特表 2022-532723 季節性インフルエンザワクチン及びアデノウイルス系呼吸器合胞体ウイルスワクチンの共投与

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-19

(54)【発明の名称】季節性インフルエンザワクチン及びアデノウイルス系呼吸器合胞体ウイルスワクチンの共投与

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/145 20060101AFI20220711BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20220711BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20220711BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220711BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20220711BHJP

   A61K 39/235 20060101ALI20220711BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20220711BHJP

   C12N 15/861 20060101ALN20220711BHJP

   C12N 15/45 20060101ALN20220711BHJP

   C12N 15/44 20060101ALN20220711BHJP

【ＦＩ】

A61K39/145

A61P31/16

A61P31/20

A61P37/04

A61K39/00 G

A61K39/235

A61K35/761

C12N15/861 Z ZNA

C12N15/45

C12N15/44

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021567987

(86)(22)【出願日】2020-05-14

(85)【翻訳文提出日】2021-11-19

(86)【国際出願番号】 EP2020063406

(87)【国際公開番号】W WO2020229577

(87)【国際公開日】2020-11-19

(31)【優先権主張番号】62/848,036

(32)【優先日】2019-05-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516257833

【氏名又は名称】ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー

【氏名又は名称原語表記】ＪＡＮＳＳＥＮ ＶＡＣＣＩＮＥＳ ＆ ＰＲＥＶＥＮＴＩＯＮ Ｂ．Ｖ．

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100135943

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 規樹

(72)【発明者】

【氏名】カレンドレット，ブノワ，クリストフ，ステファン

(72)【発明者】

【氏名】サドフ，ジェラルド，シー．

(72)【発明者】

【氏名】デ ペップ，エルス

【テーマコード（参考）】

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C085AA03

4C085BA55

4C085BA77

4C085CC08

4C085EE03

4C085GG03

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA12

4C087MA02

4C087MA66

4C087NA13

4C087NA20

4C087ZB09

4C087ZB33

(57)【要約】

ヒト対象において、重篤な有害事象を誘導することなく、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に対する防御免疫応答及びインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を誘導する方法について記載されている。方法は、対象に、融合前コンフォメーションで安定化されている組換えＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする有効量のアデノウイルスベクターを、有効量のインフルエンザワクチンと共に投与することを含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とするヒト対象において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染に対する防御免疫応答及びインフルエンザウイルス感染に対する防御免疫応答の両方を誘導する方法であって、前記対象に：
（ａ）融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む有効量の医薬組成物、好ましくはワクチンであって、前記アデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個含む、前記有効量の前記医薬組成物と、
（ｂ）有効量のインフルエンザワクチン、好ましくは季節性インフルエンザワクチンとを筋肉内投与することを含み、
（ａ）及び（ｂ）が共投与される、方法。

【請求項2】

前記（ａ）の医薬組成物及び前記（ｂ）のワクチンが、同時に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記アデノウイルスベクターが複製能を持たず、前記アデノウイルスの初期領域１（Ｅ１領域）及び初期領域３（Ｅ３領域）の少なくとも１つに欠失を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記アデノウイルスベクターが、前記Ｅ１領域及び前記Ｅ３領域の欠失を有する、複製能を持たないＡｄ２６アデノウイルスベクターである、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

前記アデノウイルスベクターが、前記Ｅ１領域及び前記Ｅ３領域の欠失を有する、複製能を持たないＡｄ３５アデノウイルスベクターである、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

前記アデノウイルスベクターによってコードされる前記組換えＲＳＶ Ｆポリペプチドが、配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする前記核酸が、配列番号６又は配列番号７のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記有効量の前記医薬組成物が、前記アデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１１個含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記対象が前記ＲＳＶ感染症に感染しやすい、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記対象が前記インフルエンザウイルス感染症に感染しやすい、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記防御免疫応答が、ＲＳＶへの曝露時に前記対象のＲＳＶ臨床症状がないか又はＲＳＶ臨床症状が減少することを特徴とする、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記防御免疫応答が、インフルエンザウイルスへの曝露時に前記対象のインフルエンザウイルス臨床症状がないか又はインフルエンザウイルス臨床症状が減少することを特徴とする、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記防御免疫応答が、ＲＳＶに対する中和抗体及び／又はＲＳＶに対する防御免疫の存在によって特徴付けられ、好ましくは、前記医薬組成物及び前記ワクチンの投与から８～３５日後に検出可能である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記防御免疫応答が、インフルエンザウイルスに対する中和抗体及び／又はインフルエンザウイルスに対する防御免疫の存在によって特徴付けられ、好ましくは、前記医薬組成物及び前記ワクチンの投与から８～３５日後に検出可能である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記投与が、重篤な有害事象を誘導しない、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

（ａ）融合前コンフォメーションで安定化されている呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む有効量の医薬組成物、好ましくはワクチンであって、前記アデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個含む、前記有効量の前記医薬組成物と、
（ｂ）有効量のインフルエンザワクチン、好ましくは季節性インフルエンザワクチンとを含む組み合わせ物であって、
それを必要とするヒト対象に筋肉内投与し、前記ヒト対象において、ＲＳＶ感染に対する防御免疫応答及びインフルエンザウイルス感染に対する防御免疫応答の両方を誘導するためのものであり、（ａ）及び（ｂ）が共投与される、組み合わせ物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬の分野に属する。特に、本発明の実施形態は、アデノウイルス系ワクチン並びに呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及びインフルエンザウイルス感染の予防的処置のためのインフルエンザワクチンと組み合わせたその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、５歳未満の乳児及び小児における重篤な急性呼吸器疾患の最も重要な原因と考えられる（Ｈａｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００９：３６０；５８８－５９８；Ｓｈａｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ．１９９９：２８２；１４４０－１４４６；Ｓｔｏｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ．２０１２：３１；５－９）。世界的に、ＲＳＶは、毎年、推定３４０万人の入院の原因となっている。米国では、５歳未満の小児におけるＲＳＶ感染は、毎年５７，０００～１７５，０００人が入院し、５００，０００人が救急処置室を訪れ、およそ５００人が死亡する原因となっている（Ｐａｒａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ．２００４：２２；２７５－２８４；Ｓｈａｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ．１９９９：２８２；１４４０－１４４６；Ｓｔｏｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ．２０１２：３１；５－９）。米国では、乳児の６０％はＲＳＶへの最初の曝露で感染し（Ｇｌｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ．１９８６：１４０；５４３－５４６）、ほぼ全ての小児が２～３歳までにウイルスに感染しているであろう。ＲＳＶに対する免疫は一過性であり、生涯にわたって繰り返し感染が発生する（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．１９９１：１６３；６９３－６９８）。１歳未満の小児において、ＲＳＶは、気管支炎の最も重要な原因であり、ＲＳＶによる入院は、月齢６ヶ月未満の小児の中で最も高い（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＣＤＣ）。呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染－感染及び発症。以下で入手可能：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｒｓｖ／ａｂｏｕｔ／ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ｈｔｍｌ （ｌａｓｔ ａｃｃｅｓｓｅｄ ０２ Ｊｕｎｅ ２０１６）；Ｈａｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００９：３６０；５８８－５９８）。５歳未満の小児におけるＲＳＶ関連の死亡のほとんど全て（９９％）は、発展途上国で発生している（Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．２０１０：３７５；１５４５－１５５５）。それにも関わらず、先進国におけるＲＳＶによる疾病負荷は大きく、小児期のＲＳＶ感染は、喘鳴、気道過敏症、及び喘息の発症につながる（Ｐｅｅｂｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４：１１３；Ｓ１５－１８；Ｒｅｇｎｉｅｒ ａｎｄ Ｈｕｅｌｓ，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ．２０１３：３２；８２０－８２６；Ｓｉｇｕｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．２００５：１７１；１３７－１４１；Ｓｉｍｏｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０：１２６；２５６－２６２；Ｓｉｍｏｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ．２００７：１５１；３４－４２，４２ ｅ３１）。

【0003】

小児に加えて、高齢者、免疫不全者、及び慢性心肺状態にある人において、ＲＳＶは、呼吸器感染の重要な原因である（Ｆａｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００５：３５２；１７４９－１７５９）。長期間の看護施設において、ＲＳＶは、毎年５～１０％の居住者に感染し、かなりの割合の肺炎率（１０～２０％）及び死亡率（２～５％）を伴うと推定される（Ｆａｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ．２０００：１３；３７１－３８４）。ＲＳＶ負荷に関する疫学研究において、米国では、毎年ＲＳＶで１１，０００人の高齢者が死亡していると推定された（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ．２００３：２８９；１７９－１８６）。これらのデータは、特定の成人集団に効果的なワクチンを開発することの重要性を裏付けている。

【0004】

ＲＳＶ融合（Ｆ）糖タンパク質に対する中和モノクローナル抗体（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）［パリビズマブ］）による受動免疫による予防が利用可能であるが、未熟児（在胎週数２９週未満）、重度の心肺疾患のある子供、又は免疫不全が重篤な子供にのみ適応される（米国小児科学会感染症委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ）、米国小児科学会細気管支炎ガイドライン委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ Ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ．） 呼吸器合胞体ウイルス感染による入院のリスクが高い乳児及び幼児におけるパリビズマブ予防のための最新のガイダンス（Ｕｐｄａｔｅｄ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ａｍｏｎｇ ｉｎｆａｎｔｓ ａｎｄ ｙｏｕｎｇ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ａｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．）Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ．２０１４：１３４；４１５－４２０）。Ｓｙｎａｇｉｓは入院のリスクを５５％減少させることが示されている（予防（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．）呼吸器合胞体ウイルス感染の予防（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）：パリビズマブの使用に関する適応症及びＲＳＶ－ＩＧＩＶの使用に関する最新情報（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ ａｎｄ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ＲＳＶ－ＩＧＩＶ．）米国小児科学会感染症委員会及び胎児及び新生児委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｆｅｔｕｓ ａｎｄ Ｎｅｗｂｏｒｎ．）Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ．１９９８：１０２；１２１１－１２１６）。

