特表 2022-537318 ぶどう膜炎の処置におけるペプチド及びその使用の方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-08-25

(54)【発明の名称】ぶどう膜炎の処置におけるペプチド及びその使用の方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/02 20060101AFI20220818BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20220818BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 9/00 20060101ALI20220818BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20220818BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20220818BHJP

【ＦＩ】

A61K38/02

A61K38/16

A61K38/08

A61P27/02

A61K9/06

A61K9/08

A61K9/127

A61K9/107

A61K45/00

A61K9/00

A61P43/00 121

A61K9/14

A61K38/00 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021575064

(86)(22)【出願日】2020-06-16

(85)【翻訳文提出日】2022-02-10

(86)【国際出願番号】 US2020037882

(87)【国際公開番号】W WO2020257162

(87)【国際公開日】2020-12-24

(31)【優先権主張番号】62/862,326

(32)【優先日】2019-06-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521549279

【氏名又は名称】バイオマルク ファーマシューティカルズ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】パリーク，インドゥー

(72)【発明者】

【氏名】バティア，アシシュ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C076AA06

4C076AA09

4C076AA17

4C076AA19

4C076AA30

4C076BB11

4C076BB13

4C076BB24

4C076CC04

4C076CC10

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA08

4C084MA02

4C084MA58

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA33

4C084ZB11

4C084ZC75

(57)【要約】

本開示は、眼の炎症又は炎症性の眼の状態、例えばぶどう膜炎などを処置する方法を含む。より具体的には、本開示は、炎症性細胞における顆粒からの炎症メディエーターの放出と関連づけられる機序を阻害することによって、炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出を阻害するか又は減少させることに関する。この点に関して、本開示は、炎症性細胞における小胞からの炎症メディエーターの分泌が関与する障害における薬理学的介入のためのいくつかの新規細胞内標的を例示する細胞内シグナル伝達機序を含む。本開示で開示されるようなペプチド断片及びそれらの変異体はこのような方法において有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象においてぶどう膜炎を処置する方法であって、
（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２４個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；
（ｂ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）で定められるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一性を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドを含む治療的有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項2】

前記ペプチドが、配列番号１の少なくとも９個の連続アミノ酸残基を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ペプチドが配列番号１０６のアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ペプチドが配列番号１２１のアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２に記載の方法。

【請求項5】

前記ペプチドがＮ末端アミノ酸においてミリストイル化又はアセチル化されている、請求項１～４の何れかに記載の方法。

【請求項6】

前記ペプチドがＮ末端アミノ酸においてアセチル化されており、配列番号１０６のアミノ酸配列からなる、請求項１又は請求項２に記載の方法。

【請求項7】

前記ペプチドがＮ末端アミノ酸においてアセチル化されており、配列番号１２１のアミノ酸配列からなる、請求項１又は請求項２に記載の方法。

【請求項8】

前記ペプチドがＮ末端アミノ酸においてミリストイル化されており、Ｃ末端アミノ酸においてＮＨ２基でアミド化されており、配列番号１０６のアミノ酸配列からなる、請求項１又は請求項２に記載の方法。

【請求項9】

前記ペプチドが、配列番号１の少なくとも４個の連続アミノ酸残基を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記ペプチドが、配列番号１の少なくとも１０個の連続アミノ酸残基を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記ペプチドが、そのＣ末端アミノ酸においてアンモニアでアミド化されている、請求項１～７、９及び１０の何れか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記組成物が、薬学的に許容可能な担体を含む、請求項１～１１の何れか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記対象が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記哺乳動物が、ヒト、イヌ、ウマ及びネコからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記組成物が、局所投与、硝子体内注射（ＩＶＴ）、結膜下注射、テノン嚢下注射（ＳＢＴ）、球後注射、眼周囲注射、網膜下注射、強膜内、経強膜的、基質内、静脈内注射、眼内投与又は何らかのそれらの組み合わせによって投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記組成物が硝子体内注射により投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項17】

前記組成物が局所注射により投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項18】

第１の投与セッションで前記組成物が硝子体内注射により投与され、１回以上の続く投与セッションにおいて前記組成物が局所投与により投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

前記局所投与が、１日に１、２又は３回の局所投与を含む、請求項１７又は１８に記載の方法。

【請求項20】

前記組成物が、局所処方物、眼内処方物、眼の埋め込み物、点眼薬、眼用ゲル、軟膏、ミクロスフェア、マイクロエマルション、リポソーム性処方物又はそれらの何らかの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項21】

第２の分子を前記対象に投与することをさらに含み、前記第２の分子が、抗生物質、抗ウイルス化合物、抗寄生虫化合物、抗炎症化合物、免疫調整化合物又は何らかのそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。

【請求項22】

前記ぶどう膜炎が、前部ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎及び汎ぶどう膜炎からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。

【請求項23】

前記ぶどう膜炎が炎症性又は自己免疫性である、請求項１又は２２に記載の方法。

【請求項24】

前記ペプチドが、配列番号１０６、１２１、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１又は２５２で示されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項25】

前記ペプチドが、約１μＭ～約１０ｍＭの濃度で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項26】

前記ペプチドが、約１μｇ～約５ｍｇの量で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項27】

前記ペプチドが、約０．０１ｍＬ～約１ｍＬの体積で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項28】

対象においてぶどう膜炎を処置する方法での使用のための、
（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２４個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；
（ｂ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）で定められるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一性を有するアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドを含む組成物であって、前記方法が、前記対象の眼に前記組成物を投与することを含む、組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願に対する相互参照
[0001] 本願は、その全体における参照により本明細書中に組み込まれる、２０１９年６月１７日出願の米国特許仮出願第６２／８６２，３２６号に対する優先権を主張する。

【0002】

技術分野
[0002] 本開示は、ぶどう膜炎などの眼の炎症及び炎症と関連する眼の障害を処置するための、ペプチド又はペプチド組成物及びそれらの使用の方法に関する。本開示はまた、炎症性細胞の遊走及びこれらの細胞からの炎症メディエーターの分泌を制御する細胞内シグナル伝達機序を調整するための、これらのペプチド又はペプチド組成物の使用にも関する。

【0003】

電子提出されたテキストファイルの説明
[0003] 本明細書とともに電子提出されたテキストファイルの内容は、それらの全体において参照により組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読方式コピー（ファイル名：BMRK_007_01WO_SeqList.txt、データ記録：２０２０年６月１６日；ファイルサイズ：８０ｋｂ）。

【背景技術】

【0004】

背景
[0004] ぶどう膜炎は、眼疾患であり、感染性及び非感染性の両方の原因がある。ぶどう膜炎は、片眼又は両眼に影響する慢性炎症状態により引き起こされ得る。眼内炎症の最もよくある形態であるぶどう膜炎は、米国での予防可能な失明の１０～１５％を占める。米国のおよそ１００，０００人の個人がぶどう膜炎に罹患し、従ってぶどう膜炎は、難病とみなされ得る。５つのタイプの非感染性ぶどう膜炎：（１）眼の前部で起こる前部ぶどう膜炎；（２）眼の中間部で起こる中間部ぶどう膜炎；（３）脈絡膜、網膜及び眼神経を含む眼の後部で起こる後部ぶどう膜炎；（４）眼の全ての部分で起こる汎ぶどう膜炎；及び（５）自己免疫性ぶどう膜炎がある。

【0005】

[0005] 非感染性ぶどう膜炎は炎症により引き起こされ、点眼薬の形態で及びステロイドの経口又は静脈内注射によって供給されるコルチコステロイドで処置され得る。アトロピンは、角膜潰瘍により引き起こされる疼痛及び虹彩の攣縮を緩和するために、及びイヌ及びネコにおいてぶどう膜炎を処置するために、局所的に使用され得る。アトロピンは、抗コリン性又は副交感神経遮断剤である。また、スコポラミン及びイソプロパミドは、このクラスの薬物に属する。アトロピンは、副交感神経系に対して作用し、アセチルコリンの伝達を遮断する。

【0006】

[0006] ある一定のケースにおいて、免疫抑制剤又は生物製剤、例えばHumira（登録商標）（アダリムマブ）などが処方される。コルチコステロイドでの処置は、後嚢下白内障、二次性の開放隅角白内障、二次性感染、骨喪失及びＨＰＡ軸抑制の発症を含め、重篤な副作用を有し得る。アダリムマブなどの生物製剤での処置は、免疫系減弱、従って、身体が、Ｂ型肝炎、アレルギー性反応、神経系の問題及び乾癬を含め、上気道感染、細菌、ウイルス感染に罹患し易くなること、を含む一連の潜在的な重篤な副作用も有する。従って、上記副作用の１つ以上を起こさない、ぶどう膜炎に対する有効な治療剤が緊急に医学的に必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

概要
[0007] 本開示は、対象においてぶどう膜炎を処置する方法を提供し、この方法は、（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２４個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び（ｃ）（ａ）又は（ｂ）で定められるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一性を有するアミノ酸配列、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドを含む組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含む。

【0008】

[0008] いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号１の少なくとも９個の連続アミノ酸残基を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸で、ミリストイル化又はアセチル化されている。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸でアセチル化されており、配列番号１０６のアミノ酸配列からなる。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸でアセチル化されており、配列番号１２１のアミノ酸配列からなる。いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号１の少なくとも４個の連続アミノ酸残基を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号１の少なくとも１０個の連続アミノ酸残基を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｃ末端アミノ酸においてアンモニアでアミド化されている。

【0009】

[0009] いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号７９、１０６、１２１、１３７、２１９、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１又は２５２で示されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸においてアセチル化されている。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸においてミリストイル化されている。いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｃ末端アミノ酸においてアンモニアでアミド化されている。いくつかの実施形態では、本ペプチドは、直鎖ペプチドである。いくつかの実施形態では、本ペプチドは環状ペプチドである。いくつかの実施形態では、本ペプチドはペグ付加されている。

【0010】

[00010] いくつかの態様では、投与段階は、対象の眼において炎症性細胞からの少なくとも１つの炎症メディエーターの放出速度を低下させ、及び／又は対象の眼の炎症性細胞から放出される少なくとも１つの炎症メディエーターの量を減少させる。いくつかの態様では、本組成物は薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの態様では、対象は哺乳動物である。いくつかの態様では、哺乳動物は、ヒト、イヌ、ウマ及びネコからなる群から選択される。

【0011】

[00011] いくつかの態様では、局所投与、硝子体内注射（ＩＶＴ）、結膜下注射、テノン嚢下注射（ＳＢＴ）、球後注射、眼周囲注射、網膜下注射、強膜内注射、経強膜的、基質内、静脈内注射、眼内投与又は何らかのそれらの組み合わせによって投与が行われる。いくつかの態様では、本組成物は、局所処方物、眼内処方物、眼の埋め込み物、点眼薬、眼用ゲル、軟膏、ミクロスフェア、マイクロエマルション、リポソーム性処方物又は何らかのそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、本組成物は、硝子体内注射によって、１回以上の投与セッションにより投与される。例えば、いくつかの実施形態では、本組成物は、毎日の硝子体内注射により投与される。いくつかの態様では、本組成物は、局所投与により投与される。例えば、いくつかの実施形態では、本組成物は、毎日の局所投与により投与される。いくつかの実施形態では、各毎日局所投与は、各日１、２又は３回の局所投与、例えば８時間ごとにおよそ１回の投与、を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、硝子体内注射及び局所投与の両方により投与される。いくつかの実施形態では、本組成物は、第１の投与セッションにおいて硝子体内注射により投与され、１回以上のその後の投与セッションでは局所投与によりに投与される。例えば、いくつかの実施形態では、本組成物は、１、２、３、４、５日以上にわたり、硝子体内注射により投与され、その後、局所投与を介して投与される。さらなる実施形態では、本組成物が局所的に投与される各日に、本組成物が１回、２回又は３回投与される。

【0012】

[00012] いくつかの態様では、本方法は、第２の分子を対象に投与することをさらに含み、この第２の分子は、抗生物質、抗ウイルス性化合物、抗寄生虫化合物、抗炎症化合物、免疫調整化合物又は何らかのそれらの組み合わせである。

【0013】

[00013] いくつかの態様では、ぶどう膜炎は、前部ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎及び汎ぶどう膜炎からなる群から選択される。いくつかの態様では、ぶどう膜炎は炎症性又は自己免疫性である。いくつかの態様では、本ペプチドは、約１μＭ～約１０ｍＭの濃度で投与される。いくつかの態様では、本ペプチドは、約１μｇ～約５ｍｇの量で投与される。いくつかの態様では、本ペプチドは、約０．０１ｍＬ～約５ｍＬの体積で投与される。

【0014】

[00014] 本開示は、対象においてぶどう膜炎を処置する方法での使用のための、（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２４個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び（ｃ）（ａ）又は（ｂ）で定められるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドを含む組成物をさらに提供し、この方法は、対象に本組成物を投与することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0015】

図面の簡単な説明

【図1】[00015]図１は、Ｈ＆Ｅで染色した、ＰＢＳ（左パネル）又は５０μｌ ＰＢＳ中の１０ｎｇ ＬＰＳ（右パネル）の硝子体内注射から２４時間後のウサギの眼の組織切片の代表的な画像を示す。ＬＰＳを注射した眼（右）において、組織腫脹及び炎症性細胞流入が明らかである。元の倍率４０Ｘ。

