特表 2022-534802 絹で刺激されたコラーゲンの製造、及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-08-03

(54)【発明の名称】絹で刺激されたコラーゲンの製造、及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20220727BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/02 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20220727BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20220727BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 8/64 20060101ALI20220727BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20220727BHJP

   A61K 47/14 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20220727BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220727BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17

A61K47/02

A61K9/14

A61K9/08

A61K9/10

A61K9/12

A61K9/06

A61K9/02

A61K9/20

A61K47/44

A61K47/10

A61K47/26

A61K9/107

A61K47/60

A61P17/00

A61P3/10

A61P19/02

A61P9/00

A61P17/02

A61P19/00

A61K8/64

A61Q19/08

A61K47/14

A61P21/00

A61P43/00 105

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021572363

(86)(22)【出願日】2020-06-06

(85)【翻訳文提出日】2022-01-18

(86)【国際出願番号】 US2020036510

(87)【国際公開番号】W WO2020247887

(87)【国際公開日】2020-12-10

(31)【優先権主張番号】62/858,048

(32)【優先日】2019-06-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＫＥＶＬＡＲ

(71)【出願人】

【識別番号】516092706

【氏名又は名称】エボルブド バイ ネイチャー， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠彦

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100107733

【弁理士】

【氏名又は名称】流 良広

(74)【代理人】

【識別番号】100115347

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 奈緒子

(72)【発明者】

【氏名】グレゴリー・エイチ・アルトマン

(72)【発明者】

【氏名】マリウス・コスタッシュ

(72)【発明者】

【氏名】エヴァ・ジェネル

(72)【発明者】

【氏名】カルロス・ジェイ・ボスケス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C083

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C076AA01

4C076AA06

4C076AA08

4C076AA11

4C076AA17

4C076AA22

4C076AA24

4C076AA25

4C076AA29

4C076AA36

4C076BB11

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB31

4C076BB40

4C076DD23

4C076DD25

4C076DD37A

4C076DD38A

4C076DD46A

4C076DD67A

4C076EE23

4C076EE54A

4C076FF70

4C083AC071

4C083AC241

4C083AC421

4C083AC691

4C083AD451

4C083BB11

4C083CC03

4C083DD08

4C083DD17

4C083DD22

4C083DD33

4C083DD39

4C083EE12

4C083EE13

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA18

4C084BA19

4C084BA20

4C084BA21

4C084BA22

4C084CA49

4C084DC50

4C084MA13

4C084MA17

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA28

4C084MA34

4C084MA41

4C084MA43

4C084MA63

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA36

4C084ZA89

4C084ZA94

4C084ZA96

4C084ZB15

4C084ZC01

4C084ZC35

(57)【要約】

本開示は、対象におけるコラーゲン発現を刺激するための絹フィブロイン組成物及びその使用方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とする対象における、コラーゲン発現の刺激又は調節によって軽減される障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法であって、約１ｋＤａ～約５ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１０ｋＤａ～約１５ｋＤａ、約１５ｋＤａ～約２０ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約２０ｋＤａ～約２５ｋＤａ、約２５ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約３０ｋＤａ～約３５ｋＤａ、約３５ｋＤａ～約４０ｋＤａ、約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａ、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａ、約４０ｋＤａ～約４５ｋＤａ、約４５ｋＤａ～約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約１００ｋＤａ、及び約８０ｋＤａ～約１４４ｋＤａの平均重量平均分子量と、１～約５の多分散性とを有する絹フィブロイン断片を含む組成物を、前記対象に投与することを含むことを特徴とする方法。

【請求項2】

前記組成物が、０～５００ｐｐｍの臭化リチウムを更に含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記組成物が、０～５００ｐｐｍの炭酸ナトリウムを更に含む、請求項１から２のいずれかに記載の方法。

【請求項4】

前記絹フィブロイン断片が、１～約１．５の多分散性を有する、請求項１から３のいずれかに記載の方法。

【請求項5】

前記絹フィブロイン断片が、約１．５～約２．０の多分散性を有する、請求項１から３のいずれかに記載の方法。

【請求項6】

前記絹フィブロイン断片が、約１．５～約３．０の多分散性を有する、請求項１から３のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

前記絹フィブロイン断片が、約２．０～約２．５の多分散性を有する、請求項１から３のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

前記絹フィブロイン断片が、約２．５～約３．０の多分散性を有する、請求項１から３のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約０．００１重量％～約１０．０重量％で存在する、請求項１から８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

前記組成物が、前記組成物の総重量に対して約０．００１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを更に含む、請求項１から９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

前記組成物が、前記絹フィブロイン断片に対して約０．００１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを更に含む、請求項１から９のいずれかに記載の方法。

【請求項12】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物に製する前の少なくとも１０日間の期間、自然発生的に又は徐々にゲル化せず、水溶液中において、色又は濁度が視覚的に変化しない、請求項１から１１のいずれかに記載の方法。

【請求項13】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％で存在する、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。

【請求項14】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１．０重量％で存在する、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。

【請求項15】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約１．０重量％～約２．０重量％で存在する、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。

【請求項16】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約２．０重量％～約３．０重量％で存在する、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。

【請求項17】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約３．０重量％～約４．０重量％で存在する、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。

【請求項18】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約４．０重量％～約５．０重量％で存在する、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。

【請求項19】

前記絹フィブロイン断片が、前記組成物中、前記組成物の総重量に対して約５．０重量％～約６．０重量％で存在する、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。

【請求項20】

前記組成物が、注射可能な組成物又は外用組成物として製せられる、請求項１から１９のいずれかに記載の方法。

【請求項21】

前記組成物が、薬学的に許容される担体を更に含む、請求項１から２０のいずれかに記載の方法。

【請求項22】

前記薬学的に許容される担体が、薬用化粧品、懸濁液、乳濁液、粉末、溶液、分散液、又はエリキシルのうちの１以上を含む又は、として製せられる、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記薬学的に許容される担体が、ゲル、ゼリー、クリーム、ローション、フォーム、スラリー、軟膏、オイル、ペースト、坐剤、スプレー、半固体組成物、固体組成物、スティック、又はムースを含む又は、として製せられる、請求項２１に記載の方法。

【請求項24】

前記薬学的に許容される担体が、ゴマ油、コーン油、綿実油、又は落花生油のうちの１以上を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項25】

前記薬学的に許容される担体が、マンニトール又はデキストロースのうちの１以上を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項26】

前記薬学的に許容される担体が、約０．００１％～約１０％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項27】

前記薬学的に許容される担体が、約１％～約１０％（ｗ／ｖ）、約１０％～約２５％（ｗ／ｖ）、約２５％～約５０％（ｗ／ｖ）、又は約５０％～約９９．９９％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項28】

前記薬学的に許容される担体が、脂肪族油、脂肪アルコール、脂肪酸、グリセリド、アシルグリセロール、及びリン脂質のうちの１以上を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項29】

前記薬学的に許容される担体が、モノグリセリド、ジグリセリド、又はトリグリセリドのうちの１以上を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項30】

前記薬学的に許容される担体が、水相を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項31】

前記薬学的に許容される担体が、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンを含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項32】

前記薬学的に許容される担体が、炭化水素油、脂肪酸、脂肪酸油、脂肪酸エステル、又はカチオン性第４級アンモニウム塩のうちの１以上を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項33】

前記薬学的に許容される担体の一部が、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せから選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤で修飾される、請求項２１に記載の方法。

【請求項34】

前記ポリエポキシリンカーが、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルから選択される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記組成物が、非経口的に投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項36】

前記組成物が、注射可能な組成物である、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項37】

前記組成物が、注射によって投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項38】

前記組成物が、皮下注射、皮内注射、経皮注射、又は真皮下注射によって投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項39】

前記組成物が、筋肉内注射、静脈内注射、腹腔内注射、骨内注射、心臓内注射、関節内注射、又は海綿体内注射によって投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項40】

前記組成物が、デポー注射によって投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項41】

前記組成物が、浸潤注射によって投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項42】

前記組成物が、留置カテーテルによって投与される、請求項１から３４のいずれかに記載の方法。

【請求項43】

前記組成物を投与することにより、前記対象における１以上のメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の発現が低減する、請求項１から４２のいずれかに記載の方法。

【請求項44】

前記コラーゲン発現を刺激又は調節することが、前記コラーゲン発現を上昇させることを含む、請求項１から４３のいずれかに記載の方法。

【請求項45】

前記コラーゲン発現が、ベースレベルに対して、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％上昇する、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記コラーゲン発現が、ベースレベルに対して、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％、約１２６％、約１２７％、約１２８％、約１２９％、約１３０％、約１３１％、約１３２％、約１３３％、約１３４％、約１３５％、約１３６％、約１３７％、約１３８％、約１３９％、約１４０％、約１４１％、約１４２％、約１４３％、約１４４％、約１４５％、約１４６％、約１４７％、約１４８％、約１４９％、約１５０％、約１５１％、約１５２％、約１５３％、約１５４％、約１５５％、約１５６％、約１５７％、約１５８％、約１５９％、約１６０％、約１６１％、約１６２％、約１６３％、約１６４％、約１６５％、約１６６％、約１６７％、約１６８％、約１６９％、約１７０％、約１７１％、約１７２％、約１７３％、約１７４％、約１７５％、約１７６％、約１７７％、約１７８％、約１７９％、約１８０％、約１８１％、約１８２％、約１８３％、約１８４％、約１８５％、約１８６％、約１８７％、約１８８％、約１８９％、約１９０％、約１９１％、約１９２％、約１９３％、約１９４％、約１９５％、約１９６％、約１９７％、約１９８％、約１９９％、又は約２００％上昇する、請求項４４に記載の方法。

【請求項47】

前記組成物を投与することにより、前記対象における皺の予防又は改善、前記対象における加齢性色素斑の予防又は改善、前記対象における乾燥肌の予防又は改善、又は前記対象における不均一な皮膚の色調の上昇の１以上がもたらされる、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項48】

前記組成物を投与することにより、前記対象における皮膚のたるみの予防又は改善、前記対象における皮膚の老化の予防又は改善、前記対象における皮膚の引張強度の低下の予防又は改善、前記対象における光損傷した皮膚の予防又は改善、又は前記対象における皮膚伸展線条（ストレッチマーク）の予防又は改善の１以上がもたらされる、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項49】

前記障害、疾患、又は状態が、皺、加齢性色素斑、乾燥肌、不均一な皮膚の色調、皮膚のたるみ、皮膚の老化、皮膚の引張強度の低下、光損傷した皮膚、又は皮膚伸展線条（ストレッチマーク）を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項50】

前記障害、疾患、又は状態が、甲状腺ホルモン誘発性心筋肥大を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項51】

前記障害、疾患、又は状態が、腱の断裂、損傷、又は裂傷を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項52】

前記腱が、小円筋腱、棘下筋腱、棘上筋腱、肩甲下筋腱、三角筋腱、二頭筋腱、三頭筋腱、腕橈骨筋腱、回外筋腱、橈側手根屈筋腱、尺側手根屈筋腱、長橈側手根伸筋腱、短橈側手根伸筋腱、腸腰筋腱、内閉鎖筋腱、長内転筋腱、腓骨又はマグナス筋腱、大殿筋又は中殿筋腱、四頭筋腱、膝蓋腱、膝窩腱、縫工筋腱、腓腹筋腱、アキレス腱、ヒラメ筋腱、前脛骨筋腱、長腓骨筋腱、長指屈筋腱、骨間筋腱、深指屈筋腱、小趾外転筋腱、母指対立筋腱、長母指屈筋腱、母指伸筋又は外転筋腱、長母趾屈筋腱、短趾屈筋腱、中様筋腱、母趾外転筋腱、長趾屈筋腱、小趾外転筋腱、眼筋腱、眼瞼挙筋腱、咬筋腱、側頭筋腱、僧帽筋腱、胸鎖乳突筋腱、頭半棘筋又は頭板状筋腱、顎舌骨筋又は甲状舌骨筋腱、胸骨舌骨筋腱、腹直筋腱、外腹斜筋腱、腹横筋腱、広背筋腱、及び脊柱起立筋腱から選択される、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記障害、疾患、又は状態が、ウェルナー症候群を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項54】

前記障害、疾患、又は状態が、糖尿病性の皮膚完全性の低下を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項55】

前記障害、疾患、又は状態が、関節炎を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項56】

前記障害、疾患、又は状態が、関節リウマチを含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項57】

前記障害、疾患、又は状態が、腫瘍の進行又は腫瘍の成長を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項58】

前記障害、疾患、又は状態が、心機能の低下を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項59】

前記障害、疾患、又は状態が、エーラス・ダンロス症候群を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項60】

前記障害、疾患、又は状態が、腹部大動脈瘤を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項61】

前記障害、疾患、又は状態が、創傷を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項62】

前記障害、疾患、又は状態が、皮膚又は結合組織の疾患を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項63】

前記障害、疾患、又は状態が、軟骨の疾患を含む、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【請求項64】

前記障害、疾患、又は状態が、再発性多発軟骨炎、ティーツェ症候群、蜂巣炎、エーラス・ダンロス症候群、ケロイド（にきびケロイドを含む）、ムコポリサダリドーシスＩ、壊死性障害（環状肉芽腫、リポイド類壊死症を含む）、骨形成不全症、皮膚弛緩症、皮膚筋炎、デュピュイトラン拘縮、ホモシスチン尿症、エリテマトーデス（皮膚、円板状、深在性、全身性、及び腎炎を含む）、マルファン症候群、混合性結合組織疾患、ムチン沈着症（濾胞性を含む）、ムコ多糖症（Ｉ、ＩＩ、ＵＵ、ＩＶ、ＩＶ、及びＶＩＩ）、粘液水腫、成年性浮腫性硬化症及び滑液嚢腫、結合組織新生物、ヌーナン症候群、骨斑紋症、硬結性紅斑を含む脂肪織炎、結節性非化膿性及び腹膜、陰茎硬化症、弾性線維性仮性黄色腫、関節炎を含むリウマチ性疾患（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、カプラン症候群、フェルティ症候群、リウマトイド結節、強直性脊椎炎、及びスチル病）、骨増殖症、リウマチ性多発筋痛症、限局性強皮症、及び全身性強皮症（ＣＲＥＳＴ症候群）から選択される、請求項１から４６のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連技術の相互参照
本願は、参照によりその全体を本明細書に援用する２０１９年６月６日出願の米国仮特許出願第６２／８５８，０４８号の利益を主張する。

【0002】

本開示は、絹フィブロイン組成物及びコラーゲン発現を刺激するための方法の分野に関する。

【背景技術】

【0003】

絹（シルク）は、様々な昆虫及びクモから生み出される天然高分子である。絹は、フィラメントコアタンパク質、絹フィブロイン、及び非フィラメント状タンパク質、セリシンからなる膠状コーティングを含む。

【0004】

局所又は非経口投与によるコラーゲン刺激に好適な安定した絹フィブロインペプチド溶液の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0005】

本開示は、それを必要とする対象における、コラーゲン発現の刺激又は調節によって軽減される障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法であって、約１ｋＤａ～約５ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１０ｋＤａ～約１５ｋＤａ、約１５ｋＤａ～約２０ｋＤａ、約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、約２０ｋＤａ～約２５ｋＤａ、約２５ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約３０ｋＤａ～約３５ｋＤａ、約３５ｋＤａ～約４０ｋＤａ、約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａ、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａ、約４０ｋＤａ～約４５ｋＤａ、約４５ｋＤａ～約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約１００ｋＤａ、及び約８０ｋＤａ～約１４４ｋＤａの平均重量平均分子量と、１～約５の多分散性とを有する絹フィブロイン断片を含む組成物を、前記対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、０～５００ｐｐｍの臭化リチウムを更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０～５００ｐｐｍの炭酸ナトリウムを更に含む。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、１～約１．５の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、約１．５～約２．０の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、約１．５～約３．０の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、約２．０～約２．５の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、約２．５～約３．０の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約０．００１重量％～約１０．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約０．００１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、絹フィブロイン断片に対して約０．００１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを更に含む。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物に製する前の少なくとも１０日間の期間、自然発生的に又は徐々にゲル化せず、水溶液中において、色又は濁度が視覚的に変化しない。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約１．０重量％～約２．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約２．０重量％～約３．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約３．０重量％～約４．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約４．０重量％～約５．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約５．０重量％～約６．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、注射可能な組成物又は外用組成物として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、皮膚科学的に許容される担体を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、注射可能な許容可能な担体を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、懸濁液、乳濁液、粉末、溶液、分散液、又はエリキシルのうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、ゲル、ゼリー、クリーム、ローション、フォーム、スラリー、軟膏、オイル、ペースト、坐剤、スプレー、半固体組成物、固体組成物、スティック、又はムースを含む又は、として製せられる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、ゴマ油、コーン油、綿実油、又は落花生油のうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、マンニトール又はデキストロースのうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、約０．００１％～約１０％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、約１％～約１０％（ｗ／ｖ）、約１０％～約２５％（ｗ／ｖ）、約２５％～約５０％（ｗ／ｖ）、又は約５０％～約９９．９９％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、脂肪族油、脂肪アルコール、脂肪酸、グリセリド、アシルグリセロール、及びリン脂質のうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、モノグリセリド、ジグリセリド、又はトリグリセリドのうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、水相を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、炭化水素油、脂肪酸、脂肪油、脂肪酸エステル、又はカチオン性第４級アンモニウム塩のうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体の一部は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せから選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤で修飾される。いくつかの実施形態では、ポリエポキシリンカーは、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルから選択される。いくつかの実施形態では、組成物は、非経口的に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、注射可能な組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、皮下注射、皮内注射、経皮注射、又は真皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、筋肉内注射、静脈内注射、腹腔内注射、骨内注射、心臓内注射、関節内注射、又は海綿体内注射（ｉｎｔｒａｃａｖｅｒｎｏｕｓ）によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、デポー（ｄｅｐｏｔ）注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、浸潤注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、留置カテーテルによって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、マイクロニードルによって投与される。いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、対象における１以上のメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の発現が低減する。いくつかの実施形態では、コラーゲン発現を刺激又は調節することは、コラーゲン発現を上昇させることを含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン発現は、ベースレベルに対して、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％上昇する。いくつかの実施形態では、コラーゲン発現は、ベースレベルに対して、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％、約１２６％、約１２７％、約１２８％、約１２９％、約１３０％、約１３１％、約１３２％、約１３３％、約１３４％、約１３５％、約１３６％、約１３７％、約１３８％、約１３９％、約１４０％、約１４１％、約１４２％、約１４３％、約１４４％、約１４５％、約１４６％、約１４７％、約１４８％、約１４９％、約１５０％、約１５１％、約１５２％、約１５３％、約１５４％、約１５５％、約１５６％、約１５７％、約１５８％、約１５９％、約１６０％、約１６１％、約１６２％、約１６３％、約１６４％、約１６５％、約１６６％、約１６７％、約１６８％、約１６９％、約１７０％、約１７１％、約１７２％、約１７３％、約１７４％、約１７５％、約１７６％、約１７７％、約１７８％、約１７９％、約１８０％、約１８１％、約１８２％、約１８３％、約１８４％、約１８５％、約１８６％、約１８７％、約１８８％、約１８９％、約１９０％、約１９１％、約１９２％、約１９３％、約１９４％、約１９５％、約１９６％、約１９７％、約１９８％、約１９９％、又は約２００％上昇する。いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、対象における皺の予防又は改善、対象における加齢性色素斑の予防又は改善、対象における乾燥肌の予防又は改善、又は対象における不均一な皮膚の色調の上昇（ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｕｎｅｖｅｎ ｓｋｉｎ ｔｏｎｅ）の１以上がもたらされる。いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、対象における皮膚のたるみの予防又は改善、対象における皮膚の老化の予防又は改善、対象における皮膚の引張強度の低下の予防又は改善、対象における光損傷した皮膚の予防又は改善、又は対象における皮膚伸展線条（ストレッチマーク）の予防又は改善の１以上がもたらされる。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、皺、加齢性色素斑、乾燥肌、不均一な皮膚の色調、皮膚のたるみ、皮膚の老化、皮膚の引張強度の低下、光損傷した皮膚、又は皮膚伸展線条（ストレッチマーク）を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、甲状腺ホルモン誘発性心筋肥大を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、腱の断裂、損傷、
又は裂傷を含む。いくつかの実施形態では、腱は、小円筋腱、棘下筋腱、棘上筋腱、肩甲下筋腱、三角筋腱、二頭筋腱、三頭筋腱、腕橈骨筋腱、回外筋腱、橈側手根屈筋腱、尺側手根屈筋腱、長橈側手根伸筋腱、短橈側手根伸筋腱、腸腰筋腱、内閉鎖筋腱、長内転筋腱、腓骨又はマグナス筋腱、大殿筋又は中殿筋腱、四頭筋腱、膝蓋腱、膝窩腱、縫工筋腱、腓腹筋腱、アキレス腱、ヒラメ筋腱、前脛骨筋腱、長腓骨筋腱、長指屈筋腱、骨間筋腱、深指屈筋腱、小趾外転筋腱、母指対立筋腱、長母指屈筋腱、母指伸筋又は外転筋腱（Ｅｘｔｅｎｓｏｒ ｏｒ ａｂｄｕｃｔｏｒ ｐｏｌｌｉｃｉｓ ｔｅｎｄｏｎｓ）、長母趾屈筋腱、短趾屈筋腱、中様筋腱、母趾外転筋腱、長趾屈筋腱、小趾外転筋腱、眼筋腱、眼瞼挙筋腱、咬筋腱、側頭筋腱、僧帽筋腱、胸鎖乳突筋腱、頭半棘筋又は頭板状筋腱、顎舌骨筋又は甲状舌骨筋腱、胸骨舌骨筋腱、腹直筋腱、外腹斜筋腱、腹横筋腱、広背筋腱、及び脊柱起立筋腱から選択される。幾つかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、ウェルナー症候群を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、糖尿病性の皮膚完全性の低下を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、関節炎を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、関節リウマチを含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、腫瘍の進行又は腫瘍の成長を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、心機能の低下を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、エーラス・ダンロス症候群を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、腹部大動脈瘤を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、創傷を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、皮膚又は結合組織の疾患を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、軟骨の疾患を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、再発性多発軟骨炎、ティーツェ症候群、蜂巣炎、エーラス・ダンロス症候群、ケロイド（にきびケロイドを含む）、ムコポリサダリドーシスＩ（ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｄｄａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ）、壊死性障害（環状肉芽腫、リポイド類壊死症を含む）、骨形成不全症、皮膚弛緩症、皮膚筋炎、デュピュイトラン拘縮、ホモシスチン尿症、エリテマトーデス（皮膚、円板状、深在性、全身性、及び腎炎を含む）、マルファン症候群、混合性結合組織疾患、ムチン沈着症（濾胞性を含む）、ムコ多糖症（Ｉ、ＩＩ、ＵＵ、ＩＶ、ＩＶ、及びＶＩＩ）、粘液水腫、成年性浮腫性硬化症及び滑液嚢腫、結合組織新生物、ヌーナン症候群、骨斑紋症、硬結性紅斑を含む脂肪織炎、結節性非化膿性及び腹膜、陰茎硬化症、弾性線維性仮性黄色腫、関節炎を含むリウマチ性疾患（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、カプラン症候群、フェルティ症候群、リウマトイド結節、強直性脊椎炎、及びスチル病）、骨増殖症、リウマチ性多発筋痛症、限局性強皮症、及び全身性強皮症（ＣＲＥＳＴ症候群）から選択される。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、好酸球性血管リンパ球増殖症；瘢痕（ｃｉｃａｔｉｘ）（肥大を含む）；皮膚瘻、皮膚弛緩症（ｃｕｉｓ ｌａｘａ）；先端皮膚炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎（アレルギー性接触、光アレルギー性、ウルシ皮膚炎）を含む皮膚炎、刺激性皮膚炎（光毒性、おむつ皮膚炎）、職業性皮膚炎；剥離性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、薬疹（例えば、中毒性表皮壊死症、結節性紅斑、血清病）、湿疹（異汗性湿疹、間擦疹、神経皮膚炎、及び放射線皮膚炎を含む）；皮膚筋炎；紅斑（慢性遊走性、硬結性、伝染性、多形性（スティーブンス・ジョンソン症候群）、及び結節性（Ｓｗｅｅｔ症候群）を含む）；発疹（突発性を含む）；顔面皮膚疾患（ざ瘡様発疹（ケロイド、酒さ、尋常性、及びＦａｖｒｅ－Ｒａｃｏｕｃｈｏｔ症候群）を含む）；足部皮膚疾患（足部白癬を含む）；手掌皮膚疾患；角化棘細胞腫；角化症（肥厚を含む）、真珠腫（中耳を含む）、魚鱗癬（先天性魚鱗癬様紅皮症、表皮溶解性角化症、葉状魚鱗癬、尋常性魚鱗癬、Ｘ連鎖魚鱗癬、及びシェーグレン・ラルソン症候群を含む）、膿漏性角皮症、掌蹠角化症、毛包角化症、脂漏性角化症、錯角化症、及び汗孔角化症；脚部皮膚疾患、肥満細胞症（色素性蕁麻疹）、類壊死症（環状肉芽腫及び脂肪類壊死症）、光線過敏症（光アレルギー性又は光毒性皮膚炎）、種痘様水疱症、日光皮膚炎、及び色素性乾皮症）；色素異常症（銀皮症、色素増加症、メラニン沈着症、黒色表皮腫、黒子、ポイツ・ジェガース症候群、色素脱失、白皮症、まだら症、白斑、色素失調症、色素性蕁麻疹、色素性乾皮症、痒疹を含む）；そう痒症（肛門及び外陰部を含む）；膿皮症（膿瘡及び壊疽性膿皮症を含む）；頭皮疾患；成年性浮腫性硬化症；新生児強皮症；皮膚付属器疾患（毛髪障害（脱毛症、毛包炎、多毛、多毛症、捻転毛髪症候群）を含む）、爪疾患（爪膝蓋骨症候群、陥入爪又は爪形成異常、爪真菌症、爪囲炎）、皮脂腺疾患（鼻瘤、新生物）、汗腺疾患（汗腺炎、多汗症、乏汗症、深在性、フォックス・フォアダイス病、新生物）；遺伝性皮膚疾患（アルフィニズム（ａｌｆｉｎｉｓｍ）、皮膚弛緩症、良性家族性天疱瘡、ポルフィリン症、先端皮膚炎、外胚葉異形成症、エリス・ファンクレフェルト症候群、部分皮膚低形成、エーラス・ダンロス症候群、表皮水疱症、魚鱗癬を含む）；伝染性皮膚疾患（皮膚真菌症、ブラストミセス症、カンジダ症、黒色分芽菌症、マズラ菌症、パラコクシジオイデス症、スポロトリクム症、白癬症を含む）；細菌性皮膚疾患（例えば、顔面頸部放線菌症、細菌性血管腫、膿瘡、丹毒、慢性遊走性紅斑、紅色陰癬、鼠径肉芽腫、化膿性汗腺炎、マズラ菌症、爪囲炎、ピンタ、鼻硬化症、ブドウ球菌皮膚感染症（せつ腫症、癰、膿痂疹、熱傷様皮膚症候群）、皮膚梅毒、皮膚結核、イチゴ腫）；皮膚寄生虫症（幼虫移行症、リーシュマニア症、及び疥癬を含む）；ウイルス性皮膚疾患（伝染性紅斑、突発性発疹、単純ヘルペス、伝染性軟属腫、いぼ）から選択される。

【0006】

本開示の実施形態を、添付図面を参照して更に説明する。図面は、必ずしも実寸に比例しておらず、概して、本開示の実施形態の原理の説明に重点が置かれている。

【図面の簡単な説明】

【0007】

【図1A】図１Ａ～図１Ｃは、若い皮膚と老化した皮膚におけるコラーゲン合成の概略図、及びコラーゲン合成の刺激における絹フィブロインの提案される役割を示す。図１Ａ：健康な若い皮膚では、高密度コラーゲンマトリックス中の真皮線維芽細胞が、新たなコラーゲンを生成することによってマトリックスを継続的に強化する。若い皮膚では、真皮細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内の無傷のコラーゲンが、線維芽細胞の付着部位と機械的抵抗を提供する。線維芽細胞は伸びて新たなコラーゲン（緑色）を生成し、ＥＣＭの完全性と安定性を促進する。

【図1B】図１Ａ～図１Ｃは、若い皮膚と老化した皮膚におけるコラーゲン合成の概略図、及びコラーゲン合成の刺激における絹フィブロインの提案される役割を示す。図１Ｂ：加齢に伴い、線維芽細胞による新たなコラーゲンの産生が減少し、コラーゲンマトリックスが分解する。加齢に伴い、コラーゲン合成の低下とＭＭＰ活性の上昇により、コラーゲン原線維が断片化される。これにより、線維芽細胞の機械的張力が失われ、ＥＣＭの完全性と安定性が失われる。

【図1C】図１Ａ～図１Ｃは、若い皮膚と老化した皮膚におけるコラーゲン合成の概略図、及びコラーゲン合成の刺激における絹フィブロインの提案される役割を示す。図１Ｃ：マトリックスへのシルクフィブロインの添加は、線維芽細胞によるコラーゲン産生を刺激し、マトリックスの構造完全性を回復させる。添加された絹フィブロインは、恐らく線維芽細胞との直接的相互作用及びコラーゲン断片の架橋とによって、線維芽細胞を刺激してコラーゲンを生成する。これは、ＥＣＭの完全性の回復と、より若々しい皮膚の外観とを促進すると思われる。（Ｖａｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．ＡｍＪ Ｐａｔｈｏｌ．２００６，１６８：１８６１から採用）。

【図2】図２は、コラーゲン生成が、絹の組成に依存することを示す。様々な絹濃度での細胞内コラーゲン産生は、絹の種類の関数として示される。刺激率（％）は、ネガティブコントロールと比較したコラーゲン形成の上昇である。絹の平均ＭＷ組成：絹Ａ＝低ＭＷ（約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量）；絹Ｂ＝中ＭＷ（約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａから選択される平均重量平均分子量）。

【図3A】図３Ａ及び図３Ｂは、ＤＡＰＩで対比染色された２×５時間の低ＭＷシルク（ＲＩＴＣ標識）に曝露させたＥＦＴ－４００組織の断面を示す。図３Ａは、５×の倍率の画像であり、組織の厚み全体を示す。

【図3B】図３Ａ及び図３Ｂは、ＤＡＰＩで対比染色した２×５時間の低ＭＷシルク（ＲＩＴＣ標識）に曝露させたＥＦＴ－４００組織の断面を示す。図３Ｂは、１０×の倍率の画像であり、表皮に焦点を合わせている。

【図4A】図４Ａ及び図４Ｂは、ＤＡＰＩで対比染色した２×５時間の中ＭＷシルク（ＦＩＴＣ標識）に曝露させたＥＦＴ－４００組織の断面を示す。図４Ａは、５×の倍率の画像であり、組織の厚み全体を示す。

【図4B】図４Ａ及び図４Ｂは、ＤＡＰＩで対比染色した２×５時間の中ＭＷシルク（ＦＩＴＣ標識）に曝露させたＥＦＴ－４００組織の断面を示す。図４Ｂは、１０×の倍率の画像であり、表皮に焦点を合わせている。

【図5】図５は、本開示の絹フィブロインタンパク質断片（ＳＰＦ）を生成するための様々な実施形態を示すフローチャートである。

【図6】図６は、抽出及び溶解の各工程中に、本開示の絹タンパク質断片溶液を生成するプロセスにおいて変更することができる様々なパラメータを示すフローチャートである。

【0008】

詳細な説明
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片を作製する方法は知られており、例えば、米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５４５，３６９号明細書、及び同第１０，１６６，１７７号明細書に記載されている。動物の毛髪のコーティング用途を含むコーティング用途において、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片を使用する方法は知られており、例えば、米国特許出願公開第２０１６０２２２５７９号明細書及び同第２０１６０２８１２９４号明細書に記載されている。化粧品用途で絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片を使用する組成物及び方法は公知であり、例えば、米国特許出願公開第２０１８０２８０２７４号明細書及び同第２０１８０００８５２２号明細書、並びに国際公開第２０１９００５８４８号に記載されている。本明細書に引用される刊行物はいずれも、参照によりその全体を援用する。

【0009】

定義
前のセクション及び本明細書の残りの記載において、特段の断りがない限り、本明細書に使用される技術用語及び科学用語はいずれも、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解される意味と同一の意味を有する。本明細書中で言及される特許及び刊行物はいずれも、参照によりその全体を援用する。

【0010】

パーセンテージ、部、及び比はいずれも、特段の断りがない限り、本発明のコラーゲンブースティング組成物の総重量に基づく。記載される成分に関連する係る重量はいずれも、活性レベルに基づくので、特段の断りがない限り、市販材料に含まれ得る溶媒や副生成物は含まない。用語「重量パーセント」は、本明細書中、「ｗｔ．％」又は％ｗ／ｗとして示すことができる。

【0011】

本明細書においては、用語「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」は、通常、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈される。

【0012】

本明細書においては、用語「約」は、通常、当業者によって決定される、許容可能な誤差範囲を含む特定の数値を意味し、これは、数値がどのように測定又は決定されるか、即ち、測定系の制約に一部依存する。例えば、「約」は、所定の数値の±２０％、±１０％、又は±５％の範囲を意味する。

【0013】

本明細書においては、用語「皮膚科学的に許容される担体」は、例えば、過度の毒性、非相溶性、不安定性、アレルギー反応などの悪影響を引き起こすことなく、哺乳動物のケラチン組織と接触させて使用するのに好適な担体を意味する。皮膚科学的に許容される担体としては、限定するものではないが、水、液体又は固体の皮膚軟化剤、保湿剤、溶媒などが挙げられる。

【0014】

本明細書においては、界面活性剤の用語「親水性－親油性バランス」（ＨＬＢ）は、分子の異なる領域の値を計算することによって決定される、親水性又は疎水性の程度の尺度であり、Ｇｒｉｆｆｉｎの方法：ＨＬＢ＝２０^＊Ｍｈ／Ｍ（式中、Ｍｈは、界面活性剤の親水性部分の分子質量、Ｍは、界面活性剤分子全体の分子質量である）によって記述され、０～２０のスケールで結果を与える。ＨＬＢ値が０の場合、完全に親油性の分子に対応し、値が２０の場合は、完全に親水性の分子に対応する。ＨＬＢ値は、分子の界面活性剤特性を予測するために使用することができ、ＨＬＢ＜１０：脂溶性（水不溶性）、ＨＬＢ＞１０：水溶性（不脂溶性）、ＨＬＢ＝１～３：消泡剤、３～６：Ｗ／Ｏ（油中水型）乳化剤、７～９：湿潤及び展着剤、８～１６：Ｏ／Ｗ（水中油型）乳化剤、１３～１６：界面活性剤、１６～１８：可溶化剤又はハイドロトロープである。

【0015】

本明細書においては、「平均重量平均分子量」は、同一組成物の絹フィブロイン又はその断片の重量平均分子量の、２以上の別々の実験の読み取り値によって決定される２以上の値の平均を意味する。

【0016】

本明細書においては、ポリマーの「多分散性（ＰＤ）」という用語は、通常、ポリマーの分子量分布の広さの尺度として使用され、多分散性ＰＤ＝Ｍｗ／Ｍｎの式で定義される。

【0017】

本明細書においては、用語「実質的に均質」は、同定された分子量の周りに正規分布で分布する絹フィブロインベースのタンパク質断片を意味し得る。本明細書においては、用語「実質的に均質」は、本開示の組成物全体に亘って、成分又は添加剤、例えば、絹フィブロイン断片、皮膚科学的に許容される担体などの均一な分布を意味し得る。

【0018】

本明細書においては、用語「絹フィブロインペプチド」、「絹フィブロインタンパク質断片」、及び「絹フィブロイン断片」は、相互変換可能に使用される。分子量又はアミノ酸単位の数は、分子サイズが重要なパラメータになるときに定義する。

【0019】

ＳＰＦの定義及び性質
本明細書において、「絹タンパク質断片」（ＳＰＦ）は、本明細書に定義される「絹フィブロイン断片」、本明細書に定義される「組換え絹断片」、本明細書に定義される「クモシルク断片」、本明細書に定義される「絹フィブロイン様タンパク質断片」、及び／又は本明細書に定義される「化学的に修飾された絹断片」のうちの１以上を含む。ＳＰＦは、本明細書に記載の任意の分子量の値又は範囲、及び本明細書に記載の任意の多分散性の値又は範囲を有することができる。本明細書において、いくつかの実施形態では、用語「絹タンパク質断片」は、また、天然に存在する絹ポリペプチド又はその変異体、天然に存在するシルクポリペプチドのアミノ酸配列、又はそれらの組合せから、それぞれ独立して選択される少なくとも２つの同一繰り返し単位を含む又はからなる絹タンパク質を意味する。

【0020】

ＳＰＦの分子量及び多分散性
実施形態では、本開示の組成物は、約１～約５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約５～約１０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１０～約１５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１５～約２０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１４～約３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２０～約２５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２５～約３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３０～約３５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３５～約４０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３９～約５４ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約４０～約４５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約４５～約５０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約５０～約５５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約５５～約６０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約６０～約６５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約６５～約７０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約７０～約７５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約７５～約８０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約８０～約８５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約８５～約９０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約９０～約９５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約９５～約１００ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１００～約１０５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１０５～約１１０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１１０～約１１５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１１５～約１２０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１２０～約１２５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１２５～約１３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１３０～約１３５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１３５～約１４０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１４０～約１４５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１４５～約１５０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１５０～約１５５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１５５～約１６０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１６０～約１６５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１６５～約１７０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１７０～約１７５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１７５～約１８０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１８０～約１８５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１８５～約１９０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１９０～約１９５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約１９５～約２００ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２００～約２０５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２０５～約２１０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２１０～約２１５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２１５～約２２０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２２０～約２２５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２２５～約２３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２３０～約２３５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２３５～約２４０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２４０～約２４５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２４５～約２５０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２５０～約２５５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２５５～約２６０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２６０～約２６５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２６５～約２７０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２７０～約２７５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２７５～約２８０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２８０～約２８５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２８５～約２９０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２９０～約２９５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約２９５～約３００ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３００～約３０５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３０５～約３１０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３１０～約３１５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３１５～約３２０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３２０～約３２５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３２５～約３３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３３０～約３３５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３３５～約３４０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３４０～約３４５ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。実施形態では、本開示の組成物は、約３４５～約３５０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、約１ｋＤａ～約１４５ｋＤａから選択される重量平均分子量と、１～約５（多分散性１を含むがこれに限定されない）、１～約１．５（多分散性１を含むがこれに限定されない）、約１．５～約２、約１．５～約３、約２～約２．５、約２．５～約３、約３～約３．５、約３．５～約４、約４～約４．５、及び約４．５～約５から選択される多分散性とを有する組成物＃１００１～＃２４５０から選択されるＳＰＦ組成物を含む。

【0022】

本明細書において、「低分子量」、「低ＭＷ」、又は「ｌｏｗ－ＭＷ」ＳＰＦは、約５ｋＤａ～約３８ｋＤａ、約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａ、又は約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される重量平均分子量又は平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含むことができる。いくつかの実施形態では、あるＳＰＦの目的低分子量は、約５ｋＤａ、約６ｋＤａ、約７ｋＤａ、約８ｋＤａ、約９ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１１ｋＤａ、約１２ｋＤａ、約１３ｋＤａ、約１４ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ、約１８ｋＤａ、約１９ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２１ｋＤａ、約２２ｋＤａ、約２３ｋＤａ、約２４ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約２６ｋＤａ、約２７ｋＤａ、約２８ｋＤａ、約２９ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３１ｋＤａ、約３２ｋＤａ、約３３ｋＤａ、約３４ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３６ｋＤａ、約３７ｋＤａ、又は約３８ｋＤａの重量平均分子量であることができる。

【0023】

本明細書において、「中分子量」、「中ＭＷ」、又は「ｍｉｄ－ＭＷ」ＳＰＦは、約３１ｋＤａ～約５５ｋＤａ又は約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａから選択される重量平均分子量又は平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含むことができる。いくつかの実施形態では、あるＳＰＦの目的中分子量は、約３１ｋＤａ、約３２ｋＤａ、約３３ｋＤａ、約３４ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３６ｋＤａ、約３７ｋＤａ、約３８ｋＤａ、約３９ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約４１ｋＤａ、約４２ｋＤａ、約４３ｋＤａ、約４４ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約４６ｋＤａ、約４７ｋＤａ、約４８ｋＤａ、約４９ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約５１ｋＤａ、約５２ｋＤａ、約５３ｋＤａ、約５４ｋＤａ、又は約５５ｋＤａであることができる。

【0024】

本明細書において、「高分子量」、「高ＭＷ」、又は「ｈｉｇｈ－ＭＷ」ＳＰＦは、約５５ｋＤａ～約１５０ｋＤａから選択される重量平均分子量又は平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含むことができる。いくつかの実施形態では、あるＳＰＦの目的高分子量は、約５５ｋＤａ、約５６ｋＤａ、約５７ｋＤａ、約５８ｋＤａ、約５９ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約６１ｋＤａ、約６２ｋＤａ、約６３ｋＤａ、約６４ｋＤａ、約６５ｋＤａ、約６６ｋＤａ、約６７ｋＤａ、約６８ｋＤａ、約６９ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約７１ｋＤａ、約７２ｋＤａ、約７３ｋＤａ、約７４ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約７６ｋＤａ、約７７ｋＤａ、約７８ｋＤａ、約７９ｋＤａ、又は約８０ｋＤａであることができる。

【0025】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子量（例えば、低分子量シルク、中分子量シルク、高分子量シルク）は、当業者によって理解されるように、それぞれのＳＰＦに含有されるアミノ酸の概数に変換することができる。当業者である。例えば、アミノ酸の平均重量は、約１１０ダルトン（即ち、１１０ｇ／ｍｏｌ）であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、線状タンパク質の分子量を１１０ダルトンで除すことで、それに含有されるアミノ酸残基数を概算することができる。

【0026】

実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、１～約５．０から選択される多分散性を有する（多分散性１を含むがこれに限定されない）。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．５～約３．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、１～約１．５から選択される多分散性を有する（多分散性１を含むがこれに限定されない）。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．５～約２．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．０～約２．５から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．５～約３．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．０～約３．５から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．５～約４．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．０～約４．５から選択される多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．５～約５．０から選択される多分散性を有する。

【0027】

実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、１の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．１の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．２の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．３の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．４の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．５の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．６の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．７の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．８の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約１．９の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．０の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．１の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．２の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．３の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．４の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．５の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．６の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．７の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．８の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約２．９の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．０の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．１の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．２の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．３の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．４の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．５の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．６の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．７の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．８の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約３．９の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．０の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．１の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．２の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．３の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．４の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．５の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．６の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．７の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．８の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約４．９の多分散性を有する。実施形態では、本開示の組成物におけるＳＰＦは、約５．０の多分散性を有する。

【0028】

いくつかの実施形態では、低、中、及び／又は高分子量のＳＰＦの組合せを有する本明細書に記載の組成物において、係る低、中、及び／又は高分子量のＳＰＦは、同一又は異なる多分散性を有することができる。

【0029】

絹フィブロイン断片
絹フィブロイン又は絹フィブロインタンパク質断片の製造方法、及びそれらの様々な分野における用途は知られており、例えば、それらの全体を参照により本明細書に援用する米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５４５，３６９号明細書、同第１０，１６６，１７７号明細書、同第１０，２８７，７２８号明細書、及び同第１０，３０１，７６８号明細書に記載されている。カイコＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの生絹は、絹フィブロイン（約７５％）とセリシン（約２５％）の２種類の主要タンパク質で構成される。絹フィブロインは、剛性と強度を提供する半結晶構造を有する繊維状タンパク質である。本明細書においては、用語「絹フィブロイン」は、約３７万Ｄａの重量平均分子量を有するＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの繭の繊維を意味する。カイコの粗繊維は、フィブロインの二重の糸からなる。これらの二重繊維を互いに保持する接着物質がセリシンである。絹フィブロインは、重量平均分子量が約３５万Ｄａの重鎖（Ｈ鎖）と、重量平均分子量が約２５，０００Ｄａの軽鎖（Ｌ鎖）から構成される。絹フィブロインは、高分子量のポリマーの主成分を占める大きな疎水性ドメインを有する両親媒性ポリマーである。疎水性領域は、小さな親水性スペーサによって中断されており、鎖のＮ末端とＣ末端も親水性が高い。Ｈ鎖の疎水性ドメインは、Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒの繰り返しヘキサペプチド配列とＧｌｙ－Ａｌａ／Ｓｅｒ／Ｔｙｒジペプチドの繰り返しを含み、これにより、安定した逆平行シート結晶子を形成することができる。Ｌ鎖のアミノ酸配列は非繰り返し的であるので、Ｌ鎖は、より親水性が高く、比較的弾性がある。絹フィブロイン分子の親水性（Ｔｙｒ，Ｓｅｒ）及び疎水性（Ｇｌｙ，Ａｌａ）鎖セグメントは、絹フィブロイン分子の自己組織化を可能にするように交互に配列される。

【0030】

本明細書では、様々な用途のために複数の産業に亘って使用することができる純粋且つ高度にスケーラブルな絹フィブロイン－タンパク質断片混合溶液を生成するための方法が提供される。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、これらの方法は、本明細書に記載の任意のＳＰＦ（組換え絹タンパク質を含むがこれに限定されない）の断片化、及び絹様又はフィブロイン様タンパク質の断片化に等しく適用可能であると考えられる。

【0031】

本明細書においては、用語「フィブロイン」は、カイコフィブロイン及び昆虫又はクモのシルクタンパク質を含む。実施形態では、フィブロインは、Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉから得られる。Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの生絹は、絹フィブロイン（約７５％）とセリシン（約２５％）の２種類の主要タンパク質で構成される。絹フィブロインは、剛性と強度を提供する半結晶構造を有する繊維状タンパク質である。本明細書においては、用語「絹フィブロイン」は、約３７万Ｄａの重量平均分子量を有するＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの繭の繊維を意味する。これらの不溶性絹フィブロインフィブリルの、水溶性絹フィブロインタンパク質断片への変換は、濃縮中性塩（例えば、８～１０Ｍの臭化リチウム）の添加を必要とし、これが、フィブロインタンパク質を水に対して不溶性にする、分子間及び分子内のイオン結合及び水素結合に干渉する。絹フィブロインタンパク質断片の製造方法、及び／又はその組成物は知られており、例えば、米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５４５，３６９号明細書、及び同第１０，１６６，１７７号明細書に記載されている。

【0032】

カイコＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの生絹繭を細断した。細断した絹の繭をＮａ_２ＣＯ_３の水溶液中で、約１００℃で約６０分間処理して、セリシンを除去した（脱ガム）。水の使用量は、生絹の重量の約０．４倍に相当し、Ｎａ_２ＣＯ_３の量は、生絹繭片の重量の約０．８４８倍である。得られた脱ガム後の絹繭片を、約６０℃にて３回脱イオン水で濯いだ（濯ぎごとに２０分間）。各サイクルの濯ぎ水の量は、０．２Ｌ×生絹繭片の重量とした。脱ガム後の絹繭片から余分な水分を除去した。ＤＩ水洗浄工程の後、湿った脱ガム後絹繭片を室温で乾燥した。脱ガム後絹繭片をＬｉＢｒ溶液と混合し、混合物を約１００℃に加熱した。加温混合物をドライオーブンに入れ、約１００℃で約６０分間加熱して、天然の絹タンパク質を完全に溶解させた。得られた絹フィブロイン溶液を濾過し、接線流濾過（ＴＦＦ）及び１０ｋＤａメンブレンを使用して脱イオン水に対して７２時間透析した。得られた絹フィブロイン水溶液の濃度は、約８．５重量％である。次いで、８．５％の絹溶液を水で希釈して、１．０％ｗ／ｖの絹溶液を得た。次いで、ＴＦＦを使用して、純粋な絹溶液を、水に対して２０．０％ｗ／ｗ絹の濃度に更に濃縮することができる。

【0033】

一連の水の交換による絹の透析は、手動で時間のかかるプロセスであるが、透析に先立ち、絹溶液を希釈するなど、特定のパラメータを変更することにより加速することができる。透析プロセスは、半自動装置、例えば接線流濾過システムを使用することにより、製造のためにスケールアップすることができる。

【0034】

いくつかの実施形態では、絹溶液は、９０℃で３０分間、９０℃で６０分間、１００℃で３０分間、及び１００℃で６０分間などの様々な調製条件パラメータの下で調製される。簡単に説明すると、９．３ＭのＬｉＢｒを調製し、室温で少なくとも３０分間放置した。５ｍＬのＬｉＢｒ溶液を１．２５ｇの絹に添加し、６０℃のオーブンに入れた。各セットのサンプルは、４、６、８、１２、２４、１６８、及び１９２時間で取り出した。

【0035】

いくつかの実施形態では、絹溶液は、９０℃で３０分間、９０℃で６０分間、１００℃で３０分間、及び１００℃で６０分間などの様々な調製条件パラメータの下で調製される。簡単に説明すると、９．３ＭのＬｉＢｒ溶液を、６０℃、８０℃、１００℃、又は沸騰の４つの温度のいずれかまで加熱した。５ｍＬの温ＬｉＢｒ溶液を１．２５ｇの絹に添加し、６０℃のオーブンに入れた。各セットのサンプルは、１、４、及び６時間で取り出した。

【0036】

いくつかの実施形態では、絹溶液は、例えば、以下のような様々な調製条件パラメータの下で調製される。次の４種類の異なる絹抽出条件を用いた：９０℃で３０分間、９０℃で６０分間、１００℃で３０分間、及び１００℃で６０分間。簡単に説明すると、９．３ＭのＬｉＢｒ溶液を、６０℃、８０℃、１００℃、又は沸騰の４つの温度のいずれかまで加熱した。５ｍＬの温ＬｉＢｒ溶液を１．２５ｇの絹に添加し、ＬｉＢｒと同温のオーブンに入れた。各セットのサンプルは、１、４、及び６時間で取り出した。各サンプル１ｍＬを、７．５ｍＬの９．３ＭのＬｉＢｒに添加し、粘度試験のために冷蔵した。

【0037】

いくつかの実施形態では、ＳＰＦは、未加工で未洗浄の、部分的に洗浄された、又は洗浄済みのカイコ繊維を、中性の臭化リチウム塩で溶解することによって得られる。未加工のカイコシルクは、セリシンを除去し、断片混合物の所望の重量平均分子量（ＭＷ）及び多分散性（ＰＤ）を達成するために、選択された温度及び他の条件下で処理される。プロセスパラメータの選択は、使用目的に応じて、明確な最終絹タンパク質断片特性を達成するために変更することができる。結果として得られる最終断片溶液は、１００万分の１（ｐｐｍ）から検出不能なレベルのプロセス汚染物質を含む絹フィブロインタンパク質断片と水であり、医薬品、医療及び消費者のアイケア市場で許容されるレベルである。ＳＰＦの濃度、サイズ、及び多分散性は、使用目的と性能要件に応じて更に変更することができる。

