▶ ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエルの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-07-21
(54)【発明の名称】乾燥微粒子
(51)【国際特許分類】
A61K 9/14 20060101AFI20220713BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20220713BHJP
A61K 9/107 20060101ALI20220713BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220713BHJP
A61K 47/40 20060101ALI20220713BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20220713BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20220713BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20220713BHJP
A61K 47/18 20060101ALI20220713BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20220713BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20220713BHJP
【ＦＩ】
A61K9/14
A61K9/19
A61K9/107
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K47/40
A61K47/34
A61K47/12
A61K47/02
A61K47/18
A61K47/24
A61K47/22
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021565947
(86)(22)【出願日】2020-05-13
(85)【翻訳文提出日】2021-11-05
(86)【国際出願番号】 EP2020063326
(87)【国際公開番号】W WO2020229536
(87)【国際公開日】2020-11-19
(31)【優先権主張番号】1906835.2
(32)【優先日】2019-05-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】514232085
【氏名又は名称】ユーシービー バイオファルマ エスアールエル
(74)【代理人】
【識別番号】110000855
【氏名又は名称】特許業務法人浅村特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】アリギ、オードリー フランソワーズ
(72)【発明者】
【氏名】ゴール、ジョナサン エリューテル モーリス
(72)【発明者】
【氏名】マルケット、サラ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C076AA17
4C076AA30
4C076BB11
4C076BB15
4C076BB16
4C076BB25
4C076CC06
4C076CC07
4C076DD09
4C076DD23
4C076DD26Z
4C076DD38
4C076DD41Z
4C076DD44
4C076DD50Z
4C076DD51Z
4C076DD60Z
4C076EE23
4C076EE24
4C076EE39
4C076FF02
4C076FF16
4C076FF31
4C076FF36
4C076GG06
4C076GG09
4C085AA13
4C085AA14
4C085DD13
4C085DD84
4C085EE01
4C085EE07
4C085GG01
4C085GG03
4C085GG04
(57)【要約】
本発明は、医薬組成物、特に抗体分子ロード高分子マイクロスフェアを乾燥微粒子の形態で含む遅延放出医薬組成物を対象とする。乾燥微粒子、及び前記乾燥微粒子を含む医薬組成物は、製造中及び貯蔵の際に安定であり、興味深い遅延放出特性が実証される。更に本発明は、前記乾燥微粒子を調製するための方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗体分子、ポリマー、及びシクロデキストリンを含む乾燥微粒子。
【請求項2】
抗体分子、ポリマー、及びシクロデキストリンを含む水性抗体分子含有エマルション。
【請求項3】
シクロデキストリンがβ－シクロデキストリンファミリーのメンバーであり、ＨＰβＣＤ及びＳＢＥβＣＤからなる群から好ましくは選択されるか、又はα－シクロデキストリンファミリーのメンバーである、請求項１に記載の乾燥微粒子又は請求項２に記載の水性抗体分子含有エマルション。
【請求項4】
抗体分子が、完全長重鎖及び軽鎖を有する完全抗体分子、又は、その抗原結合フラグメント―――例えば、Ｆａｂ、改変Ｆａｂ、Ｆａｂ’、改変Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ、Ｆａｂ－ｄｓＦｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ－Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ビス－ｓｃＦｖフラグメント、１つ若しくは２つのｓｃＦｖ若しくはｄｓｓｃＦｖに連結されたＦａｂ、例えばＢＹｂｅ（登録商標）若しくはＴＲＹｂｅ（登録商標）、ダイアボディ、トリボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体、ラクダ抗体、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）又はＶＮＡＲフラグメントを含む群から選択される―――である、請求項１若しくは３に記載の乾燥微粒子又は請求項２若しくは３に記載の水性抗体分子含有エマルション。
【請求項5】
抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）が１２：１から７：６である、請求項１、３若しくは４のいずれか一項に記載の乾燥微粒子又は請求項２から４のいずれか一項に記載の水性抗体分子含有エマルション。
【請求項6】
ポリマーが、ＰＬＧＡ、ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ又はＰＣＬからなる群から選択される、請求項１若しくは３から５のいずれか一項に記載の乾燥微粒子又は請求項２から５のいずれか一項に記載の水性抗体分子含有エマルション。
【請求項7】
緩衝剤を更に含む、請求項１若しくは３から６のいずれか一項に記載の乾燥微粒子又は請求項２から６のいずれか一項に記載の水性抗体分子含有エマルション。
【請求項8】
緩衝剤が、ホスファート、アセタート、シトラート、アルギニン、トリス、及びヒスチジンからなる群から選択される、請求項７に記載の乾燥微粒子又は水性抗体分子含有エマルション。
【請求項9】
界面活性剤を更に含む、請求項１若しくは３から８のいずれか一項に記載の乾燥微粒子又は請求項２から８のいずれか一項に記載の水性抗体分子含有エマルション。
【請求項10】
界面活性剤がポロキサマー４０７である、請求項９に記載の乾燥微粒子又は水性抗体分子含有エマルション。
【請求項11】
約１０から３０％重量（ｗ）／ｗの抗体分子、約５０から８０％ｗ／ｗのポリマー、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、並びに任意選択で、約０．２から４％ｗ／ｗの緩衝剤及び／又は約０．０５から４．０％ｗ／ｗの界面活性剤を含む、請求項１又は３から１０のいずれか一項に記載の乾燥微粒子。
【請求項12】
請求項２から１０のいずれか一項に記載の水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥することによって、又は噴霧乾燥して次いで凍結乾燥することによって得られる乾燥微粒子。
【請求項13】
請求項１及び３から１１のいずれか一項に記載の乾燥微粒子を製造するための方法であって、ａ）シクロデキストリンを水性抗体分子含有溶液に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）溶媒中にポリマーを可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相をステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得るステップと、次いで、
ｄ）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して任意選択で更に凍結乾燥して、乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法。
【請求項14】
乾燥微粒子中で抗体分子を安定化するための方法であって、シクロデキストリン及び可溶化ポリマーを水性抗体分子含有溶液に添加して水性抗体分子含有エマルションを得るステップと、次いで、得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥するステップと、任意選択で、それを更に凍結乾燥して前記乾燥微粒子中の安定化された抗体分子を得るステップと、を含む方法。
【請求項15】
請求項１又は３から１１のいずれか一項に記載の乾燥微粒子を得るための方法であって、ａ．シクロデキストリンを水性抗体分子含有溶液に添加して第１の組成物を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物とポリマーとを合わせるステップであって、前記ポリマーが可溶化されて、第２の組成物を得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の第２の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｄ．ステップｃ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法。
【請求項16】
乾燥微粒子の抗体分子持続放出性能を改善するための方法であって、シクロデキストリン及び可溶化ポリマーを水性抗体分子含有溶液に添加して水性抗体分子含有エマルションを得るステップと、次いで、得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥するステップと、任意選択で、それを更に凍結乾燥して、強化された抗体分子持続放出性能を有する前記乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法。
【請求項17】
請求項１又は３から１２のいずれか一項に記載の乾燥微粒子のうちの１つ又は複数を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬組成物、特に抗体分子ロード高分子マイクロスフェアを乾燥微粒子の形態で含む遅延放出医薬組成物を対象とする。乾燥微粒子、及び前記乾燥微粒子を含む医薬組成物は、製造中及び貯蔵の際に安定であり、興味深い遅延放出特性が実証される。更に本発明は、前記乾燥微粒子を調製するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
典型的には、治療用タンパク質、例えば抗体は、皮下又は静脈内で投与される。それにもかかわらず患者及び医師は、これらの侵襲的な経路によってこれらを繰返し投与する場合、疼痛を生じ、また不便であるためにこれらの薬物を進んで使用しない場合がある。残念ながら、市販の治療用タンパク質の大部分は頻繁な投与を必要とする。
【0003】
所与の薬物に関する投薬レジメンを改善し得る１つの製剤フォーマットは、持続放出（遅延放出としても知られる）フォーマットであり、これは、高分子マトリックス中に通常カプセル化された薬物の遅延放出を場合により数カ月にわたって可能にする。そのような遅延放出製剤では、大量の薬物が初期に放出されてから安定な放出プロファイルに到達することが非常に多く、これはバースト放出と称される。バースト放出は、初期の高薬物送達、場合により有害な副作用につながる。
【0004】
利用可能なさまざまな持続放出製剤フォーマットのうち、乾燥粉末組成物、例えば乾燥微粒子組成物は十分に確立されている。しかしそれらを、治療用タンパク質を投与するために使用する場合、いくつかの欠陥が存在する。実際、タンパク質は凝集し、抽出率が低くなりがちであることが多く、乾燥微粒子組成物の効率性を大幅に低下させる。これは乾燥微粒子として製剤化された治療用タンパク質が抗体分子である場合、特に当てはまる。
【0005】
治療用タンパク質を含む比較的安定な乾燥微粒子を調製するための１つの方法は、噴霧乾燥である。それは、液体製剤を液滴で高温乾燥媒体、典型的には空気又は窒素中に霧化することによって、液体ベースの製剤を乾燥粉末に変換するプロセスである。このプロセスによって、粒子サイズ、サイズ分布、粒子形状、密度、純度及び構造の制御が強化されるようになる。噴霧乾燥されることになる組成物は、ポリオールを一般的に含む。それにもかかわらず、この技術は、噴霧乾燥装置の内壁に粒子が付着することに起因して生じるいくつかの欠点、例えば凝集問題及び収率の低下を有する。
【0006】
