特表2022-536223ニーム抽出物並びにウロリチンＡ及びＢの相乗作用組み合わせの抗糖尿病活性
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-08-15
(54)【発明の名称】ニーム抽出物並びにウロリチンＡ及びＢの相乗作用組み合わせの抗糖尿病活性
(51)【国際特許分類】
A61K 36/58 20060101AFI20220805BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220805BHJP
A61K 31/047 20060101ALI20220805BHJP
A61K 31/353 20060101ALI20220805BHJP
【ＦＩ】
A61K36/58
A61P3/10
A61K31/047
A61K31/353
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021524012
(86)(22)【出願日】2019-11-05
(85)【翻訳文提出日】2021-06-28
(86)【国際出願番号】 US2019059774
(87)【国際公開番号】W WO2020097014
(87)【国際公開日】2020-05-14
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】505208444
【氏名又は名称】ナトレオン，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001302
【氏名又は名称】特許業務法人北青山インターナショナル
(72)【発明者】
【氏名】ヴィーララガヴァン，ムルガナンダム，エイ．
(72)【発明者】
【氏名】セン，チャンダン，ケイ．
(72)【発明者】
【氏名】カリディンディ，サニャーシ，アール．
【テーマコード（参考）】
4C086
4C088
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
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(57)【要約】
ウロリチンＡ及びウロリチンＢを含む組成物を投与することによりヒト対象における２型糖尿病の症状を治療する方法が提供される。ニーム抽出物を含む組成物を投与することによりヒト対象における２型糖尿病及びメタボリックシンドロームの症状を治療する方法が提供される。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
２型真性糖尿病を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる個体に、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の水性抽出物を含む治療有効量の組成物を投与し、食後血糖又は空腹時血糖を低減させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項2】
請求項１に記載の方法において、前記血糖を、プラセボと比較して約２０％だけ低減させることを特徴とする方法。
【請求項3】
請求項１に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約６２．５ｍｇ～約３０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項4】
請求項１に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項5】
請求項１に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項6】
請求項１に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約８週間～約１２週間にわたり投与することを特徴とする方法。
【請求項7】
請求項１に記載の方法において、前記水性抽出物は、前記組成物の総重量に基づき約３重量％の総フラボノイド及び７重量％以上のミオイノシトール一リン酸を含むことを特徴とする方法。
【請求項8】
請求項１に記載の方法において、さらに、ＨｂＡ１ｃをプラセボと比較して約２０％だけ低減させることを特徴とする方法。
【請求項9】
請求項１に記載の方法において、さらに、ＨＯＭＡ－ＩＲにより測定されるインスリン抵抗性を、プラセボと比較して５０％超だけ低減させることを特徴とする方法。
【請求項10】
２型真性糖尿病を罹患する糖尿病個体における内皮機能不全を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる前記個体に、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の水性抽出物を含む治療有効量の組成物を投与し、内皮機能を改善することを含むことを特徴とする方法。
【請求項11】
請求項１０に記載の方法において、前記改善される内皮機能としては、前記糖尿病個体における一酸化窒素（ＮＯ）の血中レベルの少なくとも約１０～１２％の増加が挙げられることを特徴とする方法。
【請求項12】
請求項１０に記載の方法において、前記改善される内皮機能としては、前記糖尿病個体におけるグルタチオン（ＧＳＨ）の血中レベルの少なくとも約１５～２０％の増加が挙げられることを特徴とする方法。
【請求項13】
請求項１０に記載の方法において、前記改善される内皮機能としては、前記糖尿病個体におけるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の血中レベルの少なくとも約８～１２％の減少が挙げられることを特徴とする方法。
【請求項14】
請求項１０に記載の方法において、前記改善される内皮機能としては、前記糖尿病個体におけるＣ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）の血中レベルの少なくとも約２０％の減少が挙げられることを特徴とする方法。
【請求項15】
請求項１０に記載の方法において、前記改善される内皮機能としては、前記糖尿病個体におけるインターロイキン－６（ＩＬ－６）の血中レベルの少なくとも約１０％の減少が挙げられることを特徴とする方法。
【請求項16】
請求項１０に記載の方法において、前記改善される内皮機能としては、前記糖尿病個体におけるＴＮＦ－アルファの血中レベルの少なくとも約９％の減少が挙げられることを特徴とする方法。
【請求項17】
請求項１０に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約６２．５ｍｇ～約３０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項18】
請求項１０に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項19】
請求項１０に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項20】
請求項１０に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約８週間～約１２週間にわたり投与することを特徴とする方法。
【請求項21】
請求項１０に記載の方法において、前記水性抽出物は、前記組成物の総重量に基づき約３重量％の総フラボノイド及び７重量％以上のミオイノシトール一リン酸を含むことを特徴とする方法。
【請求項22】
メタボリックシンドロームの症状を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる個体に、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の水性抽出物を含む治療有効量の組成物を投与し、食後血糖又は空腹時血糖を低減させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項23】
請求項２２に記載の方法において、前記血糖を、プラセボと比較して約４～６％だけ低減させることを特徴とする方法。
【請求項24】
請求項２２に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約６２．５ｍｇ～約３０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項25】
請求項２２に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項26】
請求項２２に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇの１日用量範囲で提供することを特徴とする方法。
【請求項27】
請求項２２に記載の方法において、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の前記水性抽出物を、約８週間～約１２週間にわたり投与することを特徴とする方法。
【請求項28】
請求項２２に記載の方法において、前記水性抽出物は、前記組成物の総重量に基づき約３重量％の総フラボノイド及び７重量％以上のミオイノシトール一リン酸を含むことを特徴とする方法。
【請求項29】
請求項２２に記載の方法において、さらに、ＨｂＡ１ｃをベースラインと比較して前記個体において約２％だけ低減させることを特徴とする方法。
【請求項30】
請求項２２に記載の方法において、さらに、ＨＯＭＡ－ＩＲにより測定されるインスリン抵抗性を、ベースラインと比較して前記個体において１０％超だけ低減させることを特徴とする方法。
【請求項31】
請求項２２に記載の方法において、さらに、内皮機能を改善し、それとしては、前記個体におけるＣ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）の血中レベルの少なくとも約１０％の減少が挙げられることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ニーム抽出物を使用する２型糖尿病及びメタボリックシンドロームの症状の改善に関する。本発明はまた、ウロリチンＡ及びウロリチンＢの組み合わせを使用する２型糖尿病の症状の改善に関する。本発明はまた、ニーム抽出物を使用し、並びにウロリチンＡ及びウロリチンＢの組み合わせを使用して血糖レベルを低減させる方法に関する。ウロリチンＡ（３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン）及びウロリチンＢ（３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン）の相乗作用組み合わせが、特に有効な比で提供される。特定の濃度のニーム抽出物も提供される。
【背景技術】
【0002】
糖尿病は、世界的に蔓延しつつある。糖尿病を管理するために利用可能ないくつかの処方薬の利用可能性にかかわらず、副作用をほとんど有さず、又は全く有さず、追加の利益を有するより良好な医薬が常に必要とされている。天然産物はこのような欠陥を満たし得るが、それらが天然産物であるという理由だけでなく、ヒトがそれらを囲う植物と同時進化してきたため、その結果として、それらの身体は天然産物のホリスティックな治癒特性により良好に応答し得る。このような天然産物の２つのクラスは、（１）ニーム（インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ））抽出物；並びに（２）それぞれ化学的に３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロンとしても公知であるウロリチンＡ及びＢである。
【0003】
ウロリチンは、堆積岩からの腐植質滲出液に由来するシラジット中に存在する生物活性剤である。新たな研究は、これらの分子が、動物の胃腸管中の微生物叢により生成されるエラジタンニンの代謝産物でもあることを示している。本研究において、驚くべきことに、３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロンの特定の比における組み合わせが、相乗作用的な有意な抗糖尿病効果を示す一方、遺伝性糖尿病動物において個々のウロリチンが有意な効果を有さないことが見出された。ストレプトゾトシン誘導糖尿病動物において、両方のウロリチンは、抗糖尿病活性を示した。
【0004】
インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）は、ニーム、ニツリー（ｎｉｔｒｅｅ）、又はインディアンライラックとして一般に公知であり、センダン科（Ｍｅｌｉａｃｅａｅ）マホガニーの樹木である。これは、アザディラクタ属（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ）の２つの種の一方であり、インド亜大陸、すなわち、インド、ネパール、パキスタン、バングラデシュ、スリランカ、及びモルディブを原産とする。これは、典型的には、熱帯及び亜熱帯地域中で生長する。ニーム樹木は、イラン南部に位置する島部でも生長する。この果実及び種子は、ニーム油の資源である。
【0005】
ニーム樹木から作製される産物は、それらの医薬特性のために二千年にわたりインドにおいて使用されてきた。ニーム産物は、シッダ医学並びにアーユルベーダ及びユナニ医学における主成分とみなされ、特に皮膚疾患のために処方される。ニーム油は健常な毛髪、肝機能の改善、血液の解毒、血糖レベルの平衡のためにも使用される。ニーム葉は、湿疹及び乾癬などの皮膚疾患を治療するためにも使用されている。
【0006】
ニーム抽出物は、多くの前臨床研究、例として、糖尿病に関する研究の対象である。本研究において、ニーム葉及び小枝の水性抽出物を、ストレプトゾトシン誘導糖尿病動物における、及び遺伝性糖尿病動物におけるその抗糖尿病活性について判定した。多くの産物は、ストレプトゾトシン誘導糖尿病動物に対して機能するが、遺伝性インスリン欠損動物に対しては機能せず；しかしながら、本出願の抽出物は、両方のタイプの動物において機能した。
【0007】
