特表 2022-541845 抗老化効果を有するポリペプチドおよびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-09-27

(54)【発明の名称】抗老化効果を有するポリペプチドおよびその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/07 20060101AFI20220916BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20220916BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20220916BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220916BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220916BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20220916BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 9/12 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20220916BHJP

   A61Q 19/10 20060101ALI20220916BHJP

   A61Q 5/02 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/06 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20220916BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20220916BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 47/14 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 8/06 20060101ALI20220916BHJP

   A61K 8/64 20060101ALI20220916BHJP

   A23L 33/17 20160101ALI20220916BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20220916BHJP

   C07K 5/11 20060101ALN20220916BHJP

   C07K 7/06 20060101ALN20220916BHJP

【ＦＩ】

A61K38/07

A61K38/08

A61K38/16

A61P17/00

A61P43/00 107

A61Q19/08

A61Q19/00

A61K9/06

A61K9/12

A61K9/08

A61K9/107

A61K9/14

A61Q19/10

A61Q5/02

A61K47/10

A61K47/06

A61K47/26

A61K47/36

A61K47/22

A61K47/42

A61K47/18

A61K47/46

A61K47/24

A61K47/44

A61K47/12

A61K47/14

A61K38/10

A61K8/06

A61K8/64

A23L33/17

C12N15/11 Z

C07K5/11 ZNA

C07K7/06

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022504573

(86)(22)【出願日】2020-07-22

(85)【翻訳文提出日】2022-03-22

(86)【国際出願番号】 US2020043033

(87)【国際公開番号】W WO2021016330

(87)【国際公開日】2021-01-28

(31)【優先権主張番号】62/877,164

(32)【優先日】2019-07-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522030024

【氏名又は名称】ワンスキン，インク．

(71)【出願人】

【識別番号】522030046

【氏名又は名称】フランコ，オクタヴィオ

(71)【出願人】

【識別番号】522030057

【氏名又は名称】ポルト，ウィリアム ファリアス

(74)【代理人】

【識別番号】100082072

【弁理士】

【氏名又は名称】清原 義博

(72)【発明者】

【氏名】フランコ，オクタヴィオ

(72)【発明者】

【氏名】ポルト，ウィリアム ファリアス

(72)【発明者】

【氏名】ゾナリ，アレッサンドラ

(72)【発明者】

【氏名】オリヴェイラ，カロリーナ レイス デ

(72)【発明者】

【氏名】オチョア，エドガー アンドレス

(72)【発明者】

【氏名】カルヴァーリョ，ジュリアナ ロット デ

(72)【発明者】

【氏名】ブレース，リア

(72)【発明者】

【氏名】ボローニ，マリアナ

(72)【発明者】

【氏名】ギアン，マイリエネス

(72)【発明者】

【氏名】シルバ，トゥアニー デ アレンカール エ

【テーマコード（参考）】

4B018

4C076

4C083

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B018MD20

4B018ME10

4C076AA07

4C076AA09

4C076AA12

4C076AA14

4C076AA17

4C076AA24

4C076AA29

4C076AA72

4C076BB31

4C076CC18

4C076DD34

4C076DD38

4C076DD41

4C076DD45

4C076DD46

4C076DD51

4C076DD52

4C076DD59

4C076DD60

4C076DD63

4C076DD66

4C076EE37

4C076EE41

4C076EE51

4C076EE53

4C076EE56

4C076FF04

4C076FF16

4C076FF36

4C076FF39

4C083AA111

4C083AA121

4C083AC021

4C083AC121

4C083AC131

4C083AC241

4C083AC391

4C083AC581

4C083AC641

4C083AC851

4C083AC852

4C083AD331

4C083AD411

4C083AD412

4C083AD571

4C083AD611

4C083AD621

4C083AD631

4C083AD641

4C083AD651

4C083AD661

4C083AD662

4C083AD671

4C083BB13

4C083BB51

4C083CC04

4C083CC05

4C083CC06

4C083CC07

4C083CC23

4C083CC38

4C083DD08

4C083DD17

4C083DD23

4C083DD27

4C083DD30

4C083DD31

4C083EE06

4C083EE07

4C083EE12

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA16

4C084BA17

4C084BA18

4C084BA19

4C084BA20

4C084BA23

4C084CA53

4C084CA59

4C084MA05

4C084MA13

4C084MA16

4C084MA17

4C084MA22

4C084MA28

4C084MA32

4C084MA43

4C084MA52

4C084MA63

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZB221

4C084ZB222

4C084ZC521

4C084ZC522

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA13

4H045BA15

4H045EA01

4H045EA15

4H045EA20

4H045FA10

(57)【要約】

【解決手段】
セノ治療的効果を提供することができるポリペプチドが、本明細書に提供される。ポリペプチドは、外用適用のために製剤化することができ、そして、対象に局所的に適用することができ、その結果、対象において、または対象の細胞において、セノ治療効果を提供する。
【選択図】図９

【特許請求の範囲】

【請求項1】

皮膚の処置のための組成物であって、前記組成物は、ＬＫＧＩのアミノ酸配列（配列番号：５）またはそのアナログを含む、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドを含み、ここで、前記ポリペプチドは、最大１００のアミノ酸を含む、組成物。

【請求項2】

前記単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドは、ＷＬＫＧＩのアミノ酸配列（配列番号：７）またはそのアナログを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドは、ＬＫＧＩＬのアミノ酸配列（配列番号：６）またはそのアナログを含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドは、少なくとも４つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項5】

治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

前記賦形剤は、局所適用のために構成される、請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

前記組成物は、ヒトの皮膚への適用のために構成される、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物は、クリーム、経皮パッチ、外用パッチ、軟膏、オイル、ゲル、液体、粉末、ローション、血清、エマルジョン、モイスチャライザ、泡、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、洗顔剤、化粧水、またはシャンプーである、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

前記組成物は、食用サプリメントとして構成される、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項10】

前記組成物は、飲料として構成される、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記組成物は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚用保湿剤を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項12】

前記組成物は、植物オイル、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸、トリグリセリド、ベンゾアート、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、セラミド、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚軟化剤を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項13】

前記植物オイルは、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカドオイル、プラムシードオイル、プラカシーオイル、カリコフィラムスプルカナムオイル、アーモンドオイル、およびアルガンオイルからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記組成物は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミド、またはそれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１つのビタミンを含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

前記組成物は、約５００ｎＭ～約５００μＭの、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項16】

前記組成物は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｗ）の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項17】

前記組成物は、約０．０１％～約１％の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項18】

前記組成物は、前記組成物を皮膚上で使用した後に、前記組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、皮膚水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルの少なくとも１つを改善する、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項19】

前記組成物は、前記組成物を皮膚上で使用した後に、前記組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚荒れ、皮膚色素過剰、または皮膚の全体的な外観を低下させる、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項20】

前記組成物による皮膚の処置は、皮膚に対する老化による影響を低下させるか、または処置する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項21】

前記組成物による皮膚の処置は、皮膚に対する細胞老化による影響を低下させる、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項22】

前記老化による影響は、老化関連β－ガラクトシダーゼ活性レベル、ＡＴＲＸ病巣／細胞の割合、ｐ１６発現、ＩＬ－８発現、Ｋｉ－６７発現、ヒアルロン酸合成酵素２発現、マトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）発現、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）発現、ＢＬＭ発現、またはエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）発現の少なくとも１つによって評価される、請求項２０～２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項23】

Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列、またはそのアナログを含む、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドであって、ここで、
（ａ）前記アミノ酸配列は、第１の配列の配列番号：１に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＥ、Ｘ_２はＴ、Ｘ_４はＫ、Ｘ_６はＷ、Ｘ７_はＬ、Ｘ_９はＧ、およびＸ_１０はＩであり；そして、
（ｉ）Ｘ_３はＳではなく；または
（ｉｉ）Ｘ_５が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_８はＧではなく；または
（ｉｉｉ）Ｘ_８が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_５はＮではなく；または
（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）のいずれか１つは、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、
（ｂ）前記アミノ酸配列は、第２の配列の配列番号：２に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＡ、Ｘ_２はＴ、Ｘ_３はＡ、Ｘ_４はＫ、Ｘ_５はＡ、Ｘ_６はＷ、Ｘ_７はＬ、Ｘ_８はＫ、Ｘ_９はＧ、およびＸ_１０はＩであり、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、
（ｃ）前記アミノ酸配列は、第３の配列の配列番号：３に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＫ、Ｘ_２はＬ、Ｘ_５はＩ、Ｘ_６はＬ、Ｘ_８はＧ、およびＸ_１０はＡであり；そして、
（ｉ）Ｘ_９が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_３はＮではなく；または
（ｉｉ）Ｘ_３が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_９はＳではなく；または
（ｉｉｉ）Ｘ_４が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_７はＬではなく；または
（ｉｖ）Ｘ_７が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_４はＳではなく；そして、または
（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、または（ｉｖ）のいずれか１つは、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、
（ｄ）前記アミノ酸配列は、第４の配列の配列番号：４に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＷ、Ｘ_２はＬ、Ｘ_３はＫ、Ｘ_４はＧ、Ｘ_５はＩ、Ｘ_６はＬ、Ｘ_７はＲ、Ｘ_８はＥ、Ｘ_９はＡ、およびＸ_１０はＡであり、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴う、ポリペプチド。

【請求項24】

前記アミノ酸配列は、ＬＫＧＩ（配列番号：５）を含む、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項25】

前記アミノ酸配列は、ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）を含む、請求項２３または請求項２４に記載のポリペプチド。

【請求項26】

前記アミノ酸配列は、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）を含む、請求項２３－２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項27】

前記アミノ酸配列は、配列番号：１の配列に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項28】

前記アミノ酸配列は、配列番号：１である、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項29】

前記アミノ酸配列は、配列番号：２である、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項30】

前記アミノ酸配列は、配列番号：３の配列に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項31】

前記アミノ酸配列は、配列番号：３の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項32】

前記アミノ酸配列は、配列番号：３である、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項33】

前記アミノ酸配列は、配列番号：４である、請求項２３に記載のポリペプチド。

【請求項34】

前記組み換えられたポリペプチドは、少なくとも１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸、および最大１００のアミノ酸を含む、請求項２３－３３のいずれか１項に記載のポリペプチド。

【請求項35】

請求項２３－３４のいずれか１項に記載の少なくとも１つの単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチド、および、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤を含む、皮膚の処置のための組成物。

【請求項36】

前記賦形剤は、局所適用のために構成される、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

前記組成物は、ヒトの皮膚への適用のために製剤化される、請求項３５または請求項３６に記載の組成物。

【請求項38】

前記組成物は、クリーム、軟膏、ゲル、液体、オイル、粉末、ローション、血清、エマルジョン、モイスチャライザ、泡、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、洗顔剤、化粧水、外用パッチ、またはシャンプーである、請求項３５－３７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項39】

前記組成物は、食用サプリメントとして構成される、請求項３５に記載の組成物。

【請求項40】

前記組成物は、飲料として構成される、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記組成物は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚用保湿剤を含む、請求項３５－４０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項42】

前記組成物は、植物オイル、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸、トリグリセリド、ベンゾアート、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、セラミド、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚軟化剤を含む、請求項３５－４０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項43】

前記植物オイルは、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカドオイル、プラムシードオイル、プラカシーオイル、カリコフィラムスプルカナムオイル、アーモンドオイル、およびアルガンオイルからなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物。

【請求項44】

前記組成物は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミド、またはそれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１つのビタミンを含む、請求項３５－４３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項45】

前記組成物は、約５００ｎＭ～約５００μＭの、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項３５－４４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項46】

前記組成物は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｗ）の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項３５－４４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項47】

前記組成物は、約０．０１％～約１％の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項３５－４４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項48】

前記組成物は、前記組成物を皮膚上で使用した後に、前記組成物を使用する前と比較して、皮膚の水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、ユーザの皮膚の皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルの少なくとも１つを改善する、請求項３５－４７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項49】

前記組成物は、前記組成物を皮膚上で使用した後に、前記組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚荒れ、皮膚色素過剰、または皮膚の全体的な外観を低下させる、請求項３５－４７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項50】

前記組成物による皮膚の処置は、皮膚に対する老化による影響を低下させるか、または処置する、請求項３５－４９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項51】

前記組成物による前記皮膚の処置は、皮膚に対する細胞老化による影響を低下させる、請求項３５－５０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項52】

前記老化による影響は、老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ活性レベル、ＡＴＲＸ病巣／細胞の割合、ｐ１６発現、ＩＬ－８発現、Ｋｉ－６７発現、ヒアルロン酸合成酵素２発現、マトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）発現、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）発現、ＢＬＭ発現、またはエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）発現の少なくとも１つによって評価される、請求項５０－５１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項53】

必要な対象において疾病を処置する方法であって、前記方法は、配列番号：５のアミノ酸配列を含む組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項54】

前記組成物は、配列番号：６のアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記組成物は、配列番号：７のアミノ酸配列を含む、請求項５３または請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記投与する工程は、前記組成物を前記対象に局所的に適用することを含む、請求項５３－５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記対象は、ヒトまたは他の動物である、請求項５３－５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記方法は、前記組成物の有効な量を、前記対象に投与する工程を含む、請求項５３－５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記疾病は、対象における老化細胞の蓄積に関連した障害である、請求項５３－５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

老化細胞の蓄積に関連した前記障害は、皮膚の老化を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項61】

前記組成物は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚用保湿剤を含む、請求項５３－６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記組成物は、植物オイル、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸、トリグリセリド、ベンゾアート、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、セラミド、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚軟化剤を含む、請求項５３－６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記植物オイルは、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカドオイル、プラムシードオイル、プラカシーオイル、カリコフィラムスプルカナムオイル、アーモンドオイル、およびアルガンオイルからなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記組成物は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミド、またはそれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１つのビタミンを含む、請求項５３－６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記組成物は、約５００ｎＭ～約５００μＭの、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項５３－６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記組成物は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｗ）の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、請求項５３－６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記組成物は、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの、真皮の中への、最大１０％の低皮膚浸透を達成するように製剤化される、請求項５３－６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記組成物は、前記組成物を皮膚上で使用した後に、前記組成物を使用する前と比較して、皮膚の水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、ユーザの皮膚の皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルの少なくとも１つを改善する、請求項５３－６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記組成物は、前記組成物を皮膚上で使用した後に、前記組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚荒れ、皮膚色素過剰、または皮膚の全体的な外観を低下させる、請求項５３－６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記組成物によって皮膚を処置する工程は、皮膚も対する老化による影響を低下させるか、または処置する、請求項５３－６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記組成物によって皮膚を処置する工程は、皮膚に対する細胞老化による影響を低下させる、請求項５３－７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記老化による影響は、老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ活性レベル、ＡＴＲＸ病巣／細胞の割合、ｐ１６発現、ＩＬ－８発現、Ｋｉ－６７発現、ヒアルロン酸合成酵素２発現、マトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）発現、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）発現、ＢＬＭ発現、またはエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）発現の少なくとも１つによって評価される、請求項７０－７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

必要な対象において細胞老化を低下させる方法であって、前記方法は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＬＫＧＩ（配列番号：５）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを、対象に投与する工程を含み、ここで、前記ポリペプチドは、最大１００のアミノ酸を含む、方法。

【請求項74】

前記ポリペプチドは、少なくとも４つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）のアミノ酸配列を含む、請求項７３に記載の方法。

【請求項76】

前記組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）のアミノ酸配列を含む、請求項７３に記載の方法。

【請求項77】

前記ポリペプチドは、少なくとも５つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含み、および最大１００のアミノ酸を含む、請求項７５または請求項７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記組成物は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、請求項７３－７７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項79】

必要な対象において細胞老化を低下させる方法であって、前記方法は、請求項２３－３４のいずれか１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドを含む、治療用、栄養補助用、または化粧用組成物を、前記対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項80】

前記組成物は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記投与する工程は、前記組成物を前記対象の皮膚の一部に適用することを含む、
請求項７９または請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

前記組成物は、前記対象の複数の細胞の寿命を延ばし、前記対象の複数の細胞におけるＳＩＲＴ６発現を誘発し、前記対象の複数の細胞における細胞再生速度を増加させ、前記対象の複数の細胞におけるアポトーシスを促進し、前記対象の複数の細胞におけるＤＮＡ修復を促進し、前記対象の複数の細胞におけるコラーゲン産生を増加させ、前記対象の複数の細胞におけるヒアルロン酸合成酵素産生を増加させ、前記対象の複数の細胞におけるＡＴＲＸ核病巣蓄積を減少させ、前記対象の複数の細胞におけるｐ１６発現を減少させ、前記対象の複数の細胞における老化関連ベータ－ガラクトシダーゼ産生を減少させ、前記対象の複数の細胞におけるＩＬ８発現を減少させ、前記対象の複数の細胞におけるＭＭＰ１発現を減少させ、前記対象の複数の細胞におけるＢＬＭ発現を増加させ、および／または、前記対象の複数の細胞におけるＵＶ誘発ＤＮＡ損傷を防ぐ、請求項７９－８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

必要な対象において疾病を処置する方法であって、前記方法は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：５のアミノ酸配列を含む、治療用、栄養補助用、または化粧用組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項84】

前記治療用、栄養補助用、または化粧用組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：６のアミノ酸配列を含む、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記治療用、栄養補助用、または化粧用組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：７のアミノ酸配列を含む、請求項８３または請求項８４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本特許出願は、２０１９年７月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／８７７，１６４の利益を主張するものであり、その全体は、参照によって本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

細胞老化の蓄積は単に有機体老化の産物ではなく、むしろ、ポジティブ・フィードバック・サイクルによるさらなる老化誘導に対して、積極的に寄与する可能性がある。老化の特徴の中で、細胞老化は中心的な位置を占め、老化に関する主要な、拮抗的な、および統合的な態様を統合し得る。第１に、老化は、前駆細胞の増殖能力を低下させるため、影響を受けた組織の組織修復および再生能力を損なう可能性がある。第２に、老化細胞は、パラクリンシグナル伝達環境を変化させる可能性があり、老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）を特徴とし、当該老化関連分泌表現型は炎症とさらなる細胞老化を誘発し、潜在的に有害な炎症反応を悪化させ、組織傷害を促進する可能性がある。第３に、加齢に伴う老化細胞の蓄積は、皮膚を含むがこれに限定されないいくつかの組織で記録されている。第４に、細胞老化は、黄斑変性、痴呆、アテローム性動脈硬化症、および癌などの疾患において、積極的役割を果たす存在となる可能性がある。

【0003】

老化細胞は、核中の、細胞老化関連ベータ－ガラクトシダーゼ（ＳＡ－ＢＧａｌ）産生、ｐ１６発現、およびアルファサラセミア／精神遅滞Ｘ－連鎖クロマチンリモデリングタンパク質（ＡＴＲＸ）病巣蓄積によって、識別することができる。機能性の改質はまた、老化細胞を際立たせ、増殖能力の低下や分裂促進的刺激への耐性を含む。

【発明の概要】

【0004】

単離された、合成された、および／または組み換えられたポリペプチドを含む組成物が、本明細書に説明され、ポリペプチドは、ＬＫＧＩのアミノ酸配列（配列番号：５）またはそのアナログ、ＬＫＧＩＬのアミノ酸配列（配列番号：６）またはそのアナログ、あるいはＷＬＫＧＩのアミノ酸配列（配列番号：７）またはそのアナログを含む。いくつかの実施形態では、そのようなポリペプチドは、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、または４０のアミノ酸を含むことができる。代替的に、または追加的に、そのようなポリペプチドは、最大で１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３５、３０、２５、または２０のアミノ酸を含む。いくつかの例では、ポリペプチドは、配列番号：１－４のいずれかに対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する。

【0005】

また、配列番号：８のアミノ酸配列を含む、単離され、合成され、および／または組み換えられたポリペプチドが、本明細書に説明され、当該配列番号は、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０またはそのアナログによって表わされ、
１．式中、Ｘ_１はＥ、Ｘ_２はＴ、Ｘ_４はＫ、Ｘ_６はＷ、Ｘ_７はＬ、Ｘ_９はＧ、およびＸ_１０はＩであり；そして、（ｉ）Ｘ_３はＳではなく；または
２．（ｉｉ）Ｘ_５が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_８はＧではなく；または
３．（ｉｉｉ）Ｘ_８が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_５はＮではなく；
４．または、（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）のいずれか１つは、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、
５．（ｂ）アミノ酸配列は、第２の配列の配列番号：２に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＡ、Ｘ_２はＴ、Ｘ_３はＡ、Ｘ_４はＫ、Ｘ_５はＡ、Ｘ_６はＷ、Ｘ_７はＬ、Ｘ_８はＫ、Ｘ_９はＧ、およびＸ_１０はＩであり、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、（ｃ）アミノ酸配列は、第３の配列の配列番号：３に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＫ、Ｘ_２はＬ、Ｘ_５はＩ、Ｘ_６はＬ、Ｘ_８はＧ、およびＸ_１０はＡであり；そして、（ｉ）Ｘ_９が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_３はＮではなく；または（ｉｉ）Ｘ_３が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_９はＳではなく；または（ｉｉｉ）Ｘ_４が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_７はＬではなく；または（ｉｖ）Ｘ_７が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_４はＳではなく；そして、または（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、または（ｉｖ）のいずれか１つは、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、（ｄ）アミノ酸配列は、第４の配列の配列番号：４に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＷ、Ｘ_２はＬ、Ｘ_３はＫ、Ｘ_４はＧ、Ｘ_５はＩ、Ｘ_６はＬ、Ｘ_７はＲ、Ｘ_８はＥ、Ｘ_９はＡ、およびＸ_１０はＡであり、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴う。

【0006】

いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、ＬＫＧＩ（配列番号：５）を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号：１の配列に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号：１である。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号：２である。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号：３の配列に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号：３である。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号：４である。いくつかの実施形態では、組み換えられたポリペプチドは、少なくとも１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む。

【0007】

本明細書に提供される組成物は、治療用、栄養補助用、または化粧用としての使用のために、製剤化することができる。

【0008】

いくつかの実施形態では、製剤は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、いくつかの実施形態では、賦形剤は、外用適用のために構成される。いくつかの実施形態では、賦形剤は、外用サプリメントとして構成される。さらなる実施形態では、製剤は、ヒトの皮膚への適用のために構成される。いくつかの実施形態では、製剤は、クリーム、経皮パッチ、外用パッチ、軟膏、オイル、ゲル、液体、粉末、ローション、血清、エマルジョン、モイスチャライザ、化粧水、泡、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、洗顔剤、ヒドロゲルパッチ、粉末、またはシャンプーである、いくつかの実施形態では、製剤は、音波処置、超音波処置、ＬＥＤ処置、光線処置、電気的処置、または高周波処置と共に使用されてもよい。いくつかの実施形態では、経皮パッチは、皮膚の表皮層に製剤を配達する。いくつかの実施形態では、経皮パッチは、皮膚の表皮層および真皮層に製剤を配達する。いくつかの実施形態では、製剤は、対象において、最小量または低量で全身に送達され、あるいは、対象の血流に直接送達されることを意図していない。いくつかの実施形態では、製剤は、送達部位でおよびその近くで、局所的に作用する。いくつかの実施形態では、製剤は、全身性の影響を最小限有する、または全身性の影響を有していない。

【0009】

いくつかの実施形態では、製剤は、食用のサプリメントとして構成される。場合によっては、製剤は、飲料として構成される。

【0010】

本明細書における、少なくとも１つの組み換えられたまたは合成されたポリペプチド、および治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤を含む、治療用、栄養補助用、または化粧用製剤が、本明細書に説明される。

