特表 2022-532162 移植片対宿主病の処置のためのβ－ラクタマーゼ組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-13

(54)【発明の名称】移植片対宿主病の処置のためのβ－ラクタマーゼ組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/46 20060101AFI20220706BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 47/04 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220706BHJP

   C12N 9/86 20060101ALN20220706BHJP

【ＦＩ】

A61K38/46 ZNA

A61P37/06

A61K47/02

A61K47/04

A61K9/20

A61K9/48

A61K9/08

C12N9/86

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021566450

(86)(22)【出願日】2020-05-05

(85)【翻訳文提出日】2022-01-04

(86)【国際出願番号】 US2020031429

(87)【国際公開番号】W WO2020227262

(87)【国際公開日】2020-11-12

(31)【優先権主張番号】62/843,849

(32)【優先日】2019-05-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】516293727

【氏名又は名称】シンセティック・バイオロジクス・インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】特許業務法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】カレコ、ミヒャエル

(72)【発明者】

【氏名】コネリー、シーラ

(72)【発明者】

【氏名】ファン デン ブリンク、マルセル、アール．エム．

(72)【発明者】

【氏名】ペレド、ジョナサン

(72)【発明者】

【氏名】ダ シルヴァ、マリナ、ブルゴス

【テーマコード（参考）】

4B050

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4B050CC01

4B050CC03

4B050DD02

4B050LL01

4C076AA12

4C076AA36

4C076AA53

4C076AA95

4C076BB01

4C076CC50

4C076DD22Z

4C076DD23Z

4C076FF25

4C076FF61

4C076FF68

4C084AA02

4C084BA44

4C084DC22

4C084MA16

4C084MA35

4C084MA37

4C084MA52

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB081

(57)【要約】

本発明は、部分的には、ａＧＶＨＤ並びにＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症などのａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントにおけるβ－ラクタム系抗生物質の静脈内使用に関連する合併症の発生率及び／又は重症度を、β－ラクタマーゼ剤を用いて低減させる方法及び組成物に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

有効量のβ－ラクタマーゼ剤を投与することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発生率及び／又は重症度を、その低減を必要とする対象において低減させる方法。

【請求項2】

前記β－ラクタマーゼ剤は配列番号１又は配列番号６と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記β－ラクタマーゼ剤は配列番号１又は配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記対象は移植レシピエントである、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記対象は同種造血幹細胞移植のレシピエントである、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記対象は、骨髄細胞、末梢血細胞、又は臍帯細胞のレシピエントである、請求項１～５のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

前記対象はβ－ラクタム系抗生物質が静脈内投与されるか、又は静脈内投与されている、請求項１～６のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

前記β－ラクタム系抗生物質は、ペニシリン（例えば、ピペラシリン／タゾバクタム）、セファロスポリン（例えば、セフェピム）、及び／又はカルバペネム（例えば、メロペネム、イミペネム／シラスタチン）から選択される、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記ＧＶＨＤは急性である、請求項１～８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

前記β－ラクタマーゼは移植の前に投与される、請求項４～９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

前記β－ラクタマーゼは移植に続いて投与される、請求項４～１０のいずれかに記載の方法。

【請求項12】

前記対象において腸のディスバイオシス（dysbiosis）が低減又は除去される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記対象の腸内マイクロバイオーム内の新たな定着（colonization）が予防される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記対象の腸内マイクロバイオーム内の定着の拡大が予防される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

腸内マイクロバイオームの単一優占化（monodomination）が予防される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記マイクロバイオームの定着、定着の拡大、又は単一優占化は、１種類又は複数種類の多剤耐性生物を含む、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記１種類又は複数種類の多剤耐性生物は、エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、バチルス属（Bacillus）（例えば、バチルス・セレウス（Bacillus cereus））、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、ボルデテラ属（Bordetella）、ボレリア属（Borrelia）、ブルセラ属（Brucella）、バークホルデリア属（Burkholderia）、Ｃ・デフィシル（C. difficile）、カンピロバクター属（Campylobacter）（例えば、カンピロバクター・フィタス（Campylobacter fetus）及びカンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni））、クラミジア属（Chlamydia）、クラミドフィラ属（Chlamydophila）、クロストリジウム属（Clostridium）（例えば、クロストリジウム・ボツリヌム（Clostridium botulinum）、クロストリディオイデス・デフィシル（Clostridioides difficile）（旧名クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile））、及びクロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium perfringens））、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、コクシエラ属（Coxiella）、エーリキア属（Ehrlichia）、腸内細菌科（Enterobacteriaceae）（例えば、カルバペネム耐性腸内細菌科（ＣＲＥ）及び基質拡張型β－ラクタマーゼ産生腸内細菌科（ＥＳＢＬ－Ｅ））、フルオロキノロン耐性腸内細菌科、腸球菌属（Enterococcus）（例えば、バンコマイシン耐性腸球菌属菌種、基質拡張型β－ラクタム耐性腸球菌（ＥＳＢＬ）、及びバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ））、大腸菌属（Escherichia）（例えば、腸管凝集性大腸菌、腸管出血性大腸菌、腸管侵入性大腸菌、腸管病原性大腸菌、腸管毒素原性大腸菌（例えば、これらに限定されないが、ＬＴ及び／又はＳＴ）、大腸菌０１５７：１－１７、及び多剤耐性菌大腸菌）、フランシセラ属（Francisella）、ヘモフィルス属（Haemophilus）、ヘリコバクター属（Helicobacter）（例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori））、クレブシエラ属（Klebsiella）（例えば、クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiellia pneumonia）及び多剤耐性菌クレブシエラ）、レジオネラ属（Legionella）、レプトスピラ属（Leptospira）、リステリア属（Listeria）（例えば、リステリア・モノサイトゲネス（Lysteria monocytogenes））、モルガネラ属（Morganella）、マイコバクテリウム属（Mycobacterium）、マイコプラズマ属（Mycoplasma）、ナイセリア属（Neisseria）、オリエンティア属（Orientia）、プレジオモナス・シゲロイデス（Plesiomonas shigelloides）、抗生物質耐性プロテオバクテリア、プロテウス属（Proteus）、シュードモナス属（Pseudomonas）、リケッチア属（Rickettsia）、サルモネラ属（Salmonella）（例えば、サルモネラ・パラチフィ（Salmonella paratyphi）、サルモネラ属菌種、及びサルモネラ・チフィ（Salmonella typhi））、シゲラ属（Shigella）（例えば、シゲラ属菌種）、スタフィロコッカス属（Staphylococcus）（例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）及びスタフィロコッカス属菌種）、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、トレポネーマ属（Treponema）、ビブリオ属（Vibrio）（例えば、ビブリオ・コレラエ（Vibrio cholerae）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Vibrio parahaemolyticus）、ビブリオ属菌種、及びビブリオ・バルニフィカス（Vibrio vulnificus））、並びにエルシニア属（Yersinia）（例えば、エルシニア・エンテロコリチカ（Yersinia enterocolitica））から選択される、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記マイクロバイオームの定着、定着の拡大、又は単一優占化は、腸球菌種の異常増殖を含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記マイクロバイオームの定着、定着の拡大、又は単一優占化は、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ＧＶＨＤの処置のための治療薬剤の用量又は投与の長さ若しくは投与頻度が低減される、請求項１～１９のいずれかに記載の方法。

【請求項21】

ＧＶＨＤの処置のための前記治療薬剤はステロイドである、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ＧＶＨＤの処置のための前記治療薬剤はメチルプレドニゾロン又はプレドニゾンである、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記β－ラクタマーゼ剤は小腸中で放出される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記β－ラクタマーゼ剤は、十二指腸、空腸、回腸、及び／又は回盲部のうちの１又は複数で放出される、請求項２２に記載の方法。

【請求項25】

前記β－ラクタマーゼ剤は大腸中で放出される、請求項１～２１のいずれかに記載の方法。

【請求項26】

前記β－ラクタマーゼ剤は、盲腸、結腸の上行部、横行部、下行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの少なくとも１又は複数で放出される、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記β－ラクタマーゼ剤は、胃液中で実質的に安定である放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記β－ラクタマーゼ剤は、ｐＨ依存性の溶解性を有する放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記β－ラクタマーゼ剤は、時間依存的浸食プロファイルを有する放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記β－ラクタマーゼ剤は、腸内細菌叢に存在する微生物の酵素により分解される放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記β－ラクタマーゼ剤はカプセル剤又は錠剤として製剤化される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記β－ラクタマーゼ剤は経口投与用に製剤化される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

有効量のβ－ラクタマーゼ剤を投与することを含む、移植レシピエントである対象において１又は複数の多剤耐性病原菌による定着、定着の拡大、若しくは単一優占化、及び／又は感染の発生を予防又は低減する方法。

【請求項34】

前記β－ラクタマーゼ剤は配列番号１又は配列番号６と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記β－ラクタマーゼ剤は配列番号１又は配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項３３に記載の方法。

【請求項36】

前記対象は、長期に及ぶ入院期間を経験したか、及び／又は前記定着及び／又は感染による死亡リスクが上昇している、請求項３３に記載の方法。

【請求項37】

前記対象は同種造血幹細胞移植のレシピエントである、請求項３３に記載の方法。

【請求項38】

前記対象は、骨髄細胞、末梢血細胞、又は臍帯細胞のレシピエントである、請求項３３～３７のいずれかに記載の方法。

【請求項39】

前記対象はβ－ラクタム系抗生物質が静脈内投与されるか、又は静脈内投与されている、請求項３３～３８のいずれかに記載の方法。

【請求項40】

前記β－ラクタム系抗生物質は、ペニシリン（ピペラシリン／タゾバクタム）、セファロスポリン（セフェピム）、イミペネム／シラスタチン、及びメロペネムから選択される、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記β－ラクタマーゼは移植の前に投与される、請求項３３～４０のいずれかに記載の方法。

【請求項42】

前記β－ラクタマーゼは移植に続いて投与される、請求項３６～４１のいずれかに記載の方法。

【請求項43】

前記対象において腸のディスバイオシスが低減又は除去される、請求項３３～４２のいずれか一項に記載の方法

【請求項44】

前記対象の腸内マイクロバイオーム内の新たな定着（colonization）が予防される、請求項３３～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記対象の腸内マイクロバイオーム内の定着の拡大が予防される、請求項３３～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

腸内マイクロバイオームの単一優占化（monodomination）が予防される、請求項３３～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記マイクロバイオームの定着、定着の拡大、又は単一優占化は、１又は複数の多剤耐性生物を含む、請求項３３～４６のいずれか一項に記載の方法

【請求項48】

前記１又は複数の多剤耐性生物は、エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、バチルス属（Bacillus）（例えば、バチルス・セレウス（Bacillus cereus））、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、ボルデテラ属（Bordetella）、ボレリア属（Borrelia）、ブルセラ属（Brucella）、バークホルデリア属（Burkholderia）、Ｃ・デフィシル（C. difficile）、カンピロバクター属（Campylobacter）（例えば、カンピロバクター・フィタス（Campylobacter fetus）及びカンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni））、クラミジア属（Chlamydia）、クラミドフィラ属（Chlamydophila）、クロストリジウム属（Clostridium）（例えば、クロストリジウム・ボツリヌム（Clostridium botulinum）、クロストリディオイデス・デフィシル（Clostridioides difficile）（旧名クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile））、及びクロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium perfringens））、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、コクシエラ属（Coxiella）、エーリキア属（Ehrlichia）、腸内細菌科（Enterobacteriaceae）（例えば、カルバペネム耐性腸内細菌科（ＣＲＥ）及び基質拡張型β－ラクタマーゼ産生腸内細菌科（ＥＳＢＬ－Ｅ））、フルオロキノロン耐性腸内細菌科、腸球菌属（Enterococcus）（例えば、バンコマイシン耐性腸球菌属菌種、基質拡張型β－ラクタム耐性腸球菌（ＥＳＢＬ）、及びバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ））、大腸菌属（Escherichia）（例えば、腸管凝集性大腸菌、腸管出血性大腸菌、腸管侵入性大腸菌、腸管病原性大腸菌、腸管毒素原性大腸菌（例えば、これらに限定されないが、ＬＴ及び／又はＳＴ）、大腸菌０１５７：１－１７、及び多剤耐性大腸菌）、フランシセラ属（Francisella）、ヘモフィルス属（Haemophilus）、ヘリコバクター属（Helicobacter）（例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori））、クレブシエラ属（Klebsiella）（例えば、クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiellia pneumonia）及び多剤耐性菌クレブシエラ）、レジオネラ属（Legionella）、レプトスピラ属（Leptospira）、リステリア属（Listeria）（例えば、リステリア・モノサイトゲネス（Lysteria monocytogenes））、モルガネラ属（Morganella）、マイコバクテリウム属（Mycobacterium）、マイコプラズマ属（Mycoplasma）、ナイセリア属（Neisseria）、オリエンティア属（Orientia）、プレジオモナス・シゲロイデス（Plesiomonas shigelloides）、抗生物質耐性プロテオバクテリア、プロテウス属（Proteus）、シュードモナス属（Pseudomonas）、リケッチア属（Rickettsia）、サルモネラ属（Salmonella）（例えば、サルモネラ・パラチフィ（Salmonella paratyphi）、サルモネラ属菌種、及びサルモネラ・チフィ（Salmonella typhi））、シゲラ属（Shigella）（例えば、シゲラ属菌種）、スタフィロコッカス属（Staphylococcus）（例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）及びスタフィロコッカス属菌種）、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、トレポネーマ属（Treponema）、ビブリオ属（Vibrio）（例えば、ビブリオ・コレラエ（Vibrio cholerae）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Vibrio parahaemolyticus）、ビブリオ属菌種、及びビブリオ・バルニフィカス（Vibrio vulnificus））、並びにエルシニア属（Yersinia）（例えば、エルシニア・エンテロコリチカ（Yersinia enterocolitica））から選択される、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

ＶＲＥによる腸管定着が低減される、請求項３３～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

ＶＲＥによる血流感染症が低減される、請求項３３～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

ＶＲＥの定着及び／又は感染症の処置のための治療薬剤の用量又は投与の長さ若しくは投与頻度が低減される、請求項３３～５０のいずれかに記載の方法。

【請求項52】

カルバペネム耐性腸内細菌科（ＣＲＥ）による腸管定着が低減される、請求項３３～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

ＣＲＥによる血流感染症が低減される、請求項３３～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

ＣＲＥの定着及び／又は感染症の処置のための治療薬剤の用量又は投与の長さ若しくは投与頻度が低減される、請求項５２～５３のいずれかに記載の方法。

【請求項55】

前記β－ラクタマーゼ剤は小腸内で放出される、請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記β－ラクタマーゼ剤は、十二指腸、空腸、回腸、及び／又は回盲部のうちの１又は複数で放出される、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記β－ラクタマーゼ剤は大腸で放出される、請求項３３～５４のいずれかに記載の方法。

【請求項58】

前記β－ラクタマーゼ剤は、盲腸、結腸の上行部、横行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの１又は複数で放出される、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記β－ラクタマーゼ剤は、胃液中で実質的に安定である放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記β－ラクタマーゼ剤は、ｐＨ依存的性の溶解性を有する放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記β－ラクタマーゼ剤は、時間依存的浸食プロファイルを有する放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

前記β－ラクタマーゼ剤は、腸内細菌叢に存在する微生物の酵素により分解される放出調節コーティングを用いて製剤化される、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記β－ラクタマーゼ剤はカプセル剤又は錠剤として製剤化される、請求項１～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