２型真性糖尿病（２型糖尿病としても公知）は、高血糖、インスリン抵抗性、及びインスリンの相対的欠落を特徴とする長期代謝障害である。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＣａｕｓｅｓ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＤＩＡＢＥＴＥＳ ＆ ＤＩＧＥＳＴＩＶＥ ＆ ＫＩＤＮＥＹ ＤＩＳＥＡＳＥＳ（Ｊｕｎｅ ２０１４）参照。一般的な症状としては、口渇の増加、頻尿、及び原因不明の体重減少が挙げられる。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＤｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ Ｐｒｅｄｉａｂｅｔｅｓ，ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＤＩＡＢＥＴＥＳ ＆ ＤＩＧＥＳＴＩＶＥ ＆ ＫＩＤＮＥＹ ＤＩＳＥＡＳＥＳ（Ｊｕｎｅ ２０１４）参照。症状としては、空腹感の増加、疲労感、及び治癒しない疼痛も挙げることができる。症状は緩慢に生じ始めることが多い。高血糖からの長期合併症としては、心疾患、卒中、盲目をもたらし得る糖尿病性網膜症、腎不全、及び切断をもたらし得る四肢の血流不良が挙げられる。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＤｉａｂｅｔｅｓ Ｆａｃｔ Ｓｈｅｅｔ，ＷＯＲＬＤ ＨＥＡＬＴＨ ＯＲＧＡＮＩＺＡＴＩＯＮ（Ａｕｇｕｓｔ ２０１１）参照。高浸透圧高血糖状態の突然発症が生じ得；しかしながら、ケトアシドーシスは希少である。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＦ．Ｊ．Ｐａｓｑｕｅｌ ＆ Ｇ．Ｅ．Ｕｍｐｉｅｒｒｅｚ，Ｈｙｐｅｒｏｓｍｏｌａｒ ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ ｓｔａｔｅ：ａ ｈｉｓｔｏｒｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，３７ ＤＩＡＢＥＴＥＳ ＣＡＲＥ ３１２４（２０１４）；Ｏ．Ａ．Ｆａｓａｎｍａｄｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｅｔｏａｃｉｄｏｓｉｓ：ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，３７ ＡＦＲＩＣＡＮ Ｊ．ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＆ ＭＥＤＩＣＡＬ ＳＣＩＳ．９９（２００８）参照。
【0008】
２型糖尿病は主に、肥満及び運動不足の結果として生じる。一部の人々は、他の人々よりも遺伝的にリスクがある。２型糖尿病は糖尿病の症例の約９０％を占め、他の１０％は主に１型真性糖尿病及び妊娠性糖尿病に起因する。１型真性糖尿病において、膵臓中のインスリン産生ベータ細胞の自己免疫誘導損失に起因して対照血糖に対するインスリンの低い総レベルが存在する。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＴＨＥ ＡＵＴＯＩＭＭＵＮＥ ＤＩＳＥＡＳＥＳ ５７５（Ｉａｎ ＭａｃＫａｙ ＆ Ｎｏｅｌ Ｒｏｓｅ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ２０１４）；Ｃｈａｐｔｅｒ １７：Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ＆ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ，ｉｎ ＧＲＥＥＮＳＰＡＮ’Ｓ ＢＡＳＩＣ ＆ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＥＮＤＯＣＲＩＮＯＬＯＧＹ（９ｔｈ ｅｄ．，Ｄａｖｉｄ Ｇ．Ｇａｒｄｎｅｒ ＆ Ｄｏｌｏｒｅｓ Ｓｈｏｂａｃｋ，ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｍｅｄｉｃａｌ ２０１１）参照。糖尿病の診断は、血液試験、例えば、空腹時血漿グルコース、経口糖負荷試験、又は糖化ヘモグロビン（Ａ１Ｃ）による。
【0009】
２型糖尿病は、標準体重を保ち、定期的に運動し、適切に摂食することにより部分的に予防可能である。治療は、運動及び食事変更を伴う。血糖レベルが適切に低下しない場合、典型的には医薬メトホルミンが推奨される。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＮ．Ｍ．Ｍａｒｕｔｈｕｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ ａｓ Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｒ Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ－Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ ２ Ｄｉａｂｅｔｅｓ：Ａ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ Ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ，１６４ ＡＮＮＡＬＳ ＯＦ ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ７４０（２０１６）；Ａ．Ｓａｅｎｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ，ＣＯＣＨＲＡＮＥ ＤＡＴＡＢＡＳＥ ＯＦ ＳＹＳＴＥＭＡＴＩＣ ＲＥＶＩＥＷＳ（２００５）参照。多くの人々は、最終的にはインスリン注射も要求し得る。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＡ．Ｊ．Ｋｒｅｎｔｚ ＆ Ｃ．Ｊ．Ｂａｉｌｅｙ，Ｏｒａｌ ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ，６５ ＤＲＵＧＳ ３８５（２００５）参照。インスリンを受けている者において、血糖レベルの定型的な確認が助言され；しかしながら、これは抗糖尿病ピル剤を服用している者において必要とされ得ない。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＵ．Ｌ．Ｍａｌａｎｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｆ－ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｗｈｏ ａｒｅ ｎｏｔ ｕｓｉｎｇ ｉｎｓｕｌｉｎ，ＣＯＣＨＲＡＮＥ ＤＡＴＡＢＡＳＥ ＯＦ ＳＹＳＴＥＭＡＴＩＣ ＲＥＶＩＥＷＳ（２０１２）参照。減量外科手術は、肥満の者において糖尿病を改善することが多い。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＳ．Ｃｅｔｉｎｋｕｎａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂａｒｉａｔｒｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ ｏｎ ｈｕｍｏｒａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｅｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｏｂｅｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ：Ｈｏｗ ｉｔ ｗｏｒｋｓ，３ ＷＯＲＬＤ Ｊ．ＯＦ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＣＡＳＥＳ ５０４（２０１５）；Ｓ．Ｇａｎｇｕｌｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｂａｒｉａｔｒｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ：ａｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｓｔ’ｓ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，２９ Ｊ．ＯＦ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ １０５（２０１５）参照。
【0010】
２型糖尿病の割合は、肥満と並行して１９６０年以降、顕著に増加している。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＳｕｓａｎ Ｍｏｓｃｏｕ，Ｇｅｔｔｉｎｇ ｔｈｅ ｗｏｒｄ ｏｕｔ：ａｄｖｏｃａｃｙ，ｓｏｃｉａｌ ｍａｒｋｅｔｉｎｇ，ａｎｄ ｐｏｌｉｃｙ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｎｆｏｒｃｅｍｅｎｔ，ｉｎ ＭＡＲＩＥ ＴＲＵＧＬＩＯ－ＬＯＮＤＲＩＧＡＮ ＆ ＳＡＮＤＲＡ Ｂ．ＬＥＷＥＮＳＯＮ，ＰＵＢＬＩＣ ＨＥＡＬＴＨ ＮＵＲＳＩＮＧ：ＰＲＡＣＴＩＣＩＮＧ ＰＯＰＵＬＡＴＩＯＮ－ＢＡＳＥＤ ＣＡＲＥ ３１７（２ｄ ｅｄ．，Ｊｏｎｅｓ ＆ Ｂａｒｔｌｅｔｔ Ｌｅａｒｎｉｎｇ ２０１３）参照。２０１５年時点で、１９８５年における約３千万人と比較してその疾患と診断されたおよそ３億９千２百万人の人々が存在した。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＧＢＤ ２０１５ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｉｎｊｕｒｙ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｓ，Ｇｌｏｂａｌ，ｒｅｇｉｏｎａｌ，ａｎｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，ａｎｄ ｙｅａｒｓ ｌｉｖｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ３１０ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｊｕｒｉｅｓ，１９９０－２０１５：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｔｕｄｙ ２０１５，３８８ ＴＨＥ ＬＡＮＣＥＴ １５４５（２０１６）；Ｓ．Ｓｍｙｔｈ ＆ Ａ．Ｈｅｒｏｎ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｏｂｅｓｉｔｙ：ｔｈｅ ｔｗｉｎ ｅｐｉｄｅｍｉｃｓ，１２ ＮＡＴＵＲＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ７５（２００６）参照。典型的には、これは中年又は高齢において発症するが、２型糖尿病の割合は若年層において増加している。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＨ．Ｔｆａｙｌｉ ＆ Ｓ．Ａｒｓｌａｎｉａｎ，Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎ ｙｏｕｔｈ：ｔｈｅ ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｃｈａｍｅｌｅｏｎ，５３ ＡＲＱＵＩＶＯＳ ＢＲＡＳＩＬＥＩＲＯＳ ＤＥ ＥＮＤＯＣＲＩＮＯＬＯＧＩＡ ＆ ＭＥＴＡＢＯＬＯＧＩＡ １６５（２００９）；Ｇｉｕｓｅｐｐｉｎａ Ｉｍｐｅｒａｔｏｒｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｙｐｅ １ ａｎｄ Ｔｙｐｅ ２ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｂｕｒｄｅｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ａｇｅｄ＜２０ Ｙｅａｒｓ Ｔｈｒｏｕｇｈ ２０５０，３５ ＤＩＡＢＥＴＥＳ ＣＡＲＥ ２５１５（２０１２）参照。２型糖尿病は、１０年短い平均余命を伴う。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＷＩＬＬＩＡＭＳ ＴＥＸＴＢＯＯＫ ＯＦ ＥＮＤＯＣＲＩＮＯＬＯＧＹ １３７１（１２ｔｈ ｅｄ．，Ｓｈｌｏｍｏ Ｍｅｌｍｅｄ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ／Ｓａｕｎｄｅｒｓ）参照。
【0011】
糖尿病を管理するために利用可能ないくつかの処方薬の利用可能性にかかわらず、副作用をほとんど有さず、又は全く有さず、追加の利益を有するより良好な医薬が常に必要とされている。天然産物はこのような欠陥を満たし得るが、それらが天然産物であるという理由だけでなく、ヒトがそれらを囲う植物と同時進化してきたため、その結果として、それらの身体は天然産物のホリスティックな治癒特性により良好に応答し得る。このような天然産物の２つのクラスは、（１）ニーム（インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ））抽出物；並びに（２）それぞれ化学的に３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロンとしても公知であるウロリチンＡ及びＢである。
【発明の概要】
【0012】
一実施形態において、２型糖尿病の症状を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる個体に、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の水性抽出物を含む治療有効量の組成物を投与し、プラセボと比較して食後血糖若しくは空腹時血糖を低減させ、及び／又はＨｂＡ１ｃを低減させることを含む方法が記載される。一実施形態において、メタボリックシンドロームの症状を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる個体に、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の水性抽出物を含む治療有効量の組成物を投与し、プラセボと比較して食後血糖又は空腹時血糖を低減させ、内皮機能を改善する一方、ベースラインと比較してＨｂＡ１ｃ及びｈｓＣＲＰを減少させることを含む方法が記載される。