噴霧乾燥するための出発材料は、典型的にはエマルションである。ダブルエマルション技術（例えば、水中油中水（ＷＯＷ）、水中油中固体（ＳＯＷ））は、持続放出特性を有するタンパク質ロードポリ（ラクチド－コ－グリコシド）酸（ＰＬＧＡ）微粒子を製造するために通常使用される。しかし、相当量のタンパク質が外部水性相へ失われる場合があり、薬物ロード（ＤＬ）を顕著に低下させる（Ｗａｎｇ Ｊ．ら、２００４年）。油中水（ｗ／ｏ）エマルションの噴霧乾燥は、タンパク質ロード微粒子を製造するための好適な代替方法であると思われる。実際、噴霧乾燥は再現性があり、スケーラブルが容易なワンステッププロセスである。更にダブルエマルション技術と比較して、ｗ／ｏエマルションを噴霧乾燥すると、ＤＬが高い微粒子の製造につながり得る外部水性相の存在が回避される（Ｇｉｕｎｃｈｅｄｉら、２００１年）。このアプローチは、抗体モデルとしてポリクローナル免疫グロブリンＧを使用した持続放出特性を有する高タンパク質ロード微粒子を製造するためにうまく使用されている。それにもかかわらず、このプロセスをモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に適用した場合、カプセル化プロセス中に高分子量種（ＨＭＷＳ）が形成されることによる安定性の問題が観察された。表面誘発性凝集（ｍＡｂと有機相との接触）がｍＡｂ不安定性の主な原因として仮定された。これらのＨＭＷＳは、免疫原性を誘導する場合があり、したがって製品の安全性及び有効性に影響を与えるために回避するべきである（Ｍｏｕｓｓａら、２０１６年）。
【0007】
いずれの種類の製剤（液体、凍結乾燥剤、噴霧乾燥剤など）に関しても、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８が、表面誘発性凝集に対してｍＡｂを安定化するために通常使用される。しかし、このタイプの界面活性剤、より詳細にはポリオキシエチレン系界面活性剤は、いくつかの欠点、例えば、タンパク質との混合ミセルの形成に起因する長期貯蔵中の安定性の問題を示す。これに関連して、例えば、シクロデキストリンがこの目的のための代替の賦形剤として浮上している（Ｐａｉら、２００９年；Ｓｅｒｎｏら、２０１０年；ＵＳ５９９７８５６）。それにもかかわらず、シクロデキストリンは噴霧乾燥製剤で使用した場合、タンパク質に対して期待される性能も期待される安定性効果も有していなかった（Ｊｏｈａｎｓｅｎら、１９９８年）。更にいくつかのデメリット、例えばその吸水作用を有している。
【0008】
遅延放出組成物で考慮するべき他の側面は、カプセル化効率、薬物ロード、及び初期の「バースト放出」に対するその効果である（Ｈａｎら、２０１６年）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
その結果、持続放出特性を有し、抗体の安定性が改善された（例えば、油中水エマルションを噴霧乾燥することによる抗体ロード高分子マイクロスフェアの製造中の抗体の分解が制限された）抗体ロード高分子マイクロスフェア（乾燥微粒子として提供される）を含み、同時に良好な粉末性能（例えば、高薬物ロードでの高カプセル化効率、高抽出効率、及び許容される初期のバースト放出）を提供するさらなる医薬組成物が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明は、抗体分子、ポリマー及びシクロデキストリンを含み、任意選択で緩衝剤及び／又は界面活性剤を更に含む乾燥抗体分子ロード高分子マイクロスフェア（或いは乾燥微粒子と称される）を提供することによって上記必要性に取り組む。好ましくは、シクロデキストリンは、β－シクロデキストリンファミリーのメンバーであり、ＨＰβＣＤ及びＳＢＥβＣＤからなる群から更により好ましくは選択される。或いは、それはまた、α－シクロデキストリンファミリーのメンバーであってもよい。本発明による乾燥微粒子（又はその複数形態での乾燥微粒子）は、再懸濁してからそれを必要とする患者に投与してもよい。
【0011】
抗体分子、ポリマー及びシクロデキストリンを含み、任意選択で、緩衝剤及び／又は界面活性剤を含む水性抗体分子含有エマルションも提供される。好ましくは、シクロデキストリンはβ－シクロデキストリンファミリーのメンバーであり、ＨＰβＣＤ及びＳＢＥβＣＤからなる群から更により好ましくは選択される。或いは、それはα－シクロデキストリンファミリーのメンバーであってもよい。前記水性抗体分子含有エマルションは、噴霧乾燥することによって乾燥微粒子を製造するために使用することができる。
【0012】
本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）を含む医薬組成物も包含される。
【0013】
本発明全体の文脈において、抗体分子は、完全長重鎖及び軽鎖を有する完全抗体分子、又は、その抗原結合フラグメント―――例えば（これらに限定されないが）、Ｆａｂ、改変Ｆａｂ、Ｆａｂ’、改変Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ、Ｆａｂ－ｄｓＦｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ－Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ビス－ｓｃＦｖフラグメント、１つ若しくは２つのｓｃＦｖ若しくはｄｓｓｃＦｖに連結されたＦａｂ、例えば、ＢＹｂｅ（登録商標）若しくはＴＲＹｂｅ（登録商標）、ダイアボディ、トリボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体、ラクダ抗体、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）又はＶＮＡＲフラグメントからなる群から選択される―――からなる群から選択される。
【0014】
１つの態様において、本明細書では、抗体分子、ポリマー、及びシクロデキストリンを含む水性抗体分子含有エマルション及び乾燥微粒子であって、抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）が１２：１から７：６である水性抗体分子含有エマルション及び乾燥微粒子が提供される。
【0015】
本発明による乾燥微粒子を製造するための方法、並びに前記乾燥微粒子を得るための方法、前記乾燥微粒子中で抗体分子を安定化するための方法、及び前記乾燥微粒子の持続放出性能を改善するための方法も提供される。
【発明を実施するための形態】
【0016】
・「溶媒」という用語は、本明細書において使用する場合、水性又は非水性のいずれかの液体溶媒を指す。
【0017】
薬物化合物を再懸濁するために溶媒を使用する場合、溶媒の選択は、前記溶媒に対する薬物化合物の溶解度、及び投与様式に特に依存する。タンパク質、例えば抗体を含む微粒子を再懸濁するために、水性溶媒が好ましい。水性溶媒は水のみで構成されていても、水及び１つ又は複数の混和性溶媒で構成されていても、溶解溶質、例えば、緩衝液、塩又は他の賦形剤を含んでいてもよい。本発明によれば、患者に投与する前に、１つ又は複数の微粒子を再懸濁するために好ましい溶媒は、水性溶媒、例えば、水又は生理食塩水溶媒である。
【0018】
抗体ロードマイクロスフェアを形成するのに必要とされるポリマーを可溶化するために溶媒が使用される場合、それは、アセトニトリル、酢酸エチル、アセトン、テトラヒドロフラン及び塩素系溶媒（例えばジクロロメタン）からなる群から典型的には選択される。
【0019】
・「乾燥微粒子」（その複数形態での乾燥微粒子）という用語は、非常に小さいサイズ（典型的には、約２０μｍ又はそれ未満のサイズ）の乾燥「粒子」（或いは「微粒子」又は「マイクロスフェア」とも称される）を指す。好ましくは、乾燥微粒子は、乾燥粒子の重量の約１０％未満、通常５％未満、又は更に３％未満の水を含む。前記乾燥微粒子は、本発明の文脈において、乾燥抗体ロードマイクロスフェア（或いはマイクロスフェア又はＭＳと称する）に相当する。乾燥微粒子は、水溶液又は水性エマルションを噴霧乾燥及び／又は凍結乾燥することによって典型的には得てもよい。或いは、乾燥粉末という用語を使用してもよい。
【0020】
・「水性抗体分子含有エマルション」という用語は、水中油中水又は油中水エマルションを指し、本明細書で更に定義される。本発明の文脈において、油中水エマルションが好ましい。
【0021】
・「凍結乾燥（freeze-drying）」という用語は「凍結乾燥（lyophilization）」としても知られ、少なくとも３つの主なステップ：１）凍結乾燥されることになる製品の温度を凝固点未満に低下させるステップ（典型的には、－４０から－８０℃の間；凍結ステップ）と、２）高圧真空を行うステップ（典型的には、３０から３００ｍＴｏｒｒの間；第１の乾燥ステップ）と、３）温度を上昇させるステップ（典型的には、２０から４０℃の間；第２の乾燥ステップ）とからなる乾燥微粒子を得るための方法を指す。
【0022】
・「スプレードライ」という用語は、少なくとも２つの主なステップ：１）供給液を微細液滴に霧化するステップと、２）高温乾燥ガスを用いて溶媒又は水を蒸発させるステップとからなる、乾燥微粒子を得るための方法を指す。
【0023】
・「遅延放出」（或いは、本明細書において「持続放出」と称される）という用語は、数日、数週、数カ月又は更に数年にわたる活性成分（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）の送達を指す。タンパク質ロードＰＬＧＡ微粒子に関する典型的な遅延放出プロファイルは３相性であり、（ｉ）初期のバースト放出（すなわち、初期の大量の活性成分の放出）、（ｉｉ）延滞期（すなわち、その間非常に少量の製品が放出されるか又は製品が放出されない相）及び（ｉｉｉ）放出期（すなわち、その間は放出速度が安定している相）からなる（Ｄｉｗａｎら、２００１年及びＷｈｉｔｅら、２０１３年）。活性成分の総量の好ましくは約５０％以下の初期のバースト放出が許容されるとみなされるであろう。４０％以下のいずれの初期のバースト放出も「制限されたバースト放出」と称されるであろう。抗体分子の放出も可能な限り完全なまま（すなわち、カプセル化された抗体の１００％に可能な限り近い総放出）であるべきであり、好ましくは少なくとも９０％を超えるべきである。そのような遅延放出組成物の利点のうちの１つは、組成物を患者に頻繁に投与することが少なくなるであろう点である。
【0024】
・「安定性」という用語は、本明細書において使用する場合、本発明による組成物中の抗体分子の物理的、化学的、及び立体配座的安定性を指す（生物学的潜在力の維持を含む）。抗体分子製剤の不安定性は、抗体分子が化学的に分解又は凝集して、例えば、高次ポリマーを形成すること、脱グリコシル化すること、グリコシル化を改変すること、酸化すること、又は製剤化された抗体分子の生物学的活性を低下させるその他の構造的な改変によって引き起こされる場合がある。
【0025】
・（例えば「安定乾燥微粒子」における）「安定」という用語は、目的の抗体分子が、製造中及び貯蔵時にその物理的、化学的及び／又は生物学的特性を実質的に保持する微粒子又は医薬組成物を指す。製剤中の抗体分子の安定性を測定するためのさまざまな分析法は熟練者の知識の十分な範囲内である（例の項におけるいくつかの例を参照のこと）。さまざまなパラメーターを測定して安定性、例えば（これらに限定されるものではないが）、１）抗体のモノマー形態の変化が１０％以下であること、又は２）高分子量種（ＨＭＷ又はＨＭＷＳ；本明細書において凝集体とも称される）における増加が５％以下であることを（初期のデータと比較して）判定してもよい。
【0026】
・「緩衝液」又は「緩衝剤」という用語は、本明細書において使用する場合、医薬用途のための製剤において安全であることが既知であり、製剤に関して所望されるｐＨ範囲内で製剤のｐＨを維持又は制御する効果を有する化合物の溶液を指す。ｐＨを中程度の酸性ｐＨから中程度の塩基性ｐＨで制御するための許容される緩衝液としては、これらに限定されるものではないが、ホスファート、アセタート、シトラート、アルギニン、トリス（２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－１，３、－プロパンジオール）、ヒスチジン緩衝液及び任意の薬理学的に許容されるこれらの塩がある。
【0027】
・「界面活性剤」という用語は、本明細書において使用する場合、疎水性、油性物質の水溶性を高めるか、そうでなければ異なる疎水性を有する２つの物質の混和性を増加させるために特に使用することができる溶解性の化合物を指す。界面活性剤は、特に薬物の吸収又はその標的組織への送達を改変するために製剤において通常使用される。周知の界面活性剤としては、ポリソルベート（ポリオキシエチレン誘導体；Ｔｗｅｅｎ）並びにポロキサマー（すなわち、エチレンオキシド及びプロピレンオキシドがベースのコポリマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）としても知られる）がある。本発明によれば、好ましい界面活性剤は、ポロキサマー界面活性剤であり、更により好ましくは、ポロキサマー４０７（プルロニック（登録商標）Ｆ１２７としても知られる）である。
【0028】
・「安定化剤（stabilizing agent）」、「安定化剤（stabilizer）」又は「等張性薬剤」という用語は、本明細書において使用する場合、生理学的に耐容性を示し、製剤に好適な安定性／張度を与える化合物である。凍結乾燥プロセス又はスプレードライプロセスの間、安定化剤は保護剤としても効果的である。化合物、例えばグリセリンはそのような目的で通常使用される。他の好適な安定化剤としては、これらに限定されるものではないが、アミノ酸又はタンパク質（例えば、グリシン又はアルブミン）、塩（例えば、塩化ナトリウム）、及び糖（例えば、デキストロース、マンニトール、スクロース、トレハロース及びラクトース）がある。本発明によれば、好ましい安定化剤はシクロデキストリンである。
【0029】
・「シクロデキストリン」という用語（又はその複数形態）は、環を形成するように配置された、いくつか（６から８個）のグルコースサブユニットからなる化合物である。シクロデキストリンは、ヒトにおいて非経口で使用するための液体組成物において広範囲に許容される。本発明によるシクロデキストリンの好ましい形態は、β－シクロデキストリンファミリー（７個のグルコースサブユニット）、例えば（これらに限定されないが）、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）及びスルホブチルエーテルβ－シクロデキストリン（ＳＢＥβＣＤ）に属する。或いは、α－シクロデキストリンファミリーのメンバー（６個のグルコースサブユニット）を使用してもよいが、好ましくはγ－シクロデキストリン（８－グルコースサブユニット）は使用することができない。