前記β－ラクタマーゼ剤は経口投与用に製剤化される、請求項１～６３のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、部分的には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発生率及び／又は重症度を低減させる方法及び組成物に関する。特に、本発明は、部分的には、１種類又は複数種類のβ－ラクタマーゼ剤を用いてＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度を低減させるための方法及び組成物を提供する。

【0002】

政府の利益
本発明は、米国国立衛生研究所による助成番号ＣＡ００８７４８の政府援助の下でなされたものである。米国政府は本発明に関して一定の権利を有する。

【0003】

関連出願の相互参照
本願は、２０１９年５月６日に出願された米国仮特許出願第６２／８４３，８４９号に基づく優先権を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0004】

電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。配列表のコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：「ＳＹＮ－０４３ＰＣ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、作成日：２０２０年５月４日、ファイルサイズ：１２，１４０バイト）。

【背景技術】

【0005】

同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ－ＨＣＴ）は、白血病及びリンパ腫に対する根治的治療であり得、年間１８，０００人の患者を治療するために用いられる。しかしながら、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、ａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントの２０～５０％に発症する主要合併症である。約半数のＧＶＨＤ症例がステロイド応答性である。ステロイド抵抗性ＧＶＨＤ、及び特に胃腸（ＧＩ）ＧＶＨＤは、重篤な問題であり、移植後死亡率の約２０％の割合を占める。実際、マウスでの研究は、ＧＶＨＤを有するマウスを抗生物質で処置することにより結腸の保護粘液内層が失われ、腸管バリア機能障害がもたらされることをさらに実証している。

【0006】

特に、恐らく発熱、特に、発熱性好中球減少症の経験に基づく治療に頻繁に必要とされる広域抗生物質に起因して、腸管細菌叢の重度のディスバイオシス（dysbiosis）がａｌｌｏ－ＨＣＴ患者において観察される。結果として、腸管細菌叢は実際にはａｌｌｏ－ＨＣＴ後の感染及びＧＶＨＤのリスクを調整し得ると考えられている。

【0007】

現在、ＧＩ ＧＶＨＤ合併症の軽減を目的とした有効な治療はほとんどない。したがって、ＧＶＨＤを予防又は軽減するための新たな戦略が必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は、とりわけ、急性ＧＶＨＤ（ａＧＶＨＤ）及び／又はバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の定着及び／又は感染など、ａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントへのβ－ラクタム系抗生物質の静脈内（ＩＶ）投与に関連する合併症の発生率及び／又は重症度を低減させる方法及び組成物を提供する。ある態様では、本発明は、ａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントへのβ－ラクタム系抗生物質の静脈内（ＩＶ）投与に関連する合併症の発生率及び／又は重症度を、その低減を必要とする対象にβ－ラクタマーゼ剤を投与することにより低減させる方法を提供する。別の態様では、ａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度を、その低減を必要とする対象に本明細書に記載されるβ－ラクタマーゼ剤を投与することにより低減させる方法を意図している。他の態様では、ＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症を、その予防を必要とする対象に本明細書に記載されるβ－ラクタマーゼ剤を投与することにより予防する方法を意図している。種々の実施形態では、対象は、β－ラクタム系抗生物質が静脈内（ＩＶ）投与されるか又は静脈内（ＩＶ）投与されている。

【0009】

いくつかの実施形態では、ａＧＶＨＤ及び／又はＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症など、ａｌｌｏ－ＨＣＴに関連する合併症の発生率及び／又は重症度を低減としては、マイクロバイオームに対する変化を防止することが挙げられる。例えば、本発明の方法は、微生物の多様性の喪失及び任意の所与の細菌株による異常増殖に起因するマイクロバイオームの単一優占化（monodomination）の予防及び／又は減弱をもたらし得る。

【0010】

種々の実施形態では、ａＧＶＨＤの発症リスクがある対象は移植レシピエントである。他の実施形態では、対象はａｌｌｏ－ＨＣＴのレシピエントである。いくつかの実施形態では、対象は、骨髄細胞、末梢血細胞、及び臍帯血細胞のうちの１又は複数のレシピエントである。

【0011】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は移植の前に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は移植に続いて投与される。

【0012】

種々の実施形態では、本明細書に記載される製剤及び方法は胃腸（ＧＩ）管において排他的に機能するので、β－ラクタマーゼ剤への全身暴露を回避又は軽減し、且つその潜在的な全身作用を最小化しながら特異的な送達をもたらす。種々の実施形態では、β－ラクタマーゼ剤は腸管の１又は複数の領域へ放出される。ある実施形態では、β－ラクタマーゼ剤は小腸中へ放出される。別の実施形態では、β－ラクタマーゼ剤は大腸中へ放出される。

【0013】

種々の実施形態では、マイクロバイオーム保護剤（例えば、β－ラクタマーゼ剤）は、ａＧＶＨＤを予防する免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキサート）、抗体、及びその他の免疫調整剤を含むがこれらに限定されない追加の治療薬剤又は予防剤と組み合わせて対象に投与されてもよい。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】５００ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与、及びＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の１日に２回、２日間の強制経口投与を受けたマウスにおいて、ピペラシリンの量（１ｇの糞便あたりのμｇ）が減少したことを示す図である。棒グラフの左端のバーは対照マウスのコホートからのデータに対応し、棒グラフの中央のバーはピペラシリン／タゾバクタムノンの投与を受けたがＰ３Ａ（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）の投与を受けなかったマウスの第１コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはピペラシリン／タゾバクタムとＰ３Ａ（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）の両方の投与を受けたマウスの第２コホートからのデータに対応する。

【図2】ピペラシリン／タゾバクタムの単独での投与によりマウス糞便中のファーミキューテス（Firmicutes）の存在量が減少し、ピペラシリン／タゾバクタムがＰ３Ａと共に投与された場合にファーミキューテスの倍率存在量（fold abundance）が回復し保護されたことを示す図である。棒グラフの左端のバーはピペラシリン／タゾバクタムもβ－ラクタマーゼも投与されなかった対照マウスのコホートからのデータに対応し、左から２番目のバーはＰ３Ａのみを投与されたマウスのコホートからのデータに対応し、右から２番目のバーはピペラシリン／タゾバクタムを投与されたがＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）は投与されなかったマウスの第１コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはピペラシリン／タゾバクタムとＰ３Ａ（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）の両方を投与されたマウスの第２コホートからのデータに対応する。

【図3】ピペラシリン／タゾバクタムによりマウス糞便中に存在する全細菌コピー数が減少し、この減少はＰ３Ａと共にピペラシリン／タゾバクタムが投与された場合に低減されたことを示す図である。棒グラフの左端のバーはピペラシリン／タゾバクタムもβ－ラクタマーゼも投与されなかった対照マウスのコホートからのデータに対応し、左から２番目のバーはＰ３Ａのみを投与されたマウスのコホートからのデータに対応し、右から２番目のバーはピペラシリン／タゾバクタムを投与されたがＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）は投与されなかったマウスの第１コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはピペラシリン／タゾバクタムとＰ３Ａ（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）の両方を投与されたマウスの第２コホートからのデータに対応する。

【図4】骨髄移植（ＢＭＴ）後の３０日目をエンドポイントとする生存試験の結果を示す図である。データは、死亡率低下の観点から、骨髄移植に関連する、抗生物質により悪化したＧＶＨＤが、Ｐ３Ａ投与によって低減されたことを示す。ＢＭは骨髄細胞のみを移植されたコホートを指す。ＢＭ＋Ｔは骨髄細胞及び脾臓Ｔリンパ細胞を移植されたコホートを指す。

【図5】１６Ｓ配列解析の結果を示す図であり、ピペラシリン／タゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ）及びＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ）の両方を投与されたマウスからの糞便試料は、ピペラシリン／タゾバクタムが単独で投与されたマウスからの糞便試料と比較して、腸球菌属（Enterococcus）の単一優占化の減少を示した。生理食塩水群はクロストリジウム属（Clostridium）として最も大きなバーを示し、Ｚｏｓｙｎ群は腸球菌属として最も大きなバーを示し、Ｚｏｓｙｎ＋ＳＹＮ－００４群はクロストリジウム属として最も大きなバーを示す。

【図6】１６Ｓ配列決定解析の結果を示す図であり、ピペラシリン／タゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ；ＺＯと省略）とＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ；Ｂｌａｃｔと省略）の両方を投与されたマウスからの糞便試料は、ＺＯが単独で投与されたマウスからの糞便試料と比較して腸球菌属（Enterococcus）の単一優占化の減少を示した。バーの空欄は特定の試料が増幅されなかったことを示す。ＢＭ（骨髄）群においては、生理食塩水コホートはクロストリジウム属（Clostridium）として最も大きなバーを示し、ＺＯコホートは腸球菌属として最も大きなバーを示し、ＺＯ＋Ｂｌａｃｔコホートは左から１つ目と２つ目のバーにおいては腸球菌属として、左から３つ目と４つ目のバーにおいてはクロストリジウム属として最も大きなバーを示す。ＢＭ（骨髄）＋Ｔ細胞群においては、生理食塩水コホートはクロストリジウム属として最も大きなバーを示し、ＺＯコホートは腸球菌属として最も大きなバーを示し、ＺＯ＋Ｂｌａｃｔコホートはクロストリジウム属として最も大きなバーを示す。

【図7】イミペネム＋シラスタチン単独での存在下と比較して、イミペネム＋シラスタチンと１０ｍｇ／ｋｇ用量及び５０ｍｇ／ｋｇ用量のＰ２Ａとの両方の存在下でファーミキューテスの倍率存在量（fold abundance）が回復し保護されたことを示す図である。

【図8】１６Ｓ配列解析の結果を示す図であり、イミペネム＋シラスタチンとＳＹＮ－００６（Ｐ２Ａ；１０ｍｇ／ｋｇ用量及び５０ｍｇ／ｋｇ用量）の両方を投与されたマウスからの糞便試料は、イミペネム＋シラスタチンのみを投与されたマウスからの糞便試料と比較して、腸球菌属（Enterococcus）の単一優占化の減少を示した。イミペネム群においては、抗生物質前（「ｐｒｅ－ａｂｘ」）のコホートはラクトバチルス属（Lactobacillus）として最も大きなバーを示し、抗生物質後（「ｐｏｓｔ－ａｂｘ」）のコホートは腸球菌属として最も大きなバーを示す。イミペネム＋Ｐ２Ａ（１ｍｇ）群においては、抗生物質前（「ｐｒｅ－ａｂｘ」）のコホートはクロストリジウム属及びラクトバチルス属として最も大きなバーを示し、抗生物質後（「ｐｏｓｔ－ａｂｘ」）のコホートは腸球菌属として最も大きなバーを示す。イミペネム＋Ｐ２Ａ（１０ｍｇ）群においては、抗生物質前（「ｐｒｅ－ａｂｘ」）のコホートはラクトバチルス属として最も大きなバーを示し、抗生物質後（「ｐｏｓｔ－ａｂｘ」）のコホートはクロストリジウム属として最も大きなバーを示す。イミペネム＋Ｐ２Ａ（５０ｍｇ）群においては、抗生物質前（「ｐｒｅ－ａｂｘ」）のコホートはラクトバチルス属として最も大きなバーを示し、抗生物質後（「ｐｏｓｔ－ａｂｘ」）のコホートはラクトバチルス属及びクロストリジウム属として最も大きなバーを示す。

【図9】イミペネム＋シラスタチン単独で、又は１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び５０ｍｇ／ｋｇの用量でＰ２Ａと共に処置された場合のマウス糞便におけるエンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）の相対的存在量を示す図である。

【図10】Ｐ２Ａが投与された場合の骨髄移植後の４０日目をエンドポイントとする生存試験の結果を示す図である。「ＢＭ」は骨髄細胞のみを移植されたコホートを指す。「ＢＭ＋Ｔ」は骨髄細胞及び脾臓Ｔリンパ細胞を移植されたコホートを指す。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明は、部分的には、同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ－ＨＣＴ）へのβ－ラクタム系抗生物質の静脈内投与に関連する、急性移植片対宿主病（ａＧＶＨＤ）並びにバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の定着及び／又はＶＲＥの血流感染症を含むがこれらに限定されない種々の合併症の発生率及び／又は重症度を低減させる組成物及び方法に関する。ある態様では、本発明は、ａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントへのβ－ラクタム系抗生物質の静脈内投与に関連する合併症の発生率及び／又は重症度を、その低減を必要とする対象に本明細書に記載されるβ－ラクタマーゼ剤を投与することにより低減させる方法を提供する。種々の態様では、対象は、β－ラクタム系抗生物質が静脈内（ＩＶ）投与されるか、又は静脈内（ＩＶ）投与されている。

【0016】

別の態様では、ａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度を、その低減を必要とする対象に本明細書に記載されるβ－ラクタマーゼ剤を投与することにより低減させる方法を意図している。他の態様では、ＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症を、その予防を必要とする対象に本明細書に記載されるβ－ラクタマーゼ剤を投与することにより予防する方法を意図している。種々の実施形態では、β－ラクタマーゼ剤は、腸管の１又は複数の領域へ放出され、そこで細菌量（bacterial load）を維持及び／又は調節し、細菌株の喪失を予防することにより、マイクロバイオームの多様性を保存し、マイクロバイオームの単一優占化を予防する。

【0017】

β－ラクタマーゼ剤
いくつかの態様では、本発明は、例えばａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントへのβラクタム系抗生物質の静脈内投与に関連する、ａＧＶＨＤ並びにＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症を含むがこれらに限定されない合併症の発生率及び／又は重症度を低減させるための、１種類又は複数種類のβ－ラクタマーゼの使用に関する。

【0018】

本明細書では、β－ラクタマーゼは、β－ラクタムを加水分解する酵素を指す。β－ラクタム環のアミド結合の加水分解により、抗菌剤が生物学的に不活性化される。本明細書では、クラスＡ β－ラクタマーゼ（Ａｍｂｌｅｒの分類）は、β－ラクタマーゼの加水分解が活性化部位（通常はαヘリックス_２中の７０番目のアミノ酸）におけるセリンにより仲介されるセリンβ－ラクタマーゼを指す。クラスＡ β－ラクタマーゼとしては、これらに限定されないが、Ｌｅｎ－１、ＳＨＶ－１、ＴＥＭ－１、ＰＳＥ－３／ＰＳＥ－３、ＲＯＢ－１、５／Ｂの１型、５６９／Ｈの１型、及び５６９／Ｈの３型などのバチルス・セレウス（Bacillus cereus）、バチルス・アントラシス菌種（Bacillus anthrasis sp）、ＰｅｎＰなどのバチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・ウェイヘンステファネンシス（Bacillus weihenstephanensis）、バチルス・クラウジイ（Bacillus clausii）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）、ＰＣ１、Ｓｍｅ－１、ＮｍｃＡ、ＩＭＩ型、ＰＥＲ型、ＶＥＢ型、ＧＥＳ型、ＫＰＣ型、ＣＭＥ－、及びＣＴＸ－Ｍ型のβ－ラクタマーゼが挙げられる。

【0019】

種々の態様では、本発明において有用なβ－ラクタマーゼは、配列番号1のアミノ酸配列を有する（すなわち、その内容全体が本明細書に参照により取り込まれるＷＯ２０１１／１４８０４１の「ＳＹＮ－００４」、「ｒｉｂａｘａｍａｓｅ」、又は「Ｐ３Ａ」）。この配列を変異させて、本発明の方法により利用され得るβ－ラクタマーゼ誘導体を作製してもよい。