【0005】

ＲＳＶワクチン開発への高い疾病負荷及び強い関心にも関わらず、ＲＳＶに対する認可されたワクチンがない。１９６０年代後半において、ミョウバンでアジュバント添加されたホルマリン不活化ＲＳＶ（ＦＩ－ＲＳＶ）ワクチンを評価するために一連の研究が開始され、これらの研究の結果はＲＳＶワクチン分野に大きな影響を及ぼした。筋肉内注射によって送達されたＦＩ－ＲＳＶワクチンを用いて、異なる年齢群の小児を対象に４つの研究が並行して実施された（Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９６９：８９；４４９－４６３；Ｆｕｌｇｉｎｉｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９６９：８９；４３５－４４８；Ｋａｐｉｋｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９６９：８９；４０５－４２１；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９６９：８９；４２２－４３４）。ＲＳＶに感染したＦＩ－ＲＳＶレシピエントの８０％が入院を必要とし、次の冬季に２人の子供が死亡した（Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９６９：８９；４４９－４６３）。ＲＳＶに感染したコントロール群の子供のうち入院が必要だったのはわずか５％であった。再感染時にＦＩ－ＲＳＶレシピエントで観察された呼吸器疾患増強（ＥＲＤ）のメカニズムが調査されており、その年齢群に存在する小さな気管支との関連における異常な免疫応答の結果であると考えられている。患者サンプル及び動物モデルの分析から得られたデータは、ＦＩ－ＲＳＶ ＥＲＤが、低中和抗体価、気道における免疫複合体沈着を促進する低い結合活性の非中和抗体の存在、ウイルスクリアランスに重要であることが示されている細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞プライム化の減少、及び好酸球増加症の証拠を伴う強化されたＣＤ４＋Ｔヘルパー２型（Ｔｈ２）－歪んだ応答を特徴とすることを示唆している（Ｂｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂ Ｐａｔｈｏｇ．２０１３：５５；９－１５；Ｃｏｎｎｏｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９２：６６；７４４４－７４５１；Ｄｅ Ｓｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２００２：７６；１１５６１－１１５６９；Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３：１５１；２０３２－２０４０；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．１９７６：１０；７５－７８；Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９８６：２４；１９７－２０２；Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９８８：２６；１５９５－１５９７；Ｐｏｌａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００２：１９６；８５９－８６５）。ホルマリンとＲＳＶタンパク質抗原の化学的相互作用は、ＦＩ－ＲＳＶワクチンがその後のＲＳＶ感染時にＥＲＤを促進するメカニズムの１つである可能性があると考えられている（Ｍｏｇｈａｄｄａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００６：１２；９０５－９０７）。このような理由によって、ホルマリンはＲＳＶワクチンの開発には使用されなくなった。

【0006】

ＦＩ－ＲＳＶワクチンに加えて、いくつかの弱毒生ＲＳＶワクチン及びサブユニットＲＳＶワクチンが動物モデル及びヒトの研究で試験されてきたが、多くは、安全性と免疫原性／有効性の適切なバランスを達成できないことによって阻害されてきた。弱毒生ワクチンは、とりわけ、乳児において、過剰な弱毒化及び不十分な弱毒化に関連する困難により、免疫性試験が行われてきた（Ｂｅｌｓｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００４：１９０；２０９６－２１０３；Ｋａｒｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００５：１９１；１０９３－１１０４；Ｌｕｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ．２００９：２７；５６６７－５６７６）。サブユニットワクチンに関して、どちらも膜タンパク質であるＲＳＶ融合（Ｆ）タンパク質及び糖タンパク質（Ｇ）タンパク質は、中和抗体を誘導する唯一のＲＳＶタンパク質である（Ｓｈａｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ．１９９９：２８２；１４４０－１４４６）。ＲＳＶ Ｇタンパク質とは異なり、Ｆタンパク質はＲＳＶ株間で保存されている。既知の優れた免疫原性、防御免疫、及びＲＳＶ株間のＦタンパク質の高度な保存に基づいて、様々なＲＳＶ Ｆサブユニットワクチンが開発されている（Ｇｒａｈａｍ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１１：２３９；１４９－１６６）。現在利用可能な抗Ｆタンパク質中和モノクローナル抗体予防によって提供される概念実証は、高レベルの長期中和抗体を誘導するワクチンがＲＳＶ疾患を予防する可能性があるという考えを支持する（Ｆｅｌｔｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．２０１１：７０；１８６－１９１；Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．１９９８：１７７；４６７－４６９；Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．１９９３：３２９；１５２４－１５３０）。いくつかの研究は、高齢者におけるＲＳＶに対する保護の低下は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）産生の加齢に伴う低下、ＣＤ８＋のＣＤ４＋Ｔ細胞に対する比率の低下、及び循環するＲＳＶ特異的ＣＤ８＋メモリーＴ細胞の数の減少に起因する可能性があることを示唆している（Ｄｅ Ｂｒｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００５：１９１；１７１０－１７１８；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｃｈ Ａｇｅｉｎｇ Ｄｅｖ．２００５：１２６；１２２３－１２２９；Ｌｏｏｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００２：１８５；６８２－６８５）。高レベルの血清中和抗体は、高齢者における重症度の低い感染症に関連する（Ｗａｌｓｈ ａｎｄ Ｆａｌｓｅｙ，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００４：１９０；３７３－３７８）。成人においてＲＳＶ感染後、血清抗体価は急速に上昇するが、１６～２０か月後には感染前のレベルにゆっくりと戻ることも実証されている（Ｆａｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ．２００６：７８；１４９３－１４９７）。１９６０年代のＦＩ－ＲＳＶワクチン研究で以前に観察されたＥＲＤを考慮すると、将来のワクチンは強力な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を促進し、歪んだＴｈ２型ＣＤ４＋Ｔ細胞反応を回避するはずである（Ｇｒａｈａｍ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１１：２３９；１４９－１６６）。

【0007】

ＲＳＶ Ｆタンパク質は、不可逆性タンパク質が不安定な融合前コンフォメーションから安定した融合後コンフォメーションにリフォールディングすることにより、ウイルスと宿主細胞膜とを融合する。両コンフォメーションの構造がＲＳＶ Ｆ（ＭｃＬｅｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１３：３４２，５９２－５９８；ＭｃＬｅｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０１０：１７，２４８－２５０；ＭｃＬｅｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４０，２０１３：１１１３－１１１７；Ｓｗａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ２０１１：１０８，９６１９－９６２４）、並びに関連するパラミクソウイルスの融合タンパク質について決定されており、それらはこの複雑な融合装置のメカニズムに洞察を加えている。他のＩ型融合タンパク質のように、不活性な前駆体、ＲＳＶ Ｆ０は、フーリン様プロテアーゼによって細胞内成熟中に切断される必要がある。ＲＳＶ Ｆ０は、２つのフーリン部位（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣＯ８３３０１のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣＯ８３３０１のアミノ酸残基１０９／１１０と１３６／１３７の間）を含み、これが３つのポリペプチド：Ｆ２、ｐ２７、及びＦ１につながっており、Ｆ１はそのＮ末端に疎水性融合ペプチド（ＦＰ）を含む。融合前コンフォメーションから融合後コンフォメーションにリフォールディングするために、（例えばＦＰ及びヘプタッドリピートＡ（ＨＲＡ）を含む残基１３７～２１６の）リフォールディング領域１（ＲＲ１）は、へリックス、ループ、及びストランドのアセンブリから長い連続へリックスに変形する必要がある。ＲＲ１のＮ末端セグメントに位置するＦＰは、その後、ウイルス膜から伸びて標的細胞の近位膜に入ることができる。次に、融合前ＦスパイクにおいてＣ末端ステムを形成し、且つヘプタッドリピートＢ（ＨＲＢ）を含むリフォールディング領域２（ＲＲ２）が、ＲＳＶ Ｆヘッドの他方の側に位置を変え、ＨＲＡコイルドコイルトリマーをＨＲＢドメインと結合させて、６へリックスバンドルを形成する。６へリックスバンドルを完成するためのＲＲ１コイルドコイルの形成及びＲＲ２の移動は、リフォールディングの過程で起こる最も劇的な構造変化である。

【0008】

ヒトの血清中の大半の中和抗体は、融合前コンフォメーションに対するものであるが、不安定さに起因して、融合前コンフォメーションは、溶液中及びビリオン表面上の両方で融合後コンフォメーションに早期にリフォールディングする傾向がある。融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドについて記載されている。例えば、国際公開第２０１４／１７４０１８号パンフレット、同第２０１４／２０２５７０号パンフレット、及び同第２０１７／１７４５６４号パンフレットを参照されたい。しかしながら、ヒトにおけるそのようなポリペプチドの安全性、有効性／免疫原性に関する報告はない。

【0009】

インフルエンザウイルスは、主要なヒト病原体であり、無症状感染から死亡をもたらし得る原発性ウイルス肺炎まで重症度に幅がある呼吸器疾患（一般に「インフルエンザ（ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）」又は「インフルエンザ（ｔｈｅ ｆｌｕ）」と称される）を引き起こす。感染の臨床効果は、インフルエンザ株の病原性並びに宿主の曝露、既往歴、年齢、及び免疫状態により変動する。毎年、世界中で約１０億人の人々がインフルエンザウイルスによる感染を受け、３～５百万症例の重病及び推定３００，０００から５００，０００のインフルエンザ関連死をもたらすことが推定されている。

【0010】

ヒト及び動物に感染症状を引き起こす３つの属のインフルエンザウイルス（Ａ型、Ｂ型、及びＣ型）が存在する。Ａ型及びＢ型ウイルスは、ヒトで観察されるインフルエンザの季節的な流行（Ａ型及びＢ型）及び大流行（Ａ型）を引き起こす病原体である。

【0011】

インフルエンザＡウイルスは、表面糖タンパク質であり、それぞれウイルスの付着と細胞の放出に必要であるヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）をコードする２つの遺伝子の抗原領域の変化に基づいてインフルエンザウイルス亜型に分類できる。現在、インフルエンザＡウイルスでは、１６のＨＡ（Ｈ１～Ｈ１６）と９つのＮＡ（Ｎ１～Ｎ９）の亜型の抗原バリアントが知られている。一部のインフルエンザＡ亜型（すなわち、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、及びＨ３Ｎ２）のみが人々の間で流行しているが、１６のＨＡ亜型と９のＮＡ亜型の全ての組み合わせが、動物、特に鳥類で確認されている。

【0012】

インフルエンザＢ型ウイルス株は、厳密にはヒトである。インフルエンザＢ型ウイルス株内のＨＡ中の抗原変異は、Ａ型株内で観察されるものよりも小さい。ヒトでは、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８系統（Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ系統とも称される）及びＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７（Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ）系統によって表されるとおりの、２つの遺伝的及び抗原的に異なる系統のインフルエンザＢウイルスが循環している（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００３ Ｍａｒ ２７；４２２（６９３０）：４２８－３３．）。インフルエンザＢウイルスにより引き起こされる疾患の範囲は、インフルエンザＡウイルスにより引き起こされるものよりも一般に軽度であるが、インフルエンザＢ感染について入院を要する重病が依然として頻繁に観察される。

【0013】

インフルエンザ抗原は非常に多様で変化しやすい性質があるため、ワクチンの開発は困難であることが証明されている。しかしながら、ワクチン接種は、疾患及びその深刻な合併症から保護するための最も証明された方法である。ワクチンは、インフルエンザの季節ごとに集団に蔓延すると予測されるウイルスの血清型を見越して、毎年再処方及び再投与しなければならないため、「季節性」ワクチンと見なされる。典型的には、最も一般的なヒトワクチンは、Ａ（Ｈ１Ｎ１）、Ａ（Ｈ３Ｎ２）、及びＢなど、１９７７年以降の世界的なインフルエンザの毎年の発生の主な原因である主要なウイルス型の各々からの１つの代表的な株の組み合わせである。インフルエンザワクチンには、３価の不活化ワクチン（ＴＩＶ）を含む２つの部類があり、６か月齢以上の個人に筋肉内（ＩＭ）注射で投与され、２～４９歳の健康な非妊娠者に鼻腔内投与される弱毒化インフルエンザウイルスワクチン（ＬＡＩＶ）の生菌である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0014】

