(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-08-10
(54)【発明の名称】好熱性タンパク質を利用した組換えインビトロ転写及び翻訳のための系、方法及び組成物
(51)【国際特許分類】
C12N 15/31 20060101AFI20220803BHJP
C07K 1/02 20060101ALI20220803BHJP
C07K 14/32 20060101ALI20220803BHJP
C12N 9/10 20060101ALI20220803BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20220803BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20220803BHJP
C12M 1/00 20060101ALN20220803BHJP
C12N 9/12 20060101ALN20220803BHJP
【FI】
C12N15/31
C07K1/02 ZNA
C07K14/32
C12N9/10
C12N15/63 Z
C12N1/21
C12M1/00 A
C12N9/12
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021559417
(86)(22)【出願日】2020-04-13
(85)【翻訳文提出日】2021-12-06
(86)【国際出願番号】 US2020028005
(87)【国際公開番号】W WO2020210833
(87)【国際公開日】2020-10-15
(32)【優先日】2019-04-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】322008162
【氏名又は名称】ネイチャーズ ツールボックス,インク.
【氏名又は名称原語表記】NATURE’S TOOLBOX,INC.
【住所又は居所原語表記】7701 Innovation Way NE,Rio Rancho,NM 87144(US)
(74)【代理人】
【識別番号】110000659
【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ハンバート,マイケル
(72)【発明者】
【氏名】コグリン,アレクサンダー
(72)【発明者】
【氏名】ヴィラヌエバ,チャーリー
【テーマコード(参考)】
4B029
4B050
4B065
4H045
【Fターム(参考)】
4B029AA23
4B029BB16
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4H045AA20
4H045CA11
4H045DA89
4H045EA60
4H045FA74
(57)【要約】
本発明の別の目的は、組換え無細胞発現系であって、その反応混合物が、生体化合物、タンパク質、酵素、バイオシミラーのインビトロでの生合成又は小分子の化学修飾に必要な全ての無細胞反応成分を含有するものである、当該組換え無細胞発現系を含み得る。
【選択図】
図1
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換え無細胞発現のための系であって、
-少なくとも以下の成分:
-複数の開始因子(IF);
-複数の延長因子(EF);
-複数のペプチド終結因子(RF);
-少なくとも1つのリボソームリサイクリング因子(RRF);
-複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS);及び
-少なくとも1つのメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)を有する、組換えコアタンパク質混合物と、
-少なくとも1つの核酸合成鋳型と、
-インビトロでのマクロ分子合成のために必要な無細胞反応成分を有する反応混合物とを含み、
-上記成分は、マクロ分子の無細胞発現のために構成されたバイオリアクター内に位置している、系。
【請求項2】
前記組換えコアタンパク質混合物の成分が、細菌由来の組換えコアタンパク質混合物を含む、請求項1記載の系。
【請求項3】
細菌由来の前記組換えコアタンパク質混合物が、組換えコアタンパク質混合物であってその少なくとも1つの成分が好熱性細菌由来である組換えコアタンパク質混合物を含む、請求項2記載の系。
【請求項4】
前記好熱性細菌は、好熱性バチルス科(Bacillaceae)細菌、又はゲオバチルス(Geobacillus)好熱性細菌を含む、請求項2及び3のいずれか一項に記載の系。
【請求項5】
前記ゲオバチルス(Geobacillus)好熱性細菌は、Geobacillus subterraneus、及びGeobacillus stearothermophilusからなる群から選択される、請求項4記載の系。
【請求項6】
細菌由来の前記組換えコアタンパク質混合物が、組換えコアタンパク質混合物であってその少なくとも1つの成分が非好熱性細菌、又は非好熱性細菌と好熱性細菌との組み合わせに由来する組換えコアタンパク質混合物を含む、請求項1記載の系。
【請求項7】
前記非好熱性細菌は、大腸菌(Escherichia coli)を含む、請求項6記載の系。
【請求項8】
前記複数の開始因子(IF)は、好熱性細菌由来の複数の開始因子を含む、請求項1記載の系。
【請求項9】
前記好熱性細菌由来の複数の開始因子は、IF1、IF2、IF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項1及び8のいずれか一項に記載の系。
【請求項10】
前記複数の開始因子は、配列番号2、4、6、70、72及び74からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項1、8及び9のいずれか一項に記載の系。
【請求項11】
前記複数の延長因子(EF)は、好熱性細菌由来の複数の延長因子を含む、請求項1記載の系。
【請求項12】
好熱性細菌由来の前記複数の延長因子は、EF-G、EF-Tu、EF-Ts、EF-4、EF-P、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項1及び11のいずれか一項に記載の系。
【請求項13】
前記複数の延長因子は、配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82、及び84からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項1、11及び12のいずれか一項に記載の系。
【請求項14】
前記複数のペプチド終結因子(RF)は、好熱性細菌、又はバチルス(Bacillus)細菌に由来する複数のペプチド終結因子を含む、請求項1記載の系。
【請求項15】
好熱性細菌由来の前記複数のペプチド終結因子は、RF1、RF2、及びRF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項1及び14のいずれか一項に記載の系。
【請求項16】
前記複数のペプチド終結因子は、配列番号18、20、22、86、88からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項1、14及び15のいずれか一項に記載の系。
【請求項17】
前記リボソームリサイクリング因子(RRF)は、好熱性細菌由来のリボソームリサイクリング因子を含む、請求項1記載の系。
【請求項18】
前記リボソームリサイクリング因子は、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、請求項1及び17のいずれか一項に記載の系。
【請求項19】
前記リボソームリサイクリング因子は、アミノ酸配列配列番号14及び90又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うリボソームリサイクリング因子を含む、請求項1、17及び18のいずれか一項に記載の系。
【請求項20】
前記複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS)は、好熱性細菌又は大腸菌(E.coli)由来の複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼを含む、請求項1記載の系。
【請求項21】
前記複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、AlaRS;ArgRS;AsnRS;AspRS;CysRS;GlnRS;GluRS;GlyRS;HisRS;IleRS;LeuRS;LysRS;MetRS;PheRS(a);PheRS(b);ProRS;SerRS;ThrRS;TrpRS;TyrRS;及びValRS、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項1及び20のいずれか一項に記載の系。
【請求項22】
前記複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、配列番号26、28、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、及び130からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項1、20及び21のいずれか一項に記載の系。
【請求項23】
前記メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)は、好熱性細菌由来のメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、請求項1記載の系。
【請求項24】
前記メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、請求項1及び23に記載の系。
【請求項25】
前記メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、アミノ酸配列配列番号68及び132、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、請求項1、23及び24のいずれか一項に記載の系。
【請求項26】
前記核酸合成鋳型は、DNA鋳型を含む、請求項1記載の系。
【請求項27】
前記DNA鋳型は、
-プロモーターに作用可能に連結した少なくとも1つの標的配列であって、随意にコドン最適化されていてもよい、当該標的配列;
-少なくとも1つのリボソーム結合部位(RBS);
-少なくとも1つの発現産物切断部位;及び
-少なくとも1つのタグ、
を有する線状DNA鋳型を含む、請求項26記載の系。
【請求項28】
前記核酸合成鋳型は、RNA鋳型を含む、請求項1記載の系。
【請求項29】
前記反応混合物は、以下の成分:
-ある量のリボソーム、及び随意に好熱性細菌由来のある量のリボソーム;
-ある量のリボヌクレアーゼ阻害剤;
-ある量のRNAポリメラーゼ;
-ある量のtRNA、及び随意に好熱性細菌由来のある量のtRNA;
-緩衝液;ならびに
-ある量のアミノ酸、
のうちの1又は複数を含む、請求項1記載の系。
【請求項30】
前記反応混合物は、以下の成分:
-トリス-酢酸;
-Mg(OAc)2;
-K
+-グルタミン酸塩;
-アミノ酢酸(amino-acetate);
-NaCl;
-KCl;
-MgCk;
-DTT;
-オクチル-b-グリコシド;
-NAD;
-NADP;
-ソルビトール;
-FADH;
-CoA;
-PLP;及び
-SAM、
のうちの1又は複数をさらに含む、請求項29記載の系。
【請求項31】
エネルギー源をさらに含む、請求項1及び29のいずれか一項に記載の系。
【請求項32】
前記エネルギー源は、ある量のヌクレオチド三リン酸(NTP)を含む、請求項32記載の系。
【請求項33】
前記ヌクレオチド三リン酸は、アデニン三リン酸(ATP);グアノシン三リン酸(GTP)、ウリジン三リン酸UTP、及びシチジン三リン酸(CTP)からなる群から選択されるヌクレオチド三リン酸のうちの1又は複数を含む、請求項32記載の系。
【請求項34】
前記エネルギー源は、無機ポリリン酸塩由来のエネルギー再生系を含む、請求項31、32及び33のいずれか一項に記載の系。
【請求項35】
前記無機ポリリン酸塩由来のエネルギー再生系は、
-細胞アデノシン三リン酸(ATP)エネルギー再生系であって、
-ある量のアデノシルキナーゼ(Gst AdK)酵素;
-ある量のポリリン酸キナーゼ(TaqPPK)酵素;
-ある量の無機ポリリン酸塩(PPi);及び
-ある量のアデノシン一リン酸(AMP)、を含む細胞アデノシン三リン酸(ATP)エネルギー再生系を含み、
-前記AdK酵素及びPPK酵素が相乗的に作用し、PPi及びAMPから細胞ATPエネルギーを再生するものである、請求項34記載の系。
【請求項36】
前記バイオリアクターは、連続フローバイオリアクターを含む、請求項1記載の系。
【請求項37】
組換え無細胞発現反応混合物であって、
-複数の開始因子(IF);
-複数の延長因子(EF);
-複数の終結因子(RF);
-少なくとも1つのリボソームリサイクリング因子(RRF);
-複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS);及び
少なくとも1つのメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)を含む、組換え無細胞発現反応混合物。
【請求項38】
前記複数の開始因子(IF)は、好熱性細菌由来の複数の開始因子を含む、請求項37記載の系。
【請求項39】
前記好熱性細菌由来の複数の開始因子は、IF1、IF2、IF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項37及び38のいずれか一項に記載の系。
【請求項40】
複数の開始因子は、配列番号2、4、6、70、72及び74からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項37、38及び39のいずれか一項に記載の系。
【請求項41】
前記複数の延長因子(EF)は、好熱性細菌由来の複数の延長因子を含む、請求項37記載の系。
【請求項42】
好熱性細菌由来の前記複数の延長因子は、EF-G、EF-Tu、EF-Ts、EF-4、EF-P、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項37及び41のいずれか一項に記載の系。
【請求項43】
前記複数の延長因子は、配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82、及び84からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項37、41及び42のいずれか一項に記載の系。
【請求項44】
前記複数のペプチド終結因子(RF)は、好熱性細菌、又はバチルス属(Bacillus sp.)細菌に由来する複数の終結因子を含む、請求項37記載の系。
【請求項45】
前記複数のペプチド終結因子は、RF1、RF2、及びRF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項37及び44のいずれか一項に記載の系。
【請求項46】
前記複数のペプチド終結因子は、配列番号18、20、22、86、88からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項37、44及び45のいずれか一項に記載の系。
【請求項47】
前記リボソームリサイクリング因子(RRF)は、好熱性細菌由来のリボソームリサイクリング因子を含む、請求項37記載の系。
【請求項48】
前記リボソームリサイクリング因子は、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、請求項37及び47のいずれか一項に記載の系。
【請求項49】
前記リボソームリサイクリング因子は、アミノ酸配列配列番号14及び90又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うリボソームリサイクリング因子を含む、請求項37、47及び48のいずれか一項に記載の系。
【請求項50】
前記複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS)は、その少なくとも1つが好熱性細菌由来である複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼを含む、請求項37記載の系。
【請求項51】
前記複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、AlaRS;ArgRS;AsnRS;AspRS;CysRS;GlnRS;GluRS;GlyRS;HisRS;IleRS;LeuRS;LysRS;MetRS;PheRS(a);PheRS(b);ProRS;SerRS;ThrRS;TrpRS;TyrRS;及びValRS、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、請求項37及び50のいずれか一項に記載の系。
【請求項52】
前記複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、配列番号26、28、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、及び130からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、請求項37、50及び51のいずれか一項に記載の系。
【請求項53】
前記メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)は、好熱性細菌由来のメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、請求項37記載の系。
【請求項54】
前記メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、請求項37及び53のいずれか一項に記載の系。
【請求項55】
前記メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、アミノ酸配列配列番号68及び132、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、請求項37、53及び54のいずれか一項に記載の系。
【請求項56】
単離されたヌクレオチドであって、
-配列番号1、3、5、69、71、及び73;
-配列番号7、9、11、13、15、75、77、79、81、及び83;
-配列番号17、19、21、85、及び87;
-配列番号23、及び89;ならびに
-配列番号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、及び131からなる群から選択されるヌクレオチドを含む、単離されたヌクレオチド。
【請求項57】
プロモーターに作用可能に連結した、請求項56記載のヌクレオチド配列のうちの少なくとも1つを含む、発現ベクター。
【請求項58】
請求項57記載の前記発現ベクターのうちの1つによって形質転換された、細菌。
【請求項59】
前記細菌は、大腸菌(E.coli)を含む、請求項58記載の形質転換された細菌。
【請求項60】
ペプチドであって、
-配列番号2、4、6、70、72、及び74;
-配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82、及び84;
-配列番号18、20、22、86、88;
-配列番号14、及び90;
-配列番号26、28、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、94、96、配列番号98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、及び130;ならびに
-配列番号68、及び132、又はそのいずれかの断片もしくはバリアント、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド。
【請求項61】
請求項60記載の前記ペプチドのうちの少なくとも1つを用いた、無細胞発現系。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、2019年4月12日出願の米国仮特許出願第62/833,555号の利益及び優先権を請求する。上記参照の出願の明細書及び図面の全体を、参照によってその全体としてここで援用する。
【0002】
本発明は、高収量での生体物質のインビトロでの産生のための、組換え無細胞発現系、及びそれを使用する方法に関する。
【0003】
配列表
この出願は、ASCII形式で電子的に提出したその全体として参照によりここで援用する配列表を含有する。当該ASCIIコピーは、2020年4月13日に生成したが、その名前を90125.00096-Sequence-Listing_ST25.txtとし、またサイズは427Kbyteである。
【背景技術】
【0004】
無細胞発現系(インビトロでの転写/翻訳、無細胞タンパク質発現、無細胞翻訳、又は無細胞生合成としても知られる)は、研究者たちがインビトロで機能性タンパク質又は他の標的分子を発現することができるようにさせる分子生物学技術を指す。当該系は、インビボでの産生が困難であるタンパク質又は他の小分子のインビトロでの発現のみならず、タンパク質の進化、ゲノム機能解析及び構造的研究のためのタンパク質ライブラリーのハイスループットな作製を可能にする。当該系の別の利点は、発現しようとする標的タンパク質が、しばしば宿主細胞に対して毒性があり得るか、又は概して細胞発現と両立し得ないものであり、タンパク質発現にとって完全には無効なビヒクルではないにせよインビボの系を実用的でないものにさせるということである。細菌培養細胞又は組織培養細胞に基づくインビボ技術と比較して、インビトロタンパク質発現は相当速いが、これはインビトロタンパク質発現が、遺伝子導入、細胞培養又は大規模なタンパク質精製を必要としないからである。
【0005】
より詳細には、無細胞発現系は、生細胞を用いずに、標的の分子、及び例えばRNA種とタンパク質等である複合体を生成する。典型的な無細胞発現系は、細胞溶解物中で見られる生物学的要素/機構を利用して、1又は複数の標的遺伝子を含有するDNAから標的分子を生成することができる。典型的な無細胞発現系での反応の共通の構成要素には、細胞培養溶解物に通常由来する細胞抽出物、例えばATP等のエネルギー源、アミノ酸供給、マグネシウム等の補助因子、及びプラスミド合成鋳型又は線状発現(linear expression)(又は合成)鋳型(LET又はLST)の形態が典型的である所望の遺伝子を伴う核酸合成鋳型が含まれ得る。細胞抽出物は、関心の細胞を溶解して、そして遠心分離又は他の沈降法によって細胞壁、ゲノムDNA及び他の残骸を除去することによって得ることができる。溶解物又は細胞抽出物の残りの部分には、標的分子を発現するのに要する必要な細胞機構が含有され得る。
【0006】
通常の無細胞発現系は、無細胞タンパク質合成(CFPS)に関与する。典型的なCFPS系は、関心の1又は複数のタンパク質を産生するために、微生物細胞、植物細胞又は動物細胞の粗溶解物からのエネルギー生成及びタンパク質合成に必要な触媒成分の集合を利用する。粗溶解物は、DNAからRNAへの転写、RNAからタンパク質への翻訳、タンパク質フォールディング、及びエネルギー代謝に必要な要素を含有する(例えば、リボソーム、アミノアシル-tRNAシンテターゼ、翻訳開始及び延長因子、リボソーム終結因子、ヌクレオチドリサイクリング酵素、代謝酵素、シャペロン、フォールダーゼ(foldase)等)。今日において使用される通常の細胞抽出物は、大腸菌(ECE)、ウサギ網状赤血球(RRL)、コムギ胚芽(WGE)、及び昆虫細胞(ICE)、及びさらに哺乳動物細胞(MC)より生成される。
【0007】
無細胞発現系は、従来のインビボでのタンパク質発現法を超える利点を複数提供する。無細胞系は、細胞の代謝資源の全てではないが大部分を、ひとつのタンパク質の排他的な産生に向けることが可能である。さらに、インビトロで細胞壁及び膜成分がないことが有利であるが、これはそのことが合成環境の制御を可能にさせるからである。例えば、tRNAレベルは、発現している遺伝子のコドン使用頻度を反映するように変えることができる。酸化還元電位、pH又はイオン強度もまた、インビボよりもはるかにフレキシブルに変更することができるが、これは細胞の増殖又は生存能についての懸念がほとんどないからである。さらに、精製された正確に折り畳まれたタンパク質産物の直接の回収が、容易に達成可能である。
【0008】
無細胞発現系には有利な態様が多数あるにもかかわらず、これまで、いくつかの障害によりタンパク質産生技術としての当該系の使用が制限されてきた。これら障害としては、特に米国特許第7,118,883号において特定される大腸菌抽出物由来の無細胞系、及び米国特許第9,528,137号において特定される酵母抽出物由来の無細胞系において提示されているが、活性タンパク質合成の反応持続時間が短いこと、タンパク質産生速度が遅いこと、反応スケールが小規模であること、複数のジスルフィド結合を含有するタンパク質を正確に折り畳む能力が制限されていること、及びその初期発生が「ブラックボックス」の科学であること、が挙げられる。結果として、産生収量が多く、成分の安定性が増強され、タンパク質産生速度が向上され、また反応時間が長いものである経済的に見合う商用の無細胞発現系が要望されている。
【0009】
上記のとおり、無細胞系は、それらが一貫性、収量及び拡大や縮小の能力を欠いていることを理由に、生物製剤の製造には広く使用されていない。本発明者はこれまでに、抽出物由来の無細胞系であって、大腸菌機構を、向上した産生速度と高い収量を導く耐熱性タンパク質で置換することによって、当該系の用途を向上する例示的な好熱生物を利用するだけでなく、新規のエネルギー再生系も含むものである、抽出物由来の無細胞系を報告した。(当該新規エネルギー再生系は、概して、PCT出願第PCT/US2018/012121号に記載されており、当該明細書、図面、実施例、配列表及び請求の範囲は、その全体として参照により本明細書で援用される)。
【0010】
以下に詳述するように、本発明者は、完全な組換えインビトロ転写/翻訳系を開発したが、これは一部の実施形態においては、様々な例示的な好熱性細菌からのペプチド由来の成分を組み込む。上記したように、現在市販されている無細胞系は、大腸菌細胞抽出物よりの必要な転写/翻訳機構を加えることに基づくか、又は組換え大腸菌酵素に基づくかのいずれかである。抽出物の様々な他の源が、インビトロでのタンパク質産生を改善するために好熱生物の使用を含めて報告されているが、好熱性タンパク質に基づく完全な組換え発現系を含めて、完全な組換え発現系は現在までに報告されていなかった。
【0011】
以下により詳細に述べることとなるように、本発明の技術は、より長い反応持続時間及びより高い産生収量が結果として得られる真にエネルギー的に効率がよくまた頑健であるインビトロ無細胞発現系の目的を満たしつつ、従来の無細胞発現系の制限を克服する。具体的には、本発明は、転写/翻訳に必要な各タンパク質を組み換えで発現することによって、それゆえに抽出物由来のバッチ式の系で観察されたような大きな変動に遭遇することなく、系の良好な制御及び精密な調整を伴う連続フローを可能にする、好熱生物由来の無細胞系を含む。この系は、初期研究の用途での小規模タンパク質産生のみならず、小動物試験等の中規模用途にも有用であり得る。本発明によれば、本明細書に記載の新規バイオリアクターにおける連続フローアプローチにより大規模な製造が可能になり、またはるかに大きな設置面積及び人員の要件を伴う現在の製造施設を置き換えることができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
本発明の目的のひとつは、組換え無細胞発現系であって、その反応混合物が、インビトロ転写/翻訳機構に必要な無細胞反応成分、エネルギーを提供し、タンパク質合成に必要であるアミノ酸、ヌクレオチド、代謝成分を全て含有するものである、当該組換え無細胞発現系に関する。好ましい実施形態においては、本明細書において特定される酵素は、様々な好熱性細菌から供給されるものであり得るが、これはその源の成分が大腸菌であるか又は例えば酵母等である他の真核生物系である従来の無細胞系とは対照的である。この好熱生物由来とする戦略により、インビトロ翻訳中の全てのステップ(tRNAローディング、リボソームペプチド生合成)中のより高い安定性が提供されるのみならず、組換え発現系の性能を改善すること及び稼働時間をより長くすることが可能となる。
【0013】
本発明の発明者による好熱生物由来とする戦略により、pH及び塩濃度の変動に対する感受性をほとんど示さず且つATP加水分解に起因したリン酸塩濃度の増加による影響をほとんど受けない可能性がある、組換え無細胞発現系の生成が可能となる。この好熱生物由来とする戦略の別の利点は、本発明の組換え無細胞発現系が、好熱性アミノアシル-tRNAシンテターゼ酵素によって認識される様々な組のtRNAを採用できるようになり、その結果、初めて無細胞系において完全なコドンのカバレッジが可能になることである。
【0014】
本発明の別の目的は、組換え無細胞発現系であって、その反応混合物が、生体化合物、タンパク質、酵素、バイオシミラーのインビトロでの生合成又は小分子の化学修飾に必要な全ての無細胞反応成分を含有するものである、当該組換え無細胞発現系を含み得る。
【0015】
本発明の別の目的は、連続フローオペレーションにおいて、ワクチン、生物学的製剤、タンパク質、酵素、バイオシミラーのインビトロ転写、インビトロ翻訳及びインビトロ生合成ならびに酵素を用いた小分子の生合成又は化学修飾のための、連続フローバイオリアクターシステムのための方法、系及び装置を含み得る。
【0016】
本発明の別の目的には、組換え無細胞発現反応混合物の一部を形成することができる1又は複数の単離されたヌクレオチドコード配列が含まれ得る。好ましい実施形態においては、1又は複数のヌクレオチドコード配列は、好熱性の又は他の細菌からのものであり得る。好ましい実施形態においては、ヌクレオチドコード配列は、開始因子ヌクレオチドコード配列、延長因子ヌクレオチドコード配列、終結因子ヌクレオチドコード配列、リボソームリサイクリング因子ヌクレオチドコード配列、アミノアシル-tRNAシンテターゼヌクレオチドコード配列、及びメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼヌクレオチドコード配列を含み得るが、これに限定されない。さらなるヌクレオチドコード配列としては、RNAポリメラーゼヌクレオチドコード配列のみならず、本明細書で援用される無機ポリリン酸塩エネルギー再生系に関する援用される参考文献PCT出願第PCT/US2018/012121号(「‘121出願」)において特定されるヌクレオチドコード配列が挙げられ得る。
【0017】
本発明の別の目的は、細菌細胞を形質転換するのに用いられ得るプロモーター配列に作用可能に連結した1又は複数の単離されたヌクレオチドコード配列を有する発現ベクターの生成を含み得る。ある実施形態においては、ヌクレオチドコード配列は、選択細菌における発現のために最適化され得る。
【0018】
本発明の別の目的は、さらに単離されて組換え無細胞発現反応混合物中に含まれ得るタンパク質を生成する、本明細書において特定されたヌクレオチドコード配列の発現を含み得る。好ましい実施形態においては、発現タンパク質としては、開始因子タンパク質、延長因子タンパク質、終結因子タンパク質、リボソームリサイクリング因子タンパク質、アミノアシル-tRNAシンテターゼタンパク質、及びメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼタンパク質を含み得るがこれに限定されない。さらなるヌクレオチドコード配列は、RNAポリメラーゼタンパク質のみならず、本明細書で援用する無機ポリリン酸塩エネルギー再生系に関連する‘121出願において特定されたタンパク質及び化合物を含み得る。
【0019】
本発明の別の目的は、連続フローの組換え無細胞発現装置を含み得る。この好ましい実施形態においては、当該連続フローの組換え無細胞発現装置は、連続フローオペレーションにおいて、生物学的製剤、タンパク質、酵素、バイオシミラーのインビトロ転写、インビトロ翻訳及びインビトロ生合成ならびに酵素を用いた小分子の生合成又は化学修飾のための交換媒体としての、中空繊維及び中空繊維系のバイオリアクターの用途を含み得る。
【課題を解決するための手段】
【0020】
本発明のさらなる目的は、以下の好ましい実施形態のうちの1又は複数を含み得る:
1.組換え無細胞発現のための系であって、
-少なくとも以下の成分:
-複数の開始因子(IF);
-複数の延長因子(EF);
-複数のペプチド終結因子(RF);
-少なくとも1つのリボソームリサイクリング因子(RRF);
-複数のアミノアシル-tRNAシンテターゼ(RS);及び
-少なくとも1つのメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF);を有する
組換えコアタンパク質混合物、
-少なくとも1つの核酸合成鋳型、
-インビトロでのマクロ分子合成のために必要な無細胞反応成分を有する反応混合物、を含み、
-上記成分は、マクロ分子の無細胞発現のために構成されたバイオリアクター内に位置している、系。
【0021】
2.当該組換えコアタンパク質混合物の成分が、細菌由来の組換えコアタンパク質混合物を含む、実施形態1の系。
【0022】
3.細菌由来の当該組換えコアタンパク質混合物が、組換えコアタンパク質混合物であってその少なくとも1つの成分が好熱性細菌由来である組換えコアタンパク質混合物を含む、実施形態2の系。
【0023】
4.当該好熱性細菌は、好熱性バチルス科(Bacillaceae)細菌、又はゲオバチルス(Geobacillus)好熱性細菌を含む、実施形態2及び3のいずれか1つの系。
【0024】
5.当該ゲオバチルス(Geobacillus)好熱性細菌は、Geobacillus subterraneus、及びGeobacillus stearothermophilusからなる群から選択される、実施形態4の系。
【0025】
6.細菌由来の当該組換えコアタンパク質混合物が、組換えコアタンパク質混合物であってその少なくとも1つの成分が非好熱性細菌、又は非好熱性細菌と好熱性細菌との組み合わせに由来する組換えコアタンパク質混合物を含む、実施形態1の系。
【0026】
7.当該非好熱性細菌は、大腸菌(Escherichia coli)を含む、実施形態6の系。
【0027】
8.当該複数の開始因子(IF)は、好熱性細菌由来の複数の開始因子を含む、実施形態1の系。
【0028】
9.好熱性細菌由来の当該複数の開始因子は、IF1、IF2、IF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態1及び8のいずれか1つの系。
【0029】
10.複数の開始因子は、配列番号2、4、6、70、72及び74からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態1、8及び9のいずれか1つの系。
【0030】
11.当該複数の延長因子(EF)は、好熱性細菌由来の複数の延長因子を含む、実施形態1の系。
【0031】
12.好熱性細菌由来の当該複数の延長因子は、EF-G、EF-Tu、EF-Ts、EF-4、EF-P、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態1及び11のいずれか1つの系。
【0032】
13.複数の延長因子は、配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82、及び84からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態1、11及び12のいずれか1つの系。
【0033】
14.当該複数のペプチド終結因子(RF)は、好熱性細菌、又はバチルス(Bacillus)細菌に由来する複数のペプチド終結因子を含む、実施形態1の系。
【0034】
15.好熱性細菌由来の当該複数のペプチド終結因子は、RF1、RF2、及びRF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態1及び14のいずれか1つの系。
【0035】
16.複数のペプチド終結因子は、配列番号18、20、22、86、88からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態1、14及び15のいずれか1つの系。
【0036】
17.当該リボソームリサイクリング因子(RRF)は、好熱性細菌由来のリボソームリサイクリング因子を含む、実施形態1の系。
【0037】
18.当該リボソームリサイクリング因子は、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、実施形態1及び17のいずれか1つの系。
【0038】
19.リボソームリサイクリング因子は、アミノ酸配列配列番号14及び90又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うリボソームリサイクリング因子を含む、実施形態1、17及び18のいずれか1つの系。
【0039】
20.当該複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS)は、好熱性細菌又は大腸菌(E.coli)由来の複数のアミノアシル-tRNAシンテターゼを含む、実施形態1の系。
【0040】
21.複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、AlaRS;ArgRS;AsnRS;AspRS;CysRS;GlnRS;GluRS;GlyRS;HisRS;IleRS;LeuRS;LysRS;MetRS;PheRS(a);PheRS(b);ProRS;SerRS;ThrRS;TrpRS;TyrRS;及びValRS、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態1及び20のいずれか1つの系。
【0041】
22.当該複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、配列番号26、28、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、及び130からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態1、20及び21のいずれか1つの系。
【0042】
23.当該メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)は、好熱性細菌由来のメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、実施形態1の系。
【0043】
24.当該メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、実施形態1及び23の系。
【0044】
25.メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、アミノ酸配列配列番号68及び132、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、実施形態1、23及び24のいずれか1つの系。
【0045】
26.当該核酸合成鋳型は、DNA鋳型を含む、実施形態1の系。
【0046】
27.当該DNA鋳型は、
-プロモーターに作用可能に連結した少なくとも1つの標的配列であって、随意にコドン最適化されていてもよい、当該標的配列;
-少なくとも1つのリボソーム結合部位(RBS);
-少なくとも1つの発現産物切断部位;及び
-少なくとも1つのタグ、
を有する線状DNA鋳型を含む、実施形態26の系。
【0047】
28.当該核酸合成鋳型は、RNA鋳型を含む、実施形態1の系。
【0048】
29.当該反応混合物は、以下の成分:
-ある量のリボソーム、及び随意に好熱性細菌由来のある量のリボソーム;
-ある量のリボヌクレアーゼ阻害剤;
-ある量のRNAポリメラーゼ;
-ある量のtRNA、及び随意に好熱性細菌由来のある量のtRNA;
-緩衝液;ならびに
ある量のアミノ酸、のうちの1又は複数を含む、実施形態1の系。
【0049】
30.当該反応混合物は、以下の成分:
-トリス-酢酸;
-Mg(OAc)2;
-K+-グルタミン酸塩;
-アミノ酢酸(amino-acetate);
-NaCl;
-KCl;
-MgCk;
-DTT;
-オクチル-b-グリコシド;
-NAD;
-NADP;
-ソルビトール;
-FADH;
-CoA;
-PLP;及び
-SAM、のうちの1又は複数をさらに含む、実施形態29の系。
【0050】
31.エネルギー源をさらに含む、実施形態1及び29のいずれかの系。
【0051】
32.当該エネルギー源は、ある量のヌクレオチド三リン酸(NTP)を含む、実施形態32の系。
【0052】
33.当該ヌクレオチド三リン酸は、アデニン三リン酸(ATP);グアノシン三リン酸(GTP)、ウリジン三リン酸UTP、及びシチジン三リン酸(CTP)からなる群から選択されるヌクレオチド三リン酸のうちの1又は複数を含む、実施形態32の系。
【0053】
34.当該エネルギー源は、無機ポリリン酸塩由来のエネルギー再生系を含む、実施形態31、32及び33のいずれかの系。
【0054】
35.当該無機ポリリン酸塩由来のエネルギー再生系は、
-細胞アデノシン三リン酸(ATP)エネルギー再生系であって、
-ある量のアデノシルキナーゼ(Gst AdK)酵素;
-ある量のポリリン酸キナーゼ(TaqPPK)酵素;
-ある量の無機ポリリン酸塩(PPi);及び
-ある量のアデノシン一リン酸(AMP)、を含む細胞アデノシン三リン酸(ATP)エネルギー再生系を含み、
-当該AdK酵素及びPPK酵素が相乗的に作用し、PPi及びAMPから細胞ATPエネルギーを再生するものである、実施形態34の系。
【0055】
36.当該バイオリアクターは、連続フローバイオリアクターを含む、実施形態1の系。
【0056】
37.組換え無細胞発現反応混合物であって、
-複数の開始因子(IF);
-複数の延長因子(EF);
-複数の終結因子(RF);
-少なくとも1つのリボソームリサイクリング因子(RRF);
-複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS);及び
-少なくとも1つのメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)を含む、組換え無細胞発現反応混合物。
【0057】
38.当該複数の開始因子(IF)は、好熱性細菌由来の複数の開始因子を含む、実施形態37の系。
【0058】
39.好熱性細菌由来の当該複数の開始因子は、IF1、IF2、IF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態37及び38のいずれか1つの系。
【0059】
40.複数の開始因子は、配列番号2、4、6、70、72及び74からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態37、38及び39のいずれか1つの系。
【0060】
41.当該複数の延長因子(EF)は、好熱性細菌由来の複数の延長因子を含む、実施形態37の系。
【0061】
42.好熱性細菌由来の当該複数の延長因子は、EF-G、EF-Tu、EF-Ts、EF-4、EF-P、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態37及び41のいずれか1つの系。
【0062】
43.複数の延長因子は、配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82、及び84からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態37、41及び42のいずれか1つの系。
【0063】
44.当該複数のペプチド終結因子(RF)は、好熱性細菌、又はバチルス属(Bacillus sp.)細菌に由来する複数の終結因子を含む、実施形態37の系。
【0064】
45.当該複数のペプチド終結因子は、RF1、RF2、及びRF3、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態37及び44のいずれか1つの系。
【0065】
46.複数のペプチド終結因子は、配列番号18、20、22、86、88からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態37、44及び45のいずれか1つの系。
【0066】
47.当該リボソームリサイクリング因子(RRF)は、好熱性細菌由来のリボソームリサイクリング因子を含む、実施形態37の系。
【0067】
48.当該リボソームリサイクリング因子は、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、実施形態37及び47のいずれか1つの系。
【0068】
49.リボソームリサイクリング因子は、アミノ酸配列配列番号14及び90又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うリボソームリサイクリング因子を含む、実施形態37、47及び48のいずれか1つの系。
【0069】
50.当該複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS)は、その少なくとも1つが好熱性細菌由来である複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼを含む、実施形態37の系。
【0070】
51.複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、AlaRS;ArgRS;AsnRS;AspRS;CysRS;GlnRS;GluRS;GlyRS;HisRS;IleRS;LeuRS;LysRS;MetRS;PheRS(a);PheRS(b);ProRS;SerRS;ThrRS;TrpRS;TyrRS;及びValRS、又はそのいずれかの断片もしくはバリアントを含む、実施形態37及び50のいずれか1つの系。
【0071】
52.当該複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼは、配列番号26、28、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、及び130からなるアミノ酸配列の群、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列から選択される、実施形態37、50及び51のいずれか1つの系。
【0072】
53.当該メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)は、好熱性細菌由来のメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、実施形態37のいずれか1つの系。
【0073】
54.当該メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、ゲオバチルス(Geobacillus)由来である、実施形態37及び53のいずれか1つの系。
【0074】
55.メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼは、アミノ酸配列配列番号68及び132、又は少なくとも90%の配列同一性を有する配列に従うメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼを含む、実施形態37、53、及び54のいずれか1つの系。
【0075】
56.単離されたヌクレオチドであって、
-配列番号1、3、5、69、71、及び73;
-配列番号7、9、11、13、15、75、77、79、81、及び83;
-配列番号17、19、21、85、及び87;
-配列番号23、及び89;ならびに
配列番号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、及び131からなる群から選択されるヌクレオチドを含む、単離されたヌクレオチド。
【0076】
57.プロモーターに作用可能に連結した、実施形態56のヌクレオチド配列のうちの少なくとも1つを含む、発現ベクター。
【0077】
58.実施形態57の発現ベクターのうちの1つによって形質転換された、細菌。
【0078】
59.当該細菌は、大腸菌(E.coli)を含む、実施形態58の形質転換された細菌。
【0079】
60.ペプチドであって、
-配列番号2、4、6、70、72、及び74;
-配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82、及び84;
-配列番号 18、20、22、86、88;
-配列番号14、及び90;
-配列番号 26、28、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、94、96、配列番号98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、及び130;ならびに
-配列番号68、及び132、又はそのいずれかの断片もしくはバリアント、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ペプチド。
【0080】
61.実施形態60のペプチドのうちの少なくとも1つを用いた、無細胞発現系。
【0081】
本発明の技術のさらなる目的は、以下に記載する詳細な開示、図面及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0082】
添付の図面は、本明細書に盛り込まれて本明細書の一部を形成するものであるが、本発明の1又は複数の実施形態を説明し、また本明細書と一緒になって、本発明の技術のある態様を説明する役割を果たす。図面は、単に本発明の1又は複数の好ましい実施形態を説明する目的であるものであり、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【0083】
【
図1】
図1は、以下のシンテターゼ酵素に関するアミノアシル-tRNAシンテターゼ動力学的活性アッセイの結果を示す:AlaRS、ArgRS、AsnRS、AspRS、CysRS、GlnRS(Ec)、GluRS、GlyRS、HisRS、IleRS、及びtRNAなしの対照。
【
図2】
図2は、以下のシンテターゼ酵素に関するアミノアシル-tRNAシンテターゼ動力学的活性アッセイの結果を示す:LeuRS、LysRS、MetRS、PheRS、ProRS、SerRS、ThrRS、TrpRS、TyrRS、及びValRS、及びtRNA無しの対照。
【
図3A】
図3Aは、大腸菌(E.coli)よりの例示的なtRNAを利用したアミノアシル-tRNAシンテターゼ活性アッセイの結果を示す。
【
図3B】
図3Bは、例示的な好熱性細菌Geobacillus stearothermophilusよりのtRNAを利用したアミノアシル-tRNAシンテターゼ活性アッセイの結果を示す。
【
図4】
図4は、本明細書に記載した組換え無細胞発現系を利用した緑色蛍光タンパク質(muGFP、配列番号134))無細胞発現産物の産生を示す。
【
図5】
図5は、無細胞産生のための中空繊維リアクター及びその一実施形態における連続交換(continuous exchange)の図である。
【
図6】
図6A~6Bは、無細胞産生のための中空繊維リアクター及びその一実施形態における連続交換(continuous exchange)の図である。
【
図7】
図7では、pET151/D-TOPOベクターを、N-末端タグを発現タンパク質に付加する選択合成遺伝子のために用いた。このベクターにおいて発現された全ての遺伝子は、タンパク質配列よりDNAに逆翻訳して、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化した。N-末端タグは、以下の同定した特定の配列からは省略され得る。
【
図8】
図8では、pET24a(+)ベクターを、C-末端6x His-タグを発現タンパク質に付加する選択合成遺伝子のために用いた。このベクターにおいて発現された全ての遺伝子は、タンパク質配列よりDNAに逆翻訳して、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化した。C-末端タグは、以下の同定した特定の配列からは省略され得る。
【
図9】
図9では、pNATベクターを、クローン化及び/又は合成した選択遺伝子のために設計及び使用したが、これはN-末端FLAGタグ及び/又はC-末端6X Hisタグを発現タンパク質に付加する。このベクターにおいて発現された全ての遺伝子は、タンパク質配列よりDNAに逆翻訳して、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化した。タグは、以下の同定した特定の配列からは省略され得る。
【
図10】
図10では、pNAT2.0ベクターを、クローン化及び/又は合成した選択遺伝子のために設計及び使用したが、これはN-末端又はC-末端の6X Hisタグを発現タンパク質に付加する。このベクターにおいて発現された全ての遺伝子は、タンパク質配列よりDNAに逆翻訳して、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化した。タグは、以下の同定した特定の配列からは省略され得る。
【
図11】
図11は、以下の精製したアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(aaRS)酵素に関するSDS-PAGE結果を示す:AlaRS、ArgRS、AsnRS、AspRS、CysRS、GlnRS(Ec)、GluRS、GlyRS、HisRS、IleRS、及びLeuRS。
【
図12】
図12は、以下の精製したアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(aaRS)酵素に関するSDS-PAGE結果を示す:LysRS、MetRS、PheBRS、ProRS、SerRS、ThrRS、TrpRS、TyrRS、ValRS、及び精製されたメチオニル-tRNA-トランスホルミラーゼMTF。
【
図13】
図13は、以下の精製された翻訳因子に関するSDS-PAGE結果を示す:IF-1、IF-2、IF-3、EF-G、EF-Ts、EF-Tu、EF-P、RF-1、RF-2、RF-3及びRRF。
【
図14】
図14は、精製された翻訳因子EF-4に関するSDS-PAGE結果を示す。
【
図15】
図15は、本明細書に記載した組換え無細胞発現系を利用した蛍光タンパク質(muGFP、配列番号134)産物のリアルタイム産生を示す。
【
図16】
図16は、逆精製後であるがろ過されたリボソームは含まない無細胞タンパク質発現反応の抗-FLAG抗体を用いたウェスタンブロットを示す。本明細書に記載した組換え無細胞発現系を利用した、タンパク質無細胞発現産物の、特にdeGFP(de-Green Fluorescent Protein)(deGFP、配列番号135)で、特異的な検出を示す。
【
図17A】(A)は、大腸菌(E.coli)よりの例示的なtRNAを利用した、3つの別個のアミノアシル-tRNA-シンテターゼのAMP-産生活性アッセイの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0084】
本発明は、特に、患者に直接送達するのに好適である、無細胞環境における例えばポリペプチド等である治療用マクロ分子のオンデマンド製造に好適である。したがって、本発明は、主に、治療用タンパク質の製造に関連して記載及び説明することとする。しかしながら、本発明はまた、毒性タンパク質、放射性標識アミノ酸、非天然アミノ酸等を備えたタンパク質を含む、任意のタイプのタンパク質を製造するために用いることもできる。さらに、本発明は、特に無細胞発現を用いたタンパク質のオンデマンド製造に好適であり、それゆえに、主に無細胞タンパク質発現の文脈において本発明を記載することとする。
【0085】
本発明は、種々の態様を含むが、それらは様々な方法で組み合わせることができる。以下の記載は、本発明の、構成要素を列挙して実施形態の一部を記載するために提供される。これら構成要素は、最初の実施形態とともに列挙されるが、それらは任意の手法及び任意の数で組み合わせて、さらなる実施形態を生じてもよいことを理解されたい。様々に記載される実施例及び好ましい実施形態は、明示的に記載された系、技術及び用途に対してのみに本発明が限定されるものと解釈されてはならない。さらに、本明細書は、記載の各構成要素単独で、そしてまたこの用途又は任意のそれに続く用途において全ての構成要素の任意の及び全ての種々の並べ替え及び組み合わせでもよい、任意の数の開示の構成要素を伴う、種々の実施形態、系、技術、方法、装置及び用途の全ての記載及び特許請求の範囲を支持及び包含するということを理解されたい。
【0086】
本明細書に記載の本発明の技術は、新規の組換え無細胞発現系を含み得る。好ましい一実施形態においては、本発明は、インビトロの発現活性に寄与し得る複数のコアの部分を含む、反応混合物の生成を含み得る。例示的なコアタンパク質は、以下のものを含み得る:
【0087】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、1又は複数の開始因子(IF)を有する反応混合物を含み得る。開始因子は、ペプチド合成の過程における開始複合体の形成を可能にし得る。例えば、IF1、IF2、及びIF3は、反応混合物中の開始因子としてある実施形態において用いられ得る。例えば、IF3は、30S及び50Sのサブユニットへのリボソームの解離(すなわち、翻訳を開始するのに概して必要なステップ)を促進し、また開始複合体を形成するステップにおいて、ホルミルメチオニル-tRNA以外のtRNAがP-部位に挿入されることを妨げる。IF2は、ホルミルメチオニル-tRNAに結合し、そして該ホルミルメチオニル-tRNAを30SサブユニットのP-部位へと移し、それによって開始複合体を形成する。IF1は、IF2及びIF3の機能を増強することができる。本発明においては、1又は複数の細菌に由来する開始因子を用いることが好ましいものであり得、またより好ましくは、好熱性細菌、例えばBacillaceae科及び/又はGeobacillus科の細菌ファミリー、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilus等、から得られるものである。本発明の1又は複数のIFに関する例示的なアミノ酸配列は、以下からなる群から選択され得る:
IF1(配列番号2及び70)
IF2(配列番号4及び72)
IF3(配列番号6及び74)
【0088】
本発明の実施形態においては、このように、上記アミノ酸配列のうちの1又は複数は、配列番号1~2、4、6、69~70、72及び74に従うアミノ酸配列又はこれらアミノ酸配列のうちのいずれか1つの断片もしくはバリアントによってコードされたアミノ酸配列を含む、又は当該アミノ酸配列からなる、少なくとも1つのIFを含む。この文脈において、本発明による1又は複数のIFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号1~2、4、6、69~70、72及び74に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のアミノ酸配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0089】
本発明においては、1又は複数の細菌、より好ましくは例えば大腸菌(E.coli)である高度のタンパク質を発現するように構成された細菌、において発現された及び/又は当該細菌より単離された開始因子を用いることが好ましいものであり得る。本発明の1又は複数のIFに関する例示的なヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択され得る:
IF1(配列番号1及び69)
IF2(配列番号3及び71)
IF3(配列番号5及び73)
【0090】
特に、ヌクレオチド配列は、1もしくは複数の細菌又は例えば酵母等である他のタンパク質発現系における発現のためにコドン最適化され得る。例えば、この実施形態においては、例示的なヌクレオチド配列、配列番号1、3及び5は、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化されている。
【0091】
本発明の実施形態においては、このように、上記ヌクレオチド配列のうちの1又は複数は、配列番号1、3、5、69、71及び73に従うヌクレオチド配列又はその断片もしくはバリアントによってコードされたヌクレオチド配列を含む又は当該ヌクレオチド配列からなる少なくとも1つのIFをコードする少なくとも1つのコード領域を含む。この文脈において、本発明による1又は複数のIFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号1、3、5、69、71、及び73に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のヌクレオチド配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み得る。
【0092】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、1又は複数の延長因子を有する反応混合物を含み得る。例えばEF-Tu等である延長因子は、2つのタイプ、すなわちGTP及びGDPタイプに分類できる。GTPタイプのEF-Tuは、アミノアシル-tRNAに結合し、そしてそれをリボソームのA-部位に移す。EF-Tuがリボソームから放出されると、GTPはGDPへと加水分解される。別の延長因子EF-Tsは、GDPタイプのEF-Tuに結合し、そしてそのGTPタイプへの変換を促進する。別の延長因子EF-Gは、ペプチド鎖延長の過程におけるペプチド結合形成の後のトランスロケーションを促進する。本発明においては、細菌よりの、より好ましくは、より好ましくは好熱性細菌よりのEFを用いることが好ましいものであり、例えばBacillaceae科及び/又はGeobacillus科の細菌ファミリー、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilus等、から得られるものである。本発明の1又は複数のEFに関する例示的なアミノ酸配列は、以下からなる群から選択され得る:
EF-G(配列番号8及び76)
EF-Tu(配列番号10及び78)
EF-Ts(配列番号12及び80)
EF-4(配列番号14及び82)
EF-P(配列番号16及び84)
【0093】
本発明の実施形態においては、このように、上記アミノ酸配列のうちの1又は複数は、配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82及び84に従うアミノ酸配列又はこれらアミノ酸配列のうちのいずれか1つの断片もしくはバリアントによってコードされたアミノ酸配列を含む又は当該アミノ酸配列からなる少なくとも1つのEFを含む。この文脈において、本発明による1又は複数のEFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号8、10、12、14、16、76、78、80、82及び84に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のアミノ酸配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0094】
本発明においては、1又は複数の細菌、より好ましくは例えば大腸菌(E.coli)である高度のタンパク質を発現するように構成された細菌、において発現される及び/又は当該細菌より単離される、EFを用いることが好ましいものであり得る。本発明の1又は複数のEFに関する例示的なヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択され得る:
EF-G(配列番号7及び75)
EF-Tu(配列番号9及び77)
EF-Ts(配列番号11及び79)
EF-4(配列番号13及び81)
EF-P(配列番号15及び83)
【0095】
特に、ヌクレオチド配列は、1もしくは複数の細菌又は例えば酵母等である他のタンパク質発現系における発現のためにコドン最適化され得る。例えば、この実施形態においては、例示的なヌクレオチド配列、配列番号7、9、11、13及び15は、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化されている。
【0096】
本発明の実施形態においては、このように、上記ヌクレオチド配列のうちの1又は複数は、配列番号7、9、11、13、15、75、77、79及び83に従うヌクレオチド配列又はその断片もしくはバリアントによってコードされたヌクレオチド配列を含む又は当該ヌクレオチド配列からなる少なくとも1つのEFをコードする少なくとも1つのコード領域を含む。この文脈において、本発明による1又は複数のEFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号7、9、11、13、15、75、77、79及び83に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のヌクレオチド配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み得る。