【0011】

いくつかの実施形態では、賦形剤は、外用適用のために構成される。いくつかの実施形態では、賦形剤は、外用サプリメントとして構成される。さらなる実施形態では、製剤は、ヒトの皮膚への適用のために製剤化される。より具体的には、製剤は、表皮から真皮に局所的に浸透するように構成され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、表皮層および真皮層を通って局所的に浸透するように構成され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、表皮層を通って局所的に浸透し、そして真皮層に低浸透を有するように、構成され得る。しばしば、製剤中の成分の浸透は、フランツ型拡散セルを使用するものを含むがこれらに限定されない、様々な浸透試験を使用して評価されてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリペプチドを運ぶため、かつ皮膚を通じてポリペプチドの放出時間および／または浸透深度を制御するために、担体、ミクロスフェア、リポソーム、またはミセルを含む。場合によっては、本明細書における製剤は、クリーム、軟膏、ゲル、液体、オイル、粉末、ローション、血清、エマルジョン、モイスチャライザ、泡、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、洗顔剤、化粧水、外用パッチ、ヒドロゲルパッチ、またはシャンプーである。

【0012】

いくつかの実施形態では、製剤は、食用のサプリメントとして構成される。いくつかの実施形態では、製剤は、飲料として構成される。いくつかの実施形態では、製剤は、錠剤、カプセル、ゲル、グミ、または粉末として構成される。

【0013】

必要な対象において疾病を処置する方法が、本明細書に説明され、当該方法は、配列番号：５－７の少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、治療用、栄養補助用、または化粧品用製剤を、対象に投与する工程を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、投与する工程は、製剤を対象に局所的に適用することを含む。さらなる実施形態では、対象は、ヒトまたは他の動物である。いくつかの実施形態では、方法は、製剤の有効な量を、対象に投与する工程を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、疾病は、対象における老化細胞の蓄積に関連した障害である。いくつかの実施形態では、老化細胞の蓄積に関連した障害は、皮膚の老化を含む。いくつかの実施形態では、疾病は、早老症および／または早老症の影響に関連した障害である。いくつかの実施形態では、早老症は、皮膚の表皮層および真皮層中の早期老化の徴候を有する疾病を含む。

【0016】

必要な対象において細胞老化を低下させる方法が、本明細書に説明され、当該方法は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＬＫＧＩのアミノ酸配列（配列番号：５）を含むポリペプチドを含む、治療用、栄養補助用、または化粧用製剤を、対象に投与する工程を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも４つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）のアミノ酸配列を含むいくつかの実施形態では、製剤は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも５つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、最大で１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、２０のアミノ酸、２５のアミノ酸、３０のアミノ酸、３５のアミノ酸、または４０のアミノ酸を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、製剤は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む。

【0019】

必要な対象において細胞老化を低下させる方法が、本明細書に説明され、当該方法は、本明細書に記載される少なくとも１つのポリペプチドを含む、治療用、栄養補助用、または化粧用製剤を、対象に投与する工程を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、製剤は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、投与する工程は、製剤を対象の皮膚の一部に適用することを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、対象の複数の細胞の寿命を延ばし、対象の複数の細胞におけるＳＩＲＴ６発現を誘発し、対象の複数の細胞における細胞再生速度を増加させ、対象の複数の細胞におけるアポトーシスを促進し、対象の複数の細胞におけるＤＮＡ修復を促進し、対象の複数の細胞におけるコラーゲン産生を増加させ、対象の複数の細胞におけるヒアルロン酸合成酵素産生を増加させ、対象の複数の細胞におけるＡＴＲＸ核病巣蓄積を減少させ、対象の複数の細胞におけるｐ１６発現を減少させ、対象の複数の細胞における老化関連ベータ－ガラクトシダーゼ産生を減少させ、対象の複数の細胞におけるＩＬ８発現を減少させ、対象の複数の細胞におけるＭＭＰ１発現を減少させ、対象の複数の細胞におけるＢＬＭ発現を増加させ、および／または、対象の複数の細胞におけるＵＶ誘発ＤＮＡ損傷を防ぐ。

【0021】

必要な対象において疾病を処置する方法が、本明細書に説明され、当該方法は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：５のアミノ酸配列を含む、治療用、栄養補助用、または化粧用製剤を、対象に投与する工程を含む。

【0022】

いくつかの実施形態では、治療用、栄養補助用、または化粧用製剤は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、治療用、栄養補助用、または化粧用製剤は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：７のアミノ酸配列を含む。

【0023】

引用による組み込み
本明細書で言及されるすべての出版物、特許、および特許出願は、あたかも個々の出版物、特許、または特許出願がそれぞれ参照によって本明細書に具体的かつ個別に組み込まれるのと同じ程度にまで、参照によって本明細書に組み込まれている。

【図面の簡単な説明】

【0024】

本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲によって具体的に規定される。本発明の特徴と利点をより良く理解するには、本発明の原理が用いられる例示的実施形態を説明する以下の詳細な説明と添付図面とを参照されたい。

【0025】

【図1】早老症線維芽細胞数および老化レベルに対する、個々のポリペプチドの効果を示す。

【図2A】老化線維芽細胞に対する、４つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）、ペプチド１３（パネルＢ）、ペプチド１５（パネルＣ）、およびペプチド１６（パネルＤ）のセノ治療（ｓｅｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図2B】老化線維芽細胞に対する、４つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）、ペプチド１３（パネルＢ）、ペプチド１５（パネルＣ）、およびペプチド１６（パネルＤ）のセノ治療の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図2C】老化線維芽細胞に対する、４つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）、ペプチド１３（パネルＢ）、ペプチド１５（パネルＣ）、およびペプチド１６（パネルＤ）のセノ治療の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図2D】老化線維芽細胞に対する、４つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）、ペプチド１３（パネルＢ）、ペプチド１５（パネルＣ）、およびペプチド１６（パネルＤ）のセノ治療の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図3A】より少ないＡＴＲＸ病巣／核を有する細胞数の増加（パネルＡ）、ＡＴＲＸ病巣／核の平均の低下（パネルＢ）、および１０未満のＡＴＲＸ病巣／核を有する細胞数の増加（パネルＣ）を促進するポリペプチドのセノ治療の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊＜０．０１。

【図3B】より少ないＡＴＲＸ病巣／核を有する細胞数の増加（パネルＡ）、ＡＴＲＸ病巣／核の平均の低下（パネルＢ）、および１０未満のＡＴＲＸ病巣／核を有する細胞数の増加（パネルＣ）を促進するポリペプチドのセノ治療の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊＜０．０１。

【図3C】より少ないＡＴＲＸ病巣／核を有する細胞数の増加（パネルＡ）、ＡＴＲＸ病巣／核の平均の低下（パネルＢ）、および１０未満のＡＴＲＸ病巣／核を有する細胞数の増加（パネルＣ）を促進するポリペプチドのセノ治療の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊＜０．０１。

【図4A】３週間の長期曝露中に、細胞集団における老化線維芽細胞数を減少させることができ、処置後少なくとも１週間セノ治療の効果を維持し（パネルＡ）、この期間中に細胞毒性を誘発したり細胞増殖に有意に影響したりすることのない（パネルＢ）、セノ治療用ポリペプチドの効果を示す。 ＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊、＜０．０００１。

【図4B】３週間の長期曝露中に、細胞集団における老化線維芽細胞数を減少させることができ、処置後少なくとも１週間セノ治療の効果を維持し（パネルＡ）、この期間中に細胞毒性を誘発したり細胞増殖に有意に影響したりすることのない（パネルＢ）、セノ治療用ポリペプチドの効果を示す。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊、＜０．０００１。

【図5】ポリペプチドによる処置が、複数のドナーに由来する細胞における細胞当たり平均ＡＴＲＸ病巣蓄積によって測定される時の、細胞老化における用量反応性の減少を促進することができることを示す。

【図6A】細胞老化がエトポシドへの曝露によって線維芽細胞において誘発され得ること（パネルＡ）、ポリペプチドによるエトポシド誘発老化細胞の処置が、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＢ）、細胞老化がＵＶＢ曝露によって誘発され得ること（パネルＣ）、および、ＵＶＢ処置されたサンプルをポリペプチドで処置すると、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＤ）を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図6B】細胞老化がエトポシドへの曝露によって線維芽細胞において誘発され得ること（パネルＡ）、ポリペプチドによるエトポシド誘発老化細胞の処置が、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＢ）、細胞老化がＵＶＢ曝露によって誘発され得ること（パネルＣ）、および、ＵＶＢ処置されたサンプルをポリペプチドで処置すると、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＤ）を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図6C】細胞老化がエトポシドへの曝露によって線維芽細胞において誘発され得ること（パネルＡ）、ポリペプチドによるエトポシド誘発老化細胞の処置が、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＢ）、細胞老化がＵＶＢ曝露によって誘発され得ること（パネルＣ）、および、ＵＶＢ処置されたサンプルをポリペプチドで処置すると、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＤ）を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図6D】細胞老化がエトポシドへの曝露によって線維芽細胞において誘発され得ること（パネルＡ）、ポリペプチドによるエトポシド誘発老化細胞の処置が、結果的に老化の低下をもたらし得ること（パネルＢ）、細胞老化がＵＶＢ曝露によって誘発され得ること（パネルＣ）、および、ＵＶＢ処置されたサンプルをポリペプチドで処置すると、結果的に老化低下する可能性があること（パネルＤ）を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図7A】ポリペプチドで処置されたヒトの皮膚等価物が、全体的な構造分析スコアによってより高品質を示すことができ（パネルＡ）、ポリペプチドで処置されたヒトの皮膚等価物が、未処置のヒトの皮膚等価物よりも有意に少ない老化細胞（パネルＡおよびＢ）と、ｐ１６が未処置の対照と比較して、ポリペプチド処置の表皮および真皮で有意に低い発現を有することができ、かつ、ＩＬ－８およびＭＭＰ－１が未処置の同等物と比較して、ポリペプチド処置の真皮で有意に低下して発現した、遺伝子発現の変化（パネルＣ）とを含むことができることを示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１：＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図7B】ポリペプチドで処置されたヒトの皮膚等価物が、全体的な構造分析スコアによってより高品質を示すことができ（パネルＡ）、ポリペプチドで処置されたヒトの皮膚等価物が、未処置のヒトの皮膚等価物よりも有意に少ない老化細胞（パネルＡおよびＢ）と、ｐ１６が未処置の対照と比較して、ポリペプチド処置の表皮および真皮で有意に低い発現を有することができ、かつ、ＩＬ－８およびＭＭＰ－１が未処置の同等物と比較して、ポリペプチド処置の真皮で有意に低下して発現した、遺伝子発現の変化（パネルＣ）とを含むことができることを示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１：＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図7C】ポリペプチドで処置されたヒトの皮膚等価物が、全体的な構造分析スコアによってより高品質を示すことができ（パネルＡ）、ポリペプチドで処置されたヒトの皮膚等価物が、未処置のヒトの皮膚等価物よりも有意に少ない老化細胞（パネルＡおよびＢ）と、ｐ１６が未処置の対照と比較して、ポリペプチド処置の表皮および真皮で有意に低い発現を有することができ、かつ、ＩＬ－８およびＭＭＰ－１が未処置の同等物と比較して、ポリペプチド処置の真皮で有意に低下して発現した、遺伝子発現の変化（パネルＣ）とを含むことができることを示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１：＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図8A】ｐＡｋｔ Ｓ４７３が、ポリペプチドで処置された表皮サンプルと真皮サンプルの両方で有意に減少することができ（パネルＡ）、ポリペプチド処置が、ＵＶＢ誘発細胞老化からの保護を示すＵＶＢ曝露サンプル中のＳＡ－Ｂｇａｌ染色を減少させることができ（パネルＢ）、そして、ポリペプチドが、ＳＩＲＴ６およびＢＬＭの発現を増加させることができる（パネルＣ）ことを示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図8B】ｐＡｋｔ Ｓ４７３が、ポリペプチドで処置された表皮サンプルと真皮サンプルの両方で有意に減少することができ（パネルＡ）、ポリペプチド処置が、ＵＶＢ誘発細胞老化からの保護を示すＵＶＢ曝露サンプル中のＳＡ－Ｂｇａｌ染色を減少させることができ（パネルＢ）、そして、ポリペプチドが、ＳＩＲＴ６およびＢＬＭの発現を増加させることができる（パネルＣ）ことを示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図8C】ｐＡｋｔ Ｓ４７３が、ポリペプチドで処置された表皮サンプルと真皮サンプルの両方で有意に減少することができ（パネルＡ）、ポリペプチド処置が、ＵＶＢ誘発細胞老化からの保護を示すＵＶＢ曝露サンプル中のＳＡ－Ｂｇａｌ染色を減少させることができ（パネルＢ）、そして、ポリペプチドが、ＳＩＲＴ６およびＢＬＭの発現を増加させることができる（パネルＣ）ことを示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図9】組織画像（パネルＡ）および取得したデータの統計分析（パネルＢ）としての、ヒトの皮膚等価物中の表皮層厚さの増加を示す。＊＊ｐ＜０．０１。

【図10A】２つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）およびペプチド１３（パネルＢ）、ならびに２つのポリペプチドの重ね合わせ（パネルＣ）の、予測される３次元構造を示す。

【図10B】２つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）およびペプチド１３（パネルＢ）、ならびに２つのポリペプチドの重ね合わせ（パネルＣ）の、予測される３次元構造を示す。

【図10C】２つのポリペプチド、ペプチド１４（パネルＡ）およびペプチド１３（パネルＢ）、ならびに２つのポリペプチドの重ね合わせ（パネルＣ）の、予測される３次元構造を示す。

【図11A】５日間のわたり、ペプチド１４無し（対照）で、および１２．５μＭのペプチド１４（１２．５μＭ Ｐｅｐ１４）で培養された、３Ｄ皮膚等価物（上部列）およびエクスビボの皮膚生検サンプル（底部列）についての、ヘマトキシロン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色された組織画像を示す。

【図11B】１２．５μＭのペプチド１４で処置された３Ｄ皮膚モデル（上部グラフ）サンプルとエクスビボの皮膚生検（底部グラフ）サンプルについて、分子ＤＮＡ年齢とも呼ばれる予測年齢が、未処置の対照（ｃｔｒｌ）であるサンプルの予測年齢よりも低かったことを示す。＊＊ｐ＜０．０１。

【図11C】１２．５μＭのペプチド１４（１２．５μＭ Ｐｅｐ１４）で処置されたエクスビボの皮膚生検の予測年齢が、未処置の対照（ｃｔｒｌ）であるサンプルの予測年齢よりも低かったことを示す。

【図12A】１４日間のＩＢＭＸでの前処置培養後、７日間、イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）の陽性対照、陰性対照、ＩＢＭＸを伴うペプチド１４、およびＩＢＭＸを伴うレチノイン酸で処置された、ＭｅＷｏ細胞の細胞ペレットの相対的メラニン含有量を示す。データは、陰性対照に対して正規化（１００％）されたメラニン含有量の平均および標準偏差として示される。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図12B】１４日間のイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）での前処置培養後、７日間、ＩＢＭＸを伴う陽性対照、陰性対照、ペプチド１４、およびレチノイン酸で処置された、ＭｅＷｏ細胞からの細胞培養液上清の相対的メラニン含有量を示す。データは、陰性対照に対して正規化（１００％）されたメラニン含有量の平均および標準偏差として示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。

【図13A】１４日間のイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）での前処置培養後、ＩＢＭＸの陽性対照、陰性対照、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の１４日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の１４日間、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の７日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の７日間で処置された、ＭｅＷｏ細胞の細胞培養ペレットの相対的メラニン含有量を示す。データは、陰性対照に対して正規化（１００％）されたメラニン含有量の平均および標準偏差として示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図13B】１４日間のイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）での前処置培養後、ＩＢＭＸの陽性対照、陰性対照、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の１４日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の１４日間、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の７日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の７日間で処置された、ＭｅＷｏ細胞の細胞培養上清の相対的メラニン含有量を示す。データは、陰性対照に対して正規化（１００％）されたメラニン含有量の平均および標準偏差として示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図14A】ＩＢＭＸの陽性対照、陰性対照、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の１４日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の１４日間、ＩＢＸＭを伴うペプチドの７日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の７日間で処置された、ＭｅＷｏ細胞のチロシナーゼの相対的ｍＲＮＡ発現レベルを示す。データは、ＧＡＰＤＨおよび陰性対照発現に対して正規化（１００％）された２－ｄｄＣｔの平均および標準偏差として示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図14B】ＩＢＭＸの陽性対照、陰性対照、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の１４日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の１４日間、ＩＢＸＭを伴うペプチドの７日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の７日間で処置された、ＭｅＷｏ細胞のメラニン細胞誘発転写因子（ＭＩＴＦ）の相対的ｍＲＮＡ発現レベルを示す。データは、ＧＡＰＤＨおよび陰性対照発現に対して正規化（１００％）された２－ｄｄＣｔの平均および標準偏差として示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。

【図14C】ＩＢＭＸの陽性対照、陰性対照、ＩＢＸＭを伴うペプチド１４の１４日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の１４日間、ＩＢＸＭを伴うペプチドの７日間、ＩＢＭＸを伴うレチノイン酸の７日間で処置された、ＭｅＷｏ細胞のドーパクロムトートメラーゼ（ＤＣＴ）の相対的ｍＲＮＡ発現レベルを示す。データは、ＧＡＰＤＨおよび陰性対照発現に対して正規化（１００％）された２－ｄｄＣｔの平均および標準偏差として示される。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。

【図15A】ビヒクルのみ（対照）、ペプチド１３、またはペプチド１４で処置されたインビトロのヒトの皮膚モデルのＨ＆Ｅ染色された組織画像を示す。

【図15B】ビヒクルのみ（対照）、ペプチド１４、またはペプチド１３で処置された、ヒトの皮膚モデルの組織学的スコアの平均を示し、それらはそれぞれ、２１．００、２３．８３、および２３．４４であった。＊＊ｐ＜０．０１。

【図16】処置前のベースライン（左、ベースライン）および処置の１２週間後（右、１２週間）の、ペプチド１４で処置された顔の左側の例を示す。

【図17】対照、ペプチド１４、ペプチド１３、またはレチノイン酸で処置された、３Ｄ皮膚等価物の表皮層および真皮層の、ｐ１６、ＢＬＩＭＰ１、ＺＹＧ１１Ｂ、ＩＬ－８、Ｋｉ－６７、ＺＩＣ１、ＭＭＰ１、ＨＡＳ２の相対的ｍＲＮＡ発現レベルを示す。データを、ＧＡＰＤＨおよび未処置の対照に対して正規化した２－ｄｄＣｔとして提示する。＊ｐ＜０．０５。

【図18A】取得データとして、シノラブディス・エレガンス線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ｗｏｒｍ）（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）の寿命と健康寿命の延長を示し、１μＭまたは２μＭのいずれかのポリペプチドによる処置が、線虫のスラッシング運動（ｔｈｒａｓｈｉｎｇ）（パネルＡ）、ポンピング（パネルＢ）、および寿命の中央値（パネルＣ）を改善させたことを示している。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図18B】取得データとして、シノラブディス・エレガンス線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ｗｏｒｍ）の寿命と健康寿命の延長を示し、１μＭまたは２μＭのいずれかのポリペプチドによる処置が、線虫のスラッシング運動（ｔｈｒａｓｈｉｎｇ）（パネルＡ）、ポンピング（パネルＢ）、および寿命の中央値（パネルＣ）を改善させたことを示している。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図18C】取得データとして、シノラブディス・エレガンス線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ｗｏｒｍ）の寿命と健康寿命の延長を示し、１μＭまたは２μＭのいずれかのポリペプチドによる処置が、線虫のスラッシング運動（ｔｈｒａｓｈｉｎｇ）（パネルＡ）、ポンピング（パネルＢ）、および寿命の中央値（パネルＣ）を改善させたことを示している。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図19A】ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびポリペプチド配列ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（Ｄ、Ｅ、Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図19B】ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびポリペプチド配列ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（Ｄ、Ｅ、Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図19C】ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびポリペプチド配列ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（Ｄ、Ｅ、Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図19D】ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびポリペプチド配列ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（Ｄ、Ｅ、Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図19E】ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびポリペプチド配列ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（Ｄ、Ｅ、Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【図19F】ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびポリペプチド配列ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（Ｄ、Ｅ、Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。

【発明を実施するための形態】

【0026】

老化は、主に、組織の恒常性と完全性とを維持するための能力の機能低下に起因する可能性があり、おそらくは、ストレス条件下での生理学的要求に対する反応の低下と結びついている可能性がある。

【0027】

皮膚老化のモザイクモデルでは、老化細胞は、とりわけ、時間／年齢、ＵＶ曝露、および喫煙などの、内因性および外因性の刺激によって誘発され得る。このモデルによると、老化細胞は皮膚中に蓄積し、とりわけ、炎症性サイトカインから構成される、老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）を通じて局所的な微小環境を変化させることによって、組織老化を積極的に促進する。場合によっては、老化細胞は、表皮の幹細胞再生を損なうことによって、およびそれ以外の正常細胞の老化を促進することによって、皮膚老化をさらに促進する。したがって、老化細胞は、単なる皮膚老化の産物ではなく、老化過程において積極的役割を果たす存在である。

【0028】

皮膚機能障害は、生物の老化、および老化関連疾患と障害の進行に影響を及ぼし得る。例えば、皮膚の健康および通常のバリア機能は、皮膚バリアが損なわれている対応物と比較して、炎症性および加齢性のサイトカインＩＬ－１βおよびＩＬ－６のレベルが低いことに関連している可能性がある。ＩＬ－１βおよびＩＬ－６のレベル増加は、循環器疾患（ＣＶＤ）、アルツハイマー病、およびＩＩ型糖尿病を含む、いくつかの加齢に伴う障害を患う患者の血清中に観察される。場合によっては、高齢者の血清において、ＩＬ－６は、総死亡率、ＣＶＤ、癌、および肝臓関連死亡率に関連している可能性がある。場合によっては、表皮機能の回復は、循環するＴＮＦα、ＩＬ－１β、およびＩＬ－６のサイトカインレベル値を効果的に低下させることができる。

【0029】

ポリペプチド、ポリペプチドおよび他の成分を含む組成物、ならびにその使用の方法が、本明細書に提供される。ポリペプチド、およびポリペプチドを含む組成物は、（例えば対象の細胞における）抗老化効果を提供することができる。ポリペプチドは、アポトーシスを促進すること、ＤＮＡ修復を促進すること、および／またはＤＮＡ損傷によって誘発される老化を阻害することによって、細胞および組織における老化レベルの低下を促進することができる。抗老化効果の例としては、細胞再生速度の上昇、コラーゲン産生の増加、ヒアルロン酸合成酵素産生の増加、ＡＴＲＸ核病巣蓄積の減少、ｐ１６発現の減少、ＳＡＳＰ産生の低下、老化関連ベータ－ガラクトシダーゼ産生の減少、非均一的色素沈着の低下、表皮バリアの維持または改善、および経皮水分損失（ＴＥＷＬ）の低下を含むが、これらに限定されない。本明細書に提供されるポリペプチド、および当該ポリペプチドを含む組成物は、加齢に伴うおよび／または老化に関連する疾患または疾病を、阻害するか、防止するか、あるいは遅くしてもよい。さらに、ポリペプチド、および当該ポリペプチドを含む組成物は、健康寿命を増進してもよく、または改善してもよく、および／または寿命を促進してもよい。

【0030】

本明細書に記載される方法および組成物は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコル、および試薬に限定されず、そしてそのため変更され得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみについて記述することを目的としており、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本明細書に記載の方法および組成物の範囲を制限することを意図していないということも理解されよう。

【0031】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される時、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈による明確な別段の示唆がない限り、複数の言及を含む。

【0032】

別段の定義がない限り、本明細書で使用されているすべての技術的および科学的用語は、本明細書に記載される発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものに類似する、またはそれと同等である任意の方法、装置、および物質が、本明細書に記載の発明の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法、装置、および物質がここに記載されている。