【0013】
別の実施形態において、２型真性糖尿病を罹患する糖尿病個体における内皮機能不全を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる個体に、インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）の水性抽出物を含む治療有効量の組成物を投与し、内皮機能を改善することを含む方法が記載される。
【0014】
別の実施形態において、２型糖尿病の症状を治療し、又は予防する方法において、それが必要とされる個体に、ウロリチンＡ及びウロリチンＢの組み合わせを含む治療有効量の組成物を投与することを含む方法が記載される。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【発明を実施するための形態】
【0016】
ニーム産物は、シッダ医薬並びにアーユルベーダ及びユナニ医薬における主成分とみなされ、特に皮膚疾患のために処方される。ニーム油は健常な毛髪、肝機能の改善、血液の解毒、血糖レベルの平衡のためにも使用される。ニーム葉は、湿疹及び乾癬などの皮膚疾患を治療するためにも使用されている。ニーム抽出物は、多くの前臨床研究、例として、糖尿病に関する研究の対象である。
【0017】
さらに別の態様において、本発明は、糖尿病の症状、例として、限定されるものではないが、高血糖レベルを罹患するヒト個体の治療におけるニーム抽出物の有用性を実証する。
【0018】
ニーム（インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ））樹木は、インドでは神聖なものとみなされ、インド亜大陸において遍在する。この樹木の様々な部分は様々な生物活性構成要素を提供し、それとしては、アザジラクチン、ニンボリニン、ニンビン、ニンビジン、ニンビドール、ニンビン酸ナトリウム、ゲデュニン、サラニン、及びクエルセチンが挙げられる。葉は、ニンビン、ニンバネン、６－デスアセチルニンビネン、ニンバンジオール、ニンボリド、アスコルビン酸、ｎ－ヘキサコサノール及びアミノ酸、７－デスアセチル－７－ベンゾイルアザジラジオン、７－デスアセチル－７－ベンゾイルゲデュニン、１７－ヒドロキシアザジラジオン、及びニンビオールのような成分を含有する。クエルセチン及びβ－シトステロール、ポリフェノール性フラボノイド、新葉は、抗菌及び抗真菌特性を有することが公知であり、種子は、有価な構成要素、例として、ゲデュニン及びアザジラクチンを保持する（Ｍｏｈａｍｍａｄ Ａ．Ａｌｚｏｈａｉｒｙ，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ（Ｎｅｅｍ）ａｎｄ ｉｔｓ Ａｃｔｉｖｅ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，”Ｅｖｉｄｅｎｃｅ－Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ａｎｄ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ ２０１６，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ７３８２５０６，１１ ｐａｇｅｓ参照）。この植物の様々な部分並びに様々な抽出溶媒及び方法は、様々な生物活性組成物を有する抽出物を生じさせる。多数の生物学的及び薬理学的活性、例として、抗菌、抗真菌、及び抗炎症、低血糖、抗胃潰瘍、及び抗癌活性が報告されている。ニームは、種々の腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３、ｐＴＥＮ）、血管新生（ＶＥＧＦ）、転写因子（例えば、ＮＦ－κＢ）、及びアポトーシス（例えば、ｂｃｌ２、ｂａｘ）の活性をモジュレートする。ニームは、炎症促進酵素活性、例として、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）、及びリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）酵素の調節を介して抗炎症としての役割も担う。
【0019】
本発明の一実施形態において、Ｎａｔｒｅｏｎ，Ｉｎｃ．から入手可能なＰｈｙｔｏＢＧＳ（登録商標）は、血糖管理用のインドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）（ニーム）葉及び小枝の水性抽出物（１：１ｗ／ｗの比）である。前糖尿病における１２週間の期間の無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験において、空腹時及び食後血糖レベル並びに内皮機能の尺度の屈折率を１２週間の終了までに、５００ｍｇのＢＩＤ用量においてプラセボ群と比較して有意に減少させることが示された。この用量において、これはまた、ベースライン値と比較してＨＯＭＡインスリン抵抗性、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベル、酸化ストレスバイオマーカー、ｈｓＣＲＰ、ＩＬ－６及びＴＮＦ－αを有意に減少させた。
【0020】
ＰｈｙｔｏＢＧＳ（登録商標）は、既に安定的用量のメトホルミンを受けている２型糖尿病患者（Ｔ２ＤＭ）における別の１２週間の期間の無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験においても、空腹時及び食後血糖レベル、ＨＯＭＡインスリン抵抗性、ＨｂＡ１ｃ、ｈｓＣＲＰ及び全ての酸化ストレスパラメータを、試験された全ての用量、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ及び５００ｍｇ ＢＩＤにおいて、１２週間の終了時に有意に改善することが本明細書において示された。本試験において、試験されたパラメータの多くと同様に４週間及び８週間において有意な結果が得られた。
【0021】
一実施形態において、本発明は、ウロリチンＡ及びウロリチンＢを含む組成物において、ウロリチンＢとウロリチンＡとの重量／重量比は、約０．２：１～約１：１である組成物を記載する。医薬又は栄養組成物は、許容可能な担体又は賦形剤を含めることにより調製することができる。
【0022】
代替的な実施形態において、本発明は、ニーム抽出物を含む組成物を記載する。医薬又は栄養組成物は、許容可能な担体又は賦形剤を含めることにより調製することができる。
【0023】
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、ヒト対象における糖尿病の症状を治療する方法における使用のためのものである。
【0024】
糖尿病の症状としては、限定されるものではないが、高血糖レベルを挙げることができる。
【0025】
シラジットは、海洋生物及び微生物代謝産物と混合された岩石の層により圧縮された岩石腐植土、岩石鉱物、及び有機物質から構成される。これは、ヒマラヤ山脈中の岩石から、１０００～５０００メートルの範囲の高地において、黒色塊状物として滲出し、紀元前３５００年まで遡ると、伝統的なインド医学体系であるアーユルベーダにおいてマハラサ（ｍａｈａｒａｓａ）（特別な活力剤）と呼ばれている。シラジットは、ジベンゾ－α－ピロン（「ＤＢＰ」）及びジベンゾ－α－ピロン色素タンパク質とともに、主成分としてフルボ酸を含有する。
【0026】
シラジットの２つの主要なＤＢＰ構成要素成分は、３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（「ウロリチンＡ」、或いは「３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ」としても公知）及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（「ウロリチンＢ」、或いは「３－（ＯＨ）－ＤＢＰ」としても公知）である。これらの化合物の両方を、Ｎａｔｒｅｏｎ，Ｉｎｃ．の受託製造所において９９％の純度までカスタム合成した。
【0027】
シラジットに由来するフルボ酸複合体は、コア核としての還元及び酸化型の両方の酸化ジベンゾ－α－ピロン（ＤＢＰ）並びに部分構造単位としてのアシル化ＤＢＰ及び脂質をフルボ酸（「ＦＡ」）とともに含む、天然発生の低及び中分子量の化合物の集合体である。沖積層源に由来するフルボ酸複合体材料はＤＢＰを欠き；その代わり、沖積層のフルボ酸のコア核は安息香酸から構成される。
【0028】
したがって、シラジットの活性成分は、ジベンゾ－α－ピロン及び関連代謝産物、小ぺプチド（非タンパク質アミノ酸を構成する）、いくらかの脂質、及び担体分子（フルボ酸）を含有する。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＳ．Ｇｈｏｓａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｈｉｌａｊｉｔ Ｐａｒｔ １－Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ，６５ Ｊ．ＰＨＡＲＭ．ＳＣＩＳ．７７２（１９７６）；Ｓ．Ｇｈｏｓａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｈｉａｌｊｉｔ Ｐａｒｔ ７－Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｓｈｉｌａｊｉｔ，ａｎ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ａｙｕｒｖｅｄｉｃ ｒａｓａｙａｎａ，６２ ＰＵＲＥ ＡＰＰＬ．ＣＨＥＭ．（ＩＵＰＡＣ）１２５８（１９９０）；Ｓ．Ｇｈｏｓａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｃｏｒｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｓｈｉｌａｊｉｔ ｈｕｍｕｓ，２３ ＳＯＩＬ ＢＩＯＬ．ＢＩＯＣＨＥＭ．６７３（１９９２）；米国特許第６，４４０，４３６号明細書（及びそれに引用される参照文献）；米国特許第６，８６９，６１２号明細書（及びそれに引用される参照文献）参照。
【0029】
シラジット（例えば、ＰｒｉｍａＶｉｅ（登録商標））は、アーユルベーダにおいて多様な臨床的病態に対して広く使用されている。ヒマラヤ山脈及び隣接地域の孤立した村に住む人々は、何世紀にもわたり、シラジットを単独で又は他の植物治療との組み合わせで使用し、糖尿病に伴う問題を予防し、撲滅してきた。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＶ．Ｐ．Ｔｉｗａｒｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｙｕｒｖｅｄｉｃａ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｏｎ Ｓｈｉｌａｊｉｔ，８ Ｊ．ＲＥＳ．ＩＮＤＩＧＥＮＯＵＳ ＭＥＤ．５７（１９７３）参照。さらに、これは酸化防止剤であるため、細胞毒性の酸素ラジカルにより誘導される膵島細胞への損傷を予防する。例えば、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれるＳ．Ｋ．Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ，Ｓｈｉｌａｊｉｔ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｒａｔｓ，９ ＰＨＹＴＯＴＨＥＲ．ＲＥＳ．４１（１９９５）；Ｓ．Ｋ．Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ，Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓｈｉｌａｊｉｔ ｏｎ ｂｉｏｇｅｎｉｃ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ，９ ＰＨＹＴＯＴＨＥＲ．ＲＥＳ．５６（１９９５）；Ｓ．Ｇｈｏｓａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｈｉｌａｊｉｔ ｗｉｔｈ ｂｉｏｇｅｎｉｃ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ，３４Ｂ ＩＮＤＩＡＮ Ｊ．ＣＨＥＭ．５９６（１９９５）参照。糖尿病の間のグルコース、脂肪、及びタンパク質代謝の異常は、高脂血症の発症をもたらすことが提案されている。ある研究において、シラジットは、ラットの脂質プロファイルにおける有意な有益な効果を産生した。例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＮ．Ａ．Ｔｒｉｖｅｄｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｓｈｉｌａｊｉｔ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｐｒｏｆｉｌｅ ｉｎ ａｌｌｏｘａｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ，３６ ＩＮＤＩＡＮ Ｊ．ＰＨＡＲＭＡＣＯＬ．３７３（２００４）参照。
【0030】
考察のとおり、シラジットは種々の疾病を治療するために使用されてきた。これは、性能向上剤としても推奨される。フルボ酸（ＦＡ）は、植物の生物学的系、動物、及びヒトにおける多くの重要な役割、例として、（ａ）ミネラル及び栄養素のバイオアベイラビリティの改善；（ｂ）電解質としての機能；（ｃ）毒性物質、例として、重金属の解毒；（ｄ）酸化防止剤としての機能；並びに（ｅ）免疫機能の改善を誘発することが報告されている。さらに、ジベンゾ－α－ピロンは、ミトコンドリア内部での電子伝達に関与し、したがってより多くのＡＴＰの産生を促し、エネルギーの増加をもたらすことが仮定されている。