ＲＳＶ感染症に感染しやすい集団は、インフルエンザウイルス感染症にも感染しやすいことが多い。したがって、ＲＳＶに対するワクチン及びインフルエンザウイルスに対するワクチンを、それを必要とする対象に共投与するための安全で効果的な方法が必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0015】

一般的な一態様では、本出願は、それを必要とするヒト対象において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染に対する防御免疫応答及びインフルエンザウイルス感染に対する防御免疫応答の両方を誘導する方法であって、対象に：（ａ）融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む有効量の医薬組成物、好ましくはワクチンであって、アデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個含む、有効量の医薬組成物と、（ｂ）有効量のインフルエンザワクチンとを筋肉内投与することを含み、（ａ）及び（ｂ）が共投与される、方法について記載する。

【0016】

特定の実施形態では、（ａ）の医薬組成物及び（ｂ）のワクチンは、同時に投与される。

【0017】

特定の実施形態では、アデノウイルスベクターは複製能を持たず、アデノウイルスの初期領域１（Ｅ１領域）及び初期領域３（Ｅ３領域）の少なくとも１つに欠失を有する。

【0018】

特定の実施形態において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１領域及びＥ３領域の欠失を有する、複製能を持たないＡｄ２６アデノウイルスベクターである。

【0019】

特定の実施形態において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１領域及びＥ３領域の欠失を有する、複製能を持たないＡｄ３５アデノウイルスベクターである。

【0020】

特定の実施形態では、アデノウイルスベクターによってコードされる組換えＲＳＶ Ｆポリペプチドは、配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を有する。

【0021】

特定の実施形態では、ＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸は、配列番号６又は配列番号７のポリヌクレオチド配列を含む。

【0022】

特定の実施形態では、有効量の医薬組成物は、アデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１１個含む。

【0023】

特定の実施形態では、インフルエンザワクチンは、季節性インフルエンザワクチンである。

【0024】

特定の実施形態では、対象はＲＳＶ感染症に感染しやすい。

【0025】

特定の実施形態では、対象はインフルエンザウイルス感染症に感染しやすい。

【0026】

特定の実施形態では、防御免疫応答は、ＲＳＶへの曝露時に対象のＲＳＶ臨床症状がないか又はＲＳＶ臨床症状が減少することを特徴とする。

【0027】

特定の実施形態では、防御免疫応答は、インフルエンザウイルスへの曝露時に対象のインフルエンザウイルス臨床症状がないか又はインフルエンザウイルス臨床症状が減少することを特徴とする。

【0028】

特定の実施形態では、防御免疫応答は、ＲＳＶに対する中和抗体及び／又はＲＳＶに対する防御免疫を特徴とする。

【0029】

特定の実施形態では、防御免疫応答は、インフルエンザウイルスに対する中和抗体及び／又はインフルエンザウイルスに対する防御免疫を特徴とする。

【0030】

特定の実施形態では、投与は、重篤な有害事象を誘導しない。

【0031】

一般的な一態様では、本出願は、（ａ）融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む有効量の医薬組成物、好ましくはワクチンであって、アデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個含む、有効量の医薬組成物と、（ｂ）インフルエンザワクチン、好ましくは季節性インフルエンザワクチンとを含む、キットなどの組み合わせ物を記載する。組み合わせ物は、それを必要とするヒト対象において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染に対する防御免疫応答及びインフルエンザウイルス感染に対する防御免疫応答の両方を誘導するために使用することができる。

【0032】

上述の概要及び下記の本願の好ましい実施形態の詳細な説明は、添付した図面と共に読む場合により十分に理解されることになる。しかしながら、本願は、図面に示される明確な実施形態に限定されないことを理解すべきである。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】図１は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団についてのワクチン接種から２８日後の血球凝集阻害（ＨＩ）抗体応答（ＨＡＩ）の幾何平均比のフォレストプロットを示す。

【図2】図２は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団についてのＨＩ抗体応答（ＨＡＩ）の経時的な平均（９５％ＣＩ）実際値のプロットを示す。

【図3】図３は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団についてのワクチン接種から２８日後のＨＩ抗体応答（ＨＡＩ）についてのセロコンバージョンの差のフォレストプロットを示す。

【図4】図４は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団についてのワクチン接種から２８日後のＨＩ抗体応答（ＨＡＩ）についてのセロプロテクションの差のフォレストプロットを示す。

【図5】図５は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＲＳＶ Ａ２株に対する中和抗体の力価のプロットを示しており、図には、９５％ＣＩの幾何平均が示されており、Ｎ＝ベースラインのデータを有する対象の数である。

【図6】図６は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＥＬＩＳＡで測定した場合のＲＳＶ融合前タンパク質による抗体応答のプロットを示しており、図には、９５％ＣＩの幾何平均が示されており、Ｎ＝ベースラインのデータを有する対象の数である。

【図7】図７は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＥＬＩＳＡで測定した場合のＲＳＶ融合後タンパク質による抗体応答のプロットを示しており、図には、９５％ＣＩの幾何平均が示されており、Ｎ＝ベースラインのデータを有する対象の数である。

【図8】図８は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイで測定した場合のＲＳＶ－Ｆ特異的Ｔ細胞応答のボックスプロットを示す。

【発明を実施するための形態】

【0034】

背景技術の項で、及び本明細書全体を通して、様々な刊行物、論文及び特許が引用又は記載されているが、これらの参考文献はそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文献、行為、材料、装置、物品等の議論は、本発明の文脈を提供することを目的とする。そのような議論は、これらの内容のいずれか又は全てが、開示されている、又は特許請求されているあらゆる発明に関する先行技術の一部を形成することを認めるものではない。

【0035】

特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する分野の当業者に一般に理解されている意味と同じ意味を有する。さもなければ、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書で規定されている意味を有する。

【0036】

本明細書で使用する場合及び添付した特許請求の範囲においては、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、別途文脈が明白に規定していない限り、複数の言及を含むことに留意しなければならない。

【0037】

特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲等の数値は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、数値は、通常、列挙された値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は、０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％（ｗ／ｖ）～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は、０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用する場合、数値範囲の使用は、全ての可能な部分的範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含み、文脈に明らかに別段の指示がない限り、そのような範囲内の整数及び値の分数を含む。

【0038】

他に特に指示されない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」は、一連の各要素に関すると理解すべきである。当業者は、通例の実験だけを使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多数の等価物を認識することになるか、又は確認することができるであろう。このような等価物は、本発明に包含されるものとする。

【0039】

本明細書で使用する場合、用語「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「～を有する（ｈａｓ）」、「～を有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、若しくは「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又はそれらの任意の他の変形は、記載された整数又は整数群を包含することを意味するものと理解されるが、任意の他の整数又は整数群の排除を意味するものではなく、非排他的又はオープンエンドであることが意図されている。例えば、構成要素の一覧を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品又は装置は必ずしもそれらの構成要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されていない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品若しくは装置が本来具備している他の構成要素を含むことができる。更に、明確に反対のことを述べない限り、「又は」は包括的又はを意味し、排他的又はを意味しない。例えば、条件Ａ又はＢは、以下のいずれか１つによって満たされる：Ａが真であり（又は、存在し）且つＢが偽である（又は、存在しない）、Ａが偽であり（又は、存在しない）且つＢが真である（又は、存在する）、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は、存在する）。

【0040】

また、本明細書で好ましい発明の構成要素の寸法又は特性に言及するときに使用される「約」、「略」、「一般に」、「実質的に」等の用語は、当業者には理解されているであろうように、記載された寸法／特性が厳密な境界又はパラメーターではなく、機能的に同じか又は類似している、そこからの僅かな変形は排除しないことを示すことは理解されたい。少なくとも、そのような数値パラメーターを含む言及は、当技術分野で受容されている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定又はその他の系統的誤差、製造上の公差など）を使用して、最下位桁を変化させない変動を含むであろう。

【0041】

本発明は、それを必要とするヒト対象において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染に対する防御免疫応答及びインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答の両方を誘導する方法であって、対象に：（ａ）融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む有効量の医薬組成物、好ましくはワクチンと、（ｂ）有効量のインフルエンザワクチンとを筋肉内投与することを含む、方法を提供する。

【0042】

本明細書で使用する場合、用語「ＲＳＶ融合タンパク質」、「ＲＳＶ Ｆタンパク質」、「ＲＳＶ融合ポリペプチド」、又は「ＲＳＶ Ｆポリペプチド」は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の任意の群、亜群、分離株、型、又は株の融合（Ｆ）タンパク質を指す。ＲＳＶは、２つの抗原亜群である、Ａ及びＢを有する単一の血清型として存在する。ＲＳＶ Ｆタンパク質の例としては、ＲＳＶ ＡからのＲＳＶ Ｆ（例えば、ＲＳＶ Ａ１ Ｆタンパク質及びＲＳＶ Ａ２ Ｆタンパク質）、及びＲＳＶ ＢからのＲＳＶ Ｆ（例えば、ＲＳＶ Ｂ１ Ｆタンパク質及びＲＳＶ Ｂ２ Ｆタンパク質）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用する場合、用語「ＲＳＶ Ｆタンパク質」は、変異、例えば、全長野生型ＲＳＶ Ｆタンパク質の点変異、断片、挿入、欠失及びスプライスバリアントを含むタンパク質を含む。

【0043】

特定の実施形態によれば、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆタンパク質は、ＲＳＶ Ａ株に由来する。特定の実施形態では、ＲＳＶ Ｆポリペプチドは、ＲＳＶ Ａ２株に由来する。本発明で有用な融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドは、野生型ＲＳＶ Ｆタンパク質と比較して、特に、配列番号１のアミノ酸配列を有するＲＳＶ Ｆタンパク質と比較して、少なくとも１つの変異を有するＲＳＶ Ｆタンパク質である。特定の実施形態によれば、本発明で有用な融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドは、Ｋ６６Ｅ、Ｎ６７Ｉ、Ｉ７６Ｖ、Ｓ２１５Ｐ、Ｋ３９４Ｒ、Ｓ３９８Ｌ、Ｄ４８６Ｎ、Ｄ４８９Ｎ、及びＤ４８９Ｙからなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む。

【0044】

特定の実施形態によれば、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドは、融合前に特異的なモノクローナル抗体、例えばＣＲ９５０１によって認識される少なくとも１つのエピトープを含む。ＣＲ９５０１は、融合前コンフォメーションのＲＳＶ Ｆタンパク質に特異的に結合し、融合後コンフォメーションには結合しない５８Ｃ５（国際公開第２０１１／０２００７９号パンフレット及び同第２０１２／００６５９６号パンフレット記載されている）と称される抗体の結合領域を含む。

【0045】

特定の実施形態では、ＲＳＶ Ｆポリペプチドは、国際公開第２０１４／１７４０１８号パンフレット及び同第２０１４／２０２５７０号パンフレットに記載の、短縮されたＦ１ドメインに連結した異種三量化ドメインを更に含む。本明細書で使用される場合、「短縮された」Ｆ１ドメインは、完全長Ｆ１ドメインではないＦ１ドメイン（即ち、Ｎ末端又はＣ末端で１つ又は複数のアミノ酸残基が欠失しているＦ１ドメイン）を指す。特定に実施形態によれば、少なくとも膜貫通ドメイン及び細胞質側末端は、可溶性細胞外ドメインとしての発現を可能にするために欠失している。特定の実施形態では、三量化ドメインは、配列番号２を含み、ＲＳＶ Ｆ１ドメインのアミノ酸残基５１３に直接又はリンカーを介して連結している。特定の実施形態では、リンカーはアミノ酸配列ＳＡＩＧ（配列番号３）を含む。