【0097】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、1又は複数のペプチド終結因子(RF)を有する反応混合物を含み得る。RFは、タンパク質合成の終結、翻訳されたペプチド鎖の放出、及びそれに次ぐmRNA翻訳の開始のためのリボソームのリサイクリングに関与し得る。終結因子を含まない反応系でタンパク質が合成されるとき、当該反応は、終止コドンの前で停止し、それゆえにリボソーム、ペプチド及びmRNAから構成される安定な三元複合体(ポリソーム提示)を容易に形成可能である。終止コドン(UAA、UAG又はUGA)は、リボソームのA-部位に位置するとき、終結因子RF1及びRF2が、A-部位に入り、そしてP-部位におけるペプチジル-tRNAよりのペプチド鎖の解離を促進することができる。RF1は、終止コドンのうちのUAA及びUAGを認識し、一方でRF2はUAA及びUGAを認識する。別の終結因子RF3は、RF1及びRF2によるペプチド鎖の解離後にリボソームからのRF1及びRF2の解離を促進する。
【0098】
本発明においては、細菌よりの、より好ましくは、より好ましくは好熱性細菌よりのRFを用いることが好ましいものであり、例えばBacillaceae科及び/又はGeobacillus科の細菌ファミリー、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilus等、から得られるものである。本発明の1又は複数のRFに関する例示的なアミノ酸配列は、以下からなる群から選択され得る:
RF1(配列番号18及び86)
RF2(配列番号20及び88)
RF3(配列番号22)
【0099】
本発明の実施形態においては、このように、上記アミノ酸配列のうちの1又は複数は、配列番号18、20、22、86、及び88に従うアミノ酸配列又はこれらアミノ酸配列のうちのいずれか1つの断片もしくはバリアントによってコードされたアミノ酸配列を含む、又は当該アミノ酸配列からなる少なくとも1つのRFを含む。この文脈において、本発明による1又は複数のRFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号18、20、22、86、及び88に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のアミノ酸配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0100】
本発明においては、1又は複数の細菌、より好ましくは例えば大腸菌(E.coli)である高度のタンパク質を発現するように構成された細菌、において発現された及び/又は当該細菌より単離された、RFを用いることが好ましいものであり得る。本発明の1又は複数のRFに関する例示的なヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択され得る:
RF1(配列番号17及び85)
RF2(配列番号19及び87)
RF3(配列番号21)
【0101】
特に、ヌクレオチド配列は、1もしくは複数の細菌又は例えば酵母等である他のタンパク質発現系における発現のためにコドン最適化され得る。例えば、この実施形態においては、例示的なヌクレオチド配列、配列番号17、19及び21は、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化されている。
【0102】
本発明の実施形態においては、このように、上記ヌクレオチド配列のうちの1又は複数は、配列番号17、19、21、85、及び87に従うヌクレオチド配列又はその断片もしくはバリアントによってコードされたヌクレオチド配列を含む又は当該ヌクレオチド配列からなる少なくとも1つのRFをコードする少なくとも1つのコード領域を含む。この文脈において、本発明による1又は複数のRFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号17、19、21、85、及び87に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のヌクレオチド配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み得る。
【0103】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、タンパク質合成後のP-部位において残っているtRNAの解離、及びその後に続くタンパク質合成のためのリボソームのリサイクリングを促進する、1又は複数のリボソームリサイクリング因子(RRF)を有する反応混合物を含み得る。本発明においては、細菌よりの、より好ましくは、より好ましくは好熱性細菌よりのRRFを用いることが好ましいものであり、例えばBacillaceae科及び/又はGeobacillus科の細菌ファミリー、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilus等、から得られるものである。本発明の1又は複数のRRFに関する例示的なアミノ酸配列は、以下からなる群から選択され得る:
RRF(配列番号24及び90)
【0104】
本発明の実施形態においては、このように、上記アミノ酸配列のうちの1又は複数は、配列番号23及び90に従うアミノ酸配列又はこれらアミノ酸配列のうちのいずれか1つの断片もしくはバリアントによってコードされたアミノ酸配列を含む、又は当該アミノ酸配列からなる、少なくとも1つのRRFを含む。この文脈において、本発明による1又は複数のRRFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号23及び90に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のアミノ酸配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0105】
本発明においては、1又は複数の細菌、より好ましくは例えば大腸菌(E.coli)である高度のタンパク質を発現するように構成された細菌、において発現された及び/又は当該細菌より単離された、RRFを用いることが好ましいものであり得る。本発明の1又は複数のRRFに関する例示的なヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択され得る:
RRF(配列番号23及び89)
【0106】
特に、ヌクレオチド配列は、1もしくは複数の細菌又は例えば酵母等である他のタンパク質発現系における発現のためにコドン最適化され得る。例えば、この実施形態においては、例示的なヌクレオチド配列、配列番号23は、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化されている。
【0107】
本発明の実施形態においては、このように、上記ヌクレオチド配列のうちの1又は複数は、配列番号23及び89に従うヌクレオチド配列又はその断片もしくはバリアントによってコードされたヌクレオチド配列を含む又は当該ヌクレオチド配列からなる少なくとも1つのRFをコードする少なくとも1つのコード領域を含む。この文脈において、本発明による1又は複数のRFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号23、及び89に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のヌクレオチド配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み得る。
【0108】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、1又は複数のアミノアシル-tRNAシンテターゼ(RS)酵素を有する反応混合物を含み得る。アミノアシル-tRNAシンテターゼは、それによってアミノ酸がATPの存在下でtRNAに共有結合することによりアミノアシル-tRNAが合成される、酵素である。本発明においては、好熱生物を起源とするアミノアシル-tRNAシンテターゼを用いることが好ましく、例えばBacillaceae科及び/もしくはGeobacillus科の細菌ファミリーから、又はより詳細には、G.stearothermophilus、もしくはGeobacillus stearothermophilusの種から得られるものである。さらなる実施形態は、例えば大腸菌(E.coli)等の非好熱生物よりのアミノアシル-tRNAシンテターゼ酵素の使用を含み得、当該使用は、好熱生物を起源とするアミノアシル-tRNAシンテターゼ酵素と併用される。アミノアシル-tRNAシンテターゼ酵素に関する例示的なヌクレオチド及びアミノ酸配列は、以下からなる群から選択される:
AlaRS(配列番号26及び配列番号92)
ArgRS(配列番号28及び配列番号94)
AsnRS(配列番号30及び配列番号96)
AspRS(配列番号32及び配列番号98)
CysRS(配列番号34及び配列番号100)
GlnRS(Ec)(配列番号36)
GluRS(配列番号38及び配列番号102)
GlyRS(配列番号40及び配列番号104)
HisRS(配列番号42及び配列番号106)
IleRS(配列番号44及び配列番号108)
LeuRS(配列番号46及び配列番号110)
LysRS(配列番号48及び配列番号112)
MetRS(配列番号50及び配列番号114)
PheRS(a)(配列番号52及び配列番号116)
PheRS(b)(配列番号54及び配列番号118)
ProRS(配列番号56及び配列番号120)
SerRS(配列番号58及び配列番号122)
ThrRS(配列番号60及び配列番号124)
TrpRS(配列番号62及び配列番号126)
TyrRS(配列番号64及び配列番号128)
ValRS(配列番号66及び配列番号130)
【0109】
本発明の実施形態においては、このように、上記アミノ酸配列のうちの1又は複数は、配列番号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、134、126、128及び130に従うアミノ酸配列又はこれらアミノ酸配列のうちのいずれか1つの断片もしくはバリアントによってコードされたアミノ酸配列を含む又は当該アミノ酸配列からなる少なくとも1つのRSを含む。この文脈において、本発明による1又は複数のRSの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、134、126、128、及び130に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のアミノ酸配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0110】
本発明においては、1又は複数の細菌、より好ましくは例えば大腸菌(E.coli)である高度のタンパク質を発現するように構成された細菌、において発現された及び/又は当該細菌より単離された、RSを用いることが好ましいものであり得る。本発明の1又は複数のRSに関する例示的なヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択され得る:
AlaRS(配列番号25及び配列番号91)
ArgRS(配列番号27及び配列番号93)
AsnRS(配列番号29及び配列番号95)
AspRS(配列番号31及び配列番号97)
CysRS(配列番号33及び配列番号99)
GlnRS(Ec)(配列番号35)
GluRS(配列番号37及び配列番号101)
GlyRS(配列番号39及び配列番号103)
HisRS(配列番号41及び配列番号105)
IleRS(配列番号43及び配列番号107)
LeuRS(配列番号45及び配列番号109)
LysRS(配列番号47及び配列番号111)
MetRS(配列番号49及び配列番号113)
PheRS(a)(配列番号51及び配列番号115)
PheRS(b)(配列番号53及び配列番号117)
ProRS(配列番号55及び配列番号119)
SerRS(配列番号57及び配列番号121)
ThrRS(配列番号59及び配列番号123)
TrpRS(配列番号61及び配列番号125)
TyrRS(配列番号63及び配列番号127)
ValRS(配列番号65及び配列番号129)
【0111】
特に、ヌクレオチド配列は、1もしくは複数の細菌又は例えば酵母等である他のタンパク質発現系における発現のためにコドン最適化され得る。例えば、この実施形態においては、例示的なヌクレオチド配列、配列番号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、及び65は、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化されている。
【0112】
本発明の実施形態においては、このように、上記ヌクレオチド配列のうちの1又は複数は、配列番号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、及び129に従うヌクレオチド配列又はその断片もしくはバリアントによってコードされたヌクレオチド配列を含む又は当該ヌクレオチド配列からなる少なくとも1つのRSをコードする少なくとも1つのコード領域を含む。この文脈において、本発明による1又は複数のRSの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、及び129に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のヌクレオチド配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み得る。
【0113】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、メチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)を有する反応混合物を含み得る。N-ホルミルメチオニンは、メチオニンの端部におけるアミノ基に付加したホルミル基を担持し、原核生物タンパク質合成系において開始アミノ酸として機能する。このホルミル基は、MTFによってメチオニル-tRNA内のメチオニンに付加する。すなわち、MTFは、N1υ-ホルミルテトラヒドロ葉酸内のホルミル基を、開始コドンに対応するメチオニル-tRNAのN末端に移し、それによってホルミルメチオニル-tRNAを与える。それにより付加したホルミル基は、IF2によって認識され、タンパク質合成のための開始信号として機能する。本発明においては、細菌よりの、より好ましくは、より好ましくは好熱性細菌よりのMTFを用いることが好ましいものであり、例えばBacillaceae科及び/又はGeobacillus科の細菌ファミリー、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilus等、から得られるものである。本発明の1又は複数のMTFに関する例示的なアミノ酸配列は、以下からなる群から選択され得る:
MTF(配列番号68及び132)
【0114】
本発明の実施形態においては、このように、上記アミノ酸配列のうちの1又は複数は、配列番号68及び132に従うアミノ酸配列又はこれらアミノ酸配列のうちのいずれか1つの断片もしくはバリアントによってコードされたアミノ酸配列を含む又は当該アミノ酸配列からなる少なくとも1つのMTFを含む。この文脈において、本発明による1又は複数のMTFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号68及び132に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のアミノ酸配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【0115】
本発明においては、1又は複数の細菌、より好ましくは例えば大腸菌(E.coli)である高度のタンパク質を発現するように構成された細菌、において発現された及び/又は当該細菌より単離された、MTFを用いることが好ましいものであり得る。本発明の1又は複数のMTFに関する例示的なヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択され得る:
MTF(配列番号67及び131)
【0116】
特に、ヌクレオチド配列は、1もしくは複数の細菌又は例えば酵母等である他のタンパク質発現系における発現のためにコドン最適化され得る。例えば、この実施形態においては、例示的なヌクレオチド配列、配列番号67は、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化されている。
【0117】
本発明の実施形態においては、このように、上記ヌクレオチド配列のうちの1又は複数は、配列番号67及び131に従うヌクレオチド配列又はその断片もしくはバリアントによってコードされたヌクレオチド配列を含む又は当該ヌクレオチド配列からなる少なくとも1つのMTFをコードする少なくとも1つのコード領域を含む。この文脈において、本発明による1又は複数のMTFの少なくとも1つのコード領域によってコードされたタンパク質の断片又はそのバリアントは、典型的には、好ましくは本明細書に開示の配列番号67、及び131に従う、それぞれの天然に生じる全長タンパク質のヌクレオチド配列又はそのバリアントと少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%、好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、及び最も好ましくは少なくとも95%又は97%でもある配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み得る。
【0118】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、ある量のリボソームを有する反応混合物を含み得る。リボソームは、そこでペプチドが合成される粒子である。リボソームは、mRNAに結合し、アミノアシル-tRNAをA-部位に、またホルミルメチオニル-tRNA又はペプチジル-tRNAをP-部位に配位結合させ、それによってペプチド結合を形成する。本発明においては、任意のリボソームをその起源にかかわらず使用することができるが、好ましい実施形態においては、リボソームは、組換え無細胞発現系において用いるために好熱性細菌から単離され得、また好ましくは、例えばBacillaceae科及び/又はGeobacillus科の細菌ファミリー等、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilusから等の、好熱性細菌の細胞溶解物から単離され得る。
【0119】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、種々の有機体で生じる、DNA配列をRNAに転写する酵素である、ある量のRNAポリメラーゼ又はその断片もしくはバリアントを有する反応混合物を含み得る。好ましい一実施形態におけるそのある例としては、本発明は、例えばアミノ酸配列配列番号136に従う、T7 RNAポリメラーゼを含み得る。T7 RNAポリメラーゼは、T7プロモーターと呼ばれる特異的なDNA配列に結合し、次いで下流のDNA配列をRNAに転写する酵素であるT7ファージ由来である。本発明においては、T7 RNAポリメラーゼに加えて、種々のRNAポリメラーゼが利用可能である。
【0120】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、ある量のリボヌクレアーゼ阻害剤を有する反応混合物を含み得る。リボヌクレアーゼ(RNase)酵素は、RNAのオリゴヌクレオチドへの分解を促進した。リボヌクレアーゼ阻害剤は当技術分野で公知であり、そのため、組換え無細胞発現系に含めようとするリボヌクレアーゼ阻害剤のタイプ及び量は当業者の技術の範囲内である。リボヌクレアーゼ阻害剤の非限定的な例としては、哺乳動物のリボヌクレアーゼ阻害剤タンパク質[例えば、ブタリボヌクレアーゼ阻害剤及びヒトリボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、ヒト胎盤リボヌクレアーゼ阻害剤及び組換えヒトリボヌクレアーゼ阻害剤)]、アウリントリカルボン酸(ATA)及びその塩[例えば、アウリントリカルボン酸トリアンモニウム(アルミノン)]、アデノシン5’-ピロリン酸(adenosine 5’-pyrophosphate)、2’-シチジン一リン酸遊離酸(2’-CMP)、5’-ジホスホアデノシン3’-リン酸(5’-diphosphoadenosine 3’-phosphate)(ppA-3’-p)、5’-ジホスホアデノシン2’-リン酸(5’-diphosphoadenosine 2’-phosphate)(ppA-2’-p)、ロイシン、オリゴビニスルホン酸(oligovinysulfonic acid)、ポリ(アスパラギン酸)、チロシン-グルタミン酸ポリマー、アデノシン3’-リン酸(adenosine 3’-phosphate)を伴う5’-ホスホ-2’-デオキシウリジン3’-ピロリン酸P’→5’-エステル(5’-phospho-2’-deoxyuridine 3’-pyrophosphate P’→5’-ester)(pdUppAp)、ならびにそのアナログ、誘導体、及び塩を含む。
【0121】
一実施形態においては、組換え無細胞発現系は、典型的にはプラスミド合成鋳型又は線状発現(又は合成)鋳型(LET又はLST)の形態での標的配列をコードする例えばmRNA又はDNA鋳型等のある量のアミノ酸、ポリヌクレオチド、ならびに無機ポリリン酸塩エネルギー再生系に関連する‘121出願において特定される他の化合物及び配列、ならびに好ましくはインビトロの発現反応をエネルギー的に駆動するのに必要であり得る結合したAdK/PPKのエネルギー再生系、を有する反応混合物を含み得る。
【0122】
‘121出願(参照により本明細書で援用される)の
図8に概略的に示すように、別の好ましい実施形態においては、単離及び精製されたGst AdK(参照により本明細書で援用される‘121出願の配列番号8)及び/又はTaqPPK(参照により本明細書で援用される‘121出願の配列番号11)が、ある量の無機ポリリン酸塩を含むこの無細胞発現系に加えられ得る。一実施形態においては、この量の無機ポリリン酸塩は、最適なポリリン酸塩の濃度範囲を含み得る。この好ましい実施形態においては、当該最適なポリリン酸塩濃度範囲は、概して、反応安定性の平衡状態を維持する無機ポリリン酸塩(PPi)の濃度として規定される。この好ましい実施形態においては、最適なポリリン酸塩濃度範囲は、およそ0.2~2mg/mlのPPiであり得る。
【0123】
上記に記載するように、PPKは、ポリリン酸塩及びAMPからADPを合成することが可能である。この好ましい実施形態においては、Gst AdK及びPPKの結合した作用により、2つのADPを1つのATPと1つのアデノシン一リン酸(AMP)に変換することによって当該系からアデノシン二リン酸(ADP)を除去し得る。
【化1】
【0124】
この反応は、十分に、ADPの産生に向かうPPKの平衡反応を駆動するのに十分な速さであり得る。
【化2】
【0125】
この系においては、より高い濃度のAMPの存在が、ADPに向かうTaqPPK反応をさらに駆動し得る。
【0126】
好ましい実施形態においては、本発明の組換え無細胞系を用いたマクロ分子の産生は、バイオリアクターシステムにおいて達成され得る。本明細書において用いる場合、「バイオリアクター」は、インビトロでのマクロ分子の産生を促す環境を維持するように構成された、密閉された装置の任意の形態であり得る。バイオリアクターは、例えばフィーダー反応溶液によって、バッチ式の、連続で又は半連続で動くように構成され得る。‘121出願(参照により本明細書で援用される)の
図14を参照して、この実施形態においては、本発明は、無細胞培養装置をさらに含み得る。この細胞培養装置は、ある好ましい実施形態においては好熱性細菌を培養するように構成され得る。好ましい実施形態においては、発酵容器が、取り外し可能であり、また単独でオートクレーブ可能(autoclavable)であり得る。さらに、この無細胞培養装置は、有機体を伴う好気性のみならず嫌気性の増殖に適応するように構成され得る。さらに、無細胞発現バイオリアクター及び無細胞培養装置のいずれも、例えば微細藻類、植物細胞等の様々な細胞培養に適応できる。
【0127】
一実施形態においては、本発明は、連続の交換又はフローのバイオリアクター(1)での操作に特に好適であり得る。この好ましい実施形態においては、この連続交換産生装置は、連続フローオペレーションにおいて、生物学的製剤、ワクチン、タンパク質、酵素、バイオシミラーのインビトロ転写、インビトロ翻訳及びインビトロ生合成ならびに酵素を用いた小分子の生合成又は化学修飾のための交換媒体としての、複数の繊維及び中空繊維系のバイオリアクターを含み得る。
【0128】
概して、
図5を参照すると、連続フローバイオリアクター装置は、連続フローオペレーションにおいて生物学的製剤、タンパク質、酵素、バイオシミラーのインビトロ転写、インビトロ翻訳及びインビトロ生合成ならびに酵素を用いた小分子の生合成又は化学修飾のための交換媒体としての、1又は複数の中空繊維(2)及び中空繊維系のバイオリアクター(2)を含み得る。本実施形態においては、本明細書に記載するような基質の連続的な供給が、当該装置に導入され得、また中空繊維リアクター(2)の内側及び外側の区画の間における濃度勾配を介して反応産物の除去をさらに伴うことが可能であり、これが内側区画の「フロースルー」溶液より単離され得る生物学的な材料及び生物学的に改変された材料の長い操作時間かつバッチ式に非依存の産生を可能にする。
【0129】
図5A及び5Bに示すように、例示的な中空繊維リアクター(2)の操作を記載する。本実施形態においては、フィード溶液がリアクターの内側区画(3)を介して押されるが、繊維の透過性により、mRNA合成(ヌクレオチド)のための基質、通常はタンパク質(アミノ酸)、基質(化合物のインビトロ生合成又は化学修飾のための)、ならびにリボソームの操作のためにATP及び(ヌクレオチドキナーゼを介して、例えばNDPK)GTPを提供する‘121出願より本明細書において援用されるようなATP再生系の連続的な供給が可能になり、外側区画(4)は連続交換におけるインビトロ転写、インビトロ翻訳及びインビトロ生合成反応を駆動する酵素及び因子を含有する。産生されたタンパク質、酵素、及びより大きい生物学的製剤を、
図5Bに示す閉鎖ループ系において単離及び精製した。この閉鎖ループ系は、潜在的な産物の汚染、流出、又は露出の危険性を防止及び/又は軽減し、処理に必要な量が軽減され、また任意の種類の生物学的製剤のための産生スペースの設置面積が軽減される。反応容器の容量を直線的に増加することにより、研究規模の生合成から工業規模の製造まで適応可能である。それにより、開発の努力ならびにプロセスの拡大縮小及び開発タイムラインに対する費用が軽減される。
【0130】
本明細書で用いる場合、インビトロでの組換え無細胞発現は、生物学的抽出物及び/又は規定された無細胞反応成分を含む反応混合物又は溶液中のポリペプチドの無細胞合成を指す。反応混合物は、例えばDNA、mRNA等である、マクロ分子産生のための鋳型又は遺伝子鋳型(genetic template);例えばアミノ酸、ヌクレオチド等である、合成しようとするマクロ分子のためのモノマー;ならびに当該補助因子、酵素、及び例えばリボソーム、tRNA、ポリメラーゼ、転写因子等である合成に必要な他の試薬を含み得る。組換え無細胞合成反応、及び/又は細胞アデノシン三リン酸(ATP)エネルギー再生系の成分は、本明細書において参照により援用されるが、バッチ式の連続フロー又は半連続フローとして実施/加えられ得る。
【0131】
本発明によって発現され得る標的タンパク質の一部としては、ワクチン、真核生物ペプチド、原核生物ペプチド、細菌関連ペプチド、真菌関連ペプチド、酵母関連の、ヒト関連のペプチド、植物関連ペプチド、毒素ペプチド、血管作用性小腸ペプチド、バソプレシンペプチド、新規の又は人工的に操作されたペプチド、ウイルス関連ペプチド、バクテリオファージ関連タンパク質、ホルモン、抗体、細胞受容体、細胞調節タンパク質及び上記に列挙したポリペプチドのいずれかの断片、が挙げられ得るがこれに限定されない。
【0132】
本発明は、遺伝子的に変更された有機体の産生に関与し、また組換えDNA技術に関与しているため、以下の定義を、本発明の説明の補助のために提供する。
【0133】
本明細書において用いる場合、「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」の語は、当該材料の本来の状態で又はその材料が産生されたときに通常その材料に付随している成分を実質的に又は本質的に含んでいない材料を指す。例示的な実施形態においては、純度及び均一性は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法又は高速液体クロマトグラフィー等の分析用化学技術を用いて決定される。調製物中に存在する優勢の種である核酸又は特定の細菌が、実質的に精製される。例示的な実施形態においては、「精製された」の語は、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲルにおいて本質的に1つのバンドを生じることを示す。典型的には、単離された核酸又はタンパク質は、ある範囲で表現されるあるレベルの純度を有する。この成分の純度の範囲の下限は、約60%、約70%又は約80%であり、また純度の範囲の上限は、約70%、約80%、約90%又は約90%超である。
【0134】
好ましい実施形態においては、無細胞発現系の結果物としては、例えばペプチド等である、単離又は精製され得る産物又はその断片があり得る。当該実施形態においては、標的タンパク質のゾル化(solation)又は精製であって、当該標的タンパク質が、例えばメタノール、エタノール又はアセトンでの沈降等である有機溶媒による沈降、例えばトリクロロ酢酸(TCA)又は硫酸アンモニウム沈降等である有機もしくは無機塩による沈降、例えばポリエチレングリコール(PEG)沈降等である非イオン性ポリマー沈降、pH沈降、温度沈降、免疫沈降、例えば吸着、イオン交換、アフィニティ及びゲル排除クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、等電点電気泳動、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、ゲル電気泳動、透析、精密ろ過法等のクロマトグラフ分離により、反応混合物中の少なくとも1つの他の成分から少なくとも部分的に分離される。
【0135】
本明細書で用いる場合、「活性」の語は、全長(完全)タンパク質に結合するペプチド又はその部分の機能的活性を指す。機能的活性としては、触媒活性又は酵素活性、抗原性(抗-ポリペプチド抗体に結合するためにポリペプチドと結合又は競合する能力)、免疫原性、多量体を形成する能力、及びポリペプチドのための受容体又はリガンドに特異的に結合する能力、が挙げられるがこれに限定されない。好ましくは、産生されたタンパク質の活性は、約0℃から30℃の温度で少なくとも3日間、最初の活性のうちの少なくとも55%、60%、65%、70%、80%、85%、90%、95%又はそれ以上を保持する。
【0136】
本明細書で用いる場合「核酸」の語は、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドのポリマーを指す。典型的には、「核酸」ポリマーは、一本鎖又は二本鎖いずれかの形態で発生するが、三本以上の鎖を含む構造を形成することも知られている。「核酸」の語は、天然に生じる核酸ポリマーのみならず、合成、天然及び非天然の公知のヌクレオチドアナログ又は修飾された骨格の残基又は結合を含む核酸を含み、これらは参照核酸と同様の結合性能を有し、また参照ヌクレオチドと同様の手法で代謝する。例示的なアナログとしては、ホスホロチオエート、ホスホロアミダート、メチルホスホン酸、キラル-メチルホスホン酸、2-O-メチルリボヌクレオチド、及びペプチド核酸(PNA)が挙げられるがこれに限定されない。「DNA」、「RNA」、「ポリヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド配列」、「オリゴヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「核酸」、「核酸分子」、「核酸配列」、「核酸断片」、及び「単離された核酸断片」は、本明細書において区別なく用いる。核酸に関しては、大きさを、キロベース(kb)又は塩基対(bp)のいずれかで与える。推定は、典型的には、アガロース又はアクリルアミドゲルの電気泳動に、配列決定された核酸に、又は公開されたDNA配列に由来する。タンパク質に関しては、大きさを、キロダルトン(kDa)又はアミノ酸残基数で与える。タンパク質の大きさは、ゲル電気泳動より、配列決定されたタンパク質より、起源であるアミノ酸配列より、又は公開されたタンパク質配列より、推定される。
【0137】
本明細書で用いる場合、「標的タンパク質」の語は、概して、約5以上のアミノ酸を有する任意のペプチド又はタンパク質を指す。ポリペプチドは、そこで細菌が産生され得る細菌細胞、例えば大腸菌(E.coli)等である宿主細菌において産生した例えばヒトタンパク質又は酵母タンパク質等よりの細菌に対して、相同であり得る、又は好ましくは外因性であり得、これはそれらが当該細菌に対して非相同である、すなわち外来性であることを意味している。好ましくは、哺乳動物ポリペプチド、ウイルス性の、細菌性の、真菌性の、及び人工的に操作されたポリペプチド、を用いる。
【0138】
当技術分野で公知であるように、様々な有機体は、ポリペプチドを生成するために異なるコドンを優先的に使用する。こうした「コドン使用頻度」の選択は、特定の宿主細胞系における発現を最適化するために、本発明のタンパク質及びキメラをコードする核酸分子の設計に用いられ得る。
【0139】
本発明において記載する全てのヌクレオチド配列は、特定の有機体における発現のために、又は収量の増加のために、コドン最適化され得る。コドン最適化は概して、関心の遺伝子の翻訳効率を増加させることによってタンパク質発現を向上させる。遺伝子の機能性はまた、カスタム設計した遺伝子内でのコドン使用頻度を最適化することによって増加させることもできる。コドン最適化の実施形態においては、種における低頻度のコドンが、高頻度のコドンで置換され得、例えばロイシンでは、低頻度のコドンUUAは、高頻度のコドンCUGによって置換され得る。コドン最適化によりmRNA安定性が増加し得、それゆえにタンパク質翻訳又はタンパク質フォールディングの速度が変更され得る。さらに、コドン最適化は、転写制御及び翻訳制御をカスタマイズし得るか、リボソーム結合部位を改変し得るか、又はmRNA分解部位を安定化させ得る。
【0140】
別段に示さない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に改変されたバリアント(例えば、コドン置換を縮重させる)、相補的(又は相補)配列、及び逆相補配列(reverse complement sequence)のみならず明示した配列、を暗に包含する。詳細には、縮重したコドン置換は、1又は複数の選択された(又は全ての)コドンの第3の位置が混合塩基の及び/又はデオキシイノシンの残基で置換されている配列を生成することによって達成され得る(例えば、Batzer et al.,Nucleic Acid Res.19:5081(1991);Ohtsuka et al.,J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);及びRossolini et al.,Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994)を参照)。アミノ酸をコードするヌクレオチドコドンの縮重性(degenerate nature)に加えて、所与の部位における化学的に同等であるアミノ酸の産生を結果的に生じるがコードされたポリペプチドの機能的性質に影響を及ぼさないポリヌクレオチドにおける変更が、当技術分野において周知である。「保存的アミノ酸置換」は、参照ポリペプチドの性質とほとんど干渉しないと予想される当該置換である。すなわち、保存的アミノ酸置換は、実質的に、参照タンパク質の構造及び機能を保存している。それゆえに、アミノ酸のアラニン、疎水性アミノ酸、のためのコドンは、例えばグリシン等であるあまり疎水性でない別の残基又は例えばバリン、ロイシンもしくはイソロイシン等であるより疎水性である残基をコードするコドンによって置換されてもよい。同様に、1つの負電荷をもつ残基の別のアミノ酸に対する、例えばグルタミン酸に対するアスパラギン酸等の置換、又は1つの正電荷をもつ残基の別のアミノ酸に対する、例えばアルギニンもしくはヒスチジンに対するリジン等の置換を結果的に生じる変化はまた、機能的に同等なタンパク質又はポリペプチドを産生することが予想できる。例示的な保存的アミノ酸置換は、当業者により公知である。保存的アミノ酸置換は、概して、(a)例えばベータシートもしくはアルファヘリックスのコンホメーションのような、置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、(b)置換部位における分子の電荷又は疎水性、及び/又は(c)側鎖の大部分、を維持する。
【0141】
相同性(例えば、相同率、配列同一性+配列類似性)は、対での配列アラインメントを計算する任意の相同性比較ソフトウェアを用いて決定することができる。本明細書において用いる場合、2つの核酸又はポリペプチド配列の文脈における「配列同一性」又は「同一性」には、整列させたときに同じである2つの配列にある残基への参照が含まれる。配列同一性の割合を、タンパク質に関連して用いる場合、一致しない残基位置同士はしばしば保存的アミノ酸置換が異なるものであり、ここでアミノ酸残基が同様の化学的性質(例えば、電荷又は疎水性)をもつ他のアミノ酸残基に置換されているので、分子の機能的性質は変化していないということが認識される。配列同士が保存的置換で異なる場合、配列同一性の割合は、置換の保存的性質を上方修正するように調節され得る。当該保存的置換が異なる配列同士は、「配列類似性」又は「類似性」を有するとする。この調節をするための手段は、当業者に周知である。典型的には、このことは、完全なミスマッチではなく部分として保存的置換をスコア付けし、それによって配列同一性の割合が増加することに関与する。それゆえに、例えば一致するアミノ酸がスコア1を与え、また非保存的置換がスコア0を与える場合、保存的置換は、0と1との間のスコアを与える。保存的置換のスコア付けは、例えば、Henikoff S及びHenikoff JGのアルゴリズムに従って、計算される。[Amino acid substitution matrices from protein blocks.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1992,89(22):10915-9]。
【0142】
特定の実施形態によれば、相同体配列は、本明細書で提供される配列(核酸又はアミノ酸配列)に対して、少なくとも60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、又は同一である。50%~99%である配列番号1~22の相同体配列が、本発明の特定の実施形態に含まれ得る。
【0143】
本明細書で用いる場合、「プライマー」の語は、好適な条件下でのDNA合成の開始点として機能することができるオリゴヌクレオチドを指す。当該条件には、適切な緩衝液中及び好適な温度で、4つの異なるヌクレオシド三リン酸及び延長のための試薬(例えば、DNAポリメラーゼ又は逆転写酵素)の存在下で、核酸鎖に対して相補的であるプライマー延長産物の合成が誘導されるようなものが含まれる。
【0144】
好ましくは、プライマーは一本鎖DNAである。プライマーの適切な長さは、プライマーの意図する使用に依存するが、典型的には、中間領域を含めて約6から約225のヌクレオチド、例えば15~35ヌクレオチド、18~75ヌクレオチド、及び25~150ヌクレオチド等、の範囲に及ぶ。短いプライマー分子は、概して、鋳型との十分に安定な複合体を形成するために、より低い温度を必要とする。プライマーは、鋳型核酸の正確な配列を反映する必要はないが、鋳型とハイブリッド形成するのに十分に相補的でなければならない。所与の標的配列の増幅に好適なプライマーの設計は、当技術分野で周知であり、本明細書で引用する文献に記載されている。
【0145】
本明細書で用いる場合、「ポリメラーゼ」は、ヌクレオチドの重合を触媒する酵素を指す。「DNAポリメラーゼ」は、デオキシリボヌクレオチドの重合を触媒する。公知のDNAポリメラーゼには、とりわけ、例えばPyrococcus furiosus(Pfu)のDNAポリメラーゼ、大腸菌(E.coli)のDNAポリメラーゼI、T7 DNAポリメラーゼ、及びThermus aquaticus(Taq)のDNAポリメラーゼが含まれる。「RNAポリメラーゼ」は、リボヌクレオチドの重合を触媒する。DNAポリメラーゼの先述の例はまた、DNA-依存性のDNAポリメラーゼとして知られる。RNA-依存性のDNAポリメラーゼもまた、DNAポリメラーゼの範囲内にあてはまる。逆転写酵素は、レトロウイルスによってコードされたウイルス性ポリメラーゼを含むが、RNA-依存性DNAポリメラーゼの一例である。RNAポリメラーゼ(「RNAP」)の公知の例としては、とりわけ、例えばT3 RNAポリメラーゼ、T7 RNAポリメラーゼ、SP6 RNAポリメラーゼ及び大腸菌(E.coli)RNAポリメラーゼが挙げられる。RNAポリメラーゼの先述の例はまた、DNA-依存性のRNAポリメラーゼとして知られる。上記酵素のうちのいずれかのポリメラーゼ活性は、当技術分野において周知の手段によって決定することができる。
【0146】
本明細書で用いる場合、「反応混合物」又は「無細胞反応混合物(cell-free reaction mixture)」又は「組換え無細胞反応混合物」の語は、所与の反応を実行するのに必要である試薬を含有する溶液を指す。無細胞発現系の「反応混合物」又は「反応溶液」は、典型的には、粗抽出物又は一部精製した抽出物、(例えば細菌、植物細胞、微細藻類、真菌、又は哺乳動物細胞から等の)ヌクレオチド翻訳鋳型、及び当該翻訳鋳型からの無細胞タンパク質合成を促進するのに好適な反応緩衝液を含有する。一態様においては、CF反応混合物は、外因性RNA翻訳鋳型を含むことが可能である。他の態様においては、CF反応混合物は、DNA-依存性RNAポリメラーゼのためのプロモーター要素に作用可能に連結したオープンリーディングフレームをコードするDNA発現鋳型を含むことが可能である。これら他の態様においては、CF反応混合物はまた、オープンリーディングフレームをコードするRNA翻訳鋳型の転写に向けられるDNA-依存性RNAポリメラーゼを含むことも可能である。これら他の態様においては、さらなるNTP及び二価のカチオン補助因子を、CF反応混合物中に含むことが可能である。反応混合物は、それが反応を可能にするのに必要である全ての試薬を含有する場合には完全と呼び、またそれが必要な試薬のサブセットのみを含有する場合には不完全と呼ぶ。反応成分は、常に、別個の溶液として保存され、それぞれが全成分のサブセットを含有するが、これは利便性、保存性、又は成分の濃度の用途依存的な調節を可能にするためという理由からであり、また反応成分は、反応の前に合わせて完全反応混合物を作製するということが当業者により理解されるであろう。さらに、反応成分は、市販するために別個に包装され、また有用な商用キットが、本発明の反応成分の任意のサブセットを含有し得るということが当業者により理解されるであろう。また、当業者は、反応混合物中の一部の成分は、ある実施形態では利用される一方で、無細胞発現産物の生成に必要でないということを理解されるであろう。「無細胞発現産物」の語は、無細胞発現系を通じて産生された任意の生物学的産物であり得る。
【0147】
「約」又は「およそ」の語は、例えば記載された濃度、長さ、分子量、pH、時間枠、温度、圧力又は体積等である値の統計的に有意な範囲の範囲内であることを意味する。当該値又は範囲は、所与の値又は範囲の、典型的には20%以内、より典型的には10%以内、またさらにより典型的には5%以内である、一桁の範囲内とすることが可能である。「約」又は「およそ」により包含される許容されるバリエーションは、試験下の特定の系に依存することとなる。「含むこと」、「有すること」、「含むこと」、及び「含有すること」の語は、別段に指示しない限り、オープンエンドの語として解釈されたい(すなわち、「~を含むがそれに限定されない」を意味する)。
【0148】
本明細書に記載の値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に当てはまる別個の値のそれぞれに個別に言及する簡略的な表現方法として機能することを意図しており、本明細書において別段に示さない限りその範囲を規定する両終点の境界を含み、そして別個の値はそれぞれ、あたかも本明細書において個別に列挙したかのように、本明細書に盛り込まれているものである。
【0149】
例えば細胞、又は核酸、タンパク質、若しくはベクターに関連して用いられる場合の「組換え」又は「遺伝子的に改変された」の語は、当該細胞、有機体、核酸、タンパク質又はベクターが、非相同の核酸もしくはタンパク質の導入によって又は本来の核酸もしくはタンパク質の変更によって改変されていること、或いは当該細胞が、そのように改変された細胞に由来することを示す。すなわち、例えば組換え細胞は、当該細胞の本来(非組換え又は野生型)の形態において見られない遺伝子を発現することができるか、又は別の方法で異常に発現される、過剰に発現される、低発現である、もしくは全く発現されない本来の遺伝子を発現することができる。
【0150】
本明細書で用いる場合、「形質転換」又は「遺伝子的に改変された」の語は、ある細胞内への1又は複数の核酸分子の転移を指す。微生物は、核酸分子が安定に複製されるようになるときに、細菌又は細胞又は有機体の中へ形質導入された核酸分子によって「形質転換」又は「遺伝子的に改変」される。本明細書で用いる場合、「形質転換」又は「遺伝子的に改変された」の語は、それによって核酸分子が例えば細菌等である細胞又は有機体の中へ導入することができるような全ての技術を包含する。
【0151】
本明細書で用いる場合、「プロモーター」の語は、転写の開始から上流であり得、またRNAポリメラーゼ及び転写を開始する他のタンパク質の認識及び結合に関与し得る、DNAの領域を指す。プロモーターは、細胞における発現のためのコード配列に作用可能に結合し得るか、又はプロモーターは、細胞における発現のためのコード配列に作用可能に結合し得るシグナル配列をコードするヌクレオチド配列に作用可能に連結し得る。
【0152】
「作用可能に連結する」の語は、調節性配列及びコード配列に関連して用いる場合、該調節性配列が、連結したコード配列の発現に影響を及ぼすことを意味する。「調節性配列」又は「制御要素」は、転写、RNAのプロセッシングもしくは安定性、又は関連するコード配列の翻訳についてのタイミング及びレベル/量に影響するヌクレオチド配列を指す。調節性配列には、プロモーター;翻訳リーダー配列;イントロン;エンハンサー;ステム-ループ構造;リプレッサー又は結合配列;終止配列;ポリアデニル化認識配列等が含まれ得る。特定の調節性配列は、それに対して作用可能に連結したコード配列の上流及び/又は下流に位置し得る。またコード配列に作用可能に連結した特定の調節性配列は、二本鎖の核酸分子の関連の相補鎖上に位置し得る。
【0153】
本明細書で用いる場合、「ゲノム」の語は、細胞の核の中で見られる染色体DNAを指し、また細胞の細胞内成分の中で見られるオルガネラDNAも指す。細菌に適用する場合の「ゲノム」の語は、細菌細胞の中の染色体及びプラスミドの両方を指す。本発明の一部の実施形態においては、DNA分子は、該DNA分子が細菌のゲノムの中に組み込まれるように、細菌の中に導入することができる。これらの及びさらなる実施形態においては、DNA分子は、安定なプラスミドとして又は安定なプラスミドにおいて、染色体上に組み込まれるか又は位置するかのいずれかであり得る。
【0154】
「遺伝子」又は「配列」の語は、何らかの手法で遺伝子産物(例えば、ポリペプチド又は機能性RNA)の発現を調節することが可能である適切な調節性配列に作用可能に連結したコード領域を指す。遺伝子は、コード領域(オープンリーディングフレーム、ORF)に先行する(上流)及びその後に続く(下流)のみならず、必要に応じて個々のコード領域(すなわち、エキソン)の間の配列を介在する(すなわち、イントロン)、DNAの非翻訳の調節性領域(例えばプロモーター、エンハンサー、レプレッサー等)を含む。本明細書で用いる場合、「構造遺伝子」の語は、その後に特異的なポリペプチドのアミノ酸特性の配列内に翻訳されるmRNA内に転写されるDNA配列を意味することを意図する。
【0155】
本明細書で用いる場合「発現」又は「コード配列の発現」(例えば、遺伝子又は導入遺伝子)の語は、それによって核酸転写ユニット(例えば、ゲノムDNA又はcDNAを含む)のコードされた情報が、細胞の作用可能、非作用可能、又は構造的な部分に変換されるプロセスを指し、しばしばタンパク質の合成を含む。遺伝子発現は、外部信号によって、例えば細胞、組織又は有機体の、遺伝子発現を増加又は減少させる試薬への曝露によって影響され得る。遺伝子の発現はまた、DNAからRNAからタンパク質への経路におけるいずれの場所でも調節可能である。遺伝子発現の調節は、例えば転写、翻訳、RNA輸送及びプロセッシング、mRNA等の中間分子の分解に作用する制御を介して、若しくはそれらがなされた後での特異的タンパク質分子の活性化、非活性化、区画化(compartmentalization)、若しくは分解を介して、又はそれらの組み合わせによって、発生する。遺伝子発現は、ノーザンブロット、RT-PCR、ウェスタンブロット、又はインビトロ、インサイツもしくはインビボでのタンパク質活性アッセイを含むがこれに限定されない当技術分野で公知である任意の方法によって、RNAレベル又はタンパク質レベルで測定可能である。
【0156】
「ベクター」の語は、それによってDNA、RNA、タンパク質又はポリペプチドを宿主内に導入することが可能である何らかの手段を指す。宿主に導入しようとするポリヌクレオチド、タンパク質及びポリペプチドは、事実上、治療的であるか又は予防的であり得る;コード化可能であるか又は抗原であり得る;事実上、調節可能である等である。ウイルス、プラスミド、バクテリオファージ、コスミド、及び細菌を含む、様々な種類のベクターが存在する。
【0157】
「発現ベクター」は、選択された宿主細胞又は有機体において複製可能である核酸である。発現ベクターは、自律的構造として複製可能であるか、又はあるいは全体的もしくは部分的に、宿主細胞の染色体にもしくはオルガネラの核酸に組み込み可能であり、又はそれは外来DNAを細胞に送達してそれによって宿主細胞のゲノムと共に複製するシャトルとして用いられる。すなわち、発現ベクターは、例えばプラスミド、ウイルス、人工染色体、核酸断片である選択された宿主細胞、オルガネラ又は有機体において複製可能であり、またそれのために発現ベクター上のある遺伝子(関心の遺伝子を含む)が当該細胞、オルガネラ又は有機体の中のポリペプチド又はタンパク質内に転写及び翻訳される、ポリヌクレオチドであるか;「発現カセット」を含む当技術分野で公知の任意の好適なコンストラクトである。その一方で、本明細書の実施例に記載されるように、「カセット」は、本発明の発現ベクターの部分を含有するポリヌクレオチドである。当該カセットの使用は、発現ベクターの組立体において補助となる。発現ベクターは、例えばプラスミド、ファージ、ウイルス、キメラウイルス又はコスミド等のレプリコンであり、またそれは発現制御配列に作用可能に連結する所望のポリヌクレオチド配列を含有する。
【0158】
無細胞発現系におけるタンパク質発現に関連して、本明細書において概略的に記載される場合、「発現産物」の語が、区別なく用いられ、また概して約5個超のアミノ酸を有する任意のペプチド又はタンパク質を指す。ポリペプチドは、無細胞抽出物において産生した例えばヒトタンパク質、植物タンパク質、ウイルスタンパク質、酵母タンパク質等である、それから無細胞抽出物が生じる有機体に対して、相同であり得るか、又は外因性であり得、これはそれらが当該有機体に対して非相同である、すなわち外来性であることを意味している。一部の実施形態においては、「由来する」の語は、細菌から、抽出された又は発現されて単離されたことを意味する。例えば、一実施形態においては、タンパク質は、好熱性細菌由来であり得、これは好熱性細菌に対して内在性であり、そして当該細菌から単離されるか又は異なる細菌において非相同的に発現されて個々のタンパク質又は細胞抽出物として単離されたものであるタンパク質を意味し得る。
【0159】
「無細胞抽出物」又は「溶解物」は、細菌、好熱性細菌、耐熱性細菌、古細菌、ファーミキューテス、真菌、藻類、微細藻類、植物細胞培養物、及び植物懸濁培養物を含めた種々の有機体及び/又は細胞に由来するものであり得る。
【0160】
本明細書で用いる場合、単数形の「a」、「and」及び「the」は、文脈において別段に明示しているものでない限り、複数形を含める。すなわち、例えば「ある細胞」という記載は、複数の当該細胞を含めるものであり、また「その培養」という記載は、1又は複数の培養及び当業者にとって公知であるその同等物についての記載を含める等である。本明細書における全ての技術用語及び科学用語は、別段に明示しない限り、この発明が属する技術分野の当業者に通常理解されるものと同じ意味を有する。
【0161】
ここで概略的に記載する本発明は、以下の実施例を参照することによってより容易に理解されることとなるが、当該実施例は、単に本発明の実施形態のある態様を説明する目的のために含まれる。他の技術及び方法が特許請求の範囲を満足し得、またこの他の技術及び方法を特許請求の範囲に記載の発明の範囲から逸脱することなく採用することができるということを、当業者が上記の教示及び以下の実施例から認識することができるはずであるとおり、当該実施例が本発明を限定することを意図していない。実際に、本発明は、特に、その好ましい実施形態に関連して示し記述しているが、添付の特許請求の範囲によって包含される発明の範囲から逸脱することなく、それにおいて形態及び詳細における種々の変更をなすことができるということを当業者は理解するであろう。
【0162】
ここで概略的に記載する本発明は、以下の実施例を参照することによってより容易に理解されることとなるが、当該実施例は、単に本発明の実施形態のある態様を説明する目的のために含まれる。他の技術及び方法が特許請求の範囲を満足し得、またこの他の技術及び方法を特許請求の範囲に記載の発明の範囲から逸脱することなく採用することができるということを、当業者が上記の教示及び以下の実施例から認識することができるはずであるとおり、当該実施例が本発明を限定することを意図していない。実際に、本発明は、特に、その好ましい実施形態に関連して示し記述しているが、添付の特許請求の範囲によって包含される発明の範囲から逸脱することなく、それにおいて形態及び詳細における種々の変更をなすことができるということを当業者は理解するであろう。
【実施例】
【0163】
実施例1:組換え無細胞発現系のためのタンパク質の合成及びクローン化
本発明者は、組換え無細胞発現系で用いるために、複数の組換えコアタンパク質、好ましくは選択好熱性細菌よりの複数の組換えコアタンパク質を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。この実施形態においては、本発明者は、複数のコア組換え好熱性開始因子(IF)を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。この実施形態においては、本発明者は、複数のコア組換え好熱性延長因子(EF)を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。この実施形態においては、本発明者は、複数のコア組換え終結因子(RF)を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。この実施形態においては、本発明者は、少なくとも1つのコア組換えリボソームリサイクリング因子(RRF)を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。この実施形態においては、本発明者は、複数のコア組換えアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS)を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。この実施形態においては、本発明者は、少なくとも1つのコア組換えメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)を合成及び選択発現ベクター内にクローン化した。
【0164】
表1に概略的に示すように、好ましい一実施形態においては、本発明者は、本発明の組換え無細胞発現系に適用することができる少なくとも34のタンパク質の例示的な組換えコアタンパク質混合物を形成する、ヌクレオチド及び/又はアミノ酸配列を含む少なくとも12の異なる組換え因子、ならびにヌクレオチド及び/又はアミノ酸配列を含む少なくとも22の組換えシンテターゼを(配列番号1~132)、合成、クローン化、大腸菌(E.coli)において発現、及び精製した。これらコアタンパク質を、
図7~8及び9に示すように、発現ベクター内に、例えばpET151/D-TOPO(pET151)、 pET24a(+)、又はpNAT内にクローン化した。
【0165】
本発明者は、同定した34のタンパク質のうちの1又は複数のみならず例示的な好熱性細菌よりの単離された選択リボソーム及びtRNAを組み込んだ、組換え無細胞反応混合物をさらに生成した。次に本発明者は、組換え無細胞反応混合物中に、ある量のRNAポリメラーゼ、特にT7 RNAポリメラーゼ酵素のみならず、例示的なアミノ酸、及び緩衝液を含めた。上記に記載したように、本発明者は、PCT出願第PCT/US2018/012121(‘121出願)の請求の範囲中で特定された無機ポリリン酸塩エネルギー再生系の成分のうちの1又は複数を組み込んだ、組換え無細胞反応混合物をさらに生成した。
【0166】
実施例2:例示的な組換え無細胞反応混合物の生成
一実施形態においては、本発明者は、以下からなる群から選択された、インビトロでの転写及び翻訳をすることができる組換え無細胞反応混合物を生成した:
-表1で特定される少なくとも33の好熱性コアタンパク質の反応混合物;
-表1で特定される大腸菌(E.coli)よりの1のコアタンパク質;
-好熱生物よりのtRNA;
-選択好熱生物より単離したある量のリボソーム;
-ある量のアミノ酸;
-例えばATP、CTP、GTP、TTP等のある量のヌクレオチド三リン酸(NTP);
-ある量の反応緩衝液;ならびに
-本明細書において援用されている‘121出願の請求の範囲、図面、配列、及び明細書において特定されている、無機ポリリン酸塩由来のエネルギー再生又はエネルギー再生系の1又は複数の成分。
【0167】
実施例3:組換えアミノアシル-tRNA-シンテターゼの活性
本発明者は、精製したアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS)のそれぞれの活性を確認した。概して、アミノアシル-tRNA-シンテターゼ反応は以下の2工程の方法である:
工程1:活性化 アミノ酸+ATP=>アミノアシル-AMP+PPi
工程2:転移(transfer) アミノアシル-AMP+tRNA=>アミノアシル-tRNA+AMP
【0168】
得られるPPiは、EnzCheck ピロリン酸塩キット(EnzCheck pyrophosphate kit)を用いて測定することができる。本概略を利用して、本発明者は、市販のピロリン酸塩アッセイキット(EnzCheck ピロリン酸塩アッセイキット(Pyrophosphate Assay Kit)、分子プローブ、E-6654、参照によって本明細書に援用される)を用いて動力学的アッセイを実施した。この市販のアッセイにより、ピロリン酸塩の酵素産生を間接的に、分光光度的に測定する。RS反応はそれぞれ、表2に示す以下の最終濃度で合計30μlに設定した。12.5μlのRS反応混合物を用いて、表3に示すとおりピロリン酸塩アッセイのために50μlの反応を設定した。ピロリン酸塩アッセイは、96-ウェルプレートで設定し、また360nmにおける吸光度を読み取るように設定したプレートリーダー上で、2分間隔で自動的に読み取った。これら動力学的測定は、全てのRSタンパク質の活性及び機能性についての定性的な最初の試験として用いた。
【0169】
アッセイは、メーカーの説明書にしたがって実施し、また経時的な吸光度の変化を、RS毎に時間に対してプロットした。
図1及び2に示すように、各RSは、良好の活性を示し(tRNAなしは対照として)、また無機ピロリン酸塩はATPのADP+Piへの加水分解によって生成され、またPiは、EnzCheckアッセイキットを用いて間接的に検出することが可能である。吸光度の変化が小さかったとしても、
図1及び2におけるデータは、RSに関する公開された報告と、メーカーのガイドラインにより提供されたATP使用のための他の酵素動態のために示したグラフとに匹敵している。明確にするために、
図1及び2はいずれも、各グラフにおいて10個のRSのみをプロットしているが、同じ実験から生じたものである。
【0170】
アミノアシル-tRNA-シンテターゼ反応より得られたAMPは、AMP-Glo(商標)キットを用いて測定することが可能である。本発明者は、市販のAMP検出キット(AMP-Glo(商標)アッセイ、Promega V5012、参照により本明細書に援用される)を用いてアッセイを行った。この市販のアッセイにより、発光反応を介してAMPの酵素産生が間接的に測定される。含まれる標準を、産生されたAMPの量の較正及び計算に用いることが可能である。このアッセイは、定量的なエンドポイント測定アッセイである。各RS反応は、表4に示す最終濃度により合計100μLで設定され、37℃で1時間実行した。それに次ぐAMP検出アッセイは、メーカーの説明書に従ってデュプリケートで実施し、また産生したAMPを、標準曲線を用いて算出した(
図17B)。
図17Aは、大腸菌(E.coli)よりの例示的なtRNAを利用した、3つの別個のアミノアシル-tRNA-シンテターゼのAMP-産生活性アッセイの結果を示す。標準AMP曲線は、
図17Bにおいて提供する。
【0171】
実施例4:組換えアミノアシル-tRNA-シンテターゼの活性の確認
クローン化したRSのそれぞれの活性のさらなる確認として、本発明者は、市販のキット(Cayman社、Malachite Green Phosphateアッセイキット、#10009325、参照により本明細書に援用される)を用いてマラカイトグリーンリン酸塩アッセイを実施した。産生したピロリン酸塩は、マラカイトグリーンと複合体を形成し、そして吸収として測定することが可能である色変化を導くこととなる。含まれる標準を、産生されたPPiの量の較正及び計算に用いることが可能である。このアッセイは、定量的なエンドポイント測定アッセイである。全ての反応は、メーカーの説明書に従って実行し、また産生したPPiは、標準曲線(グラフ上の小さいインレットとして示す)を用いて計算した。
【0172】
以下の表4に示すように、RS反応毎の最終濃度は、合計量150μlを含んだ。大腸菌(E.coli)よりの例示的なtRNAを、このアッセイで用いた。
図3Aに示すように、グラフでは、反応緩衝液のない対照(ATPなし)及びRSのうちの1つに関する異なるアミノ酸(AsnRS+Arg)と比較して、全てのRSに関して良好な活性を示した。各RSは、同じモル濃度で用いて、60分間インキュベートした後で、キットを用いてPPi濃度を測定した。各棒グラフは、バックグラウンド/ブランクの測定に対して補正されたものであり、デュプリケートでの測定の平均値を表す。
図3Bに示すように、同じアッセイを、例えばGeobacillus subterraneus、又はGeobacillus stearothermophilus等であるGeobacillus好熱生物よりのtRNAを用いて、概略的に上記に記載したとおりに再現した。
【0173】
実施例5:例示的なタンパク質の組換え無細胞発現
本発明者は、本発明の組換え無細胞発現系における2つの例示的なGFPペプチド(配列番号134~135)の産生を実証した。表6において特定するように、対照及び鋳型の組換え無細胞発現混合物を生成した。以下の表6において特定した組換えコアタンパク質の単離を、
図11~14に示した。
図4に示すように、組換え無細胞発現系は、加えた鋳型DNAを転写し、また
図4のバンドによって示されるとおり、得られたmRNAをタンパク質へと翻訳する。
図15にさらに示されるように、本発明者は、本明細書に記載した組換え無細胞発現系を利用した蛍光タンパク質(muGFP、配列番号134)産物のリアルタイム産生を示した。
図16にさらに示されるように、本発明者は、本明細書に記載した組換え無細胞発現系を利用した蛍光タンパク質(deGFP、配列番号135)産物の産生を示した。さらに、本発明者は、逆精製を経て、産生したGFPペプチドから組換え無細胞発現系の翻訳成分を除去することを実証した。
図16に具体的に示すように、逆精製後に、無細胞タンパク質発現反応の抗-FLAG抗体を用いたウェスタンブロットを実行した。
表
【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【表5】
【表6】
【表7】
【0174】
参考文献
以下の参考文献は、参照によってその全体としてここで援用される:
[1]Carlson,Erik D.et al.“Cell-Free Protein Synthesis:Applications Come of Age.” Biotechnology advances 30.5(2012):1185-1194.PMC.Web.1 Jan.2018.