【図2】[00016]図２は、群Ａ：ＬＰＳ単独（即ち５０μＬ ＰＢＳ中１０ｎｇ）；群Ｂ：ＬＰＳの後にＮ末端アミノ酸でアセチル化されているペプチド１０６である「アセチル化ペプチド１０６」とも呼ばれるＢＩＯ－１１００６（１００μＭのアセチル化ペプチド１０６をＬＰＳ注射の２時間後に硝子体内注射した）；群Ｃ：Ａｃ－ペプチド１０６／ＬＰＳ：ＬＰＳ注射前にアセチル化ペプチド１０６を硝子体内注射；又は群Ｄ：：眼へのアセチル化ペプチド１０６単独の硝子体内注射の何れかで処置したウサギにおける刺激／炎症性指標の目安の比較を示す。全ての値は、平均±１ＳＥＭである。各処置に対してＮ＝２又は３。Ｐ≦０．０５＝^＊ＬＰＳと比較。

【図3】[00017]図３は、群Ａ：ＬＰＳ単独（即ち５０μＬ ＰＢＳ中１０ｎｇ）；群Ｂ：ＬＰＳの後に「アセチル化ペプチド１０６」とも呼ばれるＢＩＯ－１１００６（１００μＭのアセチル化ペプチド１０６をＬＰＳ注射の２時間後に硝子体内注射した）；群Ｃ：ＬＰＳ注射２時間前にアセチル化ペプチド１０６を硝子体内注射；又は群Ｄ：眼へのアセチル化ペプチド１０６単独の硝子体内注射の何れかで処置したウサギの眼房水中の細胞浸潤物の比較を示す。全ての値は、平均±１ＳＥＭである。各処置に対してＮ＝２又は３。Ｐ≦０．０５＝^＊ＬＰＳと比較。

【図4】[00018]図４は、群Ａ：ＬＰＳ単独（上左）；群Ｂ：ＬＰＳを投与し、次にアセチル化ペプチド１０６（ＢＩＯ－１１００６）をＬＰＳの２時間後に硝子体内投与（上右）；群Ｃ：ＬＰＳ投与２時間前にアセチル化ペプチド１０６を硝子体内注射（下左）；又は群Ｄ：アセチル化ペプチド１０６単独で硝子体内注射（下右）の何れかでの処置から２４時間後のウサギの眼の組織病理学的分析のための代表的な画像を示す。拡大率は全て４００Ｘである。

【図5】[00019]ＩＲＢＰペプチドの注射によってラットに免疫付与した。免疫付与後第１０日に、１つの群のラットに対してＩＶＴ注射により１００μＭ ＢＩＯ－１１００６又は生理食塩水（群Ａ、対照）での処置を行った。ＢＩＯ－１１００６ ＩＶＴ注射後、１つの群のラットをさらに４日間にわたり処置し（群Ｂ、ＩＶＴのみ）、一方で第２の群に４日間にわたり１００μＭ ＢＩＯ－１１００６を１日３回局所的に適用して与えた（群Ｃ、ＩＶＴ＋局所）。免疫付与後第１４日に、全ラットに対して眼の検査を行い（評価者にとって盲検）、次に安楽死させ、組織病理学検査のために眼を摘出した。図５は、表３で与えられるような眼の炎症／刺激スコアリングと合わせた盲検での眼の評価に基づく。Ｎ＝４匹ラット／群。平均±ＳＤ。

【図6】[00020]上のパネルは、免疫付与後第１０日に開始された硝子体内への生理食塩水投与から４日後の実験的自己免疫性ぶどう膜炎（ＥＡＵ）ラットの、Ｈ ＆ Ｅ染色した前部ぶどう膜の画像を示す（群Ａのラット）。虹彩及び毛様体組織腫脹及び細胞浸潤物（主に単核細胞；矢印）が存在し；表４に基づきグレード３である。下のパネルは、第１０日に開始した硝子体内注射とそれに続くＢＩＯ－１１００６の４日間毎日の局所投与から４日後のＥＡＵラットの、Ｈ ＆ Ｅ染色した前部ぶどう膜の画像を示す（群Ｃのラット）。生理食塩水で処置したＥＡＵラットと比較すると、組織腫脹はより小さく、細胞浸潤物がほぼ完全に阻害される。表４に基づきグレード０～０．５。

【発明を実施するための形態】

【0016】

詳細な説明
定義
[00021] 本明細書中で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためであり、限定するものではないことを理解されたい。

【0017】

[00022] 別段の定めがない限り、本明細書中で使用される全ての技術及び科学用語は、本願が属する技術分野の熟練者にとって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載のものと同様又は同等の何れかの方法及び材料を本願の実施又は試験で使用し得るが、代表的な方法及び材料を本明細書中で記載する。

【0018】

[00023] 長年の特許法協定に従い、「a」、「an」及び「the」という語は、特許請求の範囲を含め本願で使用される場合、「１つ以上」を指す。従って、例えば、「担体」への言及は、１つ以上の担体、２つ以上の担体などの混合物を含み、「方法」への言及は、当業者にとって公知の同等な段階及び／又は方法などへの言及を含む。

【0019】

[00024] 別段示されない限り、本願及び特許請求の範囲で使用される成分量、反応条件などを表す全ての数字は、「約」という語によって全例で修飾されているものと理解されたい。従って、特にそれとは反対の指示がない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲で示される数値パラメーターは、本願により得られることが求められる所望の特性に依存して変動し得る近似である。一般に、「約」という用語は、重量、時間、用量の量などの測定可能な値に関連して本明細書中で使用される場合、当技術分野での許容可能な変動度内の値を包含することを意味する。いくつかの実施形態では、変動度はＦＤＡガイドラインに基づく。

【0020】

[00025] 本明細書中で使用される場合、「処置」は、有益な又は所望の臨床結果を得るためのアプローチである。この開示の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、次のもののうち１つ以上が含まれるが限定されない：眼の炎症の重症度の低下、眼の炎症の持続期間短縮、その発症の減少、眼の炎症の発現又は進行の管理、寛解、予防及び／又は遅延、視力の改善又は失明の進行の停止若しくは遅延、眼痛、発赤及び／又は光に対する感受性の軽減又は黄斑浮腫、緑内障、白内障若しくは眼の炎症及び／又はぶどう膜炎と関連する他の状態のうち何れか１つ以上の進行若しくは重症度の軽減を含む、眼の炎症又は眼の状態（例えばぶどう膜炎）の１つ以上の症状の緩和。

【0021】

[00026] 「有効量」又は「治療的有効量」という用語は、アウトカムを達成するために、例えば有益な又は所望の結果に影響を与えるために十分である薬剤の量を指す。治療的有効量は、処置される対象及び疾患状態、対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、投与方式などのうち１つ以上に依存して変動し得る。

【0022】

ＭＡＲＣＫＳタンパク質
[00027] ＭＡＲＣＫＳタンパク質は、アクチン結合タンパク質であり、細胞骨格配向及び機能及び細胞遊走に寄与する。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示されるＮ末端ＭＡＲＣＫＳペプチドは、白血球などの炎症性細胞を含む様々な細胞タイプの方向性のある遊走を阻害する。

【0023】

[00028] 白血球は、細胞質膜結合顆粒中で貯蔵される多くの炎症メディエーターを合成する。このようなメディエーターの例としては、好中球におけるミエロペルオキシダーゼ［ＭＰＯ］、好酸球における好酸球ペルオキシダーゼ［ＥＰＯ］及び主要塩基性タンパク質［ＭＢＰ］、単球／マクロファージにおけるリゾチーム及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び細胞傷害性リンパ球におけるグランザイムが挙げられるが限定されない。このようなメディエーターは、損傷部位で放出され、エキソサイトーシス機序を介して炎症及び組織修復に寄与する。しかし、エキソサイトーシス過程に関与する調節分子及び特異的な経路は完全には述べられていない。

【0024】

[00029] いくつかの外因性刺激は、タンパク質キナーゼＣの活性化及び続くリン酸化及び脱リン酸化事象を含む経路を介して、白血球の脱顆粒を誘発し得る。ＭＡＲＣＫＳタンパク質（本明細書中で使用される場合、ＭＡＲＣＫＳは「ミリストイル化アラニンリッチＣキナーゼ基質」を意味する）は、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）のユビキタスなリン酸化標的であり、白血球で高発現される。ＭＡＲＣＫＳタンパク質は、呼吸気道を裏打ちする杯細胞によるムチンのエキソサイトーシス分泌の過程に機構的に関与する。およそ８２ｋＤのタンパク質であるＭＡＲＣＫＳは、３つの進化的に保存された領域、Ｎ末端、リン酸化部位ドメイン（又はＰＳＤ）及び多重相同性２（multiple homology 2）（ＭＨ２）ドメインを有する。ＭＡＲＣＫＳは、ミリストイルＣｏＡ：タンパク質Ｎ－ミリストイルトランスフェラーゼ（ＮＭＴ）により触媒される反応を介した、アミノ酸配列のＮ末端（即ち位置１）に存在するグリシンのアルファ－アミン位置での、ＭＡＲＣＫＳタンパク質のアミノ酸配列中のＮ末端アミノ酸におけるアミド結合を介して、ミリストイル化される。この機序は、ＭＡＲＣＫＳ、ミリストイル化タンパク質の、細胞内顆粒の膜への結合を含むと思われる。

【0025】

[00030] ＭＡＲＣＫＳのミリストイル化Ｎ末端領域は、杯細胞におけるムチン分泌及びムチン顆粒膜へのＭＡＲＣＫＳの結合の両方を遮断することが示されているので、分泌過程に不可欠であると思われる。このペプチドは、アミド結合を介してミリストイル化されるＭＡＲＣＫＳタンパク質のＮ末端グリシンで始まるＭＡＲＣＫＳタンパク質の２４個のＬ－アミノ酸を含有し、ミリストイル化アルファ－Ｎ末端配列としても知られ（又は「ＭＡＮＳ」、交換可能に「ＭＡＲＣＫＳ Ｎ－末端」とも呼ばれる）；即ち、ミリストイル－ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）である。本明細書中で開示されるＭＡＮＳペプチドのペプチド断片はまた、好ましくはＬ－アミノ酸から構成される。ＭＡＲＣＫＳはアクチン結合タンパク質なので、細胞骨格配向及び機能及び細胞遊走にとって非常に重要である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示されるＮ末端ＭＡＲＣＫＳペプチドは、ヒト好中球、線維芽細胞及び気道上皮細胞の方向性のある遊走を阻害する。

【0026】

[00031] ぶどう膜炎、喘息、ＣＯＰＤ及び慢性気管支炎などの炎症性疾患において；嚢胞性線維症などの遺伝疾患において；アレルギー性状態（アトピー、アレルギー性炎症）において；気管支拡張症において；及び多くの急性、感染性呼吸器疾患、例えば肺炎、鼻炎、インフルエンザ又は一般的な風邪、関節炎又は自己免疫疾患において、炎症性細胞は通常、このような疾患に罹患している患者での炎症性疾患状態と関連する損傷又は感染の領域で見られるか又はそこに遊走する。これらの炎症性細胞は、これらの細胞から放出された炎症メディエーターにより引き起こされた組織損傷を介して、疾患の病態に大きく寄与し得る。この慢性炎症を介したこのような組織損傷又は破壊の一例はぶどう膜炎で起こる。

【0027】

[00032] 浸潤白血球の顆粒からの炎症メディエーター放出におけるＭＡＲＣＫＳタンパク質の関与は、ぶどう膜炎などの眼疾患、喘息、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症などの気道の炎症を特徴とする肺疾患を含め、全ての組織及び臓器での疾患における炎症に関する。

【0028】

ＭＡＲＣＫＳのＮ－末端由来のペプチド
[00033] 本開示は、ＭＡＲＣＫＳ Ｎ末端由来のペプチド断片（交換可能にただ「断片」又はただ「ペプチド」と呼ばれる）を提供する。いくつかの態様では、これらのペプチド断片は、炎症性白血球における炎症メディエーター顆粒又は小胞の放出の速度及び／又は量の低下に関与する。

【0029】

[00034] いくつかの態様では、本明細書中で開示されるペプチドは、ＭＡＲＣＫＳ Ｎ末端、即ち、ＭＡＲＣＫＳのＮ末端１～２４アミノ酸配列内由来の連続ペプチド断片由来である。いくつかの態様では、本ペプチドは、このような断片のＮ末端アミド、例えばこのような断片のＮ末端酢酸アミド及び／又は、同様にこのような断片のＣ末端アミド、例えばアンモニアのＣ末端アミドなどである。いくつかの態様では、本ペプチドは、例えば炎症性白血球における脱顆粒の過程を阻害することによって、炎症性白血球からの炎症メディエーターの放出を阻害し得るか又はその速度を低下及び／又は量を減少させ得る。このような放出の阻害又は減少は、炎症性白血球からの炎症メディエーターのＭＡＲＣＫＳ関連放出の阻害を含む。

【0030】

[00035] 別の態様では、本明細書中に記載のような、ＭＡＮＳペプチド又はその断片及びこのような断片のアミドは、炎症性細胞における膜結合に対してネイティブＭＡＲＣＫＳタンパク質と競合して、このような炎症性細胞において、このような炎症メディエーターを含有する顆粒又は小胞からの炎症のメディエーターのＭＡＲＣＫＳ関連放出を減弱させ得る（和らげ得るか又は軽減し得る）。

【0031】

[00036] いくつかの態様では、本ペプチドは、ＭＡＮＳペプチドアミノ酸配列の約４～約２３個の連続アミノ酸残基を有する。いくつかの態様では、断片は、それらが配列番号１の位置１においてＮ末端グリシンで始まらない場合、Ｎ末端がミリストイル化され得るか、又はＮ末端アセチル化を含め、Ｃ２～Ｃ１２アシル基でＮ末端がアシル化され得、及び／又はＮＨ２基でＣ末端がアミド化され得る。

