特表 2022-533578 ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の投与のための投与計画

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-25

(54)【発明の名称】ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の投与のための投与計画

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20220715BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220715BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220715BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20220715BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20220715BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

A61P35/00 ZNA

A61K39/395 N

A61K39/395 T

C12N15/13

C07K16/46

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021566974

(86)(22)【出願日】2020-05-14

(85)【翻訳文提出日】2021-12-23

(86)【国際出願番号】 EP2020063529

(87)【国際公開番号】W WO2020229626

(87)【国際公開日】2020-11-19

(31)【優先権主張番号】1906807.1

(32)【優先日】2019-05-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】1914040.9

(32)【優先日】2019-09-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2000318.2

(32)【優先日】2020-01-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521490915

【氏名又は名称】エフ－スター セラピューティクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】モロー，ミッシェル

(72)【発明者】

【氏名】ゲルマシェウスキ，フィオナ

(72)【発明者】

【氏名】グリッドン，ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】レオン，キン－メイ

(72)【発明者】

【氏名】グラディナル，クリスティアン

(72)【発明者】

【氏名】シェパード，クリストファー

(72)【発明者】

【氏名】ホルツ，ジョセフィン－ビート

(72)【発明者】

【氏名】カイタリレ，ルイ

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA16

4C085BB11

4C085EE01

4C085GG02

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

【課題】ヒト患者又は非ヒト霊長類における、ＦＳ１１８を含むＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１抗体の挙動に関するデータ（投与量を含む）は、これまで入手可能でなかった。
【解決手段】本出願は、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）に結合する抗体分子の投与のための投与計画並びにヒト患者の癌の処置におけるそれらの医学的使用に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）に結合する抗体分子であって、
配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
前記方法が、前記抗体分子を前記患者の体重１ｋｇあたり３ｍｇから２０ｍｇの用量で週１回、前記患者に投与することを含む、
抗体分子。

【請求項2】

ヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子を前記患者に投与することを含み、
前記抗体分子が、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
当該方法が、前記抗体分子を前記患者の体重１ｋｇあたり３ｍｇから２０ｍｇの用量で週１回、前記患者に投与することを含む、
方法。

【請求項3】

前記方法が、前記抗体分子を前記患者の体重１ｋｇあたり１０ｍｇから２０ｍｇの用量で投与することを含む、請求項１又は２に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項4】

前記方法が、前記抗体分子を前記患者の体重１ｋｇあたり１０ｍｇの用量で投与することを含む、請求項１から３のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項5】

前記方法は、前記抗体分子を２１０ｍｇから１４００ｍｇの用量で前記患者に投与することを含む、請求項１又は２に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項6】

前記方法は、前記抗体分子を７００ｍｇから１４００ｍｇの用量で前記患者に投与することを含む、請求項１から３又は５のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項7】

前記方法は、前記抗体分子を７００ｍｇの用量で前記患者に投与することを含む、請求項１から６のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項8】

前記腫瘍が、１つ以上のチェックポイント阻害剤による処置に抵抗性であるか、１つ以上のチェックポイント阻害剤による処置中若しくは処置後に再発しているか、又は１つ以上のチェックポイント阻害剤による処置に応答する、請求項１から７のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項9】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項８に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項10】

以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
前記患者の腫瘍が、前記以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍が、前記以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は前記以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、
抗体分子。

【請求項11】

以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子を前記患者に投与することを含み、
前記患者の腫瘍が、前記以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍が、前記以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は前記以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、
方法。

【請求項12】

前記抗体による処置前に前記患者から得られた前記腫瘍のサンプルにおける腫瘍細胞の少なくとも１５％が、ＰＤ－Ｌ１陽性であると決定されている、請求項１０又は１１に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項13】

以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けた癌患者が、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子による処置に応答する可能性があるかを決定する方法であって、
前記患者の腫瘍が前記以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型又は一次耐性表現型を有するかを決定することを含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍が、一次耐性表現型を有する腫瘍よりも高い、前記抗体による処置に応答する可能性を有し；
獲得耐性表現型を有する腫瘍が、前記以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は前記以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
一次耐性表現型を有する腫瘍が、進行性疾患の最良の全体的応答を有する腫瘍を含む、前記以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月以下にわたって安定性疾患を達成した腫瘍である、
方法。

【請求項14】

前記抗体による処置前に前記患者から得られた前記腫瘍のサンプルにおける腫瘍細胞の少なくとも１５％がＰＤ－Ｌ１陽性であるかを決定することをさらに含み、
少なくとも１５％のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む、獲得耐性表現型を有する腫瘍が、一次耐性表現型を有する腫瘍又は１５％未満のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む、獲得耐性表現型を有する腫瘍よりも高い、前記抗体による処置に応答する可能性を有する、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記癌が、頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、胃癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、黒色腫、前立腺癌、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、食道胃接合部（ＧＥＪ）の腺癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、子宮癌、外陰癌、精巣癌、陰茎癌、白血病、メルケル細胞癌及び鼻咽頭癌からなるリストから選択される、請求項１から１４のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項16】

前記癌が、肉腫、甲状腺癌、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、卵巣癌、基底細胞癌、ＭＳＩ－Ｈ固形腫瘍、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、子宮頸癌、食道癌、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膵臓癌、髄膜腫、子宮内膜癌、胸腺癌、妊娠性絨毛性新生物、リンパ腫、腹膜癌腫症、マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）結腸直腸癌及び消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）からなるリストから選択される、請求項１から１４のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項17】

前記癌が、頭頸部癌、胃癌、食道癌、ＮＳＣＬＣ、中皮腫、子宮頸部癌、甲状腺癌及び軟部肉腫からなるリストから選択され；好ましくは、前記頭頸部癌は、ＳＣＣＨＮである、請求項１から１４のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項18】

前記癌が、頭頸部癌、好ましくはＳＣＣＨＮである、請求項１から１４のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項19】

ＳＣＣＨＮ疾患部位が、口腔、中咽頭、喉頭又は下咽頭である、請求項１８に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項20】

前記方法が、前記抗体分子を前記患者の体重１ｋｇあたり１０ｍｇの用量で週１回、前記患者に投与することを含む、請求項１８又は１９に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【請求項21】

前記抗体分子が、静脈内投与される、請求項１から２０のいずれか１項に記載の使用のための抗体分子又は方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

技術分野
本発明は、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）に結合する抗体分子の投与のための投与計画並びにヒト患者の癌の処置におけるそれらの医学的使用に関する。本発明は、抗体に対するヒト患者の応答の可能性を予測するための予後閾値をさらに提供する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
癌は、満たされていない重要な必要性が依然として存在する複雑な疾患である。宿主の免疫系と腫瘍との相互作用は、近年、非臨床的及び臨床的評価が集中している分野である。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、腫瘍細胞の増殖を制御する能力を有し、増加したＴＩＬを有する患者は、良好な予後を有するという新たな臨床的証拠がある。全体として、Ｔ細胞は、癌に対する免疫防御において主要な役割を果たし、Ｔ細胞活性化の調節は、腫瘍細胞が免疫抑制の重要なメディエーターとして機能する、Ｔ細胞、腫瘍細胞及び腫瘍微小環境間の刺激性及び阻害性のリガンド－受容体相互作用の複雑な関係によって媒介される。

【0003】

腫瘍細胞の免疫抑制活性に対抗する免疫チェックポイント阻害剤の開発は、臨床腫瘍学の実践において急速に成長している処置の手段を代表するものであり、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１（ＰＤ－１リガンド）を標的とする免疫チェックポイント阻害剤は、抗腫瘍活性のいくつかの注目すべき証拠を示している。単剤療法で処置された患者の約２０％は、深く持続的な応答で臨床的利益を達成する。しかし、大多数の患者は、癌免疫療法に対する一次耐性、適応耐性及び獲得耐性を克服するための組み合わせアプローチを要するようであり、ここで、一次耐性は、処置に応答せず、したがって進行する癌として分類され、獲得耐性は、初期に治療に応答するが、最終的に進行する癌として分類され、適応耐性は、一次耐性又は獲得耐性として臨床的に発現し得る、治療に対する耐性メカニズムを進化させる癌として分類されている（Sharma et al., 2017）。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する耐性の確立は、環境的及び遺伝的要因、個々の病歴及び以前の療法の効果を含めて複雑且つ多因子的である（Sharma et al., 2017）。

【0004】

リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）は、免疫チェックポイント阻害剤に対する一次耐性及び潜在的な獲得耐性の主要なメディエーターの１つであり、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対して再発性又は難治性である、高度に前処置された進行性黒色腫患者を対象とした最初の抗体組み合わせ試験では、この集団におけるＰＤ－（Ｌ）１耐性の克服の初期の証拠が示された。

【0005】

単一特異性抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体及び抗ＬＡＧ－３抗体の同時投与に対する優れたアプローチは、国際公開第２０１７／２２０５６９ Ａ１号（F-star Delta Limited）に記載されており、これは、癌の処置のための、抗体ＦＳ１１８を含む、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の両方の結合部位を包含する二重特異性抗体を開示している。ＦＳ１１８は、Ｆｃ領域にＬＡＧ－３抗原結合部位及びＰＤ－Ｌ１のＦａｂ結合部位を含む二重特異性ＩｇＧ１（１４８，２４７Ｄａ）モノクローナル抗体であり、これは、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）及びヒトＬＡＧ－３（ｈＬＡＧ－３）の両方を比較的高い親和性で標的とし、ＬＡＧ－３の遮断及びＴ細胞活性化のＰＤ－Ｌ１媒介性阻害を示す。この特徴、並びにＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１の二重標的化を介してＴ細胞と腫瘍細胞との間の架橋を強化する能力、並びに腫瘍微小環境内に局在化する能力は、強力な抗腫瘍活性を駆動することが予想されるＦＳ１１８独自の特質である。

【0006】

具体的には、リンパ節の活性化Ｔ細胞は、ＬＡＧ－３を発現し、ＦＳ１１８などの抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、リンパ節のプライミングされたＬＡＧ－３陽性Ｔ細胞に結合し、腫瘍部位に移動して、それらとともに二重特異性抗体を運ぶと予想される。腫瘍微小環境内に入ると、二重特異性抗体を運ぶＴ細胞は、腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１に結合して遮断できると予想される。代わりに、プライミングされたＬＡＧ－３陽性リンパ球は、既に腫瘍微小環境に浸潤している可能性がある（いわゆる「腫瘍浸潤リンパ球」又は「ＴＩＬ」）。したがって、ＦＳ１１８などの抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、腫瘍微小環境内において、プライミングされたＬＡＧ－３陽性ＴＩＬ（例えば、Ｔ細胞）に直接結合し得る。したがって、抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体が結合したＴ細胞は、ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１の両方のシグナル伝達に耐性があり、それにより、これらの免疫チェックポイントタンパク質を介したＴ細胞枯渇の誘導／維持を防ぐことが予想される。

【0007】

同様に、ＰＤ－Ｌ１の発現は、腫瘍で有意に増加するため、ＦＳ１１８などの抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合することにより、最初に腫瘍の微小環境に局在化し、集中し得る。次に、抗ＬＡＧ－３部分は、腫瘍微小環境に存在するＴ細胞の表面に発現されるＬＡＧ－３に結合し、Ｔ細胞のＬＡＧ－３媒介性抑制を防ぐことができる。

【0008】

ＦＳ１１８などの抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を使用して、Ｔ細胞と腫瘍細胞との間の接触を維持又は延長すると、これらの標的に対する個々のモノクローナル抗体の組み合わせと比較して、Ｔ細胞が良好に腫瘍抗原を認識し、活性化され、腫瘍細胞の死滅を進めることができる時間が増加する。

【0009】

ＦＳ１１８は、マウスＬＡＧ－３又はＰＤ－Ｌ１と交差反応せず、及び／又はそれらに関して機能しない。マウス実験においてＦＳ１１８の代理として作用することができるマウス抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１（ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１；ＦＳ１８ｍ－１０８－２９／Ｓ１、ＬＡＬＡ変異を有する）二重特異性抗体が記載されている。癌の同系マウスモデルでは、ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、１つ／複数の抗体を３日間隔で３回投与した場合、それぞれ同じＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１結合部位を含む２つの抗体分子の組み合わせ投与と比較して強化された又は同様の腫瘍増殖抑制ができることが示された。抗ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１抗体は、９匹中７匹のマウスで腫瘍増殖を防ぐことができることも示された一方、同じＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１結合部位を含む２つの抗体分子の組み合わせ投与は、試験した動物のいずれにおいても腫瘍増殖を妨げなかった（国際公開第２０１７／２２０５６９号；P2399 A LAG-3/PD-L1 mAb² can overcome PD-L1-mediated compensatory upregulation of LAG-3 induced by single-agent checkpoint blockade, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March - 03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA）。

【0010】

その腫瘍阻害活性に加えて、ＦＳ１１８代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体がマウス腫瘍モデルで用量応答を示し、より高い用量（１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ）が一般的に腫瘍体積の減少と相関しているという初期の兆候がある。ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、ＬＡＧ－３を発現する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に対してＬＡＧ－３抑制を誘導することも示されている一方、ＬＡＧ－３発現は、代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と同じｍＬＡＧ－３及びｍＰＤ－Ｌ１結合部位を含む２つの抗体分子でマウスを処置した場合に増加した。代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体及び単剤の組み合わせの両方は、処置されたマウスの血清中の可溶性ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１レベルを増加させることが示されている（P348 Dual blockade of PD-L1 and LAG-3 with FS118, a unique bispecific antibody, induces T-cell activation with the potential to drive potent anti-tumour immune responses, Journal for ImmunoTherapy of Cancer 20175 (Suppl 2): 87；Abstract 2719: Dual blockade of PD-L1 and LAG-3 with FS118, a unique bispecific antibody, induces CD8⁺ T-cell activation and modulates the tumour microenvironment to promote antitumourimmune responses, Cancer Research, July 2018 Volume 78, Issue 13 Supplement；P2399 A LAG-3/PD-L1 mAb² can overcome PD-L1-mediated compensatory upregulation of LAG-3 induced by single-agent checkpoint blockade, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March - 03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA）。

【0011】

しかし、ＦＳ１１８代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体に関連するデータは、ＦＳ１１８分子自体がヒトで治療的に有効であることを強く示しているが、使用されるマウスモデルは、ヒトにおける使用のための特定の治療的用量を予測することに関連する欠点がある。特に、代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、マウスにおける強力な免疫原性応答及び抗薬物抗体（ＡＤＡ）の産生を自然に誘発するヒトＩｇＧ１骨格を有する。したがって、当業者は、マウスで使用される有効量がＮＨＰ及び最終的にヒトで有効であることを合理的に予想しないであろう。

【0012】

ヒト患者又は非ヒト霊長類における、ＦＳ１１８を含むＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１抗体の挙動に関するデータ（投与量を含む）は、これまで入手可能でなかった。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0013】

発明の記載
ＦＳ１１８は、ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１の両方に結合する二重特異性抗体であり、上記の背景の節で説明されているように、単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３抗体と比較して独自の方法でその抗腫瘍効果を媒介することが予想される。ＦＳ１１８の二重特異性、四価の性質及び結果として生じる、単一特異性、二価抗体と比較した結合の化学量論における違い並びにＦＳ１１８の作用機序の予想される違いを考慮すると、ヒトの単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１及び抗ＬＡＧ３抗体に使用される用量レベル及び投与スケジュールを使用してＦＳ１１８を投与できるかどうかは、不明であった。

【0014】

アベルマブ、デュルバルマブ及びアテゾリズマブなどのヒト患者の癌処置に承認された抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、それぞれ８００ｍｇ（固定用量）又は１０ｍｇ／ｋｇ（２週間に１回）、１０ｍｇ／ｋｇ（２週間に１回）及び１２００ｍｇ（３週間に１回）（標準的な１００ｋｇの患者では約１２ｍｇ／ｋｇに相当）の用量で癌患者に投与される。抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体レラトリマブ（relatlimab）と、抗ＰＤ１モノクローナル抗体ニボルマブとの組み合わせは、現在、第Ｉ相臨床試験で試験されており、４週間に１回投与される。レラトリマブ処置のみも、抗体が２週間ごとに投与される第Ｉ相試験で評価されている。

【0015】

マウス実験においてＦＳ１１８の代理として作用することができるマウスＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１（ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１；ＦＳ１８ｍ－１０８－２９／Ｓ１、ＬＡＬＡ変異を有する）二重特異性抗体は、抗体が同じ投与量レベル（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）で同じ投与スケジュール（３回投与、３日間隔）に従って投与された場合、ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と同じｍＬＡＧ－３及びｍＰＤ－Ｌ１結合部位を含む２つの単一特異性抗体分子と比較して、同系マウス腫瘍モデルにおいて優れた又は類似の抗腫瘍効果を示した。しかし、代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、マウスにおける強力な免疫原性応答及び抗薬物抗体（ＡＤＡ）の産生を自然に誘発するヒトＩｇＧ１骨格を有する。したがって、マウスで使用される有効量が非ヒト霊長類（ＮＨＰ）及び最終的にヒトで有効であるかを予測することはできなかった。

【0016】

ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体のＰＫをマウスで評価した場合（１、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇで）、本発明者らは、驚くべきことに、ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体が、ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１抗体と同じｍＰＤ－Ｌ１結合部位を含む単一特異性抗体よりも早い速度で血清から除去されることを見出した。ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の不飽和クリアランスは、ｍＰＤ－Ｌ１結合と、対照の抗ｍＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂと比較したＣＨ３ドメインの許容残基の標的特異的変化との組み合わせの結果であるように見えることがさらに示されている。（実施例１）。

【0017】

本発明者らによって得られたマウスＰＫデータをマウスにおける抗腫瘍有効性データと組み合わせることにより、本発明者らは、６μｇ／ｍＬ以上のマウス代理ｍＡｂ^２への曝露（Ｃ_ｍａｘ）がマウスにおける抗腫瘍有効性に必要であることと、驚くべきことに、投与期間を通してこのレベルの曝露を維持する必要がなかったこととを見出した。しかし、ＡＤＡ形成が発生しているように見えた（実施例１）。

【0018】

カニクイザルでは、単回投与（４ｍｇ／ｋｇ）ＰＫ試験、非医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）用量範囲所見（ＤＲＦ）試験（４週間にわたり週１回、１０、５０、２００ｍｇ／ｋｇの静脈内投与）及び４週間のＧＬＰ毒性試験（６０及び２００ｍｇ／ｋｇ）での週２回の静脈内反復投与から、ＦＳ１１８は、単一特異性抗ｈＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂよりも早く除去されることが見出された（実施例１）。

【0019】

投与期間を通して１０μｇ／ｍｌ以上のＦＳ１１８血漿レベルを維持することは、ＰＤ－Ｌ１の捕捉を維持するのに十分であり、カニクイザルのＰＤ－Ｌ１抑制及び免疫薬理学を推測することによって十分であることがわかった。これらの研究はまた、ＦＳ１１８が高用量でも十分に許容されることを示し、高用量がヒトでも十分に許容されることを示した。マウスと同様に、ＡＤＡ形成も観察された（実施例１）。

【0020】

したがって、マウス及びカニクイザルのＰＫ研究から得られた結果は、予想外にも、それぞれの単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１抗体と比較したＦＳ１１８及びＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１のクリアランス速度にも関わらず、用量間で観察された非常に低い抗体Ｃ_トラフレベルが、それぞれ持続的な抗腫瘍及び薬力学的応答を提供するのになお十分であったことを示した。それにも関わらず、マウス及びカニクイザルにおいてＡＤＡ形成が観察され、これは、これらの動物モデルには、観察された結果からヒトへの外挿に関して制限があったことを示している。

【0021】

その後、以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法以降に進行した進行性悪性腫瘍を有する患者（研究対象）におけるＦＳ１１８の安全性、忍容性、薬物動態及び活性に関する第Ｉ相用量漸増及びコホート拡大のヒトでの最初の研究を設計し、開始した。安全性を評価するために、単一の患者コホートに８００μｇ、２４００μｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を投与した。第Ｉ相試験の用量漸増部分では、患者に３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を投与した。全ての用量は、週１回（すなわち１週間あたり１回）投与され、そのため、投与頻度は、マウス及びカニクイザルのＰＫデータのみに基づいて当初必要と考えられていたよりも低かった（実施例１及び２）。

【0022】

第Ｉ相試験の最初の２４人の対象（４３人の患者に増加）からの中間結果は、最大観察濃度（Ｃ_ｍａｘ）が、カニクイザル試験から予測されたＣ_ｍａｘと一致していることを確認したが、驚くべきことに、ＦＳ１１８のクリアランス速度は、予測よりも高く、ＡＵＣ（濃度対時間曲線下の面積）は、予想よりも３０％低かった。これは、初めにヒトにおいてより高用量のＦＳ１１８が必要であることを示唆していた可能性がある。しかし、クリアランス速度が当初の予測よりも速いにも関わらず、治療効果を示すより長期の薬力学的効果が観察された（実施例２）。

【0023】

特に、ＦＳ１１８は、週１回投与される３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）レベルの持続的な増加及び持続的なＬＡＧ－３受容体占有を誘導することが示された。ｓＬＡＧ－３は、ＭＨＣＩＩに結合することにより、マクロファージ及び樹状細胞などの抗原提示細胞を刺激してＴ細胞応答を活性化し、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔ細胞を強化することが報告されており、それによって抗腫瘍免疫応答を増強することが予想される。さらに、ｓＬＡＧ３レベルは、マウスの腫瘍増殖抑制と関連していることが以前に示されており、これは、ｓＬＡＧ３レベルの増加が治療効果を示すことを示している。初期の結果は、ｓＰＤ－Ｌ１レベルもＦＳ１１８処置後に増加したことを示唆した（実施例２）。

【0024】

したがって、第Ｉ相試験で採用された最初の２４人の対象（４３人の患者に増加）からの中間結果は、驚くべきことに、
（ｉ）ＦＳ１１８をヒト癌患者に週１回３ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与すると、持続的な薬力学的応答が得られ、これは、患者の血清からのＦＳ１１８の予測よりも速いクリアランス速度にも関わらず、抗腫瘍効果と相関すると予想されること、及び
（ｉｉ）投与間隔全体にわたるＦＳ１１８曝露は、ヒト患者における薬力学的効果に必要でなかったこと
を示した。

【0025】

さらに、進行中の第Ｉ相試験の最初の結果は、（これは、試験の主要目的ではないが）癌の処置におけるＦＳ１１８の有効性の初期の直接的な証拠を提供した。より具体的には、２０１９年５月までに、少なくとも１回の「研究中」スキャンが報告された１４人の患者のうちの５人が何らかの安定性疾患を示した。２０１９年８月までに、これは、２２人中１１人の患者に増加し、２０２０年４月までに３０人中１７人の患者に増加した（実施例２）。

【0026】

第Ｉ相試験からのデータは、将来の試験のための用量選択を導くために分析された（実施例６）。第Ｉ相の最良の全体的応答（ＢＯＲ／ｉＢＯＲ）データのベイズ分析では、１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を週１回投与した場合、３ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を週１回投与した場合よりも、患者がＢＯＲ／ｉＢＯＲとして安定性疾患を示す可能性が高いと推定された。３ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を週１回投与された患者は、１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を週１回投与された患者と比較して抗薬物抗体のレベルも高かった。したがって、潜在的な免疫原性及び毒性を最小限に抑えるという観点から、ＦＳ１１８を１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇで週１回投与することが好ましい。三量体複合体形成の薬物動態／薬力学的モデリング及びシミュレーションは、三量体ＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１複合体濃度が、生体内分布係数が１０％であると仮定して、週１回、１０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８の用量で最高になると予想されることをさらに示した。より高い三量体複合体形成は、Ｔ細胞の活性化及び腫瘍増殖の阻害につながると仮定されている。週１回、３ｍｇ／ｋｇの低用量を投与された患者は、安定性疾患を示したが（表８）、有効性の増加並びに毒性及び免疫原性の低下の予想から、週１回、１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８の投与が好ましい。週１回、１０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８など、この範囲の下限の投与量は、Ｔ細胞の過剰刺激、したがってＴ細胞の枯渇のリスクを低減し、それにより持続的な治療効果の可能性を高め、処置のコストを削減すると考えられるために特に好ましい。

【0027】

ＦＳ１１８抗体は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む。

【0028】

したがって、一態様において、本発明は、ヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、
配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、抗体分子を患者の体重１ｋｇあたり少なくとも３ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、抗体分子を提供する。

【0029】

別の態様において、本発明は、ヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子を患者に投与することを含み、
抗体分子は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、抗体分子を患者の体重１ｋｇあたり少なくとも３ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、方法を提供する。

【0030】

さらなる態様において、本発明は、ヒト患者の癌を処置するための医薬の製造における、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子の使用であって、
抗体分子は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
処置は、抗体分子を患者の体重１ｋｇあたり少なくとも３ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、使用を提供する。

【0031】

ＦＳ１１８は、患者の体重１ｋｇあたり少なくとも４ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１９ｍｇ／ｋｇ又は少なくとも２０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。少なくとも１ｍｇ／ｋｇの用量でのＦＳ１１８の投与などの他の用量も企図される。

【0032】

加えて又は代わりに、ＦＳ１１８は、最大１０ｍｇ／ｋｇ、最大１１ｍｇ／ｋｇ、最大１２ｍｇ／ｋｇ、最大１３ｍｇ／ｋｇ、最大１４ｍｇ／ｋｇ、最大１５ｍｇ／ｋｇ、最大１６ｍｇ／ｋｇ、最大１７ｍｇ／ｋｇ、最大１８ｍｇ／ｋｇ、最大１９ｍｇ／ｋｇ又は最大２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、最大１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、最大２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0033】

したがって、ＦＳ１１８は、１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。代わりに、ＦＳ１１８は、１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、３ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの用量、より好ましくは、１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0034】

一実施形態において、ＦＳ１１８は、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。例えば、ＦＳ１１８は、３ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、２０ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。

【0035】

ＦＳ１１８は、上記のようにキログラム（ｋｇ）単位の患者の体重に基づいて計算された用量で患者に投与され得る。したがって、１０ｍｇ／ｋｇの用量を受け、且つ体重が７０ｋｇの患者は、７００ｍｇのＦＳ１１８の用量を投与されることになる。代わりに、ＦＳ１１８は、固定用量、すなわち患者の個々の体重に基づかない用量で患者に投与され得る。ＦＳ１１８の適切な固定用量は、７０ｋｇ、７５ｋｇ、８０ｋｇ、８５ｋｇ、９０ｋｇ、９５ｋｇ又は１００ｋｇなど、患者集団の患者の平均体重に基づいて計算できる。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８の固定用量は、患者の平均体重として７０ｋｇに基づいて計算される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８の固定用量は、患者の平均体重として８０ｋｇに基づいて計算される。さらに好ましい実施形態において、ＦＳ１１８の固定用量は、患者の平均体重として１００ｋｇに基づいて計算される。

