(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-08-31
(54)【発明の名称】ポリペプチド
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220824BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20220824BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220824BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20220824BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220824BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20220824BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220824BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220824BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/24 ZNA
A61K39/395 N
A61P1/00
A61P29/00
A61P37/06
A61P43/00 121
A61K45/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021576277
(86)(22)【出願日】2020-06-19
(85)【翻訳文提出日】2022-02-21
(86)【国際出願番号】 GB2020051495
(87)【国際公開番号】W WO2020254826
(87)【国際公開日】2020-12-24
(31)【優先権主張番号】19181870.7
(32)【優先日】2019-06-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．ＢＲＩＪ
３．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521555823
【氏名又は名称】ソリッソ ファーマシューティカルズ，インク．
(74)【代理人】
【識別番号】100082072
【弁理士】
【氏名又は名称】清原 義博
(72)【発明者】
【氏名】クロウ，スコット
(72)【発明者】
【氏名】キュービット，マリオン
(72)【発明者】
【氏名】カールトン，ティム
(72)【発明者】
【氏名】マッジョーレ，ルアナ
(72)【発明者】
【氏名】ドゥアルテ，ルルデス
(72)【発明者】
【氏名】ロバーツ，ケビン
(72)【発明者】
【氏名】ウェスト，マイク
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZA66
4C084ZB08
4C084ZB11
4C084ZC75
4C085AA14
4C085BB17
4C085CC23
4H045AA11
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
【解決手段】とりわけ、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドが提供され、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、前記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
【請求項2】
ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、前記配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項3】
ＣＤＲ２は、配列番号２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、前記配列からなる、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項4】
ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、前記配列からなる、請求項１－３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項5】
ＣＤＲ１は配列番号１を含み、または、配列番号１からなり、ＣＤＲ２は配列番号２を含み、または、配列番号２からなり、およびＣＤＲ３は配列番号３を含み、または、配列番号３からなる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項6】
配列番号８と、５０％以上の配列同一性を共有し、例えば、５５％以上の配列同一性を共有し、例えば、６０％以上の配列同一性を共有し、例えば、６５％以上の配列同一性を共有し、例えば、７０％以上の配列同一性を共有し、例えば、７５％以上の配列同一性を共有し、例えば、８０％以上の配列同一性を共有し、例えば、８５％以上の配列同一性を共有し、例えば、９０％以上の配列同一性を共有し、例えば、９５％以上の配列同一性を共有し、例えば、９６％以上の配列同一性を共有し、例えば、９７％以上の配列同一性を共有し、例えば、９８％以上の配列同一性を共有し、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、前記配列からなる、請求項１－５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項7】
配列番号８を含む、請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項8】
配列番号８からなる、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項9】
前記ポリペプチドは抗体または抗体フラグメントである、請求項１－８のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項10】
前記ポリペプチドは免疫グロブリン鎖可変ドメインからなる、請求項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項11】
前記免疫グロブリン鎖可変ドメインはＶＨＨ、ＶＨ、またはＶＬである、請求項１－１０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項12】
前記免疫グロブリン鎖可変ドメインはＶＨＨまたはＶＨである、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項13】
前記免疫グロブリン鎖可変ドメインはＶＨＨである、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物であって、前記異なるポリペプチドはＴＮＦ－αに結合する、構築物。
【請求項15】
前記異なるポリペプチドは、配列番号６７と少なくとも８０％の配列同一性を共有する配列を含む、請求項１４に記載の構築物。
【請求項16】
前記ポリペプチドは、配列番号７４を含み、または、配列番号７４からなる、少なくとも１つのプロテアーゼ不安定リンカーによって接続される、請求項１４または１５に記載の構築物。
【請求項17】
前記構築物は配列番号４６を含み、または、配列番号４６からなる、請求項１６に記載の構築物。
【請求項18】
５ｎＭ以下、例えば、４ｎＭ以下、例えば、３ｎＭ以下、例えば、２ｎＭ以下、例えば、１．７ｎＭ以下、例えば、１．５ｎＭ以下、例えば、１．４ｎＭ以下、例えば、１．３ｎＭ以下、例えば、１．２ｎＭ以下、例えば、１．１ｎＭ以下、例えば、１．０ｎＭ以下、例えば、０．９ｎＭ以下、例えば、０．８ｎＭ以下、例えば、０．７５ｎＭ以下、例えば、０．７０ｎＭ以下、例えば、０．６５ｎＭ以下、例えば、０．６０ｎＭ以下、例えば、０．５５ｎＭ以下、例えば、０．５０ｎＭ以下、例えば、０．４５ｎＭ以下、例えば、０．４０ｎＭ以下、例えば、０．３５ｎＭ以下、例えば、０．３０ｎＭ以下、例えば、０．２５ｎＭ以下、例えば、０．２０ｎＭ以下のＥＣ５０で、評価方法ＡにおいてヒトＩＬ－２３を中和する、請求項１－１７のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
【請求項19】
前記ポリペプチドまたは構築物は、１０－６Ｍ以下、例えば、１０－７Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－９Ｍ以下、例えば、１０－１０Ｍ以下、例えば、１０－１１Ｍ以下、例えば、１０－１２Ｍ以下、例えば、１０－１３Ｍ以下のＫｄで、ＩＬ－２３に結合する、請求項１－１８のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
【請求項20】
前記ポリペプチドは、トリプシンとキモトリプシンに対して実質的に耐性を有する、請求項１－１９のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
【請求項21】
請求項１～２０のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物と、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項22】
少なくとも１つのさらなる活性薬剤を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
薬剤として使用するための、請求項１～２２のうちのいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
【請求項24】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用するための、請求項２３に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
【請求項25】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする人に、治療上有効な量の請求項１～２２のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物を投与する工程を含む、方法。
【請求項26】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置のための薬剤の製造における、請求項１～２２のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用。
【請求項27】
前記ポリペプチド、前記医薬組成物、または前記構築物は経口投与される、請求項２３～２６のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、方法、あるいは使用。
【請求項28】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項２４～２７のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、方法、あるいは使用。
【請求項29】
請求項１～２０のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項30】
前記ポリヌクレオチドは、配列番号１０と７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、前記配列からなる、請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項31】
前記ポリヌクレオチドは配列番号１０を含み、または、配列番号１０からなる、請求項３０に記載のポリヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、インターロイキン２３（ＩＬ－２３）に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメイン（またはＩＣＶＤ）を含むポリペプチドに関し、ならびにこれらのポリペプチドを含む構築物および医薬組成物に関する。本発明はさらに、上記ポリペプチドをコードする核酸、上記ポリペプチドを調製するための方法、上記ポリペプチドをコードする核酸を含むｃＤＮＡおよびベクター、上記ポリペプチドを発現するまたは発現できる宿主細胞、ならびに上記ポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＩＬ－２３は、生理機能と病態の両方の制御に関与する多面的なサイトカインである。ＩＬ－２３は炎症と免疫制御に関連する機能を有し、慢性炎症の蔓延と、炎症性腸疾患（ＩＢＤ、例えば、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ））を含む自己免疫疾患における関連病態に重要であると考えられている（Ｃｒｏｘｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ， ２０１２； Ｔｅｎｇ ｅｔ ａｌ， ２０１５： Ｆｕｒｆａｒｏ ｅｔ ａｌ， ２０１７））。ＩＢＤ患者では、腸の炎症部位でＩＬ－２３の産生が増加する。ＩＬ－２３は、病原性Ｔ細胞に対する直接的な効果を通じて炎症を組織化し、ＩＬ－２３は、ＩＢＤ上皮内リンパ球およびＮＫ細胞の活性化を増強し、自然リンパ球細胞による炎症促進性サイトカインの産生を刺激する（Ｅｋｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１４）。ＩＬ－２３は、ＩＬ－１２サイトカインファミリー内のヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－２３とＩＬ－１２は共通のｐ４０サブユニットを共有し、これはリガンド特異的なＩＬ－２３ｐ１９サブユニット（ｐ１９、ＩＬ－２３Ａ、およびインターロイキン－２３サブユニットαとも呼ばれる）と二量体化してＩＬ－２３を形成し、あるいはＩＬ－１２ｐ３５と二量体化してＩＬ－１２を形成する。炎症性腸疾患の様々なモデルにおける前臨床研究の結果は、ＩＬ－２３が腸の炎症と病理を促進することを明確に示している。ＩＬ－１２と構造的に関連しているが、これらのモデルにおけるＩＬ－２３特異的中和抗体を用いた研究によれば、ＩＬ－２３とＩＬ－１２は粘膜および全身の免疫反応において多様な役割を持つこと、ＩＬ－２３の選択的枯渇は全身の免疫反応を温存しつつ腸の炎症を抑制することができることが明らかにされた。
【0003】
抗ＴＮＦモノクローナル抗体は、クローン病と潰瘍性大腸炎の処置を一変させた。インフリキシマブやアダリムマブなどの抗体は、ＴＮＦ活性を中和することにより、粘膜の治癒を促進し、多くの患者で長期的な寛解を誘導する。しかしながら、抗ＴＮＦ剤を処方された患者の約３分の１は、一次ノンレスポンダーである。一次レスポンダーのうち、その後の反応消失は年間１０～５０％と幅があることもある（二次非反応）（Ｃｏｌｏｍｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ２００７； Ｈａｎａｕｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００２， ２００６； Ｓａｎｄｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ． ２００７； Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００７）。一次非反応患者は、二次抗ＴＮＦ剤に切り替えても効果が得られない可能性が高く、従って、他の炎症経路を標的とする治療戦略が必要である。
【0004】
上記のことは、ＩＬ－２３はＩＢＤの治療標的となりうることを示唆し、全身投与ではなく局所投与の理論的根拠を与える（ＭｃＧｏｖｅｒｎ ａｎｄ Ｐｏｗｒｉｅ， ２００７）。さらに、そのような薬剤は、抗ＴＮＦ抗体が失敗した状況において、ＩＢＤの有効な治療法を提供することができる。
【0005】
ＷＯ２００７００５９５５およびＷＯ２００７０２７７１４は、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を開示している。
【0006】
近年、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに選択的に結合する完全ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体であるブラジクマブ（ＡＭＧ－１３９）の有効性および安全性が、抗ＴＮＦα治療が失敗した、または抗ＴＮＦα治療に対する耐容性がない活性なＣＤ患者において検討されている（Ｓａｎｄｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ ２０１８， Ｓａｎｄｓ ｅｔ ａｌ ２０１７）。ブラジクマブを上回る本発明の多くのポリペプチドの優位性は、以下の実施例２と５で実証されている。
【0007】
先行技術のさらなる抗ＩＬ－２３剤は、抗ＩＬ－２３ｐ１９ドメイン抗体（ＶＨＨ）である３７Ｄ５である（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ ２０１７）。３７Ｄ５を上回る本発明の多くのポリペプチドの優位性は、以下の実施例５で実証されている。
【0008】
本発明のポリペプチドは、少なくともいくつかの実施形態では、従来技術の抗ＩＬ－２３物質と比較して、以下の利点の１つ以上を有し得る。
（ｉ）ＩＬ－２３に対する親和性が増加していること、
（ｉｉ）ＩＬ－２３に対する特異性が増加していること、
（ｉｉｉ）ＩＬ－２３に対する中和能力が増加していること、
（ｉｖ）ＩＬ－１２よりもＩＬ－２３に対する特異性が増加していること、
（ｖ）ヒトやカニクイザルなどの異なる種からのＩＬ－２３との交差反応性が増加していること、
（ｖｉ）例えば、マウス、カニクイザル、またはヒトに投与された場合の免疫原性が低下していること、
（ｖｉｉ）プロテアーゼの存在下、例えば（ａ）小腸および／または大腸で見られるプロテアーゼおよび／またはＩＢＤ炎症性プロテアーゼ、例えば、トリプシン、キモトリプシン、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１２、他のＭＭＰ、およびカテプシンの存在下、ならびに／あるいは、（ｂ）小腸および／または大腸で見られる微生物細胞の溶解によって活発に分泌および／または放出される、腸共生細菌叢および／または病原細菌からのプロテアーゼの存在下での安定性が増加していること、
（ｖｉｉｉ）生成中のプロテアーゼ分解に対する安定性が増加していること（例えば、酵母プロテアーゼに対する耐性）、
（ｉｘ）経口投与への適合性が増加していること、
（ｘ）経口投与後の腸管および固有層への局所送達に対する適合性が増加していること、
（ｘｉ）大腸菌などの細菌、またはアスペルギルス属、サッカロミセス属、クリベロマイセス属、ハンゼヌラ属、またはピキア属に属する酵母、例えば、サッカロミセス・セレビシエまたはピキア・パストリスなどの異種宿主における、発現に対する好適性が増加していること、
（ｘｉｉ）医薬品での使用のための適合性および改善された特性、
（ｘｉｉｉ）機能性食品での使用のための適合性および改善された特性、
（ｘｉｖ）粘膜下固有層にアクセスするために、炎症を起こした結腸粘膜上皮および粘膜下組織の浸透などの組織浸透性が向上していること、
（ｘｖ）例えば、ヒト免疫グロブリンとの配列類似性の増加による、ヒトにおける免疫原性が低下していること、
（ｘｖｉ）多特異性フォーマットにおけるフォーマット化の適合性が増加していること、
（ｘｖｉｉ）新規エピトープに結合すること、
（ｉ）ＩＬ－２３に対する親和性が増加していること、
（ｉｉ）ＩＬ－２３に対する特異性が増加していること、
（ｉｉｉ）ＩＬ－２３に対する中和能力が増加していること、
（ｉｖ）ＩＬ－１２よりもＩＬ－２３に対する特異性が増加していること、
（ｖ）ヒトやカニクイザルなどの異なる種からのＩＬ－２３との交差反応性が増加していること、
（ｖｉ）例えば、マウス、カニクイザル、またはヒトに投与された場合の免疫原性が低下していること、
（ｖｉｉ）プロテアーゼの存在下、例えば（ａ）小腸および／または大腸で見られるプロテアーゼおよび／またはＩＢＤ炎症性プロテアーゼ、例えば、トリプシン、キモトリプシン、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１２、他のＭＭＰ、およびカテプシンの存在下、ならびに／あるいは、（ｂ）小腸および／または大腸で見られる微生物細胞の溶解によって活発に分泌および／または放出される、腸共生細菌叢および／または病原細菌からのプロテアーゼの存在下での安定性が増加していること、
（ｖｉｉｉ）生成中のプロテアーゼ分解に対する安定性が増加していること（例えば、酵母プロテアーゼに対する耐性）、
（ｉｘ）経口投与への適合性が増加していること、
（ｘ）経口投与後の腸管および固有層への局所送達に対する適合性が増加していること、
（ｘｉ）大腸菌などの細菌、またはアスペルギルス属、サッカロミセス属、クリベロマイセス属、ハンゼヌラ属、またはピキア属に属する酵母、例えば、サッカロミセス・セレビシエまたはピキア・パストリスなどの異種宿主における、発現に対する好適性が増加していること、
（ｘｉｉ）医薬品での使用のための適合性および改善された特性、
（ｘｉｉｉ）機能性食品での使用のための適合性および改善された特性、
（ｘｉｖ）粘膜下固有層にアクセスするために、炎症を起こした結腸粘膜上皮および粘膜下組織の浸透などの組織浸透性が向上していること、
（ｘｖ）例えば、ヒト免疫グロブリンとの配列類似性の増加による、ヒトにおける免疫原性が低下していること、
（ｘｖｉ）多特異性フォーマットにおけるフォーマット化の適合性が増加していること、
（ｘｖｉｉ）新規エピトープに結合すること、
【0009】
上記の利点（ｉ）～（ｘｖｉｉ）は、一価フォーマット、またはビヘッドフォーマット（例えば、ホモビヘッド（ｈｏｍｏｂｉｈｅａｄ）またはヘテロビヘッド（ｈｅｔｅｒｏｂｉｈｅａｄ）フォーマット）などの多価フォーマットで本発明のポリペプチドによって潜在的に実現され得る。
【発明の概要】
【0010】
本発明者らは、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含む、驚くほど有利なポリペプチドを製造した。これらのポリペプチドは、免疫グロブリン鎖可変ドメインＩＤ－Ｌ２５３Ｔ、１０Ｅ２、１０Ｇ１０、およびこれらの免疫グロブリン鎖可変ドメインの各々に関連するポリペプチドである。
【0011】
これらのポリペプチドは、先行技術の抗ＩＬ－２３剤であるブラジクマブや３７Ｄ５を上回る予想外の利点を有することが分かっている（特に、上記の背景技術の段落と以下の実施例２と５を参照）。
【0012】
これらのポリペプチドは、特に、驚くほど高い効力から利益を得る。それらは、カニクイザルＩＬ－２３と交差反応することもでき、小腸と大腸のプロテアーゼに曝露されても安定したままである。一実施形態では、これらのポリペプチドは、操作によりさらに増強されている。これらのさらに増強されたポリペプチドは、上記の利点から利益を得て、腸管を通過する間、ＩＬ－２３中和活性を保持し、さらに、腸管のプロテアーゼ、例えば、哺乳動物種由来の、例えば、消化性プロテアーゼ、炎症性プロテアーゼ、および微生物プロテアーゼによる分解および／または不活性化に対して抵抗する。
【0013】
これらのポリペプチドは、とりわけ、経口投与される場合、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、例えば、炎症性腸疾患（例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）の予防または治療、あるいは粘膜炎の予防または治療に有用であると期待され得る。
【0014】
本発明の多くのポリペプチドは、ブラジクマブと比較して優れた特性を有することが分かっており、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに選択的に結合する完全ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体は、抗ＴＮＦα治療に失敗した、または抗ＴＮＦα治療に耐性のない活性ＣＤの患者において検討されてきた。ブラジクマブを上回る本発明の多くのポリペプチドの優位性は、以下の実施例２と５で実証されている。
【0015】
本発明の多くのポリペプチドが、抗ＩＬ－２３ｐ１９ドメイン抗体（ＶＨＨ）である３７Ｄ５と比較して優れた特性を有することも分かっている（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ ２０１７）。３７Ｄ５を上回る本発明の多くのポリペプチドの優位性は、以下の実施例５で実証されている。
【0016】
特定の実施形態では、本発明者らは、抗ＴＮＦ－αポリペプチドとともに、「バイヘッド」フォーマットの上記のポリペプチドを提供した。本明細書で提供されるデータは、ＩＬ－２３およびＴＮＦ－αの消化管制限拮抗作用を組み合わせた治療アプローチが、いずれかの標的単独に対する単独療法よりも、炎症性腸疾患を抱える患者のより高い割合において、より長い期間、より高い程度の効力を達成し得ることを示す。
【0017】
１つの態様では、本発明は、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドを提供し、ここで、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む。
【0018】
さらなる態様では、本発明は、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドを提供し、ここで、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号１４と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号１５と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号１６と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む。
【0019】
さらなる態様では、本発明は、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドを提供し、ここで、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号２２と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は配列番号２３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ３は配列番号２４と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む。
【0020】
さらなる態様では、本発明は、本発明に係る２つ以上の同一のポリペプチドを含む構築物を提供する。
【0021】
さらなる態様では、本発明は、本発明に係る少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物を提供し、異なるポリペプチドはＴＮＦ－αに結合する。
【0022】
さらなる態様では、本発明は、本発明に係る少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物を提供し、異なるポリペプチドはＴＮＦ－α以外の標的に結合する。
【0023】
本発明のさらなる態様は本明細書のどこかで開示される。
【図面の簡単な説明】
【0024】
【図1】ＩＤ－Ｌ２１０Ｔで処置されたエクスビボのＵＣ炎症性結腸粘膜組織の平均リン－強度（ｐｈｏｓｐｈｏ－ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）値。
【図2】ＩＤ－Ｌ２１０Ｔで処置されたエクスビボのＵＣ炎症性結腸粘膜組織の平均リン－強度値（続き）。
【図3】ＴＮＦ－αに対するＦＡ１Ｋ（トリプシン切断前後）の中和効力。
【図4】ＩＬ－２３に対するＦＡ１Ｋ（トリプシン切断前後）の中和効力。
【図5】ヒト糞便上清中で４時間インキュベートした後のＦＡ１Ｋ親モノマーＩＤ－３８ＦおよびＩＤ－Ｌ２５３Ｔの安定性。
【図6】ＩＤ－Ｌ２１０ＴとＩＤ－３８Ｆで処置されたエクスビボのＵＣ炎症性結腸粘膜組織の平均リン－強度値。
【図7】ＩＤ－Ｌ２１０ＴとＩＤ－３８Ｆで処置されたエクスビボのＵＣ炎症性結腸粘膜組織の平均リン－強度値（続き）。
【0025】
配列表の記載
配列番号１－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＣＤＲ１のポリペプチド配列、
配列番号２－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＣＤＲ２のポリペプチド配列、
配列番号３－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＣＤＲ３のポリペプチド配列、
配列番号４－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ１のポリペプチド配列、
配列番号５－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ２のポリペプチド配列、
配列番号６－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ３のポリペプチド配列、
配列番号７－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ４のポリペプチド配列、
配列番号８－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔのポリペプチド配列、
配列番号９－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔをコードするポリヌクレオチド配列（終止コドンを含む）、
配列番号１０－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔをコードするポリヌクレオチド配列（終止コドンなし）、
配列番号１１－１２Ｇ１のポリペプチド配列、
配列番号１２－１Ｅ２のポリペプチド配列、
配列番号１３－１０Ｅ２のポリペプチド配列、
配列番号１４－１０Ｅ２ ＣＤＲ１のポリペプチド配列、
配列番号１５－１０Ｅ２ ＣＤＲ２のポリペプチド配列、
配列番号１６－１０Ｅ２ ＣＤＲ３のポリペプチド配列、
配列番号１７－１０Ｅ２ ＦＲ１のポリペプチド配列、
配列番号１８－１０Ｅ２ ＦＲ２のポリペプチド配列、
配列番号１９－１０Ｅ２ ＦＲ３のポリペプチド配列、
配列番号２０－１０Ｅ２ ＦＲ４のポリペプチド配列、
配列番号２１－１０Ｇ１０のポリペプチド配列、
配列番号２２－１０Ｇ１０ ＣＤＲ１のポリペプチド配列、
配列番号２３－１０Ｇ１０ ＣＤＲ２のポリペプチド配列、
配列番号２４－１０Ｇ１０ ＣＤＲ３のポリペプチド配列、
配列番号２５－１０Ｇ１０ ＦＲ１のポリペプチド配列、
配列番号２６－１０Ｇ１０ ＦＲ２のポリペプチド配列、
配列番号２７－１０Ｇ１０ ＦＲ３のポリペプチド配列、
配列番号２８－１０Ｇ１０ ＦＲ４のポリペプチド配列、
配列番号２９－ＩＤ－Ｌ２１０Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３０－ＩＤ－Ｌ２３７Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３１－ＩＤ－Ｌ２３８Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３２－ＩＤ－Ｌ２３９Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３３－ＩＤ－Ｌ２４０Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３４－ＩＤ－Ｌ２４１Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３５－ＩＤ－Ｌ２４２Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３６－ＩＤ－Ｌ２４３Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３７－ＩＤ－Ｌ２４４Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３８－ＩＤ－Ｌ２４５Ｔのポリペプチド配列、
配列番号３９－ＩＤ－Ｌ２４６Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４０－ＩＤ－Ｌ２４７Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４１－ＩＤ－Ｌ２４８Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４２－ＩＤ－Ｌ２４９Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４３－ＩＤ－Ｌ２５０Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４４－ＩＤ－Ｌ２５１Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４５－ＩＤ－Ｌ２５２Ｔのポリペプチド配列、
配列番号４６－ＦＡ１Ｋのポリペプチド配列、
配列番号４７－ＦＡ１ＫにおけるＩＤ－３８Ｆアームのポリペプチド配列、
配列番号４８－ＦＡ１ＫにおけるＩＤ－Ｌ２５３Ｔアームのポリペプチド配列、
配列番号４９－ＦＡ１Ｋにおける不安定リンカーのポリペプチド配列、
配列番号５０－ＩＤ－Ｌ２１０Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５１－ＩＤ－Ｌ２３７Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５２－ＩＤ－Ｌ２３８Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５３－ＩＤ－Ｌ２３９Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５４－ＩＤ－Ｌ２４０Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５５－ＩＤ－Ｌ２４１Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５６－ＩＤ－Ｌ２４２Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５７－ＩＤ－Ｌ２４３Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５８－ＩＤ－Ｌ２４４Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号５９－ＩＤ－Ｌ２４５Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６０－ＩＤ－Ｌ２４６Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６１－ＩＤ－Ｌ２４７Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６２－ＩＤ－Ｌ２４８Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６３－ＩＤ－Ｌ２４９Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６４－ＩＤ－Ｌ２５０Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６５－ＩＤ－Ｌ２５１Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６６－ＩＤ－Ｌ２５２Ｔをコードするポリヌクレオチド配列、
配列番号６７－ＩＤ－３８Ｆのポリペプチド配列、
配列番号６８－ＳｐｅＩ部位を含む３’プライマーのポリヌクレオチド配列、
配列番号６９－３７Ｄ５のポリペプチド配列、
配列番号７０－ブラジクマブ重鎖、
配列番号７１－ブラジクマブ軽鎖、
配列番号７２－ＩＬ－２３ｐ１９のポリペプチド配列、
配列番号７３－ＩＬ－２３ｐ４０のポリペプチド配列、
配列番号７４－プロテアーゼ不安定リンカー式のポリペプチド配列、
配列番号７５－プロテアーゼ不安定リンカーのポリペプチド配列、
配列番号７６－非プロテアーゼ不安定リンカー式のポリペプチド配列、
配列番号７７－非プロテアーゼ不安定リンカーのポリペプチド配列。
配列番号１－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＣＤＲ１のポリペプチド配列、
配列番号２－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＣＤＲ２のポリペプチド配列、
配列番号３－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＣＤＲ３のポリペプチド配列、
配列番号４－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ１のポリペプチド配列、
配列番号５－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ２のポリペプチド配列、
配列番号６－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ３のポリペプチド配列、
配列番号７－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ ＦＲ４のポリペプチド配列、
配列番号８－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔのポリペプチド配列、
配列番号９－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔをコードするポリヌクレオチド配列（終止コドンを含む）、
配列番号１０－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔをコードするポリヌクレオチド配列（終止コドンなし）、
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配列番号１２－１Ｅ２のポリペプチド配列、
配列番号１３－１０Ｅ２のポリペプチド配列、
配列番号１４－１０Ｅ２ ＣＤＲ１のポリペプチド配列、
配列番号１５－１０Ｅ２ ＣＤＲ２のポリペプチド配列、
配列番号１６－１０Ｅ２ ＣＤＲ３のポリペプチド配列、
配列番号１７－１０Ｅ２ ＦＲ１のポリペプチド配列、
配列番号１８－１０Ｅ２ ＦＲ２のポリペプチド配列、
配列番号１９－１０Ｅ２ ＦＲ３のポリペプチド配列、
配列番号２０－１０Ｅ２ ＦＲ４のポリペプチド配列、
配列番号２１－１０Ｇ１０のポリペプチド配列、
配列番号２２－１０Ｇ１０ ＣＤＲ１のポリペプチド配列、
配列番号２３－１０Ｇ１０ ＣＤＲ２のポリペプチド配列、
配列番号２４－１０Ｇ１０ ＣＤＲ３のポリペプチド配列、
配列番号２５－１０Ｇ１０ ＦＲ１のポリペプチド配列、
配列番号２６－１０Ｇ１０ ＦＲ２のポリペプチド配列、
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配列番号７７－非プロテアーゼ不安定リンカーのポリペプチド配列。
【発明を実施するための形態】
【0026】
ＶＨおよびＶＨＨを含む抗体および抗体フラグメントを含んでいるポリペプチド
従来の抗体または免疫グロブリン（Ｉｇ）は、４つのポリペプチド鎖：２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質である。それぞれの鎖は、定常領域と可変領域に分かれている。重鎖可変ドメインは本明細書ではＶＨＣと省略され、軽鎖可変ドメインは本明細書ではＶＬＣと省略される。これらのドメイン、それに関連するドメイン、およびそれに由来するドメインは、本明細書において免疫グロブリン鎖可変ドメインと呼ばれる。ＶＨＣドメインとＶＬＣドメインは、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化され、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存性の高い領域に散在され得る。フレームワーク領域と相補性決定領域は正確に定義されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ １９９１）。従来の抗体では、ＶＨＣとＶＬＣはそれぞれ、以下のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で、アミノ末端からカルボキシ末端まで配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成されている。２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖の従来の抗体四量体は、例えば、ジスルフィド結合によって相互接続された免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖で形成され、免疫グロブリン重鎖は類似性接続（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ）されている。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。軽鎖定常領域はＣＬという１つのドメインで構成されている。重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインは、抗原と相互作用する結合ドメインである。抗体の定常領域は典型的には、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）と古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子に対する抗体の結合を媒介する。抗体という用語は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（およびその亜型）のタイプの免疫グロブリンを含み、免疫グロブリンの軽鎖はカッパ型またはラムダ型であってもよい。２つの同一の重（Ｈ）鎖と２つの同一の軽（Ｌ）鎖ポリペプチドから組み立てられた免疫グロブリン－γ（ＩｇＧ）抗体の全体構造は、十分に確立されており、哺乳動物において高度に保存されている（Ｐａｄｌａｎ １９９４）。