【0033】

ペプチドまたはポリペプチにおいて、アミノ酸の適切な保存的置換は当業者に周知であり、通常、結果として生じる分子の生物活性を変化させることなくなされ得る。ワトソン等（１９８７， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ， ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ． Ｃｏ．， ｐ． ２２４）は、参照によって本明細書に組み込まれる。アミノ酸は、Ｌ－異性体またはＤ－異性体のいずれかであってもよい。アミノ酸残基がポリペプチド鎖の一部である時、アミノ酸のＤ－異性体は、所望の機能特性が保持される限り、Ｌ－アミノ酸残基に対して置換され得る。本明細書におけるアミノ酸は、それらの標準ＩＵＰＡＣの１文字コードまたは３文字コードによって表わされ得る。「Ｘ」または「Ｘｘｘ」によって表わされるアミノ酸残基は、当技術分野で周知の、自然発生のアミノ酸残基または非自然発生のアミノ酸残基のいずれか１つ、または近接残基の改変を指す。アミノ酸置換は、一般に単一の残基であり、そのような置換は、好ましくは、表１に規定されたものでなされるが、クラスター化された、または分散された複数の残基であってもよい。アミノ酸は、様々な、自然発生のアミノ酸残基または非従来型のアミノ酸残基で置き換えられ得る。そのような置換は、「保存的」なものとして分類されてもよく、その場合、ポリペプチドに含まれるアミノ酸残基は、極性、側鎖機能性、またはサイズのいずれかに関して同様の特性を有する、別の自然発生のアミノ酸と置き換えられる。追加は、１以上の自然発生のアミノ酸残基または非従来型アミノ酸残基の追加を包含する。欠失は、１以上のアミノ酸残基の欠失を包含する。

【0034】

【表1】

【0035】

本開示によって包含される置換は「非保守的」であってもよく、この場合、ポリペプチド中に存在するアミノ酸残基は、異なる群からの自然発生のアミノ酸などの、異なる性質を有するアミノ酸で置換される（例えば、電荷を有するアミノ酸または疎水性アミノ酸をアラニンで置換する）、あるいは代替的に、自然派生のアミノ酸が非従来型アミノ酸で置換される。

【0036】

本明細書で使用される時、用語「アナログ（複数可）」は、異なる有機体からの同じタンパク質などのポリペプチドと、同じ構造または機能（例えば受容体への結合）を保持する組成物を指す。アナログの例は、本明細書における、模倣薬またはペプチド模倣薬、ペプチド、小さな有機化合物と無機化合物、および大きな有機化合物と無機化合物、ならびにポリペプチドの誘導体と変異体とを含む。そのような誘導体および変異体は、１以上のアミノ酸の欠失、追加、置換、または側鎖改変によって、自然発生のポリペプチドとは異なるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ペプチドアナログは、アミノ酸の１以上が側鎖改変を経験したペプチドである。本開示によって企図される側鎖改変の例は、アミノ基の改変を含み、例えば、アルデヒドによる反応と、その後のＮａＢＨ_４での還元による還元的アルキル化；メチルアセトイミダート（ｍｅｔｈｙｌａｃｅｔｉｍｉｄａｔｅ）によるアミジン化；無水酢酸によるアシル化；シアナートによるアミノ基のカルバモイル化；２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化；無水コハク酸およびテトラヒドロフタル酸無水物によるアミノ基のアシル化；および、ピリドキサール－５－ホスフェートによるリジン化と、ＮａＢＨ_４での還元によるピリドキシル化、による改変を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドアナログは、アルギニン残基のグアニジン基が、２，３－ブタンジオン、フェニルグリオキサール、およびグリオキサールなどの試薬による、複素環凝縮産物の形成によって改変されたもの、カルボキシル基が、Ｏ－アシルイソ尿素形成を介するカルボジイミドと、その後の、例えば対応するアミドへの誘導体化によって改変されたもの、スルフヒドリル基が、以下の方法、例えば、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化；システイン酸への過ギ酸酸化；他のチオール化合物による混合ジスルフィドの形成；マレイミド、無水マレイン酸あるいは他の置換マレイミドによる反応；４－クロロ水銀安息香酸および４－クロロ水銀フェニルスルホン酸、塩化フェニル水銀、２－クロロ水銀－４－ニトロフェノール、および他の水銀剤を使用する水銀誘導体の形成；アルカリ性ｐＨでのシアナートによるカルバモイル化、などの方法によって、改変され得るもの、である。本明細書におけるアナログのいずれかにおいて、システイン残基の任意の改変は、ペプチドが必要なジスルフィド結合を形成する能力に、好ましくは影響しない。いくつかの実施形態では、ペプチドアナログは、例えば、Ｎ－ブロモスクシンイミドによる酸化、または２－ヒドロキシ－５－ニトロベンジル臭化物あるいはサルフェニル（ｓｕｌｐｈｅｎｙｌ）ハロゲン化合物によるインドール環のアルキル化；３－ニトロチロシン誘導体を形成するための、テトラニトロメタンによるニトロ化によって変化したチロシン残基：ヨード酢酸誘導体によるアルキル化、またはジエチルピロカーボネートによるＮ－カルベトキシル化によって遂行されたヒスチジン残基改変のイミダゾール環；例えば４つの位置のヒドロキシル化によって改変されたプロリン残基；完全にグリコシル化していない分子から改変されたグリコシル化への、グリコシル化変異体；および、異なる宿主細胞中の組み換え分子の発現からの結果としての、変化したグリコシル化パターンによって改変された、トリプトファン残基を含む。

【0037】

用語「単離された」は、その天然状態から改変された事を意味し；つまり、それが自然界で生じるものである場合に、変更されたか、またはその元の環境から取り除かれたか、あるいはその両方を意味する。当該用語が本明細書で使用される時、例えば、自然状態で生きている動物に自然に存在する、自然発生のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていないが、その自然の状態の共存物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されている。

【0038】

本明細書で使用される時、用語「タンパク質」、「ペプチド」、「オリゴペプチド」、または「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって共に接合された２以上のアミノ酸を含む、あらゆる組成物を指す。ポリペプチドは、しばしば、２０の自然発生のアミノ酸と一般的に呼ばれる２０のアミノ酸以外のアミノ酸を含有しており、そして、末端アミノ酸を含む多くのアミノ酸が、グリコシル化および他の翻訳後修飾などの自然なプロセスによって、または当技術分野において公知である化学改変技術によってのいずれかで、所与のポリペプチドにおいて改変されていてもよいことが理解されよう。本開示のポリペプチド中に存在し得える、既知の改変は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラボノイドまたはヘム部分の共有結合、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ－カルボキシル化、グリケーション、グリコシル化、グリコシルホスファチジルイノシトールＧＰＩ膜アンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解性プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）などのアミノ酸のポリペプチドへの転移ＲＮＡ媒介性の添加、及びユビキチン化を含むが、これらに限定されない。用語「タンパク質」はまた、ポリペプチド（例えば配列番号：１－７）およびスペーサーの、交互に起こるリピートからなる、線形または非線形のポリペプチドを指す、「人工タンパク質」を含む。ポリペプチドとスペーサーの交互のリピートをコードするＤＮＡ構築物は、当技術分野で周知の方法を使用して合成され得る（Ｒｏｔｚｓｃｈｋｅ等， １９９７， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：１４６４２－１４６４７を参照）。

【0039】

ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または他の組成物を説明するために本明細書で使用される時、用語「精製された」は、通常自然界で関連している１以上の化合物から分離された、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または他の組成物を指す。そのような他の組成物は、例えば、他のポリペプチドまたはポリヌクレオチド、炭水化物、脂質などであり得る。用語「精製された」はまた、本開示の単量体ポリペプチドのオリゴマー形態からの分離を特定するために使用され得、その例としては、ホモ二量体、ヘテロ二量体、三量体などが挙げられる。実質的に純粋なポリペプチドは、一般に、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の重量／重量のポリペプチドサンプル、あるいはより好ましくは、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％の重量／重量のポリペプチドサンプルを含む。好ましい実施形態として、本開示のポリペプチドは、異種のポリペプチドに対して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の純度である。

【0040】

本明細書で使用される時、用語「対象」または「患者」は、動物を包含する。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物であってもよい。哺乳動物の例は、限定されないが、以下の哺乳動物のクラスの任意のメンバー：ヒト、チンパンジーなどのヒト以外の霊長類、および他の類人猿ならびにサル種、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、およびブタなどの家畜；ウサギ、イヌ、およびネコなどの飼育動物；ラット、マウス、およびモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物を含む。哺乳動物はヒトであり得る。

【0041】

本明細書で使用される時、用語「処置する」、「処置すること」、または「処置」は、疾患または疾病の少なくとも１つの症状について、その発症を遅らせるか、その発生を低下させるか、またはそれを改善すること、追加の症状を防ぐこと、疾患または疾病を阻害すること、例えば、疾患または疾病の進行を抑えること、疾患または疾病を軽減すること、疾患または疾病の退行を引き起こすこと、疾患または疾病によって引き起こされる状態を軽減すること、あるいは疾患または疾病の症状を予防的におよび／または治療的に止めることを含む。

【0042】

本明細書で使用される時、用語「薬学的に許容可能な」は、限定されないが、化合物の生物学的活性または特性を抑制せず、かつ、比較的無毒である、塩、担体、または希釈剤を含む物質を指し、つまり、当該物質は、望ましくない生物学的作用を引き起こすことなく、または、それが含まれる組成物の成分のいずれに対しても有害に相互作用することなく、対象に投与され得る。

【0043】

本明細書で使用される時、用語「担体」は、細胞または組織への化合物の取り込みを促進する比較的無毒な化合物または薬剤を指す。

【0044】

本明細書で使用される時、用語「希釈剤」は、送達前に所望の化合物を希釈するために使用される化合物を指す。希釈剤はまた、より安定した環境を提供できるので、化合物を安定させるために用いられることもある。（ｐＨの制御または維持をもたらし得る）緩衝液中に溶解した塩は、限定されないが、リン酸緩衝生理食塩溶液を含む、当該技術分野の希釈剤として使用される。

【0045】

本明細書で使用される時、用語「有効な量」または「治療上有効な量」は、処置されている疾患または疾病の症状の１以上を、ある程度まで軽減する、投与されている薬剤または化合物の十分な量を指す。その結果として、疾患の徴候、症状、または原因が減少および／または軽減され得るか、または、生物系の任意の他の所望の変化がもたらされ得る。例えば、治療用途のための「有効な量」は、疾患症状を臨床的に有意に減少させるために必要とされる、本明細書に開示される通りの化合物を含む組成物の量である。任意の個体における適切な「有効な」量は、用量増加試験などの技術を使用して決定されてもよい。

【0046】

老化細胞は、老化関連ベータ－ガラクトシダーゼ（ＳＡ－ＢＧａｌ）産生、ｐ１６発現、ＳＡＳＰの提示、および／または、核中のアルファサラセミア／精神遅滞Ｘ－連鎖クロマチンリモデリングタンパク質（ＡＴＲＸ）病巣蓄積によって、識別することができる。老化細胞をも識別することができる機能的改質は、限定されないが、増殖能力の減少および分裂促進的刺激に対する抵抗を含む。

【0047】

老化は、通常、組織の恒常性と完全性とを維持する能力の機能低下に起因し、ストレス条件下での生理学的要求に対する反応の低下と結び付けられる。

【0048】

皮膚老化に関して、モザイクモデルが提案され、そこでは、老化細胞が、他の刺激の中でもとりわけ、時間／年齢、ＵＶ曝露、および喫煙などの、内因性および外因性の刺激によって誘発される。このモザイクモデルによると、老化細胞は皮膚中に蓄積し、とりわけ、炎症性サイトカインから構成される、老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）を通じて局所的な微小環境を変化させることによって、組織老化を積極的に促進する。老化細胞は、表皮の幹細胞再生を損なうことによって、およびそれ以外の正常細胞の老化を促進することによって、皮膚老化を促進し得ることが示されている。したがって、老化細胞は、単なる皮膚老化の産物ではなく、老化過程において積極的役割を果たす存在であり得る。

【0049】

ポリペプチドは、多機能的挙動などの特性を有し、その特性によって、セノ治療を含む化粧用または治療用用途に有益なものとなっている。加齢に伴って観察される皮膚の機能障害は、老化関連の疾患および障害の進行に影響を及ぼし得る。

【0050】

ポリペプチド
本明細書で提供されるポリペプチドおよびポリペプチドを含む組成物は、セノ治療の効果を提供することができ、例えば、ポリペプチドは、老化を止める、老化を防止する、老化を阻害する、老化を逆転させる、老化細胞を破壊する、老化細胞を死滅させる、老化細胞を除去する、または 老化細胞の蓄積の負担または影響を減少させる適切なメカニズムなどによって老化を低下させ得る。そのようなポリペプチドは、場合によっては、アミノ酸配列ＬＫＧＩ（配列番号：５）を含み得る。そのようなポリペプチドを含む組成物は、セノ治療の効果を提供するために用いられ得、または使用され得る。

【0051】

ポリペプチド（例えば、セノ治療用ポリペプチド）は、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７の、３８、３９、４０、または以上のアミノ酸を含み得る。場合によっては、ポリペプチドは、最大で４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００のアミノ酸長であり得る。場合によっては、ポリペプチドは、４～２５、４～１５、または４～１０のアミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上のアミノ酸を含み得る。ある実施形態では、ポリペプチドは、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０未満、またはそれら以下のアミノ酸を含む場合がある。

【0052】

セノ治療の効果を提供し得るポリペプチドの例は、以下の表２に提供される。

【0053】

【表2】

【0054】

ポリペプチドは、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列を含み得る単離されたまたは組換えられたポリペプチドであり得る。ポリペプチドに含まれたアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（アルギニン、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（Ｇｌｕ、Ｑ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、またバリン（Ｖａｌ、Ｖ）を含み得る天然アミノ酸を含むことができる。

【0055】

場合によっては、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列を含む単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、第１の配列、ＥＴＡＫＨＷＬＫＧＩ（配列番号：１）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ここで、Ｘ_１はＥであり、Ｘ_２はＴであり、Ｘ_４はＫであり、Ｘ_６はＷであり、Ｘ_７はＬであり、Ｘ_９はＧであり、およびＸ_１０はＩであり、および、（ｉ）Ｘ_３はＳではない、または、（ｉｉ）Ｘ_５が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_８はＧではない、または、（ｉｉｉ）Ｘ_８が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_５はＮではない、または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）のいずれか１つで、配列は、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を含み得る。場合によっては、単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、ＥＴＡＫＨＷＬＫＧＩ（配列番号：１）の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本開示は、さらに上記のペプチド模倣薬などのアナログを企図する。

【0056】

場合によっては、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列を含む単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、第２の配列、ＡＴＡＫＡＷＬＫＧＩ（配列番号：２）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ここで、Ｘ_１はＡであり、Ｘ_２はＴであり、Ｘ_３はＡであり、Ｘ_４はＫであり、Ｘ_５はＡであり、Ｘ_６はＷであり、Ｘ_７はＬであり、Ｘ_８はＫであり、Ｘ_９はＧであり、およびＸ_１０はＩである。そのような組換えられたポリペプチドは、随意に１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を含み得る。場合によっては、単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、ＡＴＡＫＡＷＬＫＧＩ（配列番号：２）の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本開示は、さらに上記のペプチド模倣薬などのアナログを企図する。

【0057】

場合によっては、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列を含む単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、第３の配列、ＫＬＫＧＩＬＲＧＡＡ（配列番号：３）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ここで、（ｉ）Ｘ_９が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_３はＮではない、または、（ｉｉ）Ｘ_３が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_９はＳではない、または、（ｉｉｉ）Ｘ_４が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_７はＬではない、または、（ｉｖ）Ｘ_７が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_４はＳではない、または（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）のいずれか１つで、配列は、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を含み得る。場合によっては、単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、ＫＬＫＧＩＬＲＧＡＡ（配列番号：３）の配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本開示は、さらに上記のペプチド模倣薬などのアナログを企図する。

【0058】

場合によっては、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列を含む単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、第４の配列、ＷＬＫＧＩＬＲＥＡＡ（配列番号：４）に対して少なくとも、Ｘ_３８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ここで、Ｘ_１はＷであり、Ｘ_２はＬであり、Ｘ_３はＫであり、Ｘ_４はＧであり、Ｘ_５はＩであり、Ｘ_６はＬであり、Ｘ_７はＲであり、Ｘ_８はＥであり、Ｘ_９はＡであり、およびＸ_１０はＡである。そのような組換えポリペプチドは、随意に１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を含み得る。場合によっては、単離されたまたは組換えられたポリペプチドは、ＷＬＫＧＩＬＲＥＡＡ（配列番号：４）の配列に対して少なくとも、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本開示は、さらに上記のペプチド模倣薬などのアナログを企図する。

【0059】

場合によっては、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＬＫＧＩ（配列番号：５）、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）、またはＷＬＫＧＩ（配列番号：７）を含み得る（下記の表３を参照））

【0060】

【表3】

【0061】

配列番号：５－７のうちの１つを含むポリペプチドは、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、または５０のアミノ酸を含む場合がある。いくつかの実施形態では、配列番号：５－７のうちの１つを含むポリペプチドは、最大で４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００のアミノ酸を含む場合がある。配列番号：５－７は、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、あるいはポリペプチドのＮ末端とＣ末端の間にあってもよい。場合によっては、ポリペプチドは、を超える配列番号：５－７を含み得る。

【0062】

ポリペプチドは、単離された、実質的に純粋な、または精製されたものであり得る。場合によっては、単離されたポリペプチドは、（ｉ）化学的に合成され、または（ｉｉ）宿主細胞中で発現され、および関連するおよび夾雑タンパク質（ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）から離れて精製され得る。場合によっては、ポリペプチドは、発現ベクターの一部の発現産物として宿主細胞中に存在し得、タンパク質部分に連結することができ、または化学的部分に連結することができる。

【0063】

ペプチド模倣薬を含む開示されたポリペプチドのアナログは、セノ治療の効果を提供し得る。本明細書に開示されるペプチドおよびポリペプチドは、ペプチド模倣薬等価物を含む場合がある。

【0064】

場合によっては、上記で議論されるように、ポリペプチドは、本明細書に記載のポリペプチドに対して配列同一性を有し得る。ポリペプチドの配列同一性は、２つのポリペプチド配列の正確なアミノ酸対アミノ酸の対応を指し得る。場合によっては、配列同一性を決定するための技術は、アミノ酸配列を決定し、アミノ酸配列を第２のアミノ酸配列と比較することを含み得る。２つ以上の配列は、それらのパーセント同一性によって、または２つの整列された配列間の完全一致の数をより長い方の配列の長さで除算し、そして１００で乗算することによって比較され得る。パーセント同一性はさらに、例えば、国立衛生研究所から入手可能な、例えば、バージョン２．２．９を含む、高度なＢＬＡＳＴコンピュータプログラムを使用して配列情報を比較することによって決定され得る。ＢＬＡＳＴプログラムは、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２６４－２２６８（１９９０）のアライメント方法に基づき、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０（１９９０）、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：５８７３－５８７７（１９９３）、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９９７）で議論される通りである。プログラムは、比較されているポリペプチドの全長にわたるパーセント同一性を決定するために使用されてもよい。デフォルトのパラメータは、例えば、ｂｌａｓｔｐプログラム中の短いクエリ配列を使用して検索を最適化するために提供される。プログラムは、さらにＷｏｏｔｔｏｎ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒｈｅｎ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １７：１４９－１６３（１９９３）のＳＥＧプログラムによって決定されるようなクエリ配列のマスク・オフ・セグメントに対してＳＥＧフィルターの使用を可能にする。

【0065】

組成物
本明細書に開示されるのは、本明細書に記載されたポリペプチドの１つ以上を含む組成物である。いくつかの実施形態では、組成物はセノ治療用であってもよい。場合によっては、組成物を、加齢性疾患または疾病、または加関連性障害を処置する、例えば、加齢性疾患または疾病あるいは加齢関連障害の発症を遅らせる、発生を低減する、または改善するために使用されてもよい。場合によっては、組成物は、組織病変を処置する、組織病変、例えば、日光曝露によるＵＶ損傷、の発症を遅らせ、発生を低下させ、または改善するために使用され得る。

【0066】

場合によっては、組成物は、例えば、有効量のポリペプチドを、単独で、または１つ以上のビヒクル（例えば、治療的に許容可能な組成物または治療的に許容可能な担体）および他の治療的に有効な化合物と組み合わせて含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの有効な量は、組成物で処置された細胞、組織、または生物を含むが、これらに限定されない、対象に対して所望の効果を有することを指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの有効な量は、処置される対象に対して全身的に最小限なまたは低い効果を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの有効な量は、処置領域またはその近くで局所的に最大効果を発揮する。いくつかの実施形態では、製剤は、表皮から真皮まで局所的に浸透するように構成することができる。いくつかの実施形態では、製剤は、表皮層を局所的に浸透するように構成される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの有効な量は、少なくとも１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、少なくとも１０μＭ、少なくとも２５μＭ、少なくとも５０μＭ、少なくとも７５μＭ、少なくとも１００μＭ、少なくとも１５０μＭ、少なくとも２００μＭ、少なくとも２５０μＭ、少なくとも３００μＭ、少なくとも３５０μＭ、少なくとも４００μＭ、少なくとも４５０μＭ、または少なくとも５００μＭである。いくつかの例では、ポリペプチドの有効な量は、約１ｎＭ～約１０００ｎＭ、約５ｎＭ～約７５０ｎＭ、約２５ｎＭ～約７５０ｎＭ、または約５０ｎＭ～約５００ｎＭである。いくつかの例では、ポリペプチドの有効な量は、約１μＭ～約５００μＭ、約２５μＭ～約２５０μＭ、約５０μＭ～約２００μＭ、または約７５μＭ～約１２５ｎＭである。いくつかの例では、ポリペプチドの有効な量は、最終組成物の少なくとも０．００００１％、０．００００５％、０．０００１％、０．０００５％、０．００１％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも１．５％、少なくとも２％、少なくとも２．５％、少なくとも３％、少なくとも３．５％、少なくとも４％、少なくとも４．５％、または少なくとも５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの例では、ポリペプチドの有効な量は、最終組成物の約０．００００１％～約５％、０．００００１％～約１％、０．００００１％～約０．１％、約０．００１％～約５％、約０．００５％～約４％、約０．００５％～約３％、約０．００５％～約２％、約０．００５％～約１％、または約０．００５％～約０．５％である。いくつかの実施形態では、インビボ適用に対するポリペプチドの有効な量は、インビトロ適用に使用される量の少なくとも２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００倍であリ得る。ポリペプチドの有効な量は、ポリペプチドの真皮への浸透をもたらし、いくつかの例では、約１％の浸透、約２％の浸透、約４％の浸透、約５％の浸透、または約１０％の浸透をもたらす。いくつかの例では、皮膚上に適用された組成物中のポリペプチドの最大１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％は、真皮に浸透する。いくつかの例では、皮膚上に適用された組成物中のポリペプチドの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％は、真皮に浸透する。いくつかの例では、インビボ適用に使用される量は、インビトロの浸透試験の皮膚への浸透の量の倍数である。いくつかの例では、インビボの適用で使用される量の倍数は、インビトロの皮膚への浸透の量の少なくとも２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、または１０００倍である。

【0067】

場合によっては、本明細書に記載される組成物は、１つ以上の追加の栄養補助用、化粧用、治療用、または医薬的処置（例えば、同時投与、連続投与、またはともに製剤化されている）で投与することができる。

【0068】

いくつかの実施形態では、製剤は１つ以上の処置と共に使用されてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、音波処置、超音波処置、ＬＥＤ処置、光線処置、電気処置、高周波処置、または他の皮膚科学的処置とともに使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物は処置の前に、処置の後、あるいは処置の間に皮膚に適用される。

