８は、独立して、水素、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－ＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及び－Ｘからなる群から選択され、
Ｚ_１、Ｚ_２、Ｘ、ｎ、ｍ、Ｌ_１、Ｒ_１１－Ｒ_１７は、式（Ｉ）について上述したとおりであり、
但し、キレータは少なくとも１つのＸを含み、Ｒ_１８がＸである場合、Ｌ_１はリンカーであるか、又はＲ_１２及びＲ_１４～Ｒ_１７のうちの少なくとも１つが水素ではない。

【0156】

いくつかの実施形態では、各Ａ_１１は同じであり、各Ａ_１１は、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ又はＮＨである。例えば、各Ａ_１１は、Ｓであり得る。他の実施形態では、各Ａ_１１は異なっており、各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＭｅ及びＮＨから選択される。

【0157】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、独立して、－（ＣＨ_２）_ｐ－ＣＯＯＲ_１３又はテトラゾリルであり、式中、Ｒ_１３は水素であり、各ｐは独立して０又は１である。

【0158】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、－ＣＯＯＨである。

【0159】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、－ＣＨ_２ＣＯＯＨである。

【0160】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、テトラゾリルである。

【0161】

式（ＩＩＩ）のキレータの特定の実施形態では、
各Ｒ_１８は、ＣＯＯＨであり、
Ｚ_１及びＺ_２のうちの１つは－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、Ｚ_１及びＺ_２のうちの他方は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
Ｒ_１２は、水素であり、
ｍは、１であり、各ｎは、０であり、
Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、式中、Ｌ_１はリンカーであり、－Ｒ_１１は、求電子基、例えば、シクロオクチニル、又はＤＢＣＯ若しくはＢＣＮなどのシクロオクチニル誘導体であり、
Ｒ_１４～Ｒ_１７の各々は、水素であるか、あるいはＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって５員又は６員のシクロアルキル環を形成する。

【0162】

本発明の特定の実施形態は、以下からなる群より選択されるキレータであり、

【0163】

【化19】

式中、
Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0164】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、－ＮＨ_２、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ_３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ_１３、－ＣＯＯＲ_１３、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン又はトランス－シクロオクテンである。

【0165】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）、及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である。

【0166】

好ましくは、Ｒ_１１は、アルキニル基又はシクロアルキニル基であり、より好ましくはシクロアルキニル基、例えば、ＤＢＣＯ又はＢＣＮである。

【0167】

本発明における例示的なキレータとしては、

【0168】

【化20】

【0169】

【化21】

が挙げられるが、これらに限定されない。

【0170】

以下により詳細に記載されるクリックケミストリー反応により、キレータをアジド標識標的化リガンドと反応させて１，２，３－トリアゾールリンカーを形成することによって、そのようなキレータは、標的化リガンド（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）に共有結合して、免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートを形成することができる。

【0171】

本発明のキレータは、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって製造することができる。例えば、ペンダント芳香族／複素芳香族基は、以下に例示及び記載されるものなどの当該技術分野で既知の方法によって、大員環部分に結合することができる。

【0172】

放射性金属錯体
別の一般的な態様では、本発明は、配位結合により本発明のキレータに配位された放射性金属イオンを含む放射性金属錯体に関する。本明細書に記載される本発明のキレータのいずれも、放射性金属イオンを含むことができる。好ましくは、放射性金属イオンは、α線放出放射性金属イオン、より好ましくは^２２５Ａｃである。本発明のキレータは、金属不純物に関係なく、任意の比活性で、放射性金属イオン、特に^２２５Ａｃを堅固にキレート化することができ、したがって、インビボ及びインビトロで高いキレート安定性を有し、かつ、負荷剤（challenge agent）、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（diethylene triamine pentaacetic acid、ＤＴＰＡ）に対して安定である放射性金属錯体を形成する。

【0173】

本発明の実施形態によれば、放射性金属錯体は、式（Ｉ－ｍ）の構造を有し、

【0174】

【化22】

式中、可変基は、本発明のキレータ、例えば、式（Ｉ）のキレータにおいて上記で定義したとおりであり、Ｍは、放射性金属イオンである。放射性金属イオンＭは、配位結合によりキレータに結合して、放射性金属錯体を形成する。キレータの大員環のヘテロ原子及びペンダントアーム（すなわち、－Ｚ_１－環Ａ及び／又は－Ｚ_２－環Ｂ）の任意の官能基は、放射性金属イオンの配位結合に関与し得る。

【0175】

上記の式（Ｉ）のキレータのいずれかを使用して、式（Ｉ－ｍ）の放射性金属錯体を形成することができる。

【0176】

特定の実施形態では、放射性金属イオンＭは、α線放出放射性金属イオンである。好ましくは、α線放出放射性金属イオンは、^２２５Ａｃである。

【0177】

本発明の実施形態によれば、放射性金属錯体は、少なくとも１つのＸ基を含み、Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、式中、Ｌ_１は存在しないか、又はリンカーであり、Ｒ_１１は求電子性部分若しくは求核性部分であるか、又はＲ_１１は標的化リガンドを含む。Ｒ_１１が求核性又は求電子性部分である場合、そのような部分は、リンカーを介して直接的又は間接的に放射性金属錯体を標的化リガンドに結合するのに使用することができる。

【0178】

特定の実施形態では、放射性金属は、単一のＸ基を含み、好ましくは、Ｘ基のＬ_１はリンカーである。

【0179】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、－ＮＨ_２、－ＮＣＳ（イソチオシアネート）、－ＮＣＯ（イソシアネート）、－Ｎ_３（アジド）、アルキニル、シクロアルキニル、カルボン酸、エステル、アミド、アルキルアミド、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン又はトランス－シクロオクテンであり、より具体的には、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ_３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ_１３、－ＣＯＯＲ_１３、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、マレイミド又はハロゲン化アシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｃｌ又は－Ｃ（Ｏ）Ｂｒ）であり、式中、各Ｒ_１３は、独立して、水素又はアルキルである。

【0180】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１１は、アルキニル基、シクロアルキニル基又はアジド基であり、これにより、クリックケミストリー反応を用いて、キレータを標的化リガンド又は他の化学部分（例えば、リンカー）に結合させることが可能となる。

【0181】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、アルキニル基であり、より好ましくは、特に歪み促進型アジド－アルキンシクロ付加環化（ＳＰＡＡＣ）によりアジド基と反応性である、末端アルキニル基又はシクロアルキニル基である。ＳＰＡＡＣによりアジド基と反応することができるシクロアルキニル基の例としては、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0182】

特定の実施形態では、Ｒ_１１は、以下の構造を有するジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）である。

【0183】

【化23】

【0184】

【0185】

別の特定の実施形態では、Ｒ_１１は、ビクロノニル（ＢＣＮ）である。

【0186】

本発明の実施形態によれば、環Ａ及び環Ｂの各々は、独立して、６～１０員のアリール又は５～１０員のヘテロアリールである。代替的な実施形態では、環Ａ及び環Ｂの各々は、任意選択で置換されたヘテロシクリル環、例えば、オキサゾリンであることが企図される。環Ａ及び環Ｂの各々は、任意選択でかつ独立して、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－ＯＲ_１３、－ＳＲ_１３、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＲ_１３、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１３、－Ｎ（Ｒ_１３）_２、－ＣＯＮ（Ｒ_１３）_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１３）_２及びＸからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で置換され得る。この目的に好適な６～１０員のアリール基の例としては、フェニル及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。この目的に好適な５～１０員のヘテロアリール基の例としては、ピリジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル及びイミダゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。５～１０員のヘテロアリール及び６～１０員のアリール基の好適な置換基の例としては、－ＣＯＯＨ、テトラゾリル及び－ＣＨ_２ＣＯＯＨが挙げられるが、これらに限定されない。

【0187】

【0188】

【0189】

特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの両方は、－ＣＯＯＨで置換されたピリジニルである。

【0190】

特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの両方は、テトラゾリルで置換されたピリジニルである。

【0191】

別の特定の実施形態では、環Ａ及び環Ｂの両方は、以下の構造を有するピコリン酸基である。

【0192】

【化24】

【0193】

本発明の実施形態によれば、Ｚ_１及びＺ_２の各々は、独立して、－（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ－又は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、各Ｘは、独立して、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、又は５であり、各ｍは、独立して、１、２、３、４、又は５である。

【0194】

【0195】

【0196】

【0197】

【0198】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１４及びＲ_１５は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員のシクロアルキル環（例えば、シクロペンチル又はシクロヘキシル）を形成する。そのような５員又は６員のシクロアルキル環は、Ｘ基で置換することができる。

【0199】

いくつかの実施形態ではＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員のシクロアルキル環（例えば、シクロペンチル又はシクロヘキシル）を形成する。そのような５員又は６員のシクロアルキル環は、Ｘ基で置換することができる。

【0200】

特定の実施形態では、放射性金属錯体は、式（ＩＩ－ｍ）の構造を有し、

【0201】

【化25】

式中、可変基は、本発明のキレータ、例えば、式（ＩＩ）のキレータにおいて上記で定義したとおりであり、Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは^２２５Ａｃである。

【0202】

上記の式（ＩＩ）のキレータのいずれかを使用して、式（ＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体を形成することができる。

【0203】

【0204】

【0205】

【0206】

【0207】

【0208】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１２は、水素である。

【0209】

【0210】

式（ＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体の特定の実施形態では、
Ｍは、^２２５Ａｃであり、
Ａ_１及びＡ_１０の各々は、窒素であり、
Ａ_２はＣＲ_２であり、Ｒ_２は－ＣＯＯＨであり、
Ａ_９はＣＲ_９であり、Ｒ_９は－ＣＯＯＨであり、
Ａ_３～Ａ_８の各々は、それぞれＣＲ_２、ＣＲ_３、ＣＲ_４、ＣＲ_５、ＣＲ_６、ＣＲ_７及びＣＲ_８であり、
Ｒ_３～Ｒ_８の各々は、水素であり、
Ｚ_１及びＺ_２のうちの１つは－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、Ｚ_１及びＺ_２のうちの他方は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
Ｒ_１２は、水素であり、
ｍは、１であり、
各ｎは、０であり、
Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、式中、Ｌ_１はリンカーであり、－Ｒ_１１は、求電子基、例えば、シクロオクチニル、又はＤＢＣＯなどのシクロオクチニル誘導体であり、
Ｒ_１４～Ｒ_１７の各々は、水素であるか、あるいはＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって５員又は６員のシクロアルキル環を形成する。

【0211】

特定の実施形態では、放射性金属錯体は、式（ＩＩＩ－ｍ）の構造を有し、

【0212】

【化26】

式中、可変基は、本発明のキレータ、例えば、式（ＩＩＩ）のキレータにおいて上記で定義したとおりであり、Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは^２２５Ａｃである。

【0213】

上記の式（ＩＩＩ）のキレータのいずれかを使用して、式（ＩＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体を形成することができる。

【0214】

【0215】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、独立して、－（ＣＨ_２）_ｐ－ＣＯＯＲ_１３であり、式中、Ｒ_１３は水素であり、各ｐは独立して０又は１である。

【0216】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、－ＣＯＯＨである。

【0217】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、－ＣＨ_２ＣＯＯＨである。

【0218】

いくつかの実施形態では、各Ｒ_１８は、テトラゾリルである。

【0219】

式（ＩＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体の特定の実施形態では、
各Ｒ_１８は、ＣＯＯＨであり、
Ｚ_１及びＺ_２のうちの１つは－（ＣＨ_２）_ｍ－であり、Ｚ_１及びＺ_２のうちの他方は－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｃ（Ｒ_１２）（Ｘ）－（ＣＨ_２）_ｎ－であり、
Ｒ_１２は、水素であり、
ｍは、１であり、各ｎは、０であり、
Ｘは、－Ｌ_１－Ｒ_１１であり、式中、Ｌ_１はリンカーであり、－Ｒ_１１は、求電子基、例えば、シクロオクチニル、又はＤＢＣＯなどのシクロオクチニル誘導体であり、
Ｒ_１４～Ｒ_１７の各々は、水素であるか、あるいはＲ_１６及びＲ_１７は、それらが結合している炭素原子と一緒になって５員又は６員のシクロアルキル環を形成する。

【0220】

本発明の特定の実施形態では、放射性金属錯体は、以下の構造のうちの１つを有し、

【0221】

【化27】

式中、
Ｍは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、Ｌ_１は存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ_１１は、求核性部分若しくは求電子性部分であるか、又はＲ_１１は、標的化リガンドを含み、
各Ｒ_１２は、独立して、水素、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、但し、少なくとも１つのＲ_１２は、－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３である。

【0222】

放射性金属錯体は、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって製造することができる。例えば、本発明のキレータを、放射性金属イオンと混合することができ、混合物をインキュベートして、放射性金属錯体を形成することができる。例示的な実施形態では、キレータを^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３の溶液と混合して、配位結合によりキレータに結合した^２２５Ａｃを含む放射性錯体を形成する。上記のように、本発明のキレータは、放射性金属、特に^２２５Ａｃを効率的にキレート化する。したがって、特定の実施形態では、本発明のキレータは、１：１０００、１：５００、１：４００、１：３００、１：２００、１：１００、１：５０、１：１０、又は１：５、好ましくは１：５～１：２００、より好ましくは１：５～１：１００のキレータと^２２５Ａｃイオンとの濃度比で、^２２５Ａｃイオンの溶液と混合される。したがって、いくつかの実施形態では、放射性金属錯体を形成するために使用できる本発明のキレータと^２２５Ａｃとの比は、他の既知の^２２５Ａｃキレータ、例えば、ＤＯＴＡで達成できる比よりもはるかに低い。放射性錯体は、インスタント薄層クロマトグラフィー（例えば、ｉＴＬＣ－ＳＧ）、ＨＰＬＣ、ＬＣ－ＭＳなどによって特徴付けることができる。例示的な方法は、本明細書中に、例えば以下の実施例に記載される。

【0223】

免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲート
別の一般的な態様では、本発明は、免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートに関する。本発明のキレータ及び放射性金属錯体は、免疫物質などの標的化リガンドにコンジュゲートさせて（すなわち、共有結合させて）、標的化放射線治療などの対象における医療用途に好適な免疫コンジュゲート及び／又は放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。本発明のキレータ及び放射性金属錯体を使用して、標的化リガンド、特に、目的の標的（癌細胞など）に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合フラグメントを放射線金属イオンで特異的に標識して、放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。具体的には、本発明のキレータ及び／又は放射性金属錯体を使用して、放射性金属イオン、特に^２２５Ａｃの高収率キレート化及び所望のキレータ－抗体比（ＣＡＲ）を有する放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。特定の実施形態によれば、本発明の方法は、１０未満、８未満、６未満、若しくは４未満の平均ＣＡＲ、又は約２～約８、若しくは約２～約６、若しくは約２～約４、若しくは約２～約３のＣＡＲ、又は約２、若しくは約３、若しくは約４、若しくは約５、若しくは約６、若しくは約７、若しくは約８のＣＡＲを提供する。

【0224】

本明細書で使用するとき、「免疫コンジュゲート」は、毒素、薬物、放射性金属イオン、キレータ、放射性金属錯体などの第２の分子にコンジュゲートされた（例えば、共有結合により結合された）抗体又はその抗原結合フラグメントである。「放射性免疫コンジュゲート」は、特に、抗体又はその抗原結合フラグメントが、放射性金属で標識された又は放射性金属錯体にコンジュゲートされた免疫コンジュゲートである。

【0225】

本発明の実施形態によれば、免疫コンジュゲートは、抗体又はその抗原結合フラグメントに、好ましくはリンカーを介して共有結合した、本発明のキレータ、例えば、本明細書に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（ＩＩＩ）のキレータを含む。キレータと抗体又はその抗原結合フラグメントとの間の異なる結合を有する多くの結合形態が、キレータ及び抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性官能基（すなわち、求核性及び求電子性）に応じて可能である。

【0226】

本発明の実施形態によれば、放射性免疫コンジュゲートは、本発明の放射性金属錯体、例えば、本明細書に記載される式（Ｉ－ｍ）、式（ＩＩ－ｍ）又は式（ＩＩＩ－ｍ）の放射性金属錯体を含み、好ましくはリンカーを介して、抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合されている。

【0227】

本明細書に記載されるものなどの本発明のキレータ又は放射性金属錯体のいずれかを使用して、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。

【0228】

いくつかの実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲートの放射性金属錯体は、放射性錯体のキレート部分に配位されたα線放出放射性金属イオンを含む。好ましくは、α線放出放射性金属イオンは^２２５Ａｃである。

【0229】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、トリアゾール部分を介して放射性錯体に結合し、本発明の放射性免疫コンジュゲートを形成する。

【0230】

特定の実施形態では、本出願の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲート中の抗体又は抗原結合フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合することができる。好ましくは、抗体又は抗原結合フラグメントは、癌抗原に特異的に結合する。癌抗原の例としては、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＢＣＭＡ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７９ｂ及びネクチン－４が挙げられるが、これらに限定されない。