[2]Lloyd,A.J.,Thomann,H.U.,Ibba,M.,& Soil,D.(1995).A broadly applicable continuous spectrophotometric assay for measuring aminoacyl-tRNA synthetase activity.Nucleic acids research,23(15),2886-2892.
【0175】
配列表
配列番号1
DNA
IF-1 - GbIF-1-EcOpt
Bacillaceae(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCCAAAGATGATGTGATTGAAGTTGAAGGCACCGTTATTGAAACCCTGCCGAATGCAATGTTTCGTGTTGAACTGGAAAATGGTCATACCGTTCTGGCACATGTTAGCGGTAAAATTCGCATGCACTTTATTCGTATTCTGCCTGGTGATCGTGTTACCGTTGAACTGAGCCCGTACGATCTGACCCGTGGTCGTATTACCTATCGTTATAAATGA
配列番号2
アミノ酸
IF-1-GbIF-1-EcOpt
Bacillaceae
MAKDDVIEVEGTVIETLPNAMFRVELENGHTVLAHVSGKIRMHFIRILPGDRVTVELSPYDLTRGRITYRYK
配列番号3
DNA
IF-2-GsIF-2-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAGCAAAATGCGCGTTTATGAGTACGCCAAAAAACAGAATGTTCCGAGCAAAGATGTGATCCACAAACTGAAAGAAATGAACATCGAAGTGAACAACCATATGGCAATGCTGGAAGCAGATGTTGTTGAAAAACTGGATCATCAGTATCGTCCGAATACCGGCAAAAAAGAAGAAAAAAAAGCCGAGAAGAAAACCGAGAAACCGAAACGTCCGACACCAGCAAAAGCAGCAGATTTTGCAGATGAAGAAATCTTCGATGATAGCAAAGAAGCAGCCAAAATGAAACCGGCAAAGAAAAAAGGTGCACCGAAAGGTAAAGAAACCAAAAAAACCGAAGCACAGCAGCAAGAGAAAAAACTGCTGCAGGCAGCGAAAAAGAAAGGCAAAGGTCCGGCAAAAGGGAAAAAACAGGCAGCACCGGCAGCCAAACAGGCACCGCAGCCTGCGAAAAAAGAAAAAGAACTGCCGAAAAAAATCACCTTTGAAGGTAGCCTGACCGTTGCAGAACTGGCAAAAAAACTGGGTCGTGAACCGAGCGAAATTATCAAAAAACTGTTTATGCTGGGTGTGATGGCCACCATTAATCAGGATCTGGATAAAGATGCCATTGAACTGATTTGCAGCGATTATGGTGTTGAGGTTGAAGAAAAAGTGACCATCGATGAAACCAACTTTGAAGCCATTGAAATTGTTGATGCACCGGAAGATCTGGTTGAACGTCCGCCTGTTGTTACCATTATGGGTCATGTTGATCATGGTAAAACCACACTGCTGGATGCAATTCGTCATAGCAAAGTTACCGAACAAGAAGCAGGCGGTATTACACAGCATATTGGTGCATATCAGGTTACCGTGAACGATAAGAAAATCACGTTTCTGGATACACCGGGTCATGAAGCATTTACCACCATGCGTGCACGTGGTGCACAGGTGACCGATATTGTTATTCTGGTTGTTGCAGCAGATGATGGCGTTATGCCGCAGACCGTTGAAGCAATTAATCATGCAAAAGCCGCAAACGTTCCGATTATTGTTGCCATCAACAAAATCGATAAACCGGAAGCAAATCCGGATCGTGTTATGCAAGAACTGATGGAATATAATCTGGTTCCGGAAGAATGGGGTGGTGATACCATTTTTTGTAAACTGAGCGCCAAAACCAAAGAAGGTCTGGACCATCTGCTGGAAATGATTCTGCTGGTTAGCGAAATGGAAGAACTGAAAGCCAATCCGAATCGTCGTGCAGTTGGCACCGTTATTGAAGCCAAACTGGACAAAGGTCGTGGTCCGGTTGCGACCCTGCTGATTCAGGCAGGCACCCTGCGTGTTGGTGATCCGATTGTTGTGGGCACCACCTATGGTCGTGTTCGTGCAATGGTTAATGATAGCGGTCGTCGTGTTAAAGAAGCAACCCCGAGCATGCCGGTTGAAATTACCGGTCTGCATGAAGTTCCGCAGGCAGGCGATCGTTTTATGGTTTTTGAAGATGAGAAAAAGGCACGCCAGATTGCCGAAGCACGTGCACAGCGTCAGCTGCAAGAACAGCGTAGCGTTAAAACCCGTGTTAGCCTGGATGACCTGTTTGAGCAGATTAAACAGGGTGAAATGAAAGAGCTGAACCTGATTGTTAAAGCCGATGTTCAGGGTAGCGTTGAAGCCCTGGTTGCAGCACTGCAGAAAATTGATGTTGAAGGTGTTCGCGTGAAAATTATCCATGCAGCCGTTGGTGCAATTACCGAAAGCGATATTAGCCTGGCAACCGCAAGCAATGCAATTGTGATTGGTTTTAATGTTCGTCCGGATGCAAATGCAAAACGTGCAGCAGAAAGTGAAAAAGTGGATATTCGTCTGCACCGCATTATCTATAACGTGATCGAAGAAATTGAGGCAGCCATGAAAGGTATGCTGGATCCGGAATATGAAGAGAAAGTTATTGGTCAGGCAGAAGTTCGTCAGACCTTTAAAGTTAGCAAAGTGGGTACAATTGCCGGTTGTTATGTTACCGATGGTAAAATTACCCGTGATAGTAAAGTTCGTCTGATTCGTCAGGGTATTGTTGTGTATGAAGGTGAAATTGATAGCCTGAAACGCTATAAAGATGATGTTCGTGAAGTTGCCCAGGGTTATGAATGTGGTCTGACCATTAAAAACTTCAACGACATTAAAGAGGGCGACGTTATCGAAGCCTATATCATGCAAGAAGTTGCACGCGCATAA
配列番号4
アミノ酸
IF-2-GsIF-2-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MSKMRVYEYAKKQNVPSKDVIHKLKEMNIEVNNHMAMLEADVVEKLDHQYRPNTGKKEEKKAEKKTEKPKRPTPAKAADFADEEIFDDSKEAAKMKPAKKKGAPKGKETKKTEAQQQEKKLLQAAKKKGKGPAKGKKQAAPAAKQAPQPAKKEKELPKKITFEGSLTVAELAKKLGREPSEIIKKLFMLGVMATINQDLDKDAIELICSDYGVEVEEKVTIDETNFEAIEIVDAPEDLVERPPVVTIMGHVDHGKTTLLDAIRHSKVTEQEAGGITQHIGAYQVTVNDKKITFLDTPGHEAFTTMRARGAQVTDIVILVVAADDGVMPQTVEAINHAKAANVPIIVAINKIDKPEANPDRVMQELMEYNLVPEEWGGDTIFCKLSAKTKEGLDHLLEMILLVSEMEELKANPNRRAVGTVIEAKLDKGRGPVATLLIQAGTLRVGDPIVVGTTYGRVRAMVNDSGRRVKEATPSMPVEITGLHEVPQAGDRFMVFEDEKKARQIAEARAQRQLQEQRSVKTRVSLDDLFEQIKQGEMKELNLIVKADVQGSVEALVAALQKIDVEGVRVKIIHAAVGAITESDISLATASNAIVIGFNVRPDANAKRAAESEKVDIRLHRIIYNVIEEIEAAMKGMLDPEYEEKVIGQAEVRQTFKVSKVGTIAGCYVTDGKITRDSKVRLIRQGIVVYEGEIDSLKRYKDDVREVAQGYECGLTIKNFNDIKEGDVIEAYIMQEVARA
配列番号5
DNA
IF-3-GbIF-3-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGATCAGCAAGGACTTTATCATCAATGAGCAGATTCGTGCACGTGAAGTTCGTCTGATTGATCAGAATGGTGAACAGCTGGGTATCAAAAGCAAACAAGAAGCACTGGAAATTGCAGCACGTCGTAATCTGGATCTGGTTCTGGTGGCACCGAATGCAAAACCGCCTGTTTGTCGTATTATGGATTATGGCAAATTTCGCTTCGAGCAGCAGAAAAAAGAAAAAGAGGCACGCAAAAAGCAGAAAGTGATCAATGTTAAAGAAGTGCGTCTGAGCCCGACCATTGAAGAACATGATTTTAACACCAAACTGCGCAACGCACGCAAATTTCTGGAAAAAGGTGATAAAGTGAAAGCCACCATTCGTTTTAAAGGTCGTGCAATCACCCATAAAGAAATTGGTCAGCGTGTTCTGGATCGTTTTAGCGAAGCATGTGCAGATATTGCAGTTGTTGAAACCGCACCGAAAATGGATGGTCGTAATATGTTTCTGGTGCTGGCTCCGAAAAACGACAACAAATAA
配列番号6
アミノ酸
IF-3-GbIF-3-EcOpt
Geobacillus
MISKDFIINEQIRAREVRLIDQNGEQLGIKSKQEALEIAARRNLDLVLVAPNAKPPVCRIMDYGKFRFEQQKKEKEARKKQKVINVKEVRLSPTIEEHDFNTKLRNARKFLEKGDKVKATIRFKGRAITHKEIGQRVLDRFSEACADIAVVETAPKMDGRNMFLVLAPKNDNK
配列番号7
DNA
EF-G-GsEF-G-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCACGTGAATTCAGCCTGGAAAAAACCCGTAATATTGGTATTATGGCCCATATCGATGCAGGTAAAACCACCACCACCGAACGTATTCTGTTTTATACCGGTCGTGTGCATAAAATTGGTGAAGTTCATGAAGGTGCAGCAACCATGGATTGGATGGAACAAGAACAAGAGCGTGGTATTACCATTACCAGCGCAGCCACCACCGCACAGTGGAAAGGTCATCGTATTAACATTATTGATACACCGGGTCACGTTGATTTTACCGTTGAAGTTGAACGTAGCCTGCGTGTTCTGGATGGTGCAATTACCGTGCTGGATGCACAGAGCGGTGTTGAACCGCAGACCGAAACCGTTTGGCGTCAGGCAACCACCTATGGTGTTCCGCGTATTGTTTTTGTGAACAAGATGGATAAAATCGGTGCCGATTTCCTGTATAGCGTTAAAACCCTGCATGATCGTCTGCAGGCAAATGCACATCCGGTTCAGCTGCCGATTGGTGCAGAAGATCAGTTTAGCGGTATTATTGATCTGGTTGAAATGTGCGCCTATCACTATCATGATGAACTGGGCAAAAACATCGAACGCATTGATATTCCGGAAGAATATCGTGATATGGCCGAAGAGTATCACAACAAACTGATTGAAGCAGTTGCAGAACTGGATGAAGAACTGATGATGAAATATCTGGAAGGCGAAGAAATTACCGCAGAGGAACTGAAAGCAGCAATTCGTAAAGCAACCATTAGCGTGGAATTTTTTCCGGTTTTTTGTGGTAGCGCCTTCAAAAACAAAGGTGTGCAGCTGCTGCTGGATGGCGTTGTTGATTATCTGCCGAGTCCGGTGGATATTCCTGCAATTCGTGGTGTTGTTCCGGATACCGAAGAAGAAGTTACACGCGAAGCAAGTGATGATGCACCGTTTGCAGCACTGGCCTTTAAAATCATGACCGATCCGTATGTTGGTAAGCTGACCTTTATTCGTGTTTATAGCGGCACCCTGGATAGCGGTAGCTATGTTATGAATACCACCAAAGGTAAACGTGAACGTATTGGTCGTCTGCTGCAGATGCATGCAAATCATCGTCAAGAAATCAGCAAAGTTTATGCCGGTGATATTGCAGCAGCAGTTGGTCTGAAAGATACCACAACCGGTGATACCCTGTGTGATGAAAAACATCCGGTGATTCTGGAAAGCATGCAGTTTCCGGAACCGGTTATTAGCGTTGCAATTGAACCGAAAAGCAAAGCCGATCAGGATAAAATGAGCCAGGCACTGCAGAAACTGCAAGAAGAGGATCCGACCTTTCGTGCACATACCGATCCGGAAACCGGTCAGACCATTATTAGTGGTATGGGTGAACTGCATCTGGATATCATTGTTGATCGTATGCGTCGCGAATTTAAAGTTGAAGCAAATGTTGGTGCACCGCAGGTTGCATATCGTGAAACCTTTCGTAAAAGCGCACAGGTTGAAGGCAAATTTATCCGTCAGAGTGGTGGTCGTGGTCAGTATGGTCATGTTTGGATTGAATTTTCACCGAACGAACGCGGTAAAGGCTTTGAATTTGAAAATGCAATTGTTGGTGGTGTGGTGCCGAAAGAATATGTTCCGGCAGTTCAGGCAGGTCTGGAAGAGGCAATGCAGAATGGTGTTCTGGCAGGTTATCCGGTTGTTGATATTAAAGCCAAACTGTTCGATGGCAGCTATCACGATGTTGATAGCAGCGAAATGGCATTCAAAATTGCAGCAAGCCTGGCACTGAAAAATGCCGCAACCAAATGTGATCCTGTTCTGCTGGAACCGATTATGAAAGTGGAAGTTGTTATCCCTGAGGAATATCTGGGTGATATTATGGGCGATATTACCAGCCGTCGTGGTCGCATTGAAGGTATGGAAGCACGTGGTAATGCCCAGGTTGTTCGTGCAATGGTTCCGCTGGCAGAAATGTTTGGTTATGCAACCAGCCTGCGTAGCAATACCCAAGGTCGTGGCACCTTTAGCATGGTTTTTGATCATTATGAAGAGGTGCCCAAAAACATTGCCGATGAGATCATCAAAAAAAACAAGGGCGAATAA
配列番号8
アミノ酸
EF-G-GsEF-G-EcOpt
Geobacillus
MAREFSLEKTRNIGIMAHIDAGKTTTTERILFYTGRVHKIGEVHEGAATMDWMEQEQERGITITSAATTAQWKGHRINIIDTPGHVDFTVEVERSLRVLDGAITVLDAQSGVEPQTETVWRQATTYGVPRIVFVNKMDKIGADFLYSVKTLHDRLQANAHPVQLPIGAEDQFSGIIDLVEMCAYHYHDELGKNIERIDIPEEYRDMAEEYHNKLIEAVAELDEELMMKYLEGEEITAEELKAAIRKATISVEFFPVFCGSAFKNKGVQLLLDGVVDYLPSPVDIPAIRGVVPDTEEEVTREASDDAPFAALAFKIMTDPYVGKLTFIRVYSGTLDSGSYVMNTTKGKRERIGRLLQMHANHRQEISKVYAGDIAAAVGLKDTTTGDTLCDEKHPVILESMQFPEPVISVAIEPKSKADQDKMSQALQKLQEEDPTFRAHTDPETGQTIISGMGELHLDIIVDRMRREFKVEANVGAPQVAYRETFRKSAQVEGKFIRQSGGRGQYGHVWIEFSPNERGKGFEFENAIVGGVVPKEYVPAVQAGLEEAMQNGVLAGYPVVDIKAKLFDGSYHDVDSSEMAFKIAASLALKNAATKCDPVLLEPIMKVEVVIPEEYLGDIMGDITSRRGRIEGMEARGNAQVVRAMVPLAEMFGYATSLRSNTQGRGTFSMVFDHYEEVPKNIADEIIKKNKGE
配列番号9
DNA
EF-Tu-GsEF-Tu-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCCAAAGCCAAATTTGAACGTACCAAACCGCATGTTAATATTGGCACCATTGGTCATGTTGATCATGGTAAAACCACACTGACCGCAGCAATTACCACCGTTCTGGCAAAACAGGGTAAAGCCGAAGCAAAAGCATATGATCAGATTGATGCAGCACCGGAAGAACGTGAACGTGGTATTACCATTAGCACCGCACATGTTGAATATGAAACCGATGCACGTCATTATGCCCATGTTGATTGTCCGGGTCATGCAGATTATGTGAAAAATATGATTACCGGTGCAGCACAGATGGATGGTGCAATTCTGGTTGTTAGCGCAGCAGATGGTCCGATGCCGCAGACACGTGAACATATTCTGCTGAGCCGTCAGGTTGGTGTTCCGTATATTGTTGTGTTTCTGAACAAATGCGATATGGTGGATGATGAAGAACTGCTGGAACTGGTTGAAATGGAAGTTCGTGATCTGCTGTCCGAATATGATTTTCCGGGTGATGAAGTTCCGGTTATTAAAGGTAGCGCACTGAAAGCACTGGAAGGTGATCCGCAGTGGGAAGAAAAAATCATTGAACTGATGAATGCCGTGGATGAGTATATTCCGACACCGCAGCGTGAAGTTGATAAACCGTTTATGATGCCGATCGAAGATGTGTTTAGCATTACCGGTCGTGGCACCGTTGCAACCGGTCGCGTTGAACGTGGCACCCTGAAAGTTGGTGATCCGGTTGAAATTATTGGTCTGAGTGATGAACCGAAAACCACCACCGTTACCGGTGTTGAAATGTTTCGTAAACTGTTAGATCAGGCCGAAGCCGGTGATAATATTGGTGCACTGCTGCGTGGTGTTTCACGTGATGAGGTGGAACGTGGTCAGGTTCTGGCGAAACCTGGTAGCATTACACCGCATACCAAATTCAAAGCACAGGTTTATGTTCTGACCAAAGAAGAAGGCGGTCGTCATACCCCGTTTTTTAGCAATTATCGTCCGCAGTTTTATTTCCGTACCACCGATGTTACCGGTATTATTACCCTGCCGGAAGGTGTGGAAATGGTTATGCCTGGTGATAACGTTGAAATGACCGTGGAACTGATTGCACCGATTGCAATTGAAGAAGGCACCAAATTTAGCATTCGTGAAGGTGGTCGTACCGTTGGTGCAGGTAGCGTTAGCGAAATTATCGAATAA
配列番号10
アミノ酸
EF-Tu-GsEF-Tu-EcOpt
Geobacillus
MAKAKFERTKPHVNIGTIGHVDHGKTTLTAAITTVLAKQGKAEAKAYDQIDAAPEERERGITISTAHVEYETDARHYAHVDCPGHADYVKNMITGAAQMDGAILVVSAADGPMPQTREHILLSRQVGVPYIVVFLNKCDMVDDEELLELVEMEVRDLLSEYDFPGDEVPVIKGSALKALEGDPQWEEKIIELMNAVDEYIPTPQREVDKPFMMPIEDVFSITGRGTVATGRVERGTLKVGDPVEIIGLSDEPKTTTVTGVEMFRKLLDQAEAGDNIGALLRGVSRDEVERGQVLAKPGSITPHTKFKAQVYVLTKEEGGRHTPFFSNYRPQFYFRTTDVTGIITLPEGVEMVMPGDNVEMTVELIAPIAIEEGTKFSIREGGRTVGAGSVSEIIE
配列番号11
DNA
EF-Ts-GsEF-Ts-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCAATTACCGCACAGATGGTTAAAGAACTGCGTGAAAAAACCGGTGCAGGTATGATGGATTGTAAAAAAGCACTGACCGAAACCAATGGCGATATGGAAAAAGCAATTGATTGGCTGCGCGAAAAAGGTATTGCAAAAGCAGCAAAAAAAGCCGATCGTATTGCAGCAGAAGGTATGGCATATATTGCAGTTGAAGGTAATACCGCAGTTATCCTGGAAGTTAATAGCGAAACCGATTTTGTGGCAAAAAACGAAGCATTTCAGACCCTGGTGAAAGAGCTGGCAGCACATCTGCTGAAACAGAAACCGGCAAGCCTGGATGAAGCACTGGGTCAGACCATGGATAATGGTAGCACCGTTCAGGATTATATCAATGAAGCCATTGCCAAAATCGGCGAAAAAATCACCCTGCGTCGTTTTGCAGTTGTTAATAAAGCAGATGGTGAAACCTTTGGTGCCTATCTGCATATGGGTGGTCGTATTGGTGTTCTGACCCTGCTGGCAGGTAATGCAAGCGAAGATGTTGCAAAAGATGTGGCAATGCATATTGCAGCCCTGCATCCGAAATATGTTAGCCGTGATGATGTTCCGCAAGAAGAAATTGCACACGAACGTGAAGTTCTGAAACAGCAGGCACTGAATGAAGGCAAACCGGAAAAAATTGTGGAAAAGATGGTTGAAGGTCGCCTGAACAAATTCTATGAAGATGTTTGTCTGCTGGAACAGGCCTTTGTTAAAAATCCGGATGTTACCGTTCGTCAGTATGTTGAAAGCAATGGTGCCACCGTTAAACAGTTTATTCGTTATGAAGTTGGTGAGGGCTTAGAAAAACGCCAGGATAATTTTGCCGAAGAAGTTATGAGCCAGGTTCGCAAACAGTAA
配列番号12
アミノ酸
EF-Ts-GsEF-Ts-EcOpt
Geobacillus
MAITAQMVKELREKTGAGMMDCKKALTETNGDMEKAIDWLREKGIAKAAKKADRIAAEGMAYIAVEGNTAVILEVNSETDFVAKNEAFQTLVKELAAHLLKQKPASLDEALGQTMDNGSTVQDYINEAIAKIGEKITLRRFAVVNKADGETFGAYLHMGGRIGVLTLLAGNASEDVAKDVAMHIAALHPKYVSRDDVPQEEIAHEREVLKQQALNEGKPEKIVEKMVEGRLNKFYEDVCLLEQAFVKNPDVTVRQYVESNGATVKQFIRYEVGEGLEKRQDNFAEEVMSQVRKQ
配列番号13
DNA
EF-4-GsEF-4-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAACCGTGAGGAACGTCTGAAACGTCAGGAGCGTATTCGTAACTTCAGCATCATTGCGCACATCGACCACGGTAAAAGCACCCTGGCGGATCGTATCCTGGAGAAAACCGGTGCGCTGAGCGAGCGTGAACTGCGTGAACAGACCCTGGACATGATGGATCTGGAGCGTGAACGTGGTATCACCATTAAGCTGAACGCGGTGCAACTGACCTATAAGGCGAAAAACGGCGAGGAATACATCTTCCACCTGATTGACACCCCGGGCCACGTGGATTTTACCTATGAAGTTAGCCGTAGCCTGGCGGCGTGCGAAGGTGCGATTCTGGTGGTTGATGCGGCGCAGGGTATTGAGGCGCAAACCCTGGCGAACGTGTACCTGGCGATTGACAACAACCTGGAAATCCTGCCGGTTATCAACAAAATTGATCTGCCGAGCGCGGAGCCGGAACGTGTGCGTCAGGAGATCGAAGACGTTATTGGTCTGGATGCGAGCGAGGCGGTGCTGGCGAGCGCGAAGGTTGGTATCGGCATTGAGGAAATCCTGGAGCAAATTGTGGAAAAAATTCCGGCGCCGAGCGGTGACCCGGATGCGCCGCTGAAGGCGCTGATCTTTGACAGCCTGTACGATCCGTATCGTGGCGTGGTTGCGTACGTGCGTATTGTTGACGGTACCGTTAAGCCGGGCCAGCGTATCAAAATGATGAGCACCGGCAAGGAGTTCGAAGTGACCGAGGTGGGCGTTTTTACCCCGAAGCAAAAAATCGTTGACGAACTGACCGTGGGTGATGTTGGCTATCTGACCGCGAGCATTAAGAACGTGAAAGATACCCGTGTTGGTGACACCATTACCGATGCGGAGCGTCCGGCGGCGGAACCGCTGCCGGGTTACCGTAAACTGAACCCGATGGTTTTCTGCGGCATGTATCCGATCGACACCGCGCGTTACAACGATCTGCGTGAGGCGCTGGAAAAGCTGCAGCTGAACGACGCGGCGCTGCACTTCGAGCCGGAAACCAGCCAAGCGCTGGGTTTCGGCTTTCGTTGCGGTTTTCTGGGCCTGCTGCACATGGAGATCATTCAGGAACGTATCGAGCGTGAATTTCACATCGATCTGATTACCACCGCGCCGAGCGTGGTTTATAAAGTGCACCTGACCGACGGTACCGAGGTGAGCGTTGATAACCCGACCAACATGCCGGACCCGCAAAAAATCGATCGTATTGAGGAACCGTATGTGAAGGCGACCATTATGGTTCCGAACGACTACGTGGGCCCGGTTATGGAACTGTGCCAGGGTAAACGTGGCACCTTCGTGGACATGCAATACCTGGATGAGAAGCGTGTTATGCTGATCTATGACATTCCGCTGAGCGAAATCGTTTACGACTTCTTTGATGCGCTGAAGAGCAACACCAAAGGTTACGCGAGCTTTGATTATGAGCTGATTGGCTACCGTCCGAGCAACCTGGTGAAAATGGACATCCTGCTGAACGGTGAAAAGATTGATGCGCTGAGCTTCATCGTTCACCGTGAGGCGGCGTATGAACGTGGCAAAGTGATTGTTGAGAAGCTGAAAGACCTGATCCCGCGTCAGCAATTTGAAGTGCCGGTTCAGGCGGCGATTGGTAACAAAATCATTGCGCGTAGCACCATCAAGGCGCTGCGTAAAAACGTGCTGGCGAAGTGCTACGGTGGCGATGTTAGCCGTAAGCGTAAACTGCTGGAGAAGCAGAAAGAAGGTAAGAAACGTATGAAACAGATTGGTAGCGTTGAGGTGCCGCAAGAAGCGTTCATGGCGGTGCTGAAGATCGACGATCAAAAGAAA
配列番号14
アミノ酸
EF-4-GsEF-4-EcOpt
Geobacillus
MNREERLKRQERIRNFSIIAHIDHGKSTLADRILEKTGALSERELREQTLDMMDLERERGITIKLNAVQLTYKAKNGEEYIFHLIDTPGHVDFTYEVSRSLAACEGAILVVDAAQGIEAQTLANVYLAIDNNLEILPVINKIDLPSAEPERVRQEIEDVIGLDASEAVLASAKVGIGIEEILEQIVEKIPAPSGDPDAPLKALIFDSLYDPYRGVVAYVRIVDGTVKPGQRIKMMSTGKEFEVTEVGVFTPKQKIVDELTVGDVGYLTASIKNVKDTRVGDTITDAERPAAEPLPGYRKLNPMVFCGMYPIDTARYNDLREALEKLQLNDAALHFEPETSQALGFGFRCGFLGLLHMEIIQERIEREFHIDLITTAPSVVYKVHLTDGTEVSVDNPTNMPDPQKIDRIEEPYVKATIMVPNDYVGPVMELCQGKRGTFVDMQYLDEKRVMLIYDIPLSEIVYDFFDALKSNTKGYASFDYELIGYRPSNLVKMDILLNGEKIDALSFIVHREAAYERGKVIVEKLKDLIPRQQFEVPVQAAIGNKIIARSTIKALRKNVLAKCYGGDVSRKRKLLEKQKEGKKRMKQIGSVEVPQEAFMAVLKIDDQKK
配列番号15
DNA
EF-P-GsEF-P-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGATCAGCGTGAACGACTTCCGTACCGGTCTGACCATCGAAGTTGATGGCGAGATTTGGCGTGTGCTGGAATTCCAGCACGTTAAGCCGGGTAAAGGCGCGGCGTTTGTGCGTAGCAAGCTGCGTAACCTGCGTACCGGTGCGATCCAAGAACGTACCTTCCGTGCGGGCGAGAAGGTGAACCGTGCGCAGATTGACACCCGTAAAATGCAATACCTGTATGCGAACGGTGACCAGCACGTTTTTATGGATATGGAGACCTACGAACAGATCGAGCTGCCGGCGAAACAAATTGAGTATGAACTGAAGTTCCTGAAAGAAAACATGGAAGTGTTTATCATGATGTACCAAGGTGAAACCATCGGCATTGAGCTGCCGAACACCGTTGAGCTGAAGGTGGTTGAGACCGAACCGGGTATTAAAGGTGATACCGCGAGCGGTGGCAGCAAGCCGGCGAAACTGGAAACCGGCCTGGTGGTTCAGGTGCCGTTCTTTGTTAACGAGGGTGACACCCTGATCATTAACACCGCGGATGGCACCTATGTTAGCCGTGCG
配列番号16
アミノ酸
EF-P-GsEF-P-EcOpt
Geobacillus
MISVNDFRTGLTIEVDGEIWRVLEFQHVKPGKGAAFVRSKLRNLRTGAIQERTFRAGEKVNRAQIDTRKMQYLYANGDQHVFMDMETYEQIELPAKQIEYELKFLKENMEVFIMMYQGETIGIELPNTVELKVVETEPGIKGDTASGGSKPAKLETGLVVQVPFFVNEGDTLIINTADGTYVSRA
配列番号17
DNA RF-1
タイトル:GsRF-1-EcOpt
起源:Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGTTTGATCGTCTGGAAGCAGTTGAACAGCGTTATGAAAAACTGAATGAACTGCTGATGGAACCGGATGTTATTAACGATCCGAAAAAACTGCGCGATTATAGCAAAGAACAGGCAGATCTGGAAGAAACCGTTCAGACCTATCGTGAGTATAAAAGCGTTCGTGAACAGCTGGCCGAAGCAAAAGCAATGCTGGAAGAGAAACTGGAACCTGAACTGCGTGAAATGGTGAAAGAAGAAATTGGCGAACTGGAAGAACGTGAAGAAGCACTGGTTGAGAAACTGAAAGTTCTGCTGCTGCCGAAAGATCCGAATGATGAAAAAAACGTGATCATGGAAATTCGTGCAGCAGCCGGTGGCGAAGAAGCAGCACTGTTTGCCGGTGATCTGTATCGTATGTATACCCGTTATGCAGAAAGCCAAGGTTGGAAAACCGAAGTTATTGAAGCAAGCCCGACCGGTTTAGGTGGTTATAAAGAAATCATCTTCATGATCAATGGCAAGGGTGCATACAGCAAACTGAAATTTGAAAATGGTGCACATCGTGTTCAGCGTGTTCCGGAAACCGAAAGCGGTGGTCGTATTCATACCAGCACCGCAACCGTTGCATGTCTGCCGGAAATGGAAGAAATCGAAGTGGAAATCAACGAGAAAGATATTCGCGTTGATACCTTTGCAAGCAGCGGTCCTGGTGGTCAGAGCGTTAATACCACCATGAGCGCAGTTCGTCTGACCCATATTCCGACCGGTATTGTTGTTACCTGTCAGGATGAAAAATCCCAGATCAAAAACAAAGAAAAAGCCATGAAAGTGCTGCGTGCCCGTATCTATGATAAATATCAGCAAGAGGCACGTGCGGAATATGATCAGACCCGTAAACAGGCAGTTGGCACCGGTGATCGTAGCGAACGTATTCGTACCTATAACTTTCCGCAGAATCGTGTTACCGATCATCGTATTGGTCTGACCATTCAAAAACTGGATCAGGTTCTGGATGGTCATCTGGATGAAATTATCGAAGCACTGATTCTGGATGACCAGGCAAAAAAGCTGGAACAGGCAAATGATGCAAGCTAA
配列番号18
アミノ酸
RF-1-GsRF-1-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MFDRLEAVEQRYEKLNELLMEPDVINDPKKLRDYSKEQADLEETVQTYREYKSVREQLAEAKAMLEEKLEPELREMVKEEIGELEEREEALVEKLKVLLLPKDPNDEKNVIMEIRAAAGGEEAALFAGDLYRMYTRYAESQGWKTEVIEASPTGLGGYKEIIFMINGKGAYSKLKFENGAHRVQRVPETESGGRIHTSTATVACLPEMEEIEVEINEKDIRVDTFASSGPGGQSVNTTMSAVRLTHIPTGIVVTCQDEKSQIKNKEKAMKVLRARIYDKYQQEARAEYDQTRKQAVGTGDRSERIRTYNFPQNRVTDHRIGLTIQKLDQVLDGHLDEIIEALILDDQAKKLEQANDAS
配列番号19
DNA
RF-2-GsRF-2-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCAGCACCGAATTTTTGGGATGATCAGAAAGCAGCACAGGCAGTTATTAGCGAAGCAAATGCACTGAAAGATCTGGTGGAAGAATTTAGCAGCCTGGAAGAACGTTTTGATAATCTGGAAGTTACCTACGAACTGCTGAAAGAAGAACCGGACGACGAACTGCAGGCAGAACTGGTTGAAGAGGCAAAAAAACTGATGAAAGATTTTAGCGAATTTGAACTGCAGCTGCTGCTGAATGAACCGTATGATCAAAATAATGCCATCCTGGAACTGCATCCTGGTGCCGGTGGCACCGAAAGCCAGGATTGGGCAAGCATGCTGCTGCGTATGTATACCCGTTGGGCAGAAAAAAAAGGCTTTAAAGTTGAAACCCTGGATTATCTGCCTGGTGAAGAAGCAGGTATTAAAAGCGTTACCCTGCTGATTAAAGGCCATAATGCATATGGTTATCTGAAAGCCGAAAAAGGTGTTCATCGTCTGGTTCGTATTAGCCCGTTTGATGCAAGCGGTCGTCGTCATACCAGCTTTGTTAGCTGTGAAGTTGTGCCGGAACTGGATGATAACATTGAAATTGAAATTCGCCCTGAAGAACTGAAGATTGATACCTATCGTAGCAGCGGTGCAGGCGGTCAGCATGTTAATACCACCGATAGCGCAGTGCGTATTACCCATCTGCCGACCGGTATTGTTGTTACCTGTCAGAGCGAACGTAGCCAGATTAAAAACCGTGAAAAAGCCATGAATATGCTGAAAGCCAAACTGTACCAGAAGAAATTAGAAGAACAGCAGGCCGAGCTGGCCGAACTGCGTGGTGAACAGAAAGAAATTGGTTGGGGTAATCAGATTCGCAGCTATGTTTTTCATCCGTACAGCCTGGTTAAAGATCATCGTACCAATGTTGAAGTTGGTAATGTTCAGGCCGTTATGGATGGTGAAATTGATGTTTTTATCGATGCATACCTGCGTGCCAAACTGAAATAA
配列番号20
アミノ酸
RF-2-GsRF-2-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MAAPNFWDDQKAAQAVISEANALKDLVEEFSSLEERFDNLEVTYELLKEEPDDELQAELVEEAKKLMKDFSEFELQLLLNEPYDQNNAILELHPGAGGTESQDWASMLLRMYTRWAEKKGFKVETLDYLPGEEAGIKSVTLLIKGHNAYGYLKAEKGVHRLVRISPFDASGRRHTSFVSCEVVPELDDNIEIEIRPEELKIDTYRSSGAGGQHVNTTDSAVRITHLPTGIVVTCQSERSQIKNREKAMNMLKAKLYQKKLEEQQAELAELRGEQKEIGWGNQIRSYVFHPYSLVKDHRTNVEVGNVQAVMDGEIDVFIDAYLRAKLK
配列番号21
DNA
RF-3- BX1-RF-3-EcOpt
バチルス属(Bacillus sp.)X1(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGGTAACGATTTCAAGAAAGAAGTGCTGAGCCGTCGTACCTTTGCGATCATTAGCCATCCGGATGCGGGCAAGACCACCCTGACCGAGAAACTGCTGCTGTTCGGTGGCGCGATCCGTGATGCGGGTACCGTTAAGGCGAAGAAAACCGGCAAATACGCGACCAGCGACTGGATGGAAATCGAGAAACAGCGTGGTATTAGCGTGACCAGCAGCGTTATGCAATTCGATTACAACGGTTATCGTGTGAACATTCTGGACACCCCGGGCCACCAGGACTTTAGCGAAGATACCTATCGTACCCTGATGGCGGTGGACAGCGCGGTTATGATCATTGATAGCGCGAAGGGCATCGAGGACCAAACCATTAAGCTGTTCAAAGTGTGCCGTATGCGTGGTATCCCGATTTTCACCTTTATCAACAAGCTGGACCGTCAGGGCAAACAACCGCTGGAGCTGCTGGCGGAACTGGAGGAAGTTCTGGGTATCGAGAGCTACCCGATGAACTGGCCGATTGGTATGGGCAAAGAATTTCTGGGCATCTATGATCGTTACTATAACCGTATTGAGCAGTTCCGTGTGAACGAGGAAGAGCGTTTTATCCCGCTGAACGAAGACGGTGAAATTGAGGGCAACCACAAGCTGGTTAGCAGCGGTCTGTACGAGCAGACCCTGGAAGAGATCATGCTGCTGAACGAGGCGGGTAACGAATTTAGCGCGGAGCGTGTGGCGGCGGGTCAACTGACCCCGGTTTTCTTTGGTAGCGCGCTGACCAACTTCGGCGTGCAGACCTTTCTGGAAACCTATCTGCAATTTGCTCCGCCGCCGAAGGCGCGTAACAGCAGCATCGGCGAGATTGATCCGCTGAGCGAAGAGTTTAGCGGCTTCGTTTTTAAAATTCAGGCGAACATGAACCCGGCGCACCGTGACCGTATCGCGTTCGTGCGTATTTGCAGCGGCAAGTTTGAGCGTGGCATGAGCGTTAACCTGCCGCGTCTGGGCAAGCAGCTGAAACTGACCCAAAGCACCAGCTTCATGGCGGAAGAGCGTAACACCGTGGAAGAGGCGGTTAGCGGTGACATCATTGGCCTGTACGATACCGGTACCTATCAGATCGGCGATACCCTGACCGTGGGCAAAAACGACTTCCAGTTTGAGCGTCTGCCGCAATTCACCCCGGAACTGTTTGTGCGTGTTAGCGCGAAGAACGTTATGCGTCAGAAGAGCTTTTACAAAGGTCTGCACCAGCTGGTGCAAGAAGGCGCGATTCAACTGTACAAGACCGTTAAAACCGATGAGTATCTGCTGGGTGCGGTGGGCCAGCTGCAATTCGAAGTTTTTGAGCACCGTATGAAGAACGAATATAACGCGGAAGTGCTGATGGAACGTCTGGGTAGCAAAATCGCGCGTTGGATTGAAAACGACGAGGTTGATGAAAACCTGAGCAGCAGCCGTAGCCTGCTGGTGAAAGACCGTTACGATCACTATGTTTTCCTGTTTGAGAACGACTTCGCGCTGCGTTGGTTTCAGGAAAAGAACCCGACCATCAAACTGTACAACCCGATGGACCAACACGAT
配列番号22
アミノ酸
RF-3
BX1-RF-3-EcOpt
バチルス属(Bacillus sp.)X1
MGNDFKKEVLSRRTFAIISHPDAGKTTLTEKLLLFGGAIRDAGTVKAKKTGKYATSDWMEIEKQRGISVTSSVMQFDYNGYRVNILDTPGHQDFSEDTYRTLMAVDSAVMIIDSAKGIEDQTIKLFKVCRMRGIPIFTFINKLDRQGKQPLELLAELEEVLGIESYPMNWPIGMGKEFLGIYDRYYNRIEQFRVNEEERFIPLNEDGEIEGNHKLVSSGLYEQTLEEIMLLNEAGNEFSAERVAAGQLTPVFFGSALTNFGVQTFLETYLQFAPPPKARNSSIGEIDPLSEEFSGFVFKIQANMNPAHRDRIAFVRICSGKFERGMSVNLPRLGKQLKLTQSTSFMAEERNTVEEAVSGDIIGLYDTGTYQIGDTLTVGKNDFQFERLPQFTPELFVRVSAKNVMRQKSFYKGLHQLVQEGAIQLYKTVKTDEYLLGAVGQLQFEVFEHRMKNEYNAEVLMERLGSKIARWIENDEVDENLSSSRSLLVKDRYDHYVFLFENDFALRWFQEKNPTIKLYNPMDQHD
配列番号 23
DNA
RRF-GbRRF-EcOpt
Geobacillus (大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCCAAACAGGTTATTCAGCAGGCCAAAGAAAAAATGGATAAAGCCGTTCAGGCATTTACCCGTGAACTGGCAAGCATTCGTGCAGGTCGTGCAAATGCAGGTCTGCTGGAAAAAGTTACCGTTGATTATTATGGTGTTCCGACGCCGATTAATCAGCTGGCGAGCATTAGCGTTCCGGAAGCACGTCTGCTGGTGATTCAGCCGTATGATAAAAGCGCAATCAAAGAGATGGAAAAAGCAATTCTGGCAAGCGATCTGGGTCTGACCCCGAGCAATGATGGTAGCGTTATTCGTCTGGTTATTCCGCCTCTGACCGAAGAACGTCGTCGCGAACTGGCGAAACTGGTGAAAAAATACAGCGAAGATGCAAAAGTTGCCGTGCGTAATATTCGTCGTGATGCAAATGATGAGCTGAAAAAGCTGGAAAAGAATGGCGAAATTACCGAAGATGAACTGCGTAGCTATACCGATGAAGTTCAGAAACTGACCGATGATCATATCGCAAAAATTGACGCCATCACCAAAGAGAAAGAAAAAGAAGTCATGGAAGTTTAA
配列番号24
アミノ酸
RRF
GbRRF-EcOpt
Geobacillus
MAKQVIQQAKEKMDKAVQAFTRELASIRAGRANAGLLEKVTVDYYGVPTPINQLASISVPEARLLVIQPYDKSAIKEMEKAILASDLGLTPSNDGSVIRLVIPPLTEERRRELAKLVKKYSEDAKVAVRNIRRDANDELKKLEKNGEITEDELRSYTDEVQKLTDDHIAKIDAITKEKEKEVMEV
配列番号25
DNA
AlaRS-GsAlaRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAAAAAACTGACCAGCGCACAGGTTCGTCGCATGTTTCTGGAATTTTTTCAAGAAAAAGGTCATGCCGTTGAACCGAGCGCAAGCCTGATTCCGGTTGATGATCCGAGCCTGCTGTGGATTAATAGCGGTGTTGCAACCCTGAAAAAATACTTTGATGGTCGTATTGTTCCGGAAAATCCGCGTATTTGTAATGCCCAGAAAAGCATTCGTACCAACGATATTGAAAATGTGGGTAAAACCGCACGCCATCACACCTTTTTTGAAATGCTGGGCAATTTTAGCATCGGCGATTATTTCAAACGTGAAGCAATTCATTGGGCCTGGGAATTTCTGACCAGTGATAAATGGATTGGTTTTGATCCGGAACGTCTGAGCGTTACCGTTCATCCGGAAGATGAAGAAGCATATAACATTTGGCGCAATGAAATTGGTCTGCCGGAAGAACGTATTATTCGTCTGGAAGGTAACTTTTGGGATATTGGTGAAGGTCCGAGCGGTCCGAATACCGAAATCTTTTATGATCGTGGTGAAGCCTTTGGTAATGATCCGAATGATCCTGAACTGTATCCAGGTGGTGAAAATGATCGTTATCTGGAAGTTTGGAATCTGGTGTTTAGCCAGTTTAATCATAATCCGGATGGCACCTATACACCGCTGCCGAAAAAAAACATTGATACCGGCATGGGTTTAGAACGTATGTGTAGCATTCTGCAGGATGTTCCGACCAATTTTGAAACCGACCTGTTTCTGCCGATTATTCGTGCAACCGAGCAGATTGCCGGTGAACGTTATGGTGAAGATCCGGATAAAGATGTTGCCTTTAAAGTGATTGCCGATCATATTCGCGCAGTTACCTTTGCAATTGGTGATGGTGCACTGCCGAGCAATGAAGGTCGTGGTTATGTTCTGCGTCGTCTGCTGCGTCGTGCAGTTCGTTATGCAAAACATATTGGTATTGAACGTCCGTTCATGTATGAACTGGTTCCGGTTGTTGGTGAAATCATGCACGATTATTATCCCGAGGTTAAAGAGAAAGCCGATTTTATTGCACGTGTGATTCGTACCGAAGAAGAACGTTTTCACGAAACCCTGCATGAAGGTCTGGCAATTCTGGCAGAAGTTATTGAAAAAGCAAAAGAACAGGGTTCCGATGTTATTCCGGGTGAAGAGGCATTTCGTCTGTATGATACCTATGGTTTTCCGATTGAACTGACCGAAGAATATGCAGCCGAAGCAGGTATGACCGTTGATCATGCAGGTTTTGAACGTGAAATGGAACGTCAGCGTGAACGTGCCCGTGCAGCACGTCAGGATGTTGATAGTATGCAGGTTCAAGGTGGTGTTCTGGGTGATATTAAAGATGAAAGTCGCTTTGTGGGCTATGATGAGCTGGTTGCAGCAAGCACCGTTATTGCAATTGTTAAAGATGGTCGTCTGGTGGAAGAAGTTAAAGCAGGCGAAGAAGCACAGATTATTGTTGATGTTACCCCGTTTTATGCAGAAAGCGGTGGTCAGATTGCAGATCAGGGTGTTTTTGAAAGCGAAACCGGCACCGCAGTTGTGAAAGATGTTCAGAAAGCACCGAATGGTCAGCATCTGCATGCAATTATTGTGGAACATGGCACCGTTAAAAAAGGTAGCCGTTATACCGCACGTGTTGATGAAGCAAAACGTATGCGTATTGTGAAAAATCATACCGCAACACATCTGCTGCATCAGGCACTGAAAGACGTTCTGGGTCGTCATGTTAATCAGGCAGGTAGCCTGGTTGCACCGGATCGTCTGCGTTTTGACTTTACCCATTTTGGTCAGGTTAAACCCGAAGAACTGGAACGTATTGAAGCGATTGTTAATGAGCAGATTTGGAAAAGCCTGCCGGTGGATATTTTCTATAAACCGCTGGAAGAGGCAAAAGCAATGGGTGCAATGGCACTGTTTGGTGAAAAATATGGTGATATTGTGCGTGTGGTTAAAGTGGGTGATTATAGCCTGGAACTGTGTGGTGGTTGTCATGTGCCGAATACCAGCGCCATTGGTCTGTTTAAAATCGTTAGCGAAAGCGGTATTGGTGCAGGCACCCGTCGCATTGAAGCAGTTACCGGTGAAGCAGCATATCGTTTTATGAGCGAACAGCTGGCCATTCTGCAAGAAGCAGCACAGAAACTGAAAACCAGTCCGAAAGAACTGAATGCACGTCTGGATGGCCTGTTTGCAGAACTGAAAGAATTAGAACGCGAAAATGAAAGCCTGGCAGCCCGTCTGGCACATATGGAAGCAGAACATCTGACCCGTCAGGTAAAAGATGTTAATGGTGTTCCGGTTCTGGCAGCAAAAGTTCAGGCAAATGATATGAATCAGCTGCGTGCCATGGCCGATGATCTGAAACAAAAACTGGGTACAGCAGTTATTGTTCTGGCAAGCGCACAAGGTGGTAAAGTTCAGCTGATTGCAGCCGTTACAGATGACCTGGTAAAAAAAGGTTTTCATGCGGGTAAACTGGTTAAAGAAGTTGCAAGCCGTTGCGGTGGTGGTGGCGGTGGTCGTCCGGATCTGGCACAGGCAGGCGGTAAAGATCCGAGCAAAGTTGGTGAAGCACTGGGTTATGTTGAAACCTGGGTTAAAAGCGTGAGCTAA
配列番号26
アミノ酸
AlaRS-GsAlaRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MKKLTSAQVRRMFLEFFQEKGHAVEPSASLIPVDDPSLLWINSGVATLKKYFDGRIVPENPRICNAQKSIRTNDIENVGKTARHHTFFEMLGNFSIGDYFKREAIHWAWEFLTSDKWIGFDPERLSVTVHPEDEEAYNIWRNEIGLPEERIIRLEGNFWDIGEGPSGPNTEIFYDRGEAFGNDPNDPELYPGGENDRYLEVWNLVFSQFNHNPDGTYTPLPKKNIDTGMGLERMCSILQDVPTNFETDLFLPIIRATEQIAGERYGEDPDKDVAFKVIADHIRAVTFAIGDGALPSNEGRGYVLRRLLRRAVRYAKHIGIERPFMYELVPVVGEIMHDYYPEVKEKADFIARVIRTEEERFHETLHEGLAILAEVIEKAKEQGSDVIPGEEAFRLYDTYGFPIELTEEYAAEAGMTVDHAGFEREMERQRERARAARQDVDSMQVQGGVLGDIKDESRFVGYDELVAASTVIAIVKDGRLVEEVKAGEEAQIIVDVTPFYAESGGQIADQGVFESETGTAVVKDVQKAPNGQHLHAIIVEHGTVKKGSRYTARVDEAKRMRIVKNHTATHLLHQALKDVLGRHVNQAGSLVAPDRLRFDFTHFGQVKPEELERIEAIVNEQIWKSLPVDIFYKPLEEAKAMGAMALFGEKYGDIVRVVKVGDYSLELCGGCHVPNTSAIGLFKIVSESGIGAGTRRIEAVTGEAAYRFMSEQLAILQEAAQKLKTSPKELNARLDGLFAELKELERENESLAARLAHMEAEHLTRQVKDVNGVPVLAAKVQANDMNQLRAMADDLKQKLGTAVIVLASAQGGKVQLIAAVTDDLVKKGFHAGKLVKEVASRCGGGGGGRPDLAQAGGKDPSKVGEALGYVETWVKSVS
配列番号27
DNA
