特表 2022-532262 血液製剤を生産するための材料及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-13

(54)【発明の名称】血液製剤を生産するための材料及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/19 20150101AFI20220706BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20220706BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20220706BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220706BHJP

【ＦＩ】

A61K35/19 Z

A61P7/04

A61P17/02

A61K9/08

A61K47/22

A61K47/02

A61K47/26

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022512705

(86)(22)【出願日】2020-05-01

(85)【翻訳文提出日】2021-12-20

(86)【国際出願番号】 US2020031172

(87)【国際公開番号】W WO2020227149

(87)【国際公開日】2020-11-12

(31)【優先権主張番号】62/843,061

(32)【優先日】2019-05-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/936,122

(32)【優先日】2019-11-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】508180585

【氏名又は名称】セルフィアー インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】モンゴメリー ジョシュア ドナルド

(72)【発明者】

【氏名】イシュラー ブレイデン カール

(72)【発明者】

【氏名】エイモス スティーブン エドワード

(72)【発明者】

【氏名】モスコウィッツ キース アンドリュー

(72)【発明者】

【氏名】リー アンバー ニコル

(72)【発明者】

【氏名】ホルダ ラファエル

(72)【発明者】

【氏名】フィッツパトリック グレン マイケル

(72)【発明者】

【氏名】マシューズ マイケル アレクサンダー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076AA12

4C076CC14

4C076DD25Z

4C076DD37

4C076DD55

4C076DD60Z

4C076DD67

4C076FF12

4C076FF61

4C076GG06

4C076GG50

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB38

4C087MA16

4C087MA17

4C087MA23

4C087MA44

4C087MA65

4C087NA14

4C087ZA53

4C087ZA89

(57)【要約】

本明細書では、血液製剤の調製のための材料及び方法が提供される。１つの態様において、本明細書では、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物であって、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％未満のタンパク質濃度を有する、組成物が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

血小板を含む出発材料、血小板を含む希釈された出発材料、濃縮された血小板組成物、又はこれらの組合せのタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物を調製することを含む、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物を調製するためのプロセスであって、
前記水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％以下のタンパク質濃度を有する、
プロセス。

【請求項2】

病原体低減ステップをさらに含む、請求項１に記載のプロセス。

【請求項3】

前記病原体低減ステップがＴＦＦに先行する、請求項２に記載のプロセス。

【請求項4】

前記出発材料が、約６０～約８０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項5】

ＴＦＦが、少なくとも２ダイアボリュームでのダイアフィルタリングを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項6】

ＴＦＦが、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む調製剤を用いたダイアフィルタリングを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項7】

ＴＦＦが、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む調製剤への緩衝液交換を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項8】

前記調製剤が、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）を含む緩衝剤と、重炭酸ナトリウムを含む塩基と、トレハロース、ポリスクロース、又はこれらの組合せを含む装填剤とを含む、請求項６～７のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項9】

前記調製剤が、エタノール、ＤＭＳＯ、又はこれらの組合せを含む有機溶媒を含む、請求項６～８のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項10】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３０％以下である、請求項１～９のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項11】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１０％以下である、請求項１～１０のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項12】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約１５％である、請求項１～１０のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項13】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約７％～約１０％である、請求項１～１２のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項14】

前記組成物が、（散乱強度による）５．０％未満の微粒子を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項15】

前記組成物が、（散乱強度による）４．０％未満の微粒子を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項16】

血小板又は血小板誘導体を含む前記組成物を凍結乾燥及び／又は凍結保存することをさらに含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項17】

血小板又は血小板誘導体を含む前記組成物を熱的に処理することをさらに含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項18】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも５５％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、請求項１～１７のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項19】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも８０％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項20】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも７０％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、請求項１～１９のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項21】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも８％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、請求項１～２０のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項22】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも８０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、請求項１～２１のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項23】

前記血小板又は血小板誘導体が、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項24】

前記血小板又は血小板誘導体が、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下で少なくとも２５ｎＭのトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成する、請求項１～２３のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項25】

前記血小板又は血小板誘導体が、１０^６粒子当たり少なくとも１．５トロンビン生成力価単位（ＴＧＰＵ）の力価を有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項26】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも約７０×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ）アッセイで１４分未満の閉塞時間をもたらす、請求項１～２５のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項27】

前記血小板誘導体がトロンボソームを含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項28】

前記出発材料が、
（ａ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるか、
（ｂ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるか、
（ｃ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陽性であるか、又は
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のうちの１つ以上である、
請求項１～２７のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項29】

前記組成物が、
（ａ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陰性であるか、
（ｂ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陰性であるか、
（ｃ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陰性であるか、又は
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のうちの１つ以上である、
請求項１～２８のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項30】

請求項１～２９のいずれか１項に記載のプロセスで調製された、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物。

【請求項31】

血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物であって、前記水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％以下のタンパク質濃度を有する、組成物。

【請求項32】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３０％以下である、請求項３１に記載の組成物。

【請求項33】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１０％以下である、請求項３１または３２に記載の組成物。

【請求項34】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約１５％である、請求項３１または３２に記載の組成物。

【請求項35】

前記水性媒体の前記タンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約８％～約１０％である、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項36】

前記水性媒体が、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とをさらに含む、請求項３１～３５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項37】

前記水性媒体が、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）を含む緩衝剤と、重炭酸ナトリウムを含む塩基と、トレハロース、ポリスクロース、又はこれらの組合せを含む装填剤とを含む、請求項３１～３６のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項38】

前記水性媒体が、エタノール、ＤＭＳＯ、又はこれらの組合せを含む有機溶媒を含む、請求項３１～３７のいずれか１項に記載のプロセス。

【請求項39】

（散乱強度による）５．０％未満の微粒子を含む、請求項３１～３８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項40】

（散乱強度による）４．０％未満の微粒子を含む、請求項３１～３８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項41】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも５５％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、請求項３１～４０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項42】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも８０％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、請求項３１～４１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項43】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも７０％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、請求項３１～４２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項44】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも８％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、請求項３１～４３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項45】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも８０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、請求項３１～４４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項46】

前記血小板又は血小板誘導体が、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有する、請求項３１～４５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項47】

前記血小板又は血小板誘導体が、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに少なくとも５０ｎＭのトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成する、請求項３１～４６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項48】

前記血小板又は血小板誘導体が、１０^６粒子当たり少なくとも１．５トロンビン生成力価単位（ＴＰＧＵ）の力価を有する、請求項３１～４７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項49】

前記血小板又は血小板誘導体が、少なくとも約７０×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ）アッセイで１４分未満の閉塞時間をもたらす、請求項３１～４８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項50】

前記血小板誘導体がトロンボソームを含む、請求項３１～４９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項51】

（ａ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陰性であるか、
（ｂ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陰性であるか、
（ｃ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陰性であるか、又は
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のうちの１つ以上である、
請求項３１～５０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項52】

血液凝固関連の疾患又は状態の治療を必要とする対象における前記血液凝固関連の疾患又は状態を治療する方法であって、請求項３０～５１のいずれかに記載の組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項53】

前記血液凝固関連の疾患又は状態が、フォンウィルブランド病、血友病、血小板無力症、血小板減少症、血小板減少性紫斑病、外傷、又はこれらの組合せからなる群より選択される、請求項５２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年５月３日に出願された米国仮特許出願第６２／８４３，０６１号及び２０１９年１１月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／９３６，１２２号の優先権を主張し、各出願の全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

政府の利益に関する表明
本発明は、米国保健福祉省のＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ（ＢＡＲＤＡ）によって認可された契約番号ＨＨＳＯ１００２０１３０００２１に基づく政府支援を受けてなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。

【0003】

技術分野
本開示は、概して、血液製剤、例えば、ＨＬＡ抗体含量が低減した血液製剤、及びこのような血液製剤を生産する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

背景
血液は多数の成分から構成された複雑な混合物である。概して、血液は４つの主要部：赤血球、白血球、血小板、及び血漿を含むものと説明することができる。最初の３つは細胞又は細胞類似成分であるが、４番目の血漿は、多くの身体機能に必要な塩、タンパク質、及び他の因子の広範囲かつ可変的な混合物を含む液体成分である。血液の成分は、様々な方法によって互いに分離することができる。概して、差次的遠心分離が、血液中の異なる成分をサイズに基づき、またいくつかの用途では密度に基づき分離するために、現在最も一般的に使用されている。

【0005】

不活性化された血小板（一般的には栓球（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）とも称される）は、小さく、しばしば不規則な形状（例えば、円板状又は卵形）の血液の巨核球由来成分であり、血液凝固プロセスに関与している。血小板は、外傷又は受傷に起因する過度の失血だけでなく、通常の生理活動による過剰な失血から身体を保護するのに役立つ。血小板は、正常な止血に不可欠であり、受傷した血管から血液が漏出するのを第一線で防御していると考えられる。概して血小板は、破れた血管の内層に付着し、活性化する過程で不定形の形状に変化し、血漿中に存在する、又は血小板自身若しくは血液の他の成分によって放出される、凝固システムの成分と相互作用することによって機能する。精製された血小板は、血小板数減少（血小板減少症）及び血小板機能異常（血小板無力症）の治療に使用されている。濃縮された血小板はしばしば、受傷後の出血、又は後天的な血小板機能の障害若しくは欠損中の出血（例えば、手術中に発生するもの及び血小板阻害剤の存在によるもの）の出血を制御するために使用される。

【発明の概要】

【0006】

概要
本明細書は、少なくとも部分的には、遊離タンパク質（例えば、抗体（例えば、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）抗体、又はヒト好中球抗原（ＨＮＡ）抗体）のレベルを低減させた血液製剤（例えば、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）の生産に基づくものである。

【0007】

本明細書では、血小板と水性媒体とを含む組成物であって、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％未満のタンパク質濃度を有する、組成物が提供される。

【0008】

実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を有し得る。水性媒体のタンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３０％未満であり得る。水性媒体のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度の３０％未満であり得る。水性媒体のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度の３０％未満であり得る。水性媒体のＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト好中球抗原（ＨＮＡ）抗体濃度の３０％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１０％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１０％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１０％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１０％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の５％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の５％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の５％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３％未満であり得る。水性媒体は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の３％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の３％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１％未満であり得る。タンパク質濃度は、０．５ｃｍの経路長を用いて、２８０ナノメートル（ｎｍ）における吸光度によって定量され得る。いくつかの実施形態において、２８０ｎｍにおける吸光度は１．７ＡＵ未満であり得る。いくつかの実施形態において、２８０ｎｍにおける吸光度は１．６６ＡＵ未満であり得る。いくつかの実施形態において、２８０ｎｍにおける吸光度は１．６ＡＵ未満であり得る。いくつかの実施形態において、血小板数は少なくとも２００×１０^３血小板／μＬであり得る。いくつかの実施形態において、血小板数は少なくとも２２５０×１０^３血小板／μＬであり得る。いくつかの実施形態において、当該組成物の赤血球数は０．２×１０^６赤血球／μＬ未満であり得る。いくつかの実施形態において、組成物はさらに赤血球を含み得る。いくつかの実施形態において、赤血球数は０．２×１０^６赤血球／μＬ未満であり得る。当該組成物は、規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陰性であり得る。当該組成物は、規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陰性であり得る。当該組成物は、規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陰性であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。ＨＮＡ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＮＡ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＮＡ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。水性媒体はさらに、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含むことができる。緩衝剤はＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）とすることができる。塩基は重炭酸ナトリウムとすることができる。装填剤は、単糖、多糖、又はこれらの組合せとすることができる。単糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、及びキシロースからなる群より選択することができる。単糖はトレハロースとすることができる。多糖はポリスクロースとすることができる。塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せとすることができる。有機溶媒は、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択することができる。当該組成物は、血小板を含む出発材料のタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）、血小板を含む出発材料の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製することができる。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも５０％低減され得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも７５％低減され得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９０％低減され得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９５％低減され得る。出発材料は、（ａ）規制機関が承認した検査に基づいたＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるか、（ｂ）規制機関が承認した検査に基づいたＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるか、（ｃ）規制機関が承認した検査に基づいたＨＮＡ抗体に対し陽性であるか、又は（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のうちの１つ以上であり得る。出発材料のタンパク質濃度は、約６０～約８０ｍｇ／ｍｌであり得る。出発材料はドナー血液製剤を含み得る。ドナー血液製剤は、プールされたドナー血液製剤であり得る。出発材料は、ドナーアフェレーシス材料を含み得る。ＴＦＦは、濃縮を含み得る。
ＴＦＦは、ダイアフィルタリングを含み得る。ダイアフィルタリングは、少なくとも２ダイアボリュームでのダイアフィルタリングを含み得る。ＴＦＦは緩衝液交換を含み得る。ＴＦＦは、孔径約０．２μｍ～約１μｍの膜を用いて行われ得る。ＴＦＦは、孔径約０．２μｍ～約０．４５μｍの膜を用いて行われ得る。ＴＦＦは、約２０℃～約３７℃の温度で実施することができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５０％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３０％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１０％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．７０ＡＵ未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６６ＡＵ未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６０ＡＵ未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、血小板濃度が少なくとも約２０００×１０^３血小板／μＬになるまで行うことができる。ＴＦＦは、血小板濃度が少なくとも約２２５０×１０^３血小板／μＬになるまで行うことができる。ＴＦＦは、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む緩衝液への緩衝液交換を含み得る。緩衝剤はＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）とすることができる。塩基は重炭酸ナトリウムとすることができる。装填剤は、単糖、多糖、又はこれらの組合せとすることができる。単糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、及びキシロースからなる群より選択することができる。単糖はトレハロースとすることができる。多糖はポリスクロースとすることができる。塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せとすることができる。有機溶媒は、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択することができる。遠心分離は、１４００×ｇ～約１５５０×ｇにおける遠心分離を含み得る。遠心分離は、１４５０×ｇ～約１５００×ｇにおける遠心分離を含み得る。当該プロセスは、血小板を含む組成物の遠心分離が欠如してもよい。当該組成物は、（散乱強度による）５．０％未満の微粒子を含み得る。当該組成物は、（散乱強度による）４．５％未満の微粒子を含み得る。当該組成物は、（散乱強度による）４．０％未満の微粒子を含み得る。当該組成物は、（散乱強度による）３．５％未満の微粒子を含み得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも５５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも６０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも６５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも８０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも８５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも９０％であり得る。血小板又は血小板誘導体は、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１０％を保持し得る。血小板又は血小板誘導体は、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１５％を保持し得る。血小板又は血小板誘導体は、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約２０％を保持し得る。血小板又は血小板誘導体のアネキシンＶ陽性パーセントは、少なくとも７０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のアネキシンＶ陽性パーセントは、少なくとも７５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のアネキシンＶ陽性パーセントは、少なくとも８０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも８％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも１０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも１５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも２０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも８０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも８２％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも８５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも９０％であり得る。血小板又は血小板誘導体は、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有し得る。水性媒体の乳酸濃度は、２．０ｍｍｏｌ／Ｌ未満であり得る。水性媒体の乳酸濃度は、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ未満であり得る。水性媒体の乳酸濃度は、約０．４～約１．３ｍｍｏｌ／Ｌであり得る。水性媒体の乳酸濃度は、約０．５～約１．０ｍｍｏｌ／Ｌであり得る。血小板誘導体はトロンボソームを含み得る。

【0009】

また、本明細書では、血小板と水性媒体とを含む組成物を調製するためのプロセスであって、血小板を含む出発材料のタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）、血小板を含む出発材料の遠心分離、又はこれらの組合せを含み、当該水性媒体がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％未満のタンパク質濃度を有する、プロセスも提供される。

【0010】

実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。出発材料は、（ａ）規制機関が承認した検査に基づいたＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるか、（ｂ）規制機関が承認した検査に基づいたＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるか、（ｃ）規制機関が承認した検査に基づいたＨＮＡ抗体に対し陽性であるか、又は（ｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの１つ以上であり得る。出発材料のタンパク質濃度は、約６０～約８０ｍｇ／ｍＬであり得る。出発材料はドナー血液製剤を含み得る。ドナー血液製剤は、プールされたドナー血液製剤であり得る。出発材料はドナーアフェレーシス材料を含み得る。ＴＦＦは濃縮を含み得る。ＴＦＦはダイアフィルタリングを含み得る。ダイアフィルトレーションは、少なくとも２ダイアボリュームでのダイアフィルタリングを含み得る。ＴＦＦは緩衝液交換を含み得る。ＴＦＦは、孔径約０．２μｍ～約１μｍの膜を用いて行われ得る。ＴＦＦは、孔径約０．２μｍ～約０．４５μｍの膜を用いて行われ得る。ＴＦＦは、約２０℃～約３７℃の温度で実施することができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５０％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３０％未満になるまで行う。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１０％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１％未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．７０ＡＵ未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６６ＡＵ未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、０．５ｃｍの経路長を用いて、水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６０ＡＵ未満になるまで行うことができる。ＴＦＦは、血小板濃度が少なくとも約２０００×１０^３血小板／μＬになるまで行うことができる。ＴＦＦは、血小板濃度が少なくとも約２２５０×１０^３血小板／μＬになるまで行うことができる。ＴＦＦは、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む緩衝液への緩衝液交換を含み得る。緩衝剤はＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）とすることができる。塩基は重炭酸ナトリウムとすることができる。装填剤は、単糖、多糖、又はこれらの組合せとすることができる。単糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、及びキシロースからなる群より選択することができる。単糖はトレハロースとすることができる。多糖はポリスクロースとすることができる。塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せとすることができる。有機溶媒は、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択することができる。遠心分離は、１４００×ｇ～約１５５０×ｇにおける遠心分離を含み得る。遠心分離は、１４５０×ｇ～約１５００×ｇにおける遠心分離を含み得る。当該プロセスは、血小板を含む組成物の遠心分離が欠如してもよい。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも５０％低減され得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも７５％低減され得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９０％低減され得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９５％低減され得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３０％未満であり得る。水性媒体のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度の３０％未満であり得る。水性媒体のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度の３０％未満であり得る。水性媒体のＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト好中球抗原（ＨＮＡ）抗体濃度の３０％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１０％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１０％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１０％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１０％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の５％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の５％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の５％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の３％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の３％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の３％未満であり得る。タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１％未満であり得る。水性媒体のヒトＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１％未満であり得る。当該組成物は、規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陰性であり得る。当該組成物は、規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陰性であり得る。当該組成物は、規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陰性であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。
ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。ＨＮＡ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、５％未満であり得る。ＨＮＡ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、３％未満であり得る。ＨＮＡ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、１％未満であり得る。当該組成物が（散乱強度による）５．０％未満の微粒子を含む、請求項１２５～１９９のいずれか１項に記載のプロセス。当該組成物は、（散乱強度による）４．５％未満の微粒子を含み得る。当該組成物は、（散乱強度による）４．０％未満の微粒子を含み得る。当該組成物は、（散乱強度による）３．５％未満の微粒子を含み得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも５５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも６０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも６５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも８０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも８５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも９０％であり得る。血小板又は血小板誘導体は、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１０％を保持し得る。血小板又は血小板誘導体は、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１５％を保持し得る。血小板又は血小板誘導体は、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約２０％を保持し得る。血小板又は血小板誘導体のアネキシンＶ陽性パーセントは、少なくとも７０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のアネキシンＶ陽性パーセントは、少なくとも７５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のアネキシンＶ陽性パーセントは、少なくとも８０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも８％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも１０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも１５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも２０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも８０％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも８２％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも８５％であり得る。血小板又は血小板誘導体のＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも９０％であり得る。血小板又は血小板誘導体は、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有し得る。水性媒体の乳酸濃度は、２．０ｍｍｏｌ／Ｌ未満であり得る。水性媒体の乳酸濃度は、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ未満であり得る。水性媒体の乳酸濃度は、約０．４～約１．３ｍｍｏｌ／Ｌであり得る。水性媒体の乳酸濃度は、約０．５～約１．０ｍｍｏｌ／Ｌであり得る。血小板誘導体はトロンボソームを含み得る。当該プロセスはさらに、病原体低減ステップを含み得る。病原体低減ステップはＴＦＦに先行してもよい。当該プロセスはさらに、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を凍結乾燥することを含み得る。当該プロセスはさらに、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を熱的に処理することをさらに含み得る。

【0011】

また、本明細書では、本明細書に記載のいずれかのプロセスによって調製された血小板と水性媒体とを含む組成物も提供される。

【0012】

また、本明細書では、フリーズドライされた血小板を調製するためのプロセスであって、（ａ）本明細書に記載のいずれかのプロセスを用いて血小板と水性媒体とを含む組成物を調製することと、（ｂ）血小板と当該水性媒体とを含む当該組成物をフリーズドライすることとを含む、プロセスも提供される。

【0013】

また、本明細書では、本明細書に記載のいずれかのプロセスによって調製された、フリーズドライされた血小板を含む組成物も提供される。

【0014】

また、本明細書では、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物を調製する方法であって、血小板を含む出発材料を希釈して希釈された出発材料を形成することと、血小板を約２２５０×１０^３細胞／μＬ（±２５０×１０^３）に濃縮して濃縮された血小板組成物を形成することと、濃縮された血小板組成物を少なくとも２ダイアボリューム（ＤＶ）の調製剤で洗浄してＴＦＦ処理された組成物を形成することとを含む、方法も提供される。

【0015】

実装形態は、以下の特徴のうちの１つ以上を含み得る。希釈することは、ほぼ同じ重量（±１０％）の調製剤で希釈することを含み得る。当該方法はさらに、病原体低減ステップを含み得る。病原体低減ステップは、出発材料を希釈する前に行われ得る。残留血漿パーセンテージは、約１５％未満の相対血漿（血漿タンパク質含量による定量）であり得る。洗浄後、ＴＦＦ処理した組成物中の細胞の濃度が約２０００×１０^３細胞／μＬ（±３００×１０^３）でない場合、当該方法はさらに、この範囲内に入るように調製剤を希釈すること又は濃縮することを含み得る。当該方法はさらに、ＴＦＦ処理された組成物を凍結乾燥して、凍結乾燥された組成物を形成することを含み得る。当該方法はさらに、凍結乾燥された組成物を約８０℃で約２４時間処理することを含み得る。

【0016】

また、本明細書では、本明細書に記載のいずれかの方法で調製された血小板又は血小板誘導体を含む組成物も提供される。

【0017】

本明細書に記載の材料及び方法は、いくつかの利点を提供することができる。第一に、他の場合には採取が見送られるドナーの採取を可能にし、アフェレーシス材料の競合を低減することができる。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】図１Ａは、側方散乱及び前方散乱を用いてＰＢＳ中のクラスＩ及びクラスＩＩ ＨＬＡ ＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズを識別するための初期ゲート配置を示している。 図１Ｂは、フィコエリトリン蛍光及び前方散乱を用いてＰＢＳ中のクラスＩ及びクラスＩＩ ＨＬＡ ＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズを識別するための初期ゲート配置を示している。

【図2A】図２Ａは、ＰＢＳ、供給業者の乏血小板血漿（ＰＰＰ）（三連）、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナーの乏血小板血漿（三連）におけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図2B】図２Ｂは、ＰＢＳ、供給業者の乏血小板血漿（ＰＰＰ）（三連）、及びクラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナーの乏血小板血漿（三連）におけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図2C】図２Ｃは、ＰＢＳ、供給業者の乏血小板血漿（ＰＰＰ）（単一データセット）、及びクラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナーの乏血小板血漿（単一データセット）におけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図2D】図２Ｄは、ＰＢＳ、供給業者の乏血小板血漿（ＰＰＰ）（単一データセット）、及びクラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナーの乏血小板血漿（単一データセット）におけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図3】図３Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたＧｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図３Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたＧｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図4】図４Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー１ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図４Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー１ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図5】図５Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー２ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図５Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー２ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図6】図６Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー３ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図６Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー３ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図7】図７Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー４ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図７Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー４ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図8】図８Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー５ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図８Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー５ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図9】図９Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー６ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図９Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー６ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図10】図１０Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー７ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図１０Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたドナー７ ＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図11】図１１Ａは、クラスＩ ＨＬＡでゲーティング及びプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図１１Ｂは、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図12】図１２Ａは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を５０％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）後の、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図１２Ｂは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を５０％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）後の、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図13】図１３Ａは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を約８％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）の後、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図１３Ｂは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を約８％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）の後、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図14】図１４Ａは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を約６％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）の後、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図１４Ｂは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を約６％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）の後、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図15】図１５Ａは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を約１％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）の後、クラスＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。 図１５Ｂは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）で血漿タンパク質を約１％保持した（２８０ｎｍにおける吸光度による）の後、クラスＩＩ ＨＬＡでゲーティングされたプールされたドナーＰＰＰにおけるＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズの例示的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを示している。

【図16】図１６は、染色されていない（濃色のデータポイント）又は抗ＣＤ－４１抗体で染色された（淡色のデータポイント）トロンボソームの例示的なフローサイトメトリーデータを示している。

【図17】図１７は、アネキシンＶとインキュベートしたトロンボソームの例示的なヒストグラムであり、カルシウムありの場合（淡色のデータポイント）及びなしの場合（濃色のデータポイント）を示している。

【図18】図１８は、抗ＣＤ６２抗体（淡色のデータポイント）又はアイソタイプ対照（濃色のデータポイント）とインキュベートしたトロンボソームの例示的なヒストグラムを示している。

【図19】図１９は、組織因子及びリン脂質を含むＰＲＰ試薬（実線及び長い破線）並びに対照のセファリン（点線）の存在下でのトロンボソームにおけるトロンビンピーク高さのプロットを示している。

【図20】図２０は、染色されていない（黒色）若しくはアイソタイプ対照抗体で染色された（濃灰色）低血漿トロンボソーム又はＦＩＴＣで標識された９Ｆ９抗体（薄い灰色）の例示的なヒストグラム比較、及び２つの複製物の平均蛍光強度を示す表である。