【0231】

一実施形態では、抗体は、ＰＳＭＡに特異的に結合する。好ましくは、抗体はＰＳＭＢ１２７である。本明細書で「抗ＰＳＭＡｍＡｂ」と称され、「ＰＳＭＢ１２７」と表される、ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合するヒトＩｇＧ４抗体は、配列番号３の重鎖（heavy chain、ＨＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＣＤＲ２配列、配列番号５のＨＣＣＤＲ３配列、配列番号６の軽鎖（light chain、ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号７のＬＣＣＤＲ２配列及び配列番号８のＬＣＣＤＲ３配列を有し、かつ、配列番号９のＨＣ配列及び配列番号１０のＬＣ配列を有する。抗ＰＳＭＡｍＡｂを発現させ、標準クロマトグラフィー法を用いて精製した。抗体ＰＳＭＢ１２７、その生物学的活性、その使用又は他の関連情報は、例えば、米国特許出願公開第２０２０００２４３６０（Ａ１）号に記載されており、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0232】

別の実施形態では、抗体は、ヒトカリクレイン－２（ＫＬＫ２）に特異的に結合する。好ましくは、抗体はＨ１１Ｂ６である。Ｈ１１Ｂ６抗体、生物学的活性、使用又はその他関連情報は、米国特許第１０，１００，１２５号に記載されており、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるように、Ｈ１１Ｂ６抗体ポリペプチドは、配列番号１１及び配列番号１２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変領域、並びに配列番号１４及び配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域を含む。抗Ｈ１１Ｂ６抗体は、更に、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有するか、又は配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を有するか、あるいは配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を有することができる。

【0233】

市販の抗体であるトラスツズマブ（ハーセプチン）、セツキシマブ（アービタックス）、ペルツズマブ（パージェタ）及びパニツムマブ（ベクティビックス）をそれぞれＲｏｃｈｅ、Ｌｉｌｌｙ、Ｒｏｃｈｅ及びＡｍｇｅｎから購入した。トラスツズマブ及びペルツズマブは、ヒトＨｅｒ２に結合する。セツキシマブ及びパニツムマブは、ヒトＥＧＦＲに結合する。

【0234】

本発明の免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートは、化学的及び／又は酵素的方法を含む、リガンド、例えば抗体をキレータへのコンジュゲーションのための本開示を考慮して当技術分野で既知の任意の方法によって調製することができる。例えば、免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートは、活性化酸又はハロゲン化アシルからのエステル、チオエステル又はアミドの形成を含む、結合反応；求核置換反応（例えば、ハロゲン化環の求核置換又は歪みを有する環系の開環など）；アジド－アルキンヒュスゲン環化付加（例えば、１，２，３－トリアゾールリンカーを形成するためのアジドとアルキンとの間の１，３双極子環化付加）；チオリン付加反応；イミン形成；テトラジンとトランスシクロクテン（ＴＣＯ）との間のディールス・アルダー反応；及びマイケル付加（例えば、マレイミド付加）によって調製することができる。使用される反応性官能基に応じて、異なる結合を有する多くの他の付加様式が可能である。リガンドの結合は、放射性金属イオンに配位されているキレータ又は放射性金属イオンに配位されていないキレータに対して行うことができる。

【0235】

一実施形態によれば、本発明の放射性金属コンジュゲートは、例えばクリックケミストリー反応（例えば、図２Ｂ及び２Ｄを参照されたい、「クリック放射性標識化」と称する）によって、本発明の放射性金属錯体を抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合させることによって生成することができる。あるいは、放射性免疫コンジュゲートは、例えばクリックケミストリー反応によって、本発明のキレータを抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合させることによって、本発明の免疫コンジュゲートを最初に調製し、続いて、放射性免疫コンジュゲートを生成するために、免疫コンジュゲートを放射性金属イオンで標識化すること（例えば、図２Ａ及び２Ｃを参照されたい、「１工程直接放射性標識化」と称する）により、生成することができる。コンジュゲーションの残基特異的方法（例えば、図２Ａ及び２Ｂ）及び部位特異的方法（例えば、図２Ｃ及び図２Ｄ）の両方を、本発明の免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートを生成するために使用することができる。

【0236】

タンパク質へのコンジュゲーションのための残基特異的方法は十分に確立されており、最も一般的には、活性化エステル又はイソチオシアネートを使用したリシン側鎖、又はマレイミド、ハロアセチル誘導体又は活性化ジスルフィドを有するシステイン側鎖のいずれかを伴う（ＢｒｉｎｋｌｅｙＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ１９９２：２）。ほとんどのタンパク質は複数のリジン及びシステイン残基を有するため、様々なアミノ酸位置において異なる数のコンジュゲート分子を有する生成物の不均一な混合物は、典型的には、そのような方法を使用して得られる。チロシン特異的コンジュゲーション（Ｂａｎｅｔａｌ．ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２０１３：５２０）、メチオニン特異的方法（Ｌｉｎｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１７（３５５）５９７）、追加のシステインに焦点を当てたアプローチ（Ｔｏｄａｅｔａｌ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍｉｅ２０１３：１２５９２）などを含む、追加の方法が確立されている。

【0237】

より最近では、モノクローナル抗体及び他のタンパク質について、部位選択的及び部位特異的コンジュゲーション方法が確立されている（Ａｇａｒｗａｌ，Ｐ．ａｎｄＣ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇＣｈｅｍ，２０１５．２６（２）：ｐ．１７６－９２；Ｒａｂｕｋａｅｔａｌ．ＣｕｒｒＯｐｉｎＣｈｅｍＢｉｏｌ２０１０：７９０）。これらとしては、天然アミノ酸の組み込み；ＳＮＡＰ又はＤＨＦＲなどの「自己標識化タグ」又はソルターゼＡ、リポ酸リガーゼ及びホルミルグリシン生成酵素などの別の酵素によって特異的に認識及び修飾されるタグへの目的のタンパク質の融合；目的のペイロードのコンジュゲートを可能にするためのグリカンの酵素修飾（Ｈｕｅｔａｌ．ＣｈｅｍＳｏｃＲｅｖ２０１６：１６９１）；抗体上の定義された位置を選択的に認識するための微生物トランスグルタミナーゼの使用；並びに選択的コンジュゲートに影響を及ぼすための分子認識及び／又は化学的アプローチを使用する追加の方法（Ｙａｍａｄａｅｔａｌ．２０１９：５５９２；Ｐａｒｋｅｔａｌ．ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ２０１８：３２４０；Ｐｈａｍｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ２０１８：７９９）が挙げられる。

【0238】

いくつかの実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートは、本発明のキレータを抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせるための残基特異的方法を使用して生成される。そのような残基特異的方法により、典型的には、抗体の様々な位置においてキレータ又は放射性金属錯体に共有結合した免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートが得られる。本開示を考慮して当業者に既知のタンパク質又は抗体コンジュゲートを形成するための任意の残基特異的方法を使用することができる。使用することができるコンジュゲートのための残基特異的方法の例としては、例えば活性化エステル又はイソチオシアネート基を含むキレータ又は放射性金属錯体を使用して、キレータ又は放射性金属錯体を抗体のリシン残基にコンジュゲートすること、例えば、マレイミド、ハロアセチル誘導体、アシルハライド、活性化ジスルフィド基又はメチルスルホニルフェニルオキサジアゾール基を含むキレータ又は放射性金属錯体を使用して、抗体のシステイン残基にコンジュゲートすること例えば、４－フェニル－３Ｈ－１，２，４－トリアゾリン－３，５－（４Ｈ）－ジオン（ＰＴＡＤ）を含むキレータ又は放射性金属錯体を使用して、抗体のチロシン残基にコンジュゲートすること、例えばオキサジリジン誘導体を含むキレータ又は放射性金属錯体を使用して、抗体のメチオニン残基にコンジュゲートすることが挙げられるが、これらに限定されない。本発明のキレータ又は放射性金属錯体にコンジュゲートする前に、上記の方法のうちの１つ又は２つ以上を使用して、特異的な残基において、抗体を双直交（biorthogonal）反応性官能基で標識化することも可能である。例えば、双直交反応性官能基、例えば、アジド、アルキニル又はシクロアルキニルに結合されたオキサジリジン誘導体を使用して、チロシン残基を、双直交反応性官能基において部位特異的に標識化することができ、次いで、適合性の反応性官能基を有するキレータ又は放射性金属錯体を使用して、標識されたチロシン残基を含む抗体を、本発明のキレータ又は放射性金属錯体にコンジュゲートさせることができる。

【0239】

いくつかの実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートは、本発明のキレータを抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせるための部位特異的又は部位選択的方法を用いて生成される。残基特異的方法とは対照的に、「部位特異的」又は「部位選択的」方法により、典型的には、抗体の特定の位置においてキレータ又は放射性金属錯体に共有結合した免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートが得られる。本開示を考慮して当業者に既知のタンパク質又は抗体コンジュゲートを形成するための任意の部位特異的方法を使用することができる。例えば、目的の非天然アミノ酸を有するｔＲＮＡを選択的にアミノアクリレートすることができる変異アミノアシルｔ－ＲＮＡシンセターゼを使用して、非天然アミノ酸（例えば、アジドアミノ酸又はアルキニルアミノ酸）を抗体に特異的に組み込むことができる。次に、アンバーサプレッサーｔＲＮＡとともに変異アシル化ｔＲＮＡを使用して、アンバーナンセンスコドンに応答して、非天然アミノ酸をタンパク質に部位特異的に組み込むことができる。上記の方法のうちの１つ又は２つ以上によって特異的に標識された抗体は、続いて、適合性の反応性官能基を有する本発明のキレータ又は放射性金属錯体とコンジュゲートさせることができる。

【0240】

本発明の実施形態によれば、放射性免疫コンジュゲートの製造方法は、Ｒ_１１が求核性若しくは求電子性部分である本発明のキレータ又は放射性錯体を、抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は求核性部分若しくは求電子性部分を含む修飾された抗体若しくはその抗原結合フラグメントと反応させることを含む。

【0241】

一実施形態では、方法は、本発明のキレータを、抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は求核性官能基若しくは求電子性官能基を含む修飾された抗体若しくはその抗原結合フラグメントを反応させて、キレータと抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は修飾された抗体若しくは抗原結合フラグメントとの間に共有結合を有する免疫コンジュゲートを形成することと、放射性金属イオンが配位結合により免疫コンジュゲートのキレータに結合するように、免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させて、それにより、放射性免疫コンジュゲートを形成することと、を含む。この実施形態は、放射性金属を含む化学反応工程が１つしかないので、「１工程直接放射性標識化」方法（例えば、図２Ｃに概略的に示される）と称されてもよい。

【0242】

別の実施形態では、方法は、本発明の放射性錯体を、抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は求核性若しくは求電子性官能基を含む修飾された抗体若しくはその抗原結合フラグメントを反応させ、それにより、放射性免疫コンジュゲートを形成することを含む。この実施形態は、「クリック放射性標識化」方法（例えば、図２Ｄに概略的に示される）と称されてもよい。修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントは、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、上記の方法のうちの１つ又は２つ以上を使用して、特定の残基において、抗体を２つの直交性反応性官能基で標識化することによって、あるいは、上記の方法のうちの１つ又は２つ以上を使用して、非天然アミノ酸（例えば、アジドアミノ酸又はアルキニルアミノ酸）を抗体に特異的に組み込むことによって、生成することができる。標識化の程度（ＤＯＬ）は、置換度（ＤＯＳ）と称する場合もあり、非天然アミノ酸によって修飾された抗体などのバイオコンジュゲートを特徴付ける及び最適化するための特に有用なパラメータである。これは、タンパク質分子（抗体など）に結合した非天然アミノ酸の平均数として、又は標識／タンパク質の形態でのモル比として表される。ＤＯＬは、当該分野における任意の既知の方法により、標識抗体の吸収スペクトルから決定することができる。

【0243】

特定の実施形態では、本明細書に記載されるように、本発明の免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートは、クリックケミストリー反応を用いて調製される。例えば、本発明の放射性免疫コンジュゲートは、「クリック放射性標識化」と称するクリックケミストリー反応を使用して調製することができる（例えば、図２Ｂ及び２Ｄを参照）。クリック放射性標識化は、クリックケミストリー反応パートナー、好ましくはアジド及びアルキン（例えば、シクロオクチン又はシクロオクチン誘導体）を使用して、放射性錯体（キレータに結合した放射性金属イオン）と抗体又はその抗原結合フラグメントとの間にトリアゾール共有結合を形成する。抗体のクリック放射性標識化方法は、例えば、「ＲａｄｉｏｌａｂｅｌｉｎｇｏｆＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ」と題する国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／６５９１３号に記載されており、その関連する説明は参照により本明細書に組み込まれる。「１工程直接放射性標識化」と称する他の実施形態では、免疫コンジュゲートが、抗体又はその抗原結合フラグメントとキレータとの間のクリックケミストリー反応を使用して調製され、次いで、免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと接触させて、放射性免疫コンジュゲートを形成する（例えば、図２Ａ及び２Ｃを参照）。

【0244】

一実施形態によれば、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法は、放射性金属イオンを（例えば、配位結合により）本発明のキレータに結合することを含む。

【0245】

「１工程直接放射性標識化」方法の一実施形態は、免疫コンジュゲート（すなわち、ポリペプチド－キレータ錯体）を放射性金属イオンと接触させて、それにより放射性免疫コンジュゲートを形成することを含み、免疫コンジュゲートは本発明のキレータを含む、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法として記載し得る。特定の実施形態によれば、免疫コンジュゲートは、本発明のキレータとポリペプチドとの間のクリックケミストリー反応により形成されている。特定の実施形態によれば、放射性免疫コンジュゲートは、金属のない条件を用いずに（例えば、反応混合物から一般的な金属不純物を除去又は積極的に排除する任意の工程なしに）形成されている。これは、製造プロセスに重大な課題をもたらす鉄、亜鉛及び銅などの一般的な金属の競合的（非生産的）キレート化を回避するために、金属のない厳密な条件下で抗体を放射性標識化する必要がある特定の従来方法とは対照的である。

【0246】

特定の実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲートを調製する方法は、
（ｉ）第１のクリック反応パートナー（例えば、アジド基）に共有結合したポリペプチド（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）を提供することと、
（ｉｉ）第２のクリック反応パートナー（例えば、アルキニル基又はシクロアルキニル基）に共有結合した本発明のキレータを含むキレータ錯体を提供することと、
（ｉｉｉ）第１のクリック反応パートナー（例えば、アジド基）を第２のクリック反応パートナー（例えば、アルキニル基又はシクロアルキニル基）と反応させることを可能とする条件下で、修飾されたポリペプチドをキレータ錯体と接触させて、それよりポリペプチド－キレータ錯体（すなわち、免疫コンジュゲート）を形成することと、
（ｉｖ）ポリペプチド－キレータ錯体を放射性金属イオンと接触させて、それにより放射性免疫コンジュゲートを調製すること（放射性免疫コンジュゲートは、放射性金属イオンで標識化されたポリペプチド、例えば、配位結合によりキレータに結合したα線放出放射性金属イオンで標識化された修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを含む）と、を含む、「１工程直接放射性標識化」方法を含む。

【0247】

特定の実施形態によれば、工程（ｉｖ）は、金属のない条件下で実施される。

【0248】

別の実施形態では、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法は、
（ｉ）アジド基に共有結合した抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを提供することと、
（ｉｉ）配位結合によりキレータに結合したα線放出放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することであって、キレータが、アルキニル基又はシクロアルキニル基に共有結合している、提供することと、
（ｉｉｉ）アジド基がアルキニル基又はシクロアルキニル基と反応することを可能にする条件下で、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性錯体と接触させ、それにより、放射性免疫コンジュゲートを調製することと、を含む、「クリック放射性標識化」方法（例えば、図２Ｄに示される）を含む。

【0249】

クリックケミストリー反応を実施するための条件は、技術分野において知られており、本開示を考慮して当業者に既知のクリックケミストリー反応を実施するための任意の条件を本発明で使用することができる。条件の例としては、限定されないが、ｐＨ４～１０及び温度２０℃～７０℃において、１：１～１０００：１の比で、修飾ポリペプチド及び放射性錯体をインキュベートすることが挙げられる。

【0250】

上記のクリック放射性標識化方法は、低若しくは高ｐＨ及び／又は高温条件下での放射性金属イオンのキレート化を可能にして率を最大化し、これは、アルキン反応パートナーを不活性化するリスクなしに達成することができる。アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメントと放射性錯体との間の効率的なキレート化及び効率的なＳＰＡＡＣ反応により、アジド：抗体の低い比でも高い放射化学的収率で放射性免疫コンジュゲートを生成することが可能となる。微量金属を除外しなければならない唯一の工程は、キレート化部分に対する放射性金属イオンキレート化であり、抗体の生産、精製、及びコンジュゲーションの工程は、金属を含まない条件下で行われる必要はない。

