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特表2022-532335ＧＬＹ１０１ＶＡＬ突然変異を有するＢＣＬ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-07-14
(54)【発明の名称】ＧＬＹ１０１ＶＡＬ突然変異を有するＢＣＬ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/5377 20060101AFI20220707BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220707BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220707BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220707BHJP
【ＦＩ】
A61K31/5377 ZNA
A61P35/00
A61P43/00 111
A61P35/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021567785
(86)(22)【出願日】2020-05-11
(85)【翻訳文提出日】2022-01-11
(86)【国際出願番号】 EP2020063089
(87)【国際公開番号】W WO2020229429
(87)【国際公開日】2020-11-19
(31)【優先権主張番号】62/847,477
(32)【優先日】2019-05-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】19178908.0
(32)【優先日】2019-06-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】62/971,297
(32)【優先日】2020-02-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】500287019
【氏名又は名称】レ ラボラトワール セルヴィエ
(71)【出願人】
【識別番号】504389991
【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】マレー，ジェームズ
(72)【発明者】
【氏名】コラン，フレデリク
(72)【発明者】
【氏名】クラペロン，オドレイ
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC73
4C086CB05
4C086GA07
4C086GA12
4C086GA13
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA66
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ、（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ、（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ、（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ、（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤であり、ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミド（化合物Ａ）もしくは５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物Ｂ）又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｂｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤であり、ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミド（化合物Ａ）及び５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物Ｂ）又はその薬学的に許容し得る塩からなる群より選択される、
Ｂｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項2】
ガンが、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有する、請求項１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項3】
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有する、請求項１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項4】
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有する、請求項１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項5】
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有する、請求項１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項6】
Ｂｃｌ－２媒介性ガンが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項１～５のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項7】
化合物Ａが、塩酸塩の形態にある、請求項１～５のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項8】
化合物Ｂが、硫酸水素塩の形態にある、請求項１～５のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項9】
化合物Ｂが、塩酸塩の形態にある、請求項１～５のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項10】
化合物Ｂを静脈内投与する、請求項１～５のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【請求項11】
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、請求項１～１０のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、医薬組成物。
【請求項12】
Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、請求項１１記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む医薬組成物。
【請求項13】
Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、請求項１１記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む医薬組成物。
【請求項14】
Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、請求項１１記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む医薬組成物。
【請求項15】
Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、請求項１１記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む医薬組成物。
【請求項16】
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ａ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｂ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ａ）と（ｂ）との両方である患者を感作させるための方法であって、治療上有効量の請求項１～１０のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【請求項17】
Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、治療上有効量の請求項１～１０のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【請求項18】
抗ガン剤が、ターゲット療法である、請求項１６又は１７記載の方法。
【請求項19】
ガンが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項１８記載の方法。
【請求項20】
ターゲット療法が、ベネトクラクス（ＡＢＴ－１９９）である、請求項１８又は１９記載の方法。
【請求項21】
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルが下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）このようにして検出された突然変異の存在に基づいて、治療上有効量の請求項１～１０のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【請求項22】
