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特表2022-535624ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン化合物の結晶形Ａ及び結晶形Ｂ及びその製造方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-08-09
(54)【発明の名称】ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン化合物の結晶形Ａ及び結晶形Ｂ及びその製造方法
(51)【国際特許分類】
C07D 403/14 20060101AFI20220802BHJP
A61K 31/497 20060101ALI20220802BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220802BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220802BHJP
【ＦＩ】
C07D403/14 CSP
A61K31/497
A61P35/00
A61P43/00 111
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022507753
(86)(22)【出願日】2020-08-04
(85)【翻訳文提出日】2022-02-07
(86)【国際出願番号】 CN2020106885
(87)【国際公開番号】W WO2021023192
(87)【国際公開日】2021-02-11
(31)【優先権主張番号】201910731663.3
(32)【優先日】2019-08-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】201911059460.0
(32)【優先日】2019-11-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
(71)【出願人】
【識別番号】520089004
【氏名又は名称】▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＺＨＡＮＧＺＨＯＵ ＰＩＥＮ ＴＺＥ ＨＵＡＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】特許業務法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ユイ、チュアン
(72)【発明者】
【氏名】ホン、フェイ
(72)【発明者】
【氏名】イン、ティンティン
(72)【発明者】
【氏名】チェン、チーリャン
(72)【発明者】
【氏名】チョアン、イーチャオ
(72)【発明者】
【氏名】フー、チーフェイ
(72)【発明者】
【氏名】ルオ、ミャオロン
(72)【発明者】
【氏名】チャン、ヤン
(72)【発明者】
【氏名】リー、チエン
(72)【発明者】
【氏名】チェン、シューホイ
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C063AA03
4C063BB01
4C063CC34
4C063DD22
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC48
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC75
(57)【要約】
ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン系化合物の結晶形及びその製造方法を開示し、具体的には、式（ＩＩ）で表される化合物及びその結晶形の製造方法を開示する。
【化１】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２０°、９．５４±０．２０°、１０．４５±０．２０°において特徴的な回折ピークを有するすることを特徴とする、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ。【化1】
【請求項2】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２０°、５．８５±０．２０°、９．５４±０．２０°、１０．４５±０．２０°、１１．４５±０．２０°、１３．１９±０．２０°、１５．９３±０．２０°、１９．４８±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項3】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９°、５．８５°、９．５４°、９．９４°、１０．４５°、１１．４５°、１３．１９°、１３．９２°、１４．５１°、１５．１１°、１５．９３°、１６．８６°、１７．９４°、１９．４８°、１９．９０°、２０．８０°、２１．６０°、２１．９７°、２３．２８°、２３．６６°、２５．５２°、２６．１９°、２７．４７°、２８．６６°、２９．０３°、２９．４２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項4】
ＸＲＰＤスペクトルは図１に示された通りである、請求項３に記載の結晶形Ａ。
【請求項5】
示差走査熱量曲線は２０１．７℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２５４．８℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項6】
ＤＳＣスペクトルは図２に示された通りである、請求項５に記載の結晶形Ａ。
【請求項7】
熱重量分析曲線は６３．０℃±３．０℃の際に重量が０．５８７６％減少し、１２７．４℃±３．０℃の際に重量が２．４１５６％減少し、２０９．４℃±３．０℃の際に重量が８．８６６６％減少し、２６３．２℃±３．０℃の際に重量が１１．８４１６％減少する、請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項8】
ＴＧＡスペクトルは図３に示された通りである、請求項７に記載の結晶形Ａ。
【請求項9】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１０．５７±０．２０°、１４．５９±０．２０°、１６．０５±０．２０°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂ。
【請求項10】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．６０±０．２０°、１０．５７±０．２０°、１３．８２±０．２０°、１４．５９±０．２０°、１６．０５±０．２０°、１９．５２±０．２０°、２１．４５±０．２０°、２７．１６±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項９に記載の結晶形Ｂ。
【請求項11】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．６０°、５．８７°、９．０６°、９．５４°、１０．５７°、１１．４２°、１３．２１°、１３．８２°、１４．５９°、１６．０５°、１７．２３°、１８．１６°、１９．５２°、２０．１２°、２０．２２°、２１．４５°、２２．００°、２２．９５°、２３．６１°、２４．０６°、２４．６１°、２５．８５°、２６．２９°、２７．１６°、２８．４４°、２８．６８°、３０．９４°、３２．０７°、３２．４０°、３３．０１°、３３．９４°、３４．８２°、３５．６４°、３６．９５°、３８．８８°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１０に記載の結晶形Ｂ。