【0251】

本発明のキレータ及び放射性金属錯体はまた、部位特異的放射性標識化ポリペプチド（例えば、抗体）の生成に使用することもできる。本明細書に記載のクリック放射性標識化方法は、アジド基を抗体上に部位特異的に導入するための確立された方法を利用することにより、放射性免疫コンジュゲートの部位特異的な生成を容易にする（Ｌｉ，Ｘ．，ｅｔａｌ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｗｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｓｔｈｒｏｕｇｈｇｌｙｃａｎｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇａｎｄｓｔｒａｉｎ－ｐｒｏｍｏｔｅｄａｚｉｄｅ－ａｌｋｙｎｅｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎｓ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄＥｎｇｌ，２０１４．５３（２８）：ｐ．７１７９－８２、Ｘｉａｏ，Ｈ．，ｅｔａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｕｎｎａｔｕｒａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｏｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｓ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄＥｎｇｌ，２０１３．５２（５２）：ｐ．１４０８０－３）。部位特異的方法でタンパク質又は抗体に分子を付着させる方法は、技術分野において知られており、当業者に既知の抗体を部位特異的に標識する任意の方法を、本開示を考慮して本発明で使用することができる。本発明での使用に好適な抗体を部位特異的に修飾する方法の例としては、限定されないが、修飾システイン残基（例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））の組み込み、非天然アミノ酸又はグリカン（例えば、セレノシステイン、ｐ－ＡｃＰｈｅ、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ、ＳＭＡＲＴａｇ（商標））など）、及び酵素法（例えば、グリコトランスフェラーゼ、エンドグリコシダーゼ、微生物又は細菌トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ又はＢＴＧ）、ソルターゼＡなど）の使用が挙げられる。

【0252】

いくつかの実施形態によれば、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートの生成に使用するための修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はその抗原結合フラグメントを、抗体のＦｃ－グリコシル化部位におけるコアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼ、例えば、ＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲ（Ｇｅｎｏｖｉｓ）（これは、Ｆｃ上の最も内側のＧｌｃＮＡｃをインタクトなままとし、その部位でアジド糖の部位特異的な組み込みを可能にする）で短縮する（trim）ことによって得られる。次いで、短縮された抗体又はその抗原結合フラグメントを、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼなどの糖転移酵素の存在下で、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮａｃなどのアジド標識化糖と反応させて、それにより修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることができる。

【0253】

他の実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートの生成に使用するための修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はその抗原結合フラグメントをアミダーゼで脱グリコシル化することによって得られる。次いで、得られた脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、アジドアミン、好ましくは３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン又は任意のアジドリンカーアミン若しくは任意のアジドアルキル／ヘテロアルキルアミン、例えば、アジド－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－アミン、例えば、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラエチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレングリコールと反応させ、あるいは微生物トランスグルタミナーゼの存在下で反応させて、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることができる。

【0254】

本明細書に記載の任意の放射性金属錯体を使用して、本発明の放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。特定の実施形態では、放射性金属錯体は、式（Ｉ－ｍ）、式（ＩＩ－ｍ）又は式（ＩＩＩ－ｍ）の構造を有する。好ましい実施形態では、放射性金属錯体は、以下からなる群から選択される構造を有し、

【0255】

【化28】

式中、Ｍは、放射性金属イオン、好ましくはα線放出放射性金属イオン、より好ましくは、アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）であり、Ｒ_１１は、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である。

【0256】

いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、本開示を考慮して当業者に既知の抗体及びポリペプチドの化学修飾又は酵素修飾のための任意の方法を使用して、アジド基に共有結合される。アジド及びアルキニル又はシクロアルキニル基をクリックケミストリー反応に供して１，２，３－トリアゾール部分を形成するのに十分な条件下で、アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメントを、アルキニル又はシクロアルキニル基、好ましくはシクロオクチニル基、より好ましくはＤＢＣＯを含む、本発明のキレータ又は放射性金属錯体と反応させる。

【0257】

特定の実施形態では、本出願の放射性免疫コンジュゲートとしては、

【0258】

【化29】

が挙げられるが、これらに限定されず、
式中、ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、Ｌ_１は、存在しないか、又はリンカーであり、好ましくはリンカーであり、各Ｒ_１２は、独立して、水素、ＣＨ_３又はＣＨ_２ＣＨ_３であり、少なくとも１つのＲ_１２は－ＣＨ_３又は－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｍは、α線放出放射性核種、好ましくは^２２５Ａｃである。

【0259】

本出願の放射性免疫コンジュゲートの例には、

【0260】

【化30】

が挙げられるが、これらに限定されず、
好ましくは、ｍＡｂは、ＰＳＭＢ１２７、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ハーセプチン、又はＨ１１Ｂ６から選択される。

【0261】

本明細書に記載の方法によって生成された放射性免疫コンジュゲートは、本開示を考慮して当業者に既知の方法を使用して分析することができる。例えば、ＬＣ／ＭＳ分析を使用して、キレータと、標識されたポリペプチド、例えば、抗体又はその抗原結合フラグメントとの比率を決定することができ、分析サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、ポリペプチド及びポリペプチドコンジュゲート、例えば、抗体及び抗体コンジュゲートのオリゴマー状態を決定することができ、放射化学的収率は、インスタント薄層クロマトグラフィー（例えば、ｉＴＬＣ－ＳＧ）によって決定することができ、放射化学純度は、サイズ排除ＨＰＬＣによって決定することができる。例示的な方法は、本明細書で、例えば、以下の実施例に記載される。

【0262】

医薬組成物及び使用方法
別の一般的な態様では、本発明は、本発明のキレータ、放射性金属錯体、免疫コンジュゲート、又は放射性免疫コンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。医薬組成物はまた、１つ又は２つ以上の薬学的に許容される担体を含み得る。

【0263】

一実施形態では、医薬組成物は、本発明の放射性金属錯体及び薬学的に許容される担体を含む。

【0264】

別の実施形態では、医薬組成物は、本発明の放射性免疫コンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む。

【0265】

本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野で周知の他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「薬学的に許容される担体」は、本発明による組成物の効果にも本発明による組成物の生物活性にも干渉しない無毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、抗体に基づく又は放射性錯体に基づく医薬組成物での使用に好適な、任意の薬学的に許容可能な担体を本発明において使用することができる。

【0266】

特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載の組成物は、非経口投与、例えば、静脈内、皮下、筋肉内又は腫瘍内投与に好適であるように製剤化することができる。

【0267】

他の一般的な態様では、本発明は、放射線治療及び腫瘍性疾患又は障害を治療するために腫瘍性細胞を選択的に標的化する方法に関する。本明細書に記載の放射性錯体又は放射性免疫コンジュゲートのいずれか及びそれらの医薬組成物を本発明の方法で使用することができる。

【0268】

「腫瘍（neoplasm）」は、細胞が必要以上に分裂したとき、又は死滅しなければいけない場合に死滅しないときに生じる異常な組織塊である。腫瘍は、良性（癌ではない）又は悪性（癌）であり得る。腫瘍（neoplasm）は腫瘍（tumor）とも呼ばれる。腫瘍性疾患又は障害は、癌などの腫瘍に関連する疾患又は障害である。腫瘍性疾患又は障害の例としては、播種性癌及び固形腫瘍癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0269】

一実施形態によれば、前立腺癌の治療を必要とする対象における前立腺癌（例えば、転移性前立腺癌、又は転移性去勢抵抗性前立腺癌）を治療する方法は、治療有効量の本明細書に記載される放射性免疫コンジュゲートを対象に投与することを含み、放射性免疫コンジュゲートは、Ｈ１１Ｂ６にコンジュゲートした本明細書に記載の放射性金属錯体を含む。

【0270】

本明細書に記載の方法によって治療又は放射線治療のために標的化される疾患の他の例としては、肥大、冠状動脈疾患、若しくは血管閉塞性疾患、感染した細胞、微生物、若しくはウイルスに関連する疾患又は障害、又は関節リウマチ（rheumatoid arthritis、ＲＡ）などの炎症性細胞に関連する疾患又は障害が挙げられるが、これらに限定されない。

【0271】

本発明の一実施形態では、放射線治療のために腫瘍性細胞を選択的に標的化する方法は、放射性免疫コンジュゲート又は本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0272】

本発明の一実施形態では、腫瘍性疾患又は障害を治療する方法は、それを必要とする対象に本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0273】

本発明の一実施形態では、癌を治療する必要のある対象において癌を治療する方法は、本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0274】

放射性免疫コンジュゲートは、例えば標的化リガンドによって標的化された細胞などに直接放射線を送達する。好ましくは、放射性免疫コンジュゲートは、^２２５Ａｃなどのα線放出放射性金属イオンを担持する。標的化すると、α線放出放射性金属イオン、例えば、^２２５Ａｃ及びその娘からのα粒子が標的化細胞に送達され、それに対して細胞毒性効果を引き起こし、それにより放射線治療及び／又は腫瘍性疾患若しくは障害を治療するために腫瘍性細胞を選択的に標的化する。

【0275】

放射線治療のため及び腫瘍性疾患又は障害を治療するために腫瘍性細胞を選択的に標的化するためのプレ標的化アプローチも、本発明によって企図される。プレ標的化（pre-targeting）アプローチによれば、アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメントは、投与され、抗体の標的抗原を有する細胞に結合し、循環から経時的に除去されるか又は除去剤で除去される。続いて、本発明の放射性錯体、好ましくはシクロオクチン又はシクロオクチン誘導体（例えば、ＤＢＣＯ）を含む放射性錯体は、投与されて、標的部位に結合したアジド標識化抗体とのＳＰＡＡＣ反応を受け、残りの非結合放射性錯体は、循環から急速に除去される。このプレ標的化技術は、対象における標的部位での放射性金属イオン局在を強化する方法を提供する。

【0276】

他の実施形態では、修飾されたポリペプチド、例えば、アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメント及び本発明の放射性錯体は、標的化放射線治療又は腫瘍性疾患若しくは障害の治療を必要とする対象に、同じ組成物中又は異なる組成物中で投与される。

【0277】

本明細書で使用するとき、用語「治療有効量」は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ通常の方法で決定することができる。例えば、インビトロアッセイを任意選択で用いて、最適な用量範囲を特定するのに役立てることができる。具体的な有効用量の選択は、治療又は予防される疾病、伴う症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に既知の他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば、臨床試験により）決定することができる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及び疾患の重症度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定することができる。

【0278】

本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」及び「治療（treatment）」はいずれも、対象において必ずしも認識可能ではないが、対象において認識可能であり得る、腫瘍性疾患又は障害などの放射能金属イオンの投与が有益となり得る疾患、障害又は状態に関連する、少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善又は回復を指すことを意図する。用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」及び「治療（treatment）」は、腫瘍性疾患又は障害などの放射能金属イオンの投与が有益となり得る疾患、障害、若しくは状態に関連する１つ又は２つ以上の症状の改善、発達若しくは発症の予防又はそれらの持続期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」及び「治療（treatment）」」は、疾患、障害又は状態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療（treat）」、「治療する（treating）」及び「治療（treatment）」は、疾患、障害又は状態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」及び「治療（treatment）」は、対象における疾患、障害又は状態の消失を指す。

【0279】

いくつかの実施形態では、治療有効量の本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物は、癌などの対象における腫瘍性疾患又は障害を治療するために対象に投与される。

【0280】

本発明の他の実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲート及び医薬組成物は、腫瘍性疾患又は障害の治療に有効な他の薬剤と組み合わせて使用することができる。

【0281】

放射線治療及び／又は腫瘍性疾患若しくは障害の治療のために腫瘍性細胞を選択的に標的化するのに使用するための、本明細書に記載される放射性免疫コンジュゲート及び医薬組成物、並びに放射線治療及び／又は腫瘍性疾患若しくは障害の治療のために腫瘍性細胞を選択的に標的化するための医薬の製造における、本明細書に記載される放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物の使用も提供される。

【実施例】

【0282】

以下の本発明の実施例は、本発明の本質を更に説明するためのものである。以下の実施例は本発明を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の請求項によって定められる点を理解されたい。

【0283】

実施例１：異なる位置のリンカー置換を有する大員環キレートの合成及びキレート化効率
アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）のキレート化効率に対するリンカー位置の効果を研究するために、大員環キレータＮ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６）に基づく２つのキレータを合成した。具体的には、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチル及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルを合成した。

【0284】

【化31】

【0285】

Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルの合成及び特性決定
Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルをスキーム１に従って合成した。

【0286】

【化32】

【0287】

ＺｎＣｌ_２（２－メチルテトラヒドロフラン中１．９Ｍ、３．５０ｍＬ、６．６５ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２５ｍＬ）の溶液に－７８℃で、イソペンチルマグネシウムクロリド（Ｅｔ_２Ｏ中２Ｍ、３．３３ｍＬ、６．６６ｍｍｏｌ）を滴加した。白濁した混合物を室温で１時間撹拌し、次いで０℃に冷却した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のメチル６－ホルミルピコリネート（１．００ｇ、６．１ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を５０℃で３時間加熱した。冷却した反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液に注ぎ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた抽出物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過及び濾液の濃縮により、粗生成物を褐色油状物として得た。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタンからヘプタン中５０％ＥｔＯＡｃ）により、６９３ｍｇ（収率４８％）の生成物を黄色油状物として得た。

【0288】

室温のＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）中のメチル６－（１－ヒドロキシ－４－メチルペンチル）ピコリネート（９１ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＰｈ_３（１２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（５６ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で１時間撹拌し、次に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィー（ヘプタンからヘプタン中３０％ＥｔＯＡｃ）により、８５ｍｇ（８７％収率）の生成物を無色油状物として得た。

【0289】

ＡＣＮ（３０ｍＬ）中の１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（３１５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（６９１ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に６０℃で、シリンジポンプを使用して、ＡＣＮ（５ｍＬ）中のメチル６－（クロロメチル）ピコリネートの溶液を１時間かけてゆっくりと添加した。添加後、反応混合物を６０℃で６時間撹拌し、次に濾過した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２からＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ＭｅＯＨ）により精製して、黄色がかったフォーム状固体として２０６ｍｇ（５０％収率）の生成物を得た。

【0290】

ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のメチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（３１ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）、Ｎａ_２ＣＯ_３（４０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及びＮａＩ（１．５ｍｇ）の混合物に、６－（１－クロロ－４－メチルペンチル）ピコリネート（２９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で２０時間加熱した。シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃからＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ＭｅＯＨ）により、１８．９ｍｇ（収率４０％）の生成物を黄色フィルムとして得た。

【0291】

ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（４：１：１ｖ／ｖ／ｖ、０．６ｍＬ）中のメチル６－（（１６－（１－（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）－４－メチルペンチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７ーイル）メチル）ピコリネート（３ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）の溶液をＬｉＯＨ（１Ｎ，０．１ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、これを濃縮乾固させた。残渣を０．９５ｍＬの金属を含まない水に溶解し、０．０５ｍＬの２ＮＨＣｌで中和して、水中のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルの溶液（約３ｍｇ／ｍＬの＝約５ｍＭ、約ｐＨ６）を得た。

【0292】

Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチル（ＭＷ＝６０２Ｄａ）を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって特性決定した。ＨＰＬＣ分析は、遊離キレータに対応する１７．１８１分の溶出時間での主ピークを示した。ＬＣ－ＭＳ分析は、６０３［Ｍ＋Ｈ^＋］、６２５［Ｍ＋Ｎａ^＋］及び３０２［Ｍ＋２Ｈ^＋］において質量イオンピーク（ＥＳ、ｍ／ｚ）を示し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルの合成を確認した。

【0293】

ＨＰＬＣ法：ＸＢｒｉｄｇｅＣ１８３．５μｍ１５０×４．６ｍｍ、１００Åカラム、移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ；０～２０分では勾配１０％～３０％Ｂ、２０～２０．１分では勾配３０％～１００％Ｂ、２０．１～２５分では１００％Ｂでのアイソクラティック、２５～２５．１分では勾配１００％～１０％Ｂ、２５．１～３０分では１０％Ｂでのアイソクラティック；運転後３分；流量１ｍＬ／分、カラム温度：３０℃；注入量：５ｕＬ。

【0294】

Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルの合成及び特性決定
Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルをスキーム２に従って合成した。

【0295】

【化33】

【0296】

メチル６－ホルミルピコリネート（１６５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（２４４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ_２ＣＯ_３（３２６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３・ＣＨＣｌ_３（５２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ_３（２６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ_２下で密封バイアル中に入れた。トルエン（３ｍＬ）をシリンジを介して添加し、混合物をマイクロ波で１００℃で４時間加熱した。冷却した反応混合物をセライトを通して濾過した後、濾液を濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィー（ヘプタンからヘプタン中５０％ＥｔＯＡｃ）により、１４６ｍｇ（収率６０％）の生成物を黄色油状物として得た。

【0297】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（８ｍＬ）中のメチル６－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）ピコリネート（１４１ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ_３（１８３ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１１３ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で１時間撹拌した。更なるＰＰｈ_３（１３３ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（１１３ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で更に１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、シリカゲルでのクロマトグラフィー（ヘプタンからヘプタン中３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、７３ｍｇ（４１％収率）の生成物を無色油状物として得た。