【0032】

[00037] ＰＫＣのホルボールエステル誘導性の活性化に反応して特異的な顆粒内容物を分泌する白血球細胞タイプ及びモデル細胞タイプは、本明細書中で開示されるペプチドの有効性のインビトロでの実証に有用である。本開示の化合物及び組成物による膜結合炎症メディエーターの放出の減弱は、ヒト白血球細胞株を使用して実証され得る。例えば、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）の放出の減弱又は阻害を実証するために、ヒト血液から単離される好中球が使用され得る。本開示の化合物及び組成物による好酸球ペルオキシダーゼ（ＥＰＯ）の放出の減弱化又は放出若しくは分泌の阻害を実証するために、ヒト前骨髄球細胞株ＨＬ－６０クローン１５が使用され得る。本開示の化合物及び組成物によるリゾチームの放出の減弱化又は放出若しくは分泌の阻害を実証するために、単球白血病細胞株Ｕ９３７が使用され得る。本開示の化合物及び組成物によるグランザイム放出の減弱化若しくは阻害を実証するために、リンパ球ナチュラルキラー細胞株ＮＫ－９２が使用され得る。本明細書中に記載のものなどの炎症のメディエーターの放出を阻害するか又は減弱させるためのインビトロの方法において、細胞タイプのそれぞれを一連の範囲の濃度にわたる本開示のペプチド化合物又はペプチド組成物と予め温置し、それに続いてホルボールエステルなどの炎症メディエーターの放出の刺激物質を用いてこれらの細胞を温置する。炎症のメディエーターの放出の阻害パーセントは、放出されたメディエーターの濃度の分光光度的読み取りなどにおいて、ペプチド化合物又はペプチド組成物の非存在下でのメディエーター放出と比較したときに決定される。

【0033】

[00038] 本開示のペプチド中での相対的なアミノ酸配列の位置の重要性を示すために、ＭＡＲＣＫＳタンパク質Ｎ末端領域（即ちＭＡＮＳ－ミリストイル化アルファ－Ｎ末端配列ペプチド）の２４個のアミノ酸配列と同一であるペプチドによる放出炎症メディエーター量を抑制又は減少させる相対的能力を、ＭＡＮＳ中に存在する同じ２４個のアミノ酸残基を含有するが、ＭＡＮＳにおける配列順序に関してランダムな順序で並んでいるペプチド（即ちＲＮＳペプチド、そうでなければ「ランダムＮ末端配列ペプチド」とも呼ばれる）による放出炎症メディエーター量を抑制又は減少させる能力と比較した。試験される細胞タイプのそれぞれにおいて、ＭＡＮＳペプチドは、０．５～３．０時間の時間コースにわたり炎症メディエーターの放出を濃度依存的に減弱させたが、ＲＮＳペプチドは減弱させなかった。これらの結果は、ＭＡＲＣＫＳタンパク質、具体的にはそのＮ末端領域及びより具体的にはその２４個のアミノ酸残基Ｎ末端領域で見られる順序である本開示のペプチドにおける相対的なアミノ酸配列の配置が、白血球脱顆粒の阻害に対処する少なくとも１つの細胞内経路に関与することを示唆する。

【0034】

[00039] 表１は、それぞれ対応するペプチド数及び配列番号を伴う一文字略称方式でのアミノ酸配列のリストを含有する。参照ペプチドアミノ酸配列（ＭＡＮＳペプチド）はペプチド１として挙げる。参照アミノ酸配列の４～２３個の連続アミノ酸のアミノ酸配列を有する本開示のペプチドのアミノ酸配列は、ペプチド２～２３１として挙げ、それとともにＭＡＮＳペプチドのアミノ酸を含むランダムＮ末端配列（ＲＮＳ）のアミノ酸配列はペプチド２３２として挙げる。本開示のペプチドのアミノ酸配列の代表的な変異体のアミノ酸配列は本明細書中に記載のとおりであり、またペプチド２３３～２４５及び２４７～２５１としても挙げる。列挙される変異体ペプチドがペプチドの限定グループであることは意図されず、本開示の変異体ペプチドの代表例とするためにのみ提供する。本開示のペプチド（ペプチド２３２）の、代表的なリバースアミノ酸配列（ペプチド２４６）及び代表的なランダムアミノ酸配列も示す。

【0035】

[00040] いくつかの態様では、本ペプチドは、表１で列挙されるアミノ酸配列の何れか１つに対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は少なくとも約９９．５％同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、表１で列挙されるアミノ酸配列の何れか１つを含む。いくつかの態様では、本ペプチドは、表１で列挙されるアミノ酸配列の何れか１つからなる。

【0036】

【表1】

【0037】

【表2】

【0038】

【表3】

【0039】

【表4】

【0040】

【表5】

【0041】

【表6】

【0042】

【表7】

【0043】

【表8】

【0044】

【表9】

【0045】

[00041] いくつかの態様では、本ペプチドは表１Ａで列挙されるペプチドの何れか１つである。

【0046】

【表10】

【0047】

[00042] 本開示は、ＭＡＮＳペプチドのアミノ酸配列に関連するアミノ酸配列とともに２４個未満のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを提供する。本開示のペプチドは、２４個未満のアミノ酸を含有するアミノ酸配列からなり、８～１４、１０～１２、９～１４、９～１３、１０～１３、１０～１４個、少なくとも９個、少なくとも１０個などのアミノ酸からなり得る。本ペプチドは一般的には直鎖であるが、環状ペプチドでもあり得る。環状ペプチドは、環のような形又は環状の環構造を含有するペプチドである。環状の環構造は、例えば、ペプチドのアミノ及びカルボキシル末端の間又はカルボキシル若しくはアミノ末端と側鎖との間、又はペプチド骨格とカルボキシル若しくはアミノ末端若しくは側鎖との間、又はペプチド骨格上の２つの位置の間、又は２つの側鎖の間の連結を通じて形成され得る。連結は、アミド結合又は他の化学的に安定な結合を介して形成され得る。いくつかの実施形態では、本ペプチドはヘッドトゥテイルの環状ペプチドである。いくつかの実施形態では、本ペプチドは、ＰＥＧが付加されている（ＰＥＧ付加）。ＰＥＧ付加は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖をペプチドに共有結合する過程である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ付加は、ペプチドの溶解度を向上させ及び／又は半減期を延長し、及び／又は免疫原性を低下させる。従って、いくつかの実施形態では、ペプチド薬のペプチドＰＥＧ付加の治療的有効性及び／又は忍容性。いくつかの実施形態では、本ペプチドは合成ペプチドである。いくつかの実施形態では、本ペプチドは単離ペプチドである。

【0048】

[00043] いくつかの態様では、本ペプチドは、（ａ）参照配列、ペプチド１の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定められるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有する配列；又は（ｃ）変異体が置換変異体、欠失変異体、付加変異体及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0049】

[00044] いくつかの実施形態では、本ペプチドは、（ａ）参照配列、ペプチド１の８～１４個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定められる配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％又は少なくとも約９３％同一性を有するアミノ酸配列；又は（ｃ）変異体が置換変異体、欠失変異体、付加変異体及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体、からなる群から選択されるアミノ酸配を有する。

【0050】

[00045] また他の実施形態では、本ペプチドは、（ａ）参照配列、ペプチド１の１０～１２個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定められる配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％又は少なくとも約９３％同一性を有するアミノ酸配列；又は（ｃ）変異体が置換変異体、欠失変異体、付加変異体及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0051】

[00046] さらなる実施形態では、本ペプチドは、参照配列の少なくとも９、少なくとも１０、９～１４、９～１３、１０～１３、１０～１４などの連続アミノ酸、ペプチド１；それと少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％又は少なくとも約９３％同一性を有するアミノ酸配列；又は置換変異体、欠失変異体、付加変異体及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるそれらの変異体を有するアミノ酸配列を有する。

【0052】

[00047] いくつかの実施形態では、本ペプチドのアミノ酸配列は、参照配列ペプチド１のＮ末端アミノ酸から始まる。例えば、本ペプチドは、（ａ）参照配列のＮ末端アミノ酸から始まる、参照配列ペプチド１の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列（即ちペプチド２、ペプチド４、ペプチド７、ペプチド１１、ペプチド１６、ペプチド２２、ペプチド２９、ペプチド３７、ペプチド４６、ペプチド５６、ペプチド６７、ペプチド７９、ペプチド９２、ペプチド１０６、ペプチド１２１、ペプチド１３７、ペプチド１５４、ペプチド１７２、ペプチド１９１又はペプチド２１１）；（ｂ）（ａ）で定められるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有する配列；又は（ｃ）（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し得る。これらのペプチドは、ミリストイル基を除き、Ｎ末端グリシン上で、化学的部分を全く含有しないか又は化学的部分を含有する。好ましくは、化学的部分は、アミド結合の形態での、アシル基、例えばアセチル基、又はアルキル基である。

【0053】

[00048] 他の実施形態では、本ペプチドのアミノ酸配列は、参照配列ペプチド１のＣ末端アミノ酸で終わる。例えば、本ペプチドは、（ａ）参照配列のＣ末端アミノ酸で終わる、参照配列ペプチド１の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列（即ちペプチド３、ペプチド６、ペプチド１０、ペプチド１５、ペプチド２１、ペプチド２８、ペプチド３６、ペプチド４５、ペプチド５５、ペプチド６６、ペプチド７８、ペプチド９１、ペプチド１０５、ペプチド１２０、ペプチド１３６、ペプチド１５３、ペプチド１７１、ペプチド１９０、ペプチド２１０又はペプチド２３１）；（ｂ）（ａ）で定められるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有する配列；又は（ｃ）（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し得る。

【0054】

[00049] 他の実施形態では、本ペプチドのアミノ酸配列は、参照配列、ペプチド１、（配列番号１）のＮ末端アミノ酸で始まらないが、参照配列ペプチド１の位置２～位置２１のアミノ酸で始まる。例えば、本ペプチドは、（ａ）参照配列の位置２～位置２１の間の何れかのアミノ酸で始まる、参照配列ペプチド１の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し得る。これらのペプチドは、４～２３個の連続アミノ酸長であり得、参照配列、ペプチド１の中間のペプチドに相当し得；（ｂ）（ａ）で定められるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有する配列；又は（ｃ）（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体であり得る。これらのペプチドは、アミノ酸配列、配列番号１のＮ末端グリシン由来又はそれと同等なＮ末端グリシンではないＮ末端アミノ酸上で、共有結合される化学的部位を含有し得ないか、又は化学的部位を含有し得る。好ましくは、化学的部位は、アミド結合の形態の、アシル基、例えばアセチル基若しくはミリストイ基など、又はアルキル基である。

【0055】

[00050] また他の実施形態では、本ペプチドのアミノ酸配列は、参照配列ペプチド１のペプチド２１９におけるように、連続残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含む。例えば、本ペプチドは、（ａ）参照配列ペプチド１の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列であり、本ペプチドのアミノ酸配列が参照ペプチド１のペプチド２１９におけるような連続残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含むもの（例えばペプチド２１９、ペプチド４５、ペプチド７９、ペプチド６７、ペプチド８０など）；（ｂ）（ａ）で定められるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有する配列；又は（ｃ）（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し得る。

【0056】

[00051] 別の実施形態では、好ましいペプチド配列は、（ａ）参照配列、ペプチド１の１０～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定められるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有する配列；又は（ｃ）置換変異体、欠失変異体、付加変異体及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、（ａ）で定められるアミノ酸配列の変異体、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0057】

[00052] さらなる実施形態では、本ペプチドのアミノ酸配列は、参照配列ペプチド１のＮ末端アミノ酸から始まり、参照配列ペプチド１のペプチド２１９でのように連続残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含み、一方で他の実施形態では、本ペプチドのアミノ酸配列は、参照配列ペプチド１のＣ末端アミノ酸で終わり、参照配列ペプチド１のペプチド２１９でのように連続残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含む。

【0058】

[00053] いくつかの態様では、本ペプチドは、配列番号１の少なくとも２個～少なくとも１２個のアミノ酸、例えば配列番号１の少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個又は少なくとも１０個の連続アミノ酸残基からなる。

【0059】

[00054] 代表的な態様では、本ペプチドはＮ末端アミノ酸においてアセチル化されている。代表的な態様では、本ペプチドは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、Ｎ末端アミノ酸でアセチル化されている。

【0060】

[00055] いくつかの態様では、本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸においてミリストイル化されており、及び／又はＣ末端アミノ酸においてアンモニアによりアミド化されている。

【0061】

[00056] いくつかの態様では、本ペプチドは、（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列であり、（ａ）のアミノ酸配列のＮ末端アミノ酸が、参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）のアミノ酸位置２～２１から選択される、アミノ酸配列を含む。さらに、これらのペプチドは、Ｎ末端アミノ酸においてミリストイル化され得、またＣ末端アミノ酸においてアンモニアによりアミド化され得る。より好ましいペプチド断片の長さは、少なくとも６個のアミノ酸～２３個のアミノ酸である。