【0046】

融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆタンパク質の例としては、参照によりその内容が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１７４０１８号パンフレット、同第２０１４／２０２５７０号パンフレット、及び同第２０１７／１７４５６４号パンフレットに記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0047】

特定の実施形態によれば、ＲＳＶ Ｆタンパク質は、配列番号４若しくは配列番号５のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号４若しくは配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、９５％、９０％、若しくは９５％同一なアミノ酸配列を含む。

【0048】

融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆタンパク質をコードする核酸の例としては、配列番号６及び配列番号７が挙げられる。多数の異なる核酸分子が、遺伝子コードの縮重の結果として、同じポリペプチドをコードし得ることは、当業者に理解されている。また、当業者がルーチンの手法を用いて、そこに記載されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド配列に影響を及ぼさないヌクレオチド置換を行って、ポリペプチドが発現する任意の特定の宿主生物のコドン使用を反映し得ることも理解されている。したがって、別段の記載がない限り、「アミノ酸配列をコードする核酸配列」には、互いの縮重型であり、且つ同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。タンパク質をコードするヌクレオチド配列、及びＲＮＡは、イントロンを含み得る。本明細書の配列は、当該技術分野の慣例どおり、５’から３’の方向で提供される。

【0049】

インフルエンザウイルスは、インフルエンザウイルス型：Ａ、Ｂ、及びＣ属に分類される。本明細書で使用する場合、用語「インフルエンザウイルス」は、インフルエンザウイルスの型Ａ、Ｂ、又はＣ、及びその中の任意の亜型を指す。インフルエンザＡウイルスは、ヘマグルチニン（Ｈ）及びノイラミニダーゼ（Ｎ）ウイルス表面タンパク質の組み合わせによって更に亜型に特徴付けられる。本明細書で使用する場合、ヒトインフルエンザウイルス株又は分離株についての命名法としては、ウイルスの型（属）、すなわち、Ａ、Ｂ、又はＣ、及び最初の分離の地理的場所、例えば、Ａ／ミシガン、Ａ／ホンコン、Ｂ／ブリスベン、Ｂ／プーケットが挙げられる。

【0050】

本明細書で使用する場合、「ワクチン」という用語は、特定の病原体又は疾患に対して被験体にある程度の免疫を誘導するのに効果的な活性成分を含有する薬剤又は組成物を指し、これにより、病原体による感染に関連した症状若しくは疾患の重症度、期間、又は他の徴候が少なくとも低減し、最大で完全に消失する。本発明では、ワクチンは、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスを含む。本出願の実施形態によれば、ワクチンを使用して、入院が必要となる重篤な下気道疾患を予防し、対象のＲＳＶ感染及び複製による肺炎及び細気管支炎などの合併症の頻度を低減することができる。特定の実施形態では、ワクチンは、例えばＲＳＶの他のタンパク質及び／又は他の感染病原体に対する防御免疫応答を誘導する他の成分を更に含む組み合わせワクチンであり得る。更なる活性成分の投与は、例えば、別個の投与により行われてもよいし、又は本発明のワクチンと更なる活性成分との組み合わせ製品を投与することにより行われ得る。

【0051】

特定の実施形態では、インフルエンザワクチンは、季節性インフルエンザワクチンであり、これは、インフルエンザの季節に発生する季節性インフルエンザウイルスに対するワクチンとして定義される。季節性インフルエンザワクチンの例としては、三価のＡ／Ｈ１Ｎ１－Ａ／Ｈ３Ｎ２ Ｂワクチンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、季節性インフルエンザワクチンは、任意の市販の季節性インフルエンザワクチンであり得る。市販されている季節性インフルエンザワクチンの例としては、例えば、スプリットワクチンであるＢＥＧＲＩＶＡＣ（商標）（Ｗｙａｔｈ）、ＦＬＵＡＲＩＸ（商標）
（ＧＳＫ）、ＦＬＵＺＯＮＥ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ）、及びＦＬＵＳＨＩＥＬＤ（商標）（Ｊａｍｉｅｓｏｎ）；サブユニットワクチンであるＦＬＵＶＩＲＩＮ（商標）（Ｓｅｑｉｒｕｓ）、ＡＧＲＩＰＰＡＬ（商標）
（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、及びＩＮＦＬＵＶＡＣ（商標）（Ａｂｂｏｔｔ）、並びに弱毒生インフルエンザウイルスワクチンであるＦｌｕｍｉｓｔ（商標）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．）が挙げられる。

【0052】

本明細書で使用する場合、用語「防御免疫」又は「防御免疫応答」は、ワクチン接種された対象が、このワクチン接種を行った対象の病原性因子による感染を防除できることを意味する。通常、「防御免疫応答」が発現された対象は、軽度から中等度の臨床症状を発現するにすぎないか、又は症状を全く発現しない。通常、特定の因子に対する「防御免疫応答」又は「防御免疫」を有する対象は、上記因子による感染の結果として死亡しない。

【0053】

本明細書で使用する場合、用語「誘導する」及びその変形形態は、細胞活動の任意の測定可能な増加を指す。防御免疫応答の誘導は、例えば、免疫細胞集団の活性化、増殖、若しくは成熟、サイトカインの産生の増加、及び／又は免疫機能の増加の別の指標を挙げることができる。特定の実施形態では、免疫応答の誘導は、Ｂ細胞の増殖の増加、抗原特異的抗体の産生、抗原特異的Ｔ細胞の増殖の増加、樹状細胞抗原提示の改善、並びに／又は特定のサイトカイン、ケモカイン、及び共刺激マーカーの発現の増加を挙げることができる。

【0054】

ＲＳＶ Ｆタンパク質及び／又はインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を誘導する能力を、当該技術分野で標準的である様々なアッセイを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで評価することできる。免疫応答の発現及び活性化を評価するのに利用することができる技法の概要に関して、例えばＣｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２ ａｎｄ １９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ｅｄ．Ｊ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）を参照されたい。当該技術分野で容易に知られている方法、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するもの等の活性化されたエフェクタ細胞により分泌されるサイトカインプロファイルの測定（例えば、ＥＬＩＳＰＯＴによるＩＬ－４又はＩＦＮガンマ産生細胞の定量化）により、ＰＢＭＣ増殖を測定することにより、ＮＫ細胞活性を測定することにより、免疫エフェクタ細胞の活性化状態を測定（例えば、典型的な［３Ｈ］チミジン取り込みによるＴ細胞増殖アッセイ）することにより、感作対象の抗原特異的Ｔリンパ球をアッセイ（例えば、細胞毒性アッセイにおけるペプチド特異的溶解など）することにより、細胞性免疫の測定を実施することができる。更に、腸、肺、鼻の組織への輸送を示すことができる局所部位のホーミングマーカーを備えたＩｇＧ及びＩｇＡ抗体分泌細胞は、局所免疫の指標として、免疫後の様々な時点にて血液中で測定することができ、鼻汁中のＩｇＧ及びＩｇＡ抗体を測定することができる；抗体のＦｃ機能、及びＰＭＮ、マクロファージ、ＮＫ細胞などの細胞、又は補体系との抗体相互作用の測定を特徴付けることができ；単一細胞ＲＮＡシーケンス分析は、Ｂ細胞及びＴ細胞のレパートリーを分析するために使用することができる。

【0055】

ＲＳＶ Ｆタンパク質及び／又はインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を誘導する能力は、抗体、例えば、組成物中に投与されたＲＳＶ Ｆタンパク質に対するＩｇＧ又はＩｇＭ抗体、例えば、ＲＳＶ Ａ２（ＶＮＡ Ａ２）、ＶＮＡ ＲＳＶ Ａメンフィス３７ｂ、ＲＳＶ Ｂ、ｐｒｅ－Ｆ抗体、ｐｏｓｔ－Ｆ抗体、ＲＳＶ Ｇａ抗体、ＲＳＶ Ｇｂ抗体に対するウイルス中和抗体（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）、又は例えば、インフルエンザウイルスワクチンで投与されるインフルエンザウイルスタンパク質に対するＩｇＧ又はＩｇＭ抗体、例えば、血球凝集阻害（ＨＩ）、又は微小中和（ＭＮ）抗体などの抗体の存在についての対象からの生物学的サンプル（例えば、鼻洗浄液、血液、血漿、血清、ＰＢＭＣ、尿、唾液、糞便、脳脊髄液、気管支肺胞洗浄液、又はリンパ液）を試験することによって決定することができる。例えば、免疫原を提供する組成物の投与に応答して産生される抗体の力価は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、他のＥＬＩＳＡ系アッセイ（例えば、ＭＳＤ－Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）、ドットブロット、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル、ＥＬＩＳＰＯＴ、補体増強の有無にかかわらず、補体、ＰＭＮ、マクロファージ及びＮＫ細胞とのＦｃ相互作用の測定、又は抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイによって測定することができる。例示的な方法は、実施例１に記載されている。特定の実施形態によれば、誘導される免疫応答は、ＲＳＶに対する中和抗体及び／又はＲＳＶに対する防御免疫を特徴とする。特定の実施形態によれば、誘導された免疫応答は、インフルエンザウイルスに対する中和抗体及び／又はインフルエンザウイルスに対する防御免疫を特徴とする。

【0056】

特定の実施形態によれば、防御免疫応答は、ＲＳＶに対する中和抗体及び／又はＲＳＶに対する防御免疫の存在によって特徴付けられ、好ましくは、医薬組成物の投与から８～３５日後、例えば、医薬組成物の投与から８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、又は３５日後などに検出可能である。更に好ましくは、ＲＳＶに対する中和抗体は、免疫成分の投与から約６カ月～５年後、例えば免疫成分の投与から６カ月、１年、２年、３年、４年、又は５年後に検出される。

【0057】

特定の実施形態によれば、防御免疫応答は、インフルエンザウイルスに対する中和抗体及び／又はインフルエンザウイルスに対する防御免疫の存在によって特徴付けられ、好ましくは、医薬組成物の投与から８～３５日後、例えば、医薬組成物の投与から８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、又は３５日後などに検出可能である。更に好ましくは、インフルエンザに対する中和抗体は、免疫成分の投与から約６カ月～５年後、例えば免疫成分の投与から６カ月、１年、２年、３年、４年、又は５年後に検出される。

【0058】

特定の実施形態によれば、（ａ）及び（ｂ）の共投与でＲＳＶに対して誘導される防御免疫応答は、（ａ）のみの投与でＲＳＶに対して誘導される防御免疫応答に対して非劣性であることを特徴とする。特定の実施形態によれば、（ａ）及び（ｂ）の共投与でインフルエンザウイルスに対して誘導される防御免疫応答は、（ｂ）のみの投与でインフルエンザウイルスに対して誘導される防御免疫応答に対して非劣性であることを特徴とする。本明細書で使用する場合、非劣性は、ＲＳＶ特異的抗体又はインフルエンザウイルス特異的抗体の幾何平均力価（ＧＭＴ）のマージン２を使用して決定される。例示的な方法は、実施例１に記載されている。