【0298】

ＡＣＮ（１．０ｍＬ）中のメチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（３３ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、メチル６－（ブロモ（フェニル）メチル）ピコリネート（３７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（４２ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で３時間加熱した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃからＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ＭｅＯＨ）により、５１ｍｇ（収率６４％）の生成物を白色固体として得た。

【0299】

ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（４：１：１ｖ／ｖ／ｖ、１．２ｍＬ）中のメチル６－（（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（１６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の溶液をＬｉＯＨ（１Ｎ、０．２ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、これを濃縮乾固させた。残渣を５．２ｍＬの金属を含まない水に溶解し、０．１０ｍＬの２ＮＨＣｌで中和して、水中のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルの溶液（約３ｍｇ／ｍＬ＝５ｍＭ、約ｐＨ６）を得た。

【0300】

Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル（ＭＷ＝６０８Ｄａ）を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって特性決定した。イソペンタン－Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６について上述したように、ＨＰＬＣ分析を行った。ＨＰＬＣ分析は、遊離キレータに対応する１４．１３７分の溶出時間での主ピークを示した。ＬＣ－ＭＳ分析は、６０９［Ｍ＋Ｈ^＋］、６３１［Ｍ＋Ｎａ^＋］及び３０５［Ｍ＋２Ｈ^＋］において質量イオンピーク（ＥＳ、ｍ／ｚ）を示し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルの合成を確認した。

【0301】

ランタン（ＩＩＩ）によるキレート化試験
Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルの水溶液（約３ｍｇ／ｍＬ＝約５ｍＭ、２０μＬ、０．１μｍｏｌ）をＬａ（ＮＯ_３）_３（金属を含まない水中１０ｍＭ、５０μＬ、０．５μｍｏｌ）で処理した。水中のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルの水溶液（約３ｍｇ／ｍＬ＝約５ｍＭ、２０μＬ、０．１μｍｏｌ）をＬａ（ＮＯ_３）_３（金属を含まない水中１０ｍＭ、５０μＬ、０．５μｍｏｌ）で処理した。十分に混合した後、各溶液をＬＣＭＳ及びＨＰＬＣにより分析して、キレータとＬａ^３＋との錯体が形成されたかどうかを決定した。

【0302】

イソペンタン－Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルキレートの両方は、Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６の合成についての上記の方法に従って分析したＨＰＬＣピーク保持時間の有意なシフトによって示されるように、室温でのＬａ^３＋による迅速かつ化学量論的キレート化を示した（図１Ａ及び１Ｂ）。錯体形成もＬＣＭＳにより確認した。Ｌａ（ＮＯ_３）_３と混合した後のイソペンタン－Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６のＬＣＭＳ分析は、７３９において質量イオンピーク（ＥＳ、ｍ／ｚ）を示した（Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチル＋Ｌａ^＋３－２Ｈ^＋）。ＬＡ（ＮＯ_３）_３と混合した後のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルのＬＣ－ＭＳ分析は、７４５において質量イオンピーク（ＥＳ，ｍ／ｚ）を示し（Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル＋Ｌａ^＋３－２Ｈ^＋）、両方のキレータによる錯体形成を確認した。

【0303】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチルのキレート化
（ｉ）低い^２２５Ａｃ／キレート比での^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化
プラスチックバイアルに、テトラメチルアンモニウムアセテート（水中１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチル（水中１．６６ｍＭ、２μＬ、約３．３２ｎｍｏｌ）及び^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を室温で１．５時間放置した。

【0304】

ｉＴＬＣ－ＳＧ分析：０．５μＬの反応溶液をｉＴＬＣ－ＳＧにスポットし、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載される条件下では、結合したＡｃ－２２５は、ｉＴＬＣ－ＳＧのベースラインン上に留まったが、遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。放射能はｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では観察されなかったが、これは、キレータが^２２５Ａｃイオンを首尾よくキレート化したことを示す。

【0305】

ＨＰＬＣ分析：５μＬの反応混合物を９５μＬのＰＢＳ緩衝液で希釈した。希釈した混合物をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ後、画分を１分間隔で回収した。回収した画分を室温で一晩放置した後、γ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレース（radio-trace）は、画分の活性から構築された。

【0306】

ＨＰＬＣ分析により、図１ＡのＨＰＬＣクロマトグラムに示すものと同様の保持時間のシフトに基づいて、^２２５Ａｃ錯体が形成されたことが確認された。

【0307】

ＤＴＰＡ負荷：０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ溶液と混合し、混合物を３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧにスポットし、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の条件下では、安定的にキレート化されたＡｃ－２２５は、ｉＴＬＣ－ＳＧのベースライン上に留まったが、遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ＤＴＰＡ負荷後、放射能はｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では観察されなかったが、これは、^２２５Ａｃイオンとの安定した錯体が形成されたことを示す。

【0308】

（ｉｉ）高い^２２５Ａｃ／キレート比での^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化
プラスチックバイアルに、テトラメチルアンモニウムアセテート（水中１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－イソペンチル（水中０．３３ｍＭ、２μＬ、約０．６６ｎｍｏｌ）及び^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ、５０μＣｉ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を室温で１．５時間放置した。次いで、上記のｉＴＬＣ－ＳＧ及びＤＴＰＡ負荷により、反応物を分析した。ＤＴＰＡ負荷の前又は後に遊離^２２５Ａｃが検出されなかったが、これは、^２２５Ａｃイオンとの安定した錯体が形成されたことを示す。

【0309】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルのキレート化
（ｉ）低い^２２５Ａｃ／キレート比での^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化
プラスチックバイアルに、テトラメチルアンモニウムアセテート（水中１Ｍ溶液、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル（水中１．６４ｍＭ、２μＬ、約３．２８ｎｍｏｌ）及び^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を室温で２時間放置した。遊離^２２５Ａｃイオンは検出されなかったが、これは、キレータが首尾よく^２２５Ａｃイオンをキレート化したことを示す。

【0310】

ｉＴＬＣ－ＳＧ分析：０．５μＬの反応溶液をｉＴＬＣ－ＳＧにスポットし、これを１０ｍＭのＥＤＴＡにより展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載される条件下では、結合したＡｃ－２２５は、ｉＴＬＣ－ＳＧのベースラインン上に留まったが、遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端ではＸ線活性が観察されなかったが、これは、Ａｃ－２２５の良好なキレート化を示している。

【0311】

ＨＰＬＣ分析：５μＬの反応混合物を９５μＬのＰＢＳ緩衝液で希釈した。希釈した混合物をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ後、画分を１分間隔で回収した。回収した画分を室温で一晩放置した後、γ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、画分の活性から構築された。ＨＰＬＣ分析により、図１ＢのＨＰＬＣクロマトグラムに示すものと同様の保持時間のシフトに基づいて、^２２５Ａｃ錯体が形成されたことが確認された。

【0312】

ＤＴＰＡ負荷：０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ溶液と混合し、混合物を３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧにスポットし、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の条件下では、安定的にキレート化されたＡｃ－２２５は、ｉＴＬＣ－ＳＧのベースライン上に留まったが、遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ＤＴＰＡ負荷後に遊離^２２５Ａｃが検出されなかったが、これは、^２２５Ａｃイオンとの安定な錯体が形成されたことを示す。ＤＴＰＡ負荷の前又は後に、ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端ではＸ線活性が観察されなかったが、これは、^２２５Ａｃイオンとの安定した錯体が形成されたことを示す。

【0313】

（ｉｉ）高い^２２５Ａｃ／キレート比での^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化
プラスチックバイアルに、テトラメチルアンモニウムアセテート（水中１Ｍ溶液、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル（水中０．１６ｍＭ、２μＬ、約０．３３ｎｍｏｌ）及び^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ、５０μＣｉ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を室温で２時間放置した。上記のｉＴＬＣ－ＳＧ及びＤＴＰＡ負荷により、反応物を分析した。ＤＴＰＡ負荷の前又は後に遊離^２２５Ａｃが検出されなかったが、これは、^２２５Ａｃイオンとの安定した錯体が形成されたことを示す。

【0314】

要約
纏めると、上記の結果は、「ベンジル」炭素において誘導体化されたＨ_２ｂｐ１８ｃ６が、迅速なキレート化反応速度論で、室温で^２２５Ａｃを効率的にキレート化し、安定した錯体を形成することを示している。結果はまた、高い比活性（すなわち、より低いキレータと^２２５Ａｃとの比）が、「ベンジル」位置による結合によって達成することができることを示している。

【0315】

実施例２：ＤＢＣＯ「クリック」リンカーを有するＨ_２ｂｐ１８ｃ６誘導体の合成及びキレート化効率
続いてクリックケミストリー反応により標的化リガンドへのコンジュゲーションのためのＤＢＣＯリンカーを有する、以下のＨ_２ｂｐ１８ｃ６誘導体を合成することができる：

【0316】

【化34】

【0317】

例えば、Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－アセテート－ＤＢＣＯは、スキーム３に従って合成することができる。

【0318】

【化35】

【0319】

パラジウム触媒の存在下で、メチル６－ブロモピコリネートを２－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２－オキソエチル臭化亜鉛と反応させて、メチル６－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）ピコリネートを得る。続いてＮＢＳ及びＡＩＢＮにより臭素化することにより、メチル６－（１－ブロモ－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）ピコリネートを得ることができる。塩基性反応条件下でのメチル６－（１－ブロモ－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）ピコリネートとメチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネートとの置換反応により、メチル６－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）－２－オキソエチル）ピコリネートを生成することができる。ＴＦＡの存在下で、ｔｅｒｔ－ブチルエステルをカルボン酸に加水分解することができる。ジベンゾシクロオクチン－アミンとのアミド結合形成及びその後の水酸化リチウムによるメチルエステルの加水分解により、Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－アセテート－ＤＢＣＯを得ることができる。

【0320】

Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯは、スキーム４に従って合成される。

【0321】

【化36】

【0322】

ＴＨＦ（５ｍＬ）を、メチル６－ホルミルピコリネート（１６５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）ボロン酸（４４４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（８．９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、トリ（ナフタレン－１－イル）ホスファン（２０．６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（４１５ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）の混合物にＮ_２下で－７８℃で添加した。混合物をＮ_２でパージし、室温で０．５時間撹拌し、次いで６５℃で２４時間加熱した。冷却した反応混合物をセライトを通して濾過し、濾液を濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタンからヘプタン中５０％ＥｔＯＡｃ）により、１１６ｍｇ（収率３４％）の生成物を黄色油状物として得た。

【0323】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中のメチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）ピコリネート（１３８ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ_３（１２６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（７９ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１時間撹拌した。更なるＰＰｈ_３（６３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及びＮＢＳ（３９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加し、これを更に１時間撹拌した。反応溶液をシリカゲルカラムに充填した。クロマトグラフィー（ヘプタンからヘプタン中３０％ＥｔＯＡｃ）により、６２ｍｇ（収率３８％）の生成物をフラスコ壁に付着した黄色がかったフィルムとして得た。

【0324】

ＡＣＮ（１ｍＬ）中のメチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（５６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、メチル６－（ブロモ（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）メチル）ピコリネート（６０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（７２ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で１３時間加熱した。冷却した反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２からＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ＭｅＯＨ）により、３７ｍｇ（３７％収率）の生成物を白色固体として得た。

【0325】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（１．５ｍＬ）中のメチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（２２ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を添加した。溶液を１時間撹拌した。反応溶液を濃縮して、黄色がかった残渣として粗生成物を得て、これを更に精製することなく次の工程反応に使用した。

【0326】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）中の上記粗生成物の溶液に、０℃で、Ｅｔ_３Ｎ（４２μＬ、０．３ｍｍｏｌ）、次いでＨＢＴＵ（１５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で５分間撹拌した後、ＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）中のジベンゾシクロオクチン－アミンを添加した。冷浴を除去し、それを室温で１８時間撹拌した。水を反応混合物に添加し、これをＣＨ_２Ｃｌ_２で３回抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄し、次いで食塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過した。濾液を濃縮して、粗生成物を得た。シリカゲルでのクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２からＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ＭｅＯＨ）により、１３．２ｍｇ（収率４７％）の生成物をフラスコ壁に付着した無色のフィルムとして得た。

【0327】

ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（４：１：１ｖ／ｖ／ｖ、０．６ｍＬ）中のＨ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ（４．８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＨ（１Ｎ，０．１ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、これをＨＣｌ（１Ｎ）でｐＨ＝６．５に中和した。反応混合物を室温でロータリーエバポレーターで濃縮して、揮発性溶媒を除去した。残渣をＨ_２Ｏ（４ｍＬ）及びＡＣＮ（１ｍＬ）に溶解した。凍結乾燥後、粗生成物を白色固体として得た。

【0328】

Ｌａ（ＩＩＩ）によるＨ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯのキレート化
Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ（約１．５５ｍｇ／ｍＬ＝４：１ｖ／ｖのＨ_２Ｏ／ＡＣＮ中約１．７ｍＭ、約ｐＨ６．５、ｐＨ試験紙による）の溶液を上記の粗生成物から調製した。

【0329】

Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル（約１．５５ｍｇ／ｍＬ＝約１．７ｍＭ、５０μＬ、０．０８５μｍｏｌ）の溶液をＬａ（ＮＯ_３）_３（金属を含まない水中１０ｍＭ、５０μＬ、０．５μｍｏｌ）で処理した。十分に混合した後、溶液をＬＣＭＳ及びＨＰＬＣにより分析した。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）１０４７（Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ＋Ｌａ^＋３－２Ｈ^＋）。

【0330】

ＨＰＬＣ法：ＸＢｒｉｄｇｅＣ１８３．５μｍ１５０×４．６ｍｍ、１００Åカラム、移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ；０～２０分では勾配１０％～５０％Ｂ、２０～２０．１分では勾配５０％～１００％Ｂ、２０．１～２５分では１００％Ｂでのアイソクラティック、２５～２５．１分では勾配１００％～１０％Ｂ、２５．１～３０分では１０％Ｂでのアイソクラティック；流量１ｍＬ／分、カラム温度：３０℃；注入量：５μＬ。

【0331】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるＨ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニルのキレート化
（ｉ）低い^２２５Ａｃ／キレート比での^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化
プラスチックバイアルに、テトラメチルアンモニウムアセテート（水中１Ｍ溶液、１０μＬ）、Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ（Ｈ_２Ｏ／ＡＣＮ中１．７ｍＭ、２μＬ、約３．４ｎｍｏｌ）及び^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を室温で１時間放置した。

【0332】

ｉＴＬＣ－ＳＧ分析：０．５μＬの反応溶液をｉＴＬＣ－ＳＧにスポットし、これを１０ｍＭのＥＤＴＡにより展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の条件下では、遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能は観察されなかったが、これは、１時間後に反応溶液中に遊離Ａｃ－２２５が存在しなかったことを示す。

【0333】

ＨＰＬＣ分析：５μＬの反応混合物を９５μＬのＰＢＳ緩衝液で希釈した。希釈した混合物をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ後、画分を１分間隔で回収した。回収した画分を室温で一晩放置し、次いでγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、画分の活性から構築された。

【0334】

【0335】

（ｉｉ）高い^２２５Ａｃ／キレート比での^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化
プラスチックバイアルに、テトラメチルアンモニウムアセテート（水中１Ｍ溶液、１０μＬ）、Ｈ_２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ（水中０．１７ｍＭ、２μＬ、約０．３４ｎｍｏｌ）及び^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ、５０μＣｉ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を室温で２時間放置した。上記のｉＴＬＣ－ＳＧ及びＤＴＰＡ負荷により、反応物を分析した。

【0336】

実施例３：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＩｇＧ４の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化
放射性免疫コンジュゲートを調製するための一般的方法：
抗体に共有結合した本発明の放射性金属錯体を含む放射性免疫コンジュゲートをクリック放射性標識化により調製する。本発明の放射性免疫コンジュゲートを生成するためのクリック放射性標識化の例示的な方法の概略図については図２Ａ～２Ｄを参照されたい。

【0337】

抗体へのアジドハンドルのランダムコンジュゲーション
１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７）又は他の適合性緩衝液中の抗体（１～１０ｍｇ／ｍＬ）のストック溶液を、２０％（ｖ／ｖ）の１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９）と混合して最終ｐＨを約９にした。ＮＨＳ－ＰＥＧ４－アジド（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号２６１３０）をＤＭＳＯに溶解して最終濃度を１００ｍＭにし、０．２％（ｖ／ｖ）のストック溶液を添加して、抗体（Ａｂ）に対して約３～１０のモル過剰を生成した。反応物を２２℃で１０分間インキュベートした後、１ＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）を添加しながらクエンチして、最終濃度を５０ｍＭＴｒｉｓにした。

【0338】

アジド－ｍＡｂコンジュゲートを精製し、７ＫＭＷカットオフでのＺｅｂａ脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ）、透析、標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、又は別の適合した方法などの方法を使用して、適合性緩衝液（ＰＢＳ；２０ｍＭＨｅｐｅｓ１５０ｍＭ、ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）；又は１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．２）に交換した。精製後、５０ＫＭＷカットオフを有するＡｍｉｃｏｎ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、コンジュゲートを１０～２０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。コンジュゲーション効率をＬＣ－ＭＳによって決定した。