従来の抗体または免疫グロブリン（Ｉｇ）は、４つのポリペプチド鎖：２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質である。それぞれの鎖は、定常領域と可変領域に分かれている。重鎖可変ドメインは本明細書ではＶＨＣと省略され、軽鎖可変ドメインは本明細書ではＶＬＣと省略される。これらのドメイン、それに関連するドメイン、およびそれに由来するドメインは、本明細書において免疫グロブリン鎖可変ドメインと呼ばれる。ＶＨＣドメインとＶＬＣドメインは、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化され、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存性の高い領域に散在され得る。フレームワーク領域と相補性決定領域は正確に定義されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ １９９１）。従来の抗体では、ＶＨＣとＶＬＣはそれぞれ、以下のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で、アミノ末端からカルボキシ末端まで配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成されている。２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖の従来の抗体四量体は、例えば、ジスルフィド結合によって相互接続された免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖で形成され、免疫グロブリン重鎖は類似性接続（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ）されている。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。軽鎖定常領域はＣＬという１つのドメインで構成されている。重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインは、抗原と相互作用する結合ドメインである。抗体の定常領域は典型的には、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）と古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子に対する抗体の結合を媒介する。抗体という用語は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（およびその亜型）のタイプの免疫グロブリンを含み、免疫グロブリンの軽鎖はカッパ型またはラムダ型であってもよい。２つの同一の重（Ｈ）鎖と２つの同一の軽（Ｌ）鎖ポリペプチドから組み立てられた免疫グロブリン－γ（ＩｇＧ）抗体の全体構造は、十分に確立されており、哺乳動物において高度に保存されている（Ｐａｄｌａｎ １９９４）。
【0027】
従来の抗体構造に対する例外は、ラクダ科の血清で見られる。従来の抗体に加えて、これらの血清は特別なＩｇＧ抗体を有している。これらのＩｇＧ抗体は、重鎖抗体（ＨＣＡｂ）として知られ、Ｌ鎖ポリペプチドを欠き、第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を欠いている。そのＮ末端領域において、ホモ二量体タンパク質のＨ鎖は、ＶＨＨと呼ばれる専用の免疫グロブリン鎖可変ドメインを含み、これはその同族抗原と会合する役割を果たす（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ２０１３，Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ １９９３，Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ １９９４）。
【0028】
本明細書で使用されるような抗原結合フラグメント（または「抗体フラグメント」あるいは「免疫グロブリンフラグメント」）は、ＩＬ－２３に特異的に結合する抗体の一部（例えば、１つ以上の免疫グロブリン鎖が完全長ではないが、ＩＬ－２３に特異的に結合する分子）を意味する。抗原結合フラグメントという用語の中に包含される結合フラグメントの例としては、以下のものが含まれる。
（ｉ）ＦＡｂフラグメント（ＶＬＣ、ＶＨＣ、ＣＬ、およびＣＨ１のドメインからなる一価フラグメント）、
（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により結合される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）、
（ｉｉｉ）（ＶＨＣおよびＣＨ１のドメインからなる）Ｆｄフラグメント、
（ｉｖ）（抗体の単一のアームのＶＬＣおよびＶＨＣのドメインからなる）Ｆｖフラグメント、
（ｖ）ｓｃＦｖフラグメント（合成リンカーによって、組換え方法を用いて連結されたＶＬＣドメインとＶＨＣドメインからなり、上記リンカーによって、ＶＬＣドメインとＶＨＣドメインは単一のタンパク質鎖として作られ、ＶＬＣ領域とＶＨＣ領域は対になって一価分子を形成する）、
（ｖｉ）ＶＨ（ＶＨＣドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ １９８９）、
（ｖｉｉ）ＶＬ（ＶＬＣドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン）、
（ｖｉｉｉ）Ｖ－ＮＡＲ（軟骨魚類ＩｇＮＡＲ由来のＶＨＣドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ １９９８およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ ２０１３）、
（ｉｘ）ＶＨＨ。
（ｉ）ＦＡｂフラグメント（ＶＬＣ、ＶＨＣ、ＣＬ、およびＣＨ１のドメインからなる一価フラグメント）、
（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により結合される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）、
（ｉｉｉ）（ＶＨＣおよびＣＨ１のドメインからなる）Ｆｄフラグメント、
（ｉｖ）（抗体の単一のアームのＶＬＣおよびＶＨＣのドメインからなる）Ｆｖフラグメント、
（ｖ）ｓｃＦｖフラグメント（合成リンカーによって、組換え方法を用いて連結されたＶＬＣドメインとＶＨＣドメインからなり、上記リンカーによって、ＶＬＣドメインとＶＨＣドメインは単一のタンパク質鎖として作られ、ＶＬＣ領域とＶＨＣ領域は対になって一価分子を形成する）、
（ｖｉ）ＶＨ（ＶＨＣドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ １９８９）、
（ｖｉｉ）ＶＬ（ＶＬＣドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン）、
（ｖｉｉｉ）Ｖ－ＮＡＲ（軟骨魚類ＩｇＮＡＲ由来のＶＨＣドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ １９９８およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ ２０１３）、
（ｉｘ）ＶＨＨ。
【0029】
ＶＨＨまたはＶＨにおけるアミノ酸残基の総数は１１０～１３０の範囲であってよく、好適には１１５～１２５であり、最も好適には１２１である。
【0030】
本発明の免疫グロブリン鎖可変ドメインは、例えば、核酸合成のための技術を使用して免疫グロブリン鎖可変ドメインをコードする核酸を調製し、その後、このようにして得られた核酸を発現させることによって、得ることができる。特定の実施形態によれば、本発明の免疫グロブリン鎖可変ドメインは、天然に存在する抗体のＶＨドメインまたはＶＨＨドメインなどの天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列とまったく同じ（すなわち、このアミノ酸配列と１００％の配列同一性を共有する）アミノ酸配列を有していない。
【0031】
本明細書で提供される例は、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインそれ自体に関する。しかしながら、本明細書に開示される本発明の原理は、抗体および抗体フラグメントなどの、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含む任意のポリペプチドにも等しく適用可能である。例えば、本明細書に開示される抗ＩＬ－２３免疫グロブリン鎖可変ドメインは、完全長抗体などのポリペプチドに組み込まれてもよい。このようなアプローチは、ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ ２０１４によって実証されており、ＭｃＣｏｙらは二量体構築物として発現される、ヒトＦｃ領域（ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３のドメインを含む）との融合体として設計された抗ＨＩＶ ＶＨＨを提供している。
【0032】
非ヒト免疫グロブリン可変ドメインのフレームワーク領域における少なくとも１つのアミノ酸残基をヒト可変ドメインからの対応する残基で置換することがヒト化である。可変ドメインのヒト化は、ヒトにおける免疫原性を低下させる可能性がある。
【0033】
好適には、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン鎖可変ドメインを含む。より好適には、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖可変ドメインなどの免疫グロブリン鎖可変ドメインからなる。好適には、本発明のポリペプチドは抗体または抗体フラグメントである。より好適には、本発明のポリペプチドは抗体フラグメントである。好適には、抗体フラグメントは、ＶＨＨ、ＶＨ、またはＶＬなどの免疫グロブリン可変ドメインである。好適には、抗体フラグメントは、ＶＨＨ、ＶＨ、ＶＬ、Ｖ－ＮＡＲ、ｓｃＦｖ、ＦＡｂフラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。好適には、抗体フラグメントは免疫グロブリン重鎖可変ドメインである。より好適には、抗体フラグメントはＶＨＨまたはＶＨであり、最も好適にはＶＨＨである。
【0034】
特異性、親和性、結合活性、および交差反応性
特異性とは、特定の抗原結合ポリペプチドが結合することができる抗原または抗原決定基の異なる種類の数を指す。抗原結合ポリペプチドの特異性とは、抗原結合ポリペプチドが特定の抗原を固有の分子実体として認識し、別の抗原と区別する能力のことである。
特異性とは、特定の抗原結合ポリペプチドが結合することができる抗原または抗原決定基の異なる種類の数を指す。抗原結合ポリペプチドの特異性とは、抗原結合ポリペプチドが特定の抗原を固有の分子実体として認識し、別の抗原と区別する能力のことである。
【0035】
抗原の抗原結合ポリペプチドとの解離に関する平衡定数（Ｋｄ）で表される親和性は、抗原決定基と抗原結合ポリペプチド上の抗原結合部位との間の結合強度を示す指標であり：Ｋｄの値が小さければ小さいほど、抗原決定基と抗原結合ポリペプチドとの間の結合力が強い（代替的に、親和性は親和性定数（Ｋａ）としても表すこともでき、１／Ｋｄとなる）。親和性は、対象となる特定の抗原に応じて、既知の方法によって決定することができる。好適には、親和性は、動的に切り替え可能なバイオ表面（例えば、「ｓｗｉｔｃｈＳＥＮＳＥＲ」、Ｋｎｅｚｅｖｉｃ ｅｔ ａｌ ２０１２を参照）または表面プラズモン共鳴を使用して決定される。
【0036】
結合活性は、抗原結合ポリペプチドと適切な抗原の間に制限する強度の指標である。結合活性は、抗原結合ポリペプチド上の抗原決定基とその抗原結合部位との間の親和性と、抗原結合ポリペプチド上に存在する適切な結合部位の数との両方に関連する。
【0037】
好適には、本発明のポリペプチドは、１０－６Ｍ以下、より好適には１０－７Ｍ以下、より好適には１０－８Ｍ以下、より好適には１０－９Ｍ以下、より好適には１０－１０Ｍ以下、より好適には１０－１１Ｍ以下、より好適には１０－１２Ｍ以下、より好適には１０－１３Ｍ以下の解離定数（Ｋｄ）でＩＬ－２３に結合する。
【0038】
１０－６Ｍ未満のＫｄ値は、結合を示すと考えられる。抗原または抗原決定基への抗原結合ポリペプチドの特異的な結合は、例えば、スキャチャード解析、および／または、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）などの競合結合アッセイを含む、任意の適切な既知の方法、ならびに、サンドイッチ競合アッセイ、および当該技術分野で知られているその異なる変異体で決定することができる。好適には、ポリペプチドの親和性は、表面プラズモン共鳴によって決定される。
【0039】
一実施形態では、ポリペプチドの親和性は、ｐＨ５、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中のα－ｐ４０捕捉抗体をセンサーチップにアミンカップリングすることによって、２５℃で確立される。その後、２μｇ／ｍＬまたは０．５μｇ／ｍＬを１０μＬ／分で６０秒間流すことにより、ＩＬ－２３をチップ上に固定化する。これにより、Ｐ１９サブユニットはポリペプチドに自由に結合する。次に試験ポリペプチドを、ｐＨ７．４、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０５％のポリソルベート２０、および３ｍＭのＥＤＴＡ緩衝液中で、０．０１９５～５ｎＭ（Ｌ２５３Ｔ）または０．８～５００ｎＭ（ブラジクマブＦａｂ製剤）の５種類の異なる濃度で３０μｌ／分にて３００秒添加をオンし、３００秒添加をオンしない。結合した抗Ｐ４０は、６０秒間、１０μｌ／分にて、１０ｍＭのグリシン ｐＨ２を用いるサイクルの間に再生成される。この方法論は、以下の実施例５．２で使用された。
【0040】
抗ＩＬ－２３ポリペプチド、ＩＬ－２３と相互作用するポリペプチド、またはＩＬ－２３に対するポリペプチドは、いずれもＩＬ－２３に結合する有効的なポリペプチドである。本発明のポリペプチドは、ＩＬ－２３上の線状エピトープまたは立体構造のエピトープに結合することができる。
【0041】
好適には、本発明のポリペプチドは、ヒトＩＬ－２３に結合する。より好適には、本発明のポリペプチドは、ヒトＩＬ－２３と、ヒヒＩＬ－２３、マーモセットＩＬ－２３、カニクイザルＩＬ－２３、およびアカゲザルＩＬ－２３からなる群から選択される少なくとも１つの追加の霊長類のＩＬ－２３との双方に結合する。より好適には、本発明のポリペプチドは、ヒトＩＬ－２３とカニクイザルＩＬ－２３の両方に結合する。
【0042】
好適には、本発明のポリペプチドは、ヒトＩＬ－２３を中和する。より好適には、本発明のポリペプチドは、ヒトＩＬ－２３と、ヒヒＩＬ－２３、マーモセットＩＬ－２３、カニクイザルＩＬ－２３、およびアカゲザルＩＬ－２３からなる群から選択される少なくとも１つの追加の霊長類のＩＬ－２３との双方を中和する。より好適には、本発明のポリペプチドは、ヒトＩＬ－２３とカニクイザルＩＬ２３の両方を中和する。
【0043】
好適には、ＩＬ－２３は、配列番号７２（ｐ１９サブユニット）および７３（ｐ４０サブユニット）を含むポリペプチドであり、より好適には、ＩＬ－２３は、配列番号７２および７３からなるポリペプチドである。好適には、ＩＬ－２３ｐ１９は、配列番号７２を含むポリペプチドである。より好適には、ＩＬ－２３ｐ１９は、配列番号７２からなるポリペプチドである。以下の実施例で使用されるｐ１９およびｐ４０のサブユニットも、それぞれ単一のＣ末端６ｘＨｉｓタグを組み込んだ。
【0044】
ヒトからのＩＬ－２３、および別の種からのＩＬ－２３、例えば、カニクイザルＩＬ－２３と反応することができる（「交差反応」）ポリペプチドは、動物モデルにおいて前臨床研究をより容易に行うことができるため有利である。
【0045】
好適には、本発明のポリペプチドは、ＩＬ－２３の受容体結合部位に存在する、および／またはその一部を形成するＩＬ－２３上のエピトープに対して向けられており、本発明のポリペプチドは、ＩＬ－２３に結合すると、上記ＩＬ－２３によって媒介されるＩＬ－２３受容体架橋および／またはその受容体架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低減することができる。
【0046】
本発明のポリペプチドは、ＩＬ－２３上の１つ以上のエピトープに結合する。本発明の１つの態様では、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ、１２Ｇ１、１Ｅ２、１０Ｅ２、または１０Ｇ１０、より好適にはＩＤ－Ｌ２５３Ｔと同じＩＬ－２３上のエピトープに結合するポリペプチドが提供される。本発明のポリペプチドがＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに特異的であると予想されるため、本明細書全体での「ＩＬ－２３」の記述は適宜「ｐ１９」と置き換えることもできる。
【0047】
好適には、本発明のポリペプチドは単離される。「単離された」ポリペプチドは、その元の環境から除去されたものである。例えば、天然に存在する本発明のポリペプチドは、天然系に共存する物質の一部またはすべてから分離された場合に、単離される。
【0048】
効力、阻害、および中和
効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）とは、所定の強さの効果をもたらすのに必要とされる量の観点から表された治療薬の活性の指標である。低効力の薬剤が低濃度でより小さな反応を引き起こすのと比較して、高効力の薬剤は低濃度でより大きな反応を引き起こす。効力は親和性と有効性の関数である。有効性（ｅｆｆｉｃａｃｙ）とは、標的リガンドとの結合時に生物学的反応を引き起こす治療薬の能力と、この反応の量的な大きさを指す。最大の有効濃度（ＥＣ５０）という用語は、指定された暴露時間後のベースラインと最大濃度との中間の反応を引き起こす治療薬の濃度を指す。治療薬は、抑制または刺激を引き起こす可能性がある。これは一般的に、そして、本明細書でも効力の指標として使用される。
効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）とは、所定の強さの効果をもたらすのに必要とされる量の観点から表された治療薬の活性の指標である。低効力の薬剤が低濃度でより小さな反応を引き起こすのと比較して、高効力の薬剤は低濃度でより大きな反応を引き起こす。効力は親和性と有効性の関数である。有効性（ｅｆｆｉｃａｃｙ）とは、標的リガンドとの結合時に生物学的反応を引き起こす治療薬の能力と、この反応の量的な大きさを指す。最大の有効濃度（ＥＣ５０）という用語は、指定された暴露時間後のベースラインと最大濃度との中間の反応を引き起こす治療薬の濃度を指す。治療薬は、抑制または刺激を引き起こす可能性がある。これは一般的に、そして、本明細書でも効力の指標として使用される。
【0049】
本発明の目的のための中和ポリペプチドは、ＩＬ－２３に結合するポリペプチドであり、実施例の評価方法Ａに記載されるＥＬＩＳＡなどで測定されるようにＩＬ－２３とその同族受容体（ＩＬ－２３Ｒ）の結合を阻害するものである。
【0050】
好適には、本発明のポリペプチドは、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（実施例の評価方法Ａ参照）において、ヒトＩＬ－２３を、５ｎＭ以下、例えば、４ｎＭ以下、例えば、３ｎＭ以下、例えば、２ｎＭ以下、例えば、１．７ｎＭ以下、例えば、１．５ｎＭ以下、例えば、１．４ｎＭ以下、例えば、１．３ｎＭ以下、例えば、１．２ｎＭ以下、例えば、１．１ｎＭ以下、例えば、１．０ｎＭ以下、例えば、０．９ｎＭ以下、例えば、０．８ｎＭ以下、例えば、０．７５ｎＭ以下、例えば、０．７０ｎＭ以下、例えば、０．６５ｎＭ以下、例えば、０．６０ｎＭ以下、例えば、０．５５ｎＭ以下、例えば、０．５０ｎＭ以下、例えば、０．４５ｎＭ以下、例えば、０．４０ｎＭ以下のＥＣ５０で中和する。
【0051】
ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列
２つの密接に関連するポリペプチド配列を比較する目的で、第１のポリペプチド配列と第２のポリペプチド配列との間の「配列同一性％」は、ポリペプチド配列の標準設定（ＢＬＡＳＴＰ）を使用して、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０を用いて計算することができる。２つの密接に関連するポリヌクレオチド配列を比較する目的で、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間の「配列同一性％」は、ヌクレオチド配列の標準設定（ＢＬＡＳＴＮ）を使用して、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０を用いて計算することができる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度と速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）が１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長３、期待値（Ｅ）１０、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：１０９１５ （１９８９）を参照）のアラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、両方の鎖の比較を用いる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７ （１９９３）を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間のマッチが偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸の比較における最小和確率が約０．２未満、より好適には約０．０１未満、最も好適には約０．００１未満の場合に、参照配列に類似するとみなされる。
２つの密接に関連するポリペプチド配列を比較する目的で、第１のポリペプチド配列と第２のポリペプチド配列との間の「配列同一性％」は、ポリペプチド配列の標準設定（ＢＬＡＳＴＰ）を使用して、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０を用いて計算することができる。２つの密接に関連するポリヌクレオチド配列を比較する目的で、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間の「配列同一性％」は、ヌクレオチド配列の標準設定（ＢＬＡＳＴＮ）を使用して、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０を用いて計算することができる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度と速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）が１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長３、期待値（Ｅ）１０、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：１０９１５ （１９８９）を参照）のアラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、両方の鎖の比較を用いる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７ （１９９３）を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間のマッチが偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸の比較における最小和確率が約０．２未満、より好適には約０．０１未満、最も好適には約０．００１未満の場合に、参照配列に類似するとみなされる。
【0052】
ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、その全長にわたって１００％の配列同一性を共有する場合に、他のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列と同一または類似であると呼ばれる。配列中の残基は、左から右に、すなわち、ポリペプチドの場合はＮ末端からＣ末端へ、ポリヌクレオチドの場合は、５’末端から３’末端まで番号が振られる。
【0053】
配列間の「差」は、第１の配列と比較した、第２の配列の位置における単一のアミノ酸残基の挿入、欠失、または置換を意味する。２つのポリペプチド配列は、１つ、２つ、またはそれ以上のこのようなアミノ酸の差を含むことができる。それ以外に第１の配列と同一（１００％配列同一性）である第２の配列に挿入、欠失、または置換を行うと、配列同一性の割合が減少する。例えば、同一の配列が９アミノ酸残基長である場合、第２の配列における１つの置換は、８８．９％の配列同一性をもたらす。同一の配列が１７アミノ酸残基長である場合、第２の配列における２つの置換は８８．２％の配列同一性をもたらす。同一の配列が７アミノ酸残基長である場合、第２の配列における３つの置換は５７．１％の配列同一性をもたらす。第１および第２のポリペプチド配列が９アミノ酸残基長であり、６つの同一の残基を共有する場合、第１および第２のポリペプチド配列は６６％超の同一性を共有する（第１および第２のポリペプチド配列は６６．７％の同一性を共有する）。第１および第２のポリペプチド配列が１７アミノ酸残基長であり、１６個の同一の残基を共有する場合、第１および第２のポリペプチド配列は９４％超の同一性を共有する（第１および第２のポリペプチド配列は９４．１％の同一性を共有する）。第１および第２のポリペプチド配列が７アミノ酸残基長であり、３個の同一の残基を共有する場合、第１および第２のポリペプチド配列は４２％超の同一性を共有する（第１および第２のポリペプチド配列は４２．９％の同一性を共有する）。
【0054】
代替的に、第１の参照ポリペプチド配列を第２の比較ポリペプチド配列と比較する目的で、第２の配列を生成するために第１の配列に加えられた付加、置換、および／または欠失の数を確認することもできる。付加とは、第１のポリペプチドの配列に１つのアミノ酸残基を加えること（第１のポリペプチドのいずれかの末端での付加を含む）である。置換とは、第１のポリペプチドの配列中の１つのアミノ酸残基を１つの異なるアミノ酸残基と置き換えることである。欠失とは、第１のポリペプチドの配列から１個のアミノ酸残基が欠失すること（第１のポリペプチドのいずれかの末端における欠失を含む）である。
【0055】
第１の参照ポリヌクレオチド配列を第２の比較ポリヌクレオチド配列と比較する目的で、第２の配列を生成するために第１の配列に加えられた付加、置換、および／または欠失の数を確認することもできる。付加とは、第１のポリヌクレオチドの配列に１つのヌクレオチド残基を加えること（第１のポリヌクレオチドのいずれかの末端での付加を含む）である。置換とは、第１のポリヌクレオチドの配列中の１つのヌクレオチド残基を１つの異なるヌクレオチド残基と置き換えることである。欠失とは、第１のポリヌクレオチドの配列から１個のヌクレオチド残基が欠失すること（第１のポリヌクレオチドのいずれかの末端における欠失を含む）である。
【0056】
「保存的」アミノ酸置換とは、あるアミノ酸残基が同様の化学構造の別のアミノ酸残基と取り替えられ、かつ、ポリペプチドの機能、活性、またはその他の生物学的特性にほとんど影響を与えないと予想される、アミノ酸置換である。このような保存的置換は、好適には、以下の群内の１つのアミノ酸が、同じ群内からの別のアミノ酸残基で置換される置換である。
【0057】
【表1】
【0058】
好適には、疎水性アミノ酸残基は、非極性アミノ酸である。より好適には、疎水性アミノ酸残基は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｗ、またはＣから選択される。
【0059】
本明細書で使用されるように、ポリペプチド配列の番号付け、およびＣＤＲとＦＲの定義は、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ １９９１）に従って定義される通りである。第１および第２のポリペプチド配列間の「対応する」アミノ酸残基は、Ｋａｂａｔシステムに従って第２の配列中のアミノ酸残基と同じ位置を共有する第１の配列中のアミノ酸残基であるが、第２の配列中のアミノ酸残基は第１の配列とは同一性が異なる場合がある。フレームワークとＣＤＲがＫａｂａｔの定義に従って同じ長さである場合、適切に対応する残基は同じ番号（および文字）を共有する。アラインメントは、手動で、または、例えば、標準的な設定を用いたＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０（ＢＬＡＳＴＰまたはＢＬＡＳＴＮ）などの配列アラインメントのための既知のコンピュータアルゴリズムを使用して、達成することができる。
【0060】
好適には、本発明で使用されるポリヌクレオチドは単離されている。「単離された」ポリヌクレオチドは、その元の環境から除去されたものである。例えば、天然に存在するポリヌクレオチドは、天然系に共存する物質の一部またはすべてから分離された場合に、単離される。ポリヌクレオチドは、例えば、その自然環境の一部ではないベクターにクローン化されている場合、またはｃＤＮＡ内に含まれない場合に、単離されているとみなされる。
【0061】
本発明の１つの態様では、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。好適には、ポリヌクレオチドは、配列番号９、１０、または５０～６６と７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、上記配列からなる。より好適には、ポリヌクレオチドは、配列番号９、１０、または５０～６６のいずれか１つを含むか、またはそれらからなる。さらなる態様では、前記ポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡが提供される。
【0062】
本発明の１つの態様では、コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３をコードする、配列番号９、１０、または５０～６６の一部のいずれか１つと７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、または上記配列からなるポリヌクレオチドが提供される。
【0063】
好適には、本発明のポリペプチド配列は、天然の配列に対して少なくとも１つの改変を含む。好適には、本発明のポリヌクレオチド配列は、天然の配列に対する少なくとも１つの改変を含む。好適には、ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列に対する改変は、腸管に存在するプロテアーゼ（例えば、トリプシンおよびキモトリプシン）に対するポリペプチドまたはコードされたポリペプチドの安定性を高めるためになされる。
【0064】
本発明の特定のポリペプチドの配列に関する実施態様を以下に概説する。
【0065】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび関連ポリペプチド
ＫａｂａｔフォーマットでのＩＤ－Ｌ２５３Ｔのポリペプチド配列
本発明の特に有利なポリペプチドであるＩＤ－Ｌ２５３Ｔのポリペプチド配列は、Ｋａｂａｔフォーマットで以下に記載される。ＣＤＲ１（配列番号１）は「ＣＤＲ－Ｈ１」と標識され、ＣＤＲ２（配列番号２）は「ＣＤＲ－Ｈ２」と標識され、およびＣＤＲ３（配列番号３）は「ＣＤＲ－Ｈ３」と標識される。上段は各ポリペプチド残基のＫａｂａｔ番号付け（「Ｈ」接頭辞付き）を提供し、中段はポリペプチド残基を提供し、下段は各ポリペプチド残基の連続番号付けを提供する。
ＫａｂａｔフォーマットでのＩＤ－Ｌ２５３Ｔのポリペプチド配列
本発明の特に有利なポリペプチドであるＩＤ－Ｌ２５３Ｔのポリペプチド配列は、Ｋａｂａｔフォーマットで以下に記載される。ＣＤＲ１（配列番号１）は「ＣＤＲ－Ｈ１」と標識され、ＣＤＲ２（配列番号２）は「ＣＤＲ－Ｈ２」と標識され、およびＣＤＲ３（配列番号３）は「ＣＤＲ－Ｈ３」と標識される。上段は各ポリペプチド残基のＫａｂａｔ番号付け（「Ｈ」接頭辞付き）を提供し、中段はポリペプチド残基を提供し、下段は各ポリペプチド残基の連続番号付けを提供する。
【0066】
【表2】
【0067】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび関連ポリペプチドのＣＤＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0068】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１と比較して、２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１と比較して、２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１と比較して、２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0069】
好適には、配列番号１のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＣＤＲ１は配列番号１を含み、または、より好適には、配列番号１からなる。
【0070】
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２と５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より適切に、上記配列からなる。
【0071】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0072】
好適には、配列番号２のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0073】
好適には、配列番号２の残基番号９に対応するＣＤＲ２の残基は、ＤまたはＨである。好適には、配列番号２の残基番号１０に対応するＣＤＲ２の残基は、ＹまたはＤである。好適には、配列番号２の残基番号１１に対応するＣＤＲ２の残基は、Ｓ、Ｇ、Ｒ、またはＡ（より好適にはＳ、Ｒ、またはＡ、より好適にはＳまたはＡ）である。好適には、配列番号２の残基番号１４に対応するＣＤＲ２の残基は、ＶまたはＡである。
【0074】
好適には、配列番号２の残基番号９に対応するＣＤＲ２の残基は、ＤまたはＨであり、配列番号２の残基番号１０に対応するＣＤＲ２の残基は、ＹまたはＤであり、配列番号２の残基番号１１に対応するＣＤＲ２の残基は、Ｓ、Ｇ、Ｒ、またはＡ（より好適にはＳ、Ｒ、またはＡ、より好適にはＳまたはＡ）であり、および、配列番号２の残基番号１４に対応するＣＤＲ２の残基は、ＶまたはＡである。
【0075】
好適には、ＣＤＲ２は配列番号２を含み、または、より好適には、配列番号２からなる。
【0076】
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号３と、６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0077】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号３と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号３と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号３と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、いかなる置換も配列番号３のそれらの対応する残基に対して保存的である。
【0078】
好適には、配列番号３のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0079】
好適には、配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基は、ＩまたはＬである。
【0080】
好適には、（ａ）配列番号２の残基番号９に対応するＣＤＲ２の残基は、ＤまたはＨであり、配列番号２の残基番号１０に対応するＣＤＲ２の残基は、ＹまたはＤであり、配列番号２の残基番号１１に対応するＣＤＲ２の残基は、Ｓ、Ｇ、Ｒ、またはＡ（より好適にはＳ、Ｒ、またはＡ、より好適にはＳまたはＡ）であり、および、配列番号２の残基番号１４に対応するＣＤＲ２の残基は、ＶまたはＡであり、および、（ｂ）配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基は、ＩまたはＬである。
【0081】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび関連ポリペプチドのＦＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号４と、５％、１２％、１８％、２６％、３２％、３８％、４６％、５２％、５８％、６２％、６６％、６８％、７２％、７５％、７８％、８２％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号４と、５％、１２％、１８％、２６％、３２％、３８％、４６％、５２％、５８％、６２％、６６％、６８％、７２％、７５％、７８％、８２％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0082】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号４と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号４と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号４と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0083】
好適には、配列番号４のそれらの対応する残基と異なるＦＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0084】
好適には、配列番号４の残基番号１に対応するＦＲ１の残基は、ＤまたはＥである。好適には、配列番号４の残基番号１１に対応するＦＲ１の残基は、ＱまたはＬである。好適には、配列番号４の残基番号１９に対応するＦＲ１の残基は、ＳまたはＲである。好適には、配列番号４の残基番号２３に対応するＦＲ１の残基は、ＥまたはＡである。好適には、配列番号４の残基番号２４に対応するＦＲ１の残基は、ＳまたはＡである。
【0085】
好適には、配列番号４の残基番号１に対応するＦＲ１の残基は、ＤまたはＥであり、配列番号４の残基番号１１に対応するＦＲ１の残基は、ＱまたはＬであり、配列番号４の残基番号１９に対応するＦＲ１の残基は、ＳまたはＲであり、配列番号４の残基番号２３に対応するＦＲ１の残基は、ＥまたはＡであり、および、配列番号４の残基番号２４に対応するＦＲ１の残基は、ＳまたはＡである。
【0086】
好適には、ＦＲ１は配列番号４を含み、または、より好適には、配列番号４からなる。
【0087】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号５と、１０％、１５％、２５％、３０％、４０％、４５％、５５％、６０％、７０％、７５％、８５％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0088】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号５と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号５と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号５と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0089】