【図21】図２１は、染色されていない（黒色）又は抗ＰＡＣ－１抗体で染色された（薄灰色）低血漿トロンボソームの例示的なヒストグラム比較、及び２つの複製物の平均蛍光強度を示す表である。

【図22A】図２２Ａは、様々な濃度の標識された抗ＣＤ４７抗体又はアイソタイプ対照で処理したトロンボソーム（１×１０^６細胞）の平均蛍光強度のプロットである。

【図22B】図２２Ｂは、染色されなかった（黒色）、アイソタイプ対照抗体で染色された（濃灰色）、又は抗ＣＤ４７抗体で染色された（薄灰色）トロンボソームの例示的なヒストグラムである。

【図22C】図２２Ｃは、様々な濃度の標識抗ＣＤ４７抗体又はアイソタイプ対照で処理したトロンボソーム（２５０，０００細胞）の平均蛍光強度のプロットである。

【図22D】図２２Ｄは、染色されなかった（黒色）、アイソタイプ対照抗体で染色された（濃灰色）、又は抗ＣＤ４７抗体で染色された（薄灰色）トロンボソームの例示的なヒストグラムである。

【図23A】図２３Ａは、ヒト期限内保存血小板（バッチＪ）及びそれに由来する血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有パーセントを動的光散乱（ＤＬＳ）によって定量したプロットである。

【図23B】図２３Ｂは、ヒトの期限内保存血小板（バッチＫ）及びそれに由来する血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図23C】図２３Ｃは、ヒトの期限内保存血小板（バッチＬ）及びそれに由来する血小板誘導体（凍結乾燥前）における、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図24A】図２４Ａは、ヒト期限内保存血小板（バッチＤ）及びそれに由来する血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図24B】図２４Ｂは、ヒトの期限内保存血小板（バッチＥ）及びそれに由来する血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図24C】図２４Ｃは、ヒトの期限内保存血小板（バッチＦ）及びそれに由来する血小板誘導体（凍結乾燥前）における異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図25A】図２５Ａは、病原体低減システムの例示的な概略図である。

【図25B】図２５Ｂは、反応容器の重量の経時的なプロットである。

【図25C】図２５Ｃは、反応容器内の圧力の経時的なプロットである。

【図26A】図２６Ａは、病原体を除去するように処理した（バッチＮ）又は処理しなかった（バッチＭ）再水和トロンボソームにおける、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図26B】図２６Ｂは、病原体を除去するように処理した（バッチＫ）又は処理しなかった（バッチＪ）再水和トロンボソームにおける、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図27A】図２７Ａは、病原体を除去するように処理した（バッチＮ）又は処理しなかった（バッチＭ）ｈＩＤＳＰにおける、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図27B】図２７Ｂは、病原体を除去するように処理しなかったｈＩＤＳＰ及びそれに由来するトロンボソーム（バッチＭ）における、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図27C】図２７Ｃは、病原体を除去するように処理したｈＩＤＳＰ及びそれに由来するトロンボソーム（バッチＮ）における、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図28A】図２８Ａは、病原体を除去するように処理した（バッチＫ）又は処理しなかった（バッチＪ）ｈＩＤＳＰにおける、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図28B】図２８Ｂは、病原体を除去するように処理しなかったｈＩＤＳＰ及びそれに由来するトロンボソーム（バッチＪ）における、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図28C】図２８Ｃは、病原体を除去するように処理したｈＩＤＳＰ及びそれに由来するトロンボソーム（バッチＫ）における、異なる半径の粒子の占有パーセントをＤＬＳによって定量したプロットである。

【図29A】図２９Ａは、光透過凝集測定法を用いた血小板、トロンボソーム、及びこれらの組合せの透過率のバープロットである。

【図29B】図２９Ｂは、凝集後の血小板、トロンボソーム、及びこれらの組合せの血小板（及び／又はトロンボソーム）数のバープロットである。

【図29C】図２９Ｃは、光透過凝集測定法における血小板、トロンボソーム、及びこれらの組合せの透過率のバープロットである。

【図30】図３０は、ＧＰＲＰの存在下及び非存在下におけるトロンビンで活性化された血小板、トロンボソーム、及びこれらの組合せの透過率のバープロットである。

【図31】図３１は、ＲＧＤＳの存在下及び非存在下におけるＰＭＡで活性化された血小板、トロンボソーム、及びこれらの組合せの凝集パーセントのバープロットである。

【図32】図３２Ａは、活性化された血小板のＳＥＭを示している（スケールバー＝２μｍ）。 図３２Ｂは、活性化された血小板のＳＥＭを示している（スケールバー＝１μｍ）。 図３２Ｃは、再水和されたヒトトロンボソームのＳＥＭを示している（スケールバー＝２μｍ）。 図３２Ｄは、再水和されたヒトトロンボソームのＳＥＭを示している（スケールバー＝１μｍ）。

【図33A】図３３Ａは、全血における剪断下のトロンボソーム接着のプロットである。

【図33B】図３３Ｂは、血漿における剪断下のトロンボソーム接着のプロットである。

【図33C】図３３Ｃは、ＧＰＲＰ不在下のマイクロキャピラリーチャネルにおけるフィブリン形成を示している。

【図33D】図３３Ｄは、ＧＰＲＰ存在下でのマイクロキャピラリーチャネルにおけるフィブリン形成の欠如を示している。

【図33E】図３３Ｅは、ＧＰＲＰが血漿における剪断下のトロンボソーム接着に及ぼす効果のプロットである。

【発明を実施するための形態】

【0019】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、「血小板」という用語は、全血小板、断片化された血小板、及び血小板誘導体を含み得る。

【0020】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「当該（ｔｈｅ）」、「前記（ｔｈｅ）」は、文脈による別段の明確な定めがない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「血小板」への言及は、複数のこのような血小板を含む。さらに、同等の用語を用いて説明され得る用語の使用は、それらの同等の用語の使用を含む。したがって、例えば、「対象」という用語の使用は、「患者」、「個体」、及び治療に供する者を示すために当該技術分野で使用される他の用語を含むものと理解されたい。

【0021】

別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、当該用語が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本開示の実施又は試験を行う際には、本明細書に記載の方法及び物質に類似した又は同等の、任意の方法及び物質を使用することもできるが、ここでは好ましい方法及び物質について説明する。本明細書で言及される全ての刊行物は、これらの刊行物の引用に関連した方法及び／又は材料を開示及び説明するため、参照により本明細書に援用される。援用されたいかなる刊行物と矛盾する場合も本開示が優先される。

【0022】

詳細な説明
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、このような用語が限定的であるようには意図されていないことを理解されたい。さらに、値の範囲が開示される場合、当業者は、開示された範囲内の他の全ての特定の値が、本明細書で各々の特定の値又は範囲を開示する必要なく、これらの値及びこれらの値が表す範囲によって本質的に開示されていることを理解するであろう。例えば、１～１０という開示された範囲には、１～９、１～５、２～１０、３．１～６、１、２、３、４、５などが含まれる。さらに、開示された各範囲には、範囲内の低い値に対しそれよりも最大５％低い値が、範囲内の高い値に対しそれよりも最大５％高い値が含まれる。例えば、４～１０という開示された範囲には３．８～１０．５が含まれる。この概念は、この文書内では「約（ａｂｏｕｔ）」という用語によって取り込まれている。

【0023】

別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、当該用語が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。本開示の実施又は試験を行う際には、本明細書に記載の方法及び物質に類似した又は同等の、任意の方法及び物質を使用することもできるが、ここでは好ましい方法及び物質について説明する。本明細書で言及される全ての刊行物は、これらの刊行物の引用に関連した方法及び／又は材料を開示及び説明するため、参照により本明細書に援用される。援用されたいかなる刊行物と矛盾する場合も本開示が優先される。

【0024】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、「血小板」という用語は、全血小板、断片化された血小板、血小板誘導体、又はトロンボソームを含み得る。上記の定義内の「血小板」には、例えば、全血中の血小板、血漿中の血小板、任意選択で選択血漿タンパク質を補充した緩衝液中の血小板、低温保存された血小板、乾燥血小板、凍結保存された血小板、解凍された凍結保存された血小板、再水和された乾燥血小板、再水和された凍結保存された血小板、凍結乾燥された血小板、解凍された凍結乾燥された血小板、又は再水和された凍結乾燥された血小板が含まれ得る。「血小板」は、哺乳類の「血小板」とすることができ、例えば、ヒトの血小板の場合も非ヒト哺乳類の血小板の場合もある。

【0025】

本明細書で使用する場合、「トロンボソーム」（Ｔソームとも呼ばれる）は、調製剤（例えば、本明細書に記載のいずれかの調製剤）で処理され、凍結乾燥（例えば、フリーズドライ）された血小板誘導体である。いくつかの場合には、トロンボソームは、プールされた血小板から調製することができる。トロンボソームは、常温で乾燥形態で２～３年の貯蔵寿命を有し得、数分以内に滅菌水で再水和して直ちに注入することができる。トロンボソームの一例としてはＴＨＲＯＭＢＯＳＯＭＥ（登録商標）があり、これは、血小板減少症患者の急性出血の治療向けに臨床試験が行われている。

【0026】

輸血関連急性肺障害（ＴＲＡＬＩ）は、輸血された血液製剤中の抗体（例えば、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、ヒト好中球抗原（ＨＮＡ）、又は顆粒球抗体）の存在によって引き起こされると考えられている状態であり、このような抗体は輸血レシピエントの抗原に反応する可能性がある。

【0027】

ハイリスクと考えられるドナー、又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ、クラスＩＩ、及び好中球特異的抗体が陽性のドナー由来の血漿ベース血液製剤は、ヒト由来血小板製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）の輸血又は生産で使用することが禁止されており、そのためドナープールからは除外されている。

【0028】

タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）又はマルチパス遠心分離の使用により、血液製剤中の抗体量を、例えば、ＦＤＡに承認された現在の検査方法では検出できない限界まで、低減することができる。いくつかの場合には、ある特定の血漿成分（例えば、ＨＬＡ抗体）を低減することにより、このドナー集団を血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）の生産に受け入れることが可能になり得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。

【0029】

トロンボソーム又は凍結保存血小板の生産は、米国内の血液ドナーセンターで実施されるアフェレーシス採取の利用可能性によって制限される。これらの製品の競争は激しく、血液製剤製造ニーズへの分配は、通常、患者ケアニーズよりも優先度が低い。血液製剤製造（例えば、スケールアップ）は、他の場合には採取が見送られるドナーからのアフェレーシス採取が助けとなり得る。これが遂行され得る１つの方法は、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）又は遠心分離及び血漿除去を利用することにより、ドナー血漿中の遊離抗体レベルを低減して、ＦＤＡに承認された現在の検査閾値を満たすことである。原材料（例えば、ドナー血漿）の遠心分離は、典型的にはＴＦＦよりも時間がかかるものの、原材料に同様の効果をもたらし得る。いくつかの場合には、ドナー血漿を除去し、緩衝液で置き換えることで、本発明者らが、タンパク質（例えば、抗体（例えば、ＨＬＡ抗体又はＨＮＡ抗体））の含量が（例えば、２８０ｎｍにおける吸光度による定量において）減少した最終製品（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）を製造し、特性決定することができるようになる。このような製品は、ＴＲＡＬＩの輸血関連の原因を低減することにより、製品のレシピエントにとっての安全性を高めることができる。

【0030】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される材料及び方法は、以前に採取が見送られたドナー（例えば、ＨＬＡ抗体のスクリーニングが陽性である者、又はドナー履歴から陽性ＨＬＡのリスクが示される者）を、血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）の製造に使用される原材料のドナープールに入れることを可能にし得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。さらに、原材料（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、血小板又はプールされた血小板））からのＨＬＡ抗体を低減することで、最終製品（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）をＨＬＡ低減済みとしてラベル付けすることが可能になり、レシピエントにとっての製品の安全性を高めることができる。

【0031】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、検出不可能なレベルのＨＬＡ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、検出不可能なレベルの、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、検出不可能なレベルのＨＬＡクラスＩ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、検出不可能なレベルのＨＬＡクラスＩＩ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、検出不可能なレベルのＨＮＡ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、抗体の検出は、規制機関が承認した（例えば、ＦＤＡ承認済み）アッセイを用いて行うことができる。規制機関が承認したアッセイは、任意の適切な規制機関が承認したアッセイとすることができる。いくつかの実施形態において、規制機関が承認した検査は、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ製のＬＡＢＳＣＲＥＥＮ（商標）Ｍｉｘｅｄとすることができる。いくつかの実装形態において、規制機関が承認した検査は、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）１００／２００又はＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ＸＹ及びＨＬＡ ＦＵＳＩＯＮ（商標）ソフトウェアを用いて実施することができる。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。

【0032】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、基準レベルを下回るレベルの、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、基準レベルを下回るレベルのＨＬＡクラスＩ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、基準レベルを下回るレベルのＨＬＡクラスＩＩ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、基準レベルを下回るレベルのＨＮＡ抗体を有し得る。基準レベルは、任意の適切な基準レベルであり得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。

【0033】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に陰性反応を示す。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩ抗体に陰性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に陰性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される血液製剤（例えば、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物）は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＮＡ抗体に陰性反応を示し得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。規制機関が承認したアッセイは、任意の適切な規制機関が承認したアッセイとすることができる。いくつかの実施形態において、規制機関が承認した検査は、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ製のＬＡＢＳＣＲＥＥＮ（商標）Ｍｉｘｅｄとすることができる。いくつかの実装形態において、規制機関が承認した検査は、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）１００／２００又はＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ＸＹ及びＨＬＡ ＦＵＳＩＯＮ（商標）ソフトウェアを用いて実施することができる。

【0034】

本明細書では、血小板及び／又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）と水性媒体とを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、水性媒体は、調製剤（例えば、本明細書に記載のいずれかの調製剤）を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、基準レベルを下回るレベルの、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、基準レベルを下回るレベルのＨＬＡクラスＩ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、基準レベルを下回るレベルのＨＬＡクラスＩＩ抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、基準レベルを下回るレベルのＨＮＡ抗体を有し得る。基準レベルは、任意の適切な基準レベルであり得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に陰性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩ抗体に陰性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に陰性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される水性媒体は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＮＡ抗体に陰性反応を示し得る。規制機関が承認したアッセイは、任意の適切な規制機関が承認したアッセイとすることができる。いくつかの実施形態において、規制機関が承認した検査は、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ製のＬＡＢＳＣＲＥＥＮ（商標）Ｍｉｘｅｄとすることができる。いくつかの実装形態において、規制機関が承認した検査は、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）１００／２００又はＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ＸＹ及びＨＬＡ ＦＵＳＩＯＮ（商標）ソフトウェアを用いて実施することができる。

【0035】

いくつかの実施形態において、水性媒体の残留血漿の量は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）と比較して低減され得、残留血漿のパーセンテージ（例えば、残留血漿の約５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、又は０．１％以下）であり得る。いくつかの実施形態において、水性媒体の残留血漿の量は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）と比較して低減され得、残留血漿のパーセンテージ範囲（例えば、残留血漿の約５％～約５０％、約５％～約４０％、約５％～約３０％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約５％～約１０％、約１０％～約２０％、約７％～約１５％、約７％～約１０％、約８％～約１５％、約８％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約３％、約０．１％～約１％、約０．５％～約３％、約０．５％～約１％、又は約１％～約３％）であり得る。いくつかの実施形態において、水性媒体のタンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）のタンパク質濃度の約５０％以下（例えば、約４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、又は０．１％以下）であり得る。いくつかの実施形態において、水性媒体のタンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）のタンパク質濃度の約５％～約５０％（例えば、約５％～約４０％、約５％～約３０％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約５％～約１０％、約１０％～約２０％、約７％～約１５％、約７％～約１０％、約８％～約１５％、又は約８％～約１０％）であり得る。いくつかの実施形態において、水性媒体のタンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）のタンパク質濃度の約０．１％～約５％（例えば、約０．１％～約３％、約０．１％～約１％、約０．５％～約３％、約０．５％～約１％、約１％～約２％、又は約１％～約３％）であり得る。タンパク質の濃度は、任意の適切な方法によって測定することができる。いくつかの実施形態において、タンパク質濃度は、２８０ｎｍにおける吸光度（Ａ２８０）によって測定され得る。いくつかの実施形態において、水性媒体のＡ２８０は、０．５ｃｍの経路長を用いて、１．７０ＡＵ未満（例えば、１．６６ＡＵ未満、１．６ＡＵ未満、１．５ＡＵ未満、１．４ＡＵ未満、１．３ＡＵ未満、１．２ＡＵ未満、１．１ＡＵ未満、１．０ＡＵ未満、０．９ＡＵ未満、０．８ＡＵ未満、０．７ＡＵ未満、０．６ＡＵ未満、０．５ＡＵ未満、０．４ＡＵ未満、０．３ＡＵ未満、０．２ＡＵ未満、又は０．１ＡＵ未満）であり得る。

【0036】

いくつかの実施形態において、水性媒体のＨＬＡクラスＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の約７０％未満（例えば、約６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）であり得る。ＨＬＡクラスＩ抗体の濃度は、任意の適切な方法によって測定することができる。

【0037】

いくつかの実施形態において、水性媒体のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の約５０％未満（例えば、約４０％未満、３０％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）であり得る。ＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度は、任意の適切な方法によって測定することができる。

【0038】

いくつかの実施形態において、水性媒体のＨＮＡ抗体濃度は、ドナーアフェレーシス血漿（例えば、単一ドナーアフェレーシス血漿又はプールされたドナーアフェレーシス血漿）のＨＮＡ抗体濃度の約５０％未満（例えば、約４０％未満、３０％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）であり得る。ＨＮＡ抗体の濃度は、任意の適切な方法によって測定することができる。

【0039】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の血小板数は、少なくとも１０^６（例えば、少なくとも５×１０^６、１０^７、５×１０^７、１０^８、５×１０^８、１０^９、５×１０^９、又は１０^１０）であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の血小板数は、少なくとも約２００×１０^３血小板／μＬ（例えば、少なくとも約３００×１０^３、４００×１０^３、５００×１０^３、７５０×１０^３、１０００×１０^３、１５００×１０^３、２０００×１０^３、又は２５００×１０^３血小板／μＬ）であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の血小板数は、少なくとも約２０００×１０^３血小板／μＬ（例えば、少なくとも約２０５０×１０^３、２１００×１０^３、２１５０×１０^３、２２００×１０^３、２２５０×１０^３、２３００×１０^３、２３５０×１０^３、２４００×１０^３、２４５０×１０^３、又は２５００×１０^３血小板／μＬ）であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の血小板数は、１０００×１０^４血小板／μＬ以下であり得る。

【0040】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、赤血球を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物の赤血球数は、約１０^１０未満（例えば、５×１０^９未満、１０^９未満、５×１０^８未満、１０^８未満、５×１０^７未満、１０^７未満、５×１０^６未満、又は１０^６未満）であり得る。いくつかの実施形態において、赤血球数は、０．２×１０^６／μＬ未満（例えば、０．１×１０^６／μＬ未満、０．５×１０^５／μＬ未満、又は０．１×１０^５／μＬ未満）であり得る。

【0041】

いくつかの場合には、フローサイトメトリーを使用して、本明細書に記載の組成物を評価することができる。いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体は、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる血小板と水性媒体とを含む組成物の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる血小板と水性媒体とを含む組成物の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージは、クラスＩＩのＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる血小板と水性媒体とを含む組成物の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。いくつかの実施形態において、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる血小板と水性媒体とを含む組成物の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。

【0042】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体は、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる水性媒体の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩ抗体に陽性のビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる水性媒体の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージは、クラスＩＩのＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる水性媒体の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。いくつかの実施形態において、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる水性媒体の定量において、１０％未満（例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、又は０．１％未満）である。

【0043】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、１つ以上の追加の成分を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、調製剤（例えば、本明細書に記載のいずれかの調製剤）を含み得る。いくつかの実施形態において、当該組成物は、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含み得る。緩衝剤は、任意の適切な緩衝剤とすることができる。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）とすることができる。塩基は、任意の適切な塩基とすることができる。いくつかの実施形態において、塩基は重炭酸ナトリウムとすることができる。装填剤は、任意の適切な装填剤とすることができる。いくつかの実施形態において、装填剤は、単糖、多糖、又はこれらの組合せであり得る。いくつかの実施形態において、装填剤は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、及びキシロースからなる群より選択することができる。いくつかの実施形態において、装填剤はトレハロースとすることができる。いくつかの実施形態において、多糖はポリスクロースとすることができる。塩は、任意の適切な塩とすることができる。いくつかの実施形態において、塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せとすることができる。有機溶媒は、任意の適切な有機溶媒とすることができる。いくつかの実施形態において、有機溶媒は、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択することができる。

【0044】

調製剤は、任意の適切な成分を含むことができる。いくつかの実施形態において、調製剤は液体媒体を含み得る。いくつかの実施形態において、調製剤は、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び血液若しくは血液製剤中に見出され得るか又は血小板の乾燥に有用であることが知られている任意の他の塩から選択される１つ以上の塩、又はこれらのうちの２つ以上の任意の組合せを含み得る。

【0045】

いくつかの実施形態において、調製剤は１つ以上の塩、例えば、リン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び血液又は血液製剤中に見出され得る任意の他の塩を含む。例示的な塩としては、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、及びこれらの組合せが挙げられる。いくつかの実施形態において、調製剤は約０．５ｍＭ～約１００ｍＭの１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、約０．５ｍＭ～約１００ｍＭ（例えば、約０．５～約２ｍＭ、約２ｍＭ～約９０ｍＭ、約２ｍＭ～約６ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０～約８５ｍＭ）の１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、約５ｍＭ、約７５ｍＭ、又は約８０ｍＭの１つ以上の塩を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びこの２つの組合せから選択される１つ以上の塩を約０．５ｍＭ～約２ｍＭの濃度で含む。

【0046】

好ましくは、これらの塩は、血小板又は血小板誘導体（例えば、フリーズドライされた血小板）を含む組成物中に、全血中に見出される量とほぼ同じ量で存在する。

【0047】

いくつかの実施形態において、調製剤はさらに、担体タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、担体タンパク質は、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、又はこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態において、担体タンパク質は約０．０５％～約１．０％（ｗ／ｖ）の量で存在する。

【0048】

調製剤は、血小板に対し無毒性であり、かつ溶液に対し、本明細書で提供されるプロセスの間に溶液が曝露される温度で妥当な緩衝能力をもたらす、任意の緩衝液とすることができる。したがって、緩衝液は、任意の市販された既知の生物学的に適合性の緩衝液、例えば、リン酸緩衝液（例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ））、重炭酸／炭酸（例えば、重炭酸ナトリウム緩衝液）、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、及びトリスベース緩衝液（例えば、トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ））を含み得る。同様に、緩衝液は、以下の緩衝液のうちの１つ以上を含み得る：プロパン－１，２，３－トリカルボン酸（トリカルバリル酸）；ベンゼンペンタカルボン酸；マレイン酸；２，２－ジメチルコハク酸；ＥＤＴＡ；３，３－ジメチルグルタル酸；ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノ－トリス（ヒドロキシメチル）－メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）；ベンゼンヘキサカルボン酸（メリト酸）；Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ－二酢酸（ＡＤＡ）；ブタン－１，２，３，４－テトラカルボン酸；ピロリン酸；１，１－シクロペンタン二酢酸（３，３－テトラメチレングルタル酸）；ピペラジン－１，４－ビス－（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）；Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）；１，１－シクロヘキサン二酢酸；３，６－エンドメチレン－１，２，３，６－テトラヒドロフタル酸（ＥＭＴＡ；ＥＮＤＣＡ）；イミダゾール；２－（アミノエチル）トリメチルアンモニウムクロリド（ＣＨＯＬＡＭＩＮＥ）；Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）；２－メチルプロパン－１，２，３－トリカルボン酸（β－メチルトリカルボン酸）；２－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）；リン酸；及びＮ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）。いくつかの実施形態において、調製剤は１つ以上の緩衝液、例えば、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、又は重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は約５～約１００ｍＭの１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、約５～約５０ｍＭ（例えば、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約８ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ）の１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、又は約３０ｍＭの１つ以上の緩衝液を含む。

【0049】

いくつかの実施形態において、調製剤は、単糖及び二糖などの１つ以上の糖を含み、これにはスクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、デキストロース、及びキシロースが含まれる。いくつかの実施形態において、糖は単糖である。いくつかの実施形態において、糖は二糖である。いくつかの実施形態において、糖は単糖、二糖、又はこれらの組合せである。いくつかの実施形態において、糖は非還元二糖である。いくつかの実施形態において、糖はスクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、又はキシロースである。いくつかの実施形態において、糖はトレハロースを含む。いくつかの実施形態において、調製剤はデンプンを含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、ポリスクロース（スクロースとエピクロロヒドリンとのポリマー）を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、約１０ｍＭ～約１，０００ｍＭの１つ以上の糖を含む。いくつかの実施形態において、調製剤は、約５０～約５００ｍＭの１つ以上の糖を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の糖が１０ｍＭ １０～５００ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態において、１つ以上の糖が５０ｍＭ～２００ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態において、１つ以上の糖が１００ｍＭ～１５０ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態において、１つ以上の糖は凍結乾燥剤であり、例えば、いくつかの実施形態において、凍結乾燥剤は、トレハロース、ポリスクロース、又はこれらの組合せを含む。

【0050】

いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物は、水又は生理食塩水のうちの１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、フリーズドライされた血小板）を含む組成物は、ＤＭＳＯを含み得る。