【0031】
別の態様において、本発明は、糖尿病の症状、例として、限定されるものではないが、高血糖レベルを罹患するヒト個体の治療における、３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（３－ＯＨ－ＤＢＰ）、３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ）、又はそれらの組み合わせの有用性を実証する。
【0032】
以下の非限定的な実施例は、本発明を説明するために提供され、本発明の他の実施形態に適用可能である。当業者は、本発明の任意の所与の実施形態について手順を変えること、例えば、順序若しくはステップ及び／又は使用される成分の量を変えることが必要であり得ることを認識する。
【実施例】
【0033】
３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）、３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、シラジット、及びニーム抽出物の高糖尿病効果を判定するため、以下の実験をストレプトゾトシン誘導糖尿病動物及び遺伝性糖尿病動物においてニーム抽出物及びウロリチンの両方に対して実施した。
【0034】
試験１：雄及び雌マウスにおけるストレプトゾトシン誘導糖尿病に対するニーム抽出物の効果。
【0035】
試験２：雄及び雌マウスにおけるストレプトゾトシン誘導糖尿病に対する３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、並びにそれらの特定の比における組み合わせの効果。
【0036】
試験３：遺伝性糖尿病マウスにおける血糖レベルに対するニーム抽出物、３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）、３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、並びにウロリチンの特定の比における組み合わせの効果。
【0037】
実施例１（試験１）
試験１の目的：雄及び雌マウスにおけるストレプトゾトシン誘導糖尿病に対するニーム抽出物の効果を試験すること。
試験１の目的：雄及び雌マウスにおけるストレプトゾトシン誘導糖尿病に対するニーム抽出物の効果を試験すること。
【0038】
体重、食物摂取量、水分摂取量、及び空腹時基礎血糖レベルを、糖尿病の誘導前に計測した。糖尿病は、クエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ４．５中のストレプトゾトシン（６５ｍｇ／ｋｇ体重）の単一腹腔内投与により誘導した。ストレプトゾトシン投与の５日後、空腹時血糖レベルを推定した。２３０±２０ｍｇ％の血糖レベルを有するマウスを本試験について検討した。雄及び雌マウスをそれぞれ以下の群に分けた：
１．ビヒクル対照（「Ｖｅｈ Ｃｏｎ」）
２．ストレプトゾトシン（「ＳＴＺ」）
３．ニーム５０＋ＳＴＺ
４．ニーム１００＋ＳＴＺ
５．ニーム２５０＋ＳＴＺ
６．メトホルミン２５０＋ＳＴＺ。
１．ビヒクル対照（「Ｖｅｈ Ｃｏｎ」）
２．ストレプトゾトシン（「ＳＴＺ」）
３．ニーム５０＋ＳＴＺ
４．ニーム１００＋ＳＴＺ
５．ニーム２５０＋ＳＴＺ
６．メトホルミン２５０＋ＳＴＺ。
【0039】
ストレプトゾトシン誘導高脂血症後、治療レジメンを２週間実施した。ニーム抽出物を０．３％のカルボキシメチルセルロースナトリウム（「ＣＭＣ」）中で懸濁させ、５０ｍｇ／ｋｇ体重、１００ｍｇ／ｋｇ体重、及び２５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量において２週間、経口投与した。同様に、メトホルミンを０．３％のＣＭＣ中で懸濁させ、２５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量において２週間、経口投与した。治療スケジュールの間、体重並びに食物及び水分摂取量を規則的間隔においてモニタリングした。空腹時血糖（「ＦＢＧ」）、ＨｂＡ１Ｃ、血漿コレステロール、及びトリグリセリドレベルを２週間、毎週モニタリングした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝４、それぞれの性から）で表現した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０ソフトウェアを使用してデータを一元ＡＮＯＶＡとそれに続くテューキーの検定に供して統計的有意性を確立した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１）。
【0040】
表１．ストレプトゾトシン誘導雄糖尿病マウスの血糖レベルに対するニーム抽出物の効果。
【0041】
雄ニーム＋ＳＴＺ及びメトホルミン＋ＳＴＺ処理マウスのＦＢＧ（ｍｇ％）を、ビヒクル対照マウス及びストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスと比較した。ＦＢＧレベルは、ＳＴＺ誘導糖尿病雄マウスにおいて有意に（＊＊＊ｐ＜０．００１）増加した。ニーム抽出物（ニーム５０、ニーム１００、ニーム２５０）及びメトホルミン（Ｍｅｔ ２５０）による処理は、ＳＴＺ誘導増加糖レベルを有意に（＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１）減衰させた。
【0042】
表２．ストレプトゾトシン誘導雌糖尿病マウスの血糖レベルに対するニーム抽出物の効果。
【0043】
雌ニーム＋ＳＴＺ及びメトホルミン＋ＳＴＺ処理マウスのＦＢＧ（ｍｇ％）を、ビヒクル対照マウス及びストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスと比較した。ＦＢＧレベルは、ＳＴＺ誘導糖尿病雌マウスにおいて有意に（＊＊＊ｐ＜０．００１）増加した。ニーム抽出物（ニーム５０、ニーム１００、ニーム２５０）及びメトホルミン（Ｍｅｔ ２５０）による処理は、ＳＴＺ誘導増加糖レベルを有意に（＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１）減衰させた。
【0044】
表．ストレプトゾトシン誘導雄及び雌糖尿病マウスのＨｂＡ１Ｃレベルに対するニーム抽出物の効果。
【0045】
雄及び雌ニーム＋ＳＴＺ及びメトホルミン＋ＳＴＺ処理マウスのＨｂＡ１Ｃ（％）を、ビヒクル対照マウス及びストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスと比較した。ＨｂＡ１Ｃレベルは、有意であった（＊ｐ＜０．０５）。ニーム抽出物（ニーム５０、ニーム１００、ニーム２５０）及びメトホルミン（Ｍｅｔ ２５０）による処理は、ＳＴＺ誘導糖尿病雄及び雌マウスにおいてＨｂＡ１ＣレベルのＳＴＺ誘導増加を有意に（＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１）減衰させた。
【0046】
実施例２（試験２）
試験２の目的：雄及び雌マウスにおけるストレプトゾトシン誘導糖尿病に対する３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、並びにそれらの特定の比における組み合わせの効果を試験すること。
試験２の目的：雄及び雌マウスにおけるストレプトゾトシン誘導糖尿病に対する３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）及び３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、並びにそれらの特定の比における組み合わせの効果を試験すること。
【0047】
体重、食物摂取量、水分摂取量、及び空腹時血糖（血液を１２時間の絶食後に回収した）を、糖尿病の誘導前に測定した。糖尿病は、クエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ４．５中のストレプトゾトシン（５０ｍｇ／ｋｇ体重）を腹腔内投与することにより誘導した。ストレプトゾトシン投与の５日後、空腹時血糖を推定した（１２時間の絶食後）。血糖レベル２５０±２０ｍｇ％を有するマウスを以下の試験のために検討した。雄及び雌マウスを以下の４つの群（ｎ＝８）に分けた：
ｉ．ビヒクル対照（Ｃｏｎ Ｖｅｈ）（０．３％のＣＭＣ）
ｉｉ．ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導糖尿病対照
ｉｉｉ．３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）＋ＳＴＺ
ｉｖ．３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）＋ＳＴＺ。
ｉ．ビヒクル対照（Ｃｏｎ Ｖｅｈ）（０．３％のＣＭＣ）
ｉｉ．ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導糖尿病対照
ｉｉｉ．３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）＋ＳＴＺ
ｉｖ．３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）＋ＳＴＺ。
【0048】
ストレプトゾトシン誘導高脂血症後、治療レジメンを１か月実施した。３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）をそれぞれ０．３％のＣＭＣ中で別個に懸濁させ、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量において１か月間、経口投与した。１か月の処理の間、体重並びに食物及び水分摂取量を定期的間隔においてモニタリングした。ＦＢＧ（１２時間の絶食後）を１５日間隔において２回推定した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝８）で表現した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０ソフトウェアを使用してデータを一元ＡＮＯＶＡとそれに続くテューキーの検定に供して統計的有意性を確立した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１）。
【0049】
表５．ストレプトゾトシン誘導糖尿病雌マウスの空腹時血糖（ｍｇ％）に対する３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）の効果。
【0050】
雌３－ＯＨ－ＤＢＰ＋ＳＴＺ及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ＋ＳＴＺ処理マウスのＦＢＧを、ビヒクル対照マウス及びストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスと比較した。ＦＢＧは、５日目（誘導後）にビヒクル対照群と比較してＳＴＺ群において有意に（＊＊＊ｐ＜０．００１）増加し、動物の高脂血症状態を示した。３－ＯＨ－ＤＢＰ及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰによる処理は、ＳＴＺ誘導増加糖レベルを有意に（＃＃＃ｐ＜０．００１）減衰させ、抗糖尿病活性を示した。
【0051】
表６．ストレプトゾトシン誘導糖尿病雄マウスの空腹時血糖に対する３－ＯＨ－ＤＢＰ及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰの効果。
【0052】
試験結果を表６に列記する。
【0053】
雄３－ＯＨ－ＤＢＰ＋ＳＴＺ及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ＋ＳＴＺ処理マウスの空腹時血糖を、ビヒクル対照マウス及びストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスと比較した。
【0054】
ＦＢＧは、５日目（誘導後）にビヒクル対照群と比較してＳＴＺ群において有意に（＊＊＊ｐ＜０．００１）増加し、動物の高脂血症状態を示した。３－ＯＨ－ＤＢＰ及び３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰによる処理は、ＳＴＺ誘導増加糖レベルを有意に（＃＃＃ｐ＜０．００１）減衰させ、抗糖尿病活性を示した。
【0055】
実施例３（試験３）
試験３の目的：遺伝性糖尿病マウスにおける血糖レベルに対するニーム抽出物、３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）、３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、並びにウロリチンＡ及びウロリチンＢの特定の比における組み合わせの効果を試験すること。
試験３の目的：遺伝性糖尿病マウスにおける血糖レベルに対するニーム抽出物、３，８－ジヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＡ）、３－ヒドロキシ－ジベンゾ－α－ピロン（ウロリチンＢ）、並びにウロリチンＡ及びウロリチンＢの特定の比における組み合わせの効果を試験すること。
【0056】
糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ、１１週；ｎ＝３～５）の５つの群に以下を補給した：
Ａ．プラセボ
Ｂ．ニーム抽出物（用量：５０ｍｇ／ｋｇ）
Ｃ．３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）（用量：２ｍｇ／ｋｇ）
Ｄ．３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）（用量：１０ｍｇ／ｋｇ）
Ｅ．３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）（用量：１０ｍｇ／ｋｇ）及び３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）（用量：２ｍｇ／ｋｇ）のブレンド。