【0020】

【化1】

【0021】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼは、配列番号１と約６０％以上（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0022】

いくつかの実施形態では、配列番号１は、その配列の最初の残基の前にＭｅｔ及び／又はＴｈｒを有していてもよい。種々の実施形態では、Ｍｅｔは切断されてもよい。本明細書に記載されるように、最初の残基の前にＭｅｔ及び／又はＴｈｒを含む配列を変異させて、β－ラクタマーゼ誘導体を作製してもよい。いくつかの実施形態では、先行Ｔｈｒにより、他の先行アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ）と比較して、酵素の安定性の増大がもたらされ得る。例えば、そのような残基により、アミノペプチダーゼに対する抵抗性の増大がもたらされ得る。

【0023】

本明細書では、配列番号２としてのＳＹＮ－００４の核酸配列も提供される。

【0024】

【化2】

【0025】

いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２と約６０％以上（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の配列同一性を有する。

【0026】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ、例えば、ＳＹＮ－００４は、実質的なセフトリアキソン加水分解活性を有する。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ、例えば、ＳＹＮ－００４は、天然のβ－ラクタマーゼであるＰ１Ａよりも実質的により効率的にセフトリアキソンを加水分解する。

【0027】

例示的な実施形態では、β－ラクタマーゼは、配列番号１と６０％以上の配列同一性を有し、Ａｍｂｌｅｒの分類が、２３２番目にアラニン（Ａ）以外の疎水性残基、２３７番目にアラニン（Ａ）以外の親水性残基、２３８番目にアラニン（Ａ）以外の疎水性残基、２４０番目にセリン（Ｓ）以外の親水性残基、及び２７６番目にアスパラギン酸（Ｄ）以外の親水性残基である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、２３２番目のアラニン（Ａ）以外の疎水性残基はグリシン（Ｇ）である。いくつかの実施形態では、２３７番目のアラニン（Ａ）以外の親水性残基はセリン（Ｓ）である。いくつかの実施形態では、２３８番目のアラニン（Ａ）以外の疎水性残基はグリシン（Ｇ）である。いくつかの実施形態では、２４０番目のセリン（Ｓ）以外の親水性残基はアスパラギン酸（Ｄ）である。いくつかの実施形態では、２７６番目のアスパラギン酸（Ｄ）以外はアスパラギン（Ｎ）である。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼは、Ａ２３２Ｇ、Ａ２３７Ｓ、Ａ２３８Ｇ、Ｓ２４０Ｄ、及びＤ２７６Ｎのうちの１又は複数を含む。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼは、Ａ２３２Ｇ、Ａ２３７Ｓ、Ａ２３８Ｇ、Ｓ２４０Ｄ、及びＤ２７６Ｎの全てを含み、その配列は配列番号３であり、すなわち、Ｐ４Ａである。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ及び／又は医薬組成物は、配列番号３と９０％以上、９５％、９７％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0028】

【化3】

【0029】

いくつかの実施形態では、本発明のβ－ラクタマーゼポリペプチドは、配列番号３と約６０％以上（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0030】

配列番号４は配列番号３に由来するものであり、シグナル及びＱＡＳＫＴアミノ酸をさらに含む（コーティング領域は下線で示される）。

【0031】

【化4】

【0032】

いくつかの実施形態では、本発明のβ－ラクタマーゼポリペプチドは、配列番号４と約６０％以上（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0033】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ及び／又は医薬組成物は、配列番号４と９０％以上、９５％、９７％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0034】

例示的な本発明のポリペプチドは配列番号５であり、これはＡ２３２Ｇ変異、Ａ２３７Ｓ変異、Ａ２３８Ｇ変異、Ｓ２４０Ｄ変異、及びＤ２７６Ｎ変異、Ｈｉｎｄ ＩＩＩ部位（太字のＡＡＧＣＴＴ）、及び追加のＫアミノ酸とＴアミノ酸の完全ヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、配列番号５の下線が付された部分は除外されて取り除かれている。リーダー及び追加のヌクレオチド（Ｈｉｎｄ ＩＩＩ部位、及びアミノ酸配列ＱＡＳＫＴの追加のためのＫアミノ酸とＴアミノ酸）は下線で示される。

【0035】

【化5】

【0036】

いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５（下線が付された部分の有無にかかわらず）と約６０％以上（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の配列同一性を有する。

【0037】

種々の態様では、β－ラクタマーゼポリペプチドは、配列番号６（すなわち、Ｐ２Ａ）の配列を有するか、又は配列番号６の１又は複数の変異に由来する。

【0038】

【化6】

【0039】

いくつかの実施形態では、本発明のβ－ラクタマーゼポリペプチドは、配列番号６と約６０％以上（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0040】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ及び／又は医薬組成物は、配列番号６と９０％以上、９５％、９７％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0041】

Ｐ１Ａ（すなわち、２７６番目がＤでありＮでないこと以外は配列番号１）、Ｐ２Ａ、Ｐ３Ａ／ＳＹＮ－００４、及びＰ４Ａ、並びにこれらの誘導体を含むβ－ラクタマーゼの追加の配列は、例えば、その内容全体が本明細書に参照により取り込まれるＷＯ２０１１／１４８０４１及びＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２６４５７に記載される。

【0042】

さらに、β－ラクタマーゼポリペプチドは、配列番号１の最初の残基から追加の上流残基を含んでいてもよい（例えば、ｐｅｎＰ及びｐｅｎＰ１のエクソラージ型及びエクソスモール型を含み、その内容全体が本明細書に参照により取り込まれるＪＢＣ２５８（１８）：１１２１１、１９８３参照）。さらに、β－ラクタマーゼポリペプチドはまた、配列番号１の最後の残基から追加の下流残基を含んでいてもよい。

【0043】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼは、配列番号１又は配列番号２に対して、１または複数（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、又は約１０）の変異を含む。いくつかの実施形態において、β－ラクタマーゼは、ＳＹＮ－００４のバリアント、例えば、配列番号１又は配列番号２と９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．５％以上、９９．８％以上、９９．９％以上の同一性を有する配列を含む。種々の実施形態では、配列番号１の１または複数のアミノ酸は、親水性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）またはリシン（Ｋ）などの極性で正電荷の親水性アミノ酸；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、プロリン（Ｐ）、及びシステイン（Ｃ）などの極性で中性電荷の親水性アミノ酸；アスパラギン酸（Ｄ）若しくはグルタミン酸（Ｅ）などの極性で負電荷の親水性アミノ酸、又はヒスチジン（Ｈ）などの芳香族性の極性で正電荷の親水性アミノ酸）、若しくは疎水性アミノ酸（例えば、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、又はバリン（Ｖ）などの疎水性脂肪族アミノ酸、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、又はチロシン（Ｙ）などの疎水性芳香族アミノ酸）、又は非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロリジン、Ｎ－ホルミルメチオニン β－アラニン、ＧＡＢＡ及びδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、一般的アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナーアミノ酸（例えばβメチルアミノ酸、Ｃα－メチルアミノ酸、Ｎα－メチルアミノ酸）、及び一般的なアミノ酸類似体）などの天然由来のアミノ酸で置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１は、配列の最初の残基の前にＭｅｔ及び／又はＴｈｒを有していてもよい。これらの残基は、上記と同様に変異されていてもよい。

【0044】

例示的な変異としては以下が挙げられる。

【表1】

【0045】

これらの突然変異体の全てにおいて、残基の番号は配列番号１に対応する。これらの残基の番号は、例えば、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌｓ）またはＦＡＳＴＡ（ＦＡＳＴ－ＡＩＩ）の使用により、任意の従来の生物情報学的方法の利用を通して、Ａｍｂｌｅｒ番号（その内容が参照により本明細書に取り込まれるＡｍｂｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，“Ａ ｓｔａｎｄａｒｄ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｌａｓｓ Ａ β－ｌａｃｔａｍａｓｅｓ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７６：２６９－２７２）に変換されてもよい。

【0046】

様々な実施形態において、本発明で用いられるβ－ラクタマーゼは、大腸菌細胞などの細菌細胞で産生される（例えば、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＰＣＴ／ＵＳ１５／４７１８７参照）。

【0047】

種々の実施形態では、本発明のβ－ラクタマーゼはβ－ラクタムを加水分解する。β－ラクタム環のアミド結合の加水分解により、抗菌剤が生物学的に不活性化される。β－ラクタム系抗生物質の例は当業者に明らかになるであろう。静脈内β－ラクタム系抗生物質の例示的な例としては、これらに限定されないが、ペニシリン（ピペラシリン／タゾバクタム）、セファロスポリン（セフェピム）、及び／又はカルバペネム（メロペネム；イミペネム／シラスタチン）が挙げられる。

【0048】

処置方法
いくつかの態様は、ａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントへのβ－ラクタム系抗生物質の静脈内投与に関連する、ａＧＶＨＤ及び／又はＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症、及び／又は１種類又は複数種類の多剤耐性病原菌による感染若しくは定着、定着の拡大、又は単一優占化を含むがこれらに限定されない合併症の発生率及び／又は重症度を低減させる組成物及び方法を提供する。

【0049】

いくつかの実施形態では、単一優占化（monodomination）は、対象のマイクロバイオーム内の細菌叢の約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、又は約３５％が単一生物であることを含む。

【0050】

特定の実施形態では、本発明は、ＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症を予防する組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症に関連する腸内ディスバイオシスを予防する。

【0051】

いくつかの態様では、本発明のβ－ラクタマーゼを投与することを含む、移植レシピエントにおいて、ＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症を予防する方法が提供される。

【0052】

いくつかの態様では、本発明のβ－ラクタマーゼを投与することを含む、移植レシピエントにおいて、１種類又は複数種類の多剤耐性生物の定着及び／又は血流感染症を予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１種類又は複数種類の多剤耐性生物による定着及び／又は血流感染症に関連する腸内ディスバイオシスを予防する。

【0053】

例えば、種々の実施形態では、本願方法は、以下の病原菌、すなわち、エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、バチルス属（Bacillus）（例えば、バチルス・セレウス（Bacillus cereus））、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、ボルデテラ属（Bordetella）、ボレリア属（Borrelia）、ブルセラ属（Brucella）、バークホルデリア属（Burkholderia）、Ｃ・デフィシル（C. difficile）、カンピロバクター属（Campylobacter）（例えば、カンピロバクター・フィタス（Campylobacter fetus）及びカンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni））、クラミジア属（Chlamydia）、クラミドフィラ属（Chlamydophila）、クロストリジウム属（Clostridium）（例えば、クロストリジウム・ボツリヌム（Clostridium botulinum）、クロストリディオイデス・デフィシル（Clostridioides difficile）（旧名クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile））、及びクロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium perfringens））、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、コクシエラ属（Coxiella）、エーリキア属（Ehrlichia）、腸内細菌科（Enterobacteriaceae）（例えば、カルバペネム耐性腸内細菌科（ＣＲＥ）及び基質拡張型β－ラクタマーゼ産生腸内細菌科（ＥＳＢＬ－Ｅ））、フルオロキノロン耐性腸内細菌科、腸球菌属（Enterococcus）（例えば、バンコマイシン耐性腸球菌属菌種、基質拡張型β－ラクタム耐性腸球菌（ＥＳＢＬ）、及びバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ））、大腸菌属（Escherichia）（例えば、腸管凝集性大腸菌、腸管出血性大腸菌、腸管侵入性大腸菌、腸管病原性大腸菌、腸管毒素原性大腸菌（例えば、これらに限定されないが、ＬＴ及び／又はＳＴ）、大腸菌０１５７：１－１７、及び多剤耐性大腸菌）、フランシセラ属（Francisella）、ヘモフィルス属（Haemophilus）、ヘリコバクター属（Helicobacter）（例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori））、クレブシエラ属（Klebsiella）（例えば、クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiellia pneumonia）及び多剤耐性菌クレブシエラ）、レジオネラ属（Legionella）、レプトスピラ属（Leptospira）、リステリア属（Listeria）（例えば、リステリア・モノサイトゲネス（Lysteria monocytogenes））、モルガネラ属（Morganella）、マイコバクテリウム属（Mycobacterium）、マイコプラズマ属（Mycoplasma）、ナイセリア属（Neisseria）、オリエンティア属（Orientia）、プレジオモナス・シゲロイデス（Plesiomonas shigelloides）、抗生物質耐性プロテオバクテリア、プロテウス属（Proteus）、シュードモナス属（Pseudomonas）、リケッチア属（Rickettsia）、サルモネラ属（Salmonella）（例えば、サルモネラ・パラチフィ（Salmonella paratyphi）、サルモネラ属菌種、及びサルモネラ・チフィ（Salmonella typhi））、シゲラ属（Shigella）（例えば、シゲラ属菌種）、スタフィロコッカス属（Staphylococcus）（例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）及びスタフィロコッカス属菌種）、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、トレポネーマ属（Treponema）、ビブリオ属（Vibrio）（例えば、ビブリオ・コレラエ（Vibrio cholerae）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Vibrio parahaemolyticus）、ビブリオ属菌種、及びビブリオ・バルニフィカス（Vibrio vulnificus））、並びにエルシニア属（Yersinia）（例えば、エルシニア・エンテロコリチカ（Yersinia enterocolitica））のうちの１種類又は複数種類による感染の処置又は予防において利用される。

【0054】

種々の実施形態では、本願方法は、抗生物質耐性細菌、例えば、抗生物質耐性プロテオバクテリア、ＶＲＥ、カルバペネム耐性腸内細菌科（ＣＲＥ）、フルオロキノロン耐性腸内細菌科、及び基質拡張型β－ラクタマーゼ産生腸内細菌科（ＥＳＢＬ－Ｅ）の感染の処置又は予防において利用される。

【0055】

特定の実施形態では、本願発明は、ａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度を低減させる組成物及び方法を提供する。種々の実施形態では、ａＧＶＨＤの発症リスクがある対象は移植レシピエントである。他の実施形態では、対象はａｌｌｏ－ＨＣＴのレシピエントである。いくつかの実施形態では、対象は、骨髄細胞、末梢血細胞、及び臍帯血細胞のうちの１又は複数のレシピエントである。種々の実施形態では、ａＧＶＨＤの発症リスクがある対象は、β－ラクタム系抗生物質が静脈内投与されるか、又は静脈内投与されている。

【0056】

いくつかの実施形態では、本願方法は、ａＧＶＨＤに関連する腸内ディスバイオシスを予防する。種々の実施形態では、本願方法は、ａＧＶＨＤに関連する腸内細菌叢の多様性の喪失を予防する。例えば、本願発明の方法は、ａＧＶＨＤに関連する任意の所与の細菌株（例えば、腸球菌属）の単一優占化を調節及び／又は低減する組成物の投与を意図している。本発明の他の実施形態は、移植を受けた対象におけるマイクロバイオームの多様性の低下を予防する組成物及び方法を提供する。

【0057】

いくつかの態様では、本発明のβ－ラクタマーゼ剤を投与することを含む、移植レシピエントにおけるａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度の低減に関する方法が提供される。例えば、ａＧＶＨＤの重症度を低減させることは、β－ラクタマーゼを投与されている患者におけるａＧＶＨＤのグレードを、ａＧＶＨＤの最も重症な型として分類されるグレードＩＶより小さいグレードまで減少させること、又はａＧＶＨＤを１又は複数グレード低減させる（例えば、グレードＩＩＩからグレードＩＩ）ことを含み得る。