【0036】

したがって、患者の平均体重を１００ｋｇと仮定して、本発明は、以下を提供する。

【0037】

ヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、
配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、抗体分子を少なくとも３００ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、抗体分子。

【0038】

ヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子を患者に投与することを含み、
抗体分子は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、抗体分子を少なくとも３００ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、方法。

【0039】

ヒト患者の癌を処置するための医薬の製造における、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子の使用であって、
抗体分子は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
処置は、抗体分子を少なくとも３００ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、使用。

【0040】

したがって、患者の平均体重を１００ｋｇと仮定すると、ＦＳ１１８は、代わりに、少なくとも４００ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも６００ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも９００ｍｇ、少なくとも１０００ｍｇ、少なくとも１１００ｍｇ、少なくとも１２００ｍｇ、少なくとも１３００ｍｇ、少なくとも１４００ｍｇ、少なくとも１５００ｍｇ、少なくとも１６００ｍｇ、少なくとも１７００ｍｇ、少なくとも１８００ｍｇ、少なくとも１９００ｍｇ又は少なくとも２０００ｍｇの用量で患者に投与され得る。例えば、ＦＳ１１８は、少なくとも３００ｍｇの用量で患者に投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、少なくとも１０００ｍｇの用量で患者に投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、少なくとも２０００ｍｇの用量で患者に投与される。少なくとも１００ｍｇの用量でのＦＳ１１８の投与などの他の用量も企図される。

【0041】

加えて又は代わりに、ＦＳ１１８は、患者の平均体重を１００ｋｇと仮定すると、最大１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ又は２０００ｍｇの用量で投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、最大１０００ｍｇの用量で投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、最大２０００ｍｇの用量で投与される。

【0042】

したがって、ＦＳ１１８は、患者の平均体重を１００ｋｇと仮定すると、１００ｍｇから２０００ｍｇ、３００ｍｇから２０００ｍｇ又は１０００ｍｇから２０００ｍｇの用量で投与され得る。代わりに、ＦＳ１１８は、１００ｍｇから１０００ｍｇ又は３００ｍｇから１０００ｍｇの用量で投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、３００ｍｇから２０００ｍｇの用量、より好ましくは、１０００ｍｇから２０００ｍｇの用量で投与される。

【0043】

例えば、ＦＳ１１８は、患者の平均体重を１００ｋｇと仮定すると、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、１８００ｍｇ、１９００ｍｇ又は２０００ｍｇの用量で患者に投与され得る。例えば、ＦＳ１１８は、３００ｍｇの用量で患者に投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、１０００ｍｇの用量で患者に投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、２０００ｍｇの用量で患者に投与される。

【0044】

ＦＳ１１８の代替的な固定用量及び固定用量範囲は、７０ｋｇ、７５ｋｇ、８０ｋｇ、８５ｋｇ、９０ｋｇ又は９５ｋｇなど、特に７０ｋｇ又は８０ｋｇの、患者集団の代替的な平均体重を使用して計算でき、本発明に従ってヒト癌患者に投与できる。

【0045】

例えば、患者の平均体重を７０ｋｇと仮定して、本発明は、以下を提供する。

【0046】

ヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、
配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、抗体分子を少なくとも２１０ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、抗体分子。

【0047】

ヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子を患者に投与することを含み、
抗体分子は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、抗体分子を少なくとも２１０ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、方法。

【0048】

ヒト患者の癌を処置するための医薬の製造における、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子の使用であって、
抗体分子は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
処置は、抗体分子を少なくとも２１０ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含む、使用。

【0049】

したがって、患者の平均体重を７０ｋｇと仮定すると、ＦＳ１１８は、代わりに、少なくとも２８０ｍｇ、少なくとも３５０ｍｇ、少なくとも４２０ｍｇ、少なくとも４９０ｍｇ、少なくとも５６０ｍｇ、少なくとも６３０ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも７７０ｍｇ、少なくとも８４０ｍｇ、少なくとも９１０ｍｇ、少なくとも９８０ｍｇ、少なくとも１０５０ｍｇ、少なくとも１１２０ｍｇ、少なくとも１１９０ｍｇ、少なくとも１２６０ｍｇ、少なくとも１３３０ｍｇ又は少なくとも１４００ｍｇの用量で患者に投与され得る。例えば、ＦＳ１１８は、少なくとも２１０ｍｇの用量で患者に投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、少なくとも７００ｍｇの用量で患者に投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、少なくとも１４００ｍｇの用量で患者に投与される。

【0050】

加えて又は代わりに、ＦＳ１１８は、患者の平均体重を７０ｋｇと仮定すると、最大７００ｍｇ、７７０ｍｇ、８４０ｍｇ、９１０ｍｇ、９８０ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２０ｍｇ、１１９０ｍｇ、１２６０ｍｇ、１３３０ｍｇ又は１４００ｍｇの用量で投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、最大７００ｍｇの用量で投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、最大１４００ｍｇの用量で投与される。少なくとも７０ｍｇの用量でのＦＳ１１８の投与などの他の用量も企図される。

【0051】

したがって、ＦＳ１１８は、患者の平均体重を７０ｋｇと仮定すると、７０ｍｇから１４００ｍｇ、２１０ｍｇから１４００ｍｇ又は７００ｍｇから１４００ｍｇの用量で投与され得る。代わりに、ＦＳ１１８は、７０ｍｇから７００ｍｇ又は２１０ｍｇから７００ｍｇの用量で投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、２１０ｍｇから１４００ｍｇの用量、より好ましくは、７００ｍｇから１４００ｍｇの用量で投与される。

【0052】

例えば、ＦＳ１１８は、患者の平均体重を７０ｋｇと仮定すると、２１０ｍｇ、２８０ｍｇ、３５０ｍｇ、４２０ｍｇ、４９０ｍｇ、５６０ｍｇ、６３０ｍｇ、７００ｍｇ、７７０ｍｇ、８４０ｍｇ、９１０ｍｇ、９８０ｍｇ、１０５０ｍｇ、１１２０ｍｇ、１１９０ｍｇ、１２６０ｍｇ、１３３０ｍｇ又は１４００ｍｇの用量で患者に投与され得る。例えば、ＦＳ１１８は、２１０ｍｇの用量で患者に投与され得る。好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、７００ｍｇの用量で患者に投与される。代替的な好ましい実施形態において、ＦＳ１１８は、１４００ｍｇの用量で患者に投与される。

【0053】

さらなる代替として、ＦＳ１１８は、用量間で少なくとも０．１～１０μｇ／ｍＬの平均トラフ血漿濃度（Ｃ_トラフ）を達成するのに十分な用量で患者に投与され得る。理論に拘束されることを望むものではないが、これらのＣ_トラフレベルは、インビトロでのヒト一次細胞機能アッセイにおけるＦＳ１１８のＥＣ_５０と相関しており、したがってＦＳ１１８の薬理学的に活性なレベルを表している可能性がある。

【0054】

少なくとも１０μｇ／ｍＬの平均トラフ血漿濃度血漿濃度は、ＰＤ－Ｌ１の継続的な阻害を提供すると予想される。

【0055】

ＦＳ１１８が患者に週１回投与される場合、ＦＳ１１８の用量は、７日間又は８日間で時間的に分離され得る。当技術分野で理解されるように、用量間の時間は、ある程度変化し得、各用量は、正確に同じ時間で分離されない。これは、多くの場合、主治医の裁量下で指示される。したがって、ＦＳ１１８の用量は、約７日間又は８日間などの臨床的に許容可能な時間範囲によって時間的に分離され得る。

【0056】

ＦＳ１１８は、３週間の処置サイクルで患者に投与され得る。

【0057】

ＦＳ１１８は、好ましくは、静脈内注射によって患者に投与される。

【0058】

本発明に従って処置される癌は、好ましくは、ＦＳ１１８以外の１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による前処置を受けている。

【0059】

本発明に従って処置される癌は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して、（ｉ）抵抗性であり得るか、（ｉｉ）処置中若しくは処置後に再発したものであり得るか、又は（ｉｉｉ）応答性であり得る。好ましい実施形態において、本発明に従って処置される癌は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８以外）による以前の処置中又は処置後に再発したものである。免疫チェックポイント阻害剤は、好ましくは、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１阻害剤であり、より好ましくは抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８以外）による以前の処置は、単独で又は１つ以上の追加の治療剤（例えば、１つ以上の化学療法剤）と組み合わせて投与されたものであり得る。

【0060】

本発明者らは、驚くべきことに、ＦＳ１１８処置の結果として、長寿命の疾患制御、すなわち持続的な疾患制御を経験する可能性が高い癌患者のサブグループを特定した。このサブグループの患者は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍を有する患者である。したがって、これらの腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して「獲得耐性表現型」を有すると見なされる。抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して完全応答を示した患者もこのサブグループに入ると予想される。腫瘍が抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法などの抗癌療法による処置中に完全応答、部分応答、安定性疾患又は進行性疾患を示すかどうかは、RECIST 1.1基準（Eisenhauer, 2009）又はiRECIST基準（Seymour, 2017）、好ましくはRECIST1.1基準に従って評価することができる。これには、患者の腫瘍のスキャン（例えば、ＭＲＩスキャン）の取得及び腫瘍病変のサイズ／体積の測定が含まれ得る。本明細書で獲得耐性を定義する目的で、例えば患者が、安定性疾患（又は部分応答若しくは完全応答）を示すと分類された最初のスキャンに続いて、進行性疾患を示すと分類された後のスキャンを行った場合、患者は、進行性疾患を示すスキャンが得られるまでの期間、安定性疾患（又は部分応答又は完全応答）を示したと仮定される。換言すれば、獲得耐性表現型は、（ａ）以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する完全応答若しくは部分応答の最良の全体的応答（ＢＯＲ）を有したか、又は（ｂ）最良の全体的応答（ＢＯＲ）として安定性疾患を有し、抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法で３ヶ月を超えて処置された、腫瘍として定義され得る。ＢＯＲなどの臨床エンドポイントは、RECIST 1.1基準（Eisenhauer, 2009）又はiRECIST基準（Seymour, 2017）、好ましくはRECIST1.1基準に従って定義され得る。

【0061】

対照的に、３ヶ月以内に安定性疾患を示した腫瘍（したがって安定性疾患を示さず、処置の開始から進行性の疾患を示した腫瘍を含む）を有する患者は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法を受けている間（換言すると、進行性疾患のＢＯＲを有する腫瘍を含む、安定性疾患のＢＯＲを有し、３ヶ月以内に処置された腫瘍）、長寿命の疾患制御を経験せず、したがって、これらの腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して「一次耐性表現型」を有すると見なされる。以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する腫瘍を有する患者は、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性を有すると称され得る。同様に、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次耐性表現型を有する腫瘍を有する患者は、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次耐性を有すると称され得る。以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法は、単独で又は１つ以上の追加の治療剤（例えば、１つ以上の化学療法剤及び／又は免疫療法剤）と組み合わせて投与されたものであり得る。

【0062】

具体的には、ＦＳ１１８処置を１８週間以上完了した全ての患者は、ＢＯＲが不明であった１人の患者を除いて、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して獲得耐性表現型を有する腫瘍を有することが示された（図７及び８）。しかし、ＢＯＲが不明な後者の患者は、以前の抗ＰＤ－１療法を、１年を超えて継続していたことが知られており、したがって、この患者は、獲得耐性を有すると分類されるＢＯＲを有していたと考えられる。以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次耐性表現型を有する腫瘍を有する患者のいずれも、第Ｉ相試験で１７週間を超えるＦＳ１１８処置を受けていなかった（図７及び８）。以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する腫瘍を有する患者におけるＦＳ１１８療法に対する応答の寿命延長の可能性の増加は、投与されたＦＳ１１８の用量及び腫瘍タイプとは無関係に観察された（図７から９）。したがって、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する腫瘍の耐性状態は、ＦＳ１１８療法に対する持続的応答の可能性を示している。具体的には、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次耐性表現型を有する腫瘍よりも高い、ＦＳ１１８による処置に応答する可能性、特に１８週間以上、１９週間以上又は２０週間以上、好ましくは１８週間以上のＦＳ１１８療法に応答する可能性を有する。したがって、ＦＳ１１８による処置への応答は、例えば、１８週間以上、１９週間以上又は２０週間以上、好ましくは１８週間以上にわたり、好ましくは安定性疾患、ＦＳ１１８処置に対する部分応答又は完全応答を示す腫瘍を指す。

【0063】

処置計画を含む以前のＰＤ－（Ｌ）１での疾患進行後のＰＤ－（Ｌ）１抗体による患者の再処置は、推奨されておらず、歴史的に、患者は、そのような治療から利益をほとんど得られていないため、本発明者らの上記の知見は、特に重要である（Fujita et al., Anticancer Res.2019；Fujita et al., Thoracic Cancer, 2019；Martini et al., J. Immunotherapy Cancer, 2017）。

【0064】

したがって、さらなる態様において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、抗体分子を提供する。

【0065】

本明細書で言及される場合、腫瘍は、腫瘍病変であり得る。

【0066】

本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、患者の腫瘍が抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有するかを決定することを含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有すると決定された腫瘍を抗体で処置する、抗体分子も提供する。

【0067】

以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子を患者に投与することを含み、
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、方法も提供される。

【0068】

さらに、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子を患者に投与することを含み、
患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有するかを決定することを含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有すると決定された腫瘍を抗体で処置する、方法が提供される。

【0069】

さらなる実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置するための医薬の製造における、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子の使用であって、
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、使用を提供する。

【0070】

さらなる別の実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けた癌患者が、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子による処置に応答する可能性があるかを決定する方法であって、
患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型又は一次耐性表現型を有するかを決定することを含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、一次耐性表現型を有する腫瘍よりも高い、抗体による処置に応答する可能性を有し；
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
一次耐性表現型を有する腫瘍は、進行性疾患の最良の全体的応答を有する腫瘍を含む、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月以下の間安定性疾患を達成した腫瘍である、方法を提供する。

【0071】

応答の可能性は、好ましくは、例えば１８週間以上、１９週間以上又は２０週間以上、好ましくは１８週間以上にわたり、腫瘍が安定性疾患、ＦＳ１１８による処置に対する部分応答又は完全応答を示す可能性を指す。

【0072】

本発明は、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子に対する癌患者の応答の可能性を予測する方法であって、
患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定された場合、患者は、抗体に応答する可能性が高いと予測され、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、方法も提供する。

【0073】

別の実施形態において、本発明は、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子による処置のために、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けた患者を選択する方法であって、
患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型又は一次耐性表現型を有するかを決定することを含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
一次耐性表現型を有する腫瘍は、進行性疾患の最良の全体的応答を有する腫瘍を含む、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月以下の間安定性疾患を達成した腫瘍であり；
抗体による処置のために、獲得耐性表現型を有すると決定された腫瘍を有する患者を選択する、方法を提供する。

【0074】

抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ又はアテゾリズマブによる処置を含むが、これらに限定されない抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＦＳ１１８など、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の両方に結合する抗体以外）による処置を指し得る。

【0075】

本発明者らは、獲得耐性表現型を有する腫瘍において、ＦＳ１１８による処置前にＰＤ－Ｌ１に対して陽性染色を示した腫瘍細胞のパーセンテージが、ＦＳ１１８処置の結果としての疾患制御の寿命と正の相関を示したことをさらに示した。獲得耐性群では、ＦＳ１１８で３０週間以上にわたって処置された３人の患者はまた、ベースラインでＰＤ－Ｌ１の陽性染色を示した腫瘍細胞の割合が最も高かった。抗ＰＤ－１療法又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に一次耐性を有する患者では、そのような相関関係が見られなかった（図１０）。これらの結果は、１５％以上、２０％以上又は２５％以上、好ましくは１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する腫瘍がＦＳ１１８による処置に応答する可能性がより高いことを示す。例えば、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する腫瘍は、１５％以上、１６％以上、１７％以上、１８％以上又は１９％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含み得る。

【0076】

腫瘍サンプルにおけるＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞のパーセンテージを決定するための方法は、当技術分野で公知であり、抗ＰＤ－Ｌ１抗体で腫瘍サンプルを染色し、腫瘍細胞への抗体の結合を直接的又は間接的に検出することを含み得る。ＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞のパーセンテージは、腫瘍細胞の数を例えば５高倍率視野において数え、及び抗体が結合している前記腫瘍細胞のパーセンテージを決定することにより決定することができる。

【0077】

したがって、さらなる実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルは、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むと決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、抗体分子を提供する。

【0078】

本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み；
方法は、
（ｉ）患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有するか；及び
（ｉｉ）抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルが１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むか
を決定することと；
獲得耐性表現型を有すると決定され、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む腫瘍を抗体で処置することと
を含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、抗体分子も提供する。

【0079】

以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子を患者に投与することを含み、
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルは、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むと決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、方法も提供される。

【0080】

さらに、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子を患者に投与することを含み、
（ｉ）患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有するか；及び
（ｉｉ）抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルが１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むか
を決定することと；
獲得耐性表現型を有すると決定され、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む腫瘍を抗体で処置することと
を含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、方法が提供される。

【0081】

さらなる実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌を処置するための医薬の製造における、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子の使用であって、
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルは、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むと決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、使用を提供する。

【0082】

さらなる別の実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けた癌患者が、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子による処置に応答する可能性があるかを決定する方法であって、
（ｉ）患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型又は一次耐性表現型を有するか；及び
（ｉｉ）抗体による処置前に患者から得られた腫瘍サンプルのサンプルが１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むか
を決定することを含み、
少なくとも１５％のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む獲得耐性表現型を有する腫瘍は、一次耐性表現型を有する腫瘍又は１５％未満のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む獲得耐性表現型を有する腫瘍よりも高い、抗体による処置に応答する可能性を有し；
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
一次耐性表現型を有する腫瘍は、進行性疾患の最良の全体的応答を有する腫瘍を含む、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月以下の間安定性疾患を達成した腫瘍である、方法を提供する。方法は、処置のために、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有すると決定され、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む腫瘍を選択すること、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有すると決定され、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む癌を有する腫瘍を抗体で処置することをさらに含み得る。

【0083】

本発明は、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子に対する癌患者の応答の可能性を予測する方法であって、
患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルが１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むと決定されている場合、患者は、抗体に応答する可能性が高いと予測され、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、方法も提供する。

【0084】

別の実施形態において、本発明は、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、且つ配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子による処置のために、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けた患者を選択する方法であって、
（ｉ）患者の腫瘍が以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型又は一次耐性表現型を有するか；及び
（ｉｉ）抗体による処置前に患者から得られた腫瘍のサンプルが１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含むか
を決定することと；
抗体による処置のために、獲得耐性表現型を有すると決定され、１５％以上のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む腫瘍を有する患者を選択することと
を含み、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍であり、及び
一次耐性表現型を有する腫瘍は、進行性疾患の最良の全体的応答を有する腫瘍を含む、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月以下の間安定性疾患を達成した腫瘍である、方法を提供する。

【0085】

本発明及び実施形態の上記の態様において、抗体は、本明細書に開示される投与スケジュール及び／又は投与経路に従ってある用量で患者に投与され得る。

【0086】

したがって、特に好ましい実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌、好ましくは頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を処置する方法における使用のための、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合する抗体分子であって、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含み、方法は、抗体分子を患者の体重１ｋｇあたり１０ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含み、
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、抗体分子を提供する。

【0087】

さらに好ましい実施形態において、本発明は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けたヒト患者の癌、好ましくはＳＣＣＨＮを処置する方法であって、治療有効量の、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に結合し、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む抗体分子を患者に投与することを含み、抗体分子を患者の体重１ｋｇあたり１０ｍｇの用量で週１回、患者に投与することを含み、
患者の腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に関して獲得耐性表現型を有すると決定されており、
獲得耐性表現型を有する腫瘍は、以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置に対して完全若しくは部分応答を示したか、又は以前の抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置を受けている間、３ヶ月を超えて安定性疾患を示した腫瘍である、方法も提供する。

【図面の簡単な説明】

【0088】

図面の簡単な説明

【図1】抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法（左側のパネル）、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１及び抗ＬＡＧ－３単剤療法の組み合わせ（中央のパネル）並びに二重特異性抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体ＦＳ１１８（右側のパネル）による腫瘍の処置後のＴ細胞ＬＡＧ－３発現への影響を示す。

【図2】抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性であるか、又はその後に再発した腫瘍及び抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に応答する腫瘍に対するＦＳ１１８処置の予想される効果を示す。

【図3A】腫瘍移植後３、６及び９日目に１０ｍｇ／ｋｇの治験薬（マウスあたり２００μｇ）を投与した後の平均（±ＳＥＭ）腫瘍体積を示す。ＦＳ１１８マウス代理ｍＡｂ^２＝ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１；ＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／４４２０＝ｍＬＡＧ－３／モックｍＡｂ^２；ＰＤ－Ｌ１ ＢＭ１ ｍＡｂ＝抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ；ｍＬＡＧ－３ ＢＭ１ ｍＡｂ＝抗ＬＡＧ－３ ｍＡｂ；ＩｇＧ対照＝Ｇ１ＡＡ／４４２０。

【図3B】ＰＫデータ－ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１（白丸及び白三角）及び抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ（黒丸及び黒三角）の単回静脈内投与１０ｍｇ／ｋｇを示す。それぞれ丸及び三角で表される２つの異なる研究からのデータが示される。

【図4】Ｇ１ＡＡ／４４２０（ＩｇＧ対照、１０ｍｇ／ｋｇ）及び抗マウスＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１を４つの異なる用量（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇ）で３回投与したＣ５７ＢＬ／６マウスで皮下増殖させた、ＭＣ３８同系腫瘍モデルの腫瘍体積測定値を示す。各用量は、ｘ軸上の垂直の黒矢印で示される。平均腫瘍体積プラス又はマイナス標準誤差平均（ＳＥＭ）がｙ軸に示される。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、アイソタイプ対照群（Ｇ１ＡＡ／４４２０）及びＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２処置群間で研究１７日目の腫瘍サイズの比較を行った。群間の有意差は、テューキーの多重比較検定：＊＊＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１を使用して決定された。

【図5】ＮＨＰ非ＧＬＰ及びＧＬＰ ＰＫデータ（投与後０～７日）から構築されたＦＳ１１８への全身曝露を説明する２コンパートメント集団ＰＫモデルの構造を示す。Ｖ_Ｐ（Ｖ１とも呼ばれる）＝中心体積；Ｖ_Ｔ（Ｖ２とも呼ばれる）＝末梢体積；ＣＬ_ｄ（ＣＬ２とも呼ばれる）＝交換係数；ＣＬ_Ｐ（ＣＬ１とも呼ばれる）＝ＦＳ１１８クリアランス；Ｃ_Ｐ＝血漿コンパートメント；Ｃ_Ｔ＝組織コンパートメント。

【図6】実施例２の第Ｉ相試験のヒト初回（ＦＩＨ）研究設計を示す。

【図7】２０２０年３月２５日時点で完了したＦＳ１１８処置の週数を耐性群及び用量に関連して示す（ダイヤ＝１ｍｇ／ｋｇ、丸＝３ｍｇ／ｋｇ、三角＝１０ｍｇ／ｋｇ、四角＝２０ｍｇ／ｋｇ）。本明細書で定義される抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次耐性を有する患者と比較して、本明細書で定義される抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性を有する患者間で有意差が観察され、ここで、獲得耐性を有する患者は、投与されたＦＳ１１８の用量に関係なく、一次耐性を有する患者よりも平均して長い間にわたってＦＳ１１８処置を継続する。

【図8】ＦＳ１１８処置を受けている間に２０１９年１１月２７日の時点で評価可能な腫瘍スキャンを受けた、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次又は獲得耐性を有すると分類された３９人の患者のスイマープロットを示す（ＦＳ１１８用量順）。一次耐性を有する患者は、灰色のバーで示され、獲得耐性を有する患者は、濃い灰色のバーで示される。完了したＦＳ１１８処置の週数が示される（ＰＤ＝進行性疾患、ＳＤ＝安定性疾患）。１８週間を超えるＦＳ１１８処置が完了した全ての患者（そのうちの１人は、獲得耐性表現型の腫瘍を有していた）は、安定性疾患の測定値を少なくとも１回有していた。

【図9】図７で提示されたものと同じデータに基づいて、２０２０年３月２５日時点で完了したＦＳ１１８処置の週数を示しているが、耐性群及び腫瘍タイプに関連している。ＦＳ１１８処置に対する応答の可能性は、獲得耐性表現型を有する腫瘍に関連していたが、臨床的適応（腫瘍タイプ）とは無関係であるように見える。

【図10】２０１９年１２月１２日時点でＦＳ１１８処置が完了した週数に対する、ＦＳ１１８処置前のＰＤ－Ｌ１の陽性染色を示す腫瘍生検サンプル中の腫瘍細胞の割合（ＰＤ－Ｌ１パーセント腫瘍陽性スコア［ＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳ］）を示す。Ａ：高いベースラインＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性を有する患者のＦＳ１１８処置の長さと正の相関を示した。獲得耐性群の中でＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳが最も高かった３人の患者は、ＦＳ１１８で３０週間以上処置され、ＦＳ１１８による疾患制御が証明された。Ｂ：抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に一次耐性を有する患者では、ＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳとＦＳ１１８処置の長さとの間に相関関係は観察されなかった。

【図11】抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性を有する患者が、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する一次耐性を有する患者より、ＦＳ１１８処置でより高い免疫細胞応答を示したことを示す。経時的な免疫細胞数の変化率（白丸：ＣＤ３^＋Ｔ細胞、黒四角：ＣＤ４^＋Ｔ細胞、黒三角：ＣＤ８^＋Ｔ細胞、黒ダイヤ：ＮＫ細胞）は、ＦＳ１１８処置開始前のベースラインからの変化率として表される。Ａ：患者１００４－０００３は、一次耐性を有する代表的な患者プロファイルである。Ｂ：患者１００２－００１４は、獲得耐性を有する代表的な患者プロファイルである。示されているデータは、２０１９年１１月２６日に取得された。

【発明を実施するための形態】

【0089】

詳細な説明
抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体
本発明における使用に適した抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体（本明細書に記載のＦＳ１１８など）は、国際公開第２０１７／２２０５６９ Ａ１号に記載されており、その内容は、その全体が全ての目的のために本明細書に組み込まれる。ＦＳ１１８抗体は、配列番号１に記載の重鎖配列及び配列番号２に記載の軽鎖配列を含む。