好適には、配列番号５のそれらの対応する残基と異なるＦＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0090】
好適には、配列番号５の残基番号２に対応するＦＲ２の残基は、ＦまたはＹである。好適には、配列番号５の残基番号５に対応するＦＲ２の残基は、ＶまたはＡである。好適には、配列番号５の残基番号８に対応するＦＲ２の残基は、ＫまたはＨである。好適には、配列番号５の残基番号９に対応するＦＲ２の残基は、ＱまたはＥである。好適には、配列番号５の残基番号１０に対応するＦＲ２の残基は、ＲまたはＬである。好適には、配列番号５の残基番号１２に対応するＦＲ２の残基は、ＬまたはＦである。
【0091】
好適には、配列番号５の残基番号２に対応するＦＲ２の残基は、ＦまたはＹであり、配列番号５の残基番号５に対応するＦＲ２の残基は、ＶまたはＡであり、配列番号５の残基番号８に対応するＦＲ２の残基は、ＫまたはＨであり、配列番号５の残基番号９に対応するＦＲ２の残基は、ＱまたはＥであり、配列番号５の残基番号１０に対応するＦＲ２の残基は、ＲまたはＬであり、および、配列番号１２の残基番号１２に対応するＦＲ２の残基は、ＬまたはＦである。
【0092】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号６と、８％、１５％、２０％、２６％、３２％、４０％、４５％、５２％、５８％、６５％、７０％、７６％、８０％、８２％、８５％、９０％、９２％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0093】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号６と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号６と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号６と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0094】
好適には、配列番号６の残基番号４に対応するＦＲ３の残基は、Ｉ、Ｌ、またはＭ（より適切にＩまたはＭ）である。好適には、配列番号６の残基番号１３に対応するＦＲ３の残基は、ＬまたはＶである。好適には、配列番号６の残基番号１４に対応するＦＲ３の残基は、ＹまたはＦである。好適には、配列番号６の残基番号１６に対応するＦＲ３の残基は、ＱまたはＥである。好適には、配列番号６の残基番号１８に対応するＦＲ３の残基は、ＮまたはＤである。好適には、配列番号６の残基番号２０に対応するＦＲ３の残基は、ＬまたはＶである。好適には、配列番号６の残基番号２２に対応するＦＲ３の残基は、ＰまたはＳである。好適には、配列番号６の残基番号２５に対応するＦＲ３の残基は、ＴまたはＡである。好適には、配列番号６の残基番号２７に対応するＦＲ３の残基は、ＶまたはＲである。好適には、配列番号６の残基番号３１に対応するＦＲ３の残基は、ＡまたはＮである。
【0095】
好適には、配列番号６の残基番号４に対応するＦＲ３の残基は、Ｉ、Ｌ、またはＭ（より適切にＩまたはＭ）であり、配列番号６の残基番号１３に対応するＦＲ３の残基は、ＬまたはＶであり、配列番号６の残基番号１４に対応するＦＲ３の残基は、ＹまたはＦであり、配列番号６の残基番号１６に対応するＦＲ３の残基は、ＱまたはＥであり、配列番号６の残基番号１８に対応するＦＲ３の残基は、ＮまたはＤであり、配列番号６の残基番号２０に対応するＦＲ３の残基は、ＬまたはＶであり、配列番号６の残基番号２２に対応するＦＲ３の残基は、ＰまたはＳであり、配列番号６の残基番号２５に対応するＦＲ３の残基は、ＴまたはＡであり、配列番号６の残基番号２７に対応するＦＲ３の残基は、ＶまたはＲであり、および、配列番号６の残基番号３１に対応するＦＲ３の残基は、ＡまたはＮである。
【0096】
好適には、配列番号６のそれらの対応する残基と異なるＦＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＦＲ３は配列番号６を含み、または、より好適には、配列番号６からなる。
【0097】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号７と、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0098】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号７と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号７と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号７と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0099】
好適には、配列番号７のそれらの対応する残基と異なるＦＲ４の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＦＲ４は配列番号６を含み、または、より好適には、配列番号７からなる。
【0100】
好適には、配列番号７の残基番号６に対応するＦＲ４の残基は、ＱまたはＲである。
【0101】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび関連ポリペプチドの完全長配列
好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号８と、５０％以上、より好適には５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９６％以上、より好適には９７％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号８と、５０％以上、より好適には５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９６％以上、より好適には９７％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0102】
代替的に、本発明のポリペプチドは、配列番号８と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号８と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号８と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0103】
好適には、ポリペプチドのＮ末端はＤである。好適には、ポリペプチドは配列番号８を含み、または、より好適には、配列番号８からなる。
【0104】
１０Ｅ２および関連ポリペプチド
１０Ｅ２および関連ポリペプチドのＣＤＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１４と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
１０Ｅ２および関連ポリペプチドのＣＤＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１４と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0105】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１４と比較して、２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１４と比較して、２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号１４と比較して、２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0106】
好適には、配列番号１４のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＣＤＲ１は配列番号１４を含み、または、より好適には、配列番号１４からなる。
【0107】
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号１５と５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より適切に、上記配列からなる。
【0108】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号１５と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号１５と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号１５と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0109】
好適には、配列番号１５のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0110】
好適には、ＣＤＲ２は配列番号１５を含み、または、より好適には、配列番号１５からなる。
【0111】
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号１６と、６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0112】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号１６と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号１６と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号１６と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、いかなる置換も配列番号１６のそれらの対応する残基に対して保存的である。
【0113】
好適には、配列番号１６のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0114】
１０Ｅ２および関連ポリペプチドのＦＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号１７と、５％、１２％、１８％、２６％、３２％、３８％、４６％、５２％、５８％、６２％、６６％、６８％、７２％、７５％、７８％、８２％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号１７と、５％、１２％、１８％、２６％、３２％、３８％、４６％、５２％、５８％、６２％、６６％、６８％、７２％、７５％、７８％、８２％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0115】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号１７と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号１７と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号１７と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0116】
好適には、配列番号１７のそれらの対応する残基と異なるＦＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0117】
好適には、ＦＲ１は配列番号１７を含み、または、より好適には、配列番号１７からなる。
【0118】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号１８と、１０％、１５％、２５％、３０％、４０％、４５％、５５％、６０％、７０％、７５％、８５％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0119】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号１８と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号１８と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号１８と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0120】
好適には、配列番号１８のそれらの対応する残基と異なるＦＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0121】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号１９と、８％、１５％、２０％、２６％、３２％、４０％、４５％、５２％、５８％、６５％、７０％、７６％、８０％、８２％、８５％、９０％、９２％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0122】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号１９と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号１９と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号１９と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0123】
好適には、配列番号１９のそれらの対応する残基と異なるＦＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＦＲ３は配列番号１９を含み、または、より好適には、配列番号１９からなる。
【0124】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２０と、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0125】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２０と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２０と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２０と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0126】
好適には、配列番号２０のそれらの対応する残基と異なるＦＲ４の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＦＲ４は配列番号２０を含み、または、より好適には、配列番号２０からなる。
【0127】
１０Ｅ２および関連ポリペプチドの完全長配列
好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号１３と、５０％以上、より好適には５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９６％以上、より好適には９７％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号１３と、５０％以上、より好適には５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９６％以上、より好適には９７％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0128】
代替的に、本発明のポリペプチドは、配列番号１３と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号１３と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には１３以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号１３と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0129】
好適には、ポリペプチドのＮ末端はＤである。好適には、ポリペプチドは配列番号１３を含み、または、より好適には、配列番号１３からなる。
【0130】
１０Ｇ１０および関連ポリペプチド
１０Ｇ１０および関連ポリペプチドのＣＤＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号２２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
１０Ｇ１０および関連ポリペプチドのＣＤＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号２２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0131】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号２２と比較して、２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号２２と比較して、２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号２２と比較して、２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0132】
好適には、配列番号２２のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＣＤＲ１は配列番号２２を含み、または、より好適には、配列番号２２からなる。
【0133】
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２３と５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より適切に、上記配列からなる。
【0134】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２３と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２３と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２３と比較して、８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0135】
好適には、配列番号２３のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0136】
好適には、ＣＤＲ２は配列番号２３を含み、または、より好適には、配列番号２３からなる。
【0137】
好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号２４と、６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0138】
代替的に、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号２４と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号２４と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号２４と比較して、３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、いかなる置換も配列番号２４のそれらの対応する残基に対して保存的である。
【0139】
好適には、配列番号２４のそれらの対応する残基と異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0140】
１０Ｇ１０および関連ポリペプチドのＦＲ
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号２５と、５％、１２％、１８％、２６％、３２％、３８％、４６％、５２％、５８％、６２％、６６％、６８％、７２％、７５％、７８％、８２％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号２５と、５％、１２％、１８％、２６％、３２％、３８％、４６％、５２％、５８％、６２％、６６％、６８％、７２％、７５％、７８％、８２％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0141】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号２５と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号２５と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ１は、配列番号２５と比較して、２８以下、より好適には２６以下、より好適には２４以下、より好適には２２以下、より好適には２０以下、より好適には１８以下、より好適には１６以下、より好適には１４以下、より好適には１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0142】
好適には、配列番号２５のそれらの対応する残基と異なるＦＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0143】
好適には、ＦＲ１は配列番号２５を含み、または、より好適には、配列番号２５からなる。
【0144】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号２６と、１０％、１５％、２５％、３０％、４０％、４５％、５５％、６０％、７０％、７５％、８５％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0145】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号２６と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号２６と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ２は、配列番号２６と比較して、１３以下、より好適には１２以下、より好適には１１以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0146】
好適には、配列番号２６のそれらの対応する残基と異なるＦＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。
【0147】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号２７と、８％、１５％、２０％、２６％、３２％、４０％、４５％、５２％、５８％、６５％、７０％、７６％、８０％、８２％、８５％、９０％、９２％、９５％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0148】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号２７と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号２７と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ３は、配列番号２７と比較して、２９以下、より好適には２７以下、より好適には２５以下、より好適には２３以下、より好適には２１以下、より好適には１９以下、より好適には１７以下、より好適には１５以下、より好適には１３以下、より好適には１１以下、より好適には９以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0149】
好適には、配列番号２７のそれらの対応する残基と異なるＦＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＦＲ３は配列番号２７を含み、または、より好適には、配列番号２７からなる。
【0150】
好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２８と、５％、１０％、２８％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0151】
代替的に、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２８と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２８と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドのＦＲ４は、配列番号２８と比較して、１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0152】
好適には、配列番号２８のそれらの対応する残基と異なるＦＲ４の任意の残基は、それらの対応する残基と比べて保存的置換である。好適には、ＦＲ４は配列番号２８を含み、または、より好適には、配列番号２８からなる。
【0153】
１０Ｇ１０および関連ポリペプチドの完全長配列
好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号２１と、５０％以上、より好適には５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９６％以上、より好適には９７％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号２１と、５０％以上、より好適には５５％以上、より好適には６０％以上、より好適には６５％以上、より好適には７０％以上、より好適には７５％以上、より好適には８０％以上、より好適には８５％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９６％以上、より好適には９７％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0154】
代替的に、本発明のポリペプチドは、配列番号２１と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の付加を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号２１と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の置換を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。好適には、本発明のポリペプチドは、配列番号２１と比較して、２０以下、より好適には１５以下、より好適には１０以下、より好適には９以下、より好適には８以下、より好適には７以下、より好適には６以下、より好適には５以下、より好適には４以下、より好適には３以下、より好適には２以下、より好適には１以下の欠失を有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなる。
【0155】
好適には、ポリペプチドのＮ末端はＤである。好適には、ポリペプチドは配列番号２１を含み、または、より好適には、配列番号２１からなる。
【0156】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ、１０Ｅ２、１０Ｇ１０、および関連ポリペプチドに関するさらなる実施形態
１つの実施形態では、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドが提供され、ここで、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、相補性決定領域（および、より好適にはフレームワーク領域）は、本明細書で開示される相補性決定領域（およびフレームワーク領域）から選択される。
１つの実施形態では、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドが提供され、ここで、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、相補性決定領域（および、より好適にはフレームワーク領域）は、本明細書で開示される相補性決定領域（およびフレームワーク領域）から選択される。
【0157】
１つの実施形態では、ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドが提供され、ここで、免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）を含み、ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号１、配列番号１４、または配列番号２２から選択される配列を含み、
ＣＤＲ２は、配列番号２、配列番号１５、または配列番号２３から選択される配列を含み、
ＣＤＲ３は、配列番号３、配列番号１６、または配列番号２４から選択される配列を含む。
ＣＤＲ１は、配列番号１、配列番号１４、または配列番号２２から選択される配列を含み、
ＣＤＲ２は、配列番号２、配列番号１５、または配列番号２３から選択される配列を含み、
ＣＤＲ３は、配列番号３、配列番号１６、または配列番号２４から選択される配列を含む。
【0158】
好適には、本発明で開示されるポリペプチドは、配列番号８、１１、１２、１３、２１、または２９－４５と７０％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上、より好適には９９．５％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より適切に、上記配列からなる。
【0159】
１つの実施形態では、配列番号８、１１、１２、１３、２１、または２９－４５と７０％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９８％以上、より好適には９９％以上、より好適には９９．５％以上の配列同一性を共有する配列を含み、または、より好適には、上記配列からなるポリペプチドが提供される。
【0160】
リンカーと多量体
本発明に係る構築物は、複数のポリペプチドを含み、好適には多価であり得る。このような構築物は、本発明に係る少なくとも２つの同一のポリペプチドを含み得る。本発明に係る２つの同一のポリペプチドからなる構築物は、「ホモビヘッド」である。本発明の１つの態様では、本発明の２つ以上の同一のポリペプチドを含む構築物が提供される。
本発明に係る構築物は、複数のポリペプチドを含み、好適には多価であり得る。このような構築物は、本発明に係る少なくとも２つの同一のポリペプチドを含み得る。本発明に係る２つの同一のポリペプチドからなる構築物は、「ホモビヘッド」である。本発明の１つの態様では、本発明の２つ以上の同一のポリペプチドを含む構築物が提供される。
【0161】
代替的に、構築物は、異なるが両方とも本発明に係るポリペプチド（「ヘテロビヘッド」）である少なくとも２つのポリペプチドを含み得る。
【0162】
代替的に、このような構築物は、（ａ）本発明に係る少なくとも１つのポリペプチドと、（ｂ）本発明のポリペプチド（「ヘテロビヘッド」でもある）ではない、抗体またはその抗原結合フラグメントなどの少なくとも１つのポリペプチドとを含んでいてもよい。（ｂ）の少なくとも１つのポリペプチドは、ＩＬ－２３に（例えば、異なるエピトープを介して（ａ）のそれに）結合してもよく、または、代替的にＩＬ－２３以外の標的に結合してもよい。好適には、異なるポリペプチド（ｂ）は、例えば、インターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、およびＩＬ－１８など）、インターロイキン受容体（ＩＬ－６ＲおよびＩＬ－７Ｒなど）、転写因子（ＮＦ－ｋＢなど）、サイトカイン（ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＴＧＦ－β、およびＴＳＬＰなど）、膜貫通タンパク質（ｇｐ１３０およびＣＤ３など）、表面糖タンパク質（ＣＤ４、ＣＤ２０、ＣＤ４０など）、可溶性タンパク質（ＣＤ４０Ｌなど）、インテグリン（ａ４ｂ７およびＡｌｐｈａＥｂｅｔａ７など）、接着分子（ＭＡｄＣＡＭなど）、ケモカイン（ＩＰ１０およびＣＣＬ２０など）、ケモカイン受容体（ＣＣＲ２およびＣＣＲ９など）、抑制タンパク質（ＳＭＡＤ７など）、キナーゼ（ＪＡＫ３など）、Ｇタンパク質共役型受容体（スフィンゴシン－１－Ｐ受容体など）、ヒトの病理学的プロセスに関与するその他の炎症性メディエーターまたは免疫学的に関連するリガンドに結合する。したがって、異なるポリペプチド（ｂ）は、例えば、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１－β、ＩＬ－１７Ａ、ＴＮＦ－α、またはＣＤ３、あるいは、ヒトの病理学的プロセスに関与する他の炎症性メディエーターまたは免疫学的に関連するリガンドに結合する。最も好適には、異なるポリペプチド（ｂ）はＴＮＦ－αに結合し、より好適には、異なるポリペプチド（ｂ）はＩＤ－３８Ｆである。
【0163】
構築物は、多価および／または多特異的であり得る。多価構築物（二価構築物など）は２つ以上の結合ポリペプチドを含み、したがって、１つ以上の抗原に結合が生じ得る２つ以上の部位を提示する。多価構築物の例は、ホモビヘッドまたはヘテロビヘッドであり得る。多特異性構築物（例えば、二重特異性構築物）は、（ａ）２つ以上の異なる抗原への結合が生じ得、または（ｂ）同じ抗原上の２つ以上の異なるエピトープへの結合が生じ得る２つ以上の部位を提示する、２つ以上の異なる結合ポリペプチドを含んでいる。多特異性構築物はヘテロビヘッドであり得る。多特異性構築物は多価である。
【0164】
好適には、構築物内に含まれるポリペプチドは抗体フラグメントである。より好適には、構築物内に含まれるポリペプチドは、ＶＨＨ、ＶＨ、ＶＬ、Ｖ－ＮＡＲ、ｓｃＦｖ、ＦＡｂフラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントからなるリストから選択される。より好適には、構築物内に含まれるポリペプチドはＶＨまたはＶＨＨであり、最も好適には、ＶＨＨである。
【0165】
本発明のポリペプチドは、互いに直接（すなわち、リンカーを使用せずに）、またはリンカーを介して、連結することができる。好適には、リンカーは、プロテアーゼに不安定な（「ａ ｌａｂｉｌｅ ｌｉｎｋｅｒ」）または非プロテアーゼ不安定（ｎｏｎ－ｐｒｏｔｅａｓｅ－ｌａｂｉｌｅ）リンカーである。リンカーは好適にはポリペプチドであり、ポリペプチドとそのエピトープへの結合を可能にするように選択される。治療目的で使用される場合、リンカーは、ポリペプチドが投与される対象において、好適には非免疫原性である。
【0166】
好適には、プロテアーゼ不安定リンカーは、
［－（ＧａＳ）ｘ－Ｂ－（ＧｂＳ）ｙ－］ｚ
のフォーマット、
（式中、
ａは１～１０であり、
ｂは１～１０であり、
ｘは１～１０であり、
ｙは１～１０であり、
ｚは１～１０であり、および、
ＢはＫまたはＲ（配列番号：７４）である）、
および、より好適には、
［－（Ｇ４Ｓ）ｘ－Ｂ－（Ｇ４Ｓ）ｙ－］ｚフォーマットである
（式中、
ｘは１～１０であり、
ｙは１～１０であり、
ｚは１～１０であり、および、
ＢはＫまたはＲである）。
［－（ＧａＳ）ｘ－Ｂ－（ＧｂＳ）ｙ－］ｚ
のフォーマット、
（式中、
ａは１～１０であり、
ｂは１～１０であり、
ｘは１～１０であり、
ｙは１～１０であり、
ｚは１～１０であり、および、
ＢはＫまたはＲ（配列番号：７４）である）、
および、より好適には、
［－（Ｇ４Ｓ）ｘ－Ｂ－（Ｇ４Ｓ）ｙ－］ｚフォーマットである
（式中、
ｘは１～１０であり、
ｙは１～１０であり、
ｚは１～１０であり、および、
ＢはＫまたはＲである）。
【0167】
より好適には、ａは２～５であり、ｂは２～５であり、ｘは１～３であり、ｙは１～３であり、ｚは１であり、およびＢはＫである。
【0168】
より好適には、プロテアーゼ不安定リンカーは、－（Ｇ４Ｓ）２－Ｋ－（Ｇ４Ｓ）２－（配列番号７５）というフォーマットである。
【0169】
好適には、ポリペプチドはすべて非プロテアーゼ不安定リンカーによって接続されている。好適には、非プロテアーゼ不安定リンカーは（Ｇ４Ｓ）ｘというフォーマットのものであり、ｘは１～１０である（配列番号７６）。最も好適には、ｘは６である（配列番号７７）。
【0170】
したがって、本発明に係る少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物が提供され、異なるポリペプチドはＴＮＦ－αに結合する。好適には、ＴＮＦαに結合するポリペプチドは、ＩＤ－３８Ｆまたはその変異体であり、例えば、ＩＤ－３８Ｆ（配列番号６７）と少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性、例えば、少なくとも９９％の配列同一性を共有するポリペプチドなどである。より好適には、ＴＮＦ－αに結合するポリペプチドは、ＩＤ－３８Ｆである。一実施形態では、この構築物は、（Ｇ４Ｓ）６などの非プロテアーゼ不安定リンカーを含む。代替的に、この構築物は、－（Ｇ４Ｓ）２－Ｋ－（Ｇ４Ｓ）２－などのプロテアーゼ不安定リンカーを含む。好適には、この構築物は、ＦＡ１Ｋ（配列番号４６）と少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を共有する。
【0171】
構築物が非プロテアーゼ不安定リンカーを含む実施形態では、好適には、構築物全体（すなわち、結合ポリペプチド（免疫グロブリン鎖可変ドメインであってもよい）および非プロテアーゼ不安定リンカー）は、トリプシンおよびキモトリプシンなどのプロテアーゼに対して実質的に耐性を有する。構築物がプロテアーゼ不安定リンカーを含む実施形態では、好適には、ポリペプチド（すなわち、免疫グロブリン鎖可変ドメインであり得る結合ポリペプチド）は、トリプシンおよびキモトリプシンなどのプロテアーゼに対して実質的に耐性を有するが、プロテアーゼ不安定リンカーはトリプシンまたはキモトリプシンなどのプロテアーゼに対して不安定である。
【0172】
ベクターと宿主
「ベクター」という用語は、本明細書に使用されるように、結合された別の核酸を運ぶことができる核酸分子を指すことを意図している。１つのタイプのベクターは「プラスミド」であり、それは、付加的なＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、付加的なＤＮＡセグメントはウイルスゲノムへライゲーションされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律増殖が可能である（例えば、複製およびエピソームの哺乳動物および酵母のベクターの細菌起源を有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入に際して宿主細胞のゲノムへ統合することができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが操作自在に結合される遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、「組換え発現ベクター」（または単に「組換えベクター」）と本明細書で呼ばれる。一般的に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターはしばしば、プラスミドの形態である。本明細書では、「プラスミド」と「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に用いられるベクターの形態であるため、互換的に使用することができる。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターの他の形態、ならびにバクテリオファージ系およびファージミド系を含むことを意図している。本発明はさらに、ポリペプチド配列、あるいは多価および／または多特異性構築物をコードするヌクレオチド配列にも関する。本明細書で使用されるように、「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことを意図している。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫を指すことも意図している。
