特表 2022-537807 治療送達用のプラットフォーム、組成物、および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-08-30

(54)【発明の名称】治療送達用のプラットフォーム、組成物、および方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/071 20100101AFI20220823BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220823BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20220823BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20220823BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20220823BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20220823BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20220823BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20220823BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220823BHJP

【ＦＩ】

C12N5/071 ZNA

C12N5/10

C12N15/62 Z

C12N15/12

C07K19/00

C07K14/705

A61P37/02

A61K48/00

A61P37/06

A61P29/00 101

A61P17/06

A61P3/10

A61P25/00

A61P1/04

A61P19/02

A61P27/02

A61P11/00

A61K35/28

A61K35/12

A61K47/64

A61P43/00 121

A61K45/00

A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021574169

(86)(22)【出願日】2020-06-19

(85)【翻訳文提出日】2022-02-09

(86)【国際出願番号】 US2020038816

(87)【国際公開番号】W WO2020257710

(87)【国際公開日】2020-12-24

(31)【優先権主張番号】62/864,566

(32)【優先日】2019-06-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/875,001

(32)【優先日】2019-07-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521544045

【氏名又は名称】エンテレクソ バイオセラピューティクス インク．

(74)【代理人】

【識別番号】100082072

【弁理士】

【氏名又は名称】清原 義博

(72)【発明者】

【氏名】リアジファー，ミラード

(72)【発明者】

【氏名】テイラー，チャールズ キャメロン

(72)【発明者】

【氏名】シューア，トッド

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AC20

4B065BA25

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB21

4C076BB24

4C076CC01

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC09

4C076CC10

4C076CC15

4C076CC16

4C076CC18

4C076CC21

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF31

4C076FF68

4C084AA13

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA58

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4C084MA66

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZA331

4C084ZA332

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4C084ZA592

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4C084ZA662

4C084ZA681

4C084ZA682

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA961

4C084ZA962

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4C084ZB072

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB151

4C084ZB152

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4C084ZC022

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4C084ZC352

4C084ZC751

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4C087AA02

4C087MA02

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4C087MA56

4C087MA58

4C087MA65

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4C087NA05

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZA33

4C087ZA59

4C087ZA66

4C087ZA68

4C087ZA89

4C087ZA96

4C087ZB05

4C087ZB07

4C087ZB08

4C087ZB11

4C087ZB15

4C087ZC02

4C087ZC35

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA42

4H045DA50

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

【解決手段】本明細書には、細胞外小胞を生成するためのプラットフォームが記載される。また、細胞外小胞の組成物も記載される。さらに、細胞外小胞を治療用送達に使用する方法も本明細書に記載される。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはそれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、
ｂ．ＣＤ６３を含む膜貫通部分であって、該ＣＤ６３は３つの膜貫通ドメインを含む、膜貫通部分と
を含み、
前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される、組成物。

【請求項2】

前記免疫チェックポイント部分が、修飾されたＣＤ６３を生成するために前記ＣＤ６３の細胞外ループに結合される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記細胞外ループが、前記修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループまたは第２の細胞外ループである、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記修飾されたＣＤ６３が、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記修飾されたＣＤ６３が、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

前記修飾されたＣＤ６３が、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つを含む、請求項１から５のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項7】

細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．ＰＤ－Ｌ１を含む免疫チェックポイント部分と、
ｂ．ラクトアドヘリンを含む膜貫通部分と
を含み、
前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される、組成物。

【請求項8】

細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはそれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、
ｂ．グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）を含む膜貫通部分と
を含み、
前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される、組成物。

【請求項9】

細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．免疫チェックポイント部分、および
ｂ．膜貫通部分
のうち、少なくとも１つを含む、組成物。

【請求項10】

前記免疫チェックポイント部分が、細胞外小胞に封入される、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記免疫チェックポイント部分が、細胞外小胞の表面に発現される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記免疫チェックポイント部分が、細胞外小胞により分泌される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記免疫チェックポイント部分が、前記膜貫通部分と複合体を形成する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記免疫チェックポイント部分が、前記膜貫通部分と共有結合される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

前記免疫チェックポイント部分が、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、またはこれらの組合せを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

前記免疫チェックポイント部分が、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの組合せを含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記免疫チェックポイント部分がＰＤ－Ｌ１を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

前記膜貫通部分が、１４－３－３タンパク質ゼータ／デルタ、４－３－３タンパク質イプシロン、７８ｋＤａグルコース調節タンパク質、アセチルコリンエステラーゼ／ＡＣｈＥ－Ｓ、ＡＣｈＥ－Ｅ、アクチン、細胞質１（ＡＣＴＡ）、ＡＤＡＭ１０、アルカリンホスファターゼ、α－エノラーゼ、α－シヌクレイン、アミノペプチダーゼＮ、アミロイドβ Ａ４／ＡＰＰ、アネキシン５Ａ、アネキシンＡ２、ＡＰ－１、ＡＴＦ３、ＡＴＰシトレートリアーゼ、ＡＴＰアーゼ、βアクチン（ＡＣＴＢ）、β－アミロイド４２、カベオリン１、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ１６３、ＣＤ２４、ＣＤ２６／ＤＰＰ４、ＣＤ２９／ＩＴＧＢ１、ＣＤ３、ＣＤ３７、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ４９、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７３ ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ９、ＣＤ９０、クローディン、クローディン１、コフィリン－１、補体結合タンパク質ＣＤ５５およびＣＤ５９、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０α、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０β、ＥＢＶ ＬＭＰ１、ＥＢＶ ＬＭＰ２Ａ、ＥＦ－１α－１、ＥＦ２、ＥＦＧＲ ＥＧＦＲ ＶＩＩＩ、エムプリン／ＣＤ１４７、エノラーゼ１α（ＥＮＯ１）、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ２、テトラスパニン（ＣＤ９、ＣＤ６３、およびＣＤ８１）、脂肪酸シンターゼ、フェツインＡ、フロチリン－１、フロチリン－２、フルクトース二リン酸アルドラーゼＡ、グリセリンアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、グリコホリンＡ、ＧＰＣ１、ＧＰＩアンカー５’ヌクレオチダーゼ、ＧＴＰアーゼ、熱ショックタンパク質８（ＨＳＰＡ８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ヘパリナーゼ、ヘテロ三量体Ｇタンパク質、ＨＩＶ Ｇａｇ、ＨＩＶ Ｎｅｆ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＳＶ ｇＢ、ＨＴＬＶ－１ Ｔａｘ、ハンチンチン、ＩＣＡＭ１、インテグリン、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ１／２、ロイシンリッチ受容体キナーゼ２、Ｌ－乳酸デヒドロゲナーゼＡ鎖、リソソーム関連膜糖タンパク質１、リソソーム関連膜糖タンパク質２、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＵＣ１、多剤耐性関連タンパク質、筋肉ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ２）、Ｎ－カドヘリン、ＮＫＣＣ２、ＰＤＣＤ６ＩＰ／Ａｌｉｘ、ＰＥＣＡＭ１、ホスホグリセレートキナーゼ、胎盤プリオンタンパク質、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ）、Ｒａｂ－１４、Ｒａｂ－５ａ、Ｒａｂ－５ｂ、Ｒａｂ－５ｃ、Ｒａｂ－７、Ｒａｐ １Ｂ、レジスチン、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ））、サバイビング、シンデカン－１、シンデカン－４、シンテニン－１、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ２）、ＴＳＧ１０１、ＴＳＰＡＮ８、腫瘍関連糖タンパク質テトラスパニン－８、チロシン３－モノオキシゲナーゼ／トリプトファン５－モノオキシゲナーゼ活性化タンパク質、ＴＹＲＰ－２、液胞選別タンパク質３５、またはゼータポリペプチド（ＹＷＨＡＺ）からなる群から選択される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項19】

前記膜貫通部分がラクトアドヘリンを含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

前記膜貫通部分が、ＬＡＭＰ２、あるいはその変形またはフラグメントを含み、該ＬＡＭＰ２は、配列番号４のペプチド配列と少なくとも７０％同一である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記膜貫通部分が、ＣＤ６３、あるいはその変形またはフラグメントを含み、該ＣＤ６３は、配列番号５のペプチド配列と少なくとも７０％同一である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

前記ＣＤ６３が、修飾されたＣＤ６３である、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記修飾されたＣＤ６３が、トランケートされたＣＤ６３である、請求項２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記修飾されたＣＤ６３が、少なくとも１つの追加のＣＤ６３膜貫通ドメインを含むように修飾される、請求項２２に記載の組成物。

【請求項25】

前記修飾されたＣＤ６３が、１つの膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項26】

前記修飾されたＣＤ６３が、２つの膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項27】

前記修飾されたＣＤ６３が、３つの膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項28】

前記修飾されたＣＤ６３が、４つの膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項29】

前記修飾されたＣＤ６３が、５つの膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項30】

前記免疫チェックポイント部分が、前記修飾されたＣＤ６３の細胞外ループにおいて、前記修飾されたＣＤ６３と複合体を形成する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

前記免疫チェックポイント部分が、前記修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループにおいて、前記修飾されたＣＤ６３と複合体を形成する、請求項１から３０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項32】

標的化部分をさらに含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項33】

前記標的化部分が、サイトカインを標的とするペプチドを含む、請求項３２に記載の組成物。

【請求項34】

前記標的化部分が、癌細胞マーカーを標的とするペプチドを含む、請求項３２または３３に記載の組成物。

【請求項35】

融合性部分をさらに含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項36】

前記融合性部分が、ウイルス融合性部分である、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

前記融合性部分が、哺乳動物融合性部分を含む、請求項３５または３６に記載の組成物。

【請求項38】

免疫回避部分をさらに含む、請求項１から３７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項39】

前記免疫回避部分がＣＤ４７を含む、請求項３８に記載の組成物。

【請求項40】

除核細胞を含まない、請求項１から３９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項41】

前記細胞外小胞が、エキソソーム、微小小胞体、レトロウイルス様粒子、アポトーシス小体、アポプトソーム、オンコソーム、エキソファー、外膜ウイルス、エキソマー、またはその他非常に大きな細胞外小胞を含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項42】

前記細胞外小胞がエキソソームを含む、請求項１から４１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項43】

前記細胞外小胞が複数の免疫チェックポイント部分を含む、請求項１から４２のいずれか一項に記載の組成物チェックポイント部分。

【請求項44】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも９，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項46】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも８，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項47】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも７，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項48】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも６，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項49】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも５，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項50】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも３，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項51】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも２，５００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項52】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも２，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項53】

前記細胞外小胞が、細胞外小胞１つにつき少なくとも１，５００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む、請求項４３に記載の組成物。

【請求項54】

複数のエキソソームを含む、請求項１から５３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項55】

治療上有効量のエキソソームを含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項56】

少なくとも１０＾６のエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項57】

少なくとも１０＾７のエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項58】

少なくとも１０＾８のエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項59】

少なくとも１μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項60】

少なくとも１０μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項61】

少なくとも２０μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項62】

少なくとも５０μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項63】

少なくとも１００μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項64】

少なくとも１５０μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項65】

少なくとも２００μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項66】

少なくとも２５０μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項67】

少なくとも５００μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項68】

少なくとも７５０μｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項69】

少なくとも１ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項70】

少なくとも２ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項71】

少なくとも３ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項72】

少なくとも４ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項73】

少なくとも５ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項74】

少なくとも６ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項75】

少なくとも７ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項76】

少なくとも１００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項77】

少なくとも２００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項78】

少なくとも３００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項79】

少なくとも４００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項80】

少なくとも５００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項81】

少なくとも６００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項82】

少なくとも７００ｍｇのエキソソームを含む、請求項５４または５５に記載の組成物。

【請求項83】

細胞由来である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項84】

冷凍保存される、請求項１から８３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項85】

凍結乾燥される、請求項１から８４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項86】

３７℃で２４時間安定する、請求項１から８５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項87】

３７℃で４８時間安定する、請求項１から８６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項88】

３７℃で７２時間安定する、請求項１から８７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項89】

請求項１から８８のいずれか一項に記載の細胞外小胞を生成するように構成される細胞。

【請求項90】

幹細胞である、請求項８９に記載の細胞。

【請求項91】

ヒト細胞である、請求項８９に記載の細胞。

【請求項92】

非ヒト細胞である、請求項８９に記載の細胞。

【請求項93】

間葉系幹細胞である、請求項８９から９２のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項94】

遺伝的に修飾された細胞である、請求項８９から９３のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項95】

１つ以上の免疫チェックポイント部分を発現するように構成された細胞外小胞を精製する方法であって、
ａ．細胞外小胞の異種集団を得る工程と、
ｂ．前記免疫チェックポイント部分との複合体を形成するために、前記細胞外小胞の異種集団を、検出部分を含む検出アッセイ溶液にさらす工程と、
ｃ．前記免疫チェックポイント部分と前記検出部分との間に形成される複合体から生じるシグナルを検出する工程であって、前記シグナルの強度は、発現した免疫チェックポイント部分のユニットに比例する、工程と、
ｄ．前記シグナルの強度に基づき前記細胞外小胞の亜集団を単離する工程と
を含む方法。

【請求項96】

前記検出部分が抗体を含む、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記検出部分が、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４、またはこれらの組合せを含む、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記検出部分が、前記免疫チェックポイント部分のリガンドを含む、請求項９５に記載の方法。

【請求項99】

前記検出アッセイ溶液が、前記免疫チェックポイント部分に結合するように構成されたペプチドをさらに含む、請求項９５に記載の方法。

【請求項100】

前記免疫チェックポイント部分に結合するように構成されたペプチドが、ＰＤ－１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはこれらの組合せを含む、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

請求項１から８８のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬組成物。

【請求項102】

薬学的に許容可能な担体を含む、請求項１０１に記載の医薬組成物。

【請求項103】

少なくとも１つの追加の活性薬剤を含む、請求項１０１の医薬組成物。

【請求項104】

鞘内投与、眼内投与、硝子体内投与、網膜投与、静脈内投与、筋肉内投与、脳室内投与、大脳内投与、小脳内投与、側脳室内投与、実質内投与、皮下投与、またはこれらの組合せのために製剤化される、請求項１０１に記載の医薬組成物。

【請求項105】

自己免疫疾患を処置する方法であって、請求項１０１から１０４のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。

【請求項106】

前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、１型糖尿病、多発性硬化症、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、グレーブス病、若年性関節炎、慢性ライム病、視神経炎、乾癬性関節炎、強膜炎、強皮症、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、ブドウ膜炎、炎症性眼疾病、白斑、ＣＯＰＤ、臓器移植由来の合併症、または移植片対宿主病である、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

前記自己免疫疾患が関節リウマチである、請求項１０６に記載の方法。

【請求項108】

必要とする患者のＣＤ８＋ＣＤ２５＋細胞を抑制する方法であって、請求項１から８８のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程を含む方法。

【請求項109】

請求項１０１から１０４のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むキット。

【請求項110】

請求項１から８８のいずれか一項に記載の組成物を生成するための構成要素を含むプラットフォーム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、２０１９年６月２１日出願の米国仮特許出願第６２／８６４，５６６号、および２０１９年７月１７日出願の米国仮特許出願第６２／８７５，００１号に基づく利益を主張するものであり、これら全体は本明細書中で参照により引用される。

【0002】

参照による引用
本明細書で言及される刊行物、特許、および特許出願はすべて、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により引用されるように具体的かつ個々に指示されるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に引用される。本出願は、「Ｒｉａｚｉｆａｒ Ｍ， Ｍｏｈａｍｍａｄｉ ＭＲ，Ｐｏｎｅ ＥＪ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｅｘｏｓｏｍｅｓ ａｓ Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ．２０１９；１３（６）：６６７０－６６８８．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓｎａｎｏ．９ｂ０１００４」を引用しており、その全体は本明細書中で参照により引用される。

【背景技術】

【0003】

治療薬を標的細胞に送達するのに有効な手段は、近代医療の基礎の１つである。細胞外小胞は、治療薬を標的細胞に送達するためのキャリアとして調査され、利用されている。

【発明の概要】

【0004】

現行の細胞外小胞を介して治療薬を送達する方法には、欠点がある。細胞外小胞は、サイズ、数、膜特性、または安定性の観点で不均一の場合がある。細胞外小胞により送達可能な治療薬の量は、不均一または予測不能な場合があり、処置が無効になるという結果が生じてしまう。いくつかの例では、細胞外小胞の収率は不適当な場合がある。加えて、細胞外小胞をｉｎ ｖｉｖｏ標的細胞に向けることは依然として困難であり、循環中の細胞外小胞の大部分が、肝臓、脾臓、および腎臓に蓄積するからである。このため、十分な量の治療薬を標的細胞に送達するための細胞外小胞を含む組成物および医薬組成物が、必要とされ続けている。また、十分な量の治療薬を標的細胞に送達するための細胞外小胞を産生するプラットフォームおよび方法も必要とされ続けている。さらに、治療薬を送達するために細胞外小胞を使用する方法、および疾患または疾病を処置するために細胞外小胞を使用する方法も必要とされ続けている。

【0005】

本開示の態様は、細胞外小胞を含む組成物を含んでおり、該細胞外小胞は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、ＣＤ６３を含む膜貫通部分であって、該ＣＤ６３は３つの膜貫通ドメインを含む、膜貫通部分とを含み、前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される。いくつかの実施形態では、前記免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３を生成するために前記ＣＤ６３の細胞外ループに結合される。いくつかの実施形態では、前記細胞外ループは、前記修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループまたは第２の細胞外ループである。いくつかの実施形態では、前記修飾されたＣＤ６３は、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記修飾されたＣＤ６３は、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記修飾されたＣＤ６３は、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つを含む。細胞外小胞を含む組成物であって、前記細胞外小胞は、ＰＤ－Ｌ１を含む免疫チェックポイント部分と、ラクトアドヘリンを含む膜貫通部分とを含み、前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される。細胞外小胞を含む組成物であって、前記細胞外小胞は、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）を含む膜貫通部分とを含み、前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される。細胞外小胞を含む組成物であって、前記細胞外小胞は、免疫チェックポイント部分、および膜貫通部分のうち、少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞に封入される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞の表面に発現される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞により分泌される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と共有結合される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＰＤ－Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、１４－３－３タンパク質ゼータ／デルタ、４－３－３タンパク質イプシロン、７８ｋＤａグルコース調節タンパク質、アセチルコリンエステラーゼ／ＡＣｈＥ－Ｓ、ＡＣｈＥ－Ｅ、アクチン、細胞質１（ＡＣＴＡ）、ＡＤＡＭ１０、アルカリンホスファターゼ、α－エノラーゼ、α－シヌクレイン、アミノペプチダーゼＮ、アミロイドβ Ａ４／ＡＰＰ、アネキシン５Ａ、アネキシンＡ２、ＡＰ－１、ＡＴＦ３、ＡＴＰシトレートリアーゼ、ＡＴＰアーゼ、βアクチン（ＡＣＴＢ）、β－アミロイド４２、カベオリン１、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ１６３、ＣＤ２４、ＣＤ２６／ＤＰＰ４、ＣＤ２９／ＩＴＧＢ１、ＣＤ３、ＣＤ３７、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ４９、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７３ ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ９、ＣＤ９０、クローディン、クローディン１、コフィリン－１、補体結合タンパク質ＣＤ５５およびＣＤ５９、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０α、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０β、ＥＢＶ ＬＭＰ１、ＥＢＶ ＬＭＰ２Ａ、ＥＦ－１α－１、ＥＦ２、ＥＦＧＲ ＥＧＦＲ ＶＩＩＩ、エムプリン（ｅｍｍｐｒｉｎ）／ＣＤ１４７、エノラーゼ１α（ＥＮＯ１）、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ２、テトラスパニン（ＣＤ９、ＣＤ６３、およびＣＤ８１）、脂肪酸シンターゼ、フェツインＡ、フロチリン－１、フロチリン－２、フルクトース二リン酸アルドラーゼＡ、グリセリンアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、グリコホリンＡ、ＧＰＣ１、ＧＰＩアンカー５’ヌクレオチダーゼ、ＧＴＰアーゼ、熱ショックタンパク質８（ＨＳＰＡ８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ヘパリナーゼ、ヘテロ三量体Ｇタンパク質、ＨＩＶ Ｇａｇ、ＨＩＶ Ｎｅｆ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＳＶ ｇＢ、ＨＴＬＶ－１ Ｔａｘ、ハンチンチン、ＩＣＡＭ１、インテグリン、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ１／２、ロイシンリッチ受容体キナーゼ２、Ｌ－乳酸デヒドロゲナーゼＡ鎖、リソソーム関連膜糖タンパク質１、リソソーム関連膜糖タンパク質２、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＵＣ１、多剤耐性関連タンパク質、筋肉ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ２）、Ｎ－カドヘリン、ＮＫＣＣ２、ＰＤＣＤ６ＩＰ／Ａｌｉｘ、ＰＥＣＡＭ１、ホスホグリセレートキナーゼ、胎盤プリオンタンパク質、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ）、Ｒａｂ－１４、Ｒａｂ－５ａ、Ｒａｂ－５ｂ、Ｒａｂ－５ｃ、Ｒａｂ－７、Ｒａｐ １Ｂ、レジスチン、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ））、サバイビング（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）、シンデカン－１、シンデカン－４、シンテニン－１、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ２）、ＴＳＧ１０１、ＴＳＰＡＮ８、腫瘍関連糖タンパク質テトラスパニン－８、チロシン３－モノオキシゲナーゼ／トリプトファン５－モノオキシゲナーゼ活性化タンパク質、ＴＹＲＰ－２、液胞選別タンパク質３５、またはゼータポリペプチド（ＹＷＨＡＺ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ラクトアドヘリンを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＬＡＭＰ２、あるいはその変形またはフラグメントを含み、該ＬＡＭＰ２は、配列番号４のペプチド配列と少なくとも７０％同一である。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＣＤ６３、あるいはその変形またはフラグメントを含み、該ＣＤ６３は、配列番号５のペプチド配列と少なくとも７０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤ６３は、修飾されたＣＤ６３である。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、トランケートされたＣＤ６３である。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、少なくとも１つの追加のＣＤ６３膜貫通ドメインを含むように修飾される。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、１つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、２つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、３つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、４つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、５つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３の細胞外ループにおいて、修飾されたＣＤ６３と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループにおいて、修飾されたＣＤ６３と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、前記組成物は、標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、サイトカインを標的とするペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、癌細胞マーカーを標的とするペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、融合性部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、融合性部分は、ウイルス融合性部分を含む。いくつかの実施形態では、融合性部分は、哺乳動物融合性部分を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、免疫回避部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫回避部分は、ＣＤ４７を含む。前記組成物は、除核細胞を含まない。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、エキソソーム、微小小胞体、レトロウイルス様粒子、アポトーシス小体、アポプトソーム、オンコソーム、エキソファー（ｅｘｏｐｈｅｒ）、外膜ウイルス、エキソマー（ｅｘｏｍｅｒｅ）、またはその他非常に大きな細胞外小胞を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、エキソソームを含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、複数の免疫チェックポイント部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも９，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも８，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも７，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも６，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも５，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも３，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも２，５００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも２，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも１，５００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、複数のエキソソームを含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、治療上有効量のエキソソームを含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０＾６のエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０＾７のエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０＾８のエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも
１００μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２００μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５００μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも７５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも３ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも４ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも６ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも７ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも３００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも４００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも６００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも７００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、細胞由来である。いくつかの実施形態では、前記組成物は、冷凍保存される。いくつかの実施形態では、前記組成物は、凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、前記組成物は、３７℃で２４時間安定している。いくつかの実施形態では、前記組成物は、３７℃で４８時間安定している。いくつかの実施形態では、前記組成物は、３７℃で７２時間安定している。

【0006】

本開示の他の態様は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの細胞外小胞またはエキソソームを生成するように構成された細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記細胞は幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は非ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は間葉系幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は、遺伝的に修飾された細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は、本明細書に記載の実施形態のいずれか１つに記載される細胞外小胞またはエキソソームを産生するために遺伝的に修飾される。

【0007】

本開示の他の態様は、１つ以上の免疫チェックポイント部分を発現するように構成された細胞外小胞を精製する方法を含み、該方法は、細胞外小胞の異種集団を得る工程と、前記免疫チェックポイント部分との複合体を形成するために、前記細胞外小胞の異種集団を、検出部分を含む検出アッセイ溶液にさらす工程と、前記免疫チェックポイント部分と前記検出部分との間に形成される複合体から生じるシグナルを検出する工程であって、前記シグナルの強度は、発現した免疫チェックポイント部分のユニットに比例する、工程と、前記シグナルの強度に基づき前記細胞外小胞の亜集団を単離する工程とを含む。いくつかの実施形態では、検出部分は抗体を含む。いくつかの実施形態では、検出部分は、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、検出部分は、免疫チェックポイント部分のリガンドを含む。いくつかの実施形態では、検出アッセイ溶液は、前記免疫チェックポイント部分に結合するよう構成されたペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記免疫チェックポイント部分に結合するように構成されたペプチドは、ＰＤ－１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはこれらの組合せを含む。

【0008】

本開示の他の態様は、本明細書に記載の実施形態のいずれか１つの組成物を含む医薬組成物を含んでいる。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、少なくとも１つの追加の活性薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、鞘内投与、眼内投与、硝子体内投与、網膜投与、静脈内投与、筋肉内投与、脳室内投与、大脳内投与、小脳内投与、側脳室内投与、実質内投与、皮下投与、またはこれらの組合せのために製剤化される。

【0009】

本開示の他の態様は、自己免疫疾患を処置する方法を含み、該方法は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、１型糖尿病、多発性硬化症、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、グレーブス病、若年性関節炎、慢性ライム病、視神経炎、乾癬性関節炎、強膜炎、強皮症、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、ブドウ膜炎、炎症性眼疾病、白斑、ＣＯＰＤ、臓器移植由来の合併症、または移植片対宿主病である。いくつかの実施形態では、前記自己免疫性疾患は、関節リウマチである。

【0010】

本開示の他の態様は、必要とする患者のＣＤ８＋ＣＤ２５＋細胞を抑制する方法を含み、該方法は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの組成物を投与する工程を含む。

【0011】

本開示の他の態様は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの医薬組成物を含むキットを含んでいる。

【0012】

本開示の他の態様は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの組成物を生成するための構成要素を含むプラットフォームを含んでいる。

【0013】

本特許出願は、色付きで作成された少なくとも１つの図面を包含する。色付き図面を伴うこの特許または特許出願のコピーは、必要な料金の請求と支払い後に当局により提供されるものとする。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】プログラム細胞死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）を検出する、ヒトＭＳＣにより誘導されたエキソソームに対するプロテオーム解析を例示する図である。

【図2】ＰＤ－Ｌ１の遮断がどのようにＣＤ８＋Ｔ細胞に影響を及ぼすのかを判定するための、ＰＤ－Ｌ１の遮断に対する実験デザインを例示する図である。

【図3】ＰＤ－Ｌ１抗体の遮断の存在が、ＣＤ２５＋ＣＤ８＋細胞に対するＰＤ－Ｌ１の効果を消失させたことを例示する図である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本開示の好ましい実施形態が本明細書に示され記載されているが、こうした実施形態はほんの一例として提供されるに過ぎないことは、当業者に明白である。多数の変形、変更、および置換えが、本開示から逸脱することなく当業者により現在想到されるであろう。本明細書に記載される開示の実施形態の様々な代案が、本開示の実施に利用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を規定すること、かつ本特許請求の範囲内の方法と構造、およびその等価物が本開示に包含されることが意図されている。