【0038】

図５は、本開示の純粋な絹フィブロインタンパク質断片（ＳＰＦ）を生成するための様々な実施形態を示すフローチャートである。図示した工程の全てが、本開示の全ての絹溶液を製造するために必ずしも必要とされる訳ではないことを理解すべきである。図５に示されるように、工程Ａ、繭（熱処理後又は熱処理前）、絹繊維、絹粉末、クモシルク、又は組換えクモシルクを絹源として使用することができる。Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの生絹繭を開始物質として用いる場合、繭を小片、例えばほぼ同一サイズの断片に切断することができる（工程Ｂ１）。次いで、生絹を抽出し、濯いでセリシンを除去する（工程Ｃ１ａ）。これにより、実質的にセリシンを含まない生絹が得られる。実施形態では、水を８４℃～１００℃（理想的には沸騰）の温度に加熱し、次いで、Ｎａ_２ＣＯ_３（炭酸ナトリウム）を、Ｎａ_２ＣＯ_３が完全に溶解するまで沸騰水に添加する。生絹を沸騰水／Ｎａ_２ＣＯ_３（１００℃）に添加し、約１５～９０分間浸漬する。より長い時間煮沸すると、絹タンパク質の断片がより小さくなる。実施形態では、水の体積は、約０．４×生絹重量に等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３量は、約０．８４８×生絹重量に等しい。実施形態では、水の体積は、生糸重量の０．１×生絹重量に等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３量は、２．１２ｇ／Ｌに維持される。

【0039】

続いて、水に溶解したＮａ_２ＣＯ_３溶液を排出し、過剰な水／Ｎａ_２ＣＯ_３を絹フィブロイン繊維から除去する（例えば、手、機械を使用するスピンサイクルなどによりフィブロイン抽出物を濯ぎ除去する（ｒｉｎｇ ｏｕｔ））。得られた絹フィブロイン抽出物を温水から熱水で濯いで、残存している吸着セリシン又は汚染物質を、典型的には、約４０℃～約８０℃の温度範囲で除去し、水の体積を少なくとも１回変更する（必要に応じて多数回繰り返す）。得られた絹フィブロイン抽出物は、実質的にセリシンが低減された絹フィブロインである。実施形態では、得られた絹フィブロイン抽出物を、約６０℃の温度にて水で濯ぐ。実施形態では、各サイクルの濯ぎ水の体積は、０．１Ｌ～０．２Ｌ×生絹重量に等しい。濯ぎ効果を最大にするために、濯ぎ水を攪拌、回転、又は循環させることが有利なことがある。濯ぎ後、抽出された絹フィブロイン繊維から余分な水が除去される（例えば、手又は機械を使用してフィブロイン抽出物をリングアウトする）。或いは、圧力、温度、若しくは他の試薬、又はそれらの組合せなどの当業者に知られた方法を、セリシン抽出の目的で使用することができる。或いは、絹糸腺（１００％セリシンフリーの絹タンパク質）を、ワーム（ｗｏｒｍ）から直接取り除くこともできる。これにより、タンパク質構造の変化を伴わずに、セリシンを含まない液体絹タンパク質が得られる。

【0040】

次いで、抽出されたフィブロイン繊維を完全に乾燥させる。乾燥したら、抽出した絹フィブロインを、周囲温度と沸騰温度との間の温度で絹フィブロインに添加される溶媒を使用して溶解する（工程Ｃ１ｂ）。実施形態では、溶媒は、臭化リチウム（ＬｉＢｒ）の溶液である（ＬｉＢｒの沸騰は、１４０℃で生じる）。或いは、抽出したフィブロイン繊維を乾燥せずに湿らせて溶媒に入れる。次いで、溶媒濃度を変化させて、乾燥させた絹を溶媒に添加するときと同様の濃度を達成することができる。ＬｉＢｒ溶媒の最終濃度は、０．１Ｍ～９．３Ｍであり得る。抽出されたフィブロイン繊維の完全な溶解は、溶解溶媒の濃度と共に処理時間及び温度を変えることによって達成することができる。他の溶媒をもちいてもよく、例えば、リン酸塩、リン酸、硝酸カルシウム、塩化カルシウム溶液又は無機塩の他の濃縮水溶液が挙げられるが、これらに限定されない。完全に溶解させるには、絹繊維を予め加熱した溶媒溶液に完全に浸漬し、約６０℃～約１４０℃の温度で１～１６８時間維持する必要がある。実施形態では、絹繊維は、溶媒溶液内に完全に浸漬され、次いで、約１００℃の温度で約１時間、乾燥オーブンに入れる必要がある。

【0041】

絹フィブロイン抽出物がＬｉＢｒ溶液に添加される（又はその逆）の際の温度は、フィブロインを完全に溶解するのに必要な時間、及び最終的なＳＰＦ混合溶液の分子量と多分散性に影響を与える。実施形態では、絹溶媒溶液濃度は、２０％ｗ／ｖ以下である。更に、導入又は溶解中の攪拌を使用して、様々な温度及び濃度での溶解を促進することができる。ＬｉＢｒ溶液の温度は、作製される絹タンパク質断片混合物の分子量と多分散性を制御する。実施形態では、温度がより高いと、絹をより迅速に溶解し、プロセスのスケーラビィティを高め、絹溶液の大量生産を提供する。実施形態では、８０℃～１４０℃の温度に加熱されたＬｉＢｒ溶液を使用することにより、完全な溶解を達成するためのオーブン中で必要とされる時間が短縮される。溶解溶媒の６０℃以上で時間と温度を変化させると、ネイティブな絹フィブロインタンパク質の元の分子量から形成されたＳＰＦ混合溶液のＭＷと多分散性を変化させ且つ制御する。

【0042】

或いは、繭全体を、抽出を行わずに、ＬｉＢｒなどの溶媒に直接入れることもできる（工程Ｂ２）。これは、後に、カラム分離及び／又はクロマトグラフィー、イオン交換、塩及び／又はｐＨによる化学沈殿、及び又は酵素消化及び濾過又は抽出などの疎水性及び親水性タンパク質を分離するための当技術分野で知られている方法を使用して、絹及び溶媒溶液からのシルクワーム粒子の濾過及びセリシン除去を必要とする（工程Ｃ２）。これらの方法はいずれも、標準的なタンパク質分離方法の一般的な例であるが、限定されるものではない。或いは、カイコを除去した熱処理されていない繭を、抽出を行わずに、ＬｉＢｒなどの溶媒に入れることもできる。前記方法は、セリシンの分離に使用することができ、熱処理されていない繭に含まれるワームの破片が著しく少ないという利点を有する。

【0043】

透析は、その溶液を、ある体積の水に対して透析させることによって、得られる溶解したフィブロインタンパク質断片溶液から、溶解溶媒を除去する（工程Ｅ１）ために使用することができる。透析の前の予備濾過は、絹及びＬｉＢｒ溶液から、残骸（即ち、カイコの残り）を除去する（工程Ｄ）助けとなる。一例では、透析及び望むなら可能性のある濃縮の前に、０．１％～１．０％絹－ＬｉＢｒ溶液を濾過するために、３μｍ又は５μｍのフィルタを２００～３００ｍＬ／ｍｉｎの流量で使用する。上述したような、本明細書で開示する方法は、特に、スケールアップ可能なプロセス法をもたらすことを考慮した場合、濾過及び下流での透析が容易になるように、濃度を、９．３ＭのＬｉＢｒから、０．１Ｍ～９．３Ｍの範囲に低下させるために時間及び／又は温度を使用することである。或いは、追加的な時間又は温度を用いることなく、９．３ＭのＬｉＢｒ－絹タンパク質断片溶液を、水で希釈して残骸濾過及び透析を容易にすることができる。所望の時間及び温度の濾過での溶解の結果は、公知のＭＷ及び多分散性の半透明粒子フリーの室温での保管安定性のある（ｓｈｅｌｆ－ｓｔａｂｌｅ）絹タンパク質断片ＬｉＢｒ溶液である。溶媒が除去されるまで、透析水を定期的に変える（例えば、１時間、４時間後に水を変え、次いで１２時間毎に合計６回水を変える）ことが有利である。水体積変更の総数は、絹タンパク質溶解及び断片化のために使用される溶媒の得られる濃度をもとにして、変動させることができる。透析後、最終絹溶液を更に濾過して、残留する残骸（即ち、カイコの残り）を除去することができる。

【0044】

或いは、生体分子の分離及び精製のための迅速で効率的な方法である接線流濾過（ＴＦＦ）を、得られる溶解フィブロイン溶液から溶媒を除去する（工程Ｅ２）のに使用することができる。ＴＦＦは、非常に純粋な絹タンパク質断片水溶液を提供し、制御された繰り返し可能な仕方で、大容積の溶液をもたらすためのプロセスのスケールアップ可能性を可能にする。ＴＦＦの前に、絹及びＬｉＢｒの溶液を希釈することができる（水か又はＬｉＢｒの中で２０％～０．１％絹へ）。ＴＦＦ処理の前での上述したような予備濾過は、フィルタ効率を維持することができ、残骸粒子の存在の結果としての、フィルタの表面上での絹ゲル境界層の発生を潜在的に回避させる。ＴＦＦの前の予備濾過はまた、得られる水だけの溶液の自然発生的又は長期的なゲル化を引き起こす可能性のある、絹及びＬｉＢｒ溶液から残留する残骸（即ち、カイコの残り）を除去する（工程Ｄ）助けにもなる。再循環させるか又はワンパス（ｓｉｎｇｌｅ ｐａｓｓ）のＴＦＦは、０．１％絹～３０．０％絹（より好ましくは０．１％～６．０％絹）の範囲の水－絹タンパク質断片溶液を作製するために使用することができる。溶液中での絹タンパク質断片混合物の所望の濃度、分子量及び多分散性に基づいて、異なるカットオフサイズのＴＦＦ膜を必要とする可能性がある。１～１００ｋＤａの範囲の膜は、例えば、抽出煮沸時間の長さ、又は溶解溶媒（例えば、ＬｉＢｒ）中での時間及び温度を変動させることによって作製される分子量絹溶液を変動させるのに必要である可能性がある。一実施形態では、ＴＦＦ５又は１０ｋＤａの膜は、絹タンパク質断片混合溶液を精製し、最終的な所望の絹と水の比をもたらすために使用される。その上に、ＴＦＦワンパス、ＴＦＦ、及び流下膜式蒸発器などの当業界で公知の他の方法を、溶解溶媒（例えば、ＬｉＢｒ）の除去に続いて、溶液を濃縮するために使用することができる（０．１％～３０％絹の範囲の所望濃度が得られる）。これは、水ベースの溶液を作製するために当業界で公知の標準的なＨＦＩＰ濃度法の代替法として使用することができる。より大きい細孔膜を、小さい絹タンパク質断片を濾別し、よりタイトな多分散性の値を有する及び／又は有しないより高分子量の絹の溶液を作製するために利用することもできる。

【0045】

ＬｉＢｒ及びＮａ_２ＣＯ_３検出のためのアッセイは、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を備えたＨＰＬＣシステムを使用して実施することができる。計算は、濃度に対してプロットされた被分析物についての得られたピーク面積の線形回帰によって実施した。本開示のいくつかの処方物のうちの２つ以上のサンプルを、サンプル調製及び分析のために使用した。一般に、異なる処方物の４つのサンプルを、１０ｍＬ容量フラスコ中に直接量り込んだ。サンプルを５ｍＬの２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）に懸濁し、時々振とうしながら２～８℃で２時間維持して、フィルムから検体を抽出した。２時間後、溶液を２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）で希釈した。メスフラスコのサンプル溶液をＨＰＬＣバイアルに移し、炭酸ナトリウムと臭化リチウムの推定のためＨＰＬＣ－ＥＬＳＤシステムに注入した。

【0046】

絹タンパク質処方物中のＮａ_２ＣＯ_３及びＬｉＢｒを定量化するために開発された分析手法は、１０～１６５μｇ／ｍＬの範囲で線形であることが分かった。注入精度のＲＳＤは、それぞれ炭酸ナトリウム及び臭化リチウムについて、面積では２％及び１％であり、保持時間では０．３８％及び０．１９％であった。この分析手法は、絹タンパク質処方物中の炭酸ナトリウム及び臭化リチウムの定量的決定に適用することができる。

【0047】

図６は、抽出及び溶解工程の際に、本開示の絹タンパク質断片溶液を作製するプロセスの間に改変することができる種々のパラメータを示すフローチャートである。選択方法のパラメータは、目的とする用途、例えば分子量及び多分散性に応じて明確な最終溶液の特徴を達成するように変更することができる。例示した工程の全てが、必ずしも、本開示の全ての絹溶液を加工するために必要とされる訳ではないことを理解すべきである。

【0048】

実施形態では、以下の工程にしたがって、広範な用途に有用な絹タンパク質断片が調製される。即ち、カイコＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉから絹繭の断片を形成する工程と；Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液中、約１００℃で約６０分間、その断片を抽出する工程（ここで、水の体積は約０．４×未加工の絹重量と等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の量は約０．８４８×絹フィブロイン抽出物を形成させるための断片重量である）と；濯ぎ水の体積で、１濯ぎ当たり約６０℃で約２０分間、絹フィブロイン抽出物を３回濯ぐ工程と（各サイクルについての濯ぎ水は約０．２Ｌ×断片重量に等しい）；過剰の水を、絹フィブロイン抽出物から除去する工程と；絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程と；乾燥絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液に溶解する工程と（ＬｉＢｒ溶液を最初に約１００℃に加熱して絹及びＬｉＢｒ溶液を作製し、これを維持する）；絹及びＬｉＢｒ溶液を、乾燥オーブン中に約１００℃で約６０分間置いて完全な溶解、並びに所望の分子量及び多分散性を有する混合物への天然の絹タンパク質構造の更なる断片化を達成する工程と；その溶液を濾過してカイコから残留する残骸を除去する工程と；その溶液を水で希釈して１．０重量％絹溶液を得る工程と；接線流濾過（ＴＦＦ）を使用してその溶液から溶媒を除去する工程とを含む。一実施形態では、絹溶液を精製するために１０ｋＤａの膜を利用し、最終的な所望の絹と水の比をもたらす。次いで、ＴＦＦを使用して、絹溶液を、水中２．０重量％の濃度の絹に更に濃縮することができる。

【0049】

何ら特定の理論に拘束されることを望むものではないが、抽出（即ち、時間及び温度）、ＬｉＢｒ（即ち、絹フィブロイン抽出物に添加する又はその逆の場合のＬｉＢｒ溶液の温度）及び溶解（即ち、時間及び温度）パラメータを変動させると、異なる粘度、均一性及び色を有する溶媒及び絹溶液がもたらされる。また、何ら特定の理論に拘束されることを望むものではないが、抽出のための温度を上昇させること、抽出時間を延長すること、絹を溶解させる場合、出現時及び長期に亘って、より高い温度のＬｉＢｒ溶液を使用すること（例えば、ここで示すようなオーブン中、又は代替の熱源）の温度での時間を延ばすことは、いずれも、粘性がより低く、より均一な溶媒及び絹溶液をもたらす。

【0050】

抽出工程は、そこで６０℃～１００℃の温度が維持される、より大きな容器、例えば工業用洗浄機械中で遂行することができる。濯ぎ工程を、マニュアルでの濯ぎサイクルを排除する工業用洗浄機械において遂行することもできる。ＬｉＢｒ溶液中への絹の溶解は、対流式オーブン以外の容器、例えば撹拌槽型反応器中で行うことができる。一連の水の変更によって絹を透析する工程はマニュアルであり、時間集中的なプロセスである。これは、特定のパラメータを変更すること、例えば透析前に絹溶液を希釈することによって加速することができる。透析プロセスは、半自動装置、例えば接線流濾過システムを使用することによって、製造のためにスケールアップすることができる。

【0051】

抽出（即ち、時間及び温度）、ＬｉＢｒ（即ち、絹フィブロイン抽出物に添加する又はその逆の場合のＬｉＢｒ溶液の温度）及び溶解（即ち、時間及び温度）パラメータを変動させると、異なる粘度、均一性及び色を有する溶媒及び絹溶液がもたらされる。抽出のための温度を上昇させること、抽出時間を延長すること、絹を溶解させる場合、出現時及び長期に亘って、より高い温度のＬｉＢｒ溶液を使用すること（例えば、ここで示すようなオーブン中、又は代替の熱源）の温度での時間を延ばすことは、いずれも、粘性がより低く、より均一な溶媒及び絹溶液をもたらす。殆ど全てのパラメータは実行可能な絹溶液をもたらすが、４～６時間より短い時間で完全な溶解を達成させるような方法が、プロセススケールアップ可能性のために好ましい。

【0052】

実施形態では、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される重量平均を有する絹フィブロインタンパク質断片の溶液は、以下の工程にしたがって調製される：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間添加することによって絹源を脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約６０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約１４０℃のオーブンで最大１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹タンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、前記水溶液は、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される重量平均分子量と、１～約５又は約１．５～約３．０の多分散性とを有する断片を含む。前記方法は、溶解工程の前に絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は凍結乾燥することができる。いくつかの実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片溶液は、ゲル、粉末、及びナノファイバーを含む様々な形態に更に加工することができる。

【0053】

実施形態では、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の溶液は、以下の工程にしたがって調製される：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間添加することによって脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約８０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約６０℃～約１００℃のオーブンで最大１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残留物を含み、絹タンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残留物を含み、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される重量平均分子量と、１～約５又は約１．５～約３．０の多分散性とを有する断片を含む。前記方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。

【0054】

いくつかの実施形態では、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される平均重量分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間添加することによって脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約６０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約１４０℃のオーブンで少なくとも１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される平均重量分子量と、１～約５又は約１．５～約３．０の多分散性とを有する断片を含む水溶液を生成する。前記方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に治療薬を添加することを更に含むことができる。前記方法は、抗酸化剤又は酵素のうちの１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを更に含むことができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液にビタミンを添加することを更に含むことができる。ビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であり得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥することができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、アルファヒドロキシ酸を添加することを更に含むことができる。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、約０．５％～約１０．０％の濃度で、ヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含むことができる。前記方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンのうちの少なくとも１つを添加することを更に含むことができる。前記方法で製造された純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液からフィルムを製造することができる。前記フィルムは、約１．０重量％～約５０，０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。前記フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の含水量を有し得る。前記フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含む得る。ゲルは、前記方法で生成された純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から製造することができる。前記ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。前記ゲルは、少なくとも２％の絹含量と、少なくとも２０％のビタミン含量とを有し得る。

【0055】

いくつかの実施形態では、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間添加することによって脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約８０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約６０℃～約１００℃のオーブンで少なくとも１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残留物を含み、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残留物を含み、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される重量平均分子量と、１～約５又は約１．５～約３．０の多分散性とを有する断片を含む。前記方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に治療薬を添加することを更に含むことができる。前記方法は、抗酸化剤又は酵素のうちの１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを更に含むことができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液にビタミンを添加することを更に含むことができる。ビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であり得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥することができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、アルファヒドロキシ酸を添加することを更に含むことができる。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、約０．５％～約１０．０％の濃度で、ヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含むことができる。前記方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンのうちの少なくとも１つを添加することを更に含むことができる。前記方法で製造された純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液からフィルムを製造することができる。前記フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。前記フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の含水量を有し得る。前記フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含む得る。ゲルは、前記方法で生成された純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から製造することができる。前記ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。前記ゲルは、少なくとも２％の絹含量と、少なくとも２０％のビタミン含量とを有し得る。

【0056】

いくつかの実施形態では、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の溶液は、以下の工程にしたがって調製される：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間の処理時間添加することによって脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約８０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約６０℃～約１００℃のオーブンで最大１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残留物、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残留物、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される重量平均分子量と、１～約５又は約１．５～約３．０の多分散性とを有する断片を含む。前記方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。いくつかの実施形態では、前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に活性剤（例えば、治療薬）を添加することを更に含むことができる。前記方法は、抗酸化剤又は酵素のうちの１つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを更に含むことができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液にビタミンを添加することを更に含むことができる。ビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であり得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥することができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、アルファヒドロキシ酸を添加することを更に含むことができる。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。前記方法は、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、約０．５％～約１０．０％の濃度で、ヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを更に含むことができる。前記方法は、酸化亜鉛又は二酸化チタンのうちの少なくとも１つを添加することを更に含むことができる。前記方法で製造された純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液からフィルムを製造することができる。前記フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。前記フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の含水量を有し得る。前記フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含む得る。ゲルは、前記方法で生成された純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から製造することができる。前記ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。前記ゲルは、少なくとも２重量％の絹含量と、少なくとも２０重量％のビタミン含量とを有し得る。

【0057】

絹タンパク質断片の分子量は、抽出時間及び温度を含む抽出工程の際に使用される特定のパラメータ；臭化リチウム中への絹の浸漬時のＬｉＢｒ温度、及びその溶液を特定の温度で維持する時間を含む溶解工程の際に使用される特定のパラメータ；並びに濾過工程の際に使用される特定のパラメータに基づいて制御することができる。開示する方法を用いてプロセスパラメータを制御することによって、５ｋＤａ～２００ｋＤａ又は１０ｋＤａ～８０ｋＤａから選択される様々な異なる分子量で２．５以下の多分散性を有する絹フィブロインタンパク質溶液を作製することができる。異なる分子量を有する絹溶液を達成するためにプロセスパラメータを変更することによって、２．５以下の所望の多分散性を有するある範囲の断片混合物最終製品を、所望の性能要件に基づいて、目的とすることができる。例えば、眼薬を含む高分子量の絹フィルムは、低分子量のフィルムよりも遅い放出速度に制御でき、アイケア製品における送達ビヒクルとして理想のものとすることができる。更に、２．５超の多分散性を有する絹フィブロインタンパク質溶液を達成することができる。更に、平均分子量及び多分散性が異なる２種類の溶液を混合して、組合せ溶液を作製することができる。或いは、ワームから直接取り出された液体絹糸腺（１００％セリシンフリーの絹タンパク質）を、本開示の絹フィブロインタンパク質断片溶液のいずれかと併用することができる。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物の分子量は、屈折率検出器（ＲＩＤ）を備えた高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して決定した。多分散性は、Ｃｉｒｒｕｓ ＧＰＣオンラインＧＰＣ／ＳＥＣソフトウェアバージョン３．３（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して計算した。

【0058】

処理パラメータが異なると、分子量が様々な再生絹フィブロイン、及びペプチド鎖サイズ分布（多分散性、ＰＤ）を生じることがある。これは、続いて、機械的強度、水溶性などの、再生絹フィブロインの性能に影響を及ぼす。

【0059】

未加工の絹繭を処理して絹溶液にする際にパラメータを変動させた。これらのパラメータの変動は、得られる絹溶液のＭＷに影響を及ぼした。操作したパラメータには、（ｉ）抽出の時間及び温度、（ｉｉ）ＬｉＢｒの温度、（ｉｉｉ）溶解オーブンの温度、及び（ｉｖ）溶解時間が含まれた。抽出時間を変動させた効果を判定するために実験を実施した。表１～表７に結果をまとめる。以下がそのまとめである。
－ ３０分間のセリシン抽出時間は、６０分間のセリシン抽出時間より大きい分子量をもたらした
－ 分子量は、オーブン中での時間と共に減少する
－ １４０℃ ＬｉＢｒ及びオーブンは、９５００Ｄａの分子量より低い信頼区間のローエンドをもたらした
－ １時間及び４時間の時点での３０ｍｉｎ抽出は、絹を消化しなかった
－ １時間時点での３０ｍｉｎ抽出は、３５，０００Ｄａという信頼区間のローエンドを有する有意に高い分子量をもたらした
－ 信頼区間のハイエンドに達した分子量の範囲は、１８０００～２１６０００Ｄａ（特定の上限値を有する溶液を提供するために重要である）であった

【表1】

【表2】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【0060】

抽出温度を変動させた効果を判定するために実験を実施した。表７にその結果をまとめる。以下がそのまとめである。
－ ９０℃でのセリシン抽出は、１００℃でのセリシン抽出より高いＭＷをもたらした
－ ９０℃と１００℃はいずれも、オーブン中で経時的にＭＷを低下させることを示す

【表7】

【0061】

絹に添加する場合の臭化リチウム（ＬｉＢｒ）温度を変動させた効果を判定するために実験を実施した。表８～表９にその結果をまとめる。以下がそのまとめである：
－ 分子量又は信頼区間に対する影響はなし（全て、ＣＩ～１０５００～６５００Ｄａ）
－ 試験は、ＬｉＢｒが添加され、溶解し始めると、室温でその質量の大部分が絹であるため、ＬｉＢｒ－絹溶解の温度は元のＬｉＢｒ温度を下回って急激に低下することを示す

【表8】

【表9】

【0062】

オーブン／溶解温度の効果を判定するために実験を実施した。表１０～表１４にその結果をまとめる。以下がそのまとめである：
－ オーブン温度は、３０ｍｉｎ抽出した絹より、６０ｍｉｎ抽出した絹について、より効果が小さい。理論に拘束されることを望むものではないが、３０ｍｉｎ絹は、抽出の際の分解がより小さく、したがってオーブン温度は、より大きいＭＷに対してより大きい効果を示しており、絹の分解部分がより少ないと考えられる。
－ ６０℃対１４０℃オーブンについて、３０ｍｉｎ抽出した絹は、より高いオーブン温度で、より低いＭＷの非常に有意な効果を示し、６０ｍｉｎ抽出した絹は、効果はあったがそれは遥かに小さいものであった
－ １４０℃オーブンは、～６０００Ｄａで信頼区間におけるローエンドをもたらした

【表10】

【表11】

【表12】

【表13】

【表14】

【0063】

カイコＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの生絹繭を細断した。生絹繭をＮａ_２ＣＯ_３水溶液（約１００℃）で約３０分間～約６０分間煮沸し、セリシンを除去（脱ガム）した。使用した水の体積は、約０．４×生絹重量に相当し、Ｎａ_２ＣＯ_３の量は、約０．８４８×生絹繭断片の重量である。得られた脱ガム後の絹繭片を、約６０℃にて３回脱イオン水で濯いだ（濯ぎごとに２０分間）。各サイクルの濯ぎ水の体積は、０．２Ｌ×生絹繭片の重量とした。脱ガム後の絹繭片から余分な水を除去した。ＤＩ水洗浄工程の後、湿った脱ガム後の絹繭片を室温で乾燥させた。脱ガム後の絹繭片をＬｉＢｒ溶液と混合し、混合物を約１００℃に加熱した。温めた混合物を乾燥オーブンに入れ、約６０℃～約１４０℃の温度で約６０分間加熱して、ネイティブな絹タンパク質の完全溶解を達成した。得られた溶液を室温まで冷却した後、透析して、３，５００ＤａのＭＷＣＯ膜を使用してＬｉＢｒ塩を除去した。臭化オークトン（Ｂｒ^－）二重接合イオン選択性電極（Ｏａｋｔｏｎ Ｂｒｏｍｉｄｅ （Ｂｒ^－） ｄｏｕｂｌｅ－ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｉｏｎ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ）で読み取った加水分解フィブロイン溶液で測定したＢｒ^－イオンが１ｐｐｍ未満になるまで、Ｄｉ水中で複数回の交換を行った。

【0064】

得られた絹フィブロイン水溶液は、約６ｋＤａ～約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、及び約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量と、約１．５～約３．０の多分散性とを有する純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含む、約８．０％ｗ／ｖの濃度を有する。８．０％ｗ／ｖをＤＩ水で希釈して、コーティング溶液で、１．０％ｗ／ｖ、２．０％ｗ／ｖ、３．０％ｗ／ｖ、４．０％ｗ／ｖ、５．０％ｗ／ｖを得た。

【0065】

接線流濾過（ＴＦＦ）を使用することにより、様々な％絹濃度が生成される。いずれの場合も、１％絹溶液を供給フィード（ｉｎｐｕｔ ｆｅｅｄ）として使用した。開始体積として、７５０～１８，０００ｍＬの１％絹溶液を使用した。溶液をＴＦＦで透析濾過して、臭化リチウムを除去する。残留ＬｉＢｒの所定レベルを下回ると、溶液を限外濾過し、水を除去して濃度を上昇させる。以下の例を参照。

【0066】

６種類の絹溶液を、標準的な絹構造にて使用し、以下の結果を得た：
溶液＃１は、絹濃度５．９重量％、平均ＭＷ１９．８ｋＤａ、及び２．２ＰＤＩである（６０分間の煮沸抽出、１００℃のＬｉＢｒ溶解１時間で作製）。
溶液＃２は、絹濃度６．４重量％である（３０分間の煮沸抽出、６０℃のＬｉＢｒ溶解４時間で作製）
溶液＃３は、絹濃度６．１７重量％である（３０分間の煮沸抽出、１００℃のＬｉＢｒ溶解１時間で作製）
溶液＃４は、絹濃度７．３０重量％である。７．３０％の絹溶液を、バッチ当たり１００ｇの絹繭の３０分間抽出バッチから生成した。次いで、抽出した絹繊維を、１００℃のオーブン中、１００℃の９．３ＭのＬｉＢｒを使用して１時間溶解させた。バッチ当たり１００ｇの絹繊維を溶解して、ＬｉＢｒに２０％の絹を作製した。次いで、ＬｉＢｒに溶解した絹を１％絹に希釈し、５μｍフィルタで濾過して大きな破片を除去した。ＴＦＦの開始体積／透析濾過体積として、１５，５００ｍＬの１％濾過絹溶液を使用した。ＬｉＢｒを除去したら、溶液を約１３００ｍＬの体積に限外濾過した。次いで、１２６２ｍＬの７．３０％絹を回収した。残りの溶液の除を助けるために水をフィードに添加し、次いで、５４７ｍＬの３．９１％絹を回収した。
溶液＃５は、絹濃度６．４４重量％である。６．４４重量％の絹溶液を、バッチ当たり２５、３３、５０、７５、及び１００ｇの絹繭の６０分間抽出バッチから生成した。次いで、抽出した絹繊維を、１００℃のオーブン中、１００℃の９．３ＭのＬｉＢｒを使用して１時間溶解させた。バッチ当たり３５、４２、５０、及び７１ｇの絹繊維を溶解して、ＬｉＢｒに２０％の絹を作製した。次いで、ＬｉＢｒに溶解した絹を１％絹に希釈し、５μｍフィルタで濾過して大きな破片を除去した。ＴＦＦの開始体積／透析濾過体積として、１７，０００ｍＬの１％濾過絹溶液を使用した。ＬｉＢｒを除去したら、溶液を約３０００ｍＬの体積に限外濾過した。次いで、１４９０ｍＬの６．４４％絹を回収した。残りの溶液の除去を助けるために水をフィードに添加し、次いで、１４５４ｍＬの４．８８％絹を回収した。
溶液＃６は、絹濃度２．７０重量％である。２．７０％の絹溶液を、バッチ当たり２５ｇの絹繭の６０分間抽出バッチから生成した。次いで、抽出した絹繊維を、１００℃のオーブン中、１００℃の９．３ＭのＬｉＢｒを使用して１時間溶解させた。バッチ当たり３５．４８ｇの絹繊維を溶解して、ＬｉＢｒに２０％の絹を作製した。次いで、ＬｉＢｒに溶解した絹を１％絹に希釈し、５μｍフィルタで濾過して大きな破片を除去した。ＴＦＦの開始体積／透析濾過体積として、１０００ｍＬの１％濾過絹溶液を使用した。ＬｉＢｒを除去したら、溶液を約３００ｍＬの体積に限外濾過した。次いで、３１２ｍＬの２．７％絹を回収した。

【0067】

高分子量の絹フィブロイン溶液の調製を、表１５に示す。
表１５．絹フィブロイン溶液の調製及び性質

【表15】

【0068】

生地に適用するための絹の水性コーティング組成物を、以下の表１６及び表１７に示す。

【表16】

【表17】

【0069】

３種類の絹溶液をフィルム作製に用い、以下の結果を得た。
溶液＃１は、絹濃度５．９％、平均ＭＷ１９．８ｋＤａ、及び２．２ＰＤである（６０分間の煮沸抽出、１００℃のＬｉＢｒ溶解１時間で作製）。
溶液＃２は、絹濃度６．４％である（３０分間の煮沸抽出、６０℃のＬｉＢｒ溶解４時間で作製）
溶液＃３は、絹濃度６．１７％である（３０分間の煮沸抽出、１００℃のＬｉＢｒ溶解１時間で作製）

【0070】

フィルムは、Ｒｏｃｋｗｏｏｄら（Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ； Ｖｏｌ． ６； Ｎｏ． １０； ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ－ｌｉｎｅ Ｓｅｐ． ２２， ２０１１； ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２０１１．３７９）にしたがって作製した。４ｍＬの１％又は２％（ｗｔ／ｖｏｌ）絹水溶液を１００ｍｍペトリ皿に添加し（絹の体積は、フィルムの厚みや薄さによって異なるが、重要ではない）、カバーを外して一晩乾燥させた。真空デシケーターの底を水で満たした。乾燥フィルムをデシケーターに入れ、真空にして、皿から取り出す前にフィルムを４時間水アニーリングした。溶液＃１からキャストされたフィルムは、構造的に連続したフィルムにはならなかった。フィルムは、ひびが入り、いくつかの部分になった。フィルムのこれらの部分は、水アニーリング処理にもかかわらず、水に溶解した。

【0071】

様々な分子量及び／又は分子量の組合せの絹溶液は、ゲル用途向けに最適化することができる。以下は、このプロセスの例を示すが、用途又は配合を制限することを意図するものではない。３種類の絹溶液をゲル作製に用い、以下の結果を得た。
溶液＃１は、絹濃度５．９％、平均ＭＷ１９．８ｋＤａ、及び２．２ＰＤである（６０分間の煮沸抽出、１００℃のＬｉＢｒ溶解１時間で作製）。
溶液＃２は、絹濃度６．４％である（３０分間の煮沸抽出、６０℃のＬｉＢｒ溶解４時間で作製）
溶液＃３は、絹濃度６．１７％である（３０分間の煮沸抽出、１００℃のＬｉＢｒ溶解１時間で作製）

【0072】

「Ｅｇｅｌ」は、Ｒｏｃｋｗｏｏｄらに記載される電気ゲル化プロセスである。簡単に説明すると、１０ｍｌの絹水溶液を５０ｍｌのコニカルチューブに添加し、１対の白金線電極を絹溶液に浸漬する。白金電極に２０ボルトの電位を５分間印加し、電源をオフにしてゲルを回収した。溶液＃１は、５分間に亘る印加電流でＥＧＥＬを生成しなかった。

【0073】

溶液＃２及び＃３は、公開されている西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）プロトコルにしたがってゲル化した。挙動は、公開された溶液の典型的なものであった。

【0074】

材料及び方法：絹の分子量の測定には、以下の機器及び材料を使用する：ケムステーションソフトウェアｖｅｒ．１０．０１を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１１００；屈折率検出器（ＲＩＤ）；分析バランス；メスフラスコ（１０００ｍＬ、１０ｍＬ、及び５ｍＬ）；ＨＰＬＣグレードの水；ＡＣＳグレードの塩化ナトリウム；ＡＣＳグレードのリン酸水素二ナトリウム二塩基性七水和物；リン酸；デキストランＭＷ標準－公称分子量５ｋＤａ、１１．６ｋＤａ、２３．８ｋＤａ、４８．６ｋＤａ、及び１４８ｋＤａ；５０ｍＬのＰＥＴ又はポリプロピレンディスポーザブル遠心分離管；目盛り付きピペット；テフロン（登録商標）製キャップ付きの琥珀色のガラスＨＰＬＣバイアル；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＰｏｌｙＳｅｐ ＧＦＣ Ｐ－４０００カラム（サイズ：７．８ｍｍ×３００ｍｍ）。

【0075】

手続工程：
Ａ）１Ｌの移動相（０．０１２５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液中の０．１Ｍ塩化ナトリウム溶液）の調製
２５０ｍＬの清潔で乾燥したビーカーを取り、バランスに置き、重量を風袋引きする。ビーカーにリン酸水素二ナトリウム七水和物約３．３５０９ｇを添加する。秤量したリン酸水素二ナトリウムの正確な重量を書き留める。ビーカーに１００ｍＬのＨＰＬＣ水を添加することにより、秤量したリン酸ナトリウムを溶解する。ビーカーの内容物をこぼさないように注意する。溶液を注意深く清潔で乾燥した１０００ｍＬメスフラスコに移す。ビーカーを濯ぎ、濯ぎ液をメスフラスコに移す。濯ぎを４～５回繰り返す。別の清潔で乾燥した２５０ｍＬビーカーに、正確に約５．８４４０ｇの塩化ナトリウムを秤量する。秤量した塩化ナトリウムを５０ｍＬの水に溶解し、メスフラスコ内のリン酸ナトリウム溶液に移す。ビーカーを濯ぎ、濯ぎ液をメスフラスコに移す。リン酸で溶液のｐＨを７．０±０．２に調整する。メスフラスコ内の量をＨＰＬＣ水で１０００ｍＬにし、激しく振とうして溶液を均一に混合する。０．４５μｍのポリアミドメンブレンフィルタで溶液を濾過する。溶液を清潔で乾燥した溶媒ボトルに移し、ボトルにラベル付けする。溶液の量は、リン酸水素二ナトリウム七水和物及び塩化ナトリウムの量を対応して変更することにより、必要に応じて変えることができる。

【0076】

Ｂ）デキストラン分子量標準溶液の調製
試験サンプルの期待値が使用される標準の値の範囲内に収まるように、実行するサンプルの各バッチに少なくとも５種類の異なる分子量標準を使用する。分子量標準に対応する６つの２０ｍＬシンチレーションガラスバイアルにラベル付けする。デキストラン分子量標準をそれぞれ約５ｍｇ正確に秤量し、その重量を記録する。デキストラン分子量標準を５ｍＬの移動相に溶解して、１ｍｇ／ｍＬ標準溶液を作製する。

【0077】

Ｃ）サンプル溶液の調製
サンプル溶液を調製する際に、利用できるサンプル量に制限がある場合には、比率が維持されている限り、調製物をスケールアップすることができる。サンプルのタイプとサンプル中の絹タンパク質含量に応じて、分析用バランスで５０ｍＬディスポーザブル遠心分離管に十分量のサンプルを秤量し、分析用の１ｍｇ／ｍＬサンプル溶液を作製する。
サンプルを等量の移動相に溶解し、１ｍｇ／ｍＬ溶液を作製する。チューブにしっかりと蓋をして、サンプルを（溶液中で）混合する。サンプル溶液を室温で３０分間放置する。サンプル溶液を再度１分間穏やかに混合し、４０００ＲＰＭで１０分間遠心分離する。

【0078】

Ｄ）サンプルのＨＰＬＣ分析
全ての標準とサンプル溶液１．０ｍＬを個々のＨＰＬＣバイアルに移す。分子量標準（各１回注入）と各サンプルとを２連で注入する。以下のＨＰＬＣ条件を使用して、全ての標準とサンプル溶液を分析する。

【0079】

Ｅ）データ分析と計算－Ｃｉｒｒｕｓソフトウェアを使用した平均分子量の計算
標準及び分析サンプルのクロマトグラフィーデータファイルをＣｉｒｒｕｓＳＥＣデータ収集及び分子量分析ソフトウェアにアップロードする。サンプルの各注入について、重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）、ピーク平均分子量（Ｍｐ）、及び多分散性を計算する。

【0080】

クモシルク断片
クモシルクは、タンパク質鎖の主成分である繰り返しミドルコアドメインと、非繰り返しのＮ末端及びＣ末端の各ドメインの３つのドメインで構成される天然ポリマーである。大きなコアドメインは、ブロックコポリマー様配置で構成されており、結晶性の［ポリ（Ａ）又はポリ（ＧＡ）］と結晶性の低い（ＧＧＸ又はＧＰＧＸＸ（配列番号７））ポリペプチドの２つの基本配列が交互に存在する。ドラグラインシルクは、大瓶状ドラグラインシルクタンパク質１（ＭａＳｐ１）と大瓶状ドラグラインシルクタンパク質２（ＭａＳｐ２）で構成されるタンパク質複合体である。いずれのシルクも、約３５００アミノ酸長である。ＭａＳｐ１は、繊維コアとその周辺に見られますが、ＭａＳｐ２は、特定のコア領域でクラスターを形成する。ＭａＳｐ１とＭａＳｐ２の大きな中央ドメインは、ブロックコポリマー様配置で構成されており、結晶性の［ｐｏｌｙ（Ａ）又はｐｏｌｙ（ＧＡ）］と結晶性の低い（ＧＧＸ又はＧＰＧＸＸ（配列番号７））ポリペプチドの２つの基本配列がコアドメインで交互に存在する。具体的な二次構造は、それぞれ、β－シート、α－ヘリックス、及びβ－スパイラルを含むポリ（Ａ）／（ＧＡ）、ＧＧＸ、及びＧＰＧＸＸ（配列番号７）モチーフに割り当てられる。繰り返しコアドメインの一次配列、組成、及び二次構造要素は、クモシルクの機械的特性を司り、一方で、非繰り返しＮ末端ドメイン及びＣ末端ドメインは、液体シルクドープを内腔に貯蔵し、紡糸ダクトで繊維を生成するために不可欠である。

【0081】

ＭａＳｐ１とＭａＳｐ２の主な違いは、ＭａＳｐ１がプロリン（Ｐ）を含まないのに対して、ＭａＳｐ２の総アミノ酸含量の１５％を占めるプロリン残基の存在である。Ｎ． ｃｌａｖｉｐｅｓドラグラインシルクのプロリン残基の数を計算することにより、繊維中の２つのタンパク質の存在を推定することができ、８１％のＭａＳｐ１及び１９％のＭａＳｐ２である。クモが異なれば、ＭａＳｐ１とＭａＳｐ２の比も異なる。例えば、コガネグモＡｒｇｉｏｐｅ ａｕｒａｎｔｉａのドラグラインシルク繊維は、４１％のＭａＳｐ１と５９％のＭａＳｐ２を含む。大瓶状シルクの比の係る変化は、シルク繊維の性能を記述し得る。

【0082】

１つのコガネグモ種のクモについて、少なくとも７種類の絹タンパク質が知られている。絹は、一次配列、物理的性質、及び機能が異なる。例えば、フレーム、半径、ライフラインの構築に使用されるドラグラインシルクは、強度、靭性、及び弾性を含む優れた機械的特性で知られている。等重量ベースで、クモシルクは、スチール及びＫｅｖｌａｒよりも高い靭性を有する。キャプチャスパイラル（ｃａｐｔｕｒｅ ｓｐｉｒａｌｓ）に見られる鞭毛上シルクは、最大５００％の伸長性を有する。コガネグモの補助スパイラル（ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｓｐｉｒａｌｓ）及び獲物のラッピング（ｐｒｅｙ ｗｒａｐｐｉｎｇ）に見られる小瓶状シルクは、大瓶状シルクとほぼ同程度の高い靭性と強度を有するが、水中では超収縮（ｓｕｐｅｒｃｏｎｔｒａｃｔ）しない。

【0083】

クモシルクは、高い引張強度と靭性で知られている。組換え絹タンパク質はまた、化粧品又は皮膚科学的組成物に有利な性質を付与し、特に、水和又は軟化作用、良好な膜形成性、及び低表面密度を改善することができる。多様でユニークな生体力学的性質と生体適合性及び緩慢な分解速度により、クモシルクは、組織工学、ガイド付き組織修復及び薬物送達用、化粧品（例えば、ネイル及び毛髪強化剤、スキンケア製品）用生体材料、及び工業材料（例えば、ナノワイヤー、ナノファイバー、表面コーティング）用として優れた候補になる。

【0084】

実施形態では、絹タンパク質は、天然のクモシルクタンパク質に由来するポリペプチドを含み得る。ポリペプチドは、天然のクモシルクタンパク質に由来する限り、特に限定されず、ポリペプチドの例としては、天然のクモシルクタンパク質、及び天然のクモシルクタンパク質のバリアント、アナログ、誘導体などの組換えクモシルクタンパク質が挙げられる。優れたテナシティ（ｔｅｎａｃｉｔｙ）の観点から、ポリペプチドは、クモの大瓶状腺で生成される主要なドラグラインシルクタンパク質に由来することができる。主要なドラグラインシルクタンパク質の例としては、Ｎｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓ由来の大瓶状スピドロインＭａＳｐ１及びＭａＳｐ２、並びにＡｒａｎｅｕｓ ｄｉａｄｅｍａｔｕｓ由来のＡＤＦ３及びＡＤＦ４などが挙げられる。主要なドラグラインシルクタンパク質に由来するポリペプチドの例としては、主要なドラグラインシルクタンパク質のバリアント、アナログ、誘導体などが挙げられる。更に、ポリペプチドは、クモの鞭毛状腺で生成される鞭毛状絹タンパク質に由来し得る。鞭毛状絹タンパク質の例としては、Ｎｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓなどに由来する鞭毛状絹タンパク質が挙げられる。

【0085】

主要なドラグラインシルクタンパク質に由来するポリペプチドの例としては、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列を２ユニット以上含むポリペプチド、好ましくは、その５ユニット以上を含むポリペプチド、より好ましくは、その１０ユニット以上を含むポリペプチドが挙げられる。或いは、主要なドラグラインシルクタンパク質に由来するポリペプチドは、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列のユニットを含み、且つＣ末端に、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１～３のいずれかで表されるアミノ酸配列又は米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１～３のいずれかで表されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドであり得る。主要なドラグラインシルクタンパク質に由来するポリペプチドにおいて、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列のユニットは、同一であっても互いに異なっていてもよい。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの微生物を宿主として組換えタンパク質を生産する場合、主要なドラグラインシルクタンパク質に由来するポリペプチドの分子量は、生産性の観点から、５００ｋＤａ以下、又は３００ｋＤａ以下、又は２００ｋＤａ以下である。

【0086】

式（１）において、ＲＥＰ１は、ポリアラニンを示す。ＲＥＰ１において、連続して配置されるアラニン残基の数は、好ましくは２個以上、より好ましくは３個以上、更に好ましくは４個以上、特に好ましくは５個以上である。更に、ＲＥＰ１において、連続して配置されるアラニン残基の数は、好ましくは２０個以下、より好ましくは１６個以下、更に好ましくは１２個以下、特に好ましくは１０個以下である。式（１）において、ＲＥＰ２は、１０～２００個のアミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列である。アミノ酸配列に含まれるグリシン、セリン、グルタミン、及びアラニン残基の総数は、それに含まれるアミノ酸残基の総数に対して、４０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上である。

【0087】

主要なドラグラインシルクでは、ＲＥＰ１は、結晶βシートが形成される繊維の結晶領域に対応し、ＲＥＰ２は、大部分が規則的な構成を欠き、より柔軟性のある繊維のアモルファス領域に対応する。更に、［ＲＥＰ１－ＲＥＰ２］は、ドラグラインシルクタンパク質の特徴的な配列である結晶領域とアモルファス領域からなる繰り返し領域（繰り返し配列）に対応する。

【0088】

組換え絹断片
いくつかの実施形態では、組換え絹タンパク質は、組換えクモシルクポリペプチド、組換え昆虫シルクポリペプチド、又は組換えムール貝シルクポリペプチドを意味する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組換え絹タンパク質断片は、Ａｒａｎｅｉｄａｅ又はＡｒａｎｅｏｉｄｓの組換えクモシルクポリペプチド、又はＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの組換え昆虫シルクポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組換え絹タンパク質断片は、Ａｒａｎｅｉｄａｅ又はＡｒａｎｅｏｉｄｓの組換えクモシルクポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組換え絹タンパク質断片は、Ａｒａｎｅｉｄａｅ又はＡｒａｎｅｏｉｄｓの天然のクモシルクポリペプチドに由来する繰り返し単位を有するブロックコポリマーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組換え絹タンパク質断片は、Ａｒａｎｅｉｄａｅ又はＡｒａｎｅｏｉｄｓのクモシルクポリペプチドに由来する合成の繰り返し単位と、Ａｒａｎｅｉｄａｅ又はＡｒａｎｅｏｉｄｓのクモシルクポリペプチドの天然の繰り返し単位に由来する非繰り返し単位とを有するブロックコポリマーを含む。

【0089】

遺伝子工学の最近の進歩は、様々な種類の組換え絹タンパク質を生産するための方法を提供している。組換えＤＮＡ技術は、絹タンパク質のより実用的な供給源を提供するために使用されている。本明細書においては、「組換え絹タンパク質」は、遺伝子工学的方法を使用して原核生物又は真核生物の発現系において異種的に産生される合成タンパク質を意味する。

【0090】

組換え絹ペプチドを合成するための様々な方法が知られており、参照により本明細書に援用するＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ § ８ （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ １９８７，（１９９０））に記載されている。グラム陰性の桿菌であるＥ． ｃｏｌｉは、タンパク質の工業規模での生産のための十分に確立された宿主である。したがって、組換え絹の大部分はＥ． ｃｏｌｉで生産されている。Ｅ． ｃｏｌｉは、マニピュレーションが簡単で、発生時間が短く、比較的低コストで、大量のタンパク質生産のためにスケールアップすることができる。

【0091】

組換え絹タンパク質は、絹タンパク質、前記タンパク質の断片、又は係るタンパク質のアナログをコードするｃＤＮＡを含む形質転換された原核生物又は真核生物系によって産生することができる。組換えＤＮＡアプローチにより、プログラムされた配列、二次構造、アーキテクチャ、及び正確な分子量を有する組換え絹の生産が可能となる。このプロセスには４つの主要な工程がある：（ｉ）合成シルク様遺伝子の遺伝子「カセット」への設計とアセンブリ、（ｉｉ）前記セグメントのＤＮＡ組換えベクターへの挿入、（ｉｉｉ）前記組換えＤＮＡ分子の宿主細胞への形質転換、及び（ｉｖ）選択されたクローンの発現及び精製。

【0092】

本明細書においては、用語「組換えベクター」は、プラスミドベクター、コスミドベクター、ラムダファージなどのファージベクター、アデノウイルス又はバキュロウイルスベクターなどのウイルスベクター、又は細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、又はＰ１人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体ベクターなど、当業者に知られた任意のベクターを含む。前記ベクターは、発現ベクター及びクローニングベクターを含む。発現ベクターは、プラスミド及びウイルスベクターを含み、一般に、特定の宿主生物（例えば、細菌、酵母、又は植物）又はインビトロ発現系における動作可能に結合されたコード配列の発現に必要な所望のコード配列及び適切なＤＮＡ配列を含む。クローニングベクターは、一般に、特定の所望のＤＮＡ断片を操作及び増幅するために使用され、所望のＤＮＡ断片の発現に必要な機能的配列を欠いていることがある。

