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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-09-12
(54)【発明の名称】アルキン誘導体およびその調製方法と用途
(51)【国際特許分類】
C07D 487/04 20060101AFI20220905BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20220905BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220905BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220905BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220905BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220905BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20220905BHJP
【ＦＩ】
C07D487/04 142
C07D487/04 CSP
A61K31/519
A61P35/00
A61P35/02
A61P29/00
A61P37/02
A61P19/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022501136
(86)(22)【出願日】2020-07-06
(85)【翻訳文提出日】2022-01-19
(86)【国際出願番号】 CN2020100376
(87)【国際公開番号】W WO2021004421
(87)【国際公開日】2021-01-14
(31)【優先権主張番号】201910608212.0
(32)【優先日】2019-07-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】510116819
【氏名又は名称】浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．４６ Ｗａｉｓｈａ Ｒｏａｄ，Ｊｉａｏｊｉａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１８０００，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
(71)【出願人】
【識別番号】521508896
【氏名又は名称】上海昂睿医薬技術有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】呂 賀軍
(72)【発明者】
【氏名】馬 玉涛
(72)【発明者】
【氏名】邱 海波
(72)【発明者】
【氏名】趙 ▲ウェン▼▲ウェン▼
(72)【発明者】
【氏名】胡 泰山
(72)【発明者】
【氏名】陳 磊
【テーマコード（参考）】
4C050
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C050AA01
4C050BB05
4C050CC08
4C050EE03
4C050FF03
4C050GG04
4C050HH02
4C050HH04
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB06
4C086GA13
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086NA14
4C086ZA59
4C086ZA96
4C086ZB07
4C086ZB11
4C086ZB26
(57)【要約】
本発明は、アルキン誘導体、その調製方法、及びその医薬への応用に関する。具体的には、本発明は、式（Ｉ）で示されるアルキン誘導体、その調製方法、及びそれらの薬学的に許容される塩、並びに治療薬、特にホスファチジルイノシトール３－キナーゼγ（ＰＩ３Ｋγ）阻害剤としてのそれらの使用に関する。ただし、式（Ｉ）中、各置換基の定義は明細書に記載の定義と同じである。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記の式（Ｉ）で示される化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩。【化1】
Ｒ１は、シクロアルキル基又は複素環式基から選ばれ、前記のシクロアルキル基又は複素環式基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、複素環式基、アリール基、ヘテロアリール基、または－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的にさらに置換され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、又はハロゲンから選ばれ、ここで、前記のアルキル基又はアルコキシ基は、さらに１つ又は複数のハロゲンで任意選択的に置換され、
Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、又はハロゲンから選ばれ、ここで、該アルキル基又はアルコキシ基は、さらに１つ又は複数のハロゲンで任意選択的に置換され、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、又はシクロアルキル基から選ばれ、ここで、前記のアルキル基又はシクロアルキル基は、さらにヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、又は複素環式基から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換され、かつ
ｍは、０、１、２、３、４又は５である。）
【請求項2】
Ｒ１は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基又はオキセタニル基である、請求項１に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ１は、シクロプロピル基又はオキセタニル基である、請求項１又は２に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又はハロゲンから選ばれ、前記ハロゲンは、好ましくはフッ素である、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して水素原子、アルキル基、又はハロゲンから選ばれ、かつ、ｍは０、１、２又は３であり、好ましくはＲ４は水素である、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項6】
前記化合物は、【化2】
【請求項7】
有効量の請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、賦形剤又はそれらの組み合わせとを含む、医薬組成物。
【請求項8】
ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγの阻害剤として用いられる医薬品の製造における、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項9】
ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγによって介される疾患を治療するための医薬品の製造における、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は請求項７に記載の医薬組成物の使用であって、前記ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγによって介される疾患は、好ましくはがん、骨障碍、呼吸器疾患、炎症性疾患または自己免疫疾患であり、前記呼吸器疾患は、好ましくは喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧である呼吸器系疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患である、使用。
【請求項10】
前記がんは、血液腫瘍、及び固形腫瘍であり、前記血液腫瘍は、好ましくは急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、又は骨髄増殖性疾患から選ばれ、前記血液腫瘍は、好ましくは脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスによる発がん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん、及びカルチノイド腫瘍から選ばれる、請求項９に記載の使用。
【請求項11】
前記請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は請求項７に記載の医薬組成物と、一種または複数の第２の治療薬の併用において、前記第２の治療薬は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、共刺激調節剤、免疫賦活剤、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ＣＤ２８抗体、ＣＤ３０抗体、ＣＤ４０抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、パクリタキセル、５－ＦＵ、テモゾロミド、抗血管新生剤、アキシチニブ、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤又はそれらの混合物から選ばれ、好ましくはＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項９又は１０に記載の使用。
【請求項12】
ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγの活性を阻害するための方法において、治療有効量の請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は請求項７に記載の医薬組成物を、必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項13】
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又は請求項７に記載の医薬組成物を、必要とする患者に投与することを含む、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγの活性を阻害することにより、がん、骨障碍、呼吸器系疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患を治療するための方法であって、呼吸器系疾患は、好ましくは喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧から選ばれ、
がんは、好ましくは血液腫瘍又は固形腫瘍から選ばれ、ここで、前記血液腫瘍は好ましくは急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、及び骨髄増殖性疾患から選ばれ、前記固形腫瘍は好ましくは、脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスによる発がん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん、及びカルチノイド腫瘍から選ばれる、方法。
【請求項14】
一種または複数の第２の治療薬、を前記患者に追加投与することをさらに含む方法において、前記第２の治療薬は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、共刺激調節剤、免疫賦活剤、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ＣＤ２８抗体、ＣＤ３０抗体、ＣＤ４０抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、パクリタキセル、５－ＦＵ、テモゾロミド、抗血管新生剤、アキシチニブ、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、及びそれらの混合物から選ばれ、好ましくはＰＤ－１阻害剤、又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
相互参照
本願は、発明の名称が「アルキン誘導体およびその調製方法と用途」である、２０１９年７月８日に中国特許庁へ提出された中国特許出願２０１９１０６０８２１２．０に基づく優先権を主張し、その全内容は、全体として援用により本明細書に組み込まれる。
本願は、発明の名称が「アルキン誘導体およびその調製方法と用途」である、２０１９年７月８日に中国特許庁へ提出された中国特許出願２０１９１０６０８２１２．０に基づく優先権を主張し、その全内容は、全体として援用により本明細書に組み込まれる。
【0002】
技術分野
本発明は、新しいアルキン誘導体、その調製方法、この誘導体を含む医薬組成物、及び治療薬、特にホスファチジルイノシトール３－キナーゼγ（ＰＩ３Ｋγ）阻害剤としてのその使用に関する。
本発明は、新しいアルキン誘導体、その調製方法、この誘導体を含む医薬組成物、及び治療薬、特にホスファチジルイノシトール３－キナーゼγ（ＰＩ３Ｋγ）阻害剤としてのその使用に関する。
【背景技術】
【0003】
ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３－キナーゼ或ＰＩ３Ｋ）は、ウイルスのかん遺伝子に関連する細胞内ホスファチジルキナーゼであり、それによって媒介されるＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ－ｍＴＯＲシグナル経路が腫瘍の発生と発達に重要な役割を果たし、腫瘍細胞の形成、生存、増殖、遊走、代謝およびアポトーシスを調節することができる。配列相同性と脂質基質の特異性に基づき、ＰＩ３ＫファミリーはI型、II型、III型に分類される。I型のＰＩ３Ｋは、比較的広く研究されており、多くの薬物研究の重要なターゲットである。すべてのI型のＰＩ３Ｋは、ヘテロ二量体タンバク質であり、それぞれが小さな調節ドメインと大きな１１０ｋＤａの触媒ドメインを含み、ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０γ、及びｐ１１０δに分化した４つのサブタイプとして存在する。通常、Ｉ型のＰＩ３Ｋ（ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δ、又はｐ１１０γ）は、チロシンキナーゼやＧタンパク質共役受容体によって活性化され、例えばＡｋｔ／ＰＤＫ１経路、ｍＴＯＲ、Ｔｅｃファミリーキナーゼ、及びＲｈｏファミリーのＧＴＰアーゼの下流エフェクターと結合するＰＩＰ３を生成する。ＩＩ型とＩＩI型のＰＩ３Ｋは、ＰＩ（３）ＰとＰＩ（３，４）Ｐ２の合成を通じて細胞内輸送において重要な役割を果たす。ＰＩ３Ｋは、細胞成長（ｍＴＯＲＣ１）を制御するか、ゲノムの完全性（ＡＴＭ、ＡＴＲ、ＤＮＡ－ＰＫ、及びｈＳｍｇ－１）を監視するプロテインキナーゼである。４つのＩ型のＰＩ３Ｋサブタイプは、インビボで特徴的な発現パターンを示す。ＰＩ３ＫαとＰＩ３Ｋβの発現は非常に一般的であり、細胞の成長、生存、増殖に重要な役割を果たす。ＰＩ３ＫαとＰＩ３Ｋβを阻害するのは、主にかんの治療を目的とする。ＰＩ３Ｋγは顆粒球、単球、及びマクロファージで広く発現し、ＰＩ３ＫδサブタイプはＢ細胞とＴ細胞にも見られている。ＰＩ３ＫδやＰＩ３Ｋγをコードする遺伝子のノックアウトマウスは、生き残る可能性があるが、自然免疫と適応応答に明らかな欠陥を示すことになるので、特異性ＰＩ３ＫδやＰＩ３Ｋγの阻害剤は他の細胞系に対するＰＩ３Ｋシグナル伝達の正常な機能を妨げることなく、自己免疫疾患の治療利益を有する可能性がある。
【0004】
現在、ＢＥＺ２３５、ＧＤＣ－０９４１、ＣＡＬ－１０１などの幾つかのＰＩ３Ｋに対する阻害剤は臨床研究に進んで、市場に出されることもある。最近の研究は、ＰＩ３Ｋγは自己免疫系、炎症性疾患、呼吸器系疾患などと密接に関連していることが分かった。したがって、ＰＩ３Ｋγ選択的阻害剤はがん、炎症性疾患、骨障害、呼吸器系疾患、及び自己免疫疾患（Ｍａｔｔｈｅｗ Ｗ．Ｄ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１９），６２（１０），４７８３－４８１４；Ｐｅｒｒｏｔｔａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２０１６），１７（１１），１８５８／１－１８５８／９；Ｏｋｋｅｎｈａｕｇ、Ｋｌａｕｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１６），６（１０），１０９０－１１０５．；Ｈｉｒｓｃｈ Ｅ，ら．Ｓｃｉｅｎｃｅ（８０－）．２０００；２８７：１０４９-１０５３．；Ｌｉ Ｚ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（８０－）．２０００；２８７：１０４６-１０４９．；ＫａｎｅｄａＭＭら，Ｎａｔｕｒｅ．２０１６；１-２１）の人気のある標的になっている。ＰＩ３Ｋγ選択的阻害剤は、がんを治療する潜在的な薬剤である。前記がんは、血液腫瘍及び固形腫瘍を含む。前記血液腫瘍は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、（ＷＭ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、肥満細胞症、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、または骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）から選ばれる。前記固形腫瘍は、脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスに引き起こすがん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＴ）、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん及びカルチノイド腫瘍から選ばれることが好ましい。ＰＩ３Ｋγ阻害剤は、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧などを含む呼吸器系疾患に対しても治療利益を有する。
【0005】