【0016】

絶対的または連続的な用語、例えば「ｗｉｌｌ」、「ｗｉｌｌ ｎｏｔ」、「ｓｈａｌｌ」、「ｓｈａｌｌ ｎｏｔ」、「ｍｕｓｔ」、「ｍｕｓｕｔ ｎｏｔ」、「第１の（ｆｉｒｓｔ）」、「最初に（ｉｎｉｔｉａｌｌｙ）」、「次に（ｎｅｘｔ）」、「の前に（ｂｅｆｏｒｅ）」、「の後に（ａｆｔｅｒ）」、「最後に（ｌａｓｔｌｙ）」、および「最終的に（ｆｉｎａｌｌｙ）」の使用は、本明細書に開示される本実施形態の範囲を限定するものではなく、例示的なものであることを意味する。

【0017】

本明細書では、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別の意味を示していると判断されない限り、同様に複数形を含むように意図される。さらに、用語「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有している（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「含んだ（ｗｉｔｈ）」、またはそれらの変形が、詳細な説明および／または特許請求の範囲に使用される程度に、かかる用語は、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様に包括的であることが意図されている。

【0018】

本明細書で使用するとき、「少なくとも１つの」、「１つ以上の」、ならびに「および／または」という句は、使用時（ｉｎ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）に接続的かつ弁別的の両方である。例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣのうち少なくとも１つ」、「Ａ、Ｂ、またはＣのうち少なくとも１つ」、「Ａ、Ｂ、およびＣのうち１つ以上」、「Ａ、Ｂ、またはＣのうち１つ以上」、ならびに「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」という表現はそれぞれ、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、ＡとＢ、ＡとＣ、ＢとＣ、あるいはＡ、Ｂ、およびＣを意味する。

【0019】

本明細書に記載のあらゆるシステム、方法、ソフトウェア、およびプラットフォームは、モジュール式であり、連続的な工程に限定されない。したがって、「第１の」および「第２の」などの用語は、必ずしも優先順、重要度順、または作用順を示すものではない。

【0020】

「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者が判定するような特定の値の許容可能な誤差範囲内にあることを意味し、部分的には、その値がどのように測定または判定されるか、例えば、測定システムの制限に左右される。例えば、「約」は、所与の値での実施ごとに１以上の標準偏差内にあることを意味する場合がある。特定の値が本出願と請求項に記載されている場合、別段の定めのない限り、「約」という用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味するものであると仮定されねばならない。

【0021】

「増加した」または「増加する」という用語は、本明細書では、概して統計的に有意な量の増加を意味するように使用される。いくつかの実施形態では、「増加した」または「増加する」という用語は、基準値と比較して少なくとも１０％の増加、例えば、基準値、標準、または対照と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または最大１００％の増加、あるいは１０～１００％の間での任意の増加を意味する。他の「増加する」の例として、基準値と比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、またはそれより多くの増加が挙げられる。

【0022】

「減少した」または「減少する」という用語は、本明細書では、概して統計的に有意な量の減少を意味するように使用される。いくつかの実施形態では、「減少した」または「減少する」は、基準値と比較して少なくとも１０％の減少、例えば、基準値と比較して少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または最大１００％の減少（例えば、基準値と比較して存在しないか検出不能な値）、あるいは１０～１００％の間での任意の減少を意味する。マーカーまたは症状の文脈では、これらの用語は、かかる値の統計的に有意な減少を意味する。この減少は、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％以上であってもよく、好ましくは所与の疾患がない個体に対して正常な範囲内で容認される値に低下する。

【0023】

用語「個体」、「患者」、または「対象」は、交換可能に使用される。これら用語はいずれも、医療従事者（例えば医師、正看護師、ナースプラクティショナー、医師助手、用務員、またはホスピス職員）の監督（例えば、持続的または断続的）を特徴とする状況を要求せず、または制限するものではない。

【0024】

本明細書で使用するとき、「細胞」は、概して生物学的な細胞を指す。細胞は、生体の塩基の構造的、機能的、および／または生物学的な単位であり得る。細胞は、１つ以上の細胞を有する任意の生物体に由来する場合がある。一部の非限定的な例として、原核細胞、真核細胞、細菌細胞、古細菌細胞、単細胞真核生物の細胞、原虫類細胞、植物由来の細胞（例えば、作物、果実、野菜、穀類、大豆、コーン、トウモロコシ、小麦、種子、トマト、米、キャッサバ、サトウキビ、カボチャ、まぐさ、ジャガイモ、綿、カンナビス、タバコ、顕花植物類針葉樹、裸子植物、シダ、ヒカゲノカズラ、マツモ、苔類、苔由来の細胞）、藻細胞（例えば、Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ ｂｒａｕｎｉｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ、Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｐａｔｅｎｓ Ｃ．Ａｇａｒｄｈなど）、海草（例えばケルプ）、真菌細胞（例えば酵母菌、キノコ由来の細胞）、動物細胞、無脊髄動物（例えば、ショウジョウバエ、刺胞動物、棘皮動物、線虫など）、脊椎動物（例えば、魚類、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳動物）、哺乳動物由来の細胞（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非ヒト霊長類、ヒトなど）などが挙げられる。時折、細胞は、天然の生物体に由来するものではない（例えば、細胞は合成される場合があり、その場合は人工細胞と称される）。

【0025】

「ヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用するとき、概して塩基－糖－リン酸塩の組合せを指す。ヌクレオチドは、合成ヌクレオチドを含む場合がある。ヌクレオチドは、合成ヌクレオチドアナログを含む場合がある。ヌクレオチドは、核酸配列（例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ））の単量体単位の場合がある。ヌクレオチドという用語は、リボヌクレオシド三リン酸アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）、シトシン三リン酸（ＣＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、およびｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＩＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、またはこれらの誘導体といったデオキシリボヌクレオシド三リン酸を含む場合がある。このような誘導体は、例えば、［αＳ］ｄＡＴＰ、７－デアザ－ｄＧＴＰおよび７－デアザ－ｄＡＴＰ、ならびにこれらを包含する核酸分子にヌクレアーゼ耐性を与えるヌクレオチド誘導体を含む場合がある。ヌクレオチドという用語は、本明細書で使用するとき、ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸（ｄｄＮＴＰｓ）およびそれらの誘導体を指す場合がある。ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸の例示的な例として、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＩＴＰ、ｄｄＴＴＰを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ヌクレオチドには、ラベルが付されていないか、周知の技法により検出可能にラベルを付されている場合がある。ラベル付けはさらに、量子ドットにより行うことができる。検出可能なラベルとして、例えば、放射性同位体、蛍光ラベル、化学発光ラベル、生物発光ラベル、および酵素ラベルを挙げることができる。ヌクレオチドの蛍光ラベルとして、フルオレセイン、５－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、２’７’－ジメトキシ－４’５－ジクロロ－６－カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、ローダミン、６－カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６－カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸ）、４－（４’ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、カスケードブルー、オレゴングリーン、テキサスレッド、シアニン、および５－（２’－アミノエチル）アミノナフタレン－１－スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。蛍光標識したヌクレオチドの特異的な例として、カリフォルニア州フォスターシティのＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから入手可能な［Ｒ６Ｇ］ｄＵＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＵＴＰ、［Ｒ１１０］ｄＣＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＣＴＰ、［ＪＯＥ］ｄｄＡＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ＦＡＭ］ｄｄＣＴＰ、［Ｒ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、［ＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ、［ｄＲ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ｄＲ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ｄＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、および［ｄＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ、イリノイ州アーリントンハイツのＡｍｅｒｓｈａｍから入手可能なＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ ＤｅｏｘｙＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｆｌｕｏｒ Ｘ－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＵＴＰ、およびＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＵＴＰ、インディアナ州インディアナポリスのＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手可能なＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１５－ｄＡＴＰ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄＵＴＰ、Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－ｒｏｄａｍｉｎｅ－６－ｄＵＴＰ、ＩＲ７７０－９－ｄＡＴＰ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄｄＵＴＰ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ＵＴＰ、およびＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１５－２’－ｄＡＴＰ、ならびにオレゴン州ユージーンのＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから入手可能なＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｌａｂｅｌｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ｄＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ｄＵＴＰ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ－７－ＵＴＰ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ－７－ｄＵＴＰ、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ＵＴＰ、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－１２－ｄＵＴＰ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ４８８－５－ｄＵＴＰ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ－５－ＵＴＰ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ－５－ｄＵＴＰ、ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ－６－ＵＴＰ、ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ－６－ｄＵＴＰ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ－５－ＵＴＰ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ－５－ｄＵＴＰ、およびＴｅｘａｓ Ｒｅｄ－１２－ｄＵＴＰを挙げることができる。ヌクレオチドはさらに、化学的修飾によりラベル付けまたはマーク付けされる場合がある。化学的に修飾された単一ヌクレオチドは、ビオチン－ｄＮＴＰであり得る。ビオチン化ｄＮＴＰの一部の非限定的な例として、ビオチン－ｄＡＴＰ（例えばｂｉｏ－Ｎ６－ｄｄＡＴＰ、ビオチン－１４－ｄＡＴＰ）、ビオチン－ｄＣＴＰ（例えばビオチン－１１－ｄＣＴＰ、ビオチン－１４－ｄＣＴＰ）、およびビオチン－ｄＵＴＰ（例えばビオチン－１１－ｄＵＴＰ、ビオチン－１６－ｄＵＴＰ、ビオチン－２０－ｄＵＴＰ）を挙げることができる。

【0026】

「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸」という用語は、一本鎖、二本鎖、または多重鎖の形態にある任意の長さのヌクレオチド、すなわち、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、あるいはそれらのアナログの高分子形態を指すように、交換可能に使用される。ポリヌクレオチドは、細胞外生または細胞内にある場合がある。ポリヌクレオチドは、無細胞環境に存在する場合がある。ポリヌクレオチドは、遺伝子またはそのフラグメントの場合がある。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡの場合がある。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡの場合がある。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し、既知または未知の機能を実行することができる。ポリヌクレオチドは、１つ以上のアナログ（例えば改変されたバックボーン、糖、または核酸塩基）を含む場合がある。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーのアセンブリの前または後に与えられる場合がある。アナログの一部の非限定的な例として、５－ブロモウラシル、ペプチド核酸、ゼノ核酸、モルホリノ、ロックド核酸、グリコール核酸、トレオース核酸、ジデオキシヌクレオチド、コルジセピン、７－デアザ－ＧＴＰ、フルオロフォア（例えば糖に結合されるローダミンまたはフルオレセイン）、チオール、ヌクレオチド、ビオチン結合ヌクレオチド、蛍光塩基アナログ、ＣｐＧ島、メチル－７－グアノシン、メチル化ヌクレオチド、イノシン、チオウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、キューオシン、およびワイオシンが挙げられる。ポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子または遺伝子フラグメントのコード領域またはノンコーディング領域、連鎖解析から定義された座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列から単離されたＤＮＡ、任意の配列から単離されたＲＮＡ、無細胞ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）および無細胞ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）を含む無細胞ポリヌクレオチド、核酸プローブ、およびプライマーが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により妨げられる場合がある。

【0027】

「トランスフェクション」または「トランスフェクトされた」という用語は、概して非ウイルスまたはウイルスベースの方法による核酸の細胞への導入を指す。核酸分子は、完全タンパク質またはその機能部分をコードする遺伝子配列の場合がある。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１８．１－１８．８８を参照されたい。

【0028】

「発現」または「発現する」という用語は、ポリヌクレオチドがＤＮＡ鋳型から（ｍＲＮＡまたは他のＲＮＡ転写産物などへと）転写される１つ以上のプロセス、および／または転写されたｍＲＮＡが、引き続きペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質へと翻訳されるプロセスを指す。転写産物およびコードされたポリペプチドは、総じて「遺伝子産物」と称される場合がある。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、真核細胞中のｍＲＮＡのスプライシングを含む場合がある。発現に関して「アップレギュレートされた」とは、概して、ポリヌクレオチド（例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡ）および／またはポリペプチド配列の発現レベルがその野生型状態のレベルと比較して上昇したことを指し、一方で「ダウンレギュレートされた」とは、概して、ポリヌクレオチド（例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡ）および／またはポリペプチド配列の発現レベルがその野生型状態のレベルと比較して低下したことを指す。

【0029】

用語「遺伝子」は、本明細書で使用するとき、任意選択でプロモータ、オペレータ、ターミネータなどの関連制御領域とともに、個々のタンパク質またはＲＮＡをコードする核酸の部分（「コード配列」または「コード領域」とも称される）を指し、この関連制御領域は、コード配列の上流または下流に位置していてもよい。「遺伝子」という用語は、広く解釈されるものであり、遺伝子のｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ、およびゲノムＤＮＡ形態を包含する場合がある。一部の用途では、「遺伝子」という用語は、５’および３’の未翻訳領域（５’－ＵＴＲおよび３’－ＵＴＲ）を含む転写された配列、エクソン、およびイントロンを包含する。いくつかの遺伝子では、転写された領域は、ポリペプチドをコードする「オープンリーディングフレーム」を包含する。この用語の一部の用途では、「遺伝子」は、ポリペプチドをコードするのに必要なコード配列（例えば「オープンリーディングフレーム」または「コード領域」）のみを含む。いくつかの態様では、遺伝子は、ポリペプチド、例えばリボソームＲＮＡ遺伝子（ｒＲＮＡ）や転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）遺伝子をコードしない。いくつかの態様では、「遺伝子」という用語は、転写された配列以外に、上流および下流の制御領域を含む非転写領域、エンハンサ、およびプロモータを含む。「遺伝子」という用語は、遺伝子のｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、およびゲノム形態を包含する場合がある。

【0030】

本明細書で使用するとき、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーに関連して本明細書で交換可能に使用される。タンパク質は、コーディングオープンリーディングフレームから翻訳されるか、その成熟形態へと処理されるような完全長のポリペプチドを指し、一方でポリペプチドまたはペプチドは、特定のタンパク質へと固有または同一にマッピングされるタンパク質の分解フラグメントまたは処理フラグメントを指す場合がある。ポリペプチドは、隣接したアミノ酸残基のカルボキシル基とアミノ基との間のペプチド結合により一体的に結合されるアミノ酸の単一の線状ポリマー鎖であり得る。ポリペプチドは、例えば、炭水化物の追加やリン酸化などにより修飾される場合がある。タンパク質は、１以上のポリペプチドを含む場合がある。

【0031】

本明細書で使用するとき、「フラグメント」という用語、またはその同義語は、長さがタンパク質の全長未満であるとともに、任意選択でタンパク質の機能を維持するタンパク質の部分を指す場合がある。さらに、このタンパク質の部分がタンパク質に対して分芽（ｂｌａｓｔｅｄ）されると、タンパク質配列の部分は、例えば、少なくともタンパク質配列の一部に対し８０％の同一性をもって位置合わせすることができる。

【0032】

「補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）」、「補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｓ）」、「相補的」、および「相補性」という用語は、本明細書で使用するとき、概して所与の配列に対して完全に相補的であるとともにハイブリダイズ可能な配列を指す。場合により、例えばＡ－Ｔ、Ａ－Ｕ、Ｇ－Ｃ、およびＧ－Ｕの塩基対が形成されるように、所与の領域にわたり塩基の配列が、その結合パートナーの配列と相補的に結合可能である場合、所与の核酸でハイブリダイズされる配列は、所与の分子の「補体」または「逆補体」と称される。一般に、第２の配列にハイブリダイズ可能な第１の配列は、第２の配列に特異的または選択的にハイブリダイズ可能であり、その結果、第２の配列またはそのセットに対するハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション反応中に非標的配列とのハイブリダイゼーションに対して優先する（例えば、当該技術分野でよく使用される厳密な条件など、所与の条件のセット下で熱力学的により安定した条件）。典型的に、ハイブリダイズ可能な配列は、少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列相補性を含む、２５％～１００％の相補性など、それぞれの長さのすべてまたは一部にわたる配列相補性の程度を共有している。相補性の割合を評価するためなどの配列同一性は、任意の適切なアライメントアルゴリズムにより測定可能であり、このアルゴリズムとして、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を伴うｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．ｈｔｍｌにて利用可能なＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅアライナーを参照）、ＢＬＡＳＴアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を伴うｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉにて利用可能なＢＬＡＳＴアライメントツールを参照）、またはＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を伴うｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｗａｔｅｒ／ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．ｈｔｍｌにて利用可能なＥＭＢＯＳＳ Ｗａｔｅｒアライナーを参照）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。最適なアライメントは、デフォルトパラメータを含む選択されたアルゴリズムのあらゆる適切なパラメータを使用して評価することができる。

【0033】

「パーセント（％）同一性」という用語は、本明細書で使用するとき、概して候補となる配列のアミノ酸（または核酸）残基の割合を指し、この残基は、必要に応じて最大のパーセント同一性を達成するべく配列のアライメントおよびギャップの導入後の参照配列のアミノ酸（または核酸）残基と同一のものである（すなわち、ギャップは、最適なアライメントのために候補配列および参照配列のうち１つまたは両方に導入することができ、比較目的のために非相同的な配列は無視される場合がある）。パーセント同一性を決定するためのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野内にある様々な方法で達成することができる。２つの配列のパーセント同一性は、ＢＬＡＳＴを用いて被験配列を比較配列とアライメントし、比較配列の同じ位置にあるアミノ酸またはヌクレオチドと同一であるアライメントされた被験配列におけるアミノ酸またはヌクレオチドの数を判定し、および同一のアミノ酸またはヌクレオチドの数を、比較配列中のアミノ酸またはヌクレオチドの数で割ることにより、算出することができる。

【0034】

「ミスマッチ」という用語は、概してアライメントされたときの２つのヌクレオチド間の相補性の欠如を指す。ＤＮＡの相補塩基は、ＡＴおよびＧ－Ｃである。ＲＮＡの相補塩基は、Ａ－ＵおよびＧ－Ｃである。このため、ミスマッチは、２つのオリゴヌクレオチド配列が、ＤＮＡ中でＡがＴと対にならず、またはＧがＣと対にならず、あるいはＲＮＡ中でＡがＵと対にならず、またはＧがＣと対にならない１つ以上のヌクレオチド位置においてアライメントされるときに生じる。

【0035】

本明細書で使用するとき、用語「ｉｎ ｖｉｖｏ」は、対象の身体に生じる事象を説明するために使用することができる。

【0036】

本明細書で使用するとき、用語「ｅｘ ｖｉｖｏ」は、対象の身体の外部に生じる事象を説明するために使用することができる。「ｅｘ ｖｉｖｏ」アッセイは、対象に対して実行することができない。むしろ、対象とは別の試料に対して実行することができる。Ｅｘ ｖｉｖｏは、対象の身体の外部で無傷の細胞に生じる事象を説明するために使用することができる。

【0037】

本明細書で使用するとき、用語「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」は、材料が入手される生きた生物学的ソースの生物体から分離されるように、検査試薬を保持するために容器に含めたときに生じる事象を説明するために使用することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、生存または死亡している細胞が利用される細胞ベースの分析を包含し得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイはさらに、無傷の細胞が利用されない無細胞分析を包含し得る。

【0038】

「処置すること」または「処置」は、治療上の処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指す場合があり、対象において標的とされた疾病または障害が予防または遅延（緩和）されることとなる。処置を必要とする者には、既に障害を抱える者に加えて、障害を抱える傾向がある者、または障害が予防されるべき者が挙げられる。治療利益は、処置される症状あるいは根底にある障害の根絶または寛解を指す場合がある。また、治療利益は、対象が依然として根底にある障害の影響を受ける可能性があるにもかかわらず、対象に改善が観察されるように、根底にある障害に関連した生理学的症状のうち１以上の根絶または寛解により達成することができる。予防利益として、疾患もしくは疾病の出現を遅延、予防、または排除すること、疾患もしくは疾病の症状の発症を遅延または排除すること、疾患もしくは疾病の進行を遅くする、止める、または逆転させること、あるいはそれらの任意の組合せを挙げることができる。予防利益において、特定の疾患を進行させる危険のある対象、または疾患の生理学的症状のうち１つ以上を報告する対象は、この疾患の診断を行うことができなかった場合であっても、処置を受ける場合がある。

【0039】

「有効量」および「治療上有効量」という用語は、本明細書で交換可能に使用するとき、概して必要とする対象への投与に際して所望の活性をもたらすのに十分な組成物、例えば、本開示の系を含むリンパ球（例えばＴリンパ球および／またはＮＫ細胞）などの免疫細胞を含む組成物の量を指す。本開示の文脈内で、「治療上有効」という用語は、徴候を遅らせる、進行を阻止する、あるいは本開示の方法により処置される障害の少なくとも１つの症状を軽減または緩和するのに十分な組成物の量を指す。

【0040】

「薬学的に許容可能な担体」、「薬学的に許容可能な賦形剤」、「生理学的に許容可能な担体」、または「生理学的に許容可能な賦形剤」という用語は、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶剤、あるいは封入材料など、薬学的に許容可能な材料、組成物、または溶媒を指す。化合物は、医薬製剤の他の成分と適合可能という意味で「薬学的に許容可能」な場合がある。化合物はさらに、合理的なベネフィット・リスク比と比例して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、あるいはその他の問題または合併症がないヒトおよび動物の組織または器官に接して使用するのに適切な場合がある。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ”、Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００５、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．，Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００４）を参照されたい。

【0041】

「医薬組成物」という用語は、本明細書に開示される化合物と、希釈剤または担体などの他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物は、生物体への化合物の投与を容易にすることができる。化合物投与のあらゆる技法が当該技術分野に存在しており、経口投与、注射、エアロゾル投与、非経口投与、および局所投与が挙げられるがこれらに限定されない。

【0042】

本開示は、ＰＤ－Ｌ１を用いて操作された間葉系幹細胞エキソソーム、すなわち自己免疫疾患および移植における耐性を誘導する新規な無細胞治療薬（ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を対象とする。エキソソームや微小小胞体（脱粒小胞（ｓｈｅｄｄｉｎｇ ｖｅｓｉｃｌｅ）とも知られる）などの細胞外小胞は、細胞外環境および免疫系に影響を及ぼす生物活性分子を運ぶものである。エキソソームＰＤ－Ｌ１には細胞表面ＰＤ－Ｌ１と同じ膜トポロジーがあり、その細胞外ドメインはエキソソームの表面上に露出していることが認められている。エキソソームＰＤ－Ｌ１は、濃度に依存する様式でＰＤ－１に結合し、この相互作用は、ＰＤ－Ｌ１－遮断抗体により破壊される場合がある。高レベルのエキソソームＰＤ－Ｌ１は、Ｔ細胞の「枯渇」を、Ｔ細胞が抗ＰＤ－１処置によりこれ以上回復することのできない段階へと反映する場合がある。さらに、ＩＦＮ－γに応じてエキソソームＰＤ－Ｌ１が増加すると、腫瘍細胞はＣＤ８ Ｔ細胞を適応的に不活化することができる。

【0043】

間葉系幹は、先ず健康な個体から単離される。これら細胞は、一旦拡張すると、さらなる使用のために保管される場合がある。次いで、これら細胞は、ＰＤ－Ｌ１を用いて操作することができる。このために、ＰＤＬ１遺伝子は、ラクトアドヘリン遺伝子と融合することができる。これにより、ＰＤ－Ｌ１分子はエキソソームの外部で挿入可能となる。操作の完遂を確認するに際し、これら細胞は、バイオリアクター上で成長し、調整培地は、エキソソームを単離するために採取される場合がある。エキソソーム単離において、エキソソームを採取し精製するために、タンジェント流濾過が使用される。これらエキソソームには、特定のＣＤ８＋およびＣＤ２５＋エフェクター細胞の免疫系を抑える能力がある。すべての自己免疫疾患の病院および移植における拒絶過程で重要となるのは、これらエフェクター細胞である。これらエキソソームは、一旦ｃＧＭＰ施設において生成され、すべての効力および他の要件を通過すると、患者の処置に使用することができる。いくつかの実施形態では、間葉系幹細胞エキソソームは、その抑制活性を増強するためにＰＤ－Ｌ１により操作することができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１により操作された間葉系幹細胞エキソソームは、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、ＣＯＰＤ、ループス、炎症性腸疾患、関節リウマチ、または乾癬を含むすべての自己免疫疾患および移植に対する処置であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１により操作された間葉系幹細胞エキソソームの機能は、操作された制御性Ｔ細胞が低酸素症条件下で培養される場合に増加する可能性がある。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１により操作された間葉系幹細胞エキソソームには、活性化された自己免疫系、具体的には患者のＣＤ８＋ＣＤ２５＋細胞を抑制する能力がある場合がある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームを使用すると、他のあらゆる細胞またはエキソソームは、間葉系幹細胞および間葉系幹細胞由来のエキソソームと同様に、ＰＤ－Ｌ１を含むように操作される場合がある。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１により操作された間葉系幹細胞エキソソームは、ｃＧＭＰ施設において調製可能である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１により操作された間葉系幹細胞エキソソームは、すべての自己免疫疾患、および移植処置として何らかの器官を提供された患者を処置するための臨床グレードのエキソソームと見なされる場合がある。

【0044】

本開示は、ＶＩＳＴＡ／ＰＤ－Ｌ１／ＣＴＬＡ－４を用いて操作された間葉系幹細胞エキソソーム、すなわち自己免疫疾患および移植における耐性を誘導する新規な無細胞治療薬を対象とする。エキソソームや微小小胞体（脱粒小胞とも知られる）などの細胞外小胞は、細胞外環境および免疫系に影響を及ぼす生物活性分子を運ぶものである。エキソソームＰＤ－Ｌ１には細胞表面ＰＤ－Ｌ１と同じ膜トポロジーがあり、その細胞外ドメインはエキソソームの表面上に露出していることが認められている。エキソソームＰＤ－Ｌ１は、濃度に依存する様式でＰＤ－１に結合し、この相互作用は、ＰＤ－Ｌ１－遮断抗体により破壊される場合がある。高レベルのエキソソームＰＤ－Ｌ１は、Ｔ細胞の「枯渇」を、Ｔ細胞が抗ＰＤ－１処置によりこれ以上回復することのできない段階へと反映する場合がある。さらに、ＩＦＮ－γに応じてエキソソームＰＤ－Ｌ１が増加すると、腫瘍細胞はＣＤ８ Ｔ細胞を適応的に不活化することができる。Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）は、造血細胞に発現されるＴ細胞機能の有力な負の調節因子である。ＶＩＳＴＡレベルは腫瘍微小環境内で高くなり、そこでは、このレベルを遮断することでマウスの抗腫瘍免疫応答を増強することができる。ＶＩＳＴＡは、発現が骨髄細胞系列内で最高となる造血区画内で優勢的に発現される。ＶＩＳＴＡ－Ｉｇは、Ｔ細胞の増殖を抑え、Ｔ細胞サイトカイン類および活性化マーカーの産生を鈍化させた。ＶＩＳＴＡは、抗原提示細胞に発現されるとＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化を抑える阻害型の免疫チェックポイント分子である。ＶＩＳＴＡは、ＴＬＲ７刺激の後、ＤＣ、およびＩＬ－１７－産生ＴＣＲγδ＋ならびにＣＤ４＋Ｔｈ１７ Ｔ細胞により媒介した炎症反応を決定的に調節する。ＣＴＬＡ４またはＣＴＬＡ－４（細胞毒性Ｔリンパ球関連タンパク質４）は、ＣＤ１５２（分化１５２のクラスタ）としても知られており、免疫チェックポイントとして機能するとともに免疫応答をダウンレギュレートするタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ４は、構成上制御性Ｔ細胞に発現されるが、活性化、癌においてとりわけ顕著な現象後の従来のＴ細胞でのみアップレギュレートされる。ＣＴＬＡ４は、抗原提示細胞の表面上でＣＤ８０またはＣＤ８６に結合すると「オフ」スイッチとして作用する。

