特表 2022-537772 新規ＥＧＦＲ阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-08-29

(54)【発明の名称】新規ＥＧＦＲ阻害剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20220822BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220822BHJP

   A61K 31/454 20060101ALI20220822BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220822BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 138

C07D487/04 CSP

A61P35/00

A61K31/454

A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021576027

(86)(22)【出願日】2020-06-19

(85)【翻訳文提出日】2022-02-16

(86)【国際出願番号】 EP2020067057

(87)【国際公開番号】W WO2020254547

(87)【国際公開日】2020-12-24

(31)【優先権主張番号】19181772.5

(32)【優先日】2019-06-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】306021192

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ドレンテ， コジモ

(72)【発明者】

【氏名】ゴアグラー， アニック

(72)【発明者】

【氏名】ヘウィングス， デーヴィッド スティーブン

(72)【発明者】

【氏名】ジェスキー， ゲオルク

(72)【発明者】

【氏名】クーン， ベルント

(72)【発明者】

【氏名】ナーゲル， イヴォン アリス

(72)【発明者】

【氏名】ノルクロス， ロガー ダビト

(72)【発明者】

【氏名】オブスト－サンダー， クリスタ ウルリケ

(72)【発明者】

【氏名】リッチ， アントニオ

(72)【発明者】

【氏名】ルーハー， ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】シュタイナー， サンドラ

【テーマコード（参考）】

4C050

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C050AA01

4C050BB05

4C050CC04

4C050EE02

4C050FF02

4C050GG01

4C050HH04

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB03

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC20

(57)【要約】

本発明は、本明細書に記載の一般式（Ｉ）

を有する新規化合物、該化合物を含む組成物、および該化合物を使用する方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

の化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

前記化合物が

である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。

【請求項3】

治療的に活性な物質として使用するための、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項4】

請求項１または２に記載の化合物と、治療的に不活性な担体とを含む、医薬組成物。

【請求項5】

がんの処置または予防において使用するための、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項6】

非小細胞肺がんの処置または予防において使用するための、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項7】

がんを処置または予防するための、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項8】

非小細胞肺がんを処置または予防するための、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【請求項9】

がんを処置または予防するための医薬を調製するための、請求項１または２に記載の化合物の使用。

【請求項10】

非小細胞肺がんを処置または予防するための医薬を調製するための、請求項１または２に記載の化合物の使用。

【請求項11】

有効量の請求項１または２に記載の化合物を投与することを含む、がんを処置または予防するための方法。

【請求項12】

有効量の請求項１または２に記載の化合物を投与することを含む、非小細胞肺がんを処置または予防するための方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＥＧＦＲ突然変異体を含むＴ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ／Ｃ７９７Ｓ、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８５８Ｒ／Ｃ７９７Ｓの選択的アロステリック阻害剤である化合物、それらの製造、それらを含有する医薬組成物、および治療的活性物質としてのそれらの使用を提供する。

【0002】

本発明は、式（Ｉ）

の新規化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【背景技術】

【0003】

受容体チロシンキナーゼのＨＥＲファミリは、細胞増殖、分化、および生存のメディエータである。この受容体ファミリには、４つの異なるメンバ、すなわち、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、またはＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）、およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）が含まれる。リガンドが結合すると、受容体はホモ二量体およびヘテロ二量体を形成し、続く内因性チロシンキナーゼ活性を活性化することにより、受容体の自己リン酸化および下流シグナル伝達分子が活性化される（Ｙａｒｄｅｎ，Ｙ．，Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，ＭＸ．Ｕｎｔａｎｇｌｉｎｇ ｔｈｅ ＥｒｂＢ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｎｅｔｗｏｒｋ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００１ Ｆｅｂ；２（２）：１２７－３７）。過剰発現または突然変異によるＥＧＦＲの脱調節は、結腸直腸がん、膵臓がん、神経膠腫、頭頸部がん、および肺がんを含む多くの種類のヒトがん、特に非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に関係しており、いくつかのＥＧＦＲ標的化剤が長年にわたって開発されている（（Ｃｉａｒｄｉｅｌｌｏ，Ｆ．，およびＴｏｒｔｏｒａ，Ｇ．（２００８）．ＥＧＦＲ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３５８，１１６０－１１７４）。ＥＧＦＲチロシンキナーゼの可逆的阻害剤であるエルロチニブ（タルセバ^{（登録商標）}）は、再発ＮＳＣＬＣの治療薬として数多くの国で承認されている。