【0069】

組成物は、外用適用のために製剤化することができる。例えば、組成物は皮膚上に適用のために製剤化されることがある。いくつかの実施形態では、組成物は外用の補足物として構成される。外用適用のためなどの製剤は、クリーム、軟膏、ゲル、液体、粉末、ローション、セラム、エマルジョン、モイスチャライザ、フォーム、フェースマスク、ムース、エアロゾル、噴霧剤、クレンザー、トナー、外用のパッチ、ヒドロゲルパッチ、あるいはシャンプーであり得る。局所的に適用されるポリペプチドは、患部領域、将来影響を受ける可能性のある領域、対象の一部、または実質的に対象全体に適用することができる。場合によっては、局所的処置は、緩衝液、別の局所的処置、クリーム、あるいはモイスチャライザとともに適用することができる。

【0070】

外用適用などのための組成物は、化粧品組成物として製剤化することができる。化粧品組成物の例は、メイクアップ、ファンデーション、日焼け止め、アフターサンローション、およびアンチエイジングスキンケア製品を含むスキンケア製品を含み得る。場合によっては、メイクアップ組成物は、顔に色を残すことができ、ファンデーション、ブロンザー、マスカラ、コンシーラー、アイライナー、眉色、アイシャドウ、ブラッシャー、リップカラー、パウダー、固体エマルジョンコンパクト、または他のメイクアップアイテムを含み得る。場合によっては、スキンケア製品は、皮膚の処置またはケア、あるいは何らかの形で保湿、改善、再生の加速、保護、損傷の防止、または皮膚の洗浄に使用される製品であり得る。スキンケア製品は、クリーム、外用パッチ、ヒドロゲルパッチ、経皮パッチ、軟膏、ゲル、液体、粉末、ローション、セラム、エマルジョン、オイル、クレー、モイスチャライザ、フォーム、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、クレンザー、トナー、またはシャンプーとして適用され得る。場合によっては、スキンケア製品は、接着剤、包帯、角質除去剤、歯磨き粉、モイスチャライザ、ローション、プライマー、口紅、リップクリーム、無水閉塞性保湿剤、制汗剤、デオドラント、個人用のクレンジング製品、閉塞性薬物送達パッチ、ネイルポリッシュ、パウダー、ティッシュ、ワイプ、ヘアコンディショナー、またはシェービングクリームの形態であり得る。

【0071】

本明細書で企図される組成物はまた、食用であり得、すなわち、組成物がヒトによって安全に消費されるように製剤化されるように、食用サプリメントまたは飲料として製剤化され得る。場合によっては、食用組成物は、加齢性疾患または疾病あるいは加齢関連障害を処置するのに治療的に有効であり得る。場合によっては、食用サプリメントは、錠剤、カプセル、チューズ、グミ、粉末、フードバー、ミールリプレイスメントバー、または食品添加物として構成され得る。場合によっては、飲料は、水、ソーダ、お茶、コーヒー、牛乳、ジュース、シェイク、飲み物、またはその他の食用液体を含むように製剤化され得る。

【0072】

場合によっては、組成物は、皮膚コンディショニング剤（例えば、保湿剤、角質除去剤、皮膚軟化剤、またはハイドレーター）を含み得る。保湿剤は、保湿、スケーリングの低減、または皮膚からの蓄積したスケールの除去を刺激するためのものであり得る。角質除去剤は、表面から古い皮膚細胞を除去するためのものであり得、物理的角質除去剤または化学的角質除去剤であり得る。皮膚軟化剤は、乾燥肌、ざらざらした肌、または薄片状の肌を柔らかくすることができる製剤または成分であり得る。ハイドレーターは、保湿、スケーリングの低減、または皮膚からの蓄積したスケールの除去を刺激するためのものであり得る。場合によっては、皮膚軟化剤は、水分損失を防ぎ、肌を柔らかくし、なだめる効果を有する薬剤である。いくつかの実施形態では、皮膚軟化剤は、植物油の少なくとも１つ、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸（エミュー、ミンクおよびラノリンを含む動物油）、トリグリセリド、安息香酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカド油、プラムシードオイル、プラカシーオイル、カリコフィラムスプルカナムオイル（Ｃａｌｙｃｏｐｈｙｌｌｕｍ ｓｐｒｕｃｅａｎｕｍ）、アーモンドオイル、アルガンオイル、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ホホババター、ホホバ油、Ｓｐｅｃｔｒａｓｔａｔ Ｇ２、セラミドおよび藻類抽出物を含んでもよい。場合によっては、組成物は、皮膚ハイドレーターとも呼ばれる皮膚用保湿剤を含む。場合によっては、皮膚用保湿剤は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物を含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％の皮膚コンディショニング剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１％～約７０％、約１％～約６０％、約１％～約５０％、約５％～約５０％、約５％～４５％、または約５％～４０％の皮膚コンディショニング剤を含む。

【0073】

組成物は、皮膚の光沢のある外観を改善または調節することができる光沢制御剤を含み得る。光沢制御剤は本来多孔性であり得る。そのような薬剤は、余分な水分を吸収し、輝きの外観を減らすためのリザーバーを提供し得る。光沢制御剤は、シリカ、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、タルク、絹雲母および様々な有機的なコポリマーであり得る。特に有効な光沢制御剤は、アルカリ（ＩＡ）金属、アルカリ土類（ＩＡ）金属、または遷移金属、およびシリカ（二酸化ケイ素）とカーボネートまたはシリケートとの反応によって形成されるシリケート、またはカーボネートを含み得る。好ましい光沢制御剤は、ケイ酸カルシウム、アモルファスシリカ、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸亜鉛、ベントナイト粘土、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0074】

組成物は、皮膜の持続性および皮膚への接着を助けることができる皮膜形成剤を含み得る。皮膜形成剤は、組成物の長期摩耗および非転写性能を改善することができる。皮膜形成剤は、水溶性、水不溶性、または水分散性であり得る。皮膜形成剤は、１）有機シリコーン樹脂、フッ素化シリコーン樹脂、有機シリコーン樹脂のコポリマー、トリメチルシロキシシリケート、ＧＥのシリコーン樹脂のコポリマー、ＳＦ１３１８（シリコーン樹脂およびイソステアリン酸コポリマーの有機エステル）およびＣＦ１３０１（シリコーン樹脂およびアルファメチルスチレンコポリマー）、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇの シリコーン樹脂の圧力高感度接着剤コポリマーと各種ＰＤＭＳ（ＢＩＯ－ＰＳＡシリーズ）、および２）アクリルおよびメタクリル酸ポリマーおよび樹脂、シリコーン－アクリレートタイプのコポリマー、および３Ｍのシリコーンとポリマー、信越化学工業のＫＰ５４５、アルキル－アクリレートコポリマー、信越化学工業のＫＰ５６１および５６２を含むフッ素化バージョン、３）Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｌａｂｓのデケン／ブテンコポリマー、４）ポリビニルベース材料、ＰＶＰ、ＰＶＰ／ＶＡ（ＩＳＰのＡｎｔａｒｏｎ／Ｇａｎｅｘ（ＰＶＰ／トリアコンテンコポリマー）、ＢＡＳＦのＬｕｖｉｓｋｏｌ材料を含む）、ポリウレタン、Ｐｏｌｙｄｅｒｍ ＰＥ／ＰＡ、Ｐｏｌｙｄｅｒｍ ＰＰＩ－ＳＩ－ＷＳ、Ｐｏｌｙｄｅｒｍ ＰＰＩ－ＧＨ、ＢＡＳＦからのＬｕｖｉｓｅｔＰ．Ｕ．Ｒ．を含むがこれらに限定されないＡｌｚｏのＰｏｌｙｄｅｒｍシリーズ、６）ポリクオタニウム材料、ＢＡＳＦからのＬｕｖｉｑｕａｔシリーズ、７）アクリレートコポリマーおよびアクリレート／アクリルアミドコポリマー、ＬｕｖｉｍｅｒおよびＵｌｔｒａｈｏｌｄシリーズ、どちらもＢＡＳＦから入手可能、８）スチレンベース材料、および９）セルロースおよびセルロースベース材料を含むキトサンおよびキトサンべース材料であり得る。

【0075】

組成物は増粘剤または乳化剤を含み得る。増粘剤は、化粧品組成物中で使用される液体ベース材料の粘度を増大させるために使用されてもよい。特定の増粘剤の選択は、所望の組成物のタイプ（例えば、ゲル、クリーム、ローション、またはワックスベース）、所望のレオロジー、使用される液体ベース材料、および組成物に使用される他の材料に依存し得る。増粘剤または乳化剤の例は、カンデリラ、カルナウバワックス、蜜ろう、鯨蝋、カルナウバ、ベイズベリー、モンタン、オゾケライト、セレシン、パラフィン、フィッシャートロプシュワックスなどの合成ワックス、シリコーンワックス（Ｄｏｗ ＣｏｒｎｉｎｇからのＤＣ ２５０３）、微結晶ワックスなどのワックス状の材料、石鹸、例えば、高脂肪酸、１２～２２個の炭素原子を有する酸のナトリウム塩やカリウム塩、高脂肪酸のアミド、アルキロールアミンの高脂肪酸アミド、ジベンズアルデヒド－モノソルビトールアセタール、酢酸塩、プロピオン酸塩および乳酸塩のアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩、および、これらの混合物を含み得る。さらに有用なのは、ポリマー材料、例えば、ローカストビーンガム、アルギン酸ナトリウム、カゼイン酸ナトリウム、卵アルブミン、ゼラチン寒天、カラゲーニン・ゴム・アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、マルメロ種子抽出物、トラガカントゴム、でんぷん、化工でんぷん等、半合成ポリマー材料、例えば、セルロース、セルロース誘導体、セルロースエーテルヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ・プロピルメチル・セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、グアーガム、ヒドロキシプロピルグアーガム、可溶性でんぷん、カチオンセルロース、カチオングアー、そして合成ポリマー材料、例えば、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール・ポリアクリル酸ポリマー、ポリ（アクリル酸）、カルボマー、ポリメタクリル酸ポリマー、ポリ酢酸ビニルポリマー、ポリ塩化ビニルポリマー、ポリ塩化ビニリデンポリマーとなどである。例えば、ベントナイトなどのケイ酸アルミニウム、あるいはポリエチレングリコールとポリエチレングリコールステアラート、またははジステアラートの混合物などの無機増粘剤も使用されてもよい。乳化剤は、親水性および疎水性の成分がエマルジョン内で分離しないようにするのを支援するために使用されてもよい。場合によっては、乳化剤がＯｌｉｖｅｍ、Ｏｌｉｗａｘ ＬＣ、ポリソルベート、ラウレス－４およびカリウム・セチルサルフェートを含むが、それらに限定されない。

【0076】

化粧品組成物は、外観に一時的な変化を提供し得、または外観に長期的な変化を提供し得る。場合によっては、化粧品組成物は、外観の短期的な変化（例えば、皮膚の色の沈着またはモッチリ感）、ならびに外観の長期的な変化（例えば、しみの減少、微細線な出現、しわの出現、または外観に影響を与える可能性のあるその他の特徴）を提供するために製剤され得る。

【0077】

組成物は、本明細書に開示されるように、ポリペプチドと共に適用される場合に相加効果または相乗効果を有する添加剤を含み得る。例えば、ポリペプチドおよび添加剤を含む組成物は、老化、および加齢性疾患または疾病あるいは加齢関連障害（例えば、１つ以上の症状の発症を遅らせる、発生を減らす、または改善する）に対して、添加剤、ポリペプチドの個々の効果、または添加剤とポリペプチドの個々の効果の合計より大きな影響を及ぼし得る。添加剤は、さらなるポリペプチド、グリコサミノグリカン、炭水化物、ポリフェノール、タンパク質、脂質、水性または油性植物抽出エキス、核酸、抗体、低分子、ビタミン、保湿剤、皮膚軟化剤、あるいは別の適切な添加剤であり得る。いくつかの実施形態では、組成物はＵＶブロッカーを含む。いくつかの実施形態では、ＵＶブロッカーは、アミノ安息香酸、アボベンゾン、シノキサート、ジオキシベンゾン、ホモサレート、メラジメート、オクトクリレン、オクチノキサート、オクチサレート、オキシベンゾン、パジメートＯ、エンスリゾール、スリソベンゾン、二酸化チタン、サリチル酸トロラミン、および酸化亜鉛を含んでもよいが、それらに制限されない。

【0078】

しばしば、本明細書に提供される方法、システム、および組成物はビタミンを含む。いくつかの例では、ビタミンは、皮膚鎮静の効果、皮膚回復の効果、皮膚補充の効果、および／または保湿効果を提供する。いくつかの例では、ビタミンは酸化防止効果を提供する。いくつかの例では、ビタミンは皮膚軟化剤として作用する。いくつかの例では、ビタミンは、毛穴の拡大、肌の色むら、微細線、くすみ、および／または肌の表面の弱さの外観を改善する。いくつかの例では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミドおよびそれらの混合物である。いくつかの例では、組成物は、ビタミンの誘導体を含む。いくつかの例では、ビタミンの誘導体は、組成物中のビタミンの安定性、および／または組成物中の他の成分とビタミン誘導体の組成物適合性を改善するために使用される。いくつかの例では、組成物は、ビタミンＢ３またはその誘導体、およびビタミンＥまたはその誘導体を含む。いくつかの例では、組成物は、ナイアシンアミドおよびビタミンＥまたはその誘導体を含む。いくつかの例では、組成物は、ビタミンＣまたはその誘導体、ビタミンＢ３またはその誘導体、およびビタミンＥまたはその誘導体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも０．０１％、０．０５％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％のビタミンを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約５％、約１％～１０％、または約１％～５％のビタミンを含む。

【0079】

局所的投与用の組成物は、さらに担体を含み得る。担体は、溶液、エマルジョン、軟膏、オイル、またはゲル基剤であってもよい。ゲル基剤は、例えば、下記の１つ以上を含んでもよい：ペトロラタム、ラノリン、ＰＥＧ（ｓ）、みつろう、ミネラルオイル、水およびアルコールなどの希釈液、乳化剤、および／または安定化剤。増粘剤は、局所的投与のために治療用組成物中に存在し得る。経皮投与に意図される場合、組成物は、経皮パッチまたはイオントフォレーシスデバイスを含み得る。場合によっては、生物分解性のマイクロスフェア（例えば、ポリ乳酸）も組成物の担体として使用されてもよい。場合によっては、経皮パッチは、製剤を皮膚の表皮の層に送達するために準備される。場合によっては、経皮パッチは、製剤を皮膚の表皮の層および皮層に送達されるために準備される。場合によっては、製剤は、対象において全身的に最小限に送達されるように調製され、または対象の血流に直接送達されることを意図されていない。

【0080】

組成物は、さらに緩衝液などの１つ以上の希釈剤、またはアスコルビン酸などの１つ以上の抗酸化剤、低分子量ポリペプチド、ポリペプチド、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストリンを含む炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、グルタチオンおよび他の安定剤を含み得る。中性緩衝生理食塩水、または非特異的血清アルブミンと混合した生理食塩水は、例示的な希釈剤である。生成物は、希釈剤として適切な賦形剤溶液（例えば、スクロース）を使用して凍結乾燥物として製剤化可能である。

【0081】

組成物は、治療用、栄養補助食品用、または化粧品用の賦形剤などの１つ以上の賦形剤を含み得る。賦形剤の例は、抗接着剤（ａｎｔｉａｄｈｅｒｅｎｔｓ）、結合剤、コーティング、着色剤、崩壊剤、香料、滑剤、潤滑剤、防腐剤、吸着剤、甘味料、あるいはビヒクルを含み得る。

【0082】

適切な賦形剤または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して無毒であり得、そしてリン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液、塩化ナトリウムなどの塩、アスコルビン酸、ビタミンＥおよびメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウムなど）、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコノラクトンと安息香酸ナトリウム、フェノール、ブチル、あるいはベンジルアルコール、低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド、血清アルブミンまたはゼラチンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡまたはＥＤＴＡ代替物（例えば、Ｂｉｏｐｕｒｅ ＧＬＤＡ、Ｓｐｅｃｔｒａｓｔａｔ Ｇ２）などのキレート化剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩を形成する対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎタンパク質複合体）、および／または界面活性剤を含み得る。いくつかの例では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、アルギン酸塩、ポロキサマー、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）（ｔ－オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）、非イオン性界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル－スルホヘタム、ミリスチル－スルホヘタム、リノレイル－スルホヘタム、またはステアリル－スルホヘタム；ラウリル－サルコシン、イリスチル－サルコシン、リノレイル－サルコシン、またはステアリル－サルコシン：リノレイル－ベタイン、ミリスチル－ベタイン、またはセチル－ベタイン；ラウラミドプロピル－ベタイン、コカミドプロピル－ベタイン、リノールアミドプロピル－ベタイン、ミリストアミドプロピル－ベタイン、パルミドロプロピル－ベタイン、またはイソステアラミドプロピル－ベタイン（例えば、ラウラアルニドプロピル）；ミリスタミドプロピル－タウレート、パルミドプロピル－タウレート、またはイソステアラミドプロピル－ジメチルアミンメチルココイル－タウレート、または二ナトリウムオレイルメチル－タウレート；ソルビタンモノパルミテート、およびＭＯＮＡＱＵＡＴシリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ．Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，ＮＪ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｅｓ／Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ，ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８など）、あるいは別の適切な界面活性剤を含むが、それらに制限されない。場合によっては、組成物は、スクワレン、天然オイル、植物抽出エキス、ヒアルロン酸、または粘土を含み得る。場合によっては、組成物は、有効成分の皮膚への浸透を増強するために皮膚を浸透するエンハンサーを含む。場合によっては、皮膚浸透エンハンサーは、脂肪酸、芳香油、尿素、リポソーム、マイクロスフェア、ＤＭＳＯ、アゾン、ナトリウムＰＣＡおよびスクワレンを含むが、それらに限定されない。

【0083】

いくつかの実施形態では、製剤は、ポリペプチドを運び、皮膚内でのポリペプチドの放出回数および／または浸透深度を制御することために、担体、マイクロスフェア、リポソームあるいはミセルを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、官能化されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、化学基で官能化されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以下、または２０以上の炭素を含む官能基で官能化されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アセチルまたはパルミトイルで官能化されている。

【0084】

対象に適用されるポリペプチドまたは組成物は、殺菌され得る。これは、例えば、滅菌濾過膜による濾過、または他の当技術分野で認められている滅菌方法によって遂行され得る。

【0085】

組成物は、加齢性疾患の発症、または疾病、あるいは加齢関連障害の発症を遅らせる、発生を低下させる、または皮膚の症状などの１つ以上の症状を改善することができる量のポリペプチドまたはペプチド模倣薬の治療上有効な量を含み得る。場合によっては、治療上有効な量は、対象において治療的（例えば、セノ治療）、または所望の反応を誘発し得る治療剤（例えば、ポリペプチド）の量であり得る。治療上有効な量は対象に治療効果を引き起こすのに十分であり得る。治療上有効な量は、使用するために選択された活性剤、かつ治療される対象の年齢、体重、身長、および／または一般的な健康を含む様々な要因に応じて変化し得る。

【0086】

臨床の内容で理解されるように、有効な治療量の活性剤は、別の薬物、化合物、治療用、または医薬組成物と組み合わせて達成されてもされなくてもよい。したがって、有効な治療量は、１つ以上の活性剤を投与する状況で考慮され得、単一の活性剤は、１つ以上の他の活性剤と併せて、望ましい結果が達成されるか、達成される可能性がある場合、有効量で与えられると見なされ得る。それに応じて、いくつかの例では、１つ以上の活性剤が対象に投与される場合がある。他の例では、本明細書に記載された活性剤での処置は、本明細書に記載される１つ以上の処置モダリティの前、または後に実施される。

【0087】

ポリペプチド合成
さらに、本開示のポリペプチドの１つ以上をコードする単離されたポリヌクレオチドが開示される。単離されたポリヌクレオチドは、プロモーターに動作可能に連結された、単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター中に存在し得る。発現ベクターは、単離された細胞（すなわち、発現ベクターでトランスフェクトまたは形質転換された組換え細胞）に存在し得る。

【0088】

適切な発現ベクターは、細菌、植物、真菌、昆虫、または動物の宿主細胞複製、および／または開示されたペプチド、ポリペプチド、およびそれらの変異体を発現する発現ベクターを含み得る。発現ベクターは、適切な宿主細胞（例えば、大腸菌）を形質転換するために使用されてもよい。形質転換された宿主細胞は、ペプチドまたはポリペプチドが構成的に発現されるように、あるいは（例えば、誘導性プロモーターを介して）発現を誘導する試薬を添加した後に発現されるように、培養または発酵され得る。本明細書に企図されるような発現ベクターは、コードされたポリペプチドの発現を調節する制御配列を含む場合がある。発現制御配列は、構成的または誘導性プロモーター（例えば、Ｔ３、Ｔ７、Ｌａｃ、ｔｒｐ、またはｐｈｏＡ）、リボソーム結合部位、または転写ターミネーターを含み得る。

【0089】

発現ベクターは、宿主細胞を形質転換するために利用され得る。適切な宿主細胞は、細菌、植物、菌類、昆虫、または動物の宿主細胞を含む。適切な細菌は、限定されないが、以下を含む：エシェリキア属種（例えば、大腸菌）などのグラム陰性細菌、他のグラム陰性細菌（例えば、緑膿菌などのシュードモナス菌種、またはカウロバクタークレセンタスなどのコウロバクター菌種）、またはグラム陽性菌（例えば、枯草菌などのバチルス菌種）。適切な菌細胞は、酵母（例えば、ビール酵母菌）を含む場合がある。

【0090】

発現ベクターは、例えば、ポリペプチドの合成のためのメカニズムを提供し得る。合成は、細胞（例えば、動物細胞、植物細胞、細菌細胞、または酵母菌）中で実行し得る。発現ベクターは、核酸、例えば、プラスミド、コスミド、ファスミド、またはバクテリオファージに由来するか、または化学的または酵素的手段によって合成されたＤＮＡを含むことができ、その中に、１つ以上の本明細書に記載のポリペプチドをコードすることができる核酸の１つ以上の断片を挿入またはクローン化することができる。発現ベクターは、クローン化された配列が複製されるように、定義された宿主または生物において自律的に複製可能であり得る。発現ベクターは、線形、円形、またはスーパーコイル構成を有し得、特定の目的のために他のベクターまたは他の材料と複合体を形成し得る。発現ベクターの成分は、（１）ＤＮＡ、（２）治療用または所望の産物をコード化する配列、または（３）転写、翻訳、ＲＮＡ安定性および複製用の調節要素を取り込むＤＮＡ分子を含み得るが、それらに限定されない。

【0091】

ポリペプチドは、発現ベクターを使用して産生され得る。場合によっては、そのような産生は、開示されたペプチド、ポリペプチド、またはその変異体（本明細書で企図されるように）をコードする核酸分子を含む発現ベクター（本明細書で企図される）を含む形質転換された宿主細胞（例えば、本明細書で企図される細菌宿主細胞）を培養または発酵させること（ここで、培養は、ペプチド、ポリペプチド、または変異体の発現を引き起こす条件下で起こる）、およびペプチド、ポリペプチド、または変異体を単離、分離、または精製することを含み得る。形質転換された細菌は、ペプチド、ポリペプチド、または変異体を発現させるために、当技術分野で知られている方法を使用して培養または発酵させることができる。例示的な単離、分離、または精製の方法は、下記工程の１つ以上を含んでもよい：細胞破壊工程、浄化工程（例えば、遠心分離または濾過による）、クロマトグラフ分離工程、透析工程および沈澱反応工程。

【0092】

他のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、化学的に合成され得る。ポリペプチドの合成は、液相技術、固相法、またはポリペプチド合成の他の適切な方法を使用して実施され得る。

【0093】

方法
本明細書に開示されるポリペプチドおよび組成物の使用のための方法が提供される。そのような方法は、本明細書に記載される１つ以上のポリペプチドを対象に適用することを含み得る。本明細書に記載される方法は、加齢性疾患または疾病あるいは加齢関連障害の発症を遅らせる、発生を低下させる、または改善することができる。