【0058】

いくつかの実施形態では、本願方法は、移植レシピエントにおけるａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度の低減に関する。実施形態において、移植レシピエントは、がん患者、例えば、放射線若しくは化学療法を受けたか又は受けており、続いてａｌｌｏ－ＨＣＴを受けた患者である。実施形態において、移植レシピエントは血液又は骨髄のがんを有する。実施形態において、移植レシピエントは、造血幹細胞移植のレシピエントである。ある実施形態では、がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫、及び骨髄異形成から選択される。ある実施形態では、がんは、骨肉腫、ユーイング腫瘍、脊索腫、及び軟骨肉腫から選択される。

【0059】

ａＧＶＨＤは、ドナーからレシピエントに移植された細胞又は組織の、その細胞又は組織が異物であるとのレシピエントの免疫系による認識に起因する、悪化である。したがって、クラスＩ ＭＨＣは体のより多くの細胞上に存在しているので、クラスＩ ＭＨＣプロファイルが最も適合し、次にクラスＩＩ ＭＨＣプロファイルが最も適合しているヒトからの細胞及び組織を移植することが最も好ましい。したがって、大部分の移植レシピエントにおいては、ａＧＶＨＤは、不適合のクラスＩＩ ＭＨＣ分子及びその他の多型タンパク質（マイナー組織適合抗原）に対する免疫系の活性化に起因する。

【0060】

血液又は骨髄のがんを処置するための一つの選択肢は、例えば放射線又は化学療法により、存在する血液及び骨髄の細胞を殺傷し、健康なドナーから同様の細胞を移植することであり、同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ－ＨＣＴ）と呼ばれる。

【0061】

実施形態においては、本願方法は、急性型及び慢性型のＧＶＨＤに関する。古典的な急性又は劇症型の疾患（ａＧＶＨＤ）は通常、移植後の最初の１００日以内に観察され、付随する罹患率及び死亡率のため、移植の有効性に対する主要な課題である。慢性型の移植片対宿主病（ｃＧＶＨＤ）は従来、１００日以降に起きる。中程度から重度のｃＧＶＨＤの症状の出現は、長期の生存に悪影響を与える。骨髄移植後、移植片に存在するＴ細胞は、混入物又はホストに意図的に導入されたもののいずれかとして、ホストの組織を抗原的に異物と認知した後に移植レシピエントの組織を攻撃する。Ｔ細胞は、ＴＮＦα及びインターフェロン－γ（ＩＦＮγ）を含む、過剰量のサイトカインを産生する。ｃＧＶＨＤの組織損傷は主に線維症に起因する。広範囲のホスト抗原、とりわけヒト白血球抗原（ＨＬＡ）は、移植片対宿主病を引き起こす可能性がある。しかしながら、ＧＶＨＤはＨＬＡが同一である同胞がドナーである場合でさえ起こり得る。ａＧＶＨＤは、肝臓、皮膚、及び粘膜、並びにＧＩ管に対する選択的な損傷により特徴付けられる。ａＧＶＨＤにおける組織損傷は主にアポトーシスによるものである。ａＧＶＨＤの重症度は、病変／発疹の程度及び種類（皮膚）、下痢の量（ＧＩ）、及び血清ピルビリンレベル（肝臓）に基づいて、スケール１（軽度）からスケールＩＶ（非常に重度）に等級分けされる。ｃＧＶＨＤは、ａＧＶＨＤと比べてより広範囲な組織分布により特徴付けられる。ＧＩ管、肝臓、目、筋骨格系、及び造血系と共に、皮膚及び肺はｃＧＶＨＤの主要な標的であると考えられている。超急性且つ急性致死性型のａＧＶＨＤは、通常は顕著なＨＬＡ不適合又は不十分なＧＶＨＤ予防に起因して、同種ＨＣＴの最初の２週間以内に起こり得る。ｃＧＶＨＤに関連する危険因子は通常、事前のａＧＶＨＤに対する調整の後に変化せず、ｃＧＶＨＤは先行するａＧＶＨＤの単純な発展ではないことを示唆している。

【0062】

実施形態において、本願方法は、ａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度を低減させることに関する。実施形態において、本願方法は、静脈内β－ラクタム系抗生物質で処置され、ＨＬＡの「不適合」、又は血縁関係がないドナー、患者の高年齢、雄性レシピエントに対する雌性ドナー、前処置レジメンの強度若しくは前処置レジメンの間の全身放射線照射の強度、及びドナーリンパ球の注入のなど、ａＧＶＨＤの１又は複数の危険因子を有する患者へのβ－ラクタマーゼの投与を見込んでいる。実施形態において、本願方法は、皮膚の発疹、ＧＩ管の疾患、及び肝臓症状など、ａＧＶＨＤの兆候の発生率及び／又は重症度を低減する。

【0063】

実施形態において、本願方法は、Ｂｉｌｌｉｎｇｈａｍの判断基準、すなわち、１）生存可能で機能的な免疫細胞と共に、免疫適格性移植片を投与、２）レシピエントは免疫学的には組織不適合である、及び３）レシピエントは免疫無防備状態であり、それにより移植された細胞を破壊又は不活性化することができない、のうちの１又は複数により定義されるＧＶＨＤに関する。

【0064】

製剤／放出調節プロファイル
種々の実施形態では、本発明は、少なくとも１種類のβ－ラクタマーゼを含む放出調節製剤を用いるものであり、前記製剤はＧＩ管の１又は複数の領域中に十分な量のβ－ラクタマーゼを放出する。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼはＳＹＮ－００４（別名Ｐ３Ａ）、若しくは本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、又は（例えば、上記に記載されるような）これらのバリアントである。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼはＳＹＮ－００６（別名Ｐ２Ａ）又はその変異体である。例えば、前記製剤は、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４又はＳＹＮ－００６）の約６０％以上を、胃の後に、ＧＩ管の１又は複数の領域中へ放出してもよい。

【0065】

種々の実施形態では、本発明の放出調節製剤は、即時放出（例えば、摂取時）のために設計されている。種々の実施形態では、放出調節製剤は、徐放性（sustained-release）プロファイル、すなわち、長期間にわたる体内（例えば、ＧＩ管）での活性成分の緩徐放出性（slow release）を有していてもよい。種々の実施形態では、放出調節製剤は、遅延放出性（delayed-release）プロファイルを有していてもよく、すなわち、摂取時に活性成分が即時には放出されず、むしろ、例えば、小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）又は大腸（盲腸、結腸の上行部、横行部、下行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの１又は複数）における放出について、組成物がＧＩ管において少なくなるまで活性成分の放出が延期される。例えば、組成物は、小腸又は大腸に到達するまで活性成分の放出を遅延させるために腸溶コーティングされてもよい。いくつかの実施形態では、糞便中に実質的な量の本願製剤の活性成分が存在しない。

【0066】

種々の実施形態では、本発明の放出調節製剤は、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を、胃の後に、腸管の１又は複数の領域中へ放出する。例えば、放出調節製剤は、腸管において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0067】

種々の実施形態では、本発明の放出調節製剤は、小腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、小腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0068】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、十二指腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、十二指腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0069】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、空腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、空腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0070】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、回腸／回盲部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、回腸／回盲部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0071】

種々の実施形態では、本発明の放出調節製剤は、大腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、大腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0072】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、盲腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、盲腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0073】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、結腸の上行部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、結腸の上行部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0074】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、結腸の横行部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、結腸の横行部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0075】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、結腸の下行部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、結腸の下行部において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0076】

ある実施形態では、本発明の放出調節製剤は、Ｓ状結腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上を放出する。例えば、放出調節製剤は、Ｓ状結腸において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の６０％以上、６１％以上、６２％以上、６３％以上、６４％以上、６５％以上、６６％以上、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、又は１００％を放出する。

【0077】

種々の実施形態では、放出調節製剤は、胃において、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を実質的に放出しない。

【0078】

ある実施形態では、放出調節製剤は、特定のｐＨでβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を放出する。例えば、いくつかの実施形態では、調節製剤は、酸性環境下で実質的に安定であり、且つ中性付近～アルカリ性の環境下で不安定（例えば、迅速に分解する、又は物理的に不安定）である。いくつかの実施形態では、安定性は実質的に放出されないことの指標であり、不安定性は実質的に放出されることの指標である。例えば、いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、約７．０以下、約６．５以下、約６．０以下、約５．５以下、約５．０以下、約４．５以下、約４．０以下、約３．５以下、約３．０以下、約２．５以下、約２．０以下、約１．５以下、又は約１．０以下のｐＨで実質的に安定である。いくつかの実施形態では、本願製剤は低ｐＨ領域において安定であり、したがって、例えば胃において、実質的に放出されない。いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、約１から約４以下のｐＨで実質的に安定であり、且つより高いｐＨ値で実質的に不安定である。これらの実施形態では、放出調節製剤は、胃において実質的に放出されない。これらの実施形態では、放出調節製剤は、小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）及び／又は大腸（例えば、盲腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、及びＳ状結腸のうちの１又は複数）において実質的に放出される。いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、約４から約５以下のｐＨで実質的に安定であり、したがって、より高いｐＨ値で実質的に不安定であるので、胃及び／又は小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）において実質的に放出されない。これらの実施形態では、放出調節製剤は、大腸（例えば、盲腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、及びＳ状結腸のうちの１又は複数）において実質的に放出される。様々な実施形態では、本明細書に記載されるｐＨ値は、患者の状態、例えば、絶食状態であるか食後であるかを説明するために当該技術分野で知られているように調整されてもよい。

【0079】

いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、胃液中で実質的に安定であり、且つ腸液中で実質的に不安定であり、したがって、小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）及び／又は大腸（例えば、盲腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、及びＳ状結腸のうちの１又は複数）において実質的に放出される。

【0080】

いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、胃液中で安定であるか、又は酸性環境下で安定である。これらの放出調節製剤は、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、又は約９０分で、ｐＨが約４から約５以下である胃液中又はｐＨが約４から約５以下である模擬胃液中に、放出調節製剤中のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤の約３０重量％以下を放出する。本発明の放出調節製剤は、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、又は約９０分で、ｐＨが約４から約５以下である胃液中又はｐＨが約４から約５以下である模擬胃液中に、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤の約０重量％～約３０重量％、約０重量％～約２５重量％、約０重量％～約２０重量％、約０重量％～約１５重量％、約０重量％～約１０重量％、約５重量％～約３０重量％、約５重量％～約２５重量％、約５重量％～約２０重量％、約５重量％～約１５重量％、約５重量％～約１０重量％を放出してもよい。本発明の放出調節製剤は、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、又は約９０分で、ｐＨが５以下である胃液中又はｐＨが５以下である模擬胃液中に、全てのβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤の約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、又は約１０重量％を放出してもよい。

【0081】

いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、腸液中で不安定である。これらの放出調節製剤は、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、又は約９０分で、腸液中又は模擬腸液中に、放出調節製剤中のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤の約７０重量％以上を放出する。いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、中性付近～アルカリ性の環境で不安定である。これらの放出調節製剤は、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、又は約９０分で、ｐＨが約４から約５以上である腸液中又はｐＨが約４から約５以上である模擬腸液中に、放出調節製剤中のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤の約７０重量％以上を放出する。中性付近又はアルカリ性の環境で不安定である放出調節製剤は、約５分～約９０分、約１０分～約９０分、約１５分～約９０分、約２０分～約９０分、約２５分～約９０分、約３０分～約９０分、約５分～約６０分、約１０分～約６０分、約１５分～約６０分、約２０分～約６０分、約２５分～約９０分、又は約３０分～約６０分で、ｐＨが約５より高い液体（例えば、ｐＨが約５～約１４、約６～約１４、約７～約１４、約８～約１４、約９～約１４、約１０～約１４、又は約１１～約１４である液体）中に、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤の７０重量％以上を放出してもよい。

【0082】

模擬胃液及び模擬腸液の例としては、限定されないが、２００５ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ ２３ＮＦ／２８ＵＳＰ ｉｎ Ｔｅｓｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓの２８５８ページに開示されているもの、及び／又は当業者に周知であるその他の模擬胃液及び模擬腸液、例えば、酵素を用いずに調製された模擬胃液及び／又は模擬腸液が挙げられる。

【0083】

ある実施形態では、放出調節製剤は、胃液中で、本質的に無傷（intact）のままであってもよく、又は、本質的に不溶性であってもよい。放出調節製剤は、ｐＨ依存性の１種類又は複数種類の遅延放出コーティングを含んでいてもよい。ｐＨ依存性の遅延放出コーティングは、酸性環境（ｐＨが約５以下）で実質的に安定であり得、且つ、中性付近～アルカリ性の環境（ｐＨが約５より高い）で実質的に不安定であり得る。例えば、遅延放出コーティングは、小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）及び／又は大腸（例えば、盲腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、及びＳ状結腸のうちの１又は複数）で見いだされるような中性付近～アルカリ性の環境下で、本質的に崩壊又は溶解してもよい。

【0084】

あるいは、放出調節製剤の安定性は酵素依存的であり得る。そのような実施形態では、放出調節製剤は、酵素依存的である１種類又は複数種類の遅延放出コーティングを含んでいてもよい。酵素依存的である遅延放出コーティングは、特定の酵素を含んでいない液体中で実質的に安定であり得、且つ、特定の酵素を含んでいる液体中で実質的に不安定であることになる。遅延放出コーティングは、適切な酵素を含む液体中で、本質的に崩壊又は溶解することになる。酵素依存的な制御は、例えば、ガラクトマンナンなど、腸管中の酵素に曝された場合にのみ活性成分を放出する材料を用いることによって行われ得る。また、放出調節製剤の安定性は、腸内細菌叢に存在する微生物の酵素の存在下では、酵素の安定性に依存し得る。

【0085】

種々の実施形態では、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又はこれらのバリアント）を含む放出調節製剤は、粥状液中で実質的に安定である。例えば、いくつかの実施形態では、投与から約１０時間、約９時間、約８時間、約７時間、約６時間、約５時間、約４時間、約３時間、約２時間、又は約１時間で、β－ラクタマーゼ活性の約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、又は約１０％以下が喪失する。

【0086】

いくつかの実施形態では、二重パルス（dual pulse）製剤が提供される。種々の実施形態では、本発明は、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の複数の用量を腸管に沿った異なる場所で、異なる時間で、及び／又は異なるｐＨで放出する放出調節製剤を提供する。例示的な実施形態では、放出調節製剤は、第１用量のβ－ラクタマーゼ及び第２用量のβ－ラクタマーゼを含み、第１用量及び第２用量は腸管に沿った異なる場所で、異なる時間で、及び／又は異なるｐＨで放出される。例えば、第１用量は十二指腸で放出され、第２用量は回腸で放出される。別の実施形態では、第１用量は空腸で放出され、第２用量は回腸で放出される。別の実施形態では、第１用量は小腸に沿った場所（例えば、十二指腸）で放出されるが、第２用量は大腸に沿った場所（例えば、上行結腸）で放出される。種々の実施形態では、放出調節製剤は、１回用量以上、２回用量以上、３回用量以上、４回用量以上、５回用量以上、６回用量以上、７回用量以上、又は８回用量以上のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を腸に沿った異なる場所で、異なる時間で、及び／又は異なるｐＨで放出してもよい。さらに本明細書の二重パルス製剤の記載は、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、又はこれらのバリアント）及び追加の治療薬剤を放出する放出調節製剤に適用される。