【0004】

腫瘍が体細胞キナーゼドメイン変異を有するＮＳＣＬＣ患者の一部では、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の顕著な単剤活性が観察されるが、野生型ＥＧＦＲ患者における臨床的有益性は大幅に低下する（Ｐａｅｚ，Ｊ．ら（２００４）ＥＧＦＲ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ ３０４，１４９７－１５００）。ＥＧＦＲの最も一般的な体細胞変異は、最も一般的な突然変異であるデルタ７４６～７５０によるエキソン１９欠失、および最も高頻度な変異であるＬ８５８Ｒによるエキソン２１アミノ酸置換である（Ｓｈａｒｍａ ＳＶ，Ｂｅｌｌ ＤＷ，Ｓｅｔｔｌｅｍａｎ Ｊ，Ｈａｂｅｒ ＤＡ．Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２００７ Ｍａｒ；７（３）：１６９－８１）。

【0005】

治療抵抗性は高頻度で発生し、受容体のＡＴＰ部位内の二次的Ｔ７９０Ｍ変異に起因することが多い。いくつかの開発された変異選択的不可逆性阻害剤はＴ７９０Ｍ変異体に対して高度に活性であるが、これらの有効性は、鍵となる共有結合をこれらが形成するシステイン残基であるＣ７９７Ｓの後天性変異によって損なわれる可能性がある（Ｔｈｒｅｓｓ，Ｋ．Ｓ．ら．Ａｃｑｕｉｒｅｄ ＥＧＦＲ Ｃ７９７Ｓ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＡＺＤ９２９１ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｈａｒｂｏｒｉｎｇ ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２１，５６０-５６２（２０１５））。Ｃ７９７Ｓ変異は、Ｔ７９０Ｍ標的化ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性の有力なメカニズムであることがＷａｎｇによってさらに報告された（Ｗａｎｇら．ＥＧＦＲ Ｃ７９７Ｓ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｉｒｄ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ Ｔ７９０Ｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１６；９：５９）。オシメルチニブに対する耐性を引き起こす更なる突然変異は、Ｙａｎｇによって説明されており、たとえば、ＮＳＣＬＣ処置におけるＥＧＦＲ^{Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ}およびＥＧＦＲ^{Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ}耐性変異の標的化に関する総説におけるＬ７１８Ｑの報告がある（Ｙａｎｇ ら，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ Ｎｏｖｅｌ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ Ｔｈｉｒｄ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ＥＧＦＲ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ ｉｎ Ｎｏｎ-Ｓｍａｌｌ Ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＤＯＩ：１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１７－２３１０）Ｌｕら（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＥＧＦＲ^{Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ} ａｎｄ ＥＧＦＲ^{Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ}ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＮＳＣＬＣ：Ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２０１８；１－３２）。

【0006】

最も利用可能なＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤はキナーゼのＡＴＰ部位を標的とするので、例えば薬剤耐性ＥＧＦＲ変異体を標的とすることによる、異なる働きをする新しい治療剤が必要である。

【0007】

最近の研究では、意図的にアロステリック部位を標的にすることにより、変異選択的阻害剤につながる可能性があることが示唆されている（ＪｉａらＯｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ）ａｎｄ ＥＧＦＲ（Ｃ７９７Ｓ）ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｗｉｔｈ ｍｕｔａｎｔ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｊｕｎｅ ２０１６，Ｎａｔｕｒｅ５３４，１２９－１３２）。

【0008】

がんの治療処置および／または予防処置に有用なＥＧＦＲ変異体を含有するＴ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ／Ｃ７９７Ｓ、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８５８Ｒ／Ｃ７９７Ｓ、特にＥＧＦＲ突然変異体を含有するＴ７９０ＭおよびＣ７９７Ｓを特異的に阻害する選択的分子の生成が、まさに必要とされている。

【0009】

国際公開第ＷＯ２００９１５８３６９号には、ある特定の複素環式抗菌剤が記載されている。国際公開第ＷＯ２０１６１８３５３４号には、ＥＢＮＡ１阻害剤として好適なある特定の複素環式化合物が記載されている。国際公開第ＷＯ２０１１１２８２７９号には、ｍＧｌｕＲ５修飾物質として好適なある特定の複素環式化合物が記載されている。