【0339】

抗体グリカンへのアジド糖の部位特異的組み込み
抗体グリカンを、Ｆｃグリコシル化部位（複数の場合もある）内のコアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼであるＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲ（Ｇｅｎｏｖｉｓ）でトリミングし、後でアジド糖の部位特異的組み込みに使用することができる、最も内側のＧｌｃＮａｃをＦｃ上にそのまま残した。より具体的には、カラム（Ｇｅｎｏｖｉｓ）に充填されたアガロースビーズ上に固定化したＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲを、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水ｐＨ７．４（ＴＢＳ）中で平衡化した。５～１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１ｍＬを樹脂に添加し、室温で１時間ロッカー（ｒｏｃｋｅｒ）上でインキュベートし、１００Ｘｇで１分間回転させることにより溶出した。カラムを０．５ｍＬのＴＢＳで３回溶出した。トリミングされたｍＡｂを含む溶出液をプールし、供給された緩衝液添加剤（Ｇｅｎｏｖｉｓ）をＵＤＰ－ＧＡＬＮａｚアジド糖基質及びＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ酵素とともに添加した。反応混合物を、３０℃で一晩撹拌した。最終アジドｍＡｂを、ＡＫＴＡＡｖａｎｔ機器でｍＡｂ選択カラム（ＧＥ）を用いて精製した。アジド修飾をＬＣ－ＭＳにより確認した。

【0340】

アジド－Ａｂへのキレータのコンジュゲーション
ＤＢＣＯ基を含む本発明のキレータ、例えば、

【0341】

【化37】

を実施例１に記載のように^２２５Ａｃなどの放射性金属イオンに配位して、放射性錯体を生成する。ＰＢＳ又は他の相溶性緩衝液（１０～２０ｍｇ／ｍＬ）中のランダム又は部位特異的アジド修飾抗体を、放射性錯体の溶液に添加する。反応溶液を穏やかに撹拌し、室温で３時間放置した後、例えば１５ｍＬのＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）又は別の適合性緩衝液でプレコンディショニングしたＰＤ－１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）により、精製した。純度をｉＴＬＣ－ＳＧによって評価した。生成物溶液を、化学及び放射化学純度についてＨＰＬＣにより分析した。検量線を使用した紫外線吸収により、生成物溶液中の抗体濃度を決定した。ＣａｐｉｎｔｅｃＣＲＣ－５５ＴＷ用量キャリブレーターを使用して、生成物溶液の活性を定量化した。

【0342】

クリック標識した放射性免疫コンジュゲートの分析的特性評価
放射化学的変換（％ＲＡ変換）をｉＴＬＣ－ＳＧ（Instant Thin Layer Chromatography（ｉＴＬＣ））によって決定する。Ａｃ－２２５キレートの放射化学純度（％ＲＡ純度）をＳＥ－ＨＰＬＣ（サイズ排除ＨＰＬＣ）によって決定する。

【0343】

Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－フェニル－ＩｇＧ４への２２５Ａｃ（ＩＩＩ）の直接キレート化
放射性免疫コンジュゲートを調製する以下の方法は、１工程直接放射性標識化方法（例えば、図２Ｃに概略的に示される）と称し得る。放射性標識化は金属不存在ではない条件下で首尾よく行われたが、これは、金属汚染物質に対する耐性を有するキレータの能力を更に例示している。

【0344】

本実施例で使用されるＩｇＧ４は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原に結合するアイソタイプ対照である。ＩｇＧ４の重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１及び配列番号２として以下に提供される。

【0345】

配列番号１ｍＡｂＨＣ
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＦＴＹＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

【0346】

配列番号２ｍＡｂＬＣ
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＮＡＴＩＮＣＲＡＳＱＳＶＤＹＮＧＩＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＰＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＩＩＥＤＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0347】

【化38】

【0348】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：上記ｍＡｂＩｇＧ４を、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで、７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、振盪せずに、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ＩｇＧ４（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを２０ｍＭＨｅｐｅｓ、１００ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、２０ｍＭＨｅｐｅｓ、１００ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．５）中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＩｇＧ４コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0349】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、２０μＬ、０．０９８ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＩｇＧ４（部位特異的、ＣＡＲ＝２、
２０ｍＭＨｅｐｅｓ中１．７ｍｇ／ｍＬ、１００ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．５）、３６μＬ、６１．２μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0350】

精製：反応混合物をＰＤ－１０カラムで精製した：５ｍＬ×３のＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）をカラムに通過させ、洗浄液を廃棄することにより、ＰＤ－１０樹脂をＮａＯＡｃ緩衝溶液でコンディショニングした。全ての反応混合物をカラムのリザーバに適用し、溶出液を予め番号付けしたプラスチックチューブに回収した。反応バイアルを、０．２ｍＬ×３ＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）溶液で洗浄し、洗浄液をＰＤ－１０カラムのリザーバにピぺットで入れ、溶出液を回収した。各チューブは約１ｍＬの溶出液を含んでいた。ＰＤ－１０カラムのリザーバへのＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）の継続的な適用を１０ｍＬの総溶出体積に達するまで行った。

【0351】

ＤＴＰＡ負荷：ＰＤ－１０カラム後に回収した１０μＬの画分＃３を、１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ溶液（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに装填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開し、一晩乾燥させた。これをＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の条件下では、遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、画分＃３中に遊離Ａｃ－２２５が存在しなかったことを示す。

【0352】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）；流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射活性から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＩｇＧ４ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0353】

実施例４：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0354】

【化39】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ＰＳＭＢ１２７を、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、振盪せずに、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ＰＳＭＢ１２７（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを２０ｍＭＨｅｐｅｓ、１００ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、２０ｍＭＨｅｐｅｓ、１００ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．５）中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0355】

標識：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、２０μＬ、０．０９８ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７（部位特異的、ＣＡＲ＝２、２０ｍＭＨｅｐｅｓ、１００ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．５）中２．８ｍｇ／ｍＬ、２２μＬ、６１．６μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0356】

【0357】

【0358】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0359】

実施例５：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ペルツズマブの調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0360】

【化40】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ペルツズマブを、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ペルツズマブ（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ペルツズマブコンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、。カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0361】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４２ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ペルツズマブ（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中２．４ｍｇ／ｍＬ、１２．５μＬ、３０μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0362】

【0363】

【0364】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ペルツズマブピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0365】

実施例６：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－セツキシマブの調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0366】

【化41】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：セツキシマブを、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－セツキシマブ（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－セツキシマブコンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0367】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４４ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－セツキシマブ（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中１．８ｍｇ／ｍＬ、１６．７μＬ、３０μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0368】

【0369】

【0370】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－セツキシマブピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上で示した。

【0371】

実施例７：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－パニツムマブの調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0372】

【化42】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：パニツムマブを、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－パニツムマブ（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－パニツムマブコンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬ
で溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0373】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４３ｍＣｉ）及及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－パニツムマブ（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中２．６ｍｇ／ｍＬ、１１．５μＬ、３０μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0374】

【0375】

【0376】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－パニツムマブピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0377】

実施例８：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ハーセプチンの調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0378】

【化43】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ハーセプチンを、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍｌのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰な３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ハーセプチン（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ハーセプチンコンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0379】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４１ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ハーセプチン（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中１．７ｍｇ／ｍＬ、１７．６μＬ、３０μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0380】

【0381】

【0382】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ハーセプチンピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0383】

実施例９：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0384】

【化44】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：Ｈ１１Ｂ６を、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍｌのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰な３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯを、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－Ｈ１１Ｂ６（ＤＯＬ＝１．８２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝１．８２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0385】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４３ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－フェニル－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６（部位特異的、ＣＡＲ＝１．８２、ＰＢＳ緩衝溶液中１．２ｍｇ／ｍＬ、２５．０μＬ、３０μｇ）を添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0386】

【0387】

【0388】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：３０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上で示した。

【0389】

実施例１０：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－フェニル－ＢＣＮの合成

【0390】

【化45】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）中の４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（５０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）及びＥｔ_３Ｎ（０．１ｍＬ、０．７３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で、ＨＡＴＵ（３７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で５分間撹拌した後、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）中のＮ－［（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イルメチルオキシカルボニル］－１，８－ジアミノ－３，６－ジオキサオクタンを添加した。冷浴を除去し、室温で１８時間にわたって撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をアミン官能化シリカゲル（ＣＨ_２Ｃｌ_２からＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ＭｅＯＨ）でのクロマトグラフィーにより精製して、１９．８ｍｇ（収率２７％）の生成物をフラスコ壁に付着した無色のフィルムとして得た。ＬＣ－ＭＳ分析は、９８７．６［Ｍ＋Ｈ^＋］で質量／イオンピークを示した。

【0391】

ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（４：１：１ｖ／ｖ／ｖ、１．８ｍＬ）中の６－（（４－（（１－（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）－３－オキソ－２，７，１０－トリオキサ－４－アザドデカン－１２－イル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（１４．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）の溶液に室温で、ＬｉＯＨ（１Ｎ、０．３ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した後、これをＨＣｌ（１Ｎ）でｐＨ＝６．５に中和した。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をアミン官能化シリカゲルでのクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２からＣＨ_２Ｃｌ_２中約１０％ＭｅＯＨ）により精製し、９．５ｍｇ（収率４８％）のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮを無色フィルムとして得て、これをＨ_２Ｏ（４ｍＬ）及びＡＣＮ（１ｍＬ）に溶解した。凍結乾燥後、これにより生成物を白色固体として得た。ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ７．９１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、７．８４（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４（ｓ，１Ｈ）、４．１０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、３．９１（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．７５－３．５８（ｍ，２２Ｈ）、３．５６（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５１（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ）、３．２３（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ）、２．９７（ｄｔ，Ｊ＝８，４Ｈｚ，２Ｈ）、２．９２－２．８２（ｍ，４Ｈ）、２．７８（ｄｔ，Ｊ＝８，４Ｈｚ，２Ｈ）、２．２８－２．０８（ｍ，６Ｈ）、１．６５－１．５０９ｍ，２Ｈ）、１．３９－１．２７（ｍ，１Ｈ）、０．９６－０．８４（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）９８１．４［Ｍ＋Ｎａ^＋］。

【0392】

実施例１１：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮ－ＰＳＭＢ１２７の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0393】

【化46】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ＰＳＭＢ１２７を、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮを、振盪せずに、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ＰＳＭＢ１２７（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析によって、ＢＣＮ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮ－ＰＳＭＢ１２７コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0394】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４６ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮ－ＰＳＭＢ１２７（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中２．３ｍｇ／ｍＬ、１３．０μＬ、３０μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0395】

【0396】

【0397】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：４０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮ－ＰＳＭＢ１２７ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上で示した。

【0398】

実施例１２：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ（ｏｆｆ）大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯの合成
標的化リガンドへのコンジュゲーションのためのリンカーを有する大員環の炭素原子において置換されたＨ_２ｂｐ１８ｃ６誘導体を、一般的に、以下のスキーム１４ａ及びスキーム１４ｂに従って合成する：

【0399】

【化47】

【0400】

－ＣＨ_２ＯＲ_１で置換されたジアザ－１８－クラウン－６の合成をＯｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００５，７（６），１１０５－１１０８に記載の手順を用いて合成し、続いて、スキーム３及び４に関して上述したように、これを６－（ハロメチル）ピコリン酸の誘導体と反応させる。官能基ＯＲ_１は、ヘテロ原子、アルキル、ヘテロ原子を有するアルキル、置換アリールなどであるリンカーＷを伴って又はリンカーＷなしで、リンカー、標的化リガンドなどへのライゲーション又はコンジュゲーションのために、ＮＨ_２、Ｎ_３、アルデヒド、カルボン酸塩、アルキンなどを含むがこれらに限定されない、別の官能基ＷＲ_２に変換することができる。スキーム６ａにおいて、Ｘは、脱離基、例えば、ハロ、メシラート、トシラートなどであり、Ｒ_１は、アリル、ベンジル、アルコールなどであり、Ｗは存在しないか、又はリンカー、例えば、ヘテロ原子、アルキル、ヘテロアルキル、置換アリールなどであり、Ｒ_２は、ＮＨ_２、Ｎ_３アルデヒド、カルボキシレート、アルキニルなどである。

【0401】

【化48】

【0402】

－ＣＨ_２ＯＲ_１で置換されたジアザ－１８－クラウン－６を、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８８，５３（１４）、３１９０－５及びＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８６，２３（２）、６０９－１３に記載の手順を用いて合成することができ、続いて、スキーム３及び４に関して上述したように、これを６－（ハロメチル）ピコリン酸の誘導体と反応させる。官能基ＯＲ_１は、ヘテロ原子、アルキル、ヘテロ原子を有するアルキル、置換アリールなどであるリンカーＷを伴って又はリンカーＷなしで、リンカー、標的化リガンドなどへのライゲーション又はコンジュゲーションのために、ＮＨ_２、Ｎ_３、アルデヒド、カルボン酸塩、アルキンなどを含むがこれらに限定されない、別の官能基Ｒ_２に変換することができる。

【0403】

次に、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯの合成を説明する。

【0404】

【化49】

【0405】

水素化ナトリウム（１８．１６ｇ、鉱油中６０％、４５４ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（５００ｍＬ）中の（Ｓ）－（＋）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（５０ｇ、３７８ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。この温度で１０分間撹拌した後、臭化ベンジル（７７．６３ｇ、４５４ｍｍｏｌ）をこの懸濁液にゆっくりと添加した。反応物を３０分後に室温にし、更に８時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液を用いてクエンチし、ジクロロメタン（２×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を除去した後、残渣を石油エーテル及び酢酸エチルを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（Ｓ）－４－（（ベンジルオキシ）メチル）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン（７２ｇ、８６％）を無色液体として得た。

【0406】

ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の（Ｓ）－４－（（ベンジルオキシ）メチル）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン（７２ｇ、３２４ｍｍｏｌ）の溶液に、１．５ＮＨＣｌ（１００ｍＬ）を添加し、続いて室温で１６時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、１０％重炭酸ナトリウム溶液で中和した。反応混合物を酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出し、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、石油エーテル及び酢酸エチルを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（Ｒ）－３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジオール（５１ｇ、８５％）を無色油状物として得た。

【0407】

ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２６．２９ｇ、鉱油中６０％、６８６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の（Ｒ）－３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジオール（２５．０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再度０℃に冷却し、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（８５．８９ｇ、４１１ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２，２’－（（（（（Ｒ）－３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン）（３２ｇ、５３％）を無色液体として得た。

【0408】

５００ｍＬのメタノール中の２，２’－（（（（（Ｒ）－３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン）（３２ｇ、７３．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中５ｍＬのＨＣｌを添加した。反応物を１時間還流撹拌し、冷却し、蒸発させた。粗生成物（Ｒ）－２，２’－（（３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２０ｇ）を精製せずに次の工程で使用した。

【0409】

ジクロロメタン（２５０ｍＬ）及びトリエチルアミン（５３ｍＬ、３７０ｍｍｏｌ）中の（Ｒ）－２，２’－（（３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２０ｇ、７４．０７ｍｍｏｌ）の溶液に１０℃で、固体ｐ－トルエンスルホニルクロリド（４２．２ｇ、２２２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応完了後、懸濁液を１０００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、冷１ＭＨＣｌ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、続いて２×５００ｍＬの氷冷水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムとした。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製し、（Ｒ）－（（３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（３０ｇ、７０％）を無色液体として得た。

【0410】

２００ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の（Ｒ）－（（３－（ベンジルオキシ）プロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（３０ｇ、５１．９ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（５０．７６ｇ、１５５．７ｍｍｏｌ）の混合物を、周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、２００ｍＬのＤＭＦ中のＮ、Ｎ’－（（エタン－１，２－ジイルビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（４－メチルベンゼンスルホンアミド）（２３．５６ｇ、５１．９ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを１０００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製し、（Ｒ）－２－（（ベンジルオキシ）メチル）－７，１６－ジトシル－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（２４ｇ、６７％）を無色液体として得た。

【0411】

酢酸（５０％、１００ｍＬ）中の（Ｒ）－２－（（ベンジルオキシ）メチル）－７，１６－ジトシル－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（２４ｇ、３４．７８ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（１６．３５ｇ、１７４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。反応完了後、室温に冷却し、高真空下で酢酸を除去した。粗生成物を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルを使用した逆相カラムで精製して、（Ｓ）－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－２－イル）メチルアセテート（８．０ｇ、６９％）を無色液体として得た。

【0412】

乾燥アセトニトリル（１００ｍＬ）中の（Ｓ）－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－２－イル）メチルアセテート（８．０ｇ、２３．９５ｍｍｏｌ）、６－（クロロメチル）ピコリネートメチル（１１．０７ｇ、５９．８８ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１２．６９ｇ、１１９．７５ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で１６時間加熱した。反応完了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物質を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製し、ジメチル６，６’－（（２－（アセトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（５．０ｇ、３３％）を褐色液体として得た。

【0413】

メタノール（５０ｍＬ）中の６，６’－（（２－（アセトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（５．０ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（０．１１ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を室温で添加し、１０分間撹拌した。反応完了後、これを減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中０～１０％メタノールの勾配で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィー（２３０～４００メッシュ）により精製して、６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｒ）－ジピコリネート（３．５ｇ、７５％）を褐色液体として得た。