【0090】

癌
ＰＤ－１、そのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３は、免疫チェックポイントタンパク質の例である。これらのタンパク質に結合し、阻害する抗体などの分子は、集合的に免疫チェックポイント阻害剤と呼ばれる。単剤療法としての抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体による癌患者の処置は、Ｔ細胞上のＬＡＧ－３発現のアップレギュレーションをもたらし、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１療法に対する耐性をもたらすことが示されている（図１）。抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体及び抗ＬＡＧ－３抗体の併用処置では、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１療法のみと比較して発現の増加は減少したものの、Ｔ細胞におけるＬＡＧ－３発現の増加を防ぐことはできなかった（図１）。対照的に、ＦＳ１１８（及びマウス代理抗体ＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１）による処置は、Ｔ細胞ＬＡＧ－３発現の低下及びｓＬＡＧ－３レベルの上昇をもたらすことが示されている（図１）。したがって、ＦＳ１１８は、抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１及び抗ＬＡＧ－３抗体と異なる作用機序を有し、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法剤の投与中又は投与後に進行した局所進行性、切除不能若しくは転移性の固形腫瘍又は血液悪性腫瘍の患者でＦＳ１１８処置を行った後、数人の患者で薬力学的応答及び安定性疾患を示した第Ｉ相試験の初期の結果が示すように、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１阻害剤に対するＬＡＧ－３を介した耐性を予防及び／又は逆転させることができる。

【0091】

理論に拘束されるものではないが、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法に対して抵抗性であるか、又はその間若しくはその後に再発した腫瘍及び抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法に応答する腫瘍に対するＦＳ１１８処置の予想される効果が図２に示される。

【0092】

１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置に抵抗性である癌は、好ましくは、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８などのＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体以外）による処置に耐性がある癌を指す。１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置中又は処置後に再発した癌は、好ましくは、前記免疫チェックポイント阻害剤による処置中又は処置後、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８などのＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体以外）に対する獲得耐性を有する癌を指す。

【0093】

具体的には、図２は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法に抵抗性であるか、又はその間若しくは後に再発し、Ｔ細胞の枯渇又は免疫抑制を示す腫瘍において、ＦＳ１１８処置が、Ｔ細胞表面に発現するＬＡＧ－３への結合の結果としてＴ細胞の枯渇／免疫抑制を逆転させ（そうでなければ免疫細胞に対する阻害性シグナルとして作用する）、ＬＡＧ－３のＴ細胞表面の過剰発現を減少させ、可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）の放出を促進することにより、免疫介在性抗癌効果を増強することが予想されていることを示す。したがって、ＦＳ１１８は、「標準治療」免疫チェックポイント阻害剤療法に対する一次耐性又は適応耐性を有する患者を救済する能力を有するため、免疫チェックポイント遮断の臨床的利益を大幅に拡大する可能性がある。

【0094】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法に応答する腫瘍では、ＴＩＬは、その表面にＬＡＧ－３を発現し、腫瘍は、高ＰＤ－Ｌ１であると予想される。ＦＳ１１８は、前記ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１に結合することにより、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法に加えて、これらの患者のＴ細胞活性化を増強し、抗ＰＤ－Ｌ１処置に応じたＬＡＧ－３の過剰発現を防止することが予想される。したがって、ＰＤ－Ｌ１遮断に対する耐性の発現は、抑制されることが予想される。本明細書に開示されるＦＳ１１８の投与量は、薬力学的応答及び抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法剤の投与中又は投与後に進行した腫瘍又は血液悪性腫瘍を有する数人の患者に安定性疾患をもたらすことが示されており、したがってＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１単剤療法に応答する癌を効果的に処置することにも適していると予想される。

【0095】

免疫チェックポイント阻害剤処置に応答を示す癌は、前記効果を媒介するＴＩＬを含まなければならない。したがって、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤以外の免疫チェックポイント阻害剤による処置中又は処置後に抵抗性であるか又は再発した癌は、不活性なＴＩＬ（すなわち枯渇又は免疫抑制）を含むと予想されるが、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤以外の免疫チェックポイント阻害剤による処置に応答する癌は、活性化ＴＩＬを含むと予想される。結果として、上記で抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤による処置に対して抵抗性であるか、又は再発したか、又は応答性である癌について説明したように、ＦＳ１１８は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤以外の免疫チェックポイント阻害剤による処置中若しくは処置後に抵抗性であるか若しくは再発したか、又は抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤以外の免疫チェックポイント阻害剤による処置に応答する、ＰＤ－Ｌ１を発現する癌に対して同様の効果を有することが予想される。

【0096】

したがって、好ましい実施形態において、本発明に従って処置される癌は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８などのＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体以外）による前処置を受けている。

【0097】

したがって、本発明に従って処置される癌は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８などのＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体以外）による処置に対して抵抗性であり得るか、又は抵抗性であると決定されていることがあり得る。代わりに、本発明に従って処置される癌は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８などのＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体以外）による処置中又は処置後に再発したものであり得る。さらなる代替として、本発明に従って処置される癌は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置に応答するものであるか、又は応答すると決定されたものであり得る。１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置中又は処置後の癌の再発は、好ましくは、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置中又は処置後の癌の進行を指す。癌の進行の検出は、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0098】

免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＬＡＧ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６、ＮＫｐ３０、ＮＫＧ２Ａ、ガレクチン９、ＴＩＭ－３、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＣＤ４７又はＳｉＲＰアルファ阻害剤であり得る。免疫チェックポイント阻害剤は、対象の免疫チェックポイント分子を阻害することができる抗体であり得る。好ましい実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である。免疫チェックポイント分子を阻害することができる抗体は、当技術分野で公知であり、ＣＴＬＡ－４の阻害についてイピリムマブ；ＰＤ－１についてニボルマブ、ペンブロリズマブ及びセミプリマブ；並びにＰＤ－Ｌ１についてアテゾリズマブ、アベルマブ及びデュルバルマブを含む。免疫チェックポイント分子、それらのリガンド及び阻害剤は、Marin-Acevedo et al. Journal of Hematology & Oncology (2018)でレビューされている。

【0099】

本発明に従って処置される癌は、ＰＤ－Ｌ１を発現する。好ましくは、癌は、ＰＤ－Ｌ１を発現すると決定されている。さらに、本発明に従って処置される癌は、ＴＩＬなどのＬＡＧ－３発現免疫細胞を含む。好ましくは、癌は、ＬＡＧ－３発現免疫細胞を含むと決定されている。好ましい実施形態において、癌は、癌細胞によるＰＤ－Ｌ１の発現及び免疫細胞の表面でのＬＡＧ－３の発現により、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＦＳ１１８などのＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体以外）による処置に耐性がある癌であり得る。特定の実施形態において、癌細胞の表面でのＰＤ－Ｌ１の発現及び腫瘍微小環境内の免疫細胞の表面でのＬＡＧ－３の発現は、それぞれ正常組織細胞及び活性化免疫細胞と比較して高い可能性がある。

【0100】

本発明者らは、驚くべきことに、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する腫瘍、特に以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有し、且つＦＳ１１８による処置前に少なくとも１５％のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む腫瘍は、ＦＳ１１８による処置に応答して、持続的な応答、特に持続的な安定性疾患を示す可能性が高くなることを示した。この効果は、腫瘍の種類及び投与されたＦＳ１１８の投与量とは無関係に観察された。

【0101】

したがって、本発明に従って処置される癌は、好ましくは、本明細書で定義されるように、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有する。さらにより好ましくは、本発明に従って処置される癌は、本明細書で定義されるように、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性表現型を有し、癌の腫瘍は、ＦＳ１１８による処置前に少なくとも１５％のＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍細胞を含む。

【0102】

本発明の抗体分子を使用して処置される癌は、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＨＮ）など）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫など、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、線維肉腫、腎細胞癌腫、黒色腫、膵臓癌、乳癌、多形神経膠芽腫、肺癌（非小細胞肺癌又は小細胞肺癌など）、胃癌（stomach cancer）（胃癌（gastric cancer））、膀胱癌、子宮頸癌、子宮癌、外陰癌、精巣胚細胞癌、陰茎癌、白血病（慢性リンパ性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病又は慢性リンパ芽球性白血病など）、多発性骨髄腫、扁平上皮癌、精巣癌、食道癌（食道胃接合部の腺癌など）、カポジ肉腫及び中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、肝細胞癌腫、上咽頭癌、メルケル細胞癌腫、中皮腫、甲状腺癌（未分化甲状腺癌など）並びに肉腫（軟部組織肉腫など）からなる群から選択され得る。これらの癌の腫瘍は、細胞表面にＰＤ－Ｌ１を発現すること、及び／又はＰＤ－Ｌ１及び／又はＬＡＧ－３を発現するＴＩＬなどの免疫細胞を含有することが知られているか又はそれが予想される。

【0103】

抗ＬＡＧ－３抗体を使用した腎細胞癌、肺癌（非小細胞肺癌又は小細胞肺癌など）、鼻咽頭癌、結腸直腸癌、黒色腫、胃癌（stomach cancer）（胃癌（gastric cancer））、食道癌（食道胃接合部の腺癌など）、卵巣癌、子宮頸癌、膀胱癌、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）、白血病（慢性リンパ性白血病など、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫など）及び多発性骨髄腫の処置が臨床試験で調査され、有望な結果が示されている。したがって、本発明の抗体分子を使用して処置される癌は、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）、腎細胞癌、肺癌（非小細胞肺癌又は小細胞肺癌など）、鼻咽頭癌、結腸直腸癌、黒色腫、胃癌（stomach cancer）（胃癌（gastric cancer））、食道癌（食道胃接合部の腺癌など）、卵巣癌、子宮頸癌、膀胱癌、白血病（慢性リンパ性白血病など、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫など）又は多発性骨髄腫であり得る。

【0104】

ＰＤ－Ｌ１抗体を使用した黒色腫、結腸直腸癌、乳癌、膀胱癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃癌、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）、中皮腫、肺癌（非小細胞肺癌又は小細胞肺癌など）、卵巣癌、メルケル細胞癌、膵臓癌、黒色腫及び肝細胞癌の処置も臨床試験で調査され、有望な結果が示されている。したがって、本発明の抗体分子を使用して処置される癌は、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）、黒色腫、結腸直腸癌、乳癌、膀胱癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃癌、中皮腫、肺癌（非小細胞肺癌など）、卵巣癌、メルケル細胞癌、膵臓癌、黒色腫又は肝細胞癌であり得る。

【0105】

本発明の抗体分子を使用する処置に好ましい癌は、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）、肺癌（非小細胞肺癌など）、膀胱癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胃癌、膵臓癌及び肝細胞癌である。これらの癌の腫瘍は、ＬＡＧ－３を発現する免疫細胞を含み、細胞表面にＰＤ－Ｌ１を発現するか、又はＰＤ－Ｌ１を発現する免疫細胞を含むことが知られている。

【0106】

好ましい実施形態において、癌は、頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、胃癌、食道胃接合部（ＧＥＪ）の腺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（肺腺癌又は肺扁平上皮組織学的サブタイプなど）、黒色腫（皮膚黒色腫など）、前立腺癌、膀胱癌（膀胱尿路上皮癌など）、乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、結腸直腸癌（ＣＲＣ；例えば、腺癌又は結腸又は直腸）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）及びメルケル細胞癌からなる群から選択される。

【0107】

代替の好ましい実施形態において、癌は、甲状腺癌（好ましくは未分化甲状腺癌）、肉腫（好ましくは軟部組織肉腫）、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、肉腫（例えば、脱分化した脂肪肉腫、未分化の多形性肉腫及び平滑筋肉腫を含む、軟部組織肉腫）、卵巣癌（例えば、卵巣の高／低悪性度の漿液性又は明細胞組織学）、基底細胞癌、ＭＳＩ－Ｈ固形腫瘍、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、子宮頸癌、食道癌（例えば、食道胃接合部の腺癌（ＧＥＪ）又は食道の扁平上皮癌）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膵臓癌（膵臓腺癌など）、髄膜腫、甲状腺癌、子宮内膜癌（ＭＳＩ－Ｈ子宮内膜癌など）、胸腺癌、妊娠性絨毛性新生物、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）又は末梢Ｔ細胞リンパ腫など）、腹膜癌腫症、マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）結腸直腸癌及び消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）（切除不能なＧＩＳＴなど）からなる群から選択される希少な癌である。

【0108】

好ましい一実施形態において、癌は、甲状腺癌、好ましくは未分化甲状腺癌である。代替的な好ましい実施形態において、癌は、肉腫、好ましくは軟部組織肉腫である。近年、肉腫腫瘍組織内の三次リンパ構造（ＴＬＳ）の存在は、免疫チェックポイント遮断療法に対する応答を予測し得ることが示された（Petitprez et al., 2020）。

【0109】

別の実施形態において、処置される癌は、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）、胃癌、食道癌、ＮＳＣＬＣ、中皮腫、子宮頸部癌、甲状腺癌（未分化甲状腺癌など）及び肉腫（軟部組織肉腫など）から選択され得る。

【0110】

１つの特定の実施形態において、処置される癌は、頭頸部癌、好ましくは頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、より好ましくは口腔、中咽頭、喉頭又は下咽頭の扁平上皮癌である。癌は、再発又は転移している可能性がある。ＳＣＣＨＮ患者の腫瘍微小環境におけるＴ細胞でのＬＡＧ－３及びＰＤ－１の高レベルの共発現は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１剤に対する応答性の欠如と相関しており（Hanna et al., 2018）、リンパ節の状態が陰性のＳＣＣＨＮ患者のＴＩＬでのＬＡＧ－３発現は、生存率低下の予後マーカーであることが示されている（Deng et al., 2016）。ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１の両方を同時に標的とするＦＳ１１８などの二重特異性抗体による処置は、本明細書に記載されているように免疫応答を再活性化し得る。頭頸部癌（ＳＣＣＨＮなど）は、単独で又は別の療法剤（例えば、化学療法剤）と組み合わせて投与される以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法（ＦＳ１１８以外）で既に処置され、進行しているか又はそうでない可能性がある。患者は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）について陽性又は陰性であり得る。一実施形態において、全ての患者は、ＨＰＶについて陽性である。代替的な実施形態において、全ての患者は、ＨＰＶについて陰性である。

【0111】

別の実施形態において、処置される癌は、胃癌であり、これは、高レベルのＬＡＧ－３を発現することが知られている（Morgado et al., 2018）。胃癌は、単独で又は別の療法剤（例えば、化学療法剤）と組み合わせて投与される以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法（ＦＳ１１８以外）で既に処置され、進行しているか又はしていない可能性がある。さらなる実施形態において、処置される癌は、ＮＳＣＬＣ、好ましくはステージＩＶの扁平上皮及び／又はステージＩＩＩのＮＳＣＬＣである。ＮＳＣＬＣは、単独で又は別の療法剤（例えば、化学療法剤）と組み合わせて投与される以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法（ＦＳ１１８以外）で既に処置され、進行している可能性がある。さらなる実施形態において、処置される癌は、ＳＣＬＣ、好ましくは進行期のＳＣＬＣである。ＳＣＬＣは、単独で又は別の療法剤（例えば、化学療法剤）と組み合わせて投与される以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法（ＦＳ１１８以外）で既に処置され、進行している可能性がある。さらに別の実施形態において、処置される癌は、卵巣癌である。卵巣癌は、プラチナ不応性であり得、及び／又は以前に免疫療法（単独で又は別の療法剤（例えば、化学療法剤）と組み合わせて投与される抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法（ＦＳ１１８以外））で処置されているか又はされていない可能性がある。

【0112】

用途が乳癌などの特定の種類の癌に言及している場合、これは、関連する組織、この場合には乳房組織の悪性形質転換を指す。異なる組織、例えば卵巣組織の悪性形質転換に起因する癌は、乳房などの身体の別の位置に転移性病変をもたらし得るが、これは、本明細書で言及される乳癌ではなく、卵巣癌である。

【0113】

本発明に従って処置される癌は、原発性癌であり得る。代わりに、癌は、転移性癌であり得る。

【0114】

投与経路
ＦＳ１１８は、好ましくは、静脈内注射によって患者に投与される。例えば、ＦＳ１１８は、静脈内ボーラス注射又は静脈内注入（例えば、連続注入ポンプを使用）によって患者に投与され得る。静脈内注入は、最大２４００μｇの用量で３０分超、２４００μｇを超える用量で６０分超、連続注入ポンプを使用して行われ得る。これらの投与タイプは、第Ｉ相試験（実施例２）でＦＳ１１８に問題なく採用された。

【0115】

製剤
治療用途の場合、ＦＳ１１８抗体は、薬学的に許容され、静脈内投与などの選択された投与経路によってＦＳ１１８抗体を送達するのに適切な担体とともに製剤化される。適切な薬学的に許容される担体は、希釈剤及び賦形剤などの抗体分子の静脈内投与に従来から使用されているものである。治療的使用のための薬学的に許容される担体は、製薬分野で周知であり、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985)に記載されている。

【0116】

組み合わせ処置
本明細書に開示される癌を処置する方法は、単独で又は他の処置と組み合わせて患者へのＦＳ１１８抗体の投与を含み得る。例えば、ＦＳ１１８抗体は、処置される癌に応じて、同時に若しくは連続して又は別の処置剤と組み合わせた調製物として投与され得る。例えば、ＦＳ１１８抗体は、処置される癌のための既知の治療剤と組み合わせて投与され得る。例えば、ＦＳ１１８抗体は、化学療法、抗腫瘍ワクチン接種（癌ワクチン接種とも呼ばれる）、放射線療法、免疫療法、腫瘍溶解性ウイルス、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法又はホルモン療法などの第２の抗癌療法と組み合わせて患者に投与され得る。

【0117】

ＦＳ１１８抗体は、化学療法、抗腫瘍ワクチン接種又は放射線療法などの抗癌療法においてアジュバントとして作用することが予想される。理論に拘束されることを望むものではないが、化学療法、抗腫瘍ワクチン接種又は放射線療法と組み合わせた患者へのＦＳ１１８抗体の投与は、腫瘍関連抗原に対して、化学療法、抗腫瘍ワクチン接種又は放射線療法のみで達成されるよりも大きい免疫応答を誘発すると考えられている。

【0118】

したがって、患者の癌を処置する方法は、治療有効量のＦＳ１１８抗体を化学療法剤、抗腫瘍ワクチン、放射性核種、免疫療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はホルモン療法剤と組み合わせて患者に投与することを含み得る。化学療法剤、抗腫瘍ワクチン、放射性核種、免疫療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はホルモン療法剤は、好ましくは、対象の癌のための化学療法剤、抗腫瘍ワクチン、放射性核種、免疫療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はホルモン療法剤、すなわち対象の癌の処置に効果的であることが示されている化学療法剤、抗腫瘍ワクチン、放射性核種、免疫療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はホルモン療法剤である。適切であり、対象の癌に対して効果的であることが示されている化学療法剤、抗腫瘍ワクチン、放射性核種、免疫療法剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はホルモン療法剤の選択は、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0119】

例えば、方法が治療有効量のＦＳ１１８抗体を化学療法剤と組み合わせて患者に投与することを含む場合、化学療法剤は、タキサン、細胞傷害性抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｂ＿ＲＡＦ酵素阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、アルキル化剤、プラチナ類似体、ヌクレオシド類似体、サリドマイド誘導体、抗悪性腫瘍化学療法剤などからなる群から選択され得る。タキサンは、ドセタキセル、パクリタキセル及びｎａｂ－パクリタキセルを含み；細胞傷害性抗生物質は、アクチノマイシン、ブレオマイシン、アントラサイクリン、ドキソルビシン及びバルルビシンを含み；チロシンキナーゼ阻害剤は、エルロチニブ、ゲフィチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ＰＬＸ３３９７、イマチニブ、コビミチニブ、トラメチニブ、レンバチニブ、カボザンチニブ、アンロチニブ、ソラフェニブ、セディラニブ、レゴラフリニブ、シトラバチニブ、パゾピニブ及びデファクチニブを含み；ＰＡＲＰ阻害剤は、ニラパリブ、オラパリブ、ルカパリブ及びベリパリブを含み；Ｂ－Ｒａｆ酵素阻害剤は、ベムラフェニブ及びダブラフェニブを含み；アルキル化剤は、ダカルバジン、シクロホスファミド、テモゾロミドを含み；プラチナ類似体は、カルボプラチン、シスプラチン及びオキサリプラチンを含み；ヌクレオシド類似体は、ゲムシタビン及びアザシチジンを含み；抗悪性腫瘍剤は、フルダラビンを含む。ＨＤＡＣ阻害剤は、エンチノスタット、パノビノスタット及びバリノスタットを含み；ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス及びシロリムスを含む。本発明における使用に適した他の化学療法剤には、メトトレキサート、ペメトレキセド、カペシタビン、エリブリン、イリノテカン、フルオロウラシル及びビンブラスチンが含まれる。

【0120】

癌の処置のためのワクチン接種戦略は、いずれもクリニックで実施され、科学文献で詳細に議論されている（Rosenberg S. 2000 Development of Cancer Vaccinesなど）。これは、主に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を伴う場合又は伴わない場合の両方において、ワクチン接種方法としてこれらの細胞を使用することにより、自己又は同種異系の癌細胞によって発現される様々な細胞マーカーに応答するように免疫系を刺激する戦略を含む。ＧＭ－ＣＳＦは、抗原提示において強い反応を引き起こし、前記戦略で使用される場合に特によく機能する。

【0121】

本発明のさらなる態様及び実施形態は、以下の実験的例示を含む本開示を与えられた当業者に明らかであろう。

【0122】

本明細書で言及されている全ての文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0123】

本明細書で使用される場合、「及び／又は」は、２つの特定の特徴又は構成要素のそれぞれの特定の開示として、他方の有無に関わらず解釈されるべきである。例えば、「Ａ及び／又はＢ」は、まさにそれぞれが本明細書に個別に記載されているかのように、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、並びに（ｉｉｉ）Ａ及びＢのそれぞれの特定の開示として解釈されるべきである。

【0124】

文脈上別段の指示がない限り、上記の特徴の説明及び定義は、本発明のいずれの特定の態様又は実施形態にも限定されず、記載される全ての態様及び実施形態に等しく適用される。

【0125】

本発明の他の態様及び実施形態は、文脈上別段の指示がない限り、「含む」という用語を「からなる」又は「から本質的になる」という用語に置き換えて上記の態様及び実施形態を提供する。

【0126】

ここで、本発明の特定の態様及び実施形態を、上記の図を参照して例として説明する。

【実施例】

【0127】

実施例
実施例１：ＦＳ１１８のヒト初回（ＦＩＨ）用量正当化及び用量漸増戦略
ＦＳ１１８は、２つの免疫チェックポイントタンパク質であるＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１を同時に標的とする二重特異性抗体分子である。ＦＳ１１８は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体などの単一特異性免疫チェックポイント阻害剤と多くの重要な点で異なることが示されている。これらの違いにより、ヒト患者におけるＦＳ１１８の第Ｉ相試験に適切な投与量を決定するための詳細な分析が必要になった。具体的には、ＦＳ１１８をインビトロ及びインビボ試験で試験して、以前のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法中又はその後に進行した進行性悪性腫瘍を有する患者におけるＦＳ１１８の安全性、忍容性、薬物動態及び活性を決定するために設計された第Ｉ相ヒト試験の最適な開始用量及び用量漸増戦略を決定した（以下の実施例２を参照されたい）。

【0128】

１．１ ＦＳ１１８及びｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１：非臨床試験の概要
非臨床試験には、臨床候補ＦＳ１１８によるＣ５７／ＢＬ６野生型ｗｔマウス、ＬＡＧ－３ノックアウト（ＫＯ）マウス（実施例１．３．１．１を参照されたい）及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ；カニクイザル）でのＰＫ試験が含まれた。ＮＨＰ試験には、単回投与ＰＫ試験（実施例１．３．２．１を参照されたい）、抗薬物抗体（ＡＤＡ）及び可溶性ＰＤ－Ｌ１（実施例１．３．２．２を参照されたい）の定量化を含む用量範囲所見毒性試験並びに同様の定量化パラメーターを使用したＧＬＰ（優良試験所基準）毒性試験（実施例１．３．２．３を参照されたい）が含まれた。

【0129】

マウスでの研究に関して、ＦＳ１１８は、それぞれｈＬＡＧ－３及びｈＰＤ－Ｌ１と比較して、ｍＬＡＧ－３及びｍＰＤ－Ｌ１に結合する能力が低下している。その結果、インビボＰＫ試験は、Ｃ５７／ＢＬ６野生型マウス及びＣ５７／ＢＬ６バックグラウンドのＬＡＧ－３ノックアウトマウスで、代理マウスｍＡｂ^２二重特異性抗体（ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１［ＦＳ１８－７－１０８－２９／Ｓ１、ＬＡＬＡ変異あり］）を使用して実施された（実施例１．３．１．２を参照されたい）。このマウス代理ｍＡｂ^２は、ＦＳ１１８と比較してより高い親和性でそれぞれのマウス標的タンパク質に結合する。薬理学研究の一環として、マウス代理ｍＡｂ^２をマウスＭＣ３８同系腫瘍モデルでも使用し、投与期間中の選択した時間に曝露データを収集して、分子のＰＫ及び有効性を評価した（実施例１．３．１．３を参照されたい）。

【0130】

これらの研究の結果は、ＮＨＰ ＰＫモデルの開発（実施例１．５．１を参照されたい）及び最高の非重度毒性用量（ＨＮＳＴＤ；実施例１．５．２を参照されたい）の決定に反映され、それがＦＩＨ開始用量に対する正当化につながった（実施例１．５．３を参照されたい）。

【0131】

１．２ 方法
１．２．１ ＦＳ１１８の薬物動態（ＰＫ）を理解するための、マウス及びＮＨＰにおける血清／血漿ＦＳ１１８及び血清ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１の測定
マウスＰＫ研究では、血清ＦＳ１１８及びｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１は、製造元の指示に従ってMesoscale Discovery（MSD）ヒトＩｇＧキット（MSD Kit K150JLD-2）を使用して検出された。そのため、ＰＫアッセイでは、「総」ＦＳ１１８を測定すること（すなわちｓＬＡＧ－３又はｓＰＤ－Ｌ１への結合に関わらず）が予想されていた。

【0132】

最初の単回投与ＮＨＰ研究（実施例１．３．２．１を参照されたい）では、血清ＦＳ１１８を検出するために、カスタマイズされた電気化学発光（ＥＣＬ）Mesoscale Discovery（MSD）イムノアッセイが開発された。簡単に説明すると、ＦＳ１１８（Abcam #ab124055）を捕捉するために、MSD ９６ウェルプレート（MSD #L15XB）を抗ヒトＦｃ ｍＡｂでコーティングし、MSD遮断剤Ａで室温において２時間遮断した。血清サンプルをMSD希釈液で１：１０に希釈し、ウェルに加え、振とうしながら室温で２時間インキュベートした後、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋０．０５％Tweenで３回洗浄した。結合したＦＳ１１８を検出するために、プレートをスルホタグ付き抗ヒトＩｇＧとともに室温で２時間インキュベートし、前のステップと同様に洗浄し、２Ｘ MSD読み取り緩衝液を使用して検出した。読み取り値は、５０μｇ／ｍＬから始まる１２のＦＳ１１８濃度の標準曲線を使用して較正された。