【0093】

原核生物系は、グラム陰性菌又はグラム陽性菌を含む。原核生物の発現ベクターは、宿主生物によって認識され得る複製起点、前記宿主において機能的である同種又は異種プロモーター、クモシルクタンパク質、前記タンパク質の断片、又は類似のタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むことができる。原核生物発現生物の非限定的な例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ａｎａｂａｅｎａ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ細胞が挙げられる。

【0094】

真核生物系は、酵母及び昆虫、哺乳動物又は植物の細胞を含む。この場合、発現ベクターは、酵母プラスミド複製起点又は自律複製配列、プロモーター、クモシルクタンパク質、断片、又は類似タンパク質をコードするＤＮＡ配列、ポリアデニル化配列、転写終結を部位、最後に、選択遺伝子を含むことができる。真核生物発現生物の非限定的な例としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、ｂａｓｉｄｉｏｓｐｏｒｏｇｅｎｏｕｓ、ａｓｃｏｓｐｏｒｏｇｅｎｏｕｓなどの酵母、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）又はＹａｒｒｏｗｉａ細胞などの糸状菌、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞、Ｓｆ９細胞、ＭＥＬ細胞などの昆虫細胞、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ又はＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ細胞などの「昆虫宿主細胞」、ＳＦ９細胞、ＳＦ－２１細胞、又はＨｉｇｈ－Ｆｉｖｅ細胞（ＳＦ－９及びＳＦ－２１は、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ由来の卵巣細胞であり、Ｈｉｇｈ－Ｆｉｖｅ細胞は、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ由来の卵細胞である）、タバコ、ポテト、又はエンドウマメ細胞などの「植物宿主細胞」が挙げられる。

【0095】

様々な種類の組換え絹を生産するために、様々な異種宿主系が検討されている。組換え部分スピドロイン及びエンジニアードされた絹は、細菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、昆虫（ｓｉｌｋｗｏｒｍ ｌａｒｖａｅ）、植物（タバコ、大豆、ポテト、シロイヌナズナ）、哺乳動物細胞株（ＢＨＴ／ハムスター）、及びトランスジェニック動物（マウス、ヤギ）でクローン化及び発現されている。絹タンパク質の大部分は、精製を容易にし、十分量のタンパク質を生成するために、Ｎ末端又はＣ末端のＨｉｓタグを使用して生成される。

【0096】

いくつかの実施形態では、異種系を使用して組換えクモシルクタンパク質を発現するのに適した宿主は、トランスジェニック動物及び植物を含み得る。いくつかの実施形態では、異種系を使用して組換えクモシルクタンパク質を発現するのに適した宿主は、細菌、酵母、哺乳動物細胞株を含む。いくつかの実施形態では、異種系を使用して組換えクモシルクタンパク質を発現するのに適した宿主は、Ｅ． ｃｏｌｉを含む。いくつかの実施形態では、異種系を使用して組換えクモシルクタンパク質を発現するのに適した宿主は、ゲノム編集技術（例えば、ＣＲＩＳＰＲ）を使用して生成されたトランスジェニックＢ． ｍｏｒｉカイコを含む。

【0097】

本開示における組換え絹タンパク質は、天然絹タンパク質の繰り返し単位に基づく合成タンパク質を含む。合成繰り返し絹タンパク質配列に加えて、これらは更に、１以上の天然の非繰り返し絹タンパク質配列を含むことができる。

【0098】

いくつかの実施形態では、「組換え絹タンパク質」は、組換えカイコ絹タンパク質又はその断片を意味する。絹フィブロインと絹セリシンとの組換え生産が報告されている。各種宿主が生産に用いられ、例えば、Ｅ． ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、及びＳｔｒｅｐｏｍｙｃｅｓが挙げられる。参照により本明細書に援用する欧州特許第０２３０７０２号を参照。

【0099】

本明細書においては、Ｂ． ｍｏｒｉ絹重鎖（Ｈ鎖）の繰り返しドメインに由来するＧＡＧＡＧＸヘキサペプチド（Ｘは、Ａ、Ｙ、Ｖ、又はＳである）（配列番号１）を含む絹フィブロインタンパク質様マルチブロックポリマーの設計及び生合成も提供される。

【0100】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド（配列番号２）繰り返し単位を含むＢ． ｍｏｒｉ絹重鎖（Ｈ鎖）の繰り返しドメインに由来する絹タンパク質様マルチブロックポリマーを提供する。ＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド（配列番号２）はＨ鎖のコアユニットであり、結晶性ドメインの形成に重要な役割を果たす。ＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド（配列番号２）繰り返し単位を含む絹タンパク質様マルチブロックポリマーは、天然の絹フィブロインタンパク質と同様に、自発的にβシート構造に凝集する。前記絹タンパク質様マルチブロックポリマーは、本明細書に記載の任意の重量平均分子量を有する。

【0101】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｂ． ｍｏｒｉ絹重鎖のＨ鎖に由来するＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド（配列番号２）繰り返し断片と、Ｅ． ｃｏｌｉによって産生される哺乳動物エラスチンＶＰＧＶＧ（配列番号３）モチーフとから構成される絹ペプチド様マルチブロックコポリマーを提供する。いくつかの実施形態では、本開示はＢ． ｍｏｒｉ絹重鎖のＨ鎖に由来するＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド（配列番号２）繰り返し断片と、Ｅ． ｃｏｌｉによって産生されるＧＶＧＶＰ（配列番号４）とから構成される融合絹フィブロインタンパク質を提供する。前記絹タンパク質様マルチブロックポリマーは、本明細書に記載の任意の重量平均分子量を有する。

【0102】

いくつかの実施形態では、本開示は、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６繰り返し断片（配列番号５）から構成されるＢ． ｍｏｒｉカイコ組換えタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６繰り返し断片と、Ｅ． ｃｏｌｉによって産生される非繰り返し（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨとから構成される組換えタンパク質を提供する。ここで、Ｆは、アミノ酸配列ＳＧＦＧＰＶＡＮＧＧＳＧＥＡＳＳＥＳＤＦＧＳＳＧＦＧＰＶＡＮＡＳＳＧＥＡＳＳＥＳＤＦＡＧ（配列番号６）であり、前記絹タンパク質様マルチブロックポリマーは、本明細書に記載の任意の重量平均分子量を有する。

【0103】

いくつかの実施形態では、「組換え絹タンパク質」は、組換えクモシルクタンパク質又はその断片を意味する。部分的なｃＤＮＡクローンに基づく組換えクモシルクタンパク質の生産が報告されている。そのように生産された組換えクモシルクタンパク質は、クモＮｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓに由来するドラグラインクモシルクタンパク質、スピドロイン１に由来する繰り返し配列の一部を含む（Ｘｕら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８７：７１２０－７１２４（１９９０））参照）。Ｎｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓのドラグラインシルクに由来する第２のフィブロインタンパク質、スピドロイン２の繰り返し配列の一部をコードするｃＤＮＡクローン及びその組換え合成物は、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，ｖｏｌｕｍｅ ２６７，ｐｐ．１９３２０－１９３２４に記載されている。形質転換したＥ． ｃｏｌｉに由来するＮｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓのタンパク質断片及びバリアントを含むクモシルクタンパク質の組換え合成物は、米国特許第５，７２８，８１０号明細書及び同第５，９８９，８９４号明細書に記載されている。小瓶状腺（ｍｉｎｏｒ ａｍｐｕｌｌａｔｅ）クモシルクタンパク質をコードするｃＤＮＡクローン及びその発現は、米国特許第５，７３３，７７１号明細書及び同第５，７５６，６７７号明細書に記載されている。コガネグモ（ｏｒｂ－ｗｅｂ ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｓｐｉｄｅｒ）由来の鞭毛状絹タンパク質をコードするｃＤＮＡクローンは、米国特許第５，９９４，０９９号明細書に記載されている。米国特許第６，２６８，１６９号明細書は、Ｅ． ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、及びＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ組換え発現系によるＮｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓの天然のクモドラグラインに見られる繰り返しペプチド配列に由来するクモシルク様タンパク質の組換え合成を記載している。国際公開第０３／０２０９１６号は、Ｎｅｐｈｉｌａ ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ、Ｎｅｐｈｉｌａ ｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ、Ｔｅｔｒａｇｎａｔｈａ ｋａｕａｉｅｎｓｉｓ、Ｔｅｔｒａｇｎａｔｈａ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、Ａｒｇｉｏｐｅ ａｕｒａｎｔｉａ、Ａｒｇｉｏｐｅ ｔｒｉｆａｓｃｉａｔａ、Ｇａｓｔｅｒａｃａｎｔｈａ ｍａｍｍｏｓａ、及びＬａｔｒｏｄｅｃｔｕｓ ｇｅｏｍｅｔｒｉｃｕｓの大瓶状腺（ｍａｊｏｒ ａｍｐｕｌｌａｔｅ ｇｌａｎｄｓ）、Ａｒｇｉｏｐｅ ｔｒｉｆａｓｃｉａｔａの鞭毛状腺、Ｄｏｌｏｍｅｄｅｓ ｔｅｎｅｂｒｏｓｕｓの瓶状腺、Ｐｌｅｃｔｒｅｕｒｙｓ ｔｒｉｓｔｉｓの２組の絹糸腺、及びｍｙｇａｌｏｍｏｒｐｈ Ｅｕａｇｒｕｓ ｃｈｉｓｏｓｅｕｓの絹糸腺に由来する繰り返し配列を有するクモのクモ絹タンパク質をコードするｃＤＮＡクローン及び組換え生産について記載している。前記文献はいずれも、参照によりその全体を本明細書に援用する。

【0104】

いくつかの実施形態では、組換えクモシルクタンパク質は、クモシルクタンパク質と昆虫シルクタンパク質、クモシルクタンパク質とコラーゲン、クモシルクタンパク質とレシリン、又はクモシルクタンパク質とケラチンのハイブリッドタンパク質である。クモシルク繰り返し単位は、ドラグラインクモシルクポリペプチド、小瓶状腺ポリペプチド、鞭毛状ポリペプチド、凝集クモシルクポリペプチド、房状クモシルクポリペプチド、又は洋ナシ状クモシルクポリペプチドなどの、天然に存在する大瓶状腺ポリペプチド中で繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はからなる領域のアミノ酸配列を含む又はからなる。

【0105】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、天然のクモシルクタンパク質の繰り返し単位、コンセンサス配列、及び任意に、１以上の天然の非繰り返しクモシルクタンパク質配列に由来する合成クモシルクタンパク質を含む。天然のクモ絹ポリペプチドの繰り返し単位は、Ａｒａｎｅｉｄａｅ又はＡｒａｎｅｏｉｄｓのドラグラインのクモシルクポリペプチド又は鞭毛状のクモシルクポリペプチドを含み得る。

【0106】

本明細書においては、、クモシルクの「繰り返し単位」は、ドラグラインクモシルクポリペプチド、小瓶状腺ポリペプチド、鞭毛状ポリペプチド、凝集クモシルクポリペプチド、房状クモシルクポリペプチド、又は洋ナシ状クモシルクポリペプチドなどの、天然に存在する大瓶状腺ポリペプチド中に繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフを含む又はからなる。「繰り返し単位」は、天然に存在するシルクポリペプチド（例えば、ＭａＳｐＩ、ＡＤＦ－３、ＡＤＦ－４、又はＦｌａｇ）中に繰り返し生じる少なくとも１つのペプチドモチーフ（例えば、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号２１）又はＧＰＧＱＱ（配列番号１６））（即ち、同一のアミノ酸配列）又はそれに実質的に類似するアミノ酸配列（即ち、変異アミノ酸配列）を含む又はからなる領域にアミノ酸配列が対応する領域を意味する。天然に存在する絹ポリペプチド内の対応するアミノ酸配列に「実質的に類似する」アミノ酸配列を有する「繰り返し単位」（即ち、野生型繰り返し単位）もまた、その性質に関して類似しており、例えば、「実質的に類似した繰り返し単位」を含む絹タンパク質は、依然として不溶性であり、その不溶性を維持する。例えば、天然に存在する絹ポリペプチドのアミノ酸配列と「同一」であるアミノ酸配列を有する「繰り返し単位」は、ＭａＳｐＩ、ＭａＳｐＩＩ、ＡＤＦ－３、及び／又はＡＤＦ－４のうちの１以上のペプチドモチーフに対応する絹ポリペプチドの一部であり得る。例えば、天然に存在する絹ポリペプチドのアミノ酸配列に「実質的に類似する」アミノ酸配列を有する「繰り返し単位」は、特定のアミノ酸位置に１以上のアミノ酸置換を有することを除き、ＭａＳｐＩ、ＭａＳｐＩＩ、ＡＤＦ－３、及び／又はＡＤＦ－４のうちの１以上のペプチドモチーフに対応する絹ポリペプチドの一部であり得る。

【0107】

本明細書においては、用語「コンセンサスペプチド配列」は、特定の位置に高頻度で存在するアミノ酸（例えば、「Ｇ」）を含み、特定されない他のアミノ酸が、プレースホルダ「Ｘ」によって置換されるアミノ酸配列を意味する。いくつかの実施形態では、コンセンサス配列は、（ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号７）（Ｘは、Ａ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ、及びＱから選択されるアミノ酸である）、（ｉｉ）ＧＧＸ（Ｘは、Ｙ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ、及びＱ、好ましくは、Ｙ、Ｐ、及びＱから選択されるアミノ酸である）、（ｉｉｉ）Ａｘ（ｘは、５～１０の整数である）の少なくとも１つである。

【0108】

コンセンサスペプチド配列ＧＰＧＸＸ（配列番号７）及びＧＧＸ（即ち、グリシンに富むモチーフ）は、絹ポリペプチドに柔軟性を与え、したがって、前記モチーフを含む絹タンパク質から形成された糸に柔軟性を与える。詳細には、繰り返されたＧＰＧＸＸ（配列番号７）モチーフは、絹ポリペプチドに弾力性を与えるターンスパイラル構造を形成する。大瓶状腺シルクと鞭毛上シルクはいずれも、ＧＰＧＸＸ（配列番号７）モチーフを有する。繰り返しＧＧＸモチーフは、１ターン当たり３個のアミノ酸を有する螺旋構造に関連しおり、大部分のクモシルクに見られる。ＧＧＸモチーフは、シルクに更なる弾性特性を与えることがある。繰り返しポリアラニンＡｘ（ペプチド）モチーフは、例えば国際公開第０３／０５７７２７号に記載されるように、絹ポリペプチドに強度を与える結晶性βシート構造を形成する。

【0109】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、レシリンに由来するＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号９）からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは１つのアミノ酸配列をそれぞれが含む２つの同一の繰り返し単位を含む。レシリンは、大部分の節足動物に見られるエラストマータンパク質であり、低剛性と高強度を提供する。

【0110】

本明細書においては、「非繰り返し単位」は、天然に存在するドラグラインポリペプチド（即ち、野生型非繰り返し（カルボキシ末端）単位）中、好ましくはＡＤＦ－３（配列番号１）、ＡＤＦ－４（配列番号２）、ＮＲ３（配列番号４１）、ＮＲ４（配列番号４２）、米国特許第８，３６７，８０３号明細書に記載されるクモＡｒａｎｅｕｓ ｄｉａｄｅｍａｔｕｓのＡＤＦ－４、Ａ． ｄｉａｄｅｍａｔｕｓ由来のＡＤＦ４の天然配列に由来する適合されたアミノ酸配列である配列ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号１０）を１６リピート含むＣ１６ペプチド（クモシルクタンパク質ｅＡＤＦ４、分子量４７．７ｋＤａ、ＡＭＳｉｌｋ）中の対応する非繰り返し（カルボキシ末端）アミノ酸配列に「実質的に類似」するアミノ酸配列を意味する。非繰り返しＡＤＦ－４及びそのバリアントは、効率的なアセンブリ挙動を示す。

【0111】

合成クモシルクタンパク質の中で、本開示における組換え絹タンパク質は、いくつかの実施形態では、米国特許第８２８８５１２号明細書に記載される配列番号１のポリペプチド配列を有するＣ１６タンパク質を含む。配列番号１に示されるポリペプチド配列に加えて、特に、前記配列の機能的等価物、機能的誘導体、及び塩も含まれる。

【0112】

本明細書において、「機能的等価物」は、前記アミノ酸配列の少なくとも１つの配列位置において、具体的に記載されたもの以外のアミノ酸を有する変異体を意味する。

【0113】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、有効量において、クモシルクタンパク質を含む少なくとも１つの天然又は組換え絹タンパク質を含み、これは、Ｘｕら，ＰＮＡＳ，ＵＳＡ，８７，７１２０，（１９９０）によって記載されるスピドロインメジャー１、Ｈｉｎｍａｎ及びＬｅｗｉｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，１９３２０，（１９２２）によって記載されるスピドロインメジャー２、米国特許出願第２０１６／０２２２１７４号明細書及び米国特許第９，０５１，４５３号明細書、同第９，６１７，３１５号明細書、同第９，６８９，０８９号明細書、同第８，１７３，７７２号明細書、同第８，６４２，７３４号明細書、同第８，３６７，８０３号明細書、同第８，０９７，５８３号明細書、同第８，０３０，０２４号明細書、同第７，７５４，８５１号明細書、同第７，１４８，０３９号明細書、同第７，０６０，２６０号明細書に記載される組換えクモシルクタンパク質、又は国際公開第９５／２５１６５号に記載されマイナースピドロインに対応する。前記引用文献はいずれも、参照によりその全体を本明細書に援用する。本開示の組換えＲＳＰＦに適した更なる組換えクモシルクタンパク質は、Ａｒａｎｅｕｓ ｄｉａｄｅｍａｔｕｓの「大瓶状（Ｍａｊｏｒ Ａｍｐｕｌｌａｔｅ）」腺由来のＡＤＦ３及びＡＤＦ４を含む。

【0114】

組換え絹は、参照により本明細書に援用する、以下の他の特許及び特許出願にも記載されている：米国特許出願第２００４５９０１９６号明細書、米国特許第７，７５４，８５１号明細書、米国特許出願第２００７６５４４７０号明細書、米国特許第７，９５１，９０８号明細書、米国特許出願第２０１０７８５９６０号明細書、米国特許第８，０３４，８９７号明細書、米国特許出願第２００９０２６３４３０号明細書、米国特許出願第２００８２２６８５４号明細書、米国特許出願第２００９０１２３９６７号明細書、米国特許出願第２００５７１２０９５号明細書、米国特許出願第２００７９９１０３７号明細書、米国特許出願第２００９０１６２８９６号明細書、米国特許出願第２００８８５２６６号明細書、米国特許第８，３７２，４３６号明細書、米国特許出願第２００７９８９９０７号明細書、米国特許出願第２００９２６７５９６号明細書、米国特許出願第２０１０３１９５４２号明細書、米国特許出願第２００９２６５３４４号明細書、米国特許出願第２０１２６８４６０７号明細書、米国特許出願第２００４５８３２２７号明細書、米国特許第８，０３０，０２４号明細書、米国特許出願第２００６６４３５６９号明細書、米国特許第７，８６８，１４６号明細書、米国特許出願第２００７９９１９１６号明細書、米国特許第８，０９７，５８３号明細書、米国特許出願第２００６６４３２００号明細書、米国特許第８，７２９，２３８号明細書、米国特許第８，８７７，９０３号明細書、米国特許出願第２０１９００６２５５７号明細書、米国特許出願第２０１６０２８０９６０号明細書、米国特許出願第２０１１０２０１７８３号明細書、米国特許出願第２００８９９１９１６号明細書、米国特許出願第２０１１９８６６６２号明細書、米国特許出願第２０１２６９７７２９号明細書、米国特許出願第２０１５０３２８３６３号明細書、米国特許第９，０３４，８１６号明細書、米国特許出願第２０１３０１７２４７８号明細書、米国特許第９，２１７，０１７号明細書、米国特許出願第２０１７０２０２９９５号明細書、米国特許第８，７２１，９９１号明細書、米国特許出願第２００８２２７４９８号明細書、米国特許第９，２３３，０６７号明細書、米国特許第８，２８８，５１２号明細書、米国特許出願第２００８１６１３６４号明細書、米国特許第７，１４８，０３９号明細書、米国特許第１９９９２４７８０６号明細書、米国特許出願第２００１８６１５９７号明細書、米国特許出願第２００４８８７１００号明細書、米国特許第９，４８１，７１９号明細書、米国特許第８，７６５，６８８号明細書、米国特許出願第２００８８０７０５号明細書、米国特許出願第２０１０８０９１０２号明細書、米国特許第８，３６７，８０３号明細書、米国特許出願第２０１０６６４９０２号明細書、米国特許第７，５６９，６６０号明細書、米国特許第１９９９１３８８３３号明細書、米国特許出願第２０００５９１６３２号明細書、米国特許出願第２０１２００６５１２６号明細書、米国特許出願第２０１００２７８８８２号明細書、米国特許出願第２００８１６１３５２号明細書、米国特許出願第２０１０００１５０７０号明細書、米国特許出願第２００９５１３７０９号明細書、米国特許出願第２００９０１９４３１７号明細書、米国特許出願第２００４５５９２８６号明細書、米国特許出願第２００５８９５５１号明細書、米国特許出願第２００８１８７８２４号明細書、米国特許出願第２００５０２６６２４２号明細書、米国特許出願第２００５０２２７３２２号明細書、及び米国特許出願第２００４４４１８号明細書。

【0115】

また、組換え絹は、参照により本明細書に援用する、以下の他の特許及び特許出願にも記載されている：米国特許出願第２０１９００６２５５７号明細書、米国特許出願第２０１５０２８４５６５号明細書、米国特許出願第２０１３０２２５４７６号明細書、米国特許出願第２０１３０１７２４７８号明細書、米国特許出願第２０１３０１３６７７９号明細書、米国特許出願第２０１３０１０９７６２号明細書、米国特許出願第２０１２０２５２２９４号明細書、米国特許出願第２０１１０２３０９１１号明細書、米国特許出願第２０１１０２０１７８３号明細書、米国特許出願第２０１００２９８８７７号明細書、米国特許第１０，４７８，５２０号明細書、米国特許第１０，２５３，２１３号明細書、米国特許第１０，０７２，１５２号明細書、米国特許第９，２３３，０６７号明細書、米国特許第９，２１７，０１７号明細書、米国特許第９，０３４，８１６号明細書、米国特許第８，８７７，９０３号明細書、米国特許第８，７２９，２３８号明細書、米国特許第８，７２１，９９１号明細書、米国特許第８，０９７，５８３号明細書、米国特許第８，０３４，８９７号明細書、米国特許第８，０３０，０２４号明細書、米国特許第７，９５１，９０８号明細書、米国特許第７，８６８，１４６号明細書、及び米国特許第７，７５４，８５１号明細書。

【0116】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、本明細書で定義されるＧＰＧＸＸ（配列番号７）、ＧＧＸ、及びＡｘからそれぞれ独立して選択される２～８０個の繰り返し単位を含む又はからなる。

【0117】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、以下からなる群からそれぞれ独立して選択される繰り返し単位を含む又はからなる：ＧＰＧＡＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＳＧ（配列番号１２）、ＧＰＧＧＹ（配列番号１３）、ＧＰＧＧＰ（配列番号１４）、ＧＰＧＧＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＱ（配列番号１６）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１７）、ＧＰＧＱＧ（配列番号１８）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１９）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号２０）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号２１）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号２２）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号２３）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号２４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号２５）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号２６）、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号２７）、（ｉ）ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＳＧＱＱ（配列番号２８）、（ｉｉ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号２９）、（ｉｉｉ）ＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱ（配列番号３０）：（ｉｖ）ＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹ（配列番号３１）、（ｖ）ＧＧＴＴＩＩＥＤＬＤＩＴＩＤＧＡＤＧＰＩＴＩＳＥＥＬＴＩ（配列番号３２）、（ｖｉ）ＰＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＱＧＱＧＱＧＱＧＱＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号３３）、（ｖｉｉ）ＳＡＡＡＡＡＡＡＡＧＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＤＴＹＧＡＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号３４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＳＧＧＡＧＧＳ（配列番号３５）、（ｉｘ）ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ（配列番号３６）、（ｘ）ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＣＧＱＱ（配列番号３７）、（ｘｉ）ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＫＧＱＱ（配列番号３８）、（ｘｉｉ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号３９）、（ｘｉｉｉ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号４０）、（ｘｉｖ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号４１）、又は米国特許第８，８７７，９０３号明細書に記載されるそれらのバリアント、例えば、ペプチド鎖中にＧＰＧＡＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＰＧＳＧ（配列番号１２）の順序、又はペプチド鎖中にＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号２３）、ＧＰＧＧＹ（配列番号１３）、ＧＰＧＧＰ（配列番号１４）の順序、ペプチド鎖中にＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号２３）、ＧＰＧＱＧ（配列番号１８）、ＧＧＲの順序を有する合成クモペプチド。

【0118】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｓｐｉｄｒｏｉｎ ｍａｊｏｒ １ドメイン、Ｓｐｉｄｒｏｉｎ ｍａｊｏｒ ２ドメイン、又はＳｐｉｄｒｏｉｎ ｍｉｎｏｒ １ドメインなどの天然クモシルクタンパク質に由来するアミノ酸の繰り返し単位を模倣するシルクタンパク質様マルチブロックペプチド、及びそれらの三次元構造を変えない繰り返し単位間の変動のプロファイルを提供する。これらの絹タンパク質様マルチブロックペプチドは、以下の配列（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、及び／又は（ＩＶ）のうちの１つに対応するアミノ酸の繰り返し単位を含む。
［（ＸＧＧ）_ｗ（ＸＧＡ）（ＧＸＧ）_ｘ（ＡＧＡ）_ｙ（Ｇ）_ｚＡＧ］_ｐ 式（Ｉ）（式中、Ｘは、チロシン又はグルタミンに対応し、ｗは、２又は３に等しい整数であり、ｘは、１～３の整数であり、ｙは、５～７の整数であり、ｚは、１又は２に等しい整数であり、ｐは整数であり、本明細書に記載される任意の重量平均分子量を有する。）及び／又は
［（ＧＰＧ_２ＹＧＰＧＱ_２）_ａ（Ｘ’）_２Ｓ（Ａ）_ｂ］_ｐ 式（ＩＩ）（式中、Ｘ’は、アミノ酸配列ＧＰＳ又はＧＰＧに対応し、ａは、２又は３に等しく、ｂは、７から１０の整数であり、ｐは整数であり、本明細書に記載される任意の重量平均分子量を有する。）及び／又は
［（ＧＲ）（ＧＡ）_ｌ（Ａ）_ｍ（ＧＧＸ）_ｎ（ＧＡ）_ｌ（Ａ）_ｍ］_ｐ 式（ＩＩＩ）及び／又は［（ＧＧＸ）_ｎ（ＧＡ）_ｍ（Ａ）_ｌ］_ｐ 式（ＩＶ）（式中、Ｘ’’は、チロシン、グルタミン、又はアラニンに対応し、ｌは、１～６の整数であり、ｍは、０～４の整数であり、ｎは、１～４の整数であり、ｐは、整数である。）

【0119】

いくつかの実施形態において、組換えクモシルクタンパク質又はクモシルクタンパク質のアナログは、配列（Ｖ）のアミノ酸繰り返し単位を含む。
［（Ｘａａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ）_ｗ（Ｘａａ Ｇｌｙ Ａｌａ）（Ｇｌｙ Ｘａａ Ｇｌｙ）_ｘ（Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ）_ｙ（Ｇｌｙ）_ｚＡｌａ Ｇｌｙ］_ｐ 式（Ｖ）（式中、Ｘａａは、チロシン又はグルタミンであり、ｗは、２又は３に等しい整数であり、ｘは、１～３の整数であり、ｙは、５～７の整数であり、ｚは、１又は２に等しい整数であり、ｐは整数である。）

【0120】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、米国特許第８，３６７，８０３号明細書に記載される、ＡＤＦ－３又はそのバリアント、ＡＤＦ－４又はそのバリアント、ＭａＳｐＩ（配列番号４３）又はそのバリアント、ＭａＳｐＩＩ（配列番号４４）又はそのバリアントからなる群から選択される。

【0121】

いくつかの実施形態では、本開示は、哺乳動物細胞において産生される水溶性組換えクモシルクタンパク質を提供する。哺乳動物細胞で産生されたクモシルクタンパク質の可溶性は、これらのタンパク質中の、より親水性を高くするＣＯＯＨ末端の存在に起因していた。これらのＣＯＯＨ末端アミノ酸は、微生物宿主で発現するクモシルクタンパク質に存在しない。

【0122】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、ＧＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号４６）、ＧＫＧＧＧＧＧＧ（配列番号４７）、ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号４８）、ＧＫＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号４９）、及びＧＣＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号５０）からなる群から選択されるアミノ又はカルボキシル末端で修飾された水溶性組換えクモシルクタンパク質Ｃ１６を含む。いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、タンパク質の分子量が本明細書に記載される範囲となるように、Ｃ_１６ＮＲ４、Ｃ_３２ＮＲ４、Ｃ１６、Ｃ３２、ＮＲ４Ｃ_１６ＮＲ４、ＮＲ４Ｃ_３２ＮＲ４、ＮＲ３Ｃ_１６ＮＲ３、又はＮＲ３Ｃ_３２ＮＲ３を含む。

【0123】

いくつかの実施形態では、本開示における組換えクモシルクタンパク質は、合成繰り返しペプチドセグメントと、米国特許第８，８７７，９０３号明細書に記載されるＡ．ｄｉａｄｅｍａｔｕｓ由来のＡＤＦ４の天然配列から適合されたアミノ酸配列とを有する組換えクモシルクタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、本開示におけるＲＳＰＦは、Ｓｐｉｄｒｏｉｎ ｍａｊｏｒ １ドメイン、Ｓｐｉｄｒｏｉｎ ｍａｊｏｒ ２ドメイン、又はＳｐｉｄｒｏｉｎ ｍｉｎｏｒ １ドメインなどの天然クモシルクタンパク質に由来する繰り返しペプチド単位を有し、繰り返しペプチド配列は、米国特許第８，３６７，８０３号明細書に記載されるＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＱＧＱＧＱＧＱＧＱＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号５１）又はＳＡＡＡＡＡＡＡＡＧＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＤＴＹＧＡＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号５２）である組換えクモシルクタンパクを含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ（配列番号５３）繰り返し断片で構成され、本明細書に記載される分子量を有する組換えクモタンパク質を提供する。

【0125】

本明細書においては、用語「組換え絹」は、組換えクモ及び／又はカイコ絹タンパク質又はその断片を意味する。実施形態では、クモシルクタンパク質は、捕帯絹（（ｓｗａｔｈｉｎｇ ｓｉｌｋ）房状腺絹（Ａｃｈｎｉｆｏｒｍ ｇｌａｎｄ ｓｉｌｋ））、卵嚢絹（（ｅｇｇ ｓａｃ ｓｉｌｋ）円筒状腺絹（Ｃｙｌｉｎｄｒｉｆｏｒｍ ｇｌａｎｄ ｓｉｌｋ））、卵鞘絹（（ｅｇｇ ｃａｓｅ ｓｉｌｋ）（管状絹（Ｔｕｂｕｌｉｆｏｒｍ ｓｉｌｋ））、非粘着性ドラグライン絹（（ｎｏｎ－ｓｔｉｃｋｙ ｄｒａｇｌｉｎｅ ｓｉｌｋ）瓶状絹（Ａｍｐｕｌｌａｔｅ ｇｌａｎｄ ｓｉｌｋ））、付着する絹糸（（ａｔｔａｃｈｉｎｇ ｔｈｒｅａｄ ｓｉｌｋ）洋ナシ状腺絹（Ｐｙｒｉｆｏｒｍ ｇｌａｎｄ ｓｉｌｋ））、粘着性絹コア繊維（（ｓｔｉｃｋｙ ｓｉｌｋ ｃｏｒｅ ｆｉｂｅｒｓ）鞭毛状腺絹（Ｆｌａｇｅｌｌｉｆｏｒｍ ｇｌａｎｄ ｓｉｌｋ））、及び粘着性絹外繊維（（ｓｔｉｃｋｙ ｓｉｌｋ ｏｕｔｅｒ ｆｉｂｅｒｓ）凝集腺絹（Ａｇｇｒｅｇａｔｅ ｇｌａｎｄ ｓｉｌｋ））からなる群から選択される。例えば、本明細書に記載される組換えクモシルクタンパク質は、米国特許出願第２０１６／０２２２１７４号明細書及び米国特許第９，０５１，４５３号明細書、同第９，６１７，３１５号明細書、同第９，６８９，０８９号明細書、同第８，１７３，７７２号明細書、及び同第８，６４２，７３４号明細書に記載されているタンパク質を含む。

【0126】

いくつかの生物は、ユニークな配列、構造要素、及び機械的特性を有する複数の絹繊維を作る。例えば、コガネグモは、環境又は生活環のニッチに適合するように調整された繊維に重合される様々な絹ポリペプチド配列を生成する６種類のユニークなタイプの腺を有する。これらの繊維は、それらが由来する腺に因んで命名され、ポリペプチドは、腺の略語（例えば「Ｍａ」）及びスピドロイン（スパイダーフィブロインの略）は「Ｓｐ」で標識される。コガネグモにおいては、これらのタイプは、大瓶状（ＭａＳｐ、ドラグラインとも称される）、小瓶状（ＭｉＳｐ）、鞭毛状（Ｆｌａｇ）、房状（ＡｃＳｐ）、管状（ＴｕＳｐ）、及び洋ナシ状（ＰｙＳｐ）を含む。繊維の種類、ドメイン、及び生物の異なる属及び種間の変化に亘るポリペプチド配列の前記組合せは、組換え繊維の商業的生産によって利用することができる膨大な数の潜在的特性をもたらす。今日まで、組換え絹を使った研究の大部分は、大瓶状スピドロイン（ＭａＳｐ）に着目している。

【0127】

房状（ＡｃＳｐ）シルクは、適度に高い強度と適度に高い伸展性の結果として、高い靭性を有する傾向がある。ＡｃＳｐシルクは、ポリセリンとＧＰＸのモチーフを含むことが多い大きなブロック（「アンサンブルリピート」）サイズを特徴とする。管状（ＴｕＳｐ又は円筒状）シルクは、直径が大きく、適度な強度と高い伸展性を有する傾向がある。ＴｕＳｐシルクは、ポリセリンとポリスレオニン含量及びポリアラニンの短い領域を特徴とする。大瓶状（ＭａＳｐ）シルクは、強度が高く、適度な伸展性を有する傾向がある。ＭａＳｐシルクは、ＭａＳｐ１とＭａＳｐ２の２つのサブタイプのいずれかになり得る。ＭａＳｐ１シルクは、一般に、ＭａＳｐ２シルクよりも伸びが少なく、ポリアラニン、ＧＸ、及びＧＧＸモチーフを特徴とする。ＭａＳｐ２シルクは、ポリアラニン、ＧＧＸ、及びＧＰＸモチーフを特徴とする。小瓶状（ＭｉＳｐ）シルクは、適度な強度と適度な伸展性を有する傾向がある。ＭｉＳｐシルクは、ＧＧＸ、ＧＡ、及びポリＡモチーフを特徴とし、多くの場合、約１００個のアミノ酸のスペーサ要素を含む。鞭毛状（Ｆｌａｇ）シルクは、非常に高い伸展性と適度な強度を有する傾向がある。Ｆｌａｇシルクは、通常、ＧＰＧ、ＧＧＸ、及び短いスペーサモチーフを特徴とする。

【0128】

絹ポリペプチドは、非繰り返し領域（例えば、Ｃ末端及びＮ末端ドメイン）に隣接する非繰り返しドメイン（ＲＥＰ）から構成されることを特徴とする。実施形態では、Ｃ末端ドメイン及びＮ末端ドメインの両方が、７５～３５０アミノ酸長である。リピートドメインは、階層アーキテクチャを示す。リピートドメインは、一連のブロック（繰り返し単位とも称される）を含む。ブロックは、絹リピートドメイン全体に亘って、時には完全に、時には不完全に（準リピートドメインを構成して）繰り返される。ブロックの長さと組成は、絹のタイプ及び種によって異なる。その全体を本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１６／０２２２１７４号明細書の表１は、選択された種及び絹タイプに由来するブロック配列の例を示しており、更なる例が、Ｒｉｓｉｎｇ， Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｓｐｉｄｅｒ ｓｉｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ： ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ， ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｎｄ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．， ６８：２， ｐｇ １６９－１８４ （２０１１）；及びＧａｔｅｓｙ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｔｒｅｍｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ， ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｓｐｉｄｅｒ ｓｉｌｋ ｆｉｂｒｏｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２９１：５５１３， ｐｇ． ２６０３－２６０５ （２００１）に示されている。いくつかの場合では、ブロックは、規則的なパターンで配置され、絹配列のリピートドメインに複数回（通常、２～８回）表われる、より大きなマクロリピートを形成することがある。リピートドメイン又はマクロリピート内で繰り返されるブロック、及びリピートドメイン内で繰り返されるマクロリピートは、スペーシング要素によって分離されることがある。

【0129】

本開示の特定の実施形態によれば、ブロック及び／又はマクロリピートドメインからの特定のクモシルクブロックコポリマーポリペプチドの構築は、米国特許出願公開第２０１６／０２２２１７４号明細書に示されている。

【0130】

組換え原核又は真核生物系における遺伝子発現によって生成されたクモシルク配列に基づく組換えブロックコポリマーポリペプチドは、当技術分野で知られた方法にしたがって精製することができる。好ましい実施形態では、市販の発現／分泌系を使用することができ、それにより、組換えポリペプチドが発現され、その後、宿主細胞から分泌されて、周囲の培地から容易に精製される。発現／分泌ベクターを使用しない場合、代替アプローチは、ポリペプチドが発現された原核細胞又は真核細胞に由来する細胞溶解物（細胞完全性の破壊後の細胞の残骸）から組換えブロックコポリマーポリペプチドを精製することを含む。係る細胞溶解物を生成するための方法は、当業者に知られている。いくつかの実施形態では、組換えブロックコポリマーポリペプチドは、細胞培養上清から単離される。

【0131】

組換えブロックコポリマーポリペプチドは、組換えポリペプチドに特異的に結合する抗体との免疫学的相互作用又はＮ末端又はＣ末端で６～８個のヒスチジン残基のタグが付された組換えポリペプチドを単離するためのニッケルカラムなどによる、親和性分離によって精製することができる。別のタグとしては、ＦＬＡＧエピトープ又はヘマグルチニンエピトープを含み得る。係る方法は、熟練者によって一般に使用されている。

【0132】

次いで、係るポリペプチド（即ち、組換え絹タンパク質）の溶液を、本明細書に記載されるように調製、使用することができる。

【0133】

別の実施形態では、組換え絹タンパク質は、その全体を本明細書に援用する米国特許第８，６４２，７３４号明細書に記載の方法にしたがって調製することができ、本明細書に記載されるように使用される。

【0134】

実施形態では、組換えクモシルクタンパク質が提供される。クモシルクタンパク質は、典型的には、１７０～７６０アミノ酸残基、例えば１７０～６００アミノ酸残基、好ましくは２８０～６００アミノ酸残基、例えば３００～４００アミノ酸残基、より好ましくは３４０～３８０アミノ酸残基からなる。より長いクモシルクタンパク質はアモルファス凝集体を形成する傾向があり、可溶化及び重合のために過酷な溶媒の使用を必要とするため、小サイズが有利である。組換えクモシルクタンパク質は、特にクモシルクタンパク質がクモシルクタンパク質のＮ末端部分に由来する２個超の断片を含む場合、７６０個を超える残基を含み得る。クモシルクタンパク質は、クモシルクタンパク質の対応する部分に由来する少なくとも１つの断片（ＮＴ）と、クモシルクタンパク質の対応する内部断片に由来する繰り返し断片（ＲＥＰ）とからなるＮ末端断片を含む。任意に、クモシルクタンパク質は、クモシルクタンパク質の対応する断片に由来するＣ末端断片（ＣＴ）を含む。クモシルクタンパク質は、典型的には、クモシルクタンパク質のＮ末端部分に由来する単一断片（ＮＴ）を含むが、好ましい実施形態では、Ｎ末端断片は、少なくとも２つ、例えば、クモシルクタンパク質のＮ末端部分に由来する２つの断片（ＮＴ）を含む。したがって、スピドロインは、式ＮＴ_ｍ－ＲＥＰ又はＮＴ_ｍ－ＲＥＰ－ＣＴによって概略的に表すことができ、式中、ｍは、１以上、例えば２以上、好ましくは１～２、１～４、１～６、２～４、又は２～６の整数である。好ましいスピドロインは、式ＮＴ_２－ＲＥＰ若しくはＮＴ－ＲＥＰ又はＮＴ_２－ＲＥＰ－ＣＴ若しくはＮＴ－ＲＥＰ－ＣＴによって概略的に表すことができる。タンパク質断片は、通常、ペプチド結合を介して共有結合する。一実施形態では、クモシルクタンパク質は、ＲＥＰ断片に結合されたＮＴ断片からなり、このＲＥＰ断片は、任意に、ＣＴ断片に結合される。

【0135】

一実施形態では、単離されたクモシルクタンパク質のポリマーを製造する方法の第１の工程は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの好適な宿主において、クモシルクタンパク質をコードするポリ核酸分子を発現させることを含む。このようにして得られたタンパク質は、標準的な手順を使用して単離される。任意に、リポ多糖及び他のパイロジェンが、この段階で積極的に除去される。

【0136】

単離されたクモシルクタンパク質のポリマーを製造する方法の第２の工程において、液体媒体中のクモシルクタンパク質の溶液が提供される。「可溶性」及び「溶液中」という用語は、タンパク質が視覚的に凝集せず、６０，０００×ｇでも溶媒から沈殿しないことを意味する。液体媒体は、水性媒体、好ましくは生理学的媒体、典型的には、１０～５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液又はリン酸緩衝液などの緩衝水性媒体などの任意の好適な媒体であることができる。液体培地は、６．４以上のｐＨ及び／又はクモシルクタンパク質の重合を防止するイオン組成を有する。即ち、液体媒体は、６．４以上のｐＨ又はクモシルクタンパク質の重合を防止するイオン組成のいずれか、又はその両方を有する。

【0137】

クモシルクタンパク質の重合を防止するイオン組成は、本明細書に開示される方法を利用して当業者によって容易に調製することができる。クモシルクタンパク質の重合を防止する好ましいイオン組成は、３００ｍＭ超のイオン強度を有する。クモシルクタンパク質の重合を防止するイオン組成の具体的な例としては、３００ｍＭ超のＮａＣｌ、１００ｍＭのリン酸塩、及びクモシルクタンパク質の重合に対して所望の防止効果を有するこれらのイオンの組合せ（例えば、１０ｍＭのリン酸塩と３００ｍＭのＮａＣｌとの組合せ）を含む。

【0138】

ＮＴ断片の存在により、溶液の安定性を改善し、これらの条件下でのポリマー生成を防止する。これは、即時の重合が望ましくないことがある場合、例えば、タンパク質の精製中、大量バッチの準備中、又は他の条件を最適化する必要がある場合などに有利であることがある。クモシルクタンパク質の高い溶解度を達成するために、液体培地のｐＨを６．７以上、例えば７．０以上、又は８．０以上、例えば最大１０．５に調整することが好ましい。液体培地のｐＨが６．４～６．８に調整されることも有利であることがあり、これは、クモシルクタンパク質の十分な溶解性を提供するが、その後の６．３以下へのｐＨ調整を容易にする。

【0139】

第３の工程では、液体媒体の性質が、ｐＨ６．３以下、重合を可能とするイオン組成に調整される。即ち、クモ絹タンパク質が溶解している液体培地のｐＨが６．４以上の場合、ｐＨを６．３以下に低下させる。熟練者は、これを達成するための様々な方法を熟知しており、典型的には、強酸又は弱酸の添加を含む。クモシルクタンパク質が溶解している液体媒体が、重合を防止するイオン組成を有する場合、イオン組成は、重合を可能にするように変更される。熟練者は、これを達成するための様々な方法を熟知しており、例えば、希釈、透析、又はゲル濾過などがある。必要に応じて、この工程は、液体媒体のｐＨを６．３以下に低下させることと、重合を可能にするためにイオン組成を変更することの両方を含む。液体媒体のｐＨは、６．０以下などの６．２以下に調整することが好ましい。特に、実用的な観点から、前の工程における６．４又は６．４～６．８から本工程において６．３又は６．０～６．３（例えば、６．２）へのｐＨ低下を制限することが有利であることがある。好ましい実施形態では、本工程の液体媒体のｐＨは、３以上、例えば４．２以上である。結果として生じるｐＨ範囲、例えば４．２～６．３は、急速な重合を促進する。

【0140】

第４の工程では、クモシルクタンパク質は、６．３以下のｐＨと、クモシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成とを有する液体媒体中で重合される。ＮＴ断片の存在により、６．４以上のｐＨでのクモシルクタンパク質の溶解性及び／又はクモシルクタンパク質の重合を防止するイオン組成が改善されるが、イオン組成がクモシルクタンパク質の重合を可能にする場合、ｐＨ６．３以下でのポリマー形成が加速される。得られたポリマーは、好ましくは固体で巨視的であり、６．３以下のｐＨと、クモシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成とを有する液体媒体中で生成される。好ましい実施形態では、この工程の液体媒体のｐＨは、３以上、例えば４．２以上である。結果として生じるｐＨ範囲、例えば４．２～６．３は、急速な重合を促進する。得られたポリマーは、本明細書に記載の分子量で提供でき、物品のコーティングに必要に応じて使用できる溶液形態として調製することができる。

【0141】

クモシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成は、本明細書に開示される方法を利用して当業者によって容易に調製することができる。クモシルクタンパク質の重合を可能にする好ましいイオン組成物は、３００ｍＭ未満のイオン強度を有する。クモシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成の具体的な例は、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのリン酸塩、２０ｍＭのリン酸塩、及びクモシルクタンパク質の重合に対する防止作用がないこれらのイオンの組合せ（例えば、１０ｍＭのリン酸塩又は２０ｍＭのリン酸塩と１５０ｍＭのＮａＣｌとの組合せ）が挙げられる。この液体媒体のイオン強度は、１～２５０ｍＭに調整されることが好ましい。

【0142】

特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ＮＴ断片は反対に帯電した極を有し、ｐＨの環境変化はタンパク質の表面の電荷バランスに影響を及ぼした後、重合する一方で、塩は、この事象を阻害すると考えられる。

【0143】

中性ｐＨでは、酸性極の過剰な負電荷を埋める（ｂｕｒｙｉｎｇ）エネルギーコストが、重合を妨げると予想され得る。しかし、二量体がより低いｐＨで等電点に近づくにつれて、引き付ける静電力が最終的に優勢となり、観察される塩、並びにＮＴ及びＮＴ含有ミニスピドロインのｐＨ依存的重合挙動を説明する。いくつかの実施形態では、ｐＨ誘導性ＮＴ重合、及びＮＴ－ミニスピドロインの繊維組織化の効率の上昇は、表面静電ポテンシャル変化によるものであり、ＮＴの１つの極での酸性残基のクラスター化は、重合転移が６．３以下のｐＨ値で生じるように、その電荷バランスをシフトすることが提案されている。

【0144】

第５の工程では、得られた、好ましくは固体のクモシルクタンパク質ポリマーが、前記液体媒体から単離される。任意に、この工程は、スピドロインポリマーからリポ多糖及び他のパイロジェンを積極的に除去することを含む。

【0145】

特定の理論に拘束されることを望むものではないが、スピドロインポリマーの生成は、水溶性スピドロイン二量体の生成を介して進行することが観察されている。したがって、本開示はまた、単離されたクモシルクタンパク質の二量体を生成する方法を提供し、最初の２つの方法工程は前記した通りである。クモシルクタンパク質は、ｐＨ６．４以上及び／又は前記クモシルクタンパク質の重合を防止するイオン組成の液体媒体中、二量体として存在する。第３の工程は、第２の工程で得られた二量体を単離し、任意に、リポ多糖やその他のパイロジェンを除去することを含む。好ましい実施形態では、本開示のクモシルクタンパク質ポリマーは、重合されたタンパク質二量体からなる。したがって、本開示は、クモシルクタンパク質の二量体を生成するための、クモシルクタンパク質、好ましくは本明細書に開示されるものの新たな使用を提供する。

【0146】

別の態様によれば、本開示は、本明細書に開示されるクモシルクタンパク質のポリマーを提供する。実施形態では、このタンパク質のポリマーは、本開示に係るそのための方法のいずれか１つによって得ることができる。したがって、本開示は、組換えシルクベースコーティングとしてクモシルクタンパク質のポリマーを製造するための、組換えクモシルクタンパク質、好ましくは本明細書に開示されるものの様々な使用を提供する。一実施形態によれば、本開示は、組換えシルクベースコーティングとして単離されたクモシルクタンパク質のポリマーを生成するための、クモシルクタンパク質の二量体、好ましくは本明細書に開示されるものの新たな使用を提供する。これらの使用では、ポリマーは、６．３以下のｐＨ及び前記クモシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成を有する液体媒体中で製造されることが好ましい。一実施形態では、液体媒体のｐＨは、３以上、例えば４．２以上である。得られるｐＨ範囲（例えば４．２～６．３）は、急速な重合を促進する。

【0147】

本開示の方法を使用して、重合プロセスを制御することが可能であり、これにより、望ましい性質及び形状を有する絹ポリマーを得るためのパラメータの最適化が可能になる。

【0148】

実施形態では、本明細書に記載の組換え絹タンパク質は、参照によりその全体を援用する米国特許第８，６４２，７３４号明細書に記載されているものを含む。

【0149】

別の実施形態では、本明細書に記載の組換え絹タンパク質は、参照によりその全体を援用する米国特許第９，０５１，４５３号明細書に記載される方法にしたがって調製することができる。

【0150】

米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１で表されるアミノ酸配列は、Ｃ末端のＡＤＦ３のアミノ酸配列の５０アミノ酸残基から構成されるアミノ酸配列と同一である（ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．：ＡＡＣ４７０１０，ＧＩ：１２６３２８７）。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号２で表されるアミノ酸配列は、Ｃ末端から２０残基を除去した米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１で表されるアミノ酸配列と同一である。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号３で表されるアミノ酸配列は、Ｃ末端から２９残基を除去した配列番号１で表されるアミノ酸配列と同一である。

【0151】

式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列のユニットを含み、且つＣ末端に、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１～３のいずれかで表されるアミノ酸配列又は配列番号１～３のいずれかで表されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号８によって表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、以下の変異によって得られる：そのＮ末端に、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ（ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）認識部位から構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）が付加されたＡＤＦ３（ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．：ＡＡＣ４７０１０，ＧＩ：１２６３２８７）のアミノ酸配列において、１番目から１３番目の繰り返し領域が約２倍であり、翻訳が第１１５４番目のアミノ酸残基で終了する。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドにおいて、Ｃ末端配列は、配列番号３で表されるアミノ酸配列と同一である。