Ａ．プラセボ
Ｂ．ニーム抽出物（用量：５０ｍｇ／ｋｇ）
Ｃ．３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）（用量：２ｍｇ／ｋｇ）
Ｄ．３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）（用量：１０ｍｇ／ｋｇ）
Ｅ．３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（ウロリチンＡ）（用量：１０ｍｇ／ｋｇ）及び３－ＯＨ－ＤＢＰ（ウロリチンＢ）（用量：２ｍｇ／ｋｇ）のブレンド。
【0057】
空腹時血糖レベルを規則的間隔においてモニタリングした。
【0058】
本試験の結果は、遺伝性糖尿病マウスにおける空腹時血糖に対するニーム抽出物及びＤＢＰ誘導体（ウロリチンＡ及びウロリチンＢ）の効果を実証し、これを図１に示す。
【0059】
ニーム抽出物（５０ｍｇ／ｋｇ）の補給は、ｄｂ／ｄｂ動物における空腹時血糖レベルを減少させた。ＤＢＰ誘導体は単独では空腹時血糖レベルのいかなる変化も示さなかったが、３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ（用量：１０ｍｇ／ｋｇ）及び３－ＯＨ－ＤＢＰ（用量：２ｍｇ／ｋｇ）のブレンドは、初期における血糖レベルの有意な減少を示した。この症例において使用されるマウスモデル（ｄｂ／ｄｂ；Ｌｅｐｒｄｂ／ｄｂとしても公知）は、レプチン受容体遺伝子をコードする糖尿病（ｄｂ）遺伝子中の点突然変異を有する遺伝性マウスモデルであることに留意すべきである。高脂血症は、遺伝子突然変異に起因してそれらの動物において、糖尿病が主に食習慣及び座りがちな生活様式に起因して発症するヒトと異なり、持続する。これは、後期における３，８－（ＯＨ）２－ＤＢＰ及び３－ＯＨ－ＤＢＰのブレンドの跳ね上がりの復帰の理由を説明し得る。
【0060】
一実施形態において、ウロリチンＡ及びウロリチンＢの組み合わせは、医薬又は栄養配合物として調製することができる。ウロリチンＢとウロリチンＡとの例示的な重量／重量比は、約０．２：１～約１：１の範囲であり得る。好ましい実施形態において、ウロリチンＢとウロリチンＡとの重量／重量比は、約０．２：１～約０．６：１の範囲であり得る。
【0061】
本明細書に記載の実施例によれば、上記のウロリチンＢ及びウロリチンＡの相乗作用組み合わせの１日用量は、ヒト対象において約１．５ｍｇ／ｋｇ～約８．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。別の実施形態において、１日用量は、ヒト対象において、約１．５ｍｇ／ｋｇ～約１０．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【0062】
一実施形態において、上記のウロリチンＢ及びウロリチンＡの相乗作用組み合わせの１日用量は、ヒト対象において約１００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲であり得る。好ましい実施形態において、上記のウロリチンＢ及びウロリチンＡの相乗作用組み合わせの１日用量は、ヒト対象において約１００ｍｇ～約５００ｍｇの範囲であり得る。
【0063】
試験３において観察された相乗作用は、哺乳動物対象において同等の用量範囲で実施する場合、試験１及び２と類似の様式で示されることがさらに予測される。ウロリチンＢ及びウロリチンＡの相乗作用は、ヒト対象における糖尿病の症状、例として、限定されるものではないが、増加した血糖レベルを治療する方法において観察されることがさらに予測される。
【0064】
一実施形態において、ニーム抽出物は、医薬又は栄養配合物として調製することができる。
【0065】
本明細書に記載の実施例によれば、ニーム抽出物の１日用量は、ヒト対象において１日当たり約６２．５ｍｇ～約３０００ｍｇの範囲であり得る。別のより好ましい実施形態において、１日用量は、ヒト対象において１日当たり約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇの範囲であり得る。最も好ましい実施形態において、１日用量は、ヒト対象において１日当たり約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲であり得る。
【0066】
試験３においてニーム抽出物について観察された空腹時血糖レベルの減少は、糖尿病の症状、例として、限定されるものではないが、増加した血糖レベルを治療する方法において観察されることがさらに予測される。
【0067】
実施例４－２型糖尿病の臨床試験
２型真性糖尿病を有するヒト対象における血糖コントロール、内皮機能不全、バイオマーカー及び血小板凝集に対するニーム抽出物の効果の評価。
２型真性糖尿病を有するヒト対象における血糖コントロール、内皮機能不全、バイオマーカー及び血小板凝集に対するニーム抽出物の効果の評価。
【0068】
試験目的
主要目的：メトホルミン治療を受けている２型ＤＭを有する患者における空腹時血糖（ＦＢＳ）、食後血糖（ＰＰＢＳ）及び糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）に対するニーム抽出物（ＮＥ）による１２週間の処理の効果を試験すること。
主要目的：メトホルミン治療を受けている２型ＤＭを有する患者における空腹時血糖（ＦＢＳ）、食後血糖（ＰＰＢＳ）及び糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）に対するニーム抽出物（ＮＥ）による１２週間の処理の効果を試験すること。
【0069】
副次目的：内皮機能及びバイオマーカー、例として、一酸化窒素（ＮＯ）、グルタチオン（ＧＳＨ）、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）、脂質プロファイル、及び血小板凝集に対する効果を試験すること；ＨＯＭＡ－ＩＲ及び炎症促進性サイトカイン－ＩＬ６、ＴＮＦアルファに対する効果を判定すること；並びに安全性及び忍容性を判定すること。
【0070】
試験集団
メトホルミン療法を受けている２型ＤＭ患者を、主にＮｉｚａｍ’ｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＮＩＭＳ）の総合診療外来部門からリクルートした。本試験は、Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（ＣＰ＆Ｔ，ＮＩＭＳ），Ｐａｎｊａｇｕｔｔａ，Ｈｙｄｅｒａｂａｄ，Ｉｎｄｉａ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｎｏ．ＣＰＴ／０４ＮＥＥＭ／ＤＭ／０１において実施された。
メトホルミン療法を受けている２型ＤＭ患者を、主にＮｉｚａｍ’ｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＮＩＭＳ）の総合診療外来部門からリクルートした。本試験は、Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（ＣＰ＆Ｔ，ＮＩＭＳ），Ｐａｎｊａｇｕｔｔａ，Ｈｙｄｅｒａｂａｄ，Ｉｎｄｉａ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｎｏ．ＣＰＴ／０４ＮＥＥＭ／ＤＭ／０１において実施された。
【0071】
選択基準は、以下のとおりである：３０～６５歳であり、且つインフォームドコンセントを与え、プロトコル関連試験手順に従う予定の男性及び女性対象；１１０～１２６ｍｇ／ｄＬの空腹時血漿グルコース；６．５％～８％の糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）；スクリーニング前の直近８週間、安定的用量の抗糖尿病治療（メトホルミン１５００～２５００ｍｇ／日）を受けている患者；≦６％だけのＲＩ指数の減少として報告された内皮機能不全を有する患者－（サルブタモール負荷試験）；並びに直近６か月でいかなる治験薬も受けていない対象。
【0072】
除外基準：治験責任医師により顕著とみなされる異常な血液学的又は生化学的パラメータを有する対象；コントロール不良の糖尿病（ＨｂＡ１ｃ＞８％及びＦＢＳ＞２１０ｍｇ／ｄｌ）；コントロール不良の高血圧（ＳＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ及びＤＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）；血清トリグリセリド＞５００ｍｇ／ｄｌ；ＡＳＴ及びＡＬＴ、基準値上限の＞３倍の上昇；１．５ｍｇ／ｄｌよりも高い血清クレアチニン；任意の他のダイエタリー若しくはハーブ系サプリメントの服用；又は試験における参加が健康に有害であり得ると医師が感じる任意の医学的病態。
【0073】
試験設計は、無作為化二重盲検並行群試験である。
【0074】
試験処理群
スクリーニング後、全ての適格患者を１２週間の二重盲検下の以下の４つの処理群のいずれかに無作為化した。
スクリーニング後、全ての適格患者を１２週間の二重盲検下の以下の４つの処理群のいずれかに無作為化した。
【0075】
群Ａ－同一プラセボの１つのカプセル剤、ＢＩＤ（それぞれのカプセル剤は、微結晶性セルロース３００ｍｇ、クロスカルメロースナトリウム２０ｍｇ、ヒュームド二酸化ケイ素５ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇを含有する）、すなわち、食後１日２回－午前及び夜間に服用。
【0076】
群Ｂ－１２５ｍｇのニーム抽出物（ＮＥ）を含有する１つのカプセル剤、ＢＩＤ（それぞれのカプセル剤は、１２５ｍｇのニームの水性抽出物、微結晶性セルロース１７５ｍｇ、クロスカルメロースナトリウム１０ｍｇ、ヒュームド二酸化ケイ素３ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム３ｍｇを含有する）、すなわち、食後１日２回－午前及び夜間に服用。
【0077】
群Ｃ－２５０ｍｇのニーム抽出物（ＮＥ）を含有する１つのカプセル剤、ＢＩＤ（それぞれのカプセル剤は、２５０ｍｇのニームの水性抽出物、微結晶性セルロース５０ｍｇ、クロスカルメロースナトリウム１０ｍｇ、ヒュームド二酸化ケイ素３ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム３ｍｇを含有する）、すなわち、食後１日２回－午前及び夜間に服用。
【0078】
群Ｄ－５００ｍｇのニーム抽出物ＢＩＤ（ＮＥ）を含有する１つのカプセル剤（それぞれのカプセル剤は、５００ｍｇのニームの水性抽出物、微結晶性セルロース５０ｍｇ、クロスカルメロースナトリウム１０ｍｇ、ヒュームド二酸化ケイ素３ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム３ｍｇを含有する）、すなわち、食後１日２回－午前及び夜間に服用。
【0079】
全ての処理は、メトホルミンによる既存の治療へのアドオン療法として使用した。
【0080】
プラセボカプセル剤及びニーム抽出物カプセル剤を、Ｎａｔｒｅｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ．ｉｎにより供給した。
【0081】
本明細書において使用されるニーム抽出物は、約２．３～３．７％ｗ／ｗ（平均３．０％ｗ／ｗ）の総フラボノイド（例として、クエルセチン－３－Ｏ－グルコシド、クエルセチン－３－Ｏ－ルチノシド、アペゲニン（ａｐｅｇｅｎｉｎ）ルチノシド、ルチン誘導体）、約７．３～１１．３％ｗ／ｗ（平均９．３％ｗ／ｗ）のミオイノシトール一リン酸、約５．２～７．７％ｗ／ｗ（平均６．６％ｗ／ｗ）の総ポリフェノール、及び６．３～１３．１％ｗ／ｗ（平均１０．１％ｗ／ｗ）の総アミノ酸（例として、アルギニン及びメチオニン）を含む、Ｎａｔｒｅｏｎ，Ｉｎｃ．製のＰｈｙｔｏＢＧＳ（登録商標）として入手可能なインドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ）（葉）の標準化水性抽出物である。仕様：約７重量％以上のミオイノシトール一リン酸及び約１重量％以上のフラボノイド。
【0082】
転帰尺度
主要尺度：１２週間の治療法について少なくとも１％だけのＨｂＡ１ｃの低減；並びに少なくとも１０ｍｇ／ｄｌだけの空腹時血糖（ＦＢＧ）及び食後血糖（ＰＰＢＧ）の低減。
主要尺度：１２週間の治療法について少なくとも１％だけのＨｂＡ１ｃの低減；並びに少なくとも１０ｍｇ／ｄｌだけの空腹時血糖（ＦＢＧ）及び食後血糖（ＰＰＢＧ）の低減。
【0083】
副次尺度：全ての処理群における１２週間における屈折率の６％超の変化により評価される内皮機能不全の変化；全ての処理群における１２週間の治療法の終了時のベースラインからの酸化ストレスバイオマーカー一酸化窒素（ＮＯ）、グルタチオン（ＧＳＨ）、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、炎症性バイオマーカー－高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）、及び血小板凝集の変化；１２週間の処理についてのインスリン抵抗性（ＨＯＭＡ－ＩＲ）及び炎症促進性サイトカイン－ＩＬ６、ＴＮＦアルファの変化；並びに試験薬の安全性及び忍容性評価。
【0084】
方法
対象を、書面によるインフォームドコンセントの署名後にスクリーニングした。８０人の適格対象を等比で４つの試験配合物にそれぞれ無作為化した：群Ａ（プラセボ ＢＤ＝ＢＩＤ）、群Ｂ（ＮＥ １２５ｍｇ ＢＤ）、群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）及び群Ｄ（ＮＥ ５００ｍｇ ＢＤ）。全ての登録対象は、医師により処方された直近８週間にわたる安定的用量の併用薬を受けており、同じ併用薬を本試験全体にわたり継続した。
対象を、書面によるインフォームドコンセントの署名後にスクリーニングした。８０人の適格対象を等比で４つの試験配合物にそれぞれ無作為化した：群Ａ（プラセボ ＢＤ＝ＢＩＤ）、群Ｂ（ＮＥ １２５ｍｇ ＢＤ）、群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）及び群Ｄ（ＮＥ ５００ｍｇ ＢＤ）。全ての登録対象は、医師により処方された直近８週間にわたる安定的用量の併用薬を受けており、同じ併用薬を本試験全体にわたり継続した。