【請求項12】
ＸＲＰＤスペクトルは図４に示された通りである、請求項１１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項13】
示差走査熱量曲線は２２４．４℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２５７．４℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する、請求項９～１２のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項14】
ＤＳＣスペクトルは図５に示された通りである、請求項１３に記載の結晶形Ｂ。
【請求項15】
熱重量分析曲線は９０．９℃±３．０℃の際に重量が０．１５５８％減少し、２０６．５℃±３．０℃の際に重量が６．６７５８％減少し、２５５．９℃±３．０℃の際に重量が９．４６４８％減少する、請求項９～１２のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項16】
ＴＧＡスペクトルは図６に示された通りである、請求項１５に記載の結晶形Ｂ。
【請求項17】
ＦＧＦＲに関連する疾患を治療する医薬の製造における請求項１～８のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ、請求項９～１６のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は以下の優先権を主張する：
ＣＮ２０１９１０７３１６６３．３、２０１９年８月８日；
ＣＮ２０１９１１０５９４６０．０、２０１９年１１月１日。
ＣＮ２０１９１０７３１６６３．３、２０１９年８月８日；
ＣＮ２０１９１１０５９４６０．０、２０１９年１１月１日。
【0002】
本発明は、ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン系化合物の結晶形及びその製造方法に関し、具体的には、式（ＩＩ）で表される化合物及びその結晶形の製造方法に関する。
【背景技術】
【0003】
線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）は、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）シグナル伝達の受容体であり、そのファミリーは４つのメンバー（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４）から構成され、細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、疎水性膜貫通領域及びチロシンキナーゼドメインを含む細胞内部分で構成される糖タンパク質である。線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、それらの受容体（ＦＧＦＲ）を介して、細胞増殖、細胞分化、細胞移動、血管新生など多くの生理学的調節プロセスにおいて重要な役割を果たしている。ＦＧＦシグナル伝達経路の異常（高発現、遺伝子増幅、遺伝子突然変異、染色体再配列など）を、腫瘍細胞の増殖、移動、侵入及び血管新生などの多くの病理学的プロセスと直接結び付ける多くの証拠がある。そのため、ＦＧＦＲは治療標的の重要な一類として浮上し、広範な研究開発の関心を集めている。
【発明の概要】
【0004】
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２０°、９．５４±０．２０°、１０．４５±０．２０°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａを提供する。
【0005】
【化1】
【0006】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２０°、５．８５±０．２０°、９．５４±０．２０°、１０．４５±０．２０°、１１．４５±０．２０°、１３．１９±０．２０°、１５．９３±０．２０°、１９．４８±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する。
【0007】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９°、５．８５°、９．５４°、９．９４°、１０．４５°、１１．４５°、１３．１９°、１３．９２°、１４．５１°、１５．１１°、１５．９３°、１６．８６°、１７．９４°、１９．４８°、１９．９０°、２０．８０°、２１．６０°、２１．９７°、２３．２８°、２３．６６°、２５．５２°、２６．１９°、２７．４７°、２８．６６°、２９．０３°、２９．４２°において特徴的な回折ピークを有する。
【0008】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトルが図１に示された通りである。
【0009】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトルの解析データは表１に示された通りである。
【0010】
【表1】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａの示差走査熱量曲線は２０１．７℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２５４．８℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する。
【0011】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＤＳＣスペクトルが図２に示された通りである。
【0012】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａの熱重量分析曲線は６３．０℃±３．０℃の際に重量が０．５８７６％減少し、１２７．４℃±３．０℃の際に重量が２．４１５６％減少し、２０９．４℃±３．０℃の際に重量が８．８６６６％減少し、２６３．２℃±３．０℃の際に重量が１１．８４１６％減少する。
【0013】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＴＧＡスペクトルが図３に示された通りである。
【0014】
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１０．５７±０．２０°、１４．５９±０．２０°、１６．０５±０．２０°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂを提供する。
【0015】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．６０±０．２０°、１０．５７±０．２０°、１３．８２±０．２０°、１４．５９±０．２０°、１６．０５±０．２０°、１９．５２±０．２０°、２１．４５±０．２０°、２７．１６±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する。
