特表 2022-537946 化合物及びそれらの使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-08-31

(54)【発明の名称】化合物及びそれらの使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/08 20060101AFI20220824BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20220824BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220824BHJP

   A61K 51/08 20060101ALI20220824BHJP

   A61K 33/244 20190101ALI20220824BHJP

   A61K 33/24 20190101ALI20220824BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20220824BHJP

   G01T 1/161 20060101ALI20220824BHJP

【ＦＩ】

C07K7/08

C07K14/00 ZNA

A61P35/00

A61K51/08 200

A61K51/08 100

A61K33/244

A61K33/24

A61K47/64

G01T1/161 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021574189

(86)(22)【出願日】2020-06-15

(85)【翻訳文提出日】2022-01-25

(86)【国際出願番号】 GB2020051442

(87)【国際公開番号】W WO2020249980

(87)【国際公開日】2020-12-17

(31)【優先権主張番号】1908573.7

(32)【優先日】2019-06-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2004360.0

(32)【優先日】2020-03-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521544698

【氏名又は名称】エディンバラ モレキュラー イメージング リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＥＤＩＮＢＵＲＧＨ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＩＭＡＧＩＮＧ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】100147485

【弁理士】

【氏名又は名称】杉村 憲司

(74)【代理人】

【識別番号】230118913

【弁護士】

【氏名又は名称】杉村 光嗣

(74)【代理人】

【識別番号】100181847

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 かおり

(72)【発明者】

【氏名】クリストフ フレデリック ポータル

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4C188

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084AA12

4C084MA05

4C084NA05

4C084NA06

4C084NA07

4C084NA13

4C084ZB261

4C084ZB262

4C085HH03

4C085KA29

4C085KB07

4C085KB12

4C085KB82

4C085LL18

4C086AA01

4C086HA05

4C086HA13

4C086HA28

4C086NA05

4C086NA06

4C086NA07

4C086NA13

4C086ZB26

4C188EE02

4C188EE03

4C188EE25

4C188EE27

4C188FF04

4C188FF07

4C188KK33

4C188MM08

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA17

4H045BA18

4H045BA50

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA10

4H045GA21

(57)【要約】

化合物、特にヒト又は動物に投与するためのｃＭｅｔ結合性環状ペプチドを含む化合物及びそれらの使用方法が記載されている。特に、イメージング及び／又は放射線治療に使用する薬剤の調製に適した化合物が記載されている。また、医薬組成物及び該医薬組成物を調製するためのキットも記載されている。該化合物又は医薬組成物を、がんなどの疾患の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングなどにおいて使用するイメージング方法についても記載されている。さらに、該化合物又は医薬組成物を、イメージング剤及び放射線治療剤の少なくとも１つ又は両方として使用することも記載されている。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

イメージング及び／又は放射線治療に使用される薬剤の調製に適した化合物であって、式Ｉ

【化1】

を有する、化合物
（式中、
Ｚ^１はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｈ又はＱであり、
Ｚ^２はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＯＢ^ｃ又はＱであり
（Ｂ^ｃは生体適合性カチオンである）、
ｃＭＢＰは１７～３０アミノ酸のｃＭｅｔ結合性環状ペプチドであり、アミノ酸配列（配列－１）
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であり、残基ａとｂ及びｃとｄが環状になって２つの別個のジスルフィド結合を形成している）
を含み、
Ｑの各出現は独立して、
前記ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害し、又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基（Ｍ^ＩＧ）、
ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞等における滞留性を高める生体適合性基である腫瘍滞留基（Ｔ^ＲＧ）並びに
生体内分布を促進させ、及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでの血中滞留を長くする生体適合性基である生体内分布促進基（Ｄ^ＥＧ）
の少なくとも１つであり、
Ｌは式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基であり（各Ａは独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、－ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである）、
各Ｒは独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキル又はＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｍは値１～２０の整数であり、
ｎは値０又は１の整数あり、
ＩＭは放射性部位を錯化するのに適したキレート剤である）。

【請求項2】

前記放射性部位が、アルファ線（α）放射核種、ベータ線（β）放射核種及びガンマ線（γ）放射核種の少なくとも１つである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

前記ベータ線放射核種が、電子（β^－）放射核種及び陽電子（β^＋）放射核種の少なくとも１つである、請求項２に記載の化合物。

【請求項4】

陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、シンチグラフィー及び放射線治療の１つ又は複数に使用されるものであり、任意選択で放射線治療に使用されるものである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

前記放射性部位が、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^６７Ｃｕ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^２２５Ａｃ、^１３１Ｉ、^１６６Ｈｏ、^１４９Ｐｍ、^１９９Ａｕ、^１０５Ｒｈ、^２２７Ｔｈ、^１５３Ｓｍ、^８９Ｓｒ、^２２３Ｒａ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^９９ｍＴｃ、^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^８９Ｚｒ、^１１Ｃ、^１５Ｏ、^１３Ｎ、^８２Ｒｂ及び^１８Ｆ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

前記放射性部位が、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^６７Ｃｕ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^２２５Ａｃ、^１３１Ｉ、^１６６Ｈｏ、^１４９Ｐｍ、^１９９Ａｕ、^１０５Ｒｈ、^２２７Ｔｈ、^１５３Ｓｍ、^８９Ｓｒ、^２２３Ｒａ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ及び^１２５Ｉ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

前記放射性部位が、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^８９Ｚｒ、^１１Ｃ、^１５Ｏ、^１３Ｎ、^８２Ｒｂ及び^１８Ｆ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

前記放射性部位が、^９９ｍＴｃ、^６７Ｇａ及び^１１１Ｉｎ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

前記放射性部位が、^６８Ｇａ、^１８Ｆ、^８９Ｚｒ、^１７７Ｌｕ、^２２５Ａｃ、^２１３Ｂｉ、^２２７Ｔｈ及び^９０Ｙ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

前記放射性部位が、^１７７Ｌｕ又はその好適な塩である、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

前記キレート剤が、サイクレン（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン）、サイクラム（１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン）、ＴＡＣＮ（１，４，７－トリアザシクロノナン）、ＴＨＰ（トリス（ヒドロキシピリジノン））、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）、ＮＯＤＡＧＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン、１－グルタル酸－４，７－酢酸）、ＴＲＡＰ（１，４，７－トリアザシクロノナンホスフィン酸）、ＮＯＰＯ（１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４－ビス［メチレン（ヒドロキシメチル）ホスフィン酸］－７－［メチレン（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸）、ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）、ＤＡＴＡ（（６－ペンタン酸）－６－（アミノ）メチル－１，４－ジアゼピントリアセテート））、ＡＡＺＴＡ（１，４－ビス（カルボキシメチル）－６－［ビス（カルボキシメチル）］アミノ－６－メチルペルヒドロ－１，４－ジアゼピン）、ＨＢＥＤ－ＣＣ（Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシ－５－（エチレン－ベータ－カルボキシ）ベンジル）エチレンジアミンＮ，Ｎ’－二酢酸）及びそれらの誘導体からなる群の１つ又は複数より選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

前記キレート剤が、ＴＨＰ（トリス（ヒドロキシピリジノン））、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）及びＮＯＤＡＧＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン、１－グルタル酸－４，７－酢酸）の少なくとも１つである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

前記キレート剤が、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）及びＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）の少なくとも１つである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項14】

配列－１に加えて、ｃＭＢＰがさらに、Ｃ－又はＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＡｓｐ又はＧｌｕ残基を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭがアミン基で官能基化され、これが前記Ａｓｐ又はＧｌｕ残基のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項15】

配列－１に加えて、ｃＭＢＰが、Ｃ－又はＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＬｙｓ残基を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭがカルボキシル基で官能基化され、これが前記Ｌｙｓ残基のイプシロンアミン側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項16】

ｃＭＢＰが、配列－２又は配列－３
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６（配列－２）、
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（配列－３）
のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項17】

Ｘａａ^３がＡｒｇである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項18】

配列－１、配列－２又は配列－３に加えて、ｃＭＢＰがさらに、Ｎ又はＣ末端のいずれかに、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（配列－４）、－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列－５）及び－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ（配列－６）から選択されるリンカーペプチドを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項19】

ｃＭＢＰが、アミノ酸配列（配列－７）
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項20】

Ｚ^１及びＺ^２の両方が独立してＱであり、任意選択でＱがＭ^ＩＧである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項21】

Ｚ^１がアセチルであり、Ｚ^２が一級アミドである、化合物。

【請求項22】

請求項１～２１のいずれか一項に記載の化合物であって、ｎが１である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項23】

各Ａが独立して、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックであってもよく、任意選択で各Ａがアミノ酸であってもよい、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項24】

ｍが値１～５の整数であってもよく、任意選択でｍが２であってもよい、請求項１～２３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項25】

請求項１～２４のいずれか一項に記載の化合物であって、放射線治療に使用される薬剤の調製に適する場合があり、式Ｉ

【化2】

を有する、化合物
（式中、
Ｚ^１はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｑであり、
Ｚ^２はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、Ｑであり
（Ｑは代謝阻害基（Ｍ^ＩＧ）であり、前記ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である）、
ｃＭＢＰは１７～３０アミノ酸のｃＭｅｔ結合性環状ペプチドであり、アミノ酸配列（配列－１）
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であり、残基ａとｂ及びｃとｄが環状になって２つの別個のジスルフィド結合を形成している）
を含み、
Ｌは式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基であり（各Ａは独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、－ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである）、
各Ｒは独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキル又はＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｍは値１～２０の整数であり、
ｎは値０又は１の整数あり、
ＩＭは放射性部位を錯化するのに適したキレート剤である
（該キレート剤は、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）及びＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）の少なくとも１つである））。

【請求項26】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物と生体適合性担体とを含む、哺乳動物への投与に適した形態の医薬組成物であって、任意選択でさらに放射性部位を含むものである、医薬組成物。

【請求項27】

一人の患者に対する投与量を有し、好適なシリンジ又は容器で提供される、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項28】

請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物を調製するためのキットであって、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物を無菌の固体形態で含んでおり、請求項２６又は請求項２７に記載の生体適合性担体の無菌供給物と再構成すると、溶解して所望の医薬組成物を与えるものであり、任意選択で、放射性部位をさらに含むものである、キット。

【請求項29】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用することを含む、哺乳動物の体のイメージング方法。

【請求項30】

前記イメージングがｉｎ ｖｉｖｏである、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記イメージングが、ＰＥＴイメージング、シンチグラフィ及びＳＰＥＣＴイメージングの少なくとも１つであり、任意選択で、前記イメージングがＳＰＥＣＴイメージングである、請求項２９又は請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記イメージングが、ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位又は局在化部位の画像を取得するためのものである、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物が哺乳動物の体に前もって投与されている、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

ａ） 請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを投与する工程と、
ｂ） 前記放射性部位の崩壊により発生する放射性部位からの発光を検出する工程と、
ｃ） 工程（ｂ）の発光から、目的の組織の画像を形成する工程と、
を含む、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングを支援するために使用される、請求項２９～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングを支援するために使用される、請求項２９～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

請求項２９～３５のいずれか一項に記載のイメージング方法を含む、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング又は治療法のモニタリングの方法。

【請求項38】

哺乳動物の体のイメージングにおけるイメージング剤及び哺乳動物の体の放射線治療における放射線治療剤の少なくとも１つとして使用するためのものであり、任意選択で、哺乳動物の体の放射線治療における放射線治療剤として使用するためのものである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項39】

哺乳動物の体のイメージングにおけるイメージング剤及び哺乳動物の体の放射線治療における放射線治療剤の両方として使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項40】

医薬品として使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項41】

検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングに使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項42】

がん又は前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングに使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項43】

ｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングに使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項44】

ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の画像の取得及び／又はｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位に関連する症状の治療に使用するための、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項２６若しくは請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項45】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングの方法。

【請求項46】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、哺乳動物の体に対する放射線治療方法。

【請求項47】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用して、哺乳動物の体にイメージングと放射線治療の両方を行う方法。

【請求項48】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングの方法。

【請求項49】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、ｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングの方法。

【請求項50】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の画像の取得及び／又はｃＭｅｔの過剰発現若しくは局在化に関連する症状の治療の方法。

【請求項51】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【請求項52】

検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療のモニタリング、治療法、放射線治療、疾患進行のモニタリング及び治療法のモニタリングの少なくとも１つにおける、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【請求項53】

イメージング剤及び放射線治療剤の少なくとも１つとしての、任意選択で放射線治療剤としての、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【請求項54】

がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び治療法のモニタリングの少なくとも１つにおける、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【請求項55】

ｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び治療法のモニタリングの少なくとも１つにおける、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【請求項56】

Ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の画像の取得及びｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位に関連する症状の治療の少なくとも１つにおける、請求項１～２５のいずれか一項に記載の化合物及び請求項２６又は請求項２７に記載の医薬組成物の少なくとも１つの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ヒト又は動物に投与するための化合物及びそれらの使用方法に関するものである。特に、本発明は、放射性核種を使用するイメージング（すなわち、内部放射線学若しくは核医学イメージング）及び／又は放射線治療に使用する薬剤の調製に適した化合物に関するものである。そのようなイメージング技術の例は、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）シンチグラフィー及び陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）である。放射線治療に使用される放射性核種の例としては、α粒子放射核種、β粒子放射核種及びオージェ電子放射核種が挙げられる。さらに、本発明は、核医学イメージング及び／又は放射線治療に使用するためのキット並びにイメージング／放射線治療剤に関するものである。

【背景技術】

【0002】

放射性標識化合物は、分子イメージング及び放射線治療の両方に有用であり、これらのいくつかは先行技術に記載されている。

【0003】

ＷＯ２０１２／０２２６７６には、ｉｎ ｖｉｖｏでのＰＥＴイメージングに適した放射性標識ｃＭｅｔ結合ペプチドが記載されている。ｃＭｅｔ結合ペプチドは放射性同位元素^１８Ｆで標識されている。また、特にがんの管理に使用するための医薬組成物、該薬剤及び組成物の調製方法並びに該組成物を使用したｉｎ ｖｉｖｏイメージング方法も記載されている。

【0004】

ＷＯ２０１２／１１９９３７には、ｉｎ ｖｉｖｏでのＳＰＥＣＴ又はＰＥＴイメージングに適した放射性標識ｃＭｅｔ結合ペプチドを含むテクネチウムイメージング剤が記載されている。ｃＭｅｔ結合ペプチドは、キレート剤コンジュゲートを介して標識されている。また、特にがんの診断に使用するための医薬組成物、該薬剤及び組成物の調製方法並びに該組成物を使用したｉｎ ｖｉｖｏイメージング方法も記載されている。

【0005】

ＷＯ２００５／０３０２６６には、特に大腸がん（ＣＲＣ）診断用の光イメージングのための造影剤の好ましい生物学的標的としてｃＭｅｔが開示されている。ＷＯ２００５／０３０２６６には、異常発現した標的に対して親和性のあるベクターと、リンカー部位と、光イメージングで検出可能な１つまたは複数のレポーター部位とを含む光イメージング剤が開示されている。