【0085】
対象は、無作為化来院から１２週間、４つの試験薬のいずれか１つによる治療を受けた。スクリーニングは、初回来院時に行った。無作為化（２回目来院）は、初回来院の１週間以内に行った。３及び４回目来院は、治療法の４及び８週間後のフォローアップ来院であった。５回目来院（処理終了）は、処理の１２週間の終了時であった。患者は、絶食条件下で来院ごとに部門に報告した。スクリーニング又は初回来院において、本試験についての詳細の説明後、書面によるインフォームドコンセントを参加についてそれぞれの対象から得た。
【0086】
次いで、対象のデモグラフィックデータ、既往歴、及びバイタルを記録した。内皮機能の評価を、サルブタモール負荷試験を使用してＭｉｃｒｏ Ｍｅｄｉｃａｌシステムにより非侵襲的に行った。対象は、絶食条件下で研究施設に報告した。血液サンプルを空腹時血糖、ＨｂＡ１ｃ、安全性評価、脂質プロファイル、ｈｓ－ＣＲＰ、バイオマーカー推定、血小板凝集、ＨＯＭＡ－ＩＲ及び炎症促進性サイトカイン－ＩＬ６、ＴＮＦアルファのために抜き取った。対象に朝食を提供した。朝食の２時間後、血液サンプルを食後血糖の推定のために採取した。対象に、２回目来院について翌週以内に施設に報告するように依頼した。
【0087】
２回目来院は、無作為化来院であった。選択／排除基準を満たす対象を、事前の無作為化スケジュールに関する４つの処理の１つを受けるように無作為化した。バイタルを記録し、身体検査を実施した。対象に、任意の併用薬の使用及び有害事象の点を尋ね、それを症例報告書に記録した。対象に無作為化スケジュールのとおり試験薬を投薬し、４週間後の次回のフォローアップ来院に来るように依頼した。
【0088】
後続のフォローアップ来院、３回目来院（４週目）及び４回目来院（８週目）において、対象をレビューした。バイタルを記録した。身体検査を実施した。併用薬の任意の変更、任意の有害薬物反応をＣＲＦに記録及び記入した。試験薬のコンプライアンスをそれぞれの来院時にピルカウントにより評価した。内皮機能不全をサルブタモール負荷試験により判定し、血液サンプルを空腹時及び食後（ＰＰ）血糖（朝食の２時間後）の推定のために回収した。任意のＡＤＲ、特に低血糖症の徴候、及び症状を尋ね、症例報告書（ＣＲＦ）に記録した。試験薬をスケジュールのとおり投薬した。
【0089】
処理期間の終了である５回目来院（１２週目）において、バイタルを記録し、身体検査を実施した。試験薬のコンプライアンスをピルカウントにより評価した。報告された任意の有害薬物反応を記録した。内皮機能（ＲＩ）を評価し、血液サンプルを全てのバイオマーカーの推定及び安全性評価のために回収した。
【0090】
ＦＢＧ、ＰＰＢＧ、バイオマーカー（ＭＤＡ、ＮＯ、ＧＳＨ、ｈｓＣＲＰ）、屈折率（ＲＩ）を、ベースライン、及びそれぞれの来院時に推定した。ＨＯＭＡ－ＩＲ、ＩＬ－６、及びＴＮＦアルファをベースライン、４及び１２週間において判定した。ＨｂＡ１ｃ、血小板凝集、及び脂質プロファイルをベースライン及び１２週間の処理において推定した。
【0091】
評価の方法
内皮機能の評価：サルブタモール負荷試験。デジタル容積プレチスモグラフィを用いるサルブタモール負荷試験を使用してＣｈｏｗｉｅｎｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈｏｔｏｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈｉｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｐｕｌｓｅ ｗａｖｅ ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ：ｂｌｕｎｔｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｄｅｐｅｎｄａｎｔ ｂｅｔａ ２－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｖａｓｏｄｉｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ，”Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．（１９９９ Ｄｅｃ）３４（７）：２００７－１４；及びＮａｉｄｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｗｏ β２ ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｏｕｔｅｓ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００７）３９：１６８－９により報告されているとおり内皮機能を評価した。患者を５分間の休息後に伏臥位で検査した。右手の人差し指上に配置された９４０ｎｍにおける赤外光を伝送するフォトプレチスモグラフ（Ｐｕｌｓｅ Ｔｒａｃｅ ＰＣＡ２，ＰＴ２００，Ｍｉｃｒｏ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｋｅｎｔ，ＵＫ）を使用してデジタル容積パルス（ＤＶＰ）を得た。１００Ｈｚのサンプリング周波数を有する１２ビットアナログ・デジタル変換器を使用してプレチスモグラフからのシグナルをデジタル化した。ＤＶＰ波形を２０秒間の期間にわたり記録し、ＤＶＰの収縮後期／拡張早期部分の高さをＤＶＰの振幅の割合として表現して屈折率（ＲＩ）を得、これはＭｉｌｌａｓｓｅａｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ ｌａｒｇｅ ａｒｔｅｒｙ ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ ｂｙ ｄｉｇｉｔａｌ ｐｕｌｓｅ ｃｏｎｔｏｕｒ ａｎａｌｙｓｉｓ，”Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）１０３：３７１－３７７により詳述されている手順のとおりである。ＤＶＰ記録を取り、屈折率（ＲＩ）の３つの測定値を計算し、平均値を決定した。患者に４００ｍｃｇのサルブタモールを吸入により投与した。１５分後、ＲＩの３つの測定値を再度得、サルブタモールの投与前後の平均ＲＩの差を内皮機能の評価に使用した。サルブタモール後のＲＩの≦６％の変化を、内皮機能不全とみなした。結果を以下の試験データまとめの表８に提示する。
内皮機能の評価：サルブタモール負荷試験。デジタル容積プレチスモグラフィを用いるサルブタモール負荷試験を使用してＣｈｏｗｉｅｎｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈｏｔｏｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈｉｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｐｕｌｓｅ ｗａｖｅ ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ：ｂｌｕｎｔｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｄｅｐｅｎｄａｎｔ ｂｅｔａ ２－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｖａｓｏｄｉｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ，”Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．（１９９９ Ｄｅｃ）３４（７）：２００７－１４；及びＮａｉｄｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｗｏ β２ ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｏｕｔｅｓ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，”Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００７）３９：１６８－９により報告されているとおり内皮機能を評価した。患者を５分間の休息後に伏臥位で検査した。右手の人差し指上に配置された９４０ｎｍにおける赤外光を伝送するフォトプレチスモグラフ（Ｐｕｌｓｅ Ｔｒａｃｅ ＰＣＡ２，ＰＴ２００，Ｍｉｃｒｏ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｋｅｎｔ，ＵＫ）を使用してデジタル容積パルス（ＤＶＰ）を得た。１００Ｈｚのサンプリング周波数を有する１２ビットアナログ・デジタル変換器を使用してプレチスモグラフからのシグナルをデジタル化した。ＤＶＰ波形を２０秒間の期間にわたり記録し、ＤＶＰの収縮後期／拡張早期部分の高さをＤＶＰの振幅の割合として表現して屈折率（ＲＩ）を得、これはＭｉｌｌａｓｓｅａｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ ｌａｒｇｅ ａｒｔｅｒｙ ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ ｂｙ ｄｉｇｉｔａｌ ｐｕｌｓｅ ｃｏｎｔｏｕｒ ａｎａｌｙｓｉｓ，”Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）１０３：３７１－３７７により詳述されている手順のとおりである。ＤＶＰ記録を取り、屈折率（ＲＩ）の３つの測定値を計算し、平均値を決定した。患者に４００ｍｃｇのサルブタモールを吸入により投与した。１５分後、ＲＩの３つの測定値を再度得、サルブタモールの投与前後の平均ＲＩの差を内皮機能の評価に使用した。サルブタモール後のＲＩの≦６％の変化を、内皮機能不全とみなした。結果を以下の試験データまとめの表８に提示する。
【0092】
バイオマーカーの判定；血小板凝集試験；特別試験及び安全性パラメータ
一酸化窒素レベルを、Ｍｉｒａｎｄａ，ｅｔ ａｌ．，“Ａ Ｒａｐｉｄ，Ｓｉｍｐｌｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｉｔｒａｔｅ ａｎｄ Ｎｉｔｒｉｔｅ，”ＮＩＴＲＩＣ ＯＸＩＤＥ：Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００１）Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．１，ｐｐ．６２－７１に記載のとおり分光光度的に推定した。ＭＤＡ及びグルタチオンのレベルを、それぞれＶｉｄｙａｓａｇａｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，”Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（Ａｐｒｉｌ ２００４）３６（２）：７６－７９、及びＧ．Ｌ．Ｅｌｌｍａｎ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．（１９５９）８２：７０－７７（ｏｒｉｇｉｎａｌ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）に記載のとおり分光光度的に推定した。ｈｓＣＲＰ（高感度Ｃ反応性タンパク質）を、ＥＬＩＳＡ法により決定した。サンプルを、適切な標準的技術を使用するヘモグロビン、血中尿素、及び血清クレアチニン、肝機能検査、脂質プロファイル［総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ－Ｃ）及びトリグリセリド］の決定のために一晩絶食後に回収した。ＡＤＰ及びコラーゲンを用いる血小板凝集試験は、血小板凝集測定試験、すなわち、（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ透過光血小板凝集測定）を使用して行った。ＴＮＦアルファ及びＩＬ６は、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して推定した。ＨＯＭＡ－ＩＲ（インスリン抵抗性についてのホメオスタシスモデル評価（Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ Ｍｏｄｅｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ））は、インスリン抵抗性についての近似式である。これは、空腹時インスリン（ｍＩＵ／Ｌ）×空腹時グルコース（ｍｇ／ｄＬ）／４０５の式を使用して推定される。３未満のＨＯＭＡ－ＩＲ値は正常のインスリン抵抗性を示し；３～５の値は中等度のインスリン抵抗性を示す一方、５超の値は重度のインスリン抵抗性を示す。以下の試験データまとめの表８の結果を参照。