【発明の概要】

【0010】

「薬学的に許容される塩」との用語は、生物学的にまたは別様に望ましくないものではない、遊離塩基または遊離酸の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。塩は塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸（特に塩酸）等の無機酸と、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステインなどの有機酸で形成される。また、これらの塩は、遊離酸に無機塩基や有機塩基を添加して調製してもよい。無機塩基から誘導される塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウム塩などが含まれるがこれらに限定されない。有機塩基から誘導される塩には、第１級、第２級および第３級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリイミン樹脂などの塩が含まれるがこれらに限定されない。式（Ｉ）の化合物の特定の薬学的に許容される塩は、塩酸塩、メタンスルホン酸塩、クエン酸塩である。

【0011】

略語のｕＭはマイクロモルを意味し、記号μＭに相当する。

【0012】

略語のｕＬはマイクロリットルを意味し、記号μＬに相当する。

【0013】

略語のｕｇはマイクログラムを意味し、記号のμｇに相当する。

【0014】

式（Ｉ）の化合物は、数個の不斉中心を含み得、光学的に純粋な鏡像異性体、例えばラセミ体などの鏡像異性体の混合物、光学的に純粋なジアステレオ異性体、ジアステレオ異性体の混合物、ジアステレオ異性のラセミ体またはジアステレオ異性のラセミ体の混合物として存在し得る。

【0015】

Ｃａｈｎ－Ｉｎｇｏｌｄ－Ｐｒｅｌｏｇ則によれば、不斉炭素原子は、「Ｒ」または「Ｓ」立体配置のものであり得る。

【0016】

また、本発明の一実施形態は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、およびその薬学的に許容される塩であり、より詳細には本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物である。

【0017】

本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物を製造するための工程も本発明の対象である。

【0018】

本発明における式Ｉの化合物を官能基で誘導体化して、インビボで親化合物に変換して戻し得る誘導体を提供し得ることが、理解されるであろう。

【0019】

本発明のある特定の実施形態は、治療的活性物質として使用するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

【0020】

本発明のある特定の実施形態は、がん、特に非小細胞肺がんの治療および／または予防処置で使用するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

【0021】

本発明のある特定の実施形態は、非小細胞肺がんの治療および／または予防処置で使用するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

【0022】

本発明のある特定の実施形態は、がん、特に非小細胞肺がんの治療および／または予防処置のための薬品を製造するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

【0023】

本発明のある特定の実施形態は、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容され得る補助物質を含む、医薬組成物に関する。

【0024】

本発明のある特定の実施形態は、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することによる、がん、特に非小細胞肺がんの治療および／または予防処置のための方法に関する。

【0025】

本発明のある特定の実施形態は、がん、特に非小細胞肺がんに罹患したＥＧＦＲ活性化突然変異を有する患者の治療および／または予防処置において薬品として使用するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関し、該患者におけるＥＧＦＲ活性化突然変異状態を決定し、次いで、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を該患者に投与することを含む。

【0026】

本発明のある特定の実施形態は、がん、特に非小細胞肺がんに罹患したＥＧＦＲ突然変異Ｔ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ、Ｔ７９０Ｍ／Ｌ８５８Ｒ／Ｃ７９７Ｓ、Ｌ８５８Ｒ、および／またはＬ８５８Ｒ／Ｃ７９７Ｓを有する患者の治療および／または予防処置において薬品として使用するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関し、該患者におけるＥＧＦＲ活性化突然変異状態を決定し、次いで、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を該患者に投与することを含む。

【0027】

本発明のある特定の実施形態は、がん、特に非小細胞肺がんに罹患した、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＥＧＦＲ変異検出キットｖ２．０で決定されたＥＧＦＲ活性化突然変異を有する患者の治療および／または予防処置において薬品として使用するための、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関し、該患者におけるＥＧＦＲ活性化突然変異状態を決定し、次いで、本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を該患者に投与することを含む。