【0414】

ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｒ）－ジピコリネート（１．０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．５１ｇ、０．７０ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を添加した。塩化メシル（０．３９ｇ、０．２６ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）を０℃でこの溶液に滴加した。反応物を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、これを濃縮し、粗生成物を溶出液としてジクロロメタン中のメタノール（１～２％）を使用したカラムクロマトグラフィー（アルミナ－中性）により精製して、ジメチル６，６’－（（２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（０．７ｇ、６２％）を褐色液体として得た。

【0415】

ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＴｅｒｔ－ブチル（２－メルカプトエチル）カルバメート（５３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（１２ｍｇ、鉱油中６０％、０．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。粗生成物を、水（０．１％ＴＦＡ）中のアセトニトリルを使用した分取ＨＰＬＣにより精製して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（２０ｍｇ、１８％）を褐色液体として得た。

【0416】

ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、メタノール（２ｍＬ、４Ｎ）中のＨＣｌの冷溶液を添加し、溶液を２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－アミノエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネートを黄色液体として得た（５５ｍｇ、６４％）。

【0417】

ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（（（２－アミノエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（６０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で、トリエチルアミン（０．０４ｍＬ、０．２７ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＨＡＴＵ（５１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で５分間撹拌した後、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のＤＢＣＯ－酸（２７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加した。冷浴を除去し、室温で１８時間撹拌した。水を反応混合物に添加し、これをジクロロメタン（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶液を濃縮して、粗生成物を得た。ジクロロメタン及びメタノールを用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにより、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ（２０ｍｇ、２３％）のジメチルエステルを無色液体として得た。

【0418】

室温のメタノール（０．５ｍＬ）中のＨ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ（２０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ_２Ｏ中のＬｉＯＨ（０_．６４ｍＬ、０．１Ｎ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１６時間撹拌した後、これを酢酸でｐＨ＝６．５．に中和した。反応混合物を室温でエバポレーターで濃縮して、揮発性溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ（６ｍｇ、３１％）をオフホワイト色固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ４８Ｈ５６Ｎ６Ｏ１０Ｓについての計算値９０９．０７；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋９０９．４。ＬＣ－ＭＳによる純度：９２．９２％ＲＴ：１．８６。ＨＰＬＣによる純度：９１．５６％ＲＴ：３．８７。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ ７．８３－７．７６（ｍ，４Ｈ）、７．５４－７．１７（ｍ，１０Ｈ）、４．９７－４．９０（ｍ，１Ｈ）、４．８０（ｓ，４Ｈ）、４．２３（ｓ，４Ｈ）、３．７８－３．４２（ｍ，１８Ｈ）、３．０４－３．００（ｍ，２Ｈ）、２．５１－２．３９（ｍ，３Ｈ）、２．３１－２．２９（ｍ，２Ｈ）、２．１０－２．０４（ｍ，３Ｈ）。

【0419】

実施例１３：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0420】

【化50】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ＰＳＭＢ１２７を、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍｌのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰な３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯを、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ＰＳＭＢ１２７（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0421】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４８ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中２．４ｍｇ／ｍＬ、１０μＬ、２４μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0422】

精製：反応混合物をＰＤ－１０カラムで精製した：５ｍＬ×３のＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）をカラムに通過させ、洗浄液を廃棄することにより、ＰＤ－１０樹脂をＮａＯＡｃ緩衝液溶液でコンディショニングした。全ての反応混合物をカラムのリザーバに適用し、溶出液を予め番号付けしたプラスチックチューブに回収した。反応バイアルを、０．２ｍＬ×３ＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）溶液で洗浄し、洗浄液をＰＤ－１０カラムのリザーバにピぺットで入れ、溶出液を回収した。各チューブは約１ｍＬの溶出液を含んでいた。ＰＤ－１０カラムのリザーバへのＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６～６．５）の継続的な適用を１０ｍＬの総溶出体積に達するまで行った。

【0423】

【0424】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：４０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0425】

実施例１４：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯの合成

【0426】

【化51】

ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＴｅｒｔ－ブチル（５－メルカプトペンチル）カルバメート（６５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（１２ｍｇ、鉱油中６０％、０．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、これを濃縮し、残渣をアセトニトリル及び０．１％ＴＦＡを使用した分取ＨＰＬＣにより精製して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（１５ｍｇ、１３％）を褐色液体として得た。

【0427】

ジメチル６，６’－（（２－（（（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）に、メタノール中のＨＣｌの冷溶液（２ｍＬ、４Ｎ）を添加し、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（７０ｍｇ、６６％）を黄色液体として得た。

【0428】

ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（５０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で、トリエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＨＡＴＵ（３８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で５分間撹拌した後、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のＤＢＣＯ－酸（２１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加した。冷浴を除去し、室温で１８時間撹拌した。水を反応混合物に添加し、これをジクロロメタン（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶液を濃縮して、粗生成物を得た。ジクロロメタン及びメタノールを用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにより、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ（１６ｍｇ、２３％）のジメチルエステルを無色液体として得た。

【0429】

メタノール（０．５ｍＬ）中のＨ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ（１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ_２Ｏ中のＬｉＯＨ（０_．４９ｍＬ、０．１Ｎ、０．０５ｍｍｏｌ）に添加した。室温で１６時間撹拌した後、これを酢酸でｐＨ＝６．５．に中和した。反応混合物を室温でエバポレーターで濃縮して、揮発性溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ（５ｍｇ、３３％）をオフホワイト色固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ５１Ｈ６２Ｎ６Ｏ１０Ｓについての計算値；９５１．１５；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋９５１．４。ＬＣ－ＭＳによる純度：９４．５１％ＲＴ：１．９８。ＨＰＬＣによる純度：９８．４１％ＲＴ：４．１３。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ ７．８１－７．７５（ｍ，４Ｈ）、７．５２－７．１７（ｍ，１０Ｈ）、４．９７－４．９０（ｍ，１Ｈ）、４．８０（ｓ，４Ｈ）、４．１４（ｓ，３Ｈ）、３．７７－３．４６（ｍ，１６Ｈ）、３．１０（ｓ，７Ｈ）、２．８３－２．８０（ｍ，２Ｈ）、２．５５－２．５３（ｍ，２Ｈ）、２．４２－２．３８（ｍ，３Ｈ）、２．１１－２．０８（ｍ，３Ｈ），１．３９－１．３５（ｍ，２Ｈ）、１．２０－１．１０（ｍ，４Ｈ）。

【0430】

実施例１５：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0431】

【化52】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ＰＳＭＢ１２７を、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍＬのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰の３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＨ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯを、振盪せずに、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ＰＳＭＢ１２７（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0432】

標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、０．０４７ｍＣｉ）及びＨ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７（部位特異的、ＣＡＲ＝２、ＰＢＳ緩衝溶液中２．８ｍｇ／ｍＬ、８μＬ、２２μｇ）を順次添加した。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0433】

【0434】

【0435】

ＨＰＬＣ分析：ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：４０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣＵＶトレース上に示した。

【0436】

実施例１６：ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６（部位特異的）の調製及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）標識化

【0437】

【化53】

ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：Ｈ１１Ｂ６を、２００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；ＡｃｔｉｖａＴＩ）で３７℃で部位選択的に修飾した。ＡｇｉｌｅｎｔＧ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。１ｍｌのＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して、過剰な３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを精製して除去した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７ＫＺｅｂａ脱塩カラムを使用して１×ｄＰＢＳに交換する。１０倍モル過剰のＤＯＴＡ－ＤＢＣＯを、振盪せずに、１×ｄＰＢＳ中、３７℃で１時間、部位特異的アジドＨ１１Ｂ６（ＤＯＬ＝１．９４）と反応させた。インタクト質量分析により、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを１×ｄＰＢＳに脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程及び３０ＫＭＷＣＯＡｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、ＰＢＳ中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝１．９４の最終部位特異的ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６コンジュゲートを得た。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。

【0438】

５０：１：のＨ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比での標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）及びＤＯＴＡ－Ｈ１１Ｂ６（部位特異的、ＣＡＲ＝１．９４、ＰＢＳ緩衝溶液中２．４ｍｇ／ｍＬ、１２．５μＬ、３０μｇ）を順次添加した。Ｈ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比は５０：１．である。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。約２１％の放射能シグナルがｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端で観察されたが、これは、約７９％のＡｃ－２２５が２時間後に反応溶液中でキレート化されたことを示す。

【0439】

実施例１７：様々なＳＡを標的化する^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）を有するＤＯＴＡ－ＤＢＣＯ－Ｈ１１Ｂ６（ランダムコンジュゲーション）の標識化

【0440】

【化54】

８８０：１のＨ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比での標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）、ＤＯＴＡ－Ｈ１１Ｂ６（ランダムコンジュゲート、ＣＡＲ約２．５、２５ｍＭ酢酸緩衝溶液中１０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．５、５０μＬ、５００μｇ）及びＮａＯＨ溶液（０．１Ｍ、２μＬ）を順次添加した。Ｈ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比は８８０：１である。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0441】

４４０：１のＨ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比での標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）、ＤＯＴＡ－Ｈ１１Ｂ６（ランダムコンジュゲート、ＣＡＲ約２．５、２５ｍＭ酢酸緩衝溶液中１０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．５、２５μＬ、２５０μｇ）及びＮａＯＨ溶液（０．１Ｍ、１μＬ）を順次添加した。Ｈ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比は４４０：１である。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、全てのＡｃ－２２５が、２時間後に反応溶液中で完全にキレート化されたことを示す。

【0442】

２２０：１のＨ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比での標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）、ＤＯＴＡ－Ｈ１１Ｂ６（ランダムコンジュゲート、ＣＡＲ約２．５、２５ｍＭ酢酸緩衝溶液中１０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．５、１２．５μＬ、１２５μｇ）及びＮａＯＨ溶液（０．１Ｍ、１μＬ）を順次添加した。Ｈ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比は２２０：１である。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。５％の放射能シグナルがｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端で観察されたが、これは、９５％のＡｃ－２２５が２時間後に反応溶液中でキレート化されたことを示す。

【0443】

１１０：１のＨ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比での標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）、ＤＯＴＡ－Ｈ１１Ｂ６（ランダムコンジュゲート、ＣＡＲ約２．５、２５ｍＭ酢酸緩衝溶液中１０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．５、６．２５μＬ、６２．５μｇ）及びＮａＯＨ溶液（０．１Ｍ、１μＬ）を順次添加した。Ｈ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比は１１０：１である。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。７１％の放射能シグナルがｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端で観察されたが、これは、２９％のＡｃ－２２５が２時間後に反応溶液中でキレート化されたことを示す。

【0444】

５５：１のＨ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比での標識化：プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃ（Ｈ_２Ｏ中３Ｍ、１０μＬ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ中約１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）、ＤＯＴＡ－Ｈ１１Ｂ６（ランダムコンジュゲート、ＣＡＲ約２．５、２５ｍＭ酢酸緩衝溶液中１０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ５．５、３．１３μＬ、３１．３μｇ）及びＮａＯＨ溶液（０．１Ｍ、１μＬ）を順次添加した。Ｈ１１Ｂ６：Ａｃ－２２５の比は５５：１である。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。反応溶液を３７℃で２時間放置した。次いで、０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。６４％の放射能シグナルがｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端で観察されたが、これは、３６％のＡｃ－２２５が２時間後に反応溶液中でキレート化されたことを示す。

【0445】

結論：実施例９、１６及び１７は、キレータを含むＤＯＴＡが、キレータを含むＨ２ｂｐ１８ｃ６と比較して、低いアクチニウムキレート化効能を有することを実証した。

【0446】

実施例１８：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロペンチル－縮合大員環及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0447】

【化55】

大員環上に環結合を有する上記のＨ_２ｂｐ１８ｃ６誘導体を、一般的に、以下のスキーム２１に従って合成する。

【0448】

【化56】

【0449】

標的化リガンドへのコンジュゲーションのためのリンカーを、例えば、スキーム３及び４に関して上述したように、中間体７をメチル６－（ブロモ（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）メチル）ピコリネートと反応させることによって「ベンジル」位置に導入することができる。シクロペンタン１，２－ジオール（化合物１）をシクロヘキサン１，２－ジオールと置き換えて、シクロヘキシル環縮合を有するＨ_２ｂｐ１８ｃ６誘導体を得ることができる。

【0450】

次に、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロペンチル－縮合大員環の合成を説明する。

【0451】

【化57】

【0452】

ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（５．６３ｇ、鉱油中６０％、１４７．０５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ）－シクロペンタン－１，２－ジオール（３．０ｇ、２９．４１ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再度０℃に冷却し、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１８．４４ｇ、８８．２３ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（１Ｒ，２Ｓ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロペンタン（３．５ｇ、３３％）を無色液体として得た。

【0453】

１００ｍＬのメタノール中の（（１Ｒ，２Ｓ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロペンタン（３．５ｇ、９．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬのジオキサン中ＨＣｌの溶液を添加し、１時間還流撹拌し、冷却し、蒸発させて、２，２’－（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２．０ｇ）を得て、これを精製せずに次の工程で使用した。

【0454】

ジクロロメタン（５０ｍＬ）及びトリエチルアミン（７．６０ｍＬ、５２．６３ｍｍｏｌ）中の２，２’－（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）２（２．０ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）の溶液に１０℃で、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（６．０ｇ、３１．５６ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応完了後、懸濁液を２００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、冷１ＭＨＣｌ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、続いて氷冷水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムを得た。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（２．２ｇ、４２％）を得た。

【0455】

５０ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（２．２ｇ、４．４２ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（４．３２ｇ、１３．２５ｍｍｏｌ）の混合物を、周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、５０ｍＬのＤＭＦ中の１，２－ビス（２－（トシル－λ^２－アザネイル）エトキシ）エタン（２．０６ｇ、４．４２ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを２００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（１６ａＲ，１９ａＳ）－４，１３－ジトシルテトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．８ｇ、６７％）を無色液体として得た。

【0456】

酢酸中臭化水素酸中（５０％、１０ｍＬ）の（１６ａＲ，１９ａＳ）－４，１３－ジトシルテトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．８ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（１．３８ｇ、１４．７５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。反応完了後、反応物を室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。残渣を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルを使用した逆相カラム精製により精製して、（１６ａＲ，１９ａＳ）－テトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（０．７ｇ、７８％）を無色液体として得た。

【0457】

乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）中の（１６ａＲ，１９ａＳ）－テトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（０．７ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリネート（１．７３ｇ、５．８０ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（０．７４ｇ、６．９６ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で１６時間加熱した。反応完了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物質を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製し、ジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，１９ａＳ）－テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（０．５５ｇ、３９％）を褐色液体として得た。

【0458】

６Ｎ塩酸（５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，１９ａＳ）－テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（０．５５ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で５時間加熱した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロペンチル－縮合大員環（０．３ｇ、５８％）を無色の粘着性の固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２９Ｈ４０Ｎ４Ｏ８についての計算値５７２．６６；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５７２．９。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．２７％ＲＴ：１．１７。ＨＰＬＣによる純度：９９．０５％ＲＴ：２．１２。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．８６－７．８４（ｍ，４Ｈ）、７．５９－７．５６（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，４Ｈ）、３．６０－３．４９（ｍ，１０Ｈ）、３．４４－３．４１（ｍ，４Ｈ）、２．７５－２．６８（ｍ，８Ｈ）、１．５７－１．４７（ｍ，６Ｈ）。

【0459】

【化58】

【0460】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）でのキレート化：０．１ＮＨＣｌ（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）中のテトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロペンチル－縮合大員環（水中２ｍｇ／ｍＬ、３μＬ）、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３をプラスチックバイアルに連続的に添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0461】

０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端面に移動する。ｉＴＬＣは９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0462】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端面に移動する。ｉＴＬＣは９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0463】

実施例１９：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－トランス－シクロペンチル－縮合大員環及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0464】

【化59】

ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（５．６３ｇ、鉱油中６０％、１４７．０５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｒ）－シクロペンタン－１，２－ジオール（３．０ｇ、２９．４１ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再び０℃に冷却し、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１８．４４ｇ、８８．２３ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（１Ｒ，２Ｒ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロペンタン（４．８ｇ、４６％）を無色液体として得た。

【0465】

１００ｍＬのメタノール中の（１Ｒ，２Ｒ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロペンタン（４．８ｇ、１３．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬのジオキサン中ＨＣｌを添加し、１時間還流撹拌し、冷却し、蒸発させて、２’－（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２．９ｇ）を得て、これを精製せずに次の工程で使用した。

【0466】

ジクロロメタン（５０ｍＬ）及びトリエチルアミン（１１．０３ｍＬ、７６．３１ｍｍｏｌ）中の２’－（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２．９ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）に１０℃で、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（８．７０ｇ、４５．７８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応完了後、懸濁液を２００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、冷１ＭＨＣｌ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、続いて氷冷水（２×１００）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムを得た。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（３．５ｇ、４６％）を無色液体として得た。