【0006】

ＷＯ２００４／０７８７７８には、ｃＭｅｔ又はｃＭｅｔとＨＧＦとを含む複合体に結合するポリペプチド又は多量体ペプチド構築物が開示されている。ＷＯ２００４／０７８７７８では、該ペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの応用のために検出可能な標識で、又は治療的な応用のために薬物で標識され得ることが開示されている。

【0007】

Ａｒｕｌａｐｐｕら（Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ２０１６， ５７， ７６５－７７０）は、頭頸部がんのがんイメージング用に開発した^１８Ｆ ＰＥＴ剤を開示している。該薬剤は、２つの内部ジスルフィド結合を有し、ｃＭｅｔ受容体に特異的に結合する２６アミノ酸ペプチドをベースにしている。該ペプチドのリジン残基は^１８Ｆで標識されている。

【0008】

しかしながら、放射性核種が共有結合で導入されたそのような薬剤の合成は複雑で、収率が低く、十分な純度のイメージング剤を得るためには精製工程が必要となる。さらに、そのような合成では、ｐ－^１８Ｆベンズアルデヒドなどの補欠分子族を出発物質として使用する必要があり、これは^１８Ｆ－フッ化物から調製する必要がある。そのため、大多数の^１８Ｆ系ＰＥＴ薬剤と同様に、該調製には熟練した放射線化学者と、専用のロボット及びカセット並びに遮蔽された「ホット」セルなどの専用機器とが必要である。このように、この特定のタイプの^１８Ｆ ＰＥＴイメージング剤の合成を行うには、専門の施設が必要となる。

【0009】

共有結合した^１８Ｆを持つ薬剤の調製に関連する問題のため、キレート剤が結合できる代替放射性核種の使用が浮上している。例えば、ＳＰＥＣＴイメージング用の^６７Ｇａ及びＰＥＴイメージング用の^６８Ｇａが、Ａｌ^１８Ｆ塩の使用と同様に普及している。

【0010】

（放射性同位元素をキレートすることができる）キレート剤にコンジュゲートした標的化部位を含むイメージング剤の例が存在する一方で、細胞表面のｃＭｅｔ過剰発現を高親和性結合、好ましい動態プロファイル、特異的取り込み及び／若しくは迅速な全身クリアランスで標的化することができるイメージング剤並びに／又は放射線治療剤があれば、投与後すぐ（おそらく１時間以内）に画像診断が可能になり、及び／又は標的を絞った放射線治療が可能になる（これによりオフターゲット照射によって引き起こされる毒性が軽減される）ため、有益であると考えられる。

【0011】

したがって、本発明の目的は、先行技術の欠点の少なくとも一部を回避し、又は軽減することである。

【0012】

本発明のさらなる目的は、ｃＭｅｔの過剰発現部位の標的化及び／又は関連症状において使用するための放射性イメージング及び／又は放射線治療剤を提供することである。

【発明の概要】

【0013】

本発明の第一の態様によれば、イメージング及び／又は放射線治療に使用される薬剤の調製に適した化合物であって、式Ｉ

【化1】

を有する化合物が提供される
（式中、
Ｚ^１はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｈ又はＱであり、
Ｚ^２はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＯＢ^ｃ又はＱであり
（Ｂ^ｃは生体適合性カチオンである）、
ｃＭＢＰは１７～３０アミノ酸のｃＭｅｔ結合性環状ペプチドであり、アミノ酸配列（配列－１）
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であり、残基ａとｂ及びｃとｄが環状になって２つの別個のジスルフィド結合を形成している）
を含み、
Ｑの各出現は独立して、
該ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害し、又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基（Ｍ^ＩＧ）、
ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞等における滞留性を高める生体適合性基である腫瘍滞留基（Ｔ^ＲＧ）並びに
生体内分布を促進させ、及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでの血中滞留を長くする生体適合性基である生体内分布促進基（Ｄ^ＥＧ）
の少なくとも１つであり、
Ｌは式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基であり（各Ａは独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、－ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである）、
各Ｒは独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキル又はＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｍは値１～２０の整数であり、
ｎは値０又は１の整数あり、
ＩＭは放射性部位を錯化するのに適したキレート剤である）。

【0014】

該化合物は、該放射性部位を含んでいてもよい。

【0015】

Ｚ^１基は、最後のアミノ酸残基のアミン基を置換する。したがって、Ｚ^１がＨの場合、ｃＭＢＰのアミノ末端は、最後のアミノ酸残基の遊離ＮＨ_２基で終了する。Ｚ^２基は、最後のアミノ酸残基のカルボニル基を置換する。したがって、Ｚ^２がＯＨの場合、ｃＭＢＰのカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＣＯ_２Ｈ基で終了し、Ｚ^２がＯＢ^ｃの場合、その末端カルボキシ基はＣＯ_２Ｂ^ｃ基としてイオン化される。

【0016】

「代謝阻害基」（Ｍ^ＩＧ）という用語は、アミノ末端（Ｚ^１）又はカルボキシ末端（Ｚ^２）のいずれかでｃＭＢＰペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。そのような基は当業者によく知られており、ペプチドのアミン末端については、Ｎ－アシル化基－ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^Ｇ（該アシル基－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^Ｇは、Ｃ_１－６アルキル基、Ｃ_３－１０アリール基から選ばれるＲ^Ｇを有し、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックを含む）から好適に選択される。好適なＰＥＧ基は、リンカー基（Ｌ）について以下に記載されている。そのようなＰＥＧ基は、式ＩＡ又はＩＢの生物学的修飾剤であり得る。そのようなアミノ末端Ｍ^ＩＧ基は、アセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり得、典型的にはアセチルである。

【0017】

該ペプチドのカルボキシル末端に適した代謝阻害基としては、カルボキサミド、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックが挙げられる。該ｃＭＢＰペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭ基は、アミノ酸残基の末端アミンがＣ_１－４アルキル基（任意選択でメチル基）でＮ－アルキル化されたものである。そのようなＭ^ＩＧ基は、カルボキサミド又はＰＥＧであり得、典型的にはカルボキサミドである。

【0018】

式Ｉは、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位が、Ｚ^１、Ｚ^２又はｃＭＢＰの任意の好適な位置に結合され得ることを示す。Ｚ^１又はＺ^２については、Ｚ^１／Ｚの^２いずれかがＭ^ＩＧである場合、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位はいずれもＭ^ＩＧ基に結合し得る。Ｚ^１がＨであり、又はＺ^２がＯＨである場合、Ｚ^１又はＺ^２の位置に－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位が結合すると、それぞれ式［ＩＭ］－（Ｌ）_ｎ－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２又はＺ^１－［ｃＭＢＰ］－（Ｌ）_ｎ－［ＩＭ］の化合物が得られる。いずれかのペプチド末端でｃＭＢＰの代謝を阻害することは、このように－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位を結合させることによっても達成され得るが、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］は、本明細書におけるＭ^ＩＧの定義の範囲外である。

【0019】

式Ｉの－（Ｌ）_ｎ－部位は、ＩＭの任意の好適な位置に結合され得る。－（Ｌ_ｎ）－部位は、ＩＭの既存の置換基の代わりになるか、又はＩＭの既存の置換基に共有結合する。－（Ｌ_ｎ）－部位は、任意選択で、ＩＭのカルボキシアルキル置換基を介して結合される。

【0020】

「腫瘍滞留基」（Ｔ^ＲＧ）という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞等における該化合物の滞留性を高め、又は向上させる生体適合性基を意味する。そのような基は、該化合物の全体的なサイズを増加させる部位であり得、該ペプチドのアミン末端又はカルボキシル末端については、ポリアミン、ポリリジン、ＰＥＧ（単分散）、アルブミン、脂肪直鎖炭素鎖、糖（グリコシル化）から好適に選択される。

【0021】

「生体内分布促進基」（Ｄ^ＥＧ）という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏでの化合物の生体内分布を促進し、又は血中滞留を長くする（その薬物動態を促進し、又は向上させる）生体適合性基を意味する。そのような基は、ペプチドのアミン末端又はペプチドのカルボキシル末端について、ポリアミン、ポリリジン、ＰＥＧ（単分散）、アルブミン、脂肪直鎖炭素鎖、糖（グリコシル化）から好適に選択され、最も好適にはＰＥＧ（単分散）である。

【0022】

「ｃＭｅｔ結合性環状ペプチド」（ｃＭＢＰ）という用語は、ｃＭｅｔ（ｃ－Ｍｅｔ又は肝細胞増殖因子受容体）としても知られる肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）高親和性受容体に結合するペプチドを意味する。好適なｃＭＢＰペプチドは、ｃＭｅｔに対するｃＭｅｔ／ＨＧＦ複合体の見かけのＫｄが約１０μＭ未満である。ｃＭＢＰペプチドはプロリン残基を含んでおり、そのような残基は骨格のアミド結合のシス／トランス異性化を示し得ることが知られている。本明細書に記載のｃＭＢＰペプチドには、そのような異性体が含まれる。

【0023】

「生体適合性カチオン」（Ｂ^ｃ）という用語は、イオン化した負電荷の基と塩を形成する正電荷の対イオンであって、非毒性でもあり、したがって哺乳動物の体、特に人体への投与に適している正電荷の対イオンを意味する。好適な生体適合性カチオンの例としては、アルカリ金属のナトリウム又はカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム並びにアンモニウムイオンがある。典型的な生体適合性カチオンはナトリウム及びカリウムであり、典型的にはナトリウムである。

【0024】

「アミノ酸」という用語は、Ｌ－若しくはＤ－アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）又はアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然に存在するものであっても、純粋に合成されたものであってもよく、光学的に純粋なもの、すなわち単一のエナンチオマーであり、したがってキラルなものであってもよく、又はエナンチオマーの混合物であってもよい。本明細書では、アミノ酸の従来の３文字又は１文字の略号が使用されている。使用されるアミノ酸は光学的に純粋であり得る。「アミノ酸模倣体」という用語は、天然化合物の立体構造及び電子構造を模倣するように設計されたアイソステアである、天然に存在するアミノ酸の合成類似体を意味する。そのようなアイソステアは当業者によく知られており、デプシペプチド、レトロインベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５－二置換テトラゾールが含まれるが、これらに限定されない［Ｍ． Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２４， １３７， （１９８５）を参照］。

【0025】

「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（すなわち、１つのアミノ酸のアミンと他のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）によって連結された、上記で定義した２つ以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。「ペプチド模倣体」又は「模倣体」という用語は、ペプチド又はタンパク質の生物学的活性を模倣しているが、もはやペプチド的な化学的性質を持たない生物学的活性化合物を指し、すなわち、それらはもはやペプチド結合（すなわち、アミノ酸間のアミド結合）を含んでいない。ここで、ペプチド模倣体という用語は広い意味で使用され、擬ペプチド、半ペプチド及びペプトイドなど、もはや完全にペプチド的な性質を持たない分子を含む。

【0026】

「キレート剤」（ＩＭ）という用語は、その特定の原子が単一の金属イオン又は金属イオン塩に対して複数の結合を形成できる物質を意味する。キレート剤は、窒素又は酸素などの電子供与元素を多く含む大環状化合物で構成されることが多い多座配位子である。

【0027】

式Ｉのリンカー基－（Ａ）_ｍ－の役割の一つは、ＩＭをｃＭＢＰペプチドの活性部位から遠ざけることであると考えられる。これは、該化合物が比較的嵩高い場合に標的タンパク質との相互作用が損なわれないようにするため、特に重要である。これは、嵩高い基が活性部位から離れて自由に配置できるようにする柔軟性（例えば、単純なアルキル鎖）、及び／又はＩＭを活性部位から遠ざけるシクロアルキル若しくはアリールスペーサーなどの剛性を組み合わせることで達成できる。リンカー基の性質を使用して、該化合物の生体内分布を改変することもできる。したがって、例えば、リンカーへのエーテル基の導入は、血漿タンパク質結合を改変するのに役立つ。－（Ａ）_ｍ－がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロック又は１～１０アミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、リンカー基は、ｉｎ ｖｉｖｏでの化合物の薬物動態及び血中クリアランス速度を改変するように機能し得る。そのような「生物学的修飾剤」リンカー基は、筋肉若しくは肝臓などのバックグラウンド組織からの及び／又は血液からの化合物のクリアランス速度を変化させ、バックグラウンド干渉が少なくなるため、より良い診断画像を提供することができる。また、生物学的修飾剤のリンカー基を使用して、特定の排泄経路、例えば、肝臓を介するものではなく腎臓を介するものを選択することもできる。

【0028】

「糖」という用語は、単糖、二糖又は三糖を意味する。好適な糖としては、グルコース、ガラクトース、マルトース、マンノース及びラクトースが挙げられる。任意選択で、糖はアミノ酸と容易にカップリングできるように官能基化されていてもよい。そのため、例えば、アミノ酸のグルコサミン誘導体は、ペプチド結合を介して他のアミノ酸にコンジュゲートさせることができる。アスパラギンのグルコサミン誘導体（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社から市販されている）は、この一例である。

【化2】

【0029】

イメージング剤の分子量は、好適には最大８，０００ダルトンである。任意選択で、分子量は２，８００～６，０００ダルトンの範囲であり、一般的には３，０００～４，５００ダルトンであり、３，２００～４，０００ダルトンが最も一般的である。

【0030】

本発明のイメージング剤は、両方のペプチド末端がＭ^ＩＧ基で保護されていてもよく、すなわち、任意選択でＺ^１とＺ^２の両方がＭ^ＩＧであり、これは通常は異なるものとなる。上述したように、Ｚ^１／Ｚ^２のいずれかは、任意選択で－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］と同じであってもよい。このようにペプチドの両末端が保護されていることは、ｉｎ ｖｉｖｏでのイメージング用途には重要であり、なぜなら、そうでなければ急速な代謝が起こり、その結果、ｃＭｅｔに対する選択的な結合親和性が失われることが予想されるためである。Ｚ^１とＺ^２の両方がＭ^ＩＧである場合、任意選択でＺ^１はアセチルであり、Ｚ^２は一級アミドである。Ｚ^１はアセチルであってもよく、Ｚ^２は一級アミドであってもよく、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位はｃＭＢＰのリジン残基のイプシロンアミン側鎖に結合していてもよい。

【0031】

本発明のｃＭＢＰペプチドは、ｃＭｅｔのｃＭｅｔ／ＨＧＦ複合体への結合についてのＫ_Ｄが約１０ｎＭ未満（蛍光偏光アッセイ測定に基づく）であり、最も一般的には１～５ｎＭの範囲であり、３ｎＭ未満が理想的であると考えられる。

【0032】

式ＩのｃＭＢＰのペプチド配列（配列－１）
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（配列－１）
は、１７ｍｅｒのペプチド配列であり、これが主にｃＭｅｔとの選択的結合に関与している。本発明のｃＭＢＰペプチドが１７を超えるアミノ酸残基を含む場合、残りのアミノ酸は、システインを除く任意のアミノ酸であり得る。追加された保護されていないシステイン残基は、定義されたＣｙｓ^ａ－Ｃｙｓ^ｂ及びＣｙｓ^ｃ－Ｃｙｓ^ｄジスルフィド架橋の望ましくないスクランブリングを引き起こす可能性がある。追加されたペプチドは、好ましくは、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位の容易なコンジュゲーションに適した側鎖を有する少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。そのような残基としては、アミン官能基化された－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］基とのコンジュゲーションに適したＡｓｐ若しくはＧＩｕ残基又はカルボキシ官能基化若しくは活性エステル官能基化された－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］基とのコンジュゲーションに適したＬｙｓ残基が挙げられる。－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］のコンジュゲーションのためのアミノ酸残基は、好適には、ｃＭＢＰペプチド（配列－１）の１７ｍｅｒ結合領域から離れた場所に位置し、任意選択でＣ末端又はＮ末端に位置する。任意選択で、コンジュゲーションのためのアミノ酸残基はＬｙｓ残基である。