「ベクター」という用語は、本明細書に使用されるように、結合された別の核酸を運ぶことができる核酸分子を指すことを意図している。１つのタイプのベクターは「プラスミド」であり、それは、付加的なＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、付加的なＤＮＡセグメントはウイルスゲノムへライゲーションされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律増殖が可能である（例えば、複製およびエピソームの哺乳動物および酵母のベクターの細菌起源を有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入に際して宿主細胞のゲノムへ統合することができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが操作自在に結合される遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、「組換え発現ベクター」（または単に「組換えベクター」）と本明細書で呼ばれる。一般的に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターはしばしば、プラスミドの形態である。本明細書では、「プラスミド」と「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に用いられるベクターの形態であるため、互換的に使用することができる。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターの他の形態、ならびにバクテリオファージ系およびファージミド系を含むことを意図している。本発明はさらに、ポリペプチド配列、あるいは多価および／または多特異性構築物をコードするヌクレオチド配列にも関する。本明細書で使用されるように、「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことを意図している。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫を指すことも意図している。
【0173】
本発明の１つの態様では、本発明のポリペプチドまたは構築物をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、または前記ポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡが提供される。本発明のさらなる態様では、本発明のポリペプチドまたは構築物を発現することができる、前記ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される。好適には、宿主細胞は、大腸菌などの細菌、アスペルギルス属、サッカロミセス属、クリベロマイセス属、ハンゼヌラ属、またはピキア属に属する酵母、例えば、サッカロミセス・セレビシエまたはピキア・パストリスである。
【0174】
安定性
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物は、経口投与された場合、および腸管への曝露後（例えば、小腸および／または大腸のプロテアーゼならびに／あるいはＩＢＤ炎症性プロテアーゼへの曝露後）に、中和能力および／または効力を実質的に保持する。そのようなプロテアーゼとしては、エンテロペプチダーゼ、トリプシン、キモトリプシン、および過敏性腸疾患炎症性プロテアーゼ（ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、およびカテプシンなど）が挙げられる。小腸および／または大腸のプロテアーゼ、または上記小腸および／または大腸で産生されるプロテアーゼは、腸内共生細菌叢および／または病原性細菌から供給されるプロテアーゼを含み、例えば、プロテアーゼは細胞膜付着プロテアーゼ、排泄プロテアーゼ、および細胞溶解時に放出されるプロテアーゼである。最も好適には、プロテアーゼは、トリプシンおよびキモトリプシンである。
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物は、経口投与された場合、および腸管への曝露後（例えば、小腸および／または大腸のプロテアーゼならびに／あるいはＩＢＤ炎症性プロテアーゼへの曝露後）に、中和能力および／または効力を実質的に保持する。そのようなプロテアーゼとしては、エンテロペプチダーゼ、トリプシン、キモトリプシン、および過敏性腸疾患炎症性プロテアーゼ（ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、およびカテプシンなど）が挙げられる。小腸および／または大腸のプロテアーゼ、または上記小腸および／または大腸で産生されるプロテアーゼは、腸内共生細菌叢および／または病原性細菌から供給されるプロテアーゼを含み、例えば、プロテアーゼは細胞膜付着プロテアーゼ、排泄プロテアーゼ、および細胞溶解時に放出されるプロテアーゼである。最も好適には、プロテアーゼは、トリプシンおよびキモトリプシンである。
【0175】
好適には、腸管は、イヌ、ブタ、ヒト、カニクイザル、またはマウスの腸管である。より適切に、腸管は、ヒト、カニクイザル、またはマウス、より好適には、マウスまたはヒト、最も好適にはヒトの腸管である。小腸は好適には十二指腸、空腸、および回腸からなる。大腸は好適には盲腸、結腸、直腸、および肛門管からなる。胃腸管は、胃腸管とは対照的に、小腸および大腸のみからなる。
【0176】
本発明のポリペプチドまたは構築物は、本発明のポリペプチドまたは構築物の本来の中和能力の好適には１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、または最も好適には１００％が、小腸および／または大腸に存在するプロテアーゼ、ならびに／あるいはＩＢＤ炎症性プロテアーゼに曝露後も保持されている場合に、中和能力を実質的に保持する。
【0177】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物は、小腸および／または大腸ならびに／あるいはＩＢＤ炎症性プロテアーゼに、例えば、３７℃で最大少なくとも１時間、より好適には最大少なくとも２時間、より好適には最大少なくとも３時間、より好適には最大少なくとも４時間、より好適には最大少なくとも７時間、より好適には最大少なくとも１６時間曝露後に、中和能力を実質的に保持する。
【0178】
「中和能力を実質的に保持する」とは、好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物が、本発明のポリペプチドまたは構築物の中和能力を、１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上保持することを意味する。
【0179】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物の中和能力の１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上は、腸管、より好適には小腸または大腸、より好適にはヒト糞便抽出物の条件に４時間暴露後、保持されている。
【0180】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物の中和能力の１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上は、腸管、より好適には小腸または大腸、より好適にはヒト糞便抽出物の条件に７時間暴露後、保持されている。
【0181】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物の中和能力の１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上は、腸管、より好適には小腸または大腸、より好適にはヒト糞便抽出物の条件に１６時間暴露後、保持されている。
【0182】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物の中和能力の１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上は、腸管、より好適には小腸または大腸、より好適にはマウス小腸上清の条件に１時間暴露後、保持されている。
【0183】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物の中和能力の１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上は、腸管、より好適には小腸または大腸、より好適にはマウス小腸上清の条件に４時間暴露後、保持されている。
【0184】
好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物の投与量の１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上は、ＩＬ－２３に対する中和能力を保持し、および、腸管の条件に１、２、３、４、５、６、または７時間曝露後、マウス、カニクイザル、および／またはヒトの糞便（好適には排泄された糞便または腸管から取り出された糞便）中に残っている。
【0185】
本発明のポリペプチドまたは本発明の構築物の投与された量の好適には１０％以上、より好適には２０％以上、より好適には３０％以上、より好適には４０％以上、より好適には５０％以上、より好適には６０％以上、より好適には７０％以上、より好適には８０％以上、より好適には９０％以上、より好適には９５％以上、より好適には９９％以上、最も好適には１００％が、小腸および／または大腸に存在するプロテアーゼならびに／あるいはＩＢＤ炎症性プロテアーゼに曝露後、インタクトなままであるときに、本発明のポリペプチドまたは本発明の構築物は実質的にはインタクトなままである。
【0186】
治療用途および送達
本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の治療上有効量は、対象への単回投与または複数回投与により、対象において有意な程度までＩＬ－２３を中和するのに有効な量である。治療上有効な量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびに個体において所望の応答を引き出すためのポリペプチド、医薬組成物、または構築物の能力に従って変動し得る。治療上有効な量は、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物のいかなる毒性または有害な効果も、治療上有益な効果によって上回られるような量である。本発明のポリペプチドまたは構築物は、対象への投与に適した医薬組成物に組み入れることができる。本発明のポリペプチドまたは構築物は、薬学的に許容可能な塩の形態であり得る。
本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の治療上有効量は、対象への単回投与または複数回投与により、対象において有意な程度までＩＬ－２３を中和するのに有効な量である。治療上有効な量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびに個体において所望の応答を引き出すためのポリペプチド、医薬組成物、または構築物の能力に従って変動し得る。治療上有効な量は、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物のいかなる毒性または有害な効果も、治療上有益な効果によって上回られるような量である。本発明のポリペプチドまたは構築物は、対象への投与に適した医薬組成物に組み入れることができる。本発明のポリペプチドまたは構築物は、薬学的に許容可能な塩の形態であり得る。
【0187】
本発明の医薬組成物は、好適には、経口、筋肉内、皮下、または静脈内送達のために製剤化され得る。本発明の医薬組成物は、様々な形態であり得る。これらは、例えば、液体、半固体、および固体の剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射溶液および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸薬、粉末、リポソーム、および坐薬を含む。固形剤形が好ましい。本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、賦形剤と共に組み込まれ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハースなどの形態で使用されてもよい。
【0188】
典型的には、医薬組成物は、本発明のポリペプチドまたは構築物と、薬学的に許容可能な希釈剤または担体とを含む。薬学的に許容可能な担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等の１つ以上、および、これらの組み合わせが挙げられる。薬学的に許容可能な担体はさらに、本発明のポリペプチドまたは構築物の有効期間または有効性を高める、湿潤剤あるいは乳化剤、保存料、または緩衝剤などの補助物質を少量含んでいてもよい。医薬組成物は、付着防止剤（ａｎｔｉａｄｈｅｒｅｎｔｓ）、結合剤、コーティング、崩壊剤、香料、着色料、潤滑剤、吸着剤、保存料、甘味料、凍結乾燥賦形剤（リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む）または圧縮補助剤を含んでもよい。
【0189】
最も好適には、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、経口投与される。経口投与の重要な問題は、十分なポリペプチド、医薬組成物、または構築物が、それが必要とされる腸管の領域に確実に到達することである。本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物が、それが必要とされる腸管の領域に到達することを妨げる要因としては、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物を分解することができる消化器分泌物中のプロテアーゼの存在が挙げられる。好適には、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、ポリペプチドまたは構築物自体の固有の特性により、そのようなプロテアーゼの１つ以上の存在下で実質的に安定している。好適には、本発明のポリペプチドまたは構築物は、医薬組成物に組み込まれる前に凍結乾燥される。
【0190】
本発明のポリペプチドには、腸溶性コーティングが提供されてもよい。腸溶性コーティングは、胃の低ｐＨからポリペプチドを保護するのに役立つ、経口薬に適用されるポリマーバリアである。腸溶性コーティングに用いられる材料としては、脂肪酸、ワックス、シェラック、プラスチック、および植物繊維が挙げられる。適切な腸溶性コーティング成分としては、アクリル酸メチル－メタクリル酸コポリマー、セルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ヒプロメロースアセテートサクシネート）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、メタクリル酸メチル－メタクリル酸コポリマー、アルギン酸ナトリウム、およびステアリン酸が挙げられる。適切な腸溶性コーティング剤としては、ｐＨ依存性放出ポリマーが挙げられる。これらは、胃の中で見られる強酸性のｐＨでは不溶性であるが、弱酸性のｐＨでは急速に溶解するポリマーである。したがって、好適には、腸溶性コーティングは、胃の酸性ジュース（ｐＨ～３）では溶解しないが、小腸（ｐＨ６以上）または結腸（ｐＨ７．０以上）に存在する高いｐＨ環境では溶解する。ｐＨ依存性放出ポリマーは、本発明のポリペプチドまたは構築物が、投与量が小腸に到達する頃に放出されるように選択される。
【0191】
本発明のポリペプチド、構築物、または医薬組成物は、水性溶媒または非水性溶媒、例えば、植物油または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールへの溶解、懸濁、または乳化により、および、望ましくは、従来の添加剤、例えば、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、および保存料を用いて、注射用の調製物へ製剤化可能である。許容可能な担体、賦形剤、および／または安定剤は、使用された投与量と濃度でレシピエントに無毒であり、緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、およびクエン酸を含む抗酸化剤；保存料（エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－ｃｈｌｏｒ－ｍ－クレゾール、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、あるいはこれらの組み合わせ）；アルギニン、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン、およびこれらの組み合わせなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、および他の炭水化物；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；ゼラチンまたは血清アルブミンなどのタンパク質；ＥＤＴＡなどのキレート剤；トレハロース、スクロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グルコサミン、Ｎ－メチルグルコサミン、ガラクトサミン、およびノイラミン酸などの糖；ならびに／あるいは、ポリソルベート、ＰＯＥエーテル、ポロキサマー、トリトン－Ｘ、またはポリエチレングリコールなどの非イオン界面活性剤を含む。
【0192】
本発明の医薬組成物は、（例えば、乾癬または湿疹などの自己免疫疾患の処置で使用するための）皮膚に局所的に送達されてもよい。このような医薬組成物は、好適には、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、フォーム、経皮パッチ、粉末、ペースト、またはチンキの形態であってよく、好適には、ビタミンＤ３アナログ（例えば、カルシポトリオールおよびマキサカルシトール）、ステロイド（例えば、プロピオン酸フルチカゾン、吉草酸ベタメタゾン、およびプロピオン酸クロベタゾール）、レチノイド（例えば、タザロテン）、コールタール、ならびにジトラノールを含み得る。局所用薬物はしばしば、互いに組み合わせて（例えば、ビタミンＤ３とステロイド）、またはサリチル酸などのさらなる薬剤と組み合わせて使用される。本発明の医薬組成物が乾癬または湿疹の治療のために局所的に送達される場合、好適には、乾癬または湿疹の治療に有効であると考えられるさらなる物質が、ヒドロコルチゾン（例えば、１％ヒドロコルチゾンクリーム）などのステロイド、とりわけ、クラス４またはクラス５のステロイド；シクロスポリン、または同様のマクロライド剤あるいはレチノイドなどの組成物に含まれてもよい。
【0193】
すべての送達様式について、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、組成物のｐＨを、５～５０、または、より好適には１５～４０、または、より好適には２５～３０ｇ／リットルの間の濃度で安定化させるために、緩衝液中で製剤化されてもよい。適切な緩衝液成分の例としては、クエン酸ナトリウムおよび／またはクエン酸などの生理的食塩が挙げられる。好適には、緩衝液は１００～２００、より好適には１２５～１７５ｍＭの生理的食塩、例えば、塩化ナトリウムを含む。好適には、緩衝液は、組成物のｐＨまたは患者の生理的ｐＨに近いｐＫａを有するように選択される。
【0194】
医薬組成物中の例示的なポリペプチドまたは構築物の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍｌ、または約１５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍｌの範囲であり得る。
【0195】
本発明のポリペプチド、構築物、または医薬組成物の水性製剤は、ｐＨ緩衝溶液、例えば、約４．０～約７．０または約５．０～約６．０の範囲、あるいは、代替的に約５．５のｐＨで調製され得る。適切な緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、および他の有機酸緩衝液が挙げられる。緩衝液の濃度は、例えば、緩衝液および製剤の所望の張性に応じて、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭであり得る。
【0196】
医薬組成物の張性は、張性調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）を含めることによって変えることができる。このような張性調節剤は、荷電または非荷電の化学種であり得る。代表的な非荷電張性調節剤としては、糖または糖アルコールまたは他のポリオール、好ましくはトレハロース、スクロース、マンニトール、グリセロール、１，２－プロパンジオール、ラフィノース、ソルビトールまたはラクチトール（特にトレハロース、マンニトール、グリセロール、または１，２－プロパンジオール）が挙げられる。代表的な荷電張性調節剤としては、ナトリウムイオン、カリウムイオン、またはカルシウムイオンと、塩化物イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、亜硫酸イオン、硝酸イオン、乳酸イオン、コハク酸イオン、酢酸イオン、またはマレイン酸イオン（特に塩化ナトリウムまたは硫酸ナトリウム）との組み合わせなどの塩；あるいは、アルギニンまたはヒスチジンなどのアミノ酸が挙げられる。好適には、水性製剤は等張性であるが、高張性または低張性の溶液が適している場合もある。「等張」という用語は、生理食塩液または血清などの、比較対象となる一部の他の溶液と同じ張力を有する溶液を表す。等張化剤は、約５ｍＭ～約３５０ｍＭの量、例えば、１ｍＭ～５００ｎＭの量で使用されてもよい。好適には、少なくとも１つの等張化剤が組成物中に含まれる。
【0197】
製剤化されたポリペプチドまたは構築物の凝集を低減し、および／または製剤中の微粒子の形成を最小化し、および／または吸着を低減するために、界面活性剤を医薬組成物に添加することもできる。例示的な界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ）、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロキサマー、プルロニック（登録商標））、およびドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。適切なポリオキシエチレンソルビタン－脂肪酸エステルの例としては、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０が挙げられる。界面活性剤の例示的な濃度は、約０．００１％ｗ／ｖ～約１０％ｗ／ｖの範囲であり得る。
【0198】
凍結乾燥プロセス中に不安定化条件から本発明のポリペプチドまたは構築物を保護するために、リオプロテクタントも添加され得る。例えば、既知のリオプロテクタントは、糖類（グルコース、スクロース、マンノース、およびトレハロースを含む）、ポリオール（マンニトール、ソルビトール、およびグリセロールを含む）、およびアミノ酸（アラニン、グリシン、およびグルタミン酸を含む）を含む。リオプロテクタントは、約１０ｍＭ～５００ｍＭの量で含まれ得る。
【0199】
本発明のポリペプチド、医薬組成物、または本発明の構築物の投与のための投与量範囲は、所望の治療効果を生成するためのものである。必要な投与量範囲は、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の正確な性質、投与経路、製剤の性質、患者の年齢、患者の疾患の性質、程度、あるいは重症度、（もしあれば）禁忌、および主治医の判断に依存する。これらの投与量レベルの変動は、最適化のための標準的で経験的な方法を使用して調節することができる。
【0200】
本発明のポリペプチド、医薬組成物、または本発明の構築物の適切な毎日の投与量は、１ｋｇ当たり５０ｎｇ～５０ｍｇの範囲であり、例えば、体重の１ｋｇ当たり５０ｕｇ～４０ｍｇ、例えば、１ｋｇ当たり５～３０ｍｇである。単位投与量は、１００ｍｇ未満から変動する場合があるが、典型的には１投与当たり２５０～２０００ｍｇの範囲であり、単位投与量は、毎日またはより頻繁で、例えば、１日当たり２、３、あるいは４回、またはより少ない頻度で、例えば、一日おきに、あるいは週に１回、２週間に１回、または月に１回投与されてもよい。
【0201】
本発明の一態様では、自己免疫疾患の処置のための薬剤の製造における、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用が提供される。本発明のさらなる態様では、必要とする人に治療上有効な量の本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物を投与する工程を含む、自己免疫疾患を処置する方法が提供される。
【0202】
「処置」との用語は、治療用処置と同様に予防も包含するように意図される。疾患の処置はその悪化の処置も包含し、および、疾患症状の再発を防ぐために、疾患症状から寛解している患者の処置も包含する。
【0203】
併用療法
本発明の医薬組成物は、１つ以上の活性薬剤（例えば、本明細書で記載される疾患を処置するのに適切な活性薬剤）も含み得る。自己免疫疾患の処置で通常使用される他の確立されている治療の補助剤として、あるいはその確立されている治療と組み合わせて、自己免疫疾患の処置のための治療方法で本発明の医薬組成物を使用することは、本発明の範囲内である。
本発明の医薬組成物は、１つ以上の活性薬剤（例えば、本明細書で記載される疾患を処置するのに適切な活性薬剤）も含み得る。自己免疫疾患の処置で通常使用される他の確立されている治療の補助剤として、あるいはその確立されている治療と組み合わせて、自己免疫疾患の処置のための治療方法で本発明の医薬組成物を使用することは、本発明の範囲内である。
【0204】
ＩＢＤ（クローン病または潰瘍性大腸炎などの）の処置の場合、可能性のある組み合わせとしては、例えば、５－アミノサリチル酸、またはそのプロドラッグ（スルファサラジン、オルサラジン、あるいはビサラジド（ｂｉｓａｌａｚｉｄｅ）など）；コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、あるいはブデソニド）；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキセート、アザチオプリン、あるいは６－メルカプトプリン）；抗ＴＮＦ－α抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、あるいはゴリムマブ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体（例えば、ウステキヌマブ）；抗ＩＬ６Ｒ抗体あるいは小分子ＩＬ１２／ＩＬ２３阻害剤（例えば、アピリモド（ａｐｉｌｉｍｏｄ））；抗α－４－β－７抗体（例えば、ベドリズマブ）；ＭＡｄＣＡＭ－１遮断薬（例えば、ＰＦ－００５４７６５９）；細胞接着分子α－４－インテグリンに対する抗体（例えば、ナタリズマブ）；ＩＬ２受容体αサブユニットに対する抗体（例えば、ダクリズマブあるいはバシリキシマブ）；ＪＡＫ３阻害剤（例えば、トファシチニブあるいはＲ３４８）；Ｓｙｋ阻害剤、およびそのプロドラッグ（例えば、ホスタマチニブならびにＲ－４０６）；ホスホジエステラーゼ－４阻害剤（例えば、テトミラスト）；ＨＭＰＬ－００４；プロバイオティクス；デルサラジン（Ｄｅｒｓａｌａｚｉｎｅ）；セマピモド（ｓｅｍａｐｉｍｏｄ）／ＣＰＳＩ－２３６４；および、プロテインキナーゼＣ阻害剤（例えば、ＡＥＢ－０７１）を含むリストから選択される１つ以上の活性薬剤との組み合わせが挙げられる。最も適切な組み合わせ剤は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴ、またはゴリムマブである。
【0205】
したがって、本発明の別の態様は、１つ以上のさらなる有効な薬剤、例えば、上に記載される１つ以上の活性薬剤と組み合わせた、本発明の医薬組成物を提供する。
【0206】
本発明のさらなる態様では、ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、上記リストから選択される少なくとも１つの活性薬剤と順次に、同時に、あるいは別々に投与される。
【0207】
同様に、本発明の別の態様は、
（Ａ）本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、および
（Ｂ）１つ以上の他の活性薬剤
を含む組み合わせ製品を提供し、ここで、成分（Ａ）と（Ｂ）の各々は、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合して製剤化される。本発明のこの態様では、組み合わせ製品は、単一（組み合わせ）製剤またはキット・オブ・パーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）のいずれかであり得る。したがって、本発明のこの態様は、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、および別の治療剤を含む組み合わせ製剤を包含する。
（Ａ）本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、および
（Ｂ）１つ以上の他の活性薬剤
を含む組み合わせ製品を提供し、ここで、成分（Ａ）と（Ｂ）の各々は、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合して製剤化される。本発明のこの態様では、組み合わせ製品は、単一（組み合わせ）製剤またはキット・オブ・パーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）のいずれかであり得る。したがって、本発明のこの態様は、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、および別の治療剤を含む組み合わせ製剤を包含する。
【0208】
本発明は、
（ｉ）薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、
（ｉｉ）薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された、１つ以上の他の活性薬剤を含む製剤
の成分を含むキット・オブ・パーツも包含し、成分（ｉ）と（ｉｉ）はそれぞれ、他方と組み合わせて投与するのに適した形態で提供される。
（ｉ）薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物、
（ｉｉ）薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された、１つ以上の他の活性薬剤を含む製剤
の成分を含むキット・オブ・パーツも包含し、成分（ｉ）と（ｉｉ）はそれぞれ、他方と組み合わせて投与するのに適した形態で提供される。
【0209】
したがって、キット・オブ・パーツの成分（ｉ）は、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された上記成分（Ａ）である。同様に、成分（ｉｉ）は、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈液、または担体と混合された上記成分（Ｂ）である。１つ以上の他の活性薬剤（つまり、上記成分（Ｂ））は、例えば、ＩＢＤ（例えば、クローン病および／または潰瘍性大腸炎）などの自己免疫疾患の処置に関して上述された、薬剤のいずれかであり得る。成分（Ｂ）が１つを超える活性薬剤の場合、これらのさらなる活性薬剤は、互いと製剤化されるか、成分（Ａ）と製剤化されるか、または、これらは別々に製剤化され得る。一実施形態では、成分（Ｂ）は１つの他の治療剤である。別の実施形態では、成分（Ｂ）は２つの他の治療剤である。本発明のこの態様の組み合わせ製品（組み合わせた製剤またはキット・オブ・パーツのいずれか）は、自己免疫疾患（例えば、本明細書で述べられる自己免疫疾患）の処置または予防で使用されてもよい。
【0210】
本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、薬剤としての使用に適しており、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置での使用により適している。
【0211】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患
免疫系が正常な体組織に有害に反応する場合、自己免疫疾患が発症する。自己免疫疾患は、体組織の損傷、異常な臓器の成長、および／または臓器機能の変化を結果としてもたらし得る。障害は、１つの臓器あるいは組織のタイプのみに影響を及ぼし得るか、または複数の臓器および組織に影響を及ぼし得る。自己免疫疾患によって一般に影響を受けた臓器および組織は、血液成分、例えば、赤血球、血管、結合組織、内分泌腺、例えば、甲状腺または膵臓、筋肉、関節、および皮膚を含む。炎症性疾患は、炎症によって特徴付けられる疾患である。多くの炎症性疾患は自己免疫疾患であり、その逆もまた同様である。
免疫系が正常な体組織に有害に反応する場合、自己免疫疾患が発症する。自己免疫疾患は、体組織の損傷、異常な臓器の成長、および／または臓器機能の変化を結果としてもたらし得る。障害は、１つの臓器あるいは組織のタイプのみに影響を及ぼし得るか、または複数の臓器および組織に影響を及ぼし得る。自己免疫疾患によって一般に影響を受けた臓器および組織は、血液成分、例えば、赤血球、血管、結合組織、内分泌腺、例えば、甲状腺または膵臓、筋肉、関節、および皮膚を含む。炎症性疾患は、炎症によって特徴付けられる疾患である。多くの炎症性疾患は自己免疫疾患であり、その逆もまた同様である。
【0212】
ＧＩＴの自己免疫疾患および／または炎症性疾患
小児と成人の両方を苦しめる慢性の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）クローン病および潰瘍性大腸炎は、ＧＩＴの自己免疫疾患および炎症性疾患の例である（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、２００２）。潰瘍性大腸炎は、炎症反応および形態変化が依然として結腸に限局されている状態として定義される。直腸は、患者の９５％に関与する。炎症は、大部分は粘膜に制限され、結腸の長さに沿った潰瘍、浮腫、および出血を伴う、可変重症度の連続的な障害からなる（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、２００２）。潰瘍性大腸炎は通常、排便の通過中の最も重度の下部の腹部痙攣とともに、便が混ざった血液と粘液の存在によって明示される。臨床的に、血液と粘液を伴う下痢の存在により、潰瘍性大腸炎と、血液が存在しない過敏性腸症候群とが区別される。潰瘍性大腸炎とは異なり、クローン病の症状は通常微妙であり、これが診断の遅れにつながる。障害の位置、範囲、および重症度などの因子は、胃腸症状の範囲を決定する。回結腸の障害（ｉｌｅｏｃｏｌｏｎｉｃ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）を有する患者は通常、食後の腹痛症を有し、右下腹部の圧痛、および時折、炎症性腫瘤を伴う。胃十二指腸のクローン病に関連する症状には、早期の満腹、悪心、嘔吐、心窩部痛、または嚥下障害が含まれる。肛門皮膚垂（ａｎａｌ ｔａｇｓ）、深い裂肛、およびフィステルを伴う肛門周囲の疾患は、一般的である（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、２００２）。ＧＩＴの他の疾患としては、例えば、炎症性疾患粘膜炎（適切に薬物誘導性粘膜炎および放射線誘導性粘膜炎）が挙げられる。粘膜炎では、病変が口から肛門までのいかなる場所にも生じる場合があり、口と食道の病変の場合、可変ドメインを含有する口腔洗浄薬またはクリームの調製物が使用され得る。肛門と直腸の病変の場合、可変ドメインを含有する坐薬、クリーム、またはフォームが、局所適用に適している。免疫グロブリン鎖可変ドメインは、炎症部位での血流中への吸収を介して、またはリンパ管クリアランス（ｌｙｍｐａｔｉｃ ｃｌｅａｒａｎｃｅ）とその後の血流への流入を介して、固有層あるいは他の炎症性部位から除去される。したがって、ドメインは、血流により肝臓に到達し、腎臓中の糸球体濾過により除去される。それゆえ、ドメインは、自己免疫性肝炎、ＩＩ型糖尿病、および糸球体腎炎などの疾患において治療的に機能するという十分な論理的根拠が存在する。
小児と成人の両方を苦しめる慢性の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）クローン病および潰瘍性大腸炎は、ＧＩＴの自己免疫疾患および炎症性疾患の例である（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、２００２）。潰瘍性大腸炎は、炎症反応および形態変化が依然として結腸に限局されている状態として定義される。直腸は、患者の９５％に関与する。炎症は、大部分は粘膜に制限され、結腸の長さに沿った潰瘍、浮腫、および出血を伴う、可変重症度の連続的な障害からなる（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、２００２）。潰瘍性大腸炎は通常、排便の通過中の最も重度の下部の腹部痙攣とともに、便が混ざった血液と粘液の存在によって明示される。臨床的に、血液と粘液を伴う下痢の存在により、潰瘍性大腸炎と、血液が存在しない過敏性腸症候群とが区別される。潰瘍性大腸炎とは異なり、クローン病の症状は通常微妙であり、これが診断の遅れにつながる。障害の位置、範囲、および重症度などの因子は、胃腸症状の範囲を決定する。回結腸の障害（ｉｌｅｏｃｏｌｏｎｉｃ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）を有する患者は通常、食後の腹痛症を有し、右下腹部の圧痛、および時折、炎症性腫瘤を伴う。胃十二指腸のクローン病に関連する症状には、早期の満腹、悪心、嘔吐、心窩部痛、または嚥下障害が含まれる。肛門皮膚垂（ａｎａｌ ｔａｇｓ）、深い裂肛、およびフィステルを伴う肛門周囲の疾患は、一般的である（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、２００２）。ＧＩＴの他の疾患としては、例えば、炎症性疾患粘膜炎（適切に薬物誘導性粘膜炎および放射線誘導性粘膜炎）が挙げられる。粘膜炎では、病変が口から肛門までのいかなる場所にも生じる場合があり、口と食道の病変の場合、可変ドメインを含有する口腔洗浄薬またはクリームの調製物が使用され得る。肛門と直腸の病変の場合、可変ドメインを含有する坐薬、クリーム、またはフォームが、局所適用に適している。免疫グロブリン鎖可変ドメインは、炎症部位での血流中への吸収を介して、またはリンパ管クリアランス（ｌｙｍｐａｔｉｃ ｃｌｅａｒａｎｃｅ）とその後の血流への流入を介して、固有層あるいは他の炎症性部位から除去される。したがって、ドメインは、血流により肝臓に到達し、腎臓中の糸球体濾過により除去される。それゆえ、ドメインは、自己免疫性肝炎、ＩＩ型糖尿病、および糸球体腎炎などの疾患において治療的に機能するという十分な論理的根拠が存在する。
【0213】
好適には、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、ＩＬ－２３が疾患の病態に寄与するＧＩ（胃腸）管の自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される。
【0214】
好適には、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸疾患（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、および薬物誘導性あるいは放射線誘発性の粘膜炎（より好適にはクローン病もしくは潰瘍性大腸炎、最も好適には潰瘍性大腸炎）からなるリストから選択されるＧＩ管の自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される。
【0215】
免疫グロブリン鎖可変ドメインの経口送達は、ＩＬ－２３が病態の少なくともある割合に寄与し、かつ免疫グロブリン鎖可変ドメインがＩＬ－２３が生物学上活性である組織に到達できる炎症性疾患を理想的に治療する。
【0216】
皮膚の自己免疫疾患および／または炎症性疾患
乾癬は、衰弱性で自己免疫性の皮膚科学的な疾患である。尋常性乾癬は、上記疾患の最も一般的な形態であり、銀色の鱗屑で覆われた紅色皮膚を特徴とする。組織学的には、画像は、炎症細胞浸潤を伴う乾癬プラーク内のケラチノサイトの無秩序な分化および過増殖の１つである（Ｏｒｔｏｎｎｅ、１９９９年）。乾癬皮膚病変は、特徴的な銀色の光沢のある鱗屑を伴う、様々な形状の炎症性の赤くはっきりと区切られたプラークである。乾癬との用語は、乾癬、および、紅斑、皮膚の厚化／隆起、ならびに鱗屑を含む乾癬の症状を含む。
乾癬は、衰弱性で自己免疫性の皮膚科学的な疾患である。尋常性乾癬は、上記疾患の最も一般的な形態であり、銀色の鱗屑で覆われた紅色皮膚を特徴とする。組織学的には、画像は、炎症細胞浸潤を伴う乾癬プラーク内のケラチノサイトの無秩序な分化および過増殖の１つである（Ｏｒｔｏｎｎｅ、１９９９年）。乾癬皮膚病変は、特徴的な銀色の光沢のある鱗屑を伴う、様々な形状の炎症性の赤くはっきりと区切られたプラークである。乾癬との用語は、乾癬、および、紅斑、皮膚の厚化／隆起、ならびに鱗屑を含む乾癬の症状を含む。
【0217】