【0133】

その後のＮＨＰでの反復投与研究（実施例１．３．２．２及び１．３．２．３を参照されたい）では、血漿ＦＳ１１８の検出にカスタマイズされたＬＡＧ－３捕捉／ＰＤ－Ｌ１検出フォーマットを採用した。予備的なＤＲＦ毒物学研究は、ECL MSDイムノアッセイを使用した適格ＰＫアッセイで分析された。標準物質及びサンプルは、捕捉試薬として組換えヒトＬＡＧ－３ Ｆｃキメラ（R&D #2319-L3）でプレコートされたMSDマイクロタイタープレートの適切なウェルに追加された。洗浄ステップに続いて、ビオチン化組換えヒトＰＤ－Ｌ１ Ｆｃ融合タンパク質（BPS, #71105）を各ウェルに添加し、インキュベートした。さらなる洗浄ステップ後、スルホタグ付きストレプトアビジン検出試薬（MSD, #R32AD）を添加し、インキュベートした。別の洗浄ステップに続いて、MSD読み取り溶液を添加し、ＦＳ１１８の存在を検出するためにＥＣＬを測定した。優良試験所基準（ＧＬＰ）毒性試験では、血漿ＦＳ１１８レベルを、ビオチン化ＬＡＧ－３捕捉及びAlexa Fluor（登録商標）６４７標識ＰＤ－Ｌ１検出を備えた検証済みのGyrosイムノアッセイプラットフォーム（Gyrolab）を使用して測定した。簡単に説明すると、サンプルをRexxip H緩衝液で１：１０に希釈し、プレートに添加し、次いでGyrolab xPワークステーションにロードした。ＦＳ１１８は、蛍光発光により検出された。標準曲線は、Gyrolab Evaluatorソフトウェアの重み係数（１／Ｙ^２）として応答を使用して、４パラメーターのロジスティック曲線を使用して回帰された。検証されたアッセイのＬＬＯＱは、３９．１ｎｇ／ｍＬであった。

【0134】

１．２．２ ＮＨＰにおける血漿抗ＦＳ１１８抗体（ＡＤＡ）の測定
ＦＳ１１８に応答する抗体の存在は、標準的な電気化学的発光ブリッジングフォーマットを使用して、ＮＨＰ用量範囲所見（ＤＲＦ）及び４週間の優良試験所基準（４週間ＧＬＰ）毒性試験（それぞれ実施例１．３．２．２及び１．３．２．３を参照されたい）で測定された。薬物干渉を制限するために、ビオチン化ＦＳ１１８及びスルホタグ付きＦＳ１１８を酸解離サンプルとインキュベートし、標識ＡＤＡ複合体をストレプトアビジンプレートに固定化した後、洗浄及びその後の検出を行った。アッセイ感度は、ポリクローナルウサギ陽性対照抗ＦＳ１１８抗体で７５ｎｇ／ｍＬであり、９６．５μｇ／ｍＬ ＦＳ１１８の存在下で１５０ｎｇ／ｍＬの陽性対照を検出できた。

【0135】

１．２．３ 血漿総可溶性ＰＤ－Ｌ１（ｓＰＤ－Ｌ１）の測定
ＦＳ１１８投与後の総ｓＰＤ－Ｌ１の変化は、製造元のプロトコルに従い、Quantikine（登録商標）ヒト／カニクイザルＢ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１イムノアッセイ（R&D Systems #DB7H10）を使用して、ＮＨＰ ＤＲＦ及び４週間ＧＬＰ毒性試験（それぞれ実施例１．３．２．２及び１．３．２．３を参照されたい）で定量化された。このアッセイでは、ＦＳ１１８は、Ｆｃ標識ＰＤ－Ｌ１の検出に干渉したが、内因性ＰＤ－Ｌ１の検出に干渉するように見えなかったため、このアッセイは、総ＰＤ－Ｌ１（すなわち遊離ＰＤ－Ｌ１及びＦＳ１１８－ＰＤ－Ｌ１複合体）を測定すると想定された。このアッセイで検証されたＬＬＯＱは、２５ｐｇ／ｍＬであった。

【0136】

１．３ 動物における薬物動態及び薬力学
１．３．１ マウス
１．３．１．１ 野生型及びＬＡＧ－３ノックアウトマウスにおけるＦＳ１１８ ＰＫ
ＦＳ１１８は、ｍＬＡＧ－３に結合するが（ｈＬＡＧ－３と比較して親和性が低い）、ｍＰＤ－Ｌ１に結合せず、いずれの標的に対しても機能的活性を有しない。ＦＳ１１８は、Ｃ５７／ＢＬ６野生型マウスで正常なＩｇＧ動態を有し、アイソタイプ対照抗体と同等であった（表１）。ＦＳ１１８は、ＬＡＧ－３ ＫＯマウスにも投与され、これらの動物において、ＦＳ１１８は、正常なＩｇＧ動態を示した（表１）。

【0137】

【表1】

【0138】

１．３．１．２ 野生型及びＬＡＧ－３ノックアウトマウスにおけるｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＰＫ
ＦＳ１１８とは対照的に、マウス代理ｍＡｂ^２（ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１）は、野生型マウスの血清からより迅速に除去された（表２）。野生型マウスに単回投与した後、マウス代理ｍＡｂ^２のＰＫ特性を抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ（同じＩｇＧ１フレームワーク、同じＦａｂ ＰＤ－Ｌ１結合部分）と比較した。ＰＤ－Ｌ１結合エピトープが同じであるにも関わらず、ｍＡｂ^２構築物のクリアランス速度は、ｍＡｂのクリアランス速度よりも高かった（図３Ｂ）。初めに、これは、抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂが同じクリアランス速度を示さなかったため、ｍＬＡＧ－３標的結合がマウス代理ｍＡｂ^２のクリアランス速度に関与している可能性があることを示唆した（図３Ｂ）。しかし、ＬＡＧ－３ ＫＯマウスを用いたその後の研究では、マウス代理ｍＡｂ^２は、以前に観察されたクリアランス速度を引き続き表し（表２）、最初に、このプロセスがｍＡｂ^２フォーマットと組み合わせたＰＤ－Ｌ１結合によって駆動される可能性が高いことを示唆していた。しかし、この現象は、他のｍＡｂ^２で観察されておらず、ｍＡｂ^２フォーマット自体が原因ではないことを示している。したがって、代理ｍＡｂ^２クリアランスは、抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂと比較して、ＰＤ－Ｌ１結合及びＣＨ３ドメインの許容残基の標的特異的変化の組み合わせによる可能性がある。

【0139】

抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂと比較してマウス代理ｍＡｂ^２のクリアランス速度が高いにも関わらず、両方の構築物がＭＣ３８同系腫瘍モデルで有意な抗腫瘍応答を達成したことにも留意されたく（図３Ａ）、これは、観察されたクリアランス速度が長期の薬力学的効果から切り離されているように見え、抗腫瘍効果を排除しないことを示している。

【0140】

【表2】

【0141】

１．３．１．３ ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＰＫ
１０～１１週齢で体重１７．７３～２１．２３ｇ（平均１９．４９ｇ）のメスのＣ５７／ＢＬ６マウス（The Jackson Laboratory（Street Bar Harbor, ME, USA））の動物の右肩の直下の皮下にそれぞれ１×１０^６個のＭＣ３８マウス結腸癌細胞（National Cancer Institute（Bethesda, MD, USA））を接種した。接種の８日後（研究０日目）、接種された動物の６０匹は、腫瘍サイズ（平均腫瘍体積は、約５５．６ｍｍ^３（ばらつき２．１％）であった）に基づくマッチドペア分布法を使用して１２匹の６つの群にランダム化され、処置が開始された。各群の動物は、ＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１（０．４０、０．２０、０．０６又は０．０２ｍｇ／動物の用量、約２０、１０、３及び１ｍｇ／ｋｇに相当）又は２００μＬ／動物の固定容量での陰性対照抗体Ｇ１ＡＡ／４４２０（０．２０ｍｇ／動物、約１０ｍｇ／ｋｇに相当）のいずれかによる腹腔内（ｉ．ｐ．）処置を受けた。それぞれの３用量が投与された（研究０日目、３日目及び６日目）。ＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１を製剤緩衝液で希釈し、Ｇ１ＡＡ／４４２０をダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水で希釈した。全ての腫瘍測定値は、同じ手持ちカリパス（Fowler Ultra-Cal V電カリパス）により取得した。腫瘍の寸法（長さ及び幅）は、最初の処置日（研究０日目）に全ての動物について測定され、その後、研究５３日目まで週２回（すなわち１週間に２回）測定された。腫瘍体積は、以下の式を使用して計算された：腫瘍体積（ｍｍ^３）＝長さ×幅^２×π／６。

【0142】

血清サンプルは、初回投与の１時間前及び初回投与の７１時間後、１４３時間後、１４８時間後、１５２時間後、１６８時間後、１９２時間後、２４０時間後及び２８８時間後に終末心臓出血を介して採取された。用量は、０時間、７１時間及び１４３時間で投与された。サンプルは、－８０℃で保管され、分析のためにドライアイス上で輸送された。血清代理ｍＡｂ^２濃度は、用量ごとに定量化された。Ｃ_トラフ及びＣ_ｍａｘレベル及びＡＵＣを表３に示す。２回目及び最後の投与前のトラフ濃度は、大幅に減少し、これは、ＡＤＡ応答を示している。

【0143】

【表3】

【0144】

投与期間中の曝露のこの明らかな減少にも関わらず、試験した全ての用量で顕著な腫瘍縮小が観察され、Ｇ１ＡＡ／４４２０と比較した混合モデル分析（ｐ≦０．０５）を使用して、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの用量のＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１で観察された研究の全期間にわたって腫瘍増殖速度の有意な阻害が観察された（図４）。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、アイソタイプ対照群（Ｇ１ＡＡ／４４２０）及びＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１処置群間で研究１７日目の腫瘍サイズの比較を具体的に行った。テューキーの多重比較検定を使用して、全ての用量群（１、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ）でのＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１処置後の腫瘍サイズは、アイソタイプ対照群と比較して有意に減少したことがわかった（ｐ＜０．０５）。カプランマイヤー生存分析は、ＦＳ１８ｍ－１０８－２９ＡＡ／Ｓ１ ｍＡｂ^２が３、１０又は２０ｍｇ／ｋｇで投与された場合、ＭＣ３８同系モデルのアイソタイプ対照と比較して統計的に有意な延命効果を誘導することを示した。最後の投与後に観察されたＣ_ｍａｘ及びＡＵＣ（０～３日）は、非常に変動性が高く、この研究から用量比例性に関して決定的な結論を出すことはできなかった。

【0145】

全体として、これらのデータは、マウス代理ｍＡｂ^２≧６μｇ／ｍＬ（Ｃ_ｍａｘ、最終用量、３ｍｇ／ｋｇ）への曝露（Ｃ_ｍａｘ）が抗腫瘍効果に必要であり、投与期間全体を通してこのレベルの曝露を維持する必要がないことを示唆している。野生型マウスでは、マウス代理ｍＡｂ^２の１０ｍｇ／ｋｇ単回投与後の平均Ｃ_ｍａｘは、８２．９μｇ／ｍＬであった（表２）。用量比例性を仮定すると、３ｍｇ／ｋｇの用量で２５μｇ／ｍＬに相当する。ＡＤＡ形成の影響の可能性があるため、この高いＣ_ｍａｘは、ＭＣ３８担癌マウスに３ｍｇ／ｋｇの用量で最初に投与した後に達成された可能性がある。

【0146】

１．３．２ 非ヒト霊長類
ＮＨＰにおけるＦＳ１１８の薬物動態－薬力学的挙動は、３つの別々の試験：（ｉ）単回投与（４ｍｇ／ｋｇ）ＰＫ試験、（ｉｉ）非ＧＬＰ ＤＲＦ試験（週１回、４週間で１０、５０及び２００ｍｇ／ｋｇの静脈内投与）、及び（ｉｉｉ）４週間のＧＬＰ毒性試験（６０及び２００ｍｇ／ｋｇ）での週２回の静脈内投与でのＦＳ１１８の静脈内投与で特徴付けられた。

【0147】

ＦＳ１１８のクリアランス速度は、ＮＨＰのヒトＩｇＧ様分子で予想されるよりも高く、クリアランス速度は、２００ｍｇ／ｋｇまでの用量で典型的な「標的媒介」挙動（すなわち高曝露レベルでの標的媒介クリアランスの飽和）を示さなかった。全体として、ＮＨＰ試験では、４～２００ｍｇ／ｋｇの用量範囲において、初回投与後にＣ_ｍａｘがおおよその用量比例で増加し、初回投与後、定常状態で、１回の投与間隔でＡＵＣがわずかに過剰に増加した。試験された全ての用量レベルでのＰＫプロファイルは、線形ＰＫモデルによって適切に記述され、クリアランスプロセスが週２回投与される２００ｍｇ／ｋｇまでの用量で飽和しなかったことを示している。

【0148】

１．３．２．１ ＦＳ１１８単回投与ＰＫ
この単回静脈内用量試験では、４ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８のクリアランスを抗ｈＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの単回静脈内投与と比較した。この抗ｈＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂは、ＦＳ１１８と比較して、同じヒトＩｇＧ１フレームワーク及び異なる抗ＰＤ－Ｌ１ Ｆａｂ結合部分（クローンＳ１）を有していたことに留意されたい。抗ｈＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂは、投与後最初の７日間で典型的なＩｇＧ動態を示し、その後、ＡＤＡ応答を示す曝露が急速に失われた。対照的に、ＦＳ１１８は、著しく速いクリアランスを示した。結合エピトープの類似性は、不明であるが、ＦＳ１１８及び抗ｈＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの両方がＰＤ－Ｌ１に結合する。この現象は、他のｍＡｂ^２で観察されておらず、ｍＡｂ^２フォーマット自体が原因ではないことを示している。代わりに、ＦＳ１１８のＣＨ３ドメイン及び／又はＬＡＧ－３結合の許容残基の標的化された変化が、抗ｈＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂと比較してＦＳ１１８のより高いクリアランス速度の原因であるように思われる。

【0149】

１．３．２．２ ＦＳ１１８用量範囲所見（ＤＲＦ）研究
ＤＲＦ研究（４週間にわたって１０、５０及び２００ｍｇ／ｋｇの週１回の静脈内投与）において、血漿ＦＳ１１８及び血漿ＡＤＡの測定は、それぞれ実施例１．２．１及び１．２．２に記載されているように実施された。ＦＳ１１８（ＡＵＣ）への曝露は、最後の投与後に減少した。これは、１０ｍｇ／ｋｇ用量群で特に顕著であり、免疫応答を示し、ＡＤＡの存在によって確認された。この免疫応答のため、ＤＲＦ試験では、ＦＳ１１８への曝露は、１０及び５０ｍｇ／ｋｇ用量群でも、２００ｍｇ／ｋｇ用量群の１／３動物でも投与間隔全体にわたって維持されなかった。この現象は、ＮＨＰモデルでヒトＩｇＧに対する免疫原性応答が予想されるため、ＮＨＰに投与されたヒトＩｇＧでは珍しいことではない。

【0150】

１．３．２．３ ＦＳ１１８ ４週間ＧＬＰ毒性試験
５０ｍｇ／ｋｇ／週未満の反復投与後、曝露の維持が達成される可能性は低いため、４週間のＧＬＰ毒性試験において、ＦＳ１１８は、６０及び２００ｍｇ／ｋｇで週２回静脈内投与した。４週間のＧＬＰ毒性試験で処置された全ての動物がＡＤＡ応答を示したが、ＦＳ１１８曝露への影響は、ほとんどなく、予測された臨床曝露と比較して適切な曝露マージンが維持された。

【0151】

週２回の投与を繰り返した後、ＦＳ１１８の有意な蓄積はなく、ＦＳ１１８のＰＫに対する性別の影響もなかった。

【0152】

１．３．２．４ 総可溶性ＰＤ－Ｌ１（ｓＰＤ－Ｌ１）
総ｓＰＤ－Ｌ１の血漿レベルは、実施例１．２．３に記載されるように、ＤＲＦ及び４週間のＧＬＰ毒性試験で測定された。ｓＰＤ－Ｌ１の捕捉は、ｓＰＤ－Ｌ１－ＦＳ１１８複合体のクリアランスがｓＰＤ－Ｌ１のクリアランスよりも遅い場合に標的の関与を示し、血漿中のｓＰＤ－Ｌ１－ＦＳ１１８複合体のレベルの増加につながる。膜結合ＰＤ－Ｌ１が主要な標的であるが、全身の総ｓＰＤ－Ｌ１の増加は、標的飽和の潜在的なバイオマーカーであり得る。

【0153】

１０～２００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量でＦＳ１１８を投与した後、２４時間以内に血漿総ｓＰＤ－Ｌ１の１０倍以上の増加が観察された。ＤＲＦ試験では、３つの用量群全てで、初回投与後０～９６時間で総ｓＰＤ－Ｌ１が同様に増加する軌跡が見られ、２００ｍｇ／ｋｇ投与群についてのみ、最初の投与間隔で総ｓＰＤ－Ｌ１が継続的に増加した。この研究では、ＦＳ１１８に対するＡＤＡの存在により、初回投与後７日を超える総ｓＰＤ－Ｌ１の増加のさらなる分析が損なわれた。４週間のＧＬＰ毒性試験で達成されたより高い曝露レベルでは、平均総ｓＰＤ－Ｌ１捕捉は、試験期間中に増加し続け、特に２００ｍｇ／ｋｇ用量群で動物間のばらつきが大きかった。プラトー（最大の標的捕捉を示す）は、週２回、６０又は２００ｍｇ／ｋｇのいずれかで処置した後２～４週間まで観察されなかった。ばらつきが大きいことを考えると、この研究で最大の標的捕捉が達成されたと結論付けることはできない。しかし、予想どおり、回復動物でのＦＳ１１８曝露の喪失は、ＦＳ１１８濃度が１０μｇ／ｍＬを下回った場合、ｓＰＤ－Ｌ１捕捉の喪失と明らかに関連していた。６０ｍｇ／ｋｇ用量群の一部の動物の試験２２日目のＦＳ１１８曝露の一過性の低下を別として、血漿ＦＳ１１８は、６０及び２００ｍｇ／ｋｇ用量群の両方で投与期間を通して１０μｇ／ｍＬを超えて維持され、これは、ＰＤ－Ｌ１抑制もこの期間中に維持されたことを意味する。

【0154】

モルベースで表した場合、血漿ｓＰＤ－Ｌ１－ＦＳ１１８複合体（すなわち総ｓＰＤ－Ｌ１）は、総ＦＳ１１８濃度のごく一部にすぎないことに留意されたい。例えば、週２回、２００ｍｇ／ｋｇを反復投与した後の平均ＦＳ１１８トラフ濃度は２２０μｇ／ｍＬ（１．５μＭ）である。同じ時点での平均総ｓＰＤ－Ｌ１濃度は、約５ｎｇ／ｍＬ（０．２ｎＭ）である。したがって、全身のＦＳ１１８－ＰＤ－Ｌ１複合体は、ＦＳ１１８のクリアランス速度の原因とはなり得ない。

【0155】

結論として、総ｓＰＤ－Ｌ１の急速な増加は、ＦＳ１１８の全ての用量レベルで観察され、増加率は、全ての用量レベルで同様であった。最大の標的捕捉が達成されたかに関して、決定的な結論を引き出すことはできなかった。しかし、標的の結合は、１０ｍｇ／ｋｇ以上のＦＳ１１８で飽和していた可能性がある。合計ｓＰＤ－Ｌ１値は、回復期間の終わりまでにベースラインに戻った。動物の血漿中の１０μｇ／ｍＬを超えるＦＳ１１８の閾値は、持続的な総ｓＰＤ－Ｌ１レベルの増加と関連していた。

【0156】

１．４ ＦＳ１１８及びｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１のクリアランスの調査
全体として、入手可能なＰＫデータは、野生型及びＬＡＧ－３ ＫＯマウスにおけるｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２のクリアランス速度が、主に機能的ＰＤ－Ｌ１と、ＬＡＧ－３への結合を可能にするＣＨ３ドメインの許容残基の標的特異的変化との組み合わせの結果であることを示唆していた。ＮＨＰで観察されたＦＳ１１８のクリアランス速度は、同じメカニズムによって駆動された可能性が最も高いが、ＮＨＰ及びヒト（マウスと比較して）でのより高い親和性のＬＡＧ－３結合からの寄与を排除することはできない。

【0157】

このクリアランス速度に寄与し得る追加の要因が調査され、以下に要約される。
・ＦＳ１１８は、ＦｃＲｎへの予想されるｐＨ感受性結合特性を示し、これは、ＬＡＧ－３への結合による影響を受けなかった。
・ＮＨＰ及びヒト組織におけるＦＳ１１８を用いた組織交差反応性研究では、ＦＳ１１８の観察されたクリアランスを説明できるオフターゲットの結合は、示されなかった。さらに、ＦＳ１１８は、密接に関連する標的への結合を全く示さなかった。
・ＦＳ１１８は、３７℃で最大１５日間インキュベートした場合、血清中で機能的活性を維持した。これは、異化作用が説明になる可能性が低いことを示している。
・ＦＳ１１８及びマウス代理ｍＡｂ^２をそれぞれ活性化ヒト及びマウスＴ細胞とインキュベートしても、抗ＣＤ３抗体と比較して、３時間のインキュベーション期間にわたって試験品の内在化は生じなかった。これらの結果は、他の細胞で発現された標的による標的の関与及び内在化は評価されていないが、ＦＳ１１８のクリアランスは、内在化によって媒介されなかったことを示す。

【0158】

全体として、これらのデータは、ＬＡＧ－３結合からの追加の寄与の可能性がＮＨＰで除外することはできないが、ＦＳ１１８及びマウス代理ｍＡｂ^２の不飽和クリアランス速度がＰＤ－Ｌ１標的駆動型であり、ｍＡｂ^２構築物のＬＡＧ－３標的化ＣＨ３修飾に関連付けられていることを示す。ＮＨＰ ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３並びにヒトＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３に対して同様の結合特性を有するＦＳ１１８により、ヒトでも同様のクリアランス速度が予測された。

【0159】

１．５ 予測される薬物動態 － ヒトにおける薬力学的挙動
１．５．１ ＮＨＰ ＰＫモデル
ＦＳ１１８への全身曝露を説明する２コンパートメント集団ＰＫモデルは、ＮＨＰ単回投与ＰＫ、ＤＲＦ及びＧＬＰ研究ＰＫデータから構築された（投与後０～７日；実施例１．３．２．１～１．３．２．３を参照されたい）。全てのＰＫモデリング、フィッティング及びシミュレーションは、ＡＤＡＰＴバージョン５（D’Argenio et al 2009）を使用して実行された。

【0160】

個々の動物のＰＫは、最初に２コンパートメントモデルに適合しており、その結果、動物ごとに４つのＰＫパラメーター（ＣＬ１、ＣＬ２、Ｖ１及びＶ２）が得られた。これは、全ての動物のＰＫを一緒にプールし、集団ＰＫモデルの一部として使用できるかを評価するために行われた。

【0161】

集団のＰＫ適合は、各動物のＰＫパラメーターが、特定の集団の平均ベクトル及び共分散行列によって特徴付けられる対数正規分布から抽出されたという仮定の下で実施された。これにより、未知の数が劇的に減少し、個々のＰＫケースが４×（動物の数）＝１１２から１４（４×４共分散行列の４つの集団平均値及び１０個の異なる共分散行列要素）になり、既知－未知率が大幅に改善された。

【0162】

ＦＳ１１８の線形動力学を説明するＮＨＰ及びヒトＰＫモデルの全体的な構造を図５に示す。モデルは、ＮＨＰで観察されたデータを十分に説明し（表４）、４週間のＧＬＰ毒性試験で反復投与した後の観察データを予測した。換言すれば、ＦＳ１１８のクリアランスにおける有意な可飽和成分を示唆する証拠はなかった。このモデルは、ＦＳ１１８のヒトＰＫを予測するために非比例的にスケーリングされ、クリアランス及びコンパートメント間交換に０．７５、体積に１．０の指数を使用した（表４）。標的を介した動態が観察されなかったため、標的結合親和性は、ＰＫモデルに組み込まれなかった。これらの仮定を前提として、ヒトにおけるＦＳ１１８曝露は、異なる投与計画について予測された。これらのパラメーター値を使用して、１０００人のヒト対象のＰＫのシミュレーションを実施して、ヒト初回（ＦＩＨ）臨床試験前にヒト集団のＰＫ範囲を評価した。シミュレーションは、２０ｍｇ／ｋｇ以下の用量がインビボでＦＳ１１８曝露レベルをさらに生成し、これが最高の非重度毒性用量（ＨＮＳＴＤ；以下の実施例１．５．２を参照されたい）をはるかに下回ると予測した。したがって、これらの用量は、安全性の懸念を示さなかった。

【0163】

ＮＨＰにおけるＦＳ１１８の観察されたクリアランス速度は、ＮＨＰにおける単一特異性抗体について典型的に観察されるよりも高いが、薬理学的効果を排除するほど高くはないことに留意されたい。

【0164】

【表4】

【0165】

１．５．２ 最高の非重度毒性用量（ＨＮＳＴＤ）
ＦＳ１１８は、ＮＨＰ ４週間ＧＬＰ毒性試験で十分に許容され（実施例１．３．２．３を参照されたい）、ＨＮＳＴＤは、週２回、２００ｍｇ／ｋｇであることが確証された。ヒトＰＢＭＣを用いたウェットコーティング固定化フォーマット又はヒト全血フォーマットのいずれかを使用したインビトロアッセイでは、ＦＳ１１８に関連したサイトカインの増加は観察されなかった。さらに、ＮＨＰ ４週間ＧＬＰ毒性試験では、血清サイトカイン（ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－α）のパネルでＦＳ１１８処置に関連した増加は観察されなかった。

【0166】

ＩＣＨ Ｓ９ガイダンス（ＩＣＨ Ｓ９）は、進行性癌患者におけるＦＩＨ研究のためにＨＮＳＴＤの１／６での初期臨床投与（表５）を推奨している。しかし、ＦＤＡからの最近の刊行物は、これが免疫腫瘍薬に適切でない可能性があり、標的の占有及び機能的活性に関連する追加の要因を考慮する必要があることを示唆している（Saber et al 2016）。