【0033】

配列－１のトリプトファン残基の置換を、既知のアミノ酸置換体であるフェニルアラニン及びナフチルアラニンで評価した。しかしながら、ｃＭｅｔ親和性の喪失が認められ、トリプトファン残基が活性に重要であることが示唆された。任意選択で、ｃＭＢＰペプチドはＮ－末端のセリン残基をさらに含み、１８－ｍｅｒ（配列－２）が得られる。
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６．
（配列－２）

【0034】

配列－１又は配列－２に加えて、ｃＭＢＰはさらに、
（ｉ）ｃＭＢＰペプチドのＣ－若しくはＮ－ペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＡｓｐ若しくはＧＩｕ残基若しくはその類似体を含んでいてもよく、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］はアミン基で官能基化され、これが前記Ａｓｐ若しくはＧＩｕ残基若しくはその類似体のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる、又は
（ｉｉ）ｃＭＢＰペプチドのＣ－若しくはＮ－ペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＬｙｓ残基若しくはその類似体を含んでいてもよく、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］はカルボキシル基で官能基化され、これが前記Ｌｙｓ残基若しくはその類似体のイプシロンアミン側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる。

【0035】

配列－１又は配列－２に加えて、ｃＭＢＰはさらに、ｃＭＢＰペプチドのＣ－又はＮ－ペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＬｙｓ残基又はその類似体を含んでいてもよく、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］はカルボキシル基で官能基化され、これが前記Ｌｙｓ残基又はその類似体のイプシロンアミン側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる。

【0036】

Ａｓｐ及び／又はＧｌｕの類似体としては、２－アミノブタン二酸、２－アミノヘキサン二酸、２－アミノヘプタン二酸、２－アミノオクタン二酸、２－アミノノナン二酸、２－アミノデカン二酸、２－アミノウンデカン二酸及び２－アミノドデカン二酸のうちの１つまたは複数を挙げることができる。

【0037】

Ｌｙｓの類似体としては、２，３－ジアミノプロパン酸、２，４－ジアミノブタン酸、２，５－ジアミノペンタン酸、２，７－ジアミノヘプタン酸、２，８－ジアミノオクタン酸、２，９－ジアミノノナン酸、２，１０－ジアミノデカン酸、２，１１－ジアミノウンデカン酸、２，１２－ジアミノドデカン酸のうちの１つまたは複数を挙げることができる。

【0038】

合成リンカー基（Ｌ）が存在する場合、それは［ＩＭ］及びＺ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２とのコンジュゲーションを容易にする末端官能基を含んでいてもよい。Ｌが１～１０アミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、該アミノ酸残基は独立して、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択され得、任意選択で独立して、グリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択されてもよい。任意選択で、Ｌは１～５アミノ酸のペプチド鎖を含んでいてもよい。任意選択で、Ｌは２アミノ酸のペプチド鎖を含んでいてもよい。任意選択で、Ｌは３アミノ酸のペプチド鎖を含んでいてもよい。該アミノ酸残基は独立して、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択され得、任意選択で独立して、グリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択されてもよい。該アミノ酸残基はグリシンであってもよい。

【0039】

式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基において、各Ａはアミノ酸であってもよく、ｍは値１～５の整数であってもよい。任意選択で、各Ａはアミノ酸であってもよく、ｍは２であってもよい。任意選択で、各Ａはアミノ酸であってもよく、ｍは３であってもよい。該アミノ酸は独立して、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択され得、任意選択で独立して、グリシン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択されてもよい。該又は各アミノ酸はグリシンであってもよい。

【0040】

ＬがＰＥＧ部位を含む場合、それは式ＩＡ（１７－アミノ－５－オキソ－６－アザ－３，９，１２，１５－テトラオキサヘプタデカン酸）又はＩＢの単分散ＰＥＧ様構造のオリゴマー化から得られるユニットを含んでいてもよい

【化3】

（式ＩＡ）

（式中、ｐは１～１０の整数である。あるいは、式ＩＢのプロピオン酸誘導体をベースとしたＰＥＧ様構造が使用され得る）

【化4】

（式ＩＢ）
（式中、ｐは式ＩＡについて定義されている通りであり、ｑは３～１５の整数である。式ＩＢでは、ｐは１又は２であってもよく、ｑは５～１２であってもよい）。

【0041】

Ｌは、１～１０アミノ酸残基のペプチド鎖とＰＥＧ部位とを含んでいてもよい。式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基において、各Ａは独立して、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックであってもよい。任意選択で、各Ａは独立して、アミノ酸であってもよい。ｍは値１～５の整数であってもよく、任意選択で３、任意選択で２である。

【0042】

リンカー基がＰＥＧ又はペプチド鎖を含まない場合、Ｌ基は２～１０個の原子、最も好ましくは２～５個の原子、特に好ましくは２又は３個の原子の－（Ａ）_ｍ－部位を構成する連結原子の主鎖を有していてもよい。リンカー基の主鎖が２原子以上であれば、イメージング部位が十分に分離されているため、望ましくない相互作用が最小限に抑えられるという利点がある。

【0043】

式Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２のペプチドは、
（ｉ）所望のｃＭＢＰペプチドと同じペプチド配列を有し、Ｃｙｓ^ａ及びＣｙｓ^ｂが保護されておらず、Ｃｙｓ^ｃ及びＣｙｓ^ｄ残基がチオール保護基を有する直鎖状ペプチドを固相ペプチド合成する工程と、
（ｉｉ）工程（ｉ）のペプチドを固体支持体から切断し、溶液中で水性塩基で処理して、Ｃｙｓ^ａとＣｙｓ^ｂを連結する第一ジスルフィド結合を有する単環式ペプチドを得る工程と、
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ^ｃ及びＣｙｓ^ｄのチオール保護基を除去して環化し、Ｃｙｓ^ｃとＣｙｓ^ｄを連結する第二ジスルフィド結合を与えることで、所望の二環式ペプチド生成物Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２を得る工程と、
を含む調製方法によって得ることができる。

【0044】

「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない程度の穏やかな条件下で、当該官能基から切断することができる十分な反応性を持つように設計された基を意味する。脱保護の後、所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者によく知られており、Ｂｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニルである）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち、３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル）から好適に選択される。好適なチオール保護基は、Ｔｒｔ（トリチル）、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）、ｔ－Ｂｕ（ｔｅｒｔ－ブチル）、ｔｅｒｔ－ブチルチオ、メトキシベンジル、メチルベンジル又はＮｐｙｓ（３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル）である。さらなる保護基の使用については、’Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’， Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ， （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， １９９１）に記載されている。典型的なアミン保護基はＢｏｃ及びＦｍｏｃであり、最も典型的なものはＢｏｃである。他の典型的なチオール保護基はＴｒｔ及びＡｃｍである。

【0045】

固相ペプチド合成の詳細は、Ｐ． Ｌｌｏｙｄ－Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｆ． Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ ａｎｄ Ｅ． Ｇｉｒａｌｄ； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， １９９７に記載されている。ｃＭＢＰペプチドは、不活性雰囲気下で冷凍庫に保管するのが最適である。溶液中で使用する場合は、ジスルフィド結合のスクランブリングのリスクがあるため７を超えるｐＨを避けた方がよく、ペプチドの凝集を誘発してしまうため低ｐＨを避けた方がよい。

【0046】

Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２では、Ｚ^１とＺ^２の両方がＭ^ＩＧに等しくてもよい。典型的なｃＭＢＰペプチド及びＺ^１／Ｚ^２基は、上述の通りである。特に、上述の典型的なｃＭＢＰペプチドについて説明したように、コンジュゲーションを容易にするために、ｃＭＢＰペプチドはＡｓｐ、ＧＩｕ又はＬｙｓ残基を含むことが典型的である。最も典型的なのは、ｃＭＢＰペプチドがＬｙｓ残基を含むことである。

【0047】

Ｚ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２の調製は、上述の通りである。Ｚ^３が活性エステルであるＺ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^３ペプチドは、Ｚ^２がＯＨ又は生体適合性カチオン（Ｂ^ｃ）であるＺ^１－［ｃＭＢＰ］－Ｚ^２から、従来の方法により調製することができる。

【0048】

「活性化エステル」又は「活性エステル」という用語は、より良好な脱離基を含むことでアミンなどの求核試薬とより容易に反応することができるように設計された関連カルボン酸のエステル誘導体を意味する。好適な活性エステルの例は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホスクシンイミジルエステル、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、パラニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（すなわち、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。活性エステルは、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステル、特にＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステルであってもよい。あるいは、カルボン酸が無水物を形成して分子内で活性化した形態を用いてもよい。

【0049】

放射性部位は、アルファ線（α）放射核種、ベータ線（β）放射核種及びガンマ線（γ）放射核種の少なくとも１つであってもよい。

【0050】

ベータ線放射核種は、電子（β^－）放射核種及び陽電子（β^＋）放射核種の少なくとも１つであればよい。

【0051】

本化合物は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、シンチグラフィー及び放射線治療の１つ又は複数に使用され得る。本化合物は、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び放射線治療の１つ以上に使用され得る。本化合物は、放射線治療に使用され得る。

【0052】

放射性部位は、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^６７Ｃｕ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^２２５Ａｃ、^１３１Ｉ、^１６６Ｈｏ、^１４９Ｐｍ、^１９９Ａｕ、^１０５Ｒｈ、^２２７Ｔｈ、^１５３Ｓｍ、^８９Ｓｒ、^２２３Ｒａ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^９９ｍＴｃ、^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^８９Ｚｒ、^１１Ｃ、^１５Ｏ、^１３Ｎ、^８２Ｒｂ及び^１８Ｆ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0053】

放射性部位は、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^６７Ｃｕ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^２２５Ａｃ、^１３１Ｉ、^１６６Ｈｏ、^１４９Ｐｍ、^１９９Ａｕ、^１０５Ｒｈ、^２２７Ｔｈ、^１５３Ｓｍ、^８９Ｓｒ、^２２３Ｒａ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ及び^１２５Ｉ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0054】

放射性部位は、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^８９Ｚｒ、^１１Ｃ、^１５Ｏ、^１３Ｎ、^８２Ｒｂ及び^１８Ｆ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0055】

放射性部位は、^９９ｍＴｃ、^６７Ｇａ及び^１１１Ｉｎ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0056】

放射性部位は、^６８Ｇａ、^１８Ｆ、^８９Ｚｒ、^１７７Ｌｕ、^２２５Ａｃ、^２１３Ｂｉ、^２２７Ｔｈ及び^９０Ｙ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0057】

放射性部位は、^６８Ｇａ及び^１７７Ｌｕ並びにそれらの好適な塩からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0058】

放射性部位は、^１７７Ｌｕ又はその好適な塩であってもよい。

【0059】

キレート剤は、サイクレン（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン）、サイクラム（１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン）、ＴＡＣＮ（１，４，７－トリアザシクロノナン）、ＴＨＰ（トリス（ヒドロキシピリジノン））、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）、ＮＯＤＡＧＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン、１－グルタル酸－４，７－酢酸）、ＴＲＡＰ（１，４，７－トリアザシクロノナンホスフィン酸）、ＮＯＰＯ（１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４－ビス［メチレン（ヒドロキシメチル）ホスフィン酸］－７－［メチレン（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸）、ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）、ＤＡＴＡ（（６－ペンタン酸）－６－（アミノ）メチル－１，４－ジアゼピントリアセテート））、ＡＡＺＴＡ（１，４－ビス（カルボキシメチル）－６－［ビス（カルボキシメチル）］アミノ－６－メチルペルヒドロ－１，４－ジアゼピン）、ＨＢＥＤ－ＣＣ（Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシ－５－（エチレン－ベータ－カルボキシ）ベンジル）エチレンジアミンＮ，Ｎ’－二酢酸）及びそれらの誘導体からなる群の１つ又は複数より選択されてもよい。

【0060】

キレート剤は、ＴＨＰ（トリス（ヒドロキシピリジノン））、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）及びＮＯＤＡＧＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン、１－グルタル酸－４，７－酢酸）の少なくとも１つであってもよい。

【0061】

キレート剤は、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）及びＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）の少なくとも１つであってもよい。

【0062】

キレート剤は、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）であってもよい。キレート剤は、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）であってもよい。

【0063】

配列－１に加えて、ｃＭＢＰはさらに、Ｃ－又はＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＡｓｐ又はＧｌｕ残基を含み、－（Ｌ）_ｎＩＭはアミン基で官能基化され、これが前記Ａｓｐ又はＧｌｕ残基のカルボキシル側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる。

【0064】

配列－１に加えて、ｃＭＢＰは、Ｃ－又はＮ－ｃＭＢＰペプチド末端のいずれかから４アミノ酸残基以内にＬｙｓ残基を含んでいてもよく、－（Ｌ）_ｎＩＭはカルボキシル基で官能基化されていてもよく、これが前記Ｌｙｓ残基のイプシロンアミン側鎖にコンジュゲートしてアミド結合がもたらされる。

【0065】

ｃＭＢＰは、配列－２又は配列－３
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６（配列－２）、
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（配列－３）
のいずれかのアミノ酸配列を含んでいてもよい。

【0066】

Ｘａａ^３はＡｒｇであってもよい。

【0067】

配列－１、配列－２又は配列－３に加えて、ｃＭＢＰはさらに、Ｎ又はＣ末端のいずれかに、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（配列－４）、－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－（配列－５）及び－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ（配列－６）から選択されるリンカーペプチドを含んでいてもよい。

【0068】

リンカーペプチドのＬｙｓ残基は、－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位の典型的なコンジュゲーション位置である。一部のｃＭＢＰペプチドは、配列－３を配列－４のリンカーペプチドと一緒に含み、２６ｍｅｒのアミノ酸配列（配列－７）
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
（配列－７）
を有する。

【0069】

ｃＭＢＰは、アミノ酸配列（配列－７）
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ^ｃ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
を有していてもよい。

【0070】

Ｚ^１及びＺ^２の両方が独立してＱであってもよく、任意選択でＭ^ＩＧであってもよい。

【0071】

Ｚ^１はアセチルであってもよく、Ｚ^２は一級アミドであってもよい。

【0072】

ｎは１であってもよい。ｎは０であってもよい。

【0073】

配列－１、配列－２、配列－３及び配列－７のｃＭＢＰペプチドでは、Ｚ^１＝Ｚ^２＝Ｍ^ＩＧであってもよく、Ｚ^１＝アセチル及びＺ^２＝一級アミドであってもよい。

【0074】

－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位は、好適には、Ｚ^１基若しくはＺ^２基のいずれか又は配列－１のｃＭｅｔ結合配列とは異なるｃＭＢＰペプチドのアミノ酸残基に結合している。可能なアミノ酸残基及びコンジュゲーション部位は、上述の通りである。－（Ｌ）_ｎ［ＩＭ］部位がＺ^１又はＺ^２に結合している場合、Ｎ又はＣ末端にコンジュゲーションすることによってＺ^１又はＺ^２に取って代わり、そのようにしてｉｎ ｖｉｖｏ代謝を遮断し得る。