【0045】

いくつかの実施形態では、間葉系幹細胞は、先ず健康な個体から単離可能である。これら細胞は、一旦拡張すると、さらなる使用のために保管される場合がある。次いで、これらの細胞は、ＶＩＳＴＡ／ＰＤ－Ｌ１／ＣＴＬＡ－４単独、またはこれらの組合せにより操作することができる。以下の免疫チェックポイントは、代わりに、またはＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、およびＣＴＬＡ－４と組み合わせて使用可能である：ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、またはＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）。

【0046】

このために、本明細書に記載の免疫チェックポイント遺伝子のうち１つまたはその組合せは、ラクトアドヘリン遺伝子、ＧＰＩタンパク質、あるいはその他のタンパク質またはリンカーと融合することができる。これにより、チェックポイントタンパク質はエキソソームの外部で挿入可能となる。操作の完遂を確認するに際し、これら細胞は、バイオリアクター上で成長し、調整培地は、エキソソームを単離するために採取される場合がある。エキソソーム単離において、エキソソームを採取し精製するために、タンジェント流濾過が使用可能である。これらエキソソームには、特定のＣＤ４＋／ＣＤ２５＋、すなわちＣＤ８＋ＣＤ２５＋エフェクター細胞または樹状細胞およびＢ細胞の免疫系を抑える能力がある。この抑制は、エキソソームの表面上でのチェックポイント分子の組合せに左右される。すべての自己免疫疾患の病院および移植における拒絶過程で重要となるのは、これらエフェクター細胞である。これらエキソソームは、一旦ｃＧＭＰ施設において生成され、すべての効力および他の要件を通過すると、患者の処置に使用することができる。いくつかの実施形態では、間葉系幹細胞エキソソームは、その抑制活性を増強するためにチェックポイント分子により操作することができる。このチェックポイントは、ＶＩＳＴＡ／ＰＤ－Ｌ１／ＣＴＬＡ－４の組合せ、またはいずれか単独であり得る。いくつかの実施形態では、チェックポイントは、本明細書に記載の免疫チェックポイント遺伝子の組合せであり得る。いくつかの実施形態では、チェックポイントを装飾した間葉系幹細胞エキソソームは、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、１型糖尿病、多発性硬化症、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、グレーブス病、若年性関節炎、ライム病、視神経炎、乾癬性関節炎、強膜炎、強皮症、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、ブドウ膜炎、炎症性眼疾病、白斑、ＣＯＰＤ、または臓器移植を含むがこれらに限定されない、すべての自己免疫疾患および移植に対する処置であり得る。いくつかの実施形態では、他のあらゆる細胞またはエキソソームは、本明細書に記載のプラットフォームの利用により、（間葉系幹細胞およびそのヒト線維芽細胞エキソソームと同様）免疫チェックポイントにより操作することができる。いくつかの実施形態では、チェックポイント分子を装飾したエキソソームは、注射、点眼薬、ネブライザーまたはスプレー、クリーム、および薬剤として認められる局所軟膏または他の任意の形態３０として製造可能である。いくつかの実施形態では、これらエキソソームは、ｃＧＭＰ施設において調整可能であり、すべての自己免疫疾患、および移植処置として何らかの器官を提供された患者を処置するための臨床グレードのエキソソームと見なされる場合がある。

【0047】

Ｉ．組成物
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法から生成される細胞外小胞を含む組成物が記載される。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞により分泌された膜結合型粒子である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された膜結合型粒子である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、ｅｘ ｖｉｖｏで生成された膜結合型粒子である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞を用いることなく生成された膜結合型粒子である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、エキソソーム、微小小胞体、レトロウイルス様粒子、アポトーシス小体、アポプトソーム、オンコソーム、エキソファー、外膜ウイルス、エキソマー、またはその他非常に大きな細胞外小胞である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞はエキソソームである。

【0048】

いくつかの例では、細胞外小胞は、約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの例では、細胞外小胞は、約１ｎｍ～約５ｎｍ、約１ｎｍ～約１０ｎｍ、約１ｎｍ～約２０ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約２００ｎｍ、約１ｎｍ～約５００ｎｍ、約１ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約５０ｎｍ、約５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５ｎｍ～約２００ｎｍ、約５ｎｍ～約５００ｎｍ、約５ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２０ｎｍ、約１０ｎｍ～約５０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、または約５，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの例では、細胞外小胞は、約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの例では、細胞外小胞は、最小で約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍまたは約５，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの例では、細胞外小胞は、最大で約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも約１ｎｍ～約５ｎｍ、約１ｎｍ～約１０ｎｍ、約１ｎｍ～約２０ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約２００ｎｍ、約１ｎｍ～約５００ｎｍ、約１ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約５０ｎｍ、約５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５ｎｍ～約２００ｎｍ、約５ｎｍ～約５００ｎｍ、約５ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２０ｎｍ、約１０ｎｍ～約５０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、または約５，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも最小で約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍまたは約５，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも最大で約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。

【0050】

いくつかの実施形態では、組成物は、複数の細胞外の小胞の異種集団を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、約１ｎｍ～約５ｎｍ、約１ｎｍ～約１０ｎｍ、約１ｎｍ～約２０ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約２００ｎｍ、約１ｎｍ～約５００ｎｍ、約１ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約５０ｎｍ、約５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５ｎｍ～約２００ｎｍ、約５ｎｍ～約５００ｎｍ、約５ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２０ｎｍ、約１０ｎｍ～約５０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、または約５，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、最小で約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、または約５，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、最大で約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、少なくとも約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、少なくとも約１ｎｍ～約５ｎｍ、約１ｎｍ～約１０ｎｍ、約１ｎｍ～約２０ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約２００ｎｍ、約１ｎｍ～約５００ｎｍ、約１ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約５０ｎｍ、約５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５ｎｍ～約２００ｎｍ、約５ｎｍ～約５００ｎｍ、約５ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２０ｎｍ、約１０ｎｍ～約５０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約５００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約２，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約１，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約５，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍ、または約５，０００ｎｍ～約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、少なくとも約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、少なくとも最小で約１ｎｍ、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、または約５，０００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の異種集団は、少なくとも最大で約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約２０ｎｍ、約５０ｎｍ、約１００ｎｍ、約２００ｎｍ、約５００ｎｍ、約１，０００ｎｍ、約２，０００ｎｍ、約５，０００ｎｍ、または約１０，０００ｎｍの直径を含む。

【0052】

いくつかの実施形態では、組成物は、複数の細胞外の小胞の同種集団を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の同種集団は、約１０ｎｍ～約１５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の同種集団は、約１０ｎｍ～約３０ｎｍ、約１０ｎｍ～約４０ｎｍ、約１０ｎｍ～約５０ｎｍ、約１０ｎｍ～約６０ｎｍ、約１０ｎｍ～約７０ｎｍ、約１０ｎｍ～約８０ｎｍ、約１０ｎｍ～約９０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約３０ｎｍ～約４０ｎｍ、約３０ｎｍ～約５０ｎｍ、約３０ｎｍ～約６０ｎｍ、約３０ｎｍ～約７０ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３０ｎｍ～約９０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約６０ｎｍ、約４０ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約６０ｎｍ、約５０ｎｍ～約７０ｎｍ、約５０ｎｍ～約８０ｎｍ、約５０ｎｍ～約９０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約７０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約９０ｎｍ～約１００ｎｍ、約９０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約９０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約９０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約１００ｎｍ～約１１０ｎｍ、約１００ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１００ｎｍ～約１５０ｎｍ、約１１０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１１０ｎｍ～約１５０ｎｍ、または約１２０ｎｍ～約１５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の同種集団は、約１０ｎｍ、約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、約６０ｎｍ、約７０ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１１０ｎｍ、約１２０ｎｍ、または約１５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の同種集団は、最小で約１０ｎｍ、約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、約６０ｎｍ、約７０ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１１０ｎｍ、または約１２０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の同種集団は、最大で約３０ｎｍ、約４０ｎｍ、約５０ｎｍ、約６０ｎｍ、約７０ｎｍ、約８０ｎｍ、約９０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１１０ｎｍ、約１２０ｎｍ、または約１５０ｎｍの直径を含む。

【0053】

免疫チェックポイント部分
本明細書中のいくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分を含む細胞外小胞を含む組成物が記載される。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は複数の免疫チェックポイント部分を含み、そこでは、免疫チェックポイント部分は同じまたは異なる場合がある。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞に封入される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞の表面に発現される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞により分泌される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞に封入される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞の表面に発現されるか、細胞外小胞により分泌されるか、細胞外小胞により標的細胞または標的微小環境に送達されるか、またはこれらの組合せである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、疾患または障害を処置するための治療特性を含む。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、自己免疫性疾患である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分を含む細胞外小胞を含む組成物は、疾患または障害を処置するために対象に投与することができる。

【0054】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、Ａ２ＡＲ、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、またはＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）をコードするペプチド配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡ、その変形、またはそのフラグメントをコードするペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、配列番号１に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、配列番号１（表１）に対して１００％同一のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＰＤ－Ｌ１、その変形、またはそのフラグメントをコードするペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、配列番号２に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、配列番号２（表１）に対して１００％同一のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＣＴＬＡ－４、その変形、またはそのフラグメントをコードするペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、配列番号３に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、配列番号３（表１）に対して１００％同一のペプチド配列を含む。

【0055】

【表1】

【0056】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、異種ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ＳＲＰ ＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、ｇＲＮＡ、ａＲＮＡ、ｃｒＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｎｃＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡを含む。場合により、異種ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡ含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、Ａ２ＡＲ、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、またはＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）の核配列をコードする。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡをコードする異種ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＰＤ－Ｌ１をコードする異種ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＣＴＬＡ－４をコードする異種ポリヌクレオチドを含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、サイトカインをコードする異種ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、サイトカインのペプチド配列を含むポリペプチドを含む免疫チェックポイント部分として利用可能な例示的なサイトカインとして、４－１ＢＢＬ、アシル化刺激タンパク質、アディポカイン、アルブインターフェロン、ＡＰＲＩＬ、Ａｒｈ、ＢＡＦＦ、Ｂｃｌ－６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１／ＴＣＡ３、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２／ＭＣＰ－５、ＣＣＬ１３／ＭＣＰ－４、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２／ＭＣＰ－１、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２／ＭＤＣ、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ４Ｌ１／ＬＡＧ－１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１７８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＤ７０、ＣＤ９５Ｌ／ＣＤ１７８、Ｃｅｒｂｅｒｕｓ（タンパク質）、ケモカイン、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、コロニー刺激因子、共通ｂ鎖（ＣＤ１３１）、共通ｇ鎖（ＣＤ１３２）、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ２／ＭＩＰ－２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＥＤＡ－Ａ１、Ｅｐｏ、エリスロポエチン、ＦＡＭ１９Ａ１、ＦＡＭ１９Ａ２、ＦＡＭ１９Ａ３、ＦＡＭ１９Ａ４、ＦＡＭ１９Ａ５、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド、Ｆｏｘｐ３、ＧＡＴＡ－３、ＧｃＭＡＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、肝細胞増殖因子、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５／ＩＦＮａＧ、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＺ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮω／ＩＦＮＷ１、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０ ｆａｍｉｌｙ、ＩＬ－１０－ｌｉｋｅ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７ファミリー、ＩＬ－１７Ａ－Ｆ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８ＢＰ、ＩＬ－１９、ＩＬ－１Ａ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－１Ｆ１０、ＩＬ－１Ｆ３／ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１Ｆ５、ＩＬ－１Ｆ６、ＩＬ－１Ｆ７、ＩＬ－１Ｆ８、ＩＬ－１Ｆ９、ＩＬ－１－ｌｉｋｅ、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１ＲＬ２、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ、ＩＬ－２９、ＩＬ－３、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－６－ｌｉｋｅ、ＩＬ－７、ＩＬ－８／ＣＸＣＬ８、ＩＬ－９、インフラマソーム、インターフェローム、インターフェロン、インターフェロンβ－１ａ、インターフェロンβ－１ｂ、インターフェロンγ、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、インターフェロン、インターロイキン、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン８、ＩＲＦ４、レプチン、白血病抑制因子 （ＬＩＦ）、白血球促進因子、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＡ／ＴＮＦＢ、ＬＴ－β、リンホカイン、リンホトキシン、リンホトキシンα、リンホトキシンβ、マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージ炎症タンパク質、マクロファージ活性化因子、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＨＣクラスＩＩＩ、様々なヘマトポエチン、モノカイン、ＭＳＰ、ミオカイン、ミオネクチン、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、オプレルベキン、ＯＸ４０Ｌ、血小板因子４、プロメガポエチン、ＲＡＮＫＬ、ＳＣＦ、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ６、ストローマ細胞由来因子１、ＴＡＬＬ－１、ＴＢＸ２１、ＴＧＦ－α、ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１２、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＮＣＥ、ＴＷＥＡＫ、血管内皮成長阻害薬、ＸＣＬ１、またはＸＣＬ２が挙げられる。

【0058】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、本明細書に記載の膜貫通部分と複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、本明細書に記載の膜貫通部分と非共有結合的に複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、本明細書に記載の膜貫通部分と共有結合により複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、免疫チェックポイント部分と膜貫通部分の両方を含む融合タンパク質の一部として発現可能である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、免疫チェックポイント部分と膜貫通部分のフラグメントとの両方を含む融合タンパク質の一部として発現可能である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分のＮ末端は、膜貫通部分に融合可能である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分のＣ末端は、本明細書に記載の膜貫通部分に縮合可能である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、免疫チェックポイント部分のＮ末端とＣ末端の両方にある膜貫通部分により融合され、かつ該膜貫通部分と隣接する場合がある。例えば、免疫チェックポイント部分は、融合ペプチドの一部として膜貫通部分へと挿入することができ、この場合、融合ペプチドのＮ末端は、膜貫通部分のフラグメントを含み、続いて免疫チェックポイント部分（あるいはその変形またはフラグメント）、そして膜貫通部分の他のフラグメントを含む融合ペプチドのＣ末端を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は融合ペプチドを含み、ここで免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分に融合される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と複合体を形成する免疫チェックポイント部分を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と非共有結合的に複合体を形成する免疫チェックポイント部分を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と共有結合により複合体を形成する免疫チェックポイント部分を含む。

【0059】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、本明細書に記載の複数の免疫チェックポイント部分を含む。いくつかの実施形態では、複数の免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞に封入される。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも１、１０、１００、５００、１，０００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、またはそれより多くの免疫チェックポイント部分のユニットを封入する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、封入された免疫チェックポイントを標的細胞または標的微小環境に送達する。

【0060】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、本明細書に記載の複数の免疫チェックポイント部分を分泌する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも１、１０、１００、５００、１，０００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、またはそれより多くの免疫チェックポイント部分のユニットを分泌する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、封入された免疫チェックポイントを標的細胞または標的微小環境に分泌する。

【0061】

いくつかの実施形態では、複数の免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞の表面に発現される。いくつかの実施形態では、複数の免疫チェックポイント部分は、免疫のチェックポイント部分および膜貫通部分を含む融合ペプチドの一部として発現される。いくつかの例では、細胞外小胞の表面に発現された免疫チェックポイント部分を含む細胞外小胞は、標的細胞または標的環境と接触する。

【0062】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の寸法と、免疫チェックポイント部分を含む発現された免疫チェックポイント部分または発現された融合ペプチドの寸法との比により求められる理論最大値により制限される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％である免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞を生成し、選択することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％である免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも３０％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも７０％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも７５％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも８０％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも８５％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも９０％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも９５％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームおよび方法は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を生成し、選択することができ、先の免疫チェックポイント部分のユニット数は、細胞外小胞の表面に発現可能な免疫チェックポイント部分のユニット数の理論最大値の少なくとも９５％である。

【0063】

いくつかの実施形態では、各細胞外小胞は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現し、このユニット数は、約５ユニット～約１，０００，０００ユニットであり得る。いくつかの実施形態では、各細胞外小胞は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現し、このユニット数は、約５ユニット～約１０ユニット、約５ユニット～約５０ユニット、約５ユニット～約１００ユニット、約５ユニット～約５００ユニット、約５ユニット～約１，０００ユニット、約５ユニット～約５，０００ユニット、約５ユニット～約１０，０００ユニット、約５ユニット～約５０，０００ユニット、約５ユニット～約１００，０００ユニット、約５ユニット～約５００，０００ユニット、約５ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１０ユニット～約５０ユニット、約１０ユニット～約１００ユニット、約１０ユニット～約５００ユニット、約１０ユニット～約１，０００ユニット、約１０ユニット～約５，０００ユニット、約１０ユニット～約１０，０００ユニット、約１０ユニット～約５０，０００ユニット、約１０ユニット～約１００，０００ユニット、約１０ユニット～約５００，０００ユニット、約１０ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５０ユニット～約１００ユニット、約５０ユニット～約５００ユニット、約５０ユニット～約１，０００ユニット、約５０ユニット～約５，０００ユニット、約５０ユニット～約１０，０００ユニット、約５０ユニット～約５０，０００ユニット、約５０ユニット～約１００，０００ユニット、約５０ユニット～約５００，０００ユニット、約５０ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１００ユニット～約５００ユニット、約１００ユニット～約１，０００ユニット、約１００ユニット～約５，０００ユニット、約１００ユニット～約１０，０００ユニット、約１００ユニット～約５０，０００ユニット、約１００ユニット～約１００，０００ユニット、約１００ユニット～約５００，０００ユニット、約１００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５００ユニット～約１，０００ユニット、約５００ユニット～約５，０００ユニット、約５００ユニット～約１０，０００ユニット、約５００ユニット～約５０，０００ユニット、約５００ユニット～約１００，０００ユニット、約５００ユニット～約５００，０００ユニット、約５００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１００，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１００，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、または約５００，０００ユニット～約１，０００，０００ユニットであり得る。いくつかの実施形態では、各細胞外小胞は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現し、このユニット数は、約５ユニット、約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、約５００，０００ユニット、または約１，０００，０００ユニットであり得る。いくつかの実施形態では、各細胞外小胞は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現し、このユニット数は、最小で約５ユニット、約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、または約５００，０００ユニットであり得る。いくつかの実施形態では、各細胞外小胞は、細胞外小胞の表面に免疫チェックポイント部分のユニット数を発現し、このユニット数は、最大で約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、約５００，０００ユニット、または約１，０００，０００ユニットであり得る。

【0064】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、細胞外小胞の表面に、本明細書に記載の免疫のチェックポイント部分の任意のユニット数を発現する細胞外小胞の異種集団を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、細胞外小胞の表面上に、ある範囲の免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する細胞外小胞の均質集団を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、約５ユニット～約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、約５ユニット～約１０ユニット、約５ユニット～約５０ユニット、約５ユニット～約１００ユニット、約５ユニット～約５００ユニット、約５ユニット～約１，０００ユニット、約５ユニット～約５，０００ユニット、約５ユニット～約１０，０００ユニット、約５ユニット～約５０，０００ユニット、約５ユニット～約１００，０００ユニット、約５ユニット～約５００，０００ユニット、約５ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１０ユニット～約５０ユニット、約１０ユニット～約１００ユニット、約１０ユニット～約５００ユニット、約１０ユニット～約１，０００ユニット、約１０ユニット～約５，０００ユニット、約１０ユニット～約１０，０００ユニット、約１０ユニット～約５０，０００ユニット、約１０ユニット～約１００，０００ユニット、約１０ユニット～約５００，０００ユニット、約１０ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５０ユニット～約１００ユニット、約５０ユニット～約５００ユニット、約５０ユニット～約１，０００ユニット、約５０ユニット～約５，０００ユニット、約５０ユニット～約１０，０００ユニット、約５０ユニット～約５０，０００ユニット、約５０ユニット～約１００，０００ユニット、約５０ユニット～約５００，０００ユニット、約５０ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１００ユニット～約５００ユニット、約１００ユニット～約１，０００ユニット、約１００ユニット～約５，０００ユニット、約１００ユニット～約１０，０００ユニット、約１００ユニット～約５０，０００ユニット、約１００ユニット～約１００，０００ユニット、約１００ユニット～約５００，０００ユニット、約１００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５００ユニット～約１，０００ユニット、約５００ユニット～約５，０００ユニット、約５００ユニット～約１０，０００ユニット、約５００ユニット～約５０，０００ユニット、約５００ユニット～約１００，０００ユニット、約５００ユニット～約５００，０００ユニット、約５００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１００，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１００，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、または約５００，０００ユニット～約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、少なくとも約５ユニット、約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、約５００，０００ユニット、または約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、少なくとも最小で約５ユニット、約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、または約５００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、少なくとも最大で約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、約５００，０００ユニット、または約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。

【0065】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、多くとも約５ユニット～約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、多くとも約５ユニット～約１０ユニット、約５ユニット～約５０ユニット、約５ユニット～約１００ユニット、約５ユニット～約５００ユニット、約５ユニット～約１，０００ユニット、約５ユニット～約５，０００ユニット、約５ユニット～約１０，０００ユニット、約５ユニット～約５０，０００ユニット、約５ユニット～約１００，０００ユニット、約５ユニット～約５００，０００ユニット、約５ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１０ユニット～約５０ユニット、約１０ユニット～約１００ユニット、約１０ユニット～約５００ユニット、約１０ユニット～約１，０００ユニット、約１０ユニット～約５，０００ユニット、約１０ユニット～約１０，０００ユニット、約１０ユニット～約５０，０００ユニット、約１０ユニット～約１００，０００ユニット、約１０ユニット～約５００，０００ユニット、約１０ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５０ユニット～約１００ユニット、約５０ユニット～約５００ユニット、約５０ユニット～約１，０００ユニット、約５０ユニット～約５，０００ユニット、約５０ユニット～約１０，０００ユニット、約５０ユニット～約５０，０００ユニット、約５０ユニット～約１００，０００ユニット、約５０ユニット～約５００，０００ユニット、約５０ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１００ユニット～約５００ユニット、約１００ユニット～約１，０００ユニット、約１００ユニット～約５，０００ユニット、約１００ユニット～約１０，０００ユニット、約１００ユニット～約５０，０００ユニット、約１００ユニット～約１００，０００ユニット、約１００ユニット～約５００，０００ユニット、約１００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５００ユニット～約１，０００ユニット、約５００ユニット～約５，０００ユニット、約５００ユニット～約１０，０００ユニット、約５００ユニット～約５０，０００ユニット、約５００ユニット～約１００，０００ユニット、約５００ユニット～約５００，０００ユニット、約５００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約５０，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１０，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約１００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約５０，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、約１００，０００ユニット～約５００，０００ユニット、約１００，０００ユニット～約１，０００，０００ユニット、または約５００，０００ユニット～約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、多くとも約５ユニット、約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、約５００，０００ユニット、または約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、多くとも最小で約５ユニット、約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、または約５００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、多くとも最大で約１０ユニット、約５０ユニット、約１００ユニット、約５００ユニット、約１，０００ユニット、約５，０００ユニット、約１０，０００ユニット、約５０，０００ユニット、約１００，０００ユニット、約５００，０００ユニット、または約１，０００，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。

【0066】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、約１，０００ユニット～約１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、約１，０００ユニット～約１，５００ユニット、約１，０００ユニット～約２，０００ユニット、約１，０００ユニット～約２，５００ユニット、約１，０００ユニット～約３，０００ユニット、約１，０００ユニット～約４，０００ユニット、約１，０００ユニット～約５，０００ユニット、約１，０００ユニット～約６，０００ユニット、約１，０００ユニット～約７，０００ユニット、約１，０００ユニット～約８，０００ユニット、約１，０００ユニット～約９，０００ユニット、約１，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約１，５００ユニット～約２，０００ユニット、約１，５００ユニット～約２，５００ユニット、約１，５００ユニット～約３，０００ユニット、約１，５００ユニット～約４，０００ユニット、約１，５００ユニット～約５，０００ユニット、約１，５００ユニット～約６，０００ユニット、約１，５００ユニット～約７，０００ユニット、約１，５００ユニット～約８，０００ユニット、約１，５００ユニット～約９，０００ユニット、約１，５００ユニット～約１０，０００ユニット、約２，０００ユニット～約２，５００ユニット、約２，０００ユニット～約３，０００ユニット、約２，０００ユニット～約４，０００ユニット、約２，０００ユニット～約５，０００ユニット、約２，０００ユニット～約６，０００ユニット、約２，０００ユニット～約７，０００ユニット、約２，０００ユニット～約８，０００ユニット、約２，０００ユニット～約９，０００ユニット、約２，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約２，５００ユニット～約３，０００ユニット、約２，５００ユニット～約４，０００ユニット、約２，５００ユニット～約５，０００ユニット、約２，５００ユニット～約６，０００ユニット、約２，５００ユニット～約７，０００ユニット、約２，５００ユニット～約８，０００ユニット、約２，５００ユニット～約９，０００ユニット、約２，５００ユニット～約１０，０００ユニット、約３，０００ユニット～約４，０００ユニット、約３，０００ユニット～約５，０００ユニット、約３，０００ユニット～約６，０００ユニット、約３，０００ユニット～約７，０００ユニット、約３，０００ユニット～約８，０００ユニット、約３，０００ユニット～約９，０００ユニット、約３，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約４，０００ユニット～約５，０００ユニット、約４，０００ユニット～約６，０００ユニット、約４，０００ユニット～約７，０００ユニット、約４，０００ユニット～約８，０００ユニット、約４，０００ユニット～約９，０００ユニット、約４，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約５，０００ユニット～約６，０００ユニット、約５，０００ユニット～約７，０００ユニット、約５，０００ユニット～約８，０００ユニット、約５，０００ユニット～約９，０００ユニット、約５，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約６，０００ユニット～約７，０００ユニット、約６，０００ユニット～約８，０００ユニット、約６，０００ユニット～約９，０００ユニット、約６，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約７，０００ユニット～約８，０００ユニット、約７，０００ユニット～約９，０００ユニット、約７，０００ユニット～約１０，０００ユニット、約８，０００ユニット～約９，０００ユニット、約８，０００ユニット～約１０，０００ユニット、または約９，０００ユニット～約１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、約１，０００ユニット、約１，５００ユニット、約２，０００ユニット、約２，５００ユニット、約３，０００ユニット、約４，０００ユニット、約５，０００ユニット、約６，０００ユニット、約７，０００ユニット、約８，０００ユニット、約９，０００ユニット、または約１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、最小で約１，０００ユニット、約１，５００ユニット、約２，０００ユニット、約２，５００ユニット、約３，０００ユニット、約４，０００ユニット、約５，０００ユニット、約６，０００ユニット、約７，０００ユニット、約８，０００ユニット、または約９，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団は、最大で約１，５００ユニット、約２，０００ユニット、約２，５００ユニット、約３，０００ユニット、約４，０００ユニット、約５，０００ユニット、約６，０００ユニット、約７，０００ユニット、約８，０００ユニット、約９，０００ユニット、または約１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分のユニット数を発現する。