【0030】
・「ポリマー」という用語は、単純な化学的単位の繰返しによって構築された高分子量の高分子化合物又は巨大分子を指す。ポリマーは、天然に存在する生物学的ポリマー（例えば、タンパク質、炭水化物、核酸）であっても、合成的に製造されたポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン）であってもよい。ポリマーという用語は、コポリマーも含む。生分解性及び生体適合性ポリマーが本発明の文脈において好ましい。そのようなポリマー（又は共重合体）の例は、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ＰＬＡとグリコール酸とのコポリマー（ＰＬＧＡ）、ペグ化ＰＬＧＡ、又は更にポリカプロラクトンＰＣＬである。
【0031】
・「バイアル」又は「容器」という用語は、本明細書において使用する場合、本発明の医薬組成物を乾燥微粒子のまま保持するのに好適なリザーバーを広範に指す。同様に、再懸濁するための溶媒を必要に応じて保持することになる。本発明において使用することができるバイアルの例としては（これらに限定されないが）、シリンジ（例えば、予め充填されたシリンジ）、アンプル、カートリッジ、チューブ、ボトル又は貯蔵及び／若しくは患者への医薬組成物の送達に好適な他のそのようなリザーバーがある。バイアルは、本発明による医薬組成物を含む１つ又は複数の容器と、送達デバイス、例えばシリンジ、予め充填されたシリンジ、自己注射器、無針デバイス、埋込体若しくはパッチ、又は非経口投与のための他のデバイスと、使用取扱説明書とを含むキットオブパーツの一部であってもよい。
【0032】
・「抗体分子」という用語は、完全長重鎖及び軽鎖を有する完全抗体分子、又はその抗原結合フラグメントを意味する。抗原結合フラグメントは、例えば（これらに限定されないが）、Ｆａｂ、改変Ｆａｂ、Ｆａｂ’、改変Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ、Ｆａｂ－ｄｓＦｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ－Ｆｖ、ｓｃＦｖ及びビス－ｓｃＦｖフラグメントを含むか又はこれらからなる群から選択してもよい。前記フラグメントはまた、ダイアボディ、トリボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、例えば、ｓｄＡｂ、ＶＬ、ＶＨ、ＶＨＨ又はラクダ抗体（例えば、ラクダ又はラマからのもの、例えばＮａｎｏｂｏｄｙ（商標））及びＶＮＡＲフラグメントであってもよい。本発明による抗原結合フラグメントは、１つ又は２つのｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖに連結されたＦａｂも含んでいてもよく、各ｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖは、同じ又は異なる標的に結合する（例えば、一方のｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖは治療標的に結合し、もう一方のｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖは、例えば、アルブミンに結合することによって半減期を延長させる）。そのような抗体フラグメントの例示的なものは、ＦａｂｄｓｓｃＦｖ（ＢＹｂｅ（登録商標）とも称される）又はＦａｂ－（ｄｓｓｃＦｖ）２（ＴｒＹｂｅ（登録商標）とも称される、例えばＷＯ２０１５／１９７７７２を参照のこと）である。本発明による抗体分子は、抗体又は抗体フラグメントから形成された１、２、３又は４価の、二重特異性、三重特異性、四重特異性又は多重特異性抗体分子であってもよい。その用語は、任意の種、特に２つの実質的に完全な重鎖及び２つの実質的に完全な軽鎖を有する哺乳動物種の抗体分子、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ及びＩｇＭ、並びに改変されたこれらのバリアントを含む任意のアイソタイプのヒト抗体、例えば、チンパンジー、ヒヒ、アカゲザル又はカニクイザルからの非ヒト霊長類抗体、例えば、マウス、ラット又はウサギからの齧歯動物抗体；ヤギ若しくはウマ抗体、及びこれらの誘導体、又は鳥類種のもの、例えばニワトリ抗体、又は魚類種のもの、例えばサメ抗体を含む。前記抗体分子は、任意のタイプ、例えば、モノクローナル、キメラ、ヒト化、完全ヒトのものであってもよい。必要に応じて、抗体分子は、１つ又は複数のエフェクター分子にコンジュゲートさせてもよい。上記で定義した抗体分子、並びにこれらの抗体又は抗体フラグメントを作成、製造するための方法は当技術分野において周知である（Ｖｅｒｍａら、１９９８年）。
【0033】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、組換え抗体又は組換え抗体フラグメント（単数又は複数）をコードする１つ又は複数の発現ベクターでトランスフェクトされた原核生物又は真核生物の宿主細胞を培養することによって得てもよい。真核生物宿主細胞は、好ましくは哺乳動物細胞であり、より好ましくはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。原核生物の宿主細胞は、好ましくはグラム陰性細菌であり、より好ましくは、宿主細胞は大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）細胞である。宿主細胞は、組換えタンパク質の成長及び発現を支持することになる任意の培地中で培養してもよい。各宿主細胞にとって最良の条件は、当業者であれば既知であろう。
【0034】
細胞培養物の上澄み又は封入体のいずれかから回収したら、製造に使用する宿主細胞に応じて、抗体又はその抗原結合フラグメントを精製してもよい。精製方法は当業者に周知である。これらは、典型的には、さまざまなクロマトグラフィー及びろ過ステップの組合せからなる。完全なプロセスは、水性条件で行われる。プロセスの終わりに回収した溶液を製剤にしてもよい。前記溶液は、本明細書において「水性抗体分子含有溶液」と称されることになる。それは、本発明のエマルション、次いで乾燥微粒子（単数又は複数）が形成される溶液を指す。
【0035】
・「高濃度」抗体分子という用語は、抗体分子の濃度が少なくとも５０ｍｇ／ｍＬであることを意味する。
【0036】
・「治療有効量」という用語は、本明細書において使用する場合、標的の疾患、障害若しくは状態を処置、改善若しくは予防するのに又は検出可能な治療的、薬理学的若しくは予防的効果を示すのに必要とされる抗体分子の量を指す。いずれの抗体分子に関しても、治療有効量は、最初に細胞培養アッセイ又は動物モデルのいずれかで評価してもよく、通常、齧歯動物、ウサギ、イヌ、ブタ又は霊長目で評価してもよい。動物モデルを使用して、適切な濃度範囲及び投与の経路も判定してもよい。次いで、そのような情報を使用して、ヒトにおける投与に有用な用量及び経路を判定してもよい。
【0037】
本発明の全ての実施形態において、「組成物」は、「製剤」と称される場合があり、一切区別されない。
【0038】
乾燥微粒子の形態での医薬組成物のいくつかの特性が、シクロデキストリンの存在下で、より具体的には、β－シクロデキストリンファミリーのいくつかのメンバー、例えば、ＨＰβＣＤ及びＳＢＥβＣＤの存在下で大幅に改善されたことは本発明者らの驚くべき発見である。これらの効果は、高濃度の抗体分子を含む水溶液から得られた乾燥微粒子（又は複数の乾燥微粒子）（a dry microparticle (or dry microparticles)）で、スプレードライステップを行った場合はエマルションで特に観察された。本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）は持続放出特性を有し、抗体の安定性が改善されており、同時に良好な粉末性能（例えば、高薬物ロードでの高カプセル化効率、高抽出効率及び許容される初期のバースト放出）を提供することは、実際に驚くべき発見である。
【0039】
本発明の文脈において、乾燥微粒子は、９０％を超えるカプセル化効率、２０％を超える薬物ロード及び８０％を超える抽出効率を示す場合、良好な粉末性能を有すると考えられることになる。放出されるｍＡｂの総量の少なくとも約１０％の増加は、粉末性能からの改善であると考えられることになる。シクロデキストリン不含製剤と比較してＨＭＷＳの少なくとも１０％の低下は、安定性の観点からの改善であると考えられることになる。
【0040】
本発明の主な目的は、抗体分子、ポリマー、及びシクロデキストリンを含むか又はこれらからなる乾燥微粒子である。任意選択で、前記乾燥微粒子は、緩衝剤及び／又は界面活性剤を更に含む。例として、約１０から３０％重量（ｗ）／ｗの抗体分子、約５０から８０％（ｗ／ｗ）のポリマー、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、並びに任意選択で約０．２から４％（ｗ／ｗ）の緩衝剤、及び／又は約０．０５から４．０％（ｗ／ｗ）の界面活性剤を含むか又はこれらからなる乾燥微粒子が本明細書において提供される。さらなる例として、約１０から３０％（ｗ／ｗ）の抗体分子、約０．２から４％（ｗ／ｗ）の緩衝剤、約５０から８０％（ｗ／ｗ）のポリマー、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、及び任意選択で約０．０５から４．０％（ｗ／ｗ）の界面活性剤を含むか又はこれらからなる乾燥微粒子が本明細書において提供される。前記微粒子は安定である。いずれの場合も、全ての構成要素の百分率の合計は１００％に達することを理解されたい。
【0041】
本発明の別の目的は、抗体分子、ポリマー、及びシクロデキストリンを含むか又はこれらからなる水性抗体分子含有エマルションである。任意選択で、前記水性抗体分子含有エマルションは、緩衝剤及び／又は界面活性剤を更に含む。例として、ａ）約５から約３０％ｗ／ｖ（重量／体積）（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、並びに任意選択で約５から１００ｍＭの緩衝剤、及び約０．０５から約１．５％ｗ／ｖの界面活性剤を含むか又はこれらからなる水性相と、ｂ）約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含む有機相とを含むか又はこれらからなる水性抗体分子含有エマルションが本明細書において提供される。ｗ／ｗで示される本明細書において提供される水性抗体分子含有エマルションは、約１０から３０％（ｗ／ｗ）の抗体分子、約５０から８０％（ｗ／ｗ）のポリマー、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、並びに任意選択で約０．２から４％（ｗ／ｗ）の緩衝剤、及び／又は約０．０５から４．０％（ｗ／ｗ）の界面活性剤を含むか又はこれらからなる。さらなる例として、約１０から３０％（ｗ／ｗ）の抗体分子、約０．２から４％（ｗ／ｗ）の緩衝剤、約５０から８０％（ｗ／ｗ）のポリマー、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、及び任意選択で約０．０５から４．０％（ｗ／ｗ）の界面活性剤を含むか又はこれらからなる水性抗体分子含有エマルションが本明細書において提供される。前記水性抗体分子含有エマルションは、任意の既知の手段によって乾燥微粒子を得るための中間体として使用することができる。好ましくは、前記水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得てもよい。或いは、最初に噴霧乾燥し、次いで凍結乾燥して乾燥微粒子を得てもよい。
【0042】
本発明の別の目的は、水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥することによって得られる乾燥微粒子である。前記エマルションは、水性相及び有機相をホモジネートすることによって得られ、ポリマー（有機相によって提供される）、並びに抗体分子、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝剤及び／又は界面活性剤（水性相によって提供される）を含むか又はこれらからなる。例として、水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥することによって得られる乾燥微粒子であって、前記水性抗体分子含有エマルションが、ａ）約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、並びに任意選択で約５から１００ｍＭの緩衝剤、及び約０．０５から約１．５％ｗ／ｖの界面活性剤を含むか又はこれらからなる水性相と、ｂ）約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含む有機相とを含むか又はこれらからなる乾燥微粒子が本明細書において提供される。さらなる例として、水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥することによって得られる乾燥微粒子であって、前記水性抗体分子含有エマルションが、ａ）約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子、約５から１００ｍＭの緩衝剤、１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、及び任意選択で約０．０５から約１．５％ｗ／ｖの界面活性剤を含むか又はこれらからなる水性相と、ｂ）約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含む有機相とを含むか又はこれらからなる乾燥微粒子が本明細書において提供される。噴霧乾燥ステップ後、乾燥微粒子は、任意選択で更に凍結乾燥してもよい。前記微粒子は安定である。
【0043】