【0028】

更に、本発明は、適用可能な場合はいつでも、式Ｉの化合物の対応する重水素化形態のすべての置換基を含む。

【0029】

式Ｉの化合物は、１つ以上の不斉中心を含み得、したがって、ラセミ体、ラセミ混合物、単一鏡像異性体、ジアステレオ異性混合物、および個々のジアステレオマとして生じ得る。分子上の種々の置換基の性質に応じて、付加的な不斉中心が存在してもよい。このような不斉中心の各々は独立して２つの光学異性体を生成し、混合物および純粋または部分的に精製された化合物として可能性のある光学異性体およびジアステレオマの全てが、本発明に含まれることが意図される。本発明は、これらの化合物のそのような異性体形態の全てを包含することを意味する。これらのジアステレオマの独立した合成またはそれらのクロマトグラフィによる分離は、本明細書で開示された方法を適切に修正することで、当技術分野で公知のように達成することができる。それらの絶対立体化学は、結晶生成物または結晶中間体のＸ線結晶学によって決定することができ、これらは、必要であれば、既知の絶対配置の不斉中心を含む試薬で誘導体化される。所望であれば、化合物のラセミ混合物を分離して、個々の鏡像異性体を単離し得る。分離は、化合物のラセミ混合物を鏡像異性的に純粋な化合物にカップリングさせてジアステレオ異性混合物を形成し、続いて、分別再結晶化またはクロマトグラフィのような標準的方法によって個々のジアステレオマを分離するような、当該技術分野で公知の方法で行い得る。

【0030】

一実施形態では、光学的に純粋な鏡像異性体が提供される場合、光学的に純粋な鏡像異性体とは、化合物が所望の異性体を９０重量％超、具体的には所望の異性体を９５重量％超、またはより具体的には所望の異性体を９９重量％超含有することを意味し、該重量パーセントは、化合物の異性体の全重量を基準とする。キラル的に純粋なまたはキラルに富む化合物は、キラル選択的合成によって、または鏡像異性体の分離によって調製し得る。鏡像異性体の分離は、最終生成物で、または代替的に好適な中間体上で行い得る。

【0031】

また、本発明の一実施形態は、記載された工程のいずれか１つにより製造された場合、本明細書に記載された式（Ｉ）の化合物である。

【0032】

アッセイ手順
ＨＴＲＦ Ｐｈｏｓｐｈｏ ＥＧＦＲ ＴＭＬＲＣＳアッセイ（細胞）
細胞株および培地
ＢａＦ３－ＴＭＬＲＣＳ細胞株を、Ｃｒｏｗｎｂｉｏ（米国カリフォルニア州サンディエゴ）から得た。 細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＲＰＭＩ ＡＴＣＣ（Ｇｉｂｃｏ ３１８７０）＋２ｍＭグルタミン＋ピューロマイシン０．５μｇ／ｍｌ中にて、３７℃、５％ＣＯ_２で維持した。

【0033】

プロトコル
プレートが、１２．５ｎｌの試験される化合物（用量反応）のＤＭＳＯ溶液またはＤＭＳＯのみで予め充填された後、１２．５μｌの増殖培地／ウェル中において、２０，０００細胞／ウェルでＧｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅの第７８４－０８号マイクロタイタープレートに上記のように細胞を移す。プレートを３００×ｇで３０秒間回転させた後、細胞を４時間、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９５％でインキュベートした。細胞を、４μｌ／ウェルの補充された溶解緩衝液（Ｃｉｓ－ｂｉｏ、リン酸化ＥＧＦＲ ＨＴＲＦキット、６４ＥＧ１ＰＥＨ）の化合物混合物に添加することによって溶解し、続いて、振盪しながら（４００ｒｐｍ）３０分間室温でインキュベートした。次いで、プレートを凍結し、－８０℃で一晩保存した。翌日、プレートを解凍した後に、補充した検出緩衝液中で調製した抗リン酸化ＥＧＦＲクリプテートと抗リン酸化ＥＧＦＲ－ｄ２抗体溶液との混合物４μｌを、各ウェルに加えた。次いで、蓋をしたプレートを４時間室温でインキュベートし、その後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて６１６および６６５ｎｍでの蛍光発光を読み取った。データは、６６５対６１６の信号の正規化された比に１０，０００を乗じて、上記と同様の方法で分析した。