【0152】

更に、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列のユニットを含み、且つＣ末端に、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１～３のいずれかで表されるアミノ酸配列又は米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１～３のいずれかで表されるアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドは、１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加され、且つ結晶領域とアモルファス領域とから構成される繰り返し領域を有する米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号８によって表されるアミノ酸配列を有するタンパク質であり得る。

【0153】

更に、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列を２ユニット以上含むポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＡＤＦ４に由来する組換えタンパク質である。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１５で表されるアミノ酸配列は、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ（ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）認識部位から構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）を、ＮＣＢＩデータベースから取得されるＡＤＦ４（ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．：ＡＡＣ４７０１１，ＧＩ：１２６３２８９）の部分アミノ酸配列のＮ末端に付加することによって得られるアミノ酸配列である。更に、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列を２ユニット以上含むポリペプチドは、１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加され、且つ結晶領域とアモルファス領域とから構成される繰り返し領域を有する米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１５によって表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであり得る。更に、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列を２ユニット以上含むポリペプチドは、１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加され、且つ結晶領域とアモルファス領域とから構成される繰り返し領域を有する米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１５によって表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであり得る。更に、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列を２ユニット以上含むポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１７で表されるアミノ酸配列を有するＭａＳｐ２に由来する組換えタンパク質である。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１７で表されるアミノ酸配列は、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ（ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）認識部位から構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）を、ＮＣＢＩウェブデータベースから取得されるＭａＳｐ２（ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．：ＡＡＴ７５３１３，ＧＩ：５０３６３１４７）の部分配列のＮ末端に付加することによって得られるアミノ酸配列である。更に、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）で表されるアミノ酸配列を２ユニット以上含むポリペプチドは、１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加され、且つ結晶領域とアモルファス領域とから構成される繰り返し領域を有する米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１７によって表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであり得る。

【0154】

鞭毛状絹タンパク質に由来するポリペプチドの例としては、式２：ＲＥＰ３（２）で表されるアミノ酸配列を１０単位以上含むポリペプチド、好ましくはその２０単位以上を含むポリペプチド、より好ましくは３０単位以上を含むポリペプチドが挙げられる。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの微生物を宿主として組換えタンパク質を作製する場合、鞭毛状絹タンパク質由来のポリペプチドの分子量は、生産性の観点から、好ましくは５００ｋＤａ以下、より好ましくは３００ｋＤａ以下、更に好ましくは２００ｋＤａ以下である。

【0155】

式（２）において、ＲＥＰ３は、Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｘから構成されるアミノ酸配列を示し、ここで、Ｘは、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択されるアミノ酸を示す。

【0156】

クモシルクの大きな特徴は、鞭毛状の絹が結晶領域を有さず、アモルファス領域からなる繰り返し領域を有することである。主要なドラグラインシルクなどは、結晶領域とアモルファス領域からなる繰り返し領域を有するので、高い応力と伸縮性の両方を有することが予想される。一方、鞭毛状シルクは、主要なドラグラインシルクに比べて応力は劣るものの、伸縮性は高い。この理由は、鞭毛状のシルクの殆どが、アモルファス領域で構成されると考えられるからである。

【0157】

式２：ＲＥＰ３（２）で表されるアミノ酸配列を１０単位以上含むポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１９で表されるアミノ酸配列を有する鞭毛状の絹タンパク質に由来する組換えタンパク質である。米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１９で表されるアミノ酸配列は、ＮＣＢＩデータベースから得られるＮｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓの鞭毛状の絹タンパク質の部分配列（ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．：ＡＡＦ３６０９０，ＧＩ：７１０６２２４）、具体的には、繰返し部分及びモチーフに対応するＮ末端から第１２２０番目の残基～第１６５９番目の残基のアミノ酸配列（ＰＲ１配列と称する）を、ＮＣＢＩデータベースから得られるＮｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖｉｐｅｓの鞭毛状の絹タンパク質の部分配列（ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．：ＡＡＣ３８８４７，ＧＩ：２８３３６４９）、具体的には、Ｃ末端から第８１６番目の残基～第９０７番目の残基のＣ末端アミノ酸配列と組み合わせ、その後、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ認識部位で構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号５）を、前記組み合わせた配列のＮ末端に付加することによって得られる。更に、式２：ＲＥＰ３（２）で表されるアミノ酸配列の１０単位以上含むポリペプチドは、１個又は複数のアミノ酸が置換、削除、挿入、及び／又は付加されており、アモルファス領域から構成される繰り返し領域を有する、米国特許第９，０５１，４５３号明細書の配列番号１９で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであり得る。

【0158】

ポリペプチドは、ポリペプチドをコードする遺伝子を含む発現ベクターによって形質転換された宿主を使用して産生することができる。遺伝子の作製方法は特に限定されず、クモ由来の細胞から天然のクモ絹タンパク質をコードする遺伝子をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などにより増幅し、クローニングすることにより作製することができる、又は化学的に合成することもできる。また、遺伝子を化学的に合成する方法は、特に限定されず、例えば、ＮＣＢＩウェブデータベースなどから得られる天然のクモ絹タンパク質のアミノ酸配列の情報に基づき、ＡＫＴＡオリゴパイロットプラス１０／１００（ＧＥヘルスケアジャパン株式会社）を用いて自動合成されたオリゴヌクレオチドを、ＰＣＲなどで結合させることにより合成することができる。このとき、タンパク質の精製及び観察を容易にするために、アミノ酸配列のＮ末端に開始コドンとＨｉｓ１０タグからなるアミノ酸配列が付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を合成することができる。

【0159】

発現ベクターの例としては、ＤＮＡ配列に基づいてタンパク質を発現することができるプラスミド、ファージ、ウイルスが挙げられる。プラスミド型発現ベクターは、標的遺伝子を宿主細胞で発現させ、それ自体を増幅することができる限り、特に限定されない。例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｒｏｓｅｔｔａ（ＤＥ３）を宿主として使用する場合、ｐＥＴ２２ｂ（＋）プラスミドベクター、ｐＣｏｌｄプラスミドベクターなどを使用することができる。これらの中でも、タンパク質の生産性の観点から、ｐＥＴ２２ｂ（＋）プラスミドベクターを使用することが好ましい。宿主の例としては、動物細胞、植物細胞、微生物などが挙げられる。

【0160】

本開示で使用されるポリペプチドは、好ましくは、Ａｒａｎｅｕｓ ｄｉａｄｅｍａｔｕｓの２種類の主要なドラグラインシルクタンパク質の１つであるＡＤＦ３に由来するポリペプチドである。このポリペプチドは、基本的に、高強度の伸長性と靭性を有し、合成が容易であるという利点を有する。

【0161】

したがって、本明細書に記載の実施形態、物品、及び／又は方法にしたがって使用される組換え絹タンパク質（例えば、組換えクモシルクベースのタンパク質）は、前記した１以上の組換え絹タンパク質、又はその全体を参照により本明細書に援用する米国特許第８，１７３，７７２号明細書、同第８，２７８，４１６号明細書、同第８，６１８，２５５号明細書、同第８，６４２，７３４号明細書、同第８，６９１，５８１号明細書、同第８，７２９，２３５号明細書、同第９，１１５，２０４号明細書、同第９，１５７，０７０号明細書、同第９，３０９，２９９号明細書、同第９，６４４，０１２号明細書、同第９，７０８，３７６号明細書、同第９，０５１，４５３号明細書、同第９，６１７，３１５号明細書、同第９，９６８，６８２号明細書、同第９，６８９，０８９号明細書、同第９，７３２，１２５号明細書、同第９，８５６，３０８号明細書、同第９，９２６，３４８号明細書、同第１０，０６５，９９７号明細書、同第１０，３１６，０６９号明細書、及び同第１０，３２９，３３２号明細書；米国特許公開第２００９／０２２６９６９号明細書、同第２０１１／０２８１２７３号明細書、同第２０１２／００４１１７７号明細書、同第２０１３／００６５２７８号明細書、同第２０１３／０１１５６９８号明細書、同第２０１３／０３１６３７６号明細書、同第２０１４／００５８０６６号明細書、同第２０１４／００７９６７４号明細書、同第２０１４／０２４５９２３号明細書、同第２０１５／００８７０４６号明細書、同第２０１５／０１１９５５４号明細書、同第２０１５／０１４１６１８号明細書、同第２０１５／０２９１６７３号明細書、同第２０１５／０２９１６７４号明細書、同第２０１５／０２３９５８７号明細書、同第２０１５／０３４４５４２号明細書、同第２０１５／０３６１１４４号明細書、同第２０１５／０３７４８３３号明細書、同第２０１５／０３７６２４７号明細書、同第２０１６／００２４４６４号明細書、同第２０１７／００６６８０４号明細書、同第２０１７／００６６８０５号明細書、同第２０１５／０２９３０７６号明細書、同第２０１６／０２２２１７４号明細書、同第２０１７／０２８３４７４号明細書、同第２０１７／００８８６７５号明細書、同第２０１９／０１３５８８０号明細書、同第２０１５／０３２９５８７号明細書、同第２０１９／００４０１０９号明細書、同第２０１９／０１３５８８１号明細書、同第２０１９／０１７７３６３号明細書、同第２０１９／０２２５６４６号明細書、同第２０１９／０２３３４８１号明細書、同第２０１９／００３１８４２号明細書、同第２０１８／０３５５１２０号明細書、同第２０１９／０１８６０５０号明細書、同第２０１９／０００２６４４号明細書、同第２０２０／００３１８８７号明細書、同第２０１８／０２７３５９０号明細書、同第２０１９１／０９４４０３号明細書、同第２０１９／００３１８４３号明細書、同第２０１８／０２５１５０１号明細書、同第２０１７／００６６８０５号明細書、同第２０１８／０１２７５５３号明細書、同第２０１９／０３２９５２６号明細書、同第２０２０／００３１８８６号明細書、同第２０１８／００８０１４７号明細書、同第２０１９／０３５２３４９号明細書、同第２０２０／００４３０８５号明細書、同第２０１９／０１４４８１９号明細書、同第２０１９／０２２８４４９号明細書、同第２０１９／０３４０６６６号明細書、同第２０２０／０００００９１号明細書、同第２０１９／０１９４７１０号明細書、同第２０１９／０１５１５０５号明細書、同第２０１８／０２６５５５５号明細書、同第２０１９／０３５２３３０号明細書、同第２０１９／０２４８８４７号明細書、及び同第２０１９／０３７８１９１号明細書に記載された１以上の組換え絹タンパク質を含むことができる。

【0162】

絹フィブロイン様タンパク質断片
本開示における組換え絹タンパク質は、天然の絹タンパク質の繰り返し単位に基づく合成タンパク質を含む。合成繰り返し絹タンパク質配列に加えて、これらは更に、１以上の天然の非繰り返し絹タンパク質配列を含むことができる。本明細書においては、「絹フィブロイン様タンパク質断片」は、本明細書で定義される分子量及び多分散性、並びにネイティブな絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、又は１以上のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸（配列番号２）繰り返しユニットを含む任意のタンパク質から選択されるタンパク質と一定程度の相同性を有するタンパク質断片を意味する。いくつかの実施形態では、相同性の程度は、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９４％、約９３％、約９２％、約９１％、約９０％、約８９％、約８８％、約８７％、約８６％、約８５％、約８４％、約８３％、約８２％、約８１％、約８０％、約７９％、約７８％、約７７％、約７６％、約７５％、又は７５％未満から選択される。

【0163】

本明細書に記載されるように、ネイティブの絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、又は１以上のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸（配列番号２）繰り返し単位を含む任意のタンパク質などのタンパク質は、約９％～約４５％のグリシン、又は約９％のグリシン、又は、約１０％のグリシン、約４３％のグリシン、約４４％のグリシン、約４５％のグリシン、又は約４６％のグリシンを含む。本明細書に記載されるように、ネイティブの絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、又は１以上のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸（配列番号２）繰り返し単位を含む任意のタンパク質などのタンパク質は、約１３％～約３０％のアラニン、又は約１３％のアラニン、又は約２８％のアラニン、又は約２９％のアラニン、又は約３０％のアラニン、又は約３１％のアラニンを含む。本明細書に記載されるように、ネイティブの絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、又は１以上のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸（配列番号２）繰り返し単位を含む任意のタンパク質などのタンパク質は、９％～約１２％のセリン、又は約９％のセリン、又は約１０％のセリン、又は約１１％のセリン、又は約１２％のセリンを含む。

【0164】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、又は約５５％のグリセリンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、又は約３９％のアラニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、又は約２２％のセリンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、天然のフィブロインに含まれることが知られている任意のアミノ酸を独立して含むことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の絹フィブロイン様タンパク質は、天然のフィブロインに含まれることが知られている任意のアミノ酸を独立して含まないことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の絹フィブロイン様タンパク質中、平均して、６アミノ酸のうち２個、６アミノ酸のうち３個、又は６アミノ酸のうち４個がグリシンである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の絹フィブロイン様タンパク質中、平均して、６アミノ酸のうち１個、６アミノ酸のうち２個、又は６アミノ酸のうち３個がアラニンである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の絹フィブロイン様タンパク質中、平均して、６アミノ酸のうち０個、６アミノ酸のうち１個、又は６アミノ酸のうち２個がセリンである。

【0165】

ＳＰＦの他の性質
本開示の組成物は、「生体適合性」である、又は組成物が、毒性を示さず、有害でなく、生理学的に反応性でもなく且つ免疫学的拒絶も炎症反応も引き起こさないことによって、生体組織又は生体系と適合性であることを意味する「生体適合性」を示す。係る生体適合性は、参加者が、本開示の組成物を長期間に亘って、皮膚に局所的に適用することによって証明することができる。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約７日間である。実施形態では、前記長期間は、約１４日間である。実施形態では、前記長期間は、約２１日間である。実施形態では、前記長期間は、約３０日間である。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のコーティングは、生体適合性コーティングである。

【0166】

いくつかの実施形態では、生体適合性組成物（例えば、絹を含む生体適合性コーティング）であり得る本明細書に記載の組成物を評価し、「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ － Ｐａｒｔ １： Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｅｓｔｉｎｇ ｗｉｔｈｉｎ ａ ｒｉｓｋ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｓｓ」と題する国際規格ＩＳＯ １０９９３－１を遵守することができる。いくつかの実施形態では、生体適合性組成物であり得る本明細書に記載の組成物は、細胞毒性、感作、血液適合性、発熱性、着床、遺伝子毒性、発癌性、生殖及び発生毒性、並びに分解のうちの１以上について、ＩＳＯ １０６９９３－１の下で評価することができる。

【0167】

本開示の組成物は、「低アレルギー性」であり、これは、それらがアレルギー反応を比較的、引き起こしにくいことを意味する。係る低アレルギー性は、参加者が、本開示の組成物を長期間に亘って、皮膚に局所的に適用することによって証明することができる。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約７日間である。実施形態では、前記長期間は、約１４日間である。実施形態では、前記長期間は、約２１日間である。実施形態では、前記長期間は、約３０日間である。実施形態では、前記長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。

【0168】

実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約１日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約２日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約３日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約４日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約５日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約６日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約７日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約８日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約９日間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約１０日間である。

【0169】

実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、又は約３０日間である。

【0170】

実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１０日間～６ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、６ヶ月間～１２ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１２ヶ月間～１８ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１８ヶ月間～２４ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、２４ヶ月間～３０ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、３０ヶ月間～３６ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、３６ヶ月間～４８ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、４８ヶ月間～６０ヶ月間である。

【0171】

実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、タンパク質の結晶性のために水溶液に可溶ではない。実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、水溶液に可溶である。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約３分の２の結晶部分と、約３分の１のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約２分の１の結晶部分と、約２分の１のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９９％の結晶部分と、１％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９５％の結晶部分と、５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９０％の結晶部分と、１０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８５％の結晶部分と、１５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８０％の結晶部分と、２０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７５％の結晶部分と、２５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７０％の結晶部分と、３０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６５％の結晶部分と、３５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６０％の結晶部分と、４０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５０％の結晶部分と、５０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、４０％の結晶部分と、６０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３５％の結晶部分と、６５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３０％の結晶部分と、７０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２５％の結晶部分と、７５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２０％の結晶部分と、８０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１５％の結晶部分と、８５％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１０％の結晶部分と、９０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５％の結晶部分と、９０％のアモルファス領域とを含む。実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１％の結晶部分と、９９％のアモルファス領域とを含む。

【0172】

本明細書においては、用語「無機残留物を実質的に含まない」は、組成物が、０．１％（ｗ／ｗ）以下の残留物を示すことを意味する。実施形態では、無機残留物を実質的に含まないことは、０．０５％（ｗ／ｗ）以下の残留物を示す組成物を意味する。実施形態では、無機残留物を実質的に含まないことは、０．０１％（ｗ／ｗ）以下の残留物を示す組成物を意味する。実施形態では、無機残留物の量は、０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍである。実施形態では、無機残留物の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。実施形態では、無機残留物の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。実施形態では、無機残留物の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。実施形態では、無機残留物の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。実施形態では、無機残留物の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。実施形態では、無機残留物の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。

【0173】

本明細書においては、用語「有機残留物を実質的に含まない」は、組成物が、０．１％（ｗ／ｗ）以下の残留物を示すことを意味する。実施形態では、有機残留物を実質的に含まないことは、０．０５％（ｗ／ｗ）以下の残留物を示す組成物を意味する。実施形態では、有機残留物を実質的に含まないことは、０．０１％（ｗ／ｗ）以下の残留物を示す組成物を意味する。実施形態では、有機残留物の量は、０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍである。実施形態では、有機残留物の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。実施形態では、有機残留物の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。実施形態では、有機残留物の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。実施形態では、有機残留物の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。実施形態では、有機残留物の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。実施形態では、有機残留物の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。

【0174】

本開示の組成物は、「生体適合性」を示し、これは、組成物が、毒性を示さず、有害でなく、生理学的に反応性でもなく且つ免疫学的拒絶も炎症反応も引き起こさないことによって、生体組織又は生体系と適合性であることを意味する。係る生体適合性は、参加者が、本開示の組成物を長期間に亘って、皮膚に局所的に適用することによって証明することができる。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約７日間である。実施形態では、前記長期間は、約１４日間である。実施形態では、前記長期間は、約２１日間である。実施形態では、前記長期間は、約３０日間である。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。

【0175】

本開示の組成物は、「低アレルギー性」であり、これは、それらがアレルギー反応を比較的、引き起こしにくいことを意味する。係る低アレルギー性は、参加者が、本開示の組成物を長期間に亘って、皮膚に局所的に適用することによって証明することができる。実施形態では、前記長期間は、約３日間である。実施形態では、前記長期間は、約７日間である。実施形態では、前記長期間は、約１４日間である。実施形態では、前記長期間は、約２１日間である。実施形態では、前記長期間は、約３０日間である。実施形態では、前記長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。

【0176】

以下は、本開示の絹溶液中及びその調製のための様々なパラメータに適した範囲の非限定的な例である。本開示の絹溶液は、これらのパラメータの必ずしも全てではなく１以上を含むことができ、係るパラメータの範囲の様々な組合せを使用して調製することができる。

【0177】

実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、３０．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、２５．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、２０．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１９．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１８．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１７．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１６．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１５．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１４．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１３．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１２．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１１．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１０．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、９．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、８．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、７．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、６．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、５．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、４．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、３．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、２．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１．０重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．９重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．８重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．７重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．６重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．５重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．４重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．３重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．２重量％未満である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．１重量％未満である。

【0178】

実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．１重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．２重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．３重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．４重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．５重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．６重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．７重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．８重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、０．９重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、２．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、３．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、４．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、５．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、６．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、７．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、８．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、９．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１０．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１１．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１２．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１３．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１４．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１５．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１６．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１７．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１８．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、１９．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、２０．０重量％超である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、２５．０重量％超である。

【0179】

実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約３０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約２５．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約２０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約１５．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約９．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約８．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約７．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約６．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約６．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約５．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約５．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約４．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約４．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約３．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約３．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約２．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約２．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約２．４重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．５重量％～約５．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．５重量％～約４．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．５重量％～約４．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．５重量％～約３．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．５重量％～約３．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．５重量％～約２．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約４．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約３．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約３．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約２．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約２．４重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約２．０重量％である。

【0180】

実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約２０．０重量％～約３０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約２重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約０．１重量％～約６．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約６．０重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約６．０重量％～約８．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約６．０重量％～約９．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１０．０重量％～約２０．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１１．０重量％～約１９．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１２．０重量％～約１８．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１３．０重量％～約１７．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１４．０重量％～約１６．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約２．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約２．４重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約３．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約３．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約４．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約４．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約５．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約５．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約６．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約６．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約７．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約７．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約８．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約８．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約９．０重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約９．５重量％である。実施形態では、溶液中のＳＰＦパーセントは、約１０．０重量％である。

【0181】

実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、検出不能～２５．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、検出不能～５．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、１．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、２．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、３．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、４．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、５．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシンパーセントは、２５．０重量％である。

【0182】

いくつかの実施形態では、本開示の絹フィブロインタンパク質断片は、貯蔵条件、絹のパーセント並びに出荷の数及び出荷条件に応じて１０日間～３年間の保管安定性を有する（即ち、水溶液中で貯蔵した場合、それらは、徐々に又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の凝集及び経時的な分子量の上昇がない）。更に、ｐＨを変化させて、絹の未成熟な折り畳み（ｆｏｌｄｉｎｇ）及び凝集を防止することによって、保管寿命を延長させることができる及び／又はシッピング条件を支援することができる。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～１年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～２年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～２年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、３～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、３～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、４～５年間である。

【0183】

実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１０日間～６ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、６ヶ月間～１２ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１２ヶ月間～１８ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１８ヶ月間～２４ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、２４ヶ月間～３０ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、３０ヶ月間～３６ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、３６ヶ月間～４８ヶ月間である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、４８ヶ月間～６０ヶ月間である。

【0184】

実施形態では、ＳＰＦを有する本開示の組成物は、検出不能なレベルのＬｉＢｒ残留物を有する。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、１０ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、２５ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、５０ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、７５ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、１００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、２００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、３００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、４００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、５００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、６００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、７００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、８００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、９００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、１０００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残留物の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。

【0185】

実施形態では、ＳＰＦを有する本開示の組成物は、検出不能なレベルのＮａ_２ＣＯ_３残留物を有する。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、１００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、２００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、３００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、４００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、５００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、６００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、７００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、８００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、９００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、１０００ｐｐｍ未満である。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残留物の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。

【0186】

本開示のＳＰＦ組成物のユニークな特徴は、貯蔵条件、絹のパーセント並びに出荷の数及び出荷条件に応じて１０日間～３年間の保管安定性を有する（即ち、水溶液中で貯蔵した場合、それらは、徐々に又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の凝集及び経時的な分子量の上昇がない）。更に、ｐＨを変化させて、絹の未成熟な折り畳み（ｆｏｌｄｉｎｇ）及び凝集を防止することによって、保管寿命を延長させることができる及び／又はシッピング条件を支援することができる。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、室温（ＲＴ）で、最大２週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大４週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大６週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大８週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１０週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１２週間の保管安定性を有する。実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、約４週間～約５２週間の保管安定性を有する。
以下の表１８は、本開示のＳＰＦ組成物の実施形態についての保管安定性試験結果を示す。

【表18】

【0187】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の絹フィブロインタンパク質断片に由来する絹フィルムの水溶性は、溶媒アニーリング（水アニーリング又はメタノールアニーリング）、化学架橋、酵素架橋、及び熱処理によって変化させることができる。

【0188】

いくつかの実施形態では、アニーリングのプロセスは、コーティング材料として使用される絹フィブロインタンパク質断片溶液においてベータシート形成を誘導することを伴い得る。アニーリング（例えば、結晶化度の上昇）又は絹フィブロインタンパク質ベースの断片の「分子パッキング」を促進する技術が記載されている。いくつかの実施形態では、アモルファスシルクフィルムは、水又は有機溶媒の群から選択される溶媒の存在下でベータシートを導入するためにアニールされる。いくつかの実施形態では、アモルファスシルクフィルムは、水の存在下でベータシートを導入するためにアニーリングされる（水アニーリングプロセス）。いくつかの実施形態では、アモルファス絹フィブロインタンパク質断片フィルムは、メタノールの存在下でベータシートを導入するためにアニーリングされる。いくつかの実施形態では、アニーリング（例えば、ベータシート形成）は、有機溶媒の添加によって誘導される。好適な有機溶媒としては、メタノール、エタノール、アセトン、イソプロパノール、又はそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0189】

いくつかの実施形態では、アニーリングは、いわゆる「水アニーリング」又は「水蒸気アニーリング」によって実施され、水蒸気は、ベータシートのパッキングを促進するための中間可塑剤又は触媒として使用される。いくつかの実施形態では、水アニーリングのプロセスは、真空下で実施することができる。好適な係る方法は、Ｊｉｎ Ｈ－Ｊ ｅｔ ａｌ． （２００５）， Ｗａｔｅｒ－ｓｔａｂｌｅ Ｓｉｌｋ Ｆｉｌｍｓ ｗｉｔｈ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｂｅｔａ－Ｓｈｅｅｔ Ｃｏｎｔｅｎｔ， Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， １５： １２４１－１２４７； Ｘｉａｏ Ｈ． ｅｔ ａｌ． （２０１１）， Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｌｋ Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｂｙ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ－Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｗａｔｅｒ Ｖａｐｏｒ Ａｎｎｅａｌｉｎｇ， Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， １２（５）： １６８６－１６９６に記載されている。

【0190】

水アニーリングプロセスの重要な特徴は、絹フィブロインタンパク質断片ペプチド鎖における結晶性ベータシートの形成を促進して、絹フィブロインが連続膜に自己組織化することを可能にすることである。いくつかの実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片フィルムの結晶化度は、水蒸気の温度及びアニーリングの持続時間を制御することによって制御される。いくつかの実施形態では、アニーリングは、約６５℃～約１１０℃で行われる。いくつかの実施形態では、水の温度は、約８０℃に維持される。いくつかの実施形態では、アニーリングは、約６５℃、約７０℃、約７５℃、約８０℃、約８５℃、約９０℃、約９５℃、約１００℃、約１０５℃、及び約１１０℃の群から選択される温度で実施される。

【0191】

いくつかの実施形態では、アニーリングプロセスは、約１分間～約４０分間、約１分間～約５０分間、約１分間～約６０分間、約１分間～約７０分間、約１分間～約８０分間、約１分間～約９０分間、約１分間～約１００分間、約１分間～約１１０分間、約１分間～約１２０分間、約１分間～約１３０分間、約５分間～約４０分間、約５分間～約５０分間、約５分間～約６０分間、約５分間～約７０分間、約５分間～約８０分間、約５分間～約９０分間、約５分間～約１００分間、約５分間～約１１０分間、約５分間～約１２０分間、約５分間～約１３０分間、約１０分間～約４０分間、約１０分間～約５０分間、約１０分間～約６０分間、約１０分間～約７０分間、約１０分間～約８０分間、約１０分間～約９０分間、約１０分間～約１００分間、約１０分間～約１１０分間、約１０分間～約１２０分間、約１０分間～約１３０分間、約１５分間～約４０分間、約１５分間～約５０分間、約１５分間～約６０分間、約１５分間～約７０分間、約１５分間～約８０分間、約１５分間～約９０分間、約１５分間～約１００分間、約１５分間～約１１０分間、約１５分間～約１２０分間、約１５分間～約１３０分間、約２０分間～約４０分間、約２０分間～約５０分間、約２０分間～約６０分間、約２０分間～約７０分間、約２０分間～約８０分間、約２０分間～約９０分間、約２０分間～約１００分間、約２０分間～約１１０分間、約２０分間～約１２０分間、約２０分間～約１３０分間、約２５分間～約４０分間、約２５分間～約５０分間、約２５分間～約６０分間、約２５分間～約７０分間、約２５分間～約８０分間、約２５分間～約９０分間、約２５分間～約１００分間、約２５分間～約１１０分間、約２５分間～約１２０分間、約２５分間～約１３０分間、約３０分間～約４０分間、約３０分間～約５０分間、約３０分間～約６０分間、約３０分間～約７０分間、約３０分間～約８０分間、約３０分間～約９０分間、約３０分間～約１００分間、約３０分間～約１１０分間、約３０分間～約１２０分間、約３０分間～約１３０分間、約３５分間～約４０分間、約３５分間～約５０分間、約３５分間～約６０分間、約３５分間～約７０分間、約３５分間～約８０分間、約３５分間～約９０分間、約３５分間～約１００分間、約３５分間～約１１０分間、約３５分間～約１２０分間、約３５分間～約１３０分間、約４０分間～約５０分間、約４０分間～約６０分間、約４０分間～約７０分間、約４０分間～約８０分間、約４０分間～約９０分間、約４０分間～約１００分間、約４０分間～約１１０分間、約４０分間～約１２０分間、約４０分間～約１３０分間、約４５分間～約５０分間、約４５分間～約６０分間、約４５分間～約７０分間、約４５分間～約８０分間、約４５分間～約９０分間、約４５分間～約１００分間、約４５分間～約１１０分間、約４５分間～約１２０分間、及び約４５分間～約１３０分間からなる群から選択される期間継続する。いくつかの実施形態では、アニーリングプロセスは、約１分間～約６０分間の期間継続する。いくつかの実施形態では、アニーリングプロセスは、約４５分間～約６０分間の期間継続する。より長い水アニーリングポストプロセスにより、絹フィブロインタンパク質断片の結晶化度の上昇がもたらされた。

【0192】

いくつかの実施形態では、アニーリングされた絹フィブロインタンパク質断片フィルムは、湿った絹フィブロインタンパク質断片フィルムを１００％メタノールに６０分間室温で浸漬している。メタノールアニーリングは、絹フィブロインタンパク質断片フィルムの組成を、主にアモルファスのランダムコイルから結晶性の逆平行ベータシート構造に変化させた。

【0193】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＰＦを使用して、メタノールで沈殿させることによりＳＰＦ微粒子を調製することができる。代替のフラッシュ乾燥、流動床乾燥、噴霧乾燥、又は真空乾燥を適用して、絹溶液から水を除去することができる。次いで、ＳＰＦ粉末を、冷蔵又はその他の特別な取扱い手順なしに、保管及び取り扱うことができる。いくつかの実施形態では、ＳＰＦ粉末は、低分子量の絹フィブロインタンパク質断片を含む。いくつかの実施形態では、ＳＰＦ粉末は、中分子量の絹フィブロインタンパク質断片を含む。いくつかの実施形態では、ＳＰＦ粉末は、低分子量の絹フィブロインタンパク質断片と中分子量の絹フィブロインタンパク質断片との混合物を含む。

【0194】

コラーゲンブースティング組成物及びその方法における絹タンパク質断片
本開示は、それを必要とする対象における、コラーゲン発現の刺激又は調節によって軽減される障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法であって、約１ｋＤａ～約５ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１０ｋＤａ～約１５ｋＤａ、約１５ｋＤａ～約２０ｋＤａ、約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、約２０ｋＤａ～約２５ｋＤａ、約２５ｋＤａ～約３０ｋＤａ、約３０ｋＤａ～約３５ｋＤａ、約３５ｋＤａ～約４０ｋＤａ、約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａ、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａ、約４０ｋＤａ～約４５ｋＤａ、約４５ｋＤａ～約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約１００ｋＤａ、及び約８０ｋＤａ～約１４４ｋＤａの平均重量平均分子量と、１～約５の多分散性とを有する絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載の任意の他の絹タンパク質断片を含む組成物を、前記対象に投与することを含む方法を提供する。絹フィブロイン断片の任意の他の分子量、分子量範囲、及び多分散、又は限定するものではないが、本明細書に記載の任意の他の絹タンパク質断片を、本開示の方法及び組成物に使用することができる。

【0195】

いくつかの実施形態では、組成物は、０～５００ｐｐｍの臭化リチウムを更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０～５００ｐｐｍの炭酸ナトリウムを更に含む。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、１～約１．５の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、約１．５～約２．０の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、約１．５～約３．０の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、約２．０～約２．５の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、約２．５～約３．０の多分散性を有する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約０．００１重量％～約１０．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約０．００１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片に対して約０．００１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを更に含む。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物に製する前の少なくとも１０日間の期間、自然発生的に又は徐々にゲル化せず、水溶液中において、色又は濁度が視覚的に変化しない。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約１．０重量％～約２．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約２．０重量％～約３．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約３．０重量％～約４．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約４．０重量％～約５．０重量％で存在する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン断片、又は限定するものではないが、本明細書に記載される任意の他の絹タンパク質断片は、組成物中、組成物の総重量に対して約５．０重量％～約６．０重量％で存在する。

【0196】

いくつかの実施形態では、組成物は、注射可能な組成物又は局所組成物として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、限定するものてはないが、コラーゲンをブーストする（例えば、限定するものてはないが、コラーゲン発現を刺激又は調節する）ことなどによって、皮膚の外観及び感触を改善するために製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、皮膚上のコラーゲンをブーストするために製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、皮内のコラーゲンをブーストするために製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、頭皮上のコラーゲンをブーストするために製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための液体溶液として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのフィルムとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための個体として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための粉末として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのゲルとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのシルクゲルとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための、リドカイン含有又は不含シルク／ＨＡゲルとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための石鹸として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのクリームとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのローションとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのシャンプーとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのコンディショナーとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための栄養剤として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのマスクとして製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするためのオーバー・ザ・カウンター製品として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための医薬として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための治療薬として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための絹コーティング織物として製せられる。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンをブーストするための絹コーティング不織材料として製せられる。

【0197】

いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、皮膚科学的に許容される担体を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、注射可能な許容可能な担体を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、懸濁液、乳濁液、粉末、溶液、分散液、又はエリキシルのうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、ゲル、ゼリー、クリーム、ローション、フォーム、スラリー、軟膏、オイル、ペースト、坐剤、スプレー、半固体組成物、固体組成物、スティック、又はムースのうちの１以上を含む又は製せられる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、ゴマ油、コーン油、綿実油、又は落花生油のうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、マンニトール又はデキストロースのうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、約０．００１％～約１０％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、約１％～約１０％（ｗ／ｖ）、約１０％～約２５％（ｗ／ｖ）、約２５％～約５０％（ｗ／ｖ）、又は約５０％～約９９．９９％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＨＡは、１００，０００ダルトン以上、１５０，０００ダルトン以上、１００万ダルトン以上、又は２００万ダルトン以上の分子量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＨＡは、１００，０００ダルトン以下、１５０，０００ダルトン以下、１００万ダルトン以下、又は２００万ダルトン以下の分子量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＨＡは、高分子量（例えば、約１ＭＤａ～約４ＭＤａのＨＡ分子量）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＨＡは、低分子量（例えば、約１ＭＤａ未満のＨＡ分子量）を有する。いくつかの実施形態では、ＨＡ源は、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムなどのヒアルロン酸塩であることができる。いくつかの実施形態では、ＨＡは架橋されている。架橋ＨＡは、膜、ゲル、セミゲル、スポンジ、又はミクロスフェアなど、様々な形状に製することができる。いくつかの実施形態では、架橋されたＨＡは、流体ゲル形態である、即ち、その容器の形状になる。ＨＡゲル又はセミゲルの粘度は、非コンジュゲートＨＡ及び／又はヒアルロネートの添加によって変えることができる。粘度は、本明細書に記載されるように、ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又はＨＡ－ＨＡ架橋の程度を変えることによって調整することもできる。いくつかの実施形態では、ＨＡの約４％～約１２％が、ＨＡ－ＨＡ又はＨＡ－ＳＰＦとして架橋され得る。

【0198】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、脂肪族油、脂肪アルコール、脂肪酸、グリセリド、アシルグリセロール、及びリン脂質のうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、モノグリセリド、ジグリセリド、又はトリグリセリドのうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、水相を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、炭化水素油、脂肪酸、脂肪酸油、脂肪酸エステル、又はカチオン性第４級アンモニウム塩のうちの１以上を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体の一部は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せから選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤で修飾される。いくつかの実施形態では、ポリエポキシリンカーは、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルから選択される。

【0199】

いくつかの実施形態では、組成物は、麻酔薬化合物を更に含む。いくつかの実施形態では、化合物は、ベンゾカイン、クロロプロカイン、コカイン、シクロメチカイン、ジメトカイン、ピペロカイン、プロポキシカイン、プロカイン、プロパラカイン、テトラカイン、アルチカイン、ブピバカイン、シンコカイン、エチドカイン、レボブピバカイン、リドカイン、メピバカイン、プリロカイン、ロピバカイン、及びトリメカインから選択される。いくつかの実施形態では、組成物は、リドカインを更に含む。いくつかの実施形態では、組成物中のリドカインの濃度は、０．０１％の任意の増分を含めて、約０．０１％～約１％である。いくつかの実施形態では、組成物中のリドカインの濃度は、約０．３％である。

【0200】

特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、組成物注射部位での痛み又は不快感を改善又は軽減するのに有効な量の１以上の麻酔薬を含むことができる。局所麻酔薬は、アンブカイン、アモラノン、アミロカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニリカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、ベータ－ユーカイン、ユープロシン、フェナルコミン、フォルモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチルｐ－アミノ安息香酸、ロイシノカインメシレート、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ネパイン、オクタカイン、オルソカイン、オキセタザイン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、シュードコカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、及びそれらの塩からなる群から選択することができる。

【0201】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、約０．０１％～約０．０２％、又は約０．０３％～約０．０４％、又は約０．０５％～約０．０６％～約０．０７％、又は約０．０８％～約０．０９％、又は約０．１％～約０．２％、又は約０．３％～約０．４％、又は約０．５％～約０．６％、又は約０．７％～約０．８％、又は約０．９％～約１．０％、又は約１％～約１．５％、又は約１．５％～約２．０％、又は約２．０％～約２．５％、又は約２．５％～約３．０％、又は約３．０％～約３．５％、又は約３．５％～約４．０％、又は約４．０％～約４．５％、又は約４．５％～約５．０％、又は約５．０％～約５．５％、又は約５．５％～約６．０％、又は約６．０％～約６．５％、又は約６．５％～約７．０％、又は約７．５％～約８．０％、又は約８．０％～約８．５％、又は約８．５％～約９．０％、又は約９．５％～約１０％の重量濃度で、リドカイン又は本明細書に記載される他の麻酔薬を含むことができる。

【0202】

いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、ゲルを含む、又はゲルとして製せられる。ゲルは、注射可能なゲル、例えば、限定するものではないが、組織フィラー又は局所投与用ゲルであることができる。好適なゲルは、例えば、参照により本明細書に援用する国際公開第２０１９００５８４８号に記載される。いくつかの実施形態では、ゲルは、絹フィブロイン若しくは絹フィブロイン断片、又は本明細書に記載の任意の他のＳＰＦ、ヒアルロン酸（ＨＡ）、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＡの一部は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第２級アルコールのうちの１以上を含む１以上のリンカー部分によって修飾又は架橋され、リンカー部分は、リンカーの一端でＨＡに結合する。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン若しくは絹フィブロイン断片、又は本明細書に記載の任意の他のＳＰＦの一部は、修飾又は架橋されている。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン若しくは絹フィブロイン断片、又は本明細書に記載の任意の他のＳＰＦの一部は、遊離している。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン若しくは絹フィブロイン断片、又は本明細書に記載の任意の他のＳＰＦの一部は、ＨＡに架橋されている。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン若しくは絹フィブロイン断片、又は本明細書に記載の任意の他のＳＰＦの一部は、絹フィブロイン若しくは絹フィブロイン断片、又は本明細書に記載の任意の他のＳＰＦに架橋されている。いくつかの実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片は、実質的にセリシンを欠いている。いくつかの実施形態では、ゲルは、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、又は約１５％の修飾度（ＭｏＤ）を有する。いくつかの実施形態では、修飾又は架橋は、架橋剤として、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＰＧ、ポリグリシジル－ＰＰＧ、ジグリシジル－ＰＰＧ、又はそれらの任意の組合せを使用して得られる。いくつかの実施形態では、修飾又は架橋は、約２００Ｄａ、約５００Ｄａ、１０００Ｄａ、約２０００Ｄａ、又は約６０００ＤａのＭＷを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。いくつかの実施形態では、修飾又は架橋は、約３８０Ｄａ又は約６４０ＤａのＭＷを有するポリプロピレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。いくつかの実施形態では、ゲルは、ヒドロゲルである。いくつかの実施形態では、ゲルは、水を更に含む。いくつかの実施形態では、ゲルは単相である。いくつかの実施形態では、ゲル中のＨＡ及び絹の総濃度は、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ゲル中の絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片に対するＨＡの比は、約９２／８、約９３／７、約９４／６、約９５／５、約９６／４、約９７／３、約１８／１２、約２７／３、約２９．４／０．６、約９９／１、約９２．５／７．５、又は約９０／１０である。いくつかの実施形態では、ゲルは、真皮フィラーである。いくつかの実施形態では、ゲルは、生分解性である。いくつかの実施形態では、ゲルは、注射可能である。いくつかの実施形態では、ゲルは、３０Ｇ又は２７Ｇの針を通して注射可能である。いくつかの実施形態では、ゲルは、約５Ｐａ～約５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。いくつかの実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚ、約５Ｈｚ、又は約１０Ｈｚの振動応力で測定される。いくつかの実施形態では、ゲルは、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓまでの複素粘度を有する。いくつかの実施形態では、複素粘度は、約１Ｈｚ、約５Ｈｚ、又は約１０Ｈｚの振動応力で測定される。いくつかの実施形態では、ゲルは、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギネート、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラギーナン、及びグアーガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカンを含む。

【0203】

いくつかの実施形態では、組成物は、非経口投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、注射可能な組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、皮下注射、皮内注射、経皮注射、又は真皮下注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、筋肉内注射、静脈内注射、腹腔内注射、骨内注射、心臓内注射、関節内注射、又は海綿体内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、デポー注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、浸潤注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、留置カテーテルによって投与される。いくつかの実施形態では、組成物又はその一部は、生体適合性、生分解性、生体吸収性、生体再吸収性、又はそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、流体成分、例えば、単一の流体又は実質的に１以上の流体を含む溶液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、水又は水溶液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、組織の外科的切除後など、当技術分野で知られた任意の手段によって、皮下に注射可能、移植可能、又は送達可能である。いくつかの実施形態では、組成物は、皮膚フィラーである。いくつかの実施形態では、組成物は、無菌である。

【0204】

実施形態では、本明細書に記載の組成物中の重量パーセント含水量は、約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％である。

【0205】

いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲン発現をブーストすることに加えて、軟組織内及びその周辺に投与して、ボリュームを与え、支持を与え、又は軟組織欠損を治療することができる。本明細書に記載の組成物は、真皮下の複数レベルに投与することができる。本明細書においては、用語「軟組織」は、体の他の構造及び器官を結合、支持、又は囲むものを意味することができる。例えば、本明細書に記載の軟組織は、限定するものではないが、皮膚、真皮組織、真皮下組織（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ）、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管や動脈、神経、及び滑膜（皮内）組織を含むことができる。いくつかの実施形態では、本開示は、個体の軟組織状態を治療する方法であって、本明細書に開示される１以上の組成物を前記個体の軟組織状態の部位に投与することを含み、前記組成物の投与が、前記軟組織状態を改善して前記軟組織状態を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、軟組織状態は、乳房組織の状態、顔面組織の状態、頸部の状態、皮膚の状態、上腕の状態、下腕の状態、手の状態、肩の状態、背部の状態、腹部を含む胴体の状態（ｔｏｒｓｏ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、臀部の状態、上腿の状態、脹脛の状態を含む下腿の状態、足底脂肪体の状態を含む足の状態、眼の状態、生殖器の状態、又は体の別の部分、領域、若しくは場所に影響を与える状態である。

【0206】

いくつかの実施形態では、本開示は、限定するものではないが、表皮－真皮接合部を含む皮膚の領域、並びに表層真皮（乳頭領域）及び深部真皮（網状領域）を含む真皮を含む真皮領域に関する組成物及び治療方法を提供する。皮膚は、３つの主要な層で構成される。即ち、防水性を提供し、感染に対するバリアとして機能する表皮、皮膚の付属器官の場所として機能する真皮、及び皮下組織（皮下脂肪層）の３層から構成される。表皮には血管がなく、真皮からの拡散によって栄養が与えられる。表皮を構成する主な種類の細胞は、ケラチノサイト、メラノサイト、ランゲルハンス細胞、及びメルケル細胞である。

【0207】

実施形態では、本明細書に記載の組成物を、それを必要とする患者の１以上の状態を治療する方法に提供することができる。いくつかの実施形態では、治療有効量の組成物を、状態又は他の組織欠損を治療するために、それを必要とする患者の組織に送達することができる。

【0208】

本明細書においては、用語「治療している」、「治療する」、又は「治療」は、患者において、軟組織状態などの状態の美容的又は臨床的症状を軽減又は排除すること、又は個体において、状態の美容的又は臨床的症状の発症を遅延又は予防することを意味する。

【0209】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物によって治療される状態は、軟組織の状態を含むことができる。軟組織の状態としては、限定するものではないが、身体の一部、部分、又は領域のオーグメンテーション、再建、疾患、障害、欠陥、又は不完全性が挙げられる。一態様では、開示の組成物によって治療される軟組織の状態は、限定するものではないが、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患、顔面の障害、顔面の欠陥、又は顔面の不完全性を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物によって治療される軟組織の状態は、限定するものではないが、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン又はマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット（ｄｅｒｍａｌ ｄｉｖｏｔ）、窪んだ頬、窪んだこめかみ、薄い唇、尿道の欠陥、皮膚の欠陥、乳房の欠陥、後眼窩欠陥、顔面の折り目、又は皺を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物によって治療される軟組織の状態としては、限定するものではないが、乳房の不完全性、欠陥、疾患、及び／又は障害、例えば、豊胸、乳房再建、乳房固定、小乳房症、胸部発育不全、ポーランド症候群、莢膜収縮及び／又は破裂などのインプラント合併症に起因する欠陥；顔面の不完全性、欠陥、疾患、又は障害、例えば、顔面のオーグメンテーション、顔面再建、パリー・ロムベルグ症候群、深在性エリテマトーデス、皮膚ディボット、窪んだ頬、窪んだこめかみ、薄い唇、鼻部の不完全性又は欠陥、後眼窩不完全性又は欠陥、顔面の折り目、ライン、又は皺、例えば、眉間ライン、鼻唇ライン、口周囲ライン、及び／又はマリオネットラインなど、及び／又は顔面の他の輪郭変形又は不完全性；頸部の不完全性、欠陥、疾患、又は障害；皮膚の不完全性、欠陥、疾患、及び／又は障害；他の軟組織の不完全性、欠陥、疾患、及び／又は障害、例えば、上腕、下腕、手部、肩部、背部、腹部、臀部、上腿、ふくらはぎを含む下腿、足底脂肪体を含む足部、眼球、生殖器、又は他の身体の一部、部分、又は領域を含む胴体のオーグメンテーション又は再建、又はこれらの身体の一部、部分、又は領域に影響をおよぼす疾患又は障害；尿失禁、便失禁、他の失禁形態；及び胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）が挙げられる。

【0210】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、限定するものではないが、皮膚、真皮組織、真皮下組織、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管、動脈、神経、及び滑膜（皮内）組織を含む軟組織に送達することができる。

【0211】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、細胞接着、遊走、及び増殖シグナルと共に人工生分解性マトリックスを提供することによって、創傷内に直接配置して治癒を助けることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、生分解性メッシュ又は他の移植材料上にコーティングすることができる、又はそれ自体をシート又は他の構造に形成することができる、又は水和形態で維持することができる。

【0212】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法のいずれかで使用される組成物の量は、所望の変化及び／又は改善、所望の状態症状の低減及び／又は排除、個人及び／又は医師によって所望される臨床的及び／又は美容的効果、及び治療される身体部分又は領域に基づいて決定される。組成物投与の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の１以上によって表すことができる：軟組織形状の変化及び／又は改善、軟組織サイズの変化及び／又は改善、軟組織輪郭の変化及び／又は改善、組織機能の変化及び／又は改善、組織内部成長サポート、及び／又は新たなコラーゲン沈着、組成物の持続移植、患者の満足度及び／又は生活の質の改善、及び移植可能異物の使用の低減。例えば、豊胸の手順について、組成物及び方法の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の１以上によって表すことができる：乳房サイズの増大、乳房形状の変化、乳房輪郭の変化、持続生着、莢膜収縮のリスク低減、リポネクローシスによる嚢胞形成速度を低下、患者の満足度及び／又は生活の質を改善、及び乳房インプラントの使用の低減。

【0213】

いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、対象における１以上のメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の発現を低減する。いくつかの実施形態では、コラーゲン発現を刺激又は調節することは、コラーゲン発現を上昇させることを含む。

【0214】

いくつかの実施形態では、コラーゲン発現は、ベースレベルに対して、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％上昇する。

【0215】

いくつかの実施形態では、コラーゲン発現は、ベースレベルに対して、約１０１％、約１０２％、約１０３％、約１０４％、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％、約１２６％、約１２７％、約１２８％、約１２９％、約１３０％、約１３１％、約１３２％、約１３３％、約１３４％、約１３５％、約１３６％、約１３７％、約１３８％、約１３９％、約１４０％、約１４１％、約１４２％、約１４３％、約１４４％、約１４５％、約１４６％、約１４７％、約１４８％、約１４９％、約１５０％、約１５１％、約１５２％、約１５３％、約１５４％、約１５５％、約１５６％、約１５７％、約１５８％、約１５９％、約１６０％、約１６１％、約１６２％、約１６３％、約１６４％、約１６５％、約１６６％、約１６７％、約１６８％、約１６９％、約１７０％、約１７１％、約１７２％、約１７３％、約１７４％、約１７５％、約１７６％、約１７７％、約１７８％、約１７９％、約１８０％、約１８１％、約１８２％、約１８３％、約１８４％、約１８５％、約１８６％、約１８７％、約１８８％、約１８９％、約１９０％、約１９１％、約１９２％、約１９３％、約１９４％、約１９５％、約１９６％、約１９７％、約１９８％、約１９９％、又は約２００％上昇する。

【0216】

いくつかの実施形態では、コラーゲン発現は、ベースレベルに対して、約２２５％、又は約２５０％、又は約２７５％、又は約３００％、又は約３２５％、又は約３５０％、又は約３７５％、又は約４００％、又は約４２５％、又は約４５０％、又は約４７５％、又は約５００％、又は約５２５％、又は約５５０％、又は約５７５％、又は約６００％、又は約６２５％、又は約６５０％、又は約６７５％、又は約７００％、又は約７２５％、又は約７５０％、又は約７７５％、又は約８００％、又は約８２５％、又は約８５０％、又は約８７５％、又は約９００％、又は約９２５％、又は約９５０％、又は約９７５％、又は約１０００％上昇する。