【0094】

本明細書に記載される方法は、老化細胞の蓄積に関連する疾患、障害、または疾病の発症を遅らせる、発生を低下させる、出現を低下させる、または改善することができる。老化細胞の蓄積に関連する疾患または障害は、年齢に関係し得る。場合によっては、上記疾患または障害は、未処置の場合、経時的に悪化し得る。

【0095】

ポリペプチドまたは組成物は、皮膚の健康によって直接的または間接的に影響を受ける状態を処置するために、対象に適用または投与され得る。そのような方法は、皮膚の健康を促進する化合物を対象に投与すること、または皮膚に局所的処置を適用することを含み得る。

【0096】

加齢関連障害は、身体に影響を与え得る疾患プロセス中に発生する事象の生物学的進行を含み得、これは、正常な対象において発生する加齢事象のすべてまたは一部を模倣または実質的に模倣し得る。場合によっては、事象のこの生物学的進行は、加速された時間枠で発生し得る。

【0097】

加齢性疾患または疾病あるいは加齢関連障害は、運動や摂食能力など、体内の通常のプロセスに関連している可能性がある。

【0098】

加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害は、皮膚障害または皮膚症などの皮膚に影響を与える疾患、疾病、または障害であり得、これは、しわ、線、乾燥、かゆみ、斑点、シミ、床ずれ、潰瘍、癌、色素沈着不全、感染症（例、真菌感染症）、または透明度、質感、弾力、色、色調、柔軟性、硬さ、堅さ、滑らかさ、厚さ、輝き、発光、水分補給、保水、皮膚バリア、均一性、弛緩、または油性などの皮膚特性の低下、あるいは他の皮膚病を含み得る。いくつかの例では、加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害は、皮膚の色素沈着過剰である。いくつかの例では、色素沈着過剰障害は、肝斑、シミ、黒子、および／または進行性色素性紫斑病である。いくつかの例では、色素沈着過剰は、日光による損傷、炎症、ホルモンの変化、または皮膚の損傷の結果である。いくつかの例では、色素沈着過剰は、レーザー治療、光線治療、またはケミカルピーリングを含むがこれらに限定されない美容処置、抗生物質、経口避妊薬、または光増感薬の投与、または外用の薬剤の適用の後に発生する。いくつかの例では、色素沈着過剰は、メラニンの過剰産生の結果である。

【0099】

いくつかの例では、本明細書に開示される方法、システムおよび組成物による加齢性疾患または疾病、あるは加齢関連障害の治療は、皮膚の外観を明るくし、発光を増加させ、輝かせ、すべすべにし、滑らかにし、および／または引き締める結果となる。いくつかの例では、本明細書に開示される方法、システム、および組成物による処置は、表皮バリア、皮膚水和レベル、皮膚水分保持、しわの出現、滑らかさ、硬さ、弾力、輝きおよび光度の出現を改善し、および／または皮膚におけるセラミドレベルを改善または維持する。いくつかの例では、本明細書に開示される方法、システム、および組成物による処置の効果は、皮膚水分含有量、経皮水分損失量（ＴＥＷＬ）、皮膚の厚さおよびエコー源性、皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルを測定することによって評価される。いくつかの例では、本明細書に開示される方法、システム、および組成物による処置の効果は、線／しわの出現、肌の色調（均一性）の出現、毛穴の出現、テクスチャー／滑らかさの出現、硬さ（視覚的）、弾力（触覚）、表皮バリア、肌荒れ、肌の色素沈着過剰、または全体的な外観の減少を評価する。いくつかの例では、本明細書に開示される方法、システム、および組成物による処置の効果は、皮膚の水分含有量／水分補給を測定するための角膜計、経皮水分損失量（ＴＥＷＬ）を測定するためのバポメータ（ＶａｐｏＭｅｔｅｒ）、皮膚の厚さ（密度）とエコー源性を測定する超音波、皮膚の均一性と発色団のマッピングを測定するための非侵襲的光学皮膚イメージング機器、皮膚の粘弾性特性（硬さと弾性）を測定するための吸引を使用するカトメーター、皮膚プロフィロメトリー、マルチスペクトル分析、および皮膚の表面プロファイル、線、およびしわを測定するための比色分析を使用して測定される。

【0100】

いくつかの例では、加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害の処置は、しわまたは皮膚の色素沈着の出現を例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％減少させる。いくつかの例では、機器測定は、線／しわの出現、肌の色調（均一性）の出現、毛穴の出現、質感／滑らかさの出現、硬さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚の粗さ、肌の輝き、または全体的な外観の少なくとも１つに、組成物の使用前と比較して、組成物の使用後に少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％の改善を示している。いくつかの例では、改善は、組成物を使用する前のベースラインと比較した平均改善率（ＭＰＩ）として表される。いくつかの例では、ＭＰＩは、組成物の使用前と比較して、組成物の使用後に少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％である。いくつかの例では、測定は、組成物の使用後１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、５か月、６か月、または１年で取得される。いくつかの例では、処置の効果は、皮膚測定値の１つ以上を分析する皮膚の疾病、障害、または疾患の専門家によって評価される。いくつかの例では、処置の効果は、ユーザ自身によって評価される。いくつかの例では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のユーザは、本明細書に開示される方法、システム、および組成物を使用した後、皮膚のバリア、肌の荒れ、肌の輝き、線／しわの外観、肌の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、テクスチャー／滑らかさの外観、硬さ（視覚的）、弾力（触覚的）、または全体的な外観の改善を報告する場合がある。いくつかの例では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のユーザは、皮膚の水分補給の改善を報告する場合がある。いくつかの例では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のユーザは、皮膚バリア機能の改善を報告する場合がある。

【0101】

いくつかの例では、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、皮膚の色素沈着過剰を低下させ得る。いくつかの例では、色素沈着過剰は、メラニンの過剰産生に関連している。いくつかの例では、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、メラニンの過剰生産を低下させる。いくつかの例では、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、皮膚中のメラニン色素の存在を低下させる。いくつかの例では、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、処置された皮膚の細胞による、チロシナーゼ、メラノサイト誘導転写因子（ＭＩＴＦ）およびドーパクロムトートメラーゼ（ＤＣＴ）を含むメラニン形成に関与するタンパク質の発現レベルを低下させる。いくつかの例では、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、チロシナーゼ活性の低下、チロシナーゼの発現または活性化の低下、メラニン合成の中間生成物の除去、メラノソームのケラチノサイトへの移動の低下、存在するメラニンの含有量の低下、またはメラノサイトの活性または生存率の低下を引き起こす。

【0102】

場合によっては、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、皮膚炎症を低下させ得る。場合によっては、本明細書で提供される方法、システム、および組成物は、処置された皮膚の細胞による、炎症に関与するタンパク質、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）およびインターロイキン１０（ＩＬ－１０）の発現レベルを低下させ得る。

【0103】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、１日２回の投与、例えば、朝と夜に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、日々、毎日、隔日、週５日、週１回、隔週、月２週間、月３週間、月１回、月２回、月３回、またはそれ以上投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、少なくとも１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１８か月、２年、３年、４年、５年またはそれ以上投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、朝と夜に顔および／または首の清潔で乾燥した皮膚に滑らかな層として適用されるように指示されている。いくつかの実施形態では、製剤は、皮膚の弾力を改善し、かつ皮膚の長期的な健康のための表皮バリアを強化するために科学的に製剤された毎日必須の局所サプリメントである。いくつかの実施形態では、ユーザは、ポリペプチドの少なくとも１つを含む本明細書に記載される組成物を顔および／または首に適用する。いくつかの実施形態では、組成物は、身体の皮膚に適用されるように指示されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、ＵＶブロッカーなどの他の外用の組成物と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、他の外用の組成物の適用の前、一緒に、または後に適用される。いくつかの実施形態では、組成物は、ＵＶブロッカーを含む。

【0104】

ポリペプチドまたは組成物は、局所的に、すなわち皮膚に適用され、皮膚に影響を与える疾患、疾病、または障害の発症を遅らせる、これらの発生を低下させる、または改善することができる。

【0105】

加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害は、ＵＶ損傷、ＤＮＡ損傷、細胞核におけるＡＴＲＸ病巣の蓄積、ｐ１６発現の増加、老化関連のβ－ガラクトシダーゼ活性の増加、組織における老化細胞の蓄積、ＳＡＳＰ産生の増加、化学的に誘発された老化、経時的老化、ヒアルロン酸産生の減少、サーチュイン６の発現の減少、インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－Ｉ）経路シグナル伝達の変化、マトリックスメタロペプチダーゼ１（ＭＭＰ１）の産生の増加、皮膚の薄い表皮層、または遺伝的変異によって引き起こされ得る。いくつかの例では、加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害は、処置レジメン、例えば、治療薬の副作用によって開始される、または悪化する。加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害は、直接的または間接的に皮膚の健康または外観に影響を与える可能性がある。本明細書のポリペプチドまたは組成物の外用適用は、いくつかのそのような場合では、皮膚の健康または外観を改善し得る。

【0106】

加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害は、細胞増殖性障害を含み得る。細胞増殖性障害は、皮膚の健康または外観に影響を与える可能性がある。場合によっては、化学療法や放射線療法などの細胞増殖性障害に施される処置が、皮膚の健康や外観に影響を与える可能性がある。本明細書のポリペプチドまたは組成物の外用適用は、いくつかのそのような場合では、皮膚の健康または外観を改善し得る。

【0107】

さらに本明細書に、組織または生物における老化細胞数の減少を促進し、処置された細胞にアポトーシス促進状態を誘導し、ＳＩＲＴ６発現を誘導し、ＤＮＡ誘発性老化の防止、および／またはＤＮＡ修復能力を強化し得る組成物を対象に投与することを含む、対象の皮膚を治療するための方法が提供される。場合によっては、皮膚疾患または皮膚疾病などの皮膚疾患は、皮膚のたるみまたはしわ、組織内の老化細胞の蓄積、表皮の厚さの減少、コラーゲン産生の減少、ＭＭＰ－１産生の増加、ＤＮＡ修復能力の減少、ＳＩＲＴ６発現の減少、皮膚の崩壊、皮膚の薄い表皮層、炎症、老化に関連する分泌表現型、または皮膚の幹細胞の枯渇を含み得る。

【0108】

方法は、組織または生物中の老化細胞数の有意な減少を促進し得るポリペプチドを含む組成物を対象に投与することを含み得る。老化細胞数の減少は、処置された細胞のアポトーシス促進状態、ＳＩＲＴ６発現の誘導、ＤＮＡ誘導老化の防止、またはＤＮＡ修復能力の増強を含み得る。場合によっては、サンプル、対象の一部（例えば、対象の顔の皮膚）、および／または対象中の老化細胞数を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減らすことができる。

【0109】

ポリペプチドまたは組成物は、細胞、組織、または対象に適用または投与され得る。場合によっては、ポリペプチドの適用または投与は、細胞、組織、または対象においてセノ治療の効果を引き起こし得る。場合によっては、ポリペプチドは、セノ治療の効果を提供するために対象に投与され、対象に局所的に適用され、または培養細胞でインキュベートされ得る。

【0110】

細胞は、培養細胞、あるいは対象または細胞株から単離された細胞であり得る。培養細胞のいくつかの例は、ケラチノサイトまたは線維芽細胞またはメラノサイトを含み得る。細胞は野生型でも遺伝子組み換え型でもよい。他のＲＮＡクラスの中でも、ｐ５３／ｐ２１経路、ｐ１６／ＲＢ経路、ｍＲＮＡまたはｍｉＲ遺伝子の遺伝子修飾など、いくつかの遺伝子修飾は老化を促進し得る。場合によっては、ポリペプチドまたは組成物を細胞に適用すると、細胞の老化を低減させ得る。場合によっては、細胞は、動物、線虫、およびヒトを含むがこれらに限定されない生物中にインビボまたはインサイチュで細胞を含み得る。

【0111】

組織は、対象の組織である組織、または対象から、すなわちエクスビボで単離された組織であり得る。場合によっては、組織は人工的に成長させられる。組織の例は、健康な皮膚、病気の皮膚、老化した皮膚、または頭皮を含み得る。場合によっては、ポリペプチドまたは組成物を組織に適用すると、組織の１つ以上の細胞または組織全体の老化を低減し得る。場合によっては、組織は、動物、線虫、およびヒトを含むがこれらに限定されない生物中にインビボまたはインサイチュで組織を含み得る。

【0112】

対象がヒトである場合、対象は任意の年齢であり得る。場合によっては、対象は、加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害を有し、加齢性疾患または疾病、あるいは加齢関連障害のリスクがあり、または健康である。対象は、男性または女性であり得る。

【0113】

方法は、ポリペプチドまたは組成物の外用適用を含み得る。外用適用は、皮膚または粘膜へのポリペプチドまたは組成物の摩擦、噴霧、浸漬、軽くたたく、または他の方法での適用を含み得る。

【実施例】

【0114】

実施例１
早老症患者から単離された初代線維芽細胞は、ヒトにおける初期の老化および細胞老化の遺伝モデルを構成し得る。早老症患者からの初代線維芽細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））中で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり１，０００の細胞）に播種し、そしてプレーティング後６時間、独自のライブラリからの個々のポリペプチドを使用して、５０μＭで４８時間インキュベートした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；陽性対照群は、１０μＭのＡＢＴ－２６３、老化細胞除去化合物を使用して、同じ期間インキュベートした。インキュベーション後、（未処置の対照と比較した老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ染色の活性によって評価される）相対的細胞老化を、図１に示す通りに分析し、図１では、Ｙ軸がウェル中の細胞の総数を示し（未処置の対照に対して正規化）、そして、Ｘ軸が老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ染色強度／核（すなわち老化レベル）を表わし、これも陰性対照に対して正規化している。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験を実施した。未処置の対照サンプルの細胞老化の７５％を下回るという、細胞老化の有意な減少を促進したポリペプチドを、陽性ヒットであるとみなした。

【0115】

合計７６４のポリペプチドをテストし、その中の５６が、未処置の対照サンプルの細胞老化の７５％を下回る、細胞老化の減少を促進した。したがって、それらは陽性ヒットであり、そして推定上のセノ治療化合物であるとみなされた。ＡＢＴ－２６３は、実験において陽性対照とみなされ、そしてさらに、細胞老化、およびまた、細胞の毒性の有意な減少を促進した。この観察は、ＡＢＴ－２６３の老化細胞除去特性、ならびに、テストされたポリペプチドのうちのいくつかのセノ治療の可能性を、確認した（図１）。

【0116】

実施例２
３人の健康な、経時的に歳を重ねた患者から単離された初代線維芽細胞を使用した。細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり４，０００の細胞）に播種し、そしてプレーティング後６時間、４つのセノ治療ポリペプチド（ペプチド１４、ペプチド１３、ペプチド１５、およびペプチド１６）のうちの１つで処置し、そして４８時間インキュベートした。各ポリペプチドを、ペプチド１６を除いて、６つの異なる濃度：５０μＭ、２５μＭ、１２．５μＭ、６．２５μＭ、３．１２μＭ、および１．５６μＭでテストし、ペプチド１６は、５つの異なる濃度：２５μＭ、１２．５μＭ、６．２５μＭ、３．１２μＭ、および１．５６μＭでテストした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；インキュベーション後（未処置の対照と比較した老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ染色の活性によって評価される）相対的細胞老化を分析し（図２Ａ－図２Ｄ、（パネルＡ－Ｄ））、図２Ａ－図２Ｄでは、Ｙ軸が未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベル示す。各カラムは、ポリペプチドの異なる濃度に相当する。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験（生物レプリカ）を実施した。データを分散分析（ＡＮＯＶＡ）とボンフェローニ事後比較テスト（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ ｐｏｓｔ－ｈｏｃ ｔｅｓｔ）とを使用して、分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した。

【0117】

ポリペプチドはすべて、テストされた濃度の少なくとも１つでセノ治療の可能性を示し、これは未処置の対照と比較して、細胞老化の有意な減少によって証拠付けられている。未処置の対照（ｃｔｒｌ）と比較して、＊Ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１（図２Ａ－図２Ｄ、（パネルＡ－Ｄ））。

【0118】

実施例３
ＡＴＲＸは、クロマチンリモデリング酵素であり、老化関連ヘテロクロマチン病巣の形成に寄与する。それは、老化に伴い核病巣中にますます蓄積する。したがって、それは、細胞老化のマーカーを構成する。ペプチド１４が、細胞老化のレベルを減少させたか否かを調査するために、ＡＴＲＸ病巣を、処置されたペプチド１４（１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、および１０ｎＭ）と未処置の細胞とにおいて、分析した。そうするために、３人の健康な、経時的に歳を重ねた（高齢の）ドナーから単離された初代線維芽細胞を使用した。これらの細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり４，０００の細胞）に播種し、そしてプレーティング後６時間、前述の濃度でペプチド１４のポリぺプチドを使用して、４８時間インキュベートした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；インキュベーション後、相対的な細胞老化を評価した。簡潔に言えば、細胞を固定し、透過処置し、そして抗ＡＴＲＸ抗体とその後第２の抗体とでインキュベートすることによって、免疫染色を実施した。核および染色されたＡＴＲＸ病巣の数をカウントした。図３Ａ（パネルＡ）は代表的なグラフを示し、カラム（Ｘ軸）として表わされる特定量のＡＴＲＸ病巣／細胞を呈する、細胞の数（Ｙ軸）を示す。上部グラフは未処置の細胞を示し、一方で、下部グラフはペプチド１４を使用して５００ｎＭで処置された細胞を示す。図３Ｂ（パネルＢ）は、ペプチド１４の異なる条件（カラム）で処置された繊維芽細胞のＡＴＲＸ病巣／核の平均数を示す。図３Ｃ（パネルＣ）は、ペプチド１４の異なる条件（カラム）で処置された繊維芽細胞のＡＴＲＸ病巣／核が１０未満であることを呈する細胞のパーセントを示す。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験（生物レプリカ）を実施した。図３Ｂと図３Ｃ（パネルＢとＣ）のデータを、ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後比較テストとを使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した。

【0119】

ペプチド１４処置は、未処置の細胞と比較して、５００ｎＭと５０ｎＭとで使用した時に、ＡＴＲＸ病巣／核を有意に減少させた。同じ濃度で、ペプチド１４はまた、１０未満の病巣／核を呈する細胞数を増加させた。未処置の対照（ｃｔｒｌ）と比較して、＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１（図３Ａ－３Ｃ）。

【0120】

実施例４
３人の健康な、経時的に歳を重ねた（高齢の）ドナーから単離されたヒト初代線維芽細胞を使用した。これらの細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞をＴ－７５フラスコ（１フラスコ当たり２５０，０００の細胞）に播種し、そしてプレーティング後６時間、３．１２μＭでペプチド１４を使用して３週（２１日）間インキュベートした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；０日目を、細胞がペプチド１４で処置され始めた日として定義した。ペプチド１４による処置は、２１日目と２８日目との間は行わなかった。週ごとに、細胞老化を、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色レベルに応じて評価した。データを、未処置の群に対して正規化し、そしてプロットした（図４Ａ、（パネルＡ））。細胞増殖もまた、週ごとに判定した。７日目、１４日目、２１日目、および２８日目に、細胞を、トリプシン処置し、そしてカウントした（図４Ｂ、（パネルＢ））。カウント後に、２５０，０００の細胞を、新しいＴ－７５フラスコにプレーティングした。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験（生物レプリカ）を実施した。データを、Ｔ－検定を使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した。

【0121】

ペプチド１４は、第２週で開始した、細胞老化の著しい減少（＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を促進した。２１日間の処置後に、ペプチド１４のセノ治療の効果は、ポリペプチド除去後、少なくとも７日間（実験の２１日目と２８日目との間）維持された。ペプチド１４処置群と未処置の対照とを比較し、細胞増殖に関する有意な差異は観察されなかった（図４Ａ－図４Ｂ）。

【0122】

実施例５
７人の健康な、経時的に歳を重ねた患者から単離された初代線維芽細胞を使用した（患者を、患者２、３、４、５、６、７、または８として偶発的に同定した）。これらの細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり４，０００の細胞）に播種し、そしてプレーティング後６時間、５つの異なる濃度：２５μＭ（濃度５）、１２．５μＭ（濃度４）、６．２５μＭ（濃度３）、３．１２μＭ（濃度２）、および１．５６μＭ（濃度１）で、ペプチド１４を使用して、４８時間インキュベートした。陰性対照は、未処置の細胞（濃度０）を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；インキュベーション後、相対的な細胞老化を、ＡＴＲＸ免疫染色後に定量化されたＡＴＲＸ病巣／核の平均数に応じて、判定した。３つの技術的レプリカを含む７つの個々の実験（生物レプリカ）を実施した。データを、共分散テストを使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した（図５）。

【0123】

共分散分析は、ＡＴＲＸ病巣／核の数がペプチド１４処置後に有意に低下したことを示す。ペプチド１４の有効性は、用量反応パターン通りであり、濃度とＡＴＲＸ病巣／核は有意に相関を有していた（ｐ＜０．０００４）（図５）。

【0124】

実施例６
細胞老化は、いくつかの異なる刺激によって引き起こされるかもしれない。ペプチド１４がＵＶＢ誘発の老化、および化学的誘発の老化に対して有効であるか否かを評価するために、３人の健康なドナーから単離されたヒト初代線維芽細胞を使用した。これらの細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ・ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり４，０００の細胞）に播種し、そしてプレーティング後６時間、そして、２４時間のエトポシド（２０μＭ）処置、または０．０５Ｊ／ｃｍ^２のＵＶＢ放射に２回曝露するかのいずれかのために、提出した。各ＵＶＢ曝露は、世界中の主要な都市（例えば、ニュージーランドのオークランド、米国のロサンゼルス、ブラジルのブラジリア）の４月の毎日の日光に対する約１～３時間の曝露に相当する。異なる老化誘発プロトコルの後、エトポシド処置された細胞を、ペプチド１４を使用して、５μＭ、２．５μＭ、または１μＭで４８時間インキュベートした。ＵＶＢに暴露された細胞を、ペプチド１４を使用して、５μＭで４８時間処置した。陰性対照は、ストレスにさらされた未処置の細胞を含むが、ビヒクルのみが投与されたものであった。インキュベーション後、（未処置の対照と比較した老化関連β－ガラクトシダーゼ染色の活性によって評価される）相対的な細胞老化を分析し、そして棒グラフにプロットした。ＡＴＲＸ病巣を、ＡＴＲＸ免疫蛍光染色後に、さらに評価した。グラフを、１核当たりで検知された平均ＡＴＲＸ病巣を使用して構築した。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験（生物レプリカ）を実施した。データは、ｔ－検定かＡＮＯＶＡのいずれかと、その後にボンフェローニ事後比較テストを使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した（図６Ａ－図６Ｄ）。

【0125】

エトポシド処置は、細胞老化レベルで有意な増加（ｐ＜０．００１）を、そしてまた、ＡＴＲＸ病巣核内蓄積の有意な増加（ＡＴＲＸ病巣／細胞の平均数として表わされた；ｐ＜０．０５）を促進した（図６Ａ、（パネルＡ））。エトポシドのストレスにさらされた細胞を、２．５μＭまたは５μＭのペプチド１４で処置すると、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色が、有意に低下された（＊ｐ＜０．０５）（図６Ｂ、（パネルＢ）、左のグラフ）。図６Ｂ（パネルＢ）の右のグラフに示される通り、エトポシド曝露細胞を、２．５μＭのペプチド１４で処置すると、平均ＡＴＲＸ病巣／細胞がさらに低下された。ＵＶＢ曝露はまた、図６Ｃ（パネルＣ）の左のグラフに示される通り、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色によって評価されるように、細胞老化の有意な増加を促進し、５μＭのペプチド１４処置は、細胞老化を有意に防ぐことができた（＊ｐ＜０．０５）。図６Ｃ（パネルＣ）の右のグラフに示される通り、ペプチド１４を使用する処置は、細胞数を有意に変化させなかった。ＵＶＢ曝露は、１核当たりのＡＴＲＸ病巣の平均数の有意な増加を促進し、５μＭでのペプチド１４処置は細胞老化を有意に防止し、ペプチド１４を投与されなかったＵＶＢ処置サンプルと比較して、ＡＴＲＸ病巣／核を有意に減少させることとなった（＊ｐ＜０．０１）（図６Ｄ、（パネルＤ））。