【0087】

種々の実施形態では、本発明は、薬学的に許容可能な担体又は非薬効成分（excipient）をさらに含んでいてもよい、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の放出調節製剤を使用する。当業者が認識するように、製剤は所望の使用及び投与経路に適した任意の適切な形態であってもよい。

【0088】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ（及び／又は追加の治療薬剤）を含む放出調節製剤の投与は、経口、静脈内、及び非経口のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ（及び／又は追加の薬剤）を含む放出調節製剤の投与は、例えば、全身的に投与された抗生物質への干渉を予防するため、静脈内ではない。その他の実施形態では、投与経路としては、例えば、経口投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、鼻腔内投与、硬膜外投与、舌下投与、鼻腔内投与、脳内投与、膣内投与、経皮投与、直腸投与、吸入による投与、又は局所的投与、特に耳、鼻、目、若しくは皮膚への投与が挙げられる。

【0089】

本明細書に記載されるようなβ－ラクタマーゼ（及び／又は追加の治療薬剤）を含む任意の放出調節製剤は経口投与されてもよい。そのような独創的な製剤は、その他の従来の経路により、例えば、静脈内注入若しくは静脈内ボーラス注入により、上皮若しくは粘膜皮膚裏層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸の粘膜など）を通した吸収により投与されてもよく、追加の治療薬剤と共に投与されてもよい。投与は全身的であっても局所的であってもよい。いくつかの実施形態では、投与は、例えば感染部位での抗生物質の加水分解を回避するため、感染部位で行われない。例えば、リポソーム、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、カプセル中へのカプセル化など、種々の送達系が知られており、投与に使用され得る。具体的な実施形態では、処置が必要な領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。

【0090】

経口用途のための適切な投与形態としては、例えば、錠剤、分散性粉末、顆粒、及びカプセル剤などの固形投与形態が挙げられる。ある実施形態では、放出調節製剤はカプセル剤の形態である。別の実施形態では、放出調節製剤は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、放出調節製剤はソフトゲルカプセル剤の形態である。さらなる実施形態では、放出調節製剤は、ゼラチンカプセル又はヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルの形態である。

【0091】

いくつかの投与形態において、本明細書に記載される剤は、少なくとも１種類の不活性で薬学的に許容可能な非薬効成分（excipient）又は担体（クエン酸ナトリウム、第二リン酸カルシウムなど）、及び／又はａ）賦形剤又は増量剤（デンプン、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マンニトール、ケイ酸、微結晶性セルロース、及びＢａｋｅｒｓ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｓｕｇａｒなど）、ｂ）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、アカシア、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、及びヒドロキシメチルセルロースなど）、ｃ）保水剤（グリセロールなど）、ｄ）崩壊剤（寒天、炭酸カルシウム、馬鈴薯デンプン又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、炭酸ナトリウム、クロスポビドン（架橋ポリビニルピロリドン）、クロスカルメロースナトリウム（架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）などの架橋ポリマー、デンプングリコール酸ナトリウムなど）、ｅ）溶解遅延剤（パラフィンなど）、ｆ）吸収促進剤（四級アンモニウム化合物など）、ｇ）湿潤剤（例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノアセテートなど）、ｈ）吸収剤（カオリン及びベントナイト粘土など）、及びｉ）潤滑剤（タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコールナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリルなど）、並びにそのような非薬効成分の混合物と混合される。当業者は、特定の非薬効成分が経口投与形態において２以上の機能を有し得ることを理解するであろう。例えば、カプセル剤又は錠剤などの経口投与形態の場合、投与形態はまた緩衝剤を含んでいてもよい。

【0092】

放出調節製剤は、界面活性剤をさらに含み得る。本発明における使用に適した界面活性剤は、これらに限定されないが、任意の薬学的に許容可能な非毒性界面活性剤である。本発明の組成物における使用に適した界面活性剤の種類としては、これらに限定されないが、ポリエトキシル化脂肪酸、ＰＥＧ－脂肪酸ジエステル、ＰＥＧ－脂肪酸モノエステルとＰＥＧ－脂肪酸ジエステルとの混合物、ポリエチレングリコールグリセロール脂肪酸エステル、アルコール－油エステル転移反応産物、ポリグリセリン化（polyglycerized）脂肪酸、プロピレングリコール脂肪酸エステル、プロピレングリコールエステルとグリセロールエステルとの混合物、モノグリセリド及びジグリセリド、ステロール及びステロール誘導体、プロピレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールアルキルエステル、糖エステル、ポリエチレングリコールアルキルフェノール、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ソルビタン脂肪酸エステル、低級アルコール脂肪酸エステル、イオン性界面活性剤、及びこれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらに限定されないが、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、及びクエン酸トリエチルを含む１種類又は複数種類の界面活性剤を含み得る。

【0093】

放出調節製剤はまた、柔軟性及び硬度などの所望の機械特性を得るために薬学的に許容可能な可塑剤を含み得る。そのような可塑剤としては、これらに限定されないが、トリアセチン、クエン酸エステル、クエン酸トリエチル、フタル酸エステル、セバシン酸ジブチル、セチルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、又はその他の可塑剤が挙げられる。

【0094】

放出調節製剤はまた、１種類又は複数種類の塗布溶剤を含み得る。例えば遅延放出コーティング組成物を塗布するために使用され得る，より一般的な一部の溶剤としては、イソプロピルアルコール、アセトン、及び塩化メチレンなどが挙げられる。

【0095】

放出調節製剤はまた、１種類又は複数種類のアルカリ性物質を含み得る。本発現の組成物における使用に適したアルカリ性物質としては、これらに限定されないが、リン酸化合物、炭酸化合物、クエン酸化合物、及びその他のアルミニウム化合物／マグネシウム化合物などの酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びアルミニウム塩が挙げられる。さらに、アルカリ性物質は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、及び酸化マグネシウムなどの制酸材料から選択されてもよい。

【0096】

固形経口投与形態は、例えば、１種類又は複数種類の適切な非薬効成分を用いて本発明の薬剤を造粒（例えば、湿式造粒又は乾式造粒）することにより調製され得る。あるいは、本発明の薬剤は、流動床コーティング又はパンコーティングなどの従来の方法を用いて不活性な核（例えば、ショ糖球体などのノンパレイユ／砂糖の球体、又はシリカ球体）上に積層されるか、又は当該技術分野で周知の方法を用いて押し出し及び活性化合物含有錠剤に球形化され得る。実施形態では、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）は、ショ糖球体上に噴霧コーティングされている。次に、そのような小球は、従来の方法を用いてタブレット剤又はカプセル剤中に取り込まれてもよい。

【0097】

活性薬剤に加えて、懸濁液は、例えば、エトキシ化イソセチルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタ水酸化物、ベントナイト、寒天、トラガントなど、及びこれらの混合物などの懸濁剤を含んでいてもよい。

【0098】

不活性希釈剤以外に、経口組成物はまた、甘味剤、香味剤、及び芳香剤などの補助剤を含み得る。

【0099】

非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、及び関節内への注射及び注入）に適した投与形態としては、例えば、溶液、懸濁液、分散液、及び乳化液などが挙げられる。これらはまた、使用直前に滅菌注射用媒体中に溶解又は懸濁することができる滅菌固形組成物（例えば、凍結乾燥された組成物）の形態で製造されてもよい。これらは、例えば、当該技術分野で既知の懸濁剤又は分散剤を含み得る。

【0100】

β－ラクタマーゼ（及び／又は追加の治療薬剤）を含む製剤は、慣習的に単位投与剤形で存在していてもよく、薬学の技術分野で周知の任意の方法により調製されてもよい。そのような方法は、通常、治療薬剤を１種類又は複数種類の副成分を構成する担体と組み合わせるステップを含む。一般的に、製剤は、治療薬剤を均一且つ密接に液体担体（例えば、リン酸緩衝食塩水）、微粉化固体担体、又はこれら両方と組み合わせ、必要であれば、次に（例えば、湿式顆粒又は乾式顆粒、粉体混合物など、続いて当該技術分野で既知の従来の方法を用いた錠剤化により）生成物を所望の製剤の投与形態に成形することにより調製される。

【0101】

種々の実施形態では、本発明の放出調節製剤は、任意にその他の追加の治療薬剤と共に、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）のＧＩ管への有効な、遅延されるが実質的な送達をもたらすための遅延放出コーティングなど、１種類又は複数種類の放出調整コーティングを利用してもよい。

【0102】

ある実施形態では、遅延放出コーティングは、酸性環境下で実質的に安定であり、且つ中性付近～アルカリ性の環境下で不安定である腸溶剤を含んでいる。ある実施形態では、遅延放出コーティングは、胃液中で実質的に安定である腸溶剤を含んでいる。腸溶剤は、例えば、メタクリル酸コポリマー、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルセルロース、フタル酸ポリ酢酸ビニル、カルボキシメチルエチルセルロース、及びＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）型ポリマー（ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸トリメリト酸セルロース、セラック、又はその他の腸溶コーティングポリマーの溶液又は分散液から選択され得る。ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）型ポリマーとしては、例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ ３０Ｄ、Ｌ ３０ Ｄ－５５、Ｌ １００－５５、Ｌ １００、Ｌ １２，５、Ｌ １２，５ Ｐ、ＲＬ ３０ Ｄ、ＲＬ ＰＯ、ＲＬ １００、ＲＬ １２，５、ＲＳ ３０ Ｄ、ＲＳ ＰＯ、ＲＳ １００、ＲＳ １２，５、ＮＥ ３０ Ｄ、ＮＥ ４０ Ｄ、ＮＭ ３０ Ｄ、Ｓ １００、Ｓ １２，５、及びＳ １２，５ Ｐが挙げられる。同様のポリマーとしては、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ（登録商標） ＭＡＥ ３０ ＤＰ及びＫｏｌｌｉｃｏａｔ（登録商標） ＭＡＥ １００ Ｐ が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標） ＦＳ ３０Ｄ、Ｌ ３０ Ｄ－５５、Ｌ １００－５５、Ｌ １００、Ｌ １２，５、Ｌ １２，５ Ｐ ＲＬ ３０ Ｄ、ＲＬ ＰＯ、ＲＬ １００、ＲＬ １２，５、ＲＳ ３０ Ｄ、ＲＳ ＰＯ、ＲＳ １００、ＲＳ １２，５、ＮＥ ３０ Ｄ、ＮＥ ４０ Ｄ、ＮＭ ３０ Ｄ、Ｓ １００、Ｓ １２，５ Ｓ １２，５ Ｐ、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ（登録商標） ＭＡＥ ３０ ＤＰ、及びＫｏｌｌｉｃｏａｔ（登録商標） ＭＡＥ １００ Ｐ のうち1又は複数が使用される。以下の文献は、その全体が参照により取り込まれる。（１）Ｔｈａｋｒａｌ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）：Ａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ”Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｖｏｌ．１０（２０１３）ｐｐ．１３１－１４９；（２）Ｎｉｒａｎｊａｎ Ｐａｔｒａ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ Ｅｕｄｒａｇｉｔ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ，”Ｆｕｔｕｒｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｖｏｌ．３（１０．１０１６／ｊ．ｆｊｐｓ．２０１７．０２．００１）；（３）Ｓｏｎｊｅ，Ａｂｈｉｊｉｔ ａｎｄ Ｃｈａｎｄｒａ，Ａｍｒｉｓｈ，“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ｅｕｄｒａｇｉｔ ｐｏｌｙｍｅｒｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｖｏｌ．４（１０．７８９７／２２３０－８４０７．０４５１５）。種々の実施形態では、腸溶剤は、前述の溶液又は分散液の組み合わせであってもよい。ある実施形態では、遅延放出コーティングは、腸溶剤であるＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標） Ｌ ３０ Ｄ－５５を含む。

【0103】

ある実施形態では、１種類又は複数種類のコーティング系添加物を腸溶剤と共に用いてもよい。例えば、抗粘着コーティング添加剤として、１種類又は複数種類のＰｌａｓＡＣＲＹＬ（商標）添加剤を用いてもよい。例示的なＰｌａｓＡＣＲＹＬ（商標）添加剤としては、これらに限定されないが、ＰｌａｓＡＣＲＹＬ（商標） ＨＴＰ２０及びＰｌａｓＡＣＲＹＬ（商標） Ｔ２０が挙げられる。ある実施形態では、ＰｌａｓＡＣＲＹＬ（商標） ＨＴＰ２０はＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標） Ｌ ３０ Ｄ－５５コーティングと共に製剤化される。別の実施形態では、ＰｌａｓＡＣＲＹＬ（商標） Ｔ２０はＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標） ＦＳ ３０ Ｄコーティングと共に製剤化される。

【0104】

別の実施形態では、遅延放出コーティングは、水性溶液中にある場合、ｐＨ及び／又は溶液中の酵素の存在にかかわらず、時間に応じて分解し得る。そのようなコーティングは、水不溶性ポリマーを含み得る。したがって、水性溶液中での溶解性はｐＨ非依存的である。本明細書における「ｐＨ非依存的」との用語は、ポリマーの水浸透性及び医薬成分を放出するその能力がｐＨに応じていない、及び／又はほんのわずかしかｐＨに依存していないことを意味する。そのようなコーティングは、例えば、持続放出製剤を調製するために用いられ得る。適切な水不溶性ポリマーとしては、溶液のｐＨ非依存的に水性媒体（例えば水）に実質的に不溶性の薬学的に許容可能な非毒性ポリマーが挙げられる。適切なポリマーとしては、これらに限定されないが、セルロースエーテル、セルロースエステル、又はセルロースエーテルエステル、すなわち、セルロース骨格上のヒドロキシ基の一部がアルキル基で置換され、一部がアルカノイル基で修飾されているセルロース誘導体が挙げられる。例としては、エチルセルロース、アセチルセルロース、及びニトロセルロースなどが挙げられる。不溶性ポリマーのその他の例としては、これらに限定されないが、ラッカー、並びにアクリル酸エステルポリマー及び／又はメタクリル酸エステルポリマー、第４級アミン含有量が低いアクリレート又はメタクリレートのポリマー又はコポリマー、又はこれらの混合物などが挙げられる。不溶性ポリマーのその他の例としては、ＥＵＤＲＡＧＩＴ ＲＳ（登録商標）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ ＲＬ（登録商標）、及びＥＵＤＲＡＧＩＴ ＮＥ（登録商標）が挙げられる。本発明において有用な不溶性ポリマーとしては、ポリビニルエステル、ポリ酢酸ビニル、ポリアクリル酸エステル、及びブタジエンスチレンコポリマーなどが挙げられる。ある実施形態では、結腸への送達は、緩徐浸食ワックスプラグ（slowly-eroding wax plug）（例えば、ＰＥＧの６０００を含む種々のＰＥＧ）を用いて達成される。

【0105】

他の実施形態では、遅延放出コーティングは、腸内細菌叢中に存在する微生物酵素により分解され得る。ある実施形態では、遅延放出コーティングは、小腸中に存在する細菌により分解され得る。別の実施形態では、遅延放出コーティングは、大腸中に存在する細菌により分解され得る。