【0051】

いくつかの実施形態において、調製剤はアルコール（例えば、エタノール）などの有機溶媒を含む。このような調製剤においては、溶媒の量は０．１％～５．０％（ｖ／ｖ）を範囲とすることができる。いくつかの実施形態において、有機溶媒は、約０．１％（ｖ／ｖ）～約５．０％（ｖ／ｖ）、例えば、約０．３％（ｖ／ｖ）～約３．０％（ｖ／ｖ）、又は約０．５％（ｖ／ｖ）～約２％（ｖ／ｖ）を範囲とすることができる。

【0052】

いくつかの実施形態において、好適な有機溶媒としては、限定されるものではないが、アルコール、エステル、ケトン、エーテル、ハロゲン化溶媒、炭化水素、ニトリル、グリコール、硝酸アルキル、水、又はこれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、好適な有機溶媒としては、限定されるものではないが、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、酢酸、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、イソプロピルエーテル（ＩＰＥ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、ジオキサン（例えば、１，４－ジオキサン）、アセトニトリル、プロピオニトリル、塩化メチレン、クロロホルム、トルエン、アニソール、シクロヘキサン、ヘキサン、ヘプタン、エチレングリコール、ニトロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド、及びこれらの組合せが挙げられる。いくつかの実施形態において、有機溶媒は、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はこれらの組合せからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、有機溶媒は、エタノール、ＤＭＳＯ、又はこれらの組合せを含む。エタノールなどの有機溶媒の存在は、血小板、血小板誘導体、又はトロンボソーム（例えば、フリーズドライされた血小板誘導体）の処理に有益であり得る。

【0053】

いくつかの実施形態において、調製剤は有機溶媒を含まない。いくつかの実施形態において、調製剤は有機溶媒を含む。いくつかの実施形態において調製剤はＤＭＳＯを含む。

【0054】

調製剤のｐＨは、任意の適切なｐＨであり得る。例えば、いくつかの実施形態において、調製剤のｐＨは約６．０～約７．４（例えば、約６．５～約６．９、又は約６．６～約６．８）であり得る。

【0055】

いくつかの実施形態において、１つ以上の他の成分が（例えば、調製剤の一部として）血小板と組み合わされ得る。例示的な成分としては、血小板の凝集及び活性化を防止するためのプロスタグランジンＥ１又はプロスタサイクリン及び又はＥＤＴＡ／ＥＧＴＡを挙げることができる。

【0056】

いくつかの実施形態において、調製剤は、実施例１で示されるような緩衝液Ａであり得る。いくつかの実施形態において、調製剤は、実施例１で示されるような緩衝液Ａを含み得、このとき、１つ以上の成分（例えば、エタノール）が、実施例１で示される量の最大３倍の量で存在する。使用することができる調製剤組成物の非限定的な例を表Ｐ１～Ｐ６に示す。

【0057】

（表Ｐ１）

【0058】

（表Ｐ２）

【0059】

（表Ｐ３）

【0060】

（表Ｐ４）

【0061】

（表Ｐ５）

【0062】

表Ｐ５は、緩衝液Ｂ中のＨＥＰＥＳ及び塩の濃度を示している。ｐＨは、ＮａＯＨで７．４に調整することができる。アルブミンは緩衝液Ｂの任意選択の成分である。

【0063】

（表Ｐ６）

【0064】

表Ｐ６は、別の例示的な調製剤である。

【0065】

いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を再水和することは、血小板に水性液体を加えることを含む。いくつかの実施形態において、水性液体は水である。いくつかの実施形態において、水性液体は水溶液（例えば、緩衝液）である。いくつかの実施形態において、水性液体は食塩水である。いくつかの実施形態において、水性液体は懸濁液である。

【0066】

いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、膜上に存在するタンパク質及び／又は脂質を介した血小板膜の約１０％未満（例えば約８％未満、例えば約６％未満、例えば約４％未満、例えば約２％未満、例えば約０．５％未満）の架橋を有する。いくつかの実施形態において、再水和された血小板又は血小板誘導体（例えばトロンボソーム）は、膜上に存在するタンパク質及び／又は脂質を介した血小板膜の約１０％未満（例えば約８％未満、例えば約６％未満、例えば約４％未満、例えば約２％未満、例えば約０．５％未満）の架橋を有する。

【0067】

いくつかの実施形態において、血小板又はプールされた血小板は、ＴＦＦの前に、又は調製剤で希釈される前に、約６．０～約７．４のｐＨに酸性化され得る。いくつかの実施形態において、当該方法は、血小板を酸性化してｐＨ約６．５～約６．９にすることを含む。いくつかの実施形態において、当該方法は、血小板を酸性化してｐＨ約６．６～約６．８にすることを含む。いくつかの実施形態において、酸性化は、酸性クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）を含む溶液をプールされた血小板に加えることを含む。

【0068】

いくつかの実施形態において、血小板は、ＴＦＦの前に、又は調製剤で希釈される前に単離される。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、遠心分離を用いて血小板を単離することを含む。いくつかの実施形態において、遠心分離は、約１０００×ｇ～約２０００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）で行われる。いくつかの実施形態において、遠心分離は、約１３００×ｇ～約１８００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）で行われる。いくつかの実施形態において、遠心分離は、約１５００×ｇの相対遠心力（ＲＣＦ）で行われる。いくつかの実施形態において、遠心分離は約１分～約６０分間行われる。いくつかの実施形態において、遠心分離は約１０分～約３０分間行われる。いくつかの実施形態において、遠心分離は約３０分間行われる。

【0069】

いくつかの実施形態において、血小板は、対象を治療する前に、例えば液体媒体中に単離される。

【0070】

いくつかの実施形態において、血小板はドナー由来の血小板である。いくつかの実施形態において、血小板は、アフェレーシスステップを含むプロセスによって得られる。いくつかの実施形態において、血小板はプールされた血小板である。

【0071】

いくつかの実施形態において、血小板は複数のドナーからプールされる。このような複数のドナーからプールされた血小板は、本明細書ではプールされた血小板と称されることもある。いくつかの実施形態において、ドナーは５例超、例えば１０例超、例えば２０例超、例えば５０例超、例えば最大約１００例のドナーである。いくつかの実施形態において、ドナーは約５～約１００例、例えば約１０～約５０例、例えば約２０～約４０例、例えば約２５～約３５である。プールされた血小板は、本明細書に記載されたいずれかの組成物を作製するために使用することができる。

【0072】

いくつかの実施形態において、血小板はｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導される。いくつかの実施形態において、血小板は培養物中で誘導又は調製される。いくつかの実施形態において、血小板を調製することは、巨核球の培養物から血小板を誘導又は成長させることを含む。いくつかの実施形態において、血小板を調製することは、ヒト多能性幹細胞（ＰＳＣ）（胚性幹細胞（ＥＳＣ）及び／又は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む）の培養物から血小板（又は巨核球）を誘導又は成長させることを含む。

【0073】

したがって、いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、本明細書に記載のように対象を治療する前に調製される。いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は凍結乾燥される。いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、凍結保存される。例えば、いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体は、血漿及びＤＭＳＯ（例えば、３～９％のＤＭＳＯ（例えば、６％のＤＭＳＯ））中で凍結保存され得る。いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体は、２０２０年２月１３日に公開された米国特許出願公開第２０２０／００４６７７１Ａ１号（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載のように凍結保存される。

【0074】

いくつかの実施形態において、血小板（例えば、アフェレーシス血小板、全血から単離された血小板、プールされた血小板、又はこれらの組合せ）は、液体媒体を含む調製剤中で、１０，０００血小板／μＬ～１０，０００，０００血小板／μＬの濃度で、例えば５０，０００血小板／μＬ～２，０００，０００血小板／μＬ、例えば１００，０００血小板／μＬ～５００，０００血小板／μＬ、例えば１５０，０００血小板／μＬ～３００，０００血小板／μＬ、例えば２００，０００血小板／μＬの濃度で、懸濁液を形成する。

【0075】

いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を乾燥することを含む。いくつかの実施形態において、乾燥ステップは、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を凍結乾燥することを含む。いくつかの実施形態において、乾燥ステップは、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）をフリーズドライすることを含む。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、乾燥ステップから得られた血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を再水和することを含む。

【0076】

いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、治療又は機能的アッセイで使用する前に、低温保存、凍結保存、又は凍結乾燥される（例えば、トロンボソームを生成するため）。

【0077】

血小板を乾燥するための任意の既知の技法は、当該技法が５％未満の最終残留含水量を達成できる限り、本開示に従って使用することができる。好ましくは、当該技法は２％未満、例えば、１％、０．５％、又は０．１％の最終残留含水量を達成する。好適な技術の非限定的な例としては、フリーズドライ（凍結乾燥）及び噴霧乾燥がある。好適な凍結乾燥方法を表ＬＡに提示する。さらなる例示的な凍結乾燥方法は、米国特許第７，８１１，５５８号、米国特許第８，４８６，６１７号、及び米国特許第８，０９７，４０３号に見出すことができる。例示的な噴霧乾燥方法は、乾燥ガスとしての窒素を本開示に従う調製剤と組み合わせ、次いで、二流体ノズル構成を有するＧＥＡ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｌｕｍｂｉａ ＭＤ，ＵＳＡ）のＧＥＡ Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ噴霧乾燥器に混合物を導入し、１５０℃～１９０℃の範囲の入口温度、６５℃～１００℃の範囲の出口温度、０．５～２．０バールの範囲の原子速度、５～１３ｋｇ／時間の範囲の原子速度、６０～１００ｋｇ／時間の範囲の窒素使用、及び１０～３５分の実行時間で混合物を噴霧乾燥することを含む。噴霧乾燥の最終ステップは、乾燥された混合物を優先的に採取することである。いくつかの実施形態における乾燥された組成物は、－２０℃以下から９０℃以上の範囲の温度で少なくとも６ヵ月間安定している。

【0078】

（表ＬＡ）例示的な凍結乾燥プロトコル

【0079】

いくつかの実施形態において、本明細書で開示のように得られる血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を乾燥するステップ、例えば、本明細書で開示のように得られる血小板及び／又は血小板誘導体をフリーズドライするステップは、血小板及び／又は血小板誘導体を凍結乾燥剤（例えば、非還元二糖）とインキュベートすることを含む。したがって、いくつかの実施形態において、血小板及び／又は血小板誘導体を調製するための方法はさらに、血小板を凍結乾燥剤とインキュベートすることを含む。いくつかの実施形態において、凍結乾燥剤は糖である。いくつかの実施形態において、糖は、非還元二糖などの二糖である。

【0080】

いくつかの実施形態において、血小板及び／又は血小板誘導体は、血小板を凍結乾燥剤とインキュベートするのに十分な時間及び好適な温度で、凍結乾燥剤とインキュベートする。好適な凍結乾燥剤の非限定的な例としては、単糖及び二糖などの糖があり、これにはスクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、及びキシロースが含まれる。いくつかの実施形態において、凍結乾燥剤の非限定的な例としては、血清アルブミン、デキストラン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デンプン、及びヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、例示的な凍結乾燥剤は、高分子量ポリマーを含み得る。「高分子量」とは、平均分子量が約７０ｋＤａ以上、最大１，０００，０００ｋＤａのポリマーを意味する。非限定的な例としては、スクロースとエピクロロヒドリンとのポリマー（例えば、ポリスクロース）がある。いくつかの実施形態において、凍結乾燥剤はポリスクロースである。任意の量の高分子量ポリマーを凍結乾燥剤として使用することができるが、最終濃度が約３％～１０％（ｗ／ｖ）、例えば３％～７％、例えば６％となるような量を使用することが好ましい。

【0081】

本明細書で開示される組成物で使用するための例示的な糖は、トレハロースである。糖の内容にかかわらず、糖は任意の適切な量で組成物中に存在することができる。例えば、糖は１ｍＭ～１Ｍの量で存在し得る。諸実施形態において、糖は１０ｍＭ １０～５００ｍＭの量で存在する。いくつかの実施形態において、糖は２０ｍＭ～２００ｍＭの量で存在する。諸実施形態において、糖は４０ｍＭ～１００ｍＭの量で存在する。様々な実施形態において、糖は、上記に挙げられた範囲内の異なる特定の濃度で存在し、当業者であれば、本明細書中で各々を具体的に記載する必要なく、様々な濃度を直ちに理解することができる。組成物中に２つ以上の糖類が存在する場合、各糖は、上記に挙げられた範囲及び特定の濃度に応じた量で存在し得る。

【0082】

いくつかの場合には、トロンボソームの調製はさらに、米国特許第８，４８６，６１７号に記載の手順（例えば、実施例１～５）及び同第８，０９７，４０３号に記載の手順（例えば、実施例１～３など）（参照によりこれらの全体が本明細書に援用される）のうちの１つ以上を含む。いくつかの場合には、出発材料（例えば、１つ以上のドナー血小板単位）が最初に共通の容器にプールされる。いくつかの実施形態において、出発材料は、１つ以上のドナー血小板単位を含み得る。いくつかの実施形態において、出発材料はドナー血漿を含み得る。出発材料は、遠心分離の前に抗凝固緩衝液（すなわち、ＡＣＤ－Ａ）で酸性化される場合もされない場合もある。血漿は、遠心分離後に血小板ペレットから吸引することができる。細胞を懸濁液に再懸濁させる前に、凍結保護剤を含む細胞適合性緩衝液（例えば、調製剤と同様又は同じであり得る装填緩衝液）を血小板ペレットに加えてもよい。所望の場合、血小板を緩衝液で所定の濃度（例えば、２２００ｋ／ｕｌ～２８００ｋ／ｕｌ）に希釈しても希釈しなくてもよい。緩衝液中の血小板は、１８℃～３７℃のインキュベート温度で０分～２４０分間インキュベートされ得る。凍結保護増量剤（例えば、ポリスクロース）を、最終増量剤濃度が１％～１０％ｗ／ｖ（好ましくは６％ｗ／ｖ）となるように緩衝液中の血小板に加えることができる。遠心分離され処理された血小板は、バイアルに充填し、凍結乾燥し、熱処理することができる。

【0083】

いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の粒子サイズ（例えば、直径、最大寸法）は、少なくとも約０．５μｍ（例えば、少なくとも少なくとも約０．６μｍ、少なくとも約０．７μｍ、少なくとも約０．８μｍ、少なくとも約０．９μｍ、少なくとも約１．０μｍ、少なくとも約１．２μｍ、少なくとも約１．５μｍ、少なくとも約２．０μｍ、少なくとも約２．５μｍ、又は少なくとも約５．０μｍ）である。いくつかの実施形態において、粒子サイズは約５．０μｍ未満（例えば、約２．５μｍ未満、約２．０μｍ未満、約１．５μｍ未満、約１．０μｍ未満、約０．９μｍ未満、約０．８μｍ未満、約０．７μｍ未満、約０．６μｍ未満、約０．５μｍ未満、約０．４μｍ未満、又は約０．３μｍ未満）である。いくつかの実施形態において、粒子サイズは約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）である。

【0084】

いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％）の粒子サイズが、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲内にある。いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の最大９９％（例えば、最大約９５％、最大約８０％、最大約７５％、最大約７０％、最大約６５％、最大約６０％、最大約５５％、又は最大約５０％）が、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば、約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲内にある。いくつかの実施形態において、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の約５０％～約９９％（例えば、約５５％～約９５％、約６０％～約９０％、約６５％～約８５、約７０％～約８０％）が、約０．５μｍ～約５．０μｍ（例えば約０．５μｍ～約４．０μｍ、約０．５μｍ～約２．５μｍ、約０．６μｍ～約２．０μｍ、約０．７μｍ～約１．０μｍ、約０．５μｍ～約０．９μｍ、又は約０．６μｍ～約０．８μｍ）の範囲内にある。

【0085】

いくつかの場合には、微粒子は、約０．５μｍ未満（約０．４５μｍ又は０．４μｍ未満）の粒径（例えば、直径、最大寸法）を有する粒子であり得る。いくつかの場合には、微粒子は、約０．０１μｍ～約０．５μｍ（例えば、約０．０２μｍ～約０．５μｍ）の粒径を有する粒子であり得る。

【0086】

血小板又は血小板誘導体（例えばトロンボソーム）を含む組成物（例えば、本明細書に記載の方法に従って調製された組成物）の微粒子含量は、組成物中の半径約１ｎｍ～約６０，０００ｎｍの全ての粒子の総散乱強度の約５．０％未満（例えば、約４．５％未満、４．０％未満、３．５％未満、３．０％未満、２．５％未満、２．０％未満、１．５％未満、１．０％未満、又は０．５％未満）に寄与し得る。本明細書で使用する場合、「散乱強度による」微粒子の含量とは、組成物中の半径約１ｎｍ～約６０，０００ｎｍの全ての粒子の散乱強度に基づく微粒子の含量を指す。微粒子の含量は、任意の適切な方法、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定することができる。いくつかの場合には、ＤＬＳに使用する試料の粘度は、血漿のおよその粘度であることから約１．０６０ｃＰとする（又はそうなるように調整する）ことができる。

【0087】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、細胞表面マーカーを有し得る。細胞表面マーカーの存在は、任意の適切な方法を用いて定量することができる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの存在は、１つ以上の細胞表面マーカーに特異的な結合タンパク質（例えば、抗体）及びフローサイトメトリーを用いて（例えば、陽性パーセントとして、例えば、約２．７×１０^５トロンボソーム／μＬ及び約４．８μＬの抗ＣＤ４１抗体、約３．３μＬの抗ＣＤ４２抗体、約１．３μＬのアネキシンＶ、又は約２．４μＬの抗ＣＤ６２抗体を用いて）定量され得る。細胞表面マーカーの非限定的な例としては、ＣＤ４１（糖タンパク質ＩＩｂ又はＧＰＩＩｂとも呼ばれ、例えば抗ＣＤ４１抗体を用いてアッセイされ得る）、ＣＤ４２（例えば抗ＣＤ４２抗体を用いてアッセイされ得る）、ＣＤ６２（ＣＤ６２Ｐ又はＰ－セレクチンとも呼ばれ、例えば抗ＣＤ６２抗体を用いてアッセイされ得る）、ホスファチジルセリン（例えばアネキシンＶ（ＡＶ）を用いてアッセイされ得る）、及びＣＤ４７（自己認識に使用され、このマーカーがないと、場合によってはファゴサイトーシスにつながり得る）が挙げられる。任意の細胞表面マーカーの陽性パーセントは、任意の適切な陽性パーセントとすることができる。例えば、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載の方法によって調製されたもの）の平均ＣＤ４１陽性パーセントは、少なくとも５５％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも６７％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％）であり得る。別の例として、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載のもの）の平均ＣＤ４２陽性パーセントは、少なくとも６５％（例えば、少なくとも６７％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％）であり得る。別の例として、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載の方法によって調製されたもの）の平均ＣＤ６２陽性パーセントは、少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％）であり得る。また別の例として、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載の方法によって調製されたもの）の平均アネキシンＶ陽性率は、少なくとも２５％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％）であり得る。別の例として、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載の方法によって調製されたもの）の平均ＣＤ４７陽性パーセントは、少なくとも約８％（例えば、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、又は５５％）であり得る。

【0088】

糖タンパク質ＶＩ（ＧＰＶＩ）は、コラーゲンに対する血小板受容体であり、コラーゲンがＧＶＰＩに結合することで血小板が活性化される。トロンボソームでは、新鮮な血小板と比較して、受容体結合が顕著に低減し得る。いかなる特定の理論にも拘束されないが、製造プロセスによってトロンボソーム中のこの受容体のいくつかのコピーがブロック又は破壊され、それがおそらくはトロンボソーム中のコラーゲン結合の新鮮な血小板と比較した低減をもたらすものと考えられる。

【0089】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有し得る。活性化血小板の凝集は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体の形成によって媒介され、これがフィブリノーゲン（第１因子とも呼ばれる）と結合し血餅を形成し得る。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａは、ＣＤ４１／ＣＤ６１複合体としても知られる血小板フィブリノーゲン受容体である。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａクローンのＰＡＣ－１は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａの活性形態に結合する。いかなる特定の理論にも拘束されないが、細胞膜上のフィブリノーゲンの存在は、血餅を形成可能な血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を示し得るものと考えられる。同様に、いかなる特定の理論にも拘束されないが、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載の方法によって調製されたもの）に抗ＰＡＣ１抗体が結合しないことは、ＧＰＩＩｂ／ＧＰＩＩＩａの活性形態に結合したフィブリノーゲンを示し得ると考えられる。これは、ＰＡＣ－１が同じ複合体に結合するためである。いくつかの場合には、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、本明細書に記載の方法によって調製されたもの）は、より多量の残留血漿を保持する場合、より多量の結合したフィブリノーゲンを有し得る。

【0090】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、例えば、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに、トロンビンを生成可能である。例えば、いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度）は、組織因子（例えば、０．２５ｐＭ、０．５ｐＭ、１ｐＭ、２ｐＭ、５ｐＭ、又は１０ｐＭ）と任意選択でリン脂質とを含む試薬の存在下にあるときに、少なくとも２５ｎＭ（例えば、少なくとも３０ｎＭ、３５ｎＭ、４０ｎＭ、４５ｎＭ、５０ｎＭ、５２ｎＭ、５４ｎＭ、５５ｎＭ、５６ｎＭ、５８ｎＭ、６０ｎＭ、６５ｎＭ、７０ｎＭ、７５ｎＭ、又は８０ｎＭ）のトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成し得る。例えば、いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度）は、組織因子（例えば、０．２５ｐＭ、０．５ｐＭ、１ｐＭ、２ｐＭ、５ｐＭ又は１０ｐＭ）と任意選択でリン脂質とを含む試薬の存在下にあるときに、約２５ｎＭ～約１００ｎＭ（例えば、約２５ｎＭ～約５０ｎＭ、約２５～約７５ｎＭ、約５０～約１００ｎＭ、約７５～約１００ｎＭ、約３５ｎＭ～約９５ｎＭ、約４５～約８５ｎＭ、約５５～約７５ｎＭ、又は約６０～約７０ｎＭ）のＴＰＨを生成し得る。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度）は、ＰＲＰ試薬（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅのカタログ番号ＴＳ３０．００）の存在下にあるときに、例えば、２０μＬのＰＲＰ試薬と、約４．８×１０^３粒子／μＬの血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む８０μＬの組成物とを含む条件を用いて、少なくとも２５ｎＭ（例えば、少なくとも３０ｎＭ、３５ｎＭ、４０ｎＭ、４５ｎＭ、５０ｎＭ、５２ｎＭ、５４ｎＭ、５５ｎＭ、５６ｎＭ、５８ｎＭ、６０ｎＭ、６５ｎＭ、７０ｎＭ、７５ｎＭ、又は８０ｎＭ）のＴＰＨを生成し得る。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）（例えば、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度）は、ＰＲＰ試薬（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅのカタログ番号ＴＳ３０．００）の存在下にあるときに、例えば、２０μＬのＰＲＰ試薬と、約４．８×１０^３粒子／μＬの血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む８０μＬの組成物とを含む条件を用いて、約２５ｎＭ～約１００ｎＭ（例えば、約２５ｎＭ～約５０ｎＭ、約２５～約７５ｎＭ、約５０～約１００ｎＭ、約７５～約１００ｎＭ、約３５ｎＭ～約９５ｎＭ、約４５～約８５ｎＭ、約５５～約７５ｎＭ、又は約６０～約７０ｎＭ）のＴＰＨを生成し得る。

【0091】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、例えば、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに、トロンビンを生成可能である。例えば、いくつかの場合には、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の力価は、１０^６粒子当たり少なくとも１．２（例えば、少なくとも１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、又は２．５）トロンビン生成力価単位（ＴＧＰＵ）であり得る。例えば、いくつかの場合には、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の力価は、１０^６粒子当たり１．２～２．５ＴＰＧＵ（例えば、１０^６粒子当たり１．２～２．０、１．３～１．５、１．５～２．２５、１．５～２．０、１．５～１．７５、１．７５～２．５、２．０～２．５、又は２．２５～２．５ＴＰＧＵ）であり得る。ＴＰＧＵは以下のように計算することができる：ＴＧＰＵ／１００万粒子＝［ＴＰＨ（ｎＭ）］＊［力価係数（ＩＵ）／（ｎＭ）］／［ウェル内の５７．６万粒子］。同様に、トロンビンの試料の力価係数は以下のように計算することができる：力価係数＝キャリブレーター活性計算値（ＩＵ）／有効キャリブレーター活性（ｎＭ）。いくつかの場合には、キャリブレーター活性は、ＷＨＯ国際トロンビン標準に基づき得る。

【0092】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、例えば総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ（登録商標））の使用による定量において、凝集可能であり得る。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体は、少なくとも７０×１０^３粒子／μＬ（例えば、少なくとも７３×１０^３、１００×１０^３、１５０×１０^３、１７３×１０^３、２００×１０^３、２５０×１０^３、又は２５５×１０^３粒子／μＬ）の濃度のときに、例えば、血小板低減クエン酸塩加全血において、１４分未満（例えば、１３．５、１３、１２．５、１２、１１．５、又は１１分未満）のＴ－ＴＡＳ閉塞時間（例えば、ｋＰａが８０に到達するまでの時間）をもたらし得る。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体は、少なくとも７０×１０^３粒子／μＬ（例えば、少なくとも７３×１０^３、１００×１０^３、１５０×１０^３、１７３×１０^３、２００×１０^３、２５０×１０^３、又は２５５×１０^３粒子／μＬ）の濃度のときに、血小板低減クエン酸塩加全血において、例えば、少なくとも１３００（例えば、少なくとも１３８０、１４００、１５００、１６００、又は１７００）の曲線下面積（ＡＵＣ）をもたらし得る。