【0067】

膜貫通部分
本明細書中のいくつかの実施形態では、膜貫通部分を含む細胞外小胞を含む組成物が記載される。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、完全長タンパク質、その変形、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、１４－３－３タンパク質ゼータ／デルタ、４－３－３タンパク質イプシロン、７８ｋＤａグルコース調節タンパク質、アセチルコリンエステラーゼ／ＡＣｈＥ－Ｓ、ＡＣｈＥ－Ｅ、アクチン、細胞質１（ＡＣＴＡ）、ＡＤＡＭ１０、アルカリンホスファターゼ、α－エノラーゼ、α－シヌクレイン、アミノペプチダーゼＮ、アミロイドβ Ａ４／ＡＰＰ、アネキシン５Ａ、アネキシンＡ２、ＡＰ－１、ＡＴＦ３、ＡＴＰシトレートリアーゼ、ＡＴＰアーゼ、βアクチン（ＡＣＴＢ）、β－アミロイド４２、カベオリン１、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ１６３、ＣＤ２４、ＣＤ２６／ＤＰＰ４、ＣＤ２９／ＩＴＧＢ１、ＣＤ３、ＣＤ３７、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ４９、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ９、ＣＤ９０、クローディン、クローディン１、コフィリン－１、補体結合タンパク質ＣＤ５５およびＣＤ５９、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０α、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０β、ＥＢＶ ＬＭＰ１、ＥＢＶ ＬＭＰ２Ａ、ＥＦ－１α－１、ＥＦ２、ＥＦＧＲ ＥＧＦＲ ＶＩＩＩ、エムプリン／ＣＤ１４７、エノラーゼ１α（ＥＮＯ１）、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ２、テトラスパニン（ＣＤ９、ＣＤ６３、およびＣＤ８１）、脂肪酸シンターゼ、フェツインＡ、フロチリン－１、フロチリン－２、フルクトース二リン酸アルドラーゼＡ、グリセリンアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、グリコホリンＡ、ＧＰＣ１、ＧＰＩアンカー５’ヌクレオチダーゼ、ＧＴＰアーゼ、熱ショックタンパク質８（ＨＳＰＡ８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ヘパリナーゼ、ヘテロ三量体Ｇタンパク質、ＨＩＶ Ｇａｇ、ＨＩＶ Ｎｅｆ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＳＶ ｇＢ、ＨＴＬＶ－１ Ｔａｘ、ハンチンチン、ＩＣＡＭ１、インテグリン、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ１／２、ＬＡＭＰ２ｂ、ロイシンリッチ受容体キナーゼ２、Ｌ－乳酸デヒドロゲナーゼＡ鎖、リソソーム関連膜糖タンパク質１、リソソーム関連膜糖タンパク質２、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＵＣ１、多剤耐性関連タンパク質、筋肉ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ２）、Ｎ－カドヘリン、ＮＫＣＣ２、ＰＤＣＤ６ＩＰ／Ａｌｉｘ、ＰＥＣＡＭ１、ホスホグリセレートキナーゼ、胎盤プリオンタンパク質、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ）、Ｒａｂ－１４、Ｒａｂ－５ａ、Ｒａｂ－５ｂ、Ｒａｂ－５ｃ、Ｒａｂ－７、Ｒａｐ １Ｂ、レジスチン、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ））、サバイビング、シンデカン－１、シンデカン－４、シンテニン－１、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ２）、ＴＳＧ１０１、ＴＳＰＡＮ８、腫瘍関連糖タンパク質テトラスパニン－８、チロシン３－モノオキシゲナーゼ／トリプトファン５－モノオキシゲナーゼ活性化タンパク質、ＴＹＲＰ－２、液胞選別タンパク質３５、またはゼータポリペプチド（ＹＷＨＡＺ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ラクトアドヘリンを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ラクトアドヘリンのＣ１Ｃ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＬＡＭＰ２を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＬＡＭＰ２のＬＡＭＰ様ドメイン１を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＬＡＭＰ２ｂを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、配列番号４（表２）に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、配列番号４に対して１００％同一のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＧＰＩのグリカン部分を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＧＰＩの脂質部分を含む。場合により、膜貫通部分は、ＣＤ６３を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、配列番号５（表２）に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、配列番号５に対して１００％同一のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、修飾されたＣＤ６３を含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、少なくとも１つのＣＤ６３膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、ＣＤ６３の膜貫通ドメイン１（ＴＭ１）、ＣＤ６３の膜貫通ドメイン２（ＴＭ２）、ＣＤ６３の膜貫通ドメイン３（ＴＭ３）、ＣＤ６３の膜貫通ドメイン４（ＴＭ４）、またはこれらの任意の組合せであってもよい。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多くのＣＤ６３の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、１つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、２つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、３つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、４つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、５つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、６つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、７つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、８つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、９つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、１０の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、少なくとも１つの膜貫通ドメインが取り除かれるトランケートされたＣＤ６３であってもよい。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、ＣＤ６３のトランケーション、およびＣＤ６３の少なくとも１つの膜貫通ドメインの追加であってもよい。例えば、修飾されたＣＤ６３は、ＴＭ１を取り除くためにＮ末端においてトランケートされ、さらには追加のＴＭ３とＴＭ４を含むことで、膜貫通ドメインをＣＤ６３、ＴＭ２、ＴＭ３、ＴＭ４、ＴＭ３、ＴＭ４の順で含む修飾されたＣＤ６３をもたらす場合がある。

【0068】

【表2】

【0069】

いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、修飾されたＣＤ６３の非膜貫通ドメイン（細胞質ループまたは細胞外ループのいずれか）を挿入または置換することを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、免疫チェックポイント部分により挿入または置換される細胞質ループを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、免疫チェックポイント部分により挿入または置換される細胞外ループを含む。例えば、免疫チェックポイント部分を含むポリペプチドは、修飾されたＣＤ６３の細胞外ループへと挿入可能である。代替的に、免疫チェックポイント部分を含むポリペプチドは、修飾されたＣＤ６３の細胞外ループのフラグメントを置換可能である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３のトランケートされたバージョンに融合可能である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３のＮ末端に融合可能であり、この場合、修飾されたＣＤ６３は、膜貫通ドメインのうち少なくとも１つおよび／または非膜貫通ドメインのうち少なくとも１つを取り除くためにＮ末端においてトランケートされる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３のＮ末端に融合可能であり、この場合、修飾されたＣＤ６３は、膜貫通ドメインのうち少なくとも１つおよび／または非膜貫通ドメインのうち少なくとも１つを取り除くためにＮ末端においてトランケートされる。

【0070】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、リンカーを介してＣＤ６３などの膜貫通部分に融合可能である。いくつかの実施形態では、リンカーはリンカーペプチドである。リンカーペプチドは、膜貫通部分同士を接続する役目を果たす以外にも、場合により、協同的なドメイン間相互作用を維持し、生物活性を維持するなど、他の多くの機能を提供する（Ｇｏｋｈａｌｅ ＲＳ，Ｋｈｏｓｌａ Ｃ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｌｉｎｋｅｒｓ ｉｎ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｕｌｅｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２０００；４：２２－２７、Ｉｋｅｂｅ Ｍ，Ｋａｍｂａｒａ Ｔ，Ｓｔａｆｆｏｒｄ ＷＦ，Ｓａｔａ Ｍ，Ｋａｔａｙａｍａ Ｅ，Ｉｋｅｂｅ Ｒ．Ａ ｈｉｎｇｅ ａｔ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｈｅｌｉｘ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｍｙｏｓｉｎ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｍｙｏｓｉｎ ｍｏｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９８；２７３：１７７０２－１７７０７、およびＣｈｅｎ ＸＹ，Ｚａｒｏ Ｊ，ａｎｄ Ｓｈｅｎ ＷＣ．Ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｒｓ：ｐｒｏｐｅｒｔｙ，ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ２０１４；６５，１３５７－１３６９が、本明細書で引用される）。リンカーペプチドは、小型、中型、および大型のリンカーにグループ分け可能であり、それぞれ、平均長が最大４．５±０．７、９．１±２．４、および２１．０±７．６以上または未満の残基があるが、これら３つの範囲で定められる組の中にあるあらゆる例も、企図される。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、５～２００のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、５～２５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、切断可能である（例えば、Ｔｅｖプロテアーゼにより認識かつ切断可能なペプチド配列を含むリンカーペプチド）

【0071】

配列番号６～１７は、膜貫通部分ＣＤ６３に融合する免疫チェックポイント部分ＰＤ－Ｌ１の様々な配置を例示する（表３）。

【0072】

【表3-1】

【0073】

【表3-2】

【0074】

【表3-3】

【0075】

【表3-4】

【0076】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号６に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号６に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号６に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0077】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号７に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号７に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号７に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0078】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号８に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号８に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号８に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0079】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号９に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号９に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号９に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0080】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１０に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１０に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１０に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0081】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１１に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１１に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１１に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0082】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１２に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１２に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１２に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0083】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１３に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１３に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１３に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0084】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１４に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１４に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１４に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0085】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１５に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１５に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１５に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0086】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１６に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１６に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１６に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0087】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１７に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞は、配列番号１７に対して１００％同一のポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、配列番号１７に相当する発現されたポリペプチドは、部分的に細胞外小胞の膜に埋め込まれ、部分的に細胞外小胞の表面に発現される。

【0088】

いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、本明細書に記載の免疫チェックポイント部分と複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、本明細書に記載の免疫チェックポイント部分と非共有結合的に複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、本明細書に記載の免疫チェックポイント部分と共有結合により複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、膜貫通部分のＮ末端にて本明細書に記載の免疫チェックポイント部分に融合可能である。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、膜貫通部分のＣ末端にて本明細書に記載の免疫チェックポイント部分に融合可能である。

【0089】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、疾患または障害を処置するための治療特性を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、本明細書に記載の自己免疫疾患を処置するための治療特性を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、免疫細胞の活性を標的とし、調節する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、およびＴヘルパー細胞を含むＴ細胞であり得る。

【0090】

標的化部分
本明細書中のいくつかの実施形態では、標的化部分を含む細胞外小胞が記載される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、細胞外小胞の表面に発現される場合がある。いくつかの実施形態では、標的化部分は、細胞外小胞により分泌される場合がある。標的細胞または標的環境において局在化する標的化部分を含む細胞外ビヒクルは、標的化部分を欠く細胞外小胞の局在化と比較して少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、または１０，０００倍高い。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞を標的とするＥＢＶ糖タンパク質３５０を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ニューロン上のアセチルコリン受容体を標的とするＬａｍｐ２ｂを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、免疫細胞または血液細胞を標的とするラクトアドヘリンのＣ１Ｃ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＥＧＦＲを発現するＥＧＦＲまたは細胞を標的とするＰＤＧＦＲを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＧＰＩアンカー膜タンパク質を含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、標的化部分は、細胞表面タンパク質、または標的細胞により分泌されるタンパク質を標的とする場合がある。細胞表面タンパク質または分泌タンパク質の非限定的な例は、本明細書に記載のケモカイン類のいずれか１つを含む。

【0092】

医薬組成物
本明細書には、本明細書に記載の組成物を含む医薬組成物が記載される。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、細胞外小胞を含む組成物と、細胞外小胞を分泌する細胞との両方を含む。医薬組成物は、本明細書で使用するとき、細胞外小胞を含む治療薬を、担体、賦形剤、結合剤、充填剤、懸濁化剤、香料、甘味料、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、潤滑剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、保湿剤、可塑剤、安定剤、浸透促進剤、湿潤剤、消泡剤、抗酸化剤、保存料、またはこれらの１つ以上の組合せなどの他の化学成分（すなわち、薬学的に許容可能な不活性成分）と混合したものを指す。任意選択で、組成物は、本明細書で論じられるような２つ以上の治療薬（例えば、１つ以上の治療薬および１つ以上の追加の薬剤）を含む。本明細書に提供される処置または使用の方法を実施する際に、本明細書に記載の治療上有効量の治療薬は、医薬組成物に含めて、処置される疾患、障害、または疾病、例えば自己免疫疾患を抱える哺乳動物に投与される。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。治療上有効量は、疾患の重症度、対象の年齢と相対的な健康状態、使用される治療薬の効能、および他の要因に応じて変動する場合がある。本明細書に記載の治療薬は、単独で、または混合物の成分として１つ以上の治療薬と組み合わせて使用可能である。

【0093】

本明細書に記載の医薬製剤は、静脈内、動脈内、経口、非経口、頬側、局所、経皮、直腸、筋肉内、皮下、骨内、口腔粘膜、吸入、または腹腔内を含むがこれらに限定されない適切な投与経路により対象に投与される。本明細書に記載の医薬製剤として、水性液体分散液、自己乳化分散液、固溶体、リポソーム分散液、エアロゾル、固形剤形、粉末剤、即時放出製剤、制御放出製剤、速溶製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出製剤、拡張放出製剤、パルス放出製剤、多重微粒子製剤、ならびに即時混合および制御放出製剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0094】

治療薬を含む医薬組成物は、ほんの一例として、従来の混合、溶解、粒状化、糖衣錠製造、粉末化、乳化、カプセル化、封入、圧縮のプロセスなどの従来様式で製造される。

【0095】

医薬組成物は、遊離酸または遊離塩基形態、または薬学的に許容可能な塩形態の活性成分として、少なくとも１つの治療薬を含む場合がある。加えて、本明細書に記載の方法と医薬組成物は、Ｎ－オキシド（適切な場合）、結晶形態、非結晶相に加え、同じ種類の活性を有する先述の化合物の活性代謝物の使用を含む。いくつかの実施形態では、治療薬は、非溶媒和形態、または水やエタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒を含む溶媒和形態で存在する。治療薬の溶媒和形態は、本明細書に開示されるものとしても考慮される。

【0096】

いくつかの実施形態では、治療薬は互変異性体として存在する。互変異性体はすべて、本明細書で提供される薬剤の範囲内に含まれる。そのため、治療薬またはその塩は、互変異性の現象を示す場合があり、それにより２つの化学化合物は、２つの原子間で水素原子を交換することにより容易に相互転換することができ、そのいずれかに対して共有結合を形成することを理解されたい。互変異性体化合物は、互いに平衡移動状態で存在するため、同化合物の異なる異性体形態とみなされてもよい。

【0097】

いくつかの実施形態では、治療薬は、エナンチオマー、ジアステレオマー、または他の立体異性体の形態として存在する。本明細書に開示される薬剤は、すべてのエナンチオマー、ジアステレオマー、およびエピマーの形態のほか、それらの混合物も含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬は、プロドラッグとして調製されてもよい。「プロドラッグ」とは、ｉｎ ｖｉｖｏで親薬物へと変換される薬剤を指す。プロドラッグがしばしば有効な理由としては、状況に応じてプロドラッグは親薬物よりも投与が容易な場合があるためである。プロドラッグは、例えば経口投与により生物学的に利用可能な場合があるが、親薬物はそうではない。プロドラッグはまた、医薬組成物中の溶解度が親薬物以上に改善されている場合がある。プロドラッグの非限定的な例は、本明細書に記載の治療薬である。該治療薬は、水溶解度が移動度に害を及ぼす細胞膜全体にわたる伝達を容易にするためにエステル（「プロドラッグ」）として投与されるが、その後、水溶性が有益となる細胞内部に入ると、活性部分であるカルボン酸へ代謝的に加水分解される。プロドラッグのさらなる例は、ペプチドが代謝されることで活性部分を明らかにする酸基に結合される短鎖ペプチド（ポリアミノ酸）であってもよい。ある実施形態では、インビボでの投与に際し、プロドラッグは、治療薬の生物学的、薬学的、または治療的に活性な形態へと化学的に変換される。ある実施形態では、プロドラッグは、１つ以上の工程またはプロセスにより、治療薬の生物学的、薬学的、または治療的に活性な形態へと酵素的に代謝される。

【0099】

プロドラッグがｉｎ ｖｉｖｏで代謝されると本明細書に明記されるような薬剤を生成する、治療薬のプロドラッグ形態は、特許請求の範囲内に含まれる。プロドラッグがｉｎ ｖｉｖｏで代謝されると本明細書に明記されるような薬剤を生成する、本明細書に記載の治療薬のプロドラッグ形態は、特許請求の範囲内に含まれる。場合により、本明細書に記載の治療薬の一部は、別の誘導体または活性化合物に対するプロドラッグであってもよい。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ヒドラゾンは、ｉｎ ｖｉｖｏで代謝されることで治療薬を産生する。

【0100】

ある実施形態では、本明細書に提供される組成物は、微生物活性を阻害するために１つ以上の保存料を含む。適切な保存料として、メルフェン（ｍｅｒｆｅｎ）やチオメルサールなどの水銀含有物質、安定した二酸化塩素、および塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジウムなどの第四アンモニウム化合物が挙げられる。

【0101】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤は、抗酸化剤、金属キレート剤、チオール含有化合物、および他の一般的な安定化剤から利益を得る。このような安定化剤の例として、（ａ）グリセロール約０．５％～約２％ｗ／ｖ、（ｂ）メチオニン約０．１％～約１％ｗ／ｖ、（ｃ）モノチオグリセロール約０．１％～約２％ｗ／ｖ、（ｄ）ＥＤＴＡ約１ｍＭ～約１０ｍＭ、（ｅ）アスコルビン酸約０．０１％～約２％ｗ／ｖ、（ｆ）ポリソルベート８０ ０．００３％～約０．０２％ｗ／ｖ、（ｇ）ポリソルベート２０ ０．００１％～約０．０５％ｗ／ｖ、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）硫酸デキストラン、（ｋ）シクロデキストリン、（ｌ）ペントサンポリサルフェートなどのヘパリノイド、（ｍ）マグネシウムや亜鉛などの二価カチオン、または（ｎ）これらの組合せが挙げられる。

【0102】

本明細書に記載の医薬組成物は、経口分散水溶液、液体、ゲル、シロップ、エリキシル、スラリー、懸濁液、固体経口剤形、エアロゾル、制御放出製剤、速溶製剤、発泡製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、粉末剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、遅延放出製剤、拡張放出製剤、パルス放出製剤、多微粒子製剤、ならびに即時放出および制御放出製剤の混合を含むがこれらに限定されない、任意の好適な剤形へと製剤化される。一態様では、本明細書で論じられるような治療薬、例えば治療薬は、筋肉内、皮下、または静脈内注射に適切な医薬組成物へと製剤化される。一態様では、筋肉内、皮下、または静脈内注射に適切な製剤として、生理学的に許容可能な滅菌水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液、あるいはエマルジョン、および滅菌した注射溶液または分散液へと再構築される滅菌粉末剤が挙げられる。適切な水溶性および非水溶性の担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例として、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、クレモホールなど）、それらの適切な混合物、植物油（オリーブオイルなど）、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合には所望の粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持することができる。いくつかの実施形態では、皮下注射に適切な製剤はまた、保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などの添加剤を含有する。微生物増殖の予防は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの様々な抗菌剤および抗真菌剤により確実にすることができる。場合により、糖や塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが望ましい。注射可能な医薬品形態の長期間吸収は、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤の使用により引き起こすことができる。

【0103】

静脈内注射、点滴、または注入では、本明細書に記載の治療薬は、水溶液、好ましくはハンクス液、リンガー液、または緩衝生理食塩水などの生理学的に適合可能な緩衝液中で製剤化される。口腔粘膜投与では、浸透対象の障壁に適切な浸透剤が、製剤に使用される。こうした浸透剤は、概して当該技術分野で知られている。他の非経口注射では、適切な製剤は、好ましくは生理学的に適合可能な緩衝液または賦形剤とともに、水溶液または非水溶液を含む。かかる賦形剤は、既知のものである。

【0104】

非経口注射は、ボーラス注射または持続注射を必要とする場合がある。注射用の製剤は、追加の保存料とともに単位剤形で、例えばアンプルまたは複数回用量容器に入れて提供されてもよい。本明細書に記載の医薬組成物は、油性または水性溶媒中の滅菌懸濁液、溶液、あるいはエマルジョンとして非経口注射に適した形態であってもよく、かつ懸濁化剤、安定化剤、および／または分散剤などの調合剤を含んでもよい。一態様では、活性成分は、使用前に、適切な溶媒、例えば、発熱性物質除去蒸留水を含む構成のための粉末形態にある。

【0105】

吸入投与では、治療薬は、エアロゾル、ミスト、または粉末剤としての使用のために製剤化される。本明細書に記載の医薬組成物は、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体を用いて、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー提供の形態で都合良く送達される。加圧エアロゾルの場合、投与ユニットは、バルブを設けて計量済の量を送達することにより決定されてもよい。ほんの一例として、吸入器または注入器に使用されるゼラチンなどのカプセルおよびカートリッジは、本明細書に記載の治療薬と、ラクトースやデンプンなどの適切な粉末基材との粉末混合物を包含して製剤化されてもよい。

【0106】

代表的な鼻腔内製剤は、例えば米国特許第４，４７６，１１６号、５，１１６，８１７号、および６，３９１，４５２号に記載されている。治療薬を含む製剤は、当該技術分野で知られるベンジルアルコールまたは他の適切な保存料、フルオロカーボン、および／あるいは他の可溶化剤または分散剤を利用して、生理食塩水中の溶液として調製される。例えば、Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｉｘｔｈ Ｅｄ．（１９９５）を参照されたい。好ましくは、これら組成物と製剤は、薬学的に許容可能な適切な無毒の成分とともに調製される。これら成分は、鼻腔剤形の調製において当業者に知られており、これらの一部は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５において確認できる。適切な担体の選択は、所望の鼻腔剤形、例えば溶液、懸濁液、軟膏、またはゲルの正確な性質に左右される。鼻用剤形は、全体として有効成分に加えて大量の水を含有している。ｐＨ調節剤、乳化剤または分散剤、防腐剤、界面活性剤、ゲル化剤、あるいは緩衝化剤、ならびに他の安定化剤および可溶化剤などの他の成分も、任意選択で少量で存在する。好ましくは、鼻用剤形は、鼻の分泌物と等張である必要がある。

【0107】

経口用の医薬調製物は、１つ以上の固体の賦形剤を、本明細書に記載の１つ以上の治療薬と混合し、結果生じる混合物を任意選択で粉砕し、必要に応じて適切な助剤を添加した後に顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠コア（ｄｒａｇｅｅ ｃｏｒｅｓ）を得ることにより得られる。適切な賦形剤として、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの充填剤、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物、あるいはポリビニルピロリドン（ＰＶＰまたはポビドン）やリン酸カルシウムなどのその他賦形剤が挙げられる。必要に応じて、架橋クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天、あるいはアルギン酸、またはアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸の塩といった崩壊剤が添加される。いくつかの実施形態では、活性な治療薬の投与量の同定のために、またはそれらの様々な組合せを特徴づけるために、染料または色素が、錠剤または糖衣錠コーティングに添加される。

【0108】

いくつかの実施形態では、治療薬の医薬製剤は、ゼラチン製の押込み式カプセルのほか、ゼラチン、およびグリセロールやソルビトールなどの可塑剤で作られた密封された軟カプセルを含むカプセルの形態にある。押込み式カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／あるいはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに任意選択で安定剤との混合物中に活性成分を含む。軟カプセルでは、活性治療薬は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体中に溶解または懸濁される。いくつかの実施形態では、安定剤が添加される。カプセルは、例えばカプセル内部に治療薬の製剤の大量の混合物を入れることにより調製することができる。いくつかの実施形態では、製剤（非水性懸濁液および溶液）は、軟ゼラチンカプセルに入れられる。他の実施形態では、製剤は、ＨＰＭＣを含むカプセルなどの標準のゼラチンカプセルまたは非ゼラチンカプセルに入れられる。他の実施形態では、製剤は、スプリンクル（ｓｐｒｉｎｋｌｅ）カプセルに入れられる。このカプセルは、カプセル全体が飲み込まれる、または開封してから食事前に食物の上に中身が散布される（ｓｐｒｉｎｋｌｅｄ）ものである。

【0109】

経口投与用の製剤はすべて、このような投与に適した剤形である。一態様では、固形経口剤形は、治療薬と、抗酸化剤、芳香剤、ならびに、結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、および希釈剤などの担体材料（ｃａｒｒｉｅｒ ｍａｔｅｒｉａｌｓ）のうち１つ以上とを混合することにより調製される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される固形剤形は、錠剤（懸濁錠剤、速溶錠剤、咬合崩壊錠剤（ｂｉｔｅ－ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｔａｂｌｅｔ）、急速崩壊錠剤（ｒａｐｉｄ－ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｔａｂｌｅｔ）、発泡錠剤、またはカプレットを含む）、丸剤、粉末剤、カプセル剤、固形分散剤、固溶体、生体内分解性の剤形、制御放出製剤、パルス放出剤形、多微粒子剤形、ビーズ、ペレット剤、果粒剤の形態である。他の実施形態では、医薬製剤は、粉末剤の形態にある。圧縮錠剤は、上述の製剤のバルク混合物の圧縮により調製される固形剤形である。様々な実施形態では、錠剤は１つ以上の芳香剤を含む。他の実施形態では、この錠剤は、最終圧縮された錠剤を囲むフィルムを含む。いくつかの実施形態では、フィルムコーティングは、製剤からの治療薬の放出を遅くすることができる。他の実施形態では、フィルムコーティングは、患者のコンプライアンスを補助する（例えばＯｐａｄｒｙ（登録商標）コーティングまたは糖衣）。Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）を含むフィルムコーティングは、一般的に錠剤の約１重量％～約３重量％に及ぶ。いくつかの実施形態では、固形剤形、例えば錠剤、発泡錠剤、およびカプセル剤は、治療薬の粒子を１つ以上の医薬賦形剤と混合してバルク混合組成物を形成することにより調製される。バルク混合物は、錠剤、丸剤、およびカプセル剤などの等しく有効な単位剤形へと容易に細分化される。いくつかの実施形態では、個々の単位用量は、フィルムコーティングを含む。これら製剤は、従来の製剤技法により製造される。

【0110】

別の態様では、剤形は、マイクロカプセル化製剤を含む。いくつかの実施形態では、その他１つ以上の適合性材料が、マイクロカプセル化材料に存在する。例示的な材料として、ｐＨ調整剤、侵食促進剤、消泡剤、抗酸化剤、香味料、ならびに結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、および希釈剤などの担体材料が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示的で有用なマイクロカプセル化材料として、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標）またはＮｉｓｓｏ ＨＰＣなどのヒドロキシプロピルセルロースエーテル（ＨＰＣ）、低置換ヒドロキシプロピルセルロースエーテル（Ｌ－ＨＰＣ）、Ｓｅｐｐｉｆｉｌｍ－ＬＣ、Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ（登録商標）、Ｍｅｔｏｌｏｓｅ ＳＲ、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）－Ｅ、Ｏｐａｄｒｙ ＹＳ、ＰｒｉｍａＦｌｏ、Ｂｅｎｅｃｅｌ ＭＰ８２４、およびＢｅｎｅｃｅｌ ＭＰ８４３などのヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル（ＨＰＭＣ）、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）－Ａ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレートＡｑｏａｔ（ＨＦ－ＬＳ、ＨＦ－ＬＧ、ＨＦ－ＭＳ）、Ｍｅｔｏｌｏｓｅ（登録商標）などのメチルセルロースポリマー、エチルセルロース（ＥＣ）とその混合物、例えばＥ４６１、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）、Ａｑｕａｌｏｎ（登録商標）－ＥＣ、Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢなどのポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、Ｎａｔｒｏｓｏｌ（登録商標）などのヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の塩、例えばＡｑｕａｌｏｎ（登録商標）－ＣＭＣなど、ポリビニルアルコールおよびポリエチレングリコールコポリマー、例えば、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ ＩＲ（登録商標）、モノグリセリド（Ｍｙｖｅｒｏｌ）、トリグリセリド（ＫＬＸ）、ポリエチレングリコール、修飾食物デンプン、アクリルポリマー、アクリルポリマーとＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＥＰＯ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ－５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ ３０Ｄ Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００－５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＤ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ３０Ｄ、およびＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ ４０Ｄなどのセルロースエーテルとの混合物、酢酸フタル酸セルロース、ＨＰＭＣとステアリン酸との混合物などのセピフィルム（ｓｅｐｉｆｉｌｍｓ）、シクロデキストリン、ならびにこれら材料の混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0111】