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量の請求項１～１０のいずれか一項記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤であり、ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミド（化合物Ａ、Ｓ５５７４６又はＢＣＬ２０１としても公知）もしくは５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物Ｂ）又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｂｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤に関する。また、本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するために、化合物Ａ又は化合物Ｂを含む、医薬組成物に関する。更なる実施態様では、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。
本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤であり、ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミド（化合物Ａ、Ｓ５５７４６又はＢＣＬ２０１としても公知）もしくは５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物Ｂ）又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｂｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤に関する。また、本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するために、化合物Ａ又は化合物Ｂを含む、医薬組成物に関する。更なる実施態様では、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。
【0002】
発明の背景
アポトーシス又はプログラムされた細胞死は、胚発生及び組織ホメオスタシスの維持に重要な生理学的プロセスである。アポトーシス型細胞死は、形態学的変化、例えば、核の凝縮、ＤＮＡ断片化を伴い、生化学的現象、例えば、細胞の重要な構造成分に損傷を引き起こすカスパーゼの活性化も伴い、その解体及び死を誘引する。アポトーシスプロセスのレギュレーションは複雑であり、複数の細胞内シグナル伝達経路の活性化又はリプレッションが関与している（Cory S. et al., Nature Review Cancer, 2002, 2, 647-656）。
アポトーシス又はプログラムされた細胞死は、胚発生及び組織ホメオスタシスの維持に重要な生理学的プロセスである。アポトーシス型細胞死は、形態学的変化、例えば、核の凝縮、ＤＮＡ断片化を伴い、生化学的現象、例えば、細胞の重要な構造成分に損傷を引き起こすカスパーゼの活性化も伴い、その解体及び死を誘引する。アポトーシスプロセスのレギュレーションは複雑であり、複数の細胞内シグナル伝達経路の活性化又はリプレッションが関与している（Cory S. et al., Nature Review Cancer, 2002, 2, 647-656）。
【0003】
アポトーシスのデレギュレーションは、特定の病理に関与している。アポトーシスの増加は、神経変性疾患、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病及び虚血に関連している。逆に、アポトーシス実行の欠損は、ガンの進行及びその化学療法抵抗性、自己免疫疾患、炎症性疾患及びウイルス感染において重要な役割を果たす。したがって、アポトーシスの欠如は、ガンの表現型シグネチャーの１つである（Hanahan D. et al., Cell 2000, 100, 57-70）。Ｂｃｌ－２ファミリーの抗アポトーシスタンパク質は、多数の病理に関連している。Ｂｃｌ－２ファミリーのタンパク質の関与は、多くのタイプのガン、例えば、結腸ガン、乳ガン、小細胞肺ガン、非小細胞肺ガン、膀胱ガン、卵巣ガン、前立腺ガン、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、骨髄腫及び前立腺ガンにおいて説明されている。Ｂｃｌ－２ファミリーの抗アポトーシスタンパク質の過剰発現は、腫瘍形成、化学療法に対する抵抗性及びガンに罹患した患者の臨床予後に関与する。したがって、Ｂｃｌ－２ファミリーのタンパク質の抗アポトーシス活性を阻害する化合物に対する治療上の必要性が存在する。
【0004】
ベネトクラクス（ＡＢＴ－１９９としても公知）は、選択的Ｂｃｌ－２阻害剤であり、Ｂｃｌ－２とＢＨ３タンパク質との相互作用のみを打ち消し、このため、アポトーシスを誘引する。ベネトクラクスは、（ｉ）１７ｐ欠失の有無にかかわらず、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有し、以前に少なくとも１回の処置を受けている成人を処置し、（ｉｉ）アザシチジンもしくはデシタビン又は低用量のシタラビンとの組み合わせで、７５歳以上で新たに診断された急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する成人又は標準的な化学療法の使用を妨げる他の医学的状態を有する成人を処置するのに承認されている。しかしながら、ＣＬＬではかなりの数の再発が観察されている。これは、抵抗性の獲得メカニズムが示唆される。他の高親和性ターゲット治療では、ターゲットの特定変異が、抵抗性の原因であることが実証されている（Garraway & Janne, Cancer Discovery 2012, 2, 214-226）。種々のベネトクラクス抵抗性由来白血病及びリンパ腫細胞系統において、その疎水溝に影響を及ぼすＢｃｌ－２突然変異が特定されている（Fresquet et al., Blood 2014, 123, 4111-4119；Tahir et al., BMC Cancer, 17:399）。Ｂｃｌ－２における１つの突然変異（１０１位におけるグリシンがバリンにより置換される：Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ）は、近年、臨床的に関連性があることが示された。ベネトクラクスに抵抗性の患者からのＣＬＬサンプルで特定されたためである。このＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異は、Ｂｃｌ－２の疎水性溝へのベネトクラクス結合の減少及びベネトクラクスに対する抵抗性と関連していた（Blombery et al., Cancer Discovery 2019, 9, 342-353）。また、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異は、臨床再発を妨げるための潜在的なバイオマーカーも提供する可能性がある。これらの臨床データに基づいて、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するガン患者、特に、抵抗性患者及び再発患者を処置するのに使用することができる新規な治療薬を特定する必要がある。さらに近年では、Ｂｃｌ－２における他の突然変異、例えば、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ（１０３位におけるアスパラギン酸がチロシンにより置換される、Ｄ１０３Ｙとも呼ばれる）、Ａｓｐ１０３Ｖａｌ（１０３位におけるアスパラギン酸がバリンにより置換される、Ｄ１０３Ｖとも呼ばれる）、Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ（１０３位におけるアスパラギン酸がグルタミン酸により置換される、Ｄ１０３Ｅとも呼ばれる）、Ａｌａ１１３Ｇｌｙ（１１３位におけるアラニンがグリシンにより置換される、Ａ１１３Ｇとも呼ばれる）、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ（１２９位におけるアルギニンがロイシンにより置換される、Ｒ１２９Ｌとも呼ばれる）及びＶａｌ１５６Ａｓｐ（１５６位にけるバリンがアスパラギン酸により置換される、Ｖ１５６Ｄとも呼ばれる）が、ベネトクラクスにより処置されたＣＬＬ患者において特定されているが、ナイーブなＣＬＬ患者では特定されていない（Tausch et al., Hematologica 2019, 9, e434-e437；Blombery et al., Blood 2020, 135(10), 773-777）。注目すべき点として、ゲノム分析により、１名のＣＬＬ患者が、異なるＢｃｌ－２突然変異（すなわち、Ｇ１０１Ｖ及びＤ１０３Ｙを含む）を有する場合があったことが実証されている。全ての突然変異は、ＮＧＳ（次世代配列決定）データにおいて異なる読取りで存在することが観察され、異なる白血病細胞におけるそれらの存在（ヘテロ接合性を想定）及び突然変異の相互排他性と一致した（Blombery et al., Blood 2020, 135(10), 773-777）。
【0005】
化合物Ａ及び化合物Ｂを含む第２世代のＢｃｌ－２特異的阻害剤が存在し、これらは、ベネトクラクスと比較して、部分的に重複するが、異なるＢｃｌ－２疎水性グルーブ結合様式を有する。
【0006】
化合物Ａ（Ｓ５５７４６又はＢＣＬ２０１としても公知）の化学構造は、
である。
【化1】
である。
【0007】
化合物Ａの調製及び幾つかのガンモデルにおけるその薬理学的効果は、文献（Casara et al., Oncotarget 2018, Vol.9, No.28, 20075-20088及び対応する補足情報）に記載されている。さらに、化合物Ａ及び構造的に近い類似体、ガンの処置のためのＢｃｌ－２阻害剤としてのそれらの使用並びにそれらの医薬製剤も、ＷＯ第２０１３／１１０８９０号に記載されている。同文献の内容は、参照により組み入れられる。化合物Ａの調製は、塩酸塩の形態で、その文献の実施例１に具体的に開示されている。
【0008】