ArgRS-GsArgRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAATATTGTGGGCCAGATCAAAGAAAAAATGAAAGAAGAAATTCGTCAGGCAGCAGTTCGTGCAGGTCTGGCAAGCGCAGATGAACTGCCGGATGTTCTGCTGGAAGTTCCGCGTGATAAAGCACATGGTGATTATAGCACCAATATTGCAATGCAGCTGGCACGTATTGCAAAAAAACCGCCTCGTGCAATTGCCGAAGCAATTGTTGGTCAGCTGGATCGTGAACGTATGAGCGTTGCCCGTATTGAAATTGCAGGTCCGGGTTTTATCAACTTCTATATGGATAATCGTTACCTGACCGCAGTTGTTCCGGCAATTCTGCAGGCAGGTCAGGCATATGGTGAAAGTAATGTTGGTAATGGTGAGAAAGTCCAGGTTGAATTTGTTAGCGCAAATCCGACCGGTGATCTGCATCTGGGTCATGCACGTGGTGCAGCAGTTGGTGATAGCCTGTGTAATATTCTGGCAAAAGCAGGTTTTGATGTGACCCGTGAATACTATATTAATGATGCAGGCAAGCAGATCTACAATCTGGCCAAAAGCGTTGAAGCACGTTATTTTCAGGCACTGGGTGTTGATATGCCGCTGCCGGAAGATGGTTATTATGGTGATGATATTGTGGAAATCGGCAAAAAACTGGCCGAAGAATATGGTGATCGTTTCGTTGAAATGGAAGAAGAGGAACGTCTGGCATTTTTTCGTGATTATGGTCTGCGTTATGAGCTGGAAAAAATCAAAAAAGATCTGGCCGATTTTCGCGTTCCGTTTGATGTTTGGTATAGCGAAACCAGCCTGTATGAAAGCGGTAAAATTGATGAAGCACTGAGCACCCTGCGTGAACGTGGTTATATCTATGAACAGGATGGTGCAACCTGGTTTCGTAGCACCGCATTTGGAGATGATAAAGATCGTGTTCTGATTAAACAGGACGGCACCTATACCTATCTGCTGCCGGATATTGCATATCATCAGGATAAACTGCGTCGCGGTTTTAAGAAACTGATTAACATTTGGGGTGCCGATCATCATGGTTATATTCCTCGCATGAAAGCAGCAATTGCAGCACTGGGTTATGATCCGGAAGCACTGGAAGTTGAAATTATTCAGATGGTGAATCTGTATCAGAATGGCGAACGTGTGAAAATGAGCAAACGTACCGGTAAAGCAGTTACCATGCGTGAACTGATGGAAGAGGTTGGTGTTGATGCAGTTCGTTATTTCTTTGCAATGCGTAGCGGTGATACCCATCTGGATTTTGATATGGATCTGGCAGTTAGCCAGAGCAATGAAAATCCGGTTTATTATGTTCAGTATGCCCATGCGCGTGTTAGCAGCATTCTGCGTCAGGCGGAAGAACAGCATATTAGCTATGATGGTGATCTGGCACTGCATCATCTGGTTGAAACCGAAAAAGAAATTGAGCTGCTGAAAGTGCTGGGTGATTTTCCGGATGTTGTTGCAGAAGCAGCACTGAAACGTATGCCGCATCGTGTTACCGCATATGCATTTGACCTGGCCAGCGCACTGCATAGCTTTTATAACGCCGAAAAAGTTCTGGATCTGGACAACATCGAAAAAACCAAAGCACGTCTGGCCCTGGTTAAAGCCGTTCAGATTACACTGCAGAATGCACTGGCCCTGATTGGTGTGAGCGCACCGGAACAAATGTAA
配列番号28
アミノ酸
ArgRS-GsArgRS-EcOpt
Geobacillus
MNIVGQIKEKMKEEIRQAAVRAGLASADELPDVLLEVPRDKAHGDYSTNIAMQLARIAKKPPRAIAEAIVGQLDRERMSVARIEIAGPGFINFYMDNRYLTAVVPAILQAGQAYGESNVGNGEKVQVEFVSANPTGDLHLGHARGAAVGDSLCNILAKAGFDVTREYYINDAGKQIYNLAKSVEARYFQALGVDMPLPEDGYYGDDIVEIGKKLAEEYGDRFVEMEEEERLAFFRDYGLRYELEKIKKDLADFRVPFDVWYSETSLYESGKIDEALSTLRERGYIYEQDGATWFRSTAFGDDKDRVLIKQDGTYTYLLPDIAYHQDKLRRGFKKLINIWGADHHGYIPRMKAAIAALGYDPEALEVEIIQMVNLYQNGERVKMSKRTGKAVTMRELMEEVGVDAVRYFFAMRSGDTHLDFDMDLAVSQSNENPVYYVQYAHARVSSILRQAEEQHISYDGDLALHHLVETEKEIELLKVLGDFPDVVAEAALKRMPHRVTAYAFDLASALHSFYNAEKVLDLDNIEKTKARLALVKAVQITLQNALALIGVSAPEQM
配列番号29
DNA
AsnRS-GsAsnRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGATGTGAGCATTATTGGTGGTAATCAGTGTGTTAAAACCACCACCATTGCCGAAGTTAATCAGTATGTTGGTCAGCAGGTTACCATTGGTGCATGGCTGGCAAATAAACGTAGCAGCGGTAAAATTGTTTTTCTGCAGCTGCGTGATGGCACCGGTTTTATTCAGGGTGTTGTTGAAAAAGCCAATGTTAGCGAAGAGGTTTTTCAGCGTGCAAAAACCCTGACACAAGAAACCAGCCTGTATGTGACCGGCACCGTTCGTATTGATGAACGTAGCCCGTTTGGTTATGAACTGAGCGTTGCCGATCTGCAGGTTATTCAAGAAGCAGTTGATTATCCGATTACGCCGAAAGAACATGGTGTTGAATTTCTGATGGATCATCGTCATCTGTGGCTGCGTAGCCGTCGTCAGCATGCAATTATGAAAATTCGCAACGAAATTATCCGTGCCACCTATGAATTTTTCAACGATCGTGGTTTTGTGAAAGTGGATGCACCGATTCTGACCGGTAGCGCACCGGAAGGCACCACCGAACTGTTTCATACCAAATATTTCGATGAGGATGCATATCTGAGCCAGAGCGGTCAGCTGTATATGGAAGCAGCAGCAATGGCACTGGGTAAAGTTTTTAGCTTTGGTCCGACCTTTCGTGCCGAAAAAAGCAAAACCCGTCGCCATCTGATTGAATTTTGGATGGTTGAACCGGAAATGGCCTTTTATGAATTTGAAGATAATCTGCGCCTGCAAGAGGAATATGTTAGCTATCTGGTTCAGAGCGTTCTGGAACGTTGTCGTCTGGAACTGGGTCGCCTGGGTCGTGATGTTAGCAAACTGGAATTAGTTAAACCGCCTTTTCCGCGTCTGACCTATGATGAAGCAATTAAACTGCTGCATGAAAAAGGCCTGACCGATATTGAATGGGGTGATGATTTTGGTGCACCGCATGAAACCGCAATTGCAGAAAGCTTTGATAAACCGGTGTTTATCACCCATTATCCGACCAGCCTGAAACCGTTTTATATGCAGCCGGATCCGAATCGTCCGGATGTTGTTCTGTGTGCAGATCTGATTGCTCCGGAAGGTTATGGTGAAATTATTGGCGGTAGCGAACGCATCCATGATTATGAGCTGCTGAAACGTCGCCTGGAAGAACATCATCTGCCGCTGGAAGCATATGAATGGTATCTGGATCTGCGTAAATATGGTAGCGTTCCGCATAGCGGTTTTGGTCTGGGTTTAGAACGTACCGTTGCATGGATTTGCGGTGTTGAACATGTGCGTGAAACCATTCCGTTTCCACGTCTGCTGAATCGTCTGTATCCGTAA
配列番号30
アミノ酸
AsnRS-GsAsnRS-EcOpt
Geobacillus
MDVSIIGGNQCVKTTTIAEVNQYVGQQVTIGAWLANKRSSGKIVFLQLRDGTGFIQGVVEKANVSEEVFQRAKTLTQETSLYVTGTVRIDERSPFGYELSVADLQVIQEAVDYPITPKEHGVEFLMDHRHLWLRSRRQHAIMKIRNEIIRATYEFFNDRGFVKVDAPILTGSAPEGTTELFHTKYFDEDAYLSQSGQLYMEAAAMALGKVFSFGPTFRAEKSKTRRHLIEFWMVEPEMAFYEFEDNLRLQEEYVSYLVQSVLERCRLELGRLGRDVSKLELVKPPFPRLTYDEAIKLLHEKGLTDIEWGDDFGAPHETAIAESFDKPVFITHYPTSLKPFYMQPDPNRPDVVLCADLIAPEGYGEIIGGSERIHDYELLKRRLEEHHLPLEAYEWYLDLRKYGSVPHSGFGLGLERTVAWICGVEHVRETIPFPRLLNRLYP
配列番号31
DNA
AspRS-GsAspRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGAACGCACCTATTATTGTGGTGAAGTTCCGGAAACCGCAGTTGGTGAACGTGTTGTTCTGAAAGGTTGGGTTCAGAAACGTCGTGATTTAGGTGGTCTGATTTTTATCGATCTGCGTGATCGTACCGGTATTGTTCAGGTTGTTGCAAGTCCGGATGTTAGCGCAGAAGCACTGGCAGCAGCAGAACGTGTTCGTAGCGAATATGTTCTGAGCGTTGAAGGCACCGTTGTTGCCCGTGCACCGGAAACAGTTAATCCGAATATTGCAACCGGTCGCATTGAAATTCAGGCAGAACGTATTGAAATTATCAACGAAGCAAAAACCCCTCCGTTTAGCATTAGTGATGATACCGATGCAGCCGAAGATGTTCGTCTGAAATATCGTTATCTGGATCTGCGTCGTCCGGTTATGTTTCAGACCCTGGCACTGCGTCATAAAATCACCAAAACCGTTCGTGATTTTCTGGATAGCGAACGCTTTCTGGAAATTGAAACCCCGATGCTGACCAAAAGCACACCGGAAGGTGCACGTGATTATCTGGTTCCGAGCCGTGTTCATCCGGGTGAATTTTATGCACTGCCGCAGAGTCCGCAGATCTTTAAACAGCTGCTGATGGTTGGTGGTGTGGAACGTTATTATCAGATTGCACGTTGTTTTCGTGATGAGGACCTGCGTGCAGATCGTCAGCCGGAATTTACCCAGATTGATATTGAAATGAGCTTCATCGAGCAAGAGGATATCATTGATCTGACCGAACGTATGATGGCAGCAGTTGTTAAAGCAGCAAAAGGTATTGATATTCCGCGTCCGTTTCCGCGTATTACCTATGATGAAGCAATGAGCTGTTATGGTAGCGATAAACCGGATATTCGTTTTGGTCTGGAACTGGTTGATGTGAGCGAAATTGTTCGTGATAGCGCATTTCAGGTTTTTGCGCGTGCAGTTAAAGAAGGTGGTCAGGTTAAAGCAATTAATGCAAAAGGTGCAGCACCGCGTTATAGCCGTAAAGATATTGATGCACTGGGCGAATTTGCAGGTCGTTATGGTGCCAAAGGTCTGGCATGGCTGAAAGCAGAAGGTGAAGAACTGAAAGGTCCGATTGCAAAATTCTTTACCGATGAAGAACAGGCAGCCCTGCGTCGTGCACTGGCCGTTGAAGATGGTGACCTGCTGCTGTTTGTTGCAGATGAAAAAGCAATTGTTGCAGCAGCACTGGGTGCGCTGCGTCTGAAACTGGGTAAAGAACTGGGTCTGATTGATGAAGCCAAACTGGCATTTCTGTGGGTTACCGATTGGCCTCTGCTGGAATACGATGAAGAGGAAGGTCGCTATTACGCAGCACATCATCCGTTTACCATGCCGGTGCGTGATGATATCCCGCTGCTGGAAACCAATCCGAGCGCAGTTCGTGCACAGGCATATGATCTGGTTCTGAATGGTTATGAATTAGGTGGTGGTAGCCTGCGTATTTTTGAACGTGATGTGCAAGAAAAAATGTTTCGTGCCCTGGGTTTTAGCGAAGAAGAAGCACGTCGTCAGTTTGGTTTTCTGTTAGAAGCATTTGAATATGGCACCCCTCCGCATGGTGGTATTGCACTGGGTTTAGATCGTCTGGTTATGCTGCTGGCAGGTCGTACCAATCTGCGCGATACCATTGCATTTCCGAAAACCGCCAGCGCAAGCTGTCTGCTGACCGAAGCACCGGGTCCTGTTAGCGACAAACAGCTGGAAGAACTGCATCTGGCAGTTGTTCTGCCGGAAAATGAATAA
配列番号32
アミノ酸
AspRS-GsAspRS-EcOpt
Geobacillus
MERTYYCGEVPETAVGERVVLKGWVQKRRDLGGLIFIDLRDRTGIVQVVASPDVSAEALAAAERVRSEYVLSVEGTVVARAPETVNPNIATGRIEIQAERIEIINEAKTPPFSISDDTDAAEDVRLKYRYLDLRRPVMFQTLALRHKITKTVRDFLDSERFLEIETPMLTKSTPEGARDYLVPSRVHPGEFYALPQSPQIFKQLLMVGGVERYYQIARCFRDEDLRADRQPEFTQIDIEMSFIEQEDIIDLTERMMAAVVKAAKGIDIPRPFPRITYDEAMSCYGSDKPDIRFGLELVDVSEIVRDSAFQVFARAVKEGGQVKAINAKGAAPRYSRKDIDALGEFAGRYGAKGLAWLKAEGEELKGPIAKFFTDEEQAALRRALAVEDGDLLLFVADEKAIVAAALGALRLKLGKELGLIDEAKLAFLWVTDWPLLEYDEEEGRYYAAHHPFTMPVRDDIPLLETNPSAVRAQAYDLVLNGYELGGGSLRIFERDVQEKMFRALGFSEEEARRQFGFLLEAFEYGTPPHGGIALGLDRLVMLLAGRTNLRDTIAFPKTASASCLLTEAPGPVSDKQLEELHLAVVLPENE
配列番号33
DNA
CysRS-GsCysRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAGCAGCATTCGTCTGTATAATACCCTGACGCGTAAAAAAGAACCGTTTGAACCGCTGGAACCGAACAAAGTTAAAATGTATGTTTGTGGTCCGACCGTGTATAACTATATTCATATTGGTAATGCCCGTGCAGCCATTGTGTTTGATACCATTCGTCGTTATCTGGAATTTCGCGGTTATGATGTTACCTATGTGAGCAATTTTACCGACGTGGATGACAAACTGATTAAAGCAGCACGTGAACTGGGTGAAAGCGTTCCGGCAATTGCAGAACGTTTTATTGAAGCCTATTTCGAAGATATTCAGGCCCTGGGTTGTAAAAAAGCAGATATTCATCCGCGTGTGACCGAAAATATCGATACCATTATTGAATTTATCCAGGCGCTGATCGATAAAGGCTATGCATATGAAGTTGATGGCGACGTTTATTATCGTACCCGTAAATTTCGCGAATATGGCAAACTGAGCCATCAGAGCATTGATGAACTGCAGGCAGGCGCACGTATTGAAATTGGTGAAAAAAAAGATGATCCGCTGGATTTTGCACTGTGGAAAGCAGCAAAAGAAGGTGAAATTTGTTGGGATAGCCCGTGGGGTAAAGGTCGTCCTGGTTGGCATATTGAATGTAGCGCAATGGCACGTAAATATCTGGGTGATACGATTGATATTCATGCCGGTGGTCAGGATCTGACCTTTCCGCATCATGAAAATGAAATTGCACAGAGCGAAGCACTGACCGGTAAACCGTTTGCCAAATATTGGCTGCATAATGGCTATCTGAACATCAACAACGAGAAAATGAGCAAAAGCCTGGGTAATTTTGTTCTGGTGCATGATATTATTCGCGAGATTGATCCGCAGGTTCTGCGCTTTTTTATGCTGAGCGTTCATTATCGTCATCCGATCAATTATAGCGAAGAACTGCTGGAAAGCGCACGTCGTGGTCTGGAACGTCTGAAAACCGCATATAGCAATCTGCAGCACCGTCTGCAGGCAAGCACCAATCTGACCGATAATGATGAAGAATGGGTTAGCCGTATTGCCGATATTCGTGCAAGCTTTATTCGTGAAATGGATGATGATTTTAACACCGCCAATGGTATTGCCGTTCTGTTTGAACTGGCAAAACAGGCAAATCTGTATCTGCAAGAAAAAACCACCTCCGAAAAAGTGATTCATGCATTTCTGCGTGAATTTGAACAGCTGGCAGATGTTCTGGGTCTGACCCTGAAACAGGATGAGCTGCTGGATGAAGAAATTGAAGCCCTGATTCAGAAACGTAATGAAGCCCGTAAAAATCGTGATTTTGCCCTGGCAGATCGTATTCGTGATGAATTACGTGCGAAAAACATCATCCTGGAAGATACACCGCAGGGCACCCGTTGGAAACGTGGTTAA
配列番号34
アミノ酸
CysRS-GsCysRS-EcOpt
Geobacillus
MSSIRLYNTLTRKKEPFEPLEPNKVKMYVCGPTVYNYIHIGNARAAIVFDTIRRYLEFRGYDVTYVSNFTDVDDKLIKAARELGESVPAIAERFIEAYFEDIQALGCKKADIHPRVTENIDTIIEFIQALIDKGYAYEVDGDVYYRTRKFREYGKLSHQSIDELQAGARIEIGEKKDDPLDFALWKAAKEGEICWDSPWGKGRPGWHIECSAMARKYLGDTIDIHAGGQDLTFPHHENEIAQSEALTGKPFAKYWLHNGYLNINNEKMSKSLGNFVLVHDIIREIDPQVLRFFMLSVHYRHPINYSEELLESARRGLERLKTAYSNLQHRLQASTNLTDNDEEWVSRIADIRASFIREMDDDFNTANGIAVLFELAKQANLYLQEKTTSEKVIHAFLREFEQLADVLGLTLKQDELLDEEIEALIQKRNEARKNRDFALADRIRDELRAKNIILEDTPQGTRWKRG
配列番号35
DNA
GlnRS-EcGlnRS-EcOpt
大腸菌(E.coli)
ATGAGCGAAGCAGAAGCACGTCCGACCAACTTTATTCGTCAGATTATTGATGAAGATCTGGCCAGCGGTAAACATACCACCGTTCATACCCGTTTTCCGCCTGAACCGAATGGTTATCTGCATATTGGTCATGCCAAAAGCATTTGCCTGAATTTTGGTATTGCCCAGGATTATAAAGGTCAGTGCAATCTGCGTTTCGATGATACCAATCCGGTGAAAGAAGATATCGAATACGTCGAGAGCATCAAAAATGATGTTGAATGGCTGGGTTTTCATTGGAGCGGTAATGTTCGTTATAGCAGCGATTATTTTGATCAGCTGCATGCCTATGCAATCGAACTGATTAACAAAGGTCTGGCCTATGTTGATGAACTGACACCGGAACAAATTCGTGAATATCGTGGTACACTGACCCAGCCTGGTAAAAATAGCCCGTATCGTGATCGTAGCGTTGAAGAAAATCTGGCCCTGTTTGAAAAAATGCGTGCCGGTGGTTTTGAAGAAGGTAAAGCCTGTCTGCGTGCAAAAATTGATATGGCAAGCCCGTTTATTGTTATGCGTGATCCGGTTCTGTATCGCATCAAATTTGCAGAACATCATCAGACCGGTAACAAATGGTGTATCTATCCGATGTATGATTTCACCCATTGCATTAGTGATGCCCTGGAAGGTATTACCCATAGCCTGTGTACCCTGGAATTTCAGGATAATCGTCGTCTGTATGATTGGGTGTTAGACAATATCACCATTCCGGTGCATCCGCGTCAGTATGAATTTAGCCGTCTGAATCTGGAATACACCGTTATGAGCAAACGTAAACTGAATCTGCTGGTGACCGATAAACATGTTGAAGGTTGGGATGATCCGCGTATGCCGACCATTAGCGGTCTGCGTCGTCGTGGTTATACCGCAGCAAGCATCCGTGAATTTTGTAAACGTATTGGTGTGACCAAACAGGATAACACCATTGAAATGGCCAGCCTGGAAAGCTGTATTCGCGAAGATCTGAATGAAAATGCACCGCGTGCAATGGCAGTTATCGATCCGGTTAAACTGGTGATCGAAAATTATCAAGGTGAAGGTGAAATGGTGACCATGCCGAATCATCCGAATAAACCGGAAATGGGTAGCCGTCAGGTTCCGTTTAGCGGTGAAATTTGGATTGATCGTGCAGATTTTCGTGAAGAAGCCAACAAACAGTATAAACGTCTGGTTCTGGGTAAAGAAGTTCGTCTGCGTAACGCCTATGTTATTAAAGCAGAACGTGTTGAAAAAGATGCCGAAGGCAATATTACCACCATTTTTTGTACCTATGACGCAGATACCCTGAGCAAAGATCCGGCAGATGGTCGTAAAGTTAAAGGTGTTATTCATTGGGTTAGCGCAGCACATGCACTGCCGGTTGAAATTCGCCTGTATGATCGTCTGTTTAGCGTTCCGAATCCGGGTGCAGCAGATGATTTTCTGAGCGTTATTAATCCGGAAAGCCTGGTTATTAAACAGGGTTTTGCCGAACCGAGCCTGAAAGATGCAGTTGCAGGTAAAGCATTTCAGTTTGAACGCGAAGGTTATTTTTGTCTGGATAGCCGTCATAGCACCGCAGAAAAACCGGTGTTTAATCGTACCGTTGGTCTGCGTGATACCTGGGCAAAAGTTGGTGAATAA
配列番号36
アミノ酸
GlnRS-EcGlnRS-EcOpt
E.coli
MSEAEARPTNFIRQIIDEDLASGKHTTVHTRFPPEPNGYLHIGHAKSICLNFGIAQDYKGQCNLRFDDTNPVKEDIEYVESIKNDVEWLGFHWSGNVRYSSDYFDQLHAYAIELINKGLAYVDELTPEQIREYRGTLTQPGKNSPYRDRSVEENLALFEKMRAGGFEEGKACLRAKIDMASPFIVMRDPVLYRIKFAEHHQTGNKWCIYPMYDFTHCISDALEGITHSLCTLEFQDNRRLYDWVLDNITIPVHPRQYEFSRLNLEYTVMSKRKLNLLVTDKHVEGWDDPRMPTISGLRRRGYTAASIREFCKRIGVTKQDNTIEMASLESCIREDLNENAPRAMAVIDPVKLVIENYQGEGEMVTMPNHPNKPEMGSRQVPFSGEIWIDRADFREEANKQYKRLVLGKEVRLRNAYVIKAERVEKDAEGNITTIFCTYDADTLSKDPADGRKVKGVIHWVSAAHALPVEIRLYDRLFSVPNPGAADDFLSVINPESLVIKQGFAEPSLKDAVAGKAFQFEREGYFCLDSRHSTAEKPVFNRTVGLRDTWAKVGE
配列番号37
DNA
GluRS-GsGluRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCCAAAGAAGTTCGCGTTCGTTACGCACCGAGTCCGACCGGTCATCTGCATATTGGTGGTGCACGTACCGCACTGTTTAATTACCTGTTTGCACGTCATCATGGTGGCAAAATGATTGTGCGTATTGAAGATACCGATATCGAACGTAATGTTGAAGGTGGTGAAAAAAGCCAGCTGGAAAATCTGAAATGGCTGGGCATTGATTATGATGAAAGCATTGATCAGGATGGTGGTTATGGTCCGTATCGTCAGACCGAACGTCTGGATATTTATCGCAAATATGTGAACGAACTGCTGGAACAGGGTCATGCCTATAAATGTTTTTGTACACCGGAAGAACTGGAACGTGAACGTGAAGCACAGCGTGCAGCAGGTATTGCAGCACCGCAGTATAGCGGTAAATGTCGTCATCTGACACCGGAACAGGTTGCCGAACTGGAAGCACAGGGTAAACCGTATACCATTCGTCTGAAAGTTCCGGAAGGTAAAACCTATGAATTCTATGATCTGGTGCGTGGCAAAGTTGTGTTTGAAAGCAAAGATGTTGGTGGCGATTGGGTTATTGTTAAAGCAAATGGTATTCCGACCTATAACTTTGCCGTTGTGATTGATGATCACCTGATGGAAATTTCACATGTGTTTCGTGGTGAAGAACATCTGAGCAATACCCCGAAACAGCTGATGGTGTATGAATATTTTGGTTGGGAACCGCCTCAGTTTGCACATCTGACCCTGATTGTTAATGAACAGCGTAAAAAACTGAGCAAACGCGACGAAAGCATTATTCAGTTTGTGAGCCAGTATAAAGAACTGGGTTATCTGCCGGAAGCCATGTTTAACTTTTTTGCACTGTTAGGTTGGTCACCGGAAGGTGAAGAAGAAATCTTTACCAAAGATGAACTGATCCGCATGTTTGATGTTAGCCGTCTGAGCAAAAGCCCGAGTATGTTTGATACCAAAAAGCTGACCTGGATGAACAACCAGTACATCAAAAAACTGGATCTGGATCGTCTGGTTGAACTGGCACTGCCGCATCTGGTTAAAGCAGGTCGTCTGCCTGCAGATATGACCGATGAGCAGCGTCAGTGGGCACGTGATCTGATTGCACTGTATCAAGAGCAGATGAGCTATGGTGCAGAAATTGTTCCGCTGAGCGAACTGTTTTTCAAAGAAGAGATTGATTACGAGGATGAAGCACGTCAGGTTCTGGCAGAAGAACAGGTTCCGGCAGTTCTGAGCACCTTTCTGGAAAGCGTTCGTGAGCTGGAACCGTTTACCGCAGATGAAATTAAAGCAGCAATTAAAGCCGTTCAGAAAGCAACCGGTCAGAAAGGGAAAAAACTGTTTATGCCGATTCGTGCAGCCGTTACAGGTCAGACCCATGGTCCGGAACTGCCGTTTGCAATTCAGCTGCTGGGTAAAGAAAAAGTGATTGAACGCCTGGAACGCGCACTGCAAGAAAAATTCTAA
配列番号38
アミノ酸
GluRS-GsGluRS-EcOpt
Geobacillus
MAKEVRVRYAPSPTGHLHIGGARTALFNYLFARHHGGKMIVRIEDTDIERNVEGGEKSQLENLKWLGIDYDESIDQDGGYGPYRQTERLDIYRKYVNELLEQGHAYKCFCTPEELEREREAQRAAGIAAPQYSGKCRHLTPEQVAELEAQGKPYTIRLKVPEGKTYEFYDLVRGKVVFESKDVGGDWVIVKANGIPTYNFAVVIDDHLMEISHVFRGEEHLSNTPKQLMVYEYFGWEPPQFAHLTLIVNEQRKKLSKRDESIIQFVSQYKELGYLPEAMFNFFALLGWSPEGEEEIFTKDELIRMFDVSRLSKSPSMFDTKKLTWMNNQYIKKLDLDRLVELALPHLVKAGRLPADMTDEQRQWARDLIALYQEQMSYGAEIVPLSELFFKEEIDYEDEARQVLAEEQVPAVLSTFLESVRELEPFTADEIKAAIKAVQKATGQKGKKLFMPIRAAVTGQTHGPELPFAIQLLGKEKVIERLERALQEKF
配列番号39
DNA
GlyRS-GsGlyRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCAGTTACCATGGAAGAAATTGTTGCACATGCAAAACATCGTGGTTTTGTTTTTCCGGGTAGCGAAATTTATGGTGGTCTGGCAAATACCTGGGATTATGGTCCGCTGGGTGTTGAACTGAAAAATAACATTAAACGTGCCTGGTGGAAAAAATTCGTTCAAGAAAGCCCGTATAATGTTGGTCTGGATGCAGCAATTCTGATGAATCCGCGTACCTGGGAAGCAAGCGGTCATCTGGGTAACTTTAATGATCCGATGGTTGATTGCAAACAGTGTAAAGCACGTCATCGTGCAGATAAACTGATTGAAAAAGCCCTGGAAGAAAAAGGCATTGAGATGATTGTTGATGGTCTGCCGCTGGCAAAAATGGATGAACTGATTAAAGAATATGATATCGCCTGTCCGGAATGTGGTAGCCGTGATTTTACCAATGTTCGTCAGTTTAACCTGATGTTCAAAACCTATCAGGGTGTTACCGAAAGCAGCGCCAATGAAATTTATCTGCGTCCGGAAACCGCACAGGGTATTTTTGTTAATTTCAAAAATGTGCAGCGCACCATGCGTAAAAAACTGCCGTTTGGTATTGCACAGATTGGCAAAAGCTTTCGCAACGAAATTACCCCTGGTAATTTTACCTTTCGCACCCGTGAATTTGAGCAGATGGAACTGGAATTTTTCTGTAAACCGGGTGAAGAACTGCAGTGGCTGGAATATTGGAAACAGTTTTGTAAAGAATGGCTGCTGAGCCTGGGTATGAAAGAAGATAATATTCGTCTGCGTGATCATGCCAAAGAAGAACTGAGCCATTATAGCAATGCAACCACCGATATCGAATATCATTTTCCGTTTGGTTGGGGTGAACTGTGGGGTATTGCAAGCCGTACCGATTATGATCTGAAACGCCATATGGAATATAGCGGTGAAGATTTCCATTACCTGGATCAAGAAACCAACGAACGTTATATTCCGTATTGTATTGAACCGAGTCTGGGTGCAGATCGTGTTACCCTGGCATTTATGATTGATGCCTATGATGAAGAGGAACTTGAAGATGGTACAACCCGTACCGTGATGCATCTGCATCCGGCACTGGCACCGTATAAAGCAGCAGTGCTGCCGTTAAGCAAAAAACTGGCAGATGGTGCACGTCGTATTTATGAGGAACTGGCAAAACACTTCATGGTGGATTATGATGAAACCGGTAGTATTGGTAAACGTTATCGTCGTCAGGATGAAATTGGCACCCCGTTTTGTATTACCTATGATTTTGAAAGCGAACAGGATGGTCAGGTTACCGTTCGTGATCGTGATACAATGGAACAGGTTCGTCTGCCGATTGGCGAACTGAAAGCATTTCTGGAAGAGAAAATCGCCTTCTAA
配列番号40
アミノ酸
GlyRS-GsGlyRS-EcOpt
Geobacillus
MAVTMEEIVAHAKHRGFVFPGSEIYGGLANTWDYGPLGVELKNNIKRAWWKKFVQESPYNVGLDAAILMNPRTWEASGHLGNFNDPMVDCKQCKARHRADKLIEKALEEKGIEMIVDGLPLAKMDELIKEYDIACPECGSRDFTNVRQFNLMFKTYQGVTESSANEIYLRPETAQGIFVNFKNVQRTMRKKLPFGIAQIGKSFRNEITPGNFTFRTREFEQMELEFFCKPGEELQWLEYWKQFCKEWLLSLGMKEDNIRLRDHAKEELSHYSNATTDIEYHFPFGWGELWGIASRTDYDLKRHMEYSGEDFHYLDQETNERYIPYCIEPSLGADRVTLAFMIDAYDEEELEDGTTRTVMHLHPALAPYKAAVLPLSKKLADGARRIYEELAKHFMVDYDETGSIGKRYRRQDEIGTPFCITYDFESEQDGQVTVRDRDTMEQVRLPIGELKAFLEEKIAF
配列番号41
DNA
HisRS-GsHisRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCATTTCAGATTCCGCGTGGCACCCAGGATGTTCTGCCTGGTGATACCGAAAAATGGCAGTATGTTGAACATGTTGCACGTAATCTGTGTAGCCGTTATGGTTATCGTGAAATTCGTACCCCGATTTTTGAACACACCGAACTGTTTCTGCGTGGTGTGGGTGATACCACCGATATTGTTCAGAAAGAAATGTATACCTTCGAGGATAAAGGTGGTCGTGCACTGACCCTGCGTCCGGAAGGCACCGCACCGGTTGTTCGTGCATTTGTGGAACATAAACTGTATGGTAGTCCGCATCAGCCGCTGAAACTGTATTATTCAGGTCCGATGTTTCGTTATGAACGTCCTGAAGCAGGTCGTTTTCGTCAGTTTGTTCAGTTTGGTGTTGAAGCACTGGGTAGCAGCGATCCGGCAATTGATGCAGAAGTTATGGCACTGGCAATGCATATTTATGAAGCCCTGGGTCTGAAACGTATTCGTCTGGTGATTAATAGCCTGGGTGATCTGGATAGCCGTCGTGCACATCGTGAAGCGCTGGTTCGTCATTTTAGCAGCCGTATTCATGAACTGTGTCCGGATTGTCAGACCCGTCTGCATACCAATCCGCTGCGTATTCTGGATTGTAAAAAAGATCGTGATCATGAGCTGATGGCAACCGCACCGAGCATCCTGGATTATCTGAATGAAGATAGCCGTGCCTATTTCGAGAAAGTGAAACAGTATCTGACCAATCTGGGTATTCCGTTTGTTATTGATAGTCGTCTGGTTCGTGGTCTGGATTATTACAATCATACCACCTTTGAAATCATGAGCGAAGCCGAAGGTTTTGGTGCAGCAGCAACCCTGTGTGGTGGTGGTCGTTATAATGGTCTGGTTCAAGAAATTGGTGGTCCGGAAACACCTGGTATTGGTTTTGCACTGAGCATTGAACGTCTGCTGGCAGCACTGGATGCCGAAGGTGTTGAACTGCCGGTTGAAAGTGGCCTGGATTGTTATGTTGTTGCAGTTGGTGAACGTGCAAAAGATGAAGCAGTGCGTCTGGTTTATGCCCTGCGTCGTAGCGGTCTGCGTGTTGATCAGGATTACCTGGGTCGTAAACTGAAAGCACAGCTGAAAGCAGCAGATCGTCTGGGTGCAAGCTTTGTTGCAATTATTGGTGATGAGGAACTGGAACGTCAAGAAGCAGCAGTTAAACATATGGCAAGCGGTGAACAGACCAATGTTCCGCTGGGTGAACTGGCACATTTTCTGCATGAACGTATTGGCAAAGAAGAATAA
配列番号42
アミノ酸
HisRS-GsHisRS-EcOpt
Geobacillus
MAFQIPRGTQDVLPGDTEKWQYVEHVARNLCSRYGYREIRTPIFEHTELFLRGVGDTTDIVQKEMYTFEDKGGRALTLRPEGTAPVVRAFVEHKLYGSPHQPLKLYYSGPMFRYERPEAGRFRQFVQFGVEALGSSDPAIDAEVMALAMHIYEALGLKRIRLVINSLGDLDSRRAHREALVRHFSSRIHELCPDCQTRLHTNPLRILDCKKDRDHELMATAPSILDYLNEDSRAYFEKVKQYLTNLGIPFVIDSRLVRGLDYYNHTTFEIMSEAEGFGAAATLCGGGRYNGLVQEIGGPETPGIGFALSIERLLAALDAEGVELPVESGLDCYVVAVGERAKDEAVRLVYALRRSGLRVDQDYLGRKLKAQLKAADRLGASFVAIIGDEELERQEAAVKHMASGEQTNVPLGELAHFLHERIGKEE
配列番号43
DNA
IleRS-GsIleRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGACTACAAAGAAACCCTGCTGATGCCGCAGACCGAATTTCCGATGCGTGGTAATCTGCCGAAACGTGAACCGGAAATGCAGAAAAAATGGGAAGAGATGGATATCTACCGCAAAGTTCAAGAACGTACCAAAGGTCGTCCGCTGTTTGTTCTGCATGATGGTCCGCCTTATGCAAATGGTGATATTCATATGGGTCATGCCCTGAACAAAATCCTGAAAGATATTATCGTGCGCTATAAGAGCATGAATGGTTATTGTGCACCGTATGTTCCAGGTTGGGATACCCATGGTCTGCCGATTGAAACCGCACTGGCAAAACAGGGTGTTGATCGTAAAAGCATGAGCGTTGCAGAATTTCGTAAACGTTGTGAACAGTATGCCTATGAGCAGATTGATAATCAGCGTCGTCAGTTTAAACGTCTGGGTGTTCGTGGTGATTGGGATAATCCGTATATTACCCTGAAACCGGAATATGAAGCACAGCAGATTAAAGTGTTTGGCGAGATGGCAAAAAAAGGCCTGATCTATAAAGGTCTGAAACCTGTTTATTGGAGCCCGAGCAGCGAAAGTGCACTGGCAGAAGCAGAAATTGAGTATAAAGATAAACGCTCCCCGAGCATTTATGTTGCCTTTCCGGTTAAAGATGGTAAAGGTGTTCTGGAAGGTGATGAACGTATTGTGATTTGGACCACCACACCGTGGACCATTCCGGCAAATCTGGCAATTGCAGTTCATCCGGATCTGGATTATCATGTTGTTGATGTTAGCGGTAAACGTTATGTTGTTGCAGCAGCACTGGCCGAAAGCGTTGCAAAAGAAATTGGTTGGGATGCATGGTCAGTTGTGAAAACCGTTAAAGGTAAAGAACTGGAATATGTGGTTGCGAAACACCCGTTTTATGAACGTGATAGCCTGGTTGTTTGTGGTGAACATGTGACCACCGATGCAGGCACCGGTTGTGTTCATACCGCACCTGGTCATGGTGAAGATGATTTTCTGGTTGGTCAGAAATATGGCCTGCCGGTTCTGTGTCCGGTGGATGAACGTGGTTATATGACCGAAGAAGCACCGGGTTTTGAAGGTATGTTTTATGAGGATGCCAACAAAGCGATTACGCAGAAACTGGAAGAAGTTGGCGCACTGCTGAAACTGGGTTTTATTACCCATAGCTATCCGCATGATTGGCGTACCAAACAGCCGACCATTTTTCGTGCAACCACACAGTGGTTTGCAAGCATTGATAAAATTCGCAATGAACTGCTGCAGGCCATCAAAGAAACAAAATGGATCCCGGAATGGGGTGAAATTCGCATTCATAACATGGTTCGTGATCGCGGTGATTGGTGTATTAGCCGTCAGCGTGCATGGGGTGTTCCGATTCCGGTGTTTTATGGTGAAAATGGTGAACCGATTATCACCGATGAAACCATTGAACATGTTAGCAACCTGTTTCGTCAGTATGGTAGCAATGTTTGGTTTGAACGTGAAGCAAAAGATCTGCTGCCGGAAGGTTTTACCCATCCGAGCAGCCCGAATGGTATTTTTACAAAAGAAACCGATATCATGGACGTGTGGTTTGATAGCGGTAGCAGCCATCAGGCAGTTCTGGTGGAACGTGATGATCTGATGCGTCCGGCAGATCTGTATCTGGAAGGCAGCGATCAGTATCGTGGTTGGTTTAATAGCAGCCTGAGCACCGCAGTTGCAGTGACCGGTAAAGCACCGTATAAAGGTGTGCTGAGCCATGGTTTTGTGCTGGATGGTGAAGGTCGTAAAATGAGCAAAAGCCTGGGTAATGTTGTTGTTCCTGCAAAAGTTATGGAACAGTTTGGTGCAGATATTCTGCGTCTGTGGGTTGCCAGCGTTGATTATCAGGCAGATGTTCGTATTAGCGATCATATTCTGAAACAGGTGAGCGAAGTGTATCGCAAAATTCGTAATACCTTTCGCTTTATGCTGGGTAACCTGTTTGATTTTGATCCGAATCAGAATGCAGTTCCGATTGGTGAACTGGGTGAAGTTGATCGTTATATGCTGGCCAAACTGAATAAACTGATCGCCAAAGTGAAAAAAGCCTATGATAGCTACGATTTCGCAGCCGTTTATCATGAAATGAACCATTTTTGTACCGTTGAACTGAGCGCCTTTTATCTGGATATGGCAAAAGATATCCTGTATATCGAAGCAGCAGATAGCCGTGCACGTCGTGCAGTTCAGACCGTTCTGTATGAAACCGTTGTTGCACTGGCGAAACTGATTGCACCGATTCTGCCGCATACCGCAGATGAAGTTTGGGAACATATTCCGAATCGTCGTGAAAATGTGGAAAGCGTTCAGCTGACCGATATGCCGGAACCGATTGCAATTGATGGCGAAGAGGCACTGCTGGCAAAATGGGATGCCTTTATGGATGTTCGTGATGATATGCTGAAAGCACTGGAAAATGCCCGTAACGAAAAAGTGATTGGTAAAAGCCTGACCGCAAGCGTTATTGTTTATCCGAAAGATGAAGCACGTAAACTGCTGGCGAGCCTGGATGCCGATCTGCGTCAGCTGCTGATTGTTAGCGCATTTAGCATTGCAGATGAACCGTATGATGCTGCCCCTGCAGAAGCCGAACGTCTGGATCATGTTGCCGTTCTGGTTCGTCCTGCCGAAGGTGAAACCTGCGAACGTTGTTGGACCGTTACACCGGCAGTTGGTCAGGATCCGAGCCATCCGACCTTTTGTCCGCGTTGTGCACATATTGTTAACGAACATTATAGCGCCTAA
配列番号44
アミノ酸
IleRS-GsIleRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MDYKETLLMPQTEFPMRGNLPKREPEMQKKWEEMDIYRKVQERTKGRPLFVLHDGPPYANGDIHMGHALNKILKDIIVRYKSMNGYCAPYVPGWDTHGLPIETALAKQGVDRKSMSVAEFRKRCEQYAYEQIDNQRRQFKRLGVRGDWDNPYITLKPEYEAQQIKVFGEMAKKGLIYKGLKPVYWSPSSESALAEAEIEYKDKRSPSIYVAFPVKDGKGVLEGDERIVIWTTTPWTIPANLAIAVHPDLDYHVVDVSGKRYVVAAALAESVAKEIGWDAWSVVKTVKGKELEYVVAKHPFYERDSLVVCGEHVTTDAGTGCVHTAPGHGEDDFLVGQKYGLPVLCPVDERGYMTEEAPGFEGMFYEDANKAITQKLEEVGALLKLGFITHSYPHDWRTKQPTIFRATTQWFASIDKIRNELLQAIKETKWIPEWGEIRIHNMVRDRGDWCISRQRAWGVPIPVFYGENGEPIITDETIEHVSNLFRQYGSNVWFEREAKDLLPEGFTHPSSPNGIFTKETDIMDVWFDSGSSHQAVLVERDDLMRPADLYLEGSDQYRGWFNSSLSTAVAVTGKAPYKGVLSHGFVLDGEGRKMSKSLGNVVVPAKVMEQFGADILRLWVASVDYQADVRISDHILKQVSEVYRKIRNTFRFMLGNLFDFDPNQNAVPIGELGEVDRYMLAKLNKLIAKVKKAYDSYDFAAVYHEMNHFCTVELSAFYLDMAKDILYIEAADSRARRAVQTVLYETVVALAKLIAPILPHTADEVWEHIPNRRENVESVQLTDMPEPIAIDGEEALLAKWDAFMDVRDDMLKALENARNEKVIGKSLTASVIVYPKDEARKLLASLDADLRQLLIVSAFSIADEPYDAAPAEAERLDHVAVLVRPAEGETCERCWTVTPAVGQDPSHPTFCPRCAHIVNEHYSA
配列番号45
DNA
LeuRS-GsLeuRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAGCTTTAACCACCGTGAAATCGAACAGAAATGGCAGGATTATTGGGAGAAGAATAAAACCTTTCGTACACCGGATGATGATGACAAACCGAAATTCTATGTGCTGGATATGTTTCCGTATCCGAGCGGTGCAGGTCTGCATGTTGGTCATCCGGAAGGTTATACCGCAACCGATATTCTGGCACGTATGAAACGTATGCAGGGTTATAATGTTCTGCATCCGATGGGTTGGGATGCATTTGGTCTGCCTGCAGAACAGTATGCACTGGATACCGGTAATGATCCGGCAGAATTTACCCAGAAAAACATCGATAACTTTCGTCGCCAGATTAAAAGCCTGGGTTTTAGCTATGATTGGGATCGTGAAATCAATACCACCGATCCGAATTATTACAAATGGACCCAGTGGATCTTCCTGAAACTGTATGAAAAAGGTCTGGCCTATATGGATGAAGTTCCGGTTAATTGGTGTCCGGCACTGGGCACCGTTCTGGCAAATGAAGAAGTTATTAACGGTCGTAGCGAACGTGGTGGCCATCCGGTTATTCGTAAACCGATGCGTCAGTGGATGCTGAAAATTACCGCATATGCAGATCGTCTGCTGGAAGATCTGGAAGAATTAGATTGGCCTGAAAGCATCAAAGAAATGCAGCGTAATTGGATTGGTCGTAGTGAAGGTGCAGAAATTGAATTTGCAGTTGATGGTCACGATGAAACCTTTACCGTTTTTACCACACGTCCGGATACACTGTTTGGTGCAACCTATACCGTGCTGGCACCGGAACATCCGCTGGTTGAAAAAATCACCACTCCGGAACAGAAACCTGCCGTTGATGCATATCTGAAAGAAATTCAGAGCAAAAGCGATCTGGAACGTACCGATCTGGCCAAAGAAAAAACCGGTGTGTTTACCGGTGCATATGCCATTCATCCTGTTACCGGTGATCGCCTGCCGATTTGGATTGCAGATTATGTTCTGATGAGCTATGGTACAGGTGCAATTATGGCAGTTCCGGCACATGATGAACGTGATTATGAATTCGCCAAAAAATTCCATCTGCCGATGAAAGAAGTTGTTGCAGGCGGTAATATTGAGAAAGAAGCATATACAGGCGACGGCGAACATATTAACAGCGAATTTCTGAATGGCCTGAATAAACAAGAGGCCATCGATAAAATGATTGCCTGGCTGGAAGAACATGGTAAAGGTCGTAAAAAAGTTAGCTATCGTCTGCGTGATTGGCTGTTTAGCCGTCAGCGTTATTGGGGTGAACCGATTCCGATTATTCATTGGGAAGATGGCACCATGACACCGGTTCCGGAAGAAGAACTGCCGCTGGTTCTGCCGAAAACCGATGAAATTCGTCCGAGCGGCACCGGTGAAAGTCCGCTGGCAAATATTGAAGAATGGGTTAATGTTGTGGATCCGAAAACGGGTAAAAAAGGTCGTCGCGAAACCAATACCATGCCGCAGTGGGCAGGTAGCTGTTGGTATTATCTGCGTTATATTGATCCGCACAACGATAAACAGCTGGCAGATCCGGAAAAACTGAAAAAATGGCTGCCGGTTGATGTGTATATTGGTGGTGCCGAACATGCAGTGCTGCATCTGCTGTATGCACGTTTTTGGCATAAATTTCTGTATGACCTGGGTATTGTTCCGACCAAAGAACCGTTTCAGAAACTGTTTAATCAGGGTATGATTCTGGGCGAGAACAACGAAAAAATGAGCAAAAGTAAAGGCAATGTGGTGAACCCGGATGATATTATTGAAAGCCATGGTGCAGATACCCTGCGTCTGTATGAGATGTTTATGGGTCCGCTGGAAGCAAGCATTGCATGGTCAACCAAAGGCCTGGATGGTGCACGTCGTTTTCTGGATCGTGTTTGGCGTCTGTTTGTTACCGAAAATGGTGAACTGAATCCGAACATTGTTGATGAACCGGCAAATGATACCCTGGAACGCATTTATCATCAGACCGTTAAAAAAGTGACCGAGGATTATGAAGCCCTGCGTTTTAATACCGCAATTAGCCAGCTGATGGTGTTTATTAACGAAGCCTATAAAGCCGAGCAGATGAAAAAAGAATATATGGAAGGCTTCGTGAAACTGCTGAGTCCGGTTTGTCCGCATATTGGTGAAGAACTGTGGCAGAAACTGGGTCATACCGATACCATTGCATATGAACCGTGGCCGACCTATGATGAAACCAAACTGGTTGAAGATGTGGTGGAAATTGTTGTGCAGATTAATGGTAAAGTGCGTAGTCGCCTGCATGTGCCTGTTGATCTGCCTAAAGAAGCCTTAGAAGAACGCGCACTGGCGGATGAAAAGATTAAAGAACAGCTGGAAGGTAAAACCGTGCGTAAAGTTATTGCCGTTCCGGGTAAACTGGTTAATATTGTTGCCAACTAA
配列番号46
アミノ酸
LeuRS-GsLeuRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MSFNHREIEQKWQDYWEKNKTFRTPDDDDKPKFYVLDMFPYPSGAGLHVGHPEGYTATDILARMKRMQGYNVLHPMGWDAFGLPAEQYALDTGNDPAEFTQKNIDNFRRQIKSLGFSYDWDREINTTDPNYYKWTQWIFLKLYEKGLAYMDEVPVNWCPALGTVLANEEVINGRSERGGHPVIRKPMRQWMLKITAYADRLLEDLEELDWPESIKEMQRNWIGRSEGAEIEFAVDGHDETFTVFTTRPDTLFGATYTVLAPEHPLVEKITTPEQKPAVDAYLKEIQSKSDLERTDLAKEKTGVFTGAYAIHPVTGDRLPIWIADYVLMSYGTGAIMAVPAHDERDYEFAKKFHLPMKEVVAGGNIEKEAYTGDGEHINSEFLNGLNKQEAIDKMIAWLEEHGKGRKKVSYRLRDWLFSRQRYWGEPIPIIHWEDGTMTPVPEEELPLVLPKTDEIRPSGTGESPLANIEEWVNVVDPKTGKKGRRETNTMPQWAGSCWYYLRYIDPHNDKQLADPEKLKKWLPVDVYIGGAEHAVLHLLYARFWHKFLYDLGIVPTKEPFQKLFNQGMILGENNEKMSKSKGNVVNPDDIIESHGADTLRLYEMFMGPLEASIAWSTKGLDGARRFLDRVWRLFVTENGELNPNIVDEPANDTLERIYHQTVKKVTEDYEALRFNTAISQLMVFINEAYKAEQMKKEYMEGFVKLLSPVCPHIGEELWQKLGHTDTIAYEPWPTYDETKLVEDVVEIVVQINGKVRSRLHVPVDLPKEALEERALADEKIKEQLEGKTVRKVIAVPGKLVNIVAN
配列番号47
DNA