一酸化窒素レベルを、Ｍｉｒａｎｄａ，ｅｔ ａｌ．，“Ａ Ｒａｐｉｄ，Ｓｉｍｐｌｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｉｔｒａｔｅ ａｎｄ Ｎｉｔｒｉｔｅ，”ＮＩＴＲＩＣ ＯＸＩＤＥ：Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００１）Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．１，ｐｐ．６２－７１に記載のとおり分光光度的に推定した。ＭＤＡ及びグルタチオンのレベルを、それぞれＶｉｄｙａｓａｇａｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，”Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（Ａｐｒｉｌ ２００４）３６（２）：７６－７９、及びＧ．Ｌ．Ｅｌｌｍａｎ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．（１９５９）８２：７０－７７（ｏｒｉｇｉｎａｌ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）に記載のとおり分光光度的に推定した。ｈｓＣＲＰ（高感度Ｃ反応性タンパク質）を、ＥＬＩＳＡ法により決定した。サンプルを、適切な標準的技術を使用するヘモグロビン、血中尿素、及び血清クレアチニン、肝機能検査、脂質プロファイル［総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ－Ｃ）及びトリグリセリド］の決定のために一晩絶食後に回収した。ＡＤＰ及びコラーゲンを用いる血小板凝集試験は、血小板凝集測定試験、すなわち、（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ透過光血小板凝集測定）を使用して行った。ＴＮＦアルファ及びＩＬ６は、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して推定した。ＨＯＭＡ－ＩＲ（インスリン抵抗性についてのホメオスタシスモデル評価（Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ Ｍｏｄｅｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ））は、インスリン抵抗性についての近似式である。これは、空腹時インスリン（ｍＩＵ／Ｌ）×空腹時グルコース（ｍｇ／ｄＬ）／４０５の式を使用して推定される。３未満のＨＯＭＡ－ＩＲ値は正常のインスリン抵抗性を示し；３～５の値は中等度のインスリン抵抗性を示す一方、５超の値は重度のインスリン抵抗性を示す。以下の試験データまとめの表８の結果を参照。
【0093】
データ分析。データは、平均±ＳＤとして表現する。群内分析は、対応のある「ｔ」検定を使用して行った。群間で、分析はＡＮＯＶＡを使用して行った。群間の事後分析は、テューキーの検定を用いて行った。＜０．０５のｐ値を統計的に有意とみなした。統計的分析は、ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８を使用して行った。
【0094】
サンプルサイズ：５％のアルファエラーのマージン、８０％の検定力で、且つ５％のスクリーン不成功及び１０％のドロップアウト率を想定して１０ｍｇ／ｄＬのＰＰＢＧの低減を検出するため、合計９４人の患者をスクリーニングした。
【0095】
試験の結果
合計９４人の対象をスクリーニングし、８０人の適格対象を試験に登録した。合計７８人の対象が、１２週間の処理を完了した。群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）からの２人の対象が、初回フォローアップ前に試験からドロップアウトした。一方の対象は、別の都市に移ったためドロップアウトした。他方の対象は、同じ都市の遠方の土地に転勤したため、移動上の理由を挙げてドロップアウトした。表１のデモグラフィックデータは、無作為化された全ての対象を示し、したがってそれぞれの群において２０人である。さらに、表２～表１４は、試験を完了した対象のデータを含む。したがって、群Ａ（プラセボ ＢＤ）の合計２０人の対象、群Ｂ（ＮＥ １２５ｍｇ ＢＤ）の２０人の対象、群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）の１８人の対象及び群Ｄ（ＮＥ ５００ｍｇ ＢＤ）の２０人の対象が、１２週間の試験処理を完了した。
合計９４人の対象をスクリーニングし、８０人の適格対象を試験に登録した。合計７８人の対象が、１２週間の処理を完了した。群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）からの２人の対象が、初回フォローアップ前に試験からドロップアウトした。一方の対象は、別の都市に移ったためドロップアウトした。他方の対象は、同じ都市の遠方の土地に転勤したため、移動上の理由を挙げてドロップアウトした。表１のデモグラフィックデータは、無作為化された全ての対象を示し、したがってそれぞれの群において２０人である。さらに、表２～表１４は、試験を完了した対象のデータを含む。したがって、群Ａ（プラセボ ＢＤ）の合計２０人の対象、群Ｂ（ＮＥ １２５ｍｇ ＢＤ）の２０人の対象、群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）の１８人の対象及び群Ｄ（ＮＥ ５００ｍｇ ＢＤ）の２０人の対象が、１２週間の試験処理を完了した。
【0096】
４つの試験群のデモグラフィック特徴を、表７に示す。ベースライン特徴、例として、年齢及びボディマスインデックス（ＢＭＩ）において処理群間に有意差は存在せず、そのことは均一集団を示す。
【0097】
結論
本試験において、表８に示されるとおり、ニームの水性抽出物は、ＦＢＧ、ＰＰＢＧ、ＨｂＡ１ｃ、及びＨＯＭＡ－ＩＲのレベルを有意に減少させた。これは、屈折率（ＲＩ）の改善により推定される内皮機能とともにストレスのバイオマーカーＭＤＡ、ＮＯ、及びＧＳＨも有意に改善した。ｈｓＣＲＰ、ＩＬ６、及びＴＮＦアルファのレベルの顕著な改善も見られた。測定を４、８及び１２週間において行った。
本試験において、表８に示されるとおり、ニームの水性抽出物は、ＦＢＧ、ＰＰＢＧ、ＨｂＡ１ｃ、及びＨＯＭＡ－ＩＲのレベルを有意に減少させた。これは、屈折率（ＲＩ）の改善により推定される内皮機能とともにストレスのバイオマーカーＭＤＡ、ＮＯ、及びＧＳＨも有意に改善した。ｈｓＣＲＰ、ＩＬ６、及びＴＮＦアルファのレベルの顕著な改善も見られた。測定を４、８及び１２週間において行った。
【0098】
ＦＢＧ、ＰＰＢＧ、ＨｂＡ１ｃ、及びＨＯＭＡ－ＩＲのレベルの有意な改善は、ベースライン及びプラセボと比較して４、８及び１２週間の終了時に群Ｂ（ＮＥ １２５ｍｇ ＢＤ）、群Ｃ（ＮＥ ２５０ｍｇ ＢＤ）及び群Ｄ（ＮＥ ５００ｍｇ ＢＤ）について観察された。群Ａ（プラセボ ＢＤ）について効果は見られなかった。群間分析により、上記のパラメータにおいて群Ｃ及び群Ｄは群Ｂよりも良好であることが観察されたが、群Ｄは、群Ｃよりも良好な応答を実証した。
【0099】
ＲＩの推定により測定された内皮機能不全は、ベースラインと比較して４、８、及び１２週間において群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて有意な改善を示した。群Ａは、いかなる効果も示さなかった。さらなる群間の分析時、群Ｃ及び群Ｄは、群Ｂよりも良好な応答を示すことが観察され、群ＤはＲＩにおいて最大の改善を実証した。
【0100】
酸化ストレスのバイオマーカーＭＤＡ、ＮＯ及びＧＳＨも、有意に改善した。
【0101】
群Ｂ、群Ｃ、及び群ＤについてのＧＳＨ値は、ベースラインと比較して４、８、及び１２週間の処理において有意に改善した。群Ａは、いかなる効果も示さなかった。４及び８週間における群間分析は、プラセボと比較して群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて有意性を示した。１２週間において、プラセボ及び処理群と比較して群Ｃ及び群Ｄについて有意性が着目された。
【0102】
ＭＤＡのレベルは、ベースラインと比較して４、８、及び１２週間の処理において群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて有意な改善を示した。群Ａにおいて、統計的に有意な改善は見られなかった。４及び８週間における群間分析は、プラセボと比較して全ての処理群についてＭＤＡレベルの改善におけるいかなる有意性も示さなかった。１２週目において、群Ｄのみがプラセボと比較して有意な効果を示した。処理群間では有意性は観察されなかった。
【0103】
一酸化窒素レベルは、ベースラインと比較して４、８、及び１２週間の処理において群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて有意に改善した。群Ａは、いかなる有意性も示さなかった。プラセボ及び処理群について群間比較をＮＯについて行った場合、統計的有意性は見られなかった。
【0104】
炎症性マーカーｈｓＣＲＰのレベルの改善は、ベースラインと比較して群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて４、８、及び１２週間において観察された。群Ａは、いかなる改善も示さなかった。ｈｓＣＲＰの群間分析は、４及び８週間において群Ｂ及び群Ｃがプラセボと比較していかなる有意性も示さないことを示した。その一方、群Ｄはプラセボ及び他の処理群と比較して有意性を示した。１２週目において、群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄは、プラセボと比較してｈｓＣＲＰレベルの有意な改善を示した。群Ｄは、プラセボ及び他の処理群と比較して最大応答を示した。
【0105】
炎症促進性マーカーＩＬ－６のレベルの改善は、ベースラインと比較して群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて４及び１２週間において観察された。群Ａは、いかなる改善も示さなかった。群間分析は、プラセボと比較して４及び１２週間の両方において群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて有意であった。処理群間で有意性は観察されなかった。
【0106】
炎症促進性マーカーＴＮＦアルファレベルも、ベースラインと比較して群Ｂ、群Ｃ、及び群Ｄについて４及び１２週間において有意な改善を示した。プラセボ群において効果は見られなかった。ＴＮＦアルファの群間分析は、プラセボについて及び処理群間で有意性を示さなかった。
【0107】
１２週間の処理の終了時の血小板凝集阻害パーセント（％阻害）を決定した。ＡＤＰ（１０μＭ／ｍｌ）及びコラーゲン（２μｇ／ｍｌ）を使用する血小板凝集の正常範囲は、６０％～９０％である。薬物が血小板凝集に影響するか否かを示すため、阻害パーセントの３０％超の変化が存在すべきである。血小板凝集に対する効果は、処理群のいずれについても観察されなかった。
【0108】
来院スケジュールのとおり実施された全ての安全性の血液学的及び生化学的パラメータは、ベースライン及び処理の終了時において４つ全ての処理群について基準値内であった。群Ｂ（ＮＥ １２５ｍｇ ＢＤ）の１人の患者及び群Ｄ（ＮＥ ５００ｍｇ ＢＤ）の１人の患者は、対症的治療により消退した軽度ＧＩ障害を報告した。いずれの群の対象も、有害事象に起因して試験を中断しなかった。
【0109】
本試験において使用された医薬は、十分に忍容された。重度有害事象は報告されなかった。対象はいかなる有害事象によっても試験を中断せず、それは本試験において使用された治療の好ましい安全性プロファイルを示唆する。
【0110】
本試験の知見は、ニームの水性抽出物が２型ＤＭ患者においてアドオン薬として高脂血症の管理において有用であり得ることを示す。さらに、これは、ＲＩ及びバイオマーカーの変化により証明されるとおり２型ＤＭの心血管合併症を改善すると思われる。
【0111】
表９は、ベースライン（Ｂ）及び１２週間の平均％変化（Ｍ％Ｃ）を示すＰｈｙｔｏＢＧＳ Ｔ２ＤＭ試験（ＮＩＭＳ）データのまとめを示す。
【0112】
１２週間にわたるニーム抽出物の投与は、メトホルミンに加え、２型糖尿病患者におけるＦＢＧ、ＰＰＢＧ及びＨｂＡ１Ｃレベルを減少させ、それらのレベルをほぼ正常としたことに留意すべきである。処理後の測定値は、以下のとおりであった：ＦＢＧ：９７．３±３．７（ｐ≦０．０００１）；ＰＰＢＧ：１５９．３±７．１（ｐ≦０．０００１）；ＨｂＡ１Ｃ：６．２６±０．４（ｐ≦０．０００１）。
【0113】
実施例５－メタボリックシンドロームにおける臨床試験
メタボリックシンドロームを有するヒト対象における血糖コントロール、内皮機能不全、バイオマーカー及び血小板凝集に対するニーム抽出物の効果の判定。
メタボリックシンドロームを有するヒト対象における血糖コントロール、内皮機能不全、バイオマーカー及び血小板凝集に対するニーム抽出物の効果の判定。
【0114】
本試験の方法及び処理レベル及び処理群は実施例４と同じであったが、但し、本試験においてメタボリックシンドローム指針に適合する対象を登録した。
【0115】
４つの試験群のデモグラフィック特徴を、表１０に示す。ベースライン特徴、例として、年齢及びボディマスインデックス（ＢＭＩ）において処理群間で有意差は存在せず、そのことは均一集団を示す。
【0116】
表１１は、１２週間の処理後にプラセボと（群間で）比較した血糖及び屈折率データのまとめを示す。
【0117】
表１２は、１２週間の処理後にベースラインと（群内で）比較した酸化ストレスバイオマーカー及び他の血液測定データのまとめを示す。
【0118】
本発明の栄養組成物は、栄養学的に許容可能な担体との組み合わせで投与することができる。このような配合物中の活性成分は、１重量％～９９重量％、或いは０．１重量％～９９．９重量％を占め得る。「栄養学的に許容可能な担体」は、配合物の他の成分と適合性であり、使用者に有害でない任意の担体、希釈剤、又は賦形剤を意味する。一実施形態によれば、好適な栄養学的に許容可能な担体としては、エタノール、水性エタノール混合物、水、果実、及び／又は野菜ジュース、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。
【0119】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体との組み合わせで投与することができる。このような配合物中の活性成分は、１重量％～９９重量％、或いは０．１重量％～９９．９重量％を占め得る。「薬学的に許容可能な担体」は、配合物の他の成分と適合性であり、使用者に有害でない任意の担体、希釈剤、又は賦形剤を意味する。
【0120】
送達系
好適な剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液剤、散剤、ガム、及び菓子が挙げられる。舌下送達系としては、限定されるものではないが、舌下及び舌上の溶解錠、液滴、及び飲料が挙げられる。可食フィルム、親水性ポリマー、経口溶解性フィルム、又は経口溶解性ストリップを使用することができる。他の有用な送達系は、経口若しくは鼻腔スプレー又は吸入器などを含む。