【0059】

特定の実施形態によれば、防御免疫応答は、ＲＳＶへの曝露時に対象のＲＳＶ臨床症状がないか又はＲＳＶ臨床症状が減少することを特徴とする。特定の実施形態によれば、防御免疫応答は、インフルエンザウイルスへの曝露時に対象のインフルエンザウイルス臨床症状がないか又はインフルエンザウイルス臨床症状が減少することを特徴とする。ＲＳＶ及びインフルエンザの臨床症状としては、例えば、鼻水、鼻づまり、くしゃみ、喉の痛み、耳痛を含む上気道症状；例えば、咳、息切れ、胸部圧迫感、喘鳴、痰の生成などを含む下気道症状；並びに例えば、倦怠感、頭痛、筋肉、及び／又は関節の痛み、肌寒さ／発熱などを含む全身症状が挙げられる。

【0060】

本明細書で使用する場合、用語「有害事象」（ＡＥ）は、医薬品を投与された患者における任意の有害な医学的出来事を指し、必ずしも治療と因果関係があるとは限らない。本発明の実施形態によれば、ＡＥは、次の定義を使用して、重症度が高くなる４段階で評価される。軽度（グレード１）：活動への支障なし；中程度（グレード２）：活動へのいくつかの支障あり、医学的介入の必要なし；重度（グレード３）：日常の活動に支障あり、医学的介入が必要；生命を脅かす可能性あり（グレード４）：基本的なセルフケア機能を実行できない原因となる症状、又は永続的な障害、持続的な障害を防ぐためになされる医学的若しくは手術的介入。「重篤な有害事象」、「重篤なＡＥ」、「ＳＡＥ」は、以下の結果のいずれかをもたらす任意の用量で発生する任意のＡＥであり得る：死（死は結果であり、事象ではない）；生命を脅かすもの（事象時に患者が死亡するリスクがある事象を指す）；それは、より重篤であったならば、仮想的に死を引き起こしたかもしれない事象を指さない；入院患者の入院、すなわち、計画外の夜間入院、又は既存の入院の延長；通常の生活機能を実行することが持続的にできないか又は実行する能力が実質的に混乱；先天性異常／先天性欠損症；患者を危険にさらす可能性がある、又は上記の他の結果の１つを防ぐために医学的若しくは外科的介入を必要とする可能性のある重要な医療事象（研究者が判断した場合）（例えば、入院に至らないアレルギー性気管支痙攣又は血液の悪液質又は痙攣のための緊急治療室又は自宅での集中治療）。入院とは、病院への正式な入院のことである。入院又は入院の延長は、ＡＥが重篤であるための基準を構成する；ただし、それ自体はＳＡＥとは見なされない。ＡＥがない場合、入院又は入院の延長はＳＡＥとは見なされない。これは、次の状況に当てはまる可能性がある：プロトコルにより要求される手順には、入院若しくは入院の延長を必要とする；又は入院若しくは入院の延長は、センターが従う日常的な手順の一部である（例えば、手術後のステント除去）。研究中に悪化しなかった既存の病態の選択的治療のための入院は、ＡＥとは見なされない。入院中に発生する合併症はＡＥである。合併症が入院を長引かせるか、又は他のＳＡＥ基準のいずれかを満たしている場合、その事象はＳＡＥである。

【0061】

本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、対象における所望の生物学的応答又は医学的応答を誘導する有効成分又は構成成分の量を指す。特定の有効用量の選択は、治療又は予防されることになる疾患、関連する症状、患者の体重、患者の免疫状態及び当業者によって知られる他の因子を含むいくつかの因子の検討に基づいて、当業者によって（例えば、臨床試験により）決定され得る。製剤中に用いられる正確な用量はまた、投与方法、投与経路、標的部位、患者の生理学的状態、投与される他の薬剤、及び疾患の重症度に依存する。例えば、有効量の医薬組成物はまた、アジュバントも投与されるかどうかに依存し、アジュバントの非存在下ではより高い投与量が必要とされる。

【0062】

本出願の実施形態によれば、有効量の医薬組成物は、重篤な有害事象を誘導することなくＲＳＶ Ｆタンパク質に対する防御免疫応答を誘導するのに十分な量の医薬組成物を含む。特定の実施形態では、有効量の医薬組成物は、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個、好ましくは、ウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１１個含む。

【0063】

本出願の実施形態によれば、有効量の医薬組成物は、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個、例えばウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約２×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約３×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約４×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約５×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約６×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約７×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約８×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約９×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約２×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約３×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約４×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約５×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約６×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約７×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約８×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約９×１０^１１個、又はウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１２個含む。好ましくは、組換えＲＳＶ Ｆポリペプチドは、配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を有し、アデノウイルスベクターは、血清型２６、例えば組換えＡｄ２６のものである。

【0064】

本出願の実施形態によれば、有効量のインフルエンザウイルスワクチンは、重篤な有害事象を誘導することなくインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を誘導するのに十分な量のインフルエンザウイルスワクチンを含む。特定の実施形態では、有効量のインフルエンザウイルスワクチンは、単回投与の市販の季節性インフルエンザウイルスワクチンを含む。

【0065】

特定の実施形態によれば、ヒト対象はＲＳＶ感染症に感染しやすい。特定の実施形態では、ＲＳＶ感染症に感染しやすいヒト対象としては、高齢のヒト対象、例えば、５０歳以上、６０歳以上、好ましくは６５歳以上のヒト対象；若年
のヒト対象、例えば、５歳以下、１歳以下のヒト対象；及び／又は入院している対象、若しくは抗ウイルス化合物で治療されているが不十分な抗ウイルス反応を示しているヒト対象が挙げられるが、これらに限定されない。

【0066】

特定の実施形態によれば、ヒト対象はインフルエンザウイルス感染症に感染しやすい。特定の実施形態では、インフルエンザウイルス感染症に感染しやすいヒト対象としては、高齢のヒト対象、例えば、５０歳以上、６０歳以上、好ましくは６５歳以上のヒト対象；若年のヒト対象、例えば、５歳以下、１歳以下のヒト対象；及び／又は入院している対象、若しくは抗ウイルス化合物で治療されているが不十分な抗ウイルス反応を示しているヒト対象が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＲＳＶ感染症に感染しやすいヒト対象としては、慢性心臓病、慢性肺疾患、及び／又は免疫不全のある対象が挙げられるが、これらに限定されない。

【0067】

特定の実施形態によれば、それを必要とするヒト対象は、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸分子を含むアデノウイルスを含む医薬組成物と、インフルエンザワクチンとが投与される。

【0068】

特定の実施形態では、アデノウイルスは、組換えアデノウイルスベクターとも呼ばれるヒト組換えアデノウイルスである。組換えアデノウイルスベクターの調製法は、当該技術分野で周知である。アデノウイルスに対する用語「組換え」は、本明細書で使用する場合、人為的に改変されていることを意味し、例えば、その中に能動的にクローン化された改変末端を有し、及び／又は、異種遺伝子を含み、即ち、天然に存在する野生型アデノウイルスではない。

【0069】

特定の実施形態では、本発明によるアデノウイルスベクターは、Ｅ１領域の少なくとも１つの必須遺伝子機能、例えば、ウイルス複製に必要なアデノウイルスゲノムのＥ１ａ領域及び／又はＥ１ｂ領域が欠損している。特定の実施形態では、本発明によるアデノウイルスベクターは、非必須なＥ３領域の少なくとも一部が欠損している。特定の実施形態では、このベクターは、Ｅ１領域の少なくとも１つの必須遺伝子機能及び非必須なＥ３領域の少なくとも一部が欠損している。アデノウイルスベクターは、「多重欠損」であり得、これは、アデノウイルスベクターがアデノウイルスゲノムの２つ以上の領域のそれぞれに１つ以上の必須遺伝子機能が欠損していることを意味する。例えば、前述のＥ１欠損又はＥ１、Ｅ３欠損のアデノウイルスベクターは、Ｅ４領域の少なくとも１つの必須遺伝子及び／又はＥ２領域（例えば、Ｅ２Ａ領域及び／又はＥ２Ｂ領域）の少なくとも１つの必須遺伝子が更に欠損していることがある。

【0070】

アデノウイルスベクター、その構築方法及びその増殖方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、米国特許第５，５５９，０９９号明細書、同第５，８３７，５１１号明細書、同第５，８４６，７８２号明細書、同第５，８５１，８０６号明細書、同第５，９９４，１０６号明細書、同第５，９９４，１２８号明細書、同第５，９６５，５４１号明細書、同第５，９８１，２２５号明細書、同第６，０４０，１７４号明細書、同第６，０２０，１９１号明細書、及び同第６，１１３，９１３号明細書、それぞれＶｉｒｏｌｏｇｙ，Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｄ ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９６）の６７及び６８章に収録のＴｈｏｍａｓ Ｓｈｅｎｋ，「Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ」及びＭ．Ｓ．Ｈｏｒｗｉｔｚ，「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ」、並びに本明細書で言及している他の参考文献に記載されている。一般的には、アデノウイルスベクターの構築は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮ Ａ，２ｄ ｅｄ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ（１９９２），及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ（１９９５）、並びに本明細書で言及している他の参考文献に記載されているものなどの、標準的な分子生物学的手法の使用を含む。

【0071】

特定の実施形態では、アデノウイルスは血清型２６又は３５のヒトアデノウイルスである。

【0072】

ｒＡｄ２６ベクターの調製は、例えば、国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレット及びＡｂｂｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．２００７：８１（９）：４６５４－６３に記載されている。Ａｄ２６の例示的なゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＥＦ１５３４７４及び国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレットの配列番号１に見出される。ｒＡｄ３５ベクターの調製については、例えば、米国特許第７，２７０，８１１号明細書、国際公開第００／７００７１号パンフレット、及びＶｏｇｅｌｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２００３：７７（１５）：８２６３－７１に記載されている。Ａｄ３５の例示的なゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣ００００１９及び国際公開第００／７００７１号パンフレットの図６に見出される。

【0073】

本発明による組換えアデノウイルスは、複製能があっても、複製能が欠損していてもよい。特定の実施形態では、アデノウイルスは、複製欠損であり、例えば、これは、このアデノウイルスがゲノムのＥ１領域に欠失を含むためである。当業者には公知であるように、アデノウイルスゲノムから必須領域が欠失している場合には、これらの領域によってコードされる機能は、トランスで、好ましくはプロデューサー細胞により提供されなければならない、すなわち、Ｅ１、Ｅ２、及び／又はＥ４領域の一部又は全部がアデノウイルスから欠失している場合には、それらはプロデューサー細胞中に、例えば、そのゲノムに組み込まれて、又はいわゆるヘルパーアデノウイルス若しくはヘルパープラスミドの形態で存在しなければならない。アデノウイルスはまた、Ｅ３領域中に欠失を有する可能性があるが、この領域は複製に必ずしも必要ではなく、したがって、このような欠失は補完する必要がない。

【0074】

特定の実施形態では、アデノウイルスは複製能を持たないアデノウイルスである。特定の実施形態によれば、アデノウイルスは、複製能を持たないＡｄ２６アデノウイルスである。特定の実施形態によれば、アデノウイルスは、複製能を持たないＡｄ３５アデノウイルスである。