LysRS-GsLysRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAGCCATGAAGAACTGAATGATCAGCTGCGTGTTCGTCGTGAAAAACTGAAAAAAATCGAAGAACTGGGCGTTGATCCGTTTGGTAAACGTTTTGAACGTACCCATAAAGCCCAAGAACTGTTTGAACTGTATGGTGATCTGAGCAAAGAGGAACTGGAAGAAAAACAAATTGAAGTTGCAGTTGCCGGTCGCATTATGACCAAACGTGGTAAAGGTAAAGCAGGCTTTGCACATATTCAGGATGTTACCGGTCAGATTCAGATTTATGTGCGTCAGGATGATGTTGGTGAACAGCAGTATGAACTGTTCAAAATTAGCGATCTGGGTGATATTGTTGGTGTTCGTGGCACCATGTTTAAAACCAAAGTGGGTGAACTGAGCATTAAAGTGAGCAGCTATGAATTTCTGACCAAAGCACTGCGTCCGCTGCCGGAAAAATATCATGGTCTGAAAGATATTGAACAGCGTTATCGTCAGCGCTATCTGGATCTGATTATGAATCCGGAAAGCAAAAAAACCTTTATTACCCGCTCACTGATTATCCAGAGCATGCGTCGTTATCTGGATAGCCGTGGATATCTGGAAGTTGAAACCCCGATGATGCATGCCGTTGCCGGTGGTGCAGCAGCACGTCCGTTTATTACACATCATAATGCACTGGATATGACCCTGTATATGCGTATTGCAATTGAACTGCATCTGAAACGTCTGATTGTTGGCGGTCTGGAAAAAGTGTATGAAATTGGTCGTGTGTTTCGCAATGAAGGTATTAGCACCCGTCATAATCCGGAATTTACCATGCTGGAACTGTACGAAGCATATGCCGATTTTCACGATATTATGGAACTGACCGAAAACCTGATTGCCCATATTGCAACCGAAGTTCTGGGCACCACCAAAATTCAGTATGATGAACATGTTGTTGACCTGACACCGGAATGGCGTCGTCTGCATATGGTTGATGCAATTAAAGAATATGTCGGCGTGGATTTTTGGCGTCAGATGAGTGATGAAGAAGCACGCGAACTGGCAAAAGAACATGGTGTGGAAGTTGCACCGCATATGACCTTTGGCCATATTGTGAACGAATTCTTTGAGCAGAAAGTGGAAAGCCATCTGATTCAGCCGACCTTTATCTATGGTCATCCGGTTGAAATTAGTCCGCTGGCCAAAAAAAACCCGGATGATCCTCGTTTTACCGATCGTTTTGAGCTGTTTATTGTGGGTCGTGAACATGCAAATGCCTTTACCGAACTGAACGATCCGATTGATCAGCGTCAGCGTTTTGAAGCACAGCTGAAAGAACGTGAACAGGGTAATGATGAAGCACACGAAATGGATGAAGATTTTCTGGAAGCACTGGAATATGGTATGCCTCCGACCGGTGGTTTAGGTATTGGTGTTGATCGTCTGGTTATGCTGCTGACCAATAGTCCGAGCATTCGTGATGTTCTGCTGTTTCCGCAGATGCGTCATAAATAA
配列番号48
アミノ酸
LysRS-GsLysRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MSHEELNDQLRVRREKLKKIEELGVDPFGKRFERTHKAQELFELYGDLSKEELEEKQIEVAVAGRIMTKRGKGKAGFAHIQDVTGQIQIYVRQDDVGEQQYELFKISDLGDIVGVRGTMFKTKVGELSIKVSSYEFLTKALRPLPEKYHGLKDIEQRYRQRYLDLIMNPESKKTFITRSLIIQSMRRYLDSRGYLEVETPMMHAVAGGAAARPFITHHNALDMTLYMRIAIELHLKRLIVGGLEKVYEIGRVFRNEGISTRHNPEFTMLELYEAYADFHDIMELTENLIAHIATEVLGTTKIQYDEHVVDLTPEWRRLHMVDAIKEYVGVDFWRQMSDEEARELAKEHGVEVAPHMTFGHIVNEFFEQKVESHLIQPTFIYGHPVEISPLAKKNPDDPRFTDRFELFIVGREHANAFTELNDPIDQRQRFEAQLKEREQGNDEAHEMDEDFLEALEYGMPPTGGLGIGVDRLVMLLTNSPSIRDVLLFPQMRHK
配列番号49
DNA
MetRS-GsMetRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E. coli)のためにコドン最適化)
ATGGAAAAAAAGACCTTCTATCTGACCACGCCGATCTATTATCCGAGCGATCGTCTGCATATTGGTCATGCATATACCACCGTTGCCGGTGATGCAATGGCACGTTATAAACGTATGCGTGGTTATGATGTTATGTATCTGACCGGCACCGATGAACATGGTCAGAAAATTCAGCGTAAAGCCGAAGAAAAAGGTGTTACACCGCAGCAGTATGTTGATGAAATTGTTGCAGGTATTCAAGAACTGTGGAAAAAACTGGATATCAGCTATGATGATTTCATCCGTACCACACAAGAACGCCATAAAAAAGTTGTTGAGCAGATTTTTACCCGTCTGGTTGAACAGGGTGATATTTATCTGGGTGAATATGAAGGTTGGTATTGTACCCCGTGTGAAAGCTTTTATACCGAACGTCAGCTGGTTGATGGTAATTGTCCGGATTGTGGTCGTCCGGTTGAAAAAGTTAAAGAGGAAAGCTATTTTTTCCGCATGAGCAAATATGTTGATCGCCTGCTGCAGTATTATGAAGAAAACCCGGATTTCATTCAGCCGGAAAGCCGTAAAAATGAGATGATTAACAACTTTATCAAACCTGGCCTGGAAGATCTGGCAGTTAGCCGTACCACCTTTGATTGGGGTATTAAAGTTCCGGGTAATCCGAAACATGTGATCTATGTTTGGATTGATGCACTGGCCAACTATATTACCGCATTAGGTTATGGCACCGATAACGATGAAAAATTCCGTAAATATTGGCCTGCCGATGTTCATCTGGTTGGTAAAGAAATTGTTCGCTTCCATACCATTTATTGGCCGATTATGCTGATGGCACTGGGTCTGCCGCTGCCGAAAAAAGTTTTTGGTCATGGTTGGCTGCTGATGAAAGATGGTAAAATGAGCAAAAGCAAAGGCAATGTTGTTGATCCGGTTACACTGATTGATCGTTATGGTCTGGATGCACTGCGTTATTATCTGCTGCGTGAAGTTCCGTTTGGTGCAGATGGTGTTTTTACACCGGAAGGTTTTATTGAGCGCATCAATTATGATCTGGCAAATGATCTGGGTAATCTGCTGCATCGTACCGTTGCAATGATCGAAAAATACTTTGATGGTGTGATTCCGCCTTATCGTGGTCCGAAAACACCGTTTGATCAAGAGCTGGTTCAGACCGCACGTGAAGTTGTTCGTCAGTATGAAGAGGCAATGGAAGGTATGGAATTTAGCGTTGCACTGGCAGCAGTTTGGCAGCTGATTAGTCGTACCAATAAATACATTGATGAAACCCAGCCGTGGGTGTTAGCAAAAGATGAACAGAAACGTGATGAACTGGCAGCCGTTATGACCCATCTGGCAGAAAGCCTGCGTCATACCGCAGTTCTGCTGCAGCCGTTTCTGACCCGCACACCGGAACGTATGCTGGCACAGCTGGGTATTACCGATCATAGCCTGAAAGAATGGGATAGCCTGTATGATTTTGGTCTGATTCCGGAAGGCACCAAAGTTCAGAAAGGTGAACCGCTGTTTCCGCGTCTGGATATTGAAGCAGAAGTGGAATATATCAAAGCCCATATGCAAGGTGGTAAACCGGCAGCCGAACCGGTTAAAGAAGAAAAAAAAGCAGCCGAAGCAGCGGAAATTAGCATCGATGAATTTGCAAAAGTTGATCTGCGTGTTGCCGAAGTTATTCATGCAGAACGTATGAAAAACGCCGATAAACTGCTGAAACTGCAGCTGGATTTAGGTGGTGAAAAACGTCAGGTTATTAGCGGTATTGCCGAATTCTATAAACCGGAAGAACTGGTGGGTAAAAAAGTGATTTGTGTGGCAAATCTGAAACCGGCAAAACTGCGTGGTGAATGGTCTGAAGGCATGATTCTGGCAGGCGGTAGCGGTGGTGAATTTAGCCTGGCAACCGTTGATCAGCATGTTCCGAATGGTACGAAAATCAAATAA
配列番号50
アミノ酸
MetRS-GsMetRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MEKKTFYLTTPIYYPSDRLHIGHAYTTVAGDAMARYKRMRGYDVMYLTGTDEHGQKIQRKAEEKGVTPQQYVDEIVAGIQELWKKLDISYDDFIRTTQERHKKVVEQIFTRLVEQGDIYLGEYEGWYCTPCESFYTERQLVDGNCPDCGRPVEKVKEESYFFRMSKYVDRLLQYYEENPDFIQPESRKNEMINNFIKPGLEDLAVSRTTFDWGIKVPGNPKHVIYVWIDALANYITALGYGTDNDEKFRKYWPADVHLVGKEIVRFHTIYWPIMLMALGLPLPKKVFGHGWLLMKDGKMSKSKGNVVDPVTLIDRYGLDALRYYLLREVPFGADGVFTPEGFIERINYDLANDLGNLLHRTVAMIEKYFDGVIPPYRGPKTPFDQELVQTAREVVRQYEEAMEGMEFSVALAAVWQLISRTNKYIDETQPWVLAKDEQKRDELAAVMTHLAESLRHTAVLLQPFLTRTPERMLAQLGITDHSLKEWDSLYDFGLIPEGTKVQKGEPLFPRLDIEAEVEYIKAHMQGGKPAAEPVKEEKKAAEAAEISIDEFAKVDLRVAEVIHAERMKNADKLLKLQLDLGGEKRQVISGIAEFYKPEELVGKKVICVANLKPAKLRGEWSEGMILAGGSGGEFSLATVDQHVPNGTKIK
配列番号51
DNA
Phe-aRS-GsPhe-aRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAAAGAACGCCTGTATGAACTGAAACGTCAGGCACTGGAACAAATTGGTCAGGCACGTGATCTGCGTATGCTGAATGATGTTCGTGTTGCATATCTGGGTAAAAAAGGTCCGATTACCGAAGTTCTGCGTGGTATGGGTGCACTGCCTCCGGAAGAACGTCCGAAAATTGGTGCACTGGCAAATGAAGTTCGTGAAGCAATTCAGCAGGCCCTGGAAGCAAAACAGGCAAAACTTGAACAAGAAGAAGTGGAACGTAAACTGGCAGCCGAAGCAATTGATGTTACCCTGCCTGGTCGTCCGGTTAGCCTGGGTAATCCGCATCCGCTGACACGTGTTATTGAAGAAATTGAGGACCTGTTTATTGGCATGGGTTATACCGTTGCAGAAGGTCCGGAAGTTGAAACCGATTATTACAATTTTGAAGCCCTGAATCTGCCGAAAGGTCATCCGGCACGCGATATGCAGGATAGCTTTTATATCACCGAAGAAATTCTGCTGCGTACCCATACCTCACCGATGCAGGCACGTACCATGGAAAAACATCGTGGTCGTGGTCCGGTTAAAATCATTTGTCCGGGTAAAGTTTATCGTCGCGATACCGATGATGCAACCCATAGCCATCAGTTTACACAGATTGAAGGTCTGGTTGTGGATCGTAATATTCGTATGAGCGATCTGAAAGGCACCCTGCGTGAATTTGCCCGTAAACTGTTTGGTGAAGGTCGTGATATTCGTTTTCGTCCGAGCTTTTTTCCGTTTACCGAACCGAGCGTTGAAGTTGATGTTAGCTGTTTTCGTTGTGAAGGCCGTGGTTGCGGTGTTTGTAAAGGCACCGGTTGGATTGAAATTTTAGGTGCAGGTATGGTTCATCCGAATGTTCTGGAAATGGCAGGTTTTGATAGTAAAACCTATACCGGTTTTGCATTCGGTATGGGTCCTGAACGTATTGCAATGCTGAAATATGGCATTGATGATATCCGCCACTTCTATCAGAATGATCTGCGCTTTCTGCGTCAGTTTCTGCGTGTTTAA
配列番号52
アミノ酸
Phe-aRS-GsPhe-aRS-EcOpt
Geobacillus
MKERLYELKRQALEQIGQARDLRMLNDVRVAYLGKKGPITEVLRGMGALPPEERPKIGALANEVREAIQQALEAKQAKLEQEEVERKLAAEAIDVTLPGRPVSLGNPHPLTRVIEEIEDLFIGMGYTVAEGPEVETDYYNFEALNLPKGHPARDMQDSFYITEEILLRTHTSPMQARTMEKHRGRGPVKIICPGKVYRRDTDDATHSHQFTQIEGLVVDRNIRMSDLKGTLREFARKLFGEGRDIRFRPSFFPFTEPSVEVDVSCFRCEGRGCGVCKGTGWIEILGAGMVHPNVLEMAGFDSKTYTGFAFGMGPERIAMLKYGIDDIRHFYQNDLRFLRQFLRV
配列番号53
DNA
Phe-bRS-GsPhe-bRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGCTGGTTAGCTATCGTTGGCTGGGTGAATATGTTGATCTGACCGGTATTACCGCAAAAGAACTGGCAGAACGTATTACCAAAAGCGGTATTGAAGTTGAACGTGTTGAAGCACTGGATCGTGGTATGAATGGTGTTGTTATTGGTCATGTTCTGGAATGTGAACCGCATCCGAATGCAGATAAACTGCGTAAATGTCTGGTTGATTTAGGTGAAGGTGAACCGGTGCGTATTATTTGTGGTGCACCGAATGTTGCAAAAGGTCAGAAAGTTGCAGTTGCCAAAGTTGGTGCAGTTCTGCCTGGTAACTTTAAAATCAAACGTGCAAAACTGCGTGGCGAAGAAAGCAATGGTATGATTTGTAGCCTGCAAGAACTGGGTGTTGAAACCAAAGTTGTTCCGAAAGAATATGCCGATGGCATTTTTGTTTTTCCGAGTGATGCACCGGTTGGTGCCGATGCACTGGAATGGCTGGGTCTGCATGATGAAGTTCTGGAACTGGCACTGACCCCGAATCGTGCAGATTGTCTGAGCATGATTGGTGTTGCCTATGAAGTTGCAGCAATTCTGGGTCGTGATGTTAAACTGCCGGAAGCAGCAGTTAAAGAAAATAGCGAACATGTGCACGAATATATCAGCGTTCGTGTGGAAGCACCGGAAGATAATCCGCTGTATGCAGGTCGTATTGTTAAAAATGTTCGTATTGGTCCGAGTCCGCTGTGGATGCAGGCACGTCTGATGGCAGCAGGTATTCGTCCGCATAATAATGTTGTTGACATCACCAACTATATCCTGCTGGAATATGGTCAGCCGCTGCATGCATTTGATTATGATCGTCTGGGTAGCAAAGAAATTGTTGTTCGTCGTGCAAAAGCCGGTGAAACCATTATTACCCTGGATGATGTTGAACGTAAACTGACCGAAAATCATCTGGTGATTACCAATGGTCGCGAACCGGTTGCACTGGCAGGCGTTATGGGTGGTGCCAATAGCGAAGTTCGTGATGATACCACCACCGTTTTTATTGAAGCAGCCTATTTCACCAGTCCGGTTATTCGTCAGGCCGTTAAAGATCATGGTCTGCGTAGCGAAGCGAGCACCCGTTTTGAAAAAGGTATTGATCCGGCACGTACCAAAGAGGCCCTGGATCGCGCAGCAGCACTGATGAGCGAATATGCAGGCGGTGAAGTTGTTGGTGGTATTGTTGAAGCCAGCGTTTGGCGTCAGGATCCGGTTGTTGTTACCGTTACACTGGAACGCATTAATGGTGTTCTGGGCACCGCAATGACCAAAGAAGAAGTGGCTGCCATTCTGAGCAATCTGCAGTTTCCGTTTACCGAAGATAATGGCACCTTTACCATTCATGTTCCGAGCCGTCGTCGTGATATTGCAATTGAAGAAGATATTATTGAAGAGGCAGCCCGTCTGTATGGTTATGATCGCCTGCCTGCAACACTGCCGGTTGCCGAAGCAAAACCTGGTGGTCTGACACCGCATCAGGCAAAACGTCGTCGCGTTCGTCGTTATCTGGAAGGCACCGGTCTGTTTCAGGCAATTACCTATAGCCTGACCTCACCGGATAAAGCAACCCGCTTTGCCCTGGAAACCGCAGAACCGATTCGTCTGGCACTGCCGATGAGTGAAGAACGTAGCGTTCTGCGTCAGAGCCTGATTCCGCATCTGCTGGAAGCCGCAAGCTATAATCGTGCACGTCAGGTTGAAGATGTTGCCCTGTATGAAATTGGTAGCGTTTATCTGAGCAAAGGTGAACATGTACAGCCTGCAGAAAAAGAACGTTTAGCCGGTGTGCTGACAGGTCTGTGGCATGCACATCTGTGGCAGGGTGAAAAAAAAGCCGTTGATTTTTATGTGGCCAAAGGTATTCTGGATGGTCTGTTTGATCTGCTGGGTTTAGCAGCACGTATTGAATATAAACCGGCAAAACGCGCTGATCTGCATCCGGGTCGTACCGCAGATATTGTGCTGGATGGCCGTGTGATTGGTTTTGTTGGTCAGCTGCATCCTGCAGTTCAGAAAGAGTATGATCTGAAAGAAACCTATGTGTTTGAGCTGGCCCTGACCGATCTGCTGAATGCAGAAAGCGAAGCAATTCGTTATGAACCTATTCCGCGTTTTCCGAGCGTTGTGCGCGACATTGCACTGGTTGTTGATGAAAATGTTGAAGCGGGTGCACTGAAACAGGCAATCGAAGAAGCAGGTAAACCGCTGGTTAAAGATGTTAGCCTGTTCGATGTTTATAAAGGCGATCGTCTGCCGGATGGTAAAAAAAGTCTGGCATTTAGCCTGCGTTATTATGATCCGGAACGCACCCTGACAGATGAAGAGGTTGCAGCAGTGCATGAACGTGTGCTGGCAGCAGTTGAAAAACAGTTTGGTGCCGTGCTGCGTGGTTAA
配列番号54
アミノ酸
Phe-bRS-GsPhe-bRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MLVSYRWLGEYVDLTGITAKELAERITKSGIEVERVEALDRGMNGVVIGHVLECEPHPNADKLRKCLVDLGEGEPVRIICGAPNVAKGQKVAVAKVGAVLPGNFKIKRAKLRGEESNGMICSLQELGVETKVVPKEYADGIFVFPSDAPVGADALEWLGLHDEVLELALTPNRADCLSMIGVAYEVAAILGRDVKLPEAAVKENSEHVHEYISVRVEAPEDNPLYAGRIVKNVRIGPSPLWMQARLMAAGIRPHNNVVDITNYILLEYGQPLHAFDYDRLGSKEIVVRRAKAGETIITLDDVERKLTENHLVITNGREPVALAGVMGGANSEVRDDTTTVFIEAAYFTSPVIRQAVKDHGLRSEASTRFEKGIDPARTKEALDRAAALMSEYAGGEVVGGIVEASVWRQDPVVVTVTLERINGVLGTAMTKEEVAAILSNLQFPFTEDNGTFTIHVPSRRRDIAIEEDIIEEAARLYGYDRLPATLPVAEAKPGGLTPHQAKRRRVRRYLEGTGLFQAITYSLTSPDKATRFALETAEPIRLALPMSEERSVLRQSLIPHLLEAASYNRARQVEDVALYEIGSVYLSKGEHVQPAEKERLAGVLTGLWHAHLWQGEKKAVDFYVAKGILDGLFDLLGLAARIEYKPAKRADLHPGRTADIVLDGRVIGFVGQLHPAVQKEYDLKETYVFELALTDLLNAESEAIRYEPIPRFPSVVRDIALVVDENVEAGALKQAIEEAGKPLVKDVSLFDVYKGDRLPDGKKSLAFSLRYYDPERTLTDEEVAAVHERVLAAVEKQFGAVLRG
配列番号55
DNA
ProRS-GsProRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGCGTCAGAGCCAGGCATTTATTCCGACACTGCGTGAAGTTCCGGCAGATGCAGAAGTTAAAAGCCATCAGCTGCTGCTGCGTGCAGGTTTTATTCGTCAGAGCGCAAGCGGTGTTTATACCTTTCTGCCGCTGGGTCAGCGTGTGCTGCAGAAAGTTGAAGCAATTATTCGCGAAGAAATGAATCGTATTGGTGCCATGGAACTGTTTATGCCTGCACTGCAGCCTGCAGAACTGTGGCAGCAGAGCGGTCGTTGGTATAGCTATGGTCCGGAACTGATGCGTCTGAAAGATCGTCATGAACGTGATTTTGCACTGGGTCCGACACATGAAGAGATGATTACCGCAATTGTTCGTGATGAGGTGAAAACCTATAAACGTCTGCCTCTGGTTCTGTATCAGATCCAGACCAAATTCCGTGATGAAAAACGTCCGCGTTTTGGTCTGTTACGTGGTCGTGAATTTATGATGAAAGATGCCTATAGCTTCCATACCAGCAAAGAAAGCCTGGATGAAACCTACAACAATATGTATGAAGCCTACGCCAACATTTTTCGTCGTTGCGGTCTGAATTTTCGTGCAGTTATTGCAGATAGCGGTGCAATTGGTGGTAAAGATACCCACGAATTCATGGTTCTGAGCGATATTGGTGAAGATACCATTGCATATAGTGATGCAAGCGATTATGCAGCCAATATTGAAATGGCACCGGTTGTTGCAACCTATGAAAAAAGTGATGAACCTCCGGCAGAACTGAAGAAAGTTGCCACACCGGGTCAGAAAACCATTGCCGAAGTTGCAAGCCATCTGCAAATTAGTCCGGAACGTTGTATTAAAAGCCTGCTGTTTAATGTGGATGGTCGTTATGTTCTGGTGCTGGTTCGTGGTGATCATGAAGCAAATGAAGTGAAAGTGAAAAATGTGCTGGATGCCACCGTTGTTGAACTGGCAAAACCGGAAGAAACCGAACGTGTTATGAATGCACCGATTGGTAGCCTGGGTCCTATTGGTGTTAGCGAAGATGTTACCGTTATTGCCGATCATGCAGTTGCAGCAATTGTTAATGGTGTTTGTGGTGCCAATGAAGAGGGCTATCATTACATTGGTGTGAATCCGGGTCGCGATTTTGCAGTTAGCCAGTATGCCGATCTGCGTTTTGTTAAAGAAGGTGATCCGAGTCCGGATGGTAAAGGCACCATTCGTTTTGCACGTGGTATTGAAGTTGGCCATGTTTTTAAACTGGGCACCAAATATAGCGAAGCCATGAATGCAGTTTATCTGGATGAGAATGGTCAGACCCAGACAATGATTATGGGTTGTTATGGTATTGGCGTTAGCCGTCTGGTTGCAGCCATTGCAGAACAGTTTGCCGATGAACATGGTCTGGTTTGGCCTGCAAGCGTTGCACCGTTTCATATTCATCTGCTGACCGCAAATGCCAAATCAGATGAACAGCGTGCACTGGCCGAAGAATGGTATGAAAAACTGGGTCAAGCAGGTTTTGAAGTGCTGTATGATGATCGTCCAGAACGTGCCGGTGTTAAATTTGCCGATAGCGATCTGATTGGTATTCCGCTGCGTGTTACCGTGGGTAAACGTGCAGGCGAAGGTGTTGTTGAAGTTAAAGTTCGTAAAACCGGTGAAACCTTTGATGTTCCGGTTAGCGAACTGGTTGATACCGCACGTCGTCTGCTGCAGAGCTAA
配列番号56
アミノ酸
ProRS-GsProRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MRQSQAFIPTLREVPADAEVKSHQLLLRAGFIRQSASGVYTFLPLGQRVLQKVEAIIREEMNRIGAMELFMPALQPAELWQQSGRWYSYGPELMRLKDRHERDFALGPTHEEMITAIVRDEVKTYKRLPLVLYQIQTKFRDEKRPRFGLLRGREFMMKDAYSFHTSKESLDETYNNMYEAYANIFRRCGLNFRAVIADSGAIGGKDTHEFMVLSDIGEDTIAYSDASDYAANIEMAPVVATYEKSDEPPAELKKVATPGQKTIAEVASHLQISPERCIKSLLFNVDGRYVLVLVRGDHEANEVKVKNVLDATVVELAKPEETERVMNAPIGSLGPIGVSEDVTVIADHAVAAIVNGVCGANEEGYHYIGVNPGRDFAVSQYADLRFVKEGDPSPDGKGTIRFARGIEVGHVFKLGTKYSEAMNAVYLDENGQTQTMIMGCYGIGVSRLVAAIAEQFADEHGLVWPASVAPFHIHLLTANAKSDEQRALAEEWYEKLGQAGFEVLYDDRPERAGVKFADSDLIGIPLRVTVGKRAGEGVVEVKVRKTGETFDVPVSELVDTARRLLQS
配列番号57
DNA
SerRS-GsSerRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGCTGGATGTGAAAATTCTGCGTACCCAGTTTGAAGAGGTGAAAGAAAAACTGATGCAGCGTGGTGGTGATCTGACCAATATTGATCGTTTTGAACAGCTGGATAAAGATCGTCGTCGTCTGATTGCAGAAGTTGAAGAACTGAAAAGCAAACGCAATGATGTTAGCCAGCAGATTGCAGTTCTGAAACGCGAAAAAAAAGATGCAGAACCGCTGATTGCACAGATGCGTGAAGTTGGTGATCGTATTAAACGTATGGATGAGCAGATTCGTCAGCTGGAAGCAGAACTGGATGATCTGCTGCTGAGCATTCCGAATGTTCCGCATGAAAGCGTTCCGATTGGCCAGAGCGAAGAAGATAACGTTGAAGTTCGTCGTTGGGGTGAACCGCGTAGCTTTAGCTTTGAACCGAAACCGCATTGGGAAATTGCAGATCGTCTGGGTCTGCTGGATTTTGAACGTGCAGCAAAAGTTGCAGGTAGCCGTTTTGTTTTCTATAAAGGTCTGGGTGCACGTCTGGAACGTGCACTGATTAACTTTATGCTGGATATTCACCTGGATGAGTTTGGCTATGAAGAAGTTCTGCCTCCGTATCTGGTTAATCGTGCAAGCATGATTGGCACCGGTCAGCTGCCGAAATTTGCAGAAGATGCATTTCATCTGGATAGCGAGGATTATTTTCTGATTCCGACCGCAGAAGTTCCGGTTACCAATCTGCATCGTGATGAAATTCTGGCAGCAGATGACCTGCCGATCTATTATGCAGCATATAGCGCATGTTTTCGTGCAGAAGCAGGTAGCGCAGGTCGTGATACCCGTGGTCTGATTCGCCAGCATCAGTTCAATAAAGTTGAACTGGTGAAATTCGTGAAGCCGGAAGATAGCTATGATGAACTGGAAAAGCTGACCCGTCAGGCAGAAACCATTCTGCAGCGTCTGGGCCTGCCGTATCGTGTTGTTGCACTGTGTACCGGTGATCTGGGTTTTAGCGTTGCAAAAACCTATGATATTGAAGTTTGGCTGCCGAGCTATGGCACCTATCGTGAAATTAGCAGCTGTAGCAATTTTGAAGCATTTCAGGCACGTCGTGCCAATATTCGTTTTCGTCGTGATCCGAAAGCAAAACCGGAATATGTTCATACCCTGAATGGTAGCGGTCTGGCAATTGGTCGTACCGTTGCAGCAATTCTGGAAAATTATCAGCAAGAAGATGGCAGCGTTATTGTTCCGGAAGCACTGCGTCCGTATATGGGCAATCGTGATGTTATTCGTTAA
配列番号58
アミノ酸
SerRS-GsSerRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MLDVKILRTQFEEVKEKLMQRGGDLTNIDRFEQLDKDRRRLIAEVEELKSKRNDVSQQIAVLKREKKDAEPLIAQMREVGDRIKRMDEQIRQLEAELDDLLLSIPNVPHESVPIGQSEEDNVEVRRWGEPRSFSFEPKPHWEIADRLGLLDFERAAKVAGSRFVFYKGLGARLERALINFMLDIHLDEFGYEEVLPPYLVNRASMIGTGQLPKFAEDAFHLDSEDYFLIPTAEVPVTNLHRDEILAADDLPIYYAAYSACFRAEAGSAGRDTRGLIRQHQFNKVELVKFVKPEDSYDELEKLTRQAETILQRLGLPYRVVALCTGDLGFSVAKTYDIEVWLPSYGTYREISSCSNFEAFQARRANIRFRRDPKAKPEYVHTLNGSGLAIGRTVAAILENYQQEDGSVIVPEALRPYMGNRDVIR
配列番号59
DNA
ThrRS-GsThrRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGCCGGATGTTATTCGTATTACCTTTCCGGATGGTGCCGAAAAAGAATTTCCGAAAGGCACCACCACCGAAGATGTTGCAGCAAGCATTAGTCCGGGTCTGAAAAAAAAGGCAATTGCGGGTAAACTGAATGGTCGTTTTGTTGATCTGCGTACACCGCTGCATGAAGATGGTGAACTGGTGATTATTACCCAGGATATGCCGGAAGCACTGGATATTCTGCGTCATAGCACCGCACATCTGATGGCACAGGCAATTAAACGTCTGTATGGCAATGTGAAATTAGGTGTTGGTCCGGTGATTGAAAACGGCTTCTATTATGATATCGACATGGAACATAAACTGACACCGGATGATCTGCCGAAAATTGAAGCAGAAATGCGCAAAATCGTGAAAGAGAACCTGGATATTGTTCGCAAAGAAGTTAGTCGCGAAGAGGCAATTCGCCTGTATGAAGAAATTGGTGATGAACTGAAACTGGAACTGATTGCAGATATTCCGGAAGGTGAACCGATTAGCATTTATGAACAGGGCGAATTTTTTGATCTGTGCCGTGGTGTTCATGTTCCGAGCACCGGTAAAATCAAAGAATTTAAACTGCTGAGCATCAGCGGTGCATATTGGCGTGGTGATAGCAATAACAAAATGCTGCAGCGTATTTATGGCACCGCGTTTTTCAAAAAAGAAGATCTGGATCGTTATCTGCGTCTGCTGGAAGAAGCAAAAGAACGCGATCATCGTAAACTGGGTAAAGAGCTGGAACTGTTTACCACCAGTCAGCAGGTTGGTCAGGGTCTGCCGCTGTGGCTGCCGAAAGGTGCAACCATTCGTCGTATTATTGAACGCTATATCGTGGATAAAGAAGTTGCACTGGGTTACGATCATGTTTATACACCGGTTCTGGGTAGCGTTGAACTGTATAAAACCAGCGGTCATTGGGATCACTACAAAGAAAATATGTTTCCGCCTATGGAAATGGACAATGAAGAACTGGTTCTGCGTCCGATGAATTGTCCGCATCACATGATGATCTATAAAAGCAAACTGCACAGCTATCGTGAACTGCCGATTCGTATTGCAGAACTGGGCACCATGCATCGTTATGAAATGAGCGGTGCACTGACCGGTCTGCAGCGTGTTCGTGGTATGACCCTGAATGATGCACATATCTTTGTTCGTCCGGATCAGATCAAAGATGAATTCAAACGTGTGGTGAACCTGATCCTGGAAGTGTATAAAGATTTTGGCATCGAAGAATACAGCTTCCGTCTGAGTTATCGTGATCCGCATGATAAAGAAAAATACTATGATGACGATGAAATGTGGGAAAAAGCACAGCGTATGCTGCGTGAAGCAATGGATGAATTAGGTCTGGATTATTATGAAGCCGAAGGTGAAGCAGCCTTTTATGGTCCGAAACTGGATGTTCAGGTTCGTACCGCACTGGGAAAAGATGAAACCCTGAGCACCGTTCAGCTGGATTTTCTGCTGCCGGAACGTTTCGATCTGACCTATATTGGTGAAGATGGCAAACCGCATCGTCCGGTTGTTATTCATCGTGGTGTTGTTAGCACCATGGAACGTTTTGTGGCATTTCTGATCGAAGAGTATAAAGGTGCATTTCCGACCTGGCTGGCACCGGTTCAGGTTAAAGTTATTCCGGTTAGTCCGGAAGCGCACCTGGATTATGCATATGATGTTCAGCGTACCCTGAAAGAACGTGGTTTTCGTGTTGAAGTTGATGAACGCGACGAAAAAATCGGCTATAAAATCCGTGAAGCACAGATGCAGAAAATCCCGTATATGCTGGTTGTTGGTGATAAAGAGGTTAGCGAACGCGCAGTTAATGTTCGTCGTTATGGTGAAAAAGAAAGCCGTACCATGGGCCTTGATGAATTTATGGCCCTGCTGGCAGATGATGTTCGTGAAAAACGTACCCGTCTGGGCAAAGCACAGTAA
配列番号60
アミノ酸
ThrRS-GsThrRS-EcOpt
Geobacillus
MPDVIRITFPDGAEKEFPKGTTTEDVAASISPGLKKKAIAGKLNGRFVDLRTPLHEDGELVIITQDMPEALDILRHSTAHLMAQAIKRLYGNVKLGVGPVIENGFYYDIDMEHKLTPDDLPKIEAEMRKIVKENLDIVRKEVSREEAIRLYEEIGDELKLELIADIPEGEPISIYEQGEFFDLCRGVHVPSTGKIKEFKLLSISGAYWRGDSNNKMLQRIYGTAFFKKEDLDRYLRLLEEAKERDHRKLGKELELFTTSQQVGQGLPLWLPKGATIRRIIERYIVDKEVALGYDHVYTPVLGSVELYKTSGHWDHYKENMFPPMEMDNEELVLRPMNCPHHMMIYKSKLHSYRELPIRIAELGTMHRYEMSGALTGLQRVRGMTLNDAHIFVRPDQIKDEFKRVVNLILEVYKDFGIEEYSFRLSYRDPHDKEKYYDDDEMWEKAQRMLREAMDELGLDYYEAEGEAAFYGPKLDVQVRALGKDETLSTVQLDFLLPERFDLTYIGEDGKPHRPVVIHRGVVSTMERFVAFLIEEYKGAFPTWLAPVQVKVIPVSPEAHLDYAYDVQRTLKERGFRVEVDERDEKIGYKIREAQMQKIPYMLVVGDKEVSERAVNVRRYGEKESRTMGLDEFMALLADDVREKRTRLGKAQ
配列番号61
DNA
TrpRS-GsTrpRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGAAAACCATCTTTAGCGGTATTCAGCCGAGCGGTGTTATTACCCTGGGTAACTATATTGGTGCACTGCGTCAGTTTATTGAACTGCAGCATGAATATAACTGCTATTTCTGCATTGTTGATCAGCATGCAATTACCGTTTGGCAGGATCCGCATGAACTGCGCCAGAATATTCGTCGTCTGGCAGCACTGTATCTGGCAGTTGGTATTGATCCGACACAGGCAACCCTGTTTATTCAGAGCGAAGTTCCGGCACATGCACAGGCAGCATGGATGCTGCAATGTATTGTTTATATTGGCGAACTGGAACGCATGACCCAGTTTAAAGAAAAAAGCGCAGGTAAAGAAGCAGTTAGCGCAGGTCTGCTGACCTATCCGCCTCTGATGGCAGCCGATATTCTGCTGTATAACACCGATATTGTTCCGGTTGGTGATGATCAGAAACAGCATATCGAACTGACCCGTGATCTGGCAGAACGTTTTAACAAACGTTATGGTGAGCTGTTTACCATTCCGGAAGCACGTATTCCGAAAGTTGGTGCACGTATTATGAGCCTGGTGGATCCGACCAAAAAAATGAGCAAAAGCGATCCGAATCCGAAAGCCTATATTACACTGCTGGATGATGCAAAAACCATCGAGAAAAAAATCAAAAGTGCCGTGACCGATAGCGAAGGCACCATTCGTTATGATAAAGAAGCCAAACCGGGTATTAGCAACCTGCTGAACATTTATAGCACCCTGAGCGGTCAGAGCATTGAAGAATTAGAACGTAAATATGAAGGCAAAGGCTACGGTGTTTTTAAAGCAGATCTGGCACAGGTTGTTATTGAAACCCTGCGTCCGATTCAAGAACGTTATCATCATTGGATGGAAAGCGAAGAACTGGATCGTGTTCTGGATGAAGGTGCAGAAAAAGCAAATCGTGTTGCAAGCGAAATGGTGCGTAAAATGGAACAGGCAATGGGTCTGGGTCGTCGTCGTTAA
配列番号62
アミノ酸
TrpRS-GsTrpRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MKTIFSGIQPSGVITLGNYIGALRQFIELQHEYNCYFCIVDQHAITVWQDPHELRQNIRRLAALYLAVGIDPTQATLFIQSEVPAHAQAAWMLQCIVYIGELERMTQFKEKSAGKEAVSAGLLTYPPLMAADILLYNTDIVPVGDDQKQHIELTRDLAERFNKRYGELFTIPEARIPKVGARIMSLVDPTKKMSKSDPNPKAYITLLDDAKTIEKKIKSAVTDSEGTIRYDKEAKPGISNLLNIYSTLSGQSIEELERKYEGKGYGVFKADLAQVVIETLRPIQERYHHWMESEELDRVLDEGAEKANRVASEMVRKMEQAMGLGRRR
配列番号63
DNA
TyrRS-GsTyrRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGATCTGCTGGCAGAACTGCAGTGGCGTGGTCTGGTGAATCAGACCACCGATGAAGATGGTCTGCGTGAACTGCTGAAAGAAGAACGCGTTACCCTGTATTGTGGTTTTGATCCGACCGCAGATAGCCTGCATATTGGTAATCTGGCAGCAATTCTGACCCTGCGTCGTTTTCAGCAGGCAGGTCATCAGCCGATTGCACTGGTTGGTGGTGCAACCGGTCTGATTGGTGATCCGAGCGGTAAAAAAAGCGAACGTACCCTGAATGCAAAAGAAACCGTTGAAGCATGGTCAGCACGTATTCAAGAACAGCTGAGCCGTTTTCTGGATTTTGAAGCACATGGTAATCCGGCAAAAATCAAGAACAACTATGATTGGATTGGTCCGCTGGATGTTATTACCTTTCTGCGTGATGTTGGCAAACATTTCAGCGTGAATTATATGATGGCCAAAGAAAGCGTTCAGAGCCGTATTGAAACCGGTATTAGCTTTACCGAATTCAGCTATATGATGCTGCAGGCCTATGATTTTCTGCGTCTGTATGAAACCGAAGGTTGTCGTCTGCAGATTGGTGGTAGCGATCAGTGGGGCAATATTACCGCAGGTCTGGAACTGATTCGTAAAACCAAAGGTGAAGCACGTGCATTTGGTCTGACCATTCCGCTGGTTACCAAAGCAGATGGTACAAAATTTGGTAAAACCGAAAGCGGCACCATTTGGCTGGATAAAGAAAAAACCAGTCCGTATGAGTTCTACCAGTTTTGGATTAATACCGATGATCGTGATGTGATCCGCTACCTGAAATACTTTACATTTCTGAGCAAAGAAGAGATCGAAGCCTTTGAACAAGAACTGCGTGAAGCACCGGAAAAACGTGCAGCACAGAAAGCACTGGCAGAAGAAGTTACCAAACTGGTTCATGGTGAAGAAGCACTGCGTCAGGCAGTTCGTATTAGCGAAGCACTGTTTAGCGGTGATATTGGCAACCTGACCGCAGCAGAAATTGAACAGGGTTTTAAAGATGTTCCGAGCTTTGTTCATGAAGGTGGTGATGTGCCGCTGGTCGAACTGCTGGTTAGCGCAGGTATTAGCCCGAGCAAACGTCAGGCACGTGAAGATATTCAGAATGGTGCCATTTATGTGAATGGTGAACGTCTGCAGGATGTTGGTGCGATTCTGACAGCAGAACATCGTCTGGAAGGTCGTTTTACCGTTATTCGTCGTGGCAAAAAAAAGTATTACCTGATTCGCTATGCCTAA
配列番号64
アミノ酸
TyrRS-GsTyrRS-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MDLLAELQWRGLVNQTTDEDGLRELLKEERVTLYCGFDPTADSLHIGNLAAILTLRRFQQAGHQPIALVGGATGLIGDPSGKKSERTLNAKETVEAWSARIQEQLSRFLDFEAHGNPAKIKNNYDWIGPLDVITFLRDVGKHFSVNYMMAKESVQSRIETGISFTEFSYMMLQAYDFLRLYETEGCRLQIGGSDQWGNITAGLELIRKTKGEARAFGLTIPLVTKADGTKFGKTESGTIWLDKEKTSPYEFYQFWINTDDRDVIRYLKYFTFLSKEEIEAFEQELREAPEKRAAQKALAEEVTKLVHGEEALRQAVRISEALFSGDIGNLTAAEIEQGFKDVPSFVHEGGDVPLVELLVSAGISPSKRQAREDIQNGAIYVNGERLQDVGAILTAEHRLEGRFTVIRRGKKKYYLIRYA
配列番号65
DNA
ValRS-GsValRS-EcOpt
Geobacillus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGGCACAGCATGAAGTTAGCATGCCTCCGAAATATGATCATCGTGCAGTTGAAGCAGGTCGTTATGAATGGTGGCTGAAAGGTAAATTCTTTGAAGCAACCGGTGATCCGAATAAACGTCCGTTTACCATTGTTATTCCGCCTCCGAATGTGACCGGTAAACTGCATCTGGGTCATGCATGGGATACCACACTGCAGGATATTATCACCCGTATGAAACGTATGCAGGGTTATGATGTTCTGTGGCTGCCTGGTATGGATCATGCAGGTATTGCAACCCAGGCAAAAGTTGAAGAAAAACTGCGTCAGCAGGGTCTGAGCCGTTATGATCTGGGTCGTGAAAAATTTCTGGAAGAAACCTGGAAATGGAAAGAAGAATACGCAGGTCATATTCGTAGCCAGTGGGCAAAATTAGGTCTGGGTTTAGATTATACCCGTGAACGTTTTACCCTGGATGAAGGTCTGAGCAAAGCAGTTCGTGAAGTTTTTGTTAGCCTGTATCGTAAAGGTCTGATTTATCGCGGTGAGTATATCATTAATTGGGACCCTGTTACCAAAACCGCACTGAGCGATATTGAAGTGGTTTACAAAGAAGTTAAAGGCGCACTGTATCATCTGCGTTATCCGCTGGCAGATGGTAGCGGTTGTATTGAAGTTGCAACCACACGTCCGGAAACCATGCTGGGTGATACCGCAGTTGCAGTTCATCCTGATGATGAACGTTATAAACATCTGATCGGCAAAATGGTGAAACTGCCGATTGTTGGTCGCGAAATTCCGATTATTGCAGATGAATATGTGGACATGGAATTTGGTAGTGGTGCCGTGAAAATTACACCGGCACATGATCCGAACGATTTTGAAATTGGTAATCGCCATAATCTGCCTCGTATTCTGGTGATGAATGAAGATGGCACCATGAATGAAAATGCCATGCAGTATCAAGGTCTGGATCGTTTTGAATGCCGTAAACAAATTGTTCGCGATCTGCAAGAACAGGGTGTTCTGTTTAAAATCGAAGAACATGTGCATAGCGTTGGTCATAGCGAACGTAGCGGTGCAGTTATTGAACCGTATCTGAGCACCCAGTGGTTTGTTAAAATGAAACCGCTGGCCGAAGCAGCAATTAAACTGCAGCAGACCGATGGTAAAGTTCAGTTTGTGCCGGAACGCTTTGAAAAAACCTATCTGCATTGGCTGGAAAACATTCGTGATTGGTGTATTAGCCGTCAGCTGTGGTGGGGTCATCGTATTCCGGCATGGTATCATAAAGAAACCGGTGAAATTTATGTGGATCACGAACCGCCTAAAGATATCGAAAATTGGGAACAAGATCCGGATGTTCTGGATACCTGGTTTAGCAGCGCACTGTGGCCGTTTAGCACCATGGGTTGGCCTGATGTTGAAAGTCCGGATTATAAACGTTATTATCCGACCGATGTGCTGGTTACCGGTTATGATATTATCTTTTTTTGGGTGAGCCGCATGATTTTTCAAGGCCTGGAATTTACCGGCAAACGCCCTTTTAAAGATGTTCTGATTCATGGTCTGGTGCGTGATGCACAGGGTCGTAAAATGAGCAAAAGCTTAGGTAATGGTGTTGATCCGATGGATGTGATTGATCAGTATGGTGCAGATGCACTGCGTTATTTTCTGGCAACCGGTAGCAGCCCTGGTCAGGATCTGCGTTTTAGCACCGAAAAAGTGGAAGCAACGTGGAATTTTGCCAACAAAATTTGGAATGCAAGCCGTTTTGCACTGATGAACATGGGTGGTATGACCTATGAAGAACTGGATCTGAGCGGTGAAAAAACAGTTGCGGATCATTGGATTCTGACCCGTCTGAATGAAACCATTGATACCGTTACCAAACTGGCCGAAAAATATGAATTTGGTGAAGCCGGTCGTACCCTGTATAACTTTATTTGGGATGATCTGTGCGATTGGTATATCGAAATGGCAAAACTGCCGCTGTATGGTGATGATGAGGCAGCAAAAAAAACAACCCGTAGCGTTCTGGCATATGTGCTGGATAATACCATGCGCCTGCTGCATCCGTTTATGCCGTTTATTACCGAAGAAATTTGGCAGAATCTGCCGCATGAAGGTGAAAGCATTACCGTTGCACCGTGGCCTCAGGTTCGTCCGGAACTGAGCAATGAAGAGGCAGCGGAAGAAATGCGTATGCTGGTTGATATTATTCGTGCCGTTCGTAATGTTCGTGCCGAAGTTAATACCCCTCCGAGCAAACCGATTGCACTGTATATCAAAGTTAAAGACGAACAGGTTCGTGCAGCCCTGATGAAAAATCGTGCATATCTGGAACGTTTTTGCAATCCGAGCGAACTGCTGATTGATACCAATGTTCCTGCACCGGATAAAGCAATGACCGCAGTGGTGACCGGTGCAGAACTGATTATGCCGCTGGAAGGCCTGATTAACATTGAAGAAGAAATTAAACGCCTGGAAAAAGAACTTGATAAATGGAACAAAGAGGTGGAACGCGTCGAAAAAAAACTGGCAAATGAAGGTTTTCTGGCCAAAGCACCAGCGCATGTTGTGGAAGAAGAACGTCGTAAACGTCAGGATTACATGGAAAAACGTGAAGCAGTTAAAGCACGTCTGGCCGAACTGAAACGTTAA
配列番号66
アミノ酸
ValRS-GsValRS-EcOpt
Geobacillus
MAQHEVSMPPKYDHRAVEAGRYEWWLKGKFFEATGDPNKRPFTIVIPPPNVTGKLHLGHAWDTTLQDIITRMKRMQGYDVLWLPGMDHAGIATQAKVEEKLRQQGLSRYDLGREKFLEETWKWKEEYAGHIRSQWAKLGLGLDYTRERFTLDEGLSKAVREVFVSLYRKGLIYRGEYIINWDPVTKTALSDIEVVYKEVKGALYHLRYPLADGSGCIEVATTRPETMLGDTAVAVHPDDERYKHLIGKMVKLPIVGREIPIIADEYVDMEFGSGAVKITPAHDPNDFEIGNRHNLPRILVMNEDGTMNENAMQYQGLDRFECRKQIVRDLQEQGVLFKIEEHVHSVGHSERSGAVIEPYLSTQWFVKMKPLAEAAIKLQQTDGKVQFVPERFEKTYLHWLENIRDWCISRQLWWGHRIPAWYHKETGEIYVDHEPPKDIENWEQDPDVLDTWFSSALWPFSTMGWPDVESPDYKRYYPTDVLVTGYDIIFFWVSRMIFQGLEFTGKRPFKDVLIHGLVRDAQGRKMSKSLGNGVDPMDVIDQYGADALRYFLATGSSPGQDLRFSTEKVEATWNFANKIWNASRFALMNMGGMTYEELDLSGEKTVADHWILTRLNETIDTVTKLAEKYEFGEAGRTLYNFIWDDLCDWYIEMAKLPLYGDDEAAKKTTRSVLAYVLDNTMRLLHPFMPFITEEIWQNLPHEGESITVAPWPQVRPELSNEEAAEEMRMLVDIIRAVRNVRAEVNTPPSKPIALYIKVKDEQVRAALMKNRAYLERFCNPSELLIDTNVPAPDKAMTAVVTGAELIMPLEGLINIEEEIKRLEKELDKWNKEVERVEKKLANEGFLAKAPAHVVEEERRKRQDYMEKREAVKARLAELKR
配列番号67
DNA
MTF-GsMTF-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus(大腸菌(E.coli)のためにコドン最適化)