化合物Ａは、Ｓ２／３／４／５を含むタンパク質表面積の大部分を占めるベネトクラクス類似体（Souers et al., Nature Medicine 2013, 19, 202-208）とは対照的に、典型的には、Ｓ１／２／３と呼ばれる領域を占める。化合物Ａは、Ｓ２に深く埋め込まれた残基Ａ１４９の主鎖カルボニルへの１つの水素結合を形成する。Ｂｃｌ－２への化合物Ａの結合についてのサイズ非依存性エンタルピー効率（０．８３）は、最適な極性及びファンデルワールス相互作用を示唆し、高度に特異的な結合を示す（Casara et al., Oncotarget 2018, 9, 20075-20088）。
【0009】
化合物Ｂの構造は、
５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド
である。
【化2】
５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド
である。
【0010】
化合物Ｂの調製、ガンの処置のためのＢｃｌ－２阻害剤としてのその使用及びその医薬製剤は、ＷＯ第２０１５／０１１４００号に記載されている。同文献の内容は、参照により組み入れられる。化合物Ｂは、塩酸塩の形態で、ＷＯ第２０１５／０１１４００号の実施例３８６に具体的に開示されている。化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２特異的ＢＨ３模倣体の全ての特徴を示し、血小板を温存しながら、Ｂｃｌ－２依存性リンパ系腫瘍異種移植モデルにおいて堅牢な抗腫瘍活性を示す。
【0011】
１つの想定は、一方ではベネトクラクス、他方では化合物Ａ又は化合物Ｂが、異なった結合様式を示すことである。この構造的仮説は、野生型Ｂｃｌ－２タンパク質、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ、Ａｓｐ１０３Ｖａｌ、Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及びＡｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異体Ｂｃｌ－２タンパク質の両方における３つの化合物の異なる結合パラメーターを決定することによって確認された。このため、Ｂｃｌ－２タンパク質における突然変異は、ベネトクラクスに対する抵抗性の原因となる場合があるが、化合物Ａ又は化合物Ｂに対する抵抗性の原因とはならない場合がある。とりわけ、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異は、ベネトクラクスとは対照的に、化合物Ａ及び化合物Ｂの両方の結合部位から離れて位置した。さらに、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異は、Ｂｃｌ－２とＡＢＴ－１９９との間の重要な水素結合を除去し、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２に対するＡＢＴ－１９９の親和性をかなり低下させる。化合物Ｂは、Ｄ１０３と全く直接的な相互作用を形成せず、Ｄ１０３から少なくとも９オングストローム離れて結合し、このため、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２に対するその親和性は、ほんのわずかしか影響を受けない。
【0012】
本発明のＢｃｌ－２阻害剤は、アポトーシスの欠損を含む病理、例えば、ガン並びに免疫疾患及び自己免疫疾患の処置、より具体的には、その疎水性溝に影響を及ぼすＢｃｌ－２突然変異に起因するベネトクラクスに抵抗性の患者において、それらを使用することを可能にするアポトーシス促進特性を有する。
【0013】
概要
本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｂｃｌ－２阻害剤を提供し、ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｂ又はその薬学的に許容し得る塩である。特に、本発明のＢｃｌ－２阻害剤は、Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体に対して強力な活性を有することが見出された。野生型Ｂｃｌ－２タンパク質とＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体との間に観察される活性のわずかな損失は、本発明のＢｃｌ－２阻害剤の投与がＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有する患者において臨床的に関連する応答を誘引する可能性があることを示唆している。更なる細胞研究から、化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２野生型タンパク質を発現している細胞系統と比較して、Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体を有する細胞系統において、わずかに効力の損失（９～７倍）を示したにすぎないことがさらに確認された。より一般的には、本明細書に開示された生化学的プロファイルを考慮すると、化合物Ｂは、ＡＢＴ－１９９と比較して、上記検討された変異体のセットに対してより良好なオンターゲット活性を示すことが見出された。生化学的データに加えて、細胞研究から、Ｂｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｔｙｒを過剰発現しているＫＭＳ－１２－ＰＥ細胞系統を使用する細胞アッセイにおいて、ＡＢＴ－１９９と化合物Ｂとの間の２２倍の効力のシフトをさらに実証された。本開示は、全体として、本発明のＢｃｌ－２阻害剤、より具体的には、化合物Ｂが下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有する患者において有益な効果を有することができることを示唆している。特定の態様では、ベネトクラクス処置に対してさらに以前の突然変異のうちの１つを獲得したＣＬＬ患者がターゲットとなる。
本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｂｃｌ－２阻害剤を提供し、ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、化合物Ａ、化合物Ｂ又はその薬学的に許容し得る塩である。特に、本発明のＢｃｌ－２阻害剤は、Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体に対して強力な活性を有することが見出された。野生型Ｂｃｌ－２タンパク質とＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体との間に観察される活性のわずかな損失は、本発明のＢｃｌ－２阻害剤の投与がＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有する患者において臨床的に関連する応答を誘引する可能性があることを示唆している。更なる細胞研究から、化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２野生型タンパク質を発現している細胞系統と比較して、Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体を有する細胞系統において、わずかに効力の損失（９～７倍）を示したにすぎないことがさらに確認された。より一般的には、本明細書に開示された生化学的プロファイルを考慮すると、化合物Ｂは、ＡＢＴ－１９９と比較して、上記検討された変異体のセットに対してより良好なオンターゲット活性を示すことが見出された。生化学的データに加えて、細胞研究から、Ｂｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｔｙｒを過剰発現しているＫＭＳ－１２－ＰＥ細胞系統を使用する細胞アッセイにおいて、ＡＢＴ－１９９と化合物Ｂとの間の２２倍の効力のシフトをさらに実証された。本開示は、全体として、本発明のＢｃｌ－２阻害剤、より具体的には、化合物Ｂが下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有する患者において有益な効果を有することができることを示唆している。特定の態様では、ベネトクラクス処置に対してさらに以前の突然変異のうちの１つを獲得したＣＬＬ患者がターゲットとなる。
【0014】
別の態様では、本発明は、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全ての突然変異を有するＢｃｌ－２媒介ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、治療上有効量のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、方法に関する。
【0015】
全体として、本明細書に記載された本発明により、下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有する抵抗性又は再発性ガン患者（ベネトクラクス抵抗性患者を含む）に、治療上有効量の化合物Ａ又は化合物Ｂを含む組成物を投与することが可能となる。
【0016】
発明の詳細な説明
「化合物Ａ」は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミドを意味する。
「化合物Ａ」は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミドを意味する。
【0017】
「化合物Ａ，ＨＣｌ」は、塩酸塩の形態にあるＮ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミドを意味する。
【0018】
「化合物Ｂ」は、５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミドを意味する。
【0019】
「化合物Ｂ，ＨＣｌ」は、５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミドが塩酸塩の形態にあることを意味する。