【0167】

提案されたＦＩＨ開始固定用量８００μｇから２０ｍｇ／ｋｇに上昇する週投与量（実施例１．５．３．１を参照されたい）は、ＨＮＳＴＤより少なくとも１０倍低く、推奨されるＩＣＨ Ｓ９ガイダンスを十分に下回っている。

【0168】

【表5】

【0169】

１．５．３ ＦＩＨ研究設計
初回ヒト試験（実施例２）は、非盲検、複数回投与、用量漸増及びコホート拡大試験として設計された。ＦＳ１１８の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）及び活性を特徴付けるために、進行性腫瘍と診断された成人患者を対象に研究を実施することが決定された。さらに、最初の患者を加速用量設定設計に採用し、そこで単一の患者コホートを評価し、続いて３＋３の上昇用量漸増設計を行うことが決定された（図６）。この研究は、安全性及び耐容性を体系的に評価し、進行性腫瘍を有する患者におけるＦＳ１１８の最大耐量（ＭＴＤ）及び／又は推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を特定するように設計された。ＲＰ２Ｄは、許容される毒性を伴う最大の生物学的有効用量として定義された。

【0170】

安全な用量漸増を可能にするために、開始用量及び最高用量間の用量増分が選択され、適切なＦＳ１１８用量－曝露関係を捉えるためにＰＫモデリングによって導かれた。遊離ＦＳ１１８（ＬＡＧ－３捕捉／ＰＤ－Ｌ１検出フォーマット）を測定する検証済みのGyrosアッセイを使用してヒトのＰＫを評価し、予測されたヒトＰＫと比較した用量－曝露関係の評価を可能にするため、患者内の用量漸増段階の終わりにＰＫデータが利用可能であることを確認することが決定された。また、標的結合の潜在的なバイオマーカーとして総血漿ｓＬＡＧ－３及びｓＰＤ－Ｌ１の増加を測定し、各３週間の処置サイクル後に採取されたサンプルからＡＤＡが生成される可能性を評価することも決定された。

【0171】

１．５．３．１ ＦＩＨ開始用量及び用量漸増戦略の正当化
臨床試験の許容可能な開始用量を設定する際、潜在的な薬理学的活性及び同様の分子を用いた公に利用可能な臨床経験を考慮することが重要であった（Saber et al 2016）。入手可能な全てのデータに基づいて、提案されたＦＩＨ開始用量は、静脈内８００μｇであり、抗腫瘍効果で予想されるものへのＦＳ１１８曝露を安全に増加させ、潜在的に効果のない投与計画への曝露を最小限に抑えるために、患者内加速用量漸増段階が提案された。ＦＩＨ研究は、投与間隔を通して標的抑制を維持する投与計画の必要性を調査するようにも設計された。

【0172】

選択された投与戦略をサポートする重要なポイントは、以下のとおりである。
・マウス代理ｍＡｂ^２を用いたマウス同系腫瘍モデルからの曝露データは、ＦＳ１１８への継続的な高曝露が抗腫瘍効果に必要ではなく、これが単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂとは著しく対照的であることを示唆している。この腫瘍モデルでは、マウス代理ｍＡｂ^２≧１ｍｇ／ｋｇの用量が腫瘍進行の阻害と関連しており、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの用量が統計的に有意であった。３日ごとに１０ｍｇ／ｋｇで投与（３回投与）された抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ及びマウス代理ｍＡｂ^２の抗腫瘍効果並びに野生型非担癌マウスにおける両方の分子の単回投与後の曝露プロファイルを図３Ａに示す。抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂへの曝露は、３日間にわたって１００μｇ／ｍＬ超に維持されたが、ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１への曝露は、同じ期間に約１０μｇ／ｍＬに低下した。ＭＣ３８モデルでは、マウス代理ｍＡｂ^２へのトラフ曝露が経時的に減少し、これは、ＡＤＡ形成に関連している可能性があることに留意されたい。３ｍｇ／ｋｇで、マウス代理ｍＡｂ^２は、３日ごとに、最初の投与後の推定Ｃ_ｍａｘが２５μｇ／ｍＬであり、最後の投与後に観察されたＣ_ｍａｘが６μｇ／ｍＬであった。
・ＦＳ１１８は、ＮＨＰ ４週間ＧＬＰ毒性試験で十分に許容された。他の免疫チェックポイント阻害剤で観察されたものと同様に、脳及び他の組織における混合単核細胞浸潤が観察された。
・ＦＳ１１８に関連したサイトカインの増加は、インビトロアッセイで観察されず、ＮＨＰ ４週間ＧＬＰ毒性試験では、血清サイトカインレベルの増加は、観察されなかった。これは、９０％を超える標的占有率に関連する用量が急性サイトカイン放出症候群に関連しない、他の免疫腫瘍学生物学的製剤と一致している（Herbst et al 2014、Heery et al 2017）。
・マウス代理ｍＡｂ^２のｍＰＤ－Ｌ１へのBiacore結合親和性は、ＦＳ１１８のｈＰＤ－Ｌ１への結合と比較した場合、約１０倍高いことが示されている。対照的に、マウス代理ｍＡｂ^２のｍＬＡＧ－３へのBiacore結合親和性は、ＦＳ１１８のｈＬＡＧ－３への結合と比較した場合、約２０倍低いことが示されている。しかし、これらの違いは、それぞれの標的タンパク質を過剰発現するＨＥＫ細胞への結合のＥＣ_５０値と、機能的Ｔ細胞活性化アッセイのＥＣ_５０値とを比較した場合にあまり明白ではなかった。機能的なＰＤ－Ｌ１標的結合の存在下でＦＳ１１８及びマウス代理ｍＡｂ^２のクリアランス速度が類似していることを考えると、標的結合親和性のこれらの観察された違いは、ヒトのＦＳ１１８ ＰＫの予測に影響を与える可能性は低い。
・免疫腫瘍薬の利用可能な非臨床及び臨床安全性データの分析により、２０～８０％の標的占有率及び／又は２０～８０％のインビトロ機能活性に基づくＦＩＨ用量が許容可能な臨床毒性を有することが示される。標的飽和を超えるＦＩＨ全身曝露は、ＡＤＣＣ活性が正常であるか、又は抑制されている抗体でも許容され（Saber et al 2016）、ＦＳ１１８は、ＡＤＣＣ活性を低下させるＬＡＬＡ変異を有することに留意されたい。全身標的占有率及びインビトロ機能活性（最大のパーセンテージとして）の推定値は、提案された開始用量８００μｇでのＣ_ｍａｘ（０．２６μｇ／ｍＬ）で３５．８％から７９．２％であり、ＦＩＨ用量に適切であると見なされた。
・最適以下の活性化を伴うヒトＴ細胞活性化アッセイでは、かなりのばらつきが観察されたものの、ＦＳ１１８は、平均ＥＣ_５０が０．２２μｇ／ｍＬでＩＦＮγ産生を刺激した。
・ＦＳ１１８は、同じ標的に対する単一特異性抗体と比較して高いクリアランス速度を有することが示され、メカニズムは、少なくともマウスでは、この二重特異性構築物のＰＤ－Ｌ１結合成分によって主に駆動されるようであった。ＦＳ１１８は、野生型及びＬＡＧ－３ ＫＯマウスで正常なＩｇＧ動態を示したが（機能的なＰＤ－Ｌ１結合なし）、代理ｍＡｂ^２は、野生型及びＬＡＧ－３ ＫＯマウスの両方で迅速に除去されたことに留意されたい。クリアランスプロセスは、ＮＨＰで２００ｍｇ／ｋｇまでの用量で飽和せず、ヒトでの予測される終末半減期は、３．７日であった（９５％信頼区間０．３５～１０．４日）。
・ＮＨＰ ４週間毒性試験におけるＨＮＳＴＤの定常状態でのＣ_ｍａｘ及びＡＵＣ（１つの７日間の投与間隔の下）を、提案された用量漸増計画の各用量について、ヒトの定常状態での予測される曝露と比較し、結果として生じる曝露の安全性マージンを表６に示す。提案された８００μｇの開始用量（７０ｋｇの対象で約１１μｇ／ｋｇ）は、ＮＨＰにおけるＨＮＳＴＤよりも１５，０００倍を超えて低い曝露をもたらすと予想され、これは、患者内の加速用量設定段階の終わりに１９０倍を超えて減少する。ＦＩＨ用量の安全性マージンが大きいため、ＦＳ１１８は、ヒトで予想外の正常なＩｇＧ動態を有することができ、研究の用量漸増部分に進む前にヒトでのＦＳ１１８のＰＫ挙動が確認される。クリニックでは、２０ｍｇ／ｋｇ／週の用量でＦＳ１１８のＣ_トラフ濃度が１０μｇ／ｍＬを超え、ＮＨＰのＨＮＳＴＤよりも１０倍低い曝露（Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ）が得られると予想される。この標的濃度を達成するための投与量及び投与頻度は、加速用量設定段階の終わりに調整され得る。

【0173】

【表6】

【0174】

・血漿総ｓＰＤ－Ｌ１は、ＰＫモデルに含まれていなかったが、これが標的結合の優れたバイオマーカーである可能性を示唆するＮＨＰからの証拠があり、これは、ＦＩＨ研究で測定される。マウス同系腫瘍モデルは、ＰＤ－Ｌ１の完全な抑制が各処置サイクルを通して必要とされない可能性があることも示唆している。ＮＨＰでは、１０μｇ／ｍＬ以上の血漿ＦＳ１１８濃度は、ＰＤ－Ｌ１捕捉の維持（及び推測によるとＰＤ－Ｌ１抑制）と関連していた。ＦＩＨ臨床試験は、限られた期間でのＰＤ－Ｌ１の最大抑制（Ｃ_ｍａｘ≧１０μｇ／ｍＬ）及び各投与サイクル全体でのＰＤ－Ｌ１の継続的な抑制（Ｃ_トラフ≧１０μｇ／ｍＬ）の両方を調査するように設計された。

【0175】

全体として、これらのデータは、８００μｇがＦＳ１１８の臨床試験を開始するための適切な開始用量であることを示した。この提案された開始用量は、１時間の注入の終わりに最大濃度（Ｃ_ｍａｘ ０．２６μｇ／ｍＬ）を与えると予測され、これは、標的受容体の占有率及びインビトロの機能的活性の観点から許容できる。さらに、このＣ_ｍａｘは、ＦＳ１１８ ｍＡｂ^２代理分子の抗腫瘍効果に関連するＣ_ｍａｘよりも約１０～１００倍低く、ＮＨＰにおけるＨＮＳＴＤでのＦＳ１１８へのＣ_ｍａｘ曝露よりも１５，０００倍を超えて低くなっている。同様の曝露マージンは、投与間隔の下でＡＵＣに対して維持される（表６）。ＦＳ１１８への治療に関連する曝露を迅速且つ安全に達成し、安全性を維持しながら治療量以下の用量への患者の曝露を最小限に抑えるために、患者内用量漸増スキームが提案されている。患者内用量漸増段階の終わりに、平均Ｃ_ｍａｘは、２５μｇ／ｍＬであると予想された。これは、ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるマウス代理ｍＡｂ^２の抗腫瘍効果に関連する曝露範囲内であり、ＮＨＰでのｓＰＤ－Ｌ１捕捉の維持に関連するＦＳ１１８曝露（１０μｇ／ｍＬ）を上回っている。

【0176】

非臨床腫瘍有効性データは、ＰＤ－Ｌ１の継続的な抑制が必要でないことを示唆しているが、ＦＩＨ研究中の投与間隔全体でＰＤ－Ｌ１の捕捉を維持するＦＳ１１８の投与量を調査することも決定され、１０ｍｇ／ｋｇ／週以上のＦＳ１１８の用量は、１０μｇ／ｍＬ以上の平均Ｃ_トラフ濃度を与えると予想された。

【0177】

１．６ 概要及び結論
マウス代理ｍＡｂ^２（ｍＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１）を用いたマウス同系腫瘍モデルからの曝露データは、単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂとは対照的に、ＦＳ１１８への継続的な高曝露が抗腫瘍効果に必要ではないことを示唆していた。この腫瘍モデルでは、マウス代理ｍＡｂ^２≧１ｍｇ／ｋｇの用量が腫瘍進行の阻害と関連しており、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの用量が統計的に有意であった。

【0178】

機能的なＰＤ－Ｌ１結合の存在下では、ＦＳ１１８及びマウス代理ｍＡｂ^２の両方のクリアランス速度は、標準的な単一特異性ＩｇＧ様分子で観察されるよりも高くなる。用量の増加に伴って曝露がわずかに過剰に増加するが、このクリアランスプロセスは、ＮＨＰでは週２回２００ｍｇ／ｋｇまでの用量で飽和していないようであり、線形ＰＫモデルによって適切に説明される。換言すれば、ＦＳ１１８は、膜受容体を標的とするＩｇＧ様分子で観察されることがあるように、飽和可能な標的媒介性の動的挙動を示さない。しかし、野生型及びＬＡＧ－３ ＫＯマウスではＦＳ１１８で通常のＩｇＧ動態が観察されるため、このクリアランスプロセスは、ｍＡｂ^２構築物の機能的なＰＤ－Ｌ１結合に依存しているようである（ＦＳ１１８は、マウスで有意なＰＤ－Ｌ１結合を欠いている）。

【0179】

ＮＨＰ ４週間ＧＬＰ毒性試験では、ＦＳ１１８は、臨床試験に十分な曝露マージンを提供する用量で十分に許容されることが示されている。提案されたＦＩＨの開始用量８００μｇは、１時間の０．２６μｇ／ｍＬの注入終了時に最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）を与えると予測されており、これは、マウス代理ｍＡｂ^２分子の抗腫瘍効果に関連するＣ_ｍａｘよりも約１０倍低く、ＮＨＰにおけるＨＮＳＴＤでのＦＳ１１８へのＣ_ｍａｘ曝露よりも１５，０００倍を超えて低くなっている。同様の曝露マージンは、投与間隔の下でＡＵＣに対して維持される。

【0180】

血漿総ｓＰＤ－Ｌ１は、ＮＨＰにおけるＰＤ－Ｌ１標的結合の有用なバイオマーカーであることが示されている。ＮＨＰでは、１０μｇ／ｍＬ以上の血漿ＦＳ１１８濃度は、ＰＤ－Ｌ１捕捉の維持（及び推測によるとＰＤ－Ｌ１抑制）と関連しており、ＦＩＨ臨床試験は、限られた期間でのＰＤ－Ｌ１の最大抑制（ＦＳ１１８ Ｃ_ｍａｘ≧１０μｇ／ｍＬ）及び各投与サイクル全体でのＰＤ－Ｌ１の継続的な抑制（ＦＳ１１８ Ｃ_トラフ≧１０μｇ／ｍＬ）の両方を調査するように設計された。用量漸増戦略は、患者内加速用量設定段階（１ｍｇ／ｋｇ／週のＦＳ１１８）の終了時に約１０μｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘを達成し、投与間隔内でＦＳ１１８≧１０μｇ／ｍＬを維持するより高い曝露レベルを調査するように設計された。１０及び２０ｍｇ／ｋｇ／週の用量は、投与間隔全体で１０μｇ／ｍＬを超える平均血漿ＦＳ１１８濃度を達成すると予測された。

【0181】

実施例２：以前のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法時又はその後に進行した進行性悪性腫瘍患者における、ＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体であるＦＳ１１８の安全性、忍容性、薬物動態及び活性に関する第Ｉ相、非盲検、用量漸増及びコホート拡大のヒト初回試験
２．１ 研究設計及びパラメーター
この研究は、ＦＳ１１８の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）及び活性を特徴付けるために、進行性腫瘍と診断された成人患者を対象に実施された。この第Ｉ相、多施設、非盲検、複数回投与、ヒト初回試験は、加速用量設定設計（その間に単一患者コホートが評価された）で始まり、その後、３＋３上昇用量漸増設計が続いた。この研究は、安全性及び耐容性を体系的に評価し、進行性腫瘍を有する患者におけるＦＳ１１８の最大耐量（ＭＴＤ）及び／又は推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を特定するように設計された。ＲＰ２Ｄは、許容される毒性を伴う最大の生物学的有効用量として定義された。薬物動態、薬力学、免疫原性及び応答も評価された。

【0182】

インフォームドコンセントに続いて、全ての患者は、処置開始前の２８日以内に適格性を決定するためにスクリーニングを受けた。患者への投与は、ｉＣＰＤ（すなわち免疫が確認された進行性疾患）（又はリンパ腫患者のLugano分類による進行性疾患）、許容できない毒性、患者による同意の撤回、治験責任医師による患者の中止、治験又は処置を終了するスポンサーの決定、代替の抗癌療法の開始又は死亡まで、３週間の処置サイクルで、毎週静脈内（ＩＶ）で行われた。患者は、ＦＳ１１８の最後の投与からおよそ２８日（±７日）後の処置終了（ＥＯＴ）訪問及びＦＳ１１８の最後の投与からおよそ９０日（±７日）後の９０日フォローアップ訪問を受けたか又は受ける予定である。確認されたｉＣＰＤ（又はリンパ腫患者のLugano分類による進行性疾患）後の全ての患者について、全生存期間（ＯＳ）は、生存率及び研究後の投与された癌療法剤を評価するために３ヶ月ごとに評価されたか又は評価される予定である。

【0183】

最初の５つのコホートは、単一患者コホートとして順次登録され、患者は、サイクル１中に用量制限毒性（ＤＬＴ）について観察された。患者の基礎疾患、他の病状又は併用薬若しくは手順に明確に起因しないＤＬＴ又はグレード２以上の有害事象は、各コホートで観察されなかったため、新しい患者は、次の高用量のコホートで投与され、ＤＬＴ期間にわたって観察された。患者の基礎疾患、他の病状又は併用薬若しくは手順に明確に起因しないＤＬＴ又はグレード２以上の有害事象がなくコホート５のサイクル１が完了した後、コホート６以降、用量漸増計画は３＋３設計として継続された。患者が最初の投与を忍容し、次の高用量コホートの患者が、患者の基礎疾患、他の病状又は併用薬若しくは手順に明確に起因しないＤＬＴ又はグレード２以上の有害事象の証拠なくＤＬＴ期間を完了し、用量が安全性審査委員会（ＳＲＣ）によって安全であると宣言されている場合、患者内用量漸増は、単一患者コホートで進行した。

【0184】

単一患者コホートのいずれかで、患者がＤＬＴ期間中に患者の基礎疾患、他の病状又は併用薬若しくは手順に明確に起因しないグレード２以上の有害事象を経験した場合、追加の２人の患者がその用量レベルで登録され、３＋３の設計ルールを使用して評価されるはずであったが、これは、発生しなかった。その後の全てのコホートは、３＋３設計に登録された。ＤＬＴが発生した場合、コホートは、６人の患者に拡大されるはずであったが、ＤＬＴは、観察されなかった。

【0185】

毒性は、米国国立癌研究所（ＮＣＩ）の有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０３に従って評価された。

【0186】

主要目的
この研究の主要目的は、以下のとおりである。
１．安全性を評価し、ＦＳ１１８のＭＴＤ及び／又はＲＰ２Ｄを決定すること、及び
２．ＦＳ１１８のＰＫパラメーターを決定すること。

【0187】

副次的目的
この研究の副次的目的は、以下のとおりである。
１．固形腫瘍の応答評価基準（RECIST）1.1又はLugano分類（該当する場合）及びiRECIST（免疫系治療用に修正されたRECIST 1.1）に従ってＦＳ１１８の抗癌活性の予備的証拠を評価すること。
２．ＦＳ１１８の免疫原性（抗薬物抗体［ＡＤＡ］）を特徴付けること。

【0188】

探索的目的
この研究の探索的目的は、薬力学的プロファイルを特徴付け、潜在的な主要薬理学を曝露と相関させることであった。

【0189】

患者集団及び患者数
２０１９年５月までに２４人の患者が登録され、２０１９年８月までに４０人に、２０２０年４月までに４３人に増加した。患者は、米国の４つの研究施設にわたって登録された。患者は、１８歳以上で進行した腫瘍を有していた。

【0190】

処置投与
ＦＳ１１８は、緩徐なボーラス注射として最初のコホートに静脈内投与され、ｉＣＰＤ（又はリンパ腫患者のLugano分類による進行性疾患）、許容できない毒性、患者による同意の撤回、治験責任医師による患者の中止、治験又は処置を終了するスポンサーの決定、代替の抗癌療法の開始又は死亡まで、３週間の処置サイクルで毎週後続のコホートに持続注入ポンプによって投与された。

【0191】

処置及び研究の期間
ＦＳ１１８処置を１６サイクル（又は１２ヶ月）完了した場合又は進行性疾患が確認された場合、患者は、処置を完了したと見なされた。治験に登録された全ての患者がＦＳ１１８による処置の１６サイクルを完了する機会があり、最後の治験薬投与後９０日間フォローされた後、主要エンドポイントの最終分析が実施され、単一の最終臨床試験報告書がまとめられる。研究完了の推定期間は、３６ヶ月である。

【0192】

適格基準
登録された各患者は、研究への登録に適格であるために、以下のさらなる要件を全て満たす必要があった。
１．用量漸増の場合：効果的な標準治療が利用できないか又は標準治療が失敗した患者について、抗プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）若しくは抗プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法中又は療法後に進行した、組織学的に確認された局所進行性、切除不能若しくは転移性の固形腫瘍又は血液悪性腫瘍を有する患者。
２．用量拡大の場合：効果的な標準治療が利用できないか又は標準治療が失敗した患者について、抗ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１療法中又は療法後に進行した、組織学的に確認された局所進行性、切除不能若しくは転移性の子宮頸部、卵巣、膀胱、腎臓、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、非小細胞肺癌、トリプルネガティブ乳癌又は非ホジキン若しくはホジキンリンパ腫を有する患者。
３．以前のＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１を含む計画の最小処置期間が１２週間（又は２つの応答評価に相当）であった。
４．RECIST 1.1又はLugano分類（該当する場合）を使用して治験責任医師が決定した、測定可能な疾患（中枢神経系［ＣＮＳ］の外側にある少なくとも１つの測定可能な病変として定義される）。
５．Eastern Cooperative Oncology Group（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス１以下。
６．少なくとも３ヶ月と推定される平均余命。
７．患者は腫瘍の処置前及び処置中の生検を受けることに同意し、生検手順は、研究者によって高リスクであると判断されなかった。単一患者コホートの患者の場合、許容可能なベースライン腫瘍サンプルには、新たに得られた腫瘍生検サンプル及び／又は元の診断から得られたアーカイブ組織サンプル（生後６ヶ月未満）が含まれる（可能な場合）。
８．受胎のリスクが存在する場合、男性及び女性の両方の患者に対して非常に効果的な避妊（すなわち１年に１％未満の失敗率の方法）。非常に効果的な避妊は、最初の治験処置の投与の２８日前、治験処置の期間中及び治験処置の中止後少なくとも６０日間使用する必要があった。女性患者又はそのパートナーがこの研究に参加している間に女性患者が妊娠した場合又は妊娠した疑いがある場合、処置を行う医師及び治験依頼者（又は被指名人）に直ちに通知される。
９．書面によるインフォームドコンセントを提供する意思及び能力。

【0193】

スクリーニングで以下の基準のいずれかを満たした患者は、研究への参加適格を有しなかった。
１．治験薬、標準治療ではなかった複数の免疫チェックポイント阻害剤（承認された適応症の組み合わせを除く）による以前の処置又はリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）阻害剤若しくは多重特異性免疫チェックポイント阻害剤分子による標準治療又は以前の処置の初回投与の２８日又は５半減期のいずれか短い方の期間内に全身抗癌化学療法を受けた。
２．過去２年間に処置が必要な活動性の自己免疫疾患を有する患者及び自己免疫疾患の既往歴を有する患者。注記：これには、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎及びクローン病、関節リウマチ、全身性進行性硬化症（強皮症）、全身性エリテマトーデス、自己免疫性血管炎（例えば、ウェゲナー肉芽腫症）、ＣＮＳ又は自己免疫起源と考えられる運動神経障害（例えば、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、多発性硬化症）並びに中等度又は重度の乾癬の既往症を有する患者が含まれる。ただし、関節リウマチ又は乾癬が少なくとも６ヶ月間安定して寛解し、免疫関連の有害事象、白斑、シェーグレン症候群、間質性膀胱炎、グレイブス病若しくは橋本病又はホルモン補充で安定した甲状腺機能低下症に対する、コルチコステロイドとの可能な併用処置が禁忌でない患者については、メディカルモニターの承認を得て治験が許可された。
３．以下を含むが、これらに限定されないコントロール不良の併発疾患の病歴：
○標準的治療での処置によるコントロール不良の高血圧の確認（１５０／９０ｍｍＨｇ以下に安定化されていない）、又は
○確認されたコントロール不良の糖尿病。注記：安定したインスリン補充療法を少なくとも６ヶ月間受け、免疫関連の有害事象に対するコルチコステロイドとの可能な併用処置が禁忌でない、十分にコントロールされた糖尿病を有する患者は検討対象となり得た。
４．既知の感染症：
○ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）（すなわちＢ型肝炎表面抗原陽性）又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）（すなわち検出可能なＨＣＶリボ核酸［ＲＮＡ］）。注記：抗原陰性である処置されたＨＢＶ感染の既往歴のある患者又はＨＣＶ ＲＮＡが検出できない処置されたＨＣＶ感染の既往歴のある患者は、検討対象となり得た。
○活動性感染症（ウイルス力価が陽性の無症候性感染症及び治験処置又は病状により病状が悪化する可能性があるという治験責任医師の判断を含む）は、患者の治験への参加を障害／禁止する。
５．コントロール不良のＣＮＳ転移、原発性ＣＮＳ腫瘍又は唯一の測定可能な疾患としてＣＮＳ転移を伴う固形腫瘍。活動性疾患であるが、安定したＣＮＳ疾患を有する患者は、登録され得る。
６．以前のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法による活動性間質性肺疾患又は肺炎、脳炎、発作、重度の免疫関連有害事象（すなわち肺炎、肝炎、大腸炎、下垂体炎、膵炎、心筋炎、ＣＮＳ又は眼科）の既往歴、他の免疫刺激性抗癌剤による以前の処置での重度又は生命を脅かす皮膚の有害反応の既往症。
７．免疫抑制剤の使用、免疫抑制を必要とする以前の臓器移植、モノクローナル抗体又はその賦形剤に対する過敏症又は不耐性又は以下の例外を除いて、NCI CTCAE v4.03のグレード１を超える以前の治療に関連する持続性毒性。
○全グレードの脱毛症は許容された。
○補充療法での内分泌機能障害は許容された（ホルモン補充療法での安定した下垂体炎を含む）。
○非全身性ステロイド；局所、眼内、鼻腔内、関節内又は吸入ステロイドは許容された。
○副腎不全を有する患者では、プレドニゾンと同等の１０ｍｇ／日以下の全身ステロイド補充療法は許容された。
○緩和処置又は対症療法の一部として１０ｍｇ／日以下のプレドニゾンと同等の全身ステロイド処置を受けている患者の登録については、メディカルモニター及び／又はスポンサーと話し合う必要があった。
８．長いＱＴｃ症候群及び／又はペースメーカーの病歴、脳血管障害／脳卒中（登録前６ヶ月未満）、心筋梗塞（登録前６ヶ月未満）、不安定狭心症、うっ血性心不全（New York Heart Association分類クラスＩＩ以上）又は少なくとも６ヶ月間薬物療法でコントロールされなかった臨床的に重大且つ症候性の心不整脈。
９．以下の基準による検査値のスクリーニング（NCI CTCAE、バージョン４．０３を使用）：
○ヘモグロビン＜９．０ｇ／ｄＬ（５．７μｍｏｌ／Ｌ）；
○好中球絶対数（ＡＮＣ）＜１．０×１０^９／Ｌ；
○血小板＜１００×１０^９／Ｌ；
○血清クレアチニン＞１．５×正常上限（ＵＬＮ）；
○総ビリルビン＞１．５×ＵＬＮ；又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞２．５×ＵＬＮ（肝転移の場合には５×ＵＬＮ以上）；又は
１０．治験責任医師の判断による、治験製品又はその賦形剤に対する不耐性又は患者の治験への参加を著しく障害する及び／又は禁止する状態。