現在、臨床研究に進んだＰＩ３Ｋγ選択的阻害剤は、Ｉｎｆｉｎｉｔｙ社のＩＰＩ－５４９のみであり、それは、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤）への腫瘍の抵抗を逆転させることができ、腫瘍免疫療法に用いられる見込みがある。ＩＰＩ－５４９は、その構造が以下に示され、特許出願ＷＯ２０１５０５１２４４Ａ１にはその調製方法が開示されている。
【化1】
【0006】
さらに、従来技術には、ＷＯ２０１２０５２７５３、ＷＯ２０１１００８３０２などのＰＩ３Ｋγ選択的阻害剤に関する一連の出願も開示されている。
【0007】
ＰＩ３Ｋγ選択的阻害剤の研究と応用は、一定の発展を遂げたが、それらの新しい阻害剤はまだ研究段階であるもので、生物活性が不十分であり、選択性が不十分であり、オフターゲットの可能性が高く又は安全性及び耐容性が不十分であるなどの解決すべき多くの課題があり、まだ改善の余地がある。従って、新しいＰＩ３Ｋγ選択的阻害剤の研究開発を続ける必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
上記の技術問題に鑑みて、本発明は下記の式（Ｉ）で示されるアルキン系化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。
（式中、Ｘは、ＣＨ又はＮから選ばれ、
Ｒ１は、シクロアルキル基又は複素環式基から選ばれ、ここで、前記のシクロアルキル基又は複素環式基は、さらにヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、複素環式基、アリール基、ヘテロアリール基、または－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換され、Ｒ１は、オキセタニル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、又はシクロヘキシル基から選ばれ、より好ましくはシクロプロピル基又はオキセタニル基であり、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、又はハロゲンから選ばれ、ここで、前記のアルキル基又はアルコキシ基はさらに１つ又は複数のハロゲンで任意選択的に置換され、
Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、又はハロゲンから選ばれ、ここで、前記アルキル基又はアルコキシ基はさらに１つ又は複数のハロゲンで任意選択的に置換され、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、又はシクロアルキル基から選ばれ、ここで、前記アルキル基又はシクロアルキル基はさらにヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、又は複素環式基から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換され、かつ
ｍは、０、１、２、３、４又は５である。）
【化2】
Ｒ１は、シクロアルキル基又は複素環式基から選ばれ、ここで、前記のシクロアルキル基又は複素環式基は、さらにヒドロキシ基、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、複素環式基、アリール基、ヘテロアリール基、または－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換され、Ｒ１は、オキセタニル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、又はシクロヘキシル基から選ばれ、より好ましくはシクロプロピル基又はオキセタニル基であり、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、又はハロゲンから選ばれ、ここで、前記のアルキル基又はアルコキシ基はさらに１つ又は複数のハロゲンで任意選択的に置換され、
Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、又はハロゲンから選ばれ、ここで、前記アルキル基又はアルコキシ基はさらに１つ又は複数のハロゲンで任意選択的に置換され、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、又はシクロアルキル基から選ばれ、ここで、前記アルキル基又はシクロアルキル基はさらにヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、又は複素環式基から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換され、かつ
ｍは、０、１、２、３、４又は５である。）
【0009】
本発明の好適な実施形態においては、Ｒ１は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、又はオキセタニル基であることが好ましく、シクロプロピル基又はオキセタニル基であることがより好ましい。
【0010】
本発明の好適な実施形態においては、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、又はハロゲンから選ばれ、前記ハロゲンは好ましくはフッ素である。
【0011】
本発明の好適な実施形態においては、Ｒ４は、同一または異なって、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、又はハロゲンから選ばれ、かつｍは、０、１、２又は３であり、好ましくは、Ｒ４は水素である。
【0012】
本発明の好適な実施形態においては、Ｘは、ＣＨ又はＮから選ばれ、Ｒ１は、シクロプロピル基又はオキセタニル基から選ばれ、Ｒ２及びＲ３は、水素原子及びＦから選ばれる。
【0013】
本発明の典型的な化合物は、
に限られていないが、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【表1】
【0014】
さらに、本発明は、有効量の式（Ｉ）で示される化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、賦形剤又はそれらの組み合わせとを含む医薬組成物を提供する。
【0015】
本発明は、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγの阻害剤として用いられる医薬品の製造における、本発明に係る式（Ｉ）で示される化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はその医薬組成物の使用を提供する。
【0016】
本発明は、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγによって介される疾患を治療するための医薬品の製造における、式（Ｉ）で示される化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はその医薬組成物の使用を提供する。ここで、前記ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγによって介される疾患は、がん、骨障碍、呼吸器系疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患であることが好ましい。前記呼吸器系疾患は、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧であることが好ましい。前記がんは、血液腫瘍又は固形腫瘍であるであることが好ましい。前記血液腫瘍は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、又は骨髄増殖性疾患から選ばれることが好ましい。前記固形腫瘍は、脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスによる発がん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん、及びカルチノイド腫瘍から選ばれることが好ましい。
【0017】
本発明は、さらに、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγによって介される疾患を治療するための医薬品の製造における、式（Ｉ）で示される化合物、またはその立体異性体化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はその医薬組成物と一種または複数の第２の治療薬との併用を提供する。ここで、前記ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγによって介される疾患は、がん、骨障碍、呼吸器系疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患であることが好ましい。前記呼吸器系疾患は、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧であることが好ましい。前記がんは、血液腫瘍又は固形腫瘍であることが好ましい。前記血液腫瘍は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、又は骨髄増殖性疾患から選ばれることが好ましい。前記固形腫瘍は、脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスによる発がん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん、及びカルチノイド腫瘍から選ばれることが好ましい。前記第２の治療薬は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、共刺激調節剤、免疫賦活剤、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ＣＤ２８抗体、ＣＤ３０抗体、ＣＤ４０抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、パクリタキセル、５－ＦＵ、テモゾロミド、抗血管新生剤、アキシチニブ、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はそれらの混合物から選ばれ、好ましくはＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である。
【0018】
本発明は、式（Ｉ）で示される化合物、またはその立体異性体化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はその医薬組成物を投与することを含むホスファチジルイノシトール３－キナーゼγの活性の阻害方法を提供する。
【0019】
本発明は、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼγの活性を阻害することにより、がん、骨障碍、呼吸器系疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患の病気を治療するための方法であって、式（Ｉ）前記化合物、その立体異性体、互変異性体、又はそれらの薬学的に許容される塩、又はその医薬組成物を必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。ここで、前記呼吸器系疾患は、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧から選ばれることが好ましい。前記がんは、血液腫瘍又は固形腫瘍であることが好ましい。前記血液腫瘍は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、又は骨髄増殖性疾患から選ばれることが好ましい。前記固形腫瘍は、脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスによる発がん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん、及びカルチノイド腫瘍から選ばれることが好ましい。
【0020】
幾つかの好適な実施形態では、上記のがん、骨障碍、呼吸器系疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患の病気を治療するための方法は、一種または複数のの第２の治療薬を前記患者に追加投与することをさらに含む。ここで、前記呼吸器系疾患は、喘息、嚢胞性線維症、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、気管支拡張症、急性呼吸窮迫症候群、気道疾患、胸腔疾患、又は肺動脈高血圧から選ばれることが好ましい。前記がんは、血液腫瘍又は固形腫瘍から選ばれることが好ましい。前記血液腫瘍は、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、又は骨髄増殖性疾患から選ばれることが好ましい。前記固形腫瘍は、脳腫瘍、皮膚かん、頭頸部かん、神経内分泌がん、膵臓がん、肺かん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、食道かん、肝臓かん、胃かん、結腸かん、結腸直腸かん、卵巣かん、子宮頸かん、子宮かん、子宮内膜かん、膀胱かん、腎がん、ウイルスによる発がん、髄芽腫、基底細胞がん、グリオーマ、肝細胞かん、消化管間質腫瘍、黒色腫、原始神経外胚葉性腫瘍、線維肉腫、粘液型肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、平滑筋肉腫、膀胱の移行細胞かん、上皮かん、有棘細胞かん、腺かん、気管支かん、腎細胞かん、及びカルチノイド腫瘍から選ばれることが好ましい。前記第２の治療薬は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、共刺激調節剤、免疫賦活剤、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ＣＤ２８抗体、ＣＤ３０抗体、ＣＤ４０抗体、ＧＭ－ＣＳＦ、ゲムシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、パクリタキセル、５－ＦＵ、テモゾロミド、抗血管新生剤、アキシチニブ、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、及びそれらの混合物から選ばれ、好ましくはＰＤ－１阻害剤或ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。
【0021】
発明の詳細的な説明
反対の記載がない限り、本発明の明細書および特許請求の範囲で使用されるいくつかの用語は、以下のように定義される。
反対の記載がない限り、本発明の明細書および特許請求の範囲で使用されるいくつかの用語は、以下のように定義される。
【0022】
「アルキル基」は、一基又は一基の一部と見なされる場合、Ｃ１－Ｃ２０の直鎖状又は分岐脂肪族炭化水素基を含む基を指す。Ｃ１－Ｃ１０アルキル基であることが好ましく、Ｃ１－Ｃ６アルキル基及びＣ１－Ｃ４アルキル基であることがより好ましい。アルキル基の実例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ｓ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチルなどが含まれるが、それらに限定されない。アルキル基は、置換であってもよく、非置換であってもよい。
【0023】
「シクロアルキル基」とは、飽和または部分的に飽和した単環式、縮合式、架橋式、およびスピロ環式炭素環を指す。Ｃ３－Ｃ１２シクロアルキル基であることが好ましく、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基であることがより好ましく、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキル基であることが最も好ましい。単環式シクロアルキル基の実例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル基、シクロオクチルなどを含み、好ましくは、シクロプロピル基、シクロヘキセニル基であるが、それらに限定されない。前記シクロアルキル基環は、アリール、ヘテロアリール、または複素環式環に縮合してもよく、ただし、親構造に連結する環はシクロアルキル基であり、非限定的な実例には、インダニル基、テトラヒドロナフチル基、ベンゾシクロヘプチル基等などが含まれる。シクロアルキル基は、任意選択的に置換であってもよく、非置換であってもよい。インダニル、テトラヒドロナフタレン基、ベンゾシクロヘプタニル基などが含まれる。
【0024】
「複素環式基」又は「ヘテロ環」は、本願において交換可能に使用され、いずれも１つ又は複数の環形成原子が酸素、窒素、硫黄原子などのヘテロ原子である非芳香族複素環式基を意味し、単環、縮合式環、架橋式環、およびスピロ環を含む。５乃至７員の単環式環、又は７乃至１０員の二環式又は三環式環を有することが好ましく、窒素、酸素および／または硫黄から選択される１、２又は３個の原子を含んでも良い。「複素環式基」の実例は、モルホリニル、オキセタニル基、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル基、１，１－ジオキソ－チオモルホリニル、ピペリジニル基、２－オキソ－ピペリジニル基、ピロリジニル基、２－オキソ－ピロリジニル基、ピペリジン－２－オン、８－オキサ－３－アザ－ビシクロ［３．２．１］オクタニル基、及びピペラジニル基を含むが、以下に限定されない。複素環式基は、置換であってもよく、非置換であってもよい。前記複素環式基環は、アリール基、ヘテロアリール基、またはシクロアルキル基の環に縮合してもよく、ここで、親構造と一緒に連結する環は複素環式基である。複素環式基は、任意選択的に置換であってもよく、非置換であってもよい。
【0025】
「アリール基」とは、１つ又は２つの環を含む炭素環式芳香族系を指し、ここで、該環は、縮合より一緒に連結することができる。「アリール基」という用語は、例えば、フェニル基、ナフチル基、テトラヒドロナフチル基などの芳香族基を含む。アリール基は、Ｃ６～Ｃ１０アリール基であることが好ましく、フェニル基、及びナフチル基であることがより好ましく、フェニル基であることが最も好ましい。アリール基は、置換であってもよく、非置換であってもよい。前記「アリール基」は、ヘテロアリール基、複素環式基、又はシクロアルキル基と縮合してもよく、ここで、親構造と一緒に連結する環はアリール基環である。非限定的な実例は、
を含むが、これらに限定されない。
【化3】
【0026】