【0062】

[00057] いくつかの態様では、本ペプチドは、
（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；
（ｂ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；又は
（ｃ）（ａ）で定められる配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％同一性、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％又は少なくとも約９５％同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、
本ペプチドのＣ末端アミノ酸は任意選択的に、独立して化学的に修飾され、本ペプチドのＮ末端アミノ酸は、独立して、Ｃ２～Ｃ１３飽和又は不飽和脂肪族カルボン酸、Ｃ１４飽和又は不飽和脂肪族カルボン酸、Ｃ１５～Ｃ２４飽和又は不飽和脂肪族カルボン酸及びトリフルオロ酢酸からなる群から選択されるカルボン酸でのアシル化により化学的に修飾されるか、又は化学的に修飾されず、ただし、前記ペプチドは、そのアミノ酸配列がＣ２～Ｃ１３飽和若しくは不飽和脂肪族カルボン酸、Ｃ１４不飽和脂肪族カルボン酸、Ｃ１５～Ｃ２４飽和若しくは不飽和脂肪族カルボン酸及びトリフルオロ酢酸からなる群から選択されるカルボン酸のみでのアシル化によって参照配列の配列ＧＡＱＦで始まる場合、アシル化によって修飾されるか、又は化学的に修飾されないものとし、前記ペプチドは、任意選択的に、薬学的に許容可能な担体と、前記少なくとも１つのペプチドの非存在下で起こる炎症性細胞の同じタイプの少なくとも１つからの前記炎症メディエーターの放出と比較した場合に少なくとも１つの炎症性細胞からの前記炎症メディエーターの放出を減少させるための治療的に有効な炎症メディエーター放出減少量で、組み合わせられる。

【0063】

[00058] 本ペプチドは、上記の（ａ）のアミノ酸配列、（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２３個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列をさらに含み得、ここで、（ａ）のアミノ酸配列のＮ末端アミノ酸は、参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）のアミノ酸位置２～２１から選択される。このペプチドは、さらに、そのＮ末端アミノ酸においてミリストイル化若しくはアセチル化され得るか、又は任意選択的にＣ末端アミノ酸においてアンモニアによりアミド化され得る。

【0064】

[00059] ＭＡＮＳ由来のペプチド及びその使用方法は、両方とも全ての目的に対してそれらの全体において参照により本明細書中で組み込まれる米国特許第７，５２４，９２６号及び同第８，９９９，９１５号でさらに記載される。

【0065】

[00060] 特定の実施形態では、本ペプチド配列は、配列番号７９、１０６、１２１、１３７及び２１９からなる群から選択される。

【0066】

[00061] ＭＡＲＣＫＳのＮ末端配列由来の修飾ペプチド
[00062] いくつかの態様では、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つが化学的に修飾され得、例えば表１又は表１Ａで列挙されるペプチドのうち何れか１つが化学的に修飾され得る。

【0067】

[00063] いくつかの態様では、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つは、例えば（ｉ）例えばＣ１又は好ましくはＣ２（酢酸）～Ｃ２２カルボン酸などによるＮ末端アミン基（Ｈ２Ｎ－ペプチド－）におけるアミド形成；（ｉｉ）例えばアンモニアなどでの、又はＣ１～Ｃ２２一級若しくは二級アミンでの、Ｃ末端カルボキシル基（－ペプチド－ＣＯＯＨ）におけるアミド形成；及び（ｉｉｉ）それらの組み合わせからなる群から選択され得る化学的修飾によって、化学的に修飾され得る。

【0068】

[0064] いくつかの態様では、本ペプチドのアミノ酸のうち１つ以上（例えばＮ末端及び／又はＣ末端アミノ酸）は、任意選択的に、独立して化学的に修飾され；いくつかの実施形態では、ペプチドの１つ以上のアミノ酸が化学的に修飾され、一方で、他の実施形態では、本ペプチドのアミノ酸のうち、化学的に修飾されるものはない。一態様では、好ましい修飾は、ペプチド又はペプチドセグメントのＮ末端アミノ酸のアミン（－ＮＨ_２）基で起こり得る（Ｎ末端位置ではなくペプチド配列内で内部に存在するならば、アミン基はペプチドアミド結合を形成する）。別の態様では、好ましい修飾は、ペプチド又はペプチドセグメントのＣ末端アミノ酸のカルボキシ（－ＣＯＯＨ）基で起こり得る（Ｃ末端位置ではなく、ペプチド配列内で内部に存在するならば、カルボキシ基はペプチドアミド結合を形成する）。別の態様では、好ましい修飾は、Ｎ末端アミン（－ＮＨ_２）基及びＣ末端カルボキシル（－ＣＯＯＨ）基の両方で起こり得る。

【0069】

[00065] 本ペプチドは、参照アミノ酸配列に対して、１つ以上のアミノ酸欠失、置換及び／又は付加を含み得る。好ましくは、置換は、保存的アミノ酸置換であり得るか、又は置換は、非保存的アミノ酸置換であり得る。本開示のペプチドにおいて参照アミノ酸配列でなされ得るアミノ酸置換としては、次のものが挙げられるが限定されない：アラニン（Ａ）は、リジン（Ｋ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）又はイソロイシン（Ｉ）で置換され得；グルタミン酸（Ｅ）はアスパラギン酸（Ｄ）で置換され得；グリシン（Ｇ）はプロリン（Ｐ）で置換され得；リジン（Ｋ）は、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）又はアスパラギン（Ｎ）で置換され得；フェニルアラニン（Ｆ）は、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）又はアラニン（Ａ）で置換され得；プロリン（Ｐ）は、グリシン（Ｇ）で置換され得；グルタミン（Ｑ）は、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン（Ｎ）で置換され得；アルギニン（Ｒ）は、リジン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）又はアスパラギン（Ｎ）で置換され得；セリン（Ｓ）は、スレオニンで置換され得；スレオニン（Ｔ）は、セリン（Ｓ）で置換され得；バリン（Ｖ）は、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）又はノルロイシン（Ｎｌｅ）で置換され得る。例えば、本開示のペプチドにおいて参照アミノ酸配列に対してなされ得る置換としては、フェニルアラニン（Ｆ）をアラニン（Ａ）に置換（例えば参照アミノ酸配列のアミノ酸位置４で）、グルタミン（Ｑ）をグルタミン酸（Ｅ）に（例えば参照アミノ酸配列のアミノ酸位置３で）、アラニン（Ａ）をリジン（Ｋ）に（例えば参照アミノ酸配列のアミノ酸位置２及び／又は８で）、及び／又はスレオニン（Ｔ）をセリン（Ｓ）に（例えば参照アミノ酸配列のアミノ酸位置７で）置換することが挙げられる。

【0070】

[00066] ペプチド７９、１２マーの置換変異体の例としては、例えば、ペプチド７９中の位置３のＱが配列２３８中でＥにより置換されている、ペプチド２３８；ペプチド７９の位置２のＡがペプチド２３３中でＫにより置換されている、ペプチド２３３；ペプチド７９の位置８のＡがペプチド２３４中でＫにより置換されている、ペプチド２３４；ペプチド７９の位置２及び８のＡがペプチド２３５中でＫにより置換されている、ペプチド２３５；ペプチド７９中の位置４のＦがペプチド２３７中でＡにより置換されている、ペプチド２３７；ペプチド７９中の位置１０のＫがペプチド２３９中でＡにより置換されている、ペプチド２３９；ペプチド７９中の位置１１のＧがペプチド２４０中でＡにより置換されている、ペプチド２４０；及びペプチド７９中の位置１２のＥがペプチド２４１中でＡにより置換されている、ペプチド２４１が挙げられる。

【0071】

[00067] ペプチド１０６、１０－ｍｅｒの置換変異体の例としては、例えば、ペプチド１０６の位置４のＦがペプチド２３６中でＡにより置換されている、ペプチド２３６；ペプチド１０６の位置１のＧがペプチド２４２中でＡにより置換されている、ペプチド２４２；ペプチド１０６の位置３のＱがペプチド２４３中でＡにより置換されている、ペプチド２４３；ペプチド１０６の位置５のＳがペプチド２４４中でＡにより置換されている、ペプチド２４４；ペプチド１０６の位置６のＫがペプチド２４５中でＡにより置換されている、ペプチド２４５；ペプチド１０６の位置７のＴがペプチド２４７中でＡにより置換されている、ペプチド２４７；ペプチド１０６の位置１０のＫがペプチド２４８中でＡにより置換されている、ペプチド２４８；ペプチド１０６の位置６及び１０のＫが両方ともペプチド２４９中でそれぞれＡにより置換されている、ペプチド２４９が挙げられる。

【0072】

[00068] ペプチド１３７、８－ｍｅｒの置換変異体の例としては、例えば、ペプチド１３７の位置４のＦがペプチド２５０中でＡにより置換されている、ペプチド２５０が挙げられる。

【0073】

[00069] ペプチド２１９、４－ｍｅｒの置換変異体の例としては、例えば、ペプチド２１９の位置２のＫがペプチド２５１中でＡにより置換されている、ペプチド２５１が挙げられる。

【0074】

[00070] 本明細書中で記載のものなどの置換変異体ペプチドは、単離ペプチドの形態又は化学修飾ペプチドの形態、例えば、本明細書中に記載のような、ミリストイルアミド、アセチルアミドなどのＮ末端アミド及び、例えば、アンモニアにより形成されるアミドなどのＣ末端アミドなど、及びＮ末端アミド及びＣ末端アミドの両方など、であり得る。

【0075】

[00071] いくつかの態様では、本ペプチドのアミノ酸のうち１つ以上がまた化学修飾され得る。当技術分野で公知の何れかのアミノ酸修飾は、当技術分野で公知の何れかの方法を使用して本ペプチドのアミノ酸に対してなされ得る。

【0076】

[00072] いくつかの実施形態では、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸が修飾され得る。例えば、本ペプチドのＮ末端アミノ酸は、Ｎ末端（Ｎ末端）アミノ（－Ｈ２Ｎ－）基においてアルキル化、アミド化又はアシル化され得、例えば本ペプチドのＣ末端アミノ酸は、Ｃ末端カルボキシル（－ＣＯＯＨ）基においてアミド化又はエステル化され得る。例えば、Ｎ末端アミノ基は、アセチル基（即ちＣＨ３－Ｃ（＝Ｏ）－又はミリストイル基、これらの両者とも現在好ましい基である）を含め、アミドを形成するために何らかのアシル又は脂肪アシル基を含むようにアシル化により修飾され得る。いくつかの実施形態では、Ｎ末端アミノ基は、式－Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、１～１５個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキル基である）を有するアシル基を含むように修飾され得るか、又は式－Ｃ（Ｏ）Ｒ１（式中、Ｒ１は、１～１５個の炭素原子を有する直鎖状アルキル基である）を有するアシル基を含むように修飾され得る。Ｎ－アミドは、ホルムアミド（Ｒ＝Ｈ）でもあり得る。本ペプチドのＣ末端アミノ酸もまた化学修飾され得る。例えば、Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、カルボキシル基の代わりにカルボキサミド基への変換によって化学修飾され得る（即ちアミド化）。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸は化学修飾されない。いくつかの実施形態では、Ｎ末端基が修飾され、Ｃ末端基は修飾されない。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端の両方が修飾される。

【0077】

[00073] 本ペプチドは、Ｎ末端アミノ酸のアミノ基においてアシル化されて、次のものからなる群から選択される酸によりＮ末端アミドを形成し得る：
（ｉ－ａ）直鎖状、分岐状（Ｃ３より大きい）であり得るか又は環を含み得る（Ｃ３より大きい）、Ｃ２（アセチル）～Ｃ１３脂肪族（飽和又は任意選択的に不飽和）カルボン酸（例えば、酢酸（好ましい基である）、プロパン酸、ブタン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸によるＮ末端アミド）；
（ｉ－ｂ）直鎖状、分岐状であり得るか又は環を含み得る、飽和Ｃ１４脂肪族カルボン酸；
（ｉ－ｃ）直鎖状、分岐状であり得るか又は環を含み得る、不飽和Ｃ１４脂肪族カルボン酸；
（ｉ－ｄ）直鎖状、分岐状であり得るか又は環を含み得る、Ｃ１５～Ｃ２４脂肪族（飽和又は任意選択的に不飽和）カルボン酸（例えば、テトラデカン酸（好ましい基であるミリスチン酸）による、ヘキサデカン酸による、９－ヘキサデカン酸による、オクタデカン酸による、９－オクタデカン酸による、１１－オクタデカン酸による、９，１２－オクタデカジエン酸による、９，１２，１５－オクタデカトリエン酸による、６，９，１２－オクタデカトリエン酸による、エイコサン酸による、９－エイコセン酸による、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸による、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸による、ドコサン酸による、１３－ドコセン酸による、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸による、テトラコサン酸によるなど）；
（ｉｉ）トリフルオロ酢酸；
（ｉｉｉ）安息香酸；及び
（ｉｖ－ａ）脂肪族アルキルスルホンアミドを形成するＣ１～Ｃ１２脂肪族アルキルスルホン酸（ここで、スルホン酸のＣ１～Ｃ１２脂肪族アルキル炭素鎖構造は、上記の脂肪族アルキルカルボン酸中の脂肪族アルキルカルボン酸鎖の構造と類似している）。例えば、ペプチドは、（Ｃ１－Ｃ１１－アルキル－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ペプチドとして表されるアミドを形成させるために、カルボン酸基の活性化によって、脱水カップリングを通じて、（Ｃ１－Ｃ１１）－アルキル－Ｃ（Ｏ）ＯＨとして表されるカルボン酸基を使用してアシル化され得る。同様に、スルホン酸種（（Ｃ１－Ｃ１２）－アルキル－Ｓ（Ｏ２）－Ｘとして表され、例えば式中、Ｘはハロゲン又はＯＣＨ３又は他の適合性の脱離基である）をＮ末端アミノ基と反応させて、（Ｃ１－Ｃ１２）－アルキル－Ｓ（Ｏ２）－ＮＨ－ペプチドとして表されるスルホンアミドを形成させることによって、スルホンアミドが形成され得る。
（ｉｖ－ｂ）脂肪族アルキルスルホンアミドを形成するＣ１４～Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸（ここで、スルホン酸のＣ１４～Ｃ２４脂肪族アルキル炭素鎖構造は上記の脂肪族アルキルカルボン酸中の脂肪族アルキルカルボン酸鎖の構造と類似している）。例えば、（Ｃ１３－Ｃ２３）－アルキル－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ペプチドとして表されるアミドを形成させるためにカルボン酸基の活性化による脱水カップリングを通じて（Ｃ１３－Ｃ２３）－アルキル－Ｃ（Ｏ）ＯＨとして表されるカルボン酸基を使用して、ペプチドがアシル化され得る。同様に、スルホンアミドは、スルホン酸種（（Ｃ１４－Ｃ２４）－アルキル－Ｓ（Ｏ２）－Ｘとして表される、例えば式中、Ｘはハロゲン又はＯＣＨ３又は他の適合する脱離基である）をＮ末端アミノ基と反応させて、（Ｃ１４－Ｃ２４）－アルキル－Ｓ（Ｏ２）－ＮＨ－ペプチドとして表されるスルホンアミドを形成させることによって形成され得る。