好適な剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液剤、散剤、ガム、及び菓子が挙げられる。舌下送達系としては、限定されるものではないが、舌下及び舌上の溶解錠、液滴、及び飲料が挙げられる。可食フィルム、親水性ポリマー、経口溶解性フィルム、又は経口溶解性ストリップを使用することができる。他の有用な送達系は、経口若しくは鼻腔スプレー又は吸入器などを含む。
【0121】
経口投与のため、シラジット、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、又はそれらの組み合わせは、錠剤、カプセル剤、ピル剤、散剤、顆粒剤、又は他の好適な剤形の調製のための１つ以上の固体不活性成分とさらに組み合わせることができる。経口投与のため、ニーム抽出物は、錠剤、カプセル剤、ピル剤、散剤、顆粒剤、又は他の好適な剤形の調製のための１つ以上の固体不活性成分とさらに組み合わせることができる。例えば、活性剤は、少なくとも１つの賦形剤、例えば、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、又は滑沢剤と組み合わせることができる。他の有用な賦形剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、マンニトール、キシリトール、甘味料、デンプン、カルボキシメチルセルロース、微結晶性セルロース、シリカ、ゼラチン、二酸化ケイ素などが挙げられる。
【0122】
したがって、本発明の構成成分は、慣用の補助剤、担体、又は希釈剤と一緒に、医薬組成物及びその単位投与量の形態に入れることができる。このような形態としては、全て経口使用のための固体、特に錠剤、充填カプセル剤、散剤、及びペレット形態；並びに液体、特に水性又は非水性液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、エリキシル剤、及びそれが充填されたカプセル剤；直腸投与用の坐剤；並びに非経口使用のための無菌注射用液剤が挙げられる。このような医薬組成物及びその単位剤形は、慣用の成分を慣用の比率で追加の活性化合物又は成分の有無にかかわらず含み得、このような単位剤形は、用いるべき目的の１日投与量範囲に見合う任意の好適な有効量の活性成分を含有し得る。
【0123】
本発明の構成成分は、種々の経口及び非経口剤形で投与することができる。以下の剤形が活性構成成分として本発明の化合物又は本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩のいずれかを含み得ることは当業者に明らかである。
【0124】
本発明の化合物から医薬組成物を調製するため、薬学的に許容可能な担体は、固体又は液体のいずれでもよい。固体形態製剤としては、散剤、錠剤、ピル剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、及び分注可能な顆粒剤が挙げられる。固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、又は封入材料としても作用し得る１つ以上の物質であり得る。
【0125】
散剤において、担体は、微粉砕活性構成成分との混合物である微粉砕固体である。錠剤において、活性構成成分は、必須の結合キャパシティを有する担体と好適な比率で混合され、所望の形状及びサイズに圧縮される。
【0126】
散剤及び錠剤は、好ましくは、５又は１０～約７０パーセントの活性化合物を含有する。好適な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバターなどである。用語「製剤」は、活性構成成分が担体の有無にかかわらず担体により包囲され、したがってそれと会合するカプセル剤を提供する担体としての封入材料を有する活性化合物の配合物を含むものとする。同様に、カシェ剤及びトローチ剤が含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、ピル剤、カシェ剤、及びトローチ剤が含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、ピル剤、カシェ剤、及びトローチ剤を、経口投与に好適な固体形態として使用することができる。
【0127】
液体製剤としては、液剤、懸濁液剤、及び乳濁液剤、例えば、水又は水－プロピレングリコール液剤が挙げられる。例えば、非経口注射液剤製剤は、水性ポリエチレングリコール溶液中の液剤として配合することができる。したがって、本発明による化合物は、非経口投与（例えば、注射、例えば、ボーラス注射又は連続注入による）のために配合することができ、アンプル、プレフィルドシリンジ、小容積注入、又は添加された保存剤を有する複数回投与容器の単位用量形態で提供することができる。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液剤、液剤、乳濁液剤などのような形態を取り得、配合剤、例えば、懸濁化剤、安定剤、及び／又は分散剤を含有し得る。或いは、活性成分は、好適なビヒクル、例えば、無菌パイロジェンフリー水による使用前の構成のための、無菌固体の無菌単離により、又は溶液からの凍結乾燥により得られる粉末形態であり得る。
【0128】
経口使用に好適な水性液剤は、活性構成成分を水中で溶解させ、好適な着色剤、フレーバー、安定剤及び増粘剤を所望により添加することにより調製することができる。経口使用に好適な水性懸濁液剤は、微粉砕活性構成成分を粘性材料、例えば、天然又は合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、又は他の周知の懸濁化剤により水中で分散させることにより作製することができる。
【0129】
口内の局所投与に好適な組成物としては、着香基剤、通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント中の活性剤を含むトローチ剤；不活性基剤、例えば、ゼラチン及びグリセリン又はグルコース及びアカシア中の活性成分を含む香錠；並びに好適な液体担体中の活性成分を含むマウスウォッシュが挙げられる。
【0130】
液剤又は懸濁液剤は、慣用の手段、例えば、点滴器、ピペット、又はスプレーにより鼻腔に直接施与される。組成物は、単一又は複数回投与形態で提供することができる。気道への投与が目的とされる組成物、例として、鼻腔内組成物において、化合物は、一般に、例えば、５ミクロン以下のオーダーの小さい粒子サイズを有する。このような粒子サイズは、当技術分野において公知の手段により、例えば、微粒子化により得ることができる。
【0131】
医薬製剤は、好ましくは、単位剤形である。このような形態において、製剤は、適切な量の活性構成成分を含有する単位用量に細分化される。単位剤形は、包装製剤、区別される量の製剤を含有する包装、例えば、バイアル又はアンプル中の包装錠剤、カプセル剤、及び散剤であり得る。さらに、単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、若しくはトローチ剤自体であり得、又はそれは包装形態の適切な数のそれらのいずれかであり得る。
【0132】
経口投与のための錠剤、カプセル剤、及びトローチ剤並びに経口使用のための液体が、好ましい組成物である。鼻腔への又は気道への施与のための液剤又は懸濁液剤が、好ましい組成物である。表皮への局所投与のための経皮パッチが好ましい。
【0133】
配合及び投与のための技術に関するさらなる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版に見出すことができる。
【0134】
経口投与のための固体栄養組成物は、場合により、上記列挙の栄養組成物、成分、又は化合物に加え：担体材料、例えば、トウモロコシデンプン、ゼラチン、アカシア、微結晶性セルロース、カオリン、リン酸二カルシウム、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、アルギン酸など；崩壊剤、例として、微結晶性セルロース、アルギン酸など；結合剤、例として、アカシア、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロースなど；並びに滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、シリコーン油、タルク、ワックス、油、コロイダルシリカなどを含有し得る。このような賦形剤の有用性は、当技術分野において周知である。
【0135】
１つの好ましい実施形態において、栄養組成物は、液体の形態であり得る。この実施形態によれば、液体組成物を作製する方法が提供される。
【0136】
炎症、感冒及び／又はインフルエンザを予防及び／又は治療する方法と関連する経口投与のための液体栄養組成物は、水又は他の水性ビヒクル中で調製することができる。上記列挙の成分又は化合物に加え、液体栄養組成物は、懸濁化剤、例えば、メチルセルロース、アルギン酸塩、トラガカント、ペクチン、ケルジン（ｋｅｌｇｉｎ）、カラギーナン、アカシア、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなどを含み得る。液体栄養組成物は、上記列挙の成分又は化合物と一緒に、湿潤剤、甘味料、並びに着色剤及び着香剤を含み、又は含有する液剤、乳濁液剤、シロップ剤、ゲル剤、又はエリキシル剤の形態であり得る。種々の液体及び粉末栄養組成物は、慣用の方法により調製することができる。種々のレディ・トゥ・ドリンク配合物（「ＲＴＤ」）が企図される。
【0137】
投与の経路
組成物は、任意の好適な経路、例として、限定されるものではないが、経口、舌下、バッカル、眼、肺、直腸、及び非経口投与により、又は経口若しくは鼻腔スプレー（例えば、吸入用蒸気、液滴、又は固体粒子の吸入）として投与することができる。非経口投与としては、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、腹腔内、鼻腔内、膣内、嚢内（例えば、膀胱に対する）、皮内、経皮、局所、又は皮下投与が挙げられる。本発明の範囲内に、薬物の全身又は局所放出を後に生じさせる制御配合物の患者の体内の医薬組成物の設置も企図される。例えば、薬物は、循環への制御放出のための、又は局所部位への放出のためのデポ剤中で局在化させることができる。
組成物は、任意の好適な経路、例として、限定されるものではないが、経口、舌下、バッカル、眼、肺、直腸、及び非経口投与により、又は経口若しくは鼻腔スプレー（例えば、吸入用蒸気、液滴、又は固体粒子の吸入）として投与することができる。非経口投与としては、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、腹腔内、鼻腔内、膣内、嚢内（例えば、膀胱に対する）、皮内、経皮、局所、又は皮下投与が挙げられる。本発明の範囲内に、薬物の全身又は局所放出を後に生じさせる制御配合物の患者の体内の医薬組成物の設置も企図される。例えば、薬物は、循環への制御放出のための、又は局所部位への放出のためのデポ剤中で局在化させることができる。
【0138】
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、気管支、鼻腔、肺、局所（例として、バッカル及び舌下）、経皮、膣若しくは非経口（例として、皮膚、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、脳内、眼内注射、又は注入）投与に好適なもの、又は吸入若しくは吹送による投与、例として、散剤及び液体エアロゾル投与、又は徐放系による投与に好適な形態のものであり得る。徐放系の好適な例としては、マトリックスが成形物品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態であり得る本発明の化合物を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられる。
【0139】
目下特許請求される発明を記載する文脈（特に特許請求の範囲の文脈）における用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」、及び同様の参照対象の使用は、本明細書に特に示されない限り、又は文脈により明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を包含するように解釈すべきである。本明細書における値の範囲の引用は、本明細書に特に示されない限り、その範囲内に収まるそれぞれの別個の値を個々に指す短縮法として機能するにすぎないものとし、それぞれの別個の値は、それが本明細書に個々に引用されるように本明細書に組み込まれる。用語「約」の使用は、およそ±１０％の範囲で記述値を上回り、又は下回る値を説明するものとし；他の実施形態において、値は、およそ±５％の範囲で記述値を上回り、又は下回る値の範囲であり得；他の実施形態において、値は、およそ±２％の範囲で記述値を上回り、又は下回る値の範囲であり得；他の実施形態において、値は、およそ±１％の範囲で記述値を上回り、又は下回る値の範囲であり得る。先行範囲は文脈により明確にされるものとし、さらなる限定は含まれない。本明細書に記載の全ての方法は、本明細書に特に示されない限り、又は特に文脈により明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供される任意及び全ての例、又は例示的言語（例えば、「例えば」）の使用は、本発明をより良好に説明するにすぎないものとし、特に特許請求されない限り、本発明の範囲に対する限定を提供するものではない。本明細書の言語は、任意の非特許請求要素を本発明の実施に必須なものとして示すと解釈すべきでない。
【0140】
上記の明細書において本発明をそのある実施形態との関連で記載し、説明の目的のために多くの詳細を提示してきた一方、本発明は追加の実施形態の影響を受けやすいこと、及び本明細書に記載の詳細の一部を本発明の基本的な原理を逸脱せずに、かなり変えることができることが当業者に明らかである。
【0141】
本明細書に引用される全ての参考文献は、参照により全体として組み込まれる。本発明は、その主旨からも本質的な特性からも逸脱せずに他の特定の形態で具現化することができ、したがって本発明の範囲を示すものとして上記の明細書ではなく添付の特許請求の範囲を参照されたい。
【図1】
【国際調査報告】