乾癬の処置に有用である生物学的製剤は、抗ＴＮＦα治療剤（ＴＮＦに対するモノクローナル抗体、例えば、アダリムマブおよびインフリキシマブ、あるいはＴＮＦα受容体融合タンパク質、例えば、エタネルセプトなど）、ＣＤ１１ａ（エファリズマブ）のヒト化された抗体、またはアレファセプトなどのＣＤ２に結合する薬剤（それにより、ＣＤ２ ＬＦＡ３相互作用を遮断する）を含む。本明細書で示される生物学的製剤のすべてが、乾癬の処置での使用に承認されているとは限らないことに留意されたい。
【0218】
本発明のポリペプチドは、ＩＬ－２３がそのような病変の病態に寄与する炎症性の皮膚病変への投与のために、クリーム／軟膏あるいは他の局所的担体に取り込まれ得る。
【0219】
好適には、本発明のポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される皮膚の自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される。
【0220】
好適には、ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、ＩＬ－２３が観察された病態のある割合の原因となる他の自己免疫疾患／炎症性疾患の処置で使用される。
【0221】
調製方法
本発明のポリペプチドは、例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ２０１２ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓで開示される技術を使用して取得または操作することができる。
本発明のポリペプチドは、例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ２０１２ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓで開示される技術を使用して取得または操作することができる。
【0222】
モノクローナル抗体は、組織培養中で増大するその能力と抗体鎖合成の非存在のために選択された骨髄腫（Ｂ細胞癌）細胞を、特異的抗体を産生するＢ細胞と融合させることによって、ハイブリドーマ技術を使用して産生することができる。
【0223】
決定された抗原に対して向けられるモノクローナル抗体は、例えば、
ａ）ハイブリドーマを形成するために、決定された抗原で、不死の細胞で、および好ましくは骨髄細胞であらかじめ免疫化された動物の末梢血から得られたリンパ球を不死化すること、
ｂ）形成された不死化細胞（ハイブリドーマ）を培養し、所望の特異性を有する抗体を産生する細胞を回収すること、によって得られ得る。
ａ）ハイブリドーマを形成するために、決定された抗原で、不死の細胞で、および好ましくは骨髄細胞であらかじめ免疫化された動物の末梢血から得られたリンパ球を不死化すること、
ｂ）形成された不死化細胞（ハイブリドーマ）を培養し、所望の特異性を有する抗体を産生する細胞を回収すること、によって得られ得る。
【0224】
あるいは、ハイブリドーマ細胞の使用は必要とされない。したがって、モノクローナル抗体は、
ａ）ベクターへと、特にファージ、より具体的には糸状バクテリオファージへと、（好適に、決定された抗原であらかじめ免疫された）動物のリンパ球、特に末梢血リンパ球から得られたＤＮＡあるいはｃＤＮＡ配列をクローニングする工程、
ｂ）抗体の産生を可能にする条件で、上記ベクターで原核細胞を形質転換する工程、
ｃ）抗体を抗原－親和性の選択にさらすことによって、抗体を選択する工程、
ｄ）所望の特異性を有する抗体を回収する工程、
を含むプロセスによって得られ得る。
ａ）ベクターへと、特にファージ、より具体的には糸状バクテリオファージへと、（好適に、決定された抗原であらかじめ免疫された）動物のリンパ球、特に末梢血リンパ球から得られたＤＮＡあるいはｃＤＮＡ配列をクローニングする工程、
ｂ）抗体の産生を可能にする条件で、上記ベクターで原核細胞を形質転換する工程、
ｃ）抗体を抗原－親和性の選択にさらすことによって、抗体を選択する工程、
ｄ）所望の特異性を有する抗体を回収する工程、
を含むプロセスによって得られ得る。
【0225】
ラクダ科の動物を免疫化し、血液中を循環するＢ細胞のＶＨＨレパートリーをクローニングし（ＣｈｏｍｅｚｙｎｎｓｋｉとＳａｃｃｈｉ １９８７）、および、ファージ、酵母、あるいはリボソームディスプレイを使用して、免疫（Ａｒｂａｂｉ－Ｇｈａｈｒｏｕｄｉら、１９９７）および非免疫（Ｔａｎｈａら、２００２）のライブラリからの抗原特異性ＶＨＨを単離するための方法は既知である（ＷＯ９２／０１０４７、Ｎｇｕｙｅｎら、２００１年、およびＨａｒｍｓｅｎら、２００７）。
【0226】
ｓｃＦｖフラグメントおよびＦｖフラグメントなどの抗体の抗原結合フラグメントは単離され、大腸菌で発現される（Ｍｉｅｔｈｅら ２０１３年、Ｓｋｅｒｒａら １９８８年、Ｗａｒｄら １９８９）。
【0227】
ポリペプチドのアミノ酸配列についてはサイレントであるが、特定の宿主での翻訳に好ましいコドンをもたらすポリペプチドをコードする突然変異を、ＤＮＡあるいはｃＤＮＡに対して作ることができる。例えば、大腸菌、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける核酸の翻訳に好ましいコドンは既知である。
【0228】
ポリペプチドの突然変異は、例えば、ポリペプチドをコードする核酸への置換、付加、または欠失によって達成され得る。ポリペプチドをコードする核酸への置換、付加、または欠失は、例えば、エラープローンＰＣＲ、シャッフリング、オリゴヌクレオチド指向性突然変異、アセンブリＰＣＲ、ＰＣＲ突然変異誘発、インビボの突然変異誘発、カセット変異誘発、繰り返しアンサンブル突然変異誘発、指数的アンサンブル突然変異誘発、部位特異的な突然変異誘発（Ｌｉｎｇら １９９７）、遺伝子再構成、遺伝子部位飽和変異誘発（ＧＳＳＭ）、合成ライゲーション再構成（ＳＬＲ）、またはこれらの方法の組み合わせを含む多くの方法で導入することができる。核酸への修飾、付加、または欠失はまた、組換え、繰り返し配列組換え、ホスホチオエート修飾されたＤＮＡ変異誘発、ウラシル含有鋳型変異誘発、ギャップ付き二重鎖変異誘発、点ミスマッチ修復変異誘発、修復－欠損宿主株変異誘発、化学変異誘発、放射原性（ｒａｄｉｏｇｅｎｉｃ）変異誘発、欠失変異誘発、制限－選択変異誘発、制限－精製変異誘発、アンサンブル変異誘発、キメラ核酸多量体生成、またはそれらの組合せを含む方法によって導入することができる。
【0229】
特に、人工遺伝子合成が使用されてもよい（Ｎａｍｂｉａｒら １９８４年、ＳａｋａｍａｒとＫｈｏｒａｎａ １９８８、ウェルら １９８５年、およびＧｒｕｎｄｓｔｒｏｍら １９８５）。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子は、例えば、固相ＤＮＡ合成によって合成的に産生され得る。遺伝子全体は、前駆体鋳型ＤＮＡを必要とせずに、デノボ合成され得る。所望のオリゴヌクレオチドを得るために、ビルディングブロックは、産物の配列によって必要とされる順序で、成長しているオリゴヌクレオチド鎖に順次にカップリングされる。鎖集合が完成すると、産物は固相から溶液へと放出され、脱保護され、採取される。産物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって単離され、高純度の所望のオリゴヌクレオチドが得られ得る（ＶｅｒｍａとＥｃｋｓｔｅｉｎ １９９８）。
【0230】
ＶＨとＶＨＨなどの免疫グロブリン鎖可変ドメインの発現は、細菌、例えば、大腸菌などの原核細胞などの適切な発現ベクターを使用して達成することができる（例えば、ＷＯ９４／０４６７８で開示されるプロトコルに従って（この文献は参照により本明細書に組み込まれ、以下でさらに詳述される））。ＶＨとＶＨＨなどの免疫グロブリン鎖可変ドメインの発現はまた、真核細胞、例えば、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、または、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ属、あるいはＰｉｃｈｉａ属に属する酵母などの適切な酵母菌を使用して、達成することができる。好適には、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが使用される（例えば、ＷＯ９４／０２５５９１で開示されるプロトコルに従って（この文献は参照により本明細書に組み込まれ、以下でさらに詳述される））。
【0231】
具体的に、ＶＨＨは、
ａ）Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に、任意にＨｉｓ－タグを含むＶＨＨ（例えば、ラクダ科の動物のリンパ球から得られるか、または合成的に産生される）をコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡの配列をクローニングする工程、
ｂ）ＸｈｏＩ部位を含有するＶＨＨに特異的な５’プライマー、および配列ＴＣ ＴＴＡ ＡＣＴ ＡＧＴ ＧＡＧ ＧＡＧ ＡＣＧ ＧＴＧ ＡＣＣ ＴＧ（配列番号６８）を有するＳｐｅＩ部位を含有する３’プライマーを使用した増幅後に、クローン化されたフラグメントを回収する工程、
ｃ）ＸｈｏＩとＳｐｅＩの制限酵素を用いたベクターの消化の後に、Ｉｍｍｕｎｏ ＰＢＳベクター（Ｈｕｓｅら １９８９）において同相（ｉｎ ｐｈａｓｅ）で回収されたフラグメントをクローニングする工程、
ｄ）工程ｃの組換えＩｍｍｕｎｏ ＰＢＳベクターでのトランスフェクションによって、宿主細胞、特に大腸菌を形質転換する工程、
ｅ）例えば、プロテインＡ、陽イオン交換、あるいはＶＨＨがＨｉｓタグを含む場合、ニッケル親和性樹脂を使用したカラムでのクロマトグラフィーなどのアフィニティー精製によって、ＶＨＨコード配列の発現産物を回収する工程、を含むプロセスによって、大腸菌細胞を使用して、ＷＯ９４／０４６７８で開示される方法に従って調製することができる。
ａ）Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に、任意にＨｉｓ－タグを含むＶＨＨ（例えば、ラクダ科の動物のリンパ球から得られるか、または合成的に産生される）をコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡの配列をクローニングする工程、
ｂ）ＸｈｏＩ部位を含有するＶＨＨに特異的な５’プライマー、および配列ＴＣ ＴＴＡ ＡＣＴ ＡＧＴ ＧＡＧ ＧＡＧ ＡＣＧ ＧＴＧ ＡＣＣ ＴＧ（配列番号６８）を有するＳｐｅＩ部位を含有する３’プライマーを使用した増幅後に、クローン化されたフラグメントを回収する工程、
ｃ）ＸｈｏＩとＳｐｅＩの制限酵素を用いたベクターの消化の後に、Ｉｍｍｕｎｏ ＰＢＳベクター（Ｈｕｓｅら １９８９）において同相（ｉｎ ｐｈａｓｅ）で回収されたフラグメントをクローニングする工程、
ｄ）工程ｃの組換えＩｍｍｕｎｏ ＰＢＳベクターでのトランスフェクションによって、宿主細胞、特に大腸菌を形質転換する工程、
ｅ）例えば、プロテインＡ、陽イオン交換、あるいはＶＨＨがＨｉｓタグを含む場合、ニッケル親和性樹脂を使用したカラムでのクロマトグラフィーなどのアフィニティー精製によって、ＶＨＨコード配列の発現産物を回収する工程、を含むプロセスによって、大腸菌細胞を使用して、ＷＯ９４／０４６７８で開示される方法に従って調製することができる。
【0232】
あるいは、ＶＨとＶＨＨなどの免疫グロブリン鎖可変ドメインは、
ａ）決定された特異的抗原結合部位を有する、ＶＨＨをコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡの配列を得る工程、
ｂ）開始コドンおよびＨｉｎｄｌｌｌ部位を含有する５’プライマーと、ＸｈｏＩ部位を有する終止コドンを含有する３’プライマーとを使用して、得られたＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅する工程、
ｃ）プラスミドｐＭＭ９８４のＨｉｎｄｌｌｌ（位置２６５０）部位とＸｈｏＩ（位置４０６７）部位へと、増幅されたＤＮＡまたはｃＤＮＡを組み換える工程（Ｍｅｒｃｈｌｉｎｓｋｙら １９８３）、
ｄ）許容細胞、特にＮＢ－Ｅ細胞（Ｆａｉｓｓｔら １９９５）を組換えプラスミドでトランスフェクトする工程、
ｅ）得られた産物を回収する工程、を含むプロセスによって得ることができる。
ａ）決定された特異的抗原結合部位を有する、ＶＨＨをコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡの配列を得る工程、
ｂ）開始コドンおよびＨｉｎｄｌｌｌ部位を含有する５’プライマーと、ＸｈｏＩ部位を有する終止コドンを含有する３’プライマーとを使用して、得られたＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅する工程、
ｃ）プラスミドｐＭＭ９８４のＨｉｎｄｌｌｌ（位置２６５０）部位とＸｈｏＩ（位置４０６７）部位へと、増幅されたＤＮＡまたはｃＤＮＡを組み換える工程（Ｍｅｒｃｈｌｉｎｓｋｙら １９８３）、
ｄ）許容細胞、特にＮＢ－Ｅ細胞（Ｆａｉｓｓｔら １９９５）を組換えプラスミドでトランスフェクトする工程、
ｅ）得られた産物を回収する工程、を含むプロセスによって得ることができる。
【0233】
さらに、ＶＨＨまたはＶＨなどの免疫グロブリン鎖可変ドメインは、以下のように、大腸菌またはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを使用して、Ｆｒｅｎｋｅｎら、２０００年およびＷＯ９９／２３２２１（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）で開示される方法に従って産生することができる。
【0234】
免疫化されたラマから血液試料を採取し、フィコール（水溶液に容易に溶解する、中性の非常に分岐した高質量で親水性の多糖類－Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の不連続のグラジエント遠心分離によりリンパ球集団を濃縮し、酸性グアニジウムチオシアネート抽出（ａｃｉｄ ｇｕａｎｉｄｉｕｍ ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）（ＣｈｏｍｅｚｙｎｎｓｋｉとＳａｃｃｈｉ １９８７）によって全ＲＮＡを単離し、第１の鎖ｃＤＮＡ合成（例えば、ＲＰＮ １２６６ Ａｍｅｒｓｈａｍ）などのｃＤＮＡキットを使用）を行った後、ＷＯ９９／２３２２１の２２ページと２３ページ目に詳述される特異的なプライマーを使用して、ＶＨＨとＶＨフラグメントをコードするＤＮＡフラグメントおよび短いヒンジ領域または長いヒンジ領域の一部は、ＰＣＲ使用によって増幅される。ＰｓｔＩおよびＨｉｎｄＩＩＩまたはＢｓｔＥＩＩを有するＰＣＲフラグメント消化の際に、約３００～４５０ｂｐの長さのＤＮＡフラグメントは、アガロースゲル電気泳動によって精製され、大腸菌ファージミドベクターｐＵＲ４５３６あるいはエピソームのＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ発現ベクターｐＵＲ４５４８にそれぞれライゲーションされる。ｐＵＲ４５３６はｐＨＥＮ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、１９９１）に由来し、ラマＶＨＨとＶＨ遺伝子のクローニングを可能にするために、ｌａｃＩｑ遺伝子と特有の制限部位とを含有する。ｐＵＲ４５４８はｐＳＹ１（Ｈａｒｍｓｅｎら、１９９３）に由来する。ｌｅｕ２遺伝子中のＢｓｔＥＩＩ部位は、ＰＣＲによってこのプラスミドから除去され、ＳＵＣ２シグナル配列とターミネーターとの間のクローニング部位は、ＶＨ／ＶＨＨ遺伝子フラグメントのクローニングを促進するために置き換えられる。ＶＨ／ＶＨＨは検出のために、Ｃ末端にｃ－ｍｙｃタグを有する。個々の大腸菌ＪＭ１０９コロニーは、１％のグルコースおよび１００ｍｇのＬ－１アンピシリンを補充した１５０ｍｌの２ＴＹ培地を含む、９６ウェルマイクロタイタープレートに移される。一晩増殖させた後（３７℃）、プレートは、１００ｍｇのＬ－１アンピシリンおよび０．１ｍＭのＩＰＴＧを含む２ＴＹ培地中で２つ組みとする。さらに一晩インキュベーションし、任意選択で凍結および解凍した後、細胞は、遠心分離され、ペレット化され、上清はＥＬＩＳＡにおいて使用され得る。個別のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅコロニーは、選択的な最少培地（必須アミノ酸および塩基を補充した、０．７％の酵母窒素原基礎培地（ｙｅａｓｔ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｂａｓｅ）、２％のグルコース）を含む試験管に移され、３０℃で４８時間増殖される。その後、培養物は、ＹＰＧａｌ培地（１％の酵母エキス、２％のｂａｃｔｏペプトン、および５％のガラクトースを含む）中で１０倍希釈される。２４時間および４８時間の増殖後、細胞はペレット化され、培養液上清はＥＬＩＳＡで分析され得る。６００ｎｍ（ＯＤ６００）の吸光度が任意選択で測定される。
【0235】
さらに、ＶＨ／ＶＨＨなどの免疫グロブリン鎖可変ドメインは、以下のような手順を使用して、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを使用して産生することができる。
【0236】
ＶＨ／ＶＨＨをコードする天然に存在するＤＮＡ配列を単離するか、または、５’－ＵＴＲ、シグナル配列、終止コドンを含み、かつＳａｃＩ部位とＨｉｎｄＩＩＩ部位と隣接した、ＶＨ／ＶＨＨをコードする合成的に生成されたＤＮＡ配列を得る（そのような合成配列は上に概説されるように生成することができるか、あるいは、例えば、Ｇｅｎｅａｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）などの商業的供給業者に注文してもよい）。
【0237】
マルチコピー組込み（ＭＣＩ）ベクターｐＵＲ８５６９またはｐＵＲ８５４２へとＶＨ／ＶＨＨ遺伝子を移すために、制限部位を以下のように使用する。２５ｕｌのＶＨＨ ＤＮＡ（ＧｅｎｅａｒｔプラスミドあるいはＭＣＩベクター）、１ｕｌのＳａｃＩ、１ｕｌのＨｉｎｄＩＩＩ、ＮＥＢ緩衝液１（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）などの二重消化（ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）に適切な３ｕｌの緩衝液を使用して、シャトルベクター、カセット、または他の合成遺伝子構築物内に任意選択で含まれるＶＨＨをコードするＤＮＡ配列、およびＳａｃＩとＨｉｎｄＩＩＩを有するＭＣＩベクターを、３７度℃で一晩切断する。ＶＨＨをコードする消化されたＤＮＡ２５ｕｌ、および消化されたＭＣＩベクター２５ｕｌを、１ｘＴＡＥ緩衝液を含む１．５％のアガロースゲル上で泳動させ、その後、例えば、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してゲル抽出を実施する。消化されたＭＣＩベクターおよびＶＨ／ＶＨＨをコードする消化されたＤＮＡのライゲーションを、１００ｎｇのベクター、３０ｎｇのＶＨＨ遺伝子、１．５ｕｌの１０×リガーゼ緩衝液、１ｕｌのＴ４ＤＮＡリガーゼ、およびｄｄＨ２Ｏに設定する。その後、ライゲーションを１６℃で一晩実施する。
【0238】
次に、大腸菌細胞を形質転換する。化学コンピテントＸＬ－１ブルー細胞の場合、２００ｕｌの熱コンピテントＸＬ－１ブルー細胞を解凍し、氷上で５ｕｌのライゲーションミックスを約３０分添加し、その後、４２℃で９０秒間熱ショックを実施する。その後、２％のグルコースを補充した８００ｕｌのＬｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ低塩培地を添加し、細胞を３７℃で２時間回復させる。Ｌｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ寒天およびアンピシリン（１００ｕｇ／ｍｌ）プレート上に細胞をプレーティングし、３７℃で一晩維持した。電気コンピテントＴＧ１大腸菌細胞の場合、エレクトロポレーションキュベットを使用する。エレクトロポレーションキュベットで：５０ｕｌの電気コンピテントＴＧ１細胞および１ｕｌのライゲーションミックスを約１５分間氷上で解凍する。ホルダーにキュベットを置き、パルスをかける。５００ｕｌの２ＴＹ培地を添加し、３７℃で３０分間細胞を回復させる。アンピシリン（１００ｕｇ／ｍｌ）および２％のグルコースを含むＬｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ、寒天プレート上に１００ｕｌの細胞をプレーティングする。プレートを３７℃で一晩維持する。
【0239】
上に詳述されるようにＶＨ／ＶＨＨ遺伝子を大腸菌にクローニングした後、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを線形化されたＭＣＩベクターで形質転換することができる。形質転換を実施する前に、いくつかの工程を行う：（ｉ）ＤＮＡは消化によって環状から線形に変化されなければならないか、そうでなければＤＮＡは酵母ゲノムに統合することができない、および（ｉｉ）消化されたＤＮＡは、エタノール沈澱によって不純物が除去されなければならない。さらに、変化プロセス中に酵母菌は半透過性になり、そのためＤＮＡが細胞膜を通ることができる。
【0240】
酵母形質転換の準備：以下のように、ＶＨ／ＶＨＨ遺伝子を発現する選択された大腸菌コロニーから調製されたミディプレップ（ｍｉｄｉ－ｐｒｅｐ）のＨｐａＩ消化を実施する。２０ｎｇのミディプレップ、５ｕｌのＨｐａＩ、ＮＥＢ４緩衝液（ＢｉｏＬａｂｓ）などの１０ｕｌの適切な緩衝液、およびｄｄＨ２Ｏを含む１００ｕｌの溶液を調製する。
【0241】
ＨｐａＩを有するＤＮＡを室温で一晩切断する。次に、エタノール沈澱を実施する（および、ＨｐａＩ消化からの５ｕｌの試料を片側に置く）。３００ｕｌのエタノール１００％を、９５ｕｌのＨｐａＩの消化されたミディプレップに添加し、ボルテックスし、フルスピードで５分間回転させる。ペレットが存在する場合、慎重にデカントし、１００ｕｌのエタノール７０％を添加し、その後、５分間再びフルスピードで回転させる。再び試料をデカントし、ペレットが乾燥するまで５０～６０℃で維持する。ペレットを５０ｕｌのｄｄＨ２Ｏに再懸濁する。５ｕｌを、５ｕｌのＨｐａＩ消化試料と並べてゲル上で泳動させる。
【0242】
酵母形質転換：ＹＮＢｇｌｕプレートを調製する。１０ｇの寒天＋４２５ｍｌの水（殺菌済み）、２５ｍｌの濾過した２０×ＹＮＢ（２５ｍｌの殺菌したＨ２Ｏ中の３．３５ｇのＹＮＢ（酵母窒素原基礎培地））、および５０ｍｌの無菌２０％グルコースを使用し、ペトリ皿に注ぐ。マスタープレートから１つの酵母コロニーを取り、３ｍｌのＹＰＤ（酵母エキスペプトンデキストロース（Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ Ｐｅｐｔｏｎｅ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ））中で３０℃で一晩増殖させる。次の日、約６００ｍｌのＹＰＤを調製し、これを使用して、３つのフラスコを２７５ｍｌ、２２５ｍｌ、および１００ｍｌのＹＰＤで充填する。２７．５ｕｌの酵母ＹＰＤ培養物を第１のフラスコに添加し、穏やかに混合する。第１のフラスコから７５ｍｌをとり、第２のフラスコ入れ、穏やかに混合する。第２のフラスコから１００ｍｌをとり、第３のフラスコに入れ、穏やかに混合する。１～２のＯＤ６６０に到達するまで増殖させる。このＯＤに到達したフラスコを、４つのＦａｌｃｏｎチューブにそれぞれ±４５ｍｌで分ける。４２００ｒｐｍで２分間回転させる。上清を廃棄する。４５ｍｌのＨ２Ｏを含む２つのＦａｌｃｏｎチューブにペレットを溶解する（チューブの数を４から２に減らす）。４２００ｒｐｍで２分間回転させる。４５ｍｌのＨ２Ｏにペレットを溶解する（チューブを２つから１に）。４２００ｒｐｍで２分間回転させる。５ｍｌの酢酸リチウム（ＬｉＡｃ）（１００ｍＭ）にペレットを穏やかに溶解し、数秒間回転させる。慎重に一部のＬｉＡｃを廃棄し、ＬｉＡｃの半分以上をチューブ内に保持する。細胞をボルテックスし、担体ＤＮＡを５分間沸騰させ、氷水中で素早く冷却する。２４０ｕｌのＰＥＧ、５０ｕｌの細胞、３６ｕＬｉＡｃ（１Ｍ）、２５ｕｌの担体ＤＮＡ、４５ｕｌのエタノール沈殿したＶＨ／ＶＨＨを含む１５ｍｌチューブに添加する。各工程後に穏やかに混合する（ブランク試料を同様に処理する、ただし、エタノール沈殿ＶＨ／ＶＨＨを用いない）。３０℃で３０分間インキュベートし、３～４回穏やかに反転させ、その後、４２℃で２０～２５分間熱ショックを行う。最大６０００ｒｐｍで短時間回転させる。上清を穏やかに取り除き、２５０ｕｌのｄｄＨ２Ｏを添加し、混合する。そのすべてを、プレートが乾燥するまでＹＮＢｇｌｕプレート上にストリークし、３０℃で４～５日間増殖させる。最後に、６つの等しい部分にプレートを分けることによってＹＮＢｇｌｕを調製し、その部分を１から６に番号を付け、最も大きなコロニーを播種し、番号１をストリークする。大きいものから小さいものへ、１から６へと、他のコロニーに対して繰り返す。コロニーが産生されるまで、３０℃で３～４日間大きく増殖させる。ＶＨ／ＶＨＨクローンは、炭素源としてグルコースを使用して増殖させ、ＶＨ／ＶＨＨ発現の誘導は、０．５％のガラクトースの添加により、ガラクトース－７－プロモーターを活性化することによって行われる。３ｍＬの小規模培養を実施してコロニーを試験し、ＶＨまたはＶＨＨの最良の発現を示すものを選択する。その後、このコロニーを精製で使用する。
【0243】
精製：ＶＨ／ＶＨＨは、強力なアニオン樹脂（Ｃａｐｔｏ Ｓなど）による陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製される。１日目に、５ｍｌのＹＰＤ培地（ＹＰ培地＋２％のグルコース）に、ＶＨ／ＶＨＨを発現する選択された酵母コロニーを播種し、２５ｍＬの密封した滅菌チューブ内で細胞を３０℃で一晩増殖させる（１８０ｒｐｍで振盪させながら）。２日目に、５ｍｌの一晩の培養物を、５０ｍＬの新たに調製したＹＰ培地＋２％のグルコース＋０．５％のガラクトースに希釈し、２５０ｍｌの曝気し調節されたフラスコ内で細胞を３０℃で２晩かけて増殖させる（１８０ｒｐｍで振盪させながら）。４日目に、心分離機において細胞を４２００ｒｐｍで２０分間回転させて沈殿させた。強力なアニオン樹脂を使用した陽イオン交換精製工程：リガンドを含む上清のｐＨを３．５に調節する。５０ｍＬの上清につき０．７５ｍｌの樹脂（＋／－０．５ｍＬのスラリー）を５０ｍＬのｄｄＨ２Ｏで洗浄し、その後、結合緩衝液で３回洗浄する。洗浄した樹脂を上清に添加し、振盪機上で、懸濁液を４℃で１．５時間インキュベートする。５００ｇで２分間の遠心分離によって樹脂に結合したＶＨ／ＶＨＨをペレット化し、これを洗浄緩衝液で洗浄する。上清をデカントし、１０ｍＬの結合緩衝液で樹脂を再懸濁する。ＰＤ－１０カラム内にフィルターを置き、カラムに樹脂を注ぎ、樹脂をしばらくの間沈降させ、その後、樹脂の上にフィルターを加える。結合緩衝液がすべて流れ出るまで待つ。６×０．５ｍｌの溶出緩衝液でＶＨ／ＶＨＨを溶出する。エッペンドルフチューブ内に溶出液画分を集める。Ｎａｎｏｄｒｏｐにより、６つの溶離した画分のタンパク濃度を測定する。ＶＨＨを含む画分をプールし、３，５００Ｄａのカットオフの透析膜に溶液を移す。３ＬのＰＢＳに対して、精製されたタンパク質溶液を４℃で一晩透析する。５日目に、２Ｌの新鮮なＰＢＳに対して、精製されたタンパク質溶液を４℃でさらに２時間透析する。最後に、ＢＣＡによって最終濃度を計算する。ＶＨ／ＶＨＨに関して述べられているが、上述される技術は、必要に応じて、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｖ、および他の抗体フラグメントに使用されてもよい。
【0244】
複数の抗原結合フラグメント（好適にはＶＨ／ＶＨＨ）は、Ｂｌａｔｔｌｅｒら、１９８５などによって記載される有機誘導体化剤とアミノ酸残基を反応させることによって、化学的架橋によって融合され得る。あるいは、抗原結合フラグメントは、ＤＮＡレベルで遺伝学的に融合さてもよく、すなわち、１つ以上の抗原結合フラグメントを含む完全なポリペプチドの構築物をコードするポリヌクレオチド構築物が形成されてもよい。遺伝子経路を介して複数の抗原結合フラグメントを接合する１つの方法は、抗原結合フラグメントをコードする配列を、直接あるいはペプチドリンカーを介して連結することによるものである。例えば、第１の抗原結合フラグメントのカルボキシ末端は、次の抗原結合フラグメントのアミノ末端に連結され得る。この連結モードは、トリ－、テトラ－などの官能性の構築物の構築のために抗原結合フラグメントを連結するべく、拡張することができる。多価（二価など）のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、ＷＯ９６／３４１０３（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）で開示されている。
【0245】
好適には、本発明のポリペプチド（特に、本発明のＶＨＨ）は、ＷＯ０２／４８３８２で開示された方法に従って、酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌において産生することができ、これは炭素源を含む培地上での真菌の増殖を含み、ここで、５０～１００ｗｔ％の前記炭素源はエタノールである。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおけるＶＨＨフラグメントの大規模産生は、Ｔｈｏｍａｓｓｅｎら ２００２に記載されている。
【0246】
本発明の一態様では、本発明のポリペプチドまたは構築物の調製のためのプロセスが提供され、上記プロセスは、
ｉ）本発明のポリヌクレオチドをプラスミドなどのベクターにクローニングする工程、
ｉｉ）本発明のポリペプチドまたは構築物を産生することができる細菌細胞あるいは酵母細胞などの細胞を、ポリペプチドまたは構築物の産生を可能にする条件において、前記ベクターで形質転換する工程、
ｉｉｉ）親和性クロマトグラフィーなどによって、ポリペプチドまたは構築物を回収する工程を含む。
ｉ）本発明のポリヌクレオチドをプラスミドなどのベクターにクローニングする工程、
ｉｉ）本発明のポリペプチドまたは構築物を産生することができる細菌細胞あるいは酵母細胞などの細胞を、ポリペプチドまたは構築物の産生を可能にする条件において、前記ベクターで形質転換する工程、
ｉｉｉ）親和性クロマトグラフィーなどによって、ポリペプチドまたは構築物を回収する工程を含む。
【0247】
本発明の実施形態さらに設定する項は、以下の通りである。
１．ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２と５０％以上の配列同一性共有する配列を含み、ＣＤＲ３は、配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
２．ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１に記載のポリペプチド。
３．ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項２に記載のポリペプチド。
４．配列番号３にそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）である、項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
５．配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基はＩである、項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
６．配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基はＬである、項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
７．配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基は、ＩまたはＬであり、配列番号３中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の他の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項４に記載のポリペプチド。
８．ＣＤＲ３は配列番号３を含む、項２に記載のポリペプチド。
９．ＣＤＲ３は配列番号３からなる、項３に記載のポリペプチド。
１０．ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１１．ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項１０に記載のポリペプチド。
１２．配列番号１中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１３．ＣＤＲ１は配列番号１を含む、項１１に記載のポリペプチド。
１４．ＣＤＲ１は配列番号１からなる、項１３に記載のポリペプチド。
１５．ＣＤＲ２は、配列番号２と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１６．ＣＤＲ２は、配列番号２と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項１５に記載のポリペプチド。
１７．配列番号２の残基番号９に対応するＣＤＲ２の残基はＤあるいはＨであり、および／または、配列番号２の残基番号１０に対応するＣＤＲ２の残基はＹあるいはＤであり、および／または、配列番号２の残基番号１１に対応するＣＤＲ２の残基はＳ、Ｇ、Ｒ、あるいはＡ（例えば、Ｓ、Ｒ、あるいはＡ、例えば、ＳあるいはＡ）、および／または、配列番号２の残基番号１４に対応するＣＤＲ２の残基はＶあるいはＡである、項１－１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１８．配列番号２中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－１７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１９．ＣＤＲ２は配列番号２を含む、項１５に記載のポリペプチド。
２０．ＣＤＲ２は配列番号２からなる、項１９に記載のポリペプチド。
２１．ＦＲ１は、配列番号４と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－２０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
２２．ＦＲ１は、配列番号４と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項２１に記載のポリペプチド。
２３．配列番号４の残基番号１に対応するＦＲ１の残基は、ＤまたはＥである、項１－２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
２４．配列番号４の残基番号１に対応するＦＲ１の残基はＤである、項２３に記載のポリペプチド。
２５．配列番号４の残基番号１～５に対応するＦＲ１の残基は、ＤＶＱＬＶである、項２４に記載のポリペプチド。
２６．配列番号４にそれらの対応する残基とは異なるＦＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－２５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
２７．ＦＲ１は配列番号４を含む、項２１に記載のポリペプチド。
２８．ＦＲ１は配列番号４からなる、項２７に記載のポリペプチド。
２９．ＦＲ２は、配列番号５と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－２８のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３０．ＦＲ２は、配列番号５と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項２９に記載のポリペプチド。
３１．配列番号５中のそれらの対応する残基とは異なるＦＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－３０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３２．ＦＲ２は配列番号５を含む、項２９に記載のポリペプチド。
３３．ＦＲ２は配列番号５からなる、項３２に記載のポリペプチド。
３４．ＦＲ３は、配列番号６と８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－３３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３５．ＦＲ３は、配列番号６と８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項３４に記載のポリペプチド。
３６．配列番号６中のそれらの対応する残基とは異なるＦＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－３５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３７．ＦＲ３は配列番号６を含む、項３４に記載のポリペプチド。
３８．ＦＲ３は配列番号６からなる、項３７に記載のポリペプチド。
３９．ＦＲ４は、配列番号７と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－３８のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４０．ＦＲ４は、配列番号７と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項３９に記載のポリペプチド。
４１．配列番号７中のそれらの対応する残基とは異なるＦＲ４の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－４０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４２．ＦＲ４は配列番号７を含む、項３９に記載のポリペプチド。
４３．ＦＲ４は配列番号７からなる、項４２に記載のポリペプチド。
４４．配列番号８と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－４３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４５．配列番号８と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項４４に記載のポリペプチド。
４６．ポリペプチドのＮ末端はＤである、項１－４５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４７．配列番号８を含む、項４４に記載のポリペプチド。
４８．配列番号８からなる、項４７に記載のポリペプチド。
４９．ＩＬ－２３を結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、
（ａ）ＣＤＲ１は、配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号２と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、および、ＣＤＲ３は、配列番号３と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、
（ｂ）ＦＲ１は、配列番号４と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、ＦＲ２は、配列番号５と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、ＦＲ３は、配列番号６と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、および、ＦＲ４は、配列番号７と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、ならびに、
（ｃ）ポリペプチドは、配列番号８と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、ポリペプチド。
５０．ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は、配列番号１４と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号１５と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号１６と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
５１．ＣＤＲ３は、配列番号１６と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０に記載のポリペプチド。
５２．ＣＤＲ３は、配列番号１６と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項５１に記載のポリペプチド。