経口投与用の液体製剤の剤形は、任意選択で、薬学的に許容可能な経口分散水溶液、エマルジョン、溶液、エリキシル剤、ゲル剤、およびシロップ剤を含むがこれらに限定されない群から選択された懸濁水溶液である。例えば、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄ．，ｐｐ．７５４－７５７（２００２）を参照されたい。治療薬に加えて、液体剤形は任意選択で、（ａ）崩壊剤、（ｂ）分散剤、（ｃ）湿潤剤、（ｄ）少なくとも１つの防腐剤、（ｅ）粘性促進剤、（ｆ）少なくとも１つの甘味料、および（ｇ）少なくとも１つの香料などの添加剤を含む。いくつかの実施形態では、分散水溶液は、結晶形成阻害剤をさらに含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬製剤は、自己乳化式薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）である。エマルジョンは、別の形態、通常は液滴形態にある１つの不混和相の分散液である。通常、エマルジョンは活発な機械的分散によって作製される。ＳＥＤＤＳは、エマルジョンまたはマイクロエマルジョンとは対照的に、任意の外部の機械的分散または撹拌を必要とすることなく過剰量の水に添加されると、エマルジョンを自発的に形成する。ＳＥＤＤＳの利点は、溶液全体に液滴を分布させるのに必要なのは軽い混合のみであるという点である。加えて、水または水相は、任意選択で投与直前に添加され、これにより不安定または疎水性の有効成分の安定性が確保される。ゆえにＳＥＤＤＳは、疎水性活性成分の経口および非経口送達に効果的な送達システムを提供する。いくつかの実施形態では、ＳＥＤＤＳは、疎水性活性成分のバイオアベイラビリティを改善する。自己乳化剤形を産生する方法として、米国特許第５，８５８，４０１号、６，６６７，０４８号、および６，９６０，５６３号が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0113】

治療薬を含む頬側剤形は、当該分野で既知の様々な剤形を用いて投与される。例えばこのような製剤として、米国特許第４，２２９，４４７号、４，５９６，７９５号、４，７５５，３８６号、および５，７３９，１３６号が挙げられるが、これらに限定されるものではない。加えて、本明細書に記載の頬側剤形は、頬粘膜に剤形を付着させる役目も果たす生体内分解性（加水分解性）のポリマー担体をさらに含むことができる。頬側または舌下投与では、組成物は、従来様式で製剤化された錠剤、ロゼンジ、またはゲル剤の形態を呈してもよい。

【0114】

静脈内注射では、治療薬は、水溶液中で、好ましくはハンク液、リンガー液、または緩衝生理食塩水などの生理学的に適合可能な緩衝剤に入れて製剤化される。口腔粘膜投与では、浸透対象の障壁に適切な浸透剤が、製剤に使用される。他の非経口注射では、適切な製剤は、好ましくは生理学的に適合可能な緩衝液または賦形剤とともに、水溶液または非水溶液を含む。

【0115】

非経口注射は、任意選択でボーラス注射または持続注射を必要とする。注射用製剤は、任意選択で単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回用量の容器に入れて、追加の保存料とともに提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、油性または水性溶媒中の滅菌懸濁液、水溶液、またはエマルジョンとして非経口注射に適切な形態にあり、懸濁化剤、安定剤、および／または分散剤などの調合剤を含有する。非経口投与用の医薬製剤は、水溶液形態で頚動脈小体の活性を調節する薬剤の水溶液を含む。加えて、頚動脈小体の活性を調節する薬剤の懸濁液は、任意選択で適切なもの、例えば油性注射懸濁液として調製される。

【0116】

従来の製剤技法として、例えば以下の方法の１つまたは組合せが挙げられる：（１）乾燥混合、（２）直接圧縮、（３）ミリング、（４）乾燥または非水性の造粒、（５）湿式造粒法、あるいは（６）融合。他の方法として、例えば噴霧乾燥、パンコーティング、溶解造粒（ｍｅｌｔ ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）、造粒、流動床噴霧乾燥またはコーティング（例えばウースターコーティング）、接点コーティング（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｃｏａｔｉｎｇ）、頂部噴霧（ｔｏｐ ｓｐｒａｙｉｎｇ）、錠剤化、押出しなどが挙げられる。

【0117】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な担体として、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、カゼイン酸ナトリウム、ダイズレシチン、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、ステアロイル乳酸ナトリウム、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、α化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、スクロース、微結晶性セルロース、ラクトース、マンニトールなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0118】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な充填剤として、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストラート、デキストラン、デンプン、α化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（ＨＰＭＣＡＳ）、スクロース、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコールなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0119】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な崩壊剤として、トウモロコシデンプンまたはジャガイモデンプンなどの天然デンプン、α化デンプン、またはデンプングリコール酸ナトリウム、セルロース、例えば、メチル結晶性セルロース、メチルセルロース、微結晶性セルロース、クロスカルメロース、または架橋結合セルロース、例えば架橋結合ナトリウムカルボキシメチルセルロース、架橋結合カルボキシメチルセルロース、または架橋結合クロスカルメロース、架橋デンプン、例えばデンプングリコール酸ナトリウム、架橋結合ポリマー、例えばクロスポビドン、架橋結合ポリビニルピロリドン、アルギネート、例えばアルギン酸またはアルギン酸の塩、例えばアルギン酸ナトリウム、ガム、例えば寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン、またはトラガント、デンプングリコール酸ナトリウム、ベントナイト、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプンと組み合わせたラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0120】

結合剤は、固形経口剤形製剤に粘着性を付与する。粉末を充填したカプセル製剤では、結合剤は、軟シェルまたは硬シェルのカプセルに充填可能な栓の形成を補助し、錠剤製剤では、圧縮後に錠剤が確実に無傷で残るようにし、圧縮または充填の工程前に均一な混合の確保を支援する。本明細書に記載の固形剤形中の結合剤として使用される適切な材料として、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、および微結晶性セルロース、微結晶性デキストロース、アミロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、多糖酸、ベントナイト、ゼラチン、ポリビニルピロリドン／ビニルアセテートコポリマー、クロスポビドン、ポビドン、デンプン、α化デンプン、トラガント、デキストリン、糖、例えばスクロース、グルコース、デキストロース、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、ラクトース、天然または合成ガム、例えばアカシア、トラガント、ガティガム、イサポールハスクの粘液、デンプン、ポリビニルピロリドン、カラマツアラボガラクタン（ｌａｒｃｈ ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ）、ポリエチレングリコール、ワックス、アルギン酸ナトリウムなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0121】

一般に、２０～７０％の結合剤レベルが、粉末を充填したゼラチンカプセル製剤に使用される。錠剤製剤における結合剤の使用レベルは、直接圧縮、湿式造粒法、ローラー圧縮、または、それ自体が適度の結合剤として作用し得る充填剤などの他の賦形剤のいずれかを使用することで変動する。錠剤製剤では、最大７０％の結合剤レベルが一般的である。

【0122】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な潤滑剤または流動促進剤として、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、トウモロコシデンプン、フマル酸ステアリルナトリウム、アルカリ金属およびアルカリ土類金属塩、例えばアルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール、またはメトキシポリエチレングリコール、例えばＣａｒｂｏｗａｘ（登録商標）、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ６０００、プロピレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリン（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｐａｌｍｉｔｏｓｔｅａｒａｔｅ）、安息香酸グリセリル、マグネシウム、あるいはラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0123】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な希釈剤として、糖（ラクトース、スクロース、およびデキストロースを含む）、多糖類（デキストラートおよびバクガデキストリンを含む）、ポリオール（マンニトール、キシリトール、およびソルビトールを含む）、シクロデキストリンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0124】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な湿潤剤として、例えばオレイン酸、モノステアリン酸グリセリン、ソルビタンモノオレアート、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、四級アンモニウム化合物（例えば、Ｐｏｌｙｑｕａｔ １０（登録商標））、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ドクサートナトリウム、トリアセチン、ビタミンＥ ＴＰＧＳなどが挙げられる。

【0125】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な界面活性剤として、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、ポリソルベート、ポロクサマー、胆汁酸塩、モノステアリン酸グリセリン、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＢＡＳＦ）などが挙げられる。

【0126】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な懸濁剤として、ポリビニルピロリドン、例えばポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、ポリビニルピロリドンＫ３０、ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコールは約３００～約６０００、約３３５０～約４０００、または約７０００～約５４００の分子量を有する）、ビニルピロリドン／ビニルアセテートコポリマー（Ｓ６３０）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシ－プロピルメチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ガム、例えば、トラガカントガム、アカシアガム、グアーガム、キサンタンガムを含むキサンタン、糖類、セルロース系、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリソルベート８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシレートソルビタンモノラウリン酸、ポリエトキシレートソルビタンモノラウリン酸、ポビドンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0127】

本明細書に記載の固形剤形に使用される適切な抗酸化剤として、例えばブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、アスコルビン酸ナトリウム、およびトコフェロールが挙げられる。

【0128】

本明細書に記載の固形剤形に使用される添加剤間には、相当な重なりが存在することを理解されたい。ゆえに、上で列記した添加剤は、本明細書に記載の医薬組成物の固形剤形に含めることができる添加剤の種類の単なる例示に過ぎず、限定的なものと解釈されるべきではない。このような添加剤の量は、所望される特定の特性に応じて当業者が容易に決定することができる。

【0129】

様々な実施形態では、治療薬および１つ以上の賦形剤の粒子は、乾燥混合され、錠剤などの塊に圧縮される。この塊は、経口投与後、約３０分未満、約３５分未満、約４０分未満、約４５分未満、約５０分未満、約５５分未満、または約６０分未満でほぼ分解され、それにより製剤を胃腸液へ放出する医薬組成物を提供するのに十分な硬さを有する。

【0130】

他の実施形態では、治療薬を含む粉末剤は、１つ以上の医薬賦形剤および香料を含むように製剤化される。このような粉末剤は、例えば治療薬と、任意選択で医薬賦形剤とを混合してバルク混合組成物を形成することにより調製される。追加の実施形態は、懸濁化剤および／または湿潤剤も含む。このバルク混合物は、単位投与パッケージまたは複数回投与パッケージのユニットへと均一に細分化される。

【0131】

また他の実施形態では、発泡散剤も調製される。発泡塩は、経口投与用に水中で薬を分散させるために使用されている。

【0132】

いくつかの実施形態では、医薬剤形は、治療薬の制御放出を提供するために製剤化される。制御放出とは、長期間にわたり所望の特性に従い組み込まれる剤形から治療薬が放出されることをいう。制御放出特性として、例えば持続放出、長期放出、パルス放出、および遅延放出特性が挙げられる。即時放出組成物とは対照的に、制御放出組成物は、所定の特性に従い長期間にわたり対象への薬剤送達を可能にする。このような放出速度は、長期間にわたり治療上有効なレベルの薬剤を提供し、それにより、より長期間の薬理反応を提供しながら、従来の急速放出剤形と比べて副作用を最小限に抑える。こうした長期間の反応により、対応する短時間作用型の即時放出調製物では達成されない多くの固有の利益がもたらされる。

【0133】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の固形剤形は、腸溶コーティングされた遅延放出経口剤形として、すなわち、本明細書に記載されるような医薬組成物の経口剤形として製剤化されるものであり、小腸または大腸での放出に影響を及ぼす腸溶コーティングを利用する。一態様では、腸溶コーティングされた剤形は、それら自体がコーティングされるかコーティングされない活性成分および／または他の組成物成分の顆粒、粉末、ペレット、ビーズ、または粒子を包含する圧縮、成形、または押出し型の錠剤／モールド（コーティングあり、またはコーティングなし）である。一態様では、腸溶コーティングされた経口剤形は、ペレット、ビーズ、または顆粒剤を含むカプセル剤の形態にあり、その中には、コーティングされるか、コーティングされない治療薬が含まれる。

【0134】

あらゆるコーティングは、全体がｐＨ約５未満では胃腸液に溶けないが、ｐＨ５以上では溶けるような十分な厚みで適用する必要がある。コーティングは、一般的にはセラック（このコーティングはｐＨ＞７の媒体に溶解する）、アクリルポリマー（適切なアクリルポリマーの例として、メタクリル酸コポリマーやメタクリル酸アンモニウムコポリマーが挙げられる）のいずれかから選択される。ＥｕｄｒａｇｉｔシリーズＥ、Ｌ、Ｓ、ＲＬ、ＲＳ、およびＮＥ（Ｒｏｈｍ Ｐｈａｒｍａ）は、有機溶剤、水分散液、または乾燥粉末中で可溶化されるものとして利用可能である。ＥｕｄｒａｇｉｔシリーズＲＬ、ＮＥ、およびＲＳは、胃腸管では不溶性であるが、透過性であり、主として結腸の標的化に使用される。ＥｕｄｒａｇｉｔシリーズＥは、胃で溶解する。ＥｕｄｒａｇｉｔシリーズＬ、Ｌ－３０Ｄ、およびＳは、胃では不溶性であり、腸で溶解する。ポリ酢酸ビニルフタレート（ＰＶＡＰ）は、ｐＨ＞５で溶解し、水蒸気および胃液に対する透過性が少ない。スプレーコーティングまたはパンコーティングなどの従来のコーティング技法が、コーティングを施すために使用される。コーティングの厚みは、腸管を対象とする局所送達の所望部位に到達するまで、経口剤形が無傷な状態で残るのを確実にするほどの厚みでなければならない。

【0135】

他の実施形態では、本明細書に記載の製剤は、パルス剤形を使用して送達される。パルス剤形は、遅延時間の調整後の所定の時点で、または特定の部位において１つ以上の即時放出パルスを提供することができる。例示的なパルス剤形およびその製造方法は、米国特許第５，０１１，６９２号、５，０１７，３８１号、５，２２９，１３５号、５，８４０，３２９号、および５，８３７，２８４号に開示されている。一実施形態では、パルス剤形は、粒子の少なくとも２つの群（すなわち多微粒子）を含み、それぞれが本明細書に記載の製剤を含有している。粒子の第１の群は、哺乳動物による摂取後に実質的に即時の投与量の治療薬を提供する。粒子の第１の群は、コーティングされない、あるいはコーティングおよび／あるいはシーラントを含む場合がある。一態様でが、粒子の第２の群は、コーティングされた粒子を含む。粒子の第２の群に対するコーティングは、第２の投与量の放出前に、摂取後約２時間～約７時間の遅延をもたらす。医薬組成物に適切なコーティングは、本明細書に記載されるか、当該技術分野で知られる。

【0136】

いくつかの実施形態では、対象への経口投与のために治療薬と少なくとも１つの分散剤または懸濁化剤との粒子を含む医薬製剤が提供される。この製剤は、懸濁用の粉末および／または顆粒であってもよく、水と混合すると、ほぼ均一な懸濁液が得られる。

【0137】

いくつかの実施形態では、制御放出のために製剤化される粒子は、ゲル、パッチ、または創傷包帯に組み込まれる。

【0138】

一態様では、経口投与用、および／または洗浄剤としての局所投与用の液体製剤の剤形は、薬学的に許容可能な経口分散水溶液、エマルジョン、溶液、エリキシル、ゲル、およびシロップを含むがこれらに限定されない群から選択される水性懸濁液の形態にある。例えば、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄ．，ｐｐ．７５４－７５７（２００２）を参照されたい。治療薬の粒子に加えて、液体剤形は、（ａ）崩壊剤、（ｂ）分散剤、（ｃ）湿潤剤、（ｄ）少なくとも１つの保存料、（ｅ）粘性促進剤、（ｆ）少なくとも１つの甘味料、および（ｇ）少なくとも１つの香料などの添加剤を含む。いくつかの実施形態では、分散水溶液は、結晶阻害剤をさらに含む場合がある。

【0139】

いくつかの実施形態では、液体製剤はまた、水または他の溶媒、可溶化剤、および乳化剤などの当該技術分野でよく用いられる不活性希釈剤を含む。例示的な乳化剤は、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクセートナトリウム、コレステロール、コレステロールエステル、タウロコール酸、ホスファチジルコリン、綿実油などの油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれら物質の混合物などである。

【0140】

さらに医薬組成物は、任意選択で、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、塩酸などの酸、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トリスヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基、およびシトラート／デキストロース、重炭酸ナトリウム、塩化アンモニウムなどの緩衝剤を含む、ｐＨ調整剤または緩衝化剤を含む。このような酸、塩基、および緩衝剤は、組成物のｐＨを許容可能な範囲に維持するのに必要な量で含まれる。

【0141】

加えて、医薬組成物は、任意選択で医薬組成物の重量モル浸透圧濃度を許容可能な範囲にするのに必要な量で１つ以上の塩を含む。このような塩は、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、またはアンモニウムカチオン、および塩化物アニオン、クエン酸塩アニオン、アスコルビン酸塩アニオン、ホウ酸塩アニオン、リン酸塩アニオン、重炭酸塩アニオン、硫酸塩アニオン、チオ硫酸塩アニオン、または亜硫酸水素塩アニオンを有するものを含み、適切な塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、および硫酸アンモニウムを含む。

【0142】

他の医薬組成物は、微生物の活性を阻害する１つ以上の防腐剤を任意選択で含む。適切な保存料として、メルフェン（ｍｅｒｆｅｎ）やチオメルサールなどの水銀含有物質、安定した二酸化塩素、および塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジウムなどの第四アンモニウム化合物が挙げられる。

【0143】

一実施形態では、本明細書に記載の懸濁水溶液と分散液は、少なくとも４時間、Ｔｈｅ ＵＳＰ Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ’Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（２００５ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｃｈａｐｔｅｒ ９０５）に規定されるように均質な状態で残る。一実施形態では、懸濁水溶液は、１分未満持続する物理的撹拌により均質な懸濁液へと再懸濁される。また別の実施形態では、均質な分散水溶液を維持するために撹拌は必要とされない。

【0144】

水性懸濁液および分散液に使用される崩壊剤の例として、デンプン、例えば、トウモロコシデンプンまたはジャガイモデンプンなどの天然デンプン、α化デンプン、あるいはデンプングリコール酸ナトリウム、セルロース、例えばメチル結晶性セルロース、メチルセルロース、クロスカルメロース、または架橋結合セルロース、例えば架橋結合ナトリウムカルボキシメチルセルロース、架橋結合カルボキシメチルセルロース、または架橋結合クロスカルメロース、デンプングリコール酸ナトリウムなどの架橋デンプン、クロスポビドンなどの架橋ポリマー、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸などのアルギン酸塩またはアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸の塩、寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン、またはトラガカントなどのガム、デンプングリコール酸ナトリウム、ベントナイト、天然のスポンジ、界面活性剤、陽イオン交換樹脂などの樹脂、シトラスパルプ、ラウリル硫酸ナトリウム、組み合わせたデンプン中のラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0145】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の水性懸濁液および分散液に適した分散剤として、例えば、親水性ポリマー、電解液、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０または８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン、および炭水化物系の分散剤、例えばヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースエーテル、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル－セルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチル－セルロースアセテートステアレート、非結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン／ビニルアセテートコポリマー、酸化エチレンおよびホルムアルデヒド（チロキサポールとしても知られる）を含む４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）－フェノールポリマー、ポロクサマー、ならびにポロキサミンが挙げられる。他の実施形態では、分散剤は、以下の薬剤：親水性ポリマー、電解質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０または８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースエーテル、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル－セルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチル－セルロースアセテートステアレート、非結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、酸化エチレンおよびホルムアルデヒドを含む４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）－フェノールポリマー、ポロクサマー、またはポロキサミンのうち１つを含まない群から選択される。

【0146】

本明細書に記載の水性懸濁液および分散液に適した湿潤剤として、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０（登録商標）やＴｗｅｅｎ ８０（登録商標）などの市販のＴｗｅｅｎ（登録商標））、ポリエチレングリコール、オレイン酸、モノステアリン酸グリセリル、ソルビタンモノオレアート、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクセート、トリアセチン、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、タウロコール酸ナトリウム、シメチコン、ホスファチジルコリンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0147】

本明細書に記載の水性懸濁液または分散液に適した保存料として、例えばソルビン酸カリウム、パラベン（例えば、メチルパラベンおよびプロピルパラベン）、安息香酸およびその塩、ブチルパラベンなどのパラオキシ安息香酸の他のエステル、エチルアルコールまたはベンジルアルコールなどのアルコール、フェノールなどのフェノール化合物、あるいは塩化ベンザルコニウムなどの四級化合物が挙げられる。保存料は、本明細書で使用するとき、微生物増殖を阻害するのに十分な濃度で剤形に組み込まれる。

【0148】

本明細書に記載の水性懸濁液または分散液に適した粘度増強剤として、メチルセルロース、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ｐｌａｓｄｏｎ（登録商標）Ｓ－６３０、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギネート、アカシア、キトサン、およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。粘度増強剤の濃度は、選択される薬剤および所望の粘度に左右される。

【0149】

本明細書に記載の水性懸濁液または分散液に適した甘味料の例として、例えばアカシアシロップ、アセスルファムＫ、アリターム、アスパルテーム、チョコレート、シナモン、シトラス、ココア、シクラメート、デキストロース、フルクトース、ショウガ、グリシルレチネート、カンゾウ（リコリス）シロップ、グリチルリチン酸モノアンモニウム（ＭａｇｎａＳｗｅｅｔ（登録商標））、マルトール（ｍａｌｉｔｏｌ）、マンニトール、メントール、ネオヘスペリジンＤＣ、ネオテーム、Ｐｒｏｓｗｅｅｔ（登録商標）Ｐｏｗｄｅｒ、サッカリン、ソルビトール、ステビア、スクラロース、スクロース、ナトリウムサッカリン、サッカリン、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、マンニトール、スクラロース、タガトース、タウマチン、バニラ、キシリトール、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。

【0150】

いくつかの実施形態では、治療薬は経皮剤形として調製される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の経皮製剤は、少なくとも３つの成分として（１）治療薬と、（２）浸透促進剤と、（３）任意選択で水性アジュバントとを含む。いくつかの実施形態では、経皮製剤として、ゲル化剤、クリーム、軟膏基剤などの追加の化合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、経皮製剤は、パッチまたは創傷包帯として提供される。いくつかの実施形態では、経皮製剤は、吸収を促進するとともに皮膚から経皮製剤が外れるのを防ぐために、織布裏当て材または不織布裏当て材をさらに含む。他の実施形態では、本明細書に記載の経皮製剤は、皮膚への分散を促すために飽和または過飽和の状態を維持することができる。

【0151】

一態様では、本明細書に記載の治療薬の経皮投与に適した製剤は、経皮送達デバイスおよび経皮送達パッチを利用するものであり、ポリマーまたは接着剤中で溶解および／あるいは分散される脂溶性エマルジョンまたは緩衝水溶液であり得る。一態様では、このようなパッチは、医薬品の連続送達、パルス送達、またはオンデマンド送達のために構築される。さらに、本明細書に記載の治療薬の経皮送達は、イオン泳動的なパッチなどにより達成することができる。一態様では、経皮パッチは治療薬を制御送達する。一態様では、経皮デバイスは、裏当て部材（ｂａｃｋｉｎｇ ｍｅｍｂｅｒ）、任意選択で担体を含む治療薬を含有するリザーバ、任意選択で長期間にわたり制御かつ所定の速度で治療薬を宿主の皮膚に送達するための律速バリア、およびデバイスを皮膚に固定するための手段を含む包帯（ｂａｎｄａｇｅ）の形態にある。

【0152】

さらなる実施形態では、局所製剤は、ゲル製剤（例えば、皮膚に付着するゲルパッチ）を含む。このような実施形態の一部では、ゲル組成物は、身体に接触するとゲルを生じさせる任意のポリマーを含む（例えば、ヒアルロン酸、プルロニック（登録商標）ポリマー、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）系のポリマーなどを含むゲル製剤）。一部の組成物の形態では、製剤は、限定されないが脂肪酸グリセリドの混合物などの低融点ワックスを、任意選択ではじめに融解するココアバターと組み合わせて含む。任意選択で、製剤は保湿剤をさらに含む。

【0153】

ある実施形態では、例えばリポソームやエマルジョンなどの医療用治療薬のための送達システムが、利用されてもよい。ある実施形態では、本明細書に提供される組成物は、例えばカルボキシメチルセルロース、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリカルボフィル、アクリル酸／アクリル酸ブチルコポリマー、アルギン酸ナトリウム、およびデキストランから選択される粘膜付着性ポリマーも含む場合がある。

【0154】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬は、局所投与される場合があり、溶液、懸濁液、ローション、ゲル、ペースト、薬用スティック、鎮痛剤、クリーム、または軟膏などの局所投与可能な様々な組成物へと製剤化される場合がある。このような医療用治療薬は、可溶化剤、安定剤、等張増強剤、緩衝剤、および保存料を包含する場合がある。

【0155】

経鼻投与用のエアロゾル製剤は、全体として滴剤またはスプレーに入れて鼻路に投与されるように設計された水溶液である。鼻溶液は、一般的には等張であり、約５．５～約６．５のｐＨを維持するためにわずかに緩衝化されるが、この範囲外のｐＨ値も付加的に使用可能であるという点で、鼻の分泌物と同様であってもよい。抗菌薬または保存料も、製剤に含めることができる。

【0156】

吸入剤および吸入薬用のエアロゾル製剤は、薬剤または薬剤同士の組み合わせが、経鼻または経口の呼吸経路により投与されると、対象の呼吸樹へと運ばれるように設計されてもよい。吸入溶液は、例えば噴霧器により投与可能である。微粉化薬物または液体薬物を含む吸入剤または吹送剤は、例えば分配を補助するために、噴射剤中の薬剤または薬剤同士の組合せの溶液あるいは懸濁液の医薬用エアロゾルとして、呼吸器系に送達可能である。噴射剤は、ハロゲン化炭素、例えばフッ素化塩素化炭化水素、ヒドロクロロフルオロカーボン、およびヒドロクロロカーボンなどのフルオロカーボン、ならびに炭化水素および炭化水素エーテルを含む液化ガスであり得る。

【0157】

ハロゲン化炭素噴射剤は、水素がすべてフッ素と置き換えられるフルオロカーボン噴射剤、水素がすべて塩素および少なくとも１つのフッ素と置き換えられるクロロフルオロカーボン噴射剤、水素含有フルオロカーボン噴射剤、ならびに水素含有クロロフルオロカーボン噴射剤を含む場合がある。有用な炭化水素噴射剤は、例えば、プロパン、イソブタン、ｎ－ブタン、ペンタン、イソペンタン、およびネオペンタンを含む。炭化水素の混合物も、噴射剤として使用可能である。エーテル噴霧剤は、例えばジメチルエーテルのほか、エーテルも含む。エアロゾル製剤はまた、１より多くの噴射剤を含む場合がある。例えば、エアロゾル製剤は、２以上のフルオロカーボンなど、同じクラスから１より多くの噴射剤、あるいはフッ化炭化水素と炭化水素など、様々なクラスからの１より多く、２より多く、および３より多くの噴射剤を含む場合がある。本開示の医薬組成物はまた、圧縮ガス、例えば二酸化炭素、亜酸化窒素、または窒素などの不活性ガスで分注される場合がある。