【0078】

[00074] いくつかの態様では、Ｎ末端アミノ酸のＮ末端アミノ基は、Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキル基でアルキル化され得、この脂肪族アルキル基の構造は上記のとおりである。例えば、脂肪族アルキルハロゲン化物又は脂肪族アルキルスルホン酸エステル（メシラート、トシラートなど）を使用して、好ましくは一級アルキルハロゲン化物又は一級アルキルスルホン酸エステルを使用して、アルキル化が引き起こされ得る。Ｎ末端アミノ酸は、アセチル基（即ち、好ましい基である－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）、ミリストイル基（好ましい基である）、ブタノイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、ドデカノイル基、テトラデカノイル基、ヘキサデカノイル基、９－ヘキサデセノイル基、オクタデカノイル基、９－オクタデセノイル基、１１－オクタデセノイル基、９，１２－オクタデカジエノイル基、９，１２，１５－オクタデカトリエノイル基、６，９，１２－オクタデカトリエノイル基、エイコサノイル基、９－エイコセノイル基、５，８，１１，１４－エイコサテトラエノイル基、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエノイル基、ドコサノイル基、１３－ドコセノイル基、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエノイル基、テトラコサノイル基を含め、アミドとして何れかのアシル又は脂肪族アシル脂肪アシル基を含むように、末端アミノでも修飾され得、これらの基はアミド結合によりペプチドの末端アミノ基に共有結合される。

【0079】

[00075] 本開示のペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基もまた化学的に修飾され得る。例えば、Ｃ末端アミノ酸は、好ましい基であるアンモニアのアミド；Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキルアミン、好ましくは直鎖状脂肪族アルキルアミンのアミド；ヒドロキシル置換されたＣ２～Ｃ１２脂肪族アルキルアミンのアミド；直鎖状２－（Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基のアミド；及びｎが０～１０である、オメガ－メトキシ－ポリ（エチレンオキシ）ｎ－エチルアミン基（オメガ－メトキシ－ＰＥＧ－アルファ－アミン基又はオメガ－メトキシ－（ポリエチレングリコール）アミン基とも呼ばれる）のアミドなど、アミド基を形成させるための本ペプチドのＣ末端カルボン酸基のアミンとの反応によって、化学的に修飾され得る。本ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキルアルコールのエステル及び２－（オメガ－メトキシ－ポリ（エチレンオキシ）ｎ）－エタノール（ＭＰＥＧ）基（式中、ｎは０～１０である）のエステルからなる群から選択されるエステルの形態でもあり得る。一態様では、ＰＥＧエステル、ＭＰＥＧエステル、ＰＥＧアミド、ＭＰＥＧアミドなどのポリエチレングリコール構成要素は好ましくは、約５００～４０，０００ダルトン、より好ましくは１０００～２５，０００ダルトン及び最も好ましくは約１０００～約１０，０００ダルトンの分子量を有する。

【0080】

[00076] 式ペプチド－Ｃ（Ｏ）ＯＨにより表され得る本ペプチド上のＣ末端カルボン酸基はまた、アンモニア又は一級若しくは二級アミン、好ましくはアンモニア又は一級アミンとの反応を促進するために、カルボン酸ハロゲン化物、カルボン酸無水物、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＯＰｆｐ）エステル、３－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－４－オキソ－ベンゾ－トリアゾン（ＯＤｈｂｔ）エステルなどの活性化形態への変換によってアミド化され得、好ましくは一方で、本ペプチド中の何らかの他の反応基は、ベンジルエステル、ｔ－ブチルエステル、フェニルエステルなど、特にペプチド固相合成のペプチド合成の技術分野で周知である合成された化学的に適合する保護基により保護される。得られたペプチドアミドは、式ペプチド－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ３Ｒ４（アミドは本ペプチドのＣ末端である）によって表され得、式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素；Ｃ１～Ｃ１２アルキル、例えばメチル、エチル、ブチル、イソブチル、シクロプロピルメチル、ヘキシル、ドデシル、及び任意選択的により高い、例えばテトラデシルなどのＣ１４～Ｃ２４及び上記のような同等物からなる群から選択される。

【0081】

[00077] Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸は、２－ヒドロキシエチルアミン、４－ヒドロキシブチルアミン及び１２－ヒドロキシドデシルアミンなどのヒドロキシル置換Ｃ２～Ｃ１２脂肪族アルキルアミン（ヒドロキシル基はアミンの窒素原子ではなく炭素原子に結合されている）のアミドにも変換され得る。

【0082】

[00078] Ｃ末端カルボン酸は、ヒドロキシル置換Ｃ２～Ｃ１２脂肪族アルキルアミンのアミドにも変換され得、ヒドロキシル基は、アシル化されて、上記のようにＣ２～Ｃ１２脂肪族カルボン酸とのエステルを形成し得る。好ましくは、式ペプチド－Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６により表される本ペプチドのＣ末端のペプチドアミドにおいて、Ｒ５は水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１～Ｃ１２アルキル及びヒドロキシル置換Ｃ２～Ｃ１２アルキルからなる群から選択される。

【0083】

[00079] Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸は、直鎖状２－（Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキル）オキシエチルアミンのアミドへ変換され得る。このようなアミドは、例えば、２－クロロエタノールを伴うジグリム中での直鎖状Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルコールの水素化カリウムとの反応を行って直鎖状Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキルエタノールを提供し、これをアルデヒドへの酸化によってアミンに変換し得、続いてアミンへの還元的なアミン化（例えばアンモニアを使用）を行うことにより、又はアルキルハロゲン化物（例えば塩化チオニルを使用）への変換とそれに続くアンモニアなどのアミンでの処理によって、調製され得る。

【0084】

[00080] Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸は、直鎖状ＰＥＧ－アミン（例えばオメガ－ヒドロキシ－ＰＥＧ－アルファ－アミン；オメガ－（Ｃ１～Ｃ１２）－ＰＥＧ－アルファ－アミン、例えばオメガ－メトキシ－ＰＥＧ－アルファ－アミンなど、即ちＭＰＥＧ－アミン）のアミドに変換され得る。一態様では、ポリエチレングリコール又はＰＥＧ構成成分は、好ましくは約５００～４０，０００ダルトン、より好ましくは１０００～２５，０００ダルトン及び最も好ましくは約１０００～約１０，０００ダルトンの分子量を有する。

【0085】

[00081] Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸は、オメガ－メトキシ－ポリ（エチレンオキシ）ｎ－エチルアミンのアミドにもまた変換され得、ここでｎは０～１０であり、対応するオメガ－メトキシ－ポリ（エチレンオキシ）ｎ－エタノールから、例えばアルコールから上記のようなアミンへの変換によって調製され得る。

【0086】

[00082] 別の実施形態では、Ｃ末端カルボキシルは、式ペプチド－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ７Ｒ８により表されるアミドに変換され得、式中、Ｒ７は水素であり、Ｒ８は、直鎖状２－（Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキル）オキシエチル基であり、式中、Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキル部分は上記のとおりであり、メトキシエチル（即ちＣＨ３Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－）、２－ドデシルオキシエチルなどの基を含むか；又はＲ７は水素であり、Ｒ８は、オメガ－メトキシ－ポリ（エチレンオキシ）ｎ－エチル基であり、式中、ポリ（エチレンオキシ）部分のｎは、０～１０であり、例えば２－メトキシエチル（即ちＣＨ３Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－）、オメガ－メトキシエトキシエチル（即ちＣＨ３Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－）、最大ＣＨ３Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１０－ＣＨ２ＣＨ２－である。

【0087】

[00083] 本ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、Ｃ１～Ｃ１２脂肪族アルキルアルコールのエステル、上述のようなアルコールの脂肪族アルキル部分の形態でもあり得る。本ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、ｎが０～１０である２－（オメガ－メトキシ－ポリ（エチレンオキシ）ｎ）－エタノール基のエステルの形態でもあり得、これは、エチレンオキシドの化学量論的な量、ｎの大きさに依存する化学量論的な量とナトリウム２－メトキシエタノラートとしての２－メトキシエタノールの反応から調製され得る。

【0088】

[00084] 本ペプチドのアミノ酸における側鎖もまた化学的に修飾され得る。例えば、フェニルアラニン又はチロシン中のフェニル基は、次のものからなる群から選択される置換基で置換され得る。
Ｃ１～Ｃ２４脂肪族アルキル基（即ち、直鎖状又は分岐状及び／又は飽和又は不飽和及び／又は環状基を含有）、例えばメチル（好ましい）、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、シクロプロピル、２－メチルシクロプロピル、シクロへキシル、オクチル、デシル、ドデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、エイコサニル、ドコサニル、テトラコサニル、９－ヘキサデセニル、９－オクタデセニル、１１－オクタデセニル、９，１２－オクタデカジエニル、９，１２，１５－オクタデカトリエニル、６，９，１２－オクタデカトリエニル、９－エイコセニル、５，８，１１，１４－エイコサテトラエニル、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエニル、１３－ドコセニル及び４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエニル；
少なくとも１つの炭素原子が不飽和部位から除去されたヒドロキシル基で置換されるＣ１～Ｃ１２脂肪族アルキル基、そのヒドロキシアルキル基の例としては、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシドデシルなどが挙げられる；
酢酸、ブタン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、９－ヘキサデセン酸、オクタデカン酸、９－オクタデカン酸、１１－オクタデカン酸、９，１２－オクタデカジエン酸、９，１２，１５－オクタデカトリエン酸、６，９，１２－オクタデカトリエン酸、エイコサン酸、９－エイコセン酸、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸、ドコサン酸、１３－ドコセン酸、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸、テトラコサン酸など、ジカルボン酸、例えばコハク酸、又はヒドロキシ酸、例えば乳酸などの酸のＣ２～Ｃ２５脂肪族カルボキシル基でエステル化されるヒドロキシル基で置換されるＣ１～Ｃ１２アルキル基であり、エステル置換基の炭素原子の総数が３～２５であるもの；
ハロゲン、例えばフルオロ－、クロロ－、ブロモ－及びヨード－；ニトロ－；
アミノ－、例えばＮＨ２、メチルアミノ、ジメチルアミノ；トリフルオロメチル－；
カルボキシル（－ＣＯＯＨ）；
Ｃ１～Ｃ２４アルコキシ（チロシンのアルキル化により形成され得るものなど）、例えばメトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブチルオキシ、イソブチルオキシ、シクロプロピルオキシ、２－メトキシシクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシ、オクチルオキシ、デシルオキシ、ドデシルオキシ、ヘキサデシルオキシ、オクタデシルオキシ、エイコサニルオキシ、ドコサニルオキシ、テトラコサニルオキシ、９－ヘキサデセニルオキシ、９－オクタデセニルオキシ、１１－オクタデセニルオキシ、９，１２－オクタデカジエニルオキシ、９，１２，１５－オクタデカトリエニルオキシ、６，９，１２－オクタデカトリエニルオキシ、９－エイコセニルオキシ、５，８，１１，１４－エイコサテトラエニルオキシ、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエニルオキシ、１３－ドコセニルオキシ及び４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエニルオキシ；及び
Ｃ２～Ｃ１２ヒドロキシアルキルオキシ、例えば２－ヒドロキシエチルオキシ及び上記のようなカルボン酸と又はトリフルオロ酢酸とのそのエステル。

【0089】

[00085] セリンヒドロキシル基は、次のものからなる群から選択される置換基でエステル化され得る：
上記のようなものなどのＣ２～Ｃ１２脂肪族カルボン酸基；
トリフルオロ酢酸基；及び
安息香酸基。

【0090】

[0086] リジン中のイプシロンアミノ基は、例えば、上記のようなものなどのＣ２～Ｃ１２脂肪族カルボン酸基（例えば、酸塩化物、無水物、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＯＰｆｐ）エステル、３－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－４－オキソ－ベンゾ－トリアゾン（ＯＤｈｂｔ）エステルなど、化学的に活性化されたカルボン酸の形態とのアミンの反応による）、又は安息香酸基又はアミノ酸基とのアミド形成によって、化学的に修飾され得る。さらに、リジン中のイプシロンアミノ基は、１個又は２個のＣ１～Ｃ４脂肪族アルキル基でのアルキル化によって化学的に修飾され得る。