【0020】
「化合物Ｂ，Ｈ２ＳＯ４」は、５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミドが硫酸水素塩の形態にあることを意味する。
【0021】
「遊離分子」及び「遊離塩基」は、本明細書において互換的に使用され、塩形態でない場合の化合物Ａ又は化合物Ｂを指す。
【0022】
「ガン」は、細胞群が制御不能な増殖を示す疾病のクラスを意味する。ガンの種類は、血液ガン（リンパ腫及び白血病）及びガン腫、肉腫又は芽腫を含む固形腫瘍を含む。特に「ガン」は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫、とりわけ、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫（濾胞性リンパ腫を含む）又は急性骨髄性白血病を指す。
【0023】
「Ｂｃｌ－２媒介性ガン」は、Ｂｃｌ－２タンパク質がアポトーシスに対する障壁として作用し、腫瘍発生及びガン治療に対する抵抗性を促進することができるガンを意味する。特に、「Ｂｃｌ－２媒介性ガン」は、Ｂｃｌ－２タンパク質発現のデレギュレーションにより特徴付けられるガンを含む。
【0024】
「ＨＰ－β－シクロデキストリン」は、「ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン」又は「２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン」又は「ヒドロキシプロピルベタデクス」とも呼ばれる。特に、ＨＰ－β－シクロデキストリンは、下記製品名：Cavitron（商標）W7HP7（典型的な置換度：６．０～８．０；分子量：約１５２０）、Cavitron（商標）W7HP5（典型的な置換度：４．１～５．１；分子量：約１４１０）、Kleptose（商標）HPB又はKleptose（商標）HPで市販されている。
【0025】
本明細書で使用する場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」を意味し、特に断らない限り、例えば、成分が合計して１００％になる場合、任意の追加の成分の存在を排除することを意図しない。
【0026】
本明細書で使用する場合、任意の疾患又は障害の「処置する」、「処置すること」又は「処置」という用語は、一実施態様では、疾患又は障害を改善すること（すなわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの発症を遅らせ、停止させ又は減少させること）を指す。別の実施態様では、「処置する」、「処置すること」又は「処置」は、患者により識別できない場合があるものを含む少なくとも１つの身体パラメーターを軽減し又は改善することを指す。さらに別の実施態様では、「処置する」、「処置すること」又は「処置」は、身体的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に（例えば、身体パラメーターの安定化）のいずれか又はその両方で、疾患又は障害をモデュレーションすることを指す。
【0027】
本明細書で使用する場合、「治療上有効量の組成物」は、患者に治療上の利益を引き出すのに有効量の有効成分を含有する有効量の本発明の組成物を意味する。化合物Ａについて、有用な用量は、遊離塩基として表わして１日当たりに５０mg～１５００mgの範囲である。本発明に従って投与される化合物Ｂの用量は、遊離塩基として表わして５mg～１０００mgである。
【0028】
本明細書で使用する場合、「感作させるための方法」は、再発患者又は抵抗し得患者における疾患又は障害を改善する（すなわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの発症を遅らせ又は停止させ又は減少させる）ことを可能にする治療法を意味する。特定の実施態様では、「感作させるための方法」は、既存の治療に抵抗性の患者における臨床反応の回復を意味する。
【0029】
本明細書で使用する場合、「ターゲット療法」は、単に（伝統的な化学療法と同様に）急速に分裂している全ての細胞を妨害するのではなく、発ガン及び腫瘍増殖に必要な特定のターゲット分子を妨害することにより、ガン細胞の増殖を阻止する治療法を意味する。
【0030】
実施態様
以下に、本発明の幾つかの実施態様を記載する。
Ｅ１．
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤であり、
ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミド（化合物Ａ）及び５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物Ｂ）又はその薬学的に許容し得る塩からなる群より選択される、
Ｂｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
以下に、本発明の幾つかの実施態様を記載する。
Ｅ１．
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤であり、
ここで、Ｂｃｌ－２阻害剤は、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－３－｛６－［（（３Ｓ）－３－（４－モルホリニルメチル）－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－イソキノリニル）カルボニル］－１，３－ベンゾジオキソール－５－イル｝－Ｎ－フェニル－５，６，７，８－テトラヒドロ－１－インドリジンカルボキサミド（化合物Ａ）及び５－（５－クロロ－２－｛［（３Ｓ）－３－（モルホリン－４－イルメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル］カルボニル｝フェニル）－Ｎ－（５－シアノ－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－イル）－Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）－１，２－ジメチル－１Ｈ－ピロール－３－カルボキサミド（化合物Ｂ）又はその薬学的に許容し得る塩からなる群より選択される、
Ｂｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0031】
Ｅ２．
ガンが、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
ガンが、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0032】
Ｅ３．
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0033】
Ｅ４．
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0034】
Ｅ５．
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
ガンが、Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0035】
Ｅ６．
ガンが、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
ガンが、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0036】
Ｅ７．
ガンが、Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
ガンが、Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を有する、Ｅ１記載のＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するためのＢｃｌ－２阻害剤。
【0037】
Ｅ８．
Ｂｃｌ－２媒介性ガンが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。代替的には、Ｂｃｌ－２媒介性ガンが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫又は非ホジキンリンパ腫である。
Ｂｃｌ－２媒介性ガンが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。代替的には、Ｂｃｌ－２媒介性ガンが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫又は非ホジキンリンパ腫である。
【0038】
Ｅ９．
化合物Ａが、塩酸塩の形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
化合物Ａが、塩酸塩の形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【0039】
Ｅ１０．
化合物Ｂが、硫酸水素塩の形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
化合物Ｂが、硫酸水素塩の形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【0040】
Ｅ１１．
化合物Ｂが、塩酸塩の形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
化合物Ｂが、塩酸塩の形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【0041】
Ｅ１２．
化合物Ｂを静脈内投与する、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
化合物Ｂを静脈内投与する、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤。
【0042】
Ｅ１３．