【0093】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、例えば凝集アゴニストの存在下で、凝集可能である。凝集アゴニストの非限定的な例としては、トロンビン及びコラーゲンが挙げられる。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の凝集パーセントは、凝集アゴニストの存在下で、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、６７％、７０％、７５％、８５％、９０％、又は９９％）であり得る。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の凝集パーセントは、凝集アゴニストの存在下で、約２５％～約１００％（例えば、約２５％～約５０％、約２５％～約７５％、約５０％～約１００％、約７５％～約１００％、約４０％～約９５％、約５５％～約８０％、又は約６５％～約７５％）であり得る。凝集パーセントは、任意の適切な方法、例えば、光透過凝集測定法によって定量することができる。

【0094】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物は、細胞基質及び／又は代謝産物の適切な条件及び量（例えば、ｐＨ、ｐＣＯ_２、ｐＯ_２、ＨＣＯ_３濃度、総二酸化炭素（ＴＣＯ_２）、ｓＯ_２、及び乳酸濃度）を有し得る。乳酸は、解糖の産物であってもよい。いかなる特定の理論にも拘束されないが、出発材料は、製造時までに一定期間（例えば、約３日）呼吸し解糖を行いながらｅｘ ｖｉｖｏで保存されているため、高い乳酸濃度を有し得る。例えば、いくつかの場合には、ｐＨは約６．０～約７．５（例えば、約６．０～約７．４、約６．９～約７．５、又は約７．０～約７．３）とすることができる。別の例として、ｐＣＯ_２は、約１０～約２０ｍｍＨｇ（例えば、約１０～約１５ｍｍＨｇ、約１５～約２０ｍｍＨｇ、又は約１７～約１９ｍｍＨｇ）とすることができる。ｐＯ_２は、約１４０～約１６５ｍｍＨｇ（例えば、約１４０～約１５０ｍｍＨｇ、約１５０～約１６０ｍｍｇＨ、又は約１６０～約１６５ｍｍＨｇ）とすることができる。ＨＣＯ_３濃度は、約４．５～約６．５ｍｍｏｌ／Ｌ（例えば、約５．０～約６．０ｍｍｏｌ／Ｌ）とすることができる。総二酸化炭素は、約４～約８ｍｍｏｌ／Ｌ（例えば、約５～約７ｍｍｏｌ／Ｌ）とすることができる。ｓＯ_２は、少なくとも約９８％（例えば、少なくとも約９９％）とすることができる。乳酸濃度は、約２．０ｍｍｏｌ／Ｌ未満（例えば、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ未満又は１．０ｍｍｏｌ／Ｌ未満）とすることができる。乳酸濃度は、約０．４～約１．３ｍｍｏｌ／Ｌ（例えば、約０．５～約０．６ｍｍｏｌ／Ｌ、約０．５～約１．０ｍｍｏｌ／Ｌ、又は約０．８～約１．３ｍｍｏｌ／Ｌ）とすることができる。

【0095】

本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、例えば、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性によって立証されるようないくらかの代謝活性を保持し得る。いくつかの場合には、本明細書に記載の血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、ドナーアフェレーシス血小板のＬＤＨ活性の少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約１２％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、又は４５％）を保持し得る。いかなる特定の理論にも拘束されないが、ポリスクロースを加える量が増加すれば、残存するＬＤＨ活性の量が増加すると考えられる（例えば、８％ポリスクロースを含む調製剤の産物は、４％ポリスクロースを含む調製剤の産物よりも多くＬＤＨ活性を保持する）。同様に、いかなる特定の理論にも拘束されないが、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む凍結乾燥された組成物を熱処理すると、保持されるＬＤＨ活性の量が増加すると考えられている。別の例として、代謝活性は、エステラーゼ活性の保持（例えば、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＤＡＳＥ）のアセテート基を切断してフルオロフォアをマスク解除する細胞の能力）によって立証することができる。

【0096】

血液製剤においては、概して病原体の低減が望ましい。いかなる特定の理論にも拘束されないが、病原体低減のいくつかの方法は、処理された血液製剤中で微粒子の形成を引き起こすことができると考えられている。病原体低減の１つの方法は、適切な波長の照明で病原体の核酸を変化させるための、感光性核酸インターカレート化合物の使用を伴う。ＩＮＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標）システム（Ｃｅｒｕｓ社製）は、アモトサレン（ａｍｏｔｏｓａｌｅｎ）（ＵＶＡの照明で核酸に架橋を形成する核酸インターカレート化合物）を使用する。

【0097】

本明細書に記載の最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））は、任意の適切な方法によって調製することができる。本明細書に記載の最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））は、本明細書に開示されている方法によって調製することができる。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、最終血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤は、本明細書に記載のように、血小板と水性媒体とを含む組成物をフリーズドライさせた結果であり得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤は、出発材料（例えば、未処理の血液製剤（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））、又は部分的に処理された血液製剤（例えば、濾過を経た血液製剤））のタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）を用いて調製することができる。いくつかの実施形態において、最終血液製剤は、出発材料（例えば、未処理の血液製剤（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））、又は部分的に処理された血液製剤（例えば、濾過を受けた血液製剤））の遠心分離を用いて調製することができる。本明細書に記載の方法は、概してアフェレーシス材料を出発材料とする文脈で説明されているが、他の材料、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された血小板、又は全血を使用してもよいことは理解されよう。いくつかの場合には、血小板は全血（例えば、プールされた全血）から分離され得る。

【0098】

出発材料は、任意の適切な出発材料とすることができる。いくつかの実施形態において、出発材料のタンパク質濃度は、約６０～約８０ｍｇ／ｍＬとすることができる。いくつかの実施形態において、タンパク質濃度は、全血の血漿中のタンパク質濃度に基づき得る。いくつかの実施形態において、タンパク質濃度は、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度に基づき得る。いくつかの実施形態において、出発材料は、ドナー血液製剤（例えば、全血又は分画された血液）とすることができる。いくつかの実施形態において、出発材料は、プールされたドナー血液製品（例えば、プールされた全血又はプール及び分画された血）であり得る。いくつかの実施形態において、出発材料は、ドナーアフェレーシス血漿を含み得る。いくつかの実施形態において、出発材料は、ドナーアフェレーシス血漿に由来し得る。本明細書で使用する場合、「ドナーアフェレーシス血漿」とは、血小板又は他の血球が含まれているかいないかにかかわらず、アフェレーシス材料の血漿成分を指すことができる。

【0099】

いくつかの実施形態において、出発材料は、ドナーアフェレーシス材料（例えば、ドナー血小板又はドナー血小板のプール）とすることができる。いくつかの実施形態において、出発材料は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）に基づいて、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体のうちの１つ以上に対し陽性である。いくつかの実施形態において、出発材料は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、出発材料は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性反応を示し得る。いくつかの実施形態において、出発材料は、規制機関が承認したアッセイ（例えば、ＦＤＡ承認済みアッセイ）で、ＨＮＡ抗体に対し陽性反応を示し得る。規制機関が承認したアッセイは、任意の適切な規制機関が承認したアッセイとすることができる。いくつかの実施形態において、規制機関が承認した検査は、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ製のＬＡＢＳＣＲＥＥＮ（商標）Ｍｉｘｅｄとすることができる。いくつかの実装形態において、規制機関が承認した検査は、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）１００／２００又はＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ＸＹ及びＨＬＡ ＦＵＳＩＯＮ（商標）ソフトウェアを用いて実施することができる。

【0100】

いくつかの実施形態において、出発材料は病原体低減ステップ、例えば、ＵＶＡの照明で核酸に架橋を形成する核酸インターカレート化合物を経ることができる。

【0101】

いくつかの実施形態において、出発材料（例えば、１単位以上のドナー血小板）を、最初に共通の容器にプールすることができる。出発材料は、最初に、酸性化された洗浄緩衝液（例えば、対照緩衝液）で希釈する場合もしない場合もある。いかなる特定の理論にも拘束されないが、酸性化した洗浄緩衝液で洗浄することで、処理中の血小板活性化を低減することができると考えられている。いくつかの場合には、出発材料は、２つの一般的な処理経路を経ることができ、すなわち、最終濃度に濃縮する前に、所望の残留成分（例えば、残留ドナー血漿のパーセンテージ）に達するまで制御緩衝液（例えば、ＴＦＦを使用）で洗浄するか、又は、制御緩衝液（例えば、ＴＦＦを使用）で洗浄する前に、所望の残留成分（例えば、残留ドナー血漿のパーセンテージ）に達するまで出発材料を最終濃度に濃縮することができる。ＴＦＦ処理された材料は、バイアルに充填し、凍結乾燥し、熱処理する。

【0102】

いくつかの実施形態において、当該方法は、初期希釈ステップを含み得、例えば、出発材料（例えば、未処理血液製剤（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））を調製剤（例えば、本明細書に記載の調製剤のいずれか）で希釈して、希釈された出発材料を形成することができる。いくつかの場合には、初期希釈ステップは、出発材料の質量の少なくとも約１０％（例えば、出発材料の質量の少なくとも約１５％、２５％、５０％、７５％、１００％、１５０％、又は２００％）に等しい質量の調製剤による希釈を含み得る。いくつかの実施形態において、初期希釈ステップは、ＴＦＦ装置を用いて実施され得る。

【0103】

いくつかの実施形態において、当該方法は、濃縮（例えば、血小板の濃縮）（例えば、出発材料又は希釈された出発材料の濃縮）して、濃縮された血小板組成物を形成することを含み得る。例えば、濃縮は、約１０００×１０^３～約４０００×１０^３血小板／μＬ（例えば、約１０００×１０^３～約２０００×１０^３、約２０００×１０^３～約３０００×１０^３、又は約４０００×１０^３血小板／μＬ）に濃縮することを含み得る。いくつかの実施形態において、濃縮ステップは、ＴＦＦ装置を用いて行われ得る。

【0104】

血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の濃度は、任意の適切な方法で定量することができる。例えば、カウンターを使用して、懸濁液中の血球の濃度をインピーダンスを用いて定量化することができる（例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＡｃＴ １０又はＡｃＴ ｄｉｆｆ ２）。

【0105】

いくつかの実施形態において、ＴＦＦは、出発材料、希釈された出発材料、濃縮血小板組成物、又はこれらの組合せのダイアフィルタリング（「洗浄」と呼ばれることもある）を含み得る。いくつかの実施形態において、ダイアフィルタリングは、少なくとも２ダイアボリューム（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０ダイアボリューム、又はそれ以上）での洗浄を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＦＦは緩衝液交換を含み得る。いくつかの実施形態において、緩衝液がＴＦＦで使用され得る。緩衝液は、任意の適切な緩衝液とすることができる。いくつかの実施形態において、緩衝液は調製剤（例えば、本明細書に記載のいずれかの調製剤）であってもよい。いくつかの実施形態において、緩衝液は、希釈に使用したものと同じ調製剤であってもよい。いくつかの実施形態において、緩衝液は、希釈に使用したものと異なる調製物であってもよい。いくつかの実施形態において、緩衝液は、緩衝剤を含む凍結乾燥剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒（例えば、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はこれらの組合せからなる群より選択される有機溶媒）とを含み得る。緩衝剤は、任意の適切な緩衝剤とすることができる。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ（（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）とすることができる。塩基は、任意の適切な塩基とすることができる。いくつかの実施形態において、塩基は重炭酸ナトリウムとすることができる。いくつかの実施形態において、糖は単糖であり得る。いくつかの実施形態において、装填剤は糖であり得る。いくつかの実施形態において、糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、又はキシロースを含み得る。いくつかの実施形態において、単糖はトレハロースとすることができる。いくつかの実施形態において、装填剤はポリスクロースを含み得る。塩は、任意の適切な塩とすることができる。いくつかの実施形態において、塩は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、又はこれらの組合せからなる群より選択することができる。

【0106】

いくつかの実施形態において、孔径約０．１μｍ～約１μｍ（例えば、約０．１μｍ～約１μｍ、約０．１μｍ～約０．５μｍ、約０．２～約０．４５μｍ、約０．４５～約１μｍ、約０．１μｍ、約０．２μｍ、約０．４５μｍ、約０．６５μｍ、又は約１μｍ）の膜がＴＦＦで使用され得る。膜は、任意の適切な材料から作製することができる。いくつかの場合には、膜は親水性膜であり得る。いくつかの実施形態において、膜は疎水性膜であり得る。いくつかの実施形態において、名目上の分子量カットオフ（ＮＭＷＣＯ）が少なくとも約１００ｋＤａ（例えば、少なくとも約２００、３００ｋＤａ、５００ｋＤａ、又は１０００ｋＤａ）の膜がＴＦＦで使用され得る。ＴＦＦは任意の適切な温度で実施することができる。いくつかの実施形態において、ＴＦＦは、約２０℃～約３７℃の温度（例えば、約２０℃～約２５℃、約２０℃～約３０℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、約３０℃～約３７℃、約２５℃～約３５℃、又は約２５℃～約３７℃）で実施され得る。いくつかの実施形態において、ＴＦＦは、約１００ｍｌ／分～約８００ｍｌ／分の流量（例えば、循環流量）（例えば、約１００～約２００ｍｌ／分、約１００～約４００ｍｌ／分、約１００～約６００ｍｌ／分、約２００～約４００ｍｌ／分、約２００～約６００ｍｌ／分、約２００～約８００ｍｌ／分、約４００～約６００ｍｌ／分、約４００～約８００ｍｌ／分、約６００～約８００ｍｌ／分、約１００ｍｌ／分、約２００ｍｌ／分、約３００ｍｌ／分、約４００ｍｌ／分、約５００ｍｌ／分、約６００ｍｌ／分、約７００ｍｌ／分、又は約８００ｍｌ／分）で実施され得る。

【0107】

いくつかの実施形態において、ＴＦＦを特定のエンドポイントに到達するまで実施して、ＴＦＦ処理された組成物を形成することができる。エンドポイントは、任意の適切なエンドポイントとすることができる。いくつかの実施形態において、エンドポイントは、残留血漿のパーセンテージ（例えば、残留血漿の約５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、又は０．１％以下）であり得る。いくつかの実施形態において、エンドポイントは２８０ｎｍにおける相対的吸光度（Ａ２８０）であり得る。例えば、エンドポイントは、ＴＦＦの前（例えば、出発材料又は希釈された出発材料）のＡ２８０（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用）の約５０％以下（例えば、約４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、又は０．１％以下）であるＡ２８０（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用）である。いくつかの実施形態において、Ａ２８０は、７．５％血漿＝１．６６ＡＵを測定するシステムに対応し得る。いくつかの実施形態において、Ａ２８０を測定するための装置は、以下のように構成することができ、すなわち、０．５ｃｍギャップのフローセルをＴＦＦシステムの濾液ラインに取り付けることができる。フローセルは、フローセルの各側面に光ファイバーケーブル（光源ケーブル及び光検出器ケーブル）を取り付けてフローセル光計測器に接続させることができる。フローセルは、光ファイバーケーブルの各側面のシリカガラスレンズを用いて作製することができる。いくつかの実施形態において、エンドポイントは絶対的Ａ２８０（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用）であり得る。例えば、エンドポイントは、１．７０ＡＵ以下（例えば、１．６６ＡＵ以下、１．６ＡＵ以下、１．５ＡＵ以下、１．４ＡＵ以下、１．３ＡＵ以下、１．２ＡＵ以下、１．１ＡＵ以下、１．０ＡＵ以下、０．９ＡＵ以下、０．８ＡＵ以下、０．７ＡＵ以下、０．６ＡＵ以下、０．５ＡＵ以下、０．４ＡＵ以下、０．３ＡＵ以下、０．２ＡＵ以下、又は０．１ＡＵ以下）のＡ２８０（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用）であり得る。いくつかの実施形態において、残留血漿のパーセンテージ、相対的Ａ２８０、又はＡ２８０は、血小板と水性媒体とを含む組成物の水性媒体に基づいて定量され得る。いくつかの実施形態において、残留血漿のパーセンテージは、Ａ２８０との既知の相関に基づいて定量され得る。いくつかの実施形態において、ＴＦＦが（例えば、調製剤を用いて）試料の濃縮又は希釈を含み得るため、エンドポイントは血小板濃度とすることができる。例えば、エンドポイントは、少なくとも約２０００×１０^３血小板／μＬ（例えば、少なくとも約２０５０×１０^３、２１００×１０^３、２１５０×１０^３、２２００×１０^３、２２５０×１０^３、２３００×１０^３、２３５０×１０^３、２４００×１０^３、２４５０×１０^３、又は２５００×１０^３血小板／μＬ）の血小板濃度であり得る。別の例として、エンドポイントは、約１０００×１０^３～約２５００血小板／μＬ（例えば、約１０００×１０^３～約２０００×１０^３、約１５００×１０^３～約２３００×１０^３、又は約１７００×１０^３～約２３００×１０^３血小板／μＬ）の血小板濃度とすることができる。いくつかの実施形態において、エンドポイントは、複数の基準（例えば、残留血漿のパーセンテージ及び血小板濃度、相対的Ａ２８０及び血小板濃度、又は絶対的Ａ２８０及び血小板濃度）を含み得る。

【0108】

典型的には、ＴＦＦ処理された組成物は、続いて凍結乾燥し、任意選択で熱処理ステップを伴い、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））を形成する。ただし、いくつかの場合には、ＴＦＦ処理された組成物が最終血液製剤とみなされることもある。

【0109】

いくつかの実施形態において、血液製剤は、血液製剤（例えば、未処理の血液製剤（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料）、又は部分的に処理された血液製剤（例えば、ＴＦＦを経た血液製剤））の遠心分離を用いて調製され得る。いくつかの実施形態において、血液製剤は、血液製剤（例えば、未処理の血液製剤（例えば、ドナーアフェレーシス材料）、又は部分的に処理された血液製剤（例えば、ＴＦＦを経た血液製剤））の遠心分離をせずに調製することができる。遠心分離は、任意の適切なステップを含むことができる。いくつかの実施形態において、遠心分離は、遅い加速度、遅い減速度、又はこれらの組合せを含み得る。いくつかの実施形態において、遠心分離は、約１４００×ｇ～約１５５０×ｇ（例えば、約１４００～約１４５０×ｇ、約１４５０～約１５００×ｇ、又は１５００～約１５５０×ｇ、約１４００×ｇ、約１４１０×ｇ、約１４３０×ｇ、約１４５０×ｇ、約１４７０×ｇ、約１４９０×ｇ、約１５００×ｇ、約１５１０×ｇ、約１５３０×ｇ、若しくは約１５５０×ｇ）における遠心分離を含み得る。いくつかの実施形態において、遠心分離の持続時間は約１０分～約３０分（例えば、約１０分～約２０分、約２０分～約３０分、約１０分、約２０分、又は約３０分）であり得る。

【0110】

いくつかの実施形態において、最終血液製剤は、ＴＦＦ及び遠心分離の両方を用いて（例えば、ＴＦＦの後に遠心分離、又は遠心分離の後にＴＦＦを行い）調製することができる。

【0111】

また、本明細書では、本明細書に記載のいずれかの方法によって調製された組成物も提供される。

【0112】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、処理中の複数のポイントで分析されることがある。いくつかの実施形態において、出発材料（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））は、抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）について分析されることがある。いくつかの実施形態において、出発材料（例えば、ドナーアフェレーシス材料（例えば、プールされたドナーアフェレーシス材料））は、（例えば、２８０ｎｍでの吸光度（例えば、０．５ｃｍの経路長を使用）によって）タンパク質濃度について分析されることがある。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップ（例えば、タンパク質濃度が、未処理血液製剤のタンパク質濃度の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に低減されたとき）の組成物は、抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）について分析されることがある。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップにおける血液製剤の抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）は、出発材料の抗体含量と比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））は、抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）について分析されることがある。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、最終血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））の抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）は、出発材料の抗体含量と比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤は、検出不可能なレベルのＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の水性媒体は、本明細書に記載のように分析されることがある。

【0113】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、処理中の複数のポイントで分析されることがある。いくつかの実施形態において、ドナーアフェレーシス血漿は、抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）について分析されることがある。いくつかの実施形態において、ドナーアフェレーシス血漿は、（例えば、２８０ｎｍにおける吸光度により）タンパク質濃度について分析されることがある。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップ（例えば、タンパク質濃度が、未処理血液製剤のタンパク質濃度の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に低減されたとき）の組成物は、抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）について分析されることがある。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップにおける血液製剤の抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）は、ドナーアフェレーシス血漿の抗体含量と比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））は、抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）について分析されることがある。本明細書に記載のいくつかの実施形態において、最終血液製剤は、血小板と水性媒体とを含む組成物であり得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））の抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）は、ドナーアフェレーシス血漿の抗体含量と比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤は、検出不可能なレベルのＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体を有し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の水性媒体は、本明細書に記載のように分析されることがある。

【0114】

血液製剤のタンパク質濃度は、任意の適切な方法で測定することができる。いくつかの実施形態において、血液製剤のタンパク質濃度は、２８０ｎｍの吸光度を用いて測定することができる。

【0115】

血液製剤の抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡの抗体含量）は、任意の適切な方法で測定することができる。

【0116】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡ検出方法として、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＦＬＯＷＰＲＡ（商標）Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ又はＬＡＢＳｃｒｅｅｎ Ｍｕｌｔｉ検査キットが使用され得る。原材料をＴＦＦや遠心分離の前に検査して、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）及びヒト好中球抗原（ＨＮＡ）に対するクラスＩ及びＩＩ抗体のベースラインレベルを定量することができる。検査は、ＨＬＡ及びＨＮＡの除去を測定するために、遠心分離又はＴＦＦによる処理後に繰り返すことができる。インプロセスコントロールを維持するために、ＴＦＦ手順の全体において追加の検査ポイントを実施することができる。確実に低減し現行のＦＤＡ検査及び許容要件に準拠するために、凍結乾燥及びアニーリングの後、バッチからランダムに試料を選択し、ＨＬＡ／ＨＮＡ抗体の定性試験を実施することができる。

【0117】

いくつかの実施形態において、２つの血液製剤の抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）は、マーカー（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体に結合しているそれぞれＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）に対し陽性であるビーズのパーセンテージを定量することにより、比較することができる。任意の適切な比較方法を使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法を用いて、２つの血液製剤の抗体含量を比較することができる。いくつかの実施形態において、このような方法は以下のように実施され得る。血漿のアリコート（例えば、約１ｍＬ）乏血小板血漿を得ることができる。いくつかの実施形態において、（例えば、０．２μｍのフィルターを用いて）濾過した乏血小板血漿（ＰＰＰ）のアリコート（例えば、約１ｍＬ）を得ることができる。クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズ及び／又はクラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを血漿に加えて（例えば、約２０μＬのＰＰＰに対し約５μＬの各タイプのビーズ）、ＰＰＰ及びビーズの混合物を形成することができる。ＰＰＰ及びビーズの混合物はボルテックスすることができる。ＰＰＰ及びビーズの混合物をインキュベートして、インキュベートされた混合物を形成することができる。任意の適切なインキュベート条件を使用することができる。例えば、いくつかの実施形態において、インキュベートは、インキュベートされた混合物を形成するために、ある時間の間（例えば、約３０分間）、ある温度（例えば、室温）で、他の条件（例えば、暗中）を用いて行うことができる。いくつかの実施形態において、インキュベートは、撹拌（例えば、穏やかなロッキング）を含み得る。インキュベートされた混合物中のビーズは、任意の適切な条件を用いて洗浄することができる。いくつかの実施形態において、インキュベートされた混合物中のビーズは、洗浄緩衝液で洗浄することができる。洗浄されたビーズは、任意の適切な方法によってインキュベートされた混合物から分離することができる。いくつかの実施形態において、洗浄したビーズを遠心分離（例えば、９，０００×ｇで２分間）によって分離して、ペレット状のビーズを得ることができる。いくつかの実施形態において、洗浄ステップが繰り返され得る。ビーズを再懸濁してビーズ溶液を形成することができる。検出可能部分と結合体化した抗体（例えば、アッセイされた抗体含量（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡ抗体含量）に結合する抗体）をビーズ溶液（例えば、蛍光レポーター（例えば、ＦＩＴＣ）と結合体化したαＩｇＧ）を加えることができる。抗体は、任意の適切な条件下でビーズ溶液とインキュベートすることができる。いくつかの実施形態において、抗体は、ある時間の間（例えば、約３０分間）、ある温度（例えば、室温）で、他の条件（例えば、暗中）を用いてインキュベートして、標識されたビーズを形成することができる。標識されたビーズを洗浄して、検出可能部分と結合体化した未結合の抗体を除去することができる。標識されたビーズは、任意の適切な条件を用いて洗浄することができる。いくつかの実施形態において、標識されたビーズは、洗浄緩衝液で洗浄することができる。洗浄した標識されたビーズは、任意の適切な方法によって分離することができる。いくつかの実施形態において、洗浄した標識されたビーズを遠心分離（例えば、９，０００ｇで２分間）によって分離して、ペレット状の標識ビーズを得ることができる。いくつかの実施形態において、洗浄ステップが繰り返され得る。標識されたビーズは、任意の適切な方法によって検出することができる。いくつかの実施形態において、標識されたビーズは、フローサイトメトリーによって検出することができる。いくつかの実施形態において、検出は、検出可能な部分に対し陽性であるビーズのパーセンテージを、陰性対照と比較して測定することを含み得る。いくつかの実施形態において、陰性対照は、抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡクラスＩＩ、又はＨＮＡ抗体）に対し陰性であることが知られているＰＰＰ試料を用いて、上記のように調製することができる。