５３．配列番号１６中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項５０－５２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５４．ＣＤＲ３は配列番号１６を含む、項５１に記載のポリペプチド。
５５．ＣＤＲ３は配列番号１６からなる、項５４に記載のポリペプチド。
５６．ＣＤＲ１は、配列番号１４と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－５５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５７．ＣＤＲ１は、配列番号１４と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項５６に記載のポリペプチド。
５８．配列番号１４中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項５０－５７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５９．ＣＤＲ１は配列番号１４を含む、項５６に記載のポリペプチド。
６０．ＣＤＲ１は配列番号１４からなる、項５９に記載のポリペプチド。
６１．ＣＤＲ２は、配列番号１５と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－６０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６２．ＣＤＲ２は、配列番号１５と６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項６１に記載のポリペプチド。
６３．配列番号１５中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項５０－６２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６４．ＣＤＲ２は配列番号１５を含む、項６１に記載のポリペプチド。
６５．ＣＤＲ２は配列番号１５からなる、項６４に記載のポリペプチド。
６６．（ａ）ＦＲ１は、配列番号１７と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｂ）ＦＲ２は、配列番号１８と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｃ）ＦＲ３は、配列番号１９と８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ならびに／あるいは、
（ｄ）ＦＲ４は、配列番号２０と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－６５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６７．ＦＲ１は配列番号１７を含み、および／またはＦＲ２は配列番号１８を含み、および／またはＦＲ３は配列番号１９を含み、および／またはＦＲ４は配列番号２０を含む、項６６に記載のポリペプチド。
６８．配列番号１３と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－６７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６９．配列番号１３を含むか、または配列番号１３からなる、項６８に記載のポリペプチド。
７０．Ｌ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は、配列番号２２と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号２４と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
７１．ＣＤＲ３は、配列番号２４と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０に記載のポリペプチド。
７２．ＣＤＲ３は、配列番号２４と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項７１に記載のポリペプチド。
７３．配列番号２４中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項７０－７２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７４．ＣＤＲ３は配列番号２４を含む、項７１に記載のポリペプチド。
７５．ＣＤＲ３は配列番号２４からなる、項７４に記載のポリペプチド。
７６．ＣＤＲ１は、配列番号２２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－７５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７７．ＣＤＲ１は、配列番号２２と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項７６に記載のポリペプチド。
７８．配列番号２２中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項７０－７７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７９．ＣＤＲ１は配列番号２２を含む、項７６に記載のポリペプチド。
８０．ＣＤＲ１は配列番号２２からなる、項７９に記載のポリペプチド。
８１．ＣＤＲ２は、配列番号２３と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－８０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８２．ＣＤＲ２は、配列番号２３と６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項８１に記載のポリペプチド。
８３．配列番号２３中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項７０－８２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８４．ＣＤＲ２は配列番号２３を含む、項８１に記載のポリペプチド。
８５．ＣＤＲ２は配列番号２３からなる、項８４に記載のポリペプチド。
８６．（ａ）ＦＲ１は、配列番号２５と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｂ）ＦＲ２は、配列番号２６と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｃ）ＦＲ３は、配列番号２７と、８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ならびに／あるいは、
（ｄ）ＦＲ４は、配列番号２８と、５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－８５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８７．ＦＲ１は配列番号２５を含み、および／またはＦＲ２は配列番号２６を含み、および／またはＦＲ３は配列番号２７を含み、および／またはＦＲ４は配列番号２８を含む、項８６に記載のポリペプチド。
８８．配列番号２１と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－８７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８９．配列番号２１を含むか、または配列番号２１からなる、項８８に記載のポリペプチド。
９０．ポリペプチドは抗体である、項１－８９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
９１．ポリペプチドは抗体フラグメントである、項９０に記載のポリペプチド。
９２．ＶＨＨ、ＶＨ、ＶＬ、Ｖ－ＮＡＲ、Ｆａｂフラグメント、およびＦ（ａｂ’）２フラグメントからなるリストから選択される、項９１に記載のポリペプチド。
９３．ポリペプチドはＶＨＨである、項９２に記載のポリペプチド。
９４．ポリペプチドはＶＨである、項９２に記載のポリペプチド。
９５．項１－９４のいずれか１つに記載の２つ以上の同一のポリペプチドを含む構築物。
９６．項１－９４のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物であって、ここで、上記異なるポリペプチドはＴＮＦαに結合する、構築物。
９７．項１－９４のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物であって、ここで、上記異なるポリペプチドはＴＮＦα以外の標的に結合する、構築物。
９８．ポリペプチドは、少なくとも１つのプロテアーゼ不安定性リンカーによって接続される、項９５－９７のいずれか１つに記載の構築物。
９９．プロテアーゼ不安定性リンカーは下記フォーマット
［－（ＧａＳ）ｘ－Ｂ－（ＧｂＳ）ｙ－］ｚ
のものであり、
ここで、
ａは１～１０であり、
ｂは１～１０であり、
ｘは１～１０であり、
ｙは１～１０であり、
ｚは１～１０であり、および、
ＢはＫまたはＲである、項９８に記載の構築物。
１００．ａは２～５であり、ｂは２～５であり、ｘは１～３であり、ｙは１～３であり、ｚは１であり、および、ＢはＫである、項９９に記載の構築物。
１０１．構築物は、配列番号４６を含むか、またはより好適には配列番号４６からなる、項１００に記載の構築物。
１０２．ポリペプチドはすべて、非プロテアーゼ不安定性リンカーによって接続される、項９５－９７のいずれか１つに記載の構築物。
１０３．非プロテアーゼ不安定性リンカーは下記フォーマット
（Ｇ４Ｓ）ｘ
のものであり、
ここで、
ｘは１～１０である、項１０２に記載の構築物。
１０４．ｘは６である、項１０３に記載の構築物。
１０５．５ｎＭ以下、例えば、４ｎＭ以下、例えば、３ｎＭ以下、例えば、２ｎＭ以下、例えば、１．７ｎＭ以下、例えば、１．５ｎＭ以下、例えば、１．４ｎＭ以下、例えば、１．３ｎＭ以下、例えば、１．２ｎＭ以下、例えば、１．１ｎＭ以下、例えば、１．０ｎＭ以下、例えば、０．９ｎＭ以下、例えば、０．８ｎＭ以下、例えば、０．７５ｎＭ以下、例えば、０．７０ｎＭ以下、例えば、０．６５ｎＭ以下、例えば、０．６０ｎＭ以下、例えば、０．５５ｎＭ以下、例えば、０．５０ｎＭ以下、例えば、０．４５ｎＭ以下、例えば、０．４０ｎＭ以下、例えば、０．３５ｎＭ以下、例えば、０．３０ｎＭ以下、例えば、０．２５ｎＭ以下、例えば、０．２０ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）においてヒトＩＬ－２３を中和する、項１－１０４のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１０６．１つ以上のプロテアーゼに対して実質的に耐性である、項１－１０５のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１０７．１つ以上のプロテアーゼは、胃、または、小腸あるいは大腸に存在する、項１０６に記載のポリペプチドまたは構築物。
１０８．１つ以上のプロテアーゼは小腸に存在する、項１０７に記載のポリペプチドまたは構築物。
１０９．１つ以上のプロテアーゼは、エンテロペプチダーゼ、トリプシン、キモトリプシン、および炎症性腸疾患炎症性プロテアーゼからなる群から選択される、項１０６に記載のポリペプチドまたは構築物。
１１０．１つ以上のプロテアーゼは、トリプシン、キモトリプシン、および炎症性腸疾患炎症性プロテアーゼからなる群から選択される、項１０９に記載のポリペプチドまたは構築物。
１１１．炎症性腸疾患炎症性プロテアーゼは、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、およびカテプシンからなる群から選択される１つ以上のプロテアーゼである、項１０９または１１０のいずれかに記載のポリペプチドまたは構築物。
１１２．プロテアーゼはトリプシンおよびキモトリプシンである、項１１０に記載のポリペプチドまたは構築物。
１１３．項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物と、１つ以上の薬学的に許容可能な希釈液または担体とを含む、医薬組成物。
１１４．上記医薬組成物は、腸溶性コーティングされた（ｅｎｔｅｒｉｃａｌｌｙ ｃｏａｔｅｄ）形態で提示される、項１１３に記載の医薬組成物。
１１５．少なくとも１つのさらなる活性薬剤を含む、項１１３または１１４のいずれかに記載の医薬組成物。
１１６．少なくとも１つのさらなる活性薬剤は、５－アミノサリチル酸、またはそのプロドラッグ（スルファサラジン、オルサラジン、あるいはビサラジド（ｂｉｓａｌａｚｉｄｅ）など）；コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、あるいはブデソニド）；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキセート、アザチオプリン、あるいは６－メルカプトプリン）；抗ＴＮＦα抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、あるいはゴリムマブ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体（例えば、ウステキヌマブ）；抗ＩＬ６Ｒ抗体あるいは小分子ＩＬ１２／ＩＬ２３阻害剤（例えば、アピリモド（ａｐｉｌｉｍｏｄ））；抗α－４－β－７抗体（例えば、ベドリズマブ）；ＭＡｄＣＡＭ－１遮断薬（例えば、ＰＦ－００５４７６５９）；細胞接着分子α－４－インテグリンに対する抗体（例えば、ナタリズマブ）；ＩＬ２受容体αサブユニットに対する抗体（例えば、ダクリズマブあるいはバシリキシマブ）；ＪＡＫ３阻害剤（例えば、トファシチニブあるいはＲ３４８）；Ｓｙｋ阻害剤、およびそのプロドラッグ（例えば、ホスタマチニブならびにＲ－４０６）；ホスホジエステラーゼ－４阻害剤（例えば、テトミラスト）；ＨＭＰＬ－００４；プロバイオティクス；デルサラジン（Ｄｅｒｓａｌａｚｉｎｅ）；セマピモド（ｓｅｍａｐｉｍｏｄ）／ＣＰＳＩ－２３６４；および、プロテインキナーゼＣ阻害剤（例えば、ＡＥＢ－０７１）を含むリストから選択される、項１１５に記載の医薬組成物。
１１７．少なくとも１つのさらなる活性薬剤は５－アミノサリチル酸である、項１１６に記載の医薬組成物。
１１８．薬剤として使用される、項１～１１７のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１１９．自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される、項１１８に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２０．自己免疫疾患および／または炎症性疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸疾患、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、薬物誘導性あるいは放射線誘導性の粘膜炎、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される、項１１９に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２１．自己免疫疾患および／または炎症性疾患はクローン病である、項１２０に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２２．経口投与される、項１１８～１２１のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２３．皮膚に局所投与される、項１１８～１１９のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２４．自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置のための薬剤の製造における、項１～１１７のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用。
１２５．自己免疫疾患および／または炎症性疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸疾患、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、薬物誘導性あるいは放射線誘導性の粘膜炎、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される、項１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用。
１２６．自己免疫疾患および／または炎症性疾患はクローン病である、項１２５に記載の使用。
１２７．薬剤は経口投与される、項１２４～１２６のいずれか１つに記載の使用。
１２８．薬剤は皮膚に局所投与される、項１２４に記載の使用。
１２９．自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする人に、項１～１１７のいずれか１つに記載の治療上有効な量のポリペプチド、医薬組成物、または構築物を投与する工程を含む、方法。
１３０．自己免疫疾患および／または炎症性疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、薬物誘導性あるいは放射線誘導性の粘膜炎、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される、項１２９に記載の自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する方法。
１３１．自己免疫疾患はクローン病である、項１３０に記載の自己免疫疾患を処置する方法。
１３２．ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、経口投与される、項１２９～１３１のいずれか１つに記載の自己免疫疾患を処置する方法。
１３３．ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、皮膚に局所投与される、項１２９に記載の自己免疫疾患を処置する方法。
１３４．ポリペプチド、医薬組成物、あるいは構築物は、５－アミノサリチル酸あるいはそのプロドラッグ（スルファサラジン、オルサラジン、あるいはビサラジド）；コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、あるいはブデソニド）；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキセート、アザチオプリン、あるいは６－メルカプトプリン）；抗ＴＮＦα抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、あるいはゴリムマブ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体（例えば、ウステキヌマブ）；抗ＩＬ６Ｒ抗体あるいは小分子ＩＬ１２／ＩＬ２３阻害剤（例えば、アピリモド（ａｐｉｌｉｍｏｄ））；抗α－４－β－７抗体（例えば、ベドリズマブ）；ＭＡｄＣＡＭ－１遮断薬（例えば、ＰＦ－００５４７６５９）；細胞接着分子α－４－インテグリンに対する抗体（例えば、ナタリズマブ）；ＩＬ２受容体αサブユニットに対する抗体（例えば、ダクリズマブあるいはバシリキシマブ）；ＪＡＫ３阻害剤（例えば、トファシチニブあるいはＲ３４８）；Ｓｙｋ阻害剤、およびそのプロドラッグ（例えば、ホスタマチニブならびにＲ－４０６）；ホスホジエステラーゼ－４阻害剤（例えば、テトミラスト）；ＨＭＰＬ－００４；プロバイオティクス；デルサラジン（Ｄｅｒｓａｌａｚｉｎｅ）；セマピモド（ｓｅｍａｐｉｍｏｄ）／ＣＰＳＩ－２３６４；および、プロテインキナーゼＣ阻害剤（例えば、ＡＥＢ－０７１）を含むリストから選択される少なくとも１つの活性薬剤と、順次に、同時に、あるいは別々に投与される、項１１８～１３３のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、構築物、使用、または方法。
１３５．ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、もしくはゴリムマブと、順次に、同時に、あるいは別々に投与される、項１３４に記載のポリペプチド、医薬組成物、構築物、または方法。
１３６．コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３をコードする配列番号１０の部分のいずれか１つと７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含むか、またはその配列からなるポリヌクレオチド。
１３７．項１～１３５のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物をコードするポリヌクレオチド。
１３８．ポリヌクレオチドは、配列番号１０と７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含むか、またはその配列からなる、項１３７に記載のポリヌクレオチド。
１３９．ポリヌクレオチドは配列番号１０を含むか、または配列番号１０からなる、項１３８に記載のポリヌクレオチド。
１４０．項１３６～１３９のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡ。
１４１．項１３６～１４０のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたはｃＤＮＡを含むベクター。
１４２．項１４１に記載のベクターで形質転換され、かつ項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物を発現することができる、宿主細胞。
１４３．宿主細胞は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓなどの酵母細胞である、項１４２に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
１４４．宿主細胞は大腸菌などの細菌細胞である、項１４２に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
１４５．項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物を調製するためのプロセスであって、上記プロセスは、
ｉ）項１３６～１３９のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを、プラスミドなどのベクターへとクローニングする工程と、
ｉｉ）ポリペプチドまたは構築物の産生を可能にする条件下で、項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物を産生することができる細菌細胞あるいは酵母細胞などの細胞を、前記ベクターで形質転換する工程と、
ｉｉｉ）親和性クロマトグラフィーなどによって、ポリペプチドまたは構築物を回復する工程と、
を含む、プロセス。
１．ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２と５０％以上の配列同一性共有する配列を含み、ＣＤＲ３は、配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
２．ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１に記載のポリペプチド。
３．ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項２に記載のポリペプチド。
４．配列番号３にそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）である、項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
５．配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基はＩである、項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
６．配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基はＬである、項２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
７．配列番号３の残基番号６に対応するＣＤＲ３の残基は、ＩまたはＬであり、配列番号３中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の他の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項４に記載のポリペプチド。
８．ＣＤＲ３は配列番号３を含む、項２に記載のポリペプチド。
９．ＣＤＲ３は配列番号３からなる、項３に記載のポリペプチド。
１０．ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１１．ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項１０に記載のポリペプチド。
１２．配列番号１中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１３．ＣＤＲ１は配列番号１を含む、項１１に記載のポリペプチド。
１４．ＣＤＲ１は配列番号１からなる、項１３に記載のポリペプチド。
１５．ＣＤＲ２は、配列番号２と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１６．ＣＤＲ２は、配列番号２と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項１５に記載のポリペプチド。
１７．配列番号２の残基番号９に対応するＣＤＲ２の残基はＤあるいはＨであり、および／または、配列番号２の残基番号１０に対応するＣＤＲ２の残基はＹあるいはＤであり、および／または、配列番号２の残基番号１１に対応するＣＤＲ２の残基はＳ、Ｇ、Ｒ、あるいはＡ（例えば、Ｓ、Ｒ、あるいはＡ、例えば、ＳあるいはＡ）、および／または、配列番号２の残基番号１４に対応するＣＤＲ２の残基はＶあるいはＡである、項１－１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１８．配列番号２中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－１７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１９．ＣＤＲ２は配列番号２を含む、項１５に記載のポリペプチド。
２０．ＣＤＲ２は配列番号２からなる、項１９に記載のポリペプチド。
２１．ＦＲ１は、配列番号４と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－２０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
２２．ＦＲ１は、配列番号４と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項２１に記載のポリペプチド。
２３．配列番号４の残基番号１に対応するＦＲ１の残基は、ＤまたはＥである、項１－２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
２４．配列番号４の残基番号１に対応するＦＲ１の残基はＤである、項２３に記載のポリペプチド。
２５．配列番号４の残基番号１～５に対応するＦＲ１の残基は、ＤＶＱＬＶである、項２４に記載のポリペプチド。
２６．配列番号４にそれらの対応する残基とは異なるＦＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－２５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
２７．ＦＲ１は配列番号４を含む、項２１に記載のポリペプチド。
２８．ＦＲ１は配列番号４からなる、項２７に記載のポリペプチド。
２９．ＦＲ２は、配列番号５と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－２８のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３０．ＦＲ２は、配列番号５と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項２９に記載のポリペプチド。
３１．配列番号５中のそれらの対応する残基とは異なるＦＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－３０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３２．ＦＲ２は配列番号５を含む、項２９に記載のポリペプチド。
３３．ＦＲ２は配列番号５からなる、項３２に記載のポリペプチド。
３４．ＦＲ３は、配列番号６と８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－３３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３５．ＦＲ３は、配列番号６と８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項３４に記載のポリペプチド。
３６．配列番号６中のそれらの対応する残基とは異なるＦＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－３５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
３７．ＦＲ３は配列番号６を含む、項３４に記載のポリペプチド。
３８．ＦＲ３は配列番号６からなる、項３７に記載のポリペプチド。
３９．ＦＲ４は、配列番号７と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－３８のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４０．ＦＲ４は、配列番号７と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項３９に記載のポリペプチド。
４１．配列番号７中のそれらの対応する残基とは異なるＦＲ４の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項１－４０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４２．ＦＲ４は配列番号７を含む、項３９に記載のポリペプチド。
４３．ＦＲ４は配列番号７からなる、項４２に記載のポリペプチド。
４４．配列番号８と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－４３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４５．配列番号８と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項４４に記載のポリペプチド。
４６．ポリペプチドのＮ末端はＤである、項１－４５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
４７．配列番号８を含む、項４４に記載のポリペプチド。
４８．配列番号８からなる、項４７に記載のポリペプチド。
４９．ＩＬ－２３を結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、
（ａ）ＣＤＲ１は、配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、ＣＤＲ２は、配列番号２と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、および、ＣＤＲ３は、配列番号３と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、
（ｂ）ＦＲ１は、配列番号４と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、ＦＲ２は、配列番号５と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、ＦＲ３は、配列番号６と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなり、および、ＦＲ４は、配列番号７と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、ならびに、
（ｃ）ポリペプチドは、配列番号８と７０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、ポリペプチド。
５０．ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は、配列番号１４と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号１５と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号１６と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
５１．ＣＤＲ３は、配列番号１６と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０に記載のポリペプチド。
５２．ＣＤＲ３は、配列番号１６と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項５１に記載のポリペプチド。
５３．配列番号１６中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項５０－５２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５４．ＣＤＲ３は配列番号１６を含む、項５１に記載のポリペプチド。
５５．ＣＤＲ３は配列番号１６からなる、項５４に記載のポリペプチド。
５６．ＣＤＲ１は、配列番号１４と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－５５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５７．ＣＤＲ１は、配列番号１４と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項５６に記載のポリペプチド。
５８．配列番号１４中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項５０－５７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５９．ＣＤＲ１は配列番号１４を含む、項５６に記載のポリペプチド。
６０．ＣＤＲ１は配列番号１４からなる、項５９に記載のポリペプチド。
６１．ＣＤＲ２は、配列番号１５と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－６０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６２．ＣＤＲ２は、配列番号１５と６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項６１に記載のポリペプチド。
６３．配列番号１５中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項５０－６２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６４．ＣＤＲ２は配列番号１５を含む、項６１に記載のポリペプチド。
６５．ＣＤＲ２は配列番号１５からなる、項６４に記載のポリペプチド。
６６．（ａ）ＦＲ１は、配列番号１７と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｂ）ＦＲ２は、配列番号１８と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｃ）ＦＲ３は、配列番号１９と８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ならびに／あるいは、
（ｄ）ＦＲ４は、配列番号２０と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－６５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６７．ＦＲ１は配列番号１７を含み、および／またはＦＲ２は配列番号１８を含み、および／またはＦＲ３は配列番号１９を含み、および／またはＦＲ４は配列番号２０を含む、項６６に記載のポリペプチド。
６８．配列番号１３と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項５０－６７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６９．配列番号１３を含むか、または配列番号１３からなる、項６８に記載のポリペプチド。
７０．Ｌ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は、配列番号２２と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号２４と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
７１．ＣＤＲ３は、配列番号２４と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０に記載のポリペプチド。
７２．ＣＤＲ３は、配列番号２４と６０％以上の配列同一性、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項７１に記載のポリペプチド。
７３．配列番号２４中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ３の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項７０－７２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７４．ＣＤＲ３は配列番号２４を含む、項７１に記載のポリペプチド。
７５．ＣＤＲ３は配列番号２４からなる、項７４に記載のポリペプチド。
７６．ＣＤＲ１は、配列番号２２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－７５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７７．ＣＤＲ１は、配列番号２２と８０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項７６に記載のポリペプチド。
７８．配列番号２２中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ１の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項７０－７７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７９．ＣＤＲ１は配列番号２２を含む、項７６に記載のポリペプチド。
８０．ＣＤＲ１は配列番号２２からなる、項７９に記載のポリペプチド。
８１．ＣＤＲ２は、配列番号２３と５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－８０のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８２．ＣＤＲ２は、配列番号２３と６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列からなる、項８１に記載のポリペプチド。
８３．配列番号２３中のそれらの対応する残基とは異なるＣＤＲ２の任意の残基は、それらの対応する残基に関する保存的置換である、項７０－８２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８４．ＣＤＲ２は配列番号２３を含む、項８１に記載のポリペプチド。
８５．ＣＤＲ２は配列番号２３からなる、項８４に記載のポリペプチド。
８６．（ａ）ＦＲ１は、配列番号２５と５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１２％以上の配列同一性を共有する、例えば、１８％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、３８％以上の配列同一性を共有する、例えば、４６％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６２％以上の配列同一性を共有する、例えば、６６％以上の配列同一性を共有する、例えば、６８％以上の配列同一性を共有する、例えば、７２％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７８％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｂ）ＦＲ２は、配列番号２６と１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２５％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、