ATGACCAACATTGTGTTTATGGGCACACCGGATTTTGCAGTTCCGATTCTGCGTCAGCTGCTGCATGATGGTTATCGTGTTGCAGCAGTTGTTACCCAGCCGGATAAACCGAAAGGTCGTAAACGTGAACCTGTTCCGCCTCCGGTTAAAGTTGAAGCAGAACGTCGTGGTATTCCGGTTCTGCAGCCGACCAAAATTCGTGAACCGGAACAGTATGAACAGGTGCTGGCATTTGCACCGGATCTGATTGTTACCGCAGCATTTGGTCAGATTCTGCCGAAAGCACTGCTGGATGCACCGAAATATGGTTGCATTAATGTTCATGCAAGCCTGCTGCCGGAACTGCGTGGTGGTGCACCGATTCATTATGCAATTTGGCAGGGTAAAACCAAAACCGGTGTTACCATTATGTATATGGTTGAACGTCTGGATGCCGGTGATATGCTGGCACAGGTTGAAGTGCCGATTGCAGAAACCGATACCGTTGGCACCCTGCATGATAAACTGAGCGCAGCGGGTGCAAAACTGCTGAGCGAAACCCTGCCGCTGCTGCTGGAAGGCAATATTACACCGGTTCCGCAGGATGAAGAAAAAGCAACCTATGCACCTAATATTCGTCGTGAACAAGAACGTATTGATTGGACCCAGCCTGGTGAAGCCATTTATAACCATATTCGTGCCTTTCATCCGTGGCCTGTTACCTATACCACACAGGATGGTCATATTTGGAAAGTTTGGTGGGGTGAAAAAGTTCCTGCACCGCGTAGCGCACCGCCTGGCACCATTCTGGCACTGGAAGAAAATGGTATTGTTGTTGCAACCGGTAATGAAACCGCAATTCGTATTACCGAACTGCAGCCTGCAGGTAAAAAACGTATGGCAGCCGGTGAATTTCTGCGTGGCGCAGGTAGCCGTCTGGCAGTTGGTATGAAACTGGGTGAAGATCATGAACGTACCTAA
配列番号68
アミノ酸
MTF-GsMTF-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MTNIVFMGTPDFAVPILRQLLHDGYRVAAVVTQPDKPKGRKREPVPPPVKVEAERRGIPVLQPTKIREPEQYEQVLAFAPDLIVTAAFGQILPKALLDAPKYGCINVHASLLPELRGGAPIHYAIWQGKTKTGVTIMYMVERLDAGDMLAQVEVPIAETDTVGTLHDKLSAAGAKLLSETLPLLLEGNITPVPQDEEKATYAPNIRREQERIDWTQPGEAIYNHIRAFHPWPVTYTTQDGHIWKVWWGEKVPAPRSAPPGTILALEENGIVVATGNETAIRITELQPAGKKRMAAGEFLRGAGSRLAVGMKLGEDHERT
配列番号69
DNA
IF-1-GsuIF-1
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGTTACTCATTCGAAGGAGGGAGAGCCGCTCGATGGCAAAAGACGATGTAATTGAAGTGGAAGGCACCGTCATTGAAACATTGCCAAATGCGATGTTTCGTGTAGAATTAGAAAATGGGCACACAGTATTGGCCCATGTGTCCGGCAAAATCCGTATGCACTTCATCCGCATTTTGCCTGGCGATAAAGTGACGGTGGAGTTGTCGCCGTATGATTTAACGCGTGGACGGATTACGTATCGATATAAA
配列番号70
アミノ酸
IF-1-GsuIF-1
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MLLIRRRESRSMAKDDVIEVEGTVIETLPNAMFRVELENGHTVLAHVSGKIRMHFIRILPGDKVTVELSPYDLTRGRITYRYK
配列番号71
DNA
IF-2-GsuIF-2
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGTGTCCCGCTTTGCAAAGTGCCGGACCGGTATACGCTCGGCGGCGCGATCGGCAAAGACGCCCGCGTCGTTGTCGCCGTCACCGACGAAGGGTTCGCGCGCCAATTGCAAACGATGCTCGACTGATCTTTATGGGGGTGAATGTATGTCGAAAATGCGTGTGTACGAATACGCCAAAAAACATAATGTGCCAAGCAAGGACGTTATTCATAAATTGAAAGAAATGAATATTGAAGTGAACAACCATATGACTATGCTCGAAGCCGATGTCGTCGAAAAGCTCGATCATCAATACCGCGTGAACTCAGAGAAAAAAGCGGAAAAGAAAACGGAGAAACCGAAGCGGCCGACGCCGGCGAAAGCCGCCGATTTTGCCGACGAGGAAATGTTTGAGGACAAGAAAGAAACGGCAAAGACGAAGCCGGCGAAGAAAAAGGGAGCAGTGAAAGGAAAGGAAACGAAAAAAACAGAAGCACAGCAGCAAGAAAAGAAACTGTTCCAAGCGGCGAAGAAAAAAGGAAAAGGACCGATGAAAGGCAAAAAACAAGCTGCCCCAGCCTCAAAGCAGGCGCAGCAGCCGGCGAAAAAAGAAAAAGAGCTCCCGAAAAAAATTACGTTCGAAGGTTCGCTCACGGTAGCCGAATTGGCGAAAAAACTTGGCCGCGAGCCGTCGGAAATCATTAAAAAACTGTTTATGCTCGGCGTCATGGCGACGATTAACCAAGATTTAGACAAAGATGCGATCGAGCTCATTTGCTCTGATTACGGAGTTGAAGTCGAAGAAAAAGTGACGATCGATGAAACGAATTTTGAAACGATCGAAATTGTCGATGCACCGGAAGATTTGGTGGAACGGCCGCCGGTCGTCACGATTATGGGGCACGTTGACCACGGGAAAACAACGCTGCTTGACGCAATCCGCCACTCGAAAGTGACCGAGCAAGAGGCGGGCGGTATTACACAGCATATCGGTGCTTATCAAGTCACGGTCAACGGCAAGAAAATTACGTTCCTCGATACGCCGGGGCATGAAGCGTTTACGACGATGCGGGCGCGCGGTGCGCAAGTGACGGATATCGTCATCCTTGTTGTTGCTGCTGATGATGGGGTCATGCCGCAGACGGTCGAGGCGATTAACCACGCCAAAGCGGCGAACGTACCGATTATCGTCGCCATTAACAAAATGGATAAGCCGGAAGCAAACCCGGATCGCGTTATGCAAGAGTTGATGGAGTACAACCTCGTTCCGGAAGAATGGGGTGGCGATACGATTTTCTGCAAGCTGTCGGCGAAAACCCAAGACGGTATTGACCATCTGTTGGAAATGATTTTGCTTGTCAGCGAAATGGAAGAACTAAAAGCGAACCCGAACCGCCGCGCGCTCGGTACGGTGATCGAAGCGAAGCTCGATAAAGGGCGCGGTCCGGTAGCGACGTTGCTCGTCCAAGCCGGTACGCTAAAAGTCGGTGATCCGATTGTTGTCGGAACAACGTACGGACGCGTGCGCGCGATGGTCAATGACAGCGGTCGGCGTGTCAAAGAAGCGGGTCCGTCGATGCCGGTCGAAATCACAGGGCTTCATGATGTGCCGCAAGCCGGGGACCGCTTTATGGTATTTGAAGATGAGAAGAAAGCGCGACAAATCGGAGAAGCGCGGGCACAGCGGCAGCTGCAAGAGCAGCGGAGCGTGAAAACGCGCGTCAGCTTGGACGATTTGTTTGAACAAATTAAGCAAGGTGAAATGAAAGAGCTGAACTTGATCGTTAAGGCCGACGTCCAAGGATCGGTCGAAGCGCTTGTCGCCGCCTTGCAAAAAATCGATATCGAAGGCGTGCGTGTGAAAATTATCCACGCGGCGGTCGGCGCCATTACGGAGTCAGACATCTTGTTGGCAACGACCTCGAACGCGATCGTCATCGGTTTTAACGTCCGTCCGGACACCAATGCGAAGCGGGCTGCCGAATCAGAAAACGTCGACATCCGCCTCCACCGCATTATTTACAATGTCATCGAAGAAATTGAAGCGGCGATGAAAGGGATGCTCGACCCAGAATATGAAGAAAAAGTGATCGGTCAGGCGGAAGTGCGGCAAACGTTCAAAGTGTCGAAAGTCGGCACGATCGCCGGGTGCTACGTCACCGACGGCAAAATTACCCGCGACAGCAAAGTGCGCCTTATCCGTCAAGGCATCGTCGTGTACGAAGGCGAAATCGACTCGCTCAAACGGTATAAAGATGATGTGCGTGAGGTGGCGCAAGGATACGAATGCGGCGTGACCATCAAAAACTTCAACGATATTAAAGAAGGGGACGTCATCGAGGCGTACATCATGCAGGAAGTGGCTCGCGCA
配列番号 72
アミノ酸
IF-2-GsuIF-2
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MVSRFAKCRTGIRSAARSAKTPASLSPSPTKGSRANCKRCSTDLYGGECMSKMRVYEYAKKHNVPSKDVIHKLKEMNIEVNNHMTMLEADVVEKLDHQYRVNSEKKAEKKTEKPKRPTPAKAADFADEEMFEDKKETAKTKPAKKKGAVKGKETKKTEAQQQEKKLFQAAKKKGKGPMKGKKQAAPASKQAQQPAKKEKELPKKITFEGSLTVAELAKKLGREPSEIIKKLFMLGVMATINQDLDKDAIELICSDYGVEVEEKVTIDETNFETIEIVDAPEDLVERPPVVTIMGHVDHGKTTLLDAIRHSKVTEQEAGGITQHIGAYQVTVNGKKITFLDTPGHEAFTTMRARGAQVTDIVILVVAADDGVMPQTVEAINHAKAANVPIIVAINKMDKPEANPDRVMQELMEYNLVPEEWGGDTIFCKLSAKTQDGIDHLLEMILLVSEMEELKANPNRRALGTVIEAKLDKGRGPVATLLVQAGTLKVGDPIVVGTTYGRVRAMVNDSGRRVKEAGPSMPVEITGLHDVPQAGDRFMVFEDEKKARQIGEARAQRQLQEQRSVKTRVSLDDLFEQIKQGEMKELNLIVKADVQGSVEALVAALQKIDIEGVRVKIIHAAVGAITESDILLATTSNAIVIGFNVRPDTNAKRAAESENVDIRLHRIIYNVIEEIEAAMKGMLDPEYEEKVIGQAEVRQTFKVSKVGTIAGCYVTDGKITRDSKVRLIRQGIVVYEGEIDSLKRYKDDVREVAQGYECGVTIKNFNDIKEGDVIEAYIMQEVARA
配列番号73
DNA
IF-3-GsuIF-3
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGACTACGGCAAATTCCGCTTTGAGCAGCAAAAGAAAGAAAAAGAAGCGCGCAAAAAGCAAAAGGTGATCAACATTAAAGAGGTGCGCCTCAGCCCGACAATTGAGGAACACGACTTTAATACGAAACTACGCAATGCGCGCAAGTTTTTAGAAAAAGGCGATAAAGTGAAGGCGACGATCCGCTTTAAAGGGCGGGCGATCACCCATAAAGAAATCGGGCAGCGCGTCCTTGACCGCTTCTCGGAAGCATGCGCTGATATCGCGGTCGTCGAAACGGCGCCGAAATTGGAAGGGCGCAACATGTTTTTAGTGCTGGCACCGAAAAATGACAACAAG
配列番号74
アミノ酸
IF-3-GsuIF-3
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MDYGKFRFEQQKKEKEARKKQKVINIKEVRLSPTIEEHDFNTKLRNARKFLEKGDKVKATIRFKGRAITHKEIGQRVLDRFSEACADIAVVETAPKLEGRNMFLVLAPKNDNK
配列番号75
DNA
EF-G-GsuEF-G
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGCAAGAGAGTTCTCCTTAGAAAACACTCGTAACATAGGAATCATGGCGCACATTGACGCCGGAAAAACGACGACGACGGAACGAATCCTGTTCTACACAGGCCGCGTTCATAAAATCGGGGAAACGCATGAAGGCTCAGCTACGATGGACTGGATGGAACAAGAGCAAGAGCGCGGGATTACGATTACGTCGGCGGCGACAACGGCGCAATGGAAAGGCCATCGCATCAACATCATCGACACGCCAGGGCACGTCGACTTCACGGTTGAGGTTGAACGTTCGTTGCGCGTGTTGGACGGAGCCATTACAGTTCTTGACGCCCAATCTGGTGTAGAACCGCAAACGGAAACAGTTTGGCGTCAAGCGACTACATATGGTGTTCCGCGGATTGTATTCGTCAACAAAATGGACAAAATCGGTGCGGACTTCTTGTATGCGGTAAAAACGCTCCATGACCGCTTACAAGCGAATGCCTACCCGGTGCAGTTGCCGATCGGCGCTGAAGACCAATTCACCGGCATTATTGACCTCGTGGAAATGTGTGCATACCATTACCACGACGACCTTGGCAAAAACATCGAACGCATCGAAATTCCGGAAGACTACCGCGATTTAGCGGAAGAATATCATGGCAAGCTCATTGAGGCTGTTGCGGAACTCGATGAAGAGCTGATGATGAAATATTTAGAAGGAGAAGAAATTACGAAAGAAGAGCTGAAAGCCGCAATCCGTAAGGCGACGATCAACGTTGAATTCTATCCAGTCTTCTGCGGTTCAGCTTTTAAAAACAAAGGTGTTCAGCTGCTTCTTGACGGGGTTGTCGACTACTTGCCGTCTCCGTTAGATATCCCGGCGATTCGCGGTATCATTCCGGATACGGAAGAAGAAGTGGCTCGCGAAGCACGCGATGACGCTCCGTTCTCCGCGTTGGCATTCAAAATTATGACTGACCCGTACGTTGGGAAGTTGACGTTCTTCCGCGTCTACTCCGGAACGCTTGATTCCGGTTCTTACGTCATGAACTCAACGAAACGGAAGCGTGAACGGATCGGTCGCTTGCTGCAAATGCATGCGAACCACCGTCAAGAAATTTCGACAGTCTATGCCGGTGATATTGCGGCAGCAGTAGGTTTAAAAGAAACAACGACCGGCGATACTCTATGTGATGAGAAAAATCTTGTCATCTTAGAGTCGATGCAATTCCCAGAGCCGGTTATCTCGGTGGCGATCGAACCGAAATCGAAAGCCGACCAAGATAAGATGGGTCAAGCATTGCAAAAACTGCAAGAGGAAGACCCGACATTCCGTGCGCATACCGATCCGGAAACAGGACAAACGATCATTTCCGGGATGGGCGAGCTGCACTTGGACATTATCGTCGACCGGATGCGTCGCGAATTCAAAGTCGAGGCGAACGTTGGTGCACCGCAAGTTGCTTACCGTGAAACGTTCCGTCAATCGGCTCAAGTCGAAGGGAAATTTATTCGCCAGTCCGGTGGTCGTGGTCAGTACGGTCACGTTTGGATCGAATTCACACCGAACGAACGCGGTAAAGGCTTTGAATTTGAAAATGCGATCGTCGGTGGGGTCGTTCCGAAAGAGTACGTGCCGGCTGTTCAAGCTGGATTGGAAGAAGCGATGCAAAACGGTGTCTTAGCTGGCTACCCGGTTGTTGACATCAAAGCGAAACTGTTTGATGGATCGTACCATGATGTCGACTCGAGTGAGATGGCGTTCAAAATTGCTGCTTCGATGGCGTTGAAAAACGCGGCAGCGAAGTGTGAACCGGTTCTGCTTGAACCGATCATGAAAGTAGAAGTCGTCATCCCTGAAGAATACCTCGGCGACATTATGGGTGACATCACATCCCGCCGCGGTCGCGTCGAAGGGATGGAAGCGCGCGGAAACGCCCAAGTTGTTCGTGCAATGGTGCCGCTGGCCGAAATGTTCGGTTATGCAACATCGCTCCGTTCGAACACGCAAGGGCGTGGAACGTTCTCGATGGTATTTGACCATTACGAAGAAGTTCCGAAAAACATCGCCGATGAAATTATCAAAAAAAATAAAGGCGAA
配列番号76
アミノ酸
EF-G-GsuEF-G
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MAREFSLENTRNIGIMAHIDAGKTTTTERILFYTGRVHKIGETHEGSATMDWMEQEQERGITITSAATTAQWKGHRINIIDTPGHVDFTVEVERSLRVLDGAITVLDAQSGVEPQTETVWRQATTYGVPRIVFVNKMDKIGADFLYAVKTLHDRLQANAYPVQLPIGAEDQFTGIIDLVEMCAYHYHDDLGKNIERIEIPEDYRDLAEEYHGKLIEAVAELDEELMMKYLEGEEITKEELKAAIRKATINVEFYPVFCGSAFKNKGVQLLLDGVVDYLPSPLDIPAIRGIIPDTEEEVAREARDDAPFSALAFKIMTDPYVGKLTFFRVYSGTLDSGSYVMNSTKRKRERIGRLLQMHANHRQEISTVYAGDIAAAVGLKETTTGDTLCDEKNLVILESMQFPEPVISVAIEPKSKADQDKMGQALQKLQEEDPTFRAHTDPETGQTIISGMGELHLDIIVDRMRREFKVEANVGAPQVAYRETFRQSAQVEGKFIRQSGGRGQYGHVWIEFTPNERGKGFEFENAIVGGVVPKEYVPAVQAGLEEAMQNGVLAGYPVVDIKAKLFDGSYHDVDSSEMAFKIAASMALKNAAAKCEPVLLEPIMKVEVVIPEEYLGDIMGDITSRRGRVEGMEARGNAQVVRAMVPLAEMFGYATSLRSNTQGRGTFSMVFDHYEEVPKNIADEIIKKNKGE
配列番号77
DNA
EF-Tu-GsuEF-Tu
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGCTAAAGCGAAATTTGAGCGTACGAAACCGCACGTCAACATTGGCACGATCGGCCACGTTGACCATGGGAAAACGACGTTGACAGCTGCGATCACGACAGTTCTTGCGAAACAAGGTAAAGCAGAAGCGAGAGCGTACGACCAAATCGACGCTGCTCCGGAAGAGCGTGAACGCGGAATCACGATTTCGACGGCTCACGTTGAGTATGAAACAGAAAACCGTCACTATGCGCACGTTGACTGCCCGGGCCACGCTGACTACGTGAAAAACATGATCACGGGCGCAGCGCAAATGGACGGCGCGATCCTTGTTGTATCGGCTGCTGACGGTCCGATGCCGCAAACTCGCGAACACATTCTTCTTTCCCGCCAAGTCGGTGTTCCGTACATCGTTGTTTTCTTGAACAAATGCGACATGGTGGACGACGAAGAATTGCTTGAACTCGTTGAAATGGAAGTTCGCGATCTTCTTTCTGAATATGACTTCCCGGGCGACGAAGTGCCGGTTATCAAAGGTTCGGCATTAAAAGCGCTCGAAGGCGATGCACAATGGGAAGAAAAAATCGTTGAACTGATGAACGCGGTTGACGAGTACATCCCAACTCCGCAACGTGAAGTAGACAAACCGTTCATGATGCCGGTTGAGGACGTCTTCTCGATCACGGGTCGTGGTACGGTTGCAACGGGCCGTGTTGAGCGCGGTACGTTAAAAGTTGGTGACCCGGTTGAAATCATCGGTCTTTCGGACGAGCCGAAATCGACGACTGTTACGGGTGTAGAAATGTTCCGTAAGCTTCTCGACCAAGCAGAAGCTGGTGACAACATCGGTGCGCTTCTCCGCGGTGTATCGCGTGACGAAGTTGAGCGCGGTCAAGTATTGGCGAAACCGGGCTCGATCACGCCACACACGAAATTTAAAGCACAAGTTTACGTTCTGACGAAAGAAGAAGGCGGACGCCATACTCCGTTCTTCTCGAACTACCGTCCGCAATTCTACTTCCGTACAACGGACGTAACGGGCATCATCACGCTTCCAGAAGGCGTTGAAATGGTTATGCCTGGCGACAACGTTGAAATGACGGTTGAACTGATCGCTCCGATCGCGATCGAAGAAGGTACGAAATTCTCGATCCGTGAAGGCGGCCGCACGGTTGGTGCTGGTTCCGTATCGGAAATCATTGAG
配列番号78
アミノ酸
EF-Tu-GsuEF-Tu
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MAKAKFERTKPHVNIGTIGHVDHGKTTLTAAITTVLAKQGKAEARAYDQIDAAPEERERGITISTAHVEYETENRHYAHVDCPGHADYVKNMITGAAQMDGAILVVSAADGPMPQTREHILLSRQVGVPYIVVFLNKCDMVDDEELLELVEMEVRDLLSEYDFPGDEVPVIKGSALKALEGDAQWEEKIVELMNAVDEYIPTPQREVDKPFMMPVEDVFSITGRGTVATGRVERGTLKVGDPVEIIGLSDEPKSTTVTGVEMFRKLLDQAEAGDNIGALLRGVSRDEVERGQVLAKPGSITPHTKFKAQVYVLTKEEGGRHTPFFSNYRPQFYFRTTDVTGIITLPEGVEMVMPGDNVEMTVELIAPIAIEEGTKFSIREGGRTVGAGSVSEIIE
配列番号79
DNA
EF-Ts-GsuEF-Ts
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGCGATTACAGCACAAATGGTAAAAGAGCTGCGCGAAAAAACGGGCGCAGGCATGATGGACTGCAAAAAAGCGCTCACCGAAACGAACGGTGACATGGAAAAAGCGATCGACTGGCTGCGTGAAAAAGGAATTGCTAAAGCAGCGAAAAAAGCAGATCGCATCGCAGCGGAAGGAATGACATACATCGCGACGGAAGGCAATGCGGCTGTCATTTTGGAAGTAAACTCGGAAACGGACTTCGTTGCCAAAAACGAAGCGTTCCAAACGCTCGTTAAGGAGCTGGCTGCACATCTGCTGAAACAAAAGCCAGCCACGCTTGATGAAGCGCTCGGACAAACGATGAGCAGTGGTTCCACTGTTCAAGATTACATTAACGAAGCAGTTGCTAAAATCGGTGAAAAAATTACGCTCCGCCGCTTTGCTGTTGTCAACAAAGCGGATGATGAAACGTTTGGCGCGTACTTGCACATGGGCGGGCGCATCGGCGTATTAACATTATTAGCCGGCAACGCAACTGAAGAGGTCGCTAAAGATGTGGCGATGCATATTGCTGCGCTCCATCCGAAATACGTTTCGCGCGATGAAGTGCCGCAAGAAGAGATTGCGCGCGAACGTGAAGTGTTGAAACAACAAGCGTTGAACGAAGGTAAGCCGGAAAACATCGTTGAAAAAATGGTTGAAGGCCGTCTGAAAAAGTTTTACGAAGATGTTTGCCTGCTTGAGCAAGCGTTCGTGAAAAACCCGGATGTGACGGTACGCCAATACGTCGAATCGAGCGGAGCAACCGTGAAGCAGTTCATCCGCTACGAAGTTGGTGAAGGGCTCGAAAAACGTCAAGATAATTTCGCTGAAGAAGTCATGAGCCAAGTAAGAAAACAA
配列番号80
アミノ酸
EF-Ts-GsuEF-Ts
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MAITAQMVKELREKTGAGMMDCKKALTETNGDMEKAIDWLREKGIAKAAKKADRIAAEGMTYIATEGNAAVILEVNSETDFVAKNEAFQTLVKELAAHLLKQKPATLDEALGQTMSSGSTVQDYINEAVAKIGEKITLRRFAVVNKADDETFGAYLHMGGRIGVLTLLAGNATEEVAKDVAMHIAALHPKYVSRDEVPQEEIAREREVLKQQALNEGKPENIVEKMVEGRLKKFYEDVCLLEQAFVKNPDVTVRQYVESSGATVKQFIRYEVGEGLEKRQDNFAEEVMSQVRKQ
配列番号81
DNA
EF-4-GsuEF-4
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAACCGGGAAGAACGGTTGAAACGGCAGGAACGGATTCGCAACTTTTCGATTATCGCTCACATTGACCACGGAAAATCGACGCTTGCGGACCGCATTTTAGAAAAAACAGGTGCGCTGTCGGAGCGCGAGTTGCGCGAGCAGACGCTCGATATGATGGAGCTCGAGCGCGAGCGCGGCATCACGATCAAATTGAATGCGGTCCAGTTGACATATAAAGCGAAAAACGGGGAAGAGTATATTTTCCATTTGATCGATACGCCGGGCCACGTCGATTTTACGTATGAAGTGTCGCGCAGCTTGGCTGCTTGCGAAGGAGCGATCTTAGTCGTCGATGCGGCGCAAGGCATTGAAGCGCAGACGCTCGCAAACGTGTATTTGGCCATTGACAACAATTTAGAAATTTTACCAGTCATTAATAAAATCGATTTGCCAAGCGCCGAGCCGGAGCGTGTCCGCCAAGAAATCGAAGACGTCATTGGCCTCGATGCCTCTGAAGCGGTGCTCGCCTCCGCGAAAGTCGGCATCGGCGTCGAGGACATTTTAGAACAAATCGTGGAAAAAATTCCTGCTCCGTCAGGCGATCCGGACGCGCCGTTGAAGGCGCTCATTTTTGATTCACTTTATGACCCGTACCGCGGCGTTGTCGCCTACGTCCGTATCGTCGATGGAACGGTTAAGCCGGGCCAGCGCATTAAAATGATGTCGACCGGCAAAGAGTTTGAAGTGACCGAAGTCGGCGTGTTTACACCAAAACCAAAAGTTGTCGACGAACTGATGGTCGGTGATGTCGGCTATTTAACTGCGTCGATCAAAAACGTACAAGATACGCGCGTCGGCGATACGATTACCGATGCCGAACGGCCGGCTGCTGAGCCACTCCCTGGCTACCGGAAGCTCAATCCGATGGTGTTTTGCGGCATGTACCCGATCGACACGGCGCGCTACAACGACTTGCGCGAAGCGTTAGAAAAGCTGCAGCTCAACGATGCGGCGCTTCACTTTGAACCGGAAACGTCGCAGGCGCTCGGGTTTGGCTTTCGTTGCGGGTTTCTCGGCTTGCTTCATATGGAGATTATCCAAGAGCGGATTGAACGTGAATTTCATATCGATTTAATTACAACGGCGCCGAGCGTTGTCTACAAAGTATATTTAACGGACGGAACGGAAGTCGATGTCGACAACCCGACGAACATGCCGGATCCGCAAAAAATCGACCGCATCGAAGAGCCGTATGTAAAAGCGACGATTATGGTGCCGAACGACTACGTCGGACCGGTGATGGAGCTGTGCCAAGGAAAGCGTGGCACGTTCGTTGACATGCAATATTTAGATGAAAAGCGGGTCATGTTGATTTACGATATTCCGCTGTCGGAAATCGTGTATGACTTTTTCGATGCGTTAAAGTCGAACACGAAAGGGTATGCGTCGTTTGACTATGAATTGATCGGTTACCGGCCGTCCAATCTTGTCAAAATGGATATTTTGTTGAATGGCGAAAAAATTGACGCTTTATCGTTTATTGTTCACCGCGATTCGGCTTATGAGCGCGGCAAAGTGATCGTCGAGAAGCTGAAAGATTTAATTCCACGCCAACAGTTTGAAGTGCCTGTGCAGGCGGCGATCGGCAATAAGATCATCGCCCGTTCGACGATCAAGGCGCTGCGTAAAAACGTGCTCGCCAAATGTTACGGCGGCGACGTGTCGCGGAAACGGAAACTGCTTGAGAAACAAAAAGAAGGAAAGAAACGGATGAAACAAATCGGTTCGGTCGAAGTGCCGCAGGAAGCGTTTATGGCTGTCTTGAAAATCGACGACCAGAAAAAA
配列番号82
アミノ酸
EF-4-GsuEF-4
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MNREERLKRQERIRNFSIIAHIDHGKSTLADRILEKTGALSERELREQTLDMMELERERGITIKLNAVQLTYKAKNGEEYIFHLIDTPGHVDFTYEVSRSLAACEGAILVVDAAQGIEAQTLANVYLAIDNNLEILPVINKIDLPSAEPERVRQEIEDVIGLDASEAVLASAKVGIGVEDILEQIVEKIPAPSGDPDAPLKALIFDSLYDPYRGVVAYVRIVDGTVKPGQRIKMMSTGKEFEVTEVGVFTPKPKVVDELMVGDVGYLTASIKNVQDTRVGDTITDAERPAAEPLPGYRKLNPMVFCGMYPIDTARYNDLREALEKLQLNDAALHFEPETSQALGFGFRCGFLGLLHMEIIQERIEREFHIDLITTAPSVVYKVYLTDGTEVDVDNPTNMPDPQKIDRIEEPYVKATIMVPNDYVGPVMELCQGKRGTFVDMQYLDEKRVMLIYDIPLSEIVYDFFDALKSNTKGYASFDYELIGYRPSNLVKMDILLNGEKIDALSFIVHRDSAYERGKVIVEKLKDLIPRQQFEVPVQAAIGNKIIARSTIKALRKNVLAKCYGGDVSRKRKLLEKQKEGKKRMKQIGSVEVPQEAFMAVLKIDDQKK
配列番号83
DNA
EF-P-GsuEF-P
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGATTTCAGTGAACGATTTTCGCACAGGGCTTACGATTGAGGTCGACGGCGAGATTTGGCGCGTCCTTGAGTTCCAGCATGTTAAGCCGGGCAAAGGGGCGGCGTTCGTCCGTTCGAAGCTGCGCAACTTGCGTACCGGCGCCATTCAAGAGCGGACGTTCCGCGCTGGCGAAAAAGTAAACCGGGCACAAATTGATACGCGCAAAATGCAATATTTATACGCTAACGGCGACTTGCATGTCTTTATGGATATGGAAACATACGAACAAATCGAGCTGCCAGCGAAACAAATTGAGTATGAGCTGAAGTTCTTAAAAGAAAACATGGAAGTATTTATCATGATGTATCAAGGCGAAACGATCGGTGTTGAGCTGCCGAACACCGTCGAGTTGAAAGTCGTTGAAACAGAGCCGGGCATCAAAGGTGACACGGCTTCCGGCGGTTCGAAGCCGGCCAAGCTCGAAACCGGTCTTGTCGTTCAAGTGCCGTTTTTCGTCAATGAAGGCGACACGCTCATCATTAACACGGCTGACGGTACGTACGTTTCGCGGGCA
配列番号84
アミノ酸
EF-P-GsuEF-P
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MISVNDFRTGLTIEVDGEIWRVLEFQHVKPGKGAAFVRSKLRNLRTGAIQERTFRAGEKVNRAQIDTRKMQYLYANGDLHVFMDMETYEQIELPAKQIEYELKFLKENMEVFIMMYQGETIGVELPNTVELKVVETEPGIKGDTASGGSKPAKLETGLVVQVPFFVNEGDTLIINTADGTYVSRA
配列番号85
DNA
RF-1-GsuRF-1
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGATCCAGCCGTTATCAACGACCCGAAAAAGTTGCGCGATTATTCGAAAGAGCAGGCTGATTTGACTGAAACGGTGCAAACGTACCGTGAATACAAGTCCGTTCGCAGTCAGCTCGCGGAAGCGAAGGCTATGCTGGAAGAAAAACTTGAGCCAGAGCTGCGCGAGATGGTGAAAGAGGAAATTGATGAGCTCGAAGAACGGGAAGAAGCGCTCGTTGAGAAGTTGAAAGTGTTGCTTTTGCCGAAAGATCCGAATGATGAGAAAAACGTCATTATGGAAATTCGTGCCGCCGCCGGTGGCGAGGAAGCCGCGCTGTTTGCCGGCGACTTGTACCGGATGTATACGCGCTATGCGGAGTCGCAAGGGTGGAAAACGGAAGTGATCGAAGCAAGCCCAACAGGTCTTGGCGGCTATAAAGAAATCATCTTTATGGTCAATGGGAAAGGGGCGTATTCGAAGCTGAAGTTTGAAAACGGCGCTCATCGCGTCCAACGCGTCCCGGAAACGGAATCAGGCGGACGCATCCATACATCGACGGCAACGGTCGCCTGCTTGCCGGAAATGGAAGAAGTCGAAGTCGAAATTCATGAAAAAGACATTCGCGTCGATACGTACGCCTCGAGCGGGCCAGGGGGACAAAGCGTGAACACGACGATGTCAGCCGTACGCCTCACCCATATTCCGACCGGCATTGTCGTTACTTGCCAAGACGAAAAATCGCAAATTAAAAACAAAGAAAAAGCGATGAAAGTGTTGCGCGCCCGCATTTACGACAAATACCAGCAAGAAGCGCGCGCCGAGTATGACCAAACGCGTAAGCAAGCAGTCGGCACCGGCGATCGCTCAGAGCGCATCCGCACGTACAACTTCCCGCAAAACCGCGTCACTGACCACCGTATCGGGTTGACGATTCAAAAGCTTGACCTCGTGTTAGACGGGCAGCTCGATGAAATTATCGAGGCGCTCATTTTAGACGACCAGTCGAAAAAACTGGAGCAAGCGAACGATGCGTCG
配列番号86
アミノ酸
RF-1-GsuRF-1
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MDPAVINDPKKLRDYSKEQADLTETVQTYREYKSVRSQLAEAKAMLEEKLEPELREMVKEEIDELEEREEALVEKLKVLLLPKDPNDEKNVIMEIRAAAGGEEAALFAGDLYRMYTRYAESQGWKTEVIEASPTGLGGYKEIIFMVNGKGAYSKLKFENGAHRVQRVPETESGGRIHTSTATVACLPEMEEVEVEIHEKDIRVDTYASSGPGGQSVNTTMSAVRLTHIPTGIVVTCQDEKSQIKNKEKAMKVLRARIYDKYQQEARAEYDQTRKQAVGTGDRSERIRTYNFPQNRVTDHRIGLTIQKLDLVLDGQLDEIIEALILDDQSKKLEQANDAS
配列番号87
DNA
RF-2-Gsu-RF2
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGCCGCGCCCGGCTTTTGGGATGACCAGAAAGCGGCGCAGGCGATCATTTCCGAAGCGAATGCGCTCAAGGAATTAGTCGGCGAGTTTGAATCGCTCGCGGAACGGTTCGACAACTTGGAAGTGACGTATGAGTTGTTGAAAGAGGAGCCGGATGACGAGCTGCAGGCTGAACTTGTGGAAGAAGCGAAAAAATTGACGAAAGACTTCAGCCAGTTTGAGCTGCAGCTGTTGCTCAACGAGCCGTACGACCAAAATAACGCGATTTTGGAGCTTCATCCGGGTGCGGGCGGCACGGAATCGCAAGACTGGGCGTCGATGCTGTTGCGCATGTACACGCGCTGGGCGGAGAAAAAAGGATTTAAAGTCGAAACACTGGATTATCTCCCAGGCGAGGAAGCCGGGGTGAAAAGCGTCACCTTGCTTATCAAGGGACATAATGCATACGGCTACTTAAAGGCGGAAAAAGGGGTACACCGGCTTGTGCGCATCTCCCCGTTTGACGCCTCAGGCCGCCGCCATACGTCGTTCGTGTCATGCGAAGTCGTGCCGGAGATGGACGATAACATTGAGATTGAGATCCGTCCGGAAGAGCTGAAAATCGACACGTACCGCTCAAGCGGTGCGGGCGGGCAGCACGTCAACACGACCGACTCCGCGGTGCGCATCACCCACTTGCCGACCGGCATTGTCGTTACGTGCCAATCGGAGCGGTCGCAAATTAAAAACCGCGAAAAAGCGATGAATATGTTAAAAGCGAAGCTGTATCAAAAGAAAATGGAGGAACAGCAAGCTGAACTCGCCGAGCTGCGCGGCGAGCAAAAAGAAATCGGCTGGGGCAGCCAAATCCGCTCCTACGTCTTCCATCCGTATTCGCTTGTCAAAGACCATCGGACGAATGTGGAGGTCGGCAACGTGCAAGCGGTGATGGATGGGGAAATCGATGTGTTCATTGACGCGTATTTGCGCGCGAAATTGAAG
配列番号88
アミノ酸
RF-2-GsuRF-2
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MAAPGFWDDQKAAQAIISEANALKELVGEFESLAERFDNLEVTYELLKEEPDDELQAELVEEAKKLTKDFSQFELQLLLNEPYDQNNAILELHPGAGGTESQDWASMLLRMYTRWAEKKGFKVETLDYLPGEEAGVKSVTLLIKGHNAYGYLKAEKGVHRLVRISPFDASGRRHTSFVSCEVVPEMDDNIEIEIRPEELKIDTYRSSGAGGQHVNTTDSAVRITHLPTGIVVTCQSERSQIKNREKAMNMLKAKLYQKKMEEQQAELAELRGEQKEIGWGSQIRSYVFHPYSLVKDHRTNVEVGNVQAVMDGEIDVFIDAYLRAKLK
配列番号89
DNA
RRF-GsuRRF
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGCAAAGCAAGTGATCCAACAGGCGAAAGAAAAAATGGATAAAGCTGTGCAAGCGTTCAGCCGCGAGTTGGCGACCGTCCGTGCCGGTCGGGCGAACGCGGGGTTGCTTGAGAAAGTAACCGTTGACTATTACGGTGTCGCAACGCCGATCAACCAGCTCGCTACGATCAGCGTGCCGGAAGCGCGTATGCTTGTCATTCAGCCGTATGACAAATCGGTCATTAAAGAAATGGAAAAAGCGATTTTAGCGTCGGACTTAGGAGTGACGCCGTCGAATGACGGATCGGTTATCCGCCTTGTCATTCCGCCGCTTACTGAAGAACGTCGCCGTGAACTGGCGAAGCTCGTCAAAAAATATTCGGAAGAAGCGAAAGTTGCGGTGCGCAACATCCGTCGCGATGCAAACGATGAGCTGAAAAAACTCGAGAAAAATAGCGAGATTACGGAAGATGAGCTGCGCAGCTATACCGACGAAGTGCAAAAGCTGACCGACAGCCATATCGCCAAAATTGACGCCATCACAAAAGAGAAAGAAAAAGAAGTGATGGAAGTA
配列番号90
アミノ酸
RRF-GsuRRF
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MAKQVIQQAKEKMDKAVQAFSRELATVRAGRANAGLLEKVTVDYYGVATPINQLATISVPEARMLVIQPYDKSVIKEMEKAILASDLGVTPSNDGSVIRLVIPPLTEERRRELAKLVKKYSEEAKVAVRNIRRDANDELKKLEKNSEITEDELRSYTDEVQKLTDSHIAKIDAITKEKEKEVMEV
配列番号91
DNA
AlaRS-GsuAlaRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAGAGTTTTTTTATATAAAAGACCAAAGGGGAGGATTGTTATGAAAAAGTTAACATCTGCCGAAGTGCGGCGTATGTTTTTGCAGTTTTTCCAAGAAAAAGGCCATGCGGTCGAGCCGAGCGCTTCGCTCATTCCTGTCGATGACCCGTCGTTATTATGGATCAACAGCGGTGTCGCGACGCTGAAAAAATATTTTGATGGCCGTATCATCCCGGACAACCCGCGCATTTGCAATGCGCAAAAATCGATCCGCACAAACGACATCGAAAATGTCGGGAAAACGGCTCGCCACCATACGTTTTTTGAAATGCTCGGCAACTTTTCGATCGGCGATTATTTCAAGCGTGAAGCGATTCATTGGGCATGGGAGTTTTTAACAAGTGAAAAGTGGATTGGTTTTGATCCAGAGCGGTTGTCAGTCACTGTTCATCCGGAAGACGAAGAGGCGTATAACATTTGGCGCAACGAGATCGGTCTTCCTGAAGAGCGGATTATTCGTTTAGAAGGAAACTTCTGGGATATCGGTGAAGGCCCGAGCGGTCCGAACACGGAAATTTTTTATGACCGCGGTGAAGCGTTCGGCAACGATCCAAACGATCCAGAACTGTATCCAGGCGGGGAAAATGACCGCTACTTAGAAGTATGGAATCTCGTCTTTTCACAGTTCAACCATAACCCGGACGGCACGTACACGCCGCTGCCGAAGAAAAACATCGATACCGGCATGGGCTTAGAGCGGATGTGCTCGATTTTGCAAGATGTACCGACGAACTTTGAAACTGATTTGTTCATGCCGATCATCCGCGCGACTGAGCAGATCGCGGGTGAGCAATACGGCAAAGATCCGAATAAAGACGTTGCTTTTAAGGTCATCGCTGACCATATTCGTGCCGTGACGTTTGCGGTCGGCGACGGGGCGCTGCCGTCGAACGAAGGACGAGGCTATGTATTGCGCCGCCTGCTTCGCCGCGCTGTGCGCTATGCGAAACAAATCGGCATTGACCGTCCATTTATGTATGAGCTTGTTCCGGTTGTCGGTGAAATTATGCAAGACTATTATCCGGAAGTGAAAGAAAAAGCCGATTTCATCGCCCGCGTCATTCGGACGGAAGAAGAGCGGTTCCACGAAACGCTTCATGAAGGGCTCGCCATTTTGGCAGAAGTGATGGAAAAGGCGAAAAAACAAGGAAGCACCGTCATTCCAGGAGAAGAGGCGTTCCGCTTGTACGATACGTACGGCTTCCCGCTCGAGCTGACGGAAGAATATGCTGCTGAAGCGGGCATGTCGGTCGATCACGCCGGTTTTGAGCGCGAGATGGAGCGCCAGCGCGAACGGGCCCGTGCCGCTCGCCAAGATGTCGATTCGATGCAAGTGCAAGGCGGGGTGCTCGGCGACATTAAAGACGAAAGCCGTTTTGTCGGCTACGATGAGCTCGTCGTTTCTTCGACGGTCATTGCCATCATTAAAGACGGACAGCTCGTGGAGGAAGTCGGGACTGGCGAGGAAGCACAAATCATCGTTGATGTGACGCCGTTTTACGCCGAAAGCGGCGGACAAATCGCTGACCAAGGTGTGTTTGAAGGCGAAACGGGAACAGCGGTCGTCAAAGATGTGCAAAAAGCACCGAACGGTCAGCACCTCCATTCGATTGTCGTCGAACGCGGTGCGGTGAAAAAAGGCGATCGCTATACGGCGCGCGTCGATGAAGTGAAGCGGTCGCAAATCGTGAAAAACCATACGGCGACCCACTTGCTTCATCAAGCGTTAAAAGACGTTCTTGGCCGCCATGTCAACCAGGCCGGATCACTCGTTGCCCCGGATCGGCTTCGCTTTGACTTTACTCATTTCGGGCAAGTGAAGCCTGATGAGCTCGAGCGCATTGAGGCGATCGTCAATGAACAAATTTGGAAGAGTATTCCGGTCGACATTTTTTACAAACCGCTCGAGGAAGCAAAAGCGATGGGGGCGATGGCGCTGTTTGGTGAAAAATACGGCGATATCGTCCGCGTTGTTAAAGTTGGCGACTACAGCTTAGAGTTGTGCGGCGGCTGCCATGTGCCGAATACAGCGGCCATTGGGTTGTTTAAAATCGTCTCCGAGTCCGGCATCGGTGCCGGCACGCGCCGGATTGAAGCGGTGACTGGGGAAGCGGCATACCGCTTTATGAGCGAACAGCTTGCTCTGTTGCAAGAAGCGGCGCAAAAGCTGAAAACGAGCCCGAGAGAGCTGAATGCCCGCCTTGATGGGCTGTTTGCCGAACTGCGCCAACTGCAGCGCGAAAATGAGTCGCTTGCTGCCCGTCTCGCCCATATGGAGGCGGAACACCTCACCCGTCAAGTGAAAGAGGTGGGCGGTGTGCCGGTATTAGCCGCAAAAGTGCAGGCGAACGACATGAACCAATTGCGGGCGATGGCTGATGACTTGAAGCAAAAACTAGGGACGGCGGTCATCGTGTTAGCGGCCGTGCAAGGTGGCAAAGTCCAATTGATTGCTGCGGTGACTGATGACTTAGTGAAAAAAGGATACCACGCCGGCAAACTCGTCAAAGAAGTGGCTTCACGTTGCGGCGGCGGAGGCGGCGGACGTCCTGATATGGCGCAGGCCGGTGGGAAGGACGCGAACAAAGTCGGCGAAGCGCTCGATTATGTCGAAACATGGGTCAAATCCATTTCC
配列番号92
アミノ酸
AlaRS-GsuAlaRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MRVFLYKRPKGRIVMKKLTSAEVRRMFLQFFQEKGHAVEPSASLIPVDDPSLLWINSGVATLKKYFDGRIIPDNPRICNAQKSIRTNDIENVGKTARHHTFFEMLGNFSIGDYFKREAIHWAWEFLTSEKWIGFDPERLSVTVHPEDEEAYNIWRNEIGLPEERIIRLEGNFWDIGEGPSGPNTEIFYDRGEAFGNDPNDPELYPGGENDRYLEVWNLVFSQFNHNPDGTYTPLPKKNIDTGMGLERMCSILQDVPTNFETDLFMPIIRATEQIAGEQYGKDPNKDVAFKVIADHIRAVTFAVGDGALPSNEGRGYVLRRLLRRAVRYAKQIGIDRPFMYELVPVVGEIMQDYYPEVKEKADFIARVIRTEEERFHETLHEGLAILAEVMEKAKKQGSTVIPGEEAFRLYDTYGFPLELTEEYAAEAGMSVDHAGFEREMERQRERARAARQDVDSMQVQGGVLGDIKDESRFVGYDELVVSSTVIAIIKDGQLVEEVGTGEEAQIIVDVTPFYAESGGQIADQGVFEGETGTAVVKDVQKAPNGQHLHSIVVERGAVKKGDRYTARVDEVKRSQIVKNHTATHLLHQALKDVLGRHVNQAGSLVAPDRLRFDFTHFGQVKPDELERIEAIVNEQIWKSIPVDIFYKPLEEAKAMGAMALFGEKYGDIVRVVKVGDYSLELCGGCHVPNTAAIGLFKIVSESGIGAGTRRIEAVTGEAAYRFMSEQLALLQEAAQKLKTSPRELNARLDGLFAELRQLQRENESLAARLAHMEAEHLTRQVKEVGGVPVLAAKVQANDMNQLRAMADDLKQKLGTAVIVLAAVQGGKVQLIAAVTDDLVKKGYHAGKLVKEVASRCGGGGGGRPDMAQAGGKDANKVGEALDYVETWVKSIS
配列番号93
DNA
ArgRS-GsuArgRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAACATTGTCGGACAAATGAAAGAACAGCTGAAAGAGGAAATTCGCCAGGCGGTGGGAAAAGCCGGGCTGGTGGCGGCTGAGGAGCTGCCAGAAGTATTGCTTGAGGTGCCGCGCGAAAAGGCTCATGGCGATTATTCGACGAATATCGCCATGCAGCTCGCCCGCATCGCGAAAAAGCCACCGCGGGCAATCGCCGAAGCCATCGTTGAAAAGTTTGACGCCGAGCGTGTTTCGGTGGCGCGCATCGAGGTAGCCGGCCCAGGGTTTATTAACTTTTACATGGACAATCGCTATTTGACAGCGGTTGTGCCGGCGATTTTGCAAGCGGGCCAAGCGTATGGCGAGTCGAATGTCGGCAAAGGGGAAAAAGTGCAAGTCGAGTTCGTCTCGGCTAACCCGACCGGCAACTTGCATTTAGGTCATGCTCGCGGTGCGGCGGTTGGCGATTCACTTAGCAATATTTTGGCGAAAGCCGGATTCGATGTGACGCGTGAATATTACATTAATGATGCCGGCAAACAAATTTATAACTTGGCGAAATCAGTCGAAGCCCGCTATTTCCAAGCGCTCGGTACCGATATGCCGCTGCCGGAGGACGGCTATTACGGTGACGACATCGTGGAAATCGGCAAAAAGCTCGCCGATGAATATGGCGATCGGTTCGTCCATGTGGACGAAGAAGAACGACTCGCCTTTTTCCGCGAATACGGCCTCCGTTATGAGCTCGACAAAATTAAAAACGATTTGGCTGCCTTCCGCGTTCCATTTGACGTTTGGTATTCGGAAACATCGCTTTATGAGAGCGGCAAAATCGATGAGGCGCTCTCAACGCTGCGTGAGCGCGGTTACATTTACGAACAGGACGGAGCCACATGGTTTCGTTCGACGGCGTTTGGCGATGACAAAGACCGTGTGTTAATCAAGCAAGACGGAACGTATACGTATTTGCTTCCGGACATCGCTTACCATCAAGATAAGCTGCGGCGTGGGTTCACGAAGCTAATCAACGTCTGGGGAGCGGATCATCATGGCTACATCCCGCGCATGAAAGCGGCGATCGCTGCGCTCGGCTACGATCCAGAAGCGCTCGAGGTCGAAATTATCCAAATGGTGAACTTATACCAAAACGGCGAGCGCGTCAAAATGAGCAAACGTACTGGCAAAGCGGTGACGATGCGCGAGCTGATGGAAGAAGTCGGCGTCGATGCTGTCCGCTACTTCTTCGCTATGCGTTCGGGCGATACGCATCTCGATTTTGATATGGACTTGGCTGTTGCCCAGTCGAATGAAAACCCGGTCTACTATGTCCAATATGCACATGCCCGCGTCTCAAGCATTCTCCGTCAAGCAAAAGAGCATCAACTGTCGTATGAAGGCGACGTCGATCTTCATCATCTCGTGGAAACAGAAAAAGAAATCGAGCTGCTCAAAGCGCTTGGCGACTTCCCGGACGTTGTCGCTGAGGCGGCCTTGAAACGGATGCCACATCGCGTCACCGCCTATGCGTTTGATTTGGCGTCGGCGCTCCACAGCTTTTACAATGCGGAAAAAGTGCTTGACCTAGACCAGATCGAAAAAACGAAAGCTCGTCTCGCGCTTGTCAAGGCGGTGCAAATCACGCTGCAAAACGCTCTAGCGTTAATCGGCGTCTCAGCGCCGGAACAAATG