【0217】

いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、対象における皺の予防又は改善、対象における加齢性色素斑の予防又は改善、対象における乾燥肌の予防又は改善、対象における不均一な皮膚の色調の上昇、又は皮膚の外観及び感触の改善の１以上がもたらされる。皮膚の外観及び感触の改善は、限定するものではないが、損傷した皮膚の外観及び感触を改善するだけでなく、視覚的には損傷していない皮膚の外観及び感触を改善することも含む。いくつかの実施形態では、組成物を投与することにより、対象における皮膚のたるみの予防又は改善、対象における皮膚の老化の予防又は改善、対象における皮膚の引張強度の低下の予防又は改善、対象における光損傷した皮膚の予防又は改善、又は対象における皮膚伸展線条（ストレッチマーク）の予防又は改善の１以上がもたらされる。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、皺、加齢性色素斑、乾燥肌、不均一な皮膚の色調、皮膚のたるみ、皮膚の老化、皮膚の引張強度の低下、光損傷した皮膚、又は皮膚伸展線条（ストレッチマーク）を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、皮膚の状態を含む。いくつかの実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚ディボット、窪んだ頬、窪んだこめかみ、薄い唇、後眼窩欠陥、顔面の折り目、又は皺であることができる。

【0218】

いくつかの実施形態では、開示される治療方法は、オーグメンテーション、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠陥又は不完全性の治療である。いくつかの実施形態では、開示される治療方法は、顔面のオーグメンテーション、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠陥の治療、又は顔面の不完全性の治療である。

【0219】

いくつかの実施形態では、提供される治療方法は、レーザー治療前後又はレーザー治療中に本開示の組成物を投与すること、皮膚剥離前後又は皮膚剥離中に本開示の組成物を投与すること、放射線治療前後又は放射線治療中に本開示の組成物を投与することの１以上を含む。いくつかの実施形態では、提供される治療方法は、火傷、限定するものではないが、任意のタイプの火傷（例えば、熱傷、日焼け、火による火傷、熱水火傷、放射線熱傷、化学火傷など）を含む火傷を治療するために本開示の組成物を投与することの１以上を含む。いくつかの実施形態では、提供される治療方法は、限定するものではないが、第１度、第２度、又は第３度の火傷を含む火傷を治療するために、本開示の組成物を投与することの１以上を含む。いくつかの実施形態では、提供される治療方法は、加齢による皮膚状態を治療するための本開示の組成物を投与することの１以上を含む。

【0220】

いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、甲状腺ホルモン誘発性心筋肥大を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、腱の断裂、損傷、又は裂傷を含む。いくつかの実施形態では、腱は、小円筋腱、棘下筋腱、棘上筋腱、肩甲下筋腱、三角筋腱、二頭筋腱、三頭筋腱、腕橈骨筋腱、回外筋腱、橈側手根屈筋腱、尺側手根屈筋腱、長橈側手根伸筋腱、短橈側手根伸筋腱、腸腰筋腱、内閉鎖筋腱、長内転筋腱、腓骨又はマグナス筋腱、大殿筋又は中殿筋腱、四頭筋腱、膝蓋腱、膝窩腱、縫工筋腱、腓腹筋腱、アキレス腱、ヒラメ筋腱、前脛骨筋腱、長腓骨筋腱、長指屈筋腱、骨間筋腱、深指屈筋腱、小趾外転筋腱、母指対立筋腱、長母指屈筋腱、母指伸筋又は外転筋腱（Ｅｘｔｅｎｓｏｒ ｏｒ ａｂｄｕｃｔｏｒ ｐｏｌｌｉｃｉｓ ｔｅｎｄｏｎｓ）、長母趾屈筋腱、短趾屈筋腱、中様筋腱、母趾外転筋腱、長趾屈筋腱、小趾外転筋腱、眼筋腱、眼瞼挙筋腱、咬筋腱、側頭筋腱、僧帽筋腱、胸鎖乳突筋腱、頭半棘筋又は頭板状筋腱、顎舌骨筋又は甲状舌骨筋腱、胸骨舌骨筋腱、腹直筋腱、外腹斜筋腱、腹横筋腱、広背筋腱、及び脊柱起立筋腱から選択される。幾つかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、ウェルナー症候群を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、糖尿病性の皮膚完全性の低下を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、関節炎を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、関節リウマチを含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、腫瘍の進行又は腫瘍の成長を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、心機能の低下を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、エーラス・ダンロス症候群を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、腹部大動脈瘤を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、創傷を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、皮膚又は結合組織の疾患を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、軟骨の疾患を含む。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、再発性多発軟骨炎、ティーツェ症候群、蜂巣炎、エーラス・ダンロス症候群、ケロイド（にきびケロイドを含む）、ムコポリサダリドーシスＩ（ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｄｄａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ）、壊死性障害（環状肉芽腫、リポイド類壊死症を含む）、骨形成不全症、皮膚弛緩症、皮膚筋炎、デュピュイトラン拘縮、ホモシスチン尿症、エリテマトーデス（皮膚、円板状、深在性、全身性、及び腎炎を含む）、マルファン症候群、混合性結合組織疾患、ムチン沈着症（濾胞性を含む）、ムコ多糖症（Ｉ、ＩＩ、ＵＵ、ＩＶ、ＩＶ、及びＶＩＩ）、粘液水腫、成年性浮腫性硬化症及び滑液嚢腫、結合組織新生物、ヌーナン症候群、骨斑紋症、硬結性紅斑を含む脂肪織炎、結節性非化膿性及び腹膜（ｎｏｄｕｌａｒ ｎｏｎｓｕｐｐｕｒａｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）、陰茎硬化症、弾性線維性仮性黄色腫、関節炎を含むリウマチ性疾患（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、カプラン症候群、フェルティ症候群、リウマトイド結節、強直性脊椎炎、及びスチル病を含む）、骨増殖症、リウマチ性多発筋痛症、限局性強皮症、及び全身性強皮症（ＣＲＥＳＴ症候群）から選択される。いくつかの実施形態では、障害、疾患、又は状態は、好酸球性血管リンパ球増殖症；瘢痕（ｃｉｃａｔｉｘ）（肥大を含む）；皮膚瘻、皮膚弛緩症（ｃｕｉｓ ｌａｘａ）；先端皮膚炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎（アレルギー性接触、光アレルギー性、ウルシ皮膚炎）を含む皮膚炎、刺激性皮膚炎（光毒性、おむつ皮膚炎）、職業性皮膚炎；剥離性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、薬疹（例えば、中毒性表皮壊死症、結節性紅斑、血清病）、湿疹（異汗性湿疹、間擦疹、神経皮膚炎、及び放射線皮膚炎を含む）；皮膚筋炎；紅斑（慢性遊走性、硬結性、伝染性、多形性（スティーブンス・ジョンソン症候群）、及び結節性（Ｓｗｅｅｔ症候群）を含む）；発疹（突発性を含む）；顔面皮膚疾患（ざ瘡様発疹（ケロイド、酒さ、尋常性、及びＦａｖｒｅ－Ｒａｃｏｕｃｈｏｔ症候群）を含む）；足部皮膚疾患（足部白癬を含む）；手掌皮膚疾患；角化棘細胞腫；角化症（肥厚を含む）、真珠腫（中耳を含む）、魚鱗癬（先天性魚鱗癬様紅皮症、表皮溶解性角化症、葉状魚鱗癬、尋常性魚鱗癬、Ｘ連鎖魚鱗癬、及びシェーグレン・ラルソン症候群を含む）、膿漏性角皮症、掌蹠角化症、毛包角化症、脂漏性角化症、錯角化症、及び汗孔角化症；脚部皮膚疾患、肥満細胞症（色素性蕁麻疹）、類壊死症（環状肉芽腫及び脂肪類壊死症）、光線過敏症（光アレルギー性又は光毒性皮膚炎）、種痘様水疱症、日光皮膚炎、及び色素性乾皮症）；色素異常症（銀皮症、色素増加症、メラニン沈着症、黒色表皮腫、黒子、ポイツ・ジェガース症候群、色素脱失、白皮症、まだら症、白斑、色素失調症、色素性蕁麻疹、色素性乾皮症、痒疹を含む）；そう痒症（肛門及び外陰部を含む）；膿皮症（膿瘡及び壊疽性膿皮症を含む）；頭皮疾患；成年性浮腫性硬化症；新生児強皮症；皮膚付属器疾患（毛髪障害（脱毛症、毛包炎、多毛、多毛症、捻転毛髪症候群）を含む）、爪疾患（爪膝蓋骨症候群、陥入爪又は爪形成異常、爪真菌症、爪囲炎）、皮脂腺疾患（鼻瘤、新生物）、汗腺疾患（汗腺炎、多汗症、乏汗症、深在性、フォックス・フォアダイス病、新生物）；遺伝性皮膚疾患（アルフィニズム（ａｌｆｉｎｉｓｍ）、皮膚弛緩症、良性家族性天疱瘡、ポルフィリン症、先端皮膚炎、外胚葉異形成症、エリス・ファンクレフェルト症候群、部分皮膚低形成、エーラス・ダンロス症候群、表皮水疱症、魚鱗癬を含む）；伝染性皮膚疾患（皮膚真菌症、ブラストミセス症、カンジダ症、黒色分芽菌症、マズラ菌症、パラコクシジオイデス症、スポロトリクム症、白癬症を含む）；細菌性皮膚疾患（例えば、顔面頸部放線菌症、細菌性血管腫、膿瘡、丹毒、慢性遊走性紅斑、紅色陰癬、鼠径肉芽腫、化膿性汗腺炎、マズラ菌症、爪囲炎、ピンタ、鼻硬化症、ブドウ球菌皮膚感染症（せつ腫症、癰、膿痂疹、熱傷様皮膚症候群）、皮膚梅毒、皮膚結核、イチゴ腫）；皮膚寄生虫症（幼虫移行症、リーシュマニア症、及び疥癬を含む）；ウイルス性皮膚疾患（伝染性紅斑、突発性発疹、単純ヘルペス、伝染性軟属腫、いぼ）から選択される。

【0221】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法のいずれかで使用される組成物の量は、典型的には、治療有効量である。本明細書においては、用語「治療有効量」は、「有効量」、「治療有効用量」、及び／又は「有効用量」と同義であり、それを必要とする患者の、予想される生物学的、美容的、又は臨床応答を引き起こす組成物量を意味する。非限定的な例として、有効量は、本明細書に開示される臨床的及び／又は美容的手段のうちの１以上を達成するのに十分な量である。開示された方法の特定用途のために投与される適切な有効量は、本明細書に提供される指針を使用して、当業者によって決定され得る。例えば、有効量は、本明細書に記載されるように、あらゆるインビトロ及びインビボアッセイから外挿することができる。当業者は、個体の状態を、治療過程を通してモニターすることができ、投与される本明細書に開示の組成物の有効量を、それに応じて調整することができることを認識する。

【0222】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の量は、限定するものではないが、少なくとも０．００１ｇ、又は少なくとも０．００２ｇ、又は少なくとも０．００３ｇ、又は少なくとも０．００４ｇ、又は少なくとも０．００５ｇ、又は少なくとも０．００６ｇ、又は少なくとも０．００７ｇ、又は少なくとも０．００８ｇ、又は少なくとも０．００９ｇ、又は少なくとも０．０１ｇ、又は少なくとも０．０２ｇ、又は少なくとも０．０３ｇ、又は少なくとも０．０４ｇ、又は少なくとも０．０５ｇ、又は少なくとも０．０６ｇ、又は少なくとも０．０７ｇ、又は少なくとも０．０８ｇ、又は少なくとも０．０９ｇ、又は少なくとも０．１ｇ、又は少なくとも０．２ｇ、又は少なくとも０．３ｇ、又は少なくとも０．４ｇ、又は少なくとも０．５ｇ、又は少なくとも０．６ｇ、又は少なくとも０．７ｇ、又は少なくとも０．８ｇ、又は少なくとも０．９ｇ、又は少なくとも１ｇ、又は少なくとも２ｇ、又は少なくとも３ｇ、又は少なくとも４ｇ、又は少なくとも５ｇ、又は少なくとも６ｇ、又は少なくとも７ｇ、又は少なくとも８ｇ、又は少なくとも９ｇ、又は少なくとも１０ｇ、又は少なくとも１１ｇ、又は少なくとも１２ｇ、又は少なくとも１３ｇ、又は少なくとも１４ｇ、又は少なくとも１５ｇ、又は少なくとも２０ｇ、又は少なくとも２５ｇ、又は少なくとも３０ｇ、又は少なくとも３５ｇ、又は少なくとも４０ｇ、又は少なくとも４５ｇ、又は少なくとも５０ｇ、又は少なくとも５５ｇ、又は少なくとも６０ｇ、又は少なくとも６５ｇ、又は少なくとも７０ｇ、又は少なくとも７５ｇ、又は少なくとも８０ｇ、又は少なくとも８５ｇ、又は少なくとも９０ｇ、又は少なくとも９５ｇ、又は少なくとも１００ｇである。

【0223】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の量は、限定するものではないが、最大０．００１ｇ、又は最大０．００２ｇ、又は最大０．００３ｇ、又は最大０．００４ｇ、又は最大０．００５ｇ、又は最大０．００６ｇ、又は最大０．００７ｇ、又は最大０．００８ｇ、又は最大０．００９ｇ、又は最大０．０１ｇ、又は最大０．０２ｇ、又は最大０．０３ｇ、又は最大０．０４ｇ、又は最大０．０５ｇ、又は最大０．０６ｇ、又は最大０．０７ｇ、又は最大０．０８ｇ、又は最大０．０９ｇ、又は最大０．１ｇ、又は最大０．２ｇ、又は最大０．３ｇ、又は最大０．４ｇ、又は最大０．５ｇ、又は最大０．６ｇ、又は最大０．７ｇ、又は最大０．８ｇ、又は最大０．９ｇ、又は最大１ｇ、又は最大２ｇ、又は最大３ｇ、又は最大４ｇ、又は最大５ｇ、又は最大６ｇ、又は最大７ｇ、又は最大８ｇ、又は最大９ｇ、又は最大１０ｇ、又は最大１１ｇ、又は最大１２ｇ、又は最大１３ｇ、又は最大１４ｇ、又は最大１５ｇ、又は最大２０ｇ、又は最大２５ｇ、又は最大３０ｇ、又は最大３５ｇ、又は最大４０ｇ、又は最大４５ｇ、又は最大５０ｇ、又は最大５５ｇ、又は最大６０ｇ、又は最大６５ｇ、又は最大７０ｇ、又は最大７５ｇ、又は最大８０ｇ、又は最大８５ｇ、又は最大９０ｇ、又は最大９５ｇ、又は最大１００ｇである。

【0224】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の量は、限定するものではないが、約０．００１ｇ、又は約０．００２ｇ、又は約０．００３ｇ、又は約０．００４ｇ、又は約０．００５ｇ、又は約０．００６ｇ、又は約０．００７ｇ、又は約０．００８ｇ、又は約０．００９ｇ、又は約０．０１ｇ、又は約０．０２ｇ、又は約０．０３ｇ、又は約０．０４ｇ、又は約０．０５ｇ、又は約０．０６ｇ、又は約０．０７ｇ、又は約０．０８ｇ、又は約０．０９ｇ、又は約０．１ｇ、又は約０．２ｇ、又は約０．３ｇ、又は約０．４ｇ、又は約０．５ｇ、又は約０．６ｇ、又は約０．７ｇ、又は約０．８ｇ、又は約０．９ｇ、又は約１ｇ、又は約２ｇ、又は約３ｇ、又は約４ｇ、又は約５ｇ、又は約６ｇ、又は約７ｇ、又は約８ｇ、又は約９ｇ、又は約１０ｇ、又は約１１ｇ、又は約１２ｇ、又は約１３ｇ、又は約１４ｇ、又は約１５ｇ、又は約２０ｇ、又は約２５ｇ、又は約３０ｇ、又は約３５ｇ、又は約４０ｇ、又は約４５ｇ、又は約５０ｇ、又は約５５ｇ、又は約６０ｇ、又は約６５ｇ、又は約７０ｇ、又は約７５ｇ、又は約８０ｇ、又は約８５ｇ、又は約９０ｇ、又は約９５ｇ、又は約１００ｇである。

【0225】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の量は、限定するものではないが、０．００１ｇ～０．０１ｇ、又は０．０１ｇ～０．１ｇ、又は０．１ｇ～１ｇ、又は１ｇ～１０ｇ、又は１０ｇ～２０ｇ、又は２０ｇ～３０ｇ、又は３０ｇ～４０ｇ、又は４０ｇ～５０ｇ、又は５０ｇ～６０ｇ、又は６０ｇ～７０ｇ、又は７０ｇ～８０ｇ、又は８０ｇ～９０ｇ、又は９０ｇ～１００ｇである。

【0226】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の体積は、限定するものではないが、少なくとも０．０１ｍＬ、又は少なくとも０．０２ｍＬ、又は少なくとも０．０３ｍＬ、又は少なくとも０．０４ｍＬ、又は少なくとも０．０５ｍＬ、又は少なくとも０．０６ｍＬ、又は少なくとも０．０７ｍＬ、又は少なくとも０．０８ｍＬ、又は少なくとも０．０９ｍＬ、又は少なくとも０．１０ｍＬ、又は少なくとも０．１５ｍＬ、又は少なくとも０．２０ｍＬ、又は少なくとも０．２５ｍＬ、又は少なくとも０．３０ｍＬ、又は少なくとも０．３５ｍＬ、又は少なくとも０．４０ｍＬ、又は少なくとも０．４５ｍＬ、又は少なくとも０．５０ｍＬ、又は少なくとも０．５５ｍＬ、又は少なくとも０．６０ｍＬ、又は少なくとも０．６５ｍＬ、又は少なくとも０．７０ｍＬ、又は少なくとも０．７５ｍＬ、又は少なくとも０．８０ｍＬ、又は少なくとも０．８５ｍＬ、又は少なくとも０．９０ｍＬ、又は少なくとも０．９５ｍＬ、又は少なくとも１ｍＬ、又は少なくとも２ｍＬ、又は少なくとも３ｍＬ、又は少なくとも４ｍＬ、又は少なくとも５ｍＬ、又は少なくとも６ｍＬ、又は少なくとも７ｍＬ、又は少なくとも８ｍＬ、又は少なくとも９ｍＬ、又は少なくとも１０ｍＬ、又は少なくとも１５ｍＬ、又は少なくとも２０ｍＬ、又は少なくとも２５ｍＬ、又は少なくとも３０ｍＬ、又は少なくとも３５ｍＬ、又は少なくとも４０ｍＬ、又は少なくとも４５ｍＬ、又は少なくとも５０ｍＬ、又は少なくとも５５ｍＬ、又は少なくとも６０ｍＬ、又は少なくとも６５ｍＬ、又は少なくとも７０ｍＬ、又は少なくとも７５ｍＬ、又は少なくとも８０ｍＬ、又は少なくとも８５ｍＬ、又は少なくとも９０ｍＬ、又は少なくとも９５ｍＬ、又は少なくとも１００ｍＬ、又は少なくとも１１０ｍＬ、又は少なくとも１２０ｍＬ、又は少なくとも１３０ｍＬ、又は少なくとも１４０ｍＬ、又は少なくとも１５０ｍＬ、又は少なくとも１６０ｍＬ、又は少なくとも１７０ｍＬ、又は少なくとも１８０ｍＬ、又は少なくとも１９０ｍＬ、又は少なくとも２００ｍＬ、又は少なくとも２１０ｍＬ、又は少なくとも２２０ｍＬ、又は少なくとも２３０ｍＬ、又は少なくとも２４０ｍＬ、又は少なくとも２５０ｍＬ、又は少なくとも２６０ｍＬ、又は少なくとも２７０ｍＬ、又は少なくとも２８０ｍＬ、又は少なくとも２９０ｍＬ、又は少なくとも３００ｍＬ、又は少なくとも３２５ｍＬ、又は少なくとも３５０ｍＬ、又は少なくとも３７５ｍＬ、又は少なくとも４００ｍＬ、又は少なくとも４２５ｍＬ、又は少なくとも４５０ｍＬ、又は少なくとも４７５ｍＬ、又は少なくとも５００ｍＬ、又は少なくとも５２５ｍＬ、又は少なくとも５５０ｍＬ、又は少なくとも５７５ｍＬ、又は少なくとも６００ｍＬ、又は少なくとも６２５ｍＬ、又は少なくとも６５０ｍＬ、又は少なくとも６７５ｍＬ、又は少なくとも７００ｍＬ、又は少なくとも７２５ｍＬ、又は少なくとも７５０ｍＬ、又は少なくとも７７５ｍＬ、又は少なくとも８００ｍＬ、又は少なくとも８２５ｍＬ、又は少なくとも８５０ｍＬ、又は少なくとも８７５ｍＬ、又は少なくとも９００ｍＬ、又は少なくとも９２５ｍＬ、又は少なくとも９５０ｍＬ、又は少なくとも９７５ｍＬ、又は少なくとも１０００ｍＬである。

【0227】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の体積は、限定するものではないが、最大０．０１ｍＬ、又は最大０．０２ｍＬ、又は最大０．０３ｍＬ、又は最大０．０４ｍＬ、又は最大０．０５ｍＬ、又は最大０．０６ｍＬ、又は最大０．０７ｍＬ、又は最大０．０８ｍＬ、又は最大０．０９ｍＬ、又は最大０．１０ｍＬ、又は最大０．１５ｍＬ、又は最大０．２０ｍＬ、又は最大０．２５ｍＬ、又は最大０．３０ｍＬ、又は最大０．３５ｍＬ、又は最大０．４０ｍＬ、又は最大０．４５ｍＬ、又は最大０．５０ｍＬ、又は最大０．５５ｍＬ、又は最大０．６０ｍＬ、又は最大０．６５ｍＬ、又は最大０．７０ｍＬ、又は最大０．７５ｍＬ、又は最大０．８０ｍＬ、又は最大０．８５ｍＬ、又は最大０．９０ｍＬ、又は最大０．９５ｍＬ、又は最大１ｍＬ、又は最大２ｍＬ、又は最大３ｍＬ、又は最大４ｍＬ、又は最大５ｍＬ、又は最大６ｍＬ、又は最大７ｍＬ、又は最大８ｍＬ、又は最大９ｍＬ、又は最大１０ｍＬ、又は最大１５ｍＬ、又は最大２０ｍＬ、又は最大２５ｍＬ、又は最大３０ｍＬ、又は最大３５ｍＬ、又は最大４０ｍＬ、又は最大４５ｍＬ、又は最大５０ｍＬ、又は最大５５ｍＬ、又は最大６０ｍＬ、又は最大６５ｍＬ、又は最大７０ｍＬ、又は最大７５ｍＬ、又は最大８０ｍＬ、又は最大８５ｍＬ、又は最大９０ｍＬ、又は最大９５ｍＬ、又は最大１００ｍＬ、又は最大１１０ｍＬ、又は最大１２０ｍＬ、又は最大１３０ｍＬ、又は最大１４０ｍＬ、又は最大１５０ｍＬ、又は最大１６０ｍＬ、又は最大１７０ｍＬ、又は最大１８０ｍＬ、又は最大１９０ｍＬ、又は最大２００ｍＬ、又は最大２１０ｍＬ、又は最大２２０ｍＬ、又は最大２３０ｍＬ、又は最大２４０ｍＬ、又は最大２５０ｍＬ、又は最大２６０ｍＬ、又は最大２７０ｍＬ、又は最大２８０ｍＬ、又は最大２９０ｍＬ、又は最大３００ｍＬ、又は最大３２５ｍＬ、又は最大３５０ｍＬ、又は最大３７５ｍＬ、又は最大４００ｍＬ、又は最大４２５ｍＬ、又は最大４５０ｍＬ、又は最大４７５ｍＬ、又は最大５００ｍＬ、又は最大５２５ｍＬ、又は最大５５０ｍＬ、又は最大５７５ｍＬ、又は最大６００ｍＬ、又は最大６２５ｍＬ、又は最大６５０ｍＬ、又は最大６７５ｍＬ、又は最大７００ｍＬ、又は最大７２５ｍＬ、又は最大７５０ｍＬ、又は最大７７５ｍＬ、又は最大８００ｍＬ、又は最大８２５ｍＬ、又は最大８５０ｍＬ、又は最大８７５ｍＬ、又は最大９００ｍＬ、又は最大９２５ｍＬ、又は最大９５０ｍＬ、又は最大９７５ｍＬ、又は最大１０００ｍＬである。

【0228】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の体積は、限定するものではないが、約０．０１ｍＬ、又は約０．０２ｍＬ、又は約０．０３ｍＬ、又は約０．０４ｍＬ、又は約０．０５ｍＬ、又は約０．０６ｍＬ、又は約０．０７ｍＬ、又は約０．０８ｍＬ、又は約０．０９ｍＬ、又は約０．１０ｍＬ、又は約０．１５ｍＬ、又は約０．２０ｍＬ、又は約０．２５ｍＬ、又は約０．３０ｍＬ、又は約０．３５ｍＬ、又は約０．４０ｍＬ、又は約０．４５ｍＬ、又は約０．５０ｍＬ、又は約０．５５ｍＬ、又は約０．６０ｍＬ、又は約０．６５ｍＬ、又は約０．７０ｍＬ、又は約０．７５ｍＬ、又は約０．８０ｍＬ、又は約０．８５ｍＬ、又は約０．９０ｍＬ、又は約０．９５ｍＬ、又は約１ｍＬ、又は約２ｍＬ、又は約３ｍＬ、又は約４ｍＬ、又は約５ｍＬ、又は約６ｍＬ、又は約７ｍＬ、又は約８ｍＬ、又は約９ｍＬ、又は約１０ｍＬ、又は約１１ｍＬ、又は約１２ｍＬ、又は約１３ｍＬ、又は約１４ｍＬ、又は約１５ｍＬ、又は約１６ｍＬ、又は約１７ｍＬ、又は約１８ｍＬ、又は約１９ｍＬ、又は約２０ｍＬ、又は約２１ｍＬ、又は約２２ｍＬ、又は約２３ｍＬ、又は約２４ｍＬ、又は約２５ｍＬ、又は約２６ｍＬ、又は約２７ｍＬ、又は約２８ｍＬ、又は約３０ｍＬ、又は約３５ｍＬ、又は約３６ｍＬ、又は約３７ｍＬ、又は約３８ｍＬ、又は約３９ｍＬ、又は約４０ｍＬ、又は約４１ｍＬ、又は約４２ｍＬ、又は約４３ｍＬ、又は約４４ｍＬ、又は約４５ｍＬ、又は約４６ｍＬ、又は約４７ｍＬ、又は約４８ｍＬ、又は約４９ｍＬ、又は約５０ｍＬ、又は約５１ｍＬ、又は約５２ｍＬ、又は約５３ｍＬ、又は約５４ｍＬ、又は約５５ｍＬ、又は約５６ｍＬ、又は約５７ｍＬ、又は約５８ｍＬ、又は約５９ｍＬ、又は約６０ｍＬ、又は約６１ｍＬ、又は約６２ｍＬ、又は約６３ｍＬ、又は約６４ｍＬ、又は約６５ｍＬ、又は約６６ｍＬ、又は約６７ｍＬ、又は約６８ｍＬ、又は約６９ｍＬ、又は約７０ｍＬ、又は約７１ｍＬ、又は約７２ｍＬ、又は約７３ｍＬ、又は約７４ｍＬ、又は約７５ｍＬ、又は約７６ｍＬ、又は約７７ｍＬ、又は約７８ｍＬ、又は約７９ｍＬ、又は約８０ｍＬ、又は約８１ｍＬ、又は約８２ｍＬ、又は約８３ｍＬ、又は約８４ｍＬ、又は約８５ｍＬ、又は約８６ｍＬ、又は約８７ｍＬ、又は約８８ｍＬ、又は約８９ｍＬ、又は約９０ｍＬ、又は約９１ｍＬ、又は約９２ｍＬ、又は約９３ｍＬ、又は約９４ｍＬ、又は約９５ｍＬ、又は約９６ｍＬ、又は約９７ｍＬ、又は約９８ｍＬ、又は約９９ｍＬ、又は約１００ｍＬ、又は約１１０ｍＬ、又は約１２０ｍＬ、又は約１３０ｍＬ、又は約１４０ｍＬ、又は約１５０ｍＬ、又は約１６０ｍＬ、又は約１７０ｍＬ、又は約１８０ｍＬ、又は約１９０ｍＬ、又は約２００ｍＬ、又は約２１０ｍＬ、又は約２２０ｍＬ、又は約２３０ｍＬ、又は約２４０ｍＬ、又は約２５０ｍＬ、又は約２６０ｍＬ、又は約２７０ｍＬ、又は約２８０ｍＬ、又は約２９０ｍＬ、又は約３００ｍＬ、又は約３１０ｍＬ、又は約３２０ｍＬ、又は約３３０ｍＬ、又は約３４０ｍＬ、又は約３５０ｍＬ、又は約３６０ｍＬ、又は約３７０ｍＬ、又は約３８０ｍＬ、又は約３９０ｍＬ、又は約４００ｍＬ、又は約４１０ｍＬ、又は約４２０ｍＬ、又は約４３０ｍＬ、又は約４４０ｍＬ、又は約４５０ｍＬ、又は約４６０ｍＬ、又は約４７０ｍＬ、又は約４８０ｍＬ、又は約４９０ｍＬ、又は約５００ｍＬ、又は約５１０ｍＬ、又は約５２０ｍＬ、又は約５３０ｍＬ、又は約５４０ｍＬ、又は約５５０ｍＬ、又は約５６０ｍＬ、又は約５７０ｍＬ、又は約５８０ｍＬ、又は約５９０ｍＬ、又は約６００ｍＬ、又は約６１０ｍＬ、又は約６２０ｍＬ、又は約６３０ｍＬ、又は約６４０ｍＬ、又は約６５０ｍＬ、又は約６６０ｍＬ、又は約６７０ｍＬ、又は約６８０ｍＬ、又は約６９０ｍＬ、又は約７００ｍＬ、又は約７１０ｍＬ、又は約７２０ｍＬ、又は約７３０ｍＬ、又は約７４０ｍＬ、又は約７５０ｍＬ、又は約７６０ｍＬ、又は約７７０ｍＬ、又は約７８０ｍＬ、又は約７９０ｍＬ、又は約８００ｍＬ、又は約８１０ｍＬ、又は約８２０ｍＬ、又は約８３０ｍＬ、又は約８４０ｍＬ、又は約８５０ｍＬ、又は約８６０ｍＬ、又は約８７０ｍＬ、又は約８８０ｍＬ、又は約８９０ｍＬ、又は約９００ｍＬ、又は約９１０ｍＬ、又は約９２０ｍＬ、又は約９３０ｍＬ、又は約９４０ｍＬ、又は約９５０ｍＬ、又は約９６０ｍＬ、又は約９７０ｍＬ、又は約９８０ｍＬ、又は約９９０ｍＬ、又は約１０００ｍＬである。

【0229】

いくつかの実施形態では、投与される組成物の体積は、限定するものではないが、０．０１ｍＬ～０．１０ｍＬ、又は０．１０ｍＬ～１ｍＬ、又は１ｍＬ～１０ｍＬ、又は１０ｍＬ～１００ｍＬ、又は５０ｍＬ～１００ｍＬ、又は１００ｍＬ～１５０ｍＬ、又は１５０ｍＬ～２００ｍＬ、又は２００ｍＬ～２５０ｍＬ、又は２５０ｍＬ～３００ｍＬ、又は３００ｍＬ～３５０ｍＬ、又は３５０ｍＬ～４００ｍＬ、又は４００ｍＬ～４５０ｍＬ、又は４５０ｍＬ～５００ｍＬ、又は５００ｍＬ～５５０ｍＬ、又は５５０ｍＬ～６００ｍＬ、又は６００ｍＬ～６５０ｍＬ、又は６５０ｍＬ～７００ｍＬ、又は７００ｍＬ～７５０ｍＬ、又は７５０ｍＬ～８００ｍＬ、又は８００ｍＬ～８５０ｍＬ、又は８５０ｍＬ～９００ｍＬ、又は９００ｍＬ～９５０ｍＬ、又は９５０ｍＬ～１０００ｍＬ、又は１ｍＬ～２５ｍＬ、又は１ｍＬ～５０ｍＬ、又は１ｍＬ～７５ｍＬ、又は１ｍＬ～１００ｍＬ、又は１０ｍＬ～２５ｍＬ、又は１０ｍＬ ５０ｍＬ、又は１０ｍＬ～７５ｍＬ、又は１００ｍＬ～２５０ｍＬ、又は１００ｍＬ～５００ｍＬ、又は１００ｍＬ～７５０ｍＬ、又は１００ｍＬ～１０００ｍＬである。

【0230】

コラーゲン刺激組成物としての絹フィブロインタンパク質断片
カイコＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの生絹は、絹フィブロイン（約７５％）とセリシン（約２５％）の２種類の主要タンパク質で構成される。絹フィブロインは、剛性と強度を提供する半結晶構造を有する繊維状タンパク質である。本明細書においては、用語「絹フィブロイン」は、約３７万Ｄａの重量平均分子量を有するＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの繭の繊維を意味する。カイコの粗繊維は、フィブロインの二重の糸からなる。これらの二重繊維を互いに保持する接着物質がセリシンである。絹フィブロインは、重量平均分子量が約３５万Ｄａの重鎖（Ｈ鎖）と、重量平均分子量が約２５，０００Ｄａの軽鎖（Ｌ鎖）から構成される。

【0231】

これらのフィブリル絹フィブロインの、水溶性絹フィブロインタンパク質断片への変換は、濃縮重塩（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｈｅａｖｙ ｓａｌｔ）（例えば、８～１０Ｍの臭化リチウム）の添加を必要とし、これが、フィブロインタンパク質を水に対して不溶性にする、分子間及び分子内のイオン結合及び水素結合に干渉する。絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の製造方法、及び／又はその組成物は知られており、例えば、米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５４５，３６９号明細書、及び同第１０，１６６，１７７号明細書に記載されている。

【0232】

本明細書では、未処理の未精製、部分精製、又は精製されたカイコ繊維を、中性臭化リチウム塩で溶解することによって得られる絹タンパク質断片（ＳＰＦ）混合溶液が提供される。未処理のカイコ繊維は、セリシンを除去し、断片混合物の所望の重量平均分子量（Ｍ_Ｗ）及び多分散性（ＰＤ）を達成するために、選択された温度及び他の条件下で処理される。選択した方法のパラメータは、使用目的に応じて異なる最終絹タンパク質断片の特性を達成するように変更することができる。得られる最終断片溶液は、プロセス汚染物質のＰＰＭから検出不能なレベル、医薬、医療、消費者化粧品市場で許容されるレベルを有する絹タンパク質断片と水である。溶液中の絹タンパク質断片の濃度、サイズ、及び多分散性は、所望の用途及び性能要件に応じて更に変更することができる。

【0233】

実施形態では、以下の工程にしたがって、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法に有用な絹タンパク質断片が調製される。即ち、カイコＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉから絹繭の断片を形成する工程と；Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液中、約１００℃で約６０分間、その断片を抽出する工程（ここで、水の体積は約０．４×未加工の絹重量と等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の量は約０．８４８×絹フィブロイン抽出物を形成させるための断片重量である）と；濯ぎ水の体積で、１濯ぎ当たり約６０℃で約２０分間、絹フィブロイン抽出物を３回濯ぐ工程と（各サイクルについての濯ぎ水は約０．２Ｌ×断片重量に等しい）；過剰の水を、絹フィブロイン抽出物から除去する工程と；絹フィブロイン抽出物を乾燥する工程と；乾燥絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液に溶解する工程と（ＬｉＢｒ溶液を最初に約１００℃に加熱して絹及びＬｉＢｒ溶液を作製し、これを維持する）；絹及びＬｉＢｒ溶液を、乾燥オーブン中に約１００℃で約６０分間置いて完全な溶解、並びに所望の分子量及び多分散性を有する混合物への天然の絹タンパク質構造の更なる断片化を達成する工程と；その溶液を濾過してカイコから残留する残骸を除去する工程と；その溶液を水で希釈して１．０重量％絹溶液を得る工程と、接線流濾過（ＴＦＦ）を使用してその溶液から溶媒を除去する工程とを含む。一実施形態では、絹溶液を精製するために１０ｋＤａの膜を利用し、最終的な所望の絹と水の比をもたらす。次いで、ＴＦＦを使用して、絹溶液を、水中２．０重量％の濃度の絹に更に濃縮することができる。

【0234】

何ら特定の理論に拘束されることを望むものではないが、抽出（即ち、時間及び温度）、ＬｉＢｒ（即ち、絹フィブロイン抽出物に添加する又はその逆の場合のＬｉＢｒ溶液の温度）及び溶解（即ち、時間及び温度）パラメータを変動させると、異なる粘度、均一性及び色を有する溶媒及び絹溶液がもたらされる。また、何ら特定の理論に拘束されることを望むものではないが、抽出のための温度を上昇させること、抽出時間を延長すること、絹を溶解させる場合、出現時及び長期に亘って、より高い温度のＬｉＢｒ溶液を使用すること（例えば、ここで示すようなオーブン中、又は代替の熱源）の温度での時間を延ばすことは、いずれも、粘性がより低く、より均一な溶媒及び絹溶液をもたらす。

【0235】

実施形態では、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される重量平均を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶液は、以下の工程にしたがって調製される：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間添加することによって絹源を脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約６０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約１４０℃のオーブンで少なくとも１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹タンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、前記水溶液は、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する断片を含み、絹フィブロインベースのタンパク質断片の前記水溶液は、約１．５～約３．０の多分散性を含む。前記方法は、溶解工程の前に絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は凍結乾燥することができる。

【0236】

実施形態では、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶液は、以下の工程にしたがって調製される：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間添加することによって脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約８０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約６０℃～約１００℃のオーブンで少なくとも１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残留物を含み、絹タンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残留物を含み、絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する断片を含み、絹フィブロインベースのタンパク質断片の前記水溶液は、約１．５～約３．０の多分散性を含む。前記方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。

【0237】

いくつかの実施形態では、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶液は、以下の工程にしたがって調製される：絹源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に、約３０分間の処理時間添加することによって脱ガムする；溶液からセリシンを除去して、検出不能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を生成する；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出させる；臭化リチウム溶液に絹フィブロイン抽出物を入れるときの開始温度約８０℃～約１４０℃を有する臭化リチウムの溶液に絹フィブロイン抽出物を溶解する；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を約６０℃～約１００℃のオーブンで少なくとも１時間維持する；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去する；絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を生成する。ここで、絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの臭化リチウム残留物、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの炭酸ナトリウム残留物、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する断片を含み、絹フィブロインベースのタンパク質断片の前記水溶液は、約１．５～約３．０の多分散性を含む。前記方法は、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを更に含むことができる。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定したとき、３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残留物を含み得る。絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定したとき、１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残留物を含み得る。

【0238】

実施形態では、溶液中の絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、溶液中の絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａから選択される重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、溶液中の絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０から選択される多分散性を有する。

【0239】

本明細書においては、用語「実質的にセリシンを含まない」又は「実質的にセリシンを欠いている」は、セリシンタンパク質の大部分が除去された絹繊維を意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約１０．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約９．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約８．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約７．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約６．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約５．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０５重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．１重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．５重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約１．０重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約１．５重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約２．０重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約２．５重量％～約４．０重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０１重量％～約０．１重量％のセリシンを有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．１重量％未満のセリシン含量を有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロインは、約０．０５重量％未満のセリシン含量を有する絹フィブロインを意味する。実施形態では、絹源が、沸騰している（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に約３０分間～約６０分間の処理時間添加されるときに、約２６．０重量％～約３１．０重量％の脱ガム損失（ｄｅｇｕｍｍｉｎｇ ｌｏｓｓ）が得られる。

【0240】

以下は、本開示の絹溶液の調製における及び調製のための種々のパラメータの好適な範囲の非限定的な例である。本開示の絹溶液は、これらのパラメータの１以上（必ずしも全てを含んでいなくてもよい）を含み、かかるパラメータの範囲の種々の組合せを用いて調製することができる。

【0241】

実施形態では、溶液中の絹（％）は、限定するものではないが、３０重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２５重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２０重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１９重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１８重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１７重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１６重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１５重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１４重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１３重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１２重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１１重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１０重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、９重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、８重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、７重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、５重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、４重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、３重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．９重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．８重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．７重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．６重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．４重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．３重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．２重量％未満である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．１重量％未満である。

【0242】

実施形態では、溶液中の絹（％）は、限定するものではないが、０．１重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．２重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．３重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．４重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．５重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．６重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．７重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．８重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、０．９重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、３．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、４．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、５．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、６．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、７．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、８．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、９．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１０．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１１．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１２．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１３．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１４．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１５．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１６．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１７．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１８．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、１９．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２０．０重量％超である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、２５．０重量％超である。

【0243】

実施形態では、溶液中の絹（％）は、限定するものではないが、約０．１重量％～約３０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約２５．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約２０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約１５．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約９．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約８．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約７．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約６．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約６．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約５．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約５．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約４．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約４．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約３．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約３．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約２．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約２．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約２．４重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．５重量％～約５．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．５重量％～約４．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．５重量％～約４．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．５重量％～約３．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．５重量％～約３．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．５重量％～約２．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約４．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約３．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約３．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約２．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約２．４重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約２重量％である。

【0244】

実施形態では、溶液中の絹（％）は、約２０．０重量％～約３０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約２重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約０．１重量％～約６．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約６．０重量％～約１０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約６．０重量％～約８．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約６．０重量％～約９．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１０．０重量％～約２０．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１１．０重量％～約１９．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１２．０重量％～約１８．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１３．０重量％～約１７．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１４．０重量％～約１６．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約２．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約２．４重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約３．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約３．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約４．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約４．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約５．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約５．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約６．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約６．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約７．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約７．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約８．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約８．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約９．０重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約９．５重量％である。実施形態では、溶液中の絹（％）は、約１０．０重量％である。

【0245】

実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、検出不能～３０．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、検出不能～５．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、１．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、２．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、３．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、４．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、５．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、１０．０重量％である。実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、３０．０重量％である。

【0246】

いくつかの実施形態では、本開示の絹フィブロインタンパク質ベースの断片は、貯蔵条件、絹のパーセント並びに出荷の数及び出荷条件に応じて１０日間～３年間の保管安定性を有する（即ち、水溶液中で貯蔵した場合、それらは、徐々に又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の凝集及び経時的な分子量の上昇がない）。更に、ｐＨを変化させて、絹の未成熟な折り畳み及び凝集を防止することによって、保管寿命を延長させることができる及び／又はシッピング条件を支援することができる。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～１年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～２年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、０～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～２年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、１～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～３年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、２～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、３～４年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、３～５年間である。実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は、４～５年間である。

【0247】

実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１０日間～６ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、６ヶ月～１２ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１２ヶ月～１８ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、１８ヶ月～２４ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、２４ヶ月～３０ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、３０ヶ月～３６ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、３６ヶ月～４８ヶ月である。実施形態では、本開示の組成物の安定性は、４８ヶ月～６０ヶ月である。

【0248】

実施形態では、本開示の組成物は、６ｋＤａ～１７ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１７ｋＤａ～３９ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３９ｋＤａ～８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、４０ｋＤａ～６５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１ｋＤａ～５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、５ｋＤａ～１０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、５ｋＤａ～１５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１５ｋＤａ～２０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２０ｋＤａ～２５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２５ｋＤａ～３０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３０ｋＤａ～３５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３５ｋＤａ～４０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、４０ｋＤａ～４５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、４５ｋＤａ～５０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、５０ｋＤａ～５５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、５５ｋＤａ～６０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、６０ｋＤａ～６５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、６５ｋＤａ～７０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、７０ｋＤａ～７５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、７５ｋＤａ～８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、８０ｋＤａ～８５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、８５ｋＤａ～９０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、９０ｋＤａ～９５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、９５ｋＤａ～１００ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１００ｋＤａ～１０５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１０５ｋＤａ～１１０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１１０ｋＤａ～１１５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１１５ｋＤａ～１２０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１２０ｋＤａ～１２５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１２５ｋＤａ～１３０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１３０ｋＤａ～１３５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１３５ｋＤａ～１４０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１４０ｋＤａ～１４５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１４５ｋＤａ～１５０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１５０ｋＤａ～１５５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１５５ｋＤａ～１６０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１６０ｋＤａ～１６５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１６５ｋＤａ～１７０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１７０ｋＤａ～１７５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１７５ｋＤａ～１８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１８０ｋＤａ～１８５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１８５ｋＤａ～１９０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１９０ｋＤａ～１９５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、１９５ｋＤａ～２００ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２００ｋＤａ～２０５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２０５ｋＤａ～２１０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２１０ｋＤａ～２１５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２１５ｋＤａ～２２０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２２０ｋＤａ～２２５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２２５ｋＤａ～２３０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２３０ｋＤａ～２３５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２３５ｋＤａ～２４０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２４０ｋＤａ～２４５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２４５ｋＤａ～２５０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２５０ｋＤａ～２５５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２５５ｋＤａ～２６０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２６０ｋＤａ～２６５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２６５ｋＤａ～２７０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２７０ｋＤａ～２７５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２７５ｋＤａ～２８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２８０ｋＤａ～２８５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２８５ｋＤａ～２９０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２９０ｋＤａ～２９５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、２９５ｋＤａ～３００ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３００ｋＤａ～３０５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３０５ｋＤａ～３１０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３１０ｋＤａ～３１５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３１５ｋＤａ～３２０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３２０ｋＤａ～３２５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３２５ｋＤａ～３３０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３３０ｋＤａ～３３５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３５０ｋＤａ～３４０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３４０ｋＤａ～３４５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。実施形態では、本開示の組成物は、３４５ｋＤａ～３５０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインベースのタンパク質断片を含む。

【0249】

実施形態では、本開示における絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約１～約５．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約１．５～約３．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約１～約１．５から選択される多分散性を有する。実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約１．５～約２．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約２．０～約２．５から選択される多分散性を有する。実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約２．０～約３．０から選択される多分散性を有する。実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物は、約２．５～約３．０から選択される多分散性を有する。

【0250】

いくつかの実施形態では、凍結乾燥絹粉末は、貯蔵後に水、ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）、又は有機溶液に再懸濁して、最初に生成されたものよりも高濃度の溶液を含む様々な濃度の絹溶液を調製することができる。別の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、回転熱蒸発器、又は１０質量％未満の水を含む乾燥タンパク質形態を調製するための当技術分野で知られた他の方法を使用して乾燥される。実施形態では、有機溶液における本開示の絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解性は、約５０．０％～約１００％である。実施形態では、有機溶液における本開示の絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解性は、約６０．０％～約１００％である。実施形態では、有機溶液における本開示の絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解性は、約７０．０％～約１００％である。実施形態では、有機溶液における本開示の絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解性は、約８０．０％～約１００％である。実施形態では、有機溶液における本開示の絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解性は、約９０．０％～約１００％である。実施形態では、本開示の絹フィブロインベースのタンパク質断片は、有機溶液における不溶である。

【0251】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法における適用に有用な絹フィブロインタンパク質断片はまた、絹フィブロインタンパク質断片の水性ゲルを含む。絹フィブロインタンパク質断片溶液のゲル化は、ソニケーション、ボルテックス、加熱、溶媒処理（例えば、メタノール、エタノール）、電気ゲル化、超音波処理、化学物質（例えば、ビタミンＣ）などによって引き起こすことができる。

【0252】

絹ペプチドは、天然の絹フィブロイン加水分解物から得た抽出物である。絹ペプチドは、パーソナルケア製品に含有させると、真珠の光沢と絹のような感触を示す。絹ペプチドの構造は、ヒトの毛髪及び皮膚組織に類似している。絹ペプチドは、１０個以上のアミノ酸残基及び本明細書に記載される重量平均分子量を有するセリンに富むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、絹ペプチド抽出物は、皮膚、例えば、ヒトの皮膚によって容易に吸収されることができ、皮膚に栄養素を与えて、皮膚の代謝を促進することができる。

【0253】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法における適用に有用な絹フィブロインタンパク質断片溶液はまた、低分子量絹フィブロインペプチド（約２００Ｄａ～５ｋＤａの重量平均分子量）を含む。絹フィブロインタンパク質加水分解物に由来する低分子量絹フィブロインペプチドは、遊離アミノ酸の天然の保湿因子を補完して、頭皮の水分含量を改善することができる。いくつかの実施形態では、低分子量の絹フィブロインペプチドは、毛包の奥深くに浸透して、修復し、水を補充し、毛髪に栄養を与え、水分バランスを改善し、ふけの発生を防ぐことができる。

【0254】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法における用途に有用な絹フィブロインタンパク質断片溶液はまた、加水分解された絹フィブロインに由来する絹フィブロインタンパク質アミノ酸を含む。 いくつかの実施形態では、絹フィブロインアミノ酸は、市販の加水分解絹（ＣＡＳ番号：９６６９０－４１－４）から得られるものである。Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉの絹フィブロインタンパク質に由来するアミノ酸組成は、主に、Ｇｌｙ（４３％）、Ａｌａ（３０％）、及びＳｅｒ（１２％）からなる。

【0255】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、絹フィブロインタンパク質断片の有益な効果を向上させる植物抽出物を含む。いくつかの実施形態では、植物抽出物は、米、オート、アーモンド、Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｓｉｎｅｎｓｉｓ（緑茶）エキス、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ Ｐａｒｋｉｉ（シアバター）、ココナッツ、パパイヤ、マンゴー、ピーチ、レモン、小麦、ローズマリー、アプリコット、藻類、グレープフルーツ、サンダルウッド、ライム、オレンジ、アカシア、Ａｃａｃｉａ ｃｏｎｃｉｎｎ、Ｂｕｔｅａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ、Ｂｕｔｅａ ｓｕｐｅｒｂ、Ｂｕｔｅａ ｆｒｏｎｄｏｓａ、Ｃａｍｐａｎｕｌａｔａ（ファイヤーチューリップ）、Ａｄａｎｓｏｎｉａ Ｄｉｇｉｔａｔａ（バオバブ）、Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ（デーツ）、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ Ｓａｂｄａｒｉｆｆａ（ハイビスカス）、Ａｆｒａｍｏｍｕｍ Ｍｅｌｅｇｕｅｔａ（アフリカンペッパー）、Ｋｈａｙａ Ｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ（マホガニーウッド）、Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ Ｉｎｄｉｃａ（タマリンド、即ち、クルクミン）、Ｃｙｐｅｒｕｓ Ｐａｐｙｒｕｓ（パピルス）、Ａｇｅｒａｔｕｍ ｓｐｐ．、バーチ、ごぼう、ホーステイル、ラベンダー、マジョラム、イラクサ、テールキャット、タイム、オークバーク、エキナセア、セイヨウイラクサ、マンサク、ホップ、ヘンナ、カモミール、セイヨウサンザシ、ライムツリーブロッサム、アーモンド、松葉、ホースチェスナット、ジュニパー、キウイ、メロン、マロウ、ハナタネツケバナ、ワイルドタイム、ヤロウ、メリッサ、レストハロー、コルツフット、マシュマロ、ライスメリステム、モリンガ、ジンセン及びジンジャー根、アロエベラ、ａｌｏｅ ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓ葉エキス、ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ（ラベンダー）花エキス、ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ（エルダーベリー）果実エキス、ｐｈｏｅｎｉｘ ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ（デーツ）種子エキス、ａｖａｎｄｕｌａ ｓｔｏｅｃｈａｓ（スパニッシュラベンダー）エキス、ｓｐｉｒａｅａ ｕｌｍａｒｉａ（メドウスイート）葉エキス、ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ ｒｅｃｕｔｉｔａ（カモミール）葉エキス、及びＳｙｍｐｈｙｔｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ（コンフリー）葉エキス、及びそれらの組合せから得られる抽出物からなる群から選択される。これらの植物の抽出物は、種子、根、茎、葉、花、樹皮、果実、及び／又は植物全体から得られる。