【0075】

本化合物は放射線治療に使用される薬剤の調製に適する場合があり、式Ｉ

【化5】

を有する
（式中、
Ｚ^１はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｑであり、
Ｚ^２はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、Ｑであり
（Ｑは代謝阻害基（Ｍ^ＩＧ）であり、ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である）、
ｃＭＢＰは１７～３０アミノ酸のｃＭｅｔ結合性環状ペプチドであり、アミノ酸配列（配列－１）
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であり、残基ａとｂ及びｃとｄが環状になって２つの別個のジスルフィド結合を形成している）
を含み、
Ｌは式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基であり（各Ａは独立して、－ＣＲ_２－、－ＣＲ＝ＣＲ－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＲ_２ＣＯ_２－、－ＣＯ_２ＣＲ_２－、－ＮＲＣＯ－、－ＣＯＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ－、－ＳＯ_２ＮＲ－、－ＮＲＳＯ_２－、－ＣＲ_２ＯＣＲ_２－、－ＣＲ_２ＳＣＲ_２－、ＣＲ_２ＮＲＣＲ_２－、Ｃ_４－８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_４－８シクロアルキレン基、Ｃ_５－１２アリーレン基、Ｃ_３－１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである）、
各Ｒは独立して、Ｈ、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、Ｃ_１－４アルコキシアルキル又はＣ_１－４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｍは値１～２０の整数であり、
ｎは値０又は１の整数あり、
ＩＭは放射性部位を錯化するのに適したキレート剤である
（該キレート剤は、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）及びＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）の少なくとも１つである））。

【0076】

本化合物は放射線治療に使用される薬剤の調製に適する場合があり、式Ｉ

【化6】

を有する
（式中、
Ｚ^１はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｑであり、
Ｚ^２はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、Ｑであり
（Ｑは代謝阻害基（Ｍ^ＩＧ）であり、ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である）、
ｃＭＢＰは１７～３０アミノ酸のｃＭｅｔ結合性環状ペプチドであり、アミノ酸配列（配列－１）
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６
（Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓ^ａ－ｄはそれぞれシステイン残基であり、残基ａとｂ及びｃとｄが環状になって２つの別個のジスルフィド結合を形成している）
を含み、
Ｌは式－（Ａ）_ｍ－の合成リンカー基であり（各Ａは独立して、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ビルディングブロックである）、
ｍは値１～５の整数であり、
ｎは１の整数あり、
ＩＭは放射性部位を錯化するのに適したキレート剤である（該キレート剤は、ＤＯＴＡＧＡ（２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸）及びＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）の少なくとも１つである））。

【0077】

本発明の第二の態様によれば、第一の態様の化合物と生体適合性担体とを含む、哺乳動物への投与に適した形態の医薬組成物が提供される。医薬組成物はさらに、第一の態様に記載の放射性部位を含んでいてもよい。放射性部位は、キレート剤によって錯体を形成することができる。

【0078】

生体適合性担体は、溶媒、典型的には水性溶媒、典型的には水であってもよい。該溶媒は流体であってもよい。

【0079】

「生体適合性担体」は、組成物が生理学的に許容されるように、すなわち毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物の体に投与できるように、イメージング剤を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であってもよい。生体適合性担体は、好適には、無菌でパイロジェンフリーの注射用水、生理食塩水などの水溶液（有利には、注射用の最終製品が等張になるように平衡化されていてもよい）、１つ又は複数の等張化物質（例えば、血漿カチオンと生体適合性対イオンの塩）、糖（例えば、グルコース若しくはスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール若しくはマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール材料（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液などの注射用担体液である。生体適合性担体は、パイロジェンフリーの注射用水又は等張生理食塩水であってもよい。イメージング剤及び生体適合性担体は、それぞれ好適なバイアル又は容器に入れて供給される。これらの容器は、無菌完全性及び／又は放射能安全性を維持することができる密閉容器に加えて、任意選択で不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）を含み、一方でシリンジ又はカニューレによる溶液の添加及び回収が可能なものである。そのような容器として好ましいのは、セプタムで密封されたバイアルであり、気密封止部はオーバーシール（通常はアルミニウム）で圧着されている。この封止部は、無菌完全性を維持しつつ、皮下注射針による単一又は複数の穿刺に適している（例えば、圧着型セプタムシール封止部）。そのような容器は、必要に応じて真空に耐えることができ（例えば、ヘッドスペースガスを変更し、若しくは溶液を脱気するために）、酸素又は水蒸気などの外部大気ガスの侵入を許すことなく、減圧などの圧力変化に耐えることができるという利点もある。

【0080】

医薬組成物は、一人の患者に対する投与量を有していてもよく、好適なシリンジ又は容器で提供されてもよい。

【0081】

本発明の第三の態様によれば、第二の態様の医薬組成物を調製するためのキットであって、第一の態様の化合物を無菌の固体形態で含んでおり、第二の態様の生体適合性担体の無菌供給物と再構成すると、溶解して所望の医薬組成物を与えるキットが提供される。

【0082】

キットはさらに、第一の態様に記載の放射性部位を含んでいてもよい。放射性部位は、キレート剤によって錯化することができる。

【0083】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用することを含む哺乳動物の体のイメージング方法が提供される。

【0084】

該イメージングはｉｎ ｖｉｖｏで行ってもよい。

【0085】

該イメージングは、ＰＥＴイメージング、シンチグラフィ及びＳＰＥＣＴイメージングの少なくとも１つであってもよい。

【0086】

該イメージングはＳＰＥＣＴイメージングであってもよい。

【0087】

該イメージングは、ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位又は局在化部位の画像を取得するためのものであってもよい。

【0088】

該イメージング方法では、任意選択で、第一の態様の化合物又は第二の態様の医薬組成物が哺乳動物の体に前もって投与されている。

【0089】

該イメージング方法は、
ａ）第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを投与する工程と、
ｂ）放射性部位の崩壊により発生する放射性部位からの発光を検出する工程と、
ｃ）工程（ｂ）の発光から、目的の組織表面の画像を形成する工程と、
を含んでいてもよい。

【0090】

該イメージング方法は、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングを支援するために使用されてもよい。

【0091】

該イメージング方法は、がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングを支援するために使用されてもよい。

【0092】

該イメージング方法を含む、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング又は治療法のモニタリングの方法。

【0093】

本発明のさらなる態様によれば、哺乳動物の体のイメージングにおけるイメージング剤及び哺乳動物の体の放射線治療における放射線治療剤の少なくとも１つとして使用するための、第一の態様の化合物又は第二の態様の医薬組成物が提供される。

【0094】

本発明のさらなる態様によれば、哺乳動物の体の放射線治療における放射線治療剤として使用するための、第一の態様の化合物又は第二の態様の医薬組成物が提供される。

【0095】

本発明のさらなる態様によれば、哺乳動物の体のイメージングにおけるイメージング剤及び哺乳動物の体の放射線治療における放射線治療剤の両方として使用するための、第一の態様の化合物又は第二の態様の医薬組成物が提供される。

【0096】

本発明のさらなる態様によれば、医薬品として使用するための、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つが提供される。

【0097】

本発明のさらなる態様によれば、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングに使用するための、第一の態様の化合物並びに第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つが提供される。

【0098】

本発明のさらなる態様によれば、がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングに使用するための、第一の態様の化合物並びに第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つが提供される。

【0099】

本発明のさらなる態様によれば、ｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングに使用するための、第一の態様の化合物並びに第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つが提供される。

【0100】

本発明のさらなる態様によれば、ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の画像の取得及び／又はｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位に関連する症状の治療に使用するための、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つが提供される。

【0101】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングの方法が提供される。

【0102】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、哺乳動物の体に対する放射線治療方法が提供される。

【0103】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用して、哺乳動物の体にイメージングと放射線治療の両方を行う方法が提供される。

【0104】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングの方法が提供される。

【0105】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、ｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び／又は治療法のモニタリングの方法が提供される。

【0106】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つを使用した、ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の画像の取得及び／又はｃＭｅｔの過剰発現若しくは局在化に関連する症状の治療の方法が提供される。

【0107】

本発明のさらなる態様によれば、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0108】

本発明のさらなる態様によれば、検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療のモニタリング、治療法、放射線治療、疾患進行のモニタリング及び治療法のモニタリングの少なくとも１つにおける、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0109】

本発明のさらなる態様によれば、イメージング剤及び放射線治療剤の少なくとも１つとしての、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0110】

本発明のさらなる態様によれば、放射線治療剤としての、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0111】

本発明のさらなる態様によれば、がん若しくは前がん状態の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び治療法のモニタリングの少なくとも１つにおける、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0112】

本発明のさらなる態様によれば、ｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の検出、診断、予後、転帰の予測、手術、病期分類、治療、治療法、放射線治療、治療のモニタリング、疾患進行のモニタリング及び治療法のモニタリングの少なくとも１つにおける、任意の第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0113】

本発明のさらなる態様によれば、ｉｎ ｖｉｖｏでのｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位の画像の取得及びｃＭｅｔの過剰発現部位若しくは局在化部位に関連する症状の治療の少なくとも１つにおける、第一の態様の化合物及び第二の態様の医薬組成物の少なくとも１つの使用が提供される。

【0114】

Ｉｎ ｖｉｖｏでの使用の場合、該製剤は、例えば、生体適合性担体での再構成により、哺乳動物への投与に適した形態にされることが理解されよう。

【0115】

記載されている代替の特徴及び異なる実施形態は、それらの各態様及び各実施形態に準用される。

【図面の簡単な説明】

【0116】

以下、本発明の実施形態を、例示として、下記図面を参照しながら説明する。

【図1】ＮＯＤＡＧＡを含む本発明の化合物（化合物１）及び化合物１を得るための反応スキームを示した図である。

【図2】ＴＨＰを含む本発明の化合物（化合物２）及び化合物２を得るための反応スキームを示した図である。

【図3】ＤＯＴＡを含む本発明の化合物（化合物３）及び化合物３を得るための反応スキームを示した図である。

【図4】ＤＯＴＡＧＡを含む本発明の化合物（化合物４）及び化合物４を得るための反応スキームを示した図である。

【図5】 ^６８Ｇａ－化合物３（注射後１時間及び３時間）並びに^１８Ｆ－ＦＤＧ（注射後１時間）のｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴ／ＣＴイメージングを示した図である。

【図6】 ^１７７Ｌｕ－化合物３のｉｎ ｖｉｖｏ ＳＰＥＣＴイメージング（注射後１．５時間、１７時間、４１時間、６５時間及び１４１時間）を示した図である。

【図7】 ^１８Ｆ－ＦＤＧのｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴ／ＣＴイメージング（注射後１時間）を示した図である。

【図8】 ^１７７Ｌｕ－化合物３のｉｎ ｖｉｖｏ ＳＰＥＣＴイメージング（注射後４．５時間、２０時間、４５時間、６７時間及び１４１時間）を示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0117】

イメージング剤若しくは放射線治療剤として（又は前駆体として若しくはキットの一部として）有用な化合物を以下に記載のように調製した。

【0118】

（ｃＭｅｔ結合ペプチドの調製）
（工程（ａ）：保護された前駆体直鎖ペプチドの合成）
前駆体直鎖ペプチドは、
Ａｃ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＮＨ_２（配列－７を含む）の構造を有する。

【0119】

ペプチジル樹脂Ｈ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｔｈｒ（Ψ^{Ｍｅ，Ｍｅ}ｐｒｏ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ポリマー（配列－７を含む）を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチドシンセサイザーで、Ｆｍｏｃ化学を使用して０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から開始して組み立てた。カップリング工程では、過剰な１ｍｍｏｌの予備活性化アミノ酸（ＨＢＴＵを使用）を適用した。Ｇｌｕ－Ｔｈｒシュードプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ ０５－２０－１１２２）を配列中に組み込んだ。この樹脂を窒素バブラー装置に移し、無水酢酸（１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した溶液で６０分間処理した。無水物溶液を濾過により除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄し、窒素気流下で乾燥させた。

【0120】

側鎖保護基の除去と樹脂からのペプチドの切断とを同時に、２．５％のＴＩＳ、２．５％の４－チオクレゾール及び２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で２時間３０分行った。樹脂を濾過により除去し、ＴＦＡを真空除去し、残渣にジエチルエーテルを加えた。形成された沈殿物をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して２６４ｍｇのクルードペプチドを得た。

【0121】

クルードペプチドを分取ＨＰＬＣにより精製し（グラジエント：Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡを４０分かけて２０－３０％Ｂ、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）５０ｘ２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０分）、１００ｍｇの純粋なｃＭｅｔ結合ペプチド直鎖状前駆体を得た。この純粋な生成物を分析ＨＰＬＣで分析した（グラジエント：Ａ＝Ｈ２ＣＶＯ．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡを１０分かけて１０－４０％Ｂ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物の特性評価を行った（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１４６４．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１４６５．１）。

【0122】

（工程（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４－１６ジスルフィド架橋の形成）
Ｃｙｓ４－１６；Ａｃ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ（Ａｃｍ）－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＮＨ_２（配列－７を含む）。

【0123】

工程（ａ）の直鎖状前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、その溶液をアンモニアを用いてｐＨ６に調整した。この反応混合液を５日間撹拌した。その後、ＴＦＡを用いて溶液をｐＨ２に調整し、溶媒の大部分を真空蒸発させて除去した。残渣（４０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラムに分注し、生成物を精製した。

【0124】

残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し（グラジエント：Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡを１０分かけて０％Ｂ、次いで４０分かけて０－４０％Ｂ、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４４分）、７２ｍｇの純粋なｃＭｅｔ結合ペプチド単環式前駆体を得た。この純粋な生成物（異性体Ｐ１～Ｐ３の混合物）を分析ＨＰＬＣ（グラジエント：Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡを１０分かけて１０－４０％Ｂ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．３７分（Ｐ１）；５．６１分（Ｐ２）；６．０５分（Ｐ３））により分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物の特性評価を行った（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１４６３．６、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１４６４．１（Ｐ１）；１４６４．４（Ｐ２）；１４６４．３（Ｐ３））。

【0125】

（工程（ｃ）：第二Ｃｙｓ６－１４ジスルフィド架橋の形成）
工程（ｂ）の単環式前駆体（７２ｍｇ）を、窒素ブランケット下で７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１ＭのＨＣｌ（７．２ｍＬ）及びＡｃＯＨ中０．０５ＭのＩ_２（４．８ｍＬ）をこの順序で加え、混合液を４５分間撹拌した。１Ｍのアスコルビン酸（１ｍＬ）を加え、無色混合液を得た。溶媒の大部分を真空蒸発させ、残渣（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。