【0016】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．６０°、５．８７°、９．０６°、９．５４°、１０．５７°、１１．４２°、１３．２１°、１３．８２°、１４．５９°、１６．０５°、１７．２３°、１８．１６°、１９．５２°、２０．１２°、２０．２２°、２１．４５°、２２．００°、２２．９５°、２３．６１°、２４．０６°、２４．６１°、２５．８５°、２６．２９°、２７．１６°、２８．４４°、２８．６８°、３０．９４°、３２．０７°、３２．４０°、３３．０１°、３３．９４°、３４．８２°、３５．６４°、３６．９５°、３８．８８°において特徴的な回折ピークを有する。
【0017】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトルが図４に示された通りである。
【0018】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトルの解析データは表２に示された通りである。
【0019】
【表2】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂの示差走査熱量曲線は２２４．４℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２５７．４℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する。
【0020】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＢのＤＳＣスペクトルが図５に示された通りである。
【0021】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂの熱重量分析曲線は９０．９℃±３．０℃の際に重量が０．１５５８％減少し、２０６．５℃±３．０℃の際に重量が６．６７５８％減少し、２５５．９℃±３．０℃の際に重量が９．４６４８％減少する。
【0022】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＢのＴＧＡスペクトルが図６に示された通りである。
【0023】
本発明は、更にＦＧＦＲに関連する疾患を治療するための医薬の製造における前記結晶形Ａ，前記結晶形Ｂの使用を提供する。
【0024】
＜技術効果＞
【0025】
式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ、結晶形Ｂは良好な安定性を有し、薬になりやすい、式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩の実験例によれば、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ、結晶形Ｂは、野生型ＦＧＦＲに対して良好な阻害活性を示し、且つＦＧＦＲ１、４に対するＦＧＦＲ２、３の選択性が高い。式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ、結晶形Ｂのマウス薬物動態パラメータは良好である。
【0026】
式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩は、野生型ＦＧＦＲに対して良好な阻害活性を示し、更にＦＧＦＲ１、４に対するＦＧＦＲ２、３の選択性が高い。式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩のマウス薬物動態パラメータは良好である。
【0027】
＜定義及び説明＞
【0028】
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
【0029】
本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法により製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と結合した実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好ましい実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【0030】
本発明の具体的な実施形態の化学反応は適切な溶媒で完成され、前記の溶媒は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬と材料に適するべきである。本発明の化合物を得るため、当業者が既存の実施形態に基づいて合成工程又は反応スキームを修正又は選択することが必要であることもある。
【0031】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の何らの制限にもならない。
【0032】
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品で、更に精製せずにそのままで使用してもよい。
【0033】
本発明では、下記略語を使用する：ｅｑは当量、等量を表し；ＰＥは石油エーテルを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表す。
【0034】
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品から得ることができ、市販の化合物はサプライヤーカタログ名を使用する。混合溶媒を反応溶液に添加する場合、各溶媒を先に混合してから反応溶液に添加する；又は各単一溶媒を順番に反応溶液に添加し反応系で混合する。
【0035】
化合物は、本技術分野の従来の命名原則、又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアを使用して命名され、市販の化合物は、サプライヤーのカタログ名を使用して命名される。
【0036】
本発明の粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下の通りである：
光管：Ｃｕ、ｋ２、（λ＝１．５４０５６Å）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
サンプルパン回転数：１５ｒｐｍ
約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下の通りである：
光管：Ｃｕ、ｋ２、（λ＝１．５４０５６Å）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
サンプルパン回転数：１５ｒｐｍ
【0037】
本発明の示差走査熱量分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
試料（０．５～１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム坩堝に取って測定を行い、方法は：２５℃～３００又は３５０℃、１０℃／ｍｉｎで測定する。
試料（０．５～１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム坩堝に取って測定を行い、方法は：２５℃～３００又は３５０℃、１０℃／ｍｉｎで測定する。
【0038】
本発明の熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に取って測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３００度まで、又は重量が２０％減少するまで加熱する。