【0194】

評価及び分析の主な基準
この研究の主要なエンドポイントは、以下のとおりである。
・有害事象の発生率、重症度及び期間。
・観察された最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）、Ｃ_ｍａｘまでの時間（Ｔ_ｍａｘ）、観察されたトラフ血清濃度（Ｃ_トラフ）、終末除去半減期（ｔ_１／２）、１回の投与間隔における濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）［ＡＵＣ（ＴＡＵ）］、投与間隔にわたる平均濃度［ＡＵＣ（ＴＡＵ）／ｔａｕ］、全身クリアランス（ＣＬ）、定常状態での分布体積（Ｖ_ｓｓ）及び初回投与から定常状態までの蓄積率を含むＰＫパラメーター。

【0195】

この研究の副次的エンドポイントは、以下のとおりである。
・RECIST 1.1又はLugano分類（該当する場合）及びiRECISTによって評価される応答。これらの応答は、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、客観的応答率（ＯＲＲ）、応答期間（ＤｏＲ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）／ｉＰＦＳを決定するために使用されている。全生存期間も評価される。
・ＡＤＡの検出及び分析を含むＦＳ１１８免疫原性の発生率。

【0196】

この研究の探索的エンドポイントは、以下を含む。
・末梢血単核細胞のフローサイトメトリーによるＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞集団におけるＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３受容体占有率。
・可溶性ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の定量化。

【0197】

統計的考察
登録された全ての患者について、患者の性質が表にされている。人口統計データ及びベースラインデータ（すなわち年齢、性別、人種、民族、身長及び体重）並びに病歴及び特徴は、安全性分析セットの記述統計を使用して要約された。

【0198】

有効性分析は、有効性分析セットを使用して実施されている。RECIST 1.1基準又はLugano分類（該当する場合）及びiRECIST基準ごとの腫瘍応答データが採用されている。ＯＲＲ及びＤＣＲの場合、点推定値及び９５％の正確な信頼区間が提供されている／提供される。応答が不明であるか又は欠落している患者は、非応答者として扱われる（すなわちパーセンテージを計算するときの分母に含まれる）。

【0199】

全体として最良の応答は、RECIST 1.1基準又はLugano分類（該当する場合）及びiRECIST基準に従って決定されている。

【0200】

治癒期間、ＤｏＲ、ＰＦＳ、ｉＰＦＳ及びＯＳを含む、事象までの時間変数は、カプランマイヤー法を使用して記述的に要約されている／要約される。事象までの時間変数の打ち切り方法は、統計分析計画で説明する。事象までの時間変数についてカプランマイヤー曲線が生成される。

【0201】

ＰＫ分析セットは、全てのＰＫデータの要約に使用されている。血清濃度対時間プロファイルは、必要に応じて、各患者の投与間隔及び投与コホートごとのノンパラメトリックパラメーターＣ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、Ｃ_トラフ及びＡＵＣの表形式の要約とともにグラフで表示されている。必要に応じて、総ＡＵＣは、濃度対時間プロファイルの最終段階から無限大への外挿を使用して計算され、これにより血清ｔ_１／２、ＣＬ及びＶ_ｓｓも導出できる。

【0202】

薬力学的分析セットは、薬力学的分析に使用されている。

【0203】

研究中のＦＳ１１８ ＡＤＡ陽性の患者の割合及び中和ＦＳ１１８ ＡＤＡ陽性の患者の割合が要約されている。ＦＳ１１８ ＡＤＡ力価とＰＫの相関分析が実施された。

【0204】

安全性プロファイルは、有害事象（ＤＬＴ及び重大な有害事象を含む）、身体検査所見（ＥＣＯＧパフォーマンスステータスを含む）、バイタルサイン測定、標準的な臨床検査室測定及び心電図記録に基づいている。

【0205】

サンプルサイズの正当化
２０１９年５月までに２４人の患者が登録され、２０１９年８月までに４０人に、２０２０年４月までに４３人に増加した。加速用量設定部分は、最低５人の患者で構成され、研究の３＋３上昇用量漸増部分は、用量レベルごとに３から６人の患者で構成されていた。コホートは、安全上の理由から（最大３人の患者）、ＰＫ及び／又は薬力学の強化のため（最大１０人の患者）及びＲＰ２Ｄレベル又はそれ以前の臨床効果をさらに特徴付けるため（最大２４人の患者）に拡大され得た。研究のサンプルサイズは、実践的な考慮事項によって決定されている。正式な統計的評価は行われていない。

【0206】

２．２ 中間結果（２０１９年５月）
２．２．１ 中間臨床データ
２０１９年５月までに、加速用量設定設計の単一患者コホート（８００μｇ、２４００μｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇの用量）が完了した。第Ｉ相試験の３＋３上昇用量漸増設計部分では、３ｍｇ／ｋｇが完了し、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの投与が進行していた。コホートの２つは、拡大された（１ｍｇ／ｋｇは３人の対象へ；３ｍｇ／ｋｇは１０人の対象へ）。

【0207】

２０１９年５月までに第Ｉ相試験に登録された２４人の患者のうち、８人の患者が処置中であった。１６人の患者が処置を中止し、４人の患者がｉＣＰＤのために、２人の患者が進行性疾患のRECIST 1.1のために、１０人の患者が他の考慮事項：ＴＢＣ／臨床ＰＤ／ＰＩの決定のためによる。

【0208】

２０１９年５月までの第Ｉ相試験中に観察された処置中に発現した有害事象のうち、２０％がＦＳ１１８に関連していると評価され、その全てが軽度から中等度であった。観察された１０の重篤な有害事象のうち、ＦＳ１１８に関連するものはなかった。試験したいずれの投与量でもＤＬＴは観察されなかった。これは、最大２０ｍｇ／ｋｇの用量が十分に忍容され、ＦＳ１１８の安全性プロファイルが他の免疫チェックポイント阻害剤と一致していることを示した。

【0209】

ＦＳ１１８による処置期間は、平均９．２週間＝３サイクル（０～２４週間）継続した。１４人の対象について、少なくとも１回の「研究中」スキャンが報告された。１４人の患者のうち、５人は、安定性疾患を有し、９人は、進行性疾患を有していた。有効性の決定は、第Ｉ相試験の主な目的ではなかったが、患者がＦＳ１１８処置に費やした平均時間及び研究中スキャンが１４人の患者のうちの５人で疾患の安定化を示したという事実は、ＦＳ１１８が疾患の安定化が可能であり、したがってヒト患者の腫瘍増殖を阻害する可能性を有することを示す。このデータを評価する際、第Ｉ相試験に登録された患者全員が進行した悪性腫瘍を有しており、ＦＳ１１８による処置の恩恵を受けることができないほど危険にさらされていた可能性があることに留意すべきである。第２相試験で調査され得るように、感染性がより低い癌患者の処置は、ＦＳ１１８のさらに高い有効性を示し得る。

【0210】

２．２．２ 中間薬物動態／薬力学的データ
最初の７つのコホート（８００μｇ、２４００μｇ、０．１、０．３、１、３、１０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋ用量）にわたる２０人の患者の薬物動態／薬力学的分析を実施し、ＰＫ及び薬力学（血液中のＬＡＧ－３又はＰＤ－Ｌ１受容体［可溶性又はＴ細胞発現］のＦＳ１１８結合）を測定した。ＰＫ分析は、２０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋ用量コホートの１人の患者に対してのみ実施された。

【0211】

２．２．２．１ ＰＫ分析
ＰＫ分析では、血清ＦＳ１１８レベルを、ビオチン化ＬＡＧ－３捕捉及びAlexa Fluor（登録商標）６４７標識ＰＤ－Ｌ１検出を備えたGyroLabプラットフォームを利用した検証済みのリガンド結合アッセイを使用して測定した。簡単に説明すると、血清サンプルをRexxip HNで１：１０の最小必要希釈率（ＭＲＤ）に希釈し、プレートに添加し、次いでBioAffy 1000 CDとともにGyrolab XPワークステーションにロードした。ＦＳ１１８は、蛍光発光により検出された。標準曲線は、Gyrolab Evaluatorアプリケーションの重み係数（１／ｙ２）として応答を使用して、５パラメーターのロジスティック曲線を使用して回帰された。検証されたアッセイのＬＬＯＱは、１００ｎｇ／ｍＬであった。

【0212】

結果は、７つのコホート（８００μｇ、２４００μｇ、０．１、０．３、１、３、１０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋ用量）（Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ）全体で用量の増加に伴う曝露の用量線形増加を示した。Ｃ_ｍａｘは、ヒト以外の霊長類からスケーリングされた予測とほぼ同じであったが、クリアランス速度は、予測よりも高かった（ＡＵＣは予測よりも３０％低かった）。３ｍｇ／ｋｇの用量までの毎週の投与では、曝露（Ｃ_ｍａｘ）が直線的に増加し、ＦＳ１１８の蓄積がなかった。３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇコホートの一部の対象は、測定可能なＣ_トラフＦＳ１１８濃度を示した。投与後７日（次の注入前）の血清ＦＳ１１８濃度は、１ｍｇ／ｋｇ未満の用量の全ての患者で１００ｎｇ／ｍＬ（ＬＬＯＱ）未満であった。

【0213】

２．２．２．２ 可溶性ＬＡＧ－３
血清総ｓＬＡＧ－３は、飽和量のＦＳ１１８の存在下で検証済みの酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して定量化された。簡単に説明すると、血清サンプル中のｓＬＡＧ－３は、プレートコーティングされた抗ＬＡＧ－３モノクローナル抗体（非競合的結合）で捕捉された。ＦＳ１１８は、ｓＬＡＧ－３の結合を飽和させるためにインビトロで添加された。捕捉されたｓＬＡＧ－３：ＦＳ１１８複合体は、ｓＬＡＧ－３受容体と結合したＦＳ１１８ Ｆｃａｂドメインに対するビオチン化抗イディオタイプ抗体で検出され、続いてストレプトアビジンコンジュゲートＨＲＰ及び色原体が添加された。検証されたアッセイのＬＬＯＱは、０．６７５ｎｇ／ｍＬであった。

【0214】

１、３及び１０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋの用量レベルでの可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）の分析では、サイクル１及びサイクル２の初回投与後に総ｓＬＡＧ－３が約１０倍に増加し、投与後２～３日でＣ_ｍａｘがピークに達することが示された。

【0215】

ｓＬＡＧ－３レベルの上昇は、受容体のＦＳ１１８関与を確認する。１ｍｇ／ｋｇの用量レベルでは、総ｓＬＡＧ－３濃度は、次の用量（サイクル１、８日目；Ｃ１Ｄ８）の前にベースライン値に戻った。３及び１０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋコホートでは、次の投与前に総ｓＬＡＧ－３（トラフ濃度）が蓄積したという証拠がいくつかあった。３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの用量での総可溶性ＬＡＧ－３の増加の程度及び持続時間は、ＦＳ１１８による可溶性ＬＡＧ－３捕捉の飽和がほぼ達成されたことを示唆した。

【0216】

２．２．２．３ 可溶性ＰＤ－Ｌ１
血漿総可溶性ＰＤ－Ｌ１（ｓＰＤ－Ｌ１）は、飽和量のＦＳ１１８の存在下でMeso-Scale Discoveryイムノアッセイを使用して定量化された。アッセイのＬＬＯＱは、０．４５８ｎｇ／ｍＬである。結果は、各投与後の総可溶性ＰＤ－Ｌ１（ｓＰＤ－Ｌ１）の一過性の増加の初期の証拠を示したが、これは、全ての患者で一貫しているわけではなく、多くの患者のベースライン濃度は、アッセイの定量化レベルを下回った。

【0217】

２．２．２．４ ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３受容体の占有率
ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３受容体の占有率は、全血Ｔ細胞及び単球で測定された。簡潔には、この方法は、Cyto-Chex（登録商標）チューブに全血を採取し、処理するまで４℃で保存することを含む（１試験あたり１００μＬ）。まず、非特異的結合を５μＬのヒトＢＤ Ｆｃ遮断液により室温で１０分間遮断した。次に、サンプルを３つのパネル（遊離受容体、総受容体、ＦＭＯ／アイソタイプ）の抗体カクテル（５０μＬ）のいずれかで染色し、室温で３０分間インキュベートした後、赤血球を溶解し、室温で１０分間、９００μＬのBD FACS溶解液で固定した。次に、サイトメーター（LSR Fortessa）で取得する前にサンプルを２％ＦＢＳで２回洗浄した。受容体の占有率は、以下の式を使用して計算された（仮定：ＰＤ－Ｌ１又はＬＡＧ－３の標的発現レベルは、調査期間中に変化しないままである）。

【数1】

Ｃ － アイソタイプ遊離標的（競合）ｍＡｂからの蛍光強度中央値（ＭｄＦＩ）
Ｄ － 遊離標的（競合）ｍＡｂからのＭｄＦＩ
Ｃ_０、Ｄ_０：薬物投与前のサンプルからのＭｄＦＩ値
Ｃ_ｔ、Ｄ_ｔ：所与の時点での薬物投与後サンプルからのＭｄＦＩ

【0218】

全体として、ＬＡＧ－３の発現は、ＰＤ－Ｌ１の発現と比較して４０から１３０倍低く、推定される受容体占有率のばらつきは、非常に大きかった（ＣＶは典型的には５０％超）。最初の投与から３時間後、平均ＰＤ－Ｌ１受容体占有率は、３及び１０ｍｇ／ｋｇ用量コホートでそれぞれ４９及び５４％であり、ＰＤ－Ｌ１受容体占有率と血清ＦＳ１１８濃度との間に明らかな関係はなかった。同様に、最初の投与から３時間後、平均ＬＡＧ－３受容体占有率は、３及び１０ｍｇ／ｋｇ用量コホートでそれぞれ２３及び３２％であり、ＬＡＧ－３受容体占有率と血清ＦＳ１１８濃度との間に明らかな関係はなかった。２回目の投与の直前、ＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３受容体の占有率は、投与後３時間の時点と比較して低かった。

【0219】

ＰＫ値が定量化レベルを下回っているか又は非常に低い場合、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋコホートのＣ_トラフレベルでの一部の患者の血液中の総ｓＬＡＧ－３及びｓＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３ Ｔ細胞受容体占有率の蓄積は、Ｃ_トラフレベルでの持続的な薬力学的応答の証拠を提供し、したがって、驚くべきことに、投与間隔全体にわたるＦＳ１１８曝露は、ヒト患者における薬力学的効果には必要でないことを示す。

【0220】

ＦＳ１１８と複合体を形成したｓＬＡＧ－３のクリアランスは、ＦＳ１１８のクリアランスよりも遅いことがわかったため、上記の結果は、マウス代理抗ＬＡＧ３／ＰＤ－Ｌ１抗体を有するマウスで観察された結果とは対照的に、ヒトにおけるＦＳ１１８のクリアランスが主にＬＡＧ－３媒介、より具体的には膜ＬＡＧ－３媒介であることを示している。

【0221】

２．２．３ 結論
２０１９年５月までに第Ｉ相試験で得られた中間結果は、ＦＳ１１８の忍容性が高く、観察された最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）が、カニクイザル試験から予測されたＣ_ｍａｘと一致しているが、ＦＳ１１８のクリアランス速度が、予想外にも、予測より高かったことを示している。これは、当初、ヒトでより高用量のＦＳ１１８が必要である可能性があることを示唆していたが、クリアランスの速度がより速いにも関わらず、試験されたより低い用量で持続的な薬力学的応答が観察され、これは、治療効果を示している。

【0222】

特に、得られた結果は、ＦＳ１１８が、週１回投与される３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）レベルの持続的な増加及び持続的なＬＡＧ－３受容体占有率を誘導できることを示した。ｓＬＡＧ３レベルは、マウスの治療効果と関連していることが示されている。これらの中間結果は、ｓＰＤ－Ｌ１レベルがＦＳ１１８処置後に増加したことも示唆した。

【0223】

２．３ 中間データ（２０１９年８月）
２．３．１ 中間臨床データ（２０１９年８月）
２０１９年８月までに、さらに１６人の患者が第Ｉ相試験に登録された。したがって、合計４０人の患者が登録された。これらの４０人の患者のうち、１６人が処置中であった。残りの２４人の患者は、処置を中止した。１１人の患者は、ｉＣＰＤにより、３人の患者は、無関係の有害事象により、８人の患者は、医師の決定又は進行性疾患の臨床的兆候により、２人の患者は、他の考慮事項による。

【0224】

週１回のＦＳ１１８投与は、２０ｍｇ／ｋｇまで十分に許容され、サイクル１又はそれ以降のサイクルでは用量制限毒性（ＤＬＴ）が観察されなかった。研究関連の処置中に発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、患者の６２．５％で観察された。これらのいずれも、処置中に発現した重篤な有害事象（ＴＥ－ＳＥＡＥ）と見なされなかった。２つは、トランスアミナーゼのレベルの上昇に基づいてグレード３のＴＥＡＥと見なされた。後者の２つのケースは、高レベルが明らかな臨床的影響を有しないと判断し、高レベルを非限定的な毒性として分類した、治験の安全性委員会によってレビューされた。ＴＥＡＥ及びＦＳ１１８処置間に明らかな用量関係は観察されなかった。観察された死亡又はＴＥ－ＳＡＥで、ＦＳ１１８に関連していると見なされたものはなかった。

【0225】

３、１０又は２０ｍｇ／ｋｇを投与されたコホートの３２人の対象のうちの２２人は、評価可能な腫瘍スキャンを受けた。これらの２２人の患者のうちの１１人は、何らかの安定性疾患を有し、１１人は、最良の全体的応答（ＢＯＲ及びｉＢＯＲ）に基づく進行性疾患を有していた。これは、３４．４％の病勢コントロール率（ＤＣＲ）を表す。

【0226】

例えば、表７（下記）の全ての患者は、進行中の試験中に何らかの安定性疾患を示し、少なくとも１０週間研究を継続した。

【0227】

【表7】

【0228】

特に、対象１００４－０００１（ＮＳＣＬＣに罹患している）は、安定性疾患（RECIST 1.1の最良の応答）を示し、ＦＳ１１８投与後８週目及び１６週目に観察された２８．１３パーセントの最良の腫瘍減少（直径の合計（ＳｏＤ）のベースラインからの変化）を示し、２４週目に２５％の腫瘍減少へわずかに減少した。したがって、この特定の患者は、その標的病変の測定に基づいてほぼ部分応答を示した。

【0229】

したがって、これらの結果は、患者集団に複数の異なるタイプの癌が含まれ、全ての患者が進行した悪性腫瘍を有し、治験に入る前に複数の代替処置計画に失敗し、一部の患者がＦＳ１１８による処置の恩恵を受けることができないほど危険にさらされていた可能性があったことを念頭に置くと、ＦＳ１１８が疾患を安定化できることを示している。

【0230】

２．３．２ 中間薬物動態／薬力学的データ
２０１９年８月までに、８つのコホート（８００μｇ、２４００μｇ、０．１、０．３、１、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋ用量）で最大２９人の患者に対して薬物動態／薬力学的分析が実施された。実施例２．２．２に記載されているように、遊離ＦＳ１１８血清濃度を可溶性ＬＡＧ－３とともに測定した。さらに、血液中の増殖（Ｋｉ６７^＋）及び総エフェクターメモリー又はセントラルメモリーＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の頻度を測定し、免疫細胞サブセットを列挙し、ＦＳ１１８の初回投与前及び後に腫瘍組織のＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１発現を定量化した。

【0231】

２．３．２．１ ＰＫ分析
２０１９年５月の結果（実施例２．２．２．１を参照されたい）に続いて、毎週投与される２０ｍｇ／ｋｇ（Ｑ１Ｗ）コホートの患者を含むさらに９人の患者で遊離ＦＳ１１８血清濃度レベルが定量化された。遊離ＦＳ１１８血清濃度レベルは、実施例２．２．２．１に記載されている検証済みのリガンド結合アッセイを使用して定量化された。

【0232】

処置サイクル１及びサイクル２（１サイクルあたり３週間）の開始後の最初の１週間にわたる遊離ＦＳ１１８血清ＰＫプロファイルの分析は、８００μｇ、２４００μｇ、０．１、０．３、１、３又は１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ１Ｗのいずれかを投与された患者コホート全体での曝露（Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ）の用量線形増加を示した。２０ｍｇ／ｋｇを投与された患者からのサンプルのＰＫ分析が進行中であった。推定Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ値は、各患者コホート内のサイクル１及びサイクル２のＰＫプロファイル間で同等であり、これは、抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答が低いか、ＡＤＡを介したＦＳ１１８のクリアランスの加速が低いか又はその欠如を示している。

【0233】

２０１９年５月の結果に見られるように、Ｃ_ｍａｘは、ヒト以外の霊長類からスケーリングされた予測とほぼ同じであったが、クリアランス速度は、予測よりも高かった（ＡＵＣは、予測よりも３０％低かった）。利用可能な第Ｉ相試験データに適合した１コンパートメントモデリングからの遊離ＦＳ１１８の終末クリアランス半減期（Ｔ_１／２）は、１９．６時間と推定される。

【0234】

投与開始の１週間後（サイクル１及び２）且つ次のＦＳ１１８用量の前に、１ｍｇ／ｋｇ以下の投与を受けた患者の血清中の遊離ＦＳ１１８のＣ_トラフレベルは、アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）を下回り、これは、１ｍｇ／ｋｇ Ｑ１Ｗ未満の投与スケジュールで血液中に遊離ＦＳ１１８蓄積が欠如していることを示唆している。３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇコホートの一部の対象は、投与後７日目に、およそ０．１から１０μｇ／ｍＬの範囲で定量可能な遊離ＦＳ１１８のＣ_トラフレベルを示した。

【0235】

２．３．２．２ 可溶性ＬＡＧ－３
２０１９年５月の結果（実施例２．２．２．２を参照されたい）に続いて、毎週投与される２０ｍｇ／ｋｇ（Ｑ１Ｗ）コホートの患者を含むさらに９人の患者で血清総可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）レベルが定量化された。血清総可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）レベルは、実施例２．２．２．２に記載される検証済みＥＬＩＳＡを使用して定量化された。

【0236】

２０１９年５月の中間結果と一致して、分析は、血清総ｓＬＡＧ－３の用量依存的な増加を示した。より具体的には、１、３、１０又は２０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋの用量レベルを投与された患者は、サイクル１及びサイクル２の最初の投与後に総ｓＬＡＧ－３においておよそ１０から１５０倍の増加を示し、最大濃度までの時間（Ｔ_ｍａｘ）は、投与後およそ２～３日で観察された。１ｍｇ／ｋｇの用量レベルでは、総ｓＬＡＧ－３濃度は、次の用量（Ｃ１Ｄ８）の前にベースライン値に戻った。３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ１ｗｋコホートでは、次の投与前に総ｓＬＡＧ－３（トラフ濃度）が蓄積したという証拠がいくつかあった。これは、サイクル１と比較してサイクル２で観察されたｓＬＡＧ－３のレベルがより高いことによってさらに証明される。２０１９年５月の分析をさらに発展させ、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの用量での総可溶性ＬＡＧ－３の増加の程度及び持続時間は、特に、これらの用量レベルでのＦＳ１１８による可溶性ＬＡＧ－３捕捉の飽和がほぼ達成されたことを示唆している。しかし、この明らかな観察結果を確認するには、２０ｍｇ／ｋｇの患者コホートに追加の患者数が必要である。

【0237】

このデータを利用して、１コンパートメントモデリングは、ｓＬＡＧ－３：ＦＳ１１８複合体の１５．８日間の終末クリアランス半減期（Ｔ_１／２）を推定した。遊離ｓＬＡＧ－３の推定終末Ｔ_１／２は、１．６時間であった。ＦＳ１１８ ＰＫ及びｓＬＡＧ－３データの集団及び個別の分析と、薬物動態／薬力学モデリングデータとの高い相関が観察された。これにより、ＡＤＡ干渉及びＡＤＡを介したＦＳ１１８の加速クリアランスの両方がないことが確認される。

【0238】

要約すると、この分析は、ＦＳ１１８投与後の総ｓＬＡＧ－３レベルの用量依存的増加が標的ＬＡＧ－３受容体のＦＳ１１８結合の薬力学的マーカーとして使用できることを示した。この発見は、それによりＦＳ１１８が標的細胞表面に発現するＬＡＧ－３受容体に結合することにより、潜在的に、細胞表面に発現するＬＡＧ－３のシェディングを介して、全身の可溶性ＬＡＧ－３レベルが上昇するという、ＦＳ１１８の提案された作用機序をサポートする。

【0239】

２．３．２．３ 血液中の増殖及び総エフェクター並びにセントラルメモリーＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の頻度
血液中の増殖しているＫｉ６７^＋ＣＤ４^＋及びＫｉ６７^＋ＣＤ８^＋エフェクターメモリー及びセントラルメモリーＴ細胞の頻度をフローサイトメトリー分析によって経時的にモニターした。簡潔には、全血をCyto-Chex（登録商標）に収集し、処理するまで冷蔵保存した。試験ごとに１００μＬの各サンプルを使用した。まず、非特異的結合をヒトＢＤ Ｆｃ遮断液で遮断した。次に、サンプルを表面抗体カクテル（５０μＬ）で染色した後、赤血球を溶解し、BD FACS溶解液で固定した。洗浄した細胞をFix／Perm Bufferで透過処理した後、1X Perm Bufferで２回洗浄した。細胞内抗体カクテル（５０μＬ）を添加し、２～８°Ｃで３０分間インキュベートした。次に、細胞を２％ＦＢＳで２回洗浄し、サイトメーター（BD LSR）での取得のためにTruCountチューブに移した。