【0118】

いくつかの実施形態において、血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））は、処理中に複数のポイントで分析することができる。いくつかの実施形態において、出発材料（例えば、ドナーアフェレーシス材料）を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、出発材料（例えば、ドナーのアフェレーシス材料）は、（例えば、２８０ｎｍでの吸光度により）タンパク質濃度について分析されることがある。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップ（例えば、出発材料のタンパク質濃度が７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に低減されたとき）の血液製剤を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップ（例えば、出発材料のタンパク質濃度が７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に低減されたとき）の血液製剤を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップの血液製剤からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、出発材料からの陽性ビーズのパーセントと比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップの血液製剤からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、ビーズの総量の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）であり得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存血小板、フリーズドライ血小板（例えば、トロンボソーム））からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）は、出発材料からの陽性ビーズのパーセントと比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、ビーズの総量の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の水性媒体は、本明細書に記載のように分析されることがある。

【0119】

いくつかの実施形態において、血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））は、処理中に複数のポイントで分析することができる。いくつかの実施形態において、ドナーのアフェレーシス血漿を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、ドナーアフェレーシス血漿は、（例えば、２８０ｎｍにおける吸光度により）タンパク質濃度について分析されることがある。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップ（例えば、出発材料のタンパク質濃度が７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に低減されたとき）の血液製剤を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップ（例えば、出発材料のタンパク質濃度が７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）に低減されたとき）の血液製剤を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップの血液製剤からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、ドナーのアフェレーシス血漿からの陽性ビーズのパーセントと比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、処理の中間ステップの血液製剤からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、ビーズの総量の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）であり得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））を分析して、陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントを定量することができる。いくつかの実施形態において、最終血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、ドナーアフェレーシス材料からの陽性ビーズのパーセントと比較して、少なくとも５％低減（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減）され得る。いくつかの実施形態において、最終血液製剤からの陽性ビーズ（例えば、ＨＬＡ又はＨＮＡでコーティングされたビーズ）のパーセントは、ビーズの総量の７５％以下（例えば、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、又はそれ以下）であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物の水性媒体は、本明細書に記載のように分析されることがある。

【0120】

陽性ビーズのパーセンテージは、任意の適切な方法を用いて定量することができる。いくつかの実施形態において、陽性のビーズは、陰性対照試料と比較して定量することができる。陰性対照試料は、任意の適切な陰性対照試料であり得る。いくつかの実施形態において、陰性対照試料を使用して、ある特定のパーセンテージ（例えば、約０．０１％～約１％（例えば、約０．０１％～約０．０５％、約０．０５％～約０．１％、約０．１％～約０．５％、約０．５％～約１％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、又は約１％））未満の陰性対照試料が陽性ゲート内に存在するように、陽性ゲーティングを決定することができる。いくつかの実施形態において、陰性対照試料は緩衝液（例えば、ＰＢＳ）であり得る。いくつかの実施形態において、陰性対照試料は、合成血漿組成物であり得る。いくつかの実施形態において、陰性対照試料は、アッセイする抗体（例えば、ＨＬＡ抗体又はＨＮＡ抗体）に対し陰性であることが知られている血液製剤であり得る。

【0121】

また、本明細書では、血小板を含む組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）のパーセンテージを低減する方法であって、タンジェンシャルフロー濾過によって当該組成物を濾過することを含む、方法も提供される。また、本明細書では、血小板を含む組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）の量を低減する方法であって、タンジェンシャルフロー濾過によって当該組成物を濾過することを含む、方法も提供される。また、本明細書では、血小板を含む組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）に対し陽性であるビーズのパーセンテージを低減する方法であって、タンジェンシャルフロー濾過によって当該組成物を濾過することを含む、方法も提供される。

【0122】

また、本明細書では、血小板を含む組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）のパーセンテージを低減する方法であって、遠心分離によって当該組成物を濾過することを含む、方法も提供される。また、本明細書では、血小板を含む組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）の量を低減する方法であって、遠心分離によって当該組成物を濾過することを含む、方法も提供される。また、本明細書では、血小板を含む組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）に対し陽性であるビーズのパーセンテージを低減する方法であって、遠心分離によって当該組成物を濾過することを含む、方法も提供される。

【0123】

本明細書に記載のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）の量は、基準レベルを下回って低減され得る。基準レベルは、任意の適切な基準レベルであり得る。本明細書に記載のいずれかの方法のいくつかの実施形態において、組成物（例えば、血液製剤）中の抗体（例えば、ＨＬＡ抗体（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗体若しくはＨＬＡクラスＩＩ抗体）又はＨＮＡ抗体）に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、本明細書に記載の方法を経る前の血液製剤と比較して低減され得る。抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、任意の適切な量だけ低減され得る。いくつかの実施形態において、抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、本明細書に記載のいずれかの方法を経る前の血液製剤と比較して、少なくとも５％低減され得る（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上低減され得る）。

【0124】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、任意の適切な追加の処理ステップを経ることができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物はフリーズドライされ得る。いくつかの実施形態において、フリーズドライされた血小板は熱的に処理され得る（例えば、約８０℃で約２４時間）。

【0125】

例えば、いくつかの実施形態において、組成物は凍結保存又はフリーズドライされ得る。いくつかの実施形態において、第１の組成物（例えば、本明細書に記載の血小板と水性媒体とを含む組成物）は混合物で処理され得る。いくつかの実施形態において、混合物は、塩基を含む凍結乾燥剤と、装填剤と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒（例えば、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はこれらの組合せからなる群より選択される有機溶媒）とを含んで、血小板を含む第２の組成物を形成することができる。いくつかの実施形態において、装填剤は糖であり得る。いくつかの実施形態において、糖は単糖であり得る。いくつかの実施形態において、糖類は、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース（例えば、デキストロース）、マンノース、又はキシロースであり得る。いくつかの実施形態において、装填剤はポリスクロースであり得る。

【0126】

いくつかの実施形態において、第１の組成物又は第２の組成物は乾燥され得る。いくつかの実施形態において、第１の組成物又は第２の組成物は、凍結保護剤で乾燥され得る。いくつかの実施形態において、凍結保護剤は、第３の組成物を形成するために、糖と、任意選択で塩基と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒（例えば、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はこれらの組合せからなる群より選択される有機溶媒）とを含み得る。いくつかの実施形態において、凍結保護剤はポリスクロースであり得る。

【0127】

いくつかの実施形態において、第１の組成物又は第２の組成物はフリーズドライされ得る。いくつかの実施形態において、第１の組成物又は第２の組成物は、凍結保護剤を用いてフリーズドライされ得る。いくつかの実施形態において、凍結保護剤は、第４の組成物を形成するために、糖と、任意選択で塩基と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒（例えば、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、又はこれらの組合せからなる群より選択される有機溶媒）とを含み得る。いくつかの実施形態において、フリーズドライは、約－４０℃～約５℃の温度で行われ得る。いくつかの実施形態において、フリーズドライは、勾配（例えば、約－４０℃～約５℃）で行われ得る。いくつかの実施形態において、（例えば、約２０℃～約４０℃で）二次乾燥ステップが行われ得る。

【0128】

また、本明細書では、本明細書に記載のいずれかの方法によって生産された血液製剤（例えば、血小板、凍結保存された血小板、フリーズドライされた血小板（例えば、トロンボソーム））も提供される。

【0129】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる本明細書に記載の組成物の定量において、血小板を含む組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血小板を含む組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して、少なくとも１０％（例えば少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％）低減される。

【0130】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる本明細書に記載の組成物よるの定量において、血小板を含む組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血小板を含む組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％）低減される。

【0131】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージは、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる本明細書に記載の組成物の定量において、血小板を含む組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血小板を含む組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％）低減される。

【0132】

いくつかの実施形態において、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージは、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる本明細書に記載の組成物の定量において、血小板を含む組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血小板を含む組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％）低減される。

【0133】

本明細書で提供される組成物を作製するためのプロセスの中で、凍結乾燥剤の任意選択の追加は、乾燥の前の最後のステップであり得る。ただし、いくつかの実施形態において、凍結乾燥剤は、組成物の他の成分（例えば、塩、緩衝液、任意選択で凍結保護剤、又は他の成分）と同時に、又はその前に加えられ得る。いくつかの実施形態において、凍結乾燥剤を調製剤に添加し、十分に混合して乾燥溶液を形成し、乾燥容器（例えば、ガラス又はプラスチック製の血清バイアル、凍結乾燥バッグ）に分注し、ＴＦＦ処理された組成物の乾燥を可能にする条件に供して乾燥組成物を形成する。

【0134】

様々な実施形態において、凍結乾燥バッグは、処理中にガスがバッグの少なくとも一部又は全ての部分を通過できるように構成されたガス透過性バッグである。ガス透過性バッグは、バッグの内部のガスを周囲環境に存在する大気中のガスと交換するのを可能にし得る。ガス透過性バッグは、酸素、窒素、水、空気、水素、二酸化炭素などのガスに透過性であり、本明細書で提供される組成物におけるガス交換を可能にする。いくつかの実施形態において、ガス透過性バッグは、その壁を介し二酸化炭素を透過させることにより、バッグの内部に存在する二酸化炭素の一部の除去を可能にする。いくつかの実施形態において、バッグからの二酸化炭素の放出は、バッグ内に含まれる組成物の所望ｐＨレベルを維持するのに有利であり得る。

【0135】

いくつかの実施形態において、本明細書におけるプロセスの容器は、閉鎖又は密封されたガス透過性容器である。いくつかの実施形態において、容器は、閉鎖又は密封された容器であり、その一部はガス透過性である。いくつかの実施形態において、容器内に収容される製剤の体積に対する閉鎖又は密封された容器（例えば、バッグ）のガス透過性部分の表面積（以下、「ＳＡ／Ｖ比」と称される）は、本明細書で提供される組成物のｐＨ維持を改善するように調整され得る。例えば、いくつかの実施形態において、容器のＳＡ／Ｖ比は、少なくとも約２．０ｃｍ^２／ｍＬ（例えば、少なくとも約２．１ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．２ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．３ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．４ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．５ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．６ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．７ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．８ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約２．９ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．０ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．１ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．２ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．３ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．４ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．５ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．６ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．７ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．８ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約３．９ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．０ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．１ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．２ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．３ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．４ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．５ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．６ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．７ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．８ｃｍ^２／ｍＬ、少なくとも約４．９ｃｍ^２／ｍＬ、又は少なくとも約５．０ｃｍ^２／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態において、容器のＳＡ／Ｖ比は、最大約１０．０ｃｍ^２／ｍＬ（例えば、最大約９．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約９．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約８．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約７．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約６．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．１ｃｍ^２／ｍＬ、最大約５．０ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．９ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．８ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．７ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．６ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．５ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．４ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．３ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．２ｃｍ^２／ｍＬ、最大約４．１ｃｍ^２／ｍＬ、又は最大約４．０ｃｍ^２／ｍＬ）であり得る。いくつかの実施形態において、容器のＳＡ／Ｖ比は、約２．０～約１０．０ｃｍ^２／ｍＬの範囲（例えば、約２．１ｃｍ^２／ｍＬ～約９．９ｃｍ^２／ｍＬ、約２．２ｃｍ^２／ｍＬ～約９．８ｃｍ^２／ｍＬ、約２．３ｃｍ^２／ｍＬ～約９．７ｃｍ^２／ｍＬ、約２．４ｃｍ^２／ｍＬ～約９．６ｃｍ^２／ｍＬ、約２．５ｃｍ^２／ｍＬ～約９．５ｃｍ^２／ｍＬ、約２．６ｃｍ^２／ｍＬ～約９．４ｃｍ^２／ｍＬ、約２．７ｃｍ^２／ｍＬ～約９．３ｃｍ^２／ｍＬ、約２．８ｃｍ^２／ｍＬ～約９．２ｃｍ^２／ｍＬ、約２．９ｃｍ^２／ｍＬ～約９．１ｃｍ^２／ｍＬ、約３．０ｃｍ^２／ｍＬ～約９．０ｃｍ^２／ｍＬ、約３．１ｃｍ^２／ｍＬ～約８．９ｃｍ^２／ｍＬ、約３．２ｃｍ^２／ｍＬ～約８．８ｃｍ^２／ｍＬ、約３．３ｃｍ^２／ｍＬ～約８．７ｃｍ^２／ｍＬ、約３．４ｃｍ^２／ｍＬ～約８．６ｃｍ^２／ｍＬ、約３．５ｃｍ^２／ｍＬ～約８．５ｃｍ^２／ｍＬ、約３．６ｃｍ^２／ｍＬ～約８．４ｃｍ^２／ｍＬ、約３．７ｃｍ^２／ｍＬ～約８．３ｃｍ^２／ｍＬ、約３．８ｃｍ^２／ｍＬ～約８．２ｃｍ^２／ｍＬ、約３．９ｃｍ^２／ｍＬ～約８．１ｃｍ^２／ｍＬ、約４．０ｃｍ^２／ｍＬ～約８．０ｃｍ^２／ｍＬ、約４．１ｃｍ^２／ｍＬ～約７．９ｃｍ^２／ｍＬ、約４．２ｃｍ^２／ｍＬ～約７．８ｃｍ^２／ｍＬ、約４．３ｃｍ^２／ｍＬ～約７．７ｃｍ^２／ｍＬ、約４．４ｃｍ^２／ｍＬ～約７．６ｃｍ^２／ｍＬ、約４．５ｃｍ^２／ｍＬ～約７．５ｃｍ^２／ｍＬ、約４．６ｃｍ^２／ｍＬ～約７．４ｃｍ^２／ｍＬ、約４．７ｃｍ^２／ｍＬ～約７．３ｃｍ^２／ｍＬ、約４．８ｃｍ^２／ｍＬ～約７．２ｃｍ^２／ｍＬ、約４．９ｃｍ^２／ｍＬ～約７．１ｃｍ^２／ｍＬ、約５．０ｃｍ^２／ｍＬ～約６．９ｃｍ^２／ｍＬ、約５．１ｃｍ^２／ｍＬ～約６．８ｃｍ^２／ｍＬ、約５．２ｃｍ^２／ｍＬ～約６．７ｃｍ^２／ｍＬ、約５．３ｃｍ^２／ｍＬ～約６．６ｃｍ^２／ｍＬ、約５．４ｃｍ^２／ｍＬ～約６．５ｃｍ^２／ｍＬ、約５．５ｃｍ^２／ｍＬ～約６．４ｃｍ^２／ｍＬ、約５．６ｃｍ^２／ｍＬ～約６．３ｃｍ^２／ｍＬ、約５．７ｃｍ^２／ｍＬ～約６．２ｃｍ^２／ｍＬ、又は約５．８ｃｍ^２／ｍＬ～約６．１ｃｍ^２／ｍＬ）であり得る。

【0136】

ガス透過性の閉鎖された容器（例えば、バッグ）又はその一部は、１つ以上の様々なガス透過性の材料から作製され得る。いくつかの実施形態において、ガス透過性バッグは、フルオロポリマー（例えば、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）及びパーフルオロアルコキシ（ＰＦＡ）ポリマー）、ポリオレフィン（例えば、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ））、フッ素化エチレンプロピレン（ＦＥＰ）、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、シリコーン、及びこれらの任意の組合せを含む１つ以上のポリマーで作製され得る。

【0137】

いくつかの実施形態において、乾燥された血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）は、熱処理に供することができる。加熱は、約２５℃を超える温度（例えば、約４０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、又はそれ以上）で実施され得る。いくつかの実施形態において、加熱は約７０℃～約８５℃（例えば、約７５℃～約８５℃、又は約７５℃若しくは８０℃）で行われる。加熱の温度は、加熱を実施する時間の長さと組み合わせて選択され得る。任意の適切な時間を使用することができるが、典型的には、凍結乾燥された血小板は、１時間以上３６時間以下加熱される。したがって、諸実施形態において、加熱は、少なくとも２時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、又は少なくとも３０時間実施される。例えば、凍結乾燥された血小板は、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、２９時間、又は３０時間加熱され得る。非限定的な例示的な組合せとしては、乾燥した血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を、３０℃より高い温度で少なくとも３０分間加熱すること；乾燥した血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を、５０℃より高い温度で少なくとも１０時間加熱すること；乾燥した血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を７５℃より高い温度で少なくとも１８時間加熱すること；及び乾燥した血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を８０℃で２４時間加熱することが挙げられる。いくつかの実施形態において、加熱は、密封された容器（例えば、蓋付きバイアル）内で実施され得る。いくつかの実施形態において、密封された容器は、加熱の前に真空に供する。熱処理ステップは、特にアルブミン又はポリスクロースなどの凍結保護剤の存在下では、フリーズドライされた血小板の安定性及び貯蔵寿命を改善することが分かっている。実際に、血清アルブミン又はポリスクロースと凍結乾燥後の熱処理ステップとの特定の組合せにより、熱処理ステップを伴わない凍結保護剤よりも有利な結果が得られている。凍結保護剤（例えば、スクロース）は、任意の適切な量（例えば、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の質量又は体積に対して約３％～約１０％）で存在することができる。

【0138】

いくつかの場合には、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物は、約室温で約１０分にわたって水（例えば、注射用滅菌水）で再水和させることができる。概して、再水和体積は、乾燥前にトロンボソームの各バイアルの充填に使用した量にほぼ等しい。

【0139】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示されているように調製された血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）の保存安定性は、調製前の血小板の保存安定性に少なくともほぼ等しい。

【0140】

いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板又は血小板誘導体を投与する前に、（例えば、調製剤、例えば、本明細書に記載の調製剤を用いて）血小板又は血小板誘導体を凍結保存することを含む。

【0141】

いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を投与する前に、（例えば、本明細書に記載の調製剤を用いて）血小板又は血小板誘導体を含む組成物を乾燥することを含む。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、乾燥ステップの後に組成物を加熱することを含み得る。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、フリーズドライステップ又は加熱ステップの後に、組成物を再水和することを含み得る。

【0142】

いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を投与する前に、血小板又は血小板誘導体を含む組成物を（例えば、本明細書に記載の調製剤を用いて）フリーズドライすることを含む。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、フリーズドライステップの後に組成物を加熱することを含み得る。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、フリーズドライステップ又は加熱ステップの後に、組成物を再水和することを含み得る。

【0143】

いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板、血小板誘導体、又はトロンボソームを投与する前に、（例えば、調製剤、例えば、本明細書に記載の調製剤を用いて）血小板、血小板誘導体、又はトロンボソームを低温保存することを含む。

【0144】

保存条件としては、例えば、標準的な室温保存（例えば、約２０～約３０℃の範囲の温度で保存）又は低温保存（例えば、約１～約１０℃の範囲の温度で保存）が挙げられる。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を投与する前に、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物を、（例えば、本明細書に記載の調製剤を用いて）凍結保存すること、フリーズドライすること、解凍すること、再水和すること、及びこれらの組合せを含む。例えば、いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を投与する前に、（例えば、トロンボソームを形成するために、）血小板又は血小板誘導体を含む組成物を、（例えば、本明細書に記載の調製剤を用いて）乾燥することを含む。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、乾燥ステップから得られた組成物を再水和することを含み得る。

【0145】

いくつかの実施形態において、本明細書では、血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む組成物を調製するための方法が提供される。この方法は、血小板を含む出発材料を調製剤（例えば、実施例１に示される緩衝液Ａ）でほぼ等重量（±１０％）に希釈することと、血小板を約２２５０×１０^３細胞／μＬ（±２５０×１０^３）に濃縮することと、次いで２～４ダイアボリューム（ＤＶ）（例えば、約２ダイアボリューム）の調製剤で洗浄してＴＦＦ処理組成物を形成することとを含み得る。残留血漿パーセンテージは、約１５％未満の相対血漿（血漿タンパク質含量による定量）であり得る。洗浄後、ＴＦＦ処理した組成物中の細胞の濃度が約２０００×１０^３細胞／μＬ（±３００×１０^３）でない場合、細胞は、この範囲内に入るように調製剤で希釈するか、又は濃縮することができる。当該方法はさらに、ＴＦＦ処理された組成物を凍結乾燥し、次に血小板又は血小板誘導体（例えば、トロンボソーム）を含む凍結乾燥された組成物を約８０℃で約２４時間処理することを含み得る。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、例えば出発材料を希釈する前に、病原体低減ステップを含み得る。

【0146】

また、本明細書では、本明細書に記載のいずれかの方法によって生成された組成物も提供される。

【0147】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される任意の組成物は、本明細書に記載の方法によって作製することができる。

【0148】

本明細書で開示されている特定の実施形態は、「～からなる」又は「～から本質的になる」という表現を用いて、請求項でさらに限定されることがある。

【0149】

例示的な実施形態
実施形態１は、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物であって、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％以下のタンパク質濃度を有する、組成物である。

【0150】

実施形態２は、当該水性媒体のタンパク質濃度が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３０％以下である、実施形態１に記載の組成物である。

【0151】

実施形態３は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度の３０％未満であるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度を有する、実施形態１又は２に記載の組成物である。

【0152】

実施形態４は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度の３０％未満であるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度を有する、実施形態１～３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0153】

実施形態５は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト好中球抗原（ＨＮＡ）抗体濃度の３０％未満であるＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１～４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0154】

実施形態６は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１０％以下である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0155】

実施形態７は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１０％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～６のいずれか１つに記載の組成物である。

【0156】

実施形態８は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１０％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0157】

実施形態９は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１０％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１～８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0158】

実施形態１０は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５％以下である、実施形態１～９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0159】

実施形態１１は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の５％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0160】

実施形態１２は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の５％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0161】

実施形態１３は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の５％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の組成物である。

【0162】

実施形態１４は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３％以下である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0163】

実施形態１５は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0164】

実施形態１６は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0165】

実施形態１７は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の組成物である。

【0166】

実施形態１８は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１％以下である、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0167】

実施形態１９は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0168】

実施形態２０は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0169】

実施形態２１は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0170】

実施形態２２は、タンパク質濃度が、０．５ｃｍの経路長を用いて、２８０ナノメートル（ｎｍ）における吸光度によって定量される、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0171】

実施形態２３は、２８０ｎｍにおける吸光度が１．７ＡＵ以下である、実施形態２２に記載の組成物である。

【0172】

実施形態２４は、２８０ｎｍにおける吸光度が１．６６ＡＵ以下である、実施形態２２に記載の組成物である。

【0173】

実施形態２５は、２８０ｎｍにおける吸光度が１．６ＡＵ以下である、実施形態２２に記載の組成物である。

【0174】

実施形態２６は、血小板数が少なくとも２００×１０^３血小板／μＬである、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0175】

実施形態２７は、血小板数が少なくとも２２５０×１０^３血小板／μＬである、実施形態２６に記載の組成物である。

【0176】

実施形態２８は、当該組成物が０．２×１０^６赤血球／μＬ未満の赤血球数を有する、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0177】

実施形態２９は、当該組成物が赤血球をさらに含む、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0178】

実施形態３０は、赤血球数が０．２×１０^６赤血球／μＬ未満である、実施形態２９に記載の組成物である。

【0179】

実施形態３１は、当該組成物が、規制機関が承認した試験に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陰性である、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0180】

実施形態３２は、当該組成物が、規制機関が承認した試験に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陰性である、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0181】

実施形態３３は、当該組成物が、規制機関が承認した試験に基づいてＨＮＡ抗体に対し陰性である、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の組成物である。

【0182】

実施形態３４は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでそれぞれコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0183】

実施形態３５は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでそれぞれコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0184】

実施形態３６は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでそれぞれコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0185】

実施形態３７は、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0186】

実施形態３８は、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0187】

実施形態３９は、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0188】

実施形態４０は、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0189】

実施形態４１は、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0190】

実施形態４２は、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0191】

実施形態４３は、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0192】

実施形態４４は、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0193】

実施形態４５は、ＨＮＡに対し陽性のビーズのパーセンテージが、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0194】

実施形態４６は、当該水性媒体が、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とをさらに含む、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0195】

実施形態４７は、当該緩衝剤がＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）である、実施形態４６に記載の組成物である。

【0196】

実施形態４８は、当該塩基が重炭酸ナトリウムである、実施形態４６～４７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0197】

実施形態４９は、当該装填剤が、単糖、多糖、又はこれらの組合せである、実施形態４６～４８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0198】

実施形態５０は、当該単糖が、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、及びキシロースからなる群より選択される、実施形態４９に記載の組成物である。

【0199】

実施形態５１は、当該単糖がトレハロースである、実施形態４９に記載の組成物である。

【0200】

実施形態５２は、当該多糖がポリスクロースである、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0201】

実施形態５３は、当該塩が塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せである、実施形態４６～５２のいずれか１つに記載の組成物である。

【0202】

実施形態５４は、当該有機溶媒が、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態４６～５３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0203】

実施形態５５は、当該組成物が、血小板を含む出発材料のタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）、血小板を含む出発材料の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製される、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0204】

実施形態５６は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも５０％低減される、実施形態５５に記載の組成物である。

【0205】

実施形態５７は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも７５％低減される、実施形態５５に記載の組成物である。

【0206】

実施形態５８は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９０％低減される、実施形態５５に記載の組成物である。

【0207】

実施形態５９は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９５％低減される、実施形態５５に記載の組成物である。

【0208】

実施形態６０は、当該出発材料が、
ａ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるか、
ｂ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるか、
ｃ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陽性であるか、又は
ｄ）ａ）、ｂ）、若しくはｃ）のうちの１つ以上である、
実施形態５５～５９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0209】

実施形態６１は、当該出発材料が約６０～約８０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する、実施形態５５～６０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0210】

実施形態６２は、当該出発材料がドナー血液製剤を含む、実施形態５５～６１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0211】

実施形態６３は、当該ドナー血液製剤がプールされたドナー血液製剤である、実施形態６２の組成物である。

【0212】

実施形態６４は、当該出発材料がドナーアフェレーシス材料を含む、実施形態６２～６３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0213】

実施形態６５は、ＴＦＦが濃縮を含む、実施形態５５～６４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0214】

実施形態６６は、ＴＦＦがダイアフィルタリングを含む、実施形態５５～６５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0215】