配列番号94
アミノ酸
ArgRS-GsuArgRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MNIVGQMKEQLKEEIRQAVGKAGLVAAEELPEVLLEVPREKAHGDYSTNIAMQLARIAKKPPRAIAEAIVEKFDAERVSVARIEVAGPGFINFYMDNRYLTAVVPAILQAGQAYGESNVGKGEKVQVEFVSANPTGNLHLGHARGAAVGDSLSNILAKAGFDVTREYYINDAGKQIYNLAKSVEARYFQALGTDMPLPEDGYYGDDIVEIGKKLADEYGDRFVHVDEEERLAFFREYGLRYELDKIKNDLAAFRVPFDVWYSETSLYESGKIDEALSTLRERGYIYEQDGATWFRSTAFGDDKDRVLIKQDGTYTYLLPDIAYHQDKLRRGFTKLINVWGADHHGYIPRMKAAIAALGYDPEALEVEIIQMVNLYQNGERVKMSKRTGKAVTMRELMEEVGVDAVRYFFAMRSGDTHLDFDMDLAVAQSNENPVYYVQYAHARVSSILRQAKEHQLSYEGDVDLHHLVETEKEIELLKALGDFPDVVAEAALKRMPHRVTAYAFDLASALHSFYNAEKVLDLDQIEKTKARLALVKAVQITLQNALALIGVSAPEQM
配列番号95
DNA
AsnRS-GsuAsnRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGACGTGTCGATTATTGGAGGGAATGTGTACGTGAAAACGACGATTGCTGAAGTGAACCAATATGTAGGTCAAGAAGTCACGATCGGCGCTTGGTTGGCGAACAAGCGCTCGAGCGGAAAAATCGCCTTTTTACAGCTGCGTGATGGGACTGGCTTTATTCAAGGTGTAGTTGAAAAAGCGAACGTCTCAGAAGAGGTATTTCAACGTGCGAAAACGCTGACGCAAGAAACGTCGCTCTATGTGACCGGCACGGTGCGCGTCGACGAGCGTTCACCGTTCGGTTATGAGCTTTCGGTGACGAACATACAGGTCATCAATGAAGCGGTCGATTATCCGATTACGCCAAAAGAACACGGTGTCGAGTTTTTAATGGATCATCGTCACCTTTGGCTTCGTTCGCGGCGCCAACATGCGATCATGAAAATCCGCAACGAATTGATCCGTGCGACGTATGAGTTTTTTAACGAACGTGGCTTCGTCAAAGTCGATGCGCCGATTTTGACTGGCAGCGCACCGGAAGGAACGACCGAGCTGTTCCATACGAAGTATTTTGACGAGGATGCCTATTTATCGCAAAGCGGCCAGCTATATATGGAAGCAGCAGCCATGGCGCTCGGTAAAGTGTTTTCGTTCGGTCCGACATTCCGTGCCGAAAAGTCGAAAACGCGCCGCCATTTGATCGAATTTTGGATGATCGAGCCTGAAATGGCGTTTTACGAATTTGAAGACAATTTGCGGCTGCAAGAAGAGTATGTCTCTTATCTCGTACAGTCGGTGCTTAGCCGTTGCCAACTTGAGCTCGGGCGCCTTGGACGCGACGTCACCAAGCTTGAGCTTGTCAAGCCGCCGTTTCCGCGTCTAACGTATGACGAAGCGATCAAGCTGCTGCATGACAAAGGGTTTACCGATATCGAATGGGGCGATGACTTCGGTGCGCCGCATGAGACAGCCATCGCTGAAAGCTTCGACAAGCCGGTGTTTATCACTCACTACCCGACGTCGTTAAAGCCGTTTTATATGCAGCCAGATCCGAACCGTCCGGACGTCGTGCTATGTGCTGATTTAATCGCGCCGGAGGGATACGGGGAGATTATCGGCGGTTCCGAGCGCATTCATGATTATGAGCTGCTCAAGCAGCGTCTCGAGGAGCATCATTTGCCGCTTGAAGCATATGAATGGTATTTAGATTTGCGCAAATACGGTTCCGTGCCGCACTCCGGATTCGGGCTCGGCCTCGAGCGAACGGTTGCTTGGATTTGCGGCGTTGAGCATGTACGCGAGACGATCCCGTTTCCGCGGTTGCTCAACCGTCTATACCCG
配列番号96
アミノ酸
AsnRS-GsuAsnRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MDVSIIGGNVYVKTTIAEVNQYVGQEVTIGAWLANKRSSGKIAFLQLRDGTGFIQGVVEKANVSEEVFQRAKTLTQETSLYVTGTVRVDERSPFGYELSVTNIQVINEAVDYPITPKEHGVEFLMDHRHLWLRSRRQHAIMKIRNELIRATYEFFNERGFVKVDAPILTGSAPEGTTELFHTKYFDEDAYLSQSGQLYMEAAAMALGKVFSFGPTFRAEKSKTRRHLIEFWMIEPEMAFYEFEDNLRLQEEYVSYLVQSVLSRCQLELGRLGRDVTKLELVKPPFPRLTYDEAIKLLHDKGFTDIEWGDDFGAPHETAIAESFDKPVFITHYPTSLKPFYMQPDPNRPDVVLCADLIAPEGYGEIIGGSERIHDYELLKQRLEEHHLPLEAYEWYLDLRKYGSVPHSGFGLGLERTVAWICGVEHVRETIPFPRLLNRLYP
配列番号97
DNA
AspRS-GsuAspRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGTTTCAAACACTTGAGCTTCGTCATAAAGTGGCGAAGGCGGTGCGCAACTTTTTAGACGGCGAACGCTTTTTAGAAGTGGAGACGCCAATGTTGACGAAAAGCACACCGGAAGGGGCGCGCGATTATTTAGTGCCAAGCCGCGTTCATCCGGGGGAATTTTACGCCTTGCCGCAGTCGCCGCAAATTTTTAAGCAGCTTTTGATGGTCGGCGGTTTTGAACGCTATTACCAAATCACTCGTTGCTTCCGCGATGAAGATTTGCGCGCTGACCGCCAGCCAGAGTTTACGCAAATTGACATTGAAATGTCGTTTGTCGACCAAGAAGACATCATCGATTTAACCGAACGGATGATGGCGGCGGTCGTCAAAGCAACTAAAGGGATTGACATTCCGCGCCCATTTCCACGCATCACGTATGACGAAGCGATGAGCCGTTACGGTTCCGATAAGCCGGACGTACGTTTTGGCCTTGAGCTTGTCGATGTGTCGGAAGCGGTCCGCGGCTCCGCGTTTCAAGTGTTCGCCCGCGCCGTTGAGCAAGGTGGTCAAGTGAAGGCAATCAACGTAAAAGGAGCGGCGAGCCGTTATTCGCGTAAAGACATTGACGCGTTAGCGGAGTTTGCCGGCCGCTACGGAGCGAAAGGGCTCGCTTGGTTAAAAGTTGAAGGCGGGGAGCTGAAAGGGCCGATCGCCAAGTTTTTCGTCGATGATGAGCAAACAGCGCTGCGCCAGCTGCTTGCTGCCGAAGATGGGGATTTGCTGTTGTTTGTTGCTGACGAGAAGGCGATTGTCGCGGCGGCTCTTGGTGCGTTGCGGTTAAAGCTCGGCAAAGAGCTTGGCTTGATCGATGAAACGAAGCTCGCTTTTTTATGGGTAACAGATTGGCCGCTTTTAGAGTACGACGAAGAAGAAGGCCGCTATTACGCCGCCCACCATCCGTTTACGATGCCGGTGCGTGACGATATCCCGCTGCTTGAGACAAACCCAGGCGCTGTTCGGGCGCAGGCGTATGATTTAGTGTTAAACGGCTATGAGCTTGGCGGCGGTTCGCTCCGTATTTTTGAGCGCGATGTACAAGAAAAAATGTTCCGCGCTCTAGGATTTGACCAGGAAGAGGCGCGCCGCCAGTTTGGCTTCCTGCTTGAGGCGTTTGAATATGGCACTCCGCCGCATGGCGGTATCGCCCTCGGCCTCGATCGACTTGTGATGCTCTTAGCTGGGCGCACAAACTTGCGCGATACGATCGCCTTCCCGAAAACTGCGAGCGCCAGCTGCCTGCTTACTGAAGCGCCGGGACCGGTCAGTGAAAAACAACTGAAAGAGTTGCATTTGGCTGTGGTGCTTCCCGACCAGCAA
配列番号98
アミノ酸
AspRS-GsuAspRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MFQTLELRHKVAKAVRNFLDGERFLEVETPMLTKSTPEGARDYLVPSRVHPGEFYALPQSPQIFKQLLMVGGFERYYQITRCFRDEDLRADRQPEFTQIDIEMSFVDQEDIIDLTERMMAAVVKATKGIDIPRPFPRITYDEAMSRYGSDKPDVRFGLELVDVSEAVRGSAFQVFARAVEQGGQVKAINVKGAASRYSRKDIDALAEFAGRYGAKGLAWLKVEGGELKGPIAKFFVDDEQTALRQLLAAEDGDLLLFVADEKAIVAAALGALRLKLGKELGLIDETKLAFLWVTDWPLLEYDEEEGRYYAAHHPFTMPVRDDIPLLETNPGAVRAQAYDLVLNGYELGGGSLRIFERDVQEKMFRALGFDQEEARRQFGFLLEAFEYGTPPHGGIALGLDRLVMLLAGRTNLRDTIAFPKTASASCLLTEAPGPVSEKQLKELHLAVVLPDQQ
配列番号99
DNA
CysRS-GsuCysRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAAAGGAAGAGCGAATATGAGCAGTATCCGACTTTATAATACGTTGACGCGAAAAAAGGAAACGTTTGAGCCGCTCGAACCGAACAAAGTGAAAATGTATGTATGTGGCCCGACGGTCTATAATTATATTCATATCGGCAATGCTCGCGCCGCTATCGTCTTTGATACGATCCGCCGTTATTTAGAGTTCCGCGGTTATGATGTGACGTATGTATCCAACTTTACTGATGTCGACGACAAGCTAATCAGGGCGGCCCGCGAGCTTGGTGAGAGCGTGCCGGCGATCGCCGAGCGGTTTATTGAGGCGTATTTTGAGGACATTGAGGCGCTCGGCTGCAAAAAAGCAGATATCCATCCGCGCGTGACGGAAAATATCGAAACGATTATCGAATTCATTCAAGCGCTCATTGACAAAGGCTATGCGTACGAAGTCGATGGTGACGTATACTATCGGACGCGCAAGTTTGATGGCTACGGCAAATTGTCGCATCAGTCGATCGATGAGCTACAAGCGGGGGCGCGCATCGAAGTTGGGGAAAAGAAAGATGATCCACTCGATTTTGCTCTTTGGAAAGCAGCGAAAGAAGGAGAGATTTCTTGGGACAGCCCATGGGGGAAAGGGCGGCCCGGCTGGCATATCGAATGTTCAGCGATGGCGCGCAAATATTTAGGAGATACGATCGACATTCATGCTGGCGGCCAAGACTTAACGTTTCCACACCATGAAAACGAAATTGCCCAATCGGAAGCACTGACCGGCAAACCGTTTGCGAAATATTGGCTGCACAATGGGTATTTAAATATTAACAATGAAAAAATGTCCAAGTCGCTTGGCAACTTTGTACTTGTTCACGATATCATCCGGCAGATTGACCCACAAGTGTTGCGTTTCTTTATGCTGTCGGTGCACTATCGCCACCCGATCAACTATAGCGAGGAGCTGCTTGAGAGCGCTCGGCGTGGTCTCGAACGCTTGAGGACAGCATACGGTAATTTGCAGCACCGGCTTGGGGCGAGCACGAACTTAACCGATAACGACGGCGAGTGGCTTTCGCGCCTCGCGGATATCCGCGCCTCGTTCATTCGTGAAATGGACGATGATTTCAACACAGCAAACGGCATTGCGGTCTTGTTCGAGCTCGCCAAACAAGCGAACTTGTATTTGCAGGAGAAAACGACATCCGAGAATGTCATTCACGCGTTTTTGCGCGAATTTGAGCAGCTGATGGATGTACTCGGCCTTACTTTGAAACAAGAGGAGTTGCTTGACGAAGAAATTGAGGCGCTGATCCGCCAGCGCAATGAAGCGCGGAAAAATCGTGACTTTGCCTTAGCCGACCGCATCCGCGACGAGTTGAAAGCAAAAAATATCATTTTGGAAGATACGCCGCAAGGGACGAGATGGAAACGGGGATCG
配列番号100
アミノ酸
CysRS-GsuCysRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MKGRANMSSIRLYNTLTRKKETFEPLEPNKVKMYVCGPTVYNYIHIGNARAAIVFDTIRRYLEFRGYDVTYVSNFTDVDDKLIRAARELGESVPAIAERFIEAYFEDIEALGCKKADIHPRVTENIETIIEFIQALIDKGYAYEVDGDVYYRTRKFDGYGKLSHQSIDELQAGARIEVGEKKDDPLDFALWKAAKEGEISWDSPWGKGRPGWHIECSAMARKYLGDTIDIHAGGQDLTFPHHENEIAQSEALTGKPFAKYWLHNGYLNINNEKMSKSLGNFVLVHDIIRQIDPQVLRFFMLSVHYRHPINYSEELLESARRGLERLRTAYGNLQHRLGASTNLTDNDGEWLSRLADIRASFIREMDDDFNTANGIAVLFELAKQANLYLQEKTTSENVIHAFLREFEQLMDVLGLTLKQEELLDEEIEALIRQRNEARKNRDFALADRIRDELKAKNIILEDTPQGTRWKRGS
配列番号101
DNA
GluRS-GsuGluRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGAATTGGAGGTTTGGACGATGGCAAAAAACGTGCGCGTGCGCTATGCGCCGAGCCCGACTGGCCATTTGCATATCGGTGGGGCACGGACAGCGCTGTTTAACTATTTGTTTGCCCGCCATTACGGCGGAAAAATGATCGTCCGCATCGAAGATACGGATATTGAACGGAACGTTGAAGGCGGCGAAGAGTCGCAGCTTGAAAACTTAAAATGGCTTGGCATCGATTATGACGAATCGATTGATAAGGACGGCGGATATGGGCCGTATCGTCAGACGGAACGGCTCGATATCTATCGGAAGTATGTGAACGAGCTGCTTGAACAAGGGCATGCGTATAAATGTTTTTGTACACCGGAAGAGCTCGAGCGGGAACGTGAGGAGCAACGGGCGGCAGGTATTGCTGCTCCGCAATACAGCGGCAAATGCCGCCATTTAACGCCGGAGCAAGTTGCCGAGCTTGAAGCACAAGGAAAACCGTATACGATCCGCTTGAAAGTGCCGGAAGGGAAAACGTATGAAGTAGATGATTTAGTGCGCGGTAAAGTGACGTTTGAATCGAAAGACATCGGCGATTGGGTCATTGTGAAGGCGAACGGTATTCCGACGTACAACTTTGCCGTTGTCATTGATGACCATTTGATGGAAATCAGCCATGTGTTCCGCGGTGAGGAGCATTTATCCAACACGCCGAAACAGCTAATGGTGTACGAATATTTCGGTTGGGAGCCACCGCAATTCGCCCATATGACATTGATTGTCAACGAGCAGCGGAAAAAGCTATCCAAGCGCGATGAATCGATTATCCAGTTCGTGTCGCAATATAAAGAGCTCGGCTATTTGCCGGAGGCGATGTTCAACTTTTTCGCCCTTCTTGGCTGGTCGCCGGAAGGAGAAGAAGAAATTTTTACGAAGGACGAGCTCATCCGCATTTTTGATGTCGCCCGGCTGTCGAAATCGCCGTCGATGTTTGATACGAAAAAGCTGACATGGATGAACAACCAATATATCAAAAAGCTGGATCTCGACAGGCTTGTCGAGCTGGCGTTGCCGCATTTAGTGAAAGCCGGACGCCTGCCGGCAGATATGAGTGATGAGCAGCGGCAATGGGCACGCGATTTGATTGCCTTGTACCAAGAGCAAATGAGCTACGGTGCGGAGATCGTTTCGCTGTCCGAGCTGTTCTTTAAAGAAGAAGTCGAATACGAAGACGAAGCCCGCCAAGTGCTCGCCGAAGAACAAGTACCGGATGTGCTCTCCGCCTTTTTGGCGAATGTGCGTGAGCTTGAGCCGTTTACGGCGGATGAGATTAAAGCAGCGATCAAAGCAGTGCAAAAATCGACAGGGCAAAAAGGCAAGAAGCTGTTTATGCCGATTCGCGCCGCAGTGACTGGGCAAACACACGGACCGGAACTGCCGTTTGCCATCCAACTGCTTGGCAAACAAAAGGTGATTGAACGGCTCGAACGGGCACTGCATGAAAAATTT
配列番号102
アミノ酸
GluRS-GsuGluRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MELEVWTMAKNVRVRYAPSPTGHLHIGGARTALFNYLFARHYGGKMIVRIEDTDIERNVEGGEESQLENLKWLGIDYDESIDKDGGYGPYRQTERLDIYRKYVNELLEQGHAYKCFCTPEELEREREEQRAAGIAAPQYSGKCRHLTPEQVAELEAQGKPYTIRLKVPEGKTYEVDDLVRGKVTFESKDIGDWVIVKANGIPTYNFAVVIDDHLMEISHVFRGEEHLSNTPKQLMVYEYFGWEPPQFAHMTLIVNEQRKKLSKRDESIIQFVSQYKELGYLPEAMFNFFALLGWSPEGEEEIFTKDELIRIFDVARLSKSPSMFDTKKLTWMNNQYIKKLDLDRLVELALPHLVKAGRLPADMSDEQRQWARDLIALYQEQMSYGAEIVSLSELFFKEEVEYEDEARQVLAEEQVPDVLSAFLANVRELEPFTADEIKAAIKAVQKSTGQKGKKLFMPIRAAVTGQTHGPELPFAIQLLGKQKVIERLERALHEKF
配列番号103
DNA
GlyRS-GsuGlyRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGAGGAGGATGATGACATGGCTGCAACAATGGAAGAAATCGTTGCCCACGCCAAGCATCGCGGCTTCGTGTTTCCGGGGTCGGAAATTTACGGTGGGCTGGCGAACACATGGGATTACGGTCCGCTCGGTGTCGAGCTGAAAAATAACATTAAACGGGCGTGGTGGAAAAAGTTCGTCCAAGAATCGCCACACAATGTCGGTTTGGACGCTGCCATTTTAATGAACCCAAAAACGTGGGAAGCATCCGGCCATTTAGGCAACTTCAACGATCCGATGGTCGACTGCAAACAGTGTAAAGCGCGTCATCGCGCCGACAAGCTGATTGAGCAGGCACTTGAAGAAAAAGGAATTGAGATGGTCGTTGACGGTTTGCCGCTTGCCAAGATGGAAGAGCTTATCCGTGAATACGACATCGCTTGTCCAGAATGCGGCAGTCGTGACTTTACGAACGTGCGTCAGTTTAATTTAATGTTCAAAACATACCAAGGTGTCACCGAATCAAGCGCTAACGAAATTTATTTGCGCCCGGAGACGGCCCAAGGTATTTTTGTCAACTTTAAAAACGTCCAGCGCACGATGCGCAAAAAATTACCGTTTGGCATCGCGCAAATCGGAAAAAGTTTCCGCAACGAAATTACGCCAGGGAACTTTACGTTCCGCACACGTGAATTTGAACAAATGGAGCTTGAGTTTTTCTGCAAACCGGGCGAAGAGCTGAAATGGTTCGACTACTGGAAACAATTTTGCAAGGAATGGCTGTTGTCGCTCGGCATGAACGAAGAACATATCCGCCTGCGCGACCATACGAAAGAAGAATTATCCCACTATAGTAATGCGACGACTGATATCGAGTATCAGTTCCCGTTCGGCTGGGGCGAGCTCTGGGGTATTGCGTCGCGCACCGATTACGACTTAAAACAGCATATGGAACACTCCGGTGAGGATTTCCATTATCTTGACCAAGAAACGAATGAGCGCTACATCCCGTACTGCATTGAGCCGTCGCTCGGTGCCGACCGTGTCACGCTCGCGTTTATGATTGACGCCTATGACGAGGAAGAGCTCGAAGACGGCACGACCCGGACAGTTATGCATTTGCATCCAGCGCTTGCGCCGTACAAAGCAGCTGTCTTGCCGTTATCGAAAAAGCTGGGTGACGGAGCGCGCCGAATTTATGAAGAGCTCGCGAAGCATTTCATGGTCGACTACGATGAAACAGGTTCGATTGGCAAGCGGTATCGTCGTCAAGATGAAATCGGCACGCCGTTTTGTATCACGTACGACTTTGAGTCCGAGCAAGATGGCCAAGTAACCGTTCGTGACCGTGACACGATGGAACAAGTGCGGTTGCCGATTGGGGAGCTCAAAGCCTTTTTGGATAAAAAAATTGCCTTT
配列番号104
アミノ酸
GlyRS-GsuGlyRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MEEDDDMAATMEEIVAHAKHRGFVFPGSEIYGGLANTWDYGPLGVELKNNIKRAWWKKFVQESPHNVGLDAAILMNPKTWEASGHLGNFNDPMVDCKQCKARHRADKLIEQALEEKGIEMVVDGLPLAKMEELIREYDIACPECGSRDFTNVRQFNLMFKTYQGVTESSANEIYLRPETAQGIFVNFKNVQRTMRKKLPFGIAQIGKSFRNEITPGNFTFRTREFEQMELEFFCKPGEELKWFDYWKQFCKEWLLSLGMNEEHIRLRDHTKEELSHYSNATTDIEYQFPFGWGELWGIASRTDYDLKQHMEHSGEDFHYLDQETNERYIPYCIEPSLGADRVTLAFMIDAYDEEELEDGTTRTVMHLHPALAPYKAAVLPLSKKLGDGARRIYEELAKHFMVDYDETGSIGKRYRRQDEIGTPFCITYDFESEQDGQVTVRDRDTMEQVRLPIGELKAFLDKKIAF
配列番号105
DNA
HisRS-GsuHisRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGCTTTTCAAATTCCAAGAGGGACACAAGATTTATTACCGGGTGAAACGGAAAAATGGCAATATGTCGAACAAGTGGCCCGCGACCTGTGTAGACGGTACGGCTATGAAGAAATACGGACGCCGATTTTTGAACATACGGAGCTGTTTTTACGTGGCGTTGGTGATACGACCGATATCGTCCAAAAAGAGATGTACACGTTTGAAGACAAAGGGGGCCGTGCGTTGACGCTCCGTCCGGAAGGAACCGCACCGGTCGTGCGGGCGTTCGTCGAGCATAAGCTGTACGGCAGCCCGAATCAGCCGGTCAAGTTGTATTATGCGGGACCAATGTTCCGTTATGAGCGGCCGGAAGCCGGACGGTTCCGCCAATTCGTCCAGTTTGGTGTTGAGGCAATTGGCAGCAGTGATCCGGCGATTGACGCCGAGGTGATGGCGTTAGCGATGCATATTTATAAGGCGCTTGGTTTAAAACACATCCGGCTCGTAATCAACAGTTTAGGCGATGTAGACAGCCGCCGGGCGCATCGCGAAGCGCTTGTCCGCCATTTTTCTGACCGCATTCATGAACTGTGCCCGGACTGTCAGGCGCGGCTTGAGACGAATCCGCTCCGCATTCTCGATTGTAAAAAGGACCGCGATCATGAACTGATGGCGTCAGCACCGTCGATTTTAGACTATTTGAATGACGAATCGCGCGCGTATTTTGAGAAGGTGAAGCAATATTTAACGATGCTTGACATCCCGTTTGTCATTGACTCGCGGCTCGTGCGCGGCCTCGATTATTACAACCATACGACGTTTGAAATTATGAGCGAGGCTGAAGGATTCGGCGCAGCGGCGACTCTTTGCGGCGGCGGACGCTATAACGGGCTTGTGCAAGAAATTGGCGGCCCGGAAACGCCTGGCATCGGCTTTGCGTTAAGCATTGAACGGCTGCTGGCGGCGCTTGAAGCGGAAGGGATTGAACTGCCGATCCATCGAGGAATCGATTGCTATGTTGTCGCTGTCGGTGAGCGGGCAAAAGATGAAACTGTCCGCCTCGTTTACGAATTGCGCCGTGCCGGCCTGCGTGTGGAGCAAGACTATTTAGGTCGAAAAATGAAGGCACAGCTGAAGGCAGCTGACCGTCTTGGCGCATCATTCGTTGCCATCATCGGCGACGAGGAGCTGGAAAAACAGACAGCAGCTGTGAAACACATGGCGAGCGGCGAGCAAACTGATGTGCCGCTTGGAGAGTTGGCGTCCTTTTTAATAGAACGAACAAAACGGGAGGAG
配列番号106
アミノ酸
HisRS-GsuHisRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MAFQIPRGTQDLLPGETEKWQYVEQVARDLCRRYGYEEIRTPIFEHTELFLRGVGDTTDIVQKEMYTFEDKGGRALTLRPEGTAPVVRAFVEHKLYGSPNQPVKLYYAGPMFRYERPEAGRFRQFVQFGVEAIGSSDPAIDAEVMALAMHIYKALGLKHIRLVINSLGDVDSRRAHREALVRHFSDRIHELCPDCQARLETNPLRILDCKKDRDHELMASAPSILDYLNDESRAYFEKVKQYLTMLDIPFVIDSRLVRGLDYYNHTTFEIMSEAEGFGAAATLCGGGRYNGLVQEIGGPETPGIGFALSIERLLAALEAEGIELPIHRGIDCYVVAVGERAKDETVRLVYELRRAGLRVEQDYLGRKMKAQLKAADRLGASFVAIIGDEELEKQTAAVKHMASGEQTDVPLGELASFLIERTKREE
配列番号107
DNA
IleRS-GsuIleRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGACTACAAAGAGACGCTGCTCATGCCGCAAACGGAGTTCCCGATGCGTGGCAACTTGCCGAAGCGGGAGCCGGAAATGCAAAAAAAATGGGAGGAAATGGACATTTACCGGAAAGTGCAGGAGCGGACGAAAGGACGGCCGCTGTTTGTGCTGCACGACGGCCCGCCATACGCCAACGGTGATATTCATATGGGCCATGCATTAAATAAAATTTTAAAAGATATTATCGTCCGCTACAAGTCGATGAGCGGCTTTTGTGCGCCGTATGTGCCTGGCTGGGATACACATGGCTTACCGATTGAAACGGCACTGACGAAGCAAGGTGTCGACCGCAAATCGATGAGTGTCGCTGAGTTCCGCAAGCTGTGCGAACAATACGCGTATGAGCAAATCGACAACCAGCGCCAACAGTTTAAACGGCTCGGGGTGCGGGGCGATTGGGACAACCCGTACATTACGCTCAAGCCGGAATACGAAGCCCAGCAAATTAAAGTGTTCGGTGAAATGGCGAAAAAAGGGCTCATTTATAAAGGGCTGAAGCCGGTGTATTGGTCGCCGTCGAGCGAATCGGCGCTCGCCGAAGCGGAAATCGAATATAAAGACAAACGGTCGCCGTCGATTTATGTCGCGTTCCCAGTTAAAGATGGTAAAGGTGTGCTTCAAGGGGATGAACGAATCGTCATTTGGACGACGACACCGTGGACGATTCCAGCGAACTTGGCGATCGCCGTTCACCCGGATTTGGACTACTATATTGTCGAAGCAAACGGGCAAAAATACGTTGTTGCTGCGGCCTTGGCGGAATCGGTAGCGAAAGAAGTCGGCTGGGAGGCATGGTCCGTCGTCAAAACGGTAAAAGGAAAAGAACTTGAGTACGTAGTCGCCAAACATCCGTTTTACGAGCGCGACTCGCTTGTCGTCTGCGGCGAGCACGTCACGACCGACGCCGGTACCGGCTGCGTTCATACGGCACCAGGACACGGGGAAGACGACTTTATCGTCGGACAAAAATACGGGCTTCCGGTTCTTTGCCCGGTTGATGAGCGCGGCTATATGACAGAAGAAGCGCCTGGATTTGCAGGGATGTTTTACGACGAGGCGAACAAAGCGATTACACAAAAGCTCGAGGAAGTTGGAGCGCTCCTTAAGCTCAGCTTCATTACCCACTCGTATCCGCATGATTGGCGGACGAAGCAACCGACAATTTTCCGAGCGACGACACAATGGTTTGCCTCCATTGATAAAATTCGTGATCAACTTCTTGATGCCATCAAGGAAACGAAATGGGTGCCAGAATGGGGAGAAATCCGCATCCATAACATGGTGCGCGACCGCGGTGACTGGTGCATCTCCCGCCAACGCGCTTGGGGCGTGCCAATTCCGGTCTTTTACGGCGAAAACGGCGAGCCGATCATCACAGATGAGACGATCGAGCACGTGTCAAACCTATTCCGCCAGTACGGCTCGAATGTTTGGTTTGAGCGTGAGGCGAAAGACTTATTGCCGGAAGGATTCACCCATCCGTCCAGCCCGAACGGCCTCTTTACGAAAGAGACGGATATTATGGACGTCTGGTTTGACTCCGGTTCGTCGCATCAAGCCGTGCTTGTTGAACGCGATGACCTAGAGCGTCCGGCTGATTTATACTTAGAAGGATCTGACCAATATCGCGGCTGGTTTAACTCGTCGCTGTCTACAGCCGTTGCCGTCACCGGAAAAGCACCGTATAAAGGGGTGTTAAGCCATGGCTTCGTTTTAGACGGCGAAGGGCGAAAAATGAGCAAATCGCTCGGCAACGTCGTCGTGCCGGCCAAAGTCATGGAACAGCTCGGTGCCGACATTTTACGCCTTTGGGTCGCCTCGGTTGACTATCAGGCGGATGTACGCATTTCCGATAACATTTTAAAACAAGTGTCCGAAGTGTATCGGAAAATCCGCAATACGTTCCGCTTTATGCTCGGCAACTTGTTTGATTTTGACCCGAATCAAAACGCTGTGCCGGTTGGGGAGCTTGGCGAAGTCGATCGCTACATGTTAGCGAAATTAAATAAACTCATCGCTAAAGTGAAAAAGGCGTATGACAGCTATGATTTTGCTGCTGTTTATCATGAGATGAACCATTTCTGCACCGTCGAGTTAAGCGCATTTTATTTGGATATGGCGAAAGACATTTTGTACATCGAAGCGGCCGATTGTCGTGCCCGCCGTGCGGTGCAGACGGTGCTGTATGAAACGGTTGTCGCCTTGGCGAAGCTCATTGCGCCGATTTTGCCGCACACGGCCGATGAAGTGTGGGAGCATATCCCGAACCGGAAAGAGCAAGTGGAAAGCGTCCAGCTCACCGACATGCCGGAGTCAATGGCCATCGATGGTGAAGAAGCGCTGCTTGCGAAATGGGATGCGTTTATGGATGTACGAGATGACATTTTAAAAGCGCTCGAGAATGCGCGTAATGAAAAAGTGATCGGTAAGTCGCTCACGGCGAGCGTCACTGTTTACCCGAAAGACGAAGTGCGGGCGCTTTTGGCTTCGATCAACGAGGACTTGCGCCAACTTCTCATCGTTTCCGCGTTTTCGGTCGCCGATGAATCGTATGACGCCGCGCCAGCCGAAGCAGAACGGCTCAACCATGTGGCCGTCATCGTTCGCCCGGCGGAAGGTGAGACGTGCGAACGTTGCTGGACGGTGACACCGGACGTCGGACGCGATGAGTCCCACCCGACGCTTTGTCCGCGCTGCGCACATATTGTGAACGAACATTATTCGGCA
配列番号108
アミノ酸
IleRS-GsuIleRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MDYKETLLMPQTEFPMRGNLPKREPEMQKKWEEMDIYRKVQERTKGRPLFVLHDGPPYANGDIHMGHALNKILKDIIVRYKSMSGFCAPYVPGWDTHGLPIETALTKQGVDRKSMSVAEFRKLCEQYAYEQIDNQRQQFKRLGVRGDWDNPYITLKPEYEAQQIKVFGEMAKKGLIYKGLKPVYWSPSSESALAEAEIEYKDKRSPSIYVAFPVKDGKGVLQGDERIVIWTTTPWTIPANLAIAVHPDLDYYIVEANGQKYVVAAALAESVAKEVGWEAWSVVKTVKGKELEYVVAKHPFYERDSLVVCGEHVTTDAGTGCVHTAPGHGEDDFIVGQKYGLPVLCPVDERGYMTEEAPGFAGMFYDEANKAITQKLEEVGALLKLSFITHSYPHDWRTKQPTIFRATTQWFASIDKIRDQLLDAIKETKWVPEWGEIRIHNMVRDRGDWCISRQRAWGVPIPVFYGENGEPIITDETIEHVSNLFRQYGSNVWFEREAKDLLPEGFTHPSSPNGLFTKETDIMDVWFDSGSSHQAVLVERDDLERPADLYLEGSDQYRGWFNSSLSTAVAVTGKAPYKGVLSHGFVLDGEGRKMSKSLGNVVVPAKVMEQLGADILRLWVASVDYQADVRISDNILKQVSEVYRKIRNTFRFMLGNLFDFDPNQNAVPVGELGEVDRYMLAKLNKLIAKVKKAYDSYDFAAVYHEMNHFCTVELSAFYLDMAKDILYIEAADCRARRAVQTVLYETVVALAKLIAPILPHTADEVWEHIPNRKEQVESVQLTDMPESMAIDGEEALLAKWDAFMDVRDDILKALENARNEKVIGKSLTASVTVYPKDEVRALLASINEDLRQLLIVSAFSVADESYDAAPAEAERLNHVAVIVRPAEGETCERCWTVTPDVGRDESHPTLCPRCAHIVNEHYSA
配列番号109
DNA
LeuRS-GsuLeuRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAGGAGGAGTGCGACGATGAGTTTCAACCATCGCGAAATTGAGAAAAAGTGGCAGGATTATTGGGAACAGCATAAAACGTTCCGCACCCCGGATGAAAGCGATAAACCGAAGTTTTACGTGTTGGATATGTTTCCGTATCCGTCTGGCGCTGGCTTGCACGTCGGCCATCCGGAAGGGTATACGGCGACTGATATTTTGGCGCGCATGAAGCGGATGCAAGGGTACAATGTCCTTCACCCGATGGGGTGGGACGCGTTCGGATTGCCGGCAGAACAATATGCGCTCGATACCGGCAACGACCCGGCCGAATTTACGCAAAAAAACATCGACAACTTCCGCCGGCAAATTAAGTCGCTTGGTTTTTCGTATGACTGGGATCGGGAAATTAACACGACTGATCCGAACTATTACAAATGGACGCAATGGATTTTCTTGAAGCTGTATGAAAAAGGGCTCGCCTACATGGACGAAGTACCGGTCAACTGGTGTCCGGCGCTTGGCACCGTGCTGGCGAACGAAGAAGTCATCAACGGCCGGAGCGAGCGCGGTGGGCATCCGGTCATCCGCAAGCCAATGCGGCAATGGATGCTGAAAATTACCGCCTATGCCGACCGGCTGCTCGAAGATTTGGAGGAGCTTGACTGGCCGGAAAGCATTAAAGAAATGCAACGCAACTGGATCGGCCGTTCGGAAGGAGCGGAAATTGAGTTTGCTGTCGACGGCCATGACGAGTCGTTCACGGTATTTACGACGCGGCCAGATACGCTGTTTGGCGCCACGTACGCAGTGTTGGCTCCGGAACATCCGCTTGTTGAGAAAATTACAACGCCGGAGCAAAAACCAGCCGTTGATGCTTACTTAAAAGAAGTGCAAAGCAAAAGCGACCTCGAGCGCACCGACTTGGCGAAAGAAAAAACAGGCGTGTTCACTGGTGCGTACGCCATCCATCCAGTTACCGGCGACAAGCTGCCGATTTGGATCGCCGATTACGTGTTGATGGGCTACGGCACTGGGGCGATCATGGCTGTACCGGCGCATGATGAGCGCGACTACGAGTTTGCGAAAACATTCAACTTGCCGATCAAAGAAGTCGTTGCCGGCGGGAATGTCGAAAACGAGCCGTACACTGGCGACGGGGAGCACATCAACTCTGAGTTTTTGAACGGCTTGAACAAACAAGAAGCGATCGAAAAAATGATCGCCTGGCTTGAAGAAAACGGAAAAGGACAAAAGAAAGTGTCGTACCGGCTGCGCGACTGGTTGTTTAGCCGCCAACGCTACTGGGGTGAGCCGATTCCGGTCATCCATTGGGAAGATGGGACGATGACGACGGTGCCGGAAGAAGAATTGCCGCTTGTCTTGCCGAAAACGGATGAAATTAAACCGTCGGGAACGGGTGAATCGCCGCTCGCCAACATCGAAGAATGGGTCAATGTTGTCGATCCGAAAACCGGGAAAAAAGGGCGGCGTGAAACAAACACGATGCCGCAATGGGCGGGAAGCTGCTGGTATTATTTGCGCTACATCGACCCGCATAACGACAAACAGCTCGCCGATCCGGAAAAGTTGAAACAATGGCTGCCGGTTGACGTCTACATCGGCGGGGCGGAGCATGCGGTCTTGCACTTGCTGTACGCTCGCTTCTGGCATAAAGTGTTGTACGACCTTGGCATCGTGCCGACGAAAGAGCCGTTCCAAAAGCTGTTTAACCAAGGGATGATCTTAGGCGAAAACAATGAAAAAATGAGCAAATCGAAAGGCAATGTCGTCAACCCGGATGATATCGTCGAGAGCCATGGCGCGGATACGTTGCGGCTGTATGAAATGTTTATGGGGCCGCTTGAAGCGTCGATCGCCTGGTCGACGAAAGGGCTTGACGGAGCGCGCCGTTTCTTAGAGCGCGTCTGGCGTCTGTTTGTCACCGAAGATGGTCAACTGAACCCGAACATCGTTGACGAGCCAGCGAACGATACGCTCGAGCGCGTCTACCATCAAACGGTGAAAAAAGTGACGGAAGACTACGAAGCGCTGCGCTTCAACACCGCCATTTCGCAGCTGATGGTGTTCATTAACGAAGCGTATAAAGCGGAGCAGATGAAAAAAGAATATATGGAAGGGTTCGTCAAGCTCTTATCGCCGGTTTGCCCGCATATTGGCGAAGAGCTCTGGCAAAAGCTCGGCCATACTGACACCATCGCCTATGAACCATGGCCGACATATGACGAAGCGAAACTCGTCGAAGATGTCGTTGAAATCGTGATCCAAATCAACGGCAAAGTGCGGGCGAAACTGAACGTGCCGGCGGACTTATCGAAAGAGGCGCTAGAAGAACGGGCGCTCGCCGATGAAAAAATTAAAGAGCAGCTTGCAGGGAAAACGGTGCGTAAGGTGATCACTGTCCCTGGTAAGCTCGTCAATATCGTCGCCAAC
配列番号110
アミノ酸
LeuRS-GsuLeuRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MRRSATMSFNHREIEKKWQDYWEQHKTFRTPDESDKPKFYVLDMFPYPSGAGLHVGHPEGYTATDILARMKRMQGYNVLHPMGWDAFGLPAEQYALDTGNDPAEFTQKNIDNFRRQIKSLGFSYDWDREINTTDPNYYKWTQWIFLKLYEKGLAYMDEVPVNWCPALGTVLANEEVINGRSERGGHPVIRKPMRQWMLKITAYADRLLEDLEELDWPESIKEMQRNWIGRSEGAEIEFAVDGHDESFTVFTTRPDTLFGATYAVLAPEHPLVEKITTPEQKPAVDAYLKEVQSKSDLERTDLAKEKTGVFTGAYAIHPVTGDKLPIWIADYVLMGYGTGAIMAVPAHDERDYEFAKTFNLPIKEVVAGGNVENEPYTGDGEHINSEFLNGLNKQEAIEKMIAWLEENGKGQKKVSYRLRDWLFSRQRYWGEPIPVIHWEDGTMTTVPEEELPLVLPKTDEIKPSGTGESPLANIEEWVNVVDPKTGKKGRRETNTMPQWAGSCWYYLRYIDPHNDKQLADPEKLKQWLPVDVYIGGAEHAVLHLLYARFWHKVLYDLGIVPTKEPFQKLFNQGMILGENNEKMSKSKGNVVNPDDIVESHGADTLRLYEMFMGPLEASIAWSTKGLDGARRFLERVWRLFVTEDGQLNPNIVDEPANDTLERVYHQTVKKVTEDYEALRFNTAISQLMVFINEAYKAEQMKKEYMEGFVKLLSPVCPHIGEELWQKLGHTDTIAYEPWPTYDEAKLVEDVVEIVIQINGKVRAKLNVPADLSKEALEERALADEKIKEQLAGKTVRKVITVPGKLVNIVAN
配列番号111
DNA
LysRS-GsuLysRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAGCCATGAAGAATTGAACGACCAATTGCGTGTCCGCCGGGAAAAGTTAAAAAAAATCGAAGAGCTAGGTGTCGACCCGTTTGGCAAACGGTTCGAGCGCACGCATAAAGCAGAAGAGCTGTTTAAACTGTACGGCGATTTGTCCAAAGAAGAACTTGAAGATCAGCAAATTGAAGTCGCTGTCGCCGGCCGCATTATGACGAAACGCGGTAAAGGAAAAGCAGGATTTGCTCACATTCAAGACGTCACAGGGCAAATTCAAATTTATGTCCGCCAAGACGATGTCGGTGAACAGCAATATGAGCTGTTTAAAATCTCTGACCTTGGTGATATCGTCGGTGTGCGCGGCACTATGTTCAAAACAAAAGTCGGCGAGCTTTCCATCAAAGTGTCATCATATGAATTTTTAACAAAAGCATTGCGTCCATTGCCGGAAAAATACCATGGTTTAAAGGACGTCGAACAACGTTACCGCCAACGTTATCTCGACTTAACTATGAATCCGCAAAGTAAGCAGACGTTTATCACCCGTAGTCTCATTATTCAATCGATGCGGCGTTATCTCGACAGCCAAGGTTATTTGGAAGTCGAAACACCGATGATGCACGCCATAGCAGGTGGTGCGGCTGCACGTCCGTTTATTACGCACCATAATGCCCTTGATATGACACTTTATATGCGAATCGCCATCGAACTCCATTTAAAACGGCTCATCGTCGGCGGTTTGGAAAAAGTGTATGAAATCGGACGCGTCTTCCGGAATGAGGGGATTTCCACCCGTCACAATCCGGAGTTTACGATGCTTGAACTGTACGAGGCATATGCCGACTTCCGTGACATCATGAAATTGACAGAAAACTTAATTGCTCACATTGCCACGGAAGTGCTTGGCACGACGAAAATTCAATACGGCGAACATACCGTCGATTTAACGCCTGAATGGCGGCGACTTCATATGGTCGATGCGATTAAAGAATACGTCGGCGTTGATTTCTGGCGGCACATGGACGACGAGGAAGCGCGGGCGTTGGCGAAAGAACATGGGGTCGAAATCGCCCCGCACATGACGTTTGGTCATATCGTCAATGAATTTTTTGAACAAAAAGTCGAGTCGCAACTCATCCAACCGACGTTCATTTATGGCCACCCTGTCGAAATTTCGCCGTTAGCTAAGAAAAACCCGGACGATCCACGCTTTACCGATCGATTTGAGCTATTTATCGTTGGACGTGAACATGCGAACGCGTTTACGGAACTAAACGATCCGATCGACCAGCGCCAACGTTTCGAAGCACAGTTGAAAGAACGTGAACAAGGGAACGATGAAGCGCACGAAATGGACGAAGATTTCCTCGAAGCGCTCGAGTACGGTATGCCTCCAACAGGCGGACTCGGCATCGGCGTTGACCGTCTAGTCATGCTCTTGACTAACTCTCCGTCCATTCGGGATGTGTTACTCTTCCCGCAAATGCGTCATAAA
配列番号112
アミノ酸
LysRS-GsuLysRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MSHEELNDQLRVRREKLKKIEELGVDPFGKRFERTHKAEELFKLYGDLSKEELEDQQIEVAVAGRIMTKRGKGKAGFAHIQDVTGQIQIYVRQDDVGEQQYELFKISDLGDIVGVRGTMFKTKVGELSIKVSSYEFLTKALRPLPEKYHGLKDVEQRYRQRYLDLTMNPQSKQTFITRSLIIQSMRRYLDSQGYLEVETPMMHAIAGGAAARPFITHHNALDMTLYMRIAIELHLKRLIVGGLEKVYEIGRVFRNEGISTRHNPEFTMLELYEAYADFRDIMKLTENLIAHIATEVLGTTKIQYGEHTVDLTPEWRRLHMVDAIKEYVGVDFWRHMDDEEARALAKEHGVEIAPHMTFGHIVNEFFEQKVESQLIQPTFIYGHPVEISPLAKKNPDDPRFTDRFELFIVGREHANAFTELNDPIDQRQRFEAQLKEREQGNDEAHEMDEDFLEALEYGMPPTGGLGIGVDRLVMLLTNSPSIRDVLLFPQMRHK
配列番号 113
DNA
MetRS-GsuMetRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGAGAAAAAGACGTTTTATTTGACGACGCCGATTTATTATCCGAGCGACAAATTGCACATCGGCCATGCTTATACAACAGTGGCGGGGGATACGCTAGCGCGCTATAAACGGATGCGCGGTTACGATGTTATGTATTTGACGGGAACCGATGAGCACGGGCAAAAAATTCAACGCAAGGCGGAGGAAAAAGGAGTAACGCCGCAGCAATATGTCGATGAGATCGTCGCTGGCATTCAGGAGCTATGGAAAAAGCTCGACATTTCTTATGACGATTTCATCCGTACAACGCAGGAGCGGCATAAAAAAGTAGTCGAAAAGATTTTCGCGCGTCTTGTCGAACAAGGGGATATTTATTTAGGTGAATATGAAGGATGGTATTGCACGCCATGCGAATCGTTTTACACTGAGCGACAGCTTGTCGACGGCAACTGCCCGGACTGTGGTCGTCCGGTTGAAAAAGTGAAAGAGCAGTCGTACTTTTTCCGAATGAGCAAATACGTCGACCGTTTGCTTCAATATTATGAGGAAAATCCAGATTTCATCCAGCCGGAATCGCGGAAAAACGAAATGATTAACAATTTTATTAAGCCGGGGCTTGAAGATTTAGCTGTGTCGCGGACGACGTTTGACTGGGGCATTAAAGTGCCGGGCGATCCGAAACATGTCATTTACGTCTGGATTGACGCGCTTGCCAACTATATTACAGCGCTCGGTTACGGCACGGACAATGATGAAAAGTTCCGCAAATATTGGCCGGCCGATGTCCATTTAGTCGGCAAGGAAATCATCCGCTTTCATACGATTTATTGGCCGATTATGCTCATGGCGCTTGACTTGCCGCTGCCGAAAAAAGTATTCGGTCATGGCTGGCTGCTCATGAAAGACGGGAAAATGTCGAAATCGAAAGGCAATGTCGTTGACCCGGTGACGTTGATCGATCGATACGGACTCGATGCGCTTCGTTATTATTTACTCAGGGAAGTGCCGTTCGGTTCTGACGGCGTATTCACGCCGGAAGGATTTATTGAGCGCATCAACTACGATTTAGCCAATGACCTAGGCAATTTATTGAATCGTACAGTAGCGATGATTAAGAAATATTTTGATGGGGTGATTCCGCCGTACCGCGGTCCGAAAACGCCGTTTGACGAAGAGCTGGTACAAACGGCGCGTGAGGTGGTCCGTCAGTATGAGGAAGCGATGGAACGGATGGAGTTTTCCGTTGCCCTTGCTTCGGTTTGGCAACTGATTGGCCGGACGAACAAATACATTGATGAGACGCAGCCATGGGTATTGGCCAAAGATGAAAGCAAACGGGAAGAGCTTGCTTCTGTCATGACCCACCTAGCCGAGTCGCTCCGCCATACGGCAGTGCTGTTGCAGCCGTTTTTGACACGCACGCCAGAGCGCATTTTTGCCCAGCTCGGCATTGCCGACCGTTCATTAAAAGAGTGGGATAGCTTGTACGAGTTCGGGCTCATTCCGGAAGGAACAAACGTGCAAAAAGGAGAACCACTGTTCCCGCGCCTTGATATTGAAGCGGAAGTCGAGTACATTAAGGCGCATATGCAAGGCGGCAAGCCGGCGGTGGAACCCGTTAAAGAGGAGAAGCAAGCGGCTGAGACGGCCGAAATCTCAATTGATGAGTTTGCCAAAGTTGACTTGCGCGTTGCTGAAGTCGTGCATGCTGAACGGATGAAAAACGCCAATAAGCTGTTGAAGCTCCAACTTGATCTTGGCGGCGAGAAACGGCAAGTCATCTCTGGTATCGCTGAATTTTACAAACCAGAGGAACTCATCGGCAAAAAGGTCATTTGCGTCGCCAATTTAAAACCGGCCAAACTGCGCGGTGAGTGGTCGGAAGGAATGATTTTGGCCGGCGGTAACGGCGGAGAGTTTTCACTGGCGACCGTCGATCAACATGTGCCAAACGGAACAAAAATTAAA