【0034】

結果を表１に示す。

【0035】

式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩は、医薬（例えば薬学的調製物の形態の）として使用し得る。本発明の医薬製剤は、経口投与（例えば、錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬軟ゼラチンカプセル、溶液、乳剤または懸濁液の形）、経鼻投与（例えば、鼻スプレーの形）、直腸投与（例えば、座薬の形）、または眼局所投与（例えば、溶液、軟膏、ゲルまたは水溶性高分子挿入剤の形）などの内服投与が可能である。しかしながら、投与は、筋肉内、静脈内、眼内などの非経口的に（例えば、滅菌注射液の形で）行い得る。

【0036】

式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩は、錠剤、コーティングされた錠剤、糖衣錠、硬ゼラチンカプセル、注射液または局所製剤の製造のために、薬学的に不活性な、無機または有機アジュバントで処理し得る。ラクトース、コーンスターチまたはその誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩などは、錠剤、糖衣錠および硬ゼラチンカプセルのためのそのようなアジュバントとして、使用し得る。

【0037】

軟質ゼラチンカプセルに適したアジュバントとしては、例として、植物油、ワックス、油脂、半固形物、液体ポリオール等が挙げられる。

【0038】

溶液およびシロップの製造に適したアジュバントは、例として、水、ポリオール、サッカロース、転化糖、グルコースなどである。

【0039】

注入液のための適切なアジュバントは、例としては、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油などである。

【0040】

坐薬のための適切なアジュバントは、例として、天然または硬化した油、ワックス、油脂、半固体または液体ポリオールなどである。

【0041】

眼部外用剤形のための適切なアジュバントは、例として、シクロデキストリン、マンニトール、または当技術分野で知られている多くの他の担体および賦形剤である。

【0042】

さらに、医薬製剤は、防腐剤、可溶化剤、粘度増加物質、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、マスキング剤、または酸化防止剤を含有し得る。本発明の医薬製剤はさらに、他の治療的に価値のある物質を含有し得る。

【0043】

投薬量は広範に変化させることができ、当然、各特定の場合における個々の要件に適合させる。一般に、経口投与の場合、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ～２０ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり約０．５ｍｇ～４ｍｇ（例えば、１人あたり約３００ｍｇ）を１日量として、好ましくは１～３回に分けて個別に投与し、適切であれば、例えば、同量で構成し得る。局所投与の場合、製剤は、０．００１重量％～１５重量％の薬剤を含み得、０．１～２５ｍｇの間であり得る必要量は、１日あたりの単回投与でも、１週間あたりの単回投与でも、１日あたりの複数回の投与（２～４回）でも、１週間あたりの複数回の投与でもよい。ただし、これが示されている場合は、ここに記載されている上限または下限を超える可能性があることは明らかである。

【0044】

本発明の化合物を含む医薬組成物の調製
以下の組成の錠剤は、通常の方法で製造される。

【0045】

製造手順
１．材料１、２、３、４を混ぜ合わせ、精製水で造粒する。
２．顆粒を５０℃で乾燥させる。
３．顆粒を適切な粉砕装置に通す。
４．材料５を加えて３分間混合し、適当なプレス機で圧縮する。
以下の組成のカプセルを製造する。

【0046】

製造手順
１．材料１、２、３を適当なミキサーで３０分間混合する。
２．材料４および５を加えて３分間混合する。
３．適切なカプセルに充填する。
式Ｉの化合物、乳糖およびコーンスターチを、まずミキサーで混合し、次に粉砕機で混合する。混合物をミキサーに戻し、そこにタルクを加えてまんべんなく混合する。この混合物を、機械によって適当なカプセル、例えば硬質ゼラチンカプセルに充填する。

【0047】

以下の組成の注射液を製造する。

【0048】

以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【0049】

分取例が鏡像異性体の混合物として得られる場合、純粋な鏡像異性体は、本明細書に記載されている方法、または当技術分野の当業者に知られている方法、例えばキラルクロマトグラフィーまたは結晶化によって得ることができる。

【0050】

実施例１
（２ＲＳ）－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－［６－［２－［４－［（４－ヒドロキシ－１－ピペリジル）メチル］フェニル］エチニル］－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル］－Ｎ－チアゾール－２－イル－アセトアミド