【0075】

使用可能なプロデューサー細胞（当該技術分野及び本明細書では、「パッケージング細胞」又は「補完細胞」又は「宿主細胞」と称される場合がある）は、所望のアデノウイルスを増殖させることができる任意のプロデューサー細胞であり得る。例えば、組換えアデノウイルスベクターの増殖は、アデノウイルス中の欠損を補完するプロデューサー細胞中で行われる。このようなプロデューサー細胞は、好ましくは、そのゲノム中に少なくともアデノウイルスＥ１配列を有しており、それによってＥ１領域に欠失を有する組換えアデノウイルスを補完することができる。Ｅ１を補完する任意のプロデューサー細胞、例えば、Ｅ１により不死化されたヒト網膜細胞、例えば９１１細胞又はＰＥＲ．Ｃ６細胞（米国特許第５，９９４，１２８号明細書を参照）、Ｅ１で形質転換された羊膜細胞（欧州特許第１２３０３５４号明細書を参照）、Ｅ１で形質転換されたＡ５４９細胞（例えば、国際公開第９８／３９４１１号パンフレット、米国特許第５，８９１，６９０号明細書を参照）、ＧＨ３２９：ＨｅＬａ（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０００：１１：２１３－２１９）、２９３などを使用することができる。特定の実施形態では、プロデューサー細胞は、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６細胞、又は９１１細胞、又はＩＴ２９３ＳＦ細胞などである。

【0076】

Ａｄ３５（亜群Ｂ）又はＡｄ２６（亜群Ｄ）など、亜群ＣでないＥ１欠損アデノウイルスについては、これらの亜群ＣでないアデノウイルスのＥ４－ｏｒｆ６コード配列を、Ａｄ５などの亜群ＣのアデノウイルスのＥ４－ｏｒｆ６と交換することが好ましい。これにより、例えば、２９３細胞又はＰＥＲ．Ｃ６細胞などの、Ａｄ５のＥ１遺伝子を発現する、よく知られた補完細胞株内で、そうしたアデノウイルスの増殖が可能になる（例えば、Ｈａｖｅｎｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．２００６：８７：２１３５－２１４３；国際公開第０３／１０４４６７号パンフレット（これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照）。特定の実施形態では、使用することができるアデノウイルスは、ＲＳＶ Ｆタンパク質抗原をコードする核酸がクローニングされている、Ｅ１領域中に欠失を有し、且つＡｄ５のＥ４ ｏｒｆ６領域を有する、血清型３５のヒトアデノウイルスである。特定の実施形態では、本発明のワクチン組成物中のアデノウイルスは、ＲＳＶ Ｆタンパク質抗原をコードする核酸がクローニングされている、Ｅ１領域中に欠失を有し、且つＡｄ５のＥ４ ｏｒｆ６領域を有する、血清型２６のヒトアデノウイルスである。

【0077】

代替の実施形態では、アデノウイルスベクター中に異種Ｅ４ｏｒｆ６領域（例えば、Ａｄ５の）を配置する必要はないが、代わりに、Ｅ１欠失の亜群ＣでないベクターをＥ１及び両立可能なＥ４ｏｒｆ６の両者を発現する細胞株、例えば、Ａｄ５からＥ１及びＥ４ｏｒｆ６の両方を発現する２９３－ＯＲＦ６細胞株中で増殖させる（例えば、２９３－ＯＲＦ６細胞の生成について記載があるＢｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９６：７０：６４９７－５０１；そのような細胞株を用いて、Ｅ１欠失の亜群Ｃでないアデノウイルスベクターの生成についてそれぞれ記載があるＡｂｒａｈａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９７：７１：８９４６－５１及びＮａｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２００３：１０：３２６－３６を参照されたい）。

【0078】

或いは、増殖させることになる血清型に由来するＥ１を発現する補完細胞を使用することができる（例えば、国際公開第００／７００７１号パンフレット、国際公開第０２／４０６６５号パンフレットを参照のこと）。

【0079】

Ｅ１領域に欠失を有するＡｄ３５などの亜群Ｂアデノウイルスでは、例えば、ｐＩＸ開始コドンのすぐ上流の２４３ｂｐ断片（Ａｄ３５ゲノム中のＢｓｕ３６ｌ制限部位によって５’末端で標識される）などの、ｐＩＸオープンリーディングフレームのすぐ上流の１６６ｂｐ又はこれを含む断片など、アデノウイルスのＥ１Ｂ ５５Ｋオープンリーディングフレームの３’末端を保持することが好ましいが、これはｐＩＸ遺伝子のプロモーターがこの領域に部分的に存在することから、アデノウイルスの安定性を高めるためである（例えば、Ｈａｖｅｎｇａ ｅｔ ａｌ，２００６，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８７：２１３５－２１４３；国際公開第２００４／００１０３２号パンフレット（これらは参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0080】

組換えアデノウイルスは、周知の方法に従って、調製し宿主細胞中で増殖させることができるが、これにはアデノウイルスを感染させた宿主細胞の細胞培養が必要となる。細胞培養は、任意のタイプの細胞培養（例えば、付着細胞培養、例えば培養容器の表面又はマイクロキャリアに付着した細胞、及び懸濁培養）であり得る。

【0081】

特定の実施形態によれば、本発明に有用な医薬組成物は、薬学的に許容される担体又は賦形剤を更に含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、担体若しくは賦形剤が、使用される投与量及び濃度で、それらを投与する対象に如何なる望ましくないか、又は有害な効果も引き起こさないことを意味する。このような薬学的に許容される担体及び賦形剤は、当該技術分野において周知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ ｅｄ．），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０を参照されたい）。医薬組成物の好ましい処方は、意図される投与様式及び治療用途に依存する。組成物は、動物又はヒト投与用の医薬組成物を処方するために一般的に使用されるビヒクルとして定義される、薬学的に許容される非毒性の担体又は希釈剤を含むことができる。希釈剤は、組み合わせ物の生物学的活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例は、蒸留水、生理的リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンク液である。加えて、医薬組成物又は製剤は、他の担体、アジュバント、又は非毒性、非治療的、非免疫原性安定剤なども含んでよい。担体、賦形剤、又は希釈剤の特性決定が特定用途の投与経路に依存するであろうことは、理解されるであろう。

【0082】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、１つ以上の塩、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウムなど、１つ以上のアミノ酸、例えばアルギニン、グリシン、ヒスチジン、及び／又はメチオニンなど、１つ以上の炭水化物、例えばラクトース、マルトース、スクロースなど、１つ以上の界面活性剤、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート８０など、１つ以上のキレート化剤、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、及びエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジコハク酸（ＥＤＤＳ）など、並びに１つ以上のアルコール、例えばエタノール及びメタノールなどを含む。好ましくは、医薬組成物は、５～８のｐＨ、例えば、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０など、又はそれらの間の任意の値のｐＨを有する。

【0083】

いくつかの実施形態では、本発明中で使用するための医薬組成物は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び／又は塩化マグネシウムを、１ｍＭ～１００ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、５０ｍＭ～１００ｍＭ、又は７５ｍＭ～１００ｍＭの濃度で含む。例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び／又は塩化マグネシウムの濃度は、１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、又はそれらの間の任意の濃度であり得る。

【0084】

いくつかの実施形態では、本発明中で使用するための医薬組成物は、ヒスチジン、アルギニン、及び／又はグリシンを、１ｍＭ～５０ｍＭ、５ｍＭ～５０ｍＭ、５ｍＭ～３０ｍＭ、５ｍＭ～２０ｍＭ、又は１０ｍＭ～２０ｍＭの濃度で含む。例えば、ヒスチジン、アルギニン、及び／又はグリシンの濃度は、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、３０ｍＭ、３１ｍＭ、３２ｍＭ、３３ｍＭ、３４ｍＭ、３５ｍＭ、３６ｍＭ、３７ｍＭ、３８ｍＭ、３９ｍＭ、４０ｍＭ、４１ｍＭ、４２ｍＭ、４３ｍＭ、４４ｍＭ、４５ｍＭ、４６ｍＭ、４７ｍＭ、４８ｍＭ、４９ｍＭ、若しくは５０ｍＭ、又はそれらの間の任意の濃度であり得る。

【0085】

いくつかの実施形態では、本発明中で使用するための医薬組成物は、スクロース、ラクトース、及び／又はマルトースを、１％～１０％重量／体積（ｗ／ｖ）又は５％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度で含む。例えば、スクロース、ラクトース、及び／又はマルトースの濃度は、１％（ｗ／ｖ）、１．５％（ｗ／ｖ）、２％（ｗ／ｖ）、２．５％（ｗ／ｖ）、３％（ｗ／ｖ）、３．５％（ｗ／ｖ）、４％（ｗ／ｖ）、４．５％（ｗ／ｖ）、５％（ｗ／ｖ）、５．５％（ｗ／ｖ）、６％（ｗ／ｖ）、６．５％（ｗ／ｖ）、７％（ｗ／ｖ）、７．５％（ｗ／ｖ）、８％（ｗ／ｖ）、８．５％（ｗ／ｖ）、９％（ｗ／ｖ）、９．５％（ｗ／ｖ）、若しくは１０％（ｗ／ｖ）、又はそれらの間の任意の濃度であり得る。

【0086】

いくつかの実施形態では、本発明中で使用するための医薬組成物は、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）及び／又はポリソルベート８０（ＰＳ８０）を、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０８％（ｗ／ｖ）、又は０．０２％（ｗ／ｖ）～０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度で含む。例えば、ポリソルベート２０及び／又はポリソルベート８０の濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、若しくは０．１％（ｗ／ｖ）、又はそれらの間の任意の濃度であり得る。

【0087】

いくつかの実施形態では、本発明中で使用するための医薬組成物は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及び／又エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジコハク酸（ＥＤＤＳ）を、０．１ｍＭ～５ｍＭ、０．１ｍＭ～２．５ｍＭ、又は０．１～１ｍＭの濃度で含む。例えば、ＥＤＴＡ及び／又はＥＤＤＳの濃度は、０．１ｍＭ、０．２ｍＭ、０．３ｍＭ、０．４ｍＭ、０．５ｍＭ、０．６ｍＭ、０．７ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１ｍＭ、１．５ｍＭ、２ｍＭ、２．５ｍＭ、３ｍＭ、３．５ｍＭ、４ｍＭ、４．５ｍＭ、若しくは５ｍＭ、又はそれらの間の任意の濃度であり得る。

【0088】

いくつかの実施形態では、本発明中で使用するための医薬組成物は、エタノール及び／又はメタノールを、０．１％～５％重量／体積（ｗ／ｖ）又は０．５％～５％（ｗ／ｖ）の濃度で含む。例えば、エタノール及び／又はメタノールの濃度は、０．１％（ｗ／ｖ）、０．２％（ｗ／ｖ）、０．３％（ｗ／ｖ）、０．４％（ｗ／ｖ）、０．５％（ｗ／ｖ）、０．６％（ｗ／ｖ）、０．７％（ｗ／ｖ）、０．８％（ｗ／ｖ）、０．９％（ｗ／ｖ）、１％（ｗ／ｖ）、１．５％（ｗ／ｖ）、２％（ｗ／ｖ）、２．５％（ｗ／ｖ）、３％（ｗ／ｖ）、３．５％（ｗ／ｖ）、４％（ｗ／ｖ）、４．５％（ｗ／ｖ）、若しくは５％（ｗ／ｖ）、又はそれらの間の任意の濃度であり得る。