【0467】

５０ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（３．５ｇ、７．０３ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（６．８７ｇ、２１．０８ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、５０ｍＬのＤＭＦ中の１，２－ビス（２－（トシル－λ^２－アザニル）エトキシ）エタン（（３．１９ｇ、７．０３ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを２００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（１６ａＲ，１９ａＲ）－４，１３－ジトシルテトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（３．５ｇ、８２％）を無色液体として得た。

【0468】

酢酸中臭化水素酸（５０％、１５ｍＬ）中の（１６ａＲ，１９ａＲ）－４，１３－ジトシルテトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（３．５ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（２．７０ｇ、２８．６８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。反応完了後、反応物を室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。粗製物質を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルを使用した逆相カラム精製により精製して、（１６ａＲ，１９ａＲ）－テトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．３ｇ、７５％）を無色液体として得た。

【0469】

乾燥アセトニトリル（２０ｍＬ）中の（１６ａＲ，１９ａＳ）－テトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．３ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリネート（１．９９ｇ、１０．７６ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１．３７ｇ、１２．９０ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で１６時間加熱した。反応の完了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物質を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、ジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，１９ａＲ）－テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（１．０ｇ、３９％）を褐色液体として得た。

【0470】

６Ｎ塩酸（１０ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，１９ａＲ）－テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（１．０ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で５時間加熱した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－トランス－シクロペンチル－縮合大員環（０．８ｇ、８４％）を無色の粘着性の固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２９Ｈ４０Ｎ４Ｏ８についての計算値５７２．６６；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５７３．０。ＬＣ－ＭＳによる純度：９６．１０％ＲＴ：１．１８。ＨＰＬＣによる純度：９７．７７％ＲＴ：２．２９。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ１３．４２（ｓ，１Ｈ）、９．７０（ｓ，１Ｈ）、８．１５－８．０９（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７８（ｍ，２Ｈ）、４．６９（ｓ，４Ｈ）、３．９３－３．５５（ｍ，２２Ｈ）、１．９０－１．８５（ｍ，２Ｈ）、１．５７－１．５２（ｍ，２Ｈ）、１．４６－１．３９（ｍ，２Ｈ）。

【0471】

【化60】

【0472】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－トランス－シクロペンチル－縮合大員環（水中２ｍｇ／ｍＬ、３μＬ）、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３を０．１ＮＨＣｌ（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）に添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0473】

【0474】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下で、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端面に移動し、ｉＴＬＣは９９％キレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0475】

実施例２０：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロヘキシル縮合大員環及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0476】

【化61】

ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（３．３ｇ、鉱油中６０％、８６．２０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ）－１，２－シクロヘキサン－ジオール（２．０ｇ、１７．２４ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再度０℃に冷却し、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１０．８１ｇ、５１．７２ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（１Ｒ，２Ｓ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロヘキサン（２．５ｇ、３９％）を無色液体として得た。

【0477】

１００ｍＬのメタノール中の１Ｒ，２Ｓ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロヘキサン（２．５ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬのジオキサン中ＨＣｌを添加し、１時間還流撹拌し、冷却し、蒸発させた。粗２，２’－（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．５ｇ）を精製せずに次の工程で使用した。

【0478】

ジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（５．３１ｍＬ、３６．７６ｍｍｏｌ）中の２，２’－（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．５ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）の溶液に１０℃で、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（４．２０ｇ、２２．０５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応完了後、懸濁液を２００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、冷１ＭＨＣｌ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、続いて氷冷水（２×１００）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムを得た。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（１．９ｇ、５０％）を無色液体として得た。

【0479】

５０ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の（（（１Ｒ，２Ｓ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（１．９ｇ、３．７１ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（３．６３ｇ、１１．１３ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、５０ｍＬのＤＭＦ中の１，２－ビス（２－（トシル－λ^２－アザネイル）エトキシ）エタン（１．６８ｇ、３．７１ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを２００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して（１６ａＲ，２０ａＳ）－４，１３－ジトシルヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．２ｇ、５２％）を無色液体として得た。

【0480】

酢酸中臭化水素酸（５０％、５ｍＬ）中の（１６ａＲ，２０ａＳ）－４，１３－ジトシルヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．２ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（０．９ｇ、９．６１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。反応完了後、反応物を室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。残渣を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルを使用した逆相カラム精製により精製して、（１６ａＲ，２０ａＳ）－ヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（０．４５ｇ、７４％）を無色液体として得た。

【0481】

乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）中の（１６ａＲ，２０ａＳ）－ヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（０．４５ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリネート（０．６５ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（０．４５ｇ、４．２６ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物質を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、ジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，２０ａＳ）－ヘキサデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（０．２６ｇ、３０％）を褐色液体として得た。

【0482】

６Ｎ塩酸（５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，２０ａＳ）－ヘキサデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（０．２６ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で５時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、生成物Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロヘキシル－縮合大員環（０．１１ｇ、４４％）をオフホワイト色固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ３０Ｈ４２Ｎ４Ｏ８についての計算値５８６．６９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５８７．０。ＬＣ－ＭＳによる純度：９８．１５％ＲＴ：１．３１。ＨＰＬＣによる純度：９７．７８％ＲＴ：２．３２．^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１３．３５（ｓ，１Ｈ）、９．８４（ｓ，１Ｈ）、８．１５－８．０９（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７８（ｍ，２Ｈ）、４．７０（ｓ，４Ｈ）、３．９７－３．５４（ｍ，２２Ｈ）、１．７０－１．２３（ｍ，８Ｈ）。

【0483】

【化62】

【0484】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－シス－シクロヘキシル－縮合大員環（水中２ｍｇ／ｍＬ、３μＬ）、０．１ＮＨＣｌ中の^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）をプラスチックバイアルに順次添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0485】

０．５μＬの反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0486】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0487】

実施例２１：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－トランス－シクロヘキシル縮合大員環及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0488】

【化63】

ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（３．３ｇ、鉱油中６０％、８６．２０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｒ）－シクロヘキサン－１，２－ジオール（２．０ｇ、１７．２４ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再度０℃に冷却し、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１０．８１ｇ、５１．７２ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（１Ｒ，２Ｒ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロヘキサン（２．４５ｇ、３８％）を無色液体として得た。

【0489】

１００ｍＬのメタノール中の（１Ｒ，２Ｒ）－１，２－ビス（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）シクロヘキサン（２．４５ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬのジオキサン中ＨＣｌを添加し、１時間還流撹拌し、冷却し、蒸発させた。粗２，２’－（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．５ｇ）を精製せずに次の工程で使用した。

【0490】

ジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（５．３１ｍＬ、３６．７６ｍｍｏｌ）中の２，２’－（（（（１Ｒ，２Ｒ－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．５ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）の溶液に１０℃で、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（４．２０ｇ、２２．０５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。懸濁液を更に２００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、冷１ＭＨＣｌ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、続いて氷冷水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムを得た。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（２．１ｇ、５６％）を無色液体として得た。

【0491】

３０ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の（（（１Ｒ，２Ｒ）－シクロヘキサン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（２．１ｇ、４．１ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（４．０１ｇ、１２．３０ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、３０ｍＬのＤＭＦ中の１，２－ビス（２－（トシル－λ^２－アザニル）エトキシ）エタン（１．８６ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを２００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。残渣を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、（１６ａＲ，２０ａＲ）－４，１３－ジトシルヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．３５ｇ、５４％）を無色液体として得た。

【0492】

酢酸中臭化水素酸（５０％、５ｍＬ）中の（１６ａＲ，２０ａＲ）－４，１３－ジトシルヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（１．３５ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（１．０１ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。残渣を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルをで使用した逆相カラム精製により精製して、（１６ａＲ，２０ａＲ）－ヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（０．５ｇ、７２％）を無色液体として得た。

【0493】

乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）中の（１６ａＲ，２０ａＲ）－ヘキサデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（０．５ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリネート（０．７３ｇ、３．９５ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（０．５ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、ジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，２０ａＲ）－ヘキサデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（０．３ｇ、３１％）を褐色液体として得た。

【0494】

６Ｎ塩酸（５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（（１６ａＲ，２０ａＲ）－ヘキサデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリネート（０．３ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で５時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－トランス－シクロヘキシル－縮合大員環（０．１６ｇ、５６％）をオフホワイト色固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ３０Ｈ４２Ｎ４Ｏ８についての計算値５８６．６９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５８７．０。ＬＣ－ＭＳによる純度：９８．９７％ＲＴ：１．３１。ＨＰＬＣによる純度：９７．０８％ＲＴ：２．２７。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ１３．３５（ｓ，１Ｈ）、９．８４（ｓ，１Ｈ）、８．１６－８．１０（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７８（ｍ，２Ｈ）、４．７１（ｓ，４Ｈ）、４．００－３．８２（ｍ，８Ｈ）、３．７３－３．５３（ｍ，１２Ｈ）、３．２０－３．１８（ｍ，２Ｈ）、２．０３－２．００（ｍ，２Ｈ）、１．６１－１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．１５－１．０２（ｍ，４Ｈ）。

【0495】

【化64】

【0496】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－トランス－シクロヘキシル－縮合大員環（水中２ｍｇ／ｍＬ、３μＬ）、０．１ＮＨＣｌ中の^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）をプラスチックバイアルに順次添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0497】

【0498】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0499】

実施例２２：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシメチル異性体Ｉ及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0500】

【化65】

ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（３．３３ｇ、鉱油中６０％、８３．３３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の３－エトキシプロパン－１，２－ジオール（２．０ｇ、１６．６６ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再度０℃に冷却し、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１０．４４ｇ、４９．９８ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２，２’－（（（（３－エトキシプロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン）（２．２ｇ、３５％）を無色液体として得た。

【0501】

５０ｍＬのメタノール中の２，２’－（（（（３－エトキシプロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン）（２．２ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）の溶液に、１ｍＬのジオキサン中ＨＣｌを添加した。反応物を還流で１時間撹拌し、冷却し、そして蒸発させた。粗２，２’－（（３－エトキシプロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．３ｇ）を精製せずに次の工程で使用した。

【0502】

ジクロロメタン（３０ｍＬ）及びトリエチルアミン（４．５１ｍＬ、３１．２５ｍｍｏｌ）中の２，２’－（（３－エトキシプロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．３ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の溶液に１０℃で、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（３．５６ｇ、１８．７５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。懸濁液を２００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、冷１ＭＨＣｌ（３×１００ｍＬ）、続いて氷冷水（１×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムを得た。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）で精製により、（（３－エトキシプロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（２．０ｇ、６２％）を無色液体として得た。

【0503】

２５ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の（（３－エトキシプロパン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホネート）（２．０ｇ、３．８７ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（３．７９ｇ、１１．６２ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、２５ｍＬのＤＭＦ中の１，２－ビス（２－（トシル－λ^２－アザニル）エトキシ）エタン（１．７５ｇ、３．８７ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを２００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。残渣を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、２－（エトキシメチル）－７，１６－ジトシル－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（１．１ｇ、４５％）を無色液体として得た。生成物をＳＦＣによって更に精製して、２つのエナンチオマー異性体－Ｉ（０．３ｇ、１２％）及び異性体－ＩＩ（０．２６ｇ、１１％）を分解した。異性体Ｉ及びＩＩの立体化学を恣意的に割り当てた。

【0504】

酢酸（５０％、１ｍＬ）中の（Ｓ）－２－（エトキシメチル）－７，１６－ジトシル－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（異性体Ｉ、０．３ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（０．２２ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。残渣を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルをで使用した逆相カラムにより精製して、（Ｒ）－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－２－イル）メチルアセテート（恣意的に割り当てられた立体化学）（０．１ｇ、６３％）を無色液体として得た。

【0505】

乾燥アセトニトリル（３ｍＬ）中の（Ｒ）－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－２－イル）メチルアセテート（恣意的に割り当てられた立体化学）（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリネート（１３８ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１５９ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を９０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）によって精製し、ジメチル６，６’－（（２－（アセトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン）－（Ｒ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（５０ｍｇ、２６％）を褐色液体として得た。

【0506】

メタノール（１ｍＬ）中の６，６’－（（２－（アセトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン）－（Ｒ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、１０分間撹拌した。これを減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））－（Ｓ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（２２ｍｇ、４８％）を褐色液体として得た。

【0507】

６Ｎ塩酸（０．５ｍＬ）中の６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））－（Ｓ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（２２ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で５時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシメチル異性体Ｉ（１２ｍｇ、５７％）を粘着性の固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２７Ｈ３８Ｎ４Ｏ９についての計算値５６２．６２；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５６２．８。ＬＣ－ＭＳによる純度：９６．８９％ＲＴ：１．６１。ＨＰＬＣによる純度：９６．４７％ＲＴ：１．５７。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ３．３９（ｓ，１Ｈ）、９．８１（ｓ，１Ｈ）、８．１４－８．０９（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７８（ｍ，２Ｈ）、４．７０（ｓ，４Ｈ）、３．９８－３．８５（ｍ，１０Ｈ）、３．６０－３．４２（ｍ，１５Ｈ）。

【0508】

【化66】

【0509】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシルメチル異性体Ｉ（水中２ｍｇ／ｍＬ、３μＬ）、０．１ＮＨＣｌ中の^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）をプラスチックバイアルに順次添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0510】

【0511】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0512】

実施例２３：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシメチル異性体ＩＩ及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0513】

【化67】

酢酸（５０％，１ｍＬ）中の（Ｒ）－２－（エトキシメチル）－７，１６－ジトシル－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（恣意的に割り当てられた立体化学）（異性体ＩＩ、０．２６ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（１９７ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。残渣を、水（０．１％ＴＦＡ）中の０～１００％アセトニトリルを使用した逆相カラム精製により精製して、（Ｓ）－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－２－イル）メチルアセテート（恣意的に割り当てた立体化学）（０．０６ｇ、４３％）を無色液体として得た。

【0514】

（Ｓ）－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－２－イル）メチルアセテート（恣意的に割り当てられた立体化学）（０．０６ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリネート（０．０８３ｇ、乾燥アセトニトリル（３ｍＬ）中、０．４５ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（０．０９５ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を９０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製し、ジメチル６，６’－（（２－（アセトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））－（Ｓ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（０．０２５ｇ、２２％）を褐色液体として得た。

【0515】

メタノール（０．５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（アセトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））－（Ｓ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（０．０２５ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（０．５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を１０分間撹拌した。これを減圧下で濃縮した。粗生成物を、ジクロロメタン中の０～１０％メタノールの勾配で溶出するシリカ（２３０～４００メッシュ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、ジメチル６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））－（Ｒ）－ジピコリネート（０．０１ｇ、４３％）を褐色液体として得た。

【0516】

６Ｎ塩酸（０．５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））－ジピコリネート（０．０１ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で３時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシメチル異性体ＩＩ（４ｍｇ、４４％）を粘着性の液体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２７Ｈ３８Ｎ４Ｏ９についての計算値５６２．６２；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５６２．８。ＬＣ－ＭＳによる純度：９６．８９％ＲＴ：６．３１。ＨＰＬＣによる純度：９３．９７％ＲＴ：６．６７。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ１３．３４（ｓ，１Ｈ）、９．８６（ｓ，１Ｈ）、８．１３－８．１１（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７８（ｍ，２Ｈ）、４．７０（ｓ，４Ｈ）、３．９５－３．８４（ｍ，１０Ｈ）、３．５８－３．４２（ｍ，１５Ｈ）。

【0517】

【化68】

【0518】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシルメチル異性体ＩＩ（水中２ｍｇ／ｍＬ、３μＬ）、０．１ＮＨＣｌ中の^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）をプラスチックバイアルに順次添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0519】

【0520】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0521】

実施例２４：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エトキシルメチル異性体Ｉ及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0522】

【化69】

ＤＭＦ（２ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（１００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）（恣意的に割り当てられた立体化学）の撹拌溶液に０℃で、水素化ナトリウム（１０ｍｇ、鉱油中６０％分散液、０．２５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、１０時間撹拌した。反応混合物を再び０℃に冷却し、ＤＭＦ（１ｍｌ）中のヨウ化エチル（３９ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、２０ｕＬ）の溶液を滴加した。反応混合物を室温にし、次いでこの温度で２時間撹拌した。反応完了後（ＬＣＭＳによりモニタリング）、反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。次いで、合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を、溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、生成物ジメチル６，６’－（（２－（エトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（恣意的に割り当てられた立体化学）（４５ｍｇ、４２％）を褐色液体として得た。

【0523】

ＴＨＦ（０．２５ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）及びメタノール（０．２５ｍＬ）中のジメチル６，６’－（（２－（エトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリネート（４５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）（恣意的に割り当てられた立体化学）の撹拌溶液に、水酸化リチウム一水和物（９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応完了後（ＵＰＬＣ－ＭＳによりモニタリング）、反応のｐＨを１．５ＭＨＣｌ水溶液を用いて３～４に調整し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エトキシルメチル異性体Ｉ（２８ｍｇ、６６％）を粘着性の液体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２９Ｈ４２Ｎ４Ｏ９について計算値５９０．３０；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋５９１．２。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．５９％ＲＴ：１．１９。ＨＰＬＣによる純度：９６．１２％ＲＴ：２．０１。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ１３．４０（ｓ，１Ｈ）、９．７５（ｓ，１Ｈ）、８．１６－８．０９（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７８（ｍ，２Ｈ）、４．６９（ｓ，４Ｈ）、３．９８－３．３４（ｍ，２８Ｈ）、１．０６（ｔ，Ｊ＝６．８０Ｈｚ，３Ｈ）。