本開示のさらなる目的は、抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝剤及び／又は界面活性剤を含むか又はこれらからなる乾燥微粒子を製造するための方法であって、
ａ）シクロデキストリンを水性抗体分子含有溶液に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）ポリマーを溶媒中に可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相をステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで
ｄ）水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｄ）の乾燥微粒子を更に凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含み、
ステップａ）及びｂ）は任意の順序で行ってもよい方法を記載することである。
ａ）シクロデキストリンを水性抗体分子含有溶液に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）ポリマーを溶媒中に可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相をステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで
ｄ）水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｄ）の乾燥微粒子を更に凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含み、
ステップａ）及びｂ）は任意の順序で行ってもよい方法を記載することである。
【0044】
微粒子が緩衝剤及び／又は界面活性剤を含む場合、前記緩衝剤及び／又は界面活性剤は、（ステップａの）水性抗体分子含有溶液に好ましくは存在する。例として、本明細書では、抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝液及び／又は界面活性剤を含むか又はこれらからなる乾燥微粒子を製造するための方法であって、
ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリンを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）ポリマーを溶媒中に可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相を、約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含むステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで、
ｄ）ステップｃ）の水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｄ）の乾燥微粒子を更に凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含み、
ステップａ）及びｂ）は任意の順序で行ってもよい方法を開示する。
ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリンを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）ポリマーを溶媒中に可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相を、約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含むステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで、
ｄ）ステップｃ）の水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｄ）の乾燥微粒子を更に凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含み、
ステップａ）及びｂ）は任意の順序で行ってもよい方法を開示する。
【0045】
微粒子が緩衝剤を含む場合、前記緩衝剤は、約５から１００ｍＭの緩衝剤の量で、（ステップａの）水性抗体分子含有溶液に好ましくは存在する。微粒子が界面活性剤を含む場合、前記界面活性剤は、（ステップａ）の間又はステップａ）の前に）水性抗体分子含有溶液中に約０．０５から約１．５％ｗ／ｖで好ましくは添加される。さらなる例として、抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、緩衝剤及び任意選択で界面活性剤を含むか又はこれらからなる乾燥微粒子を製造するための方法であって、
ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６（ｗ／ｗ）の抗体分子／シクロデキストリン比のシクロデキストリンを、約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子及び約５から１００ｍＭの緩衝剤を含む抗体分子含有溶液に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）ポリマーを溶媒中に可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相を、約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含むステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで
ｄ）ステップｃ）の水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｄ）の乾燥微粒子を更に凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含み、
ステップａ）及びｂ）は任意の順序で行ってもよい方法が本明細書において開示される。
ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６（ｗ／ｗ）の抗体分子／シクロデキストリン比のシクロデキストリンを、約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子及び約５から１００ｍＭの緩衝剤を含む抗体分子含有溶液に添加して水性相を得るステップと、
ｂ）ポリマーを溶媒中に可溶化して有機相を得るステップと、
ｃ）ステップａ）の水性相を、約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを含むステップｂ）の有機相に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで
ｄ）ステップｃ）の水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｄ）の乾燥微粒子を更に凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含み、
ステップａ）及びｂ）は任意の順序で行ってもよい方法が本明細書において開示される。
【0046】
微粒子が界面活性剤を含む場合、前記界面活性剤は、（ステップａ）の間又はステップａ）の前に）水性抗体分子含有溶液中に約０．０５から約１．５％ｗ／ｖで好ましくは添加される。
【0047】
本発明の別の態様は、乾燥微粒子中で抗体分子を安定化するための方法であって、ａ）シクロデキストリン、次いで可溶化ポリマーを、水性抗体分子含有溶液に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで、ｂ）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して抗体分子が安定な乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法を提供する。微粒子が緩衝剤を含む場合、前記緩衝剤は、水性抗体分子含有溶液（ステップａ）に好ましくは存在する。例として、乾燥微粒子中で抗体分子を安定化するための方法であって、ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、次いで約０．５から約１０．０％ｗ／ｖの可溶化ポリマーを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで、ｂ）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して抗体分子が安定な乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法が本明細書において提供される。別の例において、乾燥微粒子中で抗体分子を安定化するための方法であって、ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、次いで約０．５から約１０．０％ｗ／ｖの可溶化ポリマーを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子及び約５から１００ｍＭの緩衝剤を含む）に添加して水性抗体分子含有エマルションを得る（ホモジネート後に）ステップと、次いで、ｂ）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して抗体分子が安定な乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法が本明細書において提供される。微粒子が界面活性剤を含む場合、前記界面活性剤は、（ステップａ）の間又はステップａ）の前に）水性抗体分子含有溶液中に約０．０５から約１．５％ｗ／ｖで好ましくは添加されることに留意されたい。噴霧乾燥ステップ後、乾燥微粒子は、凍結乾燥のステップを更に行ってもよいことに更に留意されたい。
【0048】
抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝液及び／又は界面活性剤を含む乾燥微粒子を得るための方法であって、
ａ．シクロデキストリンを水性抗体分子含有溶液に添加して第１の組成物（これは水性相である）を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物とポリマーとを合わせるステップであって、前記ポリマーが可溶化されて、第２の組成物（これは有機相である）を得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の第２の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｄ．ステップｃ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法も記載される。
ａ．シクロデキストリンを水性抗体分子含有溶液に添加して第１の組成物（これは水性相である）を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物とポリマーとを合わせるステップであって、前記ポリマーが可溶化されて、第２の組成物（これは有機相である）を得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の第２の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｄ．ステップｃ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法も記載される。
【0049】
微粒子が緩衝剤及び／又は界面活性剤を含む場合、前記緩衝剤及び／又は界面活性剤は、水性相（ステップａ）に好ましくは存在する。例として、抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝液及び／又は界面活性剤を含む乾燥微粒子を得るための方法であって、
ａ．１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリンを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して第１の組成物（これは水性相である）を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物と約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーとを合わせるステップであって、（有機相として）前記ポリマーが可溶化されて、第２の組成物を得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の第２の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｄ．ステップｃ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法が本明細書において開示される。
ａ．１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリンを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して第１の組成物（これは水性相である）を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物と約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーとを合わせるステップであって、（有機相として）前記ポリマーが可溶化されて、第２の組成物を得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の第２の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｄ．ステップｃ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｅ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法が本明細書において開示される。