【0240】

ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋セントラルメモリーＴ細胞（それぞれＣＤ４５^＋ＣＤ３^＋ＣＤ１９^ｎｅｇＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋によって定義される、ＣＤ４５ＲＡ^ｎｅｇＣＣＲ７^ｐｏｓ発現）又はＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクターメモリーＴ細胞（それぞれＣＤ４５^＋ＣＤ３^＋ＣＤ１９^ｎｅｇＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋によって定義されるＣＤ４５ＲＡ^ｎｅｇＣＣＲ７^ｎｅｇ）の頻度が決定された。さらに、ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋エフェクター又はセントラルメモリーＴ細胞集団内のＫｉ６７^＋細胞の頻度が決定された。３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの患者コホートから入手可能なデータの分析により、ＦＳ１１８は、ベースライン測定と比較して、サイクル１での投与後に増殖するＫｉ６７^＋ＣＤ４^＋及びＫｉ６７^＋ＣＤ８^＋エフェクターメモリー及びセントラルメモリーＴ細胞の頻度の増加を誘導できることが示された。この末梢薬力学的応答の動態学的及び一過性の性質は、前臨床データで観察されたものと一致するＴ細胞活性化を示している。

【0241】

上記と同じフローサイトメトリー分析では、経時的な血液中の免疫細胞サブセットの列挙が実施された。初期データは、ＦＳ１１８投与により、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の絶対数が増加することを示した。応答動態は、一過性であり、血液中の増殖エフェクター又はセントラルメモリーＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の頻度で観察された薬力学的効果と同様であった。これは、中皮腫、子宮頸癌、未分化甲状腺癌及び喉頭癌にそれぞれ罹患している４人の患者で特に観察された。まとめると、予備データは、ＦＳ１１８が患者の全身性免疫活性化応答を誘発できることを示唆している。

【0242】

２．３．２．４ 腫瘍におけるＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の発現
マウス腫瘍モデルの前臨床試験では、以前に、ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体が、ＬＡＧ－３を発現する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に対してＬＡＧ－３抑制を誘導することができる一方、ＬＡＧ－３発現が、代理ｍＬＡＧ－３／ｍＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と同じｍＬＡＧ－３及びｍＰＤ－Ｌ１結合部位を含む２つの抗体分子でマウスを処置した場合に増加したことが示されている（P2399 A LAG3/PD-L1 mAb² can overcome PD-L1-mediated compensatory upregulation of LAG-3 induced by single-agent checkpoint blockade, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March - 03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA）。

【0243】

二重特異性ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＬＡＧ－３抗体であるＦＳ１１８に関連してこの潜在的な効果を調査するために、対の腫瘍サンプル（Ｎ＝４）が患者の投与前（－３日目から－１２日目まで）及び投与後（１９日目から４１日目まで）から取得された。ホルマリン固定及びパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍コア針生検におけるＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の発現は、それぞれインビトロ診断（ＩＶＤ）抗ＰＤ－Ｌ１（クローンＳＰ２６３）アッセイ（Roche Diagnostics/Ventana Medical Systems）及び検証済みの抗ＬＡＧ－３（クローン１７Ｂ４）免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイ（Ventana BenchMark Ultra染色プラットフォーム）を使用して評価した。ＩＨＣ染色後の評価では、１００以上の腫瘍細胞及び２５％を超える腫瘍含有量の選択基準が適用された。評価には、腫瘍細胞の膜性抗ＰＤ－Ｌ１染色のパーセンテージ及び強度に基づくパーセント腫瘍陽性スコア（％ＴＰＳ）の決定及び以下のコンパートメント：腫瘍内間質、上皮内腫瘍成分又は該当する場合には腫瘍周囲領域における、最大５つの高出力フィールドでのＰＤ－Ｌ１^＋又はＬＡＧ－３^＋免疫細胞の定量化が含まれる。

【0244】

全体として、研究のこの時点での予備的な結果は、ＦＳ１１８投与後の腫瘍におけるＰＤ－Ｌ１又はＬＡＧ－３発現の代償的なアップレギュレーションの兆候を示さなかった。

【0245】

２．３．３ 結論
２０１９年８月までに入手可能な中間結果は、２０１９年５月に観察された結論をサポートする（実施例２．２．３を参照されたい）。簡潔には、ＦＳ１１８は、十分に忍容され、最大観察濃度（Ｃ_ｍａｘ）は、カニクイザル試験から予測されたＣ_ｍａｘと一致していた。ＦＳ１１８のクリアランス速度は、予想外に予測より高かったが、試験された用量で持続的な薬力学的応答が観察され、これは、治療効果を示している。実際に、２０１９年８月までに、１１人の患者は、３４．４％の病勢コントロール率（ＤＣＲ）を表す何らかの安定性疾患を有することが観察された。これらの結果は、患者集団に複数の異なるタイプの癌が含まれ、全ての患者が進行した悪性腫瘍を有し、治験に入る前に複数の代替処置計画に失敗し、他の処置の選択肢がなく、一部の患者がＦＳ１１８による処置の恩恵を受けることができないほど危険にさらされていた可能性があったことを念頭に置くと、ＦＳ１１８が疾患を安定化できることを示している。

【0246】

さらなるサポートとして、２０１９年８月の結果は、ＦＳ１１８が、週１回投与される３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で可溶性ＬＡＧ－３（ｓＬＡＧ－３）レベルの持続的な増加を誘導できることを示した。ｓＬＡＧ３レベルは、マウスの治療効果と関連していることが示されている。

【0247】

さらに、ＦＳ１１８は、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの患者コホートでＴ細胞の活性化を示す速度論的及び一過性の末梢薬力学的応答を誘発することが示されている。さらに、Ｃ_トラフレベルでのＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋セントラルメモリー及びエフェクターＴ細胞の増殖の増加は、Ｃ_トラフレベルでの持続的な薬力学的応答のさらなる証拠を提供し、ＦＳ１１８の仮定された作用機序と一致するＦＳ１１８投与後の腫瘍におけるＰＤ－Ｌ１又はＬＡＧ－３発現の代償性アップレギュレーションの兆候はなかった。

【0248】

２．４ 中間データ（２０２０年４月）
２．４．１ 中間臨床データ（２０２０年４月）
２０２０年４月までに、さらに３人の患者が研究に登録された。したがって、合計４３人の患者が登録された。これらの４３人の患者のうち、２人の患者が処置中であった。残りの４１人の患者は、処置を完了／中止した。１４人の患者は、ｉＣＰＤにより、４人の患者は、無関係の有害事象により、１０人の患者は、医師の決定又は進行性疾患の臨床的兆候により、１０人の患者は、他の考慮事項による。これらの４１人の患者のうち、１４人がフォローアップ中であり、２７人が治験を完了した。

【0249】

研究に登録されたさらに３人の患者に関して、２０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのＦＳ１１８のＩＶ投与による週１回の投与は十分に忍容され、スポンサーに報告された用量制限毒性はなかった。

【0250】

治験に登録された全ての患者に関して、観察された処置中に発現した有害事象の約２０％は、ＦＳ１１８に関連しており、大部分は軽度から中等度の重症度であった（グレード１又は２、有害事象の共通用語基準ｖ４．３）。ＦＳ１１８関連の有害事象のおよそ５％がグレード３に分類された。ＦＳ１１８との関係で報告された重篤な有害事象（ＳＡＥ）はなかった。ＳＡＥは、死亡を生じる、生命を脅かす、入院を必要とする、障害、患者の身体への恒久的な損傷又は先天性異常／先天性欠損症を引き起こす、恒久的な障害又は損傷又は他の重大な事象、例えばアレルギー性気管支痙攣を防ぐための介入を必要とする有害事象として定義される。研究中に発生した死亡で、ＦＳ１１８に関連していると見なされたものはなかった。要約すると、新たな安全上のリスクは特定されなかった。

【0251】

２０２０年３月２５日の時点で、３、１０又は２０ｍｇ／ｋｇコホートの３０／３６人の患者が評価可能な腫瘍スキャンを受けた。ＦＳ１１８（ＢＯＲ及びｉＢＯＲ）による処置に対する最良の応答として、１７人の患者が安定性疾患（ＳＤ）を有し、１３人が進行性疾患（ＰＤ）を有すると記録された。これは、４７．２％の病勢コントロール率（ＤＣＲ）を表し、２０１９年８月から１２．８％の増加に相当する。安定性疾患を有すると記録された１７人の患者は、表８（下記）に列挙されている。

【0252】

【表8】

【0253】

第Ｉ相試験の残りの２人の患者（両方とも週１回、２０ｍｇ／ｋｇの用量を投与）のうち、１人の患者は、平滑筋肉腫（軟部組織肉腫）を有し、２０２０年３月２５日時点で３２週間にわたって治験を受けていた。もう１人の患者は、注目すべきことに、未分化甲状腺癌（ＡＴＣ）を有し、２０２０年３月２５日時点で１年を超えて（５５週間）治験を受けていた。

【0254】

２．４．２ 結論
これらの結果は、ＦＳ１１８が長期間投与すると良好な忍容性を示し、より重要なことに、１～２０ｍｇ／ｋｇの範囲内の投与量でのＦＳ１１８による処置が長期の疾患安定化をもたらし得る（１８週間を超える複数の患者がＢＯＲ／ｉＢＯＲとしてＳＤを完了し、１人の患者が１年を超えて治験を継続）ことを継続して示す。治験の患者集団に複数の異なるタイプの癌が含まれ、全ての患者が進行した悪性腫瘍を有し、治験に入る前に複数の代替処置計画に失敗し、一部の患者がＦＳ１１８による処置の恩恵を受けることができないほど危険にさらされていた可能性があったため、これは、特に重要である。この困難な患者集団にも関わらず、ＦＳ１１８は、４７．２％の病勢コントロール率（ＤＣＲ）を達成することができた。これは、２０１９年８月から１２．８％の増加に相当する。この増加は、３～２０ｍｇ／ｋｇの範囲のＦＳ１１８の用量が安定性疾患化を達成できることをさらに示している。

【0255】

実施例３：以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する耐性に基づいたＦＳ１１８に応答する可能性が高い患者の選択
３．１ 背景
進行中のＦＳ１１８試験に含まれる全ての患者は、以前に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法を受けている間又は受けた後に悪化していた。

【0256】

初期の結果（２０１９年８月）は、ＦＳ１１８が３４．４％の病勢コントロール率（ＤＣＲ）で一部の患者の疾患安定化が可能であり（実施例２．３．１を参照されたい）、２０２０年４月までに４７．２％に上昇することを示した（実施例２．４．１を参照されたい）。本発明者らは、ＰＤ－Ｌ１阻害と組み合わせたＬＡＧ－３阻害（二重チェックポイント阻害）又はＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の二重特異性標的化によって提供される新規生物学によって提供される追加の利益のために、ＦＳ１１８がこれらの患者に利益を提供し得ると仮定した（国際公開第２０１７２２０５６９Ａ１号）。抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む計画のみによる再処置で患者が臨床的利益を達成することは予想されていなかった（Fujita et al., Anticancer Res.(2019)；Fujita et al., Thoracic Cancer (2019)；Martini et al., J. Immunotherapy Cancer (2017)）。

【0257】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断に対する耐性のメカニズムの１つは、Ｔ細胞の機能を損ない得るシグナル伝達受容体のアップレギュレーションである可能性がある（Nowicki et al., The Cancer Journal (2018)）。このクラスの受容体には、ＬＡＧ－３が含まれる。この耐性のメカニズムは、Ｔ細胞が最初に応答するが、その後、枯渇してＴ細胞機能の喪失につながる獲得耐性の一形態であると考えられている。これは、患者が初期治療に応答しない一次耐性とは対照的である。

【0258】

したがって、本発明者らは、ＦＳ１１８が、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する獲得耐性を有する患者に臨床的利益を提供する可能性が最も高いと仮定し、ＦＳ１１８による処置のために患者を選択するために使用できる特定の基準を定義するために分析を行った。これらの基準を定義するために、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法による各患者の以前の処置歴に基づくサブグループが定義された（これらの療法に対する最良の全体的応答（ＢＯＲ）及びこれらの療法による処置の月数）。ＦＳ１１８から得られる臨床的利益は、各患者がＦＳ１１８処置を受けた週数に基づいており、「ＦＳ１１８完了週数」と名付けられた。

【0259】

３．２ 方法論
２０１９年１２月までに第Ｉ相試験に登録された患者のうち、４３人の患者で抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による処置歴が知られていた。これらの以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法には、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、セミプリマブ、ＭＳＢ－２３１１又はＫＮ０３５の単独又は別の薬剤（例えば、化学療法又は免疫療法（例えば、抗ＣＴＬＡ－４））との組み合わせによる処置が含まれていた。以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法がＦＳ１１８による処置の直前に行われたとは限らず、むしろ、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法は、対象の癌に対する患者の処置歴のいずれの時点でも行われ得た。

【0260】

初めに、処置歴に基づく６つのサブグループは、以下のように定義された。
・ＰＤ（処置期間に関わらず、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法のＢＯＲとしての進行性疾患（RECIST 1.1による；Eisenhauer et al., 2009））。
・ＳＤ（ＢＯＲとしての安定性疾患（RECIST 1.1による）であり、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法による処置期間が３ヶ月以下（「０～３ヶ月」として表される）。
・ＳＤ（ＢＯＲとしての安定性疾患（RECIST 1.1による）であり、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法による処置期間が３ヶ月を超えるが、６ヶ月未満（「３～６ヶ月」として表される）。
・ＳＤ（ＢＯＲとしての安定性疾患（RECIST 1.1による）であり、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法による処置期間が６ヶ月以上（「６ヶ月＋」として表される）。
・ＰＲ（以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法に対するＢＯＲとしての部分応答（RECIST 1.1による））。
・以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法による処置期間に関わらず、以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法（「ＵＮＫ」）に対する不明なRECIST基準（ＢＯＲ）。

【0261】

この研究で評価された患者のいずれも、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１を含む療法に対するＣＲ（完全応答）を有しなかったため、ＣＲ患者のサブグループは、確立されなかった。

【0262】

上記で定義された各サブグループの患者は、最初に、各患者がＦＳ１１８処置を受けた週数「ＦＳ１１８完了週数」に対してプロットされた。

【0263】

この最初の分析に続いて、以下の一次耐性及び獲得耐性の定義が導かれた。
・ＰＤサブグループ及びＳＤ０～３ヶ月サブグループの組み合わせとして定義される「一次耐性」。
・ＳＤ３～６ヶ月、ＳＤ６ヶ月＋及びＰＲサブグループの組み合わせとして定義される「獲得耐性」。
・不明（以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対するＢＯＲは不明）

【0264】

以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１含有療法に対するＣＲを有する患者が試験に参加していた場合、患者は、ＳＤ ３～６ヶ月、ＳＤ ６ヶ月＋及びＰＲサブグループと同様に、進行前の以前の治療から有意な臨床的利益を達成したことにも基づいて獲得耐性群に分類されたであろう。これは、抗ＰＤ－１及び抗ＰＤ－Ｌ１療法が完全応答をもたらす可能性があり、これらの患者の一部は、その後、耐性メカニズム及び進行性疾患を発症するためである。抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１の後に完全応答を達成する患者の耐性のメカニズムは、部分応答を達成する患者のものと同様であると予想される。

【0265】

一次耐性、獲得耐性及び不明なサブグループのそれぞれが「ＦＳ１１８週間完了」に対してプロットされた。

【0266】

プロットについて、「ＦＳ１１８週間完了」データは、２０２０年３月２５日まで正確であった。これらのデータは、進行中の治験からのものであった。全てのプロットは、パッケージ「ggplot」を使用したＲバージョン３．６．１（www.cran.r-project.org）を使用して作成され、ノンパラメトリックウィルコクソン順位検定計算を使用した統計分析は、同じバージョンのＲを使用して実施された。

【0267】

３．３ 結果
２０１９年１２月までの正確な患者データを使用して、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法（ＰＤ、ＳＤ ０～３ｍ、ＳＤ ３～６ｍ、ＳＤ ６ｍ＋、ＰＲ、ＵＮＫ）に対する以前の応答に基づいて定義された６つの初期サブグループの分析は、分析時にこれらの患者が完了したＦＳ１１８処置の週数に関して、これらの群間で有意差（ウィルコクソン順位和検定ｐ＞０．０５）を示さなかった。しかし、この抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１処置を、３ヶ月を超えて受けた、安定性疾患（ＳＤ）の以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法に対して最良の全体的応答（ＢＯＲ）を有する患者（部分応答者を含む）は、ＰＤ及びＳＤ ０～３ｍサブグループと比較した場合、ＦＳ１１８に対する応答時間がより長いという傾向が観察された。

【0268】

この驚くべき観察に基づいて、６つの初期サブグループは、その後、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を含む療法による以前の処置に対する患者の応答に基づいて２つの群に解析された。最初の群は、ＰＤ及びＳＤの０～３ヶ月のサブグループを含み、これらの患者が以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法から有意な臨床的利益を得られなかったという事実に基づき、「一次耐性」と呼ばれた。２番目の群は、ＳＤ ３～６ヶ月、ＳＤ ６ヶ月＋及びＰＲサブグループを含み、その後、進行性疾患を経験する前に３ヶ月超にわたる以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法で臨床的利益を得た患者に基づき、「獲得耐性」と名付けられた。

【0269】

患者を一次耐性群及び獲得耐性群にグループ化した場合、それぞれの群の患者がＦＳ１１８処置を継続した週数とそれぞれを比較すると、これらの２つの患者群間に著しい差異が観察された（マン・ホイットニー・ウィルコクソン検定、ｐ＝０．０５９）。より具体的には、獲得耐性群の患者は、ＦＳ１１８による処置に応答し、処置から利益を得る可能性がより高いことが観察された。特に、ＦＳ１１８処置で１８週間以上を完了した全ての患者は、以前の抗ＰＤ－１療法のＢＯＲが不明であった１人の患者を除いて、獲得耐性群からの患者であった。しかし、ＢＯＲが不明な後者の患者は、以前の抗ＰＤ－１療法を、１年を超えて継続していたことが知られており、したがって、この患者は、獲得耐性を有すると分類されるＢＯＲを有していたと考えられる。一次耐性患者のいずれも、１７週間を超えて研究を続けることができなかった。これらの観察結果は、獲得耐性群の患者が処置を継続しているため、一次耐性患者群と獲得耐性患者群との間で観察された差の統計的有意性が改善されたことを見出した、２０２０年３月２５日に入手可能な追加の臨床データによってさらにサポートされた（マン・ホイットニー・ウィルコクソン検定ｐ＝０．０４８、図７）。

【0270】

さらに、この分析は、進行中の研究からのものであるが、一次耐性患者のいずれも研究に残っていないことに留意することが重要である。

【0271】

２０１９年１２月までに、３９人の患者がＦＳ１１８処置中に評価可能な腫瘍スキャンを受けた。これらの患者を図８に示し、各患者が獲得耐性又は一次耐性のいずれの表現型を有するかを示す。獲得耐性及び一次耐性集団の両方で安定性疾患が観察されたが、１８週間を超えるＦＳ１１８処置が完了した全ての患者（獲得耐性表現型を有していた）は、安定性疾患の測定値を少なくとも１回有していた（図８）。

【0272】

ＦＳ１１８処置への応答の可能性に関して獲得耐性患者で観察された現象は、特定の用量レベル（図７）又は臨床的適応（図８及び９）とは無関係であるように見えた。

【0273】

３．４ 結論
要約すると、獲得耐性を有する患者（ＳＤ、ＰＲ又はＣＲのＢＯＲを有し、したがって、その後、進行性疾患を経験する前に、３ヶ月を超える処置期間にわたり以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法を受けている間、何らかの臨床的利益を得たと定義される）は、驚くべきことに、一次耐性を有する患者（３ヶ月以下継続した以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法から臨床的利益を得なかったか、又は何らかの臨床的利益を得た患者として定義される）よりも長くＦＳ１１８処置に陽性応答する可能性が高いことが見出されている。処置計画を含む以前のＰＤ－（Ｌ）１での疾患進行後のＰＤ－（Ｌ）１抗体による患者の再処置は、推奨されておらず、歴史的に、患者は、利益をほとんど得られないため、これは、特に重要である（Fujita et al., Anticancer Res.2019；Fujita et al., Thoracic Cancer, 2019；Martini et al., J. Immunotherapy Cancer, 2017）。したがって、本発明者らは、ＦＳ１１８処置に応答する可能性がより高い患者を選択するための閾値を特定した。この閾値は、ＦＳ１１８の用量又は癌のタイプとは無関係のようである。

【0274】

補足として、本発明者らは、次に、ＢＩ－７５４０９１（抗ＰＤ－１ ｍＡｂ）と組み合わせたＩｇＧ４モノクローナル抗体ＢＩ－７５４１１１（抗ＬＡＧ－３）を調査している進行中の３つの臨床研究、ＮＣＴ０３６９７３０４、ＮＣＴ０３７８０７２５及びＮＣＴ０３１５６１１４を特定した。これらの研究は、以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１ベースの治療に対して二次耐性（獲得耐性）を示す患者コホートの使用に言及している。これらの臨床研究に関連して公に入手可能な情報のいずれも、これらのコホートが選択された理由、二次耐性の定義がどのように導き出されたかを示しておらず、一次耐性患者集団と比較して二次耐性患者コホートの応答が改善されていることを示す提案又はデータも提供していない。したがって、これらの臨床研究は、ＦＳ１１８に関連して補助を提供せず、現在の研究に関連していないようである。

【0275】

実施例４：以前の抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する耐性に基づいてＦＳ１１８による処置を受ける患者を選択するためのマーカーとしてのＰＤ－Ｌ１発現
４．１ 背景
進行中のＦＳ１１８治験に参加している全ての患者は、抗ＰＤ－１又は抗ＰＤ－Ｌ１療法による以前の処置を受けており、これらの経路を標的にすると、チェックポイント受容体のレベルが変化し得ることは、Faroudi et al.（American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March - 03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA）によって示されているため、本発明者らは、ＦＳ１１８による処置前にＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の発現レベル（「ベースライン」）を決定し、これらの発現レベルとＦＳ１１８による処置期間との間に相関関係が存在するかどうかを判断しようとした。この分析では、患者は、実施例３で定義されているように、抗ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１療法による以前の処置に対して「獲得」又は「一次」耐性を有するものとしてグループ化された。

【0276】

４．２ 方法
ＰＤ－Ｌ１発現は、ＦＳ１１８による処置前に患者から採取した生検で測定された（「ベースライン」）。生検が分析に適格であるために、腫瘍細胞含有量が２５％以上である必要があり、１００以上の腫瘍細胞が存在する必要があった。腫瘍サンプルをホルマリン固定及びパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）し、染色し、実施例２．３．２．４に記載されるように評価した。ＰＤ－Ｌ１パーセント腫瘍陽性スコア（％ＴＰＳ）は、ＰＤ－Ｌ１の陽性染色を示す生検サンプル中の腫瘍細胞のパーセンテージとして計算された。％ＴＰＳは、利用可能な全てのサンプルについて測定された。これらのサンプルは、獲得耐性を有する１３人の対象及び一次耐性を有する４人の対象であった。

【0277】

４．３ 結果
ベースライン時のＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳ及びＦＳ１１８による処置の週数を比較すると、獲得耐性群で正の相関が観察された（片側スピアマン相関係数ｒ＝０．５７、ｐ＝０．０２２）。逆に、一次耐性患者グループでは、ＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳとＦＳ１１８処置時間との間に相関関係は見られなかった（片側スピアマン相関係数ｒ＝－０．４０、ｐ＝０．３７）。さらに、獲得耐性群では、３人の患者がＦＳ１１８で３０週間以上処置され、ＦＳ１１８による疾患制御が証明された。これらの３人の患者は、群内で最も高いＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳも有していた（図１０を参照されたい）。獲得耐性群の正の相関を使用して、ＦＳ１１８による処置に応答する可能性がより高い患者を選択するために使用できる予後閾値が決定された。これは、相関傾向線をプロットし、内挿を介してこれを使用して、１８週間のＦＳ１１８処置と相関するＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳスコアを決定することによって行われた。１８週間以上の処置の継続が獲得耐性群で観察されたが、一次耐性群で観察されなかったため、ＦＳ１１８による臨床的有益性を示していると見なされ、１８週間が選択された。このようにして決定されたＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳスコアは、１５％であった。

【0278】

４．４ 結論
全体として、これらの結果は、獲得耐性患者における腫瘍によるＰＤ－Ｌ１の発現（ＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳ）が、ＦＳ１１８によって達成される疾患制御の寿命と正の相関があることを示す。獲得耐性群でＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳが最も高かった３人の患者の全ては、ＦＳ１１８による長期の疾患制御を示した（ＦＳ１１８処置で３０週間以上）。獲得耐性群の正の相関を使用して、１５％のＰＤ－Ｌ１％ＴＰＳが、ＦＳ１１８による処置に対して持続的な応答を示す可能性が特に高い獲得耐性群の患者を選択するための予後閾値として確立された。

【0279】

実施例５：獲得耐性及び一次耐性患者の免疫応答に対するＦＳ１１８の効果
５．１ 背景
獲得耐性患者は、一次耐性患者よりもＦＳ１１８処置を長く継続する可能性が高いという実施例３の観察に続いて、本発明者らは、これら２つの群間でＦＳ１１８に対する薬理学的応答に差があるかどうかを決定しようとした。一次耐性を有する患者は、腫瘍の抑制因子又は免疫系による腫瘍の認識の欠如の結果としての不十分なＴ細胞機能のため、以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に失敗し得る（Nowicki et al., 2018）。獲得耐性を有する患者は、最初にＴ細胞応答を示し得るが、ＬＡＧ－３のアップレギュレーションを含む複数のメカニズムに起因する可能性のあるＴ細胞機能の喪失があると考えられている。ＦＳ１１８によるＴ細胞の活性化は、インビトロでのＦＳ１１８の作用機序であることが実証されている（国際公開第２０１７２２０５６９Ａ１号）。したがって、本発明者らは、ＦＳ１１８に応答する患者の免疫系の能力が、以前の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に対する患者の応答に依存し得、免疫応答を増強するＦＳ１１８の能力が、臨床的利益を提供するＦＳ１１８において重要であり得ると仮定した。