「ヘテロアリール基」は、芳香族の５乃至６員の単環式環または８乃至１０員の二環式環を指し、窒素、酸素、及び／又は硫黄から選択される１、２、３又は４個の原子を含むんでも良い。「ヘテロアリール基」の実例は、フラニル基、ピリジル基、２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、チエニル基、イソキサゾリル基、オキサゾリル基、オキサジアゾリル基、イミダゾリル基、ピロリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、１，２，３－チアジアゾリル基、ベンゾジオキソリル基、ベンゾチエニル基、ベンズイミダゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、１，３－ジオキソ－イソインドリル基、キノリニル基、インダゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、及びベンズイソキサゾリル基を含むが、以下に限定されない。ヘテロアリール基は、置換であってもよく、非置換であってもよい。
【0027】
「アルコキシ基」とは、（アルキル－Ｏ－）基を指す。ここで、アルキル基は、上記のように定義されている。Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基又はＣ１～Ｃ４アルコキシ基が好ましく選択される。その実例は、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔ－ブトキシ基などを含むが、これらに限定されない。
【0028】
「ヒドロキシ基」とは、－ＯＨ基を指す。
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
「アミノ基」とは、－ＮＨ２を指す。
「シアノ基」とは、－ＣＮを指す。
「ニトロ基」とは、－ＮＯ２を指す。
「カルボキシ基」とは、－Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
「カルボキシレート基」とは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル基又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－シクロアルキル基を指す。ここで、アルキル基、シクロアルキル基は、定義が上記の通りである。
「ＤＭＳＯ」とは、ジメチルスルホキシドを指す。
「Ｍｅ」とは、メチルを指す。
「Ｅｔ」とは、エチルを指す。
「ＴＭＳ」とは、トリメチルシリル基を指す。
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
「アミノ基」とは、－ＮＨ２を指す。
「シアノ基」とは、－ＣＮを指す。
「ニトロ基」とは、－ＮＯ２を指す。
「カルボキシ基」とは、－Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
「カルボキシレート基」とは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル基又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－シクロアルキル基を指す。ここで、アルキル基、シクロアルキル基は、定義が上記の通りである。
「ＤＭＳＯ」とは、ジメチルスルホキシドを指す。
「Ｍｅ」とは、メチルを指す。
「Ｅｔ」とは、エチルを指す。
「ＴＭＳ」とは、トリメチルシリル基を指す。
【0029】
「置換」とは、基中の１つ又は複数の水素原子、好ましくは最大５つ、より好ましくは１、２、または３つの水素原子が、それぞれ独立して対応する数の置換基で置き換えたことを指す。言うまでもなく、置換基はそれらの可能な化学的部位にのみ存在し、当業は、あまり労力をかけずに（実験または理論によって）可能なまたは不可能な置換を決定するである。例えば、遊離水素を持つアミノ基又はヒドロキシ基は不飽和（例えば、エチレン性）結合を持つ炭素原子に結合する場合、不安定になる可能性がある。
【0030】
本明細書にかかる「置換」又は「置換されている」とは、特に断らない限り、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、ハロゲン、メルカプト基、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、シクロアルキル基、複素環式基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルチオ基、ヘテロシクロアルキルチオ基、アミノ基、ハロアルキル基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシ基、カルボキシレート基、＝Ｏ及び－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１つ又は複数の置換基で置換されてもよいことを指す。
【0031】
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、又はシクロアルキル基から選ばれる。ここで、前記アルキル基又はシクロアルキル基は、さらにヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、または複素環式基から選ばれる１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換されている。特に好ましくは、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子から選択される。
【0032】
「薬学的に許容される塩」とは、元の生物学的活性を維持することが可能な、薬剤用途に適している上記の化合物のある塩を指す。式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容される塩は、適切な酸と形成されたアンモニウム塩であってもよい。
【0033】
「医薬組成物」は、本明細書に記載の化合物の一種または複数、またはそれらの生理学的に薬学的に許容される塩、またはプロドラッグと他の化学的成分との混合物、及び生理学的に薬学的に許容される担体及び賦形剤などの他の成分を含むことを表す。医薬組成物にする目的は、生体への投与を促進し、有効成分の吸収を促進し、ひいては生物学的活性を発揮することである。
【0034】
本発明において、「複数」という用語は、数が２つ以上、例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上ことを表す。
【発明を実施するための形態】
【0035】
以下、実施例を合わせて本発明をさらに説明するが、それらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【0036】
実施例は、式（Ｉ）で表される代表的な化合物の調製及び関連する構造の同定データを示す。なお、以下の実施例は、本発明を説明するために用いられるが、本発明を限定するものではないことに留意されたい。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ブルカー装置（４００ＭＨｚ）により測定され、化学シフトはｐｐｍで表された。内部標準物質（０．００ｐｐｍ）としてテトラメチルシランを使用した。１Ｈ ＮＭＲの表示法は、ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｍ＝多重線、ｂｒ＝幅広線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線である。カップリング定数が示された場合、その単位がＨｚである。
【0037】
マススペクトルは、ＬＣ／ＭＳ機器により測定され、イオン化法はＥＳＩまたはＡＰＣＩでもよい。
【0038】
薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートは、煙台黄海のＨＳＧＦ２５４または青島のＧＦ２５４シリカゲルプレートを使用した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に用いられるシリカゲルプレートは、０．１５ｍｍ～０．２ｍｍの仕様を採用した。薄層クロマトグラフィーによる製品の分離と精製は、０．４ｍｍ～０．５ｍｍの仕様を採用した。
【0039】
カラムクロマトグラフィーは、一般的に煙台黄海のシリカゲル２００～３００メッシュのシリカゲルを担体として使用した。
【0040】
以下の実施例では、特に指定のない限り、すべての温度は摂氏温度である。特に指定のない限り、さまざまな出発原料及び試薬は、市場で購入されたか、既知の方法に従って合成された。市販の原料および試薬は、さらに精製することなくそのまま使用し、特に指定のない限り、アルドリッチケミカル社、ＡＢＣＲＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ、アクロス オーガニクス、広賛化学工業科技有限公司、及び景顔化学工業科技有限公司を含む販売メーカーから購入したが、これらに限定されない。
【0041】
ＣＤ３ＯＤ：重水素化メタノール
ＣＤＣｌ３：重水素化クロロホルム
ＤＭＳＯ－ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド
ＣＤＣｌ３：重水素化クロロホルム
ＤＭＳＯ－ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド
【0042】
アルゴン雰囲気とは、反応フラスコが一つの約１Ｌ容量のアルゴンガス風船に接続されていることを指す。
【0043】
実施例では、特に断りのない限り、反応中の溶液は水溶液を指す。
【0044】
化合物の精製は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー溶離剤システムおよび薄層クロマトグラフィーを使用した。ここで、溶離剤システムは、石油エーテルと酢酸エチルとのシステム（Ａ）、ジクロロメタンとメタノールとのシステム（Ｂ）、ジクロロメタン-酢酸エチル（Ｃ）から選択された。だたし、溶剤の体積比は、化合物の極性によって異なり、酢酸又はトリエチルアミンなどの酸性またはアルカリ性の試薬を少量加えて調整することができる。
【0045】
実施例１
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（８－（（１－ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－１－ｏｘｏ－２－ｐｈｅｎｙｌ－１，２－ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎ－３－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（８－（（１－ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－１－ｏｘｏ－２－ｐｈｅｎｙｌ－１，２－ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎ－３－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
【化4】
【化5】
【0046】
第１ステップ
（Ｚ）－３－アミノ－４，４，４－トリクロロ－２－シアノブタ－２－エン酸エチルエステル
２－シアノ基酢酸エチル１ａ（１６．４８ｇ，０．１４４８ｍｏｌ）及び２，２，２－トリクロロアセトニトリル１ｂ（４０ｇ，０．２８９ｍｏｌ）を５０ｍＬのエタノールに溶解し、氷浴下でトリエチルアミン（１．１ｍＬ，７．９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、２時間反応させた。減圧下で濃縮させ、（Ｚ）－３－アミノ－４，４，４－トリクロロ－２－シアノブタ－２－エン酸エチルエステル１ｃ（３７ｇ，黄色固体）を、収率１００％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２５８．８［Ｍ＋Ｈ］
（Ｚ）－３－アミノ－４，４，４－トリクロロ－２－シアノブタ－２－エン酸エチルエステル
２－シアノ基酢酸エチル１ａ（１６．４８ｇ，０．１４４８ｍｏｌ）及び２，２，２－トリクロロアセトニトリル１ｂ（４０ｇ，０．２８９ｍｏｌ）を５０ｍＬのエタノールに溶解し、氷浴下でトリエチルアミン（１．１ｍＬ，７．９ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、２時間反応させた。減圧下で濃縮させ、（Ｚ）－３－アミノ－４，４，４－トリクロロ－２－シアノブタ－２－エン酸エチルエステル１ｃ（３７ｇ，黄色固体）を、収率１００％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２５８．８［Ｍ＋Ｈ］
【0047】
第２ステップ
３，５－ジアミノ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル
（Ｚ）－３－アミノ－４，４，４－トリクロロ－２－シアノブタ－２－エン酸エチルエステル１ｃ（３７ｇ，０．１４４８ｍｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（１８ｇ，０．３６２ｍｏｌ）を７５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、１００℃に加熱し、３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＢ）によりさらに分析・精製し、３，５－ジアミノ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル１ｄ（２４．６ｇ，黄色固体）を収率１００％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７１．１［Ｍ＋Ｈ］
３，５－ジアミノ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル
（Ｚ）－３－アミノ－４，４，４－トリクロロ－２－シアノブタ－２－エン酸エチルエステル１ｃ（３７ｇ，０．１４４８ｍｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（１８ｇ，０．３６２ｍｏｌ）を７５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、１００℃に加熱し、３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＢ）によりさらに分析・精製し、３，５－ジアミノ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル１ｄ（２４．６ｇ，黄色固体）を収率１００％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７１．１［Ｍ＋Ｈ］
【0048】
第３ステップ
２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸エチル
３，５－ジアミノ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル１ｄ（２３．５ｇ，０．１３８ｍｏｌ）及び１，１，３，３－テトラメトキシプロパン（２４．９ｇ，０．１５２ｍｏｌ）を１４０ｍＬの２Ｍ塩酸に加え、５０℃に加熱し、２時間反応させた。室温に冷却し、ｐＨ＝９にアンモニア水で調整し、ジクロロメタン（２００ｍＬ×３）で抽出を行い、有機相を合わせ、減圧下で濃縮させ、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸エチル１ｅ（１５．２ｇ，黄色固体）を収率５３．５％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２０６．９［Ｍ＋Ｈ］
第４ステップ
２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸エチル
３，５－ジアミノ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸エチル１ｄ（２３．５ｇ，０．１３８ｍｏｌ）及び１，１，３，３－テトラメトキシプロパン（２４．９ｇ，０．１５２ｍｏｌ）を１４０ｍＬの２Ｍ塩酸に加え、５０℃に加熱し、２時間反応させた。室温に冷却し、ｐＨ＝９にアンモニア水で調整し、ジクロロメタン（２００ｍＬ×３）で抽出を行い、有機相を合わせ、減圧下で濃縮させ、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸エチル１ｅ（１５．２ｇ，黄色固体）を収率５３．５％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２０６．９［Ｍ＋Ｈ］
第４ステップ
【0049】
２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸
２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸エチル１ｅ（１６．７ｇ，０．０８１ｍｏｌ）及び水酸化リチウム一水和物（１４．９８ｇ，０．３５６ｍｏｌ）を１５０ｍＬのメタノールと水との混合溶剤（Ｖ／Ｖ＝１：４）に加え、５０℃に加熱し、２時間反応させた。減圧下で濃縮させ、４Ｍの塩酸でｐＨ＝６に調整し、固形物を洗い出し、ろ過し、乾燥させ、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（７．８ｇ，黄色固体）を収率５４％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７８．９［Ｍ＋Ｈ］
２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸エチル１ｅ（１６．７ｇ，０．０８１ｍｏｌ）及び水酸化リチウム一水和物（１４．９８ｇ，０．３５６ｍｏｌ）を１５０ｍＬのメタノールと水との混合溶剤（Ｖ／Ｖ＝１：４）に加え、５０℃に加熱し、２時間反応させた。減圧下で濃縮させ、４Ｍの塩酸でｐＨ＝６に調整し、固形物を洗い出し、ろ過し、乾燥させ、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（７．８ｇ，黄色固体）を収率５４％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１７８．９［Ｍ＋Ｈ］
【0050】
第５ステップ
１－シクロプロピル－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール
アルゴンガスの保護下で、１－シクロプロピル－４－ヨード－１Ｈ－ピラゾール１ｋ（２８ｇ，０．１２ｍｏｌ，特開ＷＯ２０１５１３４７０１に従って調製）を５００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（４．２ｇ，０．００６ｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（２．２８ｇ，０．０１２ｍｏｌ）及び０．６ｍＬのトリエチルアミンを加え、温度を０℃に制御し、エチニルトリメチルシラン（２３．５ｇ，０．２４ｍｏｌ）をゆっくりと加え、室温で一晩中反応させた。ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析し精製し、１－シクロプロピル－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール１ｌ（２０．５ｇ，茶色の黒い液体）を収率８３．７％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２０５．１［Ｍ＋Ｈ］
１－シクロプロピル－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール
アルゴンガスの保護下で、１－シクロプロピル－４－ヨード－１Ｈ－ピラゾール１ｋ（２８ｇ，０．１２ｍｏｌ，特開ＷＯ２０１５１３４７０１に従って調製）を５００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（４．２ｇ，０．００６ｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（２．２８ｇ，０．０１２ｍｏｌ）及び０．６ｍＬのトリエチルアミンを加え、温度を０℃に制御し、エチニルトリメチルシラン（２３．５ｇ，０．２４ｍｏｌ）をゆっくりと加え、室温で一晩中反応させた。ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析し精製し、１－シクロプロピル－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール１ｌ（２０．５ｇ，茶色の黒い液体）を収率８３．７％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２０５．１［Ｍ＋Ｈ］
【0051】
第６ステップ
１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール
１－シクロプロピル－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール１ｌ（２０．５ｇ，０．１ｍｏｌ）を１２０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、温度を０℃に制御し、テトラブチルアンモニウムフルオリドテトラヒドロフラン溶液（１２０ｍＬ，０．１２ｍｏｌ，１ｍｏｌ／Ｌ）を加え、室温で１時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）により分析・精製し、１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（１２ｇ，淡黄色液体）を収率９０．９％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１３３．１［Ｍ＋Ｈ］
１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール
１－シクロプロピル－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール１ｌ（２０．５ｇ，０．１ｍｏｌ）を１２０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、温度を０℃に制御し、テトラブチルアンモニウムフルオリドテトラヒドロフラン溶液（１２０ｍＬ，０．１２ｍｏｌ，１ｍｏｌ／Ｌ）を加え、室温で１時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）により分析・精製し、１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（１２ｇ，淡黄色液体）を収率９０．９％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１３３．１［Ｍ＋Ｈ］
【0052】
第７ステップ
２－クロロ－６－メチル－Ｎ－フェニルベンズアミド
２－クロロ－６－メチル安息香酸１ｇ（１７ｇ，０．１ｍｏｌ）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、０．２ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを滴下し、塩化オキサリル（９．３ｍＬ，０．１１ｍｏｌ）を氷浴下でゆっくりと滴下し、室温下で３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、残留物を７０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、氷浴下で、アニリン（９．７６ｇ，０．１０５ｍｏｌ）とトリエチルアミン（３０ｍＬ，０．２１０ｍｏｌ）を溶解した１００ｍＬのジクロロメタン溶液をゆっくりと滴下し、室温下で２時間反応させた。１００ｍＬの水及び１００ｍＬのジクロロメタンを加え、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、２０ｍＬの酢酸エチル及び２００ｍＬのｎ－ヘキサンを加え、撹拌し、固体を析出させ、ろ過し、乾燥させた。２－クロロ－６－メチル－Ｎ－フェニルベンズアミド１ｈ（１８．９ｇ，黄色固体）を収率７７．１４％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２４６．０［Ｍ＋Ｈ］
２－クロロ－６－メチル－Ｎ－フェニルベンズアミド
２－クロロ－６－メチル安息香酸１ｇ（１７ｇ，０．１ｍｏｌ）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、０．２ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを滴下し、塩化オキサリル（９．３ｍＬ，０．１１ｍｏｌ）を氷浴下でゆっくりと滴下し、室温下で３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、残留物を７０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、氷浴下で、アニリン（９．７６ｇ，０．１０５ｍｏｌ）とトリエチルアミン（３０ｍＬ，０．２１０ｍｏｌ）を溶解した１００ｍＬのジクロロメタン溶液をゆっくりと滴下し、室温下で２時間反応させた。１００ｍＬの水及び１００ｍＬのジクロロメタンを加え、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、２０ｍＬの酢酸エチル及び２００ｍＬのｎ－ヘキサンを加え、撹拌し、固体を析出させ、ろ過し、乾燥させた。２－クロロ－６－メチル－Ｎ－フェニルベンズアミド１ｈ（１８．９ｇ，黄色固体）を収率７７．１４％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２４６．０［Ｍ＋Ｈ］
【0053】
第８ステップ
（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン
２－クロロ－６－メチル－Ｎ－フェニルベンズアミド１ｈ（４９０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を５ｍＬのテトラヒドロフランに加え、温度を－３０℃に制御し、ｎ－ブチルリチウム（２．５ｍＬ，５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、この温度で３０分間反応させた。また、（Ｓ）－（１－（メトキシ（メチル）アミノ）－１－オキソプロピル－２－イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル１ｉ（６９６ｍｇ，３ｍｍｏｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４３，３４３４～３４４２に従って合成して得た）を５ｍＬのテトラヒドロフランに加え、温度を－３０℃に制御し、イソプロピルマグネシウムクロリド（１．６５ｍＬ，３．３ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、この温度下で０．５時間反応させた。温度を－１５℃に制御し、１ｉの反応液を１ｈの反応液にゆっくり滴下し、１時間反応させた。１ｍＬの水を加えて反応溶液をクエンチし、濃塩酸でｐＨ＝２に調整し、減圧下で濃縮させ、残留物を１０ｍＬのメタノールに溶解し、５ｍＬの濃塩酸を加え、加熱しながら１時間還流した。減圧下で濃縮させ、２００ｍＬの酢酸エチルと石油エーテルとの混合溶剤（Ｖ／Ｖ＝１：１）で２回抽出し、ｐＨ＝１０にアンモニア水で水相を調整し、１００ｍＬのジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を減圧下で濃縮させ、残留物を分取液体クロマトグラフィーにより分離して（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｊ（３００ｍｇ，淡黄色の固形物）を収率５０％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２９９．０［Ｍ＋Ｈ］
（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン
２－クロロ－６－メチル－Ｎ－フェニルベンズアミド１ｈ（４９０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を５ｍＬのテトラヒドロフランに加え、温度を－３０℃に制御し、ｎ－ブチルリチウム（２．５ｍＬ，５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、この温度で３０分間反応させた。また、（Ｓ）－（１－（メトキシ（メチル）アミノ）－１－オキソプロピル－２－イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル１ｉ（６９６ｍｇ，３ｍｍｏｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４３，３４３４～３４４２に従って合成して得た）を５ｍＬのテトラヒドロフランに加え、温度を－３０℃に制御し、イソプロピルマグネシウムクロリド（１．６５ｍＬ，３．３ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下し、この温度下で０．５時間反応させた。温度を－１５℃に制御し、１ｉの反応液を１ｈの反応液にゆっくり滴下し、１時間反応させた。１ｍＬの水を加えて反応溶液をクエンチし、濃塩酸でｐＨ＝２に調整し、減圧下で濃縮させ、残留物を１０ｍＬのメタノールに溶解し、５ｍＬの濃塩酸を加え、加熱しながら１時間還流した。減圧下で濃縮させ、２００ｍＬの酢酸エチルと石油エーテルとの混合溶剤（Ｖ／Ｖ＝１：１）で２回抽出し、ｐＨ＝１０にアンモニア水で水相を調整し、１００ｍＬのジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を減圧下で濃縮させ、残留物を分取液体クロマトグラフィーにより分離して（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｊ（３００ｍｇ，淡黄色の固形物）を収率５０％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２９９．０［Ｍ＋Ｈ］
【0054】
第９ステップ
（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｊ（２００ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）、ビス(アセトニトリル)ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３４ｍｇ，０．１３２ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６５９ｍｇ,２．０１ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（９５ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）及び１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（１７４ｍｇ,１．３２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトニトリルに加え、７５℃に加熱し、４時間反応させた。減圧下で濃縮させ、ジクロロメタンを加え、珪藻土でろ過し、水で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｎ（１２０ｍｇ,黄色固体）を収率４５％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９４．９［Ｍ＋Ｈ］
（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｊ（２００ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）、ビス(アセトニトリル)ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３４ｍｇ，０．１３２ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６５９ｍｇ,２．０１ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（９５ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）及び１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（１７４ｍｇ,１．３２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトニトリルに加え、７５℃に加熱し、４時間反応させた。減圧下で濃縮させ、ジクロロメタンを加え、珪藻土でろ過し、水で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｎ（１２０ｍｇ,黄色固体）を収率４５％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９４．９［Ｍ＋Ｈ］
【0055】
第１０ステップ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｎ（１２０ｍｇ,０．３０４ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（５６．９２ｍｇ,０．３１９ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（６９．９３ｍｇ,０．３６４ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（４ｍｇ,０．０３０４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｍＬ,０．９１２ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で一晩中反応させた。冷たい炭酸カリウム溶液（１０ｍＬ,０．１ｍｏｌ）をゆっくりと加え、ろ過し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ液を濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド１（７０ｍｇ）を収率４１．６％で得た。
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｎ（１２０ｍｇ,０．３０４ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（５６．９２ｍｇ,０．３１９ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（６９．９３ｍｇ,０．３６４ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（４ｍｇ,０．０３０４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｍＬ,０．９１２ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で一晩中反応させた。冷たい炭酸カリウム溶液（１０ｍＬ,０．１ｍｏｌ）をゆっくりと加え、ろ過し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ液を濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド１（７０ｍｇ）を収率４１．６％で得た。
【0056】
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５５４．９［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５４～７．６７（ｍ，５Ｈ），７．４３～７．５３（ｍ，３Ｈ），７．３４～７．４１（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），６．４３（ｂｒｓ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）,３．７２（ｄｑ，Ｊ＝７．５，３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），１．０１～１．０８（ｍ，２Ｈ），０．９０～０．９８（ｍ，２Ｈ）．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５４～７．６７（ｍ，５Ｈ），７．４３～７．５３（ｍ，３Ｈ），７．３４～７．４１（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），６．４３（ｂｒｓ，２Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）,３．７２（ｄｑ，Ｊ＝７．５，３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），１．０１～１．０８（ｍ，２Ｈ），０．９０～０．９８（ｍ，２Ｈ）．
【0057】
実施例２