試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に取って測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３００度まで、又は重量が２０％減少するまで加熱する。
【図面の簡単な説明】
【0039】
【図1】式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトルである。
【図2】式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＤＳＣスペクトルである。
【図3】式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＡのＴＧＡスペクトルである。
【図4】式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＢのＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトルである。
【図5】式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＢのＤＳＣスペクトルである。
【図6】式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形ＢのＴＧＡスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【0040】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の不利な制限を意味するものではない。本発明は本明細書で詳細に説明されており、その特定の実施形態も開示されており、当業者にとって、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態において様々な変更及び修正を行うことができることは明らかである。
【0041】
実施例１：式（Ｉ）で表される化合物及びトリフルオロ酢酸塩の製造合成
【0042】
【化2】
【0043】
工程１：化合物ＢＢ－１－３の合成
化合物ＢＢ－１－２（２．０ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及び化合物ＢＢ－１－１（２．６ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を水（６．０ｍＬ）及びジオキサン（２５．０ｍＬ）に溶解した後、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（８４１ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）及び炭酸カリウム（４．８ｇ、３４．４８ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を添加し、窒素ガスの保護下で１００℃に加熱し１６時間反応させた。得られた反応溶液を吸引濾過し、スピン乾燥させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）で精製して、化合物ＢＢ－１－３を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９０．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
化合物ＢＢ－１－２（２．０ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及び化合物ＢＢ－１－１（２．６ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を水（６．０ｍＬ）及びジオキサン（２５．０ｍＬ）に溶解した後、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（８４１ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）及び炭酸カリウム（４．８ｇ、３４．４８ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を添加し、窒素ガスの保護下で１００℃に加熱し１６時間反応させた。得られた反応溶液を吸引濾過し、スピン乾燥させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）で精製して、化合物ＢＢ－１－３を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９０．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0044】
工程２：化合物ＢＢ－１の合成
化合物ＢＢ－１－３（０．５ｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びピリジン（２０９ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、２１３．２８μＬ、１ｅｑ）をクロロホルム（２０．０ｍＬ）に添加し、０℃に冷却した後臭素（４２２ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１３６．２２μＬ、１ｅｑ）を添加した。２８℃の室温で１８時間反応させた。反応物をチオ硫酸ナトリウム（１．０ｍＬ）でクエンチングした後、吸引濾過し、濾液を濃縮し、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）で精製した。化合物ＢＢ－１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２６７．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１２（ｓ，１Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）３．８６（ｓ，３Ｈ）２．４３（ｓ，３Ｈ）。
化合物ＢＢ－１－３（０．５ｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びピリジン（２０９ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、２１３．２８μＬ、１ｅｑ）をクロロホルム（２０．０ｍＬ）に添加し、０℃に冷却した後臭素（４２２ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１３６．２２μＬ、１ｅｑ）を添加した。２８℃の室温で１８時間反応させた。反応物をチオ硫酸ナトリウム（１．０ｍＬ）でクエンチングした後、吸引濾過し、濾液を濃縮し、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）で精製した。化合物ＢＢ－１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２６７．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１２（ｓ，１Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）３．８６（ｓ，３Ｈ）２．４３（ｓ，３Ｈ）。
【0045】
工程３：化合物２の合成