【0091】

[00087] グルタミン酸中のカルボン酸基は、アンモニア；メチルアミンを伴うものを含むＣ１～Ｃ１２一級脂肪族アルキルアミン（そのアルキル部分は上記のとおり）；又はアミノ酸のアミノ基などのアミンとのアミドの形成によって修飾され得る。

【0092】

[00088] グルタミン酸中のカルボン酸基は、上述のようなＣ１～Ｃ１２脂肪族ヒドロキシアルキル基とのエステル、好ましくは上記のような、メタノール、エタノール、プロパン－１－オール、ｎ－ドデカノールなどのＣ１～Ｃ１２脂肪族アルキルの一級アルコールとのエステルの形成によって修飾され得る。

【0093】

[00089] いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書中で提供されるペプチド及びその塩を含む組成物を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書中で提供されるペプチド及び薬学的に許容可能なその塩を包含する。薬学的に許容可能な本開示のペプチドの塩としては、例えば、その酸又は塩基性塩を生成させることにより修飾されるペプチドが挙げられる。酸付加塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（palmoate）、ペクチン酸塩（pectinate）、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩及びウンデカン酸塩が挙げられる。塩基性塩としては、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウム及びカリウム塩など、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム及びマグネシウム塩など、有機塩基との塩、例えばジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ－メチル－Ｄ－グルタミン及び、アルギニン、リジンなどのアミノ酸との塩が挙げられる。また、塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物、例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル塩化物、臭化物及びヨウ化物；ジメチル、ジエチル、ジブチルのようなジアルキル硫酸塩；及びジアミル硫酸塩、長鎖ハロゲン化物、例えばデシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリル塩化物、臭化物及びヨウ化物など、ベンジル及びフェネチル臭化物などのようなアラルキルハロゲン化物などの薬剤で四級化され得る。

【0094】

[00090] 特定の実施形態では、修飾ペプチドは、ＢＩＯ－１１２１１、ＢＩＯ－１１０００、ＢＩＯ－１１００２、ＢＩＯ－１１００５、ＢＩＯ－１１００７、ＢＩＯ－１１００１８、ＢＩＯ－１１０２６、ＢＩＯ－１０９０１、ＢＩＯ－１０８０３、ＢＩＯ－９１２００、ＢＩＯ－９１２０１及びＢＩＯ－９１２０２からなる群から選択される。

【0095】

医薬組成物
[00091] いくつかの態様では、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つは、ぶどう膜炎の進行を阻止するために有用な医薬組成物中に含有される。本開示はまた、治療的有効量の本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つの投与を含む、対象において細胞分泌過程を阻害するための方法も含む。

【0096】

[00092] 本開示は、上の段落に記載及び本明細書中に記載のようなペプチドと、賦形剤と、を含む組成物も包含する。本開示は、上の段落に記載及び本明細書中に記載のようなペプチド及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物も包含する。本医薬組成物は、さらに好ましくは無菌、滅菌可能又は滅菌されるものであり得る。これらのペプチドは、投与に有用な試薬とともにキット中に含有され得る。

【0097】

[00093] 一態様では、本開示は、医薬組成物を投与する方法に関する。本医薬組成物は、治療的有効量の既知の化合物と、薬学的に許容可能な担体と、を含む。薬学的に許容可能な担体は、好ましくは液体剤形である。液体調製物が使用され得、溶液又は懸濁液、例えば有効成分を含有する溶液、及び水、グリセロール及びプロピレングリコールの混合物の形態で調製され得る。必要に応じて、このような液体調製物は、次のもののうち１つ以上：増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースも使用され得、他の許容可能な担体を含み得、この選択は当技術分野で公知である。

【0098】

[00094] 特定の実施形態では、製剤は固体医薬組成物中に存在する。本開示による対象となる固体組成物は、賦形剤とともに形成され得、混合され得、及び／又は賦形剤により希釈され得る。対象の固体組成物は担体内にも封入され得、これは例えばカプセル、サシェ、錠剤、紙又は他の容器の形態であり得る。賦形剤が希釈剤として働く場合、これは、対象組成物に対するビヒクル、担体又は媒体として作用する固体、半固体、ゲル又は液体物質であり得る。眼への投与の場合、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つを伴う製剤処方物は、点眼薬、眼用ゲル、軟膏、軟膏、埋め込み物、ミクロスフェア又はリポソーム性処方物又はマイクロエマルションの形態で調製され得る。

【0099】

[00095] 様々な適切な賦形剤は、当業者により理解され、２４０４～２４０６頁の開示がそれらの全体において本明細書中に組み込まれるNational Formulary,19:2404-2406(2000)で見出され得る。適切な賦形剤の例としては、デンプン、アラビアゴム、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、メタクリラート、シェラック、ポリビニルピロリドン、セルロース、水及びメチルセルロースが挙げられるが限定されない。製剤処方物はさらに、滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱油など；湿潤剤；乳化及び懸濁剤；保存剤、例えばヒドロキシ安息香酸メチル－及びプロピルなどを含み得る。ポリオール、緩衝液及び不活性充填剤も使用し得る。ポリオールの例としては、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、スクロース、マルトース、グルコース、ラクトース、デキストロースなどが挙げられるが限定されない。適切な緩衝液としては、リン酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸緩衝液などが挙げられるが限定されない。使用され得る他の不活性充填剤としては、当技術分野で公知であり、様々な剤形の製造において有用であるものが挙げられる。必要に応じて、固体処方物は、増量剤及び／又は造粒剤などの他の構成要素を含み得る。本開示の製剤は、当技術分野で周知の手順を使用することによる患者への投与後の有効成分の速放性、持続放出又は遅延放出性を提供するように処方され得る。

【0100】

[00096] 上の医薬品が非経口又は眼内投与のために使用されるべき事象において、このような処方物は、本開示の対象組成物を含む、無菌水性注射溶液、非水性注射溶液又は両方を含み得る。水性注射溶液が調製される場合、本対象組成物は、水溶性の薬学的に許容可能な塩として存在し得る。非経口又は眼内調製物は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤及び、処方物を意図する受容者の血液と等張にする溶質を含有し得る。水性及び非水性無菌懸濁液は、懸濁剤及び増粘剤を含み得る。本処方物は、単位用量又は複数回投与容器、例えば密封アンプル及びバイアル中に存在し得る。即時注射溶液及び懸濁液は、以前に記載された種類の無菌粉末、顆粒剤及び錠剤から調製され得る。非経口又は眼内処方物は、リポソーム性組成物としてでもあり得る。

【0101】

[00097] 本対象組成物は、これが局所投与（例えば眼への点眼又はゲル又はクリーム）に適切であり得るようにも処方され得る。これらの処方物は、当業者にとって公知の様々な賦形剤を含有し得る。適切な賦形剤としては、セチルエステルワックス、セチルアルコール、白色ワックス、モノステアリン酸グリセリル、プロピレングリコール、モノステアラート、メチルステアラート、ベンジルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、鉱油、水、カルボマー、エチルアルコール、アクリラート接着剤、ポリイソブチレン接着剤及びシリコーン接着剤が挙げられ得るが限定されない。

【0102】

ぶどう膜炎を処置する方法
[00098] 本開示は、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つを対象に投与することによって、対象においてぶどう膜炎を処置する方法を提供する。いくつかの態様では、本方法は、表１又は表１Ａで挙げられるペプチドの何れか１つを対象に投与することを含む。本開示は、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つを含む組成物を対象に投与することによって、対象においてぶどう膜炎を処置する方法をさらに提供する。

【0103】

[00099] 本開示は、炎症性細胞からの炎症メディエーターのＭＡＲＣＫＳ関連放出を含む、眼での、特に白血球などの細胞の、ＭＡＲＣＫＳ関連細胞遊走過程を阻止するための方法を提供する。

【0104】

[000100] 本開示は、その細胞の小胞内に含有される少なくとも１つの炎症メディエーターを含む、眼における少なくとも１つの炎症性細胞を、少なくとも１つのペプチドの非存在下で起こる同じタイプの炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出と比較したときに炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出を減少させるための有効量の本明細書中で開示されるペプチドと接触させることを含む、少なくとも１つの炎症性細胞からの少なくとも１つの炎症メディエーターのエキソサイトーシス放出を阻害する方法も提供する。

【0105】

[000101] いくつかの態様では、炎症性細胞は、白血球、顆粒球、好塩基球、好酸球、単球、マクロファージ又はそれらの組み合わせである。いくつかの態様では、少なくとも１つの炎症性細胞の少なくとも１つの顆粒から放出される炎症メディエーターは、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、好酸球ペルオキシダーゼ（ＥＰＯ）、主要塩基性タンパク質［ＭＢＰ］、リゾチーム、グランザイム、ヒスタミン、プロテオグリカン、プロテアーゼ、走化性因子、サイトカイン、アラキドン酸の代謝産物、デフェンシン、殺菌性浸透性増強タンパク質（ＢＰＩ）、エラスターゼ、カテプシンＧ、カテプシンＢ、カテプシンＤ、ベータ－Ｄ－グルクロニダーゼ、アルファ－マンノシダーゼ、ホスホリパーゼＡ_２、コンドロイチン－４－硫酸、プロテイナーゼ３、ラクトフェリン、コラゲナーゼ、補体活性化因子、補体受容体、Ｎ－ホルミルメチオニル－ロイシル－フェニルアラニン（ＦＭＬＰ）受容体、ラミニン受容体、チトクロムｂ_５５８、単球－走化性因子、ヒスタミナーゼ、ビタミンＢ１２結合タンパク質、ゼラチナーゼ、プラスミノーゲン活性化因子、ベータ－Ｄ－グルクロニダーゼ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。好ましくは、炎症メディエーターは、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、好酸球ペルオキシダーゼ（ＥＰＯ）、主要塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、リゾチーム、グランザイム、インターロイキン、サイトカイン及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0106】

[000102] 本開示はさらに、本ペプチドの非存在下で起こる少なくとも同じタイプの炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出と比較した場合に、炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出を減少させるために、細胞内側の小胞内に含有される少なくとも１つの炎症メディエーターを含む少なくとも１つの炎症性細胞を含む対象の組織及び／又は体液に本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つを含む治療的有効量の医薬組成物を投与することを含む、対象の眼組織又は眼液における少なくとも１つの炎症性細胞からの少なくとも１つの炎症メディエーターの放出を阻害する方法を提供する。より具体的には、炎症メディエーターの放出の阻害は、炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出を阻止するか又は減少させることを含む。

【0107】

[000103] とりわけ、本開示は、ＭＡＮＳペプチド（即ちＮ－ミリストイル－ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１））又はそれらのペプチド断片を含む治療的有効量の医薬組成物の投与を含む、対象の眼において炎症を軽減させる方法を提供する。いくつかの態様では、本ペプチドは、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶ（配列番号２）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡ（配列番号４）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡ（配列番号７）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥ（配列番号１１）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧ（配列番号１６）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰ（配列番号２２）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲ（配列番号２９）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥ（配列番号３７）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡ（配列番号４６）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡ（配列番号５６）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡ（配列番号６７）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥ（配列番号７９）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧ（配列番号９２）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫ（配列番号１０６）；ＧＡＱＦＳＫＴＡＡ（配列番号１２１）；ＧＡＱＦＳＫＴＡ（配列番号１３７）；ＧＡＱＦＳＫＴ（配列番号１５４）；ＧＡＱＦＳＫ（配列番号１７２）；ＧＡＱＦＳ（配列番号１９１）及びＧＡＱＦ（配列番号２１１）である。これらのペプチドは、Ｎ末端アミノ酸でミリストイル部分を含有する代わりに、Ｎ末端アミノ酸で化学的部分を含有しないか又は非ミリストイルの化学的部分を含有し、及び／又はＣ末端アミノ酸で化学的部分を含有し、例えば、本明細書中に記載のようなＮ末端アセチル基及び／又はＣ末端アミド基などを含有する。ＭＡＮＳペプチド及びそのＮ末端ミリストイル化断片における疎水性Ｎ末端ミリストイル部分の存在は、原形質膜とのそれらの適合性及びおそらく原形質膜へのそれらの透過性を促進し、本ペプチドが細胞により取り込まれることを可能にし得る可能性がある。（ミリストイル化される）ＭＡＮＳペプチド内及びミリストイル化ＭＡＮＳペプチド断片内のさらなる官能基及びそれらの相互作用がそれらの相対的な膜透過性を増強し得ると同時に、少なくとも部分的に、膜脂質二重層へのミリストイル基の疎水性挿入は、細胞の原形質膜へのＭＡＮＳペプチド及びミリストイル化ＭＡＮＳペプチド断片の分配を可能にするのに十分である、分配係数若しくは最大１０^４Ｍ^－１の脂質との見かけの会合定数又は約８ｋｃａｌ／ｍｏｌの単位ギブズ自由結合エネルギーを提供し得る。本断片は、それらの個々の構造の代表である分配係数及び膜親和性をそれぞれ示し得る。本断片は、固相ペプチド合成によるなど、当技術分野で公知のペプチド合成方法によって調製され、高圧液体クロマトグラフィーによるなど、当技術分野で公知の方法により精製され得る。各ペプチドの分子量は、それぞれが適切な分子量でピークを示すことで、質量分析により確認され得る。本開示の方法における個々のペプチドの有効性及び個々のペプチドの組み合わせ（例えば本ペプチドの２つの組み合わせ、本ペプチドの３つの組み合わせ、本ペプチドの４つの組み合わせ）は、本明細書中で開示される実施例で記載される手順を使用して不要な実験なく容易に決定され得る。ペプチドの組み合わせが使用される場合、好ましい組み合わせは、本ペプチドのうち２つを含み；本ペプチドの好ましいモル比は、５０：５０（即ち１：１）～９９．９９：０．０１であり得、この比は、本明細書中で開示される実施例で記載される手順を使用して容易に決定され得る。