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（５－（（１－ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－４－ｏｘｏ－３－ｐｈｅｎｙｌ－３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ－２－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（５－（（１－ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－４－ｏｘｏ－３－ｐｈｅｎｙｌ－３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ－２－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
【化6】
【化7】
【0058】
第１ステップ
（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン２ａ（５ｇ,１６．７ｍｍｏｌ、ＵＳ２０１８０１０５５２７に従って調製）、ビス(アセトニトリル)ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２１７ｍｇ,０．８３５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１６．３ｇ,５０．１ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（７９６ｍｇ,１．６７ｍｍｏｌ）及び１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（２．９ｇ,２１．７ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのアセトニトリルに加え、８５℃に加熱し、５時間反応させた。減圧下で濃縮させ、ジクロロメタンを加え、珪藻土でろ過し、水で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン２ｂ（５．２ｇ）を収率７８．８％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９６．１［Ｍ＋Ｈ］
（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン２ａ（５ｇ,１６．７ｍｍｏｌ、ＵＳ２０１８０１０５５２７に従って調製）、ビス(アセトニトリル)ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２１７ｍｇ,０．８３５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１６．３ｇ,５０．１ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（７９６ｍｇ,１．６７ｍｍｏｌ）及び１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（２．９ｇ,２１．７ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのアセトニトリルに加え、８５℃に加熱し、５時間反応させた。減圧下で濃縮させ、ジクロロメタンを加え、珪藻土でろ過し、水で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン２ｂ（５．２ｇ）を収率７８．８％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３９６．１［Ｍ＋Ｈ］
【0059】
第２ステップ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン２ｂ（２５．６ｇ,６４．７ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（１３．８ｇ,７７．５ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１８．６ｇ,９７．０５ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（４．３７ｇ,３２．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１７ｇ,１２９．４ｍｍｏｌ）を３００ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、４０℃で３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、５００ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出し（５００ｍＬ×３）、有機相を合わせ、５００ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド２（２１．３ｇ）を収率５９．２％で得た。
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン２ｂ（２５．６ｇ,６４．７ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（１３．８ｇ,７７．５ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１８．６ｇ,９７．０５ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（４．３７ｇ,３２．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１７ｇ,１２９．４ｍｍｏｌ）を３００ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、４０℃で３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、５００ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出し（５００ｍＬ×３）、有機相を合わせ、５００ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド２（２１．３ｇ）を収率５９．２％で得た。
【0060】
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５５６．２［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９１（ｄｄ，Ｊ＝６．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝４．５，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５６～７．６６（ｍ，６Ｈ），７．５０～７．５５（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｂｒｓ，２Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｔ，Ｊ＝７．３，３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），１．０１～１．０８（ｍ，２Ｈ），０．９１～０．９８（ｍ，２Ｈ）．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９１（ｄｄ，Ｊ＝６．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝４．５，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５６～７．６６（ｍ，６Ｈ），７．５０～７．５５（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｂｒｓ，２Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｔ，Ｊ＝７．３，３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），１．０１～１．０８（ｍ，２Ｈ），０．９１～０．９８（ｍ，２Ｈ）．
【0061】
実施例３
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（５－（（１－ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－６－ｆｌｕｏｒｏ－４－ｏｘｏ－３－ｐｈｅｎｙｌ－３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ－２－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（５－（（１－ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－６－ｆｌｕｏｒｏ－４－ｏｘｏ－３－ｐｈｅｎｙｌ－３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ－２－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
【化8】
【化9】
【0062】
第１ステップ
（Ｓ）－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
アルゴンガスの保護下で、６－アミノ－２－クロロ－３－フルオロ安息香酸３ａ（９５ｍｇ,０．５ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィンオキシド（３８８ｍｇ,１．２５ｍｍｏｌ）及び（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニン（９５ｍｇ,０．５ｍｍｏｌ）を５ｍＬのピリジンに加え、７５℃に加熱し、３時間反応させた。そして、アニリン（５５μＬ,０．６ｍｍｏｌ）を加え、４時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、（Ｓ）－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル３ｂ（２００ｍｇ）を収率９６％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８．１［Ｍ＋Ｈ］
（Ｓ）－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
アルゴンガスの保護下で、６－アミノ－２－クロロ－３－フルオロ安息香酸３ａ（９５ｍｇ,０．５ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィンオキシド（３８８ｍｇ,１．２５ｍｍｏｌ）及び（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニン（９５ｍｇ,０．５ｍｍｏｌ）を５ｍＬのピリジンに加え、７５℃に加熱し、３時間反応させた。そして、アニリン（５５μＬ,０．６ｍｍｏｌ）を加え、４時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、（Ｓ）－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル３ｂ（２００ｍｇ）を収率９６％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８．１［Ｍ＋Ｈ］
【0063】
第２ステップ
（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－６－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン
（Ｓ）－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル３ｂ（２００ｍｇ,０．４７９ｍｍｏｌ）及びトリイソプロピルシラン（２９４μＬ,１．４３６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジクロロメタンに加え、１．２ｍＬのトリフルオロ酢酸を加え、室温下で３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、中和のために飽和重炭酸ナトリウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出し（１０ｍＬ×３）、有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－６－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン３ｃ（１７４．７ｍｇ）を収率１００％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３１８．１［Ｍ＋Ｈ］
（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－６－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン
（Ｓ）－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル３ｂ（２００ｍｇ,０．４７９ｍｍｏｌ）及びトリイソプロピルシラン（２９４μＬ,１．４３６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジクロロメタンに加え、１．２ｍＬのトリフルオロ酢酸を加え、室温下で３時間反応させた。減圧下で濃縮させ、中和のために飽和重炭酸ナトリウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出し（１０ｍＬ×３）、有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－６－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン３ｃ（１７４．７ｍｇ）を収率１００％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３１８．１［Ｍ＋Ｈ］
【0064】
第３ステップ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－α］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－６－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン３ｃ（１７４．７ｍｇ,０．４７９ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（１０２ｍｇ,０．５７５ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１３９ｍｇ,０．７１９ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２ｍｇ,０．２４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２３７μＬ,１．４３７ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、３５℃で４時間反応させた。酢酸エチルを加え、希塩酸で中和し、それぞれ飽和重炭酸ナトリウム及び塩化ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－α］ピリミジン－３－カルボキサミド３ｄ（２１０ｍｇ）を収率９２％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４７８．１［Ｍ＋Ｈ］
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－α］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－（１－アミノエチル）－５－クロロ－６－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン３ｃ（１７４．７ｍｇ,０．４７９ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（１０２ｍｇ,０．５７５ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１３９ｍｇ,０．７１９ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２ｍｇ,０．２４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２３７μＬ,１．４３７ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、３５℃で４時間反応させた。酢酸エチルを加え、希塩酸で中和し、それぞれ飽和重炭酸ナトリウム及び塩化ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－α］ピリミジン－３－カルボキサミド３ｄ（２１０ｍｇ）を収率９２％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４７８．１［Ｍ＋Ｈ］
【0065】
第４ステップ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－α］ピリミジン－３－カルボキサミド３ｄ（２１０ｍｇ,０．４４０ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（３５ｍｇ,０．０４４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４６８ｍｇ,１．４３７ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（４６ｍｇ,０．０９６ｍｍｏｌ）及び１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（９６ｍｇ,０．７１９ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの１，４－ジオキサンに加え、１００℃に加熱し、一晩中反応させた。珪藻土でろ過し、ろ液を減圧下で濃縮させ、酢酸エチルを加え、希塩酸で中和し、それぞれ飽和重炭酸ナトリウム及び塩化ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド３（１４７．４ｍｇ）を収率５８．４％で得た。