【0050】
微粒子が緩衝剤を含む場合、前記緩衝剤は、好ましくは約５から１００ｍＭの量で、水性相（ステップａ）に好ましくは存在する。微粒子が界面活性剤を含む場合、前記界面活性剤はまた、（ステップａ）の間又はステップａ）の前に）水性相中に約０．０５から約１．５％ｗ／ｖで好ましくは添加される。
【0051】
或いは、抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝液及び／又は界面活性剤を含む乾燥微粒子を得るための方法であって、
ａ．シクロデキストリン、次いで可溶化されたポリマーを、水性抗体分子含有溶液に添加して第１の組成物を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｄ．任意選択で、ステップｃ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法が本明細書において記載される。
ａ．シクロデキストリン、次いで可溶化されたポリマーを、水性抗体分子含有溶液に添加して第１の組成物を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｄ．任意選択で、ステップｃ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法が本明細書において記載される。
【0052】
微粒子が緩衝剤及び／又は界面活性剤を含む場合、前記緩衝剤及び／又は界面活性剤は、ステップａの水性抗体分子含有溶液に好ましくは存在する。例として、抗体、ポリマー、シクロデキストリン、及び任意選択で界面活性剤を含む乾燥微粒子を得るための方法であって、
ａ．シクロデキストリン（１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ））、次いで可溶化されたポリマー（約０．５から約１０．０％ｗ／ｖ）を、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して第１の組成物を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｄ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法を本明細書において記載する。
ａ．シクロデキストリン（１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ））、次いで可溶化されたポリマー（約０．５から約１０．０％ｗ／ｖ）を、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して第１の組成物を得るステップと、
ｂ．ステップａ．の第１の組成物をホモジネートして油中水エマルションを得るステップと、
ｃ．ステップｂ．の油中水エマルションを噴霧乾燥して前記乾燥微粒子を得るステップと、
ｄ．任意選択で、ステップｄ．の乾燥微粒子を凍結乾燥して最終的な乾燥微粒子を得るステップと
を含む方法を本明細書において記載する。
【0053】
微粒子が緩衝剤を含む場合、前記緩衝剤は、約５から１００ｍＭの緩衝剤の量で、ステップａの水性抗体分子含有溶液に好ましくは存在する。微粒子が界面活性剤を含む場合、前記界面活性剤はまた、（ステップａ）の間又はステップａ）の前に）ステップａの水性抗体分子含有溶液中に約０．０５から約１．５％ｗ／ｖで好ましくは添加される。
【0054】
本発明の別の目的は、乾燥微粒子の抗体分子持続放出性能を改善し、例えば、注射時のバースト放出の制限及び／又は抗体分子の良好な総放出を提示するための方法であって、ａ）シクロデキストリン、次いで可溶化ポリマーを、水性抗体分子含有溶液に添加して水性抗体分子含有エマルションを得るステップと、次いで２）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して、強化された抗体分子持続放出性能を有する前記乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法である。微粒子が緩衝剤及び／又は界面活性剤を含む場合、前記緩衝剤及び／又は界面活性剤は、水性抗体分子含有溶液中に好ましくは添加される。例として、乾燥微粒子の抗体分子持続放出性能を強化し、注射時のバースト放出の制限及び／又は抗体分子の良好な総放出を提示するための方法であって、ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、次いで約０．５から約１０．０％ｗ／ｖの可溶化ポリマーを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子を含む）に添加して水性抗体分子含有エマルションを得るステップと、次いでｂ）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して、強化された抗体分子持続放出性能を有する前記乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法が本明細書において提供される。さらなる例として、乾燥微粒子の抗体分子持続放出性能を強化し、注射時のバースト放出の制限及び／又は抗体分子の良好な総放出を提示するための方法であって、ａ）１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）のシクロデキストリン、次いで約０．５から約１０．０％ｗ／ｖのポリマーを、水性抗体分子含有溶液（約５から約３０％ｗ／ｖ（すなわち約５０から約３００ｍｇ／ｍＬ）の抗体分子及び約５から１００ｍＭの緩衝剤を含む）に添加して水性抗体分子含有エマルションを得るステップと、次いでｂ）得られた水性抗体分子含有エマルションを噴霧乾燥して、強化された抗体分子持続放出性能を有する前記乾燥微粒子を得るステップと、を含む方法が本明細書において提供される。微粒子が界面活性剤を含む場合、前記界面活性剤は、（ステップａ）の間又はステップａ）の前に）水性抗体分子含有溶液中に約０．０５から約１．５％ｗ／ｖで好ましくは添加されることに留意されたい。噴霧乾燥ステップ後、乾燥微粒子は、凍結乾燥のステップを更に行ってもよいことに更に留意されたい。
【0055】
本開示全体の文脈において、抗体分子は、完全長重鎖及び軽鎖を有する完全抗体分子、又は、その抗原結合フラグメント―――例えば（これらに限定されないが）、Ｆａｂ、改変Ｆａｂ、Ｆａｂ’、改変Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ、Ｆａｂ－ｄｓＦｖ、Ｆａｂ－Ｆｖ－Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ビス－ｓｃＦｖフラグメント、１つ若しくは２つのｓｃＦｖ若しくはｄｓｓｃＦｖに連結されたＦａｂ、例えばＢＹｂｅ（登録商標）若しくはＴＲＹｂｅ（登録商標）、ダイアボディ、トリボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体、ラクダ抗体、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）又はＶＮＡＲフラグメントを含むか若しくはこれらからなる群から選択される―――である。本発明による抗体分子は、抗体又は抗体フラグメントから形成された１、２、３又は４価、二重特異性、三重特異性、四重特異性又は多重特異性抗体分子であってもよい。前記抗体分子は、約１０から約３０％、好ましくは約１５から約３０％、更により好ましくは約２０から約３０％、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０％の範囲で乾燥微粒子中に存在していてもよい。乾燥する前に、抗体分子は、５０ｍｇ／ｍＬ又は約５０ｍｇ／ｍＬから３００ｍｇ／ｍＬ又は約３００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ又は約５０ｍｇ／ｍＬから２００ｍｇ／ｍＬ又は約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で、又は更に好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ又は約５０ｍｇ／ｍＬから１６０ｍｇ／ｍＬ又は約１６０ｍｇ／ｍＬ、例えば、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０又は１６０ｍｇ／ｍＬの濃度で水溶液中に又はエマルション中に好ましくは存在する。或いは、乾燥する前に、抗体分子は、５又は約５から３０％ｗ／ｖ又は約３０％ｗ／ｖの濃度で、又は好ましくは５又は約５から２０％ｗ／ｖ又は約２０％ｗ／ｖの濃度で、又は更に好ましくは５又は約５から１６％ｗ／ｖ又は約１６％ｗ／ｖ、例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６％ｗ／ｖの濃度で水溶液中又はエマルション中に存在する。
【0056】
本開示全体の文脈において、シクロデキストリンは、β－シクロデキストリンファミリーのメンバー、例えばＨＰβＣＤ及びＳＢＥβＣＤである。或いは、それはα－シクロデキストリンファミリーのメンバーであってもよい。安定性、カプセル化、抽出及びバースト放出の観点から最良の乾燥微粒子を得るために、特定の範囲の抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）が必要とされたことが本発明者によって示されている。本発明全体の文脈において、抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）は、好ましくは１２：１又は約１２：１から７．６又は約７：６である。更に好ましくは、抗体分子／シクロデキストリン比（ｗ／ｗ）は、１０：１又は約１０：１から７．６又は約７：６、例えば（約）１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、３：２、４：３、５：４、６：５又は７：６である。
【0057】
本開示全体の文脈において、ポリマーは、典型的には、好ましくは乳酸又はカプロラクトンがベースの生分解性ポリマーである。本発明に従って使用することができるポリマーの例示的なものは、ＰＬＧＡ、ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ又はＰＣＬである。ポリマーは、約０．５から約１０．０％ｗ／ｖ、更に好ましくは約１．０から約５．０％ｗ／ｖ、例えば、約１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５及び５．０％ｗ／ｖの濃度で水性抗体分子含有溶液中に添加される。したがって、前記ポリマーは、約５０から約８０％、例えば、５０、５５、６０、６５、７０、７５又は８０％ｗ／ｗの範囲で乾燥微粒子に存在することになる。
【0058】
本発明全体によれば、緩衝剤が存在する場合、前記緩衝剤は（これらに限定されないが）、ホスファート、アセタート、シトラート、アルギニン、トリスアミノメタン（トリス）、及びヒスチジンを含むか又はこれらからなる群から選択してもよい。前記緩衝剤は、水性抗体分子含有溶液に好ましくは存在する。緩衝剤は、約５ｍＭから約１００ｍＭの緩衝剤の量で、更に好ましくは約１０ｍＭから約５０ｍＭ、例えば、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０ｍＭの量で好ましくは存在する。したがって、前記緩衝剤は、約０．２から約４．０％ｗ／ｗ、例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５又は４．０％ｗ／ｗの範囲で乾燥微粒子に存在することになる。
【0059】
本開示全体の文脈において、界面活性剤が存在していてもよい。前記界面活性剤は、好ましくはポロキサマー、例えば、ポロキサマー４０７である。界面活性剤は、０．０５％若しくは約０．０５％から２．０％若しくは約２．０％（ｗ／ｖ）、より好ましくは０．０５％若しくは約０．０５％から１．５％若しくは約１．５％（ｗ／ｖ）、又は更に好ましくは０．１％若しくは約０．１％から１．０％若しくは約１．０％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９又は１．０％（ｗ／ｖ）の濃度で水性抗体分子含有溶液中に好ましくは添加される。したがって、前記ポリマーは、存在する場合、約０．０５から約４％ｗ／ｗ、例えば、０．０５、０．１、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５又は４．０％ｗ／ｗの範囲で乾燥微粒子に存在することになる。
【0060】
油中水エマルションにおいて、水性相の最大体積は総体積（すなわち有機相体積＋水性相体積）の４０％であることは一般的に理解されている。これは、水性相：有機相比（ｖ／ｖ）が６．７：１０以下であることに匹敵する。本開示全体の文脈において、水性相：有機相比（ｖ／ｖ）は、１／２０から７／２０、例えば、１／２０、１／１０、３／２０、２／１０、５／２０、３／１０又は７／２０の範囲である。
【0061】
好ましくは、本発明による水性抗体分子含有エマルション又は乾燥微粒子は、総じて糖化合物を一切含まない（例えば、単糖、二糖又はその他のポリサッカライド、例えば、デキストラン又はデキストラン由来化合物を含まない）。
【0062】
本発明の別の目的は、総じて本発明による乾燥微粒子のうちの１つ又は複数を含む医薬組成物である。
【0063】
本発明はまた、医薬用途のための製造品であって、上述の乾燥微粒子のうちのいずれか１つ又は複数を含むバイアルを含み、前記微粒子が抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン並びに任意選択で緩衝剤及び／又は界面活性剤を含むか又はこれらからなる製造品を提供する。
【0064】