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0043】
Ｅ１４．
Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0044】
Ｅ１５．
Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0045】
Ｅ１６．
Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0046】
Ｅ１７．
Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0047】
Ｅ１８．
Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0048】
Ｅ１９．
Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンの処置に使用するための、Ｅ１３記載のＢｃｌ－２阻害剤を含む、
医薬組成物。
【0049】
Ｅ２０．
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ａ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｂ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ａ）と（ｂ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ａ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｂ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ａ）と（ｂ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0050】
Ｅ２１．
Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0051】
Ｅ２２．
Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0052】
Ｅ２３．
Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0053】
Ｅ２４．
Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0054】
Ｅ２５．
Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0055】
Ｅ２６．
Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを有し、（ｉ）少なくとも１つの抗ガン剤に抵抗性であるかもしくは（ｉｉ）抗ガン剤での処置後に再発しているか又は（ｉ）と（ｉｉ）との両方である患者を感作させるための方法であって、
治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与することを含む、
方法。
【0056】
Ｅ２７．
抗ガン剤が、ターゲット療法である、Ｅ２０～Ｅ２６のいずれか１つ記載の方法。
抗ガン剤が、ターゲット療法である、Ｅ２０～Ｅ２６のいずれか１つ記載の方法。
【0057】
Ｅ２８．
ガンが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、Ｅ２７記載の方法。
ガンが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、Ｅ２７記載の方法。
【0058】
Ｅ２９．
ターゲット療法が、ベネトクラクス（ＡＢＴ－１９９）である、Ｅ２７又はＥ２８記載の方法。
ターゲット療法が、ベネトクラクス（ＡＢＴ－１９９）である、Ｅ２７又はＥ２８記載の方法。
【0059】
Ｅ３０．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルが下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）このようにして検出された突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルが下記突然変異：（ｉ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ；（ｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ；（ｉｉｉ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ；（ｉｖ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ；（ｖ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及び（ｖｉ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙの少なくとも１、２、３、４、５つ又は全てを含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）このようにして検出された突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0060】
Ｅ３１．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＧｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0061】
Ｅ３２．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0062】
Ｅ３３．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0063】
Ｅ３４．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0064】
Ｅ３５．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0065】
Ｅ３６．
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
患者におけるＢｃｌ－２媒介性ガンを処置する方法であって、
（ａ）前記患者から生体サンプルを取得し、生体サンプルがＡｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異を含むかどうかを検出する工程と、
（ｂ）ベネトクラクスに対する応答の可能性が低下していると、前記患者を特定する工程と、
（ｃ）Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異の存在に基づいて、治療上有効量のＥ１～Ｅ１２のいずれか１つ記載のＢｃｌ－２阻害剤を前記患者に投与する工程とを含む、
方法。
【0066】
実施例１：野生型Ｂｃｌ－２及びＢｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体に対する化合物Ａ及び化合物Ｂの親和性データ
蛍光クエンチアッセイにより、
（ｉ）アミノ酸配列（配列番号：０２）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＣ末端Ｃｙ５ラベルＢｃｌ－２野生型タンパク質（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｐ１０４１５）
又は
（ｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０３）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している。ここで、Ｘは、Lumiprobe GmbHカタログ番号１３３８０からのsulpho-Cyanine5により硫黄でラベルされたシステインである）
を有するＢｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体
の蛍光強度の変化を、アミノ酸配列（配列番号：０１）：［QWAREIGAQLRRMADDLNAQY］（同配列は、Ｃ末端において、アミノ酸Ｘ’に連結している。ここで、Ｘ’は、AAT Bioquestカタログ番号２０７９からのＴＱ５ＷＳにより硫黄でラベルされたシステインである）を有するＰＵＭＡ（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｑ９ＢＸＨ１）から得られたＣ末端ラベルされたペプチドの結合に基づいて測定する。
蛍光クエンチアッセイにより、
（ｉ）アミノ酸配列（配列番号：０２）：
【化3】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＣ末端Ｃｙ５ラベルＢｃｌ－２野生型タンパク質（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｐ１０４１５）
又は
（ｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０３）：
【化4】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している。ここで、Ｘは、Lumiprobe GmbHカタログ番号１３３８０からのsulpho-Cyanine5により硫黄でラベルされたシステインである）
を有するＢｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体
の蛍光強度の変化を、アミノ酸配列（配列番号：０１）：［QWAREIGAQLRRMADDLNAQY］（同配列は、Ｃ末端において、アミノ酸Ｘ’に連結している。ここで、Ｘ’は、AAT Bioquestカタログ番号２０７９からのＴＱ５ＷＳにより硫黄でラベルされたシステインである）を有するＰＵＭＡ（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｑ９ＢＸＨ１）から得られたＣ末端ラベルされたペプチドの結合に基づいて測定する。