窒素ガスの保護下で、化合物ＢＢ－２－１（２．０ｇ、１８．７７ｍｍｏｌ、２．１７ｍＬ、１ｅｑ、ＨＣｌ）をクロロベンゼン（１５．０ｍＬ）に溶解し、２５℃で化合物ＢＢ－２－２（８．３ｇ、６５．６９ｍｍｏｌ、５．８ｍＬ、３．５当量）を滴下し、混合物を９０℃までゆっくりと昇温させ１６時間撹拌した。反応系に水（３０．０ｍＬ）及び酢酸エチル（３０．０ｍＬ）を添加し、静置して分層し、同時に水相を酢酸エチル（２０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合併し、飽和塩化ナトリウム溶液（３０．０ｍＬ）で１回洗浄し、最後に無水硫酸ナトリウムで有機相を乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～２：１）で分離し精製して、化合物２を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７８．７［Ｍ＋１］＋。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．２６（ｓ，１Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）。
窒素ガスの保護下で、化合物ＢＢ－２－１（２．０ｇ、１８．７７ｍｍｏｌ、２．１７ｍＬ、１ｅｑ、ＨＣｌ）をクロロベンゼン（１５．０ｍＬ）に溶解し、２５℃で化合物ＢＢ－２－２（８．３ｇ、６５．６９ｍｍｏｌ、５．８ｍＬ、３．５当量）を滴下し、混合物を９０℃までゆっくりと昇温させ１６時間撹拌した。反応系に水（３０．０ｍＬ）及び酢酸エチル（３０．０ｍＬ）を添加し、静置して分層し、同時に水相を酢酸エチル（２０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合併し、飽和塩化ナトリウム溶液（３０．０ｍＬ）で１回洗浄し、最後に無水硫酸ナトリウムで有機相を乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～２：１）で分離し精製して、化合物２を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７８．７［Ｍ＋１］＋。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．２６（ｓ，１Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）。
【0046】
工程４：化合物４の合成
マイクロ波管において、窒素ガスの保護下で、化合物２（０．２ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及び化合物３（２１３ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）を、ジオキサン（１．５ｍＬ）及び水（１．５ｍＬ）の混合溶液に溶解し、テトラキス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（６５ｍｇ、５５．８６μｍｏｌ、０．０５ｅｑ）、炭酸ナトリウム（１３０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を添加し、混合物を１２０℃でマイクロ波で３０分間撹拌した。反応溶液を直接に濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）（ＴＬＣ検出 石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で分離して、化合物４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２８１．０［Ｍ＋１］＋。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．６４（ｄ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｔ，１Ｈ），３．８６（ｓ，６Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）。
マイクロ波管において、窒素ガスの保護下で、化合物２（０．２ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及び化合物３（２１３ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）を、ジオキサン（１．５ｍＬ）及び水（１．５ｍＬ）の混合溶液に溶解し、テトラキス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（６５ｍｇ、５５．８６μｍｏｌ、０．０５ｅｑ）、炭酸ナトリウム（１３０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を添加し、混合物を１２０℃でマイクロ波で３０分間撹拌した。反応溶液を直接に濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）（ＴＬＣ検出 石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で分離して、化合物４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２８１．０［Ｍ＋１］＋。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．６４（ｄ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｔ，１Ｈ），３．８６（ｓ，６Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）。
【0047】
工程５：化合物００２７－１の合成
窒素ガスの保護下で、化合物４（２５０ｍｇ、８９０．６１μｍｏｌ、１ｅｑ）をアセトニトリル（２０．０ｍＬ）及びジクロロメタン（５．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、０℃で塩化スルホニル（８４ｍｇ、６２３．４３μｍｏｌ、６２．３３μＬ、０．７ｅｑ）のアセトニトリル（２．５ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、混合物を０℃で１０分間撹拌した。反応溶液にメタノール（５．０ｍＬ）を添加してクエンチングし、減圧濃縮して乾燥させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）（ＴＬＣで検出し、石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で分離して、化合物００２７－１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１４．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
窒素ガスの保護下で、化合物４（２５０ｍｇ、８９０．６１μｍｏｌ、１ｅｑ）をアセトニトリル（２０．０ｍＬ）及びジクロロメタン（５．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、０℃で塩化スルホニル（８４ｍｇ、６２３．４３μｍｏｌ、６２．３３μＬ、０．７ｅｑ）のアセトニトリル（２．５ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、混合物を０℃で１０分間撹拌した。反応溶液にメタノール（５．０ｍＬ）を添加してクエンチングし、減圧濃縮して乾燥させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）（ＴＬＣで検出し、石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で分離して、化合物００２７－１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１４．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0048】