【0089】

本発明中で使用するための融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸分子を含むアデノウイルスを含む医薬組成物は、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって調製され得る。例えば、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸分子を含むアデノウイルスは、１つ以上の薬学的に許容される担体と混合して、溶液を得ることができる。溶液は、対象に投与されるまで、適切なバイアルに－５５℃±１０℃から－８５℃±１０℃の範囲の制御された温度で凍結液体として保存することができる。

【0090】

特定の実施形態では、本発明による医薬組成物は、１つ以上のアジュバントを更に含む。適用される抗原決定基に対する免疫応答を更に高めるアジュバントは、当該技術分野で既知である。「アジュバント」及び「免疫刺激剤」という用語は、本明細書では同義的に使用され、免疫系の刺激を引き起こす１つ以上の物質と定義される。これに関連して、アジュバントは、本発明の医薬組成物のＲＳＶ Ｆポリペプチドに対する防御免疫応答を増強するために使用される。好適なアジュバントの例としては：アルミニウム塩、例えば、水酸化アルミニウム及び／又はリン酸アルミニウム；油－エマルション組成物（又は水中油型組成物）、例えば、ＭＦ５９等のスクアレン－水エマルション（例えば、国際公開第９０／１４８３７号パンフレットを参照されたい）；サポニン製剤、例えば、ＱＳ２１及び免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）（例えば、米国特許第５，０５７，５４０号明細書；国際公開第９０／０３１８４号パンフレット、同第９６／１１７１１号パンフレット、同第２００４／００４７６２号パンフレット、同第２００５／００２６２０号パンフレットを参照されたい）；細菌又は微生物の派生物（これらの例は、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）、ＣｐＧ－モチーフ含有オリゴヌクレオチド、ＡＤＰ－リボシル化細菌毒素又はその変異体、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）易熱性エンテロトキシンＬＴ、コレラ毒素ＣＴ、及び同類のものである）；真核生物のタンパク質（例えば、抗体又はその断片（例えば、抗原自体又はＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ７、ＣＤ８０に対するもの）、並びに受容体へのリガンド（例えば、ＣＤ４０Ｌ、ＧＭＣＳＦ、ＧＣＳＦ等）（これらは、受容細胞と相互作用すると、免疫応答を刺激する））が挙げられる。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、アジュバントとして、アルミニウムを、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、リン酸カリウムアルミニウム、又はこれらの組み合わせの形態で、１回の用量当たり０．０５～５ｍｇ（例えば０．０７５～１．０ｍｇ）のアルミニウム含有量の濃度で含む。

【0091】

特定の実施形態によれば、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む医薬組成物は、季節性インフルエンザワクチンなどのインフルエンザワクチンと組み合わせて使用される。好ましくは、医薬組成物及びインフルエンザワクチンは、共投与される。

【0092】

本明細書で使用する場合、対象への２つ以上の治療の投与の文脈における「組み合わせて」という用語は、２つ以上の治療の使用を指す。用語「組み合わせて」の使用は、治療が対象に投与される順序を制限しない。例えば、第１の治療（例えば、本明細書に記載される医薬組成物）は、第２の治療が対象に投与される前に（例えば、１分前、２分前、３分前、４分前、５分前、１０分前、１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前、１２時間前、１６時間前、２４時間前、４８時間前、７２時間前、９６時間前、１週前、２週前、３週前、４週前、５週前、６週前、８週前、又は１２週前）、第２の治療が対象に投与されると同時に、又は第２の治療が対象に投与された後（例えば、１分後、２分後、３分後、４分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、１６時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週後、２週後、３週後、４週後、５週後、６週後、８週後、又は１２週後）に投与することができる。

【0093】

本明細書で使用する場合、対象への２つ以上の治療の投与の文脈における「共投与される」という用語は、２つ以上の治療を組み合わせて使用することを指し、２つ以上の治療は、２４時間以内に対象に投与される。特定の実施形態では、「共投与される」治療は、事前に混合され、同時に対象に一緒に投与される。他の実施形態では、「共投与される」治療は、２４時間以内、例えば１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、２時間、１時間又はそれより短い時間内に、別々の組成物で対象に投与される。好ましくは、「共投与される」治療は、６０分以内、例えば３０分、２０分、１０分、５分又はそれより短い時間内に、別々の組成物で対象に投与される。「共投与される」治療は、同時に、別々の組成物で対象に投与される。

【0094】

投与のタイミングは、１日１回、１年に１回、１０年に１回と大きく異なる。典型的なレジメンは、免疫化とそれに続く１～２４週間隔などの時間間隔での追加免疫注射からなる。別のレジメンは、免疫化とそれに続く、１、２、４、６、８、１０、及び１２カ月後の追加免疫注射からなる。別のレジメンでは、生涯２か月ごとに注射を行う。別のレジメンでは、毎年、又は２、３、４、若しくは５年ごとに注射を行う。或いは、免疫応答のモニタリングによって示されるように、追加免疫注射は不規則に行われる可能性がある。

【0095】

プライム化及び追加免疫投与のレジメンは、投与後に測定された免疫応答に基づいて調整できることが当業者には容易に理解される。例えば、追加免疫組成物は、一般的には、プライム化組成物の投与の数週後又は数カ月後、例えば、プライム化組成物の投与の約１週後、又は２～３週後、又は４週後、又は８週後、又は１６週後、又は２０週後、又は２４週後、又は２８週後、又は３２週後、又は３６週後、又は４０週後、又は４４週後、又は４８週後、又は５２週後、又は５６週後、又は６０週後、又は６４週後、又は６８週後、又は７２週後、又は７６週後、又は１～２年後に投与される。

【0096】

特定の態様によれば、１つ以上の追加免疫組成物を投与することができる。それぞれのプライム化及び追加免疫組成物中の抗原は、しかしながら多くの追加免疫組成物が使用され、同一である必要はないが、抗原決定基を共有するか、又は互いに実質的に類似しているべきである。

【0097】

本発明の医薬組成物は、本開示を考慮して、当該技術分野において既知の方法に従って処方することができる。

【0098】

医薬組成物は、予防的及び／又は治療的処置のための好適な手段によって投与することができる。非限定的な実施形態としては、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、皮下、経皮）、又は粘膜投与（例えば、鼻腔内、口腔内）、及び同類のものが挙げられる。一実施形態では、組成物を、筋肉内注射により投与する。当業者は、医薬組成物中の抗原に対する免疫応答を誘導するために、医薬組成物を投与する様々な可能性を認識している。特定の実施形態では、本発明の組成物を、筋肉内投与する。

【0099】

本発明はまた、それを必要とするヒト対象において、重篤な有害事象を誘導することなく、ＲＳＶ感染及びインフルエンザウイルス感染の両方に対して対象にワクチン接種するための方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、対象に：（ａ）融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターを含む有効量の医薬組成物、好ましくはワクチンと、（ｂ）有効量のインフルエンザワクチンとを投与することを含む。

【0100】

本出願の実施形態によれば、有効量の医薬組成物は、重篤な有害事象を誘導することなくＲＳＶ感染に対して対象にワクチン接種するのに十分な量の医薬組成物を含む。特定の実施形態では、有効量の医薬組成物は、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個、好ましくは、ウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１１個含む。

【0101】

本出願の実施形態によれば、有効量の医薬組成物は、融合前コンフォメーションで安定化されているＲＳＶ Ｆポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスベクターのウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０～約１×１０^１２個、例えばウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約２×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約３×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約４×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約５×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約６×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約７×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約８×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約９×１０^１０個、ウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約２×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約３×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約４×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約５×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約６×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約７×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約８×１０^１１個、ウイルス粒子を１用量当たり約９×１０^１１個、又はウイルス粒子を１用量当たり約１×１０^１２個含む。好ましくは、組換えＲＳＶ Ｆポリペプチドは、配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を有し、アデノウイルスベクターは、血清型２６、例えば組換えＡｄ２６のものである。

【0102】

本出願の実施形態によれば、有効量のインフルエンザウイルスワクチンは、重篤な有害事象を誘導することなくインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を誘導するのに十分な量のインフルエンザウイルスワクチンを含む。特定の実施形態では、有効量のインフルエンザウイルスワクチンは、単回投与の市販の季節性インフルエンザウイルスワクチンを含む。

【実施例】

【0103】

本発明の下記の実施例により、本発明の性質を更に説明する。下記の実施例は本発明を限定せず、本発明の範囲は添付した特許請求の範囲によって決定されるものであることを理解しなければならない。

【0104】

実施例１：第ＩＩ相ヒト試験
６０歳以上の健康な成人において、共投与の有無にかかわらず、季節性インフルエンザワクチン及びＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ（ＲＳＶ Ａ２株の融合前コンフォメーション安定化Ｆタンパク質（ｐｒｅ－Ｆ）についてコードするＤＮＡ導入遺伝子を含む複製能を持たないＡｄ２６）の安全性及び免疫原性を評価するために第ＩＩ相ランダム化二重盲検プラセボコントロール試験を実施した。

【0105】

試験設計／概要－
次の２つの群の一方に１：１の比率で並行してランダム化された、安定した健康状態にある６０歳以上の成人男性及び女性約１８０人を対象に、シングルセンターランダム化二重盲検プラセボコントロール第ＩＩ相試験を実施した。
－群１（共投与された（「ＣｏＡｄ」））は、１日目に市販の季節性インフルエンザワクチン（ｆｌｕａｒｉｘ）と同時に投与されたＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦのウイルス粒子（ｖｐ）を１×１０^１１個受け取り、２９日目にプラセボを受け取った。
－群２（コントロール）は、１日目に市販の季節性インフルエンザワクチン（ｆｌｕａｒｉｘ）と同時に投与されたプラセボを受け取り、２９日目にＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦのｖｐを１×１０^１１個受け取った。

【0106】

全ての試験ワクチンは筋肉内投与され、試験設計及び群の概要を以下の表１に示す。

【0107】

【表1】

【0108】

ワクチン接種スケジュール／試験期間：試験期間は参加者１人当たり約３０週間で、試験は１日目と２９日目のワクチン接種、各ワクチン接種後２８日間の経過観察期間、及び２回目のワクチン接種後６カ月後までの経過観察で構成された。非自発的な（Ｓｏｌｉｃｉｔｅｄ）有害事象（ＡＥ）は、各ワクチン接種の７日後に記録した。自発的な（Ｕｎｓｏｌｉｃｉｔｅｄ）ＡＥは、各ワクチン接種後２８日目までインフォームドコンセントフォームから収集され、試験全体を通してＳＡＥを評価した。免疫応答は、１日目、２９日目、５７日目に評価した。