実施形態６７は、ダイアフィルタリングが少なくとも２ダイアボリュームでのダイアフィルタリングを含む、実施形態６６に記載の組成物である。

【0216】

実施形態６８は、ＴＦＦが緩衝液交換を含む、実施形態５５～６７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0217】

実施形態６９は、ＴＦＦが、孔径約０．２μｍ～約１μｍの膜を用いて行われる、実施形態５５～６８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0218】

実施形態７０は、ＴＦＦが、約０．２μｍ～約０．４５μｍの孔径を有する膜を用いて行われる、実施形態５５～６８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0219】

実施形態７１は、ＴＦＦが約２０℃～約３７℃の温度で実施される、実施形態５５～７０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0220】

実施形態７２は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５０％以下になるまで行われる、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0221】

実施形態７３は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３０％以下になるまで行われる、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0222】

実施形態７４は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１０％以下になるまで行われる、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0223】

実施形態７５は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５％以下になるまで行われる、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0224】

実施形態７６は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３％以下になるまで行われる、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0225】

実施形態７７は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１％以下になるまで行われる、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0226】

実施形態７８は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．７０ＡＵ以下になるまで行われる、実施形態５５～７７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0227】

実施形態７９は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６６ＡＵ以下になるまで行われる、実施形態５５～７７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0228】

実施形態８０は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６０ＡＵ以下になるまで行われる、実施形態５５～７７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0229】

実施形態８１は、ＴＦＦが、血小板濃度が少なくとも約２０００×１０^３血小板／μＬになるまで行われる、実施形態５５～８０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0230】

実施形態８２は、ＴＦＦが、血小板濃度が少なくとも約２２５０×１０^３血小板／μＬになるまで行われる、実施形態５５～８０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0231】

実施形態８３は、ＴＦＦが、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む調製剤への緩衝液交換を含む、実施形態５５～８２のいずれか１つに記載の組成物である。

【0232】

実施形態８４は、当該緩衝剤がＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）である、実施形態８３に記載の組成物である。

【0233】

実施形態８５は、当該塩基が重炭酸ナトリウムである、実施形態８３～８４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0234】

実施形態８６は、当該装填剤が、単糖、多糖、又はこれらの組合せである、実施形態８３～８５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0235】

実施形態８７は、当該単糖が、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、及びキシロースからなる群より選択される、実施形態８６に記載の組成物である。

【0236】

実施形態８８は、当該単糖がトレハロースである、実施形態８６に記載の組成物である。

【0237】

実施形態８９は、当該多糖がポリスクロースである、実施形態８６～８８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0238】

実施形態９０は、当該塩が塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せである、実施形態８３～８９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0239】

実施形態９１は、当該有機溶媒が、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態８３～９０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0240】

実施形態９２は、遠心分離が１４００×ｇ～約１５５０×ｇにおける遠心分離を含む、実施形態５５～９１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0241】

実施形態９３は、遠心分離が１４５０×ｇ～約１５００×ｇにおける遠心分離を含む、実施形態５５～９１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0242】

実施形態９４は、当該プロセスが、血小板を含む組成物の遠心分離を含まない、実施形態５５～９１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0243】

実施形態９５は、当該組成物が（散乱強度による）５．０％未満の微粒子を含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0244】

実施形態９６は、当該組成物が（散乱強度による）４．５％未満の微粒子を含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0245】

実施形態９７は、当該組成物が（散乱強度による）４．０％未満の微粒子を含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0246】

実施形態９８は、当該組成物が（散乱強度による）３．５％未満の微粒子を含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0247】

実施形態９９は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも５５％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、実施形態１～９８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0248】

実施形態１００は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも６０％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、実施形態１～９８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0249】

実施形態１０１は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも６５％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、実施形態１～９８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0250】

実施形態１０２は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも６５％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、実施形態１～１０１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0251】

実施形態１０３は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも８０％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、実施形態１～１０１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0252】

実施形態１０４は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも９０％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、実施形態１～１０１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0253】

実施形態１０５は、前記血小板又は血小板誘導体が、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１０％を保持する、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0254】

実施形態１０６は、前記血小板又は血小板誘導体が、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１５％を保持する、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0255】

実施形態１０７は、前記血小板又は血小板誘導体が、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約２０％を保持する、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0256】

実施形態１０８は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも２５％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0257】

実施形態１０９は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも５０％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0258】

実施形態１１０は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも７０％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0259】

実施形態１１１は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも８％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0260】

実施形態１１２は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも１０％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0261】

実施形態１１３は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも１５％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0262】

実施形態１１４は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも２０％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１～１１０のいずれか１つに記載の組成物である。

【0263】

実施形態１１５は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも１０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0264】

実施形態１１６は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも５０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0265】

実施形態１１７は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも８０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0266】

実施形態１１８は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも９０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0267】

実施形態１１９は、当該血小板又は血小板誘導体が、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有する、実施形態１～１１８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0268】

実施形態１２０は、当該水性媒体が２．０ｍｍｏｌ／Ｌ未満の乳酸濃度を有する、実施形態１～１１９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0269】

実施形態１２１は、当該水性媒体が１．５ｍｍｏｌ／Ｌ未満の乳酸濃度を有する、実施形態１～１１９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0270】

実施形態１２２は、当該水性媒体が約０．４～約１．３ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸濃度を有する、実施形態１～１２１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0271】

実施形態１２３は、当該水性媒体が約０．５～約１．０ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸濃度を有する、実施形態１～１２１のいずれか１つに記載の組成物である。

【0272】

実施形態１２４は、当該血小板誘導体がトロンボソームを含む、実施形態１～１２３のいずれか１つに記載の組成物である。

【0273】

実施形態１２５は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約５０％である、実施形態１又は２２～１２４のいずれか１つに記載の組成物である。

【0274】

実施形態１２６は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約３０％である、実施形態１～５又は２２～１２５のいずれか１つに記載の組成物である。

【0275】

実施形態１２７は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約１５％である、実施形態１～５又は２２～１２６のいずれか１つに記載の組成物である。

【0276】

実施形態１２８は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約８％～約１０％である、実施形態１～９又は２２～１２７のいずれか１つに記載の組成物である。

【0277】

実施形態１２９は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約７％～約１０％である、実施形態１～９又は２２～１２８のいずれか１つに記載の組成物である。

【0278】

実施形態１３０は、当該血小板又は血小板誘導体が、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに少なくとも２５ｎＭのトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成する、実施形態１～１２９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0279】

実施形態１３１は、当該血小板又は血小板誘導体が、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに少なくとも５０ｎＭのトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成する、実施形態１～１２９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0280】

実施形態１３２は、当該血小板又は血小板誘導体が、１０^６粒子当たり少なくとも１．５トロンビン生成力価単位（ＴＧＰＵ）の力価を有する、実施形態１～１２９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0281】

実施形態１３３は、当該血小板又は血小板誘導体が、少なくとも約７０×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ）アッセイで１４分未満の閉塞時間をもたらす、実施形態１～１２９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0282】

実施形態１３４は、前記血小板又は血小板誘導体が、約７０×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ）アッセイで１２分未満の閉塞時間をもたらす、実施形態１～１２９のいずれか１つに記載の組成物である。

【0283】

実施形態１３５は、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物を調製するためのプロセスであって、
血小板を含む出発材料、血小板を含む希釈された出発材料、濃縮された血小板組成物、又はこれらの組合せのタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）により、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物を調製することを含み、
前記水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５０％以下のタンパク質濃度を有する、プロセスである。

【0284】

実施形態１３６は、当該出発材料が、
ａ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性であるか、
ｂ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性であるか、
ｃ）規制機関が承認した検査に基づいてＨＮＡ抗体に対し陽性であるか、又は
ｄ）ａ）、ｂ）、及びｃ）のうちの１つ以上である、
実施形態１２５に記載のプロセスである。

【0285】

実施形態１３７は、当該出発材料が約６０～約８０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を有する、実施形態１３５～１３６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0286】

実施形態１３８は、当該出発材料がドナー血液製剤を含む、実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0287】

実施形態１３９は、当該ドナー血液製剤がプールされたドナー血液製剤である、実施形態１３８のプロセスである。

【0288】

実施形態１４０は、当該出発材料がドナーアフェレーシス材料を含む、実施形態１３５～１３９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0289】

実施形態１４１は、ＴＦＦが濃縮を含む、実施形態１３５～１４０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0290】

実施形態１４２は、ＴＦＦがダイアフィルタリングを含む、実施形態１３５～１４１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0291】

実施形態１４３は、ダイアフィルタリングが少なくとも２ダイアボリュームでのダイアフィルタリングを含む、実施形態１４２に記載のプロセスである。

【0292】

実施形態１４４は、ＴＦＦが緩衝液交換を含む、実施形態１３５～１４３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0293】

実施形態１４５は、ＴＦＦが、孔径約０．２μｍ～約１μｍの膜を用いて行われる、実施形態１３５～１４４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0294】

実施形態１４６は、ＴＦＦが、孔径約０．２μｍ～約０．４５μｍの膜を用いて行われる、実施形態１３５～１４５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0295】

実施形態１４７は、ＴＦＦが約２０℃～約３７℃の温度で実施される、実施形態１３５～１４６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0296】

実施形態１４８は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５０％以下になるまで行われる、実施形態１３５～１４７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0297】

実施形態１４９は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３０％以下になるまで行われる、実施形態１３５～１４８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0298】

実施形態１５０は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１０％以下になるまで行われる、実施形態１３５～１４９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0299】

実施形態１５１は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の５％以下になるまで行われる、実施形態１３５～１５０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0300】

実施形態１５２は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の３％以下になるまで行われる、実施形態１３５～１５１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0301】

実施形態１５３は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が出発材料の２８０ｎｍにおける吸光度の１％以下になるまで行われる、実施形態１３５～１５２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0302】

実施形態１５４は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．７０ＡＵ以下になるまで行われる、実施形態１３５～１５３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0303】

実施形態１５５は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６６ＡＵ以下になるまで行われる、実施形態１３５～１５４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0304】

実施形態１５６は、ＴＦＦが、０．５ｃｍの経路長を用いて、当該水性媒体の２８０ｎｍにおける吸光度が１．６０ＡＵ以下になるまで行われる、実施形態１３５～１５５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0305】

実施形態１５７は、ＴＦＦが、血小板濃度が少なくとも約２０００×１０^３血小板／μＬになるまで行われる、実施形態１３５～１５６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0306】

実施形態１５８は、ＴＦＦが、血小板濃度が少なくとも約２２５０×１０^３血小板／μＬになるまで行われる、実施形態１３５～１５６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0307】

実施形態１５９は、ＴＦＦが、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む調製剤を用いたダイアフィルタリングを含む、実施形態１３５～１５８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0308】

実施形態１６０は、ＴＦＦが、緩衝剤と、塩基と、装填剤と、任意選択で塩と、任意選択で少なくとも１つの有機溶媒とを含む調製剤への緩衝液交換を含む、実施形態１３５～１５９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0309】

実施形態１６１は、当該緩衝剤がＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）である、実施形態１４９～１６０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0310】

実施形態１６２は、当該塩基が重炭酸ナトリウムである、実施形態１４９～１６１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0311】

実施形態１６３は、当該装填剤が、単糖、多糖、又はこれらの組合せである、実施形態１４９～１６２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0312】

実施形態１６４は、当該単糖が、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース、マンノース、キシロース、及びこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態１６３に記載のプロセスである。

【0313】

実施形態１６５は、当該単糖がトレハロースである、実施形態１６３に記載のプロセスである。

【0314】

実施形態１６６は、当該多糖がポリスクロースである、実施形態１６３～１６５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0315】

実施形態１６７は、当該塩が塩化ナトリウム、塩化カリウム、又はこれらの組合せである、実施形態１５９～１６６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0316】

実施形態１６８は、当該有機溶媒が、エタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、メタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、及びこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態１５９～１６７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0317】

実施形態１６９は、当該プロセスが、血小板を含む出発材料、血小板を含む希釈された出発材料、濃縮された血小板組成物、又はこれらの組合せの遠心分離を含まない、実施形態１３５～１６８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0318】

実施形態１７０は、当該プロセスが、血小板を含む組成物の遠心分離を含まない、実施形態１３５～１６９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0319】

実施形態１７１は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも５０％低減される、実施形態１３５～１７０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0320】

実施形態１７２は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも７５％低減される、実施形態１３５～１７０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0321】

実施形態１７３は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９０％低減される、実施形態１３５～１７０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0322】

実施形態１７４は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性であるビーズのパーセンテージが、それぞれクラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる組成物の定量において、血液製剤組成物のタンジェンシャルフロー濾過、血液製剤組成物の遠心分離、又はこれらの組合せを含むプロセスによって調製されていない類似の組成物と比較して少なくとも９５％低減される、実施形態１３５～１７０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0323】

実施形態１７５は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３０％以下である、実施形態１３５～１７４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0324】

実施形態１７６は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度の３０％未満であるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１７５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0325】

実施形態１７７は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度の３０％未満であるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１７６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0326】

実施形態１７８は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のヒト好中球抗原（ＨＮＡ）抗体濃度の３０％未満であるＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0327】

実施形態１７９は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１０％以下である、実施形態１３５～１７８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0328】

実施形態１８０は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１０％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１７９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0329】

実施形態１８１は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１０％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１８０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0330】

実施形態１８２は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１０％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１８１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0331】

実施形態１８３は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の５％以下である、実施形態１３５～１８２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0332】

実施形態１８４は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の５％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１８３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0333】

実施形態１８５は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の５％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１８４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0334】

実施形態１８６は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の５％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１８５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0335】

実施形態１８７は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の３％以下である、実施形態１３５～１８６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0336】

実施形態１８８は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１８７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0337】

実施形態１８９は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１８８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0338】

実施形態１９０は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の３％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１８９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0339】

実施形態１９１は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の１％以下である、実施形態１３５～１９０のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0340】

実施形態１９２は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩ抗体濃度の１％未満であるヒトＨＬＡクラスＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１９１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0341】

実施形態１９３は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＬＡクラスＩＩ抗体濃度の１％未満であるヒトＨＬＡクラスＩＩ抗体の濃度を有する、実施形態１３５～１９２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0342】

実施形態１９４は、当該水性媒体が、ドナーアフェレーシス血漿中のＨＮＡ抗体濃度の１％未満であるヒトＨＮＡ抗体濃度を有する、実施形態１３５～１９３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0343】

実施形態１９５は、当該組成物が、規制機関が承認した試験に基づいてＨＬＡクラスＩ抗体に対し陰性である、実施形態１３５～１９４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0344】

実施形態１９６は、当該組成物が、規制機関が承認した試験に基づいてＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陰性である、実施形態１３５～１９５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0345】

実施形態１９７は、当該組成物が、規制機関が承認した試験に基づいてＨＮＡ抗体に対し陰性である、実施形態１３５～１９６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0346】

実施形態１９８は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでそれぞれコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１３５～１９７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0347】

実施形態１９９は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでそれぞれコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１３５～１９８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0348】

実施形態２００は、ＨＬＡクラスＩ抗体、ＨＬＡクラスＩＩ抗体、及びＨＮＡ抗体からなる群より選択される抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡ、クラスＩＩ ＨＬＡ、又はＨＮＡでそれぞれコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１３５～１９９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0349】

実施形態２０１は、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１３５～２００のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0350】

実施形態２０２は、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１３５～２０１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0351】

実施形態２０３は、ＨＬＡクラスＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１３５～２０２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0352】

実施形態２０４は、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１３５～２０３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0353】

実施形態２０５は、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１３５～２０４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0354】

実施形態２０６は、ＨＬＡクラスＩＩ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、クラスＩＩ ＨＬＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１３５～２０５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0355】

実施形態２０７は、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、５％未満である、実施形態１３５～２０６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0356】

実施形態２０８は、ＨＮＡ抗体に対し陽性のビーズのパーセンテージが、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、３％未満である、実施形態１３５～２０７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0357】

実施形態２０９は、ＨＮＡに対し陽性のビーズのパーセンテージが、ＨＮＡでコーティングされたビーズを用いたフローサイトメトリーによる当該組成物の定量において、１％未満である、実施形態１３５～２０８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0358】

実施形態２１０は、当該組成物が（散乱強度による）５．０％未満の微粒子を含む、実施形態１３５～２０９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0359】

実施形態２１１は、当該組成物が（散乱強度による）４．５％未満の微粒子を含む、実施形態１３５～２０９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0360】

実施形態２１２は、当該組成物が（散乱強度による）４．０％未満の微粒子を含む、実施形態１３５～２０９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0361】

実施形態２１３は、当該組成物が（散乱強度による）３．５％未満の微粒子を含む、実施形態１３５～２０９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0362】

実施形態２１４は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも５５％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２１３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0363】

実施形態２１５は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも６０％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２１３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0364】

実施形態２１６は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも６５％のＣＤ４１陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２１３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0365】

実施形態２１７は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも６５％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２１６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0366】

実施形態２１８は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも８０％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２１６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0367】

実施形態２１９は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも９０％のＣＤ４２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２１６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0368】

実施形態２２０は、前記血小板又は血小板誘導体が、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１０％を保持する、実施形態１３５～２１９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0369】

実施形態２２１は、前記血小板又は血小板誘導体が、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約１５％を保持する、実施形態１３５～２１９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0370】

実施形態２２２は、前記血小板又は血小板誘導体が、ドナーアフェレーシス血小板の乳酸デヒドロゲナーゼ活性の少なくとも約２０％を保持する、実施形態１３５～２１９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0371】

実施形態２２３は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも２５％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0372】

実施形態２２４は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも５０％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0373】

実施形態２２５は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも７５％のアネキシンＶ陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２２のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0374】

実施形態２２６は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも８％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0375】

実施形態２２７は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも１０％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0376】

実施形態２２８は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも１５％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0377】

実施形態２２９は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも２０％のＣＤ４７陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0378】

実施形態２３０は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも１０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0379】

実施形態２３１は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも５０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0380】

実施形態２３２は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも８０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0381】

実施形態２３３は、当該血小板又は血小板誘導体が少なくとも９０％のＣＤ６２陽性パーセントを有する、実施形態１３５～２２９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0382】

実施形態２３４は、当該血小板又は血小板誘導体が、細胞膜に会合したフィブリノーゲンを有する、実施形態１３５～２３３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0383】

実施形態２３５は、当該水性媒体が２．０ｍｍｏｌ／Ｌ未満の乳酸濃度を有する、実施形態１３５～２３４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0384】

実施形態２３６は、当該水性媒体が１．５ｍｍｏｌ／Ｌ未満の乳酸濃度を有する、実施形態１３５～２３４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0385】

実施形態２３７は、当該水性媒体が約０．４～約１．３ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸濃度を有する、実施形態１３５～２３６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0386】

実施形態２３８は、当該水性媒体が約０．５～約１．０ｍｍｏｌ／Ｌの乳酸濃度を有する、実施形態１３５～２３６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0387】

実施形態２３９は、当該血小板誘導体がトロンボソームを含む、実施形態１３５～２３８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0388】

実施形態２４０は、病原体低減ステップをさらに含む、実施形態１３５～２３９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0389】

実施形態２４１は、当該病原体低減ステップがＴＦＦに先行する、実施形態２４０に記載のプロセスである。

【0390】

実施形態２４２は、血小板又は血小板誘導体を含む当該組成物を凍結乾燥することをさらに含む、実施形態１３５～２４１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0391】

実施形態２４３は、血小板又は血小板誘導体を含む当該組成物を凍結保存することをさらに含む、実施形態１３５～２４１のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0392】

実施形態２４４は、血小板又は血小板誘導体を含む当該組成物を熱的に処理することをさらに含む、実施形態１３５～２４３のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0393】

実施形態２４５は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約５０％である、実施形態１３５～１４８、１５４～１７４、又は１９５～２４４のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0394】

実施形態２４６は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約３０％である、実施形態１３５～１４９、１５４～１７８、又は１９５～２４５のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0395】

実施形態２４７は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約５％～約１５％である、実施形態１３５～１４８、１５４～１７８、又は１９５～２４６のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0396】

実施形態２４８は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約８％～約１０％である、実施形態１３５～１４８、１５４～１８２、又は１９５～２４７のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0397】

実施形態２４９は、タンパク質濃度がドナーアフェレーシス血漿のタンパク質濃度の約７％～約１０％である、実施形態１３５～１４８、１５４～１８２、又は１９５～２４８のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0398】

実施形態２５０は、当該血小板又は血小板誘導体が、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに少なくとも２５ｎＭのトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成する、実施形態１３５～２４９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0399】

実施形態２５１は、当該血小板又は血小板誘導体が、約４．８×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、組織因子及びリン脂質を含む試薬の存在下にあるときに少なくとも５０ｎＭのトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）を生成する、実施形態１３５～２４９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0400】

実施形態２５２は、当該血小板又は血小板誘導体が、１０^６粒子当たり少なくとも１．５トロンビン生成力価単位（ＴＧＰＵ）の力価を有する、実施形態１３５～２４９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0401】

実施形態２５３は、当該血小板又は血小板誘導体が、少なくとも約７０×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ）アッセイで１４分未満の閉塞時間をもたらす、実施形態１３５～２４９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0402】

実施形態２５４は、当該血小板又は血小板誘導体が、少なくとも約７０×１０^３粒子／μＬの濃度のときに、総血栓形成分析システム（Ｔ－ＴＡＳ）アッセイで１２分未満の閉塞時間をもたらす、実施形態１３５～２４９のいずれか１つに記載のプロセスである。

【0403】

実施形態２５５は、実施形態１３５～２５４のいずれか１つに記載のプロセスで調製された、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む、組成物である。

【0404】

実施形態２５６は、フリーズドライされた血小板を調製するためのプロセスであって、
ａ）実施形態１３５～２５４のいずれか１つに記載のプロセスを用いて、血小板と水性媒体とを含む組成物を調製することと、
ｂ）血小板と当該水性媒体とを含む当該組成物をフリーズドライすることと
を含む、プロセスである。

【0405】

実施形態２５７は、実施形態２３５に記載のプロセスによって調製された、フリーズドライされた血小板を含む組成物である。

【0406】

実施形態２５８は、血小板又は血小板誘導体と水性媒体とを含む組成物を調製するための方法であって、
血小板を含む出発材料を希釈して、希釈された出発材料を形成することと、
当該血小板が約２２５０×１０^３細胞／μＬ（±２５０×１０^３）の濃度を有するように当該希釈された出発材料を濃縮して、濃縮された血小板組成物を形成することと、
当該濃縮された血小板組成物を少なくとも２ダイアボリューム（ＤＶ）の調製剤で洗浄して、ＴＦＦ処理された組成物を形成することと
を含む、方法である。

【0407】

実施形態２５９は、希釈することが、ほぼ同じ重量（±１０％）の調製剤で希釈することを含む、実施形態２５８に記載の方法である。

【0408】

実施形態２６０は、病原体低減ステップをさらに含む、実施形態２５８～２５９のいずれか１つに記載の方法である。

【0409】

実施形態２６１は、当該病原体低減ステップが当該出発材料を希釈する前に行われる、実施形態２６０に記載の方法である。

【0410】

実施形態２６２は、残留血漿パーセンテージが約１５％相対血漿以下（血漿タンパク質含量による定量）である、実施形態２５８～２６１のいずれか１つに記載の方法である。

【0411】

実施形態２６３は、洗浄後、ＴＦＦ処理された組成物中の細胞の濃度が約２０００×１０^３細胞／μＬ（±３００×１０^３）でない場合、調製剤を希釈するか、又はこの範囲内に入るように濃縮してもよい、実施形態２５８～２６２のいずれか１つに記載の方法である。

【0412】

実施形態２６４は、当該ＴＦＦ処理された組成物を凍結乾燥して凍結乾燥された組成物を形成することをさらに含む、実施形態２５８～２６３のいずれか１つに記載の方法である。

【0413】

実施形態２６５は、当該凍結乾燥された組成物を約８０℃で約２４時間処理することをさらに含む、実施形態２６４に記載の方法である。

【0414】

実施形態２６６は、実施形態２５８～２６５のいずれか１つに記載の方法で調製された血小板又は血小板誘導体を含む組成物である。

【0415】

実施形態２６７は、血液凝固関連の疾患又は状態の治療を必要とする対象における当該血液凝固関連の疾患又は状態を治療する方法であって、実施形態１～１３４、２５５、又は２６６のいずれかに記載の組成物の治療有効量を当該対象に投与することを含む、方法である。

【0416】

実施形態２６８は、当該血液凝固関連の疾患又は状態が、フォンウィルブランド病、血友病、血小板無力症、血小板減少症、血小板減少性紫斑病、外傷、又はこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態２６７に記載の方法である。

【0417】

実施形態２６９は、血液凝固関連の疾患又は状態の治療を必要とする対象における当該血液凝固関連の疾患又は状態を治療する方法であって、実施形態１３５～２５４のいずれかに記載のプロセスによって調製された組成物の治療有効量を当該対象に投与することを含む、方法である。

【0418】

実施形態２７０は、当該血液凝固関連の疾患又は状態が、フォンウィルブランド病、血友病、血小板無力症、血小板減少症、血小板減少性紫斑病、外傷、又はこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態２６９に記載の方法である。

【0419】

実施形態２７１は、血液凝固関連の疾患又は状態の治療を必要とする対象における当該血液凝固関連の疾患又は状態を治療する方法であって、実施形態２５８～２６６のいずれかに記載のプロセスによって調製された組成物の治療有効量を当該対象に投与することを含む、方法である。

【0420】

実施形態２７２は、当該血液凝固関連の疾患又は状態が、フォンウィルブランド病、血友病、血小板無力症、血小板減少症、血小板減少性紫斑病、外傷、又はこれらの組合せからなる群より選択される、実施形態２７１に記載の方法である。