【0108】

[000104] ヒト又は動物での使用のための、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つの医薬組成物など、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つの治療的有効量を含む組成物の投与は、炎症性顆粒球細胞が存在する、又は炎症性顆粒球細胞が侵入する組織の表面と接触して、組織中若しくは組織上部位に又は体液含有層にペプチドを提供し、従って、本ペプチドが炎症性顆粒球細胞と接触することを可能にする。一態様では、このような組成物の投与は、炎症の最初の発症若しくは最初の検出又はヒト若しくは動物による炎症の最初の知覚時に、又は、さもなければ本ペプチドの非存在下で起こるであろう炎症の量の軽減のために、ヒト又は動物での炎症レベルの最初の知覚可能な変化時に、なされ得る。別の態様では、投与は、さもなければ本ペプチドの非存在下で起こるであろうさらなる炎症の量の軽減のために、ヒト又は動物での組織で進行している炎症の間になされ得る。投与の量及び頻度が、臨床評価により決定され得、疾患又は炎症の起源及び関与する組織の広がり及び患者の年齢及び体格の関数であり得る一方で、本医薬組成物の初回投与から２～８時間後、好ましくは６～１２時間後に医薬組成物の投与が反復され得ることが予想される。

【0109】

[000105] 本開示の方法は、対象における少なくとも１つの炎症メディエーター分泌細胞又は組織からの炎症メディエーター分泌をまた減少させるための本明細書中に記載のような本開示のペプチドの投与によって対象において炎症を軽減させるためにも有用であり、これにより、前記ペプチドの前記投与がない場合に起こるものと比較して、対象における炎症メディエーター分泌が減少する。

【0110】

[000106] いくつかの態様では、対象は、哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ウマ及びネコである。

【0111】

[000107] 本明細書中で開示されるペプチド及び組成物の投与の方法は、局所投与、硝子体内注射（ＩＶＴ）、結膜下注射、テノン嚢下注射（ＳＢＴ）、球後注射、眼周囲注射、網膜下注射、強膜内、経強膜的、基質内、静脈内注射、眼内投与又は何らかのそれらの組み合わせによるものであり得る。眼への投与は一般に、点眼薬、眼用ゲル、軟膏、軟膏、埋め込み物、ミクロスフェア又はリポソーム性処方物を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示されるペプチド及び組成物の投与の方法は、ＩＶＴ注射及び局所投与の組み合わせによるものである。例えば、いくつかの実施形態では、本組成物は、ＩＶＴ注射とそれに続く局所投与により；又は局所投与とそれに続くＩＶＴ注射により、投与される。いくつかの実施形態では、本組成物は、ＩＶＴ注射を含む第１の投与セッションで投与される。ＩＶＴ注射を含む第１の投与セッションには、さらなるＩＶＴ注射を含む１回以上の投与セッションが続き得る。ＩＶＴ注射は、毎日、１日おき、３、４、５若しくは６日おき、又は毎週であり得る。いくつかの実施形態では、第１の又はその後の続くＩＶＴ注射投与セッションには、本ペプチド又は組成物の局所投与を含む１回以上の投与セッションが続く。例えば、本ペプチド又は組成物の局所投与を含む１回以上の投与セッションは、毎日、１日おき、３、４、５若しくは６日おき、又は毎週であり得る。局所投与は１日１回、１日２回、１日３回又は１日４回であり得る。いくつかの実施形態では、ＩＶＴ注射後の局所投与は、ぶどう膜炎の軽減など、治療効果の促進を提供する。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、最初のＩＶＴ注射とそれに続く、例えば２、３、４、５、６、７日又はそれを超える日数にわたる毎日の局所投与を含む。いくつかの実施形態では、毎日の局所投与はそれぞれ、１日１、２、３又は４回の投与を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本組成物は、およそ８時間ごとに１回、局所的に投与される。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、最初のＩＶＴ注射とそれに続く４日間にわたる１日３回の局所投与を含む。他の実施形態では、本明細書中で提供されるペプチド及び組成物の投与は、局所投与のみによる。いくつかの実施形態では、局所投与は治療効果の促進をもたらす。いくつかの実施形態では、局所投与は、ＩＶＴなどの眼への他の投与方法と比較してより安全及び／又はより有効である。

【0112】

[000108] さらに、対象に対する投与は、抗生物質、抗ウイルス化合物、抗寄生虫化合物、抗炎症化合物及び免疫調整物質からなる群から選択される第２の分子の投与をさらに含み得る。本明細書中で使用される場合、免疫調整物質又は免疫調整化合物は、免疫系の機能に影響を与え得る薬剤である。いくつかの態様では、免疫調整化合物は、免疫系の正常化又は調節を助ける。免疫調整物質の非限定例としては、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス及びエベロリムスが挙げられる。

【0113】

[000109] ＭＡＲＣＫＳは、アクチン結合タンパク質であり、細胞骨格の配向及び機能及び細胞遊走に非常に重要である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示されるＮ末端ＭＡＲＣＫＳペプチドの投与は、このような疾患に罹患している患者における炎症性疾患状態が付随する損傷又は感染の領域へのヒト好中球などの炎症性細胞の方向性のある遊走を阻害する。

【0114】

[000110] 本開示は、細胞内側の小胞内に含有される少なくとも１つの炎症メディエーターを含有する対象の組織又は体液中に含有され得る何らかの既知の炎症性細胞との、上記及び本願を通じて記載されるペプチドの接触及び／又は投与を含む。炎症性細胞は好ましくは、白血球、より好ましくは顆粒球であり、これらは、好中球、好塩基球、好酸球又はそれらの組み合わせとしてさらに分類され得る。本方法で接触させられる炎症性細胞は、単球／マクロファージでもあり得る。

【0115】

[000111] より具体的には、本開示は、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つで細胞の細胞質内の１つ以上の顆粒又は小胞中に炎症メディエーターを含有する炎症性細胞を標的とすることを含む。いくつかの態様では、この細胞を本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つと接触させる。好ましくは、本ペプチドと炎症性細胞との接触は、これらの炎症性細胞が眼の組織又は眼の液体中に存在するぶどう膜炎有病対象又は罹患対象への投与を介するものである。本ペプチドの投与又は細胞との接触時に、本ペプチドは、炎症メディエーターを含有する細胞内顆粒又は小胞の膜へのネイティブＭＡＲＣＫＳタンパク質の結合に対して競合的に競合し、その結合を競合的に阻害する。炎症性細胞における小胞へのＭＡＲＣＫＳタンパク質の結合が遮断されると、その結果、これらの細胞におけるこれらの小胞は、細胞から炎症メディエーターのそれらの内容物をエキソサイトーシス的に放出するよう刺激された場合にそれらが通常行うように細胞の原形質膜に移動しない。従って、本開示の方法は、細胞の原形質膜への小胞の移動を阻害し、次に炎症性細胞からの炎症メディエーターの放出を減少させる。炎症性細胞からのメディエーターの放出速度及び放出量の両方とも、投与されるペプチドの濃度及び炎症性細胞との本ペプチドの接触持続時間に依存するので、経時的に細胞から放出される炎症メディエーターの量が減少する。

【0116】

[000112] いくつかの態様では、炎症部位が対象における炎症部位での疾患、状態、外傷、異物又はそれらの組み合わせの侵入の開始の結果により生じている、対象の炎症がある眼への、本明細書中に記載のような治療的有効量のＭＡＮＳペプチド又はそれらの断片の投与は、炎症部位の浸潤白血球から放出される炎症メディエーターの量を減少させ得、この白血球は好ましくは顆粒球である。いくつかの態様では、本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つの投与は、炎症部位に浸潤する顆粒球などの白血球から放出される炎症メディエーター量を減少させ得る。いくつかの態様では、投与は、同じ条件下で試験される本ペプチドの非存在下で前記顆粒球から放出される前記炎症メディエーターの量と比較して、約１％～約９９％、例えば約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％の範囲で、炎症部位において顆粒球から放出される炎症メディエーターの減少を引き起こす。

【0117】

[000113] いくつかの態様では、炎症刺激部位が前記部位への炎症性刺激物質の炎症刺激量の投与によって生じている動物での炎症刺激部位に対する治療的有効量の本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つの投与は、前記炎症性刺激物質の同一である炎症刺激量の存在下において本ペプチド非存在下で前記顆粒球から放出される前記炎症メディエーターの量と比較した場合、前記炎症刺激部位で前記炎症性刺激物質により刺激される顆粒球から放出される炎症メディエーターの量を、約１％～約１００％、例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％又は約９９％、減少させ得る。

【0118】

[000114] 本明細書中のインビトロの実施例で使用される炎症性刺激物質の例は、ホルボール１２－ミリスタート１３－アセタート（ＰＭＡ）である。単球走化性因子タンパク質（ＭＣＰ－１）は、ヒスタミンが放出される好塩基球の脱顆粒においてＣ５ａとほぼ同程度有効であり、ＩＬ－８よりもかなり強力である。ヒスタミン放出は、ケモカイン（即ち走化性因子サイトカイン）、ＲＡＮＴＥＳ及びＭＩＰ－１での刺激後に起こり得る。

【0119】

[000115] いくつかの態様では、本ペプチドは、次の範囲の間にある全てのサブ範囲及び値を含め、約１μＭ～約１０ｍＭ、例えば約１０μＭ、約２０μＭ、約３０μＭ、約４０μＭ、約５０μＭ、約６０μＭ、約７０μＭ、約８０μＭ、約９０μＭ、約１００μＭ、約１５０μＭ、約２００μＭ、約２５０μＭ、約３００μＭ、約３５０μＭ、約４００μＭ、約４５０μＭ、約５００μＭ、約５５０μＭ、約６００μＭ、約６５０μＭ、約７００μＭ、約７５０μＭ、約８００μＭ、約８５０μＭ、約９００μＭ、約９５０μＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ又は約１０ｍＭなどの濃度で投与される。

【0120】

[000116] いくつかの態様では、本ペプチドは、次の範囲の間にある全てのサブ範囲及び値を含め、約１μｇ～約５ｍｇ、例えば約１０μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ又は約５ｍｇなどの量で投与される。

【0121】

[000117] いくつかの実施形態では、本ペプチドは、次の範囲の間にある全てのサブ範囲及び値を含め、約０．０１ｍＬ～約１ｍＬ、例えば約０．０１ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．７５ｍＬ又は約１ｍＬなどの体積で投与され得る。

【0122】

[00118] 別の実施形態では、顆粒球は、動物、好ましくはヒト、の眼の組織上又は組織中に存在し、本ペプチドは、本ペプチドを含む医薬組成物、例えば水溶液中に本ペプチドを含む医薬組成物により投与され、この組成物は、局所適用によるか又は眼内注射により投与されるか、又は例えばゲル、軟膏、軟膏、埋め込み物、ミクロスフェア、マイクロエマルション又はリポソーム性処方物の形態の本ペプチドを含む医薬組成物が有用であり得る。

【0123】

[000119] いくつかの態様では、本明細書中で開示されるペプチドによる炎症メディエーターの放出の減少は、本ペプチドの非存在下で炎症性細胞から放出される量と比較した場合、少なくとも約５％～少なくとも約９９％の減少の範囲であり得る。いくつかの態様では、本ペプチドは、本ペプチドの非存在下で炎症性細胞から放出される量と比較した場合、少なくとも１つの炎症性細胞から放出される炎症メディエーターの量を約１％～約９９％、例えば約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％減少させ得る。

【0124】

[000120] さらに、本開示は、対象においてぶどう膜炎を処置する方法での使用のための本明細書中で開示されるペプチドの何れか１つを含む組成物を提供し、この方法は、対象に本組成物を投与することを含む。

【0125】

[000121] 本開示はまた、対象においてぶどう膜炎を処置する方法での使用のための、（ａ）参照配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４～２４個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び（ｃ）（ａ）又は（ｂ）で定められるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一性を有するアミノ酸配列、からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドを含む組成物も提供し、この方法は、対象に本組成物を投与することを含む。

【0126】

[000122] 本開示をここで記載してきたが、例示目的のためにのみ本明細書中に含まれ、本開示の限定であることを意図するものではない特定の実施例を参照して、これらを例示する。

【実施例】

【0127】

実施例
実施例１：ウサギにおけるＬＰＳ誘導性急性ぶどう膜炎モデルの作製
[000123] １０匹の雄New Zealand Whiteウサギ（オリクトラグス・クニクルス（Oryctolagus cuniculus））、３～４カ月齢及び体重約２～３ｋｇをCovance,Denver,PAから購入した。３０％湿度、室温（６８±２°Ｆ）にて１２時間光／１２時間暗の環境条件下でステンレス鋼製のケージ中でウサギを飼育した。これらに対して自由摂餌及び摂水とした。ウサギを試験環境に１週間順応させ、試験参加に対する適切性を判定するための獣医師による身体検査を行い、受け入れられたウサギを無作為に試験群に割り当てた。