【0106】

種々の実施形態では、本発明により、１種類又は複数種類のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含むベースコートを有する核粒子、及びコートされた核粒子上に配置される遅延放出コーティングを含む製剤が提供される。遅延放出コーティングは、酸性環境下及び／又は胃液中で実質的に安定である、及び／又は中性付近～アルカリ性の環境下又は腸液中で不安定であることによりコーティングされた核粒子が腸液に曝される。１種類又は複数種類のβ－ラクタマーゼを含むベースコートは、１種類又は複数種類の追加の治療薬剤をさらに含んでいてもよい。任意に、複数のベースコートを、各々がβ－ラクタマーゼ及び／又は追加の治療薬剤を含んでいてもよい核に塗布してもよい。ある実施形態では、核粒子はショ糖を含んでいてもよい。製剤は当該技術分野で既知の方法により調製され得る。例えば、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）は、不活性な核（例えば、ショ糖核又はショ糖球体）上に噴霧され、腸溶性の層（ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ３０ Ｄ－５５）と共に噴霧乾燥されて、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）含有ペレットを形成し得る。

【0107】

任意に、核粒子は１種類又は複数種類のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は１種類又は複数種類の追加の治療薬剤を含んでいてもよい。ある実施形態では、１又は複数の用量のβ－ラクタマーゼは、例えば微小球の形態である、核粒子中にカプセル化されてもよい。例えば、β－ラクタマーゼは、ポリマー（例えば、ラテックス）と組み合わせられ、次に、ショ糖核を使用せずに粒子状マイクロカプセル化酵素製剤に成形されてもよい。次に、形成された微小球を遅延放出コーティングで任意に被覆してもよい。

【0108】

酵素の封入に適している粒子（例えば、微小球、凝集体など）を生成するための種々のアプローチが知られている。それらは通常、酵素を含む相、及び微粒子の骨格を形成するポリマーを含む相の２相以上が含まれる。最も一般的なものは、第三の成分の添加によりポリマーが溶媒相から分離されるコアセルベート、又は水中油中水型（ｗ／ｏ／ｗ）型エマルションなどの多相エマルションであり、内側の水相はタンパク質を含み、中間の有機相はポリマーを含み、外側の水相は溶媒が除去されて微小球を形成するまでｗ／ｏ／ｗ二重エマルションを支持する安定化剤を含む。あるいは、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び安定化非薬効成分（例えば、トレハロース、マンニトール、Ｔｗｅｅｎ ８０、ポリビニルアルコール）は組み合わされ、水性溶液から噴霧され、回収される。次に、粒子は、ポリマー及び放出調節化合物を含む、乾燥した水非混和性有機溶媒中に懸濁され、次に、懸濁液は超音波処理されて粒子が分散される。他のアプローチは水相を用いるが有機溶媒を用いない。具体的には、酵素、緩衝成分、ポリマーラテックス、並びに安定化非薬効成分及び放出調節非薬効成分が、水中に溶解／分散される。水性分散液は噴霧乾燥されて、ラテックスの合体が引き起こされ、タンパク質及び非薬効成分が合体したラテックスの粒子中に取り込まれる。放出調節剤が酸性条件下で不溶性であるがより高いｐＨで可溶性である場合（カルボン酸など）、マトリックスからの放出は、胃環境下で阻害される。

【0109】

いくつかの実施形態では、被覆された核粒子に遅延放出コーティングを塗布する前に、粒子は、任意に、例えばｐＨ緩衝化合物などのアルカリ化合物を含む薬学的非薬効成分を含む、１又は複数の分離層で被覆され得る。分離層は本質的には被覆された核粒子を遅延放出コーティングから分離する。

【0110】

分離層は、通常、コーティングパン、コーティング造粒機などのコーティング装置を用いたコーティング工程又は積層工程により、又はコーティング工程のための水及び／又は有機溶媒を用いた流動床装置中で、被覆核粒子に塗布され得る。別の方法として、粉体コーティング技術を用いて分離層を核材料に塗布し得る。分離層のための材料は、薬学的に許容可能な化合物、例えば、単独又は混合物で使用される、砂糖、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどである。例えば、ステアリン酸マグネシウム、二酸化チタン、タルク、及びその他の添加剤など、可塑剤、着色剤、色素、賦形剤、抗粘着剤、及び静電気防止剤などの添加剤もまた、分離層に含まれ得る。

【0111】

いくつかの実施形態では、遅延放出コーティングを有する被覆粒子は、上塗り層でさらに覆われていてもよい。上塗り層は、その他の被覆組成物について記載されるように塗布され得る。上塗り材料は、単独又は混合物で使用される、砂糖、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの薬学的に許容可能な化合物である。上塗り材料は遅延放出コーティングで被覆された粒子の潜在的な凝集を防止し、圧縮処理の間のクラッキングから遅延放出コーティングを保護するか又は打錠処理を促進し得る。

【0112】

種々の実施形態では、製剤は、複数の放出調節粒子、放出調節ペレット、又は放出調節微小球を含んでいてもよい。ある実施形態では、製剤は複数のペレットを含むカプセル剤の形態である。ある実施形態では、製剤は複数の微小球を含むカプセル剤の形態である。

【0113】

いくつかの実施形態では、放出調節製剤は、β－ラクタマーゼが放出される複数のβ－ラクタマーゼ含有ペレット（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６（又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）含有ペレット）が充填されたカプセルであってもよい。ある実施形態では、カプセルは、硬ゼラチンカプセルなどのゼラチンカプセルである。別の実施形態では、カプセルはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルである。例えば、製剤は、多数のペレットを含むカプセルの形態であってもよい。例えば、製剤は、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含む多数の腸溶コーティングされたペレットを含む、例えばゼラチンカプセル又はヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルなどのカプセルの形態であってもよい。そのような実施形態では、ペレットの組み合わせが利用されてもよく、各ペレットは特定の時点又は場所で放出されるように設計されている。種々の実施形態では、ペレット（例えば、腸溶コーティングされたペレット）は、変化せずに胃を通過した後、腸管の１又は複数の領域中へβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を放出するように設計されている。いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ含有ペレットは、腸管の異なるｐＨ値でβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を放出するように腸溶コーティングされてもよい。

【0114】

種々の実施形態では、本発明の製剤は、複数の腸溶コーティングされたβ－ラクタマーゼ含有ペレットを含むカプセル（例えば、硬ゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセル）の形態であってもよい。そのような実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）、例えばＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６又はこれらのバリアントなどのβ－ラクタマーゼが噴霧されているショ糖球体、結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））、腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）、可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）、流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）、乳化剤、及び緩衝塩を含む。

【0115】

種々の実施形態では、本発明の製剤は、複数の腸溶コーティングされたβ－ラクタマーゼ含有ペレットを含む、カプセル（例えば、硬ゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセル）の形態であってもよい。そのような実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約１０～２０重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含む。例えば、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）は、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、又は約２０重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約２０～３０重量％のショ糖球体を含み、例えばＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６又はこれらのバリアントなどのβ－ラクタマーゼがショ糖球体上に噴霧されている。例えば、ショ糖球体は、約２０重量％、約２１重量％、約２２重量％、約２３重量％、約２４重量％、約２５重量％、約２６重量％、約２７重量％、約２８重量％、約２９重量％、又は約３０重量％で存在していてもよい。種々の実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約３０～４０重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））を含む。例えば、結合剤非薬効成分は、約３０重量％、約３１重量％、約３２重量％、約３３重量％、約３４重量％、約３５重量％、約３６重量％、約３７重量％、約３８重量％、約３９％、又は約４０重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約１５～２５重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）を含む。例えば、腸溶性ポリマーは、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２１重量％、約２２重量％、約２３重量％、約２４重量％、又は約２５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約１．５～２．５重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）を含む。例えば、可塑剤は、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、約２重量％、約２．１重量％、約２．２重量％、約２．３重量％、約２．４重量％、又は約２．５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約０．５～１．５重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）を含む。例えば、流動促進剤は、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、又は約１．５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約０．１～１．０重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）を含む。例えば、乳化剤は、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、又は約１重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約１～２重量％の緩衝塩をさらに含む。例えば、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、又は約２重量％で存在していてもよい。本明細書でに記載され重量は、カプセル自体の重量を除く全成分の合計重量を指す。

【0116】

いくつかの実施形態では、ペレット（又は個々のペレット）は、約１６重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）；約２３重量％のショ糖球体；約３５重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））；約２１重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）；約２重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）；約１重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）；約０.５重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）；及び約２重量％の緩衝塩を含む。本明細書に記載される重量は、カプセル自体の重量を除く全成分の合計重量を指す。

【0117】

例えば、ペレット（又は個々のペレット）は、約１５．８重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）；約２３．３重量％のショ糖球体；約３５重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））；約２０．８重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）；約２．１重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）；約１．０重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）；約０.４重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）；及び約１．６重量％の緩衝塩を含む。本明細書に記載される重量は、カプセル自体の重量を除く全成分の合計重量を指す。

【0118】

種々の実施形態では、本発明の製剤は、約７５ｍｇのβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含むカプセル（例えば、硬ゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセル）の形態である。カプセルは、複数の腸溶コーティングされたβ－ラクタマーゼ含有ペレットを含む。そのような実施形態では、製剤は、約１０～２０重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含む。例えば、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）は、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、又は約２０重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１５～２５重量％のショ糖球体を含む。例えば、ショ糖球体は、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２１重量％、約２２重量％、約２３重量％、約２４重量％、又は約２５重量％で存在していてもよい。種々の実施形態では、製剤は、約２５～３５重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））を含む。例えば、結合剤非薬効成分は、約２５重量％、約２６重量％、約２７重量％、約２８重量％、約２９重量％、約３０重量％、約３１重量％、約３２重量％、約３３重量％、約３４重量％、又は約３５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０～２５重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）を含む。例えば、腸溶性ポリマーは、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２１重量％、約２２重量％、約２３重量％、約２４重量％、又は約２５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１．５～２．５重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）を含む。例えば、可塑剤は、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、約２重量％、約２．１重量％、約２．２重量％、約２．３重量％、約２．４重量％、又は約２．５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．５～１．５重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）を含む。例えば、流動促進剤は、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、又は約１．５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．１～１．０重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）を含む。例えば、乳化剤は、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、又は約１重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１～２重量％の緩衝塩を含む。例えば、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、又は約２重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０～２０重量％のゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルを含んでいてもよい。例えば、ゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルは、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、又は約２０重量％であってもよい。

【0119】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、約７５ｍｇのβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含む。そのような実施形態では、製剤は、約１３重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）；約１９重量％のショ糖球体；約２９重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））；約１７重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）；約２重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）；約１重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）；約０.５重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）；約１重量％の緩衝塩；及び約１７重量％のゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルを含む。

【0120】

例えば、製剤は、約１３．１重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）；約１９．４重量％のショ糖球体；約２９．１重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））；約１７．３重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）；約１．７重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）；約０．９重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）；約０.４重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）；約１．３重量％の緩衝塩；及び約１６．８重量％のゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルを含む。

【0121】

種々の実施形態では、本発明の製剤は、約２５ｍｇのβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含むカプセル（例えば、硬ゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセル）の形態である。カプセルは、複数の腸溶コーティングされたβ－ラクタマーゼ含有ペレットを含む。そのような実施形態では、製剤は、約５～１５重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含む。例えば、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）は、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、又は約１５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０～２０重量％のショ糖球体を含む。例えば、ショ糖球体は、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、又は約２０重量％で存在していてもよい。種々の実施形態では、製剤は、約１５～２５重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））を含む。例えば、結合剤非薬効成分は、約１５重量％、約１６重量％、約１重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２１重量％、約２２重量％、約２３重量％、約２４重量％、又は約２５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０～２０重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）を含む。例えば、腸溶性ポリマーは、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、又は約２０重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約１．０～２．０重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）を含む。例えば、可塑剤は、約１．０重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、又は約２．０重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．１～１．０重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）を含む。例えば、流動促進剤は、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９％重量％、又は約１重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．１～１．０重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）を含む。例えば、乳化剤は、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、又は約１重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．５～１．５重量％の緩衝塩を含む。例えば、緩衝塩は、０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、又は約１．５重量％で存在していてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、約３０～４０重量％のゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルを含んでいてもよい。例えば、ゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルは、３０重量％、約３１重量％、約３２重量％、約３３重量％、約３４重量％、約３５重量％、約３６重量％、約３７重量％、約３８重量％、約３９重量％、又は約４０重量％であってもよい。

【0122】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、約２５ｍｇのβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）を含む。そのような実施形態では、製剤は、約１０重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）；約１５重量％のショ糖球体；約２２重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））；約１３重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）；約１重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）；約０．５重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）；約０.３重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）；約１重量％の緩衝塩；及び約３８重量％のゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルを含む。

【0123】

例えば、製剤は、約９．８重量％のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）；約１４．５重量％のショ糖球体；約２１．８重量％の結合剤非薬効成分（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））；約１３重量％の腸溶性ポリマー（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ Ｌ ３０ Ｄ－５５）；約１．３重量％の可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル）；約０．６重量％の流動促進剤（例えば、モノステアリン酸グリセリン）；約０.３重量％の乳化剤（例えば、ポリソルベート－８０）；約１．０重量％の緩衝塩；及び約３７．７重量％のゼラチンカプセル又はＨＰＭＣカプセルを含む。

【0124】

本発明はまた、複数用量のβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）及び／又は追加の治療薬剤をＧＩ管に沿って放出する放出調節製剤を提供する。そのような実施形態では、そのような製剤の全体の放出プロファイルは、例えば、複数の粒子種類又は複数の層を利用することにより調整してもよい。ある実施形態では、β－ラクタマーゼの第１用量は、例えば小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）又は大腸（例えば、盲腸、結腸の上行部、横行部、下行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの１又は複数）において放出されるように製剤化されてもよく、第２用量は、例えば小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）又は大腸（例えば、盲腸、結腸の上行部、横行部、下行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの１又は複数）の異なる場所で遅延放出されるように製剤化される。あるいは、腸管に沿った異なる場所で複数の用量が放出されてもよい。例えば、ある実施形態では、β－ラクタマーゼの第１用量は、例えば小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）で放出されるように製剤化されてもよく、第２用量は、例えば小腸（例えば、十二指腸、空腸、回腸のうちの１又は複数）の別の場所で遅延放出されるように製剤化される。別の実施形態では、β－ラクタマーゼの第１用量は、例えば大腸（例えば、盲腸、結腸の上行部、横行部、下行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの１又は複数）で放出されるように製剤化されてもよく、第２用量は、例えば大腸（例えば、盲腸、結腸の上行部、横行部、下行部、又はＳ状部、及び直腸のうちの１又は複数）の別の場所で遅延放出されるように製剤化される。

【0125】

種々の実施形態では、本明細書に記載される薬剤は、薬学的に許容可能な塩、すなわち、過度の毒性、刺激、及びアレルギー反応などを伴わず、合理的なリスク・ベネフィット比に見合う、ヒト及びその他の動物の組織と接触させて使用することに適した塩の形態であってもよい。薬学的に許容可能な塩は当該技術分野で周知である。塩は、治療薬剤の最終的な単離及び精製の間にｉｎ ｓｉｔｕで、又は遊離塩基官能基を適切な酸と反応させるか、若しくは遊離酸官能基を適切なアルカリ部分と反応させることにより別々に調製され得る。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、及び吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムなど、並びに、これらに限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、及びエチルアミンなどを含む、非毒性のアンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンのカチオンが挙げられる。