【0256】

いくつかの実施形態では、植物抽出物は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法において、組成物の総重量に対して約０．００１重量％～約１０．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、植物抽出物は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法において、組成物の総重量に対して約０．００５重量％～約５．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、植物抽出物は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法において、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約２．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、植物抽出物は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法において、組成物の総重量に対して約０．００４５重量％～約０．００５５重量％の範囲の重量パーセントで存在する。

【0257】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、２９０～３２９ｎｍの波長の紫外線を吸収するＵＶフィルタを含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、パラアミノ安息香酸アミル、パラアミノ安息香酸オクチル、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸フェニル、サリチル酸オクチル、サリチル酸ベンジル、サリチル酸ブチルフェニル、サリチル酸ホモメンチル、シンナミン酸ベンジル、パラメトキシシンナミン酸２－エトキシエチル、パラメトキシシンナミン酸オクチル、モノ（２－エチルヘキサノエート）ジパラ－メトキシシンナミン酸グリセリル、パラ－メトキシシンナミン酸イソプロピル、ジイソプロピル－ジイソプロピルシンナミン酸エステル混合物、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、ヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸及びその塩、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルホン酸ナトリウム、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、４－ｔｅｒｔ－ブチル－４’－メトキシジベンゾイルメタン、２，４，６－トリアニリノ－ｐ－（カルボ－２’－エチルヘキシル－１’－オキシ）－１，３，５－トリアジン、及び２－（２－ヒドロキシ－５－メチルフェニル）ベンゾトリアゾールからなる群から選択されるＵＶフィルタを含む。いくつかの実施形態では、２－エチルヘキシル－ｐ－メトキシシンナメート、４－ｔｅｒｔ－ブチル－４’－メトキシジベンゾイルメタン、オクトクリレン、２，４－ビス－［｛４－（２－エチルヘキシルオキシ）－２－ヒドロキシ｝－フェニル］－６－（４－メトキシフェニル）－１，３，５－トリアジン、メチレンビス－ベンゾトリアゾリルテトラメチルブチルフェノール、２，４，６－トリス－［４－（２－エチルヘキシルオキシカルボニル）アニリノ］－１，３，５－トリアジン、ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル、オキシベンゾン、２，２’－ジヒドロキシ－４，４’－ジメトキシベンゾフェノン、及びそれらの組合せからなる群から選択される水溶性紫外線吸収剤である。

【0258】

いくつかの実施形態では、ＵＶフィルタは、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、エチルヘキシルメトキシシンナメート、エチルヘキシルサリシレート、オクトクリレン、エチルヘキシルメトキシシンナメート、イソアミル－ｐ－メトキシシンナメート、エチルヘキシルトリアゾン、ジエチルヘキシルブタミドトリアゾン、メチレンビス－ベンゾトリアゾリルテトラメチルブチルフェノール、フェニルジベンズイミダゾールテトラスルホン酸二ナトリウム、ビス－エチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジン、ベンゾフェノン－３、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0259】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、ＴｉＯ_２、ＳｉＯ_２、Ｆｅ_２Ｏ_３、ＺｒＯ_２、ＭｎＯ、Ａｌ_２Ｏ_３、及びそれらの組合せから選択されるＵＶフィルタとしての無機顔料を含む。

【0260】

いくつかの実施形態では、ＵＶフィルタは、組成物中、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約０．００１重量％～約２０．０重量％の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、ＵＶフィルタは、組成物中、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、ＵＶフィルタは、組成物中、組成物の総重量に対して約０．０５重量％～約８．０重量％の重量パーセントで存在する。

【0261】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、炭化水素油、炭化水素ワックス、シリコーン油、アセトグリセリドエステル、エトキシル化グリセリド、脂肪酸のアルキルエステル、脂肪酸のアルケニルエステル、脂肪族アルコール、脂肪族アルコールエーテル、エーテルエステル、ラノリン、ラノリン誘導体、多価アルコール、ポリエーテル誘導体、多価エステル、ワックスエステル、ミツロウ誘導体、植物ワックス、天然又はエッセンシャルオイル、リン脂質、ステロール、アミド、及びそれらの組合せからなる群から選択される皮膚軟化剤を含む。

【0262】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法に組み込まれる皮膚軟化剤は、（１）炭化水素油及びワックス、例えば、鉱油、ペトロラタム、パラフィン、オゾケライト、マイクロクリスタリンワックス、ポリエチレン、スクアレン、及びペルヒドロスクアレン；（２）シリコーンオイル、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、水溶性及びアルコール可溶性シリコーングリコールコポリマー；（３）アセトグリセリドエステル、例えば、アセチル化モノグリセリド；（４）エトキシル化グリセリド、例えば、エトキシル化グリセリルモノステアレート；（５）１０～２０個の炭素原子を有する脂肪酸のアルキルエステル、例えば、ヘキシルラウレート、イソヘキシルラウレート、イソヘキシルパルミテート、イソプロピルパルミテート、デシルオレエート、イソデシルオレエート、ヘキサデシルステアレート、デシルステアレート、イソプロピルイソステアレート、ジイソプロピルアジペート、ジイソヘキシルアジペート、ジヘキシルデシルアジペート、ジイソプロピルセバケート、ラウリルラクテート、ミリスチルラクテート、脂肪酸のメチル、イソプロピル、ブチルエステル；（６）１０～２０個の炭素原子を有する脂肪酸のアルケニルエステル、例えば、オレイルミリステート、オレイルステアレート、及びオレイルオレエート；（７）１０～２０個の炭素原子を有する脂肪酸、例えば、ペラルゴン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リシノール酸、アラキジン酸、ベヘン酸、及びエルカ酸；（８）１０～２０個の炭素原子を有する脂肪族アルコール、例えば、ラウリル、ミリスチル、セチル、ヘキサデシル、ステアリル、イソステアリル、ヒドロキシステアリル、オレイル、リシノレイル、ベヘニル、エルシルアルコール、及び２－オクチルドデカノール；（９）脂肪族アルコールエーテル、例えば、１０～２０個の炭素原子のエトキシル化脂肪族アルコール、ラウリル、セチル、ステアリル、イソステアリル、オレイル、及び１～５０個のエチレンオキシド基又は１～５０個のプロピレンオキシド基が結合したコレステロールアルコール；（１０）エーテル－エステル、例えば、エトキシル化脂肪族アルコールの脂肪酸エステル；（１１）ラノリン及びその誘導体、例えば、ラノリン油、ラノリンワックス、ラノリンアルコール、ラノリン脂肪酸、イソプロピルラノレート、エトキシル化ラノリン、エトキシル化ラノリンアルコール、エトキシル化コレステロール、プロポキシル化ラノリンアルコール、アセチル化ラノリン、アセチル化ラノリンアルコール、ラノリンアルコールリノレート、ラノリンアルコールリシノレート、ラノリンアルコールリシノレートのアセテート、エトキシル化アルコールエステルのアセテート、ラノリンの水素化分解、エトキシル化水素化ラノリン、エトキシル化ソルビトールラノリン、及び液体及び半固体ラノリン吸収塩基；（１２）多価アルコール及びポリエーテル誘導体、例えば、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール２０００及び４０００、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシプロピレンポリオキシエチレングリコール、グリセロール、ソルビトール、エトキシル化ソルビトール、ヒドロキシプロピルソルビトール、ポリエチレングリコール２００～６０００、メトキシポリエチレングリコール３５０、５５０、７５０、２０００、及び５０００、ポリ［エチレンオキシド］ホモポリマー（重量平均分子量：１００，０００～５，０００，０００Ｄａ）、ポリアルキレングリコール及び誘導体、ヘキシレングリコール（２－メチル－２，４－ペンタンジオール）、１、３－ブチレングリコール、１，２，６－ヘキサントリオール、エトヘキサジオールＵＳＰ（２－エチル－１，３－ヘキサンジオール）、Ｃ１５－Ｃ１８ビシナルグリコール、及びトリメチロールプロパンのポリオキシプロピレン誘導体；（１３）多価アルコールエステル、例えば、エチレングリコールモノ及びジ脂肪酸エステル、ジエチレングリコールモノ及びジ脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール（２００～６０００）モノ及びジ脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノ－及びジ脂肪酸エステル、ポリプロピレングリコール２０００モノオレエート、ポリプロピレングリコール２０００モノステアレート、エトキシル化プロピレングリコールモノステアレート、グリセリルモノ及びジ脂肪酸エステル、ポリグリセリンポリ脂肪酸エステル、エトキシル化グリセリルモノステアレート、１，３－ブチレングリコールモノステアレート、１，３－ブチレングリコールジステアレート、ポリオキシエチレンポリオール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、及びポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、スクロースココエート、スクロースジラウレート、スクロースジステアレート、スクロースヘキサエルケート、スクロースラウレート、スクロースミリステート、スクロースオレエート、スクロースパルミテート、スクロースペンタエルケート、スクロースポリベヘネート、スクロースポリコットンシーデート、スクロースポリラウレート、スクロースポリリノレート、スクロースポリオレエート、スクロースポリパルメート、スクロースポリソイエート、スクロースポリステアレート、スクロースリシノレート、スクロースステアレート、スクローステトライソステアレート、スクローストリベヘネート、スクローストリステアラット；（１４）ワックスエステル、例えば、ミツロウ、鯨ろう、ミリスチルミリステート、及びステアリルステアレート；（１５）ミツロウ誘導体、例えば、ミツロウと様々なエチレンオキシド含量のエトキシル化ソルビトールとの反応生成物であるポリオキシエチレンソルビトールミツロウ；（１６）植物性ワックス、例えば、カルナウバ及びキャンデリラワックス；（１７）天然又はエッセンシャルオイル、例えば、柑橘系オイル、非柑橘系フルーツオイル、ナッツオイル、フレーバー、芳香、又は香りを有するオイル、カノーラオイル、コーンオイル、ニームオイル、オリーブオイル、綿実油、ココナッツオイル、ヤシ油（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｃｏｃｏｎｕｔ ｏｉｌ）、パームオイル、ナッツオイル、サフラワーオイル、ゴマオイル、大豆オイル、ピーナッツオイル、アーモンドオイル、カシューオイル、ヘーゼルナッツオイル、マカデミアオイル、ピーカンオイル、パインナッツオイル、ピスタチオオイル、クルミオイル、グレープフルーツシードオイル、レモンオイル、オレンジオイル、スイートオレンジオイル、タンジェリンオイル、ライムオイル、マンダリンオイル、オメガ３オイル、亜麻仁オイル（リンシードオイル）、アプリコットオイル、アボカドオイル、キャロットオイル、ココアバターオイル、ココナッツオイル、ヤシ油、ヘンプオイル、パパイヤシードオイル、ライスブランオイル、シアバターオイル、ティーツリーシードオイル、及び小麦胚芽オイル、ラベンダーオイル、ローズマリーオイル、桐油、ホホバオイル、ポピーシードオイル、シアバター、キャスターオイル、マンゴーオイル、ローズヒップオイル、トールオイルカモミールオイル、シナモンオイル、シトロネラオイル、ユーカリオイル、フェンネルシードオイル、ジャスミンオイル、ジュニパーベリーオイル、ラズベリーシードオイル、ラベンダーオイル、プリムローズオイル、レモングラスオイル、ナツメグオイル、パチョリオイル、ペパーミントオイル、パインオイル、ローズオイル、ローズヒップオイル、ローズマリーオイル、ユーカリオイル、ティーツリーオイル、ローズウッドオイル、サンダルウッドオイル、サッサフラスオイル、スペアミントオイル、ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ（キャスター）シードオイル、ウィンターグリーンオイル；（１８）リン脂質、例えば、レシチン及び誘導体；（１９）ステロール、例えば、コレステロール及びコレステロール脂肪酸エステル；（２０）脂肪酸アミド、エトキシル化脂肪酸アミド、及び固体脂肪酸アルカノールアミド、（２１）ラノリン、テオブロマカカオ（ココア）シードバター、ペトロラタム、ユーフォルビアセリフェラ（キャンデリラ）ワックス、ハチミツ、ゲラニオール、メントール、カンファー、セチルエステル、鉱油、サリチル酸、フェノール、パルミトイルイソロイシンのうちの１以上を含む。

【0263】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、水溶性低分子量保湿剤、脂溶性低分子量保湿剤、水溶性高分子量保湿剤、及び脂溶性高分子量保湿剤、ヒューメクタント、及びそれらの組合せからなる群から選択される保湿剤を含む。

【0264】

いくつかの実施形態では、保湿剤は、ヒューメクタントを含む。本明細書においては、用語「ヒューメクタント」は、ものの湿った状態を維持するために使用される吸湿性物質を意味する。ヒューメクタントは、近傍の空気中の水分を引き付け、吸収により保持し、水蒸気を生物又は物体の表面の内部又は下部に引き込む。

【0265】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、ヒューメクタントとして、水溶性絹フィブロインペプチドを含む。絹フィブロインタンパク質断片に由来するアミノペプチドは、皮膚によって容易に吸収され得る。いくつかの実施形態では、水溶性絹フィブロインペプチドを組成物に添加して、使用後の感触を高めることができる。

【0266】

いくつかの実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片に由来するアミノ酸は、コンディショニング剤としてコラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法に添加され得る（例えば、湿った感触、柔らかさ、滑らかさ、光沢などの優れた状態効果を発揮する目的で）。

【0267】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、ハチミツ、アロエベラ、アロエベラリーフジュース、アロエベラ液汁、ソルビトール、尿素、乳酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸、トレハロース、マルチトール、アルファ－ヒドロキシ酸、ナトリウムピログルタメート、ピロリドンカルボキシレート、Ｎ－アセチル－エタノールアミン、乳酸ナトリウム、イソプロパノール、ポリアルキレングリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、ヘキシレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール）、１，３－プロパンジオール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、グリセリルココネート、ヒドロキシステアレート、ミリステート、オレエート、ナトリウムヒアルロネート、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、リン脂質、コラーゲン、エラスチン、セラミド、レシチンソルビトール、ＰＥＧ－４、及びそれらの組合せからなる群から選択される１以上の更なるヒューメクタントを含み得る。

【0268】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３ブチレングリコール、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、グルタミン、マンニトール、ピロリドン－ナトリウムカルボキシレート（重合度ｎ＝２以上）、ポリプロピレングリコール（重合度ｎ＝２以上）、ポリグリセリン（重合度ｎ＝２以上）、乳酸、ラクテート、及びそれらの組合せからなる群から選択される多価アルコールを、保湿剤として含む。

【0269】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、コレステロール及びコレステロールエステルからなる群から選択される脂溶性低分子量保湿剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、任意に、カルボキシビニルポリマー、ポリアスパルテート、トラガカント、キサンタンガム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、水溶性キチン、キトサン、及びデキストリンからなる群から選択される水溶性高分子量保湿剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、任意に、ポリビニルピロリドン－エイコセンコポリマー、ポリビニルピロリドン－ヘキサデセンコポリマー、ニトロセルロース、デキストリン脂肪酸エステル、及び高分子シリコーンからなる群から選択される脂溶性高分子量保湿剤を含む。

【0270】

更なる好適な保湿剤としては、本質的に水溶性及び／又は水膨潤性であるポリマー保湿剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、ヒアルロン酸又はキトサンを保湿剤と組み合わせて、それらの性質を向上させる。

【0271】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約０．１重量％～約３０．０重量％で保湿剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約０．５重量％～約２５．０重量％で保湿剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約１．０重量％～約２０．０重量％で保湿剤を含む。

【0272】

本明細書に記載の組成物は、薬剤などの更なる活性剤を含む。幾つかの実施形態では、活性剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、血管拡張剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤（例えば、入れ墨用染料、インク、又は顔料）、反射剤、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せが挙げられる。本明細書に記載の組成物は、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒（例えば、ボツリヌス毒素及びクロストリジウム毒素）、酸化防止剤、抗感染剤（例えば、抗生物質）、血管拡張剤、染料（例えば、入れ墨用インク又は顔料、反射剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せからなる群から選択される活性剤であることができる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ラパマイシン、又はラパマイシン様化合物である。いくつかの実施形態では、活性剤は、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ、アモキシシリン）、エリスロマイシン（例えば、エリスロマイシンステアレート）、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン）、及びセファロスポリン（例えば、セファレキシン）、及びこれらの組合せからなる群から選択される抗生物質であることができる。

【0273】

いくつかの実施形態では、更なる活性剤は、ニトログリセリン、ラベタロール、チアジド（ｔｈｒａｚｉｄｅ）、二硝酸イソソルビド、四硝酸ペンタエリスリトール、ジギタリス、ヒドララジン、ジアゾキシド、アムリノン、Ｌ－アルギニン、硫酸バメタン、フマル酸ベンシクラン、ヘミコハク酸ベンフロジル、ニコチン酸ベンジル、塩酸ブフロメジル、塩酸ブフェニン、塩酸ブチルアミン（ｂｕｔａｌａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、クエン酸セチエジル、シクロニカート、マレイン酸シネパジド、シクランデラート、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアンモニウム、ニコチン酸エチル、ヘプロニカート、ニコチン酸ヘキシル、酒石酸イフェンプロジル、ニコチン酸イノシトール、塩酸イソクスプリン、カリジノゲナーゼ、ニコチン酸メチル、シュウ酸ナフチドフリル、クエン酸ニカメタート、ニセリトロール、ニコボキシル、ニコフラノース、ニコチニルアルコール、酒石酸ニコチニルアルコール、一酸化窒素、ノニバミド、オキシペンチフィリン、パパベリン、パパベロリン、ペンチフィリン、過酸化亜硝酸、ピナシジル、ピプラテコール、プロペントフィルチン、ラウバシン、スルオクチジル、テアスプリン、塩酸チモキサミン、ニコチン酸トコフェロール、トラゾリン、ニコチン酸キサンチノール、ジアゾキシド、ヒドララジン、ミノキシジル、ニトロプルシドナトリウム、及びこれらの組合せからなる群から選択される血管拡張剤であることができる。

【0274】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、約０．０１％～約０．１％、又は約０．０５％～約０．１５％、又は約０．１％～約０．２％、又は約０．１５％～約０．２５％、又は約０．２％～約０．３％、又は約０．２５％～約０．３５％、又は約０．３％～約０．４％、又は約０．３５％～約０．４５％、又は約０．４％～約０．５％、又は約０．４５％～約０．５５％、又は約０．５％～約０．６％、又は約０．５５％～約０．６５％、又は約０．６％～約０．７％、又は約０．６５％～約０．７５％、又は約０．７％～約０．８％、又は約０．７５％～約０．８５％、又は約０．８％～約０．９％、又は約０．８５％～約０．９５％、又は約１％～約２％、又は約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％～約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％～約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約１０％～約１５％、又は約１５％～約２０％、又は約２０％～約２５％、又は約２５％～約３０％、又は約３０％～約３５％、又は約３５％～約４０％、又は約４０％～約４５％、又は約４５％～約５０％の重量濃度で、更なる活性剤を含むことができる。

【0275】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、線維症阻害剤を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、治療部位内又はその周囲の病理学的プロセスに対する阻害効果を発揮するように作用する化合物を更に含むことができる。特定の態様では、活性剤は、次の化合物のクラスのいずれかから選択することができる：抗炎症剤（例えば、デキサメタゾン、コルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、６α－メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、及びアスピリン）。

【0276】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、粒子を含み、前記粒子は、高分子粒子、雲母、シリカ、泥、及び粘土を含み得る。コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法における粒子は、滑らかさ、摩擦の低減、滑りやすい感触の利点をもたらす一方で、毛髪を清潔で軽く、風通しの良い状態に保ち、手及び／又は髪に広げたときに改善された感触を与える。

【0277】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、アニオン性及び／又は非イオン性及び／又は双性イオン性ポリマーからなる群から選択されるポリマーから形成されるポリマー粒子を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ポリスチレン、ポリビニルアセテート、ポリジビニルベンゼン、ポリメチルメタクリレート、ポリ－ｎ－ブチルアクリレート、ポリ－ｎ－ブチルメタクリレート、ポリ－２－エチルヘキシルメタクリレート、６，１２－ナイロン、ポリウレタン、エポキシ樹脂、スチレン／酢酸ビニルコポリマー、スチレン／トリメチルアミノエチルメタクリレートクロリコポリマー、及びそれらの組合せからなる群から選択されるポリマーから形成されるポリマー粒子を含む。

【0278】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、ポリエチレンホモポリマー、エチレン－アクリル酸コポリマー、約６，０００Ｄａ～約１２，０００Ｄａの範囲の分子量を有するポリアミドポリマー、ポリエチレン－酢酸ビニルコポリマー、シリコーン－合成ワックスコポリマー、シリコーン－天然ワックスコポリマー、カンデリラ－シリコーンコポリマー、オゾケライト－シリコーンコポリマー、合成パラフィンワックス－シリコーンコポリマー、及びそれらの組合せからなる群から選択される疎水性ポリマーから形成されるカチオン性ポリマー粒子を含む。

【0279】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、別個の粒子を沈着させるための膨潤したポリマー粒子を含む。いくつかの実施形態では、膨潤したポリマー粒子は、粒子状シリコーンポリマー及び表面アルキル化球状シリコン粒子からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、膨潤したポリマー粒子を形成するシリコーンポリマーは、ポリジオルガノシロキサン、ポリモノオルガノシロキサン、及び架橋ポリジメチルシロキサン、ヒドロキシル又はメチルなどの末端基を有していてもよい架橋ポリモノメチルシロキサン、及び架橋ポリジメチルシロキサン（ＤＣ２－９０４０シリコーン液（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ））からなる群から選択される。ポリジソルガノシロキサン（ｐｏｌｙｄｉｓｏｒｇａｎｏｓｉｌｏｘａｎｅｓ）は、好ましくは、Ｒ_３ＳｉＯ_０．５繰り返し単位とＲ_２ＳｉＯ繰り返し単位の好適な組合せから誘導される。ポリモノオルガノシロキサンはＲ_１ＳｉＯ_１．５から誘導される。各Ｒは、独立して、アルキル、アルケニル（例えば、ビニル）、アルカリル、アラルキル、又はアリール（例えば、フェニル）基を表す。いくつかの実施形態では、Ｒはメチル基である。

【0280】

いくつかの実施形態では、ポリマー粒子は、１０００ｎｍ未満のメジアン粒子サイズを有するナノ粒子である。いくつかの実施形態では、ポリマー粒子は、約５ｎｍ～約６００ｎｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、ポリマー粒子は、約１０ｎｍ～約５００ｎｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、ポリマー粒子は、約１０ｎｍ～約４００ｎｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、ポリマー粒子は、約２０ｎｍ～約３００ｎｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、ポリマー粒子は、約５０ｎｍ～約６００ｎｍのメジアン粒子サイズを有する。

【0281】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、本明細書に開示されるように、皮膚科学的に許容される担体中に分散液又は懸濁液を形成する粘土粒子を含む。本明細書全体を通して、用語「粘土」は、水と混合すると塑性になる細粒の土の材料を意味することが意図される。粘土は、天然、合成、又は化学的に修飾された粘土であり得る。粘土は、不純物（例えば、少量のカリウム、ナトリウム、マグネシウム、又は鉄）を含む含水ケイ酸アルミニウムを含む。

【0282】

一実施形態では、粘土は、３８．８％～９８．２％のＳｉＯ_２及び０．３％～３８．０％のＡｌ_２Ｏ_３を含む材料であり、更に、Ｆｅ_２Ｏ_３、ＣａＯ、ＭｇＯ、ＴｉＯ_２、ＺｒＯ_２、Ｎａ_２Ｏ、及びＫ_２Ｏから選択される金属酸化物の１以上を含む。いくつかの実施形態では、粘土は、八面体配位のアルミニウム、マグネシウム、若しくは鉄、又は四面体配位のシリコンの含水シートを含む層状構造を有する。

【0283】

一実施形態では、粘土は、カオリン、タルク、２：１フィロケイ酸塩、１：１フィロケイ酸塩、スメクタイト、ベントナイト、モンモリロナイト（ベントナイトとしても知られる）、ヘクトライト、ボルコンコイト、ノントロナイト、サポナイト、バイデライト、ソーコナイト、及びそれらの混合物からなる群から選択される。一実施形態では、粘土は、カオリン又はベントナイトである。いくつかの実施形態では、粘土は、合成ヘクトライトである。別の実施形態では、粘土は、ベントナイトである。

【0284】

いくつかの実施形態では、粘土は、約０．７ｍｅｑ／１００ｇ～約１５０ｍｅｑ／１００ｇのカチオン交換容量を有する。いくつかの実施形態では、粘土は、約３０ｍｅｑ／１００ｇ～約１００ｍｅｑ／１００ｇのカチオン交換容量を有する。

【0285】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、本明細書に開示される、カチオン性に帯電したヘアコンディショニング剤と静電的に複合体を形成したアニオン性に帯電した粘土を有する複合粒子を含む。

【0286】

市販の合成ヘクトライトとしては、商品名Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＲＤ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＲＤＳ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＸＬＧ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＸＬＳ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）Ｄ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＤＦ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＤＳ、Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）Ｓ、及びＬａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）ＪＳ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｌａｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）で販売されているものが挙げられる。市販のベントナイトとしては、商品名Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）ＧＰ、Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）Ｈ、Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）Ｌ、Ｍｉｎｅｒａｌ Ｃｏｌｌｏｉｄ（登録商標）ＢＰ、Ｍｉｎｅｒａｌ Ｃｏｌｌｏｉｄ（登録商標）ＭＯ、Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）ＭＡＳ １００ （ｓｃ）、Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）ＭＡＳ １０１、Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）ＭＡＳ １０２、Ｇｅｌｗｈｉｔｅ（登録商標）ＭＡＳ １０３、Ｂｅｎｔｏｌｉｔｅ（登録商標）ＷＨ、Ｂｅｎｔｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｌ１０、Ｂｅｎｔｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｈ、Ｂｅｎｔｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｌ、Ｐｅｒｍｏｎｔ（登録商標）ＳＸ１０Ａ、Ｐｅｒｍｏｎｔ（登録商標）ＳＣ２０、及びＰｅｒｍｏｎｔ（登録商標）ＨＮ２４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｌａｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）；Ｂｅｎｔｏｎｅ（登録商標）ＥＷ及びＢｅｎｔｏｎｅ（登録商標）ＭＡ（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ）；並びにＢｅｎｔｏｎｉｔｅ（登録商標）ＵＳＰ ＢＬ ６７０及びＢｅｎｔｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｈ４４３０（Ｗｈｉｔａｋｅｒ、Ｃｌａｒｋｅ ＆ Ｄａｎｉｅｌｓ）で販売されているものが挙げられる。いくつかの実施形態では、粒子は、約１μｍ～約１００μｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約２μｍ～約５０μｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約２μｍ～約２０μｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約４μｍ～約１０μｍのメジアン粒子サイズを有する。いくつかの実施形態では、粒子は、約１μｍ、約１．１μｍ、約１．２μｍ、約１．３μｍ、約１．４μｍ、約１．５μｍ、約１．６μｍ、約１．７μｍ、約１．８μｍ、約１．９μｍ、約２．０μｍ、約２．１μｍ、約２．２μｍ、約２．３μｍ、約２．４μｍ、約２．５μｍ、約２．６μｍ、約２．７μｍ、約２．８μｍ、約２．９μｍ、約３．０μｍ、約３．１μｍ、約３．２μｍ、約３．３μｍ、約３．４μｍ、約３．５μｍ、約３．６μｍ、約３．７μｍ、約３．８μｍ、約３．９μｍ、約４．０μｍ、約４．１μｍ、約４．２μｍ、約４．３μｍ、約４．４μｍ、約４．５μｍ、約４．６μｍ、約４．７μｍ、約４．８μｍ、約４．９μｍ、約５．０μｍ、約５．１μｍ、約５．２μｍ、約５．３μｍ、約５．４μｍ、約５．５μｍ、約５．６μｍ、約５．７μｍ、約５．８μｍ、約５．９μｍ、約６．０μｍ、約６．１μｍ、約６．２μｍ、約６．３μｍ、約６．４μｍ、約６．５μｍ、約６．６μｍ、約６．７μｍ、約６．８μｍ、約６．９μｍ、約７．０μｍ、約７．１μｍ、約７．２μｍ、約７．３μｍ、約７．４μｍ、約７．５μｍ、約７．６μｍ、約７．７μｍ、約７．８μｍ、約７．９μｍ、約８．０μｍ、約８．１μｍ、約８．２μｍ、約８．３μｍ、約８．４μｍ、約８．５μｍ、約８．６μｍ、約８．７μｍ、約８．８μｍ、約８．９μｍ、約９．０μｍ、約９．１μｍ、約９．２μｍ、約９．３μｍ、約９．４μｍ、約９．５μｍ、約９．６μｍ、約９．７μｍ、約９．８μｍ、約９．９μｍ、及び約１０．０μｍから選択されるメジアン粒子サイズを有する。

【0287】

いくつかの実施形態では、カチオン性に帯電したヘアコンディショニング剤の、粘土に対する重量比は、０．０５：１～２０：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性に帯電したヘアコンディショニング剤の、粘土に対する重量比は、０．１：１～１０：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性に帯電したヘアコンディショニング剤の、粘土に対する重量比は、０．２：１～５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性に帯電したヘアコンディショニング剤の、粘土に対する重量比は、０．０５：１、０．１：１、０．２：１、０．５：１、０．７５：１、１：１、１．５：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４．０：１、４．５：１、５．０：１、５．５：１、６．０：１、６．５：１、７．０：１、７．５：１、８．０：１、８．５：１、９．０：１、９．５：１、１０．０：１、１０．５：１、１１．０：１、１１．５：１、１２．０：１、１２．５：１、１３．０：１、１３．５：１、１４．０：１、１４．５：１、１５．０：１、１５．５：１、１６．０：１、１６．５：１、１７．０：１、１７．５：１、１８．０：１、１８．５：１、１９．０：１、１９．５：１、及び２０．０：１から選択される。

【0288】

いくつかの実施形態では、粒子は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法において、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法において、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約０．１重量％～約１０．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、コラーゲンブースティング組成物中、組成物の総重量に対して約０．１重量％～約２．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、コラーゲンブースティング組成物中、組成物の総重量に対して約１．０重量％～約９．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、コラーゲンブースティング組成物中、組成物の総重量に対して約１．０重量％～約５．０重量％の範囲の重量パーセントで存在する。いくつかの実施形態では、粒子は、コラーゲンブースティング組成物中、組成物の総重量に対して約０．０１重量％、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、約２．０重量％、約２．１重量％、約２．２重量％、約２．３重量％、約２．４重量％、約２．５重量％、約２．６重量％、約２．７重量％、約２．８重量％、約２．９重量％、約３．０重量％、約３．１重量％、約３．２重量％、約３．３重量％、約３．４重量％、約３．５重量％、約３．６重量％、約３．７重量％、約３．８重量％、約３．９重量％、約４．０重量％、約４．１重量％、約４．２重量％、約４．３重量％、約４．４重量％、約４．５重量％、約４．６重量％、約４．７重量％、約４．８重量％、約４．９重量％、約５．０重量％、約５．１重量％、約５．２重量％、約５．３重量％、約５．４重量％、約５．５重量％、約５．６重量％、約５．７重量％、約５．８重量％、約５．９重量％、約６．０重量％、約６．１重量％、約６．２重量％、約６．３重量％、約６．４重量％、約６．５重量％、約６．６重量％、約６．７重量％、約６．８重量％、約６．９重量％、約７．０重量％、約７．１重量％、約７．２重量％、約７．３重量％、約７．４重量％、約７．５重量％、約７．６重量％、約７．７重量％、約７．８重量％、約７．９重量％、約８．０重量％、約８．１重量％、約８．２重量％、約８．３重量％、約８．４重量％、約８．５重量％、約８．６重量％、約８．７重量％、約８．８重量％、約８．９重量％、約９．０重量％、約９．１重量％、約９．２重量％、約９．３重量％、約９．４重量％、約９．５重量％、約９．６重量％、約９．７重量％、約９．８重量％、約９．９重量％、及び約１０．０重量％から選択される重量パーセントで存在する。

【0289】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、特により大きなサイズの粒子の粒子分散安定性を維持するために、コロイド安定剤を任意に含む。好適なコロイド安定剤は、プロピレンオキシド－エチレンオキシドコポリマー又はエチレンオキシド－プロピレンオキシドグラフト化ポリエチレンイミン、ポリオキシエチレン（２０～８０ユニットＰＯＥ）イソオクチルフェニルエーテル、脂肪族アルコールエトキシレート、ポリビニルピロリドンを含むポリエトキシル化ポリテレフタレートブロックコポリマー、ビニルピロリドン繰り返し単位を含むコポリマー、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0290】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、皮膚科学的に許容される担体としてエマルジョンを含む。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、従来のエマルジョンとして存在する。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、マイクロエマルジョンとして存在する。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、油中水型エマルジョンとして存在する。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、水中油型エマルジョンとして存在する。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、ナノエマルジョンとして存在する。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、シリコーン油中水型エマルジョンとして存在する。いくつかの実施形態では、皮膚科学的に許容される担体は、水中シリコーン油型エマルジョンとして存在する。

【0291】

本明細書においては、従来のエマルジョンは、１つの連続相及び１つの分散相を有し、これは、界面活性剤によるコーティングにより安定化された非常に小さな球体として存在する。連続相の性質に応じて、エマルジョンは、水中油型又は油中水型として記述される。これらのエマルジョンは、理想的な場合には速度論的に安定している。即ち、無限にはないが、長期間保持される。特に温度変動時には、沈降、クリーミング、増粘、又は凝集の結果として相分離する傾向がある。

【0292】

本明細書においては、マイクロエマルジョンは、熱力学的に安定であり、等方性であり、流体であり、油性成分、水性成分、及び界面活性剤の３成分を有する三元系を含む光学的に透明な単一液相である。マイクロエマルジョンは、界面活性剤、又はより多くの場合、界面活性剤と共界面活性剤の混合物が、油／水界面張力を非常に低い値、多くの場合、１０^３～１０^９、好ましくは１０^４～１０^６Ｎ／ｍの範囲に低下させ、２つの不溶性相は、熱攪拌の結果として、それ自体が均一に分散された状態になる。マイクロエマルジョンは、平衡領域（いわゆる、サブフェーズ）を有する双連続構造（ｂｉｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）が、１００～１０００オングストロームのオーダーであることが多い。マイクロエマルジョンは、油がミセルによって可溶化されるＯ／Ｗ（水中油）型のマイクロエマルジョンの１つの状態、又は水相と油相の両方が連続構造を有するように界面活性剤分子の会合の数が無限になる双連続マイクロエマルジョンのいずれかを意味する。

【0293】

性質については、マイクロエマルジョンは透明又は半透明に見え、全ての配合成分及びコンポーネントが、その中に均一に溶解している単相状態の溶液として存在し得る。

【0294】

製造プロセスに関わらず、マイクロエマルジョンは、同一の配合成分を有し、同一温度で調製されると、同一の状態になることがある。したがって、前記の３成分（油、水、及び界面活性剤）及び残りの成分は、必要に応じて任意の順序で添加及び混合することができ、任意の力で機械力を使用して攪拌し、結果として実質的に同一の状態（外観、粘度、使用感など）を有するマイクロエマルジョンを生成することができる。

【0295】

双連続マイクロエマルジョンは、水相と油相の２つの相を、広がり隣接し絡み合ったドメインの形態で含み、その界面で、安定化界面活性界面活性剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ－ａｃｔｉｖｅ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）が単分子層として濃縮されている。個々の成分、水、油、及び好適な乳化剤系が混合されると、通常、非常に低い界面張力のために、双連続マイクロエマルジョンが非常に容易に形成される。ドメインは、少なくとも一次元でナノメートルオーダーの非常に小さな広がりしか有しないため、マイクロエマルジョンは視覚的に透明に見え、使用される乳化剤系に応じて、熱力学的、即ち、無限に、特定温度範囲で安定である。

【0296】

本明細書においては、用語ナノエマルジョンは、それらのナノ粒子サイズ、１０００ｎｍ未満のために透明又は半透明の外観を示すエマルジョンを意味する。

【0297】

乳化剤（例えば、界面活性剤）は、互いに混和しない液相、多くの場合、水と非極性の有機相との間の界面張力を低下させて、それらの相互溶解度を高める物質である。界面活性剤は、少なくとも１つの親水性及び１つの疎水性構造単位の特徴的な構造上の特徴を有する。この構造上の特徴は、両親媒性とも称される。

【0298】

アニオン性、カチオン性、両親媒性、及び非イオン性の各界面活性剤は、水及び油性物質の乳化による乳化化粧品材料の製造用の乳化剤として従来から使用されている。しかし、合成界面活性剤は皮膚表面組織の破壊に関わり、体内に入ると、肝臓損傷の原因となるため、その高い安全性から、天然タンパク質ベースの乳化剤を含む多くの天然由来のタンパク質ベースの乳化剤が使用されている。

【0299】

タンパク質ベースの乳化剤を使用して得られる乳化化粧品材料は、一般に、使用時に柔らかくしっとりとした感触を有するが、完成品は、崩れ感があり、広がりがないことが多い。化粧品に使用される乳化剤の重要な要素としては、安全性及び乳化力だけでなく、使用時の感触も含む。本開示は、本明細書に開示されるコラーゲンブースティング組成物用の乳化担体を安定化するための乳化剤（以下、シルク乳化剤）としての絹フィブロインタンパク質断片の使用を提供する。

【0300】

実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、乳化剤系内にシルク乳化剤を有する担体として、エマルジョンを含む。絹フィブロインは、高分子量のポリマーの主成分を占める大きな疎水性ドメインを有する両親媒性ポリマーである。疎水性領域は、小さい親水性スペーサによって中断されており、鎖のＮ末端とＣ末端も非常に親水性である。Ｈ鎖の疎水性ドメインは、Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒの繰り返しヘキサペプチド配列と、Ｇｌｙ－Ａｌａ／Ｓｅｒ／Ｔｙｒジペプチドの繰り返しを含み、これにより、安定な逆平行シート結晶体を形成することができる。Ｌ鎖のアミノ酸配列は非反復性であるため、Ｌ鎖はより親水性で比較的弾力性がある。絹フィブロイン分子の親水性（Ｔｙｒ，Ｓｅｒ）及び疎水性（Ｇｌｙ，Ａｌａ）鎖セグメントは、絹フィブロイン分子の自己組織化が可能となるように交互に配される。

【0301】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、高ＨＬＢ値を有する低分子とを含む。疎水性反復基の組成は、親水性－Ｓｅｒ－ごとに１つのペンタペプチド－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－であり、絹フィブロインタンパク質の親水性－疎水性バランス（ＨＬＢ）は、高ＨＬＢ値（即ち、＞１０）を有する親水性分子の添加により作製された親水性環境において、７．９５～１６．７４の範囲に変更することができる。絹フィブロインタンパク質断片のＨＬＢ値の前記範囲は、Ｏ／Ｗ型エマルジョンからＷ／Ｏ型エマルジョンまでの広範囲のエマルジョンの調製を可能にする。いくつかの実施形態では、高ＨＬＢ値を有する親水性分子は、グリセロール（ＨＬＢ１１．２８）、ブタンテトラオール（ＨＬＢ１２．７）、キシリトール（ＨＬＢ１４．１３）、Ｄ－ソルビトール（ＨＬＢ１５．５５）、イノシトール（ＨＬＢ１６．７４）、ヒアルロン酸、ヒアルロネート、カラギーナン、プルラン、アルギン酸、アルギネート、微生物エキソポリサッカライド、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、グリコサミノグリカン、グルコマンナン、及びそれらの組合せを含む多糖からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤及びグリセロールを含む。

【0302】

いくつかの実施形態では、シルク乳化剤及び高ＨＬＢ値を有する親水性分子は、１：１～１：１０のシルク乳化剤対親水性分子の重量比でエマルジョン担体に含有される。いくつかの実施形態では、シルク乳化剤及び高ＨＬＢ値を有する親水性分子は、１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、１：３．０、１：３．１、１：３．２、１：３．３、１：３．４、１：３．５、１：３．６、１：３．７、１：３．８、１：３．９、１：４、１：４．１、１：４．２、１：４．３、１：４．４、１：４．５、１：４．６、１：４．７、１：４．８、１：４．９、１：５．０、１：５．１、１：５．２、１：５．３、１：５．４、１：５．５、１：５．６、１：５．７、１：５．８、１：５．９、１：６、１：６．１、１：６．２、１：６．３、１：６．４、１：６．５、１：６．６、１：６．７、１：６．８、１：６．９、１：７、１：８、１：９、及び１：１０から選択されるシルク乳化剤対親水性分子の重量比でエマルジョン担体に含有される。いくつかの実施形態では、シルク乳化剤及び高ＨＬＢ値を有する親水性分子は、１：１のシルク乳化剤対親水性分子の重量比でエマルジョン担体に含有される。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、シルク乳化剤及びグリセロールを、１：１～１：３のシルク乳化剤対グリセロールの重量比で含む。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、シルク乳化剤及びグリセロールを、１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、１：３．０から選択されるシルク乳化剤対グリセロールの重量比で含む。

【0303】

実施形態では、本開示は、前記したように、絹フィブロインタンパク質ベースの断片の水溶液又はエマルジョン担体用の乳化剤（以下、シルク乳化剤）としての絹フィブロインタンパク質ベースの断片の水性ゲルを提供する。絹フィブロインタンパク質ベースの断片の水溶液又は絹フィブロインタンパク質ベースの断片の水性ゲルを油性成分と混合し、絹フィブロインタンパク質ベースの断片の水溶液又は水性ゲル中の水と、油性成分との間の均一な乳化を達成することができる。

【0304】

いくつかの実施形態では、乳化剤として使用される絹フィブロインタンパク質断片は、約５ｋＤａ超の重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、乳化剤として使用される絹フィブロインタンパク質は、約５ｋＤａ～約３５０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、乳化剤として使用される絹フィブロインタンパク質は、約２０ｋＤａ～約８０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、乳化剤として使用される絹フィブロインタンパク質は、約４０ｋＤａ～約６０ｋＤａから選択される重量平均分子量を有する。他の実施形態では、本明細書に記載の任意の絹フィブロイン断片を、乳化剤として使用することができる。

【0305】

いくつかの実施形態では、エマルジョン担体中に存在するシルク乳化剤の量は、エマルジョン担体の総重量に対して約０．１重量％～約１５．０重量％である。いくつかの実施形態では、エマルジョン担体中に存在するシルク乳化剤の量は、エマルジョン担体の総重量に対して約０．７５重量％～約１０．０重量％である。いくつかの実施形態では、エマルジョン担体中に存在するシルク乳化剤の量は、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約１．２５重量％、約１．５０重量％、約１．７５重量％、約２．０重量％、約２．２５重量％、約２．５重量％、約２．７５重量％、約３．０重量％、約３．２５重量％、約３．５重量％、約３．７５重量％、約４．０重量％、約４．２５重量％、約４．５重量％、約４．７５重量％、約５．０重量％、約５．２５重量％、約５．５重量％、約５．７５重量％、約６．０重量％、約６．２５重量％、約７．５重量％、約７．７５重量％、約８．０重量％、約８．２５重量％、約８．５重量％、約８．７５重量％、約９．０重量％、約９．２５重量％、約９．５重量％、約９．７５重量％、約１０．０重量％、約１０．２５重量％、約１０．５重量％、約１０．７５重量％、約１１．０重量％、約１１．２５重量％、約１１．５重量％、約１１．７５重量％、約１２．０重量％、約１２．２５重量％、約１２．５０重量％、約１２．７５重量％、約１３．０重量％、約１３．２５重量％、約１３．５０重量％、約１３．７５重量％、約１４．０重量％、約１４．２５重量％、約１４．５０重量％、約１４．７５重量％、及び約１５．０重量％からなる群から選択される。

【0306】

水溶液中の絹タンパク質は、高分子量であると、振動又は攪拌のせん断によってより容易にフィブリル化する傾向がある。フィブリル化タンパク質は、水不溶性の塊からなり、化粧品材料の使用時の心地よさ低下させる。

【0307】

いくつかの実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片は、より親水性の環境とするために高ＨＬＢ値を有する親水性物質とブレンドされ、係る親水性物質としては、絹フィブロイン溶液のゲル化を防ぐグリセロール、ブタンテトラオール、キシリトール、Ｄ－ソルビトール、イノシトールポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ乳酸、セルロース、キチン、及びポリビニルアルコールが挙げられる。ランダムコイルからβシート構造（フィブリレート）へのフィブロインの形状変化を防ぐことが重要である。

【0308】

いくつかの実施形態では、ＨＬＢ値＞１０を有するスクロース脂肪エステルベースの乳化剤が、絹フィブロインタンパク質の乳化効率を高めるために、乳化安定剤として絹フィブロインタンパク質に添加される。

【0309】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法の乳化系は、スクロース脂肪酸エステルベースの乳化剤、及び絹フィブロインタンパク質の水溶液又は絹フィブロインタンパク質の水性ゲルを含み得る。

【0310】

いくつかの実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片を含む水溶液又は水性ゲルは、コラーゲン刺激組成物の共乳化剤として使用することができ、絹タンパク質の水溶液又はゲルは、未洗浄（ｕｎｓｃｏｕｒｅｄ）、部分洗浄（ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｓｃｏｕｒｅｄ）、又は洗浄済み（ｓｃｏｕｒｅｄ）の紡績カイコ繊維（繭フィラメント）を中性塩（例えば、臭化リチウム）で溶解することによって得られる。いくつかの実施形態では、スクロース脂肪酸エステルは、スクロースパルミテート及びスクロースラウレートエステルである。いくつかの実施形態では、絹タンパク質は、向上した乳化効率を有するコラーゲン刺激組成物のための界面活性剤として使用することができる。いくつかの実施形態では、リン脂質（例えば、レシチン）を使用して、絹フィブロインタンパク質断片に由来する共乳化剤と複合体を形成させ、その乳化力（界面活性剤の効率）を高めることができる。

【0311】

いくつかの実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片ベースの乳化剤を使用して得られたマイクロエマルジョンを含むコラーゲン刺激組成物は、一般に、使用時に、良好な展延性、滑らかで湿った感触を有する。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法のためのエマルジョン担体は、共乳化剤として１以上のイオン性界面活性剤を更に含むことができる。

【0312】

イオン性界面活性剤は、水溶液中で電荷を有するようにイオン化される界面活性剤であり、電荷の種類に応じて、両性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、又はアニオン性界面活性剤に分類される。アニオン性界面活性剤と両性界面活性剤、又はアニオン性界面活性剤とカチオン性界面活性剤を水溶液中で混合すると、油に対する界面張力が低下する。

【0313】

両性界面活性剤は、少なくとも１つのカチオン性官能基及び１つのアニオン性官能基を有し、溶液が酸性の場合はカチオン性であり、溶液がアルカリ性の場合はアニオン性であり、等電点付近で非イオン性界面活性剤と同様の特性を呈する。

【0314】

両性界面活性剤は、アニオン性基の種類により、カルボン酸型、硫酸エステル型、スルホン酸型、リン酸型に分類される。本発明の場合、カルボン酸型、硫酸エステル型、及びスルホン酸型が好ましい。カルボン酸型は、更にアミノ酸型とベタイン型に分類される。特に好ましいのは、ベタイン型である。

【0315】

具体的な例としては、イミダゾリン型両性界面活性剤（例えば、２－ウンデシル－１－ヒドロキシエチル－１－カルボキシメチル－４，５－ジヒドロ－２－イミダゾリウムナトリウム塩及び１－［２－（カルボキシメトキシ）エチル］－１－（カルボキシメチル）－４，５－ジヒドロ－２－ノルココアルキルイミダゾリウムヒドロキシド二ナトリウム塩）；及びベタイン型界面活性剤（例えば、２－ヘプタデシル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、アルキルベタイン、アミドベタイン、及びスルホベタイン）が挙げられる。

【0316】

カチオン性界面活性剤の例としては、セチルトリメチルアンモニウムクロリド、ステアリルトリメチルアンモニウムクロリド、ベネニルトリメチルアンモニウムクロリド、ベヘニルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロリド、ステアリルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、及びセチルトリメチルアンモニウムメチルサルフェートなどの四級アンモニウム塩が挙げられる。他の例としては、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノエチルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノエチルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノエチルアミド、ベヘン酸ジエチルアミノエチルアミド、ベヘン酸ジメチルアミノエチルアミド、ステアリン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ステアリン酸ジメチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、パルミチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジエチルアミノプロピルアミド、ミリスチン酸ジメチルアミノプロピルアミド、ベヘン酸ジエチルアミノプロピルアミド、及びベヘン酸ジメチルアミノプロピルアミドなどのアミドアミン化合物が挙げられる。

【0317】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法のための乳化剤系は、１以上のアニオン性界面活性剤を更に含み得る。アニオン性界面活性剤は、脂肪酸石鹸、Ｎ－アシルグルタメート、及びアルキルエーテルアセテートなどのカルボキシレート型、α－オレフィンスルホネート、アルカンスルホネート、及びアルキルベンゼンスルホネートなどのスルホン酸型、高級アルコール硫酸エステル塩及びリン酸エステル塩などの硫酸エステル型に分類される。カルボン酸塩型、スルホン酸型、及び硫酸エステル塩型が好ましく、特に好ましくは、硫酸エステル塩型である。