【0126】

実施例７
健康な高齢のドナーから単離されたヒト初代線維芽細胞およびケラチノサイトを使用して、ヒトの皮膚等価物を構築した。それらの皮膚等価物を、０．０１％ｗ．ｖ．で処置した。５日間のペプチド１４を、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色を使用する老化のレベル、表皮厚さによって示される全体的構造に応じて、特徴評価した。いくつかのパラメータに基づく品質評価が、盲検による分析者によって行われた。観察されたパラメータは、細胞層の一般的な組織、ならびにとりわけ角質層の厚さを含み、そしてそれらは、老化および老化レベルと共に減少することが示された。評価は、最高スコアが２８であり、ここで、より高いスコアが年齢および老化の減少と相関を有している。１９の最低スコアが、バッチ使用のために必要であった。このスコアは内部で検証を行い、そして、皮膚等価物または培養細胞の年齢／老化と共に減少することが示された。さらに、皮膚等価物を、特異的遺伝子の発現に応じて、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）によって特徴評価した。処置後、表皮および真皮を、ＲＴ－ｑＰＣＲのために別々に処置した。表皮サンプルに対して、グリセルアルデヒド３－リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ；遍在的発現）；ｐ１６（老化関連）、ＩＬ－８（皮膚刺激関連）、およびＫｉ－６７（細胞増殖関連）を分析した。真皮サンプルに対して、グリセルアルデヒド３－リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ；遍在的発現）；ｐ１６（老化関連）、ＩＬ－８（皮膚刺激関連）、およびＫｉ－６７（細胞増殖関連）；ヒアルロン酸合成酵素２（ＨＡＳ－２；ヒアルロン酸産生関連）、そしてマトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１；細胞外基質タンパク質分解関連）を分析した。ＣＴ値を、２^{－ΔΔＣｔ}法を使用して分析した。平均ｍＲＮＡ発現を、ＧＡＰＤＨ（ΔＣｔ）と陰性対照群（ΔΔＣｔ）とに対して正規化した。陰性対照群は、製剤のみを投与された。個々の３つの実験を、３つの技術的レプリカを使用して実施した。データを、Ｔ－検定を使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した（図７Ａ－図７Ｃ）。

【0127】

図７Ａ（パネルＡ）に示される通り、ヒトの皮膚等価物のペプチド１４処置は、皮膚の等価的スコアの増加を促進（ペプチド１４群２４±１対１９．０±２）し、処置の安全性、忍容性、および有益な効果を示唆している。これは、安全性および忍容性の問題を有し得る、他の老化細胞除去薬剤と対照的である。例えば、Ｔｓｅ等のＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６８： ３４２１ （２００８）；Ｗｉｌｓｏｎ等のＬａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ． １１：１１４９ （２０１０）を参照。加えて、処置は、図７Ａ（パネルＡ）および図７Ｂ（パネルＢ）に示される通り、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色の有意な減少を促進（＊＊＊ｐ＜０．００１）し、ポリペプチドのセノ治療の効果を実証している。さらに、ペプチド１４処置は、ｐ１６の、表皮における有意な減少（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）および真皮における有意な減少（＊＊ｐ＜０．０１）；真皮におけるＩＬ－８の発現の減少（＊ｐ＜０．５）；および真皮におけるＭＭＰ－１の発現の減少（＊＊ｐ＜０．０１）をもたらした。データは、図７Ｃ（パネルＣ）に示される通り、ペプチド１４のセノ治療の可能性、安全性と忍容性、ならびに皮膚遺伝子発現に対するポリペプチドの有益な効果を実証する。

【0128】

実施例８
ペプチド１４および類似のペプチド１３の作用機序に光を当てるために、Ａｋｔ Ｓ４７３リン酸化（図８Ａ、（パネルＡ））、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色（図８Ｂ、（パネルＢ））、ならびにｍＲＮＡ発現（図８Ｃ、（パネルＣ））を調査した。ウェスタンブロット法を使用する、Ａｋｔ Ｓ４７３リン酸化分析については、ヒト初代線維芽細胞およびケラチノサイトを使用した。これらの細胞を使用して、ヒトの皮膚等価物を構築し、それを、５％のＣＯ_２、３７℃、および９５％の湿度大気の気液界面で、維持した。その後、皮膚等価物を１μＭのペプチド１４またはペプチド１３のいずれかで５日間処置し、そして、タンパク質分析を皮膚等価物上で実施した。タンパク質を単離し、そして定量化した。等量のタンパク質をポリアクリルアミドゲルにロードし、そしてニトロセルロース膜に移した。ＧＡＰＤＨ（ローディング対照）とｐＡｋｔ Ｓ４７３抗体とを当該薄でインキュベートし、そして染色を化学発光によって明らかにした。相対的なｐＡｋｔ Ｓ４７３／ＧＡＰＤＨシグナルを、処置サンプルと非処置サンプルとの間で比較した。老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ実験については、繊維芽細胞を使用した。これらの細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ・ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））培養物で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり４，０００の細胞）に播種し、基本培地で６時間インキュベートして、細胞付着させた。その後、細胞を０．０５Ｊ／ｃｍ^２に２度曝露した。この直後に２度目のインキュベーションを行い、ここで、ペプチド１４またはペプチド１３を培地に添加し、そして４８時間放置し、ここで培地を交換し、そして細胞を老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼのために染色した。未処置の細胞を、陰性対照（－）として、ビヒクルのみでインキュベートした。未処置の対照の老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼレベルを１００％に対して正規化した後に、相対的な染色を取得した。ｍＲＮＡ分析については、繊維芽細胞を使用した。これらの細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で維持した。増殖後、これらの細胞を６ウェルプレートのいずれか（１ウェル当たり５０，０００の細胞）に播種し、基本培地で６時間インキュベートして、細胞付着させた。その後、細胞を、ペプチド１４またはペプチド１３のいずれかで、４８時間インキュベートした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；全ＲＮＡを単離し、サンプルを逆転写し、そしてＧＡＰＤＨ、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）、ＢＬＭ、およびエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）遺伝子のｍＲＮＡ発現を、ｑＰＣＲを使用して判定した。陰性対照群には、ビヒクルのみが投与された。ＣＴ値を、２^{－ΔΔＣｔ}法を使用して分析した。平均ｍＲＮＡ発現を、ＧＡＰＤＨ（ΔＣｔ）と陰性対照群（ΔΔＣｔ）とに対して正規化した。すべての分析について、個々の３つの実験を、３つの技術的レプリカを使用して実施した。データを、Ｔ－検定を使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した（図８Ａ－図８Ｃ）。

【0129】

ｐＡｋｔ Ｓ４７３は、ペプチド１４で処置された表皮サンプル、ならびに真皮サンプルの両方において有意に減少した（それぞれ＊ｐ＜０．０５および＊＊ｐ＜０．０１）。ペプチド１３は、真皮のサンプルにおいてのみ、ｐＡｋｔ Ｓ４７３を減少させた（＊＊＊ｐ＜０．００１）（図８Ａ、（パネルＡ））。ＵＶＢおよび老化関連Ｂ－ガラクトシダーゼ染色については、染色がＵＶＢ曝露後に常に増加することが観察された。さらに、ペプチド１４およびペプチド１３の両方は、ＵＶＢ曝露サンプルにおいて染色を減少させた（＊＊＊ｐ＜０．００１）。ペプチド１４は、特に、処置されたサンプルにおけるＳＩＲＴ６およびＢＬＭ発現の増加をもたらした（＊ｐ＜０．０５）（図８Ａ－図８Ｃ）。

【0130】

実施例９
健康な高齢のドナーから単離されたヒト初代線維芽細胞およびケラチノサイトを使用して、ヒトの皮膚等価物を構築した。それらの皮膚等価物を、０．０１％ｗ．ｖ．のペプチド１４で５日間処置し、そして表皮厚さに応じて特徴評価し、それらを総表皮面積に応じて定量化した。陰性対照は、製剤のみで処置された。例示的な組織画像は、図９のパネルＡに示される。個々の３つの実験を、３つの技術的レプリカを使用して実施した。データを、ｔ－検定を使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した（図９のパネルＢ）。

【0131】

ヒトの皮膚の等価物のペプチド１４処置は、未処置の対照と比較して、表皮厚さの増加を促進（＊＊ｐ＜０．０１）し、皮膚表皮に対する、ポリペプチドの有益な効果を示唆している（図９）。

【0132】

実施例１０
アミノ酸配列ＥＴＡＫＨＷＬＫＧＩ（配列番号：１）およびＡＴＡＫＡＷＬＫＧＩ（配列番号：２）を有するポリペプチドの、予測される３次元構造を水中で判定した。構造予測は、図１０Ａ、（パネルＡ）（配列番号：１）および図１０Ｂ、（パネルＢ）（配列番号：２）に示される。構造を重ね合わせて（図１０Ｃ、（パネルＣ））、構造の類似性を示した。
実施例１１
ペプチド１４の外用適用製剤を、ナイアシン、ビタミンＥ、少なくとも１つの防腐剤、少なくとも１つの乳化剤、および５０～１５０μＭのペプチド１４を含んで作り出す。外用製剤をヒトの皮膚に適用し、結果として、しわの外観を減少させた。

【0133】

実施例１２
ペプチド１４の外用適用製剤を、ナイアシン、ビタミンＥ、少なくとも１つの防腐剤、少なくとも１つの乳化剤、および７５～１００μＭのペプチド１４を含んで作り出す。外用製剤をヒトの皮膚に適用し、結果として、しわの外観を減少させた。

【0134】

実施例１３
例示的な外用適用製剤は、以下の表４に示される。外用製剤をヒトの皮膚に適用し、結果として、しわの外観、皮膚の色調（均一性）、毛穴の外観、質感および滑らかさの外観、堅固さ、弾力、および全体的な外観の少なくとも１つを減少させた。製剤中のポリペプチドは、本明細書に開示されるポリペプチドの少なくとも１つを含む。

【0135】

【表4】

【0136】

実施例１４
ペプチド１４を含む例示的な外用適用製剤は、以下の表５に示される。外用製剤をヒトの皮膚に適用し、結果として、しわの外観、皮膚の色調（均一性）、毛穴の外観、質感および滑らかさの外観、堅固さ、弾力、および全体的な外観の少なくとも１つを減少させた。製剤中のポリペプチドは、ペプチド１４を含む。

【0137】

【表5】

【0138】

実施例１５
３次元のインビトロ皮膚モデルおよびエクスビボのヒトの皮膚サンプルを、ペプチド１４での処置後に皮膚老化について評価した。

【0139】

インビトロの３Ｄ皮膚モデル：３Ｄ皮膚モデルを、Ｐｅｎｎａｃｃｈｉ，Ｐ．Ｃ．等、Ｇｌｙｃａｔｅｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ ａｓ ａ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｔｏ Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｓｋｉｎ Ａｇｉｎｇ． Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ． Ｐａｒｔ Ａ ２１， ２４１７－２４２５， ２０１５に記載される調製に基づく改変方法を使用して調整した。簡潔に言えば、繊維芽細胞が埋め込まれたＩ型コラーゲンゲルに対して、ゲル上部に正常なヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）を播種し、そして、ＮＨＥＫが単層に到達するように、２４時間培養した。その後、ＮＨＥＫを有する上部のゲルを気液界面に上昇させ、そしてさらに１０日間培養して、表皮を角質化させた。ペプチド１４を培養培地に添加することによって、ゲルを１２．５μＭのペプチド１４で処置した。

【0140】

エクスビボのヒトの皮膚モデル：健康なヒトドナーからの皮膚サンプルを、ＺｅｎＢｉｏ （Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ， ＮＣ）から取得し、そして、１０％（ｖ／ｖ）のＦＢＳで補充された、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して、気液界面培養で維持した。皮膚サンプルを、１日目および３日目に、対照ビヒクル、または培地中の１２．５μＭのペプチド１４のいずれかで処置した。５日後、サンプルを採取し、そして組織学用ホルマリンに固定するか、またはＤＮＡ単離のために使用した。

【0141】

ＤＮＡメチル化分析：分子ＤＮＡ年齢とも呼ばれる、予測生物学的年齢を、３Ｄ皮膚モデルサンプルおよびエクスビボのヒトの皮膚生検サンプル中の、ＤＮＡメチル化のレベルから判定した。完全なＤＮＡサンプルを、ＱＩＡａｍｐのＤＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、製造者指示に従って、サンプルから取得した。ＤＮＡメチル化評価を、皮膚老化のマーカーとして、ヒト用Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｉｎｆｉｎｉｕｍ ＥＰＩＣ ８５０Ｋチップを使用して行った。ＤＮＡサンプルは、：ｉ）未処置の対照とみなされた４つの生検サンプル（同じドナーからのもの）、ｉｉ）１２μＭのペプチド１４で処置された４つの皮膚生検サンプル（同じドナー）、ｉｉｉ）未処置の対照とみなされた３つの３Ｄ皮膚サンプル（各サンプルは、１人のドナーからの３つの皮膚をプールしたものであり、合計３人のドナーになる）、ｉｖ）１２μＭのペプチド１４で処置された３つの３Ｄ皮膚サンプル（各サンプルは、１人のドナーからの３つの皮膚をプールしたものであり、合計３人のドナーになる）、を含んでいた。画像の生データを、ｐｒｅｐｒｏｃｅｓｓＲａｗ（）と、その後にｐｒｅｐｒｏｃｅｓｓＳＷＡＮ（）のコマンドを使用して処置した。その後、メチル化シグナル（Ｍ－値）を、ｒａｔｉｏＣｏｎｖｅｒｔ（）を使用して割合に、次にｇｅｔＢｅｔａ（）を使用してベータ値に変換し、すべての機能は、「ｍｉｎｆｉ」（登録商標）パッケージに実装されている。ベータ値は、「ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ」パッケージによって実装されたベータを正規化する分位数であるｂｅｔａｑｎ（）メソッドを使用して正規化し、そして、「ｍｉｎｆｉ」（登録商標）パッケージに実装されている「ｐｒｅｐｒｏｃｅｓｓＱｕａｎｔｉｌｅ」正規法を使用して正規化した。正規化されたベータ値を、年齢推定に使用した。

【0142】

統計分析：データを、シャピロ－ウィルク検定（Ｓｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ ｔｅｓｔ）によって正規分布用にテストした。２を超える群を比較した場合には、一元配置分散分析を実施し、その後にボンフェローニ多重比較テストを行った。対のサンプルを比較する場合には、対のｔ－検定を行った。ｐ＝＜０．０５を、統計的に有意であるとみなした。統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ）またはＲソフトウェアを使用して実施した。

【0143】

結果：インビトロの３Ｄ皮膚モデルおよびエクスビボのヒトの皮膚サンプルは、５日間のペプチド１４による処置後に皮膚老化の減少を示し、それは図１１Ａ、１１Ｂ、および１１Ｃに示される通りである。図１１Ａは、５日間にわたり、ペプチド１４無し（対照）で、および１２．５μＭのペプチド１４で培養された、３Ｄ皮膚等価物（上部列）およびエクスビボの皮膚生検サンプル（底部列）についての、ヘマトキシロン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色された組織画像を示す。ペプチド１４で処置された３Ｄ皮膚等価物およびエクスビボの皮膚サンプルは、一般に、類似した表皮厚さ、または未処置の対照サンプルよりも厚い表皮厚さを示した。図１１Ｂは、１２．５μＭのペプチド１４で処置された３Ｄ皮膚モデルサンプル（処置）について、分子ＤＮＡ年齢とも呼ばれる予測年齢が、未処置の対照（ｃｔｒｌ）であるサンプルの予測年齢よりも低かったことを示す。未処置の３Ｄ皮膚モデルに対する予測年齢の平均は約８０であったが、一方で、ペプチド１４処置の３Ｄ皮膚モデルに対する予測年齢の平均は約６６であった（ｔ－検定ではｐ＝０．２５）。図１１Ｃは、１２．５μＭのペプチド１４で処置されたエクスビボの皮膚生検の予測年齢が、未処置の対照（ｃｔｒｌ）であるサンプルの予測年齢よりも低かったことを示す。エクスビボの皮膚生検サンプルに対する予測年齢の平均は約７１であったが、一方で、ペプチド１４処置のエクスビボの皮膚生検サンプルに対する予測年齢の平均は約６８であった（＊＊ｐ＜０．０１）。

【0144】

実施例１６
脊椎動物では、メラニン細胞と呼ばれる特殊細胞が、通常メラニンを生成する。ＭｅＷｏ細胞は、ヒト不死化メラニン細胞系であり、それはレチノイン酸受容体を発現する後期分化（ｌａｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ）メラニン細胞を表わし、また、メラニン形成のインビトロ調査のための実験モデルを提供し得る。インビトロモデルのメラニン形成としてのＭｅＷｏ細胞の使用に関する追加的な説明は、Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ等，１９９４． Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｇａｍｍａ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ Ｅｘｅｒｔ Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｈｕｍａｎ－ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃｅｌｌ－ｇｒｏｗｔｈ Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ． Ｄｏｉ：１０．３８９２／Ｉｊｏ．５．６．１３２５、および、Ｍａｌａｓｐｉｎａ等，Ｄｅｐｉｇｍｅｎｔｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｌｉｃｈｅｎ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｅｓｔｓ． ＰｅｅｒＪ ８：ｅ９１５０ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．７７１７／ｐｅｅｒｊ．９１５０に確認することができる。

【0145】

ペプチド１４がメラニン細胞の色素脱失を促進するか否かをテストするために、ＭｅＷｏ細胞を、１０％ｖ／ｖのＦＢＳと、１％ｖ／ｖのペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充したＤＭＥＭにおいて、５％のＣＯ_２、３７℃、および９５％の湿度で培養した。実験条件の１つによる処置前の２週間（前処置）、ＭｅＷｏ細胞を、イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）で培養して、メラニン合成を刺激した。ＭｅＷｏ細胞を、１ウェル当たり１，０００，０００細胞で６ウェルプレートに６時間播種した後、細胞を、実験条件の１つで７日間培養し、そして細胞内メラニン含有量および上清メラニン含有量について分析した。

【0146】

実験条件は陽性対照群、陰性対照群、ペプチド１４（ＩＢＭＸ）７ｄ群、およびレチノイン酸（ＩＢＭＸ）７ｄ群を含んでいた。陰性対照群は、前処置期間中に２週間、２５μＭのＩＢＭＸで刺激し、そしてその後、実験のためのプレーティング後に未処置のまま７日間おいて、ビヒクルのみを投与した。陽性対照群は、全実験中、つまり前処置期間中の２週間、および処置期間中の７日間、２５μＭのＩＢＭＸでインキュベートしたＭｅＷｏ細胞を含んでいた。ペプチド１４（ＩＢＭＸ）７ｄ群は、前処置期間中の２週間、２５μＭのＩＢＭＸでインキュベートし、そしてその後、２５μＭのＩＢＭＸと３．１２μＭのペプチド１４とで７日間処置したＭｅＷｏ細胞を含んでいた。レチノイン酸（ＩＢＭＸ）７ｄ群は、前処置期間中の２週間、２５μＭのＩＢＭＸでインキュベートし、そしてその後、２５μＭのＩＢＭＸと２μＭのレチノイン酸とで７日間処置したＭｅＷｏ細胞を含んでいた。

【0147】

処置後、細胞ペレットおよび細胞培養上清におけるメラニン含有量を、４９２ｎｍでのサンプルの吸光度によって評価した。細胞ペレットを、トリプシン処置によって調製し、カウントし、そして１６時間、２００μＬの１ＭのＮａＯＨ中でインキュベートした（Ｍａｔｓｕｄａ等，２００４； Ｙｏｏ等，２００７）。１０分間の１．２×ｇの遠心分離後に、細胞培養上清を取得した。データを、相対的なメラニン含有量、特定の波長（４９２ｎｍ）でのサンプルの吸光度を同じ波長の陰性対照サンプルの吸光度に対して正規化したものとして、表わす。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験を実施した。統計的有意性が検出された時に、データを、ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後比較テストを使用して分析した。統計的に有意なｐ－値は、群間で、ｐ＜０．０５に対して＊；Ｐ＜０．０１に対して＊＊；Ｐ＜０．００１に対して＊＊＊；ｐ＜０．０００１に対して＊＊＊＊で、記される。

【0148】

図１２Ａに示される通りの細胞ペレット中で、および図１２Ｂに示される通りの細胞上清中で、陽性対照群、陰性対照群、およびレチノイン酸処置群と比較して、ペプチド１４処置は、相対的なメラニン含有量の有意な減少を促進した。図１２Ａに示される通りの細胞ペレットでは、陽性対照は、陰性対照群の約１７０％の相対的メラニン含有量（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を有し、そしてレチノイン酸処置群は、陰性対照群の約１２５％の相対的メラニン含有量（＊＊ｐ＜０．０１）を有し、その一方で、ペプチド１４処置は、陰性対照群の約９０％の相対的メラニン含有量（＊＊＊ｐ＜０．００１）、または陰性対照群より低い相対的メラニン含有量を有していた。図１２Ｂに示される通りの細胞培養上清では、陽性対照およびレチノイン酸処置群は、陰性対照群に非常に類似した相対的メラニン含有量を有し、その一方で、ペプチド１４処置は、陰性対照群の約７０％の相対的メラニン含有量（＊ｐ＜０．０５）、または陰性対照群より低い相対的メラニン含有量を有していた。

【0149】

このことは、ペプチド１４が、様々なメラニン形成関連疾病を低下させるための用途を有し得ることを示し、その例は、しみ、皮膚炎症によって引き起こされた皮膚色素過剰、ホルモン変化、老化、日光曝露、および慢性病巣を含むがこれらに限定されない。さらに、ペプチド１４は、現在アンチエイジングスキンケア用の代表的な分子と考えられているレチノイン酸よりも、性能が良いようであった。

【0150】

実施例１７
皮膚はしばしばリバウンド皮膚色素過剰を経験することがあり、この時、色素沈着がライトニング処置（ｌｉｇｈｔｅｎｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の停止後の皮膚に再建される。ペプチド１４の色素脱失効果が、ペプチド１４処置を中止した後にも残っているか否かをテストするために、ＭｅＷｏ細胞を、１０％ｖ／ｖのＦＢＳと、１％ｖ／ｖのペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充したＤＭＥＭにおいて、５％のＣＯ_２、３７℃、および９５％の湿度で培養した。実験条件の１つによる処置前の２週間（前処置）、ＭｅＷｏ細胞を、イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）で培養して、メラニン合成を刺激した。ＭｅＷｏ細胞を、１ウェル当たり１，０００，０００細胞で６ウェルプレートに６時間播種した後、細胞を、実験条件の１つで１４日間培養し、そして細胞内メラニン含有量および上清メラニン含有量について分析した。