【0158】

エアロゾル製剤はまた、他の成分、例えばエタノール、イソプロパノール、プロピレングリコールのほか、界面活性剤または油や洗浄剤などの他の成分を含む場合がある。これら成分は、製剤を安定させる、および／またはバルブ要素を潤滑させる役割を果たすことができる。

【0159】

エアロゾル製剤は、圧力下で包装することができ、溶液、懸濁液、エマルジョン、粉末、および半固形調製物を使用してエアロゾルとして製剤化される場合がある。例えば、エアロゾル製剤溶液は、（実質的に）純粋な噴射剤に入れて、または噴射剤と溶剤の混合物として、輸送体、担体、またはイオンチャネル阻害剤などの薬剤の溶液を含む場合がある。溶剤は、薬剤を溶かすために、および／または噴射剤の蒸発を遅らせるために使用可能である。溶剤は、例えば水、エタノール、およびグリコールを含む場合がある。あらゆる適切な溶剤の組合せが使用可能であり、任意選択で保存料、抗酸化剤、および／または他のエアロゾル成分と組み合わされる。

【0160】

エアロゾル製剤は、分散液または懸濁液であり得る。エアロゾル製剤懸濁液は、薬剤または薬剤同士の組合せ、例えば輸送体、担体、イオンチャネル阻害剤、分散剤からなる懸濁液を含む場合がある。分散剤は、例えばソルビタントリオレアート、オレイルアルコール、オレイン酸、レシチン、およびトウモロコシ油を含む場合がある。エアロゾル製剤懸濁液はさらに、潤滑剤、保存料、抗酸化剤、および／または他のエアロゾル成分を含む場合がある。

【0161】

エアロゾル製剤は、同様にエマルジョンとして製剤化されてもよい。エアロゾル製剤エマルジョンは、例えばエタノールなどのアルコール、界面活性剤、水、および噴射剤のほか、薬剤または薬剤同士の組合せ、例えば輸送体、担体、イオンチャネルを含む場合がある。使用される界面活性剤は、非イオン性、陰イオン性、または陽イオン性であり得る。エアロゾル製剤エマルジョンの一例は、例えばエタノール、界面活性剤、水、および噴射剤を含む。エアロゾル製剤エマルジョンの別の例は、例えば植物油、モノステアリン酸グリセリル、およびプロパンを含む。

【0162】

キット
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物を使用するためのキットが開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるキットは、対象の疾患または障害を処置する、処置の対象を選択する、および／または本明細書に開示される処置をモニタリングするために使用することができる。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法を行うために使用可能な本明細書に記載の組成物を含む。キットは、組成物のうち少なくとも１つを含む材料または構成要素の集合体である。このため、いくつかの実施形態では、キットは、自己免疫疾患の処置用に、医薬組成物を含む組成物を含有している。

【0163】

いくつかの例では、本明細書に記載のキットは、細胞外小胞の均質集団を選択するための構成部分を含む。いくつかの実施形態では、キットは、細胞外小胞の表面に発現される免疫チェックポイント部分のユニット数を解析するための構成部分を含む。いくつかの実施形態では、キットは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、単一分子配列（Ｓｉｍｏａ）、ＰＣＲ、ｑＰＣＲなどの分析を実行するための構成部分を含む。キットに構成される構成部分の正確な性質は、その意図した目的に左右される。例えば、一部の実施形態は、対象における本明細書に開示される疾患または疾病（例えば自己免疫疾患）を処置するために構成される。いくつかの実施形態では、キットは、特に哺乳動物対象を処置するために構成される。いくつかの実施形態では、キットは、特にヒト対象を処置するために構成される。

【0164】

使用説明書がキットに含まれる場合がある。任意選択で、キットはさらに、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペッティングツール、測定ツール、包帯材料、またはその他の有用な道具一式など、他の有用な構成部分を含む。キット内で組み立てられる材料または構成部分は、医療従事者に提供され、その操作性および有用性を保つのに都合が良く適切な方法で保管することができる。例えば、構成部分は、溶解、脱水、または凍結乾燥された形態にあり、これらは室温、冷却温度、または冷凍温度で提供される場合がある。構成部分は、一般的には適切な包装材料に包含される。本明細書で利用するとき、「包装材料」という句は、組成物などのキットの内容物を収容するために使用される１つ以上の物理的構造を指す。包装材料は、好ましくは汚染物質がない滅菌環境を提供するために周知の方法により構築される。キットに利用される包装材料は、遺伝子発現アッセイ、および処置の実施において慣例的に利用されるものである。本明細書で使用するとき、「包装」という用語は、個々のキット構成部分を保持可能である、ガラス、プラスチック、紙、ホイルなどの適切な固形マトリクスまたは材料を指す。このため、例えばパッケージは、適切な量の医薬組成物を包含するために使用されるガラスバイアルまたはプレフィルドシリンジであり得る。包装材料には、キットおよびその構成部分の内容物および／または目的を示す外部ラベルがある。

【0165】

ＩＩ．プラットフォーム
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞外小胞を生成するためのプラットフォームが記載される。いくつかの実施形態では、このプラットフォームは、適正製造基準（ＧＭＰ）の標準に一致する。いくつかの実施形態では、細胞外小胞を含む組成物は、適正製造基準（ＧＭＰ）に従い生成される。いくつかの実施形態では、組成物は、病原体がほとんどない病原体レベルを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、不純物がほとんどない不純物レベルを有する。いくつかの実施形態では、組成物は、低免疫原性を含む。

【0166】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、低張処理および遠心分離により生成かつ単離される。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、ＭＳＣが破裂し、細胞外小胞が放出されるように、主に低張処理を使用して細胞外小胞を発現する間葉系幹細胞（ＭＳＣ）から単離される。いくつかの例では、ＭＳＣは、細胞の腫脹を誘導するために低張液中で再懸濁される。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、細胞の腫脹をモニタリングするための位相差顕微鏡を含む。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、腫脹した細胞を破裂させて細胞外小胞を放出させるためにホモジナイザーを含む。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、勾配（例えば蔗糖勾配）における破裂した細胞を分離して細胞外小胞を分離させるための手段を含む。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、軽度の音波粉砕、凍結解凍、フレンチプレス、またはニードルパッセージング（ｎｅｅｄｌｅ－ｐａｓｓａｇｉｎｇ）などのＭＳＣを溶解する他の手法により細胞外小胞を生成するための他の構成部分を含む。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、細胞外小胞を含む分画を遠心分離機にかけて単離するための遠心分離機を含む。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、不連続の蔗糖密度勾配において浮上分離により細胞外小胞を含む分画を分離するための手段を含む。

【0167】

いくつかの実施形態では、プラットフォームは、押出しにより細胞外小胞を生成するための手段を含む。いくつかの実施形態では、押出しプロセスは、細胞外小胞のサイズまたは直径に基づき細胞外の小胞を分離かつ単離する。例示的な押出しプロセスは、孔径が様々な膜の使用を含む。この膜は、破裂したＭＳＣを含む溶液から細胞外小胞のサイズまたは直径に基づき、細胞外小胞を分離することができる。細胞外小胞はさらに、膜孔径が次第に小さくなり１５０ｎｍ～１０ｎｍに及ぶ押出し後の継続的な押出しにより単離され、サイズを小さくされる場合がある。最後の押出しが完了すると、細胞外小胞は、遠心分離によりペレット状にされる場合がある。いくつかの実施形態では、プラットフォームは、音波粉砕、押出し、高圧／均質化、微小溶液操作、または洗浄剤透析（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｄｉａｌｙｓｉｓ）を行うための構成部分を含む。

【0168】

いくつかの実施形態では、プラットフォームは、細胞外小胞あたりの免疫チェックポイント部分のユニット数を求めるための構成部分を含む。

【0169】

ＩＩＩ．方法
細胞外小胞の生成
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載のプラットフォームを利用して、本明細書に記載の組成物を生成する方法が記載される。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞から単離されるか、細胞により分泌される場合がある。例えば、細胞外小胞は、細胞外小胞を放出するために細胞を溶解することにより生成可能である。場合により、細胞は細胞外小胞を分泌して、後にこの細胞外小胞は単離される場合がある。

【0170】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞を生成するための細胞は、細胞株、幹細胞、初代細胞、または分化細胞に由来し得る。いくつかの実施形態では、細胞外小胞のドナー細胞は、ヒト胚線維芽細胞（ＨＥＦ）、樹状細胞、間葉系幹細胞、骨髄由来樹状細胞、骨髄由来間質細胞、脂肪間質細胞、内皮細胞、除核細胞、神経幹細胞、未成熟樹状細胞、および免疫細胞、骨髄間質細胞、骨髄由来の成人始原細胞（ＭＡＰＣ）、内皮始原細胞（ＥＰＣ）、芽細胞脳室下帯に形成される中間始原細胞、神経幹細胞、筋肉幹細胞、衛星細胞、肝臓幹細胞、造血幹細胞、骨髄間質細胞、表皮幹細胞、胚性幹細胞、臍帯幹細胞、前駆細胞、筋肉前駆細胞、筋芽細胞、心筋芽細胞、神経前駆細胞、神経膠前駆細胞、ニューロン前駆細胞、または肝芽細胞からなる群から選択することができる。

【0171】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞を生成するための細胞は、遺伝的に修飾された細胞であってもよく、この場合、遺伝的修飾部分は、修飾された細胞へと導入される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子をコードする少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、修飾された細胞へと導入される。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の免疫チェックポイント部分のうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の標的化部分のうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の膜貫通部分のうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の融合ペプチドのうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の免疫回避部分のうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、修飾された細胞の染色体へと統合される場合がある。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、修飾された細胞の染色体へと統合されない。

【0172】

いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、異種ポリヌクレオチドの発現を調節する。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、異種ポリヌクレオチドの発現を増加させる。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、例えば、Ｃｌａｓｓ １ ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、Ｃｌａｓｓ ２ Ｃａｓポリペプチド、Ｉ型Ｃａｓポリペプチド、ＩＩ型Ｃａｓポリペプチド、ＩＩＩ型Ｃａｓポリペプチド、ＩＶ型Ｃａｓポリペプチド、Ｖ型Ｃａｓポリペプチド、およびＶＩ型、ＣＲＩＳＰＲ関連ＲＮＡ結合タンパク質、またはこれらの機能性フラグメントであり得る。本開示での使用に適切なＣａｓポリペプチドは、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２、Ｃａｓ１３、Ｃｐｆ１（またはＣａｓ１２ａ）、Ｃ２Ｃ１、Ｃ２Ｃ２（またはＣａｓ１３ａ）、Ｃａｓ１３ｂ、Ｃａｓ１３ｃ、Ｃａｓ１３ｄ、Ｃ２Ｃ３、Ｃａｓｌ、ＣａｓｌＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ５ｅ（ＣａｓＤ）、Ｃａｓ６、Ｃａｓ６ｅ、Ｃａｓ６ｆ、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８ａ、Ｃａｓ８ａｌ、Ｃａｓ８ａ２、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃｓｎｌ、Ｃｓｘｌ２、Ｃａｓ１０、Ｃａｓ１０ｄ，ＣａｓｌＯ、ＣａｓｌＯｄ、ＣａｓＦ、ＣａｓＧ、ＣａｓＨ、Ｃｓｙｌ、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅｌ（ＣａｓＡ）、Ｃｓｅ２（ＣａｓＢ）、Ｃｓｅ３（ＣａｓＥ）、Ｃｓｅ４（ＣａｓＣ）、Ｃｓｃｌ、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒｌ、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂｌ、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘｌ７、Ｃｓｘｌ４、ＣｓｘｌＯ、Ｃｓｘｌ６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘｌ、Ｃｓｘｌ５、Ｃｓｆｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、またはＣｕｌ９６６、およびこれらの誘導体、変異体、または任意のフラグメントを含む場合がある。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１３は、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１３ｂ、Ｃａｓ１３ｃ、およびＣａｓ１３ｄ（例えばＣａｓＲｘ）を含む場合があるが、これらに限定されるものではない。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓは、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡ切断であるか、切断活性の低下を呈する場合がある。遺伝的修飾部分は、少なくとも１つの異種ＲＮＡポリヌクレオチドと複合体を形成するように構成される場合がある。場合により、遺伝的修飾部分は、転写アクチベータまたは転写リプレッサと融合することもある。

【0173】

任意の適切なヌクレアーゼ（例えばエンドヌクレアーゼ）が、遺伝的修飾部分として使用可能である。適切なヌクレアーゼとして、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）タンパク質、またはＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、ＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、ＩＶ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、Ｖ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、およびＶＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチドを含むＣａｓヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ヌクレアーゼアクチベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）、ＣＲＩＳＰＲ関連ＲＮＡ結合タンパク質、レコンビナーゼ、フリッパーゼ、トランスポサーゼ、アルゴノート（Ａｇｏ）タンパク質（例えば、原核生物アルゴノート（ｐＡｇｏ）、古細菌アルゴノート（ａＡｇｏ）、真核生物アルゴノート（ｅＡｇｏ）、および高度好塩菌アルゴノート（Ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｅｇｏｒｙｉ Ａｒｇｏｎａｕｔｅ）（ＮｇＡｇｏ））、ＲＮＡに作用するアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡＲ）、ＣＩＲＴ、ＰＵＦ、ホーミングエンドヌクレアーゼ、あるいはこれらの任意の機能性フラグメント、任意の誘導体、ならびにこれらの変異体、および任意のフラグメントを含むが、これらに限定されるものではない。

【0174】

本明細書に開示されるような遺伝的修飾部分は、遺伝子発現の調節に関与しない付加的なペプチド配列、例えばリンカー配列、標的化配列などに結合（例えば、連結または融合）することができる。「標的化配列」という用語は、本明細書で使用するとき、ヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を指すものであり、これらは、細胞内位置、例えば、細胞膜、あるいは所与の細胞小器官、核、サイトゾル、ミトコンドリア、小胞体（ＥＲ）、ゴルジ、葉緑体、アポプラスト、ペルオキシソーム、または他の細胞小器官の膜へのタンパク質の局在化（または保持）を媒介する標的化ポリペプチドをコードする。例えば、標的化配列は、タンパク質（例えばレセプターポリペプチドまたはアダプターポリペプチド）を、核移行シグナル（ＮＬＳ）を利用する核、核輸出シグナル（ＮＥＳ）を利用する細胞の核の外部（例えば細胞質）、ミトコンドリア標的化シグナルを利用するミトコンドリア、ＥＲ保持シグナルを利用する小胞体（ＥＲ）、ペルオキシソーム標的化シグナルを利用するペルオキシソーム、膜局在化シグナルを利用する細胞膜、またはこれらの組合せに向けることができる。

【0175】

本明細書に開示されるような遺伝的修飾部分は、融合構築物（例えば融合タンパク質）の一部であり得る。本明細書で使用するとき、「融合」は、１つ以上の非天然配列（例えば部分）を含むタンパク質および／または核酸を指す場合がある。融合は、同じ非天然配列のうち１つ以上を含む場合がある。融合は、異なる非天然配列のうち１つ以上を含む場合がある。融合は、キメラであり得る。融合は、核酸アフィニティータグを含む場合がある。融合は、バーコードを含む場合がある。融合は、ペプチドアフィニティータグを含む場合がある。融合は、部位に向けられたポリペプチドの細胞内局在化（例えば、核へと標的化するための核移行シグナル（ＮＬＳ）、ミトコンドリアへと標的化するためのミトコンドリア局在化シグナル、葉緑体へと標的化するための葉緑体局在化シグナル、小胞体（ＥＲ）保持シグナルなど）を提供する場合がある。融合は、追跡または精製に使用可能な非天然の配列（例えばアフィニティータグ）を提供する場合がある。融合は、ビオチンなどの小分子、またはＡｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ染料、Ｃｙａｎｉｎｅ３染料、Ｃｙａｎｉｎｅ５染料などの染料であり得る。

【0176】

融合は、機能効果を持つ任意のタンパク質を指す場合がある。例えば、融合タンパク質は、メチルトランスフェラーゼ活性、デメチラーゼ活性、ジスムターゼ活性、アルキル化活性、脱プリン活性、酸化活性、ピリミジン二量体形成活性、インテグラーゼ活性、トランスポサーゼ活性、レコンビナーゼ活性、ポリメラーゼ活性（例えば逆転写酵素活性）、リガーゼ活性、ヘリカーゼ活性、ホトリアーゼ活性またはグリコシラーゼ活性、アセチルトランスフェラーゼ活性、デアセチラーゼ活性、キナーゼ活性、ホスファターゼ活性、ユビキチンリガーゼ活性、脱ユビキチン化活性、アデニル化活性、脱アデニル化活性、ＳＵＭＯ化活性、脱ＳＵＭＯ化活性、リボシル化活性、脱リボシル化活性、ミリストイル化活性、リモデリング活性、プロテアーゼ活性、オキシドレダクターゼ活性、トランスフェラーゼ活性、ヒドロラーゼ活性、リアーゼ活性、イソメラーゼ活性、シンターゼ活性、シンテターゼ活性、あるいは脱ミリストイル化活性を含む場合がある。作用因子タンパク質は、ゲノム座を修飾する場合がある。融合タンパク質は、Ｃａｓタンパク質における融合であり得る。融合タンパク質は、Ｃａｓタンパク質における非天然配列であり得る。

【0177】

いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、１つ以上の転写リプレッサドメイン、アクチベータドメイン、後成的ドメイン、レコンビナーゼドメイン、トランスポサーゼドメイン、フリッパーゼドメイン、ニッカーゼドメイン、またはこれらの任意の組合せに融合可能である。アクチベータドメインは、タンパク質のカルボキシル末端に位置する１つ以上のタンデム活性化ドメインを含む場合がある。場合により、遺伝的修飾部分は、タンパク質のカルボキシル末端に位置する１つ以上のタンデムリプレッサドメインを含む。例示的な活性化ドメインとして、ＧＡＬ４、単純ヘルペス活性化ドメインＶＰ１６、ＶＰ６４（単純ヘルペス活性化ドメインＶＰ１６の四量体）、ＮＦ－κＢ ｐ６５サブユニット、エプスタイン－バーウイルスＲトランス活性化因子（Ｒｔａ）が挙げられるがこれらに限定されるものではなく、Ｃｈａｖｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１５，１２（４）：３２６－３２８に記載されている。例示的なリプレッサドメインとして、Ｋｏｘ１のＫＲＡＢ（Ｋｒｕｐｐｅｌ関連ボックス）ドメイン、Ｍａｄ ｍＳＩＮ３相互作用ドメイン（ＳＩＤ）、ＥＲＦリプレッサドメイン（ＥＲＤ）が挙げられるがこれらに限定されるものではなく、Ｃｈａｖｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１５，１２（４）：３２６－３２８の記載されている。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、タンパク質のアミノ末端に位置する１つ以上のタンデムリプレッサドメインを含む。

【0178】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるヌクレアーゼは、核酸切断活性を欠くタンパク質であり得る。場合により、Ｃａｓタンパク質は、死Ｃａｓタンパク質である。死Ｃａｓタンパク質は、核酸切断活性を欠くタンパク質であり得る。Ｃａｓタンパク質は、野生型Ｃａｓタンパク質の修飾形態を含む場合がある。野生型Ｃａｓタンパク質の修飾形態は、Ｃａｓタンパク質の核酸切断活性を低下させるアミノ酸変化（例えば欠失、挿入、または置換）を含む場合がある。例えば、Ｃａｓタンパク質の修飾形態は、野生型Ｃａｓタンパク質（例えばＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のＣａｓ９）において９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満の核酸切断活性を有する場合がある。Ｃａｓタンパク質の修飾形態は、実質的な核酸切断活性がない場合もある。Ｃａｓタンパク質は、実質的な核酸切断活性がない修飾形態であるとき、酵素的に不活性および／または「死」（「ｄ」により省略される）として称される場合がある。死Ｃａｓタンパク質（例えばｄＣａｓ、ｄＣａｓ９）は、標的ポリヌクレオチドに結合可能であるが、標的ポリヌクレオチドを切断しない場合がある。いくつかの態様では、死Ｃａｓタンパク質は、死Ｃａｓ９タンパク質である。

【0179】

いくつかの実施形態では、ｄＣａｓ（例えばｄＣａｓ９）ポリペプチドは、標的ＤＮＡの転写を活性化または抑制するために単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と会合することができる。ｓｇＲＮＡは、操作されたキメラ受容体ポリペプチドを発現する細胞へと導入可能である。場合により、このような細胞は、同じ核酸を標的とする１つ以上の異なるｓｇＲＮＡを包含する。その他の場合、ｓｇＲＮＡは、細胞中の異なる核酸を標的とする。

【0180】

いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、触媒的に不活性のＣａｓポリペプチドを含む場合があり、この場合、Ｃａｓポリペプチドのヌクレアーゼ活性は、排除、または実質的に排除される。

【0181】

いくつかの例では、遺伝的修飾部分は、触媒的に不活性化されたＣａｓ９（ｄＣａｓ９）、その任意の誘導体、変異体、または任意のフラグメントを含む場合がある。

【0182】

いくつかの例では、遺伝的修飾部分は、触媒的に不活性化されたＣａｓ１２（ｄＣａｓ１２）、その任意の誘導体、変異体、または任意のフラグメントを含む場合がある。

【0183】

いくつかの例では、遺伝的修飾部分は、触媒的に不活性化されたＣａｓ１３（ｄＣａｓ１３）、その誘導体、変異体、または任意のフラグメントを含む場合がある。

【0184】

いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、本明細書に記載されるような少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドと複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、異種ＤＮＡポリヌクレオチドまたは異種ＲＮＡポリヌクレオチドのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、少なくとも１つの異種ＲＮＡポリヌクレオチドと複合体を形成することができる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ＲＮＡポリヌクレオチドとの複合体形成は、遺伝的修飾部分を異種ポリヌクレオチドの部分に向けて、標的とする。

【0185】

場合により、本明細書に記載の組成物および方法は、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドを含む。場合により、本明細書に記載の組成物および方法は、複数の異種核酸を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）であり得る。場合により、ＤＮＡ配列は、一本鎖または二本鎖であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種核酸ポリヌクレオチドは、リボ核酸（ＲＮＡ）であり得る。

【0186】

いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分は、少なくとも１つの異種ＲＮＡポリヌクレオチドと複合体を形成することができる。少なくとも１つの異種ＲＮＡポリヌクレオチドは、遺伝的修飾部分に依存する標的化の特異性のために本明細書に記載の部分のいずれか１つをコードする異種ポリヌクレオチドの核酸配列に対して相補的な配列を含む核酸標的化領域を含む場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ＲＮＡポリヌクレオチドは、二重ガイド核酸と称することができる２つの別個の核酸分子を含むガイド核酸（またはガイドＲＮＡ）、または単一ガイド核酸（例えばｓｇＲＮＡ）と称することができる単一核酸分子を含むガイド核酸であり得る。いくつかの実施形態では、ガイド核酸は、融合ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）および転写活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む単一ガイド核酸である。いくつかの実施形態では、ガイド核酸は、ｃｒＲＮＡを含む単一ガイド核酸である。いくつかの実施形態では、ガイド核酸は、ｃｒＲＮＡを含むがｔｒａｃＲＮＡを欠く単一ガイド核酸である。いくつかの実施形態では、ガイド核酸は、非融合ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡを含む二重ガイド核酸である。例示的な二重ガイド核酸は、ｃｒＲＮＡ様分子およびｔｒａｃｒＲＮＡ様分子を含む場合がある。例示的な単一ガイド核酸は、ｃｒＲＮＡ様な分子を含む場合がある。例示的な単一ガイド核酸は、融合ｃｒＲＮＡ様な分子とｔｒａｃｒＲＮＡ様分子を含む場合がある。

【0187】

ｃｒＲＮＡは、ガイド核酸の核酸標的化セグメント（例えばスペーサ領域）、およびガイド核酸のＣａｓタンパク質結合セグメントの二本鎖二重鎖（ｄｕｐｌｅｘ）の半分を形成可能なヌクレオチドの伸張部を含む場合がある。

【0188】

ｔｒａｃｒＲＮＡは、ｇＲＮＡのＣａｓタンパク質結合セグメントの二本鎖二重鎖の他半分を形成するヌクレオチドの伸張部を含む場合がある。ｃｒＲＮＡのヌクレオチドの伸張部は、ガイド核酸のＣａｓタンパク質結合ドメインの二本鎖二重鎖を形成するために、ｔｒａｃｒＲＮＡのヌクレオチドの伸張部と相補的であり、これにハイブリダイズする場合がある。

【0189】

ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡは、ガイド核酸を形成するためにハイブリダイズ可能である。ｃｒＲＮＡはさらに、標的核酸認識配列（例えばプロトスペーサ）にハイブリダイズする単鎖核酸標的化セグメント（例えばスペーサ領域）を提供する場合がある。スペーサ領域を含むｃｒＲＮＡ分子またはｔｒａｃｒＲＮＡ分子の配列は、ガイド核酸が使用される種に特異的となるように設計可能である。

【0190】

いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域は、長さ１８～７２ヌクレオチドの場合がある。ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー領域）は、約１２ヌクレオチド～約１００ヌクレオチドの長さを有する場合がある。例えば、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー領域）は、約１２ヌクレオチド（ｎｔ）～約８０ｎｔ、約１２ｎｔ～約５０ｎｔ、約１２ｎｔ～約４０ｎｔ、約１２ｎｔ～約３０ｎｔ、約１２ｎｔ～約２５ｎｔ、約１２ｎｔ～約２０ｎｔ、約１２ｎｔ～約１９ｎｔ、約１２ｎｔ～約１８ｎｔ、約１２ｎｔ～約１７ｎｔ、約１２ｎｔ～約１６ｎｔ、または約１２ｎｔ～約１５ｎｔの長さを有する場合がある。代替的に、ＤＮＡ標的化セグメントは、約１８ｎｔ～約２０ｎｔ、約１８ｎｔ～約２５ｎｔ、約１８ｎｔ～約３０ｎｔ、約１８ｎｔ～約３５ｎｔ、約１８ｎｔ～約４０ｎｔ、約１８ｎｔ～約４５ｎｔ、約１８ｎｔ～約５０ｎｔ、約１８ｎｔ～約６０ｎｔ、約１８ｎｔ～約７０ｎｔ、約１８ｎｔ～約８０ｎｔ、約１８ｎｔ～約９０ｎｔ、約１８ｎｔ～約１００ｎｔ、約２０ｎｔ～約２５ｎｔ、約２０ｎｔ～約３０ｎｔ、約２０ｎｔ～約３５ｎｔ、約２０ｎｔ～約４０ｎｔ、約２０ｎｔ～約４５ｎｔ、約２０ｎｔ～約５０ｎｔ、約２０ｎｔ～約６０ｎｔ、約２０ｎｔ～約７０ｎｔ、約２０ｎｔ～約８０ｎｔ、約２０ｎｔ～約９０ｎｔ、または約２０ｎｔ～約１００ｎｔの長さを有する場合がある。核酸標的化領域の長さは、最小で５、１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、またはそれより多くのヌクレオチドであり得る。核酸標的化領域（例えばスペーサー領域）の長さは、最大で５、１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、またはそれより多くのヌクレオチドであり得る。

【0191】

いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ２０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ１９ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ１８ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ１７ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ１６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ２１ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ガイド核酸の核酸標的化領域（例えばスペーサー）は、長さ２２ヌクレオチドである。