【0109】

主要な有効性評価項目：この試験の主要な目的は、（１）Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ及び季節性インフルエンザワクチンの同時投与の季節性インフルエンザワクチン単独投与に対する非劣性を、ＧＭＴ比（コントロール群／共投与群）について２の非劣性マージンを使用して、インフルエンザワクチン投与から２８日後の４つのインフルエンザワクチン株全てに対する、血球凝集阻害（ＨＩ）抗体の幾何学的平均力価（ＧＭＴ）で表される体液性免疫応答の観点から評価することと、（２）６０歳以上の対象に季節性インフルエンザワクチンとは別に又は同時に筋肉内投与されたｖｐが１×１０^１１個のＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦの単回投与の安全性及び認容性を評価することであった。

【0110】

統計的方法：主要な免疫原性の目的は、従属変数として２８日目の力価、共変数としてレジメンを使用した分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを使用して、コントロール（群２）群とＣｏＡｄ（群１）群の間の４つの季節性インフルエンザワクチン株の各々の対数変換ＨＩ抗体価の差についての９５％片側信頼限界を計算することによって評価した。信頼限界は、レジメンごとの個別の分散の推定を可能にするために、ウェルチ－サタスウェイトｔ間隔法を使用して計算した。信頼限界は（冪乗によって）ＧＭＴ比に逆変換され、非劣性限界の２と比較した。

【0111】

結果－
合計１８０人の対象がランダム化され、ワクチン接種された。一群当たり９０人の対象であった。ＣｏＡｄ群（群１）の２人の対象は、２回目の投与を受ける前に試験を中止した（理由：それ以上の試験治療を拒否（１対象）、ＡＥ（耳の感染症）による中止（１対象））。加えて、更に２人の対象（各群に１人）が両方の投与を受けた後に試験を中止した（理由：経過観察不能）。

【0112】

主要な分析は、全ての対象が５７日目（すなわち、２回目の投与から２８日後）に安全性及び免疫原性の評価を完了した後に実施した。５７日目までの全てのデータが分析に含まれた。

【0113】

１．主要な免疫原性分析：
免疫原性分析は、免疫原性の結果に影響を与えると予想される主要なプロトコルの逸脱を伴う対象を除き、免疫原性データが利用可能な、ランダム化されて最初のワクチン接種を受けた全ての対象として定義されるプロトコルごとのインフルエンザ免疫原性（ＰＰＩＩ）集団に基づいた。自然インフルエンザ感染後に採取されたサンプルは、季節性インフルエンザワクチンの免疫原性の評価には含まれなかった。

【0114】

Ｆｌｕａｒｉｘのワクチン接種から２８日後の幾何平均血球凝集阻害（ＨＩ）抗体価（ＧＭＴ）、共投与群（Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ）に対するコントロール群（Ｆｌｕａｒｉｘ＋プラセボ）の幾何平均比（ＧＭＲ）、及び４つのインフルエンザ株の各々に対応するＣＩを、表２及び図１に示す。４つ全てのＧＭＲ（コントロール群／ＣｏＡｄ群）の信頼上限は、非劣性マージンの２を下回った。したがって、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ＋Ｆｌｕａｒｉｘの共投与が、コントロール群（Ｆｌｕａｒｉｘ＋プラセボ）よりも非劣性であることが結論付けられた。

【0115】

【表2】

【0116】

上記の非劣性分析の感度分析は、１回は上記のモデルのベースラインＨＩレベルを調整し、もう１回はＦＡセットでモデルを実行することによって実施した。感度分析の結果は上記の結果と一致していた。

【0117】

図２は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団のＨＩ抗体応答（ＨＡＩ）の経時的な平均（９５％ＣＩ）実際値のプロットを示す。

【0118】

図３は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団についてのワクチン接種から２８日後のＨＩ抗体応答（ＨＡＩ）についての抗体陽転の違いのフォレストプロットを示す。４つのインフルエンザワクチン株に対するセロコンバージョン率は、ワクチン接種前の力価が１：１０未満の対象ではワクチン接種後の力価が１：４０以上、又はワクチン接種前の力価が１：１０以上の対象では力価が４倍以上増加するとして定義された。群の間のセロコンバージョンした対象の比率の差（コントロールからＣｏＡｄを差し引いたもの）と９０％の両側ＣＩは、ウィルソンスコア法に基づいて計算した。

【0119】

図４は、プロトコルごとのインフルエンザ免疫原性集団についてのワクチン接種から２８日後のＨＩ抗体応答（ＨＡＩ）についてのセロプロテクション率の違いのフォレストプロットを示す。４つのインフルエンザワクチン株に対するセロプロテクション率は、ワクチン接種後の力価が１：４０以上を有する対象のパーセンテージとして定義された。群の間のセロプロテクションした対象の比率の差（コントロールからＣｏＡｄを差し引いたもの）と９０％の両側ＣＩは、ウィルソンスコア法に基づいて計算した。

【0120】

２．副次的免疫原性分析：
上腕骨免疫原性分析は、免疫原性の結果に影響を与えると予想される主要なプロトコルの逸脱を伴う対象を除き、免疫原性データが利用可能な、全てランダム化されて完全にワクチン接種された対象（３つのワクチン接種全て、すなわち季節性インフルエンザ、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ、及びプラセボ）として定義されるプロトコルごとのＲＳＶ免疫原性（ＰＰＲＩ）集団に基づいた。自然ＲＳＶ感染後に採取されたサンプルは、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦの免疫原性の評価には含まれなかった。

【0121】

Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦのＦｌｕａｒｉｘとの共投与が、ＲＳＶ Ａ２（ＶＮＡ Ａ２）レベルに対するウイルス中和抗体に及ぼす影響を評価するために、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦのみの投与対共投与の２８日後のＶＮＡ Ａ２レベルのＧＭＴ比が計算された。対応する９０％ＣＩでのこの比率は１．２（１．００；１．４５）であった。Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦのワクチン接種から２８日後の幾何平均ＶＮＡ Ａ２力価（ＧＭＴ）、共投与群（Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ）に対するコントロール群（Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ）の幾何平均比（ＧＭＲ）、及び対応するＣＩを、表３に示す。

【0122】

【表3】

【0123】

図５は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＲＳＶ Ａ２株に対する中和抗体の力価のプロットを示す。ＶＮＡ Ａ２の上昇倍率及び９５％ＣＩの幾何平均は、Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ群及びＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ単独群でそれぞれ２．８（２．５；３．２）及び３．１（２．７；３．６）であった。

【0124】

図６は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＥＬＩＳＡで測定した場合のＲＳＶ ｐｒｅＦタンパク質による抗体応答のプロットを示しており、図には、９５％ＣＩの幾何平均が示されており、Ｎ＝ベースラインのデータを有する対象の数である。ｐｒｅ－Ｆ ＥＬＩＳＡの上昇倍率及び９５％ＣＩの幾何平均は、Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ群及びＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ単独群でそれぞれ２．３（２．１；２．７）及び２．６（２．３；３．０）であった。

【0125】

図７は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＥＬＩＳＡで測定した場合のＲＳＶ ｐｏｓｔ－Ｆタンパク質による抗体応答のプロットを示しており、図には、９５％ＣＩの幾何平均が示されており、Ｎ＝ベースラインのデータを有する対象の数である。ｐｏｓｔ－Ｆ ＥＬＩＳＡの上昇倍率及び９５％ＣＩの幾何平均は、Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ群及びＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ単独群でそれぞれ２．０（１．８；２．２）及び２．１（１．９；２．３）であった。

【0126】

図８は、プロトコルごとのＲＳＶ免疫原性集団の経時的なＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイで測定した場合のＲＳＶ－Ｆ特異的Ｔ細胞応答のボックスプロットを示す。２人の対象については、調整／マージの問題のため、２９日目のＥＬＩＳｐｏｔサンプルが省略されていることに注意されたい。

【0127】

３．安全性：
安全性分析は、プロトコルの逸脱やワクチンの種類に関係なく、ランダム化され、少なくとも１回の試験ワクチンを投与された全ての対象として定義される完全分析（ＦＡ）集団に基づいた。

【0128】

群１（ＣｏＡｄ）の１人の対象（１．１％）は、プラセボ投与後に３つのＳＡＥを報告した。ＳＡＥは、グレード４の高血圧緊急症、グレード４の徐脈、及びグレード３の腎障害であった。これらのＡＥはワクチン接種とは関係がないと考えられた。他のＳＡＥは報告されなかった。致命的な結果をもたらすＡＥはなかった。

【0129】

群１（ＣｏＡｄ）の１人の対象（１．１％）は、Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ投与後に中止につながるＡＥを経験した。このＡＥはグレード２の耳の感染症であり、ワクチン接種とは関係がないと考えられた。

【0130】

最も頻繁に報告された非自発的な局所事象は痛み／圧痛であり、それぞれ、Ｆｌｕａｒｉｘの同時投与の有無にかかわらず、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ投与後、対象の７８．９％又は７６．７％でＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ群で報告された。Ｆｌｕａｒｉｘ群では、これは、それぞれ、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦの同時投与の有無にかかわらず、Ｆｌｕａｒｉｘ投与後、対象の４６．７％及び３８．９％で報告された。プラセボ群では、痛み／圧痛は２０％未満で報告された。痛み／圧痛の発症までの期間の中央値は１日であり、持続期間の中央値はＦｌｕａｒｉｘとの共投与の有無にかかわらずＡｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ群で２日又は４日、プラセボ又はＦｌｕａｒｉｘ群の期間の中央値は１日又は２日であった。

【0131】

Ｆｌｕａｒｉｘの共投与の有無にかかわらず、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ投与後に対象の３０％超で報告された非自発的な全身性ＡＥは、関節痛、悪寒、倦怠感、頭痛、及び筋肉痛であった。これらのＡＥは、Ｆｌｕａｒｉｘ単独投与又はプラセボ投与後の対象の２０％未満で報告された。Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦワクチン接種（Ｆｌｕａｒｉｘの有無にかかわらず）を行ったグループでは、発症までの期間の中央値は典型的には１～２日であり、期間の中央値は一般的に１～２日であった。

【0132】

投与後に５％超の対象で報告された自発的なＡＥは、気道感染症及び血圧の上昇であった。気道感染症は、Ｆｌｕａｒｉｘ＋プラセボ投与後の対象の１２．２％、Ｆｌｕａｒｉｘ＋Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ共投与後の対象の１１．１％、Ａｄ２６．ＲＳＶ．ｐｒｅＦ単独投与後の対象の５．６％、及びプラセボ投与後の対象の８．０％で報告された。

【0133】

上記の実施形態に対して、この広い発明概念から逸脱することなく変更を加えることができることが当業者には理解されるであろう。したがって、本発明は、開示されている特定の実施形態に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の趣旨及び範囲に含まれる変形例を包含すると意図されていることが理解されよう。

【0134】

配列
配列番号１：（ＲＳＶ Ｆタンパク質Ａ２全長配列）

【化1】

【0135】

配列番号２（三量化ドメイン）
ＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬ

【0136】

配列番号３（リンカー）
ＳＡＩＧ

【0137】

配列番号４（ＲＳＶ ｐｒｅＦ２．１）

【化2】

【0138】

配列番号５（ＲＳＶ ｐｒｅＦ２．２）

【化3】

【0139】

配列番号６（ＲＳＶ Ｆ ｐｒｅ－Ｆ２．１）

【化4】

【0140】

配列番号７（ＲＳＶ Ｆ ｐｒｅ－Ｆ２．２）

【化5】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

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【国際調査報告】