【0151】

実験条件は陽性対照群、陰性対照群、ペプチド１４（ＩＢＭＸ）１４日群、レチノイン酸（ＩＢＭＸ）１４日群、ペプチド１４（ＩＢＭＸ）７日目中断群、およびレチノイン酸（ＩＢＭＸ）７日目中断群を含んでいた。陰性対照群は、前処置期間中に２週間、２５μＭのＩＢＭＸで刺激し、そしてその後、実験のためのプレーティング後に未処置のまま１４日間おいて、ビヒクルのみを投与した。陽性対照群は、全実験中、つまり前処置期間中の２週間、および処置期間中の１４日間、２５μＭのＩＢＭＸでインキュベートしたＭｅＷｏ細胞を含んでいた。群の中には、７日間または１４日間２５μＭのＩＢＭＸならびに３．１２μＭのペプチド１４の両方で処置したものや、あるいは（７日間または１４日間）２５μＭのＩＢＭＸならびに２μＭのレチノイン酸で処置したもの両方があった。ペプチド１４（ＩＢＭＸ）１４日群は、前処置期間中に２５μＭのＩＢＭＸで２週間インキュベートし、その後に２５μＭのＩＢＭＸと３．１２μＭのペプチド１４とで１４日間処置したＭｅＷｏ細胞を含んでいた。レチノイン酸（ＩＢＭＸ）１４日群は、前処置期間中に２５μＭのＩＢＭＸで２週間インキュベートし、その後に２５μＭのＩＢＭＸと２μＭのレチノイン酸とで１４日間処置したＭｅＷｏ細胞を含んでいた。ペプチド１４（ＩＢＭＸ）７日群は、前処置期間中に２５μＭのＩＢＭＸで２週間インキュベートし、その後に２５μＭのＩＢＭＸと３．１２μＭのペプチド１４とで７日間のみ処置し、そして２５μＭのＩＢＭＸのみで追加的に７日間培養したＭｅＷｏ細胞を含んでいた。レチノイン酸（ＩＢＭＸ）７日群は、前処置期間中に２５μＭのＩＢＭＸで２週間インキュベートし、その後に２５μＭのＩＢＭＸと２μＭのレチノイン酸とで７日間のみ処置し、そして２５μＭのＩＢＭＸのみで追加的に７日間培養したＭｅＷｏ細胞を含んでいた。

【0152】

処置後、細胞ペレットおよび細胞培養上清におけるメラニン含有量を、４９２ｎｍでのサンプルの吸光度によって評価した。細胞ペレットを、トリプシン処置によって調製し、カウントし、そして１６時間、２００μＬの１ＭのＮａＯＨ中でインキュベートした（Ｍａｔｓｕｄａ等，２００４； Ｙｏｏ等，２００７）。１０分間の１．２×ｇの遠心分離後に、細胞培養上清を取得した。データを、相対的なメラニン含有量、特定の波長（４９２ｎｍ）でのサンプルの吸光度を同じ波長の陰性対照サンプルのサンプル吸光度の細胞数に対して正規化したものとして、表わす。細胞増殖は１４日の期間において有意であり、この実験においてのみ、メラニン含有量データを各群内のサンプル中の細胞数に対して正規化した。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験を実施した。統計的有意性が検出された時に、データを、ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後比較テストを使用して分析した。統計的に有意なｐ－値は、群間で、ｐ＜０．０５に対して＊；Ｐ＜０．０１に対して＊＊；Ｐ＜０．００１に対して＊＊＊；ｐ＜０．０００１に対して＊＊＊＊で、記される。

【0153】

加えて、チロシナーゼ、メラニン細胞誘発転写因子（ＭＩＴＦ）、およびドーパクロムトートメラーゼ（ＤＣＴ）を含む、メラニン形成に関与するキーとなる遺伝子のｍＲＮＡレベルを分析した。

【0154】

図１３Ａに示される通りの細胞ペレット中で、および図１３Ｂに示される通りの細胞上清中で、陽性対照群およびレチノイン酸処置群と比較して、ペプチド１４処置は、相対的なメラニン含有量の有意な減少を促進した。図１３Ａに示される通りの細胞では、陽性対照は、約１３０％の相対的メラニン含有量を有し、そしてレチノイン酸１４日処置群は、約１３０％の相対的メラニン含有量を有し、その一方で、ペプチド１４の１４日処置群は、陰性対照群の約９０％の相対的メラニン含有量、または陰性対照群より低い相対的メラニン含有量を有していた。ペプチド１４の７日処置群は、約４０％の相対的メラニン含有量を有し、これは、実験群の中で最低の相対的メラニン含有量であった。レチノイン酸の７日処置群は、約９０％の相対的メラニン含有量を有していた。図１３Ｂに示される細胞培養上清では、陽性対照は、約１１０％の相対的メラニン含有量を有し、その一方で、レチノイン酸の１４日処置群およびペプチド１４の１４日処置群は、約５０％の相対的メラニン含有量を有していた。レチノイン酸の７日処置群およびペプチド１４の７日処置群は、約１００％の相対的メラニン含有量を有していた。

【0155】

メラニン形成関連遺伝子のｍＲＮＡレベルは、図１４Ａ、１４Ｂ、および１４Ｃに示される。ペプチド１４処置は、結果として、チロシナーゼ、ＭＩＴＦ、およびＤＣＴ遺伝子の発現の有意な減少をもたらすようであり、その減少は、レチノイン酸処置群のｍＲＮＡレベルよりも低いか、または少なくともそれと同様である。図１４Ａに示される通り、他の実験群と比較して、チロシナーゼの相対的発現レベルは、ペプチド１４の１４日処置群について最低となった。図１４Ｂに示される通り、ＭＩＴＦの相対的発現レベルは、ペプチド１４の１４日処置群およびレチノイン酸１４日処置群について最低となった。図１４Ｃに示される通り、他の実験群と比較して、ＤＣＴの相対的発現レベルは、ペプチド１４の１４日処置群およびペプチド１４の７日処置群について最低となった。

【0156】

このことは、ペプチド１４が、メラニン形成を低下させることができ、そして、ペプチド１４処置を中止した後も、より低いメラニン形成をもたらし続けることができることを示す。さらに、ペプチド１４は、現在アンチエイジングスキンケア用の代表的な分子と考えられているレチノイン酸よりも、性能が良いようであった。

【0157】

実施例１８
ペプチド１３およびペプチド１４処置のヒトの皮膚モデルおよび皮膚形態に及ぼす影響をテストするために、健康な高齢者ドナー（７１歳、８４歳、および９０歳）から単離されたヒト初代線維芽細胞およびケラチノサイトを使用して、ヒトの皮膚等価物を構築した。皮膚等価物を、０．０１％ｗ／ｖ（または１μＭ）のペプチド１３またはペプチド１４で５日間処置した。陰性対照は、製剤のみで処置された。５日間の培養物後、皮膚等価物を、表皮厚さにについて分析し、それらを総表皮面積に応じて定量化した。いくつかのパラメータに基づく品質評価が、盲検による分析者によって行われた。観察されたパラメータは、細胞層の一般的な組織、ならびにとりわけ角質層の厚さを含み、そしてそれらは、老化および老化レベルと共に減少することが示された。評価は、最高スコアが２８であり、ここで、より高いスコアが年齢と老化の減少と相関を有している。１９の最低スコアが、バッチ使用のために必要であった。このスコアは内部で検証を行い、そして、皮膚等価物または培養細胞の年齢／老化と共に減少することが示された。個々の３つの実験を、３つの技術的レプリカを使用して実施した。データを、ｔ－検定を使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定した。統計的に有意なｐ－値は、群間で、ｐ＜０．０５に対して＊；Ｐ＜０．０１に対して＊＊；Ｐ＜０．００１に対して＊＊＊；ｐ＜０．０００１に対して＊＊＊＊で、記される。

【0158】

図１５Ａは、ビヒクルのみ（対照）、ペプチド１３、またはペプチド１４で処置されたインビトロのヒトの皮膚モデルのＨ＆Ｅ染色された組織画像を示す。ペプチド１３またはペプチド１４で処置されたヒトの皮膚モデルは、一般に、未処置の対照サンプルに対して、（画像の上部のダークグレイ層によって示される、またはＨ＆Ｅによってブライトピンクに染色されている）角質層と、（画像の中央部のミディアムグレイ層によって示される、またはＨ＆Ｅによって紫色に染色されている）表皮層の厚みと同様、またはそれらより増加していることを示す。図１５Ｂは、ビヒクルのみ（対照）、ペプチド１４、またはペプチド１３で処置された、ヒトの皮膚モデルの組織学的スコアの平均を示し、それらはそれぞれ、２１．００、２３．８３、および２３．４４であった。組織学的スコアは、ペプチド１３またはペプチド１４で処置されたサンプルについてのものが、陰性対照についてのものより高かった。ペプチド１３またはペプチド１４を使用する皮膚サンプルの処置は、表皮の厚さおよび表皮のバリアによって評価された通り、皮膚形態を改善するようであった。

【0159】

実施例１９
ペプチド１４による皮膚深度への浸透レベルを試験するために、拡散試験を、フランツ型セルを使用し、そしてエクスビボの皮膚培養サンプル上で実施した。女性ドナー（７９歳）の腹からの新鮮なヒトの皮膚を、～２．５ｃｍ×２．５ｃｍの小片に切断した。

【0160】

フランツ型セル試験では、皮膚を、０．０１％のペプチド１４を含む１０μＬの製剤化されたクリームで処置し、そして、５ｍｍの直径の接触エリア（０．２ｃｍ^２）でフランツ型セルに置いた。受容体チャンバは、ｐＨ７．４の、２ｍＬのＰＢＳを有していた。フランツ型セルを、３２℃で２４時間、撹拌下で維持した。

【0161】

エクスビボ皮膚培養試験では、皮膚を、０．０１％のペプチド１４（合計で、２００ｎｇのペプチド１４）を含む２μＬの製剤化されたクリームで処置した。その後、皮膚サンプルを、底部のＤＭＥＭ培地との気液界面に置き、３７℃で２４時間維持した。

【0162】

２４時間後、皮膚上の余分な製剤をティッシュペーパーで取り除き、皮膚サンプルをＰＢＳ中で４回洗浄した。周囲の皮膚もすべて取り除いた。皮膚を、その後、６０℃で１－２分間インキュベートして、真皮から表皮を分離した。受容体チャンバ（２ｍＬ）中のＰＢＳ、表皮層、および真皮層を収集し、さらなる分析まで－８０℃で凍結させた。真皮層をペプチド１４に対して質量分析で分析して、真皮に浸透したペプチド１４の量を判定した。

【0163】

フランツ型セル試験では、適用されたペプチド１４の約１．３７％～２．６０％を、真皮層で確認した。エクスビボのヒトの皮膚培養試験では、適用されたペプチド１４の約１．９４％～１．９６％を、真皮層で確認した。ペプチド１４が皮膚の表面に局所的に適用された時、真皮に浸透したペプチド１４はわずかであったか、または全く浸透しなかった。このことは、外用適用によって達成されるペプチド１４の皮膚浸透が、非常に低いものから最小限であることを実証している。

【0164】

実施例２０
臨床試験をヒト対象に対して実施し、顔に対するペプチド１４の外用適用の効果を評価した。この試験は、ＩＲＢ委員会によって承認された。２２のヒト対象が臨床試験に参加し、そして２つの製品を、顔の各々の側面に１つずつ使用するように依頼された。顔の右面で、対象は、製剤のみを含む陰性対照を使用した。顔の左面で、対象は、０．０１％のペプチド１４を含む処置製剤を使用した。対象は、製品の使用を開始する前（ベースライン）、および、顔のそれぞれの側面に製剤を毎日外用適用してから６週間後および１２週間後に、評価を受けた。皮膚水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、皮内分析、皮膚粘弾性特性、および皮膚表面プロファイルの以下に詳述される様々な評価基準を使用して、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、および全体的な外観について、顔の皮膚に対する外用ペプチド１４適用の効果を評価した。

【0165】

臨床専門家による格付け 有効性に対する格付け：視覚的評価および触覚的評価を、１０ｃｍの視覚的アナログスケール（Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇ Ｓｃａｌｅｓ）（ＶＡＳ）を使用して、ベースライン、６週目、および１２週目で、顔の両面で実施した。以下のパラメータ：細かい線／しわ、皮膚の色調（色の均一性）、質感／滑らかさ（視覚的）、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、皮膚の毛穴、輝き／光度、および全体的な外観を、以下に詳述される機器および方法を使用して評価した

【0166】

コルネオメータ（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）：Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ ＣＭ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、皮膚の静電容量を測定することによって、皮膚水分量／水和性を評価した。測定を、ベースライン、６週目、および１２週目に、顔の両面で３回行い、平均化した。テストサイトマップを使用して、各測定で同じ位置が確実に測定されるようにした。

【0167】

バポメータ（ＶａｐｏＭｅｔｅｒ）：ＶａｐｏＭｅｔｅｒ（Ｄｅｌｆｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ．， Ｆｉｎｌａｎｄ）で、相対湿度と温度を測定するセンサーを備えた密閉円筒チャンバを使用して、皮膚の経皮水分損失（ＴＥＷＬ）を測定する。ＴＥＷＬ率の変化は、バリア破壊または完全性の評価基準を提供し、それによって、皮膚の完全性に対するペプチド１４の効果の指標を提供する。すべての対象が、バポメータの測定を、ベースライン、６週目、および１２週目に、顔の両側で２回行い、平均化した。評価位置を、各対象の身体マップ上に記録した。

【0168】

超音波－ＤｅｒｍａＳｃａｎ（Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ＤｅｒｍａＳｃａｎ）：ＤｅｒｍａＳｃａｎ Ｃ ＵＳＢ（Ｃｏｒｔｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡｐＳ， Ｈａｄｓｕｎｄ， Ｄｅｎｍａｒｋ）は、コンパクトな高解像度超音波スキャナーである。すべての対象が、ベースラインと１２週目に、顔の両側で超音波評価を受けた。評価の位置は、各評価に対して同じで行われ、顔マップ上に記録された。超音波スキャンの取得後、それらを皮膚厚さ（密度）およびエコー輝度について分析した。

【0169】

ＳＩＡスコープ（ＳＩＡＳｃｏｐｅ）：ＣＯＳＭＥＴＲＩＣＳ（商標）ＳＩＡＳｃｏｐｅ（Ａｓｔｒｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ， Ｔｏｆｔ， ＵＫ）は、分光光度法皮内分析（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＳＩＡ）または発色団マッピング（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ ｍａｐｐｉｎｇ）を使用する、非侵襲的な光学皮膚撮像機器である。皮膚コラーゲンおよびヘモグロビンを、ベースライン、６週目、および１２週目に、顔の両側で測定した。

【0170】

Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ：Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ ＭＰＡ ５８０（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ， Ｇｅｒｍａｎｙ）は、皮膚の粘弾性特性（堅固さと弾力）を測定するものであり、皮膚表面に吸引力を加えることによってプローブの開口部に皮膚を引き込み、そして光学測定システムを使用して浸透深度を判定する。測定を、ベースライン、６週目、および１２週目に、顔の両側で行った。同じ位置を各時点で測定し、そして顔マップを使用して記録した。測定は、堅固さ、弾力、および正味弾力（ｎｅｔ ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）を含んでいた。

【0171】

ＶＩＳＩＡ－ＣＲ：写真による文書化を、複数の照明モードで高解像度画像を捕捉する、ＶＩＳＩＡ－ＣＲ撮像システム（Ｃａｎｆｉｅｌｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｐａｒａｍｕｓ， ＮＪ， ＵＳＡ）を使用して行った。写真を、ベースライン、６週目、および１２週目に、中央、右側面図、および左側面図について、標準１および平行偏光で捕捉した。

【0172】

ＡＮＴＥＲＡ ３Ｄ（登録商標）：Ａｎｔｅｒａ ３Ｄ（登録商標）（Ｍｉｒａｖｅｘ、Ｉｒｅｌａｎｄ）は、皮膚形状測定、マルチスペクトル分析、および色彩測定を組み合わせて、３次元での皮膚表面の再構築とその後の画像分析とを提供する機器である。画像を、ベースライン、６週目、および１２週目に、すべての対象の左右の目尻のしわの領域で捕捉した。同じ位置を各時点で測定し、そして顔マップを使用して記録した。画像を、手触り、幅、および線／しわ深度について分析した。

【0173】

専門家による臨床的格付け

【0174】

６週目および１２週目の、ベースラインに対する比較

【0175】

ペプチド１４製剤：ベースラインにおけるペプチド１４で処置された顔の左側の平均スコアを、その後の時点と比較すると、６週目で臨床的格付けにおいて統計的に有意な改善が明らかとなり、それは、線／しわの外観、肌の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさ、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、および全体的な外観について、１２週目まで継続した。さらに、ペプチド１４で処置された顔の左側のベースラインと比較して、１２週目に、輝き／光度の外観が統計的に有意に改善した。

【0176】

対照製剤：ベースラインにおける陰性対照製剤で処置された顔の右側の平均スコアを、その後の時点と比較すると、６週目で臨床的格付けにおいて統計的に有意な改善が明らかとなり、それは、線／しわの外観、肌の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさ、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、輝き／光度、および全体的な外観について、１２週目まで継続した。

【0177】

ペプチド１４処置の、陰性対照に対する比較（顔の左側対右側）

【0178】

ペプチド１４処置の、処置時間についての、陰性対照に対する比較

【0179】

ベースライン（処置前）と比較した時、ペプチド１４で処置された顔の左側は、測定のいくらかで、陰性対照で処置された顔の右側よりも、よく見えた。ペプチド１４で処置された顔の左側は、陰性対照で処置された顔の右側よりも、６週目でコルネオメータ測定によるより高レベルの皮膚水和性と、ＳＩＡスコープ測定によるより高レベルのコラーゲンレベルを有し、そして、６週目でバポメータ測定によるより良いＴＥＷＬ（経上皮水分損失）の改善を呈した。ペプチド１４で処置された顔の左側と、陰性対照製剤で処置された顔の右側との間で、皮膚厚さ（密度）とエコー輝度に関するＤｅｒｍａｓｃａｎ評価および皮膚全体の外観に関するＶｉｓｉａ評価について、有意差は見られなかった。ペプチド１４で処置された顔の左側は、陰性対照製剤で処置された顔の右側よりも、１２週目で、質感（荒れ）について、より良いＡｎｔｅｒａ測定値を呈する。

【0180】

０．０１％のペプチド１４を含む外用クリームを使用する２２人の患者の１２週間後の結果を、分析した。図１６は、ベースライン（左、ベースライン）および処置１２週間後（右、１２週間）の、ペプチド１４で処置された顔の左側の例を示す。０．０１％のペプチド１４で１２週間処置されたものは、ベースライン時点と比較して、線およびしわの外観が減少し、そして滑らかさ、皮膚の色調（均一性）、質感／滑らかさ、および全体的な外観が改善したようである。

【0181】

盲検による専門家の意見の分析を実施して、すべての対象のうち、改善を示す患者のパーセントと、平均改善パーセント（ＭＰＩ）とを判定し、ＭＰＩは、ベースライン（処置前）と比較した平均改善パーセントを表す。分析から、患者の８７％が皮膚のしわの外観が減少したと評価され（ＭＰＩ：３．３％）、９０％が皮膚の弾力が改善したと評価され（ＭＰＩ：４．７５％）、および、９５．５％が皮膚の均一性（ＭＰＩ：４．４％）、輝き（ＭＰＩ：５．０６％）、毛穴の外観（ＭＰＩ：４．５８％）、および堅固さ（ＭＰＩ：５．４３％）が改善したと評価されたことを確認した。対象はすべて、より良い皮膚の質感／滑らかさ（ＭＰＩ：７．４６％）、およびより良い全体的な外観（ＭＰＩ：６．１７％）を呈するものと評価された。

【0182】

対象の顔を様々な機器によって評価して、すべての対象のうち、改善を示す患者のパーセントと、平均改善パーセント（ＭＰＩ）とを判定し、ＭＰＩは、ベースライン（処置前）と比較した平均改善パーセントを表す。機器による評価から、バポメータの評価によって、対象の８１％がより良い皮膚バリアを有していたことを確認した（ＭＰＩ：１４．１９％）。対象の７３％は、Ａｎｔｅｒａ評価によって、皮膚荒れの改善を呈した（ＭＰＩ：５．０５％）。対象の７３％は、ＶＩＳＩＡ評価によって、皮膚の輝きの改善を呈した（ＭＰＩ：１６．６３％）。

【0183】

対象による認知についても評価した。対象による認知についての分析では、８０％を上回る対象が、ペプチド１４を含む製剤が、より良い皮膚の外観、より良い皮膚の質感、より良い皮膚の堅固さ、およびより良い水和性を促進すると考えていた。対象の７８％は、皮膚の輝きの改善に気付いた。

【0184】

実施例２１
本明細書に開示されるポリペプチドの少なくとも１つを含む外用製剤は、ヒトの皮膚上で使用される。製剤は、朝と夕方に顔および／または首の清潔で乾燥した肌に、滑らかな層として適用するように指示されている。製剤は、化学的に製剤化された毎日必須の外用サプリメントであり、皮膚の回復力を改善し、かつ皮膚の永続的な健康のための表皮バリアを強化する。

【0185】

実施例２２
ユーザは、ポリペプチドの少なくとも１つを含む本明細書に記載の外用製剤を、顔および／または首に適用する。ユーザはまた、外用製剤の適用後に、ＵＶブロッカーを含む他の外用製剤を適用する。

【0186】

実施例２３
ユーザは、ポリペプチドの少なくとも１つを含む本明細書に記載の外用製剤とＵＶブロッカーとを、顔または首に適用する。外用製剤を、ユーザの身体の皮膚に適用してもよい。

【0187】

実施例２４
高齢のドナー（７１歳、８４歳、または９０歳）からの細胞で構築されたサンプルの３Ｄ皮膚等価物セクションを、１μＭのペプチド１４またはペプチド１３、あるいは２０μＭのレチノイン酸（ＲＡ）で処置し、そして、老化、加齢、および健康に関する様々なマーカーの様々な処置の効果について評価した。

【0188】

図１７は、対照、ペプチド１４、ペプチド１３、またはレチノイン酸で処置された、３Ｄ皮膚等価物の表皮（Ｅｐｉ）層および真皮（Ｄｅｒ）層の、ｐ１６、ＢＬＩＭＰ１、ＺＹＧ１１Ｂ、ＩＬ－８、Ｋｉ－６７、ＺＩＣ１、ＭＭＰ１、ＨＡＳ２の相対的ｍＲＮＡ発現レベルを示す。データを、ＧＡＰＤＨおよび未処置の対照に対して正規化した２－ｄｄＣｔとして提示する。＊ｐ＜０．０５。ペプチド１３およびペプチド１４による処置サンプルは、一般に、表皮層中のｐ１６、ＢＬＩＭＰ１、ＺＹＧ１１Ｂ、ＩＬ－８、およびＫｉ－６７について、および真皮層中のｐ１６、ＭＭＰ１、ＨＡＳ２、ＩＬ－８、およびＫｉ－６７について、同様の相対的ｍＲＮＡ発現レベルを有していた。ペプチド１３およびペプチド１４による処置サンプルは、一般に、表皮層中のｐ１６、ＢＬＩＭＰ１、ＺＹＧ１１Ｂ、ＩＬ－８について、および真皮層中のｐ１６、ＭＭＰ１、ＩＬ－８、およびＫｉ－６７について、ＲＡによる処置サンプルよりも低い相対的ｍＲＮＡ発現レベルを有していた。ペプチド１３およびペプチド１４による処置サンプルは、一般に、表皮層中のＫｉ－６７、および真皮層に対するＨＡＳ２について、ＲＡによる処置サンプルよりも高い相対的ｍＲＮＡ発現レベルを有していた。ペプチド１３およびペプチド１４による処置サンプルは、真皮層に対するＺＩＣ１およびＫｉ－６７について、ＲＡによる処置サンプルと同様の相対的ｍＲＮＡ発現レベルを有していた。