【0192】

標的核酸のヌクレオチド配列（標的配列）に相補的なガイド核酸のヌクレオチド配列は、例えば、少なくとも約１２ｎｔ、少なくとも約１５ｎｔ、少なくとも約１８ｎｔ、少なくとも約１９ｎｔ、少なくとも約２０ｎｔ、少なくとも約２５ｎｔ、少なくとも約３０ｎｔ、少なくとも約３５ｎｔ、または少なくとも約４０ｎｔの長さを有する場合がある。標的核酸のヌクレオチド配列（標的配列）に相補的なガイド核酸のヌクレオチド配列は、約１２ヌクレオチド（ｎｔ）～約８０ｎｔ、約１２ｎｔ～約５０ｎｔ、約１２ｎｔ～約４５ｎｔ、約１２ｎｔ～約４０ｎｔ、約１２ｎｔ～約３５ｎｔ、約１２ｎｔ～約３０ｎｔ、約１２ｎｔ～約２５ｎｔ、約１２ｎｔ～約２０ｎｔ、約１２ｎｔ～約１９ｎｔ、約１９ｎｔ～約２０ｎｔ、約１９ｎｔ～約２５ｎｔ、約１９ｎｔ～約３０ｎｔ、約１９ｎｔ～約３５ｎｔ、約１９ｎｔ～約４０ｎｔ、約１９ｎｔ～約４５ｎｔ、約１９ｎｔ～約５０ｎｔ、約１９ｎｔ～約６０ｎｔ、約２０ｎｔ～約２５ｎｔ、約２０ｎｔ～約３０ｎｔ、約２０ｎｔ～約３５ｎｔ、約２０ｎｔ～約４０ｎｔ、約２０ｎｔ～約４５ｎｔ、約２０ｎｔ～約５０ｎｔ、または約２０ｎｔ～約６０ｎｔの長さを有する場合がある。

【0193】

標的とされたポリヌクレオチドのプロトスペーサ配列は、関心領域内のＰＡＭを同定し、プロトスペーサとして所望のサイズのＰＡＭの上流または下流領域を選択することにより、同定可能である。対応するスペーサ配列は、プロトスペーサ領域の相補的配列を判定することにより設計可能である。

【0194】

スペーサ配列は、コンピュータプログラム（例えば機械可読コード）を使用して同定可能である。コンピュータプログラムは、予測融解温度、二次構造形成、および予測アニーリング温度などの変数、配列同一性、ゲノムコンテキスト、クロマチンアクセシビリティ、％ＧＣ、ゲノム発生頻度、メチル化状態、ＳＮＰの存在などを使用する場合がある。

【0195】

核酸を標的化する配列（例えば、本明細書に開示されるような少なくとも１つの異種ポリペプチドのスペーサ配列）と標的核酸（例えば、本明細書に記載される部分のいずれか１つをコードする異種ポリヌクレオチドのプロトスペーサ配列）との相補性の割合は、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％である。核酸を標的化する配列と標的核酸との相補性の割合は、約２０の隣接するヌクレオチドにわたり、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％であり得る。

【0196】

ガイド核酸のＣａｓのタンパク結合セグメントは、互いに相補的であるヌクレオチドの２つの伸張部（例えばｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む場合がある。このような互いに相補的であるヌクレオチドの２つの伸張部（例えばｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡ）は、介入するヌクレオチド（例えば、単一のガイド核酸の場合にはリンカー）により共有結合可能である。互いに相補的であるヌクレオチドの２つの伸張部（例えばｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡ）は、Ｃａｓタンパク結合セグメントの二本鎖ＲＮＡ二重鎖またはヘアピンを形成し、そうしてステムループ構造をもたらすようにハイブリダイズ可能である。ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡは、ｃｒＲＮＡの３’末端およびｔｒａｃｒＲＮＡの５’末端を介して共有結合可能である。代替的に、ｔｒａｃｒＲＮＡおよびｃｒＲＮＡは、ｔｒａｃｒＲＮＡの５’末端およびｃｒＲＮＡの３’末端を介して共有結合可能である。

【0197】

ガイド核酸のＣａｓタンパク質結合セグメントは、約１０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチド、例えば約１０ヌクレオチド（ｎｔ）～約２０ｎｔ、約２０ｎｔ～約３０ｎｔ、約３０ｎｔ～約４０ｎｔ、約４０ｎｔ～約５０ｎｔ、約５０ｎｔ～約６０ｎｔ、約６０ｎｔ～約７０ｎｔ、約７０ｎｔ～約８０ｎｔ、約８０ｎｔ～約９０ｎｔ，または約９０ｎｔ～約１００ｎｔの長さを有する場合がある。例えば、ガイド核酸のＣａｓタンパク質結合セグメントは、約１５ヌクレオチド（ｎｔ）～約８０ｎｔ、約１５ｎｔ～約５０ｎｔ、約１５ｎｔ～約４０ｎｔ、約１５ｎｔ～約３０ｎｔ、または約１５ｎｔ～約２５ｎｔの長さを有する場合がある。

【0198】

ガイド核酸のＣａｓのタンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖は、約６塩基対（ｂｐ）～約５０ｂｐの長さを有する場合がある。例えば、タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖は、約６ｂｐ～約４０ｂｐ、約６ｂｐ～約３０ｂｐ、約６ｂｐ～約２５ｂｐ、約６ｂｐ～約２０ｂｐ、約６ｂｐ～約１５ｂｐ、約８ｂｐ～約４０ｂｐ、約８ｂｐ～約３０ｂｐ、約８ｂｐ～約２５ｂｐ、約８ｂｐ～約２０ｂｐ、または約８ｂｐ～約１５ｂｐの長さを有する場合がある。例えば、タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖は、約８ｂｐ～約１０ｂｐ、約１０ｂｐ～約１５ｂｐ、約１５ｂｐ～約１８ｂｐ、約１８ｂｐ～約２０ｂｐ、約２０ｂｐ～約２５ｂｐ、約２５ｂｐ～約３０ｂｐ、約３０ｂｐ～約３５ｂｐ、約３５ｂｐ～約４０ｂｐ、または約４０ｂｐ～約５０ｂｐの長さを有する場合がある。

【0199】

いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖は、３６塩基対の長さを有する場合がある。タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖を形成するようにハイブリダイズするヌクレオチド配列間の相補性の割合は、少なくとも約６０％である。例えば、タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖を形成するようにハイブリダイズするヌクレオチド配列間の相補性の割合は、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％である。場合により、タンパク質結合セグメントのｄｓＲＮＡ二重鎖を形成するようにハイブリダイズするヌクレオチド配列間の相補性の割合は、１００％である。

【0200】

リンカー（例えば、単一のガイド核酸中でｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡを結合する）は、約３ヌクレオチド～約１００ヌクレオチドの長さを有する場合がある。例えば、リンカーは、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約９０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約８０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約７０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約６０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約５０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約４０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約３０ｎｔ、約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約２０ｎｔ、または約３ヌクレオチド（ｎｔ）～約１０ｎｔの長さを有する場合がある。例えば、リンカーは、約３ｎｔ～約５ｎｔ、約５ｎｔ～約１０ｎｔ、約１０ｎｔ～約１５ｎｔ、約１５ｎｔ～約２０ｎｔ、約２０ｎｔ～約２５ｎｔ、約２５ｎｔ～約３０ｎｔ、約３０ｎｔ～約３５ｎｔ、約３５ｎｔ～約４０ｎｔ、約４０ｎｔ～約５０ｎｔ、約５０ｎｔ～約６０ｎｔ、約６０ｎｔ～約７０ｎｔ、約７０ｎｔ～約８０ｎｔ、約８０ｎｔ～約９０ｎｔ、または約９０ｎｔ～約１００ｎｔの長さを有する場合がある。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡのリンカーは、４ｎｔである。

【0201】

本開示のガイド核酸は、追加の望ましい特徴（例えば、修飾または調節された安定性、細胞内標的化、蛍光標識による追跡、タンパク質またはタンパク質複合体の結合部位など）を提供する修飾または配列を含む場合がある。このような修飾の例として、例えば、５’キャップ（７－メチルグアニレートキャップ（ｍ７Ｇ））、３’ポリアデニル化尾部（３’ポリ（Ａ）尾部）、リボスイッチ配列（例えば、安定性の調節、ならびに／あるいはタンパク質および／またはタンパク質複合体によるアクセシビリティの調節を可能にするもの）、安定性調節配列、ｄｓＲＮＡ二重鎖（ヘアピン）を形成する配列、細胞内位置（例えば核、ミトコンドリア、葉緑体）に対してＲＮＡを標的とする修飾または配列、追跡を提供する修飾または配列（例えば、蛍光分子への直接コンジュゲーション、蛍光検出を容易にする部分へのコンジュゲーション、蛍光検出を可能とする配列など）、タンパク質に結合部位を提供する修飾または配列（例えば、転写活性化因子、転写リプレッサ、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ＤＮＡデメチラーゼ、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ、およびこれらの組合せを含む、ＤＮＡに作用するタンパク質）が挙げられる。

【0202】

ガイド核酸は、新規または強化された特徴（例えば安定性の改善）を伴う核酸を提供するために、１つ以上の修飾（例えば、塩基修飾、バックボーン修飾）を含む場合がある。ガイド核酸は、核酸親和性タグを含む場合がある。ヌクレオシドは、塩基と糖の組合せであり得る。ヌクレオチドの塩基部分は、複素環式塩基であり得る。プリンおよびピリミジンは、このような複素環式塩基に最もよくみられる２つの分類である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合されるリン酸基をさらに含むヌクレオシドであり得る。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドでは、リン酸基は、糖の２’、３’、または５’ヒドロキシル部分に結合可能である。ガイド核酸の形成において、リン酸基は、直鎖高分子化合物を形成するために互いに隣接するヌクレオシドに共有結合可能である。次いで、この直鎖高分子化合物の末端はそれぞれ、環状化合物を形成するためにさらに結合する場合がある。しかし、直鎖化合物が適切な場合がある。加えて、直鎖化合物は、内部ヌクレオチド塩基相補性を有し、そのため、完全または部分的に二本鎖の化合物を産生するような形で折り重なる場合がある。さらに、ガイド核酸内では、リン酸基は、よくガイド核酸のヌクレオシド間バックボーンを形成すると言われる場合もある。ガイド核酸の結合またはバックボーンは、３’～５’ホスホジエステル結合であり得る。

【0203】

ガイド核酸は、修飾されたバックボーンおよび／または修飾されたヌクレオシド間結合を含む場合がある。修飾されたバックボーンは、バックボーン中でリン原子を保持するもの、およびバックボーン中でリン原子を有していないものを含む場合がある。

【0204】

リン原子を中に包含する適切な修飾されたガイド核酸バックボーンは、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル、ならびに３’－アルキレンホスホネート、５’－アルキレンホスホネート、キラルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホラミダイトとアミノアルキルホスホラミダイトを含むホスホラミダイト、ホスホロジアミデート、チオノホスホラミダイト、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート、および正常な３’－５’結合、２’－５’結合アナログ、および逆極性を有するボラノホスフェートなどの他のアルキルホスホネートを含み、ここで、１つ以上のヌクレオチド間結合は、３’－３’、５’－５’、または２’－２’結合である。逆極性を有する適切なガイド核酸は、最も３’－ヌクレオチド間結合（３’－ｍｏｓｔ ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｌｉｎｋａｇｅ）における単一の３’－３’結合（核酸塩基が欠失しているか、その適所にヒドロキシル基を有する単一の逆ヌクレオシド残基など）を含む場合がある。様々な塩（例えば、塩化カリウムまたは塩化ナトリウム）、混合塩、および遊離酸形態も、含まれる場合がある。

【0205】

ガイド核酸は、１つ以上のホスホロチオエートおよび／またはヘテロ原子のヌクレオシド間結合、具体的には－ＣＨ２－ＮＨ－Ｏ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｏ－ＣＨ２－（メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩバックボーン）、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、および－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－を含む場合がある（ここで、天然リン酸ジエステルのヌクレオチド間結合は、－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－ＣＨ２－として表される）。

【0206】

ガイド核酸は、モルホリノバックボーン構造を含む場合がある。例えば、核酸は、リボース環の代わりに６員モルホリノ環を含む場合がある。これらの実施形態の一部では、ホスホロジアミデートまたは他の非リン酸ジエステルのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合に代わる。

【0207】

ガイド核酸は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルのヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子、およびアルキルまたはシクロアルキルのヌクレオシド間結合、あるいは１つ以上の短鎖ヘテロ原子または複素環式ヌクレオシド間結合により形成される、ポリヌクレオチドバックボーンを含む場合がある。これらは、（ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される）モルホリノ結合、シロキサンバックボーン、スルフィド、スルホキシド、およびスルホンのバックボーン、ホルムアセチルバックボーン、チオホルムアセチルバックボーン、メチレンホルムアセチルバックボーン、チオホルムアセチルバックボーン、リボアセチルバックボーン、アルケン含有バックボーン、スルファメートバックボーン、メチレンイミノバックボーン、メチレンヒドラジノバックボーン、スルホネートバックボーン、スルホンアミドバックボーン、アミドバックボーン、ならびにＮ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２構成部分の混合物を有する他のものを含む場合がある。

【0208】

ガイド核酸は、核酸模倣物を含む場合がある。「模倣物」という用語は、フラノース環のみ、またはフラノース環とヌクレオチド結合の両方が、非フラノース基と置き換えられるポリヌクレオチドを含むよう意図されている場合があり、フラノース環のみの置換えは、糖代替（ｓｕｇａｒ ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）とも称される場合がある。複素環式塩基部分または修飾された複素環式塩基部分は、適切な標的核酸でのハイブリダイゼーションのために維持される場合がある。かかる核酸の１つは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であってもよい。ＰＮＡでは、ポリヌクレオチドの糖バックボーンは、アミドを包含するバックボーン、具体的にはアミノエチルグリシンバックボーンと置き換えられる場合がある。ヌクレオチドは、保持され、バックボーンのアミド部分のアザ窒素原子に直接または間接的に結合することができる。ＰＮＡ化合物中のバックボーンは、アミドを包含するバックボーンをＰＮＡに与える、結合した２つ以上のアミノエチルグリシンのユニットを含む場合がある。複素環式塩基部分は、バックボーンのアミド部分のアザ窒素原子に直接または間接的に結合することができる。

【0209】

ガイド核酸は、複素環式塩基がモルホリノ環に付いた結合モルホリノユニット（モルホリノ核酸）を含む場合がある。結合基は、モルホリノ核酸中でモルホリノ単量体ユニットを結合可能である。非イオン性モルホリノベースのオリゴマー化合物では、細胞タンパク質との望ましくない相互作用が少ない。モルホリノベースのポリヌクレオチドは、ガイド核酸の非イオン性模倣物の場合がある。モルホリノクラス内の様々な化合物は、様々な結合基を使用して結合可能である。さらなるポリヌクレオチド模倣物のクラスは、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）と称される場合もある。核酸分子に通常存在するフラノース環は、シクロヘキセニル環と置き換えることができる。ＣｅＮＡ ＤＭＴで保護されたホスホラミダイト単量体は、ホスホラミダイトの化学的性質を使用したオリゴマー化合物合成のために調製および使用することができる。ＣｅＮＡ単量体を核酸鎖へ組み込むことで、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドの安定性を増大することができる。ＣｅＮＡオリゴアデニレートは、天然複合体と同様の安定性をもって核酸補体と複合体を形成することができる。さらなる修飾は、２’－ヒドロキシル基が糖環の４’－炭素原子に結合し、それにより２’－Ｃ，４’－Ｃ－オキシメチレン結合が生じ、二環式糖部分が生じるロックド核酸（ＬＮＡ）を含む場合がある。この結合は、メチレン（－ＣＨ２－）、すなわち２’酸素原子および４’炭素原子を架橋する基であってもよく、ここで、ｎは１または２である。ＬＮＡおよびＬＮＡアナログは、相補的核酸では非常に高い二重の熱安定性（Ｔｍ＝＋３～＋１０℃）、３’－エキソヌクレアーゼ（ｅｘｏｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）分解に向かう安定性、および良好な溶解度特性を示す場合がある。

【0210】

ガイド核酸は、置換された１つ以上の糖部分を含む場合がある。適切なポリヌクレオチドは、ＯＨ、Ｆ、Ｏ－アルキル、Ｓ－アルキル、Ｎ－アルキル、Ｏ－アルケニル、Ｓ－アルケニル、Ｎ－アルケニル、Ｏ－アルキニル、Ｓ－アルキニル、Ｎ－アルキニル、またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルから選択される糖置換基を含む場合がある。ここで、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換のＣ１～Ｃ１０アルキル、あるいはＣ２～Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。特に適切なのは、Ｏ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ（（ＣＨ２）ｎＣＨ３）２であり、ｎとｍは１～約１０である。糖置換基は、Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリル、Ｏ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、介入物質、ガイド核酸の薬物動態特性を改善するための基、またはガイド核酸の薬力学特性を改善するための基、および同様の特性を有する他の置換基から選択される場合がある。適切な修飾は、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとして知られる２’－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、アルコキシアルコキシ基）を含む場合がある。さらに適切な修飾は、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、（２’－ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基）、および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（２’－Ｏ－ジメチル－アミノ－エトキシ－エチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても知られる）、２’－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２を含む場合がある。

【0211】

他の適切な糖置換基は、メトキシ（－Ｏ－ＣＨ３）、アミノプロポキシ（－Ｏ ＣＨ２ ＣＨ２ＮＨ２）、アリル（－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２）、－Ｏ－アリル（－－Ｏ－－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２）、およびフルオロ（Ｆ）を含む場合がある。２’－糖置換基は、アラビノ（上）位置またはリボ（下）位置にあってもよい。適切な２’－アラビノ修飾は、２’－Ｆである。同様の修飾も、オリゴマー化合物の他の位置、具体的には３’末端ヌクレオシド上または２’～５’結合ヌクレオチド中の糖の３’位置、ならびに５’末端ヌクレオチドの５’位置に作られる場合がある。オリゴマー化合物はさらに、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などの糖模倣物を有する場合がある。

【0212】

ガイド核酸はさらに、核酸塩基（または「塩基」）修飾あるいは置換を含む場合がある。本明細書で使用するとき、「未修飾」または「天然」核酸塩基は、プリン塩基（例えばアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ））、およびピリミジン塩基（例えばチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ））を含む場合がある。修飾された核酸塩基は、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン、２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニル（－Ｃ＝Ｃ－ＣＨ３）ウラシルおよびシトシンなどの他の合成および天然核酸塩基、ならびに他のピリミジン塩基のアルキニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン、およびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび他の８－置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－アミノ－アデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－デアザアデニン、３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンを含む場合がある。修飾された核酸塩基は、フェノキサジンシチジン（１Ｈ－ピリミド（５，４－ｂ）（１，４）ベンゾチアジン－２（３Ｈ）－オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ－ピリミド（５，４－ｂ）（１，４）ベンゾチアジン－２（３Ｈ）－オン）などの三環式ピリミジン、置換フェノキサジンシチジン（例えば９－（２－アミノエトキシ）－Ｈ－ピリミド（４，５－ｂ）インドール－２－オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ－ピリミド（４，５－ｂ）インドール－２－オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ－ピリド（３’，２’；４，５）ピロロ（２，３－ｄ）ピリミジン－２－オン）などのＧクランプを含む場合がある。

【0213】

複素環式塩基部分は、プリンまたはピリミジン塩基が、他の複素環式化合物、例えば７－デアザ－アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン、および２－ピリドンと置き換えられるものを含む場合がある。核酸塩基は、ポリヌクレオチド化合物の結合親和性を増大させるのに有用な場合がある。これらは、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、ならびに２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル、および５－プロピニルシトシンを含むＮ－２、Ｎ－６、およびＯ－６置換プリンを含む場合がある。５－メチルシトシン置換は、核酸二重鎖安定性を０．６～１．２℃増大可能であり、適切な塩基置換であり得る（例えば２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾と組み合わせたときに）。

【0214】

ガイド核酸の修飾は、ガイド核酸の活性、細胞分布、または細胞取込みを増強可能な１つ以上の部分またはコンジュゲートを、ガイド核酸に化学的に結合することを含む場合がある。これらの部分またはコンジュゲートは、一次または二次ヒドロキシル基などの官能基に共有結合したコンジュゲート基を含む場合がある。コンジュゲート基は、介入物質、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴマーの薬力学特性を増強する基、およびオリゴマーの薬物動態特性を増強可能な基を含む場合があるが、これらに限定されるものではない。コンジュゲート基は、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および染料を含む場合があるが、これらに限定されるものではない。薬力学特性を増強する基は、取込みを改善し、分解への抵抗性を増強し、および／または標的核酸での配列特異的ハイブリダイゼーションを強化する基を含む。薬物動態特性を増強可能な基は、核酸の取込み、分布、代謝、または排泄を改善する基を含む。コンジュゲート部分は、コレステロール部分などの脂質部分、コール酸、チオエテール（例えばヘキシル－Ｓ－トリチルチオ）、チオコレステロール、脂肪族鎖（例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基）、リン脂質（例えばジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールまたはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、あるいはアダマンタン酢酸、パルミチル部分、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分を含む場合があるが、これらに限定されるものではない。

【0215】

本明細書中のいくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡを含む異種ＲＮＡポリヌクレオチドが記載される。いくつかの実施形態では、ｃＲＮＡは、本明細書に記載の部分のうちいずれか１つをコードする異種ポリヌクレオチドに相補的な配列を標的とすることを含む。

【0216】

いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、５ｎｔ～１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、５ｎｔ～６ｎｔ、５ｎｔ～７ｎｔ、５ｎｔ～８ｎｔ、５ｎｔ～９ｎｔ、５ｎｔ～１０ｎｔ、５ｎｔ～１５ｎｔ、５ｎｔ～２０ｎｔ、５ｎｔ～２５ｎｔ、５ｎｔ～５０ｎｔ、５ｎｔ～１００ｎｔ、６ｎｔ～７ｎｔ、６ｎｔ～８ｎｔ、６ｎｔ～９ｎｔ、６ｎｔ～１０ｎｔ、６ｎｔ～１５ｎｔ、６ｎｔ～２０ｎｔ、６ｎｔ～２５ｎｔ、６ｎｔ～５０ｎｔ、６ｎｔ～１００ｎｔ、７ｎｔ～８ｎｔ、７ｎｔ～９ｎｔ、７ｎｔ～１０ｎｔ、７ｎｔ～１５ｎｔ、７ｎｔ～２０ｎｔ、７ｎｔ～２５ｎｔ、７ｎｔ～５０ｎｔ、７ｎｔ～１００ｎｔ、８ｎｔ～９ｎｔ、８ｎｔ～１０ｎｔ、８ｎｔ～１５ｎｔ、８ｎｔ～２０ｎｔ、８ｎｔ～２５ｎｔ、８ｎｔ～５０ｎｔ、８ｎｔ～１００ｎｔ、９ｎｔ～１０ｎｔ、９ｎｔ～１５ｎｔ、９ｎｔ～２０ｎｔ、９ｎｔ～２５ｎｔ、９ｎｔ～５０ｎｔ、９ｎｔ～１００ｎｔ、１０ｎｔ～１５ｎｔ、１０ｎｔ～２０ｎｔ、１０ｎｔ～２５ｎｔ、１０ｎｔ～５０ｎｔ、１０ｎｔ～１００ｎｔ、１５ｎｔ～２０ｎｔ、１５ｎｔ～２５ｎｔ、１５ｎｔ～５０ｎｔ、１５ｎｔ～１００ｎｔ、２０ｎｔ～２５ｎｔ、２０ｎｔ～５０ｎｔ、２０ｎｔ～１００ｎｔ、２５ｎｔ～５０ｎｔ、２５ｎｔ～１００ｎｔ、または５０ｎｔ～１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、５ｎｔ、６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、最小で５ｎｔ、６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、または５０ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、最大で６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、少なくとも５ｎｔ～１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、少なくとも５ｎｔ～６ｎｔ、５ｎｔ～７ｎｔ、５ｎｔ～８ｎｔ、５ｎｔ～９ｎｔ、５ｎｔ～１０ｎｔ、５ｎｔ～１５ｎｔ、５ｎｔ～２０ｎｔ、５ｎｔ～２５ｎｔ、５ｎｔ～５０ｎｔ、５ｎｔ～１００ｎｔ、６ｎｔ～７ｎｔ、６ｎｔ～８ｎｔ、６ｎｔ～９ｎｔ、６ｎｔ～１０ｎｔ、６ｎｔ～１５ｎｔ、６ｎｔ～２０ｎｔ、６ｎｔ～２５ｎｔ、６ｎｔ～５０ｎｔ、６ｎｔ～１００ｎｔ、７ｎｔ～８ｎｔ、７ｎｔ～９ｎｔ、７ｎｔ～１０ｎｔ、７ｎｔ～１５ｎｔ、７ｎｔ～２０ｎｔ、７ｎｔ～２５ｎｔ、７ｎｔ～５０ｎｔ、７ｎｔ～１００ｎｔ、８ｎｔ～９ｎｔ、８ｎｔ～１０ｎｔ、８ｎｔ～１５ｎｔ、８ｎｔ～２０ｎｔ、８ｎｔ～２５ｎｔ、８ｎｔ～５０ｎｔ、８ｎｔ～１００ｎｔ、９ｎｔ～１０ｎｔ、９ｎｔ～１５ｎｔ、９ｎｔ～２０ｎｔ、９ｎｔ～２５ｎｔ、９ｎｔ～５０ｎｔ、９ｎｔ～１００ｎｔ、１０ｎｔ～１５ｎｔ、１０ｎｔ～２０ｎｔ、１０ｎｔ～２５ｎｔ、１０ｎｔ～５０ｎｔ、１０ｎｔ～１００ｎｔ、１５ｎｔ～２０ｎｔ、１５ｎｔ～２５ｎｔ、１５ｎｔ～５０ｎｔ、１５ｎｔ～１００ｎｔ、２０ｎｔ～２５ｎｔ、２０ｎｔ～５０ｎｔ、２０ｎｔ～１００ｎｔ、２５ｎｔ～５０ｎｔ、２５ｎｔ～１００ｎｔ、または５０ｎｔ～１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、少なくとも５ｎｔ、６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、少なくとも最小で５ｎｔ、６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、または５０ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、少なくとも最大で６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、多くとも５ｎｔ～１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、多くとも５ｎｔ～６ｎｔ、５ｎｔ～７ｎｔ、５ｎｔ～８ｎｔ、５ｎｔ～９ｎｔ、５ｎｔ～１０ｎｔ、５ｎｔ～１５ｎｔ、５ｎｔ～２０ｎｔ、５ｎｔ～２５ｎｔ、５ｎｔ～５０ｎｔ、５ｎｔ～１００ｎｔ、６ｎｔ～７ｎｔ、６ｎｔ～８ｎｔ、６ｎｔ～９ｎｔ、６ｎｔ～１０ｎｔ、６ｎｔ～１５ｎｔ、６ｎｔ～２０ｎｔ、６ｎｔ～２５ｎｔ、６ｎｔ～５０ｎｔ、６ｎｔ～１００ｎｔ、７ｎｔ～８ｎｔ、７ｎｔ～９ｎｔ、７ｎｔ～１０ｎｔ、７ｎｔ～１５ｎｔ、７ｎｔ～２０ｎｔ、７ｎｔ～２５ｎｔ、７ｎｔ～５０ｎｔ、７ｎｔ～１００ｎｔ、８ｎｔ～９ｎｔ、８ｎｔ～１０ｎｔ、８ｎｔ～１５ｎｔ、８ｎｔ～２０ｎｔ、８ｎｔ～２５ｎｔ、８ｎｔ～５０ｎｔ、８ｎｔ～１００ｎｔ、９ｎｔ～１０ｎｔ、９ｎｔ～１５ｎｔ、９ｎｔ～２０ｎｔ、９ｎｔ～２５ｎｔ、９ｎｔ～５０ｎｔ、９ｎｔ～１００ｎｔ、１０ｎｔ～１５ｎｔ、１０ｎｔ～２０ｎｔ、１０ｎｔ～２５ｎｔ、１０ｎｔ～５０ｎｔ、１０ｎｔ～１００ｎｔ、１５ｎｔ～２０ｎｔ、１５ｎｔ～２５ｎｔ、１５ｎｔ～５０ｎｔ、１５ｎｔ～１００ｎｔ、２０ｎｔ～２５ｎｔ、２０ｎｔ～５０ｎｔ、２０ｎｔ～１００ｎｔ、２５ｎｔ～５０ｎｔ、２５ｎｔ～１００ｎｔ、または５０ｎｔ～１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、多くとも５ｎｔ、６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、多くとも最小で５ｎｔ、６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、または５０ｎｔを含む。いくつかの実施形態では、ｃｒＲＮＡは、多くとも最大で６ｎｔ、７ｎｔ、８ｎｔ、９ｎｔ、１０ｎｔ、１５ｎｔ、２０ｎｔ、２５ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔを含む。