【0126】

残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し（グラジエント：Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡを１０分かけて０％Ｂ、次いで４０分かけて２０－３０％Ｂ、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０ｘ２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４３～５３分）、５２ｍｇの純粋なｃＭｅｔ結合ペプチドを得た。この純粋な生成物を分析ＨＰＬＣ（グラジエント：Ａ＝Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡを１０分かけて１０－４０％Ｂ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０ｘ２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）により分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物の特性評価を行った（ＭＨ_２ ^２＋計算値：１３９１．５、ＭＨ_２ ^２＋実測値：１３９２．５）。

【0127】

（化合物１の調製）
図１の反応スキームを参考に、化合物１を以下のように調製した。

【0128】

Ｂａｃｈｅｍ社から入手したＧＭＰグレードのｃＭｅｔ結合ペプチド（１５０．０ｍｇ、４９．８μｍｏｌ）を、窒素下で１０ｍＬ丸底フラスコ内の乾燥ＤＭＦ（１．９ｍＬ）に溶解した。ＣｈｅＭａｔｅｃ社から入手したＮＯＤＡＧＡ－ＮＨＳエステル（４３．８０ｍｇ、１．２当量）を乾燥ＤＭＦ（６００μＬ）に溶解し、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手した乾燥ＤＩＰＥＡ（１７３μＬ、２０．０当量）（９９．５％バイオテクノロジーグレード）を加えた。活性エステル溶液をペプチド溶液に加えたところ、沈殿物が形成された。懸濁液を２５℃で１時間撹拌し、その時点でＨＰＬＣでサンプルを分析したところ、反応が不完全であることが示された。懸濁液をさらに１時間撹拌し、その時点でさらにサンプルをＨＰＬＣで分析したところ、再び反応が不完全であることが示された。ＮＯＤＡＧＡ－ＮＨＳエステル（８．７ｍｇ、０．５２当量）及びＤＩＰＥＡ（３４．７μＬ、４当量）を反応混合液に加えた。３時間３０分後、出発ペプチドの生成物への変換は不完全であったが（出発ペプチドは約５％残っていた）、反応を停止させた。反応混合液に氷冷ＭＴＢＥ（１５ｍＬ）を加え、沈殿物を遠心分離した（２分、３，２６０ｒｐｍ、５℃）。クルード生成物を１ｍＬの水に溶解し、二相性液体を得て、これをセミ分取ＨＰＬＣで精製した（ＡＡ １００ｍｍ、ｐＨ７、ＡｃＮ、１％／分、１０ｍＬ／分、カラムＺｏｒｂａｘ Ｃ１８ ３０ｘ２５０ｍｍ、３回注入、ｔ_Ｒ＝２６．７３分）。化合物１は中程度の収率（７６．９ｍｇ、４９％）で、優れた純度（＞９８％、２１０及び２５４ｎｍ）で得られた。

【0129】

ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ／ＴＯＦにより、化合物１が得られたことを確認した。

【0130】

（ＨＰＬＣの結果）
（溶離液Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０．０９％ＴＦＡ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ ９５Ａ Ｃ１８、２．１ｘ１５０ｍｍ、３．５ｕｍ Ｐ／Ｎ ９５９７６３－９０２；グラジエント：２．５分かけて５％Ｂ、次いで８５分かけて５％－９０％Ｂ、次いで２．５分かけて９０％Ｂ、次いで２．５分後に９０％－５％Ｂ、次いで２．５分かけて５％Ｂ；検出：２１０ｎｍ）
・ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．２分；ｔ_Ｒ生成物：３０．１分

【0131】

（溶離液Ａ：水中０．１Ｍ酢酸アンモニウム、溶離液Ｂ：アセトニトリル；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ ９５Ａ Ｃ１８、２．１ｘ１５０ｍｍ、３．５ｕｍ Ｐ／Ｎ ９５９７６３－９０２；グラジエント：２．５分かけて５％Ｂ、次いで８５分後に５％－９０％Ｂ、次いで２．５分かけて９０％Ｂ、次いで２．５分後に９０％－５％Ｂ、次いで２．５分かけて５％Ｂ；検出２１０ｎｍ）
・ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２１．０分、ｔ_Ｒ生成物：１９．１５分

【0132】

（溶離液Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０．０９％ＴＦＡ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ ９５Ａ Ｃ１８、２．１ｘ１５０ｍｍ、３．５ｕｍ Ｐ／Ｎ ９５９７６３－９０２；グラジエント：２．５分かけて５％Ｂ、次いで１７分後に５％－９０％Ｂ、次いで２．５分かけて９０％Ｂ、次いで２．５分後に９０％－５％Ｂ、次いで２．５分かけて５％Ｂ；検出２１０ｎｍ）
・ｔ_Ｒ生成物＝１２．６分

【0133】

（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦの結果）
・ペプチド（再分析）：２，７８６．９８（Ｍ＋４Ｈ）
・生成物：３，１４１（計算上の生成物質量＝３，１４０．４３）

【0134】

（化合物２の調製）
図２の反応スキームに沿って、以下の説明に従って化合物２を調製した。

【0135】

ＧＭＰグレードのｃ－Ｍｅｔペプチド（３０．０ｍｇ、９．９７μｍｏｌ）及びＣｈｅＭａｔｅｃ社から入手したｐ－ＮＣＳ－Ｂｚ－ＴＨＰ（１４．３７ｍｇ、１．５当量）を、１０ｍＬ丸底フラスコ内で乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。乾燥ＤＩＰＥＡ（２６．０μＬ、１５．０当量）を加えたところ、沈殿物が形成された。部分的に可溶化した懸濁液を撹拌した。ＨＰＬＣ分析の結果、２時間後にはペプチドがほぼ完全に変換され、４時間後には完全に変換されたが、その頃には溶液は濁っており、いくらか沈殿物があった。反応混合液に氷冷ＭＴＢＥ（１５ｍＬ）を加え、沈殿物を遠心分離した（２分、３２６０ｒｐｍ、５℃）。冷ＭＴＢＥ（６ｍＬ）で洗浄を繰り返し、沈殿物を遠心分離した（２分、３２６０ｒｐｍ、５℃）。得られた白色固体をアルゴン気流下で乾燥させた後、真空乾燥させた（３１．９５ｍｇ）。クルード生成物を４００μＬの水と４００μＬのＡｃＮに溶解し、セミ分取ＨＰＬＣで精製した（Ｈ_２Ｏ中ＴＦＡ０．１％、ＡｃＮ、０．７５％／分、２０ｍＬ／分、カラム：Ｚｏｒｂａｘ Ｃ１８ ２１．２ｘ２５０ｍｍ、１回注入、ｔ_Ｒ＝３４．３分、トレースファイル５２１）。この化合物は良好な収率と純度で得られた（８９％ ＵＶ２５４ｎｍ）。

【0136】

ＨＰＬＣ、ＥＳＩ＋／ＭＳ及びＭＡＬＤＩ／ＴＯＦにより、化合物２が得られたことを確認した。

【0137】

（ＨＰＬＣの結果）
（溶離液Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０．０９％ＴＦＡ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ ９５Ａ Ｃ１８、２．１ｘ１５０ｍｍ、３．５ｕｍ Ｐ／Ｎ ９５９７６３－９０２；グラジエント：２．５分かけて５％Ｂ、次いで８５分後に５％－９０％Ｂ、次いで２．５分かけて９０％Ｂ、次いで２．５分後に９０％－５％Ｂ、次いで２．５分かけて５％Ｂ；検出２１０ｎｍ）
・ｔ_Ｒ生成物＝１３．７分

【0138】

（ＥＳＩ＋／ＭＳの結果）
・生成物：１，８７２．８．３（Ｍ＋２Ｈ）^２＋；１，２４８．５（Ｍ＋３Ｈ）^３＋

【0139】

（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦの結果）
・開始ペプチド：２，７８６．９８（Ｍ＋４Ｈ）^＋
・生成物：３，７３８（計算上の生成物質量＝３，７４１．４３）

【0140】

（化合物３の調製）
ＤＯＴＡ－ＮＨＳは、アミン標識用の活性種として市販されている。ＤＯＴＡ－ＮＨＳは、^６８Ｇａ及び^１７７Ｌｕのキレートにも使用できる。ＤＯＴＡ－ＮＨＳを、図３の反応スキームに従ってｃＭｅｔ結合ペプチドとコンジュゲートさせ、化合物３を得た。さらなる詳細は以下の通りである。

【0141】

Ｂａｃｈｅｍ社から入手したＧＭＰグレードのｃＭｅｔ結合ペプチド（１０ｍｇ、３．１７μｍｏｌ）を１．５ｍＬエッペンドルフチューブ内で乾燥ＤＭＦ（１００μＬ）に溶解し、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手したＤＩＰＥＡ（８．２６μＬ、１５．０当量）（９９．５％バイオテクノロジーグレード）を添加した。ＣｈｅＭａｔｅｃ社から入手したＤＯＴＡ－ＮＨＳ（４．１０ｍｇ、１．７当量）を乾燥ＤＭＦ（５０μＬ）に溶解し、アミン溶液に添加した。反応混合液をアルゴンガスでフラッシュし、アルゴンガスの陽圧下、２０℃で約２４時間反応させた。

【0142】

１時間後にサンプルを採取し、ＨＰＬＣで分析した。約２４時間後にさらにサンプルを採取し、ＥＳＩ＋／ＭＳ及びＭＡＬＤＩ／ＴＯＦで分析し、完全に反応したことを確認した。

【0143】

ＨＰＬＣ、ＥＳＩ＋／ＭＳ及びＭＡＬＤＩ／ＴＯＦのいずれにおいても、ｃＭｅｔ結合ペプチドが化合物３に完全に変換されていることが確認された。

【0144】

ＨＰＬＣの結果（溶離液Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０．０９％ＴＦＡ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ ９５Ａ Ｃ１８、２．１ｘ１５０ｍｍ、３．５ｕｍ Ｐ／Ｎ ９５９７６３－９０２；グラジエント：２．５分かけて５％Ｂ、次いで８５分後に５％－９０％Ｂ、次いで２．５分かけて９０％Ｂ、次いで２．５分後に９０％－５％Ｂ、次いで２．５分かけて５％Ｂ；検出２１０ｎｍ）
・Ｔ_０＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．２分
・Ｔ_１時間＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：ピークなし、ｔ_Ｒ生成物：２８．９分

【0145】

（ＥＳＩ＋／ＭＳの結果）
・約２４時間後の反応混合液－陽イオン化：１，５８５．３（Ｍ＋２Ｈ）^２＋；１，０５６．９（Ｍ＋３Ｈ）^３＋

【0146】

（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦの結果）
・ペプチド（再分析）：２，７８５．０５
・約２４時間後の反応混合液：３，１７０（計算上の生成物質量＝３，１６９．４４）

【0147】

（化合物４の調製）
ＤＯＴＡＧＡ無水物は、アミン標識用の活性種として市販されている。ＤＯＴＡＧＡ無水物は、^６８Ｇａ及び^１７７Ｌｕのキレートにも使用できる。ＤＯＴＡＧＡ無水物を、図４の反応スキームに従ってｃＭｅｔ結合ペプチドとコンジュゲートさせ、化合物４を得た。さらなる詳細は以下の通りである。

【0148】

Ｂａｃｈｅｍ社から入手したＧＭＰグレードのｃＭｅｔ結合ペプチド（２５ｍｇ、７．９２μｍｏｌ）を、１８０℃のオーブンに入れてあらかじめ水分を除去した１０ｍＬ丸底フラスコ内で乾燥ＤＭＦ（３００μＬ）に溶解した。Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手したＤＩＰＥＡ（２１μＬ、１５．０当量）（９９．５％Ｂｉｏｔｅｃｈグレード）を丸底フラスコに加え、アルゴンガスでフラッシュした。ＣｈｅＭａｔｅｃ社から入手したＤＯＴＡＧＡ無水物（７．２６ｍｇ、２．０当量）をエッペンドルフチューブ内で乾燥ＤＭＦ（３００μＬ）に溶解し、アミン溶液に加えた。反応混合液を超音波処理して溶解させた後、アルゴンガスでフラッシュし、アルゴンガスの陽圧下で約９０℃で約４時間反応させた。

【0149】

３０分後、１時間後、１時間３０分後、２時間後及び４時間後にサンプルを採取し、ＨＰＬＣで分析した。採取した各サンプルをＭＡＬＤＩ／ＴＯＦで分析し、４時間後に採取したサンプルをＥＳＩ＋／ＭＳで分析し、完全に反応したことを確認した。

【0150】

ＨＰＬＣ、ＥＳＩ＋／ＭＳ及びＭＡＬＤＩ／ＴＯＦのいずれにおいても、ｃＭｅｔ結合ペプチドが化合物４に完全に変換されていることが確認された。

【0151】

ＨＰＬＣ結果（溶離液Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０．０９％ＴＦＡ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ ９５Ａ Ｃ１８、２．１ｘ１５０ｍｍ、３．５ｕｍ Ｐ／Ｎ ９５９７６３－９０２；グラジエント：２．５分かけて５％Ｂ、次いで８５分後に５％－９０％Ｂ、次いで２．５分かけて９０％Ｂ、次いで２．５分後に９０％－５％Ｂ、次いで２．５分かけて５％Ｂ；検出２１０ｎｍ）
・Ｔ_３０分＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．２１４分、ｔ_Ｒ 生成物：２８．８５４分
・Ｔ_１時間＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．１０５分、ｔ_Ｒ生成物：２８．７２４分
・Ｔ_{１時間３０分}＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．１１２分；ｔ_Ｒ生成物：２８．７４５分
・Ｔ_２時間＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．６０７分、ｔ_Ｒ 生成物：２８．７９６分
・Ｔ_４時間＝ｔ_Ｒ ｃＭｅｔペプチド：２９．５６０分、ｔ_Ｒ生成物：２８．７４７分

【0152】

（ＥＳＩ＋／ＭＳの結果）
・約４時間後の反応混合液－陽イオン化：１，６２１．４（Ｍ＋２Ｈ）^２＋、１，６３２．３（Ｍ＋Ｎａ＋Ｈ）^２＋、１，０８１．０（Ｍ＋３Ｈ）^３＋

【0153】

（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦの結果）
・約４時間後の反応混合液：３，２４４．３（Ｍ＋Ｈ）^＋；３２６６（Ｍ＋Ｎａ）^＋（計算上の生成物質量＝３，２４１．５０）

【0154】

化合物３及び化合物４について、以下の実験を行った。
・残留溶媒の分析（実験１）、
・対イオン化学量論の決定（実験２）、
・蛍光偏光法による競合結合アッセイ（実験３）、
・化合物３及び化合物４の^１７７Ｌｕでの放射性標識（実験４）並びに
・化合物３及び化合物４の^６８Ｇａでの放射性標識（実験５）。

【0155】

（実験１：化合物３及び４の残留溶媒の分析）
化合物３及び４を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）及びトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の残留溶媒について試験した。

【0156】

（ａ）手順
ＤＭＦ、ＭｅＣＮ、ＤＩＰＥＡ、ＴＢＭＥ及びＤＣＭの分析を、ヘッドスペースガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により以下の通りに行った。