【0126】

種々の実施形態では、本願製剤により多くの利点が提供される。例えば、本発明者らは、それ自体が挑戦的である、タンパク質（すなわち、β－ラクタマーゼ）の製剤化に成功した。これは、種々の実施形態で本願製剤が薬剤を放出するＧＩ管環境によりさらに配合される。加えて、種々の実施形態では、本願製剤により、種々の抗生物質の有害作用からのＧＩ管における良好な保護範囲を可能にするように十分に緩徐なＧＩ管放出が、例えば小腸において（より緩徐な放出に見合うβ－ラクタマーゼ半減期の増大により強調される利点が）、提供される。さらに、本願ペレットの薬剤物質層を、ＥＵＤＲＡＧＩＴではなくＨＰＣで被覆することにより、例えば、本願製剤は、製剤中のＥＵＤＲＡＧＩＴの量を最小限に抑え、それにより用量制限毒性の可能性及び製造の複雑化を軽減する。

【0127】

投与及び用量
本願発明により投与されるβ－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の実際の用量は、例えば、特定の投与形態及び投与方法により異なり得ることが予測される。β－ラクタマーゼの作用を調節し得る多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時間、投与経路、排出率、対象の病状、薬剤の組み合わせ、遺伝的気質、及び反応感受性）が当業者により考慮され得る。投与は連続的に行われてもよく、最大許容用量以内の１又は複数の別個の用量で行われてもよい。所与の一連の病状についての最適投与率は、従来の用量投与試験を用いて当業者により確認され得る。

【0128】

β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の個々の用量は、例えば、約０．０１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約９５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約９００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約８５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約８００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約７５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約７００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約６５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約６００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約５５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約５００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約４５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約４００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約３５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約３００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約２５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約２００ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約１５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの活性成分、単位投与形態当たり約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、又は単位投与形態当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇを含む単位用量形態（例えば、錠剤又はカプセル剤）で投与され得る。例えば、単位用量形態は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、又は約１，０００ｍｇ（これらの間の全ての値及び範囲を含む）であってもよい。ある実施形態では、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の個々の用量は、２５ｍｇのβ－ラクタマーゼを含む単位投与形態で投与される。別の実施形態では、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の個々の用量は、５０ｍｇのβ－ラクタマーゼを含む単位投与形態で投与される。さらに別の実施形態では、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の個々の用量は、７５ｍｇのβ－ラクタマーゼを含む単位投与形態で投与される。

【0129】

ある実施形態では、β－ラクタマーゼは、１日当たり約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約９５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約９００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約８５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約８００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約７５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約７００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約６５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約６００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約５５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約５００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約４５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約４００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約３５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約３００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約２５０ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約２００ｍｇ、１日当たり約０．０１ｍｇ～約１５０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約９５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約８５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約７５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約６５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約５５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約４５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約３５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約２５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約１５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、１日当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、又は１日当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇの量で投与される。

【0130】

種々の実施形態では、β－ラクタマーゼは、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、又は約１，０００ｍｇ（これらの間の全ての値及び範囲を含む）の１日用量で投与される。

【0131】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼ（例えば、ＳＹＮ－００４若しくはＳＹＮ－００６、又は本明細書に記載されるその他のβ－ラクタマーゼ剤、及びこれらのバリアント）の適切な用量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇの範囲、例えば、体重１ｋｇ当たり、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約１．１ｍｇ、約１．２ｍｇ、約１．３ｍｇ、約１．４ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．６ｍｇ、約１．７ｍｇ、約１．８ｍｇ、約１．９ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、又は約１００ｍｇ（これらの間の全ての値及び範囲を含む）である。別の実施形態では、β－ラクタマーゼの適切な用量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇの範囲、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約９ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約８ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約７ｍｇ、体重１ｋｇ当たり．０１ｍｇ～約６ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約５ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約４ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約３ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約２ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約１．５ｍｇ、又は体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約１ｍｇである。

【0132】

種々の実施形態では、ＳＹＮ－００４又はＳＹＮ－００６の用量は、約７５ｍｇ～約３００ｍｇの間、例えば、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、又は約３００ｍｇである。

【0133】

本発明のある実施形態によれば、β－ラクタマーゼは、例えば、約１日に１回、約２日ごと、約３日ごと、約１週間に１回、約２週間に１回、約１か月に１回、約２か月に１回、約３か月に１回、約６か月に１回、又は約１年に１回投与されてもよい。ある実施形態では、β－ラクタマーゼは、１日に１回以上、例えば、１日に約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、又は約１０回投与されてもよい。

【0134】

追加の治療薬剤及び併用療法
本発明のマイクロバイオーム保護剤の投与は、追加の治療薬剤と組み合わされてもよい。追加の治療薬剤と本願製剤の共投与は、同時であってもよく、連続的であってもよい。さらに、本願製剤は、追加の治療薬剤を含んでいてもよい（例えば、同時製剤化）。

【0135】

いくつかの実施形態では、本発明の放出調節製剤は、追加の治療薬剤と組み合わせて投与される。ある実施形態では、追加の治療薬剤とマイクロバイオーム保護剤を、単一の放出調節製剤中に組み合わせてもよい。いくつかの実施形態では、治療及び／又は予防する方法は、本発明の放出調節製剤を、追加の治療薬剤を用いた処置を受けている対象に投与することを含む。

【0136】

ある実施形態では、追加の治療薬剤及びマイクロバイオーム保護剤は対象に同時に投与される。本明細書における「同時」との用語は、追加の治療薬剤及びマイクロバイオーム保護剤が、約３０分以内、約２０分以内、約１０分以内、約５分以内、又は約１分以内など、約６０分以内の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬剤及びマイクロバイオーム保護剤の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬剤及びマイクロバイオーム保護剤を含む製剤）又は別個の製剤（例えば、追加の治療薬剤を含む第１の製剤及びマイクロバイオーム保護剤を含む第２の製剤）の同時投与によるものであり得る。

【0137】

共投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬剤とマイクロバイオーム保護剤の薬学的活性が時間的に重複し、それにより複合治療効果を発揮するようなタイミングであれば、追加の治療薬剤が同時に投与されることを必要としない。例えば、追加の薬剤及びマイクロバイオーム保護剤が連続的に投与され得る。本明細書における「連続的」との用語は、追加の薬剤及びマイクロバイオーム保護剤が、約６０分以上の時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の薬剤及びマイクロバイオーム保護剤の連続的投与の時間は、約６０分以上、約２時間以上、約５時間以上、約１０時間以上、約１日以上、約２日以上、約３日以上、又は約１週間以上離れていてもよい。最適投与時間は、投与される追加の薬剤及びマイクロバイオーム保護剤の代謝率、排出率、及び／又は薬物力学的活性に依存し得る。追加の薬剤又はマイクロバイオーム保護剤のいずれが最初に投与されてもよい。

【0138】

他の実施形態では、追加の治療薬剤及びマイクロバイオーム保護剤は対象に同時に投与されるが、ＧＩ管における追加の治療薬剤及びマイクロバイオーム保護剤のそれぞれの投与形態（又は共製剤化されている場合は単一投与形態）からの放出は連続的に起こる。

【0139】

共投与はまた、追加の治療薬剤が同じ投与経路で対象に投与されることを必要としない。むしろ、それぞれの治療薬剤は任意の適切な経路、例えば、非経口経路又は非経口以外の経路で投与され得る。

【0140】

いくつかの実施形態では、１種類又は複数種類のマイクロバイオーム保護剤は、ａＧＶＨＤ並びにＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症など、ａｌｌｏ－ＨＣＴレシピエントへのβ－ラクタム系抗生物質の静脈内投与に関連する合併症の発生率及び／又は重症度を低減させる方法において使用される。

【0141】

いくつかの実施形態では、１種類又は複数種類のマイクロバイオーム保護剤は、ａＧＶＨＤ並びにＶＲＥの定着及び／又はＶＲＥの血流感染症など、ａｌｌｏ－ＨＣＴに関連する疾患の１又は複数の兆候又は副作用を予防又は処置する１種類又は複数種類の治療薬剤と組み合わせて使用される。そのような薬剤としては、これらに限定されないが、コルチコステロイド（メチルプレドニゾロン又はプレドニゾロン）などの免疫抑制剤、及びその他の免疫抑制薬剤が挙げられる。例示的なａＧＶＨＤ処置は、いくつかの実施形態では、プレドニゾロンである。その他の例示的なａＧＶＨＤ予防及び処置としては、イブルチニブ（例えば、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ）、ミコフェノール酸モフェチル、ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムスなど）、カルシニューリン阻害剤（タクロリムス又はシクロスポリンなど）、シクロスポリン、モノクローナル抗体（インフリキシマブ（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、トシリズマブ（例えば、ＡＣＴＥＭＲＡ）、アレムツズマブ（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ）、バシリキシマブ（例えば、ＳＩＭＵＬＥＣＴ）、ダクリズマブ（例えば、ＺＩＮＢＲＹＴＡ）など）、並びにデニロイキンジフチトクス（例えば、ＯＮＴＡＫ）、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、抗リンパ細胞グロブリン（ＡＬＧ）、ペントスタチン（例えば、ＮＩＰＥＮＴ）、ルキソリチニブ（例えば、ＪＡＫＡＦＩ）、及びフォトフェレーシスが挙げられる。

【0142】

いくつかの実施形態では、β－ラクタマーゼの投与によるａＧＶＨＤの発生率及び／又は重症度の低減により、イブルチニブ（例えば、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ）、ミコフェノール酸モフェチル、ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムスなど）、カルシニューリン阻害剤（タクロリムス又はシクロスポリンなど）、シクロスポリン、モノクローナル抗体（インフリキシマブ（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、トシリズマブ（例えば、ＡＣＴＥＭＲＡ）、アレムツズマブ（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ）、バシリキシマブ（例えば、ＳＩＭＵＬＥＣＴ）、ダクリズマブ（例えば、ＺＩＮＢＲＹＴＡ）など）、並びにデニロイキンジフチトクス（例えば、ＯＮＴＡＫ）、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、抗リンパ細胞グロブリン（ＡＬＧ）、ペントスタチン（例えば、ＮＩＰＥＮＴ）、ルキソリチニブ（例えば、ＪＡＫＡＦＩ）、及びフォトフェレーシスを含む、メチルプレドニゾロン又はプレドニゾロン及びその他の免疫抑制薬剤を含むａＧＶＨＤの予防又は処置に用いられる追加処置の用量又は投与の長さ若しくは投与頻度の低減が可能になる。例えば、これにより高用量及び高頻度での１種類又は複数種類のステロイドによる患者の治療が温存され得る。

【0143】

キット
本発明は、本明細書に記載される放出調節製剤の投与を単純化することができるキットを提供する。キットは、本明細書に記載される放出調節製剤のうちの少なくとも1つを含む、材料又は構成成分の集合体である。キットに構成される構成成分の正確な性質は意図された目的に依存する。ある実施形態では、キットはヒトの対象を処置する目的のために構成される。

【0144】

使用説明書をキットに含ませてもよい。使用説明書は通常、本明細書に記載される関連疾患を処置するためなど、所望の結果に影響を及ぼすキット中の構成要素の使用に際して用いられる技術を説明する具体的表現を含む。任意に、キットはまた、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、注射器、カテーテル、アプリケーター、ピペット操作器具若しくは測定器具、包帯材料、又は当該技術分野の当業者に容易に認識され得るようなその他の有用な道具など、その他の有用な構成要素を含む。

【0145】

キットに組まれた材料及び構成要素は、それらの操作性及び有用性を保存する任意の利便性及び適切な方法で実施者の保存場所に提供され得る。例えば、構成要素は、室温、冷蔵温度、又は冷凍温度で提供され得る。構成要素は通常、適切な包装材料中に含まれる。種々の実施形態では、包装材料は、好ましくは滅菌された汚染されていない環境を提供するための周知の方法により作成される。包装材料は、キット及び／又は構成要素の内容物及び／又は目的を表示する外部ラベルを有していてもよい。

【0146】

定義
本明細書で使用される「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」は、１、又は複数を意味し得る。

【0147】

さらに、参照数値表示と関連して使用される場合の「約」との用語は、その参照数値表示の最大１０％を加算又は減算した参照数値表示を意味する。例えば、「約５０％」との語は、４５％～５５％の範囲に及ぶ。

【0148】

「有効量」は、医学用途と関連して使用される場合、所望の疾患の測定可能な処置、予防、又は発症率の低減をもたらすために有効な量である。

【0149】

本明細書で使用される場合、薬剤又は刺激の存在下で、そのような調節の非存在下と比較して、活性及び／又は効果の読み取り値が有意な量、例えば、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７％以上、約９８％以上、又はそれ以上、約１００％を含むそれ以下まで低減される場合に、何かが「低減される」。当業者に理解されるように、いくつかの実施形態では、活性が低減し、いくつかの下流の読み取りが低減することになるが、その他は増大し得る。

【0150】

反対に、薬剤又は刺激の存在下で、そのような薬剤又は刺激の非存在下と比較して、活性及び／又は効果の読み取り値が有意な量、例えば、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７％以上、約９８％以上、又はそれ以上、約１００％又はそれ以上を含むそれ以下、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上増大される場合に、活性が「増大される」。

【0151】

本願で参照される場合、別段の定めがない限り、全ての構成要素の割合は全構成要素の重量に対するものである。本明細書で使用される場合、「含む（include）」との語及びその変形は、非限定的であることを意図しており、リスト中の項目の記載は、本願技術の組成物及び方法において有用であり得るその他の類似の項目を排除するものではない。同様に、「し得る（can）」及び「してもよい（may）」との用語ならびにこれらの変形は、非限定的であることを意図しており、ある実施形態が特定の要素又は特徴を含み得る又は含んでいてもよいとの記載は、それらの要素又は特徴を含まない本願技術のその他の実施形態を排除するものではない。

【0152】

含む（include）、含有する（containing）、有する（having）などの用語の類義語である非限定的な用語「含む（comprising）」は、本明細書では、発明、本発明、又はその実施形態を記載及び請求するために使用され、「からなる（consisting of）」又は「から本質的になる（consisting essentially of）」などの代替用語を用いて代替的に記載されてもよい。

【0153】

本明細書で使用される場合、「好ましい」及び「好ましくは」との語は、特定の状況下で特定の利益をもたらす技術の実施形態を指す。しかしながら、同じ状況下又はその他の状況下でその他の実施形態もまた好ましいことがある。さらに、１又は複数の好ましい実施形態の記載は、その他の実施形態が有用ではないことを意味するのではなく、本願技術の範囲からその他の実施形態を排除することを意図しているのではない。

【0154】

治療効果を達成するために必要とされる本明細書に記載される構成成分の量は、特定の目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてもよい。一般に、治療目的のための治療薬剤（例えば、本明細書に記載されるβ－ラクタマーゼ及び／又は追加の治療薬剤）の投与について、治療薬剤は薬理学的に有効な用量で与えられる。「薬理学的に有効な量」、「薬理学的に有効な用量」、「治療的に有効な量」、又は「有効量」は、特に、障害又は疾患の処置について、所望の生理学的効果をもたらすのに十分な量又は所望の結果を達成可能な量を指す。本明細書で使用される有効量は、例えば、障害又は疾患の症状の発現を遅延させ、障害又は疾患の症状の経過を変化させ（例えば、疾患の症状の進行を遅くする）、障害又は疾患の１又は複数の症状又は兆候を低減又は除去し、障害又は疾患の症状を改善するために十分な量を含み得る。治療的有用性はまた、改善が自覚されているか否かにかかわらず、潜在的な疾患又は障害の進行を停止又は遅くすることも含む。