【0217】

いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分および異種ポリヌクレオチドは、発現ベクターの使用により細胞へ送達可能である。発現ベクターの観点では、このベクターは、当該技術における任意の方法により宿主細胞、例えば哺乳動物、細菌、酵母菌、昆虫細胞へと容易に導入可能である。例えば、発現ベクターは、物理的手段、化学的手段、または生物学的手段により宿主細胞へ移すことができる。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分および異種ポリヌクレオチドは、リン酸カルシウム沈降反応、リポフェクション、粒子爆撃、マイクロインジェクション、遺伝子銃、エレクトロポレーションなどの物理的方法により細胞へ送達可能である。ベクターおよび／または外生核酸を含む細胞を産生する方法は、本明細書中の方法に適している（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｖｏｌｕｍｅｓ１－４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照）。宿主細胞へとポリヌクレオチドを導入する方法の１つは、リン酸カルシウムトランスフェクションである。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分および異種ポリヌクレオチドは、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用といった生物学的方法により細胞へ送達可能である。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞へ遺伝子を挿入するのに最も広く使用される方法となっている。いくつかの実施形態では、他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純疱疹ウイルスＩ、アデノウイルス、アデノ関連性ウイルスなどに由来する。例示的なウイルスベクターとして、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター（ＡＡＶ）、ポックスベクター、パルボウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター、または単純疱疹ウイルスベクター（ＨＳＶ）が挙げられる。いくつかの例では、レトロウイルスベクターは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ、ＭＭＬＶ、ＭｕＬＶ、またはＭＬＶ）、あるいはマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）ゲノムに由来するベクターなどの、γレトロウイルスベクターを含む。いくつかの例では、レトロウイルスベクターはさらに、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ゲノムに由来するものといったレンチウイルスベクターを含む。いくつかの例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９血清型を含む。いくつかの例では、ウイルスベクターは、２つ以上のウイルスからのウイルス部分を含むキメラウイルスベクターである。さらなる例では、ウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分および異種ポリヌクレオチドは、高分子複合体、ナノカプセル剤、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型乳剤、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む脂質ベースの系といった化学的手段により細胞へ送達可能である。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの送達媒体として使用される例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば人工膜小胞）である。標的とされたナノ粒子または他の適切なサブミクロンサイズの送達系によるポリヌクレオチドの送達など、その他最先端技術における核酸の標的化送達の方法も、利用可能である。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分および異種ポリヌクレオチドは、非ウイルス送達系により細胞へ送達可能である。非ウイルス送達系は、リポソームであり得る。脂質製剤の使用は、宿主細胞への核酸の導入（ｅｘ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ）に対して企図される。他の態様では、核酸は脂質に関連する。いくつかの実施形態では、脂質に関連する核酸は、リポソームの水性内部（ａｑｕｅｏｕｓ ｉｎｔｅｒｉｏｒ）に封入され、リポソームの脂質二重層内に点在し、リポソームとオリゴヌクレオチド療法に関連する結合分子を介してリポソームに付けられ、リポソーム中に閉じ込められ、リポソームと複合体を形成し、脂質を含有する溶液中で分散し、脂質と混合され、脂質と組み合わされ、懸濁液として脂質に包含され、ミセルに包含されるかそれと複合体を形成し、あるいはその他の方法で脂質に関連づけられる。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクターに関連する組成物は、溶液中のいかなる特定の構造にも限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、これら組成物は、二重層構造においてミセルとして、または「崩壊」構造とともに存在する。代替的には、単に溶液中で点在するだけであり、これによりサイズまたは形状が均一でない凝集体を生じさせる可能性がある。脂質は、いくつかの実施形態で自然に生じるか合成される脂肪物質である。例えば脂質は、細胞質に自然に生じる脂肪滴のほか、脂肪酸、アルコール類、アミン類、アミノアルコール類、およびアルデヒド類などの長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体を包含する化合物の分類を含む。使用に適した脂質は、商業的供給源から得られる。例えば、いくつかの実施形態では、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏから得られる。いくつかの実施形態では、ジセチルホスフェート（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．）から得られる。いくつかの実施形態では、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから得られる。ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、しばしばＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａ．）から得られる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質貯蔵液は、しばしば約－２０℃で保管される。クロロホルムは、メタノールよりも蒸発しやすいため、唯一の溶剤として使用される。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成により形成される様々な単層および多層状の脂質溶媒を包含する総称である。リポソームは、しばしばリン脂質二重層膜および内部水性媒体を持つ多孔質構造を有することを特徴とする。多層状リポソームは、水性媒体により複数の脂質層に分離される。リン脂質が過剰な水溶液中に浮遊すると、それらは自然に生じる。脂質成分は、閉鎖構造の形成前に自己再配列を受けて、脂質二重層間に水および溶質を閉じ込める（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５：５０５－１０）。しかし、溶液中で正常な多孔質構造とは異なる構造を有する組成物も、含まれる。例えば、いくつかの実施形態では、脂質はミセル構造を呈するか、脂質分子の不均一凝集体としてのみ存在する。また、リポフェクタミン－核酸複合体も企図される。いくつかの実施形態では、遺伝的修飾部分および異種ポリヌクレオチドは、細胞に送達可能、細胞外小胞を介して細胞に封入かつ送達可能である。細胞外小胞は、任意の膜結合型粒子であり得る。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、少なくとも１つの細胞により分泌される任意の膜結合型粒子であり得る。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成された膜結合型粒子である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞を用いることなく合成された膜結合型粒子である。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、エキソソーム、微小小胞体、レトロウイルス様粒子、アポトーシス小体、アポプトソーム、オンコソーム、エキソファー、外膜ウイルス、エキソマー、またはその他非常に大きな細胞外小胞であり得る。

【0218】

細胞外小胞の均質集団の同定と単離
本明細書中のいくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団を含む組成物を生成するために本明細書に記載のプラットフォームを利用する方法が記載される。いくつかの実施形態では、この方法は、細胞外小胞の寸法（例えば直径またはサイズ）に基づき、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞外小胞の質量に基づき細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞外小胞の表面上で封入、分泌、または発現される免疫チェックポイント部分のユニット数に基づき、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞外小胞の表面上で封入、分泌、または発現される免疫チェックポイント部分の寸法とユニット数の組合せに基づき、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞外小胞の表面上で発現される免疫チェックポイント部分のユニット数に基づき、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。

【0219】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する方法は、密度に基づき細胞外の小胞の均質集団を単離するために差動的超遠心分離を実行する工程を含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、重量またはサイズに基づき細胞外小胞の均質集団を単離するために濾過または限外濾過を実行する工程を含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、ＨＰＬＣを実行する工程を含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞外小胞の沈降反応を実行する工程を含む。ここでは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの水除外ポリマー（ｗａｔｅｒ－ｅｘｃｌｕｄｉｎｇ ｐｏｌｙｍｅｒ）が水分子と結びつき、可溶性成分が溶液からほとんど出ないようにすることができる。そのため、細胞外小胞を含む沈降物は、低速遠心分離または濾過のいずれかにより単離可能である。いくつかの実施形態では、前記方法は、免疫親和性により細胞外小胞を捉えることにより、親和性に基づく捕捉を実行する工程を含む。細胞外小胞の表面に表示されるタンパク質またはエピトープの例は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、Ａｌｉｘ、カベオリン－１、ＣＤ４１、ＣＤ４、フロチリン、Ｒａｂ５、ＨＳＣ７０、およびＬａｍｐ－３を含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、サイズ、密度、および免疫親和性に基づき細胞外小胞の均質集団の単離するために細胞外小胞に対してマイクロ流体工学に基づく単離方法を実行する工程を含み、音響操作、電気泳動操作、電磁気的操作などの革新的な選別機構が実施可能である。このようなデバイスの使用では、試料の体積、試薬消費、および単離時間の有意な減少が予想される。

【0220】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する方法は、細胞外小胞の表面に発現される免疫のチェックポイント部分の数に基づく工程を含む。いくつかの実施形態では、前記方法は、免疫チェックポイント部分を認識する抗体が使用されるイムノアッセイを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分を認識してこれに結合する抗体から検出したシグナルは、細胞外小胞の表面に発現される免疫チェックポイント部分の数に相関する。例示的な検出可能な部分は、酵素部分（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、βガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼなど）、蛍光染料、発光部分、放射部分、比色標識、着色ラテックス粒子またはナノ粒子、および金属ナノ層、金属ナノ粒子、金属ナノシェルがコンジュゲートした部分などの金属がコンジュゲートした部分を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、比色測定法（例えば、ＨＲＰまたはβガラクトシダーゼ活性の検出用）、光学顕微鏡を用いた目視検査、免疫蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）による共焦点顕微鏡、オートラジオグラフィ電子顕微鏡検査、免疫染色、または細胞下分画のために、直接または間接的にタグ付けされる。

【0221】

いくつかの実施形態では、細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する方法は、細胞外小胞の表面に発現される免疫のチェックポイント部分の直径とユニット数両方に基づき細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する工程を含む。例えば、前記方法は、細胞外小胞の表面に発現される直径約５０ｎｍおよび約２０００ユニットの細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞外小胞の表面に発現される直径約１０ｎｍ、２０ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、１６０ｎｍ、１７０ｎｍ、１８０ｎｍ、１９０ｎｍ、２００ｎｍ、またはそれ以上、および５００ユニット、１０００ユニット、１５００ユニット、２０００ユニット、２５００ユニット、３０００ユニット、３５００ユニット、４０００ユニット、４５００ユニット、５０００ユニット、５５００ユニット、６０００ユニット、７５００ユニット、８０００ユニット、８５００ユニット、９０００ユニット、９５００ユニット、１００００ユニット、１１０００ユニット、１２０００ユニット、１３０００ユニット、１４０００ユニット、１５０００ユニット、またはそれ以上の細胞外小胞の均質集団を同定かつ単離する。

【0222】

処置
本明細書中のいくつかの実施形態では、対象の疾患または障害を処置する方法が開示され、該方法は、本明細書に記載の組成物または医薬組成物を治療上有効量で対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、疾患または障害は自己免疫疾患であり、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、１型糖尿病、多発性硬化症、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、グレーブス病、若年性関節炎、慢性ライム病、視神経炎、乾癬性関節炎、強膜炎、強皮症、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、ブドウ膜炎、炎症性眼疾病、白斑、ＣＯＰＤ、臓器移植による合併症、または移植片対宿主病が挙げられる。

【0223】

いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞を本明細書に記載の組成物または医薬組成物と接触させる工程を含み、この接触に際して、免疫チェックポイント部分は標的細胞に送達される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、標的細胞の免疫応答を調節する。いくつかの実施形態では、接触させる工程は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。いくつかの実施形態では、組成物または医薬組成物は、対象に直接投与可能である。

【0224】

いくつかの実施形態では、組成物または医薬組成物は、単独で対象に投与可能である（例えば、独立型処置）。いくつかの実施形態では、組成物は、追加の薬剤と併用して投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、疾患または疾病に対する第１選択処置である。いくつかの実施形態では、組成物は、自己免疫疾患に対する第２、第３、または第４選択処置である。

【0225】

一般的に、本明細書に開示される方法は、組成物を経口投与する工程を含む。しかし、いくつかの例では、この方法は、組成物を腹腔内注射により投与する工程を含む。いくつかの例では、前記方法は、組成物を肛門坐薬の形態で投与する工程を含む。いくつかの例では、前記方法は、組成物を静脈内（ｉ．ｖ．）投与する工程を含む。さらに、本明細書に開示される組成物を、皮下注射、筋肉注射、皮内注射、経皮注射、経皮投与、鼻腔内投与、リンパ内注射、直腸投与、胃内投与、または他のあらゆる適切な非経口投与などの他の経路により投与できることも考えられる。いくつかの実施形態では、損傷または炎症部位付近への局所送達用の経路は、好ましくは全身経路にわたる。治療薬投与の経路、用量、時点、および持続期間は、調整可能である。いくつかの実施形態では、治療薬の投与は、疾患または疾病の急性、慢性、またはその両方の症状の発症前、あるいは発症後に行われる。

【0226】

本明細書中の自己免疫疾患を予防または処置するのに有効な組成物の投与量および用量は、自己免疫疾患または疾病に関連して観察された有益な反応、または自己免疫疾患の症状により定められる。いくつかの例では、有益な反応は、自己免疫疾患症状の低減を含む。さらなる有益な反応として、自己免疫疾患の予防、緩和、阻止、または治癒が挙げられる。組成物が治療上有効でないか、疾患または疾病、あるいは疾患または疾病の症状の十分な緩和をもたらしていない場合、投与量および／または投与経路は変更可能であり、または、追加の薬剤を組成物にとともに対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、患者は、組成物のレジメンを開始すると、第２の処置レジメンを中止される（例えば段階的に投与量が減らされる）。

【0227】

対象への投与に適切な投与量および用量は、特定の組成物、疾患の状態および重症度、処置を必要とする対象の同一性（例えば体重、性別、年齢）を含むがこれらに限定されない因子により定められ、例えば、投与される特定の薬剤、投与経路、処置される疾病、および処置される対象を含む症例を取り囲む特定環境に応じて定めることができる。

【0228】

いくつかの実施形態では、組成物の投与は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、２年、３年、４年、５年、または１０年に１回行われる。有効な用量範囲は、対象の処置に対する反応に基づき調整可能である。一部の投与経路は、他の経路よりも高濃度の有効量の治療薬を必要とする。

【0229】

患者の疾病が改善されない特定の実施形態では、医師の裁量により、組成物の投与は慢性的に行われる。すなわち、患者の疾患または疾病の症状を改善、あるいはその他の方法で制御または制限するために、患者の生涯にわたり投与される。患者の状況が改善する特定の実施形態では、投与される組成物の投与量は、一定期間にわたり一時的に減少させるか、一時的に中止される場合がある（休薬期間）。特定の実施形態では、休薬期間は、２日から１年の間であり、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、または２８日より長い期間が挙げられる。休薬期間中の投与量減少は、１０％～１００％であり、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、および１００％が挙げられる。ある実施形態では、投与される薬物の投与量は、一定期間にわたり一時的に減少させるか、一時的に中止される場合がある（「薬物転用（ｄｒｕｇ ｄｉｖｅｒｓｉｏｎ）」）。特定の実施形態では、薬物転用の期間は、２日から１年の間であり、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、または２８日より長い期間が挙げられる。薬物転用中の投与量減少は、１０％～１００％であり、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、および１００％が挙げられる。適切な期間の経過後、任意選択で正常な投薬スケジュールに戻される。

【0230】

いくつかの実施形態では、一旦患者の症状が改善すると、必要に応じて維持量が投与される。その後、特定の実施形態では、投与量または頻度、あるいはその両方は、症状に応じて、疾患、障害、または疾病の改善が保持されるレベルまで減少される。しかし、ある実施形態では、患者は症状の再発時に長期間にわたり間欠的処置を必要とする。

【0231】

こうした治療レジメンの毒性と治療効果は、ＬＤ５０とＥＤ５０の判定を含むがこれらに限定されない、細胞培養物または実験動物における標準の製薬手順により判定される。毒性と治療効果との用量比が治療指数であり、これはＬＤ５０とＥＤ５０との比として表される。ある実施形態では、細胞培養アッセイと動物試験から得たデータは、ヒトを含む哺乳動物に使用するための治療上有効な一日量の範囲および／または治療上有効な単位用量を製剤化するのに使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物の一日量は、毒性が最小限であるＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。ある実施形態では、一日量の範囲および／または単位用量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動する。

【0232】

組成物は、単独で、または追加の薬剤と組み合わせて使用できる。場合により、「追加の薬剤」は、本明細書で使用するとき、単独で投与される。組成物および追加の薬剤は、一緒に、または連続して投与可能である。併用療法薬は、同じ日に投与されるか、１日以上、数週間、数か月、または数年の間隔を空けて投与可能である。追加の薬剤の例は、サイトカイン類または小分子を標的とする抗体などの他の免疫モジュレータを含むことができる。

【0233】

本発明の好ましい実施形態を本明細書中で示しかつ記載してきたが、このような実施形態は、ほんの一例として提供されることは、当業者に明白である。本明細書内で提供される特定の例により、本発明が限定されることは意図されていない。本発明は、前述の明細書に関して記載されているが、本明細書中の実施形態の記載と例示は、限定的な意味で解釈されることを意図していない。多数の変形、変更、および置換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。さらに、本発明の態様はすべて、様々な条件と変数に依存する、本明細書で述べた特定の描写、構成、または相対的比率に限定されないことを理解されたい。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案は、本発明の実施に利用可能であることを理解されたい。それゆえ本発明は、任意のそのような代替案、修正、変形、または同等物にも及ぶと考えられる。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲およびその同等物の範囲内の方法と構造は、それにより包含されることが、意図されている。

【実施例】

【0234】

以下の例示的な実施例は、本明細書に記載される刺激、システム、および方法の実施形態の表すものであり、あらゆる形で限定されるようには意図したものではない。

【実施例1】

【0235】

間葉系幹細胞（ＭＳＣ）およびその対応する細胞外小胞（ＥＶ）は、ＰＤ－Ｌ１を含む。
ＰＤ－Ｌ１がＭＳＣおよびその対応する細胞外小胞に存在することは、ウエスタンブロットにより認められた。図１に示すように、サイズ４５ｋＤａの透明なバンド（ｃｌｅａｒ ｂａｎｄ）を、ＭＳＣおよび対応するエキソソーム上で検出した。飢餓培地を陰性対照として使用し、アイランドエキソソーム（ｉｓｌｅｔ ｅｘｏｓｏｍｅｓ）を陽性対照として使用した。これらの結果を標準化するために、同じ分析を、３つの異なる臍帯ＭＳＣドナーから得たＭＳＣ ＥＶ上で行った。

【0236】

ＭＳＣ溶解物およびＭＳＣ ＥＶ試料を音波粉砕により調製した。ＭＳＣ溶解物およびＭＳＣ ＥＶ試料の量は、タンパク質２５μｇに相当する。勾配プレキャストポリアクリルアミドゲル（Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ；Ｂｉｏ－Ｒａｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、これら試料を解析した。次いで、試料をニトロセルロース膜上へと移し、これをトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中で２時間、５％ブロッティンググレードＢｌｏｃｋｅｒ Ｎｏｎ－Ｆａｔ Ｄｒｙ Ｍｉｌｋ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて遮断した。続いて、精製された抗ヒトＣＤ２７４（Ｂ７－Ｈ１、ＰＤ－Ｌ１）抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃａｔ＃３２９７０１）に対する一次抗体を用いて、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（ＴＢＳＴ）中の０．２５％ブロッティンググレードＢｌｏｃｋｅｒ Ｎｏｎ－Ｆａｔ Ｄｒｙ Ｍｉｌｋにおいて４℃で一晩、膜をインキュベートした。次いで、膜を１０分かけてＴＢＳＴで３回洗浄した。二次抗体ＥＣＬ抗マウスＩｇＧホースラディッシュペルオキシダーゼに結合したＦ（ａｂ’）２フラグメントを、ＴＢＳＴ中の０．２５％ブロッティンググレードＢｌｏｃｋｅｒ Ｎｏｎ－Ｆａｔ Ｄｒｙ Ｍｉｌｋに希釈し、膜とともに１．５時間インキュベートした。最後に、ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびＶｅｒｓａＤｏｃ ４０００ ＭＰ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて、膜を解析した。

【実施例2】

【0237】

ＭＳＣ ＥＶはＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞を抑制する。
有意なＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞の抑制を、６日間ＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）で刺激したヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中で観察した。この抑制は、ＰＢＭＣがＰＤ－Ｌ１遮断抗体にも接触した実験群において減少したことも観察した。本実験のスキームを図２に表す。

【0238】

図３の代表的なフローサイトメトリープロットより、ＰＤ－Ｌ１の遮断の存在下で、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋集団に対するＭＳＣ ＥＶの抑制活性は大幅に減少することを認めた。さらに、一方でアイソタイプ調節抗体を含む対照群は、ＭＳＣ ＥＶ単独と同様の抑制活性を呈した。これらの結果より、ＭＳＣ ＥＶの抑制活性は、主にＰＤ－Ｌ１の存在によるものと認めた。

【実施例3】

【0239】

ＭＳＣを遺伝的に修飾し、野生型ＭＳＣより多くのエキソソームＰＤ－Ｌ１を産生する。
ＭＳＣを健康なドナーの臍帯から採取する。これらＭＳＣを採取した後、さらなる実験のために培養する。膜貫通ＣＤ６３を、公知技法（例えばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）による遺伝的修飾の標的とする。ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインをＣＤ６３に融合させる。ＣＤ６３のアミノ酸配列からなる様々な特異的な部分集合を、ＰＤ－Ｌ１融合の特に都合の良い領域、ＲＤＫＶＭＳＥ直後、ＮＮＮＦＲＱＱ直後、およびＹＰＫＮＮＨＴ直後として同定した。このようなＣＤ６３の部分を、ＣＤ６３のＬａｒｇｅ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｏｏｐ（ＬＥＬ）に認めた。１、２、３、またはそれより多くのＧ４Ｓリンカーを使用し、ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインをＣＤ６３に融合させる。

【0240】

ＭＳＣの遺伝的修飾の後、遺伝的に修飾したＭＳＣＳを培養する。遺伝的に修飾したＭＳＣ溶解物および遺伝的に修飾したＭＳＣ ＥＶの試料を、実施例１のプロトコルに従い調製する。これら試料をウエスタンブロットにより解析し、ＰＤ－Ｌ１の存在に関する試験を行う。サイズ４５ｋＤａの透明なバンドを、遺伝的に修飾したＭＳＣおよびその対応するエキソソーム中で検出する。これらバンドの色は、実施例１のウエスタンブロット解析よりも暗いものであったため、遺伝的に修飾したＭＳＣおよびその対応するエキソソームは、野生型ＭＳＣが産生する野生型ＭＳＣおよびＥＶより多くのＰＤ－Ｌ１を産生することを認めた。飢餓培地を陰性対照として、アイランドエキソソームを陽性対照として使用した。

【実施例4】

【0241】

ＭＳＣを遺伝的に修飾し、エキソソーム免疫チェックポイント阻害剤を産生する。
実施例３の方法を利用し、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、またはこれらの組合せから選択した任意の免疫チェックポイント阻害剤を転写する。

【0242】

遺伝的に修飾したＭＳＣおよびその対応するＥＶに対してウエスタンブロット解析を行い、選択された免疫チェックポイント阻害剤の存在に関する試験を行う。

【実施例5】

【0243】

遺伝的に修飾した有力なＭＳＣおよびその対応するＥＶの生成／精製
実施例３の遺伝的に修飾したＭＳＣおよびその対応するＥＶを分析し、実施例２の結果と比較してＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞抑制が増大した十分なＭＳＣおよびその対応するＥＶを生成する。

【0244】

実施例３の遺伝的に修飾したＭＳＣおよびその対応するＥＶを、検出可能な標識および可溶性ＰＤ－１でコンジュゲートした抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む溶液中で調製する。可溶性ＰＤ－１は、エキソソームＰＤ－Ｌ１に結合する。可溶性ＰＤ－１とエキソソームＰＤ－Ｌ１がＭＳＣおよびその対応するＥＶ上で相互に作用するため、検出可能な標識でコンジュゲートした抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＳＣおよびＥＶと比較して高量のエキソソームＰＤ－Ｌ１を発現する試料中で、ＭＳＣおよびＥＶに選択的に結合し、ここで、試料に存在する可溶性ＰＤ－１が、対応するエキソソームＰＤ－Ｌ１を占有する。

【0245】

この分析を使用して、有力なＭＳＣおよびＥＶを試料から生成／精製する。

【実施例6】

【0246】

遺伝的に修飾した有力なＭＳＣおよびその対応するＥＶは、ＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞抑制の向上を示す。
実施例５の有力なＭＳＣおよびＥＶを、実施例２の実験において解析する。有力なＭＳＣおよびＥＶを含む実験群は、図３の結果と比較して大幅に増大したＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞抑制を示す。

【実施例7】

【0247】

関節リウマチの処置用の遺伝的に修飾した有力なＭＳＣおよびその対応するＥＶ
実施例５および６の有力なＥＶと薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を調製し、関節リウマチ患者を処置する。この医薬組成物は、約１０＾^６～約１０＾^８のＥＶ、または約１μｇ～約７００ｍｇのＥＶを含む。

【0248】

関節リウマチ患者の炎症部位に、医薬組成物を投与する。ＥＶのＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞抑制の増大は、関節リウマチの処置に十分なものである。

【実施例8】

【0249】

腎臓移植を受ける患者を対象とする移植片対宿主病の処置用の遺伝的に修飾した有力なＭＳＣおよびその対応するＥＶ。
実施例５および６の有力なＥＶと薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を調製し、腎臓移植を受ける患者における移植片対宿主病患者を処置する。この医薬組成物は、約１０＾^６～約１０＾^８のＥＶ、または約１μｇ～約７００ｍｇのＥＶを含む。

【0250】

腎臓移植を受ける患者における移植片対宿主病患者の炎症部位に、医薬組成物を投与する。ＥＶのＣＤ２５＋ＣＤ８＋免疫細胞抑制の増大は、腎臓移植を受ける患者における移植片対宿主病の処置に十分なものである。

【0251】

前述の開示は、明確性と理解のために幾分詳細に記載されているが、形態と詳細に対する様々な変更は、本開示の真の範囲から逸脱することなく行うことが可能であることは、本開示を読み取ることで当業者に明白となる。例えば、上述のあらゆる技法および装置を、様々な組合せで使用することができる。本出願で引用される刊行物、特許、特許出願、および／またはその他の文書はすべて、あたかも個々の刊行物、特許、特許出願、および／またはその他の文書が、あらゆる目的のために参照により組み込まれるものと個々にかつ別個に示されている場合と同じ程度にまで、あらゆる目的のために全体を参照することで組み込まれている。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

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【国際調査報告】