【0067】
このペプチドと同じ部位に競合的に結合する化合物の添加により、蛍光クエンチ剤の置換によるタンパク質の蛍光強度が向上する。
【0068】
各化合物の１１点連続希釈をＤＭＳＯ中で調製し、最終バッファー条件を１０mM ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸［ＨＥＰＥＳ］、１５０mM ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ｐＨ７．４）及び５％ ＤＭＳＯとした。アッセイにおける最終タンパク質濃度は、１nMであり、ペプチドは、５０nM（野生型Ｂｃｌ－２）又は１００nM（Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ）で存在する。実験を室温で２時間インキュベーションし、その後、蛍光強度をBiotek SynergyNeoプレートリーダー（励起６２０nm、発光６８０nm）で測定した。用量応答曲線を、４パラメーターロジスティックモデル（シグモイド用量応答モデル）を使用して、XL-Fitソフトウェアでプロットし、５０％の蛍光強度の上昇を与えた阻害濃度を決定した（ＩＣ５０）。ＫＩ値をCer et al, Nucleic Acids Res, 2009, Jul 1;37(WebServer issue): W441-W445に従って、ＩＣ５０値から決定した。
【0069】
【表1】
【0070】
データから、Ｂｃｌ－２野生型タンパク質と比較して、Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体に対するＡＢＴ－１９９の活性の顕著な損失が実証される。一方、化合物Ａ及び化合物Ｂの親和性は、この突然変異によりわずかに影響を受けるのみである。さらに、化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体に対して、ＡＢＴ－１９９より７５倍強力である。
【0071】
実施例２：野生型Ｂｃｌ－２又はＢｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体のいずれかを発現する改変細胞における化合物Ａ及び化合物Ｂのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
材料及び方法
細胞系統を供給者により推奨される培地中において、５％ ＣＯ２を含む加湿大気中、３７℃で増殖させた。ＲＳ４；１１（ATCC（登録商標）CRL1873（商標））をAmerican Type Culture Collection（ATCC）から購入し、ＫＭＳ－１２－ＰＥ（ＡＣＣ ６０６）をLeibniz-Institute DSMZ（Braunschweig, Germany）から購入した。野生型Ｂｃｌ－２（「Ｂｃｌ－２ ＷＴ」とも呼ばれる）及びＧ１０１Ｖで変異したＢｃｌ－２（「Ｂｃｌ－２ Ｇ１０１Ｖ」とも呼ばれる）を含有するレンチウイルス粒子をｐｃＬＶ－ＣＭＶ－ＤＥＳＴ－ＩＲＥＳ－ＴａｇＲＦＰにクローニングした。レンチウイルス粒子（１×１０６個）を８μg/mlでポリブレンと混合し、３２℃で１時間スピノキュレーションすることによりトランスダクションし、一晩インキュベーションした。ＫＭＳ－１２－ＰＥについては８日後、ＲＳ４；１１については２１日後に、ＴａｇＲＦＰ陽性細胞をＦＡＣＳにより分取した。ＢＣＬ２発現を、抗Ｆｌａｇ及び抗ＢＣＬ２抗体を使用するイムノブロッティングによりモニターした。細胞を９６ウェルプレートに播種し、１：３での１６連続希釈の化合物（９つの異なる濃度）で処理した。ＡＢＴ－１９９、化合物Ａ及び化合物Ｂで７２時間処理した後、細胞生存率を、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を使用して評価した。結果を、化合物により処理しない細胞（対照ウェル）の生存率に対して正規化した。Ｃ５０値を、XCellソフトウェアで非線形回帰アルゴリズムを使用して計算した。
材料及び方法
細胞系統を供給者により推奨される培地中において、５％ ＣＯ２を含む加湿大気中、３７℃で増殖させた。ＲＳ４；１１（ATCC（登録商標）CRL1873（商標））をAmerican Type Culture Collection（ATCC）から購入し、ＫＭＳ－１２－ＰＥ（ＡＣＣ ６０６）をLeibniz-Institute DSMZ（Braunschweig, Germany）から購入した。野生型Ｂｃｌ－２（「Ｂｃｌ－２ ＷＴ」とも呼ばれる）及びＧ１０１Ｖで変異したＢｃｌ－２（「Ｂｃｌ－２ Ｇ１０１Ｖ」とも呼ばれる）を含有するレンチウイルス粒子をｐｃＬＶ－ＣＭＶ－ＤＥＳＴ－ＩＲＥＳ－ＴａｇＲＦＰにクローニングした。レンチウイルス粒子（１×１０６個）を８μg/mlでポリブレンと混合し、３２℃で１時間スピノキュレーションすることによりトランスダクションし、一晩インキュベーションした。ＫＭＳ－１２－ＰＥについては８日後、ＲＳ４；１１については２１日後に、ＴａｇＲＦＰ陽性細胞をＦＡＣＳにより分取した。ＢＣＬ２発現を、抗Ｆｌａｇ及び抗ＢＣＬ２抗体を使用するイムノブロッティングによりモニターした。細胞を９６ウェルプレートに播種し、１：３での１６連続希釈の化合物（９つの異なる濃度）で処理した。ＡＢＴ－１９９、化合物Ａ及び化合物Ｂで７２時間処理した後、細胞生存率を、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を使用して評価した。結果を、化合物により処理しない細胞（対照ウェル）の生存率に対して正規化した。Ｃ５０値を、XCellソフトウェアで非線形回帰アルゴリズムを使用して計算した。
【0072】
結果
【表2】
【0073】
【表3】
【0074】
結論
これらの結果から、２種類の細胞系統を使用する細胞アッセイにおいて、ＡＢＴ－１９９と化合物Ｂとの間の効力の変化が実証された。実際に、Ｂｃｌ－２野生型タンパク質を過剰発現する細胞系統と比較して、Ｂｃｌ－２ Ｇ１０１Ｖ突然変異体を過剰発現する細胞系統において、ＡＢＴ－１９９の効力の著しい損失が観察された（細胞系統に応じて、４１～１２倍の差）。対照的に、化合物Ｂは、Ｇ１０１Ｖ Ｂｃｌ－２タンパク質又は天然型タンパク質のいずれかを過剰発現する細胞系統間において、差異はわずか９～７倍であることが示した。化合物Ｂ及びＡＢＴ－１９９は両方とも、野生型Ｂｃｌ－２を過剰発現する両細胞系統において同様の効力を示したが、化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２ Ｇ１０１Ｖ突然変異体を過剰発現する細胞系統において、ＡＢＴ－１９９より５～２倍高い効力を示した。
これらの結果から、２種類の細胞系統を使用する細胞アッセイにおいて、ＡＢＴ－１９９と化合物Ｂとの間の効力の変化が実証された。実際に、Ｂｃｌ－２野生型タンパク質を過剰発現する細胞系統と比較して、Ｂｃｌ－２ Ｇ１０１Ｖ突然変異体を過剰発現する細胞系統において、ＡＢＴ－１９９の効力の著しい損失が観察された（細胞系統に応じて、４１～１２倍の差）。対照的に、化合物Ｂは、Ｇ１０１Ｖ Ｂｃｌ－２タンパク質又は天然型タンパク質のいずれかを過剰発現する細胞系統間において、差異はわずか９～７倍であることが示した。化合物Ｂ及びＡＢＴ－１９９は両方とも、野生型Ｂｃｌ－２を過剰発現する両細胞系統において同様の効力を示したが、化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２ Ｇ１０１Ｖ突然変異体を過剰発現する細胞系統において、ＡＢＴ－１９９より５～２倍高い効力を示した。
【0075】
実施例３：治験実施計画書
再発性又は抵抗性急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する患者を対象に静脈内投与された化合物Ｂを評価するための第Ｉ相非盲検非無作為化非比較多施設共同試験を設定した。特に、本試験に含まれたＣＬＬ患者は、ｉｗＣＬＬガイドライン（Hallek M. et al, Blood, 2018, Vol. 131, 25, 2745-2760）で定義されているように、ベネトクラクス処置に対して再発性又は処置抵抗性（処置失敗、例えば、病勢安定、非奏効、病勢進行、原因を問わない死亡を除く）であり、代替療法が確立されていない。この試験には、約６０名の患者が登録されるであろう。この試験は、２つのパート：用量漸増のためのパート１、用量拡大のためのパート２に分けて設計されている。
再発性又は抵抗性急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する患者を対象に静脈内投与された化合物Ｂを評価するための第Ｉ相非盲検非無作為化非比較多施設共同試験を設定した。特に、本試験に含まれたＣＬＬ患者は、ｉｗＣＬＬガイドライン（Hallek M. et al, Blood, 2018, Vol. 131, 25, 2745-2760）で定義されているように、ベネトクラクス処置に対して再発性又は処置抵抗性（処置失敗、例えば、病勢安定、非奏効、病勢進行、原因を問わない死亡を除く）であり、代替療法が確立されていない。この試験には、約６０名の患者が登録されるであろう。この試験は、２つのパート：用量漸増のためのパート１、用量拡大のためのパート２に分けて設計されている。
【0076】
第１の目的
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する患者における化合物Ｂの安全性プロファイル（用量制限毒性（ＤＬＴ）及び最大耐用量（ＭＴＤ）を含む）及び忍容性を決定し、推奨第ＩＩ相用量（ＲＰ２Ｄ）を安全性、ＰＫ及び予備的な有効性の結果に従って決定する。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する患者における化合物Ｂの安全性プロファイル（用量制限毒性（ＤＬＴ）及び最大耐用量（ＭＴＤ）を含む）及び忍容性を決定し、推奨第ＩＩ相用量（ＲＰ２Ｄ）を安全性、ＰＫ及び予備的な有効性の結果に従って決定する。