（ｃ）ＦＲ３は、配列番号２７と、８％以上の配列同一性を共有する、例えば、１５％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２６％以上の配列同一性を共有する、例えば、３２％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４５％以上の配列同一性を共有する、例えば、５２％以上の配列同一性を共有する、例えば、５８％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７６％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８２％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９２％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ならびに／あるいは、
（ｄ）ＦＲ４は、配列番号２８と、５％以上の配列同一性を共有する、例えば、１０％以上の配列同一性を共有する、例えば、２０％以上の配列同一性を共有する、例えば、３０％以上の配列同一性を共有する、例えば、４０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－８５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８７．ＦＲ１は配列番号２５を含み、および／またはＦＲ２は配列番号２６を含み、および／またはＦＲ３は配列番号２７を含み、および／またはＦＲ４は配列番号２８を含む、項８６に記載のポリペプチド。
８８．配列番号２１と５０％以上の配列同一性を共有する、例えば、５５％以上の配列同一性を共有する、例えば、６０％以上の配列同一性を共有する、例えば、６５％以上の配列同一性を共有する、例えば、７０％以上の配列同一性を共有する、例えば、７５％以上の配列同一性を共有する、例えば、８０％以上の配列同一性を共有する、例えば、８５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９０％以上の配列同一性を共有する、例えば、９５％以上の配列同一性を共有する、例えば、９６％以上の配列同一性を共有する、例えば、９７％以上の配列同一性を共有する、例えば、９８％以上の配列同一性を共有する、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項７０－８７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
８９．配列番号２１を含むか、または配列番号２１からなる、項８８に記載のポリペプチド。
９０．ポリペプチドは抗体である、項１－８９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
９１．ポリペプチドは抗体フラグメントである、項９０に記載のポリペプチド。
９２．ＶＨＨ、ＶＨ、ＶＬ、Ｖ－ＮＡＲ、Ｆａｂフラグメント、およびＦ（ａｂ’）２フラグメントからなるリストから選択される、項９１に記載のポリペプチド。
９３．ポリペプチドはＶＨＨである、項９２に記載のポリペプチド。
９４．ポリペプチドはＶＨである、項９２に記載のポリペプチド。
９５．項１－９４のいずれか１つに記載の２つ以上の同一のポリペプチドを含む構築物。
９６．項１－９４のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物であって、ここで、上記異なるポリペプチドはＴＮＦαに結合する、構築物。
９７．項１－９４のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む構築物であって、ここで、上記異なるポリペプチドはＴＮＦα以外の標的に結合する、構築物。
９８．ポリペプチドは、少なくとも１つのプロテアーゼ不安定性リンカーによって接続される、項９５－９７のいずれか１つに記載の構築物。
９９．プロテアーゼ不安定性リンカーは下記フォーマット
［－（ＧａＳ）ｘ－Ｂ－（ＧｂＳ）ｙ－］ｚ
のものであり、
ここで、
ａは１～１０であり、
ｂは１～１０であり、
ｘは１～１０であり、
ｙは１～１０であり、
ｚは１～１０であり、および、
ＢはＫまたはＲである、項９８に記載の構築物。
１００．ａは２～５であり、ｂは２～５であり、ｘは１～３であり、ｙは１～３であり、ｚは１であり、および、ＢはＫである、項９９に記載の構築物。
１０１．構築物は、配列番号４６を含むか、またはより好適には配列番号４６からなる、項１００に記載の構築物。
１０２．ポリペプチドはすべて、非プロテアーゼ不安定性リンカーによって接続される、項９５－９７のいずれか１つに記載の構築物。
１０３．非プロテアーゼ不安定性リンカーは下記フォーマット
（Ｇ４Ｓ）ｘ
のものであり、
ここで、
ｘは１～１０である、項１０２に記載の構築物。
１０４．ｘは６である、項１０３に記載の構築物。
１０５．５ｎＭ以下、例えば、４ｎＭ以下、例えば、３ｎＭ以下、例えば、２ｎＭ以下、例えば、１．７ｎＭ以下、例えば、１．５ｎＭ以下、例えば、１．４ｎＭ以下、例えば、１．３ｎＭ以下、例えば、１．２ｎＭ以下、例えば、１．１ｎＭ以下、例えば、１．０ｎＭ以下、例えば、０．９ｎＭ以下、例えば、０．８ｎＭ以下、例えば、０．７５ｎＭ以下、例えば、０．７０ｎＭ以下、例えば、０．６５ｎＭ以下、例えば、０．６０ｎＭ以下、例えば、０．５５ｎＭ以下、例えば、０．５０ｎＭ以下、例えば、０．４５ｎＭ以下、例えば、０．４０ｎＭ以下、例えば、０．３５ｎＭ以下、例えば、０．３０ｎＭ以下、例えば、０．２５ｎＭ以下、例えば、０．２０ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）においてヒトＩＬ－２３を中和する、項１－１０４のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１０６．１つ以上のプロテアーゼに対して実質的に耐性である、項１－１０５のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１０７．１つ以上のプロテアーゼは、胃、または、小腸あるいは大腸に存在する、項１０６に記載のポリペプチドまたは構築物。
１０８．１つ以上のプロテアーゼは小腸に存在する、項１０７に記載のポリペプチドまたは構築物。
１０９．１つ以上のプロテアーゼは、エンテロペプチダーゼ、トリプシン、キモトリプシン、および炎症性腸疾患炎症性プロテアーゼからなる群から選択される、項１０６に記載のポリペプチドまたは構築物。
１１０．１つ以上のプロテアーゼは、トリプシン、キモトリプシン、および炎症性腸疾患炎症性プロテアーゼからなる群から選択される、項１０９に記載のポリペプチドまたは構築物。
１１１．炎症性腸疾患炎症性プロテアーゼは、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１２、およびカテプシンからなる群から選択される１つ以上のプロテアーゼである、項１０９または１１０のいずれかに記載のポリペプチドまたは構築物。
１１２．プロテアーゼはトリプシンおよびキモトリプシンである、項１１０に記載のポリペプチドまたは構築物。
１１３．項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物と、１つ以上の薬学的に許容可能な希釈液または担体とを含む、医薬組成物。
１１４．上記医薬組成物は、腸溶性コーティングされた（ｅｎｔｅｒｉｃａｌｌｙ ｃｏａｔｅｄ）形態で提示される、項１１３に記載の医薬組成物。
１１５．少なくとも１つのさらなる活性薬剤を含む、項１１３または１１４のいずれかに記載の医薬組成物。
１１６．少なくとも１つのさらなる活性薬剤は、５－アミノサリチル酸、またはそのプロドラッグ（スルファサラジン、オルサラジン、あるいはビサラジド（ｂｉｓａｌａｚｉｄｅ）など）；コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、あるいはブデソニド）；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキセート、アザチオプリン、あるいは６－メルカプトプリン）；抗ＴＮＦα抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、あるいはゴリムマブ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体（例えば、ウステキヌマブ）；抗ＩＬ６Ｒ抗体あるいは小分子ＩＬ１２／ＩＬ２３阻害剤（例えば、アピリモド（ａｐｉｌｉｍｏｄ））；抗α－４－β－７抗体（例えば、ベドリズマブ）；ＭＡｄＣＡＭ－１遮断薬（例えば、ＰＦ－００５４７６５９）；細胞接着分子α－４－インテグリンに対する抗体（例えば、ナタリズマブ）；ＩＬ２受容体αサブユニットに対する抗体（例えば、ダクリズマブあるいはバシリキシマブ）；ＪＡＫ３阻害剤（例えば、トファシチニブあるいはＲ３４８）；Ｓｙｋ阻害剤、およびそのプロドラッグ（例えば、ホスタマチニブならびにＲ－４０６）；ホスホジエステラーゼ－４阻害剤（例えば、テトミラスト）；ＨＭＰＬ－００４；プロバイオティクス；デルサラジン（Ｄｅｒｓａｌａｚｉｎｅ）；セマピモド（ｓｅｍａｐｉｍｏｄ）／ＣＰＳＩ－２３６４；および、プロテインキナーゼＣ阻害剤（例えば、ＡＥＢ－０７１）を含むリストから選択される、項１１５に記載の医薬組成物。
１１７．少なくとも１つのさらなる活性薬剤は５－アミノサリチル酸である、項１１６に記載の医薬組成物。
１１８．薬剤として使用される、項１～１１７のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１１９．自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される、項１１８に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２０．自己免疫疾患および／または炎症性疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸疾患、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、薬物誘導性あるいは放射線誘導性の粘膜炎、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される、項１１９に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２１．自己免疫疾患および／または炎症性疾患はクローン病である、項１２０に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２２．経口投与される、項１１８～１２１のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２３．皮膚に局所投与される、項１１８～１１９のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１２４．自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置のための薬剤の製造における、項１～１１７のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用。
１２５．自己免疫疾患および／または炎症性疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸疾患、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、薬物誘導性あるいは放射線誘導性の粘膜炎、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される、項１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物の使用。
１２６．自己免疫疾患および／または炎症性疾患はクローン病である、項１２５に記載の使用。
１２７．薬剤は経口投与される、項１２４～１２６のいずれか１つに記載の使用。
１２８．薬剤は皮膚に局所投与される、項１２４に記載の使用。
１２９．自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする人に、項１～１１７のいずれか１つに記載の治療上有効な量のポリペプチド、医薬組成物、または構築物を投与する工程を含む、方法。
１３０．自己免疫疾患および／または炎症性疾患は、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、糖尿病ＩＩ型、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、セリアック病、薬物誘導性あるいは放射線誘導性の粘膜炎、天疱瘡、乾癬、湿疹、および強皮症からなるリストから選択される、項１２９に記載の自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する方法。
１３１．自己免疫疾患はクローン病である、項１３０に記載の自己免疫疾患を処置する方法。
１３２．ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、経口投与される、項１２９～１３１のいずれか１つに記載の自己免疫疾患を処置する方法。
１３３．ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、皮膚に局所投与される、項１２９に記載の自己免疫疾患を処置する方法。
１３４．ポリペプチド、医薬組成物、あるいは構築物は、５－アミノサリチル酸あるいはそのプロドラッグ（スルファサラジン、オルサラジン、あるいはビサラジド）；コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、あるいはブデソニド）；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキセート、アザチオプリン、あるいは６－メルカプトプリン）；抗ＴＮＦα抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、あるいはゴリムマブ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３抗体（例えば、ウステキヌマブ）；抗ＩＬ６Ｒ抗体あるいは小分子ＩＬ１２／ＩＬ２３阻害剤（例えば、アピリモド（ａｐｉｌｉｍｏｄ））；抗α－４－β－７抗体（例えば、ベドリズマブ）；ＭＡｄＣＡＭ－１遮断薬（例えば、ＰＦ－００５４７６５９）；細胞接着分子α－４－インテグリンに対する抗体（例えば、ナタリズマブ）；ＩＬ２受容体αサブユニットに対する抗体（例えば、ダクリズマブあるいはバシリキシマブ）；ＪＡＫ３阻害剤（例えば、トファシチニブあるいはＲ３４８）；Ｓｙｋ阻害剤、およびそのプロドラッグ（例えば、ホスタマチニブならびにＲ－４０６）；ホスホジエステラーゼ－４阻害剤（例えば、テトミラスト）；ＨＭＰＬ－００４；プロバイオティクス；デルサラジン（Ｄｅｒｓａｌａｚｉｎｅ）；セマピモド（ｓｅｍａｐｉｍｏｄ）／ＣＰＳＩ－２３６４；および、プロテインキナーゼＣ阻害剤（例えば、ＡＥＢ－０７１）を含むリストから選択される少なくとも１つの活性薬剤と、順次に、同時に、あるいは別々に投与される、項１１８～１３３のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、構築物、使用、または方法。
１３５．ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、もしくはゴリムマブと、順次に、同時に、あるいは別々に投与される、項１３４に記載のポリペプチド、医薬組成物、構築物、または方法。
１３６．コードされた免疫グロブリン鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３をコードする配列番号１０の部分のいずれか１つと７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含むか、またはその配列からなるポリヌクレオチド。
１３７．項１～１３５のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物をコードするポリヌクレオチド。
１３８．ポリヌクレオチドは、配列番号１０と７０％以上、例えば、８０％以上、例えば、９０％以上、例えば、９５％以上、例えば、９９％以上の配列同一性を共有する配列を含むか、またはその配列からなる、項１３７に記載のポリヌクレオチド。
１３９．ポリヌクレオチドは配列番号１０を含むか、または配列番号１０からなる、項１３８に記載のポリヌクレオチド。
１４０．項１３６～１３９のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含むｃＤＮＡ。
１４１．項１３６～１４０のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたはｃＤＮＡを含むベクター。
１４２．項１４１に記載のベクターで形質転換され、かつ項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物を発現することができる、宿主細胞。
１４３．宿主細胞は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓなどの酵母細胞である、項１４２に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
１４４．宿主細胞は大腸菌などの細菌細胞である、項１４２に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
１４５．項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物を調製するためのプロセスであって、上記プロセスは、
ｉ）項１３６～１３９のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを、プラスミドなどのベクターへとクローニングする工程と、
ｉｉ）ポリペプチドまたは構築物の産生を可能にする条件下で、項１～１１２のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物を産生することができる細菌細胞あるいは酵母細胞などの細胞を、前記ベクターで形質転換する工程と、
ｉｉｉ）親和性クロマトグラフィーなどによって、ポリペプチドまたは構築物を回復する工程と、
を含む、プロセス。
【0248】
本発明のさらなる実施形態を説明するさらなる項は以下の通りである。
１．ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２と５０％以上の配列同一性共有する配列を含み、ＣＤＲ３は、配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
２．ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１に記載のポリペプチド。
３．ＣＤＲ１は配列番号１からなり、ＣＤＲ２は配列番号２からなり、および、ＣＤＲ３は配列番号３からなる、項３に記載のポリペプチド。
４．ＦＲ１は、配列番号４と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＦＲ２は、配列番号５と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＦＲ３は、配列番号６と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＦＲ４は、配列番号７と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５．配列番号８と７０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６．ポリペプチドは抗体またはそのフラグメントである、項１－５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７．ポリペプチドはＶＨまたはＶＨＨである、項６に記載のポリペプチド。
８．項１～７のいずれか１つに記載の少なくとも１つポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む、構築物であって、ここで、上記異なるポリペプチドはＴＮＦ－αに結合する、ポリペプチド。
９．ポリペプチドは、少なくとも１つのプロテアーゼ不安定性リンカーによって接続される、項８に記載の構築物。
１０．ポリペプチドまたは構築物は、２ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）においてヒトＩＬ－２３を中和する、項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１１．ポリペプチドまたは構築物は、小腸に存在する１つ以上のプロテアーゼに対して実質的に耐性である、項１－１０のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１２．プロテアーゼはトリプシンおよびキモトリプシンである、項１１に記載のポリペプチドまたは構築物。
１３．自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される、項１～１２のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１４．上記ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、経口投与される、項１３に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１５．項１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物をコードするポリヌクレオチド。
次に、以下の非限定的な例によって本発明をさらに説明する。
１．ＩＬ－２３に結合する免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、ここで、上記免疫グロブリン鎖可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１－ＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ１－ＦＲ４）とを含み、ここで、ＣＤＲ１は配列番号１と６０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２と５０％以上の配列同一性共有する配列を含み、ＣＤＲ３は、配列番号３と５０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、ポリペプチド。
２．ＣＤＲ１は、配列番号１と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＣＤＲ２は、配列番号２と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＣＤＲ３は、配列番号３と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１に記載のポリペプチド。
３．ＣＤＲ１は配列番号１からなり、ＣＤＲ２は配列番号２からなり、および、ＣＤＲ３は配列番号３からなる、項３に記載のポリペプチド。
４．ＦＲ１は、配列番号４と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＦＲ２は、配列番号５と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、ＦＲ３は、配列番号６と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含み、および、ＦＲ４は、配列番号７と８０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
５．配列番号８と７０％以上の配列同一性を共有する配列を含む、項１－４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
６．ポリペプチドは抗体またはそのフラグメントである、項１－５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
７．ポリペプチドはＶＨまたはＶＨＨである、項６に記載のポリペプチド。
８．項１～７のいずれか１つに記載の少なくとも１つポリペプチドと、少なくとも１つの異なるポリペプチドとを含む、構築物であって、ここで、上記異なるポリペプチドはＴＮＦ－αに結合する、ポリペプチド。
９．ポリペプチドは、少なくとも１つのプロテアーゼ不安定性リンカーによって接続される、項８に記載の構築物。
１０．ポリペプチドまたは構築物は、２ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）においてヒトＩＬ－２３を中和する、項１－９のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１１．ポリペプチドまたは構築物は、小腸に存在する１つ以上のプロテアーゼに対して実質的に耐性である、項１－１０のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物。
１２．プロテアーゼはトリプシンおよびキモトリプシンである、項１１に記載のポリペプチドまたは構築物。
１３．自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置で使用される、項１～１２のいずれか１つに記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１４．上記ポリペプチド、医薬組成物、または構築物は、経口投与される、項１３に記載のポリペプチド、医薬組成物、または構築物。
１５．項１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチドまたは構築物をコードするポリヌクレオチド。
次に、以下の非限定的な例によって本発明をさらに説明する。
【実施例】
【0249】
実施例で使用される評価方法
評価方法Ａ：ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ
Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを、５０μｌ／ウェルの０．３μｇ／ｍｌのＩＬ－２３Ｒ－Ｆｃで一晩コーティングし、その後、４％のミルク、１％のＢＳＡで遮断した。ＩＣＶＤを、４％のミルク、１％のＢＳＡ中で連続的に希釈し、４０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２３と１：１に混合した。その後、ＩＬ－２３と混合したＩＣＶＤを、ＩＬ－２３Ｒでコーティングしたプレートに添加した。結合したＩＬ－２３を、ＢＡＦ２１９抗ｐ４０ビオチン化ｐＡｂ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）で、その後、Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰで検出した。これにより、試料中のＩＬ－２３中和活性を計算することができる。
評価方法Ａ：ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ
Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを、５０μｌ／ウェルの０．３μｇ／ｍｌのＩＬ－２３Ｒ－Ｆｃで一晩コーティングし、その後、４％のミルク、１％のＢＳＡで遮断した。ＩＣＶＤを、４％のミルク、１％のＢＳＡ中で連続的に希釈し、４０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２３と１：１に混合した。その後、ＩＬ－２３と混合したＩＣＶＤを、ＩＬ－２３Ｒでコーティングしたプレートに添加した。結合したＩＬ－２３を、ＢＡＦ２１９抗ｐ４０ビオチン化ｐＡｂ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）で、その後、Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰで検出した。これにより、試料中のＩＬ－２３中和活性を計算することができる。
【0250】
評価方法Ｂ：高塩濃度緩衝液（ｈｉｇｈ ｓａｌｔ ｂｕｆｆｅｒ）を使用するＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ
糞便抽出物中の抗ＩＬ－２３ ＩＣＶＤ濃度を測定するために、高塩濃度ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ ＥＬＩＳＡを使用した。このＥＬＩＳＡは、糞便上清の希釈液およびＩＬ－２３調製物に使用した緩衝液が、０．６Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、およびプロテアーゼ阻害剤を含むＰＢＳ中の１％のＢＳＡ、４％のミルクであるという点を除いて、上のＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）と同じであった。
糞便抽出物中の抗ＩＬ－２３ ＩＣＶＤ濃度を測定するために、高塩濃度ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ ＥＬＩＳＡを使用した。このＥＬＩＳＡは、糞便上清の希釈液およびＩＬ－２３調製物に使用した緩衝液が、０．６Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、およびプロテアーゼ阻害剤を含むＰＢＳ中の１％のＢＳＡ、４％のミルクであるという点を除いて、上のＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）と同じであった。
【0251】
評価方法Ｃ：マウス脾細胞アッセイ
脾細胞をマウス脾臓から単離し、２０ｎｇ／ｍＬのマウスＩＬ－２（２ｘアッセイ濃度）を含む培地中において、４ｘ１０５細胞／５０μＬ／ウェルで９６ウェル丸底マイクロプレートにプレーティングした。ＩＣＶＤのトップ濃度（ｔｏｐ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）を、１０ｎｇ／ｍＬのＴＨＰ－１由来のｎｈＩＬ－２３（２ｘアッセイ濃度）を含む培地中で、３００ｎＭ（２ｘ）で調製し、その後、２．６倍の希釈液を、ｎｈＩＬ－２３（２ｘ）を含む培地中で直接作成した。その後、５０μＬの各ＩＣＶＤミックス（２ｘ）を細胞（５０μＬ）上に移し、ＩＣＶＤ、ｈＩＬ－２３、およびｍＩＬ－２の最終の１ｘアッセイ濃度を得た。培養液上清中のマウスＩＬ－１７刺激および分泌のために、「ｍＩＬ－２のみ」と「ｍＩＬ－２＋ｈＩＬ－２３」を、陰性対照と陽性対照としてそれぞれ使用した。３７℃、５％のＣＯ２で３日間のインキュベーション後、プレートを２０００ｒｐｍで２分間回転させ、５０μＬの培養液上清を各ウェルから回収した。ＩＬ－１７結合ＥＬＩＳＡを使用して、培養液上清中のｍＩＬ－１７のレベルを測定し、ｈＩＬ－２３の中和を決定した。
脾細胞をマウス脾臓から単離し、２０ｎｇ／ｍＬのマウスＩＬ－２（２ｘアッセイ濃度）を含む培地中において、４ｘ１０５細胞／５０μＬ／ウェルで９６ウェル丸底マイクロプレートにプレーティングした。ＩＣＶＤのトップ濃度（ｔｏｐ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）を、１０ｎｇ／ｍＬのＴＨＰ－１由来のｎｈＩＬ－２３（２ｘアッセイ濃度）を含む培地中で、３００ｎＭ（２ｘ）で調製し、その後、２．６倍の希釈液を、ｎｈＩＬ－２３（２ｘ）を含む培地中で直接作成した。その後、５０μＬの各ＩＣＶＤミックス（２ｘ）を細胞（５０μＬ）上に移し、ＩＣＶＤ、ｈＩＬ－２３、およびｍＩＬ－２の最終の１ｘアッセイ濃度を得た。培養液上清中のマウスＩＬ－１７刺激および分泌のために、「ｍＩＬ－２のみ」と「ｍＩＬ－２＋ｈＩＬ－２３」を、陰性対照と陽性対照としてそれぞれ使用した。３７℃、５％のＣＯ２で３日間のインキュベーション後、プレートを２０００ｒｐｍで２分間回転させ、５０μＬの培養液上清を各ウェルから回収した。ＩＬ－１７結合ＥＬＩＳＡを使用して、培養液上清中のｍＩＬ－１７のレベルを測定し、ｈＩＬ－２３の中和を決定した。
【0252】
実施例１：大腸菌中のＩＣＶＤの免疫化、ファージライブラリ選択、マスタープレートスクリーニング、および産生
実施例１．１：免除化およびファージライブラリ構築
ラマを可溶性ヒト組換えＩＬ－２３で免疫化し、血清抗体の良好な力価を両方の動物で得た。ＩＬ－２３の数回のブースト免疫化の後に、各ラマから採取した白血球からＲＮＡを単離した。
実施例１．１：免除化およびファージライブラリ構築
ラマを可溶性ヒト組換えＩＬ－２３で免疫化し、血清抗体の良好な力価を両方の動物で得た。ＩＬ－２３の数回のブースト免疫化の後に、各ラマから採取した白血球からＲＮＡを単離した。
【0253】
各免疫相の終わりに各ラマから採取した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、７つの別個のファージディスプレイライブラリを生成するために使用した。ＩＣＶＤファージディスプレイライブラリの構築、およびＩＬ－２３結合活性を有するＩＣＶＤを発現するファージの一次選択を、標準的な試薬とプロトコルとを使用して実施した。一般に、全ＲＮＡを、免疫化されたラマの各々から単離した末梢血リンパ球から抽出した。その後、ＲＮＡを使用してｃＤＮＡを生成し、ＰＣＲを実施して、ＩＣＶＤ重鎖のみの抗体の可変領域を特異的に増幅した。ＩＣＶＤレパートリーをコードするｃＤＮＡフラグメントを、ファージミドベクターへクローン化し、ライブラリを大腸菌に導入した。ヘルパーファージで大腸菌を培養し、結果として生じるＩＣＶＤを表示するファージを沈澱させることによって、ファージライブラリを産生した。各ライブラリ数は、様々な希釈での対数期大腸菌株ＴＧ１の滴定および感染によって決定した。ライブラリは、６ｘ１０７～５ｘ１０８の間のＩＣＶＤ配列を含むと推測した。
【0254】
実施例１．２：ヒトＩＬ－２３結合活性を有するファージのためのライブラリ選択：周辺質抽出物の増殖および生成
ファージライブラリ選択戦略を、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに特異的に結合するＩＣＶＤを濃縮するために設定した。ファージを、可溶性ｈＩＬ－１２の存在下で、ｈＩＬ－２３またはビオチン化ｈＩＬ－２３のいずれか上でパニングすることによって選択した。結合したＩＣＶＤは異なる方法を使用して洗浄し、ＩＬ－２３Ｒによる特定の溶出またはＴＥＡによる総溶出のいずれかを使用してプレートから取り出した。選択および溶出の条件は、ＩＬ－２３の活性な可溶性形態で存在し、かつＩＬ－２３受容体（ＩＬ－２３Ｒ）へのＩＬ－２３の結合を妨害するｐ１９のエピトープに高親和性で結合するＩＣＶＤを単離するために確立した。
ファージライブラリ選択戦略を、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに特異的に結合するＩＣＶＤを濃縮するために設定した。ファージを、可溶性ｈＩＬ－１２の存在下で、ｈＩＬ－２３またはビオチン化ｈＩＬ－２３のいずれか上でパニングすることによって選択した。結合したＩＣＶＤは異なる方法を使用して洗浄し、ＩＬ－２３Ｒによる特定の溶出またはＴＥＡによる総溶出のいずれかを使用してプレートから取り出した。選択および溶出の条件は、ＩＬ－２３の活性な可溶性形態で存在し、かつＩＬ－２３受容体（ＩＬ－２３Ｒ）へのＩＬ－２３の結合を妨害するｐ１９のエピトープに高親和性で結合するＩＣＶＤを単離するために確立した。
【0255】
選択からの溶出液に存在するファージは、大腸菌ＴＧ１細胞を感染させるために使用した。コロニーを、１２の９６ウェルマスタープレートに無作為選び取り、クローン培養物を生成するために増殖させた。ＩＣＶＤを含有する周辺質画分（本明細書では「周囲（ｐｅｒｉ）」とも呼ばれる）を放出するために、細菌細胞外膜を凍結融解によって溶解した。細胞片は遠心分離によって除去し、上清は、ＩＣＶＤ特性の評価のために新鮮な９６ウェルプレートに移した。
【0256】
実施例１．３：周辺質抽出物のスクリーニング
ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害に特異的なＩＣＶＤを同定するために、周辺質抽出物を、３つの相互作用、すなわち、１）ＩＬ－２３ＲへのＩＬ－２３の結合、２）ＩＬ－１２Ｒβ１へのＩＬ－２３の結合、および３）ＩＬ－１２Ｒβ１へのＩＬ－１２の結合を妨害するそれらの能力に関して試験した。これらの相互作用は、各ＥＬＩＳＡによって試験した。
ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害に特異的なＩＣＶＤを同定するために、周辺質抽出物を、３つの相互作用、すなわち、１）ＩＬ－２３ＲへのＩＬ－２３の結合、２）ＩＬ－１２Ｒβ１へのＩＬ－２３の結合、および３）ＩＬ－１２Ｒβ１へのＩＬ－１２の結合を妨害するそれらの能力に関して試験した。これらの相互作用は、各ＥＬＩＳＡによって試験した。
【0257】
３つのプレート－ＥＬＩＳＡフォーマットを開発し、これによって、ＩＣＶＤを含む周辺質抽出物を適切なサイトカインと混合した後に、適切なサイトカイン受容体でコーティングされたＭａｘｉｓｏｒｐプレートに混合物を適用した。これにより、ＩＣＶＤによるサイトカイン受容体結合の妨害がない状態で、サイトカインを補足することが可能になり、すべての場合で、ビオチン化抗ｐ４０抗体と、それに続くＥｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰとによって検出することができる。各ＩＣＶＤの中和活性は、「無関係の」ＶＨＨ対照と比べて、その受容体へのサイトカインの結合を減少させる能力として測定された。大腸菌での産生とさらなる評価のために、見込みがあるＩＣＶＤクローンを選択した。
【0258】
実施例１．４：大腸菌での選択されたクローンの産生
選択されたＩＣＶＤのＤＮＡ配列を、大腸菌での産生のために、ベクターｐＭＥＫ２２２へと再度クローン化し（したがって、Ｃ末端ＦＬＡＧおよび６ｘＨｉｓタグを導入し）、より詳細な評価試験のために、ＩＣＶＤ親和性を６ｘＨｉｓタグによってＴａｌｏｎ樹脂上で精製した。大腸菌からうまく発現できなかったＩＣＶＤは、さらなる分析から除外した。
選択されたＩＣＶＤのＤＮＡ配列を、大腸菌での産生のために、ベクターｐＭＥＫ２２２へと再度クローン化し（したがって、Ｃ末端ＦＬＡＧおよび６ｘＨｉｓタグを導入し）、より詳細な評価試験のために、ＩＣＶＤ親和性を６ｘＨｉｓタグによってＴａｌｏｎ樹脂上で精製した。大腸菌からうまく発現できなかったＩＣＶＤは、さらなる分析から除外した。
【0259】
実施例２：精製された一次クローンの効力
ヒトＩＬ－２３に対する効力を評価するために、精製されたＩＣＶＤのＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和活性を、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）で評価した。比較例のモノクローナル抗体ブラジクマブ（ｂｒａｚｉｋｕｍａｂ）（重鎖配列番号７０、軽鎖配列番号７１）よりも高い効力を有することが分かったＩＣＶＤを、下記表に示す。
ヒトＩＬ－２３に対する効力を評価するために、精製されたＩＣＶＤのＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和活性を、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）で評価した。比較例のモノクローナル抗体ブラジクマブ（ｂｒａｚｉｋｕｍａｂ）（重鎖配列番号７０、軽鎖配列番号７１）よりも高い効力を有することが分かったＩＣＶＤを、下記表に示す。
【0260】
【表3】
【0261】
ファミリーＬクローン（１２Ｇ１および１Ｅ２）は顕著に強力であり、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ ＥＬＩＳＡにおいて、比較例の抗ＩＬ－２３抗体ブラジクマブよりも高い効力を示すだけでなく、サブナノモル効力さえも示すことが、ＥＬＩＳＡの結果により示された。クローン１０Ｅ２および１０Ｇ１０はまた、このアッセイにおいて、ブラジクマブ比較例よりも高い効力を示した。
【0262】
１０Ｅ２、１２Ｇ１、および１Ｅ２も、カニクイザルＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡで試験し、そのすべてが、このアッセイ（データは示さず）において、標準ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ ＥＬＩＳＡにおいて示された効力と同様の高い中和効力を示した。これらのクローンが、ＩＬ－２３とＩＬ－１２Ｒの相互作用またはＩＬ－１２とＩＬ－１２Ｒの相互作用を中和することができないことも立証された。理論に縛られることを望まないが、本発明者らは、これらのクローンがＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに特異的であると考える。