工程６：式（Ｉ）の化合物の合成
三口フラスコに、化合物００２７－１（５９ｍｇ、１８６．４９μｍｏｌ、１ｅｑ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５２ｍｇ、２０５．１４μｍｏｌ、１．１ｅｑ）、酢酸パラジウム（５ｍｇ、２０．５１μｍｏｌ、０．１１ｅｑ）及び２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（２０ｍｇ、４１．０３μｍｏｌ、０．２２ｅｑ）、酢酸カリウム（６０ｍｇ、６１５．４２μｍｏｌ、３．３ｅｑ）をジオキサン（４．０ｍＬ）溶液に添加し、窒素ガスで反応系中の空気を置換し、窒素ガスの飽和下で、１００℃に昇温させ、３０分間還流して撹拌し、２５℃に下げ、化合物ＢＢ－１（５０ｍｇ、１８６．４９μｍｏｌ、１ｅｑ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（１５ｍｇ、１８．６５μｍｏｌ、０．１ｅｑ）、炭酸カリウム（７７ｍｇ、５５９．４７μｍｏｌ、３ｅｑ）、ジオキサン（４．０ｍＬ）及び水（２．０ｍＬ）を添加し、窒素ガスで反応系中の空気を置換し、窒素ガスの飽和下で、１００°Ｃに昇温させ、８時間還流して撹拌した。反応溶液を直接に濃縮した。得られた粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ１５０×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％のＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、８分）で精製して、式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４６８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．７９（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ）。前記塩をジクロロメタンに溶解し、飽和炭酸ナトリウムを添加して洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液をスピン乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．５１（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｂｒｓ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ）。
三口フラスコに、化合物００２７－１（５９ｍｇ、１８６．４９μｍｏｌ、１ｅｑ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５２ｍｇ、２０５．１４μｍｏｌ、１．１ｅｑ）、酢酸パラジウム（５ｍｇ、２０．５１μｍｏｌ、０．１１ｅｑ）及び２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（２０ｍｇ、４１．０３μｍｏｌ、０．２２ｅｑ）、酢酸カリウム（６０ｍｇ、６１５．４２μｍｏｌ、３．３ｅｑ）をジオキサン（４．０ｍＬ）溶液に添加し、窒素ガスで反応系中の空気を置換し、窒素ガスの飽和下で、１００℃に昇温させ、３０分間還流して撹拌し、２５℃に下げ、化合物ＢＢ－１（５０ｍｇ、１８６．４９μｍｏｌ、１ｅｑ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（１５ｍｇ、１８．６５μｍｏｌ、０．１ｅｑ）、炭酸カリウム（７７ｍｇ、５５９．４７μｍｏｌ、３ｅｑ）、ジオキサン（４．０ｍＬ）及び水（２．０ｍＬ）を添加し、窒素ガスで反応系中の空気を置換し、窒素ガスの飽和下で、１００°Ｃに昇温させ、８時間還流して撹拌した。反応溶液を直接に濃縮した。得られた粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ１５０×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％のＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、８分）で精製して、式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４６８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．７９（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ）。前記塩をジクロロメタンに溶解し、飽和炭酸ナトリウムを添加して洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液をスピン乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．５１（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｂｒｓ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ）。
【0049】
実施例２：式（ＩＩ）で表される化合物の製造
【0050】
【化3】
【0051】
式（Ｉ）で表される化合物（４４．４ｇ、９４．８９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をテトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）に溶解した後、塩化水素（４Ｍ、９４．８９ｍＬ、４ｅｑ）の酢酸エチル溶液を滴下し、２５℃で３時間撹拌した。反応溶液を濾過して黄色の固体を得、オイルポンプで乾燥させた。式（ＩＩ）で表される化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）３．９１（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）３．９１（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）。
【0052】
実施例３：式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａの製造
約４００ｍｇの式（ＩＩ）で表される化合物を秤量して４０ｍＬのガラスバイアルに添加し、２０ｍＬのエタノールを添加し、撹拌して懸濁液とした。上記の試料を磁気加熱式攪拌機（５０℃）に置き、６０時間攪拌した（遮光）。試料を快速に遠心分離し残留した固体を真空乾燥オーブンに入れ、４５℃の条件で一晩真空で乾燥させ残留溶媒を除去し、結晶形Ａを得た。
約４００ｍｇの式（ＩＩ）で表される化合物を秤量して４０ｍＬのガラスバイアルに添加し、２０ｍＬのエタノールを添加し、撹拌して懸濁液とした。上記の試料を磁気加熱式攪拌機（５０℃）に置き、６０時間攪拌した（遮光）。試料を快速に遠心分離し残留した固体を真空乾燥オーブンに入れ、４５℃の条件で一晩真空で乾燥させ残留溶媒を除去し、結晶形Ａを得た。