【実施例】

【0421】

実施例１．タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）法
アフェレーシス血小板を、標準的な作業手順（以下のプロセスステップを含む：血小板希釈、血小板濃縮、血小板洗浄）に従ってタンジェンシャルフロー濾過に供した。

【0422】

血小板ドナー単位を、最初に共通の容器にプールする。血小板は、処理中の血小板の活性化を低減するために、最初に酸性化した洗浄緩衝液（例えば、対照緩衝液）で希釈する場合もあれば、希釈しない場合もある。血小板は２つの処理経路を経ることができ、すなわち、最終製品濃度に濃縮する前に所望の残留成分（例えば、ドナー血漿）に達するまで対照緩衝液で洗浄する経路、又は所望の残留成分（例えば、ドナー血漿）に達するまで対照緩衝液で洗浄する前に、血小板を最終製品濃度に濃縮する経路を経ることができる。ＴＦＦ処理された血小板は、次いでバイアルに充填し、凍結乾燥し、熱処理する。

【0423】

１つの特定のプロトコルは以下の通り。

【0424】

この実施例におけるＴＦＦプロセスの全てのステップで緩衝液Ａを使用した。このプロセスは１８～２４℃の温度で行った。

【0425】

緩衝液Ａ

【0426】

血小板をＴＦＦ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨコントローラーシステム）に装填し、これをＲｅｐｌｉｇｅｎ ＴＦＦ Ｃａｓｓｅｔｔｅ（ＸＰＭ４５Ｌ０１Ｅ）で調製した。血小板を等重量（±１０％）の緩衝液Ａで希釈し、約２２５０×１０^３個／μＬ（±２５０×１０^３）まで濃縮し、次いで約２ダイアボリューム（ＤＶ）の緩衝液Ａで洗浄した。目標血漿パーセンテージは、典型的には相対血漿１５％未満（血漿タンパク質含量による定量）とした。血漿タンパク質の除去を、既知の相関関係に基づき２８０ｎｍのＵＶ吸光度によってモニタリングした。洗浄後、細胞濃度が２０００×１０^３細胞／μＬ（±３００×１０^３）でない場合は、この範囲内に収まるように細胞を緩衝液Ａで希釈するか又は濃縮した。細胞は典型的には、凍結乾燥し、次に８０℃で２４時間熱処理し、それによってトロンボソームを形成したが、凍結乾燥の前に細胞を使用することもあった（「凍結乾燥前（ｐｒｅ－ｌｙｏ）」トロンボソームと呼ぶこともある）。典型的には、トロンボソームを室温で１０分にわたって再水和した。概して、再水和体積は、乾燥前にトロンボソームの各バイアルの充填に使用した量に等しい。

【0427】

いくつかの場合には、約５１％の相対血漿量、約８．１％の相対血漿量、約６．０％の相対血漿量、及び約１．３％の相対血漿量に相関するＵＶ読取り値で試料を採取した。約６．０％以下の試料を用いた各処理ステップにわたり、低体積のアリコートを試料採取した。

【0428】

実施例２．試験計画及びアッセイプロトコル
試験計画：
トロンボソームバッチＡを実施例１に記載のＴＦＦ法により生産し、血小板供給業者の報告において高αＨＬＡ力価であるドナーから採取したアフェレーシス血小板を使用した。

【0429】

αＨＬＡ検査のために、個々のドナー単位、ドナープール、ＴＦＦプロセスに沿った時点を収集した。血漿をＨＬＡビーズ（Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ ＦＬＯＷＰＲＡ（商標）Ｓｃｒｅｅｎ Ｔｅｓｔ）に加え、αＩｇＧ二次抗体で染色し、フローサイトメトリー（Ｎｏｖｏｃｙｔｅ ３００５構成）によってαＨＬＡ－ＩｇＧ結合を評価した。

【0430】

２種類のビーズ、すなわちＨＬＡクラスＩ抗原でコーティングされたビーズ及びＨＬＡクラスＩＩ抗原でコーティングされたビーズを評価した。ビーズゲーティングをＦＬＯＷＰＲＡ（商標）Ｓｃｒｅｅｎ Ｔｅｓｔの説明書に記載の通りに実施した。「αＨＬＡ陽性」集団は、Ｇｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ（ＧＫ）ＰＰＰ（乏血小板血漿）陰性対照及び単一ドナー新鮮採取陰性対照に基づいてゲーティングする。生産後に追加の陰性対照を収集して、これらの陽性ゲートの理想的な配置を確認する。

【0431】

Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ ＣＯＭＰｔｒｏｌコンペンセーションビーズ上のＦＩＴＣ－及びＰＥ－結合体化マウスＩｇＧを用いてコンペンセーション設定を確立した。ＨＬＡクラスＩＩビーズはＰＥ内で蛍光発光し、ＩｇＧ検出に使用される二次抗体はＦＩＴＣ結合体化されている。

【0432】

アッセイプロトコル：
１．Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ ＦＬＯＷＰＲＡ（商標）Ｓｃｒｅｅｎ Ｔｅｓｔキットの成分を解凍して４℃とする。
２．各所望採取ポイントから、０．２μｍで濾過したＰＰＰの１ｍＬアリコートを得る。
３．１．７ｍＬマイクロ遠心管に、５μＬのクラスＩ ＨＬＡビーズ及び５μＬのクラスＩＩ ＨＬＡビーズをピペッティングする。２０μＬの濾過済み試験血漿を加える。ボルテックスして混合する。
４．血漿をＨＬＡコーティングビーズと共に、室温及び暗中で３０分間、穏やかにロッキング／撹拌しながらインキュベートする。
５．１０×洗浄緩衝液を脱イオン水で希釈して、適切な体積の１×作業ストックにする。
６．ビーズを１ｍＬの洗浄緩衝液で洗浄する。ボルテックスし、９，０００ｇ×２分で遠心分離してビーズをペレット化する。上清を吸引する。
７．ステップ６を繰り返す。
８．１００×αＩｇＧ－ＦＩＴＣを洗浄緩衝液で希釈して適切な体積の１×作業ストックにする。
９．１００μＬの１×αＩｇＧ－ＦＩＴＣを、洗浄したＨＬＡビーズが入った管に加える。ボルテックスして混合する。
１０．ＨＬＡビーズをαＩｇＧ－ＦＩＴＣと共に、室温及び暗中で３０分間、穏やかにロッキングしながらインキュベートする。
１１．ステップ６及び７を繰り返して、結合していないαＩｇＧ－ＦＩＴＣを洗い流す。
１２．洗浄したＨＬＡビーズを２００μＬのＰＢＳに再懸濁する。ボルテックスして混合する。
１３．１００μＬのＨＬＡビーズ懸濁液を９６ウェルＵ底マイクロプレートの適切なウェル（単数又は複数）にピペッティングし、ＮｏｖｏＳａｍｐｌｅｒにドッキングする。
１４．ＮｏｖｏＣｙｔｅを使用して、フローサイトメトリーによりイベントを収集する。
ａ．先に定量したＦＬＯＷＰＲＡ（商標）Ｂｅａｄｓゲートにおいて、ＦＳＣ－Ｈ閾値１０，０００で１０，０００イベントをゆっくり収集する。
ｂ．二次停止条件は、実行時間２分及び総試料体積４０μＬとした。
ｃ．ウェル間のキャリーオーバーを最小限にするために、ＳＩＰを各試料間で洗浄する。試験ポイント間のキャリーオーバーを最小限にするために、各三連セット間でＰＢＳのウェルを実行する。

【0433】

結果
実施例３．ゲート配置及び陰性対照
クラスＩ及びクラスＩＩのＨＬＡビーズを識別するための初期ゲート配置は、ＰＢＳ中のＦＬＯＷＰＲＡ（商標）ビーズを用いて決定する。（図１Ａ及び図１Ｂ）

【0434】

バックグラウンド／非特異的結合は、ＧＫ ＰＰＰ及び新鮮なドナーＰＰＰを用いて三連で確立する。（例示的なデータを図２Ａ、図２Ｂ、図３Ａ、及び図３Ｂに示す）なお、ＧＫのＰＰＰが新鮮なドナー血漿よりもＦＩＴＣ－Ｈで高くシフトしていることに留意されたい。これは、ドナーの変動性及びＧＫ血漿の凍結／解凍効果に起因する可能性がある。追加の試料採取が必要となる。ＧＫ ＰＰＰの１％未満がＦＩＴＣ陽性になるように陽性ゲートを配置する。

【0435】

実施例４．単一ドナーの結果
各ＨＬＡクラスの代表的なＦＩＴＣ－Ｈヒストグラムを試料ごとに示す。陽性率＞１％が陽性である。蛍光比は、ＧＫ ＰＰＰ陰性対照（クラスＩ及びクラスＩＩビーズのＦＩＴＣ－Ｈ強度）に対し報告される。蛍光比＞１．０が陽性である。追加の陰性対照を収集するに伴って、これらの陽性ゲート及び蛍光比が更新される。

【0436】

ＨＬＡクラスＩ又はクラスＩＩ抗体の集団は、当該ビーズタイプにおいて陽性率及び蛍光比の両方が１以下の場合、陰性である。

【0437】

ドナー１：ＨＬＡクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩの平均陽性率は０．２％、蛍光比０．３であり、クラスＩＩの平均陽性率は１６．５％、蛍光比１．６である。（例示的なデータを図４Ａ及び図４Ｂに示す）

【0438】

ドナー２：ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩの平均陽性率は１．３％、蛍光比１．４であり、クラスＩＩの平均陽性率は２０．３％、蛍光比１．９である。（例示的なデータを図５Ａ及び図５Ｂに示す）

【0439】

ドナー３：ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は８５．２％、蛍光比は１４．４である。クラスＩＩの平均陽性率は１２．０％、蛍光比は０．８である。（例示的なデータを図６Ａ及び図６Ｂに示す）

【0440】

ドナー４：ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は８３．５％、蛍光比は１４．５である。クラスＩＩの平均陽性率は１２．６％、蛍光比は０．８である。（例示的なデータを図７Ａ及び図７Ｂに示す）

【0441】

ドナー５：ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は４．９％、蛍光比は１．２である。クラスＩＩの平均陽性率は１．３％、蛍光比は０．８である。（例示的なデータを図８Ａ及び図８Ｂに示す）

【0442】

ドナー６：ＨＬＡクラスＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は２．７％、蛍光比は０．９である。クラスＩＩの平均陽性率は０．３％、蛍光比は０．７である。（例示的なデータを図９Ａ及び図９Ｂに示す）

【0443】

ドナー７：ＨＬＡクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩの平均陽性率は０．７％で、蛍光比は０．５である。クラスＩＩの平均陽性率は９．０％、蛍光比は１．３である。（例示的なデータを図１０Ａ及び図１０Ｂに示す）

【0444】

ドナー１～７の結果を表１にも示す。

【0445】

（表１）

【0446】

ＧＫ ＰＮＰプールにＨＬＡ陽性ドナーが存在する可能性があるため、表２はＮ＝１のＨＬＡ陰性ドナーに対する結果を示している。

【0447】

（表２）

【0448】

実施例５．濾過の結果
プール：ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は６１．１％、蛍光比は４．６である。クラスＩＩの平均陽性率は９．０％、蛍光比は１．１である。（例示的なデータを図１１Ａ及び図１１Ｂに示す）

【0449】

初期希釈（５１％）：ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は４８．２％、蛍光比は４．２である。クラスＩＩの平均陽性率は５．９％、蛍光比は０．９である。（例示的なデータを図１２Ａ及び図１２Ｂに示す）

【0450】

「２０％」血漿（８．１％）：ＨＬＡクラスＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は２．４％、蛍光比は１．０である。クラスＩＩの平均陽性率は０．２％、蛍光比は０．５である。（例示的なデータを図１３Ａ及び図１３Ｂに示す）

【0451】

「＜１０％」血漿（６．０％）：ボーダーラインＨＬＡクラスＩ陽性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は１．１％、蛍光比は１．０である。クラスＩＩの平均陽性率は０．２％、蛍光比は０．５である。（例示的なデータを図１４Ａ及び図１４Ｂに示す）

【0452】

「＜３％」血漿（１．３％）：ＨＬＡ陰性。三連データからのクラスＩのデータの平均陽性率は０．４％、蛍光比は０．２である。クラスＩＩの平均陽性率は０．１％、蛍光比は０．４である。（例示的なデータを図１５Ａ及び図１５Ｂに示す）

【0453】

濾過の結果を表３Ａ及び表３Ｂにも示す。

【0454】

（表３Ａ）

【0455】

（表３Ｂ）ＰＢＳ中のＨＬＡビーズを用いて測定したバックグラウンド蛍光を試料蛍光から差し引いてから、平均蛍光強度の低減パーセント（抗体結合低減の尺度）を計算した。

１００％以上の値は、示されたビーズに対する検出可能ＨＬＡ抗体の結合が完全に低減したことを示す。

【0456】

ＧＫ ＰＮＰプールにＨＬＡ陽性ドナーが存在する可能性があるため、表４はＮ＝１のＨＬＡ陰性ドナーに対する結果を示している。

【0457】

（表４）

【0458】

実施例６．表面マーカー及びトロンビン生成。
実施例１に記載のＴＦＦ法によってトロンボソームバッチを生産し、フローサイトメトリーを用いて細胞表面マーカーの発現をアッセイした。

【0459】

フローサイトメトリーを使用して、トロンボソームをＣＤ４１、ＣＤ６２、及びホスファチジルセリン（ＰＳ）の発現について評価した。試料には染色時におよそ２７０，０００／μＬのトロンボソームが含まれており、サイトメーターで試料を分析する前におよそ１：３４に希釈した。トロンボソーム試料を再水和し、脱イオン水で１：２に希釈した。抗ＣＤ４１のストックを、４７．６μＬの抗体を５２．４μＬのＨＭＴＡに加えることによって希釈した。１０μＬの希釈されたトロンボソームを１０μＬのＨＭＴＡ及び１０μＬの希釈されたＣＤ４１抗体に加えることにより、抗ＣＤ４１で染色された試料を作製した。１２μＬの抗ＣＤ６２を２３．８μＬの抗ＣＤ４１及び６４．２μＬのＨＭＴＡと組み合わせることにより、抗ＣＤ６２マスターミックスを調製した。アイソタイプ対照ミックスも同様にして作製した。１０μＬの希釈されたトロンボソームを２０μＬの抗ＣＤ６２マスターに加えることにより、抗ＣＤ６２で染色された試料を作製した。アイソタイプマスターミックスを使用して、アイソタイプ対照試料を同様にして作製した。１１．７μＬのＡＶを８３．３μＬの抗ＣＤ４１及び８０μＬのＨＭＴＡと組み合わせることにより、アネキシンＶ（ＡＶ）マスターミックスを調製した。５０ｍＭ ＧＰＲＰを含む２０μＬの希釈されたトロンボソームを、１５ｍＭ ＣａＣｌ_２を含む２０μＬのＨＭＴＡ及び２０μＬのＡＶマスターミックスに加えることにより、ＡＶで染色された試料を作製した。カルシウムなしのＨＭＴＡを用いて陰性ゲーティング対照試料を同様にして作製して、ＡＶがＰＳに結合するのを防止した。全ての試料を室温で２０分間インキュベートした。インキュベート後、全ての試料に１ｍＬのＨＢＳを加えた。ＡＶ試験試料の希釈に使用したＨＢＳには５ｍＭのＣａＣｌ_２が含まれていた。抗ＣＤ４１結合を使用して、目的集団を識別した。ＣＤ６２発現及びＰＳ発現を、ＣＤ４１陽性集団内の抗ＣＤ６２及びＡＶの結合によって評価した。

【0460】

糖タンパク質ＩＩｂ（ＧＰＩＩｂ、抗原ＣＤ４１としても知られている）の発現を、抗ＣＤ４１抗体（４．８μＬ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、パーツ番号ＩＭ１４１６Ｕ）を用いてアッセイした。アッセイしたトロンボソームはＣＤ４１陽性を示した（表５；図１６）。

【0461】

（表５）

【0462】

ホスファチジルセリン（ＰＳ）の発現を、アネキシンＶ（ＡＶ）（１．３μＬ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５０４７５）を用いてアッセイした。ＡＶは、カルシウム依存性リン脂質結合タンパク質である。アッセイしたトロンボソームはＡＶ陽性を示した（表６；図１７）。

【0463】

（表６）

【0464】

Ｐ－セレクチン（ＣＤ６２Ｐとも呼ばれる）の発現を、抗ＣＤ６２Ｐ抗体（２．４μＬ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５０８８８）を用いてアッセイした。アッセイしたトロンボソームはＣＤ６２陽性を示した（表７、図１８）。

【0465】

（表７）

【0466】

トロンビン生成は、以下のプロトコルを用いて、組織因子及びリン脂質を含むＰＲＰ試薬の存在下、４．８×１０^３トロンボソーム／μｌで測定した。平均では、トロンボソーム試料のトロンビンピーク高さ（ＴＰＨ）は６０．３ｎＭであった。セファリンを陽性対照として使用した。（表８；図１９）

【0467】

試験したバイアルごとに、トロンボソームの再水和試料を、対照緩衝液中のＯｃｔａｐｌａｓの３０％溶液を用いて、フローサイトメトリーの粒子数に基づいて希釈して７，２００粒子／μＬにした。９６ウェルプレート内で、２０μＬのＰＲＰ試薬（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ、カタログ番号８６１９６）及び８０μＬの希釈されたトロンボソームを加えることにより、試料ウェルを生成した。２０μＬのトロンビンキャリブレーター試薬（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ、カタログ番号８６１９７）を８０μＬの希釈されたトロンボソームに加えることにより、キャリブレーターウェルを生成した。このプレートをプレートリーダーに装填し、暗中４０℃で１０分間インキュベートした。試料のインキュベート中、４０μＬのＦｌｕＣａ基質（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏカタログ番号８６１９７）を、３７℃に温めた１．６ｍＬのＦｌｕｏ－Ｂｕｆｆｅｒ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏカタログ番号８６１９７）に加え、ボルテックスして混合することにより、ＦｌｕＣａ溶液を調製した。ＦｌｕＣａ溶液を分注シリンジに吸引し、各反応ウェルに２０μＬずつ機械的に分注して、各ウェルのトロンボソーム最終濃度を４，８００粒子／μＬにし、トロンビン生成反応を開始した。トロンビン生成は、７５分にわたり各ウェルの蛍光によって測定した。

【0468】

例示的なステップバイステッププロトコルは以下の通り。
１．ＣＡＴソフトウェアをオープンし、装置をセットアップし、製造業者のガイドラインに従ってＰＲＰ試薬（組織因子及びいくらかのリン脂質を含む）、キャリブレーター、並びにｆｌｕｏ－ｂｕｆｆｅｒ及びｆｌｕｏ－ｓｕｂｓｔｒａｔｅを調製する。
２．Ｏｃｔａｐｌａｓ及びＴＧＡ希釈緩衝液を３７℃の水浴で１０分間解凍する。
３．解凍したＯｃｔａｐｌａｓをＴＧＡ希釈用緩衝液に加えて、３０％のＯｃｔａｐｌａｓを含む緩衝液を作出する。
４．３０％のＯｃｔａｐｌａｓミックスを使用して、再構成したセファリンを１：５０に希釈し、陽性対照として使用する。
５．トロンボソームを細胞培養グレードの水で１０分間再水和し、次いで３０％のＯｃｔａｐｌａｓで希釈して７，２００トロンボソーム／μＬにする。
６．マルチチャネルピペットを用いて、各試験ウェルに２０μＬのＰＲＰ試薬を加える。各較正ウェルに２０μＬのキャリブレーターを加える。
７．各試験及び較正ウェルに８０μＬの試料を加える。陰性対照ウェルには８０μＬの３０％のＯｃｔａｐｌａｓを、陽性対照のウェルには１：５０のセファリンを加える。
８．プレートをトレイに挿入し、４０℃で１０分間インキュベートする。インキュベート後、ｆｌｕｏ－ｂｕｆｆｅｒ及びｆｌｕｏ－ｓｕｂｓｔｒａｔｅの混合物（蛍光標識されたペプチドを含み、トロンビンによって切断されると蛍光シグナルを発生する）をアクティブウェルに分注する。
９．２０秒間隔で７５分間プレートを読み取って、トロンビン生成プロファイルを完全に捕捉する。

【0469】

（表８）

【0470】

これらのアッセイのデータを表９にまとめる。

【0471】

（表９）

^１フローサイトメトリー前方散乱のサイジングビートを用いて評価した粒子径。

【0472】

実施例７．９Ｆ９及びＰＡＣ－１の結合。
活性化血小板の凝集は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体の形成によって媒介され、これがフィブリノーゲン（第１因子とも呼ばれる）と結合し血餅を形成し得る。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａは、ＣＤ４１／ＣＤ６１複合体としても知られる血小板フィブリノーゲン受容体である。このプロセスにおいて、ＡＤＰはＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体の活性形態を促進する。抗体９Ｆ９は、細胞膜に会合したフィブリノーゲンに結合する。したがって、細胞膜上のフィブリノーゲンの存在は、血餅を形成可能なトロンボソームの存在を示す。

【0473】

実施例１に従って調製したトロンボソームのバイアルを、１０ｍＬの脱イオン水を用いて再水和した。トロンボソームのアリコートを、ＨＭＴＡ（ＨＥＰＥＳ修飾タイロードアルブミン）を用いて希釈して１×１０^５粒子／μＬの最終濃度にした。表１１に示すように試料を調製した。１０μＬの希釈されたトロンボソームを２０μＬのＨＭＴＡに加えることにより、染色されていない試料を調製した。ＦＩＴＣアイソタイプ対照試料は、１０μＬの希釈されたトロンボソームを１０μＬのアイソタイプ対照抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５５７４８）及び１０μＬのＨＭＴＡに加えることにより、調製した。９Ｆ９で染色された試料は、１０μＬの希釈されたトロンボソームを１０μＬの９Ｆ９抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３４０５０７）及び１０μＬのＨＭＴＡに加えることにより、調製した。ＰＡＣ－１で染色された試料は、１０μＬの希釈されたトロンボソームを、５μＬのアイソタイプ対照抗体及び１５μＬのＨＭＴＡに加えることにより、調製した。全ての試料は、反応混合物当たり合計１×１０^６粒子を用いて二連で調製した。試料を、外光を避けて室温で２０分間インキュベートした。インキュベート後、全ての試料を１ｍＬのＨＢＳで希釈し、ＡＣＥＡ ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーターを用いて取得した。ＰＡＣ－１によって生成された蛍光シグナルを使用して、結合したフィブリノーゲンなしの活性化ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体の発現を定量した。９Ｆ９からの蛍光シグナルを使用して、トロンボソームの表面受容体へのフィブリノーゲンの結合を定量した。

【0474】

ＨＴＭＡ（ＨＥＰＥＳ修飾タイロードアルブミン）。

【0475】

（表１０）

【0476】

試料をフローサイトメトリーによってアッセイしたところ、再水和後に表面に結合したフィブリノーゲンが存在することが示され（図２０）、一方、抗ＰＡＣ－１抗体は顕著な結合を示さなかった（図２１）。これは、ＴＦＦによって調製されたトロンボソームが、ＧＰＩＩｂ／ＧＰＩＩＩａの活性形態と結合したフィブリノーゲンを含むというさらなる証明である（ＰＡＣ－１も同じ複合体に結合する）。

【0477】

実施例８．ＣＤ４７結合の評価
ＣＤ４７は、自己認識に使用される細胞表面マーカーである。このマーカーがなければ、場合によってはファゴサイトーシスが生じ得る。

【0478】

実施例１に記載のように調製したトロンボソーム１バイアルを１０ｍＬの注射用滅菌水で再水和し、漸増体積のＰａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６１５６４）又は対応するアイソタイプ対照（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６０３７３）と結合体化した抗ＣＤ４７抗体で染色した。全ての試料には１００万個の細胞が含まれていた。この滴定の結果、最大蛍光シグナルはバックグラウンドの約５倍となり（図２２Ａ）、全体的なＣＤ４７陽性率は約４０％となった（表１２）。例示的なヒストグラムを図２２Ｂに示す。

【0479】

Ｖ４５０と結合体化したＣＤ４７抗体のアリコートを、ＨＭＴＡを用いて１：１０、１：５、及び１：２の希釈度で調製した。ＡｃＴ ｄｉｆｆ ２を用いてトロンボソーム試料の初期濃度を定量し、ＨＭＴＡを用いて１ｍＬアリコートの濃度を１００×１０^３／μＬに調整した。ＴＦＦトロンボソームを、１０μＬの抗体を１０μＬの希釈されたトロンボソームに加えることにより、各抗体希釈度において二連で染色した。希釈されていない抗体で染色された試料も同様にして生成した。１０μＬのＨＭＴＡを１０μＬの希釈されたトロンボソームに加えることにより、染色されていない対照試料を作製した。この試料調製を、抗ＣＤ４７の代わりにアイソタイプ対照抗体を用いて繰り返した。全ての試料を、光を避けて室温で２０分間インキュベートした。インキュベート後、試料を５００μＬのＨＢＳで希釈し、ＡＣＥＡ ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーターを用いて各試料について１５，０００イベントを取得した。試験試料中のＶ４５０蛍光を使用して、トロンボソーム表面のＣＤ４７に対する抗体結合を評価した。アイソタイプ対照試料のＶ４５０蛍光を使用して、非特異的結合をモニタリングした。

【0480】

表１１は、様々な量の抗体（抗ＣＤ４７又はアイソタイプ対照）による試料の平均蛍光強度を示している。

【0481】

（表１１）

【0482】

表１２は、様々な濃度の抗ＣＤ４７抗体におけるＣＤ４７陽性パーセントを示している。

【0483】

（表１２）

【0484】

異なるロットからのＴＦＦトロンボソームの第２のバイアルを再水和し、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅと結合体化した抗ＣＤ４７又は対応するアイソタイプ対照の体積を漸増しながら染色した。全ての試料には２５０，０００細胞が含まれていた。この場合もまた、バックグラウンドの約５倍～６倍の蛍光シグナルが認められ（図２２Ｃ）、全体的なＣＤ４７陽性率は約５０％であった（表１５）。例示的なヒストグラムを図２２Ｄに示す。