【0157】

化合物３及び４のサンプルは、各化合物を約１０ｍｇ正確に秤量し、別々のＨＰＬＣヘッドスペースバイアルに入れて二連で調製した。各バイアルに１ｍＬのジメチルアミン（ＤＭＡ）を加え、バイアルを圧着キャップで封止した。

【0158】

調製したサンプルを、対象となる必要な溶媒を含むスタンダードに対して分析した。

【0159】

スタンダードの溶媒は、表１に概説したワーキングスタンダードの濃度で調製した。

【表1】

注^１：ＩＣＨ限度値＝医薬品規制調和国際会議。
注^２：密度の値はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社からの引用で、すべての密度の値は２５℃におけるものである。
ｎ／ａ＝該当なし
（表１：ワーキングスタンダードの濃度）

【0160】

分析用に、１ｍＬのスタンダードを２０ｍＬのヘッドスペースバイアルに正確にピペットで移し、しっかりとキャップをした。必要なスタンダードの注入ごとに１本のバイアルを用意した。

【0161】

サンプル及びスタンダードは、Ｔｒｉ－Ｐｌｕｓ ３００ヘッドスペースオートサンプラーを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｔｒａｃｅ １３００ ＧＣで、表２に概説している条件下においてＧＣ分析を行った。

【表2】

（表２：ＧＣ及びヘッドスペースのパラメータ）

【0162】

ＴＦＡ分析を、以下のようにＨＰＬＣで行った。

【0163】

ＴＦＡのスタンダードストック溶液は、３３５μＬのＴＦＡを１００ｍＬの０．００８Ｎ硫酸にピペットで移して５ｍｇ／ｍＬのストックを得ることにより調製した。このストック溶液を０．００８Ｎ硫酸で希釈し、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０２５ｍｇ／ｍＬ、０．０１０ｍｇ／ｍＬ及び０．００５ｍｇ／ｍＬのスタンダードを得た。

【0164】

このスタンダードを、表３に概説した条件下でＨＰＬＣにより分析した。これにより、化合物３及び４に含まれるＴＦＡの量を定量するためのスタンダード曲線が得られた。スタンダード曲線は、５００～１０，０００ｐｐｍの範囲をカバーしていた。

【0165】

化合物３及び４のサンプルは、材料が入手できなかったため、各化合物２０ｍｇを別個の２ｍＬメスフラスコに正確に量り取って調製した。次に、これらのフラスコに対して０．００８Ｎ硫酸で容量調整し、１０ｍｇ／ｍＬ溶液を得た。

【0166】

いずれのサンプルも１０ｍｇ／ｍＬではゲルを形成し、ＨＰＬＣカラムへの注入には適していなかった。これらのサンプルをさらに２ｍｇ／ｍＬに希釈した。これらのサンプルはまだ粘性があったが、ＨＰＬＣカラムへの注入に適していた。サンプルの希釈率を補うために注入量を増やした。

【0167】

ＴＦＡ分析のためのＨＰＬＣ条件を表３に概説する。

【表3】

表３：ＴＦＡ分析のためのＨＰＬＣ条件

【0168】

（ｂ）結果
化合物３及び４のガスクロマトグラフィー（ＧＣ）による残留溶媒の測定で得られた結果を表４に示す。

【表4】

注^１：ＩＣＨ限度値＝医薬品規制調和国際会議。
注^２：ＤＭＦはＧＣのブランク注入でキャリーオーバーとして検出され、最大の可能性のある結果として報告されているが、これはまだＩＣＨ限度値を下回っている。
注^３：ＤＩＰＥＡはＩＣＨガイドラインＱ３Ｃ（Ｒ５）の残留溶媒に分類されていないため、指定の限度値はない。
ｎｄ＝検出されない
（表４：残留溶媒の分析結果のまとめ）

【0169】

ＴＦＡが塩から解離したため、提案された方法ではＴＦＡ残留限度値を決定できなかった。ＴＦＡの解離により、サンプルからのＴＦＡ反応は、予想されるレベルである＜５０００ｐｐｍをはるかに超えていた。

【0170】

そのため、ＨＰＬＣ分析はサンプル中の残留ＴＦＡの測定には適さないと判断した。

【0171】

（ｃ）結論
化合物３及び化合物４から検出された残留溶媒は、それぞれ医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）の限度値内であったことから、化合物３及び化合物４はいずれもヒトへの投与に適している。

【0172】

（実験２：化合物３及び４の対イオンの化学量論の決定）
化合物３及び４のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の化学量論を、ＨＰＬＣ分析によって決定した。

【0173】

（ａ）手順
化合物３と４は、ともにペンタＴＦＡ塩とみなされる。そのため、化合物中のＴＦＡの理論上の割合を以下のように計算した。
・ＴＦＡの分子量＝１１４．０２ｇ／ｍｏｌ
・ペンタＴＦＡ塩の分子量＝５７０．１ｇ／ｍｏｌ
・化合物３（ペンタ塩）の分子量＝３７３９．６ｇ／ｍｏｌ
・化合物４（ペンタ塩）の分子量＝３８１１．６ｇ／ｍｏｌ

【0174】

したがって、各化合物におけるＴＦＡの理論上の割合は、
・化合物３＝（５７０．１／３７３９．６）ｘ１００＝１５．２４％ＴＦＡ
・化合物４＝（５７０．１／３８１１．６）ｘ１００＝１４．９６％ＴＦＡ

【0175】

化学量論を決定するために、サンプルを１ｍｇ／ｍＬに調製し、目的の対イオン含有量（１５％）である０．１５ｍｇ／ｍＬのＴＦＡスタンダードに対して分析した。

【0176】

１００μＬのＴＦＡを１０ｍＬの０．００８Ｎ硫酸で希釈して１５ｍｇ／ｍＬのストックとし、これを希釈（０．００８Ｎ硫酸で１ｍＬ→１００ｍＬ）して約０．１５ｍｇ／ｍＬのスタンダード溶液を得ることにより、ＴＦＡスタンダード溶液を約０．１５ｍｇ／ｍＬに二連で調製した。

【0177】

化合物３及び４のサンプルは、各化合物を５ｍｇずつ秤量して５ｍＬメスフラスコに入れ、約１ｍｇ／ｍＬに調製した。フラスコに０．００８Ｎ硫酸を入れて容量を調整した。

【0178】

サンプル及びスタンダードを、表５に概説した条件を用いてＨＰＬＣで分析した。

【表5】

（表５：ＴＦＡ分析のためのＨＰＬＣ条件）

【0179】

スタンダードに対するサンプルの回収率は、使用した重量及び希釈を考慮して計算した。サンプルの回収率によって化学量論が決まり、結果は次のパターンに従うことになる。
・ペンタ塩＝１００％回収率
・テトラ塩＝８０％回収率
・トリス塩＝６０％回収率
・ビス塩＝４０％回収率
・モノ塩＝２０％回収率

【0180】

（ｂ）結果
標準回収率は１０７．０％であった。これは、標準的な調製手順に従ったためである。具体的には、純粋なＴＦＡはその揮発性のために取り扱いが困難であった。このため、純粋な揮発性物質の取り扱い及び計量に問題が生じた。

【0181】

化合物３の回収率は９１．８６％であった。

【0182】

化合物４の回収率は９９．０６％であった。

【0183】

これらの回収率は、対イオン測定に設定された通常の信頼限界の範囲内であった。

【0184】

この試験により、化合物３及び化合物４のペンタ化学量論が１０％の信頼限界内で確認された。

【0185】

（実験３：蛍光偏光（ＦＰ）による化合物３及び４の競合結合アッセイ）
ｃＭｅｔ結合性環状ペプチド（非標識）、ｃＭｅｔ－ＤＯＴＡ（化合物３）及びｃＭｅｔ－ＤＯＴＡＧＡ（化合物４）のｃＭｅｔ受容体への結合について、競合蛍光偏光（ＦＰ）アッセイにより、半最大阻害濃度（ＩＣ_５０）及び解離定数（Ｋ_ｄ）の値を求めた。

【0186】

蛍光偏光法の原理を簡単に説明すると、次のようになる。
単色光が水平偏光フィルターを通過し、サンプル中の蛍光分子を励起する。垂直偏光面に適切に配向した分子だけが光を吸収し、励起され、その後発光する。放射された光は、水平面と垂直面の両方で測定される。異方性値（Ａ）は、次の式で表される光強度の比率である。
[数１]
Ａ＝（水平偏光子での強度－垂直偏光子での強度）／（水平偏光子での強度＋２^＊垂直偏光子での強度）

【0187】

蛍光異方性の測定は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｍ５マルチモードプレートリーダーを用いて、９６ウェル平底プレートで行った。

【0188】

使用したアッセイ緩衝液は、ｐＨ７．４の、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０を加えたリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）であった。

【0189】

（ストックの準備）
蛍光プローブ（ｃＭｅｔ結合性環状ペプチドに蛍光標識（Ｃｙ５）を施したもの）をアッセイ緩衝液に溶解し、１ｍＭのストックを得た。１μＭの親ストックと５０ｎＭのワーキングストックも用意した。

【0190】

ｃＭｅｔ受容体（１００μｇ）をアッセイ緩衝液（１ｍＬ）に溶解し、７７５ｎＭの親ストックを得た。５００ｎＭ及び１６７ｎＭのワーキングストックも調製した。

【0191】

ペプチド（ｃＭｅｔ結合性環状ペプチド（非標識）、化合物３及び化合物４）をアッセイ緩衝液に溶解し、０．５ｍＭ又は１ｍＭの親ストックを得た。６７μＭのワーキングストックも調製した。

【0192】

（ペプチド競合アッセイ）
ペプチド（ｃＭｅｔ結合性環状ペプチド（非標識）、化合物３及び化合物４；６７μＭストックの３０μＬ／ウェル）の２倍希釈スクリーンを、最終濃度２０μＭ～２０ｎＭとなるようにプレートに添加した。ｃＭｅｔ受容体（１６７μＭストックの３０μＬ／ウェル）も、最終濃度５０ｎＭとなるように添加した。蛍光プローブ（５０ｎＭストックの４０μＬ／ウェル）を最終濃度２０ｎＭになるように添加した（総容量１００μＬ）。各ウェルを三連で繰り返した。１００μＬのアッセイ緩衝液（三連）を非蛍光ブランクとして使用した。スキャンする前に、プレートを３０℃で１０分間インキュベートした。プレートを室温（２５℃）でｅｘ／ｅｍ／カットオフフィルター（ＣＯＦ）６４０／６７５／６６５ｎｍで三連でスキャンした。

【0193】

ｃＭｅｔペプチド（非標識）、化合物３及び化合物４のそれぞれについて、競合ペプチド濃度に対して異方性をプロットした。

【0194】

ＩＣ_５０値は、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ ｖ４．０３を用いて以下の式でのデータフィッティングにより求めた。

【数2】

（式中、ｒは観測された異方性、ｒ_０は遊離プローブの異方性、ｒ_１は完全に結合したプローブの異方性、［ペプチド］は競合ペプチド濃度である。）

【0195】

Ｋ_ｄ値は、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ ｖ４．０３を用いて以下の式でのデータフィッティングにより求めた。

【数3】

（式中、ｒは観測された異方性、ｒ_０は遊離プローブの異方性、ｒ_１は完全に結合したプローブの異方性、［ペプチド］は競合ペプチド濃度、Ｋ_ｄＰはｃＭｅｔ受容体と蛍光プローブの解離定数、Ｋ_ｄはｃＭｅｔ受容体に結合する競合ペプチドの解離定数である。）

【0196】

ＩＣ_５０ 値とＫ_ｄ値の平均値を以下の表６に示す。

【表6】

（表６：ｃＭｅｔ結合性環状ペプチド（非標識）、化合物３及び化合物４の平均ＩＣ_５０ 値及びＫ_ｄ値）

【0197】

結果は、ｃＭｅｔ結合性環状ペプチド（非標識）、化合物３及び化合物４がｃＭｅｔ受容体に対して同等の親和性を有し、ＩＣ_５０及びＫ_ｄ値の変動が実験誤差の範囲内であることを示した。

【0198】

（実験４：化合物３及び化合物４の^１７７Ｌｕでの放射性標識）
化合物３及び４をルテチウム－１７７（^１７７Ｌｕ）で放射性標識することの実現可能性を検討した。

【0199】

（パイロット試験）
様々なペプチド（化合物３及び４）と^１７７Ｌｕの比率を試し、ＨＰＬＣ及びインスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）により対応する放射性標識の収率を評価した。

【0200】

放射性標識手順は、ｐＨ５．６の０．４Ｍ酢酸アンモニウム（試験１～８では緩衝液１）又はｐＨ４の０．４Ｍ酢酸アンモニウムと０．３２５Ｍゲンチシン酸（試験９～１２では緩衝液２）を用いて実行した。放射性標識試験には、比放射能が５００ＭＢｑ／ｎｍｏｌを超える［^１７７Ｌｕ］ＬｕＣｌ_３を使用した。規定量（表８のＶ_{１７７ＬＵ}）の［^１７７Ｌｕ］ＬｕＣｌ_３を、好適な緩衝液及び１ｎｍｏｌのペプチド（化合物３又は化合物４）と混合した。この反応混合液を、サーモミキサーシステムにおいて、８０℃で１０分、２０分又は３０分間のインキュベーション時間でインキュベートした。化合物３及び化合物４と^１７７Ｌｕとの様々な比率での放射性標識試験の概要を表７に示す。各試験の具体的な条件を表８に概説する。インキュベーション終了後、１μＬの混合液をＨＰＬＣシステムに注入し、表９に概説した条件を使用して分析した。

【表7】

（表７：化合物３及び４と^１７７Ｌｕとの様々な比率での放射性標識試験）

【表8】

Ｖ＝容積
ｍ＝分
（表８：表７に概説した各試験の実験条件）

【表9】

（表９：ＨＰＬＣの条件）

【0201】

放射性標識の収率及び放射化学的純度（ＲＣＰ）は、ＨＰＬＣ及びＩＴＬＣを用いて以下のように測定した。放射性標識の収率は、精製前の^１７７Ｌｕの取り込み率（すなわち、放射性標識の有効性）を規定するものである。

【0202】

（ＩＴＬＣによる放射性標識の収率）
ＩＴＬＣによる放射性標識の収率は、以下の式を使用して求めた。

【数4】

（式中、Ｒｆは保持係数であり、サンプルを塗布した原点から、サンプル中の成分が移動した距離と溶媒先端が移動した距離の比率として定義される。Ｒｆは、成分が塗布点又は原点に留まっている場合は０である。Ｒｆは、成分が溶媒先端とともに移動する場合は１である。

【0203】

（ＨＰＬＣによる放射性標識の収率と放射化学的純度）
ＨＰＬＣによる放射性標識の収率は、以下の式を使用して求めた。

【数5】

（式中、面積ピーク＃２は遊離^１７７Ｌｕであり、面積ピーク＃３は副生成物（又は副生成物のピークがない場合は^１７７Ｌｕで標識された化合物３若しくは４）であり、面積ピーク＃４は^１７７Ｌｕで標識された化合物３又は４（副生成物のピークがある場合）である。）