【0053】
実施例４：式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂの製造
約４００ｍｇの式（ＩＩ）で表される化合物を秤量して４０ｍＬのガラスバイアルに添加し、２０ｍＬの酢酸エチルを添加し、撹拌して懸濁液にした。上記の試料を磁気加熱式攪拌機（５０℃）に置き、６０時間攪拌した（遮光）。試料を快速に遠心分離し残留した固体を真空乾燥オーブンに入れ、４５℃の条件で一晩真空で乾燥させ残留溶媒を除去し、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂを得た。
約４００ｍｇの式（ＩＩ）で表される化合物を秤量して４０ｍＬのガラスバイアルに添加し、２０ｍＬの酢酸エチルを添加し、撹拌して懸濁液にした。上記の試料を磁気加熱式攪拌機（５０℃）に置き、６０時間攪拌した（遮光）。試料を快速に遠心分離し残留した固体を真空乾燥オーブンに入れ、４５℃の条件で一晩真空で乾燥させ残留溶媒を除去し、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂを得た。
【0054】
実験例１：野生型キナーゼの体外阻害活性評価
３３Ｐ同位体標識キナーゼ活性試験（Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ）を使用して、ＩＣ５０値を測定し、ヒトＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ４に対する試験化合物の阻害能力を評価した。
３３Ｐ同位体標識キナーゼ活性試験（Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ）を使用して、ＩＣ５０値を測定し、ヒトＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ４に対する試験化合物の阻害能力を評価した。
【0055】
緩衝液条件：２０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（Ｈｅｐｅｓ）（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのエチレングリコール－ビス－（２－アミノエチルエーテル）テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）、０．０２％のポリオキシエチレンラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３５）、０．０２ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．１ｍＭのバナジン酸ナトリウム（Ｎａ３ＶＯ４）、２ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）、１％のＤＭＳＯ。
【0056】
実験手順：室温で、試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭの溶液に調製して、準備した。基質を新たに調製したバッファーに溶解し、それに試験キナーゼを添加し、均一に混合した。音響技術（Ｅｃｈｏ５５０）を使用し、試験化合物が溶解されたＤＭＳＯ溶液を上記の均一に混合した反応溶液に添加した。反応溶液中の化合物の濃度は、１０μＭ、３．３３μＭ、１．１１μＭ、０．３７０μＭ、０．１２３μＭ、４１．２ｎＭ、１３．７ｎＭ、４．５７ｎＭ、１．５２ｎＭ、０．５０８ｎＭ、又は１０μＭ、２．５０μＭ、０．６２μＭ、０．１５６μＭ、３９．１ｎＭ、９．８ｎＭ、２．４ｎＭ、０．６１ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．０３８ｎＭであった。１５分間のインキュベーションした後、３３Ｐ－ＡＴＰ（活性０．０１μＣｉ／μＬ、対応する濃度は表３に示した）を添加し、反応を開始させた。ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ４、及びそれらの基質のサプライヤーの製品番号、ロット番号及び反応溶液中の濃度情報は表３に示した。室温で１２０分間反応させた後、反応溶液をＰ８１イオン交換濾紙（Ｗｈａｔｍａｎ＃３６９８－９１５）にスポットした。０．７５％のリン酸溶液で濾紙を繰り返し洗浄した後、濾紙の上に残ったリン酸化基質の放射能を測定した。キナーゼ活性データは、試験化合物を含むキナーゼ活性とブランク群（ＤＭＳＯのみを含む）のキナーゼ活性の比により表され、Ｐｒｉｓｍ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いたカーブフィッティングによりＩＣ５０値を得、実験結果は表４に示された通りである。
【0057】
【表3】
【0058】
【表4】
結論：式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩は、野生型ＦＧＦＲに対して良好な阻害活性を示し、且つＦＧＦＲ１、４に対するＦＧＦＲ２、３の選択性が高い。
【0059】
実験例２：化合物の薬物動態評価
実験目的：マウス体内における化合物の薬物動態を試験する。
実験材料：
ＣＤ－１マウス（オス）、溶媒（０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液）、化合物００２７のトリフルオロ酢酸塩。
実験目的：マウス体内における化合物の薬物動態を試験する。
実験材料：
ＣＤ－１マウス（オス）、溶媒（０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液）、化合物００２７のトリフルオロ酢酸塩。
【0060】
１、投与製剤の調製：
溶媒は、０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液であり、以下の手順に従って調製した：
ａ．適切な容器に約５０％体積の精製水を添加し、約６０℃～７０℃に加熱した。
ｂ．水温が規定範囲に達した後、ヒーターを切った。上記の容器に必要な量のメチルセルロースをゆっくりと添加し、攪拌を続けた。
ｃ．４℃で目視で透明な溶液になるまで撹拌を続けた。
ｄ．必要な量のトウェイン８０を上記の溶液に添加した。トウェイン８０が目視で均一に分散し、且つ透明な溶液になるまで撹拌を続けた。
ｅ．適切な量の精製水で上記の溶液を最終体積に希釈した。
ｆ．均一な溶液が形成されるまで攪拌を続けた。
溶媒は、０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液であり、以下の手順に従って調製した：
ａ．適切な容器に約５０％体積の精製水を添加し、約６０℃～７０℃に加熱した。
ｂ．水温が規定範囲に達した後、ヒーターを切った。上記の容器に必要な量のメチルセルロースをゆっくりと添加し、攪拌を続けた。
ｃ．４℃で目視で透明な溶液になるまで撹拌を続けた。
ｄ．必要な量のトウェイン８０を上記の溶液に添加した。トウェイン８０が目視で均一に分散し、且つ透明な溶液になるまで撹拌を続けた。
ｅ．適切な量の精製水で上記の溶液を最終体積に希釈した。
ｆ．均一な溶液が形成されるまで攪拌を続けた。
【0061】
胃内投与用製剤の調製：
ａ．適切な量の試料を秤量しガラス瓶に入れた；
ｂ．７０％体積の溶媒（０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液）を添加した；
ｃ．目視で均一になるまで製剤を攪拌し、必要に応じて水浴超音波処理をした；