【0280】

５．２ 方法論
ＦＳ１１８による処置の過程中、治験中の３５人の患者の血流中の末梢免疫細胞数に対するＦＳ１１８の効果が評価された（実施例３で定義されているように、２４人の患者は、獲得耐性を有し、８人の患者は、一次耐性を有し、３人は、不明）。血液サンプルは、患者から採取し、全血免疫細胞のＣＤ３^＋リンパ球、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞の絶対細胞数（ＴＢＮＫ細胞数）は、CaprionBiosciences（CaprionBiosciences, Inc., Montreal, Quebec, Canada）によって実施された。端的には、採取した血液は、処理するまで４℃でCyto-Chex（登録商標）ＢＣＴチューブに保存した。次に、１００μＬの全血を使用して、Caprionによる単回複製で予め定義されたＴＢＮＫパネルで染色した。染色後、サンプルをBD LSRフローサイトメーターで２４時間以内に取得し、FlowJoソフトウェアを使用して定量した。絶対細胞数は、ＦＳ１１８処置前（「ベースライン」と呼ばれる）及びＦＳ１１８処置中の両方のいくつかの時点で測定された。

【0281】

その後の絶対細胞数のデータ分析では、１ｍｇ／ｋｇ以上の用量のＦＳ１１８を投与された患者のみが考慮された。

【0282】

細胞タイプごとのベースラインからの細胞数の変化率は、以下のように計算された。
ベースラインからの変化率＝［（細胞数_{処置日における}－細胞数_{ベースラインにおける}）／細胞数_{ベースラインにおける}］×１００

【0283】

次に、各細胞タイプについて、ベースラインからの変化率をＦＳ１１８処置の時間に対してプロットした。免疫細胞数に基づく免疫応答プロファイルは、患者ごとに個別に計算された。

【0284】

患者は、実施例３で定義されるように、「一次」又は「獲得」耐性に分類された。

【0285】

５．３ 結果
図１１は、２人の代表的な患者のベースラインからの変化率を示す。「一次耐性」を有する患者の免疫細胞応答プロファイルの代表的な例としての患者１００４－０００３及び「獲得耐性」を有する患者の免疫細胞応答の代表的な例としての患者１００２－００１４である。獲得耐性を有する患者は、一次耐性を有する患者よりも、ＣＤ３^＋リンパ球、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の数が増加する傾向を示した（これらの細胞サブセットのベースラインからの変化率に基づく）。

【0286】

さらに、ＦＳ１１８処置の過程で観察されたベースラインからのＣＤ３^＋リンパ球の最大倍率変化を各患者のＦＳ１１８処置の時間に対してプロットした。これは、一次及び獲得耐性グループの両方に対して行われた。ベースラインと比較した免疫細胞数の倍率変化によって測定されるＣＤ３^＋リンパ球応答の大きさは、獲得耐性群のＦＳ１１８処置の期間と有意に正の相関があることがわかった（片側スピアマン相関係数ｒ＝０．４５、ｐ＝０．０２５）が、これは、一次耐性群では有意でなかった（片側スピアマン相関係数ｒ＝０．５２、ｐ＝０．０９８）。

【0287】

５．４ 結論
これらのデータは、患者の血液で観察されたＴ細胞及びＮＫ細胞の増加及びＣＤ３^＋リンパ球の倍数変化の増加がＦＳ１１８による処置の結果であることを示しており、獲得耐性を有する患者の免疫系が、ＦＳ１１８処置による免疫応答をより上昇させられることを示している。したがって、本明細書で定義される獲得耐性は、ＦＳ１１８に応答する可能性がより高い患者を選択するための閾値として使用することができる。

【0288】

実施例６：ＦＩＨデータ及びモデリングに基づく第Ｉ相拡大及び／又は第ＩＩ相試験の用量推奨
６．１ 概要
将来の臨床研究のための用量選択を導くために、ＦＩＨ第Ｉ相試験データ（実施例２～５に記載）の複数のパラメーターを収集及び分析した。ＦＩＨ第Ｉ相試験で試験された用量ごとに、これらのパラメーターは、抗薬物抗体（ＡＤＡ）及び処置中に発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の存在並びに処置時間、腫瘍増殖速度、直径の合計による腫瘍サイズ及び応答者の数によって評価される有効性を含んでいた。血清中のＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１受容体三量体複合体形成、総ｓＬＡＧ３及び総ｓＰＤ－Ｌ１プロファイルのシミュレーションも実施された。用量、ＡＤＡレベル、応答者の数によって評価される有効性及び三量体複合体形成のシミュレーションを比較した場合、ほとんどのパラメーターで違いは観察されなかったが、好ましい用量をさらなる研究に推奨できるように、用量間に十分な差異が示された。

【0289】

６．２ ＦＩＨ血清サンプルのＡＤＡ分析
ＦＳ１１８などのタンパク質治療剤の投与は、抗薬物抗体（ＡＤＡ）を誘導する可能性があり、薬物動態／薬力学的特性に影響を与える可能性がある。ＦＩＨ研究におけるヒト血清サンプル中のＦＳ１１８に対するＡＤＡの検出及び特性評価は、臨床試験をサポートするために実施された。ＦＳ１１８ ＡＤＡアッセイは、BioAgilytix Labsで開発された。簡単に説明すると、実施例１．２．２で説明したものと同様の電気化学発光（ＥＣＬ）MSDプラットフォームを使用したブリッジングアッセイを使用して、ヒト血清中のＦＳ１１８に結合する抗体を測定した。ビオチン化ＦＳ１１８を使用してＡＤＡを捕捉し、次にMSD TAG-NHS-ester（MSD #R91BN）でタグ付けされたＦＳ１１８を使用して検出した。患者の血清サンプルからのＡＤＡレベル（ＥＣＬシグナル）を測定し、プールされた未処置のヒト血清からなる陰性対照に正規化し、ＦＳ１１８用量でグループ化した（表９）。

【0290】

【表9】

【0291】

３ｍｇ／ｋｇの週１回投与群は、１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇの週１回投与計画と比較してＡＤＡのレベルが有意に高かった（ｐ≦０．０５、マンホイットニー検定）。より低い薬物用量でのより高いＡＤＡレベルは、ＡＤＡ応答「を通して投与する」高用量とも呼ばれることがあり、一般的に観察される現象である（Chirmule, 2012）。ＡＤＡのレベルの違いにも関わらず、ＴＥＡＥとＦＳ１１８処置との間に明らかな用量関係は観察されなかった（実施例２．３．１を参照されたい）。免疫原性、薬物動態／薬力学的特性及び毒性に対するＡＤＡの影響の可能性を最小限に抑えるために、将来の研究では、週１回、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの投与計画が好ましいであろう。

【0292】

６．３ ＦＩＨ第Ｉ相試験の有効性データのベイズ分析
ＦＳ１１８による処置に応じて収集されたＦＩＨ ＢＯＲ／ｉＢＯＲ有効性データを使用して、３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ、週１回の各投与群内において、将来の試験で安定性疾患を示す患者の頻度を予測するためにベイズ分析を使用した。

【0293】

ＦＩＨ第Ｉ相試験の患者におけるＢＯＲ／ｉＢＯＲとしての安定性疾患の発生は、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの週１回投与群の患者について計算された。このデータは、以下の表１０に示すように、将来の試験において各用量レベルで患者が安定性疾患を示す確率を推定するために使用された。

【0294】

【表10】

【0295】

例えば、将来の治験（例えば、第Ｉ相拡大又は第ＩＩ相）に２４人の患者が登録され、９０％の信頼区間を考慮して表１０に示されている推定確率を利用するものとすると、ＦＳ１１８の用量あたりの応答者（すなわちＢＯＲ／ｉＢＯＲとして少なくとも安定性疾患を示す患者）の数は、以下のようになると推定される。
週１回３ｍｇ／ｋｇ：４～１４人の応答者
週１回１０ｍｇ／ｋｇ：１１～１９人の応答者
週１回２０ｍｇ／ｋｇ：１１～１９人の応答者

【0296】

上に示したように、週１回の１０ｍｇ／ｋｇ及び週１回の２０ｍｇ／ｋｇの両方の用量は、最も高い割合の患者で安定性疾患を誘発することにより、最良の応答結果を達成すると予測される。したがって、このベイズ分析に基づく将来の試験では、これらの用量のいずれかが好ましい。

【0297】

６．４ 薬力学的マーカーとしての三量体ＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１受容体複合体形成
ＦＳ１１８によるＴ細胞の活性化は、インビトロでのＦＳ１１８の作用機序であることが実証されている（国際公開第２０１７２２０５６９Ａ１号）。腫瘍におけるＦＳ１１８の治療効果は、ＦＳ１１８がＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１に同時に結合し、そうでなければＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１シグナル伝達によって生成される免疫抑制シグナルを阻害する結果として、腫瘍特異的Ｔ細胞が腫瘍微小環境で活性化された結果であると仮定された。ＦＩＨ第Ｉ相試験の血清由来データを使用して、血清及び腫瘍微小環境の両方で三量体複合体形成をシミュレーションし、特に１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、週１回の投与計画を選択するための投与計画選択の薬力学的マーカーとして使用した。

【0298】

ＦＩＨ研究で収集された薬物動態／薬力学的データから、１週目及び４週目の用量別の遊離ＦＳ１１８の中央値、総ｓＬＡＧ３及び総ｓＰＤ－Ｌ１血清濃度プロファイルが得られた。これらのデータは、ＦＳ１１８の用量が大きいほど、血清及び腫瘍微小環境の両方で遊離ＦＳ１１８濃度が高くなることを予測するための基礎を提供した。これらのデータから、進行性固形腫瘍患者における遊離ＦＳ１１８、総ｓＬＡＧ－３及び総ｓＰＤ－Ｌ１血清濃度の集団モデルが開発された。このモデルは、将来の試験のための投与計画の選択を通知するために、投与計画を腫瘍内の三量体複合体の形成と関連付けるシミュレーションを実行するために使用された。モデル開発には、段階的アプローチが使用された（表１１）。まず、遊離ＦＳ１１８血清濃度を１コンパートメントＰＫモデル及び線形除去でモデリングした。次に、総ｓＬＡＧ－３及び総ｓＰＤ－Ｌ１血清濃度を追加し、結合モデルをフィッティングした。遊離ｓＬＡＧ－３及び遊離ｓＰＤ－Ｌ１と比較してＦＳ１１８への結合並びにＦＳ１１８：ｓＬＡＧ－３及びＦＳ１１８：ｓＰＤ－Ｌ１複合体のより遅い除去のシミュレーションは、患者に見られるＦＳ１１８処置時の総ｓＬＡＧ－３及び総ｓＰＤ－Ｌ１血清濃度の増加が観察されたことを説明することができた。当初、インビトロで測定された平衡解離定数がそれぞれの複合体に使用されたが、推定された平衡解離定数を有するモデルは、観察されたプロファイルをよりよく説明することができた。遊離ＦＳ１１８血清濃度プロファイルの適合は、ｓＬＡＧ－３及びｓＰＤ－Ｌ１の結合の追加及び除去によって変更されなかった。ｓＬＡＧ－３及びｓＰＤ－Ｌ１は、不特定のソースから一定に生成されると想定されていた。

【0299】

この時点で、モデルは、観察された遊離ＦＳ１１８、総ｓＬＡＧ－３及び総ｓＰＤ－Ｌ１血清濃度を説明することができた。ＦＳ１１８投与計画を有効性と関連付けるために、血清及び腫瘍微小環境の両方における細胞表面ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１受容体への結合をパラメーター推定後にモデルに追加して、血清及び腫瘍微小環境における三量体ＦＳ１１８：ＬＡＧ－３：ＰＤ－Ｌ１複合体を決定した。

【0300】

腫瘍微小環境をモデリングするために、単純な仮定が行われた。第一に、遊離ＦＳ１１８腫瘍濃度は、常に遊離ＦＳ１１８血清濃度（生体内分布係数として表される）の一部であり、血清と腫瘍との間に即時平衡があったと仮定された。腫瘍の質量が小さく、全身のＦＳ１１８濃度に影響を与えないという仮定の下において、血清から腫瘍へのＦＳ１１８の質量流量は、モデリングされなかった。したがって、腫瘍中の遊離ＦＳ１１８濃度は、生体内分布係数（ＢＣ）により、［ＦＳ１１８］_腫瘍＝ＢＣ［ＦＳ１１８］_血清として推定された。ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１の腫瘍濃度は、一定であると仮定されたＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１受容体の血清濃度と同じであると仮定された。細胞表面受容体への結合は、可溶性標的への結合について推定されたのと同じ平衡解離定数を使用してモデリングされた。

【0301】

【表11】

【0302】

以下の投与計画がシミュレーションされた：（ｉ）１時間のＩＶ注入として週１回投与される１、３、１０又は２０ｍｇ／ｋｇ、又は（ｉｉ）１時間のＩＶ注入として２週間に１回投与される３、１０又は２０ｍｇ／ｋｇ。シミュレーションは、mlxR 4.0.0ライブラリを使用してR3.6.0（R Development Core Team 2008）で実行された。シミュレーションでは、ＦＩＨ第Ｉ相試験患者からのMonolix（条件付き分布のモード）による個々のパラメーター推定値を使用した。次に、これらの個々の予測プロファイルの平均をプロットした。シミュレーションされた投与計画のいずれが血清及び腫瘍において最高の三量体複合体濃度（ＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１）を生成したかが調査された。

【0303】

シミュレーションされた個々の細胞表面三量体複合体（ＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１）の平均は、第Ｉ相試験患者からの個々の推定値を使用して、異なるＢＣの血清及び腫瘍における総ＬＡＧ－３受容体のパーセンテージとして得られ、プロットされた。シミュレーションにより、遊離ＦＳ１１８濃度が高いほど、三量体ＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１複合体濃度が低くなり、二量体ＦＳ１１８：ＬＡＧ３及びＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１複合体が有利になることが明らかになった。また、ＦＩＨ研究で収集されたデータを使用して、ＦＳ１１８の投与量が多いほど、遊離ＦＳ１１８濃度が高くなることが示された。最適な遊離ＦＳ１１８の濃度範囲は、約０．１～１μｇ／ｍＬであった。ＢＣが１０％である場合、インビボで腫瘍微小環境を最もよく模倣すると想定され、１０ｍｇ／ｋｇの週１回投与は、０．１～１μｇ／ｍＬの範囲の遊離ＦＳ１１８濃度を生成する可能性がより高いため、２０ｍｇ／ｋｇの週１回投与よりも三量体複合体濃度が高かった。

【0304】

これは、高すぎる用量及び／又は多すぎる投与が三量体複合体濃度を低下させ、したがってＦＳ１１８がＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１に同時に結合することによって誘発されるＴ細胞の活性化を低下させ、腫瘍の阻害に対する効果を低下させることも意味する。

【0305】

６．５ 結論
ＦＩＨ第Ｉ相試験データの複数の要素が分析され、将来の試験のための用量選択を導くために使用された。第一に、異なるＦＳ１１８用量でのＡＤＡの分析は、週１回の投与で１０ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇと比較して、週１回の投与で３ｍｇ／ｋｇにおいてより高いレベルのＡＤＡが検出されたことを示した。潜在的な免疫原性及び毒性を最小限に抑えるために、１０ｍｇ／ｋｇで週１回、２０ｍｇ／ｋｇで週１回の計画は、３ｍｇ／ｋｇで週１回よりも好ましいであろう。第二に、第Ｉ相ＢＯＲデータのベイズ分析では、週１回３ｍｇ／ｋｇの計画よりも、週１回１０ｍｇ／ｋｇ又は週１回２０ｍｇ／ｋｇの計画で投与した場合、患者がＢＯＲ／ｉＢＯＲとしてＳＤを示す可能性が高いと推定された。最後に、三量体複合体形成の薬物動態／薬力学的モデリング及びシミュレーションにより、三量体ＬＡＧ３：ＦＳ１１８：ＰＤ－Ｌ１複合体濃度は、ＢＣを１０％と仮定して、週１回１０ｍｇ／ｋｇの用量で最高であることが明らかになった。より高い三量体複合体は、Ｔ細胞の活性化及び腫瘍増殖の阻害につながると仮定されている。

【0306】

上記の観察を組み合わせると、将来の試験では、１０ｍｇ／ｋｇ、週１回の投与が好ましい。

【0307】

上記のデータから導き出される週１回７００ｍｇの固定用量の代替案も提案されている。集団の平均患者体重が７０ｋｇであると仮定すると、週１回、７００ｍｇの用量は、週１回、１０ｍｇ／ｋｇの用量に相当する。集団の患者の実際の体重が３５～１００ｋｇの範囲である場合、週１回、７００ｍｇの用量は、患者の実際の体重に応じて、週１回、２０ｍｇ／ｋｇから７ｍｇ／ｋｇの範囲の用量に相当する。これは、ＦＩＨ第Ｉ相試験でＴＥＡＥを伴わず安定性疾患応答が観察された用量範囲内であり、したがって有効であることが予想される。同様の理論的根拠を対象の任意の特定の患者集団に採用することができ、したがって、当業者は、本明細書の教示に基づいて任意の特定の患者集団に適切な固定用量を特定することができるであろう。例えば、集団の患者の平均体重が８０ｋｇと推定される場合、週１回、８００ｍｇの用量は、週１回、１０ｍｇ／ｋｇの用量に相当する。集団の患者の実際の体重が４０～１００ｋｇの範囲である場合、週１回、８００ｍｇの用量は、患者の実際の体重に応じて、週１回、２０ｍｇ／ｋｇから７ｍｇ／ｋｇの範囲の用量に相当する。これも、上記の理由から効果的であることが予想される。

【0308】

実施例７：第Ｉ相拡大試験のためのＳＣＣＨＮプロトコル
特定の腫瘍タイプにおけるＦＳ１１８の臨床活性を調査するために、第Ｉ相臨床試験への拡大が計画されている。これは第Ｉ相拡大コホートと呼ばれ、ＦＳ１１８の安全性、薬物動態／薬力学及び臨床効果をさらに評価するために、予め指定された数の患者を募集することを含む。

【0309】

計画されている拡大コホートには、再発性又は転移性の頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を有する患者のみが含まれる。ＳＣＣＨＮが特に選択されたのは、ＦＩＨ第Ｉ相試験（実施例２を参照されたい）で週１回、それぞれ３、１０及び２０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を投与された３人のＳＣＣＨＮ患者が、それぞれ２６、１５及び２７週間、治験を継続したためであり（実施例２．４．１、表８を参照されたい）、これは、ＦＳ１１８がＳＣＣＨＮの処置に特に効果的であり得ることを示している。さらに、ＰＤ－１のレベルの上昇（Hanna et al., 2018；Deng et al., 2016）と同様に、ＳＣＣＨＮ患者の腫瘍微小環境におけるＴ細胞上のＬＡＧ－３のレベルの増加が以前に観察されており、これは、ＰＤ－Ｌ１のレベルの上昇も示唆している。したがって、ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１の両方を標的とするＦＳ１１８がＳＣＣＨＮ腫瘍微小環境で有効であるという明確な生物学的根拠がある。より具体的には、拡大コホートには、口腔、中咽頭、喉頭又は下咽頭の疾患部位を有し、手術又は放射線などの治癒的療法を受ける適格のないＳＣＣＨＮ患者が含まれる。抗ＰＤ－１抗体は、現在、これらの疾患部位について規制当局によって承認されているため、募集される患者は、以下に説明する患者募集戦略にとって重要な抗ＰＤ－１抗体で前処置されている。ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）は、ＳＣＣＨＮのおよそ２０％、特に中咽頭癌として知られる中咽頭の疾患を引き起こすと考えられている。これらの患者は、典型的には、タバコ及び／又はアルコールの使用によって疾患が引き起こされ得る他のＳＣＣＨＮ患者よりも、抗癌処置に応答してより良い臨床転帰を示す。したがって、ＨＰＶの状態は、患者が研究に参加する前に記録され、不明な場合、研究に参加した後に検査される。

【0310】

上記で説明した理由により、全ての患者は、研究に入る前に、単剤療法又は化学療法との組み合わせのいずれかとして、承認された抗ＰＤ－１抗体で以前に処置されており、進行性疾患を有している。患者は、本明細書で定義されている以前のＰＤ－１療法に対して獲得耐性を有している必要がある（すなわち、患者は、以前の抗ＰＤ－１療法で完全応答又は部分応答を示したか、又は３ヶ月を超えて安定性疾患を示したが、その後、進行性疾患に移行した）。これは、獲得耐性を有する患者がＦＳ１１８によりよく応答する可能性が有意に高い（例えば、安定性疾患を示し、より長く処置を継続することによって）という本発明者らの発見を考慮したものである（実施例３を参照されたい）。

【0311】

承認された抗ＰＤ－１抗体による前処置を受けるには、薬剤ラベルに従い、患者のＰＤ－Ｌ１レベルが組み合わせ陽性スコア（ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（ＴＰＳ）のいずれかで１％を超えている必要がある。したがって、第Ｉ相拡大試験に参加する全ての患者のＰＤ－Ｌ１レベルは、１％を超えると予想され、これらが記録される。本発明者らは、獲得耐性患者におけるＦＳ１１８処置前のベースラインＰＤ－Ｌ１レベルがＦＳ１１８による処置の長さと正の相関関係を有することを実証したため、これは、重要である（実施例４を参照されたい）。以前の抗ＰＤ－１療法剤が各患者の系からウォッシュアウトされるために、計画された第Ｉ相拡大試験に入る前に最低２８日待つ必要がある。さらに、患者は、最後の抗ＰＤ－１療法の終了及びＦＳ１１８による処置の開始から１２週間を超えていてはならない。これにより、第Ｉ相拡大試験に参加する患者は、その進行性疾患に対して直ちにさらなる治療を要することが保証される。

【0312】

第Ｉ相拡大試験に参加する前に、全ての患者は、腫瘍の生検及び血液サンプルを提供する必要がある。生検から、腫瘍細胞及びＴ細胞のベースラインＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３発現レベルが、腫瘍微小環境内のＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージなどの癌の他の特徴に加えて、それぞれ測定及び分析される。血液サンプルは、実施例２．３．２．３に記載されているＫｉ６７^＋免疫細胞及び／又は血漿中の可溶性ＬＡＧ－３又は可溶性ＰＤ－Ｌ１を含む免疫細胞集団のレベルを測定及び分析するために使用される。全ての患者は、実施例６に記載されている投与計画の推奨と一致して、週１回、１０ｍｇ／ｋｇのＦＳ１１８を投与される。ＳＣＣＨＮにおけるＦＳ１１８の有効性は、処置後２４週間後の病勢コントロール率（ＤＣＲ）の臨床エンドポイントを使用して評価される。これは、ＦＳ１１８による処置の開始から２４週間にわたって完全応答（ＣＲ）、部分応答（ＰＲ）及び／又は安定性疾患（ＳＤ）を有する患者の割合である。したがって、これは、例えば、最初に部分応答を示すが、次に安定性疾患に移行するか又はその逆の患者を対象とする。抗ＰＤ－１療法（例えば、ドセタキセル若しくはパクリタキセルなどのタキサン、セツキシマブ又はメトトレキサート）後に標準治療を受けた患者は、主任研究員の経験に基づき、典型的には２４週間で２０％未満のＤＣＲ率を示し得る。これは、そのような患者の８０％超が標準治療の開始から２４週間までに進行性疾患を有するであろうことを意味する。ＦＳ１１８が抗ＰＤ－１療法後に投与される標準治療の前記ＤＣＲ率を超えることが最小の目的である。第Ｉ相拡大試験の患者は、ＦＩＨ及び用量漸増第Ｉ相臨床試験の患者よりも前処置が少ないことを考慮すると（実施例２を参照されたい）、この目的は、達成可能であると考えられる。

【0313】

第Ｉ相拡大試験の統計的設計では、Simonの２段階ミニマックス設計と呼ばれる方法を利用する（Simon, 1989）。第１段階では、１０人の患者が採用される。継続的な採用を保証するため、前記１０人の患者のうちの１人のみ又は０人がＦＳ１１８による処置の開始から２４週間にわたって疾患制御（ＣＲ、ＰＲ及び／又はＳＤ）を達成する場合、登録は、終了し、ＦＳ１１８は、標準治療と比較して十分に有効であると見なされない。それ以外の場合、さらに１２人の患者が第２段階として登録される。第２段階の完了時、２２人の評価可能な患者のうちの６人以上の患者がＦＳ１１８による処置の開始から２４週間にわたって疾患制御（ＣＲ、ＰＲ及び／又はＳＤ）を達成した場合、ＦＳ１１８は、これらの患者に有効であると見なされる。

【0314】

いずれの患者がＦＳ１１８による処置から最も恩恵を受け得るかをさらに理解するために、患者の癌におけるＰＤ－Ｌ１及びＬＡＧ－３の発現レベル（必須の生検材料を使用してベースラインで記録）を、ＦＳ１１８に対する臨床的有益性（治験中のＣＲ、ＰＲ及び／又はＳＤ及び処置期間）と比較して、相関関係が存在するかどうかを特定する。さらに、患者の血漿サンプル中の可溶性ＬＡＧ－３のレベルの変化並びに末梢免疫細胞集団の頻度及びＫｉ６７発現レベルの変化も、ＦＳ１１８への応答の薬力学的マーカーとして監視される。

【0315】

配列表
抗ヒトＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＦＳ１１８の重鎖のアミノ酸配列（ＬＡＬＡ変異を有する）（配列番号１）
ＣＤＲに下線が付されている。ＡＢ、ＣＤ及びＥＦループ配列は、太字で下線が付されている。

【化1】

【0316】

抗ヒトＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＦＳ１１８の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２）
ＣＤＲに下線が付されている。

【化2】

【0317】

抗マウスＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＦＳ１８－７－１０８－２９／Ｓ１の重鎖のアミノ酸配列（ＬＡＬＡ変異を有する）（配列番号３）
ＣＤＲに下線が付されている。ＡＢ、ＣＤ及びＥＦループ配列の位置は、太字で下線が付されている。ＬＡＬＡ変異の位置は、太字で示されている。

【化3】

【0318】

抗マウスＬＡＧ－３／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ^２ ＦＳ１８－７－１０８－２９／Ｓ１の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号４）
ＣＤＲに下線が付されている。

【化4】

【0319】

抗ＦＩＴＣ ｍＡｂ Ｇ１ＡＡ／４４２０（ＬＡＬＡ変異を含む）の重鎖のアミノ酸配列（配列番号５）
ＣＤＲの位置に下線が付されている。ＬＡＬＡ変異の位置は、太字で示されている。

【化5】

【0320】

抗ＦＩＴＣ ｍＡｂ Ｇ１ＡＡ／４４２０軽鎖のアミノ酸配列（配列番号６）
ＣＤＲの位置に下線が付されている。

【化6】

【0321】

参考文献
本明細書で言及されている全ての文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
Chirmule et al., Immunogenicity to Therapeutic Proteins: Impact on PK/PD and Efficacy, The AAPS Journal, 2012, 14:296-302
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【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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【国際調査報告】