【0189】

実施例２５
セノ治療戦略は、インビボにおいて、健康寿命および寿命の延長と関連付けられ得る。ペプチド１４が、健康寿命と寿命の延長を促進するか否かを評価するために、シノラブディス・エレガンス線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ｗｏｒｍ）を使用した。ペプチド１４を、１μＭまたは２μＭの異なる濃度で、線虫培地（Ｍ９緩衝液培地）に添加した。陰性対照の線虫には、ビヒクルのみが投与された。２つの健康寿命パラメータを評価し、それらは、ｉ）咽頭部のポンピング、およびｉｉ）線虫の動き、であった。寿命も判定した。咽頭部のポンピング分析については、１５匹の線虫を、咽頭の動き（ポンピング）について毎日観察し、２０秒間カウントした。この実験は、異なる日に動物の異なる集団を使用して、２人の異なる盲検による観察者によって、３回繰り返された。統計的な差異を、一元配置分散分析（Ｏｎｅ－Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）およびダネット事後比較テスト（Ｄｕｎｎｅｔ’ｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔ）によって、個々のそれぞれの時点を分析することによって検知した。すべての群を、Ｈ_２Ｏ群と比較した。線虫の動きに関する分析については、スラッシング運動（ｔｈｒａｓｈｉｎｇ）とも呼ばれる線虫の基本的な動きを、毎日１５匹分測定した。観察時間は、３０秒であった。実験は、異なる日に線虫の異なる集団を使用して、２人の異なる盲検による観察者によって、３回繰り返された。統計的差異を、一元配置分散分析およびダネット事後比較テストによって、個々のそれぞれの時点を分析することによって検出し、そしてすべての群をＨ_２Ｏ群と比較した。寿命分析については、１５匹の線虫を寿命について、最後の線虫が死ぬまで毎日観察した。この実験は、異なる日に線虫の異なる集団を使用して、２人の異なる盲検による観察者によって、３回繰り返された。平均寿命を測定した。統計的差異を、一元配置分散分析およびダネット事後比較テストによって、個々のそれぞれの時点を分析することによって検出し、そしてすべての群をＨ_２Ｏ群と比較した（図１８Ａ－１８Ｃ）。

【0190】

１μＭまたは２μＭのいずれかのペプチド１４による処置は、スラッシング運動（図１８Ａ、（パネルＡ））、ポンピング（図１８Ｂ、（パネルＢ））、および寿命（図１８Ｃ、（パネルＣ））を改善させた。スラッシング運動は１日目で有意に改善（＊ｐ＜０．０５）したが、ポンピングはこの日有意に減少した（＊ｐ＜０．５）。総合すると、データは、健康寿命および寿命の促進に関して、テストされたペプチドの安全性と有効性とを示唆している。例えば、８日目に、スラッシング運動（＊ｐ＜０．０５）およびポンピング（＊ｐ＜０．０５）の両方が、対照と比較してペプチド１４で処置された群で増加した。ポンピングは線虫の老化と共に減少し、これは主として筋肉の完全性の損失の結果である。直接測定されてはいないが、線虫の咽頭の肉眼による解剖所見の欠陥（咽頭の湾曲または腫れであり、両方共にこの線虫老化の一般的特徴である）も、Ｈ_２Ｏ対照群と比較した時に、１μＭのペプチド１４群で減少した。線虫の動きの減少は、いずれの時点においても、いずれのサンプルにおいても検出されず、このことは、ペプチドが、テスト濃度では線虫に対して毒性を有していなかったことを示唆している。１μＭおよび２μＭで使用された時、ペプチド１４は、線虫平均寿命の統計的に有意な増加を促進した（１μＭのペプチド１４ ＊＊ｐ＜０．０１；２μＭのペプチド１４ ＊ｐ＜０．０５）。

【0191】

実施例２６
細胞老化のレベルが高いため、早老症患者の皮膚細胞を老化のモデルとして使用した。早老症患者からの初代線維芽細胞を、１０％ｖ．ｖ．のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と、１％ｖ．ｖ．のペニシリン／ストレプトマイシン溶液（１，０００Ｕ．ｍＬ－１）とで補充した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ））中で培養した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃、９５％の湿度大気で培養した。増殖後、細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり４，０００の細胞）に播種し、プレーティング後６時間、５００ｎＭ、５μＭ、５０μＭのポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）またはＷＬＫＧＩ（配列番号：７）でインキュベートした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；インキュベーション後、未処置の対照に対する老化関連β－ガラクトシダーゼ染色の活性によって、およびＡＴＲＸ病巣／核の定量化によって評価された相対的細胞老化を、分析した。３つの技術的レプリカを含む３つの個々の実験（生物レプリカ）を実施した。データを、ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後比較テストを使用して分析した。ｐ－値が０．０５以下である時に、統計的有意性を特定し、ここで、＊ｐ＜０．０５かつ＊＊ｐ＜０．０１である。図１９Ａ－１９Ｆは、ポリペプチド配列ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）（図１９Ａ、図１９Ｂ、図１９Ｃ）およびＷＬＫＧＩ（配列番号：７）（図１９Ｄ、図１９Ｅ、図１９Ｆ）の、細胞死を促進することなく細胞老化を減少させる効果を示す。パネルＡおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的老化レベルを示す。パネルＢおよびＤでは、Ｙ軸は、未処置の対照に対して正規化された相対的細胞数を示す。パネルＣおよびＦでは、Ｙ軸は、細胞当たりの平均ＡＴＲＸ病巣蓄積を示す。ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）での細胞の処置は、５μＭおよび５０μＭで使用された時、未処置の細胞と比較して、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色およびＡＴＲＸ病巣／核の平均数を有意に減少させた（β－ガラクトシダーゼ染色に対してはｐ＜０．０１、およびＡＴＲＸ病巣／核に対してはｐ＜０．０５）。ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）での細胞の処置は、５μＭおよび５０μＭで使用された時、未処置の細胞と比較して、老化関連β－ガラクトシダーゼ染色レベルを減少させた（５μＭに対してはｐ＜０．０５、および５０μＭに対してはｐ＜０．０１）。細胞毒性は、テスト濃度では観察されなかった。

【0192】

実施例２７
追加的なポリペプチドを、抗老化薬剤としての適合性に対してテストした。細胞を、ポリペプチドの１つでインキュベートした。陰性対照は、未処置細胞を含み、ビヒクルのみが投与されたものであった；インキュベーション後、（陰性対照に対する老化関連β－ガラクトシダーゼ染色の活性として評価される）相対的細胞老化と、陰性対照に対する相対的細胞増殖とを分析した。多くのポリペプチドは、１未満の相対的細胞老化を示し、未処置の陰性対照群よりも細胞老化を減少させ、そして未処置の陰性対照の細胞増殖以上の細胞増殖を維持した。そのようなポリペプチドの例は、表６に示される。

【0193】

さらに、細胞老化に対する表６のポリペプチドの用量依存的効果を試験した。細胞を、１．２６μＭから５０μＭ（１．２６μＭ、３．１２μＭ、６．２５μＭ、１２．５μＭ、２５μＭ、５０μＭ）に及ぶ様々な量のポリペプチドでインキュベートした。より低用量のポリペプチドでさえ、細胞老化の顕著な減少を確認した。

【0194】

【表6】

【0195】

本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、そして記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されているに過ぎないことは当業者に明らかであろう。当業者であれば、多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく思いつくだろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替案が、本発明の実施に際して利用され得ることを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。

【0196】

例示的な実施形態
例示的な実施形態の中には、以下のものが含まれる：

【0197】

実施形態１は、ＬＫＧＩのアミノ酸（配列番号：５）またはそのアナログを含む、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドを含む、皮膚の処置のための組成物を含み、ここで、ポリペプチドは、最大１００のアミノ酸を含む。実施形態２．単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドは、ＷＬＫＧＩのアミノ酸配列（配列番号：７）またはそのアナログを含む、実施形態１の組成物。実施形態３．単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドは、ＬＫＧＩＬのアミノ酸配列（配列番号：６）またはそのアナログを含む、実施形態１または実施形態２の組成物。実施形態４．単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドは、少なくとも４つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む、実施形態１－３のいずれか１つの組成物。実施形態５．治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、実施形態１－４のいずれか１つの組成物。実施形態６．賦形剤は、局所適用のために構成される、実施形態５の組成物。実施形態７．組成物は、ヒトの皮膚への適用のために構成される、実施形態１－６のいずれか１つの組成物。実施形態８．組成物は、クリーム、経皮パッチ、外用パッチ、軟膏、オイル、ゲル、液体、粉末、ローション、血清、エマルジョン、モイスチャライザ、泡、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、洗顔剤、化粧水、またはシャンプーである、実施形態１－７のいずれか１つの組成物。実施形態９．組成物は、食用サプリメントとして構成される、実施形態１－５のいずれか１つの組成物。実施形態１０．組成物は、飲料として構成される、実施形態９の組成物。実施形態１１．組成物は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚用保湿剤を含む、実施形態１－９のいずれか１つの組成物。実施形態１２．組成物は、植物オイル、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸、トリグリセリド、ベンゾアート、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、セラミド、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚軟化剤を含む、実施形態１－９のいずれか１つの組成物。実施形態１３．植物オイルは、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカドオイル、プラムシードオイル、プラカシーオイル、カリコフィラムスプルカナムオイル、アーモンドオイル、およびアルガンオイルからなる群から選択される、実施形態１２の組成物。実施形態１４．組成物は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミド、またはそれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１つのビタミンを含む、実施形態１－１３のいずれか１つの組成物。実施形態１５．組成物は、約５００ｎＭ～約５００μＭの、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態１－１４のいずれか１つの組成物。実施形態１６．組成物は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｗ）の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態１－１４のいずれか１つの組成物。実施形態１７．組成物は、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの、真皮の中への、最大１０％の低皮膚透過を達成するように製剤化される、実施形態１－１６のいずれか１つの組成物。実施形態１８．組成物は、組成物を皮膚上で使用した後に、組成物を使用する前と比較して、皮膚の水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、ユーザの皮膚の皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルの少なくとも１つを改善する、実施形態１－１７のいずれか１つの組成物。実施形態１９．組成物は、組成物を皮膚上で使用した後に、組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚荒れ、皮膚色素過剰、または皮膚の全体的な外観を低下させる、実施形態１－１７のいずれか１つの組成物。実施形態２０．組成物による皮膚の処置は、皮膚上の老化による影響を低下させるか、または処置する、実施形態１－１９のいずれか１つの組成物。実施形態２１．組成物による皮膚の処置は、皮膚上の細胞老化による影響を低下させる、実施形態１－２０のいずれか１つの組成物。実施形態２２．老化による影響は、老化関連β－ガラクトシダーゼ活性レベル、ＡＴＲＸ病巣／細胞の割合、ｐ１６発現、ＩＬ－８発現、Ｋｉ－６７発現、ヒアルロン酸合成酵素２発現、マトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）発現、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）発現、ＢＬＭ発現、またはエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）発現の少なくとも１つによって評価される、実施形態２０－２１のいずれか１つの組成物。

【0198】

実施形態２３は、Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０のアミノ酸配列、またはそのアナログを含む、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチド、を含み、ここで、（ａ）アミノ酸配列は、第１の配列の配列番号：１に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＥ、Ｘ_２はＴ、Ｘ_４はＫ、Ｘ_６はＷ、Ｘ_７はＬ、Ｘ_９はＧ、およびＸ_１０はＩであり；そして、（ｉ）Ｘ_３はＳではなく；または（ｉｉ）Ｘ_５が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_８はＧではなく；または（ｉｉｉ）Ｘ_８が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_５はＮではなく；または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）のいずれか１つは、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、（ｂ）アミノ酸配列は、第２の配列の配列番号：２に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＡ、Ｘ_２はＴ、Ｘ_３はＡ、Ｘ_４はＫ、Ｘ_５はＡ、Ｘ_６はＷ、Ｘ_７はＬ、Ｘ_８はＫ、Ｘ_９はＧ、およびＸ_１０はＩであり、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、（ｃ）アミノ酸配列は、第３の配列の配列番号：３に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＫ、Ｘ２はＬ、Ｘ５は_Ｉ、Ｘ_６はＬ、Ｘ_８はＧ、およびＸ_１０はＡであり；そして、（ｉ）Ｘ_９が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_３はＮではなく；または（ｉｉ）Ｘ_３が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_９はＳではなく；または（ｉｉｉ）Ｘ_４が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_７はＬではなく；または（ｉｖ）Ｘ_７が任意のアミノ酸である場合、Ｘ_４はＳではなく；そして、または（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、または（ｉｖ）のいずれか１つは、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴い；あるいは、（ｄ）アミノ酸配列は、第４の配列の配列番号：４に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、式中、Ｘ_１はＷ、Ｘ_２はＬ、Ｘ_３はＫ、Ｘ_４はＧ、Ｘ_５はＩ、Ｘ_６はＬ、Ｘ_７はＲ、Ｘ_８はＥ、Ｘ_９はＡ、およびＸ_１０はＡであり、随意に、１、２、３、または４の保存的アミノ酸置換を伴う。実施形態２４．アミノ酸配列は、ＬＫＧＩ（配列番号：５）を含む、実施形態２３のポリペプチド。実施形態２５．アミノ酸配列は、ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）を含む、実施形態２３または実施形態２４のポリペプチド。実施形態２６．アミノ酸配列は、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）を含む、実施形態２３－２５のいずれか１つのポリペプチド。実施形態２７．アミノ酸配列は、配列番号：１の配列に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、実施形態２３のポリペプチド。実施形態２８．アミノ酸配列は、配列番号：１である、実施形態２３のポリペプチド。実施形態２９．アミノ酸配列は、配列番号：２である、実施形態２３のポリペプチド。実施形態３０．アミノ酸配列は、配列番号：３の配列に対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、実施形態２３のポリペプチド。実施形態３１．アミノ酸配列は、配列番号：３の配列に対して、少なくとも、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、実施形態２３のポリペプチド。実施形態３２．アミノ酸配列は、配列番号：３である、実施形態２３のポリペプチド。実施形態３３．アミノ酸配列は、配列番号：４である、実施形態２３のポリペプチド。実施形態３４．組み換えられたポリペプチドは、少なくとも１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸、および最大１００のアミノ酸を含む、実施形態２３－３３のいずれか１つのポリペプチド。実施形態３５は、少なくとも１つの、実施形態２３－３４のいずれか１つの、合成された、または組み換えられたポリペプチド、および、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤を含む、皮膚の処置のための組成物を含む。実施形態３６．賦形剤は、局所適用のために構成される、実施形態３５の組成物。実施形態３７．組成物は、ヒトの皮膚への適用のために製剤化される、実施形態３５または実施形態３６の組成物。実施形態３８．組成物は、クリーム、軟膏、ゲル、液体、オイル、粉末、ローション、血清、エマルジョン、モイスチャライザ、泡、フェースマスク、ムース、エアロゾル、スプレー、洗顔剤、化粧水、外用パッチ、またはシャンプーである、実施形態３５－３７のいずれか１つの組成物。実施形態３９．組成物は、食用サプリメントとして構成される、実施形態３５の組成物。実施形態４０．組成物は、飲料として構成される、実施形態３９の組成物。

【0199】

実施形態４１．組成物は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚用保湿剤を含む、実施形態３５－４０のいずれか１つの組成物。実施形態４２．組成物は、植物オイル、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸、トリグリセリド、ベンゾアート、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、セラミド、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚軟化剤を含む、実施形態３５－４０のいずれか１つの組成物。実施形態４３．植物オイルは、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカドオイル、プラムシードオイル、プラカシーオイル、カリコフィラムスプルカナムオイル、アーモンドオイル、およびアルガンオイルからなる群から選択される、実施形態４２の組成物。実施形態４４．組成物は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミド、またはそれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１つのビタミンを含む、実施形態３５－４３のいずれか１つの組成物。実施形態４５．組成物は、約５００ｎＭ～約５００μＭの、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態３５－４４のいずれか１つの組成物。実施形態４６．組成物は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｗ）の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態３５－４４のいずれか１つの組成物。実施形態４７．組成物は、約０．００１％～約１％の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態３５－４４のいずれか１つの組成物。実施形態４８．組成物は、組成物を皮膚上で使用した後に、組成物を使用する前と比較して、皮膚の水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、ユーザの皮膚の皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルの少なくとも１つを改善する、実施形態３５－４７のいずれか１つの組成物。実施形態４９．組成物は、組成物を皮膚上で使用した後に、組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚荒れ、皮膚色素過剰、または皮膚の全体的な外観を低下させる、実施形態３５－４７のいずれか１つの組成物。実施形態５０．組成物による皮膚の処置は、皮膚上の老化による影響を低下させるか、または処置する、実施形態３５－４９のいずれか１つの組成物。実施形態５１．組成物による皮膚の処置は、皮膚上の細胞老化による影響を低下させる、実施形態３５－５０のいずれか１つの組成物。実施形態５２．老化による影響は、老化関連β－ガラクトシダーゼ活性レベル、ＡＴＲＸ病巣／細胞の割合、ｐ１６発現、ＩＬ－８発現、Ｋｉ－６７発現、ヒアルロン酸合成酵素２発現、マトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）発現、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）発現、ＢＬＭ発現、またはエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）発現の少なくとも１つによって評価される、実施形態５０－５１のいずれか１つの組成物。

【0200】

実施形態５３は、必要な対象において疾病を処置する方法を含み、方法は、配列番号：５のアミノ酸配列を含む組成物を、対象に投与する工程を含む。実施形態５４．製剤は、配列番号：６のアミノ酸配列を含む、実施形態５３の方法。実施形態５５．組成物は、配列番号：７のアミノ酸配列を含む、実施形態５３または実施形態５４の方法。実施形態５６．投与する工程は、組成物を対象に局所的に適用することを含む、実施形態５３－５５のいずれか１つの方法。実施形態５７．対象は、ヒトまたは他の動物である、実施形態５３－５６のいずれか１つの方法。実施形態５８．方法は、組成物の有効な量を、対象に投与する工程を含む、実施形態５３－５７のいずれか１つの方法。実施形態５９．疾病は、対象における老化細胞の蓄積に関連した障害である、実施形態５３－５８のいずれか１つの方法。実施形態６０．老化細胞の蓄積に関連した障害は、皮膚の老化を含む、実施形態５３の方法。実施形態６１．組成物は、グリセリン、スクアレン、ソルビトール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウムクロスポリマー、ナイアシンアミド、糖タンパク質、ピロリドンカルボン酸（ＰＣＡ）、リジンＨＣｌ、アラントイン、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚用保湿剤を含む、実施形態５３－６０のいずれか１つの方法。実施形態６２．組成物は、植物オイル、ミネラルオイル、シアバター、カカオバター、ワセリン、脂肪酸、トリグリセリド、ベンゾアート、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、糖脂質、リン脂質、スクアレン、グリセリン、セラミド、および藻類抽出物からなる群から選択される、少なくとも１つの皮膚軟化剤を含む、実施形態５３－６１のいずれか１つの方法。実施形態６３．植物オイルは、ローズヒップオイル、アンディローバオイル、グレープシードオイル、アボカドオイル、プラムシードオイル、プラカシーオイル、Ｃａｌｙｃｏｐｈｙｌｌｕｍ ｓｐｒｕｃｅａｎｕｍオイル、アーモンドオイル、およびアルガンオイルからなる群から選択される、実施形態６２の方法。実施形態６４．組成物は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＢ９、葉酸、ナイアシンアミド、またはそれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１つのビタミンを含む、実施形態５３－６３のいずれか１つの方法。実施形態６５．組成物は、約５００ｎＭ～約５００μＭの、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態５３－６４のいずれか１つの方法。実施形態６６．組成物は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｗ）の、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの有効な量を含む、実施形態５３－６４のいずれか１つの方法。実施形態６７．組成物は、単離された、合成された、または組み換えられたポリペプチドの、真皮の中への、最大１０％の低皮膚透過を達成するように製剤化される、実施形態５３－６６のいずれか１つの方法。実施形態６８．組成物は、組成物を皮膚上で使用した後に、組成物を使用する前と比較して、皮膚の水分量、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）、皮膚厚さとエコー輝度、ユーザの皮膚の皮内分析、皮膚粘弾性特性、または皮膚表面プロファイルの少なくとも１つを改善する、実施形態５３－６７のいずれか１つの方法。実施形態６９．組成物は、組成物を皮膚上で使用した後に、組成物を使用する前と比較して、ユーザの皮膚の、線／しわの外観、皮膚の色調（均一性）の外観、毛穴の外観、質感／滑らかさの外観、堅固さ（視覚的）、弾力（触覚的）、表皮バリア、皮膚荒れ、皮膚色素過剰、または皮膚の全体的な外観を低下させる、実施形態５３－６８のいずれか１つの方法。実施形態７０．組成物によって皮膚を処置する工程は、皮膚上の老化による影響を低下させるか、または処置する、実施形態５３－６９のいずれか１つの方法。実施形態７１．組成物によって皮膚を処置する工程は、皮膚上の細胞老化による影響を低下させる、実施形態５３－７０のいずれか１つの方法。実施形態７２．老化による影響は、老化関連β－ガラクトシダーゼ活性レベル、ＡＴＲＸ病巣／細胞の割合、ｐ１６発現、ＩＬ－８発現、Ｋｉ－６７発現、ヒアルロン酸合成酵素２発現、マトリックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）発現、サーチュイン６（ＳＩＲＴ６）発現、ＢＬＭ発現、またはエキソヌクレアーゼ１（ＥＸＯ１）発現の少なくとも１つによって評価される、実施形態７０－７１のいずれか１つの方法。

【0201】

実施形態７３．必要な対象において細胞老化を低下させる方法であって、方法は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＬＫＧＩ（配列番号：５）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを、対象に投与する工程を含み、ここで、ポリペプチドは、最大１００のアミノ酸を含む、方法である。実施形態７４．ポリペプチドは、少なくとも４つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含む、実施形態７３の方法。実施形態７５．組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＷＬＫＧＩ（配列番号：７）のアミノ酸配列を含む、実施形態７３の方法。実施形態７６．組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、ＬＫＧＩＬ（配列番号：６）のアミノ酸配列を含む、実施形態７３の方法。実施形態７７．ポリペプチドは、少なくとも５つのアミノ酸、１０のアミノ酸、１５のアミノ酸、または２０のアミノ酸を含み、および最大１００のアミノ酸を含む、実施形態７５または実施形態７６の方法。実施形態７８．組成物は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、実施形態７３－７７のいずれか１つの方法。実施形態７９．必要な対象において細胞老化を低下させる方法であって、方法は、実施形態２３－３４のいずれか１つに記載の少なくとも１つのポリペプチドを含む、治療用、栄養補助用、または化粧用組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。実施形態８０．組成物は、治療用、栄養補助用、または化粧用賦形剤をさらに含む、実施形態７９の方法。実施形態８１．投与する工程は、組成物を対象の皮膚の一部に適用することを含む、実施形態７９または実施形態８０の方法。実施形態８２．組成物は、対象の複数の細胞の寿命を延ばし、対象の複数の細胞におけるＳＩＲＴ６発現を誘発し、対象の複数の細胞における細胞再生速度を増加させ、対象の複数の細胞におけるアポトーシスを促進し、対象の複数の細胞におけるＤＮＡ修復を促進し、対象の複数の細胞におけるコラーゲン産生を増加させ、対象の複数の細胞におけるヒアルロン酸合成酵素産生を増加させ、対象の複数の細胞におけるＡＴＲＸ核病巣蓄積を減少させ、対象の複数の細胞におけるｐ１６発現を減少させ、対象の複数の細胞における老化関連ベータ－ガラクトシダーゼ産生を減少させ、対象の複数の細胞におけるＩＬ８発現を減少させ、対象の複数の細胞におけるＭＭＰ１発現を減少させ、対象の複数の細胞におけるＢＬＭ発現を増加させ、および／または、対象の複数の細胞におけるＵＶ誘発ＤＮＡ損傷を防ぐ、実施形態７９－８１のいずれか１つの方法。

【0202】

実施形態８３は、必要な対象において疾病を処置する方法を含み、方法は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：５のアミノ酸配列を含む、治療用、栄養補助用、または化粧用組成物を、対象に投与する工程を含む。実施形態８４．治療用、栄養補助用、または化粧用組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号：６のアミノ酸配列を含む、実施形態８３の方法。実施形態８５．治療用、栄養補助用、または化粧用組成物は、随意に１つの保存的アミノ酸置換を伴う、配列番号７：のアミノ酸配列を含む、実施形態８３または実施形態８４の方法。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15A】

【図15B】

【図16】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図19D】

【図19E】

【図19F】

【国際調査報告】