ｅ．残りの体積の０．５％のメチルセルロース＋０．５％のトウェイン８０を補充し、均一に攪拌した。
ａ．適切な量の試料を秤量しガラス瓶に入れた；
ｂ．７０％体積の溶媒（０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液）を添加した；
ｃ．目視で均一になるまで製剤を攪拌し、必要に応じて水浴超音波処理をした；
ｅ．残りの体積の０．５％のメチルセルロース＋０．５％のトウェイン８０を補充し、均一に攪拌した。
【0062】
２、投与
１、２群の動物に、それぞれ５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬの化合物を１回胃内投与し、投与体積は１０ｍＬ／ｋｇであった。
投与前に動物の体重を測定し、体重により投与量を計算した。
１、２群の動物に、それぞれ５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬの化合物を１回胃内投与し、投与体積は１０ｍＬ／ｋｇであった。
投与前に動物の体重を測定し、体重により投与量を計算した。
【0063】
３、試料の収集と処理
伏在静脈採血により指定された時間（０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間）に全血サンプル（３０μＬ）を収集し、試験記録に実際の採血時間を記録した。収集時点の許容誤差は、投与後１時間以内の時点±１分で、その他の時点では理論時間の±５％である。
伏在静脈採血により指定された時間（０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間）に全血サンプル（３０μＬ）を収集し、試験記録に実際の採血時間を記録した。収集時点の許容誤差は、投与後１時間以内の時点±１分で、その他の時点では理論時間の±５％である。
【0064】
すべての血液試料は、直ちにラベル付き市販のＫ２－ＥＤＴＡを含む遠心分離管に移された。血液サンプルを採取後、４℃、３２００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上清血漿を吸引し、快速にドライアイスに置き、－２０℃又は更に低い温度に保存して、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に使用した。又、薬物動態パラメータを計算し、実験結果：表５をに示された通りである。
【0065】
【表5】
【0066】
結論：式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩のマウス薬物動態パラメータは良好である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2022-03-10
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２０°、９．５４±０．２０°、１０．４５±０．２０°において特徴的な回折ピークを有するすることを特徴とする、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ。【化1】
【請求項2】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９±０．２０°、５．８５±０．２０°、９．５４±０．２０°、１０．４５±０．２０°、１１．４５±０．２０°、１３．１９±０．２０°、１５．９３±０．２０°、１９．４８±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項3】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９９°、５．８５°、９．５４°、９．９４°、１０．４５°、１１．４５°、１３．１９°、１３．９２°、１４．５１°、１５．１１°、１５．９３°、１６．８６°、１７．９４°、１９．４８°、１９．９０°、２０．８０°、２１．６０°、２１．９７°、２３．２８°、２３．６６°、２５．５２°、２６．１９°、２７．４７°、２８．６６°、２９．０３°、２９．４２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項4】
示差走査熱量曲線は２０１．７℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２５４．８℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項5】
熱重量分析曲線は６３．０℃±３．０℃の際に重量が０．５８７６％減少し、１２７．４℃±３．０℃の際に重量が２．４１５６％減少し、２０９．４℃±３．０℃の際に重量が８．８６６６％減少し、２６３．２℃±３．０℃の際に重量が１１．８４１６％減少する、請求項１～３のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項6】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１０．５７±０．２０°、１４．５９±０．２０°、１６．０５±０．２０°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｂ。
【請求項7】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．６０±０．２０°、１０．５７±０．２０°、１３．８２±０．２０°、１４．５９±０．２０°、１６．０５±０．２０°、１９．５２±０．２０°、２１．４５±０．２０°、２７．１６±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項６に記載の結晶形Ｂ。
【請求項8】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．６０°、５．８７°、９．０６°、９．５４°、１０．５７°、１１．４２°、１３．２１°、１３．８２°、１４．５９°、１６．０５°、１７．２３°、１８．１６°、１９．５２°、２０．１２°、２０．２２°、２１．４５°、２２．００°、２２．９５°、２３．６１°、２４．０６°、２４．６１°、２５．８５°、２６．２９°、２７．１６°、２８．４４°、２８．６８°、３０．９４°、３２．０７°、３２．４０°、３３．０１°、３３．９４°、３４．８２°、３５．６４°、３６．９５°、３８．８８°において特徴的な回折ピークを有する、請求項７に記載の結晶形Ｂ。
【請求項9】
示差走査熱量曲線は２２４．４℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２５７．４℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する、請求項６～８のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項10】
熱重量分析曲線は９０．９℃±３．０℃の際に重量が０．１５５８％減少し、２０６．５℃±３．０℃の際に重量が６．６７５８％減少し、２５５．９℃±３．０℃の際に重量が９．４６４８％減少する、請求項６～８のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項11】
ＦＧＦＲに関連する疾患を治療する医薬の製造における請求項１～５のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ａ、請求項６～１０のいずれか１項に記載の結晶形Ｂの使用。
【国際調査報告】