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－クロロ－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－α］ピリミジン－３－カルボキサミド３ｄ（２１０ｍｇ,０．４４０ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（３５ｍｇ,０．０４４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４６８ｍｇ,１．４３７ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（４６ｍｇ,０．０９６ｍｍｏｌ）及び１－シクロプロピル－４－エチニル－１Ｈ－ピラゾール１ｍ（９６ｍｇ,０．７１９ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの１，４－ジオキサンに加え、１００℃に加熱し、一晩中反応させた。珪藻土でろ過し、ろ液を減圧下で濃縮させ、酢酸エチルを加え、希塩酸で中和し、それぞれ飽和重炭酸ナトリウム及び塩化ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに分析・精製し（溶離剤：システムＢ）、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（５－（（１－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－６－フルオロ－４－オキソ－３－フェニル－３，４－ジヒドロキナゾリン－２－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド３（１４７．４ｍｇ）を収率５８．４％で得た。
【0066】
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５７４．２［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９２（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），７．７２～７．８７（ｍ，２Ｈ），７．４９～７．６７（ｍ，６Ｈ），６．９７～７．０７（ｍ，１Ｈ），６．４４（ｓ，２Ｈ），４．６９～４．８０（ｍ，１Ｈ），３．６９～３．７９（ｍ，１Ｈ），１．３２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．０３～１．０９（ｍ，２Ｈ），０．９０～０．９９（ｍ，２Ｈ）．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９２（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），７．７２～７．８７（ｍ，２Ｈ），７．４９～７．６７（ｍ，６Ｈ），６．９７～７．０７（ｍ，１Ｈ），６．４４（ｓ，２Ｈ），４．６９～４．８０（ｍ，１Ｈ），３．６９～３．７９（ｍ，１Ｈ），１．３２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．０３～１．０９（ｍ，２Ｈ），０．９０～０．９９（ｍ，２Ｈ）．
【0067】
実施例４
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（８－（（１－（ｏｘｅｔａｎ－３－ｙｌ）－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－１－ｏｘｏ－２－ｐｈｅｎｙｌ－１，２－ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎ－３－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
（Ｓ）－２－ａｍｉｎｏ－Ｎ－（１－（８－（（１－（ｏｘｅｔａｎ－３－ｙｌ）－１Ｈ－ｐｙｒａｚｏｌ－４－ｙｌ）ｅｔｈｙｎｙｌ）－１－ｏｘｏ－２－ｐｈｅｎｙｌ－１，２－ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎ－３－ｙｌ）ｅｔｈｙｌ）ｐｙｒａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
【化10】
【化11】
【0068】
第１ステップ
４－ヨード－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール
４－ヨード－１Ｈ－ピラゾール４ａ（５ｇ,２５．７８ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、温度を０℃に制御し、水素化ナトリウム（１．３４ｇ,３３．５２ｍｍｏｌ）を加え、１０分間反応させた後、３－ヨードオキセタン（２．４４ｍＬ,２８．３５ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱し、３時間反応させた。反応液を飽和アンモニウムクロライド溶液に加え、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、４－ヨード－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｂ（５．４１２ｇ）を収率８２．８％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２５０．８［Ｍ＋Ｈ］
４－ヨード－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール
４－ヨード－１Ｈ－ピラゾール４ａ（５ｇ,２５．７８ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、温度を０℃に制御し、水素化ナトリウム（１．３４ｇ,３３．５２ｍｍｏｌ）を加え、１０分間反応させた後、３－ヨードオキセタン（２．４４ｍＬ,２８．３５ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に加熱し、３時間反応させた。反応液を飽和アンモニウムクロライド溶液に加え、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、４－ヨード－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｂ（５．４１２ｇ）を収率８２．８％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２５０．８［Ｍ＋Ｈ］
【0069】
第２ステップ
１－（オキセタン－３－イル）－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール
アルゴンガスの保護下で、４－ヨード－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｂ（５．４１２ｇ,２１．６５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬテトラヒドロフランに溶解し、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（７５８ｍｇ,１．０８ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（４１０．４ｍｇ,２．１６ｍｍｏｌ）及び１４ｍＬのトリエチルアミンを加え、温度を０℃に制御し、エチニルトリメチルシラン（６．７ｍＬ,４７．６２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、室温で５時間反応させた。１０ｍＬの水を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、１－（オキセタン－３－イル）－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール４ｃ（２．６ｇ）を収率５４．６％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２２１．０［Ｍ＋Ｈ］
１－（オキセタン－３－イル）－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール
アルゴンガスの保護下で、４－ヨード－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｂ（５．４１２ｇ,２１．６５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬテトラヒドロフランに溶解し、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（７５８ｍｇ,１．０８ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（４１０．４ｍｇ,２．１６ｍｍｏｌ）及び１４ｍＬのトリエチルアミンを加え、温度を０℃に制御し、エチニルトリメチルシラン（６．７ｍＬ,４７．６２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、室温で５時間反応させた。１０ｍＬの水を加え、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、１－（オキセタン－３－イル）－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール４ｃ（２．６ｇ）を収率５４．６％で得た。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：２２１．０［Ｍ＋Ｈ］
【0070】
第３ステップ
４－エチニル基－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール
アルゴンガスの保護下で、１－（オキセタン－３－イル）－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール４ｃ（０．６ｇ,２．７３ｍｍｏｌ）を５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、温度を０℃に制御し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（８５５ｍｇ,３．２７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、４－エチニル－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｄ（０．２３６ｇ）を収率５８．６％で得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ ７．７３（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９９～５．０７（ｍ，４Ｈ），３．０３（ｓ，１Ｈ）．
４－エチニル基－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール
アルゴンガスの保護下で、１－（オキセタン－３－イル）－４－（（トリメチルシリル）エチニル）－１Ｈ－ピラゾール４ｃ（０．６ｇ,２．７３ｍｍｏｌ）を５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、温度を０℃に制御し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（８５５ｍｇ,３．２７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間反応させた。減圧下で濃縮させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：システムＡ）によりさらに分析・精製し、４－エチニル－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｄ（０．２３６ｇ）を収率５８．６％で得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ ７．７３（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９９～５．０７（ｍ，４Ｈ），３．０３（ｓ，１Ｈ）．
【0071】
第４ステップ
（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｊ（２００ｍｇ,０．６７ｍｍｏｌ）、ビス(アセトニトリル)ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１７ｍｇ,０．０６７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６５９ｍｇ,２．０１ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（９５ｍｇ,０．２ｍｍｏｌ）及び４－エチニル基－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｄ（１４８ｍｇ,１．０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトニトリルに加え、７５℃に加熱し、４時間反応させた。減圧下で濃縮させ、ジクロロメタンを加え、珪藻土でろ過し、水で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン４ｅ（１１０ｍｇ）を収率４０％で得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ ７．８２（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０～７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４２～７．５０（ｍ，２Ｈ），７．２７～７．３５（ｍ，２Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），５．４０（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９７～５．０５（ｍ，４Ｈ），３．７１（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），２．００（ｂｒｓ，２Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）．
（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－クロロ－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン１ｊ（２００ｍｇ,０．６７ｍｍｏｌ）、ビス(アセトニトリル)ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１７ｍｇ,０．０６７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６５９ｍｇ,２．０１ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（９５ｍｇ,０．２ｍｍｏｌ）及び４－エチニル基－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール４ｄ（１４８ｍｇ,１．０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのアセトニトリルに加え、７５℃に加熱し、４時間反応させた。減圧下で濃縮させ、ジクロロメタンを加え、珪藻土でろ過し、水で洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン４ｅ（１１０ｍｇ）を収率４０％で得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ ７．８２（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０～７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４２～７．５０（ｍ，２Ｈ），７．２７～７．３５（ｍ，２Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），５．４０（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９７～５．０５（ｍ，４Ｈ），３．７１（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），２．００（ｂｒｓ，２Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）．
【0072】
第５ステップ
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン４ｅ（１１０ｍｇ,０．２６８ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（５０．１ｍｇ,０．２８ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（６１．６ｍｇ,０．３２ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．６ｍｇ,０．０２６８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１５ｍＬ,０．８０４ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で５時間反応させた。冷たい炭酸カリウム溶液（１０ｍＬ、０．１ｍｏｌ）をゆっくりと加え、１５ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出し（１５ｍＬ×３）、有機相を合わせ、３０ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド４（１１０ｍｇ）を収率７２％で得た。
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド
アルゴンガスの保護下で、（Ｓ）－３－（１－アミノエチル）－８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－２－フェニルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン４ｅ（１１０ｍｇ,０．２６８ｍｍｏｌ）、２－アミノピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボン酸１ｆ（５０．１ｍｇ,０．２８ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（６１．６ｍｇ,０．３２ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．６ｍｇ,０．０２６８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１５ｍＬ,０．８０４ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で５時間反応させた。冷たい炭酸カリウム溶液（１０ｍＬ、０．１ｍｏｌ）をゆっくりと加え、１５ｍＬの水を加え、酢酸エチルで抽出し（１５ｍＬ×３）、有機相を合わせ、３０ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮させ、分取薄層クロマトグラフィーで単離し、（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（１－（８－（（１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）エチニル）－１－オキソ－２－フェニル－１，２－ジヒドロイソキノリン－３－イル）エチル）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－３－カルボキサミド４（１１０ｍｇ）を収率７２％で得た。
【0073】
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：５７０．８［Ｍ＋Ｈ］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９３（ｄｄ，Ｊ＝６．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．６１～７．６６（ｍ，２Ｈ），７．５４～７．６０（ｍ，２Ｈ），７．４４～７．５２（ｍ，３Ｈ），７．３６～７．４０（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．８３～４．９２（ｍ，４Ｈ），４．５３～４．５８（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）．
生物学的評価
試験例１、ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害に対する本発明の化合物の活性の試験
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９３（ｄｄ，Ｊ＝６．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．６１～７．６６（ｍ，２Ｈ），７．５４～７．６０（ｍ，２Ｈ），７．４４～７．５２（ｍ，３Ｈ），７．３６～７．４０（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．８３～４．９２（ｍ，４Ｈ），４．５３～４．５８（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）．
生物学的評価
試験例１、ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害に対する本発明の化合物の活性の試験
【0074】
以下の方法はインビトロ条件下の本発明の化合物による組換えヒト化ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδキナーゼ活性ぼ阻害の程度を測定するのに使用された。この方法では、プロメガ社のＡＤＰ－ＧｌｏTM Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙキット（カタログ番号：Ｖ９１０２）を使用した。上記のキットは、発光法によるキナーゼ検出キットであり、キナーゼ反応で生じたＡＤＰ含有量を検出するために用いられる。ＡＤＰ含有量は、キナーゼ活性と正の相関があり、ＡＤＰの含有量を測定することにより、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδキナーゼ活性に対する化合物の阻害強さを反映する。詳細な実験操作は、キットの説明書を参照できる。組換えヒト化ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３Ｋδは、インビトロジェンから購入し、ＰＩ３Ｋβは、プロメガ（それぞれのカタログ番号は、ＰＩ３Ｋα：ＰＶ４７８８、ＰＩ３Ｋβ：Ｖ１７５１、ＰＩ３Ｋγ：ＰＶ４７８６、及びＰＩ３Ｋδ：ＰＶ６４５１であった）から購入した。
【0075】
実験手順を以下のように簡単に説明する。まず、被験化合物をＤＭＳＯに溶解してストック溶液を調製し、その後、試薬マニュアルに記載されている緩衝液の処方に従って緩衝液（ＨＥＰＥＳ ５０ｍＭ，ＭｇＣｌ２ ３ｍＭ，ＥＧＴＡ １ｍＭ，ＣＨＡＰＳ ０．０３％，ＮａＣｌ １００ｍＭ，ｐＨ７．５）を調製し、該緩衝液を使用して段階希釈し、反応系の被験化合物の終濃度範囲は１０００ｎＭ～０．０５ｎＭである。段階希釈したＡＴＰ溶液（ＡＤＰ－ＧｌｏTMから購入されたキナーゼアッセイキット）を使用してＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ及びＰＩ３ＫδのＡＴＰ Ｋｍ値を測定し、実験で得られたＡＴＰ Ｋｍ値に基づき、反応系のＡＴＰ濃度をすべて１０μＭに設定した。反応は３８４ウェルのマイクロウェルプレートで行った。まず、ウェルに化合物及び一定の量のＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３ＫγまたはＰＩ３Ｋδタンバク質に加え、室温下で１５分間インキュベートし、その後、反応液にＡＴＰ溶液及びＰＩＰ２：３ＰＳ（終濃度０．０１ｍｇ／ｍＬ）を加え、室温下で６０分間振とうしながらインキュベートした。その後、反応系に５μＬのＡＤＰ－Ｇｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔ（１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含有）を加え、室温下で４０分間振とうしながらインキュベートを続けた。その後、反応系に１０μＬのキナーゼ検出試薬（Ｋｉｎａｓｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ）を添加し、室温下で４０分間振とうしながらインキュベートを続けた。インキュベーションの終了後、マイクロプレートリーダーでＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅモードで各ウェルの化学発光強度値を測定した。対照群（０．１％ ＤＭＳＯ）の発光強度発光値と比較することにより、各濃度での化合物の抑制率をパーセンテージとして計算し、それに、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアを使用して化合物濃度の対数値-抑制率として非線形回帰分析を実行し、化合物のＩＣ５０値を得た。その結果を表１に示す。
【0076】
表１：ＰＩ３Ｋキナーゼ活性への本発明実施例化合物及びＩＰＩ－５４９の阻害のＩＣ
５０
値
【表2】
【0077】
表２：ＰＩ３Ｋキナーゼ活性への本発明実施例化合物及びＩＰＩ－５４９の阻害のＩＣ
５０
値
【表3】
【0078】
表１及び２から、ＩＰＩ－５４９と比較して、本発明の実施例１、実施例２及び実施例３の化合物は、ＰＩ３Ｋγキナーゼに対して有意な阻害活性を有し、かつ、ＰＩ３Ｋγキナーゼに対する阻害活性がＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、及びＰＩ３Ｋδに対する阻害活性より有意に優れ、本発明の化合物は有意なＰＩ３Ｋγ選択的阻害効果を有することが分かった。
試験例２、本発明の化合物がＰＩ３Ｋの各サブタイプを阻害した細胞活性試験
試験例２、本発明の化合物がＰＩ３Ｋの各サブタイプを阻害した細胞活性試験
【0079】
以下の方法は様々な細胞における本発明の化合物によるＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ、及びＰＩ３Ｋδキナーゼ活性の阻害の程度を測定するために使用した。この方法では、ＰＥ社のＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＡＫＴ１／２／３（ｐＳ４７３）キット（＃ＡＬＳＵ－ＰＡＫＴ－Ｂ５００）を使用した。上記のキットは、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ技術を使用し、ドナービーズ及びアクセプタービーズを使用して検出生体分子の相互作用を検出し、ｐ－ＡＫＴ（ｐＳ４７３）の含有量を検出するために用いられ、細胞レベルでのＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ、及びＰＩ３Ｋδキナーゼ活性に対する化合物の阻害強さを反映する。詳細な実験操作については、キットの説明書を参照できる。
【0080】
実験手順を以下のように簡単に説明する。この実験は、以下のように３８４ウェルプレートで行った。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐディスペンサー（Ｔｈｅｒｍｏ、＃８３６－４０４９）を使用し、異なるＰＩ３Ｋサブタイプに対して異なる細胞（ＰＩ３Ｋα：Ｃ２Ｃ１２細胞（筋芽細胞）、ＰＩ３Ｋβ：ＰＣ－３細胞（ヒト前立腺がん細胞）、ＰＩ３Ｋγ：Ｒａｗ２６４．７細胞（単核マクロファージ）、ＰＩ３Ｋδ：Ｒａｊｉ細胞（リンパ腫細胞））を使用し、６μＬの対応する細胞を３８４ウェルプレートのウェルに移し、５００ＲＰＭで３０秒間遠心分離し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに入れて２時間置いた。また、被験化合物をまずＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭのストック溶液を調製し、ＤＭＳＯを使用して４倍段階希釈した溶液を、Ｅｃｈｏ（Ｌａｂｃｙｔｅ、＃５５０）で各ウェルに３０ｎＬずつ（終濃度１００００ｎＭ～０．２ｎＭ）ピペッティングし、３０分間インキュベートした。その後、ＰＩ３Ｋαサブタイプに使用するＣ２Ｃ１２細胞に、２ｕＬのＩＧＦ－１（Ｒ＆Ｄ、＃２９１－Ｇ１－２００、終濃度１２００ｎｇ／ｍＬ）を加え、２０分間インキュベートした。ＰＩ３Ｋβサブタイプに使用するＰＣ－３細胞に、２μＬのＬＰＡ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｌ７２６０、終濃度１５ｕｇ／ｍＬ）を加え、２０分間インキュベートした。ＰＩ３Ｋγサブタイプに使用するＲａｗ２６４．７細胞に、２ｕＬのＣ５α（Ｂｉｏｔａｎｇ、＃ＲＰＲ９８９９、終濃度８０ｎｇ／ｍＬ）を加え、５分間インキュベートした。ＰＩ３Ｋδサブタイプに使用するＲａｊｉ細胞に、２μＬのＩｇＭ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、＃１０９－００６－１２９、終濃度３ｕｇ／ｍＬ）を加え、１０分間インキュベートした。インキュベーションの終了後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＡＫＴ１／２／３（ｐＳ４７３）キットを使用してＡｌｐｈａＬＩＳＡシグナルを測定した。キットの測定方は、以下のように簡単に説明する。２μＬのＬｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒを使用して細胞を１０分間溶解し、その後、３８４ウェルプレートに５ｕＬのａｃｃｅｐｔｏｒｍｉｘ及び５ｕＬのｄｏｎｏｒｍｉｘを加え、室温下で２時間振とうしながらインキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（ＰＥ，＃２１０４）を使用してＡｌｐｈａＬＩＳＡのシグナルを読み取った。対照群（０．５％ＤＭＳＯ）のシグナルの強度比と比較することにより、各濃度での化合物の抑制率を計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアを使用して化合物濃度の対数値―抑制率として非線形回帰分析を実行し、化合物のＩＣ５０値を得た。その結果を表３に示す。
【0081】
表３：本発明実施例化合物がＰＩ３Ｋサブタイプを阻害した細胞活性のＩＣ
５０
値
【表4】
【0082】
表４：他のサブタイプと比較したＰＩ３Ｋγへの細胞阻害活性の本発明実施例化合物の選択性
【表5】
【0083】
表３及び４から、本発明の実施例２の化合物は、ＰＩ３Ｋγサブタイプの細胞活性に対して有意な抑制効果を有し、かつ、ＰＩ３Ｋγサブタイプに対する細胞阻害活性がＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ及びＰＩ３Ｋδサブタイプに対する細胞阻害活性によりも有意に優れ、そのため、本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋγサブタイプに対して顕著な選択的阻害作用を有する、ことが分かった。
試験例３、マウス肝ミクロソームにおける本発明に係る化合物の代謝安定性に関する研究
試験例３、マウス肝ミクロソームにおける本発明に係る化合物の代謝安定性に関する研究
【0084】
１．実験の目的
本実験研究の目的は、マウス肝ミクロソームにおける本発明の化合物の代謝安定性を調査することにある。
本実験研究の目的は、マウス肝ミクロソームにおける本発明の化合物の代謝安定性を調査することにある。
【0085】
２．試薬情報（表５に示す）
表５：実験に用いられる試薬の情報
表５：実験に用いられる試薬の情報
【表6】
【0086】
３．実験方法
被験化合物をヒト肝ミクロソームと共培養し、補酵素ＮＡＤＰＨを加え反応を開始した。０、５、１５、３０及び６０分の時点で２０μＬのインキュベーション溶液を採取して２００μＬの内部標準を含むアセトニトリルに移し、反応を停止させた。タンパク質を沈殿させた後、３，７００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄みを採取した。上澄みに水を加え、１：１に希釈した後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法で分析した。インキュベーションシステムにおける被験化合物の消失半減期に従って、インビトロでの固有クリアランスを計算した。ミダゾラムを内部参照化合物として使用し、２つのコピーを並行してインキュベートした。インキュベーション条件を以下の表６にまとめた。
被験化合物をヒト肝ミクロソームと共培養し、補酵素ＮＡＤＰＨを加え反応を開始した。０、５、１５、３０及び６０分の時点で２０μＬのインキュベーション溶液を採取して２００μＬの内部標準を含むアセトニトリルに移し、反応を停止させた。タンパク質を沈殿させた後、３，７００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄みを採取した。上澄みに水を加え、１：１に希釈した後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法で分析した。インキュベーションシステムにおける被験化合物の消失半減期に従って、インビトロでの固有クリアランスを計算した。ミダゾラムを内部参照化合物として使用し、２つのコピーを並行してインキュベートした。インキュベーション条件を以下の表６にまとめた。
【0087】
表６：本発明の実施例化合物及びＩＰＩ－５４９、ＷＯ２０１５０５１２４４Ａ１の化合物２１のインキュベーション条件
【表7】
【0088】
４．データ分析
分析物と内部標準とのピーク面積の比（Ａａｎａｌｙｔｅ／ＡＩＳ）は、機器によって読み出され、残りのパーセンテージ（％Ｃｏｎｔｒｏｌ）はゼロ以外の時点のサンプルとゼロ時刻サンプル中のＡａｎａｌｙｔｅ／ＡＩＳの比から計算された。Ｌｎ（％Ｃｏｎｔｒｏｌ）をインキュベーション時間に対してプロットし、線形フィットを実行した。被験化合物のクリアランス定数（ｋ、ｍｉｎ－１）、クリアランス半減期（Ｔ１／２、分）及びインビトロでの固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ、ｍＬ・ｍｉｎ－１・ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）を次の式で計算した。
ｋ＝－傾き
Ｔ１／２＝０．６９３／ｋ
ＣＬｉｎｔ＝ｋ／Ｃｐｒｏｔｅｉｎ
Ｃｐｒｏｔｅｉｎ（ｍｇ・ｍＬ－１）は、インキュベーションシステムにおけるミクロソームタンパク質の濃度を指す。
分析物と内部標準とのピーク面積の比（Ａａｎａｌｙｔｅ／ＡＩＳ）は、機器によって読み出され、残りのパーセンテージ（％Ｃｏｎｔｒｏｌ）はゼロ以外の時点のサンプルとゼロ時刻サンプル中のＡａｎａｌｙｔｅ／ＡＩＳの比から計算された。Ｌｎ（％Ｃｏｎｔｒｏｌ）をインキュベーション時間に対してプロットし、線形フィットを実行した。被験化合物のクリアランス定数（ｋ、ｍｉｎ－１）、クリアランス半減期（Ｔ１／２、分）及びインビトロでの固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ、ｍＬ・ｍｉｎ－１・ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）を次の式で計算した。
ｋ＝－傾き
Ｔ１／２＝０．６９３／ｋ
ＣＬｉｎｔ＝ｋ／Ｃｐｒｏｔｅｉｎ
Ｃｐｒｏｔｅｉｎ（ｍｇ・ｍＬ－１）は、インキュベーションシステムにおけるミクロソームタンパク質の濃度を指す。
【0089】
５．実験結果（表７に示す）
表７：本発明の実施例化合物及びＩＰＩ－５４９、ＷＯ２０１５０５１２４４Ａ１の化合物２１のヒト肝ミクロソーム安定性の関連パラメータ
表７：本発明の実施例化合物及びＩＰＩ－５４９、ＷＯ２０１５０５１２４４Ａ１の化合物２１のヒト肝ミクロソーム安定性の関連パラメータ
【表8】
【0090】
結論：ＩＰＩ－５４９及びＷＯ２０１５０５１２４４Ａ１に開示された化合物２１比較して、本発明の実施例１、実施例２及び実施例３の化合物は、半減期が著しく延長され、ヒト肝ミクロソーム安定性が著しく向上した。
【0091】
特開ＷＯ２０１５０５１２４４Ａ１に開示された化合物２１の構造は、以下の通りである。
試験例４、ＩＣＲマウス本発明の化合物の経口投与による薬物動態学に関する研究
【化12】
【0092】
１．実験の目的
ＩＣＲマウスを被試動物とし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により本発明の化合物をマウスに胃内投与し、異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定することにより、マウス体内における本発明の化合物の薬物動態学的特徴を調べた。
ＩＣＲマウスを被試動物とし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により本発明の化合物をマウスに胃内投与し、異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定することにより、マウス体内における本発明の化合物の薬物動態学的特徴を調べた。