【0318】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法のためのアニオン性界面活性剤は、高級アルキル硫酸エステル塩（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム及びラウリル硫酸カリウム）；アルキルエーテル硫酸エステル塩（例えば、ＰＯＥ－トリエタノールアミンラウリルサルフェート及びナトリウムＰＯＥ－ラウリルサルフェート）；Ｎ－アシルサルコシン酸（例えば、ナトリウムラウロイルサルコシネート）；高級脂肪酸アミドスルホン酸塩（例えば、ナトリウムＮ－ミリストイルＮ－メチルタウレート、ナトリウムＮ－ココイル－Ｎ－メチルタウレート、及びナトリウムジャウロイルメチルタウレート（Ｓｏｄｉｕｍ ｊａｕｒｏｙｌｍｅｔｈｙｌ ｔａｕｒａｔｅ）；リン酸エステル塩（例えば、ナトリウムＰＯＥ－オレイルエーテルホスフェート及びＰＯＥステアリルエーテルリン酸）；スルホスクシネート（例えば、ナトリウムジ－２－エチルヘキシルスルホスクシネート、ナトリウムモノラウロイルモノエタノールアミドポリオキシエチレンスルホスクシネート、及びナトリウムラウリルポリプロピレングリコールスルホスクシネート）；アルキルベンゼンスルホネート（例えば、ナトリウム線状ドデシルベンゼンスルホネート、トリエタノールアミン線状ドデシルベンゼンスルホネート、線状ドデシルベンゼンスルホネート、及び線状ドデシルベンゼンスルホン酸）；高級脂肪酸エステルサルフェート（例えば、水素化ココナッツオイル脂肪酸グリセリル硫酸ナトリウム）；Ｎ－アシルグルタメート（例えば、モノナトリウムＮ－ラウロイルグルタメート、二ナトリウムＮ－ステアロイルグルタメート、及びナトリウムＮ－ミリストイル－Ｌ－グルタメート）；硫酸化油（例えば、ターキーレッドオイル）；ＰＯＥ－アルキルエーテルカルボン酸；ＰＯＥ－アルキルアリールエーテルカルボキシレート；α－オレフィンスルホネート；高級脂肪酸エステルスルホネート；ｓｅｃ－アルコールサルフェート；高級脂肪酸アルキルアミドサルフェート；ナトリウムラウロイルモノエタノールアミンスクシネート；ジトリエタノールアミンＮ－パルミトイルアスパルテート；及びカゼインナトリウムからなる群から選択される。

【0319】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法のための乳化剤系は、共乳化剤として１以上の非イオン性界面活性剤を更に含み得る。非イオン性界面活性剤は、好ましくは、８．９～１４のＨＬＢ値を有する。ＨＬＢが７のときの、水への溶解度及び油への溶解度のバランスが一般に知られている。即ち、本発明に好ましい界面活性剤は、油／水中で中程度の溶解度を有する。

【0320】

非イオン性界面活性剤は、以下を含み得る：（１）ポリエチレンオキシドエクステンディッド（ｅｘｔｅｎｄｅｄ）ソルビタンモノアルキレート（例えば、ポリソルベート）；（２）ポリアルコキシル化アルカノール；（３）ポリアルコキシル化アルキルフェノール（少なくとも約１４のＨＬＢ値を有するポリエトキシル化オクチル又はノニルフェノールを含み、これらは、ＩＣＯＮＯＬ（登録商標）及びＴＲＩＴＯＮ（登録商標）の商品名で市販されている）；（４）ポロキサマー（ｐｏｌａｘａｍｅｒｓ）。エチレンオキシド（ＥＯ）とプロピレンオキシド（ＰＯ）のブロックコポリマーに基づく界面活性剤も効果的であり得る。ＥＯ－ＰＯ－ＥＯブロック及びＰＯ－ＥＯ－ＰＯブロックの両方が、ＨＬＢが少なくとも約１４、好ましくは少なくとも約１６である限り、十分に機能すると予想される。そのような界面活性剤は、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）及びＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＢＡＳＦ）の商品名で市販されている；（５）ポリアルコキシル化エステル：エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロールなどのポリアルコキシル化グリコールは、部分的又は完全にエステル化され得る、即ち、１以上のアルコールが、（Ｃ８～Ｃ２２）アルキルカルボン酸でエステル化され得る。少なくとも約１４、好ましくは少なくとも約１６のＨＬＢを有する係るポリエトキシル化エステルは、本発明の組成物における使用に好適であり得る；（６）アルキルポリグルコシド。これは、（Ｃ８～Ｃ１６）アルキル鎖長を有するグルコポン４２５を含む；（７）高ＨＬＢ値を有するスクロース脂肪酸エステル（８～１８）：スクロースココエート、スクロースジラウレート、スクロースジステアレート、スクロースヘキサエルケート、スクロースヘキサオレエート／ヘキサパルミテート／ヘキサステアレート、スクロースヘキサパルミテート、スクロースラウレート、スクロースミリステート、スクロースペンタエルケート、スクロースポリベヘネート、スクロースポリコットンシーデート、スクロースポリラウレート、スクロースポリリノレエート、スクロースポリオレエート、スクロースポリパルメート、スクロースポリソイエート、スクロースポリステアレート、スクロースリノオレエート、スクロースステアレート、スクローステトライソステアレート、スクローストリラウレート。

【0321】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ソルビタンモノオレエートモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレートモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレートモノラウレート、ソルビタンモノパルミテートモノパルミテート、ソルビタンモノステアレートモノステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ジグリセリルソルビタンペンタ－２－エチルヘキシレート、ジグリセリルソルビタンテトラ－２－エチルヘキシレート）；グリセリル及びポリグリセリル脂肪酸（例えば、モノコットンシードオイル脂肪酸グリセリン、グリセリルモノエルケート、グリセリルセスキオレエート、グリセリルモノステアレート、α，α’－グリセリルオレエートピログルタメート、モノステアレートグリセリルリンゴ酸）；プロピレングリコール脂肪酸エステル（例えば、プロピレングリコールモノステアレート）；硬化ヒマシ油誘導体；グリセリルアルキルエーテル、及びそれらの組合せからなる群から選択される親油性非イオン性界面活性剤を含む。

【0322】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、ＰＯＥ－ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ＰＯＥ－ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ－ソルビタンモノステアレート、ＰＯＥ－ソルビタンモノオレエート、及びＰＯＥ－ソルビタンテトラオレエート）；ＰＯＥソルビトール脂肪酸エステル（例えば、ＰＯＥソルビトールモノラウレート、ＰＯＥ－ソルビトールモノオレエート、ＰＯＥ－ソルビトールペンタオレエート、及びＰＯＥ－ソルビトールモノステアレート）；ＰＯＥ－グリセリル脂肪酸エステル（例えば、ＰＯＥ－グリセリルモノステアレート、ＰＯＥ－グリセリルモノイソステアレート、及びＰＯＥグリセリングリセリルトリイソステアレートなどのＰＯＥ－モノオレエート）；ＰＯＥ－脂肪酸エステル（例えば、ＰＯＥ－ジステアレート、ＰＯＥ－モノジオレエート、及びエチレングリコールジステアレート）；ＰＯＥ－アルキルエーテル（例えば、ＰＯＥ－ラウリルエーテル、ＰＯＥ－オレイルエーテル、ＰＯＥ－ステアリルエーテル、ＰＯＥ－ベヘニルエーテル、ＰＯＥ２－オクチルドデシルエーテル、及びＰＯＥ－コレスタノールエーテル）；プルアロニクス（ｐｌｕａｒｏｎｉｃｓ）（例えば、プルアロニック（ｐｌｕａｒｏｎｉｃ））；ＰＯＥ－ＰＯＰ－アルキルエーテル（例えば、ＰＯＥ－ＰＯＰ－セチルエーテル、ＰＯＥ－ＰＯＰ_２－デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ－ＰＯＰ－モノブチルエーテル、ＰＯＥ－ＰＯＰ－ラノリン水和物、及びＰＯＥ－ＰＯＰグリセリングリセリルエーテル）；テトラＰＯＥ－テトラＰＯＰ－エチレンジアミノ濃縮物（例えば、テトロニック）；ＰＯＥ－ヒマシ油水素化ヒマシ油誘導体（例えば、ＰＯＥ－ヒマシ油、ＰＯＥ－水素化ヒマシ油、ＰＯＥ－水素化ヒマシ油モノイソステアレート、ＰＯＥ－水素化ヒマシ油トリイソステアレート、ＰＯＥ－水素化ヒマシ油モノピログルタミン酸モノイソステアリン酸ジエステル、及びＰＯＥ－水素化ヒマシ油マレイン酸）；ＰＯＥ－ミツロウラノリン誘導体（例えば、ＰＯＥ－ソルビトールミツロウ）；アルカノールアミド（例えば、パーム油脂肪酸ジエタノールアミド、ラウレートモノエタノールアミド、及び脂肪酸イソプロパノールアミド）；ＰＯＥ－プロピレングリコール脂肪酸エステル；ＰＯＥ－アルキルアミン；ＰＯＥ－脂肪酸アミド；スクロース脂肪酸エステル；アルキルエトキシジメチルアミンオキシド；及びトリオレイルリン酸からなる群から選択される親水性非イオン性界面活性剤を含む。

【0323】

親水性界面活性剤は、イオン性又は非イオン性であることができる。好適なイオン性界面活性剤としては、限定するものではないが、アルキルアンモニウム塩；フシジン酸塩；アミノ酸、オリゴペプチド、及びポリペプチドの脂肪酸誘導体；アミノ酸、オリゴペプチド、及びポリペプチドのグリセリド誘導体；レシチン及び水素化レシチン；リゾレシチン及び水素化リゾレシチン；リン脂質及びその誘導体；リゾリン脂質及びその誘導体；カルニチン脂肪酸エステル塩；アルキル硫酸塩；脂肪酸塩；ドキュセートナトリウム；アシルラクチレート；モノグリセリド及びジグリセリドのモノアセチル化及びジアセチル化酒石酸エステル；スクシニル化モノグリセリド及びジグリセリド；モノグリセリド及びジグリセリドのクエン酸エステル；及びそれらの混合物が挙げられる。

【0324】

前述の群において、イオン性界面活性剤としては、例として、レシチン、リゾレシチン、リン脂質、リゾリン脂質及びその誘導体；カルニチン脂肪酸エステル塩；アルキル硫酸塩；脂肪酸塩；ドキュセートナトリウム；アシルラクチレート；モノグリセリド及びジグリセリドのモノアセチル化及びジアセチル化酒石酸エステル；スクシニル化モノグリセリド及びジグリセリド；モノグリセリド及びジグリセリドのクエン酸エステル；及びそれらの混合物が挙げられる。

【0325】

イオン性界面活性剤は、レシチン、リゾレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルセリン、ＰＥＧ－ホスファチジルエタノールアミン、ＰＶＰ－ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸のラクチル酸エステル、ステアロイル－２－ラクチレート、ステアロイルラクチレート、スクシニル化モノグリセリド、モノ／ジグリセリドのモノ／ジアセチル化酒石酸エステル、モノ／ジグリセリドのクエン酸エステル、コリルサルコシン、カプロエート、カプリレート、カプレート、ラウレート、ミリステート、パルミテート、オレエート、リシノレート、リノレート、リノレネート、ステアレート、ラウリル硫酸塩、テラセシル硫酸塩、ドキュセート、ラウロイルカルニチン、パルミトイルカルニチン、ミリストイルカルニチン、並びにそれらの塩及び混合物の形態でイオン化することができる。

【0326】

親水性非イオン性界面活性剤としては、限定するものではないが、アルキルグルコシド；アルキルマルトシド；アルキルチオグルコシド；ラウリルマクロゴルグリセリド；ポリエチレングリコールアルキルエーテルなどのポリオキシアルキレンアルキルエーテル；ポリエチレングリコールアルキルフェノールなどのポリオキシアルキレンアルキルフェノール；ポリエチレングリコール脂肪酸モノエステル及びポリエチレングリコール脂肪酸ジエステルなどのポリオキシアルキレンアルキルフェノール脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールグリセロール脂肪酸エステル；ポリグリセロール脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステルなどのポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル；グリセリド、植物油、水素化植物油、脂肪酸、及びステロールからなる群の少なくとも１つのメンバとポリオールの親水性エステル交換生成物；ポリオキシエチレンステロール、誘導体、及びそれらの類似体；ポリオキシエチル化ビタミン及びその誘導体；ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；及びそれらの混合物；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、及びトリグリセリド、植物油、及び水素化植物油からなる群の少なくとも１つのメンバとポリオールの親水性エステル交換生成物が挙げられる。ポリオールは、グリセロール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、プロピレングリコール、ペンタエリスリトール、又は糖類であることができる。

【0327】

他の親水性－非イオン性界面活性剤としては、限定するものてはないが、ＰＥＧ－１０ラウレート、ＰＥＧ－１２ラウレート、ＰＥＧ－２０ラウレート、ＰＥＧ－３２ラウレート、ＰＥＧ－３２ジラウレート、ＰＥＧ－１２オレエート、ＰＥＧ－１５オレエート、ＰＥＧ－２０オレエート、ＰＥＧ－２０ジオレエート、ＰＥＧ－３２オレエート、ＰＥＧ－２００オレエート、ＰＥＧ－４００オレエート、ＰＥＧ－１５ステアレート、ＰＥＧ－３２ジステアレート、ＰＥＧ－４０ステアレート、ＰＥＧ－１００ステアレート、ＰＥＧ－２０ジラウレート、ＰＥＧ－２５グリセリルトリオレエート、ＰＥＧ－３２ジオレエート、ＰＥＧ－２０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－３０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－２０グリセリルステアレート、ＰＥＧ－２０グリセリルオレエート、ＰＥＧ－３０グリセリルオレエート、ＰＥＧ－３０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－４０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－４０パーム核油、ＰＥＧ－５０水素化ヒマシ油、ＰＥＧ－４０ヒマシ油、ＰＥＧ－３５ヒマシ油、ＰＥＧ－６０ヒマシ油、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油、ＰＥＧ－６０水素化ヒマシ油、ＰＥＧ－６０コーン油、ＰＥＧ－６カプレート／カプリレートグリセリド、ＰＥＧ－８カプレート／カプリレートグリセリド、ポリグリセリル－１０ラウレート、ＰＥＧ－３０コレステロール、ＰＥＧ－２５フィトステロール、ＰＥＧ－３０大豆ステロール、ＰＥＧ－２０トリオレエート、ＰＥＧ－４０ソルビタンオレエート、ＰＥＧ－８０ソルビタンラウレート、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＯＥ－９ラウリルエーテル、ＰＯＥ－２３ラウリルエーテル、ＰＯＥ－１０オレイルエーテル、ＰＯＥ－２０オレイルエーテル、ＰＯＥ－２０ステアリルエーテル、トコフェリルＰＥＧ－１００スクシネート、ＰＥＧ－２４コレステロール、ポリグリセリル－１０オレエート、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ６０、スクロースモノステアレート、スクロースモノラウレート、スクロースモノパルミテート、ＰＥＧ１０－１００ノニルフェノールシリーズ、ＰＥＧ１５－１００オクチルフェノールシリーズ、及びポロキサマーが挙げられる。

【0328】

好適な親油性界面活性剤としては、ほんの一例として、脂肪アルコール；グリセロール脂肪酸エステル；アセチル化グリセロール脂肪酸エステル；低級アルコール脂肪酸エステル；プロピレングリコール脂肪酸エステル；ソルビタン脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル；ステロール及びステロール誘導体；ポリオキシエチル化ステロール及びステロール誘導体；ポリエチレングリコールアルキルエーテル；糖エステル；糖エーテル；モノグリセリド及びジグリセリドの乳酸誘導体；グリセリド、植物油、水素化植物油、脂肪酸、及びステロールからなる群の少なくとも１つのメンバとポリオールの疎水性エステル交換生成物；油溶性ビタミン／ビタミン誘導体；及びそれらの混合物が挙げられる。この群のうち、好ましい親油性界面活性剤としては、グリセロール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、及びそれらの混合物が挙げられる、又は植物油、水素化植物油、及びトリグリセリドからなる群の少なくとも１つのメンバとポリオールの疎水性エステル交換生成物である。

【0329】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、モノグリセロール誘導体及び／又はジグリセロール誘導体を含む。具体例としては、モノグリセロールモノオクタノエート、モノオクチルモノグリセリルエーテル、モノグリセロールモノノナノエート、モノノニルモノグリセリルエーテル、モノグリセロールモノデカノエート、モノデシルモノグリセリルエーテル、モノグリセロールモノウンデシレネート、モノウンデシレニルグリセリルエーテル、モノグリセロールモノドデカノエート、モノドデシルモノグリセリルエーテル、モノグリセロールモノテトラデカノエート、モノグリセロールモノヘキサデカノエート、モノグリセロールモノオレエート、及びモノグリセロールモノイソステアレート、並びにジグリセロールモノオクタノエート、モノオクチルジグリセリルエーテル、ジグリセロールモノノナノエート、モノノニルジグリセリルエーテル、ジグリセロールモノデカノエート、モノデシルジグリセリルエーテル、ジグリセロールモノウンデシレネート、モノウンデシレニルグリセリルエーテル、ジグリセロールモノドデカノエート、モノドデシルジグリセリルエーテル、ジグリセロールモノテトラデカノエート、ジグリセロールモノヘキサデカノエート、ジグリセロールモノオレエート、及びジグリセロールモノイソステアレートなどのジグリセロール誘導体が挙げられる。

【0330】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、ラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースのうちの１以上とを含む。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、ラウリン酸スクロースとを含む。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、パルミチン酸スクロースとを含む。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、ラウリン酸スクロースと、パルミチン酸スクロースとを含み、エマルジョン担体中のラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースは、１：１～１：３のラウリン酸スクロース対パルミチン酸スクロースの重量比を有する。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、ラウリン酸スクロースと、パルミチン酸スクロースとを含み、エマルジョン担体中のラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースは、１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、及び１：３．０から選択されるラウリン酸スクロース対パルミチン酸スクロースの重量比を有する。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、ラウリン酸スクロースと、パルミチン酸スクロースとを含み、エマルジョン担体中のラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースは、１：１、１：１．１、１：１．２、及び１：１．３から選択されるラウリン酸スクロース対パルミチン酸スクロースの重量比を有する。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、ラウリン酸スクロースと、パルミチン酸スクロースとを含み、エマルジョン担体中のラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースは、１：１のラウリン酸スクロース対パルミチン酸スクロースの重量比を有する。

【0331】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、グリセロールと、ラウリン酸スクロースと、パルミチン酸スクロースとを含み、エマルジョン担体中のラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースは、１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、及び１：３．０から選択されるラウリン酸スクロース対パルミチン酸スクロースの重量比を有し、エマルジョン担体中の絹乳化剤及びグリセロールは、１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、及び１：３．０から選択される絹乳化剤対グリセロールの重量比を有する。

【0332】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、絹乳化剤と、グリセロールと、ラウリン酸スクロースと、パルミチン酸スクロースとを含み、エマルジョン担体中のラウリン酸スクロース及びパルミチン酸スクロースは、１：１、１：１．１、１：１．２、及び１：１．３から選択されるラウリン酸スクロース対パルミチン酸スクロースの重量比を有し、エマルジョン担体中の絹乳化剤及びグリセロールは、１：１、１：２、及び１：３．０から選択される絹乳化剤対グリセロールの重量比を有する。

【0333】

いくつかの実施形態では、乳化剤系は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して０．１重量％～５．０重量％の範囲の重量パーセントでエマルジョン担体に含有される。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して０．１重量％～３．０重量％の範囲の重量パーセントでエマルジョン担体に含有される。いくつかの実施形態では、乳化剤系は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して０．１重量％～２．０重量％の範囲の重量パーセントでエマルジョン担体に含有される。

【0334】

いくつかの実施形態では、エマルジョン担体は、前記シルク乳化剤を含む乳化剤系で乳化された油相を含む。脂肪性材料は、油相を形成するのに有用であり得る。脂肪性材料は、炭化水素油、シリコン油、高級脂肪酸、高級アルコール、合成エステル油、シリコーン油、液体油脂、固体油脂、ワックス、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0335】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、ワックスを含む。ワックスは、ポリエチレンワックス、ポリプロピレンワックス、ミツロウ、カンデリラワックス、パラフィンワックス、オゾケライト、マイクロクリスタリンワックス、カルナウバワックス、コットンワックス、エスパルトワックス、カルナウバワックス、ベイベリーワックス、ツリーワックス、鯨ワックス、モンタンワックス、ライスワックス、ラノリン、カポック（ｋａｐｏｋ）ワックス、酢酸ラノリン、液体ラノリン、サトウキビワックス、ラノリン脂肪酸イソプロピルエステル、ラウリン酸ヘキシル、還元ラノリン、ホホバワックス、硬質ラノリン、シェラックワックス、ＰＯＥラノリンアルコールエーテル、ＰＯＥラノリンアルコールアセテート、ＰＯＥコレステロールエーテル、ラノリン脂肪酸ポリエチレングリコール、ＰＯＥ水素化ラノリンアルコールエーテル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0336】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、エステル油を含む。エステル油は、コレステリルイソステアレート、イソプロピルパルミテート、イソプロピルミリステート、ネオペンチルグリコールジカプレート、イソプロピルイソステアレート、オクタデシルミリステート、セチル２－エチルヘキサノエート、セテアリルイソノナノエート、セテアリルオクタネート、イソノニルトリイソナノエート、イソトリデシルイソナノエート、グリセリルトリ－２－エチルヘキサノエート、グリセリルトリ（カプリレートカプレート）、ジエチレングリコールモノエチルエーテルオレエート、ジカプリリルエーテル、カプリル酸／カプリン酸プロピレングリコールジエステル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0337】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、グリセリド脂肪エステルを含む。本明細書においては、用語「グリセリド脂肪酸エステル」は、グリセロールとＣ_６－Ｃ_３０カルボン酸などの長鎖カルボン酸との間に形成されるモノ－、ジ－、及びトリ－エステルを意味する。カルボン酸は、飽和又は不飽和であることができ、又はヒドロキシルなどの親水性基を含むことができる。好ましいグリセリド脂肪酸エステルは、Ｃ_１０～Ｃ_２４、好ましくはＣ_１０～Ｃ_２２、最も好ましくはＣ_１２～Ｃ_２０の範囲の炭素鎖長のカルボン酸に由来する。

【0338】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、合成エステル油を含む。いくつかの実施形態では、合成エステル油は、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２－ヒドロキシステアリン酸コレステリル、エチレングリコールジ－２－エチルヘキシレート、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、Ｎ－アルキルグリコールモノイソステアレート、ネオペンチルグリコールジカプレート、ジイソステアリルマレート、グリセリルジ－２－ヘプチルウンデカノエート、トリメチロールプロパントリ－２－エチルヘキシレート、トリメチロールプロパントリイソステアレート、ペンタンエリスリトールテトラ－２－エチルヘキシレート、グリセリルトリ－２－エチルヘキシレート、トリメチロールプロパントリイソステアレート、セチル２－エチルヘキサノエート、２－エチルヘキシルパルミテート、グリセリルトリミリステート、トリ－２－ヘプチルウンデカン酸グリセリド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイルオレエート、セトステアリルアルコール、アセトグリセリド、パルミチン酸２－ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソプロピル、Ｎ－ラウロイル－Ｌ－グルタミン酸－２－オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ－２－ヘプチルウンデシル、ラウリン酸エチル、ジ－２－エチルヘキシルセバケート（ｃｅｂａｔａｔｅ）、ミリスチン酸２－ヘキシルデシル、パルミチン酸２－ヘキシルデシル、アジピン酸２－ヘキシルデシル、ジイソプロピルセバケート（ｃｅｂａｔａｔｅ）、コハク酸２－エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0339】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、エーテル油を含む。いくつかの実施形態では、エーテル油は、アルキル－１，３－ジメチルエチルエーテル、ノニルフェニルエーテル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0340】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、高級脂肪酸を含む。本明細書においては、高級脂肪酸は、８～２２の炭素数を有する。いくつかの実施形態では、高級脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トールオイル、イソステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0341】

実施形態では、脂肪性材料は、任意に、高級脂肪アルコールを含む。本明細書においては、高級脂肪族アルコールは、８～２２の炭素数を有する。いくつかの実施形態では、高級脂肪酸は、直鎖アルコール（例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、及びセトステアリルアルコール）及び分岐鎖エチルアルコール（例えば、モノステアリルグリセリルエーテル（バチルアルコール）、２－デシルテトラデシノール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、ヘキシルドデカノール、イソステアリルアルコール、及びオクチルドデカノール）、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0342】

いくつかの実施形態では、脂肪相は、液体油脂を含む。いくつかの実施形態では、液体油脂肪は、アボカド油、椿油、カメ油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、菜種油、卵黄油、ゴマ種子油、杏仁油、小麦胚芽油、ササンクア油、ヒマシ油、亜麻仁油、サフラワー油、綿実油、ペリラ油、大豆油、ピーナッツ油、茶種子油、カヤ油、ライスブラン油、中国木油、日本木油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセロール、トリオクタン酸グリセリル、及びトリイソパルミチン酸グリセリル、並びにそれらの組合せからなる群から選択される。

【0343】

いくつかの実施形態では、脂肪相は、固形油脂を含む。いくつかの実施形態では、固形油脂は、カカオバター、ココナッツ油、ウマ獣脂、パーム脂、硬化ココナッツ油、パーム油、牛獣脂、羊獣脂、硬化牛獣脂、パーム核油、豚獣脂、牛骨獣脂、ジャパニーズコアワックス（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｃｏｒｅ ｗａｘ）、硬化油、ニートフット（ｎｅｅｔｆｏｏｔ）獣脂、ジャパニーズワックス、及び水素化ヒマシ油、並びにそれらの組合せからなる群から選択される。

【0344】

いくつかの実施形態では、脂肪相は、植物油を含む。いくつかの実施形態では、植物油は、ブリチ油（ｂｕｒｉｔｉ ｏｉｌ）、大豆油、オリーブ油、茶樹油、ローズマリー油、ホホバ油、ココナッツ油、ゴマ種子油、ゴマ油、パーム油、アボカド油、ババス油、米油、アーモンド油、アルゴン油、ヒマワリ油、及びそれらの組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、植物油は、ココナッツ油、ヒマワリ油、及びゴマ油からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、油性成分は、カカオバター、パームステアリン、ヒマワリ油、大豆油、及びココナッツ油から選択される。

【0345】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法のための油相は、脂質材料を含む。いくつかの実施形態では、脂質材料は、セラミド、リン脂質（例えば、大豆レシチン、卵レシチン）、糖脂質、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0346】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法のための油相は、炭化水素油を含む。本明細書においては、炭化水素油は、２０個未満の炭素原子の平均炭素鎖長を有する。好適な炭化水素油としては、環状炭化水素、直鎖脂肪族炭化水素（飽和又は不飽和）、及び分枝鎖脂肪族炭化水素（飽和又は不飽和）が挙げられる。直鎖炭化水素油は、典型的には、約６個～約１６個の炭素原子、好ましくは約８個～約１４個の炭素原子を含む。分枝鎖炭化水素油は、通常、より多くの炭素原子を含むことができ、例えば、約６個～約２０個の炭素原子、好ましくは約８個～約１８個の炭素原子を含む。本発明の好適な炭化水素油は、一般に、周囲温度（２５から３０℃）で、０．０００１～０．５Ｐａ・ｓ、好ましくは０．００１～０．０５Ｐａ・ｓ、より好ましくは０．００１～０．０２Ｐａ・ｓの粘度を有する。

【0347】

いくつかの実施形態では、水素炭素油は、液状ペトロラタム、スクアラン、プリスタン、パラフィン、イソパラフィン、セレシン、スクアレン、鉱油、軽質鉱油、軽質鉱油と重質鉱油の混合物、ポリイソブテン、水素化ポリイソブテン、テルペンオイル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0348】

いくつかの実施形態では、水素炭素油は、軽質鉱油である。本明細書においては、鉱油は、石油から得られる透明な油性液体であり、そこからワックスが除去され、より揮発性の高い留分が蒸留によって除去される。２５０℃～３００℃で蒸留される留分は鉱油と呼ばれ、炭化水素の混合物からなり、炭化水素分子当たりの炭素原子の数は、通常、Ｃ１０～Ｃ４０である。鉱油は、その粘度により特徴付けることができ、軽質鉱油は、重質鉱油よりも比較的粘度が粘度が低く、これらの用語は、Ｕ．Ｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ， ２２ｎｄ ｒｅｖｉｓｉｏｎ， ｐ． ８９９ （１９９０）により具体的に定義されている。本発明における使用のための好適な軽質鉱油の市販品の例としては、Ｓｉｌｋｏｌｅｎｅから入手可能なＳｉｒｉｕｓ（登録商標）Ｍ４０（炭素鎖長Ｃ０～Ｃ２８、主にＣ１２～Ｃ２０、粘度４．３×１０Ｐａ・ｓ）である。本発明において使用できる他の炭化水素油としては、テトラデカン、ヘキサデカン、及びオクタデカンなどの線状飽和炭化水素、ジオクチルシクロヘキサン（例えば、ＨｅｎｋｅｌのＣＥＴＩＯＬ（登録商標）Ｓ）などの環状炭化水素、分岐鎖炭化水素（例えば、Ｅｘｘｏｎ ＣｏｒｐのＩＳＯＰＡＲ（登録商標）及びＩＳＯＰＡＲ（登録商標）Ｖ）を含む比較的低分子量の炭化水素が挙げられる。

【0349】

いくつかの実施形態では、油相用の脂肪性材料は、ネオペンチルグリコールジヘプタノエート、プロピレングリコールジカプリレート、ジオクチルアジペート、ココカプリレート／カプレート、ジエチルヘキシルアジペート、ジイソプロピルダイマージリノレエート、ジイソステアリルダイマージリノレエート、ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ ｐａｒｋｉｉ（シア）バター、Ｃ１２－Ｃ１３アルキルラクテート、ジ－Ｃ１２－Ｃ１３アルキルタートレート、トリ－Ｃ１２－Ｃ１３アルキルシトレート、Ｃ１２－Ｃ１５アルキルラクテート、ｐｐｇジオクタノエート、ジエチレングリコールジオクタノエート、メドウフォームオイル、Ｃ１２－１５アルキルオレエート、トリデシルネオペンタノエート、セテアリルアルコール及びポリソルベート６０、Ｃ１８－Ｃ２６トリグリセリド、セテアリルアルコール＆セテアリルグルコシド、アセチル化ラノリン、ｖｐ／エイコセンコポリマー、グリセリルヒドロキシステアレート、Ｃ１８－３６酸性グリコールエステル、Ｃ１８－３６トリグリセリド、グリセリルヒドロキシステアレート、及びそれらの混合物からなる群から選択される。また、セチルアルコール＆グリセリルステアレート＆ＰＥＧ－７５、ステアレート＆セテス－２０＆ステアレス－２０、ラウリルグルコシド＆ポリグリセリル－２ジポリヒドロキシステアレート、ベヘネス－２５、ポリアミド－３＆ペンタエリスリチルテトラ－ジ－ｔ－ブチルヒドロキシシンナメート、ポリアミド－４及びＰＥＧ－１００ステアレート、セチルホスフェートカリウム、ステアリン酸、及びヘクトライトも適切で好ましい。

【0350】

いくつかの実施形態では、油相用の脂肪性材料は、液体パラフィン、液体イソパラフィン、ネオペンチルグリコールジカプレート、イソプロピルイソステアレート、セチル２－エチルヘサノエート、イソノニルイソノナノエート、グリセリルトリ（カプリレートカプレート）、アルキ－１，３－ジメチルブチルエーテル、分子量１００～５００のメチルポリシロキサン、デカメチルシドペンタシロキサン、オクタメチルシドテトラシロキサン、炭素数１２～２２の高級脂肪酸、炭素数１２～２２の高級アルコール、セラミド、糖脂質、及びテルペン油からなる群から選択される。

【0351】

いくつかの実施形態では、油相の脂肪性材料は、パラフィン油、ステアリン酸グリセリル、ミリスチン酸イソプロピル、アジピン酸ジイソプロピル、セチルステアリル２－エチルヘキサノエート、水素化ポリイソブテン、ワセリン、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、マイクロクリスタリンワックス、ラノリン及びステアリン酸、シリコーンオイル、並びにそれらの組合せからなる群から選択される。

【0352】

実施形態では、油相用の脂肪性材料は、ホホバ油、オリーブ油、カメリア油、アボカド油、カカオ油、ヒマワリ油、杏仁油、パーム油、ヒマシ油、ブリチ油、中鎖トリグリセリドを含む植物油からなる群から選択される。

【0353】

実施形態では、絹乳化剤によって乳化可能な油性材料は、植物油、イソドデカン、及びイソヘキサデカン、並びに脂肪酸の１以上の油性エステルからなる群から選択され、植物油は、ホホバ油及び／又はカメリア油から選択され、前記油性エステルは、イソノニルイソノナノエート及びココカプリレートから選択される。

【0354】

いくつかの実施形態では、油相は、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法の総重量に対して１．０重量％～約９５重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、油相は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して４５．０重量％～約９５重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、油相は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して４５．０重量％～約６５．０重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、油相は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して５．０重量％～約４５重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、油相は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して５．０重量％～約３５重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、油相は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して１０．０重量％～約２５重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。

【0355】

いくつかの実施形態では、油相は、エマルジョン担体の総重量に対して５０．０重量％～約９５．０重量％の重量パーセントでコラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法中に存在する。いくつかの実施形態では、油相は、エマルジョン担体の総重量に対して約５重量％～４５重量％の重量パーセントでコラーゲンブースティング組成物中に存在する。その理由は、係る含有量により、エマルジョン担体は、室温付近のより広い温度範囲に亘って安定性を有し、良好な感触を有することができるからである。

【0356】

いくつかの実施形態では、エマルジョン担体用の水相は、水、水溶液、アルコールと水のブレンド、又は水性担体としてのリオトロピック液晶相を含む。本発明のコラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法に含まれる水の選択は、特に限定されない。具体的な例としては、精製水、イオン交換水、水道水が挙げられる。いくつかの実施形態では、水性は、エタンジオール、プロパンジオール、グリセロール、ブタンジオール、ブタンテトラオール、キシリトール、ソルビトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコールからなる群から選択される１以上の低分子多価アルコールを更に含む。いくつかの実施形態では、水相は、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールを含む１以上の低アルコール溶媒を更に含む。

【0357】

水と多価アルコールのブレンド比は、エマルジョンの配合の種類に基づいて適切に決定される。

【0358】

いくつかの実施形態では、エマルジョンは、組成物の総重量に対して約５０重量％～約９８重量％の水相を含む。いくつかの実施形態では、エマルジョンは、組成物の総重量に対して約６０重量％～約９０重量％の水相を含む。いくつかの実施形態では、エマルジョン中の水相の量は、組成物の総重量に対して約５０．０重量％、約５１．０重量％、約５２．０重量％、約５３．０重量％、約５４．０重量％、約５５．０重量％、約５６．０重量％、約５７．０重量％、約５８．０重量％、約５９．０重量％、約６０．０重量％、約６１．０重量％、約６２．０重量％、約６３．０重量％、約６４．０重量％、約６５．０重量％、約６６．０重量％、約６７．０重量％、約６８．０重量％、約６９．０重量％、約７０．０重量％、約７１．０重量％、約７２．０重量％、約７３．０重量％、約７４．０重量％、約７５．０重量％、約７６．０重量％、約７７．０重量％、約７８．０重量％、約７９．０重量％、約８０．０重量％、約８１．０重量％、約８２．０重量％、約８３．０重量％、約８４．０重量％、約８５．０重量％、約８６．０重量％、約８７．０重量％、約８８．０重量％、約８９．０重量％、約９０．０重量％、約９１．０重量％、約９２．０重量％、約９３．０重量％、約９４．０重量％、約９５．０重量％、約９６．０重量％、約９７．０重量％、約９８．０重量％から選択される。

【0359】

いくつかの実施形態では、シルク含有乳化剤系は、水相に存在する。

【0360】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、粘度調整剤及び／又は増粘剤を含む。いくつかの実施形態では、増粘剤は、エチレングリコールモノステアレート、カルボマーポリマー、カルボキシビニルポリマー、アクリルコポリマー、メチルセルロース、ラクチド及びグリコリドモノマーのコポリマー、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カラギーナン、疎水性変性ヒドロキシエチルセルロース、ラポナイト、セルロースエーテル（例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びナトリウムカルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース）の水溶性塩、カラヤガム、アラビアゴム、グアーガム（Ｇｕａｒｓ）、ＨＰグアーガムなどの天然ガム、ヘテロ多糖ガム（例えば、キサンタンガム）、及びトラガカントガムからなる群から選択される。

【0361】

いくつかの実施形態では、増粘剤は、タルク、ヒュームドシリカ、ポリマーポリエーテル化合物（例えば、１個～約１８個の炭素原子を含むアルキル又はアシル基でキャップされたポリエチレン又はポリプロピレンオキシド（ＭＷ３００～１，０００，０００））、エチレングリコールステアレート、１６個～２２個の炭素原子を有する脂肪酸のアルカノールアミド、ポリエチレングリコール３ジステアリン酸、ポリアクリル酸（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）４２０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）４８８、又はＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）４９３）、アクリル酸の架橋ポリマー、アクリル酸と疎水性モノマーとのコポリマー、カルボン酸含有モノマーとアクリルエステルとのコポリマー（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）１３４２）、アクリル酸とアクリレートエステルとの架橋コポリマー、及び多官能剤で架橋されたポリアクリル酸（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９１０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９３４、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９４０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９４１、及びＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９８０、Ｕｌｔｒｅｚ（登録商標）１０）、及び結晶性長鎖アシル誘導体からなる群から選択される。

【0362】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約０．１重量％～約１５．０重量％の増粘剤／粘度調整剤を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約０．１重量％～約１０．０重量％の増粘剤／粘度調整剤を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約０．５重量％～約６．０重量％の増粘剤／粘度調整剤を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約０．９重量％～約４．０重量％の増粘剤／粘度調整剤を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約２．０重量％の増粘剤／粘度調整剤を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法に存在する増粘剤／粘度調整剤の量は、組成物の総重量に対して約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約１．２５重量％、約１．５０重量％、約１．７５重量％、約２．０重量％、約２．２５重量％、約２．５重量％、約２．７５重量％、約３．０重量％、約３．２５重量％、約３．５重量％、約３．７５重量％、約４．０重量％、約４．２５重量％、約４．５重量％、約４．７５重量％、約５．０重量％、約５．２５重量％、約５．５重量％、約５．７５重量％、約６．０重量％、約６．２５重量％、約７．５重量％、約７．７５重量％、約８．０重量％、約８．２５重量％、約８．５重量％、約８．７５重量％、約９．０重量％、約９．２５重量％、約９．５重量％、約９．７５重量％、約１０．０重量％、約１０．１重量％、約１０．２重量％、約１０．３重量％、約１０．４重量％、約１０．５重量％、約１０．６重量％、約１０．７重量％、約１０．８重量％、約１０．９重量％、約１１．０重量％、約１１．１重量％、約１１．２重量％、約１１．３重量％、約１１．４重量％、約１１．５重量％、約１１．６重量％、約１１．７重量％、約１１．８重量％、約１１．９重量％、約１２．０重量％、約１２．１重量％、約１２．２重量％、約１２．３重量％、約１２．４重量％、約１２．５重量％、約１２．６重量％、約１２．７重量％、約１２．８重量％、約１２．９重量％、約１３．０重量％、約１３．１重量％、約１３．２重量％、約１３．３重量％、約１３．４重量％、約１３．５重量％、約１３．６重量％、約１３．７重量％、約１３．８重量％、約１３．９重量％、約１４．０重量％、約１４．１重量％、約１４．２重量％、約１４．３重量％、約１４．４重量％、約１４．５重量％、約１４．６重量％、約１４．７重量％、約１４．８重量％、約１４．９重量％、約１５．０重量％からなる群から選択される。

【0363】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、水性担体として、水、水溶液、アルコール、アルコールと水とのブレンド物、又はリオトロピック液晶相を含む。組成物に含まれる水の選択は、特に限定されない。具体的な例としては、精製水、イオン交換水、水道水などが挙げられる。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、エタンジオール、プロパンジオール、グリセロール、ブタンジオール、ブタンテトラオール、キシリトール、ソルビトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコールからなる群から選択される１以上の低分子多価アルコールを更に含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールを含む１以上の低アルコール溶媒を更に含む。

【0364】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約５０重量％～約９８重量％の水性担体を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約６０重量％～約９０重量％の水性担体を含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法中の水性担体の量は、組成物の総重量に対して約５０．０重量％、約５１．０重量％、約５２．０重量％、約５３．０重量％、約５４．０重量％、約５５．０重量％、約５６．０重量％、約５７．０重量％、約５８．０重量％、約５９．０重量％、約６０．０重量％、約６１．０重量％、約６２．０重量％、約６３．０重量％、約６４．０重量％、約６５．０重量％、約６６．０重量％、約６７．０重量％、約６８．０重量％、約６９．０重量％、約７０．０重量％、約７１．０重量％、約７２．０重量％、約７３．０重量％、約７４．０重量％、約７５．０重量％、約７６．０重量％、約７７．０重量％、約７８．０重量％、約７９．０重量％、約８０．０重量％、約８１．０重量％、約８２．０重量％、約８３．０重量％、約８４．０重量％、約８５．０重量％、約８６．０重量％、約８７．０重量％、約８８．０重量％、約８９．０重量％、約９０．０重量％、約９１．０重量％、約９２．０重量％、約９３．０重量％、約９４．０重量％、約９５．０重量％、約９６．０重量％、約９７．０重量％、約９８．０重量％から選択される。

【0365】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、非水性液体担体を含む。本明細書においては、非水性液体担体は、液体担体が実質的に水を含まないことを意味する。本発明において、「液体担体は実質的に水を含まない」とは、液体担体が水を含まない、又は、液体担体が水を含む場合でも、水の量は非常に少ないことを意味する。本発明において、含まれる場合の水の量は、組成物の重量に対して１重量％以下、好ましくは０．５重量％以下、より好ましくは０．３重量％以下、更により好ましくは０．１重量％以下、更により好ましくは０重量％である。

【0366】

いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、鉱油、炭化水素油、水素化ポリデセン、ポリイソブテン、イソパラフィン、イソドデカン、イソヘキサデカン、揮発性シリコーン油、不揮発性シリコーン油、イソヘキサデカン、スクアレン、スクアレン、エステル油、及びそれらの組合せからなる群から選択される油性材料を含む。いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、白色鉱油、スクアラン、水素化ポリイソブテン、イソヘキサデカン、及びイソドデカンからなる群から選択される油性材料を含む。いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、スクアラン及び水素化ポリイソブテンを含む。いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、白色鉱油、イソヘキサデカン、及びイソドデカンを含む。
いくつかの実施形態では、炭化水素油は、液体パラフィン、液体イソパラフィン、スクアレン、鉱油、飽和及び不飽和ドデカン、飽和及び不飽和トリデカン、飽和及び不飽和テトラデカン、飽和及び不飽和ペンタデカン、飽和及び不飽和ヘキサデカン、ポリブテン、ポリデセン、ペルメチル置換異性体、例えば、ヘキサデカン及びエイコサンのペルメチル置換異性体（例えば、２，２，４，４，６，６，８，８－ジメチル－１０－メチルウンデカン及び２，２，４，４，６，６－ジメチル－８－メチルノナン）、イソブチレンとブタンとのコポリマー、ポリ－α－オレフィン（例えば、エチレン、プロピレン、１－ブテン、１－ペンテン、１－ヘキセン、１－オクテン、１－デセン、１－ドデカン、１－テトラデセンのポリマー）、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0367】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、イソプロピルイソステアレート、ヘキシルラウレート、イソヘキシルラウレート、イソヘキシルパルミテート、イソプロピルパルミテート、デシルオレエート、イソデシルオレエート、ヘキサデシルステアレート、デシルステアレート、イソプロピルイソステアレート、ジヘキシルデシルアジペート、ラウリルラクテート、ミリスチルラクテート、セチルラクテート、オレイルステアレート、オレイルオレエート、オレイルミリステート、ラウリルアセテート、セチルプロピオネート、オレイルアジペート、イソプロピルミリステート、グリコールステアレート、及びイソプロピルラウレート、イソセチルステアロイルステアレート、ジイソプロピルアジペート、トリステアリルシトレート、トリオレイン、トリステアリングリセリルジラウレート、トリメチロールプロパンのＣ_８－Ｃ_１０トリエステル、３，３ジエタノール－１，５ペンタジオールのテトラエステル、アジピン酸のＣ_８－Ｃ_１０ジエステル、エチレングリコールモノ及びジ脂肪酸エステル、ジエチレングリコールモノ及びジ脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールモノ及びジ脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノ及びジ脂肪酸エステル、ポリプロピレングリコールモノオレエート、ポリプロピレングリコール２０００モノステアレート、エトキシル化プロピレングリコールモノステアレート、グリセリルモノ及びジ脂肪酸エステル、ポリグリセロールポリ脂肪酸エステル、エトキシル化グリセリルモノステアレート、１，３－ブチレングリコールモノステアレート、１，３－ブチレングリコールジステアレート、ソルビタン脂肪酸エステル、及びポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標））、及びそれらの組合せからなる群から選択される脂肪酸エステル油を含む有機性油を含む。

【0368】

いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、約８個～約２０個の炭素原子を有する揮発性イソパラフィンを含む。いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、約８個～約１６個の炭素原子を有する揮発性イソパラフィンを含む。いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、約１０個～約１６個の炭素原子を有する揮発性イソパラフィンを含む。いくつかの実施形態では、揮発性イソパラフィンは、イソブテンの三量体、四量体、及び五量体、並びにそれらの混合物からなる群から選択される。市販のイソパラフィン炭化水素は、その重合度の分布を有することができ、例えば、三量体、四量体、及び五量体の混合物であることができる。本明細書においては、四量体とは、四量体が最も高い含量である市販のイソパラフィン炭化水素、即ち、四量体が、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、更により好ましくは８５％以上の量で含有されることを意味する。

【0369】

いくつかの実施形態では、揮発性イソパラフィンは、いくつかのグレードのイソパラフィンの混合物である。いくつかの実施形態では、揮発性イソパラフィンは、３７．８℃で、約０．５ｍｍ^２・ｓ^－１～約５０ｍｍ^２・ｓ^－１、約０．８ｍｍ^２・ｓ^－１～約４０ｍｍ^２・ｓ^－１、約１ｍｍ^２・ｓ^－１～約３０ｍｍ^２・ｓ^－１、約１ｍｍ^２・ｓ^－１～約２０ｍｍ^２・ｓ^－１、及び約１ｍｍ^２・ｓ^－１～約１０ｍｍ^２・ｓ^－１から選択される粘度範囲を有する。２以上のイソパラフィン炭化水素溶媒を使用する場合、イソパラフィン炭化水素溶媒の混合物が前記粘度を有することが好ましい。

【0370】

いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、エステル油を含む。いくつかの実施形態では、エステル油は、３以下のＨＬＢを有し、室温で液体である。いくつかの実施形態では、エステル油は、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、及びラウリン酸メチルからなる群から選択される。実施形態では、エステル油は、ステアリン酸メチルである。

【0371】

いくつかの実施形態では、エステル油は、コンディショニングされた感触と製品の安定性との間のバランスに鑑みて、及び／又は発泡の防止に鑑みて、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約０．１重量％～約２５重量％、約０．５重量％～約１５重量％、約１．０重量％～約１０重量％、約１．０重量％～約５．０重量％から選択される重量パーセントで非水性液体担体に含まれる。

【0372】

いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、トリメチロイルプロパントリカプリレート／トリカプリレート、Ｃ１２－Ｃ１５アルキルベンゾエート、エチルヘキシルステアレート、エチルヘキシルココエート、デシルオレエート、デシルココエート、エチルオレエート、イソプロピルミリステート、エチルヘキシルパーラゴネート（ｅｔｈｙｌｈｅｘｙｌ ｐｅｒｌａｇｏｎａｔｅ）、ペンタエリスリチルテトラカプリレート／テトラカプレート、ＰＰＧ－３ベンジルエーテルミリステート、プロピレングリコールジカプリレート／ジカプレート、エチルヘキシルイソステアレート、エチルヘキシルパルミテート、及びｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ、ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ、ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ、及びｒａｐａｅ ｏｌｅｕｍなどの天然油からなる群から選択される脂肪酸エステルを含む。

【0373】

いくつかの実施形態では、非水性液体担体は、グリセリド脂肪酸エステルを含む。いくつかの実施形態では、本発明におけるヘアオイルにおける使用に好適なグリセリド脂肪酸エステルは、周囲温度（２５～３０℃）で０．０１～０．８Ｐａ・ｓ、好ましくは０．０１５～０．６Ｐａ・ｓ、より好ましくは０．０２～０．０６５Ｐａ・ｓの粘度を有する。

【0374】

実施形態では、脂肪性材料は、グリセリド脂肪酸エステルを含む。本明細書においては、用語「グリセリド脂肪酸エステル」は、グリセロールと、Ｃ６－Ｃ３０カルボン酸などの長鎖カルボン酸との間に形成されるモノ－、ジ－、及びトリ－エステルを意味する。カルボン酸は、飽和又は不飽和であることができ、又はヒドロキシルなどの親水性基を含むことができる。好ましいグリセリド脂肪酸エステルは、Ｃ１０～Ｃ２４、好ましくはＣ１０～Ｃ２２、最も好ましくはＣ１２～Ｃ２０、最も好ましくはＣ１２～Ｃ１８の範囲の炭素鎖長のカルボン酸に由来する。いくつかの実施形態では、グリセリド脂肪酸エステルは、Ｃ６－Ｃ１２脂肪酸鎖を有する中鎖トリグリセリドである。

【0375】

いくつかの実施形態では、グリセリド脂肪エステルは、カメリア油、ココナッツ油、ヒマシ油、サフラワー油、ヒマワリ油、ピーナッツ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、タラ肝油、アーモンド油、アボカド油、パーム油、ゴマ油、ラノリン、及び大豆油などの様々な植物性及び動物性油脂から供給される。合成油としては、トリミリスチン、トリオレイン、及びトリステアリングリセリルジラウレートが挙げられる。植物由来のグリセリド脂肪エステルとしては、アーモンド油、ヒマシ油、ココナッツ油、パーム核油、ゴマ油、ヒマワリ油、及び大豆油が挙げられる。

【0376】

いくつかの実施形態では、グリセリド脂肪酸エステルは、ココナッツ油、ヒマワリ油、アーモンド油、及びそれらの混合物から選択される。

【0377】

非水性液体担体は、コラーゲンブースティング組成物の総重量に対して約５０％～約９９．９％、約６０％～約９９．８％、より好ましくは約６５％～約９８％の、コラーゲンブースティング組成物の重量ベースの量で含まれる。

【0378】

いくつかの実施形態では、ヘアケア製品は、非シルク界面活性剤を実質的に含まない水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、水、水溶液、アルコール、アルコールと水との混合物、又はリオトロピック液晶相から選択される。組成物に含まれる水の選択は、特に限定されない。具体的な例としては、精製水、イオン交換水、水道水が挙げられる。