或いは、医薬用途のための製造品であって、１）上述の乾燥微粒子のうちのいずれか１つ又は複数を含む第１のバイアルであって、前記微粒子が、抗体分子、ポリマー、シクロデキストリン、並びに任意選択で緩衝剤及び／又は界面活性剤を含むか又はこれらからなるバイアルと、２）再懸濁を必要とする場合、再懸濁するための溶媒を含む第２のバイアルとを含む製造品が本明細書において記載される。
【0065】
本発明はまた、本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）、取扱説明書及び任意選択で希釈剤（乾燥微粒子（単数又は複数）を再懸濁してから使用する場合）を含むキットを提供する。
【0066】
本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）は、少なくとも約１２カ月から約３６カ月間貯蔵してもよい。最初に使用する前に、前記微粒子は好ましい貯蔵条件下で、明るい光を避け（好ましくは暗所で）、好ましくは約２から約２５℃の温度で維持する。
【0067】
本発明の乾燥微粒子（単数又は複数）を再懸濁してから使用する場合、再懸濁は、溶媒、例えば、水又は生理食塩水溶液（例えば、注射用０．９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム）を用いて無菌状態下で好ましくは行ってから使用、すなわち投与する。再懸濁された抗体組成物は、再懸濁してから好ましくは１時間以内に投与するべきである。
【0068】
本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）又は本発明による再懸濁された抗体組成物は、治療法又は診断に使用するためのものである。
【0069】
本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）又は再懸濁された抗体組成物（単数又は複数）は、治療有効量で投与される。ヒト対象に関する正確な治療有効量は、病態の重症度、対象の一般的な健康、対象の年齢、体重及び性別、食事、投薬時間及び頻度、薬物の組合せ（単数又は複数）、反応感受性、並びに治療法に対する耐容性／応答に依存する場合がある。この量は、所定の実験によって判定してもよく、臨床医の判断の範囲内である。一般的に、抗体分子の治療有効量は０．０１ｍｇ／ｋｇから５００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇであろう。
【0070】
適切な投薬量は、例えば、用いられることになる特定の抗体分子、処置される対象、投与様式、並びに処置される状態の特質及び重症度に応じて変化することになる。
【0071】
本発明による乾燥微粒子（単数又は複数）は、皮下、筋肉内、関節内又は鼻腔内経路を介して好ましくは投与される。或いは、本発明による再懸濁された抗体組成物（単数又は複数）は、吸入によって投与される。
【0072】
以下の例は、本発明の医薬組成物、例えば乾燥微粒子の調製を更に例示するために提供される。本発明の範囲は、以下の例からなるにすぎないと解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【0073】
【図1】本発明によるＡｂロード微粒子の製造を示す図である。
【図2】６７：３３のｍＡｂ１／ＨＰβＣＤを含む製剤に関する経時的な放出プロファイルを示す図である。
【図3】ＳＣ、ＳＯＷ及びＳＤ群に関して、血漿における経時的な平均ｍＡｂ１濃度の比較を示す図である。
【実施例】
【0074】
１．材料
【表1】
【0075】
２．方法
２．１抗体含有溶液の調製：
抗体（Ａｂ）含有溶液を、以下を含む最初の製剤溶液から調製した：
・３０ｍＭヒスチジン、２００ｍＭソルビトール、６０ｍＭ塩化ナトリウムを含むｐＨ５．６の水溶液中の１６０ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂ１又は
・５０ｍＭヒスチジン、１２５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０を含む水溶液中の５０ｍｇ／ｍＬ ｆＡｂ２。
２．１抗体含有溶液の調製：
抗体（Ａｂ）含有溶液を、以下を含む最初の製剤溶液から調製した：
・３０ｍＭヒスチジン、２００ｍＭソルビトール、６０ｍＭ塩化ナトリウムを含むｐＨ５．６の水溶液中の１６０ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂ１又は
・５０ｍＭヒスチジン、１２５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０を含む水溶液中の５０ｍｇ／ｍＬ ｆＡｂ２。
【0076】
製剤溶液を、適切な遠心フィルターデバイス、例えば、Ａｍｉｃｏｎ １５ ３０ＫＤａ Ｍｗ Ｃｏメンブラン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）若しくはＶＩＶＡＳＰＩＮ（登録商標）２０ ３０ ＫＤａメンブラン（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した緩衝液交換によって、又はＶＩＶＡＦＬＯＷ（登録商標）５０又は２００カセット（Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用することによって調製した。最初の溶液を連続希釈し、４０００ｇの遠心分離により濃縮することによって、又は異なる溶液がカセットに通過するのを介して生じる漸進的な緩衝液交換によって適切な製剤溶液に変化させた。最終的な抗体含有溶液を、ＳＴＥＲＩＴＯＰ（商標）又はＳＴＥＲＩＦＬＩＰ（登録商標）フィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）を使用して０．２２μｍメンブランでろ過してから、更に処理した。最終的な抗体濃度は、ｍＡｂ１とｆＡｂ２の両方に関して０．５％ｗ／ｖのポロキサマー４０７の存在下、ｍＡｂ１に関しては１５ｍＭ Ｌ－ヒスチジンｐＨ５．６で、ｆＡｂ２に関しては５０ｍＭ Ｌ－ヒスチジンｐＨ６．０で８０ｍｇ／ｍＬ（すなわち８％）であった。賦形剤、例えば、シクロデキストリン又はトレハロース（１００：０から２０：８０ｗ／ｗの抗体：シクロデキストリン又はトレハロース比）を添加してから、乳化した。
【0077】
２．２カプセル化プロセス（図１）
第１のステップは、油中水（ｗ／ｏ）エマルションの調製であった。ｗ／ｏエマルション（例えば１：１０の水／油比）を製造するために、ＰＬＧＡを酢酸エチル中に最初に溶解した（２．５％ｗ／ｖのＰＬＧＡ濃度）。ｗ／ｏエマルションを、Ｓ２５Ｎ－８Ｇ分散ツールを備えたＴ２５デジタルＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ（登録商標）高速ホモジナイザー（ＩＫＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、抗体含有溶液を有機相中に１３，５００ｒｐｍの設定で１分間高速撹拌下で注ぎ入れることによって得た。乳化ステップは室温で行った。
第１のステップは、油中水（ｗ／ｏ）エマルションの調製であった。ｗ／ｏエマルション（例えば１：１０の水／油比）を製造するために、ＰＬＧＡを酢酸エチル中に最初に溶解した（２．５％ｗ／ｖのＰＬＧＡ濃度）。ｗ／ｏエマルションを、Ｓ２５Ｎ－８Ｇ分散ツールを備えたＴ２５デジタルＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ（登録商標）高速ホモジナイザー（ＩＫＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、抗体含有溶液を有機相中に１３，５００ｒｐｍの設定で１分間高速撹拌下で注ぎ入れることによって得た。乳化ステップは室温で行った。
【0078】
第２のステップはエマルションの噴霧乾燥であった。この方法は、水性又は有機溶液、エマルション、分散液及び懸濁液を、微粒子（或いは、マイクロスフェアと称される）を含む乾燥粉末に変換するために広範囲に適用される。噴霧乾燥は、供給液を微細液滴に霧化し、高温乾燥ガスを用いて溶媒又は水を蒸発させる。プロセスパラメーター、例えば、入口温度、出口温度、霧化圧力、流量及びアスピレーションは、プロセス中、制御された。第１のステップから得たｗ／ｏエマルションを、直径値が０．７ｍｍの２流体ノズルを備えたミニ噴霧乾燥Ｂ－２９０（登録商標）（Ｂｕｃｈｉ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して、一定撹拌下で噴霧乾燥し、乾燥マイクロスフェア（ＭＳ）（すなわち乾燥微粒子）を得た。各組成物に関しては、次のパラメーター、ガス噴霧流量６００～８００Ｌ／時間、アスピレーション速度３４ｍ３／時間、及び流量３．０ｍＬ／分を一定に維持した。
【0079】
２．３．タンパク質濃度－Ａ２８０：
「総Ａｂ」アッセイを、ＵＶ分光光度法を使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＳＡ）で２８０ｎｍにおいて行った。
「総Ａｂ」アッセイを、ＵＶ分光光度法を使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＳＡ）で２８０ｎｍにおいて行った。
【0080】
２．４．ＢＣＡ（ビシンコニン酸）比色アッセイによる総タンパク質アッセイ：
ＭＳ内部にカプセル化されたＡｂの評価を、ＢＣＡ方法を使用した総タンパク質アッセイによって行った。Ｐｉｅｒｃｅのプロトコールである「マイクロプレート手順」に従った。ＭＳ内部のＡｂを投薬する前に、それをＭＳから抽出することが必要であった。この目的のために、既知の量のＭＳ（１０～２０ｍｇ）を、０．１Ｎ ＮａＯＨ溶液１ｍＬと接触させて、ポリマー及びタンパク質を溶解した。作業用試薬を、５０部のＢＣＡ試薬Ａ（０．１Ｎ水酸化ナトリウム中に、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ビシンコニン酸及び酒石酸ナトリウムを含む溶液）と１部のＢＣＡ試薬Ｂ（４％硫酸第二銅を含む溶液）とを混合することによって調製した。標準又は未知のサンプル２５μＬをマイクロプレートウェルに入れた。作業用試薬２００μＬを各ウェルに添加した。プレートシェーカーで３０秒混合後、プレートにカバーをかけ、３７℃で３０分間インキュベートした。吸光度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＳＡ）で５６２ｎｍにおいて測定した。標準曲線を、各標準（ガンマグロブリン又はＡｂ自体）に関する平均５６２ｎｍにおける測定値対その濃度をμｇ／ｍＬでプロットすることによって調製した。この標準曲線を使用して、各未知のサンプルのＡｂ濃度を判定した。ＤＬ（薬物ロード）は、Ａｂの量をＡｂ及び賦形剤の総量で割ったものとして定義し、ＥＥ（カプセル化効率）を、得られたＤＬと理論上のものとの間の比率として計算した。
ＭＳ内部にカプセル化されたＡｂの評価を、ＢＣＡ方法を使用した総タンパク質アッセイによって行った。Ｐｉｅｒｃｅのプロトコールである「マイクロプレート手順」に従った。ＭＳ内部のＡｂを投薬する前に、それをＭＳから抽出することが必要であった。この目的のために、既知の量のＭＳ（１０～２０ｍｇ）を、０．１Ｎ ＮａＯＨ溶液１ｍＬと接触させて、ポリマー及びタンパク質を溶解した。作業用試薬を、５０部のＢＣＡ試薬Ａ（０．１Ｎ水酸化ナトリウム中に、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ビシンコニン酸及び酒石酸ナトリウムを含む溶液）と１部のＢＣＡ試薬Ｂ（４％硫酸第二銅を含む溶液）とを混合することによって調製した。標準又は未知のサンプル２５μＬをマイクロプレートウェルに入れた。作業用試薬２００μＬを各ウェルに添加した。プレートシェーカーで３０秒混合後、プレートにカバーをかけ、３７℃で３０分間インキュベートした。吸光度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＳＡ）で５６２ｎｍにおいて測定した。標準曲線を、各標準（ガンマグロブリン又はＡｂ自体）に関する平均５６２ｎｍにおける測定値対その濃度をμｇ／ｍＬでプロットすることによって調製した。この標準曲線を使用して、各未知のサンプルのＡｂ濃度を判定した。ＤＬ（薬物ロード）は、Ａｂの量をＡｂ及び賦形剤の総量で割ったものとして定義し、ＥＥ（カプセル化効率）を、得られたＤＬと理論上のものとの間の比率として計算した。
【0081】
２．５．サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：
ＳＥＣは、ＨＭＷＳ（高分子量種）とＬＭＷＳ（低分子量種）の両方を検出及び定量するために最も通常使用される分析法のうちの１つである。不溶性凝集体は、ＳＥＣのためのカラムによるろ過を介した又はサンプル調製による潜在的な除去に起因して、ＳＥＣによって測定可能であるとは考えられない。
ＳＥＣは、ＨＭＷＳ（高分子量種）とＬＭＷＳ（低分子量種）の両方を検出及び定量するために最も通常使用される分析法のうちの１つである。不溶性凝集体は、ＳＥＣのためのカラムによるろ過を介した又はサンプル調製による潜在的な除去に起因して、ＳＥＣによって測定可能であるとは考えられない。
【0082】
ｍＡｂ１に関して：ＳＥＣを、ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬ ７．８ｍｍ×３０．０ｃｍカラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）及び２８０ｎｍにおけるＵＶ－検出を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ Ａｇｉｌｅｎｔ １２００高性能液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で行った。流量は１ｍＬ／分に設定し、注入容積は５０μＬであった。移動相は０．２Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ）、ｐＨ７．０であった。
【0083】