【0128】

[000124] ウサギを鎮静化した後、ケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ、ＩＭ）及びデクスメデトミジン（０．０５ｍｇ／ｋｇ、ＩＭ）の注射を行い、局所５％ベタジン溶液を使用して眼を無菌的に準備し、続いて滅菌生理食塩水ですすぎ、０．５％プロパラカインＨＣＬの１滴の適用を行った。ワイヤ開瞼器（wire lid speculum）を配置し、コリブリ型鉗子を用いて結膜を穏やかに把持し、レンズとの接触を回避するために針を僅かに後方に向けて、上の角膜縁の２ｍｍ後方に注射（２７～３０Ｇ針）を行った（扁平部を通じて）。注射後、針をゆっくりと引き抜き、セルローススポンジを使用して、注射部位を１分間圧迫し、液体の逆流を防いだ。次に眼用の抗生物質溶液の１滴を局所的に眼の表面に適用した。

【0129】

[000125] 図１で示されるように、生理食塩水を注入した対照眼組織（図１、左パネル）と比較した場合、眼組織へのＬＰＳ注射の２４時間後、腫脹及び炎症性細胞浸潤物が明らかであった（図１、右パネル）。従って、実験室で急性ぶどう膜炎のこのモデルが確立された。

【0130】

実施例２－アセチル化ペプチド１０６はウサギにおいてＬＰＳ誘導性急性ぶどう膜炎を寛解させる。
[000126] 実験プロトコール：ウサギを以下で示されるように各３匹ずつの群に分けた。試験開始から２４時間後に全群のウサギを分析した。

【0131】

[000127] 群Ａ（ＬＰＳ）：上記のように２匹のウサギの右眼に５０μｌ ＰＢＳ中の１０ｎｇ ＬＰＳを硝子体内注射した。この手順により、数時間内に急性ぶどう膜炎が生じ、注射後～２４時間でピークに達する。

【0132】

[000128] 群Ｂ：（ＬＰＳ＋ＢＩＯ－１１００６）：上記のような５０μｌ ＰＢＳ中の１０ｎｇ ＬＰＳを３匹のウサギの右目に硝子体内注射した。２時間後、次に、ウサギの右目にＮ末端アミノ酸でアセチル化されているペプチド１０６である５０μｌ ＢＩＯ－１１００６（「アセチル化ペプチド１０６」又は「ａｃ－ペプチド１０６」）（１００μＭ）を硝子体内注射した。

【0133】

[000129] 群Ｃ：（ＢＩＯ－１１００６＋ＬＰＳ）。３匹のウサギの右目にアセチル化ペプチド１０６（１００μＭ）を硝子体内注射した。２時間後、ウサギの右目に５０μｌ ＰＢＳ中の１０ｎｇ ＬＰＳを硝子体内注射した。

【0134】

[000130] 群Ｄ：（ＢＩＯ－１１００６のみ）：３匹のウサギの右目にＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）（１００μＭ）のみを硝子体内注射した。

【0135】

[000131] ペントバルビタールナトリウムＩＶ（Euthasol）の過剰量を介して実験開始から２４時間後に全ウサギを安楽死させ、以下のような炎症の測定のために、眼及び眼液を分析した。

【0136】

[000132] 眼の検査、刺激及び組織学：盲検で独立した獣医学の病理学者によって、眼の刺激（表２）及び炎症及び組織病理学を評価した。眼の表面の形態及び前眼部及び後眼部の炎症を評価するために、スリットランプ生体顕微鏡及び間接眼底鏡を使用した完全な眼の検査を実験開始から２４時間後に行った。眼の組織病理学のために、安楽死及び眼房水の回収後、眼を摘出し、４％リン酸緩衝グルタルアルデヒドにすぐに１時間移し、次に１０％リン酸緩衝ホルムアルデヒドに一晩移した。眼をパラフィン包埋し、切片を作製し（５μｍ厚さ）、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、光学顕微鏡を使用して調べた。

【0137】

【表11】

【0138】

[000133] 図２で示されるように、ＬＰＳ処置陰性対照ウサギと比較した場合、ＬＰＳ２時間後のＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）でのウサギの処置によって、刺激／炎症指標の顕著な低下が起こった。ＬＰＳ前のＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）でのウサギの前処理は、刺激／炎症指標に影響がなかった。また、ＢＩＯ－１１００６単独でのウサギの処置は、何ら顕著な応答を引き起こさなかった。

【0139】

[000134] 炎症の眼房水評価：安楽死直後に、血液混入を回避するために透明角膜アプローチを通じて３０ゲージ針を使用して眼房水を吸引した。試料を氷上に置き、吸引と同じ日に細胞数の計数を行った。

【0140】

[000135] 図３で示されるように、ＬＰＳ２時間後のＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）でのウサギの処置によって、ＬＰＳ処置陰性対照ウサギと比較した場合、眼房水中で炎症性細胞浸潤物の完全な寛解が起こった。ＬＰＳ前のＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）でのウサギの前処置は、炎症性細胞浸潤物に対して影響がなかった。また、ＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）単独でのウサギの処置は、何ら顕著な応答を引き起こさなかった。

【0141】

[000136] 白血球計数：細胞ペレットを１ｍｌのＰＢＳ中で再懸濁し、サイトスピン調製を行った。総白血球の定量のために異なる計数に対してスライドをＨ＆Ｅで染色した。この実験からの代表的な画像を図４で示す。ＬＰＳで処置したウサギにおいて、眼において中等度から重度のＰＭＮ浸潤が見られた（上左パネル）。対して、ＬＰＳで処置し、続いてＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）で処置したウサギでは、軽度ＰＭＮ浸潤しか見られなかった（上右パネル）。従って、ＬＰＳ処置後のＢＩＯ－１１００６の投与は、ＬＰＳ誘導性ＰＭＮ浸潤に対する治療効果を有する。２つのさらなる対照群も評価した。ＢＩＯ－１１００６で処置し、次にＬＰＳで処置したウサギは、ＰＭＮ浸潤の軽減を示さず（下左パネル）、一方でＢＩＯ－１１００６単独（ＬＰＳなし）での処置は、眼へのＰＭＮ浸潤に影響がなかった（下右パネル）。まとめると、図２～４で示される結果から、ＢＩＯ－１１００６（アセチル化ペプチド１０６）がぶどう膜炎に対する治療効果を有し、眼へのＰＭＮの浸潤を阻害することにより眼での炎症及び刺激を寛解させることが明らかになる。

【0142】

実施例３：ラットモデルにおけるＢＩＯ－１１００６での実験的自己免疫性慢性ぶどう膜炎の処置
[000137] ぶどう膜炎はまた、患者の免疫系が網膜の抗原又はタンパク質に対して応答する自己免疫障害としても特徴付けられ得る。自己免疫性ぶどう膜炎は、米国における重篤な失明のおよそ１０％を占める。げっ歯類自己免疫性ぶどう膜炎モデルは特徴がよく分かっており、ぶどう膜炎を処置するための治療アプローチを評価するために一般的に使用されている。このモデルにおいて、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）中で保存性が高い網膜ペプチドを用いてラットに免疫付与した。第９日と第１１日との間に、疾患が発症し、宿主免疫細胞が網膜及びぶどう膜と反応し；この病態は、ヒトで見られる自己免疫性ぶどう膜炎の主要な特徴を模倣する（Gilger BC,Immune relevant models for ocular inflammatory diseases,ILAR J.2018,Feb 21.doi:10.1093/ilar/ily002(Epub)。

【0143】

[000138] 免疫介在性慢性ぶどう膜炎のラットモデル：約６～８週齢及び１２５～１７５ｇ体重の両方の性別のLewisラットをCharles River,Kingston,NYから購入した。同じ性別のラットをケージあたり２匹で飼育し、自由接餌及び摂水とし、３０％湿度及び６８～７９°Ｆで、１２時間光／１２時間暗の光サイクル下で１週間順応させた。次にラットを下記のような試験群に無作為に割り当てた。ラットを各４匹（雄２匹及び雌２匹）の３つの群に分けた。

【0144】

[000139] 生存中及び死後分析の両方のために、関与する全ての獣医学眼科医及び病理医に対して、施される処置について盲検化した。炎症性／刺激スコアについて全てのラットを毎日監視した。動物をラット各４匹ずつの次の群に分けた：群Ａ：免疫付与なし；生理食塩水で処置（対照）；群Ｂ：ヒトＩＲＢＰ及びフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）で免疫付与及び負荷；及び群Ｃ：ＩＲＢＰ及びＦＣＡで免疫付与及び負荷、１００μＭのＢＩＯ－１１００６の硝子体内（ＩＶＴ）注射及び局所処置で処置。

【0145】

[000140] 免疫介在型のぶどう膜炎の生成：酸素中３％イソフルランへの曝露でラットを麻酔し、次に尾の基部に（１００μｌ）及び各大腿（各５０μｌ）においてＦＣＡで乳化したヒトＩＲＢＰペプチド（３０μｇ）を注射した。ぶどう膜炎発症は、このモデルにおいて免疫付与後９～１１日に起こる（Gilger BC、上で引用）。

【0146】

[000141] 処置：免疫付与から１０日後（ぶどう膜炎がこのモデルで始まった時間）に、実施例１下の上記注射プロトコール（ラット用に改変したように）を使用してＩＶＴ注射（５μｌ）によって１００μＭ濃度のＢＩＯ－１１００６又は生理食塩水対照を投与し、ＩＶＴ注射により１００μＭ ＢＩＯ－１１００６で又は生理食塩水（群１；対照）でラットの群を処置した。ＢＩＯ－１１００６注射後、ラットの１群をＢＩＯ－１１００６（群２、ＩＶＴのみ）のＩＶＴ注射でさらに４日間処置し、一方で第３の群には、１００μＭ ＢＩＯ－１１００６を４日間にわたり１日３回、局所的に適用した（群３、ＩＶＴ＋局所）。第１４日にＣＯ_２に曝露することによって全ラットを安楽死させた。

【0147】

[000142] 炎症の眼房水測定：安楽死の直後に、血液混入を回避するために角膜アプローチを通じて３０ゲージ針を使用して眼房水を吸引した。次に、眼房水を２つのアリコートに分け、一方はサイトカイン分析用とし、他方は細胞計数用とした。細胞計数試料を氷上に置き、吸引と同じ日に細胞の計数を行った。サイトカイン試料をドライアイス上に置き、－８０℃で保管した。

【0148】

[000143] 眼の組織病理学のために、安楽死後及び眼房水回収後に眼を摘出し、すぐに４％リン酸緩衝グルタルアルデヒドに１時間、次に１０％リン酸緩衝ホルムアルデヒドに一晩又は処理まで移した。次に、眼をパラフィン包埋し、切片を作製し（５μｍ）、Ｈ＆Ｅで染色し、光学顕微鏡を使用して調べた。結果を図６で示す。

【0149】

[000144] 眼の検査、刺激及び組織病理学的スコア：盲検化した独立の獣医学の眼科医及び病理医によってそれぞれ、眼の炎症（表３）及び組織病理学（表４）グレードが与えられた。眼の表面の形態及び前眼部及び後眼部の炎症を評価するためのスリットランプ生体顕微鏡及び間接眼底鏡を使用した完全な眼の検査を免疫付与後毎日行った。

【0150】

[00145] 慢性前部ぶどう膜炎の自己免疫モデルは、眼での白血球流入及び炎症促進性サイトカイン産生を特徴とする。この実験からの結果は、本ペプチドの忍容性が良好であり、ぶどう膜炎に対して治癒効果を有することを示す。例えば、図５で示されるように、ＢＩＯ－１１００６は、第１０日で始まるＩＶＴ注射によってラットにおける実験的な自己免疫性ぶどう膜炎において炎症を寛解させ（バー２）；その効果は、ＩＶＴ後４日間の１００μＭ ＢＩＯ－１１００６の局所適用でさらに高められる（バー３）。さらに、図６で示されるように、ＢＩＯ－１１００６で処置した実験的自己免疫ぶどう膜炎ラットの前部ぶどう膜において、虹彩及び毛様体組織腫脹及び主に単核である細胞の浸潤が劇的に減少する。

【0151】

【表12】

【0152】

【表13】

【0153】

実施例４：ペプチドの臨床効果の特徴評価
[000146] ぶどう膜炎、例えば、ウサギ及びラットにおける、自己免疫性慢性ぶどう膜炎（実施例３に記載）及びＬＰＳ誘導性急性ぶどう膜炎（実施例１及び２に記載）などの少なくとも１つの症状を処置するか又は寛解させるそれらの能力について、表５で挙げられる次のペプチドを試験する。

【0154】

【表14】

【0155】

[000148] 前出の実施例は、本開示の例示であり、それを限定するものと解釈されるものではない。本開示は、次の特許請求の範囲により定められ、特許請求の範囲の同等物がそこに含まれるものとする。

【0156】

[000149] 本明細書中に記載の方法は全て、本明細書中で別段の指定がない限り、又は別段明らかに文脈と矛盾しない限り、あらゆる適切な順序で行われ得る。本明細書中で提供されるありとあらゆる例又は代表的な言語（例えば「など」）の使用は、本発明の理解を単により良好に明るくするものであり、別段の主張がない限り本発明の範囲を限定することを提起するものではない。明細書中の中に、本発明の実施に必須のものとして何らかの非主張要素を示すものと解釈されるべき語はない。

【0157】

[000150] 本明細書中で引用される、刊行物、特許出願及び特許を含む参考文献は全て、各参考文献が個々に及び具体的に参照により組み込まれ、本明細書中でその全体において示される場合と同程度に、参照により本明細書によって組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【配列表】

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【国際調査報告】