配列番号114
アミノ酸
MetRS-GsuMetRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MEKKTFYLTTPIYYPSDKLHIGHAYTTVAGDTLARYKRMRGYDVMYLTGTDEHGQKIQRKAEEKGVTPQQYVDEIVAGIQELWKKLDISYDDFIRTTQERHKKVVEKIFARLVEQGDIYLGEYEGWYCTPCESFYTERQLVDGNCPDCGRPVEKVKEQSYFFRMSKYVDRLLQYYEENPDFIQPESRKNEMINNFIKPGLEDLAVSRTTFDWGIKVPGDPKHVIYVWIDALANYITALGYGTDNDEKFRKYWPADVHLVGKEIIRFHTIYWPIMLMALDLPLPKKVFGHGWLLMKDGKMSKSKGNVVDPVTLIDRYGLDALRYYLLREVPFGSDGVFTPEGFIERINYDLANDLGNLLNRTVAMIKKYFDGVIPPYRGPKTPFDEELVQTAREVVRQYEEAMERMEFSVALASVWQLIGRTNKYIDETQPWVLAKDESKREELASVMTHLAESLRHTAVLLQPFLTRTPERIFAQLGIADRSLKEWDSLYEFGLIPEGTNVQKGEPLFPRLDIEAEVEYIKAHMQGGKPAVEPVKEEKQAAETAEISIDEFAKVDLRVAEVVHAERMKNANKLLKLQLDLGGEKRQVISGIAEFYKPEELIGKKVICVANLKPAKLRGEWSEGMILAGGNGGEFSLATVDQHVPNGTKIK
配列番号115
DNA
Phe-aRS-GsuPhe-aRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAGGGACGGGTTTTTTTATTTTGTTAGAGGAGGGATTGGCGTGAAAGAACGGTTGCATGAGCTTGAACGAGAAGCGCTTGAAAAAATTGAACAAGCTGGCGATTTAAAAGCGCTCAACGATGTGCGTGTCGCCTATTTAGGCAAAAAAGGGCCGATTACCGAAGTGCTGCGCGGCATGGGAGCATTGCCGTCAGAAGAGCGTCCGAAAATTGGTGCGCTTGCCAATGAGGTAAGAGAGGCGATCCAAAAGGCGCTCGAAGCAAAACAAACGAAACTGGAAGAAGAAGAAGTCGAGCGGAAGTTGGCGGCTGAAGCGATCGATGTGACGCTTCCGGGCCGTCCGGTGAAACTGGGGAATCCTCATCCGCTGACGCGCGTCATCGAGGAAATTGAAGATTTGTTTATCGGCATGGGCTATACGGTCGCCGAAGGTCCGGAAGTCGAGACCGATTATTACAATTTTGAGGCGCTCAATTTGCCGAAAGGACACCCGGCCCGCGATATGCAAGATTCGTTTTATATTACGGAAGAAATTCTGCTTCGCACCCACACGTCGCCGATGCAGGCACGGACGATGGAAAAACATCGCGGGCGCGGTCCGGTAAAAATCATTTGCCCGGGGAAAGTGTATCGCCGCGATACCGATGATGCGACCCATTCACATCAGTTTACGCAAATTGAAGGATTGGTTGTTGACCGCAACATCCGGATGAGCGATTTAAAAGGGACGCTGCGCGAATTTGCCCGCAAGCTGTTCGGTGAAGGGCGCGACATCCGTTTTCGTCCGAGCTTTTTCCCGTTTACCGAGCCTTCAGTCGAGGTCGATGTGTCCTGCTTCCGCTGCGAAGGGCACGGCTGCAGCGTTTGCAAAGGTACGGGCTGGATTGAAATTTTAGGCGCTGGCATGGTGCACCCGAACGTGCTTGAGATGGCCGGCTTTGATTCGAAAACGTATACCGGATTTGCGTTCGGCATGGGGCCGGAGCGGATCGCGATGTTGAAATACGGCATTGATGACATCCGCCATTTCTATCAGAACGATCTTCGTTTCTTGCAACAATTTTTGCGTGTC
配列番号116
アミノ酸
Phe-aRS-GsuPhe-aRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MRDGFFYFVRGGIGVKERLHELEREALEKIEQAGDLKALNDVRVAYLGKKGPITEVLRGMGALPSEERPKIGALANEVREAIQKALEAKQTKLEEEEVERKLAAEAIDVTLPGRPVKLGNPHPLTRVIEEIEDLFIGMGYTVAEGPEVETDYYNFEALNLPKGHPARDMQDSFYITEEILLRTHTSPMQARTMEKHRGRGPVKIICPGKVYRRDTDDATHSHQFTQIEGLVVDRNIRMSDLKGTLREFARKLFGEGRDIRFRPSFFPFTEPSVEVDVSCFRCEGHGCSVCKGTGWIEILGAGMVHPNVLEMAGFDSKTYTGFAFGMGPERIAMLKYGIDDIRHFYQNDLRFLQQFLRV
配列番号117
DNA
Phe-bRS-GsuPhe-bRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGCTCGTTTCTTATCGTTGGCTAGGCGAATACGTCGATTTGACGGGCGTGACGGCGGAACAACTCGCTGATCGCATTACAAAAAGCGGCATTGAAGTCGAGCGGGTTGAAGCGCTTGAGCGGGGAATGAAAGGAGTCGTCATCGGCCATGTGCTCGAATGCGAGCCACACCCAAACGCCGATAAACTGCGGAAATGTCTTGTTGATCTTGGCGAAGGAGAGCCGGTGCAAATCATTTGCGGTGCCCCGAACGTCGCCAAGGGGCAAAAAGTTGCTGTAGCGAAAGTTGGAGCGAGACTGCCGGGCAATTTTAAAATCAAACGGGCGAAGCTGCGCGGCGAAGAGTCGAACGGCATGATTTGCTCGCTCCAAGAACTCGGTGTTGAAACAAAAGTCGTGCCGAAAGAATACGCCGAAGGCATTTTCGTCTTCCCAAGCGACGCGCCGGTCGGCGCTGATGCGCTTGAATGGCTCGGCTTGCACGATGAAGTGCTCGAACTCGCCTTGACGCCGAATCGCGCCGATTGCTTAAGCATGCTTGGCGTTGCCTACGAAGTCGCTGCGATTCTCGGCCGCGATGTGAAGTTGCCGGAAACGGCGGTGAACGAAAATGAAGAAAGCGTCCATGACTACATTTCTGTCCGTGTCGAGGCGCCGGAAGACAATCCGCTGTACGCCGGACGGATCGTGAAAAACGTCCAAATCGGCCCGTCGCCGCTTTGGATGCAAGCGCGCTTGATGGCGGCCGGCATTCGTCCACACAACAATGTTGTCGATATCACCAACTACATTTTGCTTGAGTACGGCCAGCCGCTTCACGCGTTTGACTACGACCGTCTCGGTTCGAAGGAGATCGTCGTTCGTCGTGCCAAGGCGGGAGAAATGATCGTGACGCTTGACGATGTCGAGCGGAAGCTGACTGAAGATCATCTCGTCATCACAAACGGCCGTGAGCCGGTCGCCTTAGCCGGTGTGATGGGCGGAGCGAACTCGGAAGTGCAGGATGACACGAAAACAGTGTTCATCGAAGCCGCGTATTTTACGAGCCCGGTCATCCGCCAGGCGGTGAAAGACCACGGGTTGCGCAGCGAAGCGAGCACCCGGTTTGAAAAAGGGATTGATCCGGCGCGGACGAAAGAAGCGCTCGAGCGCGCTGCTGCTTTGATGGCAGAATACGCCGGCGGCGAGGTCGTCAGCGGTATCGTGGAAGCTAATACATGGAAAGAAGAGCCGGTTGTCGTAACGGTGGCGCTGGAACGCATCAACGGCGTCCTCGGCACAGCGATGACGAAAGAGGAAGTAGCTGGCATTCTTTCAAACTTGCAATTCTCGTTTACGGAAGATAATGGAACGTTTACAATCCATGTTCCATCGCGCCGCCGCGATATTACGATCGAAGAAGATATTATCGAGGAAGTCGCCCGTTTGTATGGCTACGACCATTTGCCAGCGACTTTGCCGGTGGCCGAAGCAAAACCGGGCGAGTTGACACCGTACCAAGCGAAACGCCGCCGTGTCCGCCGCTATTTCGAAGGCGCGGGCTTGTTCCAGGCGATCACGTATTCGCTTACCAGTCCGGACAAAGCGACGCGGTTTGCTTTGGAGACAACCGAACCAGTCCGCTTGGCGTTGCCGATGAGTGAGGAGCGGAGCGTTCTCCGGCAAAGCTTGGTGCCGCATTTGCTCGAAGCGGCGAGCTACAACCGTGCCCGCCAAGTTGAGAACGTCGCGCTATATGAAATCGGCTCTGTCTATTTGTCCAAGGGGGAAAATGTCCAACCGGCGGAAAAAGAACGGCTCGCCGGCGTCATCACCGGTTTATGGCATGCCCACCTTTGGCAAGGAGAGAAAAAAGCAGCTGATTTCTATGTTGCAAAAGGCGTGCTTGACGGCTTGTTCGCCCTGCTTGGGCTGTCTGATCGCATCAGCTACCGTCCGGCGAAGCGTGCTGATTTGCATCTGGGGCGGACAGCGGAGATTGTGCTTGACGGCAAAGAGATCGGCTTTGTCGGCCAGCTCCATCCGGCTGTACAAAAAGAGTACGATTTGAAAGAAACGTATGTCTTTGAACTCGCCTTCGCTGAGCTACTGAATACAGAAGGCGAAACGATCCGTTACGAGTCGATTCCGCGCTTCCCGTCAGTCGTGCGCGACATCGCTTTAGTCGTCGACGACAATGTCGAAGCAGGTGCTCTCAAGCAGGCGATCGCCGAAGCGGGGAACCCGCTATTAAAAGACGTGGCCCTCTTTGACGTCTATAAAGGCGACCGTCTGCCGGCCGGGAAAAAATCGCTCGCCTTCTCGCTCCGCTACTACGATCCGGAACGGACGCTCACTGATGAGGAAGTTACTGCCGTCCATGAACGGGTTTTGGCAGCGGTCGAGGAGCAGTTTGGCGCGGTGTTGCGCGGG
配列番号118
アミノ酸
Phe-bRS-GsuPhe-bRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MLVSYRWLGEYVDLTGVTAEQLADRITKSGIEVERVEALERGMKGVVIGHVLECEPHPNADKLRKCLVDLGEGEPVQIICGAPNVAKGQKVAVAKVGARLPGNFKIKRAKLRGEESNGMICSLQELGVETKVVPKEYAEGIFVFPSDAPVGADALEWLGLHDEVLELALTPNRADCLSMLGVAYEVAAILGRDVKLPETAVNENEESVHDYISVRVEAPEDNPLYAGRIVKNVQIGPSPLWMQARLMAAGIRPHNNVVDITNYILLEYGQPLHAFDYDRLGSKEIVVRRAKAGEMIVTLDDVERKLTEDHLVITNGREPVALAGVMGGANSEVQDDTKTVFIEAAYFTSPVIRQAVKDHGLRSEASTRFEKGIDPARTKEALERAAALMAEYAGGEVVSGIVEANTWKEEPVVVTVALERINGVLGTAMTKEEVAGILSNLQFSFTEDNGTFTIHVPSRRRDITIEEDIIEEVARLYGYDHLPATLPVAEAKPGELTPYQAKRRRVRRYFEGAGLFQAITYSLTSPDKATRFALETTEPVRLALPMSEERSVLRQSLVPHLLEAASYNRARQVENVALYEIGSVYLSKGENVQPAEKERLAGVITGLWHAHLWQGEKKAADFYVAKGVLDGLFALLGLSDRISYRPAKRADLHLGRTAEIVLDGKEIGFVGQLHPAVQKEYDLKETYVFELAFAELLNTEGETIRYESIPRFPSVVRDIALVVDDNVEAGALKQAIAEAGNPLLKDVALFDVYKGDRLPAGKKSLAFSLRYYDPERTLTDEEVTAVHERVLAAVEEQFGAVLRG
配列番号119
DNA
ProRS-GsuProRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGACATTCAAAAATTCTTCCTATAATGAAAGAGAGAAAACGAGGTGGCTATTGATGAGACAAAGTCAAGGGTTTATTCCGACATTGCGCGAAGTGCCGGCGGACGCGGAAGTGAAAAGCCATCAGCTCCTGTTGCGGGCCGGCTTCGTCCGCCAAAGCGCAAGCGGCGTCTACACGTTTTTGCCGCTCGGGCAACGTGTTTTGCAAAAAGTGGAAGCGATTATTCGTGAGGAGATGAATCGCGCCGGAGCATTGGAGCTTCTCATGCCTGCTTTGCAGCCGGCTGAGCTTTGGCAGCAGTCCGGGCGCTGGTATTCGTATGGACCGGAGCTCATGCGCCTGAAAGACCGTCACGAGCGCGATTTCGTTCTCGGACCGACACACGAAGAGATGATTACTACGATCGTTCGCGATGAAGTGAAAACGTATAAGCGGCTGCCGCTTATCTTGTATCAAATTCAAACGAAATTCCGTGATGAAAAACGTCCGCGTTTCGGGCTGTTGCGCGGTCGCGAGTTCATCATGAAAGATGCGTATTCATTCCACACATCGCAGGAAAGTTTGGACGAAACGTACAATAAAATGTATGAAGCGTACGCGAACATTTTCCGCCGCTGCGGCTTAAATTTCCGCGCTGTCATTGCTGACTCCGGAGCGATGGGCGGCAAAGATACGCACGAGTTTATGGTGCTGTCTGATATTGGCGAGGATACGATCGCTTATTCCGATGCGTCCGACTATGCGGCCAACATTGAAATGGCACCGGTCGTCACTACGTATGAAAAAAGCAGTGAGCCGCTGGTGGAACTGAAAAAAGTGGCGACCCCGGAGCAAAAAACGATTGCTGAAGTTGCTTCGTATTTGCAAGTAGCACCGGAACGTTGCATTAAATCGCTTTTATTTAACGTTGATGGCCGCTACGTGCTCGTTCTGGTGCGCGGCGATCATGAAGCGAATGATGTGAAAGTGAAAAATGTGCTTGATGCGACTGTCGTGGAGCTGGCGACACCGGAAGAAACAGCACGAGTGATGAACTGCCCGGTTGGTTCGCTCGGCCCGATTGGCGTCAGCGAAGAGGTGACGATTATCGCCGATCATGCTGTCGCGGCGATCGTAAACGGCGTCTGCGGCGCCAATGAGGAAGGATACCATTATACGGGTGTCAATCCAGACCGCGATTTTGCCGTCAGTCAATATGCGGATTTGCGTTTCGTCCAAGAAGGCGACCCTTCTCCGGATGGCAACGGGACGATCCGCTTCGCTCGTGGCATTGAAGTTGGACATGTGTTTAAGCTCGGTACGAAATATAGCGAGGCGATGAACGCCGTTTACCTCGACGAAAATGGTCGGACACAGACGATGATTATGGGTTGCTACGGCATTGGCGTCTCTAGGCTCGTTGCGGCGATCGCCGAGCAGTTCGCCGATGAGAACGGGCTTGTATGGCCGGTTTCGGTCGCACCGTTTCACGTTCATTTGCTGACGGCGAACGCGAAAAGCGATGAACAGCGCATGCTGGCTGAAGAGTGGTACGAAAAACTCGGACAGGCCGGATTTGACGTGTTGTATGATGACCGTCCGGAACGGGCCGGGGTGAAGTTTGCCGACAGCGATTTGATCGGCATCCCGCTCCGCGTCACCGTTGGCAAGCGGGCAAGTGAAGGTGTGGTCGAAGTAAAAGTTCGGAAAACAGGCGAGACGTTTGACGTGCCGGTCGGTGAGCTGATCGAAACAGTGCGCCGTCTTTTGCAAGGA
配列番号120
アミノ酸
ProRS-GsuProRSt
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MTFKNSSYNEREKTRWLLMRQSQGFIPTLREVPADAEVKSHQLLLRAGFVRQSASGVYTFLPLGQRVLQKVEAIIREEMNRAGALELLMPALQPAELWQQSGRWYSYGPELMRLKDRHERDFVLGPTHEEMITTIVRDEVKTYKRLPLILYQIQTKFRDEKRPRFGLLRGREFIMKDAYSFHTSQESLDETYNKMYEAYANIFRRCGLNFRAVIADSGAMGGKDTHEFMVLSDIGEDTIAYSDASDYAANIEMAPVVTTYEKSSEPLVELKKVATPEQKTIAEVASYLQVAPERCIKSLLFNVDGRYVLVLVRGDHEANDVKVKNVLDATVVELATPEETARVMNCPVGSLGPIGVSEEVTIIADHAVAAIVNGVCGANEEGYHYTGVNPDRDFAVSQYADLRFVQEGDPSPDGNGTIRFARGIEVGHVFKLGTKYSEAMNAVYLDENGRTQTMIMGCYGIGVSRLVAAIAEQFADENGLVWPVSVAPFHVHLLTANAKSDEQRMLAEEWYEKLGQAGFDVLYDDRPERAGVKFADSDLIGIPLRVTVGKRASEGVVEVKVRKTGETFDVPVGELIETVRRLLQG
配列番号121
DNA
SerRS-GsuSerRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGGTGGATAAGGAGGTAAAGCGAATGCTGGATGTGAAATTACTACGCACCCAATTTCAAGAGGTGAAAGAAAAACTGCTGCAGCGCGGCGACGACTTGGCCAACATCGACCGGTTTGAGCAGCTTGATAAAGAGCGTCGTCGTTTGATCGCTCAGGTGGAGGAGTTAAAAAGCAAGCGCAATGAGGTGTCGCAACAAATTGCTGTCTTAAAGCGTGAAAAAAAGGACGCCGAGTCGTTGATCGTCGAAATGCGCGAAGTCGGCGACCGCATTAAACAAATGGACGAGCAAATTCGCCAACTTGAAGAAGAGCTCGACAGCCTTCTGTTATCGATTCCGAATGTACCGCATGAGTCAGTGCCAGTCGGTCAGTCGGAAGAAGATAATGTCGAAGTGCGAAGATGGGGGGAACCGCGTTCGTTCTCGTTCGAACCGAAGCCACATTGGGACATTGCTGACCAACTCGGTTTGCTCGATTTTGAGCGGGCTGCCAAAGTGGCAGGAAGTCGGTTTGTGTTTTACAAAGGACTAGGGGCTCGTCTTGAGCGGGCATTAATCAACTTTATGCTCGACATCCATCTCGATGAATTTGGCTATCAAGAGGTGTTGCCGCCATACTTAGTGAACCGGGCGAGCATGATCGGAACAGGGCAATTGCCAAAATTTGCGGAAGACGCGTTCCACTTGGACAATGAAGACTATTTTCTCATTCCAACAGCGGAAGTGCCTGTGACGAATTTGCATCGCGATGAAATTTTAACGGCTGATGACTTGCCGCTTTACTATGCGGCTTACAGCGCGTGCTTCCGCGCCGAAGCTGGCTCGGCTGGCCGTGACACGCGGGGGCTCATCCGCCAGCACCAATTCAATAAAGTGGAGCTCGTCAAGTTCGTCAAGCCGGAGGATTCATATGACGAGTTGGAAAAATTGACGCACCAAGCCGAAACGATCCTGCAACGGCTCGGACTTCCGTATCGCGTCGTAGCCTTGTGTACAGGGGATCTGGGATTTTCAGCGGCGAAGACGTATGATATTGAGGTGTGGCTGCCAAGCTATGGAACGTATCGGGAAATTTCGTCGTGCAGCAACTTTGAGGCGTTCCAGGCGCGCCGAGCTAATATCCGCTTCCGTCGCGAGCCGAAAGCAAAGCCAGAATATGTGCATACGCTAAACGGTTCGGGGCTAGCCATCGGCCGCACGGTTGCTGCCATTTTGGAAAACTACCAACAAGAAGACGGATCGGTCGTCATCCCGGAAGCGCTCCGTCCATATATGGGGAATCGGGATGTCATTCGC
配列番号122
アミノ酸
SerRS-GsuSerRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MVDKEVKRMLDVKLLRTQFQEVKEKLLQRGDDLANIDRFEQLDKERRRLIAQVEELKSKRNEVSQQIAVLKREKKDAESLIVEMREVGDRIKQMDEQIRQLEEELDSLLLSIPNVPHESVPVGQSEEDNVEVRRWGEPRSFSFEPKPHWDIADQLGLLDFERAAKVAGSRFVFYKGLGARLERALINFMLDIHLDEFGYQEVLPPYLVNRASMIGTGQLPKFAEDAFHLDNEDYFLIPTAEVPVTNLHRDEILTADDLPLYYAAYSACFRAEAGSAGRDTRGLIRQHQFNKVELVKFVKPEDSYDELEKLTHQAETILQRLGLPYRVVALCTGDLGFSAAKTYDIEVWLPSYGTYREISSCSNFEAFQARRANIRFRREPKAKPEYVHTLNGSGLAIGRTVAAILENYQQEDGSVVIPEALRPYMGNRDVIR
配列番号123
DNA
ThrRS-GsuThrRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGCCAGACGTTATTCGCATTACGTTCCCGGACGGGGCGAAAAAGGAGTTTCCGAGCGGAACGTCAACTGAGGACATCGCTGCCTCGATCAGTCCGGGATTGAAGAAAAAAGCGATTGCCGGGAAACTGAACGGCCGGTTTGTTGATTTACGCACGCCGCTTCAAGAAGACGGCGAGCTTGTCATTATTACCCAGGACATGCCTGAGGCACTTGATATTTTGCGTCATAGCACCGCCCATTTAATGGCGCAAGCGATCAAGCGGCTGTATGACAACGTCAAGCTTGGCGTCGGCCCGGTCATTGAAAACGGCTTCTACTATGATATTGATATGGAACATAAGCTGACGCCGGATGATTTGCCGAAAATTGAGGCGGAAATGCGCAAAATCGTAAAGGAAAATCTTGACGTTGTTCGCAAAGAGGTGAGCCGTGACGAGGCGATTCGCCTGTATGAAAAAATTGGTGATCACTTGAAACTGGAGCTCATCAACGATATTCCGGAAGGCGAGACGATTTCCATTTACGAGCAAGGCGAGTTTTTCGATCTTTGTCGGGGTGTGCACGTGCCGTCGACCGGGAAAATCAAAGAGTTCAAGCTGCTCAGCATCTCGGGGGCCTACTGGCGCGGTGACAGCAACAACAAAATGCTGCAGCGTATTTACGGTACGGCGTTTTTCAAAAAAGAAGATCTGGACCATTATTTGCAGTTGCTCGAAGAGGCGAAAGAGCGCGATCATCGCAAATTGGGCAAAGAGCTTGAGCTATTTACGACATCACAAAAAGTCGGACAAGGACTGCCGCTTTGGTTGCCGAAAGGGGCGACGATCCGTCGCTTGATTGAACGGTACATTGTCGATAAAGAAATCGCCCTTGGTTATGATCATGTATATACGCCGGTGCTCGGCAGTGTGGAGCTGTATAAAACCTCAGGACACTGGGACCATTATAAAGAAAACATGTTCCCACCGATGGAAATGGATAACGAAGAGCTCGTGCTGCGGCCGATGAACTGCCCGCACCATATGATGATTTATAAAAGCAAGCTTCATAGCTACCGTGAGCTGCCGATCCGCATCGCCGAGCTCGGCACGATGCATCGCTACGAAATGTCCGGGGCGCTTACTGGACTGCAGCGTGTCCGCGGCATGACGCTCAACGACGCCCATATTTTCGTGCGCCCGGATCAAATTAAAGACGAGTTTAAGCGCGTCGTTAATTTGATTTTGGAAGTATACAAAGACTTTGGGCTGGACGAATATTCGTTCCGCCTGTCGTACCGCGACCCACAAGATAAAGAAAAATATTACGACGACGACGAGATGTGGGAAAAGGCGCAACGCATGCTGCGCGAGGCGATGGATGAACTTGGCCTCGATTACTACGAAGCGGAAGGGGAAGCAGCGTTTTACGGACCGAAGCTCGATGTGCAAGTGCGCACGGCACTCGGCAAAGATGAGACGCTGTCGACTGTACAGCTTGACTTCCTCTTGCCGGAGCGGTTTGACTTAACATATATCGGCGAAGATGGAAAACCGCACCGCCCGGTCGTCATCCACCGCGGCGTTGTTTCCACGATGGAACGGTTTGTCGCCTTCTTGATCGAAGAATACAAAGGGGCATTTCCAACGTGGCTCGCCCCGGTGCAAGTGGAAGTCATCCCGGTATCGTCGGAAGCCCATCTCGATTATGCGTATGAAGTGAAACAAGCGCTGCAAGTAAACGGCTTCCGCGTCGAAGTCGACGAACGGGATGAAAAAATCGGCTATAAAATCCGCGAAGCGCAAATGCAAAAAATTCCTTATATGCTCGTTGTCGGCGACAAAGAAGCGGCCGAGCGAGCGGTCAACGTCCGCCGCTACGGTGAAAAAGAAAGCGAGACTGTGGCGCTTGACAAGTTTATCGCGATGCTAGAAGAAGATGTGCGGCAAAAACGAGTGAAAAAACGA
配列番号124
アミノ酸
ThrRS-GsuThrRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MPDVIRITFPDGAKKEFPSGTSTEDIAASISPGLKKKAIAGKLNGRFVDLRTPLQEDGELVIITQDMPEALDILRHSTAHLMAQAIKRLYDNVKLGVGPVIENGFYYDIDMEHKLTPDDLPKIEAEMRKIVKENLDVVRKEVSRDEAIRLYEKIGDHLKLELINDIPEGETISIYEQGEFFDLCRGVHVPSTGKIKEFKLLSISGAYWRGDSNNKMLQRIYGTAFFKKEDLDHYLQLLEEAKERDHRKLGKELELFTTSQKVGQGLPLWLPKGATIRRLIERYIVDKEIALGYDHVYTPVLGSVELYKTSGHWDHYKENMFPPMEMDNEELVLRPMNCPHHMMIYKSKLHSYRELPIRIAELGTMHRYEMSGALTGLQRVRGMTLNDAHIFVRPDQIKDEFKRVVNLILEVYKDFGLDEYSFRLSYRDPQDKEKYYDDDEMWEKAQRMLREAMDELGLDYYEAEGEAAFYGPKLDVQVRTALGKDETLSTVQLDFLLPERFDLTYIGEDGKPHRPVVIHRGVVSTMERFVAFLIEEYKGAFPTWLAPVQVEVIPVSSEAHLDYAYEVKQALQVNGFRVEVDERDEKIGYKIREAQMQKIPYMLVVGDKEAAERAVNVRRYGEKESETVALDKFIAMLEEDVRQKRVKKR
配列番号125
DNA
TrpRS-GsuTrpRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAAAACCATTTTTTCTGGCATTCAGCCAAGCGGCGTCATTACCCTTGGCAACTACATTGGTGCGATGCGACAATTTGTCGAACTGCAGCATGAGTACAACTGCTATTTTTGCATTGTCGACCAACATGCCATTACTGTTCCGCAAAATCCGAACGAACTGCAACAAAACATTCGCCGTCTCGCTGCCTTATATTTGGCAGTCGGCATCGATCCTAAACAGGCGACGCTGTTCGTTCAATCGGAGGTGCCGGCGCACGCCCAAGCGGCTTGGATGCTGCAATGCATCGTCTATATCGGCGAACTGGAGCGGATGACGCAGTTTAAAGACAAATCAGCCGGTAAAGAGGCGGTCAGTGCCGGGTTGCTCACGTATCCACCGCTTATGGCAGCCGACATTTTGCTTTACAACACGGACATTGTCCCAGTCGGCGAAGACCAAAAGCAGCACATCGAGCTGACGCGCGATTTAGCTGAGCGCTTCAACAAACGGTACGGCGAGCTGTTCACTATCCCGGAAGCGCGCATCCCGAAAATCGGCGCCCGCATTATGTCGCTTACCGATCCGACGAAAAAAATGAGCAAATCTGACCCAAACCCGAAATCGTTTATTACGCTGCTTGACGACGCCAAAACGATTGAAAAGAAAATTAAAAGTGCTGTGACCGATTCAGAAGGAACGATTCGCTATGACAAGGAAGCGAAACCGGGCATTTCGAACTTGCTCAACATTTATTCGATTTTATCGGGTCAGCCGATTGACGAACTTGAGCGGCAATACGAAGGAAAAGGATACGGGGTCTTTAAATCCGATTTGGCCCAAGTGGTCATTGAAACGCTCCAACCGATCCAAGAGCGGTATTATCATTGGCTCGAAAGTGAAGAGCTCGACCGCGTCCTAGACGAAGGGGCGGAAAAAGCGAACCGTGTCGCCTCGGAAATGGTGCGCAAAATGGAACAAGCCATGGGGCTTGGGCGGCGTCGG
配列番号126
アミノ酸
TrpRS - GsTrpRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MKTIFSGIQPSGVITLGNYIGAMRQFVELQHEYNCYFCIVDQHAITVPQNPNELQQNIRRLAALYLAVGIDPKQATLFVQSEVPAHAQAAWMLQCIVYIGELERMTQFKDKSAGKEAVSAGLLTYPPLMAADILLYNTDIVPVGEDQKQHIELTRDLAERFNKRYGELFTIPEARIPKIGARIMSLTDPTKKMSKSDPNPKSFITLLDDAKTIEKKIKSAVTDSEGTIRYDKEAKPGISNLLNIYSILSGQPIDELERQYEGKGYGVFKSDLAQVVIETLQPIQERYYHWLESEELDRVLDEGAEKANRVASEMVRKMEQAMGLGRRR
配列番号 127
DNA
TyrRS-GsuTyrRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAACCTGCTTGAAGAACTGCAATGGCGCGGACTTGTCAATCAAACGACGGATGAGGATGGGCTTCGAAAGCTCCTGAATGAGGAGAAGGTGACGCTTTATTGCGGGTTTGACCCGACAGCAGACAGCTTGCATATCGGCCATTTGGTCACGATCATGACCTTGCGTCGTTTCCAACAGGCGGGGCATCAACCGATCGCCTTAGTCGGCGGCGCCACCGGGTTGATCGGCGATCCGAGTGGCAGAAAAAGCGAGCGCACGCTCAACGCCAAGGAGACGGTCGAGACGTGGAGCGCCCGAATCAAAGCGCAACTCGAGCGGTTTCTTGATTTTGAGGCTGAGAGCAATCCAGCGAAAATCAAAAACAACTACGACTGGATCGGGCCGCTTGATGTCATCTCGTTTTTGCGTGACATCGGCAAGCATTTCAGCGTCAATTACATGCTTGCGAAAGAATCGGTGCAGTCGCGCATTGAAATGGGCATTTCGTTTACCGAGTTCAGCTATATGATGCTGCAGGCGTACGACTTCCTCAACTTGTACGAAACGGAAGGTTGCCGACTACAAATCGGTGGCAGCGACCAATGGGGCAACATCACGGCGGGGCTTGAGCTCATCCGCAGAACGAAAGGTGAGGCGAAAGCATTTGGTTTGACGGTTCCGCTCGTGACGAAAGCCGATGGGACGAAGTTCGGAAAAACGGAAAGCGGCGCGGTTTGGCTCGATCCGGAAAAAACGTCGCCGTATGAGTTTTACCAGTTCTGGATCAACACCGATGACCGCGATGTGATCCGTTACTTAAAATATTTCACGTTCTTGACAAAAGAAGAGATCGACGCGCTTGAACAAGAGCTGCGCGAAGCGCCGGAGAAGCGGGTGGCGCAAAAAACGCTTGCTTCCGAAGTGACGAAGCTCGTGCATGGCGAAGAGGCGCTCAATCAAGCGATTCGTATTTCAGAAGCACTCTTTAGCGGCGACATTGCCGAACTGACGGCTGCGGAAATCGAGCAAGGGTTTAAAAACGTGCCGTCGTTTGTCCATGAAGGAGGCGACGTCCCGCTCGTCGAGCTGCTCGTAGCTGCCGGCATCTCGCCATCGAAGCGGCAGGCGCGCGAAGATGTTCAAAACGGTGCGATTTATGTCAACGGCGAGCGCATCCAAGATGTCGGCGCTGTCTTAACGGCCGAACACCGTTTGGAAGGGCGGTTTACCGTGATCCGCCGCGGCAAGAAGAAGTATTATTTAATCCGCTACGCT
配列番号128
アミノ酸
TyrRS-GsuTyrRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MNLLEELQWRGLVNQTTDEDGLRKLLNEEKVTLYCGFDPTADSLHIGHLVTIMTLRRFQQAGHQPIALVGGATGLIGDPSGRKSERTLNAKETVETWSARIKAQLERFLDFEAESNPAKIKNNYDWIGPLDVISFLRDIGKHFSVNYMLAKESVQSRIEMGISFTEFSYMMLQAYDFLNLYETEGCRLQIGGSDQWGNITAGLELIRRTKGEAKAFGLTVPLVTKADGTKFGKTESGAVWLDPEKTSPYEFYQFWINTDDRDVIRYLKYFTFLTKEEIDALEQELREAPEKRVAQKTLASEVTKLVHGEEALNQAIRISEALFSGDIAELTAAEIEQGFKNVPSFVHEGGDVPLVELLVAAGISPSKRQAREDVQNGAIYVNGERIQDVGAVLTAEHRLEGRFTVIRRGKKKYYLIRYA
配列番号129
DNA
ValRS - GsuValRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGAAAGGGGCTTTTTTGCTTGCCTATCGGACGGTTGATCCTGTAGGCAACACAGCCATTGTTTATCACATGAAGGAGGGAATAAAAGTGGCACAGCATGAAGTGTCGATGCCGCCAAAATACGATCACCGCGCTGTTGAAGCGGGGCGCTATGACTGGTGGCTGAAAGGCAAGTTTTTTGAAACGACCGGCGATCCGGACAAACAACCGTTTACGATCGTTATCCCACCGCCGAACGTCACAGGCAAACTGCATTTGGGCCATGCGTGGGATACGACGCTGCAAGACATCATTACGCGCATGAAGCGGATGCAAGGGTATGATGTCCTATGGCTTCCGGGTATGGACCATGCCGGCATCGCCACCCAGGCGAAAGTGGAAGAAAAATTGCGCCAACAAGGACTGTCCCGCTACGATTTAGGACGGGAAAAATTTTTGGAAGAAACGTGGAAATGGAAAGAAGAATATGCCGGCCATATCCGCAGCCAATGGGCAAAATTAGGGCTCGGCCTCGATTACACGCGCGAGCGGTTTACGCTTGATGAAGGGCTGTCAAAAGCCGTACGCGAAGTGTTCGTCTCGCTTTACCGGAAAGGGCTCATTTACCGCGGTGAATACATTATCAACTGGGATCCGGCGACCAAAACCGCCTTGTCCGACATCGAGGTCATTTACAAGGAAGTGAAAGGTGCGCTTTATCATTTGCGCTATCCGCTCGCTGACGGCTCGGGCTACATTGAAGTAGCGACAACCCGTCCAGAAACGATGCTCGGTGACACGGCCGTCGCGGTTCATCCGGATGACGAGCGGTATAAACACTTGATCGGCAAGATGGTGAAATTGCCAATCGTTGGCCGGGAAATTCCGATCATCGCTGATGAGTATGTCGATATGGAATTCGGTTCCGGCGCGGTAAAAATTACACCGGCACACGATCCGAACGACTTTGAAGTTGGCAACCGCCACAACTTGCCGCGCATTCTCGTCATGAACGAAGACGGTACAATGAACGAAAACGCATTGCAATATCAAGGGCTTGACCGGTTTGAATGCCGGAAGCAAATCGTCCGTGATTTACAAGAGCAAGGCGTCCTCTTTAAAATTGAGGAACACGTCCACTCGGTCGGGCACAGTGAACGGAGCGGCGCCGTTGTTGAACCGTATTTGTCGACACAATGGTTCGTAAAAATGAAGCCGCTCGCGGAAGCTGCCATCAAGATGCAGCAAACAGAAGGAAAAGTGCAATTTGTGCCGGAGCGGTTTGAAAAAACGTACTTGCACTGGCTTGAGAACATTCGCGACTGGTGCATTTCGCGTCAGCTTTGGTGGGGGCACCGCATTCCGGCGTGGTACCATAAAGAAACGGGTGAAATTTACGTCGACCACGAGCCGCCGGCAGACATTGAAAATTGGGAGCAAGACCCGGATGTGCTTGATACATGGTTCAGCTCGGCACTCTGGCCGTTCTCCACAATGGGGTGGCCGGATACGGAAGCGCCGGACTACAAGCGCTATTACCCGACCGATGTGCTTGTCACCGGCTATGACATCATTTTCTTCTGGGTGTCGCGCATGATTTTCCAAGGGCTTGAGTTCACTGGGAAGAGACCGTTTAAAGATGTGTTGATCCACGGCCTCGTCCGCGACGCTCAAGGAAGAAAAATGAGCAAGTCGCTCGGCAACGGTGTCGACCCGATGGATGTCATTGACCAATACGGCGCCGATGCGCTCCGCTACTTCCTAGCGACCGGTAGCTCGCCAGGACAAGATTTGCGCTTTAGCACGGAAAAAGTTGAGGCGACGTGGAATTTTGCTAACAAAATTTGGAACGCTTCACGTTTCGCCTTAATGAACATGGGCGGCATGACATATGAGGAGCTCGATTTGAGCGGCGAAAAAACGGTCGCCGACCATTGGATTTTAACGCGCTTAAATGAAACGATCGACACGGTGACGAAGCTCGCCGACAAATACGAGTTTGGTGAAGTCGGTCGCACGTTGTACAACTTTATTTGGGACGATTTGTGCGACTGGTACATTGAAATGGCGAAGCTGCCGCTTTACGGCGATGATGAGACAGCGAAAAAGACGACGCGTTCAGTTTTAGCGTATGTGCTTGACAATACGATGCGCTTGTTGCATCCATTCATGCCGTTCATTACCGAGGAAATTTGGCAAAACTTGCCGCATGACGGCGAATCGATTACCGTTGCCTCGTGGCCGCAAGTGCGTCCGGAGCTGTCAAACGAAGAAGCGGCGGAAGAAATGCGGATGCTCGTTGACATTATCCGCGCGGTCCGAAACGTTCGTGCCGAAGTCAATACGCCGCCGAGCAAACCGATTGCGCTCTACATTAAGACAAAAGACGAACAAGTGCGCGCAGCGCTTATGAAAAACCGCGCTTATCTCGAACGGTTCTGCAATCCGAGCGAATTGATCATTGACACGGATGTTCCGGCGCCAGAAAAAGCGATGACTGCTGTCGTCACAGGGGCAGAGCTCATTTTGCCGCTTGAAGGACTCATCAATATCGAAGAAGAAATCAAGCGGCTTGAGAAAGAGCTCGACAAATGGAACAAAGAAGTCGAGCGTGTCGAAAAGAAACTGGCGAACGAAGGCTTTTTGGCAAAAGCGCCGGCTCATGTCGTCGAGGAAGAGCGGCGCAAGCGGCAAGATTACATCGAAAAACGCGAAGCAGTGAAAGCGCGTCTTGCCGAGTTGAAACGG
配列番号130
アミノ酸
ValRS-GsuValRS
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MKGAFLLAYRTVDPVGNTAIVYHMKEGIKVAQHEVSMPPKYDHRAVEAGRYDWWLKGKFFETTGDPDKQPFTIVIPPPNVTGKLHLGHAWDTTLQDIITRMKRMQGYDVLWLPGMDHAGIATQAKVEEKLRQQGLSRYDLGREKFLEETWKWKEEYAGHIRSQWAKLGLGLDYTRERFTLDEGLSKAVREVFVSLYRKGLIYRGEYIINWDPATKTALSDIEVIYKEVKGALYHLRYPLADGSGYIEVATTRPETMLGDTAVAVHPDDERYKHLIGKMVKLPIVGREIPIIADEYVDMEFGSGAVKITPAHDPNDFEVGNRHNLPRILVMNEDGTMNENALQYQGLDRFECRKQIVRDLQEQGVLFKIEEHVHSVGHSERSGAVVEPYLSTQWFVKMKPLAEAAIKMQQTEGKVQFVPERFEKTYLHWLENIRDWCISRQLWWGHRIPAWYHKETGEIYVDHEPPADIENWEQDPDVLDTWFSSALWPFSTMGWPDTEAPDYKRYYPTDVLVTGYDIIFFWVSRMIFQGLEFTGKRPFKDVLIHGLVRDAQGRKMSKSLGNGVDPMDVIDQYGADALRYFLATGSSPGQDLRFSTEKVEATWNFANKIWNASRFALMNMGGMTYEELDLSGEKTVADHWILTRLNETIDTVTKLADKYEFGEVGRTLYNFIWDDLCDWYIEMAKLPLYGDDETAKKTTRSVLAYVLDNTMRLLHPFMPFITEEIWQNLPHDGESITVASWPQVRPELSNEEAAEEMRMLVDIIRAVRNVRAEVNTPPSKPIALYIKTKDEQVRAALMKNRAYLERFCNPSELIIDTDVPAPEKAMTAVVTGAELILPLEGLINIEEEIKRLEKELDKWNKEVERVEKKLANEGFLAKAPAHVVEEERRKRQDYIEKREAVKARLAELKR
配列番号131
DNA
MTF-GsuMTF
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
ATGCTGATGACGAACATTGTCTTTATGGGAACGCCTGATTTTGCGGTGCCGGTTTTACGGCAGCTGCTTGATGACGGGTATCGGGTTGTTGCCGTTGTTACGCAGCCGGACAAGCCGAAAGGGCGAAAGCGCGAGCTTGTTCCGCCCCCCGTTAAGGTCGAGGCGCAAAAACACGGCATCCCGGTATTGCAACCGACGAAAATTCGTGAACCGGAACAATACGAACAAGTGCTGGCGTTTGCGCCTGACTTGATCGTGACCGCGGCATTTGGACAAATTTTGCCTAAGGCTCTGCTTGACGCTCCCAAATATGGCTGCATTAATGTTCACGCCTCGCTTCTTCCCGAGCTGCGCGGCGGTGCGCCGATCCATTATGCCATTTGGCAAGGGAAAACGAAAACAGGTGTCACGATTATGTATATGGCGGAAAAGTTGGATGCCGGCGACATGTTGACGCAAGTCGAAGTGCCGATTGAAGAAACCGATACCGTCGGCACACTGCATGATAAATTGAGCGCTGCCGGGGCTAAACTATTATCAGAAACGCTCCCGCTTTTATTGGAAGGTAACCTTGCGCCTATTCCGCAAGAGGAAGAGAAAGCGACATATGCTCCGAATATCCGGCGTGAACAAGAGCGGATTGACTGGGCGCAGCCTGGTGAGGCGATTTACAACCATATCCGTGCTTTTCATCCGTGGCCGGTTACGTATACGACATACGACGGGAACGTTTGGAAAATCTGGTGGGGCGAAAAAGTGCCGGCGCCAAGCTTAGCGTCGCCAGGCACGATTTTATCGCTTGAGGAAGACGGCATCGTCGTCGCCACCGGCAGTGAGACGGCCATTAAAATTACTGAATTGCAGCCGGCCGGCAAAAAGCGAATGGCGGCCAGCGAGTTTTTGCGCGGTGCTGGCAGCCGGCTTGCGGTCGGCACGAAGCTAGGAGAGAACAATGAACGTACG
配列番号132
アミノ酸
MTF-GsuMTF
Geobacillus subterraneus DSM 13552 (91A1)
MLMTNIVFMGTPDFAVPVLRQLLDDGYRVVAVVTQPDKPKGRKRELVPPPVKVEAQKHGIPVLQPTKIREPEQYEQVLAFAPDLIVTAAFGQILPKALLDAPKYGCINVHASLLPELRGGAPIHYAIWQGKTKTGVTIMYMAEKLDAGDMLTQVEVPIEETDTVGTLHDKLSAAGAKLLSETLPLLLEGNLAPIPQEEEKATYAPNIRREQERIDWAQPGEAIYNHIRAFHPWPVTYTTYDGNVWKIWWGEKVPAPSLASPGTILSLEEDGIVVATGSETAIKITELQPAGKKRMAASEFLRGAGSRLAVGTKLGENNERT
配列番号133
アミノ酸
RF-1-Mut-GsRF-1-EcOpt
Geobacillus stearothermophilus
MFDRLEAVEQRYEKLNELLMEPDVINDPKKLRDYSKEQADLGETVQTYREYKSVREQLAEAKAMLEEKLEPELREMVKEEIGELEEREEALVEKLKVLLLPKDPNDEKNVIMEIRAAAGGEEAALFAGDLYRMYTRYAESQGWKTEVIEASPTGLGGYKEIIFMINGKGAYSKLKFENGAHRVQRVPETESGGRIHTSTATVACLPEMEEIEVEINEKDIRVDTFASSGPGGQSVNTTMSAVRLTHIPTGIVVTCQDEKSQIKNKEKAMKVLRARIYDKYQQEARAEYDQTRKQAVGTGDRSERIRTYNFPQNRVTDHRIGLTIQKLDQVPDGHLDEIIEALILDDQAKKLEQANDAS
配列番号134
アミノ酸
muGFP+His6タグ+C-タグ
Aequorea victoria
MRGSHHHHHHGSSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVRGEGEGDATNGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVLCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDGTYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNFNSHNVYITADKQKNGIKAYFKIRHNVEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSVLSKDPNEKRDHMVLLEDVTAAGITHGMDELYKGSEPEA
配列番号135
アミノ酸
deGFP
Aequorea victoria
MELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGI
配列番号136
アミノ酸
T7 RNAポリメラーゼ
T7 Bacteriophage
MNTINIAKNDFSDIELAAIPFNTLADHYGERLAREQLALEHESYEMGEARFRKMFERQLKAGEVADNAAAKPLITTLLPKMIARINDWFEEVKAKRGKRPTAFQFLQEIKPEAVAYITIKTTLACLTSADNTTVQAVASAIGRAIEDEARFGRIRDLEAKHFKKNVEEQLNKRVGHVYKKAFMQVVEADMLSKGLLGGEAWSSWHKEDSIHVGVRCIEMLIESTGMVSLHRQNAGVVGQDSETIELAPEYAEAIATRAGALAGISPMFQPCVVPPKPWTGITGGGYWANGRRPLALVRTHSKKALMRYEDVYMPEVYKAINIAQNTAWKINKKVLAVANVITKWKHCPVEDIPAIEREELPMKPEDIDMNPEALTAWKRAAAAVYRKDKARKSRRISLEFMLEQANKFANHKAIWFPYNMDWRGRVYAVSMFNPQGNDMTKGLLTLAKGKPIGKEGYYWLKIHGANCAGVDKVPFPERIKFIEENHENIMACAKSPLENTWWAEQDSPFCFLAFCFEYAGVQHHGLSYNCSLPLAFDGSCSGIQHFSAMLRDEVGGRAVNLLPSETVQDIYGIVAKKVNEILQADAINGTDNEVVTVTDENTGEISEKVKLGTKALAGQWLAYGVTRSVTKRSVMTLAYGSKEFGFRQQVLEDTIQPAIDSGKGLMFTQPNQAAGYMAKLIWESVSVTVVAAVEAMNWLKSAAKLLAAEVKDKKTGEILRKRCAVHWVTPDGFPVWQEYKKPIQTRLNLMFLGQFRLQPTINTNKDSEIDAHKQESGIAPNFVHSQDGSHLRKTVVWAHEKYGIESFALIHDSFGTIPADAANLFKAVRETMVDTYESCDVLADFYDQFADQLHESQLDKMPALPAKGNLNLRDILESDFAFA
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-02-25
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項32
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項32】
前記エネルギー源は、ある量のヌクレオチド三リン酸(NTP)を含む、請求項
3記載の系。
【手続補正2】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項37
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項37】
組換え無細胞発現反応混合物
を含む系であって、
-複数の開始因子(IF);
-複数の延長因子(EF);
-複数の終結因子(RF);
-少なくとも1つのリボソームリサイクリング因子(RRF);
-複数のアミノアシル-tRNA-シンテターゼ(RS);及び
少なくとも1つのメチオニル-tRNAトランスホルミラーゼ(MTF)を含む、組換え無細胞発現反応混合物
を含む系。
【国際調査報告】