【0077】
第２の目的
－血漿中及び尿中の化合物Ｂの薬物動態（ＰＫ）プロファイルを決定する。
－化合物Ｂの予備的な抗腫瘍活性を、各評価集団（ＡＭＬ、ＮＨＬ、ＭＭ、ＣＬＬ）に適した奏効基準を使用して評価する。
－血漿中及び尿中の化合物Ｂの薬物動態（ＰＫ）プロファイルを決定する。
－化合物Ｂの予備的な抗腫瘍活性を、各評価集団（ＡＭＬ、ＮＨＬ、ＭＭ、ＣＬＬ）に適した奏効基準を使用して評価する。
【0078】
突然変異を有するＣＬＬ患者に関する探索的目的
以前にベネトクラクスを受けたＡＭＬ又はＣＬＬを患っている患者における処置前後の骨髄穿刺液及び血液サンプルを比較することにより、Ｂｃｌ－２突然変異（Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異及びＡｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を含む）を有する細胞に対する化合物Ｂの有効性を評価する。突然変異を、Droplet Digital ＰＣＲ技術（Vogelstein and Kinzler, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999 96 Genetics; Olmedillas-Lopez S et al, Mol Diagn Ther. 2017 Oct;21(5):493-510）を使用して、患者サンプルを分析することにより検出する。
以前にベネトクラクスを受けたＡＭＬ又はＣＬＬを患っている患者における処置前後の骨髄穿刺液及び血液サンプルを比較することにより、Ｂｃｌ－２突然変異（Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異及びＡｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異を含む）を有する細胞に対する化合物Ｂの有効性を評価する。突然変異を、Droplet Digital ＰＣＲ技術（Vogelstein and Kinzler, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999 96 Genetics; Olmedillas-Lopez S et al, Mol Diagn Ther. 2017 Oct;21(5):493-510）を使用して、患者サンプルを分析することにより検出する。
【0079】
試験薬剤
－化合物Ｂを、中心又は末梢静脈ラインを介して、ｉ．ｖ．注入により投与するものとする。
－注入用液を、以下に記載されるように、ＨＰ－β－シクロデキストリンと共に配合された１５０mg 化合物Ｂ（遊離塩基として表される）を含有する２０mLバイアルを使用して調製するものとする。
－予備的な安全性及びＰＫデータに基づいて、注入期間を適合させることができる。
－化合物Ｂを、中心又は末梢静脈ラインを介して、ｉ．ｖ．注入により投与するものとする。
－注入用液を、以下に記載されるように、ＨＰ－β－シクロデキストリンと共に配合された１５０mg 化合物Ｂ（遊離塩基として表される）を含有する２０mLバイアルを使用して調製するものとする。
－予備的な安全性及びＰＫデータに基づいて、注入期間を適合させることができる。
【0080】
２０mLバイアル中でＨＰ－β－シクロデキストリンに溶解させた化合物Ｂの凍結乾燥物の調製
凍結乾燥物を２０mLバイアル中に調製する。このバイアル中で、非経口経路により投与される溶液を再構成することが可能であろう。この凍結乾燥物を、２０mg/mL 化合物Ｂ（遊離塩基）の用量を含有する２０％ Cavitron（商標）W7HP5液の凍結乾燥により得る。
凍結乾燥物を２０mLバイアル中に調製する。このバイアル中で、非経口経路により投与される溶液を再構成することが可能であろう。この凍結乾燥物を、２０mg/mL 化合物Ｂ（遊離塩基）の用量を含有する２０％ Cavitron（商標）W7HP5液の凍結乾燥により得る。
【0081】
手順
５Ｌ反応器中に、１５００ｇ 水を秤量する。マグネティックスターラーで攪拌しながら、ボルテックスし、ついで、６００ｇ Cavitron（商標）W7HP5に注ぐ。シクロデキストリンが完全に可溶化するまで、媒体を大気温度で撹拌し、６８．１６ｇ 「化合物Ｂ，Ｈ２ＳＯ４」を加え、溶液を６０℃以下に加熱する。懸濁液をマグネティックスターラーで数時間撹拌し、ついで、媒体を３０℃未満の温度に戻す。得られた溶液のｐＨを測定し、０．５M ＮａＯＨ溶液をゆっくり注いで、ｐＨ３．０に調整する。マグネティックスターラーでの攪拌を維持しながら、水を加えることにより、溶液を３Ｌの体積にする。
５Ｌ反応器中に、１５００ｇ 水を秤量する。マグネティックスターラーで攪拌しながら、ボルテックスし、ついで、６００ｇ Cavitron（商標）W7HP5に注ぐ。シクロデキストリンが完全に可溶化するまで、媒体を大気温度で撹拌し、６８．１６ｇ 「化合物Ｂ，Ｈ２ＳＯ４」を加え、溶液を６０℃以下に加熱する。懸濁液をマグネティックスターラーで数時間撹拌し、ついで、媒体を３０℃未満の温度に戻す。得られた溶液のｐＨを測定し、０．５M ＮａＯＨ溶液をゆっくり注いで、ｐＨ３．０に調整する。マグネティックスターラーでの攪拌を維持しながら、水を加えることにより、溶液を３Ｌの体積にする。
【0082】
そのようにして得られた溶液を０．２μmフィルターに通す。
【0083】
２０mLバイアルにろ過された溶液を充填し、各バイアルが、少なくとも１５０mg 化合物Ｂ（遊離塩基として表される）を含有するようにし、サンプルを凍結乾燥工程に供する。
【0084】
得られた凍結乾燥物は、非経口投与のための医薬組成物の調製に使用されることが意図される。
【0085】
用量配分方法論
全ての適応症について組み合わせられ、過剰用量制御（ＥＷＯＣ）法による漸増により導かれるベイズ階層モデル（ＢＨＭ）を、サイクル１中のＤＬＴの発生に基づいて、用量漸増を導き、ＭＴＤを推定するのに使用するものとする。
全ての適応症について組み合わせられ、過剰用量制御（ＥＷＯＣ）法による漸増により導かれるベイズ階層モデル（ＢＨＭ）を、サイクル１中のＤＬＴの発生に基づいて、用量漸増を導き、ＭＴＤを推定するのに使用するものとする。
【0086】
代替的に、過剰用量対照（ＥＷＯＣ）法による漸増により導かれる適応ベイズ論理回帰モデル（ＢＬＲＭ）を使用して、サイクル１中のＤＬＴの発生に基づいて用量推奨を行い、単剤として投与された化合物ＢについてのＭＴＤ／ＲＰ２Ｄを推定する。
【0087】
処置期間
処置の予定期間は、病勢進行までとする。患者は、許容できない毒性のために試験薬剤による処置を早期に中止することができかつ／又は処置を治験責任医師もしくは患者の判断で治療を中止する。
処置の予定期間は、病勢進行までとする。患者は、許容できない毒性のために試験薬剤による処置を早期に中止することができかつ／又は処置を治験責任医師もしくは患者の判断で治療を中止する。
【0088】
実施例４：野生型Ｂｃｌ－２、Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体、Ｂｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異体、Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異体、Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異体、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異体及びＡｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異体に対する化合物Ａ及び化合物Ｂの親和性データ
蛍光クエンチアッセイにより、
（ｉ）アミノ酸配列（配列番号：０２）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＣ末端Ｃｙ５ラベルＢｃｌ－２野生型タンパク質（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｐ１０４１５）
又は
（ｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０３）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体
もしくは
（ｉｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０４）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異体
もしくは
（ｉｖ）アミノ酸配列（配列番号：０５）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異体
もしくは
（ｖ）アミノ酸配列（配列番号：０６）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異体
もしくは
（ｖｉ）アミノ酸配列（配列番号：０７）：
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異体
もしくは
（ｖｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０８）：
（同配列は、Ｃ末端において、アミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異体
（ここで、Ｘは、Lumiprobe GmbHカタログ番号１３３８０からのsulpho-Cyanine5により硫黄でラベルされたシステインである）
の蛍光強度の変化を、アミノ酸配列（配列番号：０１）：［QWAREIGAQLRRMADDLNAQY］（同配列は、Ｃ末端領域において、アミノ酸Ｘ’に連結している。ここで、Ｘ’は、AAT Bioquestカタログ番号２０７９からのＴＱ５ＷＳにより硫黄でラベルされたシステインである）を有するＰＵＭＡ（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｑ９ＢＸＨ１）から得られたＣ末端ラベルされたペプチドの結合に基づいて測定する。