【0524】

【化70】

【0525】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシルメチル異性体Ｉ（水中１ｍｇ／ｍＬ、１μＬ）、０．１ＮＨＣｌ中の^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）をプラスチックバイアルに順次添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0526】

【0527】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0528】

実施例２５：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エトキシルメチル異性体ＩＩ及び^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）キレートの合成

【0529】

【化71】

ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の６，６’－（（２－（ヒドロキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｒ）－ジピコリネートジメチル（恣意的に割り当てられた立体化学）（６０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に０℃で、水素化ナトリウム（６ｍｇ、鉱油中６０％分散液、０．１５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、１０時間撹拌した。反応混合物を再び０℃に冷却し、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のヨウ化エチル（２３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１２ｕＬ）の溶液を滴加した。反応混合物を室温にし、次いでこの温度で２時間撹拌した。反応完了後（ＬＣＭＳによりモニタリング）、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。次いで、合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を、溶出液としてジクロロメタン中の５％メタノールを使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、６，６’－（（２－（エトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｒ）－ジピコリネートジメチル（恣意的に割り当てられた立体化学）（２０ｍｇ、３２％）を褐色液体として得た。

【0530】

ＴＨＦ（０．１ｍＬ）、水（０．２５ｍＬ）、メタノール（０．１ｍＬ）中の６，６’－（（２－（エトキシメチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｒ）－ジピコリネートジメチル（恣意的に割り当てられた立体化学）（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（４ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応完了後（ＵＰＬＣ－ＭＳによりモニタリング）、反応物のｐＨを１．５ＭＨＣｌ水溶液を用いて３～４に調整し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エトキシルメチル異性体ＩＩ（５ｍｇ、２６％）を粘着性の液体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２９Ｈ４２Ｎ４Ｏ９について計算値５９０．３０；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋５９１．３。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．２８％，ＲＴ：１．１９９。ＨＰＬＣによる純度：９７．６０％ＲＴ：２．０１。１ＨＮＭＲ１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ１３．４０（ｓ，１Ｈ）、９．７２（ｓ，１Ｈ）、８．１６－８．００（ｍ，４Ｈ）、７．８０－７．７７（ｍ，２Ｈ）、４．６９（ｓ，４Ｈ）、４．３４－３．３８（ｍ，２８Ｈ）、１．０６（ｔ，Ｊ＝６．８０Ｈｚ，３Ｈ）。

【0531】

【化72】

【0532】

^２２５Ａｃ（ＩＩＩ）によるキレート化：テトラメチルアンモニウムアセテート（１Ｍ、１０μＬ）、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ヒドロキシルメチル異性体ＩＩ（水中１ｍｇ／ｍＬ、１μＬ）、０．１ＮＨＣｌ中の^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（１０ｍＣｉ／ｍＬ、３μＬ、３０μＣｉ）をプラスチックバイアルに順次添加した。ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間加熱した。

【0533】

【0534】

０．５μＬの反応混合物を１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣを、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで２０時間後に走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒とともに溶媒先端に移動する。ｉＴＬＣは、９９％のキレート化Ａｃ－２２５を示した。

【0535】

実施例２６：Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ＮＣＳの合成

【0536】

【化73】

工程１：水素化ナトリウム（１８．１６ｇ、鉱油中６０％、４５４ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５００ｍＬ）中の（Ｓ）－（＋）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（５０ｇ、３７８ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。この温度で１０分間撹拌した後、臭化ベンジル（７７．６３ｇ、４５４ｍｍｏｌ）をこの懸濁液にゆっくりと添加した。反応物を３０分後に室温にし、更に８時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液を用いてクエンチし、ジクロロメタン（２×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を除去した後、残渣を石油エーテル及び酢酸エチルを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、化合物１（７２ｇ、８６％）を無色液体として得た。

【0537】

工程２：化合物１（７２ｇ、３２４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、ＨＣｌ（１．５Ｎ、１００ｍＬ）水溶液を添加し、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、１０％重炭酸ナトリウム溶液で中和した。溶液を酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、石油エーテル及び酢酸エチルを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製して、化合物２（５１ｇ、８５％）を無色油状物を得た。

【0538】

工程３：ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２６．２９ｇ、鉱油中６０％、６８６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の化合物２（２５．０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。これを再度０℃に冷却し、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（（８５．８９ｇ、４１１ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液を使用してクエンチし、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製の油を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を使用したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物３（３２ｇ、５３％）を無色液体として得た。

【0539】

工程４：５００ｍＬのメタノール中の化合物３（３２ｇ、７３．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、５ｍＬのジオキサン中ＨＣｌを添加し、１時間還流撹拌し、冷却し、蒸発させた。粗製物質４（２０ｇ）を精製せずに次の工程で使用した。

【0540】

工程５：化合物４（２０ｇ、７４．０７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５０ｍＬ）及びトリエチルアミン（５３ｍＬ、３７０ｍｍｏｌ）に溶解した。溶液を１０℃に冷却し、固体ｐ－トルエンスルホニルクロリド（４２．２０ｇ、２２２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応完了後、懸濁液を１０００ｍＬのジクロロメタンで更に希釈し、冷ＨＣｌ（１Ｍ、３×２００ｍＬ）水溶液、氷冷水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、固体のガムとした。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製した。生成物５（３０ｇ、７０％）を無色液体として得た。

【0541】

工程６：２００ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の化合物５（３０ｇ、５１．９ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（５０．７６ｇ、１５５．７ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。懸濁液に、２００ｍＬのＤＭＦ中の化合物６（２３．５６ｇ、５１．９ｍｍｏｌ）を２時間にわたって滴加した。混合物を周囲温度で更に２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、固体ペーストを得た。これを１０００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁し、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾別し、濾液を高真空下で蒸発させた。粗製物質を、石油エーテル中の酢酸エチル（０～４０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製した。生成物７（２４ｇ、６７％）を無色液体として得た。

【0542】

工程７：臭化水素酸（酢酸５０％、１００ｍＬ）中の化合物７（２４ｇ、３４．７８ｍｍｏｌ）の溶液に、フェノール（１６．３５ｇ、１７４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を６０℃で６時間加熱した。反応完了後、これを室温に冷却し、酢酸を高真空下で除去した。粗生成物を、アセトニトリル及び水中０．１％ＴＦＡを使用した逆相カラム精製により精製し、化合物８（８．０ｇ、６９％）を無色液体として得た。

【0543】

工程８：乾燥アセトニトリル（１００ｍＬ）中の化合物８（８．０ｇ、２３．９５ｍｍｏｌ）、化合物９（１１．０７ｇ、５９．８８ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１２．６９ｇ、１１９．７５ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で１６時間加熱した。反応完了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトに通して濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物質を、ジクロロメタン中のメタノール（０～１０％）を使用したフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２３０～４００メッシュ）により精製した。生成物１０（５．０ｇ、３３％）を褐色液体として得た。

【0544】

工程９：メタノール（５０ｍＬ）中の化合物１０（５．０ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（０．１１ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を室温で添加し、１０分間撹拌した。反応完了後、これを減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中の０～１０％メタノールの勾配で溶出させるシリカ（２３０～４００メッシュ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物１１（３．５ｇ、７５％）を褐色液体として得た。

【0545】

工程１０：ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の化合物１１（１．０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．５１ｇ、０．７０ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を添加した。塩化メシル（０．３９ｇ、０．２６ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）をこの溶液に０℃で滴加した。反応物を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、これを濃縮し、粗生成物を溶出液としてジクロロメタン中のメタノール（１～２％）を使用してカラムクロマトグラフィー（アルミナ－中性）により精製して、化合物１２（０．７ｇ、６２％）を褐色液体として得た。

【0546】

工程１１：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１３（５３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（１２ｍｇ、鉱油中６０％、０．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物に化合物１２（１００ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中に０℃で添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。粗生成物を、アセトニトリル及び０．１％ＴＦＡを使用した分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１４（２０ｍｇ、１８％）を褐色液体として得た。

【0547】

工程１２：６Ｎ塩酸（０．５ｍＬ）中の化合物１４（２０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩撹拌した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、生成物Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルサルファイドアミン（６ｍｇ、３６％）を粘着性の固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ２９Ｈ４３Ｎ５Ｏ８Ｓについて計算値６２１．７５；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋６２２．２。ＬＣ－ＭＳによる純度：９７．９４％ＲＴ：１．３８。ＨＰＬＣによる純度：９４．１１％ＲＴ：２．９４。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１１．０２－１１．００（ｍ，２Ｈ）、８．２１（ｓ，２Ｈ）、８．１６－８．０９（ｍ，４Ｈ）、７．９３－７．９０（ｍ，２Ｈ）、４．７８－４．７５（ｍ，４Ｈ）、４．１５－３．９３（ｍ，９Ｈ）、３．５６－３．５０（ｍ，１４Ｈ）、２．９７－２．９６（ｍ，２Ｈ）、２．８１－２．７９（ｍ，２Ｈ）、２．７０－２．６７（ｍ，２Ｈ）。

【0548】

【化74】

【0549】

工程１：化合物１４（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）に、メタノール（２ｍＬ、４Ｎ）中のＨＣｌの冷溶液を添加し、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、化合物２を黄色液体として得た（５５ｍｇ、６４％）。

【0550】

工程２：乾燥ジクロロメタン（２ｍＬ）中の化合物１５（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、二硫化炭素（１２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルに、ＭＷ照射（１５０Ｗ電力）を９０℃で３０分間供した。その後、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１ＭＨＣｌ（５ｍＬ）、水（５ｍＬ）で連続的に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、粗生成物を溶出液としてジクロロメタン中の０～１０％メタノールを使用したシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（２３０～４００メッシュ）により精製して、化合物１６１６（２０ｍｇ、３８％）を黄色固体として化得た。

【0551】

工程３：化合物１６（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の塩酸（６Ｎ、０．５ｍＬ）溶液を室温で一晩撹拌した。反応完了後、これを減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィドＮＣＳ（６ｍｇ、３１％）を白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ３０Ｈ４１Ｎ５Ｏ８Ｓ２について計算値：６６３．８１；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋６６４．２。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．９４％ＲＴ：１．４１。ＨＰＬＣによる純度：９８．７７％ＲＴ：２．７６。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ９．７８（ｓ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，４Ｈ）、７．７８（ｄ，Ｊ＝６．００Ｈｚ，２Ｈ）、４．６９（ｓ，４Ｈ）、３．９６－３．５２（ｍ，２３Ｈ）、２．８５（ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ）、２．７０（ｔ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，２Ｈ）。

【0552】

【化75】

【0553】

工程１：ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の化合物１７（１．０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．５１ｇ、０．７０ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を添加した。塩化メシル（０．３９ｇ、０．２６ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）をこの溶液に０℃で滴加した。反応物を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、これを濃縮し、残渣を溶出液としてジクロロメタン（１～２％）中メタノールを使用したカラムクロマトグラフィー（アルミナ－中性）により精製して、化合物１８（０．７ｇ、６２％）を褐色液体として得た。

【0554】

工程２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１９（６５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（１２ｍｇ、鉱油中６０％、０．３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物１８（１００ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによりモニタリングした。反応完了後、これを濃縮し、残渣をアセトニトリル及び０．１％ＴＦＡを使用した分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物２０（１５ｍｇ、１３％）を褐色液体として得た。

【0555】

工程３：塩酸（６Ｎ，０．５ｍＬ）中の化合物２０（１５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩撹拌した。反応完了後、これを減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、生成物Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィドアミン（４ｍｇ、３３％）を粘着性の液体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ３２Ｈ４９Ｎ５Ｏ８Ｓについて計算値６６３．８３；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋６６４．２。ＬＣ－ＭＳによる純度：９０．３１％ＲＴ：１．４３。ＨＰＬＣによる純度：９０．６９％ＲＴ：３．１１。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ７．８５－７．８３（ｍ，２Ｈ）、７．７９－７．７５（ｍ，２Ｈ）、７．３０（ｄｄ，Ｊ＝６．８０，２４．００Ｈｚ，２Ｈ）、４．０１－３．３８（ｍ，２９Ｈ）、２．８９－２．８５（ｍ，４Ｈ）、１．８０－１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．４４－１．３９（ｍ，４Ｈ）。

【0556】

【化76】

【0557】

工程１：化合物２０（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）に、メタノール（２ｍＬ、４Ｎ）中のＨＣｌの冷溶液を添加し、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、化合物２１を黄色液体として得た（７０ｍｇ、６６％）。

【0558】

工程２：乾燥ジクロロメタン（２ｍＬ）中の化合物２１（７０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、二硫化炭素（１５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルに、ＭＷ照射（１５０Ｗ電力）を９０℃で３０分間供した。その後、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１ＭＨＣｌ（５ｍＬ）、水（５ｍＬ）で連続的に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、粗生成物を溶出液としてジクロロメタン中０～１０％メタノールを使用したシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（２３０～４００メッシュ）により精製して、化合物２２（３０ｍｇ、４０％）を黄色固体として得た。

【0559】

工程３：塩酸（６Ｎ，０．５ｍＬ）中の化合物２２（３０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩撹拌した。反応完了後、これを減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィドＮＣＳ（１２ｍｇ、４１％）を白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳＡＰＣＩ：Ｃ３３Ｈ４７Ｎ５Ｏ８Ｓ２について計算値：７０５．８９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋７０６．２。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．３３％ＲＴ：１．５８。ＨＰＬＣによる純度：９８．９２％ＲＴ：２．７６。^１ＨＮＭＲ１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１３．４０（ｓ，１Ｈ）、９．９０（ｓ，１Ｈ）、８．１７－８．０９（ｍ，４Ｈ）、７．７８（ｄ，Ｊ＝６．８０Ｈｚ，２Ｈ）、４．７０（ｓ，４Ｈ）、３．９３－３．１７（ｍ，２７Ｈ）、２．６８－２．６７（ｍ，２Ｈ）、１．６４－１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．５３－１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．４０－１．３８（ｍ，２Ｈ）。

【0560】

実施例２６：放射性免疫コンジュゲートの特性
表１は、実施例で調製した放射性免疫コンジュゲートのキレート化効率を要約したものである。

【0561】

【表1】

【0562】

４つ^２２５Ａｃ－キレータ－ｍＡｂコンジュゲートのヒト血清安定性は、以下の方法に従って測定される。
^２２５Ａｃ－Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７
^２２５Ａｃ－Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－エチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７
^２２５Ａｃ－Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－オフ大員環－ペンチルスルフィド－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７
^２２５Ａｃ－Ｈ２ｂｐ１８ｃ６－ベンジル－フェニル－ＢＣＮ－ＰＳＭＢ１２７

【0563】

９００μＬのプールされたヒト血清（ＢｉｏＩＶＴ）の各溶液に、１００μＬの約３００μＣｉ／ｍｇの４つのコンジュゲートのうちの１つを添加する。個々のコンジュゲート溶液を混合し、１０μＬを７日間にわたっていくつかの時点で回収する。各１０μＬの試料を、３０μＬの５０ｍＭのＤＴＰＡを含む別個のプラスチックバイアルに移し、室温で５分間放置する。１０μＬの混合物を回収し、次いで、ｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナで走査した。本明細書に記載の溶出条件下では、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒とともに溶媒先端に移動する。安定性の結果を表２に列挙する。

【0564】

【表2】

【0565】

実施例２７：放射性免疫コンジュゲート細胞結合アッセイ
アジド修飾抗体及び本発明のキレータ又は放射性金属錯体にコンジュゲートしたアジド修飾抗体の細胞結合を、親抗体と比較する。抗体の抗原標的を発現する細胞を、緩衝液で希釈した親抗体、アジド修飾抗体又はコンジュゲート抗体とともにインキュベートし、次いでフローサイトメトリーによる細胞結合について分析する。

【0566】

本明細書に記載された実施例及び実施形態は、例示のみを目的としたものであり、上述の実施形態に対する変更は、その広範な発明概念から逸脱することなくなされ得ることが理解される。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に制限されず、添付の特許請求の範囲によって定義されるような本発明の趣旨及び範囲内の修正をも包含することを意図するものと理解される。

【0567】

参考文献
１．ＷＯ２０１８／１８３９０６
２．Ｔｈｉｅｌｅｅｔａｌ．「ＡｎＥｉｇｈｔｅｅｎ－ＭｅｍｂｅｒｅｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＬｉｇｆｏｒＡｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ＴａｒｇｅｔｅｄＡｌｐｈａＴｈｅｒａｐｙ」Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．（２０１７）５６，１４７１２－１４７１７。
３．Ｒｏｃａ－Ｓａｂｉｏｅｔａｌ．「ＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＲｅｃｅｐｔｏｒＥｘｈｉｂｉｔｉｎｇＵｎｐｒｅｃｅｄｅｎｔｅｄＳｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｆｏｒＬｉｇｈｔＬａｎｔｈａｎｉｄｅｓ」Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００９）１３１，３３３１－３３４１。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【配列表】

2022532157000001.app

【国際調査報告】

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