【0379】

いくつかの実施形態では、水性液体担体は、エタンジオール、プロパンジオール、グリセロール、ブタンジオール、ブタンテトラオール、キシリトール、ソルビトール、イノシトール、エチレングリコール、ポリエチレングリコールからなる群から選択される１以上の低分子多価アルコールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、水及びグリセロールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、水対グリセロールの重量比１：１０で水とグリセロールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、及び１：１から選択される水対グリセロールの重量比で水とグリセロールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、水対グリセロールの重量比１：１で水とグリセロールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、水対グリセロールの重量比１：１０で水とグリセロールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、１：１０、１：１、９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、及び１：１から選択される絹フィブロインタンパク質断片対グリセロールの重量比で、絹フィブロインタンパク質断片及びグリセロールを含む。いくつかの実施形態では、水性液体担体は、絹フィブロインタンパク質断片及びグリセロールを、絹フィブロインタンパク質断片対グリセロールの重量比１：１で含む。

【0380】

いくつかの実施形態では、水性液相のｐＨは、約４．０～約９．０の範囲で調整される。いくつかの実施形態では、水性液相のｐＨは、約４．５～約８．５の範囲で調整される。いくつかの実施形態では、水性液相のｐＨは、約５．０～約７．０の範囲で調整される。ｐＨ調整剤は、緩衝液（例えば、ＰＢＳ緩衝液）、アルカリ金属塩、酸、クエン酸、コハク酸、リン酸、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、及びそれらの組合せを含み得る。

【0381】

いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約１．０重量％～約９９．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約５．０重量％～約４５．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約５．０重量％～約３５．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約１０．０重量％～約３０．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約４５．０重量％～約９５．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約６０．０重量％～約９０．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約４５．０重量％～約７５．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約６０．０重量％～約７５．０重量％の水性液体担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の水性液体担体の量は、組成物の総重量に対して約１．０重量％、約２．０重量％、約３．０重量％、約４．０重量％、約５．０重量％、約６．０重量％、約７．０重量％、約８．０重量％、約９．０重量％、約１０．０重量％、約１１．０重量％、約１２．０重量％、約１３．０重量％、約１４．０重量％、約１５．０重量％、約１６．０重量％、約１７．０重量％、約１８．０重量％、約１９．０重量％、約２０．０重量％、約２１．０重量％、約２２．０重量％、約２３．０重量％、約２４．０重量％、約２５．０重量％、約２６．０重量％、約２７．０重量％、約２８．０重量％、約２９．０重量％、約３０．０重量％、約３１．０重量％、約３２．０重量％、約３３．０重量％、約３４．０重量％、約３５．０重量％、約３６．０重量％、約３７．０重量％、約３８．０重量％、約３９．０重量％、約４０．０重量％、約４１．０重量％、約４２．０重量％、約４３．０重量％、約４４．０重量％、約４５．０重量％、約４６．０重量％、約４７．０重量％、約４８．０重量％、約４９．０重量％、約５０．０重量％、約５１．０重量％、約５２．０重量％、約５３．０重量％、約５４．０重量％、約５５．０重量％、約５６．０重量％、約５７．０重量％、約５８．０重量％、約５９．０重量％、約６０．０重量％、約６１．０重量％、約６２．０重量％、約６３．０重量％、約６４．０重量％、約６５．０重量％、約６６．０重量％、約６７．０重量％、約６８．０重量％、約６９．０重量％、約７０．０重量％、約７１．０重量％、約７２．０重量％、約７３．０重量％、約７４．０重量％、約７５．０重量％、約７６．０重量％、約７７．０重量％、約７８．０重量％、約７９．０重量％、約８０．０重量％、約８１．０重量％、約８２．０重量％、約８３．０重量％、約８４．０重量％、約８５．０重量％、約８６．０重量％、約８７．０重量％、約８８．０重量％、約８９．０重量％、約９０．０重量％、約９１．０重量％、約９２．０重量％、約９３．０重量％、約９４．０重量％、約９５．０重量％、約９６．０重量％、約９７．０重量％、約９８．０重量％から選択される。

【0382】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、天然又は合成の芳香性エッセンシャルオイルを含む。いくつかの実施形態では、芳香性エッセンシャルオイルは、ユーカリオイル、ラバンディンオイル、ラベンダーオイル、ベチバーオイル、リトシークベバオイル、レモンオイル、サンダルウッドオイル、ローズマリーオイル、カモミールオイル、セイバリーオイル、ナッツメグオイル、シナモンオイル、ヒソップオイル、キャラウェイオイル、オレンジオイル、ゲラニオールオイル、ケイドオイル、アーモンドオイル、アルガンオイル、アボカドオイル、スギオイル、小麦胚芽オイル、ベルガモットオイル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。

【0383】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＥ、ビタミンＤ、ビタミンＫ、リボフラビン、ピリドキシン、補酵素チアミンピロホスフェート、フラビンアデニンジヌクレオチド、葉酸、ピリドキサールホスフェート、テトラヒドロ葉酸（ｔｅｔｒａｄｒｏｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、及びそれらの組合せからなる群から選択されるビタミンを含む。

【0384】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～約８．０重量％でビタミン及び／又は補酵素を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約０．００１重量％～約１０．０重量％でビタミン及び／又は補酵素を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の総重量に対して約０．０５重量％～約５．０重量％でビタミン及び／又は補酵素を含む。

【0385】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、任意に、トリアゾール、イミダゾール、ナフタレン誘導体、ベンズイミダゾール、モルホリン（ｍｏｒｐｈｌｉｎｅ）誘導体、ジチオカルバメート、ベンズイソチアゾール、ベンズアミド、ホウ素化合物、ホルムアルデヒド供与体、イソチアゾロン、チオシアネート、四級アンモニウム化合物、ヨウ素誘導体、フェノール誘導体、殺菌剤、ピリジン、ジアルキルチオカルバメート、ニトリル、パラベン、アルキルパラベン、及びそれらの塩からなる群から選択される防腐剤を含む。

【0386】

いくつかの実施形態では、コラーゲン刺激組成物並びにその製造及び使用方法は、水溶液、エタノール溶液、オイル、ジェル、エマルジョン、懸濁液、ムース、液晶、固体、ジェル類、ローション、クリーム、エアゾルスプレー、ペースト、フォーム、及びトニックからなる群から選択される形態で処方される。いくつかの実施形態では、組成物は、クリーム、スプレー、エアロゾルムース、又はジェルからなる群から選択される形態である。

【0387】

実施形態では、組成物は、本開示の化合物の良好な可溶化及び／又は溶解を確実にし、本開示の化合物の沈殿を最小限にするための可溶化剤を含むことができる。これは、非経口使用のための組成物、例えば、注射用組成物にとって特に重要であり得る。可溶化剤を添加して、親水性薬物及び／又は界面活性剤などの他の成分の溶解度を高める、又は組成物を安定又は均質な溶液又は分散液として維持することもできる。

【0388】

好適な可溶化剤の例としては、限定するものではないが、アルコール及びポリオール、例えば、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオール及びそれらの異性体、グリセロール、ペンタエリスリトール、ソルビトール、マンニトール、トランスクトール、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び他のセルロース誘導体、シクロデキストリン及びシクロデキストリン誘導体；約２００～約６０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールのエーテル、例えば、テトラヒドロフルフリルアルコールＰＥＧエーテル（グリコフロール）又はメトキシＰＥＧ；アミド及び他の含窒素化合物、例えば、２－ピロリドン、２－ピペリドン、ε－カプロラクタム、Ｎ－アルキルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシアルキルピロリドン、Ｎ－アルキルピペリドン、Ｎ－アルキルカプロラクタム、ジメチルアセトアミド、及びポリビニルピロリドン；エステル、例えば、エチルプロピネート、トリブチルシトレート、アセチルトリエチルシトレート、アセチルトリブチルシトレート、トリエチルシトレート、エチルオレエート、エチルカプリレート、エチルブチレート、トリアセチン、プロピレングリコールモノアセテート、プロピレングリコールジアセテート、ε－カプロラクトン及びその異性体、δ－バレロラクトン及び異性体、β－ブチロラクトン及びその異性体；及び当技術分野で知られている他の可溶化剤、例えば、ジメチルアセトアミド、ジメチルイソソルビド、Ｎ－メチルピロリドン、モノオクタノイン、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、及び水が挙げられる。

【0389】

可溶化剤の混合物も使用することができる。例としては、限定するものではないが、トリアセチン、トリエチルシトレート、エチルオレエート、エチルカプリレート、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ポリエチレングリコール２００－１００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコール、及びジメチルイソソルビドが挙げられる。特に好ましい可溶化剤としては、ソルビトール、グリセロール、トリアセチン、エチルアルコール、ＰＥＧ－４００、グリコフロール、及びプロピレングリコールが挙げられる。

【0390】

含有させることができる可溶化剤の量は、特に制限されない。所定の可溶化剤の量は、生物学的に許容可能な量に限定されることがあり、この量は、当業者によって容易に決定され得る。場合により、例えば薬物濃度を最大にするために、生物学的に許容可能な量を遥かに超える量の可溶化剤を含有させることが有利であり、過剰の可溶化剤は、患者への組成物の投与に先立ち、蒸留又は蒸発などの従来の技術を使用して除去される。したがって、存在する場合、可溶化剤は、薬物及び他の賦形剤の合計重量に基づいて、１０重量％、２５重量％、５０重量％、１００重量％、又は最大約２００重量％の重量比でることができる。必要に応じて、５％、２％、１％、又はそれ以下などの非常に少量の可溶化剤を使用することもできる。典型的には、可溶化剤は、約１重量％～約１００重量％、より典型的には、約５重量％～約２５重量％の量で存在することができる。

【0391】

組成物は、１以上の薬学的に許容される添加剤及び賦形剤を更に含むことができる。かかる添加剤及び賦形剤としては、限定するものではないが、粘着除去剤、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、抗酸化剤、防腐剤、キレート剤、粘度調節剤、張性調節剤、香味料、着色剤、臭気剤、乳白剤、懸濁剤、結合剤、フィラー、可塑剤、潤滑剤、及びそれらの混合物が挙げられる。

【0392】

注射による投与用に本開示の組成物を製することができる形態としては、水性若しくは油性懸濁液又はエマルジョンが挙げられ、ゴマ油、コーン油、綿実油、又は落花生油、並びにエリキシル剤、マンニトール、デキストロース、又は滅菌水溶液、及び類似の医薬ビヒクルを含有する。

【0393】

生理食塩水中の水溶液もまた、従来、注射用に使用されている。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール（及びそれらの好適な混合物）、シクロデキストリン誘導体、及び植物油も使用することができる。適切な流動性は、例えば、分散液の場合に必要な粒子サイズを維持するためのレシチンなどのコーティングの使用によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、及びチメロサールによってもたらされ得る。

【0394】

本開示の組成物は、ゲル、水溶性ゼリー、クリーム、ローション、懸濁液、フォーム、粉末、スラリー、軟膏、溶液、オイル、ペースト、坐剤、スプレー、エマルジョン、生理食塩水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ベースの溶液などの、局所又は外用投与に適した固体、半固体、又は液体形態の調製物に製することができる。一般に、より高密度の担体は、領域に、有効成分への長時間の曝露を提供することができる。対照的に、溶液製剤は、選択された領域に、有効成分のより即時性の曝露を提供することができる。

【0395】

医薬組成物はまた、好適な固相又はゲル相担体又は賦形剤を含むことができ、これらは、皮膚の角質層透過性バリアを透過する治療用分子の浸透を上昇させる、又はその送達を助ける化合物である。外用製剤の分野で訓練された者に知られているこれらの浸透促進分子が多く存在する。かかる担体及び賦形剤の例としては、限定するものではないが、保湿剤（例えば、尿素）、グリコール（例えば、プロピレングリコール）、アルコール（例えば、エタノール）、脂肪酸（例えば、オレイン酸）、界面活性剤（例えば、イソプロピルミリステート及びラウリル硫酸ナトリウム）、ピロリドン、グリセロールモノラウレート、スルホキシド、テルペン（例えば、メントール）、アミン、アミド、アルカン、アルカノール、水、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。

【0396】

本開示の方法における使用のための別の例示的な製剤は、経皮送達デバイス（「パッチ」）を使用する。かかる経皮パッチを使用して、別の活性医薬成分の有無にかかわらず、制御された量で、本明細書に記載の連続又は不連続の注入組成物を提供することができる。薬剤送達のための経皮パッチの作製及び使用は、当技術分野でよく知られている。例えば、参照によりその全体を本明細書に援用する米国特許第５，０２３，２５２号明細書；同第４，９９２，４４５号明細書及び同第５，００１，１３９号明細書を参照されたい。かかるパッチは、薬剤の連続性、拍動性、又はオンデマンド送達用に作製することができる。

【0397】

医薬組成物はまた、本明細書に記載の組成物と、舌下、バッカル、直腸、骨内、眼内、鼻腔内、硬膜外、又は脊髄内投与に適した１以上の薬学的に許容される賦形剤とから調製することもできる。かかる医薬組成物の調製は、当技術分野でよく知られている。例えば、参照によりその全体を本明細書に援用するＡｎｄｅｒｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｒｕｇ Ｄａｔａ， Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ， ２００２；及びＰｒａｔｔ ａｎｄ Ｔａｙｌｏｒ， ｅｄｓ．， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ， Ｎ．Ｙ．， １９９０を参照されたい。

【0398】

これらの方法としては、経口経路、十二指腸内経路、非経口注射（静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、血管内、腹腔内、又は注入を含む）、外用（例えば、経皮適用）、直腸投与（カテーテル又はステントによる局所送達）又は吸入、脂肪内又は髄腔内が挙げられる。

【0399】

本開示の組成物はまた、含浸又はコーティングされたデバイス（例えば、ステント、即ち、動脈内に挿入された円筒形ポリマーなど）を介して送達することができる。かかる投与方法は、例えば、バルーン血管形成術などの施術後の再狭窄の予防又は改善を助けることができる。理論に拘束されるものではないが、本開示の化合物は、再狭窄に寄与する動脈壁における平滑筋細胞の遊走及び増殖を遅延させる又は阻害することができる。本開示の化合物は、例えば、ステントのストラットから、ステントグラフトから、グラフトから、又はステントのカバー若しくはシースからの局所送達によって投与することができる。いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、マトリックスと混合される。かかるマトリックスは、高分子マトリックスであることができ、化合物をステントに結合させるのに役立ち得る。かかる使用に適した高分子マトリックスとしては、例えば、ラクトンベースのポリエステル又はコポリエステル、例えば、ポリラクチド、ポリカプロラクトングリコリド、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリアミノ酸、多糖類、ポリホスファゼン、ポリ（エーテル－エステル）コポリマー（例えば、ＰＥＯ－ＰＬＬＡ）；ポリジメチルシロキサン、ポリ（エチレン－酢酸ビニル）、アクリレートベースのポリマー又はコポリマー（例えば、ポリヒドロキシエチルメチルメタクリレート、ポリビニルピロリジノン）、ポリテトラフルオロエチレン及びセルロースエステルなどのフッ素化ポリマーが挙げられる。好適なマトリックスは、非分解性であることができる、又は経時で分解して、化合物又は複数の化合物を放出することができる。本明細書に開示の組成物は、ディップ／スピンコーティング、スプレーコーティング、ディップコーティング、及び／又はブラシコーティングなどの様々な方法によってステントの表面に適用することができる。化合物を溶媒中で用い、溶媒を蒸発させて、ステント上に化合物の層を形成することができる。或いは、組成物を、ステント又はグラフとの本体、例えば、マイクロチャネル又はマイクロポアに配することができる。移植されると、組成物は、ステントの本体から拡散して動脈壁に接触する。かかるステントは、かかるマイクロポア又はマイクロチャネルを含むように製造したステントを、好適な溶媒中の本開示の化合物の溶液に浸漬した後、溶媒を蒸発させることによって調製することができる。本明細書に開示の組成物は、血管形成術中に使用されるバルーンから血管内に投与することができる。本開示の組成物の心膜を介する又は外膜適用を介する血管外投与も、再狭窄を低減するために行うことができる。

【0400】

例示的な非経口投与形態としては、無菌水溶液、例えば、プロピレングリコール水溶液又はデキストロース水溶液の溶液又は懸濁液が挙げられる。かかる剤形は、必要に応じて、適切に緩衝化することができる。

【0401】

本開示は、キットも提供する。キットは、適切なパッケージ内に、本明細書に開示の組成物を含み、使用説明書、臨床試験の内容、及び副作用のリストを含み得る文書を含む。かかるキットは、科学文献の参考文献、添付文書、臨床試験結果、及び／又はこれらの要約などの情報も含むことができ、これらは、組成物の活性及び／又は利点を示す又は確立する、及び／又は用量用法、副作用、薬物相互作用、又は医療提供者に有用なその他の情報を記述する。かかる情報は、様々な研究、例えば、インビボモデルを含む実験動物を使用した研究、及びヒトの臨床試験に基づく研究の結果に基づき得る。キットは、別の活性医薬成分を更に含むことがある。使用に適したパッケージング及び更なる物品（例えば、液体調製物用の計量カップ、空気への曝露を最小限にするためのフォイル包装）は当技術分野において知られており、キットに含まれ得る。本明細書に記載のキットは、医師、看護師、薬剤師、処方官（ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ｏｆｆｉｃｉａｌｓ）などを含む医療提供者に提供、販売、及び／又は宣伝することができる。キットはまた、いくつかの実施形態では、消費者に直接販売され得る。キットは、好ましくは、本明細書に記載の疾患及び状態の治療における使用を目的とする。

【実施例】

【0402】

本明細書に含まれる実施形態は、以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、例示のみを目的としており、本明細書に含まれる開示は、これらの実施例に何ら限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に与えられる教示の結果として明らかになるあらゆる変形を包含すると解釈されるべきである。

【0403】

一般的手順
本発明の組成物は、当技術分野で知られた様々な方法によって調製することができる。係る方法としては、以下の実施例の方法、及び以下に具体的に例示される方法が挙げられる。

【0404】

実施例１：絹フィブロインによるコラーゲン刺激
皮膚の健康と老化における絹とコラーゲンの関係－薬用化粧品が増えている。アンチエイジングスキンケア製品及び敏感肌の消費者による使用に適した製品に対する需要の高まりに応え、スキンケア業界は「薬用化粧品」を開発している。これらの化粧品は、皮膚の健康を増進し、美化するために、生物学的に有効な成分を含有している。その目的は、覆うのではなく、皮膚の欠陥の原因を解消することである。薬用化粧品の需要の高まりは、若々しい外観を維持したいという欲求を持つ世界人口の高齢化の結果である。過去１０年間で人口が急増し、４０歳以上の人口が著しく増加し、これらの高齢者群での化粧品の使用も増えている。その結果、皺、加齢性色素斑、乾燥肌、肌の色むらを予防又は改善する製品の需要が高まり、新たな処方の開発と業界の成長に拍車をかけている。［Ｍｏｒｄｏｒ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ （２０１９）． Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｍａｒｋｅｔ － Ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ ｂｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｔｙｐｅ （Ｓｋｉｎ Ｃａｒｅ， Ｈａｉｒ Ｃａｒｅ， Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ， Ｏｒａｌ Ｃａｒｅ）， Ａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ （Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ， Ｂｏｔａｎｉｃａｌｓ， Ｅｘｆｏｌｉａｎｔｓ， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ）， ａｎｄ Ｒｅｇｉｏｎｓ － Ｇｒｏｗｔｈ， Ｔｒｅｎｄｓ， ａｎｄ Ｆｏｒｅｃａｓｔ （２０１９ － ２０２４）． Ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ ｗｗｗ．ｍｏｒｄｏｒｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｉｎｄｕｓｔｒｙ－ｒｅｐｏｒｔｓ／ｇｌｏｂａｌ－ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－ｍａｒｋｅｔ－ｉｎｄｕｓｔｒｙ． Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｍａｙ ５， ２０１９． Ａｒｃｈｉｖｅｄ ａｔ ｗｅｂ．ａｒｃｈｉｖｅ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／２０１９０５０６１８４３００／ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｏｒｄｏｒｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｉｎｄｕｓｔｒｙ－ｒｅｐｏｒｔｓ／ｇｌｏｂａｌ－ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－ｍａｒｋｅｔ－ｉｎｄｕｓｔｒｙ．］これらの製品は、皮膚の疾患状態を治療するための薬物を含有していないので、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）などの機関によって規制されておらず、医師の処方箋を必要としない。［Ｍａｒｔｉｎ ＫＩ， Ｇｌａｓｅｒ ＤＡ （２０１１） Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ： Ｔｈｅ ｎｅｗ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ ｂｅａｕｔｙ． Ｍｉｓｓｏｕｒｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ１０８：１； Ｒｅｐｏｒｔ Ｌｉｎｋｅｒ （２０１８） Ｇｌｏｂａｌ Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｍａｒｋｅｔ Ｏｕｔｌｏｏｋ ２０２２． Ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ ｗｗｗ．ｒｅｐｏｒｔｌｉｎｋｅｒ．ｃｏｍ／ｐ０１１０３４８７／Ｇｌｏｂａｌ－Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－Ｍａｒｋｅｔ－Ｏｕｔｌｏｏｋ．ｈｔｍｌ． Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｍａｒｙ ５， ２０１９． Ａｒｃｈｉｖｅｄ ａｔ ｗｅｂ．ａｒｃｈｉｖｅ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／２０１９０５０６１８４７５８／ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｅｐｏｒｔｌｉｎｋｅｒ．ｃｏｍ／ｐ０１１０３４８７／Ｇｌｏｂａｌ－Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－Ｍａｒｋｅｔ－Ｏｕｔｌｏｏｋ．ｈｔｍｌ．］それらの高い人気とアクセサビリティのために、薬用化粧品の世界市場は、２０１７年に４７０億米ドルであり、２０２３年までに８００億米ドルに達すると予想されている。［Ｍｏｒｄｏｒ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ （２０１９）． Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｍａｒｋｅｔ － Ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ ｂｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｔｙｐｅ （Ｓｋｉｎ Ｃａｒｅ， Ｈａｉｒ Ｃａｒｅ， Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ， Ｏｒａｌ Ｃａｒｅ）， Ａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ （Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ， Ｂｏｔａｎｉｃａｌｓ， Ｅｘｆｏｌｉａｎｔｓ， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ）， ａｎｄ Ｒｅｇｉｏｎｓ － Ｇｒｏｗｔｈ， Ｔｒｅｎｄｓ， ａｎｄ Ｆｏｒｅｃａｓｔ （２０１９ － ２０２４）． Ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ ｗｗｗ．ｍｏｒｄｏｒｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｉｎｄｕｓｔｒｙ－ｒｅｐｏｒｔｓ／ｇｌｏｂａｌ－ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－ｍａｒｋｅｔ－ｉｎｄｕｓｔｒｙ． Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｍａｙ ５， ２０１９． Ａｒｃｈｉｖｅｄ ａｔ ｗｅｂ．ａｒｃｈｉｖｅ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／２０１９０５０６１８４３００／ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｏｒｄｏｒｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｉｎｄｕｓｔｒｙ－ｒｅｐｏｒｔｓ／ｇｌｏｂａｌ－ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－ｍａｒｋｅｔ－ｉｎｄｕｓｔｒｙ．］米国では、薬用化粧品市場の小売売上高は、近年、１００億ドルを遥かに超えており、成長を続けている。［Ｐａｃｋａｇｅｄ Ｆａｃｔｓ （２０１２） Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ＵＳ． ６^ｔｈ ｅｄ． Ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ ｗｗｗ．ｐａｃｋａｇｅｄｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－Ｅｄｉｔｉｏｎ－６２８１７７５／． Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｍａｙ ５， ２０１９． Ａｒｃｈｉｖｅｄ ａｔ ｈｔｔｐｓ：／／ｗｅｂ．ａｒｃｈｉｖｅ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／２０１９０５０６１８３８０６／ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐａｃｋａｇｅｄｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／Ｃｏｓｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ－Ｅｄｉｔｉｏｎ－６２８１７７５／．］

【0405】

皮膚の健康と老化におけるコラーゲン、線維芽細胞、及び細胞外マトリックスの役割。
真皮は皮膚の最も大きな部分であり、主に、皮膚の強度、復元性、及び弾性に関与する、高密度でコラーゲンが豊富なタンパク質性細胞外マトリックス（ＥＣＭ）で構成されている。［Ｒｉｔｔｉｅ Ｌ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ ｓｕｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ５： ａ０１５３７０； Ｑｕａｎ Ｔ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ： Ａ ｍｉｎｉ－ｒｅｖｉｅｗ． Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ６１： ４２７－４３４．］数十年もの間、科学者らは、薄化、乾燥、細かい皺などの皮膚の老化の目に見える特徴が、加齢に伴う皮膚コラーゲンの分解の増大を反映することを知見している。［Ｓｍｉｔｈ ＪＧ， Ｄａｖｉｄｓｏｎ ＥＡ， Ｓａｍｓ ＷＭ， Ｃｌａｒｋ ＲＤ （１９６２） Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｗｉｔｈ ａｇｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｕｎ ｄａｍａｇｅ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ３９： ３４７－３５０； Ｌａｖｋｅｒ ＲＭ （１９７９） Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｅｘｐｏｓｅｄ ａｎｄ ｕｎｅｘｐｏｓｅｄ ａｇｅｄ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ７３： ５９－６６； Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２０００） Ｖｉｔａｍｉｎ Ａ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１４： ４８０－４８６； Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２０００） Ｖｉｔａｍｉｎ Ａ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１４： ４８０－４８６．］コラーゲンは、皮膚の結合組織の主成分として、皮膚の強度と復元性を維持する上で重要な役割を果たす。その変性は、脆く、傷付つき易く、概して若々しい外観を失った皮膚をもたらす。［同上］。より具体的には、真皮に対する加齢の影響は、コラーゲンベースの細胞外マトリックスの構造と組織への有害な変化を伴う。［Ｒｉｔｔｉｅ Ｌ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ ｓｕｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ５： ａ０１５３７０； Ｑｕａｎ Ｔ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ： Ａ ｍｉｎｉ－ｒｅｖｉｅｗ． Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ６１： ４２７－４３４．］

【0406】

皮膚におけるこのコラーゲンの変性は、コラーゲン自体の発現の、通常の加齢に伴う減少と併せて、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）と呼ばれるコラーゲン分解酵素の発現の、通常の加齢に伴う増加の結果として生じる。酵素的ＭＭＰ作用の増加は、時間の経過に伴って、真皮ＥＣＭに断片化されたコラーゲンフィブリルの蓄積をもたらす。このコラーゲンの断片化に伴うＥＣＭの構造的完全性の喪失は、メカノトランスダクションとして知られる現象を介して、コラーゲンを生成する皮膚線維芽細胞の形状の完全性の喪失に生物学的に変換される。［Ｒｉｔｔｉｅ Ｌ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ ｓｕｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ５： ａ０１５３７０； Ｑｕａｎ Ｔ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ： Ａ ｍｉｎｉ－ｒｅｖｉｅｗ． Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ６１： ４２７－４３４．］真皮線維芽細胞とその周囲のＥＣＭとの相互作用は、細胞表面のインテグリンとして知られる膜貫通型結合及びシグナル伝達受容体を介して生じる。健康で若い皮膚に見られる、正常な組織張力などの適切な機械的応力を受けている「伸ばされた」コラーゲンマトリックスに付着した線維芽細胞では、コラーゲン産生が高い。しかし、コラーゲン発現は、老化した皮膚のＥＣＭに見られるような、より「弛緩した」ＥＣＭ環境内の線維芽細胞では抑制されており、断片化されたコラーゲンが多く蓄積する。［Ｃｈｉｑｕｅｔ Ｍ （１９９９） Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｒｅｓｓ． Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ １８： ４１７－４２６．］したがって、適切な線維芽細胞の形状の喪失は、その細胞機能の喪失に関連しており、これは、コラーゲン産生の更なる減少に至り、その後、ＭＭＰ発現の増加につながる。［Ｒｉｔｔｉｅ Ｌ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ ｓｕｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ５： ａ０１５３７０； Ｑｕａｎ Ｔ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ： Ａ ｍｉｎｉ－ｒｅｖｉｅｗ． Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ６１： ４２７－４３４．］これらのコラーゲンベースの効果に加えて、皮膚の皮膚線維芽細胞のポピュレーション（数）自体も加齢を通して減少する。若年者の皮膚と高齢者の皮膚とでは、コラーゲン含量が６８％減少すること示されており、線維芽細胞の数は３５％減少した。［Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２０００） Ｖｉｔａｍｉｎ Ａ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１４： ４８０－４８６； Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２００６） Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｇｅｄ ｓｋｉｎ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ． ＡｍＪ Ｐａｔｈｏｌ １６８： １８６１－１８６８．］コラーゲンとＭＭＰの発現及び線維芽細胞の細胞機能の変化のその後のフィードバックループは、コラーゲンマトリックスの密度低下がＥＣＭタンパク質産生のダウンレギュレーションサイクルを永続させるので、老化した皮膚の目に見える特徴をもたらす、コラーゲンの恒常性の変化を引き起こす。［Ｒｉｔｔｉｅ Ｌ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ ｓｕｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ５： ａ０１５３７０； Ｑｕａｎ Ｔ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ： Ａ ｍｉｎｉ－ｒｅｖｉｅｗ． Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ６１： ４２７－４３４．］

【0407】

特定の理論に拘束されることを望むものではないが、皮膚の老化の顕在化の重要な決定因子は、皮膚線維芽細胞の年齢ではなく、ＥＣＭの構造的な質であると考えられる。［Ｑｕａｎ Ｔ ｅｔ ａｌ （２０１３） Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １３３： ６５８－６６７．］したがって、ＥＣＭと線維芽細胞の健康を促進する老化又は損傷した皮膚の治療は、皮膚の外観の年齢依存性変化を成功裏に改善することができる。事実、研究によれば、老化した皮膚で観察されたコラーゲン産生の減少は、皮膚線維芽細胞を刺激する処置によって幾分改善され得る。［Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２０００） Ｖｉｔａｍｉｎ Ａ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１４： ４８０－４８６； Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２００６） Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｇｅｄ ｓｋｉｎ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ． ＡｍＪ Ｐａｔｈｏｌ １６８： １８６１－１８６８； Ｎｕｓｇｅｎｓ ＢＶ ｅｔ ａｌ （２００１） Ｔｏｐｉｃａｌｌｙ ａｐｐｌｉｅｄ ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩＩ， ｔｈｅｉｒ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ １ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍｉｓ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１６： ８５３－８５９；Ｑｕａｎ Ｔ ｅｔ ａｌ （２０１３） Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １３３： ６５８－６６７； Ｒｉｔｔｉｅ Ｌ， Ｆｉｓｈｅｒ ＧＪ （２０１５） Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ ｓｕｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ ５： ａ０１５３７０．］更に、日焼けで損傷した皮膚に見られる、より顕著な皮膚外観の変化は、コラーゲン産生線維芽細胞自体の損傷の結果ではないので、この損傷の改善も可能であると予想される。［Ｓｍｉｔｈ ＪＧ， Ｄａｖｉｄｓｏｎ ＥＡ， Ｓａｍｓ ＷＭ， Ｃｌａｒｋ ＲＤ （１９６２） Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｗｉｔｈ ａｇｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｕｎ ｄａｍａｇｅ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ３９： ３４７－３５０； Ｌａｖｋｅｒ ＲＭ （１９７９） Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｅｘｐｏｓｅｄ ａｎｄ ｕｎｅｘｐｏｓｅｄ ａｇｅｄ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ７３： ５９－６６； Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２０００） Ｖｉｔａｍｉｎ Ａ ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１４： ４８０－４８６； Ｖａｒａｎｉ Ｊ （２００１） Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ Ｉ ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ ｄａｍａｇｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎ ｐｈｏｔｏａｇｅｄ ｓｋｉｎ ａｎｄ ｂｙ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ－ｄｅｇｒａｄｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５８： ９３１－９４２； Ｖａｒａｎｉ Ｊ ｅｔ ａｌ （２００６） Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｇｅｄ ｓｋｉｎ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ． ＡｍＪ Ｐａｔｈｏｌ １６８： １８６１－１８６８．］

【0408】

絹ベースのスキンケアは、コラーゲン発現を促進し、老化及び損傷した皮膚を改善する。
絹繊維は、そのコアが、フィブロインとして知られる天然タンパク質で構成されている。皮膚の結紮に利用された最初の埋め込み型生体材料として、絹フィブロインは、十分に確立された使用の歴史と、ヒトの皮膚との適合性を誇る。２００３年に、著者らは、線維芽細胞によるコラーゲン産生を誘発する絹フィブロインタンパク質の能力について報告した。改変された絹タンパク質ベースのマトリックスを用いた線維芽細胞の培養は、コラーゲン発現を促進すると共に線維芽細胞密度を増加させた。［Ｃｈｅｎ Ｊ ｅｔ ａｌ （２００３） Ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｎ ＲＧＤ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｉｌｋ ｆｉｂｅｒｓ． Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔｅｒ Ｒｅｓ Ａ ６７： ５５９－５７０．］絹フィブロインとＥＣＭ産生細胞との間の直接的相互作用が、これらの好ましい結果の要因であると考えられる。

【0409】

本明細書に記載されるように、絹フィブロインの液体製剤（ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭ）は、線維芽細胞に影響を与える。即ち、絹フィブロインを添加すると、培養中の線維芽細胞が刺激され、コントロール線維芽細胞より２０～３０％超多いコラーゲンを生成する（絹フィブロインの添加濃度に依存、図２を参照）。前記した有害なフィードバックループを考慮すると、この結果は、老化及び／又は損傷した皮膚の薬用化粧品治療法の開発に非常に有望な発見である。

【0410】

スキンケア成分として、液体絹フィブロインは、ＥＣＭタンパク質の皮膚の知覚濃度を一時的に上昇させると考えられる。線維芽細胞上のインテグリンとの相互作用を介した分子シグナル伝達に加えて、絹フィブロインのタンパク質配列は、コラーゲンに存在するアミノ酸と容易且つ迅速に結合する水素が豊富なアミノ酸が主体となっている。具体的には、シルクフィブロインのβシートが豊富な構造は、可逆的な水素結合で主に構成されており、そのタンパク質配列は、非極性アミノ酸のグリシンとアラニンが主体となっている。［Ｍａｒｅｌｌｉ Ｂ ｅｔ ａｌ （２０１２） Ｓｉｌｋ ｆｉｂｒｏｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｉｏｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ． Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ３３： １０２－１０８； Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ＷＡ ｅｔ ａｌ （１９５５） Ｔｈｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｓｉｌｋ Ｆｉｂｒｏｉｎ ａｎｄ ｏｆ Ｔｕｓｓａｈ Ｓｉｌｋ Ｆｉｂｒｏｉｎ． Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ７７： ３９０８－３９１３．］これらの水素が豊富なアミノ酸は、健康な皮膚、筋肉、及び骨の形成に関与するコラーゲンに存在する、密に存在する極性及び荷電アミノ酸と容易且つ迅速に結合する。［Ｌｏｄｉｓｈ Ｈ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｏｌｌａｇｅｎ： Ｔｈｅ Ｆｉｂｒｏｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｍａｔｒｉｘ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ． Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．］コラーゲンと絹フィブロインとの結合は、ＥＣＭの完全性と安定性を更に高め得る、元来安定した相互作用である。［Ｓａｘｅｎａ Ｔ ｅｔ ａｌ （２０１４） Ｃｈａｐｔｅｒ ３ － Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙ（Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ） Ａ２ － Ｋｕｍｂａｒ， Ｓａｎｇａｍｅｓｈ Ｇ． Ｉｎ Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， Ｌａｕｒｅｎｃｉｎ ＣＴ， Ｄｅｎｇ Ｍ （ｅｄｓ）， ｐｐ ４３－６５． Ｏｘｆｏｒｄ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ．］インテグリンの絹フィブロインとの関与、及びＥＣＭの安定化によって刺激される、その後の正のフィードバック生物学的ループは、コラーゲン産生を促進し、より健康的で若々しい皮膚をもたらす（図１）。ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭフィブロインは、ヒトの皮膚を引き締め、しっかりとしたものにすることが臨床的に証明されている。

【0411】

ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭは、絹フィブロインタンパク質の液体製剤である。絹フィブロインタンパク質を精製及び可溶化するプロセスは、有毒な化学物質を含まず、純粋な絹の繭、毒性のない塩、及び水のみを必要とする。これは、絹の調製に従来使用されていた過酷な加水分解法を、使用される塩と生分解性ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭがいずれも水路に流入しても安全であるため、廃水管理を必要としないグリーンケミストリー法に置き換えたものである。即ち、ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭは、ヒトの皮膚に接触する、合成された毒性を有し得る成分を、毒性がなく、再生可能で、生成に必要なエネルギーが少なく、廃棄物の発生が少ない成分に置き換える。ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭは、生体適合性でもあり、即ち、敏感肌の対象でも、あらゆるタイプの皮膚に対しても安全である。事実、様々な形態の絹が、創傷被覆材及びグラフトの足場として使用されており、創傷治癒を改善することが見出されている。［Ａｌｔｍａｎ ＧＨ ｅｔ ａｌ （２００３） Ｓｉｌｋ－ｂａｓｅｄ ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ． Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２４：４０１－４１６． ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ４５７３２５４／； Ｔｈｕｒｂｅｒ ＡＥ， Ｏｍｅｎｅｔｔｏ ＦＧ， Ｋａｐｌａｎ ＤＬ （２０１５） Ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｉｏｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｓｉｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ７１：１４５－１５７． ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ４５７３２５４／ｐｄｆ／ｎｉｈｍｓ７１７１０７．ｐｄｆ．］

【0412】

米国環境保護庁（ＥＰＡ）によれば、グリーンケミストリーは、ソース削減のための化学の使用、即ち、化学試薬、溶媒、及び製品の危険性を最小限にする又は排除することにより、そのソースでの汚染を削減する。これは、かかる有害物質の使用又は生成を削減又は排除する化学製品及びプロセスの設計によって達成される。グリーンケミストリーの原則は、製造、使用、及び廃棄を含む、化学製品のライフサイクル全体に適用される。

【0413】

液体の絹のフィブロイン単位は、様々な二次構造で堅牢な生体材料に自己組織化する能力を有し、即ち、通常、生物及び環境に悪影響を与える溶媒、可塑剤、又は触媒を必要とすることなしに、絹を、より高次のポリマーに重合することができる。更に、タンパク質の疎水性と結晶化の傾向は、温度と湿度の変化に対する復元性を与え、ゲル及びフィルムなどの構造の形成を促進する機会を提供する。［Ｌｉ ＡＢ ｅｔ ａｌ （２０１５） Ｓｉｌｋ－ｂａｓｅｄ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ． Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２１９： ４１６－４３０． ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ４６５６１２３／．］ｐＨの変動が効能を大幅に阻害し得る薬物及び生体分子と異なり、絹フィブロインの水素が豊富なアミノ酸構造は、ｐＨ変化によって悪影響を受けない。［Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ＷＡ ｅｔ ａｌ （１９５５） Ｔｈｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｓｉｌｋ Ｆｉｂｒｏｉｎ ａｎｄ ｏｆ Ｔｕｓｓａｈ Ｓｉｌｋ Ｆｉｂｒｏｉｎ． Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ７７： ３９０８－３９１３．］低ｐＨは、コラーゲンの機械的構造の「捻じれを戻す」ことができると仮定されている［Ｃｏｆｆｅｙ ＪＷ ｅｔ ａｌ （１９７６） Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｔｉｖｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ， ｄｅｎａｔｕｒｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ， ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１： ５２８０－５２８２； Ｆｉｎｅ ＮＡ ｅｔ ａｌ （２０１５） ＳＥＲＩ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｓｃａｆｆｏｌｄ， ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｏｆ ａ ｓｉｌｋ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｃａｆｆｏｌｄ ｉｎ ｔｗｏ－ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ： １－ｙｅａｒ ｄａｔａ． Ｐｌａｓｔｉｃ Ｒｅｃｏｎｓｔ Ｓｕｒｇ １３５： ３３９－３５１］（皮膚の密な角質層に位置する機械的構造など）。その結果、表皮及び真皮内への輸送を高めるプロトン化戦略は、ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭの機能性を妨げない。臨床スキンケア試験は、この仮説を支持しており、低ｐＨの薬用美容液を塗布して、ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭでアイトリートメントを行った後、僅か７日間で小皺や皺が減少する。

【0414】

ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭは、ハイドラント、乳化剤、エクスフォリアント、クレンザー、ゲル／フィラー、ビタミンＣなどの生物活性物質又は（フタレートを含まない）香料、更には静菌剤のための担体としての役割を果たすことができる。したがって、ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭは、スキンケアにおいて非常に効果的な有効成分である。

【0415】

実施例２：コラーゲン産生に対する活性化絹の効果：研究の説明
研究目的：治療後２４時間での、線維芽細胞培養物のコラーゲン濃度に対する試験物質（ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ ＳＩＬＫ^ＴＭ）の効果の評価。初代ヒト線維芽細胞（継代５）を、２４ウェル培養プレートに５００００細胞／ｃｍ^２で播種し、一晩インキュベートした（３７℃，５％ＣＯ_２）。培地を廃棄し、５００μｌの様々な濃度の試験品又は参照物質で置き換えた。プレートを２４時間インキュベートした（３７℃，５％ＣＯ_２）。培養培地を除去し、細胞をリンスし、回収した。細胞内及び細胞外コラーゲンを、シリウスレッド色素（ネイティブコラーゲンの三重らせん（Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙ）ｎ構造に対して特異的な親和性を示す）で定量化した。色素－コラーゲン複合体の吸光度は、５４０ｎｍで分光光度的に測定した。超音波処理後、ブラッドフォード法を使用して総タンパク質を評価した。

【0416】

試験系：細胞－現行の作業指示書にしたがって調製された初代ヒト線維芽細胞；試験前に、細胞を、培地ＤＭＤＭ ４．５ｇ／ｌのグルコース、２ｍＭのＬ－グルタミン又は安定化グルタミン、１０％熱不活化胎児子牛血清（ＦＣＳ）、５０ＵＩ／ｍｌのペニシリン、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンで培養する。試験中、ＦＣＳを、参照物質と試験物質の両方の希釈のために、１％に低下させる。細胞は、マイコプラズマが除去されている。マイコプラズマの評価は、現行の作業指示書にしたがって行った。

【0417】

参照物質：ネガティブコントロール：１％熱不活化ＦＣＳ培養培地；ポジティブコントロール：１％ＦＣＳ培養培地中のトランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦβ）２０ｎｇ／ｍｌ。

【0418】

材料及び試薬
材料：細胞培養用の２４ウェルプレート；吸光度を読み取るための９６ウェルプレート；セルスクレーパー；超音波プローブ；ＭＵＬＴＩＳＫＡＮ ＥＸプレートリーダー（サーモライフサイエンス）－読み取り範囲：吸光度０～３．５単位－線形範囲：吸光度０～２．０００単位；細胞培養実験室で使用される従来の材料。

【0419】

試薬：培養培地：ＤＭＥＭ ４．５ｇ／ｌグルコース、２ｍＭ Ｌのグルタミン又は安定化グルタミン、１０％熱不活化ＦＣＳ、５０ＩＵ／ｍｌのペニシリン、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン）（５℃±３℃で保存）；ダルベッコＰＢＳ Ｃａ^２＋及びＭｇ^２＋フリー（室温２０℃±５℃で保存）；ダイレクトレッド８０ ＣＡＳ２６１０－１０－８（室温２０℃±５℃で保存）；プロテアーゼ阻害剤カクテル（５℃±３℃で保存）；ブラッドフォード試薬（５℃±３℃で保存）；ＢＳＡ溶液（ウシアルブミン血清）（５℃±３℃で保存）；ＨＣｌ（室温２０℃±５℃で保存）；ＮａＯＨ（室温２０℃±５℃で保存）；ＴＧＦβ１（－２０℃±５℃で保存）；３ｍｇ／ｍｌコラーゲン溶液（５℃±３℃で保存）。

【0420】

手続の定義：８種の濃度の試験物質を試験した。コラーゲンの評価は、細胞毒性のない４種の最高濃度で行った。各試験物質又は参照物質の状態は、少なくとも３つの培養ウェルで試験される。

【0421】

試験プロトコル
細胞播種：細胞を２４ウェル培養プレートに５００００細胞／ｃｍ^２で播種し、一晩インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ_２）。

【0422】

細胞と試験物質との接触：試験物質と参照物質の希釈は、１％ＦＣＳ培地で行った。培地を廃棄し、５００μｌの様々な濃度の試験物質又は参照物質で置き換えた。ネガティブコントロールのウェルは、１％ＦＣＳ培養培地で満たした。プレートを、４８時間±１時間（３７℃，５％ＣＯ_２）インキュベートした。

【0423】

コラーゲン合成と細胞密度の評価：各ウェルから培養培地を除去し、細胞層を５００μｌの２×濃縮プロテアーゼ阻害剤カクテルでリンスした。全ての培地＋阻害剤を、同一チューブ内にプールした。

【0424】

５００μｌの１×濃縮プロテアーゼ阻害剤カクテル中でスクレーピングすることにより細胞層を回収し、ウェルを５００μｌの１×カクテルで再度リンスした。細胞外マトリックスを構成する２つのボリュームを、同一チューブ内にプールし、超音波プローブで４０秒間処理した。

【0425】

細胞内及び細胞外コラーゲンは、ネイティブコラーゲンの三重らせん（Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙ）ｎ構造に対して特異的な親和性を示すシリウスレッド色素（ダイレクトレッド８０）で定量した。複合色素コラーゲンの吸光度は、分光光度計を使用して５４０ｎｍで測定する。較正範囲は、コラーゲン０～１０μｇで確立する。

【0426】

総タンパク質量は、ブラッドフォード法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９７６；７２：２４８－５４）を使用して評価し、較正範囲は、ＢＳＡのＰＢＳ溶液０～４００μｇ／ｍｌに設定した。３０μｌの各サンプル（試験物質、参照物質、標準の希釈物）を、９６ウェルプレート中で、２８０μｌのブラッドフォード試薬と混合した。プレートは、遮光下、室温にて約１５分間インキュベートする。吸光度は、ブランクとしてのブラッドフォード試薬に対して６２０ｎｍで測定した。

【0427】

絹フィブロインを添加すると、培養物中の線維芽細胞が刺激され、添加された絹フィブロインの濃度に応じて、コントロール線維芽細胞より２０～３０％超多いコラーゲンを生成した。また、コラーゲン生成は、絹の組成に依存する（図２）。様々な絹濃度での細胞内コラーゲン産生は、絹の種類の関数として示される。刺激（％）は、ネガティブコントロールと比較したコラーゲン生成の増加である。絹の平均ＭＷ組成：絹Ａ＝低ＭＷ（約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａから選択される平均重量平均分子量）；絹Ｂ＝中ＭＷ（約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａから選択される平均重量平均分子量）。

【0428】

結果の計算と解釈
細胞密度：タンパク質濃度は、確立した検量線にしたがって計算する。吸光度＝ｆ（タンパク質量（単位：μｇ））。１ウェル当たりのタンパク質のμｇで表される。

【0429】

コラーゲンの決定：ウェルごとのコラーゲンの量は、確立された検量線にしたがって決定する（吸光度＝ｆ（μｇ単位のコラーゲン量）。１ウェル当たりのコラーゲンのμｇで表される。結果は、ウェル中のコラーゲン量とタンパク質量との比で表される。

【0430】

実施例３：組織断面を使用した透過分析
回収した組織を１０％ホルマリン中で１８～２４時間インキュベートした後、ホルマリンをＤＰＢＳに交換した。組織を一連の勾配エタノール（７０～９５％）で脱水し、キシレンで脱水し、パラフィンに包埋した。断面を含むスライドを、標準的な手順にしたがって調製した。各組織の３つの切片を各スライド上に調製した。組織ごとに１つの未染色の脱パラフィンスライドを、蛍光透過分析用に準備した。スライドを、ｄＨ_２Ｏで５～１０分間再水和した。ＤＡＰＩストック溶液を、ｄＨ_２Ｏで１：４７，０００希釈し、スライドを希釈溶液中で１０分間インキュベートした。スライドをｄＨ_２Ｏで３回リンスした。組織切片を、イムノマウントマウンティング溶液（Ｔｈｅｒｍｏ ｃａｔ＃９９９０４０２）で覆い、カバースリップを適用した。スライドは、１０×対物レンズを使用するＯｌｙｍｐｕｓ ＶＳ１００スライドスキャナーで画像化して、蛍光シグナルを視覚化した。

【0431】

組織断面を使用した透過分析
各時点で、蛍光標識された試験物質で処理したＥＦＴ－４００組織を、中性緩衝ホルマリンで固定し、標準的な組織学的方法を使用して断面を含むスライドを調製した。未染色の脱パラフィンされたスライドを、（核を視覚化するために）ＤＡＰＩで対比染色し、ＸＭ１０蛍光カメラを備えたＯｌｙｍｐｕｓ ＶＳ－１２０自動スライドスキャナーシステムを使用して画像化した。切片はいずれも、ＤＡＰＩ（４５５ｎｍ）、ＦＩＴＣ（５１８ｎｍ）、及びＴＲＩＴＣ（６１５ｎｍ）フィルタを使用して画像化した。蛍光標識された物質を含まないｄＨ_２Ｏコントロール組織を使用して、処理済みの組織の蛍光シグナルを評価するためのスケーリング閾値を確立した。図３Ａ及び図３Ｂは、ＤＡＰＩで対比染色された２×５時間の低ＭＷ絹（ＲＩＴＣ標識）に曝露させたＥＦＴ－４００組織の断面を示す。５×倍率の画像（図３Ａ）は、組織の厚み全体を示し、１０×倍率の画像（図３Ｂ）は、表皮に焦点を合わせている。図４Ａ及び図４Ｂは、ＤＡＰＩで対比染色された２×５時間の中ＭＷ絹（ＦＩＴＣ標識）に曝露させたＥＦＴ－４００組織の断面を示す。５×倍率の画像（図４Ａ）は、組織の厚み全体を示し、１０×倍率の画像（図４Ｂ）は、表皮に焦点を合わせている。

【0432】

この研究の結果は、ＥＦＴ－４００組織におけるＲＩＴＣ標識低ＭＷ絹試験材料の時間依存性透過の証拠を示している。対照的に、ＦＩＴＣ標識中ＭＷ絹で処理されたＥＦＴ－４００組織では、殆ど透過が観察されなかった。この研究では、組織断面の画像で行われた観察と、各時点でＥＦＴ－４００組織から回収した培地で測定された蛍光シグナルの定量化との間に非常に良好な相関関係がある。

【0433】

本明細書で引用される特許、特許出願、及び公開された文献はいずれも、参照によりその全体を本明細書に援用する。本開示の方法について、その特定の実施形態に関連して記載しているが、それは、更なる変更が可能であることが理解される。更に、本願は、本開示の方法が関係する技術分野における知られた又は習慣的なプラクティスの範囲内にあるような本開示からの逸脱を含む、本開示の方法の任意の変形、使用、又は適合を包含することが意図される。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【配列表】

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【国際調査報告】