蛍光クエンチアッセイにより、
（ｉ）アミノ酸配列（配列番号：０２）：
【化5】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＣ末端Ｃｙ５ラベルＢｃｌ－２野生型タンパク質（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｐ１０４１５）
又は
（ｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０３）：
【化6】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ｇｌｙ１０１Ｖａｌ突然変異体
もしくは
（ｉｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０４）：
【化7】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ突然変異体
もしくは
（ｉｖ）アミノ酸配列（配列番号：０５）：
【化8】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｖａｌ突然変異体
もしくは
（ｖ）アミノ酸配列（配列番号：０６）：
【化9】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異体
もしくは
（ｖｉ）アミノ酸配列（配列番号：０７）：
【化10】
（同配列は、Ｃ末端において、以下で定義されるステインに対応するアミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ突然変異体
もしくは
（ｖｉｉ）アミノ酸配列（配列番号：０８）：
【化11】
（同配列は、Ｃ末端において、アミノ酸Ｘに連結している）
を有するＢｃｌ－２ Ａｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異体
（ここで、Ｘは、Lumiprobe GmbHカタログ番号１３３８０からのsulpho-Cyanine5により硫黄でラベルされたシステインである）
の蛍光強度の変化を、アミノ酸配列（配列番号：０１）：［QWAREIGAQLRRMADDLNAQY］（同配列は、Ｃ末端領域において、アミノ酸Ｘ’に連結している。ここで、Ｘ’は、AAT Bioquestカタログ番号２０７９からのＴＱ５ＷＳにより硫黄でラベルされたシステインである）を有するＰＵＭＡ（UniProtKB（登録商標）一次受託番号Ｑ９ＢＸＨ１）から得られたＣ末端ラベルされたペプチドの結合に基づいて測定する。
【0089】
このペプチドと同じ部位に競合的に結合する化合物の添加により、蛍光クエンチ剤の置換によるタンパク質の蛍光強度が向上する。
【0090】
目的は、蛍光強度により測定される、ＰＵＭＡクエンチ試薬置換を介した、リコンビナント野生型Ｂｃｌ－２、Ｇ１０１Ｖ、Ｄ１０３Ｙ、Ｄ１０３Ｖ、Ｄ１０３Ｅ、Ａ１１３Ｇ、Ｒ１２９Ｌ突然変異体の競合的結合剤としてのＡＢＴ－１９９、化合物Ａ及び化合物ＢのＫＩを決定することであった。
【0091】
アッセイを黒壁、平底、低結合３８４ウェルプレート中で行った。化合物（ＤＭＳＯ中の最終濃度５％）を、Ｇ１０１Ｖの場合を除いて（この場合、１００nM ペプチドを使用した）、５０nM ペプチド（プローブ）及び［１nM 野生型Ｂｃｌ－２タンパク質又は１nM Ｂｃｌ－２突然変異体］を含有するバッファー（１０mM ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸［ＨＥＰＥＳ］、１５０mM ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ７．４）中で混合した。アッセイプレートを１８℃で約２時間インキュベーションし、蛍光強度をSynergy Neoリーダー（Ｅｘ．６２０nm、Ｅｍ．６８０nm）において測定した。用量応答曲線を、４パラメーターロジスティックモデル（シグモイド用量応答モデル）を使用して、XL-Fitソフトウェアでプロットし、５０％の蛍光強度の上昇を与えた阻害濃度を決定した（ＩＣ５０）。ｃＫＩ値をCer et al, Nucleic Acids Res, 2009, Jul 1;37(WebServer issue): W441-W445に従って、ＩＣ５０値から決定した。
【0092】
【表4】
【0093】
【表5】
【0094】
データから、Ｂｃｌ－２野生型タンパク質と比較して、Ｂｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ、Ｂｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｖａｌ及びＢｃｌ－２ Ａｓｐ１０３Ｇｌｕ突然変異体に対するＡＢＴ－１９９の活性の著しい喪失が実証される。一方、化合物Ａ及び化合物Ｂの親和性は、これらの突然変異によりわずかにしか影響を受けない。化合物Ｂの親和性は、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及びＡｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異により中程度に影響を受ける。これにもかかわらず、化合物Ｂは、Ａｒｇ１２９Ｌｅｕ及びＡｌａ１１３Ｇｌｙ突然変異体それぞれに対して、ＡＢＴ－１９９より１２倍及び４倍強力である。
【0095】
実施例５：Ａｓｐ１０３Ｔｙｒ変異体を発現する改変細胞における化合物Ｂ及びＡＢＴ－１９９のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
材料及び方法
細胞系統を、供給者により推奨される培地中において、５％ ＣＯ２を含む加湿大気中、３７℃で増殖させた。ＫＭＳ－１２－ＰＥ（ＡＣＣ ６０６）をLeibniz-Institute DSMZ（Braunschweig, Germany）から得た。Ｄ１０３Ｙで突然変異したＢｃｌ－２を含有するレンチウイルス粒子をｐｃＬＶ－ＣＭＶ－ＤＥＳＴ－ＩＲＥＳ－ＴａｇＲＦＰにクロ－ニングした。レンチウイルス粒子（１×１０６個）を８μg/mlでポリブレンと混合し、３２℃で１時間スピノキュレーションすることによりトランスダクションし、一晩インキュベーションした。８日後に、ＴａｇＲＦＰ陽性ＫＭＳ－１２－ＰＥ細胞をＦＡＣＳにより分取した。Ｂｃｌ－２発現を、抗Ｆｌａｇ及び抗ＢＣＬ２抗体を使用するイムノブロッティングによりモニターした。細胞を９６ウェルプレートに播種し、１：３での１６連続希釈の化合物により、９点で処理した。ＡＢＴ－１９９及び化合物Ｂで７２時間処理した後、細胞生存率を、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を使用して評価した。結果を、化合物により処理しない細胞（対照ウェル）の生存率に対して正規化した。Ｃ５０値を、XCellソフトウェアで非線形回帰アルゴリズムを使用して計算した。
材料及び方法
細胞系統を、供給者により推奨される培地中において、５％ ＣＯ２を含む加湿大気中、３７℃で増殖させた。ＫＭＳ－１２－ＰＥ（ＡＣＣ ６０６）をLeibniz-Institute DSMZ（Braunschweig, Germany）から得た。Ｄ１０３Ｙで突然変異したＢｃｌ－２を含有するレンチウイルス粒子をｐｃＬＶ－ＣＭＶ－ＤＥＳＴ－ＩＲＥＳ－ＴａｇＲＦＰにクロ－ニングした。レンチウイルス粒子（１×１０６個）を８μg/mlでポリブレンと混合し、３２℃で１時間スピノキュレーションすることによりトランスダクションし、一晩インキュベーションした。８日後に、ＴａｇＲＦＰ陽性ＫＭＳ－１２－ＰＥ細胞をＦＡＣＳにより分取した。Ｂｃｌ－２発現を、抗Ｆｌａｇ及び抗ＢＣＬ２抗体を使用するイムノブロッティングによりモニターした。細胞を９６ウェルプレートに播種し、１：３での１６連続希釈の化合物により、９点で処理した。ＡＢＴ－１９９及び化合物Ｂで７２時間処理した後、細胞生存率を、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を使用して評価した。結果を、化合物により処理しない細胞（対照ウェル）の生存率に対して正規化した。Ｃ５０値を、XCellソフトウェアで非線形回帰アルゴリズムを使用して計算した。
【0096】
結果
【表6】
【0097】
結論
これらの結果から、ＢＣＬ２ Ｄ１０３Ｙを過剰発現するＫＭＳ－１２－ＰＥ細胞系統を使用する細胞アッセイにおいて、ＡＢＴ－１９９と化合物Ｂとの間の効力の変化が実証された。化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２ Ｄ１０３Ｙ突然変異体を過剰発現する細胞系統において、ＡＢＴ－１９９より約２２倍高い効力を示した。
これらの結果から、ＢＣＬ２ Ｄ１０３Ｙを過剰発現するＫＭＳ－１２－ＰＥ細胞系統を使用する細胞アッセイにおいて、ＡＢＴ－１９９と化合物Ｂとの間の効力の変化が実証された。化合物Ｂは、Ｂｃｌ－２ Ｄ１０３Ｙ突然変異体を過剰発現する細胞系統において、ＡＢＴ－１９９より約２２倍高い効力を示した。
【0098】
Ｄ１０３Ｖ、Ｄ１０３Ｅ、Ｒ１２９Ｌ及びＡ１１３Ｇ突然変異体を含む他のＢｃｌ－２臨床突然変異体を過剰発現する細胞系統を、現在、上記言及された化合物を評価するために、同じプロトコ－ルを同様に使用して設定しているところである。
【0099】
Ｂｃｌ－２突然変異体を発現する改変細胞（実施例２及び５に記載された改変細胞系統を含む）に由来する異種移植モデルに基づく更なるｉｎ ｖｉｖｏ実験から、化合物Ｂが、Ｂｃｌ－２突然変異、例えば、Ｇ１０１Ｖ及び／又はＤ１０３Ｙ等を有するＢｃｌ－２媒介性ガンを処置するのに有効な治療であることができることを示すことができる。
【0100】
更なる結果から、Ｇ１０１Ｖ、Ｄ１０３Ｙ、Ｄ１０３Ｖ、Ｄ１０３Ｅ、Ｒ１２９Ｌ及びＡ１１３Ｇから選択されるＢｃｌ－２突然変異のうちの少なくとも１つを有するＣＬＬ患者由来のｅｘ ｖｉｖｏサンプルにおいて、化合物Ｂの効力を、細胞生存アッセイを使用して試験することにより得ることができる。
【配列表】
【国際調査報告】