【0093】
２．実験方法
２．１実験薬剤及び動物
ＩＰＩ－５４９、本発明の実施例１の化合物及び実施例２の化合物
２７匹の健康な成体雄ＩＣＲマウス（動物品質証明書番号：１９０３０４００２１）が、惟通利華実験動物技術有限公司から購入された。
２．１実験薬剤及び動物
ＩＰＩ－５４９、本発明の実施例１の化合物及び実施例２の化合物
２７匹の健康な成体雄ＩＣＲマウス（動物品質証明書番号：１９０３０４００２１）が、惟通利華実験動物技術有限公司から購入された。
【0094】
２．２薬物の調製及び投与
適量の試験化合物を量り、０．５％のカルボキシメチルセルロースナトリウム（０．０５％のＴｗｅｅｎ８０含有）に加え、ボルテックス振とうし、超音波処理し、固体を均一に分散させ、懸濁液を得た。１００μＬ×２の製剤を吸引し、１．５－ｍＬのＥＰチューブに入れ、２～８℃で保管した。製剤の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬであった。
適量の試験化合物を量り、０．５％のカルボキシメチルセルロースナトリウム（０．０５％のＴｗｅｅｎ８０含有）に加え、ボルテックス振とうし、超音波処理し、固体を均一に分散させ、懸濁液を得た。１００μＬ×２の製剤を吸引し、１．５－ｍＬのＥＰチューブに入れ、２～８℃で保管した。製剤の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬであった。
【0095】
２７匹の健康な成体雄ＩＣＲマウスを一晩絶食させた後、胃内投与（投与量５ｍｇ／ｋｇ）を行い、投与の４時間後、摂食させた。
【0096】
２．３ サンプルの採取
投与前と投与０．０８３時間後、０．２５時間後、０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、及び２４時間後に、眼窩静脈から８０ｕＬ、即ち約０．０８ｍＬの血液を採取し、ＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固チューブに入れた。採取した血液サンプルを氷上で置き、血漿を（遠心分離の条件：１５００ｇ、１０分間）遠心分離により分離した。採取した血漿は分析前に、-４０～-２０℃で保管した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により、異なる化合物を胃内投与後のＩＣＲマウス血漿中の試験化合物の含有量を測定した。
投与前と投与０．０８３時間後、０．２５時間後、０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、及び２４時間後に、眼窩静脈から８０ｕＬ、即ち約０．０８ｍＬの血液を採取し、ＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固チューブに入れた。採取した血液サンプルを氷上で置き、血漿を（遠心分離の条件：１５００ｇ、１０分間）遠心分離により分離した。採取した血漿は分析前に、-４０～-２０℃で保管した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により、異なる化合物を胃内投与後のＩＣＲマウス血漿中の試験化合物の含有量を測定した。
【0097】
３、薬物動態パラメータの結果
本発明の実施例化合物及び陽性対照化合物ＩＰＩ－５４９の薬物動態パラメータを下記の表８に示す。
本発明の実施例化合物及び陽性対照化合物ＩＰＩ－５４９の薬物動態パラメータを下記の表８に示す。
【0098】
表８：本発明の実施例化合物及びＩＰＩ－５４９の薬物動態パラメータ
【表9】
【0099】
結論：ＩＰＩ－５４９と比較して、本発明の実施例１及び実施例２の化合物は、ＩＣＲマウスにおける血中濃度及び曲線下面積が有意に増加し、薬物動態吸収が良好であり、半減期が延長され、バイオアベイラビリティが大幅に向上し、良好な薬物動態学的特性を有する。
試験例５、ＳＤラット経口投与に基づいた本発明に係る化合物の薬物動態学に関する研究
試験例５、ＳＤラット経口投与に基づいた本発明に係る化合物の薬物動態学に関する研究
【0100】
１、実験の目的
ＳＤラットを被試動物とし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により本発明に係る化合物をラットに胃内投与し、異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定することにより、ラット体内における本発明の化合物の薬物動態学的特徴を調べた。
ＳＤラットを被試動物とし、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により本発明に係る化合物をラットに胃内投与し、異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定することにより、ラット体内における本発明の化合物の薬物動態学的特徴を調べた。
【0101】
２、実験方法
２．１実験薬品及び動物
ＩＰＩ－５４９、本発明の実施例１及び実施例２化合物；
惟通利華実験動物技術有限公司から購入された９匹の健康な成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、製造許可証番号：１１４００７００２７１０７７。
２．１実験薬品及び動物
ＩＰＩ－５４９、本発明の実施例１及び実施例２化合物；
惟通利華実験動物技術有限公司から購入された９匹の健康な成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット、製造許可証番号：１１４００７００２７１０７７。
【0102】
２．２医薬品の調製及び投与
強制経口投与群：
試験化合物の適切な量を量り、０．５％のカルボキシメチルセルロースナトリウム（０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０を含有する）を加え、ボルテックス振とうし、超音波で固体を均一に分散させ、懸濁液を得た。１００μＬ×２を吸引し、ろ過した後、製剤化し、１．５－ｍＬ ＥＰチューブに入れ、２～８℃で保存した。製剤濃度が０．５ｍｇ／ｍＬであった。
強制経口投与群：
試験化合物の適切な量を量り、０．５％のカルボキシメチルセルロースナトリウム（０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０を含有する）を加え、ボルテックス振とうし、超音波で固体を均一に分散させ、懸濁液を得た。１００μＬ×２を吸引し、ろ過した後、製剤化し、１．５－ｍＬ ＥＰチューブに入れ、２～８℃で保存した。製剤濃度が０．５ｍｇ／ｍＬであった。
【0103】
９匹の健康な成体雄ＳＤラットを一晩絶食させた後、胃内投与（投与量：５ｍｇ／ｋｇ）を行い、投与の４時間後、摂食させた。
【0104】
２．３ サンプルの採取
投与前、及び投与０．０８３時間後、０．２５時間後、０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、及び２４時間後に、頸静脈から約０．２ｍＬの血液を採取し、抗凝固のためにヘパリンナトリウムを使用した。採取した血液サンプルを氷上で置き、遠心分離により（遠心分離条件：１５００ｇ、１０分間）血漿を分離した。採取した血漿は、分析前に－４０～－２０℃で保存した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用し、異なる化合物を胃内投与した後のＳＤラット血漿中の試験化合物の含有量を測定した。
投与前、及び投与０．０８３時間後、０．２５時間後、０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、及び２４時間後に、頸静脈から約０．２ｍＬの血液を採取し、抗凝固のためにヘパリンナトリウムを使用した。採取した血液サンプルを氷上で置き、遠心分離により（遠心分離条件：１５００ｇ、１０分間）血漿を分離した。採取した血漿は、分析前に－４０～－２０℃で保存した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用し、異なる化合物を胃内投与した後のＳＤラット血漿中の試験化合物の含有量を測定した。
【0105】
３、薬物動態パラメータの結果
本発明の実施例化合物及び陽性対照化合物ＩＰＩ－５４９の薬物動態パラメータを表９に示す。
本発明の実施例化合物及び陽性対照化合物ＩＰＩ－５４９の薬物動態パラメータを表９に示す。
【0106】
表９：本発明の実施例化合物及びＩＰＩ－５４９の薬物動態パラメータ
【表10】
【0107】
結論：ＩＰＩ－５４９と比較して、本発明の実施例１及び実施例２の化合物は、ＳＤラットにおける薬物動態吸収が良好であり、半減期が延長され、血中濃度、曲線下面積、及びバイオアベイラビリティが大幅に向上し、薬物動態学性能が良好であった。
試験例６、ＣＴ２６マウス結腸かん細胞の皮下移植腫瘍モデルの成長に対する、本発明にの化合物とＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体との併用の阻害作用の薬力学の試験
試験例６、ＣＴ２６マウス結腸かん細胞の皮下移植腫瘍モデルの成長に対する、本発明にの化合物とＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体との併用の阻害作用の薬力学の試験
【0108】
１．実験の目的
ＣＴ２６マウス結腸かん細胞の皮下移植腫瘍モデルにおける、実施例２化合物とＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体との併用の抗腫瘍効果を評価する。
ＣＴ２６マウス結腸かん細胞の皮下移植腫瘍モデルにおける、実施例２化合物とＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体との併用の抗腫瘍効果を評価する。
【0109】
２．被験物の調製
２．１ブランク投与製剤の調製：
ブランク対照群に、５％のＮＭＰ（Ｎ－メチルピロリドン）＋９５％ＰＥＧ４００を投与し、投与体積は０．１ｍＬ／１０ｇであった。
２．１ブランク投与製剤の調製：
ブランク対照群に、５％のＮＭＰ（Ｎ－メチルピロリドン）＋９５％ＰＥＧ４００を投与し、投与体積は０．１ｍＬ／１０ｇであった。
【0110】
２．２実施例２の化合物投与製剤の調製
適量の実施例２の化合物を量り遠心分離管に入れ、５％ＮＭＰ ９５％ＰＥＧ４００を加え、完全に溶解するまでボルテックスした。溶液の濃度が６ｍｇ／ｍＬであった。完全に溶けるまでボルテックスして溶液を作製した。なお、溶液は使用する直前に作製される。
適量の実施例２の化合物を量り遠心分離管に入れ、５％ＮＭＰ ９５％ＰＥＧ４００を加え、完全に溶解するまでボルテックスした。溶液の濃度が６ｍｇ／ｍＬであった。完全に溶けるまでボルテックスして溶液を作製した。なお、溶液は使用する直前に作製される。
【0111】
２．３ ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体の調製
組換え抗ＰＤ－Ｌ１全マウスモノクローナル抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌから購入された、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）、Ｃｌｏｎｅ １０Ｆ．９Ｇ２、カタログ番号：ＢＥ０１０１、ロット番号：７２０６１９Ｆ１）をＰＢＳで濃度が１ｍｇ／ｍＬとなるように希釈した。なお、溶液は使用する直前に作製される。
組換え抗ＰＤ－Ｌ１全マウスモノクローナル抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌから購入された、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）、Ｃｌｏｎｅ １０Ｆ．９Ｇ２、カタログ番号：ＢＥ０１０１、ロット番号：７２０６１９Ｆ１）をＰＢＳで濃度が１ｍｇ／ｍＬとなるように希釈した。なお、溶液は使用する直前に作製される。
【0112】
３．実験動物
ＢＡＬＢ／ｃマウスが、雌性、７～８週齡（腫瘍細胞播種時のマウスの週齡）、体重１８．４～１９．１ｇ、各群あたり９匹であった。これらのマウスは、許可証番号がＳＣＸＫ（浙）２０１９－０００１であり、浙江惟通利華実験動物技術有限公司から購入された。
ＢＡＬＢ／ｃマウスが、雌性、７～８週齡（腫瘍細胞播種時のマウスの週齡）、体重１８．４～１９．１ｇ、各群あたり９匹であった。これらのマウスは、許可証番号がＳＣＸＫ（浙）２０１９－０００１であり、浙江惟通利華実験動物技術有限公司から購入された。
【0113】
４．ＣＴ２６マウス結腸かんの培養
ＣＴ２６マウス結腸かん細胞を１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した。指数増殖期のＣＴ２６細胞を収集し、適切な濃度でＰＢＳに再懸濁し、マウス皮下腫瘍接種に使用した。
ＣＴ２６マウス結腸かん細胞を１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した。指数増殖期のＣＴ２６細胞を収集し、適切な濃度でＰＢＳに再懸濁し、マウス皮下腫瘍接種に使用した。
【0114】
５．動物の播種及び群分け
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの背中に、２．５×１０５でＣＴ２６細胞を皮下接種した。平均腫瘍体積が約１２７ｍｍ３の場合、腫瘍サイズに応じてランダムに群分けし、９匹ずつ、４つの群に分けた。なお、群分けの当日を０日目と定義した。
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの背中に、２．５×１０５でＣＴ２６細胞を皮下接種した。平均腫瘍体積が約１２７ｍｍ３の場合、腫瘍サイズに応じてランダムに群分けし、９匹ずつ、４つの群に分けた。なお、群分けの当日を０日目と定義した。
【0115】
６．動物の投与及び観察
腫瘍播種後の定期的なモニタリングには、動物の正常な行動に対する腫瘍成長及び治療の影響が含まれた。具体的な内容には、実験動物の活動性、摂食及び飲水の状態、体重の増加又は低下の状態、目、毛及び他の異常な状態がある。体重及び腫瘍体積を週２回量り、投与期間は２１日であり、２１日目に体重及び腫瘍体積を秤量した後、次の日でマウスを犠牲にし、腫瘍塊を取り秤量し、腫瘍体積（ＴＶ）、相対的腫瘍体積（ＲＴＶ）、相対的腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）、腫瘍抑制率（ＩＲ）及び相対的腫瘍抑制率（ＴＧＩ）を算出し、統計的テストを行った。計算の式は以下の通りである。
（１）ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２
ただし、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長さと幅を表す
（２）ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０
ただし、Ｖ０は群分けして投与する際（即ｄ０）に測定した腫瘍体積で、Ｖｔは各測定での腫瘍体積である
（３）ＴＧＩ（％）＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％
ただし、Ｔ／Ｃ％は、相対的腫瘍増殖率であり、ある時点で、治療群と対照群の相対的腫瘍体積のパーセンテージで表された比値であり、ＴとＣは、治療群と対照群の一定の時点での相対的腫瘍体積である
Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％
ただし、ＴＲＴＶは治療群のＲＴＶであり、ＣＲＴＶは対照群のＲＴＶである
（４）ＩＲ（％）＝（１－ＴＷｔ／ＴＷｃ）×１００％
ただし、ＴＷｔは治療群の腫瘍重量であり、ＴＷｃは対照群の腫瘍重量である
腫瘍播種後の定期的なモニタリングには、動物の正常な行動に対する腫瘍成長及び治療の影響が含まれた。具体的な内容には、実験動物の活動性、摂食及び飲水の状態、体重の増加又は低下の状態、目、毛及び他の異常な状態がある。体重及び腫瘍体積を週２回量り、投与期間は２１日であり、２１日目に体重及び腫瘍体積を秤量した後、次の日でマウスを犠牲にし、腫瘍塊を取り秤量し、腫瘍体積（ＴＶ）、相対的腫瘍体積（ＲＴＶ）、相対的腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）、腫瘍抑制率（ＩＲ）及び相対的腫瘍抑制率（ＴＧＩ）を算出し、統計的テストを行った。計算の式は以下の通りである。
（１）ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２
ただし、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長さと幅を表す
（２）ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０
ただし、Ｖ０は群分けして投与する際（即ｄ０）に測定した腫瘍体積で、Ｖｔは各測定での腫瘍体積である
（３）ＴＧＩ（％）＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％
ただし、Ｔ／Ｃ％は、相対的腫瘍増殖率であり、ある時点で、治療群と対照群の相対的腫瘍体積のパーセンテージで表された比値であり、ＴとＣは、治療群と対照群の一定の時点での相対的腫瘍体積である
Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％
ただし、ＴＲＴＶは治療群のＲＴＶであり、ＣＲＴＶは対照群のＲＴＶである
（４）ＩＲ（％）＝（１－ＴＷｔ／ＴＷｃ）×１００％
ただし、ＴＷｔは治療群の腫瘍重量であり、ＴＷｃは対照群の腫瘍重量である
【0116】
７．結果
投与後２１日目でのＣＴ２６マウス結腸かんモデルにおける各群の薬効パラメータは、下記の表１０に示す。
投与後２１日目でのＣＴ２６マウス結腸かんモデルにおける各群の薬効パラメータは、下記の表１０に示す。
【0117】
表１０：投与後２１日目でのＣＴ２６マウス結腸かんモデルにおける各群の薬効の分析表
【表11】
【0118】
表１１：投与後２１日目でのＣＴ２６マウス結腸かんモデルにおける各群のマウス腫瘍重量の分析表
【表12】
【0119】
表１０および１１から、投与後２１日目に、ＣＴ２６マウス結腸かんモデルにおいて、６０ｍｇ／ｋｇの本発明の実施例２の化合物を使用した単剤療法群、併用治療群、及びＡｎｔｉ－ＰＤ－Ｌ１群は、ＴＧＩがそれぞれ５１．２％、７７．３％、及び３８．７％で、ＩＲがそれぞれ５２．１％、７９．０％、及び３５．８％であり、体重の変化がほぼ見られなかったことが分かった。これによって、６０ｍｇ／ｋｇの本発明の実施例２の化合物を使用した単剤療法群および併用治療群がいずれも有意かつ効果的な腫瘍成長抑制効果を示し、併用治療群は単剤療法群よりも優れた腫瘍成長抑制効果を示した。
【国際調査報告】