ｆＡｂ２に関して：ＳＥＣを、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ２００ ４．６ｍｍ×３００ｍｍカラムとＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ２００ ガードカラムを組み合わせたもの及びＵＶ－検出２８０ｎｍを備えたＵＰＬＣ Ｈ ｃｌａｓｓ ｂｉｏで行った。流量は０．３ｍＬ／分に設定し、注入容積は５μＬであった。移動相は０．１ＭＮａＣｌを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ）、ｐＨ７．０であった。
【0084】
２．６．抽出効率
抽出効率（ＥｘＥ）は、ＭＳから抽出されたＡｂの量とＢＣＡによって判定されたカプセル化されたＡｂの量との間で比較した百分率比を指す（上記項２．４を参照のこと）。ＭＳからＡｂを抽出するために、微粒子１０ｍｇをジクロロメタン（ＤＣＭ）又はアセトン（ＡＣＥ）５００μＬに溶解し、０．２μｍの多孔率を有するＮＡＮＯＳＥＰ（登録商標）（Ｐａｌｌ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）遠心デバイス中におよそ２時間入れた。サンプルを１２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。有機相を除去し、同体積の新しいＤＣＭ又はＡＣＥで置き換えた。サンプルを１２，０００ｒｐｍで５分間再び遠心分離した。このステップを２回行った。得られた沈殿物を真空下で少なくとも１時間乾燥させ、次いで２００ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．０ ５００μｌ中に可溶化した。次いで、得られたサンプルをＳＥＣによって分析して、カプセル化後のＡｂ安定性を評価した。ＨＭＷＳ増加は、カプセル化プロセスの前、緩衝液交換後に得られたＡｂ溶液であるＡｂ参照と比較して計算した。ＥｘＥが高いほど、抽出することができるカプセル化されたＡｂの量は多く、Ａｂが、抽出し再溶解するのに依然として十分安定であることを示す。それに加えて、ＥｘＥが１００％に近い場合、それは、判定されたＨＭＷＳ増加が、カプセル化された全てのＡｂの状態の非常に典型的なものであることを意味する。
抽出効率（ＥｘＥ）は、ＭＳから抽出されたＡｂの量とＢＣＡによって判定されたカプセル化されたＡｂの量との間で比較した百分率比を指す（上記項２．４を参照のこと）。ＭＳからＡｂを抽出するために、微粒子１０ｍｇをジクロロメタン（ＤＣＭ）又はアセトン（ＡＣＥ）５００μＬに溶解し、０．２μｍの多孔率を有するＮＡＮＯＳＥＰ（登録商標）（Ｐａｌｌ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）遠心デバイス中におよそ２時間入れた。サンプルを１２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。有機相を除去し、同体積の新しいＤＣＭ又はＡＣＥで置き換えた。サンプルを１２，０００ｒｐｍで５分間再び遠心分離した。このステップを２回行った。得られた沈殿物を真空下で少なくとも１時間乾燥させ、次いで２００ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．０ ５００μｌ中に可溶化した。次いで、得られたサンプルをＳＥＣによって分析して、カプセル化後のＡｂ安定性を評価した。ＨＭＷＳ増加は、カプセル化プロセスの前、緩衝液交換後に得られたＡｂ溶液であるＡｂ参照と比較して計算した。ＥｘＥが高いほど、抽出することができるカプセル化されたＡｂの量は多く、Ａｂが、抽出し再溶解するのに依然として十分安定であることを示す。それに加えて、ＥｘＥが１００％に近い場合、それは、判定されたＨＭＷＳ増加が、カプセル化された全てのＡｂの状態の非常に典型的なものであることを意味する。
【0085】
２．７．溶解研究：
ＡｂロードＰＬＧＡ ＭＳからのＡｂの溶解プロファイルを、緩衝剤でｐＨ７．０に処理したＰＢＳ １ｍＬを２ｍＬチューブ中のＭＳ４０ｍｇに添加することによって評価した。チューブを３７℃でインキュベートし、ＴＨＥＲＭＯＭＩＸＥＲ ＣＯＭＦＯＲＴ（登録商標）マイクロチューブ混合機（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して６００ｒｐｍで撹拌した。所定の時間に、サンプルを３０００ｇで１５分間遠心分離し、上澄み（１ｍＬ）を収集し、０．４５μｍナイロンＡＣＲＯＤＩＳＣ（登録商標）フィルター（Ｐａｌｌ、Ｆｒａｎｃｅ）でろ過した。ＭＳを、新しいＰＢＳ溶液１ｍＬ中に再び懸濁して更に溶解した。バースト放出を、２４時間後に放出されたＡｂの百分率として計算した。バースト放出は、毒性レベル付近又はそれを超える薬物濃度又は有効性の欠如などの問題を回避するために可能な限り低く維持するべきである（Ｈｕａｎｇ及びＢｒａｚｅｌ、２００１年）。
ＡｂロードＰＬＧＡ ＭＳからのＡｂの溶解プロファイルを、緩衝剤でｐＨ７．０に処理したＰＢＳ １ｍＬを２ｍＬチューブ中のＭＳ４０ｍｇに添加することによって評価した。チューブを３７℃でインキュベートし、ＴＨＥＲＭＯＭＩＸＥＲ ＣＯＭＦＯＲＴ（登録商標）マイクロチューブ混合機（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して６００ｒｐｍで撹拌した。所定の時間に、サンプルを３０００ｇで１５分間遠心分離し、上澄み（１ｍＬ）を収集し、０．４５μｍナイロンＡＣＲＯＤＩＳＣ（登録商標）フィルター（Ｐａｌｌ、Ｆｒａｎｃｅ）でろ過した。ＭＳを、新しいＰＢＳ溶液１ｍＬ中に再び懸濁して更に溶解した。バースト放出を、２４時間後に放出されたＡｂの百分率として計算した。バースト放出は、毒性レベル付近又はそれを超える薬物濃度又は有効性の欠如などの問題を回避するために可能な限り低く維持するべきである（Ｈｕａｎｇ及びＢｒａｚｅｌ、２００１年）。
【0086】
（例１）
この実験では、ＨＰβＣＤを安定化剤として異なる重量比で使用して、マイクロスフェア特性に与えるその影響とＨＭＷＳ形成を制限するためのその使用の利益とを評価した。ｍＡｂ１をこの例では使用した。結果を表２で報告する。
この実験では、ＨＰβＣＤを安定化剤として異なる重量比で使用して、マイクロスフェア特性に与えるその影響とＨＭＷＳ形成を制限するためのその使用の利益とを評価した。ｍＡｂ１をこの例では使用した。結果を表２で報告する。
【0087】
標的とするＥＥ（９０％を超える）が全ての製剤に関して得られた。標的とするＤＬ（２０％を超える）が５０：５０及び２０：８０のＡｂ／ＣＤ比を除く全ての比に関して得られたが、許容できないＥｘＥ（８０％未満）が９４：６のＡｂ／ＣＤ比に及びＣＤを一切含まない製剤に関して得られた。更に、組成物中のＨＰβＣＤの百分率が増加すると（すなわちｍＡｂ１／安定化剤比が減少すると）、バースト放出の増加につながった。５０：５０のｍＡｂ１／ＨＰβＣＤ比及びそれより低い比（５０：５０及び２０：８０で示される）から、高すぎるバースト放出が得られた。安定化剤を一切含まないと、ＨＭＷＳの許容できない増加が観察された（１３％を超えた）。ｍＡｂ１／ＨＰβＣＤ比もｍＡｂ１安定性に影響を与えたことが示された。実際に、ｍＡｂ１分解の有意な制限が、８０：２０のｍＡｂ１／ＨＰβＣＤ比及びそれより低い比（８０：２０、６７：３３、５０：５０及び２０：８０の比に関しては以下に示す）から観察することができた。最後に、８０：２０のｍＡｂ１／ＨＰβＣＤ比及びそれより低い比から、最小でも８９．４％のｍＡｂ１を抽出することができ、これは、これらの比において得られたＨＭＷＳ増加が、カプセル化されたほぼ全てのｍＡｂ１の典型的なものであったことを示す。更に、８０：２０のｍＡｂ１／ＨＰβＣＤ比及びそれより低い比から、溶解試験の終わりに、最小で９０．８％のｍＡｂ１が放出され、カプセル化された９０％を超えるｍＡｂの総量が放出されたことが根底にある。
【表2】
【0088】
直径が５～１０μｍ（Ｄｖ（０．５）の場合）及び２０～５０μｍ（Ｄｖ（０．９）の場合）の粒子サイズを得た（Ｄｖ（０．５）＝サンプル体積の５０％を下回る直径及びＤｖ（０．９）＝サンプル体積の９０％を下回る直径）。
【0089】
タンパク質ロードＰＬＧＡ微粒子に関する典型的な３相性放出プロファイルが観察され（すなわち、（ｉ）初期のバースト、（ｉｉ）延滞期、及び（ｉｉｉ）放出期；Ｄｉｗａｎら、２００１年及びＷｈｉｔｅら、２０１３年）、本発明による製剤に関する予想外の挙動は明確に示されなかった。図２は、６７：３３のｍＡｂ１／ＨＰβＣＤを含む製剤に関する完全放出プロファイルを示す。
【0090】
結論として、最も適切なＡｂ／ＨＰβＣＤ（６７：３３）比率でＨＰβＣＤを添加すると、ＨＭＷＳ増加の制限（＜１％）、高いＤＬ（＞２０％）、標的とするＥＥ（≧９０％）、及び許容されるバースト放出（３８％）が得られた。抗体／ＨＰβＣＤ（８０：２０）比率も、許容される結果、すなわちＨＭＷＳ増加の制限（＜５％）、高いＤＬ（＞２０％）、標的とするＥＥ（（≧９０％）及び許容されるバースト放出（３８％）が得られた。
【0091】
（例２）
ヒトにおいて非経口で使用するのに許容される２つの他のシクロデキストリン（すなわちＳＢＥβＣＤ及びγＣＤ）も、Ａｂ安定化に好適かどうかを理解すること、そうであれば、各シクロデキストリンに必要な比率、及びバースト効果に対するマイクロスフェアへのその取り込み効果を比較することは興味深かった。したがって、カプセル化研究をこれらの２つのシクロデキストリンで行った。
ヒトにおいて非経口で使用するのに許容される２つの他のシクロデキストリン（すなわちＳＢＥβＣＤ及びγＣＤ）も、Ａｂ安定化に好適かどうかを理解すること、そうであれば、各シクロデキストリンに必要な比率、及びバースト効果に対するマイクロスフェアへのその取り込み効果を比較することは興味深かった。したがって、カプセル化研究をこれらの２つのシクロデキストリンで行った。
【0092】
γＣＤを使用した場合、可溶化問題が観察された。これは、溶液中のポロキサマー４０７の存在に起因していた。実際に、ｍＡｂ１及びγＣＤのみが存在する場合、可溶化の問題は観察されなかった。したがって、γＣＤを使用した場合、ポロキサマー４０７を使用せずにカプセル化プロセス行うことが必要であった。それにもかかわらず、以前の実験では、ポロキサマー４０７を水溶液から除去すると、エマルション安定性（データは示していない）に関して、したがってｍＡｂ１放出に関して有害な結果につながった（ｍＡｂ１放出が通常９５～１００％であるのに対して、研究の終わりでは８０％にすぎなかった）ことが示された。これを考慮して、γＣＤに関しては６７：３３ｗ／ｗのｍＡｂ１／ＣＤ比のみを評価することにした。
【0093】
研究した全ての比率において、全てのシクロデキストリンに関して、許容されるＨＭＷＳ増加（５％未満）が観察されたことを認めることができた（表３）。しかし、６７：３３ｗ／ｗのｍＡｂ１／ＣＤ比において、γＣＤは、他のシクロデキストリンと比較してＨＭＷＳ形成が高かった。ＳＢＥβＣＤ及びγＣＤを用いた全ての比に関してＥｘＥは低く、観察されたＨＭＷＳ増加はＨＰβＣＤの使用と比較して、カプセル化されたｍＡｂ１の典型ではなかったことが明確に示された。
【表3】
【0094】
γＣＤで観察された問題及びＡｂ安定性に関して得られた結果を考慮して、他のパラメーターに関してはＳＢＥβＣＤ及びＨＰβＣＤのみを評価することにした。
【0095】
ｍＡｂ１／ＣＤ比の研究した比率にかかわらず、標的とするＥＥ（８５％を超える）が両方のシクロデキストリンに関して得られた（表４）。溶解試験の終わりに放出された総ｍＡｂの百分率は、両方のシクロデキストリンに関して試験した全ての比で９０％を超えた。ＤＬ及びＥＥにおいて使用したシクロデキストリンのタイプに有意な影響はなかった。バースト放出の違いを、８０：２０のｍＡｂ１／ＣＤ比を除いて、使用したシクロデキストリンのタイプにしたがって観察することができた。最後に、ｍＡｂ１安定性（６７：３３のｍＡｂ１／ＣＤ）に関する最も興味深い比率において、ＨＰβＣＤがバースト放出の観点から最も好適であった。
【表4】
【0096】
結論として、γＣＤの使用はこの実験の目的に好適ではなかった。ＳＢＥβＣＤ及びＨＰβＣＤは、ＤＬ及びＥＥに関して興味深い結果を示した。更に、ＳＢＥβＣＤとＨＰβＣＤの両方がＨＭＷＳ増加の制限を可能にした。バースト放出を考慮すると、６７：３３ｗ／ｗのＡｂ／ＣＤ比でのＨＰβＣＤの使用が最も好適であった。例１のように、８０：２０ｗ／ｗのＡｂ／ＣＤ比でのＨＰβＣＤの使用も許容される結果が得られた。或いは、８０：２０ｗ／ｗのＡｂ／ＣＤ比でのＳＢＥβＣＤでも非常に良好な結果が得られた。ＳＢＥβＣＤでのバースト放出が増加したにもかかわらず、６７：３３ｗ／ｗのＡｂ／ＣＤ比もまた、両方のシクロデキストリンに有望である。
【0097】
（例３）
この実験では、ＨＰβＣＤの使用とＡｂを安定化するために通常使用される賦形剤であるトレハロースの使用との間で比較を行った。最初に、同じＡｂ／賦形剤のｗ／ｗ比における２つの賦形剤の比較を行った。次いで、同じＡｂ／賦形剤のモル濃度／モル濃度比に基づいて２つの賦形剤を比較することも決定した。したがって、製剤Ｆ１及びＦ２は、Ａｂに関して賦形剤が同じ重量比であり、同時にＦ１及びＦ３は、Ａｂに関して賦形剤が同じモル濃度比である。
この実験では、ＨＰβＣＤの使用とＡｂを安定化するために通常使用される賦形剤であるトレハロースの使用との間で比較を行った。最初に、同じＡｂ／賦形剤のｗ／ｗ比における２つの賦形剤の比較を行った。次いで、同じＡｂ／賦形剤のモル濃度／モル濃度比に基づいて２つの賦形剤を比較することも決定した。したがって、製剤Ｆ１及びＦ２は、Ａｂに関して賦形剤が同じ重量比であり、同時にＦ１及びＦ３は、Ａｂに関して賦形剤が同じモル濃度比である。
【0098】
同じ重量比では、ＨＰβＣＤは、トレハロースよりもＨＭＷＳ形成に対してｍＡｂ１を保護するのに効果的であったことが認められた（表５）。しかし、ＨＭＷＳ増加に関して得られた値は、２つの安定化剤に関して大きな違いはなかった（ＨＰβＣＤでは０．５％、トレハロースでは０．９％）。
【0099】