工程１：エチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－オキソ－アセテート

２００ｍｌの１，４－ジオキサン中に溶解したエチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート（２０．０ｇ、１０２．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、二酸化セレン（２２．８５ｇ、２０５．９４ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。反応混合物を８０℃で５時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮して、残渣を得た。粗生成物を、石油エーテル：酢酸エチル２：１～酢酸エチル：エタノール１０：１の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、所望のエチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－オキソ－アセテート（定量収率）を淡褐色油状物として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝２０９．１（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【0051】

工程２：エチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－ヒドロキシイミノ－アセテート

１４５ｍｌのエタノール中に溶解したエチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－オキソ－アセテート（実施例１、工程１）（１７．５ｇ、８４．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、塩酸ヒドロキシルアミン（６．４２ｇ、９２．４５ｍｍｏｌ、１．１当量）および酢酸ナトリウム（１３．７９ｇ、１６８．１ｍ
ｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。反応混合物を８０℃で３．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、水で抽出し、エタノール／ＴＨＦ／酢酸エチル１：１：８の混合物で５回抽出した。有機層を濃縮乾固した。所望のエチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－ヒドロキシイミノ－アセテート（１５ｇ、収率８０％）を、黄色固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝２２４．１（Ｍ＋Ｈ^＋）。これは次の工程で直接使用した。

【0052】

工程３：エチル（２ＲＳ）－２－アミノ－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート

２２５ｍｌのエタノールおよび１２０ｍｌのＴＨＦ中に溶解したエチル２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－ヒドロキシイミノ－アセテート（実施例１、工程２）（１５．０ｇ、６７．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（３０．０ｇ、６７．２ｍｍｏｌ、１当量、１０％）を室温で加えた。混合物をＨ_２により２４時間４５℃にて水素付加（ｈｙｄｏｇｅｎａｔｅｄ）した。反応混合物をフィルタにかけ、濾液を減圧濃縮した。所望のエチル（２ＲＳ）－２－アミノ－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート（定量収率）を、褐色油状物として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝２１０．１（Ｍ＋Ｈ^＋）。これは次の工程で直接使用した。

【0053】

工程４：エチル（２ＲＳ）－２－アミノ－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート塩酸塩

ＨＣｌ／ＥｔＯＨ（３００ｍｌ、１２００ｍｍｏｌ、１４．５当量、２．５ｍｏｌ／Ｌ）中のエチル（２ＲＳ）－２－アミノ－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート（実施例１、工程３）（１５．０ｇ、８２．７９ｍｍｏｌ）の溶液を、２５℃で３６時間撹拌した。反応混合物を２５℃未満で減圧濃縮して、残渣を褐色油状物として得た。１５０ｍｌのアセトニトリルを残渣に加え、沈殿した黄色固体を回収し、２５℃未満の真空下で乾燥して、所望のエチル（２ＲＳ）－２－アミノ－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート塩酸塩（定量収率）を黄色固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝２１０．１（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【0054】

工程５：５－ヨード２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸

２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸（３．４ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）を、２０ｍｌの硫酸中に溶解した。１，３－ジヨード－５，５－ジメチルイミダゾリジン－２，４－ジオン（３．３５ｇ，８．８２ｍｍｏｌ，０．５２当量）を室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、得られた沈殿物をフィルタオフした。固体を乾燥させ、淡黄色固体として所望の生成物（５．６ｇ、定量的収率）を得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝３２９．１（Ｍ－Ｈ＋）。

【0055】

工程６：メチル５－ヨード－２－メチル－３－（トリフルオロメチル）ベンゾエート

５－ヨード－２－メチル－３－（トリフルオロメチル）安息香酸（５．６ｇ，１６．６ｍｍｏｌ）を４０ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。炭酸カリウム（４．６ｇ、３３．３ｍｍｏｌ、２当量）およびヨードメタン（１．０９ｍｌ、２．４８ｇ、１７．５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を室温で加えた。混合物を２．５時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で抽出した。水層を酢酸エチルで逆抽出した。有機層を水で洗浄した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥し、フィルタにかけ、濃縮乾固した。粗生成物を、酢酸エチル：ヘプタン０：１００～５０：５０の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィによって精製した。所望の生成物（４．５ｇ、収率７１％）を白色固体として得た。