【0204】

放射化学的純度は、以下の式を使用して求めた。

【数6】

（式中、面積ピーク＃２は遊離^１７７Ｌｕであり、面積ピーク＃３は^１７７Ｌｕで標識された化合物３又は４である。）

【0205】

放射性標識試験の結果を表１０に示す。

【表10】

（表１０：試験１～１２の放射性標識の収率、放射化学的純度及び比放射能の結果。）

【0206】

化合物３及び４はいずれも、８０℃において１０分間で、３０及び６０ＭＢｑ／ｎｍｏｌの^１７７Ｌｕで正常に標識された。

【0207】

インキュベーション時間を２０分又は３０分と長くすると、放射化学的純度が低下することがわかった。緩衝液１及び緩衝液２は、いずれも化合物３及び４の完全な放射性標識を可能にした。

【0208】

最初の結果は、^１７７Ｌｕとの１０分間のインキュベーション後、化合物３及び４で９９％を超える放射性核種の取り込み（放射性標識収率）及び９９％を超える放射化学的純度を示した。

【0209】

（最適化試験）
さらに、比放射能を少なくとも１２０ＭＢｑ／ｎｍｏｌまで上げるための試験を行った。

【0210】

放射性標識手順は、ｐＨ４の０．４Ｍ酢酸アンモニウムと０．３２５Ｍゲンチシン酸（緩衝液２）を用いて実行した。放射性標識試験には、比放射能が５００ＭＢｑ／ｎｍｏｌを超える^１７７ＬｕＣｌ_３を使用した。規定量（表１２のＶ_{１７７ＬＵ}）の^１７７ＬｕＣｌ_３を、緩衝液２及び１ｎｍｏｌのペプチド（化合物３又は化合物４）と混合した。この反応混合液を、サーモミキサーシステムにおいて、８０℃で１０分間インキュベートした。化合物３及び４と^１７７Ｌｕとの様々な比率での放射性標識試験の概要を表１１に示す。各試験の具体的な条件を表１２に概説する。インキュベーション終了後、１μＬの混合液をＨＰＬＣシステムに注入し、表９に概説した条件を使用して分析した。

【表11】

（表１１：化合物３及び４と^１７７Ｌｕとの様々な比率でのさらなる放射性標識試験）

【表12】

Ｖ＝容積
ｍ＝分
（表１２：表１１に概説した各試験の実験条件）

【0211】

放射性標識された化合物３及び４（化合物３－^１７７Ｌｕ放射性コンジュゲート及び化合物４－^１７７Ｌｕ放射性コンジュゲート）の安定性についても、最初の放射性標識から２４時間後にＨＰＬＣで分析した。

【0212】

放射性標識の収率及び放射化学的純度（ＲＣＰ）は、上記定義の通りＨＰＬＣ及びＩＴＬＣを用いて測定した。

【0213】

さらなる放射性標識試験の結果を表１３に示す。

【表13】

（表１３：試験１３～２４の放射性標識の収率、放射化学的純度及び比放射能の結果。）

【0214】

化合物３及び４はいずれも、ｐＨ４の０．４Ｍ酢酸アンモニウムと０．３２５Ｍゲンチシン酸を緩衝剤として使用して、８０℃において１０分間で、１２０及び１５０ＭＢｑ／ｎｍｏｌの^１７７Ｌｕで正常に標識された。

【0215】

放射化学的収率及び放射化学的純度は、９５％を超えていた。

【0216】

溶液中で２４時間経過した後のＨＰＬＣの結果では、放射化学的純度は依然として９０％を超えていた。２４時間後に観察された不純物は、放射線分解によるものと思われる。

【0217】

（臨床試験）
臨床環境での放射性標識実験も行った。この実験では、^１７７Ｌｕの初期放射能は７．６ＧＢｑであった。

【0218】

放射性標識実験は以下のように行った。化合物３（３２ｎｍｏｌ）を超純水（２μｇ／μＬ）及びｐＨ４．８の０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液１．５ｍＬ（８ｍｇ／ｍＬ）に溶解した。ゲンチシン酸を加え、混合液を^１７７Ｌｕ Ｖバイアルに移した。バイアルを９５℃で２５分間加熱した。混合液を注射用水で溶解し、その後無菌濾過を行ったところ、^１７７Ｌｕにコンジュゲートした６．９ＧＢｑの化合物３が得られた。２００ＭＢｑ／ｎｍｏｌを超える比放射能が得られた（ｎ＝３）。放射化学的収率と放射化学的純度はともに９９％を超えていた。

【0219】

注入溶液の安定性も非常に良好であり、室温で２４時間後に放射化学的純度が９８％を超え、２種類の未知の不純物が２％未満であることが確認された。

【0220】

（結論）
得られた放射化学的純度と比放射能は、このアプローチを使用した標的放射線治療において、腫瘍（すなわち、ｃＭｅｔ過剰発現部位）に適切な量の放射能をもたらすことができることを意味する。適切な量の放射能は、２～８ＧＢｑ、典型的には７．４ＧＢｑとされている。さらに、上述の手順を使用することは、大量の「コールド」ペプチド（すなわち、非標識ペプチド）（ｃＭｅｔ受容体を飽和させ、放射能が腫瘍の部位に送達されるのを妨げることになる）を必要としないことを意味する。

【0221】

（実験５：化合物３及び化合物４の^６８Ｇａでの放射性標識）
（パイロット試験）
化合物３及び４について、^６８Ｇａでの放射性標識の実現可能性を評価するため、パイロット試験を行った。放射性標識の収率と放射化学的純度（ＲＣＰ）はＨＰＬＣで測定した。

【0222】

放射性標識手順は、ｐＨ４．５の１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて実行した。放射性標識試験には、カチオン性予備精製を施した［^６８Ｇａ］ＧａＣｌ_３溶出液を使用した。規定量（表１５のＶ_６８Ｇａ）の［^６８Ｇａ］ＧａＣｌ_３を、緩衝液、水、エタノール及び４～１６ｎｍｏｌのペプチド（化合物３又は化合物４）と混合した。この反応混合液を、サーモミキサーシステムにおいて、９５℃で５～１０分間のインキュベーション時間でインキュベートした。化合物３及び４と^６８Ｇａとの様々な比率での放射性標識試験の概要を表１４に示す。各試験の具体的な条件を表１５に概説する。インキュベーション終了後、２．５μＬの混合液をＨＰＬＣシステムに注入し、表１６に概説した条件を使用して分析した。

【表14】

（表１４：化合物３及び４と^６８Ｇａとの様々な比率での放射性標識試験）

【表15】

Ｖ＝容積
ｍ＝分
（表１５：表１４に概説した各試験の実験条件）

【表16】

（表１６：ＨＰＬＣの条件）

【0223】

放射性標識の収率及び放射化学的純度（ＲＣＰ）は、ＨＰＬＣを用いて測定した。放射性標識の収率は、精製前の^６８Ｇａの取り込み率（すなわち、放射性標識の有効性）を規定するものである。

【0224】

（ＨＰＬＣによる放射性標識の収率及び放射化学的純度）
ＨＰＬＣによる放射性標識の収率は、以下の式を使用して求めた。

【数7】

（式中、面積ピーク＃２は遊離^６８Ｇａであり、面積ピーク＃３は副生成物（又は副生成物のピークがない場合は^６８Ｇａで標識された化合物３若しくは４）であり、面積ピーク＃４は^６８Ｇａで標識された化合物３又は４（副生成物のピークがある場合）である。）

【0225】

放射化学的純度は、以下の式を使用して求めた。

【数8】

（式中、面積ピーク＃２は遊離^６８Ｇａであり、面積ピーク＃３は^６８Ｇａで標識された化合物３又は４である。）

【0226】

放射性標識試験の結果を表１７に示す。

【表17】

（表１７：試験１～３の放射性標識の収率、放射化学的純度及び比放射能の結果。）

【0227】

化合物３及び４はいずれも、上述の条件を使用して^６８Ｇａで正常に標識された。しかしながら、精製後の比放射能は１２ＭＢｑ／ｎｍｏｌにしか達しなかった。

【0228】

パイロット試験では、化合物３及び４を^６８Ｇａとインキュベートしたところ、いずれも放射化学的純度が約６０％となった。放射線分解は観察されなかった。

【0229】

（標識時間を延長したパイロット試験の繰り返し）
様々なペプチド（化合物３及び４）と^６８Ｇａの比率を試し、ＨＰＬＣ及びインスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）により対応する放射性標識の収率を評価した。

【0230】

放射性標識手順は、ｐＨ４．５の１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて実行した。放射性標識試験には、^６８ＧａＣｌ_３分画溶出を使用した。マイクロチューブ内で、表１９の規定量Ｖ_６８Ｇａの^６８ＧａＣｌ_３（マイクロチューブ内で測定した放射能は約７．３ＭＢｑ）を、（０．１１×Ｖ_６８Ｇａ）の緩衝液及び０．２４～１．３６ｎｍｏｌのペプチド（化合物３又は化合物４）と混合した。この反応混合液を、サーモミキサーシステムにおいて、９５℃で１０分間インキュベートした。化合物３及び４と^６８Ｇａとの様々な比率での放射性標識試験の概要を表１８に示す。各試験の具体的な条件を表１９に概説する。

【0231】

インキュベーションの終わりに、マイクロチューブを遠心分離し、２．５μＬの混合液をＨＰＬＣシステムに注入し、表１６に概説した条件を使用して分析した。

【0232】

ＩＴＬＣについては、以下の手順に従った。
・混合液１μＬをＩＴＬＣ－ＳＧ紙にスポットし、移動相としてのクエン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ５）で溶出し（ＩＴＬＣ １）、
・混合液１μＬをＩＴＬＣ－ＳＧ紙にスポットし、酢酸アンモニウム（５Ｍ）／メタノール１／１の溶液で溶出した（ＩＴＬＣ ２）。

【表18】

（表１８：化合物３及び４と^６８Ｇａとの様々な比率での放射性標識試験）

【表19】

Ｖ＝容積
ｍ＝分
（表１９：表１８に概説した各試験の実験条件）

【0233】

放射性標識の収率及び放射化学的純度（ＲＣＰ）は、上述のようにＨＰＬＣを用いて測定した。ＩＴＬＣによる放射性標識の収率は、以下ように求めた。

【0234】

（ＩＴＬＣによる放射性標識の収率）
ＩＴＬＣによる放射性標識の収率は、以下の式を使用して求めた。

【数9】

（式中、Ｒｆは保持係数であり、サンプルを塗布した原点から、サンプル中の成分が移動した距離と溶媒先端が移動した距離の比率として定義される。Ｒｆは、成分が塗布点又は原点に留まっている場合は０である。Ｒｆは、成分が溶媒先端とともに移動する場合は１である。

【0235】

放射性標識試験の結果を表２０に示す。

【表20】

（表２０：試験４～１１の放射性標識の収率、放射化学的純度及び比放射能の結果。）

【0236】

化合物３と４はいずれも、上記の条件を使用して^６８Ｇａで正常に標識された。しかしながら、放射性標識された化合物３及び４（化合物３－^６８Ｇａ放射性コンジュゲート及び化合物４－^６８Ｇａ放射性コンジュゲート）は、人体への静脈内投与に適した純度ではなかった。放射線分解を防ぐためにエタノールを添加してもよいことがわかった。

【0237】

２６ＭＢｑ／ｎｍｏｌ（試験８）の比放射能が達成され、放射化学的純度は約８３％であった。

【0238】

（最適化試験）
パイロット試験の結果に基づいて、化合物３及び４への^６８Ｇａの組み込みを最適化するために、さらなる試験を行った。最適化試験には化合物３を使用した。

【0239】

放射性標識手順は、１ＭでｐＨ４．５の酢酸ナトリウム緩衝液（緩衝液１）又は０．５ＭでｐＨ４．５の酢酸ナトリウム緩衝液（緩衝液２）を用いて実行した。放射性標識試験には、^６８ＧａＣｌ_３分画溶出を使用した。

【0240】

（９５℃での加熱）
マイクロチューブ内で、表２２の規定量Ｖ_６８Ｇａの^６８ＧａＣｌ_３（マイクロチューブで測定した放射能は約７．３ＭＢｑ）を、（０．１１×Ｖ_６８Ｇａ）の好適な緩衝液、０．２４ｎｍｏｌのペプチド（化合物３又は化合物４）及び１１．３μＬのエタノールと混合した。この反応混合液を、サーモミキサーシステムにおいて、９５℃で１０分又は１５分間のインキュベーション時間でインキュベートした。

【0241】

（１１０℃で加熱）
密閉ガラスＶバイアルに、表２２の規定量Ｖ_６８Ｇａの^６８ＧａＣｌ_３（マイクロチューブで測定した放射能は約２９．２ＭＢｑ）を、（０．１１×Ｖ_６８Ｇａ）の好適な緩衝液、０．９６ｎｍｏｌのペプチド（化合物３又は化合物４）及び４５．４μＬのエタノールと混合した。この反応混合液を、加熱ブロックにおいて、１１０℃で１０分間のインキュベーション時間でインキュベーションを行った。

【0242】

インキュベーションの終わりに、マイクロチューブを遠心分離し、２．５～５μＬの混合液をＨＰＬＣシステムに注入し、表１６に概説した条件を使用して分析した。

【0243】

化合物３及び４と^６８Ｇａとの様々な比率での放射性標識試験の概要を表２１に示す。各試験の具体的な条件を表２２に概説する。

【0244】

ＩＴＬＣについては、以下の手順に従った。
・混合液１μＬをＩＴＬＣ－ＳＧ紙にスポットし、移動相としてのクエン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ５）で溶出し（ＩＴＬＣ １）、
・混合液１μＬをＩＴＬＣ－ＳＧ紙にスポットし、酢酸アンモニウム（５Ｍ）／メタノール１／１の溶液で溶出した（ＩＴＬＣ ２）。

【表21】

（表２１：化合物３及び４と^６８Ｇａとの様々な比率での放射性標識試験）

【表22】

Ｖ＝容積
ｍ＝分
ＥｔＯＨ＝エタノール
（表２２：表２１に概説した各試験の実験条件）

【0245】

放射性標識の収率及び放射化学的純度（ＲＣＰ）は、上記定義の通りＨＰＬＣ及びＩＴＬＣを用いて測定した。

【0246】

最適化試験の結果を表２３に示す。

【表23】

（表２３：試験１２～２３の放射性標識の収率、放射化学的純度及び比放射能の結果。）

【0247】

最適化試験から、以下の結論が導き出された。
・インキュベーション温度を１１０℃に上げると、放射性標識の収率が低下した（試験１６～１７（１１０℃）と比較した試験１２～１５（９５℃）を参照）。
・インキュベーション時間を長くしても、放射性標識の収率は有意に増加しなかった（試験１３及び１５（１５分）と比較した試験１２及び１４（１０分）を参照）。
・エタノールを添加しても、放射線分解を有意に防ぐことはできなかった（エタノールを添加してもしなくても、放射線分解が５％を超えることはないという結果が得られた）。
・エタノールを添加すると、^６８Ｇａコロイドの形成が促進されるようであった。
・許容できる比放射能に到達するためには、ｐＨが３．８未満であることが必要である。
・好適な放射化学的純度を得るためには、ＨＰＬＣ注入の前に精製工程（ＳＥＰ－ＰＡＫ Ｃ１８カートリッジを使用するのが好ましい）が必要であった。