それにもかかわらず、同じモル比では、ｍＡｂ１安定性は、使用した安定化剤によって大きな影響を受けた。したがって、トレハロースは、カプセル化プロセス中にＨＭＷＳ形成を十分に阻止することができなかった。更に、製剤Ｆ３に関して得られたＥｘＥ値は他の製剤よりも低く、この製剤はｍＡｂ１のさらなる分解につながることが確認された。
【表5】
【0100】
標的とするＥＥ（９０％を超える）が全ての製剤に関して得られた（表５）。使用した安定化剤のタイプのＤＬ及びＥＥに対する有意な影響はなかった。同様のバースト放出が全ての製剤に関して得られた（データは示していない）。以前にＨＰβＣＤで観察されたもの（例１を参照のこと）とは対照的に、トレハロースの量の減少はバースト放出を減少させなかったことを認めることができた（データは示していない）。
【0101】
結論として、Ａｂ安定化のために通常使用される賦形剤であるトレハロースよりも安定化剤としてＨＰβＣＤを使用することの利益が本研究において実証された。特に、トレハロースよりも低い（表５を基準として１／４の）モル濃度量のＨＰβＣＤがＨＭＷＳ形成に対するＡｂ保護を得るために必要であった。
【0102】
（例４）
この実験は以下のために、カプセル化プロセス、より詳細にはｍＡｂ用に開発された安定化戦略をｆＡｂに適用することを目的としている：
・カプセル化プロセス及び異なるフォーマットの製剤化戦略の抗体への使用の可能性を評価すること、
・マイクロスフェア特性に対する抗体特徴（サイズ、分解経路）の影響を評価すること。
この実験は以下のために、カプセル化プロセス、より詳細にはｍＡｂ用に開発された安定化戦略をｆＡｂに適用することを目的としている：
・カプセル化プロセス及び異なるフォーマットの製剤化戦略の抗体への使用の可能性を評価すること、
・マイクロスフェア特性に対する抗体特徴（サイズ、分解経路）の影響を評価すること。
【0103】
この目的のために、ｆＡｂ分子（ｆＡｂ２と称する）を使用した。ｆＡｂ２は、例１から３で使用したｍＡｂ１とは対照的にＨＭＷＳ形成の傾向が少ない。研究の結果を表６及び７に報告する。
【0104】
安定化剤なしではＨＭＷＳの増加が観察されたが、ｍＡｂ１で観察されたものより制限されていた（実験１を参照のこと）。ｆＡｂ／ＨＰβＣＤ比はｆＡｂ安定性に対して影響を与えた。ＨＭＷＳの形成は、８０：２０のｆＡｂ／ＨＰβＣＤ比からほぼ完全に抑制された。８０：２０のｆＡｂ／ＨＰβＣＤ比に関しては、ｆＡｂのほぼ９０％を抽出することができ、これは得られたＨＭＷＳ増加が、カプセル化されたほぼ全てのｆＡｂの典型であったことを示す。少量のＨＰβＣＤ（８０：２０のｆＡｂ／ＣＤ）は、ｍＡｂを研究した場合（６７：３３のｆＡｂ／ＣＤ）と比較して、ＨＭＷＳ形成を減少させるのに十分であった。ＨＭＷＳ形成の減少に関しても、６７：３３のｆＡｂ／ＣＤ比において非常に良好な結果が得られた。
【0105】
標的とするＥＥ（８５％を超える）が全ての製剤に関して得られた。製剤中のＨＰβＣＤの百分率を増加させると、バースト放出の増加につながった。溶解試験の終わりに放出された総ｍＡｂの百分率は、試験した全ての比に関して９５％か又はそれを上回った。最後に、ｍＡｂを使用して得られたものよりも高いバースト放出が観察され、バースト放出に対するＡｂのサイズ（ｆＡｂ２：５０ｋＤａ対ｍＡｂ１：１５０ｋＤａ）の影響が明確に示された。
【表6】
【表7】
【0106】
結論として、カプセル化プロセス及び安定化戦略は、ｆＡｂにうまく適用することができた。５０％を超えるバースト放出がｆＡｂで得られたが、全体的な予備結果は非常に有望である。抗体特性（サイズ、分解メカニズム）に従って、Ａｂ／ＨＰβＣＤ比の最適化は行われるべきである。当業者であれば、本説明に基づいて製剤を最適化することができるであろう。
【0107】
（例５）
ＤＬの役割
Ａｂの安定化、ＭＳへのその取り込み、及びバースト効果に対するＤＬの影響を理解するために、カプセル化研究を２つの追加の標的ＤＬを用いて：２５％及び３０％において行った。以下の表８において明確に示されているように、ＥＥ及びＡｂ安定性に対して興味深い結果が提供されているが、高いＤＬは、初期のバースト放出に関しては助けにならなかった。これらの結果は有望であるが、バースト放出を改善するためにいくつかの微調整が必要になる場合がある。
ＤＬの役割
Ａｂの安定化、ＭＳへのその取り込み、及びバースト効果に対するＤＬの影響を理解するために、カプセル化研究を２つの追加の標的ＤＬを用いて：２５％及び３０％において行った。以下の表８において明確に示されているように、ＥＥ及びＡｂ安定性に対して興味深い結果が提供されているが、高いＤＬは、初期のバースト放出に関しては助けにならなかった。これらの結果は有望であるが、バースト放出を改善するためにいくつかの微調整が必要になる場合がある。
【表8】
【0108】
（例６）
この実験は、動物の片側側腹部を介して投与した場合の本発明による乾燥微粒子の効果を、「水中油中固体」（ＳＯＷ）から得られた典型的な乾燥微粒子又は液体皮下（ＳＣ）製剤（対照として）と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏで分析することを目的としている。雄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットで実験を行った。
この実験は、動物の片側側腹部を介して投与した場合の本発明による乾燥微粒子の効果を、「水中油中固体」（ＳＯＷ）から得られた典型的な乾燥微粒子又は液体皮下（ＳＣ）製剤（対照として）と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏで分析することを目的としている。雄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットで実験を行った。
【0109】
動物を、８匹の個体からなる以下の３つの群に分割した：
・１群（８匹のラット；「ＳＣ」群；液体製剤；即時放出）は、３０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１が皮下で与えられた。製剤は、３０ｍＭＬヒスチジン、２００ｍＭソルビトール及び６０ｍＭ塩化ナトリウムから構成される水溶液中に５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂを含んでいた。
・２群（６匹のラット；「ＳＯＷ」群；０．９％ｗ／ｖ ＮａＣｌ溶液中に再懸濁された乾燥微粒子；持続放出製剤）。ｍＡｂ１の標的とする用量は９０ｍｇ／ｋｇであった。製剤は、約７３．５％ｗ ＰＬＧＡ（ＲＧ５０５）、１７．１％ｗ ｍＡｂ１、６．８％ｗトレハロース、１．７％ｗグリセロール、０．８％ｗヒスチジン（緩衝剤として）及び０．０２％ｗポリソルベート２０を含んでいた。
・３群（８匹のラット；「ＳＤ」群；０．９％ｗ／ｖ ＮａＣｌ溶液中に再懸濁された本発明による乾燥微粒子；持続放出製剤）。ｍＡｂ１の標的とする用量は９０ｍｇ／ｋｇであった。製剤は、約６６．３％ｗ ＰＬＧＡ（ＲＧ５０５）、２１．２％ｗ ｍＡｂ１、１０．６％ｗ ＨＰβＣＤ、１．３％ｗポロキサマー４０７及び０．６％ｗヒスチジン（緩衝剤として）を含んでいた。
・１群（８匹のラット；「ＳＣ」群；液体製剤；即時放出）は、３０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１が皮下で与えられた。製剤は、３０ｍＭＬヒスチジン、２００ｍＭソルビトール及び６０ｍＭ塩化ナトリウムから構成される水溶液中に５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂを含んでいた。
・２群（６匹のラット；「ＳＯＷ」群；０．９％ｗ／ｖ ＮａＣｌ溶液中に再懸濁された乾燥微粒子；持続放出製剤）。ｍＡｂ１の標的とする用量は９０ｍｇ／ｋｇであった。製剤は、約７３．５％ｗ ＰＬＧＡ（ＲＧ５０５）、１７．１％ｗ ｍＡｂ１、６．８％ｗトレハロース、１．７％ｗグリセロール、０．８％ｗヒスチジン（緩衝剤として）及び０．０２％ｗポリソルベート２０を含んでいた。
・３群（８匹のラット；「ＳＤ」群；０．９％ｗ／ｖ ＮａＣｌ溶液中に再懸濁された本発明による乾燥微粒子；持続放出製剤）。ｍＡｂ１の標的とする用量は９０ｍｇ／ｋｇであった。製剤は、約６６．３％ｗ ＰＬＧＡ（ＲＧ５０５）、２１．２％ｗ ｍＡｂ１、１０．６％ｗ ＨＰβＣＤ、１．３％ｗポロキサマー４０７及び０．６％ｗヒスチジン（緩衝剤として）を含んでいた。
【0110】
３つの群に関しては、各ラットに一方の側腹部を介してｍＡｂ１製剤を投与し、もう一方の側腹部を介してプラセボ製剤を投与した。ＳＣ群に関するプラセボ製剤は液体溶液であり、一方、ＳＯＷ及びＳＤ群に関するプラセボ製剤はプラセボマイクロスフェア懸濁液であった。
【0111】
各群に関しては、サンプルを次のように採取した：６時間、２４時間、４８時間、３日目、７日目、１０日目、１４日目、及びｍＡｂ１が血漿サンプル中に検出されなくなるまで週１回。
【0112】
効果的に投与された用量は以下のとおりであった：
・ＳＯＷ群：４２．１～４３．３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ群と比較して１．４倍の増加）、
・ＳＤ群：７７．４～８１．１ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ群と比較して２．７倍の増加）。
・ＳＯＷ群：４２．１～４３．３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ群と比較して１．４倍の増加）、
・ＳＤ群：７７．４～８１．１ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ群と比較して２．７倍の増加）。
【0113】
血漿中の経時的なｍＡｂ濃度をＥＬＩＳＡによって判定した。
【0114】
全ての製剤に関する結果を図３に示す。
・ＳＣ群：ＳＣ投与に関する典型的なプロファイルが、この群に属する全ての動物に関して観察された。ｍＡｂ１が血漿中に更に最大５０＋日まで検出された。１匹の動物に関しては免疫原性が疑われた。
・ＳＯＷ群：ｍＡｂ１が、この群において血漿中に最大４０＋日まで検出された。しかし、プロファイルは、特に投与から１０日後で非常に異なっていた。大部分の動物に関して免疫原性が疑われた。
・ＳＤ群：他の群に反して、ｍＡｂ１は１００日間を超えて血漿中に検出された。プロファイルは大部分の動物で非常に類似していた。各群間の用量の違いのために完全に比較できないが、本発明による乾燥微粒子は非常に長い送達時間を明らかに可能にし、ＳＯＷ群と比較して放出時間は２倍である。
・ＳＣ群：ＳＣ投与に関する典型的なプロファイルが、この群に属する全ての動物に関して観察された。ｍＡｂ１が血漿中に更に最大５０＋日まで検出された。１匹の動物に関しては免疫原性が疑われた。
・ＳＯＷ群：ｍＡｂ１が、この群において血漿中に最大４０＋日まで検出された。しかし、プロファイルは、特に投与から１０日後で非常に異なっていた。大部分の動物に関して免疫原性が疑われた。
・ＳＤ群：他の群に反して、ｍＡｂ１は１００日間を超えて血漿中に検出された。プロファイルは大部分の動物で非常に類似していた。各群間の用量の違いのために完全に比較できないが、本発明による乾燥微粒子は非常に長い送達時間を明らかに可能にし、ＳＯＷ群と比較して放出時間は２倍である。
【0115】
ＰＫパラメーター（ＡＵＣＩＮＦ＿Ｄ＿ｏｂｓ、Ｃｍａｘ、ｔ１／２及びｔｍａｘ）も評価した（表９）。免疫原性によって影響を受けたと思われるポイントを削除して、これらのパラメーターを計算した。更にデータを、効果的に投与された用量に対して正規化した。
【表9】
【0116】
表９から観察することができるように、最良の値は、ＳＣと比較してＳＤ群で得られた。以下のことに留意されたい：
・用量増加を伴うＣｍａｘの有意な増加はない。
・バイオアベイラビリティは、ＳＯＷ群に関するものよりもＳＤ群に関するものがはるかに高く、Ｔ１／２は２倍を超える。
・ｔｍａｘの増加はＳＯＷ群とＳＤ群の両方で観察された。
・用量増加を伴うＣｍａｘの有意な増加はない。
・バイオアベイラビリティは、ＳＯＷ群に関するものよりもＳＤ群に関するものがはるかに高く、Ｔ１／２は２倍を超える。
・ｔｍａｘの増加はＳＯＷ群とＳＤ群の両方で観察された。
【0117】
総体的結論：
例１から５において得られた結果を考慮して、本発明者らは、シクロデキストリン、特にＨＰβＣＤ、狭い範囲のＳＢＥβＣＤをうまく使用して、抗体フォーマット（例えばｍＡｂ又はｆＡｂ）及びそのｐＩにかかわらず、噴霧乾燥製剤中の抗体を安定化することができることを実証した。特に、１２：１から７：６の間の全ての抗体／安定化剤比は、スプレードライされた製剤の性能を改善することが示された。トレハロース（標準的な安定化剤）よりも低いモル濃度量（１／４から１／７）のシクロデキストリン（例えばＨＰβＣＤ）が、ＨＭＷＳ形成に対する抗体保護を得るために必要とされたことも示された。例６は、例１から５の有望な結果を確認し、本発明の乾燥微粒子は、標準的なＳＯＷ製剤と比較してバイオアベイラビリティを大幅に改善するだけではなく、抗体含有乾燥微粒子の遅延放出プロファイルも改善することが効果的に可能であることが実証された。
例１から５において得られた結果を考慮して、本発明者らは、シクロデキストリン、特にＨＰβＣＤ、狭い範囲のＳＢＥβＣＤをうまく使用して、抗体フォーマット（例えばｍＡｂ又はｆＡｂ）及びそのｐＩにかかわらず、噴霧乾燥製剤中の抗体を安定化することができることを実証した。特に、１２：１から７：６の間の全ての抗体／安定化剤比は、スプレードライされた製剤の性能を改善することが示された。トレハロース（標準的な安定化剤）よりも低いモル濃度量（１／４から１／７）のシクロデキストリン（例えばＨＰβＣＤ）が、ＨＭＷＳ形成に対する抗体保護を得るために必要とされたことも示された。例６は、例１から５の有望な結果を確認し、本発明の乾燥微粒子は、標準的なＳＯＷ製剤と比較してバイオアベイラビリティを大幅に改善するだけではなく、抗体含有乾燥微粒子の遅延放出プロファイルも改善することが効果的に可能であることが実証された。
【0118】
参考文献
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】