【0263】
実施例３：精製された一次クローンの内因性プロテアーゼの安定性
経口投与したＩＣＶＤは、小腸および大腸を通過する間にタンパク質分解性消化の影響を受ける可能性が高い。腸のプロテアーゼに対する耐性をさらに調査するために、マウスの小腸の上清と、プールしたヒト糞便試料から調製した上清の両方の存在下でインキュベートした後に、精製したＩＣＶＤの効力（の保持）を試験した。
経口投与したＩＣＶＤは、小腸および大腸を通過する間にタンパク質分解性消化の影響を受ける可能性が高い。腸のプロテアーゼに対する耐性をさらに調査するために、マウスの小腸の上清と、プールしたヒト糞便試料から調製した上清の両方の存在下でインキュベートした後に、精製したＩＣＶＤの効力（の保持）を試験した。
【0264】
マウスの小腸の上清：７匹のＣ５７ＢＬ／６オスマウスからの小腸の内容物を、０．９％の生理食塩水で取り出し、組み合わせて、均質化し、遠心分離を行った。結果として生じる上清を取り出し、アリコートし、冷凍した。
【0265】
ヒト糞便の上清：５人のヒトからの糞便試料を、１ｘＰＢＳの添加によりスラリーにした。その後、スラリーをプールし、遠心分離し、上清を取り出し、アリコートし、－８０℃で保存した。このプロセスにより、任意の細胞物質を含む糞便マトリックスを取り出した。
【0266】
ＩＣＶＤを３７℃で様々な期間にわたってインキュベートした後、「消化された」ＩＣＶＤ試料の抗ＩＬ－２３活性を、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡ（評価方法Ｂ）を使用して分析し、「未消化」ＩＣＶＤから「消化された」ＩＣＶＤまで維持された活性の割合を計算した。その結果を以下の表に示す。
【0267】
【表4】
【0268】
ＩＣＶＤは、マウス小腸の材料およびヒト糞便の材料中に存在するプロテアーゼに対する実質的な内因性の安定性を示した。ファミリーＬ ＩＣＶＤ １２Ｇ１を、その効力と内因性プロテアーゼ耐性に基づいて、さらなる最適化のために選択した。
【0269】
実施例４：１２Ｇ１の最適化された変異体の産生および特性付け
ファミリーＬ ＩＣＶＤ １２Ｇ１を、複数の変異体ＩＣＶＤを産生するために、配列修飾に供した。これらの変異体ＩＣＶＤは、上に詳述される効力とプロテアーゼ安定性のアッセイで試験した。変異体ＩＣＶＤ、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔへのそれらの突然変異、およびこれらのアッセイでのそれらのパフォーマンスを、以下の表で詳述する（ここで、ＥＣ５０値はｎＭで示され、「マウス脾細胞」は、上の評価方法Ｃを使用して得られたデータを指し、残基は、Ｋａｂａｔ番号付けとは対照的に、Ｎ末端からＣ末端への番号付けを用いて番号付けした）。
ファミリーＬ ＩＣＶＤ １２Ｇ１を、複数の変異体ＩＣＶＤを産生するために、配列修飾に供した。これらの変異体ＩＣＶＤは、上に詳述される効力とプロテアーゼ安定性のアッセイで試験した。変異体ＩＣＶＤ、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔへのそれらの突然変異、およびこれらのアッセイでのそれらのパフォーマンスを、以下の表で詳述する（ここで、ＥＣ５０値はｎＭで示され、「マウス脾細胞」は、上の評価方法Ｃを使用して得られたデータを指し、残基は、Ｋａｂａｔ番号付けとは対照的に、Ｎ末端からＣ末端への番号付けを用いて番号付けした）。
【0270】
高い効力とプロテアーゼ安定性が一般に、変異体ＩＣＶＤで維持されたことが認められた。したがって、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの変異体が一般に、高い効力とプロテアーゼ安定性を実質的に維持することが予想され得る。
【0271】
これらの変異体ＩＣＶＤのうち、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを最終的に選択し、さらなる特徴づけのために進めた。１２Ｇ１は、以下の突然変異によってＩＤ－Ｌ２５３Ｔとは異なる：Ｅ１Ｄ、Ｌ１１Ｑ、Ｒ１９Ｓ、Ａ２３Ｅ、Ａ２４Ｓ、Ｙ３７Ｆ、Ａ６０Ｓ、Ｍ６９Ｉ、Ｖ７８Ｌ、Ｆ７９Ｙ、Ｅ８１Ｑ、Ｄ８３Ｎ、Ｖ８５Ｌ、Ａ９０Ｔ、Ｎ９６Ａ、Ｌ１０３Ｉ、およびＲ１１６Ｑ（Ｋａｂａｔ番号付けとは対照的に、Ｎ末端からＣ末端への番号付けを使用）。
【0272】
【表5】
【0273】
実施例５：比較例のブラジクマブおよび３７Ｄ５と比較した、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの効力、結合親和性、およびプロテアーゼ安定性
ブラジクマブは、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに選択的に結合する、先行技術の完全にヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体である。３７Ｄ５は、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに選択的に結合する、従来技術のドメイン抗体（ＶＨＨ）である（Ｄｅｓｍｙｔｅｒら ２０１７、配列番号６９）。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの効力、結合親和性、およびプロテアーゼ安定性は、従来技術のこれらの抗ＩＬ－２３薬剤と比較して評価した。
ブラジクマブは、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに選択的に結合する、先行技術の完全にヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体である。３７Ｄ５は、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに選択的に結合する、従来技術のドメイン抗体（ＶＨＨ）である（Ｄｅｓｍｙｔｅｒら ２０１７、配列番号６９）。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの効力、結合親和性、およびプロテアーゼ安定性は、従来技術のこれらの抗ＩＬ－２３薬剤と比較して評価した。
【0274】
実施例５．１：ブラジクマブと比較したＩＤ－Ｌ２５３Ｔの効力
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび臨床的対照薬ブラジクマブを、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ阻害ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）において、効力について比較試験した。その結果を以下の表に要約する。
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび臨床的対照薬ブラジクマブを、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ阻害ＥＬＩＳＡ（評価方法Ａ）において、効力について比較試験した。その結果を以下の表に要約する。
【0275】
【表6】
【0276】
前駆体ＩＣＶＤ １２Ｇ１および上述のＩＤ－Ｌ２５３Ｔの変異体の効力に基づいて予測されるように、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ ＥＬＩＳＡにおいてブラジクマブよりも高い効力を示した。
【0277】
実施例５．２：ブラジクマブ Ｆａｂと比較したＩＤ－Ｌ２５３Ｔの親和性
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの結合キネティクスをブラジクマブ Ｆａｂ（市販のＦａｂ調製物キットを使用して調製）と比較し、Ｂｉａｃｏｒｅ試験で評価した。抗ｐ４０ ｍＡｂをＢｉａｃｏｒｅセンサプレートに固定し、組換えヒトＩＬ－２３をロードした。そのｐ４０サブユニットによるＩＬ－２３の繋留は、ｐ１９サブユニット（ブラジクマブとＩＤ－Ｌ２５３Ｔの両方に特異的である）が、抗ＩＬ－２３ＩＤ－２５３Ｔ ＩＣＶＤおよびブラジクマブ ＦＡｂフラグメントと相互作用することを可能し、これらは、結合を検出するために後にチップ上に流される。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは３２ｐＭの平均ＫＤを有するが、ブラジクマブ Ｆａｂ調製物は１２００ｐＭというはるかに高い平均ＫＤを有しており、これにより、ブラジクマブ ＦａｂがＩＤ－Ｌ２５３Ｔよりもはるかに低い結合親和性を有していることが示された。これらのデータを下記の表に要約する。
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの結合キネティクスをブラジクマブ Ｆａｂ（市販のＦａｂ調製物キットを使用して調製）と比較し、Ｂｉａｃｏｒｅ試験で評価した。抗ｐ４０ ｍＡｂをＢｉａｃｏｒｅセンサプレートに固定し、組換えヒトＩＬ－２３をロードした。そのｐ４０サブユニットによるＩＬ－２３の繋留は、ｐ１９サブユニット（ブラジクマブとＩＤ－Ｌ２５３Ｔの両方に特異的である）が、抗ＩＬ－２３ＩＤ－２５３Ｔ ＩＣＶＤおよびブラジクマブ ＦＡｂフラグメントと相互作用することを可能し、これらは、結合を検出するために後にチップ上に流される。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは３２ｐＭの平均ＫＤを有するが、ブラジクマブ Ｆａｂ調製物は１２００ｐＭというはるかに高い平均ＫＤを有しており、これにより、ブラジクマブ ＦａｂがＩＤ－Ｌ２５３Ｔよりもはるかに低い結合親和性を有していることが示された。これらのデータを下記の表に要約する。
【0278】
【表7】
【0279】
理論に縛られることを望まないが、上に提供されるデータに基づいて、本発明者らは、ＩＤ－Ｌ２５３ＴがＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに結合すると予想する。
【0280】
実施例５．３：３７Ｄ５と比較したＩＤ－Ｌ２５３Ｔのプロテアーゼ安定性
マウス小腸の材料中のＩＤ－Ｌ２５３Ｔの安定性を試験し、比較例３７Ｄ５の安定性と比較した。「消化された」ＩＣＶＤ試料の抗ＩＬ－２３活性を、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中性ＥＬＩＳＡ（評価方法Ｂ）を使用して分析し、「未消化の」ＩＣＶＤから「消化された」ＩＣＶＤまで維持された活性の割合を計算した。これらのデータを下記の表に要約する。
マウス小腸の材料中のＩＤ－Ｌ２５３Ｔの安定性を試験し、比較例３７Ｄ５の安定性と比較した。「消化された」ＩＣＶＤ試料の抗ＩＬ－２３活性を、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中性ＥＬＩＳＡ（評価方法Ｂ）を使用して分析し、「未消化の」ＩＣＶＤから「消化された」ＩＣＶＤまで維持された活性の割合を計算した。これらのデータを下記の表に要約する。
【0281】
【表8】
【0282】
３７Ｄ５に関しては、マウス小腸の材料での２時間の消化後にＥＬＩＳＡシグナルが確立されなかったが、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、２倍のインキュベーション期間後に５１％の生存率を達成したことが、これらのデータから明らかである。したがって、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、この消化のマトリックスにおいて比較例３７Ｄ５よりも顕著に安定している。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔに関してここで提供されるデータは、実施例４において上に詳述されるのと同じアッセイに対応し、３７Ｄ５に関してここで提供されるデータは、異なる場合の別個のアッセイで生成されたことに留意されたい。
【0283】
実施例６：ヒトＩＬ－２３のためのＩＤ－Ｌ２５３Ｔ特異性
実施例６．１：毒物学的な種からのＩＬ－２３との交差反応性
カニクイザルＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡを実施した。そのために、Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを、５０μｌ／ウェルの０．５μｇ／ｍｌのカニクイザルＩＬ－２３Ｒ－Ｆｃで一晩コーティングし、その後、４％のミルク、１％のＢＳＡで遮断した。ＩＣＶＤを、４％のミルク、１％のＢＳＡ中で連続的に希釈し、４０ｎｇ／ｍｌの組換えカニクイザルＩＬ－２３（ｃＩＬ－２３）と１：１に混合し、その後、３０分間インキュベートして結合させてから、ｃＩＬ－２３Ｒでコーティングしたプレートに添加した。結合したｃＩＬ－２３は、ＢＡＦ２１９抗ｐ４０ ｐＡｂで、その後、Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰで検出し、ｃＩＬ－２３Ｒに結合するｃＩＬ－２３のＩＣＶＤによる中和レベルを決定した。
実施例６．１：毒物学的な種からのＩＬ－２３との交差反応性
カニクイザルＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡを実施した。そのために、Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを、５０μｌ／ウェルの０．５μｇ／ｍｌのカニクイザルＩＬ－２３Ｒ－Ｆｃで一晩コーティングし、その後、４％のミルク、１％のＢＳＡで遮断した。ＩＣＶＤを、４％のミルク、１％のＢＳＡ中で連続的に希釈し、４０ｎｇ／ｍｌの組換えカニクイザルＩＬ－２３（ｃＩＬ－２３）と１：１に混合し、その後、３０分間インキュベートして結合させてから、ｃＩＬ－２３Ｒでコーティングしたプレートに添加した。結合したｃＩＬ－２３は、ＢＡＦ２１９抗ｐ４０ ｐＡｂで、その後、Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰで検出し、ｃＩＬ－２３Ｒに結合するｃＩＬ－２３のＩＣＶＤによる中和レベルを決定した。
【0284】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、カニクイザルＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和アッセイ（データは示さず）で活性であり、カニクイザルを任意の前臨床開発試験に適切な毒物学種にした。
【0285】
実施例６．２：非標的サイトカインに対する特異性
結合ＥＬＩＳＡまたは阻害ＥＬＩＳＡのいずれかにおいて、ＩＬ－２３に関連するサイトカインあるいはＩＬ－２３に関連しないサイトカインに対する選択性について、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを試験した。ＩＬ－１２は、ＩＬ－２３とｐ４０サブユニットを共有し、したがって、ヒトにおいて最も密接に関連するサイトカインである。ＩＬ－１２サイトカインファミリーのさらなるメンバー（ＩＬ－２７）とともに、ヒトおよびアカゲザルのＩＬ－１２を、このアッセイで試験した。重要だが非関連であるさらなる炎症性サイトカインＴＮＦα、ＩＬ－６、およびＩＦＮγも試験した。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、試験したサイトカインとの相互作用を示さなかった。このことは、オフターゲット分子へのＩＤ－Ｌ２５３Ｔの結合が、ヒトと非ヒト霊長類において非常に可能性が低いことを示す。
結合ＥＬＩＳＡまたは阻害ＥＬＩＳＡのいずれかにおいて、ＩＬ－２３に関連するサイトカインあるいはＩＬ－２３に関連しないサイトカインに対する選択性について、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを試験した。ＩＬ－１２は、ＩＬ－２３とｐ４０サブユニットを共有し、したがって、ヒトにおいて最も密接に関連するサイトカインである。ＩＬ－１２サイトカインファミリーのさらなるメンバー（ＩＬ－２７）とともに、ヒトおよびアカゲザルのＩＬ－１２を、このアッセイで試験した。重要だが非関連であるさらなる炎症性サイトカインＴＮＦα、ＩＬ－６、およびＩＦＮγも試験した。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、試験したサイトカインとの相互作用を示さなかった。このことは、オフターゲット分子へのＩＤ－Ｌ２５３Ｔの結合が、ヒトと非ヒト霊長類において非常に可能性が低いことを示す。
【0286】
実施例７：ＩＤ－Ｌ２５３Ｔに関するさらなるプロテアーゼ安定性の調査－胃腸のマトリックスメタロプロテイナーゼに対する耐性およびマウス胃腸の通過
実施例７．１：胃腸マトリックスメタロプロテイナーゼに対する耐性
活性化されたマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）のレベルは、炎症性腸疾患患者の炎症を起こした粘膜中で増加する。これらのＭＭＰは、ヒトＩｇＧ足場を含有する天然のヒトＩｇＧおよび治療剤を消化することができる（Ｂｉａｎｃｈｅｒｉ ２０１５年ら）。抗ＴＮＦα治療エタネルセプトの場合には、この消化が、ＴＮＦα中和効力の有意な減少を引き起こす。ＩＤ－Ｌ２５３ＴがＭＭＰに対して耐性があることを確認するために、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを、活性化された組換えヒトＭＭＰ３およびＭＭＰ１２の存在下で、約２０時間インキュベートした。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、約２０時間にわたって完全な生存を示したが、エタネルセプトは同じ酵素製剤によって分解された。
実施例７．１：胃腸マトリックスメタロプロテイナーゼに対する耐性
活性化されたマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）のレベルは、炎症性腸疾患患者の炎症を起こした粘膜中で増加する。これらのＭＭＰは、ヒトＩｇＧ足場を含有する天然のヒトＩｇＧおよび治療剤を消化することができる（Ｂｉａｎｃｈｅｒｉ ２０１５年ら）。抗ＴＮＦα治療エタネルセプトの場合には、この消化が、ＴＮＦα中和効力の有意な減少を引き起こす。ＩＤ－Ｌ２５３ＴがＭＭＰに対して耐性があることを確認するために、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを、活性化された組換えヒトＭＭＰ３およびＭＭＰ１２の存在下で、約２０時間インキュベートした。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、約２０時間にわたって完全な生存を示したが、エタネルセプトは同じ酵素製剤によって分解された。
【0287】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、３７℃で約２０時間にわたってＭＭＰ３とＭＭＰ１２による消化に対して完全に耐性がある。このことにより、ＭＭＰのレベルが引き上げられる場合、ＩＤ－Ｌ２５３ＴがＩＢＤ腸の炎症を起こした環境で高い安定性を保持するはずであることが示される。この知見は、一般的なプロテアーゼ耐性に関する上の知見と共に、本発明のポリペプチドがＩＢＤのための経口治療として大きな可能性を有することを示唆する。
【0288】
実施例７．２：マウス胃腸の通過および生存
上述のインビトロの試験の結果により、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔが、マウス小腸の内容物から調製された上清抽出物に存在するプロテアーゼによる不活性化に対して耐性があることが示された。著者の経験では、マウス小腸の上清は、ヒトまたはブタから得られた小腸の上清よりもはるかにタンパク分解性活性である。マウス胃腸系の通過中のＩＤ－Ｌ２５３Ｔの安定性を調査するために、試験を実施した。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、ミルクと重炭酸塩の混合物中で、抗ＴＮＦ－αＩＣＶＤ ＩＤ－３８Ｆ（ＷＯ２０１６１５６４６５、配列番号８、および実施例８を参照）で製剤化した。ＩＤ－３８Ｆは、マウス胃腸の通過中に安定していることが以前に確立され、したがって、ここでは陽性対照として機能する。経口胃管栄養法によって４匹のマウスにＩＣＶＤを併用投与した後、０時間～３時間と３時間～６時間の間で採取した糞便ペレット中のＩＣＶＤの濃度を測定した。
上述のインビトロの試験の結果により、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔが、マウス小腸の内容物から調製された上清抽出物に存在するプロテアーゼによる不活性化に対して耐性があることが示された。著者の経験では、マウス小腸の上清は、ヒトまたはブタから得られた小腸の上清よりもはるかにタンパク分解性活性である。マウス胃腸系の通過中のＩＤ－Ｌ２５３Ｔの安定性を調査するために、試験を実施した。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、ミルクと重炭酸塩の混合物中で、抗ＴＮＦ－αＩＣＶＤ ＩＤ－３８Ｆ（ＷＯ２０１６１５６４６５、配列番号８、および実施例８を参照）で製剤化した。ＩＤ－３８Ｆは、マウス胃腸の通過中に安定していることが以前に確立され、したがって、ここでは陽性対照として機能する。経口胃管栄養法によって４匹のマウスにＩＣＶＤを併用投与した後、０時間～３時間と３時間～６時間の間で採取した糞便ペレット中のＩＣＶＤの濃度を測定した。
【0289】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、同じマウスにおいて、投与後０～３時間と３～６時間の両方で、ＩＤ－３８Ｆのレベルに匹敵するレベルで検出された。結果は、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔが、マウスにおいてＩＤ－３８Ｆと同等に、またはＩＤ－３８Ｆよりも良好に生存することを示し、投与後３～６時間後に採取した糞便ペレットの上清中で１５μＭを超える最高回復濃度に到達した。
【0290】
実施例８：ヒトＩＢＤ組織におけるＩＤ－Ｌ２１０Ｔ中和活性の評価
ＩＤ－Ｌ２１０ＴのＩＬ－２３中和活性、Ｅ１Ｄ、Ｒ１９Ｓ、およびＲ９２Ｖの突然変異のみを欠くＩＤ－Ｌ２５３Ｔの変異体を、Ｖｏｓｓｅｎｋａｍｐｅｒら（２０１４）およびＣｒｏｗｅら（２０１８）によって記載されたアッセイ系を使用して、炎症を起こした結腸の粘膜組織のエクスビボ培養で調査した。
ＩＤ－Ｌ２１０ＴのＩＬ－２３中和活性、Ｅ１Ｄ、Ｒ１９Ｓ、およびＲ９２Ｖの突然変異のみを欠くＩＤ－Ｌ２５３Ｔの変異体を、Ｖｏｓｓｅｎｋａｍｐｅｒら（２０１４）およびＣｒｏｗｅら（２０１８）によって記載されたアッセイ系を使用して、炎症を起こした結腸の粘膜組織のエクスビボ培養で調査した。
【0291】
このモデルを使用して、病態生理学的条件下で、ＩＢＤ疾患組織に存在するシグナル伝達リンタンパク質のレベルの上昇に対する、ＩＤ－Ｌ２１０Ｔの阻害効果を試験した。試験は、活性なＵＣを有する４人の患者からの生検組織試料を使用して実施した。ＩＤ－Ｌ２１０Ｔ（１５０ｎＭの濃度）、またはＩＬ－２３に結合しないアイソタイプ対照ＩＣＶＤ（ＩＤ－２Ａ、無関係な抗Ｃ．ディフィシル毒素ＩＣＶＤ、２２５ｎＭの濃度）のいずれかと２４時間インキュベートした後、生検外植片を、ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｐｒｏｆｉｌｅｒヒトホスホキナーゼアレイ技術を使用して、リンタンパク質のレベルについて分析した。
【0292】
試験した様々なタンパク質に関する全患者の平均リン強度値を、図１～２に示す。アレイ上のほとんどのタンパク質のリン酸化レベルは、ＩＤ－Ｌ２１０Ｔによる処置後に減少した。
【0293】
各生検について検出された総タンパク質リン酸化シグナル（Σｎ＝３９リンタンパク質）に対する治療効果も評価した。ＩＤ－Ｌ２１０Ｔによる処置後、ＵＣ患者全員からの生検において測定された総リン酸化レベルは、（２０～５２％；平均３２％ ｎ＝４）だけ阻害された。
【0294】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、３つのアミノ酸のみがＩＤ－Ｌ２１０Ｔとは異なり、同様のＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ阻害効力、インビトロの消化に対する耐性、およびマウスの通過を示す。したがって、ＩＤ－Ｌ２１０Ｔに関するこれらの知見がＩＤ－Ｌ２５３Ｔに実質的に適用可能であることが予想される。
【0295】
実施例９：発酵培養における酵母の生産性
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを発現するＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ産生株に、５リットルの発酵を接種した。生産レベルは、クーマシー染色を用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価し、生物学的活性は、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡによって評価した。その結果は、適切な分子量で、発酵の終了時（ＥｏＦ）の上清できれいなバンドを示し、汚染物質は非常に少なかった。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの収率は、０．１８８ｇ／Ｌとして測定した。
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔを発現するＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ産生株に、５リットルの発酵を接種した。生産レベルは、クーマシー染色を用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価し、生物学的活性は、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中和ＥＬＩＳＡによって評価した。その結果は、適切な分子量で、発酵の終了時（ＥｏＦ）の上清できれいなバンドを示し、汚染物質は非常に少なかった。ＩＤ－Ｌ２５３Ｔの収率は、０．１８８ｇ／Ｌとして測定した。
【0296】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔは、標準酵母発酵技術を使用して、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓにおける産生についても試験した。生産レベルは、クーマシー染色を用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価し、その結果は、適切な分子量で、ＥｏＦ上清できれいなバンドを示した。この発酵からのＩＤ－Ｌ２５３Ｔの収率を１．３ｇ／Ｌとして測定した。完全な中和活性は、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ中立ＥＬＩＳＡによって実証された。
【0297】
実施例１０：ヘテロビヘッド（ｈｅｔｅｒｏｂｉｈｅａｄ）抗ＩＬ－２３／抗ＴＮＦ－α構築物ＦＡ１Ｋの産生および特徴付け
実施例１０．１：ＦＡ１Ｋの産生
抗ＩＬ－２３ ＩＣＶＤ ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび抗ＴＮＦ－α ＩＣＶＤ ＩＤ－３８Ｆを含むヘテロビヘッド構築物（ＷＯ２０１６１５６４６５、その文献の配列番号８、およびこの開示の配列番号６７）を産生した（本明細書で「ＦＡ１Ｋ」と呼ばれる）。この構築物中のＩＣＶＤを、中央のリシン残基（配列番号４９）を有する柔軟な非免疫原性（Ｇ４Ｓ）４リンカーによって分離し、ＷＯ２０１６１５６４６６で開示されるタイプのトリプシン切断部位（ＩＤ－３８Ｆ－（Ｇ４Ｓ）２Ｋ－（Ｇ４Ｓ）２－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ）を作成した。ＦＡ１Ｋ中で使用されるＩＤ－３８Ｆ群のポリペプチド配列は、上で使用されるＩＤ－３８Ｆのもの（配列番号４７）と同一であり、ＦＡ１Ｋ中で使用されるＩＤ－Ｌ２５３Ｔ群のポリペプチド配列は、Ｄ１Ｅ置換を除いて、上でＩＤ－Ｌ２５３Ｔに使用されるものと同一であった（配列番号４８）。
実施例１０．１：ＦＡ１Ｋの産生
抗ＩＬ－２３ ＩＣＶＤ ＩＤ－Ｌ２５３Ｔおよび抗ＴＮＦ－α ＩＣＶＤ ＩＤ－３８Ｆを含むヘテロビヘッド構築物（ＷＯ２０１６１５６４６５、その文献の配列番号８、およびこの開示の配列番号６７）を産生した（本明細書で「ＦＡ１Ｋ」と呼ばれる）。この構築物中のＩＣＶＤを、中央のリシン残基（配列番号４９）を有する柔軟な非免疫原性（Ｇ４Ｓ）４リンカーによって分離し、ＷＯ２０１６１５６４６６で開示されるタイプのトリプシン切断部位（ＩＤ－３８Ｆ－（Ｇ４Ｓ）２Ｋ－（Ｇ４Ｓ）２－ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ）を作成した。ＦＡ１Ｋ中で使用されるＩＤ－３８Ｆ群のポリペプチド配列は、上で使用されるＩＤ－３８Ｆのもの（配列番号４７）と同一であり、ＦＡ１Ｋ中で使用されるＩＤ－Ｌ２５３Ｔ群のポリペプチド配列は、Ｄ１Ｅ置換を除いて、上でＩＤ－Ｌ２５３Ｔに使用されるものと同一であった（配列番号４８）。
【0298】
ＦＡ１Ｋを、ベクターｐＵＲ９０１３へとＳａｃＩ／ＨｉｎｄＩＩＩフラグメント上でクローン化し、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｖｗｋｇａｌ１－発現株の染色体への安定しているマルチコピーの組み込みを促進する。この組み込みおよび発現系を使用すると、ＦＡ１Ｋは、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ中のガラクトース誘導性プロモーターの制御下にあり、酵母接合因子αシグナル配列によってビヘッド（ｂｉｈｅａｄ）分泌が達成された。加えて、同じシグナル配列を有するＦＡ１Ｋを、メタノール誘導性ｐＡＯＸ１プロモーターの制御下で、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓの染色体へとクローン化した。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからのＦＡ１Ｋの発現は、５０ｍＬの誘導培養物で評価した。
【0299】
これらの振盪フラスコからの上清を精製した。その後、ＦＡ１Ｋのこの精製した製剤は、特に明記されない限り、下記の実験に使用した。
【0300】
ＦＡ１ＫをＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓにクローン化し、５０ｍＬのスケールで優れた発現が示された。
【0301】
実施例１０．２：ＦＡ１Ｋのインビトロの特徴付け
ＦＡ１Ｋをトリプシンと３７℃でインキュベートすると、ＩＤ－Ｌ２５３ＴおよびＩＤ－３８Ｆ単量体群の迅速な分離を結果としてもたらされた。したがって、ＦＡ１Ｋは、ヒト小腸中のトリプシンに曝露すると、両方の単量体群の迅速な放出のために適切にフォーマットされる。
ＦＡ１Ｋをトリプシンと３７℃でインキュベートすると、ＩＤ－Ｌ２５３ＴおよびＩＤ－３８Ｆ単量体群の迅速な分離を結果としてもたらされた。したがって、ＦＡ１Ｋは、ヒト小腸中のトリプシンに曝露すると、両方の単量体群の迅速な放出のために適切にフォーマットされる。
【0302】
ＴＮＦαに対するＦＡ１Ｋの中和効力（トリプシン切断前とトリプシン切断後）を調べた（図３を参照のこと。ここで、「ＦＡ１Ｋ」はＦＡ１Ｋトリプシン処置前を指し、「ＦＡ１Ｋトリプシン」はＦＡ１Ｋトリプシン処置後を指す）。
【0303】
ＴＮＦ－α上のエピトープについての競合を測定する、ビオチン化されたｈｕｍｉｒａ（アダリムマブ）競合ＥＬＩＳＡを実施した。競合が生じる場合、エピトープは、非標識のポリペプチドによって占有され、より少ない数のビオチン化ｈｕｍｉｒａがＴＮＦαに結合し、結果として、アッセイシグナルの低下をもたらす。ＥＬＩＳＡプレートは、リン酸緩衝生理食塩水（１×ＰＢＳ）中で２５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）中の１００ｎｇ／ｍＬのヒトＴＮＦαでコーティングされ、１×ＰＢＳ中の１％のＢＳＡで遮断した。１％のＢＳＡと０．１ｍＭのＰＭＳＦは、処理前のトリプシンを有するポリペプチドに対するすべての実験のためのアッセイ希釈液として使用した。それ以外の場合は、１％のＢＳＡをアッセイ希釈液として使用した。ビオチン化アダリムマブ（ＬＧＣ）を、最終濃度の２ｎＭのビオチン化アダリムマブを得るために、すべての基準および試料と１：１に混合してから、その混合物をプレートに添加した。結合したビオチン化アダリムマブは、ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ Ｅ２８８６）を使用して検出し、ＴＭＢ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ ５０－７６－００）を使用して視覚化してから、０．５Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停止させ、および、４５０ｎｍのＦＡ１Ｋ（トリプシン処理前とトリプシン処理後）での読み取ると、この競合ＥＬＩＳＡにおいて、ＩＤ－３８Ｆと実質的に同じくらい効力があることが分かった。
【0304】
ＩＬ－２３に対するＦＡ１Ｋ（トリプシン切断前とトリプシン切断後）の中和効力を調べた（図４を参照のこと。図中、「ＦＡ１Ｋ」は、トリプシン処理前のＦＡ１Ｋを指し、「ＦＡ１Ｋトリプシン」はトリプシン処理後のＦＡ１Ｋを指す）。ＦＡ１Ｋ（トリプシン処理前とトリプシン処理後）は、ＩＤ－Ｌ２５３Ｔと少なくとも同じくらいＩＬ－２３に対して効力があった。
【0305】
ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ群が遊離ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ単量体と比べてＮ末端基伸長を有するように、ＦＡ１ＫのＣ末端位置にＩＤ－Ｌ２５３Ｔを含めることで、ＩＬ－２３中和のための利点がもたらされるようにも思われる。
【0306】
Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓにおける発現から産生および精製されたＦＡ１Ｋもまた、ＥＬＩＳＡによって、ＴＮＦ－αとＩＬ－２３の両方に対して完全に効力があることが確認された（データは示さず）。ＦＡ１Ｋの単量体群は両方とも、ヒト糞便の上清における４時間のインキュベーション後に、親単量体ＩＤ－３８ＦおよびＩＤ－Ｌ２５３Ｔの有利な安定特性を保持することが示された（図５を参照のこと。図中、左から右に、（ａ）ＩＤ－３８Ｆ、（ｂ）ＦＡ１Ｋ単量体群形態のＩＤ－３８Ｆ、（ｃ）ＩＤ－Ｌ２５３Ｔ、および（ｄ）ＦＡ１Ｋ単量体群形態のＩＤ－Ｌ２５３Ｔの生存％が示される。）
【0307】
まとめると、上記の知見により、ＦＡ１Ｋが、二剤併用療法として高濃度のこれらの単量体の各々を送達するために、適切なフォーマットであることが示された。ＦＡ１Ｋは、親単量体の好意的な効力およびプロテアーゼ安定性の特徴を保持する。不安定リンカーフォーマットゆえに、ＦＡ１Ｋをトリプシンに曝露すると、両方の単量体群の迅速な放出が結果としてもたらされ、これにより、別の群からの干渉なしに、それぞれの標的への独立した結合が可能となる。
【0308】
実施例１１：ヒトＩＢＤ組織への抗ＩＬ－２３（ＩＤ－Ｌ２１０Ｔ）と抗ＴＮＦ－α（ＩＤ－３８Ｆ）の組み合わせ投与についてのエクスビボの特徴付け
ＴＮＦ－αの中和活性（ＩＤ－３８Ｆ）およびＩＬ－２３の中和活性（ＩＤ－Ｌ２１０Ｔ）を有するＩＣＶＤが、ＩＢＤと診断された患者から採取した炎症を起こした腸の組織試料中で増加するチロシンキナーゼ受容体およびシグナル伝達タンパク質のリン酸化を抑制することができることが、上でまたは他の出版物で示されている（上記の実施例８、およびＷＯ２０１６１５６４６５、この文献中の実施例９を参照のこと）。
ＴＮＦ－αの中和活性（ＩＤ－３８Ｆ）およびＩＬ－２３の中和活性（ＩＤ－Ｌ２１０Ｔ）を有するＩＣＶＤが、ＩＢＤと診断された患者から採取した炎症を起こした腸の組織試料中で増加するチロシンキナーゼ受容体およびシグナル伝達タンパク質のリン酸化を抑制することができることが、上でまたは他の出版物で示されている（上記の実施例８、およびＷＯ２０１６１５６４６５、この文献中の実施例９を参照のこと）。
【0309】
ＵＣを有する患者から得られた、炎症を起こした結腸の粘膜組織のエクスビボ培養物中のリンタンパク質のバイオマーカーのレベルに対する、Ｌ２１０ＴとＩＤ－３８Ｆを組み合わせた効果を調べるために、新しい試験を実施した。ＩＤ－Ｌ２１０Ｔは、３つのアミノ酸のみがＩＤ－Ｌ２５３Ｔと異なっており、同様のＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ阻害効力およびインビトロの消化に対する耐性を示す。
【0310】
異なる抗サイトカインメカニズムを組み合わせることによってどのような効果を達成することができるのかを評価するために、個々のＩＣＶＤの効果を、２つのＩＣＶＤの混合物およびアイソタイプ対照ＩＣＶＤ（ＩＤ－２Ａ、無関係の抗Ｃ．ディフィシル毒素ＩＣＶＤ）と比較した。
【0311】
４人のＵＣ患者の各々からの生検を、様々な抗体（対照ＩＤ－２Ａ、ＩＤ－３８Ｆ、ＩＤ－Ｌ２１０Ｔ、またはＩＤ－３８Ｆ＋ＩＤ－Ｌ２１０Ｔ）と２４時間インキュベートし、処理後に、組織溶解物をリンタンパク質抗体アレイ上で分析した。個々のアレイ（１処理当たり４つのアレイ）上で検出された４５のリンタンパク質についての、１人の患者当たりの平均シグナル強度データを図６～７に提示する（図中、Ｌ２１０ＴはＩＤ－Ｌ２１０Ｔを指す）。様々な抗体処理の阻害効果は、対照ＩＣＶＤ ＩＤ２Ａで処理された生検のリン酸化の優勢的に高いレベルから、抗ＴＮＦ－αまたは抗ＩＬ－２３ ＩＣＶＤあるいはその２つの組み合わせで処理された生検の比較的低いリン強度値への移行によって実証される。
【0312】
本明細書で提供されるデータは、ＴＮＦ－αとＩＬ－２３のＧＩ制限拮抗（ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ）を組み合わせる治療アプローチが、いずれかの標的のみに対する単独療法と比べて、炎症性腸疾患患者のより高い割合で、より長い持続時間にわたって、より大きな程度の有効性を達成することができることを例証する。
【0313】
雑則
特許と特許出願を含む、本出願で言及される文献はすべて、可能な限り最大限に参照することによって本明細書に組み込まれる。
特許と特許出願を含む、本出願で言及される文献はすべて、可能な限り最大限に参照することによって本明細書に組み込まれる。
【0314】
本明細書全体にわたって、文脈が別段必要としない限り、単語「含む」、および「含む」と「含むこと」などのバリエーションは、記載された整数、工程、整数の群、または工程の群を含むことが暗示されるが、他の整数、工程、整数の群、または工程の群を除外しないことが認識される。
【0315】
この明細書および請求項が一部を形成する本出願は、任意の後の出願に関する優先権の基礎として使用されてもよい。そのような後の出願の請求項は、本明細書に記載される任意の特徴または特徴の組み合わせに関し得る。それらは、プロダクト、組成物、プロセス、または使用のクレームの形態をとってもよく、例として、限定されることなく、以下の請求項を含み得る。
【0316】
参考文献
以下の参考文献は、参照によってそれら全体が本明細書に組み込まれる。
・Ａｒｂａｂｉ－Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ ｅｔ ａｌ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ １９９７ ４１４：５２１－５２６
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・Ｆａｉｓｓｔ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｖｉｒｏｌ １９９５ ６９：４５３８－４５４３
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・Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９９８ ６７：９９－１３４
・Ｖｏｓｓｅｎｋａｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ ２０１４ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １４７（１）：１７２－１８３
・Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ １９８９ ３４１：５４４－５４６
・Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｅ １９８５ ３４：３１５－３２３
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】
【国際調査報告】