【0056】

工程７：メチル２－（ブロモメチル）－５－ヨード－３－（トリフルオロメチル）ベンゾエート

メチル５－ヨード－２－メチル－３－（トリフルオロメチル）ベンゾエート（実施例１、工程６）（４．８ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのトリフルオロトルエン中に溶解し、Ｎ－ブロモスクシンイミド（２．３４ｇ、１３．１ｍｍｏｌ、１当量）およびＡＩＢＮ（２００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、０．１当量）を室温で加えた。混合物を１１０℃で３時間撹拌した。反応混合物を冷却し、水で抽出し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。粗生成物を、酢酸エチル：ヘプタン０：１００～３０：７０の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、所望の生成物（４．９４ｇ、純度７５％、収率７５％）を無色油状物として得た。

【0057】

工程８：エチル（２ＲＳ）－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－［６－ヨード－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル］アセテート

エチル（２ＲＳ）－２－アミノ－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）アセテート塩酸塩（実施例１、工程４）（９３０ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ、１当量）を、１．５ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。メチル２－（ブロモメチル）－５－ヨード－３－（トリフルオロメチル）ベンゾエート（実施例１、工程７）（１．６ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．６ｍｌ、１１．３ｍｍｏｌ、３当量）を室温で加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、１００℃で１時間撹拌した。反応混合物を水で抽出し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層をブラインで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。粗生成物を、ジクロロメタン：メタノール１００：０～９０：１０の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、所望の生成物（１．１３ｇ、収率５６％）を、暗褐色油状物として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝５２０．０（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【0058】

工程９：（２ＲＳ）－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－［６－ヨード－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル］－Ｎ－チアゾール－２－イル－アセトアミド

エチル（２ＲＳ）－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－［６－ヨード－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル］アセテート（実施例１、工程８）（５５０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのメタノールおよび２０ｍｌのＴＨＦに溶解した。ＬｉＯＨ（水中１Ｍ）（１．２７ｍｌ、１．２７ｍｍｏｌ、１．２当量）を、室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を２０ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。チアゾール－２－アミン（１３８ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ、１．３当量）、ヒューニッヒ塩基（０．９２ｍｌ、５．３ｍｍｏｌ、５当量）、およびＨＡＴＵ（４８０ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ、１．２当量）を室温で加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を水で抽出し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を水で抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。粗生成物を、ジクロロメタン：メタノール１００：０～９０：１０の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、所望の生成物（４２０ｍｇ、収率６８％）を橙色半固形物として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝５７４．０（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【0059】

工程１０：１－［（４－エチニルフェニル）メチル］ピペリジン－４－オール

４－エチニルベンズアルデヒド（２．８ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）を、８５ｍｌのジクロロメタン中に溶解した。ピペリジン－４－オール（２．１ｇ、２１．５ｍｍｏｌ、１．０当量）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（７．７５ｇ、３６．６ｍｍｏｌ、１．７当量を室温で加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を水で抽出し、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層をブラインで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。粗生成物を、ジクロロメタン：メタノール１００：０～８０：２０の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、所望の生成物（３．０６、収率６６％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝２１６．３（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【0060】

工程１１：（２ＲＳ）－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－［６－［２－［４－［（４－ヒドロキシ－１－ピペリジル）メチル］フェニル］エチニル］－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル］－Ｎ－チアゾール－２－イル－アセトアミド

（２ＲＳ）－２－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［１，２－ｃ］イミダゾール－１－イル）－２－［６－ヨード－１－オキソ－４－（トリフルオロメチル）イソインドリン－２－イル］－Ｎ－チアゾール－２－イル－アセトアミド（実施例１、工程９）（２１０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）および１－［（４－エチニルフェニル）メチル］ピペリジン－４－オール（実施例１、工程１０）（１１８ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、１．５当量）を、４ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。トリエチルアミン（１１１ｍｇ、０．１５ｍｌ、１．１ｍｍｏｌ、３当量）、ビス－（トリフェニルホスフィン）－パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、０．０５当量）、トリフェニルホスフィン（１０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．１当量）およびヨウ化銅（Ｉ）（３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、混合物を８０℃で２時間攪拌した。反応混合物を水で抽出し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層をブラインで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。粗生成物を、ジクロロメタン：メタノール１００：０～９０：１０の勾配で溶出するシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、所望の生成物（１４４ｍｇ、収率５９％）を白色固体として得た。ＭＳ：ｍ／ｅ＝６６１．４（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【国際調査報告】