【0485】

第２の試験は新たなＴＦＦトロンボソーム試料で実施し、抗ＣＤ４７がトロンボソームに結合することによって生じるシグナルの強度を改善するために、抗体量を漸増し、試料当たりのトロンボソーム数を漸減しながら使用した。ＡｃＴ ｄｉｆｆ ２を用いてトロンボソーム試料の初期濃度を定量し、ＨＭＴＡを用いて１ｍＬアリコートの濃度を２５×１０^３／μＬに調整した。試料は、以下の表１３に従い、抗体量を漸増しながら二連で染色した。各試料の最終体積は一定に４０μＬで保持した。各試料中のトロンボソームの総数は、一定に２５０×１０^３／μＬで保持した。この試料調製を、抗ＣＤ４７の代わりにアイソタイプ対照抗体を用いて繰り返した。

【0486】

（表１３）

【0487】

全ての試料を、光を避けて室温で２０分間インキュベートした。インキュベート後、試料を５００μＬのＨＢＳで希釈し、ＡＣＥＡ ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーターを用いて各試料について１５，０００イベントを取得した。試験試料中のＶ４５０蛍光を使用して、トロンボソーム表面のＣＤ４７に対する抗体結合を評価した。アイソタイプ対照試料のＶ４５０蛍光を使用して、非特異的結合をモニタリングした。

【0488】

表１４は、様々な量の抗体（抗ＣＤ４７又はアイソタイプ対照）による試料の平均蛍光強度を示している。

【0489】

（表１４）

【0490】

表１５は、様々な濃度の抗ＣＤ４７抗体におけるＣＤ４７陽性パーセントを示している。

【0491】

（表１５）

【0492】

実施例９．微粒子含量の低減
実施例１に従って調製した（ただし、凍結乾燥なし）トロンボソームと比較したヒト期限内保存血小板（ｈＩＤＳＰ）の微粒子含量を、動的光散乱を用いて比較した。結果を図２３Ａ～図２３Ｃ及び表１６に示す。図２３Ａ～図２３Ｃは、各データポイントの強度の合計が１．０に等しくなるように相対的強度を基準に正規化されたヒストグラムである。例えば、特定のデータポイントのｙ軸の値が０．１の場合、典型的には、当該データポイントが試料の散乱強度の１０％を占めていると解釈することができる。

【0493】

トロンボソームのバッチの製造に使用するアフェレーシス単位のプールを作製して分析を行った。この試料タイプを「ｈＩＤＳＰ」として示す。このｈＩＤＳＰ（ヒト期限内保存血小板（ｈｕｍａｎ Ｉｎ－Ｄａｔｅ Ｓｔｏｒｅｄ Ｐｌａｔｅｌｅｔ））プールから１ｍＬのアリコートを採取し、動的光散乱（ＤＬＳ；Ｔｈｒｏｍｂｏｌｕｘ（Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｔｅｇｒａ））分析を行った。このアリコートからの試料をキャピラリーに採取し、ＤＬＳ装置に挿入した。キャピラリーを装置内に１分間置いて、温度及び動きを平衡化させた。機械の内部温度は３７℃である。１分間の平衡化の後、試料の粘度設定を選択した。ＤＬＳ装置は、血漿中の試料（例えば、アフェレーシス単位）向けの粘度設定が組み込まれている。この粘度設定をｈＩＤＳＰ試料に使用した。この設定の粘度は１．０６０ｃＰ（センチポイズ）である。血漿粘度の設定を選択した後、試料を分析した。同じｈＩＤＳＰアリコートから、第２及び第３の試料をキャピラリーに採取し、このｈＩＤＳＰプロトコルを用いて三連で分析した。次いで、このデータから微粒子のパーセンテージを定量した。

【0494】

「凍結乾燥前」試料は、トロンボソームの製造プロセスからの中間試料である。この試料タイプは、凍結乾燥の直前に採取された材料である。これらの試料をＤＬＳで分析するため、試料の粘度測定を行った。粘度計（Ｒｈｅｏｓｅｎｓｅ μＶＩＳＣ）にはオーブンが組み込まれており、試料をＤＬＳ装置の温度（３７℃）にするために使用される。試料の粘度分析の前に、オーブンを３７℃に加熱しなければならない。凍結乾燥前試料の粘度を定量するため、４００～３５０μＬの試料をシリンジに採取し、粘度計に挿入した。粘度計に試料を挿入した後、装置の温度は再び３７℃に達する必要がある。オーブンが３７℃に達した後、試料の分析を行った。「Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｖｏｌｕｍｅ」を４００μＬに設定した以外は全ての設定をＡＵＴＯとした。この粘度を同じ試料のＤＬＳ測定に使用した。この凍結乾燥前試料から１ｍＬのアリコートを採取し、動的光散乱（ＤＬＳ；Ｔｈｒｏｍｂｏｌｕｘ－ＬｉｇｈｔＩｎｔｅｇｒａ）分析を行った。このアリコートからの試料をキャピラリーに採取し、ＤＬＳ装置に挿入した。キャピラリーを装置内に１分間置いて、温度及び動きを平衡化させた。装置の内部温度は３７℃である。１分間の平衡化の後、先に測定した粘度をＤＬＳ装置の粘度設定に入れた。粘度を入力した後、試料を分析した。同じ凍結乾燥前アリコートから、第２及び第３の試料をキャピラリーに採取し、この凍結乾燥前プロトコルを用いて三連で分析した。次いで、このデータから微粒子のパーセンテージを定量した。

【0495】

トロンボソームを標準プロトコルに従って再水和し、ＳｅｒａＳｕｂ（ＣＳＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）及びＡＣＤの混合液中で１：５に希釈した。ＳｅｒａＳｕｂ／ＡＣＤ希釈液は、ＡＣＤをＳｅｒａＳｕｂ中で１：９に希釈したものである。１ｍＬのトロンボソームの１：５希釈液を調製してＤＬＳによって分析した。トロンボソーム希釈液の試料をキャピラリーに採取し、ＤＬＳ装置に挿入した。キャピラリーを装置内に１分間置いて、温度及び動きを平衡化させた。機械の内部温度は３７℃である。１分間の平衡化の後、試料の粘度設定を選択した。試料に使用した粘度は１．２００ｃＰであった。粘度を入力した後、試料を分析した。第２、第３、及び第４の試料をキャピラリーに採取し、このトロンボソームプロトコルを用いて四連で分析した。次いで、データ（及び適用可能な場合は血小板半径）から微粒子のパーセンテージを定量した。

【0496】

（表１６）

【0497】

追加の実験では、実施例１に従って調製した再水和したトロンボソームに対するヒト期限内保存血小板（ｈＩＤＳＰ）の微粒子含量を、動的光散乱（ＤＬＳ）を用いて比較した。結果を図２４Ａ～Ｃ及び表１７に示す。

【0498】

（表１７）

【0499】

実施例１２．代謝産物の分析
表１８は、実施例１に記載のトロンボソームの調製物におけるｐＨ及び存在する代謝産物の分析を示しており、これには初期希釈後、血小板誘導体濃縮後、及びダイアフィルトレーションプロセスの終了後における血小板原材料の分析が含まれ、これはｉ－ＳＴＡＴハンドヘルド血液分析器及びＣＧ４＋カートリッジを用いて定量した。

【0500】

ｉＳｔａｔ分析用の血小板試料は、異なる処理ステップで小体積（１ｍｌ）で採取した。「原材料」と称するｉＳｔａｔ分析用の最初の試料は、血小板ドナー単位をプールした後、任意の処理が行われる前に採取した。「初期希釈液」と名づけられ、プールされた血小板単位は、ＴＦＦ処理に血小板を供する前に対照緩衝液で１：１に希釈した。ＴＦＦの濃縮段階の最後に、血小板製剤から「濃縮終了」試料を採取した。細胞を洗浄した後、凍結乾燥器に入る際の製剤を代表するものとして「ＤＶ終了（凍結乾燥前）」試料を採取した。

【0501】

（表１８）

【0502】

実施例１１．病原体の低減
血液製剤においては、概して病原体の低減が望ましい。病原体低減の１つの方法は、適切な波長の照明で病原体の核酸を変化させるための、感光性核酸インターカレート化合物の使用を伴う。

【0503】

ＩＮＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標）システム（Ｃｅｒｕｓ社製）は、アモトサレン（ａｍｏｔｏｓａｌｅｎ）（ＵＶＡの照明で核酸に架橋を形成する核酸インターカレート化合物）を使用する。このシステムで使用する例示的なパラメーターを表１９に示し、システムの概略図を図２５Ａに示し、１９８分（およそ１４／分平均）での２．６Ｌの材料処理について例示的なプロセスデータを図２５Ｂ～Ｃに示す。

【0504】

実施例９に記載のようにＤＬＳを実施した。

【0505】

（表１９）

【0506】

ＩＮＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標）システムによる処理のあり又はなしで、実施例１におけるように調製したトロンボソームのｐＨ及び代謝産物の例示的な比較データを表２０に示す。

【0507】

（表２０）

【0508】

機能的特性評価（ＡｃＴ数及び凝集パラメーター）並びに細胞表面マーカーの例示的な比較データを、表２１（ｈＩＤＳＰ）、表２２（凍結乾燥前）、及び表２３（凍結乾燥し、再水和して１０ｍＬの注射用滅菌水で約１．８×１０^６／μＬの濃度にした後（個々の試料数は表２３に示す））に示す。

【0509】

（表２１）

【0510】

（表２２）

【0511】

（表２３）

【0512】

また、トロンボソームの調製物の様々な段階における微粒子含量も、実施例９に記載のように定量した。図２６Ａ～図２６Ｂは、病原体低減処理のあり又はなしで調製した、再水和したトロンボソームの類似性を示している。これらのデータの概要を表２４に示す。図２７Ａは、病原体低減処理のあり又はなしでのｈｉＤＳＰの微粒子含量を示している。図２７Ｂ～図２７Ｃは、図２９Ａに示されるｈｉＤＳＰ及びそれから調製した再水和したトロンボソームの微粒子含量を比較したものである。これらのデータの概要を表２５に示す。図２８Ａは、病原体低減処理のあり又はなしでのｈｉＤＳＰの微粒子含量を示している。図２８Ｂ～図２８Ｃは、図２８Ａに示されるｈｉＤＳＰ及びそれから調製した再水和したトロンボソームの微粒子含量を比較したものである。これらのデータの概要を表２６に示す。

【0513】

（表２４）

【0514】

（表２５）

【0515】

（表２６）

【0516】

実施例１２．血小板とトロンボソームとの間の相互作用。
この実施例において「血小板」とは、採取からおよそ３時間後にクエン酸塩加処理した全血から単離した血小板である。トロンボソームは、実施例１に記載の方法で調製したバッチＤとする。表２７は、この実施例における実験の試料レイアウトである。

【0517】

（表２７）

【0518】

血小板及びトロンボソームの共凝集を光透過凝集測定法によって評価した。血小板及びトロンボソームを共インキュベートし、凝集測定法＋／－４β－ホルボール－１２－ミリステート－１３－アセテート（ＰＭＡ）による血小板活性化によって評価した。全血から単離した新鮮採取血小板に対しては、１００ｎｇ／ｍＬのＰＭＡを使用した。保存された血小板（すなわち、アフェレーシス血小板）に対しては、１０００ｎｇ／ｍＬのＰＭＡを使用した。

【0519】

ＡＣＤ抗凝固処理全血から新鮮な血小板を単離し、洗浄し、ＨＭＴＡで２５０，０００細胞／μＬに希釈した。標準プロトコルに従ってトロンボソームを再水和し、ＨＭＴＡで２５０，０００細胞／μＬに希釈した。ＨＭＴＡ中血小板及びＨＭＴＡ中トロンボソームの各アリコートを同じ割合で混合した。血小板、トロンボソーム、及び混合試料を、ホルボール－ミリステート－アセテート（ＰＭＡ；１００ｎｇ／ｍＬ）の活性化に応じて、光透過凝集測定法（Ｈｅｌｅｎａ ＡｇｇＲＡＭ）によって評価した。混合した試料を撹拌棒のあり又はなしで評価し、撹拌に誘導された剪断力が観察された血小板－トロンボソーム共凝集に及ぼす効果について評価した。

【0520】

図２９Ａは、アゴニストありの場合及びなしの場合における表３０の試料の透過率を示している。剪断ありでアゴニストなし（黒色）の混合により、トロンボソーム及び新鮮採取血小板が血小板の活性化及び凝集を誘導した。ＰＭＡ（灰色）は血小板を活性化した。またΔ透過率の大きさはトロンボソームとの混合凝集を示唆している。剪断なしの場合、活性化しないか、又は図２９Ａで観察されたよりも規模の小さい共凝集が認められる。

【0521】

また、凝集測定の前後で、血小板及びトロンボソームＡｃＴ数も評価した。図２９Ｂは、凝集後の数を示している。白色のバーが他のバー（単数又は複数）よりも大きい場合については、トロンボソームが血小板凝集体に取り込まれていることが示唆される。アゴニストなし（黒色）の場合に粒子数が絶対的に減少したことは、とりわけ劇的で予想外である。

【0522】

また、剪断が凝集に及ぼす効果についても評価した。撹拌棒のあり又はなしで混合凝集測定法（血小板：トロンボソームの数が１：１）を繰り返した。結果を図２９Ｃに示す。これらの結果は、血小板アゴニストの不在下では、観察可能な共凝集に剪断が必要であることを示している。測定された数及び共凝集の規模は、血漿では緩衝液に比べるとわずかに減少している。

【0523】

実施例１３．ＧＰＲＰによるフィブリントラップの阻害。
この実施例では、「血小板」は、採血からおよそ１時間後の全血から単離する。トロンボソームは、実施例１に記載の方法で調製したバッチＨとする。

【0524】

ＡＣＤ抗凝固処理全血から新鮮な血小板を単離し、洗浄し、ＨＭＴＡで２５０，０００細胞／μＬに希釈した。標準プロトコルに従ってトロンボソームを再水和し、ＨＭＴＡで２５０，０００細胞／μＬに希釈した。ＨＭＴＡ中血小板及びＨＭＴＡ中トロンボソームの各アリコートを同じ割合で混合した。血小板、トロンボソーム、又は混合懸濁液の各群を均等に分け、一方の群はフィブリン重合を阻害するために１ｍＭのＧＰＲＰで処理し、一方の群は未処理のままとした。ペプチドＧｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ（ＧＰＲＰ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、品目Ｇ１８９５）は、フィブリンの重合を防止するペプチドである。血小板、トロンボソーム、及び混合試料を、トロンビン（２．５Ｕ／ｍＬ）の活性化に応じて、光透過凝集測定法（Ｈｅｌｅｎａ ＡｇｇＲＡＭ）によって評価した。

【0525】

図３０は、血小板、トロンボソーム、並びに血小板及びトロンボソームの２：１及び１：１混合物をいずれもトロンビンで活性化させ、ＧＰＲＰ（１ｍＭ）の存在下又は非存在下で用いた共凝集実験の結果を示している。混合物の場合には、トロンボソーム集団が増加するに伴って、総凝集測定値が減少した。このことから、血小板及びトロンボソームの相互作用が、部分的にはフィブリン捕捉によって引き起こされることが示唆される。しかし、共凝集相互作用の大部分は血小板に媒介されており、ＧＰＲＰを伴っても凝集の測定値が高いことから立証されるように、フィブリン捕捉に依存するものではなかった。

【0526】

実施例１２～１３は、血小板活性化を伴う（及びより少ない程度で、血小板活性化を伴わない）剪断下で、血小板及びトロンボソームが共凝集したことを示している。フィブリン重合阻害剤であるＧＰＲＰは、トロンビン活性化後の血小板－トロンボソーム共凝集をわずかに阻害するに過ぎなかった。

【0527】

実施例１４．ＲＧＤＳの共凝集阻害。
この実施例では、「血小板」は、採血からおよそ１時間後の全血から単離する。トロンボソームは、実施例１に記載の方法で調製したバッチＨとする。

【0528】

ＡＣＤ抗凝固処理全血から新鮮な血小板を単離し、洗浄し、ＨＭＴＡで２５０，０００細胞／μＬに希釈した。標準プロトコルに従ってトロンボソームを再水和し、ＨＭＴＡで２５０，０００細胞／μＬに希釈した。ＨＭＴＡ中血小板及びＨＭＴＡ中トロンボソームの各アリコートを同じ割合で混合した。血小板、トロンボソーム、又は混合懸濁液の各群を均等に分け、一方の群は血小板へのフィブリノーゲン結合を阻害するために１００μＭのＲＧＤＳで処理し、一方の群は未処理のままとした。ＲＧＤＳ （Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ；Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、品目１５３５９）は、血小板表面インテグリン、特にＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに結合するペプチド配列である。これは、血小板がフィブリノーゲン及び他の接着タンパク質に結合するのを阻害する。血小板、トロンボソーム、及び混合試料を、ホルボールミリステートーアセテート（ＰＭＡ；１００ｎｇ／ｍＬ）の活性化に応じて、光透過凝集測定法によって評価した。

【0529】

１００μＭのＲＧＤＳを用いて共凝集実験を行い、ＰＭＡで活性化して、血小板とトロンボソームとの間のフィブリノーゲン架橋によって相互作用が生じるかどうかを調べた。結果を図３１に示す。ＲＧＤＳは、共凝集測定値の５０％超をブロックした。このことから、血小板及びトロンボソームの相互作用は、大部分がフィブリノーゲン結合によって引き起こされ得ることが示唆される。

【0530】

実施例１２～１４は、トロンボソームが、（例えば、光透過凝集測定法による立証において）活性化された血小板と容易に共凝集することを示している。自発的な共凝集は、剪断によって誘導される。血小板－トロンボソームの相互作用は、緩衝液と血漿の両方で明らかである。ＧＰＲＰは共凝集を実質的に阻害しないが、ＲＧＤＳは共凝集を実質的に阻害する。このことは、共凝集の機構において、能動的な血小板ーフィブリノーゲン結合が重要な役割を果たしていること、及び共凝集が受動的なフィブリン捕捉のみでは引き起こされないことが示唆される。

【0531】

実施例１５．走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）。
再水和したトロンボソームの１０ｍＬアリコートを２０００ＲＰＭで３０分間遠心分離した。遠心分離試料の上清を取り出して１ｍＬにし、廃棄した。試料を穏やかに撹拌してトロンボソームを再懸濁させた。濃縮されたトロンボソームを、１５分ごとに撹拌しながら２時間、ｐＨ７．４の０．１Ｍカコジル酸緩衝液中の３％グルタルアルデヒドで処理した。トロンボソームを滅菌水で３回すすぎ、１５分ごとに撹拌しながら１時間、１％四酸化オスミウム溶液に移した。次いで、試料を滅菌水でさらに３回洗浄し、０．５ｍＬの液滴をポリスルホンフィルター膜に移した。マウントした試料を液体窒素で凍結し、真空下で乾燥した後、金スパッタリングを行い、走査型電子顕微鏡を用いてイメージングした。

【0532】

図３２Ａ～図３２Ｄは、血小板及びヒトトロンボソームのＳＥＭを示している。活性化直後の血小板が図３２Ａ（スケールバー＝２μｍ）及び図３２Ｂ（スケールバー＝１μｍ）に示されている。実施例１におけるように調製した再水和したヒトトロンボソームが図３２Ｃ（スケールバー＝２μｍ）及び図３２Ｄ（スケールバー＝１μｍ）に示されている。

【0533】

実施例１６．Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）トロンボソームデータ。
Ｔｏｔａｌ Ｔｈｒｏｍｂｕｓ－ｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）、ＦＵＪＩＭＯＲＩ ＫＯＧＹＯ ＣＯ．，ＬＴＤ）では、試料が、鉱油を用いて、コラーゲンコーティングマイクロチャネルに押し込まれる。圧力の変化を使用して血栓形成を評価する。閉塞開始時間はΔ１０ｋＰａに達するまでの時間であり、閉塞時間はＡＲチップ（Ｚａｃｒｏｓ、品目番号ＴＣ０１０１）を用いてΔ８０ｋＰａに達するまでの時間である。

【0534】

ＦＵＪＩＭＯＲＩ ＫＯＧＹＯ ＣＯ．，ＬＴＤによれば、ＡＲチップは、主としてフィブリン及び活性化した血小板からなる混合白色血栓の形成を分析するために使用することができる。当該チップは、コラーゲン及び組織因子でコーティングされた流路（幅３００μｍ×高さ５０μｍ）を有し、凝固機能及び血小板機能を分析するために使用することができる。これに対し、ＰＬチップは、主として活性化した血小板からなる血小板血栓の形成を分析するために使用することができる。ＰＬチップは、コラーゲンのみでコーティングされた流路を有し、血小板機能を分析するために使用することができる。

【0535】

Ｔ－ＴＡＳ（登録商標）試薬（ＣａＣＴＩ，ＡＲチップ）を３７℃に温め、トロンボソームを標準プロトコルに従って再水和した。再水和したトロンボソームのアリコートを３９００ｇｘ１０分の遠心分離で洗浄し、クエン酸ナトリウムで抗凝固処理した乏血小板血漿（ＰＰＰ）に再懸濁させておよそ３００，０００個／μＬとした。ＣａＣＴＩ（２０μＬ）をＰＰＰ中のトロンボソーム（４８０μＬ）と混合し、高剪断下でＴ－ＴＡＳ ＡＲチップに通過させた。システム内の圧力を、３０分にわたり、又はチャネル内の最大背圧が達成されるまでモニタリングした。

【0536】

製造者の指示に従ってＴ－ＴＡＳ（登録商標）装置を使用するための準備を行った。ＡＲチップ（Ｄｉａｐｈａｒｍａ、カタログ番号ＴＣ０１０１）及びＡＲチップＣａｌｃｉｕｍ Ｃｏｒｎ Ｔｒｙｐｓｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＣａＣＴＩ；Ｄｉａｐｈａｒｍａ、カタログ番号ＴＲ０１０１）を室温に温めた。３００ｕＬの再水和したトロンボソームを１．７ｍＬマイクロ遠心管に移し、３９００ｇ×１０分で遠心分離してペレット化した。トロンボソームペレットを、Ｇｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ（ＧＫ）のプールされた正常ヒト血漿又は自己由来血小板を含む若しくは含まない自己血漿に再懸濁し、ＡｃＴ数（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＡｃＴ Ｄｉｆｆ ２ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒ）による定量において、約１００，０００～４５０，０００／ｕＬの濃度にした。２０ｕＬのＣａＣＴＩ及び４８０ｕＬのＧＫ血漿中トロンボソーム試料を穏やかなピペッティングで混合した。試料を製造業者の指示に従ってＴ－ＴＡＳ（登録商標）に装填し実行した。

【0537】

表２８は、ＡＲチップ及び高剪断装置設定を用いて製造者の指示に従って実行した実験での、クエン酸塩加全血、実施例１で調製したトロンボソームを様々な濃度で添加した血小板低減クエン酸塩加全血、及び実施例１で調製したトロンボソームを様々な濃度で追加したＧｅｏｒｇｅ Ｋｉｎｇ乏血小板血漿（ＧＫ ＰＰＰ）におけるＴ－ＴＡＳ（登録商標）の結果を示している。

【0538】

（表２８）

【0539】

時間経過の結果を図３３Ａ～図３３Ｂに示す。血小板低減全血中のトロンボソームの濃度を増加させると、閉塞時間の短縮によって、よりロバストな血栓形成が促進された（図３３Ａ）。乏血小板血漿（ＰＰＰ）中のトロンボソームの濃度を増加させると、閉塞時間の短縮によって、よりロバストな血栓形成が促進された（図３３Ｂ）。

【0540】

ＧＰＲＰ（１ｍＭ）が閉塞活性に及ぼす効果についてもアッセイした。表２９は、ＧＰＲＰの存在下及び不在下における、トロンボソームあり又はなしの乏血小板血漿のＴ－ＴＡＳ（登録商標）の結果を示している。フィブリノーゲン形成防止のためにＧＰＲＰを添加しても、トロンボソームを含む試料が閉塞圧力に達することは防止されなかった。血漿中のトロンボソーム試料にＧＰＲＰを添加すると、マイクロキャピラリーチャネルにおけるフィブリンの形成が防止されるが（図３３Ｃ（ＧＰＲＰなし）、図３３Ｄ（ＧＰＲＰあり）、いずれもＧＫ ＰＰＰ中）、トロンボソーム（ＰＰＰ）にＧＰＲＰを添加すると、血栓形成は防止されなかった（図３３Ｅ）。

【0541】

（表２９）

【0542】

本発明の実施形態は様々な変更及び代替形態に適用可能であるが、具体的な実施形態が例として図面で例示され、以下に詳細に説明される。しかし、記載された特定の実施形態に本発明を限定することは意図されていない。それとは逆に、本発明は、添付の特許請求の範囲で定義された本発明の範囲内に収まる全ての変更、等価物、及び代替形態を網羅するように意図されている。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22A】

【図22B】

【図22C】

【図22D】

【図23A】

【図23B】

【図23C】

【図24A】

【図24B】

【図24C】

【図25A】

【図25B】

【図25C】

【図26A】

【図26B】

【図27A】

【図27B】

【図27C】

【図28A】

【図28B】

【図28C】

【図29A】

【図29B】

【図29C】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33A】

【図33B】

【図33C】

【図33D】

【図33E】

【国際調査報告】