【0155】

有効量、毒性、及び治療効果は、例えば、ＬＤ５０（母集団の約５０％に対して致死的である用量）及びＥＤ５０（母集団の約５０％において治療的効果がある用量）を決定するための、細胞培養物、組織試料、組織ホモジネート、又は実験動物における標準的な薬学的手段により決定し得る。用量は、用いられる投与形態及び利用される投与経路によって異なり得る。毒性効果と治療効果との用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表され得る。いくつかの実施形態では、治療指数が大きい組成物及び方法が好ましい。治療的に有効な用量は、例えば細胞培養アッセイを含む、インビトロアッセイにより最初に評価される。また、用量は、細胞培養物において決定されたようなＩＣ５０を含む循環血漿濃度範囲を達成するための動物モデル、又は適切な動物モデルにおいて製剤化され得る。血漿中の記載される組成物のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーにより測定され得る。任意の特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニタリングされ得る。投与量は、医師により決定され、必要に応じて治療の観察された効果に適合するよう調整される。

【0156】

特定の実施形態では、効果は、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約５０％以上、約７０％以上、約９０％以上の定量可能な変化をもたらすことになる。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、又は約９０％若しくはそれ以上の定量可能な変化をもたらすことになる。治療的有用性はまた、改善が自覚されているか否かにかかわらず、潜在的な疾患又は障害の進行を停止又は遅くすることも含む。

【0157】

本明細書で使用される場合、「処置方法」は、本明細書に記載される疾患又は障害の処置のための組成物の使用、及び／又は使用のための組成物、及び／又は本明細書に記載される疾患又は障害の処置のための医薬の製造における使用にも等しく適用される。

【実施例】

【0158】

実施例１：ＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ）はマウス糞便におけるピペラシリンレベルを低下及び／又は低減させた
この実験の目的は、ＳＹＮ－００４の液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水中のβ－ラクタマーゼ）が、強制経口投与によりマウスの小腸及び大腸に送達されるか否かを決定することであった。

【0159】

マウスは、５００ｍｇ/ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムを１日に２回、２日間の皮下投与を受けた。マウスは同時に、（１）５００ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与を受けたが、Ｐ３Ａの液体製剤（例えば、生理食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の強制経口投与を受けなかった第１コホート；及び（２）５００ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与を受け、且つ、１０ｍｇ／ｋｇのＰ３Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第２コホートの２つのコホートに分けられた。対照コホートのマウスは、ピペラシリン／タゾバクタムの投与もＰ３Ａの強制経口投与も受けなかった。

【0160】

２日後、ピペラシリンの存在についてマウスの糞便を評価した。図１は、５００ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与、及びＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の１日に２回、２日間の強制経口投与を受けたマウスにおいて、ピペラシリンの量（１ｇの糞便あたりのμｇ）が減少したことを示す。棒グラフの左端のバーは対照マウスのコホートからのデータに対応し、棒グラフの中央のバーはピペラシリン／タゾバクタムの投与を受けたがＰ３Ａの投与を受けなかったマウスの第１コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはピペラシリン／タゾバクタムとＰ３Ａの両方の投与を受けたマウスの第２コホートからのデータに対応する。

【0161】

実施例２：ＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ）は、ピペラシリン／タゾバクタムからファーミキューテス細菌門を保護した
マウスは、１２５ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与を受けた。マウスは同時に、（１）１２５ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与を受けたが、Ｐ３Ａの液体製剤（例えば、生理食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の強制経口投与を受けなかった第１コホート；及び（２）１２５ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１日に２回、２日間の皮下投与を受け、且つ、１０ｍｇ／ｋｇのＰ３Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第２コホートの２つのコホートに分けられた。対照コホートのマウスは、ピペラシリン／タゾバクタムの投与もＰ３Ａの強制経口投与も受けなかった。別の対象コホートのマウスは、Ｐ３Ａのみのを投与された。

【0162】

２日後、マウス糞便中のファーミキューテス細菌門属（例えば、短鎖脂肪酸を産生するラクトバチルス属及びクロストリジウム属を含むＧ＋嫌気性菌）のレベルを評価するため、マウス糞便の１６Ｓ配列解析を行った。図２は、ピペラシリン／タゾバクタム単独によりマウス糞便中のファーミキューテスの存在量が減少し、Ｐ３Ａの存在下でファーミキューテスの倍率存在量（fold abundance）が回復し保護されたことを示す。棒グラフの左端のバーは薬剤もβ－ラクタマーゼも投与されなかった対照マウスのコホートからのデータに対応し、左から２番目のバーはＰ３Ａのみを投与されたマウスのコホートからのデータに対応し、右から２番目のバーはピペラシリン／タゾバクタムを投与されたがＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）は投与されなかったマウスの第１コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはピペラシリン／タゾバクタムとＰ３Ａの両方を投与されたマウスの第２コホートからのデータに対応する。

【0163】

１６Ｓ配列解析は、マウス糞便１ｇ当たりに存在する全細菌コピー数を評価するためにも行われた。図３は、ピペラシリン／タゾバクタムによりマウス糞便中に存在する全細菌コピー数が減少し、この減少はＰ３Ａと共にピペラシリン／タゾバクタムが投与された場合に低減されたことを示す。棒グラフの左端のバーは薬剤もβ－ラクタマーゼも投与されなかった対照マウスのコホートからのデータに対応し、左から２番目のバーはＰ３Ａのみを投与された受けたマウスのコホートからのデータに対応し、右から２番目のバーはピペラシリン／タゾバクタムを投与されたがＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）は投与されなかったマウスの第１コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはピペラシリン／タゾバクタムとＰ３Ａの両方を投与されたマウスの第２コホートからのデータに対応する。

【0164】

実施例３：ＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ）はモデル生物において抗生物質により悪化したＧＶＨＤを低減した
この実験は、骨髄移植に関連するＧＶＨＤ重症度の保護及び／又は低減に対するＳＹＮ－００４投与の効果を評価するために行われた。

【0165】

１２９Ｓ１マウスは致死的に放射線照射された後、５Ｍに骨髄細胞（Ｂ６ドナー骨髄細胞）が移植され、２ＭにＣ５７ＢＬ／６からの規定用量の脾臓Ｔリンパ細胞が移植された。これらのマウスはいずれもＭＨＣ型 Ｈ２^ｂを共有しているので、臨床的に関連性のあるＭＨＣが合致した移植モデルを表す。

【0166】

マウスは、（１）５ＭにＢ６ドナー骨髄細胞の移植のみを受けたコホート；（２）５ＭにＢ６ドナー骨髄細胞の移植、２ＭにＴ細胞の移植、骨髄移植の１０日後から１００ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１週間に３回の皮下投与、及びピペラシリン／タゾバクタム投与と同時に骨髄移植の１０日後から２０ｍｇ／ｋｇのＰ３Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液中のβ－ラクタマーゼ）の１週間に３回の強制経口投与を受けたコホート；（３）Ｂ６ドナー骨髄細胞とＴ細胞の移植を受けたコホート；及び（４）５ＭにＢ６ドナー骨髄細胞の移植、２ＭにＴ細胞の移植、及び骨髄移植の１０日後から１００ｍｇ／ｋｇのピペラシリン／タゾバクタムの１週間に３回の皮下投与を受けたコホートの４つのコホートに分けられた。

【0167】

図４は、骨髄移植後の３０日目をエンドポイントとする生存試験の結果を示す。データは、死亡率低下の観点から、骨髄移植に関連する、抗生物質により悪化したＧＶＨＤが、Ｐ３Ａ投与によって低減されたことを示す。

【0168】

実施例４：ＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ）はモデル生物において腸内細菌叢の多様性の喪失及び腸管のディスバイオシスを防止した
この実験は、腸球菌属の単一優占化の調節及び／又は低減に対するＳＹＮ－００４投与の効果を評価するために行われた。この実験はまた、ＳＹＮ－００４投与により、骨髄移植を受けている致死的に放射線照射されたマウスにおけるマイクロバイオームの多様性の低下が防止され得るか否かを評価するために設計された。

【0169】

１２９Ｓ１マウスは致死的に放射線照射された後、５Ｍに骨髄細胞（Ｂ６ドナー骨髄細胞）が移植され、２ＭにＣ５７ＢＬ／６からの規定用量の脾臓Ｔリンパ細胞が移植された。マウスは、（１）生理食塩水の投与を受けたコホート；（２）ピペラシリン／タゾバクタムの投与を受けたコホート；及び（３）ピペラシリン／タゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ、ＺＯと省略）及びＳＹＮ－００４（Ｐ３Ａ；Ｂｌａｃｔと省略）の投与を受けたコホートの３つのコホートに分けられた。

【0170】

糞便試料は移植の２１日後に採取され、１６Ｓ配列解析が行われた。図５及び図６は１６Ｓ配列決定解析の結果を示し、ピペラシリン／タゾバクタムとＳＹＮ－００４の両方を投与されたマウスからの糞便試料は、ピペラシリン／タゾバクタムが単独で投与されたマウスからの糞便試料と比較して、腸球菌属の単一優占化の減少を示した。図６に関して、バーの空欄は特定の試料が増幅されなかったことを示す。

【0171】

実施例５：ＳＹＮ－００６（Ｐ２Ａ）はβラクタム系抗生物質からモデル生物の腸内マイクロバイオームを保護した
この実験は、ＳＹＮ－００６の液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水中のβ－ラクタマーゼ）を、強制経口投与によりマウスの小腸及び大腸に送達可能であるか否かを決定するために行われた。

【0172】

マウスは１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、３日目に糞便試料が採取された。マウスは同時に、（１）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受けたが、Ｐ２Ａの液体製剤（例えば、生理食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の強制経口投与を受なかった第１コホート；（２）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、且つ、１ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第２コホート；（３）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、且つ、１０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第３コホート；及び（４）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、且つ、５０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第４コホートの４つのコホートに分けられた。

【0173】

３日目にマウスの糞便を採取した。マウス糞便中のファーミキューテス細菌門属（例えば、短鎖脂肪酸を産生するラクトバチルス属及びクロストリジウム属を含むＧ＋嫌気性菌）のレベルを評価するため、マウス糞便の１６Ｓ配列解析を行った。図７は、イミペネム＋シラスタチン単独での存在下と比較して、イミペネム＋シラスタチンと１０ｍｇ／ｋｇ用量及び５０ｍｇ／ｋｇ用量のＰ２Ａとの両方の存在下でファーミキューテスの倍率存在量（fold abundance）が回復し保護されたことを示す。棒グラフの左端のバーはイミペネム＋シラスタチンのみを投与されたマウスのコホートからのデータに対応し、左から２番目のバーはイミペネム＋シラスタチン及び１ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａを投与されたマウスの第２コホートからのデータに対応し、左から３番目のバーはイミペネム＋シラスタチン及び１０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａを投与されたマウスの第３コホートからのデータに対応し、棒グラフの右端のバーはイミペネム＋シラスタチン及び５０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａを投与されたマウスの第４コホートからのデータに対応する。

【0174】

次に、実験は、イミペネム処置マウスにおける腸球菌属の単一優占化、特にエンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）の異常増殖の調節及び／又は低減に対するＳＹＮ－００６（Ｐ２Ａ）投与の効果を評価するために行われた。

【0175】

マウスは１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、３日目に糞便試料が採取された。マウスは同時に、（１）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受けたが、Ｐ２Ａの液体製剤（例えば、生理食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の強制経口投与を受なかった第１コホート；（２）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、且つ、１ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第２コホート；（３）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、且つ、１０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第３コホート；及び（４）１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの２日間の皮下投与を受け、且つ、５０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの１日に２回、２日間の強制経口投与を受けた第４コホートの４つのコホートに分けられた。糞便試料は３日目に採取され、１６Ｓ配列解析が行われた。図８は１６Ｓ配列解析の結果を示し、イミペネム＋シラスタチンとＳＹＮ－００６（１０ｍｇ／ｋｇ用量及び５０ｍｇ／ｋｇ用量）の両方を投与されたマウスからの糞便試料は、イミペネム＋シラスタチンが単独で投与されたマウスからの糞便試料と比較して、腸球菌属の単一優占化の減少を示した。図９は、イミペネム＋シラスタチン単独で、又は１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び５０ｍｇ／ｋｇの用量でＰ２Ａと共に処置された場合のマウス糞便におけるエンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）の相対的存在量を示す。結果は、ＳＹＮ－００６（Ｐ２Ａ）によりイミペネム処置マウスにおけるエンテロコッカス・フェシウムの異常増殖が防止されることを示す。各ヒストグラムにおいて、左側のクラスターは処置前の値を表し、右側のクラスターは処置後の値を表す。

【0176】

実施例６：ＳＹＮ－００６（Ｐ２Ａ）はモデル生物において抗生物質により悪化したＧＶＨＤを低減した
この実験は、骨髄移植に関連するＧＶＨＤ重症度の保護及び／又は低減に対するＳＹＮ－００６（Ｐ２Ａ）投与の効果を評価するために行われた。

【0177】

１２９Ｓ１マウスは致死的に放射線照射された後、５Ｍに骨髄細胞（Ｂ６ドナー骨髄細胞）が移植され、２ＭにＣ５７ＢＬ／６からの規定用量の脾臓Ｔリンパ細胞が移植された。これらのマウスはいずれもＭＨＣ型 Ｈ２^ｂを共有しているので、臨床的に関連性のあるＭＨＣが合致した移植モデルを表す。

【0178】

マウスは、（１）５ＭにＢ６ドナー骨髄細胞及び２ＭにＴ細胞の移植のみを受けたコホート；（２）５ＭにＢ６ドナー骨髄細胞の移植、２ＭにＴ細胞の移植、及び骨髄移植の１０～２５日後から１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの１週間に３回の皮下投与を受けたコホート；（３）５ＭにＢ６ドナー骨髄細胞の移植、２ＭにＴ細胞の移植、骨髄移植の１０～２５日後から１００ｍｇ／ｋｇのイミペネム＋シラスタチンの１週間に３回の皮下投与、及び骨髄移植の１０～２５日後から５０ｍｇ／ｋｇのＰ２Ａの液体製剤（例えば、リン酸緩衝食塩水中のβ－ラクタマーゼ）の１週間に３回の強制経口投与を受けたを受けたコホートの３つのコホートに分けられた。

【0179】

図１０は、骨髄移植後の４０日目をエンドポイントとする生存試験の結果を示す。データは、死亡率低下の観点から、骨髄移植に関連する、抗生物質により悪化したＧＶＨＤが、Ｐ２Ａ投与によって低減されたことを示す。

【0180】

本発明をその具体的実施形態に関連して記載したが、さらなる変更が可能であり、本願は、通常、発明の原理に従って、本発明の任意の変形物、使用、又は改変物に及ぶことを意図し、本開示からのそのような逸脱を含むことが本発明の属する技術の範囲内の既知の又は習慣的な実務の範囲内であり、前述した、及び以下の附属の特許請求の範囲における、本質的な特徴を適用し得ることが理解されるであろう。

【0181】

当業者は、日常的な実験のみを用いて、本明細書に具体的に記載される特定の実施例の多数の均等物を認識することになる、又は解明可能であろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。

【0182】

参照による取り込み
本明細書に記載された全ての特許及び出版物は、それら全体が参照により取り込まれる。本明細書で論じられた出版物は、本願出願日より前の開示を提供するのみである。本明細書は、本発明が、先行発明に基づくそのような出版物に先行する権利を与えることを承認するものとして解釈されるものではない。

【0183】

本明細書で使用される場合、全ての見出しは単に体系化のためであり、いずれの方法でも本開示を限定することを意図していない。個々のセクションの内容は全てのセクションに等しく適用され得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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【国際調査報告】