【0248】

最適化試験中、最大２５ＭＢｑ／ｎｍｏｌ（試験１８）の比放射能が達成され、放射化学的純度は約８３％であった。

【0249】

（結論）
得られた放射化学的純度と比放射能は、このアプローチを使用したイメージングにおいて、腫瘍（すなわち、ｃＭｅｔの過剰発現部位）に適切な量の放射能をもたらすことができることを意味する。開発段階の実験薬では、適切な量の放射能は約１２．５～７５ＭＢｑとされている。

【0250】

化合物３を用いて、以下のさらなる実験を行った。
・Ｉｎ ｖｉｖｏ線量測定試験（実験６）。

【0251】

（実験６：化合物３のｉｎ ｖｉｖｏ線量測定試験）
化合物３を用いて線量測定試験を行い、本明細書に記載の化合物のイメージング及び放射線治療における使用の適合性を調べた。

【0252】

（ａ）患者の背景
試験に参加した２人のヒト患者の詳細を表２４に示す。

【表24】

（表２４：Ｉｎ ｖｉｖｏ試験の患者の詳細。）

【0253】

（ｂ）手順
化合物３を^６８Ｇａで放射性標識し、イメージング剤（^６８Ｇａ－化合物３）を得た。放射性標識手順は以下の通りである。［^６８Ｇａ］ＧａＣｌ_３を、緩衝液（ｐＨ４．５の１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液）及び化合物３と混合した。この反応混合液を９５℃で１０分間インキュベートした。２５ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能が達成され、放射化学的純度は精製なしで約９８％であった。

【0254】

化合物３を^１７７Ｌｕで放射性標識し、治療剤（^１７７Ｌｕ－化合物３）を得た。使用した放射性標識手順は以下の通りである。化合物３を超純水（２μｇ／μｌ）及びｐＨ４．８の０．４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液１．５ｍＬ（８ｍｇ／ｍＬ）に溶解した。ゲンチシン酸を加え、混合液を^１７７Ｌｕ Ｖバイアルに移した。バイアルを９５℃で２５分間加熱した。混合液を注射用水で溶解し、その後無菌濾過を行ったところ、６．９ＧＢｑの^１７７Ｌｕ－化合物３が得られた。２００ＭＢｑ／ｎｍｏｌを超える比放射能が得られた（ｎ＝３）。

【0255】

患者１には、治療剤（^１７７Ｌｕ－化合物３）を注射する７日前にイメージング剤（^６８Ｇａ－化合物３）を投与した。患者１について、^６８Ｇａの放射能は２４０ＭＢｑであり、^１７７Ｌｕの放射能は８３５ＭＢｑであった。治療前陽電子放射断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）イメージングは、イメージング剤を注射してから１時間後と３時間後に実行した。治療剤投与の１日前に、患者１に^１８Ｆ－^１８ＦＤＧを投与した。^１８Ｆの放射能は２２７ＭＢｑであった。^１８Ｆ－ＦＤＧを注射してから１時間後にＰＥＴ／ＣＴイメージングを実施した。その後、患者１に治療剤を投与した。治療前単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングは、治療剤を注射してから１．５時間後、１７時間後、４１時間後、６５時間後及び１４１時間後に実施した。

【0256】

患者２には、治療剤（^１７７Ｌｕ－化合物３）を注射する４日前に^１８Ｆ－ＦＤＧを投与した。患者２について、^１８Ｆの放射能は２０８ＭＢｑであり、^１７７Ｌｕの放射能は９５９ＭＢｑであった。^１８Ｆ－ＦＤＧを注射してから１時間後にＰＥＴ／ＣＴイメージングを実施した。その後、患者２に治療剤を投与した。治療前ＳＰＥＣＴイメージングは、治療剤を注射してから４．５時間後、２０時間後、４５時間後、６７時間後及び１４１時間後に実施した。

【0257】

比較のために、３人目の前立腺がん患者には、現在核医学においてイメージング及び治療の最も成功した標的の１つと考えられている前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を投与した。使用した手順は以下の通りである。患者に治療剤（^１７７Ｌｕで放射性標識されたＰＳＭＡ）を注射する１９日前に、患者にイメージング剤（^１８Ｆで標識されたＰＳＭＡ）を投与した。^１８Ｆの放射能は２５０ＭＢｑであり、^１７７Ｌｕの放射能は９１８５ＭＢｑであった。^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ治療剤の放射能は、線量測定試験で使用した^１７７Ｌｕ－化合物３治療剤の放射能よりも約１０倍高かった。これは、ＰＳＭＡ剤についてはすでに線量測定試験が終了しており、高被ばく量でもｉｎ ｖｉｖｏで安全に使用できると考えられたためである。ＰＥＴ／ＣＴイメージングは、^１８Ｆ－ＰＳＭＡを注射してから１時間後に実施した。その後、患者に^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ治療剤を投与した。治療前ＳＰＥＣＴイメージングは、治療剤を注射してから１９時間後、４３時間後及び６５時間後に実施した。

【0258】

（ｃ）イメージング
ＰＥＴ／ＣＴイメージングはＳｉｅｍｅｎｓ Ｂｉｏｇｒａｐｈ ｍＣＴ Ｆｌｏｗ ＰＥＴ／ＣＴを用いて実行した。ＳＰＥＣＴイメージングはＳｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｔｅｖｏ ＳＰＥＣＴ／ＣＴを用いて実行した。

【0259】

患者１の治療前ＰＥＴ／ＣＴイメージング結果を図５に示す。この画像では、注射後（ｐ．ｉ．）１時間及び３時間の両方で、腫瘍に^６８Ｇａ－化合物３（画像上では^６８Ｇａ－ｃＭＥＴと表記）が蓄積していることが示されている。^１８Ｆ－ＦＤＧも注射後１時間で腫瘍に蓄積していることが示されている。

【0260】

患者１の治療前ＳＰＥＣＴイメージングの結果を図６に示す。この画像では、注射後（ｐ．ｉ．）１４１時間まで、腫瘍に^１７７Ｌｕ－化合物３が蓄積し、保持されていることが示されている。

【0261】

患者２の治療前ＰＥＴ／ＣＴイメージングの結果を図７に示す。この画像では、注射後１時間で腫瘍に^１８Ｆ－ＦＤＧが蓄積していることが示されている。

【0262】

患者２の治療前ＳＰＥＣＴイメージングの結果を図８に示す。この画像では、注射後（ｐ．ｉ．）１４１時間まで、腫瘍に^１７７Ｌｕ－化合物３が蓄積し、保持されていることが示されている。

【0263】

（ｄ）結果
患者１における治療剤（^１７７Ｌｕ－化合物３）の線量測定試験の結果を表２５に示す。患者２における治療剤（^１７７Ｌｕ－化合物３）の線量測定試験の結果を表２６に示す。比較のため、^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ治療剤の結果を表２７に示す。

【表25】

Ｖｏｌ＝容積
ｈ＝時間
（表２５：患者１における^１７７Ｌｕ－化合物３の線量測定結果（^１７７Ｌｕ放射能は８３５ＭＢｑであった）。

【表26】

ＶＯＩ＝対象の容積
Ｖｏｌ＝容積
ｈ＝時間
（表２６：患者２における^１７７Ｌｕ－化合物３の線量測定結果（^１７７Ｌｕ放射能は９５９ＭＢｑであった）。

【表27】

ＶＯＩ＝対象の容積
ｈ＝時間
（表２７：^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ治療剤の線量測定結果（^１７７Ｌｕ放射能は９１８５ＭＢｑであった）。

【0264】

結果は、主要な組織及び臓器における治療剤の蓄積線量を示している。

【0265】

^１７７Ｌｕ－化合物３を用いて腫瘍で得られた平均線量は、^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡを用いて得られた線量よりも低かったが、これは化合物３を用いて患者に提供された^１７７Ｌｕの放射能が低かったため、予想されたことである。

【0266】

この結果を評価するために、承認された放射線治療剤の線量測定値に関する文献調査を行った。^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥは、全身放射線治療用として承認された化合物である。Ｂｒｏｇｓｉｔｔｅｒら（Ｎｕｋｌｅａｒｍｅｄｉｚｉｎ， ２０１７， Ｖｏｌｕｍｅ ５６（１）， ｐａｇｅｓ １－８）は、^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥが５．５３Ｇｙ／ＧＢｑ（中央値２．７０Ｇｙ／ＧＢｑ、範囲０．４４－１５．３Ｇｙ／ＧＢｑ）の腫瘍線量をもたらしたと報告している。臓器線量は、腎臓（２．０３±０．９６Ｇｙ／ＧＢｑ）、肝臓（１．６７±１．７３Ｇｙ／ＧＢｑ）、脾臓（４．５０±３．６９Ｇｙ／ＧＢｑ）及び全身（０．１５±０．０８Ｇｙ／ＧＢｑ）と報告されている。腫瘍と腎臓の線量比は２．４±５．６と報告されている。Ｎｉｃｏｌａｓら（Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ， ２０１７， Ｖｏｌｕｍｅ ５８， ｐａｇｅ １４３５， ｄｏｉ： １０．２９６７／ｊｎｕｍｅｄ．１１７．１９１６８４）は、^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥが４ｃｍの腫瘍に対して０．３３３Ｇｙ／ＧＢｑの腫瘍線量をもたらし、腫瘍滞留時間が６．４時間（範囲５．４～７．３時間）であったと報告している。

【0267】

さらに、Ｏｋａｍｏｔｏら（Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ， ２０１６， Ｖｏｌｕｍｅ １１６， ｄｏｉ： １０．２９６７／ｊｎｕｍｅｄ．１１６．１７８４８３）は、^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ－Ｉ＆Ｔが腫瘍病変に３．２±２．６Ｇｙ／ＧＢｑ（範囲０．２２～１２Ｇｙ／ＧＢｑ）の平均吸収線量／サイクルを送達したことを報告している。

【0268】

文献調査で見つかった典型的な限度は、腎臓に対して２３Ｇｙ、又は骨髄に対して２Ｇｙであった。

【0269】

（ｅ）結論
^１７７Ｌｕ－化合物３によって送達される腫瘍線量は、承認された放射線治療剤である^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥ及び後期臨床開発中の放射線治療剤である^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡの範囲内である。腫瘍の半減期も^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡと同様の時間枠であり、^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥよりも長いことが分かった。さらに、^１７７Ｌｕ－化合物３を使用した場合の腎臓、肝臓及び脾臓への臓器線量は、いずれも^１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＴＡＴＥで報告された結果を下回っていた。

【0270】

したがって、今回の線量測定試験では、腫瘍に送達された線量が、既に承認されている、又は臨床開発の後期段階にある放射線治療剤で観察される範囲内であることから、本明細書に記載の化合物が放射線治療での使用に適していることが示された。

【0271】

本発明の記載の実施形態に対する様々な変更及び変形は、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明を特定の実施形態に関連して説明してきたが、特許請求される本発明がそのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者には明らかである、本発明を実施するための記述の態様の様々な変更が本発明に包含されていることが意図されている。

【0272】

（略号）
従来の１文字又は３文字のアミノ酸略号を使用している。

ＡＡＺＴＡ：１，４－ビス（カルボキシメチル）－６－［ビス（カルボキシメチル）］アミノ－６－メチルペルヒドロ－１，４－ジアゼピン
Ａｃｍ：アセトアミドメチル
ＡＣＮ（又はＭｅＣＮ）：アセトニトリル
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
Ｂｚ：ベンゾイル
サイクラム：１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン
サイクレン：１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン
ＣＲＣ：大腸がん
ＣＴ：コンピュータ断層撮影
ＤＡＴＡ：（６－ペンタン酸）－６－（アミノ）メチル－１，４－ジアゼピントリアセテート）
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄｅ：１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）エチル
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：ジメチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＯＴＡ：１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸
ＤＯＴＡＧＡ：２，２’，２’’－（１０－（１，４－ジカルボキシ－エチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸
ＥＳＩ＋／ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化質量分析
ＥｔＯＨ：エタノール
ＦＤＧ：フルオロデオキシグルコース
ＦＰ：蛍光偏光
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメトキシカルボニル
ＧＣ：ガスクロマトグラフィー
ＧＢｑ：ギガベクレル
ＧＭＰ：適正製造基準
ＨＢＥＤ－ＣＣ：Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシ－５－（エチレン－β－カルボキシ）ベンジル）エチレンジアミンＮ，Ｎ’－二酢酸
ＨＢＴＵ：Ｏ－ベンゾトリアゾール－１－イル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＧＦ：肝細胞増殖因子
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＰｙＵ：Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチレンウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＣ_５０：半最大阻害濃度
ＩＴＬＣ：インスタント薄層クロマトグラフィー
Ｋ_ｄ：解離定数
ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ：マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析
ＭＢｑ：メガベクレル
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ＮＣＳ：Ｎ－クロロ－スクシンイミド
ＮＨＳ：Ｎ－ヒドロキシ－スクシンイミド
ＮＭＭ：Ｎ－メチルモルホリン
ＮＭＰ：１－メチル－２－ピロリジノン
ＮＯＤＡＧＡ：１，４，７－トリアザシクロノナン、１－グルタル酸－４，７－酢酸
ＮＯＰＯ：１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４－ビス［メチレン（ヒドロキシメチル）ホスフィン酸］－７－［メチレン（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸
ＮＯＴＡ：１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸
Ｎｐｙｓ：３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール
ＰＥＴ：陽電子放射断層撮影
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＰＳＭＡ：前立腺特異的膜抗原
ＰｙＢＯＰ：ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＲＣＰ：放射化学的純度
ＳＰＥＣＴ：単一光子放射型コンピュータ断層撮影
ｔＢｕ：ｔ－ブチル
ＴＡＣＮ：１，４，７－トリアザシクロノナン
ＴＢＭＥ：ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＰ：トリス（ヒドロキシピリジノン）
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＴＲＡＰ：１，４，７－トリアザシクロノナンホスフィン酸
Ｔｒｔ：トリチル

【配列表フリーテキスト】

【0273】

配列－１
Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６

Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕである。
（１７ｍｅｒのｃＭＥＴ結合ペプチド。）

配列－２
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６

Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕである。
（１８ｍｅｒのｃＭＥＴ結合ペプチド。）

配列－３
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ^ａ－Ｘａａ^１－Ｃｙｓ^ｃ－Ｘａａ^２－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｘａａ^３－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ^ｄ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ^ｂ－Ｔｙｒ－Ｘａａ^４－Ｘａａ^５－Ｘａａ^６－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ

Ｘａａ^１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘａａ^２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘａａ^３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘａａ^４は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘａａ^５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘａａ^６はＡｓｐ又はＧｌｕである。
（２２ｍｅｒのｃＭＥＴ結合ペプチド。）

配列－４
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
（ｃＭＥＴ結合ペプチドの一部であるテトラペプチド配列。）

配列－５
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
（ｃＭＥＴ結合ペプチドの一部であるテトラペプチド配列。）

配列－６
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ
（ｃＭＥＴ結合ペプチドの一部である５ペプチド配列。）

配列－７
Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ
（２６ｍｅｒのｃＭＥＴ結合ペプチド。）

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

